ES2300815T3

ES2300815T3 - Ciertas lactamas espirociclicas sustituidas y el uso de estas como productos farmaceuticos.

Info

Publication number: ES2300815T3
Application number: ES04765790T
Authority: ES
Inventors: Yves Auberson; Ralf Glatthar; Rhys Salter; Oliver Simic; Marina Tintelnot-Blomley
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2003-10-03
Filing date: 2004-10-04
Publication date: 2008-06-16
Anticipated expiration: 2024-10-04
Also published as: EP1670803B1; CN1863804B; AU2004279553B2; JP4549350B2; US20070265328A1; MXPA06003645A; US7655686B2; AU2004279553C1; GB0323204D0; JP2007509038A; PT1670803E; EP1670803A1; CA2540249A1; AU2004279553A1; PL1670803T3; BRPI0415015A; ATE388954T1; HK1092472A1; DE602004012426T2; US20070015781A1

Abstract

Un compuesto de la fórmula (Ver fórmula) en donde R1 es un hidrógeno o alquilo (C1-4), R2 es un alquilo (C1-8), cicloalquilo (C3-7), cicloalquilo (C3-7) alquilo (C1-4), aril o heteroaril opcionalmente sustituido, R3 es -CH(Re)C(=O)N(Ra)Rb o -(CH2)kN(Rc)Rd, en donde k es 0, 1 o 2, Ra, Rb, Rc y Rd, independientemente, son hidrógeno o un grupo alquilo (C1-8), bicicloaquilo (C5-9), cicloalquilo (C3-7), cicloalquilo (C3-7)alquilo (C1-4), aril, arilalquilo (C1-4), heteroaril, heteroarilalquilo (C1-4), 4-cromanil, 1,2,3,4-tetrahidro-quino-4-il, 1,2,3,4-tetrahidro-naft-1-il, tiocroman-4-il-1,1-dioxido, 4-isocromanil, 1,2,3,4-tetrahidro-isoquinol-4-il, tioisochroman-4-il-1,1-dioxido, 1,1-dioxo-1,2,3,4-tetrahidro- 1lambda*6*-benzo[e][1,2]tiazin-4-il, 1,1-dioxo-3,4-dihidro-1H-1lambda"''6"-benzo[c][1,2]oxatiin-4-il, 2,2-dioxo-1,2,3,4-tetrahidro-2lambda*6*-benzo[c][1,2]tiazin-4-il o 2,2-dioxo-3,4-dihidro-2H- 2lambda*6*-benzo[e][1,2]oxatiin-4-il opcionalmente sustituido o Ra y Rb, o Rc y Rd, juntos con el átomo de nitrógeno al cual ellos están unidos, forman un grupo pirrolidil, piperidil, morfolinil o piperazinil opcionalmente sustituido, y Re es un alquilo (C1-8), alcoxi (C1-4) alquil (C1-4), cicloalquilo (C3-7) o cicloalquilo (C3-7) alquilo (C1-4), R4 es un hidrógeno o un grupo alquilo (C1-8), alcoxi (C1-4) alquilo (C1-4), cicloalquilo (C3-7), cicloalquilo (C3-7) alquilo (C1-4), alquenilo (C2-6), alquinilo (C2-6), cicloalcoxil (C3-7) alquilo (C1-4) o aril opcionalmente sustituido, R5 es un hidrógeno o alquilo (C1-4) opcionalmente sustituido, R6 es un hidrógeno, hidroxi o halógeno, y m y p, independientemente, son 1 o 2, en su forma de base libre o en su forma de sal de adición de ácido.

Description

Ciertas lactamas espirocíclicas sustituidas y el uso de éstas como productos farmacéuticos.

La presente invención se relaciona con las novedosas 2-(6-oxo-1,7-diaza-espiro[4.4]non-7-il)-propionamidas, con su preparación, con su uso como productos farmacéuticos y con las composiciones farmacéuticas que las contienen.

Más particularmente la invención se relaciona con los compuestos de la fórmula

1

En donde

R_{1} es un hidrógeno o alquilo (C_{1-4}),

R_{2} es un alquilo (C_{1-8}), cicloalquilo (C_{3-7}), cicloalquilo (C_{3-7}) alquilo (C_{1-4}), aril o heteroaril opcionalmente sustituido,

R_{3} es -CH(R_{e})C(=O)N(R_{a})R_{b} o -(CH_{2})kN(R_{c})R_{d}, en donde

k es 0, 1 ó 2,

R_{a}, R_{b}, R_{c} y R_{d}, independientemente, son hidrógeno o un grupo alquilo (C_{1-8}), bicicloaquilo (C_{5-9}), cicloalquilo (C_{3-7}), cicloalquilo (C_{3-7})alquilo (C_{1-4}), aril, arilalquilo (C_{1-4}), heteroaril, heteroarilalquilo (C_{1-4}), 4-cromanil, 1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-4-il, 1,2,3,4-tetrahidro-naftalen-1-il, tiocroman-4-il-1,1-dioxido, 4-isocromanil, 1,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-4-il, tioisochroman-4-il-1,1-dioxido, 1,1-dioxo-1,2,3,4-tetrahidro-lambda*6*-benzo[e][1,2]tiazin-4-il, 1,1-dioxo-3,4-dihidro-1H-1lambda*6*-benzo[c][1,2]oxatiin-4-il, 2,2-dioxo-1,2,3,4-tetrahidro-2lambda*6*-benzo[c][1,2]tiazin-4-il o 2,2-dioxo-3,4-dihidro-2H-2lambda*6*-benzo[e][1,2]oxatiin-4-il opcionalmente sustituido, o

R_{a} y R_{b}, o R_{e} y R_{d}, juntos con el nitrógeno al cual ellos están unidos, forman un grupo pirrolidinil, piperidinil, morfolinil o piperazinil opcionalmente sustituido, y

R_{e} es un alquilo (C_{1-8}), alcoxi (C_{1-4}) alquilo (C_{1-4}), cicloalquilo (C_{3-7}) o cicloalquilo (C_{3-7}) alquilo (C_{1-4}),

R_{4} es un hidrógeno o un grupo alquilo (C_{1-8}), alcoxi (C_{1-4}) alquilo (C_{1-4}), cicloalquilo (C_{3-7}), cicloalquilo (C_{3-7}) alquilo (C_{1-4}), alquenilo (C_{2-6}), alquinilo (C_{2-6}), cicloalcoxi (C_{3-7}) alquilo (C_{1-4}) o aril opcionalmente sustituido,

R_{5} es un hidrógeno o alquilo (C_{1-4}) opcionalmente sustituido.

R_{6} es un hidrógeno, hidroxi o halógeno, y

m y p, independientemente, son 1 o 2,

en su forma de base libre o en su forma de sal de adición de ácido.

A causa de los átomos de carbono asimétricos presentes en los compuestos de la fórmula I y sus sales, los compuestos pueden existir en la forma activa ópticamente o en la forma de mezclas de isómeros ópticos, por ejemplo en la forma de mezclas racémicas. Todos los isómeros ópticos y sus mezclas, incluyendo las mezclas racémicas, son parte de la presente invención.

Además, los compuestos de la fórmula I y sus sales pueden contener un radioisótopo, tal como titrio, ^{14}C, ^{11}C o ^{18}F. Todos los compuestos radiomarcados y su uso como biomarcadores, agentes de imágenes in vitro o in vivo, o en ensayos bioquímicos, por ejemplo ensayos de enlace, son parte de la presente invención.

Los sustituyentes en los grupos no-aromáticos definidos anteriormente se seleccionan de hidroxi, halógeno, carbamoil, carboxi, hidroxialquilo (C_{1-4}), alcoxi (C_{1-4}), alcoxi (C_{1-4})alquilo (C_{1-4}), alcoxi (C_{1-4})alcoxi (C_{1-4}), alquilo (C_{1-4})sulfanil, alcoxicarbonil (C_{1-4}), alquilo (C_{1-4})carboniloxi, alquilo (C_{1-4})carbonil, alquilsulfonil(C1-4), ciano, oxo, cicloalquilo (C_{3-7}), hetero cicloalquilo (C_{3-7}), aril opcionalmente sustituido o heteroaril opcionalmente sustituido. Los grupos cicloalquilo (C_{3-7}) o hetero-cicloalquilo (C_{3-7}) también se pueden fusionar con un adicional cicloalquilo (C_{3-7}), heterocicloalquilo (C_{3-7}), o un anillo aromático o heteroaromático.

Los sustituyentes en los grupos aromáticos o heteroaromáticos definidos anteriormente se seleccionan del halógeno, hidroxi, ciano, nitro, trifluorometil, benziloxi, fenoxi, SO_{2}NH_{2}, NHSO_{2} alquilo (C_{1-3}), carboxi, alquiloxicarbonil (C_{1-4}), carbamoil, alquilcarbamoil (C_{1-4}), alquilsulfonil(C_{1-4}), alquilocarboniloxi (C_{1-4}), alquilocarbonil (C_{1-4}), alquilo (C_{1-6}), alcoxi (C_{1-4}), hidroxialquilo (C_{1-4}), aril, heteroaril o un grupo amino opcionalmente sustituido.

Los sustituyentes en los grupos amino o carbamoil pueden ser uno o dos grupos seleccionados de alquilo (C_{1-4}), alcoxi (C_{1-4}) alquilo (C_{1-4}), alcoxi carbonil (C_{1-4}), aril alquiloxicarbonil (C_{1-4}) o heteroaril alquiloxicarbonil (C_{1-4}).

Aril es un anillo aromático de 6 miembros anillo opcionalmente mono-, di- o tri-sustituido por, independientemente, hidroxi, ciano, trifluorometil, halógeno, carboxi, alquiloxicarbonil (C_{1-4}), alquilocarbamoil (C_{1-4}), alquilsulfonil(C_{1-4}), alquilcarboniloxi (C_{1-4}), alquilcarbonilamino (C_{1-4}), alquilcarbonil (C_{1-4}), alquilo (C_{1-8}), alcoxi (C_{1-4}) o hidroxialquilo (C_{1-4}). Los grupos arilo también se pueden fusionar con un cicloalquilo (C_{3-7}), heterocicloalquilo (C_{3-7}) o un anillo aromático o heteroaromático adicional (por ejemplo para formar un grupo naftil, quinolinil o indolil).

Heteroaril es un anillo aromático de 5- o 6 miembros, en el cual 1, 2 o 3 átomos son heteroátomos independientemente seleccionados de O, N y S. El heteroaril es, por ejemplo, 1-metil-1H-pirrol-2-il o 1H-imidazol-2-il. También se puede fusionar con un cicloalquilo o anillo aromático o heteroaromático adicional (por ejemplo para formar un grupo quinolinil o indolil).

Halógeno indica un flúor, bromo, cloro o yodo.

Cualquier grupo alquilo, alquenilo, alquinilo o alcoxi es lineal o ramificado.

A menos que se defina de otra manera, los grupos que contienen carbono y las moléculas contienen de 1 a 8, preferiblemente 1 a 6, más preferiblemente 1 a 4, átomos de carbono.

En una modalidad preferida, la invención se relaciona con un compuesto de la fórmula I, en su forma de base libre o en su forma de sal de adición de ácido, en la cual R_{1} es un hidrógeno.

En otra modalidad preferida, la invención se relaciona con un compuesto de la fórmula I, en su forma de base libre o en su forma de sal de adición de ácido, en la cual R_{2} es un aril, preferiblemente fenil, más preferiblemente fenil no sustituido.

En otra modalidad preferida, la invención se relaciona con un compuesto de la fórmula I, en su forma de base libre o en su forma de sal de adición de ácido, en la cual R_{3} es -CH(R_{e})C(=O)N(R_{a})R_{b} o -(CH_{2})_{k}N(R_{c})R_{d}, en donde k es 0; R_{a} es un hidrógeno; R_{b} es un alquilo (C_{1-8}) o bicicloaquilo (C_{5-9}) tal como bicicloheptil; R_{c} es un hidrógeno; R_{d} es un arilalquilo (C_{1-4}), opcionalmente sustituido preferiblemente un bencil sustituido en el anillo fenil por un alquilo (C_{1-4}), o es un cicloalquilo (C_{3-7}), opcionalmente sustituido preferiblemente un ciclopropil sustituido por un fenil opcionalmente sustituido por un halógeno, tal como bromo, o es 4-cromanil opcionalmente sustituido, preferiblemente por un halógeno y /o alquilo (C_{1-4}); y R_{e} es un alquilo (C_{1-4}).

En otra modalidad preferida, la invención se relaciona con un compuesto de la fórmula I, en su forma de base libre o en su forma de sal de adición de ácido, en la cual R_{4} es un alquilo (C_{1-8}), o es un alquilo (C_{1-8}) sustituido, preferiblemente mono-sustituido, por un cicloalquilo (C3-7), preferiblemente un ciclopropil, por un halógeno, tal como flúor, por un alcoxi (C_{1-4}), o por un hidroxi, o es un alquenilo (C_{2-8}) opcionalmente sustituido, preferiblemente mono-sustituido, por un hidroxi, o es un alquinilo (C_{2-8}), o es un aril, preferiblemente un fenil, preferiblemente un fenil no sustituido.

En otra modalidad preferida, la invención se relaciona con un compuesto de la fórmula I, en su forma de base libre o en su forma de sal de adición de ácido, en la cual R_{4} es el 2,2,3,3-tetratritiopropil.

En otra modalidad preferida, la invención se relaciona con un compuesto de la fórmula I, en su forma de base libre o en su forma de sal de adición de ácido, en la cual R_{5} es un alquilo (C_{1-8}), preferiblemente un alquilo (C_{1-4}).

En otra modalidad preferida, la invención se relaciona con un compuesto de la fórmula I, en su forma de base libre o en su forma de sal de adición de ácido, en la cual R_{6} es un hidrógeno o halógeno, preferiblemente un hidrógeno o un flúor.

En otra modalidad preferida, la invención se relaciona con un compuesto de la fórmula I, en su forma de base libre o en su forma de sal de adición de ácido, en la cual m es 1.

En otra modalidad preferida, la invención se relaciona con un compuesto de la fórmula I, en su forma de base libre o en su forma de sal de adición de ácido, en la cual p es 1.

\newpage

En otro aspecto, la invención se relaciona con un proceso para la preparación de los compuestos de la fórmula I y sus sales, que comprende las etapas de acilación de un compuesto de la fórmula

2

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en donde R_{1}, R_{2} y R_{3} son como se definen arriba por la fórmula I, con un ácido de la fórmula

3

en donde R_{4}, R_{5}, R_{6}, m y p son como se definen arriba para la fórmula I, o una forma activa, tal como un éster o un halogenuro de ácido, de este y la recuperación del compuesto así obtenido de la fórmula I en su forma de base libre o en su forma de sal de adición de ácido.

La reacción se puede realizar de acuerdo con los métodos convencionales, por ejemplo como se describe en los ejemplos.

Los compuestos de la fórmula I también se pueden producir mediante otros procesos convencionales, por ejemplo como se describe en los ejemplos.

Las materias primas de las fórmulas II y III se conocen o se pueden preparar de acuerdo con procedimientos convencionales a partir de compuestos conocidos, por ejemplo como se describe en los ejemplos.

El tratamiento final de las mezclas de reacción y la purificación de los compuestos así obtenidos se pueden realizar de acuerdo con procedimientos conocidos.

Las sales de adición de ácido, se pueden producir a partir de las bases libres de manera conocida, y viceversa.

Los compuestos de la fórmula I y sus sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables, a partir de ahora se refirieren como agentes de la invención, muestran propiedades farmacológicas valiosas cuando se prueban in vitro y en animales, y por consiguiente son útiles como productos farmacéuticos.

Los agentes de la invención son inhibidores de proteasas aspárticas y se pueden utilizar para el tratamiento de desórdenes que involucran el proceso por tales enzimas. En particular, inhiben la beta-secretasa y como tal, inhiben la generación del beta-amiloide y la posterior agregación en oligómeros y fibrilas.

Además, los agentes de la invención muestran valiosas propiedades, como agentes de marcación histopatológicos, agentes de imágenes y/o biomarcadores, a partir de ahora "marcadores", para la marcación selectiva de BACE (enzima de división de la beta-secretasa).

Más particularmente los agentes de la invención son útiles como marcadores para la marcación de BACE in vitro o in vivo (ver los Ejemplos 9 y 10).

Los agentes de la invención por consiguiente son útiles, por ejemplo, para la determinación de los niveles de ocupación del sitio activo de un fármaco que actúa en la BACE, o para los propósitos de diagnóstico de enfermedades que resultan de una disfunción de los procesos relacionados con BACE, y para monitorear la efectividad de las farmacoterapias de dichas enfermedades.

De acuerdo con lo anterior, la presente invención también proporciona un agente de la invención para utilizar como marcador para neuroimágenes.

En otro aspecto, la presente invención proporciona una composición para la marcación del cerebro y las estructuras periféricas que involucran la BACE in vivo e in vitro que contienen un agente de la invención.

En aún otro aspecto, la presente invención proporciona un método para la marcación del cerebro y las estructuras periféricas que involucran la BACE in vitro o in vivo, que comprende el contacto del cerebro o el tejido periférico con un agente de la invención.

El método de la invención puede comprender, otra etapa dirigida a determinar si el agente de la invención marca la estructura diana. Dicha etapa además, se podría realizar mediante la observación de la estructura diana utilizando autoradiografía, tomografía por emisión de positrones (PET), o cualquier dispositivo que permita la detección de radiaciones radioactivas.

Prueba 1

Inhibición de BACE humana

La BACE recombinante (dominio extracelular, expresado en baculovirus y purificado utilizando métodos estándar) a una concentración 6 nM se incuba con el compuesto de prueba a varias concentraciones por 1 hora a temperatura ambiente en solución reguladora acetato 100 mM, pH 4,5, que contiene 0,1% de CHAPS. El sustrato del péptido sintético Mca-Ser-Glu-Val-Asn-Leu-Asp-Ala-Glu-Phe-Lys(DNP) se adiciona a una concentración final de 3 \muM y el incremento en fluorescencia se registra a una excitación de 325 nm y emisión a 400 nm en un espectro-fluorímetro de microplaca por 20 minutos en intervalos de 1-minuto. Los valores IC_{50} se calculan a partir del porcentaje de inhibición de la actividad de BACE como una función de la concentración del compuesto de prueba.

Prueba 2

Inhibición de BACE-2 humana

La BACE-2 recombinante (dominio extracelular, expresado en baculovirus y purificado utilizando métodos estándar) a concentraciones de 2,5 nM se incuba con el compuesto de prueba a varias concentraciones durante 1 hora a temperatura ambiente en solución reguladora acetato 100 mM, pH 4,5, que contiene 0,1% de CHAPS. El sustrato del péptido sintético Mca-Ser-Glu-Val-Asn-Leu-Asp-Ala-Glu-Phe-Lys(DNP) se adiciona a una concentración final de 3 \muM y el incremento en fluorescencia se registra a una excitación de 325 nm y emisión de 400 nm en un espectro-fluorímetro de microplaca por 20 minutos en intervalos de 1-minuto. Los valores IC_{50} se calculan del porcentaje de inhibición de la actividad de BACE-2 como una función de la concentración del compuesto de prueba.

Prueba 3

Inhibición de Catepsina D humana

Catepsina D recombinante (expresado como procatepsina D en baculovirus, purificada utilizando métodos estándar y activa por incubación en solución reguladora de formato de sodio pH 3,7) se incuba con el compuesto de prueba a varias concentraciones durante 1 hora a temperatura ambiente en solución de formato de sodio reguladora 100 mM, pH 3,1. El sustrato del péptido sintético Mca-Gly-Lys-Pro-Ile-Leu-Phe-Phe-Arg-Leu-Lys(DNP)-D-Arg-NH_{2} se adiciona a una concentración final de 2 \muM y el incremento en fluorescencia se registra a una excitación de 325 nm y emisión de 400 nm en un espectro-fluorímetro de microplaca por 20 minutos en intervalos de 1-minuto. Los valores IC_{50} se calculan a partir del porcentaje de inhibición de la actividad de catepsina D como una función de la concentración del compuesto de prueba.

Prueba 4

Inhibición de la liberación celular del péptido amiloide 1-40

Las células de ovario de hámster Chino se transfectaron con el gen para la proteína precursor amiloide. Las células se colocaron en placas a una densidad de 8.000 células/pozo en una placa de microtitulación de 96-pozos y se cultivaron por 24 horas en medio de cultivo celular DMEM que contiene 10% de FCS. El compuesto de prueba se adiciona a las células a varias concentraciones, y las células se cultivaron durante 24 horas en la presencia del compuesto de prueba. Los sobrenadantes se recolectaron, y la concentración del péptido amiloide 1-40 se determina utilizando ELISA de fase doble. La potencia del compuesto se calcula a partir del porcentaje de inhibición de la liberación del péptido amiloide como una función de la concentración del compuesto de prueba.

En al menos una de las pruebas indicadas arriba, los agentes de la invención mostraron actividad a concentraciones inferiores de 20 \muM.

Los agentes de la invención por consiguiente, son útiles por ejemplo, para el tratamiento y/o prevención de desórdenes neurológicos y vasculares relacionados con la generación y/o agregación del beta-amiloide, tal como enfermedades neurodegenerativas como la enfermedad de Alzheimer, Síndrome de Down, deterioro de la memoria y cognitivo, demencia, neuropatías amiloides, inflamación del cerebro, trauma nervioso o del cerebro, amiloidosis vascular, o hemorragia cerebral con amiloidosis.

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Algunos de los agentes de la invención también inhiben la BACE2 (enzima 2 que inhibe la APP sitio-beta) o Catepsina D, homólogos cercanos de las aspartil proteasas tipo pepsina. Debido a la correlación de expresión de BACE2 y CatD con un potencial más tumorigénico y metástatico de células tumorales, tales inhibidores son útiles para la supresión del proceso de metástasis asociado con las células tumorales.

Para las indicaciones mencionadas arriba, la dosificación apropiada, por supuesto variará dependiendo de, por ejemplo, el compuesto empleado, el huésped, el modo de administración y la naturaleza y severidad de la condición que se esté tratando. Sin embargo, en general, se señala que se obtuvieron resultados satisfactorios en animales en una dosificación diaria cerca de 0,1 a aproximadamente 100, preferiblemente cerca de 1 a aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal del animal. En los mamíferos grandes, por ejemplo humanos, una dosificación diaria indicada es en el rango cerca de 10 a aproximadamente 2.000, preferiblemente cerca de 10 a aproximadamente 200 mg de un agente de la invención convenientemente administrada, por ejemplo, en dosis divididas hasta cuatro veces por día o en forma de liberación controlada.

El agente de la invención se puede administrar por cualquier ruta convencional, en particular vía entérica, preferiblemente vía oral, por ejemplo en la forma de tabletas o cápsulas, o vía parenteral, por ejemplo en la forma de soluciones o suspensiones inyectables.

De acuerdo con lo precedente, la presente invención también proporciona un agente de la invención, para utilizar como un producto farmacéutico, por ejemplo para el tratamiento de desórdenes neurológicos o vasculares relacionados con la generación y/o agregación del beta-amiloide.

La presente invención adicionalmente proporciona una composición farmacéutica que comprende un agente de la invención en asociación con al menos un vehículo o diluente farmacéutico. Dichas composiciones se pueden fabricar de manera convencional. Las formas de dosificación por unidad contienen, por ejemplo, cerca de 1 a aproximadamente 1.000, preferiblemente cerca de 1 a aproximadamente 500 mg de un agente de la invención.

Los agentes de la invención se pueden administrar solos o en combinación con otros agentes farmacéuticos efectivos en el tratamiento de las condiciones mencionadas arriba.

La combinación farmacéutica puede ser en la forma de una forma de dosificación por unidad, por lo cual cada dosificación por unidad comprenderá una cantidad predeterminada de los dos componentes, en mezcla con vehículos o diluentes farmacéutico apropiados. Como alternativa, la combinación puede ser en forma de un paquete que contiene los dos componentes individualmente, por ejemplo un paquete o dispositivo dispensador adaptado para la administración simultánea o separada de los dos agentes activos, en donde estos agentes se arreglan individualmente.

Además, la presente invención proporciona el uso de un agente de la invención, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cualquiera de los desórdenes neurológicos o vasculares relacionados con la generación y/o agregación del beta-amiloide.

En aún otro aspecto, la presente invención proporciona un método para el tratamiento de cualquiera de los desórdenes neurológicos o vasculares relacionados con la generación y/o agregación del beta-amiloide, en un sujeto con la necesidad de dicho tratamiento, que comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad efectiva terapéuticamente de un agente de la invención.

Los siguientes Ejemplos ilustran la invención.

Abreviaturas

BOC ter-butoxicarbonil

BOP benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)fosfonio hexafluorofosfato

DAST trifluoruro de (Dietilamino)azufre

DCM diclorometano

DMF N,N-dimetilformamida

DMPU N, N'-dimetilpropilenourea

EDC.HCl 1-etil-3-[3-(dimetilamino)propil]-carbodiimida clorhidrato

EtOAc acetato de etilo

h horas

HCl ácido clorhídrico

HOBt hidroxibenzotriazol

HPLC cromatografía líquida de alta resolución

LAH hidruro de aluminio de litio

min minutos

Mp punto de fusión

MS espectroscopia de masas

Rf factor de retención (TLC)

rt temperatura ambiente

TBAF fluoruro de tetrabutilamonio

TBME ter-butil metil éter

TBTU O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio-tetrafluoroborato

TFA ácido trifluoroacético

THF tetrahidrofurano

TLC cromatografía de capa fina.

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Ejemplo 1

Ácido 4-(S)-hidroxi-5-(S)-[2-(S)-(1-isobutil-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(S)-(4.4]non-7-il)-propionilamino]-2-(R)-metil-6-fenil-hexanoico butilamida

113 mg (0,4 mmol) del ácido 2-(S)-(1-isobutil-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(S)-[4.4]non-7-il)-propiónico metil éster se disolvieron en 18 ml de THF y se trataron con 2 mL de una solución acuosa de LiOH 0,5 N y se agita a temperatura ambiente durante cuatro horas. La mezcla de reacción se enfría a 5ºC y se trata con una solución acuosa de HCl 1N hasta que se alcanza un pH de 4. La solución se somete a dos evaporaciones azeotrópicas consecutivas con 80 mL de tolueno y el residuo se seca bajo alto vacío, entonces se lleva en 20 mL de diclorometano y se agita a temperatura ambiente por veinte horas con 117 mg (0,4 mmol) del ácido 5-(S)-amino-4-(S)-hidroxi-2-(R)-metil-6-fenil-hexanoico butilamida, 85 mg (0,44 mmol) EDC.HCl, 54 mg (0,4 mmol) de HOBt y 0,17 mL de trietilamina (1,2 mmol). La mezcla de reacción se apaga con 10 mL de solución saturada acuosa de bicarbonato de sodio congelada, entonces se extrae dos veces con diclorometano. Las fases orgánicas combinadas se evaporaron y el residuo se somete a cromatografía de columna (silica gel, TBME/EtOAc/EtOH 49:59:2) para producir después de la evaporación de las fracciones puras del producto deseado como una resina incolora.

MS(EI+): 453 (M+1)

Las materias primas se pueden preparar como se describe a continuación:

a) ácido 2-(S)-(1-isobutil-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(S)-[4.4]non-7-il)-propiónico metil éster

260 mg (0,8 mmol) del ácido 7-(1-Metoxicarbonil-(S)-etil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(S)-[4,4]nonano-1-carboxílico ter-butil éster se agita en 3 mL de una solución 4N de HCl en dioxano por tres horas a temperatura ambiente, entonces se evapora. El residuo se lleva en tolueno y se evapora a sequedad (dos veces), entonces se lleva en 6 mL de metanol, se trata con 0,145 mL (1,6 mmol) de isobutiraldehído, 300 mg de cianoborohidruro de sodio molido a un tamiz molecular de 3\ring{A}' y 100 mg (1,6 mmol) y se agita durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se trata con 4 mL de solución saturada acuosa de cloruro de amonio y después de 10 minutos con 8 mL de solución saturada acuosa de bicarbonato de sodio, entonces se extrae con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se evaporaron y el residuo se somete a cromatografía (silica gel, EtOAc) para producir después de la evaporación de las fracciones correspondientes, el producto deseado como un aceite incoloro.

MS (ES+): 283 (M+1)

b) Ácido 7-(1-Metoxicarbonil-(S)-etil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)-[4,4]nonano-1-carboxílico ter-butil éster y ácido 7-(1-Metoxicarbonil-(S)-etil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(S)-[4,4]nonano-1-carboxílico ter-butil éster

4,3 g (12 mmol) del ácido 2-[2-(1-Metoxicarbonil-etilamino)-(S)-etil]-pirrolidina-1,2-dicarboxílico 1-ter-butil éster 2-metil éster se disolvieron en 60 mL de xileno y se calienta a 150ºC por dos horas. La mezcla de reacción se evapora y el residuo se somete a cromatografía (silica gel, EtOAc/éter de petróleo 3:2) para producir 1,85 g (46%) del carboxílico 7-(1-Metoxicarbonil-(S)-etil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)-[4,4]nonano-1-ácido ter-butil éster y el ácido 1,8 g (45%) 7-(1-Metoxicarbonil-(S)-etil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(S)-[4,4]nonano-1-carboxílico ter-butil éster. La estereoquímica absoluta se confirma por rayos -X de una muestra recristalizada en diisopropileter.

c) Ácido 2-[2-(1-Metoxicarbonil-(S)-etilamino)-etil]-pirrolidina-1,2-dicarboxílico 1-ter-butil éster 2-metil éster

271 mg (1 mmol) del ácido 2-(2-oxo-etil)-pirrolidina-1,2-dicarboxílico 1-ter-butil éster 2-metil éster y 154 mg (1.1 mmol) L-alanina metil éster clorhidrato se suspendieron en 10 mL de tolueno y se trataron con 0,073 mL (1 eq.) de trietilamina. La mezcla de reacción se agita 10 minutos a temperatura ambiente y se evapora lentamente en un rotavapor. El residuo se lleva en 15 mL de acetonitrilo y 95 mg (1,5 mmol) de cianoborohidruro de sodio en 2 mL de metanol, adicionado gota a gota. Una vez terminada la reacción (TLC, EtOAc/éter de petróleo 4:1), la mezcla de reacción se evapora y el residuo se lleva en acetato de etilo y se trata con una solución congelada, saturada acuosa de cloruro de amonio, entonces se extrae con acetato de etilo y bicarbonato de sodio saturado acuoso. Las fases orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio, se filtra y evapora para producir el producto crudo deseado como un aceite espeso.

MS(EI+): 359 (M+1)

Rf(EtOAc): 0,22.

d) ácido 5-(S)-amino-4-(S)-hidroxi-2-(R)-metil-6-fenil-hexanoico butilamida

32 mg (0,1 mmol) del ácido [1-(4-(R)-metil-5-oxo-tetrahidro-furan-2-(S)-il)-2-(S)-fenil-etil]-carbámico ter-butil éster se agitan a temperatura ambiente por dos horas en 1 mL de una solución 4N de HCl en dioxano. La mezcla de reacción se evapora a sequedad, el residuo se lleva en tolueno y se evapora a sequedad dos veces antes del secado bajo alto vacío. El residuo se lleva en 1 mL (exceso) de butilamina y se agita a 25ºC durante la noche, entonces se evapora y el residuo se extrae dos veces con acetato de etilo y bicarbonato de sodio saturado. Las fases orgánicas combinadas se evaporaron, el producto crudo deseado obtenido cuantitativamente como una resina incolora y se utiliza sin otra purificación.

MS(EI+): 293 (M+1).

Los siguientes compuestos se pueden obtener por un procedimiento similar:

Ejemplo 1a

Ácido 5-(S)-[2-(S)-(1-ciclopropilmetil-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(S)-[4.4]non-7-il) propionilamino]-4-(S)-hidroxi-2-(R)-metil-6-fenil-hexanoico butilamida

MS(EI+): 541 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 1b

Ácido 5-(S)-[2-(S)-(1-propil-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(S)-[4.4]non-7-il)-propionilamino]-4-(S)-hidroxi-2-(R)metil-6-fenil-hexanoico butilamida

MS(EI+); 529 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 1c

Ácido 5-(S)-[2-(S)-(1-fenil-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(S)-[4.4]non-7-il)-propionilamino]-4-(S)-hidroxi-2-(R)-metil-6-fenil-hexanoico butilamida

MS(EI+): 591 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 1d

Ácido 5-(S)-[2-(S)-(1-fenil-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)-[4.4]non-7-il)-propionilamino]-4-(S)-hidroxi-2-(R)-metil-6-fenil-hexanoico butilamida

MS(EI+): 591 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 1e

Ácido 4-(S)-hidroxi-2-(R)-metil-5-(S)-[2-(S)-(6-oxo-1-propil-1,7-diaza-espiro-(S)-[4.4]non-7-il)-propionilamino]-6-fenil-hexanoico (2,2-dimetil-propil)-amida

MS(EI+): 543 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 1f

Ácido 5-(S)-[2-(S)-(1-ciclopropilmetil-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(S)-[4.4]non-7-il)-propionilamino]-4-(S)-hidroxi-2-(R)-metil-6-fenil-hexanoico biciclo[2.2.1] hept-exo-2-(R,S)-ilamida

MS(EI+): 579 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 1g

Ácido 5-(S)-{2-(S)-[1-(2,2-dimetil-propil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(S)-[4.4]non-7-il]-propionilamino}-4-(S)-hidroxi-2-(R)-metil-6-fenil-hexanoico butilamida

MS(EI+): 557 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 1h

Ácido 4-(S)-hidroxi-5-(S)-{2-(S)-[1-(3-metoxi-propil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(S)-[4,4]non-7-il]-propionilamino}-2-(R)-metil-6-fenil-hexanoico butilamida

MS(EI+): 559 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 1i

Ácido 5-(S)-[2-(S)-(1-ciclopropilmetil-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)-[4.4]non-7-il)-propionilamino]-4-(S)-hidroxi-2-(R)-metil-6-fenil-hexanoico biciclo [2.2.1] hept-exo-2-(R,S)-ilamida

MS(EI+): 579 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 1j

Ácido 4-(S)-hidroxi-5-(S)-(2-(S)-[1-(3-metoxi-propil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)-[4.4]non-7-il]-propionilamino}-2-(R)-metil-6-fenil-hexanoico butilamida

MS(EI+): 559 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 1k

Ácido 5-(S)-[2-(S)-(1-propil-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)-[4.4]non-7-il)-propionilamino]-4-(S)-hidroxi-2-(R)-me- til-6-fenil-hexanoico butilamida

MS(EI+): 529 (M+1).

\newpage

Ejemplo 1l

Ácido 4-(S)-hidroxi-5-(S)-[2-(S)-(1-(2-fluoroetil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(S)-[4.4]non-7-il)-propionilamino]-2- (R)-metil-6-fenil-hexanoico butilamida

MS(EI+): 533 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 2

Ácido 5-(S)-[2-(S)-(1-alil-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)-[4.4]non-7-il)-propionilamino]-4-(S)-hidroxi-2-(R)-metil-6-fenil-hexanoico butilamida

52 mg (0,1 mmol) del ácido 4-(S)-hidroxi-2-(R)-metil-5-(S)-[2-(S)-(6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)-[4.4]non-7-il)-propionilamino]-6-fenil-hexanoico butil amida clorhidrato, 28 mg de carbonato de potasio y 0,01 mL de alil bromuro se agitan a temperatura ambiente por 65 horas en 3 mL de DMF, entonces se extrae con EtOAc y salmuera (dos veces). Las fases orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio, se evapora y se somete a cromatografía para producir el producto deseado como una resina ligeramente coloreada.

MS(EI+): 527 (M+1).

Las materias primas se pueden preparar como se describe a continuación:

a) ácido 4-(S)-hidroxi-2-(R)-metil-5-(S)-[2-(S)-(6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)-[4.4]non-7-il)-propionilamino]-6-fenil-hexanoico butil amida clorhidrato

170 mg (0,33 mmol) del ácido 7-{1-(S)-[1-(S)-(4-(R)-metil-5-oxo-tetrahidro-furan-2-(S)-il)-2-fenil-etilcarbamoil]-etil}-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)-[4.4]nonano-1-carboxílico ter-butil éster se disolvieron en 1,5 mL (exceso) de butilamina y se calienta a 65ºC bajo argón por dos horas. La mezcla de reacción se evapora, el residuo se lleva en tolueno y se evapora a sequedad, se vuelve a disolver en 5 mL de isopropanol, se trata con 1 mL de una solución 6N de HCI en isopropanol y se agita a temperatura ambiente por cuatro horas, luego se evapora, se lleva en tolueno y se evapora nuevamente para producir el producto deseado, el cual se utiliza sin otra purificación.

MS (EI+): 487 (M+1).

b) ácido 7-{1-(S)-[1-(S)-(4-(R)-metil-5-oxo-tetrahidro-furan-2-(S)-il)-2-fenil-etilcarbamoil]-etil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)-[4.4]nonano-l-carboxílico ter-butil éster y ácido 7-{1-(S)-[1-(R)-(4-(S)-metil-5-oxo-tetrahidro-furan-2-(R)-il)-2-fenil-etilcarbamoil]-etil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)-[4.4]nonano-l-carboxílico ter-butil éster

326 mg (1 mmol) del ácido 7-(1-(S)-Metoxicarbonil-etil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)-[4,4]nonano-1-carboxílico ter-butil éster se disolvieron en 15 mL de THF, se enfriaron a 10ºC y se trataron con 7 mL (1,05 eq) de una solución 0,15 N de THF en LiOH. Después de dos horas de agitación a temperatura ambiente, una solución acuosa 1 N de HCl se adiciona hasta que se alcanza un pH de 4, y la mezcla de reacción se evapora. El residuo se lleva en tolueno, se evapora a sequedad y se seca bajo alto vacío, entonces se lleva en 20 mL de diclorometano y se agita durante 18 horas después de la adición de 230 mg de 5-(1-amino-2-fenil-etil)-3-metil-dihidro-furan-2-ona racémico, 135 mg de HOBt (1 mmol), 208 mg de EDC.HCl (1,1 mmol) y 0,031 mL de trietilamina (2,25 mmol). La mezcla de reacción se extrae con EtOAc y bicarbonato de sodio saturado acuoso, las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se evaporaron y se sometieron a cromatografía (silica gel, EtOAc/diisopropileter 4:1) para producir el ácido 7-{1-(S)-[1-(S)-(4-(R)-metil-5-oxo-tetrahidro-furan-2-(S)-il)-2-fenil-etilcarbamoil]-etil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)[4.4]nonano-1-carboxílico ter-butil éster y el ácido 7-{1-(S)-[1-(R)-(4-(S)-metil- 5-oxo-tetrahidro-furan-2-(R)-il)-2-fenil-etilcarbamoil]-etil}-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)-[4.4]nonano-1-carboxílico ter-butil éster como sólidos de color blanco en producciones respectivamente 33 y 30%. La estereoquímica absoluta se confirma por comparación con material puro ópticamente fabricado a partir del 5-(S)-(1-(S)-amino-2-fenil-etil)-3-(R)-metil-dihidro-furan-2-ona.

MS(EI+): 514 (M+1).

Los siguientes compuestos se pueden obtener mediante un procedimiento similar:

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Ejemplo 2a

Ácido 5-(R)-[2-(S)-(1-alil-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)-[4.4]non-7-il)-propionilamino]-4-(R)-hidroxi-2-(S)-metil-6-fenil-hexanoico butilamida

MS(EI+): 527 (M+1).

\newpage

Ejemplo 2b

Ácido 5-(R)-[2-(S)-(1-alil-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(S)-[4.4]non-7-il)-propionilamino]-4-(R)-hidroxi-2-(S)-metil-6-fenil-hexanoico butilamida

MS(EI+): 527 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 2c

Ácido 5-(S)-[2-(S)-(1-alil-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(S)-[4.4]non-7-il)-propionilamino]-4-(S)-hidroxi-2-(R)-metil-6-fenil-hexanoico butilamida

MS(EI+): 527 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 3

Ácido 4-(S)-hidroxi-5-(S)-{2-(S)-[1-(4-hidroxi-butil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)-[4.4]non-7-il]-propionilamino}-2- (R)-metil-6-fenil-hexanoico butilamida

30 mg (0,06 mmol) del ácido 4-{7-{1-(S)-[1-(S)-{4-{R)-metil-5-oxo-tetrahidro-furan-2-(S)-il)-2-fenil-etilcarbamoil]-etil}-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)-[4.4]non-1-il)-butírico metil éster se agitan durante la noche a temperatura ambiente en 1 mL de butilamina. La mezcla de reacción se evapora a sequedad, se lleva en tolueno y se evapora nuevamente, y el residuo se disuelve en THF, se enfría a 5ºC y se trata con 3 mg (2 eq.) de borohidruro de litio. Después de la agitación por dos horas a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se enfría por debajo de 10ºC, se apaga con 2 mL de cloruro de amonio saturado acuoso y 2 mL de bicarbonato de sodio saturado acuoso y se agita por otros 10 minutos antes de la extracción con EtOAc (dos veces). Las fases orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio, se evapora, y el residuo se somete a cromatografía (silica gel, DCM/EtOH/amoníaco 90:10:0.05) para producir el producto deseado como una resina ligeramente coloreada.

MS(EI+): 559 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

Las materias primas se pueden preparar como se describe a continuación:

a) ácido 4-{7-{1-(S)-[1-(S)-(4-(R)-metil-5-oxo-tetrahidro-furan-2-(S)-il)-2-fenil-etilcarbamoil]-etil}-6-oxo-1,7- diaza-espiro-(R)-[4.4]non-1-il)-butírico metil éster

30 mg (0.06 mmol) del ácido 4-(7-{1-(S)-[1-(S)-(4-(R)-metil)-5-oxo-tetrahidro-furan-2-(S)-il)-2-fenil-etilcarbamoil]-etil}-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)-[4,4]non-1-il)-but-2-enoico metil éster se agitan en THF bajo hidrógeno por dos horas en la presencia de una cantidad catalítica del 10% de Pd/C, entonces se filtra a través de celite y se evapora para producir 30 mg del producto deseado, que se utiliza sin otra purificación.

MS(EI+): 514 (M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

b) Ácido 4-(7-{1-(S)-[1-(S)-(4-(R)-metil-5-oxo-tetrahidro-furan-2-(S)-il)-2-fenil-etilcarbamoil]-etil}-6-oxo-1,7- diaza-espiro-(R)-[4.4]non-1-il)-but-2-enoico metil éster

130 mg (0.25 mmol) del ácido 7-{1-(S)-[1-(S)-(4-(R)-metil-5-oxo-tetrahidro-furan-2-(S)-il)-2-fenil-etilcarbamoil]-etil}-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(R)-[4.4]nonano-1-carboxílico ter-butil éster se disolvieron en 2 mL de HCl 4N en dioxano. La mezcla de reacción se evapora después de 90 minutos, se lleva en tolueno y se evapora a sequedad. El residuo se lleva en diclorometano y se agita a temperatura ambiente durante 18 horas en la presencia de 92 mg (1 eq.) de yoduro de tetrabutilamonio, 0,03 mL del ácido trans-4-bromobut-2-enoico metil éster y 0,09 mL (2 eq.) de diisopropiletilamina. La mezcla de reacción se extrae con diclorometano y bicarbonato acuoso (dos veces), las fases orgánicas combinadas se evaporan y el residuo se somete a cromatografía (silica gel, EtOAc) para producir el producto deseado como una resina ligeramente pardusca.

MS(EI+): 512 (M+1).

Los siguientes compuestos se pueden obtener por un procedimiento similar:

\newpage

Ejemplo 3a

Ácido 4-(S)-hidroxi-5-(S)-{2-(S)-[1-(4-hidroxi-butil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(S)-[4.4]non-7-il]-propionilamino}-2-(R)-metil-6-fenil-hexanoico butilamida

MS(EI+): 559 (M+1).

Ejemplo 4

Ácido 4-hidroxi-5-{2-[1-(4-hidroxi-but-2-enil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro[4.4]non-7-il]-propionilamino}-2-metil-6-fenil-hexanoico butilamida

MS(EI+): 557 (M+1) se obtiene de una manera similar al ejemplo 1, pero utilizando el ácido 2-[1-(4-hidroxi-but-2-enil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro[4.4]non-7-il]-propiónico metil éster en la etapa 1a.

La materia prima se puede preparar como se describe a continuación:

Ácido 2-[1-(4-hidroxi-but-2-enil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro[4.4]non-7-il]-propiónico metil éster

82 mg (0,25 mmol) del ácido (S,S)-7-(1-Metoxicarbonil-etil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro[4,4]nonano-1-carboxílico terbutil éster, se agitan a temperatura ambiente por tres horas en 1 mL de una solución 4N de HCI en dioxano, se evapora, entonces se lleva en tolueno y se evapora nuevamente (dos veces). El residuo se lleva en 2 mL de diclorometano y se agita a temperatura ambiente por 65 horas en la presencia de 74 mg (0,2 mmol) de yoduro de tetrabutilamonio, 0,035 mL (0,2 mmol) de diisopropiletilamina y 30 mg (0,2 mmol) de 4-bromo-but-2-en-1-ol. La mezcla de reacción se extrae con EtOAc y bicarbonato de sodio saturado acuoso, las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se evaporaron a sequedad y el residuo se somete a cromatografía (silica gel, EtOAc/EtOH 9:1) para producir el producto deseado como un líquido denso.

MS(EI+): 297 (M+1).

Ejemplo 5

Ácido 5-(S)-[2-(S)-(3-(S)-fluoro-6-oxo-1-propil-1,7-diaza-espiro-(S)-[4.4]non-7-il)-propionilamino]-4-(S)-hidroxi-2-(R)-metil-6-fenil-hexanoico butilamida

Este compuesto se puede sintetizar como se describe en el Ejemplo 1, a partir del ácido (1R, 4S)-4-fluoro-2-(2-oxoetil)-pirrolidina-1,2-dicarboxílico 1-ter-butil éster 2-metil éster en lugar del ácido 2-(2-oxo-etilpirrolidina-1,2-dicarboxílico 1-ter-butil éster 2-metil éster.

MS(EI+): 547 (M+1).

Las materias primas se pueden hacer como sigue:

a) ácido (2R, 4S)-4-fluoro-2-(2-oxo-etil)-pirrolidina-1,2-dicarboxílico 1-ter-butil éster 2-metil éster

1 g (3,5 mmol) del ácido (2R,4S)-2-alil-4-fluoro-pirrolidina-1,2-dicarboxílico 1-ter-butil éster 2-metil éster se disuelve en 60 mL de diclorometano/metanol 1:1, se enfrío a -78ºC, se purga con oxígeno por dos minutos, luego se trata con un flujo de ozono hasta que la solución se torna ligeramente azul. La solución se deja calentar hasta temperatura ambiente después de la adición de 1 g (1,1 eq.) de trifenilfosfina, se agita 5 h adicionales y se somete a cromatografía (silica gel, TBME/éter de petróleo 3:2) para producir 870 mg del producto deseado como un aceite claro.

MS (EI+): 290 (M+1).

b) ácido (2R,4S)-2-alil-4-fluoro-pirrolidina-1,2-dicarboxílico 1-ter-butil éster 2-metil éster

0,39 mL de DAST (1,2 eq) se disolvieron en 30 mL de diclorometano, se enfriaron a -78ºC y se trataron durante 10 min. con la adición gota a gota de 10 mL de diclorometano que contiene 1,8 g (6,3 mmol) del ácido (2R,4R)-2-alil-4-hidroxi-pirrolidina-1,2-dicarboxílico 1-ter-butil éster 2-metil éster. La solución se deja llegar a la temperatura ambiente bajo de agitación, durante 2 h. Después de enfriar por debajo de 5ºC la mezcla de reacción se trata con una solución congelada saturada acuosa de carbonato de sodio y se extrae con diclorometano. Los extractos combinados se lavaron con salmuera y se secaron sobre sulfato de sodio, se evaporaron y el residuo se somete a cromatografía (silica gel, TBME/éter de petróleo 1:1) para producir 1 g del producto deseado como un aceite denso incoloro.

MS(EI+): 288 (M+1).

c) Ácido (2R,4R)-2-alil-4-hidroxi-pirrolidina-1,2-dicarboxílico 1-ter-butil éster 2-metil éster

3,3 g (8,27 mmol) del ácido (2R,4R)-(2-alil-4-(ter-butil-dimetil-silaniloxi)-pirrolidina-1,2-dicarboxílico 1-ter-butil éster 2-metil éster se disolvieron en 60 mL de THF, se enfriaron por debajo de 5ºC y se trataron con 8,68 mL (1,05 eq) de TBAF 1M en THF bajo agitación. La mezcla de reacción se deja alcanzar lentamente la temperatura ambiente, mientras que se agita otras 4 h. se adicionan hielo y AcOEt, la mezcla se lava con salmuera dos veces, y la fase orgánica se evapora para producir un producto crudo que se somete a cromatografía de columna (silica gel, TBME/éter de petróleo 1: 1) para producir 1,8 g del producto deseado como un aceite denso, incoloro, el cual se utiliza como tal, en la siguiente etapa.

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Ejemplo 6

(S)-N-[(1S,2R)-1-bencil-2-hidroxi-3-(3-isopropil-bencilamino)-propil]-2-((S)-6-oxo-1-propil-1,7-diaza-espiro [4,4]non-7-il)-propionamida

Una solución de 100 mg del (2R,3S)-3-amino-1-(3-isopropil)-bencilamino)-4-fenil-butan-2-ol diclorhidrato, 79 mg ácido (S)-2-((S)-6-oxo-1-propil-1,7-diaza-espiro[4,4]non-7-il)-propiónico, 102 mg de TBTU y 0,171 mL de N-metil morfolina en 5 mL de CH_{2}Cl_{2} se agita por 5 h a temperatura ambiente. La solución se diluye con DCM y posteriormente se lavaron con bicarbonato, salmuera, HCl 0,1N y bicarbonato. Después del secado con MgSO_{4} todos los volátiles se evaporaron con vacío y el producto se purifica por cromatografía de columna (silica gel, DCM/MeOH 95:5) para dar 53 mg (37%) del producto deseado.

MS-ESI+: 549 [M+]

Rf: 0,28 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH = 9/1).

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La materia prima se puede preparar como se describe a continuación:

a) (2R,3S)-3-amino-1-(3-isopropil-bencilamino)-4-fenil-butan-2-ol diclorhidrato

Una solución de 700 mg (2,7 mmol) del ter-butil(S-(R,R)(-)-(1-oxiranil-2-feniletil)-carbamato y 470 mg (3,3 mmol) del 3-iso-propilbencilamina en 10 ml de EtOH se calienta durante 15 h a 50ºC. La evaporación del solvente y la purificación por cromatografía de columna (silica gel, DCM/MeOH 9:1) suministró 820 mg del ácido [(1S,2R)-1-bencil-2-hidroxi-3-(3-iso-propilbencilamino)-propil]-carbámico ter-butil éster como un sólido incoloro. Este material se disuelve en 10 ml de HCl 4N en dioxano, se agita durante 2 h a temperatura ambiente y todos los volátiles se retiraron con vacío para dar 643 mg del compuesto deseado.

Los siguientes compuestos se pueden obtener mediante un procedimiento similar:

Ejemplo 6a

(S)-N-[(1S,2R)-1-bencil-3-(6-bromo-2,2-dimetil-croman-4-ilamino)-2-hidroxi-propil]-2-((S)-1-ciclopropilmetil-6-oxo-1,7-diaza-espiro[4,4]non-7-il)-propionamida

MS(EI+): 667, 669 (M+1).

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Ejemplo 6b

(S)-N-[(1S, 2R)-1-bencil-2-hidroxi-3-(3-isopropil-bencilamino)-propil]-2-((S)-1-ciclopropilmetil-3-(S)-fluoro-6- oxo-1,7-diaza-espiro-[4.4]non-7-il)-propionamida

MS(EI+): 579 (M+1).

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Ejemplo 6c

(S)-N-[(1S, 2R)-1-bencil-2-hidroxi-3-(3-isopropil-bencilamino)-propil]-2-((S)-1-propil-3-(S)-fluoro-6-oxo-1,7-diaza-espiro-[4.4]non-7-il)-propionamida

MS(EI+): 567 (M+1).

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Ejemplo 6d

(S)-N-{(1S,2R)-1-bencil-3-[1-(3-bromo-fenil)-ciclopropilamino]-2-hidroxi-propil}-2-((S)-1-ciclopropilmetil-3-(S)-fluoro-6-oxo-1,7-diaza-espiro[4.4]non-7-il)-propionamida

MS(EI+): 641, 643 (M+1).

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Ejemplo 6e

(S)-N-[(1S,2R)-1-bencil-2-hidroxi-3-(3-isopropil-bencilamino)-propil]-2-[(S)-1-(2-fluoro-etil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro[4.4]non-7-il]-propionamida

MS(EI+): 553 (M+1).

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Ejemplo 6f

(S)-N-[(1S,2R)-1-bencil-2-hidroxi-3-(3-isopropil-bencilamino)-propil]-2-((S)-1-ciclopropilmetil-6-oxo-1,7-diaza-espiro[4.4]non-7-il)-propionamida

MS(EI+): 561 (M+1).

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Ejemplo 7

(S)-N-[(1S,2R)-1-bencil-2-hidroxi-3-(3-isopropil-bencilamino)-propil]-2-((S)-6-oxo-1-prop-2-inil-1,7-diaza-es- piro-(S)-[4.4]non-7-il)-propionamida

Este compuesto se puede preparar como el compuesto del Ejemplo 6, pero a partir del ácido 2-(6-oxo-1-prop-2-inil-1,7-diaza-espiro-(S)-[4.4]non-7-il propiónico metil éster en lugar del ácido 2-(S)-(1-isobutil-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(S)-[4.4]non-7-il)-propiónico metil éster.

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La materia prima se puede preparar como sigue:

7a) ácido 2-(S)-(6-oxo-1-prop-2-inil-1,7-diaza-espiro-(S)-[4.4]non-7-il)-propiónico metil éster

163 mg (0,5 mmol) del ácido 7-(1-Metoxicarbonil-(S)-etil)-6-oxo-1,7-diaza-espiro-(S)-[4.4]nonano-1-carboxílico ter-butil éster se disolvieron en 1.5 mL de HCl 4N en dioxano y se agita por 3 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se evapora, el residuo se lleva en 15 mL de etanol/tolueno 1:2 y se evapora (dos veces), para producir el ácido 2-(S)-(6-oxo-1,7-diazaspiro-(S)-[4.4]non-7-il)-propiónico metil éster clorhidrato, el cual se disuelve en 10 mL de DMF, se trata con 815 mg (5 eq.) de carbonato de cesio y 0.048 mL (1,25 eq) de prop-2-inil bromuro. La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 18 h, luego se extrae (AcOEt/agua), se lava con salmuera y la fracciones orgánicas combinadas se evaporaron. El residuo se somete a cromatografía de columna (silica gel, TBME) para producir 78 mg del producto deseado.

MS(EI+): 265 (M+1).

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Ejemplo 8

(S)-N ((1S,2R)-1-bencil-2-hidroxi-3-(3-isopropilbencilamino)propil)-2-((S)-6-oxo-1-(2,2,3,3-tetratritiopropil)-1,7-diaza-espiro[4,4]non-7-il)-propionamida

(S)-N-[(1 S,2R)-1-bencil-2-hidroxi-3-(3-isopropil-bencilamino)-propil]-2-((S)-6-oxo-1-prop-2-inil-1,7-diaza-
espiro-(S)-[4,4]non-7-il)-propionamida se redujo bajo 0,9 atmósferas de gas de titrio sobre 10% de Pd/C durante 2 h. El compuesto deseado se obtuvo después de la purificación por HPLC de la mezcla de reacción (columna: Nucleosil 100-5 C18 HD, 5 \mum, 250 x 4,9 mm; eluente: H_{2}O/MeCN y 0,1% de ácido trifluoroacético; gradiente: 9:1 a 1:1 durante 20 minutos) y la formulación en etanol a una concentración final de 9,9 microgramos/mL (actividad específica 68,6 MBq/mL).

HPLC: RT = 12.87 min

ME (ES+): 557 (M+1).

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Ejemplo 9

Autoradiografía in vitro

El tejido de interés se corta en cortes de 10 micrómetros de grueso para la autoradiografía receptor con un micrótomo criostato y se monto descongelado sobre laminillas de microscopio cubiertas con silano (Vectabond). Las secciones se secan al aire. La preincubación se hace en solución reguladora (Tris 50 mM pH 7,4; 2 mM de EGTA, MgCl_{2} 5 mM, bacitracina 0,1 mM, 0,2% de albúmina de suero de bovino) se realiza durante 10 min a temperatura ambiente. El enlace del ligando se hace durante 1 hora a temperatura ambiente en solución reguladora suplementada con el compuesto tritiado 10 nM (actividad específica 3,8 TBq/mmol). El enlace no-específico se determina en la presencia del compuesto frío 10 microM. Tres lavados consecutivos en solución reguladora y agua destilada se dejan secando al ambiente y la autoradiografía (exposición a una película Biomax MR (Eastman Kodak Company) por 4 semanas).

Ejemplo 10

Autoradiografía ex vivo

El compuesto tritiado se administra por ejemplo i.v. con una formulación apropiada, al animal sacrificado en el momento del punto de observación deseado, y el tejido de interés se analiza por ejemplo como se describe en el Ejemplo 9.

Claims

1. Un compuesto de la fórmula

4

en donde

R_{1} es un hidrógeno o alquilo (C_{1-4}),

R_{3} es -CH(R_{e})C(=O)N(R_{a})R_{b} o -(CH_{2})kN(R_{c})R_{d}, en donde

k es 0, 1 o 2,

R_{a}, R_{b}, R_{c} y R_{d}, independientemente, son hidrógeno o un grupo alquilo (C_{1-8}), bicicloaquilo (C_{5-9}), cicloalquilo (C_{3-7}), cicloalquilo (C_{3-7})alquilo (C_{1-4}), aril, arilalquilo (C_{1-4}), heteroaril, heteroarilalquilo (C_{1-4}), 4-cromanil, 1,2,3,4-tetrahidro-quino-4-il, 1,2,3,4-tetrahidro-naft-1-il, tiocroman-4-il-1,1-dioxido, 4-isocromanil, 1,2,3,4-tetrahidro-isoquinol-4-il, tioisochroman-4-il-1,1-dioxido, 1,1-dioxo-1,2,3,4-tetrahidro-1lambda*6*-benzo[e][1,2]tiazin-4-il, 1,1-dioxo-3,4-dihidro-1H- 1lambda"'6"-benzo[c][1,2]oxatiin-4-il, 2,2-dioxo-1,2,3,4-tetrahidro-2lambda*6*-benzo[c][1,2]tiazin-4-il o 2,2-dioxo-3,4-dihidro-2H-2lambda*6*-benzo[e][1,2]oxatiin-4-il opcionalmente sustituido o

R_{a} y R_{b}, o R_{c} y R_{d}, juntos con el átomo de nitrógeno al cual ellos están unidos, forman un grupo pirrolidil, piperidil, morfolinil o piperazinil opcionalmente sustituido, y

R_{e} es un alquilo (C_{1-8}), alcoxi (C_{1-4}) alquil (C_{1-4}), cicloalquilo (C_{3-7}) o cicloalquilo (C_{3-7}) alquilo (C_{1-4}),

R_{4} es un hidrógeno o un grupo alquilo (C_{1-8}), alcoxi (C_{1-4}) alquilo (C_{1-4}), cicloalquilo (C_{3-7}), cicloalquilo (C_{3-7}) alquilo (C_{1-4}), alquenilo (C_{2-6}), alquinilo (C_{2-6}), cicloalcoxil (C_{3-7}) alquilo (C_{1-4}) o aril opcionalmente sustituido,

R_{5} es un hidrógeno o alquilo (C1-4) opcionalmente sustituido,

R_{6} es un hidrógeno, hidroxi o halógeno, y

m y p, independientemente, son 1 o 2,

en su forma de base libre o en su forma de sal de adición de ácido.

2. Un proceso para la preparación de un compuesto como se define en la reivindicación 1 de la fórmula 1, en forma de base libre o en forma de sal de adición de ácido, que comprende las etapas de acilación de un compuesto de la fórmula

5

en donde R_{1}, R_{2} y R_{3} son como se definen para la fórmula I, con un ácido de la fórmula

6

en donde R_{4}, R_{5}, R_{6}, m y p son como se definen para la fórmula I, o una forma activa, tal como un éster o un halogenuro de ácido, de este y la recuperación del compuesto así obtenido de la fórmula I en su forma de base libre o en su forma de sal de adición de ácido.

3. Un compuesto como se define en la reivindicación 1, en su forma de base libre o en la forma de sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable, para utilizar como un medicamento.

4. Un compuesto como se define en la reivindicación 1, en forma de base libre o en la forma de sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable, para utilizar en el tratamiento de desórdenes neurológicos o vasculares relacionados con la generación y/o agregación del beta-amiloide.

5. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto como se define en la reivindicación 1, en su forma de base libre o en su forma de sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable, como ingrediente activo y un vehículo o diluente farmacéutico.

6. El uso de un compuesto como se define en la reivindicación 1, en su forma de base libre o en su forma de sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de desórdenes neurológicos o vasculares relacionados con la generación y/o agregación del beta-amiloide.

7. Una combinación que comprende una cantidad efectiva terapéuticamente de un compuesto como se define en la reivindicación 1, en su forma de base libre o en su forma de sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable, y una segunda sustancia fármaco, para la administración simultánea o secuencial.

8. Compuesto como se define en la reivindicación 1, en su forma de base libre o en su forma de sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable, para utilizar como agente de marcación histopatológico, agente de imágenes y/o biomarcador para la marcación selectiva de la enzima BACE que divide la beta-secretasa.