ES2376820T3

ES2376820T3 - Derivados de 2-fenil-4-ciclopropil-pirimidina.

Info

Publication number: ES2376820T3
Application number: ES09730987T
Authority: ES
Inventors: Eva Caroff; Emmanuel Meyer
Original assignee: Actelion Pharmaceuticals Ltd
Current assignee: Actelion Pharmaceuticals Ltd
Priority date: 2008-04-11
Filing date: 2009-04-09
Publication date: 2012-03-20
Anticipated expiration: 2029-04-09
Also published as: CN101998953A; WO2009125365A1; TW200944516A; ATE534634T1; CA2719569A1; JP5374578B2; CN101998953B; EP2283011B1; US20110028484A1; EP2283011A1; KR20100132541A; AR071653A1; CA2719569C; IL208548A0; KR101610417B1; MX2010010932A; MA32277B1; US8466156B2; JP2011516539A; AU2009235123A1

Abstract

Un compuesto, de fórmula I R2 R1 en la que R1 representa fenilo opcionalmente sustituido una vez con halógeno, metilo, metoxilo, trifluorometilo o trifluorometoxilo; y R2 representa hidrógeno, hidroximetilo o alcoximetilo; o una sal de dicho compuesto.

Description

Derivados de 2-fenil-4-ciclopropil-pirimidina

Campo de la invenciÃ³n

La presente invenciÃ³n se refiere a ciertos derivados 2–fenil–4–ciclopropil–piridimina y a su uso como antagonistas del receptor P2Y12 en el tratamiento y/o en la prevenciÃ³n de enfermedades o afecciones vasculares perifÃ©ricas, viscerales, hepÃ¡ticas y renales del tipo vascular, y enfermedades o afecciones cardiovasculares y cerebrovasculares asociadas con la agregaciÃ³n de plaquetas, incluyendo trombosis en seres humanos y en otros mamÃferos.

Antecedentes de la invenciÃ³n

Se hace referencia a la hemostasis como el equilibrio natural para el mantenimiento de la fluidez de la sangre en el sistema vascular y la prevenciÃ³n de la pÃ©rdida excesiva de sangre a continuaciÃ³n de un daÃ±o de un vaso sanguÃneo mediante la rÃ¡pida formaciÃ³n de un coÃ¡gulo de sangre sÃ³lida. DespuÃ©s del daÃ±o vascular, la contracciÃ³n de los vasos y la adhesiÃ³n de las plaquetas ocurre inmediatamente, seguido de la agregaciÃ³n de las plaquetas, la activaciÃ³n de la cascada de coagulaciÃ³n y finalmente tambiÃ©n del sistema fibronilÃtico. Las anomalÃas hemostÃ¡ticas pueden conducir a una hemorragia excesiva o a trombosis, ambas situaciones que amenazan la vida.

En los Ãºltimos aÃ±os se han desarrollado una serie de agentes antiplaquetas, basados en diferentes mecanismos de acciÃ³n. El agente mÃ¡s ampliamente empleado en la terapia antiplaquetas es la aspirina, que inhibe de manera irreversible la ciclooxigenasa–1 y, de esta manera, afecta a la ruta metabÃ³lica del tromboxano. A pesar de que no es eficaz de manera Ã³ptima, el tratamiento con aspirina se mantiene como una terapia estÃ¡ndar con la que se comparan y juzgan los nuevos agentes terapÃ©uticos.

Se comercializan otros fÃ¡rmacos tales como los inhibidores de la fosfodiesterasa dipiridamol y cilostazol, asÃ como los antagonistas de la vitamina K (warfarina), pero no presentan todas las caracterÃsticas deseables para tales fÃ¡rmacos. En el comercio estÃ¡n disponibles tres potentes antagonistas del receptor GPIIb/IIIa aplicables por vÃa intravenosa (abciximab, eptifibatida, y tirofiban), que bloquean la agregaciÃ³n de las plaquetas. AdemÃ¡s, hasta ahora algunos antagonistas GPIIb/IIIa orales (por ejemplo sibrafiban, xemilofiban o orbofiban) no mantenido Ã©xito en el desarrollo clÃnico.

El adenosin 5’–difosfato (ADP) es un mediador clave en la activaciÃ³n y agregaciÃ³n de las plaquetas que interfiere con dos receptores ADP de plaquetas, P2Y1 y P2Y12.

Se han identificado los antagonistas del receptor ADP de plaquetas y presentan la inhibiciÃ³n de la agregaciÃ³n de plaquetas y actividad anti–trombÃ³tica. Los antagonistas mÃ¡s efectivos conocidos hasta ahora son las tienopiridinas ticlopidina, clopidogrel y CS–747, que se han usado en la clÃnica como agentes anti–trombÃ³ticos. Se ha podido demostrar que estos fÃ¡rmacos, vÃa sus metabolitos reactivos, bloquean de manera irreversible el subtipo P2Y12 del receptor ADP.

Algunos antagonistas de P2Y12 tales como AR–C69931MX (Cangrelor) o AZD6140 han alcanzado la fase III de estudios clÃnicos. Estos inhibidores son antagonistas selectivos de receptores ADP de plaquetas, que inhiben la agregaciÃ³n de plaquetas dependiente de ADP, y son efectivos in vivo.

Los derivados de piperazin–carbonilmetilaminocarbonil–naftilo o –quinolilo se han descrito como antagonistas del receptor ADP en los documentos WO 02/098856 y en WO 2004/052366.

En el documento WO 2006/114774 se describen derivados 2–fenil–4–(carbonilmetilamino-carbonil)–pirimidina como antagonistas del receptor P2Y12.

DescripciÃ³n de la invenciÃ³n

Actualmente, los inventores han descubierto que los derivados 2–fenil–4–ciclopropil–pirimidina de acuerdo con la presente invenciÃ³n presentan de manera sorprendente propiedades biolÃ³gicas significativamente mejoradas en comparaciÃ³n con los derivados correspondientes previamente conocidos por los expertos en la tÃ©cnica, todos los cuales tienen una substituciÃ³n etoxicarbonilo en uno de los Ã¡tomos de nitrÃ³geno en el grupo piperazina de la molÃ©cula.

A continuaciÃ³n se presentan diversas realizaciones de la invenciÃ³n:

i) En primer lugar la invenciÃ³n se refiere a los compuestos de fÃ³rmula I en la que

R1 representa fenilo opcionalmente una vez con halÃ³geno, metilo, metoxilo, trifluorometilo o trifluorometoxilo; y

R2 representa hidrÃ³geno, hidroximetilo o alcoximetilo;

5 y a las sales (en particular las sales farmacÃ©uticamente aceptables) de tales compuestos.

Los compuestos de fÃ³rmula I pueden contener uno o mÃ¡s centros estereogÃ©nicos o de asimetrÃa, tales como uno o mÃ¡s Ã¡tomos de carbono asimÃ©tricos. Los compuestos de fÃ³rmula I pueden, de esta manera. estar presentes como mezclas de estereoisÃ³meros, o, preferentemente, como estereoisÃ³meros puros. Las mezclas de estereoisÃ³meros se pueden separar de un modo conocido por el experto en la tÃ©cnica.

10 Los compuestos de fÃ³rmula I son antagonistas del receptor P2Y12. En consecuencia, son Ãºtiles en la terapia (incluyendo terapia de combinaciÃ³n), en la que pueden ser ampliamente utilizados como inhibidores de la activaciÃ³n, agregaciÃ³n, y desgranulaciÃ³n de plaquetas, como promotores de la desagregaciÃ³n de plaquetas o como agentes anti–trombÃ³ticos.

Los siguientes pÃ¡rrafos proveen definiciones de las diversas fracciones quÃmicas de los compuestos de acuerdo con

15 la invenciÃ³n. Dichas definiciones estÃ¡n destinadas a ser aplicadas de manera uniforme en la presnete memoria descriptiva y sus reivindicaciones, salvo que de manera explÃcita otra definiciÃ³n provea un sentido mÃ¡s amplio o mÃ¡s restrictivo.

• El tÃ©rmino “halÃ³geno” se refiere a flÃºor, cloro, bromo o yodo, preferentemente a flÃºor, cloro o bromo y mÃ¡s preferentemente a flÃºor.

20 • El tÃ©rmino “alquilo”, empleado por sÃ solo o en combinaciÃ³n, se refiere a un grupo alquilo saturado de cadena recta o ramificada que contiene de 1 a 7 Ã¡tomos de carbono (por ejemplo, metilo, etilo, n–propilo, iso–propilo, n– butilo, iso–butilo, sec–butilo, terc–butilo, n–pentilo, neopentilo, iso–pentilo, n–hexilo, iso–hexilo, n–heptilo o iso– heptilo), y preferentemente 1 a 4 Ã¡tomos de carbono. Los ejemplos representativos de los grupos alquilo preferidos incluyen metilo, etilo, propilo, iso–propilo, n–butilo, iso–butilo, sec–butilo y terc–butilo.

25 • El tÃ©rmino “alcoxilo”, empleado por sÃ solo o en combinaciÃ³n, se refiere a un grupo alcoxilo de cadena recta o ramificada que contiene de 1 a 6 Ã¡tomos de carbono (por ejemplo, metoxilo, etoxilo, n–propoxilo, iso–propoxilo, n–butoxilo, iso–butoxilo, sec–butoxilo, terc–butoxilo, n–pentoxilo, neopentiloxilo, iso–pentiloxilo, n–hexiloxilo o iso–hexiloxilo), y preferentemente 1 a 4 Ã¡tomos de carbono. Los ejemplos representativos de grupos alcoxilo preferidos incluyen metoxilo, etoxilo, n–propoxilo, iso–propoxilo, n–butoxilo, iso–butoxilo, sec–butoxilo y terc–

30 butoxilo.

• El tÃ©rmino “alcoximetilo”, tal como se lo emplea en este texto, se refiere a un grupo metilo en el que uno de los Ã¡tomos de hidrogeno ha sido reemplazado por un grupo alcoxilo tal como se lo define previamente. Los ejemplos de grupos alcoximetilo incluyen, pero no estÃ¡n limitados a, metoximetilo y etoximetilo.

AdemÃ¡s, los siguientes pÃ¡rrafos proveen definiciones de otros tÃ©rminos diversos. Dichas definiciones estÃ¡n

35 destinadas a ser aplicadas de manera uniforme a travÃ©s de esta memoria descriptiva y reivindicaciones a menos que otra definiciÃ³n expresamente presentada provea un sentido mÃ¡s amplio o mÃ¡s restrictivo.

La expresiÃ³n “sales farmacÃ©uticamente aceptables” se refiere a sales de adiciÃ³n Ã¡cidas y/o bÃ¡sicas orgÃ¡nicas o inorgÃ¡nicas no tÃ³xicas. Se puede hacer referencia a “Salt selection for basic drugs”, Int. J. Pharm. (1986), 33, 201–

217.

La expresiÃ³n “temperatura ambiente” tal como se usa en el presente documento se refiere a una temperatura de 25Â°C.

Salvo respecto de las temperaturas, el tÃ©rmino “alrededor de” colocado antes de un valor numÃ©rico “X” se refiere en esta solicitud a un intervalo que se extiende desde X menos 10% de X hasta X mÃ¡s 10% de X, y preferentemente a un intervalo que se extiende desde X menos 5% de X hasta X mÃ¡s 5% de X. En el caso particular de las temperaturas, el tÃ©rmino “alrededor de” (o de manera alternativa “en torno de”) ubicado antes de la temperatura “Y” se refiere en esta solicitud a un intervalo que se extiende desde la temperatura Y menos 10Â°C hasta Y mÃ¡s 10ÂºC, y preferentemente a un intervalo que se extiende desde Y menos 5Â°C hasta Y mÃ¡s 5 ÂºC.

ii) En particular, la invenciÃ³n se refiere a compuestos de fÃ³rmula I que tambiÃ©n son compuestos de fÃ³rmula ICE

10 ICE

en la que

R1 representa fenilo opcionalmente sustituido una vez con halÃ³geno (de manera especial flÃºor); y

R2 representa hidrÃ³geno, hidroximetilo o alcoximetilo;

y con sales (en particular las sales farmacÃ©uticamente aceptables) de los compuestos de fÃ³rmula ICE.

15 iii) De acuerdo con una realizaciÃ³n preferida de la presente invenciÃ³n, los compuestos de fÃ³rmula I tal como se los define en la realizaciÃ³n i) anterior o sus sales (entre las cuales se prefieren las sales farmacÃ©uticamente aceptables) serÃ¡n tales que R1 representa fenilo opcionalmente sustituido una vez con halÃ³geno, metilo o trifluorometilo.

v) Preferentemente, los compuestos de fÃ³rmula I tal como se los define en la realizaciÃ³n i) o ii) anteriores o sus sales (entre las cuales se prefieren las sales farmacÃ©uticamente aceptables) serÃ¡n tales que R1 represente fenilo 20 opcionalmente sustituido una vez con halÃ³geno.

v) MÃ¡s preferentemente, los compuestos de fÃ³rmula I tal como se los define en la realizaciÃ³n i) o ii) anteriores o sus sales (entre las cuales se prefieren las sales farmacÃ©uticamente aceptables) serÃ¡n tales que R1 representa fenilo opcionalmente sustituido una vez con flÃºor (de manera especial tales que R1 represente fenilo o 4–fluorofenilo, y de manera destacable tales que R1 represente fenilo).

25 vi) De acuerdo una realizaciÃ³n particular de la presente invenciÃ³n, los compuestos de fÃ³rmula I tal como se los define en una de las realizaciones i) a v) anteriores o sus sales (entre las cuales se prefieren las sales farmacÃ©uticamente aceptables) serÃ¡n tales que R2 representa hidrÃ³geno.

vii) De acuerdo con otra realizaciÃ³n particular de la presente invenciÃ³n, los compuestos de fÃ³rmula I tal como se los define en una de las realizaciones i) a v) anteriores o sus sales (entre las cuales se prefieren las sales

30 farmacÃ©uticamente aceptables) serÃ¡n tales que R2 representa hidroximetilo o alcoximetilo.

viii) De acuerdo con una variante de la realizaciÃ³n vii), los compuestos de fÃ³rmula I tal como se los define en la realizaciÃ³n vii) anterior o sus sales (entre las cuales se prefieren las sales farmacÃ©uticamente aceptables) serÃ¡n tales que R2 representa hidroximetilo.

ix) De acuerdo con otra variante de la realizaciÃ³n vii), los compuestos de fÃ³rmula I tal como se los define en la 35 realizaciÃ³n vii) anterior o sus sales (entre las cuales se prefieren las sales farmacÃ©uticamente aceptables) serÃ¡n tales que R2 representa alcoximetilo (en particular metoximetilo).

x) Los siguientes compuestos de fÃ³rmula I tal como se los define en las realizaciones i) o ii) son particularmente preferidos:

–: Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–{(S)–4–carboxi–2–[(6–ciclopropil–2–fenil–pirimidin–4–carbonil)–amino]–butiril}–piperazin– 1–carboxÃlico;

–: Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[6–(trans–2–metoximetil–ciclopropil)–2–fenil–pirimidin–4–carbonil]– amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico;

–: Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[6–((1S,2S)–2–metoximetil–ciclopropil)–2–fenil–pirimidin–4–carbonil]– amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico;

–: Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[6–((1S,2S)–2–hidroximetil–ciclopropil)–2–fenil–pirimidin–4–carbonil]– amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico;

–: Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[2–(4–fluoro–fenil)–6–((1S,2S)–2–metoximetil–ciclopropil)–pirimidin– 4–carbonil]–amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico;

–: Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[6–(cis–2–metoximetil–ciclopropil)–2–fenil–pirimidin–4–carbonil]– amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico;

asÃ tambiÃ©n como las sales (en particular las sales farmacÃ©uticamente aceptables) de los mismos.

xi) Un objetivo adicional de la invenciÃ³n son los compuestos de fÃ³rmula I (o de fÃ³rmula ICE), tal como se los define en una de realizaciones i) a x) anteriores, o sus sales farmacÃ©uticamente aceptables, como medicamentos.

Los compuestos de fÃ³rmula I y sus sales farmacÃ©uticamente aceptables pueden ser empleados como medicamentos, por ejemplo, en la forma de composiciones farmacÃ©uticas para administraciÃ³n entÃ©ral o parenteral.

xii) Por tanto, la invenciÃ³n tambiÃ©n se refiere a composiciones farmacÃ©uticas que contienen al menos un compuesto de acuerdo con una de las realizaciones i) a x) anteriores, o una sal farmacÃ©uticamente aceptable de los mismos, y un portador, diluyente o excipiente farmacÃ©uticamente aceptable. En particular, la invenciÃ³n se refiere a composiciones farmacÃ©uticas que contienen al menos un compuesto de fÃ³rmula I (o de fÃ³rmula ICE) y uno o mÃ¡s vehÃculos, diluyentes o excipientes farmacÃ©uticamente aceptables.

La producciÃ³n de las composiciones farmacÃ©uticas puede efectuarse de un modo que sea familiar para cualquier persona experimentada en la tÃ©cnica (ver por ejemplo, The Science and Practice of Pharmacy, 21a ediciÃ³n (2005), parte 5, “Pharmaceutical Manufacturing” [publicado por Lippincott Williams & Wilkins]) llevando los compuestos de fÃ³rmula I descritos o sus sales farmacÃ©uticamente aceptables, opcionalmente en combinaciÃ³n con otras substancias de valor terapÃ©utico, a una forma de administraciÃ³n galÃ©nica en conjunto con materiales vehÃculos sÃ³lidos o lÃquidos no tÃ³xicos, inertes adecuados, terapÃ©uticamente compatibles, y si se desea, con los adyuvantes farmacÃ©uticos habituales

xiii) Los compuestos de acuerdo con formula I tal como se los define en las realizaciones i) a x) anteriores y las sales farmacÃ©uticamente aceptables de los mismos pueden ser empleados para la preparaciÃ³n de un medicamento, y son adecuados:

•: para el tratamiento o la profilaxis de enfermedades que incluyen angina estable, angina inestable, infarto de miocardio, embolia (incluyendo complicaciones de la aterosclerosis, de manera destacable ictus embÃ³liico), trombosis arterial (incluyendo complicaciones trombÃ³ticas arteriales primarias de la aterosclerosis, de manera destacable ictus trombÃ³tico), trombosis venosa (principalmente trombosis venosa profunda), trombosis causada por daÃ±o vascular o por inflamaciÃ³n (incluyendo vasculitis, arteritis y glomerulonefritis), enfermedades venooclusivas, ataques isquÃ©micos transitorios, enfermedades vasculares perifÃ©ricas, infarto de miocardio con o sin trombÃ³lisis, enfermedad mieloproliferativa, trombocitemia, enfermedad de las cÃ©lulas falciformes, enfermedad inflamatoria intestinal, pÃºrpura trombocitopÃ©nica trombÃ³tica, sÃndrome urÃ©mico hemolÃtico;

•: para la prevenciÃ³n de complicaciones trombÃ³ticas de septicemia, sÃndrome de dificultad respiratoria del adulto, sÃndrome antifosfolÃpidos, trombocitopenia inducida por heparina y preeclampsia/eclampsia;

•: para la prevenciÃ³n de complicaciones cardiovasculares despuÃ©s de ciertos procedimientos quirÃºrgicos (de manera destacable revascularizaciÃ³n coronaria tal como angioplastia (PTCA), otras cirugÃas de injertos vasculares, endarterectomÃa o implantaciÃ³n de endoprÃ³tesis) o despuÃ©s de un traumatismo accidental;

•: para la prevenciÃ³n del rechazo de implantes.

xiv) En otra realizaciÃ³n, los compuestos de fÃ³rmula I tal como se los define en las realizaciones i) a x) anteriores y las sales farmacÃ©uticamente aceptables de los mismos pueden ser empleados para la preparaciÃ³n de un medicamento, y son adecuados para la prevenciÃ³n de complicaciones en afecciones en las que los vasoespasmos llevan a la vasoconstricciÃ³n y esto a la isquemia de tejidos o a la muerte de los tejidos (necrosis).

xv) Por lo tanto, un objetivo particular de la presente invenciÃ³n es el uso de un compuesto de fÃ³rmula I (o de fÃ³rmula ICE) tal como se los define en una de las realizaciones i) a x) anteriores, o de una sal farmacÃ©uticamente aceptable de los mismos, para la producciÃ³n de un medicamento para los usos listados en las realizaciones xiii) y/o xiv) (y en particular en la realizaciÃ³n xiii)) anteriores, y para la producciÃ³n de un medicamento para el tratamiento de afecciones vasculares oclusivas en general.

xvi) De manera mÃ¡s general, la invenciÃ³n se refiere a el uso de un compuesto de fÃ³rmula I (de de fÃ³rmula ICE) tal

5 como se los define en una de las realizaciones i) a x) anteriores, o de una sal farmacÃ©uticamente aceptable de los mismos, para la producciÃ³n de un medicamento para el tratamiento y/o la prevenciÃ³n de afecciones vasculares oclusivas asÃ como para el uso de un compuesto de fÃ³rmula I (o de fÃ³rmula ICE) para la producciÃ³n de un medicamento para el tratamiento y/o la prevenciÃ³n de enfermedades o afecciones vasculares perifÃ©ricas, vasculares –viscerales, –hepÃ¡ticas y –renales, cardiovasculares y cerebrovasculares asociadas con la agregaciÃ³n de plaquetas,

10 incluyendo trombosis en seres humanos y en otros mamÃferos.

xvii) Entre los usos anteriormente mencionados de los compuestos de fÃ³rmula I (o de formula ICE) o de sales farmacÃ©uticamente aceptables de los mismos para la producciÃ³n de medicamentos de acuerdo con la realizaciÃ³n xv) anterior, se prefieren los usos para la producciÃ³n de medicamentos para el tratamiento o la profilaxis de infarto de miocardio, trombosis arterial (de manera destacable ictus trombÃ³tico), ataques isquÃ©micos transitorios, enfermedad

15 vascular perifÃ©rica y angina estable e inestable.

xviii) La invenciÃ³n se relaciona ademÃ¡s con el uso de un compuesto de fÃ³rmula I (de de fÃ³rmula ICE) de acuerdo con una de las realizaciones i) a x) anteriores, o de una sal farmacÃ©uticamente aceptable de los mismos, para la preservaciÃ³n de productos sanguÃneos in vitro (por ejemplo, la preservaciÃ³n de concentrados de plaquetas), o para la prevenciÃ³n de la oclusiÃ³n en mÃ¡quinas de tratamiento extracorpÃ³rep de la sangre o de productos shemoderivados

20 (tales como mÃ¡quinas de diÃ¡lisis renal o de mÃ¡quinas de plasmafÃ©resis).

xix) La invenciÃ³n tambiÃ©n se refiere a procedimientos para el tratamiento de afecciones mencionadas en las realizaciones xiii) y/o xiv) (y en particular en la realizaciÃ³n xiii)) anteriores, comprendiendo dichos mÃ©todos la administraciÃ³n a un paciente en necesidad de dicho tratamiento, de una cantidad efectiva de un compuesto de fÃ³rmula I (o de fÃ³rmula ICE) de acuerdo con una de las realizaciones i) a x), o de una sal farmacÃ©uticamente

25 aceptable de un tal compuesto.

Cualquier referencia a un compuesto de fÃ³rmula I o ICE en este texto debe entenderse que hace referencia tambiÃ©n a las sales (y especialmente a las sales farmacÃ©uticamente aceptables) de tales compuestos, segÃºn sea apropiado y conveniente. Por supuesto, las preferencias indicadas por los compuestos de fÃ³rmula I se aplican mutatis mutandis a los compuestos de fÃ³rmula ICE, asÃ como a las sales y a las sales farmacÃ©uticamente aceptables de los compuestos

30 de fÃ³rmula I o de formula ICE. Lo mismo se aplica a estos compuestos como medicamentos, a las composiciones farmacÃ©uticas que contienen estos compuestos como principios activos, a los usos de estos compuestos para la producciÃ³n de un medicamento para el tratamiento de enfermedades de acuerdo con la presente invenciÃ³n o a los compuestos para el tratamiento de las enfermedades de acuerdo con la presente invenciÃ³n.

De acuerdo con la invenciÃ³n, los compuestos de fÃ³rmula I (o de fÃ³rmula ICE) pueden prepararse mediante los 35 procedimientos descritos a continuaciÃ³n.

PreparaciÃ³n de los compuestos de fÃ³rmula I

Abreviaturas

Las siguientes abreviaturas se usan a lo largo de la memoria descriptiva y los ejemplos:

Ac acetilo

40 ADP adenosÃn difosfato

AIBN 2,2′–azobis(2–metilpropionitrilo)

aq. acuoso

BSA seroalbÃºmina bovina

CC cromatografÃa de columna

45 DCM diclorometano

de exceso diastereomÃ©rico

DIPEA diisopropiletilamina

DME 1,2–dimetoxietano

DMF N,N–dimetilformamida Ruta general de preparaciÃ³n

dpm: cuentas por minuto

EA: acetato de etilo

EDCI: N–(3–dimetilaminopropil)–N’–etilcarbodiimida

EDTA: Ã¡cido etilendiamintetraacÃ©tico

Et: etilo

Hept: heptano

HOBT: 1–hidroxibenzotriazol

HPLC: cromatografÃa lÃquida de alto rendimiento

HV: alto vacÃo

CL-EM: cromatografÃa lÃquida – espectrometrÃa de masa

Me: metilo

MTBE: 2–metoxi–2–metilpropano

n–BuLi: n–butil litio

org.: orgÃ¡nico

Pd/C: paladio sobre carbÃ³n

Ph: fenilo

PyBOP: hexafluorofosfato de benzotriazol–1–il–oxi–tris–pirrolidin–fosfonio

Rf: factor de retenciÃ³n

TA: temperatura ambiente

SDS: dodecilsulfato sÃ³dico

tBu: terc–butilo

TCCA: Ã¡cido tricloroisocianÃºrico

TEMPO: radical 2,2,6,6–tetrametilpiperidin 1–oxilo

TFA: Ã¡cido trifluoroacÃ©tico

THF: tetrahidrofurano

TLC: cromatografÃa de capa fina

tR: tiempo de retenciÃ³n

Tris: tris(hidroximetil)aminometano

Z: benciloxicarbonilo

Los diversos compuestos de fÃ³rmula I pueden prepararse usando la ruta general resumida en el Esquema 1 a continuaciÃ³n.

R2 R2 O

N O NH

H N N N

N R1 N

N R1 O N

O

O N O

(II) (I) O O

O O OOH

Esquema 1

Los compuestos de fÃ³rmula I pueden prepararse (Esquema 1) mediante la hidrÃ³lisis de los compuestos de fÃ³rmula II bajo condiciones estÃ¡ndar bien conocidas por los expertos en la tÃ©cnica, preferentemente usando TFA.

5 AdemÃ¡s, cuando los compuestos de fÃ³rmula I se obtengan en la forma de mezclas de diasterÃ³meros, se pueden separar mediante una combinaciÃ³n apropiada de tÃ©cnicas de cromatografÃa en gel de sÃlice, HPLC y recristalizaciÃ³n.

PreparaciÃ³n de diversos intermediarios de sÃntesis

PreparaciÃ³n de los compuestos de fÃ³rmula II

10 Los compuestos de fÃ³rmula II pueden prepararse usando las rutas resumidas en el Esquema 2 a continuaciÃ³n.

Cl

O NH2 +

N

N HO

N R1

O O

O N

O O

(III)

R2

Cl R2 O N NOH H+ N N

N R1 M N N N R1 O N

O O NO

O O

O O OO

(IV) (V) (II)

Esquema 2

De esta manera, los intermediarios de fÃ³rmula III pueden acoplarse con el Ã©ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–2–amino–4– terc–butoxicarbonil–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico, llevando a los compuestos de fÃ³rmula IV. Esto puede 15 conseguirse usando mÃ©todos estÃ¡ndar de acoplamiento de pÃ©ptidos, usando agentes de acoplamiento tales como HOBT, clorhidrato de EDCI, 1,3–diciclohexilcarbodiimida, PyBOP, benzotriazol–1–il–oxi–tris–(dimetilamino)– fosfoniohexafluorofosfato, opcionalmente en presencia de una base adecuada tal como NEt3, DIPEA o N– metilmorfolina y en un disolvente adecuado tal como DCM, THF o DMF, preferentemente a una temperatura de aproximadamente la temperatura ambiente, o usando cloruro de oxalilo o cloruro de tionilo en un disolvente

20 adecuado tal como DCM o MeCN, a una temperatura entre la temperatura ambiente y 80Â°C.

Los compuestos de fÃ³rmula II pueden obtenerse despuÃ©s mediante la reacciÃ³n de los intermediarios de fÃ³rmula IV con los reactivos de fÃ³rmula V en la que M es –SnR3, siendo R alquilo, usando condiciones estÃ¡ndar para una reacciÃ³n de Stille, y, preferentemente, un derivado tributilestanano en un disolvente adecuado tal como tolueno, y preferentemente calentando entre 110Â°C y 130Â°C.

25 De manera alternativa, los compuestos de fÃ³rmula II pueden obtenerse mediante la reacciÃ³n de los intermediarios de fÃ³rmula IV con un reactivo de fÃ³rmula V en la que M es –B(OR’)2, siendo R’ hidrÃ³geno o alquilo, usando condiciones estÃ¡ndar para una reacciÃ³n de Suzuki, y, preferentemente, un derivado Ã¡cido o Ã©ster borÃ³nico en presencia de una base adecuada tal como K3PO4, Na2CO3 o K2CO3, en presencia de un catalizador adecuado de paladio tal como

tetrakis(trifenilfosfin)paladio en un disolvente adecuado tal como DME/agua o dioxano, y preferentemente calentando entre 80Â°C y 110Â°C.

PreparaciÃ³n de los compuestos de fÃ³rmula III

Los compuestos de fÃ³rmula III pueden prepararse tal como se presenta en el Esquema 3 a continuaciÃ³n.

Cl Cl

N HO N

HO

N R1 O N R1

(VI) (III)

Esquema 3

Los compuestos de fÃ³rmula III pueden prepararse mediante la oxidaciÃ³n de los compuestos de fÃ³rmula VI (para su preparaciÃ³n, ver el documento WO 2006/114774, PreparaciÃ³n de compuestos de fÃ³rmula IV, esquema 4a), usando agentes estÃ¡ndar de oxidaciÃ³n, tales como permanganato de potasio, TCCA/TEMPO, en un disolvente adecuado tal como dioxano/agua, acetona/soluciÃ³n acuosa de NaHCO3, y a una temperatura entre 5Â°C y temperatura ambiente.

PreparaciÃ³n de los compuestos de fÃ³rmula V

Si no estÃ¡n disponibles en el comercio, los compuestos de fÃ³rmula V pueden prepararse siguiendo procedimientos conocidos por los expertos en la tÃ©cnica. En particular, los compuestos de fÃ³rmula V en la que M es –SnR3 (siendo R alquilo), R2 es –CH2–OR’ (siendo R’ hidrÃ³geno o alquilo) y los grupos –SnR3 y R2 estÃ¡n en una disposiciÃ³n trans, pueden prepararse tal como se describe en el Esquema 4 a continuaciÃ³n.

R3Sn R2 R3Sn

R2

(VII) (VIII) (V)

Esquema 4

El compuesto de fÃ³rmula VII en la que R2 es –CH2–OH puede convertirse (Esquema 4) en los estananos correspondientes de fÃ³rmula VIII en los que R2 es –CH2–OH mediante una reacciÃ³n de hidroestanilaciÃ³n de acuerdo con un procedimiento descrito por Belanger G. et al. en J. Org. Chem. (2000), 7070–7074. Dichos compuestos de fÃ³rmula VIII pueden convertirse a continuaciÃ³n en los compuestos de fÃ³rmula V en los que R2 es –CH2–OH mediante una reacciÃ³n de ciclopropanaciÃ³n de acuerdo con un procedimiento descrito por Charette A. B. et al. en J. Am. Chem. Soc. (1998), 120, 11943–11952. Tal como se describe en este artÃculo, la reacciÃ³n de ciclopropanaciÃ³n es estereoselectiva si se lleva a cabo en presencia de un ligando dioxaborolano, lo que lleva a los compuestos de fÃ³rmula V en los que R2 es –CH2–OH como Ãºnicos enantiÃ³meros.

De manera alternativa, los compuestos de fÃ³rmula V en la que M es –SnR3 (siendo R alquilo), R2 es –CH2–OR” (siendo R” hidrÃ³geno o alquilo) y los grupos –SnR3 y R2 estÃ¡n en una disposiciÃ³n cis, prepararse tal como se describe en el Esquema 5 a continuaciÃ³n.

R2 R2

R3Sn

R2

R3Sn

(VII) (IX) (V)

Esquema 5

El compuesto de fÃ³rmula VII en el que R2 es –CH2–OH puede convertirse en los estananos correspondientes de fÃ³rmula IX en los que R2 es –CH2–OH mediante una reacciÃ³n de hidroestanilaciÃ³n de acuerdo con un procedimiento descrito por Sheppard G. S. et al. en J. Med. Chem. (2006), 3832–3849. La etapa siguiente que conduce al compuesto de fÃ³rmula V puede realizarse usando los procedimientos ya descritos para la conversiÃ³n de compuestos de fÃ³rmula VIII en los compuestos de fÃ³rmula V (ver el Esquema 4). Finalmente, los compuestos de fÃ³rmula V en los que R2 es –CH2–OH pueden, despuÃ©s, alquilarse en compuestos de fÃ³rmula V en los que R2 es –CH2–OR’, siendo R’ alquilo, usando condiciones estÃ¡ndar para la alquilaciÃ³n de un grupo hidroxilo, usando un agente de alquilaciÃ³n de fÃ³rmula R’–X, siendo X un grupo saliente tal como halÃ³geno, en presencia de una base adecuada tal como NaH, llevÃ¡ndose a cabo la reacciÃ³n en un disolvente adecuado tal como THF, MeCN o DMF y preferentemente a aproximadamente la temperatura ambiente.

PreparaciÃ³n del Ã©ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–2–amino–4–terc–butoxicarbonil–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico

La sÃntesis de este compuesto se describe en los Ejemplos (Ejemplo 1, etapa 1.4).

En los Ejemplos siguientes se describen realizaciones particulares de la invenciÃ³n, que sirven para ilustrar la invenciÃ³n con mayor detalle sin limitar su alcance de ninguna manera.

5 Ejemplos

Procedimientos de caracterizaciÃ³n usados:

La RMN de 1H (400 MHz) se llevÃ³ a cabo en un aparato Bruker Avance 400. Los desplazamientos quÃmicos se presentan en ppm relativos al disolvente usado; multiplicidades: s = singlete, d = doblete, t = triplete, c = cuadruplete, p = pentuplete, hex = hexete, hept = heptete, m = multiplete, a. = ancho

10 Los tiempos de retenciÃ³n de la CL-EM se obtienen usando las siguientes condiciones de eluciÃ³n:

Se usÃ³ una columna ZorbaxÂ® (Zorbax SB.AQ 5 m, 4,6 x 50 mm). Los dos disolventes de eluciÃ³n son los siguientes: Disolvente A = agua + 0,04% de TFA; disolvente B = MeCN. El caudal del eluyente es de 4,5 ml/min y las caracterÃsticas de la proporciÃ³n de la mezcla de eluciÃ³n en funciÃ³n del tiempo t desde el inicio de la eluciÃ³n se resumen en la tabla a continuaciÃ³n (se emplea un gradiente lineal entre dos puntos de tiempo consecutivos:

t (min): 0 1 1,45 1,55

Disolvente A (%): 95 5 5 95

Disolvente B (%): 5 95 95 5

Los tiempos de retenciÃ³n de la HPLC quiral para la determinaciÃ³n de un exceso diastereomÃ©rico se obtuvieron usando las siguientes condiciones de eluciÃ³n:

Se usÃ³ una columna Chiralcel (AD–H 250 x 4,6 mm ID, 5 m) bajo condiciones isocrÃ¡ticas a 25Â°C. Los dos disolventes de eluciÃ³n son los siguientes: disolvente A = 70% de hexano; disolvente B = EtOH al 30%, 0,1% de TFA. 20 El caudal del eluyente fue 0,8 ml/min y la longitud de onda de detecciÃ³n es 210 nM.

Procedimientos de CL-EM preparativa usados:

I CL-EM preparativa (I)

Se usÃ³ una columna PhenomenexÂ® (Gemini 10u C18 110A Ax 50 x 21,2 mm). Los dos disolventes de eluciÃ³n son los siguientes: disolvente A = agua + 1% de Ã¡cido fÃ³rmico; disolvente B = MeCN + 1% de Ã¡cido fÃ³rmico. El caudal del

25 eluyente es de 50 ml/min. Las caracterÃsticas de la proporciÃ³n de la mezcla de eluciÃ³n en funciÃ³n del tiempo t desde el inicio de la eluciÃ³n se resumen en las tablas a continuaciÃ³n (se usÃ³ un gradiente lineal entre dos puntos de tiempo consecutivos):

I) CL-EM preparativa (I):

t (min.): 0 0,4 2,6 3 3,4 3,8 3,9 5

Disolvente A (%): 55 55 35 35 4,5 4,5 55 55

Disolvente B (%): 45 45 65 65 95,5 95,5 45 45

30 II) CL-EM preparativa (II):

Se usÃ³ una columna X–TerraÂ® (Prep MS C18 OBDTM 10u 30 x 75 mm). Los dos disolventes de eluciÃ³n son tal como se describe para la CL-EM preparativa (I). El caudal es de 100 ml/min. Las caracterÃsticas de la proporciÃ³n de la mezcla de eluciÃ³n en funciÃ³n del tiempo t desde el inicio de la eluciÃ³n se resumen en las tablas a continuaciÃ³n (se usÃ³ un gradiente lineal entre dos puntos de tiempo consecutivos):

t (min.): 0 0,6 3,3 3,9 4,5 5,1 6

Disolvente A (%): 40 40 21 21 0 0 40

Disolvente B (%): 60 60 79 79 100 100 60

Fase estacionaria usada para la CC:

Las purificaciones mediante CC se han llevado a cabo usando sÃlica gel salvo que se especifique de otra manera.

Ejemplo 1: Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–{(S)–4–carboxi–2–[(6–ciclopropil–2–fenil–pirimidin–4–carbonil)–amino]– butiril}–piperazin–1–carboxÃlico:

1.1. Ã‰ster terc-butÃlico de Ã©ster butÃlico de Ã¡cido piperazin–1,4–dicarboxÃlico:

A una soluciÃ³n de Ã©ster terc-butÃlico de Ã¡cido piperazin–1–carboxÃlico (150 g) en DCM (1,05 L) enfriado a 4Â°C se aÃ±adiÃ³ NEt3 (123,6 ml) seguido por cloroformiato de n–butilo (107 ml) gota a gota durante 30 minutos. El baÃ±o de enfriamiento se retirÃ³ y la mezcla de reacciÃ³n se dejÃ³ calentar hasta temperatura ambiente durante 2,5 horas. Se aÃ±adiÃ³ agua, las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con DCM. Las fases orgÃ¡nicas combinadas se secaron (Na2SO4) y retiraron mediante evaporaciÃ³n para dar un aceite (242,8 g). El compuesto se usÃ³ directamente en la siguiente etapa.

TLC: (EA/Hept 1/1) Rf = 0,7.

1.2. Sal clorhidrato de Ã©ster butÃlico de Ã¡cido piperazin–1–carboxÃlico:

A una soluciÃ³n enfriada (15Â°C) del intermediario 1.1 (230,5 g) en MeOH (1 L) se aÃ±adiÃ³ HCl 4 M en dioxano (604 ml). La mezcla se agitÃ³ durante toda la noche a temperatura ambiente y se evaporÃ³ hasta sequedad. El residuo se suspendiÃ³ en MTBE (800 ml) y la mezcla se agitÃ³ durante 30 minutos y se sometiÃ³ a filtraciÃ³n. El sÃ³lido se secÃ³ en alto vacÃo para obtener un sÃ³lido blanco (176 g).

RMN de 1H (CDCl3): 10,05 (br. s, 2 H), 4,21 (t, J = 6,5 Hz, 2 H), 3,85 (t, J = 4,8 Hz, 4 H), 3,22 (s, 4 H), 1,69 (m, 2 H), 1,39 (m, 2 H), 0,96 (t, J = 7,5 Hz, 3 H).

1.3. Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–2–benziloxicarbonilamino–4–terc–butoxicarbonil–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico:

A una soluciÃ³n de Z–(L)Glu(OtBu)–OH (25,2 g) en DCM/THF (240 mL/ 60 ml) se aÃ±adieron clorhidrato de EDCI (17,2 g), hidrato de HOBT (13,7 g) y DIPEA (28,2 ml). DespuÃ©s de agitar a temperatura ambiente durante 5 minutos, se aÃ±adiÃ³ el intermediario 1.2 (20 g). La mezcla se agitÃ³ a temperatura ambiente durante toda la noche. Se aÃ±adieron DCM y agua, y se separaron las fases. La fase orgÃ¡nica se lavÃ³ con Na2CO3 2M, con NaHSO4 1M y con soluciÃ³n salina, se secÃ³ (Na2SO4) y se retirÃ³ mediante evaporaciÃ³n. El secado mediante alto vacÃo dio el compuesto deseado como un aceite naranja (40 g).

CL-EM: tR = 1,04 min.; [M+H]+: 506,49.

1.4. Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–2–amino–4–terc–butoxicarbonil–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico:

El intermediario 1.3 (40 g) se hidrogenÃ³ en MeOH (300 ml) con Pd/C (hÃºmedo, 5%, 194 mg) durante 24 horas. La mezcla se filtrÃ³ a travÃ©s de celite y se sometiÃ³ a evaporaciÃ³n. El secado mediante alto vacÃo dio el compuesto deseado como un aceite marrÃ³n claro (28 g).

CL-EM: tR = 0,79 min.; [M+H]+: 372,58.

1.5. ï¿½?cido 6–cloro–2–fenil–pirimidin–4–carboxÃlico:

A una soluciÃ³n de (6–cloro–2–fenil–pirimidin–4–il)–metanol (240 g; preparada usando un procedimiento anÃ¡logo al descrito en el documento WO 2006/114774, Ejemplo 24, intermediario 24.2) en acetona (2 l) se aÃ±adiÃ³ una soluciÃ³n acuosa de NaHCO3 (15%, 961 ml). La mezcla se enfriÃ³ hasta 5Â°C y se aÃ±adiÃ³ NaBr (11,2 g) seguido por TEMPO (8,56 g). DespuÃ©s se aÃ±asiÃ³ TCCA (506 g) poco a poco durante 1,5 horas. La mezcla resultante se agitÃ³ a temperatura ambiente durante 1,5 horas. La mezcla se filtrÃ³ a travÃ©s de una lÃ¡mina de Celite y la soluciÃ³n se retirÃ³ mediante evaporaciÃ³n. El residuo se diluyÃ³ en agua /EA. La fase acuosa se extrajo con EA y las fases orgÃ¡nicas combinadas se secaron (Na2SO4) y retiraron mediante evaporaciÃ³n. La recristalizaciÃ³n del residuo (EA/Hept) dio el producto deseado como un sÃ³lido beige (162,1 g).

CL-EM: tR = 0,94 min.; [M+H]+: 235,18.

1.6. Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–{(S)–4–terc–butoxicarbonil–2–[(6–cloro–2–fenil–pirimidin–4–carbonil)–amino]–butiril}– piperazin–1–carboxÃlico:

A una suspensiÃ³n del intermediario 1.5 (17,5 g) en MeCN (600 ml) se aÃ±adiÃ³ cloruro de oxalilo (12,6 ml). La mezcla se calentÃ³ a reflujo durante 2 h, se enfriÃ³ hasta 0Â°C y se aÃ±adiÃ³ NEt3 (31 ml) lentamente, seguido por el intermediario 1.4 (27,6 g). La mezcla se dejÃ³ calentar hasta temperatura ambiente, se agitÃ³ a temperatura ambiente durante 1 hora y se sometiÃ³ a evaporaciÃ³n. El residuo se purificÃ³ mediante CC (Hept/EA 1/0 a 1/1), para dar el producto deseado como un sÃ³lido beige (18 g).

CL-EM: tR = 1,18 min.; [M+H]+: 588,79.

1.7. Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–{(S)–4–terc–butoxicarbonil–2–[(6–ciclopropil–2–fenil–pirimidin–4–carbonil)–amino]– butiril}–piperazin–1–carboxÃlico:

Una mezcla del intermediario 1.6 (80 mg), Ã¡cido ciclopropilborÃ³nico (17 mg), K3PO4 (58 mg) y Pd(PPh3)4 (7,9 mg) en dioxano (0,5 ml) se agitÃ³ a 110Â°C en atmÃ³sfera de argÃ³n durante toda la noche. El disolvente se retirÃ³ mediante evaporaciÃ³n. El producto crudo se purificÃ³ mediante TLC preparativa (EA) para obtener el compuesto deseado como un aceite amarillo (25 mg).

CL-EM: tR = 1,20 min.; [M+H]+: 594,44.

1.8. Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–{(S)–4–carboxi–2–[(6–ciclopropil–2–fenil–pirimidin–4–carbonil)–amino]–butiril}– piperazin–1–carboxÃlico:

El intermediario 1.7 (20 mg) se disolviÃ³ en TFA (0,5 ml) y DCM (1 ml) y la mezcla se agitÃ³ a temperatura ambiente durante 4 horas. Los disolventes se retiraron y el residuo se purificÃ³ mediante CL-EM preparativa (I) para obtener el compuesto como un polvo blanco (3 mg).

CL-EM: tR = 1,06 min.; [M+H]+: 538,58.

Ejemplo 2: Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[6–(trans–2–metoximetil–ciclopropil)–2–fenil– pirimidin–4–carbonil]–amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico:

2.1. (E)–3–tributilestananil–prop–2–en–1–ol:

A alcohol propargÃlico puro (5 ml) se aÃ±adiÃ³ hidruro de tributilestaÃ±o (29,2 ml) seguido por AIBN (716 mg). La mezcla se calentÃ³ durante 2,75 horas a 80 Â°C, se enfriÃ³ hasta la temperatura ambiente y se purificÃ³ directamente mediante CC (EA/Hept 5/95) para dar el compuesto deseado (12,9 g).

RMN de 1H (CDCl3): 6,21 (m, 2H); 4,20 (m, 2H); 1,56–1,29 (m, 18H); 0,92 (t, 9H).

2.2. (Trans–2–tributilestananil–ciclopropil)–metanol:

A una soluciÃ³n de dimetoxietano (0,186 ml) en DCM anhidro (10 ml) enfriada a –5Â°C en atmÃ³sfera de argÃ³n se aaÃ±adiÃ³ lentamente dietilcinc (1M en hexano, 1,9 ml), seguido de diyodometano (0,309 ml) durante un perÃodo de 20 min. manteniendo la temperatura interna a aproximadamente –7Â°C. DespuÃ©s de completar la adiciÃ³n, la soluciÃ³n resultante se agitÃ³ durante 10 minutos a –5Â°C. Una soluciÃ³n del intermediario 2.1 (500 mg) en DCM (2 ml) se aÃ±adiÃ³ gota a gota. EL baÃ±o de enfriamiento se retirÃ³, y la mezcla de reacciÃ³n se dejÃ³ calentar hasta la temperatura ambiente y se agitÃ³ durante toda la noche a temperatura ambiente. La reacciÃ³n se inactivÃ³ con una soluciÃ³n acuosa de NH4Cl (1 ml), y una soluciÃ³n acuosa 1 M de HCl (1 ml). La mezcla se diluyÃ³ con H2O, la fase orgÃ¡nica se separÃ³ y la fase acuosa se extrajo con Et2O. Las fases orgÃ¡nicas combinadas se secaron usando MgSO4 y se retiraron mediante evaporaciÃ³n. Mediante CC (Hept/EA 95/5) se obtuvo el compuesto deseado (374 mg).

RMN de 1H (CDCl3): 3,58 (m, 1H); 3,42 (m, 1H); 1,57–1,47 (m, 6H); 1,38–1,28 (m, 6H); 1,10 (m, 1H); 0,92 (t, 9H); 0,83 (m, 6H); 0,78 (m, 1H); 0,55 (m, 2H); –0,30 (m, 1H).

2.3. Tributil–(trans–2–metoximetil–ciclopropil)–estanano:

A una soluciÃ³n de intermediario 2.2 (250 mg) en THF (50 ml) se aÃ±adiÃ³ NaH (83 mg, 60% en aceite mineral) a temperatura ambiente, y la mezcla se agitÃ³ 45 minutos a temperatura ambiente. Se aÃ±adiÃ³ CH3I (0,150 ml) y se mantuvo la agitaciÃ³n a temperatura ambiente durante 15 horas. La mezcla de reacciÃ³n se diluyÃ³ con agua y la fase acuosa se extrajo varias veces con DCM. Las fases orgÃ¡nicas combinadas se secaron usando Na2SO4 y se retiraron mediante evaporaciÃ³n. El producto crudo se purificÃ³ mediante CC (Hept/EA 100/0 a 95/5) para proveer el producto deseado (248 mg).

RMN de 1H (CDCl3): 3,45 (dd, 1H); 3,38 (s, 3 H); 3,12 (dd, 1H); 1,55–1,47 (m, 6H); 1,37–1,28 (m, 6H); 1,04 (m, 1H); 0,91 (t, 9H); 0,83 (m, 6H); 0,55 (m, 2H); –0,30 (m, 1H).

2.4. Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–terc–butoxicarbonil–2–{[6–(trans–2–metoximetil–ciclopropil)–2–fenil–pirimidin– 4–carbonil]–amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico:

Una soluciÃ³n del intermediario 2.3 (70 mg), del intermediario 1.6 (100 mg) y Pd(PPh3)4 (11 mg) en tolueno (1 ml) se desgasificÃ³ y se calentÃ³ a 130Â°C durante toda la noche en atmÃ³sfera de argÃ³n. La mezcla se sometiÃ³ a evaporaciÃ³n y el crudo se purificÃ³ mediante CC (Hept/EA 6/4 a 1/1) para obtener el compuesto deseado como un aceite amarillo (66 mg).

CL-EM: tR = 1,18 min.; [M+H]+: 638,29.

2.5. Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[6–(trans–2–metoximetil–ciclopropil)–2–fenil–pirimidin–4–carbonil]– amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico:

Este compuesto se preparÃ³ usando un procedimiento anÃ¡logo al del Ejemplo 1, etapa 1.8, con el intermediario 2.4 reemplazando al intermediario 1.7. Sin embargo, el compuesto se purificÃ³ mediante CC (Hept/EA 1/1), seguido de CL-EM preparativa (I).

CL-EM: tR = 1,01 min.; [M+H]+: 582,33.

Ejemplo 3: Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[6–((1S,2S)–2–metoximetil–ciclopropil)–2–fenil– pirimidin–4–carbonil]–amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico:

3.1. ((1R,2S)–2–tributilestananil–ciclopropil)–metanol:

A una soluciÃ³n de dimetoxietano (0,465 ml) en DCM anhidro (17 ml) enfriado a –10 Â°C en atmÃ³sfera de argÃ³n se aÃ±adiÃ³ lentamente dietilcinc (1M en hexano, 4,88 ml), seguido de diyodometano (0,768 ml) durante un perÃodo de 20 minutos manteniendo la temperatura interna a aproximadamente –10Â°C. DespuÃ©s de completar la adiciÃ³n, la soluciÃ³n resultante se agitÃ³ durante 10 minutos a –10Â°C. Una soluciÃ³n de (4R,5R)–2–butil–N,N,N',N'–tetrametil– 1,3,2–dioxaborolan–4,5–dicarboxamida (0,72 ml) en DCM (7 ml) se aaÃ±adiÃ³ durante 5 minutos, inmediatamente seguida por una soluciÃ³n del intermediario 2.1 (826 mg) en DCM (7 ml) gota a gota. Se retirÃ³ el baÃ±o de enfriamiento y la mezcla de reacciÃ³n se dejÃ³ calentar hasta temperatura ambiente y se agitÃ³ durante toda la noche a temperatura ambiente. La reacciÃ³n se inactivÃ³ con una soluciÃ³n acuosa de NH4Cl (2 ml), y una soluciÃ³n acuosa de HCl 1M (2 ml). La mezcla se diluyÃ³ con H2O, la fase orgÃ¡nica se separÃ³ y la fase acuosa se extrajo con DCM y Et2O. Las fases orgÃ¡nicas combinadas se secaron usando MgSO4 y se retiraron mediante evaporaciÃ³n. Mediante CC (Hept/EA 95/5) se obtuvo el compuesto deseado (660 mg).

RMN de 1H (CDCl3): 3,55 (dd, 1H); 3,39 (dd, 1H); 1,54–1,44 (m, 6H); 1,37–1,24 (m, 6H); 1,14–1,03 (m, 1H); 0,89 (t, 9H); 0,81 (t, 6H); 0,80–0,75 (m, 1H); 0,55–0,50 (m, 2H); –0,20 – –0,30 (m, 1H).

RotaciÃ³n Ã³ptica (589 nm, CHCl3, 25 ÂºC, l = 10 cm, 101,6 mg en 10 ml, c= 1,016):

RotaciÃ³n Ã³ptica especÃfica = +14,033Â°.

3.2. Tributil–((1S,2R)–2–metoximetil–ciclopropil)–estanano:

Este compuesto se preparÃ³ usando un procedimiento anÃ¡logo al del Ejemplo 2, etapa 2.3, con el intermediario 3.1 reemplazando al intermediario 2.2.

RMN de 1H (CDCl3): 3,42 (dd, 1H); 3,36 (s, 3 H); 3,09 (dd, 1H); 1,54–1,43 (m, 6H); 1,36–1,24 (m, 6H); 1,03 (m, 1H); 0,89 (t, 9H); 0,80 (m, 6H); 0,54 (m, 2H); –0,30 (m, 1H).

3.3. Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–terc–butoxicarbonil–2–{[6–((1S,2S)–2–metoximetil–ciclopropil)–2–fenil– pirimidin–4–carbonil]–amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico:

Este compuesto se preparÃ³ usando un procedimiento anÃ¡logo al del Ejemplo 2, etapa 2.4, con el intermediario 3.2 reemplazando al intermediario 2.3.

CL-EM: tR = 1,17 min.; [M+H]+: 638,3.

3.4. Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[6–((1S,2S)–2–metoximetil–ciclopropil)–2–fenil–pirimidin–4– carbonil]–amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico:

Este compuesto se preparÃ³ usando un procedimiento anÃ¡logo al del Ejemplo 1, etapa 1.8, con el intermediario 3.3 reemplazando al intermediario 1.7. Sin embargo el compuesto se purificÃ³ mediante CC (EA)

CL-EM: tR = 1,05 min.; [M+H]+: 582,20.

RMN de 1H (CDCl3): 9,13 (d, 1H); 8,50 (m, 2H); 7,84 (s, 1H); 7,51 (m, 3H); 5,32 (m, 1H); 4,14 (t, 2H); 3,80–3,48 (m, 9H); 3,42 (dd, 1 H); 3,40 (s, 3H); 2,60–2,48 (m, 2H); 2,24 (m, 1H); 2,12 (m, 1H); 2,06 (m, 1H); 1,97 (m, 1H); 1,68– 1,58 (m, 3H); 1,46–1,36 (m, 2H); 1,18 (m, 1H); 0,96 (t, 9H).

HPLC quiral: tR = 21,87 min; 93% de.

Ejemplo 4: Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[6–((1S,2S)–2–hidroximetil–ciclopropil)–2–fenil– pirimidin–4–carbonil]–amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico:

4.1. Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–terc–butoxicarbonil–2–{[6–((1S,2S)–2–hidroximetil–ciclopropil)–2–fenil– pirimidin–4–carbonil]–amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico:

Este compuesto se preparÃ³ usando un procedimiento anÃ¡logo al del Ejemplo 2, etapa 2.4, con el intermediario 3.1 reemplazando al intermediario 2.3. Sin embargo el compuesto se purificÃ³ mediante CC (Hept/EA 1/1 a 3/7, despuÃ©s EA)

CL-EM: tR = 1,11 min.; [M+H]+: 624,26.

4.2. Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[6–((1S,2S)–2–hidroximetil–ciclopropil)–2–fenil–pirimidin–4– carbonil]–amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico:

Este compuesto se preparÃ³ usando un procedimiento anÃ¡logo al del Ejemplo 1, etapa 1.8, con el intermediario 4.1 reemplazando al intermediario 1.7. Sin embargo el compuesto crudo se suspendiÃ³ en MeOH/NaOH (3 mL/1 M, 3 ml) y la mezcla se agitÃ³ a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla se acidificÃ³ (HCl 1M) y se extrajo con DCM. Las fases orgÃ¡nicas combinadas se secaron usando MgSO4 y se retiraron mediante evaporaciÃ³n. El residuo se purificÃ³ mediante TLC preparativa (Hept/EA/AcOH 95/5/0,1).

CL-EM: tR = 0,97 min.; [M+H]+: 568,45.

Ejemplo 5: Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[2–(4–fluoro–fenil)–6–((1S,2S)–2–metoximetil– ciclopropil)–pirimidin–4–carbonil]–amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico:

5.1. 4–fluoro–benzamidina:

A una soluciÃ³n enfriada en hielo de hexametildisilazano (7 ml) en Et2O (40 ml) se aÃ±adiÃ³ n–BuLi (1,6 M en hexanos, 20,6 ml), seguido de una soluciÃ³n de 4–fluorobenzonitrilo (2 g) en Et2O (10 ml). DespuÃ©s de agitar a 0Â°C durante 10 minutos, la mezcla se dejÃ³ calentar hasta temperatura ambiente y se agitÃ³ a temperatura ambiente durante 20 horas. La mezcla se acidificÃ³ hasta un pH 1 mediante la adiciÃ³n de una soluciÃ³n de HCl 1M y se lavÃ³ con CHCl3. DespuÃ©s, la fase acuosa se basificÃ³ hasta un pH 14 mediante la adiciÃ³n de Na2CO3 y NaOH y se extrajo dos veces con CHCl3. Las capas orgÃ¡nicas se secaron (Na2SO4) y se evaporaron para obtener el compuesto deseado (1,59 g).

CL-EM: tR = 0,33 min.; [M+H]+: 139,21.

5.2. ï¿½?cido 6–cloro–2–(4–fluoro–fenil)–pirimidin–4–carboxÃlico:

Este compuesto se preparÃ³ en 4 etapas a partir del intermediario 5.1 usando procedimientos anÃ¡logos a los descritos en el documento WO2006/114774, Ejemplo 1, etapa 1.3 y Ejemplo 24, etapas 24.1, 24.2 y 24.3. CL-EM: tR = 0,90 min.; [M+H]+: 253,24.

5.3. Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–terc–butoxicarbonil–2–{[6–cloro–2–(4–fluoro–fenil)–pirimidin–4–carbonil]– amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico:

Este compuesto se preparÃ³ usando un procedimiento anÃ¡logo al del Ejemplo 1, etapa 1.6, con el intermediario 5.2 reemplazando al intermediario 1.5.

CL-EM: tR = 1,19 min.; [M+H]+: 606,09.

5.4. Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–terc–butoxicarbonil–2–{[2–(4–fluoro–fenil)–6–((1S,2S)–2–metoximetil– ciclopropil)–pirimidin–4–carbonil]–amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico:

Este compuesto se preparÃ³ usando un procedimiento anÃ¡logo al del Ejemplo 2, etapa 2.4, con el intermediario 5.3 reemplazando al intermediario 2.3. Sin embargo el compuesto se purificÃ³ mediante CL-EM preparativa (II).

CL-EM: tR = 1,19 min.; [M+H]+: 656,22.

5.5. Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[2–(4–fluoro–fenil)–6–((1S,2S)–2–metoximetil–ciclopropil)– pirimidin–4–carbonil]–amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico:

Este compuesto se preparÃ³ usando un procedimiento anÃ¡logo al del Ejemplo 1, etapa 1.8, con el intermediario 5.4 reemplazando al intermediario 1.7. Sin embargo el compuesto se purificÃ³ mediante TLC preparativa (DCM/acetona/AcOH 5/3/0,1).

CL-EM: tR = 1,06 min.; [M+H]+: 600,32.

Ejemplo 6: Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[6–(cis–2–metoximetil–ciclopropil)–2–fenil–pirimidin– 4–carbonil]–amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico:

6.1. (Cis–2–tributilestananil–ciclopropil)–metanol:

Este compuesto se preparÃ³ usando un procedimiento anÃ¡logo al del Ejemplo 2, etapa 2.2, con (Z)–3– tributilestananil–prop–2–en–1–ol (Sheppard et al., J. Med. Chem. (2006), 49, 3832) reemplazando al intermediario

2.1.

RMN de 1H (CDCl3): 3,56–3,60 (m, 1 H); 3,25–3,30 (m, 1 H); 1,48–1,60 (m, 6H); 1,28–1,44 (m, 8H); 0,84–0,94 (m, 16 H); 0,20–0,24 (m, 1 H); –0,02–0,04 (m, 1 H).

6.2. Tributil–(cis–2–metoximetil–ciclopropil)–estanano:

Este compuesto se preparÃ³ usando un procedimiento anÃ¡logo al del Ejemplo 2, etapa 2.3, con el intermediario 6.1 reemplazando al intermediario 2.2.

RMN de 1H (CDCl3): 3,35 (s, 3 H); 3,30–3,34 (m, 1 H); 3,09–3,13 (m, 1 H); 1,48–1,57 (m, 6H); 1,28–1,39 (m, 8H); 5 0,83–0,94 (m, 16 H); 0,24–0,28 (m, 1 H); –0,04–0,02 (m, 1 H).

6.3. Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–terc–butoxicarbonil–2–{[6–(cis–2–metoximetil–ciclopropil)–2–fenil–pirimidin–4– carbonil]–amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico:

Este compuesto se preparÃ³ usando un procedimiento anÃ¡logo al del Ejemplo 2, etapa 2.4, con el intermediario 6.2 reemplazando al intermediario 2.3. Sin embargo el compuesto se purificÃ³ dos veces mediante CC (primera CC:

CL-EM: tR = 1,17 min.; [M+H]+: 638,38.

6.4. Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[6–(cis–2–metoximetil–ciclopropil)–2–fenil–pirimidin–4–carbonil]– amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico:

Este compuesto se preparÃ³ usando un procedimiento anÃ¡logo al del Ejemplo 1, etapa 1.8, con el compuesto 15 intermedio 6.3 reemplazando al compuesto intermedio 1.7.

CL-EM: tR = 1,03 min.; [M+H]+: 582,42.

Ensayos biolÃ³gicos

Ensayo de uniÃ³n del receptor P2Y12

Procedimiento

20 Se cultivaron cÃ©lulas de ovario de hÃ¡mster chino (CHO) con expresiÃ³n recombinante del receptor humano P2Y12 en placas de cultivo celular de 24 pocillos. Las cÃ©lulas se lavaron tres veces con tampÃ³n de uniÃ³n (Tris 50 mM, pH 7,4, NaCl 100 mM, EDTA 1 mM, 0,5% de BSA). Las cÃ©lulas se incubaron despuÃ©s con 0,5 ml por pocillo con tampÃ³n de uniÃ³n que contiene 2–metil–tio–adenosin 5’–difosfato (2–metil–S–ADP) marcado con tritio (entre 100.000 y 300.000 dpm por pocillo) y diversas concentraciones de los compuestos de ensayo. DespuÃ©s de incubar a temperatura

25 ambiente durante 2 horas, las cÃ©lulas se lavaron tres veces con tampÃ³n de uniÃ³n. DespuÃ©s, las cÃ©lulas se solubilizaron mediante la adiciÃ³n de 0,5 ml de tampÃ³n de solubilizaciÃ³n (SDS, NaOH, EDTA). El contenido de cada pocillo se transfiriÃ³ a continuaciÃ³n a viales para contador beta y se aÃ±adieron 2,0 ml de lÃquido de centelleo Ultima Gold. DespuÃ©s de la cuantificaciÃ³n de la seÃ±al asociada a la cÃ©lula, se calculÃ³ la extensiÃ³n de la inhibiciÃ³n de manera relativa a la mÃ¡xima inhibiciÃ³n posible, demostrada por la adiciÃ³n de un exceso de 2–metil–S–ADP frÃo.

30 Resultados

Los resultados presentados en la tabla a continuaciÃ³n se pudiieron obtener para el Ejemplo y los compuestos de referencia usando el procedimiento descrito anteriormente para el ensayo de uniÃ³n de receptor P2Y12.

NÂº de ejemplo: CI50 (nM)

1: 6

2: 3

3: 5

4
4

5: 2

6: 9

Estructura del compuesto: CI50 (nM)

N NH N O N N O O O OH O [compuesto del ejemplo 90 del documento WO 2006/114774]: 43

: 6

N NH N O N N O O O OH O [compuesto del ejemplo 1 de la presente solicitud]

OH: 23

N NH N O N N O O O OH O [mezcla 1:1 de los diasterÃ³meros (1S,2S)– y (1R,2R)– del ejemplo 500 del documento WO 2006/114774]

OH: 4

N NH N O N N O O O OH O [compuesto del ejemplo 4 de la presente solicitud]

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto, de fÃ³rmula I

R2

R1

en la que

5 R1 representa fenilo opcionalmente sustituido una vez con halÃ³geno, metilo, metoxilo, trifluorometilo o trifluorometoxilo; y R2 representa hidrÃ³geno, hidroximetilo o alcoximetilo;

o una sal de dicho compuesto.
2. Un compuesto de fÃ³rmula I de acuerdo con la reivindicaciÃ³n 1, que tambiÃ©n es un compuesto de fÃ³rmula ICE

10 ICE en la que R1 representa fenilo opcionalmente sustituido una vez con halÃ³geno; y R2 representa hidrÃ³geno, hidroximetilo o alcoximetilo;

o una sal de dicho compuesto.

15 3. Un compuesto de fÃ³rmula I de acuerdo con la reivindicaciÃ³n 1 o 2, en la que R1 representa fenilo opcionalmente sustituido una vez con flÃºor; o una sal de dicho compuesto.
4. Un compuesto de fÃ³rmula I de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 3, en la que R2 representa hidrÃ³geno;

o una sal de dicho compuesto.
5. Un compuesto de fÃ³rmula I de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 3, en la que R2 representa 20 hidroximetilo o alcoximetilo; o una sal de dicho compuesto.
6.

Un compuesto de fÃ³rmula I de acuerdo con la reivindicaciÃ³n 5, en la que R2 representa hidroximetilo; o una sal de dicho compuesto.
7.

Un compuesto de fÃ³rmula I de acuerdo con la reivindicaciÃ³n 5, en la que R2 representa alcoximetilo; o una sal de dicho compuesto.
8.

Un compuesto de fÃ³rmula I de acuerdo con la reivindicaciÃ³n 1, que se selecciona del grupo que consiste en:

–

Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–{(S)–4–carboxi–2–[(6–ciclopropil–2–fenil–pirimidin–4–carbonil)–amino]–butiril}–piperazin– 1–carboxÃlico;

–

Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[6–(trans–2–metoximetil–ciclopropil)–2–fenil–pirimidin–4–carbonil]– amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico;

–

Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[6–((1S,2S)–2–metoximetil–ciclopropil)–2–fenil–pirimidin–4–carbonil]– amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico;

–

Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[6–((1S,2S)–2–hidroximetil–ciclopropil)–2–fenil–pirimidin–4–carbonil]– amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico;

–

Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[2–(4–fluoro–fenil)–6–((1S,2S)–2–metoximetil–ciclopropil)–pirimidin– 4–carbonil]–amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico;

–

Ã‰ster butÃlico de Ã¡cido 4–((S)–4–carboxi–2–{[6–(cis–2–metoximetil–ciclopropil)–2–fenil–pirimidin–4–carbonil]– amino}–butiril)–piperazin–1–carboxÃlico;

o una sal de dicho compuesto.
9.

Como medicamento, un compuesto de fÃ³rmula I como se ha definido en las reivindicaciones 1 a 8, o una sal farmacÃ©uticamente aceptable del mismo.
10.

Una composiciÃ³n farmacÃ©utica que contiene al menos un compuesto de fÃ³rmula I como se ha definido en las reivindicaciones 1 a 8, o una sal farmacÃ©uticamente aceptable del mismo, y uno o mÃ¡s vehÃculos, diluyentes o excipientes farmacÃ©uticamente aceptables.
11.

Uso de un compuesto de fÃ³rmula I tal como se define en las reivindicaciones 1 a 8, o de una sal farmacÃ©uticamente aceptable del mismo, para la fabricaciÃ³n de un medicamento para el tratamiento de trastornos vasculares oclusivos.
12.

Un compuesto de fÃ³rmula I tal como se define en las reivindicaciones 1 a 8, o de una sal farmacÃ©uticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de trastornos vasculares oclusivos.