ES2347902T3 - Fase solida para uso en un procedimiento para la purificacion de conjugados de albumina. - Google Patents
Fase solida para uso en un procedimiento para la purificacion de conjugados de albumina. Download PDFInfo
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Abstract
Una matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica a la que está unida un conjugado de albúmina, en la que dicho conjugado de albúmina comprende una molécula seleccionada del grupo constituido por un péptido, un ADN, un ARN, vinorelbina, gemcitabina, paclitaxel, y una combinación de los mismos, en la que dicha matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica es una columna que contiene una resina hidrófoba seleccionada del grupo constituido por octilsefarosa, fenilseparosa y butilsefarosa, en el la que dicha matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica está en contacto con albúmina conjuntada.
Description
- (a)
- Campo de la invención
Esta invención se refiere a un procedimiento de purificación para el aislamiento de conjugados de albúmina de una solución que comprende tanto conjugados de albúmina como albúmina no conjugada.
- (b)
- Descripción de la técnica anterior
Los documentos WO 95/10302 y WO 99/24074 describen la formación de conjugados de albúmina en los que la molécula de interés tiene una funcionalidad reactiva acoplada a la misma que está adaptada para unirse covalentemente a albúmina, formando de este modo un conjugado. Estos conjugados se pueden formar in vivo, pero también se pueden formar in vitro. La formación del conjugado in vitro implica la adición de una molécula acoplada a una funcionalidad reactiva a una solución de albúmina. Los productos finales primarios de esta reacción son albúmina no conjugada, el conjugado de albúmina y la molécula no reaccionada acoplada con la funcionalidad reactiva.
Sería muy deseable proporcionar un procedimiento de purificación de conjugado de albúmina de una solución que comprende conjugado de albúmina y albúmina no conjugada. SUMARIO DE LA INVENCIÓN
De acuerdo con la presente invención se proporciona una matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica a la que está unida un conjugado de albúmina, en el que dicho conjugado de albúmina comprende una molécula seleccionada del grupo constituido por un péptido, un ADN, un ARN, vinorelbina, gemcitabina, paclitaxel, y una combinación de los mismos, en el que dicha matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica está en contacto con albúmina conjuntada
En una realización preferida de la presente invención el conjugado de albúmina consiste en una molécula que tiene un aceptor de Michael acoplado covalentemente a la misma que se une a albúmina, y más preferiblemente el enlace está entre el aceptor de Michael y cisteína 34 de albúmina.
En una realización más preferida de la presente invención el aceptor de Michael es un grupo maleimida, y más preferiblemente, el grupo maleimida es ácido maleimida-propiónico (MPA). El aceptor de Michael está acoplado de forma opcional a la molécula mediante un adaptador. El adaptador se selecciona preferiblemente del grupo constituido por motivos hidroxietílicos tales como ácido (2-amino)epoxi-acético (AEA), etilendiamina (EDA), ácido 2-[2(2-amino)etoxi)]etoxiacético (AEEA), ácido aminoetoxietilaminosuccínico (AEEAS); una o más motivos de cadenas de alquilo (C1-C10) tales como glicina, ácido 3-aminopropiónico (APA), ácido 8-aminooctanoico (AOA), ácido octanoico (OA), ácido 4-aminobenzoico (APhA). Son adaptadores preferidos OA, ADE, AEA, AEEA y AEEAS. Se puede usar también una combinación de dos adaptadores tales como, por ejemplo, AEEA-EDA, AEEA-AEEA, AEEASAEEAS y AEA-AEEA.
En una realización preferida de la presente invención la albúmina se selecciona del grupo constituido por albúmina de suero, albúmina recombinante y albúmina de una fuente genómica.
En una realización preferida de la presente invención, la albúmina se selecciona del grupo constituido por albúmina humana, albúmina de rata, albúmina de ratón, albúmina de cerdo, albúmina bovina, albúmina de perro y albúmina de conejo, más preferiblemente albúmina de suero humano.
En una realización preferida la albúmina es modificada con al menos uno seleccionado del grupo constituido por ácidos grasos, iones metálicos, moléculas pequeñas que presentan gran afinidad con la albúmina, y azúcares, tales como glucosa, lactosa y manosa, pero sin limitarse a ellos.
En una realización preferida de la presente invención, la molécula se selecciona del grupo constituido por un péptido, ADN, ARN, molécula orgánica pequeña y una combinación de los mismos. El péptido tiene preferentemente un peso molecular de al menos 57 daltons. Se pretende que el péptido incluya, pero sin limitarse a estos, GLP-1, GLP-2, ANP, K5, dinorfina, GRF, insulina, péptidos natriuréticos, T-20, T-1249, C-34 y PYY. La molécula pequeña se pretende que incluya, pero sin limitarse a estas, vinorelbina, gemcitabina y paclitaxel. En una realización más preferida de la presente invención, cuando la molécula es un ADN, ARN o una molécula orgánica pequeña, está unida covalentemente a la albúmina a través de un enlace covalente sensible a ácido o una secuencia de péptidos susceptible de escisión proteolítica, con lo que se posibilita la separación de la molécula de albúmina y la entrada de la molécula en una célula.
En una realización preferida de la presente invención, el soporte sólido hidrófobo es una columna que contiene una resina hidrófoba tal como, aunque sin limitarse a ellas, octilsefarosa, fenilsefarosa y butilsefarosa y más preferiblemente butilsefarosa.
En otra realización preferida de la presente invención, el soporte sólido hidrófobo que comprende un ligando hidrófobo tal como Cibacron Blue F3G-A, grupos éter o isopropilo junto con un soporte tal como matriz de poliestireno/divinilbenceno.
Las sustancias se separan en base a sus resistencias variables de interacciones hidrófobas con ligandos hidrófobos inmovilizados a una matriz no cargada. Esta técnica se lleva a cabo normalmente con concentraciones moderadamente altas de sales (1 M) en el tampón de partida (adsorción promovida por sal). La elución se consigue mediante una reducción lineal o en etapas en la concentración de sal.
El tipo de ligando, el grado de sustitución, el pH y el tipo y concentración de sal usados durante la fase de adsorción tienen un efecto profundo en el rendimiento global (por ejemplo, selectividad y capacidad) de una matriz de HlC (matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica).
El disolvente es uno de los parámetros más importantes que influyen en la capacidad y selectividad en HIC (cromatografía de interacción hidrofóbica). Por lo general el proceso de adsorción es más selectivo que el proceso de desorción. Por tanto es importante optimizar el tampón de partida en lo que respecta a pH, tipo de disolvente, tipo de sal y concentración de sal. La adición de diversas sales “de efecto de saturación” (“salting-out”) a la muestra promueve las interacciones de ligando-proteína en HIC. Cuando la concentración de sal aumenta, la cantidad de proteína unida aumenta hasta el punto de precipitación de la proteína. Cada tipo de sal difiere en su capacidad para promover interacciones hidrofóbicas. La influencia de diferentes sales en interacción hidrofóbica sigue las series de Hofmeister bien conocidas siguientes: Series de Hofmeister Efecto de saturación con sales Aniones:
PO43-> SO42-> CH3COO-> Cl-> Br > NO3 > ClO4 > SCN-Efecto caotrópico Cationes:
NH4+ < Rb+ <K+< Na+<Cs+ < Li+<Mg2+ < Ba2+
Aumentando el efecto de saturación con sales se refuerza las interacciones hidrofóbicas, mientras que aumentando el efecto caotrópico se debilitan. Por lo tanto el sulfato de amonio muestra un efecto de saturación con sales más fuerte que el cloruro de sodio. Las sales más habitualmente usadas para HIC son sulfato de amonio ((NH4)2SO4), sulfato de sodio ((Na)2SO4)), sulfato de magnesio (MgSO4), cloruro de sodio (NaCl), cloruro de potasio (KCl) y acetato de amonio (CH3COONH4).
La unión de proteína a adsorbentes de HIC es promovida mediante concentraciones de moderadas a altas de sales “de efecto de saturación”, la mayoría de las cuales también tienen una influencia estabilizante sobre la estructura de la proteína debido a su exclusión preferencial de proteínas globulares nativas, es decir, la interacción entre la sal y la superficie de la proteína es termodinámicamente desfavorable. La concentración de sal debería ser suficientemente alta (por ejemplo, de 500 a 1000 mM) para promover las interacciones ligando-proteína aún por debajo de la que provoca la precipitación de la proteína en la muestra. En el caso de albúmina la concentración de sal debería mantenerse por debajo de 3 M (moles por litro). El mecanismo principal de de saturación con sales consiste en el aumento inducido por sal de la tensión superficial de agua (Melander and Horváth, 1977). Por tanto una estructura compacta llega a ser energéticamente más favorable debido a que corresponde a menor área interfacial de la solución de proteína.
De forma interesante se ha encontrado que en las mismas condiciones (es decir, tampón compuesto por SO42-, PO42-o CH3COO-con cualquier contraión), estas sales muestran su efecto de saturación con sales esencialmente sobre toda la albúmina conjugada descrita en esta invención de una forma diferente a la albúmina no conjugada (es decir, mercaptoalbúmina y albúmina bloqueada con cisteína), permitiendo así una separación cromatográfica consistente entre albúmina conjugada frente a albúmina no conjugada. Es decir, se ha observado que se requieren menores concentraciones de sal para promover interacciones entre el ligando y la albúmina conjugada que entre el ligando y la albúmina no conjugada. Esta separación cromatográfica es esencialmente independiente de (a) la secuencia de albúmina (por ejemplo, humana, ratón, rata, etc.) (b) la fuente de albúmina (es decir, derivado de plasma o recombinante) (c) el peso molecular de la molécula conjugada, (d) la posición del aceptor de Michael (o grupo maleimida) dentro de la estructura de la molécula, (e) la secuencia de péptidos o estructura química de la molécula, y (f) la estructura tridimensional de la molécula conjugada, por ejemplo, estructura lineal frente a bucle.
En una realización preferida de la presente invención la sal del tampón acuoso tiene un efecto de saturación con sales suficiente. Para proporcionar un efecto de saturación con sales suficiente, la sal es preferiblemente, pero sin limitarse a esta, fosfato, sulfato y acetato. Más preferiblemente, la sal es fosfato o sulfato. La selección del catión del tampón es menos crítica y por tanto se puede seleccionar tal catión, sin limitación, del grupo constituido por NH4+, Rb+, K+, Na+, Cs+, Li+, Mg2+ y Ba2+ .
El tampón acuoso es preferiblemente fosfato de amonio, sulfato de amonio y fosfato de magnesio y más preferiblemente sulfato de amonio.
En una realización preferida de la presente invención el pH del tampón está preferiblemente entre 3,0 y 9,0; más preferiblemente entre 6,0 y 8,0 e incluso más preferiblemente el pH es 7,0.
En una realización preferida de la presente invención el tampón y el soporte sólido hidrófobo están a temperatura ambiente (aproximadamente 25 ºC) o a 4 ºC o entre ambas.
La tabla 1 muestra un ejemplo del efecto de diferentes sales para la purificación de conjugado HSA:primer análogo de GLP-1 preformado de una solución de HSA usando resina de butil-sefarosa (se describe la estructura del primer análogo de GLP-1 en el ejemplo 1 siguiente).
Tabla 1
- Tipo de sal
- Concentración de sal de partida de 750 mM Concentración de sal de partida de 1,750 mM
- Fosfato de amonio
- Si Si
- Sulfato de amonio
- Si Si
- Cloruro de amonio
- No No
- Yoduro de amonio
- No No
- Tiocianato de amonio
- No No
- Sulfato de magnesio
- No Si
- Fosfato de magnesio*
- - -
- Sulfato de bario*
- - -
- * significa que la sal no es soluble a concentraciones de 1750 mM o 750 mM en fosfato de sodio 20 mM (pH 7), caprilato 5 mM Si significa que se consigue resolución exitosa entre el conjugado HSA:primer análogo de GLP-1 y el HSA no conjugado No significa que no se consigue separación entre el conjugado HSA:primer análogo de GLP-1 y el HSA no conjugado
5 El término “péptido” se pretende que signifique una secuencia de aminoácido que presente un peso molecular de al menos 57 daltons. La secuencia peptídica puede ser circular (estructura en bucle) tal como ANP, puede contener más de una cadena de aminoácido tal como insulina o puede ser lineal tal como K5, dinorfina A, C-34 y GLP-1.
10 La figura 1 ilustra la purificación del conjugado HSA:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1); La figura 2 ilustra la purificación del conjugado HSA:primer análogo de GRF (SEC ID nº 2); La figura 3 ilustra la purificación del HSA no conjugado; 15 La figura 4 ilustra la purificación del conjugado rHSA:primer análogo de GLP-1 (SEC ID
nº 1); La figura 5 ilustra la purificación de HSA; La figura 6 ilustra la purificación del conjugado HSA: análogo de K5 (SEC ID nº 3); La figura 7 ilustra la purificación del conjugado HSA:primer derivado de insulina que
presenta modificación en la cadena A (SEC ID nº 4);
La figura 8 ilustra la purificación del conjugado HSA:segundo derivado de insulina que presenta modificación en la cadena A (SEC ID nº 5);
La figura 9 ilustra la purificación del conjugado HSA:primer análogo de C34 (SEC ID nº 6);
La figura 10 ilustra la purificación del conjugado HSA:segundo análogo de C34 (SEC ID nº 7);
La figura 11 ilustra la purificación del conjugado HSA:tercer análogo de C34 (SEC ID nº 8);
La figura 12 ilustra la purificación de L-cisteína;
La figura 13 ilustra la purificación de L-cisteína:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1);
La figura 14 ilustra la purificación del conjugado HSA:segundo análogo de GLP-1 (SEC ID nº 9);
La figura 15 ilustra la purificación del conjugado HSA:tercer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 10);
La figura 16 ilustra la purificación del conjugado HSA:cuarto análogo de GLP-1 (SEC ID nº 11);
La figura 17 ilustra la purificación del conjugado HSA:quinto análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1);
La figura 18 ilustra la purificación del conjugado HSA:primer análogo de exendina-4 (SEC ID nº 13);
La figura 19 ilustra la purificación del conjugado HSA:segundo análogo de exendina-4 (SEC ID nº 14);
La figura 20 ilustra la purificación de HSA:MPA;
La figura 21 ilustra la purificación de HSA;
La figura 22 ilustra la purificación del conjugado HSA:segundo análogo de C34 (SEC ID nº 3);
La figura 23 ilustra la purificación del conjugado HSA:primer análogo de dinorfina A (SEC ID nº 15);
La figura 24 ilustra la purificación del conjugado HSA:primer análogo de ANP (SEC ID nº 16);
La figura 25 ilustra la purificación del conjugado HSA:segundo análogo de dinorfina A (SEC ID nº 17);
La figura 26 ilustra la purificación del conjugado HSA:inhibidor de ACE (SEC ID nº 18);
La figura 27 ilustra la purificación del conjugado HSA:sexto análogo de GLP-1 (SEC ID
nº 19);
La figura 28 ilustra la purificación del conjugado HSA:séptimo análogo de GLP-1 (SEC ID nº 20);
La figura 29 ilustra la purificación del conjugado HSA:octavo análogo de GLP-1 (SEC ID nº 21);
La figura 30 ilustra la purificación del conjugado HSA:noveno análogo de GLP-1 (SEC ID nº 22);
La figura 31 ilustra la purificación del conjugado HSA:décimo análogo de GLP-1 (SEC ID nº 23);
La figura 32 ilustra la purificación del conjugado HSA:undécimo análogo de GLP-1 (SEC ID nº 24);
La figura 33 ilustra la purificación del conjugado HSA:tercer análogo de exendina-4 (SEC ID nº 25);
La figura 34 ilustra la purificación del conjugado HSA:duodécimo análogo de GLP-1 (SEC ID nº 26);
La figura 35 ilustra la purificación del conjugado HSA:primer derivado de insulina (SEC ID nº 4);
La figura 36 ilustra la purificación del conjugado HSA:tercer derivado de insulina (SEC ID nº 27);
La figura 37 ilustra la purificación del conjugado HSA:segundo derivado de insulina (SEC ID nº 5);
La figura 38 ilustra la purificación del conjugado HSA:cuarto derivado de insulina (SEC ID nº 28);
La figura 39 ilustra la purificación del conjugado HSA:primer análogo de GRF (SEC ID nº 2);
La figura 40 ilustra la purificación del conjugado HSA:segundo análogo de GRF (SEC ID nº 29);
La figura 41 ilustra la purificación del conjugado HSA:tercer análogo de GRF (SEC ID nº 30);
La figura 42 ilustra la purificación del conjugado HSA:cuarto análogo de GRF (SEC ID nº 31);
La figura 43 ilustra la purificación del conjugado HSA:decimotercer análogo de GLP-1 CJC 1365 (SEC ID nº 32);
La figura 44 ilustra la purificación del conjugado lactosa HSA:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1);
La figura 45 ilustra la purificación del conjugado HSA:primer análogo de T20 (SEC ID nº 33);
La figura 46 ilustra la purificación del conjugado HSA:primer análogo de T1249 (SEC ID nº 34);
La figura 47 ilustra la purificación del compuesto HSA:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1);
La figura 48 ilustra la purificación del compuesto HSA:primer análogo de C-34 (SEC ID nº 6);
La figura 49 ilustra la purificación del compuesto HSA:segundo análogo de GFR (SEC ID nº 29);
La figura 50 ilustra la purificación del conjugado HSA:conjugado de análogo de vinorelbina (SEC ID nº 35);
La figura 51 ilustra la purificación de L-cisteína;
La figura 52 ilustra la purificación de conjugado L-cisteína:análogo de vinorelbina (SEC ID nº 35);
La figura 53 ilustra la purificación del conjugado RSA:tercer análogo de exendina-4 (SEC ID nº 25);
La figura 54 ilustra la purificación del conjugado HSA:cuarto análogo de C-34 (SEC ID nº 36);
La figura 55 ilustra la purificación del conjugado HSA:quinto análogo de C-34 (SEC ID nº 37);
La figura 56 ilustra la purificación del conjugado HSA:sexto análogo de C-34 (SEC ID nº 38);
La figura 57 ilustra la purificación del conjugado HSA:séptimo análogo de C-34 (SEC ID nº 39);
La figura 58 ilustra la purificación del conjugado HSA:octavo análogo de C-34 (SEC ID nº 40);
La figura 59 ilustra la purificación del conjugado HSA:primer análogo de PYY (SEC ID nº 41);
La figura 60 ilustra la purificación del conjugado HSA:segundo análogo de PYY (SEC ID nº 42);
La figura 61 ilustra la purificación del conjugado HSA:quinto derivado de insulina (SEC ID nº 43);
La figura 62 ilustra la purificación del conjugado HSA:sexto derivado de insulina (SEC ID nº 44);
La figura 63 ilustra la purificación del conjugado HSA:séptimo derivado de insulina (SEC ID nº 45);
La figura 64 ilustra la purificación del conjugado HSA:tercer análogo de PYY (SEC ID nº 46);
La figura 65 ilustra la purificación del conjugado HSA:cuarto análogo de PYY (SEC ID nº 47);
La figura 66 ilustra la purificación del conjugado HSA:quinto análogo de PYY (SEC ID nº 48);
La figura 67 ilustra la purificación del conjugado HSA:sexto análogo de PYY (SEC ID nº 49);
La figura 68 ilustra la purificación del conjugado HSA:segundo análogo de ANP (SEC ID nº 50);
Las figuras 69A-B ilustran la purificación del conjugado HSA:tercer análogo de ANP CJC1681 (SEC ID nº 51);
La figura 70 ilustra la purificación del conjugado HSA:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1);
La figura 71 ilustra la purificación del conjugado HSA:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1);
La figura 72 ilustra la purificación del conjugado HSA:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1);
La figura 73 ilustra la purificación del conjugado HSA:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1);
La figura 74 ilustra la purificación del conjugado HSA:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1);
La figura 75 ilustra la purificación del conjugado HSA:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 52); y
La figura 76 ilustra la purificación del conjugado RSA:primer análogo de GLP-2 (SEC ID nº 52). DESCRIPCIÓN DETALLADA DE UNA REALIZACIÓN PREFERIDA DE LA INVENCIÓN Procedimientos Preparación de albúmina de suero humano (no conjugado) (HSA) para control y conjugados de albúmina preformados
Se solubilizó cada compuesto con el aceptor de Michael en agua nanopura (o en DMSO si el compuesto era difícil de solubilizar) a una concentración de 10 mM, luego se diluyó hasta 1 mM en una solución de HSA (25 %, 250 mg/ml, Cortex-Biochem, San Leandro, CA). Se incubaron luego las muestras a 37 ºC durante 30 minutos. Antes de su purificación se diluyó cada solución de conjugado hasta el 5 %, 50 mg/ml de HSA en tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7) constituido por octanoato de sodio 5 mM. Se puede añadir la concentración inicial de sal usada en el gradiente de solución al tampón para dilución de la solución mixta. Preferiblemente la concentración inicial de sal es de aproximadamente 750 a aproximadamente 1700 mM de (NH4)2SO4-.
Procedimiento para la purificación de acuerdo con una realización preferida
Usando un purificador ÄKTA (Amersham Biosciences, Uppsala, Suecia), se cargó cada conjugado con un caudal de 2,5 ml/min en una columna de 50 ml de resina de flujo rápido de butilsefarosa 4 (Amersham Biosciences, Uppsala, Suecia) equilibrada en tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7) compuesta por octanoato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM a 1,7 M. En estas condiciones los conjugados de HSA que presentan una adición de peso molecular de más de 2 kDa respecto a HSA no conjugado se adsorbían en la resina hidrófoba mientras que esencialmente todo el HSA no conjugado eluyó dentro del volumen hueco de la columna. Para adiciones de peso molecular inferiores a 2 kDa se puede usar un contenido en sal inicial mayor seguido de un gradiente en etapas decreciente de sal. Cada conjugado se purificó adicionalmente a partir de cualquier compuesto no conjugado libre mediante aplicación de un gradiente decreciente continuo o no continuo de sal ((NH4)2SO4 de 750 a 0 mM) sobre 4 volúmenes de columna. En una realización preferida, cada conjugado purificado se desaló luego y se concentró mediante diafiltración, por ejemplo usando dispositivos de filtro (30 kDa) Amicon® de ultracentrífuga (Millipore Corporation, Bedford, MA). Finalmente, para almacenamiento prolongado, cada solución de conjugado se sumerge preferiblemente en nitrógeno líquido, y se liofiliza usando un sistema de liofilización Labconco (FreeZone®4.5) y se conserva a -20 ºC. Ejemplos de análisis por LC/EMS
Tras la purificación, se inyecta preferiblemente 1 µl de cada muestra de conjugado en el sistema LC/EMS. El conjugado HSA:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1) fue confirmado por detección de una especie de mayor abundancia con una masa total de 70160 Da, lo que corresponde a la masa de mercaptoalbúmina (66448 Da) donde cisteína 34 está en la forma tiol libre, más la masa de una única molécula del primer análogo de GLP-1 (3719,9 Da). La estructura del primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1) se describe en el ejemplo 1 siguiente. Esto se ilustra en la tabla 2.
Tabla 2
- Componente
- Peso molecular Abundancia absoluta Abundancia relativa
- A
- 70160,58 321970 100,00
- B
- 65862,95 70008 21,74
- C
- 64545,45 62888 19,53
- D
- 70320,04 41167 12,79
- E
- 61287,67 16842 5,23
- F
- 60623,81 16522 5,13
- G
- 58090,04 12473 3,87
El conjugado HSA:primer análogo de GRF (SEC ID nº 2) fue confirmado por detección de una especie de mayor abundancia con una masa total de 70086 Da, lo que corresponde a la masa de mercaptoalbúmina (66448 Da) donde cisteína 34 está en la forma tiol libre, más la masa de una única molécula del primer análogo de GRF (3648,2 Da). La estructura del primer análogo de GRF (SEC ID nº 2) se describe en el ejemplo 2 siguiente. Esto se ilustra en la tabla
3.
Tabla 3
- Componente
- Peso molecular Abundancia absoluta Abundancia relativa
- A
- 70086,06 279413 100,00
- B
- 63214,84 53333 19,09
- C
- 62148,17 38582 13,81
- D
- 70247,98 34870 12,48
- E
- 56795,96 10523 3,77
- F
- 62695,49 9813 3,51
10
Los siguientes ejemplos ilustran varios compuestos que tienen un grupo maleimida como aceptor de Michael que se han conjugado con albúmina y purificado de acuerdo con el procedimiento de la presente invención.
Los siguientes ejemplos tienen la finalidad de ilustrar la presente invención y no limitar 15 su alcance. En los siguientes ejemplos los números de gradiente se refieren a los siguientes detalles de gradiente, mientras que CV significa un volumen de columna de 50 ml.
Gradiente nº 1: (NH4)2SO4 de 750 – 0 mM lineal, sobre 4 CV, caudal de 2,5 ml/min
Gradiente nº 2: (NH4)2SO4 de 1,75 M – 1,2 M gradiente en etapas sobre 0,5 CV, seguido de (NH4)2SO4 de 1,2 M – 875 mM sobre 5 CV y finalmente (NH4)2SO4 de 875 mM – O mM sobre 0,5 CV caudal de 2,5 ml/min
Gradiente nº 3: (NH4)2SO4 de 900 – 0 mM lineal sobre 4 CV, caudal de 2,5 ml/min
Gradiente nº 4: (NH4)2SO4 de 1,5 M a 1,1 M gradiente en etapas sobre 0,5 CV, seguido de (NH4)2SO4 1,1 M – 375 mM sobre 6 CV, y finalmente (NH4)2SO4 375 mM – O mM sobre 0,5 CV, caudal de 2,5 ml/min
Gradiente nº 5: (NH4)2SO4 lineal de 750 – 0 M sobre 2 CV, caudal de 2,5 ml/min
Gradiente nº 6: (NH4)2SO4 de 1,75 M -0 M gradiente en etapas sobre 6 CV, caudal de 2,5 ml/min
Gradiente nº 7: (NH4)2SO4 de 750 – 0 mM lineal sobre 6 CV, caudal de 2,5 ml/min. Ejemplo 1 Purificación del conjugado HSA:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1)
El primer análogo de GLP-1 es GLP-1 (7-36) dAla8Lys37 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con primer análogo de GLP-1 1 mM diluido en 9 ml de tampón constituido por tampón de fosfato de sodio 20 mM pH 7,0, caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 1 la fracción de conjugado purificada eluye durante el gradiente de concentración de (NH4)2SO4 decreciente como fracción B (F8-F9), mientras que la albúmina no conjugada eluye en el volumen hueco de la columna (fracción A). La fracción de conjugado se concentró con filtro de 30 kDa UltrafreeTM y se analizó usando LCEMS. Ejemplo 2 Purificación del conjugado HSA:primer análogo de GRF (SEC ID nº 2)
El primer análogo de GRF es GRF (1-29) dAla2Gln8Ala15Leu27Lys30 (ε-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con primer análogo de GRF 1 mM diluido en 9 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 2 la fracción de conjugado purificada eluye en fracción B (F6-F7), mientras que la albúmina no conjugada eluye en el volumen hueco de la columna (fracción A). La fracción de conjugado se concentró con filtro de 30 kDa UltrafreeTM y se analizó usando LCEMS.
Ejemplo 3 Purificación de HSA no conjugado 1 ml
La purificación de 1 ml de 250 mg/ml de HSA no conjugado al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) diluido en 9 ml de tampón (pH 7,0), constituido por tampón de fosfato de sodio 20 mM, caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. Esencialmente todas las moléculas de albúmina eluyen en el volumen hueco y no se observan especies de proteínas a 280 nm durante el gradiente de (NH4)2SO4. La figura 3 ilustra la curva de separación obtenida. Ejemplo 4 Purificación del conjugado rHSA:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1)
El primer análogo de GLP-1 es GLP-1 (7-36) dAla8Lys37 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y se muestra su secuencia en el ejemplo 1.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 5 ml de rHSA al 5 % (HSA recombinante de calidad para cultivo de nuevo siglo) con primer análogo de GLP-1 200 µM diluido en 5 ml de un tampón constituido por fosfato de sodio 20 mM, caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 4 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción B (F7-F8-F9). Ejemplo 5 Purificación de HSA 10 ml
La purificación de 10 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) diluido en 40 ml de tampón constituido por tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. Esencialmente todas las moléculas de albúmina eluyen en el volumen hueco y no se observan especies de proteína a 280 nm durante el gradiente de (NH4)2SO4. La figura 5 ilustra la curva de separación obtenida. Ejemplo 6 Purificación del conjugado HSA:análogo de K5 (SEC ID nº 3)
El análogo de K5 es Ac-K5 Lys8 (ε-MPA)-NH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 4 ml de 250 4 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con análogo de K5 1 mM diluido en 16 ml de un tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM,
5 se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 6 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción A con albúmina y en la fracción B (F6-F7-F8).
Ejemplo 7
Purificación de conjugado HSA:primer derivado de insulina (SEC ID nº 4)
10 El primer derivado de insulina es insulina humana con MPA en la posición B1 y se representa en la figura 1 siguiente.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con primer derivado de insulina 1 mM diluido en 9 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 7 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción B (F6F7-F8). Ejemplo 8 Purificación de conjugado HSA:segundo derivado de insulina (SEC ID nº 5)
El segundo derivado de insulina es insulina humana con MPA en la posición A1 y está representada en la figura 1 mostrada anteriormente en el ejemplo 7.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con segundo derivado de insulina 1 mM diluido en 9 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 8 la fracción de conjugado purificada aparece en la fracción B (F6-F7-F8). Ejemplo 9 Purificación de conjugado HSA:primer análogo de C34 (SEC ID nº 6)
El primer análogo de C34 es MPA-AEEA-C34-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 5 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con primer análogo de C34 1 mM diluido en 20 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 9 la fracción de conjugado purificada aparece en la fracción F2. Ejemplo 10 Purificación de conjugado HSA:segundo análogo de C34 (SEC ID nº 7)
El segundo análogo de C34 es C34 (1-34) Lys35 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y tiene la La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 5 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con segundo análogo de C34 1 mM diluido en 20 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM, caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 10 la fracción de conjugado purificada aparece en la fracción F2.
Ejemplo 11
Purificación de conjugado HSA:tercer análogo de C34 (SEC ID nº 8)
El tercer análogo de C34 es C34 (1-34) Lys13 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente estructura:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 5 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con tercer análogo de C34 1 mM diluido en 20 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 11 la fracción de conjugado purificada aparece en la fracción F2. Ejemplo 12 Purificación de I-cisteína
La purificación de 121 mg de I-cisteína en 2 ml de un tampón constituido por fosfato de sodio 20 mM, caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 5 descrito anteriormente. La figura 12 ilustra la curva de separación obtenida, donde L-cisteína eluye en el volumen hueco de la columna (F3). Ejemplo 13 Purificación de conjugado L-cisteína:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1)
El primer análogo de GLP-1 (7-36) dAla8 Lys37 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y su secuencia se mostró anteriormente en el ejemplo 1.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 121 mg de L-cisteína con 36,36 mg de primer análogo de GLP-1 diluido en 2 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 5 descrito anteriormente. La figura 13 ilustra la curva de separación obtenida, donde L-cisteína en exceso eluye en F3 (volumen hueco de la columna) y el conjugado L-cisteína:primer análogo de GLP-1 eluye en (NH4)2SO4 0 mM.
El segundo análogo de GLP-1 es GLP-1 (7-36) Lys37 (ε-MPA)-NH2 y tiene la siguiente
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2,5 ml de HSA 250 mg/ml al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con segundo análogo de GLP-1 1 mM diluido en 10 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 5 descrito anteriormente. En la figura 14 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 15 Purificación de conjugado HSA:tercer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 10)
El tercer análogo de GLP-1 es GLP-1 (7-36) Lys37 (ε-MPA)-NH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2,5 ml de HSA 250 mg/ml al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con tercer análogo de GLP-1 1 mM diluido en 10 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 5 descrito anteriormente. En la figura 15 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 16 Purificación de conjugado HSA:cuarto análogo de GLP-1 (SEC ID nº 11)
El cuarto análogo de GLP-1 es GLP-(7-36) Lys26 (ε-AEEA-AEEA-MPA) y tiene la
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2,5 ml de HSA 250 mg/ml al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con cuarto análogo de GLP-1 1 mM diluido en 10 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 16 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 17 Purificación de conjugado HSA:quinto análogo de GLP-1 (SEC ID nº 12)
El quinto análogo de GLP-1 es GLP-1 (7-36) Lys34 (ε-AEEA-AEEA-MPA) y tiene la
siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2,5 ml de HSA 250 mg/ml al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con quinto análogo de GLP-1 1 mM diluido en 10 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 17 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 18 Purificación de conjugado HSA:primer análogo de exendina-4 (SEC ID nº 13)
El primer análogo de exendina-4 es exendina-4-(1-39) Lys40 (ε-MPA)-NH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1 ml de HSA 250 mg/ml al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con primer análogo de exendina-4 1 mM diluido en 9 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 18 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 19 Purificación de conjugado HSA:segundo análogo de exendina-4 (SEC ID nº 14)
El segundo análogo de exendina-4 es exendina-4-(9-39) Lys40 (ε-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 3,5 ml de HSA 250 mg/ml al 25 % de Cortex con segundo análogo de exendina-4 1 mM diluido en 21,5 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 19 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 20 Purificación de HSA:MPA
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1 ml de HSA 250 mg/ml al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con MPA 2 mM diluido en 9 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 1750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 2 descrito anteriormente. En la figura 20 la fracción de mercaptoalbúmina está en la fracción A (F5) y la albúmina bloqueada está en la fracción B (F7-F8). Se concentró la fracción conjugada con filtro de 30 kDa de AmiconTM .
Ejemplo 21 Purificación de HSA
La purificación de 1 ml de HSA 250 mg/ml al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) diluido en 9 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 1750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 2 descrito anteriormente. Cuando se usa el gradiente nº 2, a diferencia de los gradientes nº 1 y nº 5, tanto la albúmina conjugada como la albúmina no conjugada se adsorbe sobre la resina hidrófoba durante la carga de la muestra. La figura 21 ilustra la curva de separación obtenida cuando F4 y F5 se enriquecen en mercaptoalbúmina y F6, F7 y F8 se enriquecen en albúmina bloqueada. Ejemplo 22 Purificación de conjugado HSA:segundo análogo de C34 (SEC ID nº 3)
El segundo análogo de C34 es C34 (1-34) Lys35 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y su estructura se muestra en el ejemplo 10.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con segundo análogo de C34 1 mM diluido en 9 ml de un tampón constituido por fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 1750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 2 descrito anteriormente. En la figura 22 la mercaptoalbúmina aparece en la fracción A (F5) y albúmina bloqueada y el conjugado purificado está en la fracción B (F7-F8). Ejemplo 23 Purificación de conjugado HSA:primer análogo de dinorfina A (SEC ID nº 15)
El primer análogo de dinorfina A es DynA (1-13) (MPA)-NH2 y tiene la siguiente secuencia: YGGFLRRIRPKLK(MPA)-CONH2.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con primer análogo de dinorfina A 1 mM diluido en 9 ml de un tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 1750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 2 descrito anteriormente. En la figura 23 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción A (F11-F12). Ejemplo 24 Purificación de conjugado HSA:primer análogo de ANP (SEC ID nº 16)
El primer análogo de ANP es MPA-AEEA-ANP (99-126)-CONH2 y tiene la siguiente estructura:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con primer análogo de ANP 1 mM diluido en
5 9 ml de un tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 1750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 2 descrito anteriormente. En la figura 24 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción A (F14).
Ejemplo 25 10 Purificación de conjugado HSA:segundo análogo de dinorfina A (SEC ID nº 17) El segundo análogo de dinorfina A es DynA (7-13) Lys13 (ε-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1 ml de 250 mg/ml de
15 HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con segundo análogo de dinorfina A 1 mM diluido en 9 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 1750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 2 descrito anteriormente. En la figura 25 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción A (F9).
20 Ejemplo 26 Purificación de conjugado HSA:inhibidor de ACE (SEC ID nº 18) El inhibidor de ACE usado en este ejemplo es acetil-Phe-His-ciclohexilestatillie-Lys (εAEEA-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con inhibidor de ACE 1 mM diluido en 9 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 1750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 2 descrito anteriormente. En la figura 26 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción A (F14).
Ejemplo 27
Purificación de conjugado HSA:sexto análogo de GLP-1 (SEC ID nº 19)
El sexto análogo de GLP-1 es GLP-1 (7-36) Lys23 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 3 ml de HSA 250 mg/ml al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con sexto análogo de GLP-1 1 mM diluido en 22 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 1750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 27 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 28 Purificación de conjugado HSA:séptimo análogo de GLP-1 (SEC ID nº 20)
El séptimo análogo de GLP-1 es GLP-1 (7-36) Lys18 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 3 ml de HSA 250 mg/ml al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con séptimo análogo de GLP-1 1 mM diluido en 22 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 28 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 29 Purificación de conjugado HSA:octavo análogo de GLP-1 (SEC ID nº 21)
El octavo análogo de GLP-1 es GLP-1 (7-36) Lys26 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2,5 ml de HSA 250 mg/ml al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con octavo análogo de GLP-1 1 mM diluido en 22,5 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 29 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2.
El noveno análogo de GLP-1 es GLP-1 (7-37) Lys27 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 3 ml de HSA 250 mg/ml al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con noveno análogo de GLP-1 1 mM diluido en 22 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 30 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 31 Purificación de conjugado HSA:décimo análogo de GLP-1 (SEC ID nº 23)
El décimo análogo de GLP-1 es GLP-1 (7-37) Lys37 (ε-AEEA-AEEA-MPA)-CONH2 y
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2,5 ml de HSA 250 mg/ml al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con décimo análogo de GLP-1 1 mM diluido en 22,5 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 31 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 32 Purificación de conjugado HSA:undécimo análogo de GLP-1 (SEC ID nº 24)
El undécimo análogo de GLP-1 es GLP-1 (7-36) Lys37 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2,5 ml de HSA 250 mg/ml al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con undécimo análogo de GLP-1 1 mM diluido en 22,5 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 32 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 33 Purificación de conjugado HSA:tercer análogo de exendina-4 (SEC ID nº 25)
El tercer análogo de exendina-4 es exendina-4-(1-39) Lys40 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y
5
10
15
20
25
30
23
tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2,5 ml de HSA 250 mg/ml al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con tercer análogo de exendina-4 1 mM diluido en 22,5 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 33 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 34 Purificación de conjugado HSA:duodécimo análogo de GLP-1 (SEC ID nº 26)
El duodécimo análogo de GLP-1 es GLP-1 (7-36) Lys34 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y tiene la
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2,5 ml de HSA 250 mg/ml al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con duodécimo análogo de GLP-1 1 mM diluido en 22,5 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 34 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 35 Purificación de conjugado HSA:primer derivado de insulina (SEC ID nº 4)
El primer derivado de insulina es insulina humana con MPA en la posición B1 y su estructura se detalla en el ejemplo 7.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2,5 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con primer derivado de insulina 1 mM diluido en 22,5 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 35 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 36 Purificación de conjugado HSA:tercer derivado de insulina (SEC ID nº 27)
El tercer derivado de insulina es insulina humana con OA-MPA en la posición B1 y se representa en la figura 1 mostrada anteriormente en el ejemplo 7.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 4 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con tercer derivado de insulina 1 mM diluido en 21 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 36 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2.
Ejemplo 37
Purificación de conjugado HSA:segundo derivado de insulina (SEC ID nº 5)
El segundo derivado de insulina es insulina humana con MPA en la posición A1 y se representa en la figura 1 mostrada anteriormente en el ejemplo 7.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 3 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con segundo derivado de insulina 1 mM diluido en 22 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 37 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 38 Purificación de conjugado HSA:cuarto derivado de insulina (SEC ID nº 28)
El cuarto derivado de insulina es insulina humana con MPA en la posición B29 y se representa en la figura 1 mostrada anteriormente en el ejemplo 7.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 3 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con cuarto derivado de insulina 1 mM diluido en 22 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 38 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 39 Purificación del conjugado HSA:primer análogo de GRF (SEC ID nº 2)
El primer análogo de GRF es GRF (1-29) dAla2 Gln8 Ala15 Leu27 Lys30 (ε-MPA)-CONH2 y se muestra su secuencia en el ejemplo 2.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 3,7 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con primer análogo de GRF 1 mM diluido en 22 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 39 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 40 Purificación del conjugado HSA:segundo análogo de GRF (SEC ID nº 29)
El segundo análogo de GRF es GRF (1-29) Lys30 (ε-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2,5 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con segundo análogo de GRF 1 mM diluido en 22,5 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 900 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 3 descrito anteriormente. En la figura 40 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 41 Purificación del conjugado HSA:tercer análogo de GRF (SEC ID nº 30)
El tercer análogo de GRF es GRF (1-29) dAla2 Gln8 dArg11 Ala15 Leu 27 Lys30 (ε-MPA)CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2,5 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con tercer análogo de GRF 1 mM diluido en 22,5 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 3 descrito anteriormente. En la figura 41 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2.
El cuarto análogo de GRF es GRF (1-29) dAla2 Lys30 (ε-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2,5 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con cuarto análogo de GRF 1 mM diluido en 22,5 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 900 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 3 descrito anteriormente. En la figura 42 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 43 Purificación de conjugado HSA:decimotercer análogo de GLP-1 CJC 1365 (SEC ID nº 32)
El decimotercer análogo de GLP-1 es GLP-1 (9-36) Lys37 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 3,5 ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) y decimotercer análogo de GLP-1 1 mM diluido en 21,5 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 43 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 44 Purificación de conjugado HSA lactosa:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1)
El primer análogo de GLP-1 es GLP-1 (7-36) dAla8 Lys37 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y su secuencia se muestra anteriormente en el ejemplo 1.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 4 ml de albúmina lactosaaminada al 25 % (HSA pre-incubada con lactosa en exceso a 37 ºC, pH 7,0) con primer análogo de GLP-1 200 µM en 4 ml de un tampón constituido por fosfato de sodio 20 mM, caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM (pH 7,0), se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 44 la fracción de conjugado lactosaaminada aparece en la fracción F2. Ejemplo 45 Purificación de conjugado HSA:primer análogo de T-20 (SEC ID nº 33)
El primer análogo de T-20 es Ac-T20 (1-36) Lys37 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2,5 ml de HSA al 25 % con primer análogo de T20 1 mM en 10 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 45 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 46 Purificación de conjugado HSA:primer análogo de T-1249 (SEC ID nº 34)
El primer análogo de T1249 es Ac-T1249 (1-39) Lys40 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2 ml de HSA al 25 % y primer análogo de T1249 1 mM en 10,5 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 46 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F4.
Ejemplo 47
Purificación de un conjugado HSA:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1)
El primer análogo de GLP-1 es GLP-1 (7-36) dAla8 Lys37 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y su secuencia se muestra en el ejemplo 1.
La purificación de 114,45 mg del conjugado preformado del primer análogo de GLP-1 en 12,5 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 5 descrito anteriormente. La figura 47 ilustra la curva de separación obtenida con el conjugado encontrado en la fracción F2. Ejemplo 48 Purificación de un HSA:primer análogo de C34 (SEC ID nº 6)
El primer análogo de C34 es MPA-AEEA-C34-CONH2 y su secuencia se muestra anteriormente en el ejemplo 9.
La purificación de 114,45 mg del conjugado preformado del primer análogo de C34 en 12,5 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 5 descrito anteriormente. La figura 48 ilustra la curva de separación obtenida con el conjugado encontrado en la fracción F2. Ejemplo 49 Purificación de un HSA:segundo análogo de GRF (SEC ID nº 29)
El segundo análogo de GRF es GRF (1-29) Lys30 (ε-MPA)-CONH2 y su secuencia se muestra anteriormente en el ejemplo 40.
La purificación de 125,53 mg del conjugado preformado del segundo análogo de GRF en 12,5 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, pH 7,0, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 5 descrito anteriormente. La figura 49 ilustra la curva de separación obtenida con el conjugado encontrado en la fracción F2. Ejemplo 50 Purificación de conjugado HSA:análogo de vinorelbina
El análogo de vinorelbina es una molécula de vinorelbina con AEEA-MPA acoplado a la misma como se ilustra en la siguiente estructura:
La purificación de un conjugado preparado de 2,5 ml HSA al 25 % y análogo de vinorelbina 1 mM en 22,5 ml de un tampón preparado con tampón de fosfato de sodio 20 mM, caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, pH 7,0 se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando gradiente nº 4 descrito anteriormente. En la figura 50 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. La fracción de conjugado se concentró con filtro de 30 kDa AmiconTM . Ejemplo 51 Purificación de L-cisteína
La purificación de 2,5 ml de L-cisteína 40 mM en 22,5 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 1500 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 4 descrito anteriormente. La figura 51 ilustra la curva de separación obtenida con L-cisteína eluyendo dentro del volumen hueco de la columna (fracción F3).
El análogo de vinorelbina es una molécula de vinorelbina con AEEA-MPA acoplado a la misma como se ilustra en la estructura mostrada en el ejemplo 50.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2,5 ml de L-cisteína 40 mM con análogo de vinorelbina 1 mM en 22,5 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando gradiente nº 4 descrito anteriormente. La figura 52 ilustra la curva de separación obtenida con el conjugado de L-cisteína que eluye en las fracciones F8, F9 y F10. Ejemplo 53 Purificación de conjugado RSA:tercer análogo de exendina-4 (SEC ID nº 25)
El tercer análogo de exendina-4 es exendina-4-(1-39) Lys40 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y su secuencia se muestra en el ejemplo 33.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 11 ml de RSA al 5 % (albúmina de suero de rata) con tercer análogo de exendina-4 200 µM en 11 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 53 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 54 Purificación de conjugado HSA:cuarto análogo de C34 (SEC ID nº 36)
El cuarto análogo de C34 es C34 (1-34) Lys13 (ε-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2 ml de HSA al 25 % con cuarto análogo de C34 1 mM en 13 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. La figura 54 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 55 Purificación de conjugado HSA:quinto análogo de C34 (SEC ID nº 37)
El quinto análogo de C34 es C34 (1-34) Lys35 (ε-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2 ml de HSA al 25 % con quinto análogo de C34 1 mM en 13 ml de un tampón constituido por tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 55 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2.
Ejemplo 56
Purificación de conjugado HSA:sexto análogo de C34 (SEC ID nº 38)
El sexto análogo de C34 es MPA-C34 (1-34)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2 ml de HSA al 25 % con sexto análogo de C34 1 mM en 13 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 56 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2.
Ejemplo 57
Purificación de conjugado HSA:séptimo análogo de C34 (SEC ID nº 39)
El séptimo análogo de C34 es Ac-C34 (1-34) Glu2 Lys6 Lys7 Glu9 Glu10 Lys13 Lys14 Glu16 Glu17 Lys20 Lys21 Glu23 Glu24 Lys27 Glu31 Lys34 Lys35 Lys36 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2 ml de HSA al 25 % con séptimo análogo de C34 1 mM en 13 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 57 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 58 Purificación de conjugado HSA:octavo análogo de C34 (SEC ID nº 40)
El octavo análogo de C34 es MPA-AEEA-C34 (1-34) Glu2 Lys6 Lys7 Glu9 Glu10 Lys13 Lys14 Glu16 Glu17 Lys20 Lys21 Glu23 Glu24 Lys27 Glu31 Lys34 Lys35 CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2 ml de HSA al 25 % con octavo análogo de C34 1 mM en 13 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 58 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 59 Purificación de conjugado HSA:primer análogo de PYY (SEC ID nº 41)
El primer análogo de PYY es PYY (3-36) Lys4 (ε-OA-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente estructura:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1,5 ml de HSA al 25 %
5
10
15
20
25
30
31
con primer análogo de PYY 1 mM en 6 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 59 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2.
Ejemplo 60
Purificación de conjugado HSA:segundo análogo de PYY (SEC ID nº 42)
El segundo análogo de PYY es MPA-OA-PYY (3-36)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1,5 ml de HSA al 25 % con segundo análogo de PYY 1 mM en 6 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 60 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 61 Purificación de conjugado HSA:quinto derivado de insulina (SEC ID nº 43)
El quinto derivado de insulina es insulina humana con AEEAS-AEEAS-MPA en la posición B29 y se representa en la figura 1 mostrada anteriormente en el ejemplo 7.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2 ml de HSA al 25 % con quinto derivado de insulina 1 mM en 15 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 61 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 62 Purificación de conjugado HSA:sexto derivado de insulina (SEC ID nº 44)
El sexto derivado de insulina es insulina humana con AEEAS-AEEAS-MPA y se representa en la figura 1 mostrada anteriormente en el ejemplo 7.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2,5 ml de HSA al 25 % con sexto derivado de insulina 1 mM en 15 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 62 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2.
El séptimo derivado de insulina es insulina humana con OA-MPA y se representa en la figura 1 mostrada anteriormente en el ejemplo 7.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2 ml de HSA al 25 % con séptimo derivado de insulina 1 mM en 15 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 63 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2.
Ejemplo 64
Purificación de conjugado HSA:tercer análogo de PYY (SEC ID nº 46)
El tercer análogo de PYY es MPA-PYY (3-36)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 3 ml de HSA al 25 % con tercer análogo de PYY 1 mM en 18 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 64 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 65 Purificación de conjugado HSA:cuarto análogo de PYY (SEC ID nº 47)
El cuarto análogo de PYY es PYY (3-36) Lys37 (ε-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 3 ml de HSA al 25 % con cuarto análogo de PYY 1 mM en 18 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 65 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 66 Purificación de conjugado HSA:quinto análogo de PYY (SEC ID nº 48)
El quinto análogo de PYY es MPA-PYY (22-36)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
(MPA)-ASL-RHYLNLVTRQRY-CONH2
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 6 ml de HSA al 25 % con quinto análogo de PYY 1 mM en 36 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 900 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 3 descrito anteriormente. En la figura 66 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2.
Ejemplo 67 5 Purificación de conjugado HSA:sexto análogo de PYY (SEC ID nº 49) El sexto análogo de PYY es acetil-PYY (22-36) Lys37 (ε-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia: Ac-ASLRHYLNLVTRQRYK(MPA)-CONH2 La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 6 ml de HSA al 25 % con sexto análogo de PYY 1 mM en 36 ml de tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0),
10 caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 900 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 3 descrito anteriormente. En la figura 67 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2.
Ejemplo 68
Purificación de conjugado HSA:segundo análogo de ANP (SEC ID nº 50)
15 El segundo análogo de ANP es MPA-ANP (99-126)-CONH2 y tiene la siguiente estructura:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1 ml de HSA al 25 % con segundo análogo de ANP 1 mM en 14 ml de un tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH
20 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 3 descrito anteriormente. En la figura 68 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 69 Purificación de conjugado HSA:tercer análogo de ANP (SEC ID nº 51)
25 El tercer análogo de ANP es ANP (99-126) que ha reaccionado con MAL-dPEG4TM (Quanta Biodesign, Powell, OH, EEUU) acoplado con Ser99. El análogo de ANP resultante es MPA-EEEEP-ANP (99-126) donde EEEEP es ácido etoxi etoxi etoxi etoxi propiónico; y su secuencia es la siguiente:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1 ml de HSA al 25 % con CJC 1681 1 mM en 14 ml de un tampón de fosfato de sodio 20 mM (pH 7,0), caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 900 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 3 descrito anteriormente. En las figuras 69A y 69B la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2.
Ejemplo 70
Purificación del conjugado HSA:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1)
El primer análogo de GLP-1 es GLP-1 (7-36) dAla8 Lys37 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y su secuencia se muestra anteriormente en el ejemplo 1.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con primer análogo de GLP-1 1 mM diluido en 9 ml de tampón constituido por tampón de fosfato de sodio 20 mM pH 7,0, caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 1,75 M, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 6 descrito anteriormente. En la figura 70 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción B. Ejemplo 71 Purificación del conjugado HSA:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1)
El primer análogo de GLP-1 es GLP-1 (7-36) dAla8 Lys37 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y su secuencia se muestra anteriormente en el ejemplo 1.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con primer análogo de GLP-1 1 mM diluido en 9 ml de tampón constituido por tampón de fosfato de sodio 20 mM pH 7,0, caprilato de sodio 5 mM y sulfato de magnesio 1,75 M, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 6 descrito anteriormente. En la figura 71 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 72 Purificación del conjugado HSA:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1)
El primer análogo de GLP-1 es GLP-1 (7-36) dAla8 Lys37 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y su secuencia se muestra anteriormente en el ejemplo 1.
Ejemplo con sulfato de amonio 750 mM. La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con primer análogo de GLP-1 1 mM diluido en 9 ml de tampón constituido por tampón de fosfato de sodio 20 mM pH 7,0, caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 72 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 73 Purificación del conjugado HSA:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1)
El primer análogo de GLP-1 es GLP-1 (7-36) dAla8 Lys37 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y su secuencia se muestra anteriormente en el ejemplo 1.
Ejemplo con fosfato de amonio 1,75 M. La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con primer análogo de GLP-1 1 mM diluido en 9 ml de tampón constituido por tampón de fosfato de sodio 20 mM pH 7,0, caprilato de sodio 5 mM y fosfato de amonio 1,75 M, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 6 descrito anteriormente. En la figura 73 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción B. Ejemplo 74 Purificación del conjugado HSA:primer análogo de GLP-1 (SEC ID nº 1)
El primer análogo de GLP-1 es GLP-1 (7-36) dAla8 Lys37 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 y su secuencia se muestra anteriormente en el ejemplo 1.
Ejemplo con fosfato de amonio 750 mM. La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 1 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con primer análogo de GLP-1 1 mM diluido en 9 ml de tampón constituido por tampón de fosfato de sodio 20 mM pH 7,0, caprilato de sodio 5 mM y fosfato de amonio 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 74 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 75 Purificación del conjugado HSA:primer análogo de GLP-2 (SEC ID nº 52)
El primer análogo de GLP-2 es GLP-2 (1-33) Gly2 Lys34 (ε-MPA)-CONH2 y tiene la siguiente secuencia:
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 2 ml de 250 mg/ml de HSA al 25 % (Cortex-Biochem, San Leandro, CA) con primer análogo de GLP-2 1 mM diluido en 14 ml de tampón constituido por tampón de fosfato de sodio 20 mM pH 7,0, caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 75 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2. Ejemplo 76 Purificación de conjugado RSA:primer análogo de GLP-2 (SEC ID nº 52)
El primer análogo de GLP-2 es GLP-2 (1-33) Gly2 Lys34 (ε-MPA)-CONH2 y su secuencia se muestra en el ejemplo 75.
La purificación de un conjugado preparado haciendo reaccionar 9 ml de 250 mg/ml de RSA al 25 % (albúmina de suero de rata) con primer análogo de GLP-2 1 mM diluido en 14 ml de tampón constituido por tampón de fosfato de sodio 20 mM pH 7,0, caprilato de sodio 5 mM y (NH4)2SO4 750 mM, se llevó a cabo en una columna de butilsefarosa usando el gradiente nº 1 descrito anteriormente. En la figura 76 la fracción de conjugado purificado aparece en la fracción F2.
Claims (24)
- REIVINDICACIONES
- 1.
- Una matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica a la que está unida un conjugado de albúmina, en la que dicho conjugado de albúmina comprende una molécula seleccionada del grupo constituido por un péptido, un ADN, un ARN, vinorelbina, gemcitabina, paclitaxel, y una combinación de los mismos, en la que dicha matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica es una columna que contiene una resina hidrófoba seleccionada del grupo constituido por octilsefarosa, fenilseparosa y butilsefarosa, en el la que dicha matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica está en contacto con albúmina conjuntada.
-
- 2.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de la reivindicación 1, en la que dicha molécula está unida covalentemente, opcionalmente por medio de un adaptador, con un aceptor de Michael unido covalentemente a albúmina.
-
- 3.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de la reivindicación 2, en la que dicho aceptor de Michael está unido covalentemente a cisteína 34 de dicha albúmina.
-
- 4.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de la reivindicación 2 ó 3, en la que dicho aceptor de Michael es un grupo maleimida.
-
- 5.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de la reivindicación 4, en la que dicho grupo maleimida es ácido maleimida-propiónico (MPA).
-
- 6.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que dicha molécula es un péptido.
-
- 7.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de la reivindicación 6, en la que dicho péptido tiene un peso molecular de al menos 57 dalton.
-
- 8.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la que dicha molécula es del grupo constituido por péptido similar al glucagón tipo 1 (GLP-1), péptido natriurético atrial (ANP), kringle 5 (K5), dinorfina, exendina-4, factor de liberación de la hormona del crecimiento (GRF), insulina, péptidos natriuréticos, enfuvirtida (T-20), T-1249, C-34, péptido EF C-35 soluble (SC-35), péptido YY (PYY) y análogos de los mismos.
-
- 9.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en la que dicha molécula es un péptido unido covalentemente a dicha albúmina a través de un enlace covalente sensible a ácido o una secuencia de péptido susceptible de escisión proteolítica, con lo que se posibilita la separación de dicha molécula y albúmina y la entrada de la molécula en una célula.
-
- 10.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en la que dicha matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica está en contacto con un tampón acuoso que tiene una concentración de sal alta, suficiente para promover las interacciones ligando-proteína.
-
- 11.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en la que dicha matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica está en contacto con un gradiente de concentración de sal decreciente que tiene una concentración de sal de partida inferior a 3000 mM.
-
- 12.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de la reivindicación 11, en la que dicho gradiente de concentración de sal decreciente tiene una concentración de sal de partida entre 500 y 1000 mM.
-
- 13.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, en la que dicha sal se selecciona del grupo constituido por fosfato de amonio, sulfato de amonio y fosfato de magnesio.
-
- 14.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en la que dicha molécula es un análogo de: péptido similar al glucagón tipo 1 (GLP-1), péptido similar al glucagón tipo 2 (GLP-2), péptido natriurético atrial (ANP), kringle 5 (K5), dinorfina, exendina-4, factor de liberación de la hormona del crecimiento (GRF), insulina, péptidos natriuréticos, enfuvirtida (T-20), T-1249, C-34, péptido EK C-35 soluble (SC35) o péptido YY (PYY).
-
- 15.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en la que dicho conjugado de albúmina se forma haciendo reaccionar albúmina con GLP-1 (7-36) dA1a8 Lys37 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 1), GRF (1-29)
dAla2 Gln8 Ala15 Leu27 Lys30 (ε-MPA) CONH2 (SEC ID nº 2), Ac-K5 Lys8 (ε-MPA)-NH2 (SEC ID nº 3), insulina B1-MPA (SEC ID nº 4), insulina A1-MPA (SEC ID nº 5), MPA-AEEA-C34-CONH2 (SEC ID nº 6), C34 (1-34) Lys35 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 7), C34 (1-34) Lys13 (εAEEA-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 8), GLP-1 (7-36) Lys37 (ε-MPA)-NH2 (SEC ID nº 9), GLP-1 (736) dAla8 Lys37 (ε-MPA)-NH2 (SEC ID nº 10), GLP-1 (7-36) Lys26 (ε-AEEA-AEEA-MPA) (SEC ID nº 11), GLP-1 (7-36) Lys34 (ε-AEEA-AEEA-MPA) (SEC ID nº 12), exendina-4-(1-39) Lys40 (εMPA)-NH2 (SEC ID nº 13), exendina-4-(9-39) Lys40 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 14), Dyn A (1-13) (MPA)-NH2 (SEC ID nº 15), MPA-AEEA-ANP (99-126)-CONH2 (SEC ID nº 16), Dyn A (7-13) Lys13 (ε-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 17), acetil-Phe-His-ciclohexilestatil-lle-Lys (εAEEA-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 18), GLP-1 (7-36) Lys23 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 19), GLP-1 (7-36) Lys18 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 20), GLP-1 (7-36) Lys26 (ε-AEEAMPA)-CONH2 (SEC ID nº 21), GLP-1 (7-37) Lys27 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 22), GLP1 (7-36) Lys37 (ε-AEEA-AEEA-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 23), GLP-1 (7-36) Lys37 (ε-AEEAMPA)-CONH2 (SEC ID nº 24), exendina-4-(1-39) Lys40 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 25), GLP-1 (7-36) Lys34 (ε-AEBA-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 26), insulina B1-OA-MPA (SEC ID nº 27), insulina B29-MPA (SEC ID nº 28), GRF (1-29) Lys30 (ε-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 29), GRF (1-29) dAla2 Gln8 dArg11 Ala15 Leu27 Lys30 (ε-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 30), GRF (1-29) dAla2 Lys30 (ε-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 31), GLP-1 (9-36) Lys37 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 32), Ac-T20 (1-36) Lys37 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 33), Ac-T1249 (1-39) Lys40 (εAEEA-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 34), C34 (1-34) Lys13 (ε-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 36), C34 (134) Lys35 (ε-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 37), MPA-C34 (1-34)-CONH2 (SEC ID nº 38), Ac-C34 (134) Glu2 Lys6 Lys7 Glu9 Glu10 Lys13 Lys14 Glu16 Glu17 Lys20 Lys21 Glu23 Glu24 Lys27 Glu31 Lys34 Lys35 Lys36 (ε-AEEA-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 39), MPA-AEEA-C34 (1-34) Glu2 Lys6 Lys7 Glu9 Glu10 Lys13 Lys14 Glu16 Glu17 Lys20 Lys21 Glu23 Glu24 Lys27 Glu31 Lys34 Lys35 CONH2 (SEC ID nº 40), PYY (3-36) Lys4 (ε-OA-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 41), MPA-OA-PYY (3-36)-CONH2 (SEC ID nº 42), insulina B29-AEES2-MPA (SEC ID nº 43), insulina B1-AEES2-MPA (SEC ID nº 44), insulina B29-OA-MPA (SEC ID nº 45), MPA-PYY (3-36)-CONH2 (SEC ID nº 46), PYY (3-36) Lys37 (ε-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 47), MPA-PYY (22-36)-CONH2 (SEC ID nº 48) acetil-PYY (22-36) Lys37 (ε-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 49), MPA-ANP (99-126)-CONH2 (SEC ID nº 50), MPA-EEEEP-ANP (99-126) (SEC ID nº 51) o GLP-2 (1-33) Gly2 Lys34 (ε-MPA)-CONH2 (SEC ID nº 52). -
- 16.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en la que dicha molécula es insulina B1.
-
- 17.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en la que dicha molécula es exendina-4 (1-39) Lys40 .
-
- 18.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de unacualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en la que dicho conjugado de albúmina se forma haciendo reaccionar albúmina con exendina-4 (1-39) Lys40 (ε-AEEA-MPA)-CONH2.
-
- 19.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en la que dicho conjugado de albúmina se forma haciendo reaccionar albúmina con insulina B1-OA-MPA.
-
- 20.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, en la que dicha albúmina se selecciona del grupo constituido por albúmina del suero y albúmina recombinante.
-
- 21.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, en la que dicha albúmina se selecciona del grupo constituido por albúmina humana, albúmina de rata, albúmina de ratón, albúmina de cerdo, albúmina bovina, albúmina de perro y albúmina de conejo.
-
- 22.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, en la que dicha albúmina es albúmina de suero humano.
-
- 23.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, en la que dicha albúmina está modificada con al menos una seleccionada del grupo constituido por un ácido graso, un ión metálico y un azúcar.
-
- 24.
- La matriz de cromatografía de interacción hidrofóbica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, en la que dicha albúmina está modificada con un azúcar seleccionado del grupo constituido por glucosa, lactosa y manosa.
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Families Citing this family (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6924264B1 (en) * | 1999-04-30 | 2005-08-02 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Modified exendins and exendin agonists |
| US20090175821A1 (en) * | 1999-05-17 | 2009-07-09 | Bridon Dominique P | Modified therapeutic peptides with extended half-lives in vivo |
| US20040266673A1 (en) * | 2002-07-31 | 2004-12-30 | Peter Bakis | Long lasting natriuretic peptide derivatives |
| CN1191273C (zh) * | 1999-05-17 | 2005-03-02 | 康久化学公司 | 长效促胰岛肽 |
| US7601691B2 (en) | 1999-05-17 | 2009-10-13 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Anti-obesity agents |
| US7582301B1 (en) * | 1999-05-17 | 2009-09-01 | Conjuchem Biotechnologies, Inc. | Long-lasting antiviral fusion inhibitor peptide conjugates comprising albumin and human immunodeficiency virus (HIV) peptides |
| US6514500B1 (en) * | 1999-10-15 | 2003-02-04 | Conjuchem, Inc. | Long lasting synthetic glucagon like peptide {GLP-!} |
| CA2436399A1 (en) * | 2001-02-16 | 2002-08-29 | Conjuchem Inc. | Long lasting glucagon-like peptide 2 (glp-2) for the treatment of gastrointestinal diseases and disorders |
| DE60229677D1 (de) * | 2001-05-31 | 2008-12-11 | Conjuchem Biotechnologies Inc | Langwirkende Fusionspeptidinhibitoren gegen HIV-Infektion |
| DK1745078T3 (da) | 2004-04-23 | 2009-10-26 | Conjuchem Biotechnologies Inc | Fremgangsmåde til oprensning af albuminkonjugater |
| AU2005240680A1 (en) * | 2004-05-06 | 2005-11-17 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Compounds for specific viral target |
| US8039432B2 (en) | 2005-11-09 | 2011-10-18 | Conjuchem, Llc | Method of treatment of diabetes and/or obesity with reduced nausea side effect |
| CN101384623B (zh) * | 2005-12-22 | 2013-07-24 | 常山凯捷健生物药物研发（河北）有限公司 | 白蛋白与治疗剂的预成型偶联物的制备方法 |
| WO2008047241A2 (en) | 2006-10-16 | 2008-04-24 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Modified corticotropin releasing factor peptides and uses thereof |
| US20090099074A1 (en) * | 2007-01-10 | 2009-04-16 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Modulating food intake |
| US20090088378A1 (en) * | 2007-01-12 | 2009-04-02 | Omar Quraishi | Long lasting inhibitors of viral infection |
| EP2147016A2 (en) * | 2007-05-16 | 2010-01-27 | ConjuChem Biotechnologies Inc. | Cysteic acid derivatives of anti-viral peptides |
| WO2008157824A2 (en) * | 2007-06-21 | 2008-12-24 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Thrombopoietin peptide conjugates |
| CN102026666B (zh) * | 2007-12-11 | 2013-10-16 | 常山凯捷健生物药物研发（河北）有限公司 | 促胰岛素肽缀合物制剂 |
| JP5653219B2 (ja) * | 2007-12-31 | 2015-01-14 | ニューヨーク ユニバーシティ | 水素結合サロゲートをベースとする人工ヘリックスによるウイルス宿主膜融合の制御 |
| EP2262539B1 (en) | 2008-04-01 | 2015-07-15 | Novo Nordisk A/S | Insulin albumin conjugates |
| CN101987868B (zh) * | 2009-07-30 | 2013-09-04 | 江苏豪森医药集团有限公司 | Glp-1类似物的衍生物或其可药用盐和用途 |
| EP2504019A2 (en) | 2009-11-25 | 2012-10-03 | ArisGen SA | Mucosal delivery composition comprising a peptide complexed with a crown compound and/or a counter ion |
| US9744155B2 (en) | 2012-03-28 | 2017-08-29 | Ixcela, Inc. | IPA as a therapeutic agent, as a protective agent, and as a biomarker of disease risk |
| LT3092010T (lt) * | 2014-01-10 | 2018-10-25 | Synthon Biopharmaceuticals B.V. | Metodas, skirtas gryninimui cys-sujungtų antikūno-vaisto konjugatų |
| WO2015116988A2 (en) * | 2014-01-31 | 2015-08-06 | Counterpoint Health Solutions, Inc. | Covalently bound metabolites as biomarkers |
| WO2016065052A1 (en) * | 2014-10-22 | 2016-04-28 | Extend Biosciences, Inc. | Insulin vitamin d conjugates |
| CN105111306A (zh) * | 2015-08-28 | 2015-12-02 | 北京工业大学 | 美洲短吻鳄白蛋白的分离方法 |
| AU2017238246B2 (en) | 2016-03-24 | 2021-04-01 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Conjugates of tacrolimus, their compositions, and their uses |
| MX2020004453A (es) * | 2017-09-28 | 2020-07-24 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Conjugados de accion prolongada de derivados de glp-2. |
| CN108840922A (zh) * | 2018-06-04 | 2018-11-20 | 河北常山生化药业股份有限公司 | 分离白蛋白非结合物、白蛋白结合物和小分子化合物的方法 |
| CN108977423A (zh) * | 2018-08-17 | 2018-12-11 | 集美大学 | 一种从猪肺中分离提纯血管紧张素转化酶的方法 |
| US11041847B1 (en) | 2019-01-25 | 2021-06-22 | Ixcela, Inc. | Detection and modification of gut microbial population |
| CN109721653B (zh) * | 2019-03-05 | 2023-02-03 | 嘉兴学院 | 一种胰高血糖素样肽-1片段类似物及其应用 |
| WO2021175275A1 (zh) * | 2020-03-06 | 2021-09-10 | 昆山新蕴达生物科技有限公司 | 疏水性修饰的白蛋白及其制备方法和用途 |
| WO2021222759A1 (en) * | 2020-04-30 | 2021-11-04 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Albumin drug conjugates and use thereof for the treatment of cancer |
| US11739166B2 (en) | 2020-07-02 | 2023-08-29 | Davol Inc. | Reactive polysaccharide-based hemostatic agent |
| US12161777B2 (en) | 2020-07-02 | 2024-12-10 | Davol Inc. | Flowable hemostatic suspension |
| WO2022073995A1 (en) * | 2020-10-05 | 2022-04-14 | Bia Separations D.O.O. | Improved removal of rna and contaminants from dna plasmid preparations by hydrophobic interaction chromatography |
| WO2022146917A1 (en) | 2020-12-28 | 2022-07-07 | Davol Inc. | Reactive dry powdered hemostatic materials comprising a protein and a multifunctionalized modified polyethylene glycol based crosslinking agent |
Family Cites Families (102)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4206199A (en) | 1977-07-22 | 1980-06-03 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Novel glucagon fragment and its derivatives |
| US4251631A (en) | 1978-02-23 | 1981-02-17 | Research Products Rehovot Ltd. | Cross-linked enzyme membrane |
| US4423034A (en) | 1980-10-16 | 1983-12-27 | Toyo Jozo Kabushiki Kaisha | Process for the preparation of antibodies |
| US4678671A (en) * | 1981-12-15 | 1987-07-07 | Cordis Europa N.V. | Conjugates of anticoagulant and protein |
| US4462941A (en) | 1982-06-10 | 1984-07-31 | The Regents Of The University Of California | Dynorphin amide analogs |
| US4745100A (en) | 1985-05-14 | 1988-05-17 | Eye Research Institute Of Retina Foundation | Stimulation of tear secretion |
| US4766106A (en) | 1985-06-26 | 1988-08-23 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US5118666A (en) | 1986-05-05 | 1992-06-02 | The General Hospital Corporation | Insulinotropic hormone |
| US5614492A (en) | 1986-05-05 | 1997-03-25 | The General Hospital Corporation | Insulinotropic hormone GLP-1 (7-36) and uses thereof |
| US5120712A (en) | 1986-05-05 | 1992-06-09 | The General Hospital Corporation | Insulinotropic hormone |
| US4902505A (en) | 1986-07-30 | 1990-02-20 | Alkermes | Chimeric peptides for neuropeptide delivery through the blood-brain barrier |
| US4859604A (en) | 1987-08-27 | 1989-08-22 | Ampor, Inc. | Composition for stabilization of diagnostic reagents |
| US5545618A (en) | 1990-01-24 | 1996-08-13 | Buckley; Douglas I. | GLP-1 analogs useful for diabetes treatment |
| US5843440A (en) | 1990-10-03 | 1998-12-01 | Redcell Canada, Inc. | Cellular and serum protein anchors for modulating pharmacokinetics |
| US5612034A (en) | 1990-10-03 | 1997-03-18 | Redcell, Inc. | Super-globuling for in vivo extended lifetimes |
| US5725804A (en) | 1991-01-15 | 1998-03-10 | Hemosphere, Inc. | Non-crosslinked protein particles for therapeutic and diagnostic use |
| JPH06509551A (ja) | 1991-04-05 | 1994-10-27 | ジェネンテク，インコーポレイテッド | Ｇｐ ＩＩ↓ｂＩＩＩ↓ａに対する高い特異性を有する血小板凝集阻害剤 |
| US5103233A (en) | 1991-04-16 | 1992-04-07 | General Electric Co. | Radar system with elevation-responsive PRF control, beam multiplex control, and pulse integration control responsive to azimuth angle |
| WO1993017715A1 (en) | 1992-03-05 | 1993-09-16 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Diagnostic and/or therapeutic agents, targeted to neovascular endothelial cells |
| JPH07102148B2 (ja) * | 1992-05-20 | 1995-11-08 | 株式会社ミドリ十字 | 遺伝子操作により得られるヒト血清アルブミンの製造方法、およびそれにより得られるヒト血清アルブミン含有組成物 |
| US5807827A (en) | 1992-06-12 | 1998-09-15 | Des-Tyr Dynorphin Partnership | Des-Tyr dynorphin analogues |
| EP0969016A2 (en) | 1992-06-15 | 2000-01-05 | Scios Inc. | Glucagon-like peptide and insulinotropin derivates |
| EP0602290B1 (en) | 1992-12-04 | 1999-08-25 | ConjuChem, Inc. | Antibody-conjugated Hepatitis B surface antigen and use thereof |
| US5424286A (en) | 1993-05-24 | 1995-06-13 | Eng; John | Exendin-3 and exendin-4 polypeptides, and pharmaceutical compositions comprising same |
| US5614487A (en) | 1993-05-28 | 1997-03-25 | Genentech, Inc. | Sustained release pharmaceutical composition |
| US20020018751A1 (en) | 1993-10-15 | 2002-02-14 | BRIDON Dominique P. | Cellular and serum protein anchors for diagnostic imaging |
| US5705483A (en) | 1993-12-09 | 1998-01-06 | Eli Lilly And Company | Glucagon-like insulinotropic peptides, compositions and methods |
| DK145493D0 (da) | 1993-12-23 | 1993-12-23 | Dako As | Antistof |
| US5580853A (en) | 1994-03-22 | 1996-12-03 | New England Deaconess Hospital | Modified polypeptides with increased biological activity |
| AU709559B2 (en) | 1994-04-07 | 1999-09-02 | Proteinix Company | Vasoactive intestinal polypeptide |
| CZ52397A3 (en) | 1994-08-26 | 1997-07-16 | Nancy M Lee | Analgesic method by dynorphin analogs being modified at n-end |
| US5574008A (en) | 1994-08-30 | 1996-11-12 | Eli Lilly And Company | Biologically active fragments of glucagon-like insulinotropic peptide |
| ES2211889T3 (es) * | 1994-08-31 | 2004-07-16 | Mitsubishi Pharma Corporation | Procedimiento para la purificacion de albumina de suero recombinante. |
| US5939390A (en) | 1995-03-09 | 1999-08-17 | Novo Nordisk A/S | Pharmaceutical composition |
| US5869602A (en) | 1995-03-17 | 1999-02-09 | Novo Nordisk A/S | Peptide derivatives |
| US5654276A (en) | 1995-06-07 | 1997-08-05 | Affymax Technologies N.V. | Peptides and compounds that bind to the IL-5 receptor |
| AU713616B2 (en) | 1996-01-12 | 1999-12-09 | Conjuchem, Inc. | Cellular and serum protein anchors for diagnostic imaging |
| US6277583B1 (en) | 1996-02-07 | 2001-08-21 | Conjuchem, Inc. | Affinity labeling libraries and applications thereof |
| DK0915910T3 (da) | 1996-06-05 | 2006-05-22 | Roche Diagnostics Gmbh | Exendin-analoger, fremgangsmåder til fremstilling deraf samt lægemidlter der indeholder disse |
| US5840733A (en) | 1996-07-01 | 1998-11-24 | Redcell, Canada, Inc. | Methods and compositions for producing novel conjugates of thrombin inhibitors and endogenous carriers resulting in anti-thrombins with extended lifetimes |
| US5763401A (en) | 1996-07-12 | 1998-06-09 | Bayer Corporation | Stabilized albumin-free recombinant factor VIII preparation having a low sugar content |
| WO1998005351A1 (en) | 1996-08-08 | 1998-02-12 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Methods for regulating gastrointestinal motility |
| US6277819B1 (en) | 1996-08-30 | 2001-08-21 | Eli Lilly And Company | Use of GLP-1 or analogs in treatment of myocardial infarction |
| US6268343B1 (en) | 1996-08-30 | 2001-07-31 | Novo Nordisk A/S | Derivatives of GLP-1 analogs |
| US6006753A (en) | 1996-08-30 | 1999-12-28 | Eli Lilly And Company | Use of GLP-1 or analogs to abolish catabolic changes after surgery |
| AU724326B2 (en) | 1996-09-09 | 2000-09-14 | Zealand Pharmaceuticals A/S | Peptide prodrugs containing an alpha-hydroxyacid linker |
| WO1998011437A1 (en) | 1996-09-16 | 1998-03-19 | Conjuchem, Inc. | Affinity labeling libraries with tagged leaving groups |
| UA65549C2 (uk) | 1996-11-05 | 2004-04-15 | Елі Ліллі Енд Компані | Спосіб регулювання ожиріння шляхом периферійного введення аналогів та похідних glp-1 (варіанти) та фармацевтична композиція |
| EP0941114B1 (en) | 1996-11-12 | 2005-02-23 | Novo Nordisk A/S | Use of glp-1 peptides |
| BR9713055A (pt) * | 1996-11-15 | 2000-04-04 | Genentech Inc | Processo para isolar uma neurotrofina humana recombinante, composição de neurotrofina e processo para purificar uma neurotrofina |
| DE69831673C5 (de) | 1997-01-07 | 2015-01-22 | Amylin Pharmaceuticals, Llc | Verwendung von exedinen und deren antagonisten zur verminderung der lebensmittelaufnahme |
| US6723530B1 (en) | 1997-02-05 | 2004-04-20 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Polynucleotides encoding proexendin, and methods and uses thereof |
| CA2283834A1 (en) | 1997-03-31 | 1998-10-08 | James Arthur Hoffmann | Glucagon-like peptide-1 analogs |
| US6437092B1 (en) | 1998-11-06 | 2002-08-20 | Conjuchem, Inc. | Conjugates of opioids and endogenous carriers |
| DE69806066T2 (de) | 1997-11-07 | 2003-02-06 | Conjuchem, Inc. | Affinitätsmarkierer für menschliches serum albumin |
| AU1385699A (en) * | 1997-11-07 | 1999-05-31 | Conjuchem, Inc. | Novel conjugates of rgd-containing peptides and endogenous carriers |
| US6703359B1 (en) | 1998-02-13 | 2004-03-09 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Inotropic and diuretic effects of exendin and GLP-1 |
| WO1999043708A1 (en) | 1998-02-27 | 1999-09-02 | Novo Nordisk A/S | Glp-1 derivatives of glp-1 and exendin with protracted profile of action |
| CA2321026A1 (en) | 1998-03-09 | 1999-09-16 | Zealand Pharmaceuticals A/S | Pharmacologically active peptide conjugates having a reduced tendency towards enzymatic hydrolysis |
| US6107489A (en) | 1998-03-17 | 2000-08-22 | Conjuchem, Inc. | Extended lifetimes in vivo renin inhibitors |
| US6998387B1 (en) | 1998-03-19 | 2006-02-14 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Human appetite control by glucagon-like peptide receptor binding compounds |
| US20030170250A1 (en) | 1998-03-23 | 2003-09-11 | Ezrin Alan M. | Local delivery of long lasting therapeutic agents |
| CA2291066A1 (en) | 1998-03-23 | 1999-09-30 | Conjuchem, Inc. | Local delivery of long lasting therapeutic agents |
| US6284725B1 (en) | 1998-10-08 | 2001-09-04 | Bionebraska, Inc. | Metabolic intervention with GLP-1 to improve the function of ischemic and reperfused tissue |
| US6440417B1 (en) | 1998-11-06 | 2002-08-27 | Conjuchem, Inc. | Antibodies to argatroban derivatives and their use in therapeutic and diagnostic treatments |
| BRPI0007820B8 (pt) | 1999-01-14 | 2021-05-25 | Amylin Pharmaceuticals Llc | formulações farmacêuticas agonistas de exendina e seus usos |
| US7399489B2 (en) | 1999-01-14 | 2008-07-15 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Exendin analog formulations |
| BRPI0007823A8 (pt) | 1999-01-14 | 2017-03-21 | Amylin Pharmaceuticals Inc | Métodos de supressão do glucagon |
| US6924264B1 (en) | 1999-04-30 | 2005-08-02 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Modified exendins and exendin agonists |
| US7582301B1 (en) | 1999-05-17 | 2009-09-01 | Conjuchem Biotechnologies, Inc. | Long-lasting antiviral fusion inhibitor peptide conjugates comprising albumin and human immunodeficiency virus (HIV) peptides |
| US7601691B2 (en) | 1999-05-17 | 2009-10-13 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Anti-obesity agents |
| SI1105409T1 (sl) | 1999-05-17 | 2006-06-30 | Conjuchem Inc | Zascita endogenih peptidov pred peptidazno ucinkovitostjo s konjugacijo na krvne komponente |
| US20040266673A1 (en) | 2002-07-31 | 2004-12-30 | Peter Bakis | Long lasting natriuretic peptide derivatives |
| US6849714B1 (en) | 1999-05-17 | 2005-02-01 | Conjuchem, Inc. | Protection of endogenous therapeutic peptides from peptidase activity through conjugation to blood components |
| CN101289500A (zh) | 1999-05-17 | 2008-10-22 | 康久化学生物技术公司 | 病毒感染的长效融合肽抑制剂 |
| US6514500B1 (en) | 1999-10-15 | 2003-02-04 | Conjuchem, Inc. | Long lasting synthetic glucagon like peptide {GLP-!} |
| US7144854B1 (en) | 1999-09-10 | 2006-12-05 | Conjuchem, Inc. | Long lasting anti-angiogenic peptides |
| CN1191273C (zh) * | 1999-05-17 | 2005-03-02 | 康久化学公司 | 长效促胰岛肽 |
| US6887470B1 (en) | 1999-09-10 | 2005-05-03 | Conjuchem, Inc. | Protection of endogenous therapeutic peptides from peptidase activity through conjugation to blood components |
| US6506724B1 (en) | 1999-06-01 | 2003-01-14 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Use of exendins and agonists thereof for the treatment of gestational diabetes mellitus |
| DE19926154A1 (de) | 1999-06-09 | 2000-12-14 | Ktb Tumorforschungs Gmbh | Verfahren zur Herstellung einer injizierbaren Arzneimittelzubereitung |
| DE19926475A1 (de) | 1999-06-10 | 2000-12-14 | Ktb Tumorforschungs Gmbh | Träger-Pharmaka-Konjugate |
| EP1133312B8 (en) | 1999-06-21 | 2007-10-17 | Eli Lilly And Company | Synergistic use of thiazolidinediones with glucagon-like peptide-1 and agonists thereof to treat non-insulin dependent diabetes |
| US6528486B1 (en) | 1999-07-12 | 2003-03-04 | Zealand Pharma A/S | Peptide agonists of GLP-1 activity |
| DE19932782A1 (de) * | 1999-07-14 | 2001-01-18 | Biotest Pharma Gmbh | Verfahren zur chromatographischen Fraktionierung von Plasma oder Serum, so erhaltene Präparate und deren Verwendung |
| DE19936780A1 (de) | 1999-08-09 | 2001-02-15 | Basf Ag | Neue Antagonisten von Integrinrezeptoren |
| US6706892B1 (en) | 1999-09-07 | 2004-03-16 | Conjuchem, Inc. | Pulmonary delivery for bioconjugation |
| US7090851B1 (en) | 1999-09-10 | 2006-08-15 | Conjuchem Inc. | Long lasting fusion peptide inhibitors of viral infection |
| WO2001066417A1 (en) * | 2000-03-09 | 2001-09-13 | Crisplant A/S | A discharge and stacker device |
| EP2275557A1 (en) * | 2000-04-12 | 2011-01-19 | Human Genome Sciences, Inc. | Albumin fusion proteins |
| CN1462191B (zh) | 2000-05-19 | 2013-07-24 | 埃米林药品公司 | Glp-1用于制备治疗急性冠脉综合征的药物的用途 |
| AU775663B2 (en) | 2000-10-20 | 2004-08-12 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of hibernating myocardium and diabetic cardiomyopathy with a GLP-1 peptide |
| US7259233B2 (en) | 2000-12-13 | 2007-08-21 | Eli Lilly And Company | Chronic treatment regimen using glucagon-like insulinotropic peptides |
| WO2002062844A2 (en) * | 2001-02-02 | 2002-08-15 | Conjuchem Inc. | Long lasting growth hormone releasing factor derivatives |
| CA2436399A1 (en) | 2001-02-16 | 2002-08-29 | Conjuchem Inc. | Long lasting glucagon-like peptide 2 (glp-2) for the treatment of gastrointestinal diseases and disorders |
| DE60229677D1 (de) | 2001-05-31 | 2008-12-11 | Conjuchem Biotechnologies Inc | Langwirkende Fusionspeptidinhibitoren gegen HIV-Infektion |
| SE526227C2 (sv) * | 2002-05-15 | 2005-08-02 | North China Pharmaceutical Group | Metod för rening av rekombinant humant serumalbumin |
| US6861236B2 (en) | 2002-05-24 | 2005-03-01 | Applied Nanosystems B.V. | Export and modification of (poly)peptides in the lantibiotic way |
| EP1575490A4 (en) | 2002-06-04 | 2007-08-08 | Lilly Co Eli | MODIFIED ANALOGUES OF GLUCAGON-LIKE PEPTIDE-1 (GLP-1) |
| US6989369B2 (en) * | 2003-02-07 | 2006-01-24 | Dyax Corp. | Kunitz domain peptides |
| MXPA06006746A (es) * | 2003-12-18 | 2006-08-18 | Novo Nordisk As | Analogos de glp-1 novedosos ligados a agentes similares a albumina. |
| DK1745078T3 (da) | 2004-04-23 | 2009-10-26 | Conjuchem Biotechnologies Inc | Fremgangsmåde til oprensning af albuminkonjugater |
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