ES2226488T3 - Compuestos utiles en el tratamiento de enfermedades inflamatorias. - Google Patents

Abstract

Un compuesto de **fórmula** en la que R1 y R2 representan independientemente (i) alquilo C1-6, cicloalquilo C3-8 o alquil C1-3- cicloalquilo C3-8, o un grupo tal en el que el alquilo o cicloalquilo está sustituido con uno o más grupos halógeno, -CN, nitro, hidroxi o -O-alquilo C1-6; (ii)-(CH2)aAr1 o -(CH2)aOAr1; o NR1R2 conjuntamente representan pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, tiomorfolinilo, morfolinilo o azepinilo, o un grupo condensado a un anillo de benceno, opcionalmente sustituido con uno o más grupos - (CO)n(CH2)tAr1, -(CO)n-alquil C1-6-Ar1Ar2, -(CO)n-alquilo C1-6, -(CH2)rOH, -(CH2)rO(CH2)pOH, -(CH2)rO-alquilo C1-6, - O(CH2)tAr1, -(CH2)rSO2Ar1, piperidin-1-ilo, -(CH2)tCONR8R9, -NR10(CO)n(CH2)tAr1, -NR10(CO)n-alquil C1-3-cicloalquilo C3- 6, -NR10(CO)n-alquil C1-6-dicicloalquilo C3-6, - CONR10(CH2)tAr1, halógeno, -NHSO2-alquilo C1-6, - SO2NR10R11, -SO2-alquilo C1-6 o -SO2Ar2; R3 representa -alquil C1-6-NHC(=NH)NH2, -alquenil C2-6- NHC(=NH)NH2, -alquinil C2-6-NHC(=NH)NH2,-alquil C1-6- NR14R18, -(CH2)nCONR14R18, -(CH2)nCOC-alquilo C1-6, - (CH2)dCHNR18CONR20R21, -(CH2)mNR18CONR14R18, - (CH2)dNR18Ar3, -(CH2)dCONR18Ar3, -(CH2)nCOOR18, -(CH2)cAr3, -O(CH2)cAr3, -O(CH2)cAr3, -(CH2)dCO(CH2)aAr3 o -(CH2)dOAr3; o R3 representa -(CH2)c-2, 4-imidazolidinona, - (CH2)c(piperidin-4-ilo), -(CH2)c(piperidin-3-ilo), - (CH2)c(piperidin-2-ilo), -(CH2)c(morfolin-3-ilo) o - (CH2)c(morfolin-2-ilo) opcionalmente sustituido sobre el nitrógeno con -(CO)f-alquilo C1-6, -(CO)f(CH2)cAr2 o - (C(=NH)NH2.

Description

Compuestos útiles en el tratamiento de enfermedades inflamatorias.

Esta invención se refiere a nuevos compuestos químicos, a procedimientos para su preparación, a las formulaciones farmacéuticas que los contienen y a su uso en terapia.

La inflamación es una respuesta primaria a la lesión de tejidos o invasión microbiana y se caracteriza por la adhesión de leucocitos al endotelio, diapédesis y activación dentro del tejido. La activación de leucocitos puede dar como resultado la generación de especies tóxicas de oxígeno (tales como el anión superóxido) y a la liberación de productos granulares (tales como peroxidasas y proteasas). Los leucocitos en circulación incluyen neutrófilos, eosinófilos, basófilos, monocitos y linfocitos. Las diferentes formas de inflamación implican diferentes tipos de leucocitos de infiltración, regulándose el perfil particular por el perfil de molécula de adhesión, citoquinas y expresión del factor quimiotáctico dentro del tejido.

La función primaria de los leucocitos es defender al huésped de los organismos invasores, tales como bacterias y parásitos. Una vez que se lesiona o infecta un tejido, se producen una serie de eventos que provocan la selección local de leucocitos de la circulación en el tejido afectado. La selección de leucocitos se controla teniendo en cuenta la destrucción ordenada y la fagocitosis de células extrañas o muertas, seguido de la reparación del tejido y la resolución del infiltrado inflamatorio. Sin embargo, en estados inflamatorios crónicos, la selección suele ser inapropiada, la resolución no se controla adecuadamente y la reacción inflamatoria provoca la destrucción de tejidos.

Las integrinas son proteínas heterodiméricas en la superficie celular que comprenden cadenas \alpha y \beta, implicadas en el procedimiento inflamatorio. Las integrinas \alpha4, que incluyen \alpha4\beta1 (también conocidas como antígeno-4 muy tardío (VLA-4) o CD49d/CD29) y \alpha4\beta7, se expresan principalmente en los leucocitos en lugar de en los neutrófilos (Por ejemplo, eosinófilos, linfocitos T y B, basófilos y mastocitos). Los ligandos de las moléculas de adhesión para integrinas \alpha4 incluyen (i) la molécula de adhesión celular vascular (VCAM-1; CD106), (ii) una secuencia dentro del segmento de conexión alternativamente unido (CS-1) en fibronectina (una proteína en la matriz extracelular), y (iii) un sitio en la molécula de adhesión celular a adresina mucosa (MAdCAM). En condiciones normales, VCAM-1 se expresa mínimamente en la vasculatura, sin embargo, la sobre-regulación de VCAM-1 en las células endoteliales se produce cerca de sitios de inflamación. VCAM-1 también se ha identificado en un intervalo de células no vasculares incluyendo células dendríticas, células estromales de médula ósea, sinoviocitos, astrocitos y algunas neuronas corticales. La expresión de MAdCAM se asocia predominantemente con el tejido del intestino que se expresa en las venas endoteliales superiores del tejido linfoide asociado con el intestino, nódulos linfáticos periféricos y palcas de Peyer.

Tanto \alpha4\beta1 (VLA-4) como \alpha4\beta7 pueden interactuar con VCAM-1, CS-1 en fibronectina y MAdCAM. La interacción integrina \alpha4/VCAM-1 permite la adhesión y la posterior transmigración de leucocitos a través de la pared de las vénulas post-capilares a sitios de inflamación tisular. Asimismo, tal interacción puede proporcionar una señal co-estimuladora de la activación de células T, aunque se cree que la interacción integrina \alpha4/fibronectina tiene un papel estimulador en la desgranulación de los mastocitos, basófilos y eosinófilos. Por lo tanto, los antagonistas de integrina \alpha4 son capaces de intervenir a dos niveles para lograr la atenuación de los procedimientos inflamatorios que son esenciales en la patofisiología de muchas enfermedades crónicas. Esto incluye (i) inhibición de la selección de leucocitos a sitios de inflamación tisular e (ii) inhibición de la activación de leucocitos y de la liberación de mediadores inflamatorios.

La adhesión y la señalización celular, medidas por integrinas \alpha4, son esenciales en numerosos procedimientos fisiológicos y patofisiológicos. El potencial terapéutico de los agentes de bloqueo de la integrina \alpha4 se ha investigado previamente ensayando anticuerpos monoclonales que bloquean la integrina \alpha4 específicos (anti-\alpha4-mAbs) en modelos de enfermedad experimentales in vitro e in vivo (Lobb y Hemler, 1994). Los anti-\alpha4-mAbs ha mostrado efectos beneficiosos en modelos animales de inflamación pulmonar alérgica relacionados con asma, incluyendo los modelos de cobaya, rata, conejo y oveja. Además, los anti-\alpha4-mAbs también han demostrado ser eficaces en (i) modelos de rata y ratón de encefalomielitis alérgica experimental (considerado un modelo de enfermedad autoinmune dependiente de células T, esclerosis múltiple), (ii) modelos de ratón de hipersensibilidad por contacto, (iii) colitis en el tamarino cabeza de algodón, relacionado con enfermedad inflamatoria del intestino (Podolsky y col., 1993) y (iv) diabetes mellitus dependiente de insulina en el ratón diabético no obeso (Baron y col., 1994). Los péptidos derivados de fibronectina que se cree que bloquean la función de la integrina \alpha4 han mostrado eficacia en la hipersensibilidad por contacto en ratones (Feguson y col., 1991) y en artritis adyuvante en ratas (Wahl y col., 1994).

Las solicitudes de patente Internacional con los números WO 98/53814, WO 98/53817 y WO 98/53818 (Merck) describen el uso de compuestos amida heterocíclicos, ácidos biarilalcanoicos y compuestos sulfonamida, respectivamente, como antagonistas de VLA-4 y/o \alpha4/\beta7. El documento WO 98/54207 (Celltech) describe el uso de derivados de tirosina para inhibir la unión de \alpha4-integrinas a sus ligandos para el tratamiento y profilaxis de trastornos inmunes o anti-inflamatorios.

El documento WO97/03094 (Biogen) describe una selección de compuestos semi-peptídicos que son capaces de inhibir la unión de ligandos al receptor VLA-4.

Ahora se ha descubierto un nuevo grupo de compuestos antagonistas de la integrina \alpha4 que antagonizan tanto las integrinas \alpha4\beta1 como \alpha4\beta7, con potencial para bloquear la adhesión y activación de leucocitos, ejerciendo por consiguiente propiedades anti-inflamatorias. Estos compuestos son, por lo tanto, de beneficio terapéutico potencial, especialmente proporcionando protección de la lesión de tejidos inducida por leucocitos en enfermedades en las que los leucocitos están implicados en el sitio de inflamación. Los antagonistas de las integrinas \alpha4\beta1 y \alpha4\beta7 puede tener ventajas sobre antagonistas selectivos de \alpha4\beta1 o \alpha4\beta7 porque se cree que ambas integrinas tienen un papel en la inflamación.

De esta manera, de acuerdo con un aspecto de la invención, se proporcionan compuestos de fórmula I:

1

en la que R^{1} y R^{2} representan independientemente

(i) alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-8} o alquil C_{1-3}-cicloalquilo C_{3-8}, o un grupo tal en el que el alquilo o cicloalquilo está sustituido con uno o más grupos halógeno, -CN, nitro, hidroxi o -O-alquilo C_{1-6};

(ii) -(CH_{2})_{a}Ar^{1} o -(CH_{2})_{a}OAr^{1};

o NR^{1}R^{2} conjuntamente representan pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, tiomorfolinilo, morfolinilo o azepinilo, o un grupo condensado a un anillo de benceno, opcionalmente sustituido con uno o más grupos -(CO)_{n}(CH_{2})_{t}Ar^{1}, -(CO)_{n}-alquil C_{1-6}-Ar^{1}Ar^{2}, -(CO)_{n}-alquilo C_{1-6}, -(CH_{2})_{r}OH, -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{p}OH, -(CH_{2})_{r}O-alquilo C_{1-6}, -O(CH_{2})_{t}Ar^{1}, -(CH_{2})_{r}SO_{2}Ar^{1}, piperidin-1-ilo, -(CH_{2})_{t}CONR^{8}R^{9}, -NR^{10}(CO)_{n}(CH_{2})_{t}Ar^{1}, -NR^{10}(CO)_{n}-alquil C_{1-3}-cicloalquilo C_{3-6}, -NR^{10}(CO)_{n}-alquil C_{1-6}-dicicloalquilo C_{3-6}, -CONR^{10}(CH_{2})_{t}Ar^{1}, halógeno, -NHSO_{2}-alquilo C_{1-6}, -SO_{2}NR^{10}R^{11}, -SO_{2}-alquilo C_{1-6} o -SO_{2}Ar^{2};

R^{3} representa -alquil C_{1-6}-NHC(=NH)NH_{2}, -alquenil C_{2-6}-NHC(=NH)NH_{2}, -alquinil C_{2-6}-NHC(=NH)NH_{2}, -alquil C_{1-6}-NR^{14}R^{18}, -(CH_{2})_{n}CONR^{14}R^{18}, -(CH_{2})_{n}COC-alquilo C_{1-6}, -(CH_{2})_{d}CHNR^{18}CONR^{20}R^{21}, -(CH_{2})_{m}NR^{18}CONR^{14}R^{18}, -(CH_{2})_{d}NR^{18}Ar^{3}, -(CH_{2})_{d}CONR^{18}Ar^{3}, -(CH_{2})_{n}COOR^{18}, -(CH_{2})_{c}Ar^{3}, -O(CH_{2})_{c}Ar^{3}, -O(CH_{2})_{c}Ar^{3}, -(CH_{2})_{d}CO(CH_{2})_{a}
Ar^{3} o -(CH_{2})_{d}OAr^{3};

o R^{3} representa -(CH_{2})_{c}-2,4-imidazolidinona, -(CH_{2})_{c}(piperidin-4-ilo), -(CH_{2})_{c}(piperidin-3-ilo), -(CH_{2})_{c}(piperidin-2-ilo), -(CH_{2})_{c}(morfolin-3-ilo) o -(CH_{2})_{c}(morfolin-2-ilo) opcionalmente sustituido sobre el nitrógeno con -(CO)_{f}-alquilo C_{1-6}, -(CO)_{f}(CH_{2})_{c}Ar^{2} o -(C(=NH)NH_{2};

o R^{3} representa -(CH_{2})_{x}dibenzofurano opcionalmente sustituido con alquilo C_{1-6} o halógeno;

o R^{3} representa -(CH_{2})_{c}-tioxanten-9-ona;

R^{4} representa hidrógeno, -alquilo C_{1-6}, -alquil C_{1-3}-cicloalquilo C_{3-6}, -(CH_{2})_{q}Ar^{2}, -alquil C_{1-4}-X-R^{7}, -alquil C_{1-4}-SO_{2}-alquilo C_{1-4}, -alquil C_{1-6}-NR^{12}R^{13} o -alquil C_{1-6}-NR^{12}COC-alquilo C_{1-6};

R^{5} representa hidrógeno, o R^{4}R^{5} junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un anillo cicloalquilo C_{5-7};

R^{6} representa hidrógeno o -alquilo C_{1-6};

R^{7} representa hidrógeno, -(CH_{2})_{w}NR^{12}R^{13}, -(CH_{2})_{u}Ar^{2} o -(CH_{2})_{w}NR^{12}COC-alquilo C_{1-6};

R^{8}, R^{9}, R^{16} y R^{17} representan independientemente hidrógeno, -alquilo C_{1-6}, -cicloalquilo C_{3-6}, -alquil C_{1-3}-cicloalquilo C_{3-6}, -alquenilo C_{2-6} o NR^{8}R^{9} o NR^{16}R^{17} conjuntamente representan morfolinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo o piperazinilo N-sustituido con -alquilo C_{1-6}, -CO-fenilo o -SO_{2}-metilo;

R^{10}, R^{11}, R^{12}, R^{13}, R^{15}, R^{16}, R^{20} y R^{21} representan independientemente hidrógeno o -alquilo C_{1-6};

R^{14}, R^{19} y R^{22} representan independientemente hidrógeno, -alquilo C_{1-6}, -cicloalquilo C_{3-6} o -(CH_{2})_{x}Ar^{4} o NR^{14}R^{18} o NR^{15}R^{22} conjuntamente representan morfolinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo o N-alquil C_{1-6}-piperazinilo;

Ar^{1} representa fenilo o un anillo aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros que contiene de 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre O, N y S opcionalmente sustituido con uno o más grupos halógeno, alquilo C_{1-6}, hidroxi,
-O-alquilo C_{1-6}, CF_{3}, nitro, -Ar^{2} u -OAr^{2};

Ar^{2} representa fenilo opcionalmente sustituido con uno o más grupos halógeno, -alquilo C_{1-6}, hidroxi, -O-alquilo C_{1-6}, -CF_{3} o nitro;

Ar^{3} representa fenilo, un anillo aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros que contiene de 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre O, N o S, o un grupo condensado a un anillo de benceno, opcionalmente sustituido con uno o más grupos -CO(CH_{2})_{g}Ar^{4}, -(CH_{2})_{y}Ar^{4}, -(CH_{2})_{y}COAr^{4}, -(CO)_{a}-alquilo C_{1-6}, -(CO)_{a}-alquenilo C_{2-6}, -(CO)_{a}-alquinilo C_{2-6}, -(CO)_{a}-cicloalquilo C_{3-8}, -(CO)_{a}-haloalquilo C_{1-6}, halógeno, -COCH_{2}CN, -(CH_{2})_{b}NR^{16}R^{17}, -(CH_{2})_{b}NHC(=NH)NH_{2}, -CYNR^{16}(CO)_{a}R^{17}, -(CH_{2})_{b}NR^{15}COR^{19}, -(CH_{2})_{b}CONR^{15}R^{22}, -(CH_{2})_{b}NR^{15}CONR^{15}R^{22}, -(CH_{2})_{b}CONR^{15}(CH_{2})_{j}
NR^{15}R^{22}, -(CH_{2})_{b}SO_{2}NR^{15}R^{22}, -(CH_{2})_{b}SO_{2}NR^{15}COAr^{2}, -(CH_{2})_{b}NR^{15}SO_{2}R^{19}, -SO_{2}R^{19}, -SOR^{19}, -(CH_{2})_{x}OH, -COOR^{15}, -CHO, -O-alquilo C_{1-10}, -O(CH_{2})_{j}NR^{15}R^{22}, -O(CH_{2})_{j}NHC(=NH)NH_{2}, -O(CH_{2})_{b}CONR^{16}R^{17}, -O(CH_{2})_{k}COOR^{15},
-O(CH_{2})_{j}OAr^{2}, -O(CH_{2})_{b}Ar^{2}, 3-fenil-2-pirazolin-5-ona o 4,5-dihidro-3(2H)-piridazinona;

Ar^{4} representa fenilo o un anillo aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros que contiene de 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre O, N y S opcionalmente sustituido con uno o más grupos halógeno, -alquilo C_{1-6}, -hidroxi,
-O-alquilo C_{1-6}, -CF_{3}, nitro o -CONH_{2};

X e Y representan independientemente O o S;

a, f, k, s y n representan independientemente 0 ó 1;

b, c, r, x, y y z representan independientemente un número entero de 0 a 2;

d, g y u representan independientemente 1 ó 2;

e, h, q y w representan independientemente un número entero de 1 a 3;

j y p representan independientemente un número entero de 2 a 4;

m representa independientemente un número entero de 0 a 4;

t representa independientemente un número entero de 0 a 3;

y las sales y solvatos de los mismos.

Los ejemplos de anillos aromáticos heterocíclicos de 5 ó 6 miembros que pueden representar Ar^{1}, Ar^{3} y Ar^{4} incluyen pirimidina, piridina, furano, imidazol, tiofeno, pirrol, tiazol, oxazol, isoxazol, 1,3,4-tiadiazol, 1,2,3-tiadiazol, 1,2,4-tiadiazol, 1,2,4-oxadiazol y pirazol.

Los ejemplos específicos de anillos aromáticos heterocíclicos de 5 ó 6 miembros que puede representar Ar^{1} incluyen pirimidina, piridina, furano, 1,2,4-tiadiazol y pirrol.

Los ejemplos específicos de anillos aromáticos heterocíclicos de 5 ó 6 miembros que puede representar Ar^{3} incluyen tiazol y piridina. Fenilo condensado a un anillo de benceno representa naftilo. Un ejemplo de un anillo aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros condensado a un anillo benceno que puede representar Ar^{3} incluye benzofu-
rano.

Los ejemplos específicos de anillos aromáticos heterocíclicos de 5 ó 6 miembros que puede representar Ar^{4} incluyen 1,3,4-tiadiazol, 1,2,3-tiadiazol, 1,2,4-oxadiazol y pirazol.

Es preferible que R^{1} y R^{2} se definan de tal forma que NR^{1}R^{2} conjuntamente representen piperidinilo, piperazinilo, tiomorfolinilo, morfolinilo o 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina opcionalmente sustituidos con un grupo -(CO)_{n}(CH_{2})_{t}Ar^{1}, -(CO)_{n}-alquil C_{1-6}, -(CH_{2})_{t}CONR^{8}R^{9}, -NR^{10}(CO)_{n}(CH_{2})_{t}Ar^{1}, -NR^{10}(CO)_{n}-alquil C_{1-3}-cicloalquilo C_{3-6}, -NR^{10}(CO)_{n}-
alquil C_{1-6}-dicicloalquilo C_{3-6}, -(CH_{2})_{r}O-alquilo C_{1-6}, -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{p}OH, piperidin-1-ilo, -(CH_{2})_{r}OH o -CONR^{10}(CH_{2})_{r}Ar^{1}.

Es particularmente preferido definir R^{1} y R^{2} de tal forma que NR^{1}R^{2} conjuntamente representen morfolinilo o piperazinilo opcionalmente N-sustituidos con -(CO)_{n}-alquilo C_{1-6} (especialmente -COCH_{3}), piperazinilo N-sustituido con -(CO)_{n}(CH_{2})_{r}Ar^{1} (especialmente -CO-fenilo y -(CH)_{2}-furanilo), piperidinilo sustituido con -NR^{10}(CO)_{n}(CH_{2})_{r}Ar^{1} (especialmente -NHCOCH_{2}-fenilo) o piperidinilo sustituido con -(CH_{2})_{t}CONR^{8}R^{9} (especialmente -CONH_{2}).

Es preferible que R^{3} represente -(CH_{2})_{c}-2,4-imidazolidinadiona-3-ilo, -(CH_{2})_{c}-tioxanten-9-ona-3-ilo, -(CH_{2})_{c}Ar^{3}, -O(CH_{2})_{c}Ar^{3}, -(CH_{2})_{d}OAr^{3} o -(CH_{2})_{z}dibenzofurano, particularmente -OCH_{2}Ar^{3}, -CH_{2}OAr^{3} o dibenzofurano, especialmente -CH_{2}OAr^{3} o dibenzofurano.

Cuando R^{3} representa -(CH_{2})_{z}dibenzofurano (particularmente dibenzofurano), es preferible que represente (CH_{2})_{z}
dibenzofurano (particularmente 2-dibenzofurano).

Cuando R^{3} representa -(CH_{2})_{c}-2,4-imidazolidinadiona, es preferible que represente -(CH_{2})_{c}-(2,4-imidazolidinadiona-3-ilo) (particularmente -CH_{2}-2,4-imidazolidinadiona-3-ilo).

Cuando R^{3} representa -(CH_{2})_{c}-tioxanten-9-ona, es preferible que represente -(CH_{2})_{c}-(tioxanten-9-ona-3-ilo) (particularmente -CH_{2}-tioxanten-9-ona-3-ilo).

Es especialmente preferido que R^{3} represente -CH_{2}OAr^{3}.

Es preferible que R^{4} represente -alquilo C_{1-6}, que R^{5} represente hidrógeno o que R^{4}R^{5} junto con el átomo de carbono al que están unidos formen un anillo ciclohexilo, y que R^{6} represente hidrógeno o metilo (particularmente hidrógeno).

Es particularmente preferido que R^{4} represente -alquilo C_{1-6}, y que R^{5} y R^{6} representen hidrógeno.

Es especialmente preferido que R^{4} represente -CH_{2}CHMe_{2} y que R^{5} y R^{6} representen hidrógeno.

Es particularmente preferido que R^{4} y R^{5} tengan la orientación estereoquímica mostrada en la fórmula (Ia):

2

Es preferible que R^{7} represente -(CH_{2})_{u}Ar^{2} o -(CH_{2})_{w}NR^{12}COC-alquilo C_{1-6}.

Es especialmente preferido que cada uno de R^{8} y R^{9} represente hidrógeno o que NR^{8}R^{9} conjuntamente representen piperidinilo o pirrolidinilo, particularmente piperidinilo.

Es preferible que R^{10} represente hidrógeno o metilo, particularmente hidrógeno.

Es preferible que R^{11} represente hidrógeno o metilo, particularmente hidrógeno.

Es preferible que R^{12} represente hidrógeno o metilo, particularmente hidrógeno.

Es preferible que R^{13} represente hidrógeno o metilo, particularmente hidrógeno.

Es preferible que R^{14} represente hidrógeno o metilo, particularmente hidrógeno.

Es preferible que R^{15} represente hidrógeno o alquilo C_{1-6}, particularmente hidrógeno.

Es preferible que R^{16} represente hidrógeno, alquilo C_{1-4} o alquenilo C_{2-4}, particularmente hidrógeno o propenilo.

Es preferible que R^{17} represente hidrógeno, alquilo C_{1-4} o alquenilo C_{2-4}, particularmente hidrógeno, metilo o propenilo.

Es preferible que R^{18} represente hidrógeno o metilo, particularmente hidrógeno.

Es preferible que R^{19} represente hidrógeno o alquilo C_{1-6}, particularmente alquilo C_{1-6}, especialmente metilo.

Es preferible que R^{20} represente hidrógeno o metilo, particularmente hidrógeno.

Es preferible que R^{21} represente hidrógeno o metilo, particularmente hidrógeno.

Es especialmente preferido que R^{22} represente hidrógeno, alquilo C_{1-4} o -(CH_{2})_{x}Ar^{4} o que NR^{15}R^{22} conjuntamente represente piperidinilo, pirrolidinilo o morfolinilo.

Es especialmente preferido que R^{15} y R^{22} se definan de tal forma que NR^{15}R^{22} represente conjuntamente piperidinilo.

Es preferible que Ar^{1} represente furano, pirimidina o fenilo opcionalmente sustituido con halógeno (por ejemplo cloro o flúor) o -O-alquilo C_{1-6}.

Es preferible que Ar^{2} represente fenilo no sustituido.

Es preferible que Ar^{3} represente fenilo, naftilo o benzofurano opcionalmente sustituido con uno o más grupos -(CH_{2})_{y}COAr^{4}, -COOR^{15}, -(CH_{2})_{b}SO_{2}NR^{15}R^{22}, -(CH_{2})_{b}NR^{15}SO_{2}R^{19}, -SO_{2}R^{19}, (CO)_{a}-alquenilo C_{2-6}, -(CO)_{a}-alquilo C_{1-6}, -(CO)_{a}-cicloalquilo C_{3-8}, halógeno, -(CH_{2})_{b}CONR^{15}R^{22}, 3-fenil-2-pirazolil-5-ona-2-ilo o 4,5-dihidro-3(2H)-piridazinona-6-ilo. Es particularmente preferido que Ar^{3} represente fenilo o naftilo opcionalmente sustituido con -(CO)_{a}-
alquilo C_{1-6}, -(CO)_{a}-cicloalquilo C_{3-8}, halógeno, -(CH_{2})_{y}COAr^{3} o -(CH_{2})_{b}CONR^{15}R^{22}.

Es preferible más particularmente que Ar^{3} represente fenilo sustituido con n-propilo, butilo terciario, ciclohexilo, yodo, -CO-fenilo o CO-piperidin-1-ilo o naftilo sustituido con CO-piperidin-1-ilo.

Es preferible que Ar^{4} represente fenilo o furano opcionalmente sustituido con halógeno, especialmente fenilo o furano no sustituido.

Es preferible que e represente 1 ó 2.

Es preferible que n represente 0 ó 1.

Es preferible que r represente 0 ó 1, particularmente 1.

Es preferible que p represente 2.

Es preferible que t represente 0, 1 ó 3, particularmente 0 ó 1, especialmente 0.

Es preferible que h represente 1 ó 2, particularmente 2.

Es preferible que d represente 1.

Es preferible que m represente 0 ó 1, particularmente 1.

Es preferible que c represente 0 ó 1, particularmente 1.

Es preferible que f represente 1.

Es preferible que q represente 1 ó 2, particularmente 1.

Es preferible que u represente 1.

Es preferible que w represente 1 ó 2, particularmente 1.

Es preferible que x represente 0 ó 1, particularmente 1.

Es preferible que a represente 0.

Es preferible que y represente 0 ó 1, particularmente 0.

Es preferible que b represente 0 ó 1, particularmente 0.

Es preferible que j represente 2 ó 3, particularmente 2.

Es preferible que z represente 0 ó 1, particularmente 0.

Es preferible que k represente 1.

Es preferible que s represente 0.

Es preferible que g represente 1.

Es preferible que X represente oxígeno.

Es preferible que Y represente oxígeno.

Los compuestos más preferidos de fórmula (I) son:

Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[2-(2-yodofenoxi)acetil]amino}-4-metil-pentanoil)amino]-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)
oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metil-pentanoil]amino}-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-3-(4-{[(4-acetil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}propanoico;

Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[2-(2-ciclohexilfenoxi)acetil]amino}-4-metil-pentanoil)amino]-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]amino}pentanoil)amino]-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metil-pentanoil]amino}-3-{4-[({4-[(2-fenilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-3-(4-{[(4-acetil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]amino}
pentanoil)amino]propanoico;

Ácido (2S)-3-(4-{[(4-benzoil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}propanoico;

Ácido (2S)-3-(4-{[(4-acetil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]furan-4-ilcarbonil)amino]-4-metilpentanoil}amino)propanoico;

Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-[4-({[4-(2-furoil)-1-pipe-
razinil]carbonil}oxi)fenil]propanoico;

Ácido (2S)-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]furan-4-ilcarbonil)amino]-4-metilpentanoil}amino)-3-[4-({[4-(2-furoil)-1-
piperazinil]carbonil}oxi)fenil]propanoico;

Ácido (2S)-3-(4-{[(4-benzoil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]ami-
no}pentanoil)amino]propanoico;

Ácido (2S)-3-[4-({[4-(aminocarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]amino}pentanoil)amino]propanoico;

Ácido (2S)-3-[4-{[(4-benzoil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]furan-4-ilcarbonil)ami-
no]-4-metilpentanoil}amino)propanoico;

Ácido (2S)-3-[4-({[4-(aminocarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]furan-4-ilcarbonil)amino]-4-metilpentanoil}amino)propanoico;

y sales y solvatos de los mismos.

Los siguientes compuestos también se prefieren particularmente

Ácido (2S)-3-[4-({[4-(aminocarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]-2-[((2S)-2-{[2-(2-benzoilfenoxi)acetil]
amino}-4-metilpentanoil)amino]propanoico;

Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[4-(aminocarbonil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-[4-({[4-(amino-
carbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]propanoico;

Ácido (2S)-3-[4-({[4-(aminocarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]ace-
til}amino)-4-metilpentanoil]amino}propanoico;

y sales y solvatos de los mismos.

Los compuestos preferidos anteriores se caracterizan por la baja biodisponibilidad oral que es una propiedad ventajosa para una medicina inhalada con el fin de minimizar los efectos secundarios potenciales.

Las sales adecuadas de los compuestos de fórmula (I) incluyen sales fisiológicamente aceptables tales como sales de metales álcali, por ejemplo sales de calcio, sodio y potasio y sales con (trishidroximetil)aminometano. Otras sales de los compuestos de fórmula (I) incluyen sales que pueden no ser fisiológicamente aceptables pero que pueden ser útiles en la preparación de compuestos de fórmula (I) y de sales fisiológicamente aceptables de los mismos. Si es apropiado, pueden derivarse sales de adición de ácidos a partir de ácidos inorgánicos u orgánicos, por ejemplo clorhidratos, bromhidratos, sulfatos, fosfatos, acetatos, benzoatos, citratos, succinatos, lactatos, tartratos, fumaratos, maleatos, 1-hidroxinatanoato, metanosulfonato. Los ejemplos de solvatos incluyen hidratos.

Cuando las cadenas laterales de los compuestos de fórmula (I) contienen centros quirales, la invención se extiende a mezclas de enantiómeros (incluyendo mezclas racémicas) y diastereoisómeros así como a los enantiómeros individuales. Generalmente, se prefiere usar un compuesto de fórmula (I) en forma de un enantiómero único purifi-
cado.

Los compuestos de fórmula (I) y sales y solvatos de los mismos pueden prepararse por la metodología descrita más adelante en este documento, constituyendo un aspecto más de esta invención.

Un procedimiento de acuerdo con la invención para preparar un compuesto de fórmula (I) comprende:

(a) hidrólisis de un éster de ácido carboxílico de fórmula (II)

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3

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en la que R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} son como se han definido anteriormente y R es un grupo capaz de formar un éster de ácido carboxílico; o

(b) desproteger un compuesto de fórmula (I) que está protegido.

En el procedimiento (a) un ejemplo de un grupo R adecuado es un grupo alquilo C_{1-6} tal como metilo o t-butilo. La hidrólisis puede tener lugar mediante un procedimiento ácido, por ejemplo, que implique ácido trifluoroacético y agua o mediante una vía alcalina, por ejemplo, utilizando hidróxido sódico y metanol.

En una reacción de fase sólida alternativa, R puede representar un soporte sólido funcionalizado con grupos hidroxi disponibles. Los ejemplos de soportes sólidos incluyen resinas tales como resinas de poliestireno en las que los anillos fenilo se proporcionan con grupos hidroxi mediante engarces. Un ejemplo de un engarce funcionalizado con hidroxi es -CH_{2}O-(4-hidroximetil-fenilo) (Resina de Wang) o un éster de acilo del aminoácido N-Fmoc de poliestireno reticulado con divinilbenceno al 1% 3-metoxi-4-oximetil-fenoximetilado (resina de Sasrin).

En el procedimiento (b) pueden encontrarse ejemplos de grupos protectores y de medios para su retirada en T. W. Greene "Protective Groups in Organic Synthesis" (J. Wiley y Sons, 1991). Los grupos protectores de amina adecuados incluyen sulfonilo (por ejemplo, tosilo), acilo (por ejemplo, benciloxicarbonilo o t-butoxicarbonilo) y arilalquilo (por ejemplo, bencilo), que pueden retirarse por hidrólisis o hidrógenolisis según sea apropiado.

Los compuestos de fórmula (II) pueden prepararse siguiendo el Esquema 1;

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Esquema 1

4

Etapa (i)

En este Esquema es preferible que R represente metilo.

Los compuestos de fórmula (III) y (IV) pueden hacerse reaccionar en condiciones convencionales para la preparación de una amida. Deseablemente, se usa un agente de acoplamiento por ejemplo WSCDI con o sin HOBT en un disolvente inerte tal como MeCN o DMF. P_{1} es un grupo protector de amina tal como el descrito anteriormente en el procedimiento (b). En este Esquema, es preferible que P_{1} represente Boc.

Etapa (ii)

La conversión de la fórmula (V) a (VI) se realiza de forma adecuada con p-nitrofenil cloroformiato en condiciones convencionales, por ejemplo en presencia de una base orgánica, por ejemplo piridina y un disolvente orgánico inerte tal como DCM.

Etapa (iii)

Esta reacción puede realizarse mediante la combinación de los reactivos en un disolvente adecuado, tal como DCM en presencia de una base orgánica tal como DIPEA.

Etapa (iv)

Esta etapa de desprotección puede realizarse en condiciones convencionales. Cuando P_{1} representa Boc, puede retirarse por tratamiento con ácido, por ejemplo un ácido hidrohálico (HX) tal como HCl.

Etapa (v)

Una reacción de condensación de fórmula (VIII) con el compuesto de fórmula R^{3}CO_{2}H puede realizarse en condiciones similares a las descritas anteriormente para la etapa (i).

Un procedimiento alternativo para la preparación de compuestos de fórmula (II) se da en el Esquema 2 que se muestra a continuación:

Esquema 2

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Etapa (i)

En este Esquema es preferible que R represente t-Bu. Las condiciones de reacción para esta etapa son análogas a las del Esquema 1 etapa (i).

En los compuestos de fórmula (IV) en este Esquema, es preferible que P^{1} represente Cbz.

Etapa (ii)

Este procedimiento comprende una reacción de dos etapas, que consiste en (a) tratamiento con un donador de carboxilo tal como (Cl_{3}CO)_{2}CO típicamente en presencia de una base orgánica tal como DIPEA y un disolvente adecuado, tal como THF o DCM seguido de (b) conversión al carbamato por tratamiento con R^{1}R^{2}NH en un procedimiento análogo al descrito anteriormente en el Esquema 1 etapa (iii).

Etapa (iii)

Esta reacción de desprotección puede realizarse en condiciones convencionales. Cuando P_{1} representa Cbz, la desprotección puede realizarse por hidrógenolisis por ejemplo por tratamiento con formiato amónico en presencia de Pd/C en un disolvente tal como etanol. La reacción puede tratarse con ácido, tal como un ácido hidrohálico, dando el producto en forma de una sal de ácido hidrohálico (por ejemplo la sal HCl).

Etapa (iv)

Este procedimiento es análogo al Esquema 1, etapa (v).

Un procedimiento alternativo para la preparación de compuestos de fórmula (II) se da en el Esquema 3 que se muestra a continuación:

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Esquema 3

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Etapa (i)

P_{2} es un grupo protector de amina tal como uno descrito anteriormente y en este Esquema es preferible que P_{2} represente Fmoc. Más preferiblemente, P_{2} será Boc.

Un compuesto de fórmula (IX) puede hacerse reaccionar en una fase sólida adecuada, tal como una resina de poliestireno funcionalizada con hidroxi (por ejemplo resina de Wang o Sasrin) en presencia de cloruro de 2,6-diclorobenzoílo, piridina y un disolvente adecuado, tal como DMF.

Etapa (ii)

La retirada del grupo N-protector P_{2} puede conseguirse en condiciones convencionales; por ejemplo, cuando P_{2} representa Fmoc, por tratamiento con una base orgánica tal como piperidina en un disolvente adecuado, tal como DMF o por ejemplo, cuando P_{2} representa Boc, por tratamiento con clorotrimetilsilano y fenol en un disolvente adecuado tal como DCM.

Etapa (iii)

En este Esquema, P_{1} puede representar de forma adecuada Fmoc. Como alternativa, puede representar de forma adecuada Boc. La reacción de un compuesto de fórmula (XI) con el compuesto de fórmula (IV) para producir una amina, puede realizarse en presencia de un agente de acoplamiento, tal como PyBop, una base orgánica, tal como DIPEA y un disolvente orgánico, tal como DMF.

Etapa (iv)

Esta reacción de desprotección puede realizarse en condiciones convencionales, por ejemplo cuando P_{1} representa Fmoc o Boc, en condiciones análogas a las descritas anteriormente para la etapa (ii).

Etapa (v)

Una reacción de condensación de fórmula (XIII) con el compuesto de fórmula R^{3}CO_{2}H puede realizarse en presencia de un agente de acoplamiento adecuado, tal como PyBop, una base orgánica, tal como DIPEA y un disolvente orgánico, tal como DMF.

Etapa (vi)

Esta etapa comprende una reacción de escisión de la cadena alquenilo en el compuesto de fórmula (XIV) para producir un compuesto de fórmula (XV), por ejemplo por tratamiento con Pd(PH_{3})_{4} y PhSiH_{3} (o morfolina) en presencia de un disolvente adecuado, tal como DMF.

Etapa (vii)

La conversión de un compuesto de fórmula (XV) en un compuesto de fórmula (XVI) se realiza de forma adecuada por tratamiento con p-nitrofenil cloroformiato, en condiciones convencionales, en presencia de una base orgánica, tal como DIPEA y un disolvente orgánico inerte, tal como THF y/o DCM.

Etapa (viii)

Esta reacción puede realizarse mediante la combinación de los reactivos en presencia de una base orgánica, tal como DIPEA y de disolventes adecuados, tales como DMF y/o THF.

Un procedimiento alternativo para la preparación de ciertos compuestos de fórmula (II) se da en el Esquema 4 que se muestra a continuación:

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(Esquema pasa a página siguiente)

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Esquema 4

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Etapa (i)

En este Esquema es preferible que P_{2} represente Fmoc.

Esta conversión puede conseguirse siguiendo procedimientos análogos a los del Esquema 3 etapas (i) a (iii).

Etapa (ii)

Una reacción de escisión de la cadena alquenilo puede realizarse mediante un procedimiento análogo al del Esquema 3 etapa (vi).

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Etapa (iii)

Una reacción de formación de p-nitrofenil carbonato puede realizarse con condiciones de reacción análogas a las del Esquema 3 etapa (vii).

Etapa (iv)

La conversión de la fórmula (XVIII) en (XIX) puede realizarse mediante una reacción análoga a la del Esquema 3 etapa (viii).

Etapa (v)

Esta reacción de desprotección puede realizarse usando un procedimiento análogo al del Esquema 3 etapa (ii).

Etapa (vi)

La conversión de la fórmula (XX) en (II) puede realizarse mediante una reacción de condensación en presencia de un ácido adecuado, empleando un agente de acoplamiento adecuado, tal como PyBop, una base orgánica, tal como DIPEA y un disolvente, tal como DMF.

Los compuestos de fórmula (II) en la que R^{3} representa -(CH_{2})_{d}OAr^{3} pueden prepararse como alternativa a partir de compuestos de fórmula (XX) siguiendo las etapas (vii) y (viii):

Etapa (vii)

La conversión de la fórmula (XX) en (XXI) puede realizarse mediante una reacción de condensación en presencia de un ácido haloalcanoico (tal como el derivado de bromo, es decir, Hal representa bromo), empleando un agente de acoplamiento adecuado, tal como DIC y un disolvente, tal como DMF.

Etapa (viii)

En esta etapa, la reacción de un compuesto de fórmula (XXI) con un compuesto de fórmula Ar^{3}-grupo OH puede realizarse en presencia de carbonato de potasio, yoduro sódico y un disolvente adecuado, tal como DMF.

Se conocen o pueden prepararse mediante procedimientos conocidos compuestos de fórmula III, IV, IV^{I}, NHR^{1}R^{2}, R^{3}COOH, IX, Hal(CH_{2})_{d}COOH y Ar^{3}-OH.

Los compuestos de la invención pueden ensayarse con respecto a la actividad biológica in vitro e in vivo de acuerdo con los siguientes ensayos.

(1) Ensayo de Adhesión de Jurkat J6/VCAM-1

Este ensayo se usó para investigar la interacción de la integrina VLA-4, expresada en la membrana celular Jurkat J6 (línea celular de linfoblastos humana) con VCAM-1. Se recubrieron placas de microtitulación de 96 pocillos de poliestireno con inmunoglobulina G humana (IgG; Sigma Chemicals, Reino Unido, Producto Nº I4506) a una concentración de 0,05 mg\cdotml^{-1} en tampón bicarbonato (NaHCO_{3} 36 mM y Na_{2}CO_{3} 22 mM, preparado en solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco a pH 9,8 (PBS); Sigma Chemicals, Reino Unido, Producto Nº 14190-094) durante 2 h a 37ºC. Después, esta solución se aspiró y las placas se lavaron dos veces con PBS.

Se preparó VCAM-1 clonando sus siete dominios constituyentes en un sistema de expresión Drosophila con una marca zz (Proteína A). Después, esta zzVCAM-1 se expresó a partir del cultivo celular Drosophila melanogaster S2 y se indujo con cobre. Se añadieron inhibidores de proteasa y el sobrenadante del cultivo se aclaró por filtración a través de un filtro de 0,2 \mum o por centrifugación. Después, la zzVCAM-1 se purificó a partir de este medio aclarado usando una columna de agarosa IgG, equilibrada con fosfato sódico 20 mM a pH 7,2 sólo o en presencia de cloruro sódico 0,5 M. La elución de zzVCAM-1 a partir de la columna se medió usando tiocianato amónico 3 M, que posteriormente se retiró usando una columna de desalación G25, equilibrada con fosfato sódico 20 mM, a pH 7,2. Después, la

\hbox{zzVCAM-1}

purificada se concentró hasta un pequeño volumen (concentradores celulares agitados Amicon) hasta que se obtuvo una concentración de 62,5 ng\cdotml^{-1}, calculada usando el valor del coeficiente de extinción.

Después, esta solución de zzVCAM-1 se incubó durante una noche a 4ºC en las placas de microtitulación recubiertas de IgG con albúmina de suero bovino al 3% (BSA) en PBS, seguido de aspiración y de dos lavados más con PBS. Una concentración de las células Jurkat J6 (6 x 10^{6} células\cdotml^{-1}) que creció en el medio celular RPMI 1640 (HyClone Ltd, Producto Nº B-9106-L) suplementado con suero de ternero fetal inactivado con calor al 10% (FCS; Gibco BRL, Producto Nº 10099-075) y L-glutamina 2 mM se marcaron con 10 \muM del tinte fluorescente, acetoximetiléster de 2',7'-bis(2-carboxietil)-5-(e6)-carboxifluoresceína (BCECF-AM; Molecular Probes Inc, Producto Nº B-1150) a 37ºC durante 10 minutos. Después, el exceso de tinte se retiró por centrifugación a 500 x g durante 5 minutos y las células se resuspendieron a una concentración de 1,2 x 10^{7} células\cdotml^{-1} en solución salina equilibrada de Hank (HBSS; Gibco BRL, Producto Nº 14190-094).

Se añadieron volúmenes iguales de compuestos (disueltos en un disolvente apropiado y diluidos en HBSS que contenía MnCl_{2} 1 mM) y células Jurkat J6 marcadas, a las placas recubiertas con VCAM-1 y la adhesión se dejo proceder durante 30 minutos a 37ºC. Ninguna, o casi ninguna de las células adheridas se retiró por inversión de la placa y se transfirió con papel de tejido. Después, se realizaron dos lavados con PBS y una transferencia antes de la adición de detergente al 2% (Triton-X®; Sigma Chemicals UK, Producto Nº X100). El recuento se realizó en un fluorímetro Wallac Viktor^{TM}, donde los valores bajos de fluorescencia eran indicio de los compuestos que habían inhibido la adhesión. Todas las muestras se ensayaron una sola vez y se aplicaron las siguientes cuatro parámetros de curva correspondientes, mostrados por la Ecuación (I):

Ecuación (I)

y = \frac{a - d}{1 + \left(\frac{x}{c}\right)^{b}} + d

Donde a es el mínimo, b es la pendiente de Hill, c es la CI_{50} y d es el máximo. (Los valores máximo y mínimo son los comparados con la adhesión en ausencia de compuesto y en presencia de la sal dipotásica de EDTA 2 mM; Sigma Chemicals, Reino Unido, Producto Nº ED2P). Los datos se presentan como la pCI_{50} media con el margen de error de la media de los experimentos n.

(2) Co-estimulación CD3/VCAM-1 de la Proliferación de los Linfocitos T

Se purificaron células T CD4^{+} a partir de células mononucleares de la sangre periférica por selección negativa con anticuerpos anti-CD14, CD19, CD16 y HLA.DR y perlas Dynal. Se recubrieron placas de cultivo tisular de 96 pocillos de fondo plano con 1 \mug\cdotml^{-1} de anticuerpo anti-CD3 (OKT3), se lavaron e incubaron con IgG humana y proteínas de fusión zzVCAM-1. Se añadieron las células T CD4^{+} (preparadas en medio RPMI-1640 suplementado con FCS al 10%, penicilina o estreptomicina y L-glutamina) a las placas recubiertas (1 x 10^{5} células\cdotpocillo^{-1}) y se incubaron en presencia o ausencia de diversas dosis de compuesto o anticuerpos bloqueantes durante 4 días. La timidina radiomarcada [^{3}H] se añadió durante las últimas 6 horas de incubación y después las células se recogieron usando un recolector de placas Skatron. La incorporación de la marca [^{3}H] se midió como indicador de proliferación de células T usando un contador de placas \beta. Los compuestos se ensayaron por triplicado y los datos se recogieron en un procedimiento análogo al descrito para el Ensayo (1).

(3) Inhibición de la Infiltración de Eosinófilos e Hiper-Reactividad en Cobayas

En un procedimiento basado en el descrito por Danahay y col., 1997, a cobayas sensibilizadas a ovalbúmina se les suministró una dosis de mepiramina (30 mg\cdotkg^{-1} ip) para protegerlas contra al broncoespasmo anafiláctico. Los compuestos de ensayo, disueltos en solución salina al 0,9%, se dieron mediante la vía inhalada (30 minutos de respiración de un aerosol del compuesto) o la vía intra-traqueal, 30 minutos antes y 6 horas después de la exposición a ovalbúmina (10 minutos de respiración de un aerosol generado a partir de una solución al 0,5% de ovalbúmina). La hiper-reactividad de las vías respiratorias al mimético tromboxano U46619 se midió 24 horas después de la exposición a ovalbúmina en animales no retenidos usando un pletismógrafo de todo el cuerpo (Buxco Ltd., Estados Unidos). Después, las cobayas fueron sacrificadas y se lavaron los pulmones. Después, se obtuvieron recuentos de leucocitos totales y diferenciales para el fluido broncoalveolar de lavado y se determinó el porcentaje de reducción en la acumulación de eosinófilos (Sanjar y col., 1992). Se usó dexametasona (200 \mug\cdotkg^{-1} i.t.) como control positivo. Los datos se presentaron como el efecto inhibidor de la dosis especificada expresada como porcentaje de la respuesta del control de vehículo.

(4) Ensayo de Adhesión de RPMI 886/MAdCAM-1

Este ensayo se usó para investigar la interacción de la integrina \alpha_{4}\beta_{7}, expresada en la membrana celular RPMI 8866 (línea de células linfoides B humana) con MAdCAM-1. Se recubrieron placas de microtitulación de 96 pocillos de poliestireno con inmunoglobulina G humana (IgG; Sigma Chemicals, Reino Unido, Producto Nº I4506) a una concentración de 0,05 mg\cdotml^{-1} en tampón bicarbonato (NaHCO_{3} 36 mM y Na_{2}CO_{3} 22 mM, preparado en solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco a pH 9,8 (PBS); Sigma Chemicals, Reino Unido, Producto Nº 14190-094) durante 2 horas a 37ºC. Después, esta solución se aspiró y las placas se lavaron dos veces con PBS.

Se preparó MAdCAM-1 clonando sus dominios constituyentes, bajo el control de un promotor de polihedrina, en un sistema de expresión de baculovirus con una marca zz (Proteína A). El baculovirus amplificado que contenía zzMAdCAM-1 se usó para infectar las células Spodoptera frugiperda que crecían en suspensión en medio SF900II suplementado con suero de ternero fetal al 5%. Las células se infectaron a una multiplicidad de infección de 1 y se recogieron 48 horas después por centrifugación. Se añadieron inhibidores de proteasa y el sobrenadante del cultivo se aclaró por filtración a través de un filtro de 0,2 \mum o por centrifugación. Después, la zzMAdCAM-1 se purificó de este medio aclarado usando una columna de agarosa de IgG, equilibrada con fosfato sódico 20 mM a pH 7,2 sólo o en presencia de cloruro sódico 0,5 M. La elución de zzMAdCAM-1 de la columna se midió usando tiocianato amónico 3 M. Después, la muestra se dializó minuciosamente, usando fosfato sódico 20 mM a pH 7,2, para retirar el tiocianato amónico. Después, la zzMAdCAM-1 purificada se concentró a un pequeño volumen (concentradores celulares agitados Amicon) hasta que se obtuvo una concentración de 0,5 mg\cdotml^{-1}, calculada usando el valor del coeficiente de extinción.

Esta solución de zzMAdCAM-1 se diluyó a 1:2500 y después se incubó durante una noche a 4ºC en las placas de microtitulación recubiertas de IgG con albúmina de suero bovino al 3% (BSA) en PBS, seguido de aspiración y de dos lavados más con PBS. Una concentración de las células RPMI 8866 (3 x 10^{6} células\cdotml^{-1}) que crecieron en medio celular RPMI 1640 (HyClone Ltd, Producto Nº B-9106-L) suplementado con suero de ternero fetal inactivado con calor al 10% (FCS; Gibco BRL, Producto Nº 10099-075) y L-glutamina 2 mM, se marcaron con 10 \muM del tinte fluorescente, acetoximetiléster de 2',7'-bis(2-carboxietil)-5-(e6)-carboxifluoresceína (BCECF-AM; Molecular Probes Inc, Producto Nº B-1150) a 37ºC durante 10 minutos. Después, el exceso de tinte se retiró por centrifugación a

\hbox{500 x
g}

durante 5 minutos y las células se resuspendieron a una concentración de 6 x 10^{6} células\cdotml^{-1} en solución salina equilibrada de Hank (HBSS; Gibco BRL, Producto Nº 14190-094).

Se añadieron volúmenes iguales de compuestos (disueltos en un disolvente apropiado y diluidos en HBSS que contenía MnCl_{2} 1 mM) y células RPMI 8866 marcadas, a las placas recubiertas con MAdCAM-1 y la adhesión se dejó proceder durante 30 minutos a 37ºC. Ninguna, o casi ninguna de las células adheridas se retiraron por inversión de la placa y se transfirieron con papel de tejido. Después, se realizaron dos lavados con PBS y una transferencia adicional, antes de la adición de detergente al 2% (Triton-X®; Sigma Chemicals UK, Producto Nº X100). El recuento se realizó en un Fluorímetro Wallac Viktor^{TM}, donde los bajos valores de fluorescencia eran indicativos de compuestos que habían inhibido la adhesión. Todas las muestras se ensayaron una sola vez y se aplicaron los siguientes cuatro parámetros de curva correspondientes, mostrados por la Ecuación (I) (mostrada anteriormente). Donde los valores máximo y mínimo son los comparados con la adhesión en ausencia de compuesto y en presencia de la sal dipotásica de EDTA 2 mM; Sigma Chemicals, Reino Unido, Producto Nº ED2P). Los datos se presentan como la pCl_{50} media con el error típico de la media de experimentos n.

Los ejemplos de estados de enfermedad en los que los compuestos de la invención tienen efectos anti-inflamatorios potencialmente beneficiosos incluyen enfermedades del tracto respiratorio tales como bronquitis (incluyendo bronquitis crónica), asma (incluyendo reacciones asmáticas inducidas por alergenos), enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD) y rinitis. Otros estados de enfermedad relevantes incluyen enfermedades del tracto gastrointestinal tales como enfermedades inflamatorias intestinales incluyendo enfermedad inflamatoria del intestino (por ejemplo enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa) y enfermedades inflamatorias intestinales secundarias a la exposición a radiación o exposición a alergenos. Además, los compuestos de la invención pueden usarse para tratar nefritis, enfermedades de la piel tales como psoriasis, dermatitis alérgica y reacciones de hipersensibilidad y enfermedades del sistema nervioso central que tienen un componente inflamatorio, por ejemplo enfermedad de Alzheimer, meningitis, esclerosis múltiple y demencia por SIDA.

Otros ejemplos de estados de enfermedad en los que los compuestos de la invención tienen efectos potencialmente beneficiosos incluyen afecciones cardiovasculares tales como aterosclerosis, enfermedad vascular periférica y síndrome hipereosinófilo idiopático.

Los compuestos de la invención puede ser útiles como agentes inmunosupresores y por tanto tienen uso en el tratamiento de enfermedades auto-inmunes tales como rechazo del tejido al aloinjerto después del transplante, artritis reumatoide y diabetes.

Los compuestos de la invención también pueden ser útiles en la inhibición de la metástasis.

Las enfermedades de principal interés incluyen asma, COPD y enfermedades inflamatorias del tracto respiratorio superior que implican rinitis estacional y perenne.

Se apreciará por parte de los especialistas en la técnica que las referencias en este documento al tratamiento se extienden a la profilaxis así como al tratamiento de afecciones establecidas.

Como se ha mencionado anteriormente, los compuestos de fórmula (I) son útiles como compuestos farmacéuticos, en particular como agentes anti-inflamatorios.

De esta manera, como un aspecto más de la invención se proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal o solvato fisiológicamente aceptable del mismo para uso como compuesto farmacéutico, particularmente en el tratamiento de pacientes con afecciones inflamatorias.

De acuerdo con otro aspecto de la invención, se proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal o solvato fisiológicamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de pacientes con afecciones inflamatorias.

Los compuestos de acuerdo con la invención pueden formularse para administración en cualquier vía conveniente, y por tanto la invención también incluye dentro de su alcance composiciones farmacéuticas para uso en terapia antiinflamatoria, que comprenden un compuesto de fórmula (I) o una sal o solvato fisiológicamente aceptable del mismo junto con, si se desea, uno o más diluyentes o vehículos fisiológicamente aceptables.

También se proporciona un procedimiento para preparar tal formulación farmacéutica que comprende mezclar los ingredientes.

Los compuestos de acuerdo con la invención pueden formularse, por ejemplo, para administración oral, bucal, parenteral, tópica o rectal, preferiblemente para administración tópica en el pulmón, por ejemplo por aerosol o en forma de una composición en polvo seco.

Los comprimidos y cápsulas para la administración oral pueden contener excipientes convencionales tales como aglutinantes, por ejemplo jarabe, goma arábiga, gelatina, sorbitol, tragacanto, mucílago de almidón, celulosa o polivinilpirrolidona; cargas, por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina, azúcar, almidón de maíz, fosfato cálcico o sorbitol; lubricantes, por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico, talco, polietilenglicol o sílice; disgregantes, por ejemplo, almidón de patata, croscarmelosa sódica o almidón glicolato sódico; o agentes humectantes tales como laurilsulfato sódico. Los comprimidos pueden recubrirse de acuerdo con procedimientos bien conocidos en la técnica. Las preparaciones líquidas orales pueden estar en forma de, por ejemplo, suspensiones acuosas u oleosas, soluciones, emulsiones, jarabes o elixires, o pueden presentarse en forma de un producto seco para constitución con agua u otro vehículo adecuado antes de uso. Tales preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales tales como agentes de suspensión, por ejemplo, jarabe de sorbitol, metilcelulosa, jarabe de glucosa/azúcar, gelatina, hidroximetilcelulosa, carboximetilcelulosa, gel de estearato de aluminio o grasas comestibles hidrogenadas; agentes emulsionantes, por ejemplo, lecitina, mono-oleato de sorbitano o goma arábiga; vehículos no acuosos (que pueden incluir aceites comestibles), por ejemplo aceite de almendra, aceite de coco fraccionado, ésteres oleosos, propilenglicol o alcohol etílico; o conservantes, por ejemplo, p -hidroxibenzoatos de metilo o etilo o ácido sórbico. Las preparaciones también pueden contener sales tamponantes, agentes aromatizantes, colorantes y/o edulcorantes (por ejemplo manitol) según sea apropiado.

Para la administración bucal, las composiciones pueden tomar la forma de comprimidos o grageas formulados de manera convencional.

Los compuestos también pueden formularse en forma de supositorios, por ejemplo que contienen bases supositorias convencionalmente tales como manteca de cacao u otros glicéridos.

Los compuestos de acuerdo con la invención también pueden formularse para administración parenteral mediante inyección en embolada o infusión continua y pueden presentarse en una forma de dosificación unitaria, por ejemplo en forma de ampollas, viales, infusiones de poco volumen o jeringas pre-rellenadas, o en recipientes multi-dosis con un conservante añadido. Las composiciones pueden tomar formas tales como soluciones, suspensiones o emulsiones en vehículos acuosos o no acuosos, y pueden contener agentes formuladores tales como anti-oxidantes, tampones, agentes antimicrobianos y/o agentes que ajustan la tonicidad. Como alternativa, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para constitución con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril sin pirógenos, antes de uso. La presentación sólida seca puede prepararse rellenando un polvo estéril asépticamente en recipientes estériles individuales o rellenando una solución estéril asépticamente en cada recipiente y liofilizando.

Por administración tópica como se usa en este documento, se incluye administración por insuflación e inhalación. Los ejemplos de diversos tipos de preparación para administración tópica incluyen pomadas, cremas, lociones, polvos, pesarios, pulverizadores, aerosoles, cápsulas o cartuchos para uso en un inhalador o insuflador, soluciones para nebulización o gotas (por ejemplo gotas para el ojo o la nariz). Las pomadas y cremas pueden formularse, por ejemplo, con una base acuosa u oleosa con la adición de agentes espesantes y/o gelificantes y/o disolventes adecuados. De esta manera, tales bases pueden incluir, por ejemplo, agua y/o un aceite tal como parafina líquida o un aceite vegetal tal como aceite de araquis o aceite de ricino o un disolvente tal como un polietilenglicol. Los agentes espesantes que pueden usarse incluyen parafina blanda, estearato de aluminio, alcohol cetoestearílico, politilenglicoles, cera microcristalina y cera de abeja.

Las lociones pueden formularse con una base acuosa u oleosa y en general también contendrán uno o más agentes emulsionantes, agentes estabilizantes, agentes dispersantes, agentes de suspensión o agentes espesantes.

Los polvos para aplicación externa pueden formularse con la ayuda de cualquier base en polvo adecuada, por ejemplo, talco, lactosa o almidón. Las gotas pueden formularse con una base acuosa o no acuosa que comprenda también uno o más agentes dispersantes, agentes solubilizantes o agentes de suspensión. Las composiciones en polvo para inhalación contendrán preferiblemente lactosa. Las composiciones de pulverización pueden formularse, por ejemplo, en forma de soluciones o suspensiones acuosas o en forma de aerosoles suministrados a partir de envases presurizados, con el uso de un propulsor adecuado, por ejemplo diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetra-fluoroetano, 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropano, 1,1,1,2-tetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado.

Los pulverizadores intranasales pueden formularse con vehículos acuosos o no acuosos con la adición de agentes tales como agentes espesantes, sales o ácidos tamponantes o álcali para ajustar el pH, agentes que ajustan la isotonicidad o anti-oxidantes.

Las cápsulas y cartuchos de por ejemplo gelatina, o ampollas de por ejemplo lámina de aluminio laminado, para uso en un inhalador o insuflador pueden formularse de manera que contengan una mezcla en polvo de un compuesto de la invención en una base de polvo adecuada tal como lactosa o almidón.

Las soluciones para inhalación por nebulización pueden formularse con un vehículo acuoso con la adición de agentes tales como ácido o sales tamponantes álcali, agentes que ajustan la isotonicidad o antimicrobianos. Pueden esterilizarse por filtración o calentamiento en un autoclave, o pueden presentarse en forma de un producto no es-
téril.

Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención también pueden usarse junto con otros agentes terapéuticos, por ejemplo agentes antiinflamatorios (tales como corticoesteroides (por ejemplo, propionato de fluticasona, dipropionato de beclometasona, furoato de monometasona, acetonida de triamicinolona o budesonida) o AINE (por ejemplo, cromoglicato sódico, nedocromil sodio, inhibidores de PDE-4, antagonistas de leucotrieno, inhibidores de iNOS, inhibidores de triptasa y elastasa, antagonistas de la integrina beta-2 y agonistas de adenosina 2a)) o agentes beta adrenérgicos (tales como salmeterol, salbutamol, formoterol, fenoterol o terbutalina y sales de los mismos) o agentes antiinfecciosos (por ejemplo, antibióticos, antivíricos).

De esta manera, la invención proporciona, en un aspecto adicional, una combinación que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal o solvato fisiológicamente aceptable del mismo junto con otro agente terapéuticamente activo, por ejemplo un agente antiinflamatorio tal como un corticoesteroide, AINE, agente beta adrenérgico o un agente antiinfeccioso. Es de interés particular una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal o solvato fisiológicamente aceptable del mismo en combinación con un agonista del receptor adrenérgico \beta_{2} de actuación prolongada (por ejemplo salmeterol o una sal o solvato del mismo tal como xinafoato de salme-
terol).

La combinación indicada anteriormente puede presentarse convenientemente para uso en forma de una formulación farmacéutica y de esta manera las formulaciones farmacéuticas que comprenden una combinación como se ha definido anteriormente junto con un diluyente o vehículo fisiológicamente aceptable de la misma representan un aspecto más de la invención.

Los componentes individuales de tales combinaciones pueden administrarse secuencial o simultáneamente en formulaciones farmacéuticas separadas o combinadas. Los especialistas en la técnica apreciarán fácilmente las dosis apropiadas de agentes terapéuticos conocidos.

Los compuestos de la invención pueden administrarse convenientemente en cantidades de, por ejemplo, 0,001 a 500 mg/kg de peso corporal, preferiblemente de 0,01 a 500 mg/kg de peso corporal, más preferiblemente de 0,01 a 100 mg/kg de peso corporal, de 1 a 4 veces al día. La dosis precisa dependerá por supuesto de la edad y afección del paciente y de la vía de administración particular elegida.

Los compuestos de la invención tienen la ventaja de que pueden ser más eficaces, mostrar una selectividad mayor (por ejemplo en que antagonizan selectivamente las integrinas \alpha4 con relación a las integrinas \beta2 tales como

\hbox{LFA-1}

o VLA-5 (\alphav\beta1)), tienen menos efectos secundarios, tienen una duración de la acción más larga, están menos biodisponibles o muestran menos actividad sistémica cuando se administran por inhalación, tienen una síntesis fácil y económica o tienen otras propiedades más deseables que los compuestos similares conocidos.

Ciertos intermedios son nuevos y proporcionan un aspecto más de la invención.

La invención puede ilustrarse haciendo referencia a los siguientes ejemplos:

Ejemplos Detalles Experimentales Generales

Cuando los compuestos se purificaron por "cromatografía ultrarrápida en columna sobre gel de sílice" esto se refiere al uso de gel de sílice, malla de 0,040 a 0,063 mm (por ejemplo Merck Art 9385), donde la elución de la columna se acelera mediante una presión aplicada de nitrógeno de hasta 34,47 kPa (5 psi). Cuando se ha usado cromatografía de capa fina (TLC) esto se refiere a TLC sobre gel de sílice usando placas de gel de sílice de 5 x 10 cm (por ejemplo Polygram SIL G/UV_{254}).

Espectroscopia de Masas

La Espectrometría de Masas (EM) se realizó usando un Espectrómetro de Motor de Masa HP5989A conectado a un sistema de inyección de flujo (acetato amónico acuoso 0,05 M/metanol (35:65) a un flujo de 0,7 ml/min) con ionización por termonebulización positiva.

RMN

Los espectros RMN se realizaron en un espectrómetro Bruker DPX400 a 400 MHz.

Sistema LC/EM

El sistema de Espectroscopia de Masas por Cromatografía Líquida (LCEM) usado fue como se indica a continuación: Una columna de diámetro interno de 3,3 cm x 4,6 mm, ABZ+PLUS de 3 \mum eluyendo con disolventes:
A-Acetato amónico acuoso 0,01 M + ácido fórmico al 0,1% v/v, y B - 95:5 de acetonitrilo/agua + ácido fórmico al 0,05% v/v con un flujo de 3 ml/min. Se usó el siguiente protocolo de gradiente: A al 100% durante 0,7 min; mezclas A+B, perfil del gradiente B al 0-100% durante 3,7 min; mantenido en B al 100% durante 0,9 min; volver a B al 0% durante 0,2 min.

Se empleó ionización por electronebulización positiva y negativa.

Medición de Protección

El procedimiento para medir la sustitución de las resinas de aminoácidos Fmoc fue como se indica a continuación: A 10 mg de resina se le añadió piperidina al 20% en DMF (1 ml). Después de agitar durante 30 min a 20ºC, la resina se filtró. A 50 \mul del filtrado se le añadió piperidina al 20% en DMF (0,95 ml) y se midió la absorción de la solución a 302 nm usando un espectrofotómetro de UV. La sustitución se calculó usando la siguiente ecuación:

Sustitución (mmol/g) = (Absorción x 2 x 10^{4}) / (Coeficiente de extinción + peso en mg).

Intermedios

Intermedio 1

(2S)-2-({(2S)-2-[terc-butoxicarbonil)amino]-4-metil pentanoil}amino-3-(4-hidroxifenil)propanoato de metilo

A una solución de N-(terc-butoxicarbonil)-L-leucina (7 g) en acetonitrilo (100 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (5,9 g) y 1-hidroxibenzotriazol (4,2 g). Después de agitar durante 30 min a 20ºC se añadió éster metílico de L-tirosina (5,5 g) y se continuó agitando durante

\hbox{18 h.}

La mezcla se concentró al vacío hasta aprox. 10 ml y el residuo se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (200 ml) y acetato de etilo (100 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (100 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (100 ml), agua (2 x 100 ml) y salmuera (50 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío. El residuo se co-evaporó con cloroformo para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (11,3 g, 98%). CLEM: T_{r} 3,11 min; m/z 409 (MH^{+}).

Intermedio 2

Clorhidrato de (2S)-2-{[(2S)-2-amino-4-metilpentanoil]amino}-3-(4-hidroxifenil)propanoato de metilo

A una solución del Intermedio 1 (3,1 g) en 1,4-dioxano (10 ml) se le añadió cloruro de hidrógeno 4 M en 1,4-dioxano (20 ml). La solución se agitó durante 2 h a 20ºC y después se evaporó al vacío. El residuo se co-evaporó con tolueno (2 x 20 ml) y éter (2 x 20 ml) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (2,6 g, 98%). CLEM: T_{r} 1,98 min; m/z 309 (MH^{+}).

Intermedio 3

(2S)-3-(4-Hidroxifenil)-2-({(2S)-4-metil-2-[(2-{[2-{[3-(1-piperidinilcarbonil)-2-naftil]oxi}acetil)amino]pentanoil}amino)propanoato de metilo

A una suspensión del Intermedio 44 (0,45 g) en acetonitrilo (20 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,31 g) y 1-hidroxibenzotriazol (0,22 g). Después de agitar durante 30 min a 20ºC se añadió el Intermedio 2 (0,5 g) seguido de diisopropiletilamina (0,28 ml) y se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se concentró al vacío y el residuo se repartió entre ácido clorhídrico 2 M (50 ml) y acetato de etilo (30 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo adicionalmente con acetato de etilo (30 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (30 ml), agua
(2 x 30 ml) y salmuera (20 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo (2:1) para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (0,6 g, 69%). CLEM: T_{r} 3,42 min; m/z 604 (MH^{+}).

Intermedio 4

(2S)-3-(4-Hidroxifenil)-[((2S)-2-{[2-(2-yodofenoxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil)amino]propanoato de metilo

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 43 (0,81 g) y del Intermedio 2 (1,02 g). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/ciclohexano (1:1) para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (1,2 g, 74%). CLEM: T_{r} 3,40 min; m/z 569 (MH^{+}).

\newpage

Intermedio 5

(2S)-2-({(2S)-2-[(Dibenzo[b,d]furan-4-ilcarbonil)amino]-4-metilpentanoil}amino)-3-(4-hidroxifenil)propanoato de metilo

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 45 (0,29 g) y del Intermedio 2 (0,5 g). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/ciclohexano (1:1) para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (0,66 g, 97%). CLEM: T_{r} 3,55 min; m/z 503 (MH^{+}).

Intermedio 6

(2S)-2-({(2S)-2-[(Dibenzo[b,d]furan-4-ilcarbonil)amino]-4-metilpentanoil}amino)-3-(4-{[4-nitrofenioxi)barbonil]oxi}fenil)propanoato de metilo

A una solución del Intermedio 5 (0,59 g) en diclorometano (5 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió 4-dimetilaminopiridina (0,18 g). La mezcla se enfrió a 0-5ºC y se añadió cloroformiato de 4-nitrofenilo (0,3 g). Se continuó agitando durante 18 h más y la reacción se dejó calentar a 20ºC. La solución se diluyó en cloroformo (60 ml) y se lavó con ácido clorhídrico 1 M (2 x 40 ml) y agua (40 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con ciclohexano/acetato de etilo (3:2) para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (0,36 g, 46%). CLEM: T_{r} 3,98 min; m/z 668 (MH^{+}).

Intermedio 7

4-[(2-Fenilacetil)amino]-1-piperidinacarboxilato de 4-[(2S)-2-({(2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-4-metilpenta-noil}amino)-3-metoxi-oxopropil]fenilo

A una solución de trifosgeno (0,59 g) en diclorometano anhidro (40 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió una solución del intermedio 1 (1,87 g) en diclorometano anhidro (10 ml) seguido de diisopropiletilamina (1,2 ml). Después de agitar durante 3 h a 20ºC, se añadió el Intermedio 59 (1 g) seguido de diisopropiletilamina (0,8 ml). Se continuó agitando durante 18 h y después la mezcla se evaporó al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/ciclohexano (1:1 cambiando a 5:1) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (1,76 g, 59%). CLEM: T_{r} 3,42 min; m/z 651
[M-H]^{-}.

Intermedio 8

Clorhidrato de 4-[(2-fenilacetil)amino]-1-piperidinacarboxilato de 4-((2S)-2-{[(2S)-2-amino-4-metilpentanoil]ami-no}-3-metoxi-3-oxopropil)fenilo

A una solución del Intermedio 7 (1,76 g) en 1,4-dioxano (10 ml) se le añadió cloruro de hidrógeno 4 M en 1,5 dioxano (8 ml). Después de agitar durante 3 h a 20ºC el disolvente se evaporó al vacío y el residuo se trituró con éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido de color crema (1,59 g, 100%). CLEM: T_{r} 2,50 min; m/z 553 (MH^{+}).

Intermedio 9

(2S)-2-({(2S)-2-[terc-Butoxicarbonil)amino]-4-metil pentanoil}amino)-3-(4-{[(4-nitrofenoxi)carbonil]oxi}fenil)pro-panoato de metilo

A una solución del Intermedio 1 (0,41 g) en diclorometano (3 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió piridina (1 ml). La mezcla se enfrió a 0-5ºC y se añadió cloroformiato de 4-nitrofenilo (0,22 g). Se continuó agitando durante 18 h dejando que la reacción se calentase a 20ºC. La solución se diluyó con diclorometano (40 ml) y se lavó con ácido clorhídrico 1 M (50 ml). La capa acuosa se extrajo adicionalmente con diclorometano (40 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (3:1 cambiando a 3:2) para dar el compuesto del título de forma de un sólido blanco (0,29 g, 50%). CLEM: T_{r} 3,39 min; m/z 574 (MH^{+}).

Intermedio 10

Clorhidrato de 4-[2,2-diciclohexilacetil)amino]-1-piperidinacarboxilato de 4-((2S)-2-{[(2S)-2-amino-4-metilpentanoil]amino}-3-metoxi-3-oxopropil)fenilo

A una solución del Intermedio 9 (0,22 g) en diclorometano anhidro (4 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió el Intermedio 58 (0,14 g) seguido de diisopropiletilamino (0,08 ml). Después de agitar durante 4 h a 20ºC la mezcla se diluyó con diclorometano (50 ml), se lavó con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (3 x 25 ml) y ácido clorhídrico (40 ml), se secó sobre sulfato sódico y se evaporó al vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido de color crema. A esto se le añadió cloruro de hidrógeno 4 M en 1,4-dioxano (3 ml) y la mezcla se agitó durante 3 h a 20ºC. El disolvente se evaporó al vacío y el residuo se trituró con éter para dar el compuesto del título al forma de un sólido de color crema (0,24 g, 95%). CLEM: T_{r} 3,05 min; m/z 641 (MH^{+}).

Intermedio 11

(2S)-2-[((2S)-2-{[(Benciloxi)carbonil]amino}-4-metilpentanoil)amino]-3-(4-hidroxifenil)propanoato de terc-butilo

A una solución de N-carbobenciloxi-L-leucina (8,6 g) en acetonitrilo (150 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (6,83 g) y 1-hidroxibenzotriazol (4,81 g). Después de agitar durante 30 min a 20ºC se añadió éster terc-butílico de L-tirosina (7,7 g) y se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se concentró al vacío hasta aproximadamente 10 ml y el residuo se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (300 ml) y acetato de etilo (150 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (150 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (150 ml), agua (2 x 150 ml) y salmuera (100 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío. El residuo se co-evaporó con cloroformo para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (15 g, 96%). CLEM: T_{r} 3,56 min; m/z 485 (MH^{+}).

Intermedio 12

(2S)-2-[((2S)-2-{[(Benciloxi)carbonil]amino}-4-metilpentanoil)amino]-3-(4-{[(4-nitrofenoxi)carbonil}oxi}fenil))propanoato de terc-butilo

A una solución del Intermedio 11 (1,36 g) en diclorometano (15 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió cloroformiato de 4-nitrofenilo (0,75 g) y 4-dimetilaminopiridina (0,47 g). La mezcla se agitó durante 18h a 20ºC, después se diluyó con cloroformo (50 ml), se lavó con ácido clorhídrico 1 M (2 x 30 ml) y agua (30 ml), se secó sobre sulfato sódico y se evaporó al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (4:1 cambiando a 1:1) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (1,34 g, 74%). CLEM: T_{r} 3,89 min; m/z 650 (MH^{+}).

Intermedio 13

4-Morfolinacarboxilato de 4-[((2S)-2-{[((2S)-2-{[(benciloxi)carbonil]amino}-4-metilpentanoil)amino]-3-(terc-buto-xi)-3-oxopropil]fenilo

A una solución del Intermedio 12 (0,34 g) en diclorometano (8 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió morfolina (0,06 ml) y diisopropiletilamina (0,15 ml). La mezcla se agitó durante 18 h a 20ºC, después se diluyó con cloroformo (30 ml), se lavó con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (3 x 40 ml), ácido clorhídrico 2 M (40 ml) y agua (30 ml), se secó sobre sulfato sódico y se evaporó al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo (3:2) para dar el compuesto del título en forma de una goma incolora (0,31 g, 99%). CLEM: T_{r} 3,60 min; m/z 598 (MH^{+}).

Intermedio 13 (Procedimiento alternativo)

4-Morfolinacarboxilato de 4-[(2S)-[((2S)-2-{[(benciloxi)carbonil]amino}-4-metilpentanoil)amino]-3-(terc-butoxi)-3-oxopropil]fenilo

A una solución de trifosgeno (2,24 g) en diclorometano anhidro (50 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió una solución del Intermedio 11 (10 g) en THF anhidro (50 ml) seguido de diisopropiletilamina (3,94 ml). Después de agitar durante 4 h a 20ºC se añadió morfolina (2 ml) seguido de diisopropiletilamina (3,94 ml). Se continuó agitando durante 18 h y después la mezcla se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (100 ml) y acetato de etilo (75 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (75 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (50 ml), agua (50 ml) y salmuera (30 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con ciclohexano/acetato de etilo (3:1 cambiando a 1:1) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (6,8 g, 58%).

Intermedio 14

4-(Aminocarbonil)-1-piperidinacarboxilato de 4-[(2S)-2-[((2S)-2-{[(benciloxi)carbonil]amino}-4-metilpentanoil}amino]-3-(terc-butoxi)-3-oxopropil]fenilo

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 11 (9 g) y de isonipecotamida (5,2 g). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (3,52 g, 30%).

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Intermedio 14 (Procedimiento alternativo)

4-(Aminocarbonil)-1-piperidinacarboxilato de 4-[(2S)-2-[((2S)-2-{[(benciloxi)carbonil]amino}-4-metil pentanoil}amino]-3-(terc-butoxi)-3-oxopropil]fenilo

A una solución del Intermedio 12 (1 g) en diclorometano (20 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió isonipecotamida (0,23 g) y diisopropiletilamina (0,43 ml). La mezcla se agitó durante 18 h a 20ºC, después se diluyó con cloroformo (80 ml), se lavó con carbonato potásico acuoso saturado (3 x 50 ml), ácido clorhídrico 2 M (50 ml) y agua (50 ml), se secó sobre sulfato sódico y se evaporó al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo (3:2) cambiando a acetato de etilo/metanol (4:1) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,46 g, 47%). CLEM: T_{r} 3,47 min; m/z 639 (MH^{+}).

Intermedio 15

4-Morfolinacarboxilato de 4-[(2S)-2-{[(2S)-2-amino-4-metilpentanoil]amino}-3-(terc-butoxi)-3-oxopropil]fenilo

A paladio al 10% sobre carbono, Degussa tipo E101 (0,99 g), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió una solución del intermedio 13 (0,3 g) en etanol (20 ml) seguido de formiato amónico (0,17 g). Después de agitar durante 4 h a 20ºC la mezcla se filtró a través de una capa de Harborlite J2 Filter Aid y la capa se lavó con etanol (10 ml). El filtrado combinado y los lavados se evaporaron al vacío y el residuo se repartió entre diclorometano (50 ml) e hidróxido sódico 1 M (15 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó de nuevo con hidróxido sódico 1 M (15 ml) y agua (15 ml), se secó sobre sulfato sódico y se evaporó al vacío para dar el compuesto del título en forma de una goma gris (0,1 g, 41%). CLEM: T_{r} 2,43 min; m/z 464 (MH^{+}).

Intermedio 16

4-(Aminocarbonil)-1-piperidinacarboxilato de 4-[(2S)-2-{[(2S)-2-amino-4-metilpentanoil]amino}-3-(terc-butoxi)-3-oxopropil}fenilo

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 14 (0,46 g). El compuesto del título se obtuvo en forma de una goma de color amarillo pálido (0,36 g, 99%). CLEM: T_{r} 2,33 min; m/z 505 (MH^{+}).

Intermedio 17

4-Acetil-1-piperazinacarboxilato de 4-[(2S)-2-[((2S)-2-{[(benciloxi)carbonil]amino}-4-metilpentanoil)amino]-3-(terc-butoxi)-3-oxopropil]fenilo

A una solución de trifosgeno (0,24 g) en diclorometano anhidro (5 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió una solución del Intermedio 11 (1 g) en THF anhidro (10 ml) seguido de diisopropiletilamina (0,43 ml). Se continuó agitando durante 18 h y después la mezcla se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (100 ml) y acetato de etilo (75 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (75 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (50 ml), agua (50 ml) y salmuera (30 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/etanol (9:1) para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (1,3 g, 99%). CLEM: T_{r} 3,44 min; m/z 639 (MH^{+}).

Intermedio 18

4-Benzoil-1-piperazinacarboxilato de 4-[(2S)-2-[((2S)-2-{[(benciloxi)carbonil]amino}-4-metilpentanoil)amino]-3-(terc-butoxi)-3-oxopropil]fenilo

A una solución de trifosgeno (0,24 g) en diclorometano anhidro (5 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió una solución del Intermedio 11 (1 g) en THF anhidro (10 ml) seguido de diisopropiletilamina (0,43 ml). Después de agitar durante 4 h a 20ºC se añadió el Intermedio 56 (0,78 g) seguido de diisopropiletilamina (1,15 ml). Se continuó agitando durante 18 h y después la mezcla se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (100 ml) y acetato de etilo (75 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (75 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (50 ml), agua (50 ml) y salmuera (30 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo (1:1 cambiando a 2:1) para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (1,02 g, 71%). CLEM: T_{r} 3,71 min; m/z 701 (MH^{+}).

Intermedio 19

4-(1-Piperidinilcarbonil)-1-piperidinacarboxilato de 4-[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(benciloxi)carbonil]amino}-4-metilpentanoil)amino]-3-(terc-butoxi)-3-oxopropil]fenilo

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 11 (1,81 g) y del Intermedio 55 (0,91 g). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (20:1) para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (1,24 g, 47%). CLEM: T_{r} 3,63 min; m/z 707
(MH^{+}).

Intermedio 20

4-(1-Piperidinilcarbonil)-1-piperidinacarboxilato de 4-[(2S)-2-{[(2S)-2-amino-4-metilpentanoil]amino}-3-(terc-bu-toxi)-3-oxopropil]fenilo

A paladio al 10% sobre carbono, tipo degussa E101 (0,27 g), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió una solución del Intermedio 19 (1,24 g) en etanol (20 ml) seguido de formiato amónico (0,77 g). Después de agitar durante 4 h a 20ºC la mezcla se filtró a través de una capa de Harbolite J2 Aid Filter y la capa se lavó con etanol (20 ml). El filtrado combinado y los lavados se evaporaron al vacío y el residuo se repartió entre diclorometano (50 ml) e hidróxido sódico 1 M (15 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó de nuevo con hidróxido sódico 1 M (15 ml) y agua (15 ml), se secó sobre sulfato sódico y se evaporó al vacío para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (0,55 g, 54%). CLEM: T_{r} 2,63 min; m/z 573 (MH^{+}).

Intermedio 21

Clorhidrato de 4-acetil-1-piperazinacarboxilato de 4-[(2S)-2-{[(2S)-2-amino-4-metilpentanoil]amino}-3-(terc-buto-xi)-3-oxopropil]fenilo

A paladio al 10% sobre carbono, tipo degussa E101 (0,4 g), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió una solución del Intermedio 17 (1,28 g) en etanol (30 ml) seguido de formiato amónico (0,38 g). Después de agitar durante 6 h a 20ºC la mezcla se filtró a través de una capa de Harbolite J2 Aid Filter y la capa se lavó con etanol (20 ml). El filtrado combinado y los lavados se evaporaron al vacío y el residuo se repartió entre diclorometano (70 ml) e hidróxido sódico 1 M (30 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con diclorometano (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico. La solución se trató con cloruro de hidrógeno 4 M en 1,4-dioxano (0,55 ml) y se evaporó al vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (1,02 g, 94%). CLEM: T_{r} 2,46 min; m/z 505 (MH^{+}).

Intermedio 22

Clorhidrato de 4-benzoil-1-piperazinacarboxilato de 4-[(2S)-2-{[(2S)-2-amino-4-metilpentanoil]amino}-3-(terc-bu-toxi)-3-oxopropil]fenilo

A paladio al 10% sobre carbono, tipo degussa E101 (0,3 g), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió una solución del Intermedio 18 (1 g) en etanol (30 ml) seguido de formiato amónico (0,27 g). Después de agitar durante 6 h a 20ºC la mezcla se filtró a través de una capa de Harbolite J2 Aid Filter y la capa se lavó con etanol (20 ml). El filtrado combinado y los lavados se evaporaron al vacío y el residuo se repartió entre diclorometano (70 ml) e hidróxido sódico 1 M (30 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con diclorometano (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico. La solución se trató con cloruro de hidrógeno 4 M en 1,4-dioxano (0,4 ml) y se evaporó al vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,8 g, 100%). CLEM: T_{r} 2,72 min; m/z 567 (MH^{+}).

Intermedio 23

Clorhidrato de 4-morfolinacarboxilato de 4-[(2S)-2-{[(2S)-2-amino-4-metilpentanoil]amino}-3-(terc-butoxi)-3-oxopropil]fenilo

A paladio al 10% sobre carbono, tipo degussa E101 (2,1 g), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió una solución del Intermedio 13 (6,8 g) en etanol (500 ml) seguido de formiato amónico (4,1 g). Después de agitar durante 17 h a 20ºC la mezcla se filtró a través de una capa de Harbolite J2 Aid Filter y la capa se lavó con etanol (50 ml). El filtrado combinado y los lavados se evaporaron al vacío y el residuo se repartió entre diclorometano (150 ml) e hidróxido sódico 1 M (75 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con diclorometano
(2 x 100 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico. La solución se trató con cloruro de hidrógeno 1 M en éter (13 ml) y se evaporó al vacío. El residuo se trituró con éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (4,8 g, 87%). CLEM: T_{r} 2,50 min; m/z 464 (MH^{+}).

Intermedio 24

Clorhidrato de 4-(aminocarbonil)-1-piperidinacarboxilato de 4-[(2S)-2-{[(2S)-2-amino-4-metilpentanoil]amino}-3-(terc-butoxi)-3-oxopropil]fenilo

A paladio al 10% sobre carbono, tipo degussa E101 (1,1 g), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió una solución del Intermedio 14 (3,41 g) en etanol (80 ml) seguido de formiato amónico (2,1 g). Después de agitar durante 3 h a 20ºC la mezcla se filtró a través de una capa de Harbolite J2 Aid Filter y la capa se lavó con etanol (40 ml). El filtrado combinado y los lavados se evaporaron al vacío y el residuo se repartió entre cloroformo (500 ml) y hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (200 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con cloroformo (2 x 100 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (3 x 100 ml) y agua (2 x 100 ml) y después se secaron sobre sulfato sódico. La solución se trató con cloruro de hidrógeno 4 M en 1,4-dioxano (1,5 ml) y se evaporó al vacío. El residuo se destiló azeotrópicamente con tolueno (2 x 50 ml) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (2,88 g, 100%). CLEM: T_{r} 2,36 min; m/z 505 (MH^{+}).

Intermedio 25

(2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-Butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-(4-hidroxifenil)propanoato de terc-butilo

A paladio al 10% sobre carbono, tipo degussa E101 (0,63 g), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió una solución del Intermedio 11 (2 g) en etanol (20 ml) seguido de formiato amónico (1,8 g). Después de agitar durante 2 h a 20ºC la mezcla se filtró a través de una capa de Harbolite J2 Aid Filter y la capa se lavó con etanol (50 ml). El filtrado combinado y los lavados se evaporaron al vacío y el residuo se repartió entre diclorometano (100 ml) e hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (50 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó de nuevo con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (50 ml) y agua (50 ml)., se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío para dar un sólido blanco. Se añadió una solución de esto en DMF (5 ml) a una solución premezclada del Intermedio 46 (0,879 g), clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,809 g) y 1-hidroxibenzotriazol (0,578 g) en acetonitrilo (10 ml), que se agitó en una atmósfera de nitrógeno durante 30 min a 20ºC. Se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se diluyó con acetato de etilo (200 ml), se lavó con ácido clorhídrico 1 M (3 x 50 ml), hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (3 x 50 ml) y salmuera (50 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (2,1 g, 94%). CLEM: T_{r} 3,83 min; m/z 541 (MH^{+}).

Intermedio 26

(2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-Butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-(4-{[(4-nitrofenoxi)carbonil]oxi}fenil)propanoato de terc-butilo

A una solución del Intermedio 25 (2,1 g) en diclorometano (20 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió cloroformiato de 4-nitrofenilo (1,1 g) y 4-dimetilaminopiridina (0,69 g). La mezcla se agitó durante 18 h a 20ºC, después se diluyó en cloroformo (80 ml), se lavó en ácido clorhídrico 1 M (2 x 50 ml) y agua (50 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con ciclohexano/acetato de etilo (2:1) para dar el compuesto del título en forma de un aceite transparente (2,65 g, 97%). CLEM: T_{r} 4,17 min; m/z 706 (MH^{+}).

Intermedio 27

4-Morfolinacarboxilato de 4-[(2S)-2-({(2S)-2-bromoacetil)amino]-4-metilpentanoil}amino)-3-(terc-butoxi)-3-oxo-propil]fenilo

Una solución del Intermedio 23 (0,5 g) y diisopropiletilamina (0,19 ml) en diclorometano (10 ml) se enfrió a 0-5ºC. A esto se le añadió cloruro de bromoacetilo (0,09 ml) seguido de diisopropiletilamina (0,19 ml) y se continuó agitando durante 2 h. La mezcla se diluyó en diclorometano (50 ml), se lavó con ácido clorhídrico 2 M (50 ml), hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (50 ml) y salmuera (30 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (0,52 g, 89%).

CLEM: T_{r} 3,28 min; m/z 584 (MH^{+}).

Intermedio 28

Carboxilato de 4-[(2-fenilacetil)amino]-1-piperidina 4-[(2S)-2-({(2S)-2-bromoacetil)amino]-4-metilpentanoil}ami-no)-3-metoxi-3-oxopropil]fenil

A una solución del Intermedio 8 (0,48 g) en diclorometano anhidro (4 ml) se le añadió diisopropiletilamina (0,142 ml). La mezcla se enfrió a 0-5ºC y se añadió cloruro de bromoacetilo (0,07 ml). Se continuó agitando durante 1 h y la reacción se dejó calentar a 20ºC. La mezcla se diluyó con diclorometano (5 ml), y se lavó con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (5 ml), agua (10 ml) y salmuera (10 ml), se secó sobre sulfato sódico y se evaporó al vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,464 g, 85%).

CLEM: T_{r} 3,20 min; m/z 672 (MH^{+}).

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Intermedio 29

Ácido (2S)-3-[4-(aliloxi)fenil]-2-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}propanoico unido a resina de Wang mediante ácido

A resina de Wang (malla 100-200, 10 g) se le añadió una solución de ácido (2S)-3-[4-(aliloxi)fenil]-2-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}propanoico (8,5 g) en DMF (45 ml). Después de 15 min se añadió piridina (2,4 ml) seguido de cloruro de 2,6-diclorobenzoílo (2,75 ml). La mezcla se agitó durante 18 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con DMF (5 x 40 ml), diclorometano (5 x 40 ml) y éter (5 x 40 ml) y después se secó al vacío. Se calculó que la cantidad de ácido (2S)-3-[4-(aliloxi)fenil]-2-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}propanoico substituida en la resina era 0,52 mmol/g.

Intermedio 30

Ácido (2S)-3-[4-(aliloxi)fenil]-2-[((2S)-2-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}-4-metilpentanoil)amino]propa-noico unido a resina de Wang mediante ácido

El Intermedio 29 (2,5 mmol) se trató con piperidina al 20% en DMF (15 ml) y se agitó durante 1 h y 30 min a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con DMF (5 x 20 ml). Se añadió una solución de Fmoc-leucina (2,8 g) en DMF (10 ml) seguido de una solución de hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxi-trispirrolidinofosfonio (4,1 g) en DMF (5 ml) y diisopropiletilamina (2,8 ml). La mezcla se agitó durante 18 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con DMF

\hbox{(5 x 20}

ml), diclorometano (5 x 20 ml) y éter (5 x 20 ml) y después se secó al vacío. Una muestra de 5 mg se trató con ácido trifluoroacético/diclorometano (1:1) (1 ml) durante 0,5 g a 20ºC, la resina se filtró y el filtrado se analizó por CLEM: T_{r} 4,22 min; m/z 557 (MH^{+}).

Intermedio 31

Ácido (2S)-3-[4-(aliloxi)fenil]-2-[((2S)-2-{[2-(terc-butoxi)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}propanoico unido a resina de Wang mediante ácido

El intermedio 30 (1 mmol) se trató con piperidina al 20% en DMF (10 ml) y se agitó durante 1 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con DMF (5 x 10 ml). Se añadió una solución del Intermedio 46 (0,314 g) en DMF (10 ml) seguido de una solución de hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxi-trispirrolidinofosfonio (0,78 g) en DMF (5 ml) y diisopropiletilamina (0,68 ml). La mezcla se agitó durante 18 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con DMF (5 x 10 ml), diclorometano (5 x 10 ml) y éter (5 x 10 ml) y después se secó al vacío. Una muestra de 5 mg se trató con ácido trifluoroacético/diclorometano (1:1) (1 ml) durante 0,5 h a 20ºC, la resina se filtró y el filtrado se analizó por CLEM: T_{r} 4,27 min; m/z 525 (MH^{+}).

Intermedio 32

Ácido (2S)-3-[4-(aliloxi)fenil]-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-metil-fenoxi)acetil]amino}pentanoil)amino] propanoico unido a resina de Wang mediante ácido

Éste se preparó de forma similar a partir del intermedio 30 (0,97 mmol) y ácido (2-metilfenoxi)acético (0,48 g). CLEM: T_{r} 3,89 min; m/z 483 (MH^{+}).

Intermedio 33

Ácido (2S)-2-{[[(2S)-2-({2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-(4-{[(4-nitrofenoxi)carbonil]oxi}fenil)propanoico unido a resina de Wang mediante ácido

El Intermedio 31 (1 mmol) se trató con una solución de fenilsilano (1 ml) en diclorometano (9 ml) seguido de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (0,1 g). La mezcla se agitó durante 40 min a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con diclorometano (5 x 10 ml), después se trató de nuevo con una solución de fenilsilano (1 ml) en diclorometano (9 ml) seguido de tetraquis(trifenilfosfina) paladio (0) (0,1 g). Después de agitar durante 40 min a 20ºC, la resina se filtró y se lavó con diclorometano (5 x 10 ml) y después se trató con una solución de diisopropiletilamina (1,74 ml) en 1:1 de diclorometano/THF (16 ml). Se añadió cloroformiato de 4-nitrofenilo (2 g) en porciones y la mezcla se agitó durante 18 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con diclorometano (5 x 10 ml) y éter (5 x 10 ml) y después se secó al vacío. Se trató una muestra de 5 mg con ácido trifluoroacético/diclrorometano (1:1) (1 ml) durante 0,5 h a 20ºC, la resina se filtró y el filtrado se analizó por CLEM: T_{r} 4,33 min; m/z 650 (MH^{+}).

\newpage

Intermedio 34

Ácido (2S)-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]amino}pentanoil)amino]-3-(4-{[(4-nitrofenoxi)carbonil]oxi}-fenil)propanoico unido a resina de Wang mediante ácido

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 32 (0,97 mmol). CLEM: T_{r} 3,31 min; m/z 443 (MH^{+}).

Intermedio 35

Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}-4-metilpentanoil)amino]-3-(4-{[(4-titrofenoxi)car-bonil]oxi}fenil)propanoico unido a resina de Wang mediante ácido

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 30 (1,05 mmol). CLEM: T_{r} 4,32 min; m/z 682 (MH^{+}).

Intermedio 36

Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}-4-metilpentanoil)amino]-3-(4-{[(4-furoil)-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)propanoico unido a resina de Wang mediante ácido

El intermedio 35 (1,05 mmol) se trató con una solución de 1-(2-furoil)piperazina (0,57 g) en 1:1 de diclorometano/THF (9 ml) seguido de diisopropiletilamina (1,1 ml). Después de agitar durante 4 h a 20ºC, la resina se filtró y se lavó con diclorometano (5 x 10 ml) y éter (5 x 10 ml) y después se secó al vacío. Una muestra de 5 mg se trató con ácido trifluoroacético/diclorometano (1:1) (1 ml) durante 0,5 h a 20ºC, la resina se filtró y el filtrado se analizó por CLEM: T_{r} 3,67 min; m/z 723 (MH^{+}).

Intermedio 37

Ácido (2S)-3-(4-{[(4-clorofenil)acetil]amino)-1-piperidinil)carbonil]oxi}fenil)-2-[((2S)-2-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}-4-metilpentanoil)amino]propanoico unido a resina de Wang mediante ácido

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 35 (1,7 mmol) y del intermedio 53 (1,02 g). CLEM: T_{r} 4,03 min; m/z 795 (MH^{+}).

Intermedio 38

Ácido (2S)-([(2S)-2-[(2-bromoacetil)amino]-4-metilpentanoil}amino)-3-[4-({[4-(2-furoil)-1-piperazinil]carbonil}oxi)fenil]-propanoico unido a resina de Wang mediante ácido

El Intermedio 36 (1,05 mmol) se trató con piperidina al 20% en DMF (8 ml) y se agitó durante 1 h y 30 min a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con DMF (5 x 10 ml). Se añadió una solución de ácido bromoacético (0,44 g) en DMF (8 ml) seguido de 1,3-diisopropilcarbodiimida (0,49 ml). La mezcla se agitó durante 18 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con DMF (5 x 10 ml), diclorometano (5 x 10 ml) y éter (5 x 10 ml) y después se secó al vacío. Una muestra de 5 mg se trató con ácido trifluoroacético/diclorometano (1:1) (1 ml) durante 0,5 h a 20ºC, la resina se filtró y el filtrado se analizó por CLEM: T_{r} 3,11 min; m/z 621 (MH^{+}).

Intermedio 39

Ácido (2S)-([(2S)-2-[(2-bromoacetil)amino]-4-metilpentanoil}amino)-3-[4-({[2-(4-clorofenil)acetil]amino}-1-piperidinil)carbonil]oxi}fenil)propanoico unido a resina de Wang mediante ácido

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 37 (0,73 mmol). CLEM: T_{r} 3,43 min; m/z 695 (MH^{+}).

Intermedio 40

Ácido (2S)-3-[4-(aliloxi)fenil]-2-({(2S)-2-[(2-bromoacetil)amino]-4-metilpentanoil}amino)propanoico unido a resina de Wang mediante ácido

El Intermedio 30 (0,55 mmol) se trató con piperidina al 20% en MDF (6 ml) y se agitó durante 1 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó en DMF (5 x 10 ml). Se añadió una solución de ácido bromoacético (0,23 g) en DMF (3 ml) seguido de 1,3-diisopropilcarbodiimida (0,26 ml). La mezcla se agitó durante 18 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con DMF (5 x 10 ml), diclorometano (5 x 10 ml) y éter (5 x 10 ml) y después se secó al vacío. Una muestra de 5 mg se trató con ácido trifluoroacético/diclorometano (1:1) (1 ml) durante 0,5 h a 20ºC, la resina se filtró el filtrado se analizó por CLEM: T_{r} 3,47 min; m/z 455 (MH^{+}).

\newpage

Intermedio 41

Ácido (2S)-3-[4-(aliloxi)fenil]-2-({(2S)-2-{[2-(2-ciclohexilfenoxi)acetil]amino)-4-metilpentanoil)amino]propanoico unido a resina de Wang mediante ácido

El Intermedio 40 (0,55 mmol) se trató con DMF (4 ml). Se añadieron 2-ciclohexilfenol (0,97 g), carbonato potásico (0,76 g) y yoduro sódico (0,82 g) y la mezcla se agitó durante 40 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con agua

\hbox{(3 x 5}

ml), DMF (5 x 5 ml), diclorometano (5 x 5 ml) y éter (5 x 5 ml) y después se secó al vacío. Una muestra de 5 mg se trató con ácido trifluoroacético/diclorometano (1:1) (1 ml) durante 0,5 h a 20ºC, la resina se filtró y el filtrado se analizó por CLEM: T_{r} 4,49 min; m/z 551 (MH^{+}).

Intermedio 42

Ácido (2S)-2-[((2S)-2{[2-(2-ciclohexilfenoxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil)amino]-3-(4-{[(4-nitrofenoxi)carbonil]oxi}fenil)propanoico unido a resina de Wang mediante ácido

El Intermedio 41 (0,55 mmol) se trató con una solución de fenilsilano (1,35 ml) en diclorometano (10 ml) seguido de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (0,063 g). La mezcla se agitó durante 40 min a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con diclorometano (5 x 10 ml) y después trató de nuevo con una solución de fenilsilano (1,35 ml) en diclorometano (10 ml) seguido de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (0,063 g). Después de agitar durante 40 min a 20ºC, la resina se filtró y se lavó con diclorometano (5 x 10 ml) y después se trató con una solución de diisopropiletilamina (1,9 ml) en 1:1 de diclorometano/THF (8 ml). Se añadió cloroformiato de 4-nitrofenilo (2,2 g) en porciones y la mezcla se agitó durante 18 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con diclorometano (5 x 10 ml) y éter (5 x 10 ml) y después se secó al vacío. Una muestra de 5 mg se trató con ácido trifluoroacético/diclorometano (1:1) (1 ml) durante 0,5 h a 20ºC, la resina se filtró y el filtrado se analizó por CLEM: T_{r} 4,54 min; m/z 676 (MH^{+}).

Intermedio 43

Ácido (2-yodofenoxi)acético

Se añadió bromoacetato de terc-butilo (4,0 ml) a una suspensión que contenía 2-yodofenol (4,98 g) y carbonato potásico (6,3 g) en DMF (40 ml). La mezcla se agitó durante 1 h a 20ºC en una atmósfera de nitrógeno y después se repartió entre acetato de etilo (150 ml) y agua (100 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo reciente

\hbox{(2 x
80}

ml) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron al vacío para dar un líquido transparente (7,56 g). Éste se disolvió en diclorometano (20 ml) y ácido trifluoroacético (8 ml) y la solución se agitó durante 2 h a 20ºC. El disolvente se evaporó al vacío y el residuo se trituró en una mezcla de ciclohexano/acetato de etilo (5:1) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (5,19 g, 82%). CLEM: T_{r} 3,02 min; m/z 277 [M+H]^{+}.

Intermedio 44

Ácido {[3-(1-piperidinilcarbonil)-2-naftil]oxi}acético

Éste se preparó de una forma similar a partir de 3-(1-piperidinilcarbonil)-2-naftol (Griffiths and Hawkins, 1977) (4,98 g). El éster intermedio se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/ciclohexano (1:1) y el compuesto del título se aisló en forma de un sólido blanco (3,2 g, 53%). CLEM: T_{r} 3,74 min; m/z 314 (MH^{+}).

Intermedio 45

Ácido dibenzo[b,d]furan-4-carboxílico

Se añadió una solución 1,6 M de n-butillitio en hexano (18,5 ml) a una solución agitada de dibenzofurano

\hbox{(5,0 g)}

en THF anhidro (35 ml) a -78ºC en una atmósfera de nitrógeno. La suspensión resultante se dejó calentar a 20ºC, punto en el que se agitó durante 3 h. Después se enfrió a -78ºC y se añadió a una mezcla de dióxido de carbono sólido en exceso en éter dietílico (250 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La suspensión blanca resultante se dejó en reposo durante 1 h a 20ºC y después se diluyó con hidróxido sódico 2 M (500 ml). El extracto acuoso se lavó con éter

\hbox{(3 x 200}

ml), se acidificó a pH 1 con ácido clorhídrico 6 M y se extrajo con acetato de etilo (3 x 200 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron al vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (3,64 g, 58%). CLEM: T_{r} 5,06 min; m/z 213 (MH^{+}).

Intermedio 46

Ácido [2-(terc-butil)fenoxi]acético

Se añadió bromoacetato de metilo (3,0 ml) a una suspensión que contenía 2-terc-butilfenol (5,0 ml) y carbonato potásico (10,6 g) en DMF (250 ml). La mezcla se agitó durante 20 h a 20ºC en una atmósfera de nitrógeno y después se evaporó al vacío hasta una suspensión que se repartió entre éter (200 ml) y ácido clorhídrico 1 M (100 ml). La capa acuosa se extrajo con más éter (100 ml) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/ciclohexano (1:9) para dar un líquido transparente

\hbox{(6,64 g).}

Éste se disolvió en metanol (100 ml) e hidróxido sódico 2 M (100 ml) y la solución se agitó durante 0,5 h a 20ºC. El metanol se evaporó al vacío y el residuo acuoso se lavó con éter dietílico (50 ml), se acidificó a pH 1 con ácido clorhídrico 6 M y se extrajo con acetato de etilo (2 x 200 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron al vacío para dar el compuesto del título en forma de una masa cristalina blanca (5,86 g, 95%). CLEM: T_{r} 3,78 min; m/z 207 [M-H]^{+}.

Intermedio 47

Ácido 4-(2-metoxi-2-oxoetoxi)benzoico

Se añadió bromoacetato de metilo (1,6 ml) a una suspensión que contenía 4-hidroxibenzoato de terc-butilo (Shah et al., 1992) (3,03 g), yoduro sódico (2,55 g) y carbonato potásico (4,2 g) en acetonitrilo (60 ml). La mezcla se agitó durante 17 h a 90ºC en una atmósfera de nitrógeno y después se dejó enfriar a 20ºC. Después se repartió entre agua (50 ml) y acetato de etilo (100 ml) y los extractos orgánicos se lavaron con agua (2 x 80 ml) y salmuera (60 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo (1:9) a acetato de etilo/éter de petróleo (1:2) para dar una goma de color rojo pálido (3,85 g). Ésta se disolvió en diclorometano (50 ml) y se añadió ácido trifluoroacético (15 ml) y la solución se agitó durante 3 h a 20ºC. Los disolventes se evaporaron al vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (2,97 g, 91%). CLEM: T_{r} 2,45 min; m/z 211 (MH^{+}).

Intermedio 48

Ácido [4-(1-piperidinilcarbonil)fenoxi]acético

A una suspensión del Intermedio 47 (2,95 g) en acetonitrilo (55 ml) se le añadió diisopropiletilamina (3,5 ml) seguido de tetrafluoroborato de (1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio (4,5 g). La solución resultante se agitó durante 10 min a 20ºC en una atmósfera de nitrógeno y después se añadió piperidina (1,4 ml) y la mezcla se agitó durante 18 h a 20ºC en una atmósfera de nitrógeno y después se evaporó al vacío. El residuo se repartió entre acetato de etilo (100 ml) y hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado al 8% (65 ml) y el extracto orgánico se lavó con ácido clorhídrico 2 M (50 ml) y salmuera (100 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío para dar un aceite naranja (4,05 g). Éste se disolvió en metanol (100 ml) y se añadió hidróxido sódico (30 ml) y la mezcla se agitó durante 3 h a 20ºC. Después se acidificó a pH 1 con ácido clorhídrico 1 M y se enfrió a 5ºC y el precipitado se recogió por filtración y se secó al vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (3,03 g, 80%). CLEM: T_{r} 4,17 min; m/z 254 (MH^{+}).

Intermedio 49

Ácido (2-benzoilfenoxi)acético

Se añadió bromoacetato de metilo (3,0 ml) a una suspensión que contenía 2-hidroxibenzofenona (2,3 g), carbonato potásico (3,2 g) y yoduro sódico (2,33 g) en acetonitrilo (35 ml). La mezcla se agitó durante 18 h a 90ºC en una atmósfera de nitrógeno y después se dejó enfriar a 20ºC. Después se repartió entre acetato de etilo (80 ml) y agua (60 ml) y los extractos orgánicos se lavaron con agua (2 x 60 ml) y salmuera (60 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo (1:1) para dar un aceite amarillo pálido (3,05 g). Éste se disolvió en metanol (100 ml) e hidróxido sódico 1 M (35 ml) y la solución se agitó durante 18 g a 20ºC. La solución se acidificó a pH 1 con ácido clorhídrico 2 M y se extrajo con acetato de etilo (2 x 80 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (2 x 70 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo (1:1) a acetato de etilo/metanol (4:1) para dar el compuesto del título en forma de una goma amarilla pálida (1,62 g, 57%). CLEM: T_{r} 3,41 min; m/z 257 (MH^{+}).

Intermedio 50

Ácido [(bromo-2-naftil)oxi]acético

Éste se preparó de forma similar a partir de 1-bromo-2-naftol (10,55 g). El éster intermedio se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/ciclohexano (1:3) y el compuesto del título se aisló en forma de un sólido pardo pálido (11,36 g, 89%). CLEM: T_{r} 4,17 min; m/z 281 [M-H]^{-}.

\newpage

Intermedio 51

Ácido [4-(aminocarbonil)fenoxi]acético

Una solución de ácido 4-formifenoxiacético (1,86 g) y clorhidrato de hidroxilamina (1,07 g) en ácido fórmico al 98% (50 ml) se agitó a reflujo durante 2 h y después se enfrió en un baño de hielo. El precipitado se recogió por filtración, se lavó con agua y se secó al vacío para dar un sólido blanco (1,1 g). Una mezcla de éste con hidróxido potásico en polvo (2,3 g) en terc-butanol (50 ml) se agitó a reflujo en una atmósfera de nitrógeno durante 4 h y después se dejó enfriar. La mezcla se diluyó con agua (100 ml), se lavó con acetato de etilo (50 ml) y se acidificó a pH 2 con ácido clorhídrico 6 M. El precipitado se recogió por filtración, se lavó con agua y se secó para dar el compuesto del título en forma de sólido blanco (1,06 g, 53%). CLEM: T_{r} 1,90 min; m/z 196 (MH^{+}).

Intermedio 52

4-Amino-1-piperidinacarboxilato de terc-butilo

Se añadió triacetoxiborohidruro sódico (30,2 g) en porciones durante 10 min a una mezcla enfriada con hielo de 1-(terc-butoxicarbonil)-4-piperidina (20,07 g), dibencilamina (19,7 g) y ácido acético (5 ml) en diclorometano (500 ml) y después se continuó agitando durante 16 h a 20ºC. Después, la solución se trató cuidadosamente con hidróxido sódico 2 M (400 ml) y la capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío. El residuo se trituró en hexano/éter (2:1) (250 ml) para dar un sólido blanco (18,75 g). Éste se disolvió en una mezcla de THF (50 ml), etanol (50 ml) y ácido clorhídrico 2 M (8 ml) y la solución se añadió a una suspensión de hidróxido de paladio al 20% sobre carbono (5,0 g) en etanol (100 g). La mezcla se hidrogenó a 20ºC y 1 atmósfera durante 17h y después se filtró a través de una capa de Harborlite J2 Filter Aid y la capa se lavó con etanol (100 ml). El filtrado combinado y los lavados se evaporaron al vacío y el residuo se disolvió en agua (50 ml) y se ajustó a pH 9 con hidróxido sódico 2 M y se evaporó al vacío. El residuo se lixivió en una mezcla de etanol (30 ml) y cloroformo (70 ml) y el material insoluble se retiró por filtración. Las aguas madre se evaporaron al vacío para dar el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (10,04 g, 49%). CLEM: T_{r} 1,81 min; m/z 201 (MH^{+}).

Intermedio 53

Clorhidrato de 2-(4-clorofenil)-N-(4-piperidinil)acetamida

A una solución de ácido 4-clorofenilacético (2,55 g) en acetonitrilo (100 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (3,16 g) en 1-hidroxibenzotriazol (2,22 g). Después de agitar durante 10 minutos a 20ºC, se añadió una solución del Intermedio 52 (3 g) en acetonitrilo (20 ml) y se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se evaporó al vacío y el residuo se repartió entre agua (100 ml) y acetato de etilo (100 ml). La capa orgánica se lavó con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (2 x 80 ml) y agua (50 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío para dar un sólido amarillo pálido. Éste se trituró con éter para dar un sólido blanco (4,15 g). Una porción de éste (2,36 g) se disolvió en 1,4-dioxano (100 ml) y se añadió cloruro de hidrógeno 4 M en 1,4-dioxano (12 ml). La solución se agitó durante 18 h a 20ºC y después se añadió otra porción más de cloruro de hidrógeno 4 M en 1,4-dioxano (8 ml). Se continuó agitando durante 18 h más a 20ºC y la solución se evaporó al vacío para dar un sólido blanco. Éste se trituró en éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (1,9 g, 77%). CLEM: T_{r} 1,89 min; m/z 253 (MH^{+}).

Intermedio 54

Clorhidrato de N-(5-fluorobencil)-4-piperidinacarboxamida

A una solución de ácido 1-terc-butoxicarbonilpiperidina-4-carboxílico (3,61 g) en acetonitrilo (25 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (3,21 g) y 1-hidroxibenzotriazol (2,29 g). Después de agitar durante 20 min a 20ºC se añadió 4-fluorobencilamina (2,0 ml) y se continuó agitando durante 3 h. La mezcla se concentró al vacío y el residuo se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (50 ml) y acetato de etilo (200 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con ácido clorhídrico 1 M (3 X 50 ml), hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (3 x 50 ml) y salmuera (50 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de elución de ciclohexano/acetato de etilo (1:1) a acetato de etilo puro para dar cristales incoloros (5,02 g). Una porción de estos (4,96 g) se disolvió en 1,4-dioxano (20 ml) y se añadió cloruro de hidrógeno 4 M (15 ml). La mezcla se agitó durante 2 h a 20ºC y el precipitado se recogió por filtración, se lavó con 1,4-dioxano y éter dietílico y se secó al vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido higroscópico blanco (3,54 g, 83%). CLEM: T_{r} 1,52 min; m/z 237 (MH^{+}).

Intermedio 55

Clorhidrato de 1-(4-piperidinilcarbonil)piperidina

Éste se preparó de forma similar a partir de ácido 1-terc-butoxicarbonilpiperidina-4-carboxílico (3,86 g) y piperidina (1,6 ml). La amida intermedia se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (10:1) y el compuesto del título se aisló en forma de un sólido blanco (3,26 g, 93%). EM: m/z 197 (MH^{+}). CCF: T_{r} 0,1 [diclorometano/etanol/amoniaco 880 (50:8:1) visualización con ácido yodoplatínico].

Intermedio 56

1-Benzoilpiperazina

Ésta se preparó de forma similar a partir de ácido benzoico (5,02 g) y 1-(terc-butoxicarbonil)piperazina (7,66 g) y el compuesto del título se aisló en forma de un sólido blanco (7,7 g, 82%). CLEM: T_{r} 0,51min; m/z 191 (MH^{+}).

Intermedio 57

2-Ciclohexil-N-(4-piperidinil)acetamida

Una solución de 4-amino-1-bencilpiperidina (5,0 ml), ácido ciclohexanoacético (3,79 g) y tetrafluoroborato de (1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio (8,35 g) en acetonitrilo (60 ml) se agitó durante 18 h a 20ºC en una atmósfera de nitrógeno y después se evaporó al vacío hasta un jarabe. Éste se repartió entre acetato de etilo (200 ml) e hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (200 ml). El extracto orgánico se lavó con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (2 x 100 ml) y salmuera (100 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío para dar un sólido blaquecino. Éste se cristalizó en ciclohexano para dar cristales de color crema (6,24 g). Una porción de esto

\hbox{(3,8 g)}

se disolvió en etanol (100 ml) y se trató con paladio al 10% sobre carbono, Degussa tipo E101 (1,2 g) y formiato amónico (2,24 g). La mezcla se agitó durante 2,5 h a 20ºC en una atmósfera de nitrógeno y después se filtró a través de una capa de Harborlite J2 Filter Aid y la capa se lavó con etanol (100 ml). El filtrado combinado y los lavados se evaporaron al vacío y el residuo se repartió entre cloroformo (100 ml) e hidróxido potásico 0,5 M (10 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con cloroformo reciente (2 x 100 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron al vacío para dar un sólido blanco. Éste se trituró con éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (2,01 g, 60%).

CLEM: T_{r} 1,93 min; m/z 225 (MH^{+}).

Intermedio 58

2,2-Diclohexil-N-(4-piperidinil)acetamida

Una solución que contenía ácido diciclohexilacético (4,75 g), diisopropiletilamina (7,5 ml) y hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxi-trispirrolidinofosfonio (11 g) en DMF (250 ml) se agitó durante 10 min a 20ºC y después se añadió 4-amino-1-bencilpiperidina (4,3 ml) gota a gota durante 10 min. La mezcla se agitó durante 18 h a 20ºC y después se diluyó con acetato de etilo (200 ml) y el precipitado se recogió por filtración, se lavó con acetato de etilo (60 ml) y agua (50 ml) y se secó al vacío para dar un sólido blanco (5,91 g). Una porción de esto (3 g) se suspendió en etanol (300 ml) y se trató con paladio al 10% sobre carbono, Degussa tipo E101 (1,2 g) y formiato amónico

\hbox{(2,68 g).}

La mezcla se agitó durante 4 h a 20ºC en una atmósfera de nitrógeno y después se filtró a través de una capa de Harborlite J2 Filter Aid y la capa se lavó con etanol (50 ml). El filtrado combinado y los lavados se evaporaron al vacío y el residuo se repartió entre cloroformo (200 ml) e hidróxido sódico 0,5 M (150 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con cloroformo reciente (100 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron al vacío para dar un sólido blanco. Éste se trituró con éter enfriado con hielo para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (1,8 g, 78%). CLEM: T_{r} 2,69 min; m/z 307 (MH^{+}).

Intermedio 59

2-Fenil-N-(4-piperidinil)acetamida

A una solución de ácido fenilacético (3,4 g) en acetonitrilo (100 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-(dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (5,28 g) y 1-hidroxibenzotriazol (3,72 g). Después de agitar durante 30 min a 20ºC se añadió 4-amino-1-bencilpiperidina (5,1 ml) y se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se concentró al vacío y el residuo se repartió entre ácido clorhídrico 2 M (100 ml) y acetato de etilo (75 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se lavó con más acetato de etilo (75 ml), se basificó con carbonato potásico sólido y se extrajo con diclorometano (2 x 100 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (2 x 100 ml) y salmuera (50 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío para dar un sólido blanco (4,8 g). Una porción de esto (4,7 g) se disolvió en etanol (150 ml) y se trató con paladio al 10% sobre carbono, Degussa tipo E101 (1,5 g) y formiato amónico (2,88 g). La mezcla se agitó durante 4 h a 20ºC en una atmósfera de nitrógeno y después se filtró a través de una capa de Harborlite J2 Filter Aid y la capa se lavó con etanol (150 ml). El filtrado combinado y los lavados se evaporaron al vacío y el residuo se repartió entre cloroformo (100 ml) e hidróxido sódico 0,5 M (50 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con cloroformo reciente (2 x 100 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (2,4 g, 45%). MS: m/z 219 (MH^{+}), TLC: T_{r} 0,16 [diclorometano/metanol/amoniaco 880 (40:10:1) visualización con yodo].

Ejemplos Ejemplo 1 Ácido (2S)-2-[(((2S)-2-{[2-(2benzoilfenoxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil)amino]-3-{4-[({4-[(2-fenilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi)fenil}propanoico

A una solución de 2-hidroxibenzofenona (0,134 g) en DMF anhidra (0,5 ml) se añadió carbonato potásico anhidro (0,093 g) seguido del Intermedio 28 (0,152 g) y yoduro sódico (0,1 g). Después de agitar durante 18 h a 20ºC la mezcla se repartió entre hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (10 ml) y acetato de etilo (10 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (3 x 10 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (20 ml) y salmuera (20 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío. El material bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (10:1) para dar un sólido amarillo pálido. A una solución de esto en metanol (0,5 ml) se le añadió hidróxido sódico 1 M (0,22 ml). Después de agitar durante 1,5 h a 20ºC, la mezcla se repartió entre ácido clorhídrico 2 M (5 ml) y diclorometano (10 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con diclorometano (2 x 10 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (20 ml) y salmuera (20 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío para dar el compuesto del título en forma de una espuma amarilla pálida (0,123 g, 73%). CLEM: T_{r} 3,84 min; m/z 775 [M-H]^{-}.

Ejemplo 2 Ácido (2S)-2-({(2S)-4-metil-2-[(2-{[3-(1-piperidinilcarbonil)-2-naftil]oxi}acetil)amino]pentanoil}amino)-3-{4-[({4-[(2-fenilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}propanoico

A una solución de trifosgeno (0,04 g) en diclorometano anhidro (1 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió una solución del Intermedio 3 (0,2 g) en THF anhidro (2 ml) seguido de diisopropiletilamina (0,07 ml). Después de agitar durante 3 h a 20ºC se añadió el Intermedio 59 (0,09 g) seguido de diisopropiletilamina (0,07 ml). Se continuó agitando durante 18 h y después la mezcla se repartió entre ácido clorhídrico 2 M (30 ml) y acetato de etilo (30 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (20 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (20 ml), agua (20 ml) y salmuera (20 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío. El material bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo y cambiando a acetato de etilo/etanol (9:1) para dar una espuma blanca (0,19 g). A una solución de esto (0,15 g) en metanol (2 ml) se le añadió hidróxido sódico 2 M (0,18 ml). Después de agitar durante 1 h a 20ºC, la mezcla se repartió entre ácido clorhídrico 2 M (40 ml) y acetato de etilo (30 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (30 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con cloroformo/metanol/ácido clorhídrico (95:5:1) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,12 g, 54% a partir del Intermedio 3). CLEM: T_{r} 3,73 min; m/z 834 (MH^{+}).

Ejemplo 3 Ácido (2S)-3-{4-[({4-[(2,2-diciclohexilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}-2-{[(2S)-4-metil-2-({2-[4-(1-piperidinilcarbonil)-fenoxi]acetil}amino)pentanoil]amino}propanoico

A una solución del Intermedio 48 (0,05 g) en DMF anhidra (3 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,04 g) y 1-hidroxibenzotriazol (0,03 g). Después de agitar durante 30 min a 20ºC se añadió el Intermedio 10 (0,13 g) seguido de diisopropiletilamina (0,08 g) y se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se repartió entre ácido clorhídrico 2 M (40 ml) y acetato de etilo (30 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (30 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (30 ml), agua (2 x 30 ml) y salmuera (20 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío para dar un sólido de color crema (0,16 g). A una solución de esto

\hbox{(0,15 g)}

en metanol (2 ml) se añadió hidróxido sódico 2 M (0,18 ml). Después de agitar durante 1 h a 20ºC, la mezcla se repartió entre ácido clorhídrico 2 M (40 ml) y acetato de etilo (30 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (30 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con cloroformo/metanol/ácido acético (95:5:1) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,12 g, 62% a partir del Intermedio 10). CLEM: T_{r} 4,26 min; m/z 872 (MH^{+}). Ejemplo 4 Ácido (2S)-2-{[(2S)-4-metil-2-({2-[4-(1-piperidinilcarbonil)fenoxi]acetil}amino)pentanoil]amino}-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico

A una solución del Intermedio 48 (0,06 g) en acetonitrilo (5 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,06 g) y 1-hidroxibenzotriazol (0,04 g). Después de agitar durante 30 min a 20ºC se añadió el Intermedio 15 (0,1 g), y se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se repartió entre agua (20 ml) y acetato de etilo (25 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (20 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (20 ml) y salmuera (20 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con diclorometano/etanol/amoniaco 880 (250:8:1) para dar un sólido blanco pegajoso (0,1 g). A esto se le añadió ácido trifluoroacético (3 ml) y agua (3 gotas). Después de agitar durante 4 h a 20ºC el disolvente se evaporó al vacío y el residuo se trituró con éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,06 g, 50%). CLEM: T_{r} 3,21 min; m/z 653 (MH^{+}).

Ejemplo 5 Ácido (2S)-3-[4-({[4-(aminocarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]-2-{[(2S)-4-metil-2-({2-[4-(1-piperidinilcar-bonil)fenoxi]acetil}amino)-pentanoil]amino}propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 48 (0,06 g) y del Intermedio 16 (0,12 g). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con diclorometano/etanol/amoniaco 880 (500:8:1 cambiando a 250:8:1 a 100:8:1). El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco (0,09 g, 59%). CLEM: T_{r} 2,84 min; m/z 694 (MH^{+}).

Ejemplo 6 Ácido (2S)-3-[4-({[4-(aminocarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]-2-[((2S)-2-{[2-(2-benzoilfenoxi)acetil]ami-no}-4-metilpentanoil)amino]propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir del intermedio 49 (0,07 g) y del Intermedio 16 (0,11 g). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con diclorometano/etanol/amoniaco 880 (500:8:1 cambiando a 250:8:1 a 100:8:1). El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco (0,08 g, 42%). CLEM: T_{r} 3,16 min; m/z 687 (MH^{+}).

Ejemplo 7 Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[4-(aminocarbonil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-[4-({[4-(aminocarbo-nil)-1-piperidinil]carbonil}-oxi)fenil]propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 51 (0,06 g) y del Intermedio 16 (0,11 g). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con diclorometano/etanol/amoniaco 880 (500:8:1 cambiando a 250:8:1 a 100:8:1 y a 75:8:1). El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco (0,07 g, 55%). CLEM: T_{r} 2,65 min; m/z 626 (MH^{+}).

Ejemplo 8 Ácido (2S)-3-{4-[({4-[(2-ciclohexilacetil)amino]1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}-2-[((2S)-2-{[2-(2-yodofenoxi)ace-til]amino}-4-metilpentanoil)amino]propanoico

A una solución de trifosgeno (0,058 g) en diclorometano anhidro (2 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió una solución del Intermedio 4 (0,246 g) en THF anhidro (2 ml) seguido de diisopropiletilamina (0,11 ml). Después de agitar durante 4 h a 20ºC se añadió el Intermedio 57 (0,1 g) seguido de diisopropietilamina (0,07 ml). Se continuó agitando durante 18 h y después la mezcla se repartió entre ácido clorhídrico 2 M (50 ml) y diclorometano (50 ml). Las capas se separaron y los extractos orgánicos se lavaron con agua (20 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/ciclohexano (1:1) para dar una espuma blanca (0,13 g). A una solución de esto (0,12 g) en metanol (3 ml) se añadió hidróxido sódico 2 M (30 ml) y agua (2 ml). Después de agitar durante 18 h a 20ºC, la mezcla se repartió entre ácido clorhídrico 2 M (30 ml) y cloroformo (30 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con agua (20 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con cloroformo/metanol (4:1) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,064 g, 20%). CLEM: T_{r} 4,12 min; m/z 805 (MH^{+}).

Ejemplo 9 Ácido (2S)-3-{4-[({4-[(2,2-diciclohexilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}-2-[((2S)-2-{[2-(2-yodofenoxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil)amino]propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 4 (0,203 g) y el intermedio 58 (0,14 g). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con cloroformo/metanol (9:1) para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (0,153 g, 52%). CLEM: T_{r} 4,45 min; m/z 887 (MH^{+}).

Ejemplo 10 Ácido (2S)-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]furan-4-ilcarbonil)amino]-4-metilpentanoil}amino)-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico

A una solución del Intermedio 6 (0,165 g) en diclorometano (5 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió morfolina (0,04 g) y diisopropiletilamina (0,05 ml). Después de agitar durante 30 min a 20ºC, la solución se diluyó con diclorometano (50 ml) y se lavó con carbonato potásico acuoso saturado (3 x 30 ml), ácido clorhídrico 1 M

\hbox{(2 x
40}

ml) y agua (30 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío para dar una espuma blanca (0,143 g). A una solución de esto (0,14 g) en metanol (2 ml) se añadió hidróxido sódico 1 M (2 ml) y la mezcla se agitó durante 30 min a 20ºC y después se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (40 ml) y acetato de etilo (50 ml). El extracto orgánico se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con cloroformo/metanol (4:1) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,1 g, 69%). CLEM: T_{r} 3,85 min; m/z 602 (MH^{+}). Ejemplo 11 Ácido (2S)-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]furan-4-ilcarbonil)amino]-4-metilpentanoil}amino)-3-{4-({[4-(2-furoil)-1-piperazinil]carbonil}oxi)fenil]-propanoico

A una solución del Intermedio 6 (0,13 g) en diclorometano (5 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió 1-(2-furoil)piperazina (0,04 g) y diisopropiletilamina (0,04 ml). Después de agitar durante 3 h a 20ºC, la solución se diluyó con diclorometano (20 ml) y se lavó con carbonato potásico acuoso saturado (3 x 20 ml), ácido clorhídrico
1 M (2 x 20 ml) y agua (20 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío para dar una espuma blanca (0,153 g). A una solución de esto (0,15 g) en metanol (2 ml) se añadió le hidróxido sódico 1 M (2 ml) y la mezcla se agitó durante 30 min a 20ºC y después se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (20 ml) y acetato de etilo (20 ml). El extracto orgánico se lavó con salmuera (20 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con cloroformo/metanol (4:1) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,126 g, 92%). CLEM: T_{r} 3,85 min; m/z 695
(MH^{+}).

Ejemplo 12 Ácido (2S)-3-(4-{[(4-benzoil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]furan-4-ilcarbonil)amino]-4-metilpentanoil}amino)propanoico

A una solución del Intermedio 6 (0,172 g) en diclorometano (4 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió el Intermedio 56 (0,084 g) en diisopropiletilamina (0,2 ml). Después de agitar durante 3 h a 20ºC, la solución se diluyó con diclorometano (50 ml) y se lavó con carbonato potásico acuoso saturado (3 x 50 ml), ácido clorhídrico
1 M (2 x 50 ml) y agua (50 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío. El material bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/ciclohexano (4:1) para dar una espuma blanca. A un solución de esto en metanol (2 ml) se le añadió hidróxido sódico (2 ml) y la mezcla se agitó durante 1 h a 20ºC y después se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (50 ml) y acetato de etilo (50 ml). El extracto orgánico se lavó con salmuera (50 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con cloroformo/metanol (4:1) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,041 g, 23%). CLEM: T_{r} 3,72 min; m/z 705 (MH^{+}).

Ejemplo 13 Ácido (2S)-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]furan-4-ilcarbonil)amino]-4-metilpentanoil}amino)-3-{4-[({4-[(2-fenilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}propanoico

A una solución del Intermedio 45 (0,055 g) en acetonitrilo (2 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,052 g) y 1-hidroxibenzotriazol (0,038 g). Después de agitar durante 30 min a 20ºC se añadió el Intermedio 8 (0,15 g) seguido de diisopropiletilamina (0,047 ml) y se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se diluyó con cloroformo (100 ml) y se lavó con ácido clorhídrico 1 M (3 x 50 ml), hidrogenocarbonato sódico saturado (3 x 50 ml) y agua (50 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío para dar una espuma blanca (0,189 g). A una solución de esto (0,176 g) en metanol (4 ml) se le añadió hidróxido sódico 1 M (1 ml) y la mezcla se agitó durante 2 h a 20ºC y después se repartió entre ácido clorhídrico

\hbox{1 M}

(50 ml) y acetato de etilo (200 ml). El extracto orgánico se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con cloroformo/metanol (9:1) a cloroformo/metanol (4:1) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,103 g, 79%). CLEM: T_{r} 4,00 min; m/z 733 (MH^{+}). Ejemplo 14 Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[2-(2-yodofenoxi)acetil}amino-4-metil pentanoil)amino]-3-{4-[({4-[(2-fenilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}-propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 43 (0,073 g) y del Intermedio 8 (0,15 g). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con cloroformo/metanol (6:1) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,103 g, 53%). CLEM: T_{r} 3,84 min; m/z 799 (MH^{+}).

Ejemplo 15 Ácido (2S)-3-(4-{[(4-acetil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-[((2S)-2-{[2-(2-yodofenoxi)cetil]amino}-4-metilpentanoil)amino]propanoico

A una solución del Intermedio 43 (0,07 g) en acetonitrilo (5 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,05 g) y 1-hidroxibenzotriazol (0,04 g). Después de agitar durante 30 min a 20ºC se añadió el Intermedio 21 (0,135 g) seguido de diisopropiletilamina (0,05 ml) y se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (50 ml) y acetato de etilo (30 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (30 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (40 ml) y agua (2 x 50 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío. El residuo se co-evaporó con diclorometano para dar una espuma blanca. A esto se le añadió ácido trifluoroacético (2 ml) y agua (3 gotas). Después de agitar durante 4 h a 20ºC el disolvente se evaporó al vacío y el residuo se trituró con éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,143 g, 83%). CLEM: T_{r} 3,12 min; m/z 709 (MH^{+}).

Ejemplo 15 Ácido (2S)-3-(4-{[(4-acetil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil)amino)-4-metilpentanoil]amino}propanoico

A una solución del Intermedio 46 (0,052 g) en acetonitrilo (5 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,05 g) y 1-hidroxibenzotriazol (0,04 g). Después de agitar durante 30 min a 20ºC se añadió el Intermedio 21 (0,135 g) seguido de diisopropiletilamina (0,05 ml) y se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (50 ml) y acetato de etilo (30 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (30 ml). El extracto orgánico combinado se lavó con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (40 ml) y agua (2 x 50 ml), se secó sobre sulfato sódico y se evaporó al vacío. El residuo se co-evaporó con diclorometano para dar una espuma blanca. A esto se le añadió ácido trifluoroacético (2 ml) y agua (3 gotas). Después de agitar durante 4 h a 20ºC, el disolvente se evaporó al vacío y el residuo se trituró con éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,015 g, 74%). CLEM: T_{r} 3,31 min; m/z 639 (MH^{+}).

Ejemplo 17 Ácido (2S)-3-(4-{[(4-acetil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]amino}pen-tanoil)amino]propanoico

A una solución de ácido (2-metilfenoxi)acético (0,042 g) en acetonitrilo (5 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,05 g) y 1-hidroxibenzotriazol (0,04 g). Después de agitar durante 30 min a 20ºC se añadió el Intermedio 21 (0,135 g) seguido de diisopropiletilamina (0,05 ml) y se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (50 ml) y acetato de etilo (30 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo adicionalmente con acetato de etilo (30 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (40 ml) y agua (2 x 50 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío. El residuo se co-evaporó con diclorometano para dar una espuma blanca. A esto se le añadió ácido trifluoroacético (2 ml) y agua (3 gotas). Después de agitar durante 4 h a 20ºC, el disolvente se evaporó al vacío y el residuo se trituró con éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,124 g, 86%). CLEM: T_{r} 3,10 min; m/z 597 (MH^{+}).

Ejemplo 18 Ácido (2S)-3-(4-{[(4-acetil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]furan-4-ilcarbonil)amino]-4-metilpentanoil}amino)propanoico

A una solución del Intermedio 45 (0,053 g) en acetonitrilo (5 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,05 g) y 1-hidroxibenzotriazol (0,04 g). Después de agitar durante 30 min a 20ºC se añadió el Intermedio 21 (0,135 g) seguido de diisopropiletilamina (0,05 ml) y se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (50 ml) y acetato de etilo (30 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo adicionalmente con acetato de etilo (30 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (40 ml) y agua (2 x 50 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío. El residuo se co-evaporó con diclorometano para dar una espuma blanca. A esto se le añadió ácido trifluoroacético (2 ml) y agua (3 gotas). Después de agitar durante 4 h a 20ºC el disolvente se evaporó al vacío y el residuo se trituró con éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,127 g, 83%). CLEM: T_{r} 3,33 min; m/z 643 (MH^{+}).

Ejemplo 19 Ácido (2S)-3-(4-{[(4-acetil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-[((2S)-2-{[2-(2-yodofenoxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil)amino]propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 43 (0,07 g) y del Intermedio 22 (0,151 g). El compuesto del título de obtuvo en forma de un sólido blanco (0,152 g, 81%).

CLEM: T_{r} 3,58 min; m/z 771 (MH^{+}).

Ejemplo 20 Ácido (2S)-3-(4-{[(4-benzoil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}propanoico

A una solución del Intermedio 46 (0,052 g) en acetonitrilo (5 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,05 g) y 1-hidroxibenzotriazol (0,04 g). Después de agitar durante 30 min a 20ºC se añadió el Intermedio 22 (0,151 g) seguido de diisopropiletilamina (0,05 ml) y se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (50 ml) y acetato de etilo (30 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (30 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (40 ml) y agua (2 x 50 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío. El residuo se co-evaporó con diclorometano para dar una espuma blanca. A esto se le añadió ácido trifluoroacético (2 ml) y agua (3 gotas). Después de agitar durante 4 h a 20ºC el disolvente se evaporó al vacío y el residuo se trituró con éter para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (0,017 g, 90%). CLEM: T_{r} 3,61 min; m/z 701 (MH^{+}).

Ejemplo 21 Ácido (2S)-3-(4-{[(4-benzoil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]amino}pentanoil)amino]propanoico

A una solución ácido (2-metilfenoxi)acético (0,472), en acetonitrilo (30 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,056 g) y 1-hidroxibenzotriazol (0,4 g). Después de agitar durante 30 min a 20ºC se añadió una solución del Intermedio 22 (0,15 g) en acetonitrilo (25 ml) y se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (50 ml) y acetato de etilo (30 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (40 ml) y agua (50 ml), se secó sobre sulfato sódico y se evaporó al vacío para dar una espuma blanca. A una solución de esto en cloroformo (12 ml), se le añadió ácido trifluoroacético (6 ml). Después de agitar durante 4 h a 20ºC, el disolvente se evaporó al vacío y el residuo se co-evaporó con cloroformo y éter para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (0,017 g, 90%). CLEM: T_{r} 3,44 min; m/z 659 (MH^{+}).

Ejemplo 22 Ácido (2S)-3-(4-{[(4-benzoil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-[((2S)-2-{[2-(2,4-diclorofenoxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil)amino]propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir de ácido 2,4-diclorofenoxiacético (0,055 g) y del Intermedio 22

\hbox{(0,151 g).}

El compuesto del título se obtuvo por trituración con éter en forma de un sólido blanco (0,129 g, 75%). CLEM: T_{r} 3,52 min; m/z 713 (MH^{+}). Ejemplo 23 Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[2-(yodofenoxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil)amino]-3-{4-[((4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico

A una solución del Intermedio 43 (0,556 g) en acetonitrilo (40 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,383 g) y 1-hidroxibenzotriazol (0,27 g). Después de agitar durante 30 min a 20ºC se añadió el Intermedio 23 (1 g) seguido de diisopropiletilamina (0,35 ml) y se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (50 ml) y acetato de etilo (75 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se lavó con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (40 ml) y agua (50 ml), se secó sobre sulfato sódico y se evaporó al vacío para dar una espuma blanca. A una solución de esto en diclorometano (20 ml) se le añadió ácido trifluoroacético (20 ml) y agua (1 ml). Después de agitar durante 4 h a 20ºC el disolvente se evaporó al vacío y el residuo se trituró con éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (1,15 g, 92%). CLEM: T_{r} 3,68 min; m/z 668 (MH^{+}).

Ejemplo 24 Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metil pentanoil]amino}-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico

A una solución del Intermedio 46 (0,416 g) en acetonitrilo (40 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,383 g) y 1-hidroxibenzotriazol (0,27 g). Después de agitar durante 30 min a 20ºC se añadió el Intermedio 23 (1 g) seguido de diisopropiletilamina (0,35 ml) y se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (50 ml) y acetato de etilo (75 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con hidrógenocarbonato sódico acuoso saturado (40 ml) y agua (50 ml), se secó sobre sulfato sódico y se evaporó al vacío para dar una espuma blanca. A una solución de esto en diclorometano (20 ml) le añadió ácido trifluoroacético (20 ml) y agua (1 ml). Después de agitar durante 4 h a 20ºC el disolvente se evaporó al vacío y el residuo se trituró con éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,63 g, 53%). CLEM: T_{r} 3,90 min; m/z 598 (MH^{+}).

RMN (DMSO-d_{6}) dH 12,74 (s a, 1H), 8,38 (d, 1H), 7,81 (d, 1H), 7,20-7,25 (m, 3H), 7,14 (m, 1H), 6,99 (d, 2H), 6,90 (m, 1H), 6,85 (d, 1H), 4,57 (d, 1H), 4,50 (m, 3H), 3,61 (m, 4H), 3,52 (m a, 2H), 3,30-3,40 (exceso de 2H, oscurecido por agua), 3,06 (dd, 1H), 2,90 (dd, 1H), 1,57 (m, 1H), 1,38-1,50 (m, 2H), 1,35 (s, 9H), 0,87 (d, 3H), 0,85 (d, 3H).

Ejemplo 24

(Procedimiento Alternativo)

Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico

A resina de Sasrin (125 g) se le añadió una solución de ácido (2S)-3-[4-(aliloxi)fenil]-2-{[9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}propanoico (300 g) en DMF (970 ml). Después de 15 min se añadió gota a gota piridina (60 ml) seguido de cloruro de 2,6-diclorobenzoílo (106,5 ml). La mezcla se agitó durante 18 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con agua en DMF (3 x 800 ml), metanol (3 x 800 ml) y diclorometano (3 x 1 l). La resina se trató con anhídrido acético (800 ml) y piridina (10 ml) y la mezcla se agitó durante 3,5 h a 45ºC. Después de enfriar a 20ºC, la resina se filtró y se lavó con NMP (3 x 800 ml), metanol (3 x 800 ml) y diclorometano (3 x 800 ml) y después se secó al vacío. 200 g de la resina se trataron con piperidina al 20% en MDF (1,2 l) y esto se agitó durante 3 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con DMF (3 x 1 l), metanol (3 x 1 l) y diclorometano (3 x 1 l). A esto se le añadió una solución de Fmoc-leucina (233,3 g), 1,3-diisopropilcarbodiimida (84,7 g) y 1-hidroxibenzotriazol (89,3 g) en NMP (1,2 l). La mezcla se agitó durante 18 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con NMP (3 x 1 l), metanol (3 x 1 l) y diclorometano (3 x 1 l).

La resina se filtró con piperidina al 20% en DMF (1,2 l) y se agitó durante 3 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con DMF (3 x 1 l), metanol (3 x 1 l) y diclorometano (3 x 1 l). A esto se le añadió una solución del intermedio 46 (68,8 g), 1,3-diisopropilcarbodiimida (42,3 g) y 1-hidroxibenzotriazol (44,7 g) en NMP (1,2 l). La mezcla se agitó durante 18 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con NMP (3 x 1 l), metanol (3 x 1 l) y diclorometano (3 x 1 l).

A la resina se le añadió diclorometano (500 ml), fenilsilano (160 ml) y una suspensión de tetraquis (trifenilfosfina)paladio(0) (0,34 g) en diclorometano (500 ml). La mezcla se agitó durante 2 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con diclorometano (3 x 1 l), éter (3 x 1 l) y diclorometano (6 x 1 l).

Una suspensión de la resina en diclorometano (800 ml) se trató con diisopropiletilamina (120 ml) seguido de cloroformiato de 4-nitrofenilo (131 g) en 3 porciones en intervalos de 10 minutos. La mezcla se agitó durante 2 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con diclorometano (3 x 1 l), éter (3 x 1 l) y DMF (3 x 1 l). Una suspensión de la resina en DMF (800 ml) se trató con una solución de morfolina (56,5 ml) en DMF (200 ml). La mezcla se agitó durante 2 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con DMF (3 x 1 l), éter (3 x 1 l) y diclorometano (3 x 1 l).

Una suspensión de la resina en diclorometano (400 ml) se trató con TFA al 10% en diclorometano (800 ml). Después de agitar durante 30 min a 20ºC, la resina se filtró y se lavó con diclorometano (2 x 500 ml). El filtrado combinado y los lavados se evaporaron al vacío. La resina se trituró con éter (750 ml) y el sólido blanco resultante se filtró. A esto se le añadió acetonitrilo (500 ml) y la mezcla se calentó a reflujo. La solución caliente se filtró y el filtrado se dejó enfriar a 20ºC. La mezcla se filtró para dar el compuesto del título en forma de sólido blanco
(50,9 g).

Ejemplo 25 Ácido (2S)-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]amino}pentanoil)amino]-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]-fenil}propanoico

A una solución de ácido (2-metilfenoxi)acético (0,332 g) en acetonitrilo (40 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,383 g) y 1-hidroxibenzotriazol (0,27 g). Después de agitar durante 30 min a 20ºC se añadió el Intermedio 23 (1 g) seguido de diisopropiletilamina (0,35 ml) y se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (50 ml) y acetato de etilo (75 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (40 ml) y agua (50 ml), se secó sobre sulfato sódico y se evaporó al vacío para dar una espuma blanca. A una solución de esto en diclorometano (20 ml) se le añadió ácido trifluoroacético (20 ml) y agua (1 ml). Después de agitar durante 4 h a 20ºC el disolvente se evaporó al vacío y el residuo se trituró con éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,895 g, 80%). CLEM: T_{r} 3,31 min; m/z 556 (MH^{+}).

Ejemplo 26 Ácido (2S)-3-[4-({[4-aminocarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]-2-[((2S)-2-{[2-(2-yodofenoxi)acetil]amino-4-metilpentanoil)amino]propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 43 (0,06 g) y del Intermedio 24 (0,1 g). El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco (0,07 g, 56%).

CLEM: T_{r} 3,33 min; m/z 709 (MH^{+}).

Ejemplo 27 Ácido (2S)-3-[4-({[4-aminocarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]amino}pentanoil)amino]propanoico

A una solución de ácido (2-metilfenoxi)acético (0,345 g) en acetonitrilo (50 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,4 g) y 1-hidroxibenzotriazol (0,3 g). Después de agitar durante 30 min a 20ºC se añadió el Intermedio 24 (1 g) seguido de diisopropiletilamina (0,35 ml) y se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se concentró al vacío y el residuo se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (100 ml) y acetato de etilo (300 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó ácido clorhídrico 1 M

\hbox{(2 x 100}

ml), hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (3 x 100 ml) y salmuera (100 ml) se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron al vacío para dar un sólido blanco. A una solución de esto en cloroformo (5 ml) se añadió ácido trifluoroacético (5 ml) y agua (1 ml). Después de agitar durante 3 h 20ºC el disolvente se evaporó al vacío y la resina se destiló azeotrópicamente con tolueno (2 x 20 ml) y después se trituró con éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (1,06 g, 96%). CLEM: T_{r} 3,20 min; m/z 597 (MH^{+}). Solubilidad en agua: 0,01 mg/ml.

RMN (DMSO-d_{6}) dH 12,75 (s a, 1H), 8,33 (d, 1H), 7,81 (d, 1H), 7,32 (s a, 1H), 7,21 (d, 2H), 7,15 (d, 1H), 7,11 (t, 1H), 6,98 (d, 2H), 6,79-6,89 (m, 2H), 4,46-4,56 (sistema AB, 2H), 4,39-4,46 (m, 2H), 3,95-4,14 (m, 2H), 2,80-3,10 (m, 4H), 2,33 (m, 1H), 2,20 (s, 2H), 1,75 (m, 2H), 1,40-1,60 (m, 5H), 0,82-0,87 (m, 6H).

Ejemplo 27

(Procedimiento Alternativo)

Ácido (2S)-3-[4-({[4-aminocarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]amino}pentanoil)amino]propanoico

A resina de Wang (50 g) se le añadió una solución de ácido (2S)-3-[4-(aliloxi)fenil]-2-{[(terc-butoxicarbonil)amino}propanoico (115,8 g) y 1-hidroxibenzotriazol (48,6 g)en DMF (475 ml). Después de 15 min se añadió 1,3-diisopropilcarbodiimida (56,5 ml) y la mezcla se agitó durante 24 h a 45ºC. La resina se filtró y se lavó con agua en DMF (3 x 360 ml), metanol (3 x 360 ml) y diclorometano (3 x 700 ml). A una suspensión de la resina en diclorometano (644 ml) se le añadió piridina (14,7 ml). Se añadió anhídrido acético (26,9 ml) y la mezcla se agitó durante 12 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con diclorometano (3 x 550 ml), metanol (3 x 370 ml) y diclorometano (3 x 550 ml).

Una suspensión de 20 g de la resina en diclorometano (100 ml) se enfrió a 2-5ºC y se trató con una solución de fenol (20 g) en diclorometano (80 ml). Se añadió gota a gota clorotrimetilsilano (20 ml) y la mezcla se agitó durante 6 h a 2-5ºC. La resina se filtró y se lavó con diclorometano (3 x 200 ml), metanol (3 x 200 ml), agua al 10% en DMF
(2 x 200 ml), diisopropiletilamina al 10% en DMF (3 x 200 ml), DMF (200 ml), metanol (3 x 200 ml) y diclorometano (3 x 200 ml).

Una suspensión de la resina en DMF (55 ml) se trató con una solución de Fmoc-leucina (32,7 g) y 1-hidroxibenzotriazol (12,5 g) en DMF (85 ml). Después de 5 minutos, se añadió 1,3-diisopropilcarbodiimida (19,3 ml) y la mezcla se agitó durante 15 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con DMF (3 x 150 ml), metanol (3 x 150 ml) y diclorometano (3 x 150 ml).

La resina se trató con piperidina al 20% en DMF (180 ml) y se agitó durante 1 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con DMF (3 x 150 ml), diclorometano (3 x 150 ml) DMF (3 x 150 ml) y diclorometano (3 x 150 ml). A una suspensión de esto en DMF (50 ml) se le añadió una solución de ácido (2-metilfenoxi)acético (17,9 g) y 1-hidroxibenzotriazol (14,6 g) en DMF (100 ml). Después de 5 minutos se añadió 1,3-diisopropilcarbodiimida (16,9 ml) y la mezcla se agitó durante 65 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con DMF (2 x 150 ml), metanol (3 x 150 ml) y diclorometano (3 x 150 ml).

Una suspensión de la resina en diclorometano (60 ml) se trató con una solución de tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (5,21 g) en diclorometano (140 ml) seguido de morfolina (13 ml). La mezcla se agitó durante 2 h a 20ºC y después la resina se filtró y se lavó con diclorometano (7 x 200 ml).

Una suspensión de la resina en diclorometano (160 ml) se trató con diisopropiletilamina (12,4 ml) seguido de cloroformiato de 4-nitrofenilo (24,8 g) en 3 porciones a intervalos de 5 minutos. La mezcla se agitó durante 1 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con diclorometano (3 x 200 ml). La resina se trató con una solución de isonipecotamida (15,8 g) en DMF (180 ml) y la mezcla se agitó durante 1,5 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con DMF (4 x 200 ml) y diclorometano (2 x 200 ml).

La resina se trató con TFA al 50% en diclorometano (200 ml). Después de agitar durante 1 h a 20ºC la resina se filtró y se lavó con diclorometano (5 x 200 ml). El filtrado combinado y los lavados se evaporaron al vacío. El residuo se destiló azeotrópicamente con tolueno (2 x 100 ml) y después se trituró con éter (50 ml) y el sólido blanco resultante se filtró. A esto se le añadió acetonitrilo (150 ml) y la mezcla se calentó a reflujo. La suspensión resultante se dejó enfriar a 20ºC y se agitó durante 18 h. La mezcla se filtró para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (4,9 g).

Ejemplo 27A Ácido (2S)-3-[4-({[4-(aminocarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]amino}-pentanoil)amino]propanoico

Una suspensión del Ejemplo 27 (10 g) en metanol (150 ml) se calentó a reflujo para obtener un solución transparente. A esto se le añadió una solución de carbonato potásico (1,16 g) en agua (7,5 ml). Después de calentar a reflujo durante dos minutos los disolventes se evaporaron al vacío para dar una espuma crujiente. A esto se le añadió acetonitrilo (100 ml) y la mezcla se calentó a reflujo, tiempo durante el cual la espuma se colapsó y comenzó a cristalizar. Después de diez minutos la mezcla se dejó enfriar a 20ºC y después se filtró a presión reducida y se lavó con acetonitrilo (25 ml) y éter (50 ml) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (10,65 g, 100%). Se cree que el producto debe aislarse en forma de su monohidrato. Solubilidad en agua: >250.

RMN (DMSO-d_{6}) dH 8,27 (d, 1H), 7,42 (d, 1H), 7,37 (d, 1H), 7,04-7,16 (m, 4H), 6,78-6,88 (m, 5H), 4,44-4,59 (sistema AB, 2H), 4,21 (m, 1H), 3,95-4,12 (m a, 2H), 3,87 (m, 1H), 2,80-3,10 (m, 4H), 2,34 (m, 1H), 2,20 (s, 3H), 1,75 (m, 2H), 1,75 (m, 2H), 1,41-1,60 (m, 5H), 0,86 (d, 3H), 0,80 (d, 3H).

Ejemplo 28 Ácido (2S)-3-[4-({[4-(aminocarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]furan-4-ilcarbonil)amino]-4-metilpentanoil}amino)-propanoico

A una solución del Intermedio 45 (0,438 g) en acetonitrilo (50 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,4 g) y 1-hidroxibenzotriazol (0,29 g). Después de agitar durante 30 min a 20ºC se añadió el Intermedio 24 (1 g) seguido de diisopropiletilamina (0,35 ml) y se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se concentró al vacío y el residuo se repartió entre ácido clorhídrico 1 M (100 ml) y acetato de etilo (300 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con ácido clorhídrico 1 M (2 x 100 ml), hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (3 x 100 ml) y salmuera (100 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío para dar un sólido blanco. A una solución de esto en cloroformo (5 ml) se le añadió ácido trifluoroacético (5 ml) y agua (1 ml). Después de agitar durante 3 h a 20ºC, el disolvente se evaporó al vacío y el residuo se destiló azeotrópicamente con tolueno (2 x 20 ml) y después se trituró con éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,95 g, 80%). CLEM: T_{r} 3,48 min; m/z 643 (MH^{+}).

Ejemplo 29 Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metil pentanoil]amino}-3-[4-({[4-(1-piperidinilcar-bonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]-propanoico

A una solución del Intermedio 46 (0,1 g) en acetonitrilo (5 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,09 g) y 1-hidroxibenzotriazol (0,063 g). Después de agitar durante 30 min a 20ºC se añadió el Intermedio 20 (0,18 g) y se continuó agitando durante 18 h. La mezcla se repartió entre agua (20 ml) y acetato de etilo (20 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (2 x 30 ml), agua (30 ml) y salmuera (30 ml), se secó sobre sulfato sódico y se evaporó al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol (20:1) para dar un aceite transparente. A una solución de esto en diclorometano (8 ml) se añadió ácido trifluoroacético (2 ml). Después de agitar durante 2 h a 20ºC el disolvente se evaporó al vacío y el producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol/ácido acético/agua (240:15:3:2) para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (0,08 g, 36%). CLEM: T_{r} 4,07 min; m/z 707 (MH^{+}).

Ejemplo 30 Ácido (2S)-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]amino}pentanoil)amino]-3-[4-({[4-(1-piperidinilcarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir de ácido (2-metilfenoxi)acético (0,09 g) y del Intermedio 20 (0,3 g). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol/ácido acético/agua (240:15:3:2) para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (0,116 g, 34%). CLEM: T_{r} 3,56 min; m/z 665 (MH^{+}).

Ejemplo 31 Ácido (2S)-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]furan-4-carbonil)amino-4-metil pentanoil}amino)-3-[4-({[4-(1-piperidinilcarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]-propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 45 (0,01 g) y del Intermedio 20 (0,176 g). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol/ácido acético/agua (180:15:3:2) para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (0,075 g, 35%). CLEM: T_{r} 4,09 min; m/z 771 (MH^{+}).

Ejemplo 32 Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[(1-bromo-2-naftil)oxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-[4-({[4-(1-piperidinilcarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)-fenil]propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 50 (0,124 g) y el Intermedio 20 (0,168 g). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol/ácido acético/agua (200:15:3:2) para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (0,055 g, 24%). CLEM: T_{r} 4,19 min; m/z 779 (MH^{+}).

Ejemplo 33 Ácido (2S)-3-[4-({[4-(aminocarbonil)-1-piperidinil]carbonil)oxi)fenil]-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-propanoico

A una suspensión del Intermedio 26 (0,47 g) en diclorometano (8 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió isonipecotamida (0,106 g) y diisopropiletilamina (0,2 ml). La mezcla se agitó durante 18 h a 20ºC y después se diluyó con cloroformo (100 ml), se lavó con carbonato potásico acuoso saturado (3 x 50 ml), ácido clorhídrico 1 M (3 x 50 ml) y agua (50 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío para dar una espuma blanca. A una solución de esto en cloroformo (3 ml) se le añadió ácido trifluoroacético (3 ml). Después de agitar durante 4 h a 20ºC el disolvente se evaporó al vacío y el residuo se trituró con éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,223 g, 52%).

CLEM: T_{r} 3,35 min; m/z 639 (MH^{+}).

Ejemplo 34 Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metil pentanoil]amino}-3-(4-{[(4-{[(4-fluorobencil)amino]carbonil}1-piperidinil)-carbonil]oxi}fenil)propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 26 (0,312 g) y del Intermedio 54 (0,181 g). El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco (0,187 g, 57%).

CLEM: T_{r} 3,71 min; m/z 747 (MH^{+}).

Ejemplo 35 Ácido (2S)-[((2S)-2-{[2-(2,4-diclorofenoxi)acetil]amino}-4-metil pentanoil)amino]-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico

A una suspensión de carbonato potásico anhidro (0,057 g) y yoduro sódico (0,051 g) en DMF anhidra (1 ml) se le añadió 2,4-diclorofenol (0,166 g) seguido del Intermedio 27 (0,2 g). La mezcla se agitó durante 18 h a 20ºC y después se repartió entre hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (10 ml) y acetato de etilo (10 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó adicionalmente con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (10 ml) y salmuera (10 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/ciclohexano (1:1) para dar una espuma blanca. A una solución de esto en diclorometano (2 ml) se añadió ácido trifluoroacético (2 ml). Después de agitar durante 2 h a 20ºC el disolvente se evaporó al vacío y el residuo se trituró con éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,146 g, 70%). CLEM: T_{r} 3,70 min; m/z 610 (MH^{+}).

Ejemplo 36 Ácido (2S)-2-[((2S)-{[2-(2-benzoilfenoxi)acetil]amino}-4-metil pentanoil)amino]-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir de 2-hidroxibenzofenona (0,2 g) y del Intermedio 27 (0,2 g). El compuesto del título se obtuvo en forma de una espuma de color amarillo pálido (0,057 g, 26%). CLEM: T_{r} 3,60 min; m/z 646 (MH^{+}).

Ejemplo 37 Ácido (2S)-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-propilfenoxi)acetil]amino}pentanoil)amino]-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fe-nil}propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir de 2-propilfenol (0,14 g) y del Intermedio 27 (0,2 g). El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco (0,141 g, 70%).

CLEM: T_{r} 3,71 min; m/z 584 (MH^{+}).

Ejemplo 38 Ácido (2S)-{[(2S)-2-({2-[(1-bromo-2-naftil)oxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-{4-[(4-, morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir de 1-bromo-2-naftol (0,23 g) y del Intermedio 27 (0,2 g). El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanco (0,11 g, 48%).

CLEM: T_{r} 3,91 min; m/z 670 (MH^{+}).

Ejemplo 39 Ácido (2S)-2-[((2S)-{[2-(2-ciclohexilfenoxi)acetil]amino}-4-metil pentanoil)amino]-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico

A una suspensión de carbonato potásico anhidro (0,1 g) y yoduro sódico (0,06 g) en DMF anhidra (1 ml) se le añadió 2-ciclohexilfenol (0,12 g) seguido del Intermedio 27 (0,2 g). La mezcla se agitó durante 18 h a 20ºC y después se repartió entre hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (10 ml) y acetato de etilo (10 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó adicionalmente con hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (10 ml) y salmuera (10 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/ciclohexano (1:1) para dar una espuma blanca. A una solución de esto en diclorometano (3 ml) se le añadió ácido trifluoroacético (3 ml). Después de agitar durante 2 h a 20ºC el disolvente se evaporó al vacío y el residuo se destiló azeotrópicamente con tolueno y después se trituró con éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,118 g, 55%). CLEM: T_{r} 3,24 min; m/z 624 (MH^{+}).

Ejemplo 40 Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[(benciloxi)carbonil]amino}-4-metilpentanoil)amino]-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico

A una solución del Intermedio 13 (0,19 g) en cloroformo (2 ml) se añadió ácido trifluoroacético (2 ml). Después de agitar durante 4 h a 20ºC el disolvente se evaporó al vacío y el residuo se trituró con éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,156 g, 90%). CLEM: T_{r} 3,22 min; m/z 542 (MH^{+}).

Ejemplo 41 Ácido (2S)-3-[4-({[4-(2-furoil)-1-piperazinil]carbonil}oxi)fenil]-2-[((2S)-2-{[2-(2-yodofenoxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil)amino]propanoico

El Intermedio 38 (0,26 mmol) se trató con DMF (4 ml). Se añadieron 2-yodofenol (0,57 g), carbonato potásico (0,36 g) y yoduro sódico (0,39 g) y la mezcla se agitó durante 16 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con agua (2 x 5 ml), DMF (5 x 5 ml) y diclorometano (5 x 5 ml) y después se trató con 1:1 ácido trifluoroacético/diclorometano (4 ml). Después de 30 min la resina se filtró y el filtrado se evaporó al vacío. La resina se destiló azeotrópicamente con tolueno (5 ml) y después se trituró con éter. El producto bruto se cristalizó en acetonitrilo para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,043 g).

CLEM: T_{r} 3,50 min; m/z 761 (MH^{+}).

Ejemplo 42 Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metil pentanoil]amino}-3-[4-({[4-(2-furoil)-1-piperazinil]carbonil}oxi)fenil]propanoico

El Intermedio 28 (0,26 mmol) se trató con DMF (4 ml). Se añadieron 2-terc-butil fenol (0,4 ml), carbonato potásico (0,36 g) y yoduro sódico (0,39 g) y la mezcla se agitó durante 16 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con agua (2 x 5 ml), DMF (5 x 5 ml) y diclorometano (5 x 5 ml) y después se trató con 1:1 ácido trifluoroacético/diclorometano (4 ml). Después de 30 min, la resina se filtró y el filtrado se evaporó al vacío. La resina se destiló azeotrópicamente con tolueno (5 ml) y después se trituró con éter. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con cloroformo/metanol/ácido acético (95:5:1) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,04 g). CLEM: T_{r} 3,63 min; m/z 691 (MH^{+}).

Ejemplo 43 Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[2-(2-ciclohexilfenoxi)acetil]amino}-4-metil pentanoil)amino]-3-[4-({[4-(2-furoil)-1-piperazinil]carbonil}oxi)fenil]propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 38 (0,26 mmol) y de 2-ciclohexil fenol (0,46 g). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de cloroformo/metanol (incrementado de 98:2 a 80:20) para dar el compuesto del título en forma de un sólido de color crema (0,037 g). CLEM: T_{r} 3,83 min; m/z 717 (MH^{+}).

Ejemplo 44 Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[(1-bromo-2-naftil)oxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-[4-({[4-(2-furoil)-1-piperazinil]carbonil}oxi)fenil]-propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 38 (0,26 mmol) y 1-bromo-2-naftol (0,58 g). El producto bruto se cristalizó en acetonitrilo para dar el compuesto del título en forma de un sólido de color crema (0,064 g). CLEM: T_{r} 3,69 min; m/z 763 (MH^{+}).

Ejemplo 45 Ácido (2S)-3-(4-{[(4-{[2-(4-clorofenil)acetil]amino}-1-piperidinil)carbonil]oxi}fenil)-2-[((2S)-2-{[2-(2-ciclohexilfenoxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil)amino]propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 39 (0,29 mmol) y de 2-ciclohexil fenol (0,48 g). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con cloroformo/metanol/ácido acético (95:5:0,5) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,073 g). CLEM: T_{r} 4,13 min; m/z 789 (MH^{+}).

Ejemplo 46 Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[2-(2-benzoilfenoxi)acetil}amino}-4-metil pentanoil)amino]-3-(4-{[(4-{[2-(4-clorofenil)acetil]amino}-1-piperidinil)carbonil]oxi}fenil)propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 39 (0,29 mmol) y 2-hidroxibenzofenona (0,55 g). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con cloroformo/metanol/ácido acético (95:5:0,5) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,065 g). CLEM: T_{r} 3,75 min; m/z 811 (MH^{+}).

Ejemplo 47 Ácido (2S)-3-(4-{[(4-{[2-(4-clorofenil)acetil]amino}-1-piperidinil)carbonil]oxi}fenil)-2-[((2S)-2-{[2-(2-yodofenoxi)Acetil]amino}-4-metil pentanoil)amino]propanoico

El Intermedio 37 (0,27 mmol) se trató con piperidina al 20% en DMF (5 ml) y se agitó durante 1 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con DMF (5 x 5 ml). Se añadió una solución de hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxi-tripirrolidinofosfonio (0,285 h) en DMF (2 ml) y diisopropiletilamina (0,26 ml). La mezcla se agitó durante 18 h a 20ºC. La resina se filtró y se lavó con DMF (5 x 5 ml) y diclorometano (5 x 5 ml) y después se trató con 1:1 ácido trifluoroacético/diclorometano (5 ml). Después de 30 min la resina se filtró y el filtrado se evaporó al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con cloroformo/metanol/ácido acético (95:5:0,5) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,083 g). CLEM: T_{r} 3,76 min; m/z 833 (MH^{+}).

Ejemplo 48 Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metil pentanoil]amino}-3-(4-{[4-{[2-(4-clorofenil)acetil]amino}-1-piperidinil)carbonil]oxi}fenil)propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 37 (0,27 mmol) y del intermedio 46 (0,115 g). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con cloroformo/metanol/ácido acético (95:5:0,5) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,107 g). CLEM: T_{r} 3,93 min; m/z 763 (MH^{+}).

Ejemplo 49 Ácido (2S)-3-(4-{[(4-{[2-(4-clorofenil)acetil]amino}-1-piperidinil)carbonil]oxi}fenil)-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]fu-ran-4-ilcarbonil)amino]-4-metilpentanoil}amino)propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 37 (0,27 mmol) y el intermedio 45 (0,117 g). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con cloroformo/metanol/ácido acético (95:5:0,5) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,056 g). CLEM: T_{r} 3,80 min; m/z 765 [M-H]^{-}.

Ejemplo 50 Ácido (2S)-3-(4-{[(4-{[2-(4-clorofenil)acetil]amino}-1-piperidinil)carbonil]oxi}fenil)-2-({(2S)-4-metil-2-[(2-{[3-(1-piperidinilcarbonil)-2-naftil]oxi}oxi}acetil)amino]pentanoil}amino)propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 37 (0,27 mmol) y del intermedio 44 (0,173 g). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con cloroformo/metanol/ácido acético (95:5:0,5) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,062 g). CLEM: T_{r} 3,71 min; m/z 868 (MH^{+}).

Ejemplo 51 Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metil pentanoil]amino}-3-{4-[({4-[(2-fenilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil) oxi] fenil}propanoico

El Intermedio 33 (0,23 mmol) se trató con 1:1 diclorometano/THF (3 ml). Se añadió el Intermedio 59 (0,105 g) seguido de diisopropiletilamina (0,16 ml). Después de agitar durante 18 h a 20ºC la resina se filtró, se lavó con diclorometano (4 x 5 ml) y éter (3 x 5 ml) y después se secó al vacío. La CLEM mostró que parte del carbonato de 4-nitrofenilo se había hidrolizado en el fenol, de forma que la resina se trató con 1:1 diclorometano/THF (3 ml), diisopropiletilamina (0,2 ml) y cloroformiato de 4-nitrofenilo (0,23 g). Después de agitar durante 18 h a 20ºC la resina se filtró y se lavó con diclorometano (4 x 5 ml) y después se trató con 1:1 diclorometano/THF (3 ml), el Intermedio 59 (0,07 g) y diisopropiletilamina (0,12 g). Después de agitar durante 18 h a 20ºC la resina se filtró y se lavó con diclorometano (4 x 5 ml) y después se trató con 1:1 ácido trifluoroacético/diclorometano (3 ml). Después de 30 min, la resina se filtró y el filtrado se evaporó al vacío. El residuo se co-evaporó con diclorometano seguido de éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanquecino (0,083 g). CLEM: T_{r} 3,99 min; m/z 729 (MH^{+}).

Ejemplo 52 Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metil pentanoil]amino}-3-{4-[({4-[(2-ciclohexilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}propanoico

Éste se preparó de una forma similar a partir del Intermedio 33 (0,23 mmol) y del Intermedio 57 (0,106 g). El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanquecino (0,073 g).

CLEM: T_{r} 4,27 min; m/z 735 (MH^{+}).

Ejemplo 53 Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metil pentanoil]amino}-3-{4-[({4-[(2,2-diciclohexilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}propanoico

Éste se preparó de una forma similar a partir del Intermedio 33 (0,25 mmol) y del Intermedio 58 (0,144 g). El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanquecino (0,105 g).

CLEM: T_{r} 4,63 min; m/z 817 (MH^{+}).

Ejemplo 54 Ácido (2S)-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]amino}pentanoil)amino]-3-{4-[((4-[(2-fenilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}propanoico

Éste se preparó de forma similar a partir del Intermedio 34 (0,3 mmol) y del intermedio 59 (0,196 g). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con diclorometano/metanol/ácido acético/agua (240:15:3:2) para dar el compuesto del título en forma de una espuma de color amarillo pálido (0,091 g). CLEM: T_{r} 3,49 min; m/z 687 (MH^{+}).

Ejemplo 55 Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[2-(2-ciclohexilfenoxi)acetil]amino}-4-metil pentanoil)amino]-3-{4-[({4-[(2-fenilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}propanoico

El Intermedio 42 (0,27 mmol) se trató con una solución del Intermedio 59 (0,178 g) en 1:1 diclorometano/THF (2 ml) seguido de diisopropiletilamina (0,95 ml). Después de agitar durante 2 h a 20ºC, la resina se filtró y se lavó con diclorometano (5 x 5 ml) y después se trató con 1:1 de ácido trifluoroacético/diclorometano (3 ml). Después de 30 min, la resina se filtró y el filtrado se evaporó al vacío. El residuo se trituró con éter para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanquecino (0,074 g). CLEM: T_{r} 4,04 min; m/z 755 (MH^{+}).

Ejemplo 56 Ácido (2S)-3-{4-[({4-[(2-ciclohexilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}-2-[((2S)-2-{[2-(ciclohexilfenoxi)acetil]amino}-4-metil pentanoil)amino]propanoico

Este se preparó de forma similar a partir del Intermedio 42 (0,27 mmol) y del Intermedio 57 (0,18 g). El compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido blanquecino (0,102 g). CLEM: T_{r} 4,22 min; m/z 761 (MH^{+}).

Información biológica

Los compuestos de los Ejemplos se ensayaron en el ensayo (1), el ensayo de adhesión de Jurkat, y los resultados obtenidos fueron los siguientes:

8

9

10

Los compuestos de los ejemplos 16, 17, 20, 21, 23, 24, 27 y 28 se ensayaron en el ensayo (2), co-estimulación de CD3/VCAM-1 del ensayo de proliferación de células T, y los resultados obtenidos fueron los siguientes:

11

Los compuestos de los ejemplos 16, 17, 20, 21, 23, 24, 27 y 28 también se ensayaron en el ensayo (3), Inhibición de infiltración eosinófila del pulmón e hiper-reactividad en cobayas (dosis intratracreal administrada 0,5 horas antes y 6 horas después de la exposición al antígeno), y los resultados obtenidos fueron los siguientes:

12

13

Los compuestos de los ejemplos 16, 17, 20, 21, 23, 24, 27 y 28 también se ensayaron en el ensayo (4), ensayo de adhesión de RPMI 8866/MAcCAM-1, y los resultados fueron los siguientes:

14

Abreviaturas

WSCDI	clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
PyBop	hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxi-trispirrolidinofosfonio
DIC	1,3-diisopropilcarbodiimida
HOBT	1-hidroxibenzotriazol
Boc	terc butoxicarbonilo
Fmoc	9-fluorenilmetoxicarbonilo
Cbz	carbobenciloxi
DIPEA	diisopropiletilamina
DCM	diclorometano
MDF	dimetilformamida
THF	tetrahidrofurano
NMP	1-metil-2-pirrolidinona

Referencias

Baron, J. L. y col., (1994). J. Clin. Invest. 93, 1700-1708.

Danahay y col., (1997). Br. J. Pharmacol. 120 (2), 289-297.

Ferguson, T. A y col., (1991). Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88, 8072-8076.

Griffiths, J. and Hawkins, C. (1997). J. Appl. Chem. Biotechnol. 27 (10), 558-564.

Lobb, R. R. y Hemler, M. E. (1994). J. Clin. Inverst. 94, 1722-1728.

Podolsky, D. K. y col., (1993). J. Clin. Invest. 92, 372-380.

Sanjar, S., McCabe, P. J., Fattah, D., Humbles, A. A. and Pole, S. M. (1992). Am. Rev. Respir. Dis. 145, A40.

Shah, S. y col., (1992). J. Med. Chem. 35 (21), 3745-3754.

Wahl, S. M. y col., (1994). J. Clin. Invest. 94, 655-662.

A lo largo de la memoria descriptiva y de las reivindicaciones que muestran a continuación, a menos que el contexto requiera otra cosa, se entenderá que el término "comprender", y variaciones tales como "comprende" y "que comprende", implica la inclusión de un número entero indicado o etapa o grupo de números enteros pero no la exclusión de cualquier otro número entero o etapa o grupo de números enteros o etapas.

Claims (27)

1. Un compuesto de fórmula I

15

en la que R^{1} y R^{2} representan independientemente

(i) alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-8} o alquil C_{1-3}-cicloalquilo C_{3-8}, o un grupo tal en el que el alquilo o cicloalquilo está sustituido con uno o más grupos halógeno, -CN, nitro, hidroxi o -O-alquilo C_{1-6};

(ii) -(CH_{2})_{a}Ar^{1} o -(CH_{2})_{a}OAr^{1};

o NR^{1}R^{2} conjuntamente representan pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, tiomorfolinilo, morfolinilo o azepinilo, o un grupo condensado a un anillo de benceno, opcionalmente sustituido con uno o más grupos -(CO)_{n}(CH_{2})_{t}Ar^{1}, -(CO)_{n}-alquil C_{1-6}-Ar^{1}Ar^{2}, -(CO)_{n}-alquilo C_{1-6}, -(CH_{2})_{r}OH, -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{p}OH, -(CH_{2})_{r}O-alquilo C_{1-6}, -O(CH_{2})_{t}Ar^{1}, -(CH_{2})_{r}SO_{2}Ar^{1}, piperidin-1-ilo, -(CH_{2})_{t}CONR^{8}R^{9}, -NR^{10}(CO)_{n}(CH_{2})_{t}Ar^{1}, -NR^{10}(CO)_{n}-alquil C_{1-3}-cicloalquilo C_{3-6}, -NR^{10}(CO)_{n}-alquil C_{1-6}-dicicloalquilo C_{3-6}, -CONR^{10}(CH_{2})_{t}Ar^{1}, halógeno, -NHSO_{2}-alquilo C_{1-6}, -SO_{2}NR^{10}R^{11}, -SO_{2}-alquilo C_{1-6} o -SO_{2}Ar^{2};

R^{3} representa -alquil C_{1-6}-NHC(=NH)NH_{2}, -alquenil C_{2-6}-NHC(=NH)NH_{2}, -alquinil C_{2-6}-NHC(=NH)NH_{2}, -alquil C_{1-6}-NR^{14}R^{18}, -(CH_{2})_{n}CONR^{14}R^{18}, -(CH_{2})_{n}COC-alquilo C_{1-6}, -(CH_{2})_{d}CHNR^{18}CONR^{20}R^{21}, -(CH_{2})_{m}NR^{18}CONR^{14}R^{18}, -(CH_{2})_{d}NR^{18}Ar^{3}, -(CH_{2})_{d}CONR^{18}Ar^{3}, -(CH_{2})_{n}COOR^{18}, -(CH_{2})_{c}Ar^{3}, -O(CH_{2})_{c}Ar^{3}, -O(CH_{2})_{c}Ar^{3}, -(CH_{2})_{d}CO(CH_{2})_{a}
Ar^{3} o -(CH_{2})_{d}OAr^{3};

o R^{3} representa -(CH_{2})_{c}-2,4-imidazolidinona, -(CH_{2})_{c}(piperidin-4-ilo), -(CH_{2})_{c}(piperidin-3-ilo), -(CH_{2})_{c}(piperidin-2-ilo), -(CH_{2})_{c}(morfolin-3-ilo) o -(CH_{2})_{c}(morfolin-2-ilo) opcionalmente sustituido sobre el nitrógeno con -(CO)_{f}-alquilo C_{1-6}, -(CO)_{f}(CH_{2})_{c}Ar^{2} o -(C(=NH)NH_{2};

o R^{3} representa -(CH_{2})_{x}dibenzofurano opcionalmente sustituido con alquilo C_{1-6} o halógeno;

o R^{3} representa -(CH_{2})_{c}-tioxanten-9-ona;

R^{4} representa hidrógeno, -alquilo C_{1-6}, -alquil C_{1-3}-cicloalquilo C_{3-6}, -(CH_{2})_{q}Ar^{2}, -alquil C_{1-4}-X-R^{7}, -alquil C_{1-4}-SO_{2}-alquilo C_{1-4}, -alquil C_{1-6}-NR^{12}R^{13} o -alquil C_{1-6}-NR^{12}COC-alquilo C_{1-6};

R^{5} representa hidrógeno, o R^{4}R^{5} junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un anillo cicloalquilo C_{5-7};

R^{6} representa hidrógeno o -alquilo C_{1-6};

R^{7} representa hidrógeno, -(CH_{2})_{w}NR^{12}R^{13}, -(CH_{2})_{u}Ar^{2} o -(CH_{2})_{w}NR^{12}COC-alquilo C_{1-6};

R^{8}, R^{9}, R^{16} y R^{17} representan independientemente hidrógeno, -alquilo C_{1-6}, -cicloalquilo C_{3-6}, -alquil C_{1-3}-cicloalquilo C_{3-6}, -alquenilo C_{2-6} o NR^{8}R^{9} o NR^{16}R^{17} conjuntamente representan morfolinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo o piperazinilo N-sustituido con -alquilo C_{1-6}, -CO-fenilo o -SO_{2}-metilo;

R^{10}, R^{11}, R^{12}, R^{13}, R^{15}, R^{16}, R^{20} y R^{21} representan independientemente hidrógeno o -alquilo C_{1-6};

R^{14}, R^{19} y R^{22} representan independientemente hidrógeno, -alquilo C_{1-6}, -cicloalquilo C_{3-6} o -(CH_{2})_{x}Ar^{4} o NR^{14}R^{18} o NR^{15}R^{22} conjuntamente representan morfolinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo o N-alquil C_{1-6}-piperazinilo;

Ar^{1} representa fenilo o un anillo aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros que contiene de 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre O, N y S opcionalmente sustituido con uno o más grupos halógeno, alquilo C_{1-6}, hidroxi,
-O-alquilo C_{1-6}, CF_{3}, nitro, -Ar^{2} u -OAr^{2};

Ar^{2} representa fenilo opcionalmente sustituido con uno o más grupos halógeno, -alquilo C_{1-6}, hidroxi, -O-alquilo C_{1-6}, -CF_{3} o nitro;

Ar^{3} representa fenilo, un anillo aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros que contiene de 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre O, N o S, o un grupo condensado a un anillo de benceno, opcionalmente sustituido con uno o más grupos -CO(CH_{2})_{g}Ar^{4}, -(CH_{2})_{y}Ar^{4}, -(CH_{2})_{y}COAr^{4}, -(CO)_{a}-alquilo C_{1-6}, -(CO)_{a}-alquenilo C_{2-6}, -(CO)_{a}-alquinilo C_{2-6}, -(CO)_{a}-cicloalquilo C_{3-8}, -(CO)_{a}-haloalquilo C_{1-6}, halógeno, -COCH_{2}CN, -(CH_{2})_{b}NR^{16}R^{17}, -(CH_{2})_{b}NHC(=NH)NH_{2}, -CYNR^{16}(CO)_{a}R^{17}, -(CH_{2})_{b}NR^{15}COR^{19}, -(CH_{2})_{b}CONR^{15}R^{22}, -(CH_{2})_{b}NR^{15}CONR^{15}R^{22}, -(CH_{2})_{b}CONR^{15}(CH_{2})_{j}
NR^{15}R^{22}, -(CH_{2})_{b}SO_{2}NR^{15}R^{22}, -(CH_{2})_{b}SO_{2}NR^{15}COAr^{2}, -(CH_{2})_{b}NR^{15}SO_{2}R^{19}, -SO_{2}R^{19}, -SOR^{19}, -(CH_{2})_{x}OH, -COOR^{15}, -CHO, -O-alquilo C_{1-10}, -O(CH_{2})_{j}NR^{15}R^{22}, -O(CH_{2})_{j}NHC(=NH)NH_{2}, -O(CH_{2})_{b}CONR^{16}R^{17}, -O(CH_{2})_{k}COOR^{15},
-O(CH_{2})_{j}OAr^{2}, -O(CH_{2})_{b}Ar^{2}, 3-fenil-2-pirazolin-5-ona o 4,5-dihidro-3(2H)-piridazinona;

Ar^{4} representa fenilo o un anillo aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros que contiene de 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre O, N y S opcionalmente sustituido con uno o más grupos halógeno, -alquilo C_{1-6}, -hidroxi,
-O-alquilo C_{1-6}, -CF_{3}, nitro o -CONH_{2};

X e Y representan independientemente O o S;

a, f, k, s y n representan independientemente 0 ó 1;

b, c, r, x, y y z representan independientemente un número entero de 0 a 2;

d, g y u representan independientemente 1 ó 2;

e, h, q y w representan independientemente un número entero de 1 a 3;

j y p representan independientemente un número entero de 2 a 4;

m representa independientemente un número entero de 0 a 4;

t representa independientemente un número entero de 0 a 3;

y sales y solvatos de los mismos.

2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 donde R^{4} representa alquilo C_{1-6}, R^{5} representa hidrógeno o R^{4}R^{5}, junto con el carbono al que están unidos, forma un anillo ciclohexilo, y R^{6} representa un hidrógeno o metilo.

3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2 donde R^{4} representa alquilo C_{1-6}, R^{5} y R^{6} representan hidrógeno.

4. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 3 donde R^{4} representa -CH_{2}CHMe_{2} y R^{5} y R^{6} representan hidrógeno.

5. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 donde NR^{1}R^{2} conjuntamente representan piperidinilo, piperazinilo, tiomorfolinilo, morfolinilo o 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina opcionalmente sustituidos con un grupo -(CO)_{n}(CH_{2})_{t}Ar^{1}, -(CO)_{n}-alquil C_{1-6}, -(CH_{2})_{t}CONR^{8}R^{9}, -NR^{10}(CO)_{n}(CH_{2})_{t}Ar^{1}, -NR^{10}(CO)_{n}-alquil C_{1-3}-cicloalquilo C_{3-6}, -NR^{10}(CO)_{n}-alquil C_{1-6}-dicicloalquilo C_{3-6}, -(CH_{2})_{r}O-alquilo C_{1-6}, -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{p}OH, piperidin-1-ilo, -(CH_{2})_{r}OH o -CONR^{10}(CH_{2})_{r}Ar^{1}.

6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 5 donde NR^{1}R^{2} conjuntamente representan morfolinilo o piperazinilo opcionalmente N-sustituidos con -(CO)_{n}-alquilo C_{1-6}, piperazinilo N-sustituido con -(CO)_{n}(CH_{2})_{r}Ar^{1}, piperidinilo sustituido con -NR^{10}(CO)_{n}(CH_{2})_{r}Ar^{1} o piperidinilo sustituido con -(CH_{2})_{t}CONR^{8}R^{9}.

7. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 donde R^{3} representa -(CH_{2})_{c}-2,4-imidazolidinadiona-3-ilo, -(CH_{2})_{c}-tioxanten-9-ona-3-ilo, -(CH_{2})_{c}Ar^{3}, -O(CH_{2})_{c}Ar^{3}, -(CH_{2})_{d}OAr^{3} o -(CH_{2})_{z}dibenzofurano.

8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 7 donde R^{3} representa -OCH_{2}Ar^{3}, -CH_{2}OAr^{3} o dibenzofurano.

9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 8, donde R^{3} representa -CH_{2}OAr^{3}.

10. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 donde R^{4} y R^{5} tienen la orientación estereoquímica mostrada en la fórmula (Ia):

16

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11. Un compuesto de fórmula (I) que es:

Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[2-(2-benzoilfenoxi)acetil]amino}-4-metil-pentanoil)amino]-3-{4-[({4-[(2-fenilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-2-({(2S)-4-metil-2-[(2-{[3-(1-piperidinilcarbonil)-2-naftil]oxi}acetil)amino]pentanoil}amino)-3-{4-
[({4-[2-fenilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-3-{4-[({4-[(2,2-diciclohexilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil-2-{[(2S)-4-metil-2-({2-[4-
(1-piperidinilcarbonil)fenoxi]acetil}amino)pentanoil]amino}propanoico;

Ácido (2S)-2-{[(2S)-4-metil-2-({2-[4-(1-piperidinilcarbonil)-fenoxi]acetil}amino)pentanoil]amino}-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-3-[4-({[4-(aminocarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]-2-{[(2S)-4-metil-2-({2-[4-(1-piperidinil-
carbonil)fenoxi]acetil}amino)pentanoil]amino}propanoico;

Ácido (2S)-3-{4-[({4-[(2-ciclohexilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}-2-[((2S)-2-{[2-(2-yodofenoxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil)amino]propanoico;

Ácido (2S)-3-{4-[({4-[(2,2-diclohexilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}-2-[((2S)-2-{[2-(2-yodofenoxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil)amino]propanoico;

Ácido (2S)-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]furan-4-ilcarbonil)amino]-4-metil-pentanoil}amino)-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]furan-4-ilcarbonil)amino]-4-metil-pentanoil}amino)-3-{4-[({4-[(2-fenilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[2-(2-yodofenoxi)acetil]amino}-4-metil-pentanoil)amino]-3-{4-[({4-[(2-fenilacetil)ami-
no]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-3-(4-{[(4-acetil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-[((2S)-2-{(2-(2-yodofenoxi) acetil]amino}-4-metilpentanoil]amino]propanoico;

Ácido (2S)-3-(4-{[(4-benzoil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-[((2S)-2-{[2-(2-yodofenoxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil]amino]propanoico;

Ácido (2S)-3-(4-{[(4-benzoil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-[((2S)-2-{[2-(2,4-diclorofenoxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil]amino}propanoico;

Ácido (2S)-3-[4-({[4-(aminocarabonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]-2-[((2S)-2-{[2-(2-yodofenoxi)acetil]ami-
no}-4-metilpentanoil)amino]propanoico;

Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-[4-({[4-(1-piperidinil-
carbonil)-1-piperazinil]carbonil}oxi)fenil]propanoico;

Ácido (2S)-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]amino}pentanoil)amino]-3-[4-({[4-(1-piperdinilcarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]propanoico;

Ácido (2S)-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]furan-4-ilcarbonil)amino]-4-metil-pentanoil}amino)-3-[4-({[4-(1-piperdinilcarbonil)-1-piperdinil]carbonil}oxi)fenil]propanoico;

Ácido (2S)-2-([(2S)-2-({2-[(1-bromo-2-naftil)oxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-[4-({[4-(1-piperidinilcarbonil)-1-piperdinil]carbonil}oxi)fenil]propanoico;

Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-(4-{[(4-fluorobencil)
amino]carbonil}-1-piperidinil)carbonil]oxi}fenil)propanoico;

Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[2-(2,4-diclorofenoxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil)amino]-3-{4-[(4-morfolinicarbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[2-(2-benzoilfenoxi)acetil]amino}-4-metil-pentanoil)amino]-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-propilfenoxi)acetil]amino}pentaoil)amino]-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[1-bromo-2-naftil)oxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[(benciloxi)carbonil]amino}-4-metilpentanoil)amino]-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-3-[4-({[4-(2-furoil)-1-piperazinil]carbonil}oxi)fenil]-2-[((2S)-2-{[2-(2-yodofenoxi)acetil]amino}-4-
metilpentanoil)amino]propanoico;

Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[2-(-ciclohexilfenoxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil)amino]-3-[4-({[4-(2-furoil)-1-pipe-
razinil]carbonil}oxi)fenil]propanoico;

Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[(1-bromo-2-naftil)oxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-[4-({[4-(2-furoil)-1-piperazinil]carbonil}oxi)fenil]propanoico;

Ácido (2S)-3-(4-{[(4-{[2-(4-clorofenil)acetil]amino}-1-piperidinil)carbonil]oxi}fenil)-2-[((2S)-2-{[2-(2-ciclohexilfenoxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil)amino]propanoico;

Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[2-(2-benzoilfenoxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil)amino]-3-(4-{[(4-{[2-(4-clorofenil)
acetil]amino}-1-piperdinil)carbonil]oxi}fenil)propanoico;

Ácido (2S)-3-(4-{[(4-{[2-(4-clorofenil)acetil]amino}-1-piperidinil)carbonil]oxi}fenil)-2-[((2S)-2-{[2-(2-yodofe-
noxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil)amino]propanoico;

Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-(4-{[(4-{[2-(4-clorofenil)acetil]amino}-1-piperidinil)carbonil]oxi}fenil)propanoico;

Ácido (2S)-3-(4-{[(4-{[2-(4-clorofenil)acetil]amino}-1-piperdinil)carbonil]oxi}fenil)-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]
furan-4-ilcarbonil)amino]-4-metilpentanoil}amino)propanoico;

Ácido (2S)-3-(4-{[(4-{[2-(4-clorofenil)acetil]amino}-1-piperidinil)carbonil]oxi}fenil)-2-({(2S)-4-metil-2-[(2-{[3-(1-piperdinilcarbonil)-2-naftil]oxi}acetil)amino]pentanoil}amino)propanoico;

Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-{4-[({4-[(2-ciclohexilacetil)amino]-1-piperdinil}carbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-{4-[({4-[(2,2-diciclohexilacetil)amino]-1-piperdinil}carbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]amino}pentanoil)amino]-3-{4-[({4-[(2-fenilacetil)ami-
no]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[2-(2-ciclohexilfenoxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil)amino]-3-{4-[({4-[(2-fenilacetil)
amino]-1-piperdininil}carbonil) oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-3-{4-[({4-[(2-ciclohexilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}-2-[((2S)-2-{[2-(2-ciclohexilfenoxi)acetil]amino}-4-metilpentanoil)amino]propanoico;

y sales y solvatos del mismo.

12. Un compuesto de fórmula (I) que es:

Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[2-(2-yodofenoxi)acetil]amino}-4-metil-pentanoil)amino]-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)
oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metil-pentanoil]amino}-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-3-(4-{[(4-acetil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}propanoico;

Ácido (2S)-2-[((2S)-2-{[2-(2-ciclohexilfenoxi)acetil]amino}-4-metil-pentanoil)amino]-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metil-pentanoil]amino}-3-{4-[({4-[(2-fenilacetil)amino]-1-piperidinil}carbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-3-(4-{[(4-benzoil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}propanoico;

Ácido (2S)-3-(4-{[(4-acetil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]furan-4-ilcarbonil)amino]-4-metilpentanoil}amino)propanoico;

Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-(terc-butil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-[4-({[4-(2-furoil)-1-pipe-
razinil]carbonil}oxi)fenil]propanoico;

Ácido (2S)-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]furan-4-ilcarbonil)amino]-4-metilpentanoil}amino)-3-[4-({[4-(2-furoil)-1-
piperazinil]carbonil}oxi)fenil]propanoico;

Ácido (2S)-3-(4-{[(4-benzoil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]ami-
no}pentanoil)amino]propanoico;

Ácido (2S)-3-[4-{[(4-benzoil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]furan-4-ilcarbonil)ami-
no]-4-metilpentanoil}amino)propanoico;

y sales y solvatos del mismo.

13. Un compuesto de fórmula (I) que es:

Ácido (2S)-3-(4-{[(4-acetil-1-piperazinil)carbonil]oxi}fenil)-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]amino}
pentanoil)amino]propanoico;

Ácido (2S)-3-[4-({[4-(aminocarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]-2-({(2S)-2-[(dibenzo[b,d]furan-4-ilcarbo-
nil)amino]-4-metilpentanoil}amino)propanoico;

Ácido (2S)-3-[4-({[4-(aminocarbonil)-1-piperdinil]carbonil}oxi)fenil]-2-{[(2S)-2-({2-[2-(terc-butil)fenoxi]acetil}
amino)-4-metilpentanoil]amino}propanoico;

Ácido (2S)-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]amino}pentanoil)amino]-3-{4-[(4-morfolinilcarbonil)oxi]fenil}propanoico;

Ácido (2S)-3-[4-({[4-(aminocarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]-2-[((2S)-2-{[2-(2-benzoilfenoxi)acetil]
amino}-4-metilpentanoil)amino]propanoico;

Ácido (2S)-2-{[(2S)-2-({2-[4-(aminocarbonil)fenoxi]acetil}amino)-4-metilpentanoil]amino}-3-[4-({[4-(amino-
carbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]propanoico;

y sales y solvatos del mismo.

14. Un compuesto de fórmula (I) que es:

Ácido (2S)-3-[4-({[4-(aminocarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]amino}pentanoil)amino]propanoico o una sal o solvato del mismo.

15. Un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 14 que es:

Sal potásica del ácido (2S)-3-[4-({[4-(aminocarbonil)-1-piperidinil]carbonil}oxi)fenil]-2-[((2S)-4-metil-2-{[2-(2-metilfenoxi)acetil]amino}pentanoil)amino]propanoico o un solvato del mismo.

16. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1a 15 o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo en mezcla con uno o más diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables.

17. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 o una sal o solvato fisiológicamente aceptable del mismo en combinación con un agonista del receptor \beta_{2} adrenérgico de larga actuación.

18. Un compuesto de fórmula (I) como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo para uso como agente farmacéutico.

19. Uso de un compuesto de fórmula (I) como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades inflamatorias.

20. Un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I) como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 que comprende

(a) hidrólisis de un éster de ácido carboxílico de fórmula (II)

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17

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en la que R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} son como se definen en las reivindicaciones 1 a 10 y R es un grupo capaz de formar un éster de ácido carboxílico; o

(b) desprotección de un compuesto de fórmula (I) que está protegido.

21. Un compuesto de fórmula (II)

18

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en la que R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} son como se definen en las reivindicaciones 1 a 10 y R es alquilo C_{1-6}.

22. Un compuesto de fórmula (VI)

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19

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en la que P_{1} representa Boc, R^{4}, R^{5} y R^{6} son como se definen en las reivindicaciones 1 a 4 y 10, y R representa alquilo C_{1-6}.

23. Un compuesto de fórmula (VII)

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20

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en la que P_{1} representa Boc, R^{1}, R^{2}, R^{4}, R^{5} y R^{6} son como se definen en las reivindicaciones 1 a 6 y 10, y R representa alquilo C_{1-6}.

24. Un compuesto de fórmula (VIII)

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21

en la que R^{1}, R^{2}, R^{4}, R^{5} y R^{6} son como se definen en las reivindicaciones 1 a 6 y 10 y HX es un ácido hidrohálico y R representa alquilo C_{1-6}.

25. Un compuesto de fórmula (XIII)

22

en la que R^{4}, R^{5} y R^{6} son como se definen en las reivindicaciones 1 a 4 y 10 y R' representa una resina de poliestireno funcionalizada con hidroxi.

26. Un compuesto de fórmula (XIV)

23

en la que R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} son como se definen en las reivindicaciones 1 a 4 y 7 a 10 y R' representa una resina de poliestireno funcionalizada con hidroxi.

27. Un compuesto de fórmula (XXI)

24

en la que R^{1}, R^{2}, R^{4}, R^{5}, R^{6} y d son como se definen en las reivindicaciones 1 a 6 y 10 y R' representa una resina de poliestireno funcionalizada con hidroxi y Hal representa halógeno.