ES2216528T3 - Derivados de benflumetol y su uso contra protozoos y trematodos parasitarios. - Google Patents

Abstract

Un compuesto de **fórmula** en la que R es alquilo con 1 a 8 átomos de carbono, que está substituido o no substituido con uno o más substituyentes seleccionados entre el grupo compuesto por amino, N- alquilamino inferior, N, N-dialquilamino inferior, hidroxi, hidroxi-alcoxi inferior, hidroxi-alcoxi inferior- alcoxi inferior, carboxi, amidino y guanidino, con la condición de que dichos substituyentes no estén unidos en el átomo de carbono 1 que une R al nitrógeno si esto da lugar a compuestos inestables, o R es alquenilo con hasta 8 átomos de carbono, donde el átomo de carbono que se une al nitrógeno de la fórmula no puede formar un doble enlace, que está sin substituir o substituido con uno o más substituyentes seleccionados entre el grupo compuesto por amino, N-alquilamino inferior, N, N-dialquilamino inferior, hidroxi, carboxi, amidino y guanidino, con la condición de que dichos substituyentes no se unan al átomo de carbono 1 que une R al nitrógeno si esto da lugar a compuestos inestablesy con la condición de que los substituyentes hidroxi, amino, alquilamino inferior y guanidino no se unan a un átomo de carbono que está unido al radical mediante un doble enlace, y X es arilo con 6 a 14 átomos de carbono sin substituir o substituido con uno o más substituyentes seleccionados entre el grupo compuesto por halógeno, hidroxi, alca noiloxi inferior, fenilalcoxi inferior, alcoxi inferior, amino, amino substituido con alcanoílo inferior o fenilalquilo inferior, amino mono- o disubstituido con alquilo inferior, alquilo inferior, fenilalquilo inferior, halógeno alquilo inferior, ciano-alquilo inferior, carbamoilalquilo inferior, carboxialquilo inferior, alcoxicarbonilo inferior-alquilo inferior, fenil-alcoxicarbonilo inferior-alquilo inferior, fenilo, naftilo, carboxi, alcoxicarbonilo inferior, fenil- alcoxicarbonilo inferior, fenoxicarbonilo, amidino, ciano, nitro y sulfo, o una sal del mismo, representando el prefijo "inferior" un radical de hasta 7 átomos de carbono.

Description

Derivados de benflumetol y su uso contra protozoos y trematodos parasitarios.

Sumario de la invención

La invención se refiere a 2-amino-1-[2,7-dicloro-9-(aril)-9H-fluoren-4-il]-etanoles N-substituidos, a métodos para preparar estos compuestos, a nuevos productos intermedios, a preparaciones farmacéuticas y a combinaciones fijas o variables que comprenden estos compuestos, al uso de estos compuestos (en solitario o en combinación fija o libre) y/o combinaciones para el tratamiento terapéutico o profiláctico de enfermedades o para la preparación de preparaciones farmacéuticas y a métodos para el tratamiento terapéutico o profiláctico de animales de sangre caliente que comprende la administración de estos compuestos o combinaciones.

Antecedentes de la invención

Las enfermedades parasitarias, en particular las provocadas por protozoos (tales como la malaria, patógenos: plasmodios) o por trematodos (tales como esquistosomiasis, por ejemplo, esquistosomiasis urinaria, provocada por esquistosomas, tales como Schistosoma haematobium), constituyen una proporción substancial de las enfermedades, especialmente en los países en vías de desarrollo. La malaria, transmitida por el mosquito "Anopheles" y provocada por protozoos del género Plasmodium, es una enfermedad que aparece en aproximadamente 100 millones de personas cada año, de las cuales aproximadamente un millón muere. Se traza una distinción entre Malaria-tropica (provocada por Plasmodium falciparum), Malaria tertiana (provocada por Plasmodium vivax o Plasmodium ovale) y Malaria quartana (provocada por Plasmodium malariae). La Malaria tropica es la forma más grave de la enfermedad.

El benflumetol (también lumefantrina), un compuesto de fórmula

1

es un compuesto que, en combinación con artemeter (véase el documento EP 0 500 823) - un derivado de sesquiterpeno lactona de la substancia de origen natural artemisina con el nombre [3R-(3\alpha, 5\alpha\beta, 6\beta, 8\alpha\beta, 9\alpha, 10\alpha, 12\beta,-12aR)]-decahidro-10-metoxi-3,6,9-trimetil-3,12-epoxi-12H-pirano[4, 3-j]-1,2-benzodioxepina, está en fase de revisión para la aprobación mundial como tratamiento para la malaria.

Debido a fenómenos tales como el desarrollo de resistencia, sigue existiendo una necesidad urgente de encontrar nuevos compuestos que muestren una eficacia particularmente buena contra la malaria y una toxicidad mínima.

Las diferentes vidas medias de las substancias que son activas contra la malaria significan también que podrían ponerse a disposición de la población compuestos adicionales que muestran un comportamiento farmacocinético distinto de las substancias contra la malaria ya establecidas. La cloroquina, por ejemplo, tiene una vida media muy larga, el artemeter tiene una vida media relativamente corta (2 horas en plasma), y el benflumetol, por ejemplo, tiene una vida media en plasma de 4-6 días en los pacientes.

La solubilidad del benflumetol tampoco es muy buena, y cuando se toma por ejemplo con alimentos que tienen un alto contenido graso, la absorción puede ser hasta 16 veces mayor que cuando se toma en ausencia de dichos alimentos grasos, por lo que la dosificación no se puede controlar óptimamente.

Sorprendentemente, ahora se ha encontrado una clase de compuestos que tienen numerosas propiedades beneficiosas, que satisfacen una o más de las necesidades anteriores en particular, y que facilitan, por ejemplo, el tratamiento de casos graves de malaria, o la profilaxis correspondiente, o en el sentido más amplio de la esquistosomiasis, la prevención o tratamiento de la malaria potencialmente multirresistente, y formulaciones farmacéuticas, y de esta manera muestran unas características farmacocinéticas mejoradas, pero en particular muestran una eficacia especialmente buena contra plasmodios.

Descripción detallada de la invención

La invención se refiere a un compuesto de fórmula I,

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en la que R es un alquilo substituido o no substituido con uno o más substituyentes polares o un alquenilo substituido o no substituido con uno o más substituyentes polares y X es arilo, o una sal del mismo.

Los términos generales usados en lo anterior y en lo sucesivo tienen, en el contexto de esta descripción, los siguientes significados, a menos que se indique otra cosa:

El prefijo "inferior" se refiere a un radical que tiene hasta e incluyendo un máximo de 7, especialmente hasta e incluyendo un máximo de 4 átomos de carbono, siendo los radicales en cuestión lineales o ramificados, con ramificación simple o múltiple.

Cuando se usa la forma en plural para los compuestos o las sales, esto se considera que significa también un solo compuesto o sal.

Cualquier átomo de carbono asimétrico puede estar presente en la configuración (R)-, (S)- o (R,S), preferiblemente en la configuración (R)- o (S)-. Puede haber presentes substituyentes en un doble enlace o en un anillo en la forma cis- (= Z-) o trans (= E-). De esta forma, los compuestos pueden estar presentes como mezclas de isómeros o como isómeros puros, preferiblemente como enantiómeros-diastereómeros puros. En cada caso, son especialmente preferidas la forma E o Z de un compuesto de fórmula I, que con respecto al C-OH de la fórmula I están presentes en forma de una mezcla enantiomérica (en particular un racemato). Las formas E y Z enantioméricamente puras también son importantes.

El alquilo puede ser un substituyente ramificado de forma simple o múltiple o de cadena lineal; el alquilo tiene de 1 a 8 átomos de carbono, y en particular es alquilo con 1 a 5 átomos de carbono, por ejemplo, n-pentilo, n-butilo, sec-butilo, terc-butilo, n-propilo, isopropilo, etilo o metilo u octilo, por ejemplo, n-octilo. Son especialmente preferidos metilo, n-pentilo, n-butilo y sec-butilo.

El alquilo con hasta 8 átomos de carbono que está substituido con un radical polar, preferiblemente n-pentilo, n-butilo o sec-butilo, está substituido con uno o más, especialmente hasta tres substituyentes polares seleccionados entre el grupo compuesto por amino, N-alquilamino inferior, N,N-dialquilamino inferior, hidroxi, hidroxi-alcoxi inferior, tal como 2-hidroxietoxi, hidroxi-alcoxi inferior-alcoxi inferior, tal como 2-(2-hidroxietoxi)etoxi, carboxi, amidino y guanidino, especialmente amino, hidroxi y guanidino. Si están presentes de otra forma compuestos inestables, preferiblemente dichos substituyentes no están unidos al átomo de carbono 1 (que une R con el nitrógeno de la

\hbox{fórmula 1).}

Alquenilo es alquenilo con hasta 8 átomos de carbono y es, en particular, alquenilo inferior con 3 a 7, especialmente 3 o 4 átomos de carbono, donde el átomo de carbono unido al nitrógeno de la fórmula I no puede formar un doble enlace (doble enlace sólo en la posición 2 o superior, porque de otra manera el compuesto sería inestable).

El alquenilo que está substituido con un radical polar y tiene hasta 8 átomos de carbono, en particular alquenilo inferior con 3 a 7 átomos de carbono, está substituido especialmente con uno o más, en particular hasta tres substituyentes polares seleccionados entre el grupo compuesto por amino, N-alquilamino inferior, N,N-dialquilamino inferior, hidroxi, carboxi, amidino y guanidino, especialmente amino, hidroxi y guanidino. En el caso de hidroxi, amino, alquilamino inferior y guanidino, este substituyente puede no estar unido a un átomo de carbono que está unido al radical de la molécula mediante un doble enlace. Si de otra forma están presentes compuestos inestables, dichos substituyentes preferiblemente no están unidos al átomo de carbono 1 (el átomo que une R al nitrógeno de la fórmula 1) (este suele ser el caso, especialmente con hidroxi, amino y guanidino).

Halógeno es, sobre todo, flúor, cloro, bromo o yodo, especialmente flúor, cloro o bromo.

Arilo es arilo con 6 a 14 átomos de carbono, especialmente fluorenilo, naftilo o en particular fenilo, estando dichos radicales sin substituir o substituidos con uno o más substituyentes seleccionados del grupo compuesto por halógeno, especialmente cloro; hidroxi; hidroxi substituido, en particular alcanoiloxi inferior, fenilalcoxi inferior o alcoxi inferior; amino, amino substituido con alcanoílo inferior, fenilalquilo inferior o alquilamino inferior monosubstituido o disubstituido; alquilo inferior; fenilalquilo inferior, halógenoalquilo inferior, cianoalquilo inferior, carbamoilalquilo inferior, carboxialquilo inferior, alcoxi inferior-carbonilalquilo inferior o fenil-alcoxicarbonil inferior-alquilo inferior; naftilo; carboxi; alcoxicarbonilo inferior, fenil-alcoxicarbonilo inferior o fenoxicarbonilo, amidino, ciano, nitro y sulfo. Arilo es, en particular, 4-clorofenilo. Las sales son, principalmente, las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula I.

Dichas sales se forman, por ejemplo, como sales de adición de ácidos, preferiblemente con ácidos orgánicos o inorgánicos, a partir de compuestos de fórmula I con un átomo de nitrógeno básico. Los ácidos inorgánicos adecuados son, por ejemplo, ácidos de halógeno, tales como ácido clorhídrico; ácido sulfúrico; o ácido fosfórico. Los ácidos orgánicos adecuados son, por ejemplo, ácido carboxílico, fosfónico, sulfónico o sulfámico, por ejemplo, ácido acético, ácido glicólico, ácido láctico, ácido fumárico, ácido succínico, ácido adípico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido glucárico, ácido galactárico, de aminoácidos, tales como ácido glutámico, ácido aspártico, ácido maleico, ácido hidroximaleico, ácido benzoico, ácido fenilacético, ácido metano- o etanosulfónico, ácido 2-hidroxietanosulfónico, ácido etano-1, 2-disulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido 2-naftalenosulfónico, ácido 1, 5-naftalenodisulfónico, ácido 2-, 3- o 4-metilbencenosulfónico, ácido N-ciclohexilsulfámico, ácido N-metil, N-etil o N-propilsulfámico u otros ácidos protónicos orgánicos, tales como ácido ascórbico.

En presencia de radicales cargados negativamente, tales como carboxi, también se pueden formar sales con bases, por ejemplo, sales metálicas o de amonio, tales como sales de metales alcalinos o de metales alcalinotérreos, por ejemplo, sales de sodio, potasio, magnesio o calcio, o sales de amonio con amoniaco o aminas orgánicas adecuadas, tales como monoaminas terciarias, por ejemplo, trietilamina o tri(2-hidroxietil)amina, o bases heterocíclicas, por ejemplo, N-etil-piperidina o N,N'-dimetilpiperazina.

En presencia de un grupo básico y un grupo ácido en la misma molécula, un compuesto de fórmula 1 también puede formar sales internas.

Con fines de aislamiento o purificación, también es posible usar sales farmacéuticamente inaceptables, por ejemplo picratos o percloratos. Sólo las sales farmacéuticamente aceptables o los compuestos libres (si surge la ocasión, en forma de preparaciones farmacéuticas) alcanzan un uso terapéutico y, por lo tanto, son éstos los preferidos.

En vista de la cercana relación entre los compuestos en forma libre y en forma de sus sales, incluyendo las sales que se pueden usar como intermedios, por ejemplo, en la purificación o identificación de los nuevos compuestos, debe entenderse que cualquier referencia en lo anterior y en lo sucesivo a los compuestos libres se refiere también a las sales correspondientes, cuando sea apropiado y conveniente.

Los compuestos de fórmula I muestran propiedades farmacológicas beneficiosas. En particular, muestran un alto grado de eficacia contra protozoos, tales como plasmodios, y también contra trematodos, tales como esquistosomas.

La eficacia contra plasmodios, en particular contra Plasmodium falciparum, se puede determinar de acuerdo con métodos conocidos per se, por ejemplo, de acuerdo con el método descrito en el ejemplo 6.

Se muestran las constantes de inhibición del siguiente orden de magnitud para los compuestos de fórmula I:

-

EC_{50} (concentración que muestra la mitad de la eficacia inhibidora máxima frente a los controles que no han recibido la substancia activa): de 1 a 200, preferiblemente de 1 a 20 nmol/l.

-

EC_{99} (concentración que muestra la mitad de la eficacia inhibidora máxima frente a controles que no han recibido la substancia activa): de 10 a 1000, preferiblemente de 10 a 110 nmol/l.

Este modelo in vitro de Plasmodium falciparum tiene un valor muy predictivo para la eficacia clínica en malaria falciparum.

La invención también se refiere a combinaciones de un compuesto de fórmula I, o una sal del mismo, con una o más substancias farmacéuticas activas distintas, en particular con uno o más compuestos distintos que muestran actividad antiprotozoaria, por ejemplo, con quinina, una quinolina metanol (tal como mefloquina = ®Lariam), un fenantreno metanol, tal como halofantrina, una 4-aminoquinolina, tal como cloroquina o amodiaquina, una 8-aminoquinolina, tal como pamaquina o primaquina, una acridina, tal como quinacrina, una pirimidina, tal como ácido dihidropteroico o ácido dihidrofólico, un derivado de pirimetamina, tal como pirimetamina o trimetoprim, una sulfonamida, tal como sulfadoxina (= Fanasil), una biguanida, tal como cloroguanida, una dihidrotriazina, tal como cicloguanilo, una sulfona, tal como dapsona (DDS), benflumetol o un análogo del mismo o en particular artemisina o un derivado de artemisina, tal como especialmente artemeter (=[3R-(3a, 5ab, 6b, 8ab, 9a, 10a, 12b,-12aR)]-decahidro-10-metoxi-3,6,9-trimetil-3,12-epoxi-12H-pirano[4,3-j]-1, 2-benzodioxepina); o en cada caso una sal de los mismos, si está presente al menos un grupo formador de sal.

La invención se refiere también a un producto que comprende (conjunto de componentes) (a) una substancia activa de fórmula I o una sal de la misma, y (b) como componentes activos adicionales, una o más substancias activas distintas (o en cada caso, una sal de las mismas, siempre que esté presente al menos un grupo formador de sal), en particular uno o más compuestos distintos con actividad antiprotozoaria, por ejemplo quinina, una quinolina metanol (tal como mefloquina = ®Lariam), un fenantreno metanol, tal como halofantrina, una 4-aminoquinolina, tal como cloroquina o amodiaquina, una 8-aminoquinolina, tal como pamaquina o primaquina, una acridina, tal como quinacrina, una pirimidina, tal como ácido dihidropteroico o ácido dihidrofólico, un derivado de pirimetamina, tal como pirimetamina o trimetoprim, una sulfonamida, tal como sulfadoxina (= Fanasil), una biguanida, tal como cloroguanida, una dihidrotriazina, tal como cicloguanilo, una sulfona, tal como dapsona (DDS), benflumetol o un análogo del mismo o en particular artemisina o un derivado de artemisina, tal como especialmente artemeter (=[3R-(3a, 5ab, 6b, 8ab, 9a, 10a, 12b, -12aR)]-decahidro-10-metoxi-3,6,9-trimetil-3,12-epoxi-12H-pirano[4,3-j]-1, 2-benzodioxepina); o en cada caso una sal de los mismos, siempre que esté presente al menos un grupo formador de sal, en presencia o ausencia de, en cada caso, uno o más materiales de vehículo farmacéuticamente aceptables como un producto de combinación para administración simultánea o en diferentes momentos a un animal de sangre caliente, en particular a un ser humano, en particular para la administración en un régimen escalonado en el tiempo de tal manera que la eficacia terapéutica contra estas enfermedades se potencie mutuamente por los componentes administrados como (a) y (b), en comparación con la eficacia de los componentes individuales. Las formulaciones de las substancias activas individuales o de combinaciones fijas corresponden a las indicadas bajo el título "Formulaciones farmacéuticas".

Con los grupos de compuestos preferidos de fórmula I mencionados en lo sucesivo, se pueden usar razonablemente definiciones de los substituyentes de las definiciones generales mencionadas anteriormente, por ejemplo, para substituir definiciones más generales por definiciones más específicas o especialmente por definiciones caracterizadas como preferidas; en cada caso, se prefieren las definiciones descritas anteriormente como preferidas o ejemplares.

Se prefiere un compuesto de fórmula I en la que R es alquilo con 1 a 8 átomos de carbono no substituido o mono-, di- o trisubstituido, seleccionándose los substituyentes entre amino, hidroxi y guanidino y no estando unidos en la posición 1 del radical alquilo, y X es halofenilo, en particular 4-clorofenilo o una sal del mismo.

Es más preferido un compuesto de fórmula I en la que R es alquilo con 1 a 8 átomos de carbono, en particular metilo, n-butilo, sec-butilo, n-pentilo o n-octilo y X es 4-clorofenilo, o una sal del mismo.

Se prefiere particularmente un compuesto de fórmula I en la que R es pentilo o butilo, en particular n-butilo, sec-butilo o n-butilo, y X es 4-clorofenilo, o una sal del mismo.

Es más preferido un compuesto de fórmula I en la que R es n-butilo y X es 4-clorofenilo, o una sal del mismo.

La invención se refiere especialmente a los compuestos y métodos descritos en los ejemplos, y a composiciones farmacéuticas y a métodos para su preparación.

La invención se refiere muy especialmente a un compuesto de fórmula I, en particular a un compuesto de fórmula I definido anteriormente como preferido, en forma esencialmente pura.

Procesos de preparación

Los compuestos de fórmula I, o las sales de los mismos, se pueden preparar de acuerdo con métodos que son conocidos per se, pero que son nuevos al menos en virtud de la novedad de los compuestos de fórmula I, especialmente mediante

a) condensar un compuesto de fórmula II

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en la que R es según se ha definido para un compuesto de fórmula I, con un aldehído de fórmula III,

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en la que X es según se ha definido para los compuestos de fórmula I, o

b) añadir a un oxirano de fórmula IV

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en la que X es como se ha definido para los compuestos de fórmula I, una amina de fórmula V,

R-NH_{2}

en la que R es como se ha definido para un compuesto de fórmula I, donde cualquier grupo funcional libre está presente en uno de los eductos de fórmula II en el método a) o en uno de los eductos de fórmula IV y/o V en el método b), y que se supone que no toman parte en la reacción, están presentes en forma protegida, si fuera necesario, y retirar cualquier grupo protector presente;

y, si se desea, hacer reaccionar cualquier compuesto libre de fórmula I resultante de los procedimientos descritos en a) o b) para formar su sal o cualquier sal resultante de un compuesto de fórmula I para formar un compuesto libre de fórmula I u otra sal de un compuesto de fórmula I, o separar en sus isómeros un compuesto de fórmula I que está presente en forma de mezcla isomérica.

Descripción detallada de las etapas preferidas del proceso

Método a)

La reacción tiene lugar preferiblemente en presencia de una base, por ejemplo un hidróxido metálico básico, tal como un hidróxido de metal alcalino, preferiblemente hidróxido sódico, especialmente a una temperatura entre 0ºC y la temperatura de reflujo de la mezcla de reacción, especialmente de aproximadamente 20 a 40ºC, en un disolvente adecuado, tal como un alcohol anhidro, por ejemplo etanol.

Método b)

La reacción tiene lugar, preferiblemente, en un disolvente adecuado, por ejemplo un alcohol, tal como etanol o preferiblemente 2-propanol, especialmente a una temperatura elevada, por ejemplo entre 25ºC y la temperatura de reflujo de la mezcla de reacción, especialmente a la temperatura de reflujo.

Grupos protectores

Si uno o más grupos funcionales adicionales, por ejemplo, carboxi, hidroxi, amino o mercapto, tienen que estar presentes en un compuesto de fórmula II o en un compuesto de fórmula IV y/o V en forma protegida, porque se supone que no forman parte de la reacción, se añaden uno o más de los grupos protectores que se utilizan habitualmente en síntesis. Los grupos protectores pueden estar presentes ya en los precursores y podrían proteger a los grupos funcionales en cuestión contra reacciones secundarias indeseadas, tales como acilaciones, eterificaciones, oxidaciones, solvólisis y reacciones similares. Estos grupos protectores pueden estar presentes ya en la etapa precursora y se pretende que protejan los grupos funcionales relacionados contra reacciones secundarias no deseadas tales como acilación, eterificación, esterificación, oxidación, solvólisis etc. Una característica de los grupos protectores es que ellos mismos se pueden retirar fácilmente, es decir sin reacciones secundarias indeseadas, típicamente mediante solvólisis, reducción, fotolisis o también mediante actividad enzimática, por ejemplo en condiciones análogas a las condiciones fisiológicas y que no están presentes en los productos finales. Un especialista en la técnica puede establecer fácilmente qué grupos protectores son adecuados con las reacciones mencionadas anteriormente y en lo sucesivo.

La protección de los grupos funcionales mediante dichos grupos protectores, los propios grupos protectores y sus reacciones de escisión se describen, por ejemplo, en trabajos de referencia convencionales, tales como J. F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, Londres y Nueva York 1973, en T. W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", Wiley, Nueva York 1981, en "The Peptides"; Volumen 3 (editores: E. Gross y J. Meienhofer), Academic Press, Londres y Nueva York 1981, en "Methoden der organischen Chemie" (Methods of organic chemistry), Houben Weyl, 4ª edición, volumen 15/l, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, en H.-D. Jakubke y H. Jescheit, "Aminosäuren, Peptide, Proteine" (Amino acids, peptides, proteins), Verlag Chemie, Weinheim, deerfield Beach, y Basel 1982, y en Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlkenhydrate: Monosaccharide und Derivate" (Chemistry of carbohydrates: monosaccharides and derivates), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974.

Los grupos protectores que no son componentes del producto final deseado de fórmula I, típicamente los grupos protectores carboxi, amino y/o hidroxi, se retiran de una manera conocida per se, por ejemplo mediante solvólisis, especialmente hidrólisis, alcoholisis o acidolisis, o por reducción, especialmente mediante hidrogenolisis u otros métodos de reducción así como mediante fotolisis, cuando sean aplicables en etapas graduales o simultáneamente; también se pueden usar métodos enzimáticos. La retirada de los grupos protectores se describe por ejemplo en los trabajos de referencia mencionados anteriormente en la sección de "Grupos protectores".

Medidas adicionales del proceso

Las mezclas estereoisoméricas, por ejemplo, las mezclas de diastereómeros, se pueden separar en sus isómeros correspondientes de una manera conocida per se por métodos de separación adecuados. Las mezclas diastereoméricas, por ejemplo, se pueden separar en sus diastereómeros individuales por cristalización fraccionada, cromatografía y/o distribución de disolvente. Esta separación puede tener lugar a nivel de uno de los compuestos de partida o en el propio compuesto de fórmula I. Los enantiómeros se pueden separar mediante la formación de sales diastereoméricas, por ejemplo mediante la formación de una sal con un ácido quiral enantioméricamente puro, o mediante cromatografía, por ejemplo mediante HPLC, usando sustratos cromatográficos con ligandos quirales.

Las sales de los compuestos de fórmula I con un grupo formador de sal se pueden preparar de una manera conocida per se. De esta manera, las sales de adición de ácidos de los compuestos de fórmula I se pueden obtener, por ejemplo, por tratamiento con un ácido o con un reactivo intercambiador de aniones adecuado.

Las sales se pueden hacer reaccionar para formar compuestos libres de una manera habitual, por ejemplo, por tratamiento con un agente básico adecuado, por ejemplo con carbonatos de metal alcalino, hidrógeno carbonatos o hidróxidos, por ejemplo carbonato potásico o hidróxido sódico, o se pueden convertir en otras sales, por ejemplo mediante cristalización en una solución en presencia de un ácido con un anión distinto que el de la sal de adición de ácidos original en un disolvente adecuado.

Condiciones generales del proceso

Todas las etapas del proceso descritas en este documento se pueden realizar en condiciones de reacción conocidas per se, preferiblemente en las mencionadas específicamente, en ausencia o habitualmente en presencia de disolventes o diluyentes, preferiblemente tales como los que son inertes para los reactivos usados y son capaces de disolverlos, en ausencia o en presencia de catalizadores, agentes de condensación o agentes de neutralización, dependiendo del tipo de reacción y/o reactivos a temperatura reducida, normal o elevada, por ejemplo en el intervalo de -100ºC a aproximadamente 190ºC, preferiblemente de aproximadamente -80ºC a aproximadamente 150ºC, por ejemplo a una temperatura de -80ºC a -60ºC, a temperatura ambiente, a una temperatura de -20ºC a 40ºC o al punto de ebullición del disolvente utilizado, a presión atmosférica o en un recipiente cerrado, si fuera necesario a presión y/o en una atmósfera inerte, por ejemplo de argón o nitrógeno.

Se pueden usar sales de todos los compuestos de partida e intermedios si éstos contienen grupos formadores de sal. También pueden estar presentes sales durante la reacción de dichos compuestos, siempre que la reacción no se vea alterada por las mismas.

En todas las etapas de reacción, las mezclas isoméricas que aparecen se pueden separar en sus isómeros individuales, por ejemplo diastereómeros o enantiómeros, o en cualquier mezcla de isómeros, por ejemplo racematos o mezclas diastereoméricas, típicamente como se describe en "Etapas adicionales del proceso".

Los disolventes entre los que se pueden seleccionar los que son adecuados para la reacción en cuestión incluyen, por ejemplo, agua, ésteres, tales como alquilo inferior-alcanoatos inferiores, por ejemplo acetato de dietilo, éteres cíclicos, por ejemplo tetrahidrofurano, alcoholes, tales como metanol, etanol o 1- o 2-propanol, nitrilos, tales como acetonitrilo, amidas ácidas, tales como dimetilformamida, bases, tales como bases de nitrógeno heterocíclicas, por ejemplo piridina, o mezclas de estos disolventes, por ejemplo soluciones acuosas, a menos que se indique otra cosa en la descripción del método. Tales mezclas de disolventes se pueden usar también en el procesamiento, por ejemplo por medio de cromatografía o distribución.

La invención se refiere también a las formas del proceso en las que se parte de un compuesto que se puede obtener en cualquier etapa como intermedio y se llevan a cabo las etapas que faltan, o se interrumpe el proceso en cualquier etapa, o se forma un material de partida en las condiciones de reacción, o se usa dicho material de partida en forma de un derivado de reactivo o sal, o se produce un compuesto que se puede obtener mediante el proceso de acuerdo con la invención y se procesa dicho compuesto in situ. En la realización preferida, se parte de los materiales de partida que llevan a los compuestos descritos anteriormente como preferidos, particularmente como especialmente preferidos, principalmente preferidos y/o preferidos sobre todos los demás.

Los compuestos de fórmula I, incluyendo sus sales, también se pueden obtener en forma de hidratos, o sus cristales pueden incluir por ejemplo el disolvente usado para la cristalización (presente como solvatos).

En la realización preferida, se prepara un compuesto de fórmula I de acuerdo con los procesos y las etapas de proceso definidas en los ejemplos.

Composiciones farmacéuticas y su preparación, uso de los compuestos de fórmula I

La presente invención se refiere igualmente a composiciones farmacéuticas que comprenden como sustancia activa un compuesto de fórmula I y que se pueden usar en particular para el tratamiento y profilaxis de las enfermedades definidas en los antecedentes de la invención, tales como una infección protozoaria o una infección por trematodos, principalmente malaria, especialmente Malaria tropica. Se prefieren especialmente las composiciones para administración entérica, tal como administración nasal, bucal, rectal o, especialmente, administración oral y para administración parenteral, tal como administración intravenosa, intramuscular o subcutánea, a animales de sangre caliente, especialmente seres humanos. Las composiciones comprenden el ingrediente activo solo o, preferiblemente, junto con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables. La dosificación del ingrediente activo depende de la enfermedad a tratar y de la especie, su edad, peso y estado individual, los datos farmacocinéticos individuales y el modo de administración.

La invención se refiere también a composiciones farmacéuticas para usar en un método para el tratamiento profiláctico o especialmente terapéutico del cuerpo humano o animal, a un proceso para su preparación (especialmente en forma de composiciones para el tratamiento de la malaria) y a un método de tratamiento profiláctico o terapéutico de las enfermedades indicadas anteriormente (especialmente en el párrafo anterior), principalmente malaria, especialmente Malaria tropica. La invención se refiere también a procesos y al uso de compuestos de fórmula I para preparar preparaciones farmacéuticas que comprenden como componente activo (ingrediente activo) compuestos de fórmula I.

Se da preferencia a una composición farmacéutica que es adecuada para la administración a un animal de sangre caliente, especialmente un ser humano, que padece una enfermedad atribuible a una infección por protozoos o por trematodos, especialmente malaria, tal como Malaria tropica, que comprende un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo si están presentes grupos formadores de sal, en una cantidad eficaz para el tratamiento profiláctico o terapéutico de esta enfermedad, junto con al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Las composiciones farmacéuticas comprenden de aproximadamente un 1% a aproximadamente un 95% de ingrediente activo, comprendiendo las formas de administración de una sola dosis en la realización preferida de aproximadamente un 10% a aproximadamente un 90% del ingrediente activo y comprendiendo las formas que no son del tipo de una sola dosis en la realización preferida de aproximadamente un 5% a aproximadamente un 20% del ingrediente activo. Las formas de dosificación unitarias son, por ejemplo, comprimidos recubiertos y no recubiertos, ampollas, viales, supositorios o cápsulas. Otras formas de dosificación adicionales son, por ejemplo, pomadas, cremas, pastas, espumas, tinturas, barras de labios, gotas, pulverizaciones, dispersiones, etc. Son ejemplos cápsulas que contienen de aproximadamente 0,05 g a aproximadamente 1,0 g del ingrediente activo.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se preparan de una manera conocida per se, por ejemplo, por medio de procesos convencionales de mezcla, granulación, recubrimiento, disolución o liofilización.

Se da preferencia al uso de soluciones del ingrediente activo, y también de suspensiones o dispersiones, especialmente soluciones, dispersiones o suspensiones acuosas isotónicas que, por ejemplo en el caso de composiciones liofilizadas que comprenden el ingrediente activo solo o junto con un vehículo, por ejemplo manitol, se pueden preparar antes de su uso. Las composiciones farmacéuticas se pueden esterilizar y/o pueden comprender excipientes, por ejemplo conservantes, estabilizantes, agentes humectantes y/o emulsionantes, solubilizantes, sales para regular la presión osmótica y/o tampones, y se preparan de una manera conocida per se, por ejemplo por medio de procesos convencionales de disolución y liofilización. Dichas soluciones o dispersiones pueden comprender agentes que aumentan la viscosidad, típicamente carboximetilcelulosa sódica, carboximetilcelulosa, dextrano, polivinilpirrolidona, o gelatinas, o también solubilizantes, por ejemplo ®Tween 80 [monooleato de polioxietilen(20)sorbitano; marca comercial de ICI Americas, Inc, USA].

Las suspensiones en aceite comprenden como componente oleoso aceites vegetales, sintéticos o semisintéticos habituales para fines de inyección. Son especialmente adecuados para tales fines ésteres de ácidos grasos líquidos que comprenden como componente ácido un ácido graso de cadena larga que tiene de 8 a 22, especialmente de 12 a 22 átomos de carbono, por ejemplo ácido láurico, ácido tridecílico, ácido mirístico, ácido pentadecílico, ácido palmítico, ácido margárico, ácido esteárico, ácido araquídico, ácido behénico, o los ácidos insaturados correspondientes, por ejemplo ácido oleico, ácido elaídico, ácido erúcico, ácido brasídico o ácido linoleico, si se desea con la adición de antioxidantes, por ejemplo vitamina E, \beta-caroteno o 3,5-di-terc-butil-4-hidroxitolueno. El componente alcohol de estos ésteres de ácido graso tiene un máximo de 6 átomos de carbono y es mono- o polihidroxílico, por ejemplo un alcohol mono-, di- o trihidroxílico, por ejemplo metanol, etanol, propanol, butanol o pentanol o los isómeros de los mismos, pero especialmente glicol y glicerol. Por lo tanto, los siguientes son ejemplos de ésteres de ácidos grasos adecuados: oleato de etilo, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, trioleato de polioxietilenglicerol, glicéridos poliglicolizados insaturados preparados por alcoholisis de aceite de semilla de albaricoque y constituidos a partir de glicéridos y éster de polietilenglicol; glicéridos poliglicolizados saturados preparados por alcoholisis de TCM y constituidos a partir de glicéridos y éster de polietilenglicol y/o triglicéridos de ácidos grasos saturados con cadenas de una longitud de 8 a 12 átomos de carbono, pero especialmente aceites vegetales tales como aceite de semilla de algodón, aceite de almendra, aceite de oliva, aceite de ricino, aceite de sésamo, aceite de soja y más especialmente aceite de cacahuete.

La fabricación de preparaciones inyectables se suele llevar a cabo en condiciones estériles, como el llenado, por ejemplo, de ampollas o viales, y el sellado de los recipientes.

Las composiciones farmacéuticas para administración oral se pueden obtener, por ejemplo, combinando el ingrediente activo con uno o más vehículos sólidos, si fuera necesario granulando la mezcla resultante, y procesando la mezcla o los gránulos, si se desea, para formar comprimidos o núcleos de comprimidos, si fuera necesario incluyendo excipientes adicionales.

Los vehículos adecuados son especialmente cargas tales como azúcares, por ejemplo lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol, preparaciones de celulosa, en particular de celulosa microcristalina, y/o fosfatos de calcio, por ejemplo fosfato tricálcico o hidrógeno fosfato de calcio, y también aglutinantes tales como almidones, por ejemplo almidón de maíz, de trigo, de arroz o de patata, metilcelulosa, hidroxipropil metilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica y/o polivinilpirrolidona, y/o, si se desea, disgregantes, tales como los almidones mencionados anteriormente, también carboximetil almidón, polivinilpirrolidona reticulada, ácido algínico o una sal del mismo, tal como alginato sódico. Otros excipientes adicionales son especialmente acondicionadores de la fluidez y lubricantes, por ejemplo ácido silícico, talco, ácido esteárico o sales del mismo tales como estearato magnésico o cálcico y/o polietilenglicol, o derivados de los mismos.

Los núcleos de los comprimidos pueden estar provistos con recubrimientos adecuados, entéricos si fuera necesario, usando, entre otras cosas, soluciones concentradas de azúcar que pueden comprender goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, polietilenglicol y/o dióxido de titanio, o soluciones de recubrimiento en disolventes orgánicos adecuados o mezclas de disolventes, o para la preparación de los recubrimientos entéricos, soluciones de preparaciones de celulosa apropiadas, tales como ftalato de acetilcelulosa o ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa. Se pueden añadir colorantes o pigmentos a los comprimidos o a los recubrimientos de los comprimidos, por ejemplo con fines de identificación o para indicar diferentes dosis de ingrediente activo.

Las composiciones farmacéuticas que se pueden administrar por vía oral incluyen también cápsulas duras que comprenden gelatina y también cápsulas blandas selladas que comprenden gelatina y un plastificante tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas duras pueden contener el ingrediente activo en forma de gránulos, por ejemplo mezclado con cargas, tales como almidón de maíz, aglutinantes y/o emolientes, tales como talco o estearato de magnesio, y si fuera necesario estabilizantes. En las cápsulas blandas, el ingrediente activo está preferiblemente disuelto o suspendido en excipientes líquidos adecuados tales como ácidos grasos, aceite de parafina o polietilenglicoles líquidos o ésteres de ácidos grasos de etilen o propilenglicol, a los que se pueden añadir estabilizantes y detergentes, por ejemplo del tipo éster de ácido graso de polioxietilensorbitano.

Otras formas de dosificación oral son, por ejemplo, jarabes preparados de la manera habitual que comprenden el ingrediente activo, por ejemplo, en forma suspendida y en una concentración de aproximadamente un 5% a un 20%, preferiblemente de aproximadamente un 10% o en una concentración similar que proporcione una dosis única adecuada, por ejemplo cuando se administra en medidas de 5 o 10 ml. También son adecuados, por ejemplo, los concentrados en polvo o líquidos para la preparación de batidos, por ejemplo en leche. Tales concentrados se pueden envasar también en cantidades de una sola dosis.

Son composiciones farmacéuticas adecuadas para administración por vía rectal, por ejemplo, supositorios que comprenden una combinación del ingrediente activo y una base de supositorio. Son bases de supositorio adecuadas, por ejemplo, triglicéridos naturales o sintéticos, hidrocarburos de parafina, polietilenglicoles o alcanoles superiores.

Las soluciones acuosas adecuadas para administración parenteral son especialmente las de un ingrediente activo en forma hidrosoluble, por ejemplo en forma de una sal hidrosoluble, o suspensiones acuosas para inyección que contienen sustancias que aumentan la viscosidad, por ejemplo carboximetilcelulosa sódica, sorbitol y/o dextrano y, si fuera necesario, estabilizantes. El ingrediente activo, si fuera necesario junto con excipientes, también puede estar en forma de un liofilizado y se puede preparar en una solución antes de la administración parenteral añadiendo los disolventes adecuados.

Las soluciones como las usadas, por ejemplo, para la administración parenteral se pueden emplear también como soluciones para infusión.

Son conservantes preferidos, por ejemplo, antioxidantes, tales como ácido ascórbico, o microbicidas, tales como ácido sórbico o ácido benzoico.

Los compuestos de fórmula I se pueden administrar como tales o en forma de composiciones farmacéuticas, profiláctica o terapéuticamente, preferiblemente en una cantidad eficaz contra dichas enfermedades, a un animal de sangre caliente que necesite dicho tratamiento, por ejemplo un ser humano, usándose los compuestos especialmente en forma de composiciones farmacéuticas. En el caso de un individuo que tiene un peso corporal de aproximadamente 70 kg, la dosificación diaria administrada es de aproximadamente 0,01 g a aproximadamente 5 g, preferiblemente de aproximadamente 0,05 g a aproximadamente 2 g, de un compuesto de la presente invención, preferiblemente dividido en 3 a 5, especialmente 4, dosis separadas.

La presente invención también se refiere especialmente al uso de un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, especialmente un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo que se dice que es preferido, como tal o en forma de una formulación farmacéutica con al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable para la preparación de un medicamento para el tratamiento terapéutico o profiláctico de una o más de las enfermedades indicadas anteriormente, especialmente la malaria, más especialmente Malaria tropica.

La cantidad de dosis preferida, la composición y la preparación de las formulaciones farmacéuticas (medicinas) que se tienen que usar en cada caso se han descrito anteriormente.

Un compuesto de fórmula I, o una sal del mismo (= componente (a)) se puede formular o usar en dichas composiciones farmacéuticas, procesos para la preparación de composiciones farmacéuticas, métodos y/o usos en solitario o en combinación con uno o más ingredientes activos distintos (componente(s) (b)), especialmente los mencionados en los antecedentes de la invención, formulándose los componentes (a) y (b) en las combinaciones juntos en una combinación fija o por separado en un producto que comprende (conjunto de componentes) (a) un ingrediente activo de fórmula I, o una sal del mismo, y (b) como componente activo adicional, uno o más ingredientes activos adicionales, como se han definido anteriormente, especialmente para administración en un régimen escalonado en el tiempo de manera que la eficacia terapéutica contra dichas enfermedades se potencie mutuamente por los componentes administrados como (a) y (b) en comparación con la eficacia de los componentes administrados por separado.

El material de partida de fórmula II se puede preparar a partir de un oxirano de fórmula VI,

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haciendo reaccionar este compuesto de una manera análoga a las condiciones indicadas en el método b) con, en lugar del oxirano de fórmula IV indicado, una amina de fórmula V según se define en este documento.

El oxirano de fórmula IV se puede preparar a partir de un oxirano de fórmula VI, como se ha mostrado anteriormente en este documento, por reacción con un aldehído de fórmula III, como se ha definido anteriormente en el método a), de una forma análoga a las condiciones indicadas en el método a) cuando se usa un compuesto de fórmula VI en lugar de un compuesto de fórmula II.

Un compuesto de fórmula VI se conoce o se prepara de acuerdo con métodos conocidos per se (véase por ejemplo la solicitud de patente china CN 104 45 35 A (publicada el 30 de mayo de 1990) o Atkinson et al., J. Med. Chem. 11, 1223 (1968) y Atkinson et al., J. Med. Chem. 17, 1009 (1974)).

Las aminas de fórmula V y los aldehídos de fórmula III son conocidos, y se pueden preparar de acuerdo con métodos conocidos per se, o se pueden obtener en el mercado.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos sirven para ilustrar la invención sin limitar el alcance de la misma.

Materiales de partida 4 (véase la tabla 1) A) 2-Metilamino-1-(2,7-dicloro-9H-fluoren-4-il)etanol (4a)

Una mezcla de 5,0 g de 2,7-dicloro-9H-fluoren-4-oxirano (1), 25 g de metilamina (solución al 33% en etanol) y 20 ml de etanol se calienta a reflujo durante 2 días. La mezcla de reacción se enfría a temperatura ambiente y se filtra. La torta de filtrado se lava con etanol y se seca al vacío y se obtiene una mezcla de 4a y bis-[2-(2,7-dicloro-9H-fluoren-4-il)-2-hidroxi]etilmetilamina: ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): 2,4 y 2,55 (dos singletes, N-CH_{3}, en cada caso 4a y el compuesto bis-[2-(2,7-dicloro-9H-fluoren-4-il)-2-hidroxi]etilmetilamina); 2,6-3,0 (m, CH_{2}-N); 3,8 y 3,9 (dos singletes, C-9-H de grupos fluorenilo); 5,4 y 5,5 (dos dobletes dobles, CHO); 7,1-7,7 (m, protones aromáticos).

Los siguientes materiales de partida se prepararon de una manera análoga (véase la tabla 1)

B) 2-n-Butilamino-1-(2,7-dicloro-9H-fluoren-4-il)etanol (4b)

(con n-butilamina en lugar de metilamina como educto) ^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}): 0,9 (t, 3H, CH_{3}-CCC-N); 1,2-1,6 (m, 4H, CH_{2}-CH_{2}-C-N); 2,6-2,8 (m, 3H, CH-N-CH_{2}); 3,1 (dd, 12 Hz, 3 Hz, 1H, CH-N); 3,9 (s, 2H, C-9-H); 5,4 (dd, 1H, 4 Hz, 8 Hz, CH-O); 7,3-7,8 (m, 5H).

C) 2-n-Hexilamino-1-(2,7-dicloro-9H-fluoren-4-il)etanol (4d)

(con n-hexilamina en lugar de metilamina como educto) ^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3}): 0,8 (t, 3H, N-C-C-C-C-C-CH_{3}); 1,1-1,3 (m, 6H, N-C-C-CH_{2}CH_{2}CH_{2}-C); (1,4, m, 2H, N-C-CH_{2}-); 2,5-2,7 (m, 3H, CH-N-CH_{2}); 2,95 (dd, 1H, CH-N); 3,75 (s, 2H, C-9-H); 5,35 (dd, 1H, O-CH); 7,25 (d con largo intervalo de acoplamiento, 8 Hz, 1H, C-6-H); 7,32, 7,43 (dos singletes con largo intervalo de acoplamiento, 1H, 1H, C-1-H, C-3-H); 7,56 (s con largo intervalo de acoplamiento, 1H, C-8-H); 7,58 (d, 8 Hz, c-5-H).

D) 2-n-octilamino-1-(2,7-dicloro-9H-fluoren-4-il)etanol (4e)

(con n-octilamina en lugar de metilamina como educto) ^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3}): 0,8 ppm (t, 3H, CH_{3}); 1,1-1,3 (m, 10H, NCC(CH_{2})_{5}-C); 1,4 (m, 2H, N-C-CH_{2}-); 2,5-2,7 (m, 3H, CH-N-CH_{2}); 3,0 (dd, 1 H, CH-N); 3,8 (s, 2H, C-9-H); 5,35 (dd, 1H, O-CH); 7,25 (d con largo intervalo de acoplamiento, 8 Hz, 1H, C-6-H); 7,58 (s con largo intervalo de acoplamiento, 1H, C-8-H); 7,60 (d, 8 Hz, C-5-H).

E) 2-[2-(2-Hidroxi)etoxi]etilamino-1-(2,7-dicloro-9H-fluoren-4-il)etanol (4f)

(con 2-(2-aminoetoxi)etanol (Fluka, Buchs, Suiza) como educto en lugar de metilamina) ^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3}): 2,0 ppm (ancho, 1H, OH); 2,7-3,0 (m, 4H, CH_{2}NCH_{2}); 3,6 (m, 4H, C-CH_{2}OCH_{2}-C); 3,75 (m, 2H, CH_{2}-OH); 3,85 (s, 2H, C-9-H); 5,5 (dd, 1H, O-CH); 7,3 (dm, 1H, C-6-H); 7,4 y 7,5 (dos s, en cada caso 1H, C-1,3-H); 7,65 (fraccionamiento s, 1H, C-8-H); 7,7 (d, 1H, C-5-H).

TABLA 1 Materiales de partida

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Ejemplos

(Productos finales) (véase la tabla 2)

Ejemplo 1 2-Metilamino-1-[2,7-dicloro-9-(4-clorobencilideno)-9H-fluoren-4-il]etanol (5a)

Preparación análoga a la del ejemplo 2, partiendo de 4a en lugar de 4b. ^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3}): 2,3 ppm (s ancho, 3H, N-CH_{3}); 1,3-2,0 (s ancho, 2H, NH, OH); 2,45-2,6 (m, 1H, CH-N); 2,7-2,85 (m, 1H, CH-N), 5,2 (d a, 1H, CH-O); 7,0-7,6 (m, 10H).

Ejemplo 2 "N-desbutilbenflumetol" = 2-n-butilamino-1-[2,7-dicloro-9-(4-clorobencilideno)-9H-fluoren-4-il]etanol (5b)

Se trata una suspensión de 6,47 g de 4b en 123 ml de etanol absoluto con 4,28 g de 4-clorobenzaldehído y 0,78 g de hidróxido sódico. La suspensión se agita durante 30 horas a 30ºC. La mezcla se filtra, la torta de filtrado se lava con etanol y se seca al vacío, obteniéndose el N-desbutilbenflumetol como una mezcla de isómeros (E, Z). ^{1}H-RMN (200 MHz, C_{6}D_{6}): 0,8 ppm (m, 3H, CH_{3}); 1,2 (m, 4H, N-C-CH_{2}CH_{2}-C); 2,2-2,4 (m, 2H, O-C-C-N-CH_{2}); 2,4-2,6 (m) y 2,75 (dd) je 1H (O-C-CH_{2}-N); 5,4 (dd, 9 Hz, 2,7 Hz, 1H, CH-O); 7,0-8,1 (m, 10H).

Ejemplo 3 2-n-Octilamino-1-[2,7-dicloro-9-(4-clorobenciliden)-9H-fluoren-4-il]etanol (5e)

Preparación análoga a la del ejemplo 2, partiendo de 4e en lugar de 4b; después de la purificación en gel de sílice (eluyente: tolueno/etanol 19:1, v/v) se obtiene el compuesto del título en forma de un aceite que cristaliza cuando se deja en reposo: ^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3}): 0,8 ppm (t, 3H, CH_{3}); 1,2 (s a, 10H, N-CC-(CH_{2})_{5}-C); 1,4 (m, 2H, N-C-CH_{2}-); 1,6-2,3 (a, 2H, NH, OH); 2,5-2,7 (m, 3H, CH-N-CH_{2}); 2,95 (dd, 1H, CH-N); 5,3 (m, 1H, O-CH); 7,2-7,7 (m, 10 H, CH aromático y vinílico).

Ejemplo 4 2-[2-(2-Hidroxi)etoxi]etilamino-1-[2,7-dicloro-9-(4-clorobencilideno)-9H-fluoren-4-il]etanol (5f)

Preparación análoga a la del ejemplo 2, partiendo de 4f en lugar de 4b; compuesto del título (obtenido después de cromatografía en columna de gel de sílice, eluyente: tolueno/etanol 9:1, v/v): ^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3}): 1,5-2,2 ppm (a, 3H, OH, NH); 2,5-3,0 (m, 4H, CH_{2}-N-CH_{2}); 3,5 (m, 4H, CH_{2}-O-CH_{2}); 3,7 (m, 2H, CH_{3}-OH); 5,4 (d a, 1H, Ar-CH-O); 7,3-7,8 (m, 10H, CH aromático y vinílico).

Ejemplo 5 2-n-Pentilamino-1-[2,7-dicloro-9-(4-clorobencilideno)-9H-fluoren-4-il]etanol (5c)

Una mezcla de 0,76 g de 2,7-dicloro-9-(4-clorobencilideno)-9H-fluoren-4-oxirano, 0,77 g de n-pentilamina y 7 g de 2-propanol se calienta a reflujo durante 26 horas. La mezcla se enfría y se agita durante 2 días más a temperatura ambiente. El producto se retira por filtración, se lava con 2-propanol y se seca al vacío: ^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3}): 0,8 ppm (t, 3H, CH_{3}); 1,2 (m, 4H, O-C-C-CH_{2}CH_{2}-C); 1,4 (m, 2H, O-C-CH_{2}-CCC); 1,6-2,4 (a, 2H, NH, OH); 2,5-2,7 (m, 3H, CH-N-CH_{2}); 3,0 (dd, 1H, CH-N); 5,3 (dd, 1H, O-CH); 7,2-7,7 (m, 10H, CH aromático y vinílico).

El material de partida se prepara como se indica a continuación:

5a) 2,7-Dicloro-9-(4-clorobenciliden)-9H-fluoren-4-oxirano 2

Una mezcla de 20 g de 2,7-dicloro-9H-fluoren-4-oxirano, 17,7 g de 4-clorobenzaldehído, 500 ml de etanol y 27,5 g de hidróxido sódico se agitan durante 18 horas a 25ºC (inicialmente con refrigeración). La sustancia sólida amarilla obtenida se retira por filtración, se lava con agua y de esta forma se obtiene el compuesto del título. ^{1}H-RMN (300 MHz, CDCl_{3}): 2,8 y 3,4 (td, t, en cada caso 1H, oxiran-CH_{2}O-); 4,4 (s a, 1H, Ar-CH(-C)-O); 7,3-7,8 (m, 10H, CH aromático y vinílico incluyendo s a a 7,5 ppm para C_{6}H_{4}-Cl).

TABLA 2 Ejemplos

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Ejemplo 6 Comparación de la eficacia de benflumetol (2-(di-n-butilamino)-1-[2,7-dicloro-9-(4-clorobenciliden)-9H-fluoren-4-il]etanol y 2-alquilamino-1-[2,7-dicloro-9-(4-clorobenciliden]-9H-fluoren-4-il)etanol contra Plasmodium falciparum in vitro

El estudio se realiza en Mae Sot, una provincia del noroeste de Tailandia cerca de Myanmar. Los aislados de Plasmodium falciparum usados para el estudio proceden de pacientes que tienen malaria manifestada clínicamente y que acuden a la unidad VBC de la clínica de malaria en Mae Sot para el diagnóstico y el tratamiento. El ensayo de eficacia se realiza con muestras de sangre obtenidas de pinchazos en el dedo (de acuerdo con el método de microensayo convencional de la OMS para estudiar la inhibición de la maduración de los esquizontes, véase Wemsdorfer, W.H., y Payne, D. (1988), Drug Sensitivity Tests. en: Wemsdorfer, W.H., y McGregor, I.A. (Editores), Malaria: Principles and practice of malariology; Churchill Livingstone, Edinburgh). Los ensayos se realizan en paralelo con benflumetol y los 2-alquilamino-1-[2,7-dicloro-9-(4-clorobenciliden)-9H-fluoren-4-il)etanoles en concentraciones comprendidas entre 3 y 3000 nmol/l en una mezcla de medio con sangre (BMM) usando materiales del kit de ensayo convencional de la OMS suministrado por la oficina regional de la OMS para el Pacífico Oriental, Manila, excepto las placas de microtitulación predosificadas, que se preparan en el laboratorio del instituto de medicina profiláctica específica y tropical, universidad de Viena, Austria.

El procedimiento para determinar la parasitemia antes de la incubación sigue el método convencional de la OMS (OMS (1991), Basic malaria microscopy. Parte I; OMS, Ginebra). Las titulaciones de esquizontes se determinan como se describe en Wemsdorfer y Payne (1988) (véase referencia anterior).

El análisis estadístico de los datos se realizó de acuerdo con un análisis probit de logaritmo de concentración/res-
puesta (Litchfield & Wilcoxon (1949), J. Exp. Pharmacol. 89, 99-113). Este método se basa en el procedimiento de mínimos cuadrados y es el método aceptado más ampliamente para el análisis de estudios de dosis-respuesta. Se usó una adaptación para ordenador del método (Wemsdorfer & Wemsdorfer, Mitteilungen der Österreichischen Gesellschaft für Tropenmedizin und Parasitologie 17, 221-228) para procesar los datos.

Resultados Ejemplo 6.1 Comparación de la eficacia de benflumetol y N-desbutilbenflumetol (5b, 2-(n-butilamino)-1-[2,7-dicloro-9-(4-clorobenciliden)-9H-fluoren-4-il]etanol)

Ninguno de los 58 aislados de Plasmodium falciparum estudiados mostró maduración de los esquizontes a concentraciones de benflumetol por encima de 300 nmol/l, y la inmensa mayoría de aislados (97%) están inhibidos completamente a 300 nmol/l de benflumetol. Ninguno de los aislados muestra maduración de esquizontes a una concentración de 300 nmol/l de N-desbutilbenflumetol, y la inmensa mayoría de aislados están inhibidos completamente incluso a 100 nmol/l de N-desbutilbenflumetol.

Los parámetros de respuesta para benflumetol se muestran en la tabla 3 y los de N-desbutilbenflumetol en la tabla 4. La distribución \chi^{2} para la heterogeneidad muestra una concordancia aceptable con los datos observados con las líneas de regresión. Esto es evidente también en los límites de confianza relativamente estrechos (95%).

Existen diferencias importantes en la sensibilidad de los aislados a benflumetol o N-desbutilbenflumetol, por ejemplo, una EC_{50} (dosis que produce una inhibición del 50% frente a los controles que no han recibido la sustancia activa) de 24,44 nmol/l para el benflumetol y de 4,36 nmol/l para el N-desbutilbenflumetol. De manera similar, la EC_{99} (inhibición del 99% frente a los controles que no han recibido la sustancia activa) que es el indicador más importante de la eficacia clínica de benflumetol (371,59 nmol/l) en personas no inmunes, es aproximadamente 8 (ocho) veces mayor que para el n-desbutilbenflumetol (45,72 nmol/l).

La comparación estadística de acuerdo con Litchfield y Wilcoxon demuestra que las líneas de regresión corren paralelas dentro de los límites del error experimental porque la relación de pendiente (SR = 1,1718) es menor que el factor de relación de pendiente (f_{SR} = 1,3063). Como la "relación de potencia" (PR = 5,6083) también es mayor que el factor de la relación de potencia (f_{PR} = 1,4849), la diferencia de eficacia entre el benflumetol y el N-desbutilbenflumetol es estadísticamente muy significativa.

Se ensaya la correlación de los 58 pares de EC_{50}. Con un coeficiente de correlación de 0,7308, el resultado es muy significativo (p < 0,000003). Esto se aplica también a los 58 pares de EC_{90} (coeficiente de correlación de 0,6768, p < 0,00001).

TABLA 3

Efecto inhibidor dependiente de la concentración de benflumetol en Plasmodium falciparum in vitro:
Concentración de la sustancia activa (nmol/l)	Inhibición de la maduración de esquizontes, en %
3,0	7,14
10,0	20,44
30,0	47,16
100,0	90,72
300,0	99,79
1000,0	100,00
3000,0	100,00

n = 58; a = 2,2678; b = 0,8548; r = 0,9739; \chi^{2} = 5,6500

S = 3,2009; A = 1,2922; K = 6; N' = 116; R = 333,3333333

f_{s} = 1,2193; f_{EC50} = 1,3488; f_{EC99} = 1,7399

EC_{50}: valor medio = 24,4427 (límites de confianza del 95%: inferior 118,1217; superior 32,9685)

EC_{99}: valor medio = 371,5908 (límites de confianza del 95%: inferior 213,5703; superior 646,5307)

y = 0,0997 + 1,8487; R^{2} = 0,534

TABLA 4

Efecto inhibidor dependiente de la concentración de N-desbutilbenflumetol (5b) sobre
Plasmodium falciparum in vitro:
Concentración de la sustancia activa (nmol/l)	Inhibición de la maduración de esquizontes, en %
3,0	36,53
10,0	77,40
30,0	98,60
100,0	99,85
300,0	100,00
1000,0	100,00
3000,0	100,00

n = 58; a = 3,5431; b = 0,9897; r = 0,9941; \chi^{2} = 0,6368

S = 2,7315; A = 1,2727; K = 5; N' = 116; R = 100

f_{s} = 1,1962; f_{EC50} = 1,2949; f_{EC99} = 1,6388

EC_{50}: valor medio = 4,3583 (límites de confianza del 95%: inferior 3,3658; superior 5,6436)

EC_{99}: valor medio = 45,7213 (límites de confianza del 95%: inferior 27,8989; superior 74,9291)

Y = 0,0806 + 5,3769; R^{2} = 0,4581

Ejemplos 6.2 y 6.3

En los ejemplos 6.2 y 6.3 se ensayan aislados de Plasmodium falciparum. Ninguno de los 34 aislados de Plasmodium falciparum estudiado muestra maduración de esquizontes a concentraciones de benflumetol por encima de 3000 nmol/l, y la inmensa mayoría de aislados (96%) están inhibidos completamente a 300 nmol/l de benflumetol.

Los aislados de los pacientes 11, 39 y 47 resultaron ser muy resistentes a mefloquina, obteniéndose un grado de heterogeneidad inaceptablemente alto en los datos (\chi^{2} = 16,153 a un valor máximo permisible de 11,1). Hubo una correlación positiva entre la sensibilidad a mefloquina y la sensibilidad a benflumetol. La respuesta de estos aislados a benflumetol y los compuestos ensayados también fue relativamente débil, apareciendo esta influencia en una medida menor sobre los compuestos ensayados que sobre benflumetol. Se calculó la correlación de la respuesta con pares específicos de sustancias activas en los valores de EC_{50} y EC_{90} con todos los aislados. Los compuestos de los ejemplos 6.2 y 6.3 resultaron más eficaces que el benflumetol en el presente ensayo.

TABLA 5

Efecto inhibidor dependiente de la concentración de benflumetol sobre Plasmodium falciparum in vitro
(serie de ensayo de 34 aislados, ejemplos 6.2 y 6.3):
Concentración de la sustancia activa (nmol/l)	Inhibición de la maduración de esquizontes, en %
3,0	7,16
10,0	18,40
30,0	42,75
100,0	90,74
300,0	96,25
1000,0	99,92
3000,0	100,00

n = 34; a = 2,3498; b = 0,7956; r = 0,9814; \chi^{2} = 3,6652

S = 3,4906; A = 1,2825; K = 7; N' = 68; R = 1000

f_{s} = 1,2952; f_{EC50} = 1,5218; f_{EC99} = 2,0934

EC_{50}: valor medio = 27,9715 (límites de confianza del 95%: inferior 13,3802; superior 42,5678)

EC_{99}: valor medio = 520,7651 (límites de confianza del 95%: inferior 248,7678; superior 1090,1581)

Ejemplo 6.2 Comparación de la eficacia de benflumetol y 2-metilamino-1-[2,7-dicloro-9-(4-clorobenciliden)-9H-fluoren-4-il]etanol) (5a)

Los parámetros de respuesta para el benflumetol se definen en la tabla 5 (véase anteriormente) y los del compuesto 5a en la tabla 6. La distribución \chi^{2} para la heterogeneidad muestra una concordancia aceptable entre los datos observados y las líneas de regresión.

Ninguno de los aislados muestra maduración de esquizontes a una concentración de 1000 nmol/l de 5a, y la inmensa mayoría de los aislados (96%) están inhibidos completamente incluso a 100 nmol/l.

Existen diferencias importantes en la sensibilidad de los aislados a benflumetol o al compuesto 5a. Por ejemplo, la EC_{99} (inhibición del 99% frente a los controles que no han recibido la sustancia activa), que es el indicador más importante de la eficacia clínica del compuesto 5a (87,03 nmol/l) en personas no inmunes, supone sólo aproximadamente un quinto de la de benflumetol (422,49 nmol/l), es decir, se consiguió el mismo efecto sobre Plasmodium falciparum con la sustancia 5a a aproximadamente un quinto de la dosis.

La comparación estadística de acuerdo con Litchfield y Wilcoxon demuestra que las líneas de regresión corren paralelas dentro de los límites del error experimental porque la relación de pendiente (SR = 1,2483) es menor que el factor de relación de pendiente (f_{SR} = 1,6193). Como la "relación de potencia" (PR = 2,8898) también es mayor que el factor de relación de potencia (f_{PR} = 1,9077), la diferencia de eficacia entre benflumetol y el compuesto 5a es estadísticamente significativa.

Se ensaya la correlación de 34 pares de EC_{50}. Con un coeficiente de correlación de 0,6430, el resultado es significativo. Esto se aplica también a los 34 pares de EC_{90} con un coeficiente de correlación de 0,7697.

TABLA 6

Efecto inhibidor dependiente de la concentración de 2-metilamino-1-[2,7-dicloro-9-(4-clorobenciliden)-
9H-fluoren-4-il]etanol (5a) sobre Plasmodium falciparum in vitro:
Concentración de la sustancia activa (nmol/l)	Inhibición de la maduración esquizonte, en %
3,0	13,12
10,0	51,92
30,0	83,14
100,0	95,81
300,0	97,06
1000,0	100,00
3000,0	100,00

n = 34; a = 3,3024; b = 0,7216; r = 0,9754; \chi^{2} = 3,8764

S = 3,9675; A = 1,4328; K = 6; N' = 102; R = 333,333

f_{s} = 1,3455; f_{EC50} = 1,4593; f_{EC99} = 2,2105

EC_{50}: valor medio = 10,5116 (límites de confianza del 95%: inferior 7,2030; superior 15,3400)

EC_{99}: valor medio = 264,0564 (límites de confianza del 95%: inferior 119,4579; superior 583,6850)

El compuesto 5a muestra una marcada actividad contra la malaria y es aproximadamente cuatro veces más eficaz que el benflumetol. Además, la sensibilidad de Plasmodium falciparum al compuesto 5a tiene una función incremental con mayor pendiente (S) que el benflumetol.

Ejemplo 6.3 Comparación de la eficacia de benflumetol y 2-n-pentilamino-1-[2,7-dicloro-9-(4-clorobenciliden)-9H-fluoren-4-il]etanol (5c)

Los parámetros de respuesta para benflumetol se definen en la tabla 5 (véase anteriormente) y los del compuesto 5c en la tabla 7. La distribución \chi^{2} para la heterogeneidad muestra una concordancia aceptable entre los datos observados y las líneas de regresión.

Ninguno de los aislados muestra maduración de esquizontes a una concentración de 3000 nmol/l de 5c, y la inmensa mayoría de aislados (95%) están inhibidos completamente incluso a 100 nmol/l de 5c.

Existen diferencias importantes en la sensibilidad de los aislados a benflumetol o al compuesto 5c. Por ejemplo, la EC_{99} (99% de inhibición frente a los controles que no han recibido la sustancia activa), que es el indicador más importante de la eficacia clínica del compuesto 5c (105,04 nmol/l) en personas no inmunes, es aproximadamente 4 (cuatro) veces menor que en el caso del benflumetol (422,49 nmol/l), es decir, con la sustancia 5c se obtiene el mismo efecto sobre Plasmodium falciparum con una dosis aproximadamente un 75% menor que la usada con benflumetol.

La comparación estadística de acuerdo con Litchfield y Wilcoxon demuestra que las líneas de regresión corren paralelas dentro de los límites del error experimental porque la relación de pendiente (SR = 1,3277) es menor que el factor de relación de pendiente (f_{SR} = 1,5017). Como la "relación de potencia" (PR = 2,0724) también es mayor que el factor de relación de potencia (f_{PR} = 1,7033), la diferencia de eficacia entre el benflumetol y el compuesto 5c es estadísticamente significativa.

Se ensaya la correlación de los 34 pares de EC_{50}. Con un coeficiente de correlación de 0,6044, el resultado es significativo. Esto se aplica también a los 34 pares de EC_{90} con un coeficiente de correlación de 0,8796.

TABLA 7

Efecto inhibidor dependiente de la concentración de 2-pentilamino-1-[2,7-dicloro-9-(4-clorobenciliden)-
9H-fluoren-4-il]etanol (5c) sobre Plasmodium falciparum in vitro:
Concentración de la sustancia activa (nmol/l)	Inhibición de la maduración de esquizontes, en %
3,0	6,83
10,0	36,40
30,0	81,18
100,0	94,78
300,0	96,96
1000,0	99,61
3000,0	100,00

n = 34; a = 3,0184; b = 0,7436; r = 0,9696; \chi^{2} = 4,7652

S = 3,8093; A = 1,3296; K = 6; N' = 68; R = 1000

f_{s} = 1,3446; f_{EC50} = 1,5672; f_{EC99} = 2,2892

EC_{50}: valor medio = 14,3678 (límites de confianza del 95%: inferior 9,1681; superior 22,5167)

EC_{99}: valor medio = 328,1566 (límites de confianza del 95%: inferior 143,3474; superior 751,2290)

El compuesto 5c muestra actividad per se contra la malaria y es aproximadamente cinco veces más eficaz que el benflumetol.

Se demuestra que cambiando el grupo dibutilamino del benflumetol por un grupo monoalquilamino se obtienen derivados de benflumetol que muestran una actividad que parece ser notablemente superior.

Ejemplo 7 Comprimidos

La sustancia activa desbutil benflumetol se pasa a través de un tamiz (malla 60) y, después de la mezcla, se comprime para formar comprimidos de la siguiente composición:

Desbutil benflumetol	120 mg
Celulosa microcristalina	100 mg
Almidón de maíz	160 mg
Carboximetil almidón sódico	12 mg
Sílice muy dispersa	3 mg
Estearato de magnesio	5 mg
Total	400 mg

Claims (9)

1. Un compuesto de fórmula I

9

en la que

R es alquilo con 1 a 8 átomos de carbono, que está substituido o no substituido con uno o más substituyentes seleccionados entre el grupo compuesto por amino, N-alquilamino inferior, N,N-dialquilamino inferior, hidroxi, hidroxi-alcoxi inferior, hidroxi-alcoxi inferior-alcoxi inferior, carboxi, amidino y guanidino, con la condición de que dichos substituyentes no estén unidos en el átomo de carbono 1 que une R al nitrógeno si esto da lugar a compuestos inestables, o

R es alquenilo con hasta 8 átomos de carbono, donde el átomo de carbono que se une al nitrógeno de la fórmula no puede formar un doble enlace, que está sin substituir o substituido con uno o más substituyentes seleccionados entre el grupo compuesto por amino, N-alquilamino inferior, N,N-dialquilamino inferior, hidroxi, carboxi, amidino y guanidino, con la condición de que dichos substituyentes no se unan al átomo de carbono 1 que une R al nitrógeno si esto da lugar a compuestos inestables y con la condición de que los substituyentes hidroxi, amino, alquilamino inferior y guanidino no se unan a un átomo de carbono que está unido al radical mediante un doble enlace, y

X es arilo con 6 a 14 átomos de carbono sin substituir o substituido con uno o más substituyentes seleccionados entre el grupo compuesto por halógeno, hidroxi, alcanoiloxi inferior, fenilalcoxi inferior, alcoxi inferior, amino, amino substituido con alcanoílo inferior o fenilalquilo inferior, amino mono- o disubstituido con alquilo inferior, alquilo inferior, fenilalquilo inferior, halógeno alquilo inferior, ciano-alquilo inferior, carbamoilalquilo inferior, carboxialquilo inferior, alcoxicarbonilo inferior-alquilo inferior, fenil-alcoxicarbonilo inferior-alquilo inferior, fenilo, naftilo, carboxi, alcoxicarbonilo inferior, fenil-alcoxicarbonilo inferior, fenoxicarbonilo, amidino, ciano, nitro y sulfo, o una sal del mismo, representando el prefijo "inferior" un radical de hasta 7 átomos de carbono.

2. Un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R es alquilo con 1 a 8 átomos de carbono, en particular metilo, n-butilo, sec-butilo, n-pentilo o n-octilo, y X es 4-clorofenilo, o una sal del mismo.

3. El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 2, en el que R es n-butilo y X es 4-clorofenilo, o una sal del mismo.

4. Una combinación de un compuesto de fórmula I, o una sal del mismo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 con una o más substancias farmacéuticas activas distintas, o en cada caso una sal del mismo si al menos está presente un grupo formador de sal.

5. Un producto que comprende (a) una substancia activa de fórmula I, o una sal de la misma, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, y (b) como componente adicional, una o más substancias activas adicionales, o una sal de las mismas en cada caso si al menos está presente un grupo formador de sal, en presencia o ausencia de uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, como un producto de combinación para administración simultáneamente o en momentos diferentes a un animal de sangre caliente.

6. Un compuesto de fórmula I, o una sal del mismo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, una combinación de acuerdo con la reivindicación 4 o un producto de acuerdo con la reivindicación 5 para administración en un método de tratamiento profiláctico o terapéutico del cuerpo del ser humano o animal.

7. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, junto con al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable.

8. Uso de un compuesto de fórmula I, o una sal del mismo, de acuerdo con la reivindicación 1, para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento profiláctico o terapéutico de una enfermedad protozoaria o por trematodos.

\newpage

9. Un método para preparar un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, o una sal del mismo, que comprende

a) condensar un compuesto de fórmula II

10

en la que R es según se ha definido para un compuesto de fórmula I, con un aldehído de fórmula III,

11

en la que X es según se ha definido para los compuestos de fórmula I, o

b) añadir a un oxirano de fórmula IV

12

en la que X es como se ha definido para los compuestos de fórmula I, una amina de fórmula V,

R-NH_{2}

en la que R es como se ha definido para un compuesto de fórmula I,

donde cualquier grupo funcional libre está presente en uno de los eductos de fórmula II en el método a) o en uno de los eductos de fórmula IV y/o V en el método b), y que se supone que no toman parte en la reacción, están presentes en forma protegida, si fuera necesario, y retirar cualquier grupo protector presente;

y, si se desea, hacer reaccionar cualquier compuesto libre de fórmula I resultante de los procedimientos descritos en a) o b) para formar su sal o cualquier sal resultante de un compuesto de fórmula I para formar un compuesto libre de fórmula I u otra sal de un compuesto de fórmula I, o separar en sus isómeros un compuesto de fórmula I que está presente en forma de mezcla isomérica.