ES2204169T3

ES2204169T3 - Derivados de pirazolopirimidinona para el tratamiento de la impotencia.

Info

Publication number: ES2204169T3
Application number: ES99954478T
Authority: ES
Inventors: Moohi Yoo; Wonbae Kim; Min Sun Chang; Joong In Lim; Dong Sung Kim; Ik Yon Kim; Tae Kyun Lim; Byoung Ok Ahn; Kyung Koo Kang; Miwon Son; Hyounmie Doh; Soonhoe Kim; Hyunjoo Shim; Taeyoung Oh; Heungjae Kim; Dong Goo Kim
Original assignee: Dong A Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Dong A Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1998-11-11
Filing date: 1999-11-10
Publication date: 2004-04-16
Anticipated expiration: 2019-11-10
Also published as: HK1039328A1; ATE245650T1; AU760422B2; CA2350538A1; BR9915822A; WO2000027848A1; JP3577630B2; DE69909818D1; JP2002529467A; EP1129093B1; KR100353014B1; PT1129093E; US6583147B1; KR20000035324A; BRPI9915822B8; BR9915822B1; CN1325398A; AU1081700A; CA2350538C; EP1129093A1

Abstract

Un derivado de pirazolopirimidinona representado por la siguiente **fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismoen la que R1 es un grupo alquilo de C1-C3, R2 es un grupo alquilo de C2-C6 sustituido o no sustituido, R3 es un grupo alquilo de C2-C6 sustituido o no sustituido, R4 es un grupo alquilo de C1-C6 sustituido o no sustituido, un grupo cicloalquilo de C3-C6 sustituido o no sustituido, un benceno sustituido o no sustituido, una piridina sustituida o no sustituida, o un pirrol sustituido o no sustituido, en los que el sustituyente para los grupos sustituidos se selecciona de los siguientes grupos: grupo alquilo C1-C12, grupo cicloalquilo C3-C6, halógeno, grupo fluoroalquilo C1-C6, grupo alcoxi C1-C10, benceno o heterociclo no sustituido, en los que el heterociclo se selecciona del grupo constituido por piridina, isoxazol, tiazol, pirimidina, indano, benzotiazol, pirazol, tiadiazol, oxazol, piperidina, morfolina, imidazol, pirrolidina, tienilo, triazol, pirrol y furilo.

Description

Derivados de pirazolopirimidinona para el tratamiento de la impotencia.

La presente invención se refiere a derivados de pirazolopirimidinona de la siguiente fórmula 1, y a composiciones farmacéuticas que contienen dichos derivados. Los compuestos son eficaces en el tratamiento de la impotencia, una de las disfunciones sexuales masculinas, con menores efectos secundarios.

Los compuestos de fórmula 1 pueden existir en el equilibrio tautómero representado por el siguiente esquema de reacción 1.

Esquema de reacción 1

1

Los compuestos de fórmula 1 pueden contener centros asimétricos y por lo tanto pueden existir como enantiómeros. La presente invención incluye tanto mezcla como isómeros individuales separados.

La disfunción eréctil masculina es una de las disfunciones sexuales más comunes en el hombre. Aunque la disfunción eréctil puede ser principalmente de origen psicogénico, a menudo acompaña a enfermedades crónicas, tales como la diabetes mellitus, enfermedad cardiaca, hipertensión, y una variedad de enfermedades neurológicas. Su frecuencia está muy relacionada con la edad, con una frecuencia estimada de 2% a la edad de 40 años, alcanzando 25-30% a la edad de 65. Aunque no hay datos disponibles de la frecuencia de la disfunción eréctil en hombres por encima de 75 años, probablemente está por encima de 50%.

Hay diferentes opciones de tratamiento disponibles para la disfunción eréctil, tales como asistencia sociopsicológica, terapia hormonal, autoinyección o aplicación transuretral de agentes vasodilatadores, dispositivos de vacío, implantación de prótesis, y cirugía venosa/arterial. Sin embargo, estas opciones terapéuticas tienen varias limitaciones, tales como efectos secundarios, alto coste y baja eficacia. Por lo tanto, se ha pedido un esfuerzo de investigación para desarrollar procedimientos de tratamiento nuevos, altamente eficaces y sencillos de usar, y de medicación potencialmente por vía oral.

Recientemente, se ha desarrollado Sildenafil como un agente terapéutico para la disfunción eréctil masculina por administración oral. Sildenafil es el primero de una nueva clase de fármacos que se sabe que inhiben la enzima fosfodiesterasa-5 distribuida específicamente en el tejido del cuerpo cavernoso, e inducen la relajación de las células musculares lisas del cuerpo cavernoso, de forma que se potencia el flujo sanguíneo al pene, conduciendo a una erección. Sildenafil ha mostrado una tasa de respuesta de alrededor 80% en hombres con disfunción eréctil de causa orgánica.

Por otra parte, el documento US-A-3.939.161 describe que los derivados de 1,3-dimetil-1H-pirazolpirimidinona presentan actividad anticonvulsiva y sedante, y también presentan actividad antiinflamatoria y actividad antisecretora gástrica; el documento EP 201.188 describe que los derivados de pirazolopirimidinona sustituidos en 5 tienen efectos de antagonismo del receptor de adenosina y de inhibición de las enzimas fosfodiesterasas, y se pueden usar para tratar trastornos cardiovasculares tales como la insuficiencia cardiaca; los documentos EP 463.756, EP 526.004, WO 93/6.104 y WO 93/7.149, describen que los derivados de pirazolopirimidinona que inhiben la c-GMP-fosfodiesterasa más selectivamente que la c-AMP-fosfodiesterasa son eficaces en trastornos cardiovasculares tales como angina de pecho, hipertensión, insuficiencia cardiaca, ateroesclerosis, asma crónico, etc.; y los documentos WO 94/28.902, WO 96/16.644, WO 94/16.657 y WO 98/49.166 describen que los inhibidores conocidos de la c-GMP-fosfodiesterasa, incluyendo los derivados de pirazolopirimidinona de las patentes antes mencionadas, se pueden usar para tratar la disfunción eréctil masculina. El documento WO-A-9616657 describe derivados de pirazolopirimidinona caracterizados por un grupo metilo en la posición 3 de la cadena de pirazolopirimidinona.

Los autores de la presente invención, han investigado el desarrollo de un nuevo agente terapéutico mejorado para la impotencia, y han sintetizado nuevos derivados de pirazolopirimidinona que tienen mejor eficacia para el tratamiento de la impotencia que sildenafil, basándose en el mecanismo de inhibición de la enzima fosfodiesterasa-5. Se mejora mucho la selectividad de los compuestos de la presente invención frente a la fosfodiesterasa-6 distribuida en la retina y la fosfodiesterasa-3 distribuida en el corazón, para reducir los efectos secundarios. Mejora mucho la solubilidad y el metabolismo en el hígado de los compuestos de la presente invención, que son factores importantes que afectan a la tasa de absorción cuando se administran por vía oral.

Resumen de la invención

El objeto de la presente invención es proporcionar derivados de pirazolopirimidinona y sus sales farmacéuticamente aceptables, y proporcionar composiciones farmacéuticas para el tratamiento de la impotencia, que contienen dichos derivados de pirazolopirimidinona y/o sus sales farmacéuticamente aceptables como un ingrediente activo.

Descripción detallada de la invención

La presente invención proporciona nuevos derivados de pirazolopirimidinona de la siguiente fórmula 1 y sus sales farmacéuticamente aceptables, como se define en la reivindicación 1. Las realizaciones preferidas se definen en las reivindicaciones.

Fórmula 1

2

Los sustituyentes R_{1} a R_{4} tienen los siguientes significados:

R_{1} representa grupo alquilo de C_{1}-C_{3},

R_{2} representa un grupo alquilo de C_{2}-C_{6} sustituido o no sustituido,

R_{3} representa grupo alquilo de C_{2}-C_{6} sustituido o no sustituido,

R_{4} representa grupo alquilo de C_{1}-C_{6} lineal o ramificado, sustituido o no sustituido, grupo cicloalquilo de C_{3}-C_{6} sustituido o no sustituido, benceno sustituido o no sustituido, o heterociclo sustituido o no sustituido seleccionado del grupo formado por anillo de piridina, isoxazol, tiazol, pirimidina, indano, benzotiazol, pirazol, tiadiazol, oxazol, piperidina, morfolina, imidazol, pirrolidina, tienilo, triazol, pirrol y furilo.

En el caso de que R_{2}, R_{3} y R_{4} estén sustituidos, el sustituyente es grupo alquilo de C_{1}-C_{10}, grupo cicloalquilo de
C_{3}-C_{6}, halógeno, grupo fluoroalquilo de C_{1}-C_{6}, grupo alquiloxi de C_{1}-C_{10}, benceno, o heterociclo seleccionado del grupo formado por anillo de piridina, isoxazol, tiazol, pirimidina, indano, benzotiazol, pirazol, tiadiazol, oxazol, piperidina, morfolina, imidazol, pirrolidina, tienilo, triazol, pirrol y furilo.

Preferiblemente, R_{4} es grupo alquilo de C_{1}-C_{6} sustituido o no sustituido, grupo cicloalquilo de C_{3}-C_{6} sustituido o no sustituido, benceno sustituido o no sustituido, piridina sustituida o no sustituida, o pirrol sustituido o no sustituido. En el caso de que R_{2}, R_{3} y R_{4} estén sustituidos, el sustituyente preferiblemente es halógeno, benceno, heterociclo seleccionado del grupo formado por piridina, pirrolidina, pirrol, o grupo cicloalquilo de C_{3}-C_{6}.

En la fórmula 1, más preferiblemente R_{4} es grupo alquilo de C_{1}-C_{6} sustituido, y el sustituyente es pirrolidina.

La presente invención también proporciona composiciones de acuerdo con las reivindicaciones 7 a 9, y el uso como se define en las reivindicaciones 10 y 11.

En particular, los compuestos preferibles de la presente invención son:

1) 5-[2-etoxi-5-(isopropilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona
(compuesto del ejemplo 1);

2) 5-[2-etoxi-5-(bencilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona
(compuesto del ejemplo 2);

3) 5-[2-propiloxi-5-(isopropilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-
ona (compuesto del ejemplo 3);

4) 5-[2-etoxi-5-(isopropilamidosulfonil)fenil]-1-etil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona
(compuesto del ejemplo 5);

5) 5-[2-etoxi-5-(propilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 7);

6) 5-[2-etoxi-5-(propilamidosulfonil)fenil]-1-etil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (com-
puesto del ejemplo 8);

7) 5-[2-etoxi-5-(butilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 9);

8) 5-[2-etoxi-5-(2-butilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 10);

9) 5-[2-etoxi-5-(ciclopropilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona
(compuesto del ejemplo 13);

10) 5-[2-etoxi-5-(ciclopropilamidosulfonil)fenil]-1-etil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona
(compuesto del ejemplo 14);

11) 5-[2-etoxi-5-(ciclohexilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona
(compuesto del ejemplo 19);

12) 5-[2-etoxi-5-(bencilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona
(compuesto del ejemplo 22);

13) 5-[2-propiloxi-5-(bencilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 23);

14) 5-[2-etoxi-5-(bencilamidosulfonil)fenil]-1-etil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 24);

15) 5-[2-etoxi-5-(4-fluorofenilamidosulfonil)-fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-
ona (compuesto del ejemplo 26);

16) 5-[2-etoxi-5-(4-t-butilfenilamidosulfonil) fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 28);

17) 5-[2-etoxi-5-(4-t-butilfenilamidosulfonil) fenil]-1-etil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 29);

18) 5-[2-etoxi-5-(4-isopropilfenilamidosulfonil) fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 31);

19) 5-[2-etoxi-5-(4-fluorofenilamidosulfonil) fenil]-1-etil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo (4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 33);

20) 5-[2-etoxi-5-(4-piridilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona
(compuesto del ejemplo 34);

21) 5-[2-propiloxi-5-(4-piridilamidosulfonil) fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-
ona (compuesto del ejemplo 35);

22) 5-[2-etoxi-5-(4-piridilamidosulfonil)fenil]-1-etil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona
(compuesto del ejemplo 36);

23) 5-[2-etoxi-5-(4-piridilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona
(compuesto del ejemplo 37);

24) 5-[2-etoxi-5-(3-piridilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona
(compuesto del ejemplo 38);

25) 5-[2-propiloxi-5-(3-piridilamidosulfonil) fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-
ona (compuesto del ejemplo 39);

26) 5-[2-etoxi-5-(3-piridilamidosulfonil)fenil]-1-etil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona
(compuesto del ejemplo 40);

27) 5-[2-etoxi-5-(3-piridilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona
(compuesto del ejemplo 41);

28) 5-[2-propiloxi-5-(4-piridilmetilamidosulfonil)-fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimi-
din-7-ona (compuesto del ejemplo 44);

29) 5-[2-etoxi-5-(4-piridilmetilamidosulfonil)-fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 46);

30) 5-[2-etoxi-5-(3-piridilmetilamidosulfonil)-fenil)-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 47);

31) 5-[2-etoxi-5-(3-piridilmetilamidosulfonil) fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 48);

32) 5-[2-propiloxi-5-(3-piridilmetilamidosulfonil)-fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimi-
din-7-ona (compuesto del ejemplo 49);

33) 5-[2-etoxi-5-(2-piridilmetilamidosulfonil) fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 51);

34) 5-[2-propiloxi-5-(2-piridilmetilamidosulfonil) fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimi-
din-7-ona (compuesto del ejemplo 52);

35) 5-[2-propiloxi-5-(1-metil-3-pirrolidinilamido-sulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 53);

36) 5-[2-etoxi-5-(1-metil-3-pirrolidinilamido-sulfonil)fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 54);

37) 5-[2-propiloxi-5-(1-metil-2-pirrolidinilmetil-amidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo
(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 56);

38) 5-[2-etoxi-5-(1-metil-2-pirrolidinilmetil-amidosulfonil)fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 58);

39) 5-[2-propiloxi-5-(1-metil-3-pirrolidinilmetil-amidosulfonil)fenil]-1-etil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 60);

40) 5-[2-etoxi-5-(1-metil-3-pirrolidinilmetil-amidosulfonil)fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 62);

41) 5-[2-propiloxi-5-(1-etil-3-pirrolidinilmetil-amidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 64);

42) 5-[2-etoxi-5-(1-etil-3-pirrolidinilmetil-amidosulfonil)fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 66);

43) 5-[2-propiloxi-5-(1-metil-2-pirrolidiniletil-amidosulfonil)fenil)-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 68); y

44) 5-(2-etoxi-5-(1-metil-2-pirrolidiniletil-amidosulfonil)fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona (compuesto del ejemplo 70).

Los compuestos de fórmula 1 de acuerdo con la presente invención se pueden usar en forma de sales farmacéuticamente aceptables, en particular, sales de adición de ácido que se preparan usando un ácido libre farmacéuticamente aceptable. Los ácidos libres preferidos son ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, y ácido fosfórico, y ácidos orgánicos tales como ácido cítrico, ácido tartárico, ácido acético, ácido láctico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido glucónico, ácido metanosulfónico, ácido glicólico, ácido succínico, ácido p-toluenosulfónico, ácido galacturónico, ácido embónico, ácido glutámico, y ácido aspártico. Los compuestos de fórmula 1 también se pueden usar en forma de sales de metales farmacéuticamente aceptables, particularmente sales de metales alcalinos tales como sales de sodio o de potasio.

Además, la presente invención proporciona procedimientos de preparación de derivados de pirazolopirimidinona de fórmula 1, representados por el siguiente esquema de reacción 2.

Esquema de reacción 2

3

en el que R_{1}, R_{2}, R_{3} y R_{4} se definen cada uno como en la fórmula 1.

El procedimiento para la preparación de acuerdo con la presente invención comprende las etapas de:

1) hacer reaccionar el compuesto clorosulfonado de fórmula (2) y la amina primaria (3) en condiciones de temperatura adecuada y un disolvente adecuado para dar la sulfonamida (4) (etapa 1);

2) hacer reaccionar el ácido carboxílico (4) preparado en la etapa 1 y la pirazolamina (5) para dar una amida (6) por el procedimiento conocido de preparación de amidas a partir de ácido carboxílico y amina (etapa 2); y

3) ciclar la amida (6) preparada en la etapa 2 para dar el compuesto de fórmula 1 deseado, por el procedimiento de ciclación conocido usado para preparar pirimidinonas (etapa 3).

En la etapa 1, se puede usar un pequeño exceso de 2 equivalentes de amina, o se pueden usar juntos un pequeño exceso de 1 equivalente de amina y 1 equivalente de depurador de ácido tal como una amina terciaria. La temperatura de la reacción se prefiere por debajo de 20ºC.

El procedimiento conocido para preparar amidas a partir de ácido carboxílico y amina en la etapa 2, es, por ejemplo, el procedimiento en el que el grupo carboxilo se transforma en cloruro de ácido activado o anhídrido de ácido usando cloruro de tionilo, cloruro de pivaloilo, cloruro de triclorobenzoilo, carbonildiimidazol, cloruro difenilfosfínico, etc., y después se hace reaccionar con el grupo amina, o el procedimiento usando agentes de acoplamiento tales como DCC (1,3-diciclo-hexilcarbodiimida) o EEDQ (N-etoxicarbonil-2-etoxi-1,3-dihidroquinolina).

El procedimiento de ciclación en la etapa 3 se puede llevar a cabo en presencia de una base adecuada y un disolvente adecuado. Las bases preferidas que se usan en la etapa 3 son alcóxidos metálicos; sales metálicas de amoniaco; aminas; hidruros de metal alcalino o metal alcalinotérreo; hidróxidos; carbonatos; bicarbonatos; y amidinas bicíclicas tales como DBU (1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno) y DBN (1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno). Los disolventes preferidos que se usan en la etapa 3 son alcoholes tales como metanol, etanol, isopropanol, t-butanol; éteres tales como tetrahidrofurano, dimetoxietano, dioxano; hidrocarburos aromáticos tales como benceno, tolueno, xileno, clorobenceno; acetonitrilo; dimetilsulfóxido; dimetilformamida; N-metilpirrolidin-2-ona; y piridina.

Además, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas para tratar la impotencia, que contienen los compuestos de fórmula 1 como un ingrediente activo.

La presente invención proporciona formulaciones farmacéuticas que contienen, además de excipientes no tóxicos, inertes y farmacéuticamente aceptables, uno o más compuestos de acuerdo con la presente invención, y procedimientos para prepararlas.

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Los compuestos de fórmula 1 de acuerdo con la presente invención se pueden administrar por vía oral o parenteral, y se pueden usar en forma general de preparación farmacéutica.

Los compuestos de la presente invención se pueden preparar para administración oral o parenteral, mezclando con cargas, extensores, aglutinantes, agentes humectantes, agentes disgregantes, diluyentes tales como tensioactivos, o excipientes, usados en general.

La presente invención también incluye formas de dosificación farmacéutica en unidades de dosificación. Esto significa que las formas de dosificación están presentes en forma de partes individuales, por ejemplo comprimidos, cápsulas, píldoras, supositorios y ampollas. El contenido del compuesto activo corresponde a una fracción o a un múltiplo de una dosis individual. Las unidades de dosificación pueden contener, por ejemplo, 1, 2, 3 ó 4 veces o 1/2, 1/3 o 1/4 la dosis individual. Una dosis individual preferiblemente contiene la cantidad de compuesto activo que se administra en una aplicación y que normalmente corresponde a la dosis diaria completa, la mitad, una tercera parte o una cuarta parte.

Los excipientes no tóxicos, inertes y farmacéuticamente aceptables, se debe entender que son diluyentes, cargas y auxiliares de formulación sólidos, semisólidos o líquidos, de todos los tipos.

Las formas de dosificación farmacéutica preferidas que se pueden mencionar son comprimidos, cápsulas, píldoras, gránulos, supositorios, soluciones, suspensiones y emulsiones, pastas, pomadas, geles, cremas, lociones, polvos y pulverizadores.

Las preparaciones sólidas para administración oral son comprimidos, píldoras, polvos y cápsulas, las preparaciones líquidas para administración oral son suspensiones, soluciones, emulsiones y jarabes, y las preparaciones antes mencionadas pueden contener diferentes excipientes tales como agentes humectantes, edulcorantes, agentes aromáticos y conservantes, además de los diluyentes sencillos generalmente usados tales como agua y parafina líquida.

Los comprimidos, cápsulas, píldoras y gránulos pueden contener el compuesto o compuestos activos, además de los excipientes convencionales, tales como (a) cargas y extensores, por ejemplo almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol, y ácido silícico, (b) aglutinantes, por ejemplo carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina y polivinilpirrolidona, (c) humectantes, por ejemplo glicerol, (d) agentes disgregantes, por ejemplo agar-agar, carbonato cálcico y carbonato sódico, (e) retardantes de solución, por ejemplo parafina, y (f) potenciadores de la absorción, por ejemplo compuestos de amonio cuaternario, (g) agentes humectantes, por ejemplo alcohol cetílico y monoestearato de glicerol, (h) adsorbentes, por ejemplo caolín y bentonita, e (i) lubricantes, por ejemplo talco, estearato cálcico, estearato magnésico, y polietilenglicoles sólidos, o mezclas de las sustancias listadas de (a) a (i).

Los comprimidos, cápsulas, píldoras y gránulos se pueden proporcionar con los revestimientos convencionales, y también pueden tener una composición tal que liberen el compuesto o compuestos activos sólo o preferiblemente, en una cierta parte del tracto intestinal, si es adecuado de una forma retardada, siendo ejemplos de composiciones embebidas que se pueden usar sustancias polímeras y ceras.

Si se considera apropiado, el compuesto o compuestos activos también pueden estar presentes en forma microencapsulada con uno o más de los excipientes antes mencionados. Las formas de dosificación farmacéutica para administración parenteral son inyecciones, suspensiones, emulsiones, formulaciones liofilizadas y supositorios.

Los supositorios pueden contener, además del compuesto o compuestos activos, los excipientes solubles en agua o insolubles en agua habituales, por ejemplo polietilenglicoles, grasas, por ejemplo grasa de cacao, ésteres superiores (por ejemplo, alcohol C_{14} con ácido graso C_{16}), Witepsol, Macrogol, Tween 61, grasa de laurín y gelatina de glicerol o mezclas de estas sustancias.

Las pomadas, pastas, cremas y geles pueden contener además del compuesto o compuestos activos, los excipientes habituales, por ejemplo grasas animales y vegetales, ceras, parafinas, almidón, tragacanto, derivados de celulosa, polietilenglicoles, siliconas, bentonitas, ácido silícico, talco y óxido de cinc, o mezclas de estas sustancias. Los polvos y pulverizadores pueden contener, además del compuesto o compuestos activos, los excipientes convencionales, por ejemplo lactosa, talco, ácido silícico, hidróxido de aluminio, silicato cálcico y polvo de poliamida, o mezclas de estas sustancias. Los pulverizadores pueden contener adicionalmente los propelentes convencionales, por ejemplo clorofluorohidrocarburos.

Las soluciones y emulsiones pueden contener, además del compuesto o compuestos activos, los excipientes convencionales, tales como disolventes, agentes solubilizantes y emulsionantes, por ejemplo agua, alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, dimetilformamida, aceites, en particular aceite de algodón, aceite de cacahuete, aceite de germen de trigo, aceite de oliva, aceite de ricino, y aceite de sésamo, glicerol, alcohol glicerol, alcohol tetrahidrofurfurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácido graso y sorbitán, o mezclas de estas sustancias.

Para administración parenteral, las soluciones y emulsiones también tienen que estar en una forma estéril que sea isotónica con la sangre.

Las suspensiones pueden contener, además del compuesto o compuestos activos, excipientes convencionales, tales como diluyentes líquidos, por ejemplo agua, alcohol etílico y propilenglicol, y agentes de suspensión, por ejemplo alcoholes isoestearílicos etoxilados, ésteres de polioxietilensorbitol y sorbitán, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar, tragacanto y oleato de etilo, o mezclas de estas sustancias.

Las formas de dosificación farmacéutica mencionadas también pueden contener agentes colorantes, conservantes y aditivos que mejoran el olor y sabor, por ejemplo aceite de menta y aceite de eucalipto, y edulcorantes, por ejemplo sacarina.

Las formas de dosificación farmacéutica antes mencionadas también pueden contener otros compuestos farmacéuticamente activos además de los compuestos de acuerdo con la presente invención.

Las formulaciones farmacéuticas antes mencionadas se preparan por el procedimiento convencional, por ejemplo mezclando el compuesto o compuestos activos con el excipiente o excipientes.

Los compuestos terapéuticamente activos preferiblemente deben estar presentes en las formas de dosificación farmacéutica antes mencionadas con una concentración de 0,1 a 99,5, preferiblemente de 0,5 a 99% en peso de la mezcla total.

En general, se ha demostrado que es ventajoso administrar el compuesto o compuestos activos de acuerdo con la presente invención en cantidades totales de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100 mg/kg, preferiblemente de 0,1 a 30 mg/kg, 1-3 veces cada 24 horas, en forma de varias dosis individuales si es adecuado, para lograr los resultados deseados. Sin embargo, puede ser necesario desviarse adecuadamente de las dosificaciones mencionadas, y en particular hacerlo en función de la naturaleza y peso corporal del sujeto que se va a tratar, de la gravedad de la enfermedad, la naturaleza de la formulación y la vía de administración del medicamento y el periodo o intervalo en el que se produce la administración.

Por lo tanto, en algunos casos puede ser suficiente administrar menos de la cantidad de compuesto activo antes mencionada, mientras que en otros casos se debe superar la cantidad de compuesto activo antes mencionada. La dosificación óptima particular y el modo de administración necesario para los compuestos activos pueden ser determinados por cualquier experto basándose en su conocimiento.

Los derivados de pirazolopirimidinona de fórmula 1 de acuerdo con la presente invención tienen una eficacia más destacada en el tratamiento de la impotencia que sildenafil, un agente terapéutico para la impotencia ya establecido, basado en el mecanismo de inhibición de la enzima fosfodiesterasa- 5. Las selectividades de los compuestos de acuerdo con la presente invención para la fosfodiesterasa-6 y fosfodiesterasa-3, son mucho mejores que las de sildenafil, reduciendo los efectos secundarios tales como trastornos en la visión o trastornos cardiovasculares. Además, la solubilidad en agua a pH = 2 y 5 es mucho mayor, y el metabolismo en el hígado de rata es sensiblemente menor en algunos de los derivados de pirazolopirimidinona de la presente invención. Por lo tanto, se puede esperar la probabilidad de una mejor absorción y mejor efecto in vivo, cuando se administren por vía oral comparados con sildenafil, y se puede reducir la dosis del compuesto.

Las realizaciones preferidas de la presente invención en la práctica y actualmente son ilustrativas, como se muestra en los siguientes ejemplos.

Sin embargo, se entenderá que los expertos en la técnica, considerando esta descripción, pueden hacer modificaciones y mejoras dentro del espíritu y alcance de la presente invención.

La estructura molecular de los compuestos de fórmula 1 de acuerdo con la presente invención se puede identificar por espectroscopía IR, espectroscopía UV, espectroscopía de RMN, espectroscopía de masas y análisis elemental.

Ejemplos Ejemplo 1 Preparación de 5-[2-etoxi-5-(isopropil amidosulfonil) fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona

Etapa 1

Preparación de ácido 2-etoxi-5-(isopropil amidosulfonil)benzoico

A 1,8 ml de isopropilamina se añadieron 1,9 g de ácido 2-etoxi-5-clorosulfonilbenzoico en acetona a 0ºC, y la mezcla se agitó por debajo de 20ºC durante 3 horas. Se separó la acetona por evaporación, el residuo se diluyó con acetato de etilo y se extrajo con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico. El producto se volvió a extraer con acetato de etilo después de acidificar con HCl la fracción acuosa de bicarbonato extraída. La capa orgánica extraída se lavó con agua y salmuera saturada, se secó sobre MgSO_{4}, y se concentró para dar 1,95 g del compuesto deseado.

RMN (CDCl_{3}): 1,07 (d, 6H), 1,58 (t, 3H), 3,48 (m, 1H), 4,38 (c, 2H), 4,50 (d, 1H), 7,17 (d, 1H), 8,08 (dd, 1H), 8,67 (d, 1H).

Etapa 2

Preparación de 4-[2-etoxi-5-(isopropil amidosulfonil) benzamido]-1-metil-3-propil-carbamoil-pirazol

A una solución de 1,8 g de ácido 2-etoxi-5-(isopropilamidosulfonil)benzoico en diclorometano, se añadieron 0,87 ml de trietilamina y 0,98 ml de cloruro de 2,4,6-triclorobenzoilo a 0ºC, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. Después, se añadió a esta mezcla 1-metil-3-propil-4-amino-5- carbamoil-pirazol, y la mezcla resultante se agitó. Se filtraron los cristales precipitados y el filtrado se diluyó con diclorometano. La capa orgánica se lavó con solución saturada de bicarbonato sódico, agua y salmuera en este orden, se secó sobre MgSO_{4}, se concentró y se cromatografió en columna para dar 2,0 g del compuesto puro deseado.

RMN (CDCl_{3}): 0,90 (t, 3H), 1,03 (d, 6H), 1,53 (t, 3H), 1,59 (m, 2H), 2,50 (t, 2H), 3,40 (m, 1H), 4,00 (s, 3H), 4,34 (c, 2H), 5,27 (m, 1H), 7,10 (d, 1H), 7,96 (dd, 1H), 8,69 (d, 1H), 9,23 (s an., 1H).

Etapa 3

Preparación de 5-[2-etoxi-5-(isopropil amidosulfonil) fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona

Se disolvieron 1,9 g de 4-[2-etoxi-5-(isopropil amidosulfonil)benzamido]-1-metil-3-propil-carbamoil-pirazol en 13,5 ml de t-butanol, a esta solución se añadieron 590 mg de t-butóxido potásico, y la mezcla se calentó a reflujo durante 20 h. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente, se añadió agua a la mezcla, y se añadió HCl concentrado para ajustar el pH hasta aproximadamente 2. El sólido resultante se filtró y se lavó con agua. El sólido filtrado se disolvió en diclorometano, y la capa de diclorometano se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4} anhidro, se concentró y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice para dar 1,15 g del compuesto puro deseado.

RMN (CDCl_{3}): 0,99 (t, 3H), 1,14 (d, 6H), 1,61 (t, 38), 1,62 (t, 2H), 2,89 (t, 2H), 3,54 (m, 1H), 4,25 (s, 3H), 4,34 (c, 2H), 4,57 (d, 1H), 7,12 (d, 1H), 7,96 (dd, 1H), 8,93 (d, 1H), 10,83 (s an., 1H).

Ejemplo 2 Preparación de 5-[2-etoxi-5-(bencil amidosulfonil) fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona

Etapa 1

Preparación de ácido 2-etoxi-5-(bencil amidosulfonil)benzoico

A 7,4 ml de bencilamina se añadieron 6 g de ácido 2-etoxi-5-clorosulfonilbenzoico en acetona a 0ºC, y la mezcla se agitó a 20ºC durante 3 horas. Se separó la acetona por evaporación, el residuo se diluyó con diclorometano y se extrajo con solución saturada de bicarbonato sódico. El producto se volvió a extraer con diclorometano después de acidificar con HCl la capa acuosa de bicarbonato extraída. La capa orgánica se lavó con salmuera saturada, se secó sobre MgSO_{4}, y se concentró para dar 5,76 g del compuesto deseado.

RMN (CDCl_{3}): 1,58 (t, 3H), 4,16 (d, 2H), 4,37 (c, 2H), 5,01 (t, 1H), 7,01 (d, 1H), 7,20 (m, 5H), 8,00 (dd, 1H), 8,60 (d, 1H).

Etapa 2

Preparación de 4-[2-etoxi-5-(bencil amidosulfonil) benzamido]-1-metil-3-isobutil-5-carbamoil-pirazol

Procedimiento A

A 0,65 g de ácido 2-etoxi-5-(bencilamido sulfonil)benzoico en diclorometano, se añadieron 0,53 ml de cloruro de tionilo a 0ºC y la mezcla se agitó a reflujo durante 3 horas. La mezcla se dejó enfriar y se concentró (mezcla de reacción 1). A 0,29 g de 1-metil-3-isobutil-4-amino-5-carbamoil-pirazol en diclorometano se añadieron 0,27 ml de trietilamina y una cantidad catalítica de dimetilaminopiridina, y la mezcla se dejó enfriar. La mezcla de reacción 1 anterior se añadió a esta mezcla. La mezcla resultante se agitó en un baño de hielo durante 30 min a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se diluyó con diclorometano, se lavó con HCl 1 N, solución saturada de bicarbonato sódico, agua y salmuera en este orden, se secó sobre MgSO_{4} anhidro, y se concentró hasta 0,82 g del compuesto deseado.

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Procedimiento B

La mezcla de 1,0 g de ácido 2-etoxi-5-(bencilamidosulfonil)benzoico, 0,59 g de 1-metil-3-isobutil-4-amino-5-carbamoil-pirazol y 0,885 g de EEDQ (2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina) en cloroformo se agitó durante 3 horas y se diluyó con cloroformo. La capa orgánica se lavó con HCl 1 N, solución saturada de bicarbonato sódico, agua y salmuera saturada en este orden, se secó sobre MgSO_{4} anhidro, se concentró y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice para dar 0,92 g del compuesto puro deseado.

RMN (CDCl_{3}): 0,97 (d, 6H), 1,55 (t, 3H), 1,91 (m, 1H), 2,40 (d, 2H), 3,98 (s, 3H), 4,11 (d, 2H), 4,36 (c, 2H), 5,55 (t, 1H), 5,94 (s an. ,1H), 7,08 (d, 1H), 7,21 (m, 5H), 7,58 (s an. ,1H), 7,95 (dd, 1H), 8,69 (d, 1H), 9,22 (s an., 1H).

Etapa 3

Preparación de 5-[2-etoxi-5-(bencil amidosulfonil) fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona

Se disolvieron 0,82 g de 4-[2-etoxi-5-(bencil amidosulfonil) benzamido]-1-metil-3-isobutil-carbamoil-pirazol en etanol, a esta solución se añadieron 0,173 g de metóxido sódico, y la mezcla se calentó a reflujo durante 6 h. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente, se añadió agua a la mezcla, y se añadió HCl concentrado para ajustar el pH hasta aproximadamente 2. El precipitado resultante se filtró y se lavó con agua. El sólido filtrado se disolvió een diclorometano, y la capa de diclorometano se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4} anhidro, y se concentró para dar 0,775 g del compuesto puro deseado.

RMN (CDCl_{3}): 0,96 (d, 6H), 1,62 (t, 3H), 2,16 (m, 1H), 2,80 (d, 2H), 4,18 (d, 2H), 4,26 (s, 3H), 4,35 (c, 2H), 4,83 (t, 1H), 7,09 (d, 1H), 7,22 (m, 5H), 7,91 (dd, 1H), 8,89 (d, 1H), 10,80 (s an., 1H).

Ejemplo 3-70

Se usaron las aminas adecuadas correspondientes a cada sustituyente como materia prima para preparar los compuestos de los ejemplos 3-70 por el mismo procedimiento del ejemplo 1 ó 2.

(Tabla pasa a la página siguiente)

TABLA 1

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Experimento 1

Ensayo para una erección del pene usando ratas

Con el fin de confirmar la eficacia en la impotencia de los compuestos de fórmula 1, se llevó a cabo un ensayo de erección del pene con el modelo de rata normal basado en los procedimientos de Benassi-Benelli y col. (Arch. International de Pharmaco-dynamie et de Therapie., 1979, 242, 241-247), Islam y col. (J. Ethnopharmacol. 1991, 33, 67-72) y Heaton y col. (J. Urol., 1991, 145, 1099-1102).

Se suspendieron los derivados de pirazolopirimidinona en metil-celulosa al 0,5% y se administraron por vía oral a ratas con una sola dosis de 10 mg/kg/10 ml. Después de administrar el fármaco, las ratas se observaron continuamente en términos del número de erecciones del pene y el número de lamidos de los genitales durante 2 horas, y se calculó el índice de erección del pene (IEP). La significancia estadística de las diferencias entre grupos se calculó usando la comparación múltiple de Duncan por el programa estadístico habitual, Sigma-Stat®. Se asignaron más de tres ratas a cada grupo. A las ratas de otros dos grupos se les administró sólo la cantidad equivalente de metil-celulosa al 0,5% o citrato de sildenafil 10 mg/kg, y sirvieron como grupo testigo negativo y positivo, respectivamente.

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Los índices de erección del pene en el modelo de rata con derivados de pirazolopirimidinona de los ejemplos 1-70 se listan en la siguiente tabla 2.

TABLA 2

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Como resultado se demostró la utilidad de los derivados de pirazolopirimidinona de la presente invención por su mayor índice de erección del pene que sildenafil, usado actualmente para el tratamiento de la impotencia por administración oral.

Experimento 2

Ensayo para la actividad de la fosfodiesterasa-5 (PDE 5)

Con el fin de calcular el grado de inhibición de la actividad de la PDE 5 por los compuestos de fórmula 1, se llevó a cabo el siguiente ensayo.

Se separó la enzima fosfodiesterasa-5 (PDE 5) de tejidos de cuerpo cavernoso humano. Se homogeneizaron aproximadamente 3 g de este tejido con 12 ml de tampón Hepes (Hepes 20 mM, sacarosa 250 mM, EDTA 1 mM, PMSF 1 mM, pH 7,2) a 4ºC. La solución se filtró con doble capa de gasa y se centrifugó (100.000 x g) durante 60 min a 4ºC. El líquido sobrenadante se filtró con un papel de filtro de 0,2 \mum y se separó por HPLC (columna de intercambio aniónico Mono Q) con gradiente de concentración de NaCl 0-500 mM para eluir las isozimas de la PDE. La actividad de la enzima se midió en cada fracción de la columna por el siguiente procedimiento para separar la fracción de PDE 5, y la inhibición de la PDE 5 por los compuestos de fórmula 1 se midió usando la fracción.

A un tubo de 1,5 ml se añadieron 100 \mul de mezcla de reacción (Tris-HCl 15 mM, MgCl_{2} 5 mM, BSA 0,5 mg/ml, pH 7,4) y la cantidad adecuada de fracción de PDE 5 e inhibidor de PDE, y la mezcla se agitó bien. A esta solución se añadió [^{3}H]-cAMP o [^{3}H]-cGMP (500 nM, 2 \muCi/ml), la mezcla se hizo reaccionar en la incubadora a 30ºC durante aproximadamente 1 hora, y la reacción se paró poniendo el tubo en agua hirviendo durante aproximadamente 45 segundos a 2 min. Después el tubo se enfrió en un baño de hielo durante aproximadamente 5 min. A este tubo se añadió veneno de serpiente (1 mg/ml, 100 \mul) o 5'-nucleotidasa (0,1 unidades/tubo) y la mezcla se hizo reaccionar en la incubadora a 37ºC durante 10 min, y se enfrió en baño de hielo. Se añadió un volumen de metanol de 3 veces el de la resina a la resina de intercambio aniónico (resina Bio-Rad, AG1-X2, malla nº 200-400) que ya se había lavado con HCl 0,5 N, H_{2}O, NaOH 0,5 N, H_{2}O, HCl 0,5 N, y H_{2}O en este orden, y se ajustó a pH 5. Después se dispensó 1 ml de la resina pretratada en cada tubo con mezcla vortical. La mezcla se dejó a 4ºC durante 15 min con mezcla vortical ocasional, y se centrifugó (10.000 rpm) durante aproximadamente 5 min para sedimentar la resina. El líquido sobrenadante (700 \mul) se transfirió a un vial de centelleo de líquidos, y se mezcló con 10 ml de cóctel de centelleo. Después de estabilizar la solución dejándola reposar toda la noche, se midió la radiactividad del tubo por recuento \beta.

TABLA 3

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Como resultado, se demostró que los derivados de pirazolopirimidinona de la presente invención inhiben la actividad de la fosfodiesterasa-5 con una concentración de 0,1-50 ng/ml (CI_{50}) y por lo tanto, muestran una eficacia importante en el tratamiento de la impotencia por administración oral.

Experimento 3

Ensayo de la actividad de la fosfodiesterasa-6 (PDE 6)

Se sabe que el inhibidor de la PDE 5 inhibe adicionalmente la PDE 6 distribuida en la retina, isozima de la PDE 5, y que produce trastornos en la visión. Por lo tanto, con el fin de evaluar el grado de inhibición de la PDE 6 por los compuestos de fórmula 1, se llevó a cabo el siguiente ensayo.

Se separó la enzima fosfodiesterasa-6 (PDE 6) de la retina de ranas toro. Se añadió la retina a solución de Ringer (NaCl 105 mM, KCl 2,5 mM, MgCl_{2} 2 mM, CaCl_{2} 1 mM, glucosa 5 mM, NaHCO_{3} 5 mM, Hepes 10 mM, pH 7,5-7,6) que contenía Percoll al 6%, y la solución se agitó. Después las células se rompieron con presión con jeringa y se centrifugaron (aproximadamente 10.000 rpm) instantáneamente para separar el pigmento, y la fracción resultante se usó como fracción de PDE 6.

Se dispensaron 10 \mul de mezcla de reacción (Tris-HCl 20 mM, MgCl_{2} 10 mM, BSA 0,5 mg/ml, pH 7,5) en cada pocillo de una microplaca, a los que se añadieron 10 \mul de fracción de PDE 6 y 10 \mul de inhibidor de PDE y la solución se mezcló bien. Se añadieron a la solución 10 \mul de tripsina (aproximadamente 20-100 \mug/ml), la mezcla se hizo reaccionar en incubadora a 4ºC durante 1 hora para activar la PDE 6, y la reacción se paró por adición de 10 \mul de inhibidor de tripsina de soja (concentración 6 veces mayor que la tripsina usada). A esta mezcla se añadieron 10 \mul de nucleótido cíclico (generalmente, se añadió cGMP 10 mM) y la cantidad adecuada de veneno de serpiente o 5'-nucleotidasa, y la mezcla se hizo reaccionar en incubadora a 37ºC durante 20 min. Se midió la absorbancia del fosfato inorgánico producido por esta reacción a 700-750 nm por adición de 150 \mul de solución de molibdato (H_{2}SO_{4} 0,4 N, molibdato amónico al 0,2%, dodecilsulfato sódico al 2%, ácido ascórbico al 2%) preparada inmediatamente antes.

(Tabla pasa a la página siguiente)

TABLA 4

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Como se muestra en los resultados, puesto que la concentración de inhibición de 50% (CI_{50}) para la PDE 6 es mayor que para la fosfodiesterasa-5 para algunos de los derivados de pirazolopirimidinona, la probabilidad de trastornos en la visión producidos por los compuestos de la presente invención se pueden reducir mucho comparado con sildenafil.

Experimento 4

Ensayo de la actividad de la fosfodiesterasa-3 (PDE 3)

El inhibidor de PDE 5 puede inhibir adicionalmente la PDE 3 distribuida en el corazón, isozima de la PDE 5, que puede producir efectos secundarios en el sistema cardiovascular. Por lo tanto, con el fin de evaluar el grado de inhibición de la PDE 3 por los compuestos de fórmula 1, se llevó a cabo el siguiente ensayo.

Se separó la enzima fosfodiesterasa-3 (PDE 3) de plaquetas de conejo. Se recogieron aproximadamente 60 ml de sangre por una punción de la arteria abdominal de un conejo, en jeringuillas heparinizadas. Se recogió el plasma rico en plaquetas por centrifugación durante 5 min a 450 X g y después se centrifugó otra vez durante 15 min a 1.200 X g para precipitar las plaquetas. Las plaquetas se volvieron a suspender en tampón de homogeneización (Tris-HCl 50 mM, MgCl_{2} 1 mM, pH 7,4), se homogeneizaron a 4ºC y se trataron con ultrasonidos (30 s/ml). La solución homogeneizada se centrifugó (105.000 X g) durante 1 h a 4ºC para obtener el líquido sobrenadante en el que se disolvió la PDE. Se separó el líquido sobrenadante por cromatografía en columna de DEAE-celulosa (perlas Whatman DE52) usando eluyente (Tris-HCl 50 mM, 2-mercaptoetanol 3,75 mM, pH 6,0) con gradiente de concentración de acetato sódico 0-1 M para eluir las isozimas de la PDE. Se midió la actividad de la PDE en cada fracción de la columna mediante el siguiente procedimiento para separar la fracción de PDE 3, y se midió la inhibición de la PDE 3 por los compuestos de fórmula 1, usando la fracción.

En un tubo de 1,5 ml que contenía 100 \mul de mezcla de reacción (Tris-HCl 15 mM, MgCl_{2} 5 mM, BSA 0,5 mg/ml, pH 7,4) se añadieron las cantidades adecuadas de fracción de PDE 3 y de inhibidor de PDE, y la solución se mezcló bien. Después se añadió [^{3}H]-cAMP o [^{3}H]-cGMP (500 nM, 2 \muCi/ml), la mezcla se hizo reaccionar en una incubadora a 30ºC durante aproximadamente 1 hora, y la reacción se paró poniendo el tubo en agua hirviendo durante aproximadamente 45 segundos a 2 min. El tubo se enfrió en un baño de hielo durante aproximadamente 5 min. A este tubo se añadió veneno de serpiente (1 mg/ml, 100 \mul) o 5'-nucleotidasa (0,1 unidades/tubo) y la mezcla se hizo reaccionar en la incubadora a 37ºC durante 10 min, y se enfrió en baño de hielo. Se añadió un volumen de metanol 3 veces el de la resina a la resina de intercambio aniónico (resina Bio-Rad, AG1-X2, malla nº 200-400) que ya se había lavado con HCl 0,5 N, H_{2}O, NaOH 0,5 N, H_{2}O, HCl 0,5 N y H_{2}O en este orden, y se ajustó a pH 5. Después se añadió 1 ml de la resina pretratada a cada tubo con mezcla vortical. La mezcla se dejó a 4ºC durante 15 min con mezcla vortical ocasional y se centrifugó (10.000 rpm) durante aproximadamente 5 min para sedimentar la resina. El líquido sobrenadante (700 \mul) se transfirió a un vial de centelleo de líquidos, y se mezcló con 10 ml de cóctel de centelleo. Después de estabilizar la mezcla dejándola reposar toda la noche, se midió la radiactividad del tubo por recuento \beta.

TABLA 5

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Como se muestra en los resultados, puesto que la concentración de inhibición de 50% (CI_{50}) de la PDE 3 es mayor que la de la PDE 5 para algunos de los derivados de pirazolopirimidinona, la probabilidad de efectos secundarios en el sistema cardiovascular producidos por los compuestos de la presente invención, se puede reducir mucho comparado con sildenafil.

Experimento 5

Ensayo de toxicidad aguda por vía oral en ratas

El ensayo para confirmar la toxicidad de los compuestos de fórmula 1 se llevó a cabo como sigue.

En este ensayo se usaron ratas SPF SD de seis semanas de edad, y se asignaron dos ratas a cada grupo. Los compuestos de los ejemplos 1, 2, 3, 5, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 19, 22, 23, 24, 26, 28, 29, 31, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 44, 46, 47, 48, 49, 51, 52, 53, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68 y 70, se suspendieron en metil-celulosa al 0,5% respectivamente, y se administraron por vía oral con una sola dosis de 1 g/kg usando una aguja con punta de bola. El volumen de dosificación era 10 ml/kg. Después de la administración se observaron en los animales las señales clínicas de toxicidad o mortalidad, y se midieron los cambios de peso corporal. Todos los supervivientes al final del periodo de observación se sometieron a laparotomía con anestesia de éter, y se tomaron muestras de sangre de la arota abdominal para los ensayos hematológicos y análisis bioquímicos. Después de sacrificar a los animales, se llevó a cabo la autopsia para la observación macroscópica de los órganos y tejidos. Se sacaron muestras de tejido de los órganos vitales de lesión macroscópica, y se fijaron en solución de formalina tamponada neutra al 10%, después se procesaron por procedimiento patrón para la histopatología y se examinaron con microscopio óptico. No había síntomas clínicos, cambios de peso corporal ni mortalidades significativas. Tampoco en la hematología de los parámetros químicos del suero y observación macroscópica se observaron cambios relacionados con el fármaco. Como resultado, ninguno de los compuestos ensayados mostró toxicidad en ratas hasta 1 g/kg, y se determinó que la dosis letal (DL_{50}) para la administración oral era aproximadamente 1 g/kg en ratas.

Experimento 6

Solubilidad en solución tampón a pH = 2 y 5

Con el fin de evaluar las solubilidades en agua de los compuestos de fórmula 1, en soluciones tampón de pH = 2 y 5, se llevó a cabo el siguiente experimento.

De acuerdo con lo descrito en la farmacopea Coreana se añadieron soluciones tampón de citrato-HCl (pH 2) y tampón de citrato-NaOH (pH 5) a los compuestos en polvo de fórmula 1, respectivamente. Después de la posterior agitación fuerte durant 30 s cada 5 min a 20-5ºC durante 30 min, se midió el nivel de compuestos en el filtrado por cromatografía líquida de alta precisión. Los resultados se muestran en la Tabla 6.

TABLA 6

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Como se muestra en los resultados, las solubilidades en agua de los compuestos de acuerdo con la presente invención, son muy altas. Las solubilidades en agua a pH 2 y 5 de sildenafil eran 1585 y 480 \mug/ml, respectivamente. Por otra parte, las solubilidades en agua de los compuestos de la presente invención, preferiblemente de los ejemplos 56, 58, 60, 62 y 68, eran 3722-5356 y 4923-14758 \mug/ml a pH 2 y 5 respectivamente. Es decir, las solubilidades en agua de los compuestos de acuerdo con la presente invención se han aumentado hasta un máximo de 3,3 y 30,7 veces comparadas con las de sildenafil a pH 2 y 5, respectivamente.

La solubilidad en agua del compuesto, en particular en un intervalo ácido de pH, es el factor más importante que determina la absorción del compuesto en la administración oral. Por lo tanto, se espera mejor absorción de los compuestos de acuerdo con la presente invención, a la luz de la mayor solubilidad de los compuestos en intervalo ácido de pH. También tienen la ventaja de reducir la dosis en administración oral.

Experimento 7

Metabolismo en el hígado de rata

Con el fin de evaluar el grado de metabolismo de los compuestos de fórmula 1, se estudió el metabolismo en el hígado de rata como se indica a continuación, de forma similar al procedimiento descrito (C.L. Litterist, E.G. Mimnaugh, R.I. Reagan and T.G. Gram., Drig. Metabol. Disposit., 1975, 3, 259-265). Brevemente, se evaluó la desaparición de compuestos después de incubación en la fracción de líquido sobrenadante de 9.000 x g del homogeneizado de hígado de rata, en presencia de NADPH (fosfato-dinucleótido de nicotinamida y adenina reducido).

Primero, se aisló hígado de rata Sprague-Dawley (Korea Experiment Animals, SPF) después de perfusión a través de la vena portal con tampón fosfato 0,1 M de pH 7,0 usando homogeneizador de tejidos a 4ºC. Después de centrifugar a 9.000 x g durante 20 min, se recogieron los líquidos sobrenadantes.

La solución madre de compuesto se distribuyó (10 \mug/ml) en cada uno de los tubos Eppendorf que contenían 1 ml de la solución mezclada que constaba de 1 volumen de líquidos sobrenadantes y 2 volúmenes de solución generadora. La solución generadora contiene NADP 1 mM, glucosa-6-fosfato 10 mM, nicotinamida 50 mM y MgCl_{2} 5 mM en tampón fosfato 0,1 M de pH 7,0. Después de mezcla vortical, cada tubo de ensayo se incubó en un baño de agua mantenido a 37ºC. Después de 1 h, se añadió acetonitrilo a la mezcla de reacción y se centrifugó. Se cogieron muestras de partes alícuotas de 100 \mul de los líquidos sobrenadantes de cada tubo de ensayo, para medir el remanente por cromatografía líquida de alta precisión. Los resultados se mostraban en la Tabla 7.

TABLA 7

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Como se muestra en los resultados, el grado de metabolismo de los compuestos en el hígado de rata es sensiblemente menor. El remanente (%) de algunos de los compuestos en el hígado estaba por encima de 50%, mientras que el de sildenafil en el hígado era aproximadamente 35%. En particular, el remanente (%) de algunos de los compuestos de la presente invención estaba por encima de 80% y 95% como máximo. Es decir, se confirmaba que algunos de los compuestos de la presente invención apenas eran metabolizados en el hígado.

El nivel de metabolismo del compuesto en el hígado es otro factor importante que determina la biodisponibilidad y el efecto in vivo, acompañado de la solubilidad en condiciones ácidas. El remanente (%) bajo requiere aumento de la dosis. Por lo tanto, se espera mayor biodisponibilidad y mejor efecto in vivo de los compuestos de la presente invención a la luz del menor metabolismo en el hígado. También los compuestos de la presente invención tienen la ventaja de reducir la dosis en la administración oral.

Claims

1. Un derivado de pirazolopirimidinona representado por la siguiente fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo (no se muestra la fórmula)

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en la que

R_{1} es un grupo alquilo de C_{1}-C_{3},

R_{2} es un grupo alquilo de C_{2}-C_{6} sustituido o no sustituido,

R_{3} es un grupo alquilo de C_{2}-C_{6} sustituido o no sustituido,

R_{4} es un grupo alquilo de C_{1}-C_{6} sustituido o no sustituido, un grupo cicloalquilo de C_{3}-C_{6} sustituido o no sustituido, un benceno sustituido o no sustituido, una piridina sustituida o no sustituida, o un pirrol sustituido o no sustituido, en los que el sustituyente para los grupos sustituidos se selecciona de los siguientes grupos:

grupo alquilo C_{1}-C_{12}, grupo cicloalquilo C_{3}-C_{6}, halógeno, grupo fluoroalquilo C_{1}-C_{6}, grupo alcoxi C_{1}-C_{10}, benceno o heterociclo no sustituido, en los que el heterociclo se selecciona del grupo constituido por piridina, isoxazol, tiazol, pirimidina, indano, benzotiazol, pirazol, tiadiazol, oxazol, piperidina, morfolina, imidazol, pirrolidina, tienilo, triazol, pirrol y furilo, o en el que R_{1} a R_{4} son como sigue:

(Tabla pasa a la página siguiente)

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2. Los derivados de acuerdo con la reivindicación 1, en los que R_{4} es un grupo alquilo de C_{1}-C_{6} sustituido y el sustituyente es pirrolidina.

3. El derivado de pirazolopirimidinona de acuerdo con la reivindicación 1, que se selecciona del grupo constituido por:

5-[2-etoxi-5-(isopropilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(bencilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-propiloxi-5-(isopropilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(butilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(ciclopropilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(bencilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-propiloxi-5-(bencilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(4-fluorofenilamidosulfonil)fenil]-1-etil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(4-piridilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-propiloxi-5-(4-piridilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(4-piridilamidosulfonil)fenil]-1-etil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(4-piridilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(3-piridilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-propiloxi-5-(3-piridilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(3-piridilamidosulfonil)fenil]-1-etil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(3-piridilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-propiloxi-5-(4-piridilmetilamidosulfonil)-fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(4-piridilmetilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo (4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(3-piridilmetilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(3-piridilmetilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo (4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-propiloxi-5-(3-piridilmetilamidosulfonil)-fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(2-piridilmetilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo (4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-propiloxi-5-(2-piridilmetilamidosulfonil) fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-propiloxi-5-(1-metil-2-pirrolidinilmetil-amidosulfonil) fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(1-metil-2-pirrolidinilmetilamido-sulfonil) fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-propiloxi-5-(1-metil-3-pirrolidinilmetil-amidosulfonil) fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(1-metil-3-pirrolidinilmetilamido-sulfonil) fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona; y

5-[2-propiloxi-5-(1-metil-2-pirrolidiniletil-amidosulfonil) fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona.

4. El derivado de pirazolopirimidinona de acuerdo con la reivindicación 3, que se selecciona del grupo formado por:

5-[2-propiloxi-5-(3-piridilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-ihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(4-piridilmetilamidosulfonil) fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(3-piridilmetilamidosulfonil) fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(2-piridilmetilamidosulfonil) fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-propiloxi-5-(2-piridilmetilamidosulfonil)fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-
ona;

5-[2-etoxi-5-(1-metil-2-pirrolidinilmetil-amidosulfonil) fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona;

5-[2-etoxi-5-(1-metil-3-pirrolidinilmetil-amidosulfonil) fenil]-1-metil-3-isobutil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona; y

5. El derivado de pirazolopirimidinona de acuerdo con la reivindicación 4, que se selecciona del grupo constituido por:

6. El derivado de pirazolopirimidinona de acuerdo con la reivindicación 5, que es 5-[2-propiloxi-5-(1-metil-2-pirrolidiniletilamidosulfonil) fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona.

\newpage

7. Una composición farmacéutica para el tratamiento de la impotencia, que contiene el derivado de pirazolopirimidinona de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como un ingrediente activo.

8. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7, que además contiene al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.

9. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7 u 8, en la que el derivado de pirazolopirimidinona es 5-[2-propiloxi-5-(1-metil-2-pirrolidiniletilamidosulfonil) fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona.

10. Uso del derivado de pirazolopirimidinona de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o una de sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para fabricar un medicamento para tratar la impotencia.

11. El uso de acuerdo con la reivindicación 10, en el que el derivado de pirazolopirimidinona es 5-[2-propiloxi-5-(1-metil-2-pirrolidiniletilamidosulfonil) fenil]-1-metil-3-propil-1,6-dihidro-7H-pirazolo(4,3-d)pirimidin-7-ona.