ES2202665T3

ES2202665T3 - Extracto de tejido inflamatorio como supresor de la producccion de monoxido de carbono.

Info

Publication number: ES2202665T3
Application number: ES98100213T
Authority: ES
Inventors: Kousaku c/o Nippon Zoki Pharm. Co. Ltd. Ohno; Jin-emon c/o Nippon Zoki Pharm. Co. Ltd. Konishi; Seishi c/o Nippon Zoki Pharm. Co. Ltd. Suehiro
Original assignee: Nippon Zoki Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Nippon Zoki Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1997-01-08
Filing date: 1998-01-08
Publication date: 2004-04-01
Anticipated expiration: 2018-01-08
Also published as: JPH10194978A; US6051613A; EP0852950A1; CN1155406C; CA2226478A1; KR19980070290A; EP0852950B1; ATE245426T1; CN1187369A; KR100516827B1; TW542720B; DE69816493T2; JP4033936B2; DE69816493D1

Abstract

UN OBJETO DE LA PRESENTE INVENCION ES OFRECER UNA COMPOSICION FARMACEUTICA QUE CONTIENE UN EXTRACTO PROCEDENTE DE UN TEJIDO INFLAMADO INOCULADO CON UN VIRUS DE VACUNA QUE PRESENTA UNA ACCION SUPRESORA DE LA MUERTE DE CELULAS Y UNA EXCESIVA PRODUCCION DE MONOXIDO DE NITROGENO INDUCIDA POR UNA ENDOTOXINA, Y UNA ACCION MEJORADORA DE LA HIPOTENSION INDUCIDA POR UNA ENDOTOXINA. LA PRESENTE INVENCION ES UNA NUEVA COMPOSICION FARMACEUTICA QUE CONTIENE UN EXTRACTO PROCEDENTE DE UN TEJIDO INFLAMADO INOCULADO CON UN VIRUS DE VACUNA, TAL COMO UN SUPRESOR DE LA PRODUCCION DE NITROGENO, UN AGENTE TERAPEUTICO PARA LA SEPSIS, UN AGENTE ANTIENDOTOXINICO Y UN AGENTE TERAPEUTICO PARA EL CHOQUE ENDOTOXICO. EN LA SEPSIS Y OTRAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS BACTERIANAS GRAVES, SE PRODUCE UNA ENDOTOXINA (UNA TOXINA INTRACELULAR) Y POR ESTA ACCION SE INDUCEN SINTOMAS DE CHOQUE. POR CONSIGUIENTE, LA SUSTANCIA DE LA PRESENTE INVENCION QUE PRESENTA UNA EXCELENTE ACCION INHIBIDORA DE LA TOXICIDAD INDUCIDA POR ENDOTOXINASTAL COMO SE HA MENCIONADO ANTERIORMENTE, RESULTA MUY UTIL PARA EL TRATAMIENTO O LA PREVENCION DE LOS SINTOMAS DEL CHOQUE INDUCIDO POR ENDOTOXINAS, LA SEPSIS Y DIVERSOS SINTOMAS QUE LA ACOMPAÑAN. ADEMAS, LA SUSTANCIA DE LA PRESENTE INVENCION PRESENTA UNA ACCION INHIBIDORA DE LA PRODUCCION DE MONOXIDO DE NITROGENO ANORMAL DURANTE EL ESTADO DE ENFERMEDAD, Y POR TANTO TAMBIEN RESULTA UTIL COMO AGENTE TERAPEUTICO Y PREVENTIVO FRENTE A ENFERMEDADES EN LAS CUALES PARTICIPA UNA PRODUCCION DE MONOXIDO DE NITROGENO EXCESIVA, TAL COMO LA HIPOTENSION AGUDA.

Description

Extracto de tejido inflamatorio como supresor de la producción de monóxido de carbono.

Campo técnico

La presente invención se refiere a una nueva acción farmacológica de un extracto a partir de tejido inflamatorio inoculado con el virus vaccinia. Más particularmente, se refiere a un uso de la preparación de un agente farmacéutico tal como un supresor de la producción del monóxido de nitrógeno, al uso de la preparación de un agente terapéutico para la sepsis, al uso de la preparación como un agente antiendotoxínico y al uso de la preparación como un agente terapéutico para el choque endotoxínico, que contiene el extracto a partir de tejido inflamatorio inoculado con el virus vaccinia como un componente eficaz.

Técnica anterior

Se ha sabido que, contra la invasión desde el exterior de virus, etc. y contra el desarrollo del estado de enfermedad en el interior, el cuerpo vivo produce varias sustancias reguladoras de la biofunción para mantener su homeostasis y para regular y normalizar las biofunciones mediante dos fases que consisten en una acción de supresión de las reacciones excesivas y una acción de intensificación de la depresión de funciones. Por ejemplo, ha habido varios informes sobre sustancias reguladoras de la biofunción, las cuales se producen en tejidos inflamatorios inoculados con el virus vaccinia; sobre métodos de extracción de dichas sustancias de los tejidos enfermos; y sobre actividades farmacológicas de los mismos (referencia, por ejemplo, a las Publicaciones de Patente Japonesa Examinadas Sho-63/039.572 B, Sho-63/025.600 B y Hei-03/043.279 B).

En cuanto a un fármaco que esté disponible actualmente, hay una preparación de fármaco de un extracto a partir de piel inflamatoria de conejo inoculada con el virus vaccinia. Como se menciona en la página 1.434 de "Drugs in Japan, Ethical Drugs" (publicado en Agosto de 1994; editado por Japan Pharmaceutical Information Center; publicado por Yakugyo Jiho Co., Ltd.), esta preparación es un fármaco que contiene sustancias activas no-proteicas extraídas y aisladas a partir de tejidos inflamatorios de conejos inoculados con el virus vaccinia, la cual se ha autorizado su uso contra el dolor débil de espalda, los síndromes de

\hbox{cuello}

-hombro-brazo, la periartritis escapulohumeral, la osteoartritis, la neuralgia sintomática, el picor acompañado de trastornos de la piel (tales como eczema, dermatitis y urticaria),la rinitis alérgica, las secuelas de la neuropatía mielo-óptica subaguda (tales como resfriado, dolor y parestesia/disestesia), etc.; la cual está autorizada como un medicamento de venta con receta en forma de inyecciones (subcutáneas, intramusculares e intravenosas) y de comprimidos; y está disponible comercialmente.

Como se mencionó anteriormente, se sabe que un extracto a partir de tejido inflamatorio inoculado con el virus vaccinia tiene diversas acciones farmacológicas tales como acción analgésica, acción sedante, acción antialérgica y acción de mejora de la circulación periférica. Sin embargo, no ha habido ningún informe en absoluto con respecto a las nuevas acciones farmacológicas de la presente invención tales como una acción supresora de la producción de monóxido de nitrógeno, una acción terapéutica para la sepsis, una acción antiendotoxínica, una acción terapéutica para el choque endotoxínico, etc.

Problemas para ser resueltos por la invención

En la sepsis y en otras enfermedades infecciosas bacterianas graves, se produce endotoxina (una toxina intracelular) y, como resultado de su acción, tiene lugar síntoma de choque. La endotoxina muestra variadas acciones sobre los organismos vivos tales como fiebre, leucocitosis, activación del sistema de complemento y quinina, inducción del síndrome de coagulación intramuscular diseminada (DIC) y supresión de la médula ósea. Cuando el síntoma de choque por endotoxina se desarrolla, se induce una excesiva hipotensión, una reducción del rendimiento cardiaco, una secreción urinaria pequeña, una alteración de la consciencia, etc., por lo cual, el cuerpo vivo alcanza un estado muy grave. Se ha sugerido que una hipotensión rápida tras el choque endotoxínico se debe a un exceso de monóxido de nitrógeno el cual se produce anormalmente por la acción de la endotoxina sobre las células endoteliales vasculares y ha habido investigaciones sobre inhibidores de las enzimas que sintetizan monóxido de nitrógeno, tales como los derivados de la alginina, con el objeto de conseguir agentes terapéuticos para la hipotensión tras el choque endotoxínico.

Los presentes inventores han efectuado varios ensayos y estudios sobre la actividad farmacológica de un extracto a partir de tejido inflamatorio inoculado con el virus vaccinia y, como resultado, han encontrado que dicho extracto tiene una acción supresora de la muerte de las células y supresora de un exceso de producción de monóxido de nitrógeno inducido por endotoxina y también tiene una acción de mejoramiento de la hipotensión inducida por endotoxina, con lo cual se han alcanzado los objetivos de la presente invención.

Medios para resolver los problemas

Un objeto de la presente invención es ofrecer un uso nuevo de una composición farmacéutica que contiene un extracto a partir de tejido inflamatorio inoculado con el virus vaccinia, tal como el uso de la preparación como un supresor de la producción de monóxido de nitrógeno, como un agente terapéutico para la sepsis, como un agente antiendotoxínico y como un agente terapéutico para el choque endotoxínico.

Realizaciones de la invención

El componente eficaz de la composición farmacéutica de la presente invención es una sustancia no-proteica reguladora de la biofunción, extraída a partir de los tejidos inflamatorios inoculados con el virus vaccinia. Una preparación de fármaco de un extracto a partir de la piel inflamatoria de conejo inoculada con el virus vaccinia, que se enumeró en el mencionado anteriormente "Drugs in Japan, Ethical Drugs", ha sido aprobada como un agente farmacéutico, introducida en el mercado y disponible en Japón. Además, diversos extractos de tejido inflamatorio inoculado con el virus vaccinia, mencionados en las referencias tales como las publicaciones de patente mencionadas anteriormente, pueden utilizarse como la sustancia activa de la presente invención y sus métodos de fabricación y las dosis preferidas se ilustran también en las referencias.

Con respecto a la vía de administración al paciente, las administraciones subcutáneas, intramusculares e intravenosas mediante inyección y la administración oral mediante comprimidos están aprobadas para el agente disponible comercialmente, pero también es posible administrar la dosis farmacéutica de otras formas, aparte de las anteriormente mencionadas, las cuales son óptimas para la terapia dependiendo del tipo de enfermedad. La dosis se decide adecuadamente dependiendo de la clase de extracto a partir de tejido inflamatorio inoculado con el virus vaccinia, mientras que la dosis que está aprobada en la preparación disponible comercialmente de acuerdo con el documento anterior "Drugs in Japan, Ethical Drugs" (página 1.434) es, principalmente, de 16 unidades de neurotropina por día mediante administración oral y de 3,6 a 7,2 unidades de neurotropina por día mediante inyección, respectivamente. Sin embargo, la dosis se puede aumentar o disminuir apropiadamente, dependiendo del tipo de enfermedad, del grado de gravedad, de las diferencias individuales entre los pacientes, del método de administración, del periodo de administración, etc.

A continuación, se dan los resultados de los ensayos farmacológicos relativos a la nueva acción farmacológica de un extracto a partir de tejido inflamatorio inoculado con el virus vaccinia.

(1) Acción de protección celular

Se añadió, en diversas concentraciones, endotoxina (lipopolisacárido: LPS) a 2 x 10^{4} células endoteliales de vena umbilical humana transplantadas a una placa de incubación de 3,5 cm y se sembraron dichas células endoteliales. Siete días después de la siembra, se contó el número de células mediante un hemocitómetro y se efectuó la medida de si las células estaban vivas o muertas mediante un método de tinción con azul de tripán. Se hizo coexistir la sustancia de la presente invención con este sistema de ensayo y se investigó el efecto de la sustancia de la presente invención sobre la muerte de las células endoteliales por LPS. En la Fig. 1 se muestra un ejemplo de los resultados del mismo.

Como se muestra en la Fig. 1, el LPS, en una concentración de más de 0,1 \mug/ml, dañó las células endoteliales en un manera dependiente de la dosis que tiene como resultado la muerte de las células. Contra dicha muerte celular inducida por LPS, la sustancia de la presente invención, preparada mediante un método de fabricación mencionado en el Ejemplo 1 de la Publicación de Patente Japonesa Examinada Sho- 63/039.572 B, mostró una excelente acción de protección celular con lo cual se mejoró significativamente la proporción de supervivencia de las células.

(2) Acción inhibidora de la producción de monóxido de nitrógeno

Se cultivaron células endoteliales de vena umbilical humana (2x10^{4} células/pocillo) sobre multi-placas de 96 pocillos en 200 ml de medio de cultivo hasta que las células alcanzaron la confluencia. Entonces se quitó el medio, se añadieron al mismo un medio fresco que contenía LPS (0,001-100 mg/ml) y la sustancia mencionada anteriormente de la presente invención; y, después de 24 horas, se midió la cantidad de monóxido de nitrógeno producido de esa manera mediante un análisis del desarrollo del color usando un reactivo de Griess. Así, se recogieron 100 ml de las células incubadas de cada uno de los pocillos incubados; se añadió al mismo 100 ml de un reactivo de Griess (una disolución de ácido fosfórico al 2% que contiene 1% de sulfanilamida y 0,1% de dihidrocloruro de N-1-naftiletilendiamina), la mezcla se incubó a 25ºC durante 10 minutos y se midió la absorbancia (densidad óptica: 540 nm). La disolución acuosa de nitrito de sodio se usó como una disolución patrón para investigar la acción inhibidora de la sustancia de la presente invención sobre la producción de monóxido de nitrógeno y en la Fig. 2 se muestra un ejemplo de la misma.

Como uno de los mecanismos de actuación de la acción protectora celular de la sustancia de la presente invención frente al anteriormente mencionado daño celular inducido por LPS, se investigó una acción inhibidora de la producción de monóxido de nitrógeno. Como se muestra en la Fig. 2, se aumentó significativamente la producción de monóxido de nitrógeno en presencia de LPS a dosis más altas de 0,1 \mug/ml y la sustancia de la presente invención indudablemente mostró una acción de inhibición de dicha producción de monóxido de nitrógeno inducida por LPS. Además, la sustancia de la presente invención (la cual se administró simultáneamente con la administración de LPS) mostró una acción supresora de un aumento de la sustancia NADPH-diaforasa-positiva y de una sintetasa de monóxido de nitrógeno inducible en pulmón, hígado y riñón de ratones tratados con LPS. Por lo tanto, se sugirió, por la presente, que la acción inhibidora de la sustancia de la presente invención de la producción de monóxido de nitrógeno se debió a la inhibición de una expresión de la sintetasa inducible de monóxido de nitrógeno.

(3) Acción supresora de la toxicidad letal inducida por LPS

Una disolución de la sustancia de la presente invención o una disolución salina fisiológica tamponada con fosfato se inyectó intraperitonealmente a ratones ddy macho (25-30 g) junto con LPS (0,75 mg/ratón). Después de la inyección inicial, se inyectó una disolución de la sustancia de la presente invención (40 unidades/kg) o una disolución salina fisiológica tamponada con fosfato (control), cada 12 horas durante cinco días. Se monitorizó la mortalidad de los ratones dos veces al día durante cinco días. En la Fig. 3 se muestra un ejemplo del resultado.

Como se muestra en la Fig. 3, la proporción de supervivencia de los ratones inyectados con LPS disminuyó en un lapso de tiempo mientras que, en el grupo con la sustancia de la presente invención (una preparación de fármaco de un extracto a partir de piel inflamatoria de conejo inoculada con el virus vaccinia; nombre comercial: Neutropina), se observó significativamente una acción supresora de la toxicidad letal inducida por LPS. Así, como en el ensayo de la serie celular endotelial incubada mostrado en la Fig. 1, se confirmó la acción supresora de la sustancia de la presente invención de la toxicidad letal inducida por LPS.

(4) Acción de mejora de la hipotensión inducida por LPS

Se anestesiaron ratas Fischer macho (230-250 g) mediante una inyección intraperitoneal de pentobarbital (40 mg/kg) y se insertaron catéteres en la arteria para medir la presión sanguínea y la frecuencia cardiaca y también para la administración de la sustancia de la presente invención. Después de que la presión sanguínea y la frecuencia cardiaca se estabilizaran, se inyectó por vía intravenosa la sustancia de la presente invención (60 mg/kg) o bien una disolución salina fisiológica (control). Después de 30 minutos, se inyectó LPS (15 mg/kg) y se midió la presión sanguínea cada 10 minutos durante tres horas.

La presión sanguínea arterial media de las ratas expuestas a LPS disminuyó después de aproximadamente 40 minutos desde la administración del LPS y, después de 1,5-2,5 horas, se observó una disminución de aproximadamente el 20%. Por otra parte, sin embargo, en el grupo al cual se inyectó una preparación de fármaco de un extracto a partir de piel inflamatoria de conejo inoculada con el virus vaccinia, no tuvo lugar a hipotensión sino que se observó una ligera hipertensión (alrededor del 5%).

Mérito de la invención

A partir de los resultados mencionados anteriormente de los ensayos farmacológicos, está claro que un extracto a partir de tejido inflamatorio inoculado con el virus vaccinia, el cual es un componente eficaz de la composición farmacéutica de la presente invención, muestra una excelente acción preventiva de la muerte de las células o de los animales, inducida por endotoxina (lipopolisacárido: LPS) y también muestra una evidente acción inhibidora de un exceso de producción de monóxido de nitrógeno inducido por la endotoxina. Ya se ha sugerido que una hipotensión repentina tras un choque endotoxínico se debe a un exceso de producción de monóxido de nitrógeno de las células vasculares endoteliales inducido por endotoxina y, en el ensayo farmacológico mencionado anteriormente de hipotensión inducida por LPS, la sustancia de la presente invención que tiene una acción inhibidora de la producción de monóxido de nitrógeno, mostró una acción preferida de mantenimiento de la presión sanguínea normal frente la hipotensión después de la administración de LPS. En el ensayo farmacológico mencionado anteriormente (con respecto a la acción supresora de la muerte inducida por endotoxina, a una acción inhibidora de la producción de monóxido de nitrógeno y a una acción de mejora de la hipotensión inducida por LPS), se ilustra un ejemplo de los resultados del ensayo y dichas acciones se observaron también no solamente por el extracto a partir de piel inflamatoria de conejo inoculada con el virus vaccinia comercialmente disponible, sino también por los extractos mencionados en los ejemplos de la Publicación de Patente Japonesa Examinada (JP) Sho-63/039.572 B, por los extractos mencionados en los ejemplos de JP Sho-63/025.600 B y por los extractos mencionados en los ejemplos de JP Hei-03/043.279 B así como también por diversos extractos a partir de tejido inflamatorio inoculado con el virus vaccinia.

En la sepsis y en otras enfermedades infecciosas bacterianas graves, se produce endotoxina (una toxina intracelular) y se induce un síntoma de choque por su acción. Por lo tanto, la sustancia de la presente invención que tiene una excelente acción inhibidora de la toxicidad inducida por endotoxina, como se mencionó anteriormente, es bastante útil para el tratamiento o para la prevención del síntoma de choque inducido por endotoxina, de la sepsis y de diversos síntomas adjuntos. Además, la sustancia de la presente invención tiene una acción inhibidora de la producción anormal de monóxido de nitrógeno durante el estado de enfermedad y, por tanto, es también útil como un agente terapéutico y preventivo de las enfermedades en las que intervienen un exceso de producción de monóxido de nitrógeno como la hipotensión grave.

Ejemplos

Un extracto a partir de tejido inflamatorio, por ejemplo tejido de piel, en particular, tejido de piel de mamíferos, inoculado con el virus vaccinia, que es un componente eficaz de la composición farmacéutica de la presente invención, puede convertirse en diversas preparaciones farmacéuticas mediante una combinación adecuada con varios vehículos o diluyentes farmacéuticos mediante medios convencionales por los cuales las preparaciones sólidas, semisólidas, líquidas o aerosoles para uso oral o parental se obtienen en la formulación, y la sustancia de la presente invención puede usarse sola o junto con otros componentes farmacéuticamente activos.

En el caso de las inyecciones, es posible preparar las disoluciones o las suspensiones en disolventes acuosos y no acuosos tales como el agua destilada para inyección, la disolución salina fisiológica, la disolución de Ringer, el aceite vegetal, los glicéridos de ácidos grasos sintéticos, los ésteres de ácidos grasos superiores, propilenglicol, etc.

En el caso de las preparaciones para administración oral, la sustancia de la presente invención tal cual o junto con excipientes usados comúnmente tales como un aditivo adecuado (por ejemplo lactosa, manitol, almidón de maíz, almidón de patata, etc.) se mezcla con: aglomerantes tales como celulosa cristalina, celulosa, goma arábiga, almidón de maíz, gelatina, etc.; agentes disgregantes tales como almidón de maíz, almidón de patata, carboximetilcelulosa de potasio, etc.; agentes lubricantes tales como talco, estearato de magnesio, etc.; y con otros que incluyen agentes de voluminosidad, agentes humectantes, tampones, conservantes, perfumes y similares para obtener comprimidos, polvos diluidos, gránulos o

\hbox{cápsulas.}

También es posible, dependiendo del tipo de enfermedad, preparar las preparaciones farmacéuticas de otras maneras distintas de las ya mencionadas y que son adecuadas para la terapia tales como, por ejemplo, supositorios, inhalaciones, preparaciones en aerosol, colirios, pomadas, cataplasmas, etc.

Explicación breve de los dibujos

La Fig. 1 muestra el efecto inhibidor de la sustancia de la presente invención sobre la muerte de las células endoteliales causada por la LPS.

La Fig. 2 muestra la acción inhibidora de la sustancia de la presente invención sobre un exceso de producción de monóxido de nitrógeno causado por LPS.

La Fig. 3 muestra la acción inhibidora de la sustancia de la presente invención sobre la toxicidad letal en ratones causada por la administración de LPS.

Claims

1. Uso de un extracto de tejido inflamatorio inoculado con el virus vaccinia como un componente eficaz para la preparación de una composición farmacéutica supresora de la producción de monóxido de nitrógeno inducida por endotoxina.

2. Uso de un extracto de tejido inflamatorio inoculado con el virus vaccinia como un componente eficaz de la preparación para una composición farmacéutica eficaz como un agente antiendotoxínico.

3. Uso de un extracto de tejido inflamatorio inoculado con el virus vaccinia como un componente eficaz para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de la sepsis.

4. Uso de un extracto de tejido inflamatorio inoculado con el virus vaccinia como un componente eficaz para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento del choque endotoxínico.

5. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el tejido inflamatorio es un tejido de piel.

6. Uso de acuerdo con la reivindicación 5, en el que el tejido inflamatorio es un tejido de piel de mamíferos.

7. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que la composición farmacéutica se formula para inyección.

8. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que la composición farmacéutica se formula para administración oral.