JP2001058949A - 抗ショック剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 発痘組織より抽出した生理活性物質を有効成
分とする抗ショック剤またはその予防剤を提供する。 【構成】 ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物
は、エンドトキシン投与による急激な血圧降下を抑制す
る作用、血圧を回復させる作用、多量の出血によるショ
ック時において生存時間を延長させる作用、及び、細胞
障害性のサイトカインであるＴＮＦ−αの産生を抑制す
る作用を持つ。その為、単にショック症状の血圧降下を
抑制する作用を持つだけでなく、細胞障害性サイトカイ
ンによって誘発される多臓器不全自体へも改善作用を有
する、優れた抗ショック剤またはその予防剤を提供す
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ワクシニアウイルス接
種家兎炎症皮膚抽出液を有効成分とする、ショック症状
の治療、軽減、悪化防止、悪化の軽減または予防のため
に使用される抗ショック剤を提供するものである。

【０００２】

【従来の技術】従来、多量の出血、薬物中毒、エンドト
キシン、あるいは循環器系障害などの救急疾患に伴うシ
ョック症状が散見されている。ショックとは、急激に血
圧が降下し、多臓器不全（ＭＯＦ）となる極めて重篤な
臨床症状である。原因として直接的には前記の如きもの
が考えられ、分類学的に考察すれば、出血、熱傷、脱水
等による体液喪失性ショック（外傷性ショック）、細菌
性ショック、血管緊張低下による急性末梢血管拡張性シ
ョック、内分泌不全ショック及び心不全によるショック
等に分けることができるが、その本態は末梢における循
環障害である。そのため、現在、（１）適当な種類の輸
液の適当量点滴、（２）動脈圧ＰＯ_２（酸素分圧）の一
定値以上の維持（３）昇圧剤の投与等が行われている。

【０００３】

【発明が解決しようとする問題点】ショック自体の病態
生理が末梢循環障害である点を考慮すると、ドーパミ
ン、ノルエピネフィリン等の昇圧剤の投与は、末梢血管
圧を上昇させるものとしてはかなり有効である。しかし
ながら、これらの治療によっては敗血症のショック等に
見られる過剰或いは異常な生体反応、つまり各種ケミカ
ルメディエーター（サイトカインなど）の連鎖反応によ
って生じる細胞障害を病因とするＭＯＦに対する治療薬
剤としては有効でない。従って、ショックの治療として
は、急激な血圧降下を回復させる一方で、ＭＯＦの原因
となる細胞障害性サイトカインの産生を抑制する作用を
あわせ持つ抗ショック剤の開発が望まれていた。

【０００４】近年、このようなケミカルメディエーター
対策を意図した抗ショック剤が検討されている。例え
ば、免疫グロブリン、抗エンドトキシン抗体或いは抗Ｔ
ＮＦ抗体［ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ），３３０，６６
２（１９８７）］等の投与による免疫学的手法、及びウ
リナスタチンに代表される酵素阻害剤［救急医学，１
８，３７３（１９９４）］、ＩＬ−１受容体拮抗物質
［ブラッド（Ｂｌｏｏｄ），７７，１６２７（１９９
１）］、ＴＮＦ結合性蛋白［外科診療，３４，２３５
（１９９２）］等が試みられている。しかしながら、こ
れらには重篤な副作用が見られたり、ウリナスタチン以
外は血圧降下を回復する作用が認めらず、満足すべき効
果は得られていない。

【０００５】

【問題点を解決するための手段】本発明者らは、有効成
分名がワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出液と称
される医薬品原薬を鋭意研究した結果、エンドトキシン
に起因する血圧降下に対する抑制作用を持つこと、多量
の出血、薬物中毒、敗血症、循環器障害等による急激な
血圧降下を回復するとともに、ＭＯＦの原因となる細胞
障害性サイトカインの産生を抑制する作用を持つことを
知見し、本発明を完成させた。

【０００６】本発明にかかるワクシニアウイルス接種家
兎炎症皮膚抽出液は、単にショック症状の血圧降下を抑
制する作用を持つだけでなく、培養マクロファージをエ
ンドトキシンで刺激して放出されるＴＮＦ−α（腫瘍壊
死因子）の産生を用量依存的に抑制し、また、ＴＮＦ−
αのｍＲＮＡ産生も抑制することから、このＴＮＦ−α
産生抑制作用は遺伝子レベルにも及ぼすことが示され
た。ＴＮＦ−αは、細胞障害性サイトカインの代表的な
ものであるだけに、この作用を有する物質は、細胞障害
性サイトカインによって誘発されるＭＯＦ自体も抑制す
る抗ショック剤またはその予防剤として有望である。

【０００７】ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出
液は、例えば医療薬日本医薬品集１９９７年１０月版第
１７１０頁に記載されている既知の物質であり、これを
有効成分とした製剤は、免疫調整、抗アレルギー、鎮痛
および鎮静剤、特にストレス状態にある神経組織に対し
特異的に作用する薬剤として、その含有量は力値を示す
「単位」で表されるか、または当該「単位」と実質的に
同等とされている「ノイロトロピン単位」で表され、医
療用薬剤として市販されている（以下、「単位」に統一
して記す）。しかし、これまで、抗ショック剤またはそ
の予防剤としての用途は全く知られていなかった。

【０００８】本発明にかかるワクシニアウイルス接種家
兎炎症皮膚抽出物の投与量は、患者の症状の程度、体
重、年齢等により異なるが、１〜５０単位、好ましくは
５〜２０単位を、１回か２回または持続的に投与する。
また、投与に際しては、適した有機または無機の固体ま
たは液体賦形剤のような医薬用担体、または他の抗ショ
ック剤と混合して投与することができる。投与方法は、
経口投与、皮下投与、筋肉内投与または静脈内投与が可
能であるが、静脈内投与がより望ましい。

【０００９】以下に実施例を示して本発明を詳細に説明
するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定するもの
ではない。尚、特に説明がない限り、「抽出液」は本発
明のワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出液を意味
する。

【００１０】１．抗ショック作用

【実施例１】エンドトキシンショックによる血圧降下の
抑制及び回復作用 ラットに大腸菌由来のエンドトキシンを５ｍｇ／ｋｇ静
脈内投与し、エンドトキシンショックを起こした。エン
ドトシキン投与１分前に本発明の抽出液を、各々１．２
単位／ｋｇ、３．６単位／ｋｇ及び１２単位／ｋｇ静脈
内投与した。その結果、通常、エンドトキシン投与直後
に出現する時の急激な血圧降下を抑制し、また、その後
の血圧の回復を早めた（図１）。

【００１１】

【図１】

【００１２】

【実施例２】エンドトキシンショック時の延命効果 マウスに大腸菌由来のエンドトキシンを２５ｍｇ／ｋｇ
当たり腹腔内投与し、エンドトキシンショックを起こし
た。エンドトシキン投与５分後、３時間後、６時間後及
び１２時間後に、本発明の抽出液を３．６単位／ｋｇ静
脈内投与し、その２４時間後の生死を観察した。その結
果、２４時間後の生存率を市販の抗ショック剤であるウ
リナスタチンと比較した時、その延命効果はウリナスタ
チンより優れていた（表１）。

【００１３】

【表１】

【００１４】

【実施例３】脱血による出血性低血圧時の延命効果 ラットをウレタン腹腔内投与により麻酔して、背位に固
定し、脱血、輸血、動脈圧測定及び薬物投与に使用する
ため、それぞれ右大腿動脈、左大腿静脈、総頚動脈、外
頚静脈にカテーテルを留置した。３０分以上放置し血圧
が安定した後、ヘパリン採血により脱血を施し、平均総
頚動脈圧を５０ｍｍＨｇまで下げ出血性ショックを誘導
した。そして、脱血と自家血の輸血により、その動脈圧
を維持しながら生死を観察した。その結果、脱血開始１
０分前から本発明の抽出液を１３０分間かけて３．６単
位／ｋｇ持続注入することにより、生存時間は大幅に延
長された（図２）。

【００１５】

【図２】

【００１６】２．炎症惹起性サイトカイン産生に対する
作用

【実施例４】エンドトキシン刺激培養マクロファージか
らのＴＮＦ−αの産生抑制作用 ｉｎ ｖｉｔｒｏ培養マウスマクロファージ細胞株Ｐ３
８８Ｄ_１細胞に大腸菌由来のエンドトキシン１０μｇ／
ｍｌを添加し、５％ＣＯ_２３７℃の条件下に、２時間培
養し、産生されるＴＮＦ−α量をサンドイッチＥＬＩＳ
Ａ法により測定した。尚、エンドトキシン添加と同時に
本発明の抽出液を１．５×１０^−８、１．５×１
０^−７、１．５×１０^−６及び１５×１０^−５単位／ｍ
ｌとなるように添加した。その結果、ＴＮＦ−α産生は
抽出液添加の濃度依存的に抑制され、１．５×１０^−６
単位／ｍｌ及び１５×１０^−５単位／ｍｌの濃度におい
て、対照群におけるＴＮＦ−α産生量と比較し、抽出液
添加による抑制は統計学的に有意であった（ｐ＜０．０
５，ｐ＜０．０１）（図３）。

【００１７】

【図３】

【００１８】

【実施例５】マウスにおけるエンドトキシン誘導ＴＮＦ
−α遺伝子転写に対する抑制作用 本発明の抽出液１２．５単位を３０分前に腹腔内投与し
たマウスに、大腸菌由来エンドトキシン１μｇ及びガラ
クトサミン２０ｍｇを静脈注射投与後、１時間目に脾臓
を摘出して全ＲＮＡを抽出し、ＴＮＦ−α遺伝子に関す
る逆転写反応−ポリメラーゼチェインリアクション（Ｒ
Ｔ−ＰＣＲ）を行い、ＴＮＦ−α遺伝子発現に対する影
響を調べた。対照群には、抽出液と同量の生理食塩液を
投与した。各群マウス３匹を使用した。各々のマウス脾
臓ＲＮＡ１μｇにＴＮＦ−α遺伝子特異的下流プライマ
ーを加え、逆転写酵素を作用させてｃＤＮＡを合成した
後、上流プライマーを更に添加し、耐熱性ＤＮＡ合成酵
素を用いてｃＤＮＡを増幅した。各サンプルのｃＤＮＡ
を２％寒天ゲル電気泳動により分画し、３５４塩基対の
バンドの濃度を、デンシトメーターにより測定した。同
様に、各サンプルのＲＮＡにつき、内部標準としてグリ
セルアルデヒド−３−リン酸脱水系酵素（Ｇ３ＰＤＨ）
遺伝子についても逆転写反応により、ｃＤＮＡを合成
後、増幅した。アガロース電気泳動におけるＧ３ＰＤＨ
バンドをデンシトメーターで測定し、各サンプルにつき
ＴＮＦ−αのバンドとＧ３ＰＤＨバンドの濃度比を算出
した。その結果、抽出液を投与した群は生理食塩液投与
群に比べ、ＴＮＦ−α遺伝子の発現が強く抑制されてい
た（図４）。

【００１９】

【図４】

【００２０】

【実施例６】マウスにおけるエンドトキシン誘導ＴＮＦ
−α蛋白の産生に対する抑制作用 本発明の抽出液１２．５単位／ｋｇを１日１回３日間連
続復腔内投与し、最後の投与より約２４時間目に脾臓を
採取し、脾細胞を大腸菌由来エンドトキシン１０μｇ／
ｍｌ存在下５％ＣＯ_２、３７℃で２時間培養し、培養上
清中に放出されたＴＮＦ−αをサンドイッチＥＬＩＳＡ
法により定量した。対照群のマウスには注射用生理食塩
液を、また、陽性対照群としてデキサメタゾン２ｍｇ／
ｋｇを抽出液の代わりに投与した。その結果、抽出液
は、デキサメタゾン投与と同程度にＴＮＦ−α産生を抑
制した（図５）。

【００２１】

【図５】

【００２２】

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１のラットにおける大腸菌エンドトキシ
ン誘発ショック時の血圧の降下抑制作用及び回復作用を
示すグラフである。

【図２】実施例３のラットにおける脱血による出血性シ
ョックに対する延命作用を示すグラフである。

【図３】実施例４のエンドトキシン刺激培養マクロファ
ージからのＴＮＦ−αの産生抑制作用を示すグラフであ
る。

【図４】実施例５のマウス脾臓細胞におけるエンドトキ
シン誘導ＴＮＦ−α遺伝子転写の抑制作用を示すグラフ
である。

【図５】実施例６の抽出液投与マウス脾臓細胞における
エンドトキシン誘導ＴＮＦ−α蛋白の産生抑制作用を示
すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 37/00 Ａ６１Ｐ 37/00 (72)発明者 森本 和彦 大阪府松原市西大塚１丁目３番40号 藤本 製薬株式会社創薬研究所内 (72)発明者 中尾 智佳子 大阪府松原市西大塚１丁目３番40号 藤本 製薬株式会社創薬研究所内 (72)発明者 森口 美保 大阪府松原市西大塚１丁目３番40号 藤本 製薬株式会社創薬研究所内 (72)発明者 則貞 伸嘉 大阪府松原市西大塚１丁目３番40号 藤本 製薬株式会社創薬研究所内 (72)発明者 卜部 和則 大阪府松原市西大塚１丁目３番40号 藤本 製薬株式会社創薬研究所内 (72)発明者 栄 雅敏 大阪府松原市西大塚１丁目３番40号 藤本 製薬株式会社創薬研究所内 Ｆターム(参考） 4C085 AA17 BA01 BA85 BB17 BB31 CC22 EE01 4C087 AA01 AA02 BB48 BC83 CA06 MA01 NA14 ZA36 ZA43 ZB05 ZB13 ZB35 ZC54

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ワクシニアウイルス家兎接種炎症皮膚抽
   出液を有効成分として含有する抗ショック剤またはその
   予防剤。
2. 【請求項２】 ショック症状が末梢循環不全によるショ
   ックである請求項１記載の抗ショック剤またはその予防
   剤。
3. 【請求項３】 ショック症状が細菌性ショックである請
   求項１記載の抗ショック剤またはその予防剤。
4. 【請求項４】 ショック症状がアレルギー性ショックで
   ある請求項１記載の抗ショック剤またはその予防剤。
5. 【請求項５】 ショック症状が体液喪失性ショックであ
   る請求項１記載の抗ショック剤またはその予防剤。
6. 【請求項６】 ショック症状が急性末梢血管拡張性ショ
   ックである請求項１記載の抗ショック剤またはその予防
   剤。