ES2299032T3

ES2299032T3 - Polvos que contienen nuevas mezclas de oligosacaridos y metodos para la produccion de los mismos.

Info

Publication number: ES2299032T3
Application number: ES05745334T
Authority: ES
Inventors: Richard Fuhrherr; Stefan Bassarab; Karoline Bechtold-Peters; Wolfgang Friess; Patrick Garidel; Torsten Schultz-Fademrecht
Original assignee: Boehringer Ingelheim Pharma GmbH and Co KG; Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Boehringer Ingelheim Pharma GmbH and Co KG; Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2004-05-10
Filing date: 2005-05-04
Publication date: 2008-05-16
Anticipated expiration: 2025-05-04
Also published as: WO2005113007A2; ATE383850T1; CA2564332A1; KR20070043709A; WO2005113007A3; EP1789019B1; DE102004022928A1; JP2007536315A; TW200605897A; EP1789019A2; DK1789019T3; DE502005002596D1

Abstract

Polvo que contiene un principio activo farmacéutico y una combinación de adyuvantes que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1, 4-O, elegido entre los compuestos siguientes: D-Gal-sacarosa unida a través de 1, 4-O (lactosucrosa); D-Glu-sacarosa unida a través de 1, 4-O (glucosil-sucrosa; y Glu-Glu-sacarosa unida a través de 1, 4-O (maltosil-sucrosa); y otro adyuvante adicional.

Description

Polvos que contienen nuevas mezclas de oligosacáridos y métodos para la producción de los mismos.

Ámbito de la invención

La invención se refiere al uso de nuevos oligosacáridos/mezclas de oligosacáridos para la fabricación y estabilización de composiciones farmacéuticas, en especial de tipo polvo, que contienen un principio activo farmacéutico. La fabricación de los polvos se realiza con preferencia mediante secado por atomización o mediante liofilización. La presente invención se refiere en especial a los polvos correspondientes, que contienen anticuerpos, así como a procedimientos para su fabricación.

Antecedentes

En las soluciones acuosas, los principios activos formulados/composiciones de principios activos están sujetos en parte a inestabilidades, que pueden conducir a una merma de su eficacia o bioactividad y a una mayor toxicidad o bien a incompatibilidades. Esto afecta tanto a los productos farmacéuticos clásicos como a los principios activos que contienen péptidos o proteínas. Se puede influir positivamente en la estabilidad de los principios activos farmacéuticos mediante la alteración de su estructura (internamente) o por adición de adyuvantes adecuados (externamente).

Un procedimiento habitual para la estabilización externa de los principios activos farmacéuticos consiste en el uso de adyuvantes adecuados. Los adyuvantes que estabilizan a los principios activos pueden subdividirse a grandes rasgos en los grupos siguientes: azúcares y polioles, aminoácidos, aminas, sales, polímeros y tensioactivos.

Los azúcares y polioles se emplean con frecuencia como estabilizadores inespecíficos. En el caso de los principios activos biológicos, su efecto estabilizar se atribuye principalmente a la "exclusión preferente" (Xie y Timasheff, Biophysical Chemistry 64(1-3), 25-43, 1997a; Xie y Timasheff, Protein Science 6(1), 211-221, 1997b; Timasheff, Annual review of biophysics and biomolecular structure 22, 67-97, 1993). En el caso de principios activos biológicos, durante la elección de los azúcares se evitan por lo general los azúcares reductores. Por su condición de azúcares no reductores se emplean con preferencia la sacarosa y la trehalosa. otros ejemplos de adyuvantes idóneos son la glucosa, la sorbita, la glicerina (Boctor y Mehta, Journal of Pharmacy and Pharmacology 44(7), 600-3, 1992; Timasheff, 1993 (lugar citado); Chang y col., Pharmaceutical Research 10(10), 1478-83, 1993) y la manita (Hermann y col., Pharmaceutical Biotechnology 9 (Formulation, Characterization, and Stability of Protein Drugs), 303-328, 1996; Chan y col., Pharmaceutical Research 13(5), 756-761, 1996). Es conocido además, que los más diversos polímeros tienen un efecto estabilizador en los principios activos farmacéuticos, en especial en las proteínas, por ejemplo en los anticuerpos. La albúmina de suero humano (HSA), que en el pasado se ha utilizado con frecuencia, dispone ciertamente de excelentes propiedades estabilizadoras e inhibidoras de la agregación, pero, por su potencial contaminación con gérmenes inherentes de la sangre (bloodbourne), se considera actualmente como inadecuada. Entre los polímeros conocidos hasta el presente ha demostrado ser especialmente indicada la \beta-\beta-hidroxipropil-ciclodextrina (HP-CD), porque no hay objeciones a su aplicación incluso por vía parenteral. Otros ejemplos son los dextranos de peso molecular elevado (de 18 a 82 kD), la PVP, heparina, las gelatinas de tipo A y B así como el hidroxietil-almidón (HES), la heparina, el dextrano-sulfato, el ácido polifosfórico, el ácido poli-L-glutámico, la poli-L-lisina.

Además de los azúcares y polioles pueden utilizarse también como estabilizadores los aminoácidos, solos o en combinación con otros adyuvantes. Para la estabilización de las proteínas se emplean con preferencia los aminoácidos. Por ejemplo, la adición de histidina, glicina, aspartato sódico (Na-Asp), glutamato y clorhidrato de lisina (Lys-HCl) inhibe la agregación del rhKGF en un tampón fosfato sódico 10 mM (pH = 7,0) junto con un 5% de manita (Zhang y col., Biochemistry 34(27), 8631-41, 1995). La combinación de aminoácidos y propilenglicol mejora por ejemplo la estabilidad estructural del rhCNTF (Dix y col., Pharmaceutical Research (suplemento) 12, p. 97, 1995). La lisina y la arginina aumenta la termoestabilidad del IL-1R (aumento de la Tm), por el contrario, la glicina y la alanina tienen un efecto desestabilizador (Remmele y col., Pharmaceutical Research 15 (2), 200-208, 1998).

Por otro lado, la estabilidad de los principios activos farmacéuticos puede aumentarse mediante diversos procedimientos de secado. Por lo demás, el secado se realiza en general en presencia de adyuvantes, que conservan la estabilidad de los principios activos y debería mejorar las propiedades de los polvos secos.

Un factor decisivo para la estabilización por secado es la inmovilización del principio activo dentro de una estructura (matriz) amorfa. El estado amorfo posee una viscosidad elevada, una menor movilidad molecular y una menor reactividad. Por lo tanto, los adyuvantes ventajosos deberán ser capaces de formar una estructura provista de una temperatura de transición vítrea lo más elevada posible, dentro de la cual pueda incrustarse el principio activo. La elección de los adyuvantes dependerá, pues, en especial de su capacidad de estabilización. Pero, por otro lado desempeñan también un papel importante la aceptación farmacéutica del adyuvante así como su influencia en la formación de partículas, la dispersabilidad y la fluidez, en especial cuando se trata de un procedimiento de secado por atomización.

El secado por atomización constituye un procedimiento especialmente adecuado para aumentar la estabilidad química y física de los principios activos farmacéuticos de tipo proteína/péptido (Maa y col., Pharmaceutical Research 15(5), 768-775, 1998). En especial en el ámbito de la terapia pulmonar se utiliza cada vez más el secado por atomización (US 5,626,874; US 5,972,388; Broadhead y col., J. Pharm. Pharmacol. 46(6), 458-467, 1994), porque la aplicación inhalativa se ha convertido actualmente en una alternativa incluso para el tratamiento de las enfermedades sistémicas (WO 99/07340). El requisito previo es que el tamaño medio de partícula de los polvos se sitúe en el intervalo de 1 a 10 \mum, con preferencia de 1 a 7,5 \mum, de modo que las partículas puedan penetrar hasta los sectores más profundos de los pulmones y, por tanto, en el torrente circulatorio. En el documento DE-179 22 07 A se describe por ejemplo la fabricación de las correspondientes partículas por secado de atomización. Actualmente se ha descrito ya un gran número de procedimientos para la fabricación de los polvos en cuestión (WO 95/31479; WO 96/09814; WO 96/32096; WO 96/32149; WO 97/41833; WO 97/44013; WO 98/16205; WO 98/31346; WO 99/66903; WO 00/10541; WO 01/13893; Maa y col., 1998, lugar citado; Vidgrén y col., Int. J. Pharmaceutics 35, 139-144, 1987; Niven y col., Pharmaceutical Research 11 (8), 1101-1109, 1994).

Como adyuvantes son también idóneos los azúcares y sus alcoholes (p. ej. la trehalosa, lactosa, sacarosa o la manita) así como diversos polímeros (Maa y col., Pharm. Development and Technology 2(3), 213-223, 1997; Maa y col., 1998, lugar citado; tesis doctoral de Adler, 1998, universidad de Erlangen; Costantino y col., J. Pharm. Sci. 87(11), 1406-1411, 1998). Sin embargo, los adyuvantes empleados del modo recién indicado tienen diversos inconvenientes. La adición de la trehalosa y manita, por ejemplo, empeora la fluidez de las formulaciones fabricadas mediante secado por atomización (C. Bosquillon y col., Journal of Controlled Release, 70(3), 329-339, 2001). Además, con un contenido superior al 20 por ciento en peso, la manita tiende a la recristalización (Costantino y col., 1998, lugar citado), con lo cual disminuyen de modo dramático los efectos estabilizadores. La lactosa, un adyuvante empleado con frecuencia, mejora ciertamente la fluidez de las formulaciones obtenidas mediante secado por atomización (C. Bosquillon y col., 2001, lugar citado), pero es problemática en especial para la formulación de principios activos que contienen péptidos/proteínas, porque la lactosa debido a sus propiedades reductoras puede incurrir en reacciones de Maillard desestabilizadoras con péptidos/proteínas.

Durante el secado por atomización de anticuerpos sin añadir estabilizadores se produce en general, debido a la deshidratación, calor y cizallamiento, el despliegue de la estructura secundaria nativa y, con ella, una pérdida dramática de la bioactividad. Las porciones hidrófobas, dirigidas hacia el interior, del anticuerpo acaban dirigiéndose hacia el exterior. Esto ocurre con gran frecuencia en las superficies límite hidrófobas de las gotas, que se forman en el curso del secado por atomización, con el aire. Además, los anticuerpos dentro de la fase acuosa se aglomeran formando dímeros o agregados de orden superior. Esta agregación es a menudo irreversible. Por otro lado, la temperatura elevada, a la que se pulveriza las proteínas, constituye también un parámetro crítico. Debido a la fuerte aportación de energía se puede llegar a la desestabilización de los enlaces peptídicos y la desnaturalización del anticuerpo. Además se pueden formar agregados de anticuerpos secados por atomización durante el almacenaje de los polvos. En este fenómeno incide de forma especialmente negativa el contenido residual de agua del polvo. Los agregados de proteínas se caracterizan por una actividad biológica reducida o nula así como por una mayor antigenicidad.

En la industria alimentaria se emplean azúcares polihídricos (oligosacáridos), también denominados azúcares de condensación (coupling sugars), cuyos principales componentes son la maltosilsucrosa y la glucosilsucrosa así como la lactosucrosa. Se emplean como cargas de relleno y agentes dispersantes junto con edulcorantes del tipo aspartamo, como componentes moderadamente dulces de las gomas de mascar (chiclés), para la estabilización contra la cristalización de jarabes de trehalosa o como oligosacáridos no digeribles ("NDO"). Es también conocida la mejora y la estabilización de la cualidad edulcorante de los péptidos de arpargilo o de la relación dulce-ácido en las bebidas que contienen cargas de relleno (fibras) y edulcorantes (US 2003/0059511, EP 1 223 175, DE 199 53 727). Por los documentos US 5,489,577 y EP 0630 651 es conocido también el uso de oligosacáridos para la estabilización de suspensiones de proteínas terapéuticas y de bases grasas o aceitosas. Se ha descrito que las proteínas, si no se mezclaran previamente con oligosacáridos, perderían su actividad durante el mezclado y amasado con masas hidrófobas semisólidas. En modo alguno se menciona el potencial de estabilización al almacenaje en mezclas hidrófilas ni en polvos.

En el documento WO 98/16205 se describen polvos inhalables, que, como adyuvantes, contienen oligosacáridos.

Un objetivo de la presente invención consiste en proporcionar nuevos adyuvantes/mezclas de adyuvantes para la fabricación de formulaciones farmacéuticas. Las formulaciones en cuestión deberían caracterizarse, entre otras, por una buena estabilidad al almacenaje.

Otro objetivo de la presente invención consiste en proporcionar nuevos adyuvantes/mezclas de adyuvantes para la fabricación de formulaciones farmacéuticas secadas. Las formulaciones farmacéuticas pulverulentas en cuestión deberían caracterizarse por su buena estabilidad al almacenaje y, a ser posible, por su inhalabilidad.

Otro objetivo de la presente invención consiste en proporcionar nuevos adyuvantes/mezclas de adyuvantes para la fabricación de formulaciones farmacéuticas que contienen péptidos/proteínas, en especial las que se obtienen mediante secado por atomización. Las formulaciones farmacéuticas en cuestión, que contienen péptidos/proteínas, deberían a su vez caracterizarse por la buena estabilidad al almacenaje y, a ser posible, por la inhabilidad.

Otro objetivo de la presente invención consiste en proporcionar nuevos adyuvantes/mezclas de adyuvantes para la formulación de anticuerpos terapéuticos o derivados de anticuerpos, en especial de los que se obtienen mediante secado por atomización. Las formulaciones farmacéuticas en cuestión, que contienen anticuerpos, deberían caracterizarse por la buena estabilidad al almacenaje y, a ser posible, por la inhabilidad.

Otro objetivo de la presente invención consiste en proporcionar composiciones farmacéuticas para la aplicación inhalativa, ya sea en forma de polvo seco, ya sea en forma de aerosol dosificable con gas propelente, ya sea en forma de solución inhalable con gas propelente.

Los objetivos perseguidos por la invención se alcanzan mediante las siguientes formas de ejecución así como mediante los objetos/procedimientos definidos en las reivindicaciones.

Resumen de la invención

La presente invención se refiere a polvos que contienen un principio activo farmacéutico y una combinación de adyuvantes que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, elegido entre los compuestos siguientes: D-Gal-sacarosa unida a través de 1,4-O (lactosucrosa), D-Glu-sacarosa unida a través de 1,4-O (glucosil-sucrosa) o Glu-Glu-sacarosa unida a través de 1,4-O (maltosil-sucrosa), en combinación por lo menos con otro adyuvante. El otro adyuvante es con preferencia un aminoácido, un péptido y/o un mono-, di- y/u oligosacárido, dicho oligosacárido puede ser también un segundo derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, en el supuesto de que sea diferente del primero.

El término lactosucrosa indica moléculas que tienen la siguiente fórmula estructural:

1

En el sentido de la presente invención se entiende por glucosil-sucrosa una molécula de la siguiente fórmula estructural:

2

El término maltosil-sucrosa indica moléculas de la siguiente fórmula estructural:

3

Una combinación de adyuvantes de la invención es por ejemplo una mezcla de azúcares, que, además del derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, contiene por lo menos otro azúcar en forma de mono-, di- y/u oligosacárido.

Según una forma preferida de ejecución, la mezcla de azúcares es por ejemplo la lactosucrosa en combinación con lactosa y sacarosa o una combinación de glucosil- y maltosil-sucrosa, que a su vez pueden contener otros mono-, di- u oligosacáridos.

Según otra forma de ejecución, la combinación de adyuvantes de la invención es una mezcla de por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O en combinación con un aminoácido, con preferencia la isoleucina.

Otra combinación de adyuvantes de la invención es una mezcla de por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, en combinación con un péptido, distinto del principio activo farmacéutico. El péptido contiene con preferencia uno o varios restos de isoleucina. Según otra forma preferida de ejecución, el péptido es un di- o un tri-péptido, con preferencia especial es un tripéptido o un dipéptido que contiene isoleucina, siendo preferido en especial el uso de la tri-isoleucina.

Según otra forma de ejecución la presente invención, la combinación de adyuvantes es una mezcla de azúcares que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O y por lo menos otro mono-, di- y/u oligosacárido, en combinación con un aminoácido, con preferencia la isoleucina, y/o con un péptido, con preferencia un di- o tri-péptido, que a su vez contiene con preferencia por lo menos un resto isoleucina o, según una forma especialmente preferida de ejecución, consta de restos isoleucina.

De modo sorprendente, ahora se ha encontrado que los polvos en cuestión, después del secado i) forman una estructura amorfa, ii) se obtienen en un rendimiento relativamente alto (por lo menos un 75% referido al sólido empleado como material de partida), iii) disponen de una temperatura de transición vítrea muy alta, superior a 40ºC y iv) presentan una tendencia escasa a la recristalización.

El principio activo farmacéutico es con preferencia una macromolécula biológica, que puede ser un polipéptido o una proteína, por ejemplo un factor de crecimiento, una enzima o un anticuerpo. Son, pues, especialmente acordes con la invención los polvos (a) que contienen una porción del 25 al 99,99/(p/p), con preferencia del 80 al 90% (p/p) de una de las combinaciones de adyuvantes de la invención, que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O (referido a la masa seca del polvo) y (b) que contienen una macromolécula biológica como principio activo farmacéutico, con preferencia en una concentración comprendida entre el 0,01 y el 75% (p/p), referida de nuevo a la masa seca del polvo; la suma de los porcentajes de la combinación de adyuvantes que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O y la macromolécula biológica asciende como máximo al 100% (p/p). Según otra forma de ejecución, la presente invención se refiere, pues, a polvos, que referidos a su masa seca, contienen (a) entre el 25 y el 90% (p/p) de por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, (b) entre el 1 y el 39,99% (p/p) de por lo menos un aminoácido y/o por lo menos un péptido como adyuvante adicional y (c) por lo menos un 0,01% (p/p) de un principio activo farmacéutico. Con preferencia, el adyuvante adicional es el aminoácido isoleucina o un di- o tri-péptido, con preferencia por lo menos un resto isoleucina.

Según una forma especial de ejecución, la presente invención se refiere a polvos, que, en lo que respecta a su masa seca, tienen una porción de (a) aproximadamente del 25 al 80% (p/p) por lo menos de un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de una mezcla de azúcares que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, (b) aproximadamente del 10 al 19,99% (p/p) de un aminoácido, con preferencia la isoleucina y (c) aproximadamente del 0,01 al 65% (p/p) de un principio activo farmacéutico, con preferencia de un péptido/proteína, por ejemplo un anticuerpo.

Según otra forma especial de ejecución, la presente invención se refiere a polvos, que, en lo que respecta a su masa seca, contienen (a) aproximadamente del 25 al 90% (p/p) de por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de una mezcla de azúcares que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, (b) aproximadamente del 1 al 19,99% (p/p) de un péptido, con preferencia un péptido que contiene a la isoleucina, con mayor preferencia todavía de un tri-péptido que contenga la isoleucina, con preferencia especial de la tri-isoleucina y (c) aproximadamente del 0,01 al 74% (p/p) de un principio activo farmacéutico, con preferencia de un péptido/proteína, por ejemplo un anticuerpo. Los polvos en cuestión, en especial después de mezclarse con un aminoácido, por ejemplo la isoleucina, o con un péptido, con preferencia un tri-péptido que contenga la isoleucina, presentan una buena fluidez y se caracterizan por un porcentaje elevado de partículas inhalables. Los polvos de interés disponen además de una buena estabilidad durante el procesado y durante el almacenaje.

Según otra forma de ejecución, la presente invención se refiere a polvos, que contienen una combinación de adyuvantes descrita en esta solicitud, que contienen uno o varios derivados de sacarosa unidos a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O y por lo menos un principio activo farmacéutico, el polvo en cuestión presenta una temperatura de transición vítrea superior a 40ºC, con preferencia superior a 45ºC, con mayor preferencia superior a 50ºC, con mayor preferencia todavía superior a 55ºC y con preferencia especial superior a 60ºC. Por lo general, los polvos correspondientes de la invención presentan una temperatura de transición vítrea máxima entre 96 y 110ºC. En algunos casos concretos, este valor puede incluso más elevado. La temperatura de transición vítrea depende de forma primaria de la porción del adyuvante utilizado, en especial del derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o bien de la porción de la mezcla de derivados dentro del polvo.

Los polvos de la invención son con preferencia polvos secados por atomización o liofilizados, siendo preferidos en especial los polvos secados por atomización.

Según otra forma de ejecución, la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas para aplicaciones inhalativas, que contienen un polvo descrito en esta invención o que se componen de este o se fabrican con este. En este contexto son preferidas las composiciones farmacéuticas, que contienen los polvos de la invención en forma de polvos inhalables, aerosoles dosificables con gas propelente o soluciones inhalables después de la reconstitución, sin gas propelente. Los polvos secados según la invención, con preferencia secados por atomización, que se emplean para fabricar la composición farmacéutica, se caracterizan según otra forma de ejecución por un porcentaje elevado de partículas inhalables, que tienen un diámetro de partícula aerodinámico medio (MMAD) inferior a 10 \mum, con preferencia de 0,5 a 7,5 \mum, con mayor preferencia de 0,5 a 5,5 \mum, con preferencia especial de 0,5 a
5,0 \mum.

La invención proporciona además un procedimiento para la fabricación de los polvos según la invención, caracterizado porque se prepara una solución o suspensión que contiene por lo menos uno o varios derivados de sacarosa unidos mediante 1,4-O de los compuestos antes descritos o una mezcla de azúcares que contiene estos derivados y por lo menos un principio activo farmacéutico, y se atomiza en condiciones apropiadas. La temperatura del proceso de atomización se sitúa con preferencia entre 50 y 200ºC (temperatura de entrada en la boquilla) y entre 30 y 150ºC (temperatura de salida de la boquilla).

Descripción de las figuras

Todos los porcentajes indicados en las descripciones se refieren a la concentración de los sólidos en las soluciones (p/v). Todas las leyendas de los diagramas descritos a continuación se refieren a la composición porcentual (p/p) de los polvos obtenidos mediante secado por atomización o liofilización y posterior pulverización. Se mencionan también en las leyendas la concentración de sólidos totales de la soluciones (TS = total solid) en porcentaje (p/p). En la leyenda del diagrama 8 se abrevia azúcar de condensación (coupling sugar) con CS. En las leyendas de los diagramas 18, 19, 20 y 21 se abrevia la tri-isoleucina por Ile3. En los diagramas 15, 16, 17, 18, 19, 20 y 21 se indica además la velocidad de atomización (AAF = atomizing air flow) ajustada en el Büchi B290 durante el proceso de secado por atomización. El número 40 indica un caudal volumétrico real de \sim 0,67 m^{3}/h, 50 indica un caudal volumétrico real de \sim 1,05 m^{3}/h y 60 indica un caudal volumétrico real de \sim 1,74 m^{3}/h. Por lo tanto, en todos los demás diagramas, la velocidad de atomización fue de 40, equivalente a un caudal volumétrico real de \sim 0,67 m^{3}/h.

En la figura 1 se representa el contenido de agregados después de la liofilización, pulverización, almacenaje abierto durante una semana a 40ºC y un 75% de humedad relativa (estabilidad al almacenaje forzada) y reconstitución. Se liofilizan soluciones acuosas que contienen a) una porción del 4,5% de LS55P y una porción del 0,5% de IgG, b) una porción del 4,5% de azúcar de condensación y una porción del 5,0% de IgG, c) una porción del 0,5% de IgG y d) una porción del 4,5% de manita y una porción del 0,5% de IgG. Tanto los polvos que contienen LS55P como azúcar de condensación se caracterizan por un bajo contenido de agregados.

En la figura 2 se representa el contenido de agregados después de la liofilización, pulverización, almacenaje seco durante cuatro semanas a 40ºC (estabilidad al almacenaje equilibrada) y reconstitución. Se liofilizan soluciones acuosas que contienen a) una porción del 4,5% de LS55P y una porción del 0,5% de IgG, b) una porción del 4,5% de azúcar de condensación y una porción del 0,5% de IgG, c) una porción del 5,0% de IgG y d) una porción del 4,5% de manita y una porción del 0,5% de IgG. Tanto los polvos que contienen LS55P como azúcar de condensación se caracterizan por un bajo contenido de agregados.

En la figura 3 se representa el contenido de agregados después de la liofilización, pulverización, secado con vacío, almacenaje seco durante cuatro semanas a 40ºC (estabilidad al almacenaje con secado al vacío) y reconstitución. Se liofilizan soluciones acuosas que contienen a) una porción del 4,5% de LS55P y una porción del 0,5% de IgG, b) una porción del 4,5% de azúcar de condensación y una porción del 0,5% de IgG, c) una porción del 5,0% de IgG y d) una porción del 4,5% de manita y una porción del 0,5% de IgG. Tanto los polvos que contienen LS55P como azúcar de condensación se caracterizan por bajo contenido de agregados.

En la figura 4 se representa el contenido de agregados después del secado por atomización, almacenaje abierto durante una semana a 40ºC y un 75% de humedad relativa (estabilidad al almacenaje forzada) y reconstitución. Se secan por atomización soluciones acuosas que contienen a) una porción del 9% de LS55P y una porción del 1% de IgG, b) una porción del 9% de azúcar de condensación y una porción del 1% de IgG, c) una porción del 9% de azúcar de condensación S y una porción del 1% de IgG, d) una porción del 9% de trehalosa y un 1% de IgG y e) una porción del 10% de IgG. Tanto los polvos que contienen LS55P como azúcar de condensación o el azúcar de condensación S se caracterizan por un bajo contenido de agregados.

En la figura 5 se representa el contenido de agregados después del secado por atomización, almacenaje abierto durante una semana a 40ºC y un 75% de humedad relativa (estabilidad al almacenaje forzada) y reconstitución. Se secan por atomización soluciones acuosas que contienen a) una porción del 8% de LS55P, una porción del 1% de isoleucina y una porción del 1% de IgG, b) una porción del 8% de azúcar de condensación, una porción del 1% de isoleucina y una porción del 1% de IgG, c) una porción del 8% de azúcar de condensación S, una porción del 1% de isoleucina y una porción del 1% de IgG, d) una porción del 8% de trehalosa, una porción del 1% de isoleucina y un 1% de IgG y e) una porción del 10% de IgG. Tanto los polvos que contienen LS55P como azúcar de condensación o el azúcar de condensación S se caracterizan por un bajo contenido de agregados.

En la figura 6 se representa el contenido de agregados después del secado por atomización, almacenaje abierto durante una semana a 40ºC y un 75% de humedad relativa (estabilidad al almacenaje forzada) y reconstitución. Se secan por atomización soluciones acuosas que contienen a) una porción del 3% de LS55P, una porción del 6% de citrulina y una porción del 1% de IgG, b) una porción del 3% de azúcar de condensación, una porción del 6% de citrulina y una porción del 1% de IgG, c) una porción del 3% de azúcar de condensación S, una porción del 6% de citrulina y una porción del 1% de IgG, d) una porción del 3% de trehalosa, una porción del 6% de citrulina y un 1% de IgG y e) una porción del 10% de IgG. Tanto los polvos que contienen LS55P como azúcar de condensación o el azúcar de condensación S se caracterizan por un bajo contenido de agregados.

En la figura 7 se representa el contenido de agregados después del secado por atomización, almacenaje abierto durante una semana a 40ºC y un 75% de humedad relativa (estabilidad al almacenaje forzada) y reconstitución. Se secan por atomización soluciones acuosas que contienen a) una porción del 9,9% de LS55P y una porción del 0,1% de IgG, b) una porción del 9% de LS55P y una porción del 1% de IgG, c) una porción del 6% de LS55P y una porción del 4% de IgG, d) una porción del 4% de LS55P y un 6% de IgG, e) una porción del 2,5% de LS55P y un 7,5% de IgG, f) una porción del 1% de LS55P y un 9% de IgG, g) una porción del 0,5% de LS55P y un 9,5% de IgG y h) una porción del 10% de IgG. Los polvos que contienen LS55P se caracterizan por un bajo contenido de agregados.

En la figura 8 se representa el contenido de agregados después del secado por atomización, almacenaje abierto durante una semana a 40ºC y un 75% de humedad relativa (estabilidad al almacenaje forzada) y reconstitución. Se secan por atomización soluciones acuosas que contienen a) una porción del 9,9% de azúcar de condensación y una porción del 0,1% de IgG, b) una porción del 9% de azúcar de condensación y una porción del 1% de IgG, c) una porción del 6% de azúcar de condensación y una porción del 4% de IgG, d) una porción del 4% de azúcar de condensación y un 6% de IgG, e) una porción del 2,5% de azúcar de condensación y un 7,5% de IgG, f) una porción del 1% de azúcar de condensación y un 9% de IgG y g) una porción del 10% de IgG. Los polvos que contienen azúcar de condensación se caracterizan por un bajo contenido de agregados.

En la figura 9 se representa el contenido de agregados después del secado por atomización, almacenaje abierto durante una semana a 40ºC y un 75% de humedad relativa (estabilidad al almacenaje forzada) y reconstitución. Se secan por atomización soluciones acuosas que contienen a) una porción del 3,00% de LS55P y una porción del 0,33% de IgG, b) una porción del 2,9166% de LS55P, una porción del 0,0833% de tri-isoleucina y una porción del 0,0833% de IgG, c) una porción del 2,833% de LS55P, una porción de 0,166% de tri-isoleucina y una porción del 0,33% de IgG, d) una porción del 2,66% de LS55P, una porción de 0,33% de tri-isoleucina y una porción del 0,33% de IgG. Los polvos que contienen LS55P se caracterizan por un bajo contenido de agregados. Además se reduce significativamente la agregación de proteínas en los polvos que contienen LS55P gracias al aumento de la porción de tri-isoleucina del 0% al 10%, porcentaje referido a los sólidos totales.

En la figura 10 se representa el contenido de agregados después del secado por atomización, almacenaje abierto durante una semana a 40ºC y un 75% de humedad relativa (estabilidad al almacenaje forzada) y reconstitución. Se secan por atomización soluciones acuosas que contienen a) una porción del 3,00% de LS90P y una porción del 0,33% de IgG, b) una porción del 2,9166% de LS90P, una porción del 0,0833% de tri-isoleucina y una porción del 0,33% de IgG, c) una porción del 2,833% de LS90P, una porción del 0,166% de tri-isoleucina y una porción del 0,33% de IgG y d) una porción del 2,66% de LS90P, una porción del 0,33% de tri-isoleucina y una porción del 0,33% de IgG. Los polvos que contienen LS90P se caracterizan por un bajo contenido de agregados.

En la figura 11 se representa el contenido de agregados después del secado por atomización, almacenaje abierto durante una semana a 40ºC y un 75% de humedad relativa (estabilidad al almacenaje forzada) y reconstitución. Se secan por atomización soluciones acuosas que contienen a) una porción del 2,66% de LS90P, una porción del 0,33% de tri-isoleucina y una porción del 0,33% de IgG, b) una porción del 2,66% de LS90P, una porción del 0,33% de tri-isoleucina y una porción del 0,33% de IgG, c) una porción del 2,66% de sacarosa, una porción del 0,166% de tri-isoleucina y una porción del 0,33% de IgG, d) una porción del 2,00% de sacarosa, una porción del 0,66% de lactosa, una porción del 0,33% de tri-isoleucina y una porción del 0,33% de IgG, e) una porción del 2,66% de rafinosa, una porción del 0,33% de tri-isoleucina y una porción del 0,33% de IgG, f) una porción del 2,66% de hidroxietil-almidón (HES), una porción del 0,33% de tri-isoleucina y un 0,33% de IgG y g) una porción del 2,66% de trehalosa, una porción del 0,33% de tri-isoleucina y una porción del 0,33% de IgG.

Los polvos que contienen LS90P y LS55P se caracterizan por un bajo contenido de agregados. Sobre todo si se comparan con la rafinosa y el hidroxietil-almidón (HES) pertenecientes al estado de la técnica.

En la figura 12 se representa el contenido de agregados después del secado por atomización, secado con vacío, almacenaje seco durante cuatro semanas (estabilidad al almacenaje después de secado con vacío) y reconstitución. Se secan por atomización soluciones acuosas que contienen a) una porción del 9% de azúcar de condensación y una porción del 1% de IgG, b) una porción del 8% de azúcar de condensación, una porción del 1% (p/p) de isoleucina y una porción del 1% de IgG, c) una porción del 3% de azúcar de condensación, una porción del 6% de citrulina y una porción del 1% de IgG y d) una porción del 10% de IgG. Los polvos que contienen azúcar de condensación se caracterizan por un bajo contenido de agregados.

En la figura 13 se representa el contenido de agregados después del secado por atomización, secado con vacío, almacenaje seco durante cuatro semanas (estabilidad al almacenaje después de secado con vacío) y reconstitución. Se secan por atomización soluciones acuosas que contienen a) una porción del 9,9% de LS55P y una porción del 0,1% de IgG, b) una porción del 9% de LS55P y una porción del 1% de IgG, c) una porción del 2,5% de LS55P y una porción del 7,5% de IgG, d) una porción del 1% de LS55P y una porción del 9% de IgG, e) una porción del 10% de LS55P, f) una porción del 8% de LS55P, una porción del 1% de isoleucina y una porción del 1% de IgG así como g) una porción del 3% de LS55P, una porción del 6% de citrulina y una porción del 1% de IgG. Los polvos que contienen LS55P se caracterizan por un bajo contenido de agregados.

En la figura 14a+b se representa el contenido de agregados después del secado de atomización, secado con vacío, un almacenaje seco de una o tres semanas a 2-8ºC, 25ºC y 40ºC (estabilidad durante 1 ó 3 semanas). Se secan por atomización soluciones acuosas que contienen a) una porción del 3,00% de LS90P y una porción del 0,33% de IgG, b) una porción del 2,66% de LS55P, una porción del 0,33% de isoleucina y una porción del 0,33% de IgG, c) una porción del 2,66% de LS90P, una porción del 0,33% de isoleucina y una porción del 0,33% de IgG, d) una porción del 2,66% de LS55P, una porción del 0,33% de tri-isoleucina y una porción del 0,33% de IgG, e) una porción del 2,66% de LS90P, una porción del 0,33% de tri-isoleucina y una porción del 0,33% de IgG y f) una porción del 3,33% de IgG. Tanto los polvos que contienen LS55P como los que contienen LS90P se caracterizan, después de un almacenaje de tres meses, por un contenido de agregados especialmente bajo.

En la figura 15a+b se representa el contenido de agregados después del secado por atomización y un almacenaje abierto de uno o tres meses con un 29% de humedad relativa y un 43% de humedad relativa, en ambos casos a 25ºC (estabilidad de almacenaje abierto durante 1 + 3 meses) y reconstitución. Se secan por atomización soluciones acuosas que contienen a) una porción del 2,9166% de LS90P, una porción del 0,0833% de tri-isoleucina y una porción del 0,33% de IgG siendo el AAF de 40, b) una porción del 2,833% de LS90P, una porción del 0,166% de tri-isoleucina y una porción del 0,33% de IgG siendo el AAF de 40, c) una porción del 2,66% de LS90P, una porción del 0,33% de tri-isoleucina y una porción del 0,33% de IgG siendo el AAF de 40, d) una porción del 1,60% de LS90P, una porción del 0,20% de tri-isoleucina y una porción del 0,33% de IgG, siendo el AAF de 40, e) una porción del 2,66% de LS90P, una porción del 0,33% de tri-isoleucina y una porción del 0,33% de IgG, siendo el AAF de 50, f) una porción del 2,66% de LS90P, una porción del 0,33% de tri-isoleucina y una porción del 0,33% de IgG, siendo el AAF de 60 y g) una porción del 3,33% de IgG siendo el AAF de 40. Los polvos que contienen LS90P se caracterizan, después de un almacenaje de tres meses, por un contenido especialmente bajo de agregados.

En la figura 16 se representa la fracción de partículas finas (FPF) con un diámetro de corte inferior a 5 \mum para los diversos polvos. Los polvos se fabrican mediante secado por atomización de soluciones acuosas, que contienen LS55P e IgG1 o bien LS55P, isoleucina e IgG1. Las soluciones se preparan del modo descrito en los ejemplos y se atomizan. El polvo que contiene isoleucina tiene una FPF de \sim35%, mientras que el polvo carente de isoleucina tiene solamente una FPF de \sim16%.

En la figura 17 se representa la fracción de partículas finas (FPF) con un diámetro de corte inferior a 5 \mum para los diversos polvos. Los polvos se fabrican mediante secado por atomización de soluciones acuosas, que contienen LS90P e IgG1 o bien LS90P, isoleucina e IgG1. Las soluciones se preparan del modo descrito en los ejemplos y se atomizan. El polvo que contiene isoleucina tiene una FPF de \sim28%, mientras que el polvo carente de isoleucina tiene una FPF de \sim23%.

En la figura 18 se representa la fracción de partículas finas (FPF) con un diámetro de corte inferior a 5 \mum para los diversos polvos. Los polvos se fabrican mediante secado por atomización de soluciones acuosas, que contienen LS55P e IgG1 o bien LS55P, tri-isoleucina e IgG1. Las soluciones se preparan del modo descrito en los ejemplos y se atomizan. El polvo que contiene tri-isoleucina tiene una FPF superior al 50% o al 58%, mientras que el polvo carente de tri-isoleucina tiene solamente una FPF de \sim16%.

En la figura 19 se representa el diámetro aerodinámico medio másico (MMAD) y el diámetro medio másico (MMD) de diversos polvos. Los polvos se fabrican mediante secado por atomización de soluciones acuosas, que contienen LS55P e IgG1 o bien LS55P, tri-isoleucina e IgG1. Las soluciones se preparan del modo descrito en los ejemplos y se atomizan. Todos los polvos tienen un MMAD inferior a 5 \mum y un MMD inferior a 3,5 \mum. El diagrama muestra la influencia de la porción de tri-isoleucina en el MMAD y en el MMD, para concentraciones constantes de sólidos totales y parámetros de atomización constantes. Una porción del 10% de tri-isoleucina, referido al contenido de sólidos totales de la formulación, reduce significativamente el MMAD.

En la figura 20 se representa la fracción de partículas finas (FPF) con un diámetro de corte inferior a 5 \mum para los diversos polvos. Los polvos se fabrican mediante secado por atomización de soluciones acuosas, que contienen LS90P e IgG1 o bien LS90P, tri-isoleucina e IgG1. Las soluciones se preparan del modo descrito en los ejemplos y se atomizan. El polvo que contiene tri-isoleucina tiene una FPF del \sim40% al \sim59%, mientras que el polvo carente de tri-isoleucina tiene solamente una FPF de \sim24%.

En la figura 21 se representa el diámetro medio másico (MMD) y el diámetro aerodinámico medio másico (MMAD) de diversos polvos. Los polvos se fabrican mediante secado por atomización de soluciones acuosas, que contienen LS90P e IgG1 o bien LS90P, tri-isoleucina e IgG1. Las soluciones se preparan del modo descrito en los ejemplos y se atomizan. Todos los polvos tienen un MMAD inferior a 6,5 \mum y un MMD inferior a 5 \mum. El diagrama muestra la influencia de la porción de tri-isoleucina en el MMAD y en el MMD, para concentraciones constantes de sólidos totales y parámetros de atomización constantes. Una porción del 10% de tri-isoleucina, referido al contenido de sólidos totales de la formulación, reduce significativamente el MMAD, si se compara con una porción de tri-isoleucina del 2,5% y del 5%. Tanto un contenido de sólidos más bajo (p. ej. TS = 2%) como una mayor presión de atomización (AAF = 50 ó 60) reducen también significativamente el MMAD y el MMD.

En la figura 22 se representa el contenido de monómero residual después del secado por atomización, almacenaje forzado y reconstitución. Se atomizan soluciones acuosas que contienen a) una porción del 3,33% (p/p) de lisozima, b) una porción del 0,33% (p/p) de lisozima y una porción del 3,0% de LS90P, c) una porción del 0,33% (p/p) de lisozima, una porción del 0,33% (p/p) de isoleucina y una porción del 2,66% (p/p) de LS90P y d) una porción del 0,33% (p/p) de lisozima, una porción del 0,33% (p/p) de tri-isoleucina y una porción del 2,66% (p/p) de LS90P. Los polvos que contienen el LS90P se caracterizan por un contenido elevado de monómero residual.

En la figura 23 se representa el contenido de agregados después del secado de atomización, secado con vacío y almacenaje seco a 2-8ºC, 25ºC y 40ºC durante tres meses (estabilidad a los 3 meses) y reconstitución. Se atomizan soluciones acuosas que contienen a) una porción del 3,33% (p/p) de calcitonina, b) una porción de 0,166% (p/p) de calcitonina y una porción del 3,166% de LS90P, d) una porción del 0,166% (p/p) de calcitonina, una porción del 0,33% (p/p) de isoleucina y una porción del 2,833% (p/p) de LS90P y e) una porción del 0,166% (p/p) de calcitonina, una porción del 0,33% (p/p) de tri-isoleucina y una porción del 2,833% (p/p) de LS90P. El polvo que contiene LS90P se caracteriza por un bajo contenido de agregados.

En la figura 24 se representa un inhalador para la aplicación inhalativa de las formulaciones de polvo seco.

Descripción detallada de la invención Definiciones

En el marco de esta descripción de la invención, los términos y denominaciones empleados tienen los significados que se definen a continuación. A menos que se diga lo contrario, los datos de peso y porcentajes en peso se refieren siempre a la masa seca de los polvos o al contenido de sólidos de las soluciones/suspensiones atomizadas. Las formas generales de ejecución "que contiene" o "contiene" incluyen a las formas más especiales "consta de". Además, el término "una vez" y "muchas veces" no se emplean en sentido limitante.

La expresión "derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O" significa un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O elegido entre los compuestos siguientes: D-Gal-sacarosa (lactosucrosa) unida a través de 1,4-O, D-Glu-sacarosa (glucosil-sucrosa) unida a través de 1,4-O o Glu-Glu-sacarosa (maltosil-sucrosa) unida a través de 1,4-O, en cada caso con la fórmula indicada en esta patente.

La expresión "mezcla de azúcares" o "mezcla de azúcares que contiene un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O" significa i) un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O que tiene una de las fórmulas indicadas en esta patente, ii) una mezcla por lo menos de dos derivados de sacarosa unidos a través de 1,4-O que tienen las fórmulas indicadas en esta patente, con preferencia una mezcla de maltosil- y glucosil-sucrosa, iii) una mezcla de por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O y uno de los azúcares de las fórmulas indicadas antes y otros azúcares, con preferencia una mezcla de lactosucrosa, lactosa y sacarosa, o de glucosil- y/o maltosil-sucrosa, sacarosa, fructosa y glucosa, iv) una mezcla que consta por lo menos de un 55% (p/p) de lactosucrosa, como máximo un 25 (p/p) de lactosa y como máximo un 10% (p/p) de sacarosa, v) una mezcla de por lo menos un 88% (p/p) de lactosucrosa, como máximo un 10% (p/p) de lactosa y sacarosa, vi) una mezcla en cada caso de un 25% (p/p) de glucosil- y/o o maltosil-sucrosa, entre un 48 y un 56% (p/p) de sacarosa y no más de un 10% (p/p) de glucosa y fructosa, vii) una mezcla de en cada caso un 18% (p/p) de glucosil- y maltosil-sucrosa, entre un 11 y un 15% (p/p) de sacarosa y en cada caso entre un 5 y un 9% (p/p) de glucosa, viii) una mezcla de azúcares de la empresa Hayashibara Shoji, Inc., Japón, cuyo nombre comercial es Nyuka-Oligo® LS40L (abreviado con: LS40L), Nyuka-Oligo® LS55L (abreviado con: LS55L), Nyuka-Oligo® LS55P
(abreviado con: LS55P), Nyuka-Oligo® LS90P (abreviado con: LS90P), Coupling Sugar® o Coupling Sugar S®.

La expresión "oligosacárido" o "polisacárido" significa un azúcar polihídrico, que está formado por lo menos por tres moléculas de azúcar monómero.

Con la expresión "formulación de polvo secado por atomización" o "formulación de polvo seco" se indican formulaciones de polvo que habitualmente presentan menos del 10% (p/p) humedad residual, con preferencia menos del 7% (p/p) de humedad residual, con preferencia especial menos del 5% (p/p) de humedad residual y todavía con mayor preferencia menos del 3% (p/p) de humedad residual. Si se mantienen constantes las condiciones se secado por atomización, secado con vacío o liofilización y con adyuvantes idénticos, la humedad residual depende esencialmente del tipo y porción del principio activo farmacéutico dentro de la formulación de polvo.

El término "amorfo" significa que la formulación pulverulenta contiene menos del 10% de porción cristalina, con preferencia menos del 7%, con más preferencia menos del 5% y en especial menos del 4, 3, 2 ó 1%.

El término "inhalable" significa que los polvos son adecuados para la aplicación pulmonar. Los polvos inhalables pueden dispersarse mediante un aparato de inhalación e inhalarse, de modo que las partículas penetran en los pulmones y eventualmente pueden desplegar su acción sistémica en los alvéolos. Las partículas inhalables presentan por ejemplo un tamaño medio de partícula entre 0,4 y 10 \mum (MMD = mass median diameter), por lo menos entre 0,5 y 5 \mum, con preferencia entre 1 y 3 \mum y/o un diámetro de partícula aerodinámico medio (MMAD = mass median aerodynamic diameter) entre 0,5 y 10 \mum, con preferencia entre 0,5 y 7,5 \mum, con mayor preferencia entre 0,5 y 5,5 \mum, con mayor preferencia todavía entre 1 y 5 \mum y con preferencia especial entre 1 y 4,5 \mum.

La expresión "diámetro medio másico" o "MMD" es un índice de la distribución promedio de tamaños de partícula, porque los polvos de la invención en general se hallan polidispersados. Los resultados se expresan en forma de diámetro de la distribución de sumas de volúmenes para un 50% de suma de paso. Los valores del MMD pueden determinarse por ejemplo mediante difractometría láser (véase al respecto el capítulo de los ejemplos: método), aunque como es obvio puede aplicarse también cualquier otro método habitual (p. ej. microscopía electrónica, sedimentación por centrifugación).

El término "diámetro de partícula aerodinámico medio" (= mass median aerodynamic diameter = MMAD) indica el tamaño de partícula aerodinámico, en el que normalmente un 50% de las partículas del polvo tienen un diámetro aerodinámico inferior. Como método de referencia para la determinación del MMAD se emplea en caso de duda el método indicado en esta patente (véase el capítulo de los ejemplos: método).

El término "fracción de partículas finas" (FPF) indica la porción inhalable de un polvo, que se compone de partículas que tienen un tamaño de \leq 5 \mum de MMAD. En los polvos fácilmente inhalables, la FPF es superior al 20%, con preferencia superior al 30%, con preferencia especial superior al 40%, con mayor preferencia todavía superior al 50%, con preferencia muy especial superior al 55%. El término empleado en este contexto "diámetro de corte (Cut Off Diameter)" indica las partículas que se toman en consideración para la determinación de la FPF. Una FPF del 30% con un diámetro de corte de 5 \mum (FPF 5) significa que por lo menos un 30% de todas las partículas del polvo tienen un diámetro de partícula aerodinámico medio inferior a 5 \mum.

El término "solución atomizable" significa soluciones o suspensiones acuosas, en las que el principio activo farmacéutico se halla disuelto o suspendido junto con por lo menos un adyuvante.

El término "tiempo de vuelo (time of flight)" es la denominación de un método estándar de medición, que se describe con detalle en el capítulo de los ejemplos. En la medición del "tiempo de vuelo" se determinan de forma simultánea el MMAD y la FPF (véase al respecto el capítulo de los ejemplos: método).

El término "adyuvantes farmacéuticamente aceptables", "material soporte" o "matrices" indica los adyuvantes, que pueden formar parte opcionalmente de la formulación en el marco de esta invención. Los adyuvantes pueden aplicarse por ejemplo al pulmón sin que tengan efectos toxicológicos desfavorables significativos en la persona que los recibe o en sus pulmones.

La expresión "sales farmacéuticamente aceptables" incluye por ejemplo las sales siguientes, pero no se limita a ellas: sales de ácidos inorgánicos, por ejemplo el cloruro, el sulfato, el fosfato, el difosfato, el bromuro y el nitrato. También las sales de ácidos orgánicos, por ejemplo el malato, el maleato, el fumarato, el tartrato, el succinato, el etilsuccinato, el citrato, el acetato, el lactato, el metanosulfonato, el benzoato, el ascorbato, el para-toluenosulfonato, el palmoato, el salicilato y el estearato, así como las sales estolato, gluceptato y lactobionato.

El término "cationes farmacéuticamente aceptables" abarca, aunque no se limita a ellos, por ejemplo al litio, sodio, potasio, calcio, aluminio y amonio (incluido el amonio sustituido).

Se entiende por "principio activo farmacéutico" una sustancia, un fármaco, una composición o una combinación de los mismos, que tiene efectos farmacológicos por lo general positivos sobre el organismo, un órgano y/o una célula, cuando el principio se pone en contacto con el organismo, el órgano la célula. Cuando se administra a un paciente, el efecto puede ser local o sistémico.

El término "macromolécula biológica" significa péptidos, proteínas, grasas, ácidos grasos o ácidos nucleicos.

Con el término "péptido" o "polipéptido" se indican polímeros de aminoácidos que constan de dos a cien restos de aminoácidos. Los término péptido y polipéptido se emplean como sinónimos y abarcan tanto los homo- como los heteropéptidos, también los polímeros de aminoácidos que constan de restos de aminoácidos idénticos o diferentes. Un "di-péptido" está formado, pues, por dos aminoácidos unidos a través de un enlace peptídico, un "tri-péptido" está formado por tres aminoácidos unidos mediante un enlace peptídico. El término "proteína" aquí empleado indica polímeros de aminoácidos que tienen más de 100 restos aminoácidos.

El término "análogo" indica péptidos/proteínas, en los que un aminoácido concreto o varios se han sustituido, eliminado (p. ej. fragmentos), adicionado (p. ej. derivados con una prolongación del extremo C o N) o se han modificado de cualquier otro modo en su secuencia nativa (tipo salvaje). También es posible la derivatización de una proteína nativa, p. ej. con azúcares, polietilenglicol, etc. Los análogos tienen una bioactividad por lo menos del 10, 20, 30 ó 40%, con preferencia por lo menos del 50, 60 ó 70% y con preferencia especial por lo menos del 80, 90, 95, 100% o más del 100% de la bioactividad de la proteína nativa, no sintética.

La expresión "aminoácido" indica compuestos, que contienen por lo menos un grupo amino y por lo menos un grupo carboxilo. Aunque el grupo amino ocupa normalmente la posición \alpha con respecto al grupo carboxilo, cabría pensar como posible cualquier otro ordenamiento de la molécula. Los aminoácidos pueden tener otros grupos funcionales, p. ej. grupos amino, carboxamida, carboxilo, imidazol, tio y otros grupos. Se emplean aminoácidos de origen natural o sintético, racémicos u ópticamente activos (configuración D o L), incluidos los diversos estereoisómeros. Por ejemplo, el término isoleucina abarca tanto a la D-isoleucina como a la L-isoleucina, a la isoleucina racémica y a las diversas configuraciones de ambos enantiómeros.

La expresión "formulación de proteína pura" indica un polvo secado por atomización que consta de una o varias proteínas y opcionalmente un tampón apropiado (por ejemplo del 0 al 15% (p/p) del peso del polvo seco). El polvo no contiene fundamentalmente otros adyuvantes, es decir, el contenido de los adyuvantes eventuales se sitúa por debajo del 1% (p/p), referido al peso del polvo seco.

Una sustancia "tensioactiva" es capaz de reducir la tensión superficial de la solución, en la que se halla disuelta. La actividad superficial se mide por ejemplo con el método del tensiómetro de Lecomte du Noüy (Bauer, Frömming, Führer, 6ª edición).

La expresión "oligosacárido" o "polisacárido" significa un azúcar polihídrico, formado por lo menos por tres moléculas de azúcar monómero.

Polvos de la invención

La presente invención se refiere a polvos, con preferencia polvos secados por atomización, que contienen un principio activo farmacéutico y una combinación de adyuvantes que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, elegido entre los compuestos: D-Gal-sacarosa unida a través de 1,4-O (lactosucrosa), D-Glu-sacarosa unida a través de 1,4-O (glucosil-sucrosa) o Glu-Glu-sacarosa unida a través de 1,4-O (maltosil-sucrosa), en combinación por lo menos con otro adyuvante. El adyuvante adicional es con preferencia un aminoácido, un péptido y/o un mono-, di- y/u oligosacárido; el oligosacárido puede ser también un segundo derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, en el supuesto de que sea diferente del primero.

Según una forma especial de ejecución de la invención, los polvos de interés contienen como combinación de adyuvantes, aparte del derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, además uno o varios mono-, di- y/u oligosacáridos, siendo preferido el uso de mono- y/o di-sacáridos. Son ejemplos de azúcares simples la fructosa, maltosa, galactosa, glucosa, D-manosa, sorbosa y similares. Son azúcares dobles apropiados en el sentido de la invención por ejemplo la lactosa, sacarosa, trehalosa, celobiosa y similares. Como azúcares múltiples u óligo- o polisacáridos son idóneos en especial la rafinosa, melezitosa, dextrina, almidones y similares. Por consiguiente, la invención abarca también a los polvos de interés con lactosucrosa, lactosa y sacarosa, situándose la porción de la lactosucrosa con respecto a la porción total de azúcar dentro del polvo en \geq 40% (p/p), con preferencia en \geq 55% (p/p), así como en \geq 88% (p/p). Según una forma preferida de ejecución, los polvos de la invención, aparte del principio activo farmacéutico, contienen una mezcla de azúcares de la empresa Hayashibara Shoji, Inc., Japón, denominada Nyuka-Oligo® LS55P, o abreviado con: LS55P, que contiene por lo menos un 55% de lactosucrosa, como máximo un 25% (p/p) de lactosa y como máximo un 10% (p/p) de sacarosa. Según otra forma preferida de ejecución, los polvos de la invención, aparte del principio activo farmacéutico, contienen una mezcla de azúcares empresa Hayashibara Shoji, Inc., Japón, denominada Nyuka-Oligo® LS90P, o abreviado con: LS90P, que contiene por lo menos un 88% de lactosucrosa y como máximo un 10% (p/p) de lactosa y sacarosa.

Por otro lado se ha constatado que son acordes con la invención los polvos formados por una combinación de glucosil- y maltosil-sucrosa, con preferencia en combinación una vez más con otros mono-, di- y/o polisacáridos. Por consiguiente, la presente invención abarca también los polvos correspondientes, que contienen una combinación de adyuvantes formada por glucosil- y maltosil-sucrosa, sacarosa, glucosa y/o fructosa, en la cual la porción de la glucosil- y maltosil-sucrosa con respecto a la porción de azúcar total dentro del polvo se sitúa con preferencia en un 25% (p/p) o más. Según otra forma preferida de ejecución la porción correspondiente de la glucosil- y maltosil-sucrosa se sitúa por lo menos en un 18% (p/p) de la porción de azúcar total del polvo. Según otra forma preferida de ejecución, aparte del principio activo farmacéutico, los polvos de la invención contienen una mezcla de azúcares de la empresa Hayashibara Shoji, Inc., Japón, denominada Coupling Sugar®, que contiene por lo menos en cada caso un 18% (p/p) de glucosil- y maltosil-sucrosa, entre un 11 y un 15% (p/p) de sacarosa y en cada caso entre un 5 y un 9% (p/p) de glucosa y fructosa. Además, la presente invención se refiere también a aquellos polvos que, aparte del principio activo farmacéutico, contienen una mezcla de azúcares de la empresa Hayashibara Shoji, Inc., Japón, denominada Coupling Sugar S®, que contiene por lo menos un 25% (p/p) de glucosil- y/o maltosil-sucrosa, entre un 48 y un 56% (p/p) de sacarosa y no más del 10% (p/p) de glucosa y fructosa.

Son también polvos según la invención, los que contienen una combinación de adyuvantes que, aparte de por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares, que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, contiene como adyuvantes adicionales: aminoácidos, péptidos, alcoholes, polioles, polímeros no biológicos y/o biológicos. Otros adyuvantes ya conocidos del estado de la técnica que también pueden utilizarse según la invención en combinación con por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares, que contenga por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, son por ejemplo los siguientes: lípidos, ácidos grasos, ésteres de ácidos grasos, esteroides (p. ej. colesterol), o formadores de quelatos (p. ej. el EDTA) así como diversos cationes. Son preferidos en especial los adyuvantes que tienen una temperatura de transición vítrea elevada, por ejemplo superior a 40ºC, con preferencia superior a 45ºC o superior a 55ºC. Una lista de adyuvantes adecuados se encontrará por ejemplo en Kippe (coord.), "Handbook of Pharmaceutical Excipients", 3ª ed., 2000.

Son adyuvantes proteicos adecuados por ejemplo la albúmina (de origen humano o recombinante), las gelatinas, la caseína, la hemoglobina y similares. Aparte de la manita, se toman en consideración como adyuvantes los siguientes alcoholes de azúcar: la xilita, la maltita, la galactita, la arabinita, la adonita, la lactita, la sorbita (glucita), la piranosilsorbita, la inosita, la mioinosita y similares. Los aminoácidos apropiados abarcan por ejemplo a la alanina, glicina, arginina, histidina, glutamato, asparagina, cisteína, leucina, lisina, isoleucina, valina, triptófano, metionina, fenilalanina, tirosina, citrulina, éster metílico de la aspartil-fenil-alanina (= aspartamo), acetato de trimetilamonio (= betaína) y similares. Se emplean con preferencia aquellos aminoácidos, que actúan como tampones (p. ej. la glicina o la histidina) y/o como agente dispersante. Entre los últimos grupos se encuentran con preferencia especial los aminoácidos hidrófobos, p. ej. la leucina, la valina, la isoleucina, el triptófano, la alanina, la metionina, la fenilalanina, la tirosina, la histidina o la prolina. En el marco de la presente invención se demostrado ser especialmente ventajoso el uso de la isoleucina junto con un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares que contenga por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, con preferencia en una concentración del 1 al 19,99% (p/p), con preferencia especial del 5 al 19,99% (p/p), con mayor preferencia del 10 al 19,99% (p/p).

Es también especialmente ventajoso el uso de di-, tri-, óligo- o polipéptidos como adyuvantes adicionales, que contengan uno o varios de estos restos aminoácidos marcadamente hidrófobos. Son especialmente preferidos los péptidos que tienen hasta 20 aminoácidos, también los que tienen hasta 15 aminoácidos, con mayor preferencia los que tienen hasta 12 aminoácidos, con mayor preferencia todavía los que tienen hasta 11 aminoácidos, con preferencia especial los que tienen hasta 10 aminoácidos, con mayor preferencia los que tienen hasta 9 aminoácidos, con preferencia particular los que tienen hasta 8 aminoácidos, con preferencia muy particular los que tienen hasta 7 aminoácidos, con preferencia muy especial los que tienen hasta 7, 6, 5, 4 ó 3 aminoácidos. Los péptidos empleados para la estabilización no son los mismos que se emplean como principio activo farmacéutico.

Los ejemplos de tripéptidos idóneos abarcan a modo ilustrativo uno o varios de los tripéptidos siguientes: Leu-Leu-Gly, Leu-Leu-Ala, Leu-Leu-Val, Leu-Leu-Leu, Leu-Leu-Met, Leu-Leu-Pro, Leu-Leu-Phe, Leu-Leu-Trp, Leu-Leu-Ser, Leu-Leu-Thr, Leu-Leu-Cys, Leu-Leu-Tyr, Leu-Leu-Asp, Leu-Leu-Glu, Leu-Leu-Lys, Leu-Leu-Arg, Leu-Leu-His, Leu-Gly-Leu, Leu-Ala-Leu, Leu-Val-Leu, Leu-Met-Leu, Leu-Pro-Leu, Leu-Phe-Leu, Leu-Trp-Leu, Leu-Ser-Leu, Leu-Thr-Leu, Leu-Cys-Leu, Leu-Try-Leu, Leu-Asp-Leu, Leu-Glu-Leu, Leu-Lys-Leu, Leu-Arg-Leu y Leu-His-Leu. Es especialmente ventajoso el uso de tri-péptidos de las fórmulas generales: Ile-X-X; X-Ile-X; X-X-Ile, en las que X puede ser uno de los siguientes aminoácidos: alanina, glicina, arginina, histidina, ácido glutámico, glutamina, asparagina, ácido asparagínico, cisteína, leucina, lisina, isoleucina (Ile), valina, triptófano, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, tirosina, éster metílico de la L-aspartil-L-fenilalanina (= aspartamo), el acetato de trimetilamonio. Son especialmente preferidos los tri-péptidos de la fórmula (Ile)_{2}-X, por ejemplo Ile-Ile-X, Ile-X-Ile o X-Ile-Ile, en las que X significa de nuevo uno de los aminoácidos recién mencionados. Entre ellos están por ejemplo los péptidos siguientes: Ile-Ile-Gly, Ile-Ile-Ala, Ile-Ile-Val, Ile-Ile-Ile, Ile-Ile-Met, Ile-Ile-Pro, Ile-Ile-Phe, Ile-Ile-Trp, Ile-Ile-Ser, Ile-Ile-Thr, Ile-Ile-Cys, Ile-Ile-Tyr, Ile-Ile-Asp, Ile-Ile-Glu, Ile-Ile-Lys, Ile-Ile-Arg, Ile-Gly-Ile, Ile-Ala-Ile, Ile-Val-Ile, Ile-Met-Ile, Ile-Pro-Ile, Ile-Phe-Ile, Ile-Trp-Ile, Ile-Ser-Ile, Ile-Thr-Ile, Ile-Cys-Ile, Ile-Try-Ile, Ile-Asp-Ile, Ile-Glu-Ile, Ile-Lys-Ile, Ile-Arg-Ile, Ile-His-Ile. Es especialmente ventajoso el uso del Ile-Ile-Ile.

Los polímeros idóneos abarcan por ejemplo a los adyuvantes citados anteriormente: la polivinilpirrolidona, las celulosas derivatizadas, p. ej. la hidroximetil-, la hidroxietil- o la hidroxipropil-celulosa, los azúcares polímeros, p. ej. Fiscoll, los almidones, p. ej. el hidroxietil- o hidroxipropil-almidón, las dextrinas, p. ej. las ciclodextrinas (2-hidroxipropil-\beta-ciclodextrina, la sulfobutiléter-\beta-ciclodextrina), los polietilenos, los glicoles y/o las pectinas.

Las sales son por ejemplo sales inorgánicas, tales como los cloruros, sulfatos, fosfatos, difosfatos, bromhidratos y/o sales nitrato. Los polvos de la invención pueden contener además sales orgánicas, p. ej. malatos, maleatos, fumaratos, tartratos, succinatos, etilsuccinatos, citratos, acetatos, lactatos, metanosulfonatos, benzoatos, ascorbatos, paratoluenosulfonatos, palmoatos, salicilatos, estearatos, estolatos, gluceptatos o lactobionatos. Las sales pueden contener al mismo tiempo cationes farmacéuticamente aceptables, por ejemplo sodio, potasio, calcio, aluminio, litio o amonio. Es especialmente preferido el uso de los correspondientes cationes en relación con la estabilización de las proteínas. Por consiguiente, la presente invención según otra forma de ejecución se refiere a polvos secados por atomización, que, aparte del derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares que contenga por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O y el principio activo farmacéutico, contienen una sal farmacéuticamente compatible.

Los polvos de la invención son por ejemplo polvos secados por atomización o liofilizados, pero los polvos secados por atomización constituyen la forma de ejecución preferida.

Han demostrado ser especialmente ventajosos los polvos, con preferencia los polvos liofilizados o los secados por atomización, que contienen un principio activo farmacéutico y una combinación de adyuvantes mencionada antes, que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4- O en combinación por lo menos con otro adyuvante; la porción de la combinación de adyuvantes referida a la masa seca del polvo se sitúa entre el 25 y el 99,99% (p/p), con preferencia entre el 40 y el 99% (p/p), con mayor preferencia entre el 60 y el 99% (p/p) y con preferencia especial entre el 60 y el 90% (p/p), por ejemplo en el 25, 25,1, 25,2, 25,3,... 25,7, 25,8, 25,9, etc.; 26, 27, 28, 29, 30, etc.; 31, 32, 33,... 38, 39, 40, etc.; 41, 42, 43,... 48, 49, 50, etc.; 51, 52, 53,... 58, 59, 60, etc.; 61, 62, 63,... 68, 69, 70, etc.; 71, 72, 73,... 78, 79, 80, etc.; 81, 82, 83,... 88, 89, 90, etc.; 91, 92, 93, ... 99,98, 99,99% (p/p). En relación con el uso del LS55P ha demostrado ser especialmente ventajosa una porción del 80 al 90% (p/p). En total, la porción de la combinación de adyuvantes debería elegirse entre por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O y otro adyuvante adicional, de modo que el polvo sea por lo menos parcialmente amorfo, con preferencia totalmente amorfo.

La porción del principio activo farmacéutico dentro de la masa seca del polvo de la invención se sitúa por lo general entre el 0,01 y el 75% (p/p), con preferencia entre el 0,01 y el 50% (p/p), con mayor preferencia entre el 0,33 y el 50% (p/p), con preferencia especial entre el 0,33 y el 40% (p/p). Según otra forma preferida de ejecución, la porción del principio activo farmacéutico dentro del contenido de sólidos del polvo de la invención se sitúa entre el 0,33 y el 35% (p/p), con preferencia entre el 0,33 y el 30% (p/p), con mayor preferencia entre el 0,33 y el 25% (p/p) y con preferencia especial entre el 0,33 y el 10% (p/p). Por consiguiente, esta porción se sitúa por ejemplo en el 0,01, 0,02, 0,03... 0,08, 0,09, etc.; 1, 2, 3,... 8, 9, 10, etc.; 11, 12, 13,... 18, 19, 20, etc.; 21, 22, 23,... 28, 29, 30, etc.; 31, 32, 33,... 38,39, 40, etc.; 41, 42, 43,... 48, 49, 50, etc.; 51, 52, 53,... 58, 59, 60, etc.; 61, 62, 63,... 68, 69, 70, etc.; 71, 72, 73, 74, 74,1, 74,2, 74,3,... 74,8, 74,9, etc.; 74,91, 74,92, 74,93,... 74,98, 74,99, 75% (p/p).

Son, pues, polvos de la invención los que tienen una proporción entre la combinación de adyuvantes, que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O y otro adyuvante adicional, y el principio activo farmacéutico que se sitúa por ejemplo en: 25/75, 26/74, 27/73, 28/72, 29/71, 30/70, 31/69, 32/68, 33/67, 34/66, 35/65, 36/64, 37/63, 38/62, 39/61, 40/60, 41/59, 42/58, 43/57, 44/56, 45/55, 46/54, 47/53, 48/52, 49/51, 50/50, 51/49, 52/48, 53/47, 54/46, 55/45, 56/44, 57/43, 58/42, 59/41, 60/40, 61/39, 62/38, 63/37, 64/36, 65/35, 66/34, 67/33, 68/32, 69/31, 70/30, 71/29, 72/28, 73/27, 74/26, 75/25, 76/24, 77/23, 78/22, 79/21, 80/20, 81/19, 82/18, 83/17, 84/16, 85/15, 86/14, 87/13, 88/12, 89/11, 90/10, 91/9, 92/8, 93/7, 94/6, 95/5, 96/4, 97/3, 98/2, 99/1, 99,1/0,9, 99,2/0,8, 99,3/0,7, 99,4/0,6, 99,5/0,5, 99,6/0,4, 99,66/0,33, 99,7/0,3, 99,8/0,2, 99,9/0,1, 99,99/0,01 (p/p). La porción de la combinación de adyuvantes, que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O y otro adyuvante adicional, se sitúa con preferencia en un valor comprendido entre el 80 y 90% (p/p), referido a la masa seca del polvo.

En el sentido de la invención, los principios activos farmacéuticos, aparte de los contemplados en la definición general, son entre otros los siguientes: antibióticos, principios activos antivirales, antiepilépticos, analgésicos, principios activos antiinflamatorios o broncodilatadores. Se incluyen también los principios activos que actúan por ejemplo en el sistema nervioso periférico, en los receptores adrenérgicos, los receptores colinérgicos, la musculatura esquelética, el sistema cardiovascular, la musculatura lisa, el sistema circulatorio sanguíneo, los sitios sinápticos, los sitios de conexión neuroefectora, el sistema endocrino, el sistema inmune, el sistema reproductor, el sistema esquelético, los sistemas autacoides, los sistemas de alimentación y excreción, el sistema histamínico y el sistema nervioso central. Los principios activos apropiados abarcan además por ejemplo a los hipnóticos y sedantes, los psicotrópicos, los tranquilizantes, los anticonvulsivos, los relajadores musculares, los principios activos anti-Parkinson, los analgésicos, los principios activos antiinflamatorios, los contractores musculares, los principios activos antimicrobianos, los principios activos hormonales, por ejemplo los anticonceptivos, los simpaticomiméticos, los diuréticos, los principios activos que regulan el metabolismo de las grasas, los principios activos antiandrógenos, antiparasitarios, neoplásicos, antineoplásicos e hipoglucémicos.

Se incluyen también dentro del término de principio activo farmacéutico por ejemplo aquellos principios activos que actúan sobre el sistema respiratorio, por ejemplo contra las enfermedades siguientes: asma, enfermedades pulmonares obstructivas crónicas (COPD), bronquitis enfisémica crónica, displasia broncopulmonar (BPD), síndrome del distrés respiratorio neonatal (RDS), bronquiolitis, crup (estenosis inflamatoria de laringe), estridor después de retirar la entubación, fibrosis pulmonar, neumonía o fibrosis quística (CF).

Los ejemplos representativos de broncodilatadores abarcan entre otros a los beta-agonistas, los anticolinérgicos o la metilxantina. Los ejemplos de principios activos antiinflamatorios son los esteroides, la cromolina, el nedocromilo y los inhibidores de leucotrieno. Los ejemplos de esteroides comprenden la beclometasona, la betametasona, la biclometasona, la dexametasona, la triamcinolona, la budesonida, el butixocort, la ciclesonida, al fluticasona, la flunisolida, la icometasona, la mornetasona, el tixocortol y el ioteprednol. Otros ejemplos son la budesonida, la fluticasona propionato, la beclometasoan dipropionato, el fometerol y la triamcinolona-acetonida. Los ejemplos de principios activos de acción antimicrobiana son la eritromicina, oleandomicina, troleandomicina, roxitromicina, claritromicina, davercina, azitromicina, fluritromicina, diritromicina, josamicina, espiromicina, midecamicina, leucomicina, miocamicina, rokitamicina, andazitromicina y eswinolida A; las fluorquinolonas, por ejemplo la ciprofloxacina, ofloxacina, levofloxacina, trovafloxacina, alatrofloxacina, moxifloxicina, norfloxacina, eoxacina, grepafloxacina, gatifloxacina, lomefloxacina, esparfloxacina, temafloxacina, pefloxacina, amifloxacina, fleroxacina, tosufloxacina, prulifloxacina, irloxacina, pazufloxacina, clinafloxacina y sitafloxacina; los aminoglucósidos, por ejemplo la gentamicina, netilmicina, paramecina, tobramicina, amikacina, canamicina, neomicina; la estreptomicina, vancomicina, teicoplanina, rampolanina, mideplanina, colistina, daptomicina, gramicidina, colistimetato; las polimixinas, por ejemplo la polimixina B, capreomicina, bacitracina, peneme, las penicilinas, incluidos los principios activos sensibles a la penicilinasa, por ejemplo la penicilina G, penicilina V, los principios activos resistentes a la penilicilinasa, por ejemplo la meticilina, oxacilina, cloxacilina, dicloxacilina, floxacilina, nafcilina; principios activos contra las bacterias Gram-negativas, por ejemplo la ampicilina, amoxicilina, hetacilina, cilina y galampicilina; las penicilinas anti-pseudomonas, por ejemplo la carbenicilina, ticarcilina, azlocilina, mezlocilina, andpiperacilina; las cefalosporinas, por ejemplo la cefpodoxima, cefprozil, ceftbuteno, ceftizoxima, ceftriaxon, cefalotina, cefapirina, cefalexina, cefradrina, cefoxitina, cefamandol, cefazolina, cefaloridina, cefaclor, cefadroxil, cefaloglicina, cefuroxima, ceforanida, cefotaxima, cefatrizina, cefacetril, cefepima, cefixima, cefonizida, cefoperazona, cefotetan, cefmetazol, ceftazidima, loracarbef y moxalactam; los monobactamos, como el aztreonam; y los carbapenemos, por ejemplo el imipenem, meropenem pentamidina isetioato, albuterol sulfato, lidocaína, metaproterenol sulfato, beclometasona dipropionato, triamcinolona acetamida, budesonida acetonida, fluticasona, ipratropio bromuro, flunisolida, cromolina sódica, ergotamina tartrato y, si procede, los análogos, agonistas, antagonistas, inhibidores y formas salinas farmacéuticamente aplicables y similares, de los
mismos.

El principio activo farmacéutico es según otra forma de ejecución una macromolécula biológica. Con arreglo a la definición establecida anteriormente, se entiende por ello por ejemplo a los péptidos, proteínas, grasas, ácidos grasos o ácidos nucleicos.

Las proteínas/polipéptidos biofarmacéuticamente importantes abarcan p. ej. a los anticuerpos, enzimas, factores de crecimientos, p. ej. esteroides, citoquinas, linfoquinas, moléculas de adhesión, receptores así como sus derivados y fragmentos, pero no se limitan a ellos. En general son importantes todos los polipéptidos que puedan utilizarse como agonistas o receptores o para fines de diagnóstico.

Los péptidos o proteínas idóneos en el sentido de la invención son por ejemplo la insulina, factores de crecimiento similares a la insulina, la hormona del crecimiento humano (hGH) y otros factores de crecimiento, el activador de plasminógeno de los tejidos (tPA), la eritropoyetina (EPO), las citoquinas, por ejemplo las interleucinas (IL) tales como la IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-17, IL-16, IL-18, el interferón (IFN)-alfa, beta, gamma, omega o tau, el factor de necrosis tumoral (TNF) p. ej. TNF-alfa, beta o gamma, TRAIL, G-CSF, GM-CSF, M-CSF, MCP-1 y VEGF. Otros ejemplos son los anticuerpos monoclonales, policlonales, multiespecíficos y de cadena simple (single chain), y sus fragmentos, por ejemplo el Fab, Fab', F(ab')_{2}, Fc y Fc', las cadenas de inmunoglobulina cortas (L) o largas (H) y sus regiones constantes, variables o hipervariables así como los fragmentos Dv y Fd (Chamov y col., 1999, Antibody Fusion Proteins, Wiley-Liss, Inc.). Los anticuerpos pueden ser de origen humano o no humano. Entre ellos se cuentan por ejemplo los grupos ya conocidos del hombre: IgA, IgD, IgE, IgG y IgM, con sus diversos subgrupos, por ejemplo IgA1, IgA2 e IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. Se toman también en consideración los anticuerpos humanizados y quiméricos. Son de una importancia terapéutica especial y, por tanto, son objeto de la presente invención las formulaciones de polvo que contienen anticuerpos por ejemplo contra diversos antígenos superficiales, p. ej. como el CD4, CD20 o CD44, diversas citoquinas, por ejemplo IL2, IL4 o IL5. Otros ejemplos son los anticuerpos dirigidos contra determinadas clases de inmunoglobulina (p. ej. anticuerpos anti-IgE) o contra proteínas víricas (p. ej. anticuerpos anti-RSV, anti-CMV, etc.).

Los fragmentos Fab (Fragment antigen-binding = Fab) se componen de regiones variables en ambas cadenas, que se mantienen cohesionados gracias a las regiones limítrofes constantes. Otros fragmentos de anticuerpo son los fragmentos F(ab')_{2}, que se generan por digestión proteolítica con pepsina. Mediante clonación genética pueden obtenerse fragmentos cortos de anticuerpos, que constan solamente de la región variable de la cadena larga (VH) y de la corta (VL). Estos se denominan fragmentos Fv (Fragment variable = fragmento de la parte variable). Tales fragmentos de anticuerpo se denominan también fragmentos individuales (single chain Fv-Fragment = scFv). Son conocidos los ejemplos de anticuerpos scFv y se han descrito p. ej. en Huston y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 16, 5879 y sig., 1988.

En los años pasados se han desarrollado diversas estrategias para obtener derivados scFv multímeros, p. ej. dia-, tri- y pentabodies. Los expertos llaman "diabody" a un derivado de scFv homodímero bivalente. El acortamiento del engarce peptídico de la molécula del scFV hasta 5-10 aminoácidos provoca la formación de homodímeros por trasposición de las cadenas VH/VL. Los "diabodies" pueden estabilizarse además con los puentes disulfuro introducidos. En la bibliografía técnica se encontrarán ejemplos de diabodies, p. ej. en Perisic y col., Structure 2, 1217 y sig., 1994). Los expertos llaman "minibody" a un derivado de scFv homodímero bivalente. Consta de una proteína de fusión, que contiene la región CH3 de una inmunoglobulina, con preferencia de la IgG, con preferencia especial de la IgG1, como región de dimerización. Esta une a los fragmentos scFv a través de una región bisagra, también de IgG, con la región del engarce. Los ejemplos de tales minibodies se describen en Hu y col., Cancer Res. 56, 3055 y sig., 1996. Los expertos denominan "triabody" a un derivado de scFv homotrímero trivalente (Kortt y col., Protein Engineering 10, 423 y sig., 1997). La fusión directa de las VH-VL sin emplear una secuencia de engarce conduce a la formación de trímeros.

Los fragmentos que los expertos llaman "mini-anticuerpos", que tienen una estructura bi-, tri- o tetravalente, son también derivados de fragmentos scFc. Se consigue la multimerización a través de estructuras "coiled coil" di-, tri- o tetrámeras (Pack, P. y col., Biotechnology 11, 1271 y sig., 1993; Lovejoy, B. y col., Science 259, 1288 y sig., 1993; Pack, P. y col., J. Mol. Biol. 246, 28 y sig., 1995).

Una forma de ejecución especialmente preferida de la invención abarca una proteína del grupo de los anticuerpos, más exactamente la inmunoglobulina G del tipo 1. Es un anticuerpo monoclonal humanizado, que tiene un 95% de las secuencias de anticuerpos humanos y un 5% de anticuerpos murinos. Este anticuerpo tiene un peso molecular de aprox. 148 kilodaltones (kDa), se compone de dos cadenas cortas y dos cadenas largas y en total de cuatro puentes disulfuro.

Son especialmente ventajosos los polvos, sobre todo los polvos liofilizados o secados por atomización, que como principio activo contienen un péptido o una proteína o una combinación de péptido/proteína o proteína/péptido o proteína/proteína. Las macromoléculas biológicas correspondientes pueden alcanzar entre un 0,01 y un 75% (p/p), con preferencia entre un 0,01 y un 50% (p/p) de la masa seca del polvo. Por consiguiente, su porción se situará por ejemplo en: el 0,01, 0,02, 0,03... 0,08, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3... 0,8, 0,9, etc.; 1, 2, 3,... 8, 9, 10, etc.; 11, 12, 13,... 18, 19, 20, etc.; 21, 22, 23,... 28, 29, 30, etc.; 31, 32, 33,... 38, 39, 40, etc.; 41, 42, 43,... 48, 49, 49,1, 49,2, 49,3,... 49,8, 49,9, etc.; 49,91, 49,92, 49,93,... 49,98, 49,99, 50% (p/p).

Son especialmente ventajosos y acordes con la invención los polvos, con preferencia los polvos liofilizados o secados por atomización, que tienen una proporción entre la combinación de adyuvantes, que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O y otro adyuvante, y el péptido/proteína del orden de: 25/75, 26/74, 27/73, 28/72, 29/71, 30/70, 31/69, 32/68, 33/67, 34/66, 35/65, 36/64, 37/63, 38/62, 39/61, 40/60, 41/59, 42/58, 43/57, 44/56, 45/55, 46/54, 47/53, 48/52, 49/51, 50/50, 51/49, 52/48, 53/47, 54/46, 55/45, 56/44, 57/43, 58/42, 59/41, 60/40, 61/39, 62/38, 63/37, 64/36, 65/35, 66/34, 67/33, 68/32, 69/31, 70/30, 71/29, 72/28, 73/27, 74/26, 75/25, 76/24, 77/23, 78/22, 79/21, 80/20, 81/19, 82/18, 83/17, 84/16, 85/15, 86/14, 87/13, 88/12, 89/11, 90/10, 91/9, 92/8, 93/7, 94/6, 95/5, 96/4, 97/3, 98/2, 99/1, 99,1/0,9, 99,2/0,8, 99,3/0,7, 99,4/0,6, 99,5/0,5, 99,6/0,4, 99,66/0,33, 99,7/0,3, 99,8/0,2, 99,9/0,1, 99,99/0,01 (p/p).

Si los polvos de la invención contienen proteínas/péptidos muy pequeños, de un peso molecular de < 10 kDa, con preferencia de < 5 kDa, por ejemplo los factores de crecimiento, por ejemplo las citoquinas, entonces su porción se situará con preferencia entre el 0,1 y el 10% (p/p), con mayor preferencia entre el 0,2 y el 5% (p/p) del peso total del polvo. Por consiguiente, son preferidos los polvos, cuya porción de citoquinas se sitúa en el 0,2, 0,3, 0,4... 0,8, 0,9, etc.; 1, 2, 3,... etc.; 4,1, 4,2, 4,3,... 4,8, 4,9 etc.; 4,91, 4,92, 4,93,... 4,98, 4,99% (p/p). Por el contrario, si el principio activo farmacéutico es uno o varios anticuerpos o un derivado de los mismos, entonces la porción de este principio activo dentro del contenido de sólidos del polvo se situará entre el 0,01 y el 75% (p/p), con preferencia entre el 0,01 y el 50% (p/p), con mayor preferencia entre el 0,1 y el 50% (p/p), con preferencia especial entre el 0,33 y el 50% (p/p), por ejemplo en el 0,1, 0,2, 0,3, 0,33,... 0,66, 0,7, 0,8, 0,9, etc.; 1, 2, 3,... 8,9, 10, etc.; 11, 12, 13,... 18, 19, 20, etc.; 21, 22, 23,... 28, 29, 30, etc.; 31, 32, 33,... 38, 39, 40, etc.; 41, 42, 43,... 48, 49, etc.; 49,1, 49,2, 49,3,... 49,8, 49,9, etc.; 49,91, 49,92, 49,93,... 49,98, 49,99, 50% (p/p).

Según una forma especial de ejecución, la porción de anticuerpos dentro del contenido de sólidos del polvo se sitúa entre el 10 y el 50% (p/p), con preferencia entre el 10 y el 30% (p/p), con preferencia especial entre el 10 y el 20% (p/p). Los polvos especialmente ventajosos y acordes con la invención, con preferencia los polvos liofilizados o secados por atomización, tienen una proporción entre la combinación de adyuvantes, que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O y otro adyuvante adicional, y el anticuerpo del orden de: 50/50, 51/49, 52/48, 53/47, 54/46, 55/45, 56/44, 57/43, 58/42, 59/41, 60/40, 61/39, 62/38, 63/37, 64/36, 65/35, 66/34, 67/33, 68/32, 69/31, 70/30, 71/29, 72/28, 73/27, 74/26, 75/25, 76/24, 77/23, 78/22, 79/21, 80/20, 81/19, 82/18, 83/17, 84/16, 85/15, 86/14, 87/13, 88/12, 89/11, o 90/10 (p/p). Según una forma especial de ejecución, la presente invención se refiere a polvos, con preferencia polvos liofilizados o secados por atomización, que se caracterizan porque la masa seca del polvo contiene por lo menos un 25% (p/p), con preferencia entre el 55 y el 99,99% (p/p), con preferencia especial entre el 60 y el 90% (p/p) de una mezcla de azúcares que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O y hasta un 75% (p/p) de un principio activo farmacéutico, dicha porción de lactosucrosa, maltosil-sucrosa y/o glucosil-sucrosa constituye por lo menos un 20% (p/p) de la masa seca del polvo y la suma de los porcentajes de peso se sitúa como máximo en el 100% (p/p). Los expertos son capaces de fabricar polvos de este tipo. Por ejemplo, los expertos saben que, con respecto al contenido total de sólidos de la solución a secar, como máximo podrá introducir por mezclado un 10% (p/p) de un principio activo farmacéutico, si se quiere que la porción de la mezcla de azúcares contenga por lo menos un 90% (p/p) de un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O.

La presente invención se refiere además a los polvos en cuestión, con preferencia polvos liofilizados o secados por atomización, que, además del principio activo farmacéutico, contienen también como combinación de adyuvantes por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares que contenga por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O y uno o más adyuvantes farmacéuticamente compatibles y/o una o más sales. Los adyuvantes son por ejemplo los aminoácidos, ya citados anteriormente, los péptidos y sus sales, los azúcares, los polioles, las sales de ácidos orgánicos y/o los polímeros.

Según otra forma de ejecución, la presente invención se refiere también a polvos, con preferencia polvos liofilizados o secados por atomización, que, además del principio activo farmacéutico, contienen como combinación de adyuvantes por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares que contenga por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O y uno o más aminoácidos, con preferencia un aminoácido. En este contexto, la presente invención se refiere a polvos, que con respecto a su masa seca contienen: a) por lo menos un 25% (p/p), con preferencia entre el 50 y el 90% (p/p), con preferencia especial entre el 60 y el 90% (p/p) de un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares que contenga por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, b) entre el 1 y el 19,99% (p/p) de aminoácidos, c) y además del 0,01 y al 74% (p/p) de un principio activo farmacéutico, con preferencia una macromolécula biológica, la suma de las diferentes porciones deberá totalizar como máximo el 100% (p/p). Según una forma preferida de ejecución, la porción del derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares, que contenga por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, se situará por lo menos en el 60% (p/p), con preferencia entre el 70 y el 90% (p/p) de la masa seca del polvo. En una formulación de este tipo, la porción de aminoácidos se situará con preferencia entre el 1 y 19,99% (p/p) y la porción del principio activo farmacéutico se situará entre el 0,01 y el 10% (p/p). La porción de aminoácidos puede elevarse hasta el 40% (p/p). En estos casos, la porción de principio activo farmacéutico y/o de derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de una mezcla de azúcares que contenga por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O deberá reducirse en consonancia, de modo que la suma de las porciones de sólidos alcance como máximo el 100% (p/p). Esto se aplica en especial al uso de la isoleucina como aminoácido.

A continuación, la presente invención se refiere según otra forma de ejecución a polvos, con preferencia polvos liofilizados o secados por atomización, que contienen por ejemplo un 80% (p/p) de un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de una mezcla de azúcares que contenga derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, un 19% (p/p) de aminoácido y un 1% (p/p) de principio activo farmacéutico (80/19/1); o por ejemplo (80/18/2); (80/17/3); (80/16/4); (80/15/5); (80/14/6); (80/13/7); (80/12/8); (80/11/9); (80/10/10); (70/20/10); (70/19/11); (70/18/12); (70/17/13);
(70/16/14); (70/15/15); (70/14/16); (70/13/17); (70/12/18); (70/11/19); (70/10/20); (60/20/20); (60/19/21); (60/18/22); (60/17/23); (60/16/24); (60/15/25); (60/14/26); (60/13/27); (60/12/28); (60/11/29) o (60/10/30) o consta de ellos. En el supuesto de que se mantenga constante la porción de aminoácidos y se reduzca la porción de principio activo del 20% (p/p) al 0,01% (p/p), por ejemplo al 9,99,... 9,9, 9,8, 9,7... 9,3, 9,2, 9,1... 9, 8 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1,... 0,9, 08, 0,7,... 0,66,... 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,1, 0,09, 0,08, 0,07, 0,06, 0,05, 0,04, 0,03 0,02, 0,01% (p/p), entonces podrá aumentarse en consonancia la porción del derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de la mezcla de azúcares que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, por ejemplo a: 80,01,... 80,1, 80,2, 80,3... 80,8, 80,9, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89,..., 89,1, 89,2, 89,3,... 89,33,... 89,4, 89,5, 89,6, 89,7, 89,8, 89,9,... 89,91, 89,92, 89,93,... 89,97, 89,98, 89,99% (p/p), de modo que la suma de las porciones ponderales de los distintos componentes del polvo sumen el 100% (p/p) de la masa seca del polvo. Con la adición de otros adyuvantes o sales puede ajustarse/reducirse en consonancia la porción del derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de la mezcla de azúcares que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, de los aminoácidos/péptidos y/o del principio activo farmacéutico, de modo que la suma de las porciones ponderales de los distintos componentes sea igual al
100% (p/p).

Son también acordes con la invención los polvos que tienen la composición siguiente: un 79% (p/p) de un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares que contenga por lo menos derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, un 11% (p/p) de aminoácido, un 10% (p/p) de principio activo farmacéutico (79/11/10); (78/12/10); (77/13/10); (76/14/10); (75/15/10); (74/16/10); (73/17/10); (72/18/10); (71/19/10); (70/20/10); en ella la porción del principio activo farmacéutico aminoácidos puede reducirse del 10 al 0,01% (p/p), por ejemplo al 9,99,... 9,9, 9,8, 9,7... 9,3, 9,2, 9,1... 9, 8 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1,... 0,9, 08, 0,7,... 0,66,... 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,1, 0,09, 0,08, 0,07, 0,06, 0,05, 0,04, 0,03 0,02, 0,01% (p/p) y, por consiguiente, la porción del derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de una mezcla de azúcares que contenga por los menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, podrá aumentarse hasta por ejemplo un 80,01,... 80,1, 80,2, 80,3... 80,8, 80,9, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89,..., 89,1, 89,2, 89,3,... 89,33,..., 89,4, 89,5, 89,6, 89,7, 89,8, 89,9,... 89,91, 89,92, 89,93,..., 89,97, 89,98, 89,99% (p/p), de modo que la suma de las porciones sea igual al 100% (p/p) de la masa seca del polvo.

Si el aminoácido añadido es la isoleucina, entonces según otra forma de ejecución son de la invención los polvos, con preferencia polvos liofilizados o secados por atomización, que tienen una porción a) de derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de una mezcla de azúcares que contenga por lo menos derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, por lo menos del 25% (p/p), con preferencia del 50 al 90% (p/p), con preferencia especial del 60 al 90% (p/p), b) una porción del 1 al 19,99% (p/p) de isoleucina y c) de por lo menos un 0,01 % (p/p), con preferencia del 0,01 hasta como máximo un 74% (p/p) de un principio activo farmacéutico, con preferencia de un péptido o proteína. La porción de la isoleucina se sitúa con preferencia del 5 al 19,99% (p/p), con mayor preferencia del 10 al 19,99% (p/p) de los sólidos totales del polvo. También aquí deberá cumplirse que la suma de los porcentajes ponderales de los distintos componentes no debe superar el 100% (p/p). Por consiguiente, son también acordes con la invención los polvos que tienen la composición siguiente: un 80% (p/p) de un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de una mezcla de azúcares que contenga por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, un 19% (p/p) de isoleucina y un 1% (p/p) de principio activo farmacéutico (80/19/1); (80/18/2); (80/17/3); (80/16/4); (80/15/5); (80/14/6); (80/13/7); (80/12/8); (80/11/9); (80/10/10); (70/19/11); (70/18/12); (70/17/13); (70/16/14); (70/15/15); (70/14/16); (70/13/17); (70/12/18); (70/11/19); (70/10/20); (60/19/21); (60/18/22); (60/17/23); (60/16/24); (60/15/25); (60/14/26); (60/13/27); (60/12/28); (60/11/29); (60/10/30). Si se agregan adyuvantes o sales adicionales, entonces deberán ajustarse la porción del derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de la mezcla de azúcares que contenga por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, la de isoleucina y/o la del principio activo farmacéutico, de tal manera que los porcentajes en peso de los distintos componentes sumen el 100% (p/p).

En otra forma de ejecución, la presente invención se refiere también a polvos, con preferencia polvos liofilizados o secados por atomización, que, aparte del principio activo farmacéutico, tienen una combinación de adyuvantes formada por lo menos por un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares que contenga por lo menos derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, y uno o varios péptidos, con preferencia uno o varios di- y/o tri-péptidos. La presente solicitud menciona por ejemplo algunos tri-péptidos, que, junto con el derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares que contengan por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, puedan utilizarse para la fabricación del polvo de la invención. En una forma especial de ejecución, los péptidos, en especial los di- o tri-péptidos, son aquellos que contienen por lo menos un resto de isoleucina, con preferencia dos restos de isoleucina, p según una forma de ejecución especialmente ventajosa, tres restos de
isoleucina.

En este contexto que considera que los polvos son acordes con la invención si tienen a) una porción de por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares que contenga por lo menos derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, por lo menos del 25% (p/p), con preferencia del 60 al 99% (p/p), con preferencia especial del 60 al 90% (p/p), b) una porción del 1 al 19,99% (p/p) de un péptido, con preferencia de un di- o tri-péptido, con preferencia especial de un péptido que contenga la isoleucina, por ejemplo la tri-isoleucina y c) del 0,01 hasta como máximo el 74% (p/p) de un principio activo farmacéutico, con preferencia de un péptido/proteína. También aquí se deberá cumplir que la suma de los diferentes sólidos no deberá superar el 100% (p/p). La porción de péptido, que se emplea como adyuvante y no corresponde al principio activo farmacéutico, puede elevarse también hasta el 40% (p/p). En estos casos, la porción de principio activo farmacéutico y/o del derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares que contenga por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O se deberá reducir en consonancia, de modo que la suma de las porciones de sólidos sea como máximo el 100% (p/p). Esto se aplica en especial al uso de di- y tri-péptidos, con preferencia de la tri-isoleucina.

Son también polvos acordes con la invención los que tienen la siguiente composición: un 89% (p/p) de por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares que contenga por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, un 1% (p/p) de péptido, con preferencia de di- o tri-péptido, con mayor preferencia un di- o tri-péptido que contenga la isoleucina, con preferencia especial la tri-isoleucina, un 10% (p/p) de principio activo farmacéutico (89/1/10); (88/2/10); (87/3/10); (86/4/10); (85/5/10); (84/6/10); (83/7/10); (82/8/10); (81/9/10); (80/10/10); (79/11/10); (78/12/10); (77/13/10); (76/14/10); (75/15/10); (74/16/10);, (73/17/10); (72/18/10) o (71/19/10); la porción del principio activo farmacéutico puede reducirse también del 10 al 0,01% (p/p), por ejemplo al 9,99,... 9,9, 9,8, 9,7... 9,3, 9,2, 9,1... 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1,... 0,9, 08, 0,7,... 0,66,... 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,1, 0,09, 0,08, 0,07, 0,06, 0,05, 0,04, 0,03 0,02, 0,01% (p/p) y, en consecuencia, aumentarse la porción del derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de la mezcla de azúcares que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, hasta por ejemplo un 80,01,... 80,1, 80,2, 80,3... 80,8, 80,9, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89,... 89,1, 89,2, 89,3,... 89,33,... 89,4, 89,5, 89,6, 89,7, 89,8, 89,9,... 89,91, 89,92, 89,93,... 89,97, 89,98, 89,99% (p/p), de modo que la suma total de los porcentajes en peso sea igual al 100% (p/p) de la masa seca del polvo. Por consiguiente, son también polvos de la invención los que tienen la composición siguiente: un 80% (p/p) de por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares que contenga por lo menos derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, un 19% (p/p) de péptido, con preferencia un di-péptido, con mayor preferencia un di- o tri-péptido que contenga a la isoleucina, con preferencia especial la tri-isoleucina, un 1% (p/p) de principio activo farmacéutico (80/19/1); (80/18/2); (80/17/3); (80/16/4); (80/15/5); (80/14/6); (80/13/7); (80/12/8); (80/11/9); (80/10/10); (70/19/11); (70/18/12); (70/17/13); (70/16/14); (70/15/15); (70/14/16); (70/13/17); (70/12/18); (70/11/19); (70/10/20); (60/20/20); (60/19/21); (60/18/22); (60/17/23); (60/16/24); (60/15/25); (60/14/26); (60/13/27); (60/12/28); (60/11/29); (60/10/30); para ello puede reducirse también la porción de péptido, con preferencia de di- o tri-péptido, con mayor preferencia de di- o tri-péptido que contiene isoleucina, con preferencia especial de tri-isoleucina, del 10 al 1% (p/p), por ejemplo al 9,99,... 9,9, 9,8, 9,7... 9,3, 9,2, 9,1... 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1,9, 1,8, 1,7,... 1,66,... 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,2, 1,1, 1% (p/p) y, en consonancia, se puede aumentar la porción de principio activo farmacéutico, con preferencia de péptido/proteína, hasta por ejemplo el 30,1, 30,2, 30,3... 30,8, 30,9, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 38,1, 38,2, 38,3,... 38,33,..., 38,4, 38,5, 38,6, 38,7, 38,8, 38,9,... 39% (p/p), de modo que la suma de las porciones de los pesos alcance el 100% (p/p) de la masa seca del polvo. Si se reduce la porción de péptido, con preferencia de di- o tri-péptido que contiene isoleucina, con preferencia especial de la tri-isoleucina, del 10 al 1% (p/p), tal como se mencionado, podrá aumentarse la porción del derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de una mezcla que contenga por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, dentro del polvo. Si la porción de principio activo se mantiene por ejemplo constante en el 10% (p/p), entonces pueden fabricarse polvos que tengan una porción de derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de una mezcla de azúcares que contenga por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, del 80,1, 80,2, 80,3... 80,8, 80,9, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 88,1, 88,2, 88,3,... 88,33,..., 88,4, 88,5, 88,6, 88,7, 88,8, 88,9 o bien del 89% (p/p).

Según otra forma de ejecución de la invención, los polvos pueden contener además sustancias tensioactivas, tales como el Tween 20, 40, 60, 80, Brij 35, Pluronic F 88 o Pluronic F 127. Estas se emplean con preferencia en una concentración del 0,01-0,1% (p/p). Es especialmente preferido un polvo, que, como combinación de adyuvantes, contiene un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, y además, como sustancia tensioactiva, el Tween 20, con preferencia en una concentración del 0,01-0,1% (p/p).

Según otra forma de ejecución, las partículas de los polvos de la invención presentan un MMD entre 1 y 10 \mum, con preferencia entre 1 y 5 \mum.

Según otra forma de ejecución, la presente invención se refiere a polvos, con preferencia polvos liofilizados o secados por atomización, que tienen una composición como las descritas antes y que se caracterizan por una temperatura de transición vítrea superior a 40ºC. Normalmente, los polvos correspondientes de la invención presentan una temperatura de transición vítrea máxima de aprox. 96-110ºC. Pero, en casos individuales, este valor puede ser todavía más alto.

La presente invención se refiere además a composiciones farmacéuticas, que contienen por lo menos uno de los polvos de la invención aquí descritos, con preferencia polvos liofilizados o secados por atomización.

Fabricación de los polvos de la invención

La presente invención proporciona también un procedimiento para la fabricación de uno de los polvos descritos antes con mayor detalle, con preferencia un polvo secado por atomización o liofilizado. El procedimiento se caracteriza porque se mezclan un principio activo farmacéutico y una combinación de adyuvantes que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O elegido entre D-Gal-sacarosa unida a través de 1,4-O (lactosucrosa), D-Glu-sacarosa unida a través de 1,4-O (glucosil-sucrosa) o Glu-Glu-sacarosa unida a través de 1,4-O (maltosil-sucrosa), en combinación por lo menos con otro adyuvante y se secan en condiciones apropiadas. El adyuvante adicional es con preferencia un aminoácido, con preferencia la isoleucina, un péptido, con preferencia un di- o tri-péptido, y/o un mono-, di- y/u oligosacárido, dicho oligosacárido puede ser incluso un segundo derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, en el supuesto de que este sea distinto del primero.

Fundamentalmente pueden fabricarse los polvos de la invención disolviendo el principio activo farmacéutico, con preferencia una macromolécula biológica en forma de péptido o proteína, en una solución acuosa en función de las condiciones de solubilidad del principio activo en cuestión. Por lo general se emplean soluciones tamponadas de un pH de 3-11, con preferencia de 3,5-9. Para la fabricación de polvos inhalables es especialmente ventajosa una solución acuosa que tenga un pH de 4-7,8. Para asegurar una solubilidad suficiente, el pH de la solución debería estar situado por debajo del pI del péptido/proteína. La solución acuosa puede contener de modo opcional disolventes orgánicos solubles en agua adicionales, p. ej. acetona, alcoholes o similares. Son idóneos en especial los alcoholes inferiores, p. ej. metanol, etanol, propanol, (n- o iso-propanol) o similares. Tales sistemas mixtos de disolventes contienen normalmente entre el 10 y el 20% (v/v) de un disolvente orgánico soluble en agua. El contenido de sólidos de la solución a secar se suele situar entre el 0,01 y el 20% (p/p), con preferencia entre el 0,05 y el 10% (p/p), con preferencia especial entre el 0,1 y el 5% (p/p). En el marco de la presente invención se fabrican polvos secados por atomización y polvos liofilizados partiendo de una solución acuosa que tiene un contenido de sólidos del 10% (p/p) así como polvos secados por atomización con un contenido de sólidos del 3,33% (p/p) o del 2% (p/p).

Normalmente se disuelven las combinaciones de adyuvantes, que se han descrito anteriormente a título ilustrativo, en un segundo recipiente que contiene agua muy pura o una solución tampón apropiada, de un pH entre 3 y 11, con preferencia entre 3,5 y 9, con preferencia especial entre 4,0 y 7,8 y, en un segundo paso, se mezclan con la solución del principio activo. A continuación se ajusta la solución o suspensión al contenido de sólidos deseado por adición de agua muy pura o de una solución tampón adecuada, de pH entre 3 y 11, con preferencia de 3,5 a 9 y con preferencia especial de 4,0 a 7,8.

Por consiguiente, la presente invención se refiere a un procedimiento para la fabricación de un polvo caracterizado porque

a) se disuelve o suspende un principio activo farmacéutico en una solución/suspensión acuosa;

b) se disuelve o suspende una combinación de adyuvantes formada por lo menos por un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O elegido entre los compuestos lactosucrosa, glucosil-sucrosa y maltosil-sucrosa, en combinación por lo menos con otro adyuvante, en una solución o suspensión acuosa;

c) en el supuesto de que el principio activo y la combinación de adyuvantes formada por lo menos por un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O en combinación por lo menos con otro adyuvante, se hallen disueltos o suspendidos en soluciones o suspensiones distintas, se mezclan estas;

d) se seca la solución o suspensión que contiene la combinación de adyuvantes, formada por lo menos por un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O en combinación por lo menos con otro adyuvante, y el principio activo farmacéutico.

Si el procedimiento de secado es un secado por atomización, entonces se realiza el secado del punto d) mediante atomización de la solución o suspensión correspondiente, por debajo de una temperatura de 200/120ºC (temperaturas de entrada/salida), con preferencia entre 186/96ºC y 60/40ºC, por ejemplo a 180-150/95-80º. Este proceso se describe con mayor detalle en la sección de los "ejemplos", ilustrándolo con ejemplos.

La combinación de adyuvantes que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O puede contener además una mezcla de azúcares o estar formado por dicha mezcla, que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O y otro azúcar. Los ejemplos de mezclas de azúcares apropiadas para este fin se describen con mayor detalle en la sección de "definiciones". Las mezclas de azúcares pueden contener además varios derivados de sacarosa unidos a través de 1,4-O, opcionalmente en combinación con otros mono-, di- y/u oligosacáridos. En el marco de la presente invención pueden utilizarse, pues, mezclas de azúcares con lactosucrosa, lactosa y sacarosa, en las que la porción de la lactosucrosa referida al peso total de azúcares se sitúa en \geq 40% (p/p), con preferencia en \geq 55% (p/p) o incluso en \geq 88% (p/p) o más. La mezcla de azúcares es con preferencia una mezcla de azúcares de la empresa Hayashibara Shoji, Inc., Japón, denominada Nyuka-Oligo® LS55P, o abreviada con: LS55P, que contiene por lo menos un 55% de lactosucrosa, como máximo un 25% (p/p) de lactosa y como máximo un 10% (p/p) de sacarosa. Según otra forma de ejecución, la mezcla de azúcares es una mezcla de azúcares de la empresa Hayashibara Shoji, Inc., Japón, denominada Nyuka-Oligo® LS90P, o abreviada con: LS90P, que contiene por lo menos un 88% de lactosucrosa y, como máximo, un 10% (p/p) de lactosa y sacarosa. Se pueden utilizar también mezclas de azúcares formadas por una combinación de glucosil- y maltosil-sucrosa, con preferencia en combinación de nuevo con otros mono-, di- y/o polisacáridos. Por consiguiente, son también idóneos en el sentido de la presente invención las mezclas de azúcares formadas por glucosil- y maltosil-sucrosa, sacarosa, glucosa y/o fructosa, en las que la porción de la glucosil- y maltosil-sucrosa se sitúa con preferencia en un 25% (p/p) del contenido total de azúcar, o más. Según otra forma de ejecución, la porción correspondiente a la glucosil- y maltosil-sucrosa se sitúa por lo menos en el 18% (p/p) del contenido total de azúcar. Según otra forma preferida de ejecución, la mezcla de azúcares empleada es una mezcla de azúcares de la empresa Hayashibara Shoji, Inc., Japón, denominada Coupling Sugar®, que contiene por lo menos en cada caso un 18% (p/p) de glucosil- y maltosil-sucrosa, entre el 11 y el 15% (p/p) de sacarosa y en cada caso el 5 y 3l 9% (p/p) glucosa y fructosa. En el sentido de la presente invención son también idóneas las mezclas de azúcares de la empresa Hayashibara Shoji, Inc., Japón, denominadas Coupling Sugar S®, que contienen por lo menos un 25% (p/p) de glucosil- y/o maltosil-sucrosa, entre el 48 y el 56% (p/p) de sacarosa y no más del 10% (p/p) de glucosa y fructosa.

Por consiguiente, según otra forma de ejecución, el polvo de la invención recién descrito contiene la solución/sus-
pensión a secar y además uno o varios adyuvantes farmacéuticamente compatibles y/o una o varias sales. Los adyuvantes son con preferencia aminoácidos, péptidos, alcoholes, polioles, polímeros no biológicos y/o biológicos. Otros adyuvantes conocidos por el estado de la técnica, que pueden utilizarse en combinación por lo menos con un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o con una mezcla de azúcares que contenga un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, son por ejemplo los lípidos, ácidos grasos, ésteres de ácidos grasos, esteroides (p. ej. colesterol) o formadores de quelatos (p. ej. el EDTA) así como diversos cationes. Son especialmente preferidos los adyuvantes que tienen una temperatura de transición vítrea elevada, por ejemplo superior a 40ºC, con preferencia superior a 45ºC o superior a 55ºC. Se encontrarán ejemplos de adyuvantes idóneos y de combinaciones de adyuvantes en el capítulo "polvos de la invención" de esta solicitud. Otra enumeración de adyuvantes adecuados se encontrará también, a título ilustrativo, en Kippe (coord.), "Handbook of Pharmaceutical Excipients", 3ª ed., 2000.

El contenido de la combinación de adyuvantes, que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O en combinación con otro adyuvante, dentro de la solución o suspensión a secar, se sitúa entre el 25% y el 99,99% (p/p), con preferencia entre el 60% y el 99% (p/p), con preferencia especial entre el 60 y el 90% (p/p) referidos al contenido de sólidos de la solución o suspensión a secar. La concentración de principio activo se sitúa normalmente entre el 0,01 y el 75% (p/p), con preferencia entre el 0,01 y el 50% (p/p), con mayor preferencia entre el 0,33 y el 50% (p/p), con preferencia especial entre el 0,33 y el 40% (p/p). Según otra forma preferida de ejecución el contenido de principio activo farmacéutico dentro del contenido de sólidos de la solución o suspensión a secar se sitúa entre el 0,33 y el 35% (p/p), con preferencia entre el 0,33 y el 30% (p/p), con mayor preferencia entre el 0,33 y el 25% (p/p) y con preferencia especial entre el 0,33 y el 10% (p/p).

La presente invención se refiere, pues, a un procedimiento para la fabricación de un polvo secado, con preferencia un polvo liofilizado o secado por atomización, ya descrito antes, caracterizado porque el contenido de sólidos de la solución o suspensión a secar se sitúa entre el 25 y el 99,99% (p/p), con preferencia entre el 60 y el 90% (p/p) de una combinación de adyuvantes, que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O en combinación con otro adyuvante. Según otra forma preferida de ejecución, la presente invención se refiere a un procedimiento correspondiente, caracterizado porque la porción de sólidos de la solución o suspensión a secar contiene un principio activo farmacéutico en una cantidad del 0,01 y al 75% (p/p), con preferencia entre el 0,33 y el 50% (p/p), con preferencia especial entre el 0,33 y el 30% (p/p).

Según otra forma de ejecución del procedimiento de la invención se fabrica y se seca una solución o suspensión que tiene una porción de sólidos de a) por lo menos un 25% (p/p), por ejemplo entre el 25 y el 99,99% (p/p) de una combinación de adyuvantes que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O en combinación por lo menos con otro adyuvante y b) por lo menos un 0,01% (p/p), con preferencia del 0,01 al 75% (p/p) de un principio activo farmacéutico, con preferencia de una macromolécula biológica, la suma de los porcentajes de los pesos alcanzará como máximo el 100% (p/p), referido al contenido de sólidos de la solución a atomizar. Según una forma preferida de ejecución se fabrica y se seca una solución o suspensión con una porción de sólidos a) de una combinación de adyuvantes que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O en combinación por lo menos con otro adyuvante de por lo menos el 60% (p/p), con preferencia entre el 60 y el 90% (p/p), y b) del 0,01 al 40% (p/p) de un principio activo farmacéutico, con preferencia una macromolécula biológica, la suma de los porcentajes de los pesos de la solución o suspensión alcanzará como máximo en el 100% (p/p), referido al contenido de sólidos de la solución a atomizar.

Aparte del principio activo farmacéutico y por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, la solución o suspensión a secar contiene con preferencia como adyuvante adicional una mezcla de azúcares formada por otros mono-, di- y/u oligosacáridos, y/o uno o más aminoácidos y/o péptidos o proteínas, pero los péptidos o proteínas empleados como adyuvantes no son idénticos al principio activo farmacéutico. La presente invención se refiere, pues, a un procedimiento para la fabricación de polvos, caracterizado porque la suspensión o solución a secar contiene, referidos a su porción de sólidos, a) por lo menos un 25% (p/p), con preferencia por lo menos un 60% (p/p) de por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de una mezcla de azúcares, que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, b) del 1 al 39,99% (p/p) de por lo menos un aminoácido y/o por lo menos un péptido y c) por lo menos un 0,01% (p/p) de un principio activo farmacéu-
tico.

Según otra forma preferida de ejecución, aparte de por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de una mezcla de azúcares que contenga por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, la solución o suspensión a secar contiene además uno o varios aminoácidos en calidad de adyuvantes adicionales. Se consideran ventajosas las soluciones o suspensiones, cuya porción de sólidos contiene a) por lo menos un 25% (p/p), con preferencia del 60 al 90% (p/p) de por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares, que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, b) del 1 al 19,99% (p/p) de aminoácidos y c) por lo menos un 0,01% (p/p) de un principio activo farmacéutico, con preferencia un péptido o proteína, por ejemplo un anticuerpo. La porción del principio activo farmacéutico se sitúa con preferencia entre el 0,01 y como máximo el 74% (p/p), la suma de los contenidos de sólidos alcanzará como máximo el 100% (p/p). Los expertos son capaces de fabricar los polvos de interés y ajustar las porciones ponderales de tal manera que la suma de los contenidos de sólidos no rebase el 100% (p/p). Si la porción de principio activo farmacéutico (referido al contenido total de sólidos) debe situarse por ejemplo en el 10% (p/p) y la porción de por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares, que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, debe situarse en el 80% (p/p), entonces los expertos saben que a la solución o suspensión a secar se le puede añadir como máximo un 10% (p/p) de aminoácidos.

Según otra forma preferida de ejecución, aparte de por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de una mezcla de azúcares que contenga por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, la solución o suspensión a secar contiene además la isoleucina en calidad de adyuvante adicional. Se consideran ventajosas la soluciones o suspensiones, cuya porción de sólidos contiene a) por lo menos un 25% (p/p), con preferencia del 60 al 90% (p/p) de por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares, que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, b) del 10 al 19,99% (p/p) de isoleucina así como c) por lo menos un 0,01% (p/p) de un principio activo farmacéutico, con preferencia de un péptido o proteína, por ejemplo un anticuerpo. La porción del principio activo farmacéutico se sitúa con preferencia entre el 0,01 y como máximo el 65% (p/p), pero la suma de los contenidos de sólidos alcanzará como máximo el 100% (p/p). Los expertos son capaces de fabricar los polvos de interés y ajustar las porciones ponderales de tal manera que la suma de los contenidos de sólidos no rebase el 100% (p/p). Si la porción de principio activo farmacéutico (referido al contenido total de sólidos) debe situarse por ejemplo en el 10% (p/p) y la porción de por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares, que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, debe situarse en el 80% (p/p), entonces los expertos saben que a la solución o suspensión a secar se le puede añadir como máximo un 10% (p/p) de isoleucina.

Según otra forma de ejecución, aparte de por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de una mezcla de azúcares que contenga por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, la solución o suspensión a secar contiene además uno o más péptidos, con preferencia di- o tri-péptidos, con preferencia especial tri-péptidos que contienen a la isoleucina, con preferencia muy especial la tri-isoleucina. Se consideran ventajosas la soluciones o suspensiones, cuya porción de sólidos contiene a) por lo menos un 25% (p/p), con preferencia del 60 al 90% (p/p) de por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares, que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, b) del 1 al 19,99% (p/p) de un péptido, con preferencia de un di- o tri-péptido, con preferencia especial de la tri-isoleucina así como c) por lo menos un 0,01% (p/p) de un principio activo farmacéutico, con preferencia de un péptido o proteína, por ejemplo un anticuerpo, pero la suma de los contenidos de sólidos alcanzará como máximo el 100% (p/p). La porción del principio activo farmacéutico se sitúa con preferencia entre el 0,01 y como máximo hasta el 74% (p/p). Los expertos son capaces de fabricar los polvos de interés y ajustar las porciones ponderales de tal manera que la suma de los contenidos de sólidos no rebase el 100% (p/p). Si la porción de principio activo farmacéutico (referido al contenido total de sólidos) debe situarse por ejemplo en el 10% (p/p) y la porción de por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares, que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, debe situarse en el 80% (p/p), entonces los expertos saben que a la solución o suspensión a secar se le puede añadir como máximo un 10% (p/p) de péptido, con preferencia de di-o tri-péptido y con preferencia especial de tri-isoleucina.

Tal como se ha mencionado antes, es ventajoso fabricar y atomizar soluciones a secar que tengan un pH entre 3 y 11, con preferencia entre 3,5 y 9, con preferencia especial entre 4,0 y 7,8. Los expertos ya conocen los sistemas tampón apropiados. Por lo general es especialmente ventajoso el uso de sales inorgánicas u orgánicas como sistemas tampón.

De forma típica se determina de modo experimental el contenido óptimo de adyuvantes y de proteínas para cada proteína o péptido. Las formulaciones preferidas de la invención pueden contener por lo menos un adyuvante adicional para mejorar las propiedades del polvo, como son la dispersabilidad y la fluidez, conservando una superior resistencia a la formación de agregados.

Secado por atomización

La atomización se efectúa en secadores convencionales de atomización, por ejemplo en aparatos de la empresa Niro A/S (Soeborg, DK), Büchi Labortechnik GmbH (Flawil, CH) o similares. Las condiciones óptimas para el secado por atomización dependerán en cada caso de la formulación en cuestión y deberán determinarse por métodos experimentales. Como gas se emplea normalmente el aire, pero también son apropiados los gases inertes, tales como el nitrógeno o el argón. Por otro lado se determina la temperatura del secado por atomización, considerando como tal la temperatura de entrada (inlet) y de salida (outlet), en función de la sensibilidad a la temperatura que puedan tener los principios activos empleados, en cada caso en función de los estabilizadores empleados. Es habitual una temperatura de entrada de 50-200ºC, mientras que la temperatura de salida se suele situar en 30-150ºC. En el marco de la presente invención se trabaja con una temperatura de entrada de 170-185ºC y una temperatura de salida de 80-100ºC. Sin embargo, es posible también elegir una temperatura de entrada de hasta 200ºC, con preferencia de 60-185ºC y una temperatura de salida de hasta 120ºC, con preferencia de 40-105ºC, trabajando en cada caso en función de la cantidad de estabilizador empleada. La atomización se realiza por lo general con una presión de aproximadamente 20-150 psi, con preferencia de aproximadamente 30- o 40-100 psi, por ejemplo de aproximadamente 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ó 100 psi.

En lo referente al secado de atomización de Büchi B290 la velocidad o caudal de alimentación de líquido ("Liquid-Feed-Rate") se sitúa normalmente entre 0,1 y 100 ml/min, con preferencia entre 0,1 y 30 ml/min, por ejemplo en aprox. 3 ml/min. En este contexto ha demostrado ser especialmente indicado un caudal de aspirador (Aspirator-Flow-Rate) de 20-40 m^{3}/h, con preferencia de 30-40 m^{3}/h, por ejemplo de 35 m^{3}/h y una caudal de pulverización de 0,3-2,5 m^{3}/h, con preferencia de 30-40 m^{3}/h, por ejemplo de 38,3 m^{3}/h y caudales de atomización de 0,3-2,5 m^{3}/h, con preferencia de aprox. 0,67 m^{3}/h, 1,05 m^{3}/h y 1,74 m^{3}/h.

Los polvos secados por atomización pueden someterse opcionalmente a un segundo secado suave (secado posterior), cuyo objetivo es conseguir un contenido residual uniforme de agua en el polvo, con preferencia inferior al 2% (p/p) y, de este modo, mejorar no solo la estabilidad del principio activo, sino también las propiedades del polvo, como son la temperatura de transición vítrea, fluidez y dispersabilidad. Las condiciones del proceso de secado posterior deberán elegirse de tal manera, que no se merme de forma significativa la bioactividad del principio activo farmacéutico. Las formulaciones pulverulentas de principio activo, que se secan por atomización, se fabrican, se procesan y se almacenan con preferencia en condiciones secas (con una humedad relativa baja). Después del secado por atomización, el proceso de secado posterior permite seguir reduciendo el contenido de humedad del polvo, a pesar de que sus valores residuales iniciales de agua fueran altos. De modo sorprendente, los adyuvantes, que son objeto de la presente invención, que forman parte de las formulaciones preferidas, estabilizan de modo excelente a las proteínas, incluso cuando las condiciones del proceso o del almacenaje no sean óptimas.

Liofilización

La liofilización de soluciones acuosa puede realizarse con arreglo a la descripción de Essig, Oschmann: "Lyophilisation", editorial Wissenschaftliche Verlagsgesellschaft, Stuttgart (1993). El principio activo terapéutico se liofiliza normalmente en forma de solución o suspensión acuosa. Hay que tomar en consideración las concentraciones y valores de apropiados. En una formulación preferida se disuelve en primer lugar el principio activo farmacéutico en una solución acuosa con un sistema tampón apropiado. El pH de las soluciones que contienen proteínas se sitúa en general entre 3 y 11, con preferencia entre 3,5 y 9 y con preferencia especial entre 4,0 y 8. El pH de la solución deberá ajustar por debajo o por encima del punto isoeléctrico del principio activo. En un segundo recipiente se disuelve el adyuvante o una mezcla de adyuvantes idóneos con agua muy pura o con una solución tampón adecuada, de un pH entre 3 y 11, con preferencia de 3,5 a 9 y con preferencia especial de 4,0 a 8,5 y en un segundo paso se mezcla con la solución de la proteína. Finalmente, la solución se ajusta al contenido de sólidos deseado mediante la adición de agua muy pura o de una solución tampón adecuada de un pH de 3 a 11, con preferencia de 3,5 a 9 y con preferencia especial de 4,0 a 8,5. Los contenidos de sólidos totales apropiados se sitúan entre el 0,1 y el 30% (p/p), con preferencia entre el 0,5 y el 20% (p/p) y con preferencia especial entre el 0,75 y el 15,0% (p/p). A continuación se liofilizan las soluciones en un aparato liofilizador comercial convencional, p. ej. del tipo Christ LPC-16/NT Epsilon 2-12 D de la empresa Martin Christ Gefriertrocknungsanlagen GmbH, o en otro similar. El producto es un polvo que contiene proteínas o una torta, que, antes del procesado posterior, se tritura con un procedimiento adecuado, de modo que se obtenga un polvo polidispersado. Las temperaturas del liofilizador se optimizan de forma experimental y se sitúan en general entre -70ºC y +100ºC, con preferencia entre -50ºC y +40ºC. Los parámetros preferidos de presión dentro del liofilizado son de 10*e-5 a 1013 mbar. Las formulaciones de proteínas secadas por atomización, una vez trituradas, pueden someterse con preferencia a un segundo secado suave (secado posterior), cuyo objetivo es conseguir un contenido residual uniforme de agua en las formulaciones, inferior al 2% y, de este modo, mejorar no solo la estabilidad del principio activo, sino también las propiedades del polvo, como son la temperatura de transición vítrea, la fluidez y la dispersabilidad. Las condiciones del proceso de secado posterior deberán elegirse de tal manera que no se reduzca significativamente la actividad del principio activo.

Propiedades de las formulaciones en polvo secadas por atomización

Las formulaciones en polvo de proteínas, secadas, fabricadas en el marco de esta invención, tienen un contenido residual de agua inferior al 15% (p/p), habitualmente inferior al 10% (p/p) y con preferencia inferior al 6% (p/p). De modo también preferido, las formulaciones en polvo de proteínas, secadas por atomización, tienen un contenido residual de agua inferior al 5% (p/p), con preferencia especial inferior al 3% (p/p) y con preferencia muy especial entre el 0,2 y el 2,0% (p/p). Las formulaciones de una humedad residual baja presentan en general una mejor estabilidad durante el envasado y el almacenaje. Por otro lado, las formulaciones en polvo de proteínas, secadas, de la invención son marcadamente higroscópicas, es decir, tienen a absorber humedad de su entorno. Para evitarlo se suelen almacenar dichos polvos con exclusión de la humedad ambiental, en recipientes, por ejemplo envases de tipo blíster. De modo sorprendente se ha puesto de manifiesto en las formulaciones seleccionadas de los polvos de la invención que los polvos permanecen estables incluso después de un mes de almacenaje abierto en una humedad relativa del 43% tanto en lo que se refiere a la estabilidad de las proteínas como a la inhalabilidad.

Los efectos estabilizadores de los adyuvantes aquí descritos son capaces de proteger a la proteína de las cargas extremas a que se somete tanto durante el secado por atomización como durante el almacenaje. En ausencia de los adyuvantes, las formulaciones de proteína puras, secadas por atomización, forman agregados en gran medida. Los factores inherentes del proceso, como son el calor, el estrés por cizallamiento y la desnaturalización en las superficies límites entre agua y aire provocan la agregación (hasta aprox. un 6,6% de agregados) durante el secado por atomización y luego durante el secado posterior (hasta aprox. un 5,8% de agregados). En ausencia del envoltorio hidratado estabilizante de las proteínas, en el curso del almacenaje se produce la formación masiva de agregados (de aprox. un 11,8 a un 18,9% de agregados).

A diferencia de las formulaciones de proteína puras, las formulaciones secadas por atomización, preferidas de la invención, son capaces no solo de restringir la formación de agregados después del secado por atomización, sino también de mantenerla en un nivel muy bajo incluso en diversas condiciones de almacenado. Por el secado de atomización y el siguiente secado con vacío se forman en las formulaciones preferidas solamente del 0,5 al 1,8% aprox. de agregados, mientras que en las formulaciones de proteína puras la cifra de agregados es de aprox. un
4,0%.

En condiciones de almacenaje especialmente exigentes (40ºC, 75% de humedad relativa) de la estabilidad al almacenaje forzada, destaca la clara superioridad de las formulaciones preferidas (agregados: aprox. 1,0-13,1%) frente a las formulaciones de proteína puras (agregados: aprox. 18,2-18,9%) y a una formulación análoga de referencia empleando la trehalosa como adyuvante.

Esta ventaja destaca especialmente en la comparación de la formulación descrita en el ejemplo 4. La adición de la tri-isoleucina a la solución a atomizar conduce a una mejora significativa de las propiedades aerodinámicas de los polvos. De modo sorprendente, solamente las combinaciones, que contienen por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O y la tri-isoleucina, en especial el LS55P y la tri-isoleucina y el LS90P y la tri-isoleucina, son capaces de proteger el principio activo farmacéutico, presente por ejemplo en forma de proteína, de la formación de agregados (agregados: solamente un 0,7-4,4%). Ni los adyuvantes rafinosa (agregados: 12,6%) e hidroxietil-almidón (agregados: aprox. 18,6%) descritos en combinación con la tri-leucina en el documento WO 01/32144, ni la trehalosa, descrita como estabilizador sobresaliente en el estado de la técnica, son capaces de proteger a la proteína de la agregación en las condiciones especialmente exigentes, cuando se combinan con la tri-isoleucina. Tanto las formulaciones de LS55P-tri-isoleucina como las formulaciones de LS09P-tri-isoleucina se muestran claramente ventajosas frente a una formulación de sacarosa-tri-isoleucina (agregados: 5,6%) y una formulación de sacarosa-lactosa-tri-isoleucina (agregados: 8,8%). Esto resulta tanto más sorprenden cuando en el LS55P están presentes la sacarosa y además hasta un 25% de lactosa. Resulta claro que el efecto negativo del azúcar reductor, la lactosa, en la estabilidad de la proteína se compensa de sobras en el LS55P por la lactosucrosa que contiene. Una porción elevada de lactosucrosa en la porción de azúcares de las formulaciones en polvo resultado todavía más ventajoso para la estabilidad de la proteína (ver formulaciones de LS90P).

Las formulaciones, que ya en almacenajes relativamente cortos en condiciones muy desestabilizantes (1 semana a 40ºC y 75% de humedad relativa) tienen un efecto estabilizante significativo en las proteínas incorporadas, estabilizan las proteínas incluso a largo plazo en condiciones de almacenaje estándar, mucho más suaves (p. ej. 1 año, seco, aprox. a 25ºC).

Después del equilibrado y posterior almacenaje de cuatro semanas en condiciones secas a 40ºC (estabilidad al almacenaje equilibrada), las formulaciones en polvo que contienen el LS55P y el Coupling Sugar se caracterizan por su bajo contenido de agregados (aprox. 1,4-3,2% de agregados), en especial si se comparan con polvos de proteína puros (aprox. un 11,8% de agregados).

Después del secado por atomización y posterior almacenaje de cuatro semanas en condiciones secas a 40ºC (estabilidad al almacenaje con secado al vacío), las formulaciones en polvo que contienen el LS55P y el Coupling Sugar se caracterizan por bajos contenidos de agregados (aprox. del 1,1 al 2,1% de agregados), en especial si se comparan con polvos de proteína puros (aprox. 13,2% de agregados).

Las formulaciones de LS55P (80%), isoleucina (10%) e IgG1 (10%) con una fracción de partículas finas de aprox. 35%, después del secado con vacío y posterior envasado en atmósfera de nitrógeno, después de un almacenaje de tres meses en condiciones secas entre 2 y 8ºC, 25ºC y 40ºC presentan contenidos de agregados inferiores al 1,9%.

Las formulaciones de LS55P (80%), isoleucina (10%) e IgG1 (10%) con un MMAD de aprox. 3,9 \mum y una fracción de partículas finas de aprox. 58,3%, después del secado por atomización y secado con vacío y posterior envasado en atmósfera de nitrógeno, después de un almacenaje de tres meses en condiciones secas entre 2 y 8ºC y 25ºC presentan contenidos de agregados inferiores al 1,9% y en condiciones de almacenaje secas a 40ºC (estabilidad a los 3 meses) presentan contenidos de agregados inferiores al 2,6%.

Además, las formulaciones ya mencionadas de LS55P (80%), tri-isoleucina (10%) e IgG1 (10%) después de un almacenaje abierto de un mes con aprox. un 43% de humedad relativa y 25ºC (estabilidad abierta durante 1 mes) siguen presentando un contenido bajo de agregados (aprox. 1,3%) para un MMAD pequeño aproximadamente igual (aprox. 3,8 \mum) y para una fracción de partículas finas aproximadamente igual (aprox. 59,6%).

Las formulaciones de LS90P (90%) e IgG1 (10%) que tienen un MMAD de aprox. 3,8 \mum, un MMD de aprox. 2,8 \mum y una fracción de partículas finas de aprox. 24% después del secado por atomización, secado con vacío y posterior envasado en atmósfera de nitrógeno, presentan después de un almacenaje de uno o tres meses en condiciones secas entre 2 y 8ºC, 25ºC y 40ºC (estabilidad al almacenaje de 1 ó 3 meses) contenidos de agregados inferiores a 1,2 ó 2,2%.

Las formulaciones de LS90P (80%), isoleucina (10%) e IgG1 (10%) con una fracción de partículas finas de aprox. 28%, después del secado con vacío y posterior envasado en atmósfera de nitrógeno, después de un almacenaje de uno o tres meses en condiciones secas entre 2 y 8ºC, 25ºC y 40ºC (estabilidad al almacenaje de 1 ó 3 meses) presentan contenidos de agregados inferiores al 0,9 ó 1,1%.

Las formulaciones de LS90P (80%), tri-isoleucina (10%) e IgG1 (10%) con un MMAD de aprox. 4,8 \mum y una fracción de partículas finas de 53,2%, después del secado por atomización, secado con vacío y posterior envasado en atmósfera de nitrógeno, después de un almacenaje de uno o tres meses en condiciones secas entre 2 y 8ºC, 25ºC y 40ºC (estabilidad al almacenaje de 1 ó 3 meses), presentan contenidos de agregados inferior al 1,2 ó 2,3%.

Además, las variaciones de las anteriores formulaciones de LS90P (80%), tri-isoleucina (10%) e IgG1 (10%), después de un almacenaje abierto de uno o tres meses con aprox. un 43% de humedad relativa y 25ºC (estabilidad al almacenaje abierto de 1 ó 3 meses), siguen presentando contenidos bajos de agregados, entre el 0,5 y el 0,8%. Después del secado de atomización, los MMAD se sitúa entre aprox. 3,9 y 3,3 \mum y las FPF entre aprox. 55,6 y 58,9%. Después de un almacenaje abierto de un mes con aprox. un 43% de humedad relativa y 25ºC, las formulaciones anteriores siguen presentando MMAD bajos (aprox. 4,1-3,5 \mum) y una fracción elevada de partículas finas (aprox. del 62,3 al 67,3%).

Variando las condiciones de secado pueden fabricarse polvos, que presentan con preferencia un tamaño medio de partícula (MMD) inferior a 20 \mum, con preferencia inferior a 10 \mum. Según una forma especialmente preferida de ejecución, estas partículas de la invención presentan un tamaño medio de partícula inferior 7,5 \mum, con preferencia inferior a 5 \mum. Son partículas especialmente preferidas las que tienen un tamaño medio de partícula inferior a 4 \mum y todavía más preferidas las que lo tienen menor que 3,5 \mum. En general pueden fabricarse incluso partículas de un tamaño medio de partícula de 0,1-5 \mum, con preferencia de 0,2-4 \mum. En otra forma de ejecución se mezclan a los polvos en cuestión partículas no respirables, p. ej. lactosa, de un tamaño de partícula por lo menos de 40 \mum, con preferencia entre 40 y 200 \mum. Su porción se sitúa con preferencia por lo menos en el 15%, con mayor preferencia por lo menos en el 20%, con mayor preferencia todavía por lo menos en el 30%, con preferencia especial por lo menos en el 40% y con preferencia muy especial por lo menos en el 50 ó 60%.

Aparte del tamaño medio de partícula (MMD), la inhalabilidad depende fundamentalmente del diámetro de partícula aerodinámico medio (MMAD). Las partículas de la invención presentan con preferencia un MMAD inferior a 10 \mum y con mayor preferencia inferior a 7,5 \mum. Son especialmente ventajosos los polvos formados por partículas de un MMAD inferior a 5,5 \mum, con preferencia inferior a 5 \mum, con mayor preferencia inferior a 4,5 \mum. Los polvos descritos en los ejemplos pueden fabricarse con tamaños de partícula adecuados por combinación de las condiciones óptimas de secado por atomización y la elección y concentración del adyuvante, propias de esta invención. En especial la adición de aminoácidos y/o tri-péptidos conduce a una mejor configuración de las partículas, con una porción elevada de partículas inhalables, de un MMAD inferior a 7,5 \mum, con preferencia inferior a 5,5 \mum. Con la adición de isoleucina o de tri-isoleucina pueden fabricarse polvos de una FPF superior al 28%, con preferencia superior al 40, con mayor preferencia superior al 50 y con preferencia especial superior al 55% (ver la sección de los
ejemplos).

Los polvos de la invención se caracterizan además por una temperatura de transición vítrea por lo menos de 40ºC, con preferencia por lo menos de 50ºC, con mayor preferencia por lo menos de 55ºC, con preferencia especial por lo menos de 60ºC. Los polvos especialmente preferidos presentan una temperatura de transición vítrea por lo menos de 65ºC. En general, la temperatura de transición vítrea de los polvos de la invención se sitúa entre 40 y 110ºC. La presente invención se refiere, pues, a polvos, con preferencia polvos secados por atomización, que contienen un principio activo farmacéutico y LS90P, LS55P, Coupling Sugar o Coupling Sugar S, con una temperatura de transición vítrea que se sitúa en 40ºC y más, con preferencia entre 45 y 60ºC o más. Según otra forma preferida de ejecución, la temperatura de transición vítrea se sitúa en 55ºC y más, con preferencia entre 55 y 60ºC o más.

Polvos liofilizados

Como alternativa, los polvos pueden fabricarse por liofilización seguida por una pulverización (ver los ejemplos). En los ejemplos descritos, la pulverización se realiza de una forma razonablemente muy fácil con una espátula en el vial de liofilización. Obviamente, el liofilizado puede pulverizarse también en molinos adecuados, por ejemplo en un molino de cuchillas, molino de bolas, molino de varillas, molino de mortero, molino de chorro de aire y otros procedimientos idóneos (véase Bauer, Frömming, Führer, 6ª edición).

Propiedades de los polvos liofilizados

Las formulaciones en polvo de proteínas, fabricadas por secado en el marco de esta invención, tienen un contenido residual de agua inferior al 15% (p/p), normalmente inferior al 10% (p/p) y con preferencia inferior al 5% (p/p). Con mayor preferencia, las formulaciones en polvo de proteínas, secadas por atomización, tienen un contenido residual de agua inferior al 3% (p/p), con preferencia especial inferior al 2% (p/p) y con preferencia muy especial entre el 0,2 y 1,5% (p/p). Las formulaciones de un contenido residual bajo de agua tienen en general una mejor estabilidad durante el envasado y el almacenaje. Por otro lado, las formulaciones en polvo de proteínas, secadas, de la invención son marcadamente higroscópicas, es decir, tienen a absorber la humedad de su ambiente. Para impedirlo se almacenan estos polvos habitualmente con exclusión de la humedad ambiental, en recipientes del tipo envases blíster.

Los efectos estabilizantes de los adyuvantes aquí descritos son capaces de proteger a la proteína de las cargas extremas que sufre durante la liofilización y el almacenaje. En ausencia de los adyuvantes, las formulaciones de proteína puras, secadas por atomización, forman agregados en gran medida. Los factores inherentes del proceso, como son el estrés por cizallamiento, la concentración, el desplazamiento del pH y la desnaturalización en las superficies límites entre agua y aire provocan la agregación (hasta aprox. un 2,1% de agregados) durante la liofilización. En ausencia del envoltorio hidratado estabilizante de las proteínas, en el curso del almacenaje se produce la formación masiva de agregados (aprox. 20,5% de agregados).

A diferencia de las formulaciones de proteína puras, las formulaciones liofilizadas preferidas de la invención son capaces de solo de reducir la formación de agregados después de la liofilización, sino también de mantenerla en un nivel muy bajo en las diferentes condiciones de almacenaje. Los liofilizados que han pasado la liofilización y la pulverización, en las condiciones de almacenaje especialmente exigentes (40ºC, 75% de humedad relativa) de la estabilidad de almacenaje forzada se distinguen por una neta superioridad de las formulaciones preferidas (agregados de aprox. un 1,2 a aprox. un 1,5%) si se comparan con las formulaciones de proteína puras (aprox. un 14,5% de agregados) o con una formulación análoga de referencia, que contiene manita (aprox. un 34,0% de agregados) como adyuvante.

Las formulaciones, que después de un almacenaje relativamente corto en condiciones especialmente desestabilizadoras (1 semana a 40ºC, 75% de humedad relativa) tienen un efecto estabilizante significativo en las proteínas incorporadas, estabilizan las proteínas incluso a largo plazo en condiciones estándar de almacenaje mucho más suaves (p. ej. 1 año, seco, aprox. a 25ºC).

Después del liofilizado, pulverización y equilibrado y posterior almacenaje de cuatro semanas en condiciones secas a 40ºC (estabilidad al almacenaje equilibrada), las formulaciones de polvo que contienen el LS55P y el Coupling Sugar se caracterizan por contenidos bajos de agregados (aprox. un 2,6 y un 4,6% de agregados), en especial si se comparan con los polvos de proteína puros (aprox. un 15,3% de agregados) o con una formulación análoga de referencia que contiene como adyuvante la manita (aprox. un 11,6% de agregados).

Después del liofilizado, pulverización, secado con vacío y posterior almacenaje de cuatro semanas en condiciones secas a 40ºC (estabilidad al almacenaje después de secado con vacío), las formulaciones de polvo que contienen el LS55P o el Coupling Sugar se caracterizan por contenidos bajos de agregados (aprox. 1,2 y 1,5% de agregados), en especial si se comparan con los polvos de proteína puros (aprox. 14,5% de agregados) o con una formulación análoga de referencia que contiene como adyuvante la manita (aprox. un 6,2% de agregados).

Por otro lado, los polvos de la invención se caracterizan por una temperatura de transición vítrea por lo menos de 40ºC, con preferencia por lo menos de 50ºC, con mayor preferencia por lo menos de 55ºC. En general, la temperatura de transición vítrea de los polvos de la invención se sitúa entre 40 y 110ºC, en algunos casos puede incluso rebasarse este último valor. La presente invención se refiere, pues, a polvos, con preferencia polvos liofilizados y pulverizados, que contienen un principio activo farmacéutico y LS90P, LS55P, Coupling Sugar o Coupling Sugar S, en ellos la temperatura de transición vítrea se sitúa en 40ºC y más, con preferencia entre 45 y 60ºC o más. Según otra forma preferida de ejecución, la temperatura de transición vítrea se sitúa en 55ºC y más, con preferencia entre 55 y 60ºC o hasta 110ºC.

Uso del polvo secado

Los polvos de la invención son idóneos para la fabricación un fármaco, con preferencia para la fabricación un fármaco inhalativo.

Administración del polvo de la invención

Fundamentalmente, las formulaciones en polvo de la invención pueden aplicarse directamente en forma de polvo seco mediante los llamados inhaladores de polvo seco o también en forma de aerosoles después de la suspensión o reconstitución, mediante los llamados nebulizadores. Los polvos inhalativos de la invención pueden aplicarse mediante los inhaladores ya conocidos del estado de la técnica.

Los polvos inhalativos de la invención pueden aplicarse por ejemplo mediante los inhaladores que entregan una dosis única a partir de un recipiente de depósito a través de una cámara calibrada, descritos en la patente US 4,570,630A o mediante otros dispositivos, por ejemplo los descritos en el documento DE 36 25 685 A. Los polvos inhalativos de la invención se envasan con preferencia en cápsulas (llamadas Inhalette), que se colocan dentro de los inhaladores, del modo descrito por ejemplo en WO 94/28958.

Otros ejemplos de inhaladores adecuados se podrán encontrar, entre otras en las patentes US 5,458,135; US 5,785,049 o WO 01/00263. Otros inhaladores apropiados se conocen por WO 97/41031; US 3,906,950 y US 4,013,075. Otros inhaladores de dispersión para formulaciones de polvo seco se describen en EP 129 985; EP 472 598; EP 467 172 y US 5,522,385.

Los polvos inhalativos de la invención pueden aplicarse por ejemplo mediante el inhalador conocido con el nombre de Turbuhaler® (AstraZeneca LP) o bien con inhaladores que se han descrito por ejemplo en documento EP 237 507 A. Otros inhaladores apropiados son el Rotahaler® o el Discus® (ambos de GlaxoSmithKline Corp.), el inhalador Spiros^{TM} (Dura Pharmaceuticals) y el Spinhaler® (Fiscon).

Un inhalador especialmente preferido para la aplicación de la combinación de medicamento de la invención, envasada en cápsulas Inhalette, se representa en la figura 24. Este inhalador (Handihaler) para la inhalación de medicamentos en forma de polvo, envasados en cápsulas, se caracteriza por una carcasa 1, que contiene dos ventanas 2, una tapa 3, en la que se hallan las aberturas para la entrada de aire y que está provista de un tamiz 5 fijado sobre una carcasa 4, una cámara de inhalación 6, solidaria con la tapa 3, que está dotada de un pulsador móvil 9, que oprime un muelle 8, y está provisto de dos agujas esmeriladas 7, así como una boquilla 12, unida a una caperuza 11, que puede abatirse sobre un eje con la carcasa 1, la tapa 3 y además los orificios de paso de aire 13 para ajustar la resistencia al paso de la corriente de aire.

Si los polvos inhalativos de la invención se tienen que envasar en cápsulas (Inhalette) en el sentido de la anterior aplicación preferida, entonces se podrán elegir las cantidades envasadas entre 1 y 30 mg por cápsula.

Los polvos de la invención pueden aplicarse además en forma de aerosoles inhalables impulsados por un gas propelente o sin gas propelente. Para ello se suspenden los polvos de la invención en disolventes licuados a presión o en mezclas de disolventes o se reconstituyen en una solución acuosa. Las suspensiones o soluciones idóneas son conocidas en el estado de la técnica. Es ventajosa por ejemplo la reconstitución en soluciones fisiológicas, de un pH de 3-11, con preferencia de 4-9. Es especialmente ventajosa la reconstitución en una solución acuosa de pH 5,5-7,8. Las suspensiones o soluciones que contienen gas propelente para la reconstitución de los polvos de la invención pueden contener otros adyuvantes en forma de estabilizadores, emulsionantes, sustancias tensioactivas, disolventes orgánicos solubles en agua. Las sustancias en cuestión ya son conocidas de los expertos y se describen a título de ejemplo en el manual de Bauer, Lehrbuch der Pharmazeutischen Technologie, editorial Wissenschaftl. Verlagsgesellschaft mbH, Stuttgart, 178-184; Adler, Journal of Pharmaceutical Sciences 88 (2), 199-208, 1998. Los aerosoles inhalativos correspondientes, que se fabrican por suspensión o reconstitución de los polvos de la invención, son también objeto de la presente invención.

Los gases propelentes que pueden utilizarse para la fabricación de los aerosoles inhalables de la invención son también conocidos en el estado de la técnica. Los gases propelentes idóneos se eligen entre el grupo formado por los hidrocarburos, por ejemplo el n-propano, n-butano o isobutano y los hidrocarburos halogenados, con preferencia los derivados clorados o fluorados del metano, del etano, del propano, del butano, del ciclopropano o del ciclobutano. Los gases propelentes recién nombrados pueden utilizarse a título individual o en forma de mezclas. Los gases propelentes especialmente preferidos son los derivados halogenados de alcanos, elegidos entre el TG11, TG12, TG134a (1,1,1,2-tetrafluoretano), TG227 (1,1,1,2,3,3,3-heptafluorpropano) y mezclas de los mismo, siendo preferidos los gases propelentes TG134a, TG227 y las mezclas de los mismos.

Los aerosoles inhalables con gas propelente de la invención pueden contener hasta un 5% (p/p) de principio activo. Los aerosoles de la invención contienen por ejemplo un 0,002-5% (p/p), 0,01-3% (p/p), 0,015-2% (p/p), 0,1-2% (p/p), 0,5-2% (p/p) o 0,5-1% (p/p) del principio activo farmacéutico. Los aerosoles inhalables provistos de la correspondiente concentración de principio activo pueden ajustarse mediante la reconstitución intencionada de los polvos de la invención en la cantidad correspondiente de disolvente. Los aerosoles inhalativos con gas propelente recién nombrados pueden aplicarse mediante los inhaladores ya conocidos del estado de la técnica (MDI = metered dose inhaler). A título de ejemplo cabe mencionar aquí el Ventolin® (Ventolin Pharmacy) o los inhaladores descritos en US 5,32,094 o US 5,672,581. Por consiguiente, en otro aspecto, la presente invención se refiere a medicamentos en forma de aerosoles de gas propelente recién descritos en combinación con uno o más inhaladores apropiados para la administración de estos aerosoles. La presente invención se refiere además a inhaladores caracterizados porque contienen los aerosoles de gas propelente de la invención recién descritos.

La presente invención se refiere además a cartuchos, provistos de una válvula adecuada, que pueden aplicarse en un inhalador apropiado y contienen uno de los aerosoles con gas propelente de la invención ya mencionados anteriormente. Los cartuchos y procedimientos idóneos para el envasado de estos cartuchos con los aerosoles de gas propelente de la invención ya son conocidos en el estado de la técnica.

Los polvos de la invención pueden además reconstituir en soluciones o suspensiones inhalables provistas de gas propelente. Las correspondientes soluciones inhalables con gas propelente contienen por ejemplo disolventes acuosos o alcohólicos, con preferencia etanólicos, eventualmente etanólicos mezclados con acuosos. En el caso de mezclas de disolventes acuosos/etanólicos, la porción relativa del etanol frente al agua no está limitada, pero se sitúa con preferencia por debajo del límite máximo del 70% (v/v), en especial del 60% (v/v) de etanol. El volumen restante se llena con agua. A las soluciones inhalables con gas propelente de la invención se les pueden añadir co-disolvente y/u otros adyuvantes, tal como se ha descrito antes. Se pueden emplear por ejemplo co-disolventes que contengan grupos hidroxilo u otros grupos polares, p. ej. alcoholes, en especial el alcohol isopropílico, glicoles, en especial el propilenglicol, polietilenglicol, polipropilenglicol, glicoléter, glicerina, polioxietileno-alcoholes y polioxietileno-ésteres de ácidos grasos. En este contexto se entiende por adyuvantes y aditivos cualquier sustancia farmacológicamente compatible, que no sea un principio activo, pero que puede formularse junto con el o los principios activos en un disolvente farmacológicamente idóneo para mejorar las propiedades cualitativas de la formulación de principio activo. Estas sustancias no despliegan con preferencia ningún efecto farmacológico o ningún efecto digno de mención o por lo menos ningún efecto no deseado en el contexto de la terapia pretendida. Entre los adyuvantes y aditivos, aparte de las sustancias ya mencionadas anteriormente, p. ej. las tensioactivas, cabe mencionar también p. ej. la lecitina de soja, el ácido oleico, los ésteres de sorbita, p. ej. los polisorbatos, la polivinilpirrolidona, diversos estabilizadores, complejantes, antioxidantes y/o conservantes, que aseguran o prolongan la duración de uso de las formulaciones medicamentosas acabadas, los saborizantes, las vitaminas y/o los demás aditivos ya conocidos del estado de la técnica. En los aditivos se cuentan además las sales farmacológicamente inocuas, por ejemplo el cloruro sódico, que son sustancias isotónicas. En los adyuvantes preferidos se cuentan los antioxidantes, por ejemplo el ácido ascórbico, en el supuesto de que no se emplee ya para ajustar el pH, la vitamina A, la vitamina E, los tocoferoles y otras vitaminas y provitaminas que se encuentran en el organismo humano. Los conservantes pueden utilizarse para proteger a la formulación de la contaminación con gérmenes patógenos. Como conservantes son idóneos los ya conocidos del estado de la técnica, en especial el cloruro de cetilpiridinio, el cloruro de benzalconio o el ácido benzoico o benzoatos, por ejemplo el benzoato sódico, en la concentración ya conocida por el estado de la técnica. Los conservantes recién nombrados se emplearán con preferencia en concentraciones de hasta 50 mg/100 ml, con preferencia especial entre 5 y 20 mg/100 ml. Por lo tanto, la presente invención se refiere también a aerosoles inhalativos con gas propelente, que se fabrican por reconstitución del polvo de la invención.

Para la aplicación de las soluciones inhalables con gas propelente de la invención son idóneos en especial aquellos inhaladores que nebulizan una pequeña cantidad de una formulación líquida en la dosificación terapéuticamente necesaria en pocos segundos, en un aerosol terapéutica e inhalativamente idóneo. En el marco de la presente invención son preferidos aquellos inhaladores, con los que puede nebulizarse una cantidad inferior a 100 \mul, con preferencia inferior a 50 \mul, con preferencia especial entre 10 y 30 \mul de solución de principio activo con preferencia mediante una sola actuación para obtener un aerosol de tamaño medio de partícula inferior a 20 \mum, con preferencia inferior a 10 \mum, de modo que la porción inhalable del aerosol ya equivalga a la cantidad terapéuticamente eficaz.

Un dispositivo de este tipo para la administración sin gas propelente de una cantidad dosificada de un medicamento líquido se describe con detalle por ejemplo en la solicitud de patente internacional WO 91/14468 o en WO 97/12687 (en este caso, en especial en las figuras 6a y 6b). En el marco de la presente invención se remite explícitamente a las figuras 6a y 6b en cuestión del documento WO 97/12687, incluida la parte descriptiva correspondiente. Los nebulizadores (devices) allí empleados se conocen también con el nombre comercial de Respimat® (Boehringer Ingelheim Pharma). Por su forma casi cilíndrica y un tamaño manejable de menos de 9-15 cm de longitud y 2-4 cm de anchura, este dispositivo puede ser acarreado por el paciente en cualquier momento y circunstancia. El nebulizador entrega un volumen definido de la formulación medicamentosa aplicando una presión elevada sobre boquillas pequeñas, de modo que se formen aerosoles inhalables.

El pulverizador preferido consta fundamentalmente de una parte superior de carcasa, una carcasa para la bomba, una boquilla, un mecanismo de bloqueo, una carcasa para resorte, un resorte y un recipiente de depósito, caracterizado por:

-: una carcasa de la bomba, que está fijada en la parte superior de la carcasa y lleva en su extremo un cuerpo de boquilla con la boquilla o dispositivo de boquilla,

-: un émbolo hueco con cuerpo de válvula,

-: una brida de tope, a la que está sujeto el émbolo, y que se halla en la parte superior de la carcasa,

-: un mecanismo de bloqueo, que se halla en la parte superior de la carcasa,

-: un alojamiento para el resorte y el resorte de su interior, que está colocado de forma que puede girarse en la parte superior de la carcasa gracias a un rodamiento,

-: una parte interior de la carcasa, que está montado en dirección axial sobre la carcasa del resorte.

El émbolo hueco con cuerpo de válvula corresponde a un dispositivo publicado en WO 97/12687. Sobresale en parte en el interior del cilindro de la carcasa de la bomba y está dispuesto de modo axialmente desplazable dentro del cilindro. En el marco de la presente invención se remite en especial a las figuras 1-4 y en especial a la figura 3 y a las partes descriptivas correspondientes. El émbolo hueco con cuerpo de válvula por su lado de alta presión ejerce en el momento de dispararse el resorte una presión de 5 a 60 Mpa (de 50 a 600 bares), con preferencia de 10 a 60 Mpa (de 100 a 600 bares) sobre el líquido, la solución calibrada de principio activo. Por cada actuación del émbolo son preferidos volúmenes de 10 a 50 microlitros, son especialmente preferidos volúmenes de 10 a 20 microlitros y es especialmente preferido un volumen de 15 microlitos.

El cuerpo de la válvula está colocado con preferencia en el extremo del émbolo hueco, apuntando hacia el cuerpo de la boquilla.

La boquilla del cuerpo de boquilla es con preferencia microestructurada, es decir, fabricada por microtécnica. Los cuerpos de boquilla microestructurados se han publicado por ejemplo en WO 94/07607; se remite a este documento, en especial a la figura 1 que publica y a su descripción. El cuerpo de boquilla consta p. ej. de dos placas unidas firmemente entre sí, que son de vidrio y/o de silicio, de las que por lo menos una placa presenta uno o más canales microestructurados, que unen el lado de entrada con el lado de salida de dicha boquilla. En el lado de salida de la boquilla está por lo menos una abertura redonda o no redonda, de 2-10 \mum de profundidad y 5-15 \mum de anchura, dicha profundidad se sitúa con preferencia entre 4,5 y 6,5 micras y la longitud entre 7 y 9 micras. En el caso de que la boquilla tenga varias aberturas, con preferencia dos, las direcciones del chorro en la boquilla del cuerpo de boquilla serán paralelas entre sí o bien tenderán a converger ligeramente a medida que se acercan a la abertura de la boquilla. En un cuerpo de boquilla que tenga por lo menos dos orificios de boquilla en el lado de salida, las direcciones de los chorros pueden tener un ángulo de inclinación entre sí de 20-160 grados, con preferencia un ángulo de 60-150 grados y con preferencia especial un ángulo de 80-100º. Los orificios de salida de la boquilla están separados entre sí por 10-200 \mum, con preferencia separados 10-100 \mum, con mayor preferencia 30-70 \mum, con preferencia especial 50 \mum.

Por lo tanto, las direcciones de los chorros coinciden en la proximidad de los orificios de la boquilla.

La formulación farmacéutica líquida choca con una presión de entrada de hasta 600 bares, con preferencia de 200 a 300 bares contra el cuerpo de boquilla y se pulveriza a través de los orificios de la boquilla, formando un aerosol inhalable. Los tamaños preferidos de partícula o de gotita del aerosol se sitúan en un valor de hasta 20 \mum, con preferencia de 3-10 \mum.

El mecanismo de bloqueo tiene un resorte, con preferencia un resorte de presión cilíndrico de tipo rosca, que almacena la energía mecánica. El resorte actúa sobre la brida de tope en forma de pieza de acción brusca, cuyo movimiento viene determinado por la posición de la pieza de bloqueo. El recorrido de la brida de tope está limitado con exactitud por un tope superior y un tope inferior. El resorte se tensa con preferencia mediante un engranaje transmisor de fuerza, p. ej. un engranaje de desplazamiento roscado, por la aplicación de un par de giro externo, que genera la carcasa del resorte, alojada dentro de la parte inferior de la carcasa, por el giro de la parte superior de la carcasa. En este caso, la parte superior de la carcasa y la brida de tope contienen un engranaje cónico de una o varias espiras.

La pieza de bloqueo de superficies embragables está dispuesto en forma circular alrededor de la brida de tope. Consta p. ej. de un anillo radial deformable elástico de plástico o de un metal. El anillo está dispuesto en el plano perpendicular al eje del pulverizador. Después de tensar el muelle, las superficies de bloqueo de la pieza de bloqueo se desplazan en dirección a la brida de tope e impiden que el resorte se libere. La pieza de bloqueo se dispara mediante un botón. El botón de disparo está unido a la pieza de bloqueo. Para disparar el mecanismo de bloqueo se desplaza el botón de disparo en sentido paralelo al plano del anillo y, con preferencia, en dirección al pulverizador; con ello, el anillo deformable se deforma en el plano del anillo. Los detalles constructivos del mecanismo de bloqueo se han descrito en el documento WO 97/20590.

La parte inferior de la carcasa se desplaza en dirección axial a lo largo de la carcasa del resorte y tapa el rodamiento, el mecanismo de accionamiento del husillo y el recipiente de depósito del líquido.

Al accionar el pulverizador se gira la parte superior de la carcasa con respecto a la parte inferior, con lo cual la parte inferior de la carcasa desplaza también a la carcasa del resorte. Con ello se comprime el resorte por acción del engranaje de desplazamiento roscado y se tensa y el mecanismo de bloqueo engrana de forma automática. El ángulo de giro es con preferencia una fracción entera de 360 grados, p. ej. 180 grados. De modo simultáneo con el tensado del resorte, la parte de bloqueo de la parte superior de la carcasa se desplaza alrededor de una carrera ya prevista, el émbolo hueco se recoge dentro de la carcasa de bomba del cilindro, con lo cual la cantidad parcial de líquido del recipiente depósito es succionada hacia la cámara de alta presión, situada antes de la boquilla.

En el pulverizador pueden introducirse y utilizarse, eventualmente uno tras otro, varios recipientes de depósito que contengan el líquido a pulverizar. El recipiente de depósito contiene la formulación acuosa de aerosol de la invención.

El proceso de pulverización se inicia pulsando suavemente el botón de disparo. De este modo, el mecanismo de bloqueo libera la brida de bloqueo. El resorte tensado desplaza el émbolo hacia el cilindro de la carcasa de la bomba. El líquido sale de la boquilla del pulverizador en forma pulverizada.

Más detalles constructivos se han publicado en las solicitudes PCT nº WO 97/12683 y WO 97/20590, a las que se remite explícitamente.

Los componentes del pulverizador (nebulizador) se fabrican de un material idóneo, adecuado para su función. La carcasa del pulverizador y, si el funcionamiento lo permite, también otras partes se fabrican con preferencia de plástico, p. ej. por moldeo de inyección. Para usos médicos se emplean materiales fisiológicamente inocuos.

Se remite una vez más explícitamente a las figuras 6 a/b del documento WO 97/12687 incluida la parte descriptiva correspondiente, en las que se describe un nebulizador de este tipo (Respimat®). Este es idóneo en especial para la aplicación de los aerosoles inhalables sin gas propelente de la invención.

En la figura 6a de WO 97/12687 se representa una vista longitudinal del pulverizador con el resorte tensado; en la figura 6b de WO97/12687 se representa una vista longitudinal del pulverizador con el resorte relajado: la parte superior de la carcasa (51) contienen la carcasa de la bomba (52), en cuyo extremo se ha colocado un soporte (53) para la boquilla pulverizadora. En el soporte se halla el cuerpo de boquilla (54) y un filtro (55). El émbolo hueco (57), solidario con la brida de tope (56) del mecanismo de bloqueo, sobresale parcialmente penetrando en el cilindro de la carcasa de la bomba. En su extremo, el émbolo hueco lleva el cuerpo de válvula (58). El émbolo hueco es estanco gracias a la junta (59). En el interior de la parte superior de la carcasa se halla el tope (60), sobre el que se apoya la brida de tope cuando el resorte está relajado. En la brida de tope se halla el tope (61), sobre el que se apoya la brida de tope cuando el resorte está tensado. Después de tensar el resorte, la pieza de bloqueo (62) se desplaza entre el tope (61) y un apoyo (63) de la parte superior de la carcasa. El botón de disparo (64) está unido a la pieza de bloqueo. La parte superior de la carcasa termina en la boquilla (65) y está cerrada con la caperuza protectora incrustable (66). La carcasa del resorte (67) del resorte de presión (68) se aloja de forma giratoria en la parte superior de la carcasa mediante talones de encaje de tipo resorte (69) y rodamiento giratorio. La parte inferior de la carcasa (70) se desplaza a lo largo de carcasa del resorte. Dentro de la carcasa del resorte se halla el recipiente de depósito (71) recambiable, que contiene el líquido a pulverizar (72). El recipiente de depósito está cerrado con el tapón (73), a través del cual el émbolo hueco penetra en el recipiente de depósito y se sumerge por su extremo en el líquido (depósito de solución de principio activo). En la superficie del encamisado de la carcasa del resorte se aloja el husillo (74) del contador mecánico. En el extremo del husillo, que apunta hacia la parte superior de la carcasa, se halla el piñón de ataque (75). Sobre el husillo se halla el cursor (76).

La formulación de la invención se nebuliza mediante la técnica recién descrita (Respimat®), entonces la masa entregada debería ser igual por lo menos en el 97%, con preferencia especial por lo menos en el 98% de todos los accionamientos del inhalador (carreras), a una cantidad definida, con un intervalo de tolerancia como máximo del 25%, con preferencia del 20% de esta cantidad. En cada accionamiento se entregan como cantidad definida con preferencia entre 5 y 30 mg de formulación, con preferencia especial entre 5 y 20 mg.

Sin embargo, la formulación de la invención puede nebulizarse también con otros inhaladores de caudal (stream) descritos anteriormente, los inhaladores de tipo jet o bien otros nebulizadores estacionarios.

Por consiguiente, en otro aspecto, la presente invención se refiere a medicamentos en forma de soluciones o suspensiones inhalables sin gas propelente, ya descritas en páginas anteriores, en relación con un dispositivo idóneo para la administración de estas formulaciones, con preferencia en relación con el Respimat®. La presente invención tiene como objetivo en particular las soluciones o suspensiones inhalable sin gas propelente, que contiene uno de los polvos de la invención, en relación con el dispositivo conocido con la denominación de Respimat®. La presente invención se refiere además a los dispositivos ya mencionados para la inhalación, con preferencia al Respimat®, caracterizados porque contienen las soluciones o suspensiones inhalables sin gas propelente de la invención que se han descrito en páginas anteriores.

Son preferidas según la invención las soluciones inhalables que contienen uno de los polvos de la invención aquí descritos, en una forma de administración individual.

Aparte de las anteriores soluciones o suspensiones previstas para la aplicación con el Respimat®, las soluciones o suspensiones inhalables sin gas propelentes de la invención pueden presentarse también en forma de concentrados o de soluciones o suspensiones inhalables estériles, listas para el uso. Con los concentrados se pueden generar, por ejemplo mediante la adición de soluciones de isotónicas de cloruro sódico, formulaciones listas para el uso. Las formulaciones estériles, listas para el uso, pueden aplicarse con nebulizadores estáticos o portátiles, accionados con energía, que con ultrasonidos o aire comprimido por el principio de Venturi o por otros principios generan aerosoles
inhalables.

Por consiguiente, en otro aspecto, la presente invención se refiere a medicamentos en forma de las soluciones o suspensiones ya descritas sin gas propelentes, se presentan en forma de concentrados o de formulaciones estériles listas para el uso, en relación con un dispositivo idóneo para la administración de estas soluciones, caracterizado porque dicho dispositivo es un nebulizador estático o portátil accionado con energía, que genera aerosoles inhalables gracias a ultrasonidos o aire comprimido por el efecto Venturi o por otros principios.

Otros nebulizadores idóneos para la aplicación inhalativa de los aerosoles reconstituido son el AERx^{TM} (Aradigm), el Ultravent® (Mallinkrodt) y el AconII® (Maquest Medical Products).

Ejemplos de ejecución Materiales y métodos Materiales

Como IgG1 se emplea un anticuerpo monoclonal humanizado de un peso molecular aprox. de 148 kDa, de Boehringer Ingelheim, Alemania. El anticuerpo se deriva de un anticuerpo murino, en el que se han trasladado las regiones determinantes de la complementariedad del anticuerpo murino a una estructura de inmunoglobulina humana. Se obtiene un anticuerpo quimérico con una porción humana del 95% y murina del 5%. El anticuerpo se expresa a partir de líneas de células de mieloma murinas. Se separan las células mediante una microfiltración de flujo tangencial y se purifica la solución sin células por diversos métodos cromatográficos. Otros pasos consisten en un tratamiento con nucleasas, un tratamiento a pH bajo y una nanofiltración. La solución en bruto, que contiene los anticuerpos, contiene como tampón histidina 25 mM y glicina 1,6 mM y para obtener la solución del secado por atomización se concentra por diafiltración hasta aprox. 100 mg/ml. El material en bruto para la preparación de la solución a atomizar contiene del 0,4 al 0,8% de agregados. El medicamento final es estable a 2-8ºC por lo menos durante 2 años. Se adquieren el Nyuka-Oligo® LS55P, Nyuka-Oligo® LS90P, Coupling Sugar® y Coupling Sugar S® a la empresa Hayashibara Shoji, Inc., Japón. La sacarosa, lactosa, manita, rafinosa, hidroxietil-almidón y L-isoleucina se adquieren a Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Alemania. La trehalosa procede de la empresa Georg Breuer GmbH, Alemania. La tri-isoleucina se compara a la empresa Iris Biotech GmbH, Alemania.

La lisozima de clara de huevo de gallina (lisozima), 135500 U/mg) se adquiere a la empresa SERVA Electrophoresis GmbH, Alemania. La calcitonina de salmón sintética (calcitonina) se compra a la empresa Biotrend Chemikalien GmbH, Alemania.

Secado de atomización con el Büchi B-290

Se realiza el por atomización en un aparato del tipo Büchi Mini Spray Dryer B-290 de la empresa Büchi Labortechnik GmbH. El secado por atomización de las formulaciones se realiza en principio con arreglo a la descripción del manual "Spray Drying Handbook", 5ª edición, K. Masters, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY (1991):

El secador de atomización está formado por un sistema de calefacción, un filtro, un aspirador, una torre de secado, un ciclón, sensores de temperatura para medir la temperatura de entrada y de salida y un recipiente colector. Con una bomba peristáltica se alimenta la solución a atomizar en una boquilla para dos materiales. En ella tiene lugar con aire comprimido la pulverización de la solución, convirtiéndola en gotas pequeñas. El secado se realiza en la torre de atomización con aire caliente, que, en un procedimiento de corriente de igual sentido, se aspira con un aspirador a través de la torre de atomización. El producto se recoge en un recipiente colector después de pasar por el
ciclón.

Se emplean dos tipos de ciclones:

-: Ciclón I: Büchi Cyclone (número de producto: 4189)

-: Ciclón II: Büchi High-performance Cyclone (número de producto: 46369)

El contenido de sólidos de las soluciones a atomizar se sitúa en el 10% (p/v) 3,33% y 2,00% en volúmenes de 50 a 600 ml. La temperatura de entrada se sitúa aprox. entre 170 y 185ºC, el caudal de líquido es aprox. de 3 a 3,33 ml/min, el caudal de flujo de alimentación del aspirador (Aspirator-Feed-Flow-Rate) es aprox. de 36,8 a 38,3 m^{3}/h y el caudal de pulverización (AAF = Atomizing Air Flow) es aprox. de 0,67 m^{3}/h, 1,05 m^{3}/h y 1,74 m^{3}/h. Se registra además una temperatura de salida aprox. de 80-95ºC.

Liofilizado

La liofilización se realiza en una máquina liofilizadora del tipo Christ LPC-16/NT Epsilon 2-12 D de la empresa Martin Christ Gefriertrocknungsanlagen GmbH. La máquina liofilizadora se compone de: una cámara de secado, un condensador para separar el disolvente sublimado, una bomba para generar vacío y un equipo eléctrico. El secado se regula a través de la temperatura de la superficie de ocupación y el vacío de la cámara de secado. El contenido de sólidos de la solución de liofilización es del 5% (p/v). Se reparte la solución en viales del tipo 2R, introduciendo 0,5 ml en cada uno de ellos y se coloca en la máquina liofilizadora con los tapones habituales de liofilización. En primer lugar, las soluciones se congela a -40ºC durante 30 minutos. En segundo lugar se realiza el secado principal a 0,11 mbares en tres pasos. En primer lugar a -40ºC durante 30 horas, después a -30ºC durante 8 horas y finalmente a -16ºC durante 8 horas. El siguiente paso es el secado posterior y se realiza a 20ºC con 0,001 mbares durante 20 horas. En último lugar se cierran los viales automáticamente con los tapones de liofilización que inicialmente estaban solo colocados. Los liofilizados así obtenidos se pulverizan dentro de los viales con una
espátula.

Difractometría de rayos X (difractometría de rayos X de ángulo grande (WAXS))

Para determinar la cristalinidad de las muestras secadas se analizan las muestras con un difractómetro de rayos X del tipo Seifert XRD 3000 TT (empresa Seifert, Ahrensburg, DE) en un recinto climatizado a temperatura constante de 22ºC. Los tubos de rayos X, ánodo de Cu, radiación Cu-K\alpha de una \lambda = 0,15418 mm (filtro primario de Ni), función con una tensión de ánodo de 40 kV y una intensidad de corriente de 30 mA. Después del posicionado del portaobjetos en el aparato se realiza la medición de la muestra en el intervalo de 5 a 40º con una velocidad de escaneo 2 \theta = 0,05º durando 2 segundos la medición de cada ángulo.

Se registran los difractogramas de las muestras con un programa informático ScanX-Rayflex, versión 3.07, dispositivo XRD 3000 (escaneo), o con un Rayflex versión 2.1, 1996 (análisis) en el detector SC 1000 V.

Cromatografía de exclusión de tamaños (SEC-HPLC) a) Agregados de proteína IgG1

Para cuantificar los agregados de proteína IgG1 en los polvos reconstituidos se realiza una SEC-HPLC. La SEC-HPLC se efectúa con un aparato HP1090 de la empresa Agilent. Para la separación se emplea una columna
TSK3000SWXL (300 x 7,8 mm) de la empresa Tosoh Biosep (Tosoh Bioscience, Stuttgart, Alemania). Como eluyente se emplea un tampón de hidrogenosulfato disódico dihidratado 0,1 M, sulfato sódico anhidro 0,1 M y se ajusta a pH 6,8 con ácido orto-fosfórico del 85%. La cantidad de muestra introducida en la columna es de 25 \mul con una concentración de proteína de 2-10 mg/ml. La detección de la proteína se realiza con un detector de matriz de diodos (diode array) de la empresa Agilent a 280 nm. Para la evaluación de los cromatogramas se emplean los programas informáticos HP-Chemstation de la empresa Agilent.

b) Agregados de proteína calcitonina

Para cuantificar los agregados de proteína calcitonina en los polvos reconstituidos se realiza una SEC-HPLC. La SEC-HPLC se efectúa con un aparato HP1100 de la empresa Agilent. La separación se realiza en una columna TSK2000SWXL (300 x 7,8 mm) de la empresa Tosoh Biosep (Tosoh Bioscience, Stuttgart, Alemania). Como eluyente se emplea un tampón formado por sulfato sódico 0,25 N de un pH de aprox. 6 (Windisch et al. 1997). Como alternativa se puede emplear un tampón de hidrogenofosfato disódico dihidratado 0,1 M, sulfato sódico anhidro 0,1 M y ajustado a pH 6,8 con ácido orto-fosfórico del 85%. La cantidad de muestra introducida en la columna es de 20 \mul con una concentración de proteína de 0,5-2 mg/ml. La detección de la proteína se realiza con un detector UV de la empresa Agilent a 210 nm. Para la evaluación de los cromatogramas se emplean los programas informáticos HP-Chemstation de la empresa Agilent.

c) Contenido de monómero residual de lisozima

Para cuantificar el contenido de monómero residual de lisozima en las formulaciones reconstituidas de lisozima se realiza una SEC-HPLC modificada (van de Weert, 2000). La SEC-HPLC se efectúa con un aparato HP1100 de la empresa Agilent. Para la separación se emplea una columna TSK2000SWXL (300 x 7,8 mm) de la empresa Tosoh Biosep (Tosoh Bioscience, Stuttgart, Alemania). Como eluyente se emplea un tampón de hidrogenofosfato disódico dihidratado 0,05 M y cloruro sódico 0,2 M que se ajusta a pH 7,0 con ácido orto-fosfórico del 85%. La cantidad de muestra introducida en la columna es de 25 \mul con una concentración de proteína de 2-10 mg/ml. La detección de la proteína se realiza con un detector UV de la empresa Agilent a 280 nm. Para la evaluación de los cromatogramas se emplean los programas informáticos HP-Chemstation de la empresa Agilent.

Para la evaluación de las formulaciones se cuantifica el monómero restante soluble con arreglo al método siguiente. En primer lugar se prepara una recta de calibrado con soluciones patrón de lisozima de estas concentraciones: 2,5 mg/ml, 5,0 mg/ml y 10 mg/ml. Para ello se toman en consideración la AUC de los picos de monómero en relación con la concentración correspondiente de lisozima de la solución patrón analizada. El contenido de monómero residual de las distintas formulaciones de lisozima analizadas se calcula mediante las rectas de calibrado. Cuando mayor es el contenido de monómero residual de una formulación, tanto mejor será la estabilidad de la proteína.

Determinación de tamaños de partícula (MMD)

El tamaño medio de partícula o Mass Median Diameter se determina con un aparato Sympatech Helos de la empresa Sympatech GmbH (Clausthal-Zellerfeld, DE). El principio de medición se basa en la difracción láser, se emplea un láser de helio-neón. Se dispersan 1-3 mg de polvo con aire comprimido de 2 bares y se hace pasar delante de la lente de Fourier (50 mm) a través de un rayo láser paralelo. La distribución de tamaños de partícula se evalúa con un modelo de Fraunhofer. Se realizan dos mediciones de cada polvo.

Diámetro aerodinámico medio másico (MMAD) y fracción de partículas finas (FPF)

Para las mediciones se envasan en cada caso 12-18 mg de polvo en cápsulas de gelatina dura (tamaño 3) y se introducen en el HandiHaler (aparato inhalador de polvo de la empresa Boehringer Ingelheim). Con un adaptador se conecta el HandiHaler con la boquilla USP EP/Throat de la entrada del impactador del aparato de medición y se aspira el polvo con un caudal de 39,0 l/min durante un tiempo de de 6,15 segundos. La regulación del caudal de aire se realiza mediante panel de control externo. Se miden por lo menos tres cápsulas de cada polvo.

Con el APS 3321 de la empresa TSI Inc., MN, EE.UU., en combinación con la entrada de impactador 3306 se determina simultáneamente el tamaño de partícula aerodinámico (MMAD) a través de la determinación del tiempo de vuelo y la fracción de partículas finas (FPF) a través de un impactador monopaso (diámetro de corte efectivo para un caudal de 39 l/min = 5,0 \mum). Después de la dispersión, el polvo pasa por una boquilla del tipo EP/USP Throat o Sample Induction Port y se recoge en un capilar fino, del que se extrae un 0,2% de la cantidad de polvo para la medición del tiempo de vuelo (time of flight) en condiciones isocinéticas. La medición del tiempo de vuelo se realiza después de pasar los capilares por 2 rayos láser, que al igual que una célula fotoeléctrica captan los tiempos de vuelo en un tramo definido. Como resultado se obtiene una distribución numérica que después se convierte en una distribución de pesos y, de este modo, en el diámetro aerodinámico medio másico (MMAD).

El 99,8% restante de la población de polvo, que se ha pasado por los capilares, se separa en un impactador monopaso. Se separa en el impactador la fracción superior a 5,0 \mum debido a la inercia másica en la placa de rebote. La fracción de partículas finas (FPF) sigue la corriente de aire y se separa finalmente en un filtro de profundidad. La determinación de la fracción de partículas finas se realiza por gravimetría. Se calcula la fracción de partículas finas a partir de la porción del polvo separado en filtro, referida a la cantidad total de polvo utilizado, es decir, el polvo que se ha pesado en cada cápsula.

Contenido residual de agua

Se determina el contenido residual de agua de los productos secados por valoración culombimétrica (Metrohm 737 KF Coulometer con mesa de valoración 703, Alemania). Para la determinación se disuelve o se dispersa el polvo en metanol (Hydranal - metanol seco, VWR/Merck Eurolab). La solución a medir (Hydranal-Coulomat-Lösung, VWR/Merck Eurolab) del culombímetro Metrohm Coulometer se acondiciona antes del inicio de las mediciones, es decir, se calibra la solución de medición sobre un contenido cero de agua. Se inyecta la mesa en la celdilla de valoración y se mide.

Determinación de la estabilidad

Se estudian las diversas estabilidades de los polvos o de las proteínas contenidas en el polvo después del secado por atomización. En el caso de la IgG1 y de la calcitonina se evalúa como índice de estabilidad de las formulaciones la porción porcentual de agregados de proteínas. En el caso de la lisozima se evalúa como índice de la estabilidad de las formulaciones la porción porcentual del contenido de monómero residual. En el caso de los adyuvantes innovadores descritos en la invención se comparan en parte como referencia formulaciones puras de proteína, formulaciones análogas de trehalosa, formulaciones análogas de rafinosa, formulaciones análogas de sacarosa, formulaciones análogas de sacarosa-lactosa formulaciones análogas de hidroxietil-almidón. La analítica del estudio de los agregados se efectúa con una cromatografía validada de exclusión de tamaños (SEC-HPLC) con detección UV (DAD). Para ello se reconstituyen en primer lugar los polvos tratados previamente en agua muy pura (pH entre 6 y 8).

-: Estabilidad forzada al almacenaje: se estudia la estabilidad de formulaciones seleccionadas después de un almacenaje abierto de una semana aprox. a 40ºC y aprox. 75% de humedad relativa (40ºC, 75% de hum. rel.) en viales de vidrio abiertos.

-: estabilidad al almacenaje equilibrada: se almacenan formulaciones escogidas después del secado por atomización durante un día aprox. a 22ºC y entre 50 y 55% de humedad relativa en viales de vidrio abiertos (equilibrado). Después se cierran los viales de vidrio en las condiciones recién mencionadas, se cierran por rebordeado y se estudia su estabilidad después de un almacenaje seco de cuatro semanas aprox. a 40ºC.

-: estabilidad al almacenaje con secado al vacío: se almacenan formulaciones escogidas en viales de vidrio abiertos después del secado por atomización en una estufa de secado conectada al vacío de la empresa Memmert (Alemania) aprox. a 30ºC y aprox. 0,15 milibares durante un día (secado con vacío). Después se sacan los viales de vidrio de la estufa de secado conectada al vacío, se cierran y rebordean y se estudia su estabilidad después de un almacenaje de cuatro semanas a aprox. a 40ºC.

-: estabilidad a los 3 meses: se secan con vacío (ver antes) formulaciones escogidas después del secado por atomización en viales de vidrio abiertos. Se cierran y rebordean los viales de vidrio en atmósfera de nitrógeno y se almacenan a tres temperaturas diferentes. Las temperaturas son: 2-8ºC, 25ºC y 40ºC. Pasado un mes se estudia la estabilidad de los polvos.

-: estabilidad abierta de 3 meses: se almacenan en viales de vidrio abiertos formulaciones escogidas después del secado por atomización aprox. a 29% y/o 43% de humedad relativa y en cada caso a 25ºC. Se estudia la estabilidad de los polvos después de uno y de tres meses. En el caso de las formulaciones escogidas se determinan también las características aerodinámicas del polvo mediante mediciones del tiempo de vuelo (ver antes).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 1

Secado por atomización de una formulación de IgG1 al 10% (p/v)

Se diluye una IgG1 pura, de una concentración de aprox. 109 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina de pH 6 (ver "materiales"), con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta una concentración de 100 mg/ml y se seca por atomización en ausencia de otros adyuvantes del modo descrito anteriormente, empleando para ello el ciclón I con un caudal de atomización de aprox. 0,67 m^{3}/h. El volumen empleado de solución es de 50 ml. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 18,9% de agregados o un 18,2% de agregados.

-: Después de un día de equilibrado y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 11,8% de agregados.

-: Después de un día de secado con vacío y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 13,2% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de IgG1 al 3,33% (p/v)

Se diluye una IgG1 pura, de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina de pH 6 (ver "materiales"), con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta una concentración de 33 mg/ml y se seca por atomización en ausencia de otros adyuvantes del modo descrito anteriormente, empleando para ello el ciclón I con un caudal de atomización de aprox. 0,67 m^{3}/h. El volumen empleado de solución es de 150 ml. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 16,3% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje a 2-8ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 4,5% y un 4,4% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje a 25ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 7,4% y un 7,1% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje a 40ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 13,3% y un 18,1% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje abierto con aprox. un 29% de humedad relativa y 25ºC, la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 5,5% y un 6,6% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje abierto con aprox. un 43% de humedad relativa y 25ºC, la solución del polvo reconstituido tenía en cada caso aprox. un 5,6% y un 7,0% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de trehalosa al 9% (p/v) e IgG1 al 1% (p/v)

Se disuelven 4,5 g de trehalosa en aprox. 40 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,6 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 109 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina de pH 6 (ver "materiales") y se diluye con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 9% (p/v) de adyuvante o matriz y un 1% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. El contenido de agregados se analizado del modo antes descrito.

Para la estabilidad al almacenaje se obtienen los siguientes contenidos de agregados.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 12,6% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de LS90P al 3,00% (p/v) e IgG1 al 0,33% (p/v)

Se disuelven 4,5 g de LS90P en aprox. 140 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,864 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 150 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 3,00% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,33% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo antes descrito empleando el ciclón II con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 1,0% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje a 2-8ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 0,6% y un 0,9% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje a 25ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 0,8% y un 1,3% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje a 40ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 1,1% y un 2,2% de agregados.

El MMD del polvo se determina del modo descrito antes.

-: Después del secado por atomización, el MMD del polvo se sitúa en 2,8 \mum.

El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito.

-: Después del secado por atomización, el MMAD del polvo se sitúa en 3,8 \mum y la fracción de partículas finas se sitúa en 23,6%, porcentaje referido al polvo que se ha pesado dentro de la cápsula.

Secado por atomización de una formulación de LS55P al 9,9% (p/v) y de IgG1 al 0,1% (p/v)

Se disuelven 4,950 g de LS55P en aprox. 40 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 0,518 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 96,55 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 9,9% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,1% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo antes descrito empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo antes descrito.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 5,7% de agregados.

-: Después de un día de secado con vacío y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 4,7% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de LS55P al 9% (p/v) y de IgG1 al 1% (p/v)

Se disuelven 4,5 g de LS55P en aprox. 40 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,6 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 109 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 9% (p/v) de adyuvante o matriz y un 1% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. El contenido de agregados se analiza del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 2,3% de agregados.

-: Después de un día de equilibrado y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 1,8% de agregados.

-: Después de un día de secado con vacío y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución de polvo reconstituido tiene aprox. un 1,4% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de LS55P al 6% (p/v) y de IgG1 al 4% (p/v)

Se disuelven 3,0 g de LS55P en aprox. 15 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 19,45 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 6% (p/v) de adyuvante o matriz y un 4% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 4,0% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de LS55P al 4% (p/v) y de IgG1 al 6% (p/v)

Se disuelven 2,0 g de LS55P en aprox. 15 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 29,18 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 4% (p/v) de adyuvante o matriz y un 6% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza del modo descrito antes el contenido de agregados.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 6,9% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de LS55P al 2,5% (p/v) y de IgG1 al 7,5% (p/v)

Se disuelven 1,25 g de LS55P en aprox. 10 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 38,84 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 96,55 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 2,5% (p/v) de adyuvante o matriz y un 7,5% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón 1 con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 5,9% de agregados.

-: Después de un día de secado con vacío y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 6,1% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de LS55P al 1,0% (p/v) y de IgG1 al 9,0% (p/v)

Se disuelven 0,50 g de LS55P en aprox. 5 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 41,43 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 96,55 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 1,0% (p/v) de adyuvante o matriz y un 9,0% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 10,8% de agregados.

-: Después de un día de secado con vacío y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 8,0% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de LS55P al 0,5% (p/v) y de IgG1 al 9,5% (p/v)

Se disuelven 0,25 g de LS55P en aprox. 2,5 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 46,21 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 0,5% (p/v) de adyuvante o matriz y un 9,5% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo antes descrito empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 13,7% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de LS55P al 3,00% (p/v) y de IgG1 al 0,33% (p/v)

Se disuelven 9,0 g de LS55P en aprox. 280 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 9,73 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 300 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 3,0% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,33% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón II con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 5,0% de agregados.

\newpage

El MMD del polvo se determina del modo descrito antes.

-: El MMD del polvo se sitúa en 2,9 \mum.

El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito.

-: El MMAD se sitúa en 4,3 \mum y la fracción de partículas finas se sitúa en 15,9%, porcentaje referido al polvo que se ha pesado dentro de la cápsula.

Secado por atomización de una formulación de Coupling Sugar al 9,9% (p/v) y de IgG1 al 0,1% (p/v)

Se diluyen 6,290 g de jarabe que contiene el Coupling Sugar (equivalentes a 4,950 g de Coupling Sugar) en aprox. 40 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 0,518 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 96,55 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 9,9% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,1% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón 1 con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 14,9% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de Coupling Sugar al 9% (p/v) y de IgG1 al 1% (p/v)

Se disuelven 5,71 g de jarabe que contiene el Coupling Sugar (equivalentes a 4,5 g de Coupling Sugar) en aprox. 40 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,6 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 109 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 9% (p/v) de adyuvante o matriz y un 1% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 4,9% de agregados.

-: Después de un día de equilibrado y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 3,2% de agregados.

-: Después de un día de secado con vacío y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 2,1% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de Coupling Sugar al 6% (p/v) y de IgG1 al 4% (p/v)

Se disuelven 3,81 g de jarabe que contiene Coupling Sugar (equivalentes a 3,0 g de Coupling Sugar) en aprox. 25 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 19,45 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 6% (p/v) de adyuvante o matriz y un 4% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón 1 con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

Secado por atomización de una formulación de Coupling Sugar al 4% (p/v) y de IgG1 al 6% (p/v)

Se disuelven 2,54 g de jarabe que contiene Coupling Sugar (equivalentes a 2,0 g de Coupling Sugar) en aprox. 15 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 29,18 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. de x mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 4% (p/v) de adyuvante o matriz y un 6% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 9,9% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de Coupling Sugar al 2,5% (p/v) y de IgG1 al 7,5% (p/v)

Se disuelven 1,59 g de jarabe que contiene el Coupling Sugar (equivalentes a 1,250 g de Coupling Sugar) en aprox. 8 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 38,84 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 96,55 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 2,5% (p/v) de adyuvante o matriz y un 7,5% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

Secado por atomización de una formulación de Coupling Sugar al 1,0% (p/v) y de IgG1 al 9,0% (p/v)

Se disuelven 0,653 g de jarabe que contiene el Coupling Sugar (equivalentes a 0,50 g de Coupling Sugar) en aprox. 5 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 41,43 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 96,55 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 1,0% (p/v) de adyuvante o matriz y un 9,0% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 13,1% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de Coupling Sugar S al 9% (p/v) y de IgG1 al 1% (p/v)

Se disuelven 5,86 g de jarabe que contiene Coupling Sugar S (equivalentes a 4,5 g Coupling Sugar S) en aprox. 40 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,6 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 109 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 9% (p/v) de adyuvante o matriz y un 1% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 5,4% de agregados.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 2

Secado por atomización de una formulación de trehalosa al 8% (p/v), L-isoleucina al 1% (p/v) e IgG1 al 1% (p/v)

Se disuelven 4,0 g de trehalosa y 0,5 g de L-isoleucina en el baño de ultrasonidos aprox. en 40 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,6 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 109 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 9% (p/v) de adyuvante o matriz y un 1% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 22,2% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de LS90P al 2,66% (p/v), L-isoleucina al 0,33% (p/v) e IgG1 al 0,33% (p/v)

Se disuelven 4,0 g de LS90P y 0,50 g de L-isoleucina en aprox. 140 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,864 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 150 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 3,00% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,33% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón II con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 0,7% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje a 2-8ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 0,7% y un 1,0% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje a 25ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 0,8% y un 1,1% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje a 40ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 0,6% y un 1,1% de agregados.

El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito.

-: Después del secado por atomización, el MMAD del polvo se sitúa en 7,3 \mum y la fracción de partículas finas se sitúa en 28,1%, porcentaje referido a la cantidad de polvo pesada en la cápsula.

Secado por atomización de una formulación de LS55P al 8% (p/v), L-isoleucina al 1% (p/v) e IgG1 al 1% (p/v)

Se disuelven 4,00 g de LS55P y 0,50 g de L-isoleucina en baño de ultrasonidos aprox. en 40 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,60 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 109 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina de pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 9% (p/v) de adyuvante o matriz y un 1% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h.

Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 5,5% de agregados.

-: Después de un día de secado con vacío y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 1,8% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de LS55P al 2,66% (p/v) L-isoleucina al 0,33% (p/v) e IgG1 al 0,33% (p/v)

Se disuelven 8,0 g de LS55P y 1 g de L-isoleucina en el baño de ultrasonidos aprox. en 280 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 9,7 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 300 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 3% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,33% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón 11 con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h.

Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución de polvo reconstituido tiene solo aprox. un 5,9% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje a 2-8ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 1,6% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje a 25ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 1,6% y un 1,8% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje a 40ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 1,6% y un 1,8% de agregados.

El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito.

-: El MMAD se sitúa en 4,9 \mum y la fracción de partículas finas se sitúa en 34,7%, porcentaje referido al polvo que se ha pesado dentro de la cápsula.

Secado por atomización de una formulación de Coupling Sugar al 8% (p/v), L-isoleucina al 1% (p/v) e IgG1 1% (p/v)

Se disuelven 5,08 g de jarabe que contiene el Coupling Sugar (equivalentes a 4,0 g de Coupling Sugar) y 0,50 g de L-isoleucina en el baño de ultrasonidos aprox. en 40 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,60 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 109 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 9% (p/v) de adyuvante o matriz y un 1% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h.

Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución de polvo reconstituido tiene solo aprox. un 7,1% de agregados.

-: Después de un día de equilibrado y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 2,5% de agregados.

-: Después de un día de secado con vacío y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 1,1% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de Coupling Sugar S al 8% (p/v), L-isoleucina al 1% (p/v) e IgG1 al 1% (p/v)

Se disuelven 5,21 g de jarabe que contiene Coupling Sugar S (equivalentes a 4,0 g de Coupling Sugar S) y 0,50 g de L-isoleucina en baño de ultrasonidos aprox. en 40 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,60 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 109 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 9% (p/v) de adyuvante o matriz y un 1% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h.

Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución de polvo reconstituido tiene solo aprox. un 6,8% de agregados.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 3

Secado por atomización de una formulación de trehalosa al 3% (p/v), L-citrulina al 6% (p/v) e IgG1 al 1% (p/v)

Se disuelven 1,50 g de trehalosa y 3,00 g de L-citrulina en el baño de ultrasonidos aprox. en 40 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,6 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 109 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 9% (p/v) de adyuvante o matriz y un 1% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

Secado por atomización de una formulación de LS55P al 3% (p/v), L-citrulina al 6% (p/v) e IgG1 al 1% (p/v)

Se disuelven 1,50 g de LS55P y 3,00 g de L-citrulina en el baño de ultrasonidos aprox. en 40 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,60 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 109 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 9% (p/v) de adyuvante o matriz y un 1% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h.

Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 2,9% de agregados.

-: Después de un día de secado con vacío y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 1,3% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de Coupling Sugar al 3% (p/v) L-citrulina al 6% (p/v) e IgG1 al 1% (p/v)

Se disuelven 1,91 g de jarabe que contiene el Coupling Sugar (equivalentes a 1,5 g de Coupling Sugar) y 3,00 g de L-citrulina en el baño de ultrasonidos aprox. en 40 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,60 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 109 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 9% (p/v) de adyuvante o matriz y un 1% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h.

Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 3,9% de agregados.

-: Después de un día de equilibrado y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 1,4% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de Coupling Sugar S al 3% (p/v), L-citrulina al 6% (p/v) e IgG1 al 1% (p/v)

Se disuelven 1,95 g de jarabe que contiene Coupling Sugar S (equivalentes a 1,5 g de Coupling Sugar S) y 3,00 g de L-citrulina en el baño de ultrasonidos aprox. en 40 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,60 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 109 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 9% (p/v) de adyuvante o matriz y un 1% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón I con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h.

Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución de polvo reconstituido tiene solo aprox. un 3,1% de agregados.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 4

Secado por atomización de una formulación de trehalosa al 2,66% (p/v), tri-isoleucina al 0,33% (p/v) e IgG1 al 0,33% (p/v)

Se disuelven 8,0 g de trehalosa y 1 g de tri-isoleucina en el baño de ultrasonidos aprox. en 280 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 12,30 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 96,55 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 300 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 3% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,33% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón II con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h.

Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

\newpage

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 26,7% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de rafinosa al 2,66% (p/v), tri-isoleucina al 0,33% (p/v) e IgG1 al 0,33% (p/v)

Se disuelven 8,0 g de rafinosa y 1 g de tri-isoleucina en el baño de ultrasonidos aprox. en 140 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,87 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 300 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 3% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,33% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón 11 con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h.

Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

Secado por atomización de una formulación de hidroxietil-almidón (HES) al 2,66% (p/v), tri-isoleucina al 0,33% (p/v) e IgG1 al 0,33% (p/v)

Se disuelven con agitación aprox. a 80ºC 8,0 g de HES y 1 g de tri-isoleucina en el baño de ultrasonidos aprox. en 140 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden a la solución turbia, previamente enfriada en el frigorífico, aprox. 4,87 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 150 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 3% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,33% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo antes descrito empleando el ciclón II con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h.

Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 18,6% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje abierto con un 43% de humedad relativa y 25ºC (estabilidad abierta de 3 meses), la solución del polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 11,9% y un 15,4% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de sacarosa al 2,00% (p/v), lactosa al 0,66% (p/v), tri-isoleucina al 0,33% (p/v) e IgG1 al 0,33% (p/v)

Se disuelven 6,0 g de sacarosa, 2,0 g de lactosa y 1 g de tri-isoleucina en el baño de ultrasonidos aprox. en 280 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 9,73 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 300 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 3% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,33% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón II con un caudal de pulverización aprox. de 0,67 m^{3}/h.

Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 8,8% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de sacarosa al 2,66% (p/v), tri-isoleucina al 0,33% (p/v) e IgG1 al 0,33% (p/v)

Se disuelven 8,0 g de sacarosa y 1 g de tri-isoleucina en el baño de ultrasonidos aprox. en 280 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 9,73 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 300 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 3% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,33% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón II con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h.

Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 5,6% de agregados.

Secado por atomización de una formulación de LS90P al 2,66% (p/v), tri-isoleucina al 0,33% (p/v) e IgG1 al 0,33% (p/v)

Se disuelven 4,0 g de LS90P y 0,50 g de tri-isoleucina aprox. en 140 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,864 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina de pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 150 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 3,00% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,33% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo antes descrito empleando el ciclón II con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje a 25ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 0,8% y un 1,4% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje a 40ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 0,9% y un 2,2% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje abierto con aprox. un 29% de humedad relativa y 25ºC, la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 0,4% y un 0,7% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje abierto con aprox. un 43% de humedad relativa y 25ºC, la solución del polvo reconstituido tenía en cada caso aprox. un 0,5% y un 0,6% de agregados.

El MMD del polvo se determina del modo descrito antes.

-: Después del secado por atomización, el MMD del polvo se sitúa en 4,7 \mum.

El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito.

-: Después del secado por atomización, el MMAD del polvo se sitúa en 4,8 \mum y la fracción de partículas finas se sitúa en 53,2%, porcentaje referido al polvo que se ha pesado dentro de la cápsula.

Se disuelven 4,0 g de LS90P y 0,50 g de tri-isoleucina aprox. en 140 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,864 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 150 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 3,00% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,33% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo antes descrito empleando el ciclón II con un caudal de pulverización de aprox. 1,05 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 2,2% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje abierto con 29% de humedad relativa y 25ºC (estabilidad abierta de 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 0,5% y un 0,6% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje abierto con 43% de humedad relativa y 25ºC (estabilidad abierta de 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 0,5% y un 0,7% de agregados.

El MMD del polvo se determina del modo descrito antes.

-: Después del secado por atomización, el MMD del polvo se sitúa en 2,7 \mum.

El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito.

-: Después del secado por atomización, el MMAD del polvo se sitúa en 3,6 \mum y la fracción de partículas finas se sitúa en 58,0%, porcentaje referido al polvo que se ha pesado dentro de la cápsula.

Secado por atomización de una formulación de LS90P al 2,66% (p/v), tri-isoleucina al 0,33% (p/v) e IgG1 0,33% (p/v)

Se disuelven 4,0 g de LS90P y 0,50 g de tri-isoleucina aprox. en 140 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,864 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 150 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 3,00% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,33% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo antes descrito empleando el ciclón II con un caudal de pulverización de aprox. 1,74 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un% de agregados.

-: Después de 1 mes de almacenaje abierto con un 43% de humedad relativa y 25ºC (estabilidad abierta de 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 0,5% y 0,8% de agregados.

El MMD del polvo se determina del modo descrito antes.

-: Después del secado por atomización, el MMD del polvo se sitúa en 2,6 \mum.

-: Después del secado por atomización, el MMAD del polvo se sitúa en 3,3 \mum y la fracción de partículas finas se sitúa en 58,9%, porcentaje referido a la cantidad de polvo pesada en la cápsula.

Secado por atomización de una formulación de LS90P al 1,60% (p/v), tri-isoleucina al 0,20% (p/v) e IgG1 al 0,20% (p/v)

Se disuelven 4,0 g de LS90P y 0,50 g de tri-isoleucina aprox. en 220 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,864 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 250 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 1,80% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,20% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón II con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje abierto con 29% de humedad relativa y 25ºC (estabilidad abierta de 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 0,5% y un 0,5% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje abierto con 43% de humedad relativa y 25ºC (estabilidad abierta de 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 0,7% y un 0,7% de agregados.

El MMD del polvo se determina del modo descrito antes.

-: Después del secado por atomización, el MMD del polvo se sitúa en 3,2 \mum.

El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito.

-: Después del secado por atomización, el MMAD del polvo se sitúa en 3,9 \mum y la fracción de partículas finas se sitúa en 55,6%, porcentaje referido a la cantidad de polvo pesada en la cápsula.

Secado por atomización de una formulación de LS90P al 2,833% (p/v), tri-isoleucina al 0,166% (p/v) e IgG1 al 0,33% (p/v)

Se disuelven 4,25 g de LS90P y 0,25 g de tri-isoleucina aprox. en 140 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,864 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 150 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 3,00% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,33% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón II con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 1,5% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje abierto con 43% de humedad relativa y 25ºC (estabilidad abierta de 3 meses), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 0,5% y un 0,6% de agregados.

El MMD del polvo se determina del modo descrito antes.

-: Después del secado por atomización, el MMD del polvo se sitúa en 4,8 \mum.

El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito.

-: Después del secado por atomización, el MMAD del polvo se sitúa en 5,2 \mum y la fracción de partículas finas se sitúa en 45,7%, porcentaje referido a la cantidad de polvo pesada en la cápsula.

Secado por atomización de una formulación de LS90P al 2,9166% (p/v), tri-isoleucina al 0,0833% (p/v) e IgG1 al 0,33% (p/v)

Se disuelven 4,375 g de LS90P y 0,125 g de tri-isoleucina aprox. en 140 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 4,864 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 150 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 3,00% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,33% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón II con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 1,2% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje abierto con 29% de humedad relativa y 25ºC (estabilidad abierta de 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 0,4% y un 0,5% de agregados.

El MMD del polvo se determina del modo descrito antes.

-: Después del secado por atomización, el MMD del polvo se sitúa en 4,2 \mum.

El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito.

-: Después del secado por atomización, el MMAD del polvo se sitúa en 6,1 \mum y la fracción de partículas finas se sitúa en 39,6%, porcentaje referido al polvo que se ha pesado dentro de la cápsula.

Secado por atomización de una formulación de LS55P al 2,66% (p/v), tri-isoleucina al 0,33% (p/v) e IgG1 al 0,33% (p/v)

Se disuelven 8,0 g de LS55P y 1 g de tri-isoleucina en el baño de ultrasonidos aprox. en 280 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 9,73 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 300 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 3% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,33% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón II con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h.

Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 2,1% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje a 2-8ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 0,8% y 1,5% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje a 25ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 0,9% y un 1,5% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje a 40ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 1,3% y un 2,6% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje abierto con 43% de humedad relativa y 25ºC (estabilidad abierta de 3 meses), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 1,0% y un 1,0% de agregados.

El MMD del polvo se determina del modo descrito antes.

-: Después del secado por atomización, el MMD del polvo se sitúa en 3,4 \mum.

El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito.

-: Después del secado por atomización, el MMAD se sitúa en 3,9 \mum y la fracción de partículas finas en el 58,3%, porcentaje referido al polvo que se ha pesado dentro de la cápsula.

-: Después de un almacenaje abierto de un mes aprox. con un 43% de humedad relativa y 25ºC, el MMAD se sitúa en 3,8 \mum y la fracción de partículas finas en el 59,6%, porcentaje referido al polvo que se ha pesado dentro de la cápsula.

Secado por atomización de una formulación de LS55P al 2,833% (p/v), tri-isoleucina al 0,166% (p/v) e IgG1 al 0,33% (p/v)

Se disuelven 8,5 g de LS55P y 0,5 g de tri-isoleucina en el baño de ultrasonidos aprox. en 280 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 9,73 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 300 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 3% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,33% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón II con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h.

Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 3,4% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje abierto con 43% de humedad relativa y 25ºC (estabilidad abierta de 3 meses), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 1,3% y un 1,5% de agregados.

El MMD del polvo se determina del modo descrito antes.

-: El MMD del polvo se sitúa en 2,9 \mum.

El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito.

-: El MMAD se sitúa en 4,4 \mum y la fracción de partículas finas se sitúa en 58,6%, porcentaje referido al polvo que se ha pesado dentro de la cápsula.

Secado por atomización de una formulación de LS55P al 2,9166% (p/v), tri-isoleucina al 0,0833% (p/v) e IgG1 al 0,33% (p/v)

Se disuelven 8,75 g de LS55P y 0,25 g de tri-isoleucina en el baño de ultrasonidos aprox. en 280 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 9,73 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 102,8 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 300 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 3% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,33% (p/v) de proteína y se seca por atomización del modo descrito anteriormente empleando el ciclón II con un caudal de pulverización de aprox. 0,67 m^{3}/h.

Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 4,4% de agregados.

-: Después de 1 y 3 meses de almacenaje abierto con 43% de humedad relativa y 25ºC (estabilidad abierta de 3 meses), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 0,7% y un 0,8% de agregados.

El MMD del polvo se determina del modo descrito antes.

-: El MMD del polvo se sitúa en 2,9 \mum.

El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 5

Fabricación de otros polvos de la invención Secado por atomización de una formulación de lisozima al 3,33% (p/v)

Se disuelven 5 g de lisozima aprox. en 140 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 150 ml. La solución así preparada se seca por atomización del modo antes descrito empleando el ciclón II.

El contenido de monómero residual se analiza del modo descrito anteriormente. Después del almacenaje forzado, la solución de polvo reconstituido tiene un contenido de monómero residual del 35,3%. El MMD del polvo se determina del modo descrito antes. El MMD del polvo se sitúa en 3,2 \mum. El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito. El MMAD se sitúa en 4,0 \mum y la fracción de partículas finas se sitúa en el 70,4%, porcentaje referido al polvo que se ha pesado dentro de la cápsula.

Secado por atomización de una formulación de LS90P al 3,00% (p/v) y de lisozima al 0,33% (p/v)

Se disuelven 9,0 g de LS90P en baño de ultrasonidos aprox. en 280 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se les añade 1 g de lisozima y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 300 ml. La solución así preparada se seca por atomización del modo antes descrito empleando el ciclón II.

Se analiza el contenido de monómero residual del modo antes descrito. Después del almacenaje forzado, la solución de polvo reconstituido tiene un contenido de monómero residual del 62,1%. El MMD del polvo se determina del modo descrito anteriormente. El MMD del polvo se sitúa en 4,0 \mum. El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito. El MMAD se sitúa en 3,7 \mum y la fracción de partículas finas se sitúa en el 24,7%, porcentaje referido al polvo que se ha pesado dentro de la cápsula.

Secado por atomización de una formulación de LS90P al 2,66% (p/v), isoleucina al 0,33% (p/v) y lisozima al 0,33% (p/v)

Se disuelven 8,0 g de LS90P y 1 g de isoleucina en el baño de ultrasonidos aprox. en 280 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se les añade 1 g de lisozima y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 300 ml. La solución así preparada se seca por atomización del modo antes descrito empleando el ciclón II. Se analiza el contenido de monómero residual del modo antes descrito. Después del almacenaje forzado, la solución de polvo reconstituido tiene un contenido de monómero residual del 47,9%. El MMD del polvo se determina del modo descrito antes. El MMD del polvo se sitúa en 3,9 \mum. El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito. El MMAD se sitúa en 4,1 \mum y la fracción de partículas finas se sitúa en el 29,0%, porcentaje referido al polvo que se ha pesado dentro de la cápsula.

Secado por atomización de una formulación de LS90P al 2,66% (p/v), tri-isoleucina al 0,33% (p/v) y lisozima al 0,33% (p/v)

Se disuelven 8,0 g de LS90P y 1 g de tri-isoleucina en el baño de ultrasonidos aprox. en 280 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se les añade 1 g de lisozima y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 300 ml. La solución así preparada se seca por atomización del modo antes descrito empleando el ciclón II.

Se analiza el contenido de monómero residual del modo antes descrito. Después del almacenaje forzado, la solución de polvo reconstituido tiene un contenido de monómero residual del 47,9%. El MMD del polvo se determina del modo descrito antes. El MMD del polvo se sitúa en 2,7 \mum. El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito. El MMAD se sitúa en 3,6 \mum y la fracción de partículas finas se sitúa en el 58,6%, porcentaje referido al polvo que se ha pesado dentro de la cápsula.

Secado por atomización de una formulación de calcitonina al 3,33% (p/v)

Se disuelve 1 g de calcitonina aprox. en 25 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) y se diluye con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 30 ml. La solución así preparada se seca por atomización del modo antes descrito empleando el ciclón II.

-: Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente. Después de un almacenaje de 3 meses a 2-8ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 4,1% de agregados.

-: Después de un almacenaje de 3 meses a 25ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 4,9% de agregados.

-: Después de un almacenaje de 3 meses a 40ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 7,4% de agregados.

El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito. El MMAD se sitúa en 3,9 \mum y la fracción de partículas finas se sitúa en el 59,0%, porcentaje referido al polvo que se ha pesado dentro de la cápsula.

Secado por atomización de una formulación de LS90P al 3,166% (p/v) y calcitonina al 0,166% (p/v)

Se disuelven 4,750 g de LS90P en el baño de ultrasonidos aprox. en 140 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden 0,250 g de calcitonina y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 150 ml. La solución así preparada se seca por atomización del modo antes descrito empleando el ciclón II.

Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje de 3 meses a 2-8ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 3,6% de agregados.

-: Después de un almacenaje de 3 meses a 25ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 3,9% de agregados.

-: Después de un almacenaje de 3 meses a 40ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 4,6% de agregados.

El MMD del polvo se determina del modo descrito antes. El MMD del polvo se sitúa en 2,6 \mum. El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito. El MMAD se sitúa en 4,3 \mum y la fracción de partículas finas se sitúa en el 47,3%, porcentaje referido al polvo que se ha pesado dentro de la cápsula.

Secado por atomización de una formulación de LS90P al 2,833% (p/v), isoleucina al 0,33% (p/v) y calcitonina al 0,166% (p/v)

Se disuelven 4,250 g de LS90P y 0,50 g de isoleucina en el baño de ultrasonidos aprox. en 140 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden 0,250 g de calcitonina y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 150 ml. La solución así preparada se seca por atomización del modo antes descrito empleando el ciclón II.

Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente. Después de un almacenaje de 3 meses a 2-8ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 3,3% de agregados.

-: Después de un almacenaje de 3 meses a 25ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 3,6% de agregados.

-: Después de un almacenaje de 3 meses a 40ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución de polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 3,6% de agregados.

El MMD del polvo se determina del modo antes descrito. El MMD del polvo se sitúa en 2,8 \mum. El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito. El MMAD se sitúa en 4,4 \mum y la fracción de partículas finas se sitúa en el 49,2%, porcentaje referido al polvo que se ha pesado dentro de la cápsula.

Secado por atomización de una formulación de LS90P al 2,866% (p/v), tri-isoleucina al 0,33% (p/v) y calcitonina al 0,166% (p/v)

Se disuelven 4,250 g de LS90P y 0,50 g de tri-isoleucina en el baño de ultrasonidos aprox. en 140 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se les añaden 0,250 g de calcitonina y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 150 ml. La solución así preparada se seca por atomización del modo antes descrito empleando el ciclón II.

\newpage

-: Después de un almacenaje de 3 meses a 40ºC (estabilidad a los 3 meses), la solución del polvo reconstituido tiene en cada caso aprox. un 3,9% de agregados.

El MMD del polvo se determina del modo descrito antes. El MMD del polvo se sitúa en 2,5 \mum. El MMAD y la FPF del polvo se determinan del modo antes descrito. El MMAD se sitúa en 3,5 \mum y la fracción de partículas finas se sitúa en el 60,4%, porcentaje referido al polvo que se ha pesado dentro de la cápsula.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 6

Liofilización de una formulación de IgG1 al 5% (p/v)

Se diluye IgG1 pura, de una concentración de aprox. 109 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales"), con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta una concentración de de 50 mg/ml y se liofiliza en ausencia de otros adyuvantes. El volumen de la solución es de 50 ml y antes de la liofilización se reparte en viales 2R comerciales. Se pulveriza el liofilizado dentro de los viales 2R con una espátula y se trata del modo descrito antes. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 20,5% de agregados.

-: Después de un día de equilibrado y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 15,3% de agregados.

-: Después de un día de secado con vacío y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 12,6% de agregados.

Liofilizado de una formulación de manita al 4,5% (p/v) y de IgG1 al 0,5% (p/v)

Se disuelven 2,25 g de manita en aprox. 40 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 2,3 ml de IgG1 pura, de una concentración de aprox. 109 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 4,5% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,5% (p/v) de proteína, se reparte en viales comerciales 2R y se liofiliza del modo descrito anteriormente. Se pulveriza el liofilizado dentro de los viales 2R mediante una espátula y se trata seguidamente del modo antes descrito. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 34,0% de agregados.

-: Después de un día de equilibrado y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 11,6% de agregados.

-: Después de un día de secado con vacío y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 6,2% de agregados.

Liofilizado de una formulación de LS55P al 4,5% (p/v) y de IgG1 al 0,5% (p/v)

Se disuelven 2,25 g de LS55P en aprox. 40 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 2,3 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 109 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 4,5% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,5% (p/v) de proteína, se reparte en viales 2R comerciales y se liofiliza del modo descrito anteriormente. Se pulveriza el liofilizado dentro de los viales 2R mediante una espátula y se trata seguidamente del modo antes descrito. Se analiza el contenido de agregados del modo descrito anteriormente.

\newpage

-: Después de un almacenaje abierto de una semana con un 75% de humedad relativa y 40ºC (estabilidad forzada al almacenaje), la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 2,5% de agregados.

-: Después de un día de equilibrado y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 2,6% de agregados.

-: Después de un día de secado con vacío y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 1,2% de agregados.

Liofilizado de una formulación de Coupling Sugar al 4,5% (p/v) y de IgG1 al 0,5% (p/v)

Se disuelven 2,25 g de Coupling Sugar en aprox. 40 ml de agua desmineralizada (pH aprox. 7,5). A continuación se añaden aprox. 2,3 ml de IgG1 pura de una concentración de aprox. 109 mg/ml, formulada en un tampón de glicina-histidina pH 6 (ver "materiales") y se diluyen con agua desmineralizada (pH aprox. 7,5) hasta un volumen de 50 ml. La solución así preparada contiene aprox. un 4,5% (p/v) de adyuvante o matriz y un 0,5% (p/v) de proteína, se reparte en viales 2R comerciales y se liofiliza del modo descrito anteriormente. Se pulveriza el liofilizado dentro de los viales 2R mediante una espátula y se trata seguidamente del modo antes descrito. El contenido de agregados se analiza del modo descrito antes.

-: Después de un día de equilibrado y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 4,6% de agregados.

-: Después de un día de secado con vacío y cuatro semanas de almacenaje seco a 40ºC, la solución del polvo reconstituido tiene aprox. un 1,5% de agregados.

Claims

1. Polvo que contiene un principio activo farmacéutico y una combinación de adyuvantes que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O, elegido entre los compuestos siguientes:

D-Gal-sacarosa unida a través de 1,4-O (lactosucrosa);

D-Glu-sacarosa unida a través de 1,4-O (glucosil-sucrosa; y

Glu-Glu-sacarosa unida a través de 1,4-O (maltosil-sucrosa);

y otro adyuvante adicional.

2. Polvo según la reivindicación 1 caracterizado porque contiene lactosucrosa como derivado de sacarosa.

3. Polvo según la reivindicación 2 caracterizado porque el adyuvante adicional es un mono- o di-sacárido, con preferencia la lactosa o la sacarosa.

4. Polvo según una de las reivindicaciones de 1 a 3 caracterizado porque la porción de lactosucrosa se sitúa por lo menos en el 55% (p/p) con respecto a la porción de azúcares contenida en el polvo.

5. Polvo según la reivindicación 1 caracterizado porque contiene una mezcla de glucosil-sucrosa y maltosil-sucrosa.

6. Polvo según la reivindicación 5 caracterizado porque como adyuvantes adicionales contiene otros mono- o di-sacáridos, con preferencia la fructosa, la glucosa y/o la sacarosa.

7. Polvo según la reivindicación 5 ó 6 caracterizado porque la porción total de glucosil-sucrosa y maltosil-sucrosa se sitúa por lo menos en el 25% (p/p) con respecto a la porción de azúcares contenida en el polvo.

8. Polvo según la reivindicación 7 caracterizado porque la porción correspondiente a la maltosil-sucrosa y a la glucosil-sucrosa se sitúa por lo menos en el 18% (p/p) con respecto a la porción de azúcares contenida en el polvo.

9. Polvo según una de las reivindicaciones de 1 a 8 caracterizado porque el adyuvante adicional son aminoácidos, péptidos, otros azúcares, alcoholes de azúcar, polímeros y/o sales farmacéuticamente compatibles.

10. Polvo según la reivindicación 9, caracterizado porque además el polvo contiene por lo menos un aminoácido o un péptido como adyuvante, dicho adyuvante adicional no corresponde al principio activo farmacéutico.

11. Polvo según la reivindicación 10 caracterizado porque el aminoácido es la isoleucina.

12. Polvo según la reivindicación 10 caracterizado porque el péptido es un di- o un tri-péptido.

13. Polvo según la reivindicación 10 caracterizado porque el péptido tiene uno, dos o más restos isoleucina.

14. Polvo según la reivindicación 10 caracterizado porque el tripéptido es la tri-isoleucina.

15. Polvo según la reivindicación 11 caracterizado porque la masa seca del polvo contiene del 60 al 80% (p/p) de un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de una mezcla de azúcares que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O; y entre el 1 y el 19,99% (p/p) de isoleucina.

16. Polvo según la reivindicación 10 caracterizado porque la masa seca del polvo contiene entre el 60 y el 80% (p/p) de un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de una mezcla de azúcares que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O; y entre el 1 y el 19,99% (p/p) de un péptido.

17. Polvo según la reivindicación 16, caracterizado porque el péptido es la tri-isoleucina.

18. Polvo según una de las reivindicaciones de 1 a 17 caracterizado porque la porción de la combinación de adyuvantes se sitúa entre el 25 y el 99,99% (p/p) de la masa seca del polvo.

19. Polvo según una de las reivindicaciones de 1 a 18 caracterizado porque la porción del principio activo farmacéutico se sitúa entre el 0,01 y el 75% (p/p) de la masa seca del polvo, en la que la suma de los porcentajes de los pesos alcanza el 100% (p/p).

20. Polvo según una de las reivindicaciones de 1 a 19 caracterizado porque el principio activo farmacéutico es una macromolécula biológica.

21. Polvo según una de las reivindicaciones de 1 a 20, caracterizado porque la masa seca del polvo contiene del 60 al 90% (p/p) de una combinación de adyuvantes, que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o una mezcla de azúcares que contiene por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O; y hasta un 40% de un principio activo farmacéutico; en dicho polvo, la porción de la lactosucrosa, la maltosil-sucrosa y/o la glucosil-sucrosa se sitúa por lo menos en el 20% (p/p) con respecto a la masa seca del polvo; la suma de los porcentajes de los pesos asciende como máximo al 100% (p/p).

22. Polvo según una de las reivindicaciones de 1 a 21 caracterizado porque las partículas del polvo presentan un tamaño medio de partícula (MMD) entre 1 y 10 \mum.

23. Polvo según una de las reivindicaciones de 1 a 22, caracterizado porque el polvo es un polvo secado por atomización o un polvo liofilizado.

24. Polvo según una de las reivindicaciones de 1 a 23, caracterizado porque las partículas del polvo presentan un diámetro de partícula aerodinámico medio (MMAD) entre 1 y 5 \mum.

25. Composición farmacéutica que contiene un polvo según una de las reivindicaciones de 1 a 24.

26. Procedimiento para la fabricación de un polvo según una de las reivindicaciones de 1 a 24 caracterizado porque:

27. Procedimiento según la reivindicación 26 caracterizado porque el procedimiento de secado es un secado por atomización o una liofilización.

28. Procedimiento según la reivindicación 26 ó 27 caracterizado porque el principio activo farmacéutico es una macromolécula biológica.

29. Procedimiento según una de las reivindicaciones de 26 a 28 caracterizado porque el derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O es la lactosucrosa.

30. Procedimiento según la reivindicación 29 caracterizado porque la solución o suspensión a secar contiene como adyuvantes adicionales la lactosa y la sacarosa.

31. Procedimiento según la reivindicación 29 ó 30 caracterizado porque la porción de lactosucrosa se sitúa por lo menos en el 55% (p/p) de la porción de azúcares existente dentro de la solución o suspensión a secar.

32. Procedimiento según la reivindicación 26 ó 27 caracterizado porque el derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O es una mezcla de glucosil-sucrosa y maltosil-sucrosa.

33. Procedimiento según la reivindicación 32 caracterizado porque la solución o suspensión a secar, como adyuvantes adicionales, contiene otros mono- y di-sacáridos, con preferencia la fructosa, sacarosa y/o glucosa.

34. Procedimiento según la reivindicación 32 ó 33 caracterizado porque la porción total de glucosil-sucrosa y maltosil-sucrosa se sitúa por lo menos en el 25% (p/p) de la porción de azúcares existente dentro de la solución o suspensión a secar.

35. Procedimiento según la reivindicación 34 caracterizado porque la porción correspondiente de maltosil-sucrosa y glucosil-sucrosa se sitúa por lo menos en el 18% (p/p) de la porción de azúcares existente dentro de la solución o suspensión a secar.

36. Procedimiento según una de las reivindicaciones de 26 a 35 caracterizado porque la solución o suspensión a secar, como adyuvantes adicionales, contiene aminoácidos, péptidos, otros azúcares, alcoholes de azúcar, polímeros y/o sales farmacéuticamente compatibles.

37. Procedimiento según la reivindicación 36 caracterizado porque el adyuvante adicional es un aminoácido.

38. Procedimiento según la reivindicación 37 caracterizado porque el aminoácido es la isoleucina.

39. Procedimiento según la reivindicación 36 caracterizado porque el adyuvante adicional es un péptido, dicho péptido no coincide con el principio activo farmacéutico.

40. Procedimiento según la reivindicación 39 caracterizado porque el péptido es un péptido que contiene isoleucina.

41. Procedimiento según la reivindicación 39 caracterizado porque el péptido es un di- o un tri-péptido.

42. Procedimiento según la reivindicación 41 caracterizado porque el tri-péptido es la tri-isoleucina.

43. Procedimiento según la reivindicación 38 caracterizado porque la masa seca de la solución o suspensión a secar contiene entre el 60 y el 80% (p/p) de un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de una mezcla de azúcares que contenga por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O y entre el 1 y el 19,99% (p/p) de isoleucina, la suma de los porcentajes de los pesos asciende como máximo al 100% (p/p).

44. Procedimiento según la reivindicación 41 ó 42 caracterizado porque la masa seca de la solución o suspensión a secar contiene entre el 60 y el 80% (p/p) de un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O o de una mezcla de azúcares que contenga por lo menos un derivado de sacarosa unido a través de 1,4-O y entre el 1 y el 19,99% (p/p) de un tri-péptido.

45. Procedimiento según una de las reivindicaciones de 26 a 44 caracterizado porque la porción de adyuvantes se sitúa entre el 25 y el 99% (p/p) de la masa seca de la solución o suspensión a secar.

46. Procedimiento según una de las reivindicaciones de 26 a 45 caracterizado porque la porción del principio activo farmacéutico se sitúa entre el 0,01 y el 75% (p/p) de la masa seca de la solución o suspensión a secar, la suma de los porcentajes de los pesos asciende como máximo al 100%.

47. Uso del polvo seco según una de las reivindicaciones de 1 a 24 para la fabricación de un medicamento.

48. Uso del polvo secado por atomización según la reivindicación 24 para la fabricación un medicamento inhalable.