ES2263661T3 - 1,2,5,10-tetrahidropiridazino(4,5-b)quinolin-1,10-dionas y su uso para el tratamiento del dolor. - Google Patents

Abstract

Cualquier compuesto de conformidad con el diagrama estructural I, (Ver fórmula) o un tautómero de éste donde: R1 es halo; A se selecciona de los grupos de conformidad con los diagramas estructurales II, III, IV y V (Ver fórmulas) donde X se selecciona entre carbono, oxígeno y azufre y sales de éstos aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

Description

1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-dionas y su uso para el tratamiento del dolor.

Esta invención se relaciona con el tratamiento o la prevención del dolor o la nocicepción.

Área relacionada

El dolor es una experiencia sensorial diferente de las sensaciones del tacto, la presión, el calor y el frío. A menudo es descrito por quienes lo sufren mediante términos como brillante, sordo, fijo y continuo, punzante, cortante o ardiente y en general se considera que incluye tanto la sensación original como la reacción a esa sensación. Esta gama de sensaciones, así como la variación en la percepción del dolor por diferentes individuos, torna difícil una definición precisa del dolor, sin embargo, muchos individuos sufren de dolor severo y continuo.

El dolor que es causado por el daño a las estructuras neurales a menudo se manifiesta como una supersensibilidad neural o hiperalgesia y se denomina dolor "neuropático". El dolor también puede ser "causado" por la estimulación de los receptores nociceptivos y transmitido por las vías neurales intactas, dicho dolor se denomina dolor "nociceptivo".

El nivel de estimulación a la cual el dolor se vuelve perceptible se denomina "umbral del dolor". Los analgésicos son los fármacos que alivian el dolor elevando el umbral del dolor sin pérdida del conocimiento. Después de la administración de un fármaco analgésico es necesario un estímulo de mayor intensidad o de mayor duración antes de que se experimente dolor. En un individuo que sufre de hiperalgesia un analgésico puede tener un efecto anti-hiperalgésico. En contraposición a los analgésicos, los anestésicos locales bloquean la transmisión en las fibras de los nervios periféricos bloqueando de esa manera la conciencia del dolor. Los anestésicos generales, por otra parte, reducen la conciencia del dolor produciendo una pérdida del conocimiento.

Se informó que los antagonistas de los receptores Tachykinin inducen la antinocicepción en animales, que se cree que es análoga a la analgesia en el hombre (Maggi et al, J. Auton. Pharmacol. (1993) 13, 23-93). En particular, los antagonistas no peptídicos de los receptores NK-1 demostraron producir ese tipo de analgesia. Por ejemplo, el antagonista del receptor NK-1 RP 67,580 produjo analgesia con una potencia equiparable a la de la morfina (Garret et al, Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. (1993) 88, 10.208-10.212).

Los analgésicos opioides son una clase de analgésicos bien establecida con acciones similares a las de la morfina. Los analgésicos opioides sintéticos y semisintéticos son derivados de cinco clases químicas de compuestos: fenantrenos; fenilheptilaminas; fenilpiperidinas; morfinanos; y benzomorfanos. Farmacológicamente estos compuestos tienen actividades diferentes, por lo tanto algunos son agonistas fuertes en los receptores opioides (por ejemplo, la morfina); otros son agonistas moderados a leves (por ejemplo, la codeína); aún otros presentan la actividad mezclada de agonista-antagonista (por ejemplo, la nalbufina); y todavía otros son agonistas parciales (por ejemplo, la nalorfina). Aunque un opioide agonista parcial como la nalorfina, (el análogo N-alquilo de la morfina) antagonizará los efectos analgésicos de la morfina, cuando se lo administra solo puede ser un analgésico potente por derecho propio.

De todos los analgésicos opioides, la morfina sigue siendo el más usado, pero, además de sus propiedades terapéuticas, tiene algunos inconvenientes que incluyen depresión respiratoria, disminución de la motilidad gastrointestinal (que provoca estreñimiento), náuseas y vómitos. La tolerancia y la dependencia física también limitan los usos clínicos de los compuestos opioides.

La aspirina y otros compuestos de salicilato se usan con frecuencia en el tratamiento de interrupción de la amplificación del proceso inflamatorio en las enfermedades reumatoides y la artritis, y para el alivio momentáneo del dolor. Otros medicamentos utilizados con estos fines comprenden derivados del ácido fenilpropiónico como ibuprofeno y naproxeno, sulindac, fenilbutazona, corticoesteroides, antimaláricos como sulfato de cloroquina e hidroxicloroquina y fenamatos (J. Hosp. Pharm., 36: 622 (mayo de 1979)). Estos compuestos, sin embargo, son ineficaces para el dolor neuropático.

Los tratamientos disponibles para el dolor también tienen inconvenientes. Algunos agentes terapéuticos requieren un uso prolongado antes de que el paciente experimente algún efecto. Otros medicamentos existentes tienen efectos colaterales graves en ciertos pacientes, y los sujetos deben ser controlados cuidadosamente para asegurar que ningún efecto colateral sea excesivamente amenazante. La mayoría de los medicamentos existentes proporcionan sólo alivio temporal del dolor y deben tomarse sistemáticamente sobre una base diaria o semanal. A medida que la enfermedad avanza es común que la cantidad de medicación necesaria para aliviar el dolor aumente, aumentando de ese modo la posibilidad de producir efectos colaterales adversos.

Los receptores NMDA se definen por la unión del N-metil-D-aspartato (NMDA) y comprenden un complejo receptor/canal iónico con varios dominios de unión diferentes identificados. El NMDA en sí mismo es una molécula estructuralmente similar al glutamato (Glu) que se une al sitio de unión al glutamato y es sumamente selectivo y potente en la activación del receptor NDMA (Watkins (1987); Olney (1989)).

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Se conocen muchos compuestos que se unen al sitio de unión de NMDA/Glu (por ejemplo CPP, DCPP-ene, CGP 40116, CGP 37849, CGS 19755, NPC 12626, NPC 17742, D-AP5, D-AP7, CGP 39551, CGP-43487, MDL-100,452, LY-274614, LY-233536 y LY-233053). Otros compuestos, a los que se hace referencia como antagonistas NMDA no competitivos, se unen en otros sitios en el complejo receptor NDMA (son ejemplos fenciclidina, dizocilpina, ketamina, tiletamina, SNC 1102, dextrometorfano, memantina, ácido quinurénico, CNQX, DNQX; 6,7-DCQX, 6,7-DCHQC, R(+)-HA-966, ácido 7-cloro-quinurénico, 5,7-DCKA, ácido 5-yodo-7-cloro-quinurénico, MDL-28,469, MDL-100,748, MDL-29,951, L-689,560, L-687,414, ACPC, ACPCM, ACPCE, arcaína, dietilentriamina, 1,10-diaminodecano, 1,12-diaminododecano, ifenprodil y SL-82.0715). Estos compuestos han sido ampliamente examinados por Rogawski (1992) y Massieu et. al., (1993) y los artículos citados allí.

Además de su función fisiológica, el glutamato (Glu) puede ser neurotóxico. La neurotoxicidad del Glu se denomina "excitotoxicidad" porque la acción neurotóxica del Glu, al igual que sus acciones beneficiosas, es mediada por un proceso excitador (Olney (1990); Choi (1992)). Normalmente, cuando el Glu se libera en un receptor sináptico, sólo se une transitoriamente y después es rápidamente retirado del receptor por un proceso que lo transporta nuevamente al interior de la célula. En ciertas condiciones anormales, que incluyen un accidente cerebrovascular, epilepsia y traumatismo del SNC, la captación de Glu falla y se acumula Glu en el receptor produciendo una excitación persistente de la actividad electroquímica que conduce a la muerte de las neuronas que tienen receptores de Glu. Muchas neuronas del SNC tienen receptores de Glu, por lo tanto la excitotoxicidad puede causar un daño enorme en el SNC.

Una lesión por excitotoxicidad aguda puede ocurrir como resultado de episodios isquémicos, episodios hipóxicos, traumatismos en el cerebro o la médula espinal, ciertos tipos de intoxicación alimentaria relacionadas con un veneno excitotóxico como el ácido domoico, y la degeneración neuronal mediada por crisis convulsivas, que puede ser originada por actividad convulsiva epiléptica persistente (estado del mal epiléptico). Un gran número de pruebas han implicado al receptor NMDA como un subtipo de receptor a través del cual Glu media una cantidad considerable de lesiones del SNC, y está bien establecido que los antagonistas de NMDA son eficaces para proteger las neuronas del SNC contra la degeneración excitotóxica en esos síndromes de lesión aguda del SNC (Choi (1988); Olney (1990)).

Además del daño neuronal causado por las lesiones agudas, la activación excesiva de los receptores de Glu también puede contribuir a procesos neurodegenerativos más graduales que conducen a la muerte celular en diversas enfermedades neurodegenerativas crónicas, incluida la enfermedad de Alzheimer, la esclerosis lateral amiotrófica, la demencia por SIDA, la enfermedad de Parkinson y la enfermedad de Huntington (Olney (1990)). En general se considera que los antagonistas de NMDA pueden resultar útiles en el manejo terapéutico de dichas enfermedades crónicas.

En los años ochenta se descubrió que la PCP (también conocida como "polvo de ángel") actúa en un "sitio de reconocimiento de la PCP" dentro del canal iónico del receptor de Glu y NMDA. La PCP actúa como un antagonista no competitivo que bloquea el flujo de iones a través del canal iónico del NMDA. Más recientemente se ha vuelto evidente es probable que los medicamentos que actúan en el sitio de la PCP como los antagonistas no competitivos de NMDA tengan efectos colaterales psicoticomiméticos. Además, en la actualidad se reconoce que ciertos antagonistas competitivos y no competitivos de NMDA pueden causar efectos patomorfológicos similares en el cerebro de ratas (Olney et al., (1991); Hargreaves et. Al., (1993)). Dichos compuestos también tienen efectos psicoticomiméticos en los seres humanos (Kristensen et al., (1992); Herrling (1994); Grotta (1994)).

El sitio de unión de la glicina en el complejo receptor NDMA se puede distinguir de los sitios de unión de Glu y PCP. Además, recientemente se descubrió que los receptores NMDA se producen como varios subtipos que se caracterizan por las propiedades diferenciales del sitio de unión de glicina del receptor. Muchos compuestos que se unen al sitio de la glicina en el receptor NDMA, útiles para el tratamiento del accidente cerebrovascular y las afecciones neurodegenerativas, fueron descritos en las Patentes de los Estados Unidos 5,604,227; 5,733,910; 5,599,814; 5,593,133; 5,744,471; 5,837,705 y 6,103,721.

Resumen de la invención

En la actualidad se descubrió que ciertos compuestos que presentan la capacidad de unirse al sitio de la glicina en el receptor NDMA tienen utilidad en la mejoría del dolor y en particular en la mejoría del dolor neuropático. En un primer aspecto la presente invención proporciona compuestos con el diagrama estructural I

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o tautómeros o sales de éstos aceptables desde el punto de vista farmacéutico, útiles para el tratamiento del dolor, donde:

R^{1} es halo;

A se selecciona del grupo de compuestos de conformidad con los diagramas estructurales II, III, IV y V

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donde X se selecciona entre carbono, oxígeno y azufre.

Materializaciones particulares de la invención proporcionan compuestos de conformidad con los diagramas estructurales VI o VII

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donde R^{1} y X son como se los definió con anterioridad.

Materializaciones más particulares de la invención proporcionan compuestos de conformidad con los diagramas estructurales VIII o IX.

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Materializaciones todavía más particulares de la invención son compuestos seleccionados entre:

7-cloro-4-hidroxi-2-(2H,3H,4H-benzo[e]tian-4-il)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona;

7-cloro-4-hidroxi-2-(croman-4-il)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona;

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7-cloro-4-hidroxi-2-(4,5,6,7-tetrahidrobenzo[b]tiofen-4-il)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona, y

7-cloro-4-hidroxi-2-(1,2,3,4-tetrahidronaftil)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona.

En un segundo aspecto la invención proporciona el uso de cualquier compuesto de conformidad con el diagrama estructural para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del dolor que comprende la administración a un sujeto que está sufriendo dolor de una cantidad eficaz para mejorar el dolor de dicho compuesto. Una materialización particular de la invención proporciona el uso para el tratamiento del dolor neuropático.

Las materializaciones particulares del uso provisto aquí comprenden la administración de cantidades eficaces para mejorar el dolor de compuestos de conformidad con el diagrama estructural VI o VII como se definió con anteriori-
dad.

Otro aspecto de la invención es un método para elaborar compuestos de conformidad con el diagrama estructural I.

Todavía otros aspectos de la invención son preparaciones farmacéuticas que contienen un compuesto de conformidad con el diagrama estructural I; el uso de compuestos de conformidad con el diagrama estructural I para la elaboración de medicamentos y preparaciones farmacéuticas, y un método que comprende la unión de un compuesto de la invención al sitio de la glicina en el receptor NDMA de un animal de sangre caliente, como un ser humano, para inhibir beneficiosamente la actividad del receptor NDMA.

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Descripción detallada de la invención

Los compuestos de la invención son los comprendidos por el alcance de la descripción genérica y en particular los compuestos ejemplificados de aquí en adelante.

Las sales adecuadas aceptables desde el punto de vista farmacéutico de los compuestos de la invención incluyen las sales de adición de ácido como metansulfonato, fumarato, clorhidrato, bromhidrato, citrato, tris(hidroximetil)aminometano, maleato y sales formadas con ácido fosfórico y sulfúrico. En otras materializaciones, las sales adecuadas son sales básicas como sales de un metal alcalino por ejemplo sodio, las sales de metales alcalinotérreos por ejemplo calcio o magnesio, las sales de amina orgánica por ejemplo trietilamina, morfolina, N-metilpiperidina, N-etilpiperidina, procaína, dibencilamina, colina, N,N-dibenciletilamina o de aminoácidos como lisina.

Otro aspecto de la invención es un proceso para preparar compuestos de la invención, el cual comprende los pasos siguientes:

a) La preparación de una hidrazina protegida con Boc haciendo reaccionar un aldehído, de acuerdo con uno de los procedimientos que se muestra en el esquema siguiente:

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b) el acoplamiento de dicha hidrazina protegida con Boc y la fomación de un ciclo con el producto de acuerdo con el proceso del esquema siguiente para formar un compuesto de conformidad con el diagrama estructural I:

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donde:

CMC es meto-p-toluensulfonato de 1-ciclohexil-3-(2-morfolinoetil)carbodiimida; el grupo "R/H/D" es la porción A del diagrama estructural I;

y en todo el proceso precedente:

R^{1} es como se definió para el diagrama estructural I.

Para usar un compuesto de la invención o una sal de éste aceptable desde el punto de vista farmacéutico para el tratamiento terapéutico, que puede incluir el tratamiento profiláctico, del dolor en los mamíferos, que pueden ser seres humanos, el compuesto se puede formular de conformidad con la práctica farmacéutica corriente como una preparación farmacéutica.

Las preparaciones farmacéuticas adecuadas que contienen un compuesto de la invención se pueden administrar por las vías convencionales, por ejemplo por administración oral, tópica, parenteral, bucal, nasal, vaginal o rectal o por inhalación. Para estos propósitos un compuesto de la invención se puede formular por los medios conocidos en el área en forma de, por ejemplo, comprimidos, cápsulas, soluciones acuosas u oleosas, suspensiones, emulsiones, cremas, ungüentos, geles, aerosoles nasales, supositorios, polvos finamente divididos o aerosoles para inhalación, y para uso parenteral (que incluye administración intravenosa, intramuscular o por infusión) soluciones o suspensiones acuosas u oleosas estériles o emulsiones estériles. Una vía de administración preferida es la vía oral mediante comprimido o cápsula.

Además de un compuesto de la presente invención una preparación farmacéutica de esta invención también puede contener uno o más principios farmacológicamente activos, o dicha preparación farmacéutica se puede coadministrar simultáneamente o secuencialmente con uno o más principios farmacológicamente activos.

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Las preparaciones farmacéuticas de esta invención normalmente se administrarán de forma que el sujeto reciba diariamente una dosis eficaz para mejorar el dolor. La dosis diaria se puede administrar en dosis divididas según sea necesario, la cantidad precisa del compuesto recibido y la vía de administración dependen del peso, la edad y el sexo del paciente que está siendo tratado y del estado de la enfermedad particular que está siendo tratada de acuerdo con los principios conocidos en el área. Un régimen de dosificación preferido es de una vez al día.

Otra materialización de la invención proporciona una preparación farmacéutica que contiene un compuesto con el diagrama estructural I según se definió aquí o una sal de éste aceptable desde el punto de vista farmacéutico, en asociación con un aditivo aceptable desde el punto de vista farmacéutico como un excipiente o vehículo.

Aún otra materialización de la invención proporciona el uso de un compuesto con el diagrama estructural I, o una sal de éste aceptable desde el punto de vista farmacéutico, en la fabricación de un medicamento útil para unirse al sitio de la glicina en el receptor NMDA en un animal de sangre caliente como un ser humano.

Todavía otra materialización de la invención proporciona el uso de un compuesto de la invención para la fabricación de un medicamento que incluye la unión de éste al sitio de la glicina en el receptor NMDA de un animal de sangre caliente, como un ser humano, que necesite tratamiento para el dolor, donde el uso comprende la administración a dicho animal de una cantidad eficaz de un compuesto con el diagrama estructural I o de una sal de éste aceptable desde el punto de vista farmacéutico.

Definiciones

En general en los métodos, los procesos y los ejemplos descritos aquí:

las concentraciones se llevaron a cabo mediante rotaevaporación al vacío;

las operaciones se llevaron a cabo a temperatura ambiente, que es en el rango de 18 a 26°C y bajo atmósfera de nitrógeno;

la cromatografía en columna (por el procedimiento instantáneo) se realizó sobre sílice Kieselgel de Merck (Art. 9385) a menos que se indique otra cosa;

los rendimientos se presentan únicamente con fines ilustrativos y no son necesariamente el máximo alcanzable;

la estructura de los productos finales de fórmula I fueron generalmente confirmados por técnicas de RMN y de espectrometría de masa, los espectros de resonancia magnética de protón se determinaron en DMSO-d_{6} a menos que se indique lo contrario usando un espectrómetro Varian Gemini 2000 operando a una intensidad del campo de 300 MHz; los desplazamientos químicos se informan en partes por millón en comparación con el tetrametilsilano como patrón de referencia interno (escala \delta) y las multiplicidades de señales se muestran de este modo: s, singulete; bs, singulete ancho; d, doblete; AB o dd, doblete de dobletes; t, triplete, dt, doblete de tripletes, m, multiplete; bm, multiplete ancho; los datos espectrales de masa del bombardeo atómico rápido (FAB) se obtuvieron utilizando un espectrómetro Platform (provisto por Micromass) utilizado en el modo de electronebulización y, cuando fue apropiado, se obtuvieron datos de ion positivo o de ion negativo, en esta aplicación, se estima (M+H)^{+};

en general los productos intermedios no se caracterizaron completamente y la pureza se evaluó en general por análisis de RMN o espectrometría de masa (MS).

Las abreviaturas y definiciones siguientes cuando se usan, tienen los significados siguientes:

CDCl_{3} es cloroformo deuterado;

CMC es meto-p-toluensulfonato de 1-ciclohexil-3-(2-morfolinoetil)carbodiimida;

DCM es diclorometano;

DCU es diciclohexilurea;

DHC es 1,3-diciclohexilcarbodiimida;

DMAP es 4-(dimetilamino)piridina;

DMF is N,N-dimetilformamida;

DMSO es dimetilsulfóxido;

m/s es espectroscopía de masa;

NMP es N-metilpirrolidinona;

RMN es resonancia magnética nuclear;

p.o. es per os (por vía oral);

THF es tetrahidrofurano, y

t.i.d. es tres veces al día.

Los ejemplos y las pruebas descritos aquí pretenden ilustrar pero no limitar la invención.

Ejemplos Ejemplo 1 (+/-)-7-Cloro-4-hidroxi-2-(2H,3H,4H-benzo[e]tian-4-il)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona N-(2H,3H-benzo[e]tian-4-ilidenazametil)(terc-butoxi)carboxamida

A una solución en agitación de 2H,3H-benzo[e]tian-4-ona (5,01 g, 30,5 mmol) en THF (200 mL) se le agregó carbazato de terc-butilo (6,12 g, 46,3 mmol) y 5 gotas de ácido clorhídrico concentrado. La solución resultante de color amarillo oscuro se agitó a temperatura ambiente durante 22 h y después se concentró al vacío para proporcionar un sólido beige (10,55 g). Este sólido se sometió a una destilación de Kugelrohr (75°C, 10 - 20 millitorr) con lo cual el carbazato de terc-butilo sin reaccionar se sublimó del producto. El residuo en el alambique de destilación proporcionó el compuesto del título como un sólido beige (7,19 g, 85%). ^{1}H NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}); \delta 2,90 (t, 2H, J = 6,0 Hz); 3,00 (t, 2H, J = 6 Hz); 7,11-7,22 (m, 3H); 8,01 (d, 1H, J = 7,8 Hz); 9,85 (s, 1H). MS(Cl) m/z 279.

(+/-)-N-(2H,3H-benzo[e]tian-4-ilamino)(terc-butoxi)carboxamida

A una solución en agitación de N-(2H,3H-benzo[e]tian-4-ilidenazametil)(terc-butoxi)carboxamida (6,33 g, 22,7 mmol) y cianoborohidruro de sodio en metanol (500 mL) se agregó ácido acético glacial hasta que el pH de la solución fue 3. La solución resultante se agitó y se calentó a reflujo durante 6 h y después se dejó en reposo a temperatura ambiente durante toda la noche. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo oleoso se suspendió en solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. El pH de la suspensión resultante se ajustó a 9 - 10 con hidróxido de sodio y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (5 x 125 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron para dejar un aceite denso transparente que se purificó por cromatografía instantánea (CH_{2}Cl_{2}:MeOH gradiente 100:0 a 90:10) sobre gel de sílice. El compuesto del título se aisló como un aceite transparente (5,69 g, 89%). MS (Cl) m/z 281.

7-Cloro-4-hidroxiquinolin-2,3-dicarboxilato de dimetilo

Una mezcla en agitación de 2-amino-4-clorobenzoato de metilo (2,50 g, 13,5 mmol) y acetilendicarboxilato de dimetilo (2,05 g, 14,4 mmol) en terc-butanol (22 ml) se calentó a reflujo durante 7 horas bajo atmósfera de nitrógeno. Después de agregar más acetilendicarboxilato de dimetilo (1,16 g, 8,13 mmol) y calentar a reflujo otras 2,5 horas, la mezcla de reacción se dejó enfriar hasta temperatura ambiente y se agregó terc-butóxido de potasio (1,56 g, 13,9 mmol) en una porción. Se formó un precipitado y la mezcla resultante se calentó a reflujo durante 1,5 horas. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se filtró para separar los sólidos, que se lavaron con terc-butanol y éter dietílico. Los sólidos se disolvieron en agua y se acidificaron con ácido sulfúrico 1 N para formar un precipitado. La mezcla resultante se extrajo con DCM y los extractos combinados se lavaron con solución saturada de cloruro de sodio y agua, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron para producir un sólido verde. La recristalización de este material de metanol proporcionó el compuesto del título (1,15 g, 47%) como un sólido color hueso, pf 232 - 233°C; MS (Cl): 296 (M+H). Análisis para C_{13}H_{10}ClNO_{5}: Calculado: C; 52,81; H; 3,41; N; 4,74 Encontrado: C, 52,75; H, 3,47; N, 4,69.

Ácido 3-carbometoxi-7-cloro-4-hidroxiquinolin-2-carboxílico

A una suspensión en agitación de 7-cloro-4-hidroxiquinolin-2,3-dicarboxilato de dimetilo (1,0 g, 3,38 mmol) en agua (20 mL) se le agregó una solución acuosa de hidróxido de sodio (0,27 g, 6,75 mmol). Una vez agregada, la suspensión se disolvió. La mezcla de reacción se calentó hasta 60°C durante 1 hora. Después de este tiempo la reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se acidificó con ácido clorhídrico concentrado. Después el producto se extrajo en éter dietílico y acetato de etilo. Los extractos orgánicos se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y concentraron al vacío para proporcionar el compuesto del título como un sólido (900 mg). Este material se purificó por recristalización empleando un sistema cosolvente de acetato de etilo/hexano para proporcionar el compuesto del título (571 mg, 60%) como un sólido color blanco pf 296°C (dec); MS (Cl) = 238 (M+H). Análisis para C_{12}H_{8}NO_{5}Cl \cdot 0,45 CH_{3}CO_{2}CH_{2}CH_{3}\cdot0,10 H_{2}O: Calculado: C, 51,30; H, 3,68; N, 4,34, Encontrado: C, 51,28; H, 3,62; N, 3,97 ^{1}H NMR 8,22 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,28 (dd, J = 8,7, 1.8 Hz, 1H), 3,90 (s, 3H).

3-carbometoxi-2-pirrolidincarbamida-7-cloro-4-hidroxiquinolina

A una suspensión de ácido 3-carbometoxi-7-cloro-4-hidroxiquinolin-2-carboxílico (2,25 g, 8,0 mmol) en THF (20 mL) a temperatura ambiente bajo atmósfera de N_{2} se le agregó DHC (1,65 g, 8,0 mmol) y pirrolidina (0,596 g, 8,4 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas después de ese tiempo el subproducto urea se separó mediante filtración. El producto deseado se purificó mediante cromatografía instantánea en columna empleando metanol al 5% en cloroformo para proporcionar el compuesto del título (2,52 g, 94,3%) como un sólido de color habano, pf = 215°C; MS (Cl): 335 (M+H). 300 MHz ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 8,12 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,60 (d, 1H, J =1,8 Hz), 7,47 (dd, 1H, J = 8,8, 2,0 Hz), 3,69 (s, 3H), 3,40-3,49 (m, 2H), 3,27-3,33 (m, 2H), 1,80-1,96 (m, 4H).

Ácido 7-cloro-4-oxo-2-(pirrolidinilcarbonil)-hidroquinolin-3-carboxílico

A una suspensión de 3-carbometoxi-2-pirrolidincarbamida-7-cloro-4-hidroxiquinolina (2,52 g, 7,5 mmol) en agua desionizada (40 ml) se le agregó gota a gota una solución acuosa (20 ml) de hidróxido de potasio (882 mg, 15,75 mmol). Una vez completado el agregado, la reacción se calentó hasta 60°C. Después de 3 horas, la reacción se filtró para eliminar una cantidad pequeña de material insoluble. Después el filtrado se acidificó hasta pH = 1 lo que produjo un precipitado blanco. El sólido se aisló por filtración al vacío, se lavó con agua y se secó a 30°C al vacío durante 16 horas. Esto proporcionó el compuesto del título (1,5 g, 64%) como un sólido blanco, pf = 225-8°C; MS (Cl): 321 (M+H). 300 MHz ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 8,28 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,64 (d, 1H, J = 8,7), 3,52-3,57 (m, 2H), 3,17-3,19 (m, 2H), 1,83-1,98 (m, 4H).

(+/-)-N-{N-(2H,3H,4H-benzo[e]tian-4-il)[7-cloro-4-oxo-2-(pirrolidinilcarbonil)(3-hidroquinolil)]carbonilami-no}-(terc-butoxi)carboxamida

A una suspensión en agitación de ácido 7 cloro-4-oxo-2-(pirrolidinilcarbonil)hidroquinolin-3-carboxílico (6,85 g, 21,4 mmol) y CMC (19,24 g, 45,42 mmol) en THF (100 mL) se le agregó una solución en THF (100 mL) de (+/-)-N-(2H,3H-benzo[e]tian-4-ilamino)(terc-butoxi)carboxamida (5,69 g, 20,3 mmol) seguida de DMAP (\sim5 mg). La mezcla de reacción resultante de color amarillo brillante se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche, se calentó a reflujo durante 2,5 h, se enfrió y se filtró. Los sólidos recogidos se lavaron con THF y el filtrado y los lavados mencionados antes se combinaron y se concentraron al vacío para proporcionar una espuma amarilla (15,36 g). Este material se purificó parcialmente por cromatografía instantánea en columna (CH_{2}Cl_{2}:MeOH, 95:5) sobre gel de sílice para proporcionar 10,22 g de un sólido amarillo pálido. La purificación final se llevó a cabo agitando el sólido en una mezcla de DCM/metanol (aproximadamente 90: 10) y recogiendo el sólido blanco sin disolver que era el compuesto del título (5,15 g, 44%). MS (Cl) m/z 583/585.

(+/-)-7-cloro-4-hidroxi-2-(2H,3H,4H-benzo[e]tian-4-il)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona

A una solución en agitación de (+/-)-N-{N-(2H,3H,4H-benzo[e]tian-4-il)[7-cloro-4-oxo-2-(pirrolidinilcarbonil)(3-hidroquinolil)]carbonilamino}-(terc-butoxi)carboxamida (5,15 g, 8,83 mmol) en THF (350 mL) se le agregó ácido metansulfónico (29 mL, 42,9 g, 0,447 mol). Se produjo una reacción ligeramente exotérmica y la solución amarillo brillante resultante se agitó a temperatura ambiente y después se calentó a reflujo durante 5,5 h. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, se vertió en agua (3L) y se agitó durante toda la noche. El precipitado que se formó se recogió mediante filtración, se suspendió en metanol (20 mL), se sonicó y se filtró para separar un sólido amarillo (2,69 g). Este material se suspendió nuevamente en metanol (20 mL), se sonicó y se filtró para separar un sólido amarillo que se secó al vacío para proporcionar el compuesto del título, pf >300°C (2,42 g, 66%). ^{1}H NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 2,34 (m, 1H), 2,42 (m, 1H), 3,19 (m, 1H), 3,30 (m, 1H), 6,24 (dd, 1H, J = 5,1, 14,4 Hz), 6,84 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 7,00 (m, 1H), 7,11 (m, 1H), 7,44 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 8,03 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 8,17 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 11,94 (s, 1H, intercambiable), 12,56 (s, 1H, intercambiable). Calculado para C_{20}H_{14}ClN_{3}O_{3}S \cdot 0,35 H_{2}O: C; 57,45; H; 3,54; N; 10,05 Encontrado: C, 57,02; H, 3,37; N, 10,46.

Ejemplo 2 (+/-)-7-cloro-4-hidroxi-2-(croman-4-il)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona

El compuesto del título se preparó por el método descrito en el Ejemplo 1 a partir de 4-cromanona. Rendimiento 63%; pf >300°C; MS (Cl) m/z 396/398; ^{1}H NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 2,17 (m, 1H), 2,36 (m, 1H), 4,31 (t, 1H, J = 9,6 Hz), 4,44 (m, 1H), 6,34 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 6,83 (m, 3H), 7,12 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 7,44 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,02 (s, 1H), 8,17 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 11,93 (s, 1H, intercambiable), 12,57 (s, 1H, intercambiable); Calculado para C_{20}H_{14}ClN_{3}O_{4} \cdot 0,15 H_{2}O C, 60,28; H, 3,62; N, 10,51 Encontrado: C, 60,10; H, 3,58; N, 10,86.

\newpage

Ejemplo 3 (+/-)-7-Cloro-4-hidroxi-2-(4,5,6,7-tetrahidrobenzo[b]tien-4-il)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona

El compuesto del título se preparó por el método descrito en el Ejemplo 1 a partir de 4-ceto-4,5,6,7-tetrahidrotianafteno. Rendimiento 20% ; pf >300°C; MS (Cl) m/z 400/402; ^{1}H NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 2,01 (m, 3H), 2,15 (m, 1H), 2,81 (m, 1H), 6,14 (m, 1H), 6,58 (d, 1H, J = 5.1 Hz), 7,22 (d, 1H, J = 5,1 Hz), 7,43 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 8,02 (d, 1H, J = 1,5 Hz), 11,90 (s, 1H, intercambiable), 12,52 (s, 1H, intercambiable); Calculado para C_{19}H_{14}ClSN_{3}O_{3} \cdot 0,5 H_{2}O C, 55,82; H, 3,73; N, 10,23 Encontrado: C; 55,83; H; 3,86; N; 10,18.

Ejemplo 4 (+/-)-7-cloro-4-hidroxi-2-(1,2,3,4-tetrahidronaft-1-il)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona

El compuesto del título se preparó por el método descrito en el Ejemplo 1 a partir de \alpha-tetralona. Rendimiento 83%; pf >300°C; MS (Cl) m/z 394/396; ^{1}H NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 1,90 (m, 1H), 2,07 (m, 3H), 2,81 (m, 2H), 6,25 (t, 1H, J = 7,7 Hz), 6,81 (d, 1H, J = 7,5Hz), 7,11 (m, 3H), 7,44 (dd, 1H, J = 1,8, 9,6 Hz), 8,03 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 8,17 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 11,91 (br s, 1H, intercambiable), 12,50 (s, 1H, intercambiable); Calculado para C_{21}H_{16}ClN_{3}O_{3} \cdot 0,7 H_{2}O C, 62,06; H, 4,32; N, 10,34 Encontrado: C, 61.92; H, 4.21; N, 10.52

Pruebas de función biológica

Prueba A

Inhibición de la unión de [^{3}H]-MDL105,519

La unión de los compuestos al sitio de la glicina en el receptor NMDA se puede evaluar midiendo la capacidad de los compuestos de prueba para inhibir la unión de MDL105,519 tritiado a las membranas cerebrales portadoras del receptor.

Membranas de cerebro de ratas: Las membranas de cerebro de ratas usadas en los experimentos se obtuvieron de Analytical Biological Services Inc., y fueron preparados sustancialmente de conformidad con el método de B.M. Baron et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 250, 162 (1989). Brevemente, el tejido cerebral fresco incluidos la corteza cerebral y el hipocampo de ratas macho de Sprague Dawley se homogeneizó en sacarosa 0,32 M y se centrifugó a baja velocidad para separar las membranas celulares de otros componentes celulares. Después las membranas se lavaron 3 veces usando agua desionizada, seguido del tratamiento con 0,04% de Triton X-100. Finalmente, las membranas se lavaron seis veces en tampón de citrato de Tris 50 mM, pH 7,4 y se congelaron a -80°C hasta que se las usó.

[^{3}H]MDL105,519 (72 Ci/mmol) se adquirió a Amersham. El MDL 105,519 frío se adquirió a Sigma/RBI. Los ensayos de unión se realizaron sustancialmente de conformidad con el protocolo de B.M. Baron et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 279, 62 (1996), como sigue. El día del experimento, se descongelaron las membranas cerebrales a temperatura ambiente y se suspendieron en tampón de acetato de Tris 50 mM, pH 7.4 ("TAB"). Se usaron setenta y cinco microgramos por mililitro de proteína (usando el colorante BioRad) de competencia para la unión. Los experimentos se llevaron a cabo usando placas de 96 pocillos. Las membranas se incubaron con 20 \muL de compuestos de diversas concentraciones y [^{3}H]MDL105,519 1,2 nM durante 30 minutos a temperatura ambiente en un volumen total de 250 \muL. No se determinó ninguna unión específica usando 100 \muM de MDL105.519 sin marcar. El MDL105.519 sin marcar y los compuestos se disolvieron como soluciones de reserva 12,5 mM en DMSO. La concentración final de DMSO en cada pocillo se mantuvo por debajo de 1% , se encontró que dicha concentración no alteraba los resultados de la unión. Después de la incubación, el [^{3}H]MDL105.519 sin unir se separó mediante filtración en placas Unifilter GF/B usando un equipo colector Packard. Los filtros se lavaron cuatro veces con TAB enfriado con hielo (total de 1,2 mL de tampón). Las placas se secaron durante toda la noche y la radiactividad unida se midió en un contador Packard TopCount después del agregado de 45 \muL por pocillo de MICROSCINT O.

Membranas de cerebro humano: Se obtuvieron membranas de cerebro humano de Analytical Biological Services Inc., y los ensayos se realizaron según se describe para las membranas de ratas.

Análisis de datos: Los datos se analizaron usando una hoja de cálculo de Excel de Microsoft y el software de GraphPad Prizm y la potencia de los compuestos se expresa como Ki (nM).

Prueba B

Prueba de formalina

La prueba de formalina es un ensayo que evalúa la capacidad de un compuesto para inhibir los comportamientos nociceptivos inducidos por formalina en ratas (D. Dubuisson, et al., Pain 4, 161-174 (1977); H. Wheeler-Aceto et al., Psychopharmacology 104, 35-44 (1991); T.J. Coderre, et al., Pain 54, 43-50 (1993)). En la prueba, se observan dos fases diferentes de los comportamientos inducidos por formalina. Una primera fase de la respuesta, causada por nocicepción aguda por el producto químico nocivo (formalina) inyectado en la pata, ocurre entre cero y cinco minutos. Sigue un período de inactividad de 5 a 15 min post inyección. Después del período de inactividad se produce una segunda fase de la respuesta, causada por sensibilización de las neuronas centrales en el cuerno dorsal, después de 15 minutos y dura hasta 60 minutos. La sensibilización de las neuronas centrales en la columna vertebral aumenta un aporte aferente nocivo y causa que una descarga más fuerte de dolor se transmita al cerebro. Por consiguiente, la inhibición de la segunda fase de la respuesta indica un mecanismo central de la acción del medicamento.

El procedimiento para la prueba de formalina se puede realizar del modo siguiente: las ratas machos se colocan en una cámara de plexiglás y se observan durante 30 a 45 min para observar su actividad inicial. Los animales o bien se tratan previamente con vehículo o bien con dosis diferentes de un compuesto de prueba y se les administra vehículo o el compuesto de prueba tres horas antes de la inyección de 0,05 mL de formalina al 1% estéril bajo la piel dorsal de una pata trasera. La cantidad de estremecimientos de la pata (respuestas) durante la primera fase (0 a 5 min.) y la segunda fase (20 a 35 min.) se puntúa y registra. La respuesta de estremecimiento se puede comparar con la puntuación media de un grupo testigo con solución saturada de cloruro de sodio y calcular como inhibición porcentual. La ED_{50} es la dosis de compuesto que produce una inhibición del 50% en la respuesta nociceptiva en la primera o segunda fase de la respuesta.

El % de inhibición de la respuesta nociceptiva puede calcularse como

100 x \frac{(n^{o} \ de \ respuestas \ en \ gpo \ veh\text{í}culo - n^{o} \ de \ respuestas \ en \ gpo \ compuesto)}{(número \ de \ respuestas \ en \ el \ grupo \ del \ veh\text{í}culo)}

La prueba t de Student se puede usar para el análisis estadístico para determinar la significación de los efectos del compuesto.

Prueba C

El modelo de dolor neuropático (lesión por constricción crónica)

Las propiedades anti-hiperalgésicas de un compuesto se pueden probar con el modelo de lesión por constricción crónica ("CCI"). La prueba es un modelo para el dolor neuropático asociado con lesiones nerviosas que pueden surgir directamente de traumatismo y compresión, o indirectamente de una amplia gama de enfermedades como infección, cáncer, afecciones metabólicas, toxinas, deficiencias nutricionales, disfunción inmunológica y cambios osteomusculares. En el modelo se produce una hiperalgesia periférica unilateral en ratas por ligadura de un nervio (G.J. Bennett, et al., Pain 33, 87-107 (1988)).

En el procedimiento, las ratas Sprague-Dawley (250 a 350 g) se anestesian con pentobarbital sódico y el nervio ciático común se expone a nivel de la mitad del muslo mediante disección roma a través del bíceps crural. Una sección del nervio (cerca de 7 mm), proximal a la trifurcación ciática, se libera del tejido y se liga en cuatro posiciones con hilo de sutura crómico. La sutura se ata con aproximadamente 1 mm de espacio entre ligaduras. La incisión se cierra en capas y se permite que los animales se recuperen. La hiperalgesia térmica se mide usando una prueba de retirada de la pata (K. Hargreaves, et al., Pain 32, 77-88 (1988)). Para realizar la prueba, los animales se habitúan en un piso de vidrio elevado. Una fuente de calor radiante se apunta hacia plantar medio de la pata trasera (territorio del nervio ciático) a través del piso de vidrio con un valor de corte de 20 segundos usado para prevenir la lesión a la piel. Se registran las latencias para el reflejo de retiro en ambas patas traseras.

Las patas lesionadas con nervios ligados muestran latencias de retiro de la pata más cortas en comparación con las patas sin lesionar o las patas falsamente operadas. Las respuestas a los compuestos de prueba se evalúan en diferentes momentos después de la administración oral para determinar el inicio y la duración del efecto del compuesto. Cuando se realiza la prueba, los grupos de ratas CCI reciben o bien vehículo o el compuesto de prueba por vía oral tres veces al día durante 5 días. Las latencias de retiro de la pata se miden cada día 10 min antes y 2 ó 3 h después de la primera dosis diaria. La eficacia del compuesto se expresa como la disminución porcentual media de la hiperalgesia en comparación con la de animales tratados con vehículo, calculada del modo siguiente:

\frac{(Media \ del \ grupo \ del \ veh\text{í}culo - media \ del \ grupo \ del \ compuesto)}{(Media \ del \ grupo \ del \ veh\text{í}culo)} \ x 100

El análisis de datos se realizó por la prueba de comparaciones múltiples de medias (la prueba de Dunnett) y los resultados se expresan y las potencias de los compuestos se expresan como MED (dosis eficaz mínima), en mg/kg/día, que producen una disminución porcentual (%) en la hiperalgesia que es estadísticamente significativa.

La tabla 1 muestra los resultados de las Pruebas A y C para ciertos compuestos de la invención. Donde no se proporcionan datos en la tabla, no se realizó la prueba.

TABLA 1

	Prueba A Ki (nM)	Prueba C MED (% de inh.)
Ej. 1:	411	30 (56%)
Ej. 2:	557
Ej. 3:	514
Ej. 4:	725

Claims (9)

1. Cualquier compuesto de conformidad con el diagrama estructural I,

7

o un tautómero de éste donde:

R^{1} es halo;

A se selecciona de los grupos de conformidad con los diagramas estructurales II, III, IV y V

8

donde X se selecciona entre carbono, oxígeno y azufre y sales de éstos aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, de conformidad con los diagramas estructurales VI o VII

9

3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2, de conformidad con los diagramas estructurales VIII o IX:

10

4. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 3, seleccionado entre:

7-cloro-4-hidroxi-2-(2H,3H,4H-benzo[e]tian-4-il)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona;

7-cloro-4-hidroxi-2-(croman-4-il)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona;

7-cloro-4-hidroxi-2-(4,5,6,7-tetrahidrobenzo[b]tiofen-4-il)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona, y

7-cloro-4-hidroxi-2-(1,2,3,4-tetrahidronaftil)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona.

5. El uso de cualquier compuesto de conformidad con el diagrama estructural I,

11

o un tautómero o una sal de éstos aceptable desde el punto de vista farmacéutico donde:

R^{1} es halo;

A se selecciona de grupos de conformidad con los diagramas estructurales II, III, IV y V

12

donde X se selecciona entre carbono, oxígeno y azufre para la fabricación de un medicamento para tratar a un sujeto que sufre de dolor que comprende la administración de una cantidad eficaz para mejorar el dolor de éstos.

6. El uso de acuerdo con la reivindicación 5, que comprende la administración de cualquier compuesto de conformidad con los diagramas estructurales VI o VII

13

\newpage

7. El uso de acuerdo con la reivindicación 6, que comprende la administración de cualquier compuesto de conformidad con los diagramas estructurales VIII o IX:

14

8. El uso de acuerdo con la reivindicación 7, que comprende la administración de un compuesto seleccionado entre:

7-cloro-4-hidroxi-2-(2H,3H,4H-benzo[e]tian-4-il)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona;

7-cloro-4-hidroxi-2-(croman-4-il)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona;

7-cloro-4-hidroxi-2-(4,5,6,7-tetrahidrobenzo[b]tiofen-4-il)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona, y

7-cloro-4-hidroxi-2-(1,2,3,4-tetrahidronaftil)-1,2,5,10-tetrahidropiridazino[4,5-b]quinolin-1,10-diona.

9. Una preparación farmacéutica que comprende una cantidad eficaz para mejorar el dolor de un compuesto de conformidad con el diagrama estructural I

15

o un tautómero o una sal de éste aceptable desde el punto de vista farmacéutico donde:

R^{1} es halo;

A se selecciona de grupos de conformidad con los diagramas estructurales II, III, IV y V

16

donde X se selecciona entre carbono, oxígeno y azufre,

junto con un excipiente o diluyente aceptables desde el punto de vista farmacéutico.