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EP3673035B1 - Verbesserte pflegeeigenschaften von polyester textilien ii - Google Patents

Verbesserte pflegeeigenschaften von polyester textilien ii

Info

Publication number
EP3673035B1
EP3673035B1 EP18758569.0A EP18758569A EP3673035B1 EP 3673035 B1 EP3673035 B1 EP 3673035B1 EP 18758569 A EP18758569 A EP 18758569A EP 3673035 B1 EP3673035 B1 EP 3673035B1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
cutinase
agent
amino acid
textiles
detergent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
EP18758569.0A
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
EP3673035A1 (de
Inventor
Nina Mussmann
Susanne Wieland
Daniela HERBST
Margret VAN LIER
Ines Baranski
Alexander Schulz
Boray TORUN
Christina SCHÖNDELING
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Henkel AG and Co KGaA
Original Assignee
Henkel AG and Co KGaA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henkel AG and Co KGaA filed Critical Henkel AG and Co KGaA
Publication of EP3673035A1 publication Critical patent/EP3673035A1/de
Application granted granted Critical
Publication of EP3673035B1 publication Critical patent/EP3673035B1/de
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C11D3/38636—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase containing enzymes other than protease, amylase, lipase, cellulase, oxidase or reductase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D2111/00—Cleaning compositions characterised by the objects to be cleaned; Cleaning compositions characterised by non-standard cleaning or washing processes
    • C11D2111/10—Objects to be cleaned
    • C11D2111/12—Soft surfaces, e.g. textile

Definitions

  • the present invention lies in the field of enzyme technology, in particular the anti-pilling effect of enzymes, such as those used, for example, in washing or cleaning agents.
  • the invention relates to an agent, in particular a washing or cleaning agent, which contains a cutinase as defined herein.
  • the present invention relates to a method for cleaning textiles and the use of the agent according to the invention for removing soiling.
  • the invention is directed to the use of a cutinase for reducing pilling and graying in an agent, preferably a washing or cleaning agent.
  • Pilling is the formation of small balls or fuzz in fabrics. These small balls of fuzz occur particularly in short-fiber fabrics. Long-fiber and twisted fibers, on the other hand, pill less. Generally, these balls are caused by loose fibers in the fabric or fibers that have detached from the weave. Synthetic fibers, due to their smooth surface, are more prone to pilling than natural fibers because synthetic fibers can be released from the fabric more quickly than rough natural fibers. In wool fabrics, these fibers "felt” primarily due to mechanical friction, forming balls on the surface.
  • Pilling occurs particularly in areas subject to high mechanical stress, usually the shoulder and waistband areas. Due to the continuous thinning of the fabric, these stressed areas are particularly at risk of developing holes or even tearing. This unwanted pilling results in affected textiles being rejected and thrown away by consumers faster than would be necessary based on the functionality of the textile.
  • the cutinase used here shows rapid PET degradation at 50°C. It was found that the enzyme prevents pilling on new polyester textiles and, in combination with a cellulase, supports this effect on polyester/cotton blend textiles. Furthermore, it can reduce pills that have already formed, i.e., it can cause a so-called "renew" effect. Furthermore, the cutinase prevents the graying of white laundry and the fading/graying of colored laundry. Furthermore, the cutinase exhibits direct cleaning performance for stains on PET textiles. It was further found that all of these positive washing properties are achieved without significant damage to the fiber. Because the textiles look newer for longer, they are worn longer and replaced less frequently. This leads to a reduction in the CO2 footprint, as less polyester is used.
  • WO2015135757 discloses detergents containing PET esterases ⁇ 65% according to SEQ ID NO:1, which are suitable for reducing pilling in polyester-containing textiles. Therefore, the present invention is directed to a detergent or cleaning agent characterized in that it contains a cutinase that has at least 65% sequence identity with the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length.
  • the present invention is directed to methods for cleaning textiles, characterized in that in at least one method step a The agent according to the invention is used.
  • the textiles are preferably polyester-containing textiles or are made of polyester.
  • the present invention is further directed to the use of a washing or cleaning agent as described herein, particularly preferably a liquid washing agent, for removing soiling.
  • a further aspect of the invention includes the use of the cutinase described herein for reducing pilling effects and/or increasing the anti-grey effect of a washing or cleaning agent, particularly preferably a liquid washing agent, wherein the agent contains the cutinase.
  • Cutinase (EC 3.1.1.74), also known as cutin hydrolase, is an enzyme belonging to the ⁇ / ⁇ -hydrolases family and hydrolyzes cutin. Cutinase is produced by some plant-pathogenic fungi and bacteria, among others (cutinase enables fungi to degrade the ester bond of cutin in the plant cuticle and thus penetrate the plant).
  • the cutinase is a cutinase which has at least 70% sequence identity with the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length.
  • the cutinase contained in the agent according to the invention comprises the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 or consists essentially thereof or consists thereof.
  • the invention also encompasses cutinases derived from the amino acid sequence according to SEQ ID NO:1, for example by means of mutagenesis.
  • the invention also encompasses cutinases obtainable by expressing the nucleotide sequence according to SEQ ID NO:3.
  • the invention also comprises the nucleotide sequence according to SEQ ID NO:3 and nucleotide sequences which are at least 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5%, 98.8%, 99.0%, 99.2%, 99.4% or 99.6% identical to the nucleotide sequence given in SEQ ID NO:3 over its entire length. provided that the native sequence encoding LC cutinase is excluded.
  • the cutinase comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length to at least 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5%, 98.8%, 99.0%, 99.2%, 99.4% or 99.6% is identical or consists of such a sequence.
  • the agents according to the invention preferably contain the cutinase in an amount of 0.00001 - 1 wt.%, more preferably in an amount of 0.0001 - 0.5 wt.%, particularly preferably in an amount of 0.001 - 0.1 wt.%, in each case based on the active protein.
  • sequence comparison is based on the state-of-the-art and commonly used BLAST algorithm (see, for example, Altschul, SF, Gish, W., Miller, W., Myers, EW & Lipman, DJ (1990) "Basic local alignment search tool.” J Mol Biol 215:403-410 , and Altschul, Stephan F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Hheng Zhang, Webb Miller, and David J.
  • Lipman (1997): "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs"; Nucleic Acids Res., 25, pp.3389-3402 ) and is basically done by matching similar sequences of nucleotides or amino acids in the nucleic acid or amino acid sequences. A tabular assignment of the relevant positions is called an alignment.
  • Another algorithm available in the state of the art is the FASTA algorithm. Sequence comparisons (alignments), especially multiple sequence comparisons, are created using computer programs. For example, the Clustal series (see, for example, Chenna et al. (2003): Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs.
  • T-Coffee see for example Notredame et al. (2000): T-Coffee: A novel method for multiple sequence alignments. J. Mol. Biol. 302, 205-217 ) or programs based on these programs or algorithms. Sequence comparisons (alignments) are also possible using the computer program Vector NTI ® Suite 10.3 (Invitrogen Corporation, 1600 Faraday Avenue, Carlsbad, California, USA) with the specified standard parameters; its AlignX module for sequence comparisons is based on ClustalW.
  • Such a comparison also allows a statement to be made about the similarity of the compared sequences. This is usually expressed as percent identity, i.e., the proportion of identical nucleotides or amino acid residues at the same or corresponding positions in an alignment.
  • the broader term "homology" in amino acid sequences includes conserved amino acid substitutions, i.e., amino acids with similar chemical activity, since these usually exert similar chemical activities within the protein. Therefore, the similarity of the compared sequences can also be expressed as percent homology or percent similarity.
  • Identity and/or homology statements can be made for entire polypeptides or genes, or just for individual regions. Homologous or identical regions of different nucleic acid or amino acid sequences are therefore defined by similarities in the sequences. Such regions often exhibit identical functions.
  • nucleic acid or amino acid sequence can be small and comprise only a few nucleotides or amino acids. Such small regions often perform essential functions for the overall activity of the protein. It can therefore be useful to refer sequence similarities only to individual, possibly small regions. Unless otherwise stated, details of identity or homology in the present application refer to the total length of the respective nucleic acid or amino acid sequence indicated.
  • the cutinase comprises an amino acid sequence that is at least 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5%, 98.8%, 99.0%, 99.2%, 99.4% or 99.6% homologous to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length.
  • the cutinase is characterized in that its anti-pilling performance is not significantly reduced compared to that of a cutinase comprising an amino acid sequence corresponding to the amino acid sequences given in SEQ ID NO:1, i.e., it has at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, or 95% of the reference anti-pilling performance.
  • the anti-pilling performance can be determined in a washing system containing a detergent at a dosage of between 4.5 and 7.0 grams per liter of wash liquor and the cutinase, wherein the cutinases to be compared are used at the same concentration (based on active protein), and the anti-pilling performance is determined as described herein.
  • the washing process can be carried out for 60 minutes at a temperature of 60°C, and the water can have a water hardness of between 15.5 and 16.5°C (German hardness).
  • the concentration of cutinase in the detergent intended for this washing system is from 0.00001 to 1 wt.%, preferably from 0.0001 to 0.5 wt.%, particularly preferably from 0.001 to 0.1 wt.%, based on active, purified protein.
  • a preferred liquid detergent for such a washing system is composed as follows (all values in percent by weight): 4.4% alkylbenzenesulfonic acid, 5.6% anionic surfactants, 2.4% C12-C18 sodium salts of fatty acids, 4.4% nonionic surfactants, 0.2% phosphonates, 1.4% citric acid, 0.95% NaOH, 0.01% antifoam, 2% glycerin, 0.08% preservatives, 1% ethanol, 1.6% enzyme mix (protease, amylase, cellulase, mannase), and the remainder: demineralized water.
  • the preferred dosage of the liquid detergent is between 4.5 and 6.0 grams per liter of wash liquor, for example, 4.7, 4.9, or 5.9 grams per liter of wash liquor. Washing is preferably carried out in a pH range between pH 8 and pH 10.5, preferably between pH 8 and pH 9.
  • the anti-pilling performance is determined at 60°C using a liquid detergent as stated above, wherein the washing process is preferably carried out for 60 minutes.
  • Anti-pilling performance can be monitored through visual inspection.
  • a panel of testers assigns a score on a scale of 1-5 to the laundry being tested.
  • a score of 1 represents very heavily pilled laundry, while a score of 5 represents non-pilled laundry.
  • Proteins can be combined into groups of immunologically related proteins through reaction with an antiserum or a specific antibody.
  • the members of such a group are characterized by having the same antigenic determinant recognized by an antibody. They are therefore structurally so similar to one another that they are recognized by an antiserum or specific antibodies.
  • Another subject of the invention therefore relates to cutinases which are characterized by having at least one, and increasingly preferably two, three, or four, identical antigenic determinants with a cutinase used in an agent according to the invention. Due to their immunological similarities, such cutinases are structurally so similar to the cutinases used in the agents according to the invention that a similar function can be assumed.
  • cutinases used in the agents according to the invention may have further amino acid modifications, in particular amino acid substitutions, insertions, or deletions, compared to the cutinase described in SEQ ID NO:1.
  • Such cutinases are further developed, for example, through targeted genetic modification, i.e., through mutagenesis methods, and optimized for specific applications or with regard to specific properties (e.g., with regard to their catalytic activity, stability, etc.).
  • nucleic acids encoding the cutinases used can be incorporated into recombinant cultures and thus used to generate completely novel cutinases or other polypeptides.
  • the aim is to introduce targeted mutations such as substitutions, insertions, or deletions into the known molecules in order, for example, to improve the cleaning performance of enzymes according to the invention.
  • the surface charges and/or the isoelectric point of the molecules and thus their interactions with the substrate can be altered.
  • the net charge of the enzymes can be altered in order to influence substrate binding, particularly for use in detergents and cleaning agents.
  • one or more corresponding mutations can further increase the stability of the cutinase and thereby improve its cleaning performance.
  • Advantageous properties of individual mutations, e.g., individual substitutions can complement each other.
  • a cutinase that has already been optimized with regard to certain properties, for example, with regard to its activity and/or its anti-pilling performance, can therefore be further developed within the scope of the invention.
  • the invention therefore further relates to an agent containing a cutinase, which is characterized in that it is obtainable from a cutinase as described above as the starting molecule by single or multiple conservative amino acid substitution.
  • conservative amino acid substitution means the exchange (substitution) of one amino acid residue for another amino acid residue, whereby this exchange does not lead to a change in the polarity or charge at the position of the exchanged amino acid, e.g., the exchange of a non-polar amino acid residue for another non-polar amino acid residue.
  • the homology of the cutinases modified in this way to the cutinase with SEQ ID NO:1 is preferably as defined above.
  • the cutinase is characterized in that it is obtainable from a cutinase contained in an agent according to the invention as a starting molecule by fragmentation, deletion, insertion or substitution mutagenesis and comprises an amino acid sequence which has a length of at least 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 245, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263 or 264 contiguous amino acids match the starting molecule.
  • the enzymes retain their hydrolytic activity even after mutagenesis, i.e., their hydrolytic activity corresponds at least to that of the starting enzyme, i.e., in a preferred embodiment, the hydrolytic activity is at least 80%, preferably at least 90% of the activity of the starting enzyme.
  • Other substitutions can also have beneficial effects. Both individual and multiple contiguous amino acids can be exchanged for other amino acids.
  • the cutinase may have one or more further amino acids at the N- or C-terminal end in addition to the sequence given in SEQ ID NO:1.
  • such N-terminal peptides may be the naturally occurring signal peptides for the cutinase or a single methionine residue.
  • the cutinase has, for example, the amino acid sequence given in SEQ ID NO:2. All embodiments disclosed above in the context of the mature cutinase according to SEQ ID NO:1 are also applicable to the cutinase with the sequence according to SEQ ID NO:2.
  • the invention relates to a washing or cleaning agent characterized by containing a cutinase as defined herein. Unless explicitly stated otherwise, all percentages given in connection with the compositions/agents described herein refer to wt. %, in each case based on the respective mixture/agent.
  • fatty acids or fatty alcohols or their derivatives represent branched or unbranched carboxylic acids or alcohols or their derivatives, preferably with 6 to 22 carbon atoms.
  • the oxo alcohols or their derivatives obtainable, for example, by the Roelen oxo synthesis can also be used accordingly.
  • alkaline earth metals are mentioned below as counterions for monovalent anions, this means that the alkaline earth metal is naturally present in only half the amount of the anion - sufficient to balance the charge.
  • washing or cleaning agents both concentrated and undiluted, for use on a commercial scale, in washing machines or for hand washing.
  • these include, for example, detergents for textiles, carpets, or natural fibers, for which the term "detergent" is used.
  • the washing and cleaning agents within the scope of the invention also include washing aids that are added to the actual washing agent during manual or machine washing to achieve an additional effect.
  • washing and cleaning agents within the scope of the invention also include textile pre- and post-treatment agents, i.e.
  • agents with which the laundry is brought into contact before the actual washing for example, to dissolve stubborn soils
  • agents that impart further desirable properties to the laundry such as a pleasant feel, resistance to creasing, or low static charge, in a step following the actual textile washing.
  • Fabric softeners are included among the latter agents.
  • the washing or cleaning agents according to the invention which can be in the form of powdered solids, in compacted particle form, as homogeneous solutions, gels, or suspensions, can contain, in addition to the cutinase described above, all known ingredients customary in such agents, with at least one further ingredient preferably being present in the agent.
  • the agents according to the invention can contain, in particular, surfactants, builders, bleaching agents, in particular peroxygen compounds, or bleach activators. They can also contain water-miscible organic solvents, other enzymes, sequestering agents, electrolytes, pH regulators, and/or other auxiliaries such as optical brighteners, graying inhibitors, foam regulators, dyes, and fragrances, as well as combinations thereof.
  • a combination of the agent according to the invention with one or more other ingredients is advantageous, since such an agent, in preferred embodiments according to the invention, exhibits improved cleaning performance due to resulting synergisms.
  • Such synergism can be achieved in particular by combining the agent according to the invention with a surfactant and/or a builder and/or a peroxygen compound and/or a bleach activator.
  • the agents according to the invention preferably also contain at least one compound from the class of surfactants, in particular selected from anionic and non-ionic, but also cationic, zwitterionic or amphoteric surfactants.
  • Suitable surfactants are, for example, anionic surfactants of the formula (I) R-SO 3 - Y + (I).
  • R represents a linear or branched unsubstituted alkylaryl radical.
  • Y represents a monovalent cation or the nth part of an n-valent cation.
  • Alkali metal ions are preferred, including Na + or K + , with Na + being most preferred.
  • Further cations Y + can be selected from NH4 + , 1 ⁇ 2Zn2 + , 1 ⁇ 2Mg2 + , 1 ⁇ 2Ca2 + , 1 ⁇ 2Mn2 + , and mixtures thereof.
  • Alkylaryl refers to organic radicals consisting of an alkyl radical and an aromatic radical. Typical examples of such radicals include, but are not limited to, alkylbenzene radicals such as benzyl, butylbenzene radicals, nonylbenzene radicals, decylbenzene radicals, undecylbenzene radicals, dodecylbenzene radicals, tridecylbenzene radicals, and the like.
  • such surfactants are selected from linear or branched alkylbenzenesulfonates of the formula A-1
  • R' and R" together contain 9 to 19, preferably 11 to 15 and in particular 11 to 13 C atoms.
  • a particularly preferred representative can be described by the formula A-1a:
  • the compound of formula (I) is preferably the sodium salt of a linear alkylbenzenesulfonate.
  • the at least one compound from the class of anionic surfactants of formula (I) is contained in the washing or cleaning agent in an amount of 0.001 to 30 wt.%, preferably 0.001 - 10 wt.%, further preferably 2 - 6 wt.%, even more preferably 3 - 5 wt.%, in each case based on the total weight of the cleaning agent.
  • the agents according to the invention preferably contain at least one anionic surfactant of the formula R 1 -O-(AO) n -SO 3 - X + (II).
  • R 1 represents a linear or branched, substituted or unsubstituted alkyl, aryl, or alkylaryl radical, preferably a linear, unsubstituted alkyl radical, particularly preferably a fatty alcohol radical.
  • Preferred R 1 radicals are selected from decyl, undecyl, dodecyl, tridecyl, tetradecyl, pentadecyl, hexadecyl, heptadecyl, octadecyl, nonadecyl, eicosyl radicals, and mixtures thereof, with preference given to those having an even number of carbon atoms.
  • R 1 radicals are derived from C 12 -C 18 fatty alcohols, for example from coconut fatty alcohol, tallow fatty alcohol, lauryl, myristyl, cetyl, or stearyl alcohol, or from C 10 -C 20 oxo alcohols.
  • AO stands for an ethylene oxide (EO) or propylene oxide (PO) group, preferably for an ethylene oxide group.
  • the index n stands for an integer from 1 to 50, preferably from 1 to 20 and in particular from 2 to 10. Most preferably, n stands for the numbers 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
  • X stands for a monovalent cation or the nth part of an n-valent cation, preferred are the alkali metal ions and among them Na + or K + , with Na + being extremely preferred. Further cations X+ can be selected from NH 4 + , 1 ⁇ 2 Zn 2+ , 1 ⁇ 2 Mg 2+ , 1 ⁇ 2 Ca 2+ , 1 ⁇ 2 Mn 2+ , and mixtures thereof.
  • the cleaning agent contains the at least one anionic surfactant of formula (II) in an amount of 2-10 wt.%, preferably 3-8 wt.%, based on the total weight of the cleaning agent.
  • anionic surfactants that can be used are the alkyl sulfates of the formula R 2 -O-SO 3 - X + (III).
  • R 2 represents a linear or branched, substituted or unsubstituted alkyl radical, preferably a linear, unsubstituted alkyl radical, particularly preferably a fatty alcohol radical.
  • Preferred R 2 radicals are selected from decyl, undecyl, dodecyl, tridecyl, tetradecyl, pentadecyl, hexadecyl, heptadecyl, octadecyl, nonadecyl, eicosyl radicals, and mixtures thereof, with preference being given to those having an even number of carbon atoms.
  • R 2 radicals are derived from C 12 -C 18 fatty alcohols, for example from coconut fatty alcohol, tallow fatty alcohol, lauryl, myristyl, cetyl, or stearyl alcohol, or from C 10 -C 20 oxo alcohols.
  • Y represents a monovalent cation or the nth part of an n-valent cation. Alkali metal ions are preferred, including Na + or K + , with Na + being most preferred.
  • Other cations Y + can be selected from NH4 + , 1 ⁇ 2 Zn2 + , 1 ⁇ 2 Mg2 + , 1 ⁇ 2 Ca2 + , 1 ⁇ 2 Mn2 + , and mixtures thereof.
  • the agent may contain at least one other surfactant in addition to the anionic surfactants described above, in particular those of formulas (I)-(III), or alternatively thereto.
  • Alternative or additional surfactants include, in particular, other anionic surfactants, nonionic surfactants, and mixtures thereof, as well as cationic, zwitterionic, and amphoteric surfactants.
  • the agents comprise at least one non-ionic surfactant, in particular at least one fatty alcohol alkoxylate.
  • R 3 represents a linear or branched, substituted or unsubstituted alkyl radical, preferably a linear, unsubstituted alkyl radical, particularly preferably a fatty alcohol radical.
  • Preferred R 2 radicals are selected from decyl, undecyl, dodecyl, tridecyl, tetradecyl, pentadecyl, hexadecyl, heptadecyl, octadecyl, nonadecyl, eicosyl radicals, and mixtures thereof, with preference given to those having an even number of carbon atoms.
  • R 3 radicals are derived from C 12 -C 18 fatty alcohols, for example from coconut fatty alcohol, tallow fatty alcohol, lauryl, myristyl, cetyl, or stearyl alcohol, or from C 10 -C 20 oxo alcohols.
  • AO represents an ethylene oxide (EO) or propylene oxide (PO) group, preferably an ethylene oxide group.
  • the index m represents an integer from 1 to 50, preferably from 1 to 20, and in particular from 2 to 10. Most preferably, m represents the numbers 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8.
  • nonionic surfactants which may be contained in the described agents within the meaning of the present invention include, but are not limited to, alkyl glycosides, alkoxylated fatty acid alkyl esters, amine oxides, fatty acid alkanolamides, hydroxy mixed ethers, sorbitan fatty acid esters, polyhydroxy fatty acid amides and alkoxylated alcohols.
  • Suitable amphoteric surfactants are, for example, betaines of the formula (R iii )(R iv )(R v )N + CH 2 COO - , in which R iii is an alkyl radical optionally interrupted by heteroatoms or heteroatom groups having 8 to 25, preferably 10 to 21 carbon atoms and R iv and R v are identical or different alkyl radicals having 1 to 3 carbon atoms, in particular C 10 -C 18 alkyldimethylcarboxymethylbetaine and C 11 -C 17 alkylamidopropyldimethylcarboxymethylbetaine.
  • Suitable cationic surfactants include the quaternary ammonium compounds of the formula (R vi )(R vii )(R viii )(R ix )N + X - , in which R vi to R ix represent four identical or different, in particular two long-chain and two short-chain, alkyl radicals and X - represents an anion, in particular a halide ion, for example didecyldimethylammonium chloride, alkylbenzyldidecylammonium chloride and mixtures thereof.
  • Suitable cationic surfactants are the quaternary surface-active compounds, in particular those containing a sulfonium, phosphonium, iodonium or arsonium group, which are also known as antimicrobial agents.
  • the agent can be given an antimicrobial effect or its antimicrobial effect, which may already be present due to other ingredients, can be improved.
  • the total amount of surfactants based on the weight of the agent is 2 to 30 wt.%, preferably 5 to 25 wt.%, more preferably 10 to 20 wt.%, most preferably 14 to 18 wt.%, wherein the (linear) alkylbenzenesulfonates are present at most in an amount of 0.001 to 30 wt.%, preferably 0.001 - 10 wt.%, further preferably 2 - 6 wt.%, more preferably 3 - 5 wt.%, based on the weight of the agent.
  • Detergents or cleaning agents according to the invention can contain other enzymes in addition to cutinase. These can be hydrolytic enzymes or other enzymes in a concentration appropriate for the effectiveness of the agent.
  • One embodiment of the invention thus represents agents that comprise one or more enzymes.
  • Preferred enzymes are all enzymes that can exhibit catalytic activity in the agent according to the invention, in particular a protease, amylase, cellulase, hemicellulase, mannanase, tannase, xylanase, xanthanase, xyloglucanase, ⁇ -glucosidase, pectinase, carrageenase, perhydrolase, oxidase, oxidoreductase or a lipase, as well as mixtures thereof.
  • Enzymes are advantageously present in the agent in an amount of 1 x 10 -8 to 5 wt.%, based on active protein.
  • each enzyme is present in agents according to the invention in an amount of 1 x 10 -7 -3 wt. %, from 0.00001-1 wt. %, from 0.00005-0.5 wt. %, from 0.0001 to 0.1 wt. %, and particularly preferably from 0.0001 to 0.05 wt. %, based on active protein.
  • the enzymes exhibit synergistic cleaning performance against specific soils or stains, i.e., the enzymes contained in the agent composition support one another in their cleaning performance. Synergistic effects can occur not only between different enzymes, but also between one or more enzymes and other ingredients of the agent according to the invention.
  • the amylase(s) is/are preferably an ⁇ -amylase.
  • the hemicellulase is preferably a ⁇ -glucanase, a pectinase, a pullulanase, and/or a mannanase.
  • the cellulase is preferably a cellulase mixture or a single-component cellulase, preferably or predominantly an endoglucanase and/or a cellobiohydrolase.
  • the oxidoreductase is preferably an oxidase, in particular a choline oxidase, or a perhydrolase.
  • proteases used are primarily alkaline serine proteases. They act as nonspecific endopeptidases, meaning they hydrolyze any acid amide bonds found within peptides or proteins, thereby breaking down protein-containing soils on the items being cleaned. Their pH optimum is usually in the significantly alkaline range.
  • the protein concentration can be determined using known methods, for example, the BCA method (bicinchoninic acid; 2,2'-biquinolyl-4,4'-dicarboxylic acid) or the biuret method.
  • the active protein concentration is determined by titrating the active sites using a suitable irreversible inhibitor (for proteases, for example, phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)) and determining the residual activity (see also: M. Bender et al., J. Am. Chem. Soc. 88, 24 (1966), pp. 5890-5913 ).
  • a suitable irreversible inhibitor for proteases, for example, phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)
  • the enzymes to be used can also be formulated together with accompanying substances, such as those from fermentation.
  • the enzymes are preferably used as liquid enzyme formulation(s).
  • the enzymes are generally not provided in the form of pure protein, but rather in the form of stabilized, storable, and transportable preparations.
  • These prefabricated preparations include, for example, solid preparations obtained by granulation, extrusion, or lyophilization or, particularly in the case of liquid or gel-like products, solutions of the enzymes, preferably as concentrated as possible, with little water content, and/or containing stabilizers or other additives.
  • the enzymes can be encapsulated for both solid and liquid dosage forms, for example by spray-drying or extrusion of the enzyme solution together with a preferably natural polymer, or in the form of capsules, for example those in which the enzymes are enclosed as if in a solidified gel, or in those of the core-shell type, in which an enzyme-containing core is coated with a water-, air-, and/or chemical-impermeable protective layer.
  • Additional active ingredients such as stabilizers, emulsifiers, pigments, bleaching agents, or dyes, can be applied in superimposed layers.
  • Such capsules are applied using methods known per se, for example by shake or roll granulation or in fluid-bed processes. Such granules, for example by applying polymeric film formers, are advantageously low in dust and, due to the coating, are stable during storage.
  • the agent according to the invention may comprise one or more enzyme stabilizers. Therefore, the agent according to the invention may further comprise an enzyme stabilizer selected, for example, from the group consisting of sodium formate, sodium sulfate, lower aliphatic alcohols, and boric acid, as well as their esters and salts. Of course, two or more of these compounds may also be used in combination.
  • the salts of the compounds mentioned can also be used in the form of hydrates, such as sodium sulfate decahydrate.
  • lower aliphatic alcohols includes monoalcohols, diols, and higher-hydric alcohols with up to 6 carbon atoms.
  • Polyols belonging to the group of lower aliphatic alcohols include, in particular, polyols, for example, glycerol, (mono)ethylene glycol, (mono)propylene glycol, or sorbitol, without the invention being limited to these.
  • composition according to the invention may also contain at least one further stabilizer.
  • Such stabilizers are known in the art.
  • Reversible protease inhibitors protect the enzymes contained in a detergent or cleaning agent from proteolytic degradation by reversibly inhibiting the enzymatic activity of the proteases contained in the agent.
  • Benzamidine hydrochloride, boronic acids, or their salts or esters are frequently used as reversible protease inhibitors, especially derivatives with aromatic groups, such as ortho-, meta-, or para-substituted phenylboronic acids, especially 4-formylphenyl boronic acid, or the salts or esters of the aforementioned compounds.
  • Peptide aldehydes i.e., oligopeptides with a reduced C-terminus, especially those consisting of 2 to 50 monomers, are also used for this purpose.
  • Peptide reversible protease inhibitors include, among others, ovomucoid and leupeptin.
  • enzyme stabilizers include amino alcohols such as mono-, di-, triethanolamine, and propanolamine and their mixtures; aliphatic carboxylic acids up to C12 , such as succinic acid; other dicarboxylic acids; or salts of these acids. End-capped fatty acid amide alkoxylates are also suitable for this purpose. Some organic acids used as builders can also stabilize an enzyme. Calcium and/or magnesium salts, such as calcium acetate, are also used for this purpose.
  • Polyamide oligomers or polymeric compounds such as lignin, water-soluble vinyl copolymers or cellulose ethers, acrylic polymers, and/or polyamides stabilize the enzyme preparation against, among other things, physical influences or pH fluctuations.
  • Polyamine N-oxide-containing polymers act simultaneously as enzyme stabilizers and dye transfer inhibitors.
  • Other polymeric stabilizers are linear C 8 -C 18 polyoxyalkylenes.
  • Alkyl polyglycosides can also stabilize the enzymatic components of the agent according to the invention and, preferably, can additionally enhance their performance.
  • Crosslinked Nitrogen-containing compounds preferably fulfill a dual function as soil-release agents and enzyme stabilizers. Hydrophobic, non-ionic polymers particularly stabilize any cellulase present.
  • Reducing agents and antioxidants increase the stability of enzymes against oxidative degradation; for example, sulfur-containing reducing agents, such as sodium sulfite and reducing sugars, are common for this purpose.
  • the washing or cleaning agents according to the present invention are liquid and contain water as the main solvent, i.e., they are aqueous agents.
  • the water content of the aqueous agent according to the invention is typically 15 to 70 wt.%, preferably 20 to 60 wt.%. In various embodiments, the water content is more than 5 wt.%, preferably more than 15 wt.%, and particularly preferably more than 50 wt.%, in each case based on the total amount of agent.
  • Non-aqueous solvents may also be added to the product.
  • Suitable non-aqueous solvents include mono- or polyhydric alcohols, alkanolamines, or glycol ethers, provided they are miscible with water within the specified concentration range.
  • the solvents are preferably selected from ethanol, n-propanol, i-propanol, butanols, glycol, propanediol, butanediol, methylpropanediol, glycerin, diglycol, propyl diglycol, butyl diglycol, hexylene glycol, ethylene glycol methyl ether, ethylene glycol ethyl ether, ethylene glycol propyl ether, ethylene glycol mono-n-butyl ether, diethylene glycol methyl ether, diethylene glycol ethyl ether, propylene glycol methyl ether, propylene glycol ethyl ether, propylene glycol propy
  • the one or more non-aqueous solvents are usually present in an amount of 0.1 to 10 wt.%, preferably 1 to 8 wt.%, based on the total composition.
  • the agents according to the invention may contain other ingredients that further improve the application and/or aesthetic properties of the cleaning agent.
  • these include, for example, additives to improve drainage and drying properties, to adjust viscosity and/or for stabilization, as well as other auxiliaries and additives commonly found in cleaning agents, such as UV stabilizers, perfume, pearlescent agents, dyes, corrosion inhibitors, preservatives, bittering agents, organic Salts, disinfectants, structuring polymers, defoamers, encapsulated ingredients (e.g. encapsulated perfume), pH adjusters and skin-feel-improving or caring additives.
  • additives to improve drainage and drying properties to adjust viscosity and/or for stabilization
  • auxiliaries and additives commonly found in cleaning agents such as UV stabilizers, perfume, pearlescent agents, dyes, corrosion inhibitors, preservatives, bittering agents, organic Salts, disinfectants, structuring polymers, defoamers, encapsulated ingredients (e.g. encapsulated perfume), pH adjusters and skin-feel
  • a washing or cleaning agent according to the invention preferably contains at least one water-soluble and/or water-insoluble, organic and/or inorganic builder.
  • Generally applicable builders include, in particular, aminocarboxylic acids and their salts, zeolites, silicates, carbonates, organic (co)builders, and—where there are no environmental objections to their use—phosphates.
  • these agents are preferably phosphate-free.
  • Water-soluble organic builder substances include polycarboxylic acids, especially citric acid and sugar acids, monomeric and polymeric aminopolycarboxylic acids, especially methylglycinediacetic acid, nitrilotriacetic acid, and ethylenediaminetetraacetic acid, as well as polyaspartic acid, polyphosphonic acids, especially aminotris(methylenephosphonic acid), ethylenediaminetetrakis(methylenephosphonic acid), and 1-hydroxyethane-1,1-diphosphonic acid, polymeric hydroxy compounds such as dextrin, as well as polymeric (poly)carboxylic acids, polymeric acrylic acids, methacrylic acids, maleic acids, and copolymers thereof, which may also contain small amounts of polymerizable substances without carboxylic acid functionality.
  • polycarboxylic acids especially citric acid and sugar acids
  • monomeric and polymeric aminopolycarboxylic acids especially methylglycinediacetic acid, nitrilotriacetic acid, and
  • Suitable, albeit less preferred, compounds of this class are copolymers of acrylic acid or methacrylic acid with vinyl ethers, such as vinyl methyl ethers, vinyl esters, ethylene, propylene, and styrene, in which the proportion of acid is at least 50% by weight.
  • the organic builders can be used, particularly for the production of liquid agents, in the form of aqueous solutions, preferably in the form of 30 to 50 percent by weight aqueous solutions. All of the acids mentioned are generally used in the form of their water-soluble salts, especially their alkali metal salts.
  • Organic builders can, if desired, be present in amounts of up to 40 wt.%, in particular up to 25 wt.%, and preferably from 1 wt.% to 8 wt.%. Amounts close to the stated upper limit are preferably used in paste-like or liquid, especially water-based, compositions according to the invention. Laundry aftertreatment compositions according to the invention, such as fabric softeners, can optionally also be free of organic builders.
  • Alkali silicates and, if there are no concerns about their use, polyphosphates, preferably sodium triphosphate, are particularly suitable as water-soluble inorganic builder materials.
  • Builder materials can be used, in particular crystalline or amorphous alkali aluminosilicates, if desired, in amounts of up to 50 wt.%, preferably not more than 40 wt.%, and in liquid compositions, in particular from 1 wt.% to 5 wt.%.
  • crystalline sodium aluminosilicates of detergent quality in particular zeolite A, P, and optionally X, are preferred. Amounts close to the stated upper limit are preferably used in solid, particulate compositions.
  • Suitable aluminosilicates in particular, have no particles with a grain size exceeding 30 ⁇ m and preferably consist of at least 80 wt.% particles with a size below 10 ⁇ m.
  • Suitable substitutes or partial substitutes for the aluminosilicate mentioned are crystalline alkali silicates, which can be present alone or in a mixture with amorphous silicates.
  • the alkali silicates usable as builders in the agents according to the invention preferably have a molar ratio of alkali oxide to SiO 2 of less than 0.95, in particular from 1:1.1 to 1:12, and can be amorphous or crystalline.
  • Preferred alkali silicates are sodium silicates, in particular amorphous sodium silicates, with a molar Na 2 O:SiO 2 ratio of 1:2 to 1:2.8.
  • crystalline silicates which can be present alone or in a mixture with amorphous silicates
  • Preferred crystalline layered silicates are those in which x in the general formula mentioned assumes the values 2 or 3.
  • beta- and delta-sodium disilicates Na 2 Si 2 O 5 y H 2 O
  • the weight ratio of aluminosilicate to silicate is preferably 1:10 to 10:1.
  • the weight ratio of amorphous alkali silicate to crystalline alkali silicate is preferably 1:2 to 2:1 and in particular 1:1 to 2:1.
  • Builder substances are, if desired, present in the compositions according to the invention preferably in amounts of up to 60% by weight, in particular from 5% to 40% by weight.
  • Water-soluble builders are particularly preferred in liquid formulations.
  • Laundry aftertreatment compositions according to the invention, such as fabric softeners, are preferably free of inorganic builders.
  • Polymeric thickeners within the meaning of the present invention are the polycarboxylates which act as polyelectrolytes to thicken, preferably homo- and copolymers of acrylic acid, in particular acrylic acid copolymers such as acrylic acid-methacrylic acid copolymers, and the polysaccharides, in particular heteropolysaccharides, as well as other customary thickening polymers.
  • Suitable polysaccharides or heteropolysaccharides are polysaccharide gums, for example, gum arabic, agar, alginates, carrageenans and their salts, guar, guaran, tragacanth, gellan gum, ramsan, dextran, or xanthan gum and their derivatives, e.g., propoxylated guar gum, as well as their mixtures.
  • Other polysaccharide thickeners such as starches or cellulose derivatives, can be used alternatively, but preferably in addition, to a polysaccharide gum.
  • starches of various origins include starches of various origins and starch derivatives, e.g., hydroxyethyl starch, starch phosphate esters, or starch acetates, or carboxymethylcellulose or its sodium salt, methyl, ethyl, hydroxyethyl, hydroxypropyl, hydroxypropylmethyl, or hydroxyethylmethylcellulose, or cellulose acetate.
  • starch derivatives e.g., hydroxyethyl starch, starch phosphate esters, or starch acetates, or carboxymethylcellulose or its sodium salt, methyl, ethyl, hydroxyethyl, hydroxypropyl, hydroxypropylmethyl, or hydroxyethylmethylcellulose, or cellulose acetate.
  • Acrylic acid polymers suitable as polymeric thickeners are, for example, high molecular weight homopolymers of acrylic acid (INCI Carbomer) crosslinked with a polyalkenyl polyether, in particular an allyl ether of sucrose, pentaerythritol or propylene, which are also referred to as carboxyvinyl polymers.
  • a polyalkenyl polyether in particular an allyl ether of sucrose, pentaerythritol or propylene, which are also referred to as carboxyvinyl polymers.
  • Particularly suitable polymeric thickeners are the following acrylic acid copolymers: (i) Copolymers of two or more monomers from the group of acrylic acid, methacrylic acid and their simple esters, preferably formed with C 1-4 alkanols (INCI Acrylates Copolymer), which include the copolymers of methacrylic acid, butyl acrylate and methyl methacrylate ( CAS 25035-69-2 ) or butyl acrylate and methyl methacrylate ( CAS 25852-37-3 ); (ii) cross-linked high molecular weight acrylic acid copolymers, which include, for example, copolymers of C 10-30 alkyl acrylates cross-linked with an allyl ether of sucrose or pentaerythritol with one or more monomers from the group consisting of acrylic acid, methacrylic acid and their simple esters, preferably formed with C 1-4 alkanols (INCI Acrylates/C10-30 Alkyl Acrylate Crosspolymer).
  • the content of polymeric thickener is usually not more than 8 wt.%, preferably between 0.1 and 7 wt.%, particularly preferably between 0.5 and 6 wt.%, in particular between 1 and 5 wt.% and most preferably between 1.5 and 4 wt.%, for example between 2 and 2.5 wt.%, based on the total weight of the agent.
  • one or more dicarboxylic acids and/or their salts can be added, in particular a composition of Na salts of adipic, succinic and glutaric acid, as described, for example, in the It is available under the trade name Sokalan® DSC. It is advantageously used in amounts of 0.1 to 8 wt.%, preferably 0.5 to 7 wt.%, in particular 1.3 to 6 wt.%, and particularly preferably 2 to 4 wt.%, based on the total weight of the cleaning agent. However, if their use can be omitted, the agent according to the invention is preferably free of dicarboxylic acid (salts).
  • the detergents according to the invention can be compared with reference detergents to determine the increased anti-pilling performance of the detergents according to the invention.
  • a detergent system can be composed as follows (all data in percent by weight): Reference detergent: 4.4% alkylbenzenesulfonic acid, 5.6% other anionic surfactants, 2.4% C12-C18 Na salts of fatty acids (soaps), 4.4% nonionic surfactants, 0.2% phosphonates, 1.4% citric acid, 0.95% NaOH, 0.01% defoamers, 2.0% glycerin, 0.08% preservatives, 1% ethanol, 1.6% enzyme mix (protease, amylase, cellulase, mannase), the remainder demineralized water.
  • Inventive agent 4.4% alkylbenzenesulfonic acid, 5.6% other anionic surfactants, 2.4% C12-C18 sodium salts of fatty acids (soaps), 4.4% nonionic surfactants, 0.2% phosphonates, 1.4% citric acid, 0.95% NaOH, 0.01% defoamer, 2.0% glycerin, 0.08% preservatives, 1% ethanol, 1.6% enzyme mix (protease, amylase, cellulase, mannase), 0.009% cutinase, balance demineralized water.
  • the preferred dosage of the liquid detergent is between 4.5 and 6.0 grams per liter of wash liquor, for example, 4.7, 4.9, or 5.9 grams per liter of wash liquor. Washing is preferably carried out in a pH range between pH 8 and pH 10.5, preferably between pH 8 and pH 9.
  • the aforementioned embodiments of the present invention encompass all solid, powdered, liquid, gel-like, or pasty dosage forms of washing or cleaning agents according to the invention, which may optionally also consist of multiple phases and may be present in compressed or uncompressed form.
  • the agent may be in the form of a free-flowing powder, in particular with a bulk density of 300 g/l to 1200 g/l, in particular 500 g/l to 900 g/l or 600 g/l to 850 g/l.
  • Solid dosage forms of the agent also include extrudates, granules, tablets, or pouches.
  • the agent may also be liquid, gel-like, or pasty, for example in the form of a non-aqueous liquid detergent or a non-aqueous paste, or in the form of an aqueous liquid detergent or a water-containing paste.
  • the agent may be in the form of a one-component system. Such agents consist of one phase.
  • a product can also consist of multiple phases, for example, single-phase, double-phase, or multi-phase. Such a product is therefore divided into several components (multi-component system).
  • the invention further relates to a process for cleaning textiles, characterized in that an agent according to the invention is used in at least one process step.
  • the textiles preferably contain or consist of polyester.
  • the process described above is characterized in that the agent according to the invention is used at a temperature of 0-100°C, preferably 0-80°C, more preferably 30-70°C, and most preferably 40-60°C.
  • Processes for cleaning textiles are generally characterized by the fact that various cleaning-active substances are applied to the item to be cleaned in several process steps and are washed off after the contact time, or that the item to be cleaned is treated in some other way with a detergent or a solution or dilution of this agent. All conceivable washing or cleaning processes can be enriched in at least one of the process steps by the use of a washing or cleaning agent according to the invention and then represent embodiments of the present invention. All facts, objects and embodiments described for agents according to the invention are also applicable to this subject matter of the invention. Therefore, express reference is made here to the disclosure at the appropriate point with the note that this disclosure also applies to the above inventive processes.
  • a single and/or the only step of such a process can consist of bringing a cutinase, the sole cleaning-active component, into contact with the soil, preferably in a buffer solution or water.
  • Alternative embodiments of this subject matter of the invention also include processes for treating textile raw materials or for textile care, in which an agent according to the invention is active in at least one process step.
  • processes for textile raw materials, fibers, or textiles with synthetic components are preferred, and especially for those with polyester.
  • the invention also covers the use of the washing or cleaning agent described herein as described above for the (improved) removal of soiling, for example from textiles, in particular polyester textiles.
  • the invention also relates to the use of a cutinase for reducing pilling effects of a detergent, particularly preferably a liquid detergent, wherein the detergent contains the cutinase.
  • the cutinase is a cutinase as defined herein.
  • the cutinase is present in the detergent in an amount of 0.00001-1 wt.%, preferably in an amount of 0.0001-0.5 wt.%, particularly preferably in an amount of 0.001-0.1 wt.%.
  • the cutinase, which reduces the pilling effect is applied to textiles, in particular textiles made of polyester or comprising polyester.
  • the gene was synthetically produced with codon optimization for expression in E. coli (SEQ ID NO: 3) and then cloned into the NdeI and XhoI sites of the PET-21b vector from Novagen, creating a C-terminal fusion with a 6x histidine tag.
  • the plasmid confirmed by sequencing, is transformed into electrocompetent E. coli BL21(DE3)CodonPlus RIPL cells (Agilent Technologies) using standard transformation protocols.
  • the cells are harvested by centrifugation and resuspended in lysis buffer (50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 300 mM NaCl, 20 mM imidazole). Cell disruption is performed using ultrasonication, followed by centrifugation (15,000 x g, 20 min, 4°C). The supernatant contains the His-tagged LC cutinase.
  • lysis buffer 50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 300 mM NaCl, 20 mM imidazole.
  • Cell disruption is performed using ultrasonication, followed by centrifugation (15,000 x g, 20 min, 4°C). The supernatant contains the His-tagged LC cutinase.
  • NiNTA Purification using NiNTA (Qiagen, Hilden, DE) is carried out according to the manufacturer Qiagen’s protocol.
  • the degradation kinetics of the polyesterases described here were analyzed using QCM-D (quartz crystal microbalance with dissipation monitoring).
  • the polyester model substrates were prepared starting from commercially available AT-cut QCM-D crystals (Biolin Scientific) with a typical resonance frequency of 5 MHz and a gold-terminated electrode. These crystals were modified with a polyester thin film using a spin-coating process.
  • Substrate PET film: 0.25 mm thick, amorphous, transparent from GoodFellow Cambridge Limited, ES301445 Carry out in 2 mL tubes
  • PET film (0.5 cm x 2.5 cm) was washed with (1) 1.7 mL of 0.1% SDS (w/v), 50 °C, 30 min, 400 rpm; (2) 1.5 mL of absolute ethanol, 50 °C, 5 min, 700 rpm; (3) 1.7 mL of double-distilled water, 50 °C, 5 min, 700 rpm, and dried to constant value for 48 h at 50 °C and weighed. This was followed by incubation (48–72 h at 55 °C) with a fixed amount of cutinase according to SEQ ID NO:1 (5, 25, 50 ⁇ g) in a total volume of 1.7 mL in a detergent matrix (see below, dosage 4.7 g/L).
  • the PET film was washed with (1) 1.7 mL of 0.1% SDS (w/v) + 0.5% Triton X-100 (w/v), 50 °C, 30 min, 400 rpm; (2) 1.5 mL of absolute ethanol, 50 °C, 5 min, 700 rpm; (3) 1.7 mL of double-distilled water, 50 °C, 5 min, 700 rpm; and dried to constant temperature for 48 h at 50 °C and weighed. The weight loss was determined.
  • a concentration-dependent PET degradation caused by the cutinase in the detergent matrix is clearly visible.
  • the pre-pilled fabrics are produced by 20 repeated washing cycles at 40°C in standard washing machines.
  • the cutinase according to the invention significantly improves the pill appearance.

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Description

  • Die vorliegende Erfindung liegt auf dem Gebiet der Enzymtechnologie, insbesondere der Anti-Pilling Wirkung von Enzymen, wie sie zum Beispiel in Wasch- oder Reinigungsmitteln, verwendet werden. Die Erfindung betrifft ein Mittel, insbesondere Wasch- oder Reinigungsmittel, welches eine Cutinase, wie hierin definiert, enthält. Ferner betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Reinigung von Textilien sowie die Verwendung des erfindungsgemäßen Mittels zur Entfernung von Anschmutzungen. Des Weiteren richtet sich die Erfindung auf die Verwendung einer Cutinase zur Verringerung von Pilling-Effekten und Vergrauung in einem Mittel, vorzugsweise einem Wasch- oder Reinigungsmittel.
  • Bei mehrfacher Wäsche weisen Textilien jeglicher Art mit der Zeit ein Pilling auf. Als Pilling bezeichnet man die Knötchen- oder Fusselbildung bei Stoffen. Diese kleinen Fussel entstehen insbesondere bei kurzfaserigen Stoffen. Bei langfaserigen und verzwirnten Fasern entsteht dagegen weniger Pilling. Allgemein entstehen diese Knötchen durch lose Fasern im Stoff oder solche die sich aus dem Gewebe gelöst haben. Synthetische Fasern neigen, durch ihre glatte Oberfläche, eher zum Pilling als Naturfasern, weil synthetische Fasern schneller aus dem Gewebe gelöst werden können als raue Naturfasern. Bei Wollstoffen "verfilzen" diese Fasern hauptsächlich durch mechanische Reibung und bilden Knötchen an der Oberfläche.
  • Die Hauptauswirkung von Pilling ist eine optische Beeinträchtigung. Durch die Knötchenbildung an der Oberfläche sehen Stoffe schnell gebraucht und älter aus als sie sind. Zusätzlich wirken farbige Textilien weniger leuchtend. Dagegen wird die Funktionalität des Stoffes kaum bis gar nicht beeinträchtigt. Pilling findet insbesondere an mechanisch stark beanspruchten Stellen statt, meist sind dies Schulter- und Bundbereich. Durch die fortlaufende Ausdünnung des Stoffes sind vor allem diese beanspruchten Bereiche gefährdet Löcher zu bilden oder gar zu reißen. Das unerwünschte Pilling hat zur Folge, dass entsprechend beeinträchtigte Textilien von den Verbrauchern schneller aussortiert und weggeworfen werden, als es auf Basis der Funktionalität des Textils notwendig wäre.
  • Des Weiteren neigen Textilien beim Waschen dazu zu vergrauen. Das liegt daran, dass im Waschprozess sowohl Schmutz als auch abgelöste Pigmente aus farbiger Kleidung freigesetzt werden. Obwohl versucht wird, diese durch verschiedene Waschmittelinhaltstoffe in der Waschflotte zu halten, kann trotzdem oft nicht verhindert werden, dass sich der Schmutz/die Pigmente auf der Kleidung ablagern und dort verbleiben. Dies ist der sogenannte Vergrauungs-Effekt. Besonders stark ist dieser bei einigen synthetischen Fasern wie z.B. Polyamid, aber auch Polyester ausgeprägt.
  • Eine technische Lösung um den Pilling-Effekt zu verringern liegt bislang nur für Baumwoll-Textilien vor. Hierbei werden Cellulasen im Reinigungsmittel verwendet um den Pilling-Effekt zu verringern ( DE 69632910 T3 ). Das heißt, dass Cellulasen im Waschmittel eingesetzt werden, um Anti-Pilling bzw. Anti-Grau Wirkung zu zeigen und so dafür zu sorgen, dass Kleidung länger wie neu wirkt. Cellulasen wirken jedoch ausschließlich auf Baumwolltextilien. Für andere Textilien, wie z.B. Polyester-Textilien, gibt es keine vergleichbare Möglichkeit Pilling zu reduzieren. Daher ist es wünschenswert und es besteht eine Nachfrage nach Lösungen, die das Pilling von Textilien, insbesondere Textilien, die synthetische Fasern wie Polyester enthalten, zu reduzieren, um Kleidung so lange wie möglich neu aussehen zu lassen, d.h. die Farben sollen kräftig bleiben, die Form soll erhalten bleiben und die Oberflächen sollen glatt und unbeschädigt bleiben.
  • Überraschenderweise haben die Erfinder der vorliegenden Erfindung gefunden, dass eine Cutinase, die mittels eines metagenomischen Ansatzes in einem Laubkompost identifiziert wurde (Sulaiman et al., "Isolation of a Novel Cutinase Homolog with Polyethylene Terephthalate-Degrading Activity from Leaf-Branch Compost by Using a Metagenomic Approach", Appl. Environ. Microbiol. March 2012, Vol. 78, No. 5: 1556-1562), unter Waschprozess-Bedingungen aktiv ist und hier verschiedene pflegende Eigenschaften für PET Textilien aufweist. Dies ist insoweit überraschend, als dass bisher bekannte Cutinasen und PET-Esterasen eher bei höheren Temperaturen (>= 60°C) aktiv sind, und außerdem nur in der Lage sind PET sehr langsam abzubauen. Die vorliegend eingesetzte Cutinase zeigt jedoch einen schnellen PET-Abbau bei 50°C. Es wurde gefunden, dass das Enzym zum einen das Pilling auf neuen Poylester-Textilien verhindert bzw. diesen Effekt in Kombination mit einer Cellulase auf Polyester/Baumwollmisch-Textilien unterstützt. Zum anderen können bereits gebildete Pills reduziert werden, d.h. es kann einen sogenannten "Renew" Effekt bewirken. Des Weiteren verhindert die Cutinase die Vergrauung von weißer Wäsche und das Verblassen/Vergrauen von farbiger Wäsche. Außerdem zeigt die Cutinase eine direkte Reinigungsleistung bei Flecken auf PET Textilien. Es wurde weiterhin gefunden, dass alle diese positiven Wascheigenschaften erreicht werden, ohne die Faser signifikant zu schädigen. Dadurch dass die Textilien länger neu aussehen, werden sie länger getragen und werden weniger schnell ersetzt. Dies führt zu einer Reduktion des CO2 Footprints, da weniger Polyester verbraucht wird.
  • WO2015135757 offenbart Waschmittel mit PET-Esterasen, <65% gemäß SEQ:1, die geeignet sind zur Verringerung der Knötchenbildung (Depilling) in Polyester-enthaltende Textilien. Daher richtet sich die vorliegende Erfindung auf ein Wasch- oder Reinigungsmittel, dadurch gekennzeichnet, dass es eine Cutinase enthält, die mindestens 65 % Sequenzidentität mit der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge aufweist.
  • In einem weiteren Aspekt richtet sich die vorliegende Erfindung auf Verfahren zur Reinigung von Textilien, dadurch gekennzeichnet, dass in mindestens einem Verfahrensschritt ein erfindungsgemäßes Mittel angewendet wird. Die Textilien sind vorzugsweise Polyester-haltige Textilien oder bestehen aus Polyester.
  • In noch einem Aspekt richtet sich die vorliegende Erfindung ferner auf die Verwendung eines wie hierin beschriebenen Wasch- oder Reinigungsmittels, besonders bevorzugt flüssigen Waschmittels, zur Entfernung von Anschmutzungen.
  • Darüber hinaus beinhaltet ein weiterer Aspekt der Erfindung, die Verwendung der hierin beschriebenen Cutinase zur Verringerung von Pilling-Effekten und/oder Steigerung der Anti-Grau-Wirkung eines Wasch- oder Reinigungsmittels, besonders bevorzugt eines Flüssigwaschmittels, wobei das Mittel die Cutinase enthält.
  • Eine Cutinase (EC 3.1.1.74) oder auch Cutin Hydrolase ist ein Enzym, das zu den α/β-Hydrolasen gehört und Cutin hydrolisiert. Cutinase wird unter anderem von einigen pflanzenpathogenen Pilzen und Bakterien gebildet (durch die Cutinase sind die Pilze in der Lage, die Esterbindung des Cutins in der Cuticula der Pflanzen abzubauen und so in die Pflanzen einzudringen).
  • In verschiedenen bevorzugten Ausführungsformen der Erfindung ist die Cutinase eine Cutinase, die mindestens 70 % Sequenzidentität mit der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge aufweist. In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst die im erfindungsgemäßen Mittel enthaltene Cutinase die in SEQ ID NO:1 angegebene Aminosäuresequenz oder besteht im Wesentlichen daraus oder besteht daraus. In verschiedenen Ausführungsformen der Erfindung umfasst die Erfindung auch Cutinasen, die von der Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:1, beispielsweise mittels Mutagenese, abgeleitet sind. In verschiedenen weiteren Ausführungsformen umfasst die Erfindung auch Cutinasen, die durch die Expression der Nukleotidsequenz gemäß SEQ ID NO:3 erhältlich sind. In einem Aspekt der Erfindung umfasst die Erfindung auch die Nukleotidsequenz gemäß SEQ ID NO:3 und Nukleotidsequenzen, die zu der in SEQ ID NO:3 angegebenen Nukleotidsequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 98,8%, 99,0%, 99,2%, 99,4% oder 99,6% identisch sind, mit der Maßgabe, dass die native, für LC Cutinase kodierende Sequenz ausgenommen ist.
  • In verschiedenen Ausführungsformen der Erfindung umfasst die Cutinase eine Aminosäuresequenz, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 98,8%, 99,0%, 99,2%, 99,4% oder 99,6% identisch ist oder besteht aus einer solchen Sequenz.
  • In verschiedenen weiteren Ausführungsformen ist das Mittel dadurch gekennzeichnet, dass
    1. (a) die Cutinase aus einer wie oben definierten Cutinase als Ausgangsmolekül durch ein- oder mehrfache konservative Aminosäuresubstitution erhältlich ist; und/oder
    2. (b) die Cutinase aus einer wie oben definierten Cutinase als Ausgangsmolekül erhältlich ist durch Fragmentierung, Deletions-, Insertions- oder Substitutionsmutagenese und eine Aminosäuresequenz umfasst, die über eine Länge von mindestens 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 245, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263 oder 264 zusammenhängenden Aminosäuren mit dem Ausgangsmolekül übereinstimmt.
  • Die erfindungsgemäßen Mittel enthalten die Cutinase vorzugsweise in einer Menge von 0,00001 - 1 Gew.-%, weiter bevorzugt in einer Menge von 0,0001 - 0,5 Gew.-%, besonders bevorzugt in einer Menge von 0,001 - 0,1 Gew.-%, jeweils bezogen auf das aktive Protein.
  • Die Bestimmung der Identität von Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen erfolgt durch einen Sequenzvergleich. Dieser Sequenzvergleich basiert auf dem im Stand der Technik etablierten und üblicherweise genutzten BLAST-Algorithmus (vgl. beispielsweise Altschul, S.F., Gish, W., Miller, W., Myers, E.W. & Lipman, D.J. (1990) "Basic local alignment search tool." J. Mol. Biol. 215:403-410, und Altschul, Stephan F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Hheng Zhang, Webb Miller, and David J. Lipman (1997): "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs"; Nucleic Acids Res., 25, S.3389-3402) und geschieht prinzipiell dadurch, dass ähnliche Abfolgen von Nukleotiden oder Aminosäuren in den Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen einander zugeordnet werden. Eine tabellarische Zuordnung der betreffenden Positionen wird als Alignment bezeichnet. Ein weiterer im Stand der Technik verfügbarer Algorithmus ist der FASTA-Algorithmus. Sequenzvergleiche (Alignments), insbesondere multiple Sequenzvergleiche, werden mit Computerprogrammen erstellt. Häufig genutzt werden beispielsweise die Clustal-Serie (vgl. beispielsweise Chenna et al. (2003): Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs. Nucleic Acid Research 31, 3497-3500), T-Coffee (vgl. beispielsweise Notredame et al. (2000): T-Coffee: A novel method for multiple sequence alignments. J. Mol. Biol. 302, 205-217) oder Programme, die auf diesen Programmen beziehungsweise Algorithmen basieren. Ferner möglich sind Sequenzvergleiche (Alignments) mit dem Computer-Programm Vector NTI® Suite 10.3 (Invitrogen Corporation, 1600 Faraday Avenue, Carlsbad, Kalifornien, USA) mit den vorgegebenen Standardparametern, dessen AlignX-Modul für die Sequenzvergleiche auf ClustalW basiert.
  • Solch ein Vergleich erlaubt auch eine Aussage über die Ähnlichkeit der verglichenen Sequenzen zueinander. Sie wird üblicherweise in Prozent Identität, das heißt dem Anteil der identischen Nukleotide oder Aminosäurereste an denselben oder in einem Alignment einander entsprechenden Positionen angegeben. Der weiter gefasste Begriff der Homologie bezieht bei Aminosäuresequenzen konservierte Aminosäure-Austausche in die Betrachtung mit ein, also Aminosäuren mit ähnlicher chemischer Aktivität, da diese innerhalb des Proteins meist ähnliche chemische Aktivitäten ausüben. Daher kann die Ähnlichkeit der verglichenen Sequenzen auch in Prozent Homologie oder Prozent Ähnlichkeit angegeben sein. Identitäts- und/oder Homologieangaben können über ganze Polypeptide oder Gene oder nur über einzelne Bereiche getroffen werden. Homologe oder identische Bereiche von verschiedenen Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen sind daher durch Übereinstimmungen in den Sequenzen definiert. Solche Bereiche weisen oftmals identische Funktionen auf. Sie können klein sein und nur wenige Nukleotide oder Aminosäuren umfassen. Oftmals üben solche kleinen Bereiche für die Gesamtaktivität des Proteins essentielle Funktionen aus. Es kann daher sinnvoll sein, Sequenzübereinstimmungen nur auf einzelne, gegebenenfalls kleine Bereiche zu beziehen. Soweit nicht anders angegeben beziehen sich Identitäts- oder Homologieangaben in der vorliegenden Anmeldung aber auf die Gesamtlänge der jeweils angegebenen Nukleinsäure- oder Aminosäuresäuresequenz.
  • In verschiedenen Ausführungsformen umfasst die Cutinase eine Aminosäuresequenz, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 98,8%, 99,0%, 99,2%, 99,4% oder 99,6% homolog ist.
  • In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung ist die Cutinase dadurch gekennzeichnet, dass ihre Anti-Pilling-Leistung gegenüber derjenigen einer Cutinase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenzen entspricht, nicht signifikant verringert ist, d.h. mindestens 70%, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % der Referenz-Anti-Pilling-leistung besitzt. Die Anti-Pilling-Leistung kann in einem Waschsystem bestimmt werden, das ein Waschmittel in einer Dosierung zwischen 4,5 und 7,0 Gramm pro Liter Waschflotte sowie die Cutinase enthält, wobei die zu vergleichenden Cutinasen konzentrationsgleich (bezogen auf aktives Protein) eingesetzt sind und die Anti-Pilling-Leistung wie hierin beschrieben ermittelt wird. Beispielsweise kann der Waschvorgang für 60 Minuten bei einer Temperatur von 60°C erfolgen und das Wasser eine Wasserhärte zwischen 15,5 und 16,5° (deutsche Härte) aufweisen. Die Konzentration der Cutinase in dem für dieses Waschsystem bestimmten Waschmittel beträgt von 0,00001 - 1 Gew.-%, bevorzugt von 0,0001 - 0,5 Gew.-%, besonders bevorzugt von 0,001 - 0,1 Gew.-%, bezogen auf aktives, gereinigtes Protein.
  • Ein bevorzugtes flüssiges Waschmittel für ein solches Waschsystem ist wie folgt zusammengesetzt (alle Angaben in Gewichts-Prozent): 4,4% Alkylbenzolsulfonsäure, 5,6% anionische Tenside, 2,4% C12-C18 Na-Salze von Fettsäuren, 4,4% nicht-ionische Tenside, 0,2% Phosphonate, 1,4% Zitronensäure, 0,95% NaOH, 0,01% Antischaum, 2% Glycerin, 0,08% Konservierungsstoffe, 1% Ethanol, 1,6% Enzymmix (Protease, Amylase, Cellulase, Mannase), Rest demineralisiertes Wasser. Bevorzugt beträgt die Dosierung des flüssigen Waschmittels zwischen 4,5 und 6,0 Gramm pro Liter Waschflotte, beispielsweise 4,7, 4,9 oder 5,9 Gramm pro Liter Waschflotte. Bevorzugt wird gewaschen in einem pH-Wertebereich zwischen pH 8 und pH 10,5, bevorzugt zwischen pH 8 und pH 9.
  • Im Rahmen der Erfindung erfolgt die Bestimmung der Anti-Pilling-Leistung bei 60°C unter Verwendung eines flüssigen Waschmittels wie vorstehend angegeben, wobei der Waschvorgang vorzugsweise für 60 Minuten erfolgt.
  • Die Anti-Pilling-Leistung kann anhand von visueller Abmusterung verfolgen. Eine Prüfergruppe ordnet in diesem Fall der zu untersuchenden Wäsche einen Wert einer Skala von 1-5 zu. Dabei steht der Wert = 1 für sehr stark gepillte Wäsche, während der Wert = 5 nicht gepillter Wäsche zugeordnet wird.
  • Durch den aktivitätsgleichen Einsatz der jeweiligen Cutinase wird sichergestellt, dass auch bei einem etwaigen Auseinanderklaffen des Verhältnisses von Aktivsubstanz zu Gesamtprotein (die Werte der spezifischen Aktivität) die jeweiligen enzymatischen Eigenschaften, also beispielsweise die Anti-Pilling-Leistung, verglichen werden. Generell gilt, dass eine niedrige spezifische Aktivität durch Zugabe einer größeren Proteinmenge ausgeglichen werden kann.
  • Proteine können über die Reaktion mit einem Antiserum oder einem bestimmten Antikörper zu Gruppen immunologisch verwandter Proteine zusammengefasst werden. Die Angehörigen einer solchen Gruppe zeichnen sich dadurch aus, dass sie dieselbe, von einem Antikörper erkannte antigene Determinante aufweisen. Sie sind daher einander strukturell so ähnlich, dass sie von einem Antiserum oder bestimmten Antikörpern erkannt werden. Einen weiteren Erfindungsgegenstand bilden daher Cutinasen, die dadurch gekennzeichnet sind, dass sie mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei oder vier übereinstimmende antigene Determinanten mit einer in einem erfindungsgemäßen Mittel verwendeten Cutinase aufweisen. Solche Cutinasen sind auf Grund ihrer immunologischen Übereinstimmungen den in den erfindungsgemäßen Mitteln verwendeten Cutinasen strukturell so ähnlich, dass auch von einer gleichartigen Funktion auszugehen ist.
  • Weitere in den erfindungsgemäßen Mitteln verwendete Cutinasen können im Vergleich zu der in SEQ ID NO:1 beschriebenen Cutinase weitere Aminosäureveränderungen, insbesondere Aminosäure-Substitutionen, -Insertionen oder -Deletionen, aufweisen. Solche Cutinasen sind beispielsweise durch gezielte genetische Veränderung, d.h. durch Mutageneseverfahren, weiterentwickelt und für bestimmte Einsatzzwecke oder hinsichtlich spezieller Eigenschaften (beispielsweise hinsichtlich ihrer katalytischen Aktivität, Stabilität, usw.) optimiert. Ferner können Nukleinsäuren, die die verwendeten Cutinasen kodieren, in Rekombinationsansätze eingebracht und damit zur Erzeugung völlig neuartiger Cutinasen oder anderer Polypeptide genutzt werden.
  • Das Ziel ist es, in die bekannten Moleküle gezielte Mutationen wie Substitutionen, Insertionen oder Deletionen einzuführen, um beispielsweise die Reinigungsleistung von erfindungsgemäßen Enzymen zu verbessern. Hierzu können insbesondere die Oberflächenladungen und/oder der isoelektrische Punkt der Moleküle und dadurch ihre Wechselwirkungen mit dem Substrat verändert werden. So kann beispielsweise die Nettoladung der Enzyme verändert werden, um darüber die Substratbindung insbesondere für den Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln zu beeinflussen. Alternativ oder ergänzend kann durch eine oder mehrere entsprechende Mutationen die Stabilität der Cutinase noch weiter erhöht und dadurch ihre Reinigungsleistung verbessert werden. Vorteilhafte Eigenschaften einzelner Mutationen, z.B. einzelner Substitutionen, können sich ergänzen. Eine hinsichtlich bestimmter Eigenschaften bereits optimierte Cutinasen, zum Beispiel hinsichtlich ihrer Aktivität und/oder ihrer Anti-Pilling-Leistung, kann daher im Rahmen der Erfindung zusätzlich weiterentwickelt sein.
  • Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist daher ein Mittel enthaltend eine Cutinase, die dadurch gekennzeichnet ist, dass sie aus einer Cutinase wie vorstehend beschrieben als Ausgangsmolekül erhältlich ist durch ein- oder mehrfache konservative Aminosäuresubstitution. Der Begriff "konservative Aminosäuresubstitution" bedeutet den Austausch (Substitution) eines Aminosäurerestes gegen einen anderen Aminosäurerest, wobei dieser Austausch nicht zu einer Änderung der Polarität oder Ladung an der Position der ausgetauschten Aminosäure führt, z. B. der Austausch eines unpolaren Aminosäurerestes gegen einen anderen unpolaren Aminosäurerest. Konservative Aminosäuresubstitutionen im Rahmen der Erfindung umfassen beispielsweise: G=A=S, I=V=L=M, D=E, N=Q, K=R, Y=F, S=T, G=A=I=V=L=M=Y=F=W=P=S=T. Dabei ist die Homologie der derartig modifizierten Cutinasen zu der Cutinase mit der SEQ ID NO:1 vorzugsweise wie oben definiert.
  • Alternativ oder ergänzend ist die Cutinase dadurch gekennzeichnet, dass sie aus einer in einem erfindungsgemäßen Mittel enthaltenen Cutinase als Ausgangsmolekül erhältlich ist durch Fragmentierung, Deletions-, Insertions- oder Substitutionsmutagenese und eine Aminosäuresequenz umfasst, die über eine Länge von mindestens 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 245, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263 oder 264 zusammenhängenden Aminosäuren mit dem Ausgangsmolekül übereinstimmt.
  • So ist es beispielsweise möglich, an den Termini oder in den Loops des Enzyms einzelne Aminosäuren zu deletieren, ohne dass dadurch die hydrolytische Aktivität verloren oder vermindert wird. Ferner kann durch derartige Fragmentierung, Deletions-, Insertions- oder Substitutionsmutagenese beispielsweise auch die Allergenizität betreffender Enzyme gesenkt und somit insgesamt ihre Einsetzbarkeit verbessert werden. Vorteilhafterweise behalten die Enzyme auch nach der Mutagenese ihre hydrolytische Aktivität, d.h. ihre hydrolytische Aktivität entspricht mindestens derjenigen des Ausgangsenzyms, d.h. in einer bevorzugten Ausführungsform beträgt die hydrolytische Aktivität mindestens 80, vorzugsweise mindestens 90 % der Aktivität des Ausgangsenzyms. Auch weitere Substitutionen können vorteilhafte Wirkungen zeigen. Sowohl einzelne wie auch mehrere zusammenhängende Aminosäuren können gegen andere Aminosäuren ausgetauscht werden.
  • In verschiedenen Ausführungsformen kann die Cutinase zusätzlich zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Sequenz N- oder C-terminal eine oder mehrere weitere Aminosäuren aufweisen. In bestimmten Ausführungsformen kann es sich bei solchen N-terminalen Peptiden um die natürlicherweise vorkommenden Signalpeptide für die Cutinase handeln oder auch um einen einzelnen Methionin-Rest. In solchen Ausführungsformen hat die Cutinase beispielsweise die in SEQ ID NO:2 angegebene Aminosäuresequenz. Alle Ausführungsformen die oben im Kontext mit der maturen Cutinase gemäß SEQ ID NO:1 offenbart sind, sind ebenso auf die Cutinase mit der Sequenz gemäß SEQ ID NO:2 anwendbar.
  • Ein Gegenstand der Erfindung ist ein Wasch- oder Reinigungsmittel, das dadurch gekennzeichnet ist, dass es eine Cutinase, wie hierin definiert, enthält. Alle Prozentangaben, die im Zusammenhang mit den hierin beschriebenen Zusammensetzungen/Mitteln gemacht werden, beziehen sich, sofern nicht explizit anders angegeben auf Gew.-%, jeweils bezogen auf die jeweilige Mischung/das jeweilige Mittel.
  • Im Rahmen der vorliegenden Erfindung stehen Fettsäuren bzw. Fettalkohole bzw. deren Derivate - soweit nicht anders angegeben - stellvertretend für verzweigte oder unverzweigte Carbonsäuren bzw. Alkohole bzw. deren Derivate mit vorzugsweise 6 bis 22 Kohlenstoffatomen. Insbesondere sind auch die beispielsweise nach der ROELENschen Oxo-Synthese erhältlichen Oxo-Alkohole bzw. deren Derivate entsprechend einsetzbar.
  • Wann immer im Folgenden Erdalkalimetalle als Gegenionen für einwertige Anionen genannt sind, so bedeutet das, dass das Erdalkalimetall natürlich nur in der halben - zum Ladungsausgleich ausreichenden - Stoffmenge wie das Anion vorliegt.
  • Zu diesem Erfindungsgegenstand zählen alle denkbaren Wasch- oder Reinigungsmittelarten, sowohl Konzentrate als auch unverdünnt anzuwendende Mittel, zum Einsatz im kommerziellen Maßstab, in der Waschmaschine oder in der Handwäsche. Dazu gehören beispielsweise Waschmittel für Textilien, Teppiche, oder Naturfasern, für die die Bezeichnung Waschmittel verwendet wird. Zu den Wasch- und Reinigungsmittel im Rahmen der Erfindung zählen ferner Waschhilfsmittel, die bei der manuellen oder maschinellen Textilwäsche zum eigentlichen Waschmittel hinzudosiert werden, um eine weitere Wirkung zu erzielen. Ferner zählen zu Wasch- und Reinigungsmittel im Rahmen der Erfindung auch Textilvor- und Nachbehandlungsmittel, also solche Mittel, mit denen das Wäschestück vor der eigentlichen Wäsche in Kontakt gebracht wird, beispielsweise zum Anlösen hartnäckiger Verschmutzungen, und auch solche Mittel, die in einem der eigentlichen Textilwäsche nachgeschalteten Schritt dem Waschgut weitere wünschenswerte Eigenschaften wie angenehmen Griff, Knitterfreiheit oder geringe statische Aufladung verleihen. Zu letztgenannten Mittel werden u.a. die Weichspüler gerechnet.
  • Die erfindungsgemäßen Wasch- oder Reinigungsmittel, die als pulverförmige Feststoffe, in nachverdichteter Teilchenform, als homogene Lösungen, Gele oder Suspensionen vorliegen können, können neben der oben beschriebenen Cutinase alle bekannten und in derartigen Mitteln üblichen Inhaltsstoffe enthalten, wobei bevorzugt mindestens ein weiterer Inhaltsstoff in dem Mittel vorhanden ist. Die erfindungsgemäßen Mittel können insbesondere Tenside, Builder (Gerüststoffe), Bleichmittel, insbesondere Persauerstoffverbindungen, oder Bleichaktivatoren enthalten. Ferner können sie wassermischbare organische Lösungsmittel, weitere Enzyme, Sequestrierungsmittel, Elektrolyte, pH-Regulatoren und/oder weitere Hilfsstoffe wie optische Aufheller, Vergrauungsinhibitoren, Schaumregulatoren sowie Farb- und Duftstoffe sowie Kombinationen hiervon enthalten.
  • Insbesondere eine Kombination des erfindungsgemäßen Mittels mit einem oder mehreren weiteren Inhaltsstoff(en) ist vorteilhaft, da ein solches Mittel in bevorzugten erfindungsgemäßen Ausgestaltungen eine verbesserte Reinigungsleistung durch sich ergebende Synergismen aufweist. Insbesondere durch die Kombination des erfindungsgemäßen Mittels mit einem Tensid und/oder einem Builder (Gerüststoff) und/oder einer Persauerstoffverbindung und/oder einem Bleichaktivator kann ein solcher Synergismus erreicht werden.
  • Vorteilhafte Inhaltsstoffe erfindungsgemäßer Mittel sind offenbart in der internationalen Patentanmeldung WO2009/121725 , dort beginnend auf Seite 5, vorletzter Absatz, und endend auf Seite 13 nach dem zweiten Absatz. Auf diese Offenbarung wird ausdrücklich Bezug genommen und der dortige Offenbarungsgehalt in die vorliegende Patentanmeldung einbezogen.
  • Diese und weitere Aspekte, Merkmale und Vorteile der Erfindung werden für den Fachmann aus dem Studium der folgenden detaillierten Beschreibung und Ansprüche ersichtlich. Dabei kann jedes Merkmal aus einem Aspekt der Erfindung in jedem anderen Aspekt der Erfindung eingesetzt werden. Ferner ist es selbstverständlich, dass die hierin enthaltenen Beispiele die Erfindung beschreiben und veranschaulichen sollen, diese aber nicht einschränken und insbesondere die Erfindung nicht auf diese Beispiele beschränkt ist. Alle Prozentangaben sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichts-% bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung. Numerische Bereiche, die in dem Format "von x bis y" angegeben sind, schließen die genannten Werte ein. Wenn mehrere bevorzugte numerische Bereiche in diesem Format angegeben sind, ist es selbstverständlich, dass alle Bereiche, die durch die Kombination der verschiedenen Endpunkte entstehen, ebenfalls erfasst werden.
  • Die erfindungsgemäßen Mittel enthalten neben der Cutinase vorzugsweise auch mindestens eine Verbindung aus der Klasse der Tenside, insbesondere ausgewählt aus anionischen und nichtionischen, aber auch kationischen, zwitterionischen oder amphoteren Tensiden.
  • Geeignete Tenside sind beispielsweise anionische Tenside der Formel (I)

            R-SO3 - Y+     (I).

  • In dieser Formel (I) steht R für einen linearen oder verzweigten unsubstituierten Alkylarylrest. Y steht für ein einwertiges Kation oder den n-ten Teil eines n-wertigen Kations, bevorzugt sind dabei die Alkalimetallionen und darunter Na+ oder K+, wobei Na+ äußerst bevorzugt ist. Weitere Kationen Y+ können ausgewählt sein aus NH4 +, ½ Zn2+,½ Mg2+,½ Ca2+,½ Mn2+, und deren Mischungen.
  • "Alkylaryl", wie hierin verwendet, bezieht sich auf organische Reste, die aus einem Alkylrest und einem aromatischen Rest bestehen. Typische Beispiele für derartige Reste schließen ein, sind aber nicht beschränkt auf Alkylbenzolreste, wie Benzyl, Butylbenzolreste, Nonylbenzolreste, Decylbenzolreste, Undecylbenzolreste, Dodecylbenzolreste, Tridecylbenzolreste und ähnliche.
  • In verschiedenen Ausführungsformen sind derartige Tenside ausgewählt aus linearen oder verzweigten Alkylbenzolsulfonaten der Formel A-1
  • in der R' und R" zusammen 9 bis 19, vorzugsweise 11 bis 15 und insbesondere 11 bis 13 C-Atome enthalten, dargestellt. Ein ganz besonders bevorzugter Vertreter lässt sich durch die Formel A-1a beschreiben:
  • In verschiedenen Ausführungsformen handelt es sich bei der Verbindung der Formel (I) vorzugsweise um das Natriumsalz eines linearen Alkylbenzolsulfonats.
  • In erfindungsgemäßen Mitteln ist die mindestens eine Verbindung aus der Klasse der anionischen Tenside der Formel (I) in einer Menge von 0,001 bis 30 Gew.-%, vorzugsweise 0,001 - 10 Gew.-%, ferner bevorzugt 2 - 6 Gew.-%, noch bevorzugter 3 - 5 Gew.-%, in dem Wasch- oder Reinigungsmittel enthalten, jeweils bezogen auf das Gesamtgewicht des Reinigungsmittels.
  • In verschiedenen Ausführungsformen enthalten die erfindungsgemäßen Mittel vorzugsweise mindestens ein anionisches Tensid der Formel

            R1-O-(AO)n-SO3 - X+     (II).

  • In dieser Formel (II) steht R1 für einen linearen oder verzweigten, substituierten oder unsubstituierten Alkyl-, Aryl- oder Alkylarylrest, vorzugsweise für einen linearen, unsubstituierten Alkylrest, besonders bevorzugt für einen Fettalkoholrest. Bevorzugte Reste R1 sind ausgewählt aus Decyl-, Undecyl-, Dodecyl-, Tridecyl-, Tetradecyl, Pentadecyl-, Hexadecyl-, Heptadecyl-, Octadecyl-, Nonadecyl-, Eicosylresten und deren Mischungen, wobei die Vertreter mit gerader Anzahl an C-Atomen bevorzugt sind. Besonders bevorzugte Reste R1 sind abgeleitet von C12-C18-Fettalkoholen, beispielsweise von Kokosfettalkohol, Talgfettalkohol, Lauryl-, Myristyl-, Cetyl- oder Stearylalkohol oder von C10-C20-Oxoalkoholen.
  • AO steht für eine Ethylenoxid- (EO) oder Propylenoxid- (PO) Gruppierung, vorzugsweise für eine Ethylenoxidgruppierung. Der Index n steht für eine ganze Zahl von 1 bis 50, vorzugsweise von 1 bis 20 und insbesondere von 2 bis 10. Ganz besonders bevorzugt steht n für die Zahlen 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8. X steht für ein einwertiges Kation oder den n-ten Teil eines n-wertigen Kations, bevorzugt sind dabei die Alkalimetallionen und darunter Na+ oder K+, wobei Na+ äußerst bevorzugt ist. Weitere Kationen X+ können ausgewählt sein aus NH4 +, ½ Zn2+,½ Mg2+,½ Ca2+,½ Mn2+, und deren Mischungen.
  • Zusammenfassend enthalten Mittel in verschiedenen Ausführungsformen somit mindestens ein anionisches Tensid ausgewählt aus Fettalkoholethersulfaten der Formel A-2 mit k = 11 bis 19, n = 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8. Besonders bevorzugte Vertreter sind Na-C12-14 Fettalkoholethersulfate mit 2 EO (k = 11-13, n = 2 in Formel A-2).
  • In verschiedenen Ausführungsformen enthält das Reinigungsmittel das mindestens eine anionische Tensid der Formel (II) in einer Menge von 2 - 10 Gew.-%, vorzugsweise 3 - 8 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Reinigungsmittels.
  • Weitere einsetzbare anionische Tenside sind die Alkylsulfate der Formel

            R2-O-SO3 - X+     (III).

  • In dieser Formel (III) steht R2 für einen linearen oder verzweigten, substituierten oder unsubstituierten Alkylrest, vorzugsweise für einen linearen, unsubstituierten Alkylrest, besonders bevorzugt für einen Fettalkoholrest. Bevorzugte Reste R2 sind ausgewählt aus Decyl-, Undecyl-, Dodecyl-, Tridecyl-, Tetradecyl-, Pentadecyl-, Hexadecyl-, Heptadecyl-, Octadecyl-, Nonadecyl-, Eicosylresten und deren Mischungen, wobei die Vertreter mit gerader Anzahl an C-Atomen bevorzugt sind. Besonders bevorzugte Reste R2 sind abgeleitet von C12-C18-Fettalkoholen, beispielsweise von Kokosfettalkohol, Talgfettalkohol, Lauryl-, Myristyl-, Cetyl- oder Stearylalkohol oder von C10-C20-Oxoalkoholen. Y steht für ein einwertiges Kation oder den n-ten Teil eines n-wertigen Kations, bevorzugt sind dabei die Alkalimetallionen und darunter Na+ oder K+, wobei Na+ äußerst bevorzugt ist. Weitere Kationen Y+ können ausgewählt sein aus NH4 +, ½ Zn2+,½ Mg2+,½ Ca2+,½ Mn2+, und deren Mischungen.
  • In verschiedenen Ausführungsformen sind diese Tenside ausgewählt aus Fettalkoholsulfaten der Formel A-3 mit k = 11 bis 19. Ganz besonders bevorzugte Vertreter sind Na-C12-14 Fettalkoholsulfate (k = 11-13 in Formel A-3).
  • In verschiedenen Ausführungsformen kann das Mittel neben den vorstehend beschriebenen Aniontensiden, insbesondere solchen der Formeln (I)-(III), oder alternativ dazu mindestens ein anderes Tensid enthalten. Als alternative oder zusätzliche Tenside kommen insbesondere weitere anionische Tenside, nichtionische Tenside und deren Gemische, aber auch kationische, zwitterionische und amphotere Tenside in Frage.
  • In verschiedenen Ausführungsformen umfassen die Mittel mindestens ein nichtionisches Tensid, insbesondere mindestens ein Fettalkoholalkoxylat.
  • Geeignete nichtionische Tenside sind solche der Formel

            R3-O-(AO)m-H     (IV),

    in der
    • R3
    für einen linearen oder verzweigten, substituierten oder unsubstituierten Alkylrest,
    AO
    für eine Ethylenoxid- (EO) oder Propylenoxid- (PO) Gruppierung,
    m
    für ganze Zahlen von 1 bis 50 stehen.
  • In der vorstehend genannten Formel (IV) steht R3 für einen linearen oder verzweigten, substituierten oder unsubstituierten Alkylrest, vorzugsweise für einen linearen, unsubstituierten Alkylrest, besonders bevorzugt für einen Fettalkoholrest. Bevorzugte Reste R2 sind ausgewählt aus Decyl-, Undecyl-, Dodecyl-, Tridecyl-, Tetradecyl, Pentadecyl-, Hexadecyl-, Heptadecyl-, Octadecyl-, Nonadecyl-, Eicosylresten und deren Mischungen, wobei die Vertreter mit gerader Anzahl an C-Atomen bevorzugt sind. Besonders bevorzugte Reste R3 sind abgeleitet von C12-C18-Fettalkoholen, beispielsweise von Kokosfettalkohol, Talgfettalkohol, Lauryl-, Myristyl-, Cetyl- oder Stearylalkohol oder von C10-C20-Oxoalkoholen.
  • AO steht für eine Ethylenoxid- (EO) oder Propylenoxid- (PO) Gruppierung, vorzugsweise für eine Ethylenoxidgruppierung. Der Index m steht für eine ganze Zahl von 1 bis 50, vorzugsweise von 1 bis 20 und insbesondere von 2 bis 10. Ganz besonders bevorzugt steht m für die Zahlen 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8.
  • Zusammenfassend handelt es sich bei vorzugsweise einzusetzenden Fettalkoholalkoxylaten um Verbindungen der Formel mit k = 11 bis 19, m = 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8. Ganz besonders bevorzugte Vertreter sind C12-18 Fettalkohole mit 7 EO (k = 11-17, m = 7 in Formel (V)).
  • Weitere nichtionische Tenside, die im Sinne der vorliegenden Erfindung in den beschriebenen Mitteln enthalten sein können, schließen ein, sind aber nicht beschränkt auf Alkylglykoside, alkoxylierte Fettsäurealkylester, Aminoxide, Fettsäurealkanolamide, Hydroxymischether, Sorbitanfettsäurester, Polyhydroxyfettsäureamide und alkoxylierte Alkohole.
  • Geeignete Amphotenside sind beispielsweise Betaine der Formel (Riii)(Riv)(Rv)N+CH2COO-, in der Riii einen gegebenenfalls durch Heteroatome oder Heteroatomgruppen unterbrochenen Alkylrest mit 8 bis 25, vorzugsweise 10 bis 21 Kohlenstoffatomen und Riv sowie Rv gleichartige oder verschiedene Alkylreste mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen bedeuten, insbesondere C10-C18-Alkyl-dimethylcarboxymethylbetain und C11-C17-Alkylamidopropyl-dimethylcarboxymethylbetain.
  • Geeignete Kationtenside sind u.a. die quartären Ammoniumverbindungen der Formel (Rvi)(Rvii)(Rviii)(Rix)N+ X-, in der Rvi bis Rix für vier gleich- oder verschiedenartige, insbesondere zwei lang- und zwei kurzkettige, Alkylreste und X- für ein Anion, insbesondere ein Halogenidion, stehen, beispielsweise Didecyldimethylammoniumchlorid, Alkylbenzyldidecylammoniumchlorid und deren Mischungen. Weitere geeignete kationische Tenside sind die quaternären oberflächenaktiven Verbindungen, insbesondere mit einer Sulfonium-, Phosphonium-, Jodonium- oder Arsoniumgruppe, die auch als antimikrobielle Wirkstoffe bekannt sind. Durch den Einsatz von quaternären oberflächenaktiven Verbindungen mit antimikrobieller Wirkung kann das Mittel mit einer antimikrobiellen Wirkung ausgestaltet werden bzw. dessen gegebenenfalls aufgrund anderer Inhaltsstoffe bereits vorhandene antimikrobielle Wirkung verbessert werden.
  • In verschiedenen Ausführungsformen beträgt die Gesamtmenge der Tenside bezogen auf das Gewicht des Mittels 2 bis 30 Gew.-%, vorzugsweise 5 bis 25 Gew.-%, noch bevorzugter 10 bis 20 Gew.-%, am bevorzugtesten 14 bis 18 Gew.-%, wobei die (linearen) Alkylbenzolsulfonate höchstens in einer Menge von 0,001 bis 30 Gew.-%, vorzugsweise 0,001 - 10 Gew.-%, ferner bevorzugt 2 - 6 Gew.-%, noch bevorzugter 3 - 5 Gew.-%, bezogen auf das Gewicht des Mittels vorliegen.
  • Erfindungsgemäße Wasch- oder Reinigungsmittel können neben der Cutinase weitere Enzyme enthalten. Dies können hydrolytische Enzyme oder andere Enzyme in einer für die Wirksamkeit des Mittels zweckmäßigen Konzentration sein. Eine Ausführungsform der Erfindung stellen somit Mittel dar, die eines oder mehrere Enzyme umfassen. Als Enzyme bevorzugt einsetzbar sind alle Enzyme, die in dem erfindungsgemäßen Mittel eine katalytische Aktivität entfalten können, insbesondere eine Protease, Amylase, Cellulase, Hemicellulase, Mannanase, Tannase, Xylanase, Xanthanase, Xyloglucanase, β-Glucosidase, Pektinase, Carrageenase, Perhydrolase, Oxidase, Oxidoreduktase oder eine Lipase, sowie deren Gemische. Enzyme sind in dem Mittel vorteilhafterweise jeweils in einer Menge von 1 x 10-8 bis 5 Gew.-%bezogen auf aktives Protein enthalten. Zunehmend bevorzugt ist jedes Enzym in einer Menge von 1 x 10-7-3 Gew.-%, von 0,00001-1 Gew.-%, von 0,00005-0,5 Gew.-%, von 0,0001 bis 0,1 Gew.-% und besonders bevorzugt von 0,0001 bis 0,05 Gew.-% in erfindungsgemäßen Mitteln enthalten, bezogen auf aktives Protein. Besonders bevorzugt zeigen die Enzyme synergistische Reinigungsleistungen gegenüber bestimmten Anschmutzungen oder Flecken, d.h. die in der Mittelzusammensetzung enthaltenen Enzyme unterstützen sich in ihrer Reinigungsleistung gegenseitig. Synergistische Effekte können nicht nur zwischen verschiedenen Enzymen, sondern auch zwischen einem oder mehreren Enzymen und weiteren Inhaltsstoffen des erfindungsgemäßen Mittels auftreten.
  • Bei der/den Amylase(n) handelt es sich vorzugsweise um eine α-Amylase. Bei der Hemicellulase handelt es sich vorzugsweise um eine β-Glucanase, eine Pektinase, eine Pullulanase und/oder eine Mannanase. Bei der Cellulase handelt es sich vorzugsweise um ein Cellulase-Gemisch oder eine Einkomponenten-Cellulase, vorzugsweise bzw. überwiegend um eine Endoglucanase und/oder eine Cellobiohydrolase. Bei der Oxidoreduktase handelt es sich vorzugsweise um eine Oxidase, insbesondere eine Cholin-Oxidase, oder um eine Perhydrolase.
  • Die eingesetzten Proteasen sind vorzugsweise alkalische Serin-Proteasen. Sie wirken als unspezifische Endopeptidasen, das heißt, sie hydrolysieren beliebige Säureamidbindungen, die im Inneren von Peptiden oder Proteinen liegen und bewirken dadurch den Abbau proteinhaltiger Anschmutzungen auf dem Reinigungsgut. Ihr pH-Optimum liegt meist im deutlich alkalischen Bereich.
  • Die Proteinkonzentration kann mit Hilfe bekannter Methoden, zum Beispiel dem BCA-Verfahren (Bicinchoninsäure; 2,2'-Bichinolyl-4,4'-dicarbonsäure) oder dem Biuret-Verfahren bestimmt werden. Die Bestimmung der Aktivproteinkonzentration erfolgt diesbezüglich über eine Titration der aktiven Zentren unter Verwendung eines geeigneten irreversiblen Inhibitors (für Proteasen beispielsweise Phenylmethylsulfonylfluorid (PMSF)) und Bestimmung der Restaktivität (vgl. M. Bender et al., J. Am. Chem. Soc. 88, 24 (1966), S. 5890-5913).
  • In den hierin beschriebenen Reinigungsmitteln können die einzusetzenden Enzyme ferner zusammen mit Begleitstoffen, etwa aus der Fermentation, konfektioniert sein. In flüssigen Formulierungen werden die Enzyme bevorzugt als Enzymflüssigformulierung(en) eingesetzt.
  • Die Enzyme werden in der Regel nicht in Form des reinen Proteins, sondern vielmehr in Form stabilisierter, lager- und transportfähiger Zubereitungen bereitgestellt. Zu diesen vorkonfektionierten Zubereitungen zählen beispielsweise die durch Granulation, Extrusion oder Lyophilisierung erhaltenen festen Präparationen oder, insbesondere bei flüssigen oder gelförmigen Mitteln, Lösungen der Enzyme, vorteilhafterweise möglichst konzentriert, wasserarm und/oder mit Stabilisatoren oder weiteren Hilfsmitteln versetzt.
  • Alternativ können die Enzyme sowohl für die feste als auch für die flüssige Darreichungsform verkapselt werden, beispielsweise durch Sprühtrocknung oder Extrusion der Enzymlösung zusammen mit einem vorzugsweise natürlichen Polymer oder in Form von Kapseln, beispielsweise solchen, bei denen die Enzyme wie in einem erstarrten Gel eingeschlossen sind oder in solchen vom Kern-Schale-Typ, bei dem ein enzymhaltiger Kern mit einer Wasser-, Luft- und/oder Chemikalien-undurchlässigen Schutzschicht überzogen ist. In aufgelagerten Schichten können zusätzlich weitere Wirkstoffe, beispielsweise Stabilisatoren, Emulgatoren, Pigmente, Bleich- oder Farbstoffe aufgebracht werden. Derartige Kapseln werden nach an sich bekannten Methoden, beispielsweise durch Schüttel- oder Rollgranulation oder in Fluid-bed-Prozessen aufgebracht. Vorteilhafterweise sind derartige Granulate, beispielsweise durch Aufbringen polymerer Filmbildner, staubarm und aufgrund der Beschichtung lagerstabil.
  • Weiterhin ist es möglich, zwei oder mehrere Enzyme zusammen zu konfektionieren, so dass ein einzelnes Granulat mehrere Enzymaktivitäten aufweist.
  • In verschiedenen Ausführungsformen kann das erfindungsgemäße Mittel einen oder mehrere Enzymstabilisatoren aufweisen. Daher kann das erfindungsgemäße Mittel ferner einen Enzymstabilisator beispielsweise ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Natriumformiat, Natriumsulfat, niederen aliphatischen Alkoholen und Borsäure sowie deren Estern und Salzen enthalten. Natürlich können auch zwei oder mehr dieser Verbindungen in Kombination eingesetzt werden. Die Salze der genannten Verbindungen können auch in Form von Hydraten, wie beispielsweise Natriumsulfat Dekahydrat, eingesetzt werden.
  • Der Begriff "niedere aliphatische Alkohole", wie hierin verwendet, schließt Monoalkohole, Diole und höherwertige Alkohole mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen ein. Als zu der Gruppe der niederen aliphatischen Alkohole gehörend seien in diesem Zusammenhang insbesondere Polyole, beispielsweise Glycerin, (Mono)Ethylenglykol, (Mono)Propylenglykol oder Sorbit genannt, ohne dass die Erfindung auf diese beschränkt ist.
  • Neben dem mindestens einen Enzymstabilisator, ausgewählt aus der obenstehenden Gruppe, kann ein erfindungsgemäßes Mittel auch mindestens einen weiteren Stabilisator enthalten. Derartige Stabilisatoren sind im Stand der Technik bekannt.
  • Reversible Proteaseinhibitoren schützen die in einem Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltenen Enzyme vor proteolytischem Abbau, indem die enzymatische Tätigkeit der in dem Mittel enthaltenen Proteasen reversibel inhibiert wird. Als reversible Proteaseinhibitoren werden häufig Benzamidin-Hydrochlorid, Boronsäuren oder deren Salze oder Ester eingesetzt, darunter vor allem Derivate mit aromatischen Gruppen, etwa ortho-, meta- oder para-substituierte Phenylboronsäuren, insbesondere 4-Formylphenyl-Boronsäure, beziehungsweise die Salze oder Ester der genannten Verbindungen. Auch Peptidaldehyde, das heißt Oligopeptide mit reduziertem C-Terminus, insbesondere solche aus 2 bis 50 Monomeren werden zu diesem Zweck eingesetzt. Zu den peptidischen reversiblen Proteaseinhibitoren gehören unter anderem Ovomucoid und Leupeptin.
  • Weitere Enzymstabilisatoren sind Aminoalkohole wie Mono-, Di-, Triethanol- und -Propanolamin und deren Mischungen, aliphatische Carbonsäuren bis zu C12, wie beispielsweise Bernsteinsäure, andere Dicarbonsäuren oder Salze der genannten Säuren. Auch endgruppenverschlossene Fettsäureamidalkoxylate sind für diesen Zweck geeignet. Auch manche als Builder eingesetzte organische Säuren vermögen zusätzlich ein Enzym zu stabilisieren. Auch Calcium- und/oder Magnesiumsalze werden zu diesem Zwecke eingesetzt, wie beispielsweise Calciumacetat.
  • Polyamid-Oligomere oder polymere Verbindungen wie Lignin, wasserlösliche Vinyl-Copolymere oder Cellulose-Ether, Acryl-Polymere und/oder Polyamide stabilisieren die Enzym-Präparation unter anderem gegenüber physikalischen Einflüssen oder pH-Wert-Schwankungen. Polyamin-N-Oxid-enthaltende Polymere wirken gleichzeitig als Enzymstabilisatoren und als Farbübertragungsinhibitoren. Andere polymere Stabilisatoren sind lineare C8-C18 Polyoxyalkylene. Auch Alkylpolyglycoside können die enzymatischen Komponenten des erfindungsgemäßen Mittels stabilisieren und vermögen vorzugsweise, diese zusätzlich in ihrer Leistung zu steigern. Vernetzte N-haltige Verbindungen erfüllen vorzugsweise eine Doppelfunktion als Soil-release-Agentien und als Enzym-Stabilisatoren. Hydrophobes, nichtionisches Polymer stabilisiert insbesondere eine gegebenenfalls enthaltene Cellulase.
  • Reduktionsmittel und Antioxidantien erhöhen die Stabilität der Enzyme gegenüber oxidativem Zerfall; hierfür sind beispielsweise schwefelhaltige Reduktionsmittel geläufig, etwa Natrium-Sulfit und reduzierende Zucker.
  • In einer Ausführungsform sind die Wasch- oder Reinigungsmittel gemäß der vorliegenden Erfindung flüssig und enthalten Wasser als Hauptlösungsmittel, d.h. es handelt sich um wässrige Mittel. Der Wassergehalt des erfindungsgemäßen wässrigen Mittels beträgt üblicherweise 15 bis 70 Gew.-%, vorzugsweise 20 bis 60 Gew.-%. In verschiedenen Ausführungsformen beträgt der Wassergehalt mehr als 5 Gew.-%, bevorzugt mehr als 15 Gew.-% und insbesondere bevorzugt mehr als 50 Gew.-%, jeweils bezogen auf die Gesamtmenge an Mittel.
  • Daneben können dem Mittel nichtwässrige Lösungsmittel zugesetzt werden. Geeignete nichtwässrige Lösungsmittel umfassen ein- oder mehrwertige Alkohole, Alkanolamine oder Glykolether, sofern sie im angegebenen Konzentrationsbereich mit Wasser mischbar sind. Vorzugsweise werden die Lösungsmittel ausgewählt aus Ethanol, n-Propanol, i-Propanol, Butanolen, Glykol, Propandiol, Butandiol, Methylpropandiol, Glycerin, Diglykol, Propyldiglycol, Butyldiglykol, Hexylenglycol, Ethylenglykolmethylether, Ethylenglykolethylether, Ethylenglykolpropylether, Ethylenglykolmono-n-butylether, Diethylenglykolmethylether, Diethylenglykolethylether, Propylenglykolmethylether, Propylenglykolethylether, Propylenglykolpropylether, Dipropylenglykolmonomethylether, Dipropylenglykolmonoethylether, Methoxytriglykol, Ethoxytriglykol, Butoxytriglykol, 1-Butoxyethoxy-2-propanol, 3-Methyl-3-methoxybutanol, Propylen-glykol-t-butylether, Di-n-octylether sowie Mischungen dieser Lösungsmittel.
  • Das eine oder die mehreren nichtwässrigen Lösungsmittel ist/sind üblicherweise in einer Menge von 0,1 bis 10 Gew.-%, vorzugsweise 1 bis 8 Gew.-% bezogen auf die Gesamtzusammensetzung enthalten.
  • Neben den bisher genannten Komponenten können die erfindungsgemäßen Mittel weitere Inhaltsstoffe enthalten, die die anwendungstechnischen und/oder ästhetischen Eigenschaften des Reinigungsmittels weiter verbessern. Hierzu zählen beispielsweise Additive zur Verbesserung des Ablauf- und Trocknungsverhaltens, zur Einstellung der Viskosität und/oder zur Stabilisierung, sowie weitere in Reinigungsmitteln übliche Hilfs- und Zusatzstoffe, etwa UV-Stabilisatoren, Parfüm, Perlglanzmittel, Farbstoffe, Korrosionsinhibitoren, Konservierungsmittel, Bitterstoffe, organische Salze, Desinfektionsmittel, strukturgebende Polymere, Entschäumer, verkapselte Inhaltsstoffe (z.B. verkapseltes Parfum), pH-Stellmittel sowie Hautgefühl-verbessernde oder pflegende Additive.
  • Ein erfindungsgemäßes Wasch- oder Reinigungsmittel, enthält vorzugsweise mindestens einen wasserlöslichen und/oder wasserunlöslichen, organischen und/oder anorganischen Builder (Gerüststoffe).
  • Zu den generell einsetzbaren Gerüststoffen zählen insbesondere die Aminocarbonsäuren und deren Salze, Zeolithe, Silikate, Carbonate, organische (Co)Builder und - wo keine ökologischen Vorurteile gegen ihren Einsatz bestehen - auch die Phosphate. Vorzugsweise sind die Mittel aber phosphatfrei.
  • Zu den wasserlöslichen organischen Buildersubstanzen gehören Polycarbonsäuren, insbesondere Citronensäure und Zuckersäuren, monomere und polymere Aminopolycarbonsäuren, insbesondere Methylglycindiessigsäure, Nitrilotriessigsäure und Ethylendiamintetraessigsäure sowie Polyasparaginsäure, Polyphosphonsäuren, insbesondere Aminotris(methylenphosphonsäure), Ethylendiamintetrakis(methylenphosphonsäure) und 1-Hydroxyethan-1,1-diphosphonsäure, polymere Hydroxyverbindungen wie Dextrin sowie polymere (Poly-)carbonsäuren, polymere Acrylsäuren, Methacrylsäuren, Maleinsäuren und Mischpolymere aus diesen, die auch geringe Anteile polymerisierbarer Substanzen ohne Carbonsäurefunktionalität einpolymerisiert enthalten können. Geeignete, wenn auch weniger bevorzugte Verbindungen dieser Klasse sind Copolymere der Acrylsäure oder Methacrylsäure mit Vinylethern, wie Vinylmethylethern, Vinylester, Ethylen, Propylen und Styrol, in denen der Anteil der Säure mindestens 50 Gew.-% beträgt. Die organischen Buildersubstanzen können, insbesondere zur Herstellung flüssiger Mittel, in Form wässriger Lösungen, vorzugsweise in Form 30- bis 50-gewichtsprozentiger wässriger Lösungen eingesetzt werden. Alle genannten Säuren werden in der Regel in Form ihrer wasserlöslichen Salze, insbesondere ihre Alkalisalze, eingesetzt.
  • Organische Buildersubstanzen können, falls gewünscht, in Mengen bis zu 40 Gew.-%, insbesondere bis zu 25 Gew.-% und vorzugsweise von 1 Gew.-% bis 8 Gew.-% enthalten sein. Mengen nahe der genannten Obergrenze werden vorzugsweise in pastenförmigen oder flüssigen, insbesondere wasserhaltigen, erfindungsgemäßen Mitteln eingesetzt. Erfindungsgemäße Wäschenachbehandlungsmittel, wie z.B. Weichspüler, können gegebenenfalls auch frei von organischem Builder sein.
  • Als wasserlösliche anorganische Buildermaterialien kommen insbesondere Alkalisilikate und, falls keine Bedenken wegen ihres Einsatzes bestehen, auch Polyphosphate, vorzugsweise Natriumtriphosphat, in Betracht. Als wasserunlösliche, wasserdispergierbare anorganische Buildermaterialien können insbesondere kristalline oder amorphe Alkalialumosilikate, falls gewünscht, in Mengen von bis zu 50 Gew.-%, vorzugsweise nicht über 40 Gew.-% und in flüssigen Mitteln insbesondere von 1 Gew.-% bis 5 Gew.-%, eingesetzt werden. Unter diesen sind die kristallinen Natriumalumosilikate in Waschmittelqualität, insbesondere Zeolith A, P und gegebenenfalls X, bevorzugt. Mengen nahe der genannten Obergrenze werden vorzugsweise in festen, teilchenförmigen Mitteln eingesetzt. Geeignete Alumosilikate weisen insbesondere keine Teilchen mit einer Korngröße über 30 µm auf und bestehen vorzugsweise zu wenigstens 80 Gew.-% aus Teilchen mit einer Größe unter 10 µm.
  • Geeignete Substitute beziehungsweise Teilsubstitute für das genannte Alumosilikat sind kristalline Alkalisilikate, die allein oder im Gemisch mit amorphen Silikaten vorliegen können. Die in den erfindungsgemäßen Mitteln als Gerüststoffe brauchbaren Alkalisilikate weisen vorzugsweise ein molares Verhältnis von Alkalioxid zu SiO2 unter 0,95, insbesondere von 1:1,1 bis 1:12 auf und können amorph oder kristallin vorliegen. Bevorzugte Alkalisilikate sind die Natriumsilikate, insbesondere die amorphen Natriumsilikate, mit einem molaren Verhältnis Na2O:SiO2 von 1:2 bis 1:2,8. Als kristalline Silikate, die allein oder im Gemisch mit amorphen Silikaten vorliegen können, werden vorzugsweise kristalline Schichtsilikate der allgemeinen Formel Na2SixO2x+1 · y H2O eingesetzt, in der x, das sogenannte Modul, eine Zahl von 1,9 bis 4 und y eine Zahl von 0 bis 20 ist und bevorzugte Werte für x 2, 3 oder 4 sind. Bevorzugte kristalline Schichtsilikate sind solche, bei denen x in der genannten allgemeinen Formel die Werte 2 oder 3 annimmt. Insbesondere sind sowohl beta- als auch delta-Natriumdisilikate (Na2Si2O5 · y H2O) bevorzugt. Auch aus amorphen Alkalisilikaten hergestellte, praktisch wasserfreie kristalline Alkalisilikate der obengenannten allgemeinen Formel, in der x eine Zahl von 1,9 bis 2,1 bedeutet, können in erfindungsgemäßen Mitteln eingesetzt werden. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform erfindungsgemäßer Mittel wird ein kristallines Natriumschichtsilikat mit einem Modul von 2 bis 3 eingesetzt, wie es aus Sand und Soda hergestellt werden kann. Kristalline Natriumsilikate mit einem Modul im Bereich von 1,9 bis 3,5 werden in einer weiteren bevorzugten Ausführungsform erfindungsgemäßer Mittel eingesetzt. Falls als zusätzliche Buildersubstanz auch Alkalialumosilikat, insbesondere Zeolith, vorhanden ist, beträgt das Gewichtsverhältnis Alumosilikat zu Silikat, jeweils bezogen auf wasserfreie Aktivsubstanzen, vorzugsweise 1:10 bis 10:1. In Mitteln, die sowohl amorphe als auch kristalline Alkalisilikate enthalten, beträgt das Gewichtsverhältnis von amorphem Alkalisilikat zu kristallinem Alkalisilikat vorzugsweise 1:2 bis 2:1 und insbesondere 1:1 bis 2:1.
  • Buildersubstanzen sind, falls gewünscht, in den erfindungsgemäßen Mitteln vorzugsweise in Mengen bis zu 60 Gew.-%, insbesondere von 5 Gew.-% bis 40 Gew.-%, enthalten. Besonders bevorzugt sind in flüssigen Formulierungen wasserlösliche Builder. Erfindungsgemäße Wäschenachbehandlungsmittel, wie z.B. Weichspüler, sind vorzugsweise frei von anorganischem Builder.
  • Polymere Verdickungsmittel im Sinne der vorliegenden Erfindung sind die als Polyelektrolyte verdickend wirkenden Polycarboxylate, vorzugsweise Homo- und Copolymerisate der Acrylsäure, insbesondere Acrylsäure-Copolymere wie Acrylsäure-Methacrylsäure-Copolymere, und die Polysaccharide, insbesondere Heteropolysaccharide, sowie andere übliche verdickende Polymere.
  • Geeignete Polysaccharide bzw. Heteropolysaccharide sind die Polysaccharidgummen, beispielsweise Gummi arabicum, Agar, Alginate, Carrageene und ihre Salze, Guar, Guaran, Tragacant, Gellan, Ramsan, Dextran oder Xanthan und ihre Derivate, z.B. propoxyliertes Guar, sowie ihre Mischungen. Andere Polysaccharidverdicker, wie Stärken oder Cellulosederivate, können alternativ, vorzugsweise aber zusätzlich zu einem Polysaccharidgummi eingesetzt werden, beispielsweise Stärken verschiedensten Ursprungs und Stärkederivate, z.B. Hydroxyethylstärke, Stärkephosphatester oder Stärkeacetate, oder Carboxymethylcellulose bzw. ihr Natriumsalz, Methyl-, Ethyl-, Hydroxyethyl-, Hydroxypropyl-, Hydroxypropyl-methyl- oder Hydroxyethyl-methylcellulose oder Celluloseacetat.
  • Als polymere Verdickungsmittel geeignete Acrylsäure-Polymere sind beispielsweise hochmolekulare mit einem Polyalkenylpolyether, insbesondere einem Allylether von Saccharose, Pentaerythrit oder Propylen, vernetzte Homopolymere der Acrylsäure (INCI Carbomer), die auch als Carboxyvinylpolymere bezeichnet werden.
  • Besonders geeignete polymere Verdickungsmittel sind aber folgende Acrylsäure-Copolymere: (i) Copolymere von zwei oder mehr Monomeren aus der Gruppe der Acrylsäure, Methacrylsäure und ihrer einfachen, vorzugsweise mit C1-4-Alkanolen gebildeten, Ester (INCI Acrylates Copolymer), zu denen etwa die Copolymere von Methacrylsäure, Butylacrylat und Methylmethacrylat (CAS 25035-69-2) oder von Butylacrylat und Methylmethacrylat (CAS 25852-37-3) gehören; (ii) vernetzte hochmolekulare Acrylsäurecopolymere, zu denen etwa die mit einem Allylether der Saccharose oder des Pentaerythrits vernetzten Copolymere von C10-30-Alkylacrylaten mit einem oder mehreren Monomeren aus der Gruppe der Acrylsäure, Methacrylsäure und ihrer einfachen, vorzugsweise mit C1-4-Alkanolen gebildeten, Ester (INCI Acrylates/C10-30 Alkyl Acrylate Crosspolymer) gehören.
  • Der Gehalt an polymerem Verdickungsmittel beträgt üblicherweise nicht mehr als 8 Gew.-%, vorzugsweise zwischen 0,1 und 7 Gew.-%, besonders bevorzugt zwischen 0,5 und 6 Gew.-%, insbesondere zwischen 1 und 5 Gew.-% und äußerst bevorzugt zwischen 1,5 und 4 Gew.-%, beispielsweise zwischen 2 und 2,5 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels.
  • Zur Stabilisierung des erfindungsgemäßen Mittels, insbesondere bei hohem Tensidgehalt, können ein oder mehrere Dicarbonsäuren und/oder deren Salze zugesetzt werden, insbesondere eine Zusammensetzung aus Na-Salzen der Adipin-, Bernstein- und Glutarsäure, wie sie z.B. unter dem Handelsnamen Sokalan® DSC erhältlich ist. Der Einsatz erfolgt hierbei vorteilhafterweise in Mengen von 0,1 bis 8 Gew.-%, vorzugsweise 0,5 bis 7 Gew.-%, insbesondere 1,3 bis 6 Gew.-% und besonders bevorzugt 2 bis 4 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Reinigungsmittels. Kann jedoch auf deren Einsatz verzichtet werden, so ist das erfindungsgemäße Mittel vorzugsweise frei von Dicarbonsäure(salze)n.
  • Die erfindungsgemäßen Waschmittel können mit Referenzwaschmitteln verglichen werden, um die erhöhte Anti-Pilling-Leistung der erfindungsgemäßen Mittel festzustellen. Ein solches Waschsystem kann wie folgt zusammengesetzt sein (alle Angaben in Gewichts-Prozent): Referenzmittel: 4,4% Alkylbenzolsulfonsäure, 5,6% weitere anionische Tenside, 2,4% C12-C18 Na-Salze von Fettsäuren (Seifen), 4,4% nicht-ionische Tenside, 0,2% Phosphonate, 1,4% Zitronensäure, 0,95% NaOH, 0,01% Entschäumer, 2,0% Glycerin, 0,08% Konservierungsstoffe, 1% Ethanol, 1,6% Enzymmix (Protease, Amylase, Cellulase, Mannase), Rest demineralisiertes Wasser. Erfindungsgemäßes Mittel: 4,4% Alkylbenzolsulfonsäure, 5,6% weitere anionische Tenside, 2,4% C12-C18 Na-Salze von Fettsäuren (Seifen), 4,4% nicht-ionische Tenside, 0,2% Phosphonate, 1,4% Zitronensäure, 0,95% NaOH, 0,01% Entschäumer, 2,0% Glycerin, 0,08% Konservierungsstoffe, 1% Ethanol, 1,6% Enzymmix (Protease, Amylase, Cellulase, Mannase), 0,009 % Cutinase, Rest demineralisiertes Wasser. Bevorzugt beträgt die Dosierung des flüssigen Waschmittels zwischen 4,5 und 6,0 Gramm pro Liter Waschflotte, beispielsweise 4,7, 4,9 oder 5,9 Gramm pro Liter Waschflotte. Bevorzugt wird gewaschen in einem pH-Wertebereich zwischen pH 8 und pH 10,5, bevorzugt zwischen pH 8 und pH 9.
  • Die zuvor genannten Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung umfassen alle festen, pulverförmigen, flüssigen, gelförmigen oder pastösen Darreichungsformen erfindungsgemäßer Wasch- oder Reinigungsmittel, die gegebenenfalls auch aus mehreren Phasen bestehen können sowie in komprimierter oder nicht komprimierter Form vorliegen können. Das Mittel kann als rieselfähiges Pulver vorliegen, insbesondere mit einem Schüttgewicht von 300 g/l bis 1200 g/l, insbesondere 500 g/l bis 900 g/l oder 600 g/l bis 850 g/l. Zu den festen Darreichungsformen des Mittels zählen ferner Extrudate, Granulate, Tabletten oder Pouches. Alternativ kann das Mittel auch flüssig, gelförmig oder pastös sein, beispielsweise in Form eines nicht-wässrigen Flüssigwaschmittels oder einer nicht-wässrigen Paste oder in Form eines wässrigen Flüssigwaschmittels oder einer wasserhaltigen Paste. Weiterhin kann das Mittel als Einkomponentensystem vorliegen. Solche Mittel bestehen aus einer Phase. Alternativ kann ein Mittel auch aus mehreren Phasen bestehen, d.h. beispielsweise ein- oder zwei- oder mehrphasig sein. Ein solches Mittel ist demnach in mehrere Komponenten aufgeteilt (Mehrkomponentensystem).
  • Ein weiterer Erfindungsgegenstand ist ein Verfahren zur Reinigung von Textilien, das dadurch gekennzeichnet ist, dass in mindestens einem Verfahrensschritt ein erfindungsgemäßes Mittel angewendet wird. Die Textilien enthalten vorzugsweise Polyester oder bestehen aus diesem. In verschieden Ausführungsformen zeichnet sich das oben beschriebene Verfahren dadurch aus, dass das erfindungsgemäße Mittel bei einer Temperatur von 0-100°C, bevorzugt 0-80°C, weiter bevorzugt 30-70°C und am meisten bevorzugt bei 40-60°C eingesetzt wird.
  • Hierunter fallen sowohl manuelle als auch maschinelle Verfahren, wobei maschinelle Verfahren bevorzugt sind. Verfahren zur Reinigung von Textilien zeichnen sich im Allgemeinen dadurch aus, dass in mehreren Verfahrensschritten verschiedene reinigungsaktive Substanzen auf das Reinigungsgut aufgebracht und nach der Einwirkzeit abgewaschen werden, oder dass das Reinigungsgut in sonstiger Weise mit einem Waschmittel oder einer Lösung oder Verdünnung dieses Mittels behandelt wird. Alle denkbaren Wasch- oder Reinigungsverfahren können in wenigstens einem der Verfahrensschritte um die Anwendung eines erfindungsgemäßen Wasch- oder Reinigungsmittels bereichert werden und stellen dann Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung dar. Alle Sachverhalte, Gegenstände und Ausführungsformen, die für erfindungsgemäße Mittel beschrieben sind, sind auch auf diesen Erfindungsgegenstand anwendbar. Daher wird an dieser Stelle ausdrücklich auf die Offenbarung an entsprechender Stelle verwiesen mit dem Hinweis, dass diese Offenbarung auch für die vorstehenden erfindungsgemäßen Verfahren gilt. Da Enzyme natürlicherweise bereits eine katalytische Aktivität besitzen und diese auch in Medien entfalten, die sonst keine Reinigungskraft besitzen wie beispielsweise in bloßem Puffer, kann ein einzelner und/oder der einzige Schritt eines solchen Verfahrens darin bestehen, dass als einzige reinigungsaktive Komponente eine Cutinase mit der Anschmutzung in Kontakt gebracht wird, bevorzugt in einer Pufferlösung oder in Wasser. Dies stellt eine weitere Ausführungsform dieses Erfindungsgegenstandes dar.
  • Alternative Ausführungsformen dieses Erfindungsgegenstandes stellen auch Verfahren zur Behandlung von Textilrohstoffen oder zur Textilpflege dar, bei denen in wenigstens einem Verfahrensschritt ein erfindungsgemäßes Mittel aktiv wird. Hierunter sind Verfahren für Textilrohstoffe, Fasern oder Textilien mit synthetischen Bestandteilen bevorzugt, und ganz besonders für solche mit Polyester.
  • Des Weiteren erfasst die Erfindung auch die Verwendung des hierin beschriebenen Wasch- oder Reinigungsmittels wie oben beschrieben, zur (verbesserten) Entfernung von Anschmutzungen, beispielsweise von Textilien, insbesondere Polyester-Textilien.
  • Schließlich bezieht sich die Erfindung auch auf die Verwendung einer Cutinase zur Verringerung von Pilling-Effekten eines Waschmittels, besonders bevorzugt eines Flüssigwaschmittels, wobei das Mittel die Cutinase enthält. Die Cutinase ist eine Cutinase wie sie hierin definiert ist. In verschiedenen Ausführungsformen der Verwendung ist die Cutinase in einer Menge von 0,00001 - 1 Gew.-%, bevorzugt in einer Menge von 0,0001 - 0,5 Gew.-%, besonders bevorzugt in einer Menge von 0,001 - 0,1 Gew.-%, in dem Mittel enthalten. In weiteren verschiedenen Ausführungsformen wird die Cutinase, die eine Verringerung des Pilling-Effekts bewirkt, auf Textilien, insbesondere Textilien, die aus Polyester bestehen oder Polyester umfassen, angewendet.
    • Beispiele Beispiel 1: Klonierung und Expression
  • Das Gen wurde codon-optimiert für die Expression in E.coli synthetisch hergestellt (SEQ ID NO:3), und dann in die Ndel und Xhol Stellen des Vectors PET-21b der Firma Novagen kloniert, so dass C-terminal eine Fusion mit einem 6x-Histidin-Tag entsteht. Das durch Sequenzierung bestätigte Plasmid wird mittels üblicher Transformationsprotokolle in elektrokompetente Zellen E.coli BL21(DE3)CodonPlus RIPL (Agilent Technologies) transformiert.
  • Die Anzucht erfolgt in LB-Medium bei 37°C, mit einer Induktion mit 0,1 mM IPTG bei einer OD von 0,6 und einer ab dann abgesenkten Expressionstemperatur auf 16°C.
  • Die Zellen werden durch Zentrifugation geerntet und in Lysis Puffer resuspendiert (50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 300 mM NaCl, 20 mM Imidazol). Der Zellaufschluß erfolgt mittels Ultraschall, mit anschließender Zentrifugation (15.000 x g , 20 min , 4°C). Der Überstand enthält die LC Cutinase mit HisTag.
  • Eine Aufreinigung über NiNTA (Qiagen, Hilden, DE) erfolgt nach dem Protokoll des Herstellers Qiagen.
    • Beispiel 2: Untersuchung mittels QCM-D
  • Die Abbau-Kinetik der hier beschriebenen Polyesterasen wurde mittels QCM-D (quartz crystal microbalance with dissipation monitoring) analysiert. Die Präparation der Polyester Modellsubstrate erfolgte ausgehend von kommerziell erhältliche AT-Cut QCM-D Kristalle (Biolin Scientific) mit einer typischen Resonanzfrequenz von 5MHz und einer Gold terminierten Elektrode. Mittels eines Spincoating-Prozess wurden diese Kristalle mit einer Polyester-Dünnschicht modifiziert.
  • Zu Beginn der Messung wurden die modifizierten Kristalle in einer mit Tris-HCl-Puffer durchspülten (Volumenstrom 60 µl·min-1) und konstant temperierten (T=50°C) Messzelle äquilibriert bis eine stabile Basislinie erreicht wurde (Abb. t=0h bis t=0,5h).
  • Anschließend wurde der vorgelegte Tris-HCl Puffer gegen eine Cutinase (SEQ ID NO:1) enthaltende (c= 0,15 mg/mL) Pufferlösung ausgetauscht (Abb. 1: t=0,5h) und die nach der Totzeit als Folge des Filmabbaus eintretende Massenabnahme aufgezeichnet (Abb. 1: t=0.55h bis t=1,1h) Aus den in Abbildung 1 dargestellten Ergebnissen erkennt man deutlich die schnell auftretende Massenabnahme, verursacht durch die Cutinase.
    • Beispiel 3: PET-Folienabbautest
  • Substrat: PET-Film: 0,25 mm dick, amorph, durchsichtig von GoodFellow Cambridge Limited, ES301445
    Durchführung in 2 mL Tubes
  • PET-Film (0,5 cm x 2,5 cm) wurde gewaschen mit (1) 1,7 mL 0,1 % SDS (w/v), 50 °C, 30 min, 400 rpm; (2) 1,5 mL Ethanol abs., 50 °C, 5 min, 700 rpm; (3) 1,7 mL doppelt destilliertem Wasser, 50 °C, 5 min, 700 rpm und 48 h bei 50 °C zur Konstanz getrocknet und gewogen. Danach folgte eine Inkubation (48 - 72 h bei 55 °C) mit festgelegter Menge Cutinase gemäß SEQ ID NO:1 (5, 25, 50 µg) im Gesamtvolumen 1,7 mL in Waschmittelmatrix (s. unten, Dosierung 4,7 g/L).
  • Nach Entfernung des Inkubationsüberstandes wurde der PET-Film gewaschen mit (1) 1,7 mL 0,1 % SDS (w/v) + 0,5 % Triton X-100 (w/v), 50 °C, 30 min, 400 rpm; (2) 1,5 mL Ethanol abs., 50 °C, 5 min, 700 rpm, (3) 1,7 mL doppelt destilliertem Wasser, 50 °C, 5 min, 700 rpm und 48 h bei 50 °C bis zur Konstanz getrocknet und gewogen. Es wurde der Gewichtsverlust ermittelt.
    • Ergebnis:
  • Angegeben ist der Gewichtsverlust im Vergleich zum unbehandelten Film nach 44 h Inkubation bei 50°C:
    • Waschmittel mit 25 µg Cutinase: - 0,57 mg Gewichtsverlust
    • Waschmittel mit 50 µg Cutinase: - 1,67 mg Gewichtsverlust
  • Man erkennt deutlich einen konzentrationsabhängigen PET-Abbau, verursacht durch die Cutinase in der Waschmittelmatrix.
    • Beispiel 4: Waschtest Verwendete Waschmittelmatrix
  • Dies ist eine handelsübliche Waschmittelmatrix (ohne opt. Aufheller, Parfüm und Farbstoffe), die für den Waschtest verwendet wurde:
    Chemischer Name Gew.-% Aktivsubstanz im Rohmaterial Gew.-% Aktivsubstanz in der Formulierung
    Wasser demin. 100 Rest
    Alkylbenzolsulfonsäure 96 4,4
    Anionische Tenside 70 5,6
    C12-C18 Fettsäure Na-Salz 30 2,4
    Nicht-ionische Tenside 100 4,4
    Phosphonate 40 0,2
    Zitronensäure 100 1,4
    NaOH 50 0,95
    Entschäumer t.q. 0,01
    Glycerin 100 2
    Konservierungsmittel 100 0,08
    Ethanol 93 1
    Ohne opt. Aufheller, Farbstoff, Parfüm und Enzyme
    Dosierung 4,7 g/L
    • Waschtest zur Bestimmung der Anti-Pilling-Leistung von Enzymen
  • In einer handelsüblichen Waschmaschine werden 20 identische Versuche hintereinander durchgeführt. Als zu beurteilende Textilien werden verschiedene Polyester und Mischtextilien benutzt, welche einmal neu und einmal vorgepillt sind. Nach den 20 Versuchen wird die Pillreduktion der vorgepillten Gewebe und die Pillbildung der neuen Gewebe optisch beurteilt.
  • Die vorgepillten Gewebe werden durch 20-fach wiederholte Waschzyklen bei 40°C in handelsüblichen Waschmaschinen hergestellt.
  • Nach jedem Waschzyklus wird die komplette Wäsche im Trockner getrocknet.
  • Waschbedingungen:
    • Wasser mit 16°dH, 2,5 kg saubere Füllwäsche, 60°C Normalprogramm, 80 g Waschmittel wie oben beschrieben pro Maschine
    • Dosierung der zu untersuchenden Cutinase: 4 mg Aktivenzym pro Waschmaschine
    • Probe 1: nur Waschmittel wie oben beschrieben (Vergleichsreferenz)
    • Probe 2: Waschmittel + 4 mg Cutinase (SEQ ID NO:1) (erfindungsgemäß)
    • Ergebnis nach 20 Wäschen auf 100% Polyester Textil:
      • Visuelle Abmusterung der Pills, Skala 1-5, sehr stark gepillt =1, nicht gepillt = 5
      • Probe 1: 2,0
      • Probe 2: 2,7
      • Eine Änderung von 0,5 Einheiten ist als signifikant anzusehen.
  • Die erfindungsgemäße Cutinase verbessert das Pill-Erscheinungsbild signifikant.

Claims (10)

  1. Wasch- oder Reinigungsmittel, dadurch gekennzeichnet, dass es eine Cutinase enthält, die mindestens 65 % Sequenzidentität mit der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge aufweist.
  2. Das Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Cutinase eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 98,8%, 99,0%, 99,2%, 99,4% oder 99,6% identisch ist.
  3. Das Mittel nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass
    (1) die Cutinase aus einer Cutinase nach Anspruch 1 oder 2 als Ausgangsmolekül durch ein- oder mehrfache konservative Aminosäuresubstitution erhältlich ist; und/oder
    (2) die Cutinase aus einer Cutinase nach Anspruch 1 oder 2 als Ausgangsmolekül erhältlich ist durch Fragmentierung, Deletions-, Insertions- oder Substitutionsmutagenese und eine Aminosäuresequenz umfasst, die über eine Länge von mindestens 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 245, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263 oder 264 zusammenhängenden Aminosäuren mit dem Ausgangsmolekül übereinstimmt.
  4. Das Mittel nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei die Cutinase in einer Menge von 0,00001 - 1 Gew.-%, bevorzugt in einer Menge von 0,0001 - 0,5 Gew.-%, besonders bevorzugt in einer Menge von 0,001 - 0,1 Gew.-% in dem Mittel enthalten ist.
  5. Das Mittel nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass
    a. es mindestens einen zusätzlichen Inhaltsstoff ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Tensiden, Buildern (Gerüststoffe), Bleichmitteln, Bleichaktivatoren, wassermischbare organische Lösungsmittel, weitere Enzyme, Sequestrierungsmittel, Elektrolyte, pH-Regulatoren, optische Aufheller, Vergrauungsinhibitoren, Schaumregulatoren, Farb- und Duftstoffe sowie Kombinationen hiervon enthält; und/oder
    b. es in fester oder flüssiger, bevorzugt flüssiger, Form vorliegt.
  6. Verfahren zur Reinigung von Textilien, dadurch gekennzeichnet, dass in mindestens einem Verfahrensschritt ein Mittel nach einem der Ansprüche 1 bis 5 angewendet wird.
  7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass die Textilien Polyester enthalten oder daraus bestehen.
  8. Verwendung eines Mittels nach einem der Ansprüche 1 bis 5 zur Entfernung von Anschmutzungen, insbesondere von Polyester-haltigen Textilien.
  9. Verwendung einer Cutinase, die mindestens 65 % Sequenzidentität mit der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge aufweist, zur Verringerung von Pilling-Effekten und/oder Steigerung der Anti-Grau-Wirkung eines Mittels, vorzugsweise eines Waschmittels, besonders bevorzugt eines Flüssigwaschmittels, wobei das Mittel die Cutinase enthält.
  10. Die Verwendung nach Anspruch 9, wobei
    a. die Cutinase wie in Anspruch 2 oder 3 definiert ist; und/oder
    b. die Cutinase in einer Menge wie in Anspruch 4 definiert in dem Mittel enthalten ist; und/oder
    c. das Mittel wie in Anspruch 5 definiert ist.
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