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EP0613483A1 - Nouveaux derives du lupane, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent - Google Patents

Nouveaux derives du lupane, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent

Info

Publication number
EP0613483A1
EP0613483A1 EP93900240A EP93900240A EP0613483A1 EP 0613483 A1 EP0613483 A1 EP 0613483A1 EP 93900240 A EP93900240 A EP 93900240A EP 93900240 A EP93900240 A EP 93900240A EP 0613483 A1 EP0613483 A1 EP 0613483A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
radical
oyl
temperature
acid
region
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP93900240A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Romaine Bouboutou
Norbert Dereu
Michel Evers
Jean-Christophe Gueguen
Claude James
Christèle Poujade
Daniel Reisdorf
Yves Ribeill
Françoise Soler
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Aventis Pharma SA
Original Assignee
Rhone Poulenc Rorer SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Rhone Poulenc Rorer SA filed Critical Rhone Poulenc Rorer SA
Publication of EP0613483A1 publication Critical patent/EP0613483A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J63/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton has been modified by expansion of only one ring by one or two atoms
    • C07J63/008—Expansion of ring D by one atom, e.g. D homo steroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals

Definitions

  • the present invention relates to new lupane derivatives, of general formula:
  • R 1 and R 2 are hydroxy or acyloxy and R 3 is in particular methyl. These derivatives are useful in the field of anticancer agents.
  • R 'and R " which are identical or different, are hydrogen atoms or alkyl radicals
  • X is a bond or represents a carbamoyl, N-methyl carbamoyl, aminocarbonyl or N-methylaminocarbonyl radical,
  • Y is a bond or represents a phenylene radical
  • R ° and R °° identical or different are hydrogen atoms or alkyl radicals (it being understood that R ° and R °° are not necessarily identical on each unit -CR ° R °° -), or R ° is hydroxy, hydroxyalkyl, phenyle, benzyl, carbamoylmethyl or alternatively, when Y is a bond and X is carbamoyl, Ro can form a 5 or 6-membered ring with the nitrogen atom contained in X, this cycle being able moreover to include a other heteroatom chosen from oxygen or sulfur and, n, m and p are whole numbers from 0 to 16 such that m + n + p is between 4 and 16,
  • R 1 is a methyl radical, or forms with R 3 a methylene radical or an oxo radical,
  • R 2 is a hydroxy, methyl, hydroxymethyl radical or a -CH 2 OR ' 2 , -CH 2 SR' 2 or -CH 2 NHR ' 2 radical for which R' 2 is alkyl, hydroxyalkyl, dihydroxyalkyl, acetamidoalkyl, or acetyl, or R 2 is an amino radical substituted by a hydroxyalkyl or carboxyhydroxyalkyl radical, or a dialkoylamino radical, the alkyl parts of which may form, with the nitrogen atom to which they are attached, a 5 or 6-membered heterocycle optionally containing another chosen heteroatom among oxygen, sulfur or nitrogen and optionally N-alkylated, R 3 is a hydrogen atom or forms with R 1 or R 2 a methylene radical or an oxo radical.
  • R 4 and R 5 are different and represent a hydrogen atom or a hydroxy radical, or together form an oxo, hydroxyimino or alkyloxyimino radical optionally substituted (by a carboxy or dialkoylammo radical in which the alkyl parts can form with the atom nitrogen to which they are attached, a 5 or 6-membered heterocycle optionally containing another heteroatom chosen from oxygen, nitrogen or sulfur and optionally substituted by an alkyl radical) and
  • R 6 and R 7 are hydrogen atoms, or else R 4 and R 5 , and R 6 and R 7 together form oxo radicals, and their pharmaceutically acceptable salts, when they exist, exhibit a cytoprotective effect on infected cells by an HIV virus (Human Immunodeficiency Virus) as well as an activity inh ⁇ bitrice of the production of reverse transcriptase of an HIV virus.
  • HIV virus Human Immunodeficiency Virus
  • the alkyl radicals are straight or branched and contain 1 to 4 carbon atoms.
  • the products of general formula (I) can be obtained by the action of an amino acid of general formula: H 2 N - R (III) in which R is defined as above and of which, where appropriate, the function acid has been previously protected, on the acid chloride of general formula:
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 and R 7 are defined as above, followed, where appropriate, by transformation into an ester for which the symbol R 'is alkyl, then by removal of protective radicals.
  • R 2 , R 4 or R 5 represent or contain a hydroxy radical, the latter is protected beforehand; the same applies if R 2 contains a carboxy radical or if the substituent -CR 1 R 2 R 3 in position 19 is a carboxy radical.
  • the reaction of the amino acid on the chloride of lupen-20 (29) oic-28 acid of general formula (IV) is carried out according to the usual methods which do not alter the rest of the molecule.
  • the operation is carried out in particular in the presence of an organic nitrogenous base such as a trialkylamine (triethylamine for example) in an organic solvent such as a chlorinated solvent (chloroform, 1,2-dichloroethane, dichloromethane) or in tetrahydrofuran or in a mixture of these solvents, at a temperature between 15 and 30 ° C.
  • an organic nitrogenous base such as a trialkylamine (triethylamine for example)
  • an organic solvent such as a chlorinated solvent (chloroform, 1,2-dichloroethane, dichloromethane) or in tetrahydrofuran or in a mixture of these solvents
  • the acid function of the amino acid of general formula (III) is protected by any compatible radical and the establishment and elimination of which does not alter the rest of the molecule.
  • the radicals R 2 , R 4 or R 5 of the lupane derivative of general formula (IV) are protected by compatible radicals which can be put in place and eliminated without touching the rest of the molecule.
  • the protective groups can be chosen from the radicals described by TW GREENE, Protective Groups in Organic Synthesis, J. Wiley-Interscier.ee Publication (1991) or by Me Omie, Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press (1973). It is in particular advantageous to use protective radicals which can be eliminated simultaneously. We will choose radicals which can be eliminated in neutral, basic or acidic medium.
  • the protections can advantageously be carried out in the form of esters. In this case, the removal of the protective radicals is carried out by hydrolysis in a basic medium, in particular in the presence of soda at a temperature between 10 and 50 ° C.
  • the hydroxy radicals can be protected in the ester state (formyloxy, acetoxy, i.butoxy, trichloracetyloxy, phenoxyacetyloxy, benzyloxy), in the ketone state, in the form of carbonate by a radical - COOR a in which R a is an alkyl or benzyl radical optionally substituted or also by a trialkylsilyl radical;
  • the acid protecting radicals can be chosen from alkyl (methyl, ethyl, t.butyl), substituted alkyl (trichlorethyl, haloethyl, p.
  • the lupane derivative of general formula (I) for which R 4 and R 5 together form a hydroxyimino or alkyloxyimino radical optionally substituted as defined above, and the other radicals are defined as previously can also be obtained by the action of l hydroxylamine or one of its derivatives of general formula: R 8 -O-NH 2 (V) in which R 8 is a hydrogen atom or an alkyl radical optionally substituted (by a carboxy or dialkoylamino radical in which the alkyl parts can form with the nitrogen atom to which they are attached , a 5 or 6-membered heterocycle optionally containing another heteroatom chosen from oxygen, nitrogen or sulfur and optionally substituted by an alkyl radical), on a lupane derivative of general formula (I) in which R 4 and R 5 together form an oxo radical, then optionally release of the protective radicals.
  • R 8 contains a carboxy radical or if the lupane derivative of general formula (I) contains carboxy or hydroxy radicals, the latter are protected beforehand. The protection and the release of the protective radicals are carried out according to the methods mentioned above.
  • the reaction is advantageously carried out using the hydrochloride of the derivative of general formula (V) in pyridine at the reflux temperature of the reaction mixture, or in an alcohol in the presence of an alkaline carbonate at the reflux temperature of the reaction mixture.
  • the lupane derivative of general formula (I) for which R 1 and R 2 are methyl radicals, R 3 is a hydrogen atom and the other radicals are defined as above can also be obtained by reduction of a lupane derivative of general formula (I) for which R 1 and R 3 together form a methylene radical and R 2 is defined as above.
  • the reduction is carried out by any known method which does not affect the rest of the molecule.
  • the process is carried out by catalytic hydrogenation in the presence of palladium on carbon, at atmospheric pressure, at a temperature between 15 and 25 ° C. in a solvent such as an alcohol (methanol, ethanol for example).
  • the lupane derivative of general formula (I) for which R 2 is a hydroxy radical, R 1 is a methyl radical, R 3 is a hydrogen atom and the other radicals are defined as above can also be obtained by reduction of a lupane derivative of general formula (I) for which R 2 and R 3 together form an oxo radical and R 1 is a methyl radical.
  • the reduction is carried out by any known method which does not affect the rest of the molecule.
  • the reduction is carried out with an alkaline borohydride (sodium borohydride for example) in the presence of tetrabutylammonium chloride or tetraethylammonium, in a solvent such as an aromatic hydrocarbon (toluene for example), at a temperature between 50 ° C. and the reflux temperature of the reaction mixture.
  • alkaline borohydride sodium borohydride for example
  • tetrabutylammonium chloride or tetraethylammonium in a solvent such as an aromatic hydrocarbon (toluene for example
  • the radicals liable to interfere with the reaction are protected beforehand.
  • the protection and removal of protective radicals is carried out according to the methods mentioned above.
  • the lupane derivative of general formula (I) for which R 1 and R 3 together form an oxo radical, R 2 is a hydroxy radical and the other radicals are defined as previously can also be obtained by oxidation of a lupane derivative of general formula (I) for which R 1 and R 3 together form an oxo radical and R 2 is a methyl radical.
  • the reaction is generally carried out by the action of a hypochlorite or a hypobromite.
  • a hypochlorite or a hypobromite For example by the action of sodium hypobromite which can be prepared in situ, in a hydroorganic medium, in particular in dioxane, at a temperature between -10 and 20 ° C. If necessary, the radicals liable to interfere with the reaction are protected beforehand. Protection and disposal protective radicals are carried out according to the methods mentioned above.
  • the lupane derivative of general formula (I) for which X (in the radical R) represents a carbamoyl radical and the other radicals are defined as above, can also be obtained from a lupane derivative of formula general:
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 and R 7 are defined as above and R 9 represents a radical of general formula:
  • radicals representing or containing radicals which can interfere with the reaction are protected beforehand.
  • the protection and the release of the protective radicals are carried out as described above.
  • the amine of general formula (VIII) is preferably condensed from the hydrochloride of the amine.
  • the reaction is carried out according to the usual methods of condensation of an amine on an acid.
  • an acid acceptor such as a nitrogenous organic base (trialcoylamine, pyridine, N-methylmorpholine, diaza-1,8 bicyclo [5.4.0] undecene-7, diaza-1,5 bicyclo [4.3.0] nonene-5 for example) in an organic solvent such as a chlorinated solvent (dichloromethane, dichlorethane, chloroform for example) or an amide (dimethylformamide for example).
  • an organic solvent such as a chlorinated solvent (dichloromethane, dichlorethane, chloroform for example) or an amide (dimethylformamide for example).
  • a condensing agent such as a carbodiimide (dicyclohexylcarbodiimide, 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide hydrochloride for example) and optionally in the presence of a catalyst such as N-hydroxybenzotriazole or N-hydroxysuccinimide, at a temperature between -20 and 40 ° C.
  • a condensing agent such as a carbodiimide (dicyclohexylcarbodiimide, 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide hydrochloride for example)
  • a catalyst such as N-hydroxybenzotriazole or N-hydroxysuccinimide
  • the lupane derivatives of general formula (IV) for which R 1 is a methyl radical, R 2 is a hydroxy or methyl radical and R 3 is a hydrogen atom can be prepared according to the reduction process described above for the preparation of the products of general formula (I) for which R 2 is a hydroxy radical.
  • the lupane derivatives of general formula (IV) for which R 2 is a hydroxy radical and R 1 and R 3 together form an oxo radical can be prepared by analogy with the method described for the preparation of the corresponding products of general formula (I) , by oxidation of the corresponding methyl ketone. It is understood that the protection of the acid in position -19 thus obtained is essential for the implementation in the following reaction.
  • the lupane derivatives of general formula (IV) for which R 2 is a hydroxymethyl radical can be prepared by the action of silver acetate on the corresponding bromine derivative for which R 2 is bromomethyl and for which, if necessary, the radical R 4 or R 5 is previously protected.
  • the reaction is advantageously carried out in an organic solvent such as, for example, toluene, at a temperature between 20 ° C. and the reflux temperature of the reaction mixture.
  • the starting bromine derivative can be obtained by the action of a brominating agent such as, for example, tetrabutylammonium tribromide or N-bromosuccinimide on the corresponding derivative of lup-20 (29) -en-28-oic acid.
  • the reaction is carried out in a chlorinated solvent such as methylene chloride, chloroform, or carbon tetrachloride at a temperature in the region of 25 ° C.
  • the lupane derivatives of general formula (IV) for which R 2 is a substituted amino radical and R 1 and R 3 together form an oxo radical can be prepared by the action of the corresponding amine on the lupane derivative of general formula (IV ) for which R 2 is a hydroxy radical and R 1 and R 3 together form an oxo radical.
  • the reaction is carried out by any known method to obtain an amide from an acid, without affecting the rest of the molecule.
  • One operates in particular by action of the amine on the chloride of the acid of general formula (IV), in a chlorinated solvent, at a temperature between -20 and 40oC. It is understood that the functions which can interfere with the reaction are protected beforehand, in particular when the substituted amino radical is a carboxy hydroxy alkyl radical, it is necessary to protect the carboxy radical.
  • the lupane derivatives of general formula (IV) for which R 2 is a substituted amino radical and R 1 and R 3 together form an oxo radical can be prepared by the action of the corresponding amine on the lupane derivative for which R 2 is a bromomethyl radical in the presence of tetra [triphenylphosphine] palladium and a nitrogenous base.
  • the lupane derivatives of general formula (IV) for which R 2 is a radical -CH 2 OR ' 2 or -CH 2 SR' 2 and R 1 and R 3 together form a methylene radical can be prepared from the lupane derivative for which R 2 is bromomethyl, by the action of the corresponding alcoholate or thiolate.
  • 3 ⁇ -hydroxylup-20 (29) -en-28-oic acid (3 ⁇ -betul ⁇ n ⁇ que acid) and its derivatives substituted in position 20 or 30 can be obtained according to or by analogy with the method described by W. HERZ, Phytochemistry, 11, 3061 (1972).
  • the lupane derivatives of general formula (IV) for which R 4 and R 5 together form an oxo radical can be prepared by oxidation of the lupane derivative of general formula (IV) for which R 4 and R 5 represent respectively an atom d hydrogen and a hydroxy radical.
  • the oxidation is advantageously carried out by an oxidizing agent such as chromic anhydride.
  • the lupane derivatives of general formula (IV) for which R 4 and R 5 , and R 6 and R 7 together form oxo radicals can be prepared by oxidation of the lupane derivative of general formula (IV) for which R 4 and R 5 together form an oxo radical.
  • the acid chloride of the lupane derivative of general formula (IV) can be prepared according to known methods. For example, the reaction is carried out by the action of oxalyl chloride or thionyl chloride, in a chlorinated solvent such as chloroform, dichloroethane or dichloromethane.
  • the lupane derivatives of general formula (VI) can be prepared by analogy with the method described for the preparation of the products of general formula (I), starting from a product of general formula (IV).
  • the products of general formula (VIII) can be prepared according to or by analogy with the methods described below in the examples.
  • the new lupane derivatives of general formula (I) can be purified if necessary by physical methods such as crystallization or chromatography.
  • the products according to the invention can be transformed into metal salts or into addition salts with a nitrogenous base according to the methods known per se.
  • These salts can be obtained by the action of a metal base (for example alkaline or alkaline earth), ammonia or an amine on a product according to the invention, in a suitable solvent such as water or an alcohol .
  • the salt formed precipitates after optional concentration of the solution; it is separated by filtration.
  • salts with alkali metals sodium, potassium, lithium
  • alkaline earth metals magnesium, calcium
  • the ammonium salt the salts of nitrogenous bases (ethanolamine, diethanolamine, trimethylamine , triethylamine, methylamine, propylamine, diisopropylamine, NN-dimethylethanolamine, benzylamine, dicyclohexylamine, N-benzylphenethylamine, NN'-dibenzylethylenediamine, diphenylenediamine, benzhydrylamine, quinine, choline, arginine, lysine, leucine).
  • nitrogenous bases ethanolamine, diethanolamine, trimethylamine , triethylamine, methylamine, propylamine, diisopropylamine, NN-dimethylethanolamine, benzylamine, dicyclohexylamine, N-benzylphenethylamine, NN'-dibenzylethylenediamine,
  • the new lupane derivatives according to the present invention are particularly useful for the prophylaxis and treatment of AIDS (acquired immunodeficiency syndrome) and associated syndromes [ARC (AIDS related complex)].
  • prophylaxis we mean the treatment of subjects who have been exposed to HIV viruses, in particular asymptomatic seropositive people who present the risk to develop the disease in the months or years to come after the first infection.
  • the products according to the invention which are inhibitors of the cytopathogenic effect of HIV and inhibitors of the production of reverse transcriptase in cell culture at concentrations devoid of cytotoxic or cytostatic effect, are of particular interest.
  • the powdered products were dissolved in a proportion of 2 mg of product per 2 ml (approximately 4 ⁇ 10 -3 M) in a mixture of dimethylformamide (DMF) and L-lysine (base) at (1:19, theft: theft).
  • DMF dimethylformamide
  • base L-lysine
  • a stock solution of product containing 10% of DMF and containing a molar ratio (product / lysine) close to 1 is obtained.
  • the test is carried out on the lymphoblastoid line CEM clone 13.
  • test 10% fetal calf serum, 100 IU / ml of penicillin, 100 ⁇ g / ml of streptomycin and 2 ⁇ moles / ml of glutamine and the microplates are incubated for one hour at 37 ° C., under an atmosphere containing 5% carbon dioxide. For each concentration, the test is divided into two parts: one part (3 wells) on infected cells, for determining the antiviral activity and the other part (3 wells) on non-infected cells, to determine the cytotoxicity of the products.
  • the first series is then infected with HIV-1 (100 ⁇ l per well of a suspension of LAV-1-BRU virus containing 200-300 TCID50) while the other series receives 100 ⁇ l of RPMI medium as defined above. After 7 days of incubation, 100 ⁇ l of cells are removed to measure cell viability [determined according to a modification of the technique described by R. Pauwels et al.,
  • the protection rate (in%) of a given product is determined from the optical densities (OD) by the formula: DO (cell, treated and inf.) - DO (cell, untreated and inf.)
  • the inhibitory concentration 50% is determined.
  • the protection rate provided by the products according to the invention is between 20 and 100%.
  • the 50% inhibitory concentration of the products according to the invention is between 0.30 and 100 ⁇ g / ml when it can be determined.
  • the activity of reverse transcriptase is measured directly on 50 ⁇ l of culture supernatant. According to the method described by O. Schwartz et al., AIDS Research, and Human Retrovirus 4 (6). 441-448 (1988). 10 ⁇ l of buffer containing 0.5 M of KCl, 5 mM of dithiothreitol (DTT) and 0.5% of triton X-100 are added to all microwells containing the 50 ⁇ l of supernatant to be tested. 40 ⁇ l of buffer containing the 1.25 mM ethylene glycol-bis (2-aminoethyl ether) tetraacetic acid (EGTA), 0.125 mM Tris.
  • DTT dithiothreitol
  • HCl pH 7.8, 12.5 mM MgCl 2 , 3 ⁇ Ci of ( 3 H) thymidine triphosphate (TTP), 0.05 DO 260 of polyadenylic acid - thymidylic acid (poly rA-oligo dT) are then added.
  • the microplate is covered with a plastic film and incubated for 60 minutes at 37 ° C.
  • the reaction is stopped by adding 20 ⁇ l of an ice-cold solution of 120 mM Na 4 P 2 0 7 in 60% of trichloroacetic acid and the samples are placed for 15 minutes on the ice bed.
  • the precipitates are filtered through glass fibers using a cell washer (Skatron) and the filters are washed with a solution of 12 mM Na 4 P 2 O 7 in 5% trichloroacetic acid.
  • the filters are dried and the radioactivity is counted after adding a scintillating liquid.
  • R represents a radical of general formula:
  • R ′ and R ′′ which are identical or different are hydrogen atoms or alkyl radicals
  • X is a bond or represents a carbamoyl, N-methyl carbamoyl, ammocarbonyl radical
  • Y is a bond or represents a phenylene radical
  • R ° and R °° identical or different are hydrogen atoms or alkyl radicals (it being understood that R ° and R °° are not necessarily identical on each unit -CR ° Roo-), or R ° is hydroxy, hydroxyalkyl, phenyl, benzyl, carbamoylmethyl or, when Y is a bond and X is carbamoyl, R ° can form a 5 or 6-membered ring with the nitrogen atom contained in X and, n, m and p are whole numbers from 0 to 16 such that m + n + p is between 4 and 16,
  • R 1 is a methyl radical, or forms with R 3 a methylene radical or an oxo radical,
  • R 2 is a hydroxy, methyl, hydroxymethyl radical or a -CH 2 SR ' 2 or -CH 2 NHR' 2 radical for which R ' 2 is alkyl, hydroxyalkyl, acetamidoalkyl, or acetyl, or R 2 is a substituted amino radical by a hydroxyalkyl or carboxyhydroxyalkyl radical, or a dialkoylamino radical, the alkyl parts of which may form, with the nitrogen atom to which it is attached, a 5 or 6-membered heterocycle optionally containing another nitrogen atom and optionally N-methylated,
  • R 3 is a hydrogen atom or forms with R 1 or R 2 a methylene radical or an oxo radical
  • R 4 and R 5 are different and represent a hydrogen atom or a hydroxy radical, or together form an oxo or alkyloxyimino radical optionally substituted (by a carboxy or dialkoylamino radical in which the alkyl parts can form with the nitrogen atom to which they are attached, a 5- or 6-membered heterocycle possibly containing another nitrogen atom optionally substituted by a methyl radical) and
  • R 6 and R 7 are hydrogen atoms, or
  • R 4 and R 5 , and R 6 and R 7 together form oxo radicals. it being understood that the alkyl radicals are straight or branched and contain 1 to 4 carbon atoms, as well as their salts when they exist.
  • EXAMPLE 2 0.53 cm 3 of triethylamine and 380 mg of methyl 6-aminohexanoate hydrochloride are added to a solution of 1 g of 3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl chloride dissolved in 50 cm 3 of methylene chloride, stirring is continued for 20 hours at a temperature in the region of 20 ° C., then 100 cm of distilled water are added.
  • the organic phase is decanted, the aqueous phase is extracted with a total of 75 cm of methylene chloride, the organic extracts are combined, dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40 ° C.
  • the residue obtained is purified by HPLC in fractions of 250 mg, on a column 5 cm in diameter containing 200 g of grafted silica C 18 (0.01 mm) eluted with a mixture of acetonitrile, water and tetrahydrofuran 75-10-15 by volume, collecting 75 cm 3 fractions. The first 3 fractions are eliminated; the next 2 are combined and concentrated under reduced pressure (13.5 Pa) at a temperature in the region of 35 ° C.
  • 320 mg of methyl 7-ammoheptanoate hydrochloride are added, then 0.62 cm 3 of triethylamme to a solution of 1 g of 3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl chloride in 30 cm 3 of dichloromethane.
  • the solution is stirred for 20 hours at a temperature in the region of 20 ° C and the solvent is evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the 1.77 g of beige meringue obtained are chromatographed on a column 3 cm in diameter containing 80 g of silica (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 80-20 (in volumes) by collecting 60 cm fractions.
  • the first 23 fractions are eliminated; the following 8 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 30 ° C.
  • a volume of 1.9 cm 3 of 7N sodium hydroxide is added over approximately 5 minutes to a solution of 930 mg of methyl N- [3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -7- aminoheptanoate in 7 cm of methanol and 10 cm 3 of tetrahydrofuran and the reaction mixture is stirred for 15 hours at a temperature in the region of 20 ° C and the solvent is evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of
  • Methyl 7-aminoheptanoate is prepared according to CF. HORN, B.T. FREURE, H. VINEYARD, H.J. DECKER, Angew. Chenu, 74, 531 (1962).
  • Example 4
  • the organic phase is decanted, the aqueous phase is extracted with 75 cm 3 in total of methylene chloride, the organic extracts are combined, dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C.
  • the residue obtained is purified by HPLC, in fractions of 250 mg on a column 5 cm in diameter containing 300 g of C 18 grafted silica (0.015-0.020 mm) eluted with a mixture of acetonitrile, water and tetrahydrofuran 70-15-15 (by volume), under a pressure of 370 Psi, collecting 75 cm fractions.
  • the first 3 fractions are eliminated; the next 2 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C.
  • the methyl 8-am ⁇ nooctanoate hydrochloride can be obtained in the following manner:
  • the 600 mg of me light yellow rings obtained are chromatographed on a column 2.5 cm in diameter containing 56 g of silica (0.063-0,200 mm) eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 85-15 (in volumes), collecting fractions of 7 cm 3 .
  • the first 10 fractions are eliminated; the following 17 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 30 ° C. 810 mg of methyl N- [3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -11-aminoundecanoate are thus obtained in the form of a white meringue.
  • the aqueous phase is extracted with 50 cm of ethyl ether.
  • the organic phase is decanted and washed with a total of 45 cm 3 of distilled water, dried over anhydrous magnesium sulfate, and concentrated to dryness under reduced pressure (4.05 kPa) at a temperature in the region of 30 ° C. 384 mg of a whitish meringue are thus obtained which is suspended in 12 cm 3 of diisopropyl ether, separated by filtration and washed with 8 cm 3 in total of diisopropyl ether.
  • the solid (320 mg) is resuspended in 10 cm 3 of diisopropyl ether, 3 cm 3 of ethyl ether are added and the mixture is left stirring for 1 hour.
  • the solid is separated by filtration, washed with a total of 10 cm of diisopropyl ether and dried under reduced pressure (13.5 Pa) at a temperature in the region of 35 ° C.
  • 290 mg of N- [3 ⁇ -hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -11-aminoundecanoic acid are thus obtained in the form of a white solid, melting at around 220 ° C.
  • 3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl chloride can be prepared as follows:
  • 3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oic acid can be obtained in the following manner:
  • Acetic (3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oic) anhydride can be prepared as follows:
  • aqueous phase is extracted with 30 cm in total of ethyl acetate, the combined organic phases are washed with 30 cm in total of distilled water, dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (13.5 Pa) at a temperature close to 30 ° C.
  • 340 mg of N- [3-oxolup-20 (29) -èn-28-oyl] -11-aminoundecanoic acid are thus obtained in the form of a white powder melting at around 90 ° C.
  • 3-oxolup-20 (29) -èn-28-oyl chloride can be prepared as follows: To a solution of 2 g of 3-oxolup-20 (29) -èn-28-oic acid in 44 cm 3 of chloroform, 0.76 cm of oxalyl chloride is added with stirring and the stirring is maintained at a temperature close to
  • the 3-oxolup-20 (29) -en-28-oic acid is prepared according to R. KAWAGUCHI, K. W. KIM, J. Pharm. Soc. Jpn, 60, 595, 1940.
  • Example 9 The 3-oxolup-20 (29) -en-28-oic acid is prepared according to R. KAWAGUCHI, K. W. KIM, J. Pharm. Soc. Jpn, 60, 595, 1940.
  • the residue obtained is chromatographed on a column 4 cm in diameter and containing 125 g of silica (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 6-4 (by volume), collecting 25 cm fractions 3 .
  • the first 9 fractions obtained are eliminated, the following 6 are concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 45 ° C. 960 mg of methyl N- [30-acetoxy-3-oxolup-20 (29) -èn-28-oyl] -11-methyl ammoundeca-noate are thus obtained in the form of a colorless lacquer.
  • the 30-acetoxy chloride 3-oxolup-20 (29) -èn-28-oyl is prepared in the following manner:
  • reaction mixture is stirred for 1 hour at 0 ° C., then 12 hours at a temperature in the region of 20 ° C. and diluted with 250 cm 3 of distilled water. 100 cm 3 of ethyl acetate are added and the organic phase is decanted. The aqueous phase is extracted with 2 times 100 cm 3 of ethyl acetate, the organic phases are combined, washed with 200 cm total distilled water, dried over anhydrous magnesium sulfate, and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40 ° C.
  • the residue obtained (2.4 g) is chromatographed on a column 5 cm in diameter containing 200 g of silica (0.020-0.045 mm), eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 6-4 (by volume ) by collecting 80 cm 3 fractions.
  • the first 9 fractions are eliminated, the following 8 are combined and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40 ° C.
  • 1.55 g of 30-acetoxy-3-oxolup-20 (29) -en-28-oic acid are thus obtained in the form of a white meringue.
  • 30-acetoxy-3 ⁇ -hydroxylup-20 (29) -en-28-oic acid can be prepared as follows:
  • a mixture of 4.44 g of 30-bromo-3 ⁇ -hydroxylup-20 (29) -èn-28-oique acid, 2.08 g of silver acetate in 250 cm of toluene is heated for half an hour at reflux.
  • the insoluble material is filtered hot and rinsed with a total of 75 cm of boiling toluene.
  • the combined filtrates are then evaporated under reduced pressure (2.7 kPa).
  • the residue (4.32 g) is chromatographed on a column 6 cm in diameter and containing 350 g of silica (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 7-3 (in volumes) by collecting 100 cm fractions.
  • the 700 mg of pale yellow oil obtained are chromatographed again on a column 2.8 cm in diameter containing 70 g of silica (0.020-0.045 mm). Eluted with a mixture of methylene chloride and ethyl acetate 90-10 (by volume), collecting 15 cm 3 fractions. The first 14 fractions are eliminated; the following 7 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C.
  • the combined organic phases are washed with 20 cm 3 in total of distilled water, dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the mineral salts are eliminated, taking up the residue with 20 cm 3 of ethyl acetate and 10 cm 3 of 1N hydrochloric acid.
  • the aqueous phase is extracted with 20 cm in total of ethyl acetate.
  • the combined organic phases are washed with 30 cm 3 in total of distilled water, dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C.
  • 420 mg of a white meringue are thus obtained which is chromatographed on a 2.2 cm diameter column containing 40 g of silica (0.060 mm). Eluted with a mixture of chloroform and methanol 95-5 (by volume), collecting 5 cm 3 fractions. The first 16 fractions are eliminated; the following 6 are combined and concentrated under reduced pressure (12.5 Pa) at a temperature in the region of 35 ° C. 230 mg of N- [2,3-dioxolup-20 (29) -èn-28-oyl] -11-ammoundecanoic acid are obtained in the form of a white meringue, melting at around 90 ° C. (sticky).
  • 2,3-d ⁇ oxolup-20 (29) -èn-28-oyl chloride can be prepared as follows:
  • 2,3-dioxolup-20 (29) -en-28-oic acid is prepared as follows:
  • the 7.7 g of meringue obtained are chromatographed on a 4.5 cm diameter column containing 385 g of silica (0.020-0.045 mm), eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 80-20 (in volumes), collecting 50 cm 3 fractions.
  • the first 23 fractions are eliminated, the following 9 are combined and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • 280 mg of methyl 11-aminoundecanoate hydrochloride and 0.28 cm of triethylamme are added to 25 cm of a dichloromethane solution of 3 ⁇ , 30-diacetoxylup-20 (29) -en-28-oyl chloride (prepared from 560 mg of 3 ⁇ , 30-diacetoxylup-20 (29) -en-28-oic acid).
  • the solution is then stirred for 12 hours at a temperature in the region of 20 ° C. 10 cm of distilled water are added.
  • the organic phase is separated and then washed with 20 cm 3 in total of distilled water.
  • the combined organic phases are dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C.
  • the colorless oil obtained (750 mg) is chromatographed on a column 1.7 cm in diameter and containing 15 g of silica (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 80- 20 (by volume) by collecting fractions of 15 cm 3 .
  • the first 2 fractions obtained are eliminated, the next 5 are concentrated to dryness under reduced pressure (22 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the solvent is evaporated under reduced pressure (22 kPa) and at a temperature close to 40 ° C. 600 mg of a white meringue is obtained which is used without further purification.
  • the 3 ⁇ , 30-diacetoxylup-20 (29) -en-28-oic acid is obtained in the following manner: A suspension of 1.8 g of 3 ⁇ -acetoxy-30-bromolup-20 (29) -enic acid -28- oic and 800 mg of silver acetate in 50 cm 3 of toluene is agitated
  • the residue is dissolved in 50 cm of ethyl acetate.
  • the organic phase is decanted and washed with a total of 60 cm 3 of distilled water, dried over anhydrous magnesium sulphate, then concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at an Vosine temperature of 40 ° C.
  • the white solid obtained (1.7 g) is chromatographed on a column 1.7 cm in diameter and containing 35 g of silica (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 80 -20 (by volume), collecting 15 cm 3 fractions.
  • the first 4 fractions obtained are eliminated, the following 10 are concentrated to dryness under reduced pressure (13.5 Pa) at a temperature in the region of 40oC.
  • 1.1 g of 3 ⁇ , 30-diacetoxylup-20 (29) -en-28-oic acid are thus obtained in the form of a white meringue sufficiently pure for subsequent transformations.
  • 3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oic acid can be prepared according to Bruckner, Kovacs and Koczka, J. Chem. Soc, 948 (1948).
  • Example 12 After having heated under reflux for 3 hours a mixture of 190 mg of 11-ammoundecanoic acid and 308 mg of chlorotrimethylsilane in 50 cm 3 of dichloromethane, the solution is cooled to around 20 ° C. and 750 mg of chloride of 30 are added. -acetoxy-3-oxolup-20 (29) -èn-28-oyle then 0.72 cm of triethylamme. Stirring is continued for 48 hours at a temperature in the region of 20 ° C and the solvent is evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the residue is chromatographed on a column 4 cm in diameter containing 125 g of silica (0.02-0.045 mm), eluted in the presence of the methylene chloride methanol 80-20 mixture (by volume), collecting 50 cm 3 fractions .
  • the first 20 fractions are eliminated, the following 20 are combined and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • 330 mg of N- [30-acetoxy-3-oxolup-20 (29) -èn-28-oyl] -11-ammoundecanoic acid are thus obtained in the form of a white meringue.
  • Example 13 To a solution of 150 mg of 20,29,30-trinor 3 ⁇ -acetoxy-19 - [(2-acetoxyethyl) carbamoyl] lupan-28-oic acid in 10 cm 3 of chloroform, a solution of 0 is added. , 03 cm 3 of oxalyl chloride in 5 cm 3 of chloroform. The reaction mixture is stirred for 12 hours at a temperature in the region of 20 ° C. and then concentrated under reduced pressure (15 kPa). The residue is taken up in 5 cm 3 of chloroform. To the solution obtained, 80 mg of methyl 11-aminoundecanoate hydrochloride are added and
  • the combined organic phases are washed with 60 cm 3 in total of distilled water and then dried for 3 hours over anhydrous magnesium sulfate and filtered.
  • the organic phase is concentrated to dryness under reduced pressure (10 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the 200 mg of pale yellow meringue obtained are filtered through a column 2.7 cm in diameter, containing 50 g of silica (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of chloroform, methanol and ammonia at 28 % 24-6-1 (by volume).
  • the filtrate is concentrated to dryness under reduced pressure (13.5 Pa). 120 mg of N- ⁇ 20.29, 30-trinor 3 ⁇ -acetoxy- are thus obtained.
  • the solution obtained is filtered and then concentrated to dryness under reduced pressure (13.5 Pa) at a temperature in the region of 20 ° C.
  • the solid is taken up three times with 15 cm 3 of ethanol and the solution is concentrated to dryness under reduced pressure.
  • the solid residue is suspended in 50 cm 3 of chloroform. The suspension is brought to a temperature in the region of 40 ° C. and filtered while hot.
  • the filtrate is concentrated under reduced pressure (20 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the residue is triturated with 5 cm of diisopropyl ether, filtered and then rinsed with 6 cm of diisopropyl ether.
  • the solid is dried under reduced pressure (1 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the acid 20, 29, 30-trmor 3 ⁇ -acetoxy-19- [2-acetoxyethyl) carbamoyl] lupan-28-oic can be obtained in the following way: With a solution of 450 mg of acid 20, 29, 30 -trmor 3 ⁇ -acetoxy-19 - [(2-hydroxyethyl) carbamoyl] lupan-28-oic in 60 cm 3 of chloroform is added 30 mg of 4-d ⁇ méthylam ⁇ nopyr ⁇ dme, 0.35 cm 3 of triethylamme and
  • diisopropyl filtered, rinsed with a total of 4 cm of diisopropyl ether and then dried under reduced pressure (100 Pa) at a temperature in the region of 40 ° C. 350 mg of acid are thus obtained.
  • the 20,29,30-trinor 3 ⁇ -acetoxy-19 - [(2-hydroxyethyl) carbamoyl] lupan-28-oic acid can be obtained in the following manner:
  • the solid is separated by filtration, washed with a total of 25 cm of distilled water and then air dried.
  • the 160 mg of solid are chromatographed on a column 1.2 cm in diameter, containing 5 g of silica (0.02-0.045 mm) using a mixture of chloroform, methanol and 28% ammonia 12 -6-1 (by volume), collecting 10 cm 3 fractions.
  • the first 9 fractions are eliminated, the following 13 are concentrated to dryness under reduced pressure (13.5 Pa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the residue is triturated with 5 cm 3 of diethyl ether, filtered, rinsed with 6 cm 3 in total of diethyl ether and then dried under reduced pressure (10 kPa).
  • the 80 mg of solid obtained is dissolved in 2 cm 3 of dioxane and then added
  • the organic phase is decanted and then washed with a total of 60 cm of distilled water, dried for 1 hour over anhydrous magnesium sulfate and concentrated under reduced pressure (15 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • anhydrous magnesium sulfate and concentrated under reduced pressure (15 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • 2 cm 3 of dioxane and 20 cm 3 of water are added. It is triturated and cooled to a temperature close to 0 ° C.
  • the solid is filtered, washed with 3 times 5 cm 3 of distilled water and then dried under reduced pressure (100 Pa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the 20, 29, 30-tr ⁇ nor 3 ⁇ -acetoxy-19- (2-hydroxy-1-methoxycarbonyl ⁇ ethylcarbamoyl) lupan-28-oic acid can be obtained in the following manner:
  • Example 15 2.2 cm 3 of triethylamme and 1.94 g of methyl 11-amino undecanoate hydrochloride are added to 195 cm of a chloromethyl solution of 30-nor 3 ⁇ -acetoxy-20-oxolupan-28-oyl chloride . The solution is then stirred for 72 hours at a temperature in the region of 20 ° C. The reaction mixture is diluted with 100 cm 3 of dichloromethane, the organic phase is washed with 3 times 150 cm 3 of distilled water. The combined organic phases are dried for 3 hours over magnesium sulfate and filtered. The organic phases are concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 50 ° C.
  • the pale yellow oil obtained (5.7 g) is chromatographed on a column 4 cm in diameter, 60 cm high and containing silica (0.02-0.045 mm) eluted successively with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 70-30 (by volume) for fractions 1 to 50 and a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 50-50 (by volume) for the following fractions.
  • 100 cm 3 fractions are collected.
  • the first 30 fractions are eliminated; the following 32 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C. This gives 5 g of a white meringue which is crushed with 2 times
  • the 30-nor 3 ⁇ -acetoxy-20-oxolupan-28-oic acid is prepared according to A. VYSTRCIL and M. BUDESINSY, Collect. Czech. Chem. Commun., 35, 295 (1970).
  • 370 mg of methyl 12-aminododecanoate hydrochloride are added, then 0.4 cm 3 of triethylamine to a solution of 660 mg of 3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl chloride in 13.2 cm 3 of chloroform and 13 cm 3 of tetrahydrofuran.
  • the solution is stirred for 20 hours at a temperature in the region of 20 ° C and the solvent is evaporated off under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C. 60 cm 3 of ethyl ether and 25 cm 3 of distilled water are added to the residue.
  • the organic phase is decanted and the aqueous phase is extracted with 40 cm in total of ethyl ether.
  • the combined organic phases are washed with a total of 60 cm of distilled water, dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure
  • Methyl 12-ammododecanoate is prepared according to H. ZAHN, H.D. STOPER, Chem. Ber., .21 (10), 3251 (1965).
  • EXAMPLE 17 0.24 cm of triethylamme and 500 mg of methyl aminohexadecanoate hydrochloride are added to a solution of 820 mg of methyl chloride.
  • the first 80 fractions are eliminated; the following 23 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C. 568 mg of a beige meringue are thus obtained which is chromatographed a second time (column 4 cm in diameter; 15 g of silica (0.02-0.045 mm), fractions of 30 cm 3 ).
  • the eluent system is composed of a mixture of methylene chloride and methanol 99-1 (by volume).
  • the first 30 fractions are eliminated, the following 6 are combined and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 30 ° C.
  • the 363 mg obtained are chromatographed a third time on a column 1.7 cm in diameter, containing 20 g of silica (0.02-0.045 mm), eluting with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 80-20 in volumes). 3 cm 3 fractions are collected. The first 13 fractions are eliminated the following 17 are combined and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 30 ° C.
  • the solid is separated by filtration, washed with a total of 50 cm of distilled water and dried under reduced pressure (13.5 Pa) at a temperature in the region of 20 ° C.
  • the solid obtained is suspended in 20 cm of distilled water and filtered. 292 mg of acid are thus obtained which is purified by chromatography on a column 1.7 cm in diameter containing 20 g of silica (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of cyclohexane, ethyl acetate, and methylene chloride 50-40-10 (by volume), collecting 2 cm fractions.
  • the first 10 fractions are eliminated, the following 9 are combined and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 30 ° C.
  • 280 mg of N- [3 ⁇ -hydroxylup-20 (29) -en-28-oyl] -16-ammohexadecanoic acid are thus obtained in the form of a white solid, melting at around 85 ° C.
  • Methyl 16-ammohexadecanoate can be prepared in the following manner: A solution of 1.3 g of methyl 16-phthal ⁇ m ⁇ dohexadecanoate in 50 cm 3 of methanol is stirred for 3 hours, at a temperature in the region of 80 ° C., in the presence 170 mg of hydrazme hydrate. The solution is cooled to around 20 ° C. and 2 cm of 5N hydrochloric ether are added. The solvent is evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C. The residue is taken up in 50 cm of distilled water. The solid is separated by filtration.
  • Methyl 16-phthalimidohexadecanoate can be prepared as follows:
  • the eluent mixture is composed of methylene chloride and ethyl acetate 95-5 (by volume), the fractions are 30 cm 3 .
  • the following 19 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 "C. This gives 750 mg of a white meringue which is chromatographed a second time: column 2.2 cm in diameter, 40 g of silica (0.02-0.045 mm), eluting with a mixture of methylene chloride and ethyl acetate 98-2 by volume and collecting 10 cm 3 fractions.
  • the first 16 fractions are eliminated, the following 17 are combined and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 30 ° C.
  • the 540 mg obtained are chromatographed a third time on a column 2 cm in diameter containing 40 g of silica (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 80-20 (by volume) collecting 5 cm 3 fractions.
  • the following 10 are combined and concentrated to dryness under reduced pressure at a temperature in the region of 30 ° C (2.7 kPa).
  • the 443 mg obtained are chromatographed a last time on a 1.4 cm diameter column containing 20 g of silica (0.020-0.045 mm) eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 80-20 (by volume) , collecting 5 cm 3 fractions. After elimination of the first 2 fractions, the following 7 are combined and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 30 ° C.
  • the solid obtained is suspended in 20 cm of distilled water and separated by filtration. 220 mg of N- [3 ⁇ -hydroxylup-20 (29) -en-28-oyl] -17-aminoheptadecanoic acid are thus obtained in the form of a white solid, melting at around 82 ° C.
  • Methyl 17-aminoheptadecanoate is prepared in the following manner:
  • 17-aminoheptadecanoic acid can be prepared as follows:
  • a solution of 3.4 g of 17-phthalimidoheptadecanoic acid in 60 cm of methanol is stirred for 1 hour, at a temperature in the region of 80 ° C, in the presence of 1.67 g of hydrazine hydrate.
  • the solution is cooled to around 20 ° C. and the solid is separated by filtration and dried in air.
  • the residue (1.92 g) is taken up in 180 cm of distilled water.
  • the solid is separated by filtration, washed with a total of 45 cm of distilled water and dried under reduced pressure (13.5 Pa) at a temperature in the region of 40 ° C. 980 mg of 17-aminoheptadecanoic acid is obtained in the form of a white solid.
  • 17-phthalimidoheptadecanoic acid can be prepared as follows: To 2.14 g of phthalimide potassium in 40 cm 3 of N, N-dimethylformamide, 2 g of 17-bromoheptadecanoic acid is added and the mixture is heated for 6 hours. temperature in the region of 80 ° C. The solution is cooled to around 20 ° C., it is poured into 100 cm 3 of distilled water and 10 cm of 2N hydrochloric acid are added dropwise. The solid formed is separated by filtration.
  • the 1.1 g of yellow oil obtained are chromatographed on a column 2 cm 3 in diameter and 40 cm 3 high containing silica (0.02-0.045 mm), eluted with dichloromethane, collecting fractions of 50 cm 3 .
  • the first 25 fractions are eliminated.
  • the following 21 are combined and concentrated under reduced pressure (13.5 Pa) at a temperature in the region of 40 ° C. 0.80 g of N- [3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -11-ammo-2,2-d ⁇ méthylundécanoate are obtained.
  • the filtrate is taken up in 100 cm of ethyl acetate.
  • the organic phase is dried for 2 hours over magnesium sulfate and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the 1.4 g of white meringue obtained are chromatographed on a column 2.7 cm in diameter and 36 cm high containing silica (0.02-0.045 mm) eluted successively with dichloromethane (fractions 1 to 25), a mixture of dichloromethane and ethyl acetate 95-5 (by volume)
  • Methyl 11-amino-2,2-dimethylundecanoate is prepared in the following manner:
  • Methyl 11-phthal ⁇ m ⁇ do-2,2-d ⁇ méthylundécanoate is obtained in the following way: At 8.2 g of phthalimide potassium in 70 cm of N, N-d ⁇ méthylformamide, 12.3 g of 11 -bromo-2 are added, 2-methylmethylundecanoate in solution in 70 cm of N, N-methylmethylformamide and the mixture is heated for 3 hours at a temperature in the region of 80 ° C. The solution is cooled to a temperature in the region of 20 ° C. and then poured into 1400 cm of distilled water. Acidified to a pH close to 2 using 4N hydrochloric acid and then extracted with 1000 cm 3 in total of ethyl acetate.
  • Methyl 11-bromo-2,2-dimethylundecanoate was obtained in the following manner:
  • the organic phase is washed successively with 160 cm 3 in total of 1N hydrochloric acid, 160 cm 3 in total of distilled water, 30 cm 3 of a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate and finally 80 cm 3 in total of distilled water.
  • the organic phase is dried over magnesium sulfate and then concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 50 ° C.
  • the 74 g of an orange oil obtained are distilled under reduced pressure (20 Pa), collecting the fraction which distills between 120 and 130 ° C. 33.2 g of an oil are thus obtained which is redistilled under reduced pressure (10 Pa).
  • the fraction which distills between 114 ° C and 122 ° C is collected. 25 g of 11-bromo-2,2-dimethylundecanoate demethyle are thus obtained.
  • EXAMPLE 20 A solution of 1 g of methyl N- [3-oxolup-20 (29) -èn-28-oyl] -11-aminoundecanoate, 440 mg of methyl aminoxyacetate hydrochloride is heated at reflux for 3 hours. in 20 cm of pyridine, then the solution is cooled to a temperature in the region of 20 ° C. and added with 100 cm 3 of distilled water and 50 cm 3 of acetate ethyl.
  • the organic phase is decanted, the aqueous phase extracted with 100 cm in total of ethyl acetate, the organic extracts are combined, washed with 50 cm in total of distilled water, dried over anhydrous magnesium sulfate and evaporated under pressure reduced (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C.
  • the residue obtained is chromatographed on a column 5 cm in diameter containing 200 g of silica (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 80-20 (by volume), collecting 30 cm fractions.
  • the first 11 fractions are eliminated; the following 16 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C. 940 mg of an oil are thus obtained which is purified by HPLC in 2 steps, on a column 5 cm in diameter containing 300 g of silica grafted with C 18 (0.015-0.025mm), eluted with a mixture of 'acetonitrile, water, tetrahydrofuran 50-30-15 then 65-20-15 (by volume).
  • the first 18 fractions are eliminated, the next 2 are combined and concentrated to dryness under reduced pressure (13.5 Pa) at a temperature in the region of 35 ° C.
  • the organic phase is decanted, the aqueous phase is extracted with 200 cm 3 in total of ethyl acetate, the organic extracts are combined, washed with 60 cm in total of distilled water, dried over anhydrous magnesium sulfate and evaporated under reduced pressure (13.5 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C.
  • the residue obtained (1.65 g) is chromatographed on a column 5 cm in diameter containing 200 g of silica (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of ethyl acetate and methanol 50-50 (in volumes), collecting 30 cm fractions.
  • the first 17 fractions are eliminated; the following 18 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C.
  • Example 22 A solution of 1 g of methyl N- [3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -11-amino undecanoate in 50 cm 3 of ethanol is hydrogenated, under atmospheric pressure and at a temperature around 20 ° C, in the presence of 0.1 g of 5% palladium on carbon (by weight), for
  • the residue obtained is chromatographed on a column 3 cm in diameter containing 80 g of silica (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 6-4 (by volume), collecting fractions 50 cm 3 .
  • the first 12 fractions are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C. 800 mg of a solid are thus obtained which is dissolved in 20 cm 3 of diethyl ether.
  • the ethereal solution is washed successively with 10 cm of a 2N hydrochloric acid solution and then with 4 times 10 cm 3 of distilled water.
  • Example 24 To a solution of 2.6 g of sodium hydroxide in 18 cm 3 of distilled water, cooled to -5 ° C, 0.7 cm of bromine is added. The reaction mixture is stirred for 15 minutes at -5 ° C. and then 12 cm 3 of dioxane are added. The solution obtained is added in approximately 10 minutes to a solution of
  • Methyl N- [30-nor 3 ⁇ -acetoxy-20-oxolupane-28-oyl] -11-aminoundecanoate can be prepared as follows: 2.2 cm 3 of triethylamme and 1.94 g of hydrochloride 11- methyl ammoundecanoate are added to 195 cm 3 of a solution in dichloromethane of 30 nor chloride 3 ⁇ -acetoxy-20-oxolupan28-oyl. The solution is then stirred for 72 hours at a temperature in the region of 20 ° C. The reaction mixture is diluted with 100 cm of distilled water. The organic phase is extracted with 3 times 150 cm 3 of dichloromethane. The combined organic phases are dried
  • the 30-nor 3 ⁇ -acetoxy-20-oxolupan-28-oyl chloride is obtained in the following manner:
  • the 30-nor 3 ⁇ -acetoxy-20-oxolupan-28-oic acid is prepared according to A. VYSTRCIL and M. BUDESINSY, Collect. Czech. Chem. Commun., 35, 295 (1970).
  • Example 25 To a solution of 1 g of N- [3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl] - ⁇ -alanine in 100 cm of dichloromethane, 420 mg of methyl 8-amnooctanoate hydrochloride, 240 mg are added 1-hydroxybenzotriazole hydrate, 760 mg of 1-ethyl 3- (3-dimethylammopropyl) carbodiimide hydrochloride and 1 cm 3 of triethylamme. The solution is stirred for 12 hours at a temperature in the region of 20 ° C. and then 100 cm 3 of distilled water are added. The organic phase is decanted and the aqueous phase is extracted with 150 cm 3 in total of methylene chloride.
  • the organic extracts are combined, dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C.
  • the residue obtained (1.4 g) is chromatographed on a column 4 cm in diameter containing 125 g of silica (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 60-40 ( by volume), collecting 50 cm 3 fractions.
  • the first 36 fractions are eliminated; the following 15 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C.
  • N- [3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -3-ammoprop ⁇ on ⁇ que acid can be prepared as follows: After having heated under reflux for 3 hours a mixture of 190 mg of 3-aminopropionic acid and 410 mg of chlorotrimethylsilane in 50 cm of dichloromethane, the solution is cooled to around 20 ° C. and 1 g of 3-acetoxylup chloride is added. 20 (29) -èn-28-oyl dissolved in 30 cm of dichloromethane then 0.81 cm of triethylamine dissolved in 15 cm 3 of dichloromethane.
  • Methyl 8-aminooctanoate 243 mg of 1-hydroxybenzotriazole hydrate, 690 mg of 1-ethyl 3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride and 0.5 cm of triethylamine.
  • the solution is stirred for 12 hours at a temperature in the region of 20 ° C. and then 100 cm of distilled water are added.
  • the organic phase is decanted and the aqueous phase is extracted with 150 cm in total of methylene chloride.
  • the organic extracts are combined, dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C.
  • N- (3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) glycine can be prepared as follows:
  • N- [3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl] -8-am ⁇ nooctanoic acid can be prepared in the following manner:
  • the reaction mixture is evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • 100 cm of dichloromethane are added to the residual pasty solid.
  • the organic phase is washed with a total of 150 cm of distilled water, dried over magnesium sulfate and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40 ° C.
  • the cream solid obtained (1.4 g) is chromatographed on a column 2 cm in diameter and 40 cm high in silica (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 1- 1 (by volume), collecting fractions of 70 cm 3 .
  • the first 8 fractions are eliminated, the next 2 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the reaction mixture is acidified to a pH close to 2 using 5N hydrochloric acid and then 100 cm of distilled water are added. After 3 hours of stirring, the solid is separated by filtration and rinsed with 100 cm 3 in total of distilled water. The solid is triturated with 30 cm of diisopropyl ether, filtered, rinsed with 30 cm in total of diisopropyl ether, then dried under reduced pressure (13.5 Pa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • N- (3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) -4-aminobutanoic acid can be obtained in the following manner:
  • Methyl 4-ammophenylacetate can be obtained according to H. Salkowski Chem. Ber., 28, 1917, (1895).
  • Example 29
  • the reaction mixture is concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • 100 cm 3 of dichloromethane are added to the residual pasty solid.
  • the organic phase is washed with a total of 150 cm of distilled water, dried over magnesium sulphate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the cream solid obtained (1.4 g) and chromatography on a column 2 cm in diameter and 40 cm high in silica (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 1- 1 (by volume), collecting fractions of 70 cm 3 .
  • reaction mixture is acidified to a pH close to 2 using 5N hydrochloric acid and then 150 cm of distilled water are added. After 3 hours of stirring, the solid is separated by filtration and rinsed with 150 cm 3 in total of distilled water. The solid is triturated with 30 cm of diisopropyl ether, filtered, rinsed with 75 cm 3 in total of diisopropyl ether, then dried under reduced pressure (13.5 Pa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • Methyl 4-aminomethylbenzoate can be obtained in the following manner: At 30 cm 3 of methanol cooled to a temperature close to -30 ° C., 3.3 cm 3 of thionyl chloride are added over 10 minutes. Stirring is continued for 30 minutes at a temperature in the region of -23 ° C., then 4.7 g of 4-aminomethylbenzoic acid are added. It is left to return to a temperature in the region of 20 ° C. in 1 hour. 15 cm of methanol are added to the mixture and the stirring is continued for 15 hours at a temperature in the region of 20 ° C. The solid is separated by filtration, rinsed with 90 cm 3 in total of methanol and then 150 cm 3 in total of diethyl ether.
  • N '- [N- [3 ⁇ -hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8-ammooctanoyl] -L-thréomne can be obtained as follows: to a solution of 1 g of N acid - [3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoique, in 50 cm of dichloromethane, 470 mg of benzyl L-threonmate hemioxalate is added under a stream of argon,
  • the residue obtained (1.36 g) is chromatographed on a column 4 cm in diameter containing 100 g of silica (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 30-70 ( by volume) by collecting 40 cm fractions.
  • the first 10 fractions are eliminated; the following 10 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 45 ° C.
  • 1.12 g of a white meringue are thus obtained which is dissolved in a mixture of 13.5 cm 3 of methanol, 6.7 cm 3 of tetrahydrofuran and 1.4 cm 3 of 5N sodium hydroxide.
  • the organic phase is decanted, dried over anhydrous magnesium sulfate and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the residue obtained (570 mg) is dissolved in a mixture of 15 cm of methanol, 10 cm 3 of tetrahydrofuran and 10 cm 3 of 5N sodium hydroxide.
  • Methyl L-statinate can be prepared according to the method described by Y. TAKEMOTO et al., Tetrahedron Lett., 31 (2), 217, 1990.
  • Example 52 By operating by analogy with Example 11.
  • Example 53
  • N- [3 ⁇ , 30-d ⁇ hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -1O-methyl ammodecanoate can be obtained in the following way:
  • the combined organic phases are dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the yellow oil obtained (1.34 g) is chromatographed on a column 3.2 cm in diameter containing 90 g of silica (0.02-0.04 mm) eluted with a mixture of dichloromethane and acetate. ethyl 50-50 (by volume), collecting 10 cm 3 fractions. After elimination of the first 52 fractions the following 14 are combined and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C.
  • the 800 mg of meringue obtained are dissolved in 8 cm 3 of methanol and 8 cm 3 of distilled water are added dropwise. After 30 minutes of stirring, the crystals obtained are separated by filtration, washed with 10 cm 3 in total of distilled water and dried under reduced pressure (13.5 Pa) at a temperature close to
  • Example 55 and 56 By operating by analogy with Example 54, the following products are prepared:
  • N- [3 ⁇ , 30-dihydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -11-amino 2,2-dimethylundecanoic acid is prepared from methyl 11-amino-2,2-dimethylundecanoate and 3 ⁇ , 30-diacetoxylup-20 (29) -en-28-oic acid.
  • mp 190 ° C.
  • N- [3 ⁇ -hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -7-aminoheptylcarbamoylacetic acid can be obtained in the following manner:
  • the organic extracts are combined, washed with a total of 40 cm 3 of distilled water, dried over anhydrous magnesium sulfate and the solvent is evaporated off under reduced pressure (2.7 kPa) at) a temperature close to 35 ° C.
  • the beige meringue obtained (1.8 g) is chromatographed on a column 3 cm in diameter containing 90 g of silica (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of ethyl acetate and cyclohexane 75-25 (by volume), collecting 10 cm 3 fractions.
  • the first 42 fractions are eliminated, the following 15 are combined and concentrated under reduced pressure
  • Ethyl 7-ammoheptylcarbamoylacetate can be prepared as follows: 1.3 cm 3 of ethyl malonate chloride are added dropwise to a mixture of 3.4 g of mono N-benzyloxycarbonyl- 1,7-heptyld ⁇ amme,
  • the orange oil obtained (4.0 g) is chromatographed on a column 3.5 cm in diameter containing 200 g of silica (0.02-0.045 mm), eluted with ethyl acetate, collecting fractions of 15 cm 3 .
  • the first 47 fractions are eliminated, the following 17 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a similar temperature 35 ° C.
  • the yellow oil obtained (1.62 g) is dissolved in a mixture of 5 cm 3 of acetic acid and 5 cm 3 of hydrobromic acid at
  • the mono N-benzyloxycarbonyl-1,7-heptyldiamine can be prepared as follows: To a solution of 10 g of N-benzyloxycarbonyl-8-aminocaprylic acid in 500 cm of methylene chloride, 2 g of chloride d ammonium, 5.2 g of 1-hydroxybenzotriazole hydrate, 13 g of 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide hydrochloride and 9.6 cm 3 of triethylamine. The solution is stirred for 18 hours at a temperature in the region of 20 ° C., then 1 liter of distilled water and 12 cm 3 of 4N hydrochloric acid are added. The organic phase is decanted and the aqueous phase is extracted with 200 cm 3 in total of chloroform.
  • the organic extracts are combined, washed with a total of 200 cm of distilled water, dried over anhydrous magnesium sulfate and evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C.
  • the white powder obtained (7.1 g) is dissolved in a mixture of 92 cm 3 of acetonitrile and 30 cm 3 of distilled water and 3.6 g of bis (trifluoroacetoxy) iodobenzene are added.
  • N-Benzyloxycarbonyl-8-ammocapryl ⁇ que acid can be prepared according to: A. KAPOOR, LW GERENCSER, J. Pharmac. Sci., 1969, 53. (8), 976.
  • Example 59 The N- [3 ⁇ -hydroxy-30- (2'-hydroxyethyl) thiolup-20 (29) -èn-28-oyl] -11-ammoundecanoic acid is prepared in the following manner:
  • N- [3 ⁇ -acetoxy-30- (2'-acetoxyethyl) thiolup-20 (29) -èn-28-oyl] -11-ammoundecanoate is prepared from 3 ⁇ -acetoxy-30- (2'-acetoxyethyl) thiolup-20 (29) -en-28-oyl chloride. 3.1 cm of 4N sodium hydroxide are added to a solution of 250 mg of N- [3 ⁇ -acetoxy-30- (2'-acetoxyethyl) thiolup-20 (29) -èn-28-oyl] -11- methyl ammoundecanoate in
  • the chloride of 3 ⁇ -acetoxy-30- (2'-acetoxyethyl) thiolup-20 (29) -en-28-oic acid is prepared in a similar manner to that described in Example 11: from 300 mg of '3 ⁇ -acetoxy-30- (2'-acetoxyethyl) thiolup-20 (29) -en-28-oic acid, 350 mg of a colorless lacquer is thus obtained which is used without further purification.
  • 3 ⁇ -acetoxy-30- (2'-acetoxyethyl) thiolup-20 (29) -en-28-oic acid can be obtained as follows: A mixture of 400 mg of 3 ⁇ -hydroxy-30- acid ( 2'-hydroxyethyl) thiolup- 20 (29) -èn-28-o ⁇ que, 930 mg of sodium acetate and 4.3 cm of anhydride
  • acetic acid is heated for 15 minutes at reflux. 4.3 cm of anhy- steep acetic, and heated to reflux for 15 minutes. It is cooled to a temperature in the region of 5 ° C. and 50 cm of distilled water are added dropwise over 3 hours. After 12 hours of stirring at a temperature in the region of 25 ° C, the solid formed is separated by filtration, washed with a total of 50 cm 3 of distilled water and dried under vacuum (20 kPa) at a temperature in the region of 25 ° C .
  • 3 ⁇ -hydroxy-30- (2'-hydroxyethyl) thiolup-20 (29) -èn-28-oic acid can be prepared as follows:
  • the white solid formed is separated by filtration, washed successively with 300 cm 3 in total of distilled water and 25 cm 3 of diethyl ether.
  • the white solid obtained is dried under reduced pressure (20 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C. 400 mg are thus obtained 3 ⁇ -hydroxy-30- (2'-hydroxyethyl) thiolup-20 (29) -èn-28-oic acid in the form of a white solid melting at a temperature in the region of 220 ° C.
  • N- [3 ⁇ -hydroxy-30-diethylaminolup-20 (29) -èn-28-oyl] -11-aminoundecanoic acid is prepared in the following manner:
  • Methyl N- [3 ⁇ -acetyl-30-diethylaminolup-20 (29) -èn-28-oyl] -11-aminoundecanoate is prepared in a similar manner to that described in Example 11 from 11-aminoundecanoate hydrochloride methyl and 3 ⁇ -acetyl-30-diethylaminolup-20 (29) -en-28-oic acid.
  • 3 ⁇ -acetyl-30-diethylaminolup-20 (29) -en-28-oic acid can be prepared in the following manner:
  • a solution of 200 mg of 3 ⁇ -acetyl-30-diethylaminolup-20 (29) -en-28- methyl oate and 800 mg of lithium iodide in 60 cm 3 of collidine is heated for 8 hours to a temperature close to reflux. .
  • the solvent is evaporated off under reduced pressure (15 Pa) at a temperature in the region of 70 ° C.
  • the residue is taken up in 50 cm of dichloromethane.
  • the organic phase is washed with 100 cm 3 in total of distilled water.
  • the organic phase is dried over magnesium sulphate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to
  • Methyl 3 ⁇ -acetyl-30-diethylaminolup-20 (29) -en-28-oate can be obtained in the following manner:
  • Methyl 3 ⁇ -acetyl-30-bromolup-20 (29) -en-28-oate was synthesized according to B. Pradham, Indian J. Chem. 22B, 1983, 12-16. Examples 63 to 65
  • Example 66 N- [30-acetoxy-3 ⁇ -hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -11-aminoundecanoic acid;
  • the present invention also relates to pharmaceutical compositions containing at least one product of general formula (I) optionally in the form of a salt, in the pure state or in the form of a combination with one or more compatible and pharmaceutically acceptable diluents or adjuvants, or with another agent for the treatment of AIDS, an antiviral, immunomodulatory or antimicrobial agent.
  • composition according to the invention is capable of keeping cells infected with an HIV virus alive and therefore of reducing the progression to AIDS or of reducing its severity in subjects already infected by reducing the mortality of the infected cells.
  • the compositions can be used orally, parenterally or rectally.
  • compositions can be used for curative or preventive purposes in subjects having an immunodeficiency and / or infected with an HIV virus.
  • constitution of these components sitions will be adapted to the specific case of the digestive tract of the immunocompromised.
  • compositions for oral administration tablets, pills, capsules, powders or granules can be used.
  • the active product according to the invention is mixed with one or more inert diluents or adjuvants, such as sucrose, lactose or starch.
  • compositions can include substances other than diluents, for example a lubricant such as magnesium stearate or a coating intended for controlled release.
  • a lubricant such as magnesium stearate or a coating intended for controlled release.
  • compositions for oral administration pharmaceutically acceptable solutions, suspensions, emulsions, syrups and elixirs containing inert diluents such as water or paraffin oil can be used.
  • inert diluents such as water or paraffin oil
  • These compositions can also include substances other than diluents, for example wetting, sweetening or flavoring products.
  • compositions for parenteral administration can be sterile solutions or emulsions.
  • solvent or vehicle propyleneglycol, a polyethylene glycol, vegetable oils, in particular olive oil, injectable organic esters, for example ethyl oleate, can be used.
  • compositions can also contain adjuvants, in particular wetting agents, isotonizers, emulsifiers, dispersants and stabilizers.
  • Sterilization can be done in several ways, for example using a bacteriological filter, by irradiation or by heating. They can also be prepared in the form of sterile solid compositions which can be dissolved at the time of use in sterile water or any other sterile injectable medium.
  • compositions for rectal administration are suppositories or rectal capsules, which contain, in addition to the active principle, excipients such as cocoa butter, semisynthetic glycerides or polyethylene glycols.
  • the doctor will determine the dosage he considers most appropriate based on preventive or curative treatment, depending on the age, weight, degree of infection and other factors specific to the subject. treat. Generally, the doses are between 10 and 100 mg / kg intravenously for an adult.
  • the present invention also relates to combinations consisting of one or more lupane derivatives of general formula (I), and / or where appropriate their salts, and of another active principle known for its anti-retrovirus activity, optionally in the presence pharmaceutically acceptable excipients.
  • anti-retrovirus agents which can be combined are chosen from agents which are compatible and inert with respect to the lupane derivative of general formula (I).
  • these agents are chosen from reverse transcriptase inhibitors [zidovudme (AZT), didanosme (DDI), dideoxycytidme (DDC), TIBO, nevirapme, PMEA, HEPT ...], among protease inhibitors [ such as, for example, A 77003], or among these inhibitors of the tat protein [such as, for example, RO 24-7429].
  • Ampoules containing a solution containing 10 mg of N- [3 ⁇ -hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -11-aminoundecanoic acid are prepared by adding 2% glycine and 0.1% cysteme to 500 cm of a 0.2% solution of N- [3 ⁇ -hydroxylup-20 (29) en-28-oyl) -11 -aminoundecanoic acid in isotonic phosphate buffer. The solution is divided and aseptically distributed in ampoules. Each ampoule contains 10 mg of active product.

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Abstract

Nouveaux dérivés du lupane de formule générale (I) dans laquelle R est (A), dans laquelle R' et R" identiques ou différents sont H ou alcoyle, X est une liaison, carbamoyle ou aminocarbonyle éventuellement substitués, Y est une liaison ou phénylène, R° et R°° identiques ou différents sont H ou alcoyle ou R° est OH, hydroxyalcoyle, phényle, benzyle, carbamoylméthyle, ou forme un hétérocycle avec l'azote de X lorsque X est carbamoyle et Y est une liaison, et, n, m, et p sont des entiers de 0 à 16, 4 m+n+p 16, R1 est méthyle, R2 est hydroxy, méthyle, hydroxyméthyle, -CH2OR'2, -CH2SR'2 ou -CH2NHR'2 ou, R2 est amino substitué ou dialcoylamino dont les parties alcoyle peuvent former un hétérocycle, R3 est H ou forme avec R1 ou R2 méthylène ou oxo, R4 et R5 sont différents et représentent H ou hydroxy, ou forment ensemble oxo, hydroxyimino ou alcoyloxyimino qui peut être substitué, et R6 et R7 sont H, ou bien O2, R4 et R5, et R6 et R7 forment ensemble des radicaux oxo, les radicaux alcoyle (1 à 4C) étant droits ou ramifiés, ainsi que leurs sels lorsqu'ils existent et leur préparation. Les nouveaux produits selon l'invention sont particulièrement intéressants dans le domaine du SIDA.

Description

NOUVEAUX DERIVES DIT LUPANE , LEUR PREPARATION ET LES COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES OUI LES CONTIENNENT
La présente invention concerne de nouveaux dérivés du lupane, de formule générale :
leurs sels, leur préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
Dans la demande de brevet japonais J 01 143 832 ont été décrits des dérivés de la bétuline de formule générale :
dans laquelle R1 et R2 sont hydroxy ou acyloxy et R3 est notamment methyle. Ces dérivés sont utiles dans le domaine des anticancéreux.
Il a été maintenant trouvé que les dérivés du lupane de formule générale (I) dans laquelle : R représente un radical de formule générale
dans laquelle R' et R" identiques ou différents sont des atomes d'hydrogène ou des radicaux alcoyle,
X est une liaison ou représente un radical carbamoyle, N-méthyl carbamoyle, aminocarbonyle ou N-méthylaminocarbonyle,
Y est une liaison ou représente un radical phénylène,
R° et R°° identiques ou différents sont des atomes d'hydrogène ou des radicaux alcoyle (étant entendu que R° et R°° ne sont pas nécessairement identiques sur chaque motif -CR°R°°-), ou R° est hydroxy, hydroxyalcoyle, phenyle, benzyle, carbamoylmethyle ou bien, lorsque Y est une liaison et X est carbamoyle, Rº peut former un cycle à 5 ou 6 chaînons avec l'atome d'azote contenu dans X, ce cycle pouvant en outre comprendre un autre hétéroatome choisi parmi l'oxygène ou le soufre et, n, m et p sont des nombres entiers de 0 à 16 tels que m + n + p soit compris entre 4 et 16,
R1 est un radical methyle, ou forme avec R3 un radical méthylène ou un radical oxo,
R2 est un radical hydroxy, methyle, hydroxyméthyle ou un radical -CH2OR'2, -CH2SR'2 ou -CH2NHR'2 pour lequel R'2 est alcoyle, hydroxyalcoyle, dihydroxyalcoyle, acétamidoalcoyle, ou acétyle, ou R2 est un radical amino substitué par un radical hydroxyalcoyle ou carboxyhydroxyalcoyie, ou un radical dialcoylamino dont les parties alcoyle peuvent former avec l'atome d'azote auquel elle sont rattachées, un heterocycle à 5 ou 6 chaînons contenant éventuellement un autre hétéroatome choisi parmi l'oxygène, le soufre ou l'azote et éventuellement N-alcoylé, R3 est lin atome d'hydrogène ou forme avec R1 ou R2 un radical méthylène ou un radical oxo. R4 et R5 sont différents et représentent un atome d'hydrogène ou un radical hydroxy, ou forment ensemble un radical oxo, hydroxyimino ou alcoyloxyimino éventuellement substitué (par un radical carboxy ou dialcoylammo dont les parties alcoyle peuvent former avec l'atome d'azote auquel elles sont rattachées, un heterocycle à 5 ou 6 chaînons contenant éventuellement un autre hétéroatome choisi parmi l'oxygène, l'azote ou le soufre et éventuellement substitué par un radical alcoyle) et
R6 et R7 sont des atomes d'hydrogène, ou bien R4 et R5, et R6 et R7 forment ensemble des radicaux oxo, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables lorsqu'ils existent, manifestent un effet cytoprotecteur de cellules infectées par un virus HIV (Human Immunodefîciency Virus) ainsi qu'une activité inhαbitrice de la production de transcriptase inverse d'un virus HIV. Dans la formule générale ci-dessus, il est entendu que les radicaux alcoyle sont droits ou ramifiés et contiennent 1 à 4 atomes de carbone.
Selon l'invention les produits de formule générale (I) peuvent être obtenus par action d'un amino acide de formule générale : H2N - R (III) dans laquelle R est défini comme ci-dessus et dont le cas échéant la fonction acide a été préalablement protégée, sur le chlorure de l'acide de formule générale :
dans laquelle R1, R2, R3, R4, R5, R6 et R7 sont définis comme précédemment, suivie le cas échéant de la transformation en un ester pour lequel le symbole R' est alcoyle, puis de l'élimination des radicaux protecteurs.
Il est entendu que lorsque R2, R4 ou R5 représentent ou contiennent un radical hydroxy, celui-ci est préalablement protégé; il en est de même si R2 contient un radical carboxy ou si le substituant -CR1R2R3 en position 19 est un radical carboxy. La réaction de l'amino acide sur le chlorure de l'acide lupèn-20(29)oïque-28 de formule générale (IV) s'effectue selon les méthodes habituelles qui n'altèrent pas le reste de la molécule. On opère notamment en présence d'une base organique azotée telle qu'une trialcoylamine (triéthylamine par exemple) dans un solvant organique tel qu'un solvant chloré (chloroforme, dichloro-1,2 éthane, dichlorométhane) ou dans le tétrahydrofurane ou dans un mélange de ces solvants, à une température comprise entre 15 et 30°C.
La fonction acide de l'amino acide de formule générale (III) est protégée par tout radical compatible et dont la mise en place et l'élimination n'altère pas le reste de la molécule. De même les radicaux R2, R4 ou R5 du dérivé du lupane de formule générale (IV) sont protégés par des radicaux compatibles et pouvant être mis en place et éliminés sans toucher au reste de la molécule. A titre d'exemple les groupements protecteurs peuvent être choisis parmi les radicaux décrits par T.W. GREENE, Protective Groups in Organic Synthesis, J. Wiley-Interscier.ee Publication (1991) ou par Me Omie, Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press (1973). Il est notamment avantageux d'utiliser des radicaux protecteurs pouvant être éliminés simultanément. On choisira des radicaux pouvant être éliminés en milieu neutre, basique ou acide. Les protections peuvent être effectuées avantageusement à l'état d'esters. Dans ce cas, l'élimination des radicaux protecteurs s'effectue par hydrolyse en milieu basique, notamment en présence de soude à une température comprise entre 10 et 50°C.
A titre d'exemple, les radicaux hydroxy peuvent être protégés à l'état d'ester (formyloxy, acétoxy, i.butoxy, trichloracétyloxy, phénoxyacétyloxy, benzyloxy), à l'état de cétone, sous forme de carbonate par un radical -COORa dans lequel Ra est un radical alcoyle ou benzyle éventuellement substitués ou encore par un radical trialcoylsilyle; les radicaux protecteurs d'acide peuvent être choisis parmi les radicaux alcoyle (methyle, éthyle, t.butyle), alcoyle substitué (trichloréthyle, haloéthyle, p. toluènesulfonyléthyle, benzyle, benzyle substitué par un radical nitro, benzhydryle, triphénylméthyle, benzyloxyméthyle...), alcoyloxyalcoyle (méthoxyméthyle), tétrahydropyranyle ou triméthylsilyle. Les dérivés du lupane de formule générale (I) dans lesquels le radical R possède un centre chiral, présentent des formes isomères. Il est entendu que ces formes isomères et leurs mélanges entrent dans le cadre de la présente invention. La préparation de l ' une ou l ' autre de ces formes dépend du choix de l' amino acide de départ. Le cas échéant, la transformation en un ester pour lequel R' est un radical alcoyle, s'effectue selon les méthodes habituelles qui n'altèrent le reste de la molécule. Notamment on opère par action d'un iodure d' alcoyle.
Selon l'invention le dérivé du lupane de formule générale (I) pour lequel R4 et R5 forment ensemble un radical hydroxyimino ou alcoyloxyimino éventuellement substitué comme défini précédemment, et les autres radicaux sont définis comme précédemment peut également être obtenu par action de l'hydroxylamine ou un de ses dérivés de formule générale : R8-O-NH2 (V) dans laquelle R8 est un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle éventuellement substitué (par un radical carboxy ou dialcoylamino dont les parties alcoyle peuvent former avec l'atome d'azote auquel elles sont rattachées, un heterocycle à 5 ou 6 chaînons contenant éventuellement un autre hétéroatome choisi parmi l'oxygène, l'azote ou le soufre et éventuellement substitué par un radical alcoyle), sur un dérivé du lupane de formule générale (I) dans laquelle R4 et R5 forment ensemble un radical oxo, puis le cas échéant libération des radicaux protecteurs.
Il est entendu que si R8 contient un radical carboxy ou si le dérivé du lupane de formule générale (I) contient des radicaux carboxy ou hydroxy, ces derniers sont préalablement protégés. La protection et la libération des radicaux protecteurs s'effectuent selon les méthodes citées précédemment.
La réaction s'effectue avantageusement à partir du chlorhydrate du dérivé de formule générale (V) dans la pyridine à la température de reflux du mélange réactionnel, ou dans un alcool en présence d'un carbonate alcalin à la température de reflux du mélange réactionnnel. Selon l'invention le dérivé du lupane de formule générale (I) pour lequel R1 et R2 sont des radicaux methyle, R3 est un atome d'hydrogène et les autres radicaux sont définis comme précédemment peut également être obtenu par réduction d'un dérivé du lupane de formule générale (I) pour lequel R1 et R3 forment ensemble un radical méthylène et R2 est défini comme ci-dessus.
La réduction s'effectue par toute méthode connue qui n'affecte pas le reste de la molécule. Notamment on opère par hydrogénation catalytique en présence de palladium sur charbon, sous pression atmosphérique, à une température comprise entre 15 et 25°C dans un solvant tel qu'un alcool (méthanol, éthanol par exemple).
Le cas échéant les radicaux susceptibles d'interférer avec la réaction sont préalablement protégés . La protection et l'élimination des radicaux protecteurs s'effectue selon les méthodes citées précédemment.
Selon l'invention le dérivé du lupane de formule générale (I) pour lequel R2 est un radical hydroxy, R1 est un radical methyle, R3 est un atome d'hydrogène et les autres radicaux sont définis comme précédemment peut également être obtenu par réduction d'un dérivé du lupane de formule générale (I) pour lequel R2 et R3 forment ensemble un radical oxo et R1 est un radical methyle.
La réduction s'effectue par toute méthode connue qui n'affecte pas le reste de la molécule. Notamment la réduction s'effectue par un borohydrure alcalin (borohydrure de sodium par exemple) en présence de chlorure de tétrabutylammonium ou de tétraéthylammonium, dans un solvant tel qu'un hydrocarbure aromatique (toluène par exemple), à une température comprise entre 50°C et la température de reflux du mélange réactionnel.
Le cas échéant les radicaux susceptibles d'interférer avec la réaction sont préalablement protégés. La protection et l'élimination des radicaux protecteurs s'effectue selon les méthodes citées précédemment. Selon l'invention le dérivé du lupane de formule générale (I) pour lequel R1 et R3 forment ensemble un radical oxo, R2 est un radical hydroxy et les autres radicaux sont définis comme précédemment peut également être obtenu par oxydation d'un dérivé du lupane de formule générale (I) pour lequel R1 et R3 forment ensemble un radical oxo et R2 est un radical methyle.
La réaction s'effectue généralement par action d'un hypochlorite ou d'un hypobromite. Par exemple par action de l'hypobromite de sodium qui peut être préparé in situ, en milieu hydroorganique, notamment dans le dioxane, à une température comprise entre -10 et 20°C. Le cas échéant les radicaux susceptibles d'interférer avec la réaction sont préalablement protégés. La protection et l'élimination des radicaux protecteurs s 'effectuent selon les méthodes citées précédemment.
Selon l'invention le dérivé du lupane de formule générale (I) pour lequel X (dans le radical R) représente un radical carbamoyle et les autres radicaux sont définis comme précédemment, peut être également obtenu à partir d'un dérivé du lupane de formule générale :
dans laquelle R1, R2, R3, R4, R5, R6 et R7 sont définis comme précédemment et R9 représente un radical de formule générale :
dans laquelle n et R" sont définis comme précédemment, par action d'une aminé de formule générale :
dans laquelle R' , R° , R°°, m et p sont définis comme précédemment puis le cas échéant transformation de l'acide obtenu en un ester pour lequel R' est un radical alcoyle et élimination le cas échéant des radicaux protecteurs.
Il est entendu que les radicaux représentant ou contenant des radxcaux pouvant interférer avec la réaction sont préalablement protégés. La protection et la libération des radicaux protecteurs s'effectuent comme décrit précédemment . La condensation de l'aminé de formule générale (VIII) s'effectue de préférence à partir du chlorhydrate de l'aminé. La réaction s'effectue selon les méthodes habituelles de condensation d'une aminé sur un acide. Notamment, on opère en présence d'un accepteur d'acide tel qu'une base organique azotée (trialcoylamine, pyridine, N-méthylmorpholine, diaza-1,8 bicyclo[5.4.0]undécène-7, diaza-1,5 bicyclo [4.3.0]nonène-5 par exemple) dans un solvant organique comme un solvant chloré (dichlorométhane, dichloréthane, chloroforme par exemple) ou un amide (diméthylformamide par exemple). Il est également possible d'opérer en présence d'un agent de condensation tel qu'un carbodiimide (dicyclohexylcarbodiimide, chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide par exemple) et éventuellement en présence d'un catalyseur tel que le N-hydroxybenzotriazole ou le N-hydroxysuccinimide, à une température comprise entre -20 et 40°C. L'amino acide de formule générale (III) et le dérivé du lupane de formule générale (IV) peuvent être préparés comme décrit ci-après dans les exemples.
Notamment, les dérivés du lupane de formule générale (IV) pour lesquels R1 est un radical methyle, R2 est un radical hydroxy ou methyle et R3 est un atome d'hydrogène peuvent être préparés selon le procédé de réduction décrit précédemment pour la préparation des produits de formule générale (I) pour lesquels R2 est un radical hydroxy.
Les dérivés du lupane de formule générale (IV) pour lesquels R1 est un radical methyle et R2 et R3 forment ensemble un radical oxo peuvent être préparés selon la méthode décrite par A. VYSTRCIL et coll., Collect. Czech. Chem. Comm., 35 , 295 (1970).
Les dérivés du lupane de formule générale (IV) pour lesquels R2 est un radical hydroxy et R1 et R3 forment ensemble un radical oxo peuvent être préparés par analogie avec la méthode décrite pour la préparation des produits correspondants de formule générale (I), par oxydation de la méthylcétone correspondante. Il est entendu que la protection de l'acide en position -19 ainsi obtenu est indispensable pour la mise en oeuvre dans la réaction suivante. Les dérivés du lupane de formule générale (IV) pour lesquels R2 est un radical hydroxyméthyle peuvent être préparés par action de l'acétate d'argent sur le dérivé brome correspondant pour lequel R2 est bromométhyle et pour lequel, si nécessaire, le radical R4 ou R5 est préalablement protégé. La réaction s'effectue avantageusement dans un solvant organique comme par exemple le toluène, à une température comprise entre 20°C et la température de reflux du mélange réactionnel. Le dérivé brome de départ peut être obtenu par action d'un agent de bromation comme par exemple le tribromure de tétrabutylammonium ou le N-bromosuccinimide sur le dérivé correspondant de l'acide lup-20(29)-èn-28-oïque. La réaction s'effectue dans un solvant chloré comme le chlorure de méthylène, le chloroforme, ou le tétrachlorure de carbone à une température voisine de 25°C.
Les dérivés du lupane de formule générale (IV) pour lesquels R2 est un radical amino substitué et R1 et R3 forment ensemble un radical oxo peuvent être préparés par action de l'aminé correspondante sur le dérivé du lupane de formule générale (IV) pour lequel R2 est un radical hydroxy et R1 et R3 forment ensemble un radical oxo. La réaction s'effectue par toute méthode connue pour obtenir un amide à partir d'un acide, sans toucher au reste de la molécule. On opère notamment par action de l'aminé sur le chlorure de l'acide de formule générale (IV), dans un solvant chloré, à une température comprise entre -20 et 40ºC. Il est entendu que les fonctions pouvant interférer avec la réaction sont préalablement protégées, notamment lorsque le radical amino substitué est un radical carboxy hydroxy alcoyle, il est nécessaire de protéger le radical carboxy.
Les dérivés du lupane de formule générale (IV) pour lesquels R2 est un radical amino substitué et R1 et R3 forment ensemble un radical oxo peuvent être préparés par action de l'aminé correspondante sur le dérivé du lupane pour lequel R2 est un radical bromométhyle en présence de tétra[triphénylphosphine] palladium et d'une base azotée.
Les dérivés du lupane de formule générale (IV) pour lesquels R2 est un radical -CH2OR'2 ou -CH2SR'2 et R1 et R3 forment ensemble un radical méthylène peuvent être préparés à partir du dérivé du lupane pour lequel R2 est bromométhyle, par action de l'alcoolate ou du thiolate correspondant.
L'acide 3α-hydroxylup-20(29)-èn-28-oïque (acide 3α-bétulιnιque) et ses dérivés substitués en position 20 ou 30 peuvent être obtenus selon ou par analogie avec la méthode décrite par W. HERZ, Phytochemistry, 11, 3061 (1972).
Les dérivés du lupane de formule générale (IV) pour lesquels R4 et R5 forment ensemble un radical oxo, peuvent être préparés par oxydation du dérivé du lupane de formule générale (IV) pour lequel R4 et R5 représentent respectivement un atome d'hydrogène et un radical hydroxy. L'oxydation s'effectue avantageusement par un agent oxydant comme l'anhydride chromique.
Les dérivés du lupane de formule générale (IV) pour lesquels R4 et R5, et R6 et R7 forment ensemble des radicaux oxo, peuvent être préparés par oxydation du dérivé du lupane de formule générale (IV) pour lequel R4 et R5 forment ensemble un radical oxo.
Les dérivés du lupane de formule générale (IV) pour lesquels R4 et R5 forment ensemble un radical hydroxyimino ou alcoyloxyimino éventuellement substitué (par un radical carboxy ou dialcoylamino dont les parties alcoyle peuvent former avec l'atome d'azote auquel elles sont rattachées, un heterocycle à 5 ou 6 chaînons contenant éventuellement un autre hétéroatome choisi parmi l'oxygène, l'azote ou le soufre et éventuellement substitué par un radical alcoyle) peuvent être préparés par analogie avec le procédé décrit précédemment pour la préparation des dérivés du lupane de formule générale (I) pour lesquels R4 et R5 forment ensemble un radical =N-O-R8.
Le chlorure d'acide du dérivé du lupane de formule générale (IV) peut être préparé selon les méthodes connues. A titre d'exemple, on opère par action du chlorure d'oxalyle ou du chlorure de thionyle, dans un solvant chloré comme le chloroforme, le dichloroéthane ou le dichlorométhane. Les dérivés du lupane de formule générale (VI) peuvent être préparés par analogie avec la méthode décrite pour la préparation des produits de formule générale (I), à partir d'un produit de formule générale (IV). Les produits de formule générale (VIII) peuvent être préparés selon ou par analogie avec les méthodes décrites ci-après dans les exemples.
Les nouveaux dérivés du lupane de formule générale (I) peuvent être purifiés le cas échéant par des méthodes physiques telles que la cristallisation ou la chromatographie.
Les produits selon l'invention peuvent être transformés en sels métalliques ou en sels d'addition avec une base azotée selon les méthodes connues en soi. Ces sels peuvent être obtenus par action d'une base métallique (par exemple alcaline ou alcalino terreuse), de l'ammoniaque ou d'une aminé sur un produit selon l'invention, dans un solvant approprié tel que l'eau ou un alcool. Le sel formé précipite après concentration éventuelle de la solution ; il est séparé par filtration.
Comme exemples de sels pharraaceutiquement acceptables peuvent être cités les sels avec les métaux alcalins (sodium, potassium, lithium) ou avec les métaux alcalmoterreux (magnésium, calcium), le sel d'ammonium, les sels de bases azotées (éthanolamine, diéthanolamine, triméthylamine, triéthylamine, méthylamine, propylamine, diisopropylamine, NN-diméthyléthanolamine, benzylamine, dicyclohexylamine, N-benzylphénéthylamine, NN'-dibenzyléthylènediamine, diphénylènediamine, benzhydrylamine, quinine, choline, arginine, lysine, leucine, dibenzylamine).
Les nouveaux dérivés du lupane selon la présente invention sont particulièrement utiles pour la prophylaxie et le traitement du SIDA (syndrome d'immunodéficience acquise) et de syndromes associés [ARC (AIDS related complex)]. Par prophylaxie nous sous-entendons le traitement des sujets qui ont été exposés aux virus HIVs, en particulier les séropositifs asymptomatiques qui présentent le risque de développer la maladie dans les mois ou les années à venir après la primomfection.
Les produits selon l'invention, qui sont inhibiteurs de l'effet cytopathogène du HIV et inhibiteurs de la production de transcriptase inverse en culture cellulaire à des concentrations dépourvues d'effet cytotoxique ou cytostatique, sont particulièrement intéressants.
Les activités ont été mises en évidence dans les tests suivants :
Activité vis-à-vis de l'effet cvtopathoσène du virus HIV
Les produits en poudre ont été mis en solution à raison de 2 mg de produit par 2 ml (environ 4 × 10-3 M) dans un mélange de diméthylformamide (DMF) et de L-lysine (base) à (1:19, vol:vol). On ajoute d'abord 1 volume de DMF et on solubilise le produit au mieux puis on ajoute 9 volumes d'une solution αe L-lysme base a 4 × 10-3 M dans de l'eau distillée. De cette manière on obtient une solution stock de produit à 10 % de DMF et contenant un rapport molaire (produit/lysine) proche de 1. Le test est réalisé sur la lignée lymphoblastoïde CEM clone 13. Dans une microplaque de 96 puits on dépose 25 μl/puits d'une solution de produit à tester dans du tampon phosphate isotonique (TPI) ou de TPI seul dans le cas des contrôles. Les produits sont étudiés à différentes concentrations (souvent 8), à raison de
6 puits par concentration. On ajoute alors 125 μl d'une suspension de cellules CEM (8 × 104 cellules pai ml) dans le milieu RPMI contenant
10 % de sérum de veau foetal, 100 Ul/ml de pénicilline, 100 μg/ml de streptomycine et 2 μmoles/ml αe glutamine et les microplaques sont incubées une heure à 37°C, sous une atmosphère contenant 5 % de gaz carbonique. Pour chaque concentration, l'essai est partagé en deux parties : une partie (3 puits) sur cellules infectées, pour la détermination de l'activité antivirale et l'autre partie (3 puits) sur cellules non infectées, pour déterminer la cytotoxicité des produits. On infecte alors la première série avec HIV-1 (100 μl par puits d'une suspension de virus LAV-1-BRU contenant 200-300 TCID50) tandis que l'autre série reçoit 100 μl de milieu RPMI tel que défini précédemment. Au bout de 7 jours d'incubation, 100 μl de cellules sont prélevés pour mesurer la viabilité cellulaire [déterminée selon une modification de la technique décrite par R. Pauwels et coll.,
J. Virol. Meth., 20, 309-321 (1988)]. On ajoute à ce prélèvement
10 μl d'une solution contenant 7 mg de MTT [bromure de 3- (4,5-diméthyl 2-thiazolyl)-2,5-diphényltétrazolium] par ml de tampon phosphate isotoπique. Après 3 heures d'incubation à 37°C le surnageant est enlevé. Le MTT est converti en un sel de formazan
(bleu) uniquement à l'intérieur des cellules vivantes. On ajoute alors 100 μl d'isopropanol (contenant 0,04 mole/l d'acide chlorhydrique) et les microplaques sont agitées jusqu'à la solubilisation du bleu de formazan. L'absorbance à 540 nm est lue avec un lecteur automatique de réactions ELISA en microplaques. Cette absorbance est proportionnelle à la quantité de cellules vivantes.
Le taux de protection (en %) d'un produit donné est déterminé à partir des densités optiques (DO) par la formule : DO(cell. traitées et inf.)-DO(cell, non traitées et inf.)
DO(cell. traitées et non inf.)-DO(cell. non traitées et inf.)
Le cas échéant la concentration inhibitrice 50 % est déterminée.
Les résultats démontrent que pour des concentrations de produit testé comprises entre 0,5 et 30 μg/ml, on obtient une diminution significative de l'effet cytopathogène.
Le taux de protection procuré par les produits selon 1 ' invention est compris entre 20 et 100 %.
La concentration inhibitrice 50 % des produits selon l'invention est comprise entre 0,30 et 100 μg/ml lorsqu'elle peut être déterminée. Péteirûnatàon de is multiplication virale car dosage de la transcriptase inverse du virus HIV
L'activité de la transcriptase inverse est mesurée directement sur 50 μl de surnageant de culture. Selon la méthode décrite par O. Schwartz et coll., AIDS Research, and Human Retrovirus 4 (6). 441-448 (1988). 10 μl de tampon contenant 0,5 M de KCl, 5 mM de dithiothreitol (DTT) et 0,5 % de triton X-100 sont ajoutés à tous les micropuits contenant les 50 μl de surnageant à tester. 40 μl de tampon contenant les 1,25 mM d'éthylène glycol-bis (2-aminoéthyl éther) tétraacétique acide (EGTA) , 0,125 mM de Tris. HC1 pH 7,8, 12,5 mM de MgCl2, 3 μCi de (3H) thymidine triphosphate (TTP), 0,05 DO260 d'acide polyadénylique - acide thymidylique (poly rA-oligo dT) sont ajoutés ensuite. La microplaque est couverte au moyen d'un film plastique et incubée 60 minutes à 37°C.
On arrête la réaction en ajoutant 20μl d'une solution glacée de 120 mM de Na4P207 dans 60 % d'acide trichloracétique et les échantillons sont placés 15 minutes sur le lit de glace.
Les précipités sont filtrés sur fibres de verre en utilisant un laveur de cellules (Skatron) et les filtres sont lavés avec une solution de 12 mM de Na4P2O7 dans 5 % d'acide trichloracétique.
Les filtres sont séchés et la radioactivité est comptée après ajout d'un liquide scintillant.
On observe des inhibitions de la production de transcriptase inverse associée au virus, comprises entre 20 et 100 % aux concentrations testées (0,30 à 100 μg/ml).
D'un intérêt particulier sont les produits de formule générale (I) dans laquelle :
R représente un radical de formule générale :
dans laquelle R' et R" identiques ou différents sont des atomes d'hydrogène ou des radicaux alcoyle, X est une liaison ou représente un radical carbamoyle, N-méthyl carbamoyle, ammocarbonyle,
Y est une liaison ou représente un radical phénylène, R° et R°° identiques ou différents sont des atomes d'hydrogène ou des radicaux alcoyle (étant entendu que R° et R°° ne sont pas nécessairement identiques sur chaque motif -CR°Rºº-), ou R° est hydroxy, hydroxyalcoyle, phenyle, benzyle, carbamoylmethyle ou bien, lorsque Y est une liaison et X est carbamoyle, R° peut former un cycle à 5 ou 6 chaînons avec l'atome d'azote contenu dans X et, n, m et p sont des nombres entiers de 0 à 16 tels que m + n + p soit compris entre 4 et 16,
R1 est un radical methyle, ou forme avec R3 un radical méthylène ou un radical oxo,
R2 est un radical hydroxy, methyle, hydroxyméthyle ou un radical -CH2SR'2 , ou -CH2NHR'2 pour lequel R'2 est alcoyle, hydroxyalcoyle, acétamidoalcoyle, ou acétyle, ou R2 est un radical amino substitué par un radical hydroxyalcoyle ou carboxyhydroxyalcoyle, ou un radical dialcoylamino dont les parties alcoyle peuvent former avec l'atome d'azote auquel elle sont rattachées, un heterocycle à 5 ou 6 chaînons contenant éventuellement un autre atome d'azote et éventuellement N- méthylé,
R3 est un atome d'hydrogène ou forme avec R1 ou R2 un radical méthylène ou un radical oxo,
R4 et R5 sont différents et représentent un atome d'hydrogène ou un radical hydroxy, ou forment ensemble un radical oxo, ou alcoyloxyimino éventuellement substitué (par un radical carboxy ou dialcoylamino dont les parties alcoyle peuvent former avec l'atome d'azote auquel elles sont rattachées, un heterocycle à 5 ou 6 chaînons contenant éventuellement un autre atome d'azote éventuellement substitué par un radical methyle) et
R6 et R7 sont des atomes d'hydrogène, ou bien
R4 et R5, et R6 et R7 forment ensemble des radicaux oxo. étant entendu que les radicaux alcoyle sont droits ou ramifiés et contiennent 1 à 4 atomes de carbone, ainsi que leurs sels lorsqu'ils existent.
Et parmi ces produits, plus spécialement actifs sont : - la N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctanoyl]-β-alanme ;
- la N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctanoyl]-L-ala¬nme ;
- la N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctanoyl]-L-thréonme ;
- la N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-amιnooctanoyl]-L-statine ;
- l'acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-ammoheptylcarbamoylacétique. Les exemples suivants donnés à titre non limitatif illustrent la présente invention.
Exemple 1
On ajoute 650 mg de chlorhydrate de 5-ammopentanoate de methyle puis
1,07 cm3 de triéthylamme à 50 cm3 d'une solution chloroformique de chlorure de 3β-acétoxylup-20(29)èn-28-oyle (préparée à partir de
1,7 g d'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oique). La solution est alors agitée 20 heures à une température voisine de 20°C. Après addition de 60 cm3 d'eau distillée la phase organique est décantée et la phase aqueuse est lavée par 40 cm3 au total de chloroforme. Les phases organiques rassemblées sont lavées par 40 cm au total d'eau distillée, séchées sur du sulfate de sodium anhydre et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient 1,9 g d'une meringue jaune qui est chromatographiée sur une colonne de 2,2 cm de diamètre contenant 38 g de silice (0,02-0,045 mm) éluée par de l'oxyde de dusopropyle en recueillant des fractions de 10 cm3. Après élimination des 23 premières fractions, les 17 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite
(2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 1,1 g de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-5-aminopentanoate de methyle sous forme d'une meringue blanche (Rf=0,35 ; chromatographie sur couche mince de silice ; êluant : oxyde de diisopropyle).
18 cm3 de soude 4N sont ajoutés a une solution de 1,1 g de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-5-aminopentanoate de methyle dans 18 cm3 de méthanol et 9 cm3 de tétrahydrofurane et le mélange reactionnel est agité pendant 15 heures à une température voisine de 20°C. On dilue par 40 cm d'eau distillée et agite de nouveau pendant 15 minutes environ. La suspension est alors acidifiée à un pH voisin de 2 à l'aide de 21 cm d'acide chlorhydrique 4N. Après 1 heure d'agitation, le solide est séparé par filtration, lavé 5 fois par 100 cm3 au total d'eau distillée jusqu'à élimination des ions chlorures (test au nitrate d'argent) et séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 20°C. On obtient ainsi 820 mg d'acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-5-aminopentanoïque sous la forme d'une meringue blanche fondant vers 160°C. Le chlorure de 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle est préparé d'après J. PROVITA et A.VYSTRCIL, Collect. Czech. Chem. Commun., 41, 1200 (1976).
Exemple 2 On ajoute 0,53 cm3 de triethylamine et 380 mg de chlorhydrate de 6-aminohexanoate de methyle à une solution de 1 g de chlorure de 3β-acëtoxylup-20(29)-èn-28-oyle en solution dans 50 cm3 de chlorure de méthylène, on maintient l'agitation pendant 20 heures à une température voisine de 20°C, puis on ajoute 100 cm d'eau distillée.
La phase organique est décantée, la phase aqueuse est extraite par 75 cm au total de chlorure de méthylène, les extraits organiques sont rassemblés, séchés sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu est purifié par HPLC par fractions de 250 mg, sur un colonne de 5 cm de diamètre contenant 200 g de silice greffée C18 (0 , 01 mm) éluée avec un mélange d'acétonitrile, d'eau et de tétrahydrofurane 75-10-15 en volumes en recueillant des fractions de 75 cm3. Les 3 premières fractions sont éliminées; les 2 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 838 mg de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-6-ammohexanoate de methyle sous forme d'une meringue blanche [Rf=0,3 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane-acétate d'éthyle (80-20 en volumes)].
Une solution de 800 mg de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-6-ammo hexanoate de methyle dans 13 cm3 de méthanol, 6,5 cm3 de tétrahydrofurane et 1,6 cm de soude 4N est agitée pendant 15 heures à une température voisine de 20°C. Après addition de 2 cm3 d'acide chlorhydrique 5N et de 20 cm3 d eau distillée, l'agitation est maintenue pendant 30 minutes. Le solide est séparé par filtration,
3
lavé par 50 cm au total d'eau distillée et séché à l'air. On obtient ainsi 750 mg d'acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-6-ammo hexanoïque, sous la forme d'un solide blanc, fondant vers 135°C.
Exemple 3
On ajoute 320 mg de chlorhydrate de 7-ammoheptanoate de methyle puis 0,62 cm3 de triéthylamme à une solution de 1 g de chlorure de 3β-acétoxylup-20(29)-en-28-oyle dans 30 cm3 de dichloromethane. La solution est agitée 20 heures à une température voisine de 20°C et le solvant est évaporé à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Les 1,77 g de meringue beige obtenus sont chromatographiés sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 80 g de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 80-20 (en volumes) en recueillant des fractions de 60 cm . Les 23 premières fractions sont éliminées; les 8 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. On obtient ainsi 930 mg de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-ammoheptanoate de methyle sous forme d'une meringue blanche [Rf=0,2 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane-acétate d'éthyle 80-20 (en volumes)]. Un volume de 1,9 cm3 de soude 7N est ajouté en 5 minutes environ à une solution de 930 mg de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7- aminoheptanoate de methyle dans 7 cm de méthanol et 10 cm3 de tétrahydrofurane et le mélange réactionnel est agité pendant 15 heures à une température voisine de 20°C et le solvant est évaporé à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de
30°C. Le résidu est dilué dans 40 cm d'eau distillée et acidifié à un pH voisin de 2 à l'aide d'acide chlorhydrique 5N. Après 20 minutes d'agitation, le solide est séparé par filtration, lavé par 100 cm3 au total d'eau distillée et séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 20°C. On obtient ainsi 740 mg d'acide N-[3β- hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptanoïque fondant vers 134°C.
Le 7-aminoheptanoate de methyle est préparé d'après CF. HORN, B.T. FREURE, H. VINEYARD, H.J. DECKER, Angew. Chenu, 74 , 531 (1962). Exemple 4
On ajoute 0,53 cm de triéthylamine et 490 mg de chlorhydrate de
8-aminooctanoate de methyle à une solution de 1 g de chlorure de 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle en solution dans 50 cm3 de chlorure de méthylène et maintient l'agitation pendant 20 heures à une température voisine de 20°C. Après addition de 100 cm3 d'eau distillée, la phase organique est décantée, la phase aqueuse est extraite par 75 cm3 au total de chlorure de méthylène, les extraits organiques sont rassemblés, séchés sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu obtenu est purifié par HPLC, par fractions de 250 mg sur une colonne de 5 cm de diamètre contenant 300 g de silice greffée C18 (0, 015-0, 020 mm) éluée avec un mélange d'acétonitrile, d'eau et de tétrahydrofurane 70-15-15 (en volumes), sous une pression de 370 Psi en recueillant des fractions de 75 cm . Les 3 premières fractions sont éliminées ; les 2 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 750 mg de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctanoate de methyle sous forme d'une meringue blanche [Rf=0,3 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane acétate d'éthyle 80-20 en (volumes)].
Une solution de 750 mg de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-amino octanoate de methyle dans 12 cm3 de methanol, 6 cm3 de tétrahydrofurane et 1,5 cm3 de soude 4N est agitée pendant 15 heures à une température voisine de 20°C. Après addition de 10 cm de methanol, de 2cm d'acide chlorhydrique 5N puis de 25 cm d'eau distillée, l'agitation est maintenue pendant 30 minutes à une température voisine de 20°C et le solide est séparé par filtration, lavé par 50 cm3 au total d'eau distillée, et séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi
710 mg d'acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctanoïque, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 140°C.
Le chlorhydrate du 8-amιnooctanoate de methyle peut être obtenu de la manière suivante :
A une solution de 1 g d'acide 8-ammooctanoïque dans 40 cm3 de methanol, on ajoute 0,7 cm3 de chlorure de thionyle, à une température voisine de -20°C et maintient l'agitation pendant
12 heures à une température voisine de 20°C. Le solvant est éliminé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 1,48 g de chlorhydrate de 8-ammooctanoate de methyle, sous la forme d'un solide blanc.
Exemple 5
On ajoute 310 mg de chlorhydrate de 10-ammodécanoate de methyle puis 0,35 cm3 de triéthylamme à 11 cm3 d'une solution chloroformique de chlorure de 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle (préparée à partir de
550 mg d'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oïque). La solution est alors agitée 15 heures à une température voisine de 20°C. Après addition de 15 cm3 d'eau distillée, le mélange réactionnel est agite pendant 1 heure, la phase organique est décantée et la phase aqueuse est extraite par 20 cm3 au total de chloroforme. Les phases organiques rassemblées sont lavées par 20 cm3 au total d'eau distillée, séchées sur du sulfate de sodium anhydre et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de
30°C. On obtient 730 mg d'une meringue jaune qui est chromatographiée sur une colonne de 2,1 cm de diamètre contenant 35 g de silice (0,02- 0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 60-40 (en volumes) en recueillant des fractions de 5 cm3. Après élimination des 21 premières fractions, les 17 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. On obtient ainsi 600 mg de N- [3β-acétoxylup-20(29)- èn-28-oyl]-10-aminodécanoate de methyle sous forme d'une meringue blanche [Rf=0,72 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane-acétate d'éthyle 60-40 (en volumes)].
8,7 cm de soude 4N sont ajoutés à une solution de 600 mg de N-[3β- acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-10-aminodécanoate de methyle dans 9 cm3 de methanol et 4,5 cm3 de tétrahydrofurane et le mélange réactionnel est agité pendant 15 heures à une température voisine de 20°C. On dilue par 40 cm3 d'eau distillée et acidifie à l'aide de 10 cm3 d'acide chlorhydrique 4N. Après 1 heure d'agitation, on ajoute 15 cm3 d'éther éthylique et isole la phase organique. La phase aqueuse est extraite par 30 cm au total d'éther. Les phases organiques rassemblées sont lavées par 30 cm au total d'eau distillée, séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. On obtient ainsi 550 mg d'acide N-[3β-hydroxyiup-20(29)-èn-28-oyl-10-aminodécanoïque fondant vers 100°C. Le chlorhydrate de 10-aminodécanoate de methyle peut être préparé comme décrit dans la demande de brevet allemand 971 392.
Exemple 6
On ajoute 580 mg de chlorhydrate de 11-aminoundécanoate de methyle puis 0,62 cm de triéthylamine à une solution de 1,03 g de chlorure de 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle dans 30 cm3 de dichlorométhane. La solution est alors agitée 48 heures à une température voisine de 20°C et le solvant est évaporé à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 20°C. On obtient 2 g d'une meringue jaune qui est chromatographiée sur une colonne de 2,7 cm de diamètre contenant 80 g de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec de l'oxyde de dusopropyle en recueillant des fractions de 20 cm3. Après élimination des 10 premières fractions, les 6 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. On obtient ainsi 1,29 g de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-undéca¬noate de methyle sous forme d'une meringue blanche.
4.5 cm de soude 4N sont ajoutés à une solution de 1,28 g de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-ammoundécanoate de methyle dans
8 cm3 de methanol et 13 cm3 de tétrahydrofurane, le mélange réactionnel est agité pendant 24 heures à une température voisine de 20°C et le solvant est évaporé à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. Le résidu est mis en suspension dans
60 cm d'eau distillée. On aciαifie à un pH voisin de 2 à l'aide de
3.6 cm d'acide chlorhydrique 5N. Après 20 minutes d'agitation, le solide est séparé par filtration, lavé à l'eau distillée jusqu'à un pH voisin de 7 et séché à l'air à une température voisine de 20°C. On obtient ainsi 1,2 g d'acide N- [3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-ammoundécanoique, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 115°C. Le 11 -ammoundécanoate de methyle est préparé d'après H. ZAHN, J. KUNDE, Chem. Ber., 94., 2470 (1961).
Exemple 7
On ajoute 243 mg de chlorhydrate de 11-ammoundécanoate de methyle puis 0,27 cm3 de triéthylamme dans 20 cm3 d'un mélange tétrahydrofurane/ chloroforme 50-50 (en volumes), contenant 453 mg de chlorure de
3α-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle. La solution est agitée 20 heures à une température voisine de 20°C et le solvant est évaporé à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. Le résidu est repris par 60 cm3 d'éther éthylique et 25 cm3 d'eau distillée, la phase organique est décantée et la phase aqueuse est extraite par 25 cm3 au total d'éther éthylique. Les phases organiques rassemblées sont lavées par 45 cm3 au total d'eau distillée, séchées sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. Les 600 mg de me ringue jaune clair obtenus sont chromatographiés sur une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 56 g de silice (0,063-0,200 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 85-15 (en volûmes) en recueillant des fractions de 7 cm3. Les 10 premières fractions sont éliminées; les 17 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. On obtient ainsi 810 mg de N-[3α-acêtoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoate de methyle sous forme d'une meringue blanche.
5,8 cm de soude 4N sont ajoutés en 5 minutes environ à une solution de 400 mg de N-[3α-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoate de methyle dans 7 cm3 de methanol et 3, 5 cm3 de tétrahydrofurane et le mélange réactionnel est agité pendant 24 heures à une température voisine de 20°C. On dilue par 35 cm3 d'eau distillée et évapore les solvants organiques sous pression réduite (4,05 kPa) à une température voisine de 30°C. La suspension aqueuse est alors acidifiée à un pH voisin de 1 à 1 'aide de 6,8 cm3 d'acide chlorhydrique 4N. Après
1 heure d'agitation, on extrait la phase aqueuse avec 50 cm d'éther éthylique. La phase organique est décantée et lavée par 45 cm3 au total d'eau distillée, sêchée sur du sulfate de magnésium anhydre, et concentrée à sec sous pression réduite (4,05 kPa) à une température voisine de 30°C. On obtient ainsi 384 mg d'une meringue blanchâtre qui est mise en suspension dans 12 cm3 d oxyde de diisopropyle, séparée par filtration et lavée par 8 cm3 au total d'oxyde de diisopropyle. Le solide (320 mg) est remis en suspension dans 10 cm3 d'oxyde de diisopropyle, on ajoute 3 cm3 d'éther éthylique et on laisse sous agitation pendant 1 heure. Le solide est séparé par filtration, lavé par 10 cm au total d'oxyde de diisopropyle et séché à pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 290 mg d'acide N-[3α-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoïque, sous la forme d'un solide blanc, fondant vers 220°C.
Le chlorure de 3α-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle peut être préparé de la manière suivante :
Une solution de 267 mg de chlorure d'oxalyle et de 437 mg d'acide 3α-acétylbétulinique dans 14 cm de chloroforme est maintenue sous agitation à une température voisine de 20°C pendant 18 heures et le solvant est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. Le résidu est repris dans 20 cm de cyclohexane et le solvant est évaporé à sec sous pression réduite dans les mêmes conditions. Cette opération est répétée 2 fois. On obtient ainsi 453 mg de chlorure de 3α-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle.
L'acide 3α-acétoxylup-20(29)-èn-28-oïque peut être obtenu de la manière suivante :
Une solution de 490 mg d'anhydride (3α-acétoxylup-20(29)-èn-28 oïque) acétique αans 49 cm3 d'éthanol à 70 % est chauffé 1 heures 30 minutes au reflux en présence de 4 , 9 cm d'ammoniaque 4N. La suspension est refroidie vers 20 °C, l'insoluble est séparé par filtration, lavé par 20 cm3 au total d'éthanol absolu, et les filtrats réunis sont concentrés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. On obtient 452 mg d'acide 3a-acétoxylup-20(29)-èn-28-oïque sous la forme d'un solide crème.
L'anhydride (3α-acétoxylup-20(29)-èn-28-oïque) acétique peut être préparé de la manière suivante :
Un mélange de 445 mg d'acide 3α-hydroxylup-20(29)-èn-28-oïque (acide 3α-bétulmιque), de 1,14 g d'acétate de sodium et de 4,5 cm d'anhydride acétique est chauffé 1 heure 15 minutes au reflux. La solution est ensuite refroidie vers 20°C puis 15 cm3 d'eau distillée sont ajoutés goutte à goutte, et l'agitation est maintenue pendant
1 heure. Le solide formé est séparé par filtration et lavé à l'aide de 25 cm3 au total d'eau distillée. Le résidu est alors dissous dans
50 cm3 d'éther éthylique, 10 cm3 d'eau distillée sont ajoutés, la phase organique est décantée, lavée par 10 cm d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. On obtient ainsi 0500 mg d' anhydride (3α-acétoxylup-20(29)-èn-28-oïque) acétique, sous la forme d'une meringue blanche.
L'acide 3α-bétulmιque est obtenu selon W. HERZ, Phytochemistry, 11, 3061 (1972). Exemple 8
On ajoute 610 mg de chlorhydrate de 11-aminoundécanoate de methyle puis 0,68 cm3 de triéthylamine à 20 cm3 d'une solution chloroformique de chlorure de 3-oxolup-20(29)-èn-28-oyle (préparé à partir d'l g d'acide 3-oxolup-20(29)-èn-28-oïque). La solution est alors agitée 15 heures à une température voisine de 20ºC. Après addition de 40 cm3 d'eau distillée la phase organique est décantée et la phase aqueuse est extraite par 30 cm au total de chloroforme. Les phases organiques rassemblées sont lavées par 30 cm3 au total d'eau distillée, séchées sur du sulfate de sodium anhydre et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de
40°C. On obtient 1,5 g d'une meringue jaune qui est chromatographiée sur une colonne de 3,5 cm de diamètre contenant 150 g de silice
(0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de chlorure de méthylène et de methanol 98-2 (en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm3.
Après élimination des 45 premières fractions, les 30 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 50°C. On obtient ainsi 1,1 g de N-[3-oxolup- 20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoate de methyle sous forme d'une meringue blanche [Rf=0,5 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : dichlorométhane-méthanol 98-2 (en volumes)]. 9 cm3 de soude 4N sont ajoutes a une solution de 600 mg de N-[3-oxolup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoate de methyle dans 9 cm3 de methanol et 4, 5 cm de tétrahydrofurane et le mélange réactionnel est agité pendant 17 heures à une température voisine de 20°C. On dilue par 20 cm d'eau distillée et acidifie à l'aide de 12 cm d'acide chlorhydrique 4N. Après 15 minutes d'agitation, la suspension est additionnée de 25 cm d'acétate d'éthyle et la phase organique est séparée. La phase aqueuse est extraite par 30 cm au total d'acétate d'éthyle, les phases organiques rassemblées sont lavées par 30 cm au total d'eau distillée, séchées sur sulfate de sodium anhydre et concentrées à sec sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 30°C. On obtient ainsi 340 mg d'acide N-[3-oxolup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoïque, sous la forme d'une poudre blanche fondant vers 90°C. Le chlorure de 3-oxolup-20(29)-èn-28-oyle peut être préparé de la manière suivante : A une solution de 2 g d'acide 3-oxolup-20(29)-èn-28-oique dans 44 cm3 de chloroforme, on ajoute sous agitation 0,76 cm de chlorure d'oxalyle et on maintient l'agitation à une température voisine de
20°C pendant 20 heures. Le solvant est alors évaporé à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Les traces de chlorure d'oxalyle sont éliminées en mettant le résidu en suspension dans 10 cm3 de cyclohexane et en évaporant à sec le solvant sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de
35°C. On obtient 2,2 g de chlorure de 3-oxolup-20(29)-èn-28-oyle sous la forme d'une meringue jaune.
L'acide 3-oxolup-20(29)-èn-28-oïque est préparé d'après R. KAWAGUCHI, K. W. KIM, J. Pharm. Soc. Jpn, 60, 595, 1940. Exemple 9
On aj oute 380 mg de chlorhydrate de 11-aminoundécanoate de methyle puis 0,56 cm3 de triethylamme à une solution de 800 mg de chlorure de 30-acétoxy-3-oxolup-20(29)èn-28-oyle dans 40 cm de dichlorométhane. La solution est alors agitée 1 heure et 30 minutes à une température voisine de 20°C et le solvant est évaporé à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu obtenu est chromatographie sur une colonne de 4 cm de diamètre et contenant 125 g de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 6-4 (en volumes) en recueillant des fractions de 25 cm3. Les 9 premières fractions obtenues sont éliminées, les 6 suivantes sont concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 45°C. On obtient ainsi 960 mg de N-[30-acétoxy-3-oxolup-20(29)-èn-28-oyl]-11-ammoundéca-noate de methyle sous forme d'une laque incolore. On ajoute 1 , 6 cm3 de soude 4N à une solution de 930 mg de N-[30-acetoxy-3-oxolup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoate de methyle dans
13 cm 3 de methanol et 6,5 cm3 de tétrahydrofurane et le mélange réactionnel est agité pendant 15 heures à une température voisine de 20ºC. On acidifie à l'aide de 1,3 cm3 d'acide chlorhydrique 5N et on dilue par 100 cm3 d'eau distillée. Après 1 heure d'agitation, le solide est séparé par filtration, lavé par 30 cm au total d'eau distillée. On obtient ainsi 730 mg d'acide N-[30-hydroxy-3-oxo lup- 20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoïque fondant à une température voisine de 100°C.
Le chlorure de 30-acétoxy 3-oxolup-20(29)-èn-28-oyle est préparé de la manière suivante :
A une solution de 770 mg d'acide 30-acétoxy-3-oxolup-20(29)-èn-28- oïque dans 38,5 cm3 de dichlorométhane, on ajoute 0,22 cm3 de chlorure d'oxalyle. Après 15 heures d'agitation à une température voisine de 20°C, le solvant est évaporé sous pression réduite
(2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient 800 mg de chlorure de 30-acétoxy-3-oxolup-20(29)-èn-28-oyle sous la forme d'une meringue blanche qui est utilisée sans autre purification.
L'acide 30-acétoxy-3-oxolup-20(29)-èn-28-oïque est obtenu de la manière suivante :
On ajoute, goutte à goutte, en 30 minutes environ, une solution de
1,6 g d'anhydride chromique dans 1,6 cm3 d'eau distillée et 16 cm3 de pyridine refroidie à 0°C, à une solution de 2,34 g d'acide
30-acétoxy-3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oïque dans 28 cm3 de pyridine à
0°C. Le mélange réactionnel est agité 1 heure à 0°C, puis 12 heures à une température voisine de 20°C et diluée par 250 cm3 d'eau distillée. On ajoute 100 cm3 d'acétate d'éthyle et la phase organique est décantée. La phase aqueuse est extraite par 2 fois 100 cm3 d'acétate d'éthyle, les phases organiques sont rassemblées, lavées par 200 cm au total d'eau distillée, séchées sur du sulfate de magnésium anhydre, et évaporées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (2,4 g) est chromatographie sur une colonne de 5 cm de diamètre contenant 200 g de silice (0,020-0,045 mm), éluée par un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 6-4 (en volumes) en recueillant des fractions de 80 cm3. Les 9 premières fractions sont éliminées, les 8 suivantes sont rassemblées et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine ce 40°C. On obtient ainsi 1,55 g d'acide 30-acétoxy-3-oxolup-20(29)-èn-28-oïque sous la forme d'une meringue blanche.
L'acide 30-acétoxy-3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oïque peut être préparé de la manière suivante :
Un mélange de 4,44 g d'acide 30-bromo-3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oique, 2,08 g d'acétate d'argent dans 250 cm de toluène est chauffé une demi-heure au reflux. L'insoluble est filtré à chaud et rincé par 75 cm au total de toluène bouillant. Les filtrats réunis sont ensuite évaporés sous pression réduite (2,7 kPa) . Le résidu (4,32 g) est chromatographie sur une colonne de 6 cm de diamètre et contenant 350 g de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 7-3 (en volumes) en recueillant des fractions de 100 cm . Les 14 premières fractions obtenues sont éliminées, les 11 suivantes sont concentrées sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 45°C. On obtient ainsi 2,34 g d'acide 30-acétoxy-3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oïque sous forme d'une meringue blanche. [Rf=0,26 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane-acétate d'éthyle 70-30 (en volumes)]. L'acide 30-bromo 3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oïque est obtenu de la manière suivante :
Une solution de 4 g d'acide 3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oïque et 4,32 g de tribromure de tétrabutylammonium dans 80 cm de chloroforme et 80 cm de tétrahydrofurane est agitée 2 jours à une température voisine de 25°C. Le mélange réactionnel est lavé successivement
2 fois par 50 cm3 d'eau distillée, 2 fois par 25 cm3 d'une solution de thiosulfate de sodium 0,1N et par 2 fois 25 cm3 d'eau distillée puis séché sur du sulfate de magnésium anhydre. La phase organique est évaporée sous pression réduite (2,7 kPa) et à une température voisine de 40°C. On obtient un solide pâteux jaune (5,01 g) qui est chromatographie sur une colonne de 6 cm de diamètre, contenant 350 g de silice (0,02-0,045 mm) et éluée avec un mélange de chlorure de méthylène et d'acétate d'éthyle 90-10 (en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les 5 premières fractions obtenues sont éliminées, les 70 suivantes sont évaporées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 4,44 g d'acide 30-bromo 3β-hydroxy-lup-20(29)-èn-28-oïque sous forme d'un solide blanc. [Rf=0,3 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chlorure de méthylène-acétate d'éthyle 90-10 (en volumes)].
Exemple 10
On ajoute 580 mg de chlorhydrate de 11 -aminoundécanoate de methyle puis 0,65 cm 3 de triéthylamine à 20 cm3 d'une solution chloroformique de chlorure de 2,3-dioxolup-20(29)-èn-28-oyle (préparée à partir de 1 g d'acide 2,3-dioxolup-20(29)-èn-28-oïque). La solution est agitée
24 heures àà u xne température voisine de 20°C. On ajoute 40 cm d'eau distillée, l'agitation est maintenue pendant 15 minutes puis la phase organique est décantée et la phase aqueuse est extraite par 30 cm3 au total de chloroforme. Les phases organiques rassemblées sont lavées par 30 cm3 au total d'eau distillée, séchées sur du sulfate de sodium anhydre et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient 1,4 g d'une meringue jaune qui est chromatographiée une première fois sur une colonne de 2,7 cm de diamètre contenant 70 g de silice (0,02-0,045 mm) en éluant avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 80-20 (en volumes) et en recueillant des fractions de 10 cm3. Après élimination des 33 premières fractions, les 12 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C.
Les 700 mg d'huile jaune pâle obtenus sont chromatographiés une nouvelle fois sur une colonne de 2,8 cm de diamètre contenant 70 g de silice (0,020-0,045 mm). On élue avec un mélange de chlorure de méthylène et d'acétate d'éthyle 90-10 (en volumes), en recueillant des fractions de 15 cm3. Les 14 premières fractions sont éliminées; les 7 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient 470 mg de N- (2,3-dioxolup-20(29)-èn-28-oyl)-11-aminodécanoate de methyle sous la forme d'une meringue jaune [Rf=0,37 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme-méthanol 95-5 (envolumes)]. 7 cm de soude 4N sont ajoutés à une solution de 470 mg de N-[2,3-dioxolup-20(29)-èn-28-oyl]-11-ammoundécanoate de methyle dans 7 cm3 de methanol et 3,5 cm de tétrahydrofurane et le mélange réactionnel est agité pendant 15 heures à une température voisine de 20°C. On dilue par 15 cm3 d'eau distillée, acidifie a un pH voisin de 3-4 à l'aide de 9 cm3 d'acide chlorhydrique 4N, maintient l'agitation pendant 15 minutes et ajoute 30 cm3 de chloroforme. Après décantation de la phase organique, la phase aqueuse est extraite par 20 cm3 au total de chloroforme. Les phases organiques rassemblées sont lavées par 20 cm3 au total d'eau distillée, séchées sur sulfate de sodium anhydre et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Les sels minéraux sont éliminés en reprenant le résidu par 20 cm3 d'acétate d'éthyle et 10 cm3 d'acide chlorhydrique 1N. La phase aqueuse est extraite par 20 cm au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques rassemblées sont lavées par 30 cm3 au total d eau distillée, sechees sur sulfate de sodium anhydre et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 420 mg d'une meringue blanche qui est chromatographiée sur une colonne de 2,2 cm de diamètre contenant 40 g de silice (0,060 mm). On élue avec un mélange de chloroforme et de methanol 95-5 (en volumes) en recueillant des fractions de 5 cm3. Les 16 premières fractions sont éliminées; les 6 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (12,5 Pa) à une température voisine de 35°C. On obtient 230 mg d'acide N-[2,3-dioxolup-20(29)-èn-28-oyl]-11-ammoundécanoïque, sous la forme d'une meringue blanche, fondant vers 90°C (collant).
Le chlorure de 2,3-dιoxolup-20(29)-èn-28-oyle peut être préparé de la manière suivante :
A une solution de 1 g d'acide 2,3-dιoxolup-20(29)-èn-28-oïque dans 21 cm 3 de chloroforme, on ajoute sous agitation 0,72 cm3 de chlorure d'oxalyle et on maintient sous agitation à une température voisine de
20°C pendant 18 heures. Le solvant est alors évaporé à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu est mis en suspension dans 10 cm3 de cyclohexane et le solvant est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. Cette opération est répétée 2 fois. On obtient 940 mg de chlorure de 2,3-dioxolup-20(29)-èn-28-oyle sous la forme d'une meringue jaune. [Rf=0,62 ; chromatographie sur couche mince ; éluant cyclohexane-acétate d'éthyle 80-20 (en volumes)]. L'acide 2,3-dioxolup-20(29)-èn-28-oïque est préparé de la manière suivante :
On ajoute 3,48 g de terbutylate de potassium à une solution de 5,27 g d'acide 3-oxolup-20(29)-èn-28-oïque dans 248 cm de terbutanol puis on fait passer un courant d'oxygène pendant 23 heures à une température voisine de 25°C. On ajoute alors 31 cm3 d'acide chlorhydrique 1N. Après 15 minutes sous agitation, l'insoluble est éliminé par filtration et le filtrat est évaporé à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu est repris par 50 cm 3 de cyclohexane et le solvant est évapore.. a.. sec dans les mêmes conditions; cette opération est répétée 3 fois. Les 7,7 g de meringue obtenus sont chromatographies sur une colonne de 4,5 cm de diamètre contenant 385 g de silice (0,020-0,045 mm), éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 80-20 (en volumes), en recueillant des fractions de 50 cm3. Les 23 premières fractions sont éliminées, les 9 suivantes sont rassemblées et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 3,3 g d'acide 2,3-dioxolup-20(29)-èn-28-oïque, sous la forme d'une meringue jaune. [Rf=0,2 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane-acétate d'éthyle 80-20 (en volûmes)].
Exemple 11
On ajoute 280 mg de chlorhydrate de 11-aminoundécanoate de methyle et 0,28 cm de triethylamme à 25 cm d'une solution dans le dichlorométhane de chlorure de 3β,30-diacétoxylup-20(29)-èn-28-oyle (préparée à partir de 560 mg d'acide 3β,30-diacétoxylup-20(29)-èn-28-oïque). La solution est alors agitée 12 heures à une température voisine de 20°C. On ajoute 10 cm d'eau distillée. La phase organique est séparée puis lavée avec 20 cm3 au total d'eau distillée. Les phases organiques réunies sont séchées sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. L'huile incolore obtenue (750 mg) est chromatographiée sur une colonne de 1,7 cm de diamètre et contenant 15 g de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 80-20 (en volumes) en recueillant des fractions de 15 cm3. Les 2 premières fractions obtenues sont éliminées, les 5 suivantes sont concentrées à sec sous pression réduite (22 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 650 mg de N-[3β,30-dιacétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-ammoundéca-noate de methyle sous forme d'une laque blanche [Rf=0,28 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane acétate d'éthyle 80-20 (en volumes)].
3
10 cm de soude 4N sont ajoutés à une solution de 650 mg de N-[3β,30-dιacétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoate de methyle 10 cm de methanol et 5 cm de tétrahydrofurane et le mélange réactionnel est agité pendant 18 heures à une température voisine de 20°C. On acidifie à un pH voisin ce 1-2 à l'aide d'une solution d'acide chlorhydrique 5N. Après 1 heure d'agitation, le solide est séparé par filtration, lavé par 30 cm au total d'eau distillée. Le solide obtenu est mis en solution dans un mélange de dichlorométhane et d'éthanol 90-10 (en volumes). L'insoluble est filtré et les filtrats sont concentrés sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi une huile qui est agitée ave 20 cm d'éther éthylique. Après 12 heures d'agitation à une température voisine de 20°C, le solide formé est filtré puis rincé par 10 cm3 au total d'éther éthylique et séché sous pression réduite (13,5 Pa). On obtient ainsi 400 mg d'acide N-[3β,30-dιhydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]- 11-ammoundécanoique fondant à une température voisine de 174°C.
Le chlorure de 3β,30-dïacétoxylup-20(29)-èn-28-oyle est préparé de la manière suivante :
A une solution de 560 mg d'acide 3β,30-dιacétoxylup-20(29)-èn-28-oïque dans 25 cm de dichlorométhane, on ajoute 0,22 cm3 de chlorure d'oxalyle. Après 15 heures d'agitation à une température voisine de
20°C, le solvant est évaporé sous pression réduite (22 kPa) et à une température voisine de 40°C. On obtient 600 mg d'une meringue bianche qui est utilisée sans autre purification.
L'acide 3β,30-diacétoxylup-20(29)-èn-28-oïque est obtenu de la manière suivante : Une suspension de 1,8 g d'acide 3β-acétoxy-30-bromolup-20(29)-èn-28- oïque et 800 mg d acétate d'argent dans 50 cm3 de toluène est agitée
48 heures à une température voisine de 20°C puis filtrée. La solution obtenue est ensuite concentrée à sec sous pression réduite (2 kPa).
Le résidu est mis en solution dans 50 cm d'acétate d'éthyle. La phase organique est décantée et lavée par 60 cm3 au total d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium anhydre, puis concentrée sous pression réduite (2,7 kPa) à une température vosine de 40°C. Le solide blanc obtenu (1,7 g) est chromatographie sur une colonne de 1,7 cm de diamètre et contenant 35 g de silice (0,02- 0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 80-20 (en volumes), en recueillant des fractions de 15 cm3. Les 4 premières fractions obtenues sont éliminées, les 10 suivantes sont concentrées à sec sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 40ºC. On obtient ainsi 1,1 g d'acide 3β,30-diacétoxylup- 20(29)-èn-28-oïque sous forme d'une meringue blanche suffisamment pure pour les transformations ultérieures.
L'acide 3β-acêtoxy-30-bromolup-20(29)-èn-28-oïque est obtenu de la manière suivante :
Une solution de 2,5 g d'acide 3β-acétoxy-lup-20(29)-èn-28-oïque et 2,41 g de tribromure de tétrabutylammonium dans 50 cm3 de chloroforme est agitée 5 jours à une température voisine de 25°C. Le mélange rëactionnel est lavé successivement 2 fois par 25 cm3 d'eau distillée, 2 fois par 25 cm3 d'une solution de thiosulfate de sodium
0,1N et par 2 fois 25 cm3 d'eau distillée puis séché sur du sulfate de magnésium anhydre. La phase organique est concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) et à une température voisine de 40°C. On obtient un solide pâteux jaune (4 g) qui est chromatographie sur une colonne de 3,2 cm de diamètre contenant 100 g de silice (0,02- 0,045 mm) et éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 85-15 (en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm3. Les 5 premières fractions obtenues sont éliminées, les 10 suivantes sont évaporées sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 2,7 g d'acide 3β-acétoxy-30-bromolup-20(29)-èn-28-oique sous forme d'un solide blanc fondant à une température voisine de 190°C.
L'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oïque peut être préparé selon Bruckner, Kovacs et Koczka, J. Chem. Soc, 948 (1948).
Exemple 12 Après avoir chauffé au reflux pendant 3 heures un mélange de 190 mg d'acide 11-ammoundécanoique et 308 mg de chlorotriméthylsilane dans 50 cm3 de dichlorométhane, la solution est refroidie vers 20°C et on ajoute 750 mg de chlorure de 30-acétoxy-3-oxolup-20(29)-èn-28-oyle puis 0,72 cm de triethylamme. L'agitation est maintenue pendant 48 heures à une température voisine de 20°C et le solvant est évaporé à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu est chromatographie sur une colonne de 4 cm de diamètre contenant 125 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée en présence du mélange chlorure de méthylène methanol 80-20 (en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les 20 premières fractions sont éliminées, les 20 suivantes sont rassemblées et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 330 mg d'acide N- [30-acétoxy-3-oxolup-20 (29) -èn-28-oyl]-11-ammoundécanoique sous la forme d'une meringue blanche. A une solution de 330 mg d'acide N-[30-acétoxy-3-oxolup-20(29)-èn-28¬oyl]-11-ammoundécanoique dans 13 cm3 de methanol, on ajoute 90 mg de cyanoborohydrure de sodium puis goutte à goutte, en 5 minutes environ, 1,46 cm d'une solution aqueuse à 15 % de chlorure de titane
III. La solution est maintenue sous agitation pendant 15 heures à une température voisine de 20°C et on ajoute 75 cm d'eau distillée,
50 cm3 d'acétate d'éthyle et 10 cm3 d'acide chlorhydrique 1N. La phase organique est séparée, la phase aqueuse est extraite par 30 cm3 au total d'acétate d'éthyle, les extraits organiques sont rassemblés, séchés sur du sulfate de magnésium anhydre et évaporés sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (370 mg) est chromatographie sur une colonne de 4 cm de diamètre contenant 125 g de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 60-40 (en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les 10 premières fractions sont éliminées ; les 7 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite
(2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le solide blanc obtenu est dissous dans 0,5 cm3 d'éthanol et on dilue avec 22 cm3 d'eau distillée. Après 10 minutes d'agitation, le solide est séparé par filtration, lavé par 20 cm au total d'eau distillée et séché à l'air. On obtient 260 mg de N-[3β,30-dihydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]- 11-aminoundécanoate de methyle sous forme d'un solide blanc, fondant vers 80°C.
Exemple 13 A une solution de 150 mg d'acide 20,29,30-trinor 3β-acétoxy-19-[(2- acétoxyéthyl)carbamoyl]lupan-28-oïque dans 10 cm3 de chloroforme, on ajoute une solution de 0,03 cm3 de chlorure d'oxalyle dans 5 cm3 de chloroforme. Le mélange réactionnel est agité 12 heures à une température voisine de 20°C puis concentré sous pression réduite (15 kPa). Le résidu est repris par 5 cm3 de chloroforme. A la solution obtenue, on ajoute 80 mg de chlorhydrate de 11 -aminoundécanoate de methyle et
0,09 cm de triéthylamine. La solution est alors agitée 12 heures à une température voisine de 20°C. On ajoute 10 cm d'eau distillée puis on amène le mélange réactionnel à un pH voisin de 2 au moyen d'une solution d'acide chlorhydrique 4N. La phase organique est séparée et la phase aqueuse est extraite 2 fois 15 cm3 de chloroforme.
Les phases organiques réunies sont lavées par 60 cm3 au total d'eau distillée puis séchées 3 heures sur du sulfate de magnésium anhydre et filtrées. La phase organique est concentrée à sec sous pression réduite (10 kPa) à une température voisine de 40°C. Les 200 mg de meringue jaune pâle obtenus sont filtrés sur une colonne de 2,7 cm de diamètre, contenant 50 g de silice, (0,02-0,045 mm) éluée par un mélange de chloroforme, de methanol et d'ammoniaque à 28 % 24-6-1 (en volumes). On concentre à sec le filtrat sous pression réduite (13,5 Pa). On obtient ainsi 120 mg de N-{20,29, 30-trinor 3β-acétoxy- 19-[(2-acétoxyéthyl)carbamoyl]lupan-28-oyl}-11-aminoundécanoate de methyle sous forme d'une laque blanche [Rf=0,90 chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme, methanol, ammoniaque à 28 % 24-6-1 (en volumes)].
3
5 cm de soude 4N sont ajoutés à une solution de 200 mg de N¬
{20, 29, 30-trmor 3β-acétoxy-19-[(2-acétoxyéthyl)carbamoyl]lupan-28oyl}-11 -aminoundécanoate de methyle dans 10 cm3 de methanol et 5 cm3 de tétrahydrofurane et le mélange réactionnel est agité pendant 15 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange réactionnel est ensuite acidifié à un pH voisin de 2 à l'aide d'acide chlorhydrique 4N et dilué par 50 cm d'eau distillée. Après 2 heures sous agitation à une température voisine de 20°C, le solide est séparé par filtration, lavé par 20 cm3 au total d'eau distillée puis mis en solution dans 10 cm d'éthanol. La solution obtenue est filtrée puis concentrée à sec sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 20°C. Le solide est repris trois fois par 15 cm3 d'éthanol et la solution est concentrée à sec sous pression réduite. Le résidu solide est mis en suspension dans 50 cm3 de chloroforme. La suspension est portée à une température voisine de 40°C et filtrée à chaud. Le filtrat est concentré sous pression réduite (20 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu est trituré avec 5 cm d'oxyde de diisopropyle, filtré puis rincé avec 6 cm d'oxyde de diisopropyle. Le solide est séché sous pression réduite (1 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 90 mg d'acide N-{20, 29, 30-trinor 3β-hydroxy-19-[(2-hydroxyéthyl)carbamoyl]lupan-28-oyl}-11-ammoundécanoïque sous la forme d'un solide blanc fondant à une température voisine de 170°C.
L'acide 20, 29, 30-trmor 3β-acétoxy-19-[2-acétoxyéthyl)carbamoyl]lupan-28-oïque peut être obtenu de la manière suivante : A une solution de 450 mg d'acide 20, 29, 30-trmor 3β-acétoxy-19-[(2-hydroxyéthyl) carbamoyl] lupan-28-oïque dans 60 cm3 de chloroforme on ajoute 30 mg de 4-dιméthylamιnopyrιdme, 0,35 cm3 de triethylamme et
0,1 cm d'anhydride acétique. Le mélange réactionnel est agité 72 heures à une température voisine de 20°C puis amené à un pH voisin de 1-2 au moyen d'une solution d'acide chlorhydrique 4N. La phase organique est décantée puis lavée par 30 cm au total d'eau distillée, séchée 1 heure sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrée sous pression réduite (40,5 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu solide est trituré avec 5 cm3 d'oxyde de
3
diisopropyle, filtré, rincé par 4 cm au total d'oxyde de diisopropyle puis séché sous pression réduite (100 Pa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 350 mg d'acide
20,29,30-trinor 3β-acétoxy-19-[(2-acétoxyéthyl)carbamoyl]lupan-28- oïque sous la forme d'un solide blanc fondant à une température voisine de 190°C.
L'acide 20,29,30-trinor 3β-acétoxy-19-[(2-hydroxyéthyl)carbamoyl]lupan-28-oïque peut être obtenu de la manière suivante :
A une solution de 500 mg d'acide 29,30-dinor 3β-acétoxylupan-20,28- dioïque dans 50 cm3 de chloroforme on ajoute 0,11 cm3 de chlorure d'oxalyle. Le mélange est agité durant 12 heures à une température voisine de 20°C, puis il est concentré sous pression réduite (20 kPa) à une température voisine de 40°C. Le solide résiduel est mis en solution dans 15 cm3 de chloroforme et on ajoute, en 10 minutes, une solution de 0,18 cm3 d'éthanolamine dans 5 cm3 de chloroforme. Après
3 jours d'agitation à une température voisine de 20°C, on ajoute 20 cm3 d'eau distillée puis on amène à un pH voisin de 1-2 au moyen d'une solution d'acide chlorhydrique 4N. La phase organique est décantée, lavée par 80 cm au total d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium anhydre, filtrée puis évaporée sous pression réduite (20 kPa) à une température voisine de 40°C. Les 600 mg de meringue jaune pâle obtenue sont chromatographies sur une colonne de 1,8 cm de diamètre, contenant 20 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée par un mélange de dichlorométhane et de methanol 95-5 (en volumes). Les 7 premières fractions sont éliminées, les 12 suivantes sont concentrées à sec sous pression réduite (13,5 Pa). On obtient ainsi 230 mg d'acide 20,29,30-trinor 3β-acétoxy-19- [ (2-hydroxyéthyl) carbamoyl]lupan-28-oïque sous forme d'une meringue blanche [Rf=0,30 chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : dichlorométhane methanol 95-5(en volumes)]. L'acide 29,30-dinor 3β-acétoxyiupan-20,28-dioïque peut être obtenu selon la méthode décrite par J.K. GUIDER et coll., J. Chem. Soc, 3024 (1953;.
Exemple 14
A une solution de 300 mg d'acide 20 , 29 , 30-trmor 3β-acétoxy-19- (2acétoxy-1-méthoxycarbonyléthylcarbamoyl) lupan-28-oïque dans 20 cm3 de chloroforme, on ajoute en 1 minute une solution de 0,05 cm3 de chlorure d'oxalyle dans 5 cm3 de chloroforme. Le mélange réactionnel est agité 12 heures à une température voisine de 20°C puis concentré sous pression réduite (25 kPa). Le résidu est repris par 15 cm de chloroforme. A la solution obtenue, on ajoute 140 mg de chlorhydrate de 11-ammo-undécanoate de methyle et 0,15 cm3 de triethylamme. La solution est alors agitée 12 heures à une température voisine de
20°C. On ajoute 10 cm d'eau distillée puis on amène le mélange réactionnel à un pH voisin de 1 au moyen d'une solution d'acide chlorhydrique 4N. La phase organique est séparée et la phase aqueuse est extraite par 2 fois 10 cm de chloroforme. Les phases organiques réunies sont lavées par 30 cm au total d'eau distillée puis séchées 3 heures sur du sulfate de magnésium et filtrées. La phase organique est concentrée à sec sous pression réduite (25 kPa) à une température voisine de 40°C. Les 450 mg de laque jaune pâle obtenus sont chromatographies sur une colonne de 1,7 cm de diamètre, contenant 20 g de silice (0,02-0,045 min. éluée au moyen d'un mélange de dichlorométhane et de methanol 97,5-2,5 (en volumes). On récolte des fractions de 10 cm3. Les 10 premières fractions sont éliminées, les 15 suivantes sont concentrées à sec sous pression réduite (13,5 Pa). Les 300 mg de solide obtenus sont chromatographies sur une colonne de 2,8 cm de diamètre, contenant 50 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée au moyen d'un mélange de chloroforme, de methanol et d'ammoniaque à 28 % 24-12-1 (en volumes). On récolte des fractions de 10 cm3. Les 7 premières fractions sont éliminées, les 10 suivantes sont concentrées à sec sous pression réduite (13,5 Pa). On obtient ainsi 200 mg de N-[20,29,30-trιnor 3β-acétoxy-19-(2-acétoxy-1-méthoxycarbonyléthylcarbamoyl)lupan-28-oyl]-11-aminoundécanoate de methyle sous la forme d'une laσue blanche [Rf=0,80 chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme, methanol, ammoniaque à 28 % 24-6-1 (en volumes)].
5 cm3 de soude 4N sont ajoutes a une solution de 200 mg de N- [20,29,30-trinor 3β-acétoxy-19-(2-acétoxy-1-méthoxycarbonyléthylcarbamoyl)lupan-28-oyl]-11-ammoundécanoate) de methyle dans 10 cm3 de methanol et 5 cm de tétrahydrofurane et le mélange réactionnel est agité pendant 15 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange réactionnel est ensuite acidifié à un pH voisin de 2 à l'aide d'acide chlorhydrique 4N. On dilue par 50 cm3 d'eau distillée. On agite pendant 2 heures à une température voisine de 20°C. Le solide est séparé par filtration, lavé par 25 cm au total d'eau distillée puis séché à l'air. Les 160 mg de solide sont chromatographies sur une colonne de 1,2 cm de diamètre, contenant 5 g de silice (0,02-0,045 mm) au moyen d'un mélange de chloroforme, de methanol et d'ammoniaque à 28 % 12-6-1 (en volumes), en recueillant des fractions de 10 cm3. Les 9 premières fractions sont éliminées, les 13 suivantes sont concentrées à sec sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 40°C. Le résidu est trituré avec 5 cm3 d'oxyde de diéthyle, filtré, rincé par 6 cm3 au total d'oxyde de diéthyle puis séché sous pression réduite (10 kPa). Les 80 mg de solide obtenus sont mis en solution dans 2 cm3 de dioxane puis on ajoute
0, 5 cm3 d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 4N et 15 cm3 d'eau distillée. Le solide est filtré, lavé 4 fois par 2 cm d'eau distillée puis mis en solution dans 10 cm d'éthanol. La solution obtenue est filtrée puis évaporée sous pression réduite (8 kPa) à une température voisine de 35°C. L'addition d'éthanol et l'évaporation est répétée 3 fois. Le résidu est mis en solution dans un mélange de
30 cm3 de chloroforme et de 3 cm3 de tétrahydrofurane. La solution est filtrée puis concentrée sous pression réduite (8 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu est trituré avec 5 cm d'oxyde de diisopropyle, filtré, rincé 3 fois par 2 cm d'oxyde de diisopropyle, puis séché sous pression réduite (13,5 Pa) . On obtient ainsi 50 mg d'acide N-[20,29,30-trinor !9-(1-carboxy-2-hydroxyéthylcarbamoyI)-3β-hydroxylupan-28-oyl]-11-aminoundécanoïque sous la forme d'un solide blanc fondant à une température voisine de 208°C. L'acide 20,29, 30-trmor 3β-acétoxy-1-(2-acétoxy-19-méthoxycarbonylethylcarbamoyl)lupan-28-oïque peut être obtenu de la manière suivante :
A une solution de 300 mg d'acide 20 ,29,30-trinor 3β-acétoxy-19-(2-hydroxy-1-méthoxycarbonylethylcarbamoyl)lupan-28-oïque dans 25 cm3 de chloroforme on ajoute 30 mg de 4-dιméthylamιnopyrιdme et 0,35 cm de triethylamme et 0,21 cm d'anhydride acétique. Le mélange réactionnel est agité 12 heures à une température voisine de 20°C. On ajoute 20 cm d'eau distillée puis on amène à un pH voisin de 2-3 au moyen d'une solution d'acide chlorhydrique 4N. La phase organique est décantée puis lavée par 60 cm au total d'eau distillée, séchée 1 heure sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrée sous pression réduite (15 kPa) à une température voisine de 40°C. A l'huile incolore obtenue, on ajoute 2 cm3 de dioxane et 20 cm3 d eau. On triture et on refroidit à une température voisine de 0°C. Le solide est filtré, lavé au moyen de 3 fois 5 cm3 d'eau distillée puis séché sous pression réduite (100 Pa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 300 mg d'acide 20, 29, 30-trmor 3β-acétoxy-19-(2-acétoxy-1-méthoxycarbonylethylcarbamoyl)lupan-28-oïque sous la forme d'un solide blanc fondant à une température voisine de 180°C.
L'acide 20, 29, 30-trιnor 3β-acétoxy-19-(2-hydroxy-1-méthoxycarbonyl¬ethylcarbamoyl)lupan-28-oïque peut être obtenu de la manière suivante :
A une solution de 1,8 g d'acide 29,30-dιnor 3β-acétoxylupan-20,28-dioïque dans 150 cm3 de chloroforme on ajoute 0,38 cm de chlorure d'oxalyle. Le mélange est agité durant 12 heures à une température voisine de 20°C, puis concentré sous pression réduite (20 kPa) à une température voisine de 40°C. Le solide résiduel est mis en solution dans 40 cm de chloroforme et on ajoute en 10 minutes une solution de 700 mg de chlorhydrate de L-sérmate de methyle et 1,5 cm3 de triethylamme. Après 12 heures d'agitation à une température voisine de 20°C, on ajoute 50 cm3 d eau distillée puis on amené a un pH voisin de 1-2 au moyen d'une solution d'acide chlorhydrique 4N. La phase organique est décantée, lavée par 30 cm3 d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrée à sec sous pression réduite (20 kPa) à une température voisine de 40°C. Les 600 mg de meringue jaune pâle obtenus sont chromatographies sur une colonne de 2,4 cm de diamètre, contenant 50 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée au moyen d'un mélange acétate d'éthyle/dichlorométhane 1-1 (en volumes). Les 14 premières fractions sont éliminées, les 9 suivantes sont concentrée à sec sous pression réduite (13,5 Pa). On obtient ainsi 800 mg d'un solide qui est trituré avec 10 cm3 d'acétonitrile, filtré, lavé avec 2 fois 2 cm d'acétonitrile et séché sous pression réduite (13,5 Pa). On obtient ainsi 800 mg d'acide 20,29,30-trinor
3β-acétoxy-19-(2-hydroxy-1-méthoxycarbonyl-éthylcarbamoyl)lupan-28- oïque sous forme d'une meringue blanche fondant à une température voisine de 230°C.
Exemple 15 2,2 cm3 de triethylamme et 1,94 g de chlorhydrate de 11-amino undêcanoate de methyle sont ajoutés à 195 cm d'une solution chloromêthylênique de chlorure de 30-nor 3β-acétoxy-20-oxolupan-28- oyle. La solution est alors agitée 72 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange réactionnel est dilué par 100 cm3 dee dichlorométhane, la phase organique est lavée par 3 fois 150 cm3 d'eau distillée. Les phases organiques rassemblées sont séchées 3 heures sur du sulfate de magnésium et filtrées. Les phases organiques sont concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 50°C. L'huile jaune pâle obtenue (5,7 g) est chromatographiée sur une colonne de 4 cm de diamètre, 60 cm de haut et contenant de la silice (0,02-0,045 mm) éluée successivement avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 70-30 (en volumes) pour les fractions 1 à 50 et un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 50-50 (en volumes) pour les fractions suivantes. On recueille des fractions de 100 cm3. Les 30 premières fractions sont éliminées; les 32 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 5 g d'une meringue blanche qui est triturée avec 2 fois
100 cm d'oxyde de diisopropyle puis séchée sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 4,75 g de N-(30-nor 3β-acétoxy-20-oxolupan-28-oyl)-11-aminoundécanoate de methyle sous forme d'une meringue blanche [Rf=0,23 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane acétate d'éthyle 8-2 (en volumes)]. 10 cm de soude 5N sont ajoutés à une solution de 700 mg de N-(30-nor
3β-acétoxy-20-oxolupan-28-oyl)-11-aminoundécanoate de methyle dans
15 cm3 de methanol et 15 cm3 de tétrahydrofurane et le mélange réactionnel est agité pendant 48 heures à une température voisine de
20°C. On ajoute successivement à trois reprises et à 24 heures d'intervalle un mélange de 10 cm3 de methanol et de 10 cm3 de tétrahydrofurane en laissant agiter le mélange réactionnel à une température voisine de 20°C. Le mélange réactionnel est ensuite acidifié à un pH voisin de 2 à l'aide d'acide chlorhydrique 4N. On ajoute 150 cm d'eau distillée. Après 2 heures sous agitation à une température voisine de 20°C, le solide est séparé par filtration, lavé par 180 cm au total d'eau distillée et séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 20°C. On obtient ainsi 500 mg d'un solide blanc. La phase aqueuse est extraite par 200 cm3 au total de dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont séchées sur sulfate de magnésium anhydre puis évaporées sous pression réduite ( 1 3 , 5 Pa) à une température voisine de 20°C. On obtient ainsi
150 mg d'une huile jaune pâle. Le solide et l'huile sont réunis et chromatographies sur une colonne de 2 cm de diamètre, 40 cm de haut, contenant de la silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 50-50 (en volumes), en recueillant des fractions de 10 cm3. Les 15 premières fractions sont éliminées ; les 10 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite
(2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 400 mg d'une huile jaune pâle. Cette huile est dissoute dans 1 ,5 cm3 de tétrahydrofurane. Après 20 minutes sous agitation à une température voisine de 20°C, on ajoute à 20 minutes d'intervalle 1,5 cm3 et 10 cm3 d'oxyde de diisopropyle. Le solide est séparé par filtration et séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de
40°C. On obtient ainsi 200 mg d'acide N-(30-nor 3β-acêtoxy-20-oxolupane-28-oyl)-11-ammoundécanoique, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 150°C. Le chlorure de 30-nor 3β-acétoxy-20-oxolupan28-oyle est obtenu de la manière suivante :
1 , 5 cm 3 de chlorure d'oxalyle est ajouté en 5 minutes à 150 cm3 d'une solution, dans le dichlorométhane, d'acide 30-nor 3β-acétoxy-20- oxolupanoïque. La solution est alors agitée 20 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange réactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. La meringue blanche obtenue est triturée avec 2 fois 200 cm de cyclohexane. Le solide est filtré et séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 3,7 g de chlorure de 30-nor 3β-acêtoxy-20-oxolupan-28-oyle sous la forme d'une meringue blanche.
L'acide 30-nor 3β-acétoxy-20-oxolupan-28-oïque est préparé d'après A. VYSTRCIL et M. BUDESINSY, Collect. Czech. Chem. Commun., 35, 295 (1970).
Exemple 16
On ajoute 370 mg de chlorhydrate de 12-aminododécanoate de methyle puis 0,4 cm3 de triéthylamine à une solution de 660 mg de chlorure de 3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyle dans 13,2 cm3 de chloroforme et 13 cm3de tétrahydrofurane. La solution est agitée 20 heures à une température voisine de 20°C et le solvant est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu est additionné de 60 cm3 d'éther éthylique et 25 cm3 d'eau distillée. La phase organique est décantée et la phase aqueuse est extraite par 40 cm au total d'éther éthylique. Les phases organiques rassemblées sont lavées par 60 cm au total d'eau distillée, séchées sur sulfate de sodium anhydre et concentrées à sec sous pression réduite
(2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. Les 860 mg de meringue de couleur crème obtenus sont chromatographies sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 52 g de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 80-20 (en volumes) en recueillant des fractions de 7 cm3. Les 7 premières fractions sont éliminées; les 7 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 650 mg de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-12-ammododécanoate de methyle, sous la forme d'une meringue blanche.
8,1 cm de soude 4N sont ajoutés en 5 minutes environ à une solution de 570 mg de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-12-amιnododécanoate de methyle dans 9 cm3 de methanol et 4,5 cm3 de tétrahydrofurane. Le mélange réactionnel est agité pendant 20 heures à une température voisine de 20°C et le solvant est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On dilue par 40 cm3 d'eau distillée et acidifie à un pH voisin de 1 à l'aide de 9,5 cm3 d'acide chlorhydrique 4N. Après 15 heures d'agitation à une température voisine de 20°C, 120 cm3 d'éther éthylique sont ajoutés et la phase organique est décantée. La phase aqueuse est extraite de nouveau par 50 cm3 d'éther éthylique, les phases organiques rassemblées sont lavées par 75 cm au total d'eau distillée, séchées sur sulfate de magnésium anhydre et évaporées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. Le résidu est mis en suspension dans 9 cm3 d'oxyde de diisopropyle, le solide est séparé par filtration, lavé par 4 cm au total d'oxyde de diisopropyle et séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 30°C. On obtient ainsi 470 mg d'acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-12-ammododécanoïque fondant vers 182°C.
Le 12-ammododécanoate de methyle est préparé d'après H. ZAHN, H.D. STOPER, Chem. Ber., .21(10), 3251 (1965).
Exemple 17 On ajoute 0,24 cm de triethylamme et 500 mg de chlorhydrate de 16aminohexadécanoate de methyle à une solution de 820 mg de chlorure de
3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle en solution dans un mélange composé de 20 cm3 de chloroforme et de 20 cm3 de tétrahydrofurane. Après
20 heures d'agitation à une température voisine de 20°C, on ajoute 40 cm d'eau distillée et décante la phase organique. La phase aqueuse est extraite par 75 cm au total de chloroforme, les extraits organiques sont rassemblés, séchés sur du sulfate de magnésium anhydre et évaporés sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu obtenu est chromatographie une première fois sur une colonne de 4 cm de diamètre contenant 150 g de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 80-20 (en volumes) et en recueillant des fractions de 10 cm3. Les 80 premières fractions sont éliminées; les 23 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 568 mg d'une meringue beige qui est chromatographiée une deuxième fois (colonne de 4 cm de diamètre; 15Q g de silice (0,02-0,045 mm), fractions de 30 cm3). Le système éluant est composé d'un mélange de chlorure de méthylène et de methanol 99-1 (en volumes). Les 30 premières fractions sont éliminées, les 6 suivantes sont réunies et évaporées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. Les 363 mg obtenus sont chromatographiées une troisième fois sur une colonne de 1,7 cm de diamètre, contenant 20 g de silice (0,02-0,045 mm) en éluant avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 80-20 en volumes). On recueille des fractions de 3 cm3. Les 13 premières fractions sont éliminées les 17 suivantes sont rassemblées et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. On obtient ainsi 380 mg de N-[3β-acêtoxylup-20(29)-èn-28-oyl]- 16-aminohexadécanoate de methyle sous forme d'une meringue blanche [Rf=0,3 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chlorure de méthylène acétate d'éthyle 97-3 (en volumes)].
Une solution de 380 mg de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-16-amino hexadécanoate de methyle dans un mélange de 5 cm3 de methanol, 2,5 cm de tétrahydrofurane et 0,62 cm de soude 4N est agitée pendant 15 heures à une température voisine de 20°C. Le solvant est ensuite évaporé à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. Le résidu blanc est mis en suspension dans 25 cm3 d'eau distillée. On ajoute 1 cm3 d'acide chlorhydrique 5N et on maintient l'agitation pendant 20 minutes. Le solide est séparé par filtration, lavé par 50 cm au total d'eau distillée et séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 20°C. Le solide obtenu est mis en suspension dans 20 cm d'eau distillée et filtré. On obtient ainsi 292 mg d'acide qui est purifié par chromatographie sur une colonne de 1,7 cm de diamètre contenant 20 g de silice (0,02-0,045 mm) éluée par un mélange de cyclohexane, d'acétate d'éthyle, et de chlorure de méthylène 50-40-10 (en volumes) en recueillant des fractions de 2 cm . Les 10 premières fractions sont éliminées, les 9 suivantes sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. On obtient ainsi 280 mg d'acide N- [3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-16-ammohexadécanoique, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 85°C.
Le 16-ammohexadécanoate de methyle peut être préparé de la manière suivante : Une solution de 1,3 g de 16-phtalιmιdohexadécanoate de methyle dans 50 cm3 de methanol est agitée pendant 3 heures, a une température voisine de 80°C, en présence de 170 mg d'hydrate d'hydrazme. La solution est refroidie vers 20°C et on ajoute 2 cm d'éther chlorhydrique 5N. Le solvant est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu est repris dans 50 cm d'eau distillée. Le solide est séparé par filtration. Les filtrats sont concentrés à sec sous pression réduite à une température voisine de 35°C. On obtient 320 mg d'un solide blanc. Le solide séparé par filtration est lavé par 25 cm au total d'eau distillée, mis en suspension dans 20 cm d'eau distillée et on ajoute 1 cm3 d'acide chlorhydrique 5N. Après 15 minutes sous agitation, les cristaux sont séparés par filtration, lavés par 20 cm d'acide chlorhydrique 1N et 20 cm3 d eau distillée. Ce lot (1,2 g) additionné des 320 mg obtenus après évaporation des filtrats est chromatographie sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 30 g de silice (0,020¬
0,045 mm), éluée par un mélange de chloroforme et de methanol 90-10
(en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm . Les 3 premières fractions sont éliminées, les 6 suivantes sont rassemblées et évaporées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu est mis en suspension dans 20 cm d'une solution saturée de bicarbonate de sodium, et agité 15 minutes. Le solide est séparé par filtration, lavé par 50 cm au total d'eau distillée et séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de
20°C. On obtient ainsi 500 mg oe 16-ammohexadécanoate de methyle sous la forme d'un solide blanc. Le 16-phtalimidohexadécanoate de methyle peut être préparé de la manière suivante :
A un mélange de 1,36 g de 16-hydroxyhexadecanoate de methyle, 847 mg de phtalimide, 1,49 g de triphénylphosphine, dans 2,6 cm3 de tétrahydrofurane, on ajoute goutte a goutte une solution de 0,89 cm3 d'azidodicarboxylate d' êthyle dans 2, 6 cm de tétrahydrofurane.
L'agitation est maintenue 15 heures à une température voisine de 20°C et le solvant est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. Les 5,4 g de résidu obtenus sont chromatographies sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 100 g de silice (0,020-0,045 mm) éluée avec du chlorure de méthylène. Les 18 premières fractions sont éliminées, les 36 suivantes sont rassemblées et évaporées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. On obtient ainsi 1,5 g de 16- phtalimidohexadécanoate de methyle, sous la forme d'un solide blanc.
Exemple 18
On ajoute 0,31 cm de triéthylamine et 660 mg de chlorhydrate de 17- aminoheptadécanoate de methyle à une solution de 1 g de chlorure de 3β-acêtoxylup-20(29)-èn-28-oyle dans un mélange de 20 cm3 de chloroforme et de 20 cm de tétrahydrofurane. Apres 20 heures d'agitation à une température voisine de 20°C, on ajoute 40 cm3 d'eau distillée. La phase organique est décantée et la phase aqueuse est extraite par 100 cm au total de chloroforme. Les extraits organiques sont rassemblés, séchés sur du sulfate de magnésium anhydre et le solvant est éliminé -sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. Le résidu obtenu est chromatographie une première fois sur un colonne de 4 cm de diamètre contenant 100 g de silice
(0,02-0,045 mm). Le mélange éluant est composé de chlorure de méthylène et d'acétate d'éthyle 95-5 (en volumes), les fractions sont de 30 cm3. Après élimination des 5 premières fractions, les 19 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35"C. On obtient ainsi 750 mg d'une meringue blanche qui est chromatographiée une deuxième fois : colonne de 2,2 cm de diamètre, 40 g de silice (0,02-0,045 mm), en éluant avec un mélange de chlorure de méthylène et d'acétate d'éthyle 98-2 en volumes et en recueillant des fractions de 10 cm3. Les 16 premières fractions sont éliminées, les 17 suivantes sont rassemblées et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. Les 540 mg obtenus sont chromatographies une troisième fois sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 40 g de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 80-20 (en volumes) en recueillant des fractions de 5 cm3. Après élimination des 4 premières fractions, les 10 suivantes sont rassemblées et concentrées à sec sous pression réduite à une température voisine de 30°C (2,7 kPa). Les 443 mg obtenus sont chromatographies une dernière fois sur une colonne de 1,4 cm de diamètre contenant 20 g de silice (0,020-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 80-20 (en volumes), en recueillant des fractions de 5 cm3. Après élimination des 2 premières fractions, les 7 suivantes sont rassemblées et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. On obtient 210 mg de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-17-ammoheptadécanoate de methyle sous forme d'une meringue blanche [Rf=0,4 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane, acétate d'éthyle 80-20 (en volumes)].
Une solution de 210 mg de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-17-ammo heptadécanoate de methyle dans 2,7 cm3 de methanol, 1 , 3 cm3 de tétrahydrofurane et 0,34 cm3 de soude 4N est agitée pendant 15 heures à une température voisine de 20°C. Le solvant est alors éliminé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. Le résidu est mis en solution dans 12,5 cm d'eau distillée et on ajoute 0,5 cm3 d'acide chlorhydrique 5N. Après 20 minutes d'agitation, le solide est séparé par filtration, lavé par 50 cm3 au total d'eau distillée et séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 20°C. On obtient ainsi 194 mg d'acide qui est chromatographie sur une colonne de 1 , 7 cm de diamètre contenant 20 g de silice (0,020-0,045 mm), éluée avec un mélange de cyclohexane, d'acétate d'éthyle et de chlorure de méthylène 50-40-10 (en volumes) en recueillant des fractions de 5 cm3. Les 10 premières fractions sont éliminées, les 9 suivantes sont rassemblées et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le solide obtenu est mis en suspension dans 20 cm d'eau distillée et séparé par filtration. On obtient ainsi 220 mg d'acide N-[3β- hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-17-aminoheptadécanoïque, sous la forme d'un solide blanc, fondant vers 82°C.
Le 17-aminoheptadécanoate de methyle est préparé de la manière suivante :
On ajoute 0,37 cm3 de chlorure de thionyle dans 23 cm3 de methanol refroidi à -20°C et on ajoute 980 mg d'acide 17-aminoheptadécanoïque. La solution est agitée pendant 12 heures à une température voisine de
20°C et le solvant est éliminé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 1,08 g de chlorhydrate de 17-ammoheptadécanoate de methyle, sous la forme d'un solide blanc. L'acide 17-aminoheptadêcanoïque peut être préparé de la manière suivante :
Une solution de 3,4 g de l'acide 17-phtalimidoheptadécanoïque dans 60 cm de methanol est agitée pendant 1 heure, à une température voisine de 80°C, en présence de 1,67 g d'hydrate d'hydrazine. La solution est refroidie vers 20°C et le solide est séparé par filtration et séché à l'air. Le résidu (1,92 g) est repris dans 180 cm d'eau distillée. Le solide est séparé par filtration, lavé par 45 cm au total d'eau distillée et séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 40°C. On obtient 980 mg de l'acide 17-aminoheptadécanoïque sous la forme d'un solide blanc.
L'acide 17-phtalimidoheptadêcanoïque peut être préparé de la manière suivante : A 2,14 g de phtalimide potassé dans 40 cm3 de N,N-dimethylformamide, on ajoute 2 g d'acide 17-bromoheptadécanoïque et on chauffe 6 heures à une température voisine de 80°C. La solution est refroidie vers 20°C, on la verse dans 100 cm3 d'eau distillée et on ajoute goutte à goutte 10 cm d'acide chlorhydrique 2N. Le solide formé est séparé par filtration. On obtient 5,13 g d'un résidu qui est chromatographie sur une colonne de 4 cm de diamètre contenant 250 g de silice (0,020-0,045 mm) éluée avec un mélange de chlorure de méthylène et de methanol 95-5 (en volumes). Les 4 premières fractions sont éliminées, les 3 suivantes sont rassemblées et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 3,39 g d'acide 17-phtalimidoheptadécanoïque, sous la forme d'un solide blanc.
Exemple 19 A une solution de 0,54 g de 11 -amιno-2 , 2-dιméthylundécanoate de méthyle et 0,28 cm3 de triethylamme dans 50 cm3 de dichlorométhane on ajoute une solution de 1,1 g αe chlorure de 3β-acétoxylup-20(29)-èn¬
28-oyle (préparé à partir de 1 g d'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle) dans 50 cm3 de dichlorométhane. La solution est agitée 15 heures à une température voisine de 20°C. On ajoute 100 cm3 de dichlorométhane. La phase organique est lavée par 300 cm3 au total d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium et concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de
40°C. Les 2 g d'huile obtenus sont chromatographies sur une colonne de 3 cm de diamètre est 50 cm de haut de silice (0,02-0,045 mm) éluée par un mélange de dichlorométhane et d'acétate d'éthyle 95-5 (en volûmes), en recueillant des fractions de 50 cm3. Les 12 premières fractions sont éliminées, les 4 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 60°C. L'huile jaune obtenue est mise en solution dans 100 cm3 de dichlorométhane. La phase organique est lavée par 150 cm au total d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium puis concentrée sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Les 1,1 g d'huile jaune obtenus sont chromatographies sur une colonne de 2 cm3 de diamètre et 40 cm3 de haut contenant de la silice (0,02-0,045 mm), éluée avec du dichlorométhane, en recueillant des fractions de 50 cm3 . Les 25 premières fractions sont éliminées. Les 21 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 40°C. On obtient 0,80 g de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-ammo-2,2-dιméthylundécanoate de methyle sous la forme d'une laque blanche (Rf=0,12 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichlorométhane).
19 cm de soude 4N sont ajoutés en 5 minutes environ à une solution de 1,4 g de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-amino-2,2-diméthyl ndécanoate de methyle dans 40 cm3 de methanol et 40 cm3 de tétrahydrofurane et le mélange réactionnel est agité pendant 48 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange réactionnel est acidifié à un pH voisin de 2 à l'aide d'acide chlorhydrique 4N puis on ajoute 200 cm3 d'eau distillée. Apres 30 minutes d agitation, la phase aqueuse est décantée, le solide est séparé par filtration et rincé par 90 cm au total d'eau distillée. Le filtrat est repris par 100 cm d'acétate d'éthyle. La phase organique est séchée 2 heures sur du sulfate de magnésium et évaporée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Les 1,4 g de meringue blanche obtenus sont chromatographies sur une colonne de 2,7 cm de diamètre et 36 cm de haut contenant de la silice (0,02-0,045 mm) éluée successivement par du dichlorométhane (fractions 1 à 25), un mélange de dichlorométhane et d'acétate d'éthyle 95-5 (en volumes)
(fractions 26 à 80) et un mélange de dichlorométhane et d'acétate d'éthyle 9:1 (en volumes) (fractions 81 à 120) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les 95 premières fractions sont éliminées, les
20 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite
(2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 1 g d'une meringue blanche qui est trituré avec 15 cm3 de n-heptane, filtré, lavé avec 20 cm au total de n-heptane puis séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 750 mg d'acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-amino-2,2-dιméthyl undécanoïque fondant à une température voisine de
120°C. Le 11-amino-2,2-diméthylundécanoate de methyle est préparé de la manière suivante :
Une solution de 15,4 g de 11-phtalimido-2,2-diméthylundécanoate de methyle et 2,33 cm3 d'hydrate d'hydrazine à 98%, dans 500 cm3 de methanol est agitée 12 heures à une température voisine de 20°C. On ajoute 32 cm de methanol chlorhydrique 5N. Le solvant est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu est repris par 150 cm3 d'eau distillée. Après 20 minutes d'agitation, le solide est séparé par filtration, lavé par 90 cm3 au total d'eau distillée. La phase aqueuse est amenée à un pH voisin de
9-10 au moyen d'une solution de carbonate de sodium à 10 %, extraite par 500 cm3 au total d'oxyde de diisopropyle, séchée sur du sulfate de magnésium puis concentrée sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu est repris par un mélange de 15 cm3 de methanol et 50 cm3 d'oxyde de diéthyle. On ajoute 10 cm3 de methanol chlorhydrique 5N puis on évapore à sec sous pression réduite
(2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. L'huile jaune obtenue est reprise par 100 cm3 d eau distillée. On ajoute 2 cm3 d'acide chlorhydrique 4N puis amène à un pH voisin de 9-10 au moyen d'une solution de carbonate de sodium à 10 %. On extrait par 450 cm3 au total d'acétate d'éthyle. La phase organique est séchée sur du sulfate de magnésium puis concentrée à sec sous pression réduite
(13,5 Pa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 6,8 g de 11-amιno-2,2-dιméthylundécanoate de methyle sous la forme d'une huile visqueuse jaune [Rf=0,54 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme, methanol, ammoniaque à 28 % 24-6-1 (en volumes)].
Le 11-phtalιmιdo-2,2-dιméthylundécanoate de methyle est obtenu de la manière suivante : A 8 , 2 g de phtalimide potassée dans 70 cm de N,N-dιméthylformamide, on ajoute 12,3 g de 11 -bromo-2, 2-dιméthylundécanoate de methyle en solution dans 70 cm de N,N-dιméthylformamιde et on chauffe 3 heures à une température voisine de 80 °C . La solution est refroidie à une température voisine de 20°C puis versée dans 1400 cm d'eau distillée. On acidifie à un pH voisin de 2 au moyen d'acide chlorhydrique 4N puis on extrait par 1000 cm3 au total d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée par 450 cm au total d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium, puis concentrée sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 60°C. On obtient ainsi 15,4 g de 11-phtalιmιdo-2,2-dιméthylundécanoate de methyle sous la forme d'une huile visqueuse jaune pâle [Rf=0,38 ; chromatographie sur couche mince de silice - éluant : cyclohexane acétate d'éthyle 8-2 (en volumes)].
Le 11-bromo-2,2-diméthylundécanoate de methyle a été obtenu de la manière suivante :
A une solution de 25 cm3 de diisopropylamine dans 90 cm3 de tétrahydrofurane refroidie à une température voisine de -78°C, on ajoute en 25 minutes 110 cm3 d'une solution 1,6 M de n-butylithium dans l'hexane. On laisse 1 heure à une température voisine de -78°C. On ajoute 18,5 cm d'isobutyrate de methyle en 25 minutes. On agite
1 heure à une température voisine de -70°C avant d'ajouter en
15 minutes une solution de 70,4 g de 1,9-dibromononane dans 45 cm de tétrahydrofurane. On laisse agiter 2 heures à une température voisine de -70°C puis 12 heures à une température voisine de 20°C. On concentre sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On ajoute 200 cm3 d'acide chlorhydrique IN, puis on extrait au moyen de 250 cm de dichlorométhane. La phase organique est lavée successivement par 160 cm3 au total d'acide chlorhydrique 1N, 160 cm3 au total d'eau distillée, 30 cm3 d'une solution aqueuse saturée en bicarbonate de sodium et enfin 80 cm3 au total d'eau distillée. La phase organique est séchée sur du sulfate de magnésium puis concentrée sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 50°C. Les 74 g d'une huile orange obtenue sont distillés sous pression réduite (20 Pa) en recueillant la fraction qui distille entre 120 et 130°C. On obtient ainsi 33,2 g d'une huile qui est redistillée sous pression réduite (10 Pa). On recueille la fraction qui distille entre 114°C et 122°C. On obtient ainsi 25 g de 11-bromo-2,2-diméthylundécanoate demethyle.
Exemple 20 On chauffe au reflux pendant 3 heures, une solution de 1 g de N-[3-oxolup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoate de methyle, 440 mg de chlorhydrate d'aminoxyacétate de methyle dans 20 cm de pyridine, puis la solution est refroidie à une température voisine de 20°C et additionnée de 100 cm3 d'eau distillée et de 50 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique est décantée, la phase aqueuse extraite par 100 cm au total d'acétate d'éthyle, les extraits organiques sont rassemblés, lavés par 50 cm au total d'eau distillée, séchés sur du sulfate de magnésium anhydre et évaporés sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu obtenu est chromatographie sur un colonne de 5 cm de diamètre contenant 200 g de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 80-20 (en volumes), en recueillant des fractions de 30 cm . Les 11 premières fractions sont éliminées ; les 16 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 940 mg d'une huile qui est purifiée par HPLC en 2 fois, sur une colonne de 5 cm de diamètre contenant 300 g de silice greffée en C18 (0, 015-0, 025mm), éluée avec un mélange d'acétonitrile, d'eau, de tétrahydrofurane 50-30-15 puis 65-20-15 (en volumes). Les 18 premières fractions sont éliminées, les 2 suivantes sont rassemblées et concentrées à sec sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 450 mg de N-[3-(méthoxycarbonylméthoxyimino]lup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoate de methyle sous la forme d'une d'une laque incolore [Rf=0,4 ; acétate d'éthyle (75-25 en volumes)].
Une solution de 454 mg de N-[-(méthoxycarbonylméthoxyimino)lup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoate de methyle dans 6 cm3 de methanol, 3 cm de tétrahydrofurane et 0,77 cm de soude 4N est agitée pendant 15 heures à une température voisine de 20°C et acidifiée avec 1 cm d'acide chlorhydrique 5N. Après 2 heures d'agitation, le solide est séparé par filtration, lavé par 30 cm au total d'eau distillée et séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 320 mg d'acide N-[3-(carboxyméthoxyimino)lup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoïque, (mélange des isomères Z et E), sous la forme d'un solide blanc fondant vers 100°C.
Exemple 21
On chauffe au reflux pendant 1 heure, une solution de 1,35 g de N-[3-oxolup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoate de methyle, 210 mg de chlorhydrate de 2-(4-méthyl-1-piperazmyl)éthoxyamine dans 25 cm de pyridine, puis la solution est refroidie à une température voisine de
20°C. 200 cm3 d'eau distillée sont ajoutes, puis 11 cm3 de soude IN
3
et 100 cm d'acétate d'éthyle. La phase organique est décantée, la phase aqueuse est extraite par 200 cm3 au total d'acétate d'éthyle, les extraits organiques sont rassemblés, lavés par 60 cm au total d'eau distillée, séchés sur du sulfate de magnésium anhydre et évaporés sous pression réduite (13,5 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu obtenu (1,65 g) est chromatographie sur un colonne de 5 cm de diamètre contenant 200 g de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange d'acétate d'éthyle et de methanol 50-50 (en volumes), en recueillant des fractions de 30 cm . Les 17 premières fractions sont éliminées; les 18 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 1,34 g de N-{3-[2-(4-méthyl-1-pipérazi-nyl)êthoxyimino]lup-20(29)- èn-28-oyl}-11-aminoundécanoate de methyle sous forme d'une meringue blanche [Rf=0,3 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : acétate d'éthyle methanol 50-50 (en volumes)].
Une solution de 1,34 g de N-{3-[2-(4-méthyl-1-pipérazinyl) éthoxyimino]lup-20(29)-èn-28-oyl}-11-aminoundécanoate de methyle dans 20 cm3 de methanol, 10 cm3 de tétrahydrofurane et 1,05 cm3 de soude 4N est agitée pendant 15 heures à une température voisine de 20°C et le solvant est éliminé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On ajoute alors 25 cm3 d'acétate d'éthyle, le solide est séparé par filtration et lavé avec 15 cm3 au total d'acétate d'éthyle. On obtient ainsi 760 mg d'acide N-{3-[2-(4-méthyl-1-pipérazinyl)éthoxyimino]lup-20(29)-èn-28-oyl}-11-aminoundécanoïque, (mélange des isomères Z et E) , sous la forme d'un solide beige fondant vers 97°C.
Exemple 22 Une solution de 1 g de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-amino undécanoate de methyle dans 50 cm3 d'éthanol est hydrogénée, sous pression atmosphérique et a une température voisine de 20°C, en présence de 0,1 g de palladium sur charbon à 5 % (en poids), pendant
4 heures. Le catalyseur est filtré, lavé par 30 cm au total d'éthanol absolu et les filtrats sont évaporés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient 810 mg d'une huile incolore qui est chromatographiée sur une colonne de 4 cm de diamètre contenant 100 g de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane, de chlorure de méthylène et d'acétate d'éthyle 80-10-10 (en volumes), en recueillant des fractions de 30 cm3. Après élimination des 17 premières fractions, les 6 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient 600 mg d'un mélange 50-50 de N-[3β-acétoxylupan-28-oyl]-11-aminoundécanoate de methyle et d'éthyle sous la forme d'une huile incolore [Rf=0,5 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane, acétate d'éthyle 80-20 (en volumes)].
Une solution de 600 mg de N-[3β-acétoxylupan-28-oyl]-11-ammo undécanoate de methyle dans 4,3 cm 3 de methanol et 8,5 cm3 de tétrahydrofurane est additionnée d'1 cm de soude 4N, agitée pendant
15 heures à une température voisine de 20°C, acidifiée à un pH voisin de 3-4 à l'aide de 0,9 cm d'acide chlorhydrique 4N et diluée avec
25 cm d'eau distillée. Après 15 heures sous agitation, le solide est séparé par filtration, lavé par 50 cm au total d'eau distillée et séché sous pression atmospnéπque à une température voisine de 20°C.
On obtient ainsi 410 mg d'acide N-[3β-hydroxylupan-28-oyl]-11-ammo undécanoique, fondant vers 110-115°C.
Exemple 23
Une solution de 1,4 g de N-(30-nor 3β-acétoxy-20-oxolupan-28-oyl)+11-ammoundécanoate de methyle, 100 mg de borohydrure de sodium et 700 mg de chlorure de tétrabutylammonium, dans 120 cm de toluène, est chauffée à une température voisine du reflux. Après 9 heures, on ajoute 100 mg de borohydrure de sodium et 700 mg de chlorure de tétrabutylammonium et on porte 9 heures à une température voisine du reflux. Après avoir ajouté une fois de plus 100 mg de borohydrure de sodium et 700 mg de chlorure de tétrabutylammonium, le mélange réactionnel est chauffé 24 heures à une température voisine du reflux. On ajoute 1 cm3 d'eau distillée et on maintient la température. Après 8 heures, on ajoute successivement 3 fois à 8 heures d'intervalle, 100 mg de borohydrure de sodium et 700 mg de chlorure de tétrabutylammonium. La solution est alors agitée 48 heures à une température voisine de 20°C. On ajoute alors 50 cm3 d'eau distillée en 1 heure. La phase organique est décantée, la phase aqueuse est extraite par 80 cm3 au total d'acétate d'éthyle, les phases organiques rassemblées sont lavées par 90 cm3 au total d'eau distillée, séchées 2 heures sur du sulfate de magnésium anhydre et évaporées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 45°C. Le résidu obtenu est chromatographie sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 80 g de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 6-4 (en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les 12 premières fractions sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 800 mg d'un solide qui est mis en solution dans 20 cm3 d'éther diëthylique. La solution éthérée est lavée successivement par 10 cm d'une solution d'acide chlorhydrique 2N puis par 4 fois 10 cm3 d'eau distillée. La phase organique est séchée sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 500 mg de N-(30-nor 3β-acétoxy-20- hydroxylupan-28-oyl)-11-aminoundécanoate de methyle sous forme d'une meringue blanche.
Une solution de 500 mg de N-(30-nor 3β-acétoxy-20-hydroxylupan-28-oyl)-11-aminoundécanoate de methyle dans 10 cm3 de methanol, 5 cm3 de tétrahydrofurane et 5 cm de soude 4N est agitée pendant 12 heures à une température voisine de 20°C. La suspension est alors acidifiée à un pH voisin de 1-2 à l'aide d'acide chlorhydrique 4N puis diluée au moyen de 20 cm d'eau distillée. Après 30 minutes d'agitation, le solide est séparé par filtration, lavé successivement par 5 fois
10 cm3 d'eau distillée et 3 fois 5 cm3 d'éther diéthylique puis séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 400 mg d'un solide qui est mis en solution dans 5 cm3 de dioxane. A la solution obtenue, on ajoute 15 cm3 d'eau distillée. Le solide blanc obtenu est filtré, lavé par 2 fois 3 cm3 d'un mélange dioxane-eau distillée 1-3 (en volumes) puis séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 250 mg d'acide N-(30-nor 3β,20-dιhyαroxylupan-28-oyl)-11-ammoundécanoique, fondant vers 170°C.
Exemple 24 A une solution de 2,6 g de soude dans 18 cm3 d'eau distillée, refroidie à -5°C, on ajoute 0,7 cm de brome. Le mélange réactionnel est agité 15 minutes à -5°C puis on ajoute 12 cm3 de dioxane. La solution obtenue est ajoutée en 10 minutes environ à une solution de
2,3 g de N-(30-nor 3β-acétoxy-20-oxolupan-28-oyl)-11-aminoundécanoate de methyle dans 50 cm3 de dioxane. La solution est agitée à une température voisine de 10°C pendant 15 heures puis on ajoute une solution de 0,5 g de sulfite de sodium dans 5 cm d'eau distillée et on acidifie à un pH voisin de 1 à l'aide d'acide chlorhydrique 4N.
Après 30 minutes, on dilue par 50 cm d'eau distillée et le solide est séparé par filtration, lavé par 50 cm au total d'eau distillée et séché à l'air sous pression atmosphérique à une température voisine de 20°C. On obtient ainsi 2 g d'un solide blanc qui est mis en solution dans un mélange de 10 cm3 de dioxane et 5 cm3 d'eau distillée. Le mélange est abandonné 48 heures à une température voisine de 20°C. Le solide est filtré, rincé successivement par 2 cm de dioxane et 2 fois 5 cm d'oxyde de diéthyle puis séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 800 mg d'acide N-(30-nor 3β-hydroxy-20-oxolupan-28-oyl)-11-ammoundécanoique, fondant vers 160°C. Le N-[30-nor 3β-acétoxy-20-oxolupane-28-oyl]-11-aminoundécanoate de methyle peut être préparé de la manière suivante : 2,2 cm3 de triethylamme et 1,94 g de chlorhydrate de 11-ammoundécanoate de methyle sont ajoutés à 195 cm3 d'une solution dans le dichlorométhane de chlorure de 30 nor 3β-acétoxy-20-oxolupan28-oyle. La solution est alors agitée 72 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange réactionnel est dilué par 100 cm d'eau distillée. La phase organique est extraite par 3 fois 150 cm3 de dichlorométhane. Les phases organiques rassemblées sont séchées
3 heures sur du sulfate de magnésium, le desséchant est filtré, rincé par 90 cm3 au total de dichlorométhane. Les phases organiques, réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 50°C. Les 5,7 g d'huile jaune pâle obtenus sont chromatographies sur une colonne de 4 cm de diamètre, 60 cm de haut et contenant de la silice (0,02-0,045 mm) éluée successivement avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 70-30 (en volumes) pour les fractions 1 à 50 et un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 50-50 (en volumes), pour les fractions suivantes.
On recueille des fractions de 100 cm3. Les 30 premières fractions sont éliminées; les 32 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 5 g d'une meringue blanche qui est triturée avec 2 fois
100 cm 3 d'oxyde de diisopropyle puis se-chee sous pression réduite
(2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 4,75 g de N-(30-nor 3β-acétoxy-20-oxolupan-28-oyl]-11-aminoundécanoate de methyle sous forme d'une meringue blanche [Rf=0,23 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane acétate d'éthyle 8- 2 (envolumes)].
Le chlorure de 30-nor 3β-acétoxy-20-oxolupan-28-oyle est obtenu de la manière suivante :
1,5 cm 3 de chlorure d'oxalyle sont ajoutés en 5 minutes à 150 cm3 d'une solution dans le dichlorométhane de d'acide 30-nor 3β-acétoxy- 20-oxolupan-28-oïque. La solution est alors agitée 20 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange réactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. La meringue blanche obtenue est triturée avec 2 fois 200 cm3 de cyclohexane puis le solvant est évaporé à sec sous pression réduite
(2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 3,7 g de chlorure de 30-nor 3β-acétoxy-20-oxolupan-28-oyle sous la forme d'une meringue blanche.
L'acide 30-nor 3β-acétoxy-20-oxolupan-28-oïque est préparé d'après A. VYSTRCIL et M. BUDESINSY, Collect . Czech. Chem. Commun., 35, 295 (1970).
Exemple 25 A une solution de 1 g de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-β-alânine dans 100 cm de dichlorométhane, on ajoute 420 mg de chlorhydrate de 8-amιnooctanoate de methyle, 240 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole, 760 mg de chlorhydrate de 1-éthyl 3-(3-dιméthylammopropyl) carbodiimide et 1 cm3 de triethylamme. La solution est agitée pendant 12 heures à une température voisine de 20°C puis on ajoute 100 cm3 d'eau distillée. La phase organique est décantée et la phase aqueuse est extraite par 150 cm3 au total de chlorure de méthylène.
Les extraits organiques sont rassemblés, séchés sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu obtenu (1,4 g) est chromatographie sur une colonne de 4 cm de diamètre contenant 125 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 60-40 (en volumes), en recueillant des fractions de 50 cm3. Les 36 premières fractions sont éliminées; les 15 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 1,1 g de N-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-3-ammopropιonoyl]-8-ammooctanoate de methyle sous forme d'une meringue blanche [Rf=0,5 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chlorure de méthylène methanol 90-10 (en volumes)].
Une solution de 1,1 g de N-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-3-aminopropionoyl]-8-ammooctanoate de methyle dans 15 cm de methanol,
7,5 cm3 de tétrahydrofurane et 1,9 cm3 de soude 4N est agitée pendant 15 heures à une température voisine de 20°C puis on ajoute 20 cm3 de
3
methanol, 3 cm d'acide chlorhydrique 5N et 50 cm3 d'eau distillée.
Après 30 minutes d'agitation, le solide formé est séparé par filtration, lavé par 50 cm au total d'eau distillée et séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 845 mg d'acide N-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-3-ammopropionoyl]-8-ammooctanoïque, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 115°C.
L'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-3-ammopropιonιque peut être préparée de la manière suivante : Après avoir chauffé au reflux pendant 3 heures un mélange de 190 mg d'acide 3-aminopropionique et 410 mg de chlorotrimêthylsilane dans 50 cm de dichlorométhane, la solution est refroidie vers 20°C et on ajoute 1 g de chlorure de 3-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle en solution dans 30 cm de dichlorométhane puis 0,81 cm de triéthylamine en solution dans 15 cm 3 de dichlorométhane. L agitation est maintenue pendant 15 heures à une température voisine de 20°C et le solvant est évaporé à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu est chromatographie sur une colonne de 5 cm de diamètre contenant 250 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée en présence du mélange chlorure de méthylène methanol 90-10 (en volumes), en recueillant des fractions de 50 cm . Les 9 premières fractions sont éliminées, les 15 suivantes sont rassemblées et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 1,04 g d'acide N-(3β-acétoxylup- 20(29)-èn-28-oyl)-3-aminopropionique sous la forme d'un meringue blanche [Rf=0,3 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chlorure de méthylènemëthanol 90-10 (en volumes)].
Exemple.26
A une solution de 1 g de N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)glycine dans 100 cm3 de dichlorométhane, on ajoute 410 mg de chlorhydrate de
8-aminooctanoate de methyle, 243 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole, 690 mg de chlorhydrate de 1-éthyl 3-(3-diméthylaminopropyl)carbodiimide et 0,5 cm de triéthylamine. La solution est agitée pendant 12 heures à une température voisine de 20°C puis on ajoute 100 cm d'eau distillée. La phase organique est décantée et la phase aqueuse est extraite par 150 cm au total de chlorure de méthylène. Les extraits organiques sont rassemblés, séchés sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu obtenu (1,26 g) est chromatographie sur un colonne de 5 cm de diamètre contenant 200 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 50-50 (en volumes) en recueillant des fractions de
50 cm3. Les 17 premières fractions sont éliminées; les 27 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 1,2 g de N-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)glycyl]-8-ammoocta-noate de methyle sous la forme d'une meringue blanche [Rf=0,2 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane acétate d'éthyle 50-50 (en volumes)].
Une solution de 1,2 g de N-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)glycyl]-8-ammooctanoate de methyle dans 17 cm de methanol,
8,5 cm3 de tétrahydrofurane et 2,1 cm3 de soude 4N est agitée pendant 15 heures à une température voisine de 20°C puis on ajoute 20 cm3 de methanol, 4 cm3 d'acide chlorhydrique 5N et 50 cm3 d'eau distillée et
50 cm d'acétate d'éthyle. La phase organique est décantée et la phase aqueuse est extraite par 200 cm au total d'acétate d'éthyle.
Les extraits organiques sont rassemblés, séchés sur du sulfate de magnésium anhydre et évaporés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu est dissous dans 4 cm3 d'éthanol et 40 cm3 d'eau distillée sont additionnés. Après 30 minutes d'agitation, le solide est séparé par filtration, lavé par 50 cm3 au total d'eau distillée et séché sous pression réduite
(13,5 Pa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 883 mg d'acide N-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-glycyl]-8-ammooctanoïque, sous la forme d'un solide blanc, fondant vers 130°C.
La N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)glycine peut être préparée de la manière suivante :
Après avoir chauffé au reflux pendant 6 heures 30 minutes un mélange de 830 mg de glycine et 2,28 g de chlorotrimethylsilane dans 300 cm3 de dichlorométhane, la solution est refroidie vers 20°C et on ajoute
5,17 g de chlorure de 3-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle puis 3,54 cm de triethylamme. L'agitation est maintenue pendant 48 heures à une température voisine de 20°C et le solvant est évaporé à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu est chromatographie sur une colonne de 5 cm de diamètre contenant 250 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange chlorure de méthylène methanol 90-10 (en volumes), en recueillant des fractions de 50 cm3. Les 10 premières fractions sont éliminées, les 15 suivantes sont rassemblées et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35"C. On obtient ainsi 1,04 g de N-[3β-acêtoxylup-20(29)-èn-28-oyl]glycine sous la forme d'une meringue blanche [Rf≈ 0,3 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chlorure de méthylène methanol (90-10 en volumes)].
Exemple 27
A une solution de 1,13 g d'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)- 8-aminooctanoïque, dans 100 cm3 de dichlorométhane, on ajoute 250 mg de chlorhydrate de glycinate de methyle, 240 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole, 690 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimιde et 0,5 cm de triéthylamine. La solution est agitée pendant 12 heures à une température voisine de 20°C puis on ajoute 100 cm d'eau distillée. La phase organique est décantée et la phase aqueuse est extraite par 150 cm3 au total de chlorure de méthylène. Les extraits organiques sont rassemblés , séchés sur du sulfate de magnésium anhydre et évaporés à sec sous pression réduite
(2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu obtenu (1,3 g) est chromatographie sur une colonne de 4 cm de diamètre contenant
125 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 30-70 (en volumes), en recueillant des fractions de 50 cm3. Les 15 premières fractions sont éliminées; les 17 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 1,2 g de N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoylglycinate de methyle, sous la forme d'une meringue blanche [Rf=0,3 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane acétate d'éthyle (50-50 en volumes)].
Une solution de 1,2 g de N-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]glycinate de methyle dans 17 cm3 de methanol, 8,5 cm3 de tétrahydrofurane et 2,1 cm3 de soude 4N est agitée pendant 15 heures à une température voisine de 20°C puis on ajoute 10 cm3 de methanol, 2,5 cm3 d'acide chlorhydrique 5N et 40 cm3 d'eau distillée.
Après 30 minutes d'agitation, le solide est séparé par filtration, lavé par 50 cm3 au total d'eau distillée et séché à l'air à une température voisine de 20°C. On obtient ainsi 1,03 g d'acide N-[N- (3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-ammooctanoyl]glycine, sous la forme d'un solide blanc, fondant vers 132°C.
L'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-en-28-oyl]-8-amιnooctanoïque peut être préparé de la manière suivante :
Après avoir chauffé au reflux pendant 3 heures un mélange de 330 mg d'acide 8-ammooctanoïque et 410 mg de chlorotriméthylsilane dans
3
50 cm de dichlorométhane, la solution est refroidie vers 20°C et on ajoute 1 g de chlorure de 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle puis 0,81 cm de triethylamme. L'agitation est maintenue pendant 15 heures à une température voisine de 20°C et le solvant est évaporé à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu est chromatographie sur une colonne de 5 cm de diamètre contenant 200 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée en présence du mélange cyclohexane-acétate d'éthyle 60-40 (en volumes), en recueillant des fractions de 50 cm3. Les 18 premières fractions sont éliminées, les 31 suivantes sont rassemblées et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 1,1 g d'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoique sous la forme d'un meringue blanche [Rf=0,4 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane acétate d'éthyle 60-40 (en volumes)].
Exemple 28
A une solution de 1,05 g d'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl] 4-ammobutanoïque dans 60 cm de tétrahydrofurane, on ajoute 0,4 g de 4-ammophénylacétate de methyle puis 0,31 g de 1-hydroxybenzotriazole. Après 15 minutes d'agitation à une température voisine de 20°C, on ajoute 0,84 g oe chlorhydrate de 1-(3-dιméthylammopropyl)-3-éthylcarbodumide puis 1 cm de triethylamme. La solution est agitée 240 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange réactionnel est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Au solide pâteux résiduel, on ajoute 100 cm de dichlorométhane. La phase organique est lavée par 150 cm au total d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium et évaporée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le solide crème obtenu (1,4 g) est chromatographie sur une colonne de 2 cm de diamètre et 40 cm de haut de silice (0,02-0,045 mm) éluée par un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 1-1 (en volumes), en recueillant des fractions de 70 cm3. Les 8 premières fractions sont éliminées, les 2 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient
750 mg de N-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-4 aminobutanoyl]-4- aminophénylacétate de methyle sous la forme d'une huile jaune pâle visqueuse [Rf=0,69 ; chromatographie sur couche mince de silice : éluant : cyclohexane/ - acétate d'éthyle 1-1 (en volumes)].
10 cm de soude 4N sont ajoutés en 5 minutes environ à une solution de 1,1 g de N-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-4 aminobutanoyl]-4- aminophénylacétate de methyle dans 20 cm3 de methanol et 20 cm3 de tétrahydrofurane et le mélange réactionnel est agité pendant
72 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange réactionnel est acidifié à un pH voisin de 2 à l'aide d'acide chlorhydrique 5N puis on ajoute 100 cm d'eau distillée. Après 3 heures d'agitation,le solide est séparé par filtration et rincé par 100 cm3 au total d'eau distillée. Le solide est trituré avec 30 cm d'oxyde de diisopropyle, filtré, rincé par 30 cm au total d'oxyde de diisopropyle, puis séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 500 mg d'acide N-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-4-aminobutanoyl]-4-aminophënylacétique fondant à une température voisine de 190°C (pâteux).
L'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-4-aminobutanoïque peut être obtenu de la manière suivante :
Après avoir chauffé 4 heures au reflux un mélange de 0,7 g d'acide 4arainobutyrique et 1,68 cm3 de chlorotriméthysilane dans 180 cm3 de chloroforme, la solution est refroidie vers 20°C et on ajoute une solution de 3,3 g de chlorure de 3-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle dans
90 cm3 de chloroforme, puis 3 cm3 de triéthylamine. L'agitation est maintenue pendant 30 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange réactionnel est lavé par 450 cm au total d'eau distillée. La phase organique est séchée sur du sulfate de magnésium anhydre puis évaporée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu obtenu (4,3 g) est chromatographie sur une colonne de 3 cm de diamètre et 40 cm de haut contenant de la silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de dichlorométhane et de méthanol 95-5 (en volumes), en recueillant des fractions de 50 cm3. Les
6 premières fractions sont éliminées; les 44 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 2,3 g d'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl] 4-ammobutanoïque sous forme d'une meringue blanche [Rf=0,51 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : dichlorométhane-méthanol 9-1 (en volumes)].
Le 4-ammophénylacétate de methyle peut être obtenu selon H. Salkowski Chem. Ber., 28, 1917, (1895). Exemple 29
A une solution de 1,05 g d'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl) 4-aminobutanoïque dans 100 cm3 de tétrahydrofurane, on ajoute 0,4 g de 4-ammométhylbenzoate de methyle puis 0,31 g de 1 -hydroxybenzotriazole. Après 15 minutes d'agitation à une température voisine de 20°C, on ajoute 0,84 g de chlorhydrate de 1-éthyl-3-(3-diméthylaminopropyl)carbodiimide puis 1 cm3 de triethylamme. La solution est agitée 72 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange réactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Au solide pâteux résiduel, on ajoute 100 cm3 de dichlorométhane. La phase organique est lavée par 150 cm au total d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium et concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le solide crème obtenu (1,4 g) et chromatographie sur une colonne de 2 cm de diamètre et 40 cm de haut de silice (0,02-0,045 mm) éluée par un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 1-1 (en volumes), en recueillant des fractions de 70 cm3. Les 15 premières fractions sont éliminées, les 24 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient 1,15 g de N-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-4- aminobutanoyl]-4-ammométhylbenzoate de methyle sous la forme d'une meringue blanche [Rf=0,15 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant cyclo-hexane-acétate d'éthyle 1:1 (en volumes)].
15 cm3 de soude 4N sont ajoutes en 5 minutes environ a une solution de 1,1 g de N-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-4-aminobutanoyl]-4- amino mêthylbenzoate de methyle dans 30 cm3 de methanol et 30 cm3 de tétra-hydrofurane et le mélange réactionnel est agité pendant
24 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange réactionnel est acidifié à un pH voisin de 2 à l'aide d'acide chlorhydrique 5N puis on ajoute 150 cm d'eau distillée. Après 3 heures d'agitation, le solide est séparé par filtration et rince par 150 cm3 au total d'eau distillée. Le solide est trituré avec 30 cm d'oxyde de diisopropyle, filtré, rincé par 75 cm3 au total d'oxyde de diisopropyle, puis séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 900 mg d'acide N-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-4- aminobutanoyl]-4-aminométhylbenzoïque fondant à une température voisine de 180-190°C (pâteux).
Le 4-aminométhylbenzoate de methyle peut être obtenu de la manière suivante: A 30 cm3 de methanol refroidis à une température voisine de -30°C, on ajoute en 10 minutes, 3,3 cm3 de chlorure de thionyle. L'agitation est maintenue 30 minutes à une température voisine de -23°C puis on ajoute 4,7 g d'acide 4-aminométhylbenzoïque. On laisse revenir à une température voisine de 20°C en 1 heure. Le mélange est additionné de 15 cm de methanol et l'agitation est maintenue 15 heures à une température voisine de 20°C. Le solide est séparé par filtration, rincé par 90 cm3 au total de methanol puis 150 cm3 au total d'oxyde de diéthyle. Le solide est séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 20°C. On obtient ainsi 3,2 g de chlorhydrate de 4-aminométhylbenzoate de methyle sous la forme d'un solide blanc fondant à une température voisine de 270°C.
Exemples 30 à 49 En opérant par analogie avec l'exemple 27 les dérivés suivants ont été préparés :
30)
La N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctanoyl]-β-alanine, a été préparée à partir d'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque et de β-alaninate de methyle, pF=138°C, (R=51 %).
31)
L'acide N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-L-aspartique, a été préparé à partir d'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque et de L-aspartate de dibenzyle, pF=140°C, (R=47 %).
32)
La N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctanoyl]-L-phénylglycine, a été préparée à partir d'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque et de L-phénylglycinate de methyle, pF=135°C, (R=45 %).
33)
La N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-L-alanine, a été préparée à partir d'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque et de L-alanmate de benzyle, pF=120°C, (R=34 %) .
34)
La N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctanoyl]-D-sérine, a été préparée à partir d'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8- aminooctanoïque et de D-sérmate de methyle, pF=252°C, (R=8 %). 35)
Le N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctanoyl]-L-homosérinate de sodium, a été préparé à partir d'acide N-[3β-acétoxylup- 20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctanoïque et d'α-amino-γ-butyrolactone, pF=130°C, (R=45 %).
36)
La N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-D,L-isosérine a été préparée à partir d'acide N- [3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28oyl]-8-ammooctanoïque et de D,L-isosérinate de methyle, pF=140°C, (R=56 %).
37)
La N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-L-lysine, a été préparée à partir d'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8- aminooctanoïque et de N-trifluoroacétyl-L-lysinate de methyle, (R=16 %).
38)
La N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-L-asparagine, a été préparée à partir d'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn- 28-oyl]-8-aminooctanoïque et de L-asparaginate de p-nitrobenzyle, pF=120°C, (R=34 %).
39)
La N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]sarcosine, a été préparée à partir d'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque et de sarcosinate d'éthyle, pF=120°C, (R=85 %).
40)
La N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-L-proline, a été préparée à partir d'acide N-[3β-acêtoxylup-20(29)-ên-28-oyl]-8-aminooctanoïque et de L-prolinate de methyle, pF=142°C, (R=72 %) .
41)
La N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-L-phénylalanine a été préparée à partir d'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-ên-28- oyl] -8-aminooctanoïque et de L-phénylalaninate de methyle, pF=116°C, (R=58 %).
42)
La N ' - [N- [ 3β-hydroxylup-20 ( 29 ) -èn-28-oyl ] -8-aminooctanoyl ] -L-valine , a été préparée à partir d ' acide N- [ 3β-acétoxylup-20 ( 29 ) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoïque et de L-valinate de methyle , pF=1 45°C , (R=80 %) .
43 )
L'acide N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-3-amino-2-hydroxy-3-phénylpropionique (2S,3S), a été préparé à partir d'acide N- [3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoïque et de 3-amino-2-hydroxy-3-phénylpropionate de methyle (2S,3S), pF=120°C, (R=58 %).
44)
L'acide N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-4-aminobutyryl]-6-aminohexanoïque a été préparé à partir d'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-4-aminobutyrique et de 6-aminohexanoate de methyle, pF=140°C, (R=100 %).
L'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-4-aminobutyrique a été préparé à partir de chlorure de 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle et d'acide 4-aminobutyrique, [Rf=0,43 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chlorure de méthylène, methanol 90-10 (en volumes)].
45)
L'acide N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-5-aminopentanoyl]-5-aminopentanoïque a été préparé à partir d'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-5-aminopentanoïque et de 5-aminopentanoate de methyle, pF=132°C, (R=85 %) .
L'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-5-aminopentanoïque a été préparé à partir de chlorure de 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle et d'acide 5-aminopentanoïque, [Rf=0,51 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chlorure de méthylène, methanol 90-10 (en volumes)].
46)
L'acide N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptanoyl]-3- aminopropionique a été préparé à partir d'acide N-[3β-acétoxylup- 20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptanoïque et de 3-aminopropionate de methyle, pF=194°C, (R=36 %).
L'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptanoïque a été préparé à partir de chlorure de 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle et d'acide 7-aminoheptanoïque, [Rf=0,26 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane, acétate d'éthyle 60-40 (en volumes)].
47)
L'acide N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-6-aminohexanoyl]-4- aminobutyrique a été préparé à partir d'acide N-[3β-acétoxylup- 20(29)-èn-28-oyl]-6-aminohexanoïque et de 4-aminobutyrate de methyle, pF=206°C, (R=10 %).
L'acide N-[3β-acêtoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-6-aminohexanoïque a été préparé à partir de chlorure de 3β-acétoxylup-20 (29)-èn-28-oyle et d'acide 6-aminohexanoïque, [Rf=0,2 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane, acétate d'éthyle 60-40 (en volumes)].
48)
L'acide N' - [N- [3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoyl] -3-aminopropionique a été préparé à partir d'acide N- [3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoïque et de 3-aminopropionate de methyle, pF=138°C, (R=51 %) .
49)
L'acide N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-4-aminobutyrique a été préparé à partir d'acide N-[3β-acétoxylup- 20 (29) -èn-28-oyl ] -8-amιnooctanoιque et de 4-ammobutyrate de methyle , pF=1 68°C , (R=23 % ) .
Exemple 50
La N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctanoyl]-L-thréomne peut être obtenue de la façon suivante: à une solution de 1 g d'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoique, dans 50 cm de dichlorométhane, on ajoute, sous un courant d'argon, 470 mg d'hémioxalate de L-thréonmate de benzyle,
240 mg d'hydrate de 1 -hydroxybenzotriazole, 600 mg de chlorhydrate de 1-(3-dιméthylamιnopropyl)-3-éthylcarbodnmιde et 0,88 cm3 de triethylamme. La solution est agitée pendant 12 heures à une température voisine de 20°C puis on ajoute 60 cm d'eau distillée. La phase organique est décantée, séchée sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 45°C. Le résidu obtenu (1,36 g) est chromatographie sur une colonne de 4 cm de diamètre contenant 100 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 30-70 (en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm . Les 10 premières fractions sont éliminées ; les 10 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 45°C. On obtient ainsi 1,12 g d'une meringue blanche qui est mise en solution dans un mélange de 13,5 cm3 de methanol, de 6,7 cm3 de tétrahydrofurane et de 1,4 cm3 de soude 5N.
Après 15 heures sous agitation à une température voisine de 20°C, on ajoute 1,4 cm3 d'acide chlorhydrique 5N et 15 cm3 d'eau distillée. Le methanol est éliminé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 45°C. Après 30 minutes d'agitation, le solide obtenu est séparé par filtration, lavé par 35 cm3 au total d'eau distillée et séché à l'air à une température voisine de 20°C. On obtient ainsi 880 mg de N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctanoyl]-L-thréomne, sous la forme d'un solide blanc, fondant vers 130°C.
Exemple 51 La N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctanoyl]-L-statine peut être obtenue de la façon suivante :
A une solution de 500 mg d'acide N-[3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]- 8-aminooctanoïque, dans 30 cm de dichlorométhane, on ajoute 211 mg de chlorhydrate de L-statinate de methyle, 105 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole, 298 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl) -3-éthylcarbodiimide et 0,38 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée pendant 18 heures à une température voisine de 20°C puis on ajoute 50 cm d'eau distillée. La phase organique est décantée, séchée sur du sulfate de magnésium anhydre et évaporée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (570 mg) est mis en solution dans un mélange de 15 cm de methanol, de 10 cm3 de tétrahydrofurane et de 10 cm3 de soude 5N.
Après 15 heures sous agitation à une température voisine de 20°C, on ajoute 5 cm3 de methanol, puis 10 cm3 d'acide chlorhydrique 5N et
5 cm3 d'eau distillée. Le mélange est extrait par 60 cm3 d'éther diéthylique. La phase organique est décantée et lavée par 30 cm3 au total d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium anhydre, et concentrée a sec sous pression réduite (4,0 kPa) à une température
3 voisine de 40°C. Le résidu (520 mg) est mis en suspension dans 10 cm d'éther diéthylique. Après 1 heure d'agitation, le solide obtenu est séparé par filtration, lavé par 5 cm3 d'éther diéthylique et séché sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 20°C. On obtient ainsi 340 mg de N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-L-statine sous la forme d'un solide blanc, fondant vers
158°C.
Le L-statinate de methyle peut être préparé selon la méthode décrite par Y. TAKEMOTO et coll., Tetrahedron Lett., 31 (2), 217, 1990.
Exemple 52 En opérant par analogie avec l'exemple 11.
L'acide N-[3β,30-dihydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-10-aminodécanoïque a été préparé à partir de chlorure de 3β,30-diacétoxylup-20(29)-èn-28-oyle et de 10-ammodécanoate de methyle, pF=130-140°C, (R=14 %) . Exemple 53
En opérant par analogie avec l'exemple 11 et l'exemple 27 on prépare la N'-[N-[3β,30-dιhydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-amιnooctanoyl]glycine, pF=154°C, (R=83 %). Exemple 54
Le N-[3β,30-dιhydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-1O-ammodécanoate de méthyle peut être obtenu de la manière suivante :
Une solution de 760 mg d'acide N-[3β,30-dιhydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-10-ammodécanoïque, 0,48 cm d'iodure de methyle, 0,45 cm de 1,8-dιazabι-cyclo[5.4.0]undéc-7-ène dans 6 cm de N,N-diméthylformamide est agitée 4 heures à une température voisine de 20°C. Après addition de 60 cm d'eau distillée et de 25 cm3 de chloroforme, la phase organique est décantée. La phase aqueuse est extraite par 25 cm au total de chloroforme. Les phases organiques rassemblées sont séchées sur du sulfate de sodium anhydre et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. L'huile jaune obtenue (1,34 g) est chromatographiée sur une colonne de 3,2 cm de diamètre contenant 90 g de silice (0,02-0,04 mm) éluée avec un mélange de dichlorométhane et d'acétate d'éthyle 50-50 (en volumes) en recueillant des fractions de 10 cm3. Après élimination des 52 premières fractions les 14 suivantes sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Les 800 mg de meringue obtenus sont mis en solution dans 8 cm3 de methanol et on ajoute, goutte-a-goutte, 8 cm3 d'eau distillée. Après 30 minutes d'agitation les cristaux obtenus sont séparés par filtration, lavés par 10 cm3 au total d'eau distillée et séchés sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de
30°C. On obtient ainsi 800 mg de N-[3β,30-dιhydroxylup-20(29)-en- 28-oyl]-10-ammodécanoate de methyle, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 100°C.
Exemple 55 et 56 En opérant par analogie avec l'exemple 54, les produits suivants sont préparés :
55)
Le N'-[N-[3β,30-dihydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]glycinate de methyle a été préparé à partir d'acide N'-[N-[3β,30- dihydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]glycine, pF=115°C, (R=77 %).
56)
Le N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]glycinate de methyle a été préparé à partir d'acide N'-[N-[3β-hydroxylup- 20(29)-èn-28-oyl]- 8-aminooctanoyl]glycine, pF=100°C, (R=90 %).
Exemple 57
En opérant par analogie avec l'exemple 19, on prépare le produit suivant : L'acide N-[3β,30-dihydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-amino 2,2-diméthylundécanoïque est préparé à partir de 11 -amino-2, 2-diméthylundécanoate de methyle et d'acide 3β,30-diacétoxylup-20(29)-èn-28-oïque. pF=190°C.
Exemple 58
L'acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoylacétique peut être obtenu de la manière suivante :
A une solution de 3,5 g de chlorure de 3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28oyle dans 60 cm3 de chloroforme, on ajoute sous agitation, 1 , 3 g de 7-aminoheptylcarbamoylacétate d'éthyle, puis 1,1 cm3 de triéthylamine. Après 12 heures sous agitation à une température voisine de 25°C, 50 cm3 d eau distillée sont ajoutes, la phase organique est décantée et la phase aqueuse est extraite par 25 cm3 au total de chloroforme. Les extraits organiques sont rassemblés, lavés par 40 cm3 au total d'eau distillée, séchés sur du sulfate de magnésium anhydre et le solvant est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à) une température voisine de 35°C. La meringue beige obtenue (1,8 g) est chromatographiée sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 90 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange d'acétate d'éthyle et de cyclohexane 75-25 (en volumes), en recueillant des fractions de 10 cm3. Les 42 premières fractions sont éliminées, les 15 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite
(2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu obtenu (830 mg) est mis en solution dans un mélange de 8 cm3 de methanol,
4 cm 3 de tétrahydrofurane et 2,75 cm3 de soude 4N. Après 12 heures sous agitation à une température voisine de 25°C, le solvant est évaporé à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisme de 35°C. Le résidu est repris par 40 cm3 d'eau distillée et acidifié à l'aide de 3 cm3 d'acide chlorhydrique 4N. Les cristaux obtenus sont séparés par filtration, laves par 90 cm3 au total d'eau distillée et séchés sous pression réduite (13,5 Pa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 670 mg d'acide N-[3β-hydroxylup- 20(29)-èn-28-oyl]-7-ammoheptylcarbamoylacétιque sous la forme d ' un solide blanc, fondant vers 140°C.
Le 7-ammoheptylcarbamoylacétate d'éthyle peut être préparé de la manière suivante : On ajoute, goutte-à-goutte, 1,3 cm3 de chlorure de malonate d'éthyle à un mélange de 3,4 g de mono N-benzyloxycarbonyl-1,7-heptyldιamme,
1,68 cm3 de triethylamme dans 120 cm3 de tétrahydrofurane et la solution est agitée 48 heures à une température voisine de 25°C. Après addition de 400 cm3 d'eau distillée et de 200 cm3 de chloroforme, la phase organique est décantée et la phase aqueuse est extraite par 400 cm au total de chloroforme. Les extraits organiques sont rassemblés, lavés par 400 cm au total d'eau distillée, séchés sur du sulfate de sodium anhydre et évaporés sous pression réduite (12,7 kPa) à une température voisine de 35°C. L'huile orangée obtenue (4,0 g) est chromatographiée sur une colonne de 3 , 5 cm de diamètre contenant 200 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec de l'acétate d'éthyle, en recueillant des fractions de 15 cm3. Les 47 premières fractions sont éliminées, les 17 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. L'huile jaune obtenue (1,62 g) est mise en solution dans un mélange de 5 cm3 d'acide acétique et de 5 cm3 d'acide bromhydrique à
30 % (en solution dans l'acide acétique) et est agitée pendant 15 minutes à une température voisine de 25°C. Le solvant est éliminé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 45°C. On obtient ainsi 1,23 g de 7-aminoheptylcarbamoylacétate d'éthyle sous forme d'un miel épais utilisé tel quel.
La mono N-benzyloxycarbonyl-1,7-heptyldiamine peut être préparée de la manière suivante : A une solution de 10 g d'acide N-benzyloxycarbonyl-8-aminocaprylique dans 500 cm de chlorure de méthylène, on ajoute 2 g de chlorure d'ammonium, 5,2 g d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole, 13 g de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide et 9,6 cm3 de triëthylamine. La solution est agitée pendant 18 heures à une température voisine de 20°C puis on ajoute 1 litre d'eau distillée et 12 cm3 d'acide chlorhydrique 4N. La phase organique est décantée et la phase aqueuse est extraite par 200 cm3 au total de chloroforme.
Les extraits organiques sont rassemblés, lavés par 200 cm au total d'eau distillée, séchés sur du sulfate de magnésium anhydre et évaporés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. La poudre blanche obtenue (7,1 g) est mise en solution .dans un mélange de 92 cm3 d'acétonitrile et de 30 cm3 d'eau distillée et on ajoute 3,6 g de bis (trifluoroacétoxy) iodobenzène.
Après 24 heures sous agitation à une température voisine de 20°C, on ajoute 400 cm3 d'eau distillée, 120 cm3 d'ammoniaque 4N et 100 cm3 de chloroforme. La phase organique est décantée, la phase aqueuse est extraite par 200 cm3 au total de chloroforme. Les extraits organiques sont rassemblés, lavés par 100 cm3 d'eau distillée, séchés sur du sulfate de magnésium anhydre, et concentrés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi
3,47 g de mono N-benzyloxycarbonyl-1,7-heptyldiamine, sous la forme d'une huile orangée [Rf= 0,5 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme, methanol, ammoniaque à 20 % 12-3-0,5
(en volumes)]. L'acide N-benzyloxycarbonyl-8-ammocaprylιque peut être préparé selon : A. KAPOOR, L.W. GERENCSER, J. Pharmac. Sci., 1969, 53. (8) , 976.
Exemple 59 L ' acide N-[3β-hydroxy-30-(2'-hydroxyethyl)thiolup-20(29)-èn-28-oyl]-11-ammoundécanoique est préparé de la manière suivante :
En opérant par analogie avec l'exemple 7, on prépare le N-[3β-acétoxy-30-(2'-acétoxyéthyl)thiolup-20(29)-èn-28-oyl]-11-ammoundécanoate de methyle à partir du chlorure de 3β-acétoxy-30-(2'-acétoxyéthyl)thiolup-20(29)-èn-28-oyle. 3,1 cm d'hydroxyde de sodium 4N sont ajoutés à une solution de 250 mg de N-[3β-acétoxy-30-(2'-acétoxyéthyl)thiolup-20(29)-èn-28-oyl]-11-ammoundécanoate de methyle dans
20 cm3 de tétrahyrofurane et 10 cm3 de methanol. Le mélange réactionnel est agité 12 heures à une température voisine de 20°C puis acidifié à un pH voisin de 3 au moyen d'acide chlorhydrique 4N puis dilué à l'aide de 200 cm d'eau distillée. Après 2 heures d'agitation, le solide est séparé par filtration, lavé par 90 cm3 au total d'eau distillée puis séché sous pression réduite (10 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 150 mg d'acide N-[3β-hydroxy-30-(2'-hydroxyethyl)thiolup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoïque sous la forme d'un solide blanc fondant à une température voisine de 170°C.
Le chlorure de l'acide 3β-acétoxy-30-(2'-acétoxyéthyl)thiolup-20(29)-èn-28-oïque est préparé de manière analogue à celle décrite à l'exemple 11 : à partir de 300 mg d'acide 3β-acétoxy-30-(2'-acétoxyéthyl)thiolup-20(29)-èn-28-oïque on obtient ainsi 350 mg d'une laque incolore qui est utilisée sans autre purification.
L'acide 3β-acétoxy-30-(2'-acétoxyéthyl)thiolup-20(29)-èn-28-oïque peut être obtenu de la manière suivante : Un mélange de 400 mg d'acide 3β-hydroxy-30-(2'-hydroxyethyl)thiolup- 20(29)-èn-28-oïque, 930 mg d'acétate de sodium et 4,3 cm d'anhydride
3 acétique est chauffé 15 minutes à reflux. On ajoute 4,3 cm d'anhy- dride acétique, et on chauffe à reflux durant 15 minutes. On refroidit à une température voisine de 5°C et on ajoute goutte-àgoutte, en 3 heures environ, 50 cm d'eau distillée. Après 12 heures d'agitation à une température voisine de 25°C, le solide formé est séparé par filtration, lavé avec au total 50 cm3 d'eau distillée et séché sous vide (20 kPa) à une température voisine de 25°C. Les
500 mg de solide blanc crème obtenus sont mis en suspension dans
30 cm3 d'éthanol. On ajoute 3 cm3 d'ammoniaque (densité 0,8) . On agite 12 heures à une température voisine de 25°C. Le solvant est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa). Le résidu est chromatographie sur une colonne de 2 cm de diamètre, contenant 200 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée par un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 7-3 (en volumes) en recueillant des fractions de 10 cm3. Les 18 premières fractions sont éliminées, les 7 suivantes sont rassemblées et évaporées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 300 mg d'acide 3β- acétoxy-30-(2'-acétoxyéthyl)thiolup-20(29)-èn-28-oïque sous la forme d'un solide blanc [Rf=0,49 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane, acétate d'éthyle 7-3 (en volumes)]. L'acide 3β-hydroxy-30-(2'-hydroxyethyl)thiolup-20(29)-èn-28-oïque peut être préparé de la manière suivante :
Après avoir agité durant 3 heures à une température voisine de 25°C, une solution de 215 mg de 2-hydroxyéthanethiol et de 200 mg d'éthy¬
3
late de sodium dans 15 cm d'éthanol, le mélange est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à un température voisine de 40°C. Au solide résiduel sont ajoutes successivement 20 cm3 de tétrahydrofurane et 480 mg d'acide 3β-hydroxy-30-bromolup-20(29)-èn- 28-oïque. La suspension obtenue est agitée 48 heures à une température voisine de 25°C puis on ajoute 10 cm d'eau distillée. Le mélange est acidifié à un pH voisin de 2 à l'aide d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 2N puis dilué au moyen de 300 cm d'eau distillée. Le solide blanc formé est séparé par filtration, lavé successivement par 300 cm 3 au total d eau distillée et 25 cm3 d'éther diéthylique. Le solide blanc obtenu est séché sous pression réduite (20 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 400 mg d'acide 3β-hydroxy-30-(2'-hydroxyethyl)thiolup-20(29)-èn-28-oïque sous la forme d'un solide blanc fondant à une température voisine de 220°C.
Exemples 60 et 61 En opérant de manière analogue à l'exemple 59 les dérivés suivants ont été préparés :
60)
L'acide N-[3β-hydroxy-30-méthylthiolup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoïque à partir de l'acide 3β-hydroxy-30-bromolup-20(29)-èn-28-oïque et de méthanethiol, pF=148°C.
61)
L'acide N- [3β-hydroxy-30-(2'acétylammoéthyl)thiolup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoïque à partir de l'acide 3β-hydroxy-30-bromolup-20(29)-èn-28-oïque et de N-acétylaminoéthanethiol, pF=150°C. Exemple 62
L'acide N- [3β-hydroxy-30-diéthylaminolup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoïque est préparé de la manière suivante :
Le N-[3β-acétyl-30-diéthylaminolup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoate de methyle est préparé de manière analogue à celle décrite à l'exemple 11 à partir de chlorhydrate de 11-aminoundécanoate de methyle et d'acide 3β-acétyl-30-diéthylaminolup-20(29)-èn-28-oïque.
2,4 cm d'hydroxyde de sodium 1 N sont ajoutés à une solution de
450 mg de N-[3β-acétyl-30-diéthylaminolup-20(29)-èn-28-oyl]-11-amino undécanoate de methyle dans 10 cm3 de methanol et 5 cm3 de tétrahydrofurane. Le mélange réactionnel est agité 12 heures à une température voisine de 20°C puis acidifié à pH voisin de 4-5 au moyen d'acide citrique solide puis dilué par 100 cm d'eau distillée. On extrait la phase aqueuse par 100 cm3 au total de chloroforme. Les phases organiques réunies sont lavées avec 75 cm3 au total d'eau distillée, puis séchées sur sulfate de magnésium. On évapore le solvant sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 5Q°C. Le résidu (400 mg) est chromatographie sur une colonne de 2,8 cm de diamètre, contenant 40 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée par un mélange de chloroforme, de methanol et d'ammoniaque 24-6-1 (en volumes), en recueillant des fractions de 20 cm3. Les 4 premières fractions sont éliminées, les 6 suivantes sont rassemblées et évaporées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu obtenu est repris par 8 cm3 d'acétonitrile. Le solide obtenu est séparé par filtration, lavé avec au total 4 cm d'acétonitrile et séché sous pression réduite
(2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 140 mg d'acide N-[3β-hydroxy-30-diêthylaminolup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoïque sous la forme d'un solide blanc, pF =130°C.
L'acide 3β-acétyl-30-diéthylaminolup-20 (29) -èn-28-oïque peut être préparé de la manière suivante :
Une solution de 200 mg de 3β-acétyl-30-diéthylaminolup-20(29)-èn-28- oate de methyle et 800 mg d'iodure de lithium dans 60 cm3 de collidine est chauffée 8 heures à une température voisine du reflux. On évapore le solvant sous pression réduite (15 Pa) à une température voisine de 70°C. On reprend le résidu par 50 cm de dichlorométhane. On lave la phase organique par 100 cm3 au total d eau distillée. La phase organique est séchée sur du sulfate de magnésium et concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de
35°C. On obtient ainsi 152 mg d'acide 3β-acétyl-30-diéthylaminolup20 (29) -èn-28-oïque qui est utilisé sans autre purification.
Le 3β-acétyl-30-diéthylaminolup-20(29)-èn-28-oate de methyle peut être obtenu de la manière suivante :
3
A 30 cm de tetrahydroturane, on ajoute, 30 mg d acétate de palladium, 140 mg de triphenylphosphine et 0,02 cm3 de triéthylamine. On laisse agiter le mélange 30 minutes à une température voisine de
25°C. Le solide jaune obtenu est ajouté à une solution de 770 mg de
3β-acétyl-30-bromolup-20(29)-èn-28-oate de methyle, 70 cm de tétrahydrofurane et 0, 4 cm de diëthylamine. On chauffe le milieu réactionnel durant 30 heures à une température voisine du reflux. Après évaporation du solvant sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40ºC, le solide résiduel est repris par 50 cm3 de dichlorométhane. La phase organique est lavée par 45 cm3 au total d'eau distillée, séchée sur sulfate de magnésium anhydre puis évaporée sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de
40°C. Le résidu est chromatographie sur une colonne de 2,3 cm de diamètre contenant 60 g de silice (0,02-0,045 mm) éluée par un mélange de chloroforme et de methanol 9-1 (en volumes) en recueillant des fractions de 15 cm . Les 8 premières fractions sont éliminées, les 50 suivantes sont rassemblées et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi
400 mg de 3β-acétyl-30-diéthylaminolup-20(29)-èn-28-oate de methyle.
Le 3β-acétyl-30-bromolup-20(29)-èn-28-oate de methyle a été synthétisé selon B.Pradham, Indian J. Chem. 22B, 1983, 12-16. Exemples 63 à 65
Les dérivés suivants ont été préparés de manière analogue a la méthode décrite dans l'exemple 62.
63)
L'acide N-[3β-hydroxy-30-pyrrolidinolup-20(29)-èn-28-oyl] 11-aminoundécanoïque est préparé à partir de 3β-acétyl-30-bromolup-20 (29) -èn28-oate de methyle et de pyrrolidine, pF=146°C.
64)
L ' acide N- [ 3β-hydroxy-30- (2 ' -hydroxyethyl ) aminolup-20 (29) -èn-28-oyl] -1 1 -aminoundécanoïque est préparé à partir de 3β-acétyl-30-bromolup20 (29) -èn-28-oate de methyle et de 2-acétyloxyéthanamine , pF=21 4 °C .
65 )
L'acide N-[3β-hydroxy-30-(4'-méthylpipérazino)lup-20(29)-èn-28-oyl] 11 -aminoundécanoïque est préparé à partir de 3β-acétyl-30-bromolupp¬20(29)-èn-28-oate de methyle et de N-méthylpipérazine, pF=160°C. Exemple 66 Acide N-[30-acétoxy-3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-11-aminoundécanoïque ;
Acide N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-2-aminoisobutyrique ; Acide N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-4-amino-3(R,S)-hydroxybutyrique ;
Acide N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-4-amino-4-benzyl-3-hydroxybutyrique (3S,4S) ;
Acide N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-4-amino-4-cyclohexylméthyl-3-hydroxybutyrique (3R,4S) ;
Acide N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-5-hydroxy-2-pipéridinecarboxylique (2S,5R) ;
Acide 3-[[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]- propionique ; Acide 3-[[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]- 2(R)-hydroxypropionique ;
Acide 3-[[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyll-7-aminoheptylcarbamoyl]- 2(S)-hydroxypropionique ;
Acide 3-[[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]- 2(R,S )-hydroxypropionique ;
Acide 3-[EN-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]-3(R)-hydroxypropionique ;
Acide 3-[[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl)- 3(S)-hydroxypropionique ; Acide 3-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl}-7-aminoheptylcarbamoyl-3(R,S)-hydroxypropionique ;
Acide 3-[[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]-2(R),3(R)-dihydroxypropionique ; Acide 3-[[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-ammoheptylcarbamoyl]-2(S),3(S)-dihydroxypropionique ;
Acide 3-[[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]-2(R),3(S)-dihydroxypropionique ; Acide 3-[[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]-2(S),3(R)-dihydroxypropionique ;
Acide 4-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]-butyrique ;
Acide 4-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]-4(R)-hydroxybutyrique ;
Acide 4-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]-4(S)-hydroxybutyrique ;
Acide 4-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]-4(R,S) hydroxybutyrique ; Acide 4-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]-2(R)-hydroxybutyrique ;
Acide 4-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]-2(S)-hydroxybutyrique ;
Acide 4-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]-2(R,S)-hydroxybutyrique ;
Acide 4-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]-2(R,S)-phénylbutyrique ;
Acide 4-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]-3(R,S)-phénylbutyrique ; Acide 4-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]-4(R,S) phénylbutyrique ;
Acide 4-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]-3(R,S)-méthylbutyrique ; Acide 4-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-ën-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]- 3(R,S)-hydroxybutyrique ;
Acide 4-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]- 3,3-diméthylbutyrique ; Acide 4-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]- 2,2-diméthylbutyrique ;
Acide 4-[N-{3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]- 4,4-diméthylbutyrique ;
Acide 4-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]- 3-hydroxy-3-méthylbutyrique 3(R,S) ;
Acide 4-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]- 3,4-dihydroxybutyrique, 3(R,S),4(R,S) ;
Acide 4-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]- 2,3-dihydroxybutyrique, 2(R,S),3(R,S) ; Acide 4-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]4-isobutyl-3-hydroxybutyrique, 3(R,S),4(R,S) ;
Acide [N-[3β,30-dihydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]acétique ;
Acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-amino-2(R,S)-méthylundécanoïque ;
N'-[N-[3β,30-dihydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-L statine ;
N'-[N-[3β,30-dihydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-L serine ; N'-[N-[3β,30-dihydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-L thréonine ;
N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptanoyl]-L statine ; N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-amιnoheptanoyl]-L thréonine ;
N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-en-28-oyl]-7-aminoheptanoyl]-L serine ;
N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundecanoyl]-glycine ; N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundecanoyl]-L statine ;
N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundecanoyl]-L thréonine ;
N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-en-28-oyl]-11-aminoundecanoyl]-L serine ; N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundecanoyl]-D statine ;
N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-D statine ;
N'-[N-[3β-hydroxy-30-(2'-hydroxyethyl)thiolup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-glycine ; N'-[N-[3β-hydroxy-30-(2'-hydroxyethyl)thiolup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-L statine ;
N'-[N-[3β-hydroxy-30-(2'-hydroxyethyl)thiolup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-L thréonme ;
N'-[N-[3β-hydroxy-30-(2'-hydroxyethyl)thiolup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-L serine ;
Acide N-[3β-hydroxy-30-méthoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundéca¬noïque ;
Acide N-[30-t.butyloxy-3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoïque ; Acide N-[3β-hydroxy-30-(2',3'-dihydroxypropyl)oxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoïque ; Acide N-[3β-hydroxy-30-(2'-hydroxyethyl)oxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11- aminoundécanoïque ; Acide N-[3β-hydroxy-30-(2',3'-dihydroxypropyl)thiolup-20(29)-èn-28- oyl]-11-aminoundécanoïque ; Acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-3-(8-aminooctamido)phénylacétique ;
Acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-4-(8-aminooctamido)phenylacétique ;
Acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-2-(8-aminooctamido)phenylacétique ;
Acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-3-(11-aminoundecanamido)phénylacetique ;
Acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-4-(11-aminoundecanamido)phénylacétique ; Acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-2-(11-aminoundecanamido)phénylacétique ;
Acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-3-(8-aminooctamido)methylbenzoïque ;
Acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-2-(8-aminooctamido)méthyl¬benzoïque ;
Acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-4-(8-aminooctamido)methylbenzoïque ;
Acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-3-(11-aminoundecanamido)méthylbenzoïque ; Acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-2-(11-aminoundecanamido)méthylbenzoïque ;
Acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-4-(11-aminoundecanamido)méthylbenzoïque. Acide N' -[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-2-aminoisobutyrique ;
Acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-5-hydroxy-2-pipéridinecarboxylique (2-R,S) ; Acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-aminobenzoïque ;
Acide N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-2-aminobenzoïque ;
Acide N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-4-aminobenzoïque ;
Acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-(R,S)-amino-3-phénylpropionique ;
Acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-aminoisobutyrique (2-R,S) ; Acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-aminobutyrique (3-R,S) ;
Acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-N'-hydroxycarbonyléthylpropionique ;
N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-trans-4-hydroxy-L proline ;
N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-9-aminononanoyl] glycine ;
Acide N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-nipécotique ;
Acide N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctanoyl]-4-amino-6-méthylheptanoïque-(4S) ;
N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-4-amino-5-phenyl-3-hydroxypentanoïque(3S,4S) ; Acide 2- [N- [3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -7-aminoheptylcarbamόyl] - 2 (R) -propionique ;
Acide 2-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]- 2(S)-propionique ; Acide 2-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]- 2(R,S)-propionique ;
Acide 2-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]- 2,2-diméthylacétique ;
Acide 2-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]- 2(R)-benzylacétique ;
Acide 2-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-ën-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]- 2(S)-benzylacétique ;
Acide 2-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]- 2(R,S)-benzylacétique ; Acide [N-[3β-hydroxy-30-(2'-hydroxyethyl)thio-lup-20(29)-èn-28-oyl]- 7-aminoheptylcarbamoyl]acétique ;
Acide 2-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]-benzoïque ;
Acide 3-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]-benzoïque ;
Acide N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl]-benzoïque ;
Acide 2-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctylcarbamoyl]- 2(R)-propionique ; Acide 2-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctylcarbamoyl]-2(S)-propionique ;
Acide 2-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctylcarbamoyl]-2,2-diméthylacétιque ; Acide 2-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctylcarbamoyl]-2(R)-benzylacétique ;
Acide 2-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctylcarbamoyl]-2(S)-benzylacétique ; Acide 2-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctylcarbamoyl]-2(R,S)-benzylacétique ;
Acide [N-[3β-hydroxy-30-(2'-hydroxyethyl)thιo-lup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctylcarbamoyl]acétique ;
Acide 2-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctylcarbamoyl]-benzoïque ;
Acide 3-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctylcarbamoyl]-benzoïque ;
Acide 4-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctylcarbamoyl]-benzoïque. La présente invention concerne également les compositions pharmaceutiques contenant au moins un produit de formule générale (I) éventuellement sous forme de sel, à l'état pur ou sous forme d'une association avec un ou plusieurs diluants ou adjuvants compatibles et pharmaceutiquement acceptables, ou avec un autre agent destiné au traitement du SIDA, un agent antiviral, immunomodulateur ou antimicrobien.
La composition selon l'invention est capable de maintenir en vie les cellules infectées par un virus HIV et donc de réduire la progression vers le SIDA ou de diminuer sa gravité chez les sujets déjà infectés en réduisant la mortalité des cellules infectées. Les compositions peuvent être utilisées par voie orale, parentérale ou rectale.
Les compositions peuvent être utilisées à titre curatif ou à titre préventif chez des sujets présentant une immunodéfîcience et/ou infectés par un virus HIV. Bien entendu, la constitution de ces compo- sitions sera adaptée au cas particulier du tractus digestif des immunodéprimés.
Comme compositions solides pour administration orale peuvent être utilisés des comprimés, des pilules, des gélules, des poudres ou des granulés. Dans ces compositions, le produit actif selon l'invention est mélangé à un ou plusieurs diluants ou adjuvants inertes, tels que saccharose, lactose ou amidon.
Ces compositions peuvent comprendre des substances autres que les diluants, par exemple un lubrifiant tel que le stéarate de magnésium ou un enrobage destiné à une libération contrôlée.
Comme compositions liquides pour administration orale, on peut utiliser des solutions pharmaceutiquement acceptables, des suspensions, des émulsions, des sirops et des élixirs contenant des diluants inertes tels que l'eau ou l'huile de paraffine. Ces compositions peuvent également comprendre des substances autres que les diluants, par exemple des produits mouillants, édulcorants ou aromatisants.
Les compositions pour administration parentêrale, peuvent être des solutions stériles ou des émulsions. Comme solvant ou véhicule, on peut employer le propyleneglycol, un polyethyleneglycol, des huiles végétales, en particulier l'huile d'olive, des esters organiques injectables, par exemple l'oléate d'éthyle.
Ces compositions peuvent également contenir des adjuvants, en particulier des agents mouillants, isotonisants, émulsifiants, dispersants et stabilisants .
La stérilisation peut se faire de plusieurs façons, par exemple à l'aide d'un filtre bactériologique, par irradiation ou par chauffage. Elles peuvent également être préparées sous forme de compositions solides stériles qui peuvent être dissoutes au moment de l'emploi dans de l'eau stérile ou tout autre milieu stérile injectable.
Les compositions par administration rectale sont les suppositoires ou les capsules rectales, qui contiennent outre le principe actif, des excipients tels que le beurre de cacao, des glycérides semisynthétiques ou des polyéthylèneglycols.
En thérapeutique humaine, le médecin déterminera la posologie qu'il estime la plus appropriée en fonction d'un traitement préventif ou curatif, en fonction de l'âge, du poids, du degré de l'infection et des autre facteurs propres au sujet à traiter. Généralement, les doses sont comprises entre 10 et 100 mg/kg par voie intra veineuse pour un adulte.
La présente invention concerne également les associations constituées d'un ou plusieurs dérivés du lupane de formule générale (I), et/ou le cas échéant leurs sels, et d'un autre principe actif connu pour son activité anti-rétrovirus, éventuellement en présence d'excipients pharmaceutiquement acceptables.
Les agents anti-rétrovirus pouvant être associés sont choisis parmi des agents compatibles et inertes vis-à-vis du dérivé du lupane de formule générale (I) . A titre non limitatif ces agents sont choisis parmi des inhibiteurs de la reverse transcriptase [zidovudme (AZT), didanosme (DDI), didéoxycytidme (DDC), TIBO, névirapme, PMEA, HEPT... ], parmi des inhibiteurs de la protéase [comme par exemple le A 77003], ou parmi ces inhibiteurs de la protéine tat [comme par exemple le RO 24-7429].
L'exemple suivant illustre une composition selon l'invention.
Exemple
On prépare des ampoules contenant une solution dosée à 10 mg d'acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-11-aminoundécanoïque en ajoutant 2 % de glycine et 0,1 % de cystéme à 500 cm d'une solution à 0,2 % d'acide N- [3β-hydroxylup-20 (29) en-28-oyl) -11 -aminoundécanoïque dans du tampon phosphate isotonique. La solution est divisée et répartie aseptiquement dans des ampoules. Chaque ampoule contient 10 mg de produit actif.

Claims

REVENDICATIONS
1 - Nouveau dérivé du lupane de formule générale :
dans laquelle :
R représente un radical de formule générale :
dans laquelle R' et R" identiques ou différents sont des atomes d'hydrogène ou des radicaux alcoyle,
X est une liaison ou représente un radical carbamoyie, N-méthyl carbamoyle, ammocarbonyle ou N-méthylaminocarbonyle,
Y est une liaison ou représente un radical phénylène,
R° et R°° identiques ou différents sont des atomes d'hydrogène ou des radicaux alcoyle (étant entendu que R° et R°° ne sont pas nécessairement identiques sur chaque motif -CR°R°°-), ou R° est hydroxy, hydroxyalcoyle, phenyle, benzyle, carbamoylmethyle ou bien, lorsque Y est une liaison et X est carbamoyie, R° peut former un cycle à 5 ou 6 chaînons avec l'atome d'azote contenu dans X, ce cycle pouvant en outre comprendre un autre hétéroatome choisi parmi l'oxygène ou le soufre et, n, m et p sont des nombres entiers de 0 à 16 tels que m + n + p soit compris entre 4 et 16, R1 est un radical methyle, ou forme avec R3 un radical méthylène ou un radical oxo,
R2 est un radical hydroxy, methyle, hydroxyméthyle ou un radical -CH2OR'2, -CH2SR'2 ou -CH2NHR'2 pour lequel R'2 est alcoyle, hydroxyalcoyle, dihydroxyalcoyle, acetamidoalcoyle, ou acétyle, ou R2 est un radical amino substitué par un radical hydroxyalcoyle ou carboxyhydroxyalcoyle, ou un radical dialcoylamino dont les parties alcoyle peuvent former avec l'atome d'azote auquel elle sont rattachées, un heterocycle à 5 ou 6 chaînons contenant éventuellement un autre hétéroatome choisi parmi l'oxygène, le soufre ou l'azote et éventuellement N-alcoylé,
R3 est un atome d'hydrogène ou forme avec R1 ou R2 un radical méthylène ou un radical oxo,
R4 et R5 sont différents et représentent un atome d'hydrogène ou un radical hydroxy, ou forment ensemble un radical oxo, hydroxyimino ou alcoyloxyimino éventuellement substitué (par un radical carboxy ou dialcoylamino dont les parties alcoyle peuvent former avec l'atome d'azote auquel elles sont rattachées, un heterocycle à 5 ou 6 chaînons contenant éventuellement un autre hétéroatome choisi parmi l'oxygène, l'azote ou le soufre et éventuellement substitué par un radical alcoyle) et
R6 et R7 sont des atomes d'hydrogène, ou bien
R4 et R5, et R6 et R7 forment ensemble des radicaux oxo, étant entendu que les radicaux alcoyle sont droits ou ramifiés et contiennent 1 a 4 atomes de carbone, ainsi que leurs sels lorsqu'ils existent.
2 - Nouveau dérivé du lupane selon la revendication 1 pour lequel : R représente un radical de formule générale : dans laquelle R' et R" identiques ou différents sont des atomes d'hydrogène ou des radicaux alcoyle,
X est une liaison ou représente un radical carbamoyle, N-méthyl carbamoyle, aminocarbonyle, Y est une liaison ou représente un radical phénylène,
R° et R°° identiques ou différents sont des atomes d'hydrogène ou des radicaux alcoyle (étant entendu que R° et R°° ne sont pas nécessairement identiques sur chaque motif -CR°R°°-), ou R° est hydroxy, hydroxyalcoyle, phenyle, benzyle, carbamoylmethyle ou bien, lorsque Y est une liaison et X est carbamoyie, R° peut former un cycle à 5 ou 6 chaînons avec l'atome d'azote contenu dans X et, n, m et p sont des nombres entiers de 0 à 16 tels que m + n + p soit compris entre 4 et 16,
R1 est un radical methyle, ou forme avec R3 un radical méthylène ou un radical oxo,
R2 est un radical hydroxy, methyle, hydroxyméthyle ou un radical -CH2SR'2, ou -CH2NHR'2 pour lequel R'2 est alcoyle, hydroxyalcoyle, acetamidoalcoyle, ou acétyle, ou R2 est un radical amino substitué par un radical hydroxyalcoyle ou carboxyhydroxyalcoyle, ou un radical dialcoylamino dont les parties alcoyle peuvent former avec l'atome d'azote auquel elle sont rattachées, un heterocycle à 5 ou 6 chaînons contenant éventuellement un autre atome d'azote et éventuellement N-méthylé,
R3 est un atome d'hydrogène ou forme avec R1 ou R2 un radical méthylène ou un radical oxo,
R4 et R5 sont différents et représentent un atome d'hydrogène ou un radical hydroxy, ou forment ensemble un radical oxo, ou alcoyloxyimino éventuellement substitué (par un radical carboxy ou dialcoylamino dont les parties alcoyle peuvent former avec l'atome d'azote auquel elles sont rattachées, un heterocycle à 5 ou 6 chaînons contenant éventuellement un autre atome d'azote éventuellement substitué par un radical methyle) et
R6 et R7 sont des atomes d'hydrogène, ou bien
R4 et R5, et R6 et R7 forment ensemble des radicaux oxo, étant entendu que les radicaux alcoyle sont droits ou ramifiés et contiennent 1 à 4 atomes de carbone, ainsi que leurs sels lorsqu ' ils existent.
3 - Un dérivé du lupane selon la revendication 1 , caractérisé en ce qu'il s'agit de la N'-[N-[3β-hdroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctanoyl]-β-alanme.
4 - Un dérivé du lupane selon la revendication 1 , caractérisé en ce qu'il s'agit de la N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctanoyl]-L-alanme.
5 - Un dérivé du lupane selon la revendication 1 , caractérisé en ce qu'il s'agit de la N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctanoyl]-L-thréonme.
6 - Un dérivé du lupane selon la revendication 1 , caractérisé en ce qu'il s'agit de la N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-ammooctanoyl]-L-statme. 7 - Un dérivé du lupane selon la revendication 1 , caractérisé en ce qu'il s'agit de l'acide N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-ammoheptylcarbamoylacétique.
8 - Procédé de préparation d'un nouveau dérivé du lupane selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on fait agir un amino acide de formule générale :
H2N - R dans laquelle R est défini comme dans la revendication 1, et dont le cas échéant, la fonction acide a été préalablement protégée, sur le chlorure de l'acide de formule générale :
dans laquelle R1, R2, R3, R4, R5, R6 et R7 sont définis comme dans la revendication 1 , étant entendu que les fonctions hydroxy ou acides représentées ou contenues dans ces radicaux sont préalablement protégées, puis transforme le cas échéant en un ester, élimine les radicaux protecteurs et transforme éventuellement le produit obtenu en un sel.
9 - Procédé de préparation d'un dérivé du lupane selon la revendication 1, pour lequel R4 et R5 forment ensemble un radical hydroxyimino ou alcoyloxyimino éventuellement substitué comme défini dans la revendication 1, et les autres radicaux sont définis comme dans la revendication 1, caractérisé en ce que l'on fait agir l'hydroxylamine ou un de ses dérivés de formule générale :
R8-O-NH2 dans laquelle R6 est un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle éventuellement substitué (par un radical carboxy ou dialcoylamino dont les parties alcoyle peuvent former avec l'atome d'azote auquel elles sont rattachées, un heterocycle à 5 ou 6 chaînons contenant éventuellement un autre hétéroatome choisi parmi l'oxygène, l'azote ou le soufre et éventuellement substitué par un radical alcoyle), sur un dérivé du lupane selon la revendication 1 pour lequel R4 et R5 forment ensemble un radical oxo, puis le cas échéant, élimine les radi eaux protecteurs et transforme éventuellement le produit obtenu en un sel.
10 - Procédé de préparation d'un dérivé du lupane selon la revendication 1, pour lequel R1 et R2 sont ces radicaux methyle, R3 est un atome d'hydrogène et les autres radicaux sont définis comme dans la revendication 1, caractérisé en ce que l'on réduit un dérivé du lupane selon la revendication 1 pour lequel R1 et R3 forment ensemble un radical méthylène et R2 est un radical methyle, puis le cas échéant, élimine les radicaux protecteurs et transforme éventuellement le produit obtenu en un sel.
11 - Procédé de préparation d'un dérivé du lupane selon la revendication 1 , pour lequel R2 est un radical hydroxy, R1 est un radical methyle, R3 est un atome d'hydrogène et les autres radicaux sont définis comme dans la revendication 1, caractérisé en ce que l'on effectue la réduction d'un dérivé du lupane selon la revendication 1, pour lequel R2 et R3 forment ensemole un radical oxo et R1 est un radical methyle, puis le cas échéant, élimine les radicaux protecteurs et transforme éventuellement le produit obtenu en un sel.
12 - Procédé de préparation d'un dérivé du lupane selon la revendicanon 1, pour lequel R1 et R3 forment ensemble un radical oxo, R2 est un radical hydroxy et les autres radicaux sont définis comme dans la revendication 1, caractérisé en ce que l'on oxyde un dérivé du lupane selon la revendication 1 , pour lequel R1 et R3 forment ensemble un radical oxo et R2 est un radical methyle, puis le cas échéant, ëlimme les radicaux protecteurs et transforme éventuellement le produit obtenu en un sel.
13 - Procédé de préparation d'un dérivé du lupane selon la revendication 1, pour lequel X (dans le radical R) représente un radical carbamoyie et les autres radicaux sont définis comme dans la revendication 1, caractérisé en ce que l'on fait agir une amme de formule générale : dans laquelle R', R°, R°°, m et p sont définis comme dans la revendication 1, sur un dérivé du lupane de formule générale :
dans laquelle R1, R2, R3, R4, R5, R6 et R7 sont définis comme dans la revendication 1 et R6 représente un radical de formule générale :
dans laquelle n et R" sont définis comme dans la revendication 1, puis élimine le cas échéant des radicaux protecteurs et transforme éventuellement le produit obtenu en un sel. 14 - Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient au moins un produit selon la revendication 1, à l'état pur ou en association avec tout diluant ou adjuvant compatible et pharmaceutiquement acceptable et/ou en association avec un autre principe actif antiviral, immunomodulateur ou antimicrobien.
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Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5962527A (en) * 1995-03-21 1999-10-05 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Method and composition for treating cancers
US5658947A (en) * 1995-03-21 1997-08-19 Board Of Trustees Of The University Of Illinois Method and composition for selectively inhibiting melanoma using betalinic acid
US5869535A (en) 1995-03-21 1999-02-09 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Method and composition for selectively inhibiting melanoma
US5679828A (en) * 1995-06-05 1997-10-21 Biotech Research Labs, Inc. Betulinic acid and dihydrobetulinic acid derivatives and uses therefor
DE69825446T2 (de) 1997-06-04 2005-09-29 Cornell Research Foundation, Inc. Betulinolderivate
US6403816B1 (en) * 1997-09-30 2002-06-11 Dabur Research Foundation Betulinic acid derivatives having antiangiogenic activity, processes for producing such derivatives and their use for treating tumor associated angiogenesis
ES2281960T3 (es) * 1998-03-02 2007-10-01 The University Of North Carolina At Chapel Hill Derivados acilados de betulina y dihidrobetulina, su preparacion y su uso.
US6369101B1 (en) 1999-02-26 2002-04-09 Regents Of The University Of Minnesota Therapeutic method to treat herpes virus infection
US6392070B1 (en) * 1999-08-10 2002-05-21 Regents Of The University Of Minnesota Birch bark processing and the isolation of natural products from birch bark
DE69917684T2 (de) * 1999-09-09 2005-07-21 Dabur Research Foundation, Sahibabad Betulinsäure-derivate mit antiangiogener wirkung, verfahren zur herstellung solcher derivate und deren verwendung für die behandlung tumorassoziierter angiogenese
EP1309605A1 (fr) 2000-08-18 2003-05-14 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Promedicaments de derives de l'acide betulinique pour le traitement du cancer et du vih
US7488722B2 (en) * 2001-05-11 2009-02-10 University Of Ottawa Anxiolytic Marcgraviaceae compositions containing betulinic acid, betulinic acid derivatives, and methods
GB0128071D0 (en) * 2001-11-22 2002-01-16 Cyclacel Ltd Medicament
RU2211843C1 (ru) * 2002-01-25 2003-09-10 Новосибирский институт органической химии им. Н.Н.Ворожцова СО РАН N'-{n-[3-оксо-20(29)-лупен-28-оил]-9-аминононаноил}-3-амино-3-фенилпропио новая кислота, обладающая иммуностимулирующей и противовирусной активностью
US20040265320A1 (en) * 2003-01-29 2004-12-30 Karl Salzwedel Inhibition of HIV-1 replication by disruption of the processing of the viral capsid-spacer peptide 1 protein
US7537765B2 (en) * 2003-01-29 2009-05-26 Panacos Pharmaceuticals, Inc. Inhibition of HIV-1 replication by disruption of the processing of the viral capsid-spacer peptide 1 protein
US7026305B2 (en) * 2003-04-14 2006-04-11 Meharry Medical College Anti-HIV agents with dual sites of action
US7326717B2 (en) * 2003-05-06 2008-02-05 L'oreal Pyrimidine n-oxide compounds for stimulating the growth of keratin fibers and/or reducing loss thereof
CA2560266A1 (fr) * 2004-03-17 2005-09-29 Panacos Pharmaceuticals, Inc. Sels pharmaceutiques de l'acide 3-<i>o</i>-(3',3'-dimethylsuccinyl)betulinique
WO2005112929A2 (fr) * 2004-05-20 2005-12-01 Cornell Research Foundation, Inc. Activite anti vih-1 de derives de betulinol
US7282521B2 (en) * 2004-05-24 2007-10-16 University Of North Carolina At Chapel Hill Anti-retroviral moronic acid derivatives
EA200700611A1 (ru) * 2004-09-10 2008-02-28 Бридж Б. Саксена Производные бетулинола в качестве противораковых агентов
TW200628161A (en) * 2004-11-12 2006-08-16 Panacos Pharmaceuticals Inc Novel betulin derivatives, preparation thereof and use thereof
US20060193804A1 (en) * 2005-02-24 2006-08-31 L'oreal Haircare use of cyclic amine derivatives
CA2604720A1 (fr) 2005-04-12 2006-10-19 Panacos Pharmaceuticals, Inc. Polymorphes de di-n-methyle-d-glucamined'acide 3-o-(3',3'-dimethylsuccinyle)betulinique
JP2008543945A (ja) * 2005-06-22 2008-12-04 ミリアド ジェネティクス， インコーポレイテッド 抗ウイルス化合物
WO2007098247A2 (fr) * 2006-02-21 2007-08-30 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Taraxastanes substitués utiles dans le traitement d'infections virales
US20080039428A1 (en) * 2006-06-29 2008-02-14 Panacos Pharmaceuticals, Inc. Antiretroviral combination therapy
WO2008115281A2 (fr) * 2006-10-16 2008-09-25 Myriad Genetics, Inc. Composés de traitement d'infections virales
RU2317996C1 (ru) * 2006-10-30 2008-02-27 Институт нефтехимии и катализа РАН N'-{n-[3-оксо-лупан-28-оил]-9-аминононаноил}-3-амино-3-фенил-пропионовая кислота и ее соли как противовирусные и иммуностимулирующие агенты
US20090062243A1 (en) * 2007-08-03 2009-03-05 Advanced Life Sciences, Inc. Lupane-Type Triterpenoids Modified at 30-Position and Analogues Thereof
FR2920309B1 (fr) 2007-08-28 2010-05-28 Galderma Res & Dev Utilisation de travoprost pour traiter la chute des cheveux
RU2353623C1 (ru) * 2007-09-17 2009-04-27 Новосибирский институт органической химии им. Н.Н. Ворожцова СО РАН (НИОХ СО РАН) Корректор цитостатической полихимиотерапии
RU2357973C1 (ru) * 2007-09-26 2009-06-10 ИНСТИТУТ НЕФТЕХИМИИ И КАТАЛИЗА Российской Академии Наук Способ получения дипептидов лупанового ряда
WO2009090063A1 (fr) * 2008-01-16 2009-07-23 Jado Technologies Gmbh Dérivés de sapogénine stéroïde, androstane et sapogénine triterpénoïde pour le traitement et la prévention de maladies infectieuses
FR2929118B1 (fr) 2008-03-28 2010-05-07 Oreal Utilisation de l'association de madecassoside et/ou de terminoloside et d'une arginine pour induire et/ou stimuler la croissance de ces fibres keratiniques humaines et/ou freiner leur chute
FR2929117B1 (fr) 2008-03-28 2010-05-07 Oreal Utilisation de l'association du 2,4-diaminopyrimidine 3-n-oxyde et du madecassosside et/ou du terminoloside pour induire et/ou stimuler la croissance de ces fibres keratiniques humaines et/ou freiner leur chute
KR100941595B1 (ko) * 2008-06-05 2010-02-11 주식회사 알앤엘바이오 바이러스 억제제로서 유용한 트리테르페노이드계 화합물
RU2385324C1 (ru) * 2008-07-07 2010-03-27 Новосибирский институт органической химии им. Н.Н. Ворожцова Сибирского отделения Российской академии наук (НИОХ СО РАН) (статус государственного учреждения) Корректор паранеопластических повреждений и токсических эффектов цитостатической полихимиотерапии
FR2949052B1 (fr) 2009-08-13 2015-03-27 Oreal Procede de traitement cosmetique du cuir chevelu.
CN102558280B (zh) * 2011-11-18 2014-09-17 温州大学 一种30-卤代桦木酸的生产方法
WO2013158649A1 (fr) 2012-04-16 2013-10-24 Case Western Reserve University Compositions et méthodes pour moduler l'activité 15-pgdh
JP6186010B2 (ja) * 2013-02-06 2017-08-23 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｈｉｖ成熟阻害活性を有するｃ−１９修飾トリテルペノイド類
EP3057973B1 (fr) 2013-10-15 2019-09-04 Case Western Reserve University Compositions comportant un inhibiteur de 15-pdgh pour la cicatrisation de plaies
CN104045680B (zh) 2014-06-20 2016-09-14 东北林业大学 桦木醇的乙酰氨基酸酰类衍生物及其制备方法
AU2015357489A1 (en) 2014-12-05 2017-07-06 Case Western Reserve University Compositions and methods of modulating S-nitrosylation
PL227790B1 (pl) 2015-08-13 2018-01-31 Slaski Univ Medyczny W Katowicach Fosfoniany acetylenowych pochodnych betuliny o działaniu przeciwnowotworowym, sposób ich wytwarzania i zastosowanie.
US10688037B1 (en) 2015-12-31 2020-06-23 Nutraceutical Wellness Inc. Compositions and method for hair regrowth
EP3548035A4 (fr) 2016-11-30 2020-07-22 Case Western Reserve University Combinaisons d'inhibiteurs de 15-pgdh avec des corcostéroïdes et/ou des inhibiteurs du tnf et leurs utilisations
CN110573154A (zh) 2017-02-06 2019-12-13 卡斯西部储备大学 调节短链脱氢酶活性的组合物和方法
PL237998B1 (pl) 2018-05-28 2021-06-28 Narodowy Inst Lekow Fosfonowe pochodne kwasu 3-karboksyacylobetulinowego, sposób ich otrzymywania oraz ich zastosowanie
SG11202105345TA (en) 2018-11-21 2021-06-29 Univ Case Western Reserve Compositions and methods of modulating short-chain dehydrogenase activity
JP2023527279A (ja) 2020-05-20 2023-06-28 ロデオ・セラピューティクス・コーポレイション 短鎖デヒドロゲナーゼ活性を調節する組成物及び方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See references of WO9310142A1 *

Also Published As

Publication number Publication date
US5468888A (en) 1995-11-21
WO1993010142A1 (fr) 1993-05-27
CA2121692A1 (fr) 1993-05-27
FR2683531B1 (fr) 1993-12-31
HUT66959A (en) 1995-01-30
EP0542622A1 (fr) 1993-05-19
TW224103B (fr) 1994-05-21
FR2683531A1 (fr) 1993-05-14
YU97492A (sh) 1995-12-04
FI942181A0 (fi) 1994-05-11
IL103731A0 (en) 1993-04-04
HU9401353D0 (en) 1994-08-29
MX9206503A (es) 1993-05-01
FI942181A7 (fi) 1994-05-11

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