EA036236B1 - БИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ МОНОВАЛЕНТНЫЕ ДИАТЕЛА, КОТОРЫЕ СПОСОБНЫ СВЯЗЫВАТЬСЯ С gpA33 И CD3, И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ - Google Patents
БИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ МОНОВАЛЕНТНЫЕ ДИАТЕЛА, КОТОРЫЕ СПОСОБНЫ СВЯЗЫВАТЬСЯ С gpA33 И CD3, И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ Download PDFInfo
- Publication number
- EA036236B1 EA036236B1 EA201690447A EA201690447A EA036236B1 EA 036236 B1 EA036236 B1 EA 036236B1 EA 201690447 A EA201690447 A EA 201690447A EA 201690447 A EA201690447 A EA 201690447A EA 036236 B1 EA036236 B1 EA 036236B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- domain
- seq
- polypeptide chain
- gpa33
- binding
- Prior art date
Links
- 238000009739 binding Methods 0.000 title claims abstract description 209
- 230000027455 binding Effects 0.000 title claims abstract description 207
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 377
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 330
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 330
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 60
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 45
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 26
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 20
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 78
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 78
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 78
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 51
- 101800001707 Spacer peptide Proteins 0.000 claims description 43
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 34
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 32
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 25
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 25
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 18
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 18
- OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 Chemical compound C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N 0.000 claims description 17
- 101710176384 Peptide 1 Proteins 0.000 claims description 17
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 15
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 13
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 13
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 13
- 102100034231 Cell surface A33 antigen Human genes 0.000 claims description 9
- 101710165668 Cell surface A33 antigen Proteins 0.000 claims description 9
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 9
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 8
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 6
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 18
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 87
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 73
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 33
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 30
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 28
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 26
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 18
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 18
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 14
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 14
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 13
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 12
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 12
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 12
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 12
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 12
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 11
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 11
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 11
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 10
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 10
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 10
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 8
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 8
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 8
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 8
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 8
- 101000946860 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Proteins 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 102100035794 T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Human genes 0.000 description 7
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 7
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 7
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 7
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 7
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 6
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 6
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 6
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 6
- 238000012063 dual-affinity re-targeting Methods 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101000917824 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Proteins 0.000 description 5
- 102100029205 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Human genes 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 5
- 238000000375 direct analysis in real time Methods 0.000 description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 5
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 5
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 5
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 4
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 4
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 4
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 4
- 102000004584 Somatomedin Receptors Human genes 0.000 description 4
- 108010017622 Somatomedin Receptors Proteins 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 230000002494 anti-cea effect Effects 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 4
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 230000006334 disulfide bridging Effects 0.000 description 4
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 4
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 231100000416 LDH assay Toxicity 0.000 description 3
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 3
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 3
- 238000002843 lactate dehydrogenase assay Methods 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 description 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 2
- 206010052360 Colorectal adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 2
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 2
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 2
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 101000996823 Homo sapiens Cell surface A33 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102100036887 Immunoglobulin heavy variable 1-2 Human genes 0.000 description 2
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 2
- -1 Polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 2
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000054366 human GPA33 Human genes 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 2
- 238000011363 radioimmunotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 208000002491 severe combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RNAMYOYQYRYFQY-UHFFFAOYSA-N 2-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-6-methoxy-n-(1-propan-2-ylpiperidin-4-yl)-7-(3-pyrrolidin-1-ylpropoxy)quinazolin-4-amine Chemical compound N1=C(N2CCC(F)(F)CC2)N=C2C=C(OCCCN3CCCC3)C(OC)=CC2=C1NC1CCN(C(C)C)CC1 RNAMYOYQYRYFQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 2-(ethylamino)ethanol Chemical compound CCNCCO MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 108700031308 Antennapedia Homeodomain Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000018651 Epithelial Cell Adhesion Molecule Human genes 0.000 description 1
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 1
- 101000917826 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Proteins 0.000 description 1
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 1
- WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N Hydroxyethyl methacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCO WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000026139 Memory disease Diseases 0.000 description 1
- 206010054949 Metaplasia Diseases 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101100069130 Mus musculus Gpa33 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 229920002732 Polyanhydride Polymers 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000219061 Rheum Species 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000194015 Streptococcus sp. G148 Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108700042075 T-Cell Receptor Genes Proteins 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric Acid Chemical class [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000019552 anatomical structure morphogenesis Effects 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229960002092 busulfan Drugs 0.000 description 1
- 230000002308 calcification Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000005773 cancer-related death Effects 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000006041 cell recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 239000000599 controlled substance Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 229940029030 dendritic cell vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- XQRLCLUYWUNEEH-UHFFFAOYSA-L diphosphonate(2-) Chemical compound [O-]P(=O)OP([O-])=O XQRLCLUYWUNEEH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000011038 discontinuous diafiltration by volume reduction Methods 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 229940126534 drug product Drugs 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 239000005038 ethylene vinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 208000021045 exocrine pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 208000010749 gastric carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000003709 heart valve Anatomy 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 238000012623 in vivo measurement Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 235000014413 iron hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- NCNCGGDMXMBVIA-UHFFFAOYSA-L iron(ii) hydroxide Chemical class [OH-].[OH-].[Fe+2] NCNCGGDMXMBVIA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000015689 metaplastic ossification Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940043515 other immunoglobulins in atc Drugs 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 1
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M sodium octadecanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 1
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000009258 tissue cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 238000002689 xenotransplantation Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3046—Stomach, Intestines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/35—Valency
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/524—CH2 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/526—CH3 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/624—Disulfide-stabilized antibody (dsFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/626—Diabody or triabody
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биспецифическим моновалентным диателам, которые содержат две полипептидные цепи и которые характеризуются наличием по меньшей мере одного сайта связывания, специфического в отношении эпитопа CD3, и одного сайта связывания, специфического в отношении эпитопа gpA33 (т.е. "gpA33 CD3 биспецифическое моновалентное диатело"). Изобретение также относится к биспецифическим моновалентным диателам, которые содержат домен Fc иммуноглобулина ("биспецифические моновалентные Fc-диатела") и состоят из трех полипептидных цепей и которые характеризуются наличием по меньшей мере одного сайта связывания, специфического в отношении эпитопа gpA33, и одного сайта связывания, специфического в отношении эпитопа CD3 (т.е. "gpA33 CD3 биспецифическое моновалентное Fc-диатело"). Биспецифические моновалентные диатела и биспецифические моновалентные Fc-диатела согласно изобретению способны одновременно связываться с gpA33 и CD3. Изобретение относится к фармацевтическим композициям, которые содержат такие биспецифические моновалентные диатела или такие биспецифические моновалентные Fc-диатела. Изобретение дополнительно относится к способам применения таких диател в лечении злокачественной опухоли и других заболеваний и состояний.
Description
Ссылки на родственные заявки
Согласно заявке на данное изобретение испрашивается приоритет в соответствии с заявками на выдачу патентов США № 61/869528 (поданной 23 августа 2013 г.; в стадии рассмотрения) и 61/907691 (поданной 22 ноября 2013 г.; в стадии рассмотрения) и заявкой на выдачу европейского патента № 13198859 (поданной 20 декабря 2013 г.), каждая из которых полностью включена в настоящий документ посредством ссылки.
Ссылка на перечень последовательностей
Настоящее изобретениеа включает в себя один или несколько перечней последовательностей в соответствии с 37 C.F.R. 1.821 et seq., которые раскрыты как на бумажном, так и на машиночитаемом носителе и чьи бумажные и машиночитаемые раскрытия полностью включены в настоящий документ посредством ссылки.
Область техники, к которой относится настоящее изобретение
Настоящее изобретение относится к биспецифическим моновалентным диателам, которые содержат две полипептидные цепи и которые характеризуются наличием одного сайта связывания, специфического в отношении эпитопа gpA33, и одного сайта связывания, специфического для эпитопа CD3 (т.е. gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело). Настоящее изобретение также относится к биспецифическим моновалентным диателам, которые содержат домен Fc иммуноглобулина (биспецифические моновалентные Fc-диатела) и состоит из трех полипептидных цепей и которые характеризуются наличием одного сайта связывания, специфического в отношении эпитопа gpA33, и одного сайта связывания, специфического в отношении эпитопа CD3 (т.е. gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное Fc-диатело). Биспецифические моновалентные диатела и биспецифические моновалентные Fc-диатела согласно настоящему изобретению способны одновременно связываться с gpA33 и CD3. Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, которые содержат такие биспецифические моновалентные диатела или такие биспецифические моновалентные Fc-диатела. Настоящее изобретение дополнительно относится к способам применение таких диател в лечении злокачественной опухоли и других заболеваний и состояний.
Предшествующий уровень техники настоящего изобретения
I. gpA33.
Колоректальный рак принадлежит к числу самых распространенных злокачественных опухолей в западном мире и является ведущей причиной смертельных исходов, вызванных злокачественными опухолями (Silverberg, E. et al. (1989), Cancer Statistics, 1989, CA Cancer J Clin. 39(1):3-20). Одной потенциально применимой мишенью для рака толстой кишки является трансмембранный гликопротеин А33 с молекулярной массой 43 кДа (gpA33) ((Heath, J.K. et al. (1997), The Human A33 Antigen Is A Transmembrane Glycoprotein And A Novel Member Of The Immunoglobulin Superfamily, Proc. Natl. Acad. Sci.) (U.S.A.) 94(2):469-474; Ritter, G. et al. (1997), Characterization Of Posttranslational Modifications Of Human A33 Antigen, A Novel Palmitoylated Surface Glycoprotein Of Human Gastrointestinal Epithelium, Biochem. Biophys. Res. Commun. 236(3):682-686). gpA33 был впервые открыт путем получения моноклональных мышиных антител против происходящей из карциномы поджелудочной железы человека клеточной линии ASPC1. Обнаружили, что одно антитело (MAb А33) реагировало с белком клеточной поверхности с молекулярной массой 43 кДа, который в связи с этим обозначили как gpA33 (Wong, N.A. et al. (2006), EpCAM and gpA33 Are Markers Of Barrett's Metaplasia, J. Clin. Pathol. 59(3):260-263).
gpA33 представляет собой трансмембранный белок семейства адгезивных молекул, обеспечивающих межклеточный контакт; Abud, H.E. et al. (2000), The Murine А33 Antigen Is Expressed At Two Distinct Sites During Development, The ICM Of The Blastocyst and The Intestinal Epithelium, Mech. Dev. 98(1-2):111-114; Barendswaard, E.C. et al. (1998), Rapid and Specific Targeting Of Monoclonal Antibody A33 To A Colon Cancer Xenograft In Nude Mice, Int. J. Oncol. 12(1):45-53; Panjideh, H. et al. (2008), Biodistribution and Efficacy Of [131I]A33scFv::CDy, A Recombinant Antibody-Enzyme Protein For Colon Cancer, Int. J. Oncol. 32(4):925-930). Несмотря на то, что функциональная значимость антигена А33 еще не выяснена, было показано, что он опосредует восстановление слизистой толстой кишки в животной модели колита и равномерно экспрессируется в >95% всех колоректальных карцином. Экспрессия А33 является равномерной в течение всех стадий заболевания, а также при любой степени гистологической дифференциации, и антиген не секретируется или не выделяется в кровоток обнаруживаемым образом (Infante, J.R. et al. (2013), Safety, Pharmacokinetics
And Pharmacodynamics Of The Anti-A33 Fully-Human Monoclonal Antibody, KRN330, In Patients With Advanced Colorectal Cancer, Eur. J. Cancer. 49(6): 1169-1175; Panjideh, H. et al. (2008), Biodistribution And Efficacy Of [131I]A33scFv:CDy, A Recombinant Antibody-Enzyme Protein For Colon Cancer, Int. J. Oncol. 32(4):925-930). Напротив, было идентифицировано только несколько случаев экспрессии не относящегося к желудочно-кишечному тракту антигена А33 (Johnstone, C.N. et al. (2000), Characterization Of Mouse A33 Antigen, A Definitive Marker For Basolateral Surfaces Of Intestinal Epithelial Cells, Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 279(3):G500-G510).
- 1 036236
В связи с тем, что экспрессия антигена А33 в высокой степени ограничена, исследователи изучали возможность лечения опосредованных А33 злокачественных опухолей с помощью антител (Infante, J.R. et al. (2013), Safety, Pharmacokinetics And Pharmacodynamics Of The Anti-A33 Fully-Human Monoclonal Antibody, KRN330, In Patients With Advanced Colorectal Cancer, Eur. J. Cancer. 49(6): 1169-1175; Ackerman, M.E. et al. (2008), A33 Antigen Displays Persistent Surface Expression, Cancer Immunol. Immunother. 57(7):1017-1027; Barendswaard, E.C. et al. (2001), Relative Therapeutic Efficacy Of 125I-And 131I-Labeled Monoclonal Antibody A33 In A Human Colon Cancer Xenograft, J. Nucl. Med. 42(8):1251-1256; Carrasquillo, J.A. et al. (2011), 124I-huA33 Antibody PET Of Colorectal Cancer, J. Nucl. Med. 52(8):11731180; Chong, G et al. (2005), Phase I Trial Of 131I-HuA33 In Patients With Advanced Colorectal Carcinoma, Clin. Cancer Res. 11(13):4818-4826; Deckert, P.M. et al. (2000), Pharmacokinetics And Microdistribution Of Polyethylene Glycol-Modified Humanized A33 Antibody Targeting Colon Cancer Xenografts, Int. J. Cancer. 87(3):382-390; Johnston, A.P. et al. (2012), Targeting Cancer Cells: Controlling The Binding And Internalization Of Antibody-Functionalized Capsules ACS Nano. 6(8):6667-6674; Koppe, M.J. et al. (2005), Radioimmunotherapy And Colorectal Cancer, Br. J. Surg. Mar; 92(3):264-276; Sakamoto, J. et al. (2006), A Phase I Radioimmunolocalization Trial Of Humanized Monoclonal Antibody HuA33 In Patients With Gastric Carcinoma Cancer Sci) 97(11): 1248-1254; Scott, A.M. et al. (2005), A Phase I Trial Of Humanized Monoclonal Antibody A33 In Patients With Colorectal Carcinoma: Biodistribution, Pharmacokinetics, And Quantitative Tumor Uptake, Clin. Cancer Res. 11(13):4810-4817; Tschmelitsch, J. et al. (1997), Enhanced Antitumor Activity Of Combination Radioimmunotherapy (131I-Labeled Monoclonal Antibody Λ33) With Chemotherapy (Fluorouracil),Cancer Res. 57(11):2181-2186). Аналогично фрагменты таких антител также были исследованы в отношении их потенциальной терапевтической роли (Coelho, V. et al. (2007), Design, Construction, And In Vitro Analysis Of A33scFv::CDy, A Recombinant Fusion Protein For Antibody-Directed Enzyme Prodrug Therapy In Colon Cancer, Int. J. Oncol. 31(4):951-957).
II. CD3.
CD3 представляет собой Т-клеточный корецептор, состоящий из четырех различных цепей (Wucherpfennig, K.W. et al. (2010), Structural Biology Of The T-Cell Receptor: Insights Into Receptor Assembly, Ligand Recognition, And Initiation Of Signaling, Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2(4):a005140; pages 1-14; Chetty, R. et al. (1994), CD3: Structure, Function And The Role Of Immunostaining In Clinical Practice, J. Pathol. 173:303-307).
У млекопитающих комплекс CD3 содержит цепь CD3y, цепь CD3δ и две цепи CD3ε. Указанные цепи связываются с молекулой, известной как Т-клеточный рецептор (TCR), для создания сигнала активации в Т-лимфоцитах. При отсутствии CD3 не происходит правильная сборка TCR, и они распадаются (Thomas, S. et al. (2010), Molecular Immunology Lessons From Therapeutic T-Cell Receptor Gene Transfer, Immunology 129(2):170-177). CD3 обнаружен связанным с мембранами всех зрелых Т -клеток и практически ни с каким другим типом клеток (см. Janeway, C.A. et al. (2005), в Immunobiology: The Immune System In Health And Disease, 6th ed. Garland Science Publishing, NY, pp. 214-216; Sun, Z.J. et al. (2001), Mechanisms Contributing To T Cell Receptor Signaling And Assembly Revealed By The Solution Structure Of An Ectodomain Fragment Of The CD3ε:γ Heterodimer, Cell 105(7):913-923; Kuhns, M.S. et al. (2006), Deconstructing The Form And Function Of The TCR/CD3 Complex, Immunity. 2006 Feb;24(2):133-139).
III. Биспецифические диатела.
Способность интактного, немодифицированного антитела (например, IgG) связывать эпитоп антигена зависит от присутствия вариабельных доменов на легких и тяжелых цепях иммуноглобулина (т.е. доменов VL и VH соответственно). Конструкция диатела основана на одноцепочечном конструкте Fv (scFv) (см., например, Holliger et al. (1993), Diabodies: Small Bivalent And Bispecific Antibody Fragments, Proc. Natl. Acad. Sci) (U.S.A.) 90:6444-6448; патентную публикацию США № 2004/0058400 (Hollinger et al.); US 2004/0220388 (Mertens et al.); Alt et al. (1999) FEBS Lett. 454(1-2):90-94; Lu, D. et al. (2005), A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity, J. Biol. Chem. 280(20):1966519672; WO 02/02781 (Mertens et al.); Olafsen, T. et al. (2004), Covalent Disulfide-Linked Anti-CEA Diabody Allows Site-Specific Conjugation And Radiolabeling For Tumor Targeting Applications, Protein Eng. Des Sel. 17(1):21-27; Wu, A. et al. (2001), Multimerization Of A Chimeric Anti-CD20 Single Chain Fv-Fv Fusion Protein Is Mediated Through Variable Domain Exchange, Protein Engineering 14(2): 1025-1033; Asano et al. (2004), A Diabody For Cancer Immunotherapy And Its Functional Enhancement By Fusion Of Human Fc Region, Abstract 3P-683, J. Biochem. 76(8):992; Takemura, S. et al. (2000), Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System, Protein Eng. 13(8):583-588; Baeuerle, P.A. et al. (2009), Bispecific T-Cell Engaging Antibodies For Cancer Therapy Cancer Res. 69(12):4941-4944).
Взаимодействие легкой цепи антитела и тяжелой цепи антитела и, в частности, взаимодействие его доменов VL и VH формирует один из сайтов связывания с эпитопом антитела. Напротив, конструкт scFv содержит домен VL и VH антитела, содержащийся в одной полипептидной цепи, причем домены отделены гибким линкером, длина которого достаточна для обеспечения возможности самосборки двух доменов в функциональный сайт связывания с эпитопом. Если самосборка доменов VL и VH становится не- 2 036236 возможной вследствие недостаточной длины линкера (меньше чем приблизительно 12 аминокислотных остатков), два конструкта scFv взаимодействуют друг с другом с образованием бивалентной молекулы, в которой VL одной цепи ассоциируются с VH другой (рассмотрено в Marvin et al. (2005), Recombinant
Approaches To IgG-Like Bispecific Antibodies, Acta Pharmacol. Sin. 26:649-658).
Природные антитела способны связываться только с одним видом эпитопов (т.е. являются моноспецифическими), хотя они могут связываться с множественными копиями этого вида (т.е. проявляя бивалентность или мультивлентность). В известном уровне техники сообщалось о способности производить диатела, которые отличаются от таких природных антител тем, что они способны связывать два или больше различных видов эпитопов (т.е. проявляя биспецифичность или мультиспецифичность в дополнение к бивалентности или мультивалентности) (см., например, Holliger et al. (1993), Diabodies: Small Bivalent And Bispecific Antibody Fragments, Proc. Natl. Acad. Sci) (U.S.A.), 90:6444-6448; US 2004/0058400 (Hollinger et al.); US 2004/0220388 (Mertens et al.); Alt et al. (1999) FEBS Lett. 454(12):90-94; Lu, D. et al. (2005), A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity, J. Biol. Chem. 280(20):19665-19672; WO 02/02781 (Mertens et al.); Mertens, N. et al, New Recombinant Bi- and Trispecific Antibody Derivatives, In: NOVEL FRONTIERS IN THE Production Of Compounds For Biomedical Use, A. VanBroekhoven et al. (Eds.), Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, The Netherlands (2001), pages 195-208; Wu, A. et al. (2001), Multimerization Of A Chimeric Anti-CD20 Single Chain Fv-Fv Fusion Protein Is Mediated Through Variable Domain Exchange, Protein Engineering 14(2):10251033; Asano et al. (2004), A Diabody For Cancer Immunotherapy And Its Functional Enhancement By Fusion Of Human Fc Region, Abstract 3P-683, J. Biochem. 76(8):992; Takemura, S. et al. (2000), Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System, Protein Eng. 13(8):583-588; Baeuerle, P.A. et al. (2009), Bispecific T-Cell Engaging Antibodies For Cancer Therapy, Cancer Res. 69(12):4941-4944).
Обеспечение не моноспецифическими диателами предоставляет существенное преимущество: способность колигирования и колокализации клеток, которые экспрессируют различные эпитопы. Таким образом, бивалентные диатела характеризуются широким диапазоном применений, включая в себя терапию и иммунодиагностику. Бивалентность обеспечивает возможность большой гибкости в конструировании и разработке диатела в различных применениях, обеспечивая повышенную авидность в отношении мультимерных антигенов, перекрестную сшивку различных антигенов и направленное нацеленное воздействие на конкретные типы клеток на основании присутствия обоих целевых антигенов. В связи с их повышенной валентностью низкие скорости диссоциации и быстрое выведение из циркуляции (для диател небольшого размера, составляющего ~50 кДа или ниже), известные в настоящей области техники молекулы диател, также продемонстрировали конкретное применение в области визуализации опухолей (Fitzgerald et al. (1997), Improved Tumour Targeting By Disulphide Stabilized Diabodies Expressed In Pichia pastoris, Protein Eng. 10:1221). Особое значение представляет колигирование различных клеток, например перекрестная сшивка цитотоксических Т-клеток с опухолевыми клетками (Staerz et al. (1985), Hybrid Antibodies Can Target Sites For Attack By T Cells, Nature 314:628-631, and Holliger et al. (1996), Specific Killing Of Lymphoma Cells By Cytotoxic T-Cells Mediated By A Bispecific Diabody, Protein Eng. 9:299-305).
Домены связывания с эпитопом диатела также могут быть направлены на поверхностную детерминанту любой иммунной эффекторной клетки, такой как CD3, CD16, CD32 или CD64, которые экспрессируются на Т-лимфоцитах, клетках - естественных киллерах (NK) или других мононуклеарных клетках. Во многих исследованиях также обнаружили, что связывание диатела с детерминантами эффекторных клеток, например, рецепторами Fcy (FcyR) активирует эффекторную клетку (Holliger et al. (1996), Specific Killing Of Lymphoma Cells By Cytotoxic T-Cells Mediated By A Bispecific Diabody, Protein Eng. 9:299-305; Holliger et al. (1999), Carcinoembryonic Antigen (CEA)-Specific T-cell Activation In Colon Carcinoma Induced By Anti-CD3 x Anti-CEA Bispecific Diabodies And В7 x Anti-CEA Bispecific Fusion Proteins, Cancer Res. 59:2909-2916; международные патентные публикации № WO 2006/113665; WO 2008/157379; WO 2010/080538; WO 2012/018687; WO 2012/162068). Как правило, активация эффекторных клеток запускается связыванием антигена, связанного антителом, с эффекторной клеткой посредством взаимодействия Fc-FcyR; таким образом, в связи с этим молекулы диател согласно настоящему изобретению могут проявлять Ig-подобную функциональность, независимо от того, содержат ли они домен Fc (например, согласно результатам любого анализа эффекторной функции, известного в настоящей области техники или представленного в качестве примера в настоящем документе (например, анализа ADCC)). Путем перекрестной сшивки опухолевых и эффекторных клеток диатело не только приводит эффекторную клетку в пространственную близость относительно опухолевых клеток, но приводит к эффективному лизису опухолевых клеток (см., например, Cao et al. (2003), Bispecific Antibody Conjugates In Therapeutics, Adv. Drug. Deliv. Rev. 55:171-197).
Тем не менее, вышеперечисленные преимущества сталкиваются с существенной стоимостью. Образование таких не моноспецифических диател требует успешной сборки двух или больше отдельных и
- 3 036236 различных полипептидов (т.е. такое образование требует, чтобы диатела образовывались посредством гетеродимеризации различных видов полипептидных цепей). Этот факт контрастирует с моноспецифическими диателами, которые образуются посредством гомодимеризации идентичных полипептидных цепей. Поскольку необходимо предоставить по меньшей мере два несходных полипептида (т.е. два вида полипептидов) для образования не моноспецифического диатела и поскольку гомодимеризация таких полипептидов приводит к неактивным молекулам (Takemura, S. et al. (2000), Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System, Protein Eng. 13(8):583-588), получение таких полипептидов должно осуществляться таким путем, который предотвратит образование ковалентных связей между полипептидами одного и того же вида (Takemura, S. et al. (2000), Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System, Protein Eng. 13(8):583-588). В связи с этим в настоящей области техники раскрыто нековалентное связывание таких полипептидов (см., например, Olafsen et al. (2004), Covalent Disulfide-Linked Anti-CEA Diabody Allows Site-Specific Conjugation And Radiolabeling For Tumor Targeting Applications, Prot. Engr. Des. Sel. 17:21-27; Asano et al. (2004), A Diabody For Cancer Immunotherapy And Its Functional Enhancement By Fusion Of Human Fc Region, Abstract 3P-683, J. Biochem. 76(8):992; Takemura, S. et al. (2000), Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System, Protein Eng. 13(8):583-588; Lu, D. et al. (2005), A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity, J. Biol. Chem. 280(20):19665-19672).
Тем не менее в настоящей области техники установлено, что биспецифические моновалентные диатела, состоящие из нековалентно связанных полипептидов, являются нестабильными и легко диссоциируются до нефункциональных мономеров (см. например, Lu, D. et al. (2005), A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity, J. Biol. Chem. 280(20): 19665-19672).
Ввиду такой проблемы в настоящей области техники добились успеха в разработке стабильных, ковалентно связанных гетеродимерных не моноспецифических диател (см., например, международные патентные публикации № WO 2006/113665; WO 2008/157379; WO 2010/080538; WO 2012/018687; WO 2012/162068; Johnson, S. et al. (2010), Effector Cell Recruitment With Novel Fv-Based Dual-Affinity Re-Targeting Protein Leads To Potent Tumor Cytolysis And In Vivo B-Cell Depletion, J. Molec. Biol. 399(3):436-449; Veri, M.C. et al. (2010), Therapeutic Control Of В Cell Activation Via Recruitment Of Fcgamma Receptor IIb (CD32B) Inhibitory Function With A Novel Bispecific Antibody Scaffold, Arthritis Rheum. 62(7): 1933-1943; Moore, P.A. et al. (2011), Application Of Dual Affinity Retargeting Molecules To Achieve Optimal Redirected T-Cell Killing Of B-Cell Lymphoma, Blood 117(17):4542-4551; патентные публикации США № 2012/0294796 и 2013/0149236). Такие подходы предусматривают конструирование одного или нескольких цистеиновых остатков в каждом из используемых видов полипептидов. Например, было показано, что добавление цистеинового остатка к С-концу таких конструктов обеспечивает образование дисульфидной связи между полипептидными цепями, стабилизируя полученный гетеродимер, не создавая помехи для характеристик связывания бивалентной молекулы.
Были описаны диатела и другие иммуноглобулины, предположительно характеризующиеся специфичностью в отношении любого или обоих из gpA33 и CD3 (см., например, патентные публикации США № 2012/0014957; 2012/0034160; 2012/0087858; 2012/0189541; 2012/0195900; 2012/0201746; 2012/0237442; 2012/0263722; 2012/0258108 и 2012/0276608).
Несмотря на такой успех, получение стабильных, функциональных гетеродимерных, не моноспецифических диател может быть дополнительно усовершенствовано путем тщательного рассмотрения и размещения используемых доменов в полипептидных цепях. Таким образом, настоящее изобретение относится к предоставлению специфических полипептидов, которые детально разработаны для получения, посредством связывания ковалентной связью, гетеродимерных диател и гетеродимерных Fc-диател, которые способны одновременно связывать gpA33 и CD3.
Краткое раскрытие настоящего изобретения
Настоящее изобретение относится к gpA33 х CD3 биспецифическим моновалентным диателам. Согласно конкретным вариантам осуществления диатела согласно настоящему изобретению дополнительно содержат домен Fc-области иммуноглобулина (т.е. домен Fc ) (gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные Fc-диатела) или альбуминсвязывающий домен (ABD) (gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела с ABD) для увеличения периода полужизни in vivo. gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела согласно настоящему изобретению и gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные Fc-диатела согласно настоящему изобретению содержат две различные полипептидные цепи, которые ассоциируются друг с другом гетеродимерным образом с образованием одного сайта связывания, специфического в отношении эпитопа gpA33, и одного сайта связывания, специфического в отношении эпитопа CD3. Таким образом, gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела и gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные Fc-диатела согласно настоящему изобретению являются моновалентными в том смысле, что они способны связываться только с одной копией эпитопа gpA33
- 4 036236 и только с одной копией эпитопа CD3, но являются биспецифическими в том смысле, что одно диатело способно связываться одновременно с эпитопом gpA33 и с эпитопом CD3.
gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела согласно настоящему изобретению состоят из двух полипептидных цепей (первой и второй полипептидных цепей), которые ковалентно связаны друг с другом, например, с помощью связывания дисульфидным мостиком цистеиновых остатков, расположенных в пределах каждой полипептидной цепи. gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные Fc-диатела согласно настоящему изобретению состоят из трех полипептидных цепей (первой, второй и третьей полипептидных цепей), причем первая и вторая полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом, и первая и третья полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом. Биспецифические моновалентные диатела и биспецифические моновалентные Fc-диатела согласно настоящему изобретению способны одновременно связываться с gpA33 и CD3. Настоящее изобретение относится к таким gpA33 х CD3 биспецифическим моновалентным диателам и gpA33 х CD3 биспецифическим моновалентным Fc-диателам и к фармацевтическим композициям, которые содержат такие биспецифические моновалентные диатела или такие биспецифические моновалентные Fc-диатела. Настоящее изобретение дополнительно относится к способам применения таких диател в лечении злокачественной опухоли и других заболеваний и состояний.
Согласно настоящему изобретению предусмотрено биспецифическое моновалентное диатело, причем указанное биспецифическое моновалентное диатело способно специфически связываться с эпитопом гликопротеина А33 (gpA33) и с эпитопом CD3, причем биспецифическое моновалентное диатело содержит первую полипептидную цепь и вторую полипептидную цепь, причем указанная первая и вторая полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом, и при этом:
A) первая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу:
i) домен 1, содержащий субдомен (1А), который содержит домен VL моноклонального антитела, способного связываться с CD3 (VLCD3) (SEQ ID NO: 5); и субдомен (1B), который содержит домен VH моноклонального антитела, способного связываться с gpA33 (VHgpA33) (SEQ ID NO: 27); причем указанные субдомены (1А) и (1B) отделены друг от друга пептидным линкером (SEQ ID NO: 1);
ii) домен 2, причем указанный домен 2 представляет собой K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4) или Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3), причем указанный домен 2 отделен от указанного домена 1 пептидным линкером (SEQ ID NO: 2);
B) вторая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу:
i) домен 1, содержащий субдомен (1А), который содержит домен VL моноклонального антитела, способного связываться с gpA33 (VLgpA33) (SEQ ID NO: 26), и субдомен (1B), который содержит домен VH моноклонального антитела, способного связываться с CD3 (VHCD3) (SEQ ID NO: 25), причем указанные субдомены (1А) и (1В) отделены друг от друга пептидным линкером (SEQ ID NO: 1);
ii) домен 2, причем указанный домен 2 представляет собой Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3) или K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4), причем указанный домен 2 отделен от указанного домена 1 пептидным линкером (SEQ ID NO: 2); и причем указанный домен 2 указанной первой полипептидной цепи и указанный домен 2 указанной второй полипептидной цепи не представляют собой оба Е-спиральных домена или оба K-спиральных домена;
и при этом:
(a) указанный домен VL указанной первой полипептидной цепи и указанный домен VH указанной второй полипептидной цепи образуют антигенсвязывающий домен, способный специфически связываться с эпитопом CD3; и (b) указанный домен VH указанной первой полипептидной цепи и указанный домен VL указанной второй полипептидной цепи образуют антигенсвязывающий домен, способный специфически связываться с эпитопом gpA33.
Согласно настоящему изобретению дополнительно предусмотрено биспецифическое моновалентное диатело, в котором указанная первая полипептидная цепь содержит альбуминсвязывающий домен (SEQ ID NO: 34), причем указанный альбуминсвязывающий домен расположен на С-конце по отношению к указанному домену 2 и отделен от указанного домена 2 линкером 3 (SEQ ID NO: 32).
Согласно настоящему изобретению дополнительно предусмотрено биспецифическое моновалентное Fc-диатело, причем указанное биспецифическое моновалентное Fc-диатело способно специфически связываться с эпитопом гликопротеина А33 (gpA33) и с эпитопом CD3 и содержит домен Fc IgG, причем биспецифическое моновалентное Fc-диатело содержит первую полипептидную цепь, вторую полипептидную цепь и третью полипептидную цепь, причем указанная первая и вторая полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом и указанная первая и третья полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом, и при этом:
А) первая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу:
i) домен 1, содержащий субдомен (1А), который содержит домен VL моноклонального антитела, способного связываться с gpA33 (VLgpA33) (SEQ ID NO: 26), и субдомен (1B), который содержит домен VH моноклонального антитела, способного связываться с CD3 (VHCD3) (SEQ ID NO: 25), причем указан-
- 5 036236 ные субдомены (1А) и (1В) отделены друг от друга пептидным линкером (SEQ ID NO: 1);
ii) домен 2, причем указанный домен 2 представляет собой Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3) или
K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4), причем указанный домен 2 отделен от указанного домена 1 пептидным линкером (SEQ ID NO: 2); и iii) домен 3, содержащий субдомен (3А), который содержит цистеинсодержащий пептид (пептид 1) (SEQ ID NO: 39) и субдомен (3В), который содержит полипептидную часть домена Fc IgG, имеющую домены СН2 и СН3 домена Fc иммуноглобулина IgG; причем указанные домены 3 и 2 отделены друг от друга спейсерным пептидом, характеризующимся последовательностью GGG (линкер 5);
B) вторая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу:
i) домен 1, содержащий субдомен (1А), который содержит домен VL моноклонального антитела, способного связываться с CD3 (VLCD3) (SEQ ID NO: 5), и субдомен (1B), который содержит домен VH моноклонального антитела, способного связываться с gpA33 (VHgpA33) (SEQ ID NO: 27); причем указанные субдомены (1А) и (1B) отделены друг от друга пептидным линкером (SEQ ID NO: 1);
ii) домен 2, причем указанный домен 2 представляет собой K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4) или Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3), причем указанный домен 2 отделен от указанного домена 1 пептидным линкером (SEQ ID NO: 2); и причем указанный домен 2 указанной первой полипептидной цепи и указанный домен 2 указанной второй полипептидной цепи не представляют собой оба Е-спиральных домена или оба K-спиральных домена; и
C) третья полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу домен 3, содержащий:
(1) субдомен (3А), который содержит цистеинсодержащий пептид (пептид 1) (SEQ ID NO: 39); и (2) субдомен (3В), который содержит полипептидную часть домена Fc IgG, имеющую домены СН2 и СН3 домена Fc иммуноглобулина IgG;
и при этом:
(a) указанные полипептидные части доменов Fc IgG указанной первой и третьей полипептидной цепи образуют указанный домен Fc IgG;
(b) указанный домен VL указанной первой полипептидной цепи и указанный домен VH указанной второй полипептидной цепи образуют антигенсвязывающий домен, способный специфически связываться с эпитопом gpA33; и (c) указанный домен VH указанной первой полипептидной цепи и указанный домен VL указанной второй полипептидной цепи образуют антигенсвязывающий домен, способный специфически связываться с эпитопом CD3.
Согласно настоящему изобретению дополнительно предусмотрено биспецифическое моновалентное Fc-диатело, причем указанное биспецифическое моновалентное Fc-диатело способно специфически связываться с эпитопом гликопроениа А33 (gpA33) и с эпитопом CD3 и содержит домен Fc IgG, причем биспецифическое моновалентное Fc-диатело содержит первую полипептидную цепь, вторую полипептидную цепь и третью полипептидную цепь, причем указанная первая и вторая полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом и указанная первая и третья полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом, и при этом:
A) первая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу:
i) домен 3, содержащий субдомен (3А), который содержит цистеинсодержащий пептид (пептид 1) (SEQ ID NO: 39), и субдомен (3В), который содержит полипептидную часть домена Fc IgG, имеющую домены СН2 и СН3 домена Fc иммуноглобулина IgG;
ii) домен 1, содержащий субдомен (1А), который содержит домен VL моноклонального антитела, способного связываться с gpA33 (VLgpA33) (SEQ ID NO: 26), и субдомен (1B), который содержит домен VH моноклонального антитела, способного связываться с CD3 (VHCD3) (SEQ ID NO: 25), причем указанные субдомены (1А) и (1В) отделены друг от друга пептидным линкером (SEQ ID NO: 1);
причем указанные домены 1 и 3 отделены друг от друга спейсерным пептидом (линкер 4) (SEQ ID NO: 38);
iii) домен 2, причем указанный домен 2 представляет собой Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3) или K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4), причем указанный домен 2 отделен от указанного домена 1 пептидным линкером (SEQ ID NO: 2); и
B) вторая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу:
i) домен 1, содержащий субдомен (1А), который содержит домен VL моноклонального антитела, способного связываться с CD3 (VLCD3) (SEQ ID NO: 5); и субдомен (1B), который содержит домен VH моноклонального антитела, способного связываться с gpA33 (VHgpA33) (SEQ ID NO: 27); причем указанные субдомены (1А) и (1B) отделены друг от друга пептидным линкером (SEQ ID NO: 1);
ii) домен 2, причем указанный домен 2 представляет собой K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4) или Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3), причем указанный домен 2 отделен от указанного домена 1 пептидным линкером (SEQ ID NO: 2); и причем указанный домен 2 указанной первой полипептидной цепи и указанный домен 2 указанной второй полипептидной цепи не представляют собой оба Е-спиральных домена или оба K-спиральных домена; и
- 6 036236
С) третья полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу домен 3, содержащий:
(1) субдомен (3А), который содержит цистеинсодержащий пептид (пептид 1) (SEQ ID NO: 39); и (2) субдомен (3В), который содержит полипептидную часть домена Fc IgG, имеющую домены СН2 и СН3 домена Fc иммуноглобулина IgG;
и при этом:
(a) указанные полипептидные части доменов Fc IgG указанных первой и третьей полипептидных цепей образуют указанный домен Fc IgG;
(b) указанный домен VL указанной первой полипептидной цепи и указанный домен VH указанной второй полипептидной цепи образуют антигенсвязывающий домен, способный специфически связываться с эпитопом gpA33; и (c) указанный домен VH указанной первой полипептидной цепи и указанный домен VL указанной второй полипептидной цепи образуют антигенсвязывающий домен, способный специфически связываться с эпитопом CD3.
Согласно настоящему изобретению дополнительно предусмотрено биспецифическое моновалентное Fc-диатело, в котором указанный субдомен (3В) указанной первой полипептидной цепи содержит последовательность, отличную от последовательности указанного субдомена (3В) указанной третьей полипептидной цепи.
Согласно настоящему изобретению дополнительно предусмотрено биспецифическое моновалентное Fc-диатело, в котором указанный субдомен (3В) указанной первой полипептидной цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40 и указанный субдомен (3В) указанной третьей полипептидной цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41.
Согласно настоящему изобретению дополнительно предусмотрено биспецифическое моновалентное Fc-диатело, в котором указанный субдомен (3В) указанной первой полипептидной цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41 и указанный субдомен (3В) указанной третьей полипептидной цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40.
Согласно настоящему изобретению дополнительно предусмотрено биспецифическое моновалентное Fc-диатело, в котором указанный домен 3 указанной первой полипептидной цепи и/или указанный домен 3 указанной третьей полипептидной цепи содержит вариантную последовательность СН2-СН3 относительно последовательности СН2-СН3 области Fc дикого типа, и которая проявляет сниженное связывание с рецептором Fcy относительно связывания, проявляемого указанной областью Fc дикого типа.
Согласно настоящему изобретению дополнительно предусмотрено биспецифическое моновалентное диатело или биспецифическое моновалентное Fc-диатело, в котором указанный домен 2 указанной первой полипептидной цепи содержит Е-спираль (SEQ ID NO: 3) и указанный домен 2 указанной второй полипептидной цепи содержит K-спираль (SEQ ID NO: 4).
Согласно настоящему изобретению дополнительно предусмотрено биспецифическое моновалентное диатело или биспецифическое моновалентное Fc-диатело, в котором указанный домен 2 указанной первой полипептидной цепи содержит К-спираль (SEQ ID NO: 4) и указанный домен 2 указанной второй полипептидной цепи содержит Е-спираль (SEQ ID NO: 3).
Согласно настоящему изобретению дополнительно предусмотрено биспецифическое моновалентное диатело, причем указанное биспецифическое моновалентное диатело способно специфически связываться с эпитопом CD3 и с эпитопом гликопротеина А33 (gpA33), причем указанное биспецифическое моновалентное диатело содержит:
(1) первую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28, и вторую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; или (2) первую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35, и вторую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30;
причем указанная первая и указанная вторая полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом дисульфидной связью.
Согласно настоящему изобретению дополнительно предусмотрено биспецифическое моновалентное Fc-диатело, причем указанное биспецифическое моновалентное Fc-диатело способно специфически связываться с эпитопом CD3 и с эпитопом гликопротеина А33 (gpA33) и содержит домен Fc IgG, причем указанное биспецифическое моновалентное Fc-диатело содержит:
(1) первую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42, вторую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44, и третью полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46; или (2) первую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48, вторую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28, и третью полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность
- 7 036236
SEQ ID NO: 46;
причем указанная первая и указанная вторая полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом первой дисульфидной связью и указанная первая и третья полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом второй дисульфидной связью.
Согласно настоящему изобретению дополнительно предусмотрена фармацевтическая композиция для лечения злокачественной опухоли, характеризующейся экспрессией gpA33, причем указанная фармацевтическая композиция содержит биспецифическое моновалентное диатело или биспецифическое моновалентное Fc-диатело и физиологически приемлемый носитель.
Согласно настоящему изобретению дополнительно предусмотрено применение биспецифического моновалентного диатела или биспецифического моновалентного Fc-диатела или фармацевтической композиции в лечении злокачественной опухоли, характеризующейся экспрессией gpA33.
Согласно настоящему изобретению дополнительно предусмотрен полинуклеотид, который кодирует первую или вторую полипептидную цепь биспецифического моновалентного диатела или первую или вторую полипептидную цепь биспецифического моновалентного Fc-диатела.
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1 проиллюстрированы структуры первой и второй полипептидных цепей двухцепочечного gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела согласно настоящему изобретению.
На фиг. 2А и 2В проиллюстрированы структуры двух версий первой, второй и третьей полипептидных цепей трехцепочечного gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного Fc-диатела согласно настоящему изобретению (версия 1, фиг. 2А; версия 2, фиг. 2В)
На фиг. 3 продемонстрировано, что диатела согласно настоящему изобретению способны одновременно связываться с CD3 и с gpA33.
На фиг. 4 проиллюстрирована способность диател согласно настоящему изобретению лечить злокачественную опухоль. Клетки колоректального рака или клетки рака поджелудочной железы инкубировали в присутствии gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела (DART-1) и или РВМС человека (Е:Т = 25:1) или активированных Т-клеток человека (Е:Т = 10:1) и измеряли цитотоксичность (фиг. 4А (клетки колоректального рака Colon CSCL), фиг. 4В (клетки колоректального рака Со1о205), и фиг. 4С (клетки рака поджелудочной железы ASPC-1).
На фиг. 5A-5F показано, что активация Т-клеток CD8 происходила в присутствии биспецифического моновалентного диатела к CD3 (DART-1) только в присутствии злокачественных клеток (фиг. 5А-5С: CD8 Т-клетки + клетки colo205 (фиг. 5А), Т-клетки CD8 + клетки ASPC-1 (фиг. 5В), Т-клетки CD8 отдельно (фиг. 5С); фиг. 5D-5F: Т-клетки CD4 + клетки colo205 (фиг. 5D), Т-клетки CD4+ клетки ASPC-1 (фиг. 5Е), Т-клетки CD8 отдельно (фиг. 5F).
На фиг. 6A-6D показано, что gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела (DART-1 и DART-2) опосредовали эквивалентную цитотоксичность в отношении клеток колоректальной аденокарциномы SW948 (фиг. 6А), клеток colo205 (фиг. 6В) и клеток Colo205-Luc (фиг. 6С) и что ни одно диатело не опосредовало цитотоксичность gpA33-отрицательной клеточной линии злокачественной опухоли, НСТ116 (фиг. 6D).
На фиг. 7A-7D показана способность gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела (DART-2), gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела, содержащего альбуминсвязывающий домен (DART-2 с ABD w/ABD) и gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела, содержащего домен Fc иммуноглобулина IgG (DART-2 с Fc w/Fc) стимулировать цитотоксичность злокачественных клеток в присутствии РВМС человека или яванского макака.
На фиг. 8 продемонстрирована in vivo способность gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела (DART-1) уменьшать объем опухоли в мышиной модели рака толстой кишки Со1о205.
На фиг. 9A-9D показаны данные сцинтиграфии опухолей у мышей NOD (страдающих диабетом без ожирения) scid (с тяжелой комбинированной иммунной недостаточностью) гамма (NSG), которым имплантировали клетки Со1о205 через два дня после получения инертного носителя (фиг. 9А) или gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело (DART-1) (фиг. 9В) и через 12 дней после получения инертного носителя (фиг. 9С) или DART-1 (фиг. 9D).
На фиг. 10 продемонстрирована in vivo способность gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела (DART-1) уменьшать объем опухоли в мышиной модели рака поджелудочной железы ASPC-1.
На фиг. 11 показана способность gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела, содержащего домен Fc иммуноглобулина IgG (версия 1DART-2 w/Fc) опосредовать резкое снижение объема опухоли в in vivo модели рака толстой кишки.
На фиг. 12 показана способность gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела, содержащего домен Fc иммуноглобулина IgG (версия 1DART-2 w/Fc) опосредовать снижение объема опухоли в in vivo модели рака толстой кишки даже в крайне низких дозах.
На фиг. 13 показана фармакокинетика gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела (DART-2) и gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела, содержащего домен Fc иммуног- 8 036236 лобулина IgG (версия 1DART-2 w/Fc) у яванских макак.
На фиг. 14А, 14В показан анализ SPR связывания версии 1 DART-2 w/Fc с иммобилизированным CD3 человека и яванского макака. Черные пунктирные линии представляют глобальную аппроксимацию 1:1 модели Ленгмюра кривых связывания, полученных при концентрациях DART-2 w/Fc, составляющих 0, 6,25, 12,5, 25, 50 или 100 нМ. Данные являются репрезентативными для трех независимых экспериментов.
На фиг. 15А, 15В показан анализ SPR связывания версии 1 DART-2 w/Fc с захваченным gpA33 человека и яванского макака. Черные пунктирные линии представляют глобальную аппроксимацию 1:1 модели Ленгмюра кривых связывания, полученных при концентрации версии 1 DART-2 w/Fc, составляющей 0, 6,25, 12,5, 25, 50 или 100 нМ. Данные являются репрезентативными для трех независимых экспериментов.
Подробное раскрытие настоящего изобретения
Настоящее изобретение относится к биспецифическим моновалентным диателам, которые содержат две полипептидные цепи и которые характеризуются наличием одного сайта связывания, специфического в отношении эпитопа gpA33, и одного сайта связывания, специфического в отношении эпитопа CD3 (т.е. gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело). Настоящее изобретение также относится к биспецифическим моновалентным диателам, которые содержат домен Fc иммуноглобулина (биспецифические моновалентные Fc-диатела) и состоят из трех полипептидных цепей и которые характеризуются наличием одного сайта связывания, специфического в отношении эпитопа gpA33, и одного сайта связывания, специфического в отношении эпитопа CD3 (т.е. a gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное Fc-диатело). Биспецифические моновалентные диатела и биспецифические моновалентные Fc-диатела согласно настоящему изобретению способны одновременно связываться с gpA33 и CD3. Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, которые содержат такие биспецифические моновалентные диатела или такие биспецифические моновалентные Fc-диатела. Настоящее изобретение дополнительно относится к способам применения таких диател в лечении злокачественной опухоли и других заболеваний и состояний.
gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела согласно настоящему изобретению состоят из двух полипептидных цепей, которые ассоциируются друг с другом с образованием одного сайта связывания, специфического в отношении эпитопа gpA33, и одного сайта связывания, специфического в отношении эпитопа CD3. Отдельные полипептидные цепи диатела ковалентно связаны друг с другом, например, путем связывания дисульфидной связью цистеиновых остатков, расположенных в пределах каждой полипептидной цепи. Каждая полипептидная цепь содержит антигенсвязывающий домен вариабельного домена легкой цепи, антигенсвязывающий домен вариабельного домена тяжелой цепи и домен гетеродимеризации. Промежуточный линкерный пептид (линкер 1) отделяет антигенсвязывающий домен вариабельного домена легкой цепи от антигенсвязывающего домена вариабельного домена тяжелой цепи. Антигенсвязывающий домен вариабельного домена легкой цепи первой полипептидной цепи взаимодействует с антигенсвязывающим доменом вариабельного домена тяжелой цепи второй полипептидной цепи с образованием первого функционального антигенсвязывающего сайта, который является специфическим в отношении первого антигена (т.е. или gpA33, или CD3). Аналогично, антигенсвязывающий домен вариабельного домена легкой цепи второй полипептидной цепи взаимодействует с антигенсвязывающим доменом вариабельного домена тяжелой цепи первой полипептидной цепи с образованием второго функционального антигенсвязывающего сайта, который является специфическим в отношении второго антигена (т.е. или gpA33, или CD3, в зависимости от идентичности первого антигена). Таким образом, выбор антигенсвязывающего домена вариабельного домена легкой цепи и антигенсвязывающего домена вариабельного домена тяжелой цепи первой и второй полипептидных цепей скоординирован так, чтобы две полипептидные цепи совместно содержали антигенсвязывающие домены вариабельных доменов легкой и тяжелой цепи, способные связываться с gpA33 и CD3.
gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные Fc-диатела согласно настоящему изобретению состоят из первой полипептидной цепи, второй полипептидной цепи и третьей полипептидной цепи. Первая и вторая полипептидные цепи ассоциируются друг с другом с образованием одного сайта связывания, специфического в отношении эпитопа gpA33, и одного сайта связывания, специфического в отношении эпитопа CD3. Первая полипептидная цепь и третья полипептидная цепь ассоциируются друг с другом с образованием домена Fc иммуноглобулина. Первая и вторая полипептидные цепи биспецифического моновалентного Fc-диатела ковалентно связаны друг с другом, например, путем связывания дисульфидной связью цистеиновых остатков, расположенных в пределах каждой полипептидной цепи. Первая и третьей полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом, например, путем связывания дисульфидной связью цистеиновых остатков, расположенных в пределах каждой полипептидной цепи. Каждая из первой и второй полипептидных цепей содержит антигенсвязывающий домен вариабельного домена легкой цепи, антигенсвязывающий домен вариабельного домена тяжелой цепи и домен гетеродимеризации. Промежуточный линкерный пептид (линкер 1) отделяет антигенсвязывающий домен вариабельного домена легкой цепи от антигенсвязывающего домена вариабельного домена тяжелой цепи.
- 9 036236
Антигенсвязывающий домен вариабельного домена легкой цепи первой полипептидной цепи взаимодействует с антигенсвязывающим доменом вариабельного домена тяжелой цепи второй полипептидной цепи с образованием первого функционального антигенсвязывающего сайта, который является специфическим в отношении первого антигена (т.е. или gpA33, или CD3). Аналогично, антигенсвязывающий домен вариабельного домена легкой цепи второй полипептидной цепи взаимодействует с антигенсвязывающим доменом вариабельного домена тяжелой цепи первой полипептидной цепи с образованием второго функционального антигенсвязывающего сайта, который является специфическим в отношении второго антигена (т.е. или gpA33, или CD3, в зависимости от идентичности первого антигена). Таким образом, выбор антигенсвязывающего домена вариабельного домена легкой цепи и антигенсвязывающего домена вариабельного домена тяжелой цепи первой и второй полипептидных цепей скоординирован так, чтобы две полипептидные цепи совместно содержали антигенсвязывающие домены вариабельных доменов легкой и тяжелой цепи, способные связываться с gpA33 и CD3. Каждая из первой и третьей полипептидных цепей содержит цистеинсодержащий пептид (пептид 1) SEQ ID NO: 39 и частично или полностью домен CH2 и/или частично или полностью домен СН3 полного домена Fc иммуноглобулина и цистеинсодержащий пептид. Некоторая часть или весь домен СН2 и/или некоторая часть или весь домен СН3 ассоциируются с образованием домена Fc иммуноглобулина биспецифических моновалентных Fc-диател согласно настоящему изобретению. Первая и третья полипептидные цепи биспецифических моновалентных Fc-диател согласно настоящему изобретению ковалентно связаны друг с другом, например, путем связывания дисульфидной связью цистеиновых остатков, расположенных в пределах цистеинсодержащего пептида полипептидных цепей.
Образование гетеродимеров первой и второй полипептидных цепей биспецифического моновалентного диатела или биспецифического моновалентного Fc-диатела может управляться доменами гетеродимеризации. Такие домены включают в себя GVEPKSC (SEQ ID NO: 54) (или VEPKSC; SEQ ID NO: 55) на одной полипептидной цепи и GFNRGEC (SEQ ID NO: 56) (или FNRGEC; SEQ ID NO: 57) на другой полипептидной цепи (US2007/0004909). Альтернативно, такие домены могут быть сконструированы так, чтобы они содержали спирали противоположных зарядов. Домен гетеродимеризации одной из полипептидных цепей содержит последовательность по меньшей мере из шести, по меньшей мере из семи или по меньшей мере из восьми положительно заряженных аминокислот, и домен гетеродимеризации другой полипептидной цепи содержит последовательность по меньшей мере из шести, по меньшей мере из семи или по меньшей мере из восьми отрицательно заряженных аминокислот. Например, первый или второй домен гетеродимеризации может содержать последовательность, содержащую восемь положительно заряженных аминокислот, и другие из доменов гетеродимеризации могут содержать последовательность, содержащую восемь отрицательно заряженных аминокислот. Положительно заряженная аминокислота может представлять собой лизин, аргинин, гистидин и т.д., и/или отрицательно заряженная аминокислота может представлять собой глутаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту и т.д. Положительно заряженная аминокислота предпочтительно представляет собой лизин и/или отрицательно заряженная аминокислота предпочтительно представляет собой глутаминовую кислоту.
Биспецифические моновалентные диатела и биспецифические моновалентные Fc-диатела согласно настоящему изобретению сконструированы так, чтобы такие первые и вторые полипептидные цепи были ковалентно связаны друг с другом посредством цистеиновых остатков вдоль их длины. Такие цистеиновые остатки могут быть введены в промежуточный линкер, который отделяет домены VL и VH полипептидов. Альтернативно и более предпочтительно, второй пептид (линкер 2) введен в каждую из полипептидных цепей, например, на амино-конце полипептидных цепей или в положении, которое помещает линкер 2 между доменом гетеродимеризации и антигенсвязывающим доменом вариабельного домена легкой цепи или вариабельного домена тяжелой цепи.
Как указано выше, gpA33 экспрессируется клетками колоректального рака. Антитела, способные иммуноспецифически связываться с gpA33, способны связываться с такими клетками. CD3 экпрессируется на Т-клетках. Таким образом, антитела, способные иммуноспецифически связываться как с gpA33, так и с CD3, способны направлять Т-клетки на клетки колоректального рака и другие злокачественные клетки, которые экспрессируют gpA33 (например, клетки карциномы толстой кишки, клетки рака поджелудочной железы и т.д.) и, таким образом, обеспечивать улучшенную терапию для таких злокачественных опухолей.
I. Предпочтительные gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела согласно настоящему изобретению.
A) gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела.
Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения предусмотрены gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела, которые состоят из первой полипептидной цепи и второй полипептидной цепи, чьи последовательности позволяют полипептидным цепям ковалентно связаться друг с другом с образованием ковалентно-ассоциированного комплекса, который способен одновременно связываться как с gpA33, так и CD3.
- 10 036236
Первая полипептидная цепь предпочтительных gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател содержат в направлении от N-конца к С-концу N-конец, домен VL моноклонального антитела, способного связываться или с CD3, или с gpA33 (т.е. или VLCD3, или VLgpA33), первый промежуточный спейсерный пептид (линкер 1), домен VH моноклонального антитела, способного связываться или с gpA33 (если такая первая полипептидная цепь содержит VLCD3), или с CD3 (если такая первая полипептидная цепь содержит VLgpA33), цистеинсодержащий второй промежуточный спейсерный пептид (линкер 2), стимулирующий образование гетеродимера домен и С-конец (фиг. 1).
Вторая полипептидная цепь предпочтительных gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател содержит в направлении от N-конца к С-концу N-конец, домен VL моноклонального антитела, способного связываться или с gpA33, или с CD3 (т.е. или VLgpA33, или VLCD3, в зависимости от домена VL, выбранного для первой полипептидной цепи диатела), промежуточный линкерный пептид (линкер 1), домен VH моноклонального антитела, способного связываться ли с CD3 (если такая вторая полипептидная цепь содержит VLgpA33), или с CD3 (если такая вторая полипептидная цепь содержит VLCD3), цистеинсодержащий спейсерный пептид (линкер 2), стимулирующий образование гетеродимера домен и С-конец (фиг. 1).
Домен VL первой полипептидной цепи предпочтительных gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател взаимодействует с доменом VH второй полипептидной цепи предпочтительных gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател с образованием первого функционального антигенсвязывающего сайта, который является специфическим в отношении первого антигена (т.е. или CD3, или gpA33). Аналогично, домен VL второй полипептидной цепи взаимодействует с доменом VH первой полипептидной цепи с образованием второго функционального антигенсвязывающего сайта, который является специфическим в отношении второго антигена (т.е. или gpA33, или CD3, в зависимости от идентичности первого антигена). Таким образом, выбор доменов VL и VH первой и второй полипептидных цепей скоординирован так, чтобы две полипептидные цепи предпочтительных gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател совместно содержали домены VL и VH, способные связываться с gpA33 и CD3 (т.е. они содержат VLcd3/VHcd3 И VLgpA33/VHgpA33).
Длина промежуточного линкерного пептида (линкера 1, который отделяет такие домены VL и VH) наиболее предпочтительно выбрана так, чтобы существенно или полностью предотвращать связывание доменов VL и VH полипептидной цепи друг с другом. Таким образом, домены VL и VH первой полипептидной цепи существенно или полностью не способны связываться друг с другом. Аналогично, домены VL и VH второй полипептидной цепи существенно или полностью не способны связываться друг с другом. Предпочтительный промежуточный спейсерный пептид (линкер 1) характеризуется последовательностью (SEQ ID NO: 1): GGGSGGGG.
Цистеинсодержащий второй промежуточный спейсерный пептид (линкер 2) будет содержать 1, 2, 3 или больше цистеинов. Предпочтительный цистеинсодержащий спейсерный пептид (линкер 2) характеризуется последовательностью SEQ ID NO: 2: GGCGGG.
Стимулирующие образование гетеродимера домены первого и второго полипептидов отличаются друг от друга и сконструированы, чтобы ассоциироваться друг с другом так, чтобы стимулировать ассоциацию первой и второй полипептидных цепей. Таким образом, согласно предпочтительному варианту осуществления одна из этих полипептидных цепей будет сконструирована, чтобы содержать стимулирующий образование гетеродимера Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3):
EVATVLEKEVAALEKEVATVLEKEVATYLEK чьи остатки будут формировать отрицательный заряд при рН 7, тогда как другая из двух полипептидных цепей буде сконструирована так, чтобы содержать стимулирующий образование гетеродимера K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4):
чьи остатки будут формировать положительный заряд при рН 7.
Присутствие таких заряженных доменов стимулирует ассоциацию между первым и вторым полипептидами и, таким образом, способствует гетеродимеризации. Несущественно, какая спираль обеспечивается какой цепью при условии, что спирали, используемые на первой и второй полипептидных цепях, различаются так, чтобы способствовать гетеродимеризации между такими цепями.
1. gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело, DART-1.
Первая и вторая полипептидные цепи предпочтительного gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела, обозначенного в настоящем документе как DART-1, содержат полипептидные домены, характеризующиеся следующими последовательностями:
Домен VL антитела, которое связывает CD3 (VLCD3) (SEQ ID NO: 5):
QAWTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPWT PARFSGSLLGGKAALTITGAQAEDEADYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVLG
Антигенсвязывающий домен VLCD3 содержит
CDR1 с последовательностью (SEQ ID NO: 6): RSSTGAVTTSNYAN;
CDR2 с последовательностью (SEQ ID NO: 7): GTNKRAP и
- 11 036236
CDR3 с последовательностью (SEQ ID NO: 8): ALWYSNLWV.
Домен VH антитела, которое связывает CD3 (VHCD3) (SEQ ID NO: 9):
EVQLVE S GGGLVQP GGS LRLS CAAS GETFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYAT YYADSVKDRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTL VTVSS
Антигенсвязывающий домен VHCD3 содержит
CDR1 с последовательностью (SEQ ID NO: 10): TYAMN;
CDR2 с последовательностью (SEQ ID NO: 11); RIRSKYNNYATYYADSVKD и
CDR3 с последовательностью (SEQ ID NO: 12): HGNFGNSYVSWFAY.
Домен VL мышиного антитела, которое связывает gpA33 (VLgPA33) (SEQ ID NO: 13):
QIVLTQSPAIMSASPGERVTMTCSARSSISFMYWYQQKPGSSPRLLIYDTSNLASGVPVR FSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSSYPLTFGSGTKLELK
Антигенсвязывающий домен VLgpA33 содержит
CDR1 с последовательностью (SEQ ID NO: 14): SARSSISFMY;
CDR2 с последовательностью (SEQ ID NO: 15): DTSNLAS и
CDR3 с последовательностью (SEQ ID NO: 16): QQWSSYPLT.
Домен VH мышиного антитела, которое связывает gpA33 (VHgpA33) (SEQ ID NO: 17):
QVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFSGSWMNWVKQRPGQGLEWIGRIYPGDGETNY NGKFKDKATLTADKSSTTAYMELSSLTSVDSAVYFCARIYGNNVYFDVWGAGTTVTVSS
Антигенсвязывающий домен VHgpA33 содержит
CDR1 с последовательностью (SEQ ID NO: 18): GSWMN;
CDR2 с последовательностью (SEQ ID NO: 19): RIYPGDGETNYNGKFKD и
CDR3 с последовательностью (SEQ ID NO: 20): IYGNNVYFDV.
Первый промежуточный спейсерный пептид (линкер 1) характеризуется последовательностью (SEQ ID NO: 1): GGGSGGGG. Цистеинсодержащий спейсерный пептид (линкер 2) характеризуется последовательностью SEQ ID NO: 2: GGCGGG.
Стимулирующий образование гетеродимера домен первой полипептидной цепи представляет собой Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3). Стимулирующий образование гетеродимера домен второй полипептидной цепи представляет собой K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4).
Таким образом, первая полипептидная цепь DART-1 характеризуется последовательностью (SEQ ID NO: 21):
QAWTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPWT PAR FS GS L L GGKAALTIT GAQAEDEADYYCALWYS NLWVFGGGTKLTVLGG GGSGGGGQV QLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFSGSWMNWVKQRPGQGLEWIGRIYPGDGETNYNG KFKDKATLTADKSSTTAYMELSSLTSVDSAVYFCARIYGNNVYFDVWGAGTTVTVSSGGC GGGEVAALEKEVAALEKEVAALEKEVAALEK
Следует принимать во внимание, что остатки 1-110 SEQ ID NO: 21 представляют собой домен VL антитела, которое связывает CD3 (VLCD3) (SEQ ID NO: 5); остатки 111-118 SEQ ID NO: 21 представляют собой первый промежуточный спейсерный пептид (линкер 1) (SEQ ID NO: 1); остатки 119-237 SEQ ID NO: 21 представляют собой домен VH мышиного антитела, которое связывает gpA33 (VHgpA33) (SEQ ID NO: 17), остатки 238-243 SEQ ID NO: 21 представляют собой цистеинсодержащий спейсерный пептид (линкер 2) (SEQ ID NO: 2) и остатки 244-271 SEQ ID NO: 21 представляют собой стимулирующий образование гетеродимера Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3).
Предпочтительный полинуклеотид, который кодирует первую полипептидную цепь DART-1, харастеризуется следующей последовательностью (SEQ ID NO: 22):
caggctgtggtgactcaggagccttcactgaccgtgtccccaggcggaactqtgaccctg acatgcagatccagcacaggcgcagtgaccacatctaactacgccaattgggtgcagcag aagccaggacaggcaccaaggggcctgatcgggggtacaaacaaaagggctccctggacc cctgcacggttttctggaagtctgctgggcggaaaggccgctctgactattaccggggca caggccgaggacgaagccgattactattgtgctctgtggtatagcaatctgtgggtgttc gggggtggcacaaaactgactgtgctgggaggtggtggatccggcggaggtggacaggtc cagctgcagcagtctggacctgagctggtgaagcctggggcctcagtgaagatttcctgc aaagcttcaggctacacattcagtggctcttggatgaactgggtgaagcagaggcctgga cagggtcttgagtggattggacggatctaccctggagatggagaaactaactacaatggg aagtttaaggacaaggccacactgactgcagacaaatcatccaccacagcctacatggag ctcagcagcctgacctctgtggactctgcggtctatttctgtgcaagaatctatggtaat aacgtttacttcgatgtctggggcgcagggaccacggtcaccgtgtcttccggaggatgt ggcggtggagaagtggccgcactggagaaagaggttgctgctttggagaaggaggtcgct gcacttgaaaaggaggtcgcagccctggagaaa
- 12 036236
Вторая полипептидная цепь DART-1 характеризуется следующей последовательностью (SEQ ID NO: 23):
QIVLTQSPAIMSASPGERVTMTCSARSSISFMYWYQQKPGSSPRLLIYDTSNLASGVPVR FSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSSYPLTFGSGTKLELKRGGGSGGGGEVQLV ESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADS VKDRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS GGCGGGKVAALKEKVAALKEKVAALKEKVAALKE
Следует принимать во внимание, что остатки 1-107 SEQ ID NO: 23 представляют собой домен VL мышиного антитела, которое связывает gpA33 (VLgpA33) (SEQ ID NO: 13); остатки 108-115 SEQ ID NO: 23 представляют собой первый промежуточный спейсерный пептид (линкер 1) (SEQ ID NO: 1); остатки 116240 SEQ ID NO: 23 представляют собой домен VH антитела, которое связывает CD3 (VHCD3) (SEQ ID NO: 9), остатки 241-246 SEQ ID NO: 23 представляют собой цистеинсодержащий спейсерный пептид (линкер 2) (SEQ ID NO: 2) и остатки 247-274 SEQ ID NO: 23 представляют собой стимулирующий образование гетеродимера K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4).
Предпочтительный полинуклеотид, который кодирует вторую полипептидную цепь DART-1, характеризуется следующей последовательностью (SEQ ID NO: 24):
Caaattgttctcacccagtctccagcaatcatgtctgcatctccaggggagagggtcacc atgacctgcagtgccaggtcaagtataagtttcatgtactggtaccagcagaagccagga tcctcccccagactcctgatttatgacacatccaacctggcttctggagtccctgttcgc ttcagtggcagtgggtctgggacctcttattctctcacaatcagccgaatggaggctgaa gatgctgccacttattactgccagcagtggagtagttacccactcacgttcggttctggg accaagctggagctgaaacggggtggaggatccggcggaggcggagaggtgcagctggtg gagtctgggggaggcttggtccagcctggagggtccctgagactctcctgtgcagcctct ggattcaccttcaacacatacgctatgaattgggtccgccaggctccagggaaggggctg gagtgggttgcaaggatcaggtccaagtacaacaattatgcaacctactatgccgactct gtgaaggatagattcaecatctcaagagatgattcaaagaactcactgtatctgcaaatg aacagcctgaaaaccgaggacacggccgtgtattactgtgtgagacacggtaacttcggc aattcttacgtgtcttggtttgcttattggggacaggggacactggtgactgtgtcttcc ggaggatgtggcggtggaaaagtggccgcactgaaggagaaagttgctgctttgaaagag aaggtcgccgcacttaaggaaaaggtcgcagccctgaaagag
2. gpA33 x CD3 биспецифическое моновалентное диатело, DART-2.
Первая и вторая полипептидные цепи второго предпочтительного gpA33 x CD3 биспецифического моновалентного диатела, обозначенного в настоящем документе как DART-2, содержат полипептидные домены, характеризующиеся следующими последовательностями:
Домен VL антитела, которое связывает CD3 (VLCD3) (SEQ ID NO: 5):
QAWTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPWT PARFSGSLLGGKAALTITGAQAEDEADYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVLG
Антигенсвязывающий домен VLCD3 содержит
CDR1 с последовательностью: (SEQ ID NO: 6) RSSTGAVTTSNYAN;
CDR2 с последовательностью (SEQ ID NO: 7): GTNKRAP и
CDR3 с последовательностью (SEQ ID NO: 8): ALWYSNLWV
Домен VH антитела, которое связывает CD3 (VHCD3) (SEQ ID NO: 25):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRQAPGKGLEWVGRIRSKYNNYAT YYADSVKDRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTL VTVSS
Антигенсвязывающий домен VHCD3 содержит
CDR1 с последовательностью (SEQ ID NO: 10): TYAMN;
CDR2 с последовательностью (SEQ ID NO: 11): RIRSKYNNYATYYADSVKD и
CDR3 с последовательностью: (SEQ ID NO: 12) HGNFGNSYVSWFAY.
Обсуждаемое выше мышиное антитело, которое связывается с gpA33 человека, гуманизировали для получения доменов VL и VH предпочтительного диатела DART-2. Указанные гуманизированные домены представлены ниже:
Домен VL гуманизированного антитела, которое связывает gpA33 (VLgpA33) (SEQ ID NO: 26):
DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCSARSSISFMYWYQQKPGKAPKLLIYDTSNLASGVPSR FSGSGSGTEFTLTISSLEAEDAATYYCQQWSSYPLTFGQGTKLEIK
Антигенсвязывающий домен VLgpA33 содержит
CDR1 с последовательностью (SEQ ID NO: 14): SARSSISFMY;
CDR2 с последовательностью (SEQ ID NO: 15): DTSNLAS и
CDR3 с последовательностью (SEQ ID NO: 16): QQWSSYPLT.
Домен VH гуманизированного антитела, которое связывает gpA33 (VHgpA33) (SEQ ID NO: 27):
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGSWMNWVRQAPGQGLEWIGRIYPGDGETNY NGKFKDRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARIYGNNVYFDVWGQGTTVTVSS Антигенсвязывающий домен VHgpA33 содержит
CDR1 с последовательностью (SEQ ID NO: 18): GSWMN;
- 13 036236
CDR2 с последовательностью (SEQ ID NO: 19): RIYPGDGETNYNGKFKD и
CDR3 с последовательностью (SEQ ID NO: 20): IYGNNVYFDV.
Первый промежуточный спейсерный пептид (линкер 1) характеризуется последовательностью (SEQ ID NO: 1): GGGSGGGG. Цистеинсодержащий спейсерный пептид (линкер 2) характеризуется последовательностью SEQ ID NO: 2: GGCGGG.
Стимулирующий образование гетеродимера домен первой полипептидной цепи представляет собой Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3). Стимулирующий образование гетеродимера домен второй полипептидной цепи представляет собой K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4).
Таким образом, первая полипептидная цепь DART-2 характеризуется следующей последовательностью (SEQ ID NO: 28):
QAWTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPWT PARFSGSLLGGKAALTITGAQAEDEADYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVLGGGGSGGGGQV QLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGSWMNWVRQAPGQGLEWIGRIYPGDGETNYNG KFKDRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARIYGNNVYFDVWGQGTTVTVSSGGC GGGEVAALEKEVAALEKEVAALEKEVAALEK
Следует принимать во внимание, что остатки 1-110 SEQ ID NO: 28 представляют собой домен VL антитела, которое связывает CD3 (VLCD3) (SEQ ID NO: 5); остатки 111-118 SEQ ID NO: 28 представляют собой первый промежуточный спейсерный пептид (линкер 1) (SEQ ID NO: 1); остатки 119-237 SEQ ID NO: 28 представляют собой домен VH антитела, которое связывает gpA33 (VHgpA33) (SEQ ID NO: 27), остатки 238-243 SEQ ID NO: 28 представляют собой цистеинсодержащий спейсерный пептид (линкер 2) (SEQ ID NO: 2) и остатки 244-271 SEQ ID NO: 28 представляют собой стимулирующий образование гетеродимера Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3)
Предпочтительный полинуклеотид, который кодирует первую полипептидную цепь DART-2, харастеризуется следующей последовательностью (SEQ ID NO: 29):
caggctgtggtgactcaggagccttcactgaccgtgtccccaggcggaactgtgaccctg acatgcagatccagcacaggcgcagtgaccacatctaactacgccaattgggtgcagcag aagccaggacaggcaccaaggggcctgatcgggggtacaaacaaaagggctccctggacc cctgcacggttttctggaagtctgctgggcggaaaggccgctctgactattaccggggca caggccgaggacgaagccgattactattgtgctctgtggtatagcaatctgtgggtgttc gggggtggcacaaaactgactgtgctgggaggtggtggatccggcggaggtggacaggtc cagctggtccagagcggggccgaagtcaaaaaacccggagcaagcgtgaaggtctcctgc aaagcatcaggctatacatttacaggcagctggatgaactgggtgaggcaggctccagga cagggactggagtggatcgggcgcatctaccctggagacggcgaaactaactataatgga aagttcaaagaccgagtgaccatcacagccgataagtctactagtaccgcctacatggag ctgagctccctgcggtctgaagataccgccgtctactattgcgctagaatttacggaaac aatgtctattttgacgtgtgggggcagggaacaactgtgactgtctcctccggaggatgt ggcggtggagaagtggccgcactggagaaagaggttgctgctttggagaaggaggtcgct gcacttgaaaaggaggtcgcagccctggagaaa
Вторая полипептидная цепь DART-2 характеризуется следующей последовательностью (SEQ ID NO: 30):
DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCSARSSISFMYWYQQKPGKAPKLLIYDTSNLASGVPSR FSGSGSGTEFTLTISSLEAEDAATYYCQQWSSYPLTFGQGTKLEIKGGGSGGGGEVQLVE S GGGLVQP GGS LRL S CAAS G FT FS T YAMNWVRQAPGKGLEWVGRIR SKYNNYAT YYADSV KDRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSSG GCGGGKVAALKEKVAALKEKVAALKEKVAALKE
Следует принимать во внимание, что остатки 1-106 SEQ ID NO: 30 представляют собой домен VL антитела, которое связывает gpA33 (VLgpA33) (SEQ ID NO: 26); остатки 107-114 SEQ ID NO: 30 представляют собой первый промежуточный спейсерный пептид (линкер 1) (SEQ ID NO: 1); остатки 115-239 SEQ ID NO: 30 представляют собой домен VH антитела, которое связывает CD3 (VHCD3) (SEQ ID NO: 25), остатки 240-245 SEQ ID NO: 30 представляют собой цистеинсодержащий спейсерный пептид (линкер 2) (SEQ ID NO: 2) и остатки 246-273 SEQ ID NO: 30 представляют собой стимулирующий образование гетеродимера K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4).
- 14 036236
Предпочтительный полинуклеотид, который кодирует вторую полипептидную цепь DART-2, характеризуется следующей последовательностью (SEQ ID NO: 31):
Gacattcagctgactcagtccccctcttttctgtccgcatccgtcggagatcgagtgact attacttgctctgctaggtcctcaatcagcttcatgtactggtatcagcagaagcccggc aaagcacctaagctgctgatctacgacacaagcaacctggcctccggggtgccatctcgg ttctctggcagtgggtcaggaactgagtttaccctgacaattagctccctggaggctgaa gatgccgctacctactattgccagcagtggagcagctatcctctgaccttcggacagggg actaaactggaaatcaagggtggaggatccggcggcggaggcgaggtgcagctggtggag tctgggggaggcttggtccagcctggagggtccctgagactctcctgtgcagcctctgga ttcaccttcagcacatacgctatgaattgggtccgccaggctccagggaaggggctggag tgggttggaaggatcaggtccaagtacaacaattatgcaacctactatgccgactctgtg aaggatagattcaccatctcaagagatgattcaaagaactcactgtatctgcaaatgaac agcctgaaaaccgaggacacggccgtgtattactgtgtgagacacggtaacttcggcaat tcttacgtgtcttggtttgcttattggggacaggggacactggtgactgtgtcttccgga ggatgtggcggtggaaaagtggccgcactgaaggagaaagttgctgctttgaaagagaag gtcgccgcacttaaggaaaaggtcgcagccctgaaagag
3. gpA33 x CD3 биспецифическое моновалентное диатело, содержащее альбуминсвязывающий домен (ABD) (DART-2 w/ABD).
Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения gpA33 x CD3 биспецифическое моновалентное диатело будет содержать альбуминсвязывающий домен (ABD) (gpA33 x CD3 биспецифическое моновалентное диатело с ABD).
Как раскрыто в международной патентной публикации WO 2012/018687, для улучшения in vivo фармакокинетических свойств молекул диател молекулы могут быть модифицированы так, чтобы они содержали полипептидную часть белка, связывающегося с сывороточными белками, на одном или нескольких концах молекулы диатела. Наиболее предпочтительно, такая полипептидная часть белка, связывающегося с сывороточными белками, будет встроена на С-конце молекулы диатела. Особенно предпочтительная полипептидная часть белка, связывающегося с сывороточными белками, для этой цели представляет собой альбуминсвязывающий домен (ABD) из белка G стрептококка. Альбуминсвязывающий домен 3 (ABD3) белка G штамма Streptococcus G148 является особенно предпочтительным.
Альбуминсвязывающий домен 3 (ABD3) белка G штамма Streptococcus G148 состоит из 46 аминокислотных остатков, образующих стабильный трехспиральную структуру и характеризуется широкой альбуминсвязывающей специфичностью (Johansson, M.U. et al. (2002), Structure, Specificity, And Mode Of Interaction For Bacterial Albumin-Binding Modules, J. Biol. Chem. 277(10):8114-8120). Альбумин представляет собой наиболее распространенный белок в плазме и характеризуется периодом полувыведения, составляющим 19 дней у людей. Альбумин содержит несколько низкомолекулярных сайтов связывания, которые позволяют ему нековалентно связываться с другими белками и, тем самым, продлевать их периоды полужизни в сыворотке.
Таким образом, первая полипептидная цепь или вторая полипептидная цепь gpA33 x CD3 биспецифического моновалентного диатела, содержащего альбуминсвязывающий домен, содержит третий линкер (линкер 3), который отделяет Е-спираль (или K-спираль) такой полипептидной цепи от альбуминсвязывающего домена. Предпочтительная последовательность такого линкера 3 представляет собой GGGS (SEQ ID NO: 32) или GGGNS (SEQ ID NO: 33). Предпочтительный альбуминсвязывающий домен (ABD) характеризуется следующей аминокислотной последовательностью (SEQ ID NO: 34):
LAQAKEAAIRELDKYGVSDYYKNLIDNAKSAEGVKALIDEILAALP
Чтобы проиллюстрировать этот аспект настоящего изобретения, первая полипептидную цепь описанного выше DART-2 модифицировали так, чтобы она содержала альбуминсвязывающий домен, приводя в результате к образованию gpA33 x CD3 биспецифического моновалентного диатела, содержащего ABD, обозначенного в настоящем документе как DART-2 w/ABD.
Первая полипептидная цепь такого DART-2 w/ABD характеризуется следующей аминокислотной последовательностью (SEQ ID NO: 35):
QAWTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPWT PARFSGSLLGGKAALTTTGAQAEDEADYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVLGGGGSGGGGQV QLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGSWMNWVRQAPGQGLEWIGRIYPGDGETNYNG KFKDRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARIYGNNVYFDVWGQGTTVTVSSGGC GGGEVAALEKEVAALEKEVAALEKEVAALEKGGGSLAQAKEAAIRELDKYGVSDYYKNLI DNAKSAE GVKALIDEILAAL P
Следует принимать во внимание, что остатки 1-271 SEQ ID NO: 35 являются идентичными остаткам 1-271 DART-2 и, таким образом, представляют, в направлении от N-конца к С-концу, домен VL антитела, которое связывает CD3 (VLCD3) (SEQ ID NO: 5); первый промежуточный спейсерный пептид (линкер 1) (SEQ ID NO: 1); домен VH антитела, которое связывает gpA33 (VHgpA33) (SEQ ID NO: 27), цистеинсодержащий спейсерный пептид (линкер 2) (SEQ ID NO: 2), стимулирующий образование гетеродимера Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3) и С-конец. Остатки 272-275 представляют собой линкер 3 (SEQ ID NO: 32), и остатки 276-321 представляют собой альбуминсвязывающий домен (SEQ ID NO: 34).
- 15 036236
Предпочтительный полинуклеотид, который кодирует первую полипептидную цепь DART-2 w/ABD, характеризуется следующей последовательностью (SEQ ID NO: 36):
caggctgtggtgactcaggagccttcactgaccgtgtccccaggcggaactgtgaccctg acatgcagatccagcacaggcgcagtgaccacatctaactacgccaattgggtgcagcag aagccaggacaggcaccaaggggcctgatcgggggtacaaacaaaagggctccctggacc cctgcacggttttctggaagtctgctgggcggaaaggccgctctgactattaccggggca caggccgaggacgaagccgattactattgtgctctgtggtatagcaatctgtgggtgttc gggggtggcacaaaactgactgtgctgggagggggtggatccggcggaggtggacaggtc cagctggtccagagcggggccgaagtcaaaaaacccggagcaagcgtgaaggtctcctgc aaagcatcaggctatacatttacaggcagctggatgaactgggtgaggcaggctccagga cagggactggagtggatcgggcgcatctaccctggagacggcgaaactaactataatgga aagttcaaagaccgagtgaccatcacagccgataagtctactagtaccgcctacatggag ctgagctccctgcggtctgaagataccgccgtctactattgcgctagaatttacggaaac aatgtctattttgacgtgtgggggcagggaacaactgtgactgtctcctccggaggatgt ggcggtggagaagtggccgcactggagaaagaggttgctgctttggagaaggaggtcgct gcacttgaaaaggaggtcgcagccctggagaaaggcggcgggtctctggcccaggcaaaa gaggcagccatccgcgaactggataaatatggcgtgagcgattattataagaacctgatt gacaacgcaaaatccgcggaaggcgtgaaagcactgattgatgaaattctggccgccctg cct
Вторая полипептидная цепь DART-2 w/ABD является такой же, как обсуждаемая выше вторая полипептидная цепь DART-2 (SEQ ID NO: 30).
В. gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела, содержащие домен Fc IgG (DART-2 w/Fc).
Согласно дополнительному варианту осуществления настоящее изобретение предусматривает gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела, содержащие домен Fc IgG. Соответственно, такие диатела в настоящем документе называется gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные Fc-диатела. Домен Fc Fc-диател согласно настоящему изобретению может представлять собой либо полную область Fc (например, полную область Fc IgG) или только фрагмент полной области Fc. Хотя домен Fc биспецифических моновалентных Fc-диател согласно настоящему изобретению может обладать способность связываться с одним или несколькими рецепторами Fc (например, FcyR), более предпочтительно такой домен Fc будет вызывать сниженное связывание с FcyRIA (CD64), FcyRIIA (CD32A), FcyRIIB (CD32B), FcyRIIIA (CD16a) или FcyRIIIB (CD16b) (относительно связывания, проявляемого областью Fc дикого типа) или будет существенно устранять способность такого домена Fc связываться с таким(и) рецептором(ами). Домен Fc биспецифических моновалентных Fc-диател согласно настоящему изобретению может включать в себя частично или полностью домен СН2 и/или частично или полностью домен СН3 полной области Fc или может содержать вариантную последовательность СН2 и/или вариантную последовательность СН3 (которая может включать в себя, например, одну или несколько вставок и/или одну или несколько делеций относительно доменов СН2 или СН3 полной области Fc). Домен Fc биспецифических моновалентных Fc-диател согласно настоящему изобретению может содержать не относящиеся к Fc полипептидные части, или может содержать части не встречающихся в природе полных областей Fc, или может содержать не встречающиеся в природе ориентации доменов СН2 и/или СН3 (такие как, например, два домена СН2 или два домена СН3, или, в направлении от N-конца к С-концу, домен СН3, соединенный с доменом СН2, и т.д.).
Согласно первому варианту осуществления, обозначенному как версия 1 и показанному на фиг. 2А, первая полипептидная цепь иллюстративного gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного Fc-диатела будет содержать, в направлении от N-конца к С-концу, N-конец, домен VL моноклонального антитела, способного связываться или с gpA33, или с CD3 (т.е. или VLgpA33, или VLCD3), промежуточный спейсерный пептид (линкер 1), домен VH моноклонального антитела, способного связываться или с gpA33 (если такая первая полипептидная цепь содержит VLCD3), или с CD3 (если такая первая полипептидная цепь содержит VLgpA33), цистеинсодержащий второй промежуточный спейсерный пептид (линкер 2), стимулирующий образование гетеродимера домен, спейсерный пептид (линкер 5), цистеинсодержащий пептид (пептид 1), домен Fc IgG (предпочтительно все или часть доменов СН2 и СН3 области Fc антитела) и С-конец.
Согласно второму варианту осуществления, обозначенному как версия 2 и показанному на фиг. 2В, первая полипептидная цепь иллюстративного gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного Fc-диатела будет содержать в направлении от N-конца к С-концу N-конец, цистеинсодержащий пептид (пептид 1), домен Fc IgG (предпочтительно все или часть доменов СН2 и СН3 области Fc антитела), промежуточный спейсерный пептид (линкер 4); домен VL моноклонального антитела, способного связываться или с gpA33, или с CD3 (т.е. или VLgpA33, или VLCD3), промежуточный спейсерный пептид (линкер 1), домен VH моноклонального антитела, способного связываться или с gpA33 (если такая первая полипептидная цепь содержит VLCD3), или с CD3 (если такая первая полипептидная цепь содержит VLgpA33), цистеинсодержащий второй промежуточный спейсерный пептид (линкер 2), стимулирующий образование гетеродимера домен и С-конец.
- 16 036236
Предпочтительно согласно любому варианту осуществления домен Fc первой полипептидной цепи будет вызывать сниженное связывание с FcyRIA (CD64), FcyRIIA (CD32A), FcyRIIB (CD32B), FcyRIIIA (CD16a) или FcyRIIIB (CD16b) (относительно связывания, проявляемого областью Fc дикого типа) или будет существенно устранять способность такого домена Fc связываться с таким(и) рецептором(ами). Варианты и мутантные формы Fc, способные опосредовать такое измененное связывание, хорошо известны в настоящей области техники и включают в себя аминокислотные замены в положениях 234 и 235, замену в положении 265 или замену в положении 297 (см., например, патент США № 5624821, включенный в настоящий документ посредством ссылки). Согласно предпочтительному варианту осуществления домен СН2 и СН3 включает в себя замену в положении 234 на аланин и в положении 235 на аланин.
Вторая полипептидная цепь таких иллюстративных gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных Fc-диател (версии 1 и версии 2) будет содержать, в направлении от N-конца к С-концу, N-конец, домен VL моноклонального антитела, способного связываться или с gpA33, или с CD3 (т.е. или VLgpA33, или VLCD3, в зависимости от домена VL, выбранного для первой полипептидной цепи диатела), промежуточный линкерный пептид (линкер 1), домен VH моноклонального антитела, способного связываться или с CD3 (если такая вторая полипептидная цепь содержит VLgpA33), или с CD3 (если такая вторая полипептидная цепь содержит VLCD3), цистеинсодержащий спейсерный пептид (линкер 2), стимулирующий образование гетеродимера домен (предпочтительно K-спиральный домен) и С-конец.
Иллюстративные gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные Fc-диатела (версия 1 и версия 2) будут дополнительно содержать третью полипептидную цепь, которая будет содержать в направлении от N-конца к С-концу N-конец, цистеинсодержащий пептид (пептид 1), домен Fc IgG (предпочтительно все или часть доменов СН2 и СН3 области Fc антитела), характеризующийся таким же изотипом, что и домен Fc первой полипептидной цепи, и С-конец. Домен Fc третьей полипептидной цепи предпочтительно будет вызывать снижение связывания с FcyRIA (CD64), FcyRIIA (CD32A), FcyRIIB (CD32B), FcyRIIIA (CD16a) или FcyRIIIB (CD16b) (относительно связывания, проявляемого областью Fc дикого типа) или будет существенно устранять способность такого домена Fc связываться с таким(и) рецептором(ами), как обсуждалось выше, по отношению к первой полипептидной цепи иллюстративных gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных Fc-диател.
Необязательно, присутствующий промежуточный спейсерный пептид (линкер 4) будет предпочтительно содержать аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 37): APSSS и более предпочтительно характеризуется аминокислотной последовательностью (SEQ ID NO: 38): APSSSPME.
Цистеинсодержащий пептид (пептид 1) первой и третьей полипептидных цепей и могут состоять из одной и той же аминокислотной последовательности или из различных аминокислотных последовательностей и будут содержать 1, 2, 3 или больше цистеиновых остатков. Особенно предпочтительный пептид 1 характеризуется аминокислотной последовательностью (SEQ ID NO: 39): DKTHTCPPCP.
Промежуточный спейсерный пептид (линкер 1) предпочтительно характеризуется последовательностью SEQ ID NO: 1, описанной выше. Цистеинсодержащий второй промежуточный спейсерный пептид (линкер 2) предпочтительно характеризуется последовательностью SEQ ID NO: 2, описанной выше.
Стимулирующий образование гетеродимера домен первой и второй полипептидных цепей gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных Fc-диател будет предпочтительно представлять собой описанный выше Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3) и K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4) и будет выбран так, чтобы одна из таких полипептидных цепей содержала Е-спиральный домен, тогда как другая содержала K-спиральный домен, как обсуждалось выше.
Предпочтительный спейсерный пептид (линкер 5) характеризуется последовательностью GGG.
Домены СН2 и/или СН3 первого и третьего полипептидов необязательно должны быть идентичными и предпочтительно модифицированы так, чтобы содействовать образованию комплекса между двумя полипептидами. Например, аминокислотная замена (предпочтительно замена на аминокислоту, содержащую объемную боковую группу, образующую выступ, например триптофан) может быть введена в домен СН2 или СН3 так, чтобы стерическое влияние предотвращало взаимодействие с аналогично мутированным доменом и вынуждало мутированный домен образовывать пару с доменом, в котором была сконструирована комплементарная, или обеспечивающая размещение мутация, т.е. впадина (например, замена на глицин). Такие наборы мутаций можно сконструировать в любой паре полипептидов, содержащих молекулу биспецифического моновалентного Fc-диатела, и, кроме того, сконструировать в любой части полипептидных цепей указанной пары. Способы белковой инженерии, чтобы способствовать гетеродимеризации вместо гомодимеризации, хорошо известны в настоящей области техники, в частности в отношении инженерии иммуноглобулиноподобных молекул, и предусмотрены в настоящем документе (см., например, Ridgway et al. (1996), Knobs-Into-Holes Engineering Of Antibody CH3 Domains For Heavy Chain Heterodimerization, Protein Engr. 9:617-621, Atwell et al. (1997), Stable Heterodimers From Remodeling The Domain Interface Of A Homodimer Using A Phage Display Library, J. Mol. Biol. 270:26-35, и Xie et al. (2005), A New Format Of Bispecific Antibody: Highly Efficient Heterodimerization, Expression And Tumor Cell Lysis, J. Immunol. Methods 296:95-101; каждая из которых полностью включена в на
- 17 036236 стоящий документ посредством ссылки). Предпочтительно, что выступ конструируют в доменах СН2СН3 первой полипептидной цепи, а впадину конструируют в доменах СН2-СН3 третьей полипептидной цепи. Таким образом, выступ будет содействовать в предотвращении гомодимеризации первой полипептидной цепи посредством своих доменов СН2 и/или СН3. Поскольку третья полипептидная цепь предпочтительно содержит замену, обеспечивающую образование впадины, она будет гетеродимеризоваться с первой полипептидной цепью, а также гомодимеризоваться самим с собой. Предпочтительный выступ создается путем модификации домена Fc нативной области Fc IgG так, чтобы она содержала модификацию T366W. Предпочтительная впадина создается путем модификации домена Fc нативной области Fc IgG, чтобы она содержала модификацию T366S, L368A и Y407V. Для содействия в очищении гомодимера третьей полипептидной цепи от конечного биспецифического моновалентного Fc-диатела, содержащего первую, вторую и третью полипептидные цепи, сайт связывания с белком А доменов СН2 и СН3 третьей полипептидной цепи предпочтительно подвергают мутации с помощью аминокислотной замены в положении 435 (H435R). Для содействия в очищении третья полипептидная цепь гомодимера третьей полипептидной цепи от конечного биспецифического моновалентного Fc-диатела, содержащего первую, вторую и третью полипептидные цепи, сайт связывания с белком А доменов СН2 и СН3 третьей полипептидной цепи предпочтительно подвергают мутации с помощью аминокислотной замены. Таким образом, гомодимер третьей полипептидной цепи не будет связываться с белком А, тогда как биспецифическое моновалентное Fc-диатело будет сохранять свою способность связывать белок А через сайт связывания с белком А на первой полипептидной цепи.
Предпочтительная последовательность для доменов СН2 и СН3 домена Fc антитела, присутствующего в первой полипептидной цепи, представляет собой (SEQ ID NO: 40):
APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPTEKTISKAKGQPREPQVYT LPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKS RW QQGNV FS C S VMHEALHNHY TQKSLSLSPGK
Предпочтительная последовательность для доменов СН2 и СН3 домена Fc антитела, присутствующего в третьей полипептидной цепи, представляет собой (SEQ ID NO: 41):
APEAAGGP S VFLFP PKPKD Т LM 13 RT РЕ VT С VWDVS HEDPE VK FNW Y VDG VE VHNAKTK IPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYT LPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRYTQKSLSLSPGK
1. Версия 1 DART-2 w/Fc.
Первая, вторая и третья полипептидные цепи предпочтительного gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного Fc-диатела, обозначенного в настоящем документе как версия 1 DART-2 w/Fc, содержат полипептидные домены, характеризующиеся следующими последовательностями:
Первая полипептидная цепь такой версии 1 DART-2 w/Fc характеризуется следующей аминокислотной последовательностью (SEQ ID NO: 42):
DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCSARSSISFMYWYQQKPGKAPKLLTYDTSNLASGVPSR FSGSGSGTEFTLTISSLEAEDAATYYCQQWSSYPLTFGQGTKLEIKGGGSGGGGEVQLVE S GGGLVQP GGS LRL S CAAS GFT FS T YAMNWVRQAPGKGLEWVGRIRS KYNNYAT YYAD SV KDRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSSG GCGGGEVAALEKEVAALEKEVAALEKEVAALEKGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWS VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS C SVMHEALHNHYT QKS LS L S P GK
Следует принимать во внимание, что остатки 1-106 SEQ ID NO: 42 представляют собой домен VL антитела, которое связывает gpA33 (VLgpA33) (SEQ ID NO: 26); остатки 107-114 SEQ ID NO: 42 представляют собой первый промежуточный спейсерный пептид (линкер 1) (SEQ ID NO: 1); остатки 115-239 SEQ ID NO: 42 представляют собой домен VH антитела, которое связывает CD3 (VHCD3) (SEQ ID NO: 25); остатки 240-245 SEQ ID NO: 42 представляют собой цистеинсодержащий спейсерный пептид (линкер 2) (SEQ ID NO: 2); остатки 246-273 SEQ ID NO: 42 представляют собой стимулирующий образование гетеродимера Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3); остатки 274-276 представляют собой спейсерный пептид GGG (линкер 5); остатки 277-286 представляют собой пептид 1 (SEQ ID NO: 39), остатки 277-503 представляют собой последовательность для доменов СН2 и СН3 домена Fc антитела (SEQ ID NO: 40).
Предпочтительный полинуклеотид, который кодирует первую полипептидную цепь версии 1 DART-2 w/Fc, характеризуется следующей последовательностью (SEQ ID NO: 43):
gacattcagctgactcagtccccctcttttctgtccgcatccgtcggagatcgagtgact attacttgctctgctaggtcctcaatcagcttcatgtactggtatcagcagaagcccggc aaagcacctaagctgctgatctacgacacaagcaacctggcctccggggtgccatctcgg
- 18 036236 ttctctggcagtgggtcaggaactgagtttaccctgacaattagctccctggaggctgaa gatgccgctacctactattgccagcagtggagcagctatcctctgaccttcggacagggg actaaactggaaatcaagggtggaggatccggcggcggaggcgaggtgcagctggtggag tctgggggaggcttggtccagcctggagggtccctgagactctcctgtgcagcctctgga ttcaccttcagcacatacgctatgaattgggtccgccaggctccagggaaggggctggag tgggttggaaggatcaggtccaagtacaacaattatgcaacctactatgccgactctgtg aaggatagattcaccatctcaagagatgattcaaagaactcactgtatctgcaaatgaac agcctgaaaaccgaggacacggccgtgtattactgtgtgagacacggtaacttcggcaat tcttacgtgtcttggtttgcttattggggacaggggacactggtgactgtgtcttccgga ggatgtggcggtggagaagtggccgcactggagaaagaggttgctgctttggagaaggag gtcgctgcacttgaaaaggaggtcgcagccctggagaaaggcggcggggacaaaactcac acatgcccaccgtgcccagcacctgaagccgcggggggaccgtcagtcttcctcttcccc ccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtg gacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtg cataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagc gtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctcc aacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccga gaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagc ctgtggtgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaat gggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttc ttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctca tgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtct ccgggtaaa
Вторая полипептидная цепь такой версии 1 DART-2 w/Fc характеризуется следующей аминокислотной последовательностью (SEQ ID NO: 44):
QAWTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLTGGTNKRAPWT PARFSGSLLGGKAALTITGAQAEDEADYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVLGGGGSGGGGQV QLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGSWMNWVRQAPGQGLEWIGRTYPGDGETNYNG KFKDRVTITADKS ΤΞ TAYMELS Ξ LRSEDTAVYYCARIYGNNVYFDVWGQGT TVTVS SGGC GGGKVAALKEKVAALKEKVAALKEKVAALKE
Следует принимать во внимание, что остатки 1-110 SEQ ID NO: 44 представляют собой домен VL антитела, которое связывает CD3 (VLCD3) (SEQ ID NO: 5); остатки 111-118 SEQ ID NO: 44 представляют собой первый промежуточный спейсерный пептид (линкер 1) (SEQ ID NO: 1); остатки 119-237 SEQ ID NO: 44 представляют собой домен VH антитела, которое связывает gpA33 (VHgpA33) (SEQ ID NO: 27), остатки 238-243 SEQ ID NO: 44 представляют собой цистеинсодержащий спейсерный пептид (линкер 2) (SEQ ID NO: 2) и остатки 244-271 SEQ ID NO: 44 представляют собой стимулирующий образование гетеродимера K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4).
Предпочтительный полинуклеотид, который кодирует вторую полипептидную цепь версии 1 DART-2 w/Fc, характеризуется последовательностью (SEQ ID NO: 45):
caggctgtggtgactcaggagccttcactgaccgtgtccccaggcggaactgtgaccctg acatgcagatccagcacaggcgcagtgaccacatctaactacgccaattgggtgcagcag aagccaggacaggcaccaaggggcctgatcgggggtacaaacaaaagggctccctggacc cctgcacggttttctggaagtctgctgggcggaaaggccgctctgactattaccggggca caggccgaggacgaagccgattactattgtgctctgtggtatagcaatctgtgggtgttc gggggtggcacaaaactgactgtgctgggagggggtggatccggcggaggtggacaggtc cagctggtccagagcggggccgaagtcaaaaaacccggagcaagcgtgaaggtctcctgc aaagcatcaggctatacatttacaggcagctggatgaactgggtgaggcaggctccagga cagggactggagtggatcgggcgcatctaccctggagacggcgaaactaactataatgga aagttcaaagaccgagtgaccatcacagccgataagtctactagtaccgcctacatggag ctgagctccctgcggtctgaagataccgccgtctactattgcgctagaatttacggaaac aatgtctattttgacgtgtgggggcagggaacaactgtgactgtctcctccggaggatgt ggcggtggaaaagtggccgcactgaaggagaaagttgctgctttgaaagagaaggtcgcc gcacttaaggaaaaggtcgcagccctgaaagag
Третья полипептидная цепь такой версии 1DART-2 w/Fc характеризуется следующей аминокислотной последовательностью (SEQ ID NO: 46):
DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRYTQKSLSLSPGK
Следует принимать во внимание, что остатки 1-10 SEQ ID NO: 46 представляют собой пептид 1 (SEQ ID NO: 39) и остатки 11-227 представляют собой домены СН2 и СН3 домена Fc антитела (SEQ ID NO: 41).
- 19 036236
Предпочтительный полинуклеотид, который кодирует третью полипептидную цепь версии 1
DART-2 w/Fc, характеризуется следующей последовательностью (SEQ ID NO: 47):
Gacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaagccgcggggggaccgtcagtc ttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcaca tgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggac ggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtac cgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaag tgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaa gggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaag aaccaggtcagcctgagttgcgcagtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggag tgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactcc gacggctccttcttcctcgtcagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcagggg aacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccgctacacgcagaagagc ctctccctgtctccgggtaaa
2. Версия 2 DART-2 w/Fc.
Первая, вторая и третья полипептидные цепи второго предпочтительного gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного Fc-диатела, обозначенного в настоящем документе как версия 2 DART-2 w/Fc, содержат полипептидные домены, характеризующиеся следующими последовательностями. Среди прочих отличий, версия 1 DART-2 w/Fc отличается от версии 2 DART-2 w/Fc в расположении последовательностей СН2 и СН3 первой полипептидной цепи; указанные последовательности расположены на
С-конце относительно последовательностей VL и VH версии 1 DART-2 w/Fc, тогда как они расположены на N-конце относительно последовательностей VL и VH версии 2 DART-2 w/Fc.
Первая полипептидная цепь такой версии 2 DART-2 w/Fc характеризуется следующей аминокислотной последовательностью (SEQ ID NO: 48):
DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVD
GVEVHNAKTKPRE E QYNS T YR WS VL TVLHQDWLNGKE YKC KVSNKAL PAPIE KTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKAPSSSPMEDIQLT QSPSFLSASVGDRVTITCSARSSISFMYWYQQKPGKAPKLLIYDTSNLASGVPSRFSGSG SGTEFTLTISSLEAEDAATYYCQQWSSYPLTFGQGTKLEIKGGGSGGGGEVQLVESGGGL VQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRQAPGKGLEWVGRIRSKYNNYATYYADSVKDRFT ISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSSGGCGGG KVAALKE KVAALKE KVAALKE KVAALKE
Следует принимать во внимание, что остатки 1-10 SEQ ID NO: 48 представляют собой пептид 1 (SEQ ID NO: 39); остатки 11-227 SEQ ID NO: 48 представляют собой последовательность для доменов СН2 и СН3 домена Fc антитела (SEQ ID NO: 40); остатки 228-235 SEQ ID NO: 48 представляют собой промежуточный спейсерный пептид (линкер 4) (SEQ ID NO: 38); остатки 236-341 SEQ ID NO: 48 представляют собой домен VL антитела, которое связывает gpA33 (VLgpA33) (SEQ ID NO: 26); остатки 342-349 SEQ ID NO: 48 представляют собой первый промежуточный спейсерный пептид (линкер 1) (SEQ ID NO: 1); остатки 350-474 SEQ ID NO: 48 представляют собой домен VH антитела, которое связывает CD3 (VHCD3) (SEQ ID NO: 25); остатки 475-480 SEQ ID NO: 48 представляют собой цистеинсодержащий спейсерный пептид (линкер 2) (SEQ ID NO: 2); и остатки 481-508 SEQ ID NO: 48 представляют собой стимулирующий образование гетеродимера K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4).
Вторая полипептидная цепь такой версии 2 DART-2 w/Fc характеризуется аминокислотной последовательностью первой полипептидной цепи DART-2 (т.е. SEQ ID NO: 28) (описанной выше).
Третья полипептидная цепь такой версии 2 DART-2 w/Fc характеризуется аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 46 (описанной выше).
Фармацевтические композиции.
Композиции согласно настоящему изобретению включают в себя композиции нерасфасованного лекарственного средства, пригодные в производстве фармацевтических композиций (например, неочищенных или нестерильных композиции) и фармацевтических композиций (т.е. композиций, которые являются подходящими для введения субъекту или пациенту), которые можно использовать в получении стандартных лекарственных форм. Такие композиции содержат профилактически или терапевтически эффективное количество gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател или gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных Fc-диател, раскрытых в настоящем документе, и дополнительное терапевтическое средство и фармацевтически приемлемый носитель. Композиции согласно настоящему изобретению предпочтительно содержат профилактически или терапевтически эффективное количество одной или нескольких молекул согласно настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель.
Согласно настоящему изобретению также предусмотрены фармацевтические композиции, содержащие такие gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела или gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные Fc-диатела и второе терапевтическое антитело (например, специфическое к антигену злокачественной опухоли моноклональное антитело), которое является специфическим в отношении конкретного антигена, связанного со злокачественной опухолью, и фармацевтически приемлемый носи- 20 036236 тель.
Согласно конкретному варианту осуществления термин фармацевтически приемлемый означает одобренный регуляторным органом федерального правительства или правительства штата или перечисленный в Фармакопее США или другой общепризнанной фармакопее для применения у животных и более конкретно у людей. Термин носитель относится к разбавителю, адъюванту, например адъюванту Фрейнда (полному и неполному), вспомогательное вещество или инертный носитель, с которым водят терапевтическое средство. Такие фармацевтические носители могут представлять собой стерильные жидкости, такие как вода и масла, включая в себя масла минерального, животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и подобное. Вода представляет собой предпочтительный носитель, если фармацевтическую композицию вводят внутривенно. Солевые растворы и водные растворы декстрозы и растворы глицерина также можно использовать в качестве жидких носителей, в частности, для инъекционных растворов. Подходящие фармацевтические вспомогательные вещества включают в себя крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат натрия, глицерин моностеарат, тальк, хлорид натрия, сухое обезжиренное молоко, глицерин, пропилен, гликоль, воду, этанол и подобное. Композиция при необходимости также может содержать незначительные количества смачивающих средств или эмульгаторов, или рН буферных средств. Указанные композиции могут принимать форму растворов, суспензий, эмульсий, таблеток, драже, капсул, порошков, составов замедленного высвобождения и подобное.
Как правило, ингредиенты композиций согласно настоящему изобретению поставляются либо отдельно, либо смешанными вместе в стандартной лекарственной форме, например в виде сухого лиофилизированного порошка или безводного концентрата, в герметически запаянном контейнере, таком как ампула или саше с указанием количества активного средства. Если композиция предназначена для введения с помощью инфузии, она может продаваться с инфузионным флаконом, содержащим стерильную воду или солевой раствор фармацевтической степени чистоты. Если композиция предназначена для введения с помощью инъекции, ампула со стерильной водой для инъекций или солевым раствором может быть предоставлена с тем, чтобы ингредиенты можно было смешать перед введением.
Композиции согласно настоящему изобретению могут быть введены в состав в виде нейтральных или солевых форм. Фармацевтически приемлемые соли включают в себя без ограничения соли, образованные такими анионами, как анионы, происходящие из соляной, ортофосфорной, уксусной, щавелевой, винной кислот и т.д., и соли, образованные катионами, такими как катионы, происходящие из натрия, калия, аммония, кальция, гидроксидов железа, изопропиламина, триэтиламина, 2-этиламиноэтанола, гистидина, прокаина и т.д.
Согласно настоящему изобретению также предусмотрен фармацевтический пакет или набор, содержащий одна или несколько контейнеров, заполненных такими раскрытыми gpA33 х CD3 биспецифическими моновалентными диателами или gpA33 х CD3 биспецифическими моновалентными Fcдиателами (отдельно или с дополнительным(и) терапевтическим(и) средством(ами)) и таким фармацевтически приемлемым носителем. Кроме того, одно или несколько других профилактических или терапевтических средств, пригодных для лечения заболевания, также могут быть включены в фармацевтический пакет или набор. Согласно настоящему изобретению также предусмотрен фармацевтический пакет или набор, содержащий один или несколько контейнеров, заполненных одним или несколькими ингредиентами фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению. Необязательно такой(ие) контейнер(ы) может сопровождать уведомление в форме, предусмотренной государственным органом, регулирующим производство, применение или продажу фармацевтических средств или биологических продуктов, причем указанное уведомление отражает разрешение соответствующим органом производства, применения или продажи для введению людям.
Согласно настоящему изобретению предусмотрены наборы, которые можно использовать в описанных выше способах. Согласно одному варианту осуществления набор содержит одну или несколько молекул согласно настоящему изобретению. Согласно другому варианту осуществления набор дополнительно содержит одно или несколько других профилактических или терапевтических средств, пригодных для лечения злокачественной опухоли, в одном или нескольких контейнерах. Согласно другому варианту осуществления набор дополнительно содержит одно или несколько антител, которые связывают один или несколько антигенов, ассоциированных со злокачественной опухолью. Согласно определенным вариантам осуществления другое профилактическое или терапевтическое средство представляет собой химиотерапевтическое средство. Согласно другим вариантам осуществления профилактическое или терапевтическое средство представляет собой биологическое или гормональное терапевтическое средство.
Применения композиций согласно настоящему изобретению.
gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела или gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные Fc-диатела согласно настоящему изобретению характеризуются способностью осуществлять лечение любого заболевания или состояния, связанного с экспрессией gpA33 или характеризующегося его экспрессией. Таким образом, без ограничения фармацевтические композиции, содержащие такие мо- 21 036236 лекулы, можно использовать в диагностике или лечении злокачественных опухолей толстой кишки, колоректальных злокачественных опухолей и злокачественных опухолей поджелудочной железы.
Способы введения.
Композиции согласно настоящему изобретению могут быть предусмотрены для лечения, профилактики и уменьшения интенсивности одного или нескольких симптомов, связанных с заболеванием, нарушением или инфекцией, путем введения субъекту эффективного количества фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению. Согласно предпочтительному аспекту такие композиции являются по существу очищенными (т.е. по существу не содержат веществ, которые ограничивают ее действие или производят нежелательные побочные эффекты). Согласно конкретному варианту осуществления субъект представляет собой животное, предпочтительно млекопитающее, такое как не относящееся к приматам млекопитающее (например, корова, лошадь, кошка, собака, грызун и т.д.) или примат (например, обезьяна, такая как, яванский макак, человек и т.д.). Согласно предпочтительному варианту осуществления субъект представляет собой человека.
Известны различные системы доставки, и их можно использовать для введения композиций согласно настоящему изобретению, например инкапсулирование в липосомах, микрочастицы, микрокапсулы, рекомбинантные клетки, способные экспрессировать антитело или слитый белок, опосредованный рецептором эндоцитоз (см., например, Wu et al. (1987), Receptor-Mediated In Vitro Gene Transformation By A Soluble DNA Carrier System, J. Biol. Chem. 262:4429-4432), конструкция из нуклеиновой кислоты в виде части ретровирусного или другого вектора и т.д.
Способы введения gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател или gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных Fc-диател согласно настоящему изобретению включают в себя без ограничения парентеральное введение (например, интрадермальное, внутримышечное, интраперитонеальное, внутривенное и подкожное), эпидуральное и мукозальное введение (например, интраназальный и пероральный пути). Согласно конкретному варианту осуществления молекулы согласно настоящему изобретению вводят внутримышечно, внутривенно или подкожно. Композиции можно вводить любым удобным путем, например с помощью инфузии или болюсной инъекции, путем поглощения через эпителиальные или кожно-слизистые оболочки (например, слизистую ротовой полости, слизистую прямой кишки и кишечника и т.д.) и можно вводить вместе с другими биологически активными средствами. Введение может быть системным или местным. Кроме того, пульмонарное введение также можно использовать, например, с помощью применения ингалятора или небулайзера и состава с аэрозольным средством. См., например, патенты США № 6019968; 5985320; 5985309; 5934272; 5874064; 5855913; 5290540 и 4880078 и международные патентные публикации согласно РСТ № WO 92/19244; WO 97/32572; WO 97/44013; WO 98/31346 и WO 99/66903, каждая из которых полностью включена в настоящий документ посредством ссылки.
Согласно настоящему изобретению также предусмотрено, что gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела или gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные Fc-диатела согласно настоящему изобретению упакованы в такой гереметически запаянный контейнер, как ампула или саше, с указанием количества таких молекул. Согласно одному варианту осуществления gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела или gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные Fc-диатела согласно настоящему изобретению поставляют в виде сухого стерилизованного лиофилизированного порошка или безводного концентрата в гереметически запаянном контейнере и его можно развести, например, водой или солевым раствором до соответствующей концентрации для введения субъекту. gpA33 х CD3 диатела или gpA33 х CD3 Fc-диатела согласно настоящему изобретению предпочтительно поставляют в виде сухого стерильного лиофилизированного порошка в гереметически запаянном контейнере в стандартной дозировке, составляющей по меньшей мере 5 мкг, более предпочтительно по меньшей мере 10 мкг, по меньшей мере 15 мкг, по меньшей мере 25 мкг, по меньшей мере 50 мкг, по меньшей мере 100 мкг или по меньшей мере 200 мкг.
Лиофилизированные gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела или gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные Fc-диатела согласно настоящему изобретению необходимо хранить при температуре от 2 до 8°С в их оригинальном контейнере, и молекулы необходимо вводить не позднее чем через 12 ч, предпочтительно не позднее чем через 6 ч, не позднее чем через 5 ч, не позднее чем через 3 ч или не позднее чем через 1 ч после их разведения. Согласно альтернативному варианту осуществления gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела или gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные Fc-диатела согласно настоящему изобретению поставляют в жидкой форме в гереметически запаянном контейнере с указанием количества и концентрации молекулы, слитого белка или конъюгированной молекулы. Жидкую форму таких биспецифических моновалентных диател или биспецифических моновалентных Fc-диател предпочтительно поставляют в гереметически запаянном контейнере, в котором молекулы находятся в концентрации, составляющей по меньшей мере 1 мкг/мл, более предпочтительно по меньшей мере 2,5 мкг/мл, по меньшей мере 5 мкг/мл, по меньшей мере 10 мкг/мл, по меньшей мере 50 мкг/мл или по меньшей мере 100 мкг/мл.
Количество gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател или gpA33 х CD3 биспецифиче- 22 036236 ских моновалентных Fc-диател согласно настоящему изобретению, которое будет эффективным в лечении, профилактике или уменьшении интенсивности одного или нескольких связанных с нарушением симптомов, можно определить с помощью стандартных клинических техник. Точная доза, применяемая в составе, также будет зависеть от пути введения и серьезности состояния, и должна определяться в соответствии с решением лечащего врача и всех соответствующих обстоятельств пациента. Эффективные дозы можно экстраполировать из кривых зависимости от дозы из in vitro тестовых систем или тестовых систем - животных моделей.
Для gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател или gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных Fc-диател, предусмотренных настоящим изобретением, вводимая пациенту дозировка составляет, как правило, по меньшей мере приблизительно 0,01 мкг/кг, по меньшей мере приблизительно 0,05 мкг/кг, по меньшей мере приблизительно 0,1 мкг/кг, по меньшей мере приблизительно 0,2 мкг/кг, по меньшей мере приблизительно 0,5 мкг/кг, по меньшей мере приблизительно 1 мкг/кг, по меньшей мере приблизительно 2 мкг/кг, по меньшей мере приблизительно 3 мкг/кг, по меньшей мере приблизительно 5 мкг/кг, по меньшей мере приблизительно 10 мкг/кг, по меньшей мере приблизительно 20 мкг/кг, по меньшей мере приблизительно 30 мкг/кг, по меньшей мере приблизительно 50 мкг/кг, по меньшей мере приблизительно 0,1 мг/кг, по меньшей мере приблизительно 0,15 мг/кг массы тела субъекта или больше.
Дозировку и частоту введения биспецифических моновалентных диател или биспецифических моновалентных Fc-диател согласно настоящему изобретению можно снизить или изменить путем усиления поглощения и проникновения биспецифических моновалентных Fc-диател в ткани с помощью таких модификаций, как, например, липидизация.
Согласно одному варианту осуществления вводимую пациенту дозировку gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател или gpA33 х CD3 Fc биспецифических моновалентных диател согласно настоящему изобретению можно рассчитать для применения в качестве монотерапии. Согласно другому варианту осуществления биспецифические моновалентные диатела или биспецифические моновалентные Fc-диатела согласно настоящему изобретению используют в комбинации с другими терапевтическими композициями, и вводимая пациенту дозировка является ниже, чем при использовании таких биспецифических моновалентных диател или биспецифических моновалентных Fc-диател в качестве монотерапии.
Согласно конкретному варианту осуществления может быть необходимым введение фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению местно в нуждающуюся в лечении область; этого можно достичь, например, без ограничения с помощью местной инфузии, инъекции или посредством имплантата, причем указанный имплантат изготовлен из пористого, непористого или желатинообразного материала, включая в себя такие мембраны, как мембраны Sialastic, или волокна. При введении молекулы согласно настоящему изобретению предпочтительно необходимо уделить внимание применению материалов, которые не абсорбируют молекулу.
Согласно другому варианту осуществления композиции могут быть доставлены в везикуле, в частности липосоме (см. Langer (1990), New Methods Of Drug Delivery, Science, 249:1527-1533); Treat et al., в Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, p. 353-365 (1989); Lopez-Berestein, ibid., p. 317-327; см., главным образом, там же).
Согласно другому варианту осуществления композиции могут быть доставлены в системе контролируемого или замедленного высвобождения. Любую технику, известную специалисту в настоящей области техники, можно использовать для получения составов замедленного высвобождения, содержащих одну или несколько молекул согласно настоящему изобретению. См., например, патент США № 4526938; международные патентные публикации согласно РСТ № WO 91/05548; WO 96/20698; Ning et al. (1996), Intratumoral Radioimmunotheraphy Of A Human Colon Cancer Xenograft Using A SustainedRelease Gel, Radiotherapy & Oncology 39:179-189, Song et al. (1995), Antibody Mediated Lung Targeting Of Long-Circulating Emulsions, PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372-397; Cleek et al. (1997), Biodegradable Polymeric Carriers For A bFGF Antibody For Cardiovascular Application, Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854; и Lam et al. (1997), Microencapsulation Of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody For Local Delivery, Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759760, каждая из которых полностью включена в настоящий документ посредством ссылки. Согласно одному варианту осуществления насос можно использовать в системе контролируемого высвобождения (См. Langer, ранее; Sefton, (1987), Implantable Pumps, CRC Crit. Rev. Biomed. Eng. 14:201-240; Buchwald et al. (1980), Long-Term, Continuous Intravenous Heparin Administration By An Implantable Infusion Pump In Ambulatory Patients With Recurrent Venous Thrombosis, Surgery 88:507-516; и Saudek et al. (1989), A Preliminary Trial Of The Programmable Implantable Medication System For Insulin Delivery, N. Engl. J. Med. 321:574-579). Согласно другому варианту осуществления полимерные материалы можно использовать для достижения контролируемого высвобождения антител (см., например, MEDICAL APPLICATIONS OF CONTROLLED RELEASE, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984);
- 23 036236
Levy et al. (1985), Inhibition Of Calcification Of Bioprosthetic Heart Valves By Local Controlled-Release Diphosphonate, Science, 228:190-192; During et al. (1989), Controlled Release Of Dopamine From A Polymeric Brain Implant: In Vivo Characterization, Ann. Neurol. 25:351-356; Howard et al. (1989), Intracerebral Drug Delivery In Rats With Lesion-Induced Memory Deficits, J. Neurosurg. 7(1):105-112); патенты США № 5679377; 5916597; 5912015; 5989463; 5128326; международные патентные публикации согласно РСТ № WO 99/15154 и WO 99/20253). Примеры полимеров, используемых в составах замедленного высвобождения, включают в себя без ограничения полимер 2-гидроксиэтилметакрилата, полимер метилметакрилата, полимер акриловой кислоты, сополимер этилена и винилацетата, полимер метакриловой кислоты, полигликолиды (PLG), полиангидриды, полимер N-винилпирролидона, полимер винилового спирта, полиакриламид, полиэтиленгликоль, полилактиды (PLA), сополимер лактидов и гликолидов (PLGA) и полиортоэфиры. Согласно другому варианту осуществления систему контролируемого высвобождения можно разместить вблизи к терапевтической мишени (например, легким), таким образом, будет необходима только доля системной дозы (см., например, Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, ранее, vol. 2, p. 115-138 (1984)). Согласно другому варианту осуществления полимерные композиции, пригодные в качестве имплантатов контролируемого высвобождения, используются согласно Dunn с соавт. (см. патент США № 5945155). Указанный конкретный способ основан на терапевтическом эффекте in situ контролируемого высвобождения биоактивного материала из полимерной системы. Имплантация, как правило, происходит в любом месте в организме пациента, нуждающегося в терапевтическом лечении. Согласно другому варианту осуществления используют неполимерную систему замедленной доставки, при помощи которой неполимерный имплантат в организме субъекта используется в качестве системы доставки лекарственного средства. При имплантации в организм органический растворитель имплантата будет рассеиваться, диспергироваться или выщелачиваться из композиции в окружающую тканевую жидкость, и неполимерный материал будет постепенно коагулировать или осаждаться с образованием твердой, микропористой матрицы (см. патент США № 5888533).
Системы контролируемого высвобождения обсуждаются в обзоре Langer (1990, New Methods Of Drug Delivery, Science 249:1527-1533). Любую технику, известную специалисту в настоящей области техники, можно использовать для получения составов замедленного высвобождения, содержащих одно или несколько терапевтических средств согласно настоящему изобретению. См., например, патент США № 4526938; международные патентные публикации № WO 91/05548 и WO 96/20698; Ning et al. (1996), Intratumoral Radioimmunotheraphy Of A Human Colon Cancer Xenograft Using A Sustained-Release Gel, Radiotherapy & Oncology, 39:179-189, Song et al. (1995), Antibody Mediated Lung Targeting Of Long-Circulating Emulsions, PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology, 50:372-397; Cleek et al. (1997), Biodegradable Polymeric Carriers For A bFGF Antibody For Cardiovascular Application, Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854; и Lam et al. (1997), Microencapsulation Of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody For Local Delivery, Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-760, каждая из которых полностью включена в настоящий документ посредством ссылки.
Согласно конкретному варианту осуществления, в случае если композиция согласно настоящему изобретению представляет собой нуклеиновую кислоту, кодирующую биспецифическое моновалентное диатело или биспецифическое моновалентное Fc-диатело согласно настоящему изобретению, нуклеиновая кислота может быть введена in vivo для стимуляции экспрессии кодируемого ею биспецифического моновалентного диатела или биспецифического моновалентного Fc диатела, путем конструирования ее в виде части соответствующего нуклеиновокислотного экспрессионного вектора и введения ее так, чтобы она стала внутриклеточной, например, путем применения ретровирусного вектора (см. патент США № 4980286), или путем прямой инъекции, или путем использования бомбардировки микрочастицами (например, генной пушки; Biolistic, Dupont), или покрытия липидами, или рецепторами клеточной поверхности, или средствами трансфекции, или путем введения ее, соединенной с гомеобокс-подобным пептидом, который, как известно, проникает в ядро (см., например, Joliot et al. (1991), Antennapedia Homeobox Peptide Regulates Neural Morphogenesis, Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88:1864-1868) и т.д. Альтернативно, нуклеиновая кислота может быть введена внутриклеточно и встроена в ДНК клетки-хозяина для экспрессии путем гомологичной рекомбинации.
Лечение субъекта с помощью терапевтически или профилактически эффективного количества gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател или gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных Fc-диател согласно настоящему изобретению может включать в себя однократное лечение или предпочтительно может включать в себя серию лечений. Согласно предпочтительному примеру субъект получает лечение с помощью молекул согласно настоящему изобретению один раз в неделю приблизительно 1-10 недель, предпочтительно 2-8 недель, более предпочтительно приблизительно 3-7 недель и даже более предпочтительно в течение приблизительно 4, 5 или 6 недель. Согласно другим вариантам осуществления фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению вводят один раз в день, два раза в день или три раза в день. Согласно другим вариантам осуществления фармацевтические композиции вводят один раз в неделю, два раза в неделю, один раз в две недели, один раз в месяц, каждые шесть недель, один раз в два месяца, дважды в год или один раз в год. Также следует понимать, что эффективная дозировка молекул, используемых для лечения, может увеличиваться или уменьшаться в
- 24 036236 течение курса конкретного лечения.
Представив описание настоящего изобретения в общих чертах, оно станет более понятным со ссылкой на следующие примеры, которые представлены для иллюстрации, и не предусмотрено, что они ограничивают настоящее изобретение, если не указано иное.
Пример 1.
Характеристики моноклонального антитела к gpA33 человека.
Мышиное моноклональное антитело, способное специфически связываться с gpA33 человека, подвергали химеризации и гуманизации. Цепи VL и VH исходного мышиного антитела характеризуются последовательностями SEQ ID NO: 13 и 17, соответственно. Цепи VL и VH гуманизированного антитела характеризуются последовательностями SEQ ID NO: 26 и 27, соответственно.
Антигенсвязывающий домен VLgpA33 содержит
CDR1 с последовательностью (SEQ ID NO: 14): SARSSISFMY;
CDR2 с последовательностью (SEQ ID NO: 15): DTSNLAS и
CDR3 с последовательностью (SEQ ID NO: 16): QQWSSYPLT.
Антигенсвязывающий домен VHgpA33 содержит
CDR1 с последовательностью (SEQ ID NO: 18): GSWMN;
CDR2 с последовательностью (SEQ ID NO: 19): RIYPGDGETNYNGKFKD и
CDR3 с последовательностью (SEQ ID NO: 20): IYGNNVYFDV.
В табл. 1 показан эффект таких изменений на кинетику связывания.
Таблица 1
| Антитело | KD | ка | kd |
| Мышиное гпАЬ 1 | 2,3 нМ | 3,3 х 10s | 7,5 х ΙΟ’4 |
| Химерное mAb 1 | 2,4 нМ | 5,8 х 10’ | 1,4 х 10‘3 |
| Г уманизированное mAb 1 | 3,4 нМ | 5,6 х 10’ | 1,9 χ 10’3 |
Данные показывают, что модификации, приводящие к гуманизации доменов VL и VH антитела, не оказывают существенное влияние на кинетику связывания с gpA33.
Пример 2.
Конструкция gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател и Fc-диател и контрольных диател.
В табл. 2 содержится перечень последовательностей полипептидных цепей предпочтительных gpA33 х CD3 диател и gpA33 х CD3 Fc-диател, которые экспресировали и очищали. Обнаружили, что диатела способны одновременно связываться с gpA33 и CD3, судя по обнаружению такого одновременного связывания иллюстративными gpA33 х CD3 биспецифическими моновалентными диателами, DART-1 и DART-2, и иллюстративным gpA33 х CD3 биспецифическим моновалентным Fc-диателом (DART-2 w/Fc). Кроме того, получили контрольное биспецифическое моновалентное диатело (контрольное DART), которое являлось биспецифическим моновалентным в отношении CD3 и FITC, и было обнаружено, что оно способно одновременно связываться с CD3 и FITC.
- 25 036236
Таблица 2
| Диатело | Полипептиды - заместители (в направлении от N-конца к С-концу) |
| gpA33 X CD3 биспецифическое моновалентное диатело (DART-1) | SEQ ID NO:21 SEQ ID NO:23 |
| gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело (DART-2) | SEQ ID NO:28 SEQ ID NO:30 |
| gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело, содержащее альбуминсвязывающий домен (DART-2 w/ABD), содержит альбуминсвязывающий домен (ABD) для увеличения периода полужизни in vivo | SEQ ID NO:35 SEQ ID NO:30 |
| gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело, содержащее версию 1 домена Fc IgG (версия 1 DART-2 w/Fc), содержит домен Fc для увеличения периода полужизни in vivo | SEQ ID NO:42 SEQ ID NO:44 SEQ ID NO:46 |
| gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело, содержащее версию 2 домена Fc IgG (версия 2 DART-2 w/Fc), содержит домен Fc для увеличения периода полужизни т vivo | SEQ ID NO:48 SEQ ID NO:28 SEQ ID NO:46 |
gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела представляют собой гетеродимеры, состоящие из двух полипептидных цепей (одна цепь каждой перечисленной последовательности), и gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные Fc-диатела представляют собой гетеродимеры, состоящие из трех полипептидных цепей (одна цепь каждой перечисленной аминокислотной последовательности). Способы образования биспецифических моновалентных диател представлены в международных патентных публикациях № WO 2006/113665, WO 2008/157379, WO 2010/080538, WO 2012/018687, WO 2012/162068 и WO 2012/162067.
Было обнаружено, что контрольное CD3 х FITC биспецифическое моновалентное диатело способно одновременно связываться с CD3 и с FITC. Было обнаружено, что описанные выше gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела и gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные Fc-диатела способны одновременно связываться с gpA33 и с CD3. Чтобы продемонстрировать такое одновременное связывание, gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело DART-1 инкубировали в присутствии растворимого фрагмента CD3, который был иммобилизирован на твердой подложке. Обнаружение связывания оценивали с помощью способности иммобилизированных антител дополнительно связывать gpA33. Результаты подтверждают способность описанных выше gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател и gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных Fc-диател опосредовать одновременное связывание с gpA33 и CD3 (фиг. 3)
Пример 3.
gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела являются цитотоксическими в отношении злокачественных клеток.
Способность gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател согласно настоящему изобретению лечить злокачественную опухоль проиллюстрировали путем инкубации клеток колоректального рака или клеток рака поджелудочной железы в присутствии gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного DART-1 и либо РВМС человека (Е:Т = 25:1), либо активированных Т-клеток человека (Е:Т = 10:1). gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело DART-1 проявило сильную способность к перенаправленному цитолизу с концентрациями, требующими достижения 50% максимальной активности (ЕС50) в диапазоне от суб-нг/мл до приблизительно 1 нг/мл. Напротив, цитотоксичность не наблюдалась при использовании gpA33-отрицательных клеточных линий злокачественной опухоли (например, НСТ116). Результаты исследования показаны на фиг. 4А (клетки колоректального рака, сходные со стволовыми (клетки Colon CSCL), На фиг. 4В (клетки колоректального рака Со1о205) и на фиг. 4С (клетки рака поджелудочной железы ASPC-1). Результаты обобщенно представлены в табл. 3.
- 26 036236
Таблица 3
| Целевая клеточная линия | ЕС50 gpA33 X CD3 биспецифического моновалентного диатела (нг/мл) | Эффектор: мишень (Е:Т) | Максимальный наблюдаемый цитолиз в % |
| Colon CSLC | 0,9015 | 25:1 | 38 |
| Со1о205 | 0,5853 | 10:1 | 35 |
| ASPC-1 | 1,142 | 10:1 | 25 |
Пример 4.
Т-клеточная активация в присутствии gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател.
Для того чтобы дополнительно показать способность диател согласно настоящему изобретению лечить злокачественную опухоль, дремлющие Т-клетки человека инкубировали с gpA33 х CD3 биспецифическими моновалентными DART-1 в присутствии или при отсутствии злокачественных клеток (colo205 или ASPC-1). Для получения характеристик Т-клеточной активации во время опосредованного gpA33 х CD3 биспецифическим моновалентным диателом (DART-1) процесса перенаправленного цитолиза, Т-клетки из анализов перенаправленного цитолиза окрашивали в отношении маркера Т-клеточной активации CD25 и анализировали с помощью FACS. CD25 подвергался положительной регуляции в CD8 (фиг. 5А, 5В) и CD4 (фиг. 5D, 5E) Т-клетках зависимым от дозы образом, указывая на то, что gpA33 х CD3 биспецифические моновалентные диатела индуцировали Т-клеточную активацию в процессе перенаправленного цитолиза. Напротив, при отсутствии клеток-мишеней не наблюдалась активация CD8 (фиг. 5С) или CD4 (фиг. 5F) Т-клеток, что указывает на то, что gp-A33 х CD3 диатела не активируют Т-клетки при отсутствии клеток-мишеней. Аналогично, CD8 или CD4 Т-клетки не были активированы при инкубации с клетками-мишенями и контрольным биспецифическим моновалентным диателом (контрольным DART) (фиг. 5А, 5В и 5D-5F соответственно), что указывает на необходимость перекрестной сшивки Т-клетки и клетки - мишени с gpA33 х CD3 биспецифическими моновалентными диателами.
Пример 5.
Эквивалентность gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела (DART-1), характеризующегося последовательностями мышиного вариабельного домена антитела к gpA33 человека, и gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела (DART-2), характеризующегося последовательностями гуманизированного вариабельного домена антитела к gpA33 человека
Как обсуждалось выше, gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело DART-1 содержит домены VLgpA33 и VHgpA33 мышиного моноклонального антитела, тогда как gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело DART-2 содержит гуманизированный домен VLgpA33 и гуманизированный домен VHgpA33 того же мышиного антитела. Чтобы продемонстрировать способность гуманизированных доменов VLgpA33 и VHgpA33 стимулировать нацеливание Т-клеток на экспрессирующие gpA33 злокачественные клетки, злокачественные клетки, которые экспрессируют gpA33, инкубировали в присутствии дремлющих Т-клеток (анализ LDH; Е:Т = 10:1) в присутствии либо DART-1, DART-1, либо контрольного биспецифического моновалентного диатела (контрольного DART). Результаты настоящего анализа (показанного на фиг. 6A-6D) показали, что DART-1 и DART-2 опосредовали эквивалентную цитотоксичность в отношении клеток колоректальной аденокарциномы SW948 (фиг. 6А) и клеток colo205 (фиг. 6В). Как DART-1, так и DART-2 опосредовали цитотоксичность экспрессирующей люциферазу клеточной линии Со1о205, которая была стабильно трансфектирована с геном люциферазы светлячка (luc2) (Colo205-Luc), что измеряли по сниженной люминесценции (фиг. 6С). Ни DART-1, ни DART-2 не опосредовали цитотоксичность gpA33-отрицательной клеточной линии злокачественной опухоли, НСТ116 (фиг. 6D). Как показано в табл. 4, DART-1 и DART-2 проявили сходную эквивалентную биоактивность против множественных опухолевых клеточных линий.
Таблица 4
| Эффектор/мн шеи ь | Анализ LDH | Люциферазный анализ | |||
| Донорная Т-клетка | Опухолевая клеточная линия | gpA33xCD3 DART-2 | gpA33xCD3 DART1 | gpA33xCD3 DART-2 | gpA33xCD3 DART1 |
| D54677 | SW948 | 0,79 | 1,34 | ||
| D54677 | Со1о205 | 1,17 | 2,52 | ||
| D51031 | Colo205-Luc | 2,29 | 3,53 | 2,53 | 4,55 |
| D41440 | Со1о205 | 2,29 | 3,37 | ||
| D41440 | Colo205-Luc | 2,80 | 4,26 | 2,57 | 3,26 |
- 27 036236
Пример 6.
Перекрестная реактивность gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател, gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател, содержащих альбуминсвязывающий домен, и gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател, содержащих домен Fc IgG, с РВМС яванского макака.
Как показано выше, гуманизированный домен VLgpA33 и гуманизированный домен VHgpA33 gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела DART-2 опосредуют цитотоксичность §рАЗЗэкспрессирующих злокачественных клеток в присутствии Т-клеток человека. Неожиданно обнаружили, что домены VLCD3 и VHCD3 gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател согласно настоящему изобретению также способны связываться с CD3 Т-клеток яванского макака и перенаправлять указанные клетки на уничтожение экспрессирующих gpA33 клеток.
Как показано на фиг. 7A-7D, было обнаружено, что все из gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела DART-2, gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела, содержащего альбуминсвязывающий домен (DART-2 w/ABD), и gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела DART-2, содержащего домен Fc IgG (DART-2 w/Fc) были способны стимулировать цитотоксичность злокачественных клеток в присутствии РВМС человека или яванского макака. На фиг. 7А, 7В показана способность трех диател опосредовать цитотоксичность клеток Colo205-Luc, которые инкубировали с РВМС человека, которую измеряли с помощью анализа LDH (фиг. 7А) или люциферазного анализа (фиг. 7В). На фиг. 7C, 7D показана соответствующая способность трех диател опосредовать цитотоксичность клеток Colo205-Luc, которые инкубировали с РВМС яванского макака, которую измеряли с помощью анализа LDH (фиг. 7А) или люциферазного анализа (фиг. 7В).
Как показано в табл. 5, gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело DART-2 и gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело, содержащее альбуминсвязывающий домен (DART-2 w/ABD), проявляли сопоставимую CTL -активность. Биспецифические моновалентные диатела проявили сходную активность в отношении эффекторных клеток РВМС как человека, так и яванского макака (cyno).
Таблица 5
| ЕС50 - CTL активность (нг/мл) Клетки - мишени Со1о205 | ||||
| Анализ LDH | Люциферазный анализ | |||
| DART | РВМС человека | РВМС супо | РВМС человека | РВМС супо |
| gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело (DART-2) | 4,09 | 3,81 | 2,73 | 1,55 |
| gpA33 X CD3 биспецифическое диатело, содержащее альбуминсвязывающий домен (DART-2 w/ABD) | 5,52 | 4,63 | 3,07 | 1,63 |
Пример 7.
In vivo реактивность gpA33 х CD3 диатела в мышиной модели опухоли толстой кишки.
Чтобы продемонстрировать in vivo способность gpA33 х CD3 диател согласно настоящему изобретению обеспечивать лечение злокачественной опухоли, клетки colo205 имплантировали совместно с активированными Т-клетками в страдающих диабетом без ожирения с тяжелой комбинированной иммунной недостаточностью гамма мышей (Agliano, A. et al. (2008), Human Acute Leukemia Cells Injected In NOD/Ltsz-Scid/IL-2Rgamma Null Mice Generate A Faster And More Efficient Disease Compared To Other NOD/Scid-Related Strains, Int. J. Cancer, 123(9):2222-2227; Sanchez, P.V. et al. (2009), A Robust Xenotransplantation Model For Acute Myeloid Leukemia, Leukemia, 23(11):2109-2117; Racki, W.J. et al. (2010), NOD-Scid IL2rgamma(Null) Mouse Model Of Human Skin Transplantation And Allograft Rejection, Transplantation, 89(5):527-536; Choi, B. et al. (2011), Human В Cell Development And Antibody Production In Humanized NOD/SCID/IL-2Ry(Nu11) (NSG) Mice Conditioned By Busulfan, J. Clin. Immunol. 31(2):253264; Sartelet, H. et al. (2012), Description Of A New Xenograft Model Of Metastatic Neuroblastoma Using NOD/SCID/Il2rg Null (NSG) Mice, In Vivo, 26(1):19-29; Spranger, S. et al. (2012), NOD/scid IL-2Rg(null) Mice: A Preclinical Model System To Evaluate Human Dendritic Cell-Based Vaccine Strategies in vivo, J. Transl. Med. 10:30; von Bonin, M. et al. (2013), in vivo Expansion Of Co-Transplanted T Cells Impacts On Tumor Re-Initiating Activity Of Human Acute Myeloid Leukemia In NSG Mice, PLoS One. 8(4):e60680).
gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело DART-1 вводили внутривенно мышам один раз в день в течение 4 дней (QDх4), начиная со дня имплантации. Обнаружили, что объем опухоли Со1о205 увеличился у мышей, получающих контроль - инертный носитель (фиг. 8). Тем не менее, обна- 28 036236 ружили, что животные, получающие DART-1, проявляли пониженный объем опухоли Со1о205 или ее отсутствие (фиг. 8).
Изображение мышей NSG, которым имплантировали клетки Со1о205, показало, что на 2 день лечение мыши, получающие инертный носитель (фиг. 9А) или gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело DART-1 (фиг. 9В), характеризовались наличием значительных опухолей. Тем не менее, на 12 день лечения мыши, получающие gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело DART-1, характеризовались резко уменьшенными объемами опухолей (фиг. 9D). На 12 день лечения мыши, получающие инертный носитель, продемонстрировали увеличенный объем опухоли (фиг. 9С).
В качестве дополнительного доказательства in vivo способности gpA33 х CD3 диател согласно настоящему изобретению обеспечивать лечение злокачественной опухоли, описанную выше модель опухоли проводили с использованием клеток опухоли поджелудочной железы ASPC-1 и активированных Т-клеток человека (Е:Т = 1:1). gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело DART-1, контрольное биспецифическое моновалентное диатело (контрольное DART) или инертный носитель вводили внутривенно один раз в день в течение 9 дней (QDx9), начиная со дня имплантации. Обнаружили, что объем опухоли ASPC-1 увеличивался у мышей, получающих контроль - инертный носитель (фиг. 10). Тем не менее, обнаружили, что животные, получающие DART-1, проявляли уменьшенный объем опухоли, зависимым от дозы образом (фиг. 10).
Пример 8.
Определение эффективности версии 1 gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела, содержащего домен Fc IgG (версии 1 DART-2 w/Fc).
Для определения эффективности версии 1 gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела, содержащего домен Fc IgG (версии 1 DART-2 w/Fc), мышам проводили инфузию (с использованием осмотических насосов) в течение 7 дней с описанной выше версией 1 DART-2 w/Fc при различных уровнях дозировки. Через 48 ч после имплантации насоса (т.е. в присутствии устойчивого уровня циркулирующей в крови версии 1DART-2 w/Fc), смесь опухолевых клеток Со1о205 и Т-клеток имплантировали подкожно в организм мышей и осуществляли мониторинг степени роста опухоли. В табл. 6 обобщенно представлена схема исследования; каждая группа содержала по 8 самок мышей.
Таблица 6
| Группа | Лечение | Доза (мг/кг) | Путь / Схема | Клеточный(е) имплантат(ы) |
| 1 | Инертный носитель | 0 | IV/QDx5 | COLO205 (5E6) |
| 2 | gpA33xCD3 биспецифическое моновалентное диатело, содержащее домен Fc IgG (версия 1 DART-2 w/Fc) | 3,1 | IP/CIF | COLO205 (5E6) hT-клетки (5E6) |
| 3 | Версия 1 DART-2 w/Fc | 1,5 | IP/CIF | COLO205 (5E6) hT-клетки (5E6) |
| 4 | Версия 1 DART-2 w/Fc | 0,75 | IP/CIF | COLO205 (5E6) hT-клетки (5E6) |
| 5 | Версия 1 DART-2 w/Fc | 0,375 | IP/CIF | COLO205 (5E6) hT-клетки (5E6) |
| 6 | Версия 1 DART-2 w/Fc | 0,5 | IV/QDx5 | COLO205 (5E6) hT-клетки (5E6) |
Результаты настоящего исследования показаны На фиг. 11 и указывают на то, что введение описанных выше gpA33 х CD3 биспецифических моновалентных диател, содержащих домен Fc IgG (версии 1 DART-2 w/Fc), опосредовало резкое снижение объема опухоли во всех исследованных дозировках.
В свете резкого снижения объема опухоли, полученного в представленном выше исследовании, провели дополнительное исследование для оценки эффективности в намного меньших дозах. В табл. 7 обобщенно представлена схема этого дополнительного исследования; каждая группа содержала по 8 самок мышей.
- 29 036236
Таблица 7
| Группа | Лечение | Доза (мг/кг) | Путь/ Схема | Клеточный(е) нмплантат(ы) |
| 1 | Инертный носитель | 0 | IV/QDx5 | COLO205 (5E6) |
| 2 | gpA33xCD3 биспецифическое Моновалентное диатело, содержащее домен Fc IgG (версия 1 DART-2 w/Fc) | 0,2 | IP/CIF | COLO205 (5E6) hT-клетки (5E6) |
| 3 | Версия 1 DART-2 w/Fc | 0,04 | IP/CIF | COLO205 (5E6) hT-клетки (5E6) |
| 4 | Версия 1 DART-2 w/Fc | 0,008 | IP/CIF | COLO205 (5E6) hT-клетки (5E6) |
| 5 | Версия 1 DART-2 w/Fc | 0,0016 | IP/CIF | COLO205 (5E6) hT-клетки (5E6) |
| 6 | Версия 1 DART-2 w/Fc | 0,5 | IV/QDx5 | COLO205 (5E6) hT-клетки (5E6) |
Результаты этого дополнительного исследования показаны на фиг. 12, на которой каждый символ обозначает животное, которое получило указанную дозировку описанного выше gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела, содержащего домен Fc IgG (версии 1 DART-2 w/Fc), или инертного носителя. Данные показывают эффективность во всех исследованных дозировках.
Пример 9.
Фармакокинетический профиль gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела (DART-2) и gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного диатела, содержащего домен Fc IgG (DART-2 w/Fc), у яванского макака.
Способность доменов VLCD3 и VHCD3 диател согласно настоящему изобретению связываться с CD3 яванского макака обеспечивает возможность применения этих животных для измерения in vivo фармакокинетики диател согласно настоящему изобретению.
Для измерения таких фармакокинетических параметров описанное выше gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело (DART-2) или gpA33 х CD3 биспецифическое моновалентное диатело, содержащее домен Fc IgG (версия 1 DART-2 w/Fc) вводили с помощью инъекции яванским макакам (10 мкг/кг/день) и подвергали мониторингу концентрацию таких молекул, оставшихся в кровотоке. На фиг. 13 показан результат этого исследования и указано, что DART-2 и версия 1 DART-2 w/Fc проявляют кинетику выведения первого порядка.
Пример 10.
Анализ SPR связывания gpA33 х CD3 биспецифического моновалентного Fc-диатела (версии 1 DART-1 w/Fc) с CD3 и gpA33 человека и яванского макака.
Связывание gpA33 х CD3 биспецифического Fc-диатела (версии 1 DART-2 w/Fc) с растворимыми версиями рецептора CD3 человека и яванского макака анализировали с помощью SPR на биосенсоре BIAcore 3000 (GE, Healthcare). Рецепторы иммобилизировали на сенсорном чипе СМ5 согласно процедуре, рекомендуемой производителем. Кратко, карбоксильные группы на поверхности сенсорного чипа активировали инъекцией раствора, содержащего 0,2 М №этил-Ы-(3-диэтиламинопропил)карбодиимида и 0,05 М N-гидрокси-сукцинимида. Рецептор растворимого CD3 (1 мкг/мл) затем впрыскивали на активированную поверхность СМ5 в 10 мМ ацетата натрия, рН 5,0, с объемной скоростью потока, составляющей 5 мкл/мин, с последующим добавлением 1 М этаноламина для деактивации.
Растворимые версии CD3 яванского макака и человека, используемые в таком анализе, экспрессировали в клетках млекопитающих в виде CD3ε/CD3δ гетеродимера, стабилизированного противоположно заряженными стимулирующими образование гетеродимера Е-спиральными и K-спиральными последовательностями на их С-концах. Растворимый CD3ε яванского макака содержал первые 118 аминокислотных остатков CD3ε яванского макака с аллелем V35 (FN18+), за которым следовал описанный выше Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3) на карбокси-конце. Аминокислотная последовательность аллеля
- 30 036236
V35 (FN18+) CD3ε яванского макака представляет собой следующее (SEQ ID NO: 49):
MQ5GTRWRVL QHLGSEAQWQ HHLYLKARVC KPVTRGAGAG
GLCLLSIGVW HNGKNKEDSG ENCMEMDVMA GRQRGQNKER
GQDGNEEMGS DRLFLPEFSE VATIVIVDIC PPPVPNPDYE
ITQTPYQVSI MEQSGYYVCY ITLGLLLLVY PIRKGQQDLY
SGTTVILTCS PRGSNPEDAS YWSKNRKAKA SGLNQRRI
Растворимый CD3δ яванского макака содержал первые 101 аминокислотный остаток CD3δ яванского макака, за которым следовал описанный выше K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4) на карбоксиконце. Аминокислотная последовательность (SEQ ID NO: 50):
CD3δ яванского макака представляет собой следующее
MEHSTFLSGL LLTNNTRLDL PATLAGIIVT PLRDRDDAQY
VLATLLSQVS GKRILDPRGI DVIATLLLAL SRLGGNWARN
PFKIPVEELE
YRCNGTDIYK GVFCFAGHET К
DRVFVKCNTS DKESAVQVHY GRLSGAADTQ
VTWVEGTVGT RMCQNCVELD ALLRNDQVYQ
Два белка коэкспрессировали в клетках CHO-S млекопитающего и очищали с использованием mAb к Е/К-спирали, прикрепленном к SEPHAROSE®.
Растворимый ΟΟ3ε человек содержал остатки 1-127 CD3ε человека с C119S и C122S, за которыми следовал описанный выше Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3) на карбокси-конце. Аминокислотная последовательность ΟΟ3ε человека представляет собой следующее (SEQ ID NO: 51):
MQSGTHWRVL QYPGSEILWQ RGSKPEDANF WSKNRKAKAK GLNQRRI
GLCLLSVGVW HNDKNIGGDE YLYLRARVCE PVTRGAGAGG
GQDGNEEMGG DDKNIGSDED NCMEMDVMSV RQRGQNKERP
ITQTPYKVSI HLSLKEFSEL· ATIVIVDICI PPVPNPDYEP
SGTTVILTCP EQSGYYVCYP TGGLLLLVYY IRKGQRDLYS
Растворимый CD3δ человека содержал остатки 1-101
CD3δ человека, за которыми следовал описанный выше K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4) на карбокси-конце. Два белка коэкспрессировали в клетках CHO-S млекопитающего и очищали с использованием с использованием аффинной колонки к
Е/К-спирали. Аминокислотная последовательность CD3δ (SEQ ID NO: 52):
человека представляет собой следующее
FKIPIEELE
YRCNGTDTYK
DRVFVNCNTS
DKESTVQVHY
ITWVEGTVGT
RMCQSCVELD
LLSDITRLDL
PATVAGIIVT
GKRILDPRGI
DVIATLLLAL
GVFCFAGHET GRLSGAADTQ ALLRNDQVYQ PLRDRDDAQY SHLGGNWARN К
Растворимый gpA33 человека содержал остатки 1-235 gpA33 человека с (SEQ ID NO: 53) повторами НННННН (6His) на карбокси-конце. Растворимый gpA33 яванского макака содержал остатки 1-314 gpA33 яванского макака от Met 1 до Gln 314 с 6 His повторами на карбокси-конце. Белки экспрессировали в клетках CHO-S млекопитающего и очищали с использованием Ni SEPHAROSE®.
Эксперименты по связыванию проводили в буфере HBS-EP, который содержит 10 мМ HEPES, рН 7,4, 150 мМ NaCl, 3 мМ EDTA и 0,005% поверхностно-активное вещество Р20. Связывание версии 1 DART-2 w/Fc анализировали (в двух параллелях) в концентрациях, составляющих 0, 6,25, 12,5, 25, 50 и 100 нМ, впрыскиваемых в течение 120 с с объемной скоростью потока, составляющей 30 мкл/мин.
Восстановление поверхности иммобилизированного рецептора проводили путем импульсной инъекции 10 мМ глицина, рН 1,5. Стандартные кривые получали путем впрыскивания каждого разведения DART-2 w/Fc на обработанную поверхность без иммобилизированного белка. Кривые связывания в нулевой концентрации вычитали как фон. Данные KD определяли путем глобальной аппроксимации кривых связывания с моделью связывания 1: 1 Ленгмюра (программное обеспечение BIAevaluation™ v4.1).
Анализ SPR связывания gpA33 х CD3 биспецифического Fc-диатела (версии 1 DART-2 w/Fc) с CD3 и gpA33 человека и яванского макака продемонстрировал существенное сходство молекул из двух различных видов (фиг. 14А, 14В; фиг. 15А, 15В). В табл. 8 представлены равновесные константы диссоциации (KD), рассчитанные путем глобальной аппроксимации к константам аффинности и кинетическим константам 1:1 модели Ленгмюра для взаимодействий DART-2 w/Fc. Значения KD версии 1 DART-2 w/Fc для CD3 человека и яванского макака являются почти идентичными при 23 и 26 нМ соответственно, несмотря на некоторое различие в реакциях максимального связывания между двумя антигенами. Случайная ориентация антигенов с различными аминокислотными последовательностями, непосредственно иммобилизированными на поверхности, может привести к различным плотностям доступных сайтов связывания на поверхности. Значения KD для взаимодействия версии 1 DART-2 w/Fc с gpA33 человека и обезьяны представляют собой 2,2 и 12 нМ соответственно (табл. 8). Различие в аффинности является результатом небольшого снижения константы скорости ассоциации и увеличения константы скорости диссоциации для взаимодействия версии 1 DART-2 w/Fc с gpA33 яванского макака (табл. 8). Данные представляют собой средние значения от трех независимых экспериментов в двух параллелях (SD = стандартное отклонение; h, человек; cyno, яванский макак).
- 31 036236
Таблица 8
Равновесные константы диссоциации (KD) для связывания версии 1 DART-2 W/Fc с антигенами из различных видов
| Антигены | ka (±SD) (M-'c1) | kd (±SD) (с1) | Kd(±SD) (hM) |
| hCD3s/3 | l,5(±0,l)x 105 | 3,5(±0,06)xl0‘3 | 23 ±2,0 |
| cynoCD3s/6 | l,3(±0,02)xl05 | 3,4(±0,02) xlO-3 | 26 ±0,6 |
| hgpA33-His | 4,2(±0,3) xlO5 | 9,0(±0,5)xl0“’ | 2,2±0,2 |
| cynogpA33-His | 2,3(±0,2)xl05 | 2,8(±0,l) xlO'3 | 12±l,0 |
Все упомянутые в настоящем описании изобретения публикации и патенты включены в настоящий документ в той же степени, как если бы было предусмотрено, что каждая отдельная публикация или патентная заявка специально и индивидуально включена посредством ссылки во всей своей полноте. Наряду с тем, что настоящее изобретение было описано с использованием конкретных его вариантов осуществления, следует понимать, что возможны дополнительные модификации, и предусмотрено, что настоящий документ охватывает любые изменения, применения или адаптации настоящего изобретения, следуя в целом принципам настоящего изобретения и включая в себя такие отклонения от настоящего раскрытия, которые согласуются с известной или общепринятой практикой в настоящей области техники, к которой принадлежит настоящее изобретение, и которые могут быть применены к основным признакам, изложенным выше в настоящем документе.
Claims (23)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Биспецифическое моновалентное диатело, способное специфично связываться с эпитопом гликопротеина А33 (gpA33) и с эпитопом CD3, содержащее первую полипептидную цепь и вторую полипептидную цепь, причем указанная первая и вторая полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом, и при этом:A) первая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу:i) домен 1, содержащий субдомен (1А), который содержит домен VL моноклонального антитела, способного связываться с CD3 (VLCD3) (SEQ ID NO: 5); и субдомен (1В), который содержит домен VH моноклонального антитела, способного связываться с gpA33 (VHgpA33) (SEQ ID NO: 27); причем указанные субдомены (1А) и (1В) отделены друг от друга пептидным линкером (SEQ ID NO: 1);ii) домен 2, представляющий собой K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4) или Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3), причем указанный домен 2 отделен от указанного домена 1 пептидным линкером (SEQ ID NO: 2);B) вторая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу:i) домен 1, содержащий субдомен (1А), который содержит домен VL моноклонального антитела, способного связываться с gpA33 (VLgpA33) (SEQ ID NO: 26), и субдомен (1B), который содержит домен VH моноклонального антитела, способного связываться с CD3 (VHCD3) (SEQ ID NO: 25), причем указанные субдомены (1А) и (1В) отделены друг от друга пептидным линкером (SEQ ID NO: 1);ii) домен 2, представляющий собой Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3) или K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4), причем указанный домен 2 отделен от указанного домена 1 пептидным линкером (SEQ ID NO: 2); и причем указанный домен 2 указанной первой полипептидной цепи и указанный домен 2 указанной второй полипептидной цепи не представляют собой оба Е-спиральных домена или оба K-спиральных домена; и при этом:(a) указанный домен VL указанной первой полипептидной цепи и указанный домен VH указанной второй полипептидной цепи образуют антигенсвязывающий домен, способный специфично связываться с эпитопом CD3; и (b) указанный домен VH указанной первой полипептидной цепи и указанный домен VL указанной второй полипептидной цепи образуют антигенсвязывающий домен, способный специфично связываться с эпитопом gpA33.
- 2. Биспецифическое моновалентное диатело по п.1, в котором указанная первая полипептидная цепь содержит альбуминсвязывающий домен (SEQ ID NO: 34), причем указанный альбуминсвязывающий домен расположен на С-конце по отношению к указанному домену 2 и отделен от указанного домена 2 линкером 3 (SEQ ID NO: 32).
- 3. Биспецифическое моновалентное Fc-диатело, способное специфично связываться с эпитопом гликопротеина А33 (gpA33) и с эпитопом CD3 и содержит домен Fc IgG, содержащее первую полипептидную цепь, вторую полипептидную цепь и третью полипептидную цепь, причем указанная первая и вторая полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом и указанная первая и третья полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом, и при этом:А) первая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу:i) домен 1, содержащий субдомен (1А), который содержит домен VL моноклонального антитела, способного связываться с gpA33 (VLgpA33) (SEQ ID NO: 26), и субдомен (1B), который содержит домен- 32 036236VH моноклонального антитела, способного связываться с CD3 (VHCD3) (SEQ ID NO: 25), причем указанные субдомены (1А) и (1В) отделены друг от друга пептидным линкером (SEQ ID NO: 1);ii) домен 2, представляющий собой Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3) или K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4), причем указанный домен 2 отделен от указанного домена 1 пептидным линкером (SEQ ID NO: 2); и iii) домен 3, содержащий субдомен (3А), который содержит цистеинсодержащий пептид (пептид 1) (SEQ ID NO: 39), и субдомен (3В), который содержит полипептидную часть домена Fc IgG, имеющую домены СН2 и СН3 домена Fc иммуноглобулина IgG; причем указанные домены 3 и 2 отделены друг от друга спейсерным пептидом, характеризующимся последовательностью GGG (линкер 5);B) вторая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу:i) домен 1, содержащий субдомен (1А), который содержит домен VL моноклонального антитела, способного связываться с CD3 (VLCD3) (SEQ ID NO: 5), и субдомен (1В), который содержит домен VH моноклонального антитела, способного связываться с gpA33 (VHgpA33) (SEQ ID NO: 27); причем указанные субдомены (1А) и (1В) отделены друг от друга пептидным линкером (SEQ ID NO: 1);ii) домен 2, представляющий собой K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4) или Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3), причем указанный домен 2 отделен от указанного домена 1 пептидным линкером (SEQ ID NO: 2); и причем указанный домен 2 указанной первой полипептидной цепи и указанный домен 2 указанной второй полипептидной цепи не представляют собой оба Е-спиральных домена или оба K-спиральных домена; иC) третья полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу домен 3, содержащий:(1) субдомен (3А), который содержит цистеинсодержащий пептид (пептид 1) (SEQ ID NO: 39); и (2) субдомен (3В), который содержит полипептидную часть домена Fc IgG, имеющую домены СН2 и СН3 домена Fc иммуноглобулина IgG;и при этом:(a) указанные полипептидные части доменов Fc IgG указанных первой и третьей полипептидной цепей образуют указанный домен Fc IgG;(b) указанный домен VL указанной первой полипептидной цепи и указанный домен VH указанной второй полипептидной цепи образуют антигенсвязывающий домен, способный специфично связываться с эпитопом gpA33; и (c) указанный домен VH указанной первой полипептидной цепи и указанный домен VL указанной второй полипептидной цепи образуют антигенсвязывающий домен, способный специфично связываться с эпитопом CD3.
- 4. Биспецифическое моновалентное Fc-диатело, способное специфично связываться с эпитопом гликопротеина А33 (gpA33) и с эпитопом CD3 и содержит домен Fc IgG, содержащее первую полипептидную цепь, вторую полипептидную цепь и третью полипептидную цепь, причем указанная первая и вторая полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом и указанные первая и третья полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом, и при этом:A) первая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу:i) домен 3, содержащий субдомен (3А), который содержит цистеинсодержащий пептид (пептид 1) (SEQ ID NO: 39), и субдомен (3В), который содержит полипептидную часть домена Fc IgG, имеющую домены СН2 и СН3 домена Fc иммуноглобулина IgG;ii) домен 1, содержащий субдомен (1А), который содержит домен VL моноклонального антитела, способного связываться с gpA33 (VLgpA33) (SEQ ID NO: 26), и субдомен (1B), который содержит домен VH моноклонального антитела, способного связываться с CD3 (VHCD3) (SEQ ID NO: 25), причем указанные субдомены (1А) и (1В) отделены друг от друга пептидным линкером (SEQ ID NO: 1);причем указанные домены 1 и 3 отделены друг от друга спейсерным пептидом (линкер 4) (SEQ ID NO: 38);iii) домен 2, представляющий собой Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3) или K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4), причем указанный домен 2 отделен от указанного домена 1 пептидным линкером (SEQ ID NO: 2); иB) вторая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу:i) домен 1, содержащий субдомен (1А), который содержит домен VL моноклонального антитела, способного связываться с CD3 (VLCD3) (SEQ ID NO: 5), и субдомен (1В), который содержит домен VH моноклонального антитела, способного связываться с gpA33 (VHgpA33) (SEQ ID NO: 27); причем указанные субдомены (1А) и (1В) отделены друг от друга пептидным линкером (SEQ ID NO: 1);ii) домен 2, представляющий собой K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4) или Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3), причем указанный домен 2 отделен от указанного домена 1 пептидным линкером (SEQ ID NO: 2); и причем указанный домен 2 указанной первой полипептидной цепи и указанный домен 2 указанной второй полипептидной цепи не представляют собой оба Е-спиральных домена или оба K-спиральных домена; иC) третья полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу домен 3, содержащий:(1) субдомен (3А), который содержит цистеинсодержащий пептид (пептид 1) (SEQ ID NO: 39); и- 33 036236 (2) субдомен (3В), который содержит полипептидную часть домена Fc IgG, имеющую домены СН2 и СН3 домена Fc иммуноглобулина IgG;и при этом:(a) указанные полипептидные части доменов Fc IgG указанных первой и третьей полипептидной цепей образуют указанный домен Fc IgG;(b ) указанный домен VL указанной первой полипептидной цепи и указанный домен VH указанной второй полипептидной цепи образуют антигенсвязывающий домен, способный специфично связываться с эпитопом gpA33; и (c ) указанный домен VH указанной первой полипептидной цепи и указанный домен VL указанной второй полипептидной цепи образуют антигенсвязывающий домен, способный специфично связываться с эпитопом CD3.
- 5. Биспецифическое моновалентное Fc-диатело по любому из пп.3, 4, в котором указанный субдомен (3В) указанной первой полипептидной цепи содержит последовательность, отличную от последовательности указанного субдомена (3В) указанной третьей полипептидной цепи.
- 6. Биспецифическое моновалентное Fc-диатело по п.5, в котором указанный субдомен (3В) указанной первой полипептидной цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40 и указанный субдомен (3В) указанной третьей полипептидной цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41.
- 7. Биспецифическое моновалентное Fc-диатело по п.5, в котором указанный субдомен (3В) указанной первой полипептидной цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41 и указанный субдомен (3В) указанной третьей полипептидной цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40.
- 8. Биспецифическое моновалентное Fc-диатело по любому из пп.3-7, в котором указанный домен 3 указанной первой полипептидной цепи и/или указанный домен 3 указанной третьей полипептидной цепи содержит вариантную последовательность СН2-СН3 относительно последовательности СН2-СН3 области Fc дикого типа, которая проявляет сниженное связывание с рецептором Fcy относительно связывания, проявляемого указанной областью Fc дикого типа.
- 9. Биспецифическое моновалентное диатело по любому из пп.1, 2 или биспецифическое моновалентное Fc-диатело по любому из пп.3-8, в котором указанный домен 2 указанной первой полипептидной цепи содержит Е-спираль (SEQ ID NO: 3) и указанный домен 2 указанной второй полипептидной цепи содержит K-спираль (SEQ ID NO: 4).
- 10. Биспецифическое моновалентное диатело по любому из пп.1, 2 или биспецифическое моновалентное Fc-диатело по любому из пп.3-8, в котором указанный домен 2 указанной первой полипептидной цепи содержит K-спираль (SEQ ID NO: 4) и указанный домен 2 указанной второй полипептидной цепи содержит Е-спираль (SEQ ID NO: 3).
- 11. Биспецифическое моновалентное диатело, способное специфично связываться с эпитопом CD3 и с эпитопом гликопротеина А33 (gpA33), содержащее:(1) первую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28, и вторую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; или (2) первую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35, и вторую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30;причем указанная первая и указанная вторая полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом дисульфидной связью.
- 12. Биспецифическое моновалентное Fc-диатело, способное специфично связываться с эпитопом CD3 и с эпитопом гликопротеина А33 (gpA33) и содержит домен Fc IgG, содержащее:(1) первую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42, вторую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44, и третью полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46; или (2) первую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48, вторую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28, и третью полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46;причем указанная первая и указанная вторая полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом первой дисульфидной связью и указанная первая и указанная третья полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом второй дисульфидной связью.
- 13. Фармацевтическая композиция для лечения злокачественной опухоли, характеризующейся экспрессией gpA33, содержащая биспецифическое моновалентное диатело по любому из пп.1, 2 или 9-11 или биспецифическое моновалентное Fc-диатело по любому из пп.3-10 или 12; и физиологически приемлемый носитель.- 34 036236
- 14. Применение биспецифического моновалентного диатела по любому из пп.1, 2 или 9, 10 в лечении злокачественной опухоли, характеризующейся экспрессией gpA33.
- 15. Применение биспецифического моновалентного диатела по п.11 в лечении злокачественной опухоли, характеризующейся экспрессией gpA33.
- 16. Применение биспецифического моновалентного Fc-диатела по любому из пп.3-10 в лечении злокачественной опухоли, характеризующейся экспрессией gpA33.
- 17. Применение биспецифического моновалентного Fc-диатела по п.12 в лечении злокачественной опухоли, характеризующейся экспрессией gpA33.
- 18. Применение фармацевтической композиции по п.13 в лечении злокачественной опухоли, характеризующейся экспрессией gpA33.
- 19. Применение по любому из пп.14-18, где указанная злокачественная опухоль представляет собой колоректальный рак, рак толстой кишки, рак желудка или рак поджелудочной железы.
- 20. Полинуклеотид, который кодирует указанную первую полипептидную цепь биспецифического моновалентного диатела по любому из пп.1, 2 или 9-11.
- 21. Полинуклеотид, который кодирует указанную вторую полипептидную цепь биспецифического моновалентного диатела по любому из пп.1, 2 или 9-11.
- 22. Полинуклеотид, который кодирует указанную первую полипептидную цепь биспецифического моновалентного Fc-диатела по любому из пп.3-10 или 12.
- 23. Полинуклеотид, который кодирует указанную вторую полипептидную цепь биспецифического моновалентного Fc-диатела по любому из пп.3-10 или 12.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201361869528P | 2013-08-23 | 2013-08-23 | |
| US201361907691P | 2013-11-22 | 2013-11-22 | |
| EP13198859.4A EP2840091A1 (en) | 2013-08-23 | 2013-12-20 | Bi-specific diabodies that are capable of binding gpA33 and CD3 and uses thereof |
| PCT/US2014/051793 WO2015026894A2 (en) | 2013-08-23 | 2014-08-20 | Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding to gpa33 and cd3, and uses thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201690447A1 EA201690447A1 (ru) | 2016-08-31 |
| EA036236B1 true EA036236B1 (ru) | 2020-10-16 |
Family
ID=49882883
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201690447A EA036236B1 (ru) | 2013-08-23 | 2014-08-20 | БИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ МОНОВАЛЕНТНЫЕ ДИАТЕЛА, КОТОРЫЕ СПОСОБНЫ СВЯЗЫВАТЬСЯ С gpA33 И CD3, И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US9932400B2 (ru) |
| EP (2) | EP2840091A1 (ru) |
| JP (1) | JP6581985B2 (ru) |
| KR (1) | KR102269584B1 (ru) |
| CN (1) | CN105658235B (ru) |
| AP (1) | AP2016009082A0 (ru) |
| AU (1) | AU2014308907B2 (ru) |
| BR (1) | BR112016003369A2 (ru) |
| CA (1) | CA2920117C (ru) |
| CL (1) | CL2016000363A1 (ru) |
| CR (1) | CR20160090A (ru) |
| EA (1) | EA036236B1 (ru) |
| ES (1) | ES2827226T3 (ru) |
| GE (1) | GEP20197033B (ru) |
| IL (1) | IL244238B (ru) |
| MX (1) | MX373382B (ru) |
| MY (1) | MY179866A (ru) |
| PE (1) | PE20160193A1 (ru) |
| PH (1) | PH12016500291B1 (ru) |
| SG (1) | SG11201601270WA (ru) |
| TN (1) | TN2016000052A1 (ru) |
| TW (1) | TWI675845B (ru) |
| UA (1) | UA119329C2 (ru) |
| WO (1) | WO2015026894A2 (ru) |
Families Citing this family (47)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9963510B2 (en) | 2005-04-15 | 2018-05-08 | Macrogenics, Inc. | Covalent diabodies and uses thereof |
| EP2840091A1 (en) | 2013-08-23 | 2015-02-25 | MacroGenics, Inc. | Bi-specific diabodies that are capable of binding gpA33 and CD3 and uses thereof |
| EP3152235B1 (en) * | 2014-05-29 | 2021-08-25 | MacroGenics, Inc. | Tri-specific binding molecules and methods of use thereof |
| TWI693232B (zh) | 2014-06-26 | 2020-05-11 | 美商宏觀基因股份有限公司 | 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法 |
| AR101997A1 (es) | 2014-09-26 | 2017-01-25 | Macrogenics Inc | Diacuerpos monovalentes biespecíficos que son capaces de unir cd19 y cd3, y usos de los mismos |
| SG11201702544WA (en) | 2014-09-29 | 2017-04-27 | Univ Duke | Bispecific molecules comprising an hiv-1 envelope targeting arm |
| US11071783B2 (en) | 2015-03-19 | 2021-07-27 | Duke University | HIV-1 neutralizing antibodies and uses thereof |
| EP3271022A4 (en) | 2015-03-19 | 2018-10-31 | Duke University | Hiv-1 neutralizing antibodies and uses thereof |
| US10450368B2 (en) | 2015-03-19 | 2019-10-22 | Duke University | HIV-1 neutralizing antibodies and uses thereof (CD4bs antibodies) |
| US10344077B2 (en) | 2015-03-19 | 2019-07-09 | Duke University | HIV-1 neutralizing antibodies and uses thereof (V3 antibodies) |
| TWI773646B (zh) | 2015-06-08 | 2022-08-11 | 美商宏觀基因股份有限公司 | 結合lag-3的分子和其使用方法 |
| EP3310811B1 (en) * | 2015-06-16 | 2021-06-16 | Genentech, Inc. | Anti-cd3 antibodies and methods of use |
| SMT202100527T1 (it) * | 2015-07-30 | 2021-11-12 | Macrogenics Inc | Molecole di legame a pd-1 e lag-3 e loro metodi d'uso |
| TWI744242B (zh) | 2015-07-31 | 2021-11-01 | 德商安美基研究（慕尼黑）公司 | Egfrviii及cd3抗體構築體 |
| TWI796283B (zh) | 2015-07-31 | 2023-03-21 | 德商安美基研究（慕尼黑）公司 | Ｍｓｌｎ及ｃｄ３抗體構築體 |
| EA039859B1 (ru) | 2015-07-31 | 2022-03-21 | Эмджен Рисерч (Мюник) Гмбх | Биспецифические конструкты антител, связывающие egfrviii и cd3 |
| TWI829617B (zh) | 2015-07-31 | 2024-01-21 | 德商安美基研究（慕尼黑）公司 | Ｆｌｔ３及ｃｄ３抗體構築體 |
| IL258759B2 (en) | 2015-11-03 | 2023-04-01 | Ambrx Inc | Anti-cd3-folate conjugates and their uses |
| SG11201804839WA (en) | 2015-12-14 | 2018-07-30 | Macrogenics Inc | Bispecific molecules having immunoreactivity with pd-1 and ctla-4, and methods of use thereof |
| MA55746A (fr) | 2016-01-21 | 2022-03-02 | Novartis Ag | Molécules multispécifiques ciblant cll-1 |
| HUE060504T2 (hu) | 2016-02-03 | 2023-03-28 | Amgen Res Munich Gmbh | PSMA és CD3 bispecifikus T-sejthez kötõ ellenanyag-konstrukciók |
| WO2017142928A1 (en) | 2016-02-17 | 2017-08-24 | Macrogenics, Inc. | Ror1-binding molecules, and methods of use thereof |
| EP3442574A4 (en) | 2016-04-15 | 2019-12-11 | MacroGenics, Inc. | Novel B7-H3 binding MOLECULES, ANTIBODY-ACTIVE CONJUGATES AND METHOD OF USE THEREOF |
| CN107556387A (zh) * | 2016-06-30 | 2018-01-09 | 中国科学院深圳先进技术研究院 | 抗gpc3和cd3特异性双靶向抗体、含该双靶向抗体表达盒的微环dna及应用 |
| WO2018053328A1 (en) * | 2016-09-16 | 2018-03-22 | Duke University | Bispecific molecules comprising an hiv-1 envelope targeting arm |
| CN107915776B (zh) * | 2016-10-11 | 2021-05-14 | 康梦实 | 双特异性抗体fitc×cd3及其制备方法和应用 |
| BR112019011277A2 (pt) | 2016-12-02 | 2019-10-22 | University Of Southern California | polinucleotídeo, sistema de expressão recombinante, vetor, polipeptídeo, célula recombinante, polipeptídeo de receptor imune sintético isolado ou heterodímero de polipeptídeo, célula efetora imune ou célula-tronco, população de células imunes ou efetoras, métodos de fabricação de uma célula efetora imune que expressa sir, de geração de uma população de células modificadas por rna, de fornecimento de imunidade antidoença e de tratamento ou prevenção de uma doença, composição, uso ou método, kit, e, sequência de aminoácidos. |
| EP3558368B1 (en) | 2016-12-23 | 2025-11-12 | MacroGenics, Inc. | Adam9-binding molecules, and methods of use thereof |
| US11459394B2 (en) | 2017-02-24 | 2022-10-04 | Macrogenics, Inc. | Bispecific binding molecules that are capable of binding CD137 and tumor antigens, and uses thereof |
| IL269826B1 (en) | 2017-04-11 | 2025-09-01 | Inhibrx Inc | Multispecific polypeptide constructs having constrained cd3 binding and methods of using the same |
| CN108728464A (zh) * | 2017-04-14 | 2018-11-02 | 深圳新诺微环生物科技有限公司 | 一种表达抗hiv双特异性抗体的微环dna载体及其制备方法和应用 |
| JP7303802B2 (ja) * | 2017-09-23 | 2023-07-05 | メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター | Ａ３３抗体組成物および放射性免疫療法におけるその使用方法 |
| SG11202005557TA (en) * | 2017-12-12 | 2020-07-29 | Macrogenics Inc | Bispecific cd 16-binding molecules and their use in the treatment of disease |
| CN111787949A (zh) | 2018-02-15 | 2020-10-16 | 宏观基因有限公司 | 变体cd3-结合结构域及其在用于治疗疾病的组合疗法中的用途 |
| JP7724061B2 (ja) * | 2018-04-11 | 2025-08-15 | インヒブルクス バイオサイエンシズ インコーポレイテッド | 制約されたｃｄ３結合を有する多重特異性ポリペプチド構築物ならびに関連する方法および使用 |
| CN112243444A (zh) * | 2018-06-08 | 2021-01-19 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 具有减少的翻译后修饰的肽接头 |
| AU2019286396A1 (en) | 2018-06-14 | 2020-12-17 | Bioatla, Inc. | Multi-specific antibody constructs |
| TW202035451A (zh) | 2018-07-24 | 2020-10-01 | 美商英伊布里克斯公司 | 含有受限cd3結合域及受體結合區之多重特異性多肽構築體及其使用方法 |
| JP7482363B2 (ja) | 2018-08-08 | 2024-05-14 | ドラゴンフライ セラピューティクス， インコーポレイテッド | Ｎｋｇ２ｄ、ｃｄ１６及び腫瘍関連抗原に結合するタンパク質 |
| CN113166263A (zh) | 2018-10-11 | 2021-07-23 | 印希比股份有限公司 | Dll3单域抗体及其治疗性组合物 |
| US20220281998A1 (en) * | 2019-08-28 | 2022-09-08 | Azusapharma Sciences, Inc. | Bifidobacterium spp. expressing and secreting diabody-type bsab |
| US11845799B2 (en) | 2019-12-13 | 2023-12-19 | Genentech, Inc. | Anti-Ly6G6D antibodies and methods of use |
| JP7745556B2 (ja) | 2020-02-21 | 2025-09-29 | マクロジェニクス，インコーポレーテッド | Ｃｄ１３７結合分子及びその使用 |
| EP4240766A2 (en) | 2020-11-04 | 2023-09-13 | Genentech, Inc. | Subcutaneous dosing of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies |
| JP7402381B2 (ja) | 2020-11-04 | 2023-12-20 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３二重特異性抗体による処置のための投与 |
| AU2021381768A1 (en) * | 2020-11-18 | 2023-06-22 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Anti-gpa33 multi-specific antibodies and uses thereof |
| JP2023546368A (ja) | 2021-05-14 | 2023-11-02 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | モスネツズマブおよびポラツズマブベドチンを用いたｃｄ２０陽性増殖性障害の処置のための方法 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020193571A1 (en) * | 1996-01-08 | 2002-12-19 | Paul J. Carter | Wsx receptor agonist antibodies |
| US20030229208A1 (en) * | 1988-12-28 | 2003-12-11 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
| US20040082039A1 (en) * | 2001-02-19 | 2004-04-29 | Stephen Gillies | Artificial proteins with reduced immunogenicity |
| US20070004909A1 (en) * | 2005-04-15 | 2007-01-04 | Macrogenics, Inc. | Covalent diabodies and uses thereof |
| US20100174053A1 (en) * | 2005-04-15 | 2010-07-08 | Macrogenics, Inc. | Covalent diabodies and uses thereof |
| US20100196372A1 (en) * | 2003-01-13 | 2010-08-05 | Macrogenics, Inc. | FcgammaRIIB Fusion Proteins and Compositions Thereof |
| US20120184716A1 (en) * | 2010-08-16 | 2012-07-19 | Novlmmune S.A. | Methods for the Generation of Multispecific and Multivalent Antibodies |
| US20120289418A1 (en) * | 2009-07-08 | 2012-11-15 | Universite Catholique De Louvain | Diagnostic method and kit for the detection of a lymphocytic variant of hypereosinophilic syndrome |
| WO2012162067A2 (en) * | 2011-05-21 | 2012-11-29 | Macrogenics, Inc. | Cd3-binding molecules capable of binding to human and non-human cd3 |
Family Cites Families (125)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3378250D1 (en) | 1982-04-22 | 1988-11-24 | Ici Plc | Continuous release formulations |
| US4752601A (en) | 1983-08-12 | 1988-06-21 | Immunetech Pharmaceuticals | Method of blocking immune complex binding to immunoglobulin FC receptors |
| US5128326A (en) | 1984-12-06 | 1992-07-07 | Biomatrix, Inc. | Drug delivery systems based on hyaluronans derivatives thereof and their salts and methods of producing same |
| US4980286A (en) | 1985-07-05 | 1990-12-25 | Whitehead Institute For Biomedical Research | In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells |
| US5985599A (en) | 1986-05-29 | 1999-11-16 | The Austin Research Institute | FC receptor for immunoglobulin |
| EP0307434B2 (en) | 1987-03-18 | 1998-07-29 | Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. | Altered antibodies |
| US4800078A (en) | 1987-05-28 | 1989-01-24 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Immunotherapeutic method of treating respiratory disease by intranasal administration of Igb |
| US4880078A (en) | 1987-06-29 | 1989-11-14 | Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha | Exhaust muffler |
| JP3095168B2 (ja) | 1988-02-05 | 2000-10-03 | エル． モリソン，シェリー | ドメイン‐変性不変部を有する抗体 |
| US5169933A (en) | 1988-08-15 | 1992-12-08 | Neorx Corporation | Covalently-linked complexes and methods for enhanced cytotoxicity and imaging |
| US5576184A (en) | 1988-09-06 | 1996-11-19 | Xoma Corporation | Production of chimeric mouse-human antibodies with specificity to human tumor antigens |
| US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
| US5116964A (en) | 1989-02-23 | 1992-05-26 | Genentech, Inc. | Hybrid immunoglobulins |
| GB8916400D0 (en) | 1989-07-18 | 1989-09-06 | Dynal As | Modified igg3 |
| WO1991005548A1 (en) | 1989-10-10 | 1991-05-02 | Pitman-Moore, Inc. | Sustained release composition for macromolecular proteins |
| CA2071867A1 (en) | 1989-11-06 | 1991-05-07 | Edith Mathiowitz | Method for producing protein microspheres |
| US5364930A (en) | 1990-10-16 | 1994-11-15 | Northwestern University | Synthetic C1q peptide fragments |
| GB9105245D0 (en) | 1991-03-12 | 1991-04-24 | Lynxvale Ltd | Binding molecules |
| DE69232706T2 (de) | 1991-05-01 | 2002-11-28 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Rockville | Verfahren zur behandlung infektiöser respiratorischer erkrankungen |
| US5637481A (en) | 1993-02-01 | 1997-06-10 | Bristol-Myers Squibb Company | Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell |
| US5223408A (en) | 1991-07-11 | 1993-06-29 | Genentech, Inc. | Method for making variant secreted proteins with altered properties |
| AU2605592A (en) | 1991-10-15 | 1993-04-22 | Atrix Laboratories, Inc. | Polymeric compositions useful as controlled release implants |
| US5912015A (en) | 1992-03-12 | 1999-06-15 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Modulated release from biocompatible polymers |
| AU4116793A (en) | 1992-04-24 | 1993-11-29 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells |
| US5736137A (en) | 1992-11-13 | 1998-04-07 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma |
| GB9225453D0 (en) | 1992-12-04 | 1993-01-27 | Medical Res Council | Binding proteins |
| US5934272A (en) | 1993-01-29 | 1999-08-10 | Aradigm Corporation | Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug |
| EP0682710B1 (en) | 1993-02-10 | 2003-10-29 | Unilever Plc | Isolation process using immobilized proteins with specific binding capacities |
| EP0714409A1 (en) | 1993-06-16 | 1996-06-05 | Celltech Therapeutics Limited | Antibodies |
| EP0711303B2 (en) | 1993-07-30 | 2009-06-10 | Affymax, Inc. | Biotinylation of proteins |
| GB9316989D0 (en) | 1993-08-16 | 1993-09-29 | Lynxvale Ltd | Binding molecules |
| CA2190101A1 (en) | 1994-05-13 | 1995-11-23 | Donald Leonard Nicholas Cardy | Improvements in or relating to peptide delivery |
| AU4755696A (en) | 1995-01-05 | 1996-07-24 | Board Of Regents Acting For And On Behalf Of The University Of Michigan, The | Surface-modified nanoparticles and method of making and using same |
| US6019968A (en) | 1995-04-14 | 2000-02-01 | Inhale Therapeutic Systems, Inc. | Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use |
| JP2000507912A (ja) | 1995-08-31 | 2000-06-27 | アルカームズ コントロールド セラピューティックス，インコーポレイテッド | 作用剤の徐放性組成物 |
| US5736152A (en) | 1995-10-27 | 1998-04-07 | Atrix Laboratories, Inc. | Non-polymeric sustained release delivery system |
| US6750334B1 (en) | 1996-02-02 | 2004-06-15 | Repligen Corporation | CTLA4-immunoglobulin fusion proteins having modified effector functions and uses therefor |
| US5942328A (en) | 1996-02-29 | 1999-08-24 | International Business Machines Corporation | Low dielectric constant amorphous fluorinated carbon and method of preparation |
| JP2000506165A (ja) | 1996-03-04 | 2000-05-23 | ザ ペン ステイト リサーチ ファウンデーション | 細胞インターナリゼーションを増強するための物質および方法 |
| AU728657B2 (en) | 1996-03-18 | 2001-01-18 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Immunoglobulin-like domains with increased half-lives |
| US5834597A (en) | 1996-05-20 | 1998-11-10 | Protein Design Labs, Inc. | Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same |
| US5874064A (en) | 1996-05-24 | 1999-02-23 | Massachusetts Institute Of Technology | Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery |
| US5985309A (en) | 1996-05-24 | 1999-11-16 | Massachusetts Institute Of Technology | Preparation of particles for inhalation |
| US5855913A (en) | 1997-01-16 | 1999-01-05 | Massachusetts Instite Of Technology | Particles incorporating surfactants for pulmonary drug delivery |
| US6699658B1 (en) | 1996-05-31 | 2004-03-02 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Yeast cell surface display of proteins and uses thereof |
| US6300065B1 (en) | 1996-05-31 | 2001-10-09 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Yeast cell surface display of proteins and uses thereof |
| CA2262405A1 (en) | 1996-08-02 | 1998-02-12 | Bristol-Myers Squibb Company | A method for inhibiting immunoglobulin-induced toxicity resulting from the use of immunoglobulins in therapy and in vivo diagnosis |
| US6025485A (en) | 1997-02-14 | 2000-02-15 | Arcaris, Inc. | Methods and compositions for peptide libraries displayed on light-emitting scaffolds |
| WO1998023289A1 (en) | 1996-11-27 | 1998-06-04 | The General Hospital Corporation | MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn |
| ES2236832T3 (es) | 1997-01-16 | 2005-07-16 | Massachusetts Institute Of Technology | Preparacion de particulas para inhalacion. |
| US6277375B1 (en) | 1997-03-03 | 2001-08-21 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Immunoglobulin-like domains with increased half-lives |
| DE19721700C1 (de) | 1997-05-23 | 1998-11-19 | Deutsches Krebsforsch | Mutierter OKT3-Antikörper |
| US5989463A (en) | 1997-09-24 | 1999-11-23 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Methods for fabricating polymer-based controlled release devices |
| SE512663C2 (sv) | 1997-10-23 | 2000-04-17 | Biogram Ab | Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer |
| PL199659B1 (pl) | 1998-02-25 | 2008-10-31 | Merck Patent Gmbh | Białko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2, cząsteczka DNA kodująca białko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2 i sposób wytwarzania białka fuzyjnego przeciwciała hu-KS IL2 |
| US6455263B2 (en) | 1998-03-24 | 2002-09-24 | Rigel Pharmaceuticals, Inc. | Small molecule library screening using FACS |
| DE69937291T2 (de) | 1998-04-02 | 2008-07-10 | Genentech, Inc., South San Francisco | Antikörpervarianten und fragmente davon |
| US6528624B1 (en) | 1998-04-02 | 2003-03-04 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
| US6194551B1 (en) | 1998-04-02 | 2001-02-27 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
| US6242195B1 (en) | 1998-04-02 | 2001-06-05 | Genentech, Inc. | Methods for determining binding of an analyte to a receptor |
| GB9809951D0 (en) | 1998-05-08 | 1998-07-08 | Univ Cambridge Tech | Binding molecules |
| SE9802213D0 (sv) | 1998-06-18 | 1998-06-18 | Amersham Pharm Biotech Ab | A method for the removal/purification of serum albumins and means for use in the method |
| JP2002518432A (ja) | 1998-06-24 | 2002-06-25 | アドバンスト インハレーション リサーチ，インコーポレイテッド | 吸入器から放出される大多孔性粒子 |
| WO2000009560A2 (en) | 1998-08-17 | 2000-02-24 | Abgenix, Inc. | Generation of modified molecules with increased serum half-lives |
| US7315786B2 (en) | 1998-10-16 | 2008-01-01 | Xencor | Protein design automation for protein libraries |
| KR101155191B1 (ko) | 1999-01-15 | 2012-06-13 | 제넨테크, 인크. | 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체 |
| US6737056B1 (en) | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
| US7527787B2 (en) | 2005-10-19 | 2009-05-05 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Multivalent immunoglobulin-based bioactive assemblies |
| DE19937264A1 (de) | 1999-08-06 | 2001-02-15 | Deutsches Krebsforsch | F¶v¶-Antikörper-Konstrukte |
| CN1423700A (zh) | 2000-03-24 | 2003-06-11 | 麦克美特股份公司 | 含有针对nkg2d受体复合物的表位的结合位点的多功能多肽 |
| AU2001270609A1 (en) | 2000-06-30 | 2002-01-14 | Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw | Heterodimeric fusion proteins |
| DK1355919T3 (da) | 2000-12-12 | 2011-03-14 | Medimmune Llc | Molekyler med længere halveringstider, sammensætninger og anvendelser deraf |
| EP1497318A4 (en) | 2001-04-18 | 2006-03-01 | Dyax Corp | BINDING MOLECULES FOR FC ZONE POLYPEPTIDES |
| EP2316485A1 (en) | 2001-10-12 | 2011-05-04 | Schering Corporation | Use of bispecific antibodies to regulate immune responses |
| WO2003033666A2 (en) | 2001-10-16 | 2003-04-24 | The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Broadly cross-reactive neutralizing antibodies against human immunodeficiency virus selected by env-cd4-co-receptor complexes |
| US20050142539A1 (en) | 2002-01-14 | 2005-06-30 | William Herman | Targeted ligands |
| US20040002587A1 (en) | 2002-02-20 | 2004-01-01 | Watkins Jeffry D. | Fc region variants |
| US7317091B2 (en) | 2002-03-01 | 2008-01-08 | Xencor, Inc. | Optimized Fc variants |
| US20040132101A1 (en) | 2002-09-27 | 2004-07-08 | Xencor | Optimized Fc variants and methods for their generation |
| AU2003217912A1 (en) | 2002-03-01 | 2003-09-16 | Xencor | Antibody optimization |
| EP1354600A1 (en) | 2002-04-19 | 2003-10-22 | Affimed Therapeutics AG | Antibody combination useful for tumor therapy |
| JP2006506954A (ja) | 2002-04-29 | 2006-03-02 | ゲンパト７７ ファーマコジェネティクス エージー | Ｔｃｒ及びｔｉｒｃ７に結合する新規な抗体、並びに治療及び診断におけるその使用 |
| ATE483472T1 (de) | 2002-05-30 | 2010-10-15 | Macrogenics Inc | Cd16a bindungsproteine und verwendung zur behandlung von immunkrankheiten |
| EP1576172A2 (en) | 2002-06-21 | 2005-09-21 | Dyax Corporation | Serum protein-associated target-specific ligands and identification method therefor |
| US8044180B2 (en) | 2002-08-14 | 2011-10-25 | Macrogenics, Inc. | FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof |
| US8187593B2 (en) | 2002-08-14 | 2012-05-29 | Macrogenics, Inc. | FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof |
| CA2495251C (en) | 2002-08-14 | 2018-03-06 | Macrogenics, Inc. | Fc.gamma.riib-specific antibodies and methods of use thereof |
| US8193318B2 (en) | 2002-08-14 | 2012-06-05 | Macrogenics, Inc. | FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof |
| KR100980065B1 (ko) | 2002-09-27 | 2010-09-03 | 젠코어 인코포레이티드 | 최적화된 Ｆｃ 변이체 및 그의 제조 방법 |
| US7960512B2 (en) | 2003-01-09 | 2011-06-14 | Macrogenics, Inc. | Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same |
| WO2004063351A2 (en) | 2003-01-09 | 2004-07-29 | Macrogenics, Inc. | IDENTIFICATION AND ENGINEERING OF ANTIBODIES WITH VARIANT Fc REGIONS AND METHODS OF USING SAME |
| DE10303664A1 (de) | 2003-01-23 | 2004-08-12 | Nemod Immuntherapie Ag | Erkennungsmoleküle zur Behandlung und Detektion von Tumoren |
| AU2004255216B2 (en) | 2003-07-01 | 2010-08-19 | Immunomedics, Inc. | Multivalent carriers of bi-specific antibodies |
| PT1706424E (pt) | 2004-01-12 | 2009-10-01 | Applied Molecular Evolution | Variantes da região fc |
| CA2563379A1 (en) | 2004-03-31 | 2005-10-20 | Centocor, Inc. | Human glp-1 mimetibodies, compositions, methods and uses |
| WO2005097202A2 (en) | 2004-04-06 | 2005-10-20 | Affibody Ab | Use of serum albumin binding peptides conjugates for the preparation of a medicament |
| AU2005247301B2 (en) | 2004-04-16 | 2011-08-18 | Macrogenics, Inc. | FCγRIIB-specific antibodies and methods of use thereof |
| JP2007536932A (ja) | 2004-05-10 | 2007-12-20 | マクロジェニクス，インコーポレーテッド | ヒト化ＦｃγＲＩＩＢ特異的抗体とその利用法 |
| US7432419B2 (en) | 2004-05-14 | 2008-10-07 | Los Alamos National Security, Llc | Compositions and methods for the treatment of Pierce's disease |
| NZ582684A (en) | 2004-06-18 | 2011-05-27 | Ambrx Inc | Use of an antibody or binding fragment thereof comprising a non naturally encoded amino acid coupled to a linker |
| PL1776384T3 (pl) | 2004-08-04 | 2013-10-31 | Mentrik Biotech Llc | WARIANTY REGIONÓW Fc |
| US7632497B2 (en) | 2004-11-10 | 2009-12-15 | Macrogenics, Inc. | Engineering Fc Antibody regions to confer effector function |
| US20060193849A1 (en) | 2005-02-25 | 2006-08-31 | Antisoma Plc | Biological materials and uses thereof |
| US20120237442A1 (en) | 2005-04-06 | 2012-09-20 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Design and Construction of Novel Multivalent Antibodies |
| WO2010080538A1 (en) | 2008-12-19 | 2010-07-15 | Macrogenics, Inc. | Covalent diabodies and uses thereof |
| EP2573114B1 (en) | 2005-08-10 | 2016-03-30 | MacroGenics, Inc. | Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same |
| EP1820513A1 (en) * | 2006-02-15 | 2007-08-22 | Trion Pharma Gmbh | Destruction of tumor cells expressing low to medium levels of tumor associated target antigens by trifunctional bispecific antibodies |
| US7786270B2 (en) | 2006-05-26 | 2010-08-31 | Macrogenics, Inc. | Humanized FcγRIIB-specific antibodies and methods of use thereof |
| EP3424951A1 (en) | 2007-06-21 | 2019-01-09 | MacroGenics, Inc. | Covalent diabodies and uses thereof |
| SI2975051T1 (sl) | 2009-06-26 | 2021-08-31 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Zlahka izolirana bispecifična protitelesa z nativnim imunoglobulinskim formatom |
| CA2776385C (en) | 2009-10-07 | 2019-04-09 | Macrogenics, Inc. | Fc region-containing polypeptides that exhibit improved effector function due to alterations of the extent of fucosylation, and methods for their use |
| PH12012501751A1 (en) | 2010-03-04 | 2012-11-12 | Macrogenics Inc | Antibodies reactive with b7-h3, immunologically active fragments thereof and uses thereof |
| PH12018501083A1 (en) | 2010-03-04 | 2019-02-18 | Macrogenics Inc | Antibodies reactive with b7-h3, immunologically active fragments thereof and uses thereof |
| UY33492A (es) | 2010-07-09 | 2012-01-31 | Abbott Lab | Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas |
| MX339622B (es) | 2010-08-02 | 2016-06-02 | Macrogenics Inc | Diacuerpos covalentes y sus usos. |
| EP2601218A4 (en) | 2010-08-03 | 2015-02-18 | Abbvie Inc | VARIABLE DOUBLE DOMAIN IMMUNOGLOBULINS AND USES THEREOF |
| BR112013004581A2 (pt) | 2010-08-26 | 2017-06-27 | Abbvie Inc | imunoglobulinas de domínio variável dual e seus usos |
| RU2013125479A (ru) | 2010-11-02 | 2014-12-10 | Эбботт Лэборетриз | Иммуноглобулины с двумя вариабельными доменами и их применение |
| AR083705A1 (es) | 2010-11-04 | 2013-03-13 | Abbott Lab | Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas |
| MY163368A (en) | 2010-12-21 | 2017-09-15 | Abbvie Inc | Il-1-alpha and -beta bispecific dual variable domain immunoglobulins and their use |
| US20120201746A1 (en) | 2010-12-22 | 2012-08-09 | Abbott Laboratories | Half immunoglobulin binding proteins and uses thereof |
| US20120195900A1 (en) | 2010-12-22 | 2012-08-02 | Abbott Laboratories | Tri-variable domain binding proteins and uses thereof |
| EP2714079B2 (en) | 2011-05-21 | 2019-08-28 | MacroGenics, Inc. | Deimmunized serum-binding domains and their use for extending serum half-life |
| UA116479C2 (uk) * | 2013-08-09 | 2018-03-26 | Макродженікс, Інк. | БІСПЕЦИФІЧНЕ МОНОВАЛЕНТНЕ Fc-ДІАТІЛО, ЯКЕ ОДНОЧАСНО ЗВ'ЯЗУЄ CD32B I CD79b, ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ |
| EP2840091A1 (en) | 2013-08-23 | 2015-02-25 | MacroGenics, Inc. | Bi-specific diabodies that are capable of binding gpA33 and CD3 and uses thereof |
-
2013
- 2013-12-20 EP EP13198859.4A patent/EP2840091A1/en not_active Withdrawn
-
2014
- 2014-08-20 MX MX2016001738A patent/MX373382B/es active IP Right Grant
- 2014-08-20 US US14/913,654 patent/US9932400B2/en active Active
- 2014-08-20 ES ES14837376T patent/ES2827226T3/es active Active
- 2014-08-20 UA UAA201602539A patent/UA119329C2/uk unknown
- 2014-08-20 TW TW103128713A patent/TWI675845B/zh not_active IP Right Cessation
- 2014-08-20 GE GEAP2014014099 patent/GEP20197033B/en unknown
- 2014-08-20 CN CN201480045719.5A patent/CN105658235B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2014-08-20 AU AU2014308907A patent/AU2014308907B2/en not_active Ceased
- 2014-08-20 EP EP14837376.4A patent/EP3035956B1/en active Active
- 2014-08-20 WO PCT/US2014/051793 patent/WO2015026894A2/en not_active Ceased
- 2014-08-20 JP JP2016536401A patent/JP6581985B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2014-08-20 SG SG11201601270WA patent/SG11201601270WA/en unknown
- 2014-08-20 EA EA201690447A patent/EA036236B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2014-08-20 KR KR1020167007407A patent/KR102269584B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2014-08-20 CA CA2920117A patent/CA2920117C/en active Active
- 2014-08-20 AP AP2016009082A patent/AP2016009082A0/xx unknown
- 2014-08-20 BR BR112016003369A patent/BR112016003369A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2014-08-20 PE PE2016000281A patent/PE20160193A1/es unknown
- 2014-08-20 TN TN2016000052A patent/TN2016000052A1/en unknown
- 2014-08-20 MY MYPI2016000329A patent/MY179866A/en unknown
-
2016
- 2016-02-11 PH PH12016500291A patent/PH12016500291B1/en unknown
- 2016-02-17 CL CL2016000363A patent/CL2016000363A1/es unknown
- 2016-02-22 CR CR20160090A patent/CR20160090A/es unknown
- 2016-02-22 IL IL244238A patent/IL244238B/en active IP Right Grant
-
2017
- 2017-11-21 US US15/819,423 patent/US10858430B2/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030229208A1 (en) * | 1988-12-28 | 2003-12-11 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
| US20020193571A1 (en) * | 1996-01-08 | 2002-12-19 | Paul J. Carter | Wsx receptor agonist antibodies |
| US20040082039A1 (en) * | 2001-02-19 | 2004-04-29 | Stephen Gillies | Artificial proteins with reduced immunogenicity |
| US20100196372A1 (en) * | 2003-01-13 | 2010-08-05 | Macrogenics, Inc. | FcgammaRIIB Fusion Proteins and Compositions Thereof |
| US20070004909A1 (en) * | 2005-04-15 | 2007-01-04 | Macrogenics, Inc. | Covalent diabodies and uses thereof |
| US20100174053A1 (en) * | 2005-04-15 | 2010-07-08 | Macrogenics, Inc. | Covalent diabodies and uses thereof |
| US20120289418A1 (en) * | 2009-07-08 | 2012-11-15 | Universite Catholique De Louvain | Diagnostic method and kit for the detection of a lymphocytic variant of hypereosinophilic syndrome |
| US20120184716A1 (en) * | 2010-08-16 | 2012-07-19 | Novlmmune S.A. | Methods for the Generation of Multispecific and Multivalent Antibodies |
| WO2012162067A2 (en) * | 2011-05-21 | 2012-11-29 | Macrogenics, Inc. | Cd3-binding molecules capable of binding to human and non-human cd3 |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2014308907B2 (en) | Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding to gpA33 and CD3, and uses thereof | |
| TWI830761B (zh) | 針對cldn18.2和cd3之抗體構建體 | |
| US12157771B2 (en) | Proteins binding NKG2D, CD16 and CLEC12A | |
| TWI706960B (zh) | 能夠結合cd19和cd3的雙特異性雙抗體及其用途 | |
| AU2017281034B2 (en) | CD3 binding antibodies | |
| EP3161004B1 (en) | Covalently bonded diabodies having immunoreactivity with pd-1 and lag-3, and methods of use thereof | |
| TWI756164B (zh) | 活化ｔ細胞之雙特異性抗原結合分子 | |
| JP2021129564A (ja) | 共通軽鎖および使用方法 | |
| JP2019520797A (ja) | 二重特異性結合タンパク質およびその使用 | |
| TW201536805A (zh) | 具有結合ＣＤ３２Ｂ和ＣＤ７９ｂ能力的雙特異性單價Ｆｃ雙抗體及其用途 | |
| JP2024150674A (ja) | 抗ｈｅｒ２ポリペプチド及びそれらの使用の方法 | |
| KR20180033501A (ko) | Dll3 및 cd3에 결합하는 이중특이적인 항체 작제물 | |
| HK1226000B (en) | Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding to gpa33 and cd3, and uses thereof | |
| WO2025247196A1 (zh) | 一种多功能融合多肽 | |
| CN120530135A (zh) | 抗b7h3抗体和使用方法 | |
| KR20250135302A (ko) | 항-cmet 항체 및 사용 방법 | |
| CN114641496A (zh) | 用于癌症治疗的多特异性结合蛋白 | |
| HK1236976B (en) | Covalently bonded diabodies having immunoreactivity with pd-1 and lag-3, and methods of use thereof | |
| HK1241895B (en) | Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding cd19 and cd3, and uses thereof | |
| HK1241895A1 (en) | Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding cd19 and cd3, and uses thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM |