DE60309513T2

DE60309513T2 - Substanzen zur Vorbeugung und Behandlung von Autoimmunkrankheiten

Info

Publication number: DE60309513T2
Application number: DE60309513T
Authority: DE
Inventors: Alan P. Redlands Escher; Fengchun Loma Linda Li
Original assignee: Loma Linda University
Current assignee: Loma Linda University
Priority date: 2002-08-06
Filing date: 2003-08-06
Publication date: 2007-05-03
Anticipated expiration: 2023-08-07
Also published as: ES2300652T3; DE60309513D1; CN101147807B; JP2006513993A; DE60319103D1; CN101057976A; AU2003296892B2; JP5123226B2; EP1626083B1; WO2004034966A3; CA2494888A1; CA2653201C; ATE344317T1; EP1543109B1; US20050239729A1; CA2649821A1; JP5555431B2; CN101057976B; ES2275253T3; DE60309514T2

Description

STAND DER TECHNIK
Die autoimmunen Krankheiten verursachen eine bedeutende Erscheinung von Krankheiten und Sterblichkeit der Menschen. Diese Krankheiten umfassen etwa 80 Krankheiten wie chronische Polyarthritis, systemischer Lupus und multiple Sklerose und betreffen etwa 5% der Bevölkerung der Vereinigten Staaten. Eine autoimmune Krankheit, der Typ I-Diabetes, ist die häufigste chronische Krankheit bei Kindern, und sie hat eine gleichmäßig anwachsende Inzidenz auf weltlicher Ebene.
Im Allgemeinen beginnt die Erscheinung des Typ I-Diabetes mit der Anzeige durch die Zellen, die Antigene (APC) von synthetisierten Autoantigenen aus den Pankreas-Betazellen enthalten. Diese Anzeige hat als Resultat die Zerstörung der Pankreas-Betazellen durch das Immunsystem und wird hauptsächlich durch die Hilfssubstanz T1 (Th1) und die Zellschädigenden Lymphozyten T unterstützt, was zum Verlust der Insulinproduktion führt.
Bei vielen prophylaktischen und therapeutischen Ansätzen für den Typ I-Diabetes wird versucht, die Zerstörung der Betazellen zu verhindern und das Immunsystem zu veranlassen, die selbst reagierenden pathogenen Lymphozyten zu beseitigen, zu deaktivieren oder zu hemmen wie zum Beispiel durch die Verabreichung von Impfungen, die nur einen Autoantigen liefern, oder durch die Verabreichung von Substanzen, die direkte Aktuatoren des Immunsystems sind, wie die Zytokine. Dennoch sind die aktuell verfügbaren Impfungen auf DNA-Basis für die Verhinderung der Krankheit nicht vollkom men wirksam, und die Verwendung von einigen dieser Impfungen ist eher mit der Induktion oder Erhöhung der Autoimmunität als mit der Verhinderung der Krankheit verbunden. Außerdem ist die Verwendung der Zytokine mit einem bedeutenden Vorhandensein von Krankheiten verbunden.
FILIPPOVA M. ET AL: "Effects of plasmid DNA injection on cyclophosphamide-accelerated diabetes in NOD mice" DNA AND CELL BIOLOGY, New York, NY, US, vol. 20. no. 3, 1. März 2001 (01-03-2001), Seiten 175–181, XP002295859 ISSN: 1044–5498, beschreibt eine Zusammensetzung, die Plasmid-DNA und eine Ausscheidungsform der GAD enthält, die den Diabetes verhindern oder verzögern kann, sie beschreibt aber keine Substanz, die eine Sequenz von Polynukleotiden enthält, die ΔBCL-2 codiert.
Daher besteht die Notwendigkeit einer neuen Methode für die Verhinderung, Verzögerung des Erscheinens oder Behandlung von autoimmunen Krankheiten mit Verwendung von Impfungen, die nicht mit diesen Nachteilen verbunden sind. Außerdem besteht die Notwendigkeit einer neuen Methode für die Verhinderung, Verzögerung des Erscheinens oder Behandlung des Typ I-Diabetes mit Verwendung von Impfungen, die nicht mit diesen Nachteilen verbunden sind.
ZUSAMMENFASSUNG
Gemäß der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung eines Aufbaus von Polynukleotid mit einer Sequenz von Polynukleotiden vorgesehen, die ΔBCL-2 codiert, für die Herstellung eines Arzneimittels zur Verhinderung und Verzögerung des Erscheinens des Typ I-Diabetes ist.
In einer Realisierungsform wird das Arzneimittel in Dosierungseinheiten zwischen etwa 0,5 mg und etwa 5 mg hergestellt. In einer anderen Realisierungsform wird das Arzneimittel in Dosierungseinheiten zwischen etwa 1 mg und etwa 4 mg hergestellt. In einer anderen Realisierungsform wird das Arzneimittel in Dosierungseinheiten zwischen etwa 2,5 mg und etwa 3 mg hergestellt. In einer anderen Realisierungsform wird das Arzneimittel in einer für die intramuskuläre Verabreichung passenden Form hergestellt. In einer anderen Realisierungsform wird das Arzneimittel in einer für die intravenöse Verabreichung passenden Form hergestellt.
Gemäß einer anderen Realisierungsform der vorliegenden Erfindung ist eine Methode für die Verhinderung, Verzögerung des Erscheinens oder Behandlung des Typ I-Diabetes in einem Patienten vorgesehen. Die Methode schließt die Wahl eines Patienten ein, der für die Entwicklung des Typ I-Diabetes empfindlich ist, Typ I-Diabetes entwickelt oder Typ I-Diabetes hat; und die Verabreichung von einer oder mehreren Dosierungen eines Aufbaus von Polynukleotid mit einer Sequenz von Polynukleotiden, die ΔBCL-2 codiert.
In einer anderen Realisierungsform sind eine oder mehrere Dosierungen mehrfache Dosierungen. In einer anderen Realisierungsform schließt die Verabreichung von einer oder mehreren Dosierungen eine intramuskuläre Spritze für den Patienten mit einer oder mehreren Dosierungen ein. In einer anderen Realisierungsform schließt die Methode außerdem nach der Verabreichung die Monitorierung des Patienten ein, um die Entwicklung des Typ I-Diabetes festzustellen.
ABBILDUNGEN
Diese und andere Merkmale, Aspekte und Vorteile der vorliegenden Erfindung werden besser durch die folgende Beschreibung, die beiliegenden Patentansprüche und die Begleitabbildungen verständlich, in denen:
die 1 schematische Darstellungen der drei Substanzen gemäß der vorliegenden Erfindung sind; und
die 2 schematische Darstellungen der fünfzehn Plasmiden sind, die getestet wurden, um ihre Wirksamkeit für die Verhinderung, die Verzögerung des Erscheinens oder die Behandlung einer autoimmunen Krankheit gemäß einer Methode dieser Erfindung festzustellen.
BESCHREIBUNG
Gemäß einer Realisierungsform dieser Erfindung sind Substanzen für die Verhinderung, Verzögerung des Erscheinens oder Behandlung des Typ I-Diabetes vorgesehen. Gemäß einer anderen Realisierungsform dieser Erfindung ist eine Methode für die Verhinderung, Verzögerung des Erscheinens oder Behandlung des Typ I-Diabetes vorgesehen. In einer bevorzugten Realisierungsform ist die Methode, die die Verwendung einer Substanz gemäß dieser Erfindung vorsieht, eine Impfung. In den Substanzen und der Methode dieser Erfindung wird nicht nur die Verabreichung eines Autoantigens verwendet, und es werden keine Moleküle verwendet, die direkte Aktuatoren des Immunsystems sind, wie in den vorhergehenden Methoden. In der vorliegenden Erfindung wird dagegen eine Impfung für die Verhinderung der Apoptose von einem oder mehreren Zelltypen verwendet, die die autoimmune Krankheit hemmen kann. Da einer oder mehrere dieser Zelltypen, die die autoimmune Krankheit hemmen können, noch physiologischen und immunen Regeln unterliegen, wird die Gefahr, die Autoimmunität herbeizuführen oder zu erhöhen, deutlich durch die vorliegende Methode gegenüber einigen Methoden der vorhergehenden Technik reduziert. Da diese Erfindung außerdem nicht die Verabreichung von Substanzen einschließt, die wie die Zytokine direkte Aktuatoren des Immunsystems sind, schließt diese Erfindung nicht die gefährlichen Nebenwirkungen ein, die mit diesen direkten Aktuato ren des Autoimmunsystems verbunden sind. Ein weiterer Vorteil einer genetischen Impfung, die hauptsächlich Plasmid-DNA enthält, besteht darin, dass sie in großen Mengen zu relativ niedrigen Kosten produziert werden kann und keine „Kühlkette" für die Lagerung erfordert. Daher ist die Verwendung der Substanzen und Methoden gemäß dieser Erfindung sowohl wirtschaftlich als auch praktisch für die Verhinderung, Verzögerung des Erscheinens oder Behandlung einer autoimmunen Krankheit. Außerdem verändert eine genetische Impfung gemäß dieser Erfindung das genetische Material eines Organismus direkt, was bedeutet, dass die nativen Epitopen im Gegensatz zu den Impfungen auf Proteinbasis vom Immunsystem des Organismus behandelt werden. Die Substanzen und die Methode dieser Erfindung werden jetzt detailliert beschrieben.
Wie in dieser Beschreibung verwendet, schließt der Begriff „autoimmune Krankheit" sowohl Krankheiten, die teilweise oder ganz auf die Zerstörung der normalen Zellen oder Gewebe durch das eigene Immunsystem des Organismus zurückzuführen sind, als auch die Zerstörung von Zellen oder Geweben durch das eigene Immunsystem des Organismus ein, die in den Organismus transplantiert wurden, um den Platz von defekten oder fehlenden Zellen oder Geweben einzunehmen, wie zum Beispiel Transplantationen von Inselzellen oder Transplantationen von teilweisen oder ganzen Organen.
Wie in dieser Beschreibung verwendet, ist nicht gemeint, dass der Begriff „einschließen" und die Variationen des Begriffs wie „einschließlich" und „schließt ein" andere ganze Additive, Komponenten oder Phasen ausschließt.
In einer Realisierungsform schließt diese Erfindung eine Substanz ein, die für die Verhinderung, Verzögerung des Erscheinens oder Behandlung des Typ I-Diabetes verwendet werden kann. Die Substanz ist ein DNA-Aufbau mit einer Sequenz von Polynukleotiden, ID von SEQ. NR.: 3, die eine abge schnittene Form des BCL-2 codiert, die als ΔBCL-2 in diese Erfindung bezeichnet wurde.
Wie die Experten des Zweiges in Bezug auf diese Beschreibung verstehen werden, schließt die vorliegende Erfindung, auch wenn spezifische Sequenzen für die Sequenzen der Polinukleotiden geliefert werden, so wie sie in dieser Beschreibung beschrieben werden, wie zum Beispiel die Sequenzen der Polinukleotiden, die ΔBCL-2 codieren, jede beliebige andere Sequenz ein, die nicht zu einer Änderung der Translationssequenz der Aminosäuren führt, so wie jede beliebige Sequenz, die nicht zu einer Änderung in der Translationssequenz der Aminosäuren führt, wo aber die Änderung nicht grundlegend die Funktion der Translationssequenz der Aminosäuren beeinflusst, so dass sie für die Verwendungen, die in dieser Beschreibung vorgesehen sind, unpassend wird.
In Bezug auf die 1 werden jetzt die schematischen Darstellungen der drei Substanzen angegeben, eine gemäß dieser Erfindung. Wie man sehen kann, schließt jede Substanz den Aufbau einer Plasmid-DNA ein. Die Substanz A schließt einen Plasmid-Aufbau mit einem Polynukleotid ein, der einen Autoantigen für die autoimmune Krankheit codiert, wie Glutaminsäure-Decarboxylase-Ausscheidung, die ein Autoantigen für den Typ I-Diabetes ist, gefolgt von einem Polynukleotid, ID von SEQ. NR.: 1, der BAX codiert. Die Substanz B schließt einen Plasmid-Aufbau mit einem Polynukleotid ein, ID von SEQ. NR.: 2, der E3-GP19k codiert, ohne einen Polynukleotid, der einen Autoantigen für die autoimmune Krankheit codiert. Die Substanz C schließt einen Plasmid-Aufbau mit einem Polynukleotid ein, ID von SEQ. NR.: 3, der eine abgeschnittene Form des anti-apoptotischen Proteins BCL-2 ohne einen Polynukleotid codiert, der einen Autoantigen für die autoimmune Krankheit codiert. Wie in den Abbildungen verwendet, stellt „CMV" das anregende Element des Zytomegalie-Virus dar, „pA" stellt eine Polyadenylierungsstelle dar, und „IRES" stellt eine Ribosombindungsstelle innerhalb des Virus EMCV dar, ID von SEQ. NR.: 4.
Um die Vorteile dieser Erfindung zu zeigen, wurden fünfzehn Plasmiden aufgebaut und als Impfungen verwendet. Jeder Aufbau wurde im Vektor pND2 kloniert. In Bezug auf die 2 werden die schematischen Darstellungen der fünfzehn Plasmiden angegeben, die getestet wurden, um ihre Wirksamkeit für die Verhinderung, Verzögerung des Erscheinens oder Behandlung einer autoimmunen Krankheit festzustellen. Wie man sehen kann, befand sich jeder Plasmid unter der Plasmid-Transkriptionskontrolle desselben Promotors (CMVp), um den Ausdruck beider Leserahmen zu garantieren, die in jeder transfizierten Zelle offen sind. Während des Aufbaus dieser Plasmiden, die die cDNA enthalten, die BCL-2 codiert, wurde festgestellt, dass Plasmiden aufgrund der großen Dimension der cDNA beseitigt wurden. Daher wurde für den Aufbau der Plasmiden eine abgeschnittene Version von bcl-2 verwendet, die als Δblc-2 bezeichnet wurde. Wie in 2 dargestellt, schlossen die Plasmiden cDNA ein, die zytoplasmatische GAD codiert, ID von SEQ. NR.: 5 (Plasmid 1); GAD Ausscheidung (SGAD), ID von SEQ. NR.: 6 (Plasmid 2); eine Luciferase Kontrollausscheidung, ID von SEQ. NR.: 7 (Plasmid 3); das geschnittene menschliche anti-apoptotische Protein BCL-2 (ΔBCL-2), ID von SEQ. NR.: 3 (Plasmid 4); das anti-apoptotische Protein BAX, ID von SEQ. NR.: 1 (Plasmid 5); E3-GP19k, ID von SEQ. NR.: 2 (Plasmid 6); ΔBCL-2, ID von SEQ. NR.: 3, in Kombination mit der zytoplasmatischen GAD, ID von SEQ. NR.: 5, GAD Ausscheidung, ID von SEQ. NR.: 6, und Luciferase Ausscheidung, ID von SEQ. NR.: 7 (Plasmiden 7-9, entsprechend), BAX, ID von SEQ. NR.: 1, in Kombination mit der zytoplasmatischen GAD, ID von SEQ. NR.: 5, GAD Ausscheidung, ID von SEQ. NR.: 6, und Luciferase Ausscheidung, ID von SEQ. NR.: 7 (Plasmiden 10-12, entsprechend), und E3-GP19k, ID von SEQ. NR.: 2, in Kombination mit der zytoplasmatischen GAD, ID von SEQ. NR.: 5, GAD Ausscheidung, ID von SEQ. NR.: 6, und Luciferase Ausscheidung, ID von SEQ. NR.: 7 (Plasmiden 13-15, entsprechend).
Alle Plasmiden wurden erzeugt, der offene Leserahmen wurde durch die Verwendung von PCR verstärkt, die Verstärkerprodukte wurden nach der Sequentierung der DNA kontrolliert, und sie wurden ohne Änderungen vorgefunden. Es wurde daher jeder Aufbau verwendet, um die COS-7-Simianzellen vorübergehend für die Analyse des Immunoblots der Zelllysate zu transfizieren, die bestätigt hat, dass ein Genprodukt mit korrekter Dimension codiert wurde (nicht dargestellte Daten).
Daher wurden wie folgt die Effekte der 15 Plasmiden auf diabetischen nicht fettleibigen Mäusen (NOD) festgelegt. Zunächst wurde die Plasmid-DNA durch Verwendung des Kits Qiagen Endofree (Qiagen Inc., Chatsworth, CA, USA) isoliert, und es wurden intramuskulär 300 ug von jeder der 15 Plasmid-DNA in Gruppen von fünfzehn weiblichen, 4–5 Wochen alten Mäusen NOD eingespritzt. Die Dosierung von 300 ug wurde als bedeutende Dosierung für die menschliche klinische Einstellung auf der Grundlage des Gewichts des Organismus gewählt. Das Erscheinen des Diabetes wurde bis zum Alter von 35 Wochen monitoriert, wobei Urin- und Glukoseblutanalysen verwendet wurden. Die Mäuse wurden nach positiven Tests aufgrund hoher Glykosurieniveaus mit Glukoseniveaus im Blut über 300 mg/dl für zwei aufeinander folgende Tage als diabetisch betrachtet.
Die Ergebnisse dieser Experimente haben folgendes bewiesen. Die Prozentzahl der diabetischen Tiere im Alter von 35 Wochen änderte sich von 73 auf 93% bei Mäusen, die mit Plasmiden 1-3 geimpft wurden; von 60 bis 67% bei Mäusen, die mit Plasmiden 4 oder 7-9 geimpft wurden; von 47 bis 85% bei Mäusen, die mit Plasmiden 5 und 10-12 geimpft wurden; und von 53 bis 73% bei Mäusen, die mit Plasmiden 6 und 13-15 geimpft wurden. Die (nicht geimpften) Kontrolltiere hatten eine Inzidenz des Diabetes von etwa 93%. Daher hat die Verabreichung von 300 ug des alleinigen Vektors des Plasmids oder von 300 ug des alleinigen Vektors des Plasmids, der Antigene codiert, Plasmiden 1-3, als Ergebnis keine bedeutende Hemmung des Diabetes er geben. Die mit den Plasmiden 6-9 und 11 geimpften Mäuse haben eine statistisch bedeutende Hemmung des Diabetes gegenüber den nicht behandelten Mäusen gezeigt (P < 0,05 für den Plasmid 7, und P < 0,02 für den Plasmid 9). Dazu haben die Mäuse, die pND2-E3-GP19k, den Plasmid 6, oder pND2-SGAD55-BAX, den Plasmid 11, erhalten haben, eine Inzidenz des Diabetes gezeigt, der sich bei 35 Wochen bedeutend gegenüber den Mäusen verringert, die den Plasmid pND2-GAD65, Plasmid 1, oder pND2-GAD65-BAX, Plasmid 10 (P < 0,04), erhalten haben, und gegenüber den Mäusen, die pND2-GAD65-ΔBCL2, Plasmid 7, oder pND2-SGAD55-ΔBCL2, Plasmid 8, erhalten haben, die eine bedeutende Verringerung des Diabetes gegenüber den Mäusen gezeigt haben, die pND2-GAD65, Plasmid 1 (P < 0,05), erhalten haben. Die Hemmung des Diabetes wurde mit einer geringeren Entzündung der Inseln verbunden (nicht dargestellte Daten). Diese Resultate werden jetzt detaillierter beschrieben.
Die Mäuse, die mit Plasmiden mit Δbcl-2, Plasmiden 4 und 7-9, geimpft wurden, haben eine Verzögerung von 4–5 Wochen für das Erscheinen des Diabetes unabhängig vom damit ausgedrückten Antigen und eine Verringerung der Inzidenz des Diabetes im Alter von 35 Wochen (60–67% gegenüber dem etwa 93% der nicht geimpften Kontrollmäuse) unabhängig vom damit ausgedrückten Antigen gezeigt. Daher hat der damit ausgedrückte Autoantigen GAD nicht den Effekt gehemmt.
Die Mäuse, die mit Plasmiden mit bax, den Plasmiden 5 und 10-12, geimpft wurden, haben keine Hemmung des Diabetes gezeigt, mit Ausnahme des sgad55-bax, Plasmid 11. Während die mit Plasmid 11 geimpften Mäuse angefangen hatten, den Diabetes in einer ähnlichen Zeit wie die anderen Mäuse zu entwickeln, die mit einem Plasmid nur mit bax, Plasmid 5, geimpft wurden, betrug die Inzidenz des Diabetes bei mit Plasmid 11 geimpften Mäusen im Alter von 35 Wochen nur 47% gegenüber einer Inzidenz von 93% bei den nicht geimpften Kontrollmäusen (p < 0,05).
Die Mäuse, die mit Plasmiden mit E3-gp19k, Plasmiden 6 und 13-15, geimpft wurden, zeigten einen großen Unterschied beim Erscheinen des Diabetes je nach dem damit ausgedrückten Antigen. Die Mäuse, die mit dem Plasmid mit E3-gp19k ohne Autoantigen, Plasmid 6, geimpft wurden, haben mit einer Verzögerung von 4–5 Wochen begonnen, den Diabetes zu entwickeln, und sie haben eine Verringerung des Diabetes im Alter von 35 Wochen gezeigt (53% gegenüber dem 93% der nicht geimpften Kontrollmäuse für die Kontrolle) (p < 0,05). Die Mäuse, die mit den Plasmiden mit E3-gp19k mit Autoantigen, Plasmiden 13-15, geimpft wurden, haben den Effekt sowohl in Bezug auf die Verzögerung des Erscheinens des Diabetes als auch in Bezug auf die Inzidenz der diabetischen Tiere bei 35 Wochen gehemmt.
Daher wurden die Immunantworten mit Verwendung einer ELISpot-Analyse gekennzeichnet, die spezifisch für GAD ist, und ELISA der Isotopen IgG Anti-GAD des Serums, um festzulegen, ob die Hemmung des Diabetes durch die Verabreichung der Substanzen der vorliegenden Erfindung mit der Hemmung der Aktivität ähnlich wie die entzündliche Th1 und mit der Einstellung der Antwort nach oben wie die entzündungshemmende Th2 verbunden ist.
Die Analyse ELISpot wurde wie folgt geführt. Es wurden Splenozyten der Mäuse beim Erscheinen des Diabetes oder am Ende der Beobachtungsdauer der nicht diabetischen Tiere isoliert. Dann wurden die Zellen mit dem rekombinierenden Protein GAD stimuliert, und es wurde die Anzahl der Zellen gezählt, die IFN-Gamma (ähnliche Aktivität wie Th1) und IL-4 (ähnliche Aktivität wie Th2) ausscheiden, wobei ein Standardprotokoll des Erbauers befolgt wurde. Danach wurde die Anzahl der Zellen abgezogen, die die Zytokine bei Fehlen der GAD-Stimulation ausscheiden, und dann wurden die Resultate analysiert. Für IFN-Gamma haben die Daten deutlich angezeigt, dass die Hemmung des Diabetes durch den Plasmid 6, der nur E3-GP19k codiert, oder durch die Plasmiden 4 und 7-9, die ΔBCL-2 allein oder zusammen mit einem Antigen codieren, mit der Hemmung der spezifischen Aktivität der GAD verbunden ist. Daher konnten E3-19k und ΔBCL-2 eine Immunantwort herbeiführen, die die Autoreaktivität gegen die Betazellen unterdrücken konnte. Überraschenderweise schien es nicht so, dass die Kombination SGAD55-BAX die Th1 ähnelnde Aktivität bedeutend hemmte. Außerdem hat nur SGAD55, die nicht den Diabetes gehemmt hat, die Th1 ähnliche spezifische Antwort der GAD gehemmt.
Gegenüber IL-4 haben die Daten einen Anstieg der spezifischen Aktivität der GAD bei Mäusen angezeigt, die den Plasmid 6, der nur E3-GP19k codiert (Hemmung des Diabetes), den Plasmid 13, der SGAD55 und E3-19k hemmt (keine Hemmung des Diabetes), und den Plasmid 8 SGAD55 und ΔBCL-2 (Hemmung des Diabetes) erhalten haben. Auf diese Weise war eine höhere Th2 ähnliche Aktivität nicht immer mit einer Th1 ähnlichen Aktivität bei der Verringerung oder Hemmung der Krankheit verbunden.
ELISA wurde wie folgt geführt. Für ELISA wurde Tierserum von Isotopen IgG2a,b und IgG1 Anti-GAD verwendet, die entsprechend eine Th1 und eine Th2 ähnliche Aktivität anzeigen. ELISA von IgG2a,b Anti-GAD hat angezeigt, dass drei der Plasmid-DNA, die für ΔBCL-2, Plasmiden 4, 8 und 9 codieren, eine bedeutende Reduzierung der Th1 ähnlichen Aktivität gegenüber dem Plasmid 5, der für BAX codiert, aber nicht bei den nicht geimpften Kontrollmäusen, gezeigt haben. ELISA von IgG1 Anti-GAD hat angezeigt, dass alle Plasmid-DNA, die BAX, Plasmiden 5 und 10-12 codieren, als Resultat eine Th2 ähnliche Aktivität bei der Verringerung haben.
Diese Daten zeigen zusammen genommen an, dass zunächst bax, eine Plasmid-cDNA, die für ein pro-apoptotisches Protein codiert, als Molekularhilfsstoff für genetische Impfungen zur Verhinderung von autoimmunen Krankheiten verwendet werden kann, wie eine Impfung mit einem Polynukleotid, der eine Ausscheidungsform eines Autoantigens codiert. An zweiter Stelle konnte eine Plasmid-cDNA, die E3-GP19k codiert oder die nur den geschnittenen BCL-2 codiert, die autoimmune Krankheit hemmen, auch wenn eine Plasmid-cDNA, die E3-GP19k codiert oder die nur einen geschnittenen BCL-2 codiert, weniger wirksam war, wenn sie mit einem Autoantigen kombiniert wurde.
In einer Realisierungsform der vorliegenden Erfindung ist eine Methode für die Verhinderung, Verzögerung des Erscheinens oder Behandlung Typ I-Diabetes vorgesehen. Die Methode schließt zunächst die Wahl eines Patienten ein, der empfindlich für die Entwicklung Typ I-Diabetes ist, der Typ I-Diabetes entwickelt oder der Typ I-Diabetes hat. Die Wahl kann mit Verwendung von Standardmethoden ausgeführt werden, wie die Experten des Zweiges in Bezug auf diese Beschreibung verstehen werden. Die Wahl ausgeführt werden kann, indem beim Patienten das Vorhandensein von Antiinsulin- oder Anti-GAD-Autoantikörpern oder sowohl Antiinsulin- als auch/oder Anti-GAD-Autoantikörpern, das Vorhandensein einer ansteigenden Hyperglykämie, das Vorhandensein von Glykosurie, das Vorhandensein von einer genetischen Prädisposition für Diabetes oder mehr als einem der genannten Merkmale festgestellt wird.
Daher werden dem Patienten eine oder mehrere Dosierungen eines Plasmid-Aufbaus gemäß der vorliegenden Erfindung verabreicht. D. h., ein Plasmid-Aufbau mit einem Polynukleotid, der eine abgeschnittene Form des antiapoptotischen Proteins BCL-2 codiert, aber ohne einen Polynukleotid, der ein Autoantigen für die autoimmune Krankheit codiert. In einer bevorzugten Realisierungsform werden dem Organismus zwei Plasmid-Aufbauten gemäß der vorliegenden Erfindung verabreicht. In einer besonders bevorzugten Realisierungsform werden dem Organismus alle drei Plasmid-Aufbauten gemäß der vorliegenden Erfindung verabreicht.
In einer bevorzugten Realisierungsform wird der Plasmid-Aufbau in mehrfachen Dosierungen verabreicht. In einer anderen bevorzugten Realisierungs form variiert die Dosierung zwischen etwa 0,001 mg/Kg und etwa 10 mg/Kg. In einer anderen bevorzugten Realisierungsform variiert die Dosierung zwischen etwa 0,01 mg/Kg und etwa 1 mg/Kg. In einer anderen bevorzugten Realisierungsform beträgt die Dosierung etwa 0,05 mg/Kg. In einer bevorzugten Realisierungsform variiert eine passende Dosierung für einen erwachsenen Menschen zwischen etwa 0,5 mg und etwa 5 mg. In einer bevorzugten Realisierungsform variiert eine passende Dosierung für einen erwachsenen Menschen zwischen etwa 1 mg und etwa 4 mg. In einer bevorzugten Realisierungsform variiert eine passende Dosierung für einen erwachsenen Menschen zwischen etwa 2,5 mg und etwa 3 mg. In einer anderen bevorzugten Realisierungsform wird die Dosierung wöchentlich von etwa 2 bis etwa 10 Mal verabreicht. In einer besonders bevorzugten Realisierungsform wird die wöchentliche Dosierung 4 Mal verabreicht. In einer besonders bevorzugten Realisierungsform wird die wöchentliche Dosierung nur ein Mal verabreicht.
Die Verabreichung kann über einen passenden Weg verabreicht werden. In einer bevorzugten Realisierungsform ist der Weg intramuskulär oder intravenös.
Dazu kann die Methode nach der Verabreichung die Monitorierung des Patienten einschließen, um die Entwicklung der autoimmunen Krankheit festzustellen.
BEISPIEL 1
VERHINDERUNG DES DIABETES
Gemäß der vorliegenden Erfindung wird das Erscheinen des Diabetes bei einem Patienten zum Beispiel wie folgt verzögert oder verhindert. Zunächst wählt man den Patienten, indem man sich auf das Vorhandensein der sich im Umlauf befindenden Antiinsulin- und Anti-GAD-Autoantikörper basiert.
Dann werden dem Patienten intramuskulär 0,05 mg/Kg eines Plasmid-Aufbaus mit einer Sequenz von Polynukleotiden eingespritzt, ID von SEQ. NR.: 1, die das pro-apoptotische Protein BAX codiert und die SGAD codiert, ID von SEQ. NR.: 6, oder mit einer Sequenz von Polynukleotiden, ID von SEQ. NR.: 2, die das adenovirale Protein E3-GP19k codiert, oder mit einer Sequenz von Polynukleotiden, ID und SEQ. NR.: 3, die ΔBCL-2 codiert. Die Einspritzung wird wöchentlich für 3 Wochen wiederholt, während das Niveau der Antiinsulin- und Anti-GAD-Autoantikörper kontrolliert wird. Die Behandlung wird beendet, wenn das Niveau der sich im Umlauf befindenden Antiinsulin- und Anti-GAD-Autoantikörper wieder normal ist.

Claims

Substanz zur Verhinderung, Verzögerung des Erscheinens oder zur Behandlung des Typ I-Diabetes. Die Substanz enthält einen Aufbau von Polynukleotid mit einer Sequenz von Polynukleotiden, die ΔBCL-2 codiert.
Substanz gemäß Patentanspruch 1, in dem die Substanz verwendet wird, wenn bei einem Patienten Antiinsulin- oder Anti-GAD-Antikörper (GAD = Glutaminsäure-Decarboxylase) oder sowohl Antiinsulin- als auch Anti-GAD-Antikörper auftreten.
Substanz gemäß Patentanspruch 1, in dem die Substanz verwendet wird, wenn bei einem Patienten ansteigende Hyperglykämie auftritt.
Substanz gemäß Patentanspruch 1, in dem die Substanz verwendet wird, wenn bei einem Patienten Glykosurie auftritt.
Substanz gemäß Patentanspruch 1, in dem die Substanz verwendet wird, wenn bei einem Patienten eine genetische Prädisposition für Diabetes vom Typ I vorhanden ist.
Verwendung eines Aufbaus von Polynukleotid mit einer Sequenz von Polynukleotiden, die ΔBCL-2 für die Herstellung eines Arzneimittels zur Verhinderung, Verzögerung des Erscheinens oder zur Behandlung des Typ I-Diabetes codiert.
Verwendung gemäß Patentanspruch 6, in dem das Arzneimittel verwendet wird, wenn bei einem Patienten Antiinsulin- oder Anti-GAD-Antikörper oder sowohl Antiinsulin- als auch Anti-GAD-Antikörper auftreten.
Verwendung gemäß Patentanspruch 6, in dem das Arzneimittel verwendet wird, wenn bei einem Patienten ansteigende Hyperglykämie auftritt.
Verwendung gemäß Patentanspruch 6, in dem das Arzneimittel verwendet wird, wenn bei einem Patienten Glykosurie vorhanden ist.
Verwendung gemäß Patentanspruch 6, in dem das Arzneimittel verwendet wird, wenn bei einem Patienten eine genetische Prädisposition für Diabetes vom Typ I auftritt.
Verwendung gemäß eines beliebigen Patentanspruchs von 6 bis 10, in dem das Arzneimittel in einer für die intramuskuläre Verabreichung passenden Form hergestellt wird.
Verwendung gemäß eines beliebigen Patentanspruchs von 6 bis 10, in dem das Arzneimittel in einer für die intravenöse Verabreichung passenden Form hergestellt wird.