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DE3044793A1 - N-adamentansubstituierte tetrapeptidamide und deren pharmakologisch vertraegliche salze - Google Patents

N-adamentansubstituierte tetrapeptidamide und deren pharmakologisch vertraegliche salze

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Publication number
DE3044793A1
DE3044793A1 DE19803044793 DE3044793A DE3044793A1 DE 3044793 A1 DE3044793 A1 DE 3044793A1 DE 19803044793 DE19803044793 DE 19803044793 DE 3044793 A DE3044793 A DE 3044793A DE 3044793 A1 DE3044793 A1 DE 3044793A1
Authority
DE
Germany
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solution
phenylalanyl
formula
amino
boc
Prior art date
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Withdrawn
Application number
DE19803044793
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English (en)
Inventor
Robert Henry Chicago Ill. Mazur
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
GD Searle LLC
Original Assignee
GD Searle LLC
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Filing date
Publication date
Application filed by GD Searle LLC filed Critical GD Searle LLC
Publication of DE3044793A1 publication Critical patent/DE3044793A1/de
Withdrawn legal-status Critical Current

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Description

Unsere Nr. 23 175 Pr/Ec/br
G.D. Searle & Co.
Skokie, 111., V. St.A.
N-adamantansubstituierte Tetrapeptidamide und deren pharmakologisch verträgliche Salze
Die Erfindung betrifft N-adamantansubstituierte Tetrapeptidamide und deren pharmakologisch verträgliche Salze. Diese Verbindungen sind Analoga von Enkephalin, worin das Methionin oder Leucin in 5-Stellung durch ein Ädamantylamid und das Glycin in 2-Stellung durch verschiedene aminosäure Reste substituiert sind. Gegebenenfalls kann das Tyrosin in 1-Stellung und das Phenylalanin in 4-Stellung ebenfalls durch verschiedene Aminosäurereste substituiert sein. Enkephalin, ein natürlich vorkommendes Pentapeptid, wurde isoliert und erwies sich als ein Gemisch von 2 Pentapeptiden, die sich nur im fünften Aminosäurerest unterscheiden. Leucin -enkephalin besitzt folgende Formel
H TyrGIyGIyPheLeu OH
12 3 4 5
und Methionin -enkephalin besitzt folgende Formel
H Tyr GIy GIy Phe Met OH
12.3 4 5 I
worin die Tyr, Phe, Met und Leu-Reste alle L-stereochemische Konfiguration besitzen.
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R.Tomatis, et al, Il Farmaco- Ed.Sc, 34 (6), S.496-506 (1979) beschreibt die Synthese von Leu-enkephalin-1-adamantylamid und Leu-/D-Ala_/enkephalin-1-adamantylamid. Diese Verbindungen unterscheiden sich von den erfindungsgemäßen Verbindungen strukturell dadurch, daß sie ein 1-Adamantylamid zeigen, das an das gesamte Enkephalinmolekül gebunden ist, während die vorliegende Erfindung den Ersatz der Aminosäure in 5-Stellung des Enkephalins durch Adamantylamid lehrt.
K.Q.Do, et al., Helvetic Chimica Acta, 62 (4), S.956-964 (1979) beschreibt die Synthese von (S)-(+)-2-Amino-3-(1-adamanty1)-propionsäure, eine Verbindung, in der der Phenylrest des Phenylalanins durch Adamantan substituiert ist. Die vorliegende Erfindung beschreibt neue N-adamantansubstituierte Tetrapeptidamide. Diese Verbindungen sind Analoga von Enkephalin, worin die 5-Stellung durch ein Adamantylamid substituiert ist. Die Adamantylamidreste der erfindungsgemäßen Verbindung unterscheiden sich strukturell von der (S) -( + )-2-Amino-3-(1-adamantyl)-propionsäure dadurch, daß der Aminorest und der Carboxylrest, falls vorhanden, direkt an den Ädamantanrest gebunden sind.
Die Erfindung betrifft neue N-adamantansubstituierte Tetrapeptidamide, Derivate davon und deren pharmakologisch verträgliche Salze der Formel
13002S/0627
GIy-
worin W Tyrosin oder einen Rest der Formel
worin R^ , R2 und R-, jeweils unabhängig voneinander Wasserstoff oder einen Alkylrest mit 1 bis 4 C-Atomen sind, X Methionin, Methioninsulfoxxd„ Dehydro·-^- aminobuttersäure, I-Aminocyclopropancarbonsäure, Alanin, O-Methylhomoserin, Prolin oder Norleucin, Y Phenylalanin, Dehydrophenylalanin, Cyclohexylalanin oder einen Rest der Formel
worin R. Wasserstoff oder einen Alkylrest mit 1 bis 4 C-Atomen und M Wasserstoff, Stickstoff oder Halogen
Z einen Rest der Formel
130025/0627
worin R5 Wasserstoff, Carboxyl, Methoxycarbonyl, Carboxamid oder Hydroxymethyl und η 0, 1 oder 2 sind, einen Rest der Formel
worin Rr und η vorstehende Bedeutung haben, einen Rest der Formel
worin R1- und η vorstehende Bedeutung haben, einen Rest der Formel-
-HN (CH0)
worin R1. und η vorstehende Bedeutung haben.
130025/0627 '
ORIGINAL INSPECTED
einen Rest der Formel
worin R1- und η vorstehende Bedeutung haben oder einen Rest der Formel
.'.!■■■
-HN
worin R5 und η vorstehende Bedeutung haben, bedeuten, wobei die stereochemische Konfiguration von jedem der optisch aktiven Aminosäurereste unabhängig voneinander D, L oder DL sein kann, und deren pharmakologisch verträgliche Salze.
Abkürzungen bezeichnen die Aminosäuren gemäß den Nomenklaturregeln, veröffentlicht durch IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature in Biochem. J. 126, S.773-780 (1972). Die Aminosäuren haben L-stereochemische Konfiguration außer, wenn etwas anderes angegeben ist. Dem Fachmann dürfte klar sein, daß viele Variationen in der Substituentengruppe (R5) am Adamantanrest möglich sind, ohne die pharmakologische Wirksamkeit der vorliegenden Verbindungen zu beeinträchtigen und daß es möglich sein wird, mehr als eine Substituentengruppe am Adamantanrest zu haben, die gleich oder verschieden sein kann, ohne die pharmakologische Wirkung zu
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beeinträchtigen. Eine Anzahl an möglichen Substituentengruppen werden im 1979 bis 1980 Aldrich-Katalog Handbook of Fine Chemicals auf den Seiten 21 bis 22 beschrieben. Zu den möglichen Substituentengruppen gehören beispielsweise Halogen, Nitro, Hydroxy, Tetrazol, Amino, Oxo, -CH2OB(OH2), -NHCOCH3, -(CH2)Q_4 NH3, -0(CH2) ^4 CH3, -SO3CH3, - (CH2)0_4 CHO, - (CH2)o_4 CH3, - (CH2)o-4 CN,
~iCH2)o-4 COOH^-COCl, -COCH.,, -NHCONH9, -(CH-) . OH und -N=C=S.
Äquivalente zu den angegebenen Verbindungen sind für die erfindungsgemäßen Zwecke deren Solvate, worin biologisch unwesentliche Mengen des Lösungsmittels vorhanden sind.
Ebenfalls Äquivalente zu den Verbindungen der Formel (I) für die Zwecke der Erfindung sind deren pharmazeutisch verträgliche Säureadditionssalze. Derartige Säureadditionssalze können von einer Vielzahl von anorganischen und organischen Säuren stammen wie Schwefelsäure, Phosphorsäure, Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Iodwasserstoffsäure, Salpetersäure, Sulfamidsäure, Zitronensäure, Milchsäure, Brenztraubensäure, Oxalsäure, Maleinsäure, Bernsteinsäure, Weinsäure, Zimtsäure, Essigsäure, Trifluoressigsäure, Benzoesäure, Salicylsäure, Gluconsäure, Ascorbinsäure und verwandte Säuren.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen wertvolle pharmakologischeEigenschaften. Sie sind beispielsweise Agonisten an Opiatrezeptorstellen und eignen sich als Analgetika.
Der Versuch, der zur Bestimmung der Agonistwirksamkeit an den Opiatrezeptorstellen verwendet wird, ist eine Modifikation der Technik, die von Pert, Snowman und Snyder in Brain Research, 70, 184 (1974) beschrieben wird.
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Einzelheiten dieses Versuchs sind folgende: Ein 300 bis 400 g schweres Albino-Meerschweinchen beliebigen Geschlechts wird durch cervicale Dislokation getötet, das Gehirn entfernt und das Cerebellum verworfen. Das zurückbleibende Gewebe wird gekühlt, gewogen und in 30 ml 0,32M Saccharose mit einem PTPE-Glas-Homogenisierer homogenisiert. Das Homogenat wird 10 Minuten lang bei 4O0C bei 1000 g in einer Sorvall RC-2B-Zentrifuge zentrifugiert. Der sich dabei bildende Überstand wird dekantiert und 30 Minuten lang bei 40C bei 20 000 g zentrifugiert. Die dabei entstehenden Pellets werden gewaschen, durch Wiedersuspension in 0,05M Tris-HCl-Puffer (pH 7,4) und dann 30 Minuten lang bei 4°C bei 20 000 g zentrifugiert. Die fertigen Pellets werden in 30 ml Puffer je Gehirn für den Versuch "suspendiert! Für Versuche in Gegenwart von Natriumionen ist der Puffer Krebs-tris, pH 7,4, während in Abwesenheit von Natriumionen der Puffer 0,05M tris-HCl, pH 7,4 ist. Levorphanol (10 M) und Dextrorphan (10 M) werden zur Bestimmung von spezifischen Bindungen verwendet. Die Rezeptorbindungsaktivität wirdy wie von Pert und Snyder beschrieben mit einigen Modifikationen bestimmt. H-(-)-naloxon (19,985 Ci/mMol, Posten Nr. 887-201, New England Nuclear Corp., Boston, Mass.) wird als Radioligand verwendet. Die gewaschene Membranfraktion wird 1:10 in einem geeigneten Puffer verdünnt,und es werden 2 ml je Rohr in dem Versuch verwendet. Die Bindungsstudien werden eingeleitet durch 1Ominütige Vorinkubation des Homogenats, das unterschiedliche: Konzentrationen (3-fach) der Testverbindung oder der Standardverbindung auf Eis (40C) enthält. Die Reaktion wird eingeleitet durch Zugabe des H-naloxons (Endkonzentration 2,5 nM) zum Rohr und Inkubation auf Eis für weitere 30 Minuten. Die Proben werden schnell unter verringertem Druck auf Whatman GF/C-Glasfaserfilterscheiben filtriert. Die Filter werden 2 χ mit 8 ml eiskaltem Puffer gewaschen und
TM
dann in 1 ml NCS -Gewebe solubilisxerungsmittel (Amersham/
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ORIGINAL INSPECTED
30U793
Searle Corp., Arlington, Heights, 111.) 1 Stunde lang bei 550C solubilisiert. Nach dem Abkühlen werden die Proben angesäuert und in einem Plüssigkeitsscintillationszähler (Mark II Nuclear Chicago) gezählt. Eine ID50-Konzentration des Mittels, das die H-naloxon-bindung inhibiert, wird bestimmt aus Log-Probit-Kurven der prozentualen Hemmung der H-naloxon-bindung gegenüber der Konzentration der Te s tverb indung.
Der beschriebene in vitro-Versuch ist weitgehend dafür bekannt, daß er übereinstimmt mit entsprechenden Agonist-Antagönist-Eigenschaften in vivo (Nature, Bd. 247, 11. Jan. 1974). Als ein bekannter Agonist, Morphin, mit Hilfe dieses Versuches getestet wurde in Abwesenheit eines Natriumions, hatte er eine IDj-0-Konzentration von χ 10
Es ist außerdem bekannt, daß die Rezeptoraffinitäten im Ileum in ihren Bindungseigenschaften gleich sind mit denjenigen des Gehirns (Terenius, Acta. Pharmacol, et Toxicol., 37, 211-221 (1975)). Ein vorliegender Befund zeigt an, daß die Arzneimittel die auf die Ileum-Opiat-RezeptQren wirken, Constipation verursachen und somit geeignet sind als Antidiarrhömittel.
Die analgetische Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen kann durch Anwendung des Phenyl-p-benzochinoninduzierten Zuck-Testes bei der Maus demonstriert werden. Dieser Test ist eine Modifikation des von L.C.Hendershot und J„ Forsaith, in J.Pharmacol. Exp. Ther ., 125, S. 237 (1959) beschriebenen Verfahrens.
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Einzelheiten dieses Tests sind folgende: Gruppen von 10 18 bis 25 g schweren CD-1 Mäusemännchen (Charles River) werden subkutan (s.c.) oder intragastrisch (i.g.) mit dem Kontrollvehikel oder der zu testenden Verbindung in einem Volumen von 10 ml/kg vorbehandelt. 2,5 mg/kg Phenyl-pbenzochinon (PBC) werden intraüeritoneal (i.p.) 30 oder 60 Minuten später als 0,025%ige Lösung in 5 % Ethanol verabreicht. 5 Minuten nach der PBC-Erregung wird jede Maus 10 Minuten lang beobachtet und während dieser Zeit die Anzahl der Zuckungen gezählt. Eine Zuckung besteht aus einer Kombination oder Folge von Krümmen des Rückens, Beckendrehung und Strecken der hinteren Gliedmaßen. Signifikante Analgesie wird angenommen, wenn dio Häufigkeit der Zuckungen des Tieres >. 50 % des täglichen Durchschnitts der Kontrollgruppe ist.
Die Bestimmung des ED^-Wertes, ausgedrückt als die Dosis die das Zucken um > 50 % des Durchschnitts der Kontrollgruppe bei 50 % der Mäuse herabsetzt, orfolgt nach der Methode von J.T. Litchfield und F.Wilcoxon, J.Pharmacol. Exp., Ther. 96, S. 99 (1949). Als Morphin im Mäusekrümmtest s.c. getestet wurde, zeigte es einen EDrf.-Wert (95 % Zuverlässigkeitsgrenze) nach 60 Minuten von 0,1 (0,3 bis 0,37) mpk. Als eine repräsentative erfindungsgemäße Verbindung, Methyl-2,6 -dimethyl -DL-tyrosy.l-D-me thionylglycyl-L-phenylalanyl-3-amino-i -adamant.ancarboxylat, s.c. getestet wurde, zeigte sie einen ED^^-Wert (95 % Zuverlässigkeitsgrenze) nach 60 Minuten von 0,31 (0,13 bis 0,74) mpk.
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Die erfindungsgemäßen Verbindungen können mit verschiedenen typischen pharmazeutischen Trägern kombiniert werden, um geeignete analgetische Mittel zu ergeben. Die Dosis dieser Verbindungen hängt von verschiedenen Faktoren ab, wie von der jeweils verwendeten Verbindung und der jeweils erzielten Reaktion. Typische Dosen zur Verwendung als Analgetikum können zwischen 0,3 bis 10 mg/kg je Tag parenteral verabreicht betragen.
Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen erfolgt zweckmäßigerweise nach Verfahren, die zur Peptidsynthese bestimmt sind, d.h. sowohl Synthesen in Lösung als auch Festphasenpeptidsynthesen. Im Falle der Lösungssynthese ist die Reihenfolge, in der die Aminosäuren verbunden werden, nicht kritisch und das Tetrapeptidadamantylamid kann durch Verbinden irgendeiner geeigneten Einheit, die die gewünschten Aminosäuren oder Adamantylamid enthält» hergestellt werden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen lassen sich durch das von G.W.Anderson, et al., J.Am.Chem.Soc., 88, S.1338 (1966) beschriebene gemischte Anhydridkupplungsverfahren herstellen. Dabei wird eine N-geschützte Aminosäure oder Peptid in einem inerten Lösungsmittel gelöst. Zu den geeigneten Lösungsmitteln gehören beispielsweise Tetrahydrofuran, Dichlorethan und Ethylacetat. Ein Äquivalent eines tertiären Amins wie N-Methylmorpholin wird zugesetzt und die Lösung auf etwa -200C gekühlt. Ein Äquivalent Isobutylchlorformiat oder Ethylchlorformiat wird tropfenweise unter Rühren zugesetzt, während die Temperatur unter -100C gehalten wird. Nach etwa 5 Minuten wird die zu kuppelnde Verbindung, d.h. eine Aminosäure, Peptid oder Adamantylamid, als freie Base (oder als ein Salz zusammenkit einem Äquivalent N-Methylmorpholin) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wird bei Raum-
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temperatur gerührt, bis die Reaktion beendet ist. Die Reaktion ist normalerweise im wesentlichen nach 2 bis Stunden beendet, kann jedoch langer durchgeführt werden, um die Beendigung sicherzustellen. Vom N-geschützten Produkt wird dann auf übliche Weise die Schutzgruppe entfernt, wobei man das gewünschte Produkt erhält. Die Reaktion wird durch folgendes Schema erläutert, worin W, X, Y und Z vorstehende Bedeutung haben und CZJ eine N-Schutzgruppe darstellt:
Schema 1
w χ HNCH2COOH + CICOCH^H(CH3) 2
(Isobutylchlorformiat)
N-Ke thy lraorpholin
il
w χ HN— CH2-C — 0— C OCH2CH(CH3J2
\S-
+ H Y Z
□ W-X-HN-CH2-C—Y-Z + HOCH2CHCCH3J2 + CO2
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Wahlweise können die erfindungsgemäßen Verbindungen durch die wohlbekannte Festphasenpeptidsynthese, wie sie von Merrifield, J.Am.Chem.Soc., 85, S.2149 (1963) beschrieben wird, hergestellt werden. Dieses Verfahren besteht darin, daß man zuerst die N-geschützte C-terminal-Aminosäure an einen Polymerträger bindet, z.B. ein chlormethyliertes Copolymer, Styrol-1% Divinylbenzol und anschließend die Schutzgruppe entfernt und in Gegenwart eines geeigneten Dehydratisierungsmittels, beispielsweise Dicyclohexylcarbodiimid, hintereinander mit jeder der geeigneten N-geschützten Aminosäuren kuppelt.
Die Aminofunktionen dieser Zwischenprodukte kann durch üblicherweise verwendete Aminoschutzgruppen wie Äryl-niederalkylgruppen, geschützt werden. Derartige Gruppen können Diphenylmethyl- oder Triphenylmethy!gruppen sein, die gegebenenfalls durch Halogen, Stickstoff, Niederalkyl oder Niederalkoxy substituiert sind, wie beispielsweise Benzhydryl, Trityl und Diparamethoxybenzhydryl; Acylgruppen wie Formyl, Trifluoracetyl, Phthaloyl, p-Toluolsulfonyl; Gruppen, die von Carbonsäure oder Thiocarbonsäure stammen wie Carbobenζoxygruppen, die gegebenenfalls im aromatischen Rest durch Halogen, Stickstoff gruppen oder Niederalkyl-,. Niederalkoxy- oder Niedercarbalkoxygruppen substituiert sind, wie beispielsweise Carbobenzoxy (Cbz), p-Bromcarbobenzoxy oder p-Chlorcarbobenzoxy, p-Nitrocarbobenzoxy und p-Methoxycarbobenzoxy; gefärbte Benzyloxycarbonylgruppen wie p-Phenylazobenzyloxycarbonyl und p-(p-Methoxyphenylazo)-benzyloxycarbonyl, Tolyloxcarbonyl, 2-Phenyl-2-propoxycarbonyl, 2-Tolyl-2-propoxycarbonyl und 2-(Parabiphenylyl)-2-propoxycarbonyl und aliphatische Oxycarbonylgruppen wie t-Butoxycarbonyl (Boc), AlIyIoxycarbonyl, Cyclopentyloxycarbonyl und
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t-Amyloxycarbonyl. Eine besonders bevorzugte N-Schutzgruppe für die erfindungsgemäße Verwendung ist die t-Butoxycarbonyl-(Boc)gruppe.
Die Aminogruppen können außerdem durch Enaminbildung geschützt werden, die durch Reaktion der Aminogruppen mit 1,3-Diketonen, beispielsweise Benzoylaceton oder Acetylaceton, erhalten werden.
Schutzgruppen werden zweckmäßigerweise entfernt durch Reaktionen wie Reduktion mit Natrium in flüssigem Ammoniak, Hydrogenolyse (beispielsweise in Gegenwart eines Palladiumschwarzkatalysators), Behandlung mit einer Halogenwasserstoff säure (wie Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Fluorwasserstoffsäure oder Iodwasserstoffsäure) in Essigsäure oder Behandlung mit Trifluoressigsäure.
Nachstehende Beispiele dienen der weiteren Erläuterung der Erfindung. In den Beispielen sind die Temperaturen in °C und die relativen Mengen in g oder ml angegeben, außer wenn etwas anderes vermerkt ist.
Beispiel 1
Man stellte 3-Aminc-1-adamantancarbonsäure nach dem Verfahren von Loevens Kemiske Fabrik' Produktionsaktieselskab, Netherlands Application 6 512 491, 29. März 1966, Chem. Abs. 65, 16975 (1966) her und setzte 3,90 g davon einer Lösung von 3,6 ml Thionylchlorid in 125 ml Methanol zu. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht unter Rückfluß erhitzt und das Methanol unter Vakuum abdestilliert. Der Rückstand wurde mit Ether geschüttelt und ergab Methyl-3-amino-1 -adcimantancarboxylat-hydrochlorid, das folgende Strukturformel aufwies:
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-304Λ793
COOCH3 .HCl
Beispiel 2
Man versetzte 30 ml einer 1N Natriumhydroxidlösung mit 4,95 g L-Phenylalanin. Die Lösung wurde gekühlt und gerührt in einem Eisbad t und 5,4 ml.einer 6,1M Lösung von Carbobenzoxychlorid wurde tropfenweise zusammen mit zusätzlicher 1N Natriumhydroxidlösung zugesetzt, so daß der pH-Wert bei 11,0 bis 11,5 blieb. Das Reaktionsgemisch wurde mit Ether gewaschen. Die wäßrige Schicht wurde auf einen pH-Wert von 1,0 mit 12N Salzsäure angesäuert und dann die Lösung mit Ethylacetat extrahiert. Der Ethylacetatextrakt wurde abgetrennt und 3 χ mit Wasser gewaschen und dann über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum entfernt. Der Rückstand kristallisierte beim Reiben mit Wasser und ergab N-Carbobenzoxy-L-phenylalanin. 3,99 g Methyl-3-amino-i-adamantancarboxylathydrochlorid und 4,78 g Carbobenzoxy-L-phenylalanin wurden in 40 ml Methylenchlorid gelöst- Diese Lösung versetzte man mit 1,8 ml N-Methylmorpholin und anschließend unmittelbar mit 2,19 g Dicyclohexylcarbodiimid, Das Reaktionsgemisch ließ man 24 Stunden lang bei Raumtemperatur stehen, wonach die Behandlung mit Carbobenzoxy-L-phenylanalin und Dicyclohexylcarbodiimid wiederholt wurde. Man ließ das Reaktionsgemisch nochmals 24 Stunden bei Raumtemperatur stehen. Der Dicyclohexylharnstoff wurde abfiltriert und mit Methylenchlorid gewaschen. Die kombinierten Filtrate wurden 2 χ mit 0,5 M Kaliumbisulfat, Wasser und 1M Lösung von Kaliumbicarbonat gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Dichlormethan wurde unter Vakuum
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entfernt und der Rückstand durch Niederdruckchromatographie an Silicagel gereinigt unter Verwendung eines Gemischs aus Hexan und Chloroform als Eluierungsmittel, wobei sich Methylcarbobenzoxy-L-phenylalanyl-3-amino-i-adamantancarboxylat bildete, das folgende Strukturformel aufwies
Cbz Phe—HN ~-Λ[ J— COOCH3 ' , j
worin Cbz Carbobenzoxy bedeutet-Beispiel 3
3,58 g Methyl-carbobenzoxy-L-phenylalanyl-3-amino-iadamantancarboxylat, gelöst in 10 ml Essigsäure, wurde/? mit 15 ml einer 5M Lösung Bromwasserstoffsäure in Essigsäure versetzt, und man ließ das Reaktionsgemisch 1 Stunde lang bei Raumtemperatur stehen. Das Lösungsmittel wurde durch Vakuumdestillation entfernt und der Rückstand mit zwei 100 ml-Portionen Hexan und dann 100 ml Ether geschüttelt, wobei man Methyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamanbancarboxy I al; hydrobromid folgender.Strukturformel
Phe—NH—JU J— COOCH3 .HBr
erhielt.
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ORIGINAL INSPECTED Beispiel 4
Das rohe Methyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarboxylathydrobromid von Beispiel 3 wurde in 15 ml Dimethylformamid gelöst. Diese Lösung wurde mit 1,12 ml N-Methylmorpholin und anschließend mit 2,18 g t-Butoxycarbonylglycin-N-hydroxysuccinimidester versetzt. Man ließ das Reaktionsgemisch 24 Stunden lang bei Raumtemperatur stehen und verdünnte es dann mit 300 ml Ethylacetat. Die Ethylacetatschicht wurde mit 0,5M Kaliumbisulfat und anschließend mit Wasser, 0f5M Kaliumbicarbonat und Wasser gewaschen und über Magnesium" sulfat getrocknet. Die Lösung wurde zur Entfernung des Magnesiumsulfats filtriert,und das Lösungsmittel wurde entfernt-Nach Reinigung des Rückstandes durch Niederdruckchromatographie an Silicagel erhielt man Boc-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarboxylat der folgenden Formel
Boc—GIy—Phe — HN—^l J-— COOCH-
Beispiel 5
3,65 g Methyl-Boc-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarboxylat, gelöst in 20 ml Dioxan, wurde mit 10 ml einer 6M Lösung Salzsäure in Dioxan versetzt. Man ließ das Reaktionsgemisch 30 Minuten lang bei Raumtemperatur stehen, entfernte das Lösungsmittel und schüttelte den Rest mit Ether. Nach Entfernen des Ethers erhielt man ein weißes Pulver, das
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Methyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarboxylathydrochlorid war und folgende Formel besaß
H-GIy HN-^, j_ C00CR
Beispiel 6
Ein gemischte s Anhydrid wurde hergestellt durch Umsetzung von 2,0 g Boc-D-methionin mit 0,90 ml N-Methylmorpholin und 1,06 ml Isobutylchlorformiat in 15 ml Tetrahydrofuran bei -2O0C. Eine Lösung von 2,84 g Methyl-glycy'1-I.-phenylalanyl-3-amino-i-adamantancarboxylat-hydrochlorid in 15 ml Tetrahydrofuran wurde mit 0,78 ml N-Methylmorpholin neutralisiert und dem vorstehenden gemischten Anhydridreaktionsgemisch zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt und über Nacht stehengelassen. Das Reaktionsgemisch wurde mit 200 ml Ethylacetat verdünnt. Die Ethylacetatschicht wurde gesammelt und mit Wasser und anschließend mit 0,2 M Kaliumbisulfat, Wasser und 1M Kaliumbicarbonat gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Die Lösung wurde filtriert und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt. Nach Reinigung des Rückstandes durch Niederdruckchromatographie an Silicagel erhielt man Methyl-Boc-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-iadamantancarboxylat der folgenden Formel
130025/0627
ORIGINAL INSPECTED
Boc-(D)-Met-Gly-Phe-HN—7^ ^l— COOCH-,
Beispiel 7
Eine Lösung von 3,383 g Methyl-Boc-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarboxylat in 15 ml Dioxan ließ man mit 10 ml einer 6M Lösung Chlorwasserstoff in Dioxan 30 Minuten lang bei Raumtemperatur reagieren. Das Dioxan wurde entfernt und der Rückstand in einem Vakuumexikator getrocknet, wobei man das schutzgruppenfreie Peptid erhielt, das Methyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarboxylat-hydrochlorid der folgenden Formel war
H-(D)-Met-Gly-Phe-
-HN-I. i-C
COOGH3 .HCl
Beispiel 8
Eine Lösung von 3,513 g Methyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-i-adamantancarboxylat-hydrochlorid in 30 ml Tetrahydrofuran wurde mit 3,17 g Boc-L-tyrosinpentachlorphenylester und anschließend 1,12 ml N-Methylmorpholin versetzt. Man ließ das Reaktionsgemisch 4 Stunden
130025/0627
ORIGINAL INSPECTED
lang bei Raumtempteratur stehen und verdünnte es dann mit 200 ml Ethylacetat. Die Ethylacetatschicht wurde entfernt und 3 χ mit 0,5M Lösung Kaliumbisulfat gewaschen und dann über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand durch Niederdruckchromatographie an Silicagel gereinigt, wobei man Methyl-Boc-L-tyrosyl-D-methiony1-glycery1-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarboxylat der folgenden Formel erhielt
Boc—Tyr— CPJf — Met—GIy—Phe
-HN JJ 'J-COOCH.,
Beispiel 9
Ein Gemisch aus 5,0 ml Essigsäure, 5,0 ml Dioxan und 10,0 ml einer 6M Lösung Chlorwasserstoff in Dioxan wurde mit 1,0 g Methyl-Boc-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenyl- · alanyl-3-amino-1-adamantancarboxylat versetzt. Man ließ das Reaktionsgemisch 30 Minuten bei Raumtemperatur stehen und entfernte dann das Lösungsmittel durch Vakuumdestillation. Der Rückstand wurde in einem Gemisch aus 2,0 ml Methanol und 20 ml Wasser gelöst und die Lösung lyophilisiert, wobei, man Methyl-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarboxylat-hydrochlorid der folgenden Formel erhielt
130025/0627 ^n
ORIGINAL INSPECTED
EC— Tyr — CP).- Met— GIy- Phe — HN —^AjL JL. COOCH3
.HCl
Beispiel 10
0,285 g Methyl-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancart»oxylat-hydrochlorid wurden in einem Gemisch aus 2,0 ml Methanol und 2,0 ml Wasser gelöst, wonach 0,1 ml 30%iges Wasserstoffperoxid zugesetzt wurde. Man ließ das Reaktionsgemisch 1 Stunde lang bei Raumtemperatur stehen, setzte dann 20 ml Wasser zu und lyophilisierte das Gemisch, wobei man Methyl-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarboxylat-sulfoxidhydrochlorid der folgenden Formel erhielt
..H-Tyr- CD) -Met-Gly-Phe-HN-y^ ^/-COOCH3 „HC1
Beispiel 11
Das Hydrochloridadditionssalz des Beispiels 9 kann in ein anderes geeignetes Salz der freien Base durch übliche Verfahren wie Ionenaustauschmethoden umgewandelt werden.
Beispielsweise wird ein schwach basisches Ionenaustauscherharz wie 1R-45 in die Acetatform durch folgendes Verfahren umgewandelt:
130025/0627
ORIGINAL INSPECTED
a. Waschen mit 2N Natriumhydroxid,
b- Waschen bis zur Neutralität mit Wasser,
c. Waschen mit 50%iger wäßriger Essigsäure und
d. Waschen mit Wasser bis zur Neutralität.
1 g Methyl-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-3~ämino-1-adamantancarboxylat-hydrochlorid in 100 ml Wasser wurde durch diese Säule mit einer Geschwindigkeit von 1,0 ml/Min, geleitet und die Säule mit zusätzlichen 100 ml Wasser gewaschen. Die kombinierten Eluate wurden lyophilisiert, wobei sich das Acetatsalz bildete, nämlich Methyl~L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalany1-3-amino-1-adamantancarboxylat-essigsäuresalz.
Wenn man das vorstehende Verfahren mit dem Harz in der HydroxLclform wiederholt (nur Stufen a, und b. des Waschverfahrens werden wiederholt) erhält man die freie Base Methyl~I.--tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-B-amino-1 -adamantancarboxylat .
Beispiel 12
Verwendet man eine gleiche Menge L-p-Nitrophenylalanin oder L-p-Chlorphenylalanin anstelle des L-Phenylalanins des Beispiels 1 und wiederholt im wesentlichen das Verfahren der Beispiele 1 bis 9, erhält man Methyl-L-tyrosyl-D-methionylglycyl-L-p-nitrophenylalanyl-3-amino-1-adamantancarboxylathydrochlorid oder L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-p-chlorphenylalanyl-3-amino-1-adamantancarboxylat-hydrochlorid der folgenden Formeln
130025/0627
ORIGINAL INSPECTED
Η—Tyr—CD)—Met—GIy—HN -CH— C
OOCH.
HCl
H-Tyr—(.D)--Met--Gly-HN -CH- C
COOCH
.HCl
130025/0627 ORIGINAL INSPECTED
Beispiel 13
Man löste 5,09 g Boc-L-phenylalanin in 25 ml trockenem Dimethylformamid und setzte 2,13 ml N-Methylmorpholin zu. Das Reaktionsgemisch wurde auf -500C gekühlt, und es wurden 2,51 ml Isobutylchlorformiat zugesetzt. Das Reaktionsgeinisch wurde 15 Minuten lang gerührt, anschließend 1,77 ml N-Methylmorpholin und 3,93 g Methyl-3-amino-1-adamantancarboxylat-hydrochlorid zugesetzt und das Reaktionsgemisch gerührt, bis sich alles Methyl-3-amino-i-adamantancarboxylat gelöst hatte und dann 3 Tage lang bei 50C stehengelassen. Das Reaktionsgemisch wurde in 100 ml Wasser gegossen und 2 χ mit 50 ml Ethylacetat extrahiert. Die Ethylacetatfraktionen wurden 2 χ mit 50 ml Wasser, 50 ml einer 0,5M Lösung Kaliumbisulfat, 50 ml Wasser, 50 ml einer 0,5M Lösung Kaliumbicarbonat und 50 ml Wasser gewaschen und dann über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand in 150 ml lOolgom Chloroform in Hexan gelöst und durch Niederdruckchromatographie an Silicagel gereinigt unter Verwendung einer sich von 10% auf 50% steigernden Lösung aus Chloroform in Hexan als Eluierungsitiittel. Nach Entfernen des Lösungsmittels unter Vakuum erhielt man als Produkt Methyl-Boc-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarboxylat der folgenden Formel
Boc Phe— HN —4J J— COOCH
13002B/0627
ORIGINAL INSPECTED
Beispiel 14
5,48 g Methyl-Boc-phenylalanyl-S-amino-i-adaraantancarboxylat
lösung wurden in 15 ml Dioxan gelöst und 20ml einer 5,9MYChlorwasserstoff in Dioxan wurde zugesetzt. Nach 1Ominütigem Stehen bei Raumtemperatur wurde das Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand mit Diethylether gerührt. Das kristalline Produkt wurde durch Filtration gesammelt, mit Diethylether gewaschen und im Vakuumofen 16 Stunden lang bei 500C und 0,1mm Druck getrocknet, wobei man Methyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarboxylathydrochlorid der folgenden Formel erhielt
H Phe—HN —3JLI J-- COOCH .Hcl
Beispiel 15
Eine Lösung von 16,0 g Methyl-Boc-D-methionyl-glycinat in 50 ml Dioxan wurde mit 50 ml einer Lösung von 5,6M Chlorwasserstoff in Dioxan versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 30 Minuten lang bei Raumtemperatur gerührt und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt. Der Rückstand wurde mit Diethylether unter Bildung eines Gummis gerührt. Der Ether wurde dekantiert und das Produkt unter Hochvakuum getrocknet,
130025/0627
INSPECTED
wobei man Methyl-D-methionyl-glycinat-hydrochlorid der folgenden Formel erhielt
H-(D)— Met GIy OCH3 .HCl
Beispiel 16
Eine Lösung aus 16,88 g Boc-L-tyrosin in 50 ml trockenem Dimethylformamid wurde mit 6,65 ml N-Methylmorpholin versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde auf -400C gekühlt und 7,84 ml Isobutylchlorformiat wurden zugesetzt. Man ließ das Reaktionsgemisch sich auf 00C binnen 15 Minuten erwärmen und setzte dann 13,32 g Methyl-D-methionyl-glycinat-hydrochlorid, gelöst in 50 ml Dimethylformamid und unmittelbar danach 5,2 ml N-Methylmorpholin zu. Das Reaktionsgemisch wurde 30 Minuten lang bei 00C gerührt. Nach Stehenlassen über Nacht bei 5°C wurden 3 ml Ν,Ν-Dimethylo.thylendiamin zugesetzt und das Reaktionsgemisch 15 Minuten lang bei Kaumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum bei 35°C und 1 mm Druck entfernt und der ölige Rückstand in einem Gemisch aus 100 ml Wasser und 700 ml Ethylacetat gelöst. Die Ethylacetatschicht wurde abgetrennt und 3 χ mit 80 ml einer 0,5M Lösung Kaliumbisulfat„ 2 χ mit 80 ml Wasser, 2 χ mit 80 ml einer 0,5M Lösung Kaliumcarbonat und 3 χ mit 100 ml einer 10%igen Lösung Natriumsulfat gewaschen und dann über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter Druck entfernt. Der Rückstand wurde in 1,2 1 5%igem Ethylacetat in Chloroform gelöst und durch Niederdruckchromatographie an Silicagel gereinigt, dann unter vermindertem Druck zur Trockne eingeengt und aus Ethylacetat umkristallisiert, wobei man Methyl-Boc-L-
130025/0627
cn
tyrosyl-D-methionyl-glycinat der folgenden Formel erhielt Boc Tyr (D) Met GIy OCH
Beispiel 17
6,02 g Methyl-Boc-L-tyrosyl-D-methionyl-glycinat wurden in 30 ml Methylalkohol gelöst, wonach Wasser zugesetzt wurde, bis die Lösung trüb wurde. Eine 4M Lösung Kaiiumhydroxid wurde zugesetzt, um den pH-Wert bei 12 bis 13 zu halten. Als der pH-Wert von 13 30 Minuten lang stabil war, wurde das Methanol unter vermindertem Druck entfernt. Die wäßrige Lösung wurde filtriert und mit konzentrierter Salzsäure auf einen pH-Wert von 3 eingestellt. Das Produkt kristallisierte und wurde abfiltriert und mit Wasser gewaschen, wobei man Boc-L-tyrosyl-D-methionyl-glycin der folgenden Formel erhielt
Boc Tyr (D) Met GIy
Beispiel 18
5,06-g Boc-L-tyrosyl-D-itiethionyl-glycin wurden in 40 ml Dimethylformamid gelöst, worauf 1,28 ml N-Methylmorpholin der Lösung zugesetzt wurden. Das Reaktionsgemisch wurde auf -500C gekühlt und es wurden 1,51 ml Isobutylchlorformiat
130025/0627
zugesetzt, wobei sich ein Niederschlag bildete. Man ließ das Reaktionsgemische sich auf -200C binnen 15 Minuten erwärmen und setzte 4,45 g Methyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarboxylat-hydrochlorid und unmittelbar danach 1,25 ml N-Methylmorpholin zu. Der sich bildende Gummi löste sich während des Erwärmens auf Raumtemperatur binnen etwa 45 Minuten auf. Man ließ das Reaktionsgemisch 1,5 Stunden bei Raumtemperatur und dann 3 Tage bei 50C stehen. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur erwärmt, worauf 1,0 ml N,N-Dimethy!ethylendiamin zugesetzt und das Reaktionsgemisch 10 Minuten lang gerührt wurde. Das Dimethylformamid wurde unter verminde.rtem Druck bei 320C entfernt und der Rückstand in einem Gemisch aus 70 ml Wasser und 100 ml Ethylacetat gelöst. Die wäßrige Schicht wurde abgetrennt und 1 χ mit Ethylacetat extrahiert und die kombinierten Ethylacetatlösungen 3 χ mit 70 ml einer 0,5M Lösung Kaliumbisulfat, 1 χ mit 70 ml Wasser, 2 χ mit einer 0,5M Lösung Kaliumcarbonat und 3 χ mit 70 ml einer 10%igen Natriumsulfatlösung gewaschen und anschließend über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, wobei man das Rohprodukt erhielt, das dann durch Niederdruckchromatographie an Silicagel gereinigt wurde, worauf man Methyl-Boc-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1~ adamantancarboxylat der folgenden Formel erhielt
Boc Tyr (D) Met— GIy— Phe— HN ^J J_ COOCEL
130025/0627
ORIGINAL
Beispiel 19
Eine Lösung aus 1,1 g Methyl-Boc-L-tyrosyl-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-i-adamantancarboxylat in 10 ml Methanol wurde mit 10 ml Wasser versetzt. Der pH-Wert wurde mit einer 4M Lösung Kaliumhydroxid auf 13 eingestellt und 2,5 Stunden zwischen 13 und 13,5 gehalten. Danach wurde der pH-Wert mit 12N Salzsäure auf 11,0 eingestellt und das Methanol unter Vakuum entfernt. Die rückständige wäßrige Lösung wurde durch langsame Zugabe von Salzsäure auf pH 2,0 eingestellt, wobei das Produkt kristallisierte. Das Produkt wurde abfiltriert und mit Wasser gewaschen und dann 2 Stunden lang bei 500C und 0,1 mm Druck getrocknet. Der Rückstand wurde in einer 6N Lösung Ammoniak gelöst, überschüssiges Ammoniak wurde unter Vakuum entfernt und die zurückbleibende wäßrige Lösung mit 1N Essigsäure auf einen pH-Wert von 4r0 eingestellt- Das Produkt kristallisierte und wurde abfiltriert, mit Wasser gewaschen und 16 Stunden lang bei 500C und 0,1 mm Druck getrocknet, wo rauf man Boc-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-S-amino-1 -adamantancarbonsaure der folgenden Formel erhielt
Boc — Tyr— (D)—Met—GIy- Phe—HN -~Λί jL_ COOH
Eine Lösung von 0,94 g Boc-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarbonsaure in 20 ml Dioxan wurde mit 10 ml einer 5,7N Lösung Chlorwasserstoff in Dioxan
130025/0627
ORIGINAL INSPECTED
versetzt. Man ließ das Reaktionsgemisch 30 Minuten lang bei Raumtemperatur stehen. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum entfernt und der Rückstand'in Wasser gelöst. Die trübe Lösung wurde mit einer kleinen Menge Supercel-HyfIo 30 Minuten lang gerührt, dann filtriert und unter Bildung eines weißen Pulvers lyophilisiert. Das Pulver wurde 2 Stunden lang bei 500C und 0,1 mm Druck getrocknet, wobei man L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalany1-3-amino-1 adamantancarbonsäure-hydrochlorid der folgenden Formel erhielt
H —Tyr (D) —Met — GIy —Phe HW '
Beispiel 20
Eine Lösung von 0,266 g Ammoniak in 9,007 g Dimethylformamid wurde hergestellt und in einem fest verschlossenen Behälter bis zum Verbrauch aufbewahrt. Eine Lösung von 1,434 g Boc-L~tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarbonsäure in 10 ml Dimethylformamid wurde hergestellt und mit 0,200 ml N-Methylmorpholin versetzt, Das Reaktionsgemisch wurde auf -600C abgekühlt,und es wurden 0,237 ml Isobutylchlorformiat zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde gerührt und man ließ es sich auf -100C binnen 20 Minuten erwärmen, dann setzte man nacheinander zwei 1,04 g-Portionen der Lösung aus Ammoniak in Dimethylformamid zu und bewahrte
130025/0S27
ORIGINAL INSPECTED
das Reaktionsgemisch 2,5 Stunden bei 00C auf. Weitere 1,04 g der Ammoniaklösung wurden zugesetzt und das Reaktionsgemisch, danach 1 Stunde lang bei '00C aufbewahrt. Das Dimethylformamid wurde abdestilliert bei 350C. Der Rückstand wurde in Wasser und Ethylacetat aufgenommen. Die Ethylacetatfraktion wurde abgetrennt und 2 χ mit einer 0,5M Lösung Kaliumcarbonat und 2 χ mit Wasser gewaschen und anschließend über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde abdestilliert und der Rückstand unter vermindertem Druck getrocknet, wobei man Boc-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarboxamid der folgenden Formel erhielt
Boc-Tyr- (D) -Met-Gly-Phe-HN
Eine Lösung aus 1,0g Boc-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarboxamid in 5,0 ml Eisr essig wurde mit 5,0 ml einer 6N Lösung Chlorwasserstoff in Dioxan versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 20 Minuten lang bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand in 125 ml Wasser gelöst. Die Lösung wurde lyophilisiert und ergab
130025/0627
ORIGINAL INSPECTED
30U793
L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-S-amino-1-adamantancarboxamid-hydrochlorid der folgenden Formel
H-Tyr- (D) -Met-Gly-Phe-HN _JJ J CNH2 .HCl
Beispiel 21
Eine Lösung aus 14,05 g Boc-L-tyrosin und 5,55 ml N-Methylmorpholin in 150 ml Tetrahydrofuran, getrocknet über 5A-Sieben, wurde unter Stickstoff gerührt und auf -500C gekühlt. Die gekühlte Lösung wurde mit 6,5 ml Isobutylchlorformiat versetzt, Binnen 30 Minuten wurde die Lösung auf -100C erwärmt, dann wieder auf -400C gekühlt und mit 6,65 g L-Threonlnmethylester versetzt. Man ließ die Reaktion bei Raumtemperatur über Nacht fortschreiten. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum entfernt und der Rückstand zwischen 100ml Ethylacetat und nacheinander 20 ml-Portionen kaltem 0,5M Kaliumbisulfat, gesättigtem Natriumbicarbonat und gesättigter Natriumchloridlösung aufgeteilt und dann über Natriumsulfat getrocknet. Die Lösung wurde filtriert und das Lösungsmittel entfernt, worauf man Boc-L-tyrosyl-L-threonin-methylester erhielt.
Beispiel 22
19,6 g Boc-L-tyrosyl-L-threonin-methylester wurden in 75 ml einer 2M Kaliumhydroxidlösung bei Raumtemperatur gelöst.
130025/0627
ORIGINAL INSPECTED
Nach 30 Minuten wurde die wäßrige Lösung mit 20 ml Ethylacetat extrahiert, mit kaltem 1M Kaliumbisulfat angesäuert und mit 4 25-ml Portionen Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und filtriert. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, worauf man Boc-L-tyrosyl-L-threonin erhielt,
Beispiel 23
A. Ein ungesättigtes Azlacton-Zwischenprodukt wurde hergestellt durch Rühren von 3,82 g Boc-L-tyrosyl-L-threonin mit 0,82 g einer wäßrigen Natriumacetatlösung und 5,67 ml Essigsäureanhydrid unter einer Stickstoffatmosphäre bei Raumtemperatur über Nacht. Das Lösungsmittel wurde unter •vermindertem Druck bei 400C entfernt und der Rückstand mit Hexan trituriert. Das Hexan wurde dekantiert und der Rückstand über Nacht unter vermindertem Druck über Kaliumhydroxidpellets getrocknet. Der Rückstand wurde in 20 ml Chloroform suspendiert und weiter durch Zugabe von 5A-Sieben getrocknet. Die Lösung wurde filtriert und mit einer Lösung von 5 g Methylglycinat in 100 ml Chloroform vereinigt. Das Volumen wurde unter vermindertem Druck auf etwa 50 ml eingeengt,und man ließ das Reaktionsgemisch bei Raumtemperatur über Nacht stehen. Das Reaktionsgemisch wurde mit 50 ml Chloroform verdünnt und mit 20 ml Portionen kalter 1M Kaliumbisulfatlösung, 2M Kalxumcarbonatlosung und gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen. Das Reaktionsgemisch wurde über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck eingeengt, wobei man den gewünschten ungesättigten Tripeptidester als
130025/0827
ein Gemisch aus Methyl-Boc-tyrosyl-dehydro-cC-aminobutyrylglycinat und Methyl-Boc-O-acetyltyrosyl-dehydro-Oi^ aminobutyryl-glycinat erhielt. Dieser Tripeptidester kann weiter durch Chromatographie an Silicagel gereinigt werden, wobei man Boc-O-acetyltyrosyl-dehydro-Q/-aminobutyryl-glycinat-glycinmethylester der folgenden Formel erhält
Boc-
COHN--CH
'COOCH,
B. Der Tripeptidester von A. wurde unter einer Stickstoffatmosphäre in 30 ml einer 1N Kaliumhydroxidlösung gelöst und 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gehalten» Nach dem Ansäuern mit 3,0 ml Eisessig wurde das Reaktionsgemisch mit einer 20 ml Portion Chloroform und 4 25 ml Portionen Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden mit 20 ml einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriex-fc und unter vermindertem Druck eingeengt, wobei man die ungesättigte Tripeptidsäure, Boc-L-tyrosyl-dehydro-oC-aminobutyryl-glycin der folgenden Formel erhielt
130025/0827
INSPECTED
Boc Tyr HN— C — CO — GIy— OH
H CH 3
Beispiel 24
6,5 ml Isobutylchlorformiat wurden unter einer Stickstoffatmosphäre und unter Rühren bei -500C 100 ml einer Methylenchloridlösung zugesetzt, die 2g 5A-Siebe, 13,26 g Bocphenylalanin und 5,5 ml N-Methylmorpholin enthielt. Binnen 30 Minuten wurde das Reaktionsgemisch auf -1O0C erwärmt und dann auf -4 00C wieder abgekühltf worauf 7,94 g 1-Aminoadamantan zugesetzt wurden. Das Kühlbad wurde entfernt und das Reaktionsgemisch bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Die Lösung wurde filtriert und mit 50 ml einer kalten 1M Kaliumbisulfatlösung und anschließend mit 20 ml Portionen einer 2M Kaliumcarbonatlösung und gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen. Die Lösung wurde dann über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und zur Trockne eingeengt, worauf man Boc-L-phenylalanyl-i-aminoadamantan der folgenden Formel erhielt
Boc Phe HN
130025/0027
ORIGINAL INSPECTED
Beispiel 25
Eine Lösung von 9,5 g Boc-L-phenylalanyl-1-arainoadamantan in 25 ml kaltem, trockenem Dichlormethan wurde unter einer Stickstoffatmosphäre mit 25 ml Trifluoressigsäure verdünnt. Man ließ die Umsetzung 45 Minuten lang ablaufen, konzentrierte anschießend die Lösung und versetzte das Konzentrat mit 50 ml Methylenchlorid. Dann wurde die Lösung mit jeweils 25 ml eiskaltem Wasser r 2 M Kalxumcarbonatlosung sowie gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck konzentriert. Der Rückstand wurde mit Ethylether gerieben, und der erhaltene Feststoff wurde isoliert und über Kaliumhydroxid unter vermindertem Druck getrocknet, wobei L-Phenylalanyl-'l aminoadamantan der folgenden Formel
H Phe-
erhalten wurde.
Beispiel 26
Eine getrocknete (Siebe)Lösung von 4,21 g Boc-L-tyrosyldehydro-Oi-aminobutyryl-glycin und 1,11 ml N-Methylmorpholrn in 20 ml Tetrahydrofuran wurde unter Stickstoff gerührt und auf -500C gekühlt. Diese Lösung wurde mit 1,30 ml Chlorameisensäureisobutylester. versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde
130025/0627
ORIGINAL INSPECTED
dann im Verlauf von 30 Minuten auf -100C erwärmt und sodann auf -400C gekühlt, während es mit 3,13 g trockenem L-Phenylalanyl-1-aminoadamantan versetzt wurde. Anschließend wurde das Kühlbad entfernt, und das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und dann filtriert und mit Tetrahydrofuran gewaschen. Die vereinigten Filtrate wurden unter vermindertem Druck eingeengt, und der Rückstand wurde in 50 ml Methylenchlorid gelöst und nacheinander mit jeweils 20 ml gesättigter Natrxumbicarbonatlosung, kalter 1M Kaliumbisulfatlösung und gesättigter Natriumchloridlösung gewaschenjund anschließend über Natriumsulfat getrocknet. Die getrocknete Lösung wurde anschließend filtriert und unter Vakuum konzentriert und sodann durch Chromatographie über Silikagel mit Stufeneluierung mittels Chloroform und Methanol gereinigt, wobei das Boc-L-tyrosyl-dehydro-«t-aminobutyrylglycyl-L-phenylalanyl-1-aminoadamantan erhalten wurde. Eine Lösung von 3,51 g dieses Produktes in 10 ml Eisessig wurde unter einer Stickstoffatmosphäre mit 10 ml einer 5N Lösung von Chlorwasserstoff in Dioxan verdünnt. Man ließ die Umsetzung 1 Stunde- lang ablaufen und entfernte dann das Lösungsmitte^unter vermindertem Druck. Der Rückstand wurde lyophilisiert, wobei das L-Tyrosyl-dehydro-oC-aminobutyryl-glycyl-L-phenylalanyl-i-aminoadamantan-hydrochlorid der folgenden Formel
H-Tyr-AAbu-Gly-Phe-HN_JI J -HCl
erhalten wurde.
130025/0627
Beispiel 27
Eine kalte, trockene Lösung von 26,3 g Boc-methionin in 20 ml Methylenchlorid wurde unter Stickstoff tropfenweise unter Rühren mit 16,4 g Methyl-trifluormethansulfonat versetzt. Die Lösung wurde filtriert und zu 200 ml rasch gerührtem Diethylether gegeben. Der erhaltene Feststoff wurde gesammelt, erneut in Diethylether suspendiert und wiederum gesammelt, worauf er über Kaliumhydroxid unter vermindertem Druck getrocknet wurde, wobei das SulfoniumsaLz, d.h. Boc-S-methylmethionin-trifluormethansulfonat, erhalten wurde. Unter Anwendung besonders getrockneter Einrichtungen wurde eine trockene Lösung von 17g des vorstehenden Sulfoniumsalzes und 14,34 g trockenem Calciumcarbonat in 4 0 ml Dimethylformamid, die über Sieben getrocknet worden war, 4 Stunden lang unter einer Stickstoffatmosphäre auf 60 bis 700C erhitzt. Der größte Teil des Dimetnyliiormamids wurde unter vermindertem Druck entfernt. Der Rückstand wurde mit 50 ml 2N Essigsäure angesäuert, und die Lösung wurde mit mehreren Anteilen von jeweils 50 ml Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten Ethylacetatschichten wurden nacheinander mit jeweils 20 ml kalter 1M Kaliumbisulfatlösung, gesättigter Natriumbicarbonatlösung und gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen und anschließend über Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, und der Rückstand wurde durch Chromatographie über Silicagel gereinigt. Das Produkt, d.h. Boc-i-aminocyclopropan-i-carbonsäur e-methylester, wurde als kristallines Material eius den Fraktionen, die aus jeweils 50 % Hexan und Chloroform bestanden, erhalten. Es hatte einen Schmelzpunkt von etwa 800C und entsprach der folgenden Formel
130025/0627
ORIGINAL INSPECTED
JSZL
Boc HN —V— COOCH3
Beispiel 28
Eine Lösung von 3,91 g Boc-i-aminocyclopropan-i-carbonsäuremethylester in 15 ml Methylenchlorid wurde über Sieben getrocknet und filtriert.. Anschließend setzte man 10 ml Trifluoressigsäure zu und ließ die Umsetzung 20 Minuten ablaufen. Die Lösung wurde dann unter vermindertem Druck konzentriert und anschließend mit Ethylether verdünnt, wobei das 1-Aminocyclopropan-1-carbonsäure-methylester-trifluoracetat erhalten wurde. Ein Gemisch aus 2,29 g dieses Trifluoracetatsalzes, 10,9 g N-t-Butoxycarbonyltyrosin-pentachlorphenylester und 1,11 ml N-Methylmorpholin in 15 ml Dimethylformamid wurde unter einer Stickstoffatmosphäre 3 Tage bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurde das Gemisch unter vermindertem Druck konzentriert und mit 100 ml Methylenchlorid und 0,74 g Dimethylaminoethylamin versetzt. Nach 5 Minuten wurde die Lösung 2 χ mit jeweils 20 ml kalter 2M Kaliumbisulfatlösung extrahiert. Die Methylenchloridlösung wurde über Natriumsulfat getrocknet, und das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, wobei der Boc-L-tyrosyl-1-aminocyclopropan-1-carbonsäure~methy!ester erhalten wurde. 3,5 g dieses Esters wurden unter einer Stickstoffatmosphäre 2 Stunden bei Raumtemperatur mit 10 ml 3M Kaliumhydroxidlösung gerührt. Die Lösung wurde mit 10 ml Ethylacetat extrahiert. Die wäßrige Schicht wurde zu 15 ml kalter,
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rasch gerührter 2M Kaliumbisulfatlösung gegeben. Es bildete sich ein feiner Niederschlag, der durch Filtration gesammelt, mit Wasser gewaschen und getrocknet wurde, wobei die Boc-L-tyrosyl-1-aminocyclopropan-1-carbonsäure der folgenden Formel
Bo c Ty r HN —*■— COOH
erhalten wurde.
Beispiel 29
Eine Lösung von 1,42 g Boc-glycin und 0,90 ml N-Methylmorpholin in 10 ml trockenem Methylenchlorid wurde unter Stickstoff bei -45°C mit 1,05 ml Chlorameisensäure-isobutylester umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde auf -200C erwärmt und dann erneut auf -400C gekühlt. Diese Lösung wurde mit 2,38 g L-Phenylalanyl-1-aminoadamantan versetzt. Das Kühlbad wurde entfernt, und das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen. Dann wurde das Reaktionsgemisch filtriert, mit 20 ml Methylenchlorid verdünnt und sodann nacheinander mit 10 ml kalter 1M Kaliumbisulfatlösung, 10 ml kalter 2M Kaliumcarbonatlösung und mit 10 ml gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen. Das Reaktionsgemisch wurde dann über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und konzentriert. Das Produkt trennte sich bei Zugabe von Ether in Form von Kristallen ab. Das kristalline Material wurde gesammelt, wobei das Boc-glycyl-L-phenylalanyl-1-aminoadamantan erhalten wurde. Eine trockene Lösung von 2,8 g Boc-glycyl-L-phenylalanyl-1-aminoadamantan
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ORIGINAL INSPECTED
in 15 ml Methylenchlorid wurde unter einer Stickstoffatmosphäre bei 5°C mit 10 ml Trifluoressigsaure umgesetzt. Man ließ das Reaktionsgemisch 30 Minuten bei Raumtemperatur stehen. Die Lösung wurde unter vermindertem Druck konzentriert/ anschließend mit 10 ml 5M Kaliumcarbonatlosung verdünnt und mit Methylenchlorid extrahiert. Das Reaktionsgemisch wurde über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft, wobei das Glycyl-L-phenylalanyl-1-aminoadamantan der folgenden Formel
H. GIy Phe
erhalten wurde,
Beispiel 30
Eine gerührte Suspension des trockenen Natriumsalzes von Boc-L-tyrosyl-1-amino-cyclopropan-1-carbonsäure (hergestellt aus 1,82 g Boc-L-tyrosyl-2-amino-cyclopropan"I-carbonsäure) in 20 ml Dimethylformamid wurde unter einer Stickstoffatmosphäre bei -700C mit 0,65 ml Chlorameisensäureisobutylester umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde im Verlauf von 30 Minuten auf -100C erwärmt und sodann erneut auf -400C gekühlt. Diese Lösung wurde mit 1,78 g Glycyl~L-phenylalanyl-1-aminoadamantan versetzt. Das Kühlbad wurde entfernt, und das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt und anschließend unter vermindertem Druck konzentriert.
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ORIGINAL INSPECTED
Der Rückstand wurde zwischen 20 ml 2M Kaiiumcarbonatlösung und 50 ml Ethylacetat verteilt. Die organische Schicht wurde mit 10 ml kalter 1M Kaliumb^isulfatlösung und anschließend mit 10 ml gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen, sodann über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde durch Chromatographie über Silicagel gereinigt, wobei das Boc-L-tyrosy1-1-aminocyclopropan-1-carboxyl-glycy1-L-phenylalany1-1-aminoadamantan erhalten wurde. Eine Lösung von 2,80 g dieses Produktes in 5 ml Eisessig wurde mit 15 ml einer 5N Lösung von Chlorwasserstoff in Essigsäure verdünnt. Das Reaktionsgemisch wurde 1 Stunde bei Raumtemperatur stehengelassen, und dann wurde das Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt. Der Rückstand wurde in 20 ml einer 10%igen wäßrigen Essigsäurelösung gelöst und lyophilisiert, wobei das Hydrachloridsalz, d.h. L-Tyrosyl-1-aminocyclopropan-1 -carboxyl-glycyl-L-phenylalanyl-1~aminoadaroanl:an--hydrochlor ul, der folgenden Formel
H—Tyr—HN C—Gly— Phe—HN—U J -HCl
erhalten wurde.
Beispiel 31
Eine Lösung von 1,88 g Boc-L-tyrosyl-D-methionyl-glycin und 0,45 ml N-Methylmorpholin in 25 ml trockenem Tetrahydrofuran wurde unterStickstoff und unter Rühren auf -450C gekühlt. Die gekühlte Lösung wurde mit 0,52 ml Chlorameisensäure-
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ORIGINAL INSPECTED
isobutylester versetzt. Das Reaktionsgemxsch wurde im Verlauf von 10 Minuten auf -200C erwärmt und sodann erneut auf -350C gekühlt. Nach der Zugabe von 1,9 g L-Phenylalanyl-1-aminoadamantan wurde das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur erwärmt und über Nacht stehengelassen. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch filtriert, und das Tetrahydrofuran wurde unter vermindertem Druck entfernt. Der Rückstand wurde in Methylenchlorid gelöst und nacheinander mit kalter 1M Kaliumbisulfatlösung und gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen. Nach Entfernung des- Lösungsmittels und Reinigung durch Chromatographie über Silicagel wurde das Boc-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-phenylalanyl-1-aminoadamantan der folgenden Formel
Boc -Tyr—(D)—Met—GIy—Phe—HN
erhalten. Beispiel 32
Eine Lösung von 1,58 g Boc-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-1-aminoadamantan in 10 ml Dioxan wurde 1 Stunde lang mit 30 ml einer 5N Lösung von Chlorwasserstoff in Dioxan umgesetzt. Das Lösungsmittel wurde unter einem Stickstoffstrom entfernt. Der Rückstand wurde mit Diethylether zerrieben. Nach Entfernung des Diethylethers wurde
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das L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-i-aitiinoadamantan-hydrochlorid der folgenden Formel
-Tyr—. (D)_Met—Gly—Phe—HN
HCl.
erhalten.
Beispiel 33
Nach den Arbeitsweisen der Beispiele 24 und 25, wobei jedoch anstelle des dort verwendeten 1-Aminoadamantans eine äquivalente Menge 2-Aminoadamantan eingesetzt: wurde, wurde das L-Phenylalanyl-2-aminoadamantan erhalten. Nach den Arbeitsweisen der Beispiele 31 und 32, wobei jedoch anstelle des in Beispiel 31 verwendeten L~Phenylalanyl-1-aminoadamantans eine äquivalente Menge an L-Phenylalanyl-2-aminoadamantan eingesetzt wurde, wurde das L-Tyrosyl-D-methionylglycyl-L-phenylalanyl-2-aminoadamantan-hydrochlorid der folgenden Formel
H Tyr (D) Met— GIy Phe
.HCl
erhalten.
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ORIGINAL INSPECTED
Beispiel 34
Eine Lösung von 15,0 ml Dioxan und 15,6 ml 4M Natriumhydroxidlösung wurde hergestellt, und in dieser Lösung wurden 6,18 g DL-2,6-Dimethyltyrosin-hydrochlorid gelöst, worauf diese Lösung mit 9,23 g 2-(t-Butoxycarbonyl-oxyimino)-2-phenylacetonitril versetzt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und anschließend mit 100 ml Wasser verdünnt. Dann wurde das Reaktionsgemisch 2x mit jeweils 50 ml Ethylacetat extrahiert. Der wäßrige Extrakt wurde mit einer 5%igen Lösung von Kaliumbisulfat ■ auf einen pH-Wert von 2 eingestellt, wobei ein öliger Feststoff erhalten wurde. Das Produkt wurde filtriert, mit Wasser gewaschen und unter vermindertem Druck getrocknet. Das rohe Produkt wurde in einem Gemisch aus Chloroform zu Wasser zu Essigsäure zu Methanol im Verhältnis 97,8 : 0,1 ; 01 : 2,0 gelöst und durch Niederdruckchromatographie gereinigt, wobei das Boc-DL-2,6-dimethyltyrpsin erhalten wurde.
Beispiel 35
Eine Lösung von 5,34 g Boc-DL-2,6-dimethyl-tyrosin und 2,0 ml N-Methylmorpholin wurde auf -200C gekühlt. Die Temperatur wurde bei -17 bis -200C gehalten, während 2,4 ml Chlorameisensäure-isobutylester tropfenweise zugesetzt wurden. Das Reaktionsgemisch wurde 5 Minuten gerührt und dann mit einer Lösung von 2,1 ml N-Methylmorpholin und 3,63 g Methyl-D-methioninat—hydrochlorid in 10 ml Dimethylformamid versetzt, während die Temperatur bei etwa -200C gehalten wurde. Das Reaktionsgemisch wurde 30 Minuten bei -200C gerührt, anschließend auf Raumtemperatur erwärmt und über Nacht stehengelassen. Das Reaktionsgemisch wurde zu
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600 ml einer kalten, 5%igen Lösung von Kaliumbisulfat gegeben- Der gummiartige Niederschlag, der sich bildete, wurde filtriert, 4 χ mit jeweils 100 ml kaltem Wasser gewaschen und unter vermindertem Druck getrocknet. Nach Reinigung durch Niederdruckchromatographie über Silicagel unter Verwendung eines Gemisches aus Chloroform : Methanol : Essigsäure : Wasser im Verhältnis 98:1,8:0,1:01 als Eluierungsmittel wurde das Methyl-Boc-2,6-dimethyl-DL-tyrosyl-D-methioninat erhalten.
Beispiel 36
Eine Lösung von 4,27 g Methyl-Boc-2,6-dimethyl-DL-tyrosyl-D-methioninat in 14 ml Methanol wurde mit einer Lösung von 1,18 g Lithiumhydroxid-hydrat in 14 ml Wasser versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 3 Stunden in der Kälte gerührt, worauf 100 ml einer 5%igen Lösung von Kaliumbisulf at. zugesetzt wurden, um den pH-Wert auf 2,5 zu bringen. Da« gummiartige Produkt, das sich bildete, wurde mit Ethylacetat extrahiert. Die Ethylacetatschichten wurden gesammelt und vereinigt, anschließend mit Wasser gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet- Die Lösung wurde filtriert, um das Magnesiumsulfat zu entfernen,und das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, wobei das Boc-2,6-dimet.hyl-DL-tyrosyl-D-methionin erhalten wurde.
Beispiel 37
Eine Lösung von 1,0 g L-Phenylalanyl-3-amino-i-adamantancarbonsäure-methylester und 1,03 g 2,4,5-Trichlorphenyl-Bocglycinat in 5 ml Dimethylformamid wurde mit 0,3 ml N-Methylmorpholin versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 3,5 Stunden
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lang gerührt und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen- Das Reaktionsgemisch wurde dann zu 75 ml eine-r kalten, 5%igen wäßrigen Lösung von Kaliumbisulfat gegeben. Der sich bildende gummiartige Niederschlag wurde 3 χ mit jeweils 25 ml Ethylacetat extrahiert- Die vereinigten Ethylacetatextrakte wurden mit Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und filtriert. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, wobei ein glasartiger Schaumstoff gebildet wurde. Das rohe Produkt wurde in Chloroform gelöst und durch Niederdruckchromatographie über Silicagel unter Verwendung von Ethylacetat und Chloroform als Eluierungsmittel gereinigt. Nach Entfernung des Lösungsmittels wurde der Boc-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-iadamantancarbonsäure-methylester als weißes kristallines Produkt erhalten.
Beispiel 38
1,21 g Boc-glycyl-L-phenylalanyl-S-amino-i-adamantancarbonsäure-methylester wurden in 8 ml Essigsäure gelöst und mit 4,0 ml einer 6,OM Lösung von Chlorwasserstoff in Dioxan versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 15 Minuten bei Raumtemperatur stehengelassen, worauf die Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt wurden. Nach Zugabe von Diethylether zu dem Rückstand wurde ein weißer Niederschlag erhalten, der durch Filtration gesammelt, mit Diethylether gewaschen und unter vermindertem Druck bei 600C für eine Dauer von 2,5 Stunden getrocknet wurde, wobei das Glycyl-L-phenylalanyl-S-amino-i-adamantancarbonsäure-methylesterhydrochlorid erhalten wurde.
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Beispiel 39
Nach der Arbeitsweise von Beispiel 35, wobei jedoch anstelle des dort verwendeten Boc-2/6-dimethyl-DL-tyrosin und Methyl-D-methioninat-hydrochlorid äquivalente Mengen an Boc-2,6-dimethyl-DL-tyrosyl-D-methionin und Glycl-L-phenylalanyl-3-amino-Ir-adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid eingesetzt wurden, wurde der Boc-2,6-dimethyl-DL-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-S-amino-l-adamantancarbonsäure-methylester erhalten. Nach der Arbeitsweise von Beispiel 38, wobei jedoch anstelle des dort verwendeten Boc-glycyl-L-phenylalanyl-S-amino-i-adaittantancarbonsäuremethylesters der Boc-2,6-dimethyl-DL-tyrosyl-D-mehhionylglycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarbonsäure-methy L-ester eingesetzt wurde, wurde das 2,6-Dimethyl-DL-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1 --adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid der folgenden Formel
,CH
Δ O
HO—(' *> CH0-CH-C- (D) -Met-Gly-Phe-H
V- ""2 ' ^^ .HCl
CH3
erhalten, Beispiel 40
Nach den Arbeitsweisen der Beispiele 34, 35, 36, 37 und 39, wobei jedoch anstelle des in Beispiel 34 eingesetzten Boc-2,6-dimethyl-DL-tyrosin das Boc-ß , ß--dimel:hyl-DL~tyrosin
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INSPECTED
eingesetzt wurde, wurden zwei Diastereoisomere erhalten, die durch Niederdruckchromatographie über Silicagel getrennt wurden, wobei eine stufenweise Eluierung mit einem Gemisch aus Chloroform : Hexan : Methanol im Verhältnis 85:5:0,5 bis zu einem Gemisch aus Methanol : Chloroform im Verhältnis 5:95 vorgenommen wurde und der Methylester der Boc-ß,ß-dimethyltyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarbonsäure (Isomeres I) mit einem R^ = 0,48 in einem Gemisch"aus 5 % Methanol und 95 % Chloroform und der Methylester der Boc-ß,ß-dimethyltyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-i-adamantancarbonsäure (Isomeres II) mit einem R^ = o,37 in einem Gemisch aus 5 % Methanol und 95 % Chloroform erhalten wurden.
Diese isomeren Produkte wurden nach der Arbeitsweise von Beispiel 38 entblockiert. Die Verbindungen wurden in Essigsäure gelöst und dann 15 Minuten bei Raumtemperatur mit einer 6M Lösung von Chlorwasserstoff in Dioxan umgesetzt. Die Lösungsmittel wurden unter vermindertem Druck entfernt, und Diethylether wurde zugesetzt. Die erhaltenen Niederschläge wurden durch Filtration gesammelt, mit Diethylether gewaschen und unter vermindertem Druck getrocknet, wobei das ß,ß-Dimethyltyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-S-amino-1-adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid (Isomeres I) mit einer /^/D von -14° (c 1, Essigsäure) und das ß,ß-Dimethyltyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarbonsäure-methyles ter-hydro-
25
chlorid (Isomeres II) mit einer /CCZ1-. von +19,5° (c 1, Essigsäure) mit der folgenden Formel
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.. .304A793 ο
-C-Met-Gly-Phe-HN—JLJ J— COOCH3
D /^Zj
.HCl
erhalten wurden. Beispiel 41
18,9 g Boc-D-alanin wurden in 100 ml Methylenchlorid gelöst und mit 22,0 ml N-Methylmorpholin versetzt. Die Lösung wurde auf -700C gekühlt und mit 13,0 ml Chlorameisensäureisobutylester versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde auf -15°C erwärmt und erneut auf -700C gekühlt und mit 12,6 g Methylglycinat-hydrochlorid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 16 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann 3 χ mit einer 1,0M Lösung von Kaliumbisulfat, gesättigter Kaliumbicarbonatlösung und einer gesättigten Natriumchloridlösunq extrahiert. Die Methylenchlorid-lösung wurde über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und vom Lösungsmittel befreit. Das Produkt wurde durch Chromatographie über Silicagel unter Verwendung eines Gemisches aus Methanol und Chloroform als Eluierungsmittel gereinigt. Nach Entfernung des Lösungsmittels wurde das Methyl-Boc-D-alanylglycinat erhalten.
Beispiel 42
26,0 g Methyl-Boc-D-alanylglycinat wurden in 340 ml Essigsäure gelöst, und die Lösung wurde mit 170 ml einer 6N Lösung von Chlorwasserstoff in Dioxan versetzt. Man ließ das Reaktionsgemisch 10 Minuten lang stehen und entfernte dann das Lösungsmittel unter Vakuum. Der Rückstand wurde
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ORIGINAL INSPECTED
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mit Diethylether zerrieben- Der erhaltene weiße Niederschlag wurde filtriert und mit Diethylether gewaschen, wobei das Methyl-D-alanylglycinat-hydrochlorid erhalten wurde.
Beispiel· 43
Nach der Arbeitsweise von Beispiel 41, wobei jedoch anstelle des dort verwendeten Boc-D-alanins und Methyl-glycinathydrochlorids das Boc-L-tyrosin und Methyl-D-alanylglycinathydrochlorid eingesetzt wurden,- wurden das Methyl-Boc-L-tyrosyl-D-alanylglycinat erhalten.
Beispiel 44
42,3 g Methyl-Boc-L-tyrosyl-D-alanylglycinat wurden in 200 rnl Methanol gelöst und mit 200 ml einer IN Lösung von Natriumhydroxid versetzt. Das Reaktionsgemisch, wurde 30 Minuten stehengelassen und anschließend mit einer 1M Lösung von Kaliumbisulfat auf einen pH-Wert von 3 eingestellt. Der auf diese Weise erhaltene Niederschlag wurde durch Filtration gesammelt, mit Wasser gewaschen und getrocknet, wobei das Boc-L-tyrosyl-D-alanylglycin erhalten wurde.
Beispiel 45
Nach der Arbeitsweise von Beispiel 41, wobei jedoch das dort verwendete Boc-D-alanin und Methyl-glycinat-hydrochlorid durch Boc-L-tyrosyl-D-alanylglycin und L-Phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid ersetzt wurden, wurde der Boc-L-tyrosyl-D-alanylglycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarbonsäure-methylester erhalten.
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ORIGINAL INSPECTED Beispiel 46
Nach der Arbeitsweise von Beispiel 42, wobei jedoch das dort verwendete Methyl-Boc-D-alanylglycinat durch den Boc-L-tyrosyl-D-alanylglycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarbonsäure-methylester ersetzt wurde, wurde das L-Tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L~phenylalanyl-3-amino-1 -adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid der folgenden Formel
H—Tyr—(D)-Ala—GIy—Phe—HN —S J—COOCH3 .HCl
erhalten,
Beispiel 47
Eine Lösung von 100 ml 2-Hydroxyadamanta.n in 250 ml Pyridin wurde tropfenweise mit 137,9 g Trifluoressigsäureanhydrid versetzt, worauf das Reaktionsgemisch über Nacht gerührt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde dann auf Eis gegossen, mit Wasser auf 1,0 Liter verdünnt und 3 χ mit jeweils 500 ml Diethylether extrahiert. Die vereinigten Diethyletherextrakte wurden mit 5%iger Chlorwasserstoffsäure gewaschen, bis die Waschflüssigkeit sauer war, anschließend 1 χ mit 5%iger Natriumbicarbonatlösung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, wobei das 2-Adamantyl-trifluoracetat als Öl erhalten wurde.
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ORIGINAL INSPECTED
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50 g 2-Adamantyl-trifluoracetat wurden in 500 ml Hexan gelöst und 4 Tage lang photolysiert (254 nm). Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, und der ölige Rückstand wurde in eine Niederdrucksäule gebracht und mit Dichlorethan eluiert. Der erste Hauptbestandteil, der eluiert wurde, war das Ausgangsmaterial. Der zweite Hauptbestandteil war das Produkt, d.h. 1-Trifluoracetyl-2-hydroxyadamantan, das aus Pentan kristallisiert wurde. 100 ml einer 10%igen Natriumhydroxidlösung wurden mit 13,0 g i-Trifluoracetyl-2-hydroxyadamantan versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 15 Minuten auf einem Dampfbad erhitzt, anschließend mit Wasser auf 200 ml verdünnt und 2 χ mit jeweils 150 ml Diethylether gewaschen. Die wäßrige Lösung wurde mit konzentrierter Chlorwasserstoffsäure angesäuert. Der auf diese Weise erhaltene Niederschlag wurde durch Filtration gesammelt.,· mit Wasser gewaschen und in einer Dampfkammer getrocknet, wobei die 2-Hydroxy-1-adamantancarbonsäure erhalten wurde. 6/7 g 2-Hydroxy-1-adamantancarbonsäure wurden in 50 ml Aceton gelöst und mit soviel 8N Jones-Reagens (Chromsäureanhydrid in verdünnter Schwefelsäure) versetzt,- daß 1 Minute lang eine rote Farbe gehalten wurde. Anschließend wurde Isopropylalkohol zugesetzt, um etwaiges überschüssiges Jones-Reagens zu zerstören, und das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt. Der Rückstand wurde mit Wasser gewaschen, durch Filtration gesammelt und erneut mit Wasser gewaschen und im Saugtrockner getrocknet, wobei die 2~Keto-1~ adamantancarbonsaure erhalten wurde. 4,7 g 2-Keto-'i~ adamantancarbonsaure wurden in 75 ml Ethanol gelöst und über Platinoxid in Gegenwart von Ammoniakgas unter einem Druck von 4,14 bar bei Raumtemperatur hydriert. Das
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ORIGINAL INSPECTED
Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt. Der Rückstand wurde mit 15 ml Wasser versetzt/ die sodann wieder unter vermindertem Druck entfernt wurden. Diese Stufe wurde mit weiteren 15 ml Wasser wiederholt, worauf der Rückstand unter vermindertem Druck I Stunde bei 1000C getrocknet wurde, wobei die 2-Amino-1-adamantancarbonsäure der folgenden Formel
COOH
erhalten wurde.
Beispiel 48
Eine Lösung von 4,4 g 2-Amino-1-adamantancarbonsäure in 100 ml trockenem Methanol wurde unter Rühren bei -700C mit 3,21 ml Thionylchlorid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen. Nach Entfernung des Lösungsmittels unter vermindertem Druck wurde das 2-Amino-i-adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid der folgenden Formel
-HCl
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ORIGINAL INSPECTED
erhalten. Der das 2-Amino-i-adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid enthaltende Rückstand wurde in 150 ml Chloroform gelöst, durch eine Filterhilfe (Filter CeI) filtriert, mit 10 ml einer 5M Kaliumcarbonatlösung gewaschen, abgetrennt und dann mit einem zweiten Chloroformextrakt der wäßrigen Phase vereinigt. Der Chloroformextrakt wurde über Natriumsulfat getrocknet, durch eine Filterhilfe (Filter CeI) filtriert und im Vakuum konzentriert. Der auf diese Weise erhaltene sirupartige Rückstand wurde in 10 ml Tetrahydrofuran gelöst und über Sieben 30 Minuten lang getrocknet, bevor er in der nachstehenden Umsetzung mit dem gemischten Anhydrid eingesetzt wurde, Eine (über Sieben) getrocknete Lösung von 6,37 g Boc-L-phenylalanin und 2,66 ml N-Methylmorpholin wurde unter einer Stickstoffatmosphäre bei -6O0C gerührt. Diese Lösung wurde mit 2f12 ml Chlorameisensäure-isobutyiaster versetzt. Die Lösung wurde auf -1O0C erwärmt und dann erneut im Verlauf von 10 Minuten auf -400C gekühlt, und dann wurde die vorstehende Tetrahydrofuran-lösung von 2-Amino-1-adamantancarbonsäure-methylester zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur erwärmt und über Nacht gerührt. Anschließend wurden 150 ml Chloroform zugesetzt, und die Chloroform-lösung wurde 2 χ mit jeweils 10 ml einer 2M Kaliumcarbonatlösung und 1 χ mit 20 ml einer IM Kaliumbisulfatlösung gewaschen. Die Chloroformschicht wurde gesammelt,, über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck konzentriert, wobei ein öliger Rückstand erhalten wurde. Durch Dünnschichtchromatographie unter Verwendung von 2,5 % Methanol in Chloroform als Eluierungsmittel und ein NMR-Spektrum (CDCl3, 60 MHz, Tetramethylsilan als interner Standard) des öligen Rückstandes wurde angezeigt, daß zwei Diastereoisomere, A und B, des Methylesters
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ORIGINAL INSPECTED
der Boc-L-phenylalanyl-2-amino-1-adamantancarbonsaure erhalten wurden. Isomer A (Rf = 0,41, Methylester bei 216 cps bzw. 216 c/s.) wurde aus Ether als kristalliner Feststoff mit einem Schmelzpunkt von 153 bis 158°C erhalten. Isomer B (R,- = 0,46, Methylester bei 212 cps bzw. bei 212 c/s.) und weiteres Isomer A wurden durch chromatographische Trennung über Silicagel unter Anwendung einer stufenweisen Eluierung in Hexan und Chloroform erhalten.
A. Eine Lösung von 1,862 g Boc-L-phenylalanyl-2-amino-iadamantancarbonsäure-methylester (Isomer A) in 10 ml Methylenchlorid wurde mit 5 ml Trifluoressigsäure versetzt» Nach 15 Minuten bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch auf ein kleines Volumen eingeengt und mit 5 ml einer kalten Kaliumcarbonatlösung versetzt. Das Gemisch wurde 2 χ mit jeweils 20 ml Chloroform extrahiert. Die vereinigten Chloroformextrakte wurden über Natriumsulfat getrocknet, wobei der L-Phenylalanyl-2-amino-i-adamantancarbonsäuremethylester (Isomer A) als kristalliner Feststoff mit einem Schmelzpunkt von 160 bis 167°C erhalten wurde. Unter einer Stickstoffatmosphäre bei -500C wurde eine trockene (1 g 4A-Siebe) Lösung von 1,878 g Boc-L-tyrosyl-D-methionylglycin und 0,444 ml N-Methylmorpholin in 25 ml Tetrahydrofuran unter Rühren mit 0,52 ml Chlorameisensäure-· isobutyl-· ester versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 10 Minuten auf -100C erwärmt und dann auf -400C gekühlt und mit 1,24 g L-Phenylalanyl-2~amino-1-adamantancarbonsäure-methylester versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Nach Zusatz von Wasser trennte sich
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ORIGINAL INSPECTED
ein Feststoff ab, der durch Filtration gesammelt, gewaschen und getrocknet wurde. Der Rückstand wurde in Methanol gelöst, durch eine Filterhilfe (Filter CeI) filtriert, konzentriert und mit gleichen Volumina Ethylacetat und Ether verdünnt. Der Feststoff, der ausfiel, wurde durch Filtration gesammelt, mit Ether gewaschen und getrocknet, wobei der Boc-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-2-amino-1-adamantancarbonsäure-methylester (Isomer A) erhalten wurde. 2,34 g dieser Verbindung wurden in 10 ml Essigsäure gelöst und mit 20 ml einer 5N Lösung von Chlorwasserstoff in Dioxan versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde unter einem Stickstoffstrom 1,5 Stunden konzentriert und dann mit 150 ml Ether verdünnt. Der sich bildende Feststoff wurde gesammelt, in Methanol gelöst, auf etwa 10 ml konzentriert und mit 40 ml Wasser verdünnt, worauf das Gemisch über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen wurde. Anschließend wurde die Lösung filtriert und lyophilisiertr wobei das L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-2-amino-1-adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid (Isomer A) der folgenden Formel
-HCl
H—Tyr—(D)-Met—Gly—Phe—HN /i^"l\/ (Isomer A)
COOCH3
erhalten wurde.
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B. Eine Lösung von 1,7 g Boc-L-phenylalanyl-2-amino-iadamantancarbonsäure-methylester (Isomer B) in 10 ml Methylenchlorid wurde mit 5 ml Trifluoressigsäure versetzt. Nach 15 Minuten wurde das Reaktionsgemisch unter einem Stickstoffstrom auf ein geringes Volumen eingeengt und dann zwischen 25 ml Methylenchlorid und 5 ml 5M Kaliumcarbonatlösung verteilt. Die Methylenchloridschicht wurde gesammelt, und die wäßrige Phase wurde mit weiteren 25 ml Methylenchlorid extrahiert. Die Methylenchloridextrakte wurden vereinigt, über Natriumsulfat getrocknet und auf ein kleines Volumen eingeengt, worauf sie mit Hexan verdünnt wurden. Das sich bildende kristalline Produkt wurde durch Filtration gesammelt,, wobei der L-PhenylaJ.anyl-2-amino-1-adamantancarbonsäure-methylester (Isomer B) mit einem Schmelzpunkt von 88 bis 900C erhalten wurde. Das gemischte Anhydrid aus 1,65 g Boc-L-tyrosyl-D-methionylglycin wurde wie im vorstehenden Teil. Λ hergestellt. Dazu wurden 1,256 g L-Phenylalanyl-2-amino-i-adamantancarbonsäure-methylester (Isomer B) gegeben. Man ließ die umsetzung 1 Stunde bei Raumtemperatur ablaufen und versetzte das Reaktionsgemisch dann mit 50 ml Methylenchlorid. Das Reaktionsgemisch wurde filtriert, mit jeweils 10 ml einer 2M Kaliumcarbonatlösung und einer IM Kaliumbisulfatlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und filtriert Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum entfernt, wobei ein glasartiges Material erhalten wurde, das aus dem Methylester der Boc-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-2-amino-1-adamantancarbonsaure bestand. Dieses Produkt wurde in 10 ml Eisessig gelöst und mit 20 ml einer 5N Lösung von Chlorwasserstoff in Dioxan versetzt.
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ORIGINAL INSPECTED
Man ließ die Umsetzung 45 Minuten ablaufen und konzentrierte dann das Reaktionsgemisch, unter vermindertem Druck. Der Rückstand wurde in wäßrigem Methanol gelöst und durch eine Filterhilfe (Filter CeI) filtriert, anschließend 6 χ mit jeweils 10 ml Methylenchlorid und Ethylacetat extrahiert. Die Ethylacetatextrakte wurden vereinigt, und das Lösungsmittel wurde durch Eindampfen entfernt. Der auf diese Weise erhaltene Rückstand wurde in 40 ml Wasser gelöst, durch eine Filterhilfe (Filter CeI) filtriert und lyophilisiert, wobei das Produkt, d.h. L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-2-amino-iadamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid der folgenden Formel
,HCl H—Tyr — (D) — Met— GIy — Phe~HH—/^h^/ (Isomer B )
COOCH
erhalten wurde.
Beispiel 49
A. Eine Lösung von 0,798 g L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-2-amino-1-adamantancarbonsäure-methylesterhydrochlorid (Isomer A) in 10 ml 10%igem wäßrigen Methanol wurde mit 2 ml einer 30%igen Wasserstoffperoxidlösung versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck konzentriert, und der Rückstand wurde in Wasser
130025/oea?
ORIGINAL INSPECTED
gelöst und lyophilisiert, wobei das L-Tyrosyl-D-methionylglycyl-L-phenylalanyl-2-amino-i-adamantancarbonsäuremethylester-sulfoxid-hydrochlorid der folgenden Formel
H.—Tyr;—CP). —Met—GIy —Phe— HN
.HCl
(Isomer Λ)
erhalten wurde.
B. Nach der Arbeitsweise von Teil A, wobei jedoch das dort verwendete Isomer A durch eine äquivalente Menge an Isomer B von L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-2-amino-i-adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid
ersetzt wurde, wurde das L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-2-amino-i-adamantancarbonsäure-methylestersulfoxid-hydrochlorid der folgenden Formel
H —-Tyr— {D) — Met—GIy— Phe—HN
-HCl
(Isomer B)
erhalten.
130026/0627
ORIGINAL INSPECTED Beispiel 50
Eine Lösung von 13,3 g O-Methyl-homoserin in 370 ml Methanol und 180 ml einer 6N Lösung von Chlorwasserstoff in Dioxan wurde 3 bis 4 Tage bei Raumtemperatur stehengelassen. Anschließend wurde das Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt, und der Rückstand wurde lyophilisiert, wobei das O-Methyl-homoserin-methylester-hydrochlorid der folgenden Formel
H0N
HCl
COOCH3
erhalten wurde. Nach den Arbeitsweisen der Beispiele 35 bis 39, wobei jedoch das in Beispiel 35. eingesetzte Methyl-D-methioninat-hydrochlorid durch eine äquivalente Menge an O-Methyl-homoserin-methylester-hydrochlorid ersetzt wurder wurde das DL-2,6-Dimethyltyrosyl-DL-0-methylhomoserylglycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarbonsäuremethylester-hydrochlorid der folgenden Formel
CH2OCH3
erhalten.
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ORIGINAL INSPECTED
Beispiel 51
Eine Lösung von 13,7 g Thionylchlorid in 100 ml Methanol wurde bei -200C unter Rühren mit 5 g D-Norleucin (Nie) versetzt. Man ließ das Reaktionsgemisch 16 Stunden bei Raumtemperatur stehen. Anschließend wurde das Methanol unter vermindertem Druck entfernt, und der Rückstand wurde mit Diethylether geschüttelt, wobei das Methyl-D-norleucinathydrochlorid als kristallines Produkt der folgenden Formel
H2N — CH — COOCH3 . HCl
CH2 CH2 CH2 CH3
erhalten wurde.
Eine Lösung von 12,4 g Boc-L-tyrosin in 100 ml Dimethylformamid wurde auf -2O0C gekühlt und durch Zusatz von 1 Äquivalent N-Methylmorpholin und 1 Äquivalent Chlorameisensäure-isobutylester in ein gemischtes Anhydrid umgewandelt. Das Reaktionsgemisch wurde auf -300C gekühlt und nacheinander mit 4,48 ml N-Methylmorpholin und 6,65 g Methyl-D-norleucinathydrochlorid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann weitere 16 Stunden stehengelassen. Das Dimethylformamid wurde unter hohem Vakuum bei 400C abdestilliert, und der Rückstand wurde mit Ethylacetat und Wasser geschüttelt. Die Ethylacetat-Fraktion wurde abgetrennt und nacheinander mit 0,5M Kaliumbisulfatlösung, Wasser und einer 1M Kaliumbicarbonatlösung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt,
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ORIGINAL INSPECTED
und das Produkt wurde aus 50 ml Isopropanol und 40 ml Wasser kristallisiert, wobei das Methyl-Boc-L-tyrosyl-D-norleucinat erhalten wurde. 4,06 g Methyl-Boc-L-tyrosyl-D-norleucinat wurden in 40 ml einer 1M Kaliumhydroxidlösung suspendiert, und das Gemisch wurde 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurde 2M Kaliumbisulfatlösung im Überschuß zugesetzt, und das Produkt wurde in Ethylacetat aufgenommen. Die Ethylacetatlösung wurde nacheinander mit einer 0,5M Kaliumbisulfatlösung und Wasser gewaschen und dann über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, wobei das Boc-L-tyrosyl-D-norleucin erhalten wurde. Eine Lösung von 1,42g Boc-L-tyrosyl-D-norleucin in 15 ml Tetrahydrofuran wurde auf -200C gekühlt und durch Zusatz von 1 Äquivalent N-Methylmorpholin und 1 Äquivalent Chlorameisensäure-isobutylester in das gemischte Anhydrid · umgewandelt. Dieses Reäktionsgemisch wurde mit 1,24 g Glycyl-L-phenylalanyl—3-amxno-l-adamantancarbonsäure-methylester versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann weitere 16 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Das Reaktionsgemisch wurde mit 200 ml Ethylacetat verdünnt,- und die Ethylacetatlösung wurde nacheinander mit einer 0,5M Kaliumbisfulfatlösung, Wasser und einer 1M Kaliumbicarbonatlösung gewaschen und dann über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, und das Produkt wurde durch Niederdruckchromatographie über Silicagel (Woelm) unter Anwendung einer Stufeneluierung mit 100 % Chloroform bis 5 % Methanol und 95 % Chloroform gereinigt, wobei der Boc-L-tyrosyl-D-norleucyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarbonsäure-methylester erhalten wurde.
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ORIGINAL INSPECTED
Eine Lösung von 0,896 g Boc-L-tyrosyl-D-norleucyl-glycylphenylalanyl-3-amino-1-adamantancarbonsäure-methylester in 10 ml Methylacetat wurde mit 10 ml einer 6M Lösung von Chlorwasserstoff in Dioxan versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 1 Stunde bei Raumtemperatur stehengelassen, und anschließend wurde das Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt- Der Rückstand wurde mit Ethylacetat extrahiert. Nach Entfernung des Lösungsmittels wurde das L-Tyrosyl-D-norleucyl-glycyl-L-phenylalanyl-S-amino-iadamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid der folgenden Formel
H _Tyr — D — Nie — GIy Phe ΝΗ--^ J— COOCH3 . HCl
erhalten.
Beispiel 52
500 ml Methanol wurden bei -200C nacheinander mit 180 ml Thionylchlorid und 91,3 g ß-Hydroxyphenylalanin (ß-OH-Phe) versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde. 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, worauf das Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt wurde. Der Rückstand wurde mit Diethylether geschüttelt. Nach Entfernung des Lösungsmittels wurde das DL-ß-Hydroxyphenylalanin-methylester-hydrochlorid der folgenden Formel
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ORIGINAL INSPECTED
jN CHCOOCH3
CHOH ' .HCl
erhalten.
23,1 g DL-ß-Hydroxyphenylalanin-methylester-hydrochlorid wurden feinpulverisiert und in 230 ml Methylenchlorid suspendiert. Die Suspension wurde mit 19,3 g Boc-glycin und 11,2 ml N-Methylmorpholin versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt und anschließend auf 00C gekühlt und dann auf einmal mit einer Lösung von 23,7 g Dicyclohexylcarbodiimid in 100 ml Methylenchlorid versetzt. Das Gemisch wurde 4 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann filtriert, um den Dicyclohexylharnstoff, der sich während der Umsetzung bildete, zu entfernen. Das Methylenchlorid-Filtrat wurde unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft, und der Rückstand wurde mit Ethylacetat geschüttelt und filtriert, um das N-Methylmorpholin-hydrochlorid zu entfernen. Das Filtrat wurde nacheinander mit 0,5M Kaliumbisulfitlösung, Wasser und 1M Kaliumbicarbonatlösung gewaschen und anschließend über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, wobei der Boc-glycyl-DL-ß-hydroxyphenylalanin-methylester erhalten wurde. 7,03 g dieses Dipeptids wurden in 40 ml Dioxan gelöst,und 20ml / 6M Lösung von Chlorwasserstoff in Dioxan wurden zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen, und anschließend wurde das Lösungsmittel unter Vakuum entfernt. Der Rückstand wurde mit Diethylether zerrieben, wobei ein Pulver erhalten wurde, das aus dem Glycyl-DL-ß-hydroxyphenylalanin-methyl-
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ORIGINAL INSPECTED
ester-hydrochlorid bestand. 5,17 g dieses Dipeptids und 5,23 g Boc-D-methionin wurden in 20 ml Dimethylformamid gelöst, und die Lösung wurde auf -100C gekühlt. Diese Lösung wurde rasch nacheinander mit 1 Äquivalent N-Methylmorpholin und 4,32 g Dicyclohexylcarbodiimid in 20 ml Methylenchlorid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 4 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und anschließend filtriert. Das Filtrat wurde mit 300 ml Ethylacetat verdünnt, und die Ethylacetatlösung wurde nacheinander mit 0,5M Kaliumbisulfatlösung, Wasser und 1M Kaliumbicarbonatlösung gewaschen und dann über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde, unter vermindertem Druck entfernt, wobei ein roher glasarticjer Feststoff erhalten wurde, der durch Niederdruckchromatographie über Silicagel (Woelm) gereinigt wurde, wobei eine Stufeneluierung von einem Gemisch aus 50 % Chloroform und 50 % Hexan bis 100 % Chloroform und eine zweite Stufeneluierung von 100 % Chloroform bis zu einem Gemisch aus 50 % Methanol und 50 % Chloroform angewendet wurden, um den Boc-D-methionylglycyl-DL-ß-hydroxyphenylalanin-methylester zu erhalten. 5,95 g dieses Tripeptidesters wurden in 50 ml Methanol gelöst. Die Lösung wurde auf 100C gekühlt und unter Rühren mit 50 ml einer 1M Kaliumhydroxidlösung versetzt. Die Umsetzung war rasch abgeschlossen. Das Reaktionsgemisch wurde mit 3,0 ml Essigsäure versetzt, und das Methanol wurde unter vermindertem Druck entfernt. Der Rückstand wurde mit Ethylacetat extrahiert. Die Ethylacetatlösung wurde mit 0,5M Kaliumbisulfatlösung und Wasser gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck abgedampft, wobei das Boc-D-methionyl-glycyl-DL-ß-hydroxyphenylalanin erhalten wurde. 4,69 g dieses Tripeptids wurden in 10 ml Essigsäureanhydrid gelöst und mit 0,82 g wasserfreiem Natriumacetat versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde
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ORlGJNAL INSPECTED
16 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch 2 χ mit jeweils 25 ml Hexan gerührt, um den größten Teil des Essigsäureanhydrids zu entfernen. Die Hexan-Waschflüssigkeiten wurden verworfen. Der gummiartige Rückstand wurde mit 25 ml Wasser gerührt, worauf ein körniger Niederschlag gebildet wurde. Der Niederschlag wurde durch Filtration gesammelt und mit einem großen Volumen Wasser gewaschen, um das Azlacton, d.h. 2-Boc-D-methionylaminomethyl-4-benzylidenoxazolin-5-on der folgenden Formel
BOC-
(D)
MET-
NH-
•CH-
zu erhalten.
3,38 g dieses Produktes imd 1,67 g 3-Amino-1~adamantancarbonsäure-methylester wurden in 15 ml Ethylacetat gelöst, und die Lösung wurde 2 Stunden auf 600C erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde mit 150 ml Ethylacetat verdünnt, und die Ethylacetatlösung wurde nacheinander mit 0,5M Kaliumbisulfatlösung r Wasser und 1M Kaliumbicarbonatlösung gewaschen und anschließend über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, und der Rückstand wurde durch Niederdruckchromatographie über Silicagel (Woelm) gereinigt, wobei eine Stufeneluierung von 100 % Chloroform bis zu einem Gemisch von 5 % Methanol und 95 % Chloroform angewendet wurde, um den Boc~D-methionyl-glycyl-dehydrophenylalanyl-3-amino-i-adamantancarbonsäure-methylester zu erhalten.
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ORIGINAL INSPECTED
3,21 g dieses Produktes wurden in 30 ml Dioxan gelöst und mit 30 ml einer 6N Lösung von Chlorwasserstoff in Dioxan versetzt- Das Reaktionsgemisch wurde 1 Stunde bei Raumtemperatur stehengelassen, und anschließend wurde das Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt. Der Rückstand wurde mit Diethylether geschüttelt. Nach Entfernung des Lösungsmittels wurde ein Pulver erhalten, das aus D-Methionylglycyl-dehydrophenylalanyl-S-amino-i-adamantancarbonsäuremethylester-hydrochlorid bestand. Nun wurde ein gemischtes Anhydrid hergestellt, indem man eine Lösung von Boc-L-tyrosin in 17 ml Dimethylformamid bei -200C mit 1 Äquivalent N-Methylmorpholin und 1 Äquivalent Chlorameisensäure-isobutylester versetzte. Das Reaktionsgemisch wurde mit 2,9 g D-Methionyl-glycyl-dehydrophenylalanyl-S-amino-iadamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid und 1 Äquivalent N-Methylmorpholin versetzt. Das Gemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, und der Rückstand wurde mit Ethylacetat extrahiert. Die Ethylacetatlösung wurde nacheinander mit 0,5M Kaliumbisulfatlösung, Wasser und IM Kaliumbicarbonatlosung gewaschen und anschließend über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt. Der Rückstand wurde durch Niederdruckchromatographie über Silicagel (Woelm) gereinigt, wobei eine Stufeneluierung von einem Gemisch aus 80 % Chloroform und 20 % Hexan bis 100 % Chloroform und anschließend eine zweite Stufeneluierung von 100 % Chloroform bis zu einem Gemisch aus 50 % Methanol und 50 % Chloroform angewendet wurde, um den Boc-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-dehydrophenylalanyl-3-amino-1-adamantancarbonsäure-methylester zu erhalten„ 0,805 g dieses geschützten Peptids wurden in 10 ml Methyl-
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ORIGINAL INSPECTED
acetat gelöst und mit 1O ml einer 6M Lösung von Chlorwasserstoff in Dioxan versetzt. Die Lösung wurde 1 Stunde bei Raumtemperatur stehengelassen, und anschließend wurde das Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt. Der Rückstand wurde mit Ethylacetat geschüttelt, wobei ein Pulver erhalten wurde, das durch Filtration gesammelt wurde und aus dem L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-dehydrophenylalanyl-3-amino-1-adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid der folgenden Formel
Ii
H—Tyr—D—Met—GIy—HN—C-C—HN
CH
bestand.
Beispiel 53
3,35 g Boc-N-methyl-L-pheny!alanin, die nach dem Verfahren von S.T.Cheung und N ..L. Benoiton, CAN. J.CHEM-, 55 (1977), S.906? hergestellt worden waren, wurden in 35 ml Dimethylformamid gelöst und in das gemischte Anhydrid umgewandelt, indem man 1 Äquivalent N-Methylmorpholin zusetzte, anschließend auf -200C kühlte und sodann tropfenweise unter Rühren 1 Äquivalent Chlorameisensäure-isobutylester zusetzte, während die Temperatur unterhalb -100C gehalten wurde. Das Reaktionsgemisch wurde mit 2,46 g 3-Amino-i-adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid und anschließend mit 1,1 ml N-Methylmorpholin versetzt.
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ORiGiNAL INSPECTED
Nachdem das Gemisch 24 Stunden bei Raumtemperatur gestanden hatte, wurde das Dimethylformamid unter Hochvakuum abdestilliert. Der Rückstand wurde in Ethylacetat aufgenommen, und die Lösung wurde nacheinander mit 0,5M Kaliumbisulfatlösung, Wasser und 1M Kaliumbicarbonatlösung gewaschen und anschließend über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt und das rohe Produkt wurde durch Niederdruckchromatographie über Silicagel (Woelm) gereinigt, wobei eine Stufeneluierung von einem Gemisch aus 20 % Chloroform und 80 % Hexan bis zu 100 % Chloroform angewendet wurde, um den Boc-N-methyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarbonsäure-methylester zu erhalten. 2,87 g dieses Produktes wurden in 25 ml Dioxan gelöst und mit 25 ml einer 6M Lösung von Chlorwasserstoff in Dioxan versetzt, worauf die Lösung 1 Stunde bei Raumtemperatur stehengelassen wurde. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt,und der Rückstand wurde unter Hochvakuum getrocknet, um das N-Methyl~L-phenyl.alany.l~ 3-amino-i-adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid zu erhalten. 0,006 Mol dieses Produktes wurden in 10 ml Methylenchlorid gelöst und mit 0,78 ml N-Methylmorpholin versetzt.
Das Reaktionsgemisch wurde mit 1,58 g Boc-glycin versetzt, anschließend auf -1O0C gekühlt und dann mit 1,86 g Dicyclohexylcarbodiimid in 10 ml Methylenchlorid versetzt. Nach 2 Stunden bei Raumtemperatur wurde das Gemisch filtriert, und das Filtrat wurde unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde in Ethylacetat aufgenommen^, und die Ethylacetatlösung wurde nacheinander mit 0,5M Kaliumbisulfatlösung, Wasser und 1M Kaliumbicarbonatlösung
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ORIGINAL INSPECTED
gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, und der Rückstand wurde durch Niederdruckchromatographie gereinigt, wobei eine Stufeneluierung von einem Gemisch aus 10 % Chloroform und 90 % Hexan bis zu 100 % Chloroform angewendet wurde, um einen glasartigen Feststoff, der aus Boc-glycyl-N-methyl-L-phenylalanyl-3-amino~1~adamantancarbonsäure~ methylester bestand, zu erhalten. 2,5 g dieses Produktes wurden in 10 ml Dioxan gelöst und mit 20 ml einer 6M Lösung von Chlorwasserstoff in Dioxan versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 1 Stunde bei Raumtemperatur stehengelassen und dann unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft, wobei das Glycyl-N-methyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid der folgenden Formel
H — GIy— N —CH — C — HN —^ J—COOCH3 .HCl
erhalten wurde.
1,50 g Boc-D-methionin wurden in 10 ml Tetrahydrofuran gelöst und in das gemischte Anhydrid umgewandelt, indem man 1 Äquivalent N-Methylmorpholin zusetzte, auf -20°C kühlte und sodann 1 Äquivalent Chlorameisensäure-isobutylester zusetzte, während die Temperatur unter -100C gehalten wurde. 2,18 g des vorstehend erhaltenen Glycyl-N-methyl-L-phenylalanyl~3-amino-1-adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorids wurden in 10 ml Tetrahydrofuran gelöst, durch Zusatz von 0,56 ml N-Methylmorpholin neutralisiert und sodann bei -300C zu dem
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vorstehenden gemischten Anhydrid gegeben. Man ließ das Reaktionsgemisch 2 Stunden bei Raumtemperatur stehen und entfernte dann das Lösungsmittel unter vermindertem Druck. Der erhaltene Rückstand wurde in Ethylacetat aufgenommen. Die Ethylacetatlösung wurde nacheinander mit 0,5M Kaliumbisulfatlösung, Wasser und 1M Kaliumbicarbonatlösung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, wobei der Boc-D-methionyl-glycyl-N-methyl-L-phenylalanyl-S-amino-1-adamantancarbonsäure-methylester erhalten wurde. Dieses Produkt wurde entblockiert, indem man 3,0 cj dieses Produktes in 20 ml Dioxan löste und mit 30 ml einer 6M Lösung von Chlorwasserstoff in Dioxan versetzte. Das Reaktionsgemisch wurde 1 Stunde bei Raumtemperatur stehengelassen, worauf das Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt wurde, um das D-Methionyl-glycyl-N-methyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid zu erhalten. 1,31 g dieses Produktes wurden in 30 ml Tetrahydrofuran gelöst. Diese Lösung wurde mit 0,49 ml N-MethyImorpholin und anschließend mit 2,33 g Boc-L-tyrosin-pentachlorphenylester versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde eine Zeitlang bei Raumtemperatur stehengelassen und dann mit Ethylacetat extrahiert. Der Ethylacetatextrakt wurde nacheinander mit 0,4M Kaliumbisulfatlösung, Wasser und 1,0M Kaliumbicarbonatlösung gewaschen und dann über Magnesiumsulfat getrocknet . Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, und der Rückstand wurde durch Niederdruckchromatographie über Silicagel (Woelm) gereinigt, wobei eine Stufeneluierung von 100 % Chloroform bis zu einem Gemisch aus 5 % Methanol und 95 % Chloroform angewendet wurde, um den Boc-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-N-methyl-L-phenylalanyl~3-amino-1-adamantancarbonsäure-methylester zu erhalten. 0,5 g dieses
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ORIGINAL INSPECTED
N-geschützten Peptids wurden in 5,0 ml Dioxan gelöst. Die Lösung wurde· mit 5,0 ml einer 6M Lösung von Chlorwasserstoff in Dioxan versetzt, und das Reaktionsgemisch wurde 1 Stunde bei Raumtemperatur stehengelassen. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt. Der Rückstand wurde mit Diethylether geschüttelt, wobei ein Pulver erhalten wurde. Nach Entfernung des Diethylethers durch Filtration wurde das Produkt, d.h. das L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-N-methyl-L-phenylalanyl-S-amino-i-adamantancarbonsäure-methylesterhydrochlorid der folgenden Formel
H—Tyr—(D)—Met—Gly—N
COOCH3 -HCl
erhalten.
Die vorstehende Arbeitsweise wurde wiederholt, wobei jedoch anstelle des dort verwendeten Boc-L-tyrosin-pentachlorphenylesters 1,73 g Boc-N-methyl-L-tyrosin-hydroxy-succinimidester eingesetzt wurden. Auf diese Weise wurde das Boc-N-methyl-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-N-methyl-L-phenylalany1-3-amino-1-adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid erhalten. Dieses Produkt wurde durch Niederdruckchromatographie über Silicagel (Woelm) gereinigt, wobei eine Stufeneluierung von einem Gemisch aus 60 % Chloroform und 40 % Hexan bis zu 100 % Chloroform und anschließend eine zweite Stufeneluierung von 100 % Chloroform bis zu einem Gemisch aus 5 % Methanol und 95 % Chloroform angewendet wurden. 0,55 g des Produktes
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wurden wie vorstehend beschrieben entblockiert, wobei das N-Methyl-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-N-methyl-L-phenylalanyl-S-amino-i-adamantancarbonsäure-methylesterhydrochlorid der folgenden Formel
CIL
CH2-CH-C-(D)-Met-Gly-N-CH-C-HN
NHCH.
erhalten wurde. Beispiel 54
116g L-Phenylalanin wurden in 1000 ml 90%iger Essigsäure gelöst und über 23 g eines Katalysators aus 5 % .Rhodiumauf-Kohlenstoff bei einem Druck von 2/76 bar und 37°C für die Dauer von 24 Stunden hydriert. Anschließend wurde der Katalysator durch Filtration entfernt, das Filtrat unter Hochvakuum zur Trockene konzentriert und der Rückstand aus 2 1 15%iger Essigsäure kristallisiert, wobei L-ß-Cyclohexylalanin der folgenden Formel
COOH
erhalten wurde.
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ORIGINAL INSPECTED
Nach der Arbeitsweise der Beispiele 1 bis 9, wobei jedoch anstelle des in Beispiel 1 eingesetzten L-Phenylalanins 1 Äquivalent L-ß-Cyclohexylalanin verwendet wurde, wurde das L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-ß-cyclohexylalanyl^- amino-1-adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid der folgenden Formel
H—Tyr—(D)—Met— Gly—HN- CH- C
COOCH
.HCl
erhalten.
Beispiel 55
Nach dem von H.T.Nogasawa u.a. in J.MED.CHEM., Bd. 16 (1973), S. 823 beschriebenen Verfahren wurde 2-Amino-2-adamantancarbonsäure hergestellt. Nach den Arbeitsweisen der Beispiele 1 bis 9, wobei jedoch anstelle der in Beispiel 1 eingesetzten 3-Amino-1-adamantancarbonsäure die 2-Amino-2-adamantancarbonsäure verwendet wurde, wurde das L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl^-amino-^-adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid der folgenden Formel
— Tyr— (D) ·— Met—Gly— Phe HN
.HCl
COOCH.
130025/0627
erhalten.
Beispiel 56
4,7 g 4-Oxo-2-adamantancarbonsäure (hergestellt nach dem von G.Snatzke u.a. in CHEM.BER., Bd. 100 (1967), S.1710-1724 beschriebenen Verfahren) wurden in 75 ml Ethanol über 0,47 g Platinoxid in Gegenwart von Ammoniakgas unter einem Druck von 4,14 bar bei Raumtemperatur hydriert. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, und 15 ml Wasser wurden zugesetzt, die anschließend unter vermindertem Druck entfernt wurden. Weitere 15 ml Wasser wurden zugesetzt und erneut· unter vermindertem Druck entfernte worauf der Rückstand 1 Stunde in einem Vakuumtrockenschrank bei 1000C getrocknet wurde, um die 4-Amino-2-adamantancarbonsäure der folgenden Formel
COOCH
NH2
zu erhalten.
Nach den Arbeitsweisen der Beispiele 1 bis 9, wobei jodoch anstelle der in Beispiel 1 verwendeten 3-Amino-1-adamantancarbonsäure 1 Äquivalent 4-Amino-2-adamantancarbonsäure eingesetzt wurde, wurde das L~Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl^-amino^-adamantancarbonsäure-methylesterhydrochlorid der folgenden Formel .
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ORIGINAL INSPECTED
.HCl Η— Tyr— CD).—Met—Gis—Phe—HN
COOCH3
erhalten.
Beispiel 57
19,4 g 2-0x0-1-adamantancarbonsäure wurden 1 Stunde mit 25 ml Thionylchlorid am Rückfluß erhitzt. Anschließend wurde das überschüssige Thionylchlorid unter vermindertem Druck entfernt, und es wurde Toluol zugesetzt, das anschließend unter vermindertem Druck entfernt wurde, um irgendwelches überschüssiges Thionylchlorid zu entfernen. Der Rückstand wurde in Diethylether gelöst, und es wurde Ammoniakgas über die Lösung geleitet, bis die exotherme Reaktion beendet war. Der auf diese Weise .erhaltene Feststoff wurde durch Filtration gesammelt und mit Diethylether gewaschen, wobei das 2-Oxoadamantan-i-carboxamid der folgenden Formel
erhalten wurde.
Eine Lösung von 19,3 g 2-0xoadamantan-1-carboxamid und 10,9 g Natriummethoxid in 100 ml Methanol wurde bei 100C tropfen-
130025/062
~85~ 30U793
weise mit einer Lösung von 23,97 g Brom in 25 ml Methanol versetzt, während die Temperatur bei 100C gehalten wurde. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur erwärmt und über Nacht gerührt, anschließend in Wasser gegossen und zwischen Methylenchlorid und Wasser verteilt. Die organische Schicht wurde abgetrennt, mit Wasser gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, wobei der 2-0xoadamantan-1-carbaminsäure-methylester erhalten wurde. 22,3 g dieser Verbindung wurden in 100. ml Diethylether gelöst. Diese Lösung wurde tropfenweise zu einem Gemisch aus 86,9 g n-Butyllithium und 61,7 g Methoxymethyl-triphenyl-phosphonium·· chlorid in 1,0 1 Diethylether gegeben. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht gerührt und mit 40,88 g Zinkchlorid versetzt, worauf das Gemisch 1 Stunde gerührt und anschließend filtriert wurde. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, und der Rückstand wurde in 90%iger Essigsäure, gclösl·.. Nachdem das Reaktionsgemisch 18 Stunden gerührt worden war, wurde es in Wasser gegossen und 3 χ mit jeweils 150 ml Diethylether extrahiert. Die vereinigten Etherschichten wurden mit gesättigter Natriumbicarbonatlösung gewaschen, bis sie neutral waren, und anschließend über Magnesiumsulfat getrockneI: Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, und der Rückstand wurde in Aceton gelöst. Dann wurde soviel Jones-Reagens zugesetzt, daß für 1 Minute eine rote Farbe aufrechterhalten wurde, worauf Isopropylalkohol zugesetzt wurde, um überschüssiges Jones-Reagens zu zersetzen. Das Aceton wurde unter vermindertem Druck entfernt, und 150 ml Wasser wurden zugesetzt. Der Feststoff wurde filtriert, mit Wasser gewaschen, in 100 ml 5%iger Chlorwasserstoffsäure gelöst und 1/2 Stunde auf dem Dampfbad erwärmt. Der pH-Wert
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ORIGINAL INSPECTED
wurde mit Natriumhydroxid auf 7 eingestellt, und das Produkt wurde durch Filtration gesammelt und getrocknet, um die 1-Amino-2-adamantancarbonsäure der folgenden Formel.
.COOH
zu erhalten.
Nach den Arbeitsweisen der Beispiele 1 bis 9, wobei jedoch anstelle der in Beispiel 1 eingesetzten 3-Amino-1-adamantancarbonsäure 1 Äquivalent i-Amino-2-adamantancarhonsäure verwendet wurde r wurde das L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-1-amino~2-adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid der folgenden Formel
H Tyr CD) Met— GIy.— Phe HN COOCH . HCl
erhalten.
Beispiel 58
Einje Lösung von 1,2g Nitrxltetrafluorborat in 15 ml Acetonitril wurde auf 00C gekühlt und mit einer Lösung von 2,17 g
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5-Brom-2-oxoadamantan (hergestellt nach dem von H.W.Geluk in SYNTHESIS (1972), S. 374 beschriebenen Verfahren) in 15 ml Acetonitril unter raschem Rühren und Kühlen versetzt. £)as Reaktionsgemisch wurde 30 Minuten gerührt, anschließend in Wasser gegossen und mit Diethylether extrahiert. Der Diethyletherextrakt wurde mit 5 %iger Natriurabicarbonatlösung und mit Wasser gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, um das N-(2-Oxoadamantan-5-yl)-acetamid zu erhalten. Nach der Arbeitsweise von Beispiel 57, wobei jedoch anstelle des dort verwendeten 2-Oxoadamantan-1-carbaminsäure-methylesters 1 Äquivalent an N-(2-Oxoadamantan-5-yl)-acetamid verwendet wurde, wurde das L-Tyrosyl-D-methiohyl-glycyl-L-phenylalanyl-5~amino-2-adamantancarbonsäure-methylester~hYdrochlorid der folgenden Formel
COOCH-
H—Tyr—(D)-Met—Gly—Phe—HN , ^ ^,
. HCl
erhalten.
Beispiel 59
Eine Lösung von 5,98 g 3-Amino-1-adamantancarbonsäure in 40 ml trockenem Tetrahydrofuran wurde unter einer Stickstoffatmosphäre und unter Rühren mit 6,5 ml Bortrifluorid-etherat versetzt. Das Rühren wurde fortgesetzt, während 35 ml einer
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ORIGINAL INSPECTED
1M Lösung von Boran in Tetrahydrofuran mit solcher Geschwindigkeit zugesetzt wurde, daß der Rückfluß erhalten blieb. Das Reaktionsgemisch wuree 4,5 Stunden am Rückfluß erhitzt und anschließend abgekühlt, worauf 20 ml einer 4N Lösung von Natriumhydroxid tropfenweise zugesetzt wurden. Die obere Phase, die das Tetrahydrofuran und den Borsäureester des Produktes enthielt, wurde abgetrennt. Das Tetrahydrofuran wurde unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand wurde mit 40 ml einer 4N Natrxumhydroxidlösung 24 Stunden bei 1000C erhitzt. Die Lösung wurde 3 χ mit jeweils 200 ml Chloroform extrahiert. Die vereinigten Chloroformextrakte wurden über Kaliumcarbonat getrocknet,, und das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt- Der Rückstand wurde mit Diethylether gerührt, wobei das 3-Amino-1-adamantanmethanol der folgenden Formel
CH2OH
als kristallines Produkt erhalten wurde»
Eine Lösung von 1,83 g Boc-L-phenylalanin in 15 ml Dimethylformamid wurde mit 0,76 ml N-Methylmorpholin versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde auf -400C gekühlt und unter Rühren mit 0,90 ml Chlorameisensäure-isobutylester versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 15 Minuten bei einer Temperatur unter -100C gerührt und dann mit 1,04 g 3~Amino-1-adamantanmethanol versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 15 Minuten bei -200C gerührt und dann über Nacht bei 50C abgestellt.
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ORIGINAL INSPECTED
Das Dimethylformamid wurde unter vermindertem Druck entfernt, und der Rückstand wurde in Methylenchlorid und Wasser gelöst. Die Methylenchloridphase wurde abgetrennt und 2 χ mit jeweils 35 ml Wasser, 3 χ mit jeweils 35 ml einer 0,5M Kaliumbisulfatlösung und 2 χ mit jeweils 35 ml Wasser gewaschen und anschließend über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, und der Rückstand wurde durch Chromatographie über Silicagel (Whatman 10 μΐη). gereinigt, wobei eine Stufeneluierung von einem Gemisch aus Hexan und Chloroform 1:1 bis zu 100 % Chloroform angewendet wurde, um das Boc-L-phenylalanyl-3-amino-adamantanmethanol zu erhalten. 2,0 g dieses Produktes wurden in 5 ml einer 6N Lösung von Chlorwasserstoff in Dioxan gelöst. Das Reaktionsgemisch wurde 20 Minuten bei Raumtemperatur stehengelassen, anschließend wurde das Lösungsmittel unter vermindertem Druck bei 3O0C entfernt, und der Rückstand wurde mit Diethylether gerührt, um das Produkt in Form eines Fettstoffes zu erhalten. Das feste Produkt wurde durch Filtration gesammelt und unter vermindertem Druck getrocknet, wobei L-Phenylalanyl-3-amino-1-adamantanmethanol-hydrochlorid der folgenden Formel
H Phe HN—J^l J___ CH2OH .HCl
erhalten wurde.
Nach den Arbeitsweisen der Beispiele 4 bis 9, wobei jedoch anstelle des in Beispiel 4 eingesetzten I.-Phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorids
,30025/0627 0R1GlNAL ,NSPEO7ED
30U793
1 Äquivalent L-Phenylalanyl-3-amino-i-adamantanmethänolhydrochlorid verwendet wurde, wurde das L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-E-phenylalanyl-S-amino-i-adamantanmethanolhydrochlorid der folgenden Formel
H Tyr (D) Met— GIy— Phe — HN
CH2OH
.HCl
erhalten.
Beispiel 60
Nach den Arbeitsweisen der Beispiele 41 bis 48, wobei jedoch anstelle des in Beispiel Hi eingesetzten Boc-D-alanins eine äquivalente Menge an Boc-D-prolin oder Boc-L-prolin eingesetzt wurde/ wurde das L-Tyrosyl-D-prolyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-i-adamantanearbonsäure-methylester-hydrochlorid oder das L-Tyrosyl-L-prolyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-iadamantancarbonsäure-methylester-hydrochlorid der folgenden Formeln
H —Tyr- (M— Pro—GIy—Phe—HN
COOCH,
.HCl
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ORIGINAL INSPECTED
H-Tyr— (Li - Pro--Gly-Phe- HN --£[ jL COOCH3 .HCl
erhalten.
Beispiel 61
Nach den Arbeitsweisen der Beispiele 24 und 25, wobei jedoch anstelle des in Beispiel 24 eingesetzten 1-Ämino-adainantans eine äquivalente Menge an 1-(Aminomethyl)-adamantan eingesetzt wurde, wurde das L-Phenylalanyl-1-feminomethyl) -adamantan erhalten. Nach den Arbeitsweisen der Beispiele 31 und 32, wobei jedoch anstelle des in Beispiel 31 eingesetzten L-Phenylalanyl-1-aminoadamantans das L-Phenylalanyl-1-(aminomethyl) adamantan eingesetzt wurde, wurde das L-Tyrosyl-D-methionylglycyl-L-phenylalanyl-1-(aminomethyl)-adamantan-hydrochlorid der folgenden Formel
H—-Tyr— (DJ—Met—Gly—Phe—HN-CH
.HCl
erhalten.
Für: G. D. Searle & Co., Skokie, 111., V.St.A.
Dr.H.Chr.Beil Rechtsanwalt
13ÖÖ2B/0627
ORIGINAL INSPECTED

Claims (17)

  1. Patentansp r ü c he
    W— X GIy— Y — Z
    worin W Tyrosin oder einen Rest der Formel
    worin R-, R^ und R-. jeweils unabhängig voneinander Wasserstoff oder einen Alkylrest mit I bis 4 C-Atomen sind, X Methionin, Methioninsulfoxid, Dehydro-^ aminobuttersäure, 1-Aminocyclopropancarbonsäure, Alanin, O-Methylhomoserin, Prolin oder Norleucin, Y Phenylalanin, Dehydrophenylalanin, Cyclohexylalanin oder einen Rest der Formel
    worin R. Wasserstoff oder einen Alkylrest mit 1 bis 4 C-Atomen und M Wasserstoff, Stickstoff oder Halogen
    sind,
    Z einen Rest der Formel
    130025/0627
    ORlGfNAL INSPECTED
    HN (CH,) ·
    30A4793
    worin R,- Wasserstoff, Carboxyl, Methoxycarbonyl, Carboxamid oder Hydroxymethyl und η 0, 1 oder 2 sind, einen Rest der Formel
    HN (CH^)
  2. 2. η
    worin R5 und η vorstehende Bedeutung haben, einen Rest der Formel
    worin Rj. und η vorstehende Bedeutung haben, einen Rest der Formel
    worin R1- und η vorstehende Bedeutung haben,
    130025/0827
    einen Rest der Formel
    worin Rj- und η vorstehende Bedeutung haben oder einen Rest der Formel
    -HN
    worin R^ und η vorstehende Bedeutung haben, bedeuten, wobei die stereochemische Konfiguration von jedem der optisch aktiven Aminosäurereste unabhängig voneinander D, L oder DL sein kann, und deren pharmakologisch verträgliche Salze.
    2. Verbindung nach Anspruch 1, worin W, X und Y vorstehende Bedeutung haben und Z einen Rest der Formel
    HN-
    (CH2>n
    bedeutet, worin R5 Wasserstoff, Carboxyl, Methoxycarbonyl, Carboxamid oder Hydroxymethyl und η 0, 1 oder 2 bedeuten, wobei die stereochemische Konfiguration von jedem der optiych aktiven Aminosäurereste unabhängig voneinander D, L oder DL sein kann, und deren pharmakologisch verträgliche Salze.
    130025/0827
    ORIGINAL INSPECTED
  3. 3. Verbindung nach Anspruch 2 der Formel
    W X — GIy Y— HN
    worin W, X und Y vorstehende Bedeutung haben und R^ Wasserstoff oder Methoxycarbonyl bedeutet, wobei die stereochemische Konfiguration von jedem der optisch aktiven Aminosäurereste unabhängig voneinander D, L oder DL sein kann und deren pharmakologisch verträgliche Salze,
  4. 4. Verbindung nach Anspruch 2 der Formel
    W — X — GIy — Y—HN
    worin W Tyrosin, 2,6-Dimethyltyrosin, ß,ß-Dimethyltyrosin
    oder N-MethyItyrosin,
    X Methionin, Methxonxnsulfoxxd, 1-Aminocyclopropancarbonsäure, Alanin, Prolin oder Norleucin, Y Phenylalanin, N-Methylphenylalanin oder p-Nitrophenyl-
    alanin,
    R5 Wasserstoff, Carboxyl, Methoxycarbonyl, Carboxamid
    oder Hydroxymethyl und η 0 oder 1 bedeuten, wobei die stereochemische Konfiguration von jedem der optisch aktiven Aminosäurereste unabhängig voneinander D, L oder DL sein kann, und deren pharmakologisch verträgliche Salze.
    130025/0627
  5. 5. Verbindung nach Anspruch 2 der Formel
    W X GIy Y HN
    worin W Tyrosin, 2,6-Dimethyltyrosin, β,β-Dimethyltyrosin
    oder N-MethyItyrosin,
    X Methionin, Methioninsulfoxid/ 1-Aminocyclopropancarbonsäure, Alanin, Prolin oder Norleucin, Υ Phenylalanin, N-Methylphenylalanin oder p-Nitrophenyl-
    alanin und
    Rr Wasserstoff oder Methoxycarbonyl bedeuten, wobei die stereochemische Konfiguration von jedem der optisch aktiven Aminosäurereste unabhängig voneinander D, L oder DL sein kann, und deren pharmakologisch verträgliche Salze.
  6. 6. Verbindung nach Anspruch 4 der Formel
    H—Tyr— (D) — Met—Gly—Phe—HN-
    (CH2>n
    worin R5 Wasserstoff, Carboxyl, Methoxycarbonyl, Carboxamid oder Hydroxymethyl und η 0 oder 1 bedeuten, wobei die stereochemische Konfiguration von jedem der optisch aktiven Aminosäurereste unabhängig voneinander D, L oder DL sein kann, und deren pharmakologisch verträgliche Salze.
  7. 7. Verbindung nach Anspruch 1, worin W, X und Y die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben und Z einen Rest
    130026/0627
    der Formel
    bedeutet, worin R Wasserstoff, Carboxyl, Methoxycarbonyl, Carboxamid oder Hydroxymethyl und η 0, 1 oder 2 bedeuten, wobei die stereochemische Konfiguration von jedem der optisch aktiven Aminosäurereste unabhängig voneinander D, L oder DL sein kann, und deren pharmakoigisch verträgliche
    Salze.
  8. 8. Verbindung nach Anspruch 7 der Formel
    w-
    X-
    ■Gly—
    worin W, X und Y die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben und R5 Wasserstoff oder Methoxycarbonyl bedeutet, wobei die stereochemische Konfiguration von jedem der optisch aktiven Aminosäurereste unabhängig voneinander D, L oder DL sein kann, und deren pharmakologisch verträgliche Salze.
  9. 9. Verbindung nach Anspruch 7 der Formel
    W X GIy Y HN
    ζ η
    130025/Q627
    worin W Tyrosin, 2,6-Dimethy!tyrosin, ß,ß-Dimethyltyrosin oder N-Methyltyrosin,
    X Methionin, Methioninsulfoxid, 1-Aminocyclopropancarbonsäure, Alanin, Prolin oder Norleucin, Y Phenylalanin, N-Methylphenylalanin oder p-Nitrophenylalanin,
    R5 Wasserstoff, Carboxyl, Methoxycarbonyl, Carboxamid
    oder Hydroxymethyl und η 0 oder 1 bedeuten, wobei die stereochemische Konfiguration von jedem der optisch aktiven Aminosäurereste unabhängig voneinander D, L oder DL sein kann, und deren pharmakologisch verträgliche Salze.
  10. 10. Verbindung nach Anspruch 7 der Formel
    worin W Tyrosin, 2,6-Dimethyltyrosin, ß,ß-Dimethyltyrosin oder N-Methyltyrosin,
    X Methionin, Methioninsulfoxid, 1-Aminocyclopropancarbonsäure, Alanin, Prolin oder Norleucin, Y Phenylalanin, N-Methylphenylalanin oder p-Nitrophenylalanin, und
    Rc Wasserstoff oder Methoxycarbonyl bedeuten,, wobei die stereochemische Konfiguration von jedem der optisch aktiven Aminosäurereste unabhängig voneinander D, L oder DL sein kann, und deren pharmakologisch verträgliche Salze.
    130025/0627
  11. 11. Verbindung nach Anspruch 7 der Formel
    H Tyr (D) Met GIy Phe—HN (CH )
    2 η
    worin R5Wasserstoff, Carboxyl, Methoxycarbonyl, Carboxamid oder Hydroxymethyl und η 0 oder 1 bedeuten, wobei die stereochemische Konfiguration von jedem der optisch aktiven Aminosäurereste unabhängig voneinander D, L oder DL sein kann, und deren pharmakologisch verträgliche Salze.
  12. 12. Methyl-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-S-amino-1-adamantancarboxylatsulfoxid.
  13. 13. L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-i-aminoadamantan.
  14. 14. Methyl-2,6-dimethyl-DL-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarboxylat.
  15. 15. Methyl-L-tyrosyl-D-norleucyl-glycyl-L-phenylalanyl-S-amino-1-adamantancarboxylat.
  16. 16. Methyl-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-N-methyl-L-phenylalanyl-3~amino-1-adamantancarboxylat.
  17. 17. Methyl-N-methyl-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-N-methyl-L-phenylalanyl-3-amino-1-adamantancarboxylat,
    130025/0627
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