DE1235322B

DE1235322B - Verfahren zur Herstellung von 7-Oxo-desacetamido-colchicinderivaten

Info

Publication number: DE1235322B
Application number: DER38144A
Authority: DE
Inventors: Dr Georges Muller; Andre Poittevin
Original assignee: Roussel Uclaf SA
Current assignee: Sanofi Aventis France
Priority date: 1963-06-19
Filing date: 1964-06-16
Publication date: 1967-03-02
Also published as: ES301169A1; DE1620200B2; NL6406936A; US3393240A; GB1065393A; DE1620200A1; FR1375049A; AT244510B; DE1620200C3; NL122491C; DK104629C; SE343852B; BE649506A; CH435251A; BR6460060D0

Description

DEUTSCHES •flflPWW' PATENTAMT Deutsche KL: 12 ρ -11/01

AUSLEGESCHRIFT

Nummer: 1235 322

Aktenzeichen: R 38144IV d/12 ρ

1 235 322 Anmeldetag: 16.Juni 1964

Auslegetag: 2. März 1967

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von 7-Oxo-desacetamido-colchicin-derivaten der allgemeinen Formel

CH₃O ^ ^

Verfahren zur Herstellung

von 7-Oxo-desacetamido-colchicinderivaten

CH_sO

CH₃O

4a	6
12b	7
\l2a	*/
/ 12	\ 8
11	9

O-R

in der R einen Alkylrest bedeutet. (Das Grundgerüst der Colchicinderivate ist nach dem System RRJ 3923 des Ringindex, 2. Auflage, 1960, numeriert.)

Diese Verbindungen besitzen interessante physiologische Eigenschaften und können unter anderem zur Herstellung anderer Derivate mit wertvollen physiologischen Eigenschaften dienen. Die Verbindungen der allgemeinen Formel I besitzen eine starke antimitotische Wirkung und sind relativ weniger toxisch als die gewöhnhchen Colchicinderivate. Sie können zur Behandlung von myeloider Leukämie, cutaner Neoplasie, Lymphosarkom, Tumoren des Verdauungstraktes und ganz allgemein von Carcinomen verwendet werden. Andererseits können sie industriell in der Landwirtschaft für Mitose-Modifikationen und zum Hervorrufen von Polyploidie angewandt werden, sei es durch Berieseln der Kulturböden mit wäßrigen Lösungen oder Suspensionen der Produkte oder durch vorherige Behandlung der Samen mit den Produkten direkt oder verdünnt in einem Lösungs- oder Trägermittel.

7-Oxo-desacetamido-colchicin wurde hinsichtlich seiner antimitotischen Wirksamkeit nach dem Verfahren von R. Jequier, D. Branceni und M. Peterfalvi (Arch. Int. Pharmacodyn, 103 [1955], S. 243) mit Colchicin verglichen. Dabei wurde folgendermaßen verfahren:

Mehrere Dosen der zu untersuchenden Verbindung wurden Gruppen von zwei oder drei Ratten subkutan injiziert, wobei das injizierte Volumen 0,2 cm³ pro 100 g Körpergewicht ausmachte. 6 Stunden nach der Injektion wurden die Tiere getötet, aus dem Oberschenkelknochenmark wurden Ausstrichpräparate hergestellt und nach May—Gr üη w a 1 d—Giem s a gefärbt. Dann wurden bei jedem Präparat 1000 Zellen gezählt. Die DAM 100, das ist die antimitotische Dosis, die bei 1000 ZeUen 100 Mitosen liefert, wurde Anmelder:

Roussel-Uclaf, Paris

Vertreter:

Dr. F. Zumstein,

Dipl.-Chem. Dr. rer. nat. Ε. Assmann
und Dipl.-Chem. Dr. R. Koenigsberger,
Patentanwälte, München 2, Bräuhausstr. 4

Als Erfinder benannt:

Dr. Georges Muller, Nogent, Marne, Seine;
Andre Poittevin, Les Lilas, Seine (Frankreich)

Beanspruchte Priorität:

Frankreich vom 19. Juni 1963 (938 630)

an Hand der graphischen Darstellung bestimmt, die den gefundenen mitotischen Index (Zellen in Mitrose pro Gesamtzahl der Zellen) als Funktion des Logarithmus der Dosierungsmenge wiedergab. Dabei wurde für das 7-Oxo-desacetamido-colchicin eine DAM 100 von 1,4 mg/kg gefunden, während für das Colchicin unter den gleichen Bedingungen eine DAM 100 von 0,7 mg/kg ermittelt wurde. Da das 7-Oxo-desacetamido-colchicin eine DL₅₀ von 56 mg/ kg±7 mg aufweist, während das Colchicin selbst eine DL₅₀ von 2 mg/kg aufweist, ist der mit der vorliegenden Verbindung verbundene technische Fortschritt klar ersichtlich, da die obengenannte erfindungsgemäß erhältliche Verbindung bei annähernd gleicher antimitotischer Wirksamkeit mehr als 20mal weniger toxisch ist als das Colchicin, was einen außerordentlichen Vorteil darstellt.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel I werden dadurch hergestellt, daß man in an sich bekannter Weise N-Desacetyl-colchicein (II) mit N-Chlor-succinimid in saurem Medium umsetzt, das entstandene N-Chlor-N-desacetyl-colchicein (III) mit einem Alkalihydroxyd umsetzt, das erhaltene 7-Imino-desacetamido-colchicein (IV) einer sauren Hydrolyse unterwirft, das gebildete 7-Oxo-desacetamido-colchicein (V) mit einem Diazoalkan reagieren läßt und aus dem erhaltenen Gemisch aus 7-Oxo-lO-desmethoxy-lO-alkoxy-desacetamido-colchicin (I) und 7-Oxo-9-desmeth-

709 517/530

oxy-9-alkoxy-desacetamido-isocolchicin (VI) ersteres durch fraktionierte Kristallisation abtrennt.

Die Umsetzung von N-Desacetyl-colchicein mit N-Chlor-succinimid wird vorzugsweise in wäßriger Essigsäure durchgeführt. Unter diesen Bedingungen kristallisiert das gebildete N-Chlor-N-desacetyl-colchicein sofort aus.

Die Chlorwasserstoffabspaltung aus N-Chlor-N-desacetyl-colchicein wird z. B. durch Umsetzung dieser Verbindung mit Kalilauge oder Natronlauge erzielt. Man arbeitet vorteilhafterweise in alkoholischem Medium, z. B. in Methanol oder Äthanol. Das hierbei entstehende 7-Imino-desacetamido-colchicein ist zum Unterschied von den üblichen Ketiminen relativ stabil und kann daher aus dem N-Chlorderivat mit befriedigenden Ausbeuten erhalten werden.

Die saure Hydrolyse des Ketimins der Formel IV kann leicht mit Hilfe einer organischen Säure durchgeführt werden, z. B. mit wäßriger Essigsäure.

Die Umsetzung des 7-Oxo-desacetamido-colchiceins mit einem Diazoalkan wird nach an sich bekannten Methoden in Methylenchlorid, und vorzugsweise in Gegenwart von Methanol, durchgeführt.

Aus dem Gemisch aus 7-Oxo-10-desmethoxy-10-alkoxy-desacetamido-colchicin und 7-Oxo-9-desmethoxy-9-alkoxy-desacetamido-isocolchicin trennt man erteres durch fraktionierte Kristallisation, z. B. aus Methanol, ab.

Das folgende Beispiel erläutert die Erfindung.

30

Beispiel
7-Oxo-desacetamido-colchicin (I, R = CH₃)

A. N-Chlor-N-desacetyl-colchicein (III)

OD

Man löst 20 g N-Desacetyl-colchicin (II) in 10 ml Essigsäure und 200 ml Wasser, indem man 5 Minuten bei Zimmertemperatur rührt.

Sodann fügt man eine Lösung von 8,2 g N-Chlorsuccinimid in 82 ml Essigsäure bei 60° C zu und rührt die Reaktionsmischung 15 Minuten bei Zimmertemperatur. Danach saugt man ab, wäscht mit Wasser, trocknet im Vakuum und erhält 17,2 g N-Chlor-N-desacetyl-colchicein (III); F. 170 bis 174°C, [ocjg = -320±10°C (c = 0,5%, Chloroform), das man ohne weitere Reinigung weiterverarbeitet.

Das Produkt erhält man in Form von Nadeln, die unlöslich sind in Wasser, in verdünnten wäßrigen Säuren, in Äther und Benzol, wenig löslich in Alkoholen und löslich in Aceton und Chloroform.

Die Verbindung ist in der Literatur noch nicht beschrieben.

B. 7-Imino-desacetamido-colchicein (IV)

Man löst 17,2 g N-Chlor-N-desacetyl-colchicein (III) in 85 ml einer 2normalen methanolischen Kalilauge und läßt 17 Stunden bei Zimmertemperatur stehen. Sodann versetzt man mit Wasser und danach tropfenweise mit Essigsäure bis zu einem pH-Wert von 6,5 bis 6,7.

Man kühlt auf Eis, saugt das gebildete Produkt ab, wäscht mit Wasser, teigt mit Aceton an, trocknet und erhält 12,45 g 7-Imino-desacetamido-colchicein (IV), F. 130° C (wäßriges Solvat), das man ohne weitere Reinigung weiterverarbeitet.

Zur Analyse kristallisiert man das erhaltene Produkt aus Methanol um und erhält ein methanolisches Solvat vom Schmelzpunkt 150° C₅ das nach dem Um-

kristallisieren aus Essigsäureäthylester ein Produkt mit einem Schmelzpunkt von 178° C ergibt. Dieses Produkt erhält man in Form von Nadeln, die unlöslich sind in Wasser, in Äther und Benzol, wenig löslich in Aceton und löslich in verdünnten wäßrigen Säuren und Alkalien, in Alkoholen und in Chloroform.

Analyse: C₁₉H₁₉O₅N; Molgewicht 341,35.
Berechnet ... C 66,85, H 5,61, N 4,10, O 23,44°/₀; gefunden ... C 66,8, H 5,7, N 3,8, 0 23,7%.

Diese Verbindung wurde in der Literatur noch nicht beschrieben.

C. 7-Oxo-desacetamidö-colchicein (V)

Man löst 12,45 g 7-Inuno-desacetamido-colchicein (IV) in 125 ml 50%igar Essigsäure, erhitzt 30 Minuten auf 50 ^aC und fügt langsam 125 ml Wasser zu.

Nach Kratzen kristallisiert 7-Oxo-desacetamidocolchicein aus. Man kühlt auf Eis, saugt ab, wäscht mit Wasser, trocknet und erhält 8,7 g 7-Oxo-desacetamido-colchicein (V), F. 154° C, das ohne weitere Reinigung weiterverarbeitet werden kann.

Das erhaltene Produkt schmilzt nach dem Umkristallisieren aus einem Gemisch von Methylenchlorid und Essigsäureäthylester bei 157 °C und kristallisiert in Form von Stäbchen, die unlöslich sind in Wasser, in verdünnten wäßrigen Säuren und Alkalien, in Äther und Benzol, wenig löslich in Aceton und löslich in Alkoholen und in Chloroform.

Analyse: C₁₉H₁₈O₆; Molgewicht 342,33.

Berechnet... C 66,66, H 5,30%;
gefunden ... C66,6, H5,4%.

Diese Verbindung ist in der Literatur noch nicht beschrieben.

D. 7-Oxo-desacetamido-colchicin (I, R = CH₃)

Man löst 9,2 g 7-Oxo-desacetamido-colchicein (V) in 90 ml einer Mischung aus Methylenchlorid und 50%igem Methanol, kühlt die Lösung auf 0°C ab und fügt innerhalb von 10 Minuten 180 ml einer l%igen Lösung von Diazomethan in Methylenchlorid zu.

Man rührt 1 Stunde bei 0°C, versetzt sodann mit einigen Tropfen Essigsäure und destilliert im Vakuum zur Trockne.

Man nimmt das erhaltene Produkt in 60 ml einer Mischung aus Methylenchlorid und Methanol (1: 3) auf, destilliert das Methylenchlorid ab, läßt 10 Minuten stehen, saugt ab, trocknet und erhält als erste Fraktion 3,78 g 7-Oxo-desacetamido-colchicin, das man aus einem Gemisch aus Methylenchlorid und Essigsäureäthylester umkristallisiert, wobei 2,93 g 7-Oxo-desacetamido-colchicin erhalten werden; F. 230° C

Das Produkt erhält man in Form von rechteckigen Stäbchen, die unlöslich sind in Wasser, in verdünnten wäßrigen Säuren und Alkalien, in Äther und Benzol, wenig löslich in Alkoholen und löslich in Aceton und Chloroform.

Analyse: C₂₀H₂₀O₆; Molgewicht 356,36.
Berechnet ... C 67,4, H 5,66%;
gefunden ... C 67,1, H 5,7%.

Diese Verbindung wurde in der Literatur noch nicht beschrieben.

Claims

Patentanspruch:

Verfahren zur Herstellung von 7-Oxo-desacetamido-colchicin-derivaten der allgemeinen Formel CH_aO

CH₃O

O-R

in der R einen Alkylrest bedeutet, dadurch gekennzeichnet, daß man in an sich bekannter Weise N-Desacetyl-colchicein (II) mit N-Chlor-succinimid in saurem Medium umsetzt, das entstandene N-Chlor-N-desacetyl-colchicein (III) mit einem Alkalihydroxyd umsetzt, das erhaltene 7-Imino-desacetamido-colchicein (TV) einer sauren Hydrolyse unterwirft, das gebildete 7-Oxodesacetamido-colchicein (V) mit einem Diazoalkan umsetzt und aus dem erhaltenen Gemisch aus7-Oxo-10-desmethoxy-10-alkoxy-desacetamidocolchicin (I) und 7-Oxo-9-desmethoxy-9-alkoxydesacetamido-isocolchicin (VI) ersteres durch fraktionierte Kristallisation abtrennt.

In Betracht gezogene Druckschriften:
Deutsche Patentschriften Nr. 867 093, 896 803;
deutsche Auslegeschrift Nr. 1 018 872;
Chem. Ber., 88 (1955), S. 883 fF.;
Liebigs Ann. der Chemie, 531 (1942), S. 88ff.; Helv. chim. acta, 44 (1961), S. 540 ff.

Hierzu 1 Blatt Zeichnungen