DE1184770C2 - Verfahren zur Herstellung von antibacteriell wirksamen Peptiden - Google Patents

Description

BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLAND

DEUTSCHES

PATENTAMT

PATENTSCHRIFT

Internat. KL: C 07 c

Deutsche KX: 12 q- 6/01

Nummer:

Aktenzeichen:

Anmeldetag:

H45503IVb/12q
17. April 1962
7. Januar 1965
2. September 1965

Auslegetag:

Ausgabetag:

Patentschrift stimmt mit der Auslegeschrift überein

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Peptiden der allgemeinen Formel I

H₂N-R—CO-NH — R - CO-,

Lf- NH — R—CO -1—[-

.]_[_ NH - R — CO -]—X

worin /I₁ und /J₂ für O oder 1 stehen, X eine Hydroxy-, Alkoxy-, Amino-, Monoalkylamino-, Dialkylamino- oder Hydrazinogruppe darstellt und die Symbole R je einen von der «-Amino- und der Carboxylgruppe befreiten Rest einer «-Aminocarbonsäure bedeuten, wobei mindestens einer der R-Reste eine Aminogruppe enthält und wobei mindestens eine Aminogruppe des Moleküls einen Acylrest einer langkettigen gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Carbonsäure trägt oder das Symbol X einen Monoalkylamino- oder Dialkylaminorest mit einem langkettigen Alkylsubstituenten bedeutet, und Säureadditiohssalzen dieser Verbindungen.

Die durch vorstehende allgemeine Formel I veranschaulichten Verbindungen sind Di-, Tri- oder Tetrapeptide, die sich von «-Aminocarbonsäuren, wie Serin, Phenylalanin, Tyrosin, Leucin, insbesondere von basischen «-Aminocarbonsäuren, wie Lysin, Arginin/ Ornithin, «,y-Diaminobuttersäure, oc,ß-Diamino-propionsäure, ableiten und «-amidartig verknüpft sind. Bevorzugt sind Dipeptide und als Bausteine essentielle Aminosäuren, insbesondere L-Lysin. Die Alkoxygruppe in der Bedeutung für das Symbol X ist insbesondere eine niedere Alkoxygruppe, wie die Methoxy- oder Äthoxygruppe. Der langkettige Acylrest leitet sich vorteilhaft von einer mindestens 10 Kohlenstoffatome enthaltenden Carbonsäure ab. Bevorzugte Reste solcher Art sind z. B. der Palmitoyl- oder der Stearoylrest. Der langkettige, in einer endständigen Monoalkyl- bzw. Dialkylaminogruppe gegebenenfalls vorhandene Alkylrest enthält ebenfalls bevorzugt mindestens 10 Kohlenstoffatome. Als Beispiel eines solchen Restes sei der Cetyl- und Laurylrest genannt.

Die durch die R-Symbole dargestellten Reste können sich von gleichen wie von verschiedenartigen «-Aminocarbonsäuren ableiten.

Verfahren zur Herstellung von antibacteriell
wirksamen Peptklen

Patentiert für:

F. Hoffmann-La Roche & Co. Aktiengesellschaft, Basel (Schweiz)

Vertreter:

Dr. G. Schmitt, Rechtsanwalt,

Lörrach (Bad.), Friedrichstr. 3

Als Erfinder benannt:

Dr. Peter Quitt, Basel;

Dr. Rolf Studer, Neuallschwil;

Dr. Karl Vogler, Riehen (Schweiz)

Beanspruchte Priorität:

Schweiz vom 1. Juni 1961 (6366),

vom 1. Dezember 1961 (13 988)

Das erfindungsgemäße Verfahren besteht darin, daß man die Peptide der allgemeinen Formel I nach an sich bekannten Methoden der Peptidchemie aufbaut. Man kann diese Peptide aus entsprechend geschützten «-Aminocarbonsäuren bzw. entsprechend geschützten Peptiden unter Verwendung von Kondensationsmitteln oder über gemischte Anhydride, Azide, aktivierte Ester oder Säurechloride aufbauen, die endständige Carboxylfunktion gegebenenfalls zur freien Carboxylgruppe verseifen öder in eine Amido-, N-Monoalkylamido-, Ν,Ν-Dialkylamido- oder Hydrazidgruppe überführen, die Schutzgruppen anschließend entfernen und die erhaltenen Peptide gegebenenfalls in Salze überführen, wobei der langkettige Acylrest durch Austausch einer selektiv abspaltbaren Schutzgruppe nachträglich eingeführt werden kann.

Nach einer bevorzugten Ausführungsart des erfindungsgemäßen Verfahrens setzt man eine Verbindung der allgemeinen Formel II

H₂N- R — CO-[- NH — R — CO -]—[- NH- R-CO -]— Y mit einer Verbindung der allgemeinen Formel III

H₂N — R— CO-[- NH — R — CO -]—[- NH— R— CO-fc- X'

509 653/267

3 4

worin α, b, c und d für O oder 1 stehen und die Summe Carboxylgruppe befreiten Rest einer Λ-Aminocarbon-

dieser Indizes 0, 1 oder 2 beträgt, Y ein Halogenatom, säure bedeuten, wobei mindestens einer der R-Reste

eine Hydroxy- oder Azidogruppe, eine gegebenenfalls eine Aminogruppe enthält und wobei ferner alle in

nitrierte Phenoxygruppe, eine Phenylmercaptogruppe den Verbindungen II und ΙΠ vorhandenen Amino-

oder den Rest eines Anhydrides mit einer anorga- S 'gruppen mit Ausnahme der in der Formel III am

nischen oder organischen Säure, X' eine Alkoxy-, linken Kettenende befindlichen «-Aminogruppe durch

Amino-, Monoalkylamino-, Dialkylaminogruppe oder abspaltbare Schutzgruppen und/oder langkettige Acyl-

eine Hydroxygruppe in Form eines Salzes mit einer reste geschützt sind, unter Abspaltung von HY zu

anorganischen oder tertiären organischen Base und einem Di-, Tri- oder Tetrapeptid der allgemeinen

die Symbole R je einen von der «-Amino- und der io Formel

H₂N-R-CO—NH-R —CO-I-NH-R —CO-]-[-NH — R —CO-]—X' IV

umsetzt, worin R und X' dasselbe wie oben bedeuten, 15 geführter Peptidkondensation einzuführen, z. B. durch Tt₁ und Ti₂ für O oder 1 stehen und alle im Molekül Einwirken von entsprechenden Säurechloridett, wie vorhandenen Aminogruppen, wie oben angegeben, Palmitoylchlorid.

geschützt sind, daß man erhaltene Peptide, die weder Im nachfolgenden sollen einige Ausführungsformen

einen langkettigen N-Acylrest noch in der endständigen des erfindungsgemäßen Verfahrens näher erläutert COX'-Gruppe einen langkettigen N-Alkylsubstituenten ao werden:

enthalten, durch Austausch selektiv abspaltbarer Carbodiimidmethode

Schutzgruppen gegen mindestens einen langkettigen

N-Acylrest bzw. durch Einführung eines langkettigen Diese Methode kann dann angewendet werden,

N-Alkylsubstituenten in die endständige Carboxyl- wenn man eine Verbindung der Formel II mit funktion in entsprechende, durch langkettige N-Acyl- as Y = OH, also eine Aminocarbpnsäure bzw. ein Di- bzw. N-Alkylgruppen substituierte Peptide überführt, oder Tripeptid mit freier endständiger Carboxylgruppe gegebenenfalls das erhaltene Produkt in ein Hydrazid als Ausgangsmaterial verwendet. Die besteht darin,, überführt, daß man aus dem so erhaltenen Peptid die daß man die Kondensation der beiden Peptidaufbauabspaltbaren Schutzgruppen abspaltet und gegebenen- stücke der Formain II und ΠΙ in Gegenwart eines falls die erhaltenen Verbindungen in Säureadditions- 30 Kondensationsmittels, wie eines Carbodiimides, ζ. Β. salze umwandelt. Dicyclohexylcarbodiimid, oder Carbonyldiimidazol,

Wie in der Peptidchemie üblich, werden die an der vornimmt. Die Reaktion wird vorteilhaft bei niedriger Bildung der Peptidbindung nicht beteiligten reaktiven Temperatur in einem Lösungsmittel, wie z. B. Chloro-Grupperi vor der Kondensation geschützt. Hinsichtlich form, Dimethylformamid, Essigester, ausgeführt, woder Carboxylgruppe erreicht man dies in einfacher 35 bei der entstandene Harnstoff durch Filtration ent-Weise durch Verwendung des entsprechenden Esters fernt wird, das Peptid aber in Lösung bleiben soll, das oder des Amids oder durch Salzbildung mit einer dann aus dem Filtrat isoliert werden kann, anorganischen oder tertiären organischen Base. Freie . ., ^_nJ

Aminogruppen können z. B. durch Überführung in Azidmetnode

die entsprechenden Carbobenzoxyderivate geschützt 4° Bei dieser Methode wird die Peptidbindung durch werden, z. B. durch Einwirkung von Carbobenzoxy- Wechselwirkung eines Säureazides (Y = N₃) mit einer chlorid nach S c h ο 11 e η—B a u m a η η. Die Carbo- Aminogruppe gebildet Das Azid erhält man durch benzoxy-Schutzgruppe kann nach durchgeführter Einwirken von salpetriger Säure auf das entsprechende Kondensation durch katalytische Hydrierung wieder Säurehydrazid. Die Reaktion wird zweckmäßigerweise abgespalten werden. Der bzw. die langkettigen 45 in Lösung, z. B. in Essigester, Dimethylformamid, N-Acylreste wirken bei der Kondensation ebenfalls usw., gegebenenfalls in Gegenwart von Essigsäure, als Schutzgruppen. Eine weitere Möglichkeit des bei tiefer Temperatur durchgeführt. Schutzes der Aminosäuren besteht in der Über- _.. ,, ., , ,

führung in, Phthalylderivate, z. B. durch Erhitzen der Saurechlondmethode

Aminosäure bzw. des Peptides mit Phthalsäure- 50 Diese Methode besteht darin, daß man die Peptidänhydrid. Nach erfolgter Kondensation erhält man bindung durch Umsatz eines Säurechlorids (Y = CI) nach Zusatz von Hydraziden und durch Behandeln mit einer Aminogruppe bildet. Es ist dabei zweckmit Salzsäure eine Freisetzung der Aminogruppen. mäßig, von mittels Thionylchlorid gewonnenen Die Aminogruppen können auch durch Formylreste Carbobenzoxyaminosäurechloriden auszugehen, die geschützt werden, wozu man auf die Aminosäuren 55 mit einem Aminosäureester (X' = Alkoxy) in Gegenbzw. Peptide Ameisensäure in Gegenwart von Essig- wart einer Base unter Kühlung gekoppelt werden, säureanhydrid einwirken läßt. '

Bei Vorliegen von sowohl durch Formyl- als auch Synthese unter Verwendung gemischter Anhydride Carbobenzoxyreste geschützten Aminogruppen im

Molekül läßt sich eine selektive Abspaltung erzielen, 60 Diese Synthese besteht darin, daß die bei der Konindem man z. B. nur die Carbobenzoxygruppen densation die Peptidbindung eingehende Carboxyldurch katalytische Hydrierung oder mit Bromwasser- funktion -COY in Form eines in der Peptidchemie stoffsäure—Essigsäure abspaltet und dabei die Formyl- üblichen gemischten Anhydrides mit einer organischen gruppen unbeeinflußt läßt. Man kann jedoch auch die oder anorganischen Säure vorliegt. Man geht dabei Formylgruppen selektiv abspalten, z. B. durch Mineral- 65 zweckmäßigerweise so vor, daß man eine Verbindung säuren in der Kälte, wobei die Carbobenzoxygruppen der Formel II mit Y = OH in einem inerten Lösungsunbeeinflußt bleiben. Auf diese Weise ist es möglich, mittel, wie z. B. Tetrahydrofuran, mit einer Base, ά. Β. die langkettigen N-Acylreste auch erst nach durch- Triäthylamin, behandelt, auf das so gebildete Salz bei

üefer Temperatur einer Chlorkohlensäureester einwirken läßt und das entstandene gemischte Anhydrid ohne Isolierung mit einer Verbindung der Formel III, z. B. mit einem Aminocarbonsäureester (X' = Alkoxy) oder mit dem Na-SaIz einer Aminocarbonsäure (X'.= ONa) umsetzt Als phlorkohlensäureester können z. B. der Methyl-, Äthyl- oder tert-Butylester verwendet werden. Zur Herstellung von reaktiven Anhydriden kommen unter anderem auch Schwefeltrioxyd in Dimethylformamid sowie Diäthylchlorphosphit 1(C₂HsO)₂P — CIf oder Tetraäthylpyrophosphit [(C₂HsO)₂P — O — P(OC₂Hs)₂] in Betracht.

Synthese unter Verwendung aktivierter Ester

Diese Synthese besteht darin, daß die Carboxylfunktion -COY der Verbindung der Formel II als sogenannter aktivierter Ester vorliegt, z. B. als p-Nitrophenylester. Dieser kann aus einer geschützten Aminocarbonsäure in Gegenwart von Pyridin mittels Di- ao p-nitrophenylsuffit (NO₂-C₆H₄-SO-CeH₄-NO₂) gewonnen werden und geht durch Umsatz mit einem Aminosäureester (X' der Formel ΙΠ = Alkoxy) bei Zimmertemperatur die Peptidbindung ein. Das Reaktionsprodukt kann durch Kristallisation aufgearbeitet werden. Als aktivierte Ester können beispielsweise der p-Nitrophenyl-, 3,5-Dinitrophenyl-, Thiophenylester Verwendung finden.

Die Verfahrensprodukte zeichnen sich durch antibakterielle Wirksamkeit sowohl gegen grampositive als auch gramnegative pathogene und apathogene Bakterine sowie gegen Hefen aus. Die Verbindungen sind sehr wenig toxisch. Sie zersetzen sich unter Einwirkung von proteolytischen Enzymen, wobei Spaltprodukte gebildet werden, die keinerlei antibakterielle Wirksamkeit mehr entfalten. Die Verbindungen können daher als Konservierungs- und Desinfektionsmittel verwendet werden.

Die Verfahrensprodukte eignen sich besonders zur Desinfektion von Räumen, Anlagen, Apparaturen, Gefäßen usw. der Lebens- und Futtermittelindustrie, beispielsweise in der Milchwirtschaft, wo z. B. die folgenden Indikationsgebiete in Betracht fallen: Desinfektion der Hände des Melkpersonals, der Kuheuter, von Milchgefäßen, Melkmaschinen, Rohrleitungen und Molkereianlagen usw.

Die Verfahrensprodukte haben ferner Bedeutung als Wunddesmfektionsmittel (Antiseptika).

In den folgenden Beispielen werden folgende Abkürzungen verwendet:

Z = Carbobenzoxy

CH₂OCO-

PaIm = Palmitoyl

DMF = Dimethylformamid = (CH₃)₂NHCO

Arg = Arginyl

= — HN- CH- CO-

(CH₂V
NH-C-NH₂

¹ '■ II ■.■;·■·■

NH

55

60 Nitroarg = Nitroarginyl

= — HN- CH- CO-

(CH₂)₃
NH-C-NHNO₂

NH

Dab = «,y-Diaminobutyryl

= —HN-CH-CO-

(CH₂V

NH₂
Lys = Lysyl

= —HN-CH-CO-

(CH₂),

NH₂
Om = Ornithyl

= — HN — CH — CO —

(CH₂),

NH₂
Ser = Seryl

= —HN-CH-CO-

CH₂OH Leu = Leucyl

= — HN — CH — CO —

CH₂
CH

CH₃ CH₃ Phe = Phenylalanyl

= —HN-CH ^-CO-

CH₂

Tyr = Tyrosyl

= — HN — CH — CO —

OH

Dementsprechend wird im folgenden z. B. der N"-Pataitoyl-(N«-carbobenzoxy)-L-lysyl-(N^e-carbobenzoxy)-L-Iysin-methylester der Formel

CH₃(CHj)₁₄ — CO — NH — CH — CO — NH — CH — COOCH₃

I I

(CH₂J₄ (CH₂),

I I

NH NH

I I ,

C₆H₅CH₂OCO COOCH₂C₆H₅

als N^-Palm-iN'-ZJ-r-Lys-iNT-Z^L-Lys-OCHa bezeichnet und z. B. der L-Nitroargininäthylester der Formel

H₂N- CH- COOC₂H₅

(CH₂),
NH-C-NH-NO₂

Il

als H-L-Nitroarg-OCüHjj.

Antibakterielle Wirkung von Peptiden der im Anspruch !'angegebenen Formel I

Peptid

	Milzbrand bazillen	gramnegativ	Shigelk
Antibakterielle Wirkung (y/lm) Erreger	5 10	E. coli	10 19,5
grampositiv	5 10	10 39	10 19,5
Pneumo- kokken	2,5 2,5	19,5 39	1,25 1,25
5 39	5 5	5 5	5 5
10 39	10 19,5	5 10	. 2,5 2,5
5 10	5 5	19,5 39	10 10
5 156	19,5 19,5	19,5 19,5	5 5
19,5 39	10 10	19,5 19,5	5 10
5 19,5	10 10	39 312	5 10
5 10	19,5 19,5	19,5 78	2,5 5
2,5 5	39 78	10 10	—
5 39	5 5	10 19,5	10 10
2,5 5	19,5 78
5 5
19,5 39

,L-Lysyl-L-lysyl-iN'-palmitoylJ-L-lysin-methylester- JH trihydrochlorid \ A

N^Palmitoyl-L-lysyl-L-lysin-amid-hydrochlorid ..... < .

N^Palmitoyl-L-lysyl-L-lysin-methylester-dihydro- J H chlorid \ A

N'-Palmitoyl-L-lysyl-L-lysin-äthylester-dihydro- J H

chlorid \ A

N^-Myristoyl-L-lysyl-L-lysin-methylester-dihydro- J H chlorid \ A

N^Pentadecancyl-L-lysyl-L-lysin-methylester- (H

dihydrochlorid \ A

N"-Margaroyl-L-lysyl-L-lysin-methylester-dihydf o- J H chlorid \ A

N^-Palmitoyl-L-ornithyl-L-ornithin-methylester- J H

dihydrochlorid [A

N"-Palinitoyl-L-lysyl-L-diammobuttersäure-methyl- J H ester-dihydrochlorid \ A

N^Palmitoyl-L-ornithyl-L-arginin-methylester- J H

dihydrochlorid \ A

N^Palmitoyl-L-arginyl-L-arginin-äthylester-dihydro- J H chlorid 1A

L-Diaminobutyryl-D-diamino-butyryl-D-diamino- , jj

butyryl-N^-palmitoyl-L-diaminobuttersäure- < .

hydrazid-tetrahydrobromid ^

Bemerkungen: H: Absolute hemmende Konzentration in y/ml.

A: Absolute abtötende Konzentration in y/ml.

Beispieli und 16 Stunden bei 0⁰C stehengelassen. Das gebildete

. _. _ ^^_TT dicke Gel wird mit 50 ml DMF verdünnt, auf 5O⁰C

N«-Palm-(N*-Z)-L-Lys-(N*-Z)-L-Lys-OCH_{3 6;}. _{erwännt; wieder au}f 20° C abgekühlt und vom Dicyclo-

100g N^a-Palm-(N«-Z)-L-Lys-OH und 57gH-(N«-Z)- hexylharnstoflf abgenutscht. Man fällt das Filtrat in

L-Lys-OCH₃ werden in 230 ml DMF gelöst, auf —10° C 415°/oiger Natriumchloridlösung, nutscht nach 1 Stunde

abgekühlt, mit 40,8 g Dicyclohexylcarbodiimid versetzt ab, wäscht mit Wasser und trocknet im Vakuum bei

70° C. Nach Umkristallisieren aus Essigester-^-Petroläther erhält man N"-Pahn-(N^£-Z)-L-Lys-(N^e-Z)-L-Lys-OCH₃ vom Schmelzpunkt 123 bis 125°C; [λ]!,⁰ = —8,4° (c = 2 in DMF).

N^PaIm-L-LyS-L-LyS-OCH₃ · 2HCl

50 g N^a-Palm-(N^E-Z)-L-Lys-(N⁸-Z)-L-Lys-OCH₃ werden in 50 ml Eisessig unter Erwärmen gelöst und bei 20° C unter Feuchtigkeitsausschluß mit 150 ml 33°/oiger Bromwasserstoffsäure—Eisessig während IV₂ Stunden geschüttelt. Man entgast 15 Minuten im Wasserstrahlvakuum, verdünnt mit 150 ml Wasser und extrahiert zweimal mit Äther. Die wäßrige Phase wird unter Eiszusatz mit konzentriertem Ammoniak alkalisch gestellt und mehrmals mit Essigester extrahiert. Die Essigesterauszüge werden über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum bei 40° C eingedampft. Der zurückbleibende Sirup wird in 20 ml Methanol gelöst, mit 4normaler methanolischer Salzsäure auf einen pH-Wert von 7 eingestellt und im Vakuum bei 4O⁰C eingedampft. Man kristallisiert aus Aceton und erhält N^a-Palm-L-Lys-L-Lys-OCH₃ · 2HCl vom Schmelzpunkt 210 bis 212°C (Zersetzung); [«]² ₀° = -17° (c = 2 in Wasser).

N«-Palm-(N^e-Z)-L-Lys-(N^e-Z)-L-Lys-OH

26 g N^-Palm-iN^ZH-Lys-iN^ZH-Lys-OCHs löst man in 11 Methanol und verseift während 16 Stunden mit 50 ml 2 η-Natronlauge bei 20° C. Die filtrierte Lösung wird im Vakuum bei 35° C auf ein Volumen von 100 ml eingedampft, in 11 0,01 η-Salzsäure gefällt, abgenutscht, mit Wasser gewaschen und im Vakuum bei 70° C getrocknet. Man kristallisiert aus Essigester—Petroläther und erhält N^a-Palm-(N^e-Z)-L-Lys-(N^e-Z)-L-Lys-OH vom Schmelzpunkt 129 bis 131°C.

N*-Palm-L-Lys-L-Lys-OH · HCl

16 g N^a-Palm-(N^e-Z)-L-Lys-(N^e-Z)-L-Lys-OH in 300 ml Eisessig und 30 ml Wasser werden nach Zusatz von 1 g mit. Palladium aktivierter Kohle hydriert. Der Katalysator wird abgenutscht, das Filtrat im Vakuum bei 45°C eingedampft und der Rückstand zweimal mit Methanol verdampft. Man nimmt in wenig Wasser auf, stellt den pH-Wert mit 1 η-Salzsäure auf 7 und fällt die filtrierte Lösung in Aceton aus. Man erhält N"-Palm-L-Lys-L-Lys-OH · HCl, das sich bei Temperaturen über 180°C zersetzt; [a]™ = -4° (c = 2 in Wasser). .

B ei s pi el 2
N"-Palm-(N^e-Z)-L-Lys-(N^£-Z)-L-Lys-NH₂

20 g N«-Palm-(N^e-Z)-L-Lys-(N^e-Z)-L-Lys-OCH₃ (erhalten gemäß den Angaben im Beispiel 1) in 800 ml Methanol werden bei 25° C mit Ammoniakgas gesättigt und 48 Stunden bei 25°C stehengelassen. Man nutscht ab, wäscht mit viel Wasser, trocknet im Vakuum bei 40° C und kristallisiert aus DMF-Wasser. Das erhaltene N*-Palm-(N^e-Z)-L-Lys-(N^e-Z)-L-LyS-NH₂ schmilzt bei 174 bis 176°C; [«]? = -8,2° (c = 2 in DMF).

N«-Palm-L-Lys-L-Lys-NH₂ · 2HCl

17 g N«-Palm-(N^e-Z)-L-Lys-(N⁸-Z)-L-Lys-NH₂ in

ίο 300 ml Eisessig und 30 ml Wasser werden mit HiKe von 1,7 g mit Palladium aktivierter Kohle hydriert.

Der Katalysator wird abgenutscht und das filtrat im Vakuum bei 45° C eingedampft. Nach zweimaligem Abdampfen des Rückstandes mit Wasser wird in wenig Wasser gelöst, mit 3 η-Salzsäure auf pH-Wert 7 gestellt und mit Aceton ausgefällt. Das gebildete N-'-Palm-L-Lys-L-Lys-NHü · 2HCl schmilzt bei 232 bis 233°C (Zersetzung); [λ]!⁰=-11° (c = 2 in Wasser).

ao .

Beispiel 3

N«-Palm-(N^e-Z)-L-Lys-(N^e-Z)-L-Lys-NHNH₂

26 g N^a-Palm-(N^e-Z)-L-Lys-(N^s-Z)-L-Lys-OCH₃ (erhalten gemäß den Angaben im Beispiel 1) in 400 ml Methanol werden mit 26 ml 100⁰/oigem Hydrazinhydrat versetzt und 15 Minuten auf dem Dampfbad erwärmt. Nach 24 Stunden wird mit 800 ml Wasser vermischt, abgenutscht, mit viel Wasser gewaschen und getrocknet. Man kristallisiert aus DMF—Alkohol und erhält N^a-Pahn-(N^e-Z)-L-Lys-(N^e-Z)-L-Lys-NHNH₂ vom Schmelzpunkt 190 bis 191°C; [«[!? = -10,8° (c= 1 in DMF).

N«-Palm-L-Lys-L-Lys-NHNH₂ · 3HBr

Eine Lösung von 22 g N^a-Palm-(N^e-Z)-L-Lys-(N'-Z)-L-Lys-NHNH₂ in 100 ml Eisessig wird unter Feuchtigkeitsausschluß mit 110 ml 33°/_oigem Bromwasserstoff—Eisessig während I¹I₂ Stunden geschüttelt. Man kristallisiert durch Zusatz von 500 ml absolutem Äther, nutscht ab, wäscht mit viel absolutem Äther und kristallisiert aus Alkohol—Äther um. Das erhaltene N"-Palm-L-Lys-L-Lys-NHNH₂ · 3HBr weist eine Drehung von [α]ο° = -^14,8° (c = 1 in Wasser) auf,

B ei spiel 4

Nach den vorstehend beschriebenen Arbeitsweisen

können die in der folgenden Tabelle aufgeführten Dipeptide erhalten werden. In dieser Tabelle bedeutet

Me = Methanol

Et = Äthanol

Aq = Wasser

Ac = Aceton

E = Äthylacetat P= Petroläther DMF = Dimethylformamid F = Schmelzpunkt Aet = Äther

	N«-Palm-(Ne-Z)-L-Lys-(Ns-Z)-L-Lys-OC2H5 N*-Palm-L-Lys-L-Lys-OC2HB · 2HCl	F.°	C	-23°	yC j,	Aq)
	N«-Palm-L-Lys-L-Lys-OC2H5 · 2H3PO4	110 bis 113 242 bis 246	(Et/Aq) (Et)	-20°	(C = 3,	Aq)
b	N«-Palm-(Ne-Z)-D-Lys-(N6-Z)-D-Lys-OC2H5 N<*-Palm-D-Lys-D-Lys-OC2H6 ■ 2HCl .	165	(Ac/Aq)	'+23°	(c = 3,	Aq)
«{	Na-Palm-(N£-Z)-DL-Lys-(Ne-Z)-DL-Lys-OC2H5 N^-PaIm-DL-LyS-DL-LyS-OC2H5 · 2HCl	110 bis 113 242 bis 246	(Et) . (Et)
	93 bis 109 210 bis 220	(Et) (Et)

509 653/267

	11	105 bis 235 bis	F. °	12	C	•	-21°.	MZ	3,Aq)
		121 bis 230 bis	108 240	(Et/Aq) (Et)		- 1,9° -12,2°	(C =	1,DMF) 2, Me)
ei	NÄ-Stearoyl-(Ne-Z)-L-Lys-(Ne-Z)-L-Lys-OC2H5 Na-'Stearoyl-L-Lys-L-Lys-OC2H5 ■ 2HCl	135 bis 217 bis	124 233	(E) (Me/)Ac	- 2,5° -. 5,2°	(C = (C =	1, DMF) 2, Me)
f /	N«-Palm-(N<s-Z)-L-Orn-(Ni-Z)-L-Orn-OCH3 N^-PaIm-L-Om-L-Om-OCH3 · 2HCl	137 bis 212 bis	139 220	(E) (Me/Ac)	-11,6° -20,0°	(C = (C =	2, Me) 2, Me)
g I	Na-Palm-(Ni-Z)-L-Orn-L-Nitroarg-OCH3 N«-Palm-L-0rn-L-Arg-0CH3 · 2HCl	119 bis 183 bis 184	139 214	(Me/Ac) (Me/Ac)	-13,8°	(C = (C =	2, DMF)
h j	Na-Lauroyl-(Ne-Z)-L-Lys-(Ne-Z)-L-Lys-OCH3 N«-Lauroyl-L-Lys-L-Lys-OCH3 ; 2HCl	151 bis 170	121 184	(E/P) . (DMF/Ac) (Me/Et)		(C =
Ί	N«-Palm-(N>'-Z)-L-Dab-(Nv-Z)-L-Dab-NHNH2 N*-Palm-L-Dab-L-Dab-NHNH2 · 2HCl	178 bis 194 bis	153	(Me/Aq) (Me/Et)
k {	N"-Ne-Di-Z-L-Lys-(Ne-palm)-L-Lys-OCH3 H-L-Lys-(Ne-palm)-L-Lys-OCH3 · 2HCl	130 bis 206 bis	180 195	(Aq) (Et/Aet)	-11,5° -19,9°		2, Me) 2, Me)
1 J	Na,N£-Di-ZrL-Lys-(N£-palm)-L-Lys-NHNH2 H-L-Lys-(Ne-palm)-L-Lys-NHNH2 · HBr	125 bis 139	132 211	(Me/Aet) (Me/Aet)	- 8,2°	(r — (C =	2,Aq)
m J	N^-Cäprinoyl-L-Lys-L-Lys-OCHs · 2HCl	86 bis 181 bis	127	(Me) (Aq/Ac)	-13,6° -33,2°	(C =	2, DMF) 1» Aq)
η 1	N«-Palm-(Ne-Z)-L-Lys-L-Ser-OCH3 N«-Palm-L-Lys-L-Ser-OCH3 · 2HCl	105 bis 159 bis	88 185	(E) (Aq)	- Γ -42,6°	(C = (C =	2, DMF) 1, Aq)
ο J	Na-Palm-(Ne-Z)-L-Lys-L-Leu-OCH3 N "-PaIm-L-LyS-L-LeU-OCH3		108 161	(E) (Me/E)		(C =
P I	N«-Palm-(Ne-Z)-L-Lys-L-Tyr-OCH3 Na-Palm-L-Lys-L-Tyr-OCH3

B e i s pie I 5

N^a-Z-L-Nitroarg-L-Nitroarg-OC₂H₅
35,3 g N^a-Z-L-Nitroarg-OH (Z. physiol.

, g g Chem.,

224 [1934], S. 40) werden in 400 ml absolutem Tetrahydrofuran gelöst und bei —10° C unter Rühren mit 16,2g Carboriyldiimidazol versetzt. Nach weiterem Rühren (40 Minuten) gibt man eine Lösung von H-L-Nitroarg-OC₂H_S (hergestellt aus etwa 0,2 Mol öligem Hydrochlorid mittels Triäthylamin) in 150 ml DMF zu und rührt noch 4 Stunden bei 0°C. Nach Entfernen der Lösungsmittel im Vakuum wird in 1 η-Salzsäure aufgenommen, wobei sich ein OeI abscheidet, das mehrmals mit Wasser verrieben wird, wobei es schließlich erstarrt. Nach Umkristallisieren aus Alkohol—Wasser erhält man N^Ä-Z-L-Nitroarg-L-Nitroarg-OC₂H₅. Schmelzpunkt 123 bis 125°C. [«]|< .== _7,8° (c = 1,0 in Alkohol).

N^-Palm-L-Nitroarg-L-Nitroarg-OCaHs

14,6 g N^-Z-L-Nitroarg-L-Nitroarg-OCüH,; werden während einer Stunde mit 50 ml 25%iger Bromwasserstoffsäure in Eisessig decarbobenzoxyliert. Man fällt das Hydrobromid in Äther, wäscht mehrere Male mit Äther und dämpft im Vakuum zweimal mit absolutem Alkohol ein. Den Rückstand setzt man in absolutem Alkohol mit überschüssigem Triäthylamin um und dampft im Vakuum ein. Man nimmt in 150 ml absolutem Pyridin auf, setzt 4 ml Triäthylamin zu und tropft bei —10 bis —15°C unter starkem Rühren 7,2 g Palmitoylchlorid ein. Noch 30 Minuten wird bei °0C weitergerührt und dann vom Lösungsmittel im Vakuum befreit. Den Rückstand verteilt man zwischen Essigester und 3 η-Salzsäure, wäscht rasch mit Wasser und gesättigter Natriumchloridlösung, trocknet über Natriumsulfat und dampft im Vakuum ein. Das erhaltene Produkt N^-Palm-L-Nitroarg-L-Nitroarg-OC₂H₅ schmilzt bei 169 bis 173° C (aus Alkohol— Äther). .

N^a-Palm-L-Arg-L-Arg-OC₂H₅ · 2HCl

Der vorstehend beschriebene geschützte Dipeptidester wird in der 50fachen Menge Eisessig gelöst und nach Zugabe von 10°/₀ Wasser und 5°/₀ Pd-Katalysator auf Kohle 24 Stunden bei Raumtemperatur hydrogenolysiert. Nach Filtration des Katalysators wird im Vakuum eingedampft und der Rückstand mit Methanol oder Äthanol kristallisiert. Schmelzpunkt des erhaltenen N<"-Palm-L-Arg-L-Arg-OC₂H₅ · 2HCl 225 bis 230°C; [«]!' = -13,7° (c = 2 in Äthanol).

Beispiel 6

N*-Formyl-(N*-Z)-L-Lys-(N^e-Z)-L-Lys-OCH₃ ,

26,3 g N'x-FormyKN'-ZK-Lys-OH (J. Amer. chem. Soc, 82 ,S. 3727 [I960]) werden in 150 ml absolutem Tetrahydrofuran gelöst und bei —10° C unter Rühren mit 13,8 g Carbonyldiimidazol versetzt. Nach 30 Minuten gibt man eine Lösung von H-(N^E-Z)-L-Lys-OCH₃ (aus 28 g Hydrochlorid mit Triäthylamin freigesetzt) in 50 ml Tetrahydrofuran zu und rührt noch 4 Stunden bei Raumtemperatur weiter. Man dampft im Vakuum ein, nimmt in Essigester auf und wäscht mit eiskalter 1 molarer Weinsäurelösung, Eiswasser, 10°/₀iger Kaliumhydrogencarbonatlösung und gesättigter Natriumchloridlösung, wobei zum Lösen ausfallender Substanz zuweilen etwas Tetrahydrofuran zugegeben werden muß. Dann wird über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft. Aus Aceton—Äther schmilzt das erhaltene N^a-Formyl-(N^-Z)-L-LyS-(N*-Z)-L-LyS-OCH₃ bei 147 bis 149⁰C; [_a]f = -16,9° (c= -1,0 in Methanol).

Deformylierung und Umsatz mit Fettsäurechloriden

29 g N^a-Formyl-(N^£-Z)-L-Lys-(N⁸-Z)-L-Lys-OCH₃ werden in 100 ml !normaler methanolischer Salzsäure und 70 ml Methanol während 5 Stunden geschüttelt, wobei einer klare Lösung entsteht. Danach wird im Vakuum eingedampft. Den Rückstand verreibt man mehrere Male unter Äther und dampft zweimal mit je 100 ml Toluol im Vakuum ein. Dann wird in 300 ml absolutem Tetrahydrofuran aufgenommen und unter Eiskühlung mit 10 ml Triäthylamin versetzt, filtriert und nach Zugabe von weiteren 10 ml Triäthylamin

bei gutem Rühren mit 50 mMol eines höheren Fettsäurechlorids versetzt, so daß die Temperatur —10° C nicht übersteigt. Man läßt noch 20 Minuten bei 0°C rühren und engt etwa zur Hälfte im Vakuum ein. Den Rückstand verteilt man zwischen Essigester und Salzsäure, wäscht mit Salzsäure, Wasser und konzentrierter Natriumchloridlösung, wobei zur Verhinderung der Niederschlagsbildung von Zeit zu Zeit etwa Methanol zugesetzt oder etwas erwärmt wird. Die über Natriumsulfat getrocknete Lösung wird im Vakuum eingedampft.

Auf diese Weise können die folgenden N*-äcylierten Dipeptidester erhalten werden:

F. ⁰C

N*-Tridecanoyl-(N⁸-Z)-L-Lys-(N^e-Z)-L-Lys-OCH₃ N^-Tridecanoyl-L-Lys-L-Lys-OCHa · 2HCl

N«-Myristoyl-(N⁸^Z)-L-Lys-(N⁸-Z)-L-Lys-OCH₃ N^-Myristoyl-L-Lys-L-Lys-OCHa · 2HCl

N*-Pentadecanoyl-(N'-Z)-L-Lys-(N⁸-Z)-L-Lys-OCH₃ N^Pentadecanoyl-L-Lys-L-Lys-OCHs · 2HCl

N^a-Margaroyl-(N⁸-Z)-L-Lys-(N⁸-Z)-L-Lys-OCH₃ N^a-Margaroyl-L-Lys-L-Lys-OCH₃ · 2HCl

N*-Arachidoyl-(N⁸-Z)-L-Lys-(N⁸-Z)-L-Lys-OCH₃ N^a-Arachidoyl-L-Lys-L-Lys-OCH₃ · 2HCl

N"-Phytanoyl-(N⁸-Z)-L-Lys-(N^E-Z)-L-Lys-OCH₃ N-'-Phytanoyl-L-Lys-L-Lys-OCHs · 2HCl

135 bis 137

215 bis 219

128 bis 132

214 bis 240

129 bis 130
209 bis 215

130 bis 132

216 bis 220

120 bis 123
220 bis 225

115 bis 118

215 bis 219

(Me/Aq)
(Me/Aet)

(E/P)
(Me/Aet)

(Me/Aq)
(Me/Aet)

(Me/Aq)
(Me/Aet)

(E/P)
(Me)

(E/P)
(Me/Aet)

-13,7° (c = 2, Me)

-18,5° (c = 2, Me)

-11,1° (c = 2, Me)

-19,1° (c = 2, Me)

-11,7° (c = 2, Me)

-19,4° (c = 2, Me)

-11,8° (c = 2, Me)

-16,5° (c = 2, Me)

-16,5° (c = 2, Me)

-12,9° (c = 2, Me)

-19,5° (c = 2, Me)

Beispiel 7

35 H-D-Dab-(N''-palm)-L-Dab-NHNH₂ · 2 HBr

N«-Palm-(N^e-Z)-L-Lys-(N^s-Z)-L-Lys-

(N⁸-Z)-L-Lys-OCH₃

Aus N"-Palm-(N⁸-Z)-L-Lys-(N⁸-Z)-L-Lys-OH (gemäß Beispiel 1) und H-(N^e-Z)-L-Lys-OCH₃ mit Dicyclohexylcarbodiimid. Schmelzpunkt 148 bis 150°C (aus Essigester—Äther).

N»-Palm-(N⁸-Z)-L-Lys-(N⁸-Z)-L-Lys-(N^-Z)-L-LyS-NHNH₂

Aus N⁰SPaIm-(N⁵-Z)-L-LyS-(N*-Z)-L-LyS-(N⁸- Z)-L-LyS-OCH₃ mittels Hydrazinhydrat, analog Beispiel^. Schmelzpunkt 192 bis 194°C(ausDMF—Alkohol); [λ]!? = -9,0° (c = 1, DMF).

N^-PaIm-L-LyS-L-LyS-L-LyS-NHNH₂ · 4 HBr So

Aus N*- PaIm-(N⁸- Z)-L-LyS-(N⁸- Z)-L-LyS-(N⁸- Z)-L-LyS-NHNH₂ mittels HBr-Eisessig; [<x]%° = -18,5° (c= 1,H₂O).

Beispiel 8

N'^J£-Formyl-(N''-Z)-D-Dab-(Ni'-palm)-L-Dab-OCH₃

Aus H-(Nv-palm)-L-Dab-OCH₃ · HCl und N«-or-F ^b l l

55

mittels Dicyclohexylcarbodi_v imid in DMF nach Beispiel 1. Schmelzpunkt 164 bis 166° C aus Essigester.

N«-Formyl-(Ny-Z)-D-Dab-(N7-palm)-L-Dab-NHNH₂

Aus dem vorstehenden Ester mittels Hydrazinhydrat nach Beispiel 3. Schmelzpunkt 204 bis 206°C aus Methanol.

10 g N

NHNH₂ werden mit 120 ml 33%igem Bromwasserstoff—Eisessig Übergossen und unter Feuchtigkeitsausschluß 2 Stunden geschüttelt. Die Emulsion wird mit 500 ml absolutem Äther ausgefällt und das Fällungsprodukt in 50 ml Wasser zwecks Deformylierung bei 2Ö°C 2 Stunden stehengelassen. Das Endprodukt wird durch Lyophilisieren isoliert und aus Methanol—Essigester umgefällt. Schmelzpunkt 215 bis 218⁰C (Zersetzung). ·

Beispiel9

•N"-Z-(N y-Z)-D-Dab-(Nv-Z)-D-Dab-

(Ny-palm)-L-Dab-OCH₃

8,4 g H-(Ny-Palm)-L-Dab-OCH₃ · HCl werden in 80 ml DMF gelöst und während 15 Minuten mit 3,2ml Triäthylamin kräftig gerührt. Man nutscht ab, löst im Filtrat 13 g Ν«-Ζ-(Νυ-Ζ)-ώ-Ό<&-(Ν*-Ζ)-ώ-Όά\>-ΟΉ. und versetzt sodann bei 0°C mit 4,3 g Dicyclohexylcarbodiimid. Nach 24 Stunden wird der gebildete Dicyclohexylharnstoff abgenutscht und das Filtrat unter Zusatz von 20 g Natriumchlorid in 110,1 n-Salzsäure gefällt. Man nutscht ab und fällt unter Zusatz von Natriumchlorid aus DMF mit 0,ln-Ammoniak um, trocknet im Vakuum bei 70° C und kristallisiert aus Methanol um, wobei man N^a-Z-(Ni'-Z)-D-Dab-(Ny-Z)-D-Dab-(N''-palm)-L-Dab-OCH₃ vom Schmelzpunkt 178 bis 180°C erhält,

N«-Z-(NJ'-Z)-D-Dab-(Ni'-Z)-D-Dab-.■'.■■.·■ (N^-palnO-L-Dab-NHNH,,

14 g N«-Z-(Ny-Z)-D-Dab-(Nv-Z)-D-Dab-(N''-palm)-L-Dab-OCHg werden in 100 ml DMF und 14 ml

15 16

100%igem Hjedfazinhydrat unter Erwärmen gelöst und 2 Stunden bei 20⁰C stehengelassen. Die wäßrige

24 Stunden bei 20°C stehengelassen. Sodann wird mit Lösung wird lyophilisiert und der Rückstand aus

200 ml Alkohol verrieben, abgenutscht, mit Alkohol Methanol—Äther ausgefällt. Man löst in Methanol,

gewaschen und getrocknet. Man erhält N^-Z-(Nv-Z)- neutralisiert mit Pyridin auf pH 7 und fällt die Lösung

D-Dab-(N''-Z)-D-Dab-(N''-pahn)-L-Dab-NHNH₂ vom 5 in Alkohol aus. Nach dem Trocknen wird die Substanz

Schmelzpunkt 222 bis 224⁰C. in 50 ml Wasser gelöst und lyophilisiert. Man erhält

das Tetrahydrobromid in Form eines farblosen Pulvers

H-D-Dab-D-Dab-(Nv-palm)-L-Dab-NHNH₂ · 3 HBr vom Schmelzpunkt 245 bis 250⁰C (Zersetzung).

10g N^-Z-fN^-D-Dab-iNy-Z^D-Dab-fNy-palm)- ίο Beispiel 11
L-Dab-NHNH₂ werden mit 75 ml 33%igem Brom-

wasserstoff—Eisessig Übergossen und 2 Stunden unter N«-(10-Undecenoyl)-L-Lys-L-Lys-OC₂H₅ · 2 HCl

Feuchtigkeitsausschluß geschüttelt. Die Suspension 28 g H-(N^e-Phthaloyl)-L-Lys-OC₂H₅ · HCl werden

wird mit 300 ml absolutem Äther vermischt, die über- in 150 ml DMF durch leichtes Erwärmen gelöst, nach

stehende Mutterlauge abdekantiert und der Rück- 15 Abkühlen mit 12 ml Triäthylamin versetzt und vom

stand mehrmals mit frischem absolutem Äther ge- Triäthylaminhydrochlorid abgenutscht. Dem Filtrat

waschen. Das H-D-Dab-D-Dab-iN^-palmi-L-Dab- werden 35 gN^a-(10-Undecenoyl)-N^s-phthaIoyl)-L-Lys-

NHNH₂ · 3 HBr wird aus Methanol—Äther umge- OH zugesetzt und durch leichtes Erwärmen gelöst,

fällt, worauf es eine Drehung von [«]o° = —7,8° Dann wird auf 0 bis —5°C abgekühlt und 17,5 g

(c = 1 in Wasser) aufweist, ao Dicyclohexylcarbodiimid in 80 ml DMF zugesetzt und

dann in den Eisschrank gestellt. Nach 24 Stunden wird

Beispiel 10 _vom Harnstoff abgesaugt, mit Eiswasser gefällt, das

geschützte Dipeptid mit Essigester gelöst, mit In-Bi- ^^arbonat' 0,lnTalzsäureund Wasser gewaschen. Nach _{a5 Eindamp}}_{en knsumsisTt man aus} Äthanol-Wasser

9,1 g N^-FormyHNv-ZH-Dab-iN^-D-Dab- um. Der erhaltene N<*-(K>-Undecenoyl)-(N«-phthal-

NHNH₂ werden in 100 ml Eisessig, 50 ml Wasser, oyl)-L-Lys-(N*-phthaloyl)-L-Lys-OC₂H_s schmilzt bei

100 ml Essigester und 12,7 ml 3n-Salzsäure bei 0⁰C 130 bis 132°C; [<x]V = -7,4° (c = 2,54 in Äthanol),

unter starkem Rühren gelöst. Bei — 10⁰C tropft man Zur Abspaltung der Schutzgruppen werden 7,3 g des

unter Rühren eine Lösung von 1,32 g Natriumnitrit in 30 beschriebenen Dipeptides in 100 ml Äthanol und 3 ml

15 ml Wasser langsam zu, extrahiert nach 15 Minuten Wasser, unter Zusatz von 1 g Hydrazinhydrat, am

bei O⁰C mit Essigester, wäscht mit Wasser und Rückfluß 1 Stunde erhitzt. Nach einigem Stehen bei

1 n-Natriumhydrogencarbonat und trocknet die Lösung Raumtemperatur wird mit 2 ml konzentrierter SaIzbei 0⁰C über Natriumsulfat. Diese Azidlösung wird säure versetzt, gut durchgeschüttelt und vom gebildeten miteiner Lösung von 11 g H-(N^-Z)-D-DBb-(Ny-PaIm)- 35 Phthalylhydrazid abgesaugt. Durch Einengen der L-Dab-OCH₃ in 65 ml DMF versetzt, 20 Stunden bei äthanolischen Mutterlauge und Filtrieren kann noch 0°C und 6 Stunden bei 20⁰C stehengelassen, im weiteres Phthalylhydrazid abgetrennt werden. Nach Vakuum bei 45 ⁰C konzentriert und mit 400 ml Äther Einengen des Filtrates kann das freie N^-OO-Undeausgefällt. Der N^-FormyHNr-ZJ-L-Dab-iNr-Z)- CCnOyI)-L-LyS-L-LyS-OC₂H₅ · 2 HCl mit Aceton und D-Dab-(Ny-Z)-D-Dab-(Ny-palm)-L-Dab-OCH3 wird 40 Petroläther gefällt werden. Nach zweimaliger Umabgenutscht, mit Äther gewaschen und im Vakuum bei kristallisation aus Äthanol schmilzt es bei 241 bis 6O⁰C getrocknet; Schmelzpunkt 222 bis 224°C. 243⁰C [«]? = —31 ± 2° (c = 1,6 in H₂O).

N^-FormyHNy-ZH-Dab-tNv-Z^-Dab- Beispiel 12

(Nv-Z)-_D-Dab-(Nr-palm)-L-Dab-NHNH₂ « _N«._Nr.Di-Z-L-Lys-(N^-Z)-L-Lys-cetylamid .'

11g N^a-Formyl-(N''-Z)-L-Dab-(N''-Z)-D-Dab- Eine Lösung von 35,4 g N^Ä-Ny-Di-Z-L-Lys-(N^e-Z)-

(Nv-Z)-D-Da^(Nr-PaIm)-L-Dab-OCHs werden in L-Lys-OH (J. Chem. Soc:, 1953, S. 475) in 150 ml 90 ml DMF und 11 ml 100%igem Hydrazinhydrat Tetrahydrofuran wird bei 2° C unter Rühren mit 8,6 g unter Erwärmen gelöst. Nach 20 Stunden wird mit 50 Carbonyldiimidazol versetzt. Nach 30 Minuten gibt 200 ml Wasser vermischt, abgenutscht, mit Wasser man 12,7 g Cetylamin zu und läßt über Nacht bei gewaschen und im Vakuum bei 8O⁰C getrocknet. Raumtemperatur stehen. Die ausgefallene Substanz Man erhält N^a-Formyl-(N''-Z)-L-Dab-(N''-Z)-D-Dab- wird abgenutscht und gewaschen und liefert 19,8 g (N»'-Z)-D-Dab-(N''-palm)-L-Dab-NHNH₂ vom Schmelz- Material, während das Filtrat im Vakuum eingedampft, punkt 240 bis 242° C. 55 in Essigester aufgenommen, gewaschen und getrocknet,

nach Eindampfen und Umkristallisieren aus Chloro-

H-L-Dab-D-Dab-D-Dab-(Nr-palm)-L-Dab- form—Petroläther weitere 5,2 g Substanz liefert. Insge-

NHNH₂-4 HBr ^samt erhält man 25,0 g N^W-Di-Z-L-Lys-iN^-Z)-

L-Lys-cetylamid vom Schmelzpunkt 147 bis 152⁰C;

8gN«-Formyl-(N''-Z)-L-Dab-(N>'-Z)-D-Dab-(N»'-Z)- 60 [a]% = -6,3° (c = 2,0 in Dimethylformamid).
D-Dab-(Ny-palm)-L-Dab-NHNH₂ werden mit 80 ml
33%igem Bromwasserstoff—Eisessig Übergossen und H-L-Lys-L-Lys-cetylamid · 3 HCl

2 Stunden unter Feuchtigkeitsausschluß geschüttelt.

Die Suspension wird mit 300 ml absolutem Äther aus- 28 g N*,N''-Di-Z-L-Lys-(N^s-Z)-L-Lys-cetylamid wer-

gefällt und die überstehende Mutterlauge abgenutscht. 65 den durch Behandlung mit 50 ml 33%iger Bromwasser-

Der Rückstand wird mehrmals mit frischem Äther stoffsäure in Eisessig während 2 Stunden decarbobenz-

behandelt, sodann in 80 ml Wasser aufgenommen, oxyliert. Nach Fällen mit Äther und Abdampfen mit

vorhandene Ätherreste durch Evakuieren entfernt und 50 ml Methanol wird in einem Minimum Wasser ge-

löst und auf 80 g Amberh'te IRA 410 (Handelsname) gegeben. Man eluiert mit Wasser, filtriert durch Kohle, versetzt mit 30 ml 3n-Salzsäure und engt bei 50⁰C und 60 mm Hg auf 40 ml ein. Nach Fällen mit Aceton wird genutscht, über Phosphorpentoxyd getrocknet, in heißem Äthanol aufgenommen, durch Kohle filtriert und durch langsame Zugabe von Aceton das H-L-Lys-L-Lys-cetylamid ■ 3 HCl zum Ausfallen gebracht. Man erhält so 6,3 g vom Schmelzpunkt 230 bis 250°C (Zersetzung); [oc]f = +6,6° (c = 2,0 in Methanol).

B e i sρ i e 1 13

N^a-Z-(N^e-Phthaloyl)-L-Lys-(N^e-phthaloyl)-L-LyS-OC₂H₅

10,5 g (31 mMol) N*-Phthaloyl-L-lys-OC₂H₅-Hydrochlorid werden in 70 ml DMF gelöst, mit 4,4 ml Triäthylamin versetzt und filtriert. Das Filtrat wird sofort zu einer Lösung von 12,6 g (31 mMol) N^a-Z-(N^e-Phthaloyl)-L-lys-OH in 150 ml absolutem Tetrahydrofuran gegeben, und zur Mischung werden 6,4 g (31 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid zugefügt. Nach 16stündigem Stehenlassen bei 2 bis 4°C wird von Dicyclohexylharnstoff abfiltriert und im Vakuum ein-Rückfiuß erhitzt. Nach Abkühlen wird mit 8,0 ml 3,2n-Salzsäure in Alkohol versetzt, über Nacht bei Raumtemperatur gehalten und vom Phthalhydrazid abgenutscht; Das Filtrat wird im Vakuum eingedampft und zweimal aus Alkohol—Äther umkristallisiert (nach weiterer Filtration von Phthalhydrazid). Man erhält so 3,3 g N«-Oleyl-L-Lys-L-Lys-OC₂H₅ · 2 HCl, welches sich oberhalb 230⁰C, ohne zu schmelzen, [<x]f = -17,7° (c = 1,0 in Äthanol).

zersetzt;

Beispiel 14

N<*-Palm-(N^e-Z)-L-Lys-NHNH₂

29,4 g (N^c-Z)-L-Lys-OCH₃ werden in 100 ml Tetrahydrofuran gelöst, mit 15,4 ml absolutem Triäthylamin versetzt und unter Rühren bei 15 bis 20⁰C mit einer Lösung von 27,5 g Palmitinsäurechlorid in 30 ml Tetrahydrofuran versetzt. Nach Rühren über Nacht wird der Reaktionsmischung 300 ml Wasser, 200 g Eis und 12 ml konzentrierte Salzsäure zugesetzt, das ausgefällte Produkt mit Wasser gewaschen, in 250 ml Alkohol gelöst und erneut mit einer Mischung von 300 ml Wasser, 200 g Eis, 12 ml konzentriertem Ammoniak und 10 g Ammoniumchlorid gefällt. Nach

gedampft. Den Rückstand nimmt man in Essigester 25 Abnutschen wird das Produkt mit 200 ml Wasser ge- und ln-Salzsäure auf, filtriert von weiterem Harnstoff, waschen und bei 6O⁰C getrocknet. Schmelzpunkt des wäscht mit ln-Salzsäure, Wasser, 10% Bicarbonat, so erhaltenen N<*-Palm-(N^e-Z)-L-Lys-OCH₃: 90 bis gesättigter Natriumchloridlösung, trocknet über Na-' 91° C (nach Umlösen aus Essigester),
triumsulfat und dampft im Vakuum ein. Man erhält 50 g des so. erhaltenen Esters werden in 200 ml

N"-Z-(N^s-Phthaloyl)-L-Lys-(N^e-phthaloyi)-L-Lys- 30 Dimethylformamid gelöst, mit 23 ml Hydrazinhydrat

versetzt und 24 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Das erstarrte Gel wird mit Wasser verrieben, abgenutscht, mit Wasser gewaschen und nochmals aus Dimethylformamid—Wasser umgefällt. Schmelzpunkt 152bis 154°C (aus Methanol); [<x]V = -6,8° (c = 2 in Dimethylformamid).

35

OC₂H₅ vom Schmelzpunkt 116 bis 121 ° C (aus Essigester—Petroläther); [al¹ = -11,8° (c = 0,5 in Äthanol).

H-(N^e-Phthaloyl)-L-Lys-(N^e-phthaloyl)-L-LyS-OC₂H₅ · HBr

Aus dem erhaltenen Produkt wird die N"-Carbobenzoxygruppe mit HBr—Eisessig auf bereits beschriebene Art abgespalten. Man erhält so das Hydrobromid von H-(N^e-Phthaloyl)-L-Lys-(N^e-phthaloyl)-L-LyS-OC₂H₆ · HBr. Schmelzpunkt 230 bis 235⁰C (aus Chloroform + wenig Alkohol—Äther).

N^Ä-Oleyl-(N^e-phthaloyl)-L-Lys-(N^e-phthaloyl)-L-LyS-OC₂H₆

12,9 g (20 mMol) des erhaltenen Hydrobromids werden in 35 ml Chloroform mit 3 ml Triäthylamin freigesetzt, bei -2O⁰C mit 100 ml Tetrahydrofuran versetzt, filtriert und mit weiteren 3 ml Triäthylamin versetzt. Bei — 30⁰C tropft man unter gutem Rühren 5,6 g (18,6 mMol) ölsäurechlorid unter Stickstoff zu, rührt noch Va Stunde bei O⁰C und dampft im Vakuum ein. Man nimmt den Rückstand in Essigester—1 n-Salzsäure warm auf, trennt im vorgewärmten Scheidetrichter und wäscht rasch mit warmem Wasser und konzentrierter Natriumchloridlösung, trocknet und dampft im Vakuum ein. Aus Essigester—Petroläther und Alkohol—Wasser erhält man 12 g N"-Oleyl-(N»-phthaloyl)-L-Lys-(N^e-phthaloly)-L-LyS-OC₂H₅ vom Schmelzpunkt 118 bis 125°C; [x]f = -9,1° (1,0 in Äthanol).

N^a-Oleyl-L-Lys-L-Lys-OC₂H₅ · HCl

9,7 g (11,7 mMol) des erhaltenen Produkts werden zwecks Abspaltung der Phthaloyl-Schutzgruppen in 100 ml Alkohol gelöst und nach Zugabe von 3,5 ml 6,72n-Hydrazinhydrat unter Stickstoff 1 Stunde am N«-Palm-(N^e-Z)-L-Lys-(N⁸-Z)-L-Lys-OCH₃ (Azid-Reaktion)

26,6 g N^a-Palm-(N«-Z)-L-Lys-NHNH₂ werden mit 250 ml Dimethylformamid Übergossen und mit 42 ml HCl-Gas—Tetrahydrofuran (6n) gelöst und auf —10° C gekühlt und unter gutem Rühren 7 ml Amylnitrit in 12 ml Dimethylformamid zugetropft. Das Azid beginnt bald auszufallen, und man rührt bei — 10⁰C noch 1 Stunde. Dann wird mit einer auf — 10⁰C vorgekühlten Lösung von 15g (N^s-Z)-L-Lys-OCH3 in 30 ml Dimethylformamid und 36 ml Triäthylamin versetzt und das Gemisch bei — 10⁰C 6 Stunden gerührt. Dann läßt man die Temperatur langsam über Nacht auf +25⁰C ansteigen und versetzt mit 21 g Natriumbicarbonat in 500 ml Wasser und 250 g Eis unter gutem Rühren, nutscht ab und wäscht mit Wasser. Dann wird zweimal aus Methanol—Wasser auskristallisiert. Schmelzpunkt 123 bis 125°C; [<x]V = 8,31° (c = 2 in Dimethylformamid).

N«-Palm-L-Lys-L-Lys-NH₂ -2 HCl

Amidierung und Hydrogenolyse der Schutzgruppen nach Beispiel 2 liefern das Endprodukt N "-PaIm-L-Lys-L-Lys-NH₂ · 2 HCl in besonders guter optischer Reinheit. Schmelzpunkt 244°C; [<%]!' = -15,6° (c = 2 in Wasser).

Die in den vorstehenden Beispielen verwendeten Ausgangsmaterialien können wie folgt hergestellt werden:

509 653/267

(vgl. Beispiel 4, f)

Eine Lösung von 26,6 g (0,1 Mol) N^Ä-Z-L-Orn-OH (Biochem. J., 46, S. 582 [1950]) in 150 ml 1,5 n-Kaliumhydroxydlösung und 100 ml Tetrahydrofuran wird bei 2 bis 5°C tropfenweise mit 30 g (0,11 Mol) Pamitoylchlorid versetzt. Nach erfolgter Zugabe wird noch 40 Minuten weitergerührt und zur Erhaltung des alkalischen Mediums zeitweilig 2 n-Kaliumhydroxydlösung zugesetzt. Dann wird mit Salzsäure angesäuert (Kongorot) und im Vakuum vom Tetrahydrofuran befreit. Zum Rückstand gibt man 500 ml Essigester

IO und etwas konzentrierte Salzsäure, trennt die wäßrige Phase ab, wäscht unter Zugabe von etwas Methanol mit 4n-Salzsäure, Wasser und konzentrierter Natriumchloridlösung, trocknet über.Natriumsulfat und dampft im Vakuum ein. Nach Umkristallisieren des Rückstandes aus Methanol—Wasser (10 : 1) erhält man N^a-Palm-(N'^!-Z)-L-Orn-OH vom Schmelzpunkt 91 bis 96⁰C; [oc]%° = +4,8° (c = 1,0 in Äthanol).

Die. in der folgenden Tabelle aufgeführten N<*-acylierten N^u>-Z-Aminosäuren wurden nach dieser Standardvorschrift gewonnen (vgl. die in der ersten Kolonne angegebenen Beispiele):

	N"-Palm-(N*-Z)-L-Lys-OH	101 bis 102°	Schmelzpunkt ° C/Kristalle aus
1	Nie-Palm-(Ne-Z)-D-Lys-OH	101 bis 102°	(Salzsäure—Wasser)
4, c	N"-Palm-(Ne-Z)-DL-Lys-OH	134 bis 135°	(Salzsäure—Wasser)
4,d	Na-Stearoyl-(Ne-Z)-L-Lys-OH	95 bis 97°	(Essigester—Petroläther)
4,e	N«-Lauroyl-(Ne-Z)-L-Lys-OH	102 bis 104°	(Essigester—Petroläther)
4,h	N«-Palm-(Nv-Z)-L-Dab-OH	94 bis 96°	(Äther—Petroläther)
4,i	Na-Caprinoyl-(N£-Z)-L-Lys-OH	102 bis 106°	(Methanol—Wasser)
4, m		(Essigester—Petroläther)

Die Aminosäureester werden entweder nach dem Standardverfahren nach Curtius und G ο e b e 1, J. prakt. Chemie [2], 37, S. 150 (1888), mit Alkohol— HCl oder mittels Alkohol und Thionylchlorid nach Brenner und H u b e r, HeIv. Chimica Acta, 36, S. 1109 (1953), hergestellt.

H-(N«-Palm)-L-Lys-OCH₃ (vgl. Beispiel 4, k)

35

24 g H-L-Lys-OH · HCl werden in 1500 ml Wasser gelöst und mit 40 g basischem Kupfercarbonat

2 Stunden am Rückfluß erhitzt. Sodann wird filtriert und bei 0°C und mit 40 g Palmitoylchlorid und 2 n-Natronlauge zur Aufrechterhaltung der Basizität versetzt. Nach 2 Stunden wird der ausgefallene Kupferkomplex abgenutscht, mit Wasser, Aceton und Äther gewaschen und getrocknet. Das Pulver wird in 500 ml Methanol und 50 ml Wasser suspendiert, mit konzentrierter Salzsäure angesäuert und bei 60° C V₂ Stunde mit Schwefelwasserstoff behandelt. Man filtriert vom Kupfersulfid ab und bringt das Filtrat mit Natronlauge auf pH 7. Nach 4 Stunden wird bei Zimmertemperatur filtriert und der Rückstand aus Eisessig— Äther kristallisiert. Man erhält H-(N^E-Palm)-L-Lys-OH vom Schmelzpunkt 240° C.

30 ml wasserfreies Methanol werden bei —10° C mit 2,7 ml Thionylchlorid versetzt. Zu dieser Mischung werden 14 g H-(N^e-Palm)-L-Lys-OH zugesetzt. Nach

3 Stunden wird die klare Lösung bei 45⁰C im Vakuum eingedampft, der Rückstand in Methanol gelöst und durch Zugabe von Äther kristallisiert. Die Kristalle werden abgenutscht, mit Äther gewaschen und getrocknet. Man erhält H-(N^£-Palm)-L-Lys-OCH₃ · HCl vom Schmelzpunkt 142 bis 143° C.

H-(Nv-Palm)-L-Dab-OCH₃ (vgl. Beispiel 8)

41g H-L-Dab-OH · HCl und 35 g basisches Kupfercarbonat werden in 300 ml Wasser 2V₂ Stunden unter Rühren am Rückfluß erhitzt. Nach dem Abnutschen wird das Filtrat mit 60 g Natriumbicarbonat versetzt und unter Rühren tropfenweise bei 20° C mit einer Lösung von 73 g Palmitoylchlorid in 200 ml Aceton versetzt. Man rührt 16 Stunden bei 2O⁰C, nutscht den Kupferkomplex ab, wäscht mit viel Wasser und Aceton, löst in 200 ml Wasser und 500 ml Methanol unter Zusatz von konzentrierter Salzsäure und behandelt mit Schwefelwasserstoff, bis sich kein Kupfersulfid mehr abscheidet. Das Kupfersulfid wird abfiltriert, mit Methanol gewaschen, das Filtrat im Vakuum bei 30°C auf ein Volumen von 300ml eingedampft, mit Triäthylamin auf einen pH-Wert von 7 gebracht und gleichzeitig mit 500 ml Methanol verdünnt. Nach 5 Stunden wird abgenutscht, mit Methanol gewaschen und getrocknet. Man erhält H-(Nv-Palm)-L-Dab-OH vom Schmelzpunkt 208 bis 210°C (Zersetzung).

80 ml Methanol und 7,3 ml Thionylchlorid werden bei —10° C gemischt, mit 36 g H-(Nv-Palm)-L-Dab-OH versetzt und 6 Stunden unter Feuchtigkeitsausschluß am Rückfluß auf 5O⁰C erwärmt. Man dampft die Lösung im Vakuum bei 50° C ein und kristallisiert aus Methanol—Äther um, wobei H-(Nv-Palm)-L-Dab-OCH₃ · HCl vom Schmelzpunkt 144 bis 146° C erhalten wird.

N^a-Formyl-(Nv-Z)-D-Dab-OH (vgl. Beispiel 8)
Vergleiche HeIv. Chim. Acta, 43, S. 279 (1959).

N«-Z-(Nv-Z)-D-Dab-OH (vgl. Beispiel 9)
Vergleiche Chem. Listy, 47, S. 427 (1953).

N«-Z-(Nv-Z)-D-Dab-(N''-Z)-D-Dab-OCHs
(vgl. Beispiel 9)

Aus H-(Nv-Z)-D-Dab-OCH₃ und N^-Z-(Nv-Z)-D-Dab-OH mittels Carbodiimid nach Beispiel 1; Schmelzpunkt 122 bis 124° C. Die entsprechende Dipeptidsäure wird durch Verseifen mit der berechneten Menge Alkali erhalten. Schmelzpunkt 163 bis 165° C.

N^a-Formyl-(Nv-Z)-L-Dab-(Nv-Z)-D-Dab-OCH₃
(vgl. Beispiel 10)

Aus den Komponenten nach Beispiel 1; Schmelzpunkt 138 bis 141⁰C. ν

N*-Formyl-(Nr-Z)-L-Dab-(Nv-Z)-D-Dab-NHNH₂
(vgl. Beispiel 10)

Aus dem entsprechenden Ester mit Hydrazinhydrat gemäß Beispiel 3; Schmelzpunkt 196 bis 200⁰C.

H-(Nv-Z)-D-Dab-(Ny-Palm)-L-Dab-OCH₃
(vgl. Beispiel 10)

Aus N^a-Formyl-(Ny-Z)-D-Dab-(Nr-Palm)-L-Dab-OCH₃ und methanolischer Salzsäure bei Zimmertemperatur.

H-(N«-Phthaloyl)-L-Lys-OCH₃ · HCl
(vgl. Beispiel 11)

g H-(N^C-Phthaloyl-L-Lys-OH (Rec. Trav. Chim. Pays-Bas, 79, S. 688 [I960]) werden mit 1500 ml HCl-Äthanol Übergossen und bei 60⁰C 72 Stunden unter Feuchtigkeitsausschluß und Rückfluß gehalten. Dann wird eingeengt und mit Äther gefällt. Nach Umkristallisieren aus Äthanol—Äther erhält man das Hydrochlorid von H-(N^e-Phthaloyl)-L-Lys-OC₂H₅ mit dem Schmelzpunkt 175 bis 177°C; [ot]f = +12,3° (C = 2 in H₂O).

N«-(10-Undecenoyl)-(N^e-phthaloyl)-L-Lys-OH
(vgl. Beispiel 11)

Zur Herstellung von N" - (10 - Undecenoyl)-(N^e-phthaloyl)-L-Lys-OH werden 3,3 g des entsprechenden Esterhydrochlorids in 30 ml DMF gelöst, 1,5 ml Triäthylamin zugesetzt und vom gebildeten Triäthylamin-hydrochlorid abgenutscht. Dann werden 1,9 g 10-Undecensäure zugegeben, gut gekühlt und mit einer Lösung von 2,2 g Dicyclohexylcarbodiimid in 10 ml DMF versetzt. Nach 20 Stunden wird vom Harnstoff abgesaugt und das Filtrat mit Eis—NaCl-Lösung gefällt. Man nimmt auf in Essigester, wäscht mit Bicarbonat, Salzsäure und Wasser und trocknet. Nach Umkristallisieren aus Essigester—Petroläther erhält man reinen N"-(10-Undecenoyl)-(N^e-phthaloyl)-L-LyS-OC₂H₅. 21 g davon werden mit 250 ml Aceton gelöst, 50 ml H₂O und 25 ml konzentrierte Salzsäure zugefügt und 3¹I₂ Stunden am Rückfluß gekocht. Bei 40⁰C wird im Vakuum eingedampft, dreimal mit ίο Essigester ausgezogen und aus Essigester—Petroläther umkristallisiert. Das so gewonnene N^lO-Undecenoyl)-(N^e-phthaloyl)-L-Lys-OH schmilzt bei 114 bis 116⁰C.

N*-Z-(N"-Phthaloyl)-L-Lys-OH (vgl. Beispiel 13)

15 g (0,048MoI) N^e-Phthaloyl-L-Lys-OH · Hydrochlorid werden in 150 ml Wasser und 100 ml Aceton gelöst und zusammen mit 6 g Magnesiumoxyd bei 4 bis 5°C gerührt, während man 9,0 g (0,053 Mol) Carbo-

ao benzoxychlorid in 30 ml Aceton innerhalb von 45 Minuten zutropft. Nach weiterem 4stündigem Rühren bei 5 bis 10⁰C wird angesäuert, im Vakuum zur Hälfte eingeengt und mit Essigester ausgezogen. Dieser wird mit 5°/_oigem Kaliumbicarbonat erschöpfend extrahiert, und die Extrakte werden nach Ansäuern wiederum mit Essigester ausgezogen. Nach Trocknen und Verdampfen im Vakuum hinterläßt dieser 14,5 g N^Ä-Z-(N^E-Phthaloyl)-L-Lys-OH in Form einer glasartigen Masse, die nicht kristallisiert.

Claims (11)

Patentansprüche:

1. Verfahren zur Herstellung von antibakteriell wirksamen Peptiden der allgemeinen Formell

H₂N- R— CO — NH—R— CO -[- NH— R-CO -]—[- NH — R — CO -V- X

worin W₁ und M₂ 0 oder I₅ X eine Hydroxy-, Alkoxy-, Amino-, Monoalkylamino-, Dialkylamino- oder Hydrazinogruppe und die Symbole R je einen von der a-Amino- und der Carboxylgruppe befreiten Rest einer «-Aminocarbonsäure bedeuten, wobei mindestens einer der R-Reste eine Aminogruppe enthält und wobei mindestens eine Aminogruppe des Moleküls einen Acylrest einer langkettigen gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Carbonsäure trägt oder das Symbol X einen Monoalkylamino- oder Dialkylaminorest mit einem langkettigen Alkylsubstituenten bedeutet, dadurch gekennzeichnet, daß man die Peptide aus entsprechend geschützten «-Aminocarbonsäuren bzw. entsprechend geschützten Peptiden unter Verwendung von Kondensationsmitteln oder über gemischte Anhydride, Azide, aktivierte Ester oder Säurechloride aufbaut, die endständige Carboxylfunktion gegebenenfalls zur freien Carboxylgruppe verseift oder in eine Amido-, N-Monoalkylamido-Ν,Ν-Dialkylamido- oder Hydrazidogruppe überführt, die Schutzgruppen anschließend entfernt und die erhaltenen Peptide gegebenenfalls in Salze überführt, wobei der langkettige Acylrest durch Austausch einer selektiv abspaltbaren Schutzgruppe nachträglich eingeführt werden kann.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung der allgemeinen Formel II

H₂N — R— CO -[- NH — R — CO -]—[- NH — R— CO -J₈-Y mit einer Verbindung der allgemeinen Formel III

H₂N-R-CO-[-NH—R—CO-]—[-NH—R —CO'—J₅-X'

worin a, b, c und d für 0 oder 1 stehen und die Summe dieser Indizes 0, 1 oder 2 beträgt, Y ein Halogenatom, eine Hydroxy- oder Azidogruppe, eine gegebenenfalls nitrierte Phenoxygruppe, eine Phenylmercaptogruppe oder den Rest eines Anhydrides mit einer anorganischen oder organischen Säure, X' eine Alkoxy-, Amino-, Monoalkylamino-, Dialkylaminogruppe oder eine Hydroxygruppe in Form eines Salzes mit einer anorganischen oder tertiären organischen Base und die Symbole R je einen von der «-Amino und der Carboxylgruppe befreitest Rest einer «-Aminocarbo !säure bedeuten, wobei mindestens einer der R Reste eine Aminogruppe enthält und wobei·

ferner alle- in den Verbindungen II und III vorhandenen Aminogruppen mit Ausnahme der in der Formel III am linken Kettenende befindlichen «-Aminogruppe durch abspaltbare

Schutzgruppen und/oder langkettige Acylreste geschützt sind, unter Abspaltung von HY zu einem Di-, Tri- oder Tetrapeptid der allgemeinen Formel IV

H₂N — R—CO — NH — R — CO -[- NH — R— CO -1—[- NH — R — CO -1— X'

umsetzt, worin R und X' dasselbe wie oben bedeuten, H₁ und «2 für O °der 1 stehen und alle im Molekül vorhandenen Aminogruppen wie oben angegeben geschützt sind, daß man erhaltene Peptide, die weder einen langkettigen N-Acylrest noch in der endständigen COX'-Gruppe einen langkettigen N-Alkylsubstituenten enthalten, durch Austausch selektiv abspaltbarer Schutzgruppen gegen" mindestens einen langkettigen N-Acylrest bzw. durch Einführung eines langkettigen N-Alkylsubstituenten in die endständige Carboxylfunktion in entsprechende, durch langkettige N-Acyl- bzw. N-Alkylgruppen substituierte Peptide überführt, gegebenenfalls das erhaltene Produkt in ein Hydrazid überführt, daß man aus dem so erhaltenen Peptid die abspaltbaren Schutzgruppen abspaltet und gegebenenfalls die erhaltenen Verbindungen in Säureadditionssalze umwandelt.

3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß Y eine Hydroxygruppe bedeutet und man die Verbindung der allgemeinen Formel II mit der Verbindung der allgemeinen Formel III in Gegenwart eines Kondensationsmittels umsetzt.

4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß man als Kondensationsmittel ein Carbodiimid, z. B. Dicyclohexylcarbodiimid, oder Carbonyldiimidazol verwendet.

5. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man zwei Diaminocarbonsäuren, die je eine «-ständige Aminogruppe tragen, zum Dipeptid kondensiert.

6. Verfahren nach Anspruch 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß man langkettige Acyl- und Alkylreste, die mindestens 10 Kohlenstoffatome aufweisen, verwendet.

7. Verfahren nach Anspruch 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß man langkettige Acylreste, die 10 bis 20 Kohlenstoffatome aufweisen, wie z. B. den Palmitoyl- oder Stearoylrest, verwendet.

8. Verfahren nach Anspruch 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß man als Ausgangsmaterialien optisch aktive, insbesondere L-«-Aminocarbonsäuren verwendet.

9. Verfahren nach Anspruch 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß man D-, l- oder DL-Lysin als Ausgangsmatprial verwendet.

10. Verfahren nach Anspruch 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, daß man N^a-Palmitoyl-N^e-carbobenzoxy-L-lysin mit N^e-Carbpbenzoxy-L-lysin oder N^a,N^e-Dicarbobenzoxy-L-lysin mit N^e-Palmitoyl-L-lysin oder N^Palmitoyl-N^-carbobenzoxy-L-«,y-diaminobuttersäure mit N^y-Carbobenzoxy-L-«,y-diaminobuttersäure oder N^a-Formyl-N^y-carbobenzoxy-L-«,y-diaminobuttersäure mit N^-PaI-mitoyl-L-«,y-diaminobuttersäure oder N^-Palmitoyl-N^cafbobenzoxy-L-ornithin mit L-Nitroarginin oder N^-Palmitoyl-N^-carbobenzoxy-L-ornithin mit N^-Carbobenzoxy-L-ornithin umsetzt, wobei man jeweils die an zweiter Stelle genannte Aminosäure als Natriumsalz, als Ester, insbesondere als Methyl- oder Äthylester, oder als Amid einsetzt.

11. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man N"-Carbobenzoxy-L-nitroarginin mit dem Methyl- oder Äthylester von L-Nitroarginin umsetzt, den Carbobenzoxyrest durch den Palmitoylrest ersetzt und die Nitroschutzgruppe abspaltet.

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