CZ301561B6

CZ301561B6 - Prostredek pro prevenci a potlacování kokcidióz

Info

Publication number: CZ301561B6
Application number: CZ20070851A
Authority: CZ
Inventors: Klein@Pavel
Original assignee: Výzkumný ústav živocišné výroby, v. v. i.
Priority date: 2007-12-04
Filing date: 2007-12-04
Publication date: 2010-04-14
Also published as: US20110009490A1; US8030353B2; US20090275661A1; US8053475B2; CZ2007851A3

Abstract

Prostredek pro prevenci a potlacování kokcidióz s obsahem formaurindikarboxylové kyseliny a jejích derivátu obecného vzorce I. V 1 kg biologicky prijatelné matrice je obsažen alespon 0,1 .mi.mol úcinné látky, kterou je formaurindikarboxylová kyselina a její deriváty obecného vzorce I. Prostredek se nove používá zejména jako antiprotozoární lécivo pro prevenci a potlacování kokcidióz.

Description

Prostředek pro prevenci a potlačování kokcidióz

Oblast techniky 5

Řešení se týká nového vysoce účinného prostředku pro prevenci a potlačování kokcidióz, který obsahuje fcrmaurindikarboxylovou kyselinu a její deriváty.

Dosavadní stav techniky

Kokcidie parazitují u celé řady živočišných druhů, zejména pak u hospodářsky významných zvířat, kde způsobují výrazné ekonomické ztráty v podobě úhynů, nemocnosti, snížení užitkovosti a zvýšení nákladů na léčbu a prevenci. Nejrozšířenější jsou kokcidie rodu Eimeria parazituj ící jak u ptáků, tak i u savců, a dále pak zejména kokcidie Cryptosporidium a Isospora. Cryptosporidium parvum nacházená typicky v tenkém střevě u sajících mláďat přežvýkavců je i významným patogenem Člověka. C. parvum a geneticky blízce příbuzný druh C. hominis jsou v lidské populaci nacházeny nejčastěji u jedinců s poruchami imunitního systému, zejména pak u pacientů s AIDS, u kterých způsobuji vysilující chronické vodnaté průjmy. U imunokompetentních lid20 ských jedinců způsobují kryptosporidie úplavici, která zpravidla po několika dnech sama odezní, nicméně úporné průjmy a dehydratace mohou způsobit vážné komplikace u malých dětí a starých osob.

V terapii a prevenci kokcidióz je dnes možné použit dva rozdílné postupy: 1) vakcinaci a 2) podávání kokcidiostatik a antikokcidik. Vakcinace proti řadě druhů Eimeria je prakticky použitelná u drůbeže. U ostatních živočišných druhů je nutné používat antikokcidiálně působící látky, jejichž spektrum dnes pokrývá všechny běžně se vyskytující kokcidie. Problémem použití těchto látek, byly většinou syntetizovány již v 50. až 70. letech minulého století, je však vznik rezistence, dále nutnost dodržovat rotační programy a v neposlední řadě rovněž jejich rezidualita, kteráje závažným problémem z hlediska bezpečnosti potravního řetězce.

Specifická je pak situace z kryptosporidových nákaz lidí i zvířat, kde v podstatě dosud neexistuje zcela spolehlivý preparát a možnosti imunoterapie jsou velmi omezené (Harp et Goff, 1995; Jenkins, 2004). U lidí lze pro chemoterapii kryptosporidiózy použít paromomycin, případně pak azithromycin, nitazoxanid či lethrazuril, u kterých byla potvrzena částečná antikryptosporidiální aktivita (Blanshard et al., 1997; Giacmetti et al., 1998). Pro použití u zvířat je dosud registrován pouze halofuginon-laktát.

Vzhledem k výše uvedeným skutečnostem je zjevné, že existuje potřeba nalézt nová vysoce účinná antikokcidika, která by neohrožovala léčené subjekty toxicitou a nezanechávala by rezidua.

Podstata vynálezu 45

Výše uvedené nedostatky odstraňuje prostředek pro prevenci a potlačováni kokcidióz, podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že 1 kg biologicky přijatelné matrice obsahuje jako účinnou látku alespoň 0,1 pmol formaurindikarboxylové kyseliny a jejích derivátů, obecného vzorce 1

-1CZ 301561 B6

OH (O, ve kterém Rl až R3 značí

	R1	R2	R3
Formauríndikarboxylová kyselina	H	COOH	COOH
Formaurindikarboxyláty (soli formaurindikarboxylová kyseliny)	H	COO’	COO
Aurintrikarboxylová kyselina	—OH COOH —FVoh	COOH	COOH
Aurintrikarboxytáty (soli aurintrikarboxylová kyseliny)	coo -ZVoH	COO	COO'
Aluminon	COO-NH/	COONH₄‘	COONH₄*

Prostředek podle vynálezu se dále vyznačuje tím, že biologicky přijatelná matrice je tvořena vodným alkalickým roztokem nebo vodou.

Použití prostředku podle vynálezu pro výrobu antiprotozoámího léčiva pro prevenci a potlačování kokcidióz je rovněž podstatou tohoto vynálezu.

Výše uvedené deriváty jsou známé a zejména u nejdůležitějšího, kterým je aurintrikarboxylová kyselina, byly popsány pozoruhodné účinky na živé organismy. Přestože je aurintrikarboxylová is kyselina známa již od konce 19. století, nebylo dosud prokázáno, že by vykazovala inhibiční účinnost na parazitické prvoky nebo byla navržena, případně použita, jako antiprotozoámí léčivo.

Přesto mezi nejvýznamnější její vlastnosti patří to, že aurintrikarboxylová kyselina je velmi silný inhibitor nukleáz, jmenovitě DNAázy I, RNAázy A, SI nukleázy, exonukleázy III či restrikčních endonukleáz Sal I, Bam HI, Pst I a Sma I (Hallick et al., 1977). Další biologické účinky aurintri-2CZ 301561 B6 karboxylové kyseliny jsou odvozeny například od stimulace fosforylace tyrozinu (Okada et Koizumi, 1995). Aurintrikarboxylová kyselina také zabraňuje srážení krve prostřednictvím inhibice vazby von Willebrandova faktoru na krevní destičky (Owens et Holme, 1996) a má řadu dalších biologických vlastností. Mezi známé účinky aurintrikarboxylové kyseliny na patogenní organismy patří inhibice YopH faktoru, který podmiňuje virulenci bakterie Yersinia (Liang et al., 2003).

Je s podivem, že použití formaurindikarboxylové kyseliny a jejích derivátů jako antiprotozoámího léčiva dosud v literatuře nebylo popsáno. V odborné literatuře jsou tyto látky uvedeny jako io aurintrikarboxylová kyselina (CAS # 4431-00-9), triamonná sůl aurintrikarboxylové kyseliny, tzv. aluminon (CAS # 569-58-4), formaurindikarboxylová kyselina (CAS # 62051-06-3).

Z mechanizmu biologického účinku uvedených látek se dá oprávněně předpokládat, že by jejich použití přicházelo v úvahu též jako léčiva proti ostatním infekcím, vyvolaných prvky a to zejmé15 na ve formě vhodných roztoků, gelů, mastí i v pevné lékové formě.

Následující příklady provedení prostředek podle vynálezu pouze dokládají, aniž by ho jakkoliv omezovaly. Na přiloženém grafů (Graf 1) jsou uvedeny výsledky z použití aurintrikarboxylové kyseliny u laboratorního modelu, u novorozených myší C57BI6 experimentálně infikovaných

Cryptosporidium parvum.

Příklad provedení

Příklad

Pro ověření in vivo aktivity aurintrikarboxylové kyseliny byl použit model dle Tziporiho (1998) v následující modifikaci: třídenní mláďata myší kmene C57BI6 byla randomizována a byly utvo30 řeny skupiny po 8 až 9 mláďatech. Každá skupina byla po dobu experimentu chována s matkou ve vlastním sterilním mikroizolátoru za standardních podmínek. Den po randomizaci byla myšata perorálně infikována bovinním izolátem C. parvum. Velikost infekční dávky byla 1 milión oocyst. Bezprostředně po experimentální infekci byl myšatům perorálně podán roztok připravený na požadované koncentrace rozpuštěním krystalů aurintrikarboxylové kyseliny v ekvimolámím roztoku hydroxidu sodného i draselného nebo ve 100% roztoku dimetylsulfoxídu.

Léčba dávkami 50 a 100 μιηοΐ/g ž.hm./den trvala 8 dnů a léčba byla tolerována bez zjevných příznaků toxicity. Léčivo bylo podáváno perorálně pravidelně ve 12—h intervalech. Kontrolní skupina namísto aurintrikarboxylové kyseliny přijímala PBS pufr, jako pozitivní kontrola sloužila skupina léčená paromomycinem (100 mg/kg/den). Intenzita infekce byla vyhodnocena na základě zjištění počtu oocyst C. parvum v homogenizátu intestinálního traktu v 9. dnu po infekci. Pokus byl v letech 2006 až 7 celkem 4x opakován, pokaždé s velmi podobným výsledkem. V následujícím grafu jsou uvedeny výsledky v pořadí posledního ověření, kde byl pro rozpuštění aurintrikarboxylové kyseliny použit hydroxid sodný.

Z výše uvedeného jasně vyplývá, že účinnost formaurindikarboxylové kyseliny ajejich derivátů je více než pravděpodobná i u ostatních hostitelů a to také proti dalším kokcidiím (včetně Eimeria ísospora).

-3CZ 301561 B6

Průmyslová využitelnost

Prostředek na bázi formaurindikarboxylové kyseliny ajejich derivátů prokázal účinnost zejména pri prevenci a potlačování nebezpečných kokcidióz, vyvolaných druhem Cryptosporidium par5 vum.

Použitá literatura:

Blanshard C, Shanson DC, Gazzard BG: Pilot studies of azithromycin, letrazuril and paromomycin in the treatment of cryptosporidiosis. Int J STD AIDS 1997; 8(2): 124-9

Giacomettí A, Burzacchini F, Cirioni O, Barchiesi F, Dini M, Scalise G: Effícacy of treatment with paromomycin, azithromycin, and nitazoxanide in a patient with disseminated cryptospori15 diosis. Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 1998; 18:885-889.

Harp JA, GoffJP: Protection of calves with a vaccine against Cryptosporidium parvum. J Parasitol. 1995;81( 1 ):54-7.

Jenkins MC: Present and future control of cryptosporidiosis in humans and animals. Expert Rev Vaccines. 2004;3(6):669-71

Liang F, Huang Z, Lee SY, Liang J, Ivanov MI, Alonso A, Bliska JB, Lawrence DS, Mustelin T, Zhang ZY: Aurintricarboxylic acid blocks in vitro and in vivo activity of YopH, an essential virulent factor of Yersinia pestis, the agent of plague. J Biol Chem. 2003:278(43):41734—41.

Okada N, Koizumi S: A neuroprotective compound, aurin tricarboxylic acid, stimulates the tyrosine phosphorylation cascade in PC12 cells. J Biol Chem. 1995;270(27): 16464-9.

Owens MR, Holme S.: Aurin tricarboxylic acid inhibits adhesion of platelets to subendothelium. Thromb Res. 1996;81(2): 177-85.

Tzipori S: Cryptosporidiosis: laboratory investigations and chemotherapy. Adv Parasitol. 1998;40:187-221

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

5 1. Prostředek pro prevenci a potlačování kokcidióz, vyznačující se tím, že 1 kg biologicky přijatelné matrice obsahuje jako účinnou látku alespoň 0,1 pmol formaurindikarboxylové kyseliny a jejích derivátů, obecného vzorce í ve kterém Rl až R3 značí

R1 R
2 R3

Formaurindikarboxylová kyselina H COOH COOH Formaurindikarboxytáty (soli formaurindikarboxylové kyseliny) H coo· coo- Auríntrikarboxylová kyselina COOH ^fVoH COOH COOH Aurintrikarboxyláty (soli aurintrikarboxylové kyseliny) coo· COO’ COO' Aluminon —OH COONH/ COONH/ COO-NH/

15 2. Prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že biologicky přijatelná matrice je tvořena vodným alkalickým roztokem nebo vodou.
3. Použití prostředku podle nároků 1 a 2 pro výrobu antiprotozoámího léčiva pro prevenci a potlačování kokcidióz.

1 výkres

-5CZ 301561 B6

Grafl:

Inhibiční účinek aurintrikarboxyiovó kyseliny na experimentální infekci Cryptosporidium parvum u sajících C57BI6 myší