[go: up one dir, main page]

CZ299374B6 - Molekuly nukleové kyseliny kódující sacharózofruktosyltransferázu závislou na sacharóze (SST), vektor, hostitelská bunka, zpusob prípravy SST, SST, transgenní rostlinná bunka, rostlina, rostlinný rozmnožovací materiál a zpusob prípravy 1-kestózy, nys - Google Patents

Molekuly nukleové kyseliny kódující sacharózofruktosyltransferázu závislou na sacharóze (SST), vektor, hostitelská bunka, zpusob prípravy SST, SST, transgenní rostlinná bunka, rostlina, rostlinný rozmnožovací materiál a zpusob prípravy 1-kestózy, nys Download PDF

Info

Publication number
CZ299374B6
CZ299374B6 CZ0314099A CZ314099A CZ299374B6 CZ 299374 B6 CZ299374 B6 CZ 299374B6 CZ 0314099 A CZ0314099 A CZ 0314099A CZ 314099 A CZ314099 A CZ 314099A CZ 299374 B6 CZ299374 B6 CZ 299374B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
nucleic acid
plant
leu
sst
gly
Prior art date
Application number
CZ0314099A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ314099A3 (cs
Inventor
G. Heyer@Arnd
Hellwege@Elke
Gritscher@Dominique
Original Assignee
Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e. V.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e. V. filed Critical Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e. V.
Publication of CZ314099A3 publication Critical patent/CZ314099A3/cs
Publication of CZ299374B6 publication Critical patent/CZ299374B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
    • C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
    • C12N15/8245—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine involving modified carbohydrate or sugar alcohol metabolism, e.g. starch biosynthesis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Molekula nukleové kyseliny kódující sacharózofruktosyltransferázu závislou na sacharóze (SST), která je vybrána ze skupiny zahrnující (a) molekuly nukleové kyseliny kódující protein, který obsahuje aminokyselinovou sekvenci uvedenou jako sekvenci identifikacního císla 2 a 4, (b) molekuly nukleové kyseliny, které obsahují nukleotidovou sekvenci uvedenou jako sekvenci identifikacního císla 1 nebo odpovídající ribonukleotidovou sekvenci, (c) molekuly nukleové kyseliny, které obsahují nukleotidovousekvenci uvedenou jako sekvenci identifikacního císla 3 nebo odpovídající ribonukleotidovou sekvenci, a (d) molekuly nukleové kyseliny, které obsahují fragment molekul nukleové kyseliny uvedených v (a) až (c) kódující protein, který je schopen katalyzovat vytvorení .beta.-2,1-glykosidických nebo .beta.-2,6-glykosidických vazeb mezi fruktózovými jednotkami. Molekula nukleové kyseliny, vektor obsahující molekulu nukleové kyseliny, hostitelská bunka, která je transformovaná molekulou nukleové kyseliny, zpusob prípravy SST a SST, která je kódovánamolekulou nukleové kyseliny, transgenní rostlinnábunka, která je transformovaná molekulou nukleovékyseliny, rostlina obsahující tyto bunky, rostlinný rozmnožovací materiál a zpusob prípravy 1-kestózy, nystózy a/nebo fruktosylnystózy.

Description

(54) Název vynálezu:
Molekuly nukleové kyseliny kódující sacharózofruktosyltransferázu závislou na sacharóze (SST), vektor, hostitelská buňka, způsob přípravy SST, SST, transgenní rostlinná buňka, rostlina, rostlinný rozmnožovací materiál a způsob přípravy 1-kestózy, nystózy a/nebo fruktosylnystózy (57) Anotace:
Molekula nukleové kyseliny kódující sacharózofruktosyltransferázu závislou na sacharóze (SST), která je vybrána ze skupiny zahrnující (a) molekuly nukleové kyseliny kódující protein, který obsahuje aminokyselinovou sekvenci uvedenou jako sekvenci identifikačního čísla 2 a 4, (b) molekuly nukleové kyseliny, které obsahují nukleotidovou sekvenci uvedenou jako sekvenci identifikačního čísla 1 nebo odpovídající ribonukleotidovou sekvenci, (c) molekuly nukleové kyseliny, které obsahují nukleotidovou sekvenci uvedenou jako sekvenci identifikačního čísla 3 nebo odpovídající ribonukleotidovou sekvenci, a (d) molekuly nukleové kyseliny, které obsahují fragment molekul nukleové kyseliny uvedených v (a) až (c) kódující protein, který je schopen katalyzovat vytvoření β-2,1 -glykosidických nebo P-2,6-glykosidických vazeb mezi fruktózovými jednotkami. Molekula nukleové kyseliny, vektor obsahující molekulu nukleové kyseliny, hostitelská buňka, která je transformovaná molekulou nukleové kyseliny, způsob přípravy SST a SST, která je kódována molekulou nukleové kyseliny, transgenní rostlinná buňka, která je transformovaná molekulou nukleové kyseliny, rostlina obsahující tyto buňky, rostlinný rozmnožovací materiál a způsob přípravy 1-kestózy, nystózy
299 374 (13) Druh dokumentu: B6 (51) Int. Cl.:
C12N15/82 Cl 2N 9/10 C12Q 1/68 C12P19/04 A01H 5/00 a/nebo fruktosylnystózy.
EcoRI (Sac!)
Kpnl (2006.01) (2006.01) (2006.01) (2006.01) (2006.01)
Sal!(Pstl Sphl) Notl /Smál Híndlll
B33 í cySST jocs iTerm
1500 bp 2200 bp 215 bp
p8in19 .............>
Molekuly nukleové kyseliny kódující sacharózofruktosyltransferázu závislou na sacharóze (SST), vektor, hostitelská buňka, způsob přípravy SST, SST, transgenní rostlinná buňka, rostlina, rostlinný rozmnožovací materiál a způsob přípravy 1-kestózy, nystózy a/nebo fruktosylnystózy
Oblast techniky
Vynález se týká molekul nukleové kyseliny kódujících sacharózofruktosyltransferázy závislé na sacharóze (SST), které mají fruktosylpolymerázovou aktivitu, způsobu přípravy sacharózofruktosyltransferázy závislé na sacharóze a této SST, která je kódována molekulou nukleové kyseliny, s jejíž pomocí mohou být tvořeny fruktosylové polymery s krátkým řetězcem, 1-kestóza, nystóza a/nebo fruktosylnystóza, použitím různých metod, například fermentačních nebo jiných biotechnologických metod. Dále se tento vynález týká vektorů a hostitelských buněk obsahujících takové molekuly nukleové kyseliny, jakož i rostlinných buněk, rostlin transformovaných popsanými molekulami nukleové kyseliny a rostlinného rozmnožovacího materiálu obsahující tyto rostlinné buňky. Kromě toho jsou popsány způsoby produkce transgenních rostlin, které syntetizují 1-kestózu, nystózu a/nebo fruktosylnystózu díky zavedení molekul DNA kódujícím SST z artyčoku. Postup přípravy SST slouží k produkci 1-kestózy, nystózy a/nebo fruktosylnystózy (neboli fruktosylových polymerů s krátkým řetězcem) v různých hostitelských organismech.
Dosavadní stav techniky
Lineární, ve vodě rozpustné polymery mají mnohé různé možnosti použití, například pro zvýšení viskozity vodných systémů, jako detergenty, jako suspendační činidla nebo pro urychlení sedimentačního procesu a pro komplexování, ale také pro vázání vody. Polymery na bázi sacharidů, například fruktosylové polysacharidy, jsou obzvláště zajímavé materiály, protože jsou biologicky odbouratelné.
Nezávisle na jejich použití jako regenerační suroviny pro průmyslovou produkci a zpracování, jsou fruktosylové polymery také zajímavé jako potravní aditiva, například jako umělá sladidla. Pro tento účel jsou obzvláště vhodné polymery mající nízký stupeň polymerizace.
Doposud byly popsány pouze způsoby produkce fruktanových polysacharidů s dlouhým řetězcem v rostlinách expresí enzymů bakteriálního původu, jakož i způsob produkce transgenních rostlin exprimujících fruktosyltransferázy z Helianthus tuberosus. Způsoby tvorby enzymů pro produkci fruktosylových polymerů s krátkým řetězcem nejsou známy. V popisu patentové přihlášky PCT/USA89/02729 se popisuje možnost tvořit cukerné polymery, zejména dextran nebo poly40 fruktózu, v transgenních rostlinách, obzvláště v plodech transgenních rostlin. Pro přípravu takových modifikovaných rostlin se navrhuje použití levansacharózy z mikroorganismů, konkrétně zAerobacter levanicum, Streptococcus salivarius a Bacillus subtilis, nebo dextransacharózy τ Leuconostoc mesenteroides. Nepopisuje se ani produkce aktivních enzymů ani levanu či dextranu ani transgenních rostlin. Patentová přihláška PCT/EP93/02110 popisuje způsob pro45 dukce transgenních rostlin exprimujících gen Isc levansacharózy z gram-negativní bakterie Erwinia amylovora. V patentové přihlášce PCT/NL93/00279 je popsána transformace rostlin majících chimérické geny, které obsahují gen sacB τ Bacillus subtilis nebo gen ftf ze Streptococcus mutans. V případě genu sacB se doporučuje pro zvýšení hladiny exprese v transgenních rostlinách modifikace v 5'-netranslatované oblasti genu. Patentová přihláška PCT/NL96/00012 popisuje sekvence DNA kódující enzymy syntetizující cukerné polymery a produkci transgenních rostlin s pomocí těchto sekvencí DNA. Popisované sekvence pocházejí z Helianthus tuberosus. Podle dokumentu PCT/NL96/00012 jsou popsané sekvence vhodné nejenom k modifikaci fruktanového profilu například petúnie a brambory, ale také samotné Helianthus tuberosus. Proto přihláška PCT/NL96/00012 popisuje, kromě jiného, transgenní brambory exprimující SST z Helianthus tuuberosus. Dokonce i když lze detekovat enzymatickou aktivitu SST exprimované
- 1 CZ 299374 B6 v transgenních rostlinách, může být dosaženo pouze nízké úrovně konverze substrátu sacharózy na fruktosylové polymery s krátkým řetězcem. To může mít vztah k různým faktorům, jako je nízká afinita enzymu k substrátu nebo případná inhibice enzymu tvořeným produktem.
Proto je předmětem předkládaného vynálezu poskytnout molekuly nukleové kyseliny kódující sacharózofruktosyltransferázu závislou na sacharóze (SST), s jejíž pomocí je možné připravit organismy modifikované metodami genetického inženýrství tak, že jsou schopné produkovat fruktosylové polymery s krátkým řetězcem.
Výše zmíněný problém je řešen předkládaným vynálezem, který je popsán pomocí následujících příkladů a definován patentovými nároky.
Podstata vynálezu
Předmětný vynález se týká molekuly nukleové kyseliny kódující sacharózofruktosyltransferázu závislou na sacharóze (SST), která je vybrána ze skupiny zahrnující:
a) molekuly nukleové kyseliny kódující protein, který obsahuje aminokyselinovou sekvenci uvedenou jako sekvenci identifikačního čísla 2 a 4,
b) molekuly nukleové kyseliny, které obsahují nukleotidovou sekvenci uvedenou jako sekvenci identifikačního čísla 1 nebo odpovídající ribonukleotidovou sekvenci,
c) molekuly nukleové kyseliny, které obsahují nukleotidovou sekvenci uvedenou jako sekvenci identifikačního čísla 3 nebo odpovídající ribonukleotidovou sekvenci, a
d) molekuly nukleové kyseliny, které obsahují fragment molekul nukleové kyseliny uvedených v a) až c) kódující protein, který je schopen katalyzovat vytvoření P-2,l-glykosidických nebo
3_2,6-glykosidických vazeb mezi fruktózovými jednotkami.
Ve výhodném provedení podle předmětného vynálezu je touto molekulou nukleové kyseliny molekula DNA. Výhodně je molekulou DNA molekula cDNA.
Podle dalšího výhodného provedení podle předmětného vynálezu je touto molekulou nukleové kyseliny molekula RNA.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží vektor, který obsahuje libovolnou výše speci35 Ukovanou molekulu nukleové kyseliny.
Ve výhodném provedení tohoto vektoru je molekula nukleové kyseliny operativně spojena s regulačním prvkem, který dovoluje transkripci a syntézu translatovatelné RNA v prokaryotických a/nebo eukaryotických buňkách. Výhodně je v případě tohoto vektoru regulační prvek odvozen z patatinového promotoru B33.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží hostitelská buňka, která je transformovaná libovolnou výše specifikovanou molekulou nukleové kyseliny nebo libovolným výše specifikovaným vektorem, nebo buňka, která prochází z takové buňky a obsahuje libovolnou výše speci45 fikovanou molekulu nukleové kyseliny nebo libovolný výše specifikovaný vektor.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží způsob přípravy SST, jehož podstata spočívá v tom, že se výše specifikovaný hostitelská buňka kultivuje v podmínkách, které dovolují syntézu SST a SST se izoluje z kultivovaných buněk a/nebo kultivačního média.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží SST, která je kódována molekulou libovolné výše specifikované nukleové kyseliny, nebo která je připravena výše specifikovaným způsobem.
-2CZ 299374 B6
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží transgenní rostlinná buňka, která je transformovaná libovolnou výše specifikovanou molekulou nukleové kyseliny nebo libovolným výše specifikovaným vektorem nebo která prochází z takové buňky, přičemž molekula nukleové kyseliny kódující SST zartyčoku je řízena regulačním prvkem, který umožňuje transkripci translato5 vatelné RNA v rostlinných buňkách.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží rostlina, která obsahuje výše specifikované rostlinné buňky.
Ve výhodném provedení je touto rostlinou rostlina pšenice, ječmene, rýže, kukuřice, řepy cukrové nebo cukrové třtiny. Podle dalšího výhodného provedení je touto rostlinou rostlina bramboru.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží rostlinný rozmnožovací materiál z libovolné výše specifikované rostliny, který obsahuje výše specifikované rostlinné buňky.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží způsob přípravy 1-kestózy, nystózy a/nebo fruktosylnystózy, jehož podstata spočívá v tom, že zahrnuje:
a) kultivaci výše specifikované hostitelské buňky v podmínkách, které dovolují produkci SST a konverzi, pokud je to třeba, externě přidané sacharózy nebo ekvivalentního substrátu na 120 kestózu, nystózu a/nebo fruktosylnystózu, a
b) získání tímto způsobem tvořené 1-kestózy, nystózy a/nebo fruktosylnystózy zkultivovaných buněk nebo média.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží způsob přípravy 1-kestózy, nystózy a/nebo 25 fruktosylnystózy, jehož podstata spočívá v tom, že zahrnuje:
a) působení výše specifikované SST na sacharózu nebo ekvivalentní substrát v podmínkách dovolujících konverzi na 1-kestózu, nystózu a/nebo fruktosylnystózu, a
b) získání takto tvořené 1-kestózy, nystózy a/nebo fruktosylnystózy.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží způsob přípravy 1-kestózy, nystózy a/nebo fruktosylnystózy, jehož podstata spočívá v tom, že zahrnuje:
a) kultivaci libovolné výše specifikované rostliny, a
b) získání 1-kestózy, nystózy a/nebo fruktosylnystózy z těchto rostlin nebo jejich výše specifikovaného rozmnožovacího materiálu.
Pokud se týče předmětného vynálezu, potom je třeba uvést, že enzymem majícím fruktosylpolymerázovou aktivitu se míní protein, který je schopný katalyzovat vznik β-2,1-glykosidické nebo β-2,6-glykosidické vazby mezi fruktózovými jednotkami. Fruktosylový zbytek, který má být přenesen, může takto pocházet ze sacharózy nebo fruktanového polymeru.
Fruktosylovým polymerem s krátkým řetězcem se rozumí molekula obsahující alespoň dva, ale ne více než 100 fruktosylových zbytků, které jsou spojeny buď β-2,1-nebo fi-2,6-glykosidickou vazbou. Fruktosylový polymer může nést na svém konci glukózový zbytek, který je spojen prostřednictvím OH skupiny na atomu C-l glukózy a OH skupiny atomu C-2 fruktosylu.
V tomto případě fruktosylový polymer obsahuje molekulu sacharózy.
Ve výhodném provedení pocházejí sekvence nukleové kyseliny vynálezu z artyčoku.
Podle předmětného vynálezu bylo překvapivě zjištěno, že během exprese molekul nukleové 50 kyseliny se tvořila velká množství fruktosylových polymerů.
-3 CZ 299374 B6
Při použití molekul nukleové kyseliny podle vynálezu se získá na rozdíl od brambor popsaných v patentové přihlášce PCT/NL96/00012 velké množství oligofruktanu, které je dokonce větší, než buněčný obsah substrátové sacharózy.
Molekuly nukleové kyseliny podle vynálezu mohou být jak DNA, tak RNA molekuly. Vhodné molekuly DNA jsou například molekuly genomové DNA nebo cDNA. Molekuly nukleové kyseliny podle vynálezu mohou být izolovány z přírodních zdrojů, výhodně artyěoku, nebo mohou být syntetizovány pomocí známých metod.
Prostřednictvím obvyklých molekulárně biologických metod je možné (viz např. Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2. vydání, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY) zavést do molekul nukleové kyseliny vynálezu odlišné mutace. Výsledkem je, že takto je možné syntetizovat proteiny s modifikovanými biologickými vlastnostmi. Jedna možnost je tvorba delečních mutant, ve kterých se tvoří molekuly nukleové kyseliny neustálými delecemi od 5'- nebo 3'-konce kódující sekvence DNA, a to vede k syntéze proteinů, které jsou adekvátně zkráceny. Takovými delecemi na 5'-konci nukleotidové sekvence je například možné identifikovat aminokyselinové sekvence, které jsou odpovědné za translokaci enzymu v plastidech (transiční peptidy). To umožňuje specifickou produkci enzymů, které díky odstranění příslušných sekvencí nejsou již déle lokalizovány ve vakuolách, ale v cytosolu, nebo které jsou diky přidání dalších signálních sekvencí lokalizovány v jiných kompartmentech.
Další možností je zavedení bodové mutace na pozice, kde modifikace aminokyselinové sekvence ovlivňuje např. enzymovou aktivitu nebo regulaci enzymu. Tímto způsobem mohou být například tvořeny mutanty, které mají změněnou hodnotu Km nebo které již nadále nepodléhají regulačním mechanismům, které normálně v buňce existuje vzhledem k alosterické regulaci nebo kovalentní modifikaci.
Kromě toho mohou být tvořeny mutanty, které vykazují změněnou specifitu pro substrát nebo produkt. Mohou být také tvořeny mutanty, které vykazují změněný profil aktivita-teplota.
Pro manipulaci v prokaryotických buňkách pomocí metod genetického inženýrství mohou být molekuly nukleové kyseliny podle vynálezu nebo části těchto molekul zavedeny do plazmidů umožňujících mutagenezi nebo modifikaci sekvence rekombinací sekvence DNA. Prostřednictvím obvyklých metod {Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual,
2. vydání, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NNY) se mohou vyměňovat báze a mohou být přidány přirozené nebo syntetické sekvence. Aby se fragmenty DNA navzájem spojily, mohou knim být přidány adaptéry nebo spojky (linkery). Mimoto se mohou provádět manipulace, které poskytují vhodná štěpná místa nebo které odstraňují přebytečnou DNA nebo štěpná místa. Jsou-li možné inzerce, delece nebo substituce, může se provádět in vitro mutageneze, náhrada pomocí primeru, restrikce nebo ligace. Jako metody analýzy se obvykle používají sekvenční analýza, restrikční analýza a další biochemické nebo molekulárně biologické metody.
Termín „hybridizace“ má ve smyslu tohoto vynálezu význam hybridizace za obvyklých hybridi45 začních podmínek, výhodně za stringentních podmínek, jak je například popsáno v Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2. vydání, (1989), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY.
Molekuly nukleové kyseliny, které hybridizují s molekulami podle vynálezu, mohou být izolo50 vány např. z genomových nebo cDNA knihoven, které byly připraveny z artyěoku.
Aby se identifikovaly a izolovaly takové molekuly nukleové kyseliny, mohou být použity molekuly podle vynálezu nebo části těchto molekul nebo reverzní komplementy těchto molekul, například prostřednictvím hybridizace podle obvyklých metod (viz např. Sambrook et al., 1989,
-4CZ 299374 B6
Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2. vydání Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY).
Jako hybridizační sonda mohou být například použity molekuly nukleové kyseliny, jejichž nukle5 otidová sekvence je zcela shodná nebo podstatně podobná sekvenci zobrazené zde jako sekvenci id. č. 1, nebo části těchto sekvencí. Fragmenty použité jako hybridizační sonda mohou být syntetické fragmenty, které byly vytvořeny prostřednictvím obvyklých způsobů syntézy, a jejichž sekvence v podstatě souhlasí se sekvencí molekuly nukleové kyseliny podle vynálezu.
Molekuly hybridizující s molekulami nukleové kyseliny podle vynálezu také zahrnují fragmenty, deriváty a alelické varianty molekul nukleové kyseliny popsaných výše kódujících protein podle vynálezu. Termínem „fragmenty“ se rozumí části molekul nukleové kyseliny, které jsou dostatečně dlouhé, aby kódovaly jeden z popisovaných proteinů. Termín „derivát“ v tomto smyslu znamená, že se sekvence těchto molekul liší od sekvencí molekul nukleové kyseliny popsaných výše v jedné nebo několika pozicích, ale s těmito sekvencemi mají vysoký stupeň homologie. Homologie takto znamená sekvence identické alespoň ve 40 %, zejména identické alespoň v 60 %, výhodně ve více než 80 % a zejména výhodně ve více než 90 %. Tyto proteiny kódované molekulami nukleové kyseliny mají sekvenci identickou s aminokyselinovou sekvencí zobrazenou v sekvenci id. č. 2 alespoň v 80 %, výhodně v 85 % a zejména výhodně ve více než 90 %,
95 %, 97 % a 99 %. Odchylky od výše popsaných molekul nukleové kyseliny mohou být tvořeny deleci, substitucí, inzercí nebo rekombinací.
Molekuly nukleové kyseliny, které jsou homologní svýše popsanými molekulami a které představují deriváty těchto molekul jsou obvykle varianty těchto molekul, které představují modi25 fikace mající tutéž biologickou funkci. Mohou to být přirozeně se vyskytující varianty, například sekvence zjiných organismů nebo mutace, které mohou nastat buď přirozeně, nebo které byly vneseny specifickou mutagenezí. Kromě toho mohou být tyto varianty synteticky vytvořené sekvence. Alelické varianty mohou být buď přirozeně se vyskytující varianty nebo synteticky vytvořené varianty nebo varianty vytvořené metodami rekombinantní DNA.
Proteiny kódované různými variantami molekul nukleové kyseliny podle vynálezu vykazují určité společné vlastnosti, jako je enzymová aktivita, molekulová hmotnost, imunologická reaktivita nebo konformace nebo fyzikální vlastnosti, jako je elektroforetická pohyblivost, chování při chromatografií, sedimentační koeficienty, rozpustnost, spektroskopické vlastnosti, stabilita, opti35 mální pH, optimální teplota.
Ve výhodném provedení se vynález týká molekul nukleové kyseliny, které specificky hybridizují s transkripty molekul nukleové kyseliny. Tyto molekuly nukleové kyseliny jsou výhodně oligonukleotidy, které jsou dlouhé alespoň 10, zejména alespoň 15 a obzvláště výhodně alespoň
5 0 nukleotidů. Molekuly nukleové kyseliny a oligonukleotidy vynálezu mohou být použity například jako primery pro reakci PCR (polymerázová řetězová reakce). Mohou být také složky „antisense“ konstruktů (konstruktů s opačnou orientací) nebo molekul DNA kódujících vhodné ribozymy.
Jak již bylo uvedeno, do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží vektory obsahujících molekuly nukleové kyseliny podle vynálezu. Výhodně jsou plazmidy, kosmidy, viry, bakteriofágy a další vektory obvykle používané na poli genetického inženýrství.
Sekvence nukleové kyseliny podle vynálezu je výhodně operativně spojena s regulačními prvky ve vektoru podle vynálezu, což zaručuje transkripci a syntézu RNA v prokaryotických a/nebo eukaryotických buňkách, která může být translatována.
Expresní vektory podle vynálezu umožňují produkci enzymů syntetizujících fruktosylové polymery s krátkým řetězcem v různých hostitelských organismech.
-5CZ 299374 B6
Kódované enzymy mohou být použity pro produkci fruktosylových polymerů s krátkým řetězcem také mimo hostitelské organismy. Takto mohou být použity pro produkci fruktosylových polymerů s krátkým řetězcem fermentační a další biotechnologické metody. Například je také představitelné, že fruktosylové polymery budou produkovány prostřednictvím imobil izo váných enzymů.
Podle vynálezu jsou výhodné regulační prvky promotoru patatinu B33. Další výhodné promotory jsou promotor 35S CaMV a promotor genu alkoholdehydrogenázy ze Saccharomyces cerevisiae.
Vektory podle vynálezu mohou mít další funkční jednotky ovlivňující stabilizaci vektoru v hostitelském organismu, jako je bakteriální počátek replikace nebo 2-μ DNA pro účel stabilizace v Sacharomyces cerevisiae. Mimoto mohou být obsaženy sekvence „levé hranice“ a „pravé hranice“ T-DNA z Agrobacterium, čímž se umožní stabilní integrace do genomu rostlin.
Navíc vektory podle vynálezu mohou obsahovat funkční terminátory, jako je terminátor genu oktopinsyntetázy z Agrobacterium.
Aby se enzym transportoval do různých buněčných kompartmentů, je v dalším provedení molekula nukleově kyseliny vynálezu spojena s vektorem vynálezu molekulou nukleově kyseliny kódující funkční signální sekvenci. Touto modifikací může být například přidání N-koncové signální sekvence pro sekreci do prostoru buněčné membrány vyšších rostlin, ale předmětem vynálezu může být také každá další modifikace, která vede k fúzi signální sekvence s kódovanou fruktosyltransferázou.
V obzvláště výhodném provedení se vynález týká plazmidu pB33-cySST, jehož konstrukce je popsána v příkladech (obr. 1).
Zajímavá je exprese molekul nukleové kyseliny podle vynálezu v prokaryotických buňkách, například v Escherichia coli, protože tímto způsobem je možné přesněji charakterizovat enzymatické aktivity enzymů kódujících tyto molekuly.
Jak již bylo výše specifikováno, vynález se rovněž týká hostitelských buněk přechodně nebo stabilně obsahujících molekuly nukleové kyseliny nebo vektory podle vynálezu. Hostitelskou buňkou se rozumí organismus, který je schopný zavedení in vitro rekombinantní DNA a pak eventuálně syntetizovat proteiny kódované molekulami nukleové kyseliny podle vynálezu.
Výhodně jsou těmito buňkami prokaryotické nebo eukaryotické buňky. Vynález se zejména týká rostlinných buněk obsahujících vektorové systémy podle vynálezu nebo jejich deriváty či části. Výhodně jsou schopné syntetizovat enzymy pro produkci fruktosylových polymerů s krátkým řetězcem díky faktu, že do nich byly vneseny vektorové systémy podle vynálezu, jejich deriváty nebo části. Buňky podle vynálezu jsou výhodně charakterizovány faktem, že zavedená molekula nukleové kyseliny vynálezu je buď heterologní vzhledem k transformované buňce, tj. v těchto buňkách se přirozeně nevyskytuje, neboje v genomu lokalizována na jiném místě, než příslušná přirozeně se vyskytující sekvence.
Molekulami podle předmětného vynálezu je možno kódovat proteiny a rovněž tak je možno navrhnout způsoby jejich přípravy, kterými se hostitelská buňka podle vynálezu pěstuje za podmínek umožňujících syntézu proteinu, a protein je pak izolován z pěstovaných buněk a/nebo kultivačního média. Kromě toho se vynález týká SST, které mohou být produkovány rostlinami podle vynálezu.
Poskytnutím molekul nukleové kyseliny podle vynálezu je nyní možné produkovat fruktosylové polymery s krátkým řetězcem v každém organismu prostřednictvím genetického inženýrství, zatímco až dosud nebylo možné rostliny modifikovat konvenčními metodami, například kříže55 ním, tak, aby byly schopné syntetizovat fruktosylové polymery. Zvýšením aktivity proteinů
-6CZ 299374 B6 vynálezu, například nadměrnou expresí („overexpresí“) vhodných molekul nukleové kyseliny nebo poskytnutím mutant, které již nadále nepodléhají buněčné specifickým regulačním mechanismům a/nebo které mají změněné teplotní závislosti vzhledem k jejich aktivitě, je možné zvýšit výtěžek v rostlinách modifikovaných genetickým inženýrstvím.
Podle předmětného vynálezu je tudíž možná exprese molekul nukleové kyseliny podle vynálezu v rostlinných buňkách, aby se zvýšila aktivita příslušné SST nebo aby se SST zavedla do buněk, které normálně tento enzym neexprimují. Nadto je možné modifikovat molekuly nukleové kyseliny podle vynálezu metodami odborníkovi známými, aby se získaly SST podle vynálezu, které již nadále nepodléhají buněčně specifickým regulačním mechanismům nebo které mají změněnou teplotní závislost nebo specifičnost k substrátu či produktu.
Když jsou molekuly nukleové kyseliny exprimovány v rostlinách, může být syntetizovaný protein lokalizovaný v jakémkoliv kompartmentu rostlinné buňky. Aby se dosáhlo lokalizace ve specifickém kompartmentu, musí být odstraněna sekvence zaručující lokalizaci ve vakuole, a je-li to nutné, zbylá kódující oblast musí být spojena se sekvencemi DNA zaručujícími lokalizaci ve specifickém kompartmentu. Takové sekvence jsou známy (viz např. Braun et al., EMBO J, 11, 1992, 2219- 3227; Wolter et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 85, 1988, 846-850; Sonnewald et al., Planí J., 1, 1991, 95-106).
Do rozsahu předmětného vynálezu tudíž také patří transgenní rostlinné buňky, které byly transformovány jednou nebo několika molekulami nukleové kyseliny podle vynálezu, a také transgenní rostlinné buňky pocházejících z takových transformovaných buněk. Takové buňky obsahují jednu nebo několik molekul nukleové kyseliny podle vynálezu, které jsou výhodně spojeny s regulačními DNA prvky zaručujícími transkripci v rostlinných buňkách, zejména s promotorem. Takové rostlinné buňky se odlišují od přirozeně se vyskytujících rostlinných buněk tím, že obsahují alespoň jednu molekulu nukleové kyseliny podle vynálezu, která se v těchto buňkách přirozeně nevyskytuje, nebo tím, že molekula je zavedena do genomu buňky na místo, kde se přirozeně nevyskytuje, tj. do jiné genomové oblasti.
Z transgenních rostlinných buněk mohou být regenerovány celé rostliny použitím metod odborníkům známým. Do rozsahu předmětného vynálezu tudíž rovněž náleží rostliny, které lze získat regenerací transgenních rostlinných buněk podle vynálezu.
Dalším aspektem předmětného vynálezu jsou rostliny obsahující transgenní rostlinné buňky popsané výše. Transgenní rostliny mohou být v podstatě rostliny jakéhokoli rostlinného druhu, tj. jak jednoděložné, tak dvouděložné. Výhodně jsou to plodiny, zejména rostliny, které syntetizují a/nebo ukládají škrob, jako jsou pšenice, ječmen, rýže, kukuřice, řepa cukrovka, cukrová třtina nebo brambory. Zejména výhodné jsou rostliny ukládající sacharózu.
Jak již bylo uvedeno, do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží rozmnožovací materiál a produkty sklizně rostlin podle vynálezu, například ovoce, semena, hlízy, podnoží, sadby, řízky apod.
Transgenní rostlinné buňky a rostliny podle vynálezu syntetizují fruktosylové polymery s krátkým řetězcem díky expresi nebo dodatečné expresi alespoň jedné molekuly nukleové kyseliny podle vynálezu.
Vynález se tedy také týká fruktosylových polymerů s krátkým řetězcem získatelných z transgenních rostlinných buněk a rostlin podle vynálezu, jakož i z rozmnožovacího materiálu a produktů sklizně.
Transgenní rostlinné buňky podle vynálezu mohou být regenerovány na celé rostliny metodami odborníkovi známými. Proto se předmět vynálezu také týká rostlin obsahujících transgenní rostlinné buňky podle vynálezu. Tyto rostliny jsou výhodně plodiny, zejména rostliny, které synte-7CZ 299374 B6 tizují a/nebo ukládají sacharózu a/nebo škrob. Zejména výhodná je brambora. Vynález se také týká rozmnožovacího materiálu rostlin podle vynálezu, obzvláště hlíz.
Aby se v rostlinných buňkách exprimovaly molekuly nukleové kyseliny podle vynálezu v „sen5 se“ (tj. souhlasně s normálním smyslem transkripce) nebo „antisense“ (tj. proti směru normální transkripce) orientaci, jsou spojeny s regulačními DNA prvky, které zaručují transkripci v rostlinných buňkách. To jsou zejména promotory. V podstatě je pro expresi vhodný jakýkoliv promotor aktivní v rostlinných buňkách.
Promotor může být vybrán tak, že se exprese uskuteční konstitutivně nebo pouze v určitém pletivu, na určitém stupni vývoje rostliny nebo v určité době určené vnějšími podněty. Vzhledem k rostlině může být promotor homologní nebo heterologní. Vhodné promotory jsou například promotor 35S RNA z viru mozaiky květáku a ubichitinový promotor z kukuřice pro konstitutivní expresi, zejména výhodný je promotor genu patatinu B33 (Rocha-Sosa et al., EMBO J., 8, 1989,
23-29) pro expresi specifickou pro hlízu u brambor nebo promotor zaručující pouze expresi ve fotosynteticky aktivním pletivu, například promotor ST-LS1 (Slockhaus et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 84, 1987, 7943-7947; Stockhaus et al., EMBO J, 8, 1989, 2445-2451), nebo expresi specifickou pro endosperm promotory HMG ze pšenice, promotor USP, promotor faseolinu nebo promotory zeinových genů z kukuřice.
Kromě toho zde může být terminační sekvence sloužící pro správné ukončení transkripce, a také připojení konce poly-A k transkriptů, což je funkce nutná pro stabilizaci transkriptů. Tyto prvky jsou popsány v odborné literatuře (viz. Gielen et al., EMBO J, 8, 1989, 23-29) a mohou být libovolně zaměňovány.
Pro zavádění cizích genů do vyšších rostlin existuje velký počet dostupných klonovacích vektorů obsahujících replikační signál pro E. coli a genový markér pro selekci transformovaných bakteriálních buněk. Příklady těchto vektorů jsou pBR322, vektory řádu pUC, řady M13mp, pACYC184 apod. Požadovaná sekvence může být vložena do vektoru ve vhodném štěpném místě. Získaný plazmid je vhodný pro transformaci buněk E. coli. Transformované buňky E. coli jsou pak pěstovány ve vhodném médiu, poté jsou sklizeny a lyžovány. Plazmid je regenerován. Jako analytické metody pro charakterizaci regenerované plazmidové DNA se obvykle používají restrikční analýzy, gelové elektroforézy a další biochemické nebo molekulárně biologické metody. Po každé manipulaci může být plazmidová DNA štěpena a regenerované fragmenty DNA spojeny s dalšími sekvencemi DNA. Každá plazmidová DNA sekvence může být klonována do téhož nebo jiného plazmidů.
Pro zavedení DNA do rostlinné hostitelské buňky je dostupný velký počet metod. Tyto metody zahrnují transformaci rostlinných buněk s T-DNA pomocí Agrobacterium tumefaciens nebo
Agrobacterium rhizogenes jako prostředků transformace, fúzi protoplastů, injekci, elektroporaci DNA, zavedení DNA prostřednictvím biolistických metod, jakož i další možnosti.
Pro injekci a elektroporaci DNA do rostlinných buněk nejsou na použité plazmidy žádné specifické požadavky. Mohou být použity jednoduché plazmidy, jako jsou deriváty pUC. Jestli mají být z takto transformovaných buněk regenerovány celé rostliny, měl by se použít markér pro selekci.
V závislosti na metodě pro zavedení požadovaných genů do rostlinné buňky mohou být nezbytné další sekvence DNA. Jestliže je například pro transformaci rostlinné buňky použit plazmid Ti nebo Ri, alespoň pravý hraniční úsek, ale často pravý a levý hraniční úsek T-DNA plazmidů Ti a
Ri musí být připojen jako hraniční úsek ke genům, které mají být do buňky zavedeny.
Jestliže se pro transformaci použije Agrobacterium, musí být zaváděná DNA klonována do specifických plazmidů, a sice buďto do intermediámího, nebo do binárního vektoru. Intermediární vektory mohou být integrovány homologní rekombinací do plazmidů Ti nebo Ri v Agro-8CZ 299374 B6 bacterium díky sekvencím, které jsou homologní k sekvencím v T-DNA. Plazmid Ti nebo Ri dále obsahuje úsek vir nezbytný pro přenos T-DNA. Intermediámí vektory se nemohou replikovat v Agrobacterium. Prostřednictvím pomocného (helper) plazmidů může být intermediámí vektor přenesen do Agrobacterium tumefaciens (konjugací). Binární vektory se mohou replikovat jak v E. coli, tak i Agrobacterium. Obsahují markerový gen pro selekci a linker nebo polylinker (klonovací nebo mnohočetné klonovací místo) ohraničený pravým a levým T-DNA hraničním úsekem. Mohou být transformovány přímo do Agrobacterium (Holsters et al., Mol. Gen. Genet., 163, 1978, 181-187). Agrobacterium sloužící jako hostitelská buňka by mělo obsahovat plazmid nesoucí úsek vir. Usek vir je nezbytný pro přenos T-DNA do rostlinné buňky.
Může zde být i další T-DNA. Agrobacterium takto transformované se pak použije pro transformaci rostlinných buněk. Použití T-DNA pro transformaci rostlinných buněk bylo rozsáhle zkoumáno a popsáno v dokumentech EP-A-120 516; Hoekema: The Binary Plant Vector System, Offsetdrukkerij Kanters Β. V., Alblasserdam, 1985, Chapter V, Fraley et al., Crit. Rev. Plant. Sci., 4, 1-46, aAn et al., EMBOJ., 4, 1985, 277-287.
Pro přenos DNA do rostlinných buněk se rostlinné explantáty kultivují společně s Agrobacterium tumefaciens nebo Agrobacterium rhizogenes. Z infikovaného rostlinného materiálu (jako jsou např. kousky listů, části stonku, kořeny, ale také protoplasty nebo rostlinné buňky kultivované v suspenzi) mohou být regenerovány celé rostliny ve vhodném médiu, které může obsahovat antibiotika nebo biocidní látky pro selekci transformovaných buněk. Rostliny získané tímto způsobem mohou být testovány na přítomnost zavedené DNA. Jsou známy další možnosti zavádění cizorodé DNA za použití biolistických metod nebo transformací protoplastů (viz. např. Willmitzer, L., 1993, Transgenic plants. In: Biotechnology, A Multi-Volume Comprehensive Treatise (H. J. Rehm, G. Reed, A. Piihler, P. Stadler, eds.), Vol. 2, 627-659, VCH Weinheim25 New York-Basel-Cambridge).
Alternativní systémy pro transformaci jednoděložných rostlin jsou transformace pomoci biolistického přístupu, elektricky nebo chemicky vyvolané zavedení DNA do protoplastů, elektroporace částečně permeabilizovaných buněk, makroinjekce DNA do květů, mikroinjekce DNA do mikrospór a proembryí, introdukce DNA do klíčících pylových zrn a zavedení DNA do embryí bobtnáním (přehled viz: Potrykus, Physiol. Plant, 1990, 269-273).
Zatímco transformace dvouděložných rostlin prostřednictvím vektorového systému plazmidů Ti s pomocí Agrobacterium tumefaciens je dobře zavedena, novější výzkumné práce naznačují, že také jednoděložné rostliny jsou přístupné pro transformaci prostřednictvím vektorů založených na
Agrobacterium {Chán et al., Plant Mol. Biol, 22, 1993, 491-506; Iliei et al., Plant J, 6, 1994, 271-282; Bytebier et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 84, 1987, 5345-5349; Raineri et al., Bio/Technology, 8, 1990, 33-38; Gould et al., Plant Physiol., 95, 1991, 426-434; Mooney et al., Plant, Cell Tiss. & Org. Cult, 25, 1991, 209-218; Li et al., Plant Mol. Biol., 20, 1992, 103740 1048).
Tři zvýše uvedených transformačních systémů mohou být použity také pro různé obilniny: elektroporace tkání, transformace protoplastů a přenos DNA ostřelováním regenerativní tkáně a buněk částicemi (přehled viz: Jáhne et al., Euphytica, 85, 1995, 35-44).
V odborné literatuře byla také často popisována transformace pšenice (přehled viz: Maheshwari et al., Critical Reviews in Plant Science, 14(2), 1995, 149-178).
Vynález se také týká rostlin obsahujících alespoň jednu, ale výhodně velké množství buněk, obsahujících vektorové systémy podle vynálezu nebo deriváty či jejich části, které jsou schopny syntetizovat enzymy pro produkci fruktosylových polymerů s krátkým řetězcem díky zavedení vektorových systémů, derivátů nebo částí vektorových systémů podle vynálezu. Vynález také poskytuje rostliny mnoha různých druhů, rodů, čeledí, řádů a tříd, které jsou schopné syntetizovat enzymy pro produkci fruktosylových polymerů s krátkým řetězcem díky zavedeným vektorovým systémům nebo derivátům nebo jejich částem. Protože známé rostliny nejsou schopny produ-9CZ 299374 B6 kovat fruktosylové polymery s krátkým řetězcem, je snadné kontrolovat, zda byla metoda úspěšně provedena, například chromatografickou analýzou cukrů obsahujících fruktózu. Naproti tomu je výhodné, že několik málo rostlin obsahuje fruktosylové polymery, protože tím jsou definované molekulové hmotnosti, tj. velikost fruktosylového polymeru s krátkým řetězcem.
Nadto je možná lokalizace v různých buněčných kompartmentech a různých orgánech, jakož i zvýšení exprese, a tedy i výtěžku.
Fruktosylové polymery s krátkým řetězcem je možno připravit postupem zahrnujícím:
a) kontakt sacharózy nebo ekvivalentního substrátu s SST podle vynálezu za podmínek umožňu10 jících konverzi na fruktosylové polymery s krátkým řetězcem, a
b) získání fruktosylových polymerů tvořených tímto způsobem.
Povaha vytvořených fruktosylových polymerů závisí na enzymové specifitě fruktosyltransferázy. Když je použita SST podle vynálezu, tvoří se nejspíš kestóza, ale také nystóza a fruktosylnystóza.
Kromě toho se vynález týká fruktosylových polymerů produkovaných rostlinou buňkou nebo rostlinou podle vynálezu nebo získaných z rozmnožovacího materiálu nebo produktů sklizně rostlin nebo rostlinných buněk podle vynálezu nebo získaných výše popsaným způsobem podle vynálezu. Tyto fruktosylové polymery mohou být výhodně použity pro produkci potravin, jako je pečivo nebo těstoviny. Výhodně mohou být tyto fruktosylové polymery použity pro zvýšení viskozity vodných systémů, jako detergenty, jako suspendující činidla nebo pro urychlení sedimentačního procesu a komplexování, ale také pro vázání vody.
Přehled obrázků
Obrázek 1: ukazuje konstrukci plazmidu pB33-cySST.
Vektor: pBinB33 (derivát pBinI9; Bevan, 1984, Nucl. Acids Res., 12:8711) promotor: promotor B33 (Rocha-Sosa et al., 1989, EMBO J., 8: 23-29) donor: Solanum tuberosum kódující úsek: gen SST z Cynars scolymus orientace: sense terminátor: polyadenylační signál z genu oktopinsyntetázy z A.tumefaciens, plazmid pTiACH5 (Gielen et al., 1984, EMBO J., 3: 835-846) donátor: Agrobacterium tumefaciens rezistence: kanamycin
Obrázek 2: ukazuje analýzu rozpustných cukrů v hlízách transgenních rostlin, které byly tvořeny za použití vektorového systému pB33-cySST. Fruktosylové polymery s krátkým řetězcem (zejména 1-kestóza) vytvořené díky genetické modifikaci jsou označeny.
Obrázek 3: ukazuje analýzu rozpustných cukrů v transgenních rostlinách, které byly tvořeny za použití vektorového systému pB33-cySST a p35S-cySST, ve srovnání s rostlinami divokého typu.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Identifikace, izolace a charakterizace cDNA kódující sacharózofruktosyltransferázu závislou na sacharóze z artyčoku (Cynare scolymus)
Z květních disků artyčoku byla izolována celková RNA (Sambrook et al., viz výše). Poly(A)+ mRNA se izolovala za použití mRNA izolačního systému PolyATtract (Promega Corporation,
Madison, WI, USA). Komplementární DNA (cDNA) se syntetizovala z 5 pg této RNA pomocí soupravy pro syntézu „ZAp-cDNA synthesis kit“ od firmy Stratagene podle instrukcí výrobce.
-10CZ 299374 B6
Získalo se 2x106 nezávislých rekombinantních fágů. Amplifikovaná cDNA knihovna se testovala obvyklými metodami pomocí fragmentu DNA značeného 32P a odpovídajícího 3'-konci z 6-SFT cDNA (Sprenger et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 92, 1995, 11652) o délce 392 bp. Tento fragment se získal pomocí RT-PCR (užitím soupravy „RT-PCR Kit“, Stratagene, Heidelberg,
Germany) z kompletní RNA z primárních listů ječmene indukovaných světlem (72 hodin). Pozitivní klony se dále analyzovaly.
Příklad 2
Sekvenční analýza inzertu cDNA plazmidů pCy21
Plazmidová DNA byla izolována z klonu pCy21. Sekvence inzertu cDNA se určovala obvyklými metodami pomocí dideoxynukleotidové metody (Sanger et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 74, 1977, 5463-5467).
Inzert klonu pCy21 je DNA o délce 2055 bp. Nukleotidová sekvence je uvedena v sekvenci id. č. 1. Odpovídající aminokyselinová sekvence je uvedena v sekvenci id. č. 2.
Sekvenční analýza a srovnání sjiž publikovanými sekvencemi ukázaly, že sekvence uvedená v sekvenci id. č. 1 je nová a zahrnuje kódující úsek vykazující homologie s SST z jiných organismů.
Příklad 3
Příprava plazmidů pB33-cySST a zavedení plazmidů do genomu brambory
Plazmid pB33-cySST obsahuje tři fragmenty A, B a C v binárním vektoru pBinl9 (Bevan, 1984, Nucl. Acids. Res., 12: 8711, modifikováno podle Becker, 1990, Nucl. Acids Res., 18: 203) (srov. obr. 1). Fragment A obsahuje promotor B33 patatinového genu b33 z brambory. Obsahuje fragment Dral (pozice -1512 až pozice +14) patatinového genu B33 (Rocha-Sosa et al., 1989, EMBO J., 8:23-29), který je vložen mezi štěpná místa EcoRI a Sací polylinkeru z pBinl9-Hyg.
Fragment B obsahuje kódující úsek sekvence uvedené v sekvenci id. č. 1. Fragment B byl získán jako fragment Notl s tupými konci z vektoru pBluescript SK, ve kterém je vložen do štěpného místa EcoRI prostřednictvím EcoRI/Notl sekvence linkeru. Fragment C obsahuje polyadenylační signál genu 3 zT-DNA Ti plasmidu pTi ACH 5 (Gielen et al., 1984; EMBO J., 3, 835-846), nukleotidy 11749 - 11939, který byl izolován jako fragment Pvu II-Hind III z plazmidů pAGV
40 (Herrera-Estrella et al., 1983, Nátuře, 303, 209 - 213) a klonován mezi štěpná místa Sphl a
Hind III polylinkeru zpBinl9-Hyg po přidání linkerů Sph I ke štěpnému místu PvuII. Plazmid pB33-cySST má velikost přibližně 14 kb. Tento plazmid byl zaveden do Agrobacterium (Hófgen and Willmitzer, Nucleic, Acids Res., 16, 1988, 9877).
Plazmid pB33-cySST byl zaveden do rostlin brambor prostřednictvím genového přenosu vyvolaného Agrobacterium užitím výše popsaných obvyklých metod. Celé rostliny byly regenerovány z transformovaných buněk. Z regenerovaných rostlin byly získány enzymové extrakty a ty byly testovány na přítomnost fruktosylových polymerů. Analýza se prováděla jak popisuje Róber (Planta, 199, 528-536). Analýza hlíz velkého počtu transformovaných rostlin transformovaných tímto vektorem jasně ukázala výskyt fruktosylových polymerů s krátkým řetězcem, zejména 1-kestózy, který může být přisouzen expresí genu SST podle vynálezu (srov. obr. 2).
Příklad 4
Analýza rozpustných cukrů u rostlin divokého typu a transgenních rostlin obsahujících SST
Byly připraveny transgenní rostliny obsahující vektory pB33-cySST a 35S-cySST (mající kódující úsek sekvence id. č. 1 pod kontrolou promotoru 35S) tak, jak je popsáno v příkladu 3.
- 11 CZ 299374 B6
Z transgenních rostlin a z rostlin divokého typu se získaly extrakty a vyšetřovaly se na přítomnost fruktosylových polymerů, viz příklad 3. Analýza HPAEC ukázaná na obrázku 3 dokazuje produkci oligofruktanů. Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce 1.
Tabulka 1
Rozpustné cukry (sacharóza a oligofruktan) u rostlin divokého typu (WT) a transgenních rostlin
Unie sacharóza 1-kestóza nystóza F-nystóza
WT 1 (Désirée) 2,09 - - -
WT 2 (Désirée) 1,67 - - -
B33-cySST 6 2,26 3,58 1,60 -
B33-cySST 54 5,13 3,06 2,90 0,23
35S-cySST 18 4,08 4,05 1,51 0,12
35S-cySST 22 4,80 4,14 2,19 < 0,1
Hodnoty uvedeny v g cukru na kg čerstvé hmotnosti
Jakje zjevné z obrázku 3 a tabulky 1, obsah fruktosylových polymerů, zejména 1-kestózy, převyšuje obsah sacharózy. Tedy pokusy provedené podle předkládaného vynálezu dokazují použi15 telnost molekul nukleové kyseliny vynálezu pro produkci fruktosylových polymerů v transgenních rostlinách.
SEZNAM SEKVENCÍ (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 1:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 2226 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (vi) PŮVODNÍ ZDROJ:
(A) ORGANISMUS: Cynara Scolymus (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: CDS (B) POZICE: 8..1918 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 1:
- 12CZ 299374 B6
CCACCAC ATG Met GCT TCC TCT ACC ACC ACC CCA CTC CTC CCT CAC CAC CAC
Ala Ser Ser Thr 5 Thr Thr Pro Leu Leu 10 Pro His His His
1
CTT CAG AAC CCG CAA CAA CTC GCC GGA TCT CCG GCA GCT CAT CGT CTA
Leu Gin 15 Asn Pro Gin Gin 20 Leu Ala Gly Ser Pro Ala 25 Ala His Arg Leu 30
TCC CGA CCC ACA CTC CTT TCT GGG ATC CTT GTT TCG GTC CTA GTC ATC
Ser Arg Pro Thr Leu 35 Leu Ser Gly Ile Leu Val Ser 40 Val Leu Val 45 Ile
TGT GCT CTC GTT GCT GTA ATC CAC AAC CAA TCA CAG CAA CCC TAC CAT
Cys Ala Leu Val 50 Ala Val Ile His Asn 55 Gin Ser Gin Gin Pro 60 Tyr His
GAC GGC GGA GCT AAA CCC TCC TCC TCC GCC GCT ACC ACC ACC TTC CCA
Asp Gly Gly 65 Ala Lys Pro Ser Ser 70 Ser Ala Ala Thr Thr 75 Thr Phe Pro
ACA GCG TCG CCA GAA GCT GGT TTG AAA CGG TTT CCC ATT GAG TTG AAA
Thr Ala 80 Ser Pro Glu Ala Gly 85 Leu Lys Arg Phe Pro 90 Ile Glu Leu Lys
ACG AAT GCT GAG GTT GAG TGG CAA CGC TCG GCT TAC CAT TTT CAG CCC
Thr Asn 95 Ala Glu Val Glu 100 Trp Gin Arg Ser Ala Tyr 105 His Phe Gin Pro 110
GAT AAG AAC TAC ATT AGC GAT CCT GAT GGC CCA ATG TAT CAC ATG GGG
Asp Lys Asn Tyr Ile 115 Ser Asp Pro Asp Gly Pro Met 120 Tyr His Met 125 Gly
TGG TAT CAT CTC TTC TAT CAG TAC AAT CCA GAG TCT GCC ATC TGG GGG
Trp Tyr His Leu 130 Phe Tyr Gin Tyr Asn 135 Pro Glu Ser Ala Ile 140 Trp Gly
AAC ATC ACA TGG GGC CAC TCC GTA TCC AAA GAC ATG ATC AAC TGG TTC
Asn Ile Thr 145 Trp cly His Ser Val 150 Ser Lys Asp Met Ile 155 Asn Trp Phe
CAT CTC CCC TTC GCC ATG GTC CCT GAC CAA TGG TAC GAT ATC GAA GGT
His Leu 160 Pro Phe Ala Met Val 165 Pro Asp Gin Trp Tyr 170 Asp Ile Glu Gly
GTC ATG ACC GGC TCC GCC ACC GTC CTC CCT GAC GGT CAG ATC ATC ATG
Val Met 175 Thr Gly Ser Ala 180 Thr Val Leu Pro Asp Gly 185 Gin Ile Ile Met 190
CTC TAC ACC GGC AAC GCG TAC GAT CTC TCG CAA CTG CAA TGC TTA GCA
Leu Tyr Thr Gly Asn 195 Ala Tyr Asp Leu Ser Gin Leu 200 Gin Cys Leu 205 Ala
TAT GCC GTC AAC TCG TCT GAT CCC CTC CTC CTC GAT TGG AAA AAG TAC
Tyr Ala Val Asn 210 Ser Ser Asp Pro Leu 215 Leu Leu Asp Trp Lys 220 Lys Tyr
GAG GGA AAT CCC ATC TTG TTC CCA CCT CCT GGG GTG GGA TAC AAG GAT
Glu Gly Asn 225 Pro Ile Leu Phe Pro 230 Pro Pro Gly Val Gly 235 Tyr Lys Asp
TTT CGG GAC CCA TCT ACA CTG TGG TTG GGT CCC GAT GGT GAA TAC AGA
Phe Arg Asp Pro Ser Thr Leu Trp Leu Gly Pro Asp Gly Glu Tyr Arg
240 245 250
145
193
241
289
337
385
433
481
529
577
625 €73
721
769
- 13 CZ 299374 B6
ATG GTA Met Val 255 ATG GGG TCC Ser AAG CAT AAC GAG ACC ATC Lys His Asn Glu Thr Ile GGT TGT Gly Cys GCC Ala TTG ATT Leu Ile 270 817
Met Gly
260 265
TAC CAT ACC ACT AAT TTT ACG CAT TTC GAG CTC AAG GAA GAG GTG CTT 865
Tyr His Thr Thr Asn Phe Thr His Phe Glu Leu Lys Glu Glu Val Leu
275 280 285
CAC GCC GTT ccc CAC ACG GGT ATG TGG GAA TGT GTG GAT CTT TAT CCG 913
His Ala Val Pro His Thr Gly Met Trp Glu Cys Val Asp Leu Tyr Pro
290 295 300
GTA TCC ACC ACG CAC ACA AAC GGG TTG GAC ATG GTG GAT AAC GGG CCG 961
Val Ser Thr Thr His Thr Asn Gly Leu Asp Met Val Asp Asn Gly Pro
305 310 315
AAT GTG AAG CAT GTG TTG AAA CAA AGT GGG GAT GAA GAT CGA CAT GAT 1009
Asn Val Lys His Val Leu Lys Gin Ser Gly Asp Glu Asp Arg His Asp
320 325 330
TGG TAT GCG CTC GGG ACT TAT GAC GTC GTG AAT GAT AAG TGG TAT CCA 1057
Trp Tyr Ala Leu Gly Thr Tyr Asp Val Val Asn Asp Lys Trp Tyr Pro
335 340 345 350
GAT GAC CCT GAA AAC GAT GTG GGT ATC GGG TTA AGA TAC GAT TTC GGA 1105
Asp Asp Pro Glu Asn Asp Val Gly Ile Gly Leu Arg Tyr Asp Phe Gly
355 360 365
AAG TTT TAT GCG TCA AAG ACG TTC TAC GAC CAA CAT AAG AAG AGA CGG 1153
Lys Phe Tyr Ala Ser Lys Thr Phe Tyr Asp Gin His Lys Lys Arg Arg
370 375 380
GTC CTT TGG GGT TAC GTT GGA GAA ACC GAT CCC CCT AAA TAC GAC GTT 1201
Val Leu Trp Gly Tyr Val Gly Glu Thr Asp Pro Pro Lys Tyr Asp Val
385 390 395
TAC AAG GGA TGG GCT AAC ATT TTG AAC ATT CCA AGG ACC ATA GTT TTG 1249
Tyr Lys Gly Trp Ala Asn Ile Leu Asn Ile Pro Arg Thr Ile Val Leu
400 405 410
GAC ACG AAA ACG AAT ACC AAT TTG ATT CAA TGG CCA ATT GCG GAA GTC 1297
Asp Thr Lys Thr Asn Thr Asn Leu Ile Gin Trp Pro Ile Ala Glu Val
415 420 425 430
GAA AAC TTG AGA TCG AAT AAA TAC AAT GAA TTC AAA GAC GTG GAG CTG 1345
Glu Asn Leu Arg Ser Asn Lys Tyr Asn Glu Phe Lys Asp Val Glu Leu
435 440 445
AAA CCG GGA TCA CTG ATT CCG CTC GAG ATA GGC ACA GCA ACA CAG TTG 1393
Lys Pro Gly Ser Leu Ile Pro Leu Glu Ile Gly Thr Ala Thr Gin Leu
450 455 460
GAT ATA ACT GCG ACA TTC GAA GTT GAT CAA ACG ATG TTG GAA TCG ACG 1441
Asp Ile Thr Ala Thr Phe Glu Val Asp Gin Thr Met Leu Glu Ser Thr
465 470 475
CTT GAA GCC GAT GTT TTG TTC AAT TGT ACG ACC AGT GAA GGT TCA GCC 1489
Leu Glu . Ala , Asp Val Leu Phe Asn Cys Thr Thr Ser Glu Gly Ser Ala
480 485 490
GGG , AGA · GGG GTG TTG GGG CCA TTT GGA CTG GTG GTT CTA GCT GAT GCC 1537
Gly Arg Gly ' Val Leu Gly Pro Phe Gly Leu Val Val Leu Ala Asp Ala
495 500 505 510
14CZ 299374 B6
GAA Glu CGA TCT GAG CAA CTT CCT GTG TAT TTC TAT ATA GCA AAA GAC ACC 1585
Arg Ser Glu Gin 515 Leu Pro Val Tyr Phe 520 Tyr Ile Tkla Lys Asp Thr 525
GAT GGA TCC TCA AAA ACT TAC TTC TGT GCC GAT GAA TCA AGA TCA TCG 1633
Asp Gly Ser Ser Lys Thr Ťyr Phe Cys Ala Asp Glu Ser Arg Ser Ser
530 535 540
AAC GAT GTA GAC ATA GGG AAA TGG GTG TAC GGA AGC AGT GTT CCT GTT 1681
Asn Asp Val Asp Xle Gly Lys Trp Val Tyr Gly Ser Ser Val Pro Val
545 550 555
CTA GAA GGC GAA AAA TTC AAC ATG AGG TTG CTG GTG GAT CAT TCA ATT 1729
Leu Glu Gly Glu Lys Phe Asn Met Arg Leu Leu Val Asp His Ser Ile
560 565 570
GTC GAA GGC TTC GCA CAA GGA GGC AGA ACG GTG GTG ACA TCA AGA GTG 1777
Val Glu Gly Phe Ala Gin Gly Gly Arg Thr Val Val Thr Ser Arg Val
575 580 585 590
TAT CCG GCG AAG GCG ATC TAC GGC GCT GCA AAG TTA TTT TTG TTC AAC 1825
Tyr Pro Ala Lys Ala Ile Tyr Gly Ala Ala Lys Leu Phe Leu Phe Asn
595 600 605
AAC GCC ACC GGA ATC AGC GTG AAG GCA TCT CTC AAG ATC TGG AAA ATG 1873
Asn Ala Thr Gly Ile Ser Val Lys Ala Ser Leu Lys Ile Trp Lys Met
610 615 620
AAG GAA GCA CAA CTG GAT CCA TTC CCT CTT TCT GGA TGG AGT TCT 1918
Lys Glu Ala Gin Leu Asp Pro Phe Pro Leu Ser Gly Trp Ser Ser
625 630 635
TGATGATGAT GATGATTAAG AACTCATTTC ATGAAGATGA TGATTAAGAA CTCATTTCAT 1978
GATGATGATG ATGATTCCAG TTTATATGCG TACCCTGTTC CCTTTACCTG TATGTGGTGG 2038
TGGTGGTGAA ATATGGTTAG CATGATTCCG GGTTGGCGAG GGCAATATGG TAATTTACTA 2098
TCGCTGTAGT AGTACTCCAC TTGTGAGATT ATATTTCATA AATTCAATTA TTATTCCTGT 2158
TTACAACCTT TTTCATTGTA TCATACCACC CATTGAATCC CATCATGTTC AATTAGTGTT 2218
GCAAAAAA 2226 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 2:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 637 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 2:
Met Ala ser Ser Thr Thr Thr Pro Leu Leu Pro His His His Leu Gin
1 5 10 15
Asn Pro Gin Gin Leu Ala Gly Ser Pro Ala Ala His Arg Leu Ser Arg
20 25 30
Pro Thr Leu Leu Ser Gly Ile Leu Val Ser Val Leu Val Ile Cys Ala
40 45
- 15CZ 299374 B6
Leu Val 50 Ala Val Ile His Asn 55 Gin Ser Gin Gin Pro 60 Tyr His Asp Gly
Gly 65 Ala Lys Pro Ser Ser 70 Ser Ala Ala Thr Thr 75 Thr Phe Pro Thr Ala 80
Ser Pro Glu Ala Gly 85 Leu Lys Arg Phe Pro 90 Ile Glu Leu Lys Thr 95 Asn
Ala Glu Val Glu 100 Trp Gin Arg Ser Ala 105 Tyr His Phe Gin Pro 110 Asp Lys
Asn Tyr Ile 115 Ser Asp Pro Asp Gly 120 Pro Met Tyr His Met 125 Gly Trp Tyr
His Leu 130 Phe Tyr Gin Tyr Asn 135 Pro Glu Ser Ala Ile 140 Trp Gly Asn Ile
Thr 145 Trp Gly His Ser Val 150 Ser Lys Asp Met Ile 155 Asn Trp Phe His Leu 160
Pro Phe Ala Met Val 165 Pro Asp Gin Trp Tyr 170 Asp Ile Glu Gly Val 175 Met
Thr Gly Ser Ala 180 Thr Val Leu Pro Asp 185 Gly Gin Ile Ile Met 190 Leu Tyr
Thr Gly Asn 195 Ala Tyr Asp Leu Ser 200 Gin Leu Gin cys Leu 205 Ala Tyr Ala
Val Asn 210 Ser Ser Asp Pro Leu 215 Leu Leu Asp Trp Lys 220 Lys Tyr Glu Gly
Asn 225 Pro Ile Leu Phe Pro 230 Pro Pro Gly Val Gly 235 Tyr Lys Asp Phe Arg 240
Asp Pro Ser Thr Leu 245 Trp Leu Gly Pro Asp 250 Gly Glu Tyr Arg Met 255 Val
Met Gly Ser Lys 260 His Asn Glu Thr Ile 265 Gly Cys Ala Leu Ile 270 Tyr His
Thr Thr Asn 275 Phe Thr His Phe Glu 280 Leu Lys Glu Glu Val 285 Leu His Ala
Val Pro 290 His Thr Gly Met Trp 295 Glu Cys Val Asp Leu 300 Tyr Pro Val Ser
Thr 305 Thr His Thr Asn Gly 310 Leu Asp Met Val Asp 315 Asn Gly Pro Asn Val 320
Lys His Val Leu Lys Gin Ser Gly Asp Glu Asp Arg His Asp Trp Tyr
- 16CZ 299374 B6
325
330
335
Ala Leu Gly Thr Tyr Asp Val Val Asn Asp Lys Trp Tyr Pro Asp Asp
340 345 35 0
Pro Glu Asn Asp Val Gly Ile Gly Leu Arg Tyr Asp Phe Gly Lys Phe
355 360 365
Tyr Ala Ser Lys Thr Phe Tyr Asp Gin His Lys Lys Arg Arg Val Leu
370 375 380
Trp Gly Tyr Val Gly Glu Thr Asp Pro Pro Lys Tyr Asp Val Tyr Lys
385 390 395 400
Gly Trp Ala Asn Ile Leu Asn Ile Pro Arg Thr Ile Val Leu Asp Thr
405 410 415
Lys Thr Asn Thr Asn Leu Ile Gin Trp Pro Ile Ala Glu Val Glu Asn
420 425 430
Leu Arg Ser Asn Lys Tyr Asn Glu Phe Lys Asp Val Glu Leu Lys Pro
435 440 445
Gly Ser Leu Ile Pro Leu Glu Ile Gly Thr Ala Thr Gin Leu Asp Ile
450 455 460
Thr Ala Thr Phe Glu Val Asp Gin Thr Met Leu Glu Ser Thr Leu Glu
465 470 475 480
Ala Asp Val Leu Phe Asn Cys Thr Thr Ser Glu Gly Ser Ala Gly Arg
485 490 495
Gly Val Leu Gly Pro Phe Gly Leu Val Val Leu Ala Asp Ala Glu Arg
500 505 510
Ser Glu Gin Leu Pro Val Tyr Phe Tyr Ile Ala Lys Asp Thr Asp Gly
515 520 525
Ser Ser Lys Thr Tyr Phe Cys Ala Asp Glu Ser Arg Ser Ser Asn Asp
530 535 540
Val Asp Ile Gly Lys Trp Val Tyr Gly Ser Ser Val Pro Val Leu Glu
545 550 555 560
Gly Glu Lys Phe Asn Met Arg Leu Leu Val Asp His Ser Ile Val Glu
565 570 575
Gly Phe Ala Gin Gly Gly Arg Thr Val Val Thr Ser Arg Val Tyr Pro
580 585 590
Ala Lys Ala Ile Tyr Gly Ala Ala Lys Leu Phe Leu Phe Asn Asn Ala
595 600 605
Thr Gly Ile Ser Val Lys Ala Ser Leu Lys Ile Trp Lys Met Lys Glu
610 615 620
Ala Gin Leu Asp Pro Phe Pro Leu Ser Gly Trp Ser Ser
625 630 635
17CZ 299374 B6 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 3:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 1911 párů bází (B) TYP: nukleotid (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární io (ii) TYP MOLEKULY: jiná nukleová kyselina (A) POPIS: /popis = „syntetická DNA“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: CDS 15 (B) POZICE: 1..1911 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 3:
ATG GCA AGC TCT ACG Met Ala Ser Ser Thr ACT Thr ACA CCG TTG TTA CCG CAC CAC His 650 CAT His TTG Leu CAG Gin 48
Thr Pro 645 Leu Leu Pro His
640
AAT CCT CAG CAG TTG GCT GGA AGT CCA GCT GCA CAC AGG TTG AGT CGT 56
Asn Pro Gin Gin Leu Ala Gly Ser Pro Ala Ala His Arg Leu Ser Arg
655 660 665
CCT ACT CTT TTG AGT GGT ATA TTG GTA AGT GTA CTG GTC ATC TGC GCA 144
Pro Thr Leu Leu Ser Gly Ile Leu Val Ser Val Leu Val Ile Cys Ala
670 675 680 685
TTG GTC GCA GTT ATA CAT .AAT CAG TCT CAA CAG CCA TAC CAT GAT GGT 152
Leu Val Ala Val Ile His Asn Gin Ser Gin Gin Pro Tyr His Asp Gly
690 695 700
GGT GCC AAG CCT AGC TCT AGC GCT GCC ACG ACT ACT TTT CCT ACA GCC 240
Gly Ala Lys Pro Ser Ser Ser Ala Ala Thr Thr Thr Phe Pro Thr Ala
705 710 715
AGC CCT GAA GCA GGA TTG AAA AGA TTC CCT ATC GAA CTC AAG ACC AAC 288
Ser Pro Glu Ala Gly Leu Lys Arg Phe Pro Ile Glu Leu Lys Thr Asn
720 725 730
GCA GAA GTC GAG TGG CAG AGA AGT GCA TAC CAC TTC CAG CCA GAT AAG 336
Ala Glu Val Glu Trp Gin Arg Ser Ala Tyr His Phe Gin Pro Asp Lys
735 740 745
AAC TAT ATC TCA GAC CCA GAC GGG CCT ATG TAC CAT ATG GGT TGG TAC 384
Asn Tyr Ile Ser Asp Pro Asp Gly Pro Met Tyr His Met Gly Trp Tyr
750 755 760 765
CAC TTA TTC TAC CAA TAT AAT CCA GAG AGT GCA ATA TGG GGA AAT ATA 432
His Leu Phe Tyr Gin Tyr Asn Pro Glu Ser Ala Ile Trp Gly Asn Ile
770 775 780
ACT TGG GGT CAT AGC GTT AGC AAG GAT ATG ATT AAT TGG TTT CAC TTG 480
Thr Trp Gly His Ser Val Ser Lys Asp Met Ile Asn Trp Phe His Leu
795 790 795
CCA TTT GCG ATG GTC CCA GAT CAA TGG TAT GAT ATT GAG GGC GTT ATG 528
Pro Phe Ala Met Val Pro Asp Gin Trp Tyr Asp Ile Glu Gly Val Met
900 905 810
18CZ 299374 B6
ACT Thr GGA Gly 815 AGC Ser GCA Ala ACT Thr GTT Val TTG CCA GAC GGA CAG ATC ATT ATG TTG TAT 576
Leu 820 Pro Asp Gly Gin Ile 825 Ile Met Leu Tyr
ACC GGT AAT GCA TAC GAC TTG AGT CAG TTG CAG TGT CTC GCC TAT GCC 624
Thr 830 Gly Asn Ala Tyr Asp 835 Leu Ser Gin Leu Gin 840 Cys Leu Ala Tyr Ala 845
GTT AAT AGC AGC GAC CCC TTG TTG ctc GAT TGG AAG AAG TAC GAG GGC 672
Val Asn Ser Ser Asp 850 Pro Leu Leu Leu Asp Trp 855 Lys Lys Tyr Glu 860 Gly
AAT CCG ATT CTC TTT CCG CCT CCT GGC GTC GGA TAT AAA GAT TTC AGA 720
Asn Pro Ile Leu 865 Phe Pro Pro Pro Gly 870 Val Gly Tyr Lys Asp 875 Phe Arg
GAT CCC AGT ACT CTC TGG CTC GGT CCA GAC GGA GAG TAC CGT ATG GTC 768
Asp Pro Ser 880 Thr Leu Trp Leu Gly 885 Pro Asp Gly Glu Tyr 890 Arg Met Val
ATG GGC AGC AAA CAC AAT GAA ACA ATC GGG TGC GCA CTC ATC TAT CAC 816
Met Gly 895 Ser Lys His Asn Glu 900 Thr Ile Gly Cys Ala 905 Leu Ile Tyr His
ACG ACA AAC TTC ACG CAC TTC GAG CTC AAG GAA GAA GTC TTA CAC GCT 864
Thr 910 Thr Asn Phe Thr His 915 Phe Glu Leu Lys Glu 920 Glu Val Leu His Ala 925
GTT CCT CAC ACA GGA ATG TGG GAG TGC GTC GAC TTA TAT CCC GTC AGT 912
Val Pro His Thr Gly 930 Met Trp Glu Cys Val Asp 935 Leu Tyr Pro Val 940 Ser
ACT ACT CAT ACG AAT GGC TTG GAT ATG GTC GAC AAT GGT CCC AAC GTC 960
Thr Thr His Thr 945 Asn Gly Leu Asp Met 950 Val Asp Asn Gly Pro 955 Asn Val
AAA CAT GTC CTC AAG CAG TCC GGC GAC GAG GAC AGG CAC GAC TGG TAC 1008
Lys His Val 960 Leu Lys Gin Ser Gly Asp 965 Glu Asp Arg His 970 Asp Trp Tyr
GCT TTA GGT ACA TAT GAC GTC GTC AAC GAC AAA TGG TAT CCC GAC GAT 1056
Ala Leu 975 Gly Thr Tyr Asp Val 980 Val Asn Asp Lys Trp 985 Tyr Pro Asp Asp
CCC GAG AAC GAC GTC GGA ATT GGC CTT CGT TAC GAC TTC GGC Aa.G TTC 1104
Pro 990 Glu Asn Asp Val Gly 995 Ile Gly Leu Arg Tyr Asp 1000 Phe Gly Lys Phe 1005
TAC GCC AGT AAA ACA TTC TAC GAT CAG CAC AAA AAA CGT CGT GTT TTA 1152
Tyr Ala Ser Lys Thr Phe 1010 Tyr Asp Gin His Lys 1015 Lys Arg Arg Val Leu 1020
TGG GGA TAC GTC GGC GAG ACG GAC CCG CCC AAA TAC GAT GTC TAC AAA 1200
Trp Gly Tyr Val Gly 1025 Glu Thr Asp Pro Pro Lys 1030 Tyr Asp Val Tyr 1035 Lys
GGT TGG GCA AAT ATC CTC AAC ATA CCT CGC ACT ATT GTC CTC GAT ACG 1248
Gly Trp Ala Asn 1040 Ile Leu Asn Ile Pro 1045 Arg Thr Ile Val Leu 1050 Asp Thr
AAG ACA AAC ACG AAC CTC ATA CAG TGG CCT ATT GCC GAG GTG GAG AAT 1296
Lys Thr Asn 1055 Thr Asn Leu Tle Gin 1060 Trp Pro Ile Ala 1065 Glu Val Glu Asn
19CZ 299374 B6
TTA CGT AGC AAC AAA TAC AAC GAG TTC AAG GAT GTG GAA TTG AAG CCT 1344
Leu Arg 1070 Ser Asn Lys Tyr Asn 1075 Glu Phe Lys Asp Val 1080 Glu Leu Lys Pro 1085
GGA AGT TTG ATT CCG TTA GAA ATC GGT ACT GCT ACT CAA CTC GAC ATC 1392
Gly Ser Leu Ile Pro Leu Glu Ile Gly Thr Ala Thr Gin Leu Asp Ile
1090 1095 1100
ACC GCT ACT TTT GAG GTC GAT CAG ACC ATG CTC GAG AGT ACC TTA GAA 1440
Thr Ala Thr Phe Glu Val Asp Gin Thr Met Leu Glu Ser Thr Leu Glu
1105 1110 1115
GCG GAC GTA TTA TTT AAC TGT ACC ACA TCC GAG GGG AGC GCA GGT CGC 1488
Ala Asp Val Leu Phe Asn Cys Thr Thr Ser Glu Gly Ser Ala Gly Arg
1120 1125 1130
GGA GTC CTT GGT CCA TTC GGA CTT GTC GTC TTA GCG GAC GCA GAA AGA 1536
Gly Val Leu Gly Pro Phe Gly Leu Val Val Leu Ala Asp Ala Glu Arg
1135 1140 1145
AGC GAG CAG TTG CCC GTC TAT TTT TAC ATT GCC AAG GAC ACC GAC GGT 1584
Ser Glu Gin Leu Pro Val Tyr Phe Tyr Ile Ala Lys Asp Thr Asp Gly
1150 1155 1160 1165
TCC AGC AAG ACA TAC TTC TGC GCA GAT GAG TCC CGC AGC AGC AAC GAC 1632
Ser Ser Lys Thr Tyr Phe Cys Ala Asp Glu Ser Arg Ser Ser Asn Asp
1170 1175 1180
GTC GAT ATC GGC AAG TGG GTC TAT GGT TCG TCA GTC CCA GTG TTG GAG 1680
Val Asp Ile Gly Lys Trp Val Tyr Gly Ser Ser Val Pro Val Leu Glu
1185 1190 1195
GGA GAG AAA TTT AAC ATG CGC CTG CTT GTC GAC CAC AGC ATC GTC GAA 1728
Gly Glu Lys Phe Asn Met Arg Leu Leu Val Asp His Ser Ile Val Glu
1200 1205 1210
GGC TTC GCT CAG GGT GGC CGT ACT GTC GTA ACC AGT CGT GTC TAC CCT 1776
Gly Phe Ala Gin Gly Gly Arg Thr Val Val Thr Ser Arg Val Tyr Pro
1215 1220 1225
GCT AAA GCC ΑΤΑ TAT GGG GCA GCC AAA CTC TTC CTC TTT AAT AAT GCC 1824
Ala Lys Ala Ile Tyr Gly Ala Ala Lys Leu Phe Leu Phe Asn Asn Ala
1230 1235 1240 1245
ACA GGC ATA TCA GTC AAA GCC AGC TTA AAA ATT TGG AAA ATG AAA GAG 1872
Thr Gly Ile Ser Val Lys Ala Ser Leu Lys Ile Trp Lys Met Lys Glu
1250 1255 1260
GCT CAG TTG GAC CCG TTT CCA TTA AGC GGC TGG TCT AGC 1911
Ala Gin Leu Asp Pro Phe Pro Leu Ser Gly Trp Ser Ser
1265 1270 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 4:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 637 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 4:
-20CZ 299374 B6
Met 1 Ala Ser Ser Thr 5 Thr Thr Pro Leu Leu 10 Pro His His His Leu 15 Gin
Asn Pro Gin Gin 20 Leu Ala Gly Ser Pro 25 Ala Ala His Arg Leu 30 Ser Arg
Pro Thr Leu 35 Leu Ser Gly Ile Leu 40 Val Ser Val Leu Val 45 Ile Cys Ala
Leu Val 50 Ala Val Ile His Asn 55 Gin Ser Gin Gin Pro 60 Tyr His Asp Gly
Gly 65 Ala Lys Pro Ser Ser 70 Ser Ala Ala Thr Thr 75 Thr Phe Pro Thr Ala 80
Ser Pro Glu Ala Gly 85 Leu Lys Arg Phe Pro 90 Ile Glu Leu Lys Thr 95 Asn
Ala Glu Val Glu 100 Trp Gin Arg Ser Ala 105 Tyr His Phe Gin Pro 110 Asp Lys
Asn Tyr Ile 115 Ser Asp Pro Asp Gly 120 Pro Met Tyr His Met 125 Gly Trp Tyr
His Leu 130 Phe Tyr Gin Tyr Asn 135 Pro Glu Ser Ala Ile 140 Trp Gly Asn Ile
Thr 145 Trp Gly His Ser Val 150 Ser Lys Asp Met Ile 155 Asn Trp Phe His Leu 160
Pro Phe Ala Met Val 165 Pro Asp Gin Trp Tyr 170 Asp Ile Glu Gly Val 175 Met
Thr Gly Ser Ala 180 Thr Val Leu Pro Asp 185 Gly Gin Ile Ile Met 190 Leu Tyr
Thr Gly Asn 195 Ala Tyr Asp Leu Ser 200 Gin Leu Gin Cys Leu 205 Ala Tyr Ala
Val Asn 210 Ser Ser Asp Pro Leu 215 Leu Leu Asp Trp lys 220 Lys Tyr Glu Gly
Asn 225 Pro Ile Leu Phe Pro 230 Pro Pro Gly Val Gly 235 Tyr Lys Asp Phe Arg 240
Asp Pro Ser Thr Leu 245 Trp Leu Gly Pro Asp 250 Gly Glu Tyr Arg Met 255 Val
Met Gly Ser Lys 260 His Asn Glu Thr Ile 265 Gly Cys Ala Leu Ile 270 Tyr His
Thr Thr Asn 275 Phe Thr His Phe Glu 280 Leu Lys Glu Glu Val 285 Leu His Ala
Val Pro 290 His Thr Gly Met Trp 295 Glu Cys Val Asp Leu 300 Tyr Pro Val Ser
-21 CZ 299374 B6
Thr 305 Thr His Thr Asn Gly 310 Leu Asp Met Val Asp 315 Asn Gly Pro Asn Val 320
Lys His Val Leu Lys 325 Gin Ser Gly Asp Glu 330 Asp Arg His Asp Trp 335 Tyr
Ala Leu Gly Thr 340 Tyr Asp Val Val Asn 345 Asp Lys Trp Tyr Pro 350 Asp Asp
Pro Glu Asn 355 Asp Val Gly Ile Gly 360 Leu Arg Tyr Asp Phe 365 Gly Lys Phe
Tyr Ala 370 Ser Lys Thr Phe Tyr 375 Asp Gin His Lys Lys 380 Arg Arg Val Leu
Trp 385 Gly Tyr Val Gly Glu 390 Thr Asp Pro Pro Lys 395 Tyr Asp Val Tyr Lys 400
Gly Trp Ala Asn Ile 405 Leu Asn Ile Pro Arg 410 Thr Ile Val Leu Asp 415 Thr
Lys Thr Asn Thr 420 Asn Leu Ile Gin Trp 425 Pro Ile Ala Glu Val 430 Glu Asn
Leu Arg Ser 435 Asn Lys Tyr Asn Glu 440 Phe Lys Asp Val Glu 445 Leu Lys Pro
Gly Ser 450 Leu Ile Pro Leu Glu 455 Ile Gly Thr Ala Thr 460 Gin Leu Asp Ile
Thr 465 Ala Thr Phe Glu Val 470 Asp Gin Thr Met Leu 475 Glu Ser Thr Leu Glu 480
Ala Asp Val Leu Phe 485 Asn cys Thr Thr Ser 490 Glu Gly Ser Ala Gly 495 Arg
Gly Val Leu Gly 500 Pro Phe Gly Leu Val 505 Val Leu Ala Asp Ala 510 Glu Arg
Ser Glu Gin 515 Leu Pro Val Tyr Phe 520 Tyr Ile Ala Lys Asp 525 Thr Asp Gly
Ser Ser 530 Lys Thr Tyr Phe Cys 535 Ala Asp Glu Ser Arg 540 Ser Ser Asn Asp
Val 545 Asp Ile Gly Lys Trp 550 Val Tyr Gly Ser Ser 555 Val Pro Val Leu Glu 560
Gly Glu Lys Phe Asn 565 Met Arg Leu Leu Val 570 Asp His Ser Ile Val 575 Glu
Gly Phe Ala Gin 580 Gly Gly Arg Thr Val 585 Val Thr Ser Arg Val 590 Tyr Pro
Ala Lys Ala 595 Ile Tyr Gly Ala Ala 600 Lys Leu Phe Leu Phe 605 Asn Asn Ala
Thr Gly Ile Ser Val Lys Ala Ser Leu Lys Ile Trp Lys Met Lys Glu
610 615 620
-22CZ 299374 B6
Ala Gin Leu Asp Pro Phe Pro Leu Ser Gly Trp Ser Ser 625 630 635
PATENTOVÉ NÁROKY
1. Molekula nukleové kyseliny kódující sacharózofruktosyltransferázu závislou na sacharóze

Claims (4)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Molekula nukleové kyseliny kódující sacharózofruktosyltransferázu závislou na sacharóze ío (SST), která je vybrána ze skupiny obsahující:
    a) molekuly nukleové kyseliny kódující protein, který obsahuje aminokyselinovou sekvenci uvedenou jako sekvenci identifikačního čísla 2 a 4,
    b) molekuly nukleové kyseliny, které obsahují nukleotidovou sekvenci uvedenou jako sekvenci identifikačního čísla 1 nebo odpovídající ribonukleotidovou sekvenci,
    15 c) molekuly nukleové kyseliny, které obsahují nukleotidovou sekvenci uvedenou jako sekvenci identifikačního čísla 3 nebo odpovídající ribonukleotidovou sekvenci, a
    d) molekuly nukleové kyseliny, které obsahují fragment molekul nukleové kyseliny uvedených v a) až c) kódující protein, který je schopen katalyzovat vytvoření β-2,1-glykosidických nebo 3-2,6-glykosidických vazeb mezi fruktózovými jednotkami.
  2. 2. Molekula nukleové kyseliny podle nároku 1, která je molekula DNA.
  3. 3. Molekula DNA podle nároku 2, která je molekula cDNA.
    25 4. Molekula nukleové kyseliny podle nároku 1, která je molekula RNA.
    5. Vektor, který obsahuje molekulu nukleové kyseliny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4.
    6. Vektor podle nároku 5, kde molekula nukleové kyseliny je operativně spojena s regulačním
    30 prvkem, který dovoluje transkripci a syntézu translatovatelné RNA v prokaryotických a/nebo eukaryotických buňkách.
    7. Vektor podle nároku 6, kde regulační prvek je odvozen z patatinového promotoru B33.
    35 8. Hostitelská buňka, která je transformovaná molekulou nukleové kyseliny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 nebo vektorem podle kteréhokoliv z nároků 6 nebo 7, nebo buňka, která pochází z takové buňky a obsahuje molekulu nukleové kyseliny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 nebo vektor podle kteréhokoliv z nároků 6 nebo 7.
    40 9. Způsob přípravy SST, vyznačující se tím, že hostitelská buňka podle nároku 8 se kultivuje v podmínkách, které dovolují syntézu SST a SST se izoluje z kultivovaných buněk a/nebo kultivačního média.
    10. SST, která je kódována molekulou nukleové kyseliny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4,
    45 nebo která je připravena způsobem podle nároku 9.
    11. Transgenní rostlinná buňka, která je transformovaná molekulou nukleové kyseliny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 nebo vektorem podle kteréhokoliv z nároků 6 nebo 7, nebo která pochází z takové buňky, přičemž molekula nukleové kyseliny kódující SST z artyčoku je řízena
    50 regulačním prvkem, který umožňuje transkripci translatovatelné RNA v rostlinných buňkách.
    -23CZ 299374 B6
    12. Rostlina, která obsahuje rostlinné buňky podle nároku 11.
    13. Rostlina podle nároku 12, kterou je rostlina pšenice, ječmene, rýže, kukuřice, řepy cukrové nebo cukrové třtiny.
    14. Rostlina podle nároku 12, kterou je rostlina bramboru.
    15. Rostlinný rozmnožovací materiál z rostliny podle kteréhokoliv z nároků 12 až 14, který obsahuje rostlinné buňky podle nároku 11.
    16. Způsob přípravy 1-kestózy, nystózy a/nebo fruktosylnystózy, vyznačující se tím, že obsahuje
    a) kultivaci hostitelské buňky podle nároku 8 nebo rostlinné buňky podle nároku 11 v podmínkách, které dovolují produkci SST a konverzi, pokud je to třeba, externě přidané sacharózy nebo
    15 ekvivalentního substrátu na 1-kestózu, nystózu a/nebo fruktosylnystózu, a
    b) získání tímto způsobem tvořené 1-kestózy, nystózy a/nebo fruktosylnystózy zkultivovaných buněk nebo média.
    17. Způsob přípravy 1-kestózy, nystózy a/nebo fruktosylnystózy, vyznačující se tím, 20 že obsahuje
    a) působení SST podle nároku 10 na sacharózu nebo ekvivalentní substrát v podmínkách dovolujících konverzi na 1-kestózu, nystózu a/nebo fruktosylnystózu, a
    b) získání takto tvořené 1-kestózy, nystózy a/nebo fruktosylnystózy.
    25 18. Způsob přípravy 1-kestózy, nystózy a/nebo fruktosylnystózy, vy z n a č uj í c í se tím, že obsahuje
    a) kultivaci rostliny podle kteréhokoliv z nároků 12 až 14, a
    b) získání 1-kestózy, nystózy a/nebo fruktosylnystózy z těchto rostlin nebo jejich rozmnožovacího materiálu podle nároku 15.
  4. 4 výkresy
    -24CZ 299374 B6
    Sall(Pstl Sphl) Hindllll
    EcoRI (Sací)
    1500 bp
    2200 bp 215 bp pBinl 9
    Obr. 1
    -25CZ 299374 B6
    3 3 x· »< »< Φ W tn w r* <·+ θ’ O’ O’ N N N w
    w 0) o ar C a> 3Γ r* O' O< N N 0) 0)
    Std.
    WT1
    Cy 6
    Cy 51
    Cy 54
    Cy 11
    Cy 42
    Cy 27
    WT2
    Obr. 2
CZ0314099A 1997-03-04 1998-03-02 Molekuly nukleové kyseliny kódující sacharózofruktosyltransferázu závislou na sacharóze (SST), vektor, hostitelská bunka, zpusob prípravy SST, SST, transgenní rostlinná bunka, rostlina, rostlinný rozmnožovací materiál a zpusob prípravy 1-kestózy, nys CZ299374B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19708774A DE19708774A1 (de) 1997-03-04 1997-03-04 Nucleinsäuremoleküle codierend Enzyme die Fructosylpolymeraseaktivität besitzen

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ314099A3 CZ314099A3 (cs) 2000-01-12
CZ299374B6 true CZ299374B6 (cs) 2008-07-09

Family

ID=7822194

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ0314099A CZ299374B6 (cs) 1997-03-04 1998-03-02 Molekuly nukleové kyseliny kódující sacharózofruktosyltransferázu závislou na sacharóze (SST), vektor, hostitelská bunka, zpusob prípravy SST, SST, transgenní rostlinná bunka, rostlina, rostlinný rozmnožovací materiál a zpusob prípravy 1-kestózy, nys

Country Status (16)

Country Link
US (2) US6515203B1 (cs)
EP (1) EP0977876B1 (cs)
JP (1) JP4101304B2 (cs)
CN (1) CN1163612C (cs)
AR (1) AR010124A1 (cs)
AT (1) ATE343637T1 (cs)
AU (1) AU6825498A (cs)
BR (1) BRPI9808154B1 (cs)
CA (1) CA2283375C (cs)
CZ (1) CZ299374B6 (cs)
DE (2) DE19708774A1 (cs)
ES (1) ES2275302T3 (cs)
HU (1) HU225800B1 (cs)
PL (1) PL197151B1 (cs)
WO (1) WO1998039460A1 (cs)
ZA (1) ZA981762B (cs)

Families Citing this family (184)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0952222A1 (en) * 1998-04-17 1999-10-27 Centrum Voor Plantenveredelings- En Reproduktieonderzoek (Cpro-Dlo) Transgenic plants presenting a modified inulin producing profile
DE19840028A1 (de) * 1998-09-02 2000-03-09 Max Planck Gesellschaft Nucleinsäuremoleküle codierend Enzyme, die Fructosyltransferaseaktivität besitzen, und deren Verwendung
DE19857654A1 (de) 1998-12-14 2000-06-15 Max Planck Gesellschaft Beeinflussung des Blühverhaltens von Pflanzen durch Expression Saccharose-spaltender Proteine
AUPQ815500A0 (en) 2000-06-14 2000-07-06 Molecular Plant Breeding Nominees Ltd Modification of fructan biosynthesis
US6791015B2 (en) 2000-10-30 2004-09-14 E. I. Du Pont De Nemours And Company Fructan biosynthetic enzymes
US7608754B2 (en) 2001-06-25 2009-10-27 Ses Europe N.V./S.A. Double fructan beets
AR052059A1 (es) * 2004-12-21 2007-02-28 Bayer Cropscience Gmbh Plantas de cana azucarera con contenido incrementado de carbohidratos de almacenamiento
CL2007003744A1 (es) 2006-12-22 2008-07-11 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende un derivado 2-piridilmetilbenzamida y un compuesto insecticida; y metodo para controlar de forma curativa o preventiva hongos fitopatogenos de cultivos e insectos.
CL2007003743A1 (es) * 2006-12-22 2008-07-11 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende fenamidona y un compuesto insecticida; y metodo para controlar de forma curativa o preventiva hongos fitopatogenos de cultivos e insectos.
EP2120558B1 (de) * 2007-03-12 2016-02-10 Bayer Intellectual Property GmbH 3,4-Disubstituierte Phenoxyphenylamidin-Derivate und deren Verwendung als Fungizide
US20100167926A1 (en) 2007-03-12 2010-07-01 Bayer Cropscience Ag 3-substituted phenoxyphenylamidines and use thereof as fungicides
EP1969931A1 (de) * 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Fluoalkylphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
EP1969934A1 (de) 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience AG 4-Cycloalkyl-oder 4-arylsubstituierte Phenoxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
EP1969929A1 (de) 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience AG Substituierte Phenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
EP2136627B1 (de) 2007-03-12 2015-05-13 Bayer Intellectual Property GmbH Dihalogenphenoxyphenylamidine und deren verwendung als fungizide
JP2010524869A (ja) * 2007-04-19 2010-07-22 バイエル・クロツプサイエンス・アクチエンゲゼルシヤフト チアジアゾリルオキシフェニルアミジンおよび殺菌剤としてのこれらの使用
DE102007045953B4 (de) 2007-09-26 2018-07-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045922A1 (de) 2007-09-26 2009-04-02 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045919B4 (de) 2007-09-26 2018-07-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045920B4 (de) 2007-09-26 2018-07-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Synergistische Wirkstoffkombinationen
DE102007045956A1 (de) 2007-09-26 2009-04-09 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombination mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
EP2090168A1 (de) 2008-02-12 2009-08-19 Bayer CropScience AG Methode zur Verbesserung des Pflanzenwachstums
EP2072506A1 (de) 2007-12-21 2009-06-24 Bayer CropScience AG Thiazolyloxyphenylamidine oder Thiadiazolyloxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
EP2168434A1 (de) 2008-08-02 2010-03-31 Bayer CropScience AG Verwendung von Azolen zur Steigerung der Resistenz von Pflanzen oder Pflanzenteilen gegenüber abiotischem Stress
CN102186809A (zh) 2008-08-14 2011-09-14 拜尔农作物科学股份公司 杀虫性的4-苯基-1h-吡唑
DE102008041695A1 (de) * 2008-08-29 2010-03-04 Bayer Cropscience Ag Methoden zur Verbesserung des Pflanzenwachstums
EP2201838A1 (de) 2008-12-05 2010-06-30 Bayer CropScience AG Wirkstoff-Nützlings-Kombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
EP2198709A1 (de) 2008-12-19 2010-06-23 Bayer CropScience AG Verfahren zur Bekämpfung resistenter tierischer Schädlinge
EP2204094A1 (en) 2008-12-29 2010-07-07 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants Introduction
AU2009335333B2 (en) 2008-12-29 2015-04-09 Bayer Intellectual Property Gmbh Method for improved use of the production potential of genetically modified plants
EP2223602A1 (de) 2009-02-23 2010-09-01 Bayer CropScience AG Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials genetisch modifizierter Pflanzen
EP2039771A2 (en) 2009-01-06 2009-03-25 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
EP2039772A2 (en) 2009-01-06 2009-03-25 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants introduction
EP2039770A2 (en) 2009-01-06 2009-03-25 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
KR20110106448A (ko) 2009-01-19 2011-09-28 바이엘 크롭사이언스 아게 사이클릭 디온 및 살충제, 살비제 및/또는 살진균제로서의 그의 용도
EP2227951A1 (de) 2009-01-23 2010-09-15 Bayer CropScience AG Verwendung von Enaminocarbonylverbindungen zur Bekämpfung von durch Insekten übertragenen Viren
EP2391608B8 (en) 2009-01-28 2013-04-10 Bayer Intellectual Property GmbH Fungicide n-cycloalkyl-n-bicyclicmethylene-carboxamide derivatives
AR075126A1 (es) 2009-01-29 2011-03-09 Bayer Cropscience Ag Metodo para el mejor uso del potencial de produccion de plantas transgenicas
EP2218717A1 (en) 2009-02-17 2010-08-18 Bayer CropScience AG Fungicidal N-((HET)Arylethyl)thiocarboxamide derivatives
WO2010094666A2 (en) 2009-02-17 2010-08-26 Bayer Cropscience Ag Fungicidal n-(phenylcycloalkyl)carboxamide, n-(benzylcycloalkyl)carboxamide and thiocarboxamide derivatives
TW201031331A (en) 2009-02-19 2010-09-01 Bayer Cropscience Ag Pesticide composition comprising a tetrazolyloxime derivative and a fungicide or an insecticide active substance
EP2232995A1 (de) 2009-03-25 2010-09-29 Bayer CropScience AG Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
MX2011009372A (es) 2009-03-25 2011-09-27 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de principios activos con propiedades insecticidas y acaricidas.
MA33140B1 (fr) 2009-03-25 2012-03-01 Bayer Cropscience Ag Combinaisons d'agents actifs ayant des proprietes insecticides et acaricides
BRPI0924986A8 (pt) 2009-03-25 2016-06-21 Bayer Cropscience Ag "combinações de substâncias ativas com propriedades inseticidas e acaricidas, seus usos e método para o controle de pragas animais".
CN102448304B (zh) 2009-03-25 2015-03-11 拜尔农作物科学股份公司 具有杀昆虫和杀螨特性的活性成分结合物
EP2410850A2 (de) 2009-03-25 2012-02-01 Bayer Cropscience AG Synergistische wirkstoffkombinationen
EP2239331A1 (en) 2009-04-07 2010-10-13 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
US8835657B2 (en) 2009-05-06 2014-09-16 Bayer Cropscience Ag Cyclopentanedione compounds and their use as insecticides, acaricides and/or fungicides
EP2251331A1 (en) 2009-05-15 2010-11-17 Bayer CropScience AG Fungicide pyrazole carboxamides derivatives
AR076839A1 (es) 2009-05-15 2011-07-13 Bayer Cropscience Ag Derivados fungicidas de pirazol carboxamidas
EP2255626A1 (de) 2009-05-27 2010-12-01 Bayer CropScience AG Verwendung von Succinat Dehydrogenase Inhibitoren zur Steigerung der Resistenz von Pflanzen oder Pflanzenteilen gegenüber abiotischem Stress
BRPI1011983A2 (pt) 2009-06-02 2015-09-22 Bayer Cropscience Ag utilização de inibidores de succinato desidrogenase para o controle sclerotinia ssp.
MX2012000566A (es) 2009-07-16 2012-03-06 Bayer Cropscience Ag Combinaciones sinergicas de principios activos con feniltriazoles.
WO2011015524A2 (en) 2009-08-03 2011-02-10 Bayer Cropscience Ag Fungicide heterocycles derivatives
EP2292094A1 (en) 2009-09-02 2011-03-09 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2343280A1 (en) 2009-12-10 2011-07-13 Bayer CropScience AG Fungicide quinoline derivatives
TW201138624A (en) 2009-12-28 2011-11-16 Bayer Cropscience Ag Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
EP2519516A2 (en) 2009-12-28 2012-11-07 Bayer CropScience AG Fungicidal hydroximoyl-tetrazole derivatives
CN102725270B (zh) 2009-12-28 2015-10-07 拜尔农科股份公司 杀真菌剂肟基-杂环衍生物
CN102811617A (zh) 2010-01-22 2012-12-05 拜耳知识产权有限责任公司 杀螨和/或杀虫活性物质结合物
ES2523503T3 (es) 2010-03-04 2014-11-26 Bayer Intellectual Property Gmbh 2-Amidobencimidazoles sustituidos con fluoroalquilo y su uso para el aumento de la tolerancia al estrés en plantas
AR080827A1 (es) 2010-04-06 2012-05-09 Bayer Cropscience Ag Utilizacion del acido 4- fenil- butirico y/o de sus sales para el aumento de la tolerancia al estres en plantas
EP2555626A2 (de) 2010-04-09 2013-02-13 Bayer Intellectual Property GmbH Verwendung von derivaten der (1-cyancyclopropyl)phenylphosphinsäure, deren ester und/oder deren salze zur steigerung der toleranz in pflanzen gegenüber abiotischem stress
WO2011134913A1 (en) 2010-04-28 2011-11-03 Bayer Cropscience Ag Fungicide hydroximoyl-heterocycles derivatives
BR112012027558A2 (pt) 2010-04-28 2015-09-15 Bayer Cropscience Ag ''composto da fórmula (i), composição fungicida e método para o controle de fungos fitogênicos de colheitas''
WO2011134911A2 (en) 2010-04-28 2011-11-03 Bayer Cropscience Ag Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
UA110703C2 (uk) 2010-06-03 2016-02-10 Байєр Кропсайнс Аг Фунгіцидні похідні n-[(тризаміщений силіл)метил]-карбоксаміду
WO2011151369A1 (en) 2010-06-03 2011-12-08 Bayer Cropscience Ag N-[(het)arylethyl)] pyrazole(thio)carboxamides and their heterosubstituted analogues
MX2012013896A (es) 2010-06-03 2012-12-17 Bayer Cropscience Ag N-[(het)arilalquil)]pirazol(tio)carboxamidas y sus analogos heterosustituidos.
SG185668A1 (en) 2010-06-09 2012-12-28 Bayer Cropscience Nv Methods and means to modify a plant genome at a nucleotide sequence commonly used in plant genome engineering
EP2580336B1 (en) 2010-06-09 2017-05-10 Bayer CropScience NV Methods and means to modify a plant genome at a nucleotide sequence commonly used in plant genome engineering
EP2595961B1 (en) 2010-07-20 2017-07-19 Bayer Intellectual Property GmbH Benzocycloalkenes as antifungal agents
CN103228141B (zh) 2010-09-03 2016-04-20 拜耳知识产权有限责任公司 取代的稠合的嘧啶酮和二氢嘧啶酮
AU2011306893A1 (en) 2010-09-22 2013-04-04 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of biological or chemical control agents for controlling insects and nematodes in resistant crops
EP2460406A1 (en) 2010-12-01 2012-06-06 Bayer CropScience AG Use of fluopyram for controlling nematodes in nematode resistant crops
JP5977242B2 (ja) 2010-10-07 2016-08-24 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト テトラゾリルオキシム誘導体とチアゾリルピペリジン誘導体を含んでいる殺菌剤組成物
JP2013541554A (ja) 2010-10-21 2013-11-14 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー Ｎ−ベンジルヘテロ環式カルボキサミド類
CA2815114A1 (en) 2010-10-21 2012-04-26 Juergen Benting 1-(heterocyclic carbonyl) piperidines
CN103298802B (zh) 2010-11-02 2016-06-08 拜耳知识产权有限责任公司 N-杂芳基甲基吡唑基羧酰胺
WO2012065947A1 (en) 2010-11-15 2012-05-24 Bayer Cropscience Ag 5-halogenopyrazolecarboxamides
US20130231303A1 (en) 2010-11-15 2013-09-05 Bayer Intellectual Property Gmbh 5-halogenopyrazole(thio)carboxamides
JP5860471B2 (ja) 2010-11-15 2016-02-16 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ Ｎ−アリールピラゾール（チオ）カルボキサミド類
KR20180096815A (ko) 2010-12-01 2018-08-29 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 작물에서 선충류를 구제하고 수확량을 증가시키기 위한 플루오피람의 용도
EP2460407A1 (de) 2010-12-01 2012-06-06 Bayer CropScience AG Wirkstoffkombinationen umfassend Pyridylethylbenzamide und weitere Wirkstoffe
EP2474542A1 (en) 2010-12-29 2012-07-11 Bayer CropScience AG Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
JP2014502611A (ja) 2010-12-29 2014-02-03 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー 殺菌剤ヒドロキシモイル−テトラゾール誘導体
EP2471363A1 (de) 2010-12-30 2012-07-04 Bayer CropScience AG Verwendung von Aryl-, Heteroaryl- und Benzylsulfonamidocarbonsäuren, -carbonsäureestern, -carbonsäureamiden und -carbonitrilen oder deren Salze zur Steigerung der Stresstoleranz in Pflanzen
EP2494867A1 (de) 2011-03-01 2012-09-05 Bayer CropScience AG Halogen-substituierte Verbindungen in Kombination mit Fungiziden
US20130345058A1 (en) 2011-03-10 2013-12-26 Wolfram Andersch Use of lipochito-oligosaccharide compounds for safeguarding seed safety of treated seeds
JP2014509599A (ja) 2011-03-14 2014-04-21 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー 殺菌剤ヒドロキシモイル−テトラゾール誘導体
EP2694494A1 (en) 2011-04-08 2014-02-12 Bayer Intellectual Property GmbH Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
AR090010A1 (es) 2011-04-15 2014-10-15 Bayer Cropscience Ag 5-(ciclohex-2-en-1-il)-penta-2,4-dienos y 5-(ciclohex-2-en-1-il)-pent-2-en-4-inos sustituidos como principios activos contra el estres abiotico de las plantas, usos y metodos de tratamiento
AR085568A1 (es) 2011-04-15 2013-10-09 Bayer Cropscience Ag 5-(biciclo[4.1.0]hept-3-en-2-il)-penta-2,4-dienos y 5-(biciclo[4.1.0]hept-3-en-2-il)-pent-2-en-4-inos sustituidos como principios activos contra el estres abiotico de las plantas
EP2511255A1 (de) 2011-04-15 2012-10-17 Bayer CropScience AG Substituierte Prop-2-in-1-ol- und Prop-2-en-1-ol-Derivate
AR085585A1 (es) 2011-04-15 2013-10-09 Bayer Cropscience Ag Vinil- y alquinilciclohexanoles sustituidos como principios activos contra estres abiotico de plantas
PL2699093T3 (pl) 2011-04-22 2016-04-29 Bayer Cropscience Ag Kombinacje związku aktywnego zawierające pochodną karboksyamidową i związek grzybobójczy
AU2012266597B2 (en) 2011-06-06 2016-09-22 Bayer Cropscience Nv Methods and means to modify a plant genome at a preselected site
WO2013004652A1 (de) 2011-07-04 2013-01-10 Bayer Intellectual Property Gmbh Verwendung substituierter isochinolinone, isochinolindione, isochinolintrione und dihydroisochinolinone oder jeweils deren salze als wirkstoffe gegen abiotischen pflanzenstress
US9265252B2 (en) 2011-08-10 2016-02-23 Bayer Intellectual Property Gmbh Active compound combinations comprising specific tetramic acid derivatives
MX346439B (es) 2011-08-22 2017-03-17 Bayer Cropscience Nv Métodos y medios para modificar un genoma vegetal.
JP2014524455A (ja) 2011-08-22 2014-09-22 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー 殺真菌性ヒドロキシモイル−テトラゾール誘導体
EP2561759A1 (en) 2011-08-26 2013-02-27 Bayer Cropscience AG Fluoroalkyl-substituted 2-amidobenzimidazoles and their effect on plant growth
EP2753177A1 (en) 2011-09-09 2014-07-16 Bayer Intellectual Property GmbH Acyl-homoserine lactone derivatives for improving plant yield
WO2013037717A1 (en) 2011-09-12 2013-03-21 Bayer Intellectual Property Gmbh Fungicidal 4-substituted-3-{phenyl[(heterocyclylmethoxy)imino]methyl}-1,2,4-oxadizol-5(4h)-one derivatives
WO2013037955A1 (en) 2011-09-16 2013-03-21 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of acylsulfonamides for improving plant yield
CN103917097A (zh) 2011-09-16 2014-07-09 拜耳知识产权有限责任公司 5-苯基-或5-苄基-2-异噁唑啉-3-甲酸酯用于改善植物产量的用途
WO2013037958A1 (en) 2011-09-16 2013-03-21 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of phenylpyrazolin-3-carboxylates for improving plant yield
BR112014006940A2 (pt) 2011-09-23 2017-04-04 Bayer Ip Gmbh uso de derivados de ácido 1-fenilpirazol-3-carboxílico 4-substituído como agentes contra estresse abiótico em plantas
EA028662B1 (ru) 2011-10-04 2017-12-29 Байер Интеллекчуал Проперти Гмбх Рнк-интерференция для борьбы с грибами и оомицетами путем ингибирования гена сахаропиндегидрогеназы
WO2013050324A1 (de) 2011-10-06 2013-04-11 Bayer Intellectual Property Gmbh Abiotischen pflanzenstress-reduzierende kombination enthaltend 4- phenylbuttersäure (4-pba) oder eines ihrer salze (komponente (a)) und eine oder mehrere ausgewählte weitere agronomisch wirksame verbindungen (komponente(n) (b)
WO2013075817A1 (en) 2011-11-21 2013-05-30 Bayer Intellectual Property Gmbh Fungicide n-[(trisubstitutedsilyl)methyl]-carboxamide derivatives
MX2014006350A (es) 2011-11-30 2014-06-23 Bayer Ip Gmbh Derivados de n-bicicloalquil- y n-tricicloalquil-(tio)carboxamida fungicidas.
AU2012357896B9 (en) 2011-12-19 2016-12-15 Bayer Cropscience Ag Use of anthranilic acid diamide derivatives for pest control in transgenic crops
TWI558701B (zh) 2011-12-29 2016-11-21 拜耳知識產權公司 殺真菌之３－［（１，３－噻唑－４－基甲氧基亞胺）（苯基）甲基］－２－經取代之－１，２，４－二唑－５（２ｈ）－酮衍生物
KR102028903B1 (ko) 2011-12-29 2019-10-07 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 살진균 3-[(피리딘-2-일메톡시이미노)(페닐)메틸]-2-치환-1,2,4-옥사디아졸-5(2h)-온 유도체
HUE036328T2 (hu) 2012-02-22 2018-06-28 Bayer Cropscience Ag Fluopirám alkalmazása fabetegségek leküzdésére szõlõn
US9629367B2 (en) 2012-02-27 2017-04-25 Bayer Intellectual Property Gmbh Active compound combinations containing a thiazoylisoxazoline and a fungicide
WO2013139949A1 (en) 2012-03-23 2013-09-26 Bayer Intellectual Property Gmbh Compositions comprising a strigolactame compound for enhanced plant growth and yield
EP2836489B1 (en) 2012-04-12 2016-06-29 Bayer Cropscience AG N-acyl-2-(cyclo) alkylpyrrolidines and piperidines useful as fungicides
US20150080337A1 (en) 2012-04-20 2015-03-19 Bayer Cropscience N-cycloalkyl-n-[(trisubstitutedsilylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives
MX374868B (es) 2012-04-20 2025-03-06 Bayer Cropscience Ag Derivados de n-cicloalquil-n-[(heterociclilfenil)metilen]-(tio)carboxamida.
WO2013160230A1 (en) 2012-04-23 2013-10-31 Bayer Cropscience Nv Targeted genome engineering in plants
EP2662360A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole indanyl carboxamides
EP2662364A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole tetrahydronaphthyl carboxamides
EP2662363A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole biphenylcarboxamides
EP2662362A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole indanyl carboxamides
EP2662361A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazol indanyl carboxamides
MX2014013497A (es) 2012-05-09 2015-02-10 Bayer Cropscience Ag Pirazol indanil carboxamidas.
EP2662370A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole benzofuranyl carboxamides
US9375005B2 (en) 2012-05-09 2016-06-28 Bayer Cropscience Ag 5-halogenopyrazole indanyl carboxamides
AR091104A1 (es) 2012-05-22 2015-01-14 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos que comprenden un derivado lipo-quitooligosacarido y un compuesto nematicida, insecticida o fungicida
AU2013289301A1 (en) 2012-07-11 2015-01-22 Bayer Cropscience Ag Use of fungicidal combinations for increasing the tolerance of a plant towards abiotic stress
CN104780764A (zh) 2012-09-05 2015-07-15 拜尔农作物科学股份公司 取代的2-酰氨基苯并咪唑、2-酰氨基苯并噁唑和2-酰氨基苯并噻唑或其盐作为活性物质对抗非生物植物胁迫的用途
JP6153619B2 (ja) 2012-10-19 2017-06-28 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト カルボキサミド誘導体を含む活性化合物の組み合わせ
AU2013333845B2 (en) 2012-10-19 2017-06-08 Bayer Cropscience Ag Method of plant growth promotion using carboxamide derivatives
MX381528B (es) 2012-10-19 2025-03-12 Bayer Cropscience Ag Método para mejorar la tolerancia al estrés abiótico en plantas usando derivados de carboxamida o tiocarboxamida.
AU2013333847B2 (en) 2012-10-19 2017-04-20 Bayer Cropscience Ag Method for treating plants against fungi resistant to fungicides using carboxamide or thiocarboxamide derivatives
EP2735231A1 (en) 2012-11-23 2014-05-28 Bayer CropScience AG Active compound combinations
WO2014079957A1 (de) 2012-11-23 2014-05-30 Bayer Cropscience Ag Selektive inhibition der ethylensignaltransduktion
EA201500580A1 (ru) 2012-11-30 2016-01-29 Байер Кропсайенс Акциенгезельшафт Двойные фунгицидные смеси
CN104918493B (zh) 2012-11-30 2018-02-06 拜尔农作物科学股份公司 三元杀真菌和杀虫混合物
WO2014083031A2 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Bayer Cropscience Ag Binary pesticidal and fungicidal mixtures
US9943082B2 (en) 2012-11-30 2018-04-17 Bayer Cropscience Ag Ternary fungicidal mixtures
UA117820C2 (uk) 2012-11-30 2018-10-10 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт Подвійна фунгіцидна або пестицидна суміш
EP2740720A1 (de) 2012-12-05 2014-06-11 Bayer CropScience AG Substituierte bicyclische- und tricyclische Pent-2-en-4-insäure -Derivate und ihre Verwendung zur Steigerung der Stresstoleranz in Pflanzen
WO2014086751A1 (de) 2012-12-05 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Verwendung substituierter 1-(arylethinyl)-, 1-(heteroarylethinyl)-, 1-(heterocyclylethinyl)- und 1-(cyloalkenylethinyl)-cyclohexanole als wirkstoffe gegen abiotischen pflanzenstress
EP2740356A1 (de) 2012-12-05 2014-06-11 Bayer CropScience AG Substituierte (2Z)-5(1-Hydroxycyclohexyl)pent-2-en-4-insäure-Derivate
AR093909A1 (es) 2012-12-12 2015-06-24 Bayer Cropscience Ag Uso de ingredientes activos para controlar nematodos en cultivos resistentes a nematodos
AR093996A1 (es) 2012-12-18 2015-07-01 Bayer Cropscience Ag Combinaciones bactericidas y fungicidas binarias
WO2014095677A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Bayer Cropscience Ag Difluoromethyl-nicotinic- tetrahydronaphtyl carboxamides
WO2014135608A1 (en) 2013-03-07 2014-09-12 Bayer Cropscience Ag Fungicidal 3-{phenyl[(heterocyclylmethoxy)imino]methyl}-heterocycle derivatives
WO2014161821A1 (en) 2013-04-02 2014-10-09 Bayer Cropscience Nv Targeted genome engineering in eukaryotes
CA2909213A1 (en) 2013-04-12 2014-10-16 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Novel triazole derivatives
WO2014167008A1 (en) 2013-04-12 2014-10-16 Bayer Cropscience Ag Novel triazolinthione derivatives
BR112015026235A2 (pt) 2013-04-19 2017-10-10 Bayer Cropscience Ag método para melhorar a utilização do potencial de produção de plantas transgênicas envolvendo a aplicação de um derivado de ftaldiamida
JP2016519687A (ja) 2013-04-19 2016-07-07 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト バイナリー殺虫または農薬混合物
WO2014177514A1 (en) 2013-04-30 2014-11-06 Bayer Cropscience Ag Nematicidal n-substituted phenethylcarboxamides
TW201507722A (zh) 2013-04-30 2015-03-01 Bayer Cropscience Ag 做為殺線蟲劑及殺體內寄生蟲劑的ｎ－（２－鹵素－２－苯乙基）－羧醯胺類
CN105636939B (zh) 2013-06-26 2018-08-31 拜耳作物科学股份公司 N-环烷基-n-[(二环基苯基)亚甲基]-(硫代)甲酰胺衍生物
AR096827A1 (es) 2013-07-09 2016-02-03 Bayer Cropscience Ag Uso de piridoncarboxamidas seleccionadas o sus sales como ingredientes activos contra estrés abiótico en plantas
WO2015082586A1 (en) 2013-12-05 2015-06-11 Bayer Cropscience Ag N-cycloalkyl-n-{[2-(1-substitutedcycloalkyl)phenyl]methylene}-(thio)carboxamide derivatives
CN105873907B (zh) 2013-12-05 2019-03-12 拜耳作物科学股份公司 N-环烷基-n-{[2-(1-取代的环烷基)苯基]亚甲基}-(硫代)甲酰胺衍生物
AR101214A1 (es) 2014-07-22 2016-11-30 Bayer Cropscience Ag Ciano-cicloalquilpenta-2,4-dienos, ciano-cicloalquilpent-2-en-4-inas, ciano-heterociclilpenta-2,4-dienos y ciano-heterociclilpent-2-en-4-inas sustituidos como principios activos contra el estrés abiótico de plantas
AR103024A1 (es) 2014-12-18 2017-04-12 Bayer Cropscience Ag Piridoncarboxamidas seleccionadas o sus sales como sustancias activas contra estrés abiótico de las plantas
EP3283476B1 (en) 2015-04-13 2019-08-14 Bayer Cropscience AG N-cycloalkyl-n-(biheterocyclyethylene)-(thio)carboxamide derivatives
AU2016279062A1 (en) 2015-06-18 2019-03-28 Omar O. Abudayyeh Novel CRISPR enzymes and systems
US11306337B2 (en) 2015-11-12 2022-04-19 Ctc—Centro De Tecnologia Canavieira S.A. Polypeptides having hydrolytic activity on 1-kestose in the presence of sucrose but lacking sucrase (invertase) activity, polynucleotides encoding same and methods of producting and using same in industrial sucrose production from 1-kestose
RU2019104918A (ru) 2016-07-29 2020-08-28 Байер Кропсайенс Акциенгезельшафт Комбинации активных соединений и способы защиты материала размножения растений
BR112019005668A2 (pt) 2016-09-22 2019-06-04 Bayer Ag novos derivados de triazol
BR112019005660A2 (pt) 2016-09-22 2019-06-04 Bayer Cropscience Ag novos derivados de triazol e seu uso como fungicidas
US20190225974A1 (en) 2016-09-23 2019-07-25 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Targeted genome optimization in plants
CA3041351A1 (en) 2016-10-26 2018-05-03 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Use of pyraziflumid for controlling sclerotinia spp in seed treatment applications
CN110248547A (zh) 2016-12-08 2019-09-17 拜耳农作物科学股份公司 杀虫剂用于控制金针虫的用途
EP3332645A1 (de) 2016-12-12 2018-06-13 Bayer Cropscience AG Verwendung substituierter pyrimidindione oder jeweils deren salze als wirkstoffe gegen abiotischen pflanzenstress
WO2018108627A1 (de) 2016-12-12 2018-06-21 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Verwendung substituierter indolinylmethylsulfonamide oder deren salze zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen
WO2018204777A2 (en) 2017-05-05 2018-11-08 The Broad Institute, Inc. Methods for identification and modification of lncrna associated with target genotypes and phenotypes
US12297436B2 (en) 2017-05-18 2025-05-13 The Broad Institute, Inc. Systems, methods, and compositions for targeted nucleic acid editing
WO2019025153A1 (de) 2017-07-31 2019-02-07 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Verwendung von substituierten n-sulfonyl-n'-aryldiaminoalkanen und n-sulfonyl-n'-heteroaryldiaminoalkanen oder deren salzen zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen
KR102338449B1 (ko) 2017-09-21 2021-12-10 더 브로드 인스티튜트, 인코퍼레이티드 표적화된 핵산 편집을 위한 시스템, 방법, 및 조성물
US20230193242A1 (en) 2017-12-22 2023-06-22 The Broad Institute, Inc. Cas12b systems, methods, and compositions for targeted dna base editing
US10968257B2 (en) 2018-04-03 2021-04-06 The Broad Institute, Inc. Target recognition motifs and uses thereof
BR112020024615A2 (pt) 2018-06-04 2021-03-02 Bayer Aktiengesellschaft benzoilpirazóis bicíclicos de ação herbicida
WO2020131862A1 (en) 2018-12-17 2020-06-25 The Broad Institute, Inc. Crispr-associated transposase systems and methods of use thereof

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1994014970A1 (en) * 1992-12-28 1994-07-07 Stichting Scheikundig Onderzoek In Nederland Method for obtaining transgenic plants showing a modified fructan pattern
WO1995013389A1 (en) * 1993-11-09 1995-05-18 E.I. Du Pont De Nemours And Company Transgenic fructan accumulating crops and methods for their production
WO1996001904A1 (en) * 1994-07-08 1996-01-25 Stichting Scheikundig Onderzoek In Nederland Production of oligosaccharides in transgenic plants
WO1996021023A1 (en) * 1995-01-06 1996-07-11 Centrum Voor Plantenveredelings- En Reproduktieonderzoek (Cpro - Dlo) Dna sequences encoding carbohydrate polymer synthesizing enzymes and method for producing transgenic plants

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL1002275C2 (nl) * 1996-02-07 1997-08-08 Have D J Van Der Bv Modificatie van polysacchariden.

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1994014970A1 (en) * 1992-12-28 1994-07-07 Stichting Scheikundig Onderzoek In Nederland Method for obtaining transgenic plants showing a modified fructan pattern
WO1995013389A1 (en) * 1993-11-09 1995-05-18 E.I. Du Pont De Nemours And Company Transgenic fructan accumulating crops and methods for their production
WO1996001904A1 (en) * 1994-07-08 1996-01-25 Stichting Scheikundig Onderzoek In Nederland Production of oligosaccharides in transgenic plants
WO1996021023A1 (en) * 1995-01-06 1996-07-11 Centrum Voor Plantenveredelings- En Reproduktieonderzoek (Cpro - Dlo) Dna sequences encoding carbohydrate polymer synthesizing enzymes and method for producing transgenic plants

Also Published As

Publication number Publication date
ATE343637T1 (de) 2006-11-15
JP2001513642A (ja) 2001-09-04
DE69836267D1 (de) 2006-12-07
CN1163612C (zh) 2004-08-25
BR9808154A (pt) 2000-03-28
CZ314099A3 (cs) 2000-01-12
WO1998039460A1 (en) 1998-09-11
US20030138927A1 (en) 2003-07-24
HU225800B1 (en) 2007-09-28
HUP0003600A3 (en) 2002-10-28
AU6825498A (en) 1998-09-22
DE69836267T2 (de) 2007-05-31
DE19708774A1 (de) 1998-09-17
US6515203B1 (en) 2003-02-04
US7153674B2 (en) 2006-12-26
EP0977876A1 (en) 2000-02-09
AR010124A1 (es) 2000-05-17
JP4101304B2 (ja) 2008-06-18
CA2283375A1 (en) 1998-09-11
PL197151B1 (pl) 2008-03-31
PL335657A1 (en) 2000-05-08
HUP0003600A2 (hu) 2001-02-28
ZA981762B (en) 1999-09-03
CN1249783A (zh) 2000-04-05
BRPI9808154B1 (pt) 2015-08-25
CA2283375C (en) 2011-05-10
ES2275302T3 (es) 2007-06-01
EP0977876B1 (en) 2006-10-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ299374B6 (cs) Molekuly nukleové kyseliny kódující sacharózofruktosyltransferázu závislou na sacharóze (SST), vektor, hostitelská bunka, zpusob prípravy SST, SST, transgenní rostlinná bunka, rostlina, rostlinný rozmnožovací materiál a zpusob prípravy 1-kestózy, nys
EP0663956B1 (en) Dna sequences which lead to the formation of polyfructans (levans), plasmids containing these sequences as well as a process for preparing transgenic plants
CA2624375C (en) Nucleic acid molecules encoding enzymes from wheat which are involved in starch synthesis
AU715054B2 (en) Nucleic acid molecules from plants coding enzymes which participate in the starch synthesis
US6353154B1 (en) Nucleic acid molecules encoding starch phosphorylase from maize
US20050009165A1 (en) Raffinose synthase gene, method for producing raffinose, and transgenic plant
CZ20001680A3 (cs) Molekuly nukleové kyseliny kódující enzymy, které mají fruktosyltransferázovou aktivitu, a způsoby přípravy inulinu s dlouhým řetězcem
AU672017B2 (en) Dna sequences and plasmids for the preparation of plants with changed sucrose concentration
HU226140B1 (en) Dna molecules that code for enzymes involved in strach synthesis, vectors, bacteria, transgenic plant cells and plants containing said molecules
JP3431177B2 (ja) 習性及び収量において変更されたトランスジェニック植物を作製するプラスミド
EP0973919A1 (en) Plant 4-alpha-glucanotransferases
JP4410318B2 (ja) ラフィノース合成酵素遺伝子、ラフィノースの製造法及び形質転換植物
JP2004522420A (ja) イソマルトを生産するトランスジェニック植物
AU777455B2 (en) Nucleic acid molecules from artichoke (cynara scolymus) encoding enzymes having fructosyl polymerase activity
CA2235619A1 (en) Modified plants and plant products
US6891084B1 (en) DNA encoding raffinose synthase from soybean
US20030150021A1 (en) Maize 4-alpha-glucanotransferase
HK1026921A (en) Nucleic acid molecules from artichoke (cynara scolymus) encoding enzymes having fructosyl polymerase activity

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20130302