CZ180697A3 - Transfer of genes in medullary motor neurons through the mediation of adenovirus vectors - Google Patents
Transfer of genes in medullary motor neurons through the mediation of adenovirus vectors Download PDFInfo
- Publication number
- CZ180697A3 CZ180697A3 CZ971806A CZ180697A CZ180697A3 CZ 180697 A3 CZ180697 A3 CZ 180697A3 CZ 971806 A CZ971806 A CZ 971806A CZ 180697 A CZ180697 A CZ 180697A CZ 180697 A3 CZ180697 A3 CZ 180697A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- nucleic acid
- motoneurons
- adenovirus
- genome
- interest
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Přenos genů do medulárních motoneuroriu prostřednictvím adenovirových vektorů
Oblast techniky
Vynález se týká oblasti genové terapie. Obzvláště se vynález týká nového způsobu léčení patologií nervového systému přenosem genů do medulárních motoneuronů za použití adenovirových vektorů.
Dosavadní stav techniky
Genová terapie a použití modifikovaných virů jako vektorů pro neurodegenerativní choroby představují nové terapeutické,obzvláště slibné přístupy k léčení neurodegenerativních chorob. Z virů, které byly za tímto účelem až dosud použity, lze zejména uvést adenoviry (Le Gal La Salle a kol., Science 259, 988-990), vir herpes, adeno-přidružené viry a retroviry. Studie popsané v rámci dosavadního stavu techniky ukazují, že tyto vektory, a zejména adenoviry, jsou schopné infikovat s velmi vysokou účinností buňky centrální nervové soustavy. Tyto výsledky takto umožňují realizovat způsoby léčení patologií centrální nervové soustavy přímou injekcí v úrovni centrální nervové soustavy (zejména stereotaxií) rekombinantních adenovirů obsahujích terapeutický gen.
Pokud jde o míchu, umožňovala by genová terapie v rámci některých neurodegenerativních chorob a úrazových stavů rovněž bojovat proti degeneraci motorických neuronů (motoneuronů) zavedením některých genů kódujících například růstové faktory. Nicméně tyto aplikace jsou až dosud omezeny neexistencí jednoduché metody, umožňující specifický přenos genu v úrovní míchy. Vynález umožňuje řešit tento problém
Podstata vynálezu
Vynález ve skutečnosti popisuje obzváště účinný způsob selektivního přenosu genů do míchy. Vynález je zejména odvozen od experimentálního důkazu o tom, že je možné specificky přenést gen v úrovni motoneuronů podáním v úrovni svalu adenovirového vektoru,, ve kterém je inkorporován uvedený gen.
Ve skutečnosti přihlašovatel nyní prokázal, že adenoviry jsou obzvláště výhodným způsobem absorbovány v úrovni neuromuskulárních spojů (motorické destičky) a vedeny až do buněčných tělísek motoneuronů (ventrální rohovina míchy) retrográdním transportem podél motoneuronálních axonů. Intramuskulární podání adenovirových vektorů podle vynálezu takto tvoří nový, velmi specifický způsob infekce motoneuronů retrográdním transportem, umožňující velmi přesně zacílit medulární oblast ve které má být proveden zákrok a ve které byl lokalizován úrazový stav nebo/a ve které byla lokalizována degenerace.
Způsob podle vynálezu je obzvláště výhodný vzhledem k tomu, že umožňuje při přesném sledování kartografie neuromuskulárních spojů infikovat specifickým a unilaterálním způsobem motoneurony různých funkčních medulárních oblastí. Aplikace podle vynálezu se ukazuje být mnohem méně traumatizu jící než stereotaxická injekce do medulárního parenchymu, kte rá by v každém případě byla difuznější a nerestriktivní k neu ronům motorického typu.
První předmět vynálezu takto spočívá v použití rekombinantního adenoviru obsahujícím ve svém genomu zainteresovanou nukleovou kyselinu pro přípravu farmaceutické kompozice určené pro přenos uvedené nukleové kyseliny do medulárních motoneuronů intramuskulárním podáním.
Jak již bylo uvedeno výše, je způsob podle vynálezu obzvláště výhodný vzhledem k tomu, že umožňuje přesně zacílit motoneurony každé funkční medulární oblasti. Takto podle místa poruchy, která má být léčena, se aplikace provádí do svalu nesoucího nervovou vazbu s uvedeným místem poruchy. V rámci vynálezu je nyní možné rozumnou volbou různých injekcí specificky a unilaterálně infikovat velký počet medulárních motoneuronů rozdělených v různých úrovních. V rámci výhodného provedení způsobu podle vynálezu umožňuje podání do svalů horních končetin (bicepcy, tricepsy) přenos genu do motoneuronů v cervikální úrovni. Podání do svalů hrudníku (pektorální svaly) umožňuje přenos genu do motoneuronů v hrudní oblasti, zatímco podání do svalů dolních končetin (svaly tvoří cí součást svalů lýtka) umožňuje přenos genu do motoneuronů v bederní a křížové oblasti. Je samozřejmé, že i ostatní svaly mohou být použity pro podání v úrovni uvedených motoneuronů, přičemž mohou být zacíleny i ostatní motoneurony.
Za tímto účelem je možné použít přesnou kartografii neuromuskulárních spojů pro stanovení v závislosti na cílené medulární oblasti, který ze svalů nebo které ze svalů jsou nejvhodnější pro podání v každém jednotlivém případě. Takové kartografie jsou odborníkovi v daném oboru k dispozici (viz zejména Nicholopoulos a kol., J.Comp.Neurol.217, 78-85, Peyronnard et Charon, Exp. Brain. Res. 50, 125-132). V závislosti na medulární oblasti, která se ukáže být vhodná pro infikování mohou být takto vybrány jeden nebo několik svalů, o kterých je známo, že mohou být enervovány uvažovanou medulární oblastí.
Intramuskulární podání adenovirů může být provedeno různými způsoby. V rámci prvního způsobu provedení se toto podání praktikuje injekcí do několika bodů jednoho a téhož svalu tak, aby se dosáhlo zainteresování velkého počtu motorických destiček. Tento způsob provedení podání je obzvláště účinný v případech kdy nelze identifikovat bod vnoření nervu do uvažovaného svalu. V případě, že takové místo vnoření nervu do svalu lze spolehlivě identifikovat, potom se podání výhodně provádí jednou nebo několika injekcemi v úrovni uvedeného bodu nebo v blízkosti uvedeného bodu. Při tomto způsobu realizace podání je účinnost přenosu nejvyšší, nebot v úrovni neuromuskulárního spoje se absorbuje velké množství podaného vektoru.
Při první výhodné formě provedení vynálezu se tedy intramuskulární podání provádí injekcemi do několiks bodů jednoho a téhož svalu.
V rámci jiné výhodné formy provedení vynálezu :se intramuskulární podání provádí injekcí nebo injekcemi v úrovni bodu vnoření nervu do svalu nebo v blízkosti uvedeného bodu vnoření nervu.
V rámci dalšího předmětu vynálezu se vynález týká použití rekombinantního adenoviru obsahujícího ve svém genomu zainteresovanou nuklovou kyselinu pro přípravu farmaceutické kompozice určené pro přenos uvedené nukleové kyseliny do červi kálních medulárních motoneuronů podáním do svalů horních končetin (příklad: bicepsy, tricepsy).
V rámci dalšího předmětu vynálezu se vynález týká použití rekombinantního adenoviru obsahujícího ve svém genomu zainteresovanou nukleovou kyselinu pro přípravu farmaceutické kompozice určené pro přenos uvedené nukleové kyseliny do hrudních medulárních motoneuronů podáním do svalů hrudníku (příklad: pektorální svaly).
V rámci dalšího předmětu vynálezu se vynález týká použití rekombinantního adenoviru obsahujícího ve svém genomu zainteresovanou nukleovou kyselinu pro přípravu farmaceutické kompozice určené pro přenos uvedené nukleové kyseliny do bederních nebo/a křížových medulárních neuronů podání do svalů dolních okončetin (například do svalu .tvořícího součást svalů lýtka).
Způsob podle vynálezu může být proveden za použití adenovirů různého původu. Ve skutečnosti byly charakterizovány různé sérotypy adenovirů, jejichž struktura a vlastnosti se poněkud mění. Z těchto sérotypů se v rámci vynálezu výhodně použijí lidské adenoviry typu 2 nebo 5 (Ad 2 nebo Ad 5) nebo adenoviry zvířecího původu (o tom viz francouzská patentová přihláška FR 9305954). Z adenovirů zvířecího původu, které jsou použitelné v rámci vynálezu, lze citovat adenoviry psího, bovinního, murinního (příklad: Mav1, Beard a kol., Virology 75 (1990) 81), ovčího, prasečího, ptačího nebo také opičího (příklad: SAV) původu. Výhodně je adenovirem zvířecího původu psí adenovir, obzvláště výhodně adenovir CAV2 /kmen manhattan nebo A26/61 (ATCC VR-800) jako příklad).
V rámci výhodné formy provedení vynálezu se jako adenovir použije adenovir lidského původu. Podle jiné výhodné formy provedení vynálezu se jako adenovir použije adenovir zvířecího původu.
Genom adenovirů zejména obsahuje opakovanou inverzní sekvenci (ITR) na každém konci, enkapsidační sekvenci (Psi), rané geny a pozdní geny. Základní rané geny jsou obsaženy v oblastech E1, E2, E3 a E4. Z těchto genů jsou geny obsažené v oblasti E1 (zejména E1a a E1b) nezbytné pro virální replikaci. Například oblasti E4 a L5 se uplatňují při virální propagaci. Základní pozdní geny jsou obsaženy v oblastech L1 až L5. Genom adenovirů Ad5 byl v celém rozsahu sekvencován a je odborníkům přístupný (například genová banka M73260). Stejně tak byly sekvencovány i části nebo celek genomu adenovirů různých sérotypů (Ad2, Ad7, Ad12, atd.). Adenovirální vektory použité v rámci realizace vynálezu obsahují sekvence ITR, sekvenci umožňující enkapsidaci a zainteresovanou nukleovou kyselinu.
V rámci výhodné formy provedení vynálezu je genom použitých adenovirů zbaven celé nebo části oblasti E1. Oblast E1 je totiž podstatná pro virální replikaci a její inaktivace vede k tvorbě defektního viru, pokud jde o jeho replikaci, tj. k tvorbě viru, který je neschopen vlastní replikace v infikovaných buňkách. Uvedená oblast E1 nebo jakákoliv jiná uvažovaná virální oblast může být učiněna nefunkční libovolnou známou technikou a zejména úplným vypuštěním, substitucí, částečnou delecí nebo adicí jedné nebo několika bází do uvažovaného genu nebo do uvažovaných genů. Takové modifikace mohou být provedeny in vitro (na izolované DNA) nebo in sítu, například za použití technik genového inženýrství, nebo také působením mutagenních činidel. Výhodně je genom použitého adenoviru zbaven části oblasti E1 odpovídající zbytkům 454 až 3328 (fragment PvuII-Bg1II) nebo 382 až 3446 (fragment HinfII-Sau3A).
V rámci obzvláště výhodné :formy provedení vynálezu je genóm použitého adenoviru rovněž zbaven celé nebo části oblasti E3 nebo/a E4. Přihlašovatel nyní prokázal, še je možné konstruovat vektory nesoucí tyto různé typy delecí. Takové dodatečné delece umožňují zvýšit bezpečnost vektoru a zvětšit jeho kapacitu.
Zainteresovaná nukleová kyselina může být vložena na různá místa genomu adenoviru. Výhodně je tato nukleová kyselina vložena v úrovni oblastí E1, E3 nebo E4. Nicméně je zřejmé, že mohou být použita i jiná místa. Přístup k nukleotidové sekvenci genomu umožňuje odborníkovi identifikovat nebo vytvořit restrikční místa použitelná k uvedenému účelu.
Defektní rekombinantní adenoviry podle vynálezu mohou ; být připraveny libovolnou známou technikou (Levrero a kol., Gene 101 (1991) 195, EP 185537, Graham, EMBO J. 3 (1984)2917). Zejména mohou být uvedené defektní adenoviry připraveny homologov.ou rekombinaci mezi adenovirem a plasmidem nesoucím mimo jiné sekvenci zainteresované DNA. Tato homologová rekombinace se realizuje po ko-transfekci uvedeného adenoviru a plasmidu ve vhodné buněčné řadě. Použitá buněčná řada výhodně musí (i) být transformovatelná uvedenými prvky a musí (ii) obsahovat sekvence schopné komplentovat část genomu defektního adenoviru, výhodně v integrované formě za účelem vyvarování se rekombinačních rizik. Jakožto příklad takové buněčné řady lze uvést řadu z ledvin lidského emrya 293 (Graham a kol., J.Gen.Virol.36 (1977)59), která zejména obsahuje v integrované formě ve svém genomu levou část genomu adenoviru Ad5 (12 %).
První metoda spočívá v tranfekci (defektního) rekombinantního viru, připraveného in vitro v kompetentní buněčné řadě, tj. nesoucí v poloze trans všechny funkce, které jsou nezbytné pro komplementování ídefektního viru. Tyto funkce jsou výhodně integrované v genomu buňky, což redukuje rekombinační rizika a uděluje buněčné řadě zvýšenou stabilitu. V případě adenovirů, ve kterých je deficitní pouze oblast E1, je použitou buněčnou řadou výhodně řada 293.
Druhá metoda spočívá v ko-transfekci ve vhodné buněčné řadě DNA defektního rekombinantního viru připraveného in vitro a DNA jednoho nebo několika virů nebo plasmidů helper. Při této metodě není nezbytné disponovat kompetentní buněčnou řadou schopnou komplementovat všechny defektní funkce rekombinantního adenoviru. Část těchto funkcí je ve skutečnosti komplementována virem nebo viry helper. Tento vir nebo viry helper jsou samotné defektní.
Strategie konstrukce vektorů odvozených od adenovirů byly rovněž popsány v patentových přihláškách FR93/05954 a FR93/08596.
Multiplikované adenoviry se potom izolují a purifikují klasickými technikami molekulární biologie, jak to bude dále ilustrováno v příkladové části.
Pro použití těchto adenovirů v rámci vynálezu jsou adenoviry výhodně sdruženy s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo nosiči za vzniku injikovatelné formulace. Zejména se může jednat o solné roztoky (fosforečnan sodný, hydrogenfosforečnan sodný, chlorid sodný, chlorid draselný, chlorid vápenatý nebo chlorid hořečnatý, atd. nebo směsi takových solí) mající sterilní isotonický charakter, nebo o suché kompozice, získané zejména lyofilizaci, které po přidání sterilizované vody nebo fyziologického roztoku umožňují rekonstituci injikovatelných roztoků. Dávky použitého viru v rámci dané konkrétní aplikace jsou závislé na různých faktorech, zejména na místu (sval) podání, počtu injekcí, genu, který má být exprimován nebo také na zvolené době léčení. Obecně jsou rekombinantní adenoviry podle vynálezu formulovány a podávány ve formě dávek obsahujících mezi 10^ a 10 pfu, výhodně mezi 10° a 10 pfu. Jednotka pfu (plaque forming unit) odpovídá infekční potenci virového roztoku a je stanovena za použití infekce příslušné buněčné kultury, přičemž se obecně po 15 dnech stanoví počet kolonií infikovaných buněk. Techniky stanovení titru virálního roztoku jsou v odborné literatuře sdostatek dokumentovány.
Způsob podle vynálezu je obzvláště výhodný pro léčení medulárních poranění nebo nemocí způsobených degenerací motoneuronů. Medulární traumata odpovídají zejména sekcím v úrovni motoneuronů, které je zbavují jejich přívodných cest z vrchních center a způsobují jejich degeneraci. Přenos genů kódujících růstové faktory do motoneuronů ve stavu léze retrográdním transportem podle vynálezu nyní nabízí možnost omezit nebo dokonce eliminovat takovou degeneraci. V případě neuropatii motoneuronů lze uvést například amyotrofní laterální sklorózu, spinální amyotrofie typu I (Werdning-Hoffmanova nemoc), typu II nebo typu III (Kugelberg-Welanderova nemoc) a bulbární spinální amyotrofie (jako například Kennedyho nemoc). Přenos genů kódujících růstové faktory nebo další známé molekuly určené pro stimulování neurotrofního účinku na motoneurony ve stavu degenerace podle vynálezu nabízí rovněž nový směs léčení tohoto typu patologií. Účinnost způsobu podle vynálezu může být zejména prokázána na zvířecích modelech: model částečné nebo úplné sekce míchy, myš Wobbler (zvířecí model pro studium amyotrofní laterální sklerózy (Leestma J.E.,Am.J.Pathol.,100,821-824)); myš mnd (motoneuronová degenerace: zvířecí model pro studium amyotrofní laterální sklerózy (Messer a kol.,1992, Genomics,18,797-802)) nebo myš pmm (progresivní motoneuronová neuropatie: zvířecí model pro studium motoneuronální degenerace v průběhu jejího rozvoje),jak to bude dále ilustrováno v příkladové části. Inkorporace, tolerance a neškodnost ve vztahu k lidským pacientům mohou být testovány na modelech in vitro kultur lidských emryonálních medulárních neuronů.
V tomto ohledu zainteresovaná nukleová kyselina inkorporovaná do adenovirálních vektorů podle vynálezu kóduje přednostně neuroaktivní látku, tj. látku schopnou realizovat příznivý účinek na nervové buňky. Může se jednat o látku schop nou kompenzovat deficit endogenní látky nebo redukovat přebytek endogenní látky, nebo také o látku udělující buňkám nové vlastnosti. Může se zejména jednat o růstový faktor, neurotrofní faktor, cytokin, neurotransmitor nebo také o enzym nebo o neurotransmitorový nebo hormonální receptor.
Z růstových faktorů lze přednostně uvést stimulační faktory kolonií (G-CSF, GM-CSF, M-CSF, CSF, atd.) nebo růstové faktory fibroplastů (FGFa, FGFb) nebo vaskulární buňky (VEGF). Z neurotrofnich faktorů lze jako výhodné faktory zejména uvést ciliární neurotrofní faktor (CNTF), maturační faktory gliálních buněk (GMFa,b), GDNF, BDNF, NT3, NT5, atd. Výhodnými cytokiny jsou interleukiny a interferony, zatímco z enzymů se přednostně používají biosyntézní neurotransmitorové enzymy (tyrosin-hydroxyláza, acetylcholin-transferáza, kyselina glutamová-dekarboxyláza), lysosomální enzymy (hexosaminidázy, arylsulfatáza, glukocerebrosidáza, HGPRT), enzymy uplatňující se při detoxifikaci volných radikálů (peroxyddismutáza I, II nebo III, kataláza, glutathion-peroxydáza).
Z receptorů lze mimo jiné použít receptory androgenů (uplatňující se při Kennedyho nemoci).
Uvedené různé faktory mohou být použity v nativní formě nebo ve formě variant nebo fragmentů mající účinnost stejného typu.
Rovněž je možné přenášet antimediátorové sekvence.
Nukleová kyselina může být přírodního nebo umělého původu. Může se zejména jednat o genomovou DNA (DNAg), komplementární DNA (DNAc), hybridní sekvence nebo syntetické nebo polosyntetické sekvence. Tato nukleová kyselina může být lidského, zvířecího, rostlinného, bakteriálního nebo virového původu a podobně. Nukleová kyselina může být získána libovolnou známou technikou a zejména vytříděním z bank, chemickou syntézou nebo také komplexními metodami zahrnujícími chemickou nebo enzymatickou modifikaci sekvencí získaných uvedeným vytříděním z bank. Výhodně se jedná o komplementární a genomovou nukleovou kyselinu DNAc resp. DNAg.
Obecně nukleová kyselina rovněž zahrnuje promoční oblast funkční transkripce do motoneuronů, jakož i oblast situovanou v poloze 3' zainteresovaného genu, která specifikuje signál transkripčního konce a místo polyadenylace. Soubor těchto prvků tvoří expresní kazetu. Pokud jde o uvedenou promoční oblast, může se jednat o promoční oblast přirozeně zodpovědnou za expresi uvažovaného genu v případě, že je tato oblast schopna funkce v infikované buňce. Rovněž se může jednat o oblasti různých původů (zodpovědné za expresi ostatních proteinů nebo dokonce syntetických proteinů). Zejména se může jednat o promoční sekvence eukaryotických nebo virálních genů. Tak například se může jednat o promoční sekvence pocházející z genomu buňky, která má být infikována. Stejně tak se může jednat o promoční sekvence pocházející z genomu viru, včetně použitého adenoviru. V tomto ohledu lze uvést například promotory genů E1A, MLP, CMV, RSV, atd.. Kromě toho mohou být tyto promoční oblasti modifikovány adicí aktivačních sekvencí, regulačních sekvencí nebo sekvencí umožňujících tkáňově specifickou a majoritní expresi (promotory GFAP, enoláza, atd.). Jinak v případě, že heterologová nukleo vá kyselina neobsahuje promoční sekvence, může býr vložena do genomu viru až za takovou promoční sekvencí.
Předmětem vynálezu je rovněž způsob přenosu nukleových kyselin do motoneuronů, jehož podstata spočívá v tom, že zahrnuje muskulární podání adenovirálního vektoru, v jehož genomu je zabudována uvedená nukleová kyselina. Výhodně se způsob podle vynálezu realizuje injekcí nebo injekcemi do několika bodů jednoho a téhož svalu nebo v případě, kdy je možné určit místo vnoření nervu do svalu, jednou nebo několika injekcemi v úrovni uvedeného místa vnoření nervu nebo v blízkosti uvedeného místa vnoření nervu.
V následující části popisu bude vynález blíže objasněn pomocí příkladů provedení vynálezu, přičemž tyto příklady mají pouze ilustrační charakter a nikterak neomezují rozsah vynálezu, který je jednoznačně vymezen definicí patentových nároků.
Stručný popis obrázků
Obr.1 (fotografie A):
Značení beta-galaktosidázy v podélných řezech (50/um) krysí míchy v bederní oblasti po intramuskulární injekci adenoviru-beta-galaktosidázy do svalu tvořícího součást svalů lýtka:
- difuzní značení četných motoneuronálních buněčných tělísek (na fotografii A vyznačeno značkou ve tvaru prázdného řeckého písmene delta),
- intenzivnější značení několika motoneuronů v úrovni buněčného tělíska a neuritů, demonstrující typickou morfologii motoneuronů (na fotografii A vyznačeno značkou ve tvaru plného řeckého písmene delta).
Obr.2 (fotografie B): stejný objekt jako na fotografii A, avšak za použití většího zvětšení:
Značení beta-galaktosidázy v podélných řezech (50/Um) krysí míchy v bederní oblasti po intramuskulární injekci ade12 noviru-beta-galaktosidázy do svalu tvořícího součást svalů lýtka.
Obr.3 (fotografie C):
Kombinované značení beta-galaktosidázy a imunocytochemické značení CGRP (Calciton Gene Related Peptide) v podélných řezech (50/Um) krysí míchy v bederní oblasti po intramuskulární injekci adenoviru-beta-galaktosidázy do svalu tvořícího součást svalů lýtka.
Příklady provedení vynálezu
1. Injekce adenoviru-beta-galaktosidázy do svalu tvořícího součást svalů lýtka neporaněné krysy nebo krysy, která podstoupila hrudní hemisekci míchy
Tento příklad popisuje přenos genu b-gal v úrovni bederních motoneuronů podáním do svalu tvořícího součást svalů lýtka adenoviru, ve kterém je zabudován uvedený gen.
Studie byla realizována na modelu částečné nebo úplné sekce míchy krysy provedené ve spodní hrudní oblasti za účelem ochromení jedné nebo obou zadních končetin zvířete.Tato se ce zbaví motoneurony jejich přívodních cest vedoucích z vyšších center a způsobí jejich degeneraci. Podání bylo provedeno tak, aby se dosáhlo infekce motoneuronů ve stavu léze retro grádním transportem.
Adenovirálním vektorem použitým v tomto příkladu je vektor Ad.RSV.beta-gal. Tento vektor je zbaven sekvencí nezbyt ných pro jeho replikaci, i když nicméně obsahuje sekvence nezbytné pro proniknutí do buněk určených k infikování, jakož i veškeré podstatné sekvence nezbytné pro enkapsidaci tohoto adenoviru. Uvedený vektor rovněž nese pod kontrolou promotoru RSV gen beta-galaktosidázy z Escherichia coli. Konstrukce defektního rekombinantního adenoviru Ad.RSVbeta-gal byla popsá13 na v literatuře (Stratford-Perricaudet a kol., J.Clin.
Invest.90( 1 992)626 ) . Stručně řečeno je adenovirus Ad.RSBbGal defektním rekombinantním adenovirem (s deleci oblastí E1 a E3) získaným homologovou rekombinací in vivo mezi mutantním adenovirem Ad-d1324 (Thimmappaya a kol., Cell 31(1982)543) a plasmidem pAd.RSVbGal (Akli a kol.)1993).
Uvedený plasmid pAd.RSVbGal obsahuje v orientaci od 5’ do 3':
- fragment PvuII odpovídající levému konci adenoviru Ad5 obsahující: sekvenci ITR, počátek replikace, enkapsidační signály a amplifikátor E1A,
- gen kódující beta-galaktosidázu pod kontrolou promotoru RSV (vir Rousova sarkomu) a
- druhý fragment genomu adenoviru Ad5, který umožňuje homologovou rekombinaci mezi plasmidem pAd.RSVbGal a adenovirem d1324.
Po linearizaci enzymem Clal se plasmid pAd.RSVbGal a adenovir d1324 ko-transfekují do řady 293 v přítomnosti fosforečnanu vápenatého k umožnění homologové rekombinace. Rekom binantní adenoviry takto generované se selektují purifikací na purifikační plotně. Po izolaci se DNA rekombinantního adenoviru amplifikuje v buněčné řadě 293, což vede k supernatantu obsahujícímu nepurifikovaný defektní rekombinantní adenovir mající titr asi ΙΟ^θ pfu/ml. Virální částice se potom purifikují odstředěním v gradientu chloridu česného za použití známých technik (o tom viz zejména Graham a kol.,Virology 52 (1973)456). Adenovir se potom použije v purifikované formě fosfátového solného roztoku (PBS).
Bezprostředně potom,co pokusné zvíře podstoupilo (nebo nepodstoupilo) hemisekci míchy (ve spodní hrudní oblasti, což má za účinek ochrnutí jedné nebo obou zadních končetin), byly aplikovány do svalu tvořícího součást svalů lýtka tři injekce adenoviru Ad-RSV-b-Gal (10 pfu/ml injekcí). Do každého místa bylo aplikováno Hamiltonovou injekční stříkačkou 9/Ul adenoviru.
Pokusná zvířata byla potom utracena (infuze 4% formaldehydu) čtyři dny po injekci, což je minimální doba, ve které může dojít k retrográdnímu transportu ze svalu do míchy. V cervikální, hrudní a bederní oblasti byly potom z míchy vyříznuty tři řezy, přičemž každý z těchto řezů měl tlouštíku 50/Um a byl veden v podélném směru míchy. Získané řezy byly potom zpracovány za účelem vyvolání beta-galaktosidázy, což umožňuje zviditelnit buňky, které byly infikovány virem. Další řezy byly podrobeny imunocytochemickému značení CGRP (Calcitonin Gene Related Peptide), což umožňuje specifické značení mononeuronů.
Beta-galaktosidáza byla vyvolána ze svého substrátu, X-Gal, přičemž produkt reakce poskytne modré zbarvení.
CGRP (Calcitonin Gene Related Peptide) je neurotransmitor, který je specifickým značkovačem motoneuronů. Tento CGRP je vyvolán imunocytochemicky se sekundární protilátkou kopulovanou s peroxydázou, přičemž je jako substrát enzymu použije diaminobenzidin. Produkt reakce poskytne kaštanově hnědé zbarvení.
Vyvolání beta-galaktosidázy umožňuje prokázat přítomnost infikovaných motoneuronů, výlučně v bederní oblasti, ve stavu léze v případě prys podrobených výše uvedené hemisekci a ze strany odpovídající injekci.
Byly získány dva typy značení, a to difuzní značení buněčného tělíska velkého počtu motoneuronů a intenzivnější značení buněčného tělíska a neuritů omezenějšího počtu motoneuronů (fotografie A a B). Tento rozdíl intenzity značení je pravděpodobně způsobem skutečností, že pouze omezený počet motoneuronů, které byly velmi blízko místu injekce, mohl absorbovat vir intenzivním způsobem.
Kombinace imunocytochemického značení CGRP a vyvolání beta-galaktosidázy umožnila prokázat dvojím vybarvením, že téměř všechny CGRP-pozitivní buněčná tělíska (tj. motoneurony) byly infikovány virem (viz fotografie C).
Claims (13)
1. Použití rekombinantního adenovirů obsahujícího ve svém genomu zainteresovanou nukleovou kyselinu pro přípravu farmaceutické kompozice určené pro přenos uvedené nukleové kyseliny do cervikálních medulárních motoneuronů podáním do svalů horních končetin (například bicepsy, tricepsy).
2. Použití rekombinantního adenovirů obsahujícího ve svém genomu zainteresovanou nukleovou kyselinu pro přípravu farmaceutické kompozice určené pro přenos uvedené nukleové kyseliny do hrudních medulárních motoneuronů podáním do svalů hrudníku (například hrudní svaly).
3. Použití rekombinantního adenovirů obsahujícího ve svém genomu zainteresovanou nukleovou kyselinu pro přípravu farmaceutické kompozice určené pro přenos uvedené nukleové kyseliny do bederních nebo/a křížových medulárních motoneuronů podáním do svalů spodních končetin (například sval tvořící součást svalů lýtka).
4. Použití rekombinantního adenovirů, jehož genom je zbaven celé nebo části oblasti E1 a celé nebo části oblasti E3 nebo/a E4 a obsahuje zainteresovanou nukleovou kyselinu pro přípravu farmaceutické kompozice určené pro přenos uvedené nukleové kyseliny do medulárních motoneuronů intramuskulárním podáním.
5. Použití rekombinantního adenovirů obsahujícího ve svém genomu nukleovou kyselinu kódující NT3 pro přípravu farmaceutické kompozice určené pro přenos uvedené nukleové kyseliny do medulárních motoneuronů intramuskulárním podáním.
6. Použití podle některého z nároků 1 až 5, vyznačené tím, že adenovirem je adenovir lidského původu.
7. Použití podle některého z nároků 1 až 5, vyznačené t í m, že adenovirem je adenovir zvířecího původu.
8. Použití podle některého z předcházejících nároků, v y značené tím, že zainteresovaná nukleová kyselina je vložena do genomu adenovirů v úrovni oblasti E1, E3 nebo E4.
9. Použití podle některého z nároků 1 až 4, vyznačené t í m, že zainteresovaná nukleová kyselina kóduje látku schopnou mít příznivý účinek na nervové buňky.
10. Použití podle nároku 9,vyznačené tím, že zainteresovaná nukleová kyselina kóduje růstový faktor, neurotrofní faktor, cytokin, neurotransmitor nebo enzym nebo receptor.
11. Použití podle nároku 9,vyznačené tím, že zainteresovaná nukleová kyselina navíc obsahuje signály umožňující expresi látky v motoneuronech.
12. Použití podle některého z nároků 1 až 5, vyznačen é t i m, že se intramuskulární podání provede injekcí do několika bodů jednoho a téhož svalu.
13. Použití rekombinantního adenovirů obsahujícího ve svém genomu nukleovou kyselinu kódující neurotrofní faktor pro pří právu farmaceutické kompozice určené pro léčení amyotrofní laterální sklerózy přenosem uvedené nukleové kyseliny do medu lárních motoneuronů intramuskulárním podáním.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9415014A FR2727867B1 (fr) | 1994-12-13 | 1994-12-13 | Transfert de genes dans les motoneurones medullaires au moyen de vecteurs adenoviraux |
| PCT/FR1995/001650 WO1996018740A1 (fr) | 1994-12-13 | 1995-12-12 | Transfert de genes dans les motoneurones medullaires au moyen de vecteurs adenoviraux |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ180697A3 true CZ180697A3 (en) | 1997-09-17 |
Family
ID=9469770
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ971806A CZ180697A3 (en) | 1994-12-13 | 1995-12-12 | Transfer of genes in medullary motor neurons through the mediation of adenovirus vectors |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6632427B1 (cs) |
| EP (1) | EP0797677A1 (cs) |
| JP (1) | JPH10510428A (cs) |
| AU (1) | AU712775B2 (cs) |
| BR (1) | BR9510090A (cs) |
| CA (1) | CA2208224A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ180697A3 (cs) |
| FI (1) | FI972491A7 (cs) |
| FR (1) | FR2727867B1 (cs) |
| HU (1) | HUT77258A (cs) |
| NO (1) | NO972712D0 (cs) |
| SK (1) | SK74597A3 (cs) |
| WO (1) | WO1996018740A1 (cs) |
Families Citing this family (79)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5846782A (en) | 1995-11-28 | 1998-12-08 | Genvec, Inc. | Targeting adenovirus with use of constrained peptide motifs |
| US6465253B1 (en) | 1994-09-08 | 2002-10-15 | Genvec, Inc. | Vectors and methods for gene transfer to cells |
| US5770442A (en) * | 1995-02-21 | 1998-06-23 | Cornell Research Foundation, Inc. | Chimeric adenoviral fiber protein and methods of using same |
| US6127525A (en) * | 1995-02-21 | 2000-10-03 | Cornell Research Foundation, Inc. | Chimeric adenoviral coat protein and methods of using same |
| US6783980B2 (en) | 1995-06-15 | 2004-08-31 | Crucell Holland B.V. | Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy |
| EP1445322B2 (en) | 1995-06-15 | 2012-06-06 | Crucell Holland B.V. | Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy |
| EP0969875B1 (en) * | 1997-01-17 | 2008-11-26 | Aventis Pharma S.A. | Naked dna-mediated gene transfer into medullary motor neurons |
| FR2761258B1 (fr) * | 1997-03-26 | 1999-06-11 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Procede de stimulation de la regeneration nerveuse |
| US20030017138A1 (en) | 1998-07-08 | 2003-01-23 | Menzo Havenga | Chimeric adenoviruses |
| US6929946B1 (en) * | 1998-11-20 | 2005-08-16 | Crucell Holland B.V. | Gene delivery vectors provided with a tissue tropism for smooth muscle cells, and/or endothelial cells |
| US20050232900A1 (en) * | 1999-05-18 | 2005-10-20 | Crucell Holland B.V. | Serotype of adenovirus and uses thereof |
| US6913922B1 (en) * | 1999-05-18 | 2005-07-05 | Crucell Holland B.V. | Serotype of adenovirus and uses thereof |
| US6492169B1 (en) | 1999-05-18 | 2002-12-10 | Crucell Holland, B.V. | Complementing cell lines |
| US6582692B1 (en) * | 1999-11-17 | 2003-06-24 | Avigen, Inc. | Recombinant adeno-associated virus virions for the treatment of lysosomal disorders |
| US7235233B2 (en) | 2000-09-26 | 2007-06-26 | Crucell Holland B.V. | Serotype 5 adenoviral vectors with chimeric fibers for gene delivery in skeletal muscle cells or myoblasts |
| NZ533833A (en) * | 2001-12-21 | 2008-01-31 | Salk Inst For Biological Studi | Targeted retrograde gene delivery to motor neurons |
| US6998118B2 (en) * | 2001-12-21 | 2006-02-14 | The Salk Institute For Biological Studies | Targeted retrograde gene delivery for neuronal protection |
| ES2335657T3 (es) | 2002-04-25 | 2010-03-31 | Crucell Holland B.V. | Medios y metodos para la produccion de vectores de adenovirus. |
| SI2019683T2 (sl) | 2006-04-25 | 2022-10-28 | The Regents Of The University Of California | Dajanje rastnih faktorjev za zdravljenje motenj CŽS |
| PT2396038E (pt) | 2009-02-12 | 2016-02-19 | Curna Inc | Tratamento das doenças associadas com o factor neurotrófico derivado do cérebro (bdnf) por inibição do produto antisenso natural da transcrição para bdnf |
| CN102439149B (zh) | 2009-02-12 | 2018-01-02 | 库尔纳公司 | 通过抑制针对胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)的天然反义转录物来治疗gdnf相关的疾病 |
| US20110319317A1 (en) | 2009-03-04 | 2011-12-29 | Opko Curna, Llc | Treatment of sirtuin 1 (sirt1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to sirt1 |
| CA2755409C (en) | 2009-03-16 | 2019-04-30 | Joseph Collard | Treatment of nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2 (nrf2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to nrf2 |
| JP5904935B2 (ja) | 2009-03-17 | 2016-04-20 | クルナ・インコーポレーテッド | デルタ様１ホモログ（ｄｌｋ１）に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるｄｌｋ１関連疾患の治療 |
| EP2427553A4 (en) | 2009-05-06 | 2012-11-07 | Opko Curna Llc | TREATMENT OF LIPID TRANSPORT AND METABOLISM-RELATED DISEASES BY INHIBITING THE NATURAL ANTISENSE TRANSCRIPT AGAINST A LIPID TRANSPORT AND METABOLIC TREATMENT |
| JP6250930B2 (ja) | 2009-05-06 | 2017-12-20 | クルナ・インコーポレーテッド | トリステトラプロリン（ｔｔｐ）に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるｔｔｐ関連疾患の治療 |
| ES2664590T3 (es) | 2009-05-18 | 2018-04-20 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con factores de reprogramación por inhibición del tránscrito antisentido natural a un factor de reprogramación |
| CN102549158B (zh) | 2009-05-22 | 2017-09-26 | 库尔纳公司 | 通过抑制针对转录因子e3(tfe3)的天然反义转录物来治疗tfe3和胰岛素受体底物蛋白2(irs2)相关的疾病 |
| KR101704988B1 (ko) | 2009-05-28 | 2017-02-08 | 큐알엔에이, 인크. | 항바이러스 유전자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 항바이러스 유전자 관련된 질환의 치료 |
| ES2629339T3 (es) | 2009-06-16 | 2017-08-08 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con la paraoxonasa 1 (pon1) por inhibición de transcrito antisentido natural a pon1 |
| CN102695797B (zh) | 2009-06-16 | 2018-05-25 | 库尔纳公司 | 通过抑制针对胶原基因的天然反义转录物来治疗胶原基因相关的疾病 |
| ES2618894T3 (es) | 2009-06-24 | 2017-06-22 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con el receptor del factor de necrosis tumoral 2 (tnfr2) por inhibición del transcrito natural antisentido para tnfr2 |
| KR101807324B1 (ko) | 2009-06-26 | 2017-12-08 | 큐알엔에이, 인크. | 다운 증후군 유전자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 다운 증후군 유전자 관련된 질환의 치료 |
| KR101802536B1 (ko) | 2009-08-05 | 2017-11-28 | 큐알엔에이, 인크. | 인슐린 유전자 (ｉｎｓ)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 인슐린 유전자 (ｉｎｓ) 관련된 질환의 치료 |
| CN102482671B (zh) | 2009-08-25 | 2017-12-01 | 库尔纳公司 | 通过抑制‘含有iq模体的gtp酶激活蛋白’(iqgap)的天然反义转录物而治疗iqgap相关疾病 |
| KR101823702B1 (ko) | 2009-12-16 | 2018-01-30 | 큐알엔에이, 인크. | 막 결합 전사 인자 펩티다제, 부위 １(ｍｂｔｐｓ１)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 ｍｂｔｐｓ１ 관련 질환의 치료 |
| DK2516648T3 (en) | 2009-12-23 | 2018-02-12 | Curna Inc | TREATMENT OF HEPATOCYTE GROWTH FACTOR (HGF) RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENSE TRANSCRIPT AGAINST HGF |
| KR101793753B1 (ko) | 2009-12-23 | 2017-11-03 | 큐알엔에이, 인크. | 커플링방지 단백질 ２(ｕｃｐ２)에 대한 천연 안티센스 전사체의 저해에 의한 ｕｃｐ２ 관련 질환의 치료 |
| ES2657452T3 (es) | 2009-12-29 | 2018-03-05 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con el factor respiratorio nuclear 1 (NRF1) mediante inhibición de transcrito antisentido natural a NRF1 |
| CN102770540B (zh) | 2009-12-29 | 2017-06-23 | 库尔纳公司 | 通过抑制肿瘤蛋白63(p63)的天然反义转录物而治疗p63相关疾病 |
| DK2521784T3 (en) | 2010-01-04 | 2018-03-12 | Curna Inc | TREATMENT OF INTERFERON REGULATORY FACTOR 8- (IRF8) RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENCE TRANSCRIPT TO IRF8 |
| WO2011085066A2 (en) | 2010-01-06 | 2011-07-14 | Curna, Inc. | Treatment of pancreatic developmental gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a pancreatic developmental gene |
| CA2786535C (en) | 2010-01-11 | 2019-03-26 | Curna, Inc. | Treatment of sex hormone binding globulin (shbg) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to shbg |
| US8946182B2 (en) | 2010-01-25 | 2015-02-03 | Curna, Inc. | Treatment of RNASE H1 related diseases by inhibition of natural antisense transcript to RNASE H1 |
| JP5976548B2 (ja) | 2010-02-22 | 2016-08-23 | カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド | Ｐｙｃｒ１に対する天然アンチセンス転写物の阻害によるピロリン−５−カルボン酸レダクターゼ１（ｐｙｃｒ１）関連疾患の治療 |
| US9044494B2 (en) | 2010-04-09 | 2015-06-02 | Curna, Inc. | Treatment of fibroblast growth factor 21 (FGF21) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to FGF21 |
| US9089588B2 (en) | 2010-05-03 | 2015-07-28 | Curna, Inc. | Treatment of sirtuin (SIRT) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a sirtuin (SIRT) |
| TWI531370B (zh) | 2010-05-14 | 2016-05-01 | 可娜公司 | 藉由抑制ｐａｒ４天然反股轉錄本治療ｐａｒ４相關疾病 |
| EP3299464B1 (en) | 2010-05-26 | 2019-10-02 | CuRNA, Inc. | Treatment of atonal homolog 1 (atoh1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to atoh1 |
| CN103068982B (zh) | 2010-07-14 | 2017-06-09 | 库尔纳公司 | 通过抑制盘状大同系物(dlg)的天然反义转录物而治疗dlg相关疾病 |
| US8993533B2 (en) | 2010-10-06 | 2015-03-31 | Curna, Inc. | Treatment of sialidase 4 (NEU4) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to NEU4 |
| WO2012054723A2 (en) | 2010-10-22 | 2012-04-26 | Opko Curna Llc | Treatment of alpha-l-iduronidase (idua) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to idua |
| JP6073795B2 (ja) | 2010-10-27 | 2017-02-01 | カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド | インターフェロン関連発生制御因子１（ｉｆｒｄ１）への天然アンチセンス転写物の阻害によるｉｆｒｄ１関連疾患の治療 |
| EP2643463B1 (en) | 2010-11-23 | 2017-09-27 | CuRNA, Inc. | Treatment of nanog related diseases by inhibition of natural antisense transcript to nanog |
| EP2718439B1 (en) | 2011-06-09 | 2017-08-09 | CuRNA, Inc. | Treatment of frataxin (fxn) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to fxn |
| HK1210211A1 (en) | 2012-03-15 | 2016-04-15 | 科纳公司 | Treatment of brain derived neurotrophic factor (bdnf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to bdnf |
| WO2015171918A2 (en) | 2014-05-07 | 2015-11-12 | Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Compositions and uses for treatment thereof |
| GB201410693D0 (en) | 2014-06-16 | 2014-07-30 | Univ Southampton | Splicing modulation |
| EP3201339A4 (en) | 2014-10-03 | 2018-09-19 | Cold Spring Harbor Laboratory | Targeted augmentation of nuclear gene output |
| EP3359685A1 (en) | 2015-10-09 | 2018-08-15 | University Of Southampton | Modulation of gene expression and screening for deregulated protein expression |
| JP7054675B2 (ja) | 2015-12-14 | 2022-04-14 | コールド スプリング ハーバー ラボラトリー | 網膜色素変性症１８と網膜色素変性症１３の処置のための組成物と方法 |
| JP7049249B2 (ja) | 2015-12-14 | 2022-04-06 | コールド スプリング ハーバー ラボラトリー | 中枢神経系疾患の処置のための組成物および方法 |
| JP2019500345A (ja) | 2015-12-14 | 2019-01-10 | コールド スプリング ハーバー ラボラトリー | 肝臓病の処置のための組成物および方法 |
| WO2017106210A1 (en) | 2015-12-14 | 2017-06-22 | Cold Spring Harbor Laboratory | Antisense oligomers for treatment of alagille syndrome |
| KR102604132B1 (ko) | 2015-12-14 | 2023-11-17 | 콜드스프링하버러보러토리 | 상염색체 우성 정신 지체 5 및 드라베 증후군의 치료를 위한 안티센스 올리고머 |
| US11096956B2 (en) | 2015-12-14 | 2021-08-24 | Stoke Therapeutics, Inc. | Antisense oligomers and uses thereof |
| SI3673080T1 (sl) | 2017-08-25 | 2024-03-29 | Stoke Therapeutics, Inc. | Protismiselni oligomeri za zdravljenje bolezenskih stanj in bolezni |
| HRP20250322T1 (hr) | 2017-10-23 | 2025-06-06 | Stoke Therapeutics, Inc. | Protusmisleni oligomeri, namijenjeni liječenju stanja i bolesti uzrokovanih raspadanjem rna posredovanim besmislenim mutacijama |
| EP3737692A4 (en) | 2018-01-09 | 2021-09-29 | Elstar Therapeutics, Inc. | CALRETICULIN AND MODIFIED T-LYMPHOCYTES BINDING CONSTRUCTIONS FOR THE TREATMENT OF DISEASES |
| US12152073B2 (en) | 2018-03-14 | 2024-11-26 | Marengo Therapeutics, Inc. | Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof |
| BR112020022512A2 (pt) | 2018-05-04 | 2021-05-04 | Stoke Therapeutics, Inc. | métodos e composições para tratamento de doença de armazenamento de éster de colesteril |
| AU2019297451A1 (en) | 2018-07-03 | 2021-01-28 | Marengo Therapeutics, Inc. | Anti-TCR antibody molecules and uses thereof |
| EP3927747A1 (en) | 2019-02-21 | 2021-12-29 | Marengo Therapeutics, Inc. | Antibody molecules that bind to nkp30 and uses thereof |
| CN119661722A (zh) | 2019-02-21 | 2025-03-21 | 马伦戈治疗公司 | 结合t细胞相关癌细胞的多功能分子及其用途 |
| GB2609554B (en) | 2020-01-03 | 2025-08-20 | Marengo Therapeutics Inc | Anti-TCR antibody molecules and uses thereof |
| AU2021270720A1 (en) | 2020-05-11 | 2022-12-08 | Stoke Therapeutics, Inc. | OPA1 antisense oligomers for treatment of conditions and diseases |
| KR20240004462A (ko) | 2021-04-08 | 2024-01-11 | 마렝고 테라퓨틱스, 인크. | Tcr에 결합하는 다기능성 분자 및 이의 용도 |
| WO2022226291A1 (en) | 2021-04-22 | 2022-10-27 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions and methods for treating cancer |
| WO2023178311A1 (en) * | 2022-03-18 | 2023-09-21 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Methods for treating disorders under hypothermia and compositions relating to the same |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5703055A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
| WO1993007270A1 (en) * | 1991-10-01 | 1993-04-15 | Genentech, Inc. | Production of gpa neurotrophic factor |
| PT586076E (pt) * | 1992-08-07 | 2003-11-28 | Wyeth Corp | Vacinas de adenovirus recombinantes |
| FI951404A7 (fi) * | 1992-09-25 | 1995-03-24 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Adenovirusvektoreita vieraiden geenien siirtämiseksi keskushermostojärjestelmän , erityisesti aivojen, soluihin |
| JP3532566B2 (ja) * | 1993-06-24 | 2004-05-31 | エル． グラハム，フランク | 遺伝子治療のためのアデノウイルスベクター |
| ES2310924T3 (es) * | 1993-07-13 | 2009-01-16 | Centelion | Vectores adenovirales defectivos y utilizacion en terapia genica. |
-
1994
- 1994-12-13 FR FR9415014A patent/FR2727867B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-12-12 FI FI972491A patent/FI972491A7/fi not_active IP Right Cessation
- 1995-12-12 EP EP95942249A patent/EP0797677A1/fr not_active Ceased
- 1995-12-12 AU AU43502/96A patent/AU712775B2/en not_active Ceased
- 1995-12-12 CA CA002208224A patent/CA2208224A1/fr not_active Abandoned
- 1995-12-12 JP JP8518369A patent/JPH10510428A/ja not_active Ceased
- 1995-12-12 WO PCT/FR1995/001650 patent/WO1996018740A1/fr not_active Ceased
- 1995-12-12 SK SK745-97A patent/SK74597A3/sk unknown
- 1995-12-12 BR BR9510090A patent/BR9510090A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-12-12 HU HU9701819A patent/HUT77258A/hu unknown
- 1995-12-12 CZ CZ971806A patent/CZ180697A3/cs unknown
-
1997
- 1997-01-17 US US08/785,074 patent/US6632427B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-06-12 NO NO972712A patent/NO972712D0/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SK74597A3 (en) | 1997-12-10 |
| NO972712L (no) | 1997-06-12 |
| FI972491L (fi) | 1997-06-12 |
| BR9510090A (pt) | 1998-07-14 |
| FR2727867A1 (fr) | 1996-06-14 |
| MX9704102A (es) | 1997-09-30 |
| US6632427B1 (en) | 2003-10-14 |
| FR2727867B1 (fr) | 1997-01-31 |
| NO972712D0 (no) | 1997-06-12 |
| WO1996018740A1 (fr) | 1996-06-20 |
| CA2208224A1 (fr) | 1996-06-20 |
| EP0797677A1 (fr) | 1997-10-01 |
| FI972491A0 (fi) | 1997-06-12 |
| AU712775B2 (en) | 1999-11-18 |
| HUT77258A (hu) | 1998-03-02 |
| AU4350296A (en) | 1996-07-03 |
| FI972491A7 (fi) | 1997-06-12 |
| JPH10510428A (ja) | 1998-10-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ180697A3 (en) | Transfer of genes in medullary motor neurons through the mediation of adenovirus vectors | |
| Facchiano et al. | Promotion of regeneration of corticospinal tract axons in rats with recombinant vascular endothelial growth factor alone and combined with adenovirus coding for this factor | |
| Gravel et al. | Adenoviral gene transfer of ciliary neurotrophic factor and brain-derived neurotrophic factor leads to long-term survival of axotomized motor neurons | |
| US20020006395A1 (en) | Defective adenoviruses including a therapeutic gene and an immunoprotective gene | |
| Liu et al. | Application of recombinant adenovirus for in vivo gene delivery to spinal cord | |
| US6245330B1 (en) | Recombinant adenoviruses coding for glial-derived neurotrophic factor (GDNF) | |
| Dijkhuizen et al. | Adenoviral vector‐directed expression of neurotrophin‐3 in rat dorsal root ganglion explants results in a robust neurite outgrowth response | |
| JP3835809B2 (ja) | 組み換えアデノウイルスおよび眼疾患の治療のための遺伝子療法におけるそれらの使用 | |
| JP2004501650A (ja) | 複製欠損アデノウイルスｔｎｆベクター | |
| Lee et al. | Replicating adenoviral vector–mediated transfer of a heat-inducible double suicide gene for gene therapy | |
| Smith et al. | Astrocytes infected with replication-defective adenovirus containing a secreted form of CNTF or NT3 show enhanced support of neuronal populationsin vitro | |
| US20040224409A1 (en) | Recombinant adenoviruses coding for brain-derived neurotrophic factor (BDNF) | |
| Durham et al. | Toxicity of replication-defective adenoviral recombinants in dissociated cultures of nervous tissue | |
| JP2001524934A (ja) | 遺伝子治療ウイルスベクターの投与に対して哺乳類罹患動物を寛容化する方法 | |
| EP0969875B1 (en) | Naked dna-mediated gene transfer into medullary motor neurons | |
| HUP9903779A2 (hu) | Eljárás amiotrófiás lateroszklerózis kezelésére | |
| IL112993A (en) | Recombinant viruses, their preparation and their use in gene therapy | |
| AU703793B2 (en) | Recombinant adenoviruses coding for brain-derived neurotrophic factor (BDNF) | |
| EP0879294B1 (en) | Transduced human hematopoietic stem cells | |
| MXPA97004102A (en) | Transfer of genes in the medular motoneurons by means of adenovira vectors | |
| WO1999036559A1 (en) | Viral vectors expressing self-polymerizing neuronal intermediate filaments and their use | |
| KR100720201B1 (ko) | 트랜스진의 신경-특이성 발현을 위한 음성 조절요소의 용도 | |
| AU2928202A (en) | Adenoviral-vector-mediated gene transfer into medullary motor neurons | |
| KR20000070272A (ko) | 수질 운동 뉴런 중으로의 아데노바이러스 벡터 매개-유전자전달방법 | |
| JPH09510356A (ja) | 神経膠細胞成熟因子ベータ型（ＧＭＦ−β）のための組み換えアデノウィルス |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |