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CN120858099A - Cdk抑制剂 - Google Patents

Cdk抑制剂

Info

Publication number
CN120858099A
CN120858099A CN202480019942.6A CN202480019942A CN120858099A CN 120858099 A CN120858099 A CN 120858099A CN 202480019942 A CN202480019942 A CN 202480019942A CN 120858099 A CN120858099 A CN 120858099A
Authority
CN
China
Prior art keywords
alkyl
compound
mmol
ring
pharmaceutically acceptable
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202480019942.6A
Other languages
English (en)
Inventor
毕方超
朱伟波
付家胜
覃华
鲍劲霄
石谷沁
孙大庆
张雯
徐开
孙维梅
陶维康
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Qilu Pharmaceutical Research and Development Centre Ltd
Original Assignee
Shanghai Qilu Pharmaceutical Research and Development Centre Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Qilu Pharmaceutical Research and Development Centre Ltd filed Critical Shanghai Qilu Pharmaceutical Research and Development Centre Ltd
Publication of CN120858099A publication Critical patent/CN120858099A/zh
Pending legal-status Critical Current

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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4365—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system having sulfur as a ring hetero atom, e.g. ticlopidine
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Abstract

本申请公开了一类作为选择性CDK8/CDK19抑制剂的新化合物，含有所述化合物的药物组合物、制备所述化合物的有用中间体以及利用本申请化合物治疗细胞增殖性疾病，例如癌症的方法。该化合物具有如式(I)所示的结构。

Description

CDK抑制剂
本申请要求于2023年03月22日提交中国专利局、申请号为CN202310293044.7、发明名称“CDK抑制剂”的中国专利申请，2023年05月22日提交中国专利局、申请号为CN202310580087.3、发明名称“CDK抑制剂”，2023年12月11日提交中国专利局、申请号为CN202311700730.8、发明名称“CDK抑制剂”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
技术领域
本申请属于药物化学领域，具体涉及具有CDK8/CDK19抑制活性的新型化合物，含有所述化合物的药物组合物、制备所述化合物的有用中间体以及利用本申请化合物治疗细胞增殖性疾病，例如癌症的方法。
背景技术
细胞周期是细胞生命活动的基本过程，控制着细胞的生长、增殖和分化。细胞周期蛋白-依赖性激酶(cyclin-dependent kinases，CDKs)是一类重要的细胞酶，与细胞周期蛋白(cyclins)协同，在细胞周期的调控中发挥着重要的作用。
CDK8与CDK19是结构和功能均密切相关的同源性较高的肿瘤调节转录激酶，与CDK家族其他激酶不同，如CDK1、CDK2及CDK4/6，CDK8在细胞循环调节中不起作用，因此阻断CDK8不抑制正常细胞的生长，但是由于CDK8对多功能干细胞表型的形成具有至关重要的作用，因此当敲除胚胎干细胞中的CDK8时，将导致胚胎发育停止。CDK8通过与介体复合物的结合或通过磷酸化转录因子在调节转录中发挥重要作用。无数的遗传和生化研究已将CDK8确定为许多癌症的关键致癌驱动因素。具体而言，CDK8介导的致癌Wnt-β-catenin信号激活、雌激素诱导基因的转录和超级增强子相关基因的抑制分别有助于结直肠、乳腺和血液恶性肿瘤的肿瘤发生。目前约在50％的结肠癌、黑色素瘤、乳腺癌中已经观察到CDK8过表达，并且与预后差相关。除此之外，也有研究表明，CDK8抑制剂可作为单一药物或与多种抗肿瘤疗法或激活免疫系统的药剂组合提供抗癌治疗的重要方法，例如可用于治疗血液疾病(例如AML、MM、骨髓增生异常综合征(MDS)和慢性淋巴性白血病(CLL)的治疗。
虽然目前有大量现有技术公开了可以作为CDK8或CDK8/CDK19抑制剂的化合物，但处于临床阶段的分子较少，且均处于临床早期阶段，因此，开发一类新的选择性CDK8/CDK19抑制剂具有重大的研究意义。
发明内容
本申请的目的在于提供一类具有CDK8/CDK819抑制活性的新型化合物，含有所述化合物的药物组合物，制备所述化合物的有用中间体以及所述化合物在制备治疗癌症药物中的应用。
本申请提供一种式(I)所示的化合物及其药学上可接受的盐，
其中，
环B选自
环C选自苯基、5-6元杂芳基或者8-10元稠杂环基，其中5-6元杂芳基选自
Ra各自独立地选自氨基、-CONH2；
Rb各自独立地选自氢、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基；
Rc各自独立地选自氢、-C1-4烷基、-COC1-4烷基、-C0-4烷基CONRcaRcb、-COC3-6环烷基、C3-6环烷基、-S(＝O)2C1-4烷基、-S(＝O)2NRcaRcb、8-10元稠杂环基、-C1-4烷基-C3-6环烷基、3-6元杂环烷基、-CO-3-6元杂环烷基、-C1-4烷基-3-6元杂环烷基；其中C1-4烷基、C3-6环烷基、8-10元稠杂环基、3-6元杂环烷基、-CO-3-6元杂环烷基和-C1-4烷基-3-6元杂环烷基可任选地被1-3个选自如下基团所取代：C1-4烷基、氰基、卤素、C1-4卤代烷基；Rca、Rcb各自独立地选自氢、C1-4烷基；或者Rca和Rcb与其连接的N原子共同环化为3-6元杂环烷基；
n选自0、1、2；
m选自0、1、2、3、4；
p选自0、1、2、3；
并且，当环C选自苯基时，Rc选自8-10元稠杂环基；
并且，当环C选自吡啶基时，m不为0或者Rc不为-C1-4烷基、-COC1-4烷基；
并且，当环C选自噻唑基时，m不为0或者Rc不为-COC1-4烷基；
并且，式(I)化合物不为
本申请提供一种式(I)所示的化合物及其药学上可接受的盐，
其中，
环B选自
环C选自苯基、5-6元杂芳基或者8-10元稠杂环基，其中5-6元杂芳基选自
Ra各自独立地选自氨基、-CONH2；
Rb各自独立地选自氢、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基；
Rc各自独立地选自氢、-C1-4烷基、-COC1-4烷基、-C0-4烷基CONRcaRcb、-COC3-6环烷基、C3-6环烷基、-S(＝O)2C1-4 烷基、-S(＝O)2NRcaRcb、8-10元稠杂环基、-C1-4烷基-C3-6环烷基；其中C1-4烷基、C3-6环烷基和8-10元稠杂环基可任选地被1-3个选自如下基团所取代：C1-4烷基、氰基、卤素、C1-4卤代烷基；Rca、Rcb各自独立地选自氢、C1-4烷基；
n选自0、1、2；
m选自0、1、2、3、4；
p选自0、1、2、3；
并且，当环C选自苯基时，Rc选自8-10元稠杂环基；
并且，当环C选自吡啶基时，m不为0或者Rc不为-C1-4烷基、-COC1-4烷基；
并且，当环C选自噻唑基时，m不为0或者Rc不为-COC1-4烷基；
并且，式(I)化合物不为
本申请提供一种式(I)所示的化合物及其药学上可接受的盐，
其中，
环B选自
环C选自5-6元杂芳基或者8-10元稠杂环基，其中5-6元杂芳基选自
Ra各自独立地选自氨基、-CONH2；
Rb各自独立地选自氢、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基；
Rc各自独立地选自氢、-C1-4烷基、-COC1-4烷基、-C0-4烷基CONRcaRcb、-COC3-6环烷基、C3-6环烷基、-S(＝O)2C1-4烷基、-S(＝O)2NRcaRcb、8-10元稠杂环基、-C1-4烷基-C3-6环烷基；其中C1-4烷基、C3-6环烷基和8-10元稠杂环基可任选地被1-3个选自如下基团所取代：C1-4烷基、氰基、卤素、C1-4卤代烷基；Rca、Rcb各自独立地选自氢、C1-4烷基；
n选自0、1、2；
m选自0、1、2、3、4；
p选自0、1、2、3；
并且，当环C选自吡啶基时，m不为0或者Rc不为-C1-4烷基、-COC1-4烷基；
当环C选自噻唑基时，m不为0或者Rc不为-COC1-4烷基；
且式(I)化合物不为
本申请提供一种式(I)所示的化合物及其药学上可接受的盐，
其中，
环B选自
环C选自5-6元杂芳基或者8-10元稠杂环基，其中5-6元杂芳基选自
Ra各自独立地选自氨基、-CONH2；
Rb各自独立地选自氢、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基；
Rc各自独立地选自氢、-C1-4烷基、-COC1-4烷基、-C0-4烷基CONRcaRcb、-COC3-6环烷基、C3-6环烷基、-S(＝O)2C1-4烷基、-S(＝O)2NRcaRcb；其中C1-4烷基和C3-6环烷基可任选地被1-3个选自如下基团所取代：C1-4烷基、氰基、卤素、C1-4卤代烷基；Rca、Rcb各自独立地选自氢、C1-4烷基；
n选自0、1、2；
m选自0、1、2、3、4；
p选自0、1、2、3；
并且，当环C选自吡啶基时，m不为0或者Rc不为-C1-4烷基、-COC1-4烷基；
当环C选自噻唑基时，m不为0或者Rc不为-COC1-4烷基；
且式(I)化合物不为
在本申请的一些方案中，上述化合物及其药学上可接受的盐，其选自，
其中，
环B选自
环C选自8-10元稠杂环基；
Ra各自独立地选自氨基、-CONH2；
Rb选自氢；
Rc各自独立地选自氢、-C1-4烷基、-COC1-4烷基、-C0-4烷基CONRcaRcb、-COC3-6环烷基、C3-6环烷基、-S(＝O)2C1-4烷基、-S(＝O)2NRcaRcb、8-10元稠杂环基、-C1-4烷基-C3-6环烷基；其中C1-4烷基、C3-6环烷基和8-10元稠杂环基可任选地被1-3个选自如下基团所取代：C1-4烷基、氰基、卤素、C1-4卤代烷基；Rca、Rcb各自独立地选自氢、C1-4烷基；
n选自0、1、2；
m选自0、1、2、3、4；
并且，式(I)化合物不为
在本申请的一些方案中，上述化合物及其药学上可接受的盐，其选自，
其中，
环B选自
环C选自8-10元稠杂环基；
Ra各自独立地选自氨基、-CONH2；
Rb选自氢；
Rc各自独立地选自氢、-C1-4烷基、-COC1-4烷基、-C0-4烷基CONRcaRcb、-COC3-6环烷基、C3-6环烷基、-S(＝O)2C1-4烷基、-S(＝O)2NRcaRcb、8-10元稠杂环基、-C1-4烷基-C3-6环烷基、3-6元杂环烷基、-CO-3-6元杂环烷基、-C1-4烷基-3-6元杂环烷基；其中C1-4烷基、C3-6环烷基、8-10元稠杂环基、3-6元杂环烷基、-CO-3-6元杂环烷基和-C1-4烷基-3-6元杂环烷基可任选地被1-3个选自如下基团所取代：C1-4烷基、氰基、卤素、C1-4卤代烷基；Rca、Rcb各自独立地选自氢、C1-4烷基；或者Rca和Rcb与其连接的N原子共同环化为3-6元杂环烷基；
n选自0、1、2；
m选自0、1、2、3、4；
并且，式(I)化合物不为
在本申请的一些方案中，结构单元选自
在本申请的一些方案中，Rb选自氢。
在本申请的一些方案中，结构单元选自
在本申请的一些方案中，Rc各自独立地选自-CH3、-SO2CH3、-SO2N(CH3)2、
在本申请的一些方案中，Rc各自独立地选自-CH3、-SO2CH3、-SO2N(CH3)2、
在本申请的一些方案中，Rc各自独立地选自H、
在本申请的一些方案中，Rc各自独立地选自-CH2CH3、
在本申请的一些方案中，结构单元选自
在本申请的一些方案中，环C选自8-10元稠杂环基；优选地，环C选自苯并5-6元杂环基、苯并5-6元杂芳基；5-6元杂芳基并5-6元杂环基；5-6元杂芳基并5-6元杂芳基；更优选地，环C选自苯并5-6元含氮杂环基。
在本申请的一些方案中，环C选自
在本申请的一些方案中，环C选自
在本申请的一些方案中，环C选自
在本申请的一些方案中，环C选自
在本申请的一些方案中，环C选自
在本申请的一些方案中，结构单元选自 其中Rc，m如上述所定义。
在本申请的一些方案中，结构单元选自 其中，Rc，m如上述所定义。
在本申请的一些方案中，结构单元选自 其中，Rc，m如上述所定义。
在本申请的一些方案中，结构单元选自 其中Rc，m如上述所定义。
在本申请的一些方案中，结构单元选自其中Rc，m如上述所定义。
在本申请的一些方案中，结构单元选自其中Rc如上述所定义。
在本申请的一些方案中，结构单元选自
在本申请的一些方案中，结构单元选自
在本申请的一些方案中，结构单元选自
在本申请的一些方案中，结构单元选自
在本申请的一些方案中，结构单元选自
在本申请的一些方案中，结构单元选自
在本申请的一些方案中，结构单元选自
在本申请的一些方案中，结构单元选自
在本申请的一些方案中，上述式(I)化合物及其药学上可接受的盐选自式(II)、(III)或(IV)所示的化合物及其药学上可接受的盐，
其中，环C，Rc，m如上述所定义。
在本申请的一些方案中，上述式(I)化合物及其药学上可接受的盐选自式(II)、(III)所示的化合物及其药学上可接受的盐，
其中，环C，Rc，m如上述所定义。
在本申请的一些方案中，上述式(I)化合物及其药学上可接受的盐选自式(IV)所示的化合物及其药学上可接受的盐，
其中，Rc选自选自氢、-C1-4烷基、-COC1-4烷基、-C0-4烷基CONRcaRcb、-COC3-6环烷基、C3-6环烷基、-S(＝O)2C1-4烷基、-S(＝O)2NRcaRcb、8-10元稠杂环基、-C1-4烷基-C3-6环烷基、3-6元杂环烷基、-CO-3-6元杂环烷基、-C1-4烷基-3-6元杂环烷基；其中C1-4烷基、C3-6环烷基、8-10元稠杂环基、3-6元杂环烷基、-CO-3-6元杂环烷基和-C1-4烷基-3-6元杂环烷基可任选地被1-3个选自如下基团所取代：C1-4烷基、氰基、卤素、C1-4卤代烷基；Rca、Rcb各自独立地选自氢、 C1-4烷基；或者Rca和Rcb与其连接的N原子共同环化为3-6元杂环烷基。
本申请还提供下述化合物及其药学上可接受的盐，其中，所述化合物可选自以下任一结构，
本申请还提供一种药物组合物，其含有(优选为治疗有效量的)上述化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
本申请还提供上述化合物或其药学上可接受的盐或上述的药物组合物在制备治疗CDK8/CDK19介导的癌症的药物中的用途。
本申请还提供上述的化合物或其药学上可接受的盐或上述的药物组合物，用于治疗CDK8/CDK19介导的癌症。
本申请还提供了治疗CDK8/CDK19介导的癌症的方法，其包括向患者施用治疗有效量的上述化合物或其药学上可接受的盐或上述的药物组合物。
在本申请的一些方案中，上述的用途及方法，其中癌症选自血液肿瘤和实体瘤；优选地，血液肿瘤包括急性髓系白血病、骨髓增生异常综合征及骨髓增殖性疾病(MPDs)；实体瘤包括如乳腺癌、胃癌、结直肠癌及胰腺癌等。
技术效果
本申请的化合物具有较好的CDK8/CDK19激酶抑制活性；本申请部分化合物化合物对CDK2/7/9激酶抑制活性 较弱，可选择性抑制CDK8/CDK19激酶。
本申请化合物有着较好的肿瘤细胞增殖抑制活性；本申请化合物对CYP450酶的直接抑制的风险较低；本申请化合物具有良好的药代动力学性质。
说明和定义
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。
术语“药学上可接受的”指在合理的医学判断范围内适合与人类和动物的组织接触使用而无过度的毒性、刺激、过敏反应或其它的问题或并发症，与合理的收益/风险比相当的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
术语“药学上可接受的盐”是指本申请化合物与相对无毒的酸或碱制备得到的衍生物。这些盐可以在化合物合成、分离、纯化期间就被制备，或者单独使用经过纯化的化合物的游离形式与适合的酸或碱反应。当化合物中含有相对酸性的官能团时，与碱金属、碱土金属氢氧化物或有机胺反应得到碱加成盐，包括基于碱金属与碱土金属的阳离子以及无毒的铵、季铵和胺阳离子，还涵盖氨基酸的盐等。当化合物中含有相对碱性的官能团时，与有机酸或无机酸反应得到酸加成盐。
术语“药学上可接受的载体”是指本领域通常可接受的用于将生物活性药剂递送给动物、特别是哺乳动物的介质，根据给药方式和剂型的性质包括例如佐剂、赋形剂或赋形物，例如稀释剂、防腐剂、填充剂、流动调节剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、助悬剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、抗菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂。药学上可接受的载体在本领域普通技术人员的眼界范围内根据大量因素配制。其包括但不限于：配制的活性药剂的类型和性质，要将含有该药剂的组合物给药的对象，组合物的预期给药途径，和目标治疗适应症。药学上可接受的载体包括含水介质和非水介质这两者以及多种固体和半固体剂型。除了活性药剂以外，这样的载体包括许多不同的成分和添加剂，因多种原因(例如稳定活性药剂、粘合剂等)在处方中包括的这样的另外的成分对于本领域普通技术人员是众所周知的。
术语“有效预防或治疗量”是指本申请化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体以适用于任何医学治疗和/或预防的合理效果/风险比治疗障碍的足够量的化合物。但应认识到，本申请式I所示化合物或其药学上可接受的盐和组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。
术语“任选地”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的，例如，术语“可任选地被一个或多个Rd取代”是指可以被一个或多个Rd取代，也可以不被Rd取代。
当任何变量(例如Rd)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。例如，表示环戊基被3个Rd所取代，且每个Rd都有独立的选项。
当一个取代基的键可以交叉连接到一个环上的两个原子时，这种取代基可以与这个环上的任意原子相键合。例如，结构单元表示取代基R1可以在苯环上的任意一个位置发生取代。
当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到化学结构通式中包括但未具体提及的化合物时，这种取代基可以通过其任何原子相键合。例如，吡唑作为取代基，是指吡唑环上任意一个碳原子或氮原子连接到被取代的基团上；当结构中出现时，表示该原子为键合原子，例如表示吗啉环上的N原子为键合原子。
除非另有规定，“环”是指饱和的、部分饱和的或不饱和的单环以及多环，“多环”包括螺环、稠环或桥环。代表性的“环”包括被取代或未被取代的环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基、芳基或杂芳基。术语“杂”表示取代或未被取代的杂原子以及杂原子的氧化形式，也称为杂原子团，所述杂原子一般选自N、O、S，氧化形式一般包括NO、SO、S(O)2，氮原子可以是取代的，即NR(R为H或者文中定义的其他取代基)；环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如，“3-6元杂环烷基”是指3-6个原子环绕排列而成的环，每个环任选地包含1～3个杂原子，即N、O、S、NO、SO、S(O)2或NR，每个环任选的被R基团所取代，R为文中所定义的基团。
除非另有规定，“环烷基”是指饱和的单环或多环烃基。环烷基优选C3-8单环烷基，更优选C3-6单环烷基，这些单环烷基的实例包括但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基。
除非另有规定，“杂环烷基”是指环中包含一定数目杂原子或杂原子团的单杂环烷基以及多杂环烷基，所述杂原子一般选自N、O、S、NO、SO、S(O)2以及NR。杂环烷基优选3-8元单杂环烷基，更优选3-6元单杂环烷基，更优选5-6元单杂环烷基，这些单杂环烷基的实例包括，但不限于环氧乙烷基、四氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、1,3-二氧戊环、1,4-二氧六环等。
除非另有规定，本申请所述的“稠杂环基”或“并杂环基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个相邻的原子所形成的、至少一个环原子为杂原子或杂原子团的环状基团，其环碳原子任选地被氧代，即C被氧代形成C(O)，其中每个环中可包含一定数目的不饱和键，例如双键。本申请所述的“8-10元稠杂环基”包括饱和的8-10元稠杂环基，部分饱和的8-10元稠杂环基以及芳香性的8-10元稠杂环基，稠合方式包含6元环并6元环，5元环并6元环，5元环并5元环，优选地，本申请所述的“8-10元稠杂环基”是指苯并5-6元杂环基、苯并5-6元杂芳基、5-6元杂芳基并5-6元杂环基、5-6元杂芳基并5-6元杂芳基或5-6元杂环烷基并5-6元杂环烷基，其中，“杂环基”是指环中包含一定数目杂原子和/或杂原子团的非芳香性的单环或多环，环可以是饱和的，或者是部分饱和的。苯并5-6元杂环基的实例包括但不限于、苯并5-6元杂芳基实例包括但不限于5-6元杂芳基并5-6元杂芳基的实例包括但不限于5-6元杂环烷基并5-6元杂环烷基的实例包括但不限于
除非另有规定，术语“芳基”是指不饱和的、通常为芳族的烃基，其可为单环或稠合在一起的多个环。优选C5-10芳基，更优选C5-8芳基，最优选单环的C5-6芳基；芳基的实例包括但不限于苯基、萘基。
除非另有规定，术语“杂芳基”意指稳定的单环或者多环的芳族烃，其包含至少一个杂原子或杂原子团(N、O、S、NO、SO、S(O)2或NR)。优选5元或6元单环的杂芳基。杂芳基的实例包括但不限于吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡嗪基、恶唑基、异恶唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基。
除非另有规定，术语“烷基”用于表示直链或支链的饱和烃基。优选C1-6的烷基，更优选C1-4的烷基，烷基的实例包括，但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基，、戊基、异戊基，新戊基、正己基等。
除非另有规定，术语“烷氧基”是指通过氧桥连接的烷基，即是烷基将羟基中的氢原子取代所得到的基团。优选C1-6烷氧基，更优选C1-4烷氧基。烷氧基的实施例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、新戊氧基、正己基氧基。
除非另有规定，术语“卤素”表示氟、氯、溴或碘原子。
除非另有规定，术语“卤代烷基”是指一个或多个氢原子被卤原子取代的烷基。优选C1-6卤代烷基，更优选C1-4卤代烷基。卤代烷基的实例包括但不仅限于一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氯甲基、三溴甲基、2,2,2-三氟乙基，2,2,2三氯乙基等。
特别说明，本文中所有的取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
在本申请实施例中，标题化合物的命名是借助Chemdraw通过化合物结构转化过来的。若化合物名称与化合物结构存在不一致的情况，可通过综合相关信息和反应路线辅助确定；无法通过其他来确认的，以给出的化合物结构式为准。
本申请中部分化合物的制备方法引用了前述类似化合物的制备方法。本领域人员应当知晓，在使用或参照使用其引用的制备方法时，反应物的投料比、反应溶剂、反应温度等可根据反应物的不同，进行适当的调整。
本申请的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选地实施方式包括但不限于本申请的实施例。
本申请实施例中使用的缩写及其对应的化学名称如下：
具体实施方式
本申请的化合物结构是通过核磁共振(NMR)质谱来确定的。NMR化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker Ascend 400核磁仪器，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代甲醇(CD3OD) 和氘代氯仿(CDCl3)，重水(D2O)内标为四甲基硅烷(TMS)。
超高效液质联用色谱UPLC-MS的测定用Waters UPLC H-class SQD2质谱仪。
HPLC的测定使用Waters e2695-2998。
制备HPLC使用Waters 2555-2489(10μm，ODS250cm×5cm)。
手性HPLC测定使用Agilent1220，柱子Daicel chiralpak AD-H(5μm,4.6*250mm)和Agilent1260，柱子Daicel-OJ-RH(5μm,4.6*150mm)，Daicel-OD-RH(5μm,4.6*150mm)，Daicel-IA(5μm,4.6*150mm)。
薄层层析硅胶板使用烟台江友硅胶开发有限公司HSGF254硅胶板，TLC采用的规格是0.20mm±0.03mm，制备型20×20cm，柱层析使用青岛海浪硅胶干燥剂有限公司200～300目硅胶为载体。
本申请实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。
在无特殊说明的情况下，本申请的所有反应均在连续的磁力搅拌下，在干燥氮气或氩气气氛下进行，溶剂为干燥溶剂，反应温度单位为摄氏度。
一、制备实施例
实施例1：
2-(4-(3-氨基-2-氨基甲酰基噻吩并[2,3-b]吡啶-4-基)-1,4-二氮杂-1-基)-N,N-二甲基恶唑-4-甲酰胺(化合物1)
反应路线:
操作步骤：
步骤A：将2-氯噁唑-4-羧酸乙酯(2克，11.4毫摩尔)，Boc-高哌嗪(2.75克，13.7毫摩尔)和二异丙基乙基胺(3.68克，28.5毫摩尔)加入N,N-二甲基甲酰胺(40毫升)中，反应液在120摄氏度下，搅拌2小时。
TLC监测显示原料消失后，冷却。加入水(200毫升)和乙酸乙酯(200毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(100毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物用硅胶柱层析纯化，得到2-(4-(叔丁氧羰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)恶唑-4-羧酸乙酯(3.3克)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.76(s,1H),4.35(q,J＝7.1Hz,2H),3.77-3.52(m,6H),3.47-3.41(m,1H),3.37-3.31(m,1H),2.00-1.92(m,2H),1.44(s,9H),1.36(t,3H).
步骤B：将2-(4-(叔丁氧羰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)恶唑-4-羧酸乙酯(3.3克，9.7毫摩尔)溶于四氢呋喃(30毫升)中，加入水(20毫升)和一水合氢氧化锂(1.35克，32.3毫摩尔)，加完室温搅拌3小时。
TLC监测显示原料消失后，反应液用1M盐酸水溶液酸化，乙酸乙酯(50毫升)萃取。有机相干燥，减压浓缩干得2-(4-(叔丁氧羰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)恶唑-4-羧酸(3克)。
MS(ESI)M/Z:311.6[M+H]+.
步骤C：将2-(4-(叔丁氧羰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)恶唑-4-羧酸(2.8克，9毫摩尔)，二甲胺盐酸盐(1.47克，18毫摩尔)和HATU(4.45克，11.7毫摩尔)加入N,N-二甲基甲酰胺(70毫升)中，冰水浴下滴加二异丙基乙基胺(4.65克，36毫摩尔)，加完室温搅拌2小时。
TLC监测显示原料消失后，加入水(200毫升)和乙酸乙酯(200毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(100毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物用硅胶柱层析纯化，得到4-(4-(二甲基氨基甲酰基)恶唑-2-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(2.8克)。
MS(ESI)M/Z:338.7[M+H]+.
步骤D：将4-(4-(二甲基氨基甲酰基)恶唑-2-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(0.5克，1.47毫摩尔)溶于二氯甲烷(5毫升)中，加入三氟乙酸(1毫升)，加完室温搅拌2小时。
TLC监测显示原料消失后，反应液减压浓缩干。所得残余物2-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-N，N-二甲基恶唑-4-甲酰胺三氟乙酸盐直接用于下一步。
MS(ESI)M/Z:238.5[M+H]+.
步骤E：将上步2-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-N，N-二甲基恶唑-4-甲酰胺三氟乙酸盐粗品(1.47毫摩尔)，2,4-氯烟腈(256毫克，1.47毫摩尔)和二异丙基乙基胺(950毫克，7.35毫摩尔)溶于乙腈(15毫升)中，混合液在80摄氏度下搅拌过夜。
TLC监测显示原料消失后，冷却。加入水(30毫升)和乙酸乙酯(30毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(10毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物用硅胶柱层析纯化，得2-(4-(2-氯-3-氰基吡啶-4-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-N，N-二甲基恶唑-4-甲酰胺(300毫克)。
MS(ESI)M/Z:374.8[M+H]+.
步骤F：将2-(4-(2-氯-3-氰基吡啶-4-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-N，N-二甲基恶唑-4-甲酰胺(300毫克，0.8毫摩尔)，巯基乙酸甲酯(166毫克，1.56毫摩尔)和甲醇钠(85毫克，1.56毫摩尔)加入甲醇(10毫升)中，混合液加热回流过夜。
TLC监测显示原料消失后，冷却。反应液直接浓缩干。所得残余物用硅胶柱层析纯化，得3-氨基-4-(4-(4-(二甲基氨基甲酰基)恶唑-2-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯(200毫克)。
MS(ESI)M/Z:444.5[M+H]+.
步骤G：将3-氨基-4-(4-(4-(二甲基氨基甲酰基)恶唑-2-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯(200毫克，0.45毫摩尔)溶于四氢呋喃(10毫升)中，加入水(50毫升)和一水合氢氧化锂(38毫克，0.9毫摩尔)，加完升温至60摄氏度，搅拌过夜。
TLC监测显示原料消失后，冷却，反应液减压浓缩干。所得3-氨基-4-(4-(4-(二甲基氨基甲酰基)恶唑-2-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-羧酸粗品直接用于下一步。
MS(ESI)M/Z:430.7[M+H]+.
步骤H：将上步3-氨基-4-(4-(4-(二甲基氨基甲酰基)恶唑-2-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-羧酸粗品(0.45毫摩尔)，氨水(800毫克，5.8毫摩尔)和二异丙基乙基胺(150毫克，1.16毫摩尔)加入N,N-二甲基甲酰胺(4毫升)中，再加入HATU(331毫克，0.87毫摩尔)，加完室温搅拌3小时。
TLC监测显示原料消失后，加入水(20毫升)和乙酸乙酯(20毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(10毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物制备纯化得到2-(4-(3-氨基-2-氨基甲酰基噻吩并[2,3-b]吡啶-4-基)-1,4-二氮杂-1-基)-N,N-二甲基恶唑-4-甲酰胺(7.67毫克)。
MS(ESI)M/Z:430.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝5.3Hz,1H),7.94(s,1H),7.16-7.01(m,5H),3.91-3.84(m,2H),3.69(t,J＝6.1Hz,2H),3.35(s,6H),3.29-3.18(m,2H),2.91(m,2H),2.19-2.10(m,2H).
实施例2：
3-氨基-4-(4-(6-(二甲基氨基甲酰基)吡啶-3-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(化合物2)
反应路线:
操作步骤：
步骤A：将5-溴-2-吡啶羧酸(2克，9.9毫摩尔)加入二氯甲烷(12毫升)中，加入草酰氯(4毫升)和N,N-二甲基甲酰胺(1滴)，反应液室温搅拌2小时。反应液减压浓缩干，粗品溶液二氯甲烷(12毫升)，依次加入二甲胺盐酸盐(1.61克，20毫摩尔)和三乙胺(8毫升)，反应液室温搅拌过夜。
TLC监测显示原料消失后。加入水(50毫升)和乙酸乙酯(50毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(50毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物用硅胶柱层析纯化，得到5-溴-N，N-二甲基吡啶甲酰胺(1.9克)。
MS(ESI)M/Z:228.9[M+H]+.
步骤B：将5-溴-N，N-二甲基吡啶甲酰胺(800毫克，3.5毫摩尔)，Boc-高哌嗪(839毫克，4.2毫摩尔)，叔丁醇钠(471毫克，4.9毫摩尔)，BINAP(327毫克，0.525毫摩尔)和三(二亚苄基丙酮)二钯(160毫克，0.175毫摩尔)加入甲苯(16毫升)中，氮气置换三次，120摄氏度下，反应3小时。
TLC监测显示原料消失后，冷却。加入水(50毫升)和乙酸乙酯(50毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(10毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物用硅胶柱层析纯化，得到4-(6-(二甲基氨基甲酰基)吡啶-3-基)-1,4-二氮杂-1-羧酸叔丁酯(520毫克)。
MS(ESI)M/Z:348.7[M+H]+.
步骤C：将4-(6-(二甲基氨基甲酰基)吡啶-3-基)-1,4-二氮杂-1-羧酸叔丁酯(520毫克，1.49毫摩尔)溶于二氯甲烷(6毫升)中，加入三氟乙酸(2毫升)，室温搅拌2小时。
TLC监测显示原料消失后，反应液减压浓缩干得到5-(1,4-二氮杂-1-基)-N，N-二甲基吡啶甲酰胺三氟乙酸盐，粗品直接用于下一步。
MS(ESI)M/Z:248.9[M+H]+.
步骤D：将上步5-(1,4-二氮杂-1-基)-N，N-二甲基吡啶甲酰胺三氟乙酸盐粗品(1.49毫摩尔)，2,4-氯烟腈(260毫克，1.49毫摩尔)和二异丙基乙基胺(1.16克，8.98毫摩尔)溶于乙腈(15毫升)中，混合液在80摄氏度下搅拌过夜。
TLC监测显示原料消失后，冷却。加入水(30毫升)和乙酸乙酯(30毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(10毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物用硅胶柱层析纯化，得5-(4-(2-氯-3-氰基吡啶-4-基)-1,4-二氮杂-1-基)-N，N-二甲基吡啶甲酰胺(500毫克)。
MS(ESI)M/Z:385.0[M+H]+.
步骤E：将5-(4-(2-氯-3-氰基吡啶-4-基)-1,4-二氮杂-1-基)-N，N-二甲基吡啶甲酰胺(500毫克，1.3毫摩尔)，巯基乙酸甲酯(276毫克，2.6毫摩尔)和甲醇钠(141毫克，2.6毫摩尔)加入甲醇(10毫升)中，混合液加热回流 过夜。
TLC监测显示原料消失后，冷却。反应液直接浓缩干。所得残余物用硅胶柱层析纯化，得3-氨基-4-(4-(6-(二甲基氨基甲酰基)吡啶-3-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯(410毫克)。
MS(ESI)M/Z:455.2[M+H]+.
步骤F：将3-氨基-4-(4-(6-(二甲基氨基甲酰基)吡啶-3-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯(410毫克，0.9毫摩尔)溶于四氢呋喃(10毫升)中，加入水(5毫升)和一水合氢氧化锂(80毫克，1.9毫摩尔)，加完升温至60摄氏度，搅拌过夜。
TLC监测显示原料消失后，冷却，反应液减压浓缩干。所得3-氨基-4-(4-(6-(二甲基氨基甲酰基)吡啶-3-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-羧酸粗品直接用于下一步。
MS(ESI)M/Z:441.3[M+H]+.
步骤G：将上步3-氨基-4-(4-(6-(二甲基氨基甲酰基)吡啶-3-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-羧酸粗品(0.9毫摩尔)，氨水(1.25克，9毫摩尔)和二异丙基乙基胺(232毫克，1.8毫摩尔)加入N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)中，再加入HATU(515毫克，1.35毫摩尔)，加完室温搅拌3小时。
TLC监测显示原料消失后，加入水(20毫升)和乙酸乙酯(20毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(10毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物制备纯化得到3-氨基-4-(4-(6-(二甲基氨基甲酰基)吡啶-3-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(59.79毫克)。
MS(ESI)M/Z:440.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝5.3Hz,1H),8.14(d,J＝3.0Hz,1H),7.49(d,J＝8.8Hz,1H),7.22(dd,J＝8.9,3.0Hz,1H),7.16-7.06(m,3H),7.04-6.94(m,2H),3.87(t,J＝4.7Hz,2H),3.63(t,J＝6.2Hz,2H),3.34-3.17(m,4H),3.12(s,3H),2.97(s,3H),2.22-2.12(m,2H).
实施例3：
4-(4-(2-乙酰基二氢异吲哚-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)-3-氨基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(化合物3)
反应路线:
操作步骤：
步骤A：将5-溴二氢异吲哚盐酸盐(500毫克，2.13毫摩尔)溶于二氯甲烷(10毫升)，加入三乙胺(647.2毫克，6.40毫摩尔)，滴加入乙酰氯(251毫克，3.20毫摩尔)，室温反应过夜。
TLC监测显示原料消失后，加入稀盐酸(1M，10毫升)和二氯甲烷(15毫升)，搅拌，分液。有机相先用饱和 食盐水(10毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩，粗品硅胶柱层析，纯化得到1-(5-溴代二氢异吲哚-2-基)乙烷-1-酮(370毫克)。
MS(ESI)M/Z:240.3[M+H]+.
步骤B：将1-(5-溴代二氢异吲哚-2-基)乙烷-1-酮(370毫克，1.54毫摩尔)，1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(370.4毫克，1.85毫摩尔)，叔丁醇钠(207.3毫克，2.16毫摩尔)，1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(143.9毫克，0.23毫摩尔)，三(二亚苄基丙酮)二钯(70.6毫克，0.077毫摩尔)溶于甲苯(5毫升)中，氮气置换3次，120摄氏度回流反应3小时。
TLC监测显示原料消失后，冷却。加水(20毫升)，乙酸乙酯(20毫升×2)萃取。合并有机相，有机相先用饱和食盐水(20毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩，粗品硅胶柱层析，纯化得到4-(2-乙酰基二氢异吲哚-5-基)-1,4-二氮杂-1-羧酸叔丁酯(400毫克)。
MS(ESI)M/Z:360.6[M+H]+.
步骤C：4-(2-乙酰基二氢异吲哚-5-基)-1,4-二氮杂-1-羧酸叔丁酯(400毫克，1.11毫摩尔)溶于二氯甲烷(2毫升)，加入三氟乙酸(1.5毫升)，室温搅拌反应2小时。
TLC监测显示原料消失后，减压浓缩，油泵拉干，得到粗品1-(5-(1,4-二氮杂-1-基)二氢异吲哚-2-基)乙烷-1-酮三氟乙酸盐，直接用于投下一步。
步骤D：将粗品1-(5-(1,4-二氮杂-1-基)二氢异吲哚-2-基)乙烷-1-酮三氟乙酸盐，2,4-二氯烟酸腈(192.5毫克，1.11毫摩尔)，N,N-二异丙基乙胺(717.3毫克，5.55毫摩尔)加入乙腈(5毫升)，80摄氏度回流反应过夜。
LCMS监测显示原料消失后，冷却。加入水(10毫升)，乙酸乙酯(20毫升×2)萃取。合并有机相，有机相先用饱和食盐水(20毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得到4-(4-(2-乙酰基二氢异吲哚-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)-2-氯烟腈(330毫克)。
MS(ESI)M/Z:396.5[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.02-7.96(m,1H),7.13-7.07(m,1H),6.96(d,J＝6.5Hz,1H),6.79-6.70(m,2H),4.69(d,J＝24Hz,2H),4.48(d,J＝20.4Hz,2H),3.97-3.89(m,2H),3.78-3.68(m,4H),3.53(t,J＝5.9Hz,2H),2.06-1.88(m,5H).
步骤E：将4-(4-(2-乙酰基二氢异吲哚-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)-2-氯烟腈(120毫克，0.30毫摩尔)，巯基乙酰胺(82.9毫克，0.91毫摩尔)，甲醇钠(24.6毫克，0.46毫摩尔)加入甲醇(2.5毫升)，65摄氏度反应4小时。再加入甲醇钠(24.6毫克，0.46毫摩尔)，90摄氏度下于微波管中反应过夜。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩。所得残余物制备纯化得到4-(4-(2-乙酰基二氢异吲哚-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)-3-氨基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(38.55毫克)。
MS(ESI)M/Z:451.6[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(dd,J＝5.4,0.8Hz,1H),7.18-7.06(m,4H),7.04-6.97(m,2H),6.79-6.69(m,2H),4.72(d,J＝18.4Hz,2H),4.51(d,J＝15.1Hz,2H),3.81-3.72(m,2H),3.60-3.52(m,2H),3.31-3.26(m,2H),3.23-3.14(m,2H),2.20-2.10(m,2H),2.04(s,3H).
实施例4：
3-氨基-4-(4-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(化合物4)
反应路线:
操作步骤：
步骤A：将6-溴-1-甲基-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮(900毫克，3.96毫摩尔)，1,4-二氮杂烷-1-羧酸叔丁酯(1.19克，5.95毫摩尔)，甲烷磺酸(2-二环己基膦基-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(337毫克，0.4毫摩尔)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(185毫克，0.4毫摩尔)和叔丁醇钾(977毫克，8.72毫摩尔)加入二氧六环(30毫升)中，氮气置换三次，100摄氏度反应过夜。
TLC监测显示原料消失后，加入水(60毫升)，混合液用乙酸乙酯(30毫升×2次)萃取，合并有机相，有机相先用饱和食盐水(30毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化，得到4-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1,4-二氮杂烷-1-羧酸叔丁基(270毫克)。
MS(ESI)M/Z:347.5[M+H]+.
步骤B：将4-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1,4-二氮杂烷-1-羧酸叔丁基(270毫克，0.78毫摩尔)溶于二氯甲烷(3毫升)中，加入三氟乙酸(1毫升)，在室温搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，减压浓缩，加入乙腈(10毫升×2次)再减压浓缩，粗品得到5-(1,4-二氮杂烷-1-基)-1-(4-甲氧基苄基)-3-甲基-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮三氟乙酸盐(192毫克)。
MS(ESI)M/Z:247.4[M+H]+.
步骤C：将上步粗品-(1,4-二氮杂潘-1-基)-1-(4-甲氧基苄基)-3-甲基-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮三氟乙酸盐(192毫克，0.78毫摩尔)，2,4-氯烟腈(135毫克，0.78毫摩尔)和二异丙基乙基胺(500毫克，3.9毫摩尔)溶于乙腈(4毫升)中，混合液在80摄氏度下搅拌过夜。
TLC监测显示原料消失后，冷却。加入水(20毫升)和乙酸乙酯(20毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(10毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物用硅胶柱层析纯化，得2-氯-4-(4-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)烟腈(150毫克)。
MS(ESI)M/Z:383.3[M+H]+.
步骤D：将2-氯-4-(4-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)烟腈(150毫克，0.39毫摩尔)，巯基乙酰胺(107毫克，1.18毫摩尔)和甲醇钠(32毫克，0.59毫摩尔)加入甲醇(3毫升)中，混合液在65摄氏度下搅拌4小时。再向反应液中加入甲醇钠(32毫克，0.59毫摩尔)，反应液在90摄氏度下搅拌过夜。
TLC监测显示原料消失后，冷却。反应液直接浓缩干。所得残余物制备纯化得3-氨基-4-(4-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(18.15毫克)。
MS(ESI)M/Z:438.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.37(s,1H),8.40(d,J＝5.3Hz,1H),7.11-7.06(m,3H),7.02(s,2H),6.79(d,J＝8.5Hz,1H),6.54(d,J＝2.3Hz,1H),6.42(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),3.75(t,J＝4.8Hz,2H),3.54(t,J＝6.2Hz,2H),3.37-3.31(m,2H),3.23(s,3H),3.22-3.18(m,2H),2.18-2.12(m,2H).
实施例5：
3-氨基-4-(4-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(化合物5)
反应路线:
操作步骤：
步骤A：将6-溴-1-甲基-1H-吲唑(500毫克，2.38毫摩尔)，Boc-高哌嗪(572毫克，2.86毫摩尔)，叔丁醇钠(320毫克，3.33毫摩尔)，BINAP(222毫克，0.15毫摩尔)和三(二亚苄基丙酮)二钯(109毫克，0.12毫摩尔)加入甲苯(10毫升)中，氮气置换三次，120摄氏度下，反应3小时。
TLC监测显示原料消失后，冷却。加入水(20毫升)和乙酸乙酯(20毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(10毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物用硅胶柱层析纯化，得到4-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-1,4-二氮杂-1-羧酸叔丁酯(600毫克)。
MS(ESI)M/Z:330.9[M+H]+.
步骤B：将4-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-1,4-二氮杂-1-羧酸叔丁酯(600毫克，1.82毫摩尔)溶于二氯甲烷(6毫升)中，加入三氟乙酸(2毫升)，室温搅拌2小时。
TLC监测显示原料消失后，反应液减压浓缩干得到6-(1,4-二氮杂-1-基)-1-甲基-1H-吲唑三氟乙酸盐，粗品直接用于下一步。
MS(ESI)M/Z:230.8[M+H]+.
步骤C：将上步6-(1,4-二氮杂-1-基)-1-甲基-1H-吲唑三氟乙酸盐粗品(1.82毫摩尔)，2,4-氯烟腈(316毫克，1.82毫摩尔)和二异丙基乙基胺(1.18克，9.13毫摩尔)溶于乙腈(10毫升)中，混合液在80摄氏度下搅拌过夜。
TLC监测显示原料消失后，冷却。加入水(20毫升)和乙酸乙酯(20毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(10毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物用硅胶柱层析纯化，得2-氯-4-(4-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-1,4-二氮杂-1-基)烟腈(200毫克)。
MS(ESI)M/Z:367.2[M+H]+.
步骤D：将2-氯-4-(4-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-1,4-二氮杂-1-基)烟腈(200毫克，0.55毫摩尔)，巯基乙酰胺(150毫克，1.64毫摩尔)和甲醇钠(45毫克，0.82毫摩尔)加入甲醇(3毫升)中，混合液在65摄氏度下搅拌4小时。再向反应液中加入甲醇钠(45毫克，0.82毫摩尔)，反应液在90摄氏度下搅拌过夜。
TLC监测显示原料消失后，冷却。反应液直接浓缩干。所得残余物制备纯化得3-氨基-4-(4-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(94.34毫克)。
MS(ESI)M/Z:422.5[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝5.3Hz,1H),7.77(s,1H),7.52(d,J＝8.9Hz,1H),7.17-6.96(m,5H),6.80(dd,J＝9.0,2.1Hz,1H),6.68(s,1H),3.91(s,3H),3.89-3.81(m,2H),3.65(t,J＝6.2Hz,2H),3.26-3.14(m,2H),2.27-2.14(m,2H),1.26-1.11(m,2H).
实施例6：
3-氨基-4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(化合物6)
反应路线:
操作步骤：
步骤A：在0℃下将氢化钠(60％，245毫克，6.12毫摩尔)加入N,N—二甲基甲酰胺(4毫升)中，加入4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(600毫克，3.06毫摩尔)，搅拌30分钟后加入碘甲烷(521毫克，3.67毫摩尔)，升至室温反应30分钟。
TLC监测显示原料消失后，冷却。加入水(20毫升)和乙酸乙酯(20毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(10毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物用硅胶柱层析纯化，得到4-溴-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(570毫克)。
步骤B：将4-溴-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(570毫克，2.71毫摩尔)溶于甲苯(10毫升)中，加入1,4-二氮杂-1-羧酸叔丁酯(652毫克，3.26毫摩尔)，叔丁醇钠(365毫克，380毫摩尔)，1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(254毫克，0.41毫摩尔)和三(二亚苄基丙酮)二钯(124毫克，0.14毫摩尔)。N2置换后120摄氏度反应3小时。
TLC监测显示原料消失后，冷却。加入水(20毫升)和乙酸乙酯(20毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(10毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物用硅胶柱层析纯化，得到4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1,4-二氮杂-1-羧酸叔丁酯(670毫克)
MS(ESI)M/Z:331.4[M+H]+.
步骤C：将4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1,4-二氮杂-1-羧酸叔丁酯(670毫克，2.03毫摩尔)加入二氯甲烷(7毫升)中，加入三氟乙酸(2.5毫升)混合液在常温下搅拌2小时。
TLC监测显示原料消失后，减压浓缩干，得4-(1,4-二氮杂-1-基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶的粗品(467毫克)。
MS(ESI)M/Z:231.0[M+H]+.
步骤D：将4-(1,4-二氮杂-1-基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(467毫克，2.03毫摩尔)，2,4-氯烟腈(351毫克，2.03毫摩尔)和N,N-二异丙基乙胺(1.31克，10.15毫摩尔)加入乙腈(20毫升)中，混合液在80摄氏度下搅拌过夜。
TLC监测显示原料消失后，冷却。加入水(40毫升)和乙酸乙酯(30毫升)和少量甲醇，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(30毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物用硅胶柱层析纯化，得到2-氯-4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1,4-二氮杂-1-基)烟腈(230毫克)。
MS(ESI)M/Z:367.5[M+H]+.
步骤E：将2-氯-4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1,4-二氮杂-1-基)烟腈(230毫克，0.63毫摩尔)，2-巯基乙酸甲酯(133毫克，1.26毫摩尔)和甲醇钠(67毫克，1.26毫摩尔)加入甲醇(5毫升)中，混合液在100摄氏度下搅拌过夜。
TLC监测显示原料消失后，冷却。反应液用硅胶柱层析纯化，得到甲基3-氨基-4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-羧酸盐(150毫克)
MS(ESI)M/Z:437.5[M+H]+.
步骤F：将甲基3-氨基-4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-羧酸盐 (150毫克，0.34毫摩尔)加入四氢呋喃(3毫升)和水(1.5毫升)中，再加入一水合氢氧化锂(29毫克，0.69毫摩尔)。混合液在60摄氏度下搅拌过夜。
TLC监测显示原料消失后，冷却。反应液浓缩，纯化得到3-氨基-4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-羧酸的粗品投下一步。
MS(ESI)M/Z:423.5[M+H]+.
步骤G：将3-氨基-4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-羧酸粗品(0.34毫摩尔)加入N,N-二甲基甲酰胺(3毫升)中，再加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(195毫克，0.52毫摩尔)和N,N-二异丙基乙胺(266毫克，2.06毫摩尔)。在室温下搅拌15分钟，再加入25wt％的氨水(290毫克，2.06毫摩尔)。混合液在室温下搅拌2小时。
TLC监测显示原料消失后。反应液浓缩去N,N-二甲基甲酰胺，残余物二氯甲烷(30毫升)和甲醇(3毫升)溶解，然后用水(10)洗，再用饱和食盐水(10毫升)洗。无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物制备纯化得3-氨基-4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(6.46毫克)。
MS(ESI)M/Z:422.5[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝5.3Hz,1H),7.89(d,J＝5.7Hz,1H),7.20(d,J＝3.6Hz,1H),7.15-7.07(m,3H),7.03(s,2H),6.52(d,J＝3.6Hz,1H),6.29(d,J＝5.6Hz,1H),4.08-3.98(m,2H),3.84-3.77(m,2H),3.72(s,3H),3.47-3.43(m,2H),3.26-3.16(m,2H),2.30-2.21(m,2H).
实施例7：
3-氨基-4-(4-(5-(二甲基氨基甲酰基)噻唑-2-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(化合物7)
参考实施例1的合成方法，得3-氨基-4-(4-(4-(二甲基氨基甲酰基)噻唑-2-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(7.84毫克)。
MS(ESI)M/Z:446.4[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.40(d,J＝5.7Hz,1H),7.61(s,1H),7.20-6.95(m,5H),3.99(m,2H),3.66(m,2H),3.31-3.11(m,4H),3.09(s,6H),2.24-2.15(m,2H).
实施例8：
3-氨基-4-(4-(4-(二甲基氨基甲酰基)噻唑-2-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(化合物8)
参考实施例1的合成方法，得3-氨基-4-(4-(4-(二甲基氨基甲酰基)噻唑-2-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(1.61毫克)。
MS(ESI)M/Z:446.4[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝5.3Hz,1H),7.15-7.06(m,4H),7.04-7.68(m,2H),3.98-3.89(m,2H),3.64(t,J＝5.7Hz,2H),3.33-3.21(m,4H),3.12(s,3H),2.92(s,3H),2.25-2.15(m,2H).
实施例9：
3-氨基-4-(4-(5-(二甲基氨基甲酰基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(化合物9)
参考实施例1的合成方法，得3-氨基-4-(4-(5-(二甲基氨基甲酰基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(5.29毫克)。
MS(ESI)M/Z:447.6[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(d,J＝5.3Hz,1H),7.16-6.97(m,5H),4.06-3.96(m,2H),3.77-3.69(m,2H),3.46(s,3H),3.42-3.38(m,2H),3.28-3.19(m,2H),3.02(s,3H),2.28-2.18(m,2H).
实施例10：
3-氨基-4-(4-(2-异丁基二氢异吲哚-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(化合物10)
参考实施例3的合成方法，得3-氨基-4-(4-(2-异丁基二氢异吲哚-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(44.37毫克)。
MS(ESI)M/Z:479.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(dd,J＝5.4,0.9Hz,1H),7.18-6.98(m,6H),6.78-6.70(m,2H),4.79(d,J＝17.7Hz,2H),4.53(d,J＝15.2Hz,2H),3.77(t,J＝4.7Hz,2H),3.56(t,J＝6.2Hz,2H),3.31-3.26(m,2H),3.21-3.14(m,2H),2.79-2.69(m,1H),2.18-2.10(m,2H),1.06(d,J＝6.7Hz,6H).
实施例11：
3-氨基-4-(4-(2-(环丙烷羰基)二氢异吲哚-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(化合物11)
参考实施例3的合成方法，得3-氨基-4-(4-(2-(环丙烷羰基)二氢异吲哚-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(69.95毫克)。
MS(ESI)M/Z:477.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42-8.38(m,1H),7.18-6.98(m,6H),6.75(d,J＝7.6Hz,2H),4.91(d,J＝17.2Hz,2H),4.54(d,J＝15.2Hz,2H),3.79-3.72(m,2H),3.59-3.52(m,2H),3.32-3.26(m,2H),3.23-3.14(m,2H),2.19-2.11(m,2H),1.89-1.81(m,1H),0.82-0.75(m,4H).
参考上述实施例的合成方法制备如下目标化合物：
实施例34：
3-氨基-4-(4-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)二氢异吲哚-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺
反应路线:
操作步骤：
步骤A：将4-溴-1,2-双(溴甲基)苯(1.0克，2.92毫摩尔)溶于乙腈(25毫升)，加入1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-胺盐酸盐(476.87毫克，2.92毫摩尔)，再加入碳酸钾(1.41克，10.21毫摩尔)，85摄氏度反应过夜。
TLC监测显示原料消失后，冷却。加水(20毫升)，乙酸乙酯(20毫升×2)萃取。合并有机相，有机相先用饱和食盐水(20毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得到5-溴-2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)异吲哚啉(264毫克)。
MS(ESI)M/Z:308.2[M+H]+.
步骤B：将5-溴-2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)异吲哚啉(264毫克，0.86毫摩尔)，Boc-高哌嗪(223.89毫克，1.12毫摩尔)，叔丁醇钠(115.7毫克，1.2毫摩尔)，BINAP(80.32毫克，0.13毫摩尔)和三(二亚苄基丙酮)二钯(39.4毫克，0.043毫摩尔)加入甲苯(10毫升)中，氮气置换三次，120摄氏度下，反应3小时。
TLC监测显示原料消失后，冷却。加入水(20毫升)和乙酸乙酯(20毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(10毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物用硅胶柱层析纯化，得到4-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-羧酸叔丁酯。
MS(ESI)M/Z:428.5[M+H]+.
步骤C：将4-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-羧酸叔丁酯(36毫克，0.084毫摩尔)溶于二氯甲烷(3毫升)，加入三氟乙酸(2毫升)，室温搅拌反应2小时。
TLC监测显示原料消失后，减压浓缩，油泵拉干，得到粗品5-(1,4-二氮杂-1-基)-2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)异吲哚啉三氟乙酸盐，直接用于投下一步。
步骤D：将上步5-(1,4-二氮杂-1-基)-2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)异吲哚啉三氟乙酸盐粗品(0.084毫摩尔)，2,4-氯烟腈(14.59毫克，0.084毫摩尔)和二异丙基乙基胺(54.38毫克，0.42毫摩尔)溶于乙腈(10毫升)中，混合液在80摄氏度下搅拌过夜。
TLC监测显示原料消失后，冷却。加入水(20毫升)和乙酸乙酯(20毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(10毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物用硅胶柱层析纯化，得2-氯-4-(4-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)烟腈。
MS(ESI)M/Z:464.4[M+H]+.
步骤E：将2-氯-4-(4-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)烟腈(22毫克，0.048毫摩尔)溶于乙醇(5毫升)中，加入硫脲(10.83毫克，0.14毫摩尔)，甲磺酸(4.57毫克，0.048毫摩尔)，85摄氏度反应1小时。点板反应完后，再加入水(2毫升)，85摄氏度反应30分钟。
TLC监测显示原料消失后，冷却。加入碳酸氢钠水溶液(20毫升)和二氯甲烷(20毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(10毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。得2-巯基-4-(4-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)烟酸腈投下一步。
步骤F：将2-巯基-4-(4-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)烟酸腈(0.048毫摩尔)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)中，加入氯乙酰胺(5.33毫克，0.057毫摩尔)，氢氧化钠溶液(8M，2毫升)，室温反应1小时。
TLC监测显示原料消失后，冷却。加入水(20毫升)和乙酸乙酯(20毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(10毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物制备纯化得到3-氨基-4-(4-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)二氢异吲哚-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(1.06毫克)。
MS(ESI)M/Z:519.4[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝5.2Hz,1H),7.13-6.98(m,6H),6.71-6.61(m,2H),4.18(m,1H),4.06(m,5H),3.32-3.04(m,6H),2.17-2.09(m,2H),1.34(s,6H).
实施例35：
3-氨基-4-(4-(2-(2,2-二氟环戊基)二氢异吲哚-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺
参考实施例3的合成方法，得3-氨基-4-(4-(2-(2,2-二氟环戊基)二氢异吲哚-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(29.67毫克)。
MS(ESI)M/Z:513.5[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝5.3Hz,1H),7.11-6.98(m,6H),6.69(s,1H),6.62(dd,J＝7.9,2.2Hz,1H),3.95(m,1H),3.99-3.79(m,4H),3.74(m,2H),3.54(m,2H),3.18(m,2H),3.08(m,2H),2.21-1.99(m,6H),1.75(s,2H).
实施例36：
(R)-3-氨基-4-(4-(2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)二氢异吲哚-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺
参考实施例3的合成方法，得到(R)-3-氨基-4-(4-(2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)异吲哚-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(12.97毫克)。
MS(ESI)M/Z:505.5[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.43-8.30(m,1H),7.10-6.90(m,6H),6.72-6.54(m,2H),4.14-3.81(m,4H),3.80-3.60(m,3H),3.60-3.45(m,2H),3.25-3.02(m,4H),2.22-2.03(m,2H),1.31-1.19(m,3H).
实施例37：
3-氨基-4-(4-(2-乙基二氢异吲哚-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺
参考实施例3的合成方法，得到3-氨基-4-(4-(2-乙基二氢异吲哚-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(25.82毫克)
MS(ESI)M/Z:437.4[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝5.3Hz,1H),7.11-6.94(m,6H),6.70-6.57(m,2H),3.82-3.70(m,6H),3.54(m,2H),3.31(m,2H),3.18(m,2H),2.69(q,J＝7.0Hz,2H),2.13(m,2H),1.10(t,J＝7.2Hz,3H).
实施例38：
3-氨基-4-(4-(2-异丙基异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺
参考实施例3的合成方法，得到3-氨基-4-(4-(2-异丙基异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(20.3毫克)。
MS(ESI)M/Z:451.3[M+H]+.
δ1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝5.3Hz,1H),7.13-6.98(m,6H),6.69-6.56(m,2H),3.81-3.67(m,6H),3.54(m,2H),3.29(m,2H),3.18(m,2H),2.64(m,1H),2.17-2.09(m,2H),1.09(d,J＝6.2Hz,6H).
实施例39：
3-氨基-4-(4-(2-环丙基异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺
参考实施例3的合成方法，得到3-氨基-4-(4-(2-环丙基异吲哚啉-5-基)-1，4-二氮杂-1-基)噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酰胺(39.8毫克)。
MS(ESI)M/Z:449.4[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝5.3Hz,1H),7.14-7.05(m,3H),7.04-6.96(m,3H),6.68-6.63(m,1H),6.63-6.57(m,1H),3.92-3.82(m,4H),3.77-3.70(m,2H),3.57-3.50(m,2H),3.30-3.26(m,2H),3.23-3.13(m,2H),2.18-2.08(m,2H),2.03-1.99(m,1H),0.47-0.41(m,2H),0.41-0.33(m,2H).
实施例40：
3-氨基-4-(4-(2-(环丙基甲基)异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺
参考实施例3的合成方法，得到3-氨基-4-(4-(2-(环丙基甲基)异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(20.5毫克)。
MS(ESI)M/Z:463.5[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝5.3Hz,1H),7.16-6.94(m,6H),6.71(s,1H),6.63(d,J＝8.3Hz,1H),4.03-3.82(m,4H),3.79-3.68(m,2H),3.59-3.49(m,2H),3.31-3.30(m,2H),3.21-3.14(m,2H),2.69-2.57(m,2H),2.20-2.06(m,2H),1.00-0.88(m,1H),0.55-0.44(m,2H),0.24-0.13(m,2H).
实施例41：
4-(4-(2-乙酰基异吲哚啉-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮杂-1-基)-3-氨基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺
参考实施例3的合成方法，得到4-(4-(2-乙酰基异吲哚啉-5-基)-6,6-二氟-1,4-二氮杂-1-基)-3-氨基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(6.88毫克)。
MS(ESI)M/Z:487.4[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48(d,J＝5.3Hz,1H),7.24-7.11(m,4H),6.99-6.87(m,4H),4.74(m,2H),4.53(m,2H),4.22(m,2H),3.90(m,2H),3.66(m,2H),3.35(m,2H),2.05(s,3H).
实施例42：
3-氨基-4-(4-(2-(二甲基氨基甲酰基)异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺
参考实施例3的合成方法，得到3-氨基-4-(4-(2-(二甲基氨基甲酰基)异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(17.3毫克)。
MS(ESI)M/Z:480.5[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝5.3Hz,1H),7.15-6.95(m,6H),6.71(m,2H),4.59(m,4H),3.76(m,2H),3.56(m,2H),3.35(m,2H),3.19(m,2H),2.82(s,6H),2.14(m,2H).
实施例43：
3-氨基-4-(4-(2-(吡咯烷-1-羰基)异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺
参考实施例3的合成方法，得到3-氨基-4-(4-(2-(吡咯烷-1-羰基)异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(5.7毫克)。
MS(ESI)M/Z:506.4[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝5.3Hz,1H),7.15-6.97(m,6H),6.71(m,2H),4.60(m,4H),3.76(m,2H),3.56(m,2H),3.43-3.33(m,6H),3.19(m,2H),2.15(m,2H),1.79(m,4H).
实施例44：
3-氨基-4-(4-(2-(2-(二甲基氨基)-2-氧乙基)异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺
参考实施例3的合成方法，得到3-氨基-4-(4-(2-(2-(二甲基氨基)-2-氧乙基)异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(7.64毫克)。
MS(ESI)M/Z:494.4[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝5.2Hz,1H),7.11-6.99(m,6H),6.67(s,1H),6.61(d,J＝8.5Hz,1H),3.87(m,4H),3.75(m,2H),3.54(m,4H),3.33(m,2H),3.19(m,2H),3.01(s,3H),2.83(s,3H),2.14(m,2H).
实施例45：
3-氨基-4-(4-(2-(2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基)异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺
参考实施例3的合成方法，得到3-氨基-4-(4-(2-(2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基)异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(15.3毫克)。
MS(ESI)M/Z:520.5[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39(d,J＝5.3Hz,1H),7.12-6.89(m,6H),6.69-6.57(m,2H),3.88(m,4H),3.74(m,2H),3.54(m,2H),3.49-3.41(m,6H),3.29(m,2H),3.19(m,2H),2.14(m,2H),1.93-1.80(m,2H),1.80-1.71(m,2H).
实施例46：
3-氨基-4-(4-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺
参考实施例3的合成方法，得3-氨基-4-(4-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(15.55毫克)。
MS(ESI)M/Z:493.5[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝5.2Hz,1H),7.12-6.98(m,6H),6.68(s,1H),6.61(d,J＝8.2Hz,1H),3.87(d,J＝11.4Hz,2H),3.82-3.67(m,7H),3.54(t,J＝6.4Hz,2H),3.43-3.31(m,4H),3.19(s,2H),2.13(s,2H),1.86-1.77(m,2H),1.50-1.37(m,2H).
实施例47：
3-氨基-4-(4-(2-丙酰基异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺
参考实施例3的合成方法，得到3-氨基-4-(4-(2-丙酰基异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(491.34毫克)。
MS(ESI)M/Z:465.5[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝5.3Hz,1H),7.18-7.04(m,4H),7.00(s,2H),6.78-6.70(m,2H),4.70(d,J＝17.7Hz,2H),4.53(d,J＝15.4Hz,2H),3.77(t,J＝4.9Hz,2H),3.55(d,J＝6.4Hz,2H),3.30(s,2H),3.18(s,2H),2.35(q,J＝7.3Hz,2H),2.14(q,J＝5.8Hz,2H),1.04(t,J＝7.4Hz,3H).
实施例48：
3-氨基-4-(4-(2-甲基-1-氧代异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺
反应路线:
操作步骤：
步骤A：将5-溴-2-甲基异吲哚啉-1-酮(900毫克，3.98毫摩尔)，Boc-高哌嗪(1.19克，5.97毫摩尔)，碳酸铯(2.59克，7.96毫摩尔)，氯(2-二环己基膦基-2',6'-二甲氧基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(222毫克，0.15毫摩尔)和三(二亚苄基丙酮)二钯(143毫克，0.19毫摩尔)加入甲苯(10毫升)中，氮气置换三次，120摄氏度下，反应4小时。
TLC监测显示原料消失后，冷却，过滤。加入水(20毫升)和乙酸乙酯(20毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(10毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到4-(2-甲基-1-氧代异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-羧酸叔丁酯(800毫克)。
MS(ESI)M/Z:346.2[M+H]+.
步骤B：将4-(2-甲基-1-氧代异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-羧酸叔丁酯(800毫克，2.3毫摩尔)溶于二氯甲烷(6毫升)中，加入三氟乙酸(6毫升)，室温搅拌2小时。
TLC监测显示原料消失后，反应液减压浓缩干得到5-(1,4-二氮杂-1-基)-2-甲基异吲哚啉-1-酮三氟乙酸盐，粗品直接用于下一步。
步骤C：将上步5-(1,4-二氮杂-1-基)-2-甲基异吲哚啉-1-酮三氟乙酸盐粗品(2.3毫摩尔)，2,4-氯烟腈(400毫克，2.3毫摩尔)和二异丙基乙基胺(1.5克，11.58毫摩尔)溶于乙腈(10毫升)中，混合液在80摄氏度下搅拌过夜。
TLC监测显示原料消失后，冷却。加入水(20毫升)和乙酸乙酯(20毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(10毫升)洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干。所得残余物用硅胶柱层析纯化得2-氯-4-(4-(2-甲基-1-氧代异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)烟腈(200毫克)。
MS(ESI)M/Z:381.9[M+H]+.
步骤D：将2-氯-4-(4-(2-甲基-1-氧代异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)烟腈(200毫克，0.52毫摩尔)，巯基乙酰胺(143毫克，1.57毫摩尔)和甲醇钠(42毫克，0.78毫摩尔)加入甲醇(2毫升)中，混合液在65摄氏度下搅拌4小时。再向反应液中加入甲醇钠(42毫克，0.78毫摩尔)，反应液在90摄氏度下搅拌过夜。
TLC监测显示原料消失后，冷却。反应液直接浓缩干。所得残余物制备纯化得3-氨基-4-(4-(2-甲基-1-氧代异吲哚啉-5-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(4.57毫克)。
MS(ESI)M/Z:437.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝5.3Hz,1H),7.44(d,J＝8.5Hz,1H),7.14-7.05(m,3H),7.01(s,2H),6.94-6.82(m,2H),4.32(s,2H),3.85(m,2H),3.63(m,2H),3.30(m,2H),3.19(m,2H),3.00(s,3H),2.17(m,2H).
实施例49：
3-氨基-4-(4-(2-甲基苯并[d]恶唑-6-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺
反应路线:
操作步骤：
步骤A：将6-溴-2-甲基苯并恶唑(700毫克，3.3毫摩尔)，1,4-二氮杂-1-羧酸叔丁酯(991.76毫克，4.95毫摩尔)，碳酸铯(2.15克，6.6毫摩尔)，氯(2-二环己基膦基-2',6'-二甲氧基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(118.94毫克，0.17毫摩尔)加入二氧六环(20毫升)中，真空置换氮气3次，120摄氏度反应6小时。
LCMS监测显示原料消失后，冷却，加入水(40毫升)和乙酸乙酯(60毫摩尔)有机相先用饱和食盐水(30毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩，所得残余物硅胶柱层析纯化得到4-(2-甲基苯并[d]恶唑-6-基)-1,4-二氮杂-1-羧酸叔丁酯(720毫克)。
MS(ESI)M/Z:332.0[M+H]+.
步骤B：将4-(2-甲基苯并[d]恶唑-6-基)-1,4-二氮杂-1-羧酸叔丁酯(800毫克，2.42毫摩尔)溶于二氯甲烷(6毫升)中，加入三氟乙酸(6毫升)室温反应3小时。
TLC板监测显示原料消失后，减压浓缩得到6-(1,4-二氮杂-1-基)-2-甲基苯并[d]恶唑三氟乙酸盐粗品，直接用于下一步。
步骤C：将6-(1,4-二氮杂-1-基)-2-甲基苯并[d]恶唑三氟乙酸盐粗品(2.42毫摩尔)，2,4-二氯烟腈(380.1毫克，2.2毫摩尔)，二异丙基乙基胺(1.42克，10.99毫摩尔)溶于乙腈(15毫升)中，混合液在80摄氏度下搅拌过夜。
TLC监测显示原料消失后，冷却。加入水(30毫升)和乙酸乙酯(30毫升)，搅拌，分液。有机相饱和食盐水(15毫升)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干。所得残余物用硅胶柱层析纯化得2-氯-4-(4-(2-甲基苯并[d]恶唑-6-基)-1,4-二氮杂-1-基)烟腈(700毫克)。
MS(ESI)M/Z:368.0[M+H]+.
步骤D：将2-氯-4-(4-(2-甲基苯并[d]恶唑-6-基)-1,4-二氮杂-1-基)烟腈(150毫克，0.41毫摩尔)，巯基乙酸甲酯(111.62毫克，1.2毫摩尔)，甲醇钠(33.12毫克，0.61毫摩尔)加入甲醇(2毫升)中，60摄氏度反应4小时。
向反应液中补加甲醇钠(33.12毫克，0.61毫摩尔)，90摄氏度过夜反应。
LCMS监测显示原料消失后，冷却，加入水(40毫升)和二氯甲烷(60毫摩尔)有机相先用饱和食盐水(30毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩，所得残余物制备纯化得到3-氨基-4-(4-(2-甲基苯并[d]恶唑-6-基)-1,4-二氮杂-1-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺(41.47毫克)。
MS(ESI)M/Z:423.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39(d,J＝5.3Hz,1H),7.41(d,J＝8.8Hz,1H),7.14-7.05(m,3H),7.03-6.96(m,3H),6.79(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),3.82(m,2H),3.59(m,2H),3.33(m,2H),3.20(m,2H),2.51(s,3H)2.17(m,2H).
参照WO2005100365中的制备方法，制备得到对照化合物15U：
二、生物活性实验
(一)CDK体外酶学实验
用ADP-Glo Luminescent方法在体外测试对CDK8/CycC/Med12激酶、CDK19/CycC激酶活性的抑制作用，并得出化合物对CDK8激酶活性的半数抑制浓度IC50。
用时差性荧光共振能量转移检测(LanceUltra)方法在体外测试激酶CDK2/CycE1,CDK2/cyclinH/MAT1和CDK9/cyclinT1激酶活性的抑制作用，并得出化合物对CDK2/CDK7/CDK9激酶活性的半数抑制浓度IC50。
1、实验材料
CDK8纯化自维亚生物公司，CDK19购自BPS Bioscience公司，底物MBP购自signalChem公司，ADP-Glo试剂盒购自Promega公司，DMSO购自Sigma公司，384孔板购自Corning公司。
CDK2/CDK7/CDK9购自Carna公司，底物18/底物8购自吉尔生化公司。
2、实验方法
(1)配制1×Kinase buffer；在1×Kinase buffer中加入FAM-labeled peptide和ATP制成2.5×Peptide solution。
(2)化合物浓度梯度的配制：受试化合物测试浓度10μM起始，3倍稀释，10个浓度，复孔检测。在384孔板中稀释成100倍终浓度的100％ DMSO(二甲基亚砜)溶液。使用分液器Echo 650向目的板384孔板转移50nL 100倍终浓度的化合物。阳性和阴性对照孔加入200nL DMSO。
(3)在1×Kinase buffer中加入相应激酶配制激酶溶液。
(4)在化合物孔和阳性对照孔分别加2.5μL的激酶溶液；在阴性对照孔中加2.5μL的1×Kinase buffer。
(5)1000rpm离心30秒，反应板振荡混匀后室温孵育10分钟。
(6)在1×Kinase buffer中加入MBP标记的多肽和ATP制成2倍终浓度的ATP和底物的混合溶液。
(7)加入2.5μL或10μL的2倍终浓度的ATP和底物的混合溶液，起始反应。
(8)将384孔板1000rpm离心30秒，振荡混匀后，37℃孵育2小时或1小时。
(9)加入5μL ADP-Glo试剂1，停止激酶反应，1000rpm离心30秒，振荡混匀，37℃孵育1小时。转移10μLADP-Glo试剂2到384孔板中；在37℃下孵育反应1小时。
或
加入20μL终止检测液，停止激酶反应，1000rpm离心30秒，振荡混匀，室温放置1小时。
(10)用Envision 2104Multilabel Reader上读取RLU值。
计算公式：
复制RLU读数值，将上述数据通过公式转换为抑制百分率。
％inhibition＝(max-Sample RLU)/(max-min)*100。
或
复制荧光读数的数值比(Lance signal ratio(665nm/615nm))；将上述数据通过公式转换为抑制百分率。
％inhibition＝(max-Sample Lance signal ratio)/(max-min)*100。
其中：“min”为不加酶进行反应的对照样孔读数；“max”为加入DMSO作为对照孔读数。
拟合量效曲线
将数据导入MS Excel并使用XLFit excel add-in version 5.4.0.8进行曲线拟合；拟合公式:Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+(IC50/X)^HillSlope)。
3、实验结果
本申请化合物对CDK激酶活性的抑制IC50数据如表1中所示。可以看出，本申请化合物具有较好的CDK8/CDK19激酶抑制活性；且本申请的部分化合物对CDK2/7/9激酶的抑制活性较弱，可选择性抑制CDK8/CDK19激酶。
表1
注：“/”表示未测定
(二)细胞增殖抑制实验
本实验采用荧光法测定细胞内ATP含量(CellTiter-Glo)的方法来检测化合物对MV4-11和KG-1细胞株的抑制增殖作用，并得出化合物对上述细胞株抑制增殖的半数抑制浓度IC50。
1.实验材料
IMDM培养基，胎牛血清(FBS)，100X Pen/Strep，GlutaMAX-I Supplement购自GIBCO公司；MV4-11和KG-1细胞株购自美国ATCC细胞库；Cell Titer-Glo发光法细胞活力检测试剂购自Promega公司。
2.实验方法
1)按照每孔300个MV4-11或KG-1细胞的密度将细胞接种于384孔培养板，每孔50μL。置于培养箱(37℃，5％CO2)中孵育过夜。
2)第0天：使用D300e(TECAN)向培养板细胞中加入50nL梯度稀释的待测化合物(起始浓度为10μM，9个浓度，1:3比例稀释)，DMSO终浓度为0.4vol％，将培养板置于细胞培养箱中孵育168小时(37℃，5％CO2)。空白对照加入每孔20nL的DMSO。
3)第7天：每孔加入30μL Cell Titer-Glo试剂，500rpm震荡10分钟，1000rpm离心1分钟，室温避光静置孵育20分钟稳定发光信号。
4)Envision酶标仪(PerkinElmer)检测发光信号。
5)使用GraphPad Prism 6软件进行数据分析，计算化合物的IC50。
本申请部分化合物对MV4-11和KG-1细胞系的抑制结果见表2。可以看出，本申请化合物对MV4-11细胞及KG-1细胞有着较好的肿瘤细胞增殖抑制活性。
表2
(三)人肝微粒体CYP450酶直接抑制试验
本实验采用CYP450酶各亚型的特异性底物作为探针与人肝微粒体共同孵育，检测代谢物生成的生成的方法检测化合物对人肝微粒体CYP450各亚型的直接抑制作用，并得出化合物对上述各CYP亚型的半数抑制浓度IC50。
1、试验材料
人肝微粒购买自BD Gentest，浓度为20mg/mL；磷酸钾缓冲液，100mM；氯化镁，300mM；NADP(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)，10mM；终止液，乙腈(含内标200nM alprazolam,200nM labetalol and 200nM tolbutamide)。
阳性对照、待测化合物和底物如表3所示。
表3阳性对照、待测化合物和底物
2、实验方法
孵育在96深孔板中进行。将以下体积分配到孵育板的每个孔中：169μL主溶液和1μL多个浓度的测试化合物或阳性对照化合物工作溶液。将孵育板放入水浴中并在37℃下预热5分钟。实验一式两份进行。
将10μL底物添加到孵育板中，然后添加20μL 10mM NADPH溶液，以终浓度1mM开始反应。在37℃水浴中孵育20分钟。
孵育20分钟后，通过添加300μL淬灭溶液(含3vol％甲酸的冷乙腈、200nM阿普唑仑、200nM拉贝洛尔和200nM甲苯磺丁脲)来淬灭反应。将板在4℃下以3,220g离心50分钟。将150μL上清液转移至新板中。上清液可用150μL纯水稀释。充分混合并使用UPLC-MS/MS分析样品。
人肝微粒体中CYP450的抑制通过与未抑制的溶剂对照(＝100％活性)相比标记代谢物形成的活性下降百分比来测量。将每个浓度的酶活性平均值(未抑制对照的％)相对于抑制剂浓度作图，并拟合成IC50曲线。
3、实验结果
表4
结果：从上表可以看出，本申请实施例3化合物对CYP2C19酶的IC50明显高于15U，表明本申请化合物对CYP450酶的直接抑制的风险更低。
(四)动物体内药代动力学试验
以大鼠和犬为受试动物，研究本申请化合物经静脉推注和口服注射给药后，在特定时间点收集血浆样品，LC-MS/MS检测血浆中化合物浓度，计算PK参数，体现本申请化合物的在大鼠和犬体内血浆的药代动力学行为。
1.试验方案
1.1试验药品：
15U和实施例3。
1.2试验动物
大鼠，Sprague-Dawley,雄性，供货商为浙江维通利华实验动物技术有限公司。
犬，Beagle Dog，雄性，供货商，Jiangsu Marshall Biotechnology Co.LTD。
1.3给药
实施例3和15U化合物大鼠给药信息：IV(静脉内)给药剂量为1mg/kg，给药体积为5mL/kg；PO(口服)给药剂量为5mg/kg，给药体积为10mL/kg，5vol％DMSO/30vol％PEG400(增溶剂)/65vol％Saline(生理盐水)。
实施例3和15U化合物犬给药信息：实施例3IV给药剂量为0.5mg/kg，给药体积为2mL/kg；PO给药剂量为1mg/kg，给药体积为2mL/kg，5vol％DMSO/30vol％PEG400(增溶剂)/65vol％Saline(生理盐水)。15U化合物IV给药剂量为0.5mg/kg，给药体积为1mL/kg；PO给药剂量为3mg/kg，给药体积为2mL/kg，5vol％DMSO/30vol％PEG400(增溶剂)/65vol％Saline(生理盐水)。
1.4实验器材
离心机购自Eppendorf公司，移液器购自Eppendorf公司。
1.5样品采集
大鼠和犬给药后，在0.0833(IV)、0.25、0.5、1、2、4、8和24小时，静脉采血分别为各0.2mL和0.5mL，置于EDTA-K2试管中，于4℃、2000g离心10min分离血浆，于-80℃保存。
1.6样品处理
大鼠血浆样品处理：
1)50μL血浆样品加入200μL乙腈沉淀，涡旋混合后离心15分钟。
2)取处理后上清液用水稀释后通过LC/MS/MS分析待测化合物的浓度。
犬血浆样品处理：
1)30μL血浆样品加入200μL乙腈沉淀，涡旋混合后离心15分钟。
2)取处理后上清液用水稀释后通过LC/MS/MS分析待测化合物的浓度。
2.实验结果
药代动力学参数用WinNonlin 6.1计算得到，药代动力学参数见表5和表6。其中，Cmax表示最大血药浓度，CL表示清除率，Vss表示稳态分布容积，T1/2表示末端消除半衰期，MRTInf表示平均驻留时间，AUC表示药时曲线下面积，F表示生物利用度。
表5大鼠静脉注射和口服本申请部分化合物的药代动力学参数
表6犬静脉注射和口服本申请部分化合物的药代动力学参数
注：“/”表示未测定
结果：从表5和表6可以看出，本申请化合物在大鼠和犬体内具有较高的暴露量和生物利用度，体现了良好的药代动力学性质。
以上所述仅为本申请的较佳实施例，并不用以限制本申请，凡在本申请的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请保护的范围之内。

Claims (17)

  1. 式(I)所示的化合物及其药学上可接受的盐，
    其中，
    环B选自
    环C选自苯基、5-6元杂芳基或者8-10元稠杂环基，其中5-6元杂芳基选自
    Ra各自独立地选自氨基、-CONH2；
    Rb各自独立地选自氢、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基；
    Rc各自独立地选自氢、-C1-4烷基、-COC1-4烷基、-C0-4烷基CONRcaRcb、-COC3-6环烷基、C3-6环烷基、-S(＝O)2C1-4烷基、-S(＝O)2NRcaRcb、8-10元稠杂环基、-C1-4烷基-C3-6环烷基、3-6元杂环烷基、-CO-3-6元杂环烷基、-C1-4烷基-3-6元杂环烷基；其中C1-4烷基、C3-6环烷基、8-10元稠杂环基、3-6元杂环烷基、-CO-3-6元杂环烷基和-C1-4烷基-3-6元杂环烷基可任选地被1-3个选自如下基团所取代：C1-4烷基、氰基、卤素、C1-4卤代烷基；Rca、Rcb各自独立地选自氢、C1-4烷基；或者Rca和Rcb与其连接的N原子共同环化为3-6元杂环烷基；
    n选自0、1、2；
    m选自0、1、2、3、4；
    p选自0、1、2、3；
    并且，当环C选自苯基时，Rc选自8-10元稠杂环基；
    并且，当环C选自吡啶基时，m不为0或者Rc不为-C1-4烷基、-COC1-4烷基；
    并且，当环C选自噻唑基时，m不为0或者Rc不为-COC1-4烷基；
    并且，式(I)化合物不为
  2. 如权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于，其中
    环B选自
    环C选自5-6元杂芳基或者8-10元稠杂环基，其中5-6元杂芳基选自
    Ra各自独立地选自氨基、-CONH2；
    Rb各自独立地选自氢、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基；
    Rc各自独立地选自氢、-C1-4烷基、-COC1-4烷基、-C0-4烷基CONRcaRcb、-COC3-6环烷基、C3-6环烷基、-S(＝O)2C1-4烷基、-S(＝O)2NRcaRcb、8-10元稠杂环基、-C1-4烷基-C3-6环烷基；其中C1-4烷基、C3-6环烷基和8-10元稠杂环基可任选地被1-3个选自如下基团所取代：C1-4烷基、氰基、卤素、C1-4卤代烷基；Rca、Rcb各自独立地选自氢、C1-4烷基；
    n选自0、1、2；
    m选自0、1、2、3、4；
    p选自0、1、2、3；
    并且，当环C选自吡啶基时，m不为0或者Rc不为-C1-4烷基、-COC1-4烷基；
    并且，当环C选自噻唑基时，m不为0或者Rc不为-COC1-4烷基；
    并且，式(I)化合物不为
  3. 如权利要求1-2中任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于，其中，
    环B选自
    环C选自8-10元稠杂环基；
    Ra各自独立地选自氨基、-CONH2；
    Rb各自独立地选自氢；
    Rc各自独立地选自氢、-C1-4烷基、-COC1-4烷基、-C0-4烷基CONRcaRcb、-COC3-6环烷基、C3-6环烷基、-S(＝O)2C1-4烷基、-S(＝O)2NRcaRcb、8-10元稠杂环基、-C1-4烷基-C3-6环烷基；其中C1-4烷基、C3-6环烷基和8-10元稠杂环基可任选地被1-3个选自如下基团所取代：C1-4烷基、氰基、卤素、C1-4卤代烷基；Rca、Rcb各自独立地选自氢、C1-4烷基；
    n选自0、1、2；
    m选自0、1、2、3、4；
    并且，式(I)化合物不为
  4. 如权利要求1-3中任一项所述的式(I)所示的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于，Rc各自独立地选自-CH3、-SO2CH3、-SO2N(CH3)2、
  5. 如权利要求1-4中任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于，结构单元选自
  6. 如权利要求1-5中任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于，环C选自
  7. 如权利要求6所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于，环C选自
  8. 如权利要求1-7中任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于，结构单元选自 其中Rc，m如权利要求1-7中任一项所定义。
  9. 如权利要求8所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于，结构单元选自其中Rc，m如权利要求8所定义。
  10. 如权利要求1-9中任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于，结构单元选自
  11. 如权利要求10所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于，结构单元选自
  12. 如权利要求1-11中任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于，其选自式(II)、(III)或(IV)所示化合物及其药学上可接受的盐，
    其中，环C，Rc，m如权利要求1-11中任一项所定义。
  13. 化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物选自：
  14. 一种药物组合物，其包含权利要求1-13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。
  15. 权利要求1-13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求14所述的药物组合物在制备治疗CDK8/CDK19介导的癌症的药物中的用途。
  16. 一种治疗CDK8/CDK19介导的癌症的方法，其包括向患者施用治疗有效量的权利要求1-13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求14所述的药物组合物。
  17. 如权利要求15所述的用途或权利要求16所述的方法，其中，所述癌症选自血液肿瘤和实体瘤；优选地，所述血液肿瘤包括急性髓系白血病、骨髓增生异常综合征及骨髓增殖性疾病；所述实体瘤包括如乳腺癌、胃癌、结直肠癌及胰腺癌。
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