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CN113943259A - 一种氨基酸衍生物、其制备方法及应用 - Google Patents

一种氨基酸衍生物、其制备方法及应用 Download PDF

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CN113943259A
CN113943259A CN202010692426.3A CN202010692426A CN113943259A CN 113943259 A CN113943259 A CN 113943259A CN 202010692426 A CN202010692426 A CN 202010692426A CN 113943259 A CN113943259 A CN 113943259A
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CN
China
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tert
phenyl
amino
butyl
preparation
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Application number
CN202010692426.3A
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王雪菊
戴静芳
吴少平
张俊清
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Xi'an Hepeng Biomedical Co ltd
Original Assignee
Xi'an Hepeng Biomedical Co ltd
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Abstract

本发明公开了一种可用于凝血因子(Factor)XIa抑制作用的氨基酸衍生物及其应用。本发明提供了一种如式I所示的的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N‑氧化物、代谢物或前药，在体外多项生物测试结果显示对于凝血因子(Factor)XIa，极低浓度即可产生明显的抑制活性作用，其中的一些优选化合物在低浓度的条件下即可显著延长人的全血液凝结时间，无论是1.5倍还是2.0倍凝结延长时间。都达到了可实用的标准，具有乐观的成药前景。该类化合物可作为凝血因子XIa的抑制剂、包含其的药物组合物、其制备方法以及其在制备用于预防或治疗血栓和血管栓塞相关疾病的药物中的用途。

Description

一种氨基酸衍生物、其制备方法及应用
技术领域
本发明涉及一类新的氨基酸衍生物，可作为凝血因子XIa的抑制剂、包含其的药物组合物、其制备方法以及其在制备用于预防或治疗血栓和血管栓塞相关疾病的药物中的用途。
背景技术
血栓是一种病理性产物，是心脏和血管内，血液发生凝固或血液中某些有形成分凝集而形成的固体质块。血栓形成后，部分或全部脱落，随血液流动，堵塞血管而成为栓塞。血栓或血栓栓塞会引发一系列的心脑血管疾病，已成为世界范围内发病率和死亡率的主要原因。全球每年有2600多万人死于各种血栓性疾病，在我国其发病率也逐年上升。根据中国卫生部公布的第三次全国死因调查结果，死于心脑血管疾病的占死亡人数的22.5％。在这种严峻形势下，开发廉价、安全、有效的抗血栓药物对人类健康具有十分重要的意义。
经典的凝血级联反应在认识静脉血栓的形成起到关键作用。凝血级联反应由内源性途径(又称接触激活途径)及外源性途径(又称组织因子途径)两种通路传递血液凝结行为.处于反应路径上游的Factor XI(FXI)被激活成Factor XIa(FXIa)，可以催化Factor IX(FIX)成Factor IXa(FIXa)，继续结合Factor VIIIa(FVIIIa)，共同高效低地的生成FactorXa(FXa)。拮抗Factor Xa(FXa)的活性，实现防止血液凝结的临床效果，就是以利伐沙班为代表的沙板类药物的作用靶点。如Factor Xa(FXa)的活性保持，再经Factor Va(FVa)的协同作用，可以将Factor II(FII)激活成凝血酶(Factor IIa，FIIa)，最终形成纤维蛋白，聚集成大小不一的血栓斑块。FXI是维持内源性途径所必需的，而且在凝血级联反应放大过程中发挥关键作用。在凝血级联反应中，凝血酶(Factor IIa，FIIa)可反馈激活FXI，活化的FXIa又促使凝血酶的大量产生，从而使凝血级联反应放大。
与此同时，临床荟萃研究发现，这些抗凝药物都会引起不同程度、不同比例的出血风险。无论是传统的抗凝药物，如华法林、肝素、低分子量肝素(LMWH)，还是近年上市的新药，如凝血因子FXIa抑制剂(利伐沙班、阿哌沙班等)和凝血酶抑制剂(达比加群酯、水蛭素等)，都可能引起出血并发症。因此，研发具有出血副作用小的抗血栓新药具有重要价值。
凝血因子FXI(Coagμlation factor XI)又名血浆凝血激酶前质(Plasmathromboplastin antecedent)，是一种丝氨酸水解酶原，是一种非活化状态，其在肝脏合成，分子量为160KD。凝血因子FXI正常情况下以二聚体形式(Homodimer)存在，会被活化而转换为凝血因子FXIα。其转化过程为：在内源性凝血过程中，因血液与带负电荷的异物表面接触时，首先由凝血酶原(FII)结合到异物表面，被激活为凝血酶(FIIα)，随后将凝血因子FXI激活为凝血因子FXIα，从而启动内源性凝血途径。在上述凝血级联机制中，凝血因子FXIα由于位于内在凝血途径的源头附近，内源凝血途径的开始和凝血因子FXIα的形成对导致血凝块形成非常重要。近年来有研究表明，增高凝血因子FXI的水平与男性的静脉血栓形成和心肌梗死相关联，并增加了脑血管以及冠状动脉病的几率。因而推断抑制FXIα即可以有效地抑制血栓形成并且不会导致显著出血。
目前，针对FXI/FXIα靶点，大约有23个候选化合物在进行研究，尚无药物上市，进展最快为临床Ⅱ期研究中。截止2020年05月10日，正在进行临床II期研发的候选化合物有6个，其中，有3个为小分子化学药物，3个为生物药。另外有4个候选化合物在进行I期临床研发，累计共有10个在进行临床研究。小分子抑制剂中，SHR-2285、ONO-5450598未公开报道结构，如下为已公开结构的处于临床研究阶段的品种。
Figure BDA0002589780190000021
综上所述，从药物发展趋势来看，在小分子化合物方面，有至少多组化合物在进行成药性研究，但基于药效的临床数据尚未完全公布，也没有候选化合物开展临床III期。因此，如何开发出适合临床需要，具有良好成药参数的全新结构凝血因子FXIα抑制剂仍是目前该领域面临的巨大挑战。
本发明通过深入分析靶点蛋白分子结构，创造性的进行一系列的有机小分子构效关系研究，所涉及的一系列化合物，体外多项生物测试结果显示对于凝血因子(Factor)XIa，极低浓度即可产生明显的抑制活性作用，其中的一些优选化合物在低浓度的条件下即可显著延长人的全血液凝结时间，无论是1.5倍还是2.0倍凝结延长时间。都达到了可实用的标准，具有乐观的成药前景。经典的大鼠动静脉血栓实验(AVST)验证了实施例17的化合物具有显著的生物体内抗血栓作用。所以，本发明的化合物具有比本领域发明背景中提及所提及的化合物具有更大的临床潜力。
发明内容
本发明提供了一类新的凝血因子XIa抑制剂。所述化合物为式I的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药：
Figure BDA0002589780190000031
其中
A选自苯基和环己基；
R1各自独立地选自卤素、C1-6烷基、四唑基和三唑基，所述C1-6烷基、四唑基或三唑基各自任选地被一或多个选自氨基和卤素的取代基取代；
n为0、1、2或3；
R2和R3各自独立地选自H和C1-6烷基；
m为0或1；
R4为H；
R6选自H和C1-6烷基；
R7为H或任选地被一或多个R10取代的苯基、苄基、萘基，茚基、吲哚、苯并咪唑、环己基；
R10各自独立地选自-(CH2)r-C(O)s-R11；
r为0或1；
s为1或2；
R11选自H、-CH2R12和任选地被R13取代的C1-6氧代烷基；
R12选自C1-6烷基、C3-6环烷基和苯基；
R13选自-OCOOR14和
Figure BDA0002589780190000032
R14选自C1-6烷基和C3-6环烷基；
R5为任选地被一或多个R8取代的苯基或Cp烷基；
p为0、1、2、3、4、5或6；
R8为在苯基取代位置为邻位或间位或对位的-NR15R16；
R15为H或CH3；
R16为-C(O)-R17；
R17为CH3、-CH2-N(CH3)2或-CH2-OCH3；
R8也可为在Cp烷基取代的-C(O)R18；
R18可以为如下结构中的任意一种
Figure BDA0002589780190000033
Figure BDA0002589780190000041
另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含预防或治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，以及一种或多种药学上可接受的载体。
另一方面，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，其用于预防或治疗血栓和栓塞相关疾病。
另一方面，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药在制备用于预防或治疗血栓和栓塞相关疾病的药物中的用途。
另一方面，本发明提供了预防或治疗血栓和栓塞相关疾病的方法，其包括向有此需要的个体给药预防或治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，或者本发明的药物组合物。
本发明也提供了制备本发明的化合物的方法，其包括以下步骤：
Figure BDA0002589780190000042
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、m和n如上所定义；且PG为羧基的保护基。
发明详述
定义
除非在下文中另有定义，本文中所用的所有技术术语和科学术语的含义意图与本领域技术人员通常所理解的相同。提及本文中使用的技术意图指在本领域中通常所理解的技术，包括那些对本领域技术人员显而易见的技术的变化或等效技术的替换。虽然相信以下术语对于本领域技术人员很好理解，但仍然阐述以下定义以更好地解释本发明。
如本文中所使用，术语“包括”、“包含”、“具有”、“含有”或“涉及”及其在本文中的其它变体形式为包含性的(inclusive)或开放式的，且不排除其它未列举的元素或方法步骤。
如本文中所使用，术语“烷基”定义为直链或支链的饱和脂肪族烃基。例如，如本文中所使用，术语“C1-6烷基”指具有1至6个碳原子的直链或支链的基团(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基、异己基等)。
如本文中所使用，术语“环烷基”指饱和的非芳族单环或多环(诸如双环)烃环。例如，术语“C3-6环烷基”指具有3至6个成环碳原子的饱和的非芳族单环或多环(诸如双环)烃环(例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基)。术语“C5-6环烷基”指具有5至6个成环碳原子的饱和的非芳族单环或多环(诸如双环)烃环(例如环戊基或环己基)。
如本文中所使用，术语“烷氧基”意指在烷基(如上文所定义)任意合理的位置插入氧原子的基团。例如，术语“C1-6烷氧基”的代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。如本文中所使用，术语“卤代”或“卤素”基团定义为包括氟、氯、溴或碘。
术语“取代”指所指定的原子上的一个或多个(例如1个、2个、3个或4个)氢被从所指出的基团的选择代替，条件是未超过所指定的原子在当前情况下的正常原子价并且所述取代形成稳定的化合物。取代基和/或变量的组合仅仅当这种组合形成稳定的化合物时才是允许的。
如果取代基被描述为“任选地被…取代”，则取代基可(1)未被取代或(2)被取代。如果取代基的碳被描述为任选地被取代基列表中的一个或多个取代，则碳上的一个或多个氢(至存在的任何氢的程度)可单独和/或一起被独立地选择的取代基替代或未替代。如果取代基的氮被描述为任选地被取代基列表中的一个或多个取代，则氮上的一个或多个氢(至存在的任何氢的程度)可各自被独立地选择的取代基替代或未替代。
如果取代基被描述为“独立地选自”一组基团，则各取代基独立于另一者被选择。因此，各取代基可与另一(其他)取代基相同或不同。
如本文中所使用，术语“一个或多个”意指在合理条件下的1个或超过1个，例如2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个。除非指明，否则如本文中所使用，取代基的连接点可来自取代基的任意适宜位置。
当取代基的键显示为穿过环中连接两个原子的键时，则这样的取代基可键连至该可取代的环中的任一成环原子。
术语“立体异构体”表示由于至少一个不对称中心形成的异构体。在具有一个或多个(例如1个、2个、3个或4个)不对称中心的化合物中，其可产生外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单独的非对映异构体。特定分子也可以几何异构体(顺式/反式)存在。类似地，本发明的化合物可以两种或更多种处于快速平衡的结构不同的形式的混合物(通常称作互变异构体)存在。互变异构体的代表性实例包括酮-烯醇互变异构体、苯酚-酮互变异构体、亚硝基-肟互变异构体、亚胺-烯胺互变异构体等。要理解，本申请的范围涵盖所有这样的以任意比例(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％)的异构体或其混合物。
本发明涵盖本发明的化合物的所有可能的结晶形式或多晶型物，其可为单一多晶型物或多于一种多晶型物的任意比例的混合物。
还应当理解，本发明的某些化合物可以游离形式存在用于治疗，或适当时，以其药学上可接受的衍生物形式存在。在本发明中，药学上可接受的衍生物包括但不限于：药学上可接受的盐、溶剂合物、代谢物或前药，在将它们向需要其的患者给药后，能够直接或间接提供本发明的化合物或其代谢物或残余物。因此，当在本文中提及“本发明的化合物”时，也意在涵盖化合物的上述各种衍生物形式。
本发明的化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐及碱加成盐。适合的酸加成盐由形成药学上可接受盐的酸来形成。适合的碱加成盐由形成药学上可接受盐的碱来形成。适合的盐的综述参见Stahl及Wermuth的“Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use”(Wiley-VCH,2002)。用于制备本发明的化合物的药学上可接受的盐的方法为本领域技术人员已知的。
本发明的化合物可以溶剂合物(优选水合物)的形式存在，其中本发明的化合物包含作为所述化合物晶格的结构要素的极性溶剂，特别是例如水、甲醇或乙醇。极性溶剂特别是水的量可以化学计量比或非化学计量比存在。
本领域技术人员会理解，由于氮需要可用的孤对电子来氧化成氧化物，因此并非所有的含氮杂环都能够形成N-氧化物；本领域技术人员会识别能够形成N-氧化物的含氮杂环。本领域技术人员还会认识到叔胺能够形成N-氧化物。用于制备杂环和叔胺的N-氧化物的合成方法是本领域技术人员熟知的，包括用过氧酸如过氧乙酸和间氯过氧苯甲酸(MCPBA)、过氧化氢、烷基过氧化氢如叔丁基过氧化氢、过硼酸钠和双环氧乙烷(dioxirane)如二甲基双环氧乙烷来氧化杂环和叔胺。这些用于制备N-氧化物的方法已在文献中得到广泛描述和综述，参见例如：T.L.Gilchrist,Comprehensive Organic Synthesis,vol.7,pp748-750；A.R.Katritzky和A.J.Boulton,Eds.,Academic Press；以及G.W.H.Cheeseman和E.S.G.Werstiuk，Advances in Heterocyclic Chemistry,vol.22,pp 390-392,A.R.Katritzky和A.J.Boulton,Eds.,Academic Press。
在本发明的范围内还包括本发明的化合物的代谢物，即在给药本发明的化合物时体内形成的物质。这样的产物可由例如被给药的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、酶解等产生。因此，本发明包括本发明的化合物的代谢物，包括通过使本发明的化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的时间的方法制得的化合物。
本发明在其范围内进一步包括本发明的化合物的前药，其为自身可具有较小药理学活性或无药理学活性的本发明的化合物的某些衍生物，当被给药至身体中或其上时可通过例如水解裂解转化成具有期望活性的本发明的化合物。通常这样的前药会是所述化合物的官能团衍生物，其易于在体内转化成期望的治疗活性化合物。关于前药的使用的其他信息可参见“Pro-drugs as Novel Delivery Systems”，第14卷，ACS Symposium Series(T.Higuchi及V.Stella)及“Bioreversible Carriers in Drug Design,”PergamonPress,1987(E.B.Roche编辑，American Pharmaceutical Association)。本发明的前药可例如通过用本领域技术人员已知作为“前-部分(pro-moiety)(例如“Design ofProdrugs”，H.Bundgaard(Elsevier,1985)中所述)”的某些部分替代本发明的化合物中存在的适当官能团来制备。
本发明还涵盖含有保护基的本发明的化合物。在制备本发明的化合物的任何过程中，保护在任何有关分子上的敏感基团或反应基团可能是必需的和/或期望的，由此形成本发明的化合物的化学保护的形式。这可以通过常规的保护基实现，例如，在ProtectiveGroups in Organic Chemistry,ed.J.F.W.McOmie,Plenum Press,1973；和T.W.Greene&P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,1991中所述的那些保护基，这些参考文献通过援引加入本文。使用本领域已知的方法，可以在适当的后续阶段移除保护基。
术语“约”是指在所述数值的±10％范围内，优选±5％范围内，更优选±2％范围内。
化合物
本发明的一个目的在于提供一种提供一种式I的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药：
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物具有式I的结构：
Figure BDA0002589780190000071
其中，R1、R2、R3、R6、R7、R8、m和n如上文所定义。
根据本发明的一些实施方案，
Figure BDA0002589780190000072
选自
Figure BDA0002589780190000073
Figure BDA0002589780190000074
其中波浪线
Figure BDA0002589780190000076
表示基团与分子其余部分的连接点。
R19可为H或CH3；
R20可为-CO2R21；
R21为C1至C6的直链烷烃。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物具有式II的结构：
Figure BDA0002589780190000075
其中，R1、R2、R3、R6、R7、R8、m和n如上文所定义。
B为如下结构中的任意一种，
Figure BDA0002589780190000081
Figure BDA0002589780190000082
R22各自独立地选自-COOH、-COOCH3、-COOCH2CH3、-COOC(CH3)3、-COOCH2OCOOCH2CH3、-COOCH2OCOOCH(CH3)2、-COOCH(CH3)OCOOCH2CH3、-COOCH(CH3)OCOOCH(CH3)2、
Figure BDA0002589780190000083
-CONHSO2CH3、
Figure BDA0002589780190000084
-CH2COOH、-OCH3、-OCHF2、
Figure BDA0002589780190000085
-Cl、-F、-NHCOOCH3和-SO2NHCOCH3，
其中波浪线
Figure BDA0002589780190000086
表示基团与分子其余部分的连接点。
在符合本领域常识的基础上，可对上述各优选基团进行任意组合，从而得到本发明的各种优选实施方案。
药物组合物
本发明的另一目的在于提供一种药物组合物，其包含预防或治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，以及一种或多种药学上可接受的载体。
本发明中“药学上可接受的载体”是指与治疗剂一同给药的稀释剂、辅剂、赋形剂或媒介物，并且其在合理的医学判断的范围内适于接触人类和/或其它动物的组织而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或与合理的益处/风险比相应的其它问题或并发症。
当所述药物组合物通过静脉内给药时，水是示例性载体。还可以使用生理盐水和葡萄糖及甘油水溶液作为液体载体，特别是用于注射液。适合的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽糖、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇等。所述组合物还可以视需要包含少量的湿润剂、乳化剂或pH缓冲剂。口服制剂可以包含标准载体，如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。适合的药学上可接受的载体的实例如在Remington’s PharmaceuticalSciences(1990)中所述。
本发明的药物组合物可以系统地作用和/或局部地作用。为此目的，它们可以适合的途径给药，例如通过注射(如静脉内、动脉内、皮下、腹膜内、肌内注射，包括滴注)或经皮给药；或者通过口服、含服、经鼻、透粘膜、局部、以眼用制剂的形式或通过吸入给药。
对于这些给药途径，可以适合的剂型给药本发明的药物组合物。所述剂型包括但不限于片剂、胶囊剂、锭剂、硬糖剂、散剂、喷雾剂、乳膏剂、软膏剂、栓剂、凝胶剂、糊剂、洗剂、软膏剂、水性混悬剂、可注射溶液剂、酏剂、糖浆剂等。
本发明的化合物在药物组合物中的含量或用量可以是约0.001-1000mg，适合地是0.01-800mg，优选0.05-500mg，更优选0.1-350mg，特别优选0.5-100mg。
在一些实施方案中，本发明提供制备本发明的药物组合物的方法，所述方法包括将本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药与一种或多种药学上可接受的载体组合。
治疗方法和用途
本发明的另一目的在于提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，其用于预防或治疗血栓和栓塞相关疾病。
本发明的另一目的在于提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药在制备用于预防或治疗血栓和栓塞相关疾病的药物中的用途。
本发明的另一目的在于提供预防或治疗血栓和栓塞相关疾病的方法，其包括向有此需要的个体给药预防或治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，或者本发明的药物组合物。
根据本发明的一些实施方案，所述血栓和栓塞相关疾病为动脉粥样硬化疾病、心肌梗死、中风、缺血性脑血栓、外周动脉疾病、周围动脉闭塞性疾病、肺栓塞、深部静脉血栓形成、急性冠脉综合症或冠脉介入术后的血栓形成。
可调整给药方案以提供最佳所需响应。例如，可给药单次推注，可随时间给药数个分剂量，或可如治疗情况的急需所表明而按比例减少或增加剂量。要注意，剂量值可随要减轻的病况的类型及严重性而变化，且可包括单次或多次剂量。要进一步理解，对于任何特定个体，具体的给药方案应根据个体需要及给药组合物或监督组合物的给药的人员的专业判断来随时间调整。
所给药的本发明的化合物的量会取决于所治疗的个体、病症或病况的严重性、给药的速率、化合物的处置及处方医师的判断。一般而言，有效剂量在每日每kg体重约0.0001至约50mg，例如约0.01至约10mg/kg/日(单次或分次给药)。对70kg的人而言，这会合计为约0.007mg/日至约3500mg/日，例如约0.7mg/日至约700mg/日。在一些情况下，不高于前述范围的下限的剂量水平可以是足够的，而在其它情况下，仍可在不引起任何有害副作用的情况下采用较大剂量，条件是首先将所述较大剂量分成数个较小剂量以在一整天中给药。
除非另外说明，否则如本文中所使用，术语“治疗”意指逆转、减轻、抑制这样的术语所应用的病症或病况或者这样的病症或病况的一或多种症状的进展，或预防这样的病症或病况或者这样的病症或病况的一或多种症状。
如本文所使用的“个体”包括人或非人动物。示例性人个体包括患有疾病(例如本文所述的疾病)的人个体(称为患者)或正常个体。本发明中“非人动物”包括所有脊椎动物，例如非哺乳动物(例如鸟类、两栖动物、爬行动物)和哺乳动物，例如非人灵长类、家畜和/或驯化动物(例如绵羊、犬、猫、奶牛、猪等)。
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：本发明所涉及的一系列化合物，体外多项生物测试结果显示对于凝血因子(Factor)XIa，极低浓度即可产生明显的抑制活性作用，其中的一些代表化合物在低浓度的条件下即可显著延长人的全血液凝结时间，无论是1.5倍还是2.0倍凝结延长时间。都达到了可实用的标准。经典的大鼠动静脉血栓实验(AVST)验证了实施例3的化合物具有显著的生物体内抗血栓作用。所以，本发明的化合物具有较大的临床潜力。
附图说明
图1为实施例5、17、20化合物在大鼠动静脉血栓模型中的血栓抑制药效结果
具体实施方式
为了使本发明的目的和技术方案更加清楚，以下结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，均按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
在常规的合成法以及实施例和中间体合成例中，各缩写的含义如下表1所示。
Figure BDA0002589780190000101
Figure BDA0002589780190000111
表1字母缩写含义表
实施例1：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(甲基(2-(苯磺酰基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000112
第一步：(S)-4-(4-(苄氧基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
N-叔丁氧羰基-L-天冬氨酸-4-苄酯(6.0g，18.6mmol)，4-氨基苯甲酸叔丁酯(3.94g，20.4mmol)，EDCI(4.27g，22.27mmol)，HOBT(3.01g，22.27mmol)，三乙胺(5.62g，55.7mmol)溶于二氯甲烷(120mL)中，室温搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-4-(4-(苄氧基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(9.10g，产率98％)，白色固体。
第二步：(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基)-4-氧代丁酸的制备(S)-4-(4-(苄氧基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(9.10g，18.3mmol)溶于甲醇(100mL)，加入Pd/C(0.9g，10％Pd，50％wet)，氢气气氛下室温搅拌过夜，过滤浓缩得(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基)-4-氧代丁酸(7.16g，产率96％)。
第三步：N-甲基-2-(苯磺酰基)乙基-1-胺的制备
封管反应器中，苯基乙烯基砜(166mg，1mmol)，甲胺盐酸盐(140mg，2mmol)溶于甲醇(3mL)，加入三乙胺(0.42mL，3mmol)，30℃搅拌过夜，浓缩反应液，柱层析纯化得N-甲基-2-(苯磺酰基)乙基-1-胺(171mg，产率86％)，浅黄色固体。
第四步：(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-(甲基(2-(苯磺酰基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)
苯甲酸叔丁酯的制备
N-甲基-2-(苯磺酰基)乙基-1-胺(100mg，0.50mmol)，(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基)-4-氧代丁酸(200mg，0.49mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.59mL)，DIPEA(0.59mL)溶于乙酸乙酯/DMF(4mL/1mL)中，加热至55℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-(甲基(2-(苯磺酰基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(184mg，产率64％)，白色固体。
第五步：(S)-4-(2-氨基-4-(甲基(2-(苯磺酰基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯盐
酸盐的制备
冰浴下，(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-(甲基(2-(苯磺酰基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(177mg，0.3mmol)溶于四氢呋喃(3mL)，加入HCl乙酸乙酯溶液(3mol/L，10mL)，0-5℃搅拌7小时，浓缩得(S)-4-(2-氨基-4-(甲基(2-(苯磺酰基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯盐酸盐(160mg)，白色固体。
第六步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(甲基(2-(苯磺酰基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-(2-氨基-4-(甲基(2-(苯磺酰基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯盐酸盐(160mg，约0.3mmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酸(103mg，0.38mol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.36mL)，DIPEA(1.0mL)溶于乙酸乙酯/DMF(5mL/1mL)中，加热至55℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(甲基(2-(苯磺酰基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(78mg，产率35％)，白色固体。
第七步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(甲基(2-(苯磺酰基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸的制备
(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(甲基(2-(苯磺酰基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(78mg，0.105mmol)加入HCl 1,4-二氧六环溶液(4mol/L，3mL)，室温搅拌3小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(甲基(2-(苯磺酰基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸(56mg，产率78％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ12.73(brs,1H),10.44(d,J＝8.4Hz,1H),9.88(d,J＝4.0Hz,1H),8.75(d,J＝7.6Hz,1H),7.97-7.89(m,5H),7.76-7.72(m,3H),7.68-7.63(m,3H),6.86-6.77(m,2H),4.84-4.78(m,1H),3.78-3.74(m,1H),3.65-3.61(m,1H),3.56-3.47(m,2H),2.90(s,2H),2.73-2.61(m,3H).
MS m/z(ESI):684[M+1]+。
实施例2：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000131
第一步：(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酸叔丁酯的制备
(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-L-天冬氨酸(411mg，1mmol)，1-甲基哌嗪(0.11mL，1mmol)，HATU(402mg，1.1mmol)，DIPEA(0.5mL)溶于二氯甲烷(10mL)中，室温搅拌3小时。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酸叔丁酯(490mg，产率100％)，白色固体。
第二步：(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酸的制备
(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酸叔丁酯(490mg，1mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)，加入三氟乙酸(5mL)，室温搅拌2小时，浓缩反应液得(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酸(430mg，产率99％)，白色固体。
第三步：(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酸(430mg，1mmol)，4-氨基苯甲酸叔丁酯(256mg，1.3mmol)，HATU(503mg，1.3mmol)，DIPEA(2mL)溶于二氯甲烷(10mL)中，室温搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(478mg，产率78％)，白色固体。
第四步：(S)-4-(2-氨基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(478mg，0.78mmol)溶解于二氯甲烷(8mL)，加入二乙胺(5mL)，室温搅拌1小时，浓缩反应液，残留物经柱层析纯化得(S)-4-(2-氨基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(250mg，产率82％)，浅黄色固体。
第五步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-(2-氨基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(250mg，0.64mmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酸(207mg，0.77mmol)，HATU(293mg，0.77mmol)，DIPEA(0.6mL)溶于二氯甲烷(10mL)中，室温搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(328mg，产率80％)，白色固体。
第六步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸的制备
(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(100mg，0.16mmol)溶解于二氯甲烷(4mL)，加入三氟乙酸(2mL)，室温下搅拌2小时，浓缩反应液，残留物经柱层析纯化得(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸(51mg，产率55％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ10.36(s,1H),9.87(s,1H),8.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.95(t,J＝8.0Hz,1H),7.88(d,J＝8.4Hz,2H),7.68-7.64(m,3H),6.84(d,J＝16Hz,1H),6.70(d,J＝16Hz,1H),5.24-5.19(m,1H),3.33-3.30(m,8H),3.20-3.09(m,1H),3.04-2.96(m,1H),2.76-2.67(m,3H).
MS m/z(ESI):585[M+H]+。
实施例3：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)苯甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000151
第一步：(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸的制备
(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-L-天冬氨酸(411mg，1mmol)，哌啶(0.105mL，1.1mmol)，HATU(402mg，1.1mmol)，DIPEA(0.5mL)溶于二氯甲烷(10mL)中，室温搅拌3小时。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸(480mg，产率100％)，白色固体。
第二步：(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸叔丁酯的制备
(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸(480mg，1mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)，加入三氟乙酸(5mL)，室温搅拌2小时，浓缩反应液得(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸叔丁酯(420mg，产率99％)，白色固体。
第三步：(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸叔丁酯(420mg，1mmol)，4-氨基苯甲酸叔丁酯(256mg，1.3mmol)，HATU(503mg，1.3mmol)，DIPEA(2mL)溶于二氯甲烷(10mL)中，室温搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(515mg，产率86％)，白色固体。
第四步：(S)-4-(2-氨基-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(515mg，0.86mmol)溶解于二氯甲烷(8mL)，加入二乙胺(5mL)，室温搅拌1小时，浓缩反应液，残留物经柱层析纯化得(S)-4-(2-氨基-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(243mg，产率75％)，浅黄色固体。
第五步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-(2-氨基-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(243mg，0.65mmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酸(210mg，0.78mmol)，HATU(296mg，0.78mmol)，DIPEA(0.6mL)溶于二氯甲烷(10mL)中，室温搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(340mg，产率84％)，白色固体。
第六步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)苯甲酸的制备
(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(200mg，0.32mmol)溶解于二氯甲烷(4mL)，加入三氟乙酸(2.5mL)，室温下搅拌2小时，浓缩反应液，残留物经柱层析纯化得(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)苯甲酸(124mg，产率68％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ10.42(s,1H),9.86(s,1H),8.76(d,J＝7.6Hz,1H),7.93(t,J＝8.4Hz,1H),7.88(d,J＝8.8Hz,2H),7.73(d,J＝9.2Hz,1H),7.64(dd,J＝1.2,8.6Hz,1H),6.82(d,J＝16Hz,1H),6.77(d,J＝16.4Hz,1H),4.87-4.82(m,1H),3.45-3.39(m,4H),2.86-2.81(m,1H),2.76-2.70(m,1H),1.58-1.54(m,2H),1.50-1.46(m,2H),1.45-1.35(m,2H).
MS m/z(ESI):570[M+H]+。
实施例4：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000161
第一步：(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-吗啉-4-氧代丁酸叔丁酯的制备
(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-L-天冬氨酸(418mg，1mmol)，吗啡啉(0.095mL，1.1mmol)，HATU(412mg，1.1mmol)，DIPEA(1mL)溶于二氯甲烷(10mL)中，室温搅拌2小时。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-吗啉-4-氧代丁酸叔丁酯(480mg，产率100％)，白色固体。
第二步：(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-吗啉-4-氧代丁酸的制备
(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-吗啉-4-氧代丁酸叔丁酯(480mg，1mmol)溶解于二氯甲烷(6mL)，加入三氟乙酸(3mL)，室温搅拌2.5小时，浓缩反应液得(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-吗啉-4-氧代丁酸(420mg，产率99％)，白色固体。
第三步：(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-吗啉-4-氧代丁酸(420mg，1mmol)，4-氨基苯甲酸叔丁酯(256mg，1.3mmol)，HATU(503mg，1.3mmol)，DIPEA(2mL)溶于二氯甲烷(10mL)中，室温搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(527mg，产率88％)，白色固体。
第四步：(S)-4-(2-氨基-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(527mg，0.88mmol)溶解于二氯甲烷(8mL)，加入二乙胺(6mL)，室温搅拌1小时，浓缩反应液，残留物经柱层析纯化得(S)-4-(2-氨基-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(330mg，产率99％)，黄色固体。
第五步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-(2-氨基-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(330mg，0.875mmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酸(283mg，1.05mmol)，HATU(399mg，1.05mmol)，DIPEA(1mL)溶于二氯甲烷(12mL)中，室温搅拌4小时。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(528mg，产率96％)，黄色固体。
第六步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸的制备
(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(200mg，0.32mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)，加入三氟乙酸(3mL)，室温下搅拌2小时，浓缩反应液，残留物经柱层析纯化得(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸(95mg，产率52％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ10.47(s,1H),9.87(s,1H),8.80(d,J＝7.2Hz,1H),7.93(t,J＝8.0Hz,1H),7.88(d,J＝9.2Hz,2H),7.73(d,J＝8.8Hz,2H),7.63(dd,J＝1.2,8.4Hz,1H),6.82(d,J＝16Hz,1H),6.77(d,J＝16Hz,1H),4.85(q,J＝6.8Hz,1H),3.60-3.52(m,4H),3.48-3.41(m,4H),2.89-2.83(m,1H),2.79-2.73(m,1H).
MS m/z(ESI):572[M+H]+。
实施例5：(S,E)-4-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000181
第一步：(S)-4-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基)-4-氧代丁酸(203mg，0.5mmol)，1-乙酰基哌嗪(0.125mL，1.0mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.59mL)，DIPEA(0.5mL)溶于乙酸乙酯(6mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-4-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(244mg，产率94％)，白色固体。
第二步：(S)-4-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-氨基-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
冰水浴下，(S)-4-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(160mg，0.31mmol)溶解于四氢呋喃(2mL)，加入HCl乙酸乙酯溶液(3mol/L，5mL)，冰水浴下搅拌5小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S)-4-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-氨基-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(52mg，产率45％)，白色固体。
第三步：(S,E)-4-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-氨基-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(52mg，0.125mmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酸(37mg，0.138mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.147mL)，DIPEA(0.1mL)溶于乙酸乙酯(6mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经反相柱层析纯化得(S,E)-4-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(52mg，产率62％)，白色固体。
第四步：(S,E)-4-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸的制备
(S,E)-4-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(52mg，0.078mmol)溶解于二氯甲烷(2.5mL)，加入三氟乙酸(0.5mL)，室温下搅拌3小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S,E)-4-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸(40mg，产率84％)，黄色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ10.48(s,1H),9.88(s,1H),8.81(d,J＝7.2Hz,1H),7.95(t,J＝8.4Hz,1H),7.89(d,J＝9.2Hz,2H),7.74(d,J＝8.8Hz,2H),7.66(dd,J＝1.0,9.0Hz,1H),6.83(d,J＝22.4Hz,1H),6.77(d,J＝22.4Hz,1H),4.87(q,J＝6.8Hz,1H),3.50-3.41(m,8H),2.92-2.87(m,1H),2.82-2.77(m,1H),2.03(d,J＝5.2Hz,3H).
MS m/z(ESI):613[M+H]+。
实施例6：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000191
第一步：(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基)-4-氧代丁酸(205mg，0.5mmol)，N,N-二甲基哌啶-4-胺(0.117mL，1.0mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.59mL)，DIPEA(0.5mL)溶于乙酸乙酯(6mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(260mg，产率100％)，白色固体。
第二步：(S)-4-(2-氨基-4-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
冰水浴下，(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(260mg，0.5mmol)溶解于四氢呋喃(2mL)，加入HCl乙酸乙酯溶液(3mol/L，5mL)，冰水浴下搅拌5小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S)-4-(2-氨基-4-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(99mg，产率47％)，白色固体。
第三步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-(2-氨基-4-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(99mg，0.237mmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酸(67mg，0.25mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.28mL)，DIPEA(0.2mL)溶于乙酸乙酯(6mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经反相柱层析纯化得(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(39mg，产率25％)，白色固体。
第四步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸的制备
(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸叔丁酯(39mg，0.058mmol)溶解于二氯甲烷(2.5mL)，加入三氟乙酸(0.5mL)，室温下搅拌3小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸(20mg，产率56％)，黄色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ12.64(brs,1H),10.46(s,1H),9.87(s,1H),8.83-8.77(m,1H),7.94(t,J＝8.2Hz,1H),7.89(d,J＝8.4Hz,2H),7.74(d,J＝8.4Hz,2H),7.65(d,J＝8.4Hz,1H),6.82(d,J＝16Hz,1H),6.76(d,J＝16Hz,1H),4.90-4.83(m,1H),4.49-4.44(m,1H),4.04-3.99(m,1H),3.01-2.74(m,4H),2.69(s,6H),2.01-1.97(m,3H),1.58-1.53(m,1H),1.35-1.31(m,1H).
MS m/z(ESI):613[M+H]+。
实施例7：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-吗啉-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000211
第一步：(S)-4-(5-(苄氧基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
N-叔丁氧羰基-L-谷氨酸5-苄酯(6.0g，17.8mmol)，4-氨基苯甲酸叔丁酯(3.78g，19.6mmol)，EDCI(4.09g，21.34mmol)，HOBT(2.88g，21.34mmol)，三乙胺(5.39g，53.4mmol)溶于二氯甲烷(120mL)中，室温搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-4-(5-(苄氧基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(9.01g，产率99％)，白色固体。
第二步：(S)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-5-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基)-5-氧代戊酸的制备
(S)-4-(5-(苄氧基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(9.01g，17.6mmol)溶于甲醇(100mL)，加入10％Pd/C(0.9g，10％Pd，50％wet)，氢气气氛下室温搅拌过夜，过滤浓缩得(S)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-5-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基)-5-氧代戊酸(7.13g，产率96％)。
第三步：(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-5-吗啉-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-5-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基)-5-氧代戊酸(218mg，0.5mmol)，吗啡啉(0.088mL，1.0mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.60mL)，DIPEA(0.6mL)溶于乙酸乙酯(5mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-5-吗啉-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(244mg，产率96％)，黄色固体。
第四步：(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-5-吗啉-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
冰水浴下，(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-5-吗啉-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(244mg，0.48mmol)溶解于四氢呋喃(3mL)，加入HCl乙酸乙酯溶液(3mol/L，5mL)，冰水浴下搅拌6小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-5-吗啉-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(123mg，产率65％)，黄色固体。
第五步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-吗啉-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-5-吗啉-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(123mg，0.31mmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酸(90mg，0.335mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.37mL)，DIPEA(0.3mL)溶于乙酸乙酯(6mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经反相柱层析纯化得(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-吗啉-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(133mg，产率65.8％)，白色固体。
第六步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-吗啉-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸的制备
(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-吗啉-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(133mg，0.21mmol)溶解于四氢呋喃(2mL)，加入HCl 1,4-二氧六环溶液(3mL)，室温下搅拌5小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-吗啉-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸(58mg，产率47％)，黄色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ12.68(s,1H),10.49(s,1H),9.88(s,1H),8.80(d,J＝7.2Hz,1H),7.96(t,J＝8.4Hz,1H),7.91(d,J＝8.8Hz,2H),7.72(d,J＝8.8Hz,2H),7.66(dd,J＝1.2,8.4Hz,1H),6.84(d,J＝18Hz,1H),6.80(d,J＝18Hz,1H),4.87(q,J＝7.1Hz,1H),3.55-3.52(m,4H),3.43-3.40(m,4H),2.42-2.37(m,2H),2.03-2.00(m,1H),1.94-1.84(m,1H).
MS m/z(ESI):586[M+H]+。
实施例8：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-氧代-5-(哌啶-1-基)戊酰胺基)苯甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000221
第一步：(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-5-氧代-5-(哌啶-1-基)戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-5-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基)-5-氧代戊酸(213mg，0.5mmol)，哌啶(0.1mL，1.0mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.59mL)，DIPEA(0.59mL)溶于乙酸乙酯(6mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-5-氧代-5-(哌啶-1-基)戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(240mg，产率98％)，黄色固体。
第二步：(S)-4-(2-氨基-5-氧代-5-(哌啶-1-基)戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
冰水浴下，(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-5-氧代-5-(哌啶-1-基)戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(240mg，0.48mmol)溶解于四氢呋喃(3mL)，加入HCl乙酸乙酯溶液(3mol/L，5mL)，冰水浴下搅拌6小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S)-4-(2-氨基-5-氧代-5-(哌啶-1-基)戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(143mg，产率73％)，白色固体。
第三步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-氧代-5-(哌啶-1-基)戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-(2-氨基-5-氧代-5-(哌啶-1-基)戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(143mg，0.37mmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酸(108mg，0.40mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.435mL)，DIPEA(0.4mL)溶于乙酸乙酯(5mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-氧代-5-(哌啶-1-基)戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(115mg，产率49％)，淡黄色固体。
第四步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-氧代-5-(哌啶-1-基)戊酰胺基)苯甲酸的制备
(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-氧代-5-(哌啶-1-基)戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(115mg，0.18mmol)溶解于四氢呋喃(2mL)，加入HCl1,4-二氧六环溶液(3mL)，室温下搅拌5小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-氧代-5-(哌啶-1-基)戊酰胺基)苯甲酸(55mg，产率52％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ12.69(s,1H),10.45(s,1H),9.88(s,1H),8.77(d,J＝7.6Hz,1H),7.96(t,J＝8.2Hz,1H),7.91(d,J＝9.2Hz,2H),7.72(d,J＝8.8Hz,2H),7.66(dd,J＝1.0,8.6Hz,1H),6.85(d,J＝18.8Hz,1H),6.81(d,J＝18.8Hz,1H),4.50(q,J＝7.1Hz,1H),3.41(t,J＝5.4Hz,2H),3.30(m,2H),2.38(t,J＝8.0Hz,2H),2.04-1.95(m,1H),1.93-1.87(m,1H),1.57-1.54(m,2H),1.51-1.44(m,2H),1.40-1.36(m,2H).
MS m/z(ESI):584[M+H]+。
实施例9：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000241
第一步：(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-5-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基)-5-氧代戊酸(216mg，0.51mmol)，1-甲基哌嗪(0.11mL，1.0mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.60mL)，DIPEA(0.6mL)溶于乙酸乙酯(5mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(250mg，产率99％)，浅黄色固体。
第二步：(S)-4-(2-氨基-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
冰水浴下，(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(250mg，0.5mmol)溶解于四氢呋喃(2mL)，加入HCl乙酸乙酯溶液(3mol/L，6mL)，冰水浴下搅拌6小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S)-4-(2-氨基-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(113mg，产率56％)，白色固体。
第三步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-(2-氨基-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(113mg，0.28mmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酸(83mg，0.31mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.33mL)，DIPEA(0.3mL)溶于乙酸乙酯(5mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(89mg，产率49％)，淡黄色固体。
第四步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸的制备
(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁酯(89mg，0.136mmol)溶解于乙腈(2mL)，加入HCl1,4-二氧六环溶液(4mol/L，3mL)，室温下搅拌3小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸(45mg，产率55％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ10.51(s,1H),9.88(s,1H),8.81(d,J＝8.0Hz,1H),7.96(t,J＝8.2Hz,1H),7.91(d,J＝8.8Hz,2H),7.73(d,J＝8.8Hz,2H),7.66(dd,J＝1.2,8.8Hz,1H),6.85(d,J＝20Hz,1H),6.81(d,J＝20Hz,1H),4.51(q,J＝7.6Hz,1H),3.53-3.49(m,4H),2.69-2.65(m,4H),2.46-2.41(m,4H),2.25-2.16(m,1H),2.14-2.06(m,1H),2.01-1.92(m,1H).
MS m/z(ESI):599[M+H]+。
实施例10：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000251
第一步：(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-((2-(叔丁氧羰基)-1H-吲哚-5-基)氨基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酸(225mg，0.5mmol)，哌啶(0.1mL，1.0mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.59mL)，DIPEA(0.6mL)溶于乙酸乙酯(5mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(250mg，产率99％)，浅黄色固体。
第二步：(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯的制备
冰水浴下，(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(250mg，0.5mmol)溶解于四氢呋喃(3mL)，加入HCl乙酸乙酯溶液(3mol/L，6mL)，冰水浴下搅拌8小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(75mg，产率36％)，黄色固体。
第三步：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(75mg，0.184mmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酸(54mg，0.20mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.22mL)，DIPEA(0.2mL)溶于乙酸乙酯(5mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(86mg，产率70％)，白色固体。
第四步：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备
(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(86mg，0.13mmol)溶解于二氯甲烷(2mL)，加入三氟乙酸(3mL)，室温下搅拌5小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸(42mg，产率53％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.51(brs,1H),9.99(s,1H),9.93(s,1H),9.92(s,1H),8.78(d,J＝7.6Hz,1H),8.01(s,1H),7.99(t,J＝8.2Hz,1H),7.70(d,J＝8.4Hz,1H),7.37(s,2H),6.96-6.92(m,1H),6.88-6.84(m,2H),4.93-4.88(m,1H),3.53-3.44(m,4H),2.95-.86(m,1H),2.81-2.73(m,1H),1.66-1.59(m,2H),1.58-1.50(m,2H),1.46-1.41(m,2H).
MS m/z(ESI):609[M+H]+。
中间体(S)-4-((2-(叔丁氧羰基)-1H-吲哚-5-基)氨基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酸(10-1)的制备
Figure BDA0002589780190000261
第一步：(S)-5-(4-(苄氧基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯的制备
N-叔丁氧羰基-L-天冬氨酸4-苄酯(6.0g，18.6mmol)，5-氨基-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(4.3g，18.6mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，14.7g)，DIPEA(7.2g)溶于乙酸乙酯(250mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-5-(4-(苄氧基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(9.98g，产率99％)，白色固体。
第二步：(S)-4-((2-(叔丁氧羰基)-1H-吲哚-5-基)氨基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酸的制备
(S)-5-(4-(苄氧基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(9.98g，18.6mmol)溶于甲醇(200mL)，加入10％Pd/C(0.5g)，氢气气氛下室温搅拌过夜，过滤浓缩得(S)-4-((2-(叔丁氧羰基)-1H-吲哚-5-基)氨基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酸(8.01g，产率96％)。
中间体5-氨基吲哚-2-甲酸叔丁酯(10-5)的制备
Figure BDA0002589780190000271
第一步：5-硝基吲哚-2-甲酸(7.0g，34mmol)溶于四氢呋喃(140mL)，加入氯化亚砜(7mL，96.5mmol)与DMF(0.1mL)，加热回流3小时，冷至室温，浓缩得到5-硝基吲哚-2-甲酰氯，直接用于下步反应。
第二步：5-硝基吲哚-2-甲酰氯溶解于四氢呋喃(100mL)，与此溶液中滴加叔丁醇钾四氢呋喃溶液(1mol/L，75mL)，室温搅拌1小时。加水淬灭反应，1N盐酸调节pH至中性，乙酸乙酯萃取。有机层用无水硫酸镁干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得5-硝基吲哚-2-甲酸叔丁酯(7.57g，产率85％)。
第三步：5-硝基吲哚-2-甲酸叔丁酯(7.57g，28.9mmol)溶于四氢呋喃(150mL)，加入Pd/C(0.7g,10％Pd,50％wet)，氢气气氛下室温搅拌过夜。过滤浓缩得5-氨基吲哚-2-甲酸叔丁酯(6.51g，产率97％)。
实施例11：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000272
第一步：(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-((2-(叔丁氧羰基)-1H-吲哚-5-基)氨基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酸(446mg，1mmol)，1-甲基哌嗪(0.225mL，2.0mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，1.06mL)，DIPEA(1mL)溶于乙酸乙酯(10mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(530mg，产率100％)，浅黄色固体。
第二步：(S)-5-(2-氨基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯的制备
冰水浴下，(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(530mg，1.0mmol)溶解于四氢呋喃(5mL)，加入HCl乙酸乙酯溶液(3mol/L，10mL)，冰水浴下搅拌8小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S)-5-(2-氨基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(191mg，产率44％)，黄色固体。
第三步：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-5-(2-氨基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(191mg，0.44mmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酸(122mg，0.45mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.545mL)，DIPEA(0.5mL)溶于乙酸乙酯(9mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(100mg，产率33％)，白色固体。
第四步：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备
(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(100mg，0.147mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)，加入三氟乙酸(3mL)，室温下搅拌5小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸(45mg，产率49％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.70(brs,1H),10.03(s,1H),9.86(s,1H),8.76(d,J＝7.2Hz,1H),8.02(s,1H),7.95(t,J＝8.0Hz,1H),7.66(dd,J＝1.0,8.6Hz,1H),7.37(s,2H),7.04(d,J＝2.0Hz,1H),6.85-6.77(m,2H),4.89-4.83(m,1H),3.55-3.49(m,8H),2.89-2.85(m,1H),2.79-2.73(m,1H),2.46-2.35(m,3H).
MS m/z(ESI):624[M+H]+。
实施例12：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000291
第一步：(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-((2-(叔丁氧羰基)-1H-吲哚-5-基)氨基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酸(223mg，0.5mmol)，吗啡啉(0.088mL，1mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.59mL)，DIPEA(0.5mL)溶于乙酸乙酯(10mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(230mg，产率90％)，浅黄色固体。
第二步：(S)-5-(2-氨基-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯的制备
冰水浴下，(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(230mg，0.45mmol)溶解于四氢呋喃(2.5mL)，加入HCl乙酸乙酯溶液(3mol/L，9mL)，冰水浴下搅拌8小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S)-5-(2-氨基-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(135mg，产率64％)，黄色固体。
第三步：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-5-(2-氨基-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(135mg，0.325mmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酸(91mg，0.34mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.385mL)，DIPEA(0.3mL)溶于乙酸乙酯(9mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(85mg，产率39％)，白色固体。
第四步：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备
(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(85mg，0.128mmol)溶解于二氯甲烷(2mL)，加入三氟乙酸(2mL)，室温下搅拌5小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸(40mg，产率51％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.52(s,1H),9.98(s,1H),9.87(s,1H),8.74(d,J＝7.2Hz,1H),7.98(s,1H),7.93(t,J＝8.2Hz,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,1H),7.33(s,2H),6.95(s,1H),6.81(s,2H),4.86(q,J＝7.2Hz,1H),3.57-3.55(m,2H),3.53-3.50(m,2H),3.48-3.46(m,2H),3.43-3.41(m,2H),2.91-2.82(m,1H),2.77-2.67(m,1H).
MS m/z(ESI):611[M+H]+。
实施例13：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000301
第一步：(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯的制备
(S)-4-((1,2-二(叔丁氧羰基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)氨基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酸(225mg，0.41mmol)，哌啶(0.1mL，1.0mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.59mL)，DIPEA(0.6mL)溶于乙酸乙酯(5mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯(250mg，产率99％)，浅黄色固体。
第二步：(S)-5-(2-氨基-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯的制备
冰水浴下，(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯(250mg，0.4mmol)溶解于四氢呋喃(2.5mL)，加入HCl乙酸乙酯溶液(3mol/L，6mL)，冰水浴下搅拌8小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S)-5-(2-氨基-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(135mg，产率79％)，白色固体。
第三步：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-5-(2-氨基-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(135mg，0.325mmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酸(91mg，0.34mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.385mL)，DIPEA(0.3mL)溶于乙酸乙酯(5mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(85mg，产率39％)，白色固体。
第四步：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸的制备
(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(85mg，0.13mmol)溶解于二氯甲烷(2mL)，加入三氟乙酸(3mL)，室温下搅拌5小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸(40mg，产率51％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ10.13(s,1H),9.99(s,1H),9.77(s,1H),8.63(d,J＝7.2Hz,1H),8.05(s,1H),7.95(d,J＝1.2Hz,1H),7.84(t,J＝8.4Hz,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,1H),7.42-7.18(m,1H),6.73-6.66(m,2H),4.77-4.72(m,1H),3.29-3.27(m,4H),2.78-2.71(m,1H),2.66-2.57(m,1H),1.48-1.44(m,2H),1.42-1.36(m,2H),1.35-1.25(m,2H).
MS m/z(ESI):610[M+H]+。
中间体(S)-4-((1,2-二(叔丁氧羰基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)氨基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酸(13-1)的制备
Figure BDA0002589780190000311
第一步：(S)-5-(4-(苄氧基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯的制备
N-叔丁氧羰基-L-天冬氨酸4-苄酯(2.68g，8.3mmol)，5-氨基-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯(2.76g，8.3mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，6.61g)，DIPEA(3.21g)溶于乙酸乙酯(50mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-5-(4-(苄氧基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯(5.20g，产率98％)，白色固体。
第二步：(S)-4-((1,2-二(叔丁氧羰基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)氨基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酸的制备
(S)-5-(4-(苄氧基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯(5.20g，8.1mmol)溶于甲醇(200mL)，加入10％Pd/C(0.5g)，氢气气氛下室温搅拌过夜，过滤浓缩得(S)-4-((1,2-二(叔丁氧羰基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)氨基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酸(4.20g，产率94％)。
中间体5-氨基-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯(13-5)的制备
Figure BDA0002589780190000321
第一步：冰浴下，2,2,2-三氯乙酰亚胺酸甲酯(7.91g，44.8mmol)滴加入4-硝基邻苯二胺(6.168g，40.3mmol)溶解于乙酸(83mL)的溶液中，搅拌5小时，过滤收集析出的固体，得到5-硝基-2-(三氯甲基)-1H-苯并[d]咪唑(5.80g，产率51.4％)，白色固体。
第二步：5-硝基-2-(三氯甲基)-1H-苯并[d]咪唑(550mg，1.96mmol)加入1N NaOH水溶液(50mL)中，室温搅拌4小时。过滤。滤液用3N盐酸调节至pH 4，过滤收集析出的固体，得到5-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸(377mg，产率92％)
第三步：5-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸(1.82g，8.75mmol)，DMAP(2.135g，17.5mmol)溶解于二氯甲烷(100mL)，滴入Boc2O(7.63g，35mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液，室温搅拌过夜。反应液用1N稀盐酸，饱和碳酸氢钠水溶液，饱和食盐水各洗涤一次，有机层用无水硫酸镁干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得5-硝基-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯(1.95g，产率62％)。
第四步：5-硝基-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯(800mg，2.2mmol)溶解于甲醇/四氢呋喃(10mL/5mL)。加入Raney Ni(80mg)，氢气气氛下搅拌过夜，过滤浓缩得5-氨基-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯(719mg，产率98％)。
实施例14：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000322
第一步：(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-((1,2-二(叔丁氧羰基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)氨基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酸(550mg，1mmol)，吗啡啉(0.20mL，2.0mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，1mL)，DIPEA(1mL)溶于乙酸乙酯(8mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(520mg，产率100％)，浅黄色固体。
第二步：(S)-5-(2-氨基-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯的制备
冰水浴下，(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(520mg，1.0mmol)溶解于四氢呋喃(5mL)，加入HCl乙酸乙酯溶液(3mol/L，10mL)，冰水浴下搅拌8小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S)-5-(2-氨基-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(218mg，产率52％)，白色固体。
第三步：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-5-(2-氨基-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(218mg，0.52mmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酸(141mg，0.52mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.62mL)，DIPEA(0.6mL)溶于乙酸乙酯(10mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(165mg，产率48％)，白色固体。
第四步：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸的制备
(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(81mg，0.121mmol)溶解于二氯甲烷(2mL)，加入三氟乙酸(1mL)，室温下搅拌2小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-吗啉-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸(55mg，产率74％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ10.49(s,1H),10.35(s,1H),9.88(s,1H),9.27(s,1H),8.79(t,J＝7.4Hz,1H),8.19(d,J＝1.2Hz,1H),7.98-.29(m,1H),7.65(dd,J＝1.2,8.2Hz,1H),7.63-7.58(m,1H),7.46(dd,J＝2.0,8.8Hz,1H),6.82(t,J＝16.6Hz,2H),4.90-4.85(m,1H),3.58(brs,2H),3.53(brs,2H),3.47(brs,2H),3.43(brs,2H),2.90-2.84(m,1H),2.79-2.70(m,1H).
MS m/z(ESI):612[M+H]+。
实施例15：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000341
第一步：(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-4-((1,2-二(叔丁氧羰基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)氨基)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酸(547mg，1mmol)，1-甲基哌嗪(0.20mL，2.0mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，1mL)，DIPEA(1mL)溶于乙酸乙酯(8mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(530mg，产率100％)，浅黄色固体。
第二步：(S)-5-(2-氨基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯的制备
冰水浴下，(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(530mg，1.0mmol)溶解于四氢呋喃(5mL)，加入HCl乙酸乙酯溶液(3mol/L，10mL)，冰水浴下搅拌8小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S)-5-(2-氨基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(198mg，产率46％)，白色固体。
第三步：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-5-(2-氨基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(198mg，0.46mmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酸(125mg，0.47mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.545mL)，DIPEA(0.5mL)溶于乙酸乙酯(8mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(51mg，产率16％)，白色固体。
第四步：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸的制备
(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(51mg，0.075mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)，加入三氟乙酸(4mL)，室温下搅拌5小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸(35mg，产率75％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ10.39(s,1H),9.87(s,1H),9.80(d,J＝7.6Hz,1H),8.21(s,1H),7.94(t,J＝8.2Hz,1H),7.64(d,J＝8.8Hz,1H),7.61(d,J＝8.8Hz,1H),7.44(d,J＝8.0Hz,1H),6.83(d,J＝16Hz,1H),6.78(d,J＝16Hz,1H),4.88(q,J＝6.8Hz,1H),3.77(t,J＝5.0Hz,3H),3.11(t,J＝4.8Hz,3H),3.08-3.00(m,2H),2.96-2.89(m,1H),2.82-2.76(m,1H),2.70(s,3H).
MS m/z(ESI):625[M+H]+。
实施例16：5-((S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000351
第一步：(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯的制备
(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸(111mg，0.33mmol)，5-氨基-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯(100mg，0.30mmol)，HATU(126mg，0.33mmol)，DIPEA(0.16mL)加入二氯甲烷(3mL)中，室温搅拌2小时，加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯(165mg，产率77％)。
第二步：(S)-5-(2-氨基-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯的制备
冰浴下，(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯(133mg，0.204mmol)溶于四氢呋喃(3mL)，加入HCl乙酸乙酯溶液(3mol/L，5mL)，冰水浴下搅拌5小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S)-5-(2-氨基-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(70mg，产率76％)。
第三步：5-((S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-5-(2-氨基-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(70mg，0.155mmol)，(1r,4r)-4-氰基环己烷-1-甲酸(25mg，0.16mmol)，HATU(80mg，0.21mmol)，DIPEA(0.1mL)加入二氯甲烷(3mL)中，室温搅拌2小时，加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得5-((S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(52mg，产率57％)。
第四步：5-((S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸的制备
5-((S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(52mg，0.089mmol)溶于二氯甲烷中(3mL)，加入三氟乙酸(2mL)，室温搅拌2小时，浓缩，反相柱层析纯化得5-((S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸(35mg，产率74％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.57(s,1H),9.96(s,1H),8.15(d,J＝8.0Hz,1H),7.98(s,1H),7.62-7.53(m,2H),7.29-7.27(m,2H),7.25(s,1H),7.17(d,J＝8.0Hz,1H),7.11(s,1H),4.75-4.69(m,1H),3.10(s,3H),2.66-2.61(m,2H),2.39-2.07(m,2H),2.27-2.17(m,2H),2.01-1.93(m,5H),1.87-1.78(m,2H),1.60-1.30(m,3H).
MS m/z(ESI):531[M+H]+
中间体(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸(16-1)的制备
Figure BDA0002589780190000361
第一步：(S)-3-(3-溴苯基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸的制备
L-3-溴苯丙氨酸(15g，61.5mmol)加入1,4-二氧六环/水(1/1，200mL)中，加入二碳酸二叔丁酯(15.75mL，68.6mmol)，碳酸氢钠(15.75g，187.5mmol)，室温搅拌4小时。冰浴冷却下，水相用2N稀盐酸调至pH 3，减压蒸除1,4-二氧六环，残余物用乙酸乙酯萃取，合并萃取液，用饱和食盐水洗至中性，无水硫酸镁干燥，减压蒸除乙酸乙酯得(S)-3-(3-溴苯基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸(19g，产率90％)，白色固体。
第二步：(S)-3-(3-溴苯基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸苄酯的制备
(S)-3-(3-溴苯基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸(19g，55.2mmol)溶于DMF(100mL)，加入碳酸铯(15g，46mmol)，滴加溴化苄(7mL，58.9mmol)，室温搅拌4小时。加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取，合并萃取液，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，减压蒸除乙酸乙酯，残余物用正己烷打浆得到(S)-3-(3-溴苯基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸苄酯(18.1g，产率76％)，白色固体。
第三步：(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(甲基氨基)苯基)丙酸苄酯的制备
封管中，氮气气氛下，(S)-3-(3-溴苯基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸苄酯(11.7g，27mmol)，甲胺盐酸盐(8.21g，122mmol)，Pd2(dba)3(250mg，2.7mmol)，Brettphos(580mg，10.8mmol)，碳酸铯(39.6g，122mmol)加入无水四氢呋喃(100mL)中，110℃反应过夜。冷至室温，过滤，浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(甲基氨基)苯基)丙酸苄酯(7.3g，产率70％)。
第四步：(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸苄酯的制备
(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(甲基氨基)苯基)丙酸苄酯(2.0g，5.3mmol)溶于二氯甲烷(40mL)，加入三乙胺(1.05g，10.42mmol)与乙酸酐(850mg，8.33mmol)。室温搅拌4小时，加水淬灭反应，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸苄酯(2.0g，产率90％)。
第五步：(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸的制备
(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸苄酯(2.0g，4.7mmol)溶于甲醇(20mL)，加入Pd/C(0.9g，10％Pd，50％wet)，氢气气氛下室温搅拌2小时，过滤浓缩得(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸(1.50g，产率95％)。
中间体(1r,4r)-4-氰基环己烷-1-甲酸(16-4)的制备
Figure BDA0002589780190000371
第一步：(1r,4r)-4-甲酰胺基环己烷-1-甲酸甲酯的制备
(1r,4r)-4-(甲氧羰基)环己烷-1-甲酸(1.86g，10mmol)溶解于二氯甲烷(20mL)中，加入二氯亚砜(3mL)，室温搅拌2小时，减压浓缩。残留物溶于甲基叔丁基醚(20mL)，冰浴下缓慢滴加浓氨水，析出大量白色固体，过滤，固体溶解于二氯甲烷中，无水硫酸镁干燥，过滤浓缩得到(1r,4r)-4-甲酰胺基环己烷-1-甲酸甲酯(1.55g，产率84％)。
第二步：(1r,4r)-4-氰基环己烷-1-甲酸甲酯的制备
(1r,4r)-4-甲酰胺基环己烷-1-甲酸甲酯(300mg，1.62mmol)溶于DMF(5mL)，冰浴冷却下，滴加三氯氧磷(0.5mL)。滴加完毕，升至室温，继续搅拌2小时，加入水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸镁干燥，减压蒸除乙酸乙酯，残余物用柱色谱纯化得到(1r,4r)-4-氰基环己烷-1-甲酸甲酯(250mg，产率92％)。
第三步：(1r,4r)-4-氰基环己烷-1-甲酸的制备
(1r,4r)-4-氰基环己烷-1-甲酸甲酯(250mg，1.49mmol)溶于水/四氢呋喃/甲醇(2mL/2mL/2mL)中，加入一水合氢氧化锂(83mg，1.92mmol)，室温搅拌2小时。减压除去有机溶剂，加少量水，1N稀盐酸调节至pH3，乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸镁干燥，减压蒸除乙酸乙酯得到(1r,4r)-4-氰基环己烷-1-甲酸(200mg，产率88％)。
实施例17：5-((S)-2-((1r,4S)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000381
第一步：5-((S)-2-((1r,4S)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-5-(2-氨基-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(67mg，0.15mmol)，(1r,4r)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酸(30mg，0.16mmol)，HATU(80mg，0.21mmol)，DIPEA(0.1mL)加入二氯甲烷(3mL)中，室温搅拌2小时，加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得5-((S)-2-((1r,4S)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(25mg，产率27％)。
第二步：5-((S)-2-((1r,4S)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸的制备
5-((S)-2-((1r,4S)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(25mg，0.040mmol)溶于二氯甲烷中(3mL)，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌3小时，浓缩，反相柱层析纯化得5-((S)-2-((1r,4S)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸(18mg，产率79％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.57(s,1H),9.96(s,1H),8.15(d,J＝8.0Hz,1H),7.98(s,1H),7.62-7.53(m,2H),7.29-7.27(m,2H),7.25(s,1H),7.17(d,J＝8.0Hz,1H),7.11(s,1H),4.83-4.71(m,1H),3.81-3.71(m,2H),3.18-3.13(m,4H),3.10(s,3H),2.75(s,6H),2.15(t,J＝10.8Hz,1H),1.73-1.51(m,4H),1.33-1.18(m,3H),0.93-0.89(m,2H).
MS m/z(ESI):563[M+H]+
中间体(1r,4r)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酸(17-1)的制备
Figure BDA0002589780190000382
第一步：(1r,4r)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酸苄酯的制备
(1r,4r)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酸(0.415g，1.61mmol)溶于DMF(10mL)，加入碳酸铯(1.059g，3.25mmol)，滴加溴化苄(304mg，1.78mmol)，室温搅拌4小时。加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取，合并萃取液，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，减压蒸除乙酸乙酯，残余物用柱色谱纯化得到(1r,4r)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酸苄酯(0.516g，产率92％)，白色固体。
第二步：(1r,4r)-4-(氨基甲基)环己烷-1-甲酸苄酯盐酸盐的制备
(1r,4r)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酸苄酯(1.76g，5.07mmol)溶于HCl乙酸乙酯(3mol/L，20mL)，室温搅拌，析出白色固体，过滤，干燥得(1r,4r)-4-(氨基甲基)环己烷-1-甲酸苄酯盐酸盐(1.20g，产率83％)。
第三步：(1r,4r)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酸苄酯的制备
(1r,4r)-4-(氨基甲基)环己烷-1-甲酸苄酯盐酸盐(1.20g，4.24mmol)溶于甲醇(20mL)，加入多聚甲醛(382mg)与氰基硼氢化钠(320mg)，室温搅拌过夜。加入饱和碳酸氢钠水溶液，乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸镁干燥，减压蒸除乙酸乙酯，残余物用柱色谱纯化得到(1r,4r)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酸苄酯(820mg，产率70％)。
第四步：(1r,4r)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酸的制备
(1r,4r)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酸苄酯(500mg，1.82mmol)溶于甲醇(10mL)，加入Pd/C(50mg，10％Pd，50％wet)，氢气气氛下室温搅拌2小时，过滤浓缩得(1r,4r)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酸(330mg，产率97％)。
实施例18：5-(2-(4-(氨基甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(2-甲氧基-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000391
第一步：(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(2-甲氧基-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸苄酯的制备
(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(甲基氨基)苯基)丙酸苄酯(384mg，1mmol)，三乙胺(0.5mL，3.6mmol)溶解于二氯甲烷中，滴加2-甲氧基乙酰基chloride(0.11mL，1.1mmol)，室温搅拌1.2小时。反应液用水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(2-甲氧基-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸苄酯(460mg，粗产率100％)，黄色油状物。
第二步：(S)-2-氨基-3-(3-(2-甲氧基-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐的制备
(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(2-甲氧基-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸苄酯(460mg，1mmol)溶于乙酸乙酯中，加入HCl/1,4-二氧六环溶液(4mol/L，4mL)，室温搅拌2小时。浓缩得(S)-2-氨基-3-(3-(2-甲氧基-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐400mg，粗产率100％，黄色固体。
第三步：(S)-1-(苄氧基)-3-(3-(2-甲氧基-N-甲基乙酰胺基)苯基)-1-氧代丙基-2-基(1r,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羧基的制备
(S)-2-氨基-3-(3-(2-甲氧基-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐(400mg，1mmol)，反式-4-(叔丁氧羰基氨基甲基)环己基羧酸(258mg，1mmol)，HATU(436mg，1.1mmol)，DIPEA(2mL)加入DMF/二氯甲烷(3mL/3mL)中，室温搅拌过夜，加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-1-(苄氧基)-3-(3-(2-甲氧基-N-甲基乙酰胺基)苯基)-1-氧代丙基-2-基(1r,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羧基420mg，产率70.6％，浅黄色固体。
第四步：(S)-2-(((1r,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)氧代)-3-(3-(2-甲氧基-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸的制备
(S)-1-(苄氧基)-3-(3-(2-甲氧基-N-甲基乙酰胺基)苯基)-1-氧代丙基-2-基(1r,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羧基(420mg，0.71mmol)溶解于甲醇(5mL)，加入Pd/C(40mg，10％Pd，50％wet)，氢气气氛下搅拌过夜，过滤，浓缩得(S)-2-(((1r,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)氧代)-3-(3-(2-甲氧基-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸(340mg，产率95％)，淡黄色固体。
第五步：5-((S)-2-(((1r,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)氧代)-3-(3-(2-甲氧基-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯的制备
(S)-2-(((1r,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)氧代)-3-(3-(2-甲氧基-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸(252mg，0.5mmol)，5-氨基-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯(167mg，0.5mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.59mL)，DIPEA(0.59mL)溶于乙酸乙酯(10mL)中，加热至55℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得5-((S)-2-(((1r,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)氧代)-3-(3-(2-甲氧基-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯(160mg，产率38.9％)，淡黄色固体。
第六步：5-((S)-2-(((1r,4S)-4-(氨基甲基)环己烷-1-羰基)氧代)-3-(3-(2-甲氧基-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸的制备
5-((S)-2-(((1r,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)氧代)-3-(3-(2-甲氧基-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯(160mg，0.19mmol)溶于二氯甲烷中(3mL)，加入三氟乙酸(2mL)，室温搅拌2小时，浓缩，柱层析纯化得5-((S)-2-(((1r,4S)-4-(氨基甲基)环己烷-1-羰基)氧代)-3-(3-(2-甲氧基-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸(57mg，产率51％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ10.51(s,1H),10.32(s,1H),9.41(s,1H),8.34-8.15(m,2H),7.69(s,2H),7.63(d,J＝8.8Hz,1H),7.42(dd,J＝1.6,9.0Hz,1H),7.36(t,J＝7.6Hz,1H),7.29(d,J＝7.2Hz,1H),7.24(s,1H),7.17(d,J＝7.6Hz,1H),4.78-4.72(m,1H),3.15(s,2H),3.11(s,3H),3.08(s,3H),2.93-2.69(m,1H),2.68-2.62(m,2H),2.13-2.10(m,1H),1.77-1.71(m,3H),1.59-1.43(m,3H),1.30-1.16(m,2H),0.95-0.88(m,2H).
MS m/z(ESI):565[M+H]+
实施例19：5-((S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000411
第一步：(S)-2-氨基-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐的制备
(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸苄酯(130mg，0.305mmol)溶于四氢呋喃(3mL)，加入HCl乙酸乙酯溶液(3mol/L，5mL)，室温下搅拌3小时，浓缩反应液得(S)-2-氨基-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐(111mg)，直接用于下步反应。
第二步：(S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸苄酯的制备
(S)-2-氨基-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸苄酯盐酸盐(111mg，0.305mmol)，(1r,4r)-4-氰基环己烷-1-甲酸(51mg，0.33mmol)，HATU(127mg，0.33mmol)，DIPEA(0.16mL)加入二氯甲烷(3mL)中，室温搅拌2小时，加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得(S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸苄酯(120mg，产率85％)。
第三步：(S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸的制备
(S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸苄酯(120mg，0.26mmol)溶于甲醇(3mL)，加入Pd/C(15mg，10％Pd，50％wet)，氢气气氛下室温搅拌4小时，过滤浓缩得(S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸(95mg，产率98％)。
第四步：5-((S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸(95mg，0.256mmol)，5-氨基-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(60mg，0.26mmol)，HATU(108mg，0.28mmol)，DIPEA(0.14mL)加入二氯甲烷(3mL)中，室温搅拌2小时，加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得5-((S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(50mg，产率33％)。
第五步：5-((S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备
5-((S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(50mg，0.085mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)，加入三氟乙酸(2.5mL)，室温下搅拌3小时，浓缩反应液，残留物经乙醚打浆纯化得5-((S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸(32mg，产率71％)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.44(s,1H),9.95(s,1H),8.14(d,J＝7.6Hz,1H),7.94(s,1H),7.45-7.14(m,6H),6.92(s,1H),4.73-4.71(m,1H),3.10(s,3H),2.66-2.61(m,2H),2.39-2.07(m,2H),2.27-2.17(m,2H),2.01-1.93(m,5H),1.87-1.78(m,2H),1.60-1.30(m,3H).
MS m/z(ESI):530[M+H]+
实施例20：5-((S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸
Figure BDA0002589780190000421
第一步：(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸苄酯的制备
(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(甲基氨基)苯基)丙酸苄酯(565mg，1.47mmol)，N,N-二甲基甘氨酸(182mg，1.77mmol)，HATU(838mg，2.2mmol)，DIPEA(0.61mL)溶于二氯甲烷(10mL)中，室温搅拌1.5小时。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸苄酯(670mg，产率97％)。
第二步：(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸的制备
(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸苄酯(1g，2.1mmol)溶解于甲醇(10mL)，加入Pd/C(0.1g，10％Pd，50％wet)，氢气气氛下室温搅拌2小时，过滤浓缩得(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸(768mg，产率95％)。
第三步：(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸(379mg，1mmol)，5-氨基-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(232mg，1mmol)，HATU(418mg，1.2mmol)，DIPEA(0.49mL)加入二氯甲烷(3mL)中，室温搅拌2小时，加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(520mg，产率88％)。
第四步：(S)-5-(2-氨基-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯的制备
冰浴下，(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(76mg，0.128mmol)溶于四氢呋喃(3mL)，加入HCl乙酸乙酯溶液(3mol/L，5mL)，冰水浴下搅拌5小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S)-5-(2-氨基-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(60mg，产率95％)。
第五步：5-((S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-5-(2-氨基-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(250mg，0.507mmol)，(1r,4r)-4-氰基环己烷-1-甲酸(80mg，0.52mmol)，HATU(199mg，0.52mmol)，DIPEA(0.26mL)加入二氯甲烷(3mL)中，室温搅拌2小时，加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得5-((S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(80mg，产率26％)。
第六步：5-((S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备
5-((S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(80mg，0.13mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)，加入三氟乙酸(2.5mL)，室温下搅拌3小时，浓缩反应液，残留物经乙醚打浆纯化得5-((S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸(70mg，产率95％)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ12.85(brs,1H),11.71(s,1H),9.98(s,1H),9.62(s,1H),8.41(s,1H),8.19(d,J＝8.8Hz,1H),7.97(d,J＝1.2Hz,1H),7.44-7.23(m,5H),7.04(d,J＝1.6Hz,1H),4.81-4.75(m,1H),3.18(s,3H),3.17-3.09(m,2H),2.94-2.81(m,2H),2.73(s,6H),2.69-2.56(m,2H),2.27-2.17(m,1H),2.02-1.85(m,3H),1.71-1.68(m,1H),1.58-1.32(m,3H)
MS m/z(ESI):573[M+H]+
实施例21：5-((S)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)-2-((1r,4S)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000441
第一步：5-((S)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)-2-((1r,4S)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-5-(2-氨基-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(99mg，0.2mmol)，(1r,4r)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酸(37mg，0.2mmol)，HATU(80mg，0.21mmol)，DIPEA(0.1mL)加入二氯甲烷(3mL)中，室温搅拌2小时，加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得5-((S)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)-2-((1r,4S)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(55mg，产率42％)。
第二步：5-((S)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)-2-((1r,4S)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备
5-((S)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)-2-((1r,4S)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(55mg，0.083mmol)溶于二氯甲烷中(3mL)，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌3小时，浓缩，反相柱层析纯化得5-((S)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)-2-((1r,4S)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸(38mg，产率75％)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.71(s,1H),10.36(brs,1H),9.98(s,1H),8.16(d,J＝8.8Hz,1H),7.97(s,1H),7.72-7.23(m,6H),7.05(s,1H),5.31(s,1H),4.83-4.71(m,1H),3.81-3.71(m,2H),3.18-3.13(m,4H),2.75(s,6H),2.71(s,6H),2.15(t,J＝11.8Hz,1H),1.73-1.51(m,4H),1.33-1.18(m,3H),0.93-0.89(m,2H).
MS m/z(ESI):605[M+H]+。
实施例22：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000442
第一步：(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯的制备
(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸(50mg，0.132mmol)，5-氨基-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯(44mg，0.132mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，105mg，0.165mmol)，DIPEA(52mg，0.40mmol)溶于乙酸乙酯(5mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯(75mg，产率82％)。
第二步：(S)-5-(2-氨基-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯的制备
冰浴下，(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1,2-二甲酸二叔丁酯(75mg，0.108mmol)溶于四氢呋喃(2mL)，加入HCl乙酸乙酯溶液(5mL)，冰浴下搅拌7小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S)-5-(2-氨基-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(42mg，产率80％)，白色固体。
第三步：5-((S)-2-((1r,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-5-(2-氨基-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(42mg，0.085mmol)，(1r,4r)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酸(22mg，0.085mmol)，HATU(35mg，0.092mmol)，DIPEA(0.05mL)溶于二氯甲烷(5mL)中，室温搅拌3小时。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得5-((S)-2-((1r,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(41mg，产率65％)，白色固体。
第四步：5-((S)-2-((1r,4S)-4-(氨基甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸的制备
5-((S)-2-((1r,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(41mg，0.056mmol)溶解于二氯甲烷(4mL)，加入三氟乙酸(2mL)，室温下搅拌2小时，浓缩反应液，残留物经柱层析纯化得5-((S)-2-((1r,4S)-4-(氨基甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸(20mg，产率62％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ10.29(s,1H),10.11(s,1H),8.20-8.16(m,1H),8.09-8.02(m,1H),7.79(s,2H),7.61-7.51(m,1H),7.42-7.21(m,5H),4.83-4.72(m,1H),3.87-3.56(m,2H),3.39(q,J＝6.8Hz,1H),3.16-3.08(m,3H),2.94-2.88(m,1H),2.63(s,6H),2.14(t,J＝12Hz,1H),1.78-1.71(m,3H),1.16-1.07(m,6H),0.98-0.89(m,2H).
MS m/z(ESI):578[M+H]+。
实施例23：5-((S)-2-((1r,4S)-4-(氨基甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000461
第一步：(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸(100mg，0.297mmol)，5-氨基-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(70mg，0.30mmol)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.425mL)，DIPEA(0.4mL)溶于乙酸乙酯(5mL)中，加热至50℃搅拌过夜。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(135mg，产率83％)。
第二步：(S)-5-(2-氨基-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯的制备
冰浴下，(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(135mg，0.245mmol)溶于四氢呋喃(2mL)，加入HCl乙酸乙酯溶液(5mL)，冰浴下搅拌7小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S)-5-(2-氨基-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(65mg，产率59％)，白色固体。
第三步：5-((S)-2-((1r,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-5-(2-氨基-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(65mg，0.144mmol)，(1r,4r)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酸(39mg，0.151mmol)，HATU(58mg，0.153mmol)，DIPEA(0.08mL)溶于二氯甲烷(5mL)中，室温搅拌3小时。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得5-((S)-2-((1r,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(55mg，产率55％)，白色固体。
第四步：5-((S)-2-((1r,4S)-4-(氨基甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备
5-((S)-2-((1r,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(55mg，0.079mmol)溶解于二氯甲烷(4mL)，加入三氟乙酸(2mL)，室温下搅拌2小时，浓缩反应液，残留物经柱层析纯化得5-((S)-2-((1r,4S)-4-(氨基甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸(35mg，产率82％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ12.61(brs,1H),11.69(s,1H),9.99(s,1H),8.09(d,J＝8.4Hz,1H),7.99(s,1H),7.65(s,2H),7.38-7.34(m,2H),7.32-7.27(m,2H),7.23(s,1H),7.15(d,J＝8.0Hz,1H),7.04(d,J＝1.2Hz,1H),4.76-4.70(m,1H),3.10(s,3H),2.92-2.87(m,1H),2.64(d,J＝6.8Hz,2H),2.13(t,J＝11.8Hz,1H),1.78-1.70(m,6H),1.55-1.44(m,2H),1.27-1.07(m,3H),0.94-0.87(m,2H).
MS m/z(ESI):534[M+H]+。
实施例24：(S)-5-(2-(环己烷甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000471
第一步：(S)-5-(2-(环己烷甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-5-(2-氨基-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(65mg，0.144mmol)，环己烷甲酸(19mg，0.151mmol)，HATU(58mg，0.153mmol)，DIPEA(0.08mL)溶于二氯甲烷(5mL)中，室温搅拌3小时。加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得(S)-5-(2-(环己烷甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(62mg，产率77％)。
第二步：(S)-5-(2-(环己烷甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备
(S)-5-(2-(环己烷甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸叔丁酯(62mg，0.11mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)，加入三氟乙酸(2.5mL)，室温下搅拌2.5小时，浓缩反应液，残留物经反相柱层析纯化得(S)-5-(2-(环己烷甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸(31mg，产率55％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.57(s,1H),9.96(s,1H),8.03(d,J＝8.0Hz,1H),7.96(s,1H),7.36-7.34(m,2H),7.29-7.27(m,2H),7.23(s,1H),7.14(d,J＝8.0Hz,1H),6.97(s,1H),4.75-4.69(m,1H),3.10(s,3H),2.93-2.87(m,1H),2.18-2.13(m,1H),1.69-1.56(m,7H),1.46-1.44(m,1H),1.26-1.09(m,6H).
MS m/z(ESI):505[M+H]+。
实施例25：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)戊酸的制备
Figure BDA0002589780190000481
第一步：5-(苄氧羰基氨基)戊酸叔丁酯的制备
5-(苄氧羰基氨基)戊酸(1.01g，4mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，加入DCC(2.48g，12mmol)，叔丁醇(1.76g，24mmol)，DMAP(105mg，0.8mmol)，室温搅拌3.5小时。过滤，滤液浓缩，加入乙醚20mL，再次过滤，滤液浓缩，残留物经柱层析纯化得5-(苄氧羰基氨基)戊酸叔丁酯(950mg，产率41％)，淡黄色油状物。
第二步：5-氨基戊酸叔丁酯的制备
5-(苄氧羰基氨基)戊酸叔丁酯(950mg，3.1mmol)溶解于甲醇(20mL)中，加入Pd/C(0.9g，10％Pd，50％wet)，氢气气氛下室温搅拌过夜，过滤浓缩得5-氨基戊酸叔丁酯(520mg，产率97％).
第三步：(S)-5-(2-((((9H-芴-9-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)戊酸叔丁酯的制备
将(S)-2-((((9H-芴-9-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸(95mg，0.2mmol)，5-氨基戊酸叔丁酯(52mg，0.3mmol)，HATU(93mg，0.24mmol)和二异丙基乙胺(0.10mL)加入二氯甲烷(3mL)中室温搅拌2小时。加入水，二氯甲烷萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得(S)-5-(2-((((9H-芴-9-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)戊酸叔丁酯(105mg，产率84％)。
第四步：(S)-5-(2-氨基-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)戊酸叔丁酯的制备
将(S)-5-(2-((((9H-芴-9-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)戊酸叔丁酯(105mg，0.167mmol)溶解于二氯甲烷(3mL)中，加入二乙胺(2mL)，室温搅拌2小时，反应液浓缩，残留物经柱层析纯化得(S)-5-(2-氨基-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)戊酸叔丁酯(55mg，产率81％)。
第五步：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)戊酸叔丁酯的制备
将(S)-5-(2-氨基-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)戊酸叔丁酯(55mg，0.135mmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(37mg，0.135mmol)，HATU(57mg，0.15mmol)和二异丙基乙胺(0.1mL)加入二氯甲烷(4mL)中搅拌均匀反应2小时。加入水，二氯甲烷萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)戊酸叔丁酯(75mg，产率84％)。
第六步：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)戊酸的制备
将(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)戊酸叔丁酯(75mg，0.114mmol)加入二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌2小时。浓缩，残留物制备薄层色谱纯化得(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)戊酸(45mg，产率66％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.97(s,1H),9.86(s,1H),8.57(d,J＝8.0Hz,1H),7.98-7.91(m,2H),7.64(d,J＝8.4Hz,1H),6.80(d,J＝16.0Hz,1H),6.75(d,J＝16.0Hz,1H),4.65(q,J＝7.2Hz,1H),3.86-3.83(m,4H),3.28-3.23(m,2H),3.06-2.99(m,4H),2.83-2.71(m,2H),2.20(t,J＝7.2Hz,2H),1.49-1.37(m,4H).
MS m/z(ESI):600[M+H]+。
中间体(S)-2-((((9H-芴-9-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸(25-3)的制备
Figure BDA0002589780190000491
第一步：(S)-2-((((9H-芴-9-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸叔丁酯的制备
将N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-天冬氨酸1-叔丁酯(4.1g，10mmol)，硫代吗啉-1,1-二氧化物(1.5g，11mmol)，HATU(4.56g，12mmol)和二异丙基乙胺(5mL)加入二氯甲烷(50mL)中室温搅拌2小时。加入水，二氯甲烷萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得(S)-2-((((9H-芴-9-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸叔丁酯(5.0g，产率95％)。
第二步：(S)-2-((((9H-芴-9-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸的制备
将(S)-2-((((9H-芴-9-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸叔丁酯(5.0g，9.45mmol)加入二氯甲烷(50mL)中，加入三氟乙酸(20mL)，室温搅拌2小时。浓缩，柱层析纯化得(S)-2-((((9H-芴-9-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸(4.2g，产率94％)。
实施例26：(E)-5-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)2-戊烯酸的制备
Figure BDA0002589780190000501
第一步：(S)-2-氨基-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸叔丁酯的制备
将(S)-2-((((9H-芴-9-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸叔丁酯(529mg，1mmol)加入二氯甲烷(5mL)中，加入二乙胺(3mL)，室温搅拌2小时。浓缩，柱层析纯化得(S)-2-氨基-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸叔丁酯(214mg，产率70％)。
第二步：(S,E)-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸叔丁酯的制备
将(S)-2-氨基-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸叔丁酯(153mg，0.5mmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(134mg，0.5mmol)，HATU(209mg，0.55mmol)和二异丙基乙胺(0.25mL)加入二氯甲烷(5mL)中室温搅拌反应2小时。加入水，二氯甲烷萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得(S,E)-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸叔丁酯(220mg，产率79％)。
第三步：(S,E)-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸的制备
将(S,E)-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸叔丁酯(220mg，0.39mmol)加入二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温搅拌2小时。浓缩，柱层析纯化得(S,E)-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸(182mg，产率92％)。
第四步：(E)-5-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)2-戊烯酸叔丁酯的制备
将(S,E)-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸(182mg，0.36mmol)，(E)-5-氨基-2-戊烯酸叔丁酯(93mg，0.55mmol)，HATU(152mg，0.4mmol)和二异丙基乙胺(0.18mL)加入二氯甲烷(5mL)中室温搅拌反应2小时。加入水，二氯甲烷萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得(E)-5-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)2-戊烯酸叔丁酯(107mg，产率45％)。
第五步：(E)-5-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)2-戊烯酸的制备
将(E)-5-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)2-戊烯酸叔丁酯(107mg，0.16mmol)加入二氯甲烷(4mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温搅拌3小时。浓缩，残留物反相制备柱层析纯化得(E)-5-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)2-戊烯酸(55mg，产率56％)，白色固体。
MS m/z(ESI):598[M+H]+。
中间体(E)-5-氨基-2-戊烯酸叔丁酯(26-4)的制备
Figure BDA0002589780190000511
第一步：3-(FMOC-氨基)-1-丙醛的制备
3-(FMOC-氨基)-1-丙醇(1.025g，3.45mmol)溶于乙酸乙酯(25mL)，加入IBX(5.78g，10.4mmol)。加热至80℃，剧烈搅拌4小时。冷至室温，过滤，浓缩得3-(FMOC-氨基)-1-丙醛粗品(约1.26g)，直接用于下步反应。
第二步：(E)-5-((((9H-芴-9-基甲氧基)羰基)氨基)2-戊烯酸叔丁酯的制备
3-(FMOC-氨基)-1-丙醛粗品(约1.26g，约3.45mmol)溶于二氯甲烷(20mL)，加入(叔丁氧羰基亚甲基)三苯基膦烷(1.56g，4.1mmol)，室温搅拌过夜。浓缩，残留物柱层析纯化得(E)-5-((((9H-芴-9-基甲氧基)羰基)氨基)2-戊烯酸叔丁酯(1.18g，产率87％)。
第三步：(E)-5-氨基-2-戊烯酸叔丁酯的制备
(E)-5-((((9H-芴-9-基甲氧基)羰基)氨基)2-戊烯酸叔丁酯(787mg，2mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，加入三水合四丁基氟化铵(1.89g，6mmol)，室温搅拌5小时。浓缩，残留物柱层析纯化得(E)-5-氨基-2-戊烯酸叔丁酯(212mg，产率62％)。
实施例27：(E)-4-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)2-丁烯酸的制备
Figure BDA0002589780190000521
实验步骤与及反应条件与实施例26相同。
MS m/z(ESI):584[M+1]+。
实施例28：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(甲基(2-(甲磺酰基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000522
实验步骤与及反应条件与实施例1相同。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ12.63(brs,1H),10.40(s,1H),9.88(s,1H),8.85(d,J＝8.0Hz,1H),7.93(t,J＝8.4Hz,2H),7.88(d,J＝8.8Hz,2H),7.73(d,J＝9.2Hz,1H),7.64(dd,J＝1.2,8.6Hz,1H),6.82(d,J＝16Hz,1H),6.77(d,J＝16.4Hz,1H),4.85-4.80(m,1H),3.78-3.74(m,1H),3.65-3.61(m,1H),3.56-3.47(m,2H),2.94(s,3H),2.86-2.83(m,1H),2.80(s,3H),2.76-2.70(m,1H).
MS m/z(ESI):622[M+1]+。
实施例29：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-(1,1-二氧化硫代吗啉)-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000523
实验步骤与及反应条件与实施例7相同。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ12.58(s,1H),10.43(s,1H),9.87(s,1H),8.80(d,J＝7.2Hz,1H),7.96(t,J＝8.4Hz,1H),7.91(d,J＝8.8Hz,2H),7.72(d,J＝8.8Hz,2H),7.65(dd,J＝1.2,8.4Hz,1H),6.84(d,J＝16Hz,1H),6.80(d,J＝16Hz,1H),4.87(q,J＝6.8Hz,1H),3.88-3.84(m,4H),3.10-3.03(m,4H),2.42-2.37(m,2H),2.03-2.00(m,1H),1.94-1.84(m,1H).
MSm/z(ESI):634[M+H]+。
实施例30：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸
Figure BDA0002589780190000531
实验步骤与及反应条件与实施例10相同。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.70(brs,1H),10.03(s,1H),9.86(s,1H),8.76(d,J＝7.2Hz,1H),8.02(s,1H),7.95(t,J＝8.0Hz,1H),7.66(dd,J＝1.0,8.6Hz,1H),7.37(s,2H),7.04(d,J＝2.0Hz,1H),6.85-6.77(m,2H),4.89-4.83(m,1H),3.55-3.49(m,8H),2.46-.35(m,3H),2.25-2.16(m,2H),2.14-2.06(m,1H),2.00-1.85(m,1H).
MS m/z(ESI):638[M+H]+。
实施例31：(S,E)-5-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-(4-二甲氨基哌啶-1-基)-5-氧代戊酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸
Figure BDA0002589780190000532
实验步骤与及反应条件与实施例10相同。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.72(brs,1H),10.13(s,1H),9.86(s,1H),8.76(d,J＝7.2Hz,1H),8.02(s,1H),7.95(t,J＝8.0Hz,1H),7.66(dd,J＝1.0,8.6Hz,1H),7.37(s,2H),7.04(d,J＝2.0Hz,1H),6.85-6.77(m,2H),4.89-4.83(m,1H),4.04-3.99(m,1H),3.01-2.74(m,3H),2.69(s,6H),2.01-1.97(m,3H),2.25-2.16(m,2H),2.14-2.06(m,1H),2.00-1.85(m,1H),1.58-1.53(m,1H),1.35-1.31(m,1H).
MS m/z(ESI):666[M+H]+。
实施例32：5-((S)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)-2-((1r,4S)-4-(四氢吡咯-1-基甲基)环己烷-1-甲酰胺基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000541
实验步骤与及反应条件与实施例16相同。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.57(s,1H),9.96(s,1H),8.15(d,J＝8.0Hz,1H),7.98(s,1H),7.62-7.53(m,2H),7.29-7.27(m,2H),7.25(s,1H),7.17(d,J＝8.0Hz,1H),7.11(s,1H),4.83-4.71(m,1H),3.81-3.71(m,2H),3.18-3.13(m,4H),3.10(s,3H),2.55-2.47(m,4H),2.15(t,J＝10.8Hz,1H),1.73-1.51(m,8H),1.33-1.18(m,3H),0.93-0.89(m,2H).
MS m/z(ESI):589[M+H]+
实施例33：5-((S)-2-((1r,4S)-4-(((丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰氨基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸-2-乙氧基-2-氧代乙酯的制备
Figure BDA0002589780190000542
第一步：(1r,4r)-4-(((丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酸的制备
氨甲环酸(1.26g,8mmol)溶于8％NaOH水溶液(4ml,8mmol)。冰浴下，滴加氯甲酸丁酯(1.20g,8.8mmol)。缓慢加入碳酸钠(466mg，4.4mmol)室温搅拌5小时。加入1N稀盐酸(8mL)，过滤收集产生的固体得(1r,4r)-4-(((丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酸(1.67g，产率81％)。
第二步：5-((S)-2-((1r,4S)-4-(((丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯的制备
(S)-5-(2-氨基-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(70mg，0.155mmol)，(1r,4r)-4-(((丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酸(41mg，0.16mmol)，HATU(80mg，0.21mmol)，DIPEA(0.1mL)加入二氯甲烷(3mL)中，室温搅拌2小时，加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得5-((S)-2-((1r,4S)-4-氰基环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(70mg，产率65％)。
第三步：5-((S)-2-((1r,4S)-4-(((丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸的制备
5-((S)-2-((1r,4S)-4-(((丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸叔丁酯(70mg，0.101mmol)溶于二氯甲烷中(3mL)，加入三氟乙酸(2mL)，室温搅拌2小时，浓缩，反相柱层析纯化得5-((S)-2-((1r,4S)-4-(((丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸(50mg，产率78％)，白色固体。
第四步：5-((S)-2-((1r,4S)-4-(((丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰氨基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸-2-乙氧基-2-氧代乙酯的制备
5-((S)-2-((1r,4S)-4-(((丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸(50mg，0.0787mmol)溶于DMF(2mL)，加入氯乙酸乙酯(14mg,0.11mmol),碳酸钾(44mg，0.32mmol)，40℃搅拌4小时。反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥，减压蒸除乙酸乙酯，残余物用柱色谱纯化得到5-((S)-2-((1r,4S)-4-(((丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰氨基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸-2-乙氧基-2-氧代乙酯(48mg，产率85％)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ9.96(s,1H),8.15(d,J＝8.0Hz,1H),7.98(s,1H),7.62-7.53(m,2H),7.29-7.27(m,2H),7.25(s,1H),7.17(d,J＝8.0Hz,1H),7.11(s,1H),5.21(s,2H),4.83-4.71(m,1H),4.21(q,J＝7.2Hz,2H),3.90(t,J＝7.2Hz,2H),3.81-3.71(m,2H),3.10(s,3H),2.88-2.82(m,2H),2.45-2.27(m,5H),1.73-1.51(m,8H),1.38-1.28(m,4H),1.23(t,J＝7.2Hz,3H),0.93(t,J＝7.2Hz,3H).
MS m/z(ESI):721[M+H]+。
实施例34：5-((S)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)-2-((1r,4S)-4-(哌啶-1-基甲基)环己烷-1-甲酰胺基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸1-异丙氧基-1-((异丙氧羰基)氧代)乙酯的制备
Figure BDA0002589780190000551
实验步骤与及反应条件与实施例33相同。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.55(s,1H),9.96(s,1H),8.15(d,J＝8.0Hz,1H),7.96-7.92(m,2H),7.62-7.53(m,2H),7.29-7.27(m,2H),7.25(s,1H),7.17(d,J＝8.0Hz,1H),7.11(s,1H),4.83-4.71(m,2H),3.81-3.71(m,2H),3.10(s,3H),2.55-2.47(m,5H),2.15-2.08(m,5H),1.73-1.61(m,8H),1.57(d,J＝5.4Hz,3H),1.33-1.25(m,6H),1.23(d,J＝6.4Hz,6H).
MS m/z(ESI):717[M+H]+
实施例35：5-((S)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)-2-((1r,4S)-4-(吗啉-1-基甲基)环己烷-1-甲酰胺基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0002589780190000561
第一步：(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸甲酯的制备
(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酸(101mg，0.30mmol)，5-氨基-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸甲酯(57mg，0.30mmol)，HATU(126mg，0.33mmol)，DIPEA(0.16mL)加入二氯甲烷(3mL)中，室温搅拌2小时，加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸甲酯(127mg，产率83％)。
第二步：(S)-5-(2-氨基-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸甲酯盐酸盐的制备
(S)-5-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸甲酯(127mg，0.25mmol)溶于四氢呋喃(3mL)，加入HCl乙酸乙酯溶液(3mol/L，5mL)，室温下搅拌5小时，浓缩反应液得(S)-5-(2-氨基-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸甲酯盐酸盐(110mg，产率99％)。
第三步：5-((S)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)-2-((1r,4S)-4-(吗啉-1-基甲基)环己烷-1-甲酰胺基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸甲酯的制备
(S)-5-(2-氨基-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸甲酯盐酸盐(110mg，0.25mmol)，(1r,4r)-4-(吗啉基甲基)环己烷-1-甲酸(57mg，0.25mmol)，HATU(105mg，0.28mmol)，DIPEA(0.15mL)加入二氯甲烷(3mL)中，室温搅拌2小时，加水洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经柱层析纯化得5-((S)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)-2-((1r,4S)-4-(吗啉-1-基甲基)环己烷-1-甲酰胺基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸甲酯(88mg，产率57％)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ9.86(s,1H),8.25(d,J＝8.0Hz,1H),7.98(s,1H),7.62-7.53(m,2H),7.29-7.27(m,2H),7.25(s,1H),7.17(d,J＝8.0Hz,1H),7.11(s,1H),4.83-4.71(m,1H),4.10(s,3H),3.81-3.71(m,2H),3.48-3.43(m,4H),3.12(s,3H),2.55-2.47(m,4H),2.39-2.28(m,8H),1.73-1.51(m,7H).
MS m/z(ESI):619[M+H]+
实施例36：(S)-5-(3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)-2-(4-(吗啉甲基)苯甲酰胺基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000571
实验步骤与及反应条件与实施例19相同。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.55(s,1H),9.95(s,1H),8.85(s,1H),8.14(s,1H),7.94d,J＝7.6Hz,2H),7.45-7.39(m,4H),7.29-7.14(m,4H),7.00-6.92(m,2H),4.73-4.71(m,1H),3.60(s,2H),3.55-3.50(m,4H),3.10(s,3H),2.66-2.61(m,2H),2.39-2.29(m,4H),2.01-1.93(m,3H).
MS m/z(ESI):598[M+H]+
实施例37：(S)-5-(2-(2-氯-4-(吗啉甲基)苯甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000572
实验步骤与及反应条件与实施例19相同。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.55(s,1H),9.95(s,1H),8.95(s,1H),8.14(d,J＝7.6Hz,1H),7.94-7.92(m,2H),7.45-7.39(m,4H),7.29-7.14(m,4H),6.92(s,1H),4.73-4.71(m,1H),3.60(s,2H),3.55-3.50(m,4H),3.10(s,3H),2.66-2.61(m,2H),2.39-2.29(m,4H),2.01-1.93(m,3H).
MS m/z(ESI):632[M+H]+
实施例38：5-((S)-2-((1r,4S)-4-(N,N-二甲基氨基甲酰亚胺基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000581
实验步骤与及反应条件与实施例16相同。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.25(s,1H),9.96(s,1H),9.62(s,1H),8.15(d,J＝8.0Hz,1H),7.98(s,1H),7.62-7.53(m,2H),7.29-7.27(m,2H),7.25(s,1H),7.17(d,J＝8.0Hz,1H),7.11(s,1H),4.83-4.71(m,1H),3.81-3.71(m,2H),3.10(s,3H),3.00(s,6H),2.36-2.26(m,2H),2.15(s,3H),1.73-1.51(m,4H),1.33-1.18(m,4H).
MS m/z(ESI):576[M+H]+
实施例39：(1S,4r)-4-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酰胺)环己烷-1-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000582
实验步骤与及反应条件与实施例26相同。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ10.57(s,1H),9.86(s,1H),8.57(d,J＝8.0Hz,1H),7.98-7.91(m,2H),7.64(d,J＝8.4Hz,1H),6.80(d,J＝16.0Hz,1H),6.75(d,J＝16.0Hz,1H),4.75(q,J＝7.2Hz,1H),3.86-3.83(m,4H),3.28-3.23(m,2H),3.10-3.06(m,2H),2.83-2.71(m,2H),2.31-2.10(m,2H),1.75-1.68(m,2H),1.49-1.37(m,6H).
MS m/z(ESI):626[M+H]+。
实施例40：(1S,4r)-4-(((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酰胺)甲基)环己烷-1-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000591
实验步骤与及反应条件与实施例26相同。1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ10.67(s,1H),9.86(s,1H),8.57(d,J＝8.0Hz,1H),7.98-7.91(m,2H),7.64(d,J＝8.4Hz,1H),6.80(d,J＝16.0Hz,1H),6.75(d,J＝16.0Hz,1H),4.65(q,J＝7.2Hz,1H),3.86-3.83(m,4H),3.28-3.23(m,2H),3.15-3.10(m,4H),2.83-2.71(m,2H),2.31-2.10(m,2H),1.75-1.68(m,2H),1.49-1.37(m,6H).
MS m/z(ESI):640[M+H]+。
实施例41：5-((S)-2-((1r,4S)-4-((二甲基氨基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3-(3-(N-甲基乙酰胺基)苯基)丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000592
实验步骤与及反应条件与实施例23相同。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ12.61(brs,1H),11.69(s,1H),9.99(s,1H),8.09(d,J＝8.4Hz,1H),7.99(s,1H),7.65(s,2H),7.38-7.34(m,2H),7.32-7.27(m,2H),7.23(s,1H),7.15(d,J＝8.0Hz,1H),7.04(d,J＝1.2Hz,1H),4.83-4.71(m,1H),3.81-3.71(m,2H),3.18-3.13(m,4H),3.10(s,3H),2.75(s,6H),1.73-1.51(m,4H),1.33-1.18(m,3H),0.93-0.89(m,2H).
MS m/z(ESI):562[M+H]+。
实施例42：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-吗啉-5-氧代戊酰胺基)-2-萘甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000593
实验步骤与及反应条件与实施例7相同。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ12.68(s,1H),10.49(s,1H),9.88(s,1H),8.80(d,J＝7.2Hz,1H),8.25(s,1H),8.02(s,1H),7.96(t,J＝8.4Hz,1H),7.66(dd,J＝1.2,8.4Hz,1H),7.44(t,J＝7.2Hz,2H),7.36(t,J＝7.2Hz,2H),6.84(d,J＝18Hz,1H),6.80(d,J＝18Hz,1H),4.87(q,J＝7.1Hz,1H),3.55-3.52(m,4H),3.43-3.40(m,4H),2.42-2.37(m,2H),2.03-2.00(m,1H),1.94-1.84(m,1H).
MS m/z(ESI):636[M+H]+。
实施例43：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四唑-1-基)苯基)丙烯酰胺基)-5-吗啉-5-氧代戊酰胺基)-1H-茚-2-甲酸的制备
Figure BDA0002589780190000601
实验步骤与及反应条件与实施例7相同。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ11.44(s,1H),10.49(s,1H),9.88(s,1H),8.83(d,J＝7.2Hz,1H),8.11(d,J＝7.6Hz,1H),7.96(t,J＝8.4Hz,1H),7.66(dd,J＝1.2,8.4Hz,1H),7.56(s,1H),7.40(d,J＝7.6Hz,1H),6.84(d,J＝18Hz,1H),6.80(d,J＝18Hz,1H),4.87(q,J＝7.1Hz,1H),3.59(s,2H).3.55-3.52(m,4H),3.43-3.40(m,4H),2.42-2.37(m,2H),2.03-.00(m,1H),1.94-1.84(m,1H).
MS m/z(ESI):624[M+H]+。
生物学评价
体外实验例1：测定本发明化合物作为凝血因子X1a抑制剂的生物活性
试剂和材料：
50mM HEPES；pH7.4；145mM NaCl；5mM KCl；0.01％Tween20
凝血因子XIa蛋白酶:取1μL凝血因子XIa原液(5.1mg/mL)，用反应液稀释至100μg/mL，分装每瓶2μL，-80℃保存。凝血因子XIa特异性底物(S-2366，pyroGlu-Pro-Arg-pNA·HCl，)：用DMSO配制成10mM，每管分装66μL，-20℃保存。
试验流程：
将溶于100％DMSO受试化合物用100％DMSO配制成10mM，用DMSO稀释成100μM并向下连续三倍稀释成14个浓度(均为100×)，在最终体系中的终浓度为1.0μM，0.33μM，0.11μM，0.037μM，0.012μM，0.0041μM，0.0014μM，0.00046μM，0.00015μM，0.000051μM。在384孔板中每孔加入0.2μl化合物，空白用DMSO替代，1500rpm离心1min，将化合物离至底部，所有样品进行复孔检测。
每孔加入10μl用反应液配成0.1nM的XIa酶溶液，空白孔加入10μl缓冲液替代，离心，将酶溶液离至底部，在37℃孵育15分钟。
每孔加入用反应液配制的660μM底物10μl，离心，将底物液离至底部，用动力学方法每隔3min测定OD 405至1h。
数据处理：
对各动力学曲线用软件Gen5输出maxV，用Mean±SD表示。
计算药物抑制率
Figure BDA0002589780190000611
其中max组为阳性对照，用DMSO代替药物；min组为阴性对照，用DMSO代替药物，用反应液代替XIa酶溶液。用GraphpadPrism对抑制率和浓度对数值进行四参数曲线拟合，限制最小值为0，最大值为100，计算IC50。
体外实验例2：人全血液体外抗凝血活性的测定
试剂和材料：
血浆：取4名健康女性人血收集于含3.8％枸橼酸钠抗凝剂的采血管中。室温3000rpm离心10min，收集血浆并混合10人血浆，4℃保存2h之内使用。活化部分凝血活酶时间(APTT)测定试剂盒(凝固法)其中包括APTT试剂和氧化钙溶液。LG-PABER-I型血小板聚集凝血因子分析仪，离心机，涡旋混合器。
试验过程：
取血浆混合均匀。将溶于100％DMSO的10mM受试化合物用血浆稀释至1000、100、30、10、5、2.5、1、0.3、0.1μM。空白对照组用血浆按相应比例稀释100％DMSO。所有样品进行复孔检测。
将APTT试剂，CaCl2试剂、血浆(含受试物/DMSO)放入凝血仪中对应位置。其中APTT试剂和血浆预温3min，CaCl2预温15min(温度达到37±1℃)，使其充分溶解，用前振摇混匀。
测试时先加入磁珠，取50μl待测血浆加入测试杯，再加入预温的APTT试剂50μl，置37℃预温通道5min后，加入预温的CaCl2 50μl，立即进行自动测试并记录结果，单位秒(s)
数据处理：
计算各化合物的APTT与相应DMSO对照相比所得比值，用Mean±SD表示，与相应浓度用Excel进行线性拟合，计算EC1.5×，即1.5倍空白对照的APTT所对应的化合物的浓度。
表2实施例化合物对FXIad的抑制活性及抗血液凝结活性表
Figure BDA0002589780190000612
Figure BDA0002589780190000621
Figure BDA0002589780190000631
表2显示了实施例化合物对于凝血因子FXIa的抑制活性和对于人血液凝结的迟滞作用。
体内实验例3：大鼠动静脉血栓实验
试剂和材料：静脉输液针、Polyethylene Tubing(I.D.＝0.58mm)、3号手术丝线、CMC-NA、PEG 300、DMAC、5％葡萄糖溶液、微量注射泵、超声波清洗器、细胞破碎仪、电子天平
试验动物：饲养于SPF环境，温度20～26℃，相对湿度30～70％，12:12h光暗照明；自由饮水及采食。Wistar大鼠(SPF级，雄性，240-260g)
试验流程
购买试验动物，进行适应性饲养5天；按动物体重分为7组，每组8只；实验开始前动物禁食不禁水饲养16小时；三段式聚乙烯管规格：两端管长度为3.5cm。中段管为0.8静脉输液针软管，长度为12.5cm。三段管中丝线，3号手术丝线。
禁食结束后，灌胃给药组(PO溶剂对照、利伐沙班、实施例化合物)所有动物在给药后，腹腔注射1％戊巴比妥钠(30mg/kg,3mL/kg)麻醉，将大鼠用灭菌手术器械在颈部切口，分离气管，分离右颈总动脉和左颈外静脉，剪取3号手术丝线放置于三段式聚乙烯管中，使接触血液的丝线长度为固定长度，以生理盐水充满聚乙烯管，建立动脉夹夹闭的颈动、静脉旁路回路。给药一段时间(实施例化合物)后，打开动脉夹。所有动物贯通时间均为15min，然后迅速取出丝线，称重并计算血栓湿重(血栓湿重＝丝线总湿重-丝线净湿重)；烘箱60℃干燥24h后称重并计算血栓干重(血栓干重＝丝线总干重-丝线净干重)。
静脉给药(iv bolus+iv infusion)组，腹腔注射1％戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉，将大鼠置于仰卧位，iv bolus给药后，立即开始iv infusion给药。麻醉动物用灭菌手术器械在颈部切口，分离气管，分离右颈总动脉和左颈外静脉，剪取3号手术丝线放置于三段式聚乙烯管中，使接触血液的丝线长度为6cm，以生理盐水充满聚乙烯管，建立动脉夹夹闭的颈动、静脉旁路回路。Iv infusion给药一段时间后，打开动脉夹，计时15min(期间持续给药)后迅速取出手术丝线称重，计算血栓湿重(血栓湿重＝丝线总湿重-丝线净重)；60℃烘箱24h后称重，计算血栓干重(血栓干重＝丝线总干重-丝线净重)。
分别计算各组的血栓湿重(g)、干重(g)、湿重抑制率(％)和干重抑制率(％)。
数据处理：试验数据用Microsoft Office Excel 2010软件进行计算和相关统计学处理。数据除特别说明外，用均数±标准误(Mean±S.E)表示，两组间比较采用t-检验分析。P值小于0.05认为差异具有统计学意义。
试验结论：本发明化合物对动物体内血栓形成有明显的抑制作用。
动物药效学实验结果表明，本发明化合物具有显著的体内抗血栓形成作用。

Claims (7)

1.一种如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药：
Figure FDA0002589780060000011
其中
A选自苯基和环己基；
R1各自独立地选自卤素、C1-6烷基、四唑基和三唑基，所述C1-6烷基、四唑基或三唑基各自任选地被一或多个选自氨基和卤素的取代基取代；
n为0、1、2或3；
R2和R3各自独立地选自H和C1-6烷基；
m为0或1；
R4为H；
R6选自H和C1-6烷基；
R7为H或任选地被一或多个R10取代的苯基、苄基、萘基，茚基、吲哚、苯并咪唑、环己基；
R10各自独立地选自-(CH2)r-C(O)s-R11；
r为0或1；
s为1或2；
R11选自H、-CH2R12和任选地被R13取代的C1-6氧代烷基；
R12选自C1-6烷基、C3-6环烷基和苯基；
R13选自-OCOOR14和
Figure FDA0002589780060000012
R14选自C1-6烷基和C3-6环烷基；
R5为任选地被一或多个R8取代的苯基或Cp烷基；
p为0、1、2、3、4、5或6；
R8为在苯基取代位置为邻位或间位或对位的-NR15R16；
R15为H或CH3；
R16为-C(O)-R17；
R17为CH3、-CH2-N(CH3)2或-CH2-OCH3；
R8也可为在Cp烷基取代的-C(O)R18；
R18可以为如下结构中的任意一种
Figure FDA0002589780060000021
Figure FDA0002589780060000022
2.如权利要求1所述的如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，其特征在于，
Figure FDA0002589780060000023
选自
Figure FDA0002589780060000024
Figure FDA0002589780060000025
其中，R19可为H或CH3；
R20可为-CO2R21；
R21为C1至C6的直链烷烃。
3.如权利要求2所述的如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，其特征在于，所述的如式I所示的化合物为如下式II所示的结构：
Figure FDA0002589780060000026
其中，R1、R2、R3、R6、R7、R8、m和n如权利要求1或2所定义。
4.如权利要求3所述的如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，其特征在于，
B为如下结构中的任意一种，
Figure FDA0002589780060000027
Figure FDA0002589780060000028
和/或，R22各自独立地选自-COOH、-COOCH3、-COOCH2CH3、-COOC(CH3)3、-COOCH2OCOOCH2CH3、-COOCH2OCOOCH(CH3)2、-COOCH(CH3)OCOOCH2CH3、-COOCH(CH3)OCOOCH(CH3)2、
Figure FDA0002589780060000031
-CONHSO2CH3、
Figure FDA0002589780060000032
Figure FDA0002589780060000033
-CH2COOH、-OCH3、-OCHF2、
Figure FDA0002589780060000034
-Cl、-F、-NHCOOCH3和-SO2NHCOCH3。
5.一种如权利要求1-4中任一项所述的如式I所示的化合物的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：
Figure FDA0002589780060000035
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、m和n如权利要求1-4中任一项所定义；且PG为羧基的保护基。
6.一种药物组合物，其包含预防或治疗有效量的如权利要求1-4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，以及一种或多种药学上可接受的载体。
7.一种如权利要求1-4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药在制备用于预防或治疗血栓和栓塞相关疾病的药物中的用途。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113636982A (zh) * 2021-04-28 2021-11-12 合肥工业大学 一种肉桂酸衍生物及其制备方法和用途
CN120535564A (zh) * 2025-07-24 2025-08-26 杭州诺泰诺和生物医药科技有限公司 一种含有Sar linker的多肽的制备方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE20110357U1 (de) * 2001-06-22 2001-09-06 Wella Ag, 64295 Darmstadt p-Aminophenol-Derivate und diese Verbindungen enthaltende Färbemittel
CN101784516A (zh) * 2007-06-13 2010-07-21 百时美施贵宝公司 作为凝血因子抑制剂的二肽类似物
CN102834397A (zh) * 2010-02-11 2012-12-19 百时美施贵宝公司 作为凝血因子xia抑制剂的大环化合物
WO2013152727A1 (en) * 2012-04-12 2013-10-17 The University Of Hong Kong Platinum(ii) complexes for oled applications
CN104478866A (zh) * 2014-12-05 2015-04-01 广东东阳光药业有限公司 噁唑烷酮类化合物及其在药物中的应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE20110357U1 (de) * 2001-06-22 2001-09-06 Wella Ag, 64295 Darmstadt p-Aminophenol-Derivate und diese Verbindungen enthaltende Färbemittel
CN101784516A (zh) * 2007-06-13 2010-07-21 百时美施贵宝公司 作为凝血因子抑制剂的二肽类似物
CN102834397A (zh) * 2010-02-11 2012-12-19 百时美施贵宝公司 作为凝血因子xia抑制剂的大环化合物
WO2013152727A1 (en) * 2012-04-12 2013-10-17 The University Of Hong Kong Platinum(ii) complexes for oled applications
CN104478866A (zh) * 2014-12-05 2015-04-01 广东东阳光药业有限公司 噁唑烷酮类化合物及其在药物中的应用

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113636982A (zh) * 2021-04-28 2021-11-12 合肥工业大学 一种肉桂酸衍生物及其制备方法和用途
CN120535564A (zh) * 2025-07-24 2025-08-26 杭州诺泰诺和生物医药科技有限公司 一种含有Sar linker的多肽的制备方法
CN120535564B (zh) * 2025-07-24 2025-09-23 杭州诺泰诺和生物医药科技有限公司 一种含有Sar linker的多肽的制备方法

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