CN113384618B - 一种无花果乳浆提取物作为制备治疗血管内皮细胞损伤药物的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种无花果乳浆提取物作为制备治疗血管内皮细胞损伤药物的应用，涉及医药技术领域。本发明是利用石油醚提取无花果乳浆中的活性物质，并利用该活性物质制备治疗血管内皮细胞损伤药物。经过试验研究发现，本发明的药物能够抑制细胞凋亡、减轻细胞损伤，恢复正常的血管相关因子水平，保护内皮细胞正常生理功能，防止微血管发生病变。
Description
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种无花果乳浆提取物作为制备治疗血管内皮细胞损伤药物的应用。
背景技术
糖尿病可造成组织炎症、病理损伤和多种心血管疾病，而高糖是糖尿病微血管病变的关键因素之一。高浓度葡萄糖及其有毒的副产物，如晚期糖基化终末产物(AGEs)等，会导致糖尿病患者大血管和微血管的内皮功能障碍，包括细胞通透性增加，细胞凋亡，糖萼破裂，造成机体氧化应激和细胞因子分泌异常等，这也是引起糖尿病大血管并发症的始动环节。
高糖环境下导致细胞受损和生理因子分泌紊乱，具体表现为上清液中乳酸脱氢酶(LDH)显著增高，超氧化物歧化酶(SOD)显著降低，血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮素-1(ET-1)显著增高，一氧化氮(NO)和内皮型一氧化氮合酶(eNOs)显著降低。
无花果是桑科榕属植物无花果Ficus carica L.的果实，具有消肿解毒、润肺止咳、清热生津等功效。无花果乳浆是无花果鲜果和茎秆挤出的乳白色粘稠乳汁，其含有的活性物质种类较多。目前，无花果乳浆对糖尿病微血管的研究作用较少，本发明从微血管生理角度，探究无花果乳浆对于高糖诱导血管内皮细胞的损伤保护作用。
发明内容
为此，本发明提供了一种无花果乳浆提取物作为制备治疗血管内皮细胞损伤药物的应用。本发明利用有机溶剂对无花果乳浆中的活性物质进行提取，经过试验验证，该提取物可提高Huvec高糖模型的增殖、迁移和侵袭能力，抑制凋亡，显著提高一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOs)和超氧化物歧化酶(SOD)含量，显著降低乳酸脱氢酶(LDH)、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮素-1(ET-1)含量，即本发明的无花果乳浆提取物可以减轻高糖引起的Huvec损伤，具有明显的细胞保护作用，并恢复异常血管生理因子水平。
本发明所述无花果乳浆提取物是利用石油醚对新鲜无花果乳浆进行萃取，经蒸发、浓缩干燥后制备而成。
优选的，本发明无花果乳浆提取物的制备方法如下：
取新鲜采集的无花果乳浆，搅拌加入无水乙醇，其中无花果乳浆与乙醇的体积比为1:1-1.5(约60％醇浓度体系)，4℃静置醇沉10-24h，抽滤分离后得到醇沉部分和上清液；
在上清液加入无水乙醇，其中上清液与乙醇的体积比为1：15-19(约95％醇浓度体系)，充分搅拌后，4℃静置醇沉10-24h，再次收集醇沉部位和上清液；
将上清液合并，旋蒸除去乙醇，再加入石油醚进行萃取，得到萃取液；
最后将萃取液经过蒸发浓缩以及干燥处理，得到无花果乳浆提取物。
本发明所述药物还包括医学上可接受的辅剂及赋形剂。
本发明是利用无花果乳浆提取物制成能够治疗人脐静脉血管内皮细胞损伤的药物，其中血管内皮细胞损伤为糖所致的血管内皮细胞损伤。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明是利用无花果乳浆的石油醚提取物可明显抑制细胞凋亡、减轻细胞损伤，恢复正常的血管相关因子水平，保护内皮细胞正常生理功能，防止微血管发生病变。
附图说明
图1为无花果乳浆石油醚提取物的浓度对Huvec细胞毒性；
图2为显微镜观察无花果乳浆石油醚提取物对Huvec高糖模型的迁移影响(×40)；
图3为无花果乳浆石油醚提取物对Huvec高糖模型的迁移率；
图4为显微镜观察无花果乳浆石油醚提取物对Huvec高糖模型的侵袭影响(×200)；
图5为无花果乳浆石油醚提取物对Huvec高糖模型的侵袭率；
图6为显微镜观察无花果乳浆石油醚提取物对Huvec高糖模型血管形成能力的影响(×100)；
图7为无花果乳浆石油醚提取物对Huvec高糖模型凋亡影响；
图8为无花果乳浆石油醚提取物对Huvec高糖模型的凋亡率；
图9为无花果乳浆石油醚提取物对Huvec高糖模型的因子影响。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
1材料与仪器
1.1细胞系
本发明所用Huvec人脐静脉血管内皮细胞(ATCC CRL-1730)购自普诺赛。
1.2药物与试剂
本发明所用主要药品与试剂有：新鲜采摘于广西玉林的无花果乳浆；胰蛋白酶(不含EDTA)、FBS、PBS购自美国Gibco公司；Transwell侵袭小室(批号：351157)、Martigel基质胶(批号：256234)购自美国康宁公司；ECM培养基购自美国Sciencell公司；Annexin V-FITC/PI双染凋亡检测试剂盒(批号：556547)购自美国BD公司；SOD(批号：ml063052)、LDH(批号：ml024518)、NO(批号：ml022390)ELISA试剂盒购自上海酶联生物；VEGF(批号：C18013036)、ET-1(批号：C19013037)、eNOs(批号：C13013038)ELISA试剂盒购自武汉华美生物；无水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二甲亚砜均为分析纯，购自国药集团。
1.3主要仪器
本发明所用主要仪器有：N-1100旋转蒸发仪，东京理化器械株式会社；SCIENTZ-10N冷冻干燥机，宁波新芝生物；safe-1200TE生物安全柜，上海力新仪器公司；HF90二氧化碳培养箱，上海力新仪器公司；Spectra Max M5酶标仪，美国分子仪器公司；CKX41倒置显微镜，日本奥林巴斯公司；Accuri C6流式细胞仪，美国BD公司。
2方法
2.1无花果乳浆的部位萃取
2.1.1无花果乳浆石油醚提取物
取新鲜采集的无花果乳浆，搅拌加入无水乙醇，其中无花果乳浆与乙醇的体积比为1:1.5，4℃静置醇沉24h，抽滤分离后得到醇沉部分和上清液；
在上清液加入无水乙醇，其中上清液与乙醇的体积比为1：19，充分搅拌后，4℃静置醇沉24h，再次收集醇沉部位和上清液；
将上清液合并，旋蒸除去乙醇，再加入石油醚进行萃取，得到萃取液；
最后将萃取液经过蒸发浓缩以及干燥处理，得到无花果乳浆石油醚提取物。
2.2.2无花果乳浆乙酸乙酯提取物
取新鲜采集的无花果乳浆，搅拌加入无水乙醇，其中无花果乳浆与乙醇的体积比为1:1.5，4℃静置醇沉24h，抽滤分离后得到醇沉部分和上清液；
在上清液加入无水乙醇，其中上清液与乙醇的体积比为1：19，充分搅拌后，4℃静置醇沉24h，再次收集醇沉部位和上清液；
将上清液合并，旋蒸除去乙醇，再加入乙酸乙酯进行萃取，得到萃取液；
最后将萃取液经过蒸发浓缩以及干燥处理，得到无花果乳浆乙酸乙酯提取物。
2.2.3无花果乳浆正丁醇和剩余水部位提取物
取新鲜采集的无花果乳浆，搅拌加入无水乙醇，其中无花果乳浆与乙醇的体积比为1:1.5，4℃静置醇沉24h，抽滤分离后得到醇沉部分和上清液；
在上清液加入无水乙醇，其中上清液与乙醇的体积比为1：19，充分搅拌后，4℃静置醇沉24h，再次收集醇沉部位和上清液；
将上清液合并，旋蒸除去乙醇，再加入正丁醇进行萃取，分离得到上层萃取液和下层剩余水溶液；
最后将萃取液和下层剩余水溶液经过蒸发浓缩以及干燥处理，分别得到无花果乳浆正丁醇提取物和剩余水部位提取物。
2.2无花果乳浆不同溶剂提取物对Huvec细胞高糖模型的增殖影响
在ECM培养基(葡萄糖浓度为5.5mM)中加入葡萄糖，获得葡萄糖浓度为35mM的高糖ECM培养基，然后利用高糖ECM培养基与分别与提取物混合，制备出浓度3000μg/mL-23.44μg/mL提取物溶液(即石油醚提取物溶液、乙酸乙酯提取物溶液、正丁醇提取物溶液、剩余水部位提取物溶液)。
同时利用ECM培养基(葡萄糖浓度为5.5mM)以及高糖ECM培养基作为对照组。
将上述溶液分别作用于Huvec细胞。具体方式如下：
将10代以内的Huvec经胰酶消化后铺于96孔板内(1×105个/孔)，孵育过夜。每孔加入100μL上述溶液。37℃，5％CO2孵育48h，每孔加入MTT溶液120μL，37℃孵育4h，加入DMSO溶液100μL，570nm处观察吸光度值(OD)，计算细胞存活率，细胞存活率＝实验组OD值/空白对照组OD值×100％。经过试验发现高糖环境可使Huvec存活率显著下降。
在不同溶剂提取物中，只有石油醚提取物可以对高糖环境下的Huvec起到较显著的保护作用。故以下试验采用高糖ECM培养基与无花果乳浆石油醚提取物制成的溶液作为供试品。
2.3 MTT法测定不同浓度供试品对Huvec细胞高糖模型的增殖影响
从图1中可以看出，当供试品中石油醚提取物在750μg/mL及以下浓度时均可显著提高细胞活力(*P<0.05)，维持高糖环境下的细胞活性。此外，石油醚提取物在750μg/mL浓度以下无明显的细胞毒性。
2.3“划痕试验”考察供试品对Huvec高糖模型的迁移影响
将Huvec接种在6孔板中(3×105个/孔)，使用枪头尖划痕，PBS清洗，每孔加入含石油醚提取物的供试品，每个浓度设置三个复孔，设置高糖模型组和正常对照组，在0h、24h、48h用倒置显微镜在事先标记的固定位置拍照，以0h划痕面积作为参照，使用ImageJ软件计算迁移率，迁移率＝(0h划痕面积-t时刻划痕面积)/0h划痕面积×100％。
通过显微图像和ImageJ量化分析，在24h内，高糖模型组的细胞迁移能力明显下降(##P<0.01)，在48h内，高糖显著性降低了Huvec的迁移愈合能力(###P<0.001)，如图2所示。与模型组相比，在24h内无花果乳浆石油醚提取物即发挥了较好的保护作用，在48h内，各浓度均可以显著性改善细胞的迁移能力(***P<0.001)。100μg/mL的供试品既表现出良好的促进Huvec迁移的效果，如图3所示。但随着浓度增高，促迁移效果略有下降，推测可能与轻微的细胞毒性有关。
2.4 Transwell侵袭试验考察供试品对Huvec高糖模型的侵袭影响
采用24孔、8μm孔径的Transwell板，胰酶消化Huvec，用低血清高糖培养基重悬细胞至1.5×105/mL，上室加入200μL细胞悬液，下室加入石油醚提取物浓度不同的供试品750μL，高糖模型组下室加入不含石油醚提取物的高糖完全培养基，正常对照组下室加入低糖完全培养基。孵育48小时后，4％甲醛、甲醇固定，0.1％结晶紫染色，倒放在显微镜下拍摄，使用ImageJ软件计算侵袭率，侵袭率＝结晶紫染色面积/小室面积×100％。
通过显微图像和ImageJ量化分析发现，相较于正常对照组，高糖模型组侵袭细胞数明显较少(###P<0.001)，100μg/mL～400μg/mL无花果乳浆石油醚提取物均可显著性提高细胞侵袭能力(***P<0.001)，见图4、图5。
2.5血管形成试验
将枪头和96孔板4℃预冷，每孔加入50μL Matrigel基质胶，37℃孵育1h。每孔接种Huvec(4×105个)，加入100μL石油醚提取物的供试品，设置高糖模型组和正常对照组，孵育6h后，用倒置显微镜观察成管情况。
将Huvec接种在基质胶上，可在体外模拟血管的体内形成。如图6所示，相比于正常对照组，高糖模型组显著降低了Huvec的血管形成能力，血管形成不连贯，变细，管状数目变少。而石油醚提取物位可以呈剂量依赖性的提高血管形成的能力，保护因高糖受损的模拟血管，防止其形成中断，形成表观形状规则的管状集合体，且管状数量增多。
2.6流式细胞仪检测细胞凋亡
胰酶消化Huvec，接种在六孔板内(3×105个/孔)，每孔加入含供试品高糖培养基，设置高糖模型组和正常对照组，孵育48h后，使用不含EDTA的胰酶消化，按照说明书加入AnnexinV-FITC、PI染液，1h内在流式细胞仪中检测。
如图7、图8所示，与正常对照组相比，高糖模型组在早期凋亡和晚期凋亡的细胞数显著性提升(###P<0.001)，说明高糖环境促使了Huvec损伤凋亡。100μg/mL～400μg/mL无花果石油醚提取物均可显著性抑制Huvec早晚期凋亡(***P<0.001)，其中200μg/mL的保护效果最佳，不同浓度之间差异较小。
2.7酶联免疫吸附法(ELISA)测定供试品对Huvec高糖模型中VEGF、ET-1、SOD、LDH、NO、eNOs因子的影响
胰酶消化Huvec，接种在六孔板内(3×105个/孔)，每孔加入含供试品高糖培养基，设置高糖模型组和正常对照组。孵育48h后，取超滤后细胞上清液，-20℃保存，备用。严格按照ELISA试剂盒说明书进行测定。
如图9所示，与正常对照组相比，高糖模型组的LDH、VEGF和ET-1因子水平显著性提高(##P<0.01)，SOD、NO和eNOs含量显著性下降(##P<0.01)。石油醚提取物各浓度均可显著性降低LDH、ET-1含量和提高NO水平(*P<0.05)，200μg/mL～400μg/mL浓度范围可以显著降低VEGF含量(**P<0.01)，400μg/mL时可明显提高eNOs含量(***P<0.001)和SOD水平(**P<0.01)。
综上所述，本发明发现高糖模型在体外可以显著性阻碍Huvec人脐静脉内皮细胞的正常生理功能，如增殖、迁移、侵袭和血管形成，并促进细胞凋亡，无花果乳浆的石油醚提取物可明显改善上述功能，抑制细胞凋亡。无花果乳浆的石油醚提取物可以减轻细胞损伤，恢复正常的血管相关因子水平，保护内皮细胞正常生理功能，防止微血管发生病变。
以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例，显然本发明不仅仅限于以上实施例，还可以有其他变形。本领域的技术人员从本发明公开内容直接导出或间接引申的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
Claims (3)
1.一种无花果乳浆提取物作为制备治疗血管内皮细胞损伤药物的应用，其特征在于，所述无花果乳浆提取物的制备方法如下：
取新鲜采集的无花果乳浆，搅拌加入无水乙醇，其中无花果乳浆与乙醇的体积比为1:1-1.5，4°C静置醇沉10-24h，抽滤分离后得到醇沉部分和上清液；
在上清液加入无水乙醇，其中上清液与乙醇的体积比为1：15-19，充分搅拌后，4°C静置醇沉10-24h，再次收集醇沉部位和上清液；
将上清液合并，旋蒸除去乙醇，然后再加入石油醚进行萃取，得到萃取液；
最后将萃取液经过蒸发浓缩以及干燥处理，得到无花果乳浆提取物；
所述血管内皮细胞损伤为糖所致的血管内皮细胞损伤。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物还包括医学上可接受的辅剂。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述血管内皮细胞为人脐静脉血管内皮细胞。
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Non-Patent Citations (1)
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| Inhibitory Potential of Murraya Koenigii (L.) and Ficus Carica L. Extracts Against Aldose Reductase (ALR), Advanced Glycation End Products (AGEs) Formation and Sorbitol Accumulation;Shah Asma Farooq,等;《Serbian Journal of Experimental and Clinical Research》;20210805;第22卷(第2期);第125-130页 * |
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