CN111527105A

CN111527105A - 诱导补体活性的方法

Info

Publication number: CN111527105A
Application number: CN201880065818.8A
Authority: CN
Inventors: S·帕尼克; S·摩尔; P·尼基丁; T·拜恩; G·帕里
Original assignee: Biowera Divi Corp
Current assignee: Biowera Divi Corp
Priority date: 2017-10-11
Filing date: 2018-10-11
Publication date: 2020-08-11
Anticipated expiration: 2038-10-11
Also published as: EP3694874A1; TW201927808A; US20200239556A1; JP7369121B2; TWI823868B; JP2020536544A; CN111527105B; WO2019075220A1; US11192944B2

Abstract

本公开提供诱导细胞表面上的补体活性的方法，该方法包括使所述细胞与有效量的抗因子B抗体接触，其中所述抗因子B抗体抑制C3bBb复合物解离成因子Bb和C3b。

Description

诱导补体活性的方法

本公开的领域

本公开总体上涉及治疗性补体相关的病症的领域。

背景

补体系统是固有免疫系统的一部分。其主要作用是“补充”抗体和吞噬细胞从生物体中清除有害病原体的能力。

补体系统包括三个单独的上游激活途径，全部都汇聚在共同的末端途径上。其中两种途径是由特定且不同的的机制诱发的：当抗体与抗原结合时，经典途径(CP)被应答；凝集素途径(LP)是由病原体表面上的糖类残基激活的。替代途径(AP)的独特之处在于它在基础水平上持续激活，这被称为“AP慢转(tick-over)”；它的活性可通过异物表面和受损的细胞上的多种信号经由正反馈放大回路大大增加。AP扩增回路的主要驱动因素是AP转化酶(C3bBb)。当裂解酶原因子B生成分裂产物fBb时，形成此酶，所述分裂产物fBb与表面结合的C3b快速缔合以形成活性酶C3bBb。然后，C3bBb持续裂解中央C3蛋白的额外分子，导致调理素(C3b、iC3b)、过敏毒素(C3a和C5a)和末端裂解复合物(MAC；C5b-9)的生成。

简述

本公开的某些方面涉及诱导细胞表面上的补体活性的方法，该方法包括使所述细胞与有效量的特异性结合因子Bb的抗体(“抗因子B抗体”)接触，其中所述抗因子B抗体抑制C3bBb复合物的解离。在一些实施方案中，所述抗因子B抗体除因子Bb外特异性结合因子B。

在一些实施方案中，所述抗因子B抗体具有选自下组的一个或多个性质：(i)与C3bBb复合物特异性结合，(ii)降低、抑制或防止C3bBb复合物的降解，(iii)诱导血清中的C3裂解，(iv)降低C3的血清浓度，(v)诱导所述细胞表面上C3b的积累；(vi)诱导血清补体活性的丧失，(vii)诱导所述细胞表面上的膜攻击沉积，和(viii)其任何组合。在一些实施方案中，所述抗因子B抗体降低或阻断CD55介导的C3bBb复合物的解离。在一些实施方案中，所述抗因子B抗体降低或阻断因子H介导的C3bBb复合物的解离。

在一些实施方案中，所述补体活性是补体介导的细胞死亡。在一些实施方案中，所述补体活性是替代补体途径。

在一些实施方案中，所述细胞是体内细胞。

在一些实施方案中，所述抗因子B抗体与参考抗体竞争结合C3bBb复合物，所述参考抗体包含具有SEQ ID NO:7的重链可变区和具有SEQ ID NO:8的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗因子B抗体与参考抗体特异性结合因子Bb上的相同表位，所述参考抗体包含具有SEQ ID NO:7的重链可变区和具有SEQ ID NO:8的轻链可变区。

在一些实施方案中，所述抗因子B抗体包含重链可变区(VH)的互补决定区-1(CDR1)、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VH CDR3包含SEQID NO:3或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:3。在一些实施方案中，所述抗因子B抗体包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VH CDR1包含SEQ ID NO:1或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:1。在一些实施方案中，所述抗因子B抗体包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VH CDR2包含SEQ ID NO:2或具有一处或两处氨基酸取代的SEQID NO:2。

在一些实施方案中，所述抗因子B抗体包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VL CDR1包含SEQ ID NO:4或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:4。在一些实施方案中，所述抗因子B抗体包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VL CDR2包含SEQ ID NO:5或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:5。在一些实施方案中，所述抗因子B抗体包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VL CDR3包含SEQ ID NO:6或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:6。

在一些实施方案中，所述抗因子B抗体的VH包含与SEQ ID NO:7至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗因子B抗体的VL包含与SEQ ID NO:8至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述抗因子B抗体是嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一些实施方案中，所述抗因子B抗体是双特异性或多特异性抗体。

在一些实施方案中，所述抗因子B抗体通过诱导细胞死亡来治疗疾病或病况。在一些实施方案中，所述疾病或病况包括癌症、感染或自身免疫疾病。在一些实施方案中，所述抗因子B抗体是肠胃外、静脉内、皮下、皮内、经皮、肌肉内、口服、眼内、鞘内、腹腔内、鼻内、颊部、舌下、直肠、阴道或经由肺部路径施用的。

本公开的一些方面涉及一种双特异性抗体，其包含(i)特异性结合因子Bb(“抗因子B结合域”)并抑制C3bBb复合物的解离的抗原结合域和(ii)组织或细胞特异性的第二抗原结合域。在一些实施方案中，所述抗因子B抗体除因子Bb外特异性结合因子B。

在一些实施方案中，所述抗因子B结合域具有选自下组的一个或多个性质：(i)与C3bBb复合物特异性结合，(ii)降低、抑制或防止C3bBb复合物的降解，(iii)诱导补体活性，(iv)诱导血清中C3裂解，(v)降低C3的血清浓度，(vi)诱导所述细胞表面上C3b的积累；(vii)诱导所述细胞表面上的膜攻击复合物沉积，和(viii)其任何组合。

在一些实施方案中，所述抗因子B结合域降低或阻断CD55介导的C3bBb复合物的解离。在一些实施方案中，所述抗因子B结合域降低或阻断因子H介导的C3bBb复合物的解离。

在一些实施方案中，所述抗因子B结合域与参考抗体竞争结合C3bBb复合物，所述参考抗体包含具有SEQ ID NO:7的重链可变区和具有SEQ ID NO:8的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗因子B结合域与参考抗体特异性结合因子Bb上的相同表位，所述参考抗体包含具有SEQ ID NO:7的重链可变区和具有SEQ ID NO:8的轻链可变区。

在一些实施方案中，所述抗因子B结合域包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VH CDR3包含SEQ ID NO:3或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:3。在一些实施方案中，所述抗因子B结合域包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VH CDR1包含SEQ ID NO:1或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:1。在一些实施方案中，所述抗因子B结合域包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VH CDR2包含SEQ ID NO:2或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:2。

在一些实施方案中，所述抗因子B结合域包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VL CDR1包含SEQ ID NO:4或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:4。在一些实施方案中，所述抗因子B结合域包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VL CDR2包含SEQ ID NO:5或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:5。在一些实施方案中，所述抗因子B结合域包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VL CDR3包含SEQ ID NO:6或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:6。

在一些实施方案中，所述抗因子B结合域的VH包含与SEQ ID NO:7至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗因子B结合域的VL包含与SEQ ID NO:8至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列。

本公开的一些方面涉及一种多特异性抗体，其包含(i)本文公开的双特异性抗体和(ii)第三抗原结合域。

本公开的一些方面涉及一种多核苷酸或一组多核苷酸，其编码本文公开的抗体、双特异性抗体或多特异性抗体。本公开的一些方面涉及一种载体或一组载体，其包含本文公开的一种多核苷酸或一组多核苷酸。

本公开的一些方面涉及一种诱导细胞表面上的补体活性的方法，该方法包括使所述细胞与有效量的本文公开的双特异性抗体或多特异性抗体接触。在一些实施方案中，所述补体活性是补体介导的细胞死亡。

本公开的一些方面涉及一种诱导有需要受试者中的细胞死亡的方法，其包括施用有效量的本文公开的双特异性抗体或多特异性抗体。

本公开的一些方面涉及一种通过在有需要受试者中诱导细胞死亡来治疗疾病或病况的方法，该方法包括施用有效量的本文公开的双特异性抗体或多特异性抗体。

实施方案

E1.一种诱导细胞表面上的补体活性的方法，其包括使所述细胞与有效量的特异性结合因子Bb的抗体(“抗因子B抗体”)接触，其中所述抗因子B抗体抑制C3bBb复合物的解离。

E2.根据E1所述的方法，其中所述抗因子B抗体除因子Bb外特异性结合因子B。

E3.根据E1或E2所述的方法，其中所述抗因子B抗体具有选自下组的一个或多个性质：(i)与C3bBb复合物特异性结合，(ii)降低、抑制或防止C3bBb复合物的降解，(iii)诱导血清中C3裂解，(iv)降低C3的血清浓度，(v)诱导所述细胞表面上C3b的积累；(vi)诱导血清补体活性的丧失，(vii)诱导所述细胞表面上的膜攻击沉淀，和(viii)其任何组合。

E4.根据E1至E3任一项所述的方法，其中所述抗因子B抗体降低或阻断CD55介导的C3bBb复合物的解离。

E5.根据E1至E4任一项所述的方法，其中所述抗因子B抗体降低或阻断因子H介导的C3bBb复合物的解离。

E6.根据E1至E5任一项所述的方法，其中所述补体活性是补体介导的细胞死亡。

E7.根据E1至E6任一项所述的方法，其中所述补体活性是可替换补体途径。

E8.根据E1至E7任一项所述的方法，其中所述细胞是体内细胞。

E9.根据E1至E8任一项所述的方法，其中所述抗因子B抗体与参考抗体竞争结合所述C3bBb复合物，所述参考抗体包含具有SEQ ID NO:7的重链可变区和具有SEQ ID NO:8的轻链可变区。

E10.根据E1至E9任一项所述的方法，其中所述抗因子B抗体与参考抗体特异性结合因子Bb上的相同表位，所述参考抗体包含具有SEQ ID NO:7的重链可变区和具有的轻链可变区。

E11.根据E1至E10任一项所述的方法，其中所述抗因子B抗体包含重链可变区(VH)的互补决定区-1(CDR1)、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VHCDR3包含SEQ ID NO:3或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:3。

E12.根据E1至E11任一项所述的方法，其中所述抗因子B抗体包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VH CDR1包含SEQID NO:1或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:1。

E13.根据E1至E12任一项所述的方法，其中所述抗因子B抗体包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VH CDR2包含SEQID NO:2或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:2。

E14.根据E1至E13任一项所述的方法，其中所述抗因子B抗体包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VL CDR1包含SEQID NO:4或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:4。

E15.根据E1至E14任一项所述的方法，其中所述抗因子B抗体包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VL CDR2包含SEQID NO:5或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:5。

E16.根据E1至E15任一项所述的方法，其中所述抗因子B抗体包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VL CDR3包含SEQID NO:6或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:6。

E17.根据E1至E16任一项所述的方法，其中所述抗因子B抗体的VH包含与SEQ IDNO:7至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列。

E18.根据E1至E17任一项所述的方法，其中所述抗因子B抗体的VL包含与SEQ IDNO:8至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列。

E19.根据E1至E18任一项所述的方法，其中所述抗因子B抗体是嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。

E20.根据E1至E19任一项所述的方法，其中所述抗因子B抗体是双特异性或多特异性抗体。

E21.根据E1至E20任一项所述的方法，其中所述抗因子B抗体通过诱导细胞死亡来治疗疾病或病况。

E22.根据E21所述的方法，其中所述疾病或病况包括癌症、感染或自身免疫性疾病。

E23.根据E22所述的方法，其中所述癌症选自下组：黑色素瘤(MEL)；肾细胞癌(RCC)；肺癌；结直肠癌(CRC)；前列腺癌；肝癌；头和颈的鳞状细胞癌；食管、卵巢、胃肠道和乳腺的癌；血液系统恶性肿瘤如多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤/原发性纵隔B细胞淋巴瘤和慢性髓细胞性白血病；及其任何组合。

E24.根据E22所述的方法，其中所述自身免疫性疾病选自下组：多发性硬化症、1型糖尿病、类风湿性关节炎、狼疮、乳糜泻、干燥综合征、多肌痛、强直性脊柱炎、斑秃、血管炎、颞动脉炎、爱迪生氏病、年龄相关性黄斑变性、脱发症、自身免疫性肝炎(例如，与乙型肝炎病毒感染相关的自身免疫性肝炎；与丙型肝炎病毒感染相关的自身免疫性肝炎)、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性皮肤病、自身免疫性甲状腺疾病、大疱性类天疱疮、乳糜泻、冷凝集素疾病、皮肌炎、1型糖尿病、格雷夫斯病、古德帕斯彻氏综合征、桥本氏病(Hashimoto'sdisease)、甲状旁腺功能减退、垂体机能减退症、甲状腺功能减退、特发性血小板减少性紫癜、炎性肠病(例如，克罗恩氏病；溃疡性结肠炎)、多发性硬化症、重症肌无力、心肌炎、视神经脊髓炎、寻常天疱疮、落叶型天疱疮、多肌炎、银屑癣、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、干燥综合征、系统性红斑狼疮、葡萄膜炎、韦格纳肉芽肿和多发性/皮肌炎、年龄相关的自身免疫性病症、年龄相关性黄斑变性、阿尔茨海默氏病、肌萎缩性侧索硬化症、过敏性反应、嗜银粒性痴呆、关节炎(例如，类风湿性关节炎)、哮喘、动脉粥样硬化、非典型溶血性尿毒症综合征、自身免疫疾病、自身免疫性溶血性贫血、Barraquer-Simons综合征、贝切特氏病、英式淀粉样血管病、大疱性类天疱疮、伯格氏病、Clq肾病、癌症、暴发性抗磷脂综合征、脑淀粉样血管病、冷凝集素疾病、皮质基底节变性、克雅氏病、克罗恩氏病、冷球蛋白性血管炎、普吉氏痴呆(dementia pugilistica)、路易体痴呆(DLB)、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化、盘状红斑狼疮、唐氏综合征、局灶节段性肾小球硬化、形式思维障碍、额颞痴呆(FTD)、额颞叶痴呆伴与17号染色体关联的帕金森氏症、额颞叶退化、Gerstmann-Straussler-Scheinker病、格林巴利综合征、Hallervorden-Spatz病、溶血尿毒症综合征、遗传性血管性水肿、Hypophosphastasis、特发性肺炎综合征、免疫复合物病、包涵体肌炎、炎性疾病、缺血/再灌注损伤、轻度认知障碍、免疫性血小板减少性紫癜(ITP)、A型钼辅因子缺乏症(MoCD)、膜增生性肾小球肾炎(MPGN)I、膜增生性肾小球肾炎(MPGN)II(致密沉积病)、膜性肾炎、多发性梗塞性痴呆、狼疮(例如，系统性红斑狼疮(SLE))、肾小球肾炎、川崎病、多灶性运动神经病、多发性硬化症、多系统萎缩症、重症肌无力、心肌梗塞、强直性肌营养不良、视神经脊髓炎、尼曼匹克症C型、非瓜马尼亚运动神经元疾病伴神经原纤维缠结、帕金森氏病、帕金森氏病伴痴呆、阵发性睡眠性血红蛋白尿症、寻常天疱疮、匹克氏病、脑炎后帕金森综合征、多肌炎、朊蛋白脑淀粉样血管病、进行性皮质下神经胶质过多症、进行性核上性麻痹、银屑癣、败血症、志贺毒素大肠杆菌(STEC)-HuS、脊髓性肌萎缩、中风、亚急性硬化性全脑炎、缠结性痴呆、移植排斥、血管炎(例如，ANCA相关的血管炎)、韦格纳肉芽肿病、镰状细胞病、冷球蛋白血症、混合性冷球蛋白血症、原发性混合性冷球蛋白血症、II型混合性冷球蛋白血症、III型混合性冷球蛋白血症、肾炎、药物诱发性血小板减少症、狼疮肾炎、大疱性类天疱疮、获得性大疱性表皮松解症、延迟溶血性输血反应、低补体性荨麻疹血管炎综合征、假晶状体大疱性角膜病变、血小板输注无效症及其任何组合。

E25.根据E22所述的方法，其中所述感染包含细菌感染(例如，脑膜炎奈瑟氏球菌或链球菌)、病毒感染(例如，HIV)、真菌感染、寄生虫感染或其任何组合。

E26.根据E1至E25任一项所述的方法，其中所述抗因子B抗体是肠胃外、静脉内、皮下、皮内、经皮、肌肉内、口服、眼内、鞘内、腹腔内、鼻内、颊部、舌下、直肠、阴道或经由肺部路径施用的。

E27.根据E1至E26任一项所述的方法，其中所述细胞是肿瘤细胞或病原体。

E28.根据E1至E27任一项所述的方法，其中所述细胞是天然细胞。

E29.一种双特异性抗体，包含(i)特异性结合因子Bb(“抗因子B结合域”)并抑制C3bBb复合物的解离的抗原结合域和(ii)组织或细胞特异性的第二抗原结合域。

E30.根据E29所述的双特异性抗体，其中所述抗因子B抗体除因子Bb外特异性结合因子B。

E31.根据E29或E30所述的双特异性抗体，其中所述抗因子B结合域具有选自下组的一个或多个性质：(i)与C3bBb复合物特异性结合，(ii)降低、抑制或防止C3bBb复合物的降解，(iii)诱导补体活性，(iv)诱导血清中C3裂解，(v)降低C3的血清浓度，(vi)诱导所述细胞表面上C3b的积累；(vii)诱导所述细胞表面上的膜攻击复合物沉积，和(viii)其任何组合。

E32.根据E29至E31任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗因子B结合域降低或阻断CD55介导的C3bBb复合物的解离。

E33.根据E29至E32任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗因子B结合域降低或阻断因子H介导的C3bBb复合物的解离。

E34.根据E29至E33任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗因子B结合域与参考抗体竞争结合C3bBb复合物，所述参考抗体包含具有SEQ ID NO:7的重链可变区和具有SEQID NO:8的轻链可变区。

E35.根据E29至E34任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗因子B结合域与参考抗体特异性结合因子Bb上的相同表位，所述参考抗体包含具有SEQ ID NO:7的重链可变区和具有SEQ ID NO:8的轻链可变区。

E36.根据E29至E35任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗因子B结合域包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VHCDR3包含SEQ ID NO:3或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:3。

E37.根据E29至E36任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗因子B结合域包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VHCDR1包含SEQ ID NO:1或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:1。

E38.根据E29至E37任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗因子B结合域包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VHCDR2包含SEQ ID NO:2或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:2。

E39.根据E29至E38任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗因子B结合域包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VLCDR1包含SEQ ID NO:4或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:4。

E40.根据E29至E39任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗因子B结合域包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VLCDR2包含SEQ ID NO:5或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:5。

E41.根据E29至E40任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗因子B结合域包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VLCDR3包含SEQ ID NO:6或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:6。

E42.根据E29至E41任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗因子B结合域的VH包含与SEQ ID NO:7至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列。

E43.根据E29至E42任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗因子B结合域的VL包含与SEQ ID NO:8至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列。

E44.根据E29至E42任一项所述的双特异性抗体，其是嵌合或人源化的。

E45.一种多特异性抗体，其包含(i)权利要求29至44任一项所述的双特异性抗体和(ii)第三抗原结合域。

E46.一种组合物，其包含E29至E44任一项所述的双特异性抗体或E45所述的多特异性抗体。

E47.一种多核苷酸或一组多核苷酸，其包含编码E29至E44任一项所述的双特异性抗体或E45所述的多特异性抗体的核酸。

E48.一种载体或一组载体，其包含E47所述的多核苷酸或多核苷酸组。

E49.根据E48所述的载体或载体组，其中所述多核苷酸或多核苷酸组可操作地与启动子连接。

E50.一种宿主细胞，其包含E45所述的多核苷酸或多核苷酸组，或E48或E49所述的载体或载体组。

E51.一种产生双特异性抗体或多特异性抗体的方法，其包括在合适的条件下培养E50所述的宿主细胞。

E52.一种诱导细胞表面上补体活性的方法，该方法包括使所述细胞与有效量的E29至E44任一项所述的双特异性抗体或E45所述的多特异性抗体接触。

E53.根据E52所述的方法，其中所述补体活性是补体介导的细胞死亡。

E54.根据E52或E53所述的方法，其中所述补体活性是替代补体途径。

E55.根据E52至E54任一项所述的方法，其中所述细胞是体内的细胞。

E56.一种在有需要受试者中诱导细胞死亡的方法，其包括施用有效量的E29至E44任一项所述的双特异性抗体或E45所述的多特异性抗体。

E57.一种通过在有需要受试者中诱导细胞死亡来治疗疾病或病况的方法，其包括施用有效量的E29至E44任一项所述的双特异性抗体或E45所述的多特异性抗体。

E58.根据E57所述的方法，其中所述疾病或病况包括癌症、感染或自身免疫性疾病。

E59.根据E58所述的方法，其中所述癌症选自下组：黑色素瘤(MEL)；肾细胞癌(RCC)；肺癌；结直肠癌(CRC)；前列腺癌；肝癌；头和颈的鳞状细胞癌；食管、卵巢、胃肠道和乳腺的癌；血液系统恶性肿瘤如多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤/原发性纵隔B细胞淋巴瘤和慢性髓细胞性白血病；及其任何组合。

E60.根据E59所述的方法，其中所述感染包含细菌感染(例如，脑膜炎奈瑟氏球菌或链球菌)、病毒感染(例如，HIV)、真菌感染、寄生虫感染或其任何组合。

E61.根据E58所述的方法，其中所述自身免疫性疾病选自多发性硬化症、1型糖尿病、类风湿性关节炎、狼疮、乳糜泻、干燥综合征、多肌痛、强直性脊柱炎、斑秃、血管炎、颞动脉炎、爱迪生氏病、年龄相关性黄斑变性、脱发症、自身免疫性肝炎(例如，与乙型肝炎病毒感染相关的自身免疫性肝炎；与丙型肝炎病毒感染相关的自身免疫性肝炎)、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性皮肤病、自身免疫性甲状腺疾病、大疱性类天疱疮、乳糜泻、冷凝集素疾病、皮肌炎、1型糖尿病、格雷夫斯病、古德帕斯彻氏综合征、桥本氏病、甲状旁腺功能减退、垂体机能减退症、甲状腺功能减退、特发性血小板减少性紫癜、炎性肠病(例如，克罗恩氏病；溃疡性结肠炎)、多发性硬化症、重症肌无力、心肌炎、视神经脊髓炎、寻常天疱疮、落叶型天疱疮、多肌炎、银屑癣、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、干燥综合征、系统性红斑狼疮、葡萄膜炎、韦格纳肉芽肿和多发性/皮肌炎、年龄相关的自身免疫性病症、年龄相关性黄斑变性、阿尔茨海默氏病、肌萎缩性侧索硬化症、过敏性反应、嗜银粒性痴呆、关节炎(例如，类风湿性关节炎)、哮喘、动脉粥样硬化、非典型溶血性尿毒症综合征、自身免疫疾病、自身免疫性溶血性贫血、Barraquer-Simons综合征、贝切特氏病、英式淀粉样血管病、大疱性类天疱疮、伯格氏病、Clq肾病、癌症、暴发性抗磷脂综合征、脑淀粉样血管病、冷凝集素疾病、皮质基底节变性、克雅氏病、克罗恩氏病、冷球蛋白性血管炎、普吉氏痴呆、路易体痴呆(DLB)、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化、盘状红斑狼疮、唐氏综合征、局灶节段性肾小球硬化、形式思维障碍、额颞痴呆(FTD)、额颞叶痴呆伴与17号染色体关联的帕金森氏症、额颞叶退化、Gerstmann-Straussler-Scheinker病、格林巴利综合征、Hallervorden-Spatz病、溶血尿毒症综合征、遗传性血管性水肿、hypophosphastasis、特发性肺炎综合征、免疫复合物病、包涵体肌炎、炎性疾病、缺血/再灌注损伤、轻度认知障碍、免疫性血小板减少性紫癜(ITP)、A型钼辅因子缺乏症(MoCD)、膜增生性肾小球肾炎(MPGN)I、膜增生性肾小球肾炎(MPGN)II(致密沉积病)、膜性肾炎、多发性梗塞性痴呆、狼疮(例如，系统性红斑狼疮(SLE))、肾小球肾炎、川崎病、多灶性运动神经病、多发性硬化症、多系统萎缩症、重症肌无力、心肌梗塞、强直性肌营养不良、视神经脊髓炎、尼曼匹克症C型、非瓜马尼亚运动神经元疾病伴神经原纤维缠结、帕金森氏病、帕金森氏病伴痴呆、阵发性睡眠性血红蛋白尿症、寻常天疱疮、匹克氏病、脑炎后帕金森综合征、多肌炎、朊蛋白脑淀粉样血管病、进行性皮质下神经胶质过多症、进行性核上性麻痹、银屑癣、败血症、志贺毒素大肠杆菌(STEC)-HuS、脊髓性肌萎缩、中风、亚急性硬化性全脑炎、缠结性痴呆、移植排斥、血管炎(例如，ANCA相关的血管炎)、韦格纳肉芽肿病、镰状细胞病、冷球蛋白血症、混合性冷球蛋白血症、原发性混合性冷球蛋白血症、II型混合性冷球蛋白血症、III型混合性冷球蛋白血症、肾炎、药物诱发性血小板减少症、狼疮肾炎、大疱性类天疱疮、获得性大疱性表皮松解症、延迟溶血性输血反应、低补体性荨麻疹血管炎综合征、假晶状体大疱性角膜病变、血小板输注无效症及其任何组合。

附图简述

图1A-1B是在与抗因子B抗体(抗因子B Ab或也称为FBb Ab)温育的人血清中C3bBb的因子H(图1A)和DAF/CD55(图1B)解离的图示，所述抗因子B抗体包含SEQ ID NO:7的重链可变区和SEQ ID NO:8的轻链可变区。与抗体或抗体片段(抗因子BAb；抗因子B F(ab')₂；Quidelα-fB；抗因子B Fab；C3bBb)混合的C3bBb复合物装载被添加至用链霉亲和素涂覆的Octet探针。C3b+fB和fB用作阴性对照。在600秒时，探针被转移至仅含有缓冲液的溶液中。在780秒时，添加因子H(图1A)或DAF/CD55(图1B)。抗因子B F(ab')₂＝抗因子B Ab的F(ab')2片段；Quidelα-fB＝商业上可得到的因子B抗体；抗因子B Fab＝抗因子B Ab的Fab片段；fB＝因子B。

图2是Western印迹的图像，其检测用因子B抗体处理的血清样品中的C3裂解。通常在约140kD处检测到人C3。在与包含因子B抗体(抗因子B Ab，抗因子B-Fab或Quidelα-fB)的缓冲液温育10分钟、20分钟或30分钟后，分析等分试样。单独的缓冲液(泳道2和3)和与mIgG2a温育的样品(泳道4-6)用作阴性对照。缓冲液：补体替代途径(CAP)稀释缓冲液中的10％正常人血清(NHS)。kD：千道尔顿；mIgG2a：IgG2a单克隆抗体；抗因子B Ab:Fab：抗因子BAb的Fab片段；Quidelα-fB：商业上可得到的因子B抗体。

图3是考马斯凝胶的图像，其检测用C3、因子B(FB)、抗因子B Ab、因子H和DAF/CD55中的一种或多种处理，然后用因子D处理的血清样品中的C3裂解，如指示的。通常在约140kD处检测到人C3。kD：千道尔顿。

图4是嵌合抗因子B Ab在食蟹猴中的药代动力学(PK)和药效学(PD)的图示，所述嵌合抗因子B Ab包含SEQ ID NO:12的重链和SEQ ID NO:13的轻链。在如x轴上所示的各时间点处采集血清样品。在30天内测量血浆中嵌合抗因子B Ab的浓度(左侧Y轴；圆圈时间点)。在30天内测量的百分比PD补体替代途径(CAP)活性(右侧Y轴；方形时间点)归一化至预处理基线水平。

详述

本公开提供利用补体途径诱导有害细胞死亡的方法。在特定的实施方案中，本公开包括诱导细胞表面上的补体活性方法，其包括使所述细胞与有效量的抗因子B抗体接触。在某些实施方案中，所述抗因子B抗体抑制C3bBb复合物的解离。在一些方面中，所述抗因子B抗体是双特异性抗体或多特异性抗体。

I.定义

应注意，术语“一(a、an)”实体是指一个或多个此实体；例如，“核苷酸序列”应理解为代表一个或多个核苷酸序列。同样地，术语“一(a、an)”、“一个或多个”和“至少一个”在本文中可互换地使用。

而且，在本文中使用的“和/或”应被视为两个指定特征或组成中的每个具有彼此或不具有彼此的具体公开。因此，在本文中在如“A和/或B”的短语中使用的术语“和/或”旨在包括“A和B”、“A或B”、“A”(单独地)和“B”(单独地)。同样地，如“A、B和/或C”的短语中使用的术语“和/或”旨在涵盖以下各个方面：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独地)；B(单独地)；和C(单独地)。

应当理解，无论在何处用语言“包括”来描述方面，都还提供了以“由...组成”和/或“基本上由...组成”措词描述的另外类似方面。

除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本公开相关的本领域普通技术人员通常理解的相同含义。例如，生物医学和分子生物学简明字典，Juo，Pei-Show，第2版，2002，CRC出版社；细胞和分子生物学字典，第3版，1999，Academic出版社；和生物化学和分子生物学牛津字典，Revised，2000，牛津大学出版社，向技术人员提供本公开中使用的许多术语的通用词典。

单位、前缀和符号以其国际单位制(SI)接受的形式表示。数字范围包括定义范围的数字。除非另有指示，否则氨基酸序列以氨基至羧基的方向从左至右书写。本文提供的标题不是对本公开的各个方面的限制，可以通过整体参考说明书来获得本公开的各个方面。因此，通过参考整个说明书更完整地定义了下面直接定义的术语。

术语“大约”在本文中用来表示大约、大致、围绕或在其区域中。当术语“约”与数值范围结合使用时，它通过在所述数值的上方和下方扩展边界来修改该范围。因此，“约10-20”是指“约10至约20”。通常，术语“约”可以以高于或低于(更高或更低)例如10％的变动范围来修改高于或低于规定值的数值。

“抗体”包括但不限于与抗原特异性结合的糖蛋白免疫球蛋白，其包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链或其抗原结合部分。每条H链包含重链可变区(在本文中缩写为VH)和重链恒定区。重链恒定区包含三个恒定域，C_H1、C_H2和C_H3。每条轻链包含轻链可变区(在本文中缩写为VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个恒定域，C_L。VH和VL区可进一步细分为高变区，其称为互补决定区(CDR)，其间散布着更为保守的区，称为框架区(FR)。每个VH和VL包含三个CDR和四个FR，从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。

术语“抗体”包括，例如，天然存在的抗体和非天然存在的抗体；单克隆和多克隆抗体；嵌合和人源化抗体；人或非人抗体；全合成抗体；和单链抗体。可通过重组方法将非人抗体人源化以降低其在人类中的免疫原性。在没有明确规定的情况下，除非上下文另有指示，否则术语“抗体”还包括任何上述免疫球蛋白的抗原结合片段或抗原结合部分，并且包括单价和二价片段或部分，以及单链抗体。抗体的抗原结合片段可包括抗体的保留结合抗体的靶标的能力的任何部分。在一些实施方案中，抗因子B抗体的抗原结合片段保留结合因子Bb的能力。在一些实施方案中，抗体的抗原结合片段包含抗体的1、2、3、4、5或6个CDR。在一些实施方案中，抗体的抗原结合片段包含抗体的1、2、3、4、5或6个CDR以及1、2、3、4、5、6、7或8个框架区。在一些实施方案中，抗体的抗原结合片段包含抗体的VH区和/或VL区。氨基酸的少量添加、缺失、插入、取代或修饰是允许的，只要它们不消除抗体结合特定抗原的能力。特别地，抗体的一个或多个框架区中的保守性氨基酸取代在本公开的范围内。

术语“单克隆抗体”(“mAb”)是指单一分子组成的非天然存在的抗体分子，即，其主要序列基本同一并且对特定表位表现出单一结合特异性和亲和力的抗体分子。mAb是分离的抗体的实例。术语“单克隆抗体”不限于使用杂交瘤技术制备的抗体。相反，如本文所用的单克隆抗体可通过杂交瘤、重组、转基因或本领域技术人员已知的其它技术产生。

如本文所用，“双特异性”抗体是指能够结合两种抗原的抗体。如本文所用，“多特异性”抗体是指能够结合三种或更多种抗原的抗体。在一些实施方案中，双特异性抗体或多特异性抗体包含第一VH区、第一VL区、第二VH区和第二VL区，其中第一VH区和第一VL区结合因子Bb，且第二VH区和第二VL区结合第二抗原。在一些实施方案中，第二抗原是肿瘤抗原，例如，在肿瘤细胞的表面上存在的抗原。在一些实施方案中，肿瘤抗原选自下组：α甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、CA-125、粘蛋白1(MUC-1)、上皮肿瘤抗原(ETA)、黑色素瘤相关抗原(MAGE)、p53、表皮生长因子受体(EGFR，例如，HER2和/或EGFR12)、CD30及其任何组合。在一些实施方案中，第二抗原是B细胞上存在的抗原，例如，分化簇19(CD19)或CD20。

术语“结合”是指由于例如共价、静电、疏水和离子和/或氢键相互作用(包括如盐桥和水桥的相互作用)在两个分子之间的直接缔合。本公开的抗因子B抗体特异性结合因子Bb蛋白内的表位。“特异性结合”是指以至少约10^-7M或更大，例如，5x 10^-7M、10^-8M、5x 10^-8M及更大的亲和力结合。“非特异性结合”是指以多于约10^-7M的亲和力结合，例如，以10^-6M、10^-5M、10^-4M等的亲和力结合。在一些实施方案中，抗因子B抗体以至少约10^-7M、至少约5x 10^- ⁷M、10^-8M、5x 10^-8M或更大的亲和力结合因子Bb。

如本文所用的，术语“交叉竞争(cross competes)”和“交叉竞争(crosscompetition)”指抗体与参考抗体竞争结合靶抗原的能力。可使用本领域已知的任何方法来确定抗体是否与参考抗体交叉竞争。例如，BIAcore分析、ELISA测定或流式细胞术可用于证明与本发明的抗体的交叉竞争。测试抗体抑制抗体与因子Bb结合的能力证明，测试抗体可与参考抗体竞争与因子Bb的结合。在一些实施方案中，与参考抗体交叉竞争结合抗原(例如，因子Bb)的抗体与参考抗体结合相同的表位。在一些实施方案中，与参考抗体交叉竞争结合抗原(例如，因子Bb)的抗体结合由参考抗体识别的表位附近或邻近的表位。在一些实施方案中，与参考抗体交叉竞争结合抗原(例如，因子Bb)的抗体结合在参考抗体识别的表位远端的表位；然而，抗体与远端表位的结合足以破坏参考抗体与抗原的结合能力。如果抗体与抗原上的与参考抗体相互作用的氨基酸相同或重叠的氨基酸残基相互作用，则该抗体与参考抗体结合相同的表位。

如本文所用的，“施用”意指经由药学上可接受的路径向受试者给予药学上可接受量的本文公开的抗因子B抗体。施用的路径可以是静脉内的，例如，静脉内注射和静脉内输注。施用的额外路径包括，例如，皮下、肌肉内、口服、鼻和肺部施用。抗因子B抗体可以作为包含至少一种赋形剂的药物组合物的一部分施用。在一些实施方案中，抗因子B抗体是静脉内施用的。在一些实施方案中，抗因子B抗体是皮下施用的。

如本文所用，“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”指，例如，减轻疾病或病况的严重性；减少状态过程的持续时间；改善或消除与疾病或病况有关的一个或多个症状；向具有疾病或病况的受试者提供有益效果，而不必治愈该疾病或病况。在一些实施方案中，术语“治疗(treat)”或“治疗(treating)”意指在有需要的受试者中诱导补体活性。

如本文所用的，术语“诱导补体活性”意指激活、增加或防止受试者中补体途径的终止。补体系统包括三个单独的上游激活途径，全部都汇聚在一个共同的末端途径上。其中两种途径是由特定的机制引起的：当抗体与抗原结合时，经典途径(CP)被应答，且凝集素途径(LP)是由病原体表面上的糖类残基激活的。替代途径(AP)的独特之处在于它在基础水平上持续激活，这被称为“AP慢转(tick-over)”；它的活性可通过异物表面和受损的细胞上的多种信号经由正反馈放大回路大大增加。AP通过补体组分C3的自发水解开始。然后，C3(H₂O)结合因子B(SEQ ID NO:15；表1)，随后被因子D裂解以产生C3(H₂O)Bb和Ba(副产物)。然后，C3(H₂O)Bb将C3裂解为C3b(C3的激活形式)和C3a(副产物)。然后，C3b与因子B缔合，随后被因子D裂解，产生C3bBb(“C3转化酶”)。然后，C3转化酶继续裂解中央C3蛋白的额外分子，导致以下的生成：调理素(C3b、iC3b)，其促进吞噬作用；过敏毒素(C3a和C5a)，其有助于靶向免疫细胞；末端裂解复合物(MAC；C5b-9)，其破坏靶细胞的质膜，促进细胞死亡。如本文所公开的，补体活性的诱导可指激活或促进CP、LP和/或AP的任何步骤。

表1：人因子Bb氨基酸序列

在某些实施方案中，补体活性的诱导包含抑制补体组分的抑制因子。存在各种制衡，以防止补体途径的过度激活。例如，包括补体受体1(CR1)和衰变加速因子(“DAF”或“CD55”)的膜结合蛋白与因子B竞争结合细胞表面上的C3b，且CR1和DAF/CD55均能够从C3bBb复合物中置换Bb。因子H类似地结合C3b，防止因子B结合或从C3bBb复合物中置换因子Bb。在一些实施方案中，抗因子B抗体防止通过CR1、DAF/CD55和/或因子H从C3bBb复合物中置换因子Bb。

如本文所用的，“受试者”意指人个体。受试者可为当前正罹患疾病或病况的患者。在某些实施方案中，疾病或病况包括癌症或自身免疫性疾病。在一些实施方案中，癌症选自下组：黑色素瘤(MEL)；肾细胞癌(RCC)；肺癌；结直肠癌(CRC)；前列腺癌；肝癌；头和颈的鳞状细胞癌；食管、卵巢、胃肠道和乳腺的癌；血液系统恶性肿瘤如多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤/原发性纵隔B细胞淋巴瘤和慢性髓细胞性白血病；及其任何组合。在一些实施方案中，自身免疫性疾病选自下组：多发性硬化症、1型糖尿病、类风湿性关节炎、狼疮、乳糜泻、干燥综合征、多肌痛、强直性脊柱炎、斑秃、血管炎、颞动脉炎、及其任何组合。在一些实施方案中，疾病或病症包含病原体的感染。在一些实施方案中，病原体选自细菌、寄生虫、真菌或其任何组合。

如本文所用(可互换使用)的“治疗剂量”、“剂量”、“有效剂量”或“给药量”意指达到本文所述的治疗目的的剂量。在一些实施方案中，“治疗剂量”意指在受试者中诱导补体活性的剂量。在某些实施方案中，“治疗剂量”意指在受试者中诱导补体活性且导致靶向的细胞死亡的剂量。

“保守性氨基酸取代”是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基取代的氨基酸。具有相似侧链的氨基酸残基的家族已经在本领域中定义，所述侧链包括碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)，酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)，不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)，非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，如果多肽中的一个氨基酸被来自同一侧链家族的另一个氨基酸取代，则该取代被认为是保守的。在另一实施方案中，一串氨基酸可保守地取代为侧链家族成员的顺序和/或组成不同的结构上相似的串。

两个多核苷酸或多肽序列之间的术语“序列同一性百分比”是指考虑到为了最佳比对而必须引入的添加或缺失(即缺口)，序列在比较窗口中共有的相同匹配的位置的数目。匹配的位置是在靶序列和参考序列中均存在的相同核苷酸或氨基酸的任何位置。由于缺口不是核苷酸或氨基酸，因此不计数靶序列中存在的缺口。同样，由于计数了靶序列核苷酸或氨基酸，而不是来自参考序列的核苷酸或氨基酸，因此不计数参考序列中存在的缺口。

序列同一性的百分比是通过以下计算的：通过确定两个序列中出现相同氨基酸残基或核酸碱基的位置的数目以产生匹配位置的数目，将匹配位置的数目除以比较窗口中的位置的总数目，然后将结果乘以100，以产生序列同一性的百分比。两个序列之间的序列的比较和序列同一性百分数的确定可以使用易于使用的供线上使用和用于下载的软件来完成。合适的软件程序可从多种来源获得，并且用于蛋白质和核苷酸序列的比对。确定序列同一性百分比的一个合适的程序是bl2seq，其是BLAST程序套件的一部分，可从美国政府的国家生物技术信息中心BLAST网站(blast.ncbi.nlm.nih.gov)获得。Bl2seq使用BLASTN或BLASTP任一算法在两个序列之间进行比较。BLASTN用于比较核酸序列，而BLASTP用于比较氨基酸序列。其它合适的程序是，例如，Needle、Stretcher、Water或Matcher，其是EMBOSS生物信息学程序组件的一部分且还可从欧洲生物信息学研究所(EBI)获得，网址为www.ebi.ac.uk/Tools/psa。

与多核苷酸或多肽参考序列比对的单个多核苷酸或多肽靶序列内的不同区域可各自具有它们自己的序列同一性百分比。应注意，序列同一性百分比值四舍五入到最接近的十分之一。例如，将80.11、80.12、80.13和80.14四舍舍入为80.1，而将80.15、80.16、80.17、80.18和80.19舍入为80.2。还应注意，长度值将一直为整数。

本领域技术人员将理解，用于计算序列同一性百分比的序列比对的生成不限于仅由一级序列数据驱动的二元序列-序列比较。序列比对可源自多序列比对。生成多个序列比对的一个合适的程序是ClustalW2，其可从www.clustal.org获得。另一合适的程序是MUSCLE，其可从www.drive5.com/muscle/获得。ClustalW2和MUSCLE可替换地从例如EBI获得。

还应理解，可以通过将序列数据与来自异源来源的数据(如结构数据(例如，晶体学蛋白质结构)、功能数据(例如，突变的位置)或系统发生数据)整合而生成序列比对。整合异源数据以生成多序列比对的合适的程序是T-Coffee，其可在www.tcoffee.org获得，或者可从例如EBI获得。还应当理解，可自动或手动地确定用于计算序列同一性百分比的最终比对。

多核苷酸变体可在编码区、非编码区或两者中含有改变。在一个实施方案中，多核苷酸变体含有产生沉默取代、添加或缺失，但不改变编码的多肽的性质或活性的改变。在另一实施方案中，由于遗传密码的简并性，通过沉默取代产生核苷酸变体。在其它实施方案中，变体中5-10、1-5或1-2个氨基酸以任意组合被取代、缺失或添加。可以出于多种原因产生多核苷酸变体，例如，以优化特定宿主的密码子表达(将人mRNA中的密码子改变为其它物种密码子，例如，细菌宿主，如大肠杆菌)。

II.本公开的方法

本公开涉及诱导细胞表面上的补体活性的方法，其包括使所述细胞与有效量的抗因子B抗体接触。抗因子B抗体可结合因子B，其通常作为单链多肽在血液中循环，并激活替代途径。激活替代途径后，因子B被补体因子D切割，产生非催化链Ba和催化亚基Bb。活性的亚基Bb是丝氨酸蛋白酶，其与C3b缔合以形成替代途径C3转化酶(即，C3bBb复合物)。在一些实施方案中，本公开的抗因子B抗体还结合因子Bb。因子Bb参与了预激活的B淋巴细胞的增殖，而Ba抑制它们的增殖。

在一些实施方案中，抗因子B抗体结合因子Bb部分并抑制C3bBb复合物的解离。在某些实施方案中，抗因子B抗体抑制C3bBb复合物解离成因子Bb和C3b。在一些实施方案中，抗因子B抗体是双特异性抗体或多特异性抗体。

在某些实施方案中，抗因子B抗体特异性结合因子Bb。在一些实施方案中，抗因子B特异性结合因子Bb和因子B二者。在一些实施方案中，抗因子B抗体特异性结合C3bBb复合物。在一些实施方案中，抗因子B抗体降低、抑制或防止C3bBb复合物的降解。在一些实施方案中，抗因子B抗体诱导血清中C3裂解。在一些实施方案中，抗因子B抗体降低C3的血清浓度。在一些实施方案中，抗因子B抗体诱导细胞表面上C3b的积累。在一些实施方案中，抗因子B抗体诱导细胞表面上膜攻击沉积。

在一些实施方案中，抗因子B抗体结合C3bBb复合物的因子Bb。在一些实施方案中，抗因子B抗体在因子B结合C3(H₂O)或C3b之前结合因子B。在其它实施方案中，抗因子B抗体在因子B结合C3(H₂O)或C3b之后且在由因子D裂解因子B之前结合因子B。在一些实施方案中，抗因子B抗体结合因子B并在由因子D裂解因子B之后保持与因子Bb结合。

在某些实施方案中，抗因子B抗体使补体途径的活性降低。在一些实施方案中，抗因子B抗体使血清补体活性的活性降低。在一些实施方案中，抗因子B抗体使血清中可替换补体途径的活性降低。在一些实施方案中，抗因子B抗体使经典补体途径的活性降低。在某些实施方案中，抗因子B抗体通过促进C3的消耗直至C3的循环水平不再支持补体途径的激活来使补体途径的活性降低。

在一些实施方案中，抗因子B抗体通过降低或阻断抑制因子介导的C3bBb复合物的解离来抑制C3bBb复合物解离，例如，解离成因子Bb和C3b。在一些实施方案中，抗因子B抗体降低或阻断DAF/CD55介导的C3bBb复合物的解离。

补体衰变加速因子，也称为CD55或DAF，是一种在人类中由CD55基因编码的蛋白质。DAF调节细胞表面上的补体系统。它识别在C4(经典补体途径和凝集素途径)和C3(替代补体途径)激活过程中产生的C4b和C3b片段。DAF与经典途径和凝集素途径的细胞相关C4b的相互作用干扰C2向C2a的转化，由此阻止C4b2a C3转化酶的形成，且DAF与替代途径的C3b的相互作用干扰通过因子D将因子B向Bb的转化，由此阻止替代途径的C3bBb复合物的形成。通过减少或阻断DAF/CD55介导的C3bBb复合物的解离，使用抗因子B抗体的现有方法阻止补体途径(例如替代途径)的负调节，由此诱导补体活性。

在一些实施方案中，抗因子B抗体降低或阻断因子H介导的C3bBb复合物的解离。在一些实施方案中，抗因子B抗体降低或阻断CR1介导的C3bBb复合物的解离。在一些实施方案中，抗因子B抗体降低或阻断抑制因子与C3bBb复合物的结合。在一些实施方案中，抑制因子选自下组：DAF/CD55、因子H、CR1及其任何组合。

在一些实施方案中，补体活性包含补体介导的细胞死亡。在一些实施方案中，补体活性诱导靶细胞的细胞死亡。在一些实施方案中，靶细胞死亡包含通过第二细胞(例如，免疫细胞)对靶细胞的吞噬作用。在一些实施方案中，细胞死亡发生在靶细胞的质膜上形成末端裂解复合物(MAC；C5b-9)之后。在一些实施方案中，细胞死亡包括靶细胞的凋亡。

在一些实施方案中，补体活性包含调理素的产生。调理素，如本文所提及的，是一种促进免疫细胞靶向细胞以终止(例如，吞噬作用)的分子。在一些实施方案中，调理素包含C3b、iC3b或C3b和iC3b二者。在一些实施方案中，补体活性包含过敏毒素的产生。在一些实施方案中，过敏毒素包含C3a、C5a或C3a和C5a二者。在一些实施方案中，过敏毒素包含化学引诱物，其吸引免疫细胞至靶细胞。在一些实施方案中，补体活性包含末端裂解复合物(“膜攻击复合物”或“MAC”；C5b-9)的形成。在一些实施方案中，末端裂解复合物在靶细胞的质膜中形成，产生孔，其促进靶细胞的死亡。

在一些实施方案中，靶细胞是体内细胞。在某些实施方案中，体内细胞是自体细胞，例如，由其所在的人中产生的人细胞，例如，天然细胞。在其它实施方案中，体内细胞是外来细胞，例如，病原体。在一些实施方案中，体内细胞是异常细胞，例如，癌症细胞或过渡激活的免疫细胞。在一些实施方案中，体内细胞是癌症细胞。在一些实施方案中，癌症选自下组：黑色素瘤(MEL)；肾细胞癌(RCC)；肺癌；结直肠癌(CRC)；前列腺癌；肝癌；头和颈的鳞状细胞癌；食管、卵巢、胃肠道和乳腺的癌；血液系统恶性肿瘤如多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤/原发性纵隔B细胞淋巴瘤和慢性髓细胞性白血病；及其任何组合。在其它实施方案中，体内细胞是病原体。在一些实施方案中，体内细胞选自下组：细菌、真菌、寄生虫及其任何组合。在一些实施方案中，体内细胞通过病毒被感染。

可使用本领域已知的任何方法来测量补体活性的诱导。在一些实施方案中，通过检测细胞表面上C3b的水平来测量补体活性的诱导。在一些实施方案中，通过检测患者血清中C3a的水平来测量补体活性的诱导。在一些实施方案中，通过检测患者血清中C3的水平来测量补体活性的诱导。在一些实施方案中，通过检测患者血清中因子Ba的水平来测量补体活性的诱导。在一些实施方案中，通过检测细胞表面上C3bBb的水平来测量补体活性的诱导。在一些实施方案中，通过检测靶细胞死亡的水平来测量补体活性的诱导。在一些实施方案中，通过检测免疫应答的水平来测量补体活性的诱导。在某些实施方案中，免疫应答的特征在于一个或多个免疫细胞定位于靶细胞。

在一些实施方案中，细胞与抗因子B抗体的接触，相对于接触前的C3b水平，增加细胞表面上C3b的水平。在一些实施方案中，细胞与抗因子B抗体的接触，相对于接触前的C3b水平，增加受试者血清中C3b的水平。在一些实施方案中，细胞与抗因子B抗体的接触，相对于接触前的C3a的水平，增加受试者的血清中C3a的水平。在一些实施方案中，细胞与抗因子B抗体的接触，相对于接触前的C3的水平，降低受试者的血清中C3的水平。在一些实施方案中，细胞与抗因子B抗体的接触，相对于接触前的C3bBb的水平，增加细胞表面上C3bBb的水平。

在一些实施方案中，本公开的抗因子B抗体在C3bBb的抑制因子(例如，DAF/CD55和/或因子H)的存在下抑制C3bBb复合物的解离。在不致力于机制的情况下，通过抑制替代途径的膜结合抑制因子，抗因子B抗体诱导细胞表面上C3b的产生并促进替代补体途径。

本公开的某些方面涉及在有需要的受试者中诱导细胞表面上的补体活性的方法，其包括使所述细胞与有效量的抗因子B抗体接触，其中所述抗因子B抗体抑制C3bBb复合物的解离。在某些实施方案中，抗因子B抗体抑制C3bBb复合物解离成因子Bb和C3b。在一些实施方案中，受试者是人。在某些实施方案中，受试者受疾病或病况折磨。

在一些其它实施方案中，本文公开的抗因子B抗体，当被体内施用时，不增加感染(例如，细菌感染)的风险。在某些实施方案中，本文公开的抗因子B抗体，当被体内施用时，相较于抗C5抗体不增加感染的风险。在一些实施方案中，感染是由脑膜炎奈瑟氏球菌(N.meningitides)和肺炎链球菌(S.pneumoniae)引起的。在其它实施方案中，感染与脑膜炎相关联或引起脑膜炎。

在某些实施方案中，受试者患有疾病或病况，其包括癌症。特定的癌症可选自本领域已知的任何癌症。在一些实施方案中，癌症选自下组：黑色素瘤(MEL)；肾细胞癌(RCC)；肺癌；结直肠癌(CRC)；前列腺癌；肝癌；头和颈的鳞状细胞癌；食管、卵巢、胃肠道和乳腺的癌；血液系统恶性肿瘤如多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤/原发性纵隔B细胞淋巴瘤和慢性髓细胞性白血病；及其任何组合。在某些实施方案中，受试者患有血液系统恶性肿瘤。在某些实施方案中，受试者患有B细胞淋巴瘤。在其它实施方案中，受试者患有T细胞淋巴瘤。在其它实施方案中，受试者患有白血病，例如，慢性髓细胞性白血病。

在某些实施方案中，受试者患有疾病或病况，其包含自身免疫性疾病。特定的自身免疫性疾病可选自本领域已知的任何自身免疫性疾病。在一些实施方案中，自身免疫疾病选自下组：多发性硬化症、1型糖尿病、类风湿性关节炎、狼疮、乳糜泻、干燥综合征、多肌痛、强直性脊柱炎、斑秃、血管炎、颞动脉炎及其任何组合。在某些实施方案中，受试者患有多发性硬化症。在其它实施方案中，受试者患有糖尿病，例如，1型糖尿病。在其它实施方案中，受试者患有类风湿性关节炎。在其它实施方案中，受试者患有狼疮。在其它实施方案中，受试者患有乳糜泻。

可使用本公开的方法治疗的自身免疫性疾病或病症是，但不限于，爱迪生氏病、年龄相关性黄斑变性、脱发症、自身免疫性肝炎(例如，与乙型肝炎病毒感染相关的自身免疫性肝炎；与丙型肝炎病毒感染相关的自身免疫性肝炎)、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性皮肤病、自身免疫性甲状腺疾病、大疱性类天疱疮、乳糜泻、冷凝集素疾病、皮肌炎、1型糖尿病、格雷夫斯病、古德帕斯彻氏综合征、桥本氏病、甲状旁腺功能减退、垂体机能减退症、甲状腺功能减退、特发性血小板减少性紫癜、炎性肠病(例如，克罗恩氏病；溃疡性结肠炎)、多发性硬化症、重症肌无力、心肌炎、视神经脊髓炎、寻常天疱疮、落叶型天疱疮、多肌炎、银屑癣、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、干燥综合征、系统性红斑狼疮、葡萄膜炎和韦格纳肉芽肿和多发性/皮肌炎。

可使用本公开的方法治疗的疾病包括，例如，年龄相关的自身免疫性病症、年龄相关性黄斑变性、阿尔茨海默氏病、肌萎缩性侧索硬化症、过敏性反应、嗜银粒性痴呆、关节炎(例如，类风湿性关节炎)、哮喘、动脉粥样硬化、非典型溶血性尿毒症综合征、自身免疫疾病、自身免疫性溶血性贫血、Barraquer-Simons综合征、贝切特氏病、英式淀粉样血管病、大疱性类天疱疮、伯格氏病、Clq肾病、癌症、暴发性抗磷脂综合征、脑淀粉样血管病、冷凝集素疾病、皮质基底节变性、克雅氏病、克罗恩氏病、冷球蛋白性血管炎、普吉氏痴呆、路易体痴呆(DLB)、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化、盘状红斑狼疮、唐氏综合征、局灶节段性肾小球硬化、形式思维障碍、额颞痴呆(FTD)、额颞叶痴呆伴与17号染色体关联的帕金森氏症、额颞叶退化、Gerstmann-Straussler-Scheinker病、格林巴利综合征、Hallervorden-Spatz病、溶血尿毒症综合征、遗传性血管性水肿、Hypophosphastasis、特发性肺炎综合征、免疫复合物病、包涵体肌炎、感染(例如，由细菌(例如，脑膜炎奈瑟氏球菌或链球菌)、病毒(例如，人免疫缺陷病毒(HIV))或其它感染试剂引起的疾病)、炎性疾病、缺血/再灌注损伤、轻度认知障碍、免疫性血小板减少性紫癜(ITP)、A型钼辅因子缺乏症(MoCD)、膜增生性肾小球肾炎(MPGN)I、膜增生性肾小球肾炎(MPGN)II(致密沉积病)、膜性肾炎、多发性梗塞性痴呆、狼疮(例如，系统性红斑狼疮(SLE))、肾小球肾炎、川崎病、多灶性运动神经病、多发性硬化症、多系统萎缩症、重症肌无力、心肌梗塞、强直性肌营养不良、视神经脊髓炎、尼曼匹克症C型、非瓜马尼亚运动神经元疾病伴神经原纤维缠结、帕金森氏病、帕金森氏病伴痴呆、阵发性睡眠性血红蛋白尿症、寻常天疱疮、匹克氏病、脑炎后帕金森综合征、多肌炎、朊蛋白脑淀粉样血管病、进行性皮质下神经胶质过多症、进行性核上性麻痹、银屑癣、败血症、志贺毒素大肠杆菌(STEC)-HuS、脊髓性肌萎缩、中风、亚急性硬化性全脑炎、缠结性痴呆、移植排斥、血管炎(例如，ANCA相关的血管炎)、韦格纳肉芽肿病、镰状细胞病、冷球蛋白血症、混合性冷球蛋白血症、原发性混合性冷球蛋白血症、II型混合性冷球蛋白血症、III型混合性冷球蛋白血症、肾炎、药物诱发性血小板减少症、狼疮肾炎、大疱性类天疱疮、获得性大疱性表皮松解症、延迟溶血性输血反应、低补体性荨麻疹血管炎综合征、假晶状体大疱性角膜病变和血小板输注无效症。

在某些实施方案中，受试者患有感染。在一些实施方案中，感染选自细菌感染、病毒感染、真菌感染、寄生虫感染或其任何组合。

在某些实施方案中，抗因子B抗体通过诱导细胞死亡来治疗疾病或病况。在一些实施方案中，抗因子B抗体诱导通过促进针对疾病或病况的一种或多种细胞的靶向的免疫应答(例如，通过增加调理素或过敏毒素的水平)来诱导细胞死亡。

可通过本领域已知的任何手段来施用本文公开的抗因子B抗体。在一些实施方案中，抗因子B抗体是肠胃外、静脉内、皮下、皮内、经皮、肌肉内、口服、眼内、鞘内、腹腔内、鼻内、颊部、舌下、直肠、阴道或经由肺部路径施用的。在某些实施方案中，抗因子B抗体是静脉内施用的。在某些实施方案中，抗因子B抗体是皮下施用的。

II.A.抗因子B抗体

在本公开的一些方面中，抗因子B抗体特异性结合因子Bb，例如，人因子Bb(表1；SEQ ID NO:15)。在一些方面中，除因子Bb外，抗因子B抗体还特异性结合因子B，例如，人因子B。在一些方面中，抗因子B抗体经由因子Bb特异性结合C3bBb复合物。

在特定的实施方案中，抗因子B抗体与参考抗体竞争结合因子Bb，例如，C3bBb复合物的因子Bb，其中参考抗体包含重链和轻链；其中重链包含重链可变(VH)区，且轻链包含轻链可变(VL)区；其中VH区包含VH互补决定区1(CDR1)、VH CDR2和VH CDR3；其中VL区包含VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3；其中VH CDR1包含SEQ ID NO:1，VH CDR2包含SEQ ID NO:2，且VHCDR3包含SEQ ID NO:3；且其中VL CDR1包含SEQ ID NO:4，VL CDR2包含SEQ ID NO:5，且VLCDR3包含SEQ ID NO:6(表2)。

表2：抗因子B抗体序列

在一些实施方案中，抗因子B抗体与参考抗体竞争结合因子Bb，例如，C3bBb复合物的因子Bb，其中参考抗体包含包含SEQ ID NO:7的重链可变区和包含SEQ ID NO:8的轻链可变区。

在一些实施方案中，抗因子B抗体与参考抗体结合因子Bb(C3bBb复合物的因子Bb)上的相同表位，其中参考抗体包含重链和轻链；其中重链包含VH区，且轻链包含VL区；其中VH区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3；其中VL区包含VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；其中VHCDR1包含SEQ ID NO:1，VH CDR2包含SEQ ID NO:2，且VH CDR3包含SEQ ID NO:3；且其中VLCDR1包含SEQ ID NO:4，VL CDR2包含SEQ ID NO:5，且VL CDR3包含SEQ ID NO:6。

在一些实施方案中，抗因子B抗体与参考抗体结合因子Bb(例如，C3bBb复合物的因子Bb)上的相同表位，其中参考抗体包含包含SEQ ID NO:7的重链可变区和包含SEQ ID NO:8的轻链可变区。

在一些实施方案中，抗因子B抗体包含重链和轻链；其中重链包含VH区，且轻链包含VL区；其中VH区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3；其中VL区包含VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；且其中VH CDR3包含SEQ ID NO:3或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:3。

在一些实施方案中，抗因子B抗体包含重链和轻链；其中重链包含VH区，且轻链包含VL区；其中VH区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3；其中VL区包含VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；且其中VH CDR1包含SEQ ID NO:1或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:1。

在一些实施方案中，抗因子B抗体包含重链和轻链；其中重链包含VH区，且轻链包含VL区；其中VH区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3；其中VL区包含VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；且其中VH CDR2包含SEQ ID NO:2或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:2。

在一些实施方案中，抗因子B抗体包含重链和轻链；其中重链包含VH区，且轻链包含VL区；其中VH区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3；其中VL区包含VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；且其中VL CDR1包含SEQ ID NO:4或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:4。

在一些实施方案中，抗因子B抗体包含重链和轻链；其中重链包含VH区，且轻链包含VL区；其中VH区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3；其中VL区包含VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；且其中VL CDR2包含SEQ ID NO:5或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:5。

在一些实施方案中，抗因子B抗体包含重链和轻链；其中重链包含VH区，且轻链包含VL区；其中VH区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3；其中VL区包含VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；且其中VL CDR3包含SEQ ID NO:6或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:6。

在特定的实施方案中，抗因子B包含重链和轻链；其中重链包含VH区，且轻链包含VL区；其中VH区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3；其中VL区包含VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；其中VH CDR1包含SEQ ID NO:1，VH CDR2包含SEQ ID NO:2，且VH CDR3包含SEQ IDNO:3；且其中VL CDR1包含SEQ ID NO:4，VL CDR2包含SEQ ID NO:5，且VL CDR3包含SEQ IDNO:6。

在一些实施方案中，抗因子B抗体的VH包含与SEQ ID NO:7至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗因子B抗体的VH包含SEQ IDNO:7。

在一些实施方案中，抗因子B抗体的VL包含与SEQ ID NO:8至少70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗因子B抗体的VL包含SEQ ID NO:8。

在一些实施方案中，抗因子B抗体包含重链，该重链包含与SEQ ID NO:9至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗因子B抗体包含含有SEQ ID NO:9的重链。

在一些实施方案中，抗因子B抗体包含轻链，该轻链包含与SEQ ID NO:10至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗因子B抗体包含含有SEQ ID NO:10的轻链。

在一些实施方案中，抗因子B抗体是嵌合抗体。在某些实施方案中，抗因子B抗体是人源化抗体。在特定的实施方案中，抗因子B抗体是人抗体。在某些实施方案中，抗因子B抗体是双特异性抗体，其中双特异性抗体进一步包含组织或细胞特异性的抗原结合域。在一些实施方案中，抗因子B抗体是多特异性抗体，其中多特异性抗体进一步包含至少一种组织或细胞特异性的抗原结合域。

III.双特异性和多特异性抗因子B抗体

本公开的某些方面涉及双特异性抗体，其包含(i)抗因子B结合域和(ii)第二抗原结合域。在一些实施方案中，抗因子B结合域抑制C3bBb复合物的解离。在某些实施方案中，双特异性抗体抑制C3bBb复合物解离成因子Bb和C3b。在一些实施方案中，第二抗原结合域是组织特异的或细胞特异的。

本公开的其它方法涉及多特异性抗体，其包含(i)抗因子B结合域，(ii)第二抗原结合域，和(iii)第三抗原结合域。在一些实施方案中，抗因子B结合域抑制C3bBb复合物的解离。在某些实施方案中，抗因子B结合域抑制C3bBb复合物解离成因子Bb和C3b。在一些实施方案中，第二抗原结合域是组织特异的或细胞特异的。在一些实施方案中，第三抗原结合域是组织特异的或细胞特异的。在特定的实施方案中，多特异性抗体进一步包含第四抗原结合域、第五抗原结合域、第六抗原结合域、第七抗原结合域或更多。

在一些实施方案中，双特异性或多特异性抗体(例如，其因子Bb结合域)降低、抑制或防止C3bBb复合物的降解。在一些实施方案中，双特异性或多特异性抗体(例如，其因子Bb结合域)诱导血清中C3裂解。在一些实施方案中，双特异性或多特异性抗体(例如，其因子Bb结合域)降低C3的血清浓度。在一些实施方案中，双特异性或多特异性抗体(例如，其因子Bb结合域)诱导细胞表面上C3b的积累。在一些实施方案中，双特异性或多特异性抗体(例如，其因子Bb结合域)诱导血清补体活性的丧失。在一些实施方案中，双特异性或多特异性抗体(例如，其因子Bb结合域)诱导细胞表面上的膜攻击沉积。

在一些实施方案中，双特异性或多特异性抗体(例如，其因子Bb结合域)特异性结合因子Bb，例如，C3bBb复合物的因子Bb。在一些实施方案中，双特异性或多特异性抗体(例如，其因子Bb结合域)在因子B与C3(H₂O)或C3b结合之前结合因子B。在其它实施方案中，双特异性或多特异性抗体(例如，其因子Bb结合域)在因子B与C3(H₂O)或C3b结合之后且在因子D裂解因子B之前结合因子B。在一些实施方案中，双特异性或多特异性抗体(例如，其因子Bb结合域)结合因子B且在因子D裂解因子B之后保留与因子Bb的结合。

在某些实施方案中，双特异性或多特异性抗体使补体途径的活性降低。在一些实施方案中，双特异性或多特异性抗体使血清补体活性的活性降低。在一些实施方案中，双特异性或多特异性抗体使血清中替代补体途径的活性降低。在一些实施方案中，双特异性或多特异性抗体使经典补体途径的活性降低。在某些实施方案中，双特异性或多特异性抗体通过促进C3的消耗直至C3的循环水平不再支持补体途径激活来使补体途径的活性降低。

在一些实施方案中，双特异性或多特异性抗体(例如，其因子Bb结合域)通过降低或阻断抑制因子介导的C3bBb复合物的解离来抑制C3bBb复合物解离，例如，解离成因子Bb和C3b。在一些实施方案中，双特异性或多特异性抗体(例如，其因子Bb结合域)降低或阻断DAF/CD55介导的C3bBb复合物的解离。在一些实施方案中，双特异性或多特异性抗体(例如，其因子Bb结合域)降低或阻断因子H介导的C3bBb复合物的解离。在一些实施方案中，双特异性或多特异性抗体(例如，其因子Bb结合域)降低或阻断CR1介导的C3bBb复合物的解离。在一些实施方案中，双特异性或多特异性抗体(例如，其因子Bb结合域)降低或阻断抑制因子与C3bBb复合物的结合。在一些实施方案中，抑制因子选自下组：DAF/CD55、因子H、CR1及其任何组合。

III.A.抗原结合域

在某些实施方案中，抗因子B结合域与参考抗体竞争结合因子B和/或因子Bb，例如，C3bBb复合物的因子Bb，其中参考抗体包含VH区和VL区；其中VH区包含如下：包含SEQ IDNO:1的VH CDR1、包含SEQ ID NO:2的VH CDR2和包含SEQ ID NO:3的VH CDR3；且其中VL区包含如下：包含SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含SEQ ID NO:5的VL CDR2和包含SEQ ID NO:6的VLCDR3。

在一些实施方案中，抗因子B结合域与参考抗体竞争结合因子Bb，例如，C3bBb复合物的因子Bb，其中参考抗体包含包含SEQ ID NO:7的重链可变区和包含SEQ ID NO:8的轻链可变区。

在一些实施方案中，抗因子B结合域与参考抗体结合因子Bb(例如，C3bBb复合物的因子Bb)上的相同表位，其中参考抗体包含VH区和VL区；其中VH区包含如下：包含SEQ IDNO:1的VH CDR1、包含SEQ ID NO:2的VH CDR2和包含SEQ ID NO:3的VH CDR3；且其中VL区包含如下：包含SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含SEQ ID NO:5的VL CDR2和包含SEQ ID NO:6的VLCDR3。

在一些实施方案中，抗因子B抗体与参考抗体结合因子Bb(例如，C3bBb复合物的因子Bb)上的相同表位，其中参考抗体包含含有SEQ ID NO:7的重链可变区和含有SEQ ID NO:8的轻链可变区。

在一些实施方案中，抗因子B结合域包含重链和轻链；其中重链包含VH区，且轻链包含VL区；其中VH区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3；其中VL区包含VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；且其中VH CDR3包含SEQ ID NO:3或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:3。

在一些实施方案中，抗因子B结合域包含VH区和VL区；其中VH区包含VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3；其中VL区包含VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；且其中VH CDR1包含SEQ IDNO:1或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:1。

在一些实施方案中，抗因子B结合域包含VH区和VL区；其中VH区包含VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3；其中VL区包含VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；且其中VH CDR2包含SEQ IDNO:2或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:2。

在一些实施方案中，抗因子B结合域包含VH区和VL区；其中VH区包含VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3；其中VL区包含VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；且其中VL CDR1包含SEQ IDNO:4或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:4。

在一些实施方案中，抗因子B结合域包含VH区和VL区；其中VH区包含VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3；其中VL区包含VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；且其中VL CDR2包含SEQ IDNO:5或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:5。

在一些实施方案中，抗因子B结合域包含VH区和VL区；其中VH区包含VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3；其中VL区包含VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；且其中VL CDR3包含SEQ IDNO:6或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:6。

在特定的实施方案中，抗因子B结合域包含VH区和VL区；其中VH区包含VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3；其中VL区包含VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；其中VH CDR1包含SEQ ID NO:1，VH CDR2包含SEQ ID NO:2，且VH CDR3包含SEQ ID NO:3；且其中VL CDR1包含SEQ ID NO:4，VL CDR2包含SEQ ID NO:5，且VL CDR3包含SEQ ID NO:6。

在一些实施方案中，抗因子B结合域的VH包含与SEQ ID NO:7至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗因子B结合域的VH包含SEQ IDNO:7。

在一些实施方案中，抗因子B结合域的VL包含与SEQ ID NO:8至少70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗因子B结合域的VL包含SEQ IDNO:8。

可选择第二抗原结合和/或第三抗原结合域来靶向在靶细胞的表面上表达的任何抗原。在一些实施方案中，第二抗原结合域或第三抗原结合域结合肿瘤抗原。在一些实施方案中，肿瘤抗原选自下组：α甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、CA-125、粘蛋白1(MUC-1)、上皮肿瘤抗原(ETA)、黑色素瘤相关抗原(MAGE)、p53、表皮生长因子受体(EGFR，例如，HER1、ErbB-1、HER2和/或EGFR12)、CD30及其任何组合。

在其它实施方案中，第二抗原结合和/或第三抗原结合域靶向除内源性BBB受体和/或转铁蛋白受体之外在靶细胞的表面上表达的任何抗原。

在一些实施方案中，第二抗原结合域或第三抗原结合域结合B细胞上存在的抗原。在一些实施方案中，第二抗原结合域或三抗原结合域结合CD19。在一些实施方案中，第二抗原结合域或第三抗原结合域结合CD20。在其它实施方案中，第二抗原结合域或第三抗原结合域结合自身抗原特异性T效应细胞的表面上的抗原。在一些实施方案中，第二抗原结合域或第三抗原结合域结合电压门控钾通道Kv1.3。

在一些实施方案中，双特异性抗体或多特异性抗体是嵌合的。在某些实施方案中，双特异性抗体或多特异性抗体是人源化的。

III.B.方法

本公开的某些方面涉及诱导细胞表面上补体活性的方法，其包括使所述细胞与有效量的本文公开的双特异性抗体或多特异性抗体接触。本公开的其它方面涉及在有需要受试者中诱导细胞死亡的方法，其包括施用有效量的本文公开的双特异性抗体或多特异性抗体。

在一些实施方案中，补体活性包含补体介导的细胞死亡。在一些实施方案中，补体活性诱导靶细胞的细胞死亡。在一些实施方案中，靶细胞死亡包含由第二细胞(例如，免疫细胞)对靶细胞的吞噬作用。在一些实施方案中，细胞死亡发生在靶细胞质膜上形成末端裂解复合物(MAC；C5b-9)之后。在一些实施方案中，细胞死亡包含靶细胞的凋亡。

在一些实施方案中，补体活性包含调理素的产生。在一些实施方案中，调理素包含C3b、iC3b或C3b和iC3b二者。在一些实施方案中，补体活性包含过敏毒素的产生。在一些实施方案中，过敏毒素包含C3a、C5a或C3a和C5a二者。在一些实施方案中，补体活性包含末端裂解复合物(MAC；C5b-9)的形成。在一些实施方案中，末端裂解复合物在靶细胞的质膜中形成，产生孔，其促进靶细胞的死亡。

在一些实施方案中，靶细胞是体内细胞。在某些实施方案中，体内细胞是自体细胞。在其它实施方案中，体内细胞是外来细胞，例如，病原体。在一些实施方案中，体内细胞是异常细胞。在一些实施方案中，体内细胞是癌细胞。在一些实施方案中，癌症选自下组：黑色素瘤(MEL)；肾细胞癌(RCC)；肺癌；结直肠癌(CRC)；前列腺癌；肝癌；头和颈的鳞状细胞癌；食管、卵巢、胃肠道和乳腺的癌；血液系统恶性肿瘤如多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤/原发性纵隔B细胞淋巴瘤和慢性髓细胞性白血病；及其任何组合。在其它实施方案中，体内细胞是病原体。在一些实施方案中，体内细胞选自下组：细菌、真菌、寄生虫及其任何组合。在一些实施方案中，体内细胞是由病毒感染的。

在一些实施方案中，细胞与双特异性抗体或多特异性抗体的接触，相对于接触前的C3b水平，增加细胞表面上C3b的水平。在一些实施方案中，细胞与双特异性抗体或多特异性抗体的接触，相对于接触前的C3b水平，增加受试者血清中C3b的水平。在一些实施方案中，细胞与双特异性抗体或多特异性抗体的接触，相对于接触前的C3a水平，增加受试者血清中C3a的水平。在一些实施方案中，细胞与双特异性抗体或多特异性抗体的接触，相对于接触前的C3水平，降低受试者血清中C3的水平。在一些实施方案中，细胞与双特异性抗体或多特异性抗体的接触，相对于接触前的C3bBb水平，增加细胞表面上C3bBb的水平。

本公开的某些方面涉及在有需要的受试者中诱导细胞表面上补体活性的方法，其包括使所述细胞与有效量的本文公开的双特异性抗体或多特异性抗体接触，其中双特异性抗体或多特异性抗体抑制C3bBb复合物的解离。在某些实施方案中，双特异性或多特异性抗体抑制C3bBb复合物解离成因子Bb和C3b。在一些实施方案中，受试者是人。在某些实施方案中，受试者受疾病或病况折磨。

本公开的其它方面涉及通过在有需要受试者中诱导细胞死亡来治疗疾病或病况的方法，其包括施用有效量的本文公开的双特异性抗体或多特异性抗体。

在某些实施方案中，受试者患有疾病或病况，其包含自身免疫性疾病。特定的自身免疫性疾病可选自本领域已知的任何自身免疫疾病。在一些实施方案中，自身免疫疾病选自下组：多发性硬化症、1型糖尿病、类风湿性关节炎、狼疮、乳糜泻、干燥综合征、多肌痛、强直性脊柱炎、斑秃、血管炎、颞动脉炎及其任何组合。在某些实施方案中，受试者患有多发性硬化症。在其它实施方案中，受试者患有糖尿病，例如，1型糖尿病。在其它实施方案中，受试者患有类风湿性关节炎。在其它实施方案中，受试者患有狼疮。在其它实施方案中，受试者患有乳糜泻。

在某些实施方案中，受试者患有感染。在一些实施方案中，所述感染选自下组：细菌感染、病毒感染、真菌感染、寄生虫感染或其任何组合。

在某些实施方案中，双特异性抗体或多特异性抗体通过诱导细胞死亡来治疗疾病或病况。在一些实施方案中，双特异性抗体或多特异性抗体通过促进针对疾病或病况的一种或多种细胞的靶向的免疫应答(例如，通过增加调理素或过敏毒素的水平)来诱导细胞死亡。在一些实施方案中，双特异性抗体或多特异性抗体通过形成末端裂解复合物(“膜攻击复合物”或“MAC”；C5b-9)来诱导细胞死亡。在一些实施方案中，末端裂解复合物在靶细胞的质膜中形成，产生孔，其促进靶细胞的死亡。

通过本领域已知的任何手段施用本文公开的双特异性抗体或多特异性抗体。在一些实施方案中，双特异性抗体或多特异性抗体是肠胃外、静脉内、皮下、皮内、经皮、肌肉内、口服、眼内、鞘内、腹腔内、鼻内、颊部、舌下、直肠、阴道或经由肺部路径施用的。在某些实施方案中，双特异性抗体或多特异性抗体是静脉内施用的。在某些实施方案中，双特异性抗体或多特异性抗体是皮下施用的。

IV.多核苷酸

本公开的某些方面涉及一种多核苷酸或一组多核苷酸，其包含编码本文公开的抗体的核酸。在一些实施方案中，多核苷酸包含与SEQ ID NO:11至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一的核酸序列。在某些实施方案中，多核苷酸包含SEQ ID NO:11。

在一些实施方案中，多核苷酸包含与SEQ ID NO:13至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一的核酸序列。在某些实施方案中，多核苷酸包含SEQID NO:13。

在一些实施方案中，多核苷酸包含与SEQ ID NO:12至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一的核酸序列。在某些实施方案中，多核苷酸包含SEQID NO:12。

编码本公开的抗体的核苷酸序列可操作地与一个或多个预期的靶细胞(例如，经遗传修饰来合成编码的抗体的细胞)中表达核苷酸序列的调控元件(如启动子和增强子)连接。因此，在一些情况中，本公开提供包含编码本公开的抗体的核苷酸序列的核酸，其中核苷酸序列可操作地与一个或多个调控元件(例如，启动子和/或增强子)连接。

合适的启动子和增强子元件是本领域已知的。供原核宿主细胞中使用的合适的启动子包括，但不限于，噬菌体T7 RNA聚合酶启动子；T3启动子；T5启动子；λP启动子；trp启动子；lac操纵子启动子；杂合启动子，例如，lac/tac杂合启动子、tac/trc杂合启动子、trp/lac启动子、T7/lac启动子；trc启动子；tac启动子等；gpt启动子；araBAD启动子；体内调控的启动子，如ssaG启动子或相关启动子(参见，例如，美国专利申请号20040131637)、pagC启动子(Pulkkinen和Miller，J.Bacteriol.,1991:173(1):86-93；Alpuche-Aranda等，PNAS,1992；89(21):10079-83)，nirB启动子(Harborne等(1992)Mol.Micro.6:2805-2813)等(参见，例如，Dunstan等(1999)Infect.Immun.67:5133-5141；McKelvie等(2004)Vaccine 22:3243-3255；和Chatfield等(1992)Biotechnol.10:888-892)；σ70启动子，例如，共有σ70启动子(参见，例如，GenBank登录号AX798980、AX798961和AX798183)；稳定期启动子，例如，dps启动子、spv启动子等；源自致病性岛SPI-2的启动子(参见，例如，WO96/17951)；actA启动子(参见，例如，Shetron-Rama等(2002)Infect.Immun.70:1087-1096)；rpsM启动子(参见，例如，Valdivia和Falkow(1996).Mol.Microbiol.22:367)；tet启动子(参见，例如，Hillen,W.和Wissmann，A.(1989)于Saenger,W.和Heinemann,U.(编)，Topics inMolecular and Structural Biology,Protein–Nucleic Acid Interaction.Macmillan,London,UK,第10期,第143-162页))；SP6启动子(参见，例如，Melton等(1984)Nucl.AcidsRes.12:7035)；等等。用于原核生物(如大肠杆菌)的合适的强启动子包括，但不限于Trc、Tac、T5、T7和P_λ。用于细菌宿主细胞的操纵基因的非限制性实例包括乳糖启动子操纵子(LacI阻遏蛋白与乳糖接触时改变构象，由此防止LacI阻遏蛋白与操纵基因结合)，色氨酸启动子操纵基因(当与色氨酸复合时，TrpR阻遏蛋白具有结合操纵基因的构象；在缺少色氨酸的情况下，TrpR阻遏蛋白具有不结合操纵基因的构象)，和tac启动子操纵基因(参见，例如，deBoer等(1983)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.80:21-25)。

在一些实施方案中，例如，用于在酵母细胞中的表达，合适的启动子是组成性启动子如ADH1启动子、PGK1启动子、ENO启动子、PYK1启动子等等；或可调控启动子如GAL1启动子、GAL10启动子、ADH2启动子、PHO5启动子、CUP1启动子、GAL7启动子、MET25启动子、MET3启动子、CYC1启动子、HIS3启动子、ADH1启动子、PGK启动子、GAPDH启动子、ADC1启动子、TRP1启动子、URA3启动子、LEU2启动子、ENO启动子、TP1启动子和AOX1(例如，用于毕赤酵母属)。

对于在真核细胞中表达，合适的启动子包括，但不限于，轻和/或重链免疫球蛋白基因启动子和增强子元件；巨细胞病毒即刻启动子；单纯性疱疹病毒胸苷激酶启动子；早和晚期SV40启动子；存在于来自逆转录病毒的长末端重复中的启动子；小鼠金属硫蛋白-I启动子；和本领域已知的各种组织特异性启动子。组成型哺乳动物启动子包括，但不限于，用于以下基因的启动子：次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)、腺苷脱氨酶、丙酮酸激酶、β-肌动蛋白启动子和其他组成型启动子。在真核细胞中组成性起作用的额外示例性病毒启动子包括，例如，来自巨细胞病毒(CMV)、猿猴病毒(例如，SV40)、乳头瘤病毒、腺病毒、人免疫缺陷病毒(HIV)、劳斯肉瘤病毒、巨细胞病毒、莫洛尼白血病病毒的长末端重复(LTR)和其它逆转录病毒的启动子，以及单纯疱疹病毒的胸苷激酶启动子。其它组成型启动子是本领域普通技术人员已知的。用作本发明的基因表达序列的启动子还包括诱导型启动子。诱导型启动子在诱导剂的存在下表达。例如，在某些金属离子的存在下，诱导金属硫蛋白启动子以促进转录和翻译。其它诱导型启动子是本领域普通技术人员已知的。

合适的载体和启动子的选择完全在本领域普通技术人员的水平内。

包含编码本公开的抗体的核苷酸序列的多核苷酸可以以存在于本领域已知的任何载体中，例如，表达载体或克隆载体。如本文所用的，表达载体是指包含插入的编码序列的转录和翻译所必需的元件，或者在RNA病毒载体的情况下，当被引入至合适的宿主细胞中时复制和翻译所必需的元件的任何核酸构建体。表达载体可包括质粒、噬菌粒、病毒及其衍生物。

大量合适的载体和启动子是本领域技术人员已知的。许多商业上可得到的用于生成题述重组载体。通过示例提供了以下载体。细菌：pBs、phagescript、PsiX174、pBluescript SK、pBs KS、pNH8a、pNH16a、pNH18a、pNH46a(Stratagene，La Jolla，Calif.，USA)；pTrc99A、pKK223-3、pKK233-3、pDR540和pRIT5(Pharmacia，乌普萨拉，瑞典)。真核生物：pWLneo、pSV2cat、pOG44、PXR1、pSG(Stratagene)pSVK3、pBPV、pMSG和pSVL(Pharmacia)。合适的表达载体包括，但不限于，病毒载体。病毒载体的实例包括，但不限于，基于以下的病毒载体：牛痘病毒；脊髓灰质炎病毒；腺病毒(参见，例如，Li等，Invest Opthalmol Vis Sci35:2543 2549，1994；Borras等，Gene Ther 6:515524，1999；Li和Davidson，PNAS 92:77007704，1995；Sakamoto等，H Gene Ther 5:1088 1097，1999；WO 94/12649，WO 93/03769；WO93/19191；WO94/28938；WO 95/11984和WO 95/00655)；腺相关病毒(参见，例如，Ali等,HumGene Ther 9:81 86,1998,Flannery等，PNAS 94:6916 6921,1997；Bennett等，InvestOpthalmol Vis Sci 38:2857 2863，1997；Jomary等,Gene Ther 4:683690,1997，Rolling等，Hum Gene Ther 10:641 648，1999；Ali等，Hum Mol Genet 5:591 594，1996；Srivastava in WO 93/09239，Samulski等，J.Vir.(1989)63:3822-3828；Mendelson等，Virol.(1988)166:154-165；and Flotte等，PNAS(1993)90:10613-10617)；SV40；单纯疱疹病毒；逆转录病毒载体(例如，鼠白血病病毒、脾脏坏死病毒，以及源自逆转录病毒如劳斯肉瘤病毒、哈维肉瘤病毒、禽白血病病毒、人免疫缺陷病毒的载体(参见，例如，Miyoshi等，PNAS 94:10319 23，1997；Takahashi等，J Virol 73:7812 7816，1999)，骨髓增生性肉瘤病毒和乳腺肿瘤病毒)；等等。

在一些实施方案中，载体是病毒载体，其包含选自下组的核酸序列：逆转录病毒，如莫洛尼氏鼠白血病病毒、哈维鼠肉瘤病毒、鼠乳腺肿瘤病毒和劳斯肉瘤病毒；腺病毒，腺相关病毒；SV40型病毒；多瘤病毒；爱泼斯坦-巴尔病毒；乳头瘤病毒；疱疹病毒；牛痘病毒；脊髓灰质炎病毒；和RNA病毒，如逆转录病毒。人们可容易地采用本领域公知的其它载体。某些病毒载体基于非细胞病性真核病毒，其中非必需基因已被感兴趣的基因替换。非细胞病性病毒包括逆转录病毒，其生命周期涉及将基因组病毒RNA逆转录成DNA，随后将前病毒整合到宿主细胞DNA中。逆转录病毒已被批准用于人基因疗法试验。最有用的是那些复制缺陷的逆转录病毒(即，能够指导期望的蛋白质的合成，但是不能制造感染性颗粒)。此类遗传改变的逆转录病毒表达载体对于基因在体内的高效转导具有一般效用。产生复制缺陷型逆转录病毒的标准方案(包括以下步骤：将外源基因材料并入质粒，用质粒转染包装细胞系，由包装细胞系产生重组逆转录病毒，从组织培养基中收集病毒颗粒，以及用病毒颗粒感染靶细胞)提供于Kriegler,M.,Gene Transfer and Expression,A Laboratory Manual,W.H.Freeman Co.,New York(1990)和Murry,E.J.,Methods in Molecular Biology,第7期,Humana出版社有限公司,Cliffton,N.J.(1991)。

在一个实施方案中，病毒是腺相关病毒，一种双链DNA病毒。可将腺相关病毒工程化为复制缺陷型，并能够感染许多种细胞类型和物种。它进一步具有以下优点，如热和脂质溶剂稳定性；不同谱系细胞(包括造血细胞)的高转导频率；以及双重感染抑制作用的缺乏，因此允许进行多个系列的转导。据报道，腺相关病毒可以以位点特异性方式整合到人细胞DNA中，由此使插入诱变的可能性和逆转录病毒感染的插入基因表达特征的可变性最小化。此外，在缺少选择压力的情况下，在组织培养中对野生型腺相关病毒感染进行了大于100次的传代，这意味腺相关病毒基因组整合是一个相对稳定的事件。腺相关病毒也可以染色体外的方式发挥作用。

在另一实施方案中，病毒载体是已经经操作而携带编码本文公开的抗C1s抗体的多核苷酸的腺相关病毒(AAV)。已经公开了用于获得重组AAV(rAAV)的通用方法。参见，例如，USP 8,734,809、2013/0195801以及本文中引用的参考文献。在一些实施方案中，rAAV载体包含一个或多个AAV插入的末端重复(ITR)和感兴趣的转基因(例如，优化的FIX多核苷酸序列)。在某些实施方案中，制备rAAV的方法涉及培养期望的宿主细胞，该宿主细胞含有编码AAV衣壳蛋白或其片段的核酸序列；功能性rep基因；rAAV载体，其由AAV插入的末端重复(ITR)和感兴趣的转基因组成；以及足够的辅助功能，以允许将重组AAV载体包装到AAV衣壳蛋白中。用于进行这些以及相关程序的材料和方法已经公开于，例如，USP 8,734,809、2013/0195801、PCT/US1997/015692、PCT/US2002/033692、PCT/US2002/033630、WO2007/148971、WO00/20561、WO03/042361和WO2007/04670中。

可依照本发明使用源自几乎任何血清型的一种或多种不同的AAV载体序列。特定AAV载体序列的选择将由已知参数指导，如感兴趣的趋向性，所需载体产量等。通常，AAV血清型在氨基酸和核酸水平上具有显著同源性的基因组序列，提供一组相关的遗传功能，产生相关的病毒粒子，并类似地复制和组装。对于各种AAV血清型的基因组序列和基因组相似性的概述参见例如GenBank登录号U89790；GenBank登录号J01901；GenBank登录号AF043303；GenBank登录号AF085716；Chlorini等(1997，J.Vir.71:6823-33)；Srivastava等(1983，J.Vir.45:555-64)；Chlorini等(1999，J.Vir.73:1309-1319)；Rutledge等(1998，J.Vir.72:309-319)；和Wu等(2000，J.Vir.74:8635-47)。AAV血清型1、2、3、4和5是供本发明的上下文中使用的AAV核苷酸序列的说明性来源。AAV6、AAV7、AAV8或AAV9或通过例如衣壳改组技术和AAV衣壳库获得的，或来自新设计、开发或进化的ITR的新开发的AAV样颗粒，也适用于某些发明应用。参见Dalkara，D等(2013)，Sci Transl.Med.5(189):189ra76；Kotterman，MA Nat.Rev.Genet.(2014)15(7):455。

在其它实施方案中，载体衍生自慢病毒。在某些实施方案中，载体是能够感染非分裂的细胞的重组慢病毒的载体。

慢病毒基因组和前病毒DNA通常具有逆转录病毒中发现的三个基因：gag、pol和env，其侧翼为两个长末端重复(LTR)序列。gag基因编码内部结构(基质、衣壳和核衣壳)蛋白；pol基因编码RNA指导的DNA聚合酶(逆转录酶)、蛋白酶和整合酶；且env基因编码病毒包膜糖蛋白。5'和3'LTR用于促进病毒粒子RNA的转录和聚腺苷酸化。LTR包含病毒复制所需的所有其它顺式作用序列。慢病毒具有额外的基因，其包括vif、vpr、tat、rev、vpu、nef和vpx(在HIV-l、HIV-2和/或SIV中)。

与5'LTR邻近的是基因组的逆转录(tRNA引物结合位点)和有效将病毒RNA衣壳化成颗粒(Psi位点)所必需的序列。如果衣壳化(或将逆转录病毒RNA包装成感染性病毒粒子)所必需的序列从病毒基因组中丢失，则顺式缺陷会防止基因组RNA的衣壳化。

然而，所得的突变体仍然能够指导所有病毒粒子蛋白的合成。本发明提供了一种产生能够感染非分裂细胞的重组慢病毒的方法，该方法包括用两种或更多种携带包装功能的载体(即，gag、pol和env以及rev和tat)转染合适的宿主细胞。如下文将公开的，缺少功能性tat基因的载体对于某些应用是合乎需要的。因此，例如，第一载体可提供编码病毒gag和病毒pol的核酸且另一载体可提供编码病毒env以产生包装细胞的核酸。将提供异源基因的载体(在本文被鉴定为转移载体)引入该包装细胞，产生产生细胞，该产生细胞释放携带感兴趣的外来基因的感染性病毒颗粒。

根据载体和外来基因的上述构型，第二载体可提供编码病毒包膜(env)基因的核酸。env基因几乎可源自任何合适的病毒，包括逆转录病毒。在一些实施方案中，env蛋白是双嗜性包膜蛋白，其允许转导人类和其他物种的细胞。

逆转录病毒衍生的env基因的实例包括，但不限于：莫洛尼鼠白血病病毒(MoMuLV或MMLV)、哈维鼠肉瘤病毒(HaMuSV或HSV)、鼠乳腺肿瘤病毒(MuMTV或MMTV)、长臂猿白血病病毒(GaLV或GALV)、人免疫缺陷病毒(HIV)和劳斯肉瘤病毒(RSV)。也可使用其它env基因如水泡性口炎病毒(VSV)蛋白G(VSV G)，肝炎病毒和流感病毒的env基因。

提供病毒env核酸序列的载体与本文其他地方所述的调控序列可操作地缔合。

在某些实施方案中，载体包括其中缺失了HIV毒力基因env、vif、vpr、vpu和nef，而不损害该载体转导非分裂细胞的能力的慢病毒载体。

在一些实施方案中，载体包括包含3'LTR的U3区的缺失的慢病毒载体。U3区的缺失可以是完全缺失或部分缺失。

在一些实施方案中，包含编码本文所述的抗体的核苷酸序列的本发明的慢病毒载体可用(a)包含gag、pol或gag和pol基因的第一核苷酸序列和(b)包含异源env基因的第二核苷酸序列转染到细胞中；其中慢病毒载体缺少功能性tat基因。在其它实施方案中，用包含rev基因的第四核苷酸序列进一步转染细胞。在某些实施方案中，慢病毒载体缺少选自vif、vpr、vpu、vpx和nef或其组合的功能性基因。

在某些实施方案中，慢病毒载体包含一个或多个编码gag蛋白、Rev应答元件、中央多嘌呤区(cPPT)或其任何组合的核苷酸序列。

慢病毒载体的实例公开于WO9931251、W09712622、W09817815、W09817816和WO9818934，其通过提述以其整体并入本文。

其它载体包括质粒载体。质粒载体已在本领域中广泛描述，并且是本领域技术人员众所周知的。参见，例如，Sambrook等，Molecular克隆:A Laboratory Manual，第二版，Cold Spring Harbor Laboratory出版社，1989。在最近几年中，发现质粒载体由于其不能在宿主基因组内复制和整合入宿主基因组而特别有利于在体内将基因递送至细胞。然而，这些具有与宿主细胞相容的启动子的质粒可表达来自质粒内可操作编码的基因的肽。可从商业供应商处获得的一些常用质粒包括pBR322、pUC18、pUC19、各种pcDNA质粒、pRC/CMV、各种pCMV质粒、pSV40和pBlueScript。特异性质粒的额外实例包括pcDNA3.1，目录号V79020；pcDNA3.1/hygro，目录号V87020；pcDNA4/myc-His，目录号V86320；和pBudCE4.1，目录号V53220，所有均来自(Carlsbad，CA.)。其它质粒是本领域普通技术人员众所周知的。此外，可使用标准分子生物学技术自定义设计质粒，以去除和/或添加DNA的特异性片段。

V.宿主细胞

本公开提供了分离的经遗传修饰的宿主细胞(例如，体外细胞)，其被题述核酸遗传修饰。在一些实施方案中，题述分离的遗传修饰的宿主细胞可产生题述抗体。这种细胞被称为“重组细胞”或“遗传修饰的宿主细胞”。本公开的遗传修饰的宿主细胞包含含有编码本公开的抗体的核苷酸序列的核酸。

合适的宿主细胞包括真核宿主细胞，如哺乳动物细胞；昆虫宿主细胞；酵母细胞；和原核细胞，如细菌细胞。可例如通过磷酸钙沉淀、DEAE葡聚糖介导的转染、脂质体介导的转染、电穿孔或其它已知方法来实现将题述核酸引入宿主细胞。

合适的哺乳动物细胞包括原代细胞和永生细胞系。合适的哺乳动物细胞系包括人细胞系、非人灵长类动物细胞系、啮齿动物(例如，小鼠、大鼠)细胞系等。合适的哺乳动物细胞系包括，但不限于，HeLa细胞(例如，美国模式培养保藏中心(ATCC)No.CCL-2)、CHO细胞(例如，ATCC No.CRL9618，CCL61，CRL9096)、293细胞(例如，ATCC No.CRL-1573)、Vero细胞、NIH3T3细胞(例如，ATCC No.CRL-1658)、Huh-7细胞、BHK细胞(例如，ATCC No.CCL10)、PC12细胞(ATCC No.CRL1721)、COS细胞、COS-7细胞(ATCC No.CRL1651)、CVI(猴肾系)、RAT1细胞、小鼠L细胞(ATCC No.CCLI.3)、人胚肾(HEK)细胞(ATCC No.CRL1573)、HLHepG2细胞、等等。在一些情况中，细胞是HEK细胞。在某些实施方案中，细胞是HEK 293细胞。在一些情况中，细胞是CHO细胞，例如，CHO-K1细胞(ATCC No.CCL-61)、CHO-M细胞、CHO-DG44细胞(ATCCNo.PTA-3356)、DUXB11(中国仓鼠卵巢系，DHFRˉ)、R1610(中国仓鼠成纤维细胞)、BALBC/3T3(小鼠成纤维细胞)、HAK(仓鼠肾系)、SP2/O(小鼠骨髓瘤)、P3x63-Ag3.653(小鼠骨髓瘤)、BFA-1c1BPT(牛内皮细胞)、RAJI(人淋巴细胞)、

NS0、CAP、BHK21等。在一些实施方案中，宿主细胞是COS细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是293细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是CHO细胞。

合适的酵母细胞包括，但不限于，巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、芬兰毕赤酵母(Pichia finlandica)、喜海藻糖毕赤酵母(Pichia trehalophila)、Pichiakoclamae、膜醭毕赤酵母(Pichia membranaefaciens)、仙人掌毕赤酵母(Pichiaopuntiae)、耐热毕赤酵母(Pichia thermotolerans)、柳毕赤酵母(Pichia salictaria)、Pichia guercuum、皮杰普氏毕赤酵母(Pichia pijperi)，具柄毕赤酵母(Pichiastiptis)、甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)、毕赤酵母属菌种(Pichia sp.)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、酵母属菌种(Saccharomyces sp.)、多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、克鲁维酵母属菌种(Kluyveromyces sp.)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、白假丝酵母(Candida albicans)、构巢曲霉(Aspergillusnidulans)、黑曲霉(Aspergillus niger)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、里氏木霉(Trichoderma reesei)、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、镰孢属菌种(Fusarium sp.)、禾谷镰孢(Fusarium gramineum)、镶片镰孢(Fusarium venenatum)、粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)、莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)等等。在一些实施方案中，宿主细胞是酵母。在一些实施方案中，宿主细胞是毕赤酵母。

合适的原核细胞包括但不限于，大肠杆菌、芽孢杆菌属(例如，枯草芽孢杆菌)、乳杆菌属菌种等各种实验室菌株中的任一种。参见，例如，Carrier等(1992)J.Immunol.148:1176-1181；美国专利号6,447,784；和Sizemore等(1995)Science 270:299-302。通常，实验室菌株是非致病性的菌株。在一些实施方案中，宿主细胞是大肠杆菌。在一些实施方案中，宿主细胞是枯草芽孢杆菌。

可通过本领域技术人员众所周知的各种技术将本发明的分离的核酸分子引入宿主细胞中。这些包括，但不限于，转染(包括电泳和电穿孔)、原生质体融合、磷酸钙沉淀、与包膜DNA的细胞融合、显微注射以及完整病毒的感染。参见，Ridgway，A.A.G."MammalianExpression Vectors"第24.2章,第470-472页Vectors,Rodriguez和Denhardt,编(Butterworths,Boston,Mass.1988)。最优选地，经由电穿孔将质粒引入宿主。使转化的细胞在适于产生轻链和重链的条件下生长，并测定重链和/或轻链蛋白质合成。示例性测定技术包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)或荧光激活的细胞分选分析(FACS)、免疫组织化学等等。

包含本发明的分离的核酸分子的宿主细胞在适当的生长培养基中生长。如本文所用，术语“适当的生长培养基”意指含有细胞生长所需的营养物的培养基。细胞生长所需的营养物可包括碳源、氮源、必需氨基酸、维生素、矿物质和生长因子。任选地，培养基可包含一个或多个选择因子。任选地，培养基可含有小牛血清或胎牛血清(FCS)。在一个实施方案中，培养基基本上不含有IgG。生长培养基通常将通过例如药物选择或必需营养物的缺乏来选择包含DNA构建体的细胞，所述必需营养物由DNA构建体上的选择标记补充或与DNA构建体共转染。培养的哺乳动物细胞通常在商业上可得到的含血清或无血清培养基(例如，MEM、DMEM、DMEM/F12)中生长。在一个实施方案中，培养基是CDoptiCHO(Invitrogen，Carlsbad，CA.)。在另一实施方案中，培养基是CD17(Invitrogen，Carlsbad，CA.)。适合于所使用的特定细胞系的培养基的选择在本领域普通技术人员的水平内。

VI.药物组合物

含有本发明的抗体的组合物可含有合适的药学上可接受的载剂。例如，它们可含有促进活性化合物加工成经设计用于递送至作用部位的制剂的赋形剂和/或助剂。

药物组合物可经配制用于肠胃外施用(即，静脉内、皮下或肌肉内)。

本发明的组合物可为多种形式，包括，例如，液体(例如，可注射和可输注的溶液)、分散体、悬浮液、半固体和固体剂型。优选的形式取决于施用的模式和治疗应用。

可调整剂量方案以提供最佳的期望的应答。例如，可施用单次推注，可随时间施用数个分开的剂量，或者可根据治疗情况的紧急程度按比例减少或增加剂量。以剂量单位形式配制肠胃外组合物是有利的，以易于施用和剂量的均匀性。参见，例如，Remington'sPharmaceutical Sciences(Mack Pub.Co.，Easton，Pa.1980)。

合适的药物载剂的非限制性实例也描述于E.W.Martin的Remington'sPharmaceutical Sciences。赋形剂的一些实例包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。组合物还可含有pH缓冲剂、湿润剂或乳化剂。

对于口服施用，药物组合物可采用通过常规手段制备的片剂或胶囊形式。组合物也可制备成液体，例如糖浆或悬浮液。液体可包括悬浮剂、乳化剂、非水性媒介物和防腐剂。制剂还可包括调味剂、着色剂和甜味剂。可替换地，组合物可以以干燥产品的形式存在，以用水或另一合适的媒介物来构成。

对于颊部施用，根据常规方案，组合物可采取片剂或锭剂的形式。

对于通过吸入的施用，供根据本发明使用的化合物方便地以具有或不具有赋形剂的雾化气雾剂形式或以来自加压包装或喷雾器的雾化喷雾剂的形式递送，所述雾化喷雾剂任选地带有推进剂，例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟甲烷、二氧化碳或其他合适的气体。在加压的气雾剂的情况下，可通过提供阀门来确定剂量单位以递送计量的量。可配制用于吸入器或吹药器的例如明胶的胶囊和药筒，所述胶囊和药筒含有化合物和合适的粉末基质(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。

药物组合物也可配制成栓剂或保留灌肠剂用于直肠施用，例如，含有常规的栓剂基质(如可可油或其他甘油酯)。

在一个实施方案中，药物组合物包含抗体(例如，抗因子B抗体、双特异性抗体或多特异性抗体)、编码抗体的多核苷酸、包含多核苷酸的载体或包含载体的宿主细胞，和药学上可接受的载剂。

现已详细描述了本发明，通过参考以下实施例将更清楚地理解本发明，以下实施例包括在本文中仅出于说明的目的，而不旨在限制本发明。

实施例

实施例1-抗因子B抗体的产生

抗人补体因子B(fBb)单克隆抗体的产生如下：用纯化的fBb蛋白免疫NZBW小鼠生成杂交瘤文库，使用本领域技术人员已知的技术筛选杂交瘤文库与靶标的结合。流式细胞术用于生成单个细胞克隆，且通过直接酶联免疫吸附测定(ELISA)筛选这些单个克隆的上清液与fBb的优先结合。在培养物中扩增与fBb特异性结合的克隆，并从杂交瘤上清液中纯化单克隆抗体。使用补体系统替代途径WIESLAB试剂盒(Euro Diagnostica，Sweden)进一步筛选纯化的mAb对替代途径(AP)活性的抑制作用。根据这些结果，鉴定了结合fBb的新型抗体。本文中的抗体被指定为抗因子B Ab。

实施例2-抗因子B Ab与人因子B结合的结合亲和力

通过ELISA确定抗因子B Ab的相对EC₅₀值。将未标记的纯化的人因子Bb涂覆到高结合ELISA板上，并与渐增量的纯化的mAb(以10μg/mL开始三倍系列稀释)一起温育。辣根过氧化物酶(HRP)缀合的山羊抗小鼠二抗抗体(Southern Biotech)用于检测，并与3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)1-Step Ultra TMB-ELISA底物溶液(Thermo Scientific)反应。用等体积的1N硫酸终止反应；并在OD₄₅₀nm处测量吸光度。使用PRISM软件计算每个单克隆抗体的EC₅₀。发现抗因子B Ab以相似的亲和力结合全长人补体因子B及其活性酶形式，因子Bb。

实施例3-抗因子B Ab阻断C3bBb复合物的因子H解离

在人或食蟹猴血清中预温育抗因子B Ab导致补体的替代途径(AP)的浓度依赖性衰减，这在体外使用AP ELISA试剂盒或在设计为特异性激活AP的兔红细胞溶血实验中被证明。

使用Octet系统(Pall ForteBio)，检查了抗因子B抗体对因子H(FH)解离C3bBb复合物的速率的影响。简言之，制备生物素化的备解素并将其结合到用链霉亲和素涂覆的Octet探针上。然后，将结合的备解素探针在含有10mM HEPES、150mM NaCl、2mM MgCl₂、0.05％吐温20的C3bBb复合物中温育。通过使50μg/mL浓度的抗体(抗因子B Ab、抗因子B F(ab')2、Quidelα-fB、抗因子B Fab、C3bBb、C3b+fB或仅C3b)混合来制备溶液。当C3转化酶结合备解素探针时，测量缔合。参见图1。温育600秒后，将探针转移至仅含有缓冲液的溶液中，以测量C3bBb复合物与备解素结合的探针的解离。实验开始后780秒，加入在测定缓冲液中包含50μg/mL因子H的解离溶液。如图1A中所示，抗因子B Ab保持与C3bBb复合物最强的结合。这证明抗因子B Ab阻止因子H(C3bBb复合物中AP C3转化酶的主要流体相抑制因子)结合和破坏C3bBb复合物。

实施例4-抗因子B Ab阻断C3bBb复合物的CD55解离

使用与以上实施例3中描述的相同的Octet系统，检查了抗因子B抗体对CD55解离C3bBb复合物的速率的影响。简言之，制备生物素化的备解素并将其结合到用链霉亲和素涂覆的Octet探针上。然后，将结合的备解素探针在含有包含10mM HEPES、150mM NaCl、2mMMgCl₂、0.05％吐温20的溶液的C3bBb复合物中温育。通过使50μg/mL浓度的抗体(抗因子BAb、抗因子B F(ab')2、Quidelα-fB、抗因子B Fab、C3bBb、C3b+fB或仅C3b)混合来制备溶液。当C3转化酶结合备解素探针时，测量缔合。参见图2。温育600秒后，将探针转移至仅含有缓冲液的溶液中，以测量C3bBb复合物与备解素结合的探针的解离。在实验开始后780秒，加入在测定缓冲液中包含50μg/mL CD55的解离溶液。如图1B中所示，抗因子B Ab保持与C3bBb复合物最强的结合，阻止CD55结合并破坏C3bBb复合物的解离。这些数据证明抗因子B Ab阻止DAF/CD55与C3AP转化酶(补体级联的膜结合抑制性调节因子)结合。

实施例5-抗因子B Ab诱导血清中C3裂解

测试了正常人血清以确定M4是否诱导血清中C3的裂解。与CAP稀释缓冲液初始温育后，将M4、M4 Fab或Quidelα-fB添加到样品中。作为阴性对照，将单独的CAP稀释缓冲液中的10％NHS或具有mIgG2a抗体的Cap稀释缓冲液添加到血清中。在向血清样品中添加抗体后的10分钟、20分钟或30分钟时，取等分的血清并将其添加到样品缓冲液(包含还原剂)中。经由Western印迹分析从血清中提取的裂解物。裂解物在还原的4-12％NuPAGE凝胶(MES缓冲液)上运行。在转移至膜后，将膜与以1:1000稀释的多克隆兔α人C3一抗一起温育，并使用以1:5000稀释的Licor抗兔IgG二抗度进行检测。

在大约140kD处检测到正常C3。如图2中所示，抗因子B Ab和抗因子B Fab(而不是与单独的缓冲液、mIgG2a或Quidelα-fB一起温育的血清)以时间依赖性方式诱导C3裂解。在抗因子B Ab和抗因子B Fab的处理的情况下，正常C3表达也有时间依赖性的降低。在与抗因子B Ab温育20分钟和30分钟的样品中，在约65kD处检测到裂解的C3，这证明了C3的裂解。

实施例6-抗因子B Ab阻断溶液中因子H和CD55 DAF活性

接下来，测试正常人血清以确定抗因子B Ab是否阻断溶液中因子H和DAF/CD55活性。在与C3、因子B、抗因子B Ab、因子H和/或DAF/CD55初始温育后，将因子D添加到样品中，并在37℃温育45分钟。45分钟后，取等分的血清并将其添加至样品缓冲液(包含还原剂)中。从血清中提取的裂解物在凝胶上分离，并使用考马斯亮蓝染料分析。如图3中所示，虽然仅因子H或DAF/CD55的处理维持正常的C3表达，但是抗因子B Ab及因子H或DAF/CD55的处理引起C3的裂解。参见，相较于泳道6和8中的单条带的泳道7和9中约140kD处的双条带。因此，抗因子B Ab阻断溶液中因子H和DAF/CD55活性。

实施例7-嵌合抗因子B Ab

合成了杂交瘤克隆抗因子B Ab的可变域，连同克隆所需的额外侧翼序列。将可变域克隆到表达载体中，该表达载体生成由小鼠可变区和人IgG4恒定/Fc区组成的嵌合抗体。将构建体转染到HEK293细胞中，并使用蛋白A琼脂糖从培养上清液中纯化。含有移植到人IgG4抗体的恒定区上的抗因子B Ab可变区的嵌合抗体称为嵌合抗因子B Ab。

实施例8-使用嵌合抗因子B Ab的体内测定

进行体内实验以评定嵌合抗因子B Ab在食蟹猴中的药代动力学和药效学。简言之，食蟹猕猴经静脉内施用30mg/kg的嵌合抗因子B Ab。在长达30天的各个时间点收集血浆和血清。如图4所示，在遍及PK/PD研究过程的具体时间点采集的血清和血浆样品的分析揭示了，静脉内施用嵌合抗因子B Ab导致给药的动物中可检测到的血清AP活性的丧失。

还发现血清经典途径活性显著衰减。这些样品的Western印迹分析显示C3下降，这一发现已使用构建成测量食蟹猴血浆C3浓度的内部ELISA证实。

结合来自体内研究的数据，这些结果得出以下结论：抗因子B Ab和嵌合抗因子BAb结合并稳定了液体相和固体相AP C3转化酶，防止了其降解并导致C3的消耗和血清补体活性的丧失。

实施例9-抗因子B Ab的人源化抗体的治疗用途

结合并防止AP C3转化酶的抑制作用的抗因子B Ab或嵌合抗因子B Ab的完全人源化版本可用于治疗性靶向并诱导固有免疫系统受损的患者的细胞表面上的补体活性。

实施例10-抗因子B Ab的双特异性抗体的治疗用途

用人源化抗因子B Ab和结合感兴趣的细胞上的膜结合蛋白的第二抗体的可变区(或例如F(ab)或F(ab')2区)来构建双特异性抗体，其中双特异性抗体的第二抗体用作归巢机制。例如，一种双特异性抗体(其一端包含人源化抗因子B Ab，另一端包含针对CD20的可变区)可用于特异性靶向B细胞(在淋巴瘤或自身免疫性疾病的情况下)。类似地，包含人源化抗因子B Ab或其片段，以及靶向电压门控钾通道Kv1.3的可变区(其在患有自身免疫性疾病(如多发性硬化症和1型糖尿病)的患者中的自身抗原特异性T效应细胞的表面上是上调的)的双特异性抗体可用于特异性激活自身免疫淋巴细胞表面上的补体级联反应，同时保留非自我反应的淋巴细胞。因此，以双特异性方式使用人源化抗因子B Ab的可变区和归巢抗体提供了将补体活性聚焦在任何感兴趣的细胞类型的表面上的平台。

实施例11-替代补体途径抑制作用不能防止抗体涂覆的脑膜炎奈瑟氏球菌或肺炎链球菌的全血杀伤

背景：负责检测和清除病原体的补体级联可通过经典(CP)、凝集素(LP)或替代(AP)途径激活，每种途径均可通过途径特异性模式识别受体独立激活。然而，在许多疾病中观察到异常的补体激活。尽管已证明C5水平下的治疗性补体抑制是用于治疗多种疾病的成功方法，但即使预防性接种时，其也与增加的感染风险相关联，特别是与侵袭性脑膜炎球菌疾病关联。靶向途径特异性组分提供了理论上的优势，即选择性抑制触发疾病发病机制的途径，同时保留其它完整途径进行免疫监视的优势。

目的：此实验旨在发现抗因子Bb抗体是否表现出潜在增加的感染风险。我们进行了体外杀菌(补体介导的)和全血杀伤测定(补体和免疫细胞介导的)，以评定AP在杀死脑膜炎奈瑟氏球菌和肺炎链球菌中的相对贡献。

方法：使用肺炎链球菌菌株TIGR4和C组脑膜炎奈瑟氏球菌菌株4243进行实验。流式细胞仪用于测量C3和C4的沉积；途径特异性抑制因子用于确定调理补体片段在细菌上沉积中的不同途径的相对贡献。在抗因子Bb抗体的存在下，在正常人血浆中进行杀菌实验，且进行含有完整的补体和吞噬细胞的全血杀伤测定。在存在或不存在荚膜抗体的情况下进行实验，以分别模拟接种状态和非接种状态。

结果：使用饱和浓度的抗C1s抗体单独抑制CP防止脑膜炎奈瑟氏球菌在正常人血浆和全血中的C4沉积和杀伤。然而，在含有特定的抗脑膜炎球菌抗体的全血杀伤测定中，需要同时抑制CP和AP两者以防止抗体涂覆的脑膜炎奈瑟氏球菌的杀伤。对于抗体涂覆的肺炎链球菌，仅抗因子Bb抗体完全阻断C3的沉积。如预期的，在吞噬细胞的存在下，仅在全血中观察到了肺炎链球菌的杀伤；在特异性抗体的存在下，阻断AP并不损害肺炎球菌的杀伤(在3小时>90％杀伤)。

结论：此处呈现的数据表明，抗体涂覆的脑膜炎奈瑟氏球菌可激活补体的AP，以及在抗脑膜炎奈瑟氏球菌抗体的存在下，该途径的抑制不会显著影响脑膜炎奈瑟氏球菌的杀伤，因为膜攻击复合物介导的杀伤仍可经由未阻断的途径发生。当AP被阻断时，抗体介导的肺炎链球菌的杀伤(需要吞噬细胞)也以不受阻碍的方式进行。这些数据表明，针对脑膜炎奈瑟氏球菌和肺炎链球菌的疫苗接种是至关重要的，并且在施用治疗性AP抑制因子时可能是有效的。

具体实施方案的前述描述将如此充分地揭示本发明的一般性质，以至于其他人可通过应用本领域技术人员的知识而容易地修改和/或适应各种应用(如具体的实施方案)，而无需过度实验，无需脱离本发明的一般概念。因此，基于本文呈现的教导和指导，此类适应和修改意欲在所公开的实施方案的等同形式的含义和范围内。应当理解，本文中的短语或术语是出于描述而非限制的目的，使得本说明书的术语或短语会由技术人员根据教导和指导来解释。

通过考虑本文公开的发明的说明书和实践，本发明的其它实施方案对于本领域技术人员将是显而易见的。说明书和实施例意欲仅被认为是示例性的，本发明的真实范围和精神由所附权利要求书指示。

本文公开的所有出版物、专利和专利申请均以相同的程度通过提述并入，如同每个单独的出版物、专利或专利申请均被具体地且单独地指示以通过提述并入。

序列表

<110> 美国比奥维拉迪维股份有限公司(Bioverativ USA Inc)

S·帕尼克(PANICKER, SANDIP)

S·摩尔(MOORE, STEPHEN)

P·尼基丁(NIKITIN, PAVEL)

T·拜恩(BYUN, TONY)

G·帕里(PARRY, Graham)

<120> 诱导补体活性的方法

<130> 4159.517PC02/C-K/DHH

<150> US 62/637,135

<151> 2018-03-01

<150> US 62/570,953

<151> 2017-10-11

<160> 15

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR1

<400> 1

Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Leu

1 5

<210> 2

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR2

<400> 2

Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Ala

1 5

<210> 3

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR3

<400> 3

Ala Arg Leu Glu Asn Asp Tyr Gly Phe Thr Tyr

1 5 10

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR1

<400> 4

Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr

1 5 10

<210> 5

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR2

<400> 5

Arg Met Ser

1

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR3

<400> 6

Ala Gln Met Leu Glu Arg Pro Trp Thr

1 5

<210> 7

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗因子B VH

<400> 7

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Leu Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Ala Phe Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala His

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Glu Asn Asp Tyr Gly Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ala

115

<210> 8

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗因子B VL

<400> 8

Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Phe Ser Asn Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Ser Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Met

85 90 95

Leu Glu Arg Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 9

<211> 444

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗因子B重链

<400> 9

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Leu Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Ala Phe Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala His

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Glu Asn Asp Tyr Gly Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

225 230 235 240

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

245 250 255

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe

260 265 270

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

275 280 285

Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

290 295 300

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

305 310 315 320

Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

325 330 335

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln

340 345 350

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

355 360 365

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

370 375 380

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

385 390 395 400

Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

405 410 415

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

420 425 430

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440

<210> 10

<211> 216

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗因子B轻链

<400> 10

Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Phe Ser Asn Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Ser Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Met

85 90 95

Leu Glu Arg Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly

210 215

<210> 11

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗因子B VH

<400> 11

gaagtgcaac tccaacagag cggaccagaa cttgtgaagc ccggagcctc agtgaagatg 60

tcctgtaagg cttccggata ttccttcact gattacctga tgaactgggt caagcagagc 120

catggaaagt ccctggagtg gattgggcgc atcaatccgt acaacggcga tgcgttctac 180

aaccagcggt ttaaggggaa ggccaccctg accgtggaca agtcatcgtc caccgcccac 240

atggagttga gatccctgac ctcggaggac agcgccctct actactgcgc aaggctggaa 300

aacgattacg gcttcaccta ctggggccag ggtactctgg tcactgtgtc cgct 354

<210> 12

<211> 1335

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗因子B重链

<400> 12

gaagtgcaac tccaacagag cggaccagaa cttgtgaagc ccggagcctc agtgaagatg 60

tcctgtaagg cttccggata ttccttcact gattacctga tgaactgggt caagcagagc 120

catggaaagt ccctggagtg gattgggcgc atcaatccgt acaacggcga tgcgttctac 180

aaccagcggt ttaaggggaa ggccaccctg accgtggaca agtcatcgtc caccgcccac 240

atggagttga gatccctgac ctcggaggac agcgccctct actactgcgc aaggctggaa 300

aacgattacg gcttcaccta ctggggccag ggtactctgg tcactgtgtc cgcttccacc 360

aagggcccat ccgtcttccc cctggcgccc tgctccagga gcacctccga gagcacagcc 420

gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480

ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540

tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacgaagac ctacacctgc 600

aatgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagtc caaatatggt 660

cccccatgcc caccatgccc agcacctgag ttcgaggggg gaccatcagt cttcctgttc 720

cccccaaaac ccaaggacac tctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac gtgcgtggtg 780

gtggacgtga gccaggaaga ccccgaggtc cagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 840

gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagttca acagcacgta ccgtgtggtc 900

agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtc 960

tccaacaaag gcctcccgtc ctccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1020

cgagagccac aggtgtacac cctgccccca tcccaggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1080

agcctgacct gcctggtcaa aggcttctac cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1140

aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc 1200

ttcttcctct acagcaggct aaccgtggac aagagcaggt ggcaggaggg gaatgtcttc 1260

tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cacagaagag cctctccctg 1320

tctctgggta aatga 1335

<210> 13

<211> 339

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VL

<400> 13

gatatcgtga tgacccaggc tgccttctcc aaccctgtga ctctcggaac ctccgcctca 60

atctcctgct cgtcatccaa gtccctgctt cactcgaacg ggattaccta cctgtattgg 120

tacttgcaaa gaccgggcca gagcccccag ctgctgatct accgcatgtc gaacctggcc 180

agcggagtgc cagaccggtt ctccggttct ggttccggga ctgacttcac tctgcggatt 240

agcagggtgg aagcagagga cgtcggagtg tactactgtg cgcagatgct cgagcgcccg 300

tggacctttg gcggaggcac caagctggaa atcaagact 339

<210> 14

<211> 657

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 轻链

<400> 14

gatatcgtga tgacccaggc tgccttctcc aaccctgtga ctctcggaac ctccgcctca 60

atctcctgct cgtcatccaa gtccctgctt cactcgaacg ggattaccta cctgtattgg 120

tacttgcaaa gaccgggcca gagcccccag ctgctgatct accgcatgtc gaacctggcc 180

agcggagtgc cagaccggtt ctccggttct ggttccggga ctgacttcac tctgcggatt 240

agcagggtgg aagcagagga cgtcggagtg tactactgtg cgcagatgct cgagcgcccg 300

tggacctttg gcggaggcac caagctggaa atcaagactg tggctgcacc atctgtcttc 360

atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420

aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480

ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540

agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600

acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgttag 657

<210> 15

<211> 764

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人因子Bb

<400> 15

Met Gly Ser Asn Leu Ser Pro Gln Leu Cys Leu Met Pro Phe Ile Leu

1 5 10 15

Gly Leu Leu Ser Gly Gly Val Thr Thr Thr Pro Trp Ser Leu Ala Arg

20 25 30

Pro Gln Gly Ser Cys Ser Leu Glu Gly Val Glu Ile Lys Gly Gly Ser

35 40 45

Phe Arg Leu Leu Gln Glu Gly Gln Ala Leu Glu Tyr Val Cys Pro Ser

50 55 60

Gly Phe Tyr Pro Tyr Pro Val Gln Thr Arg Thr Cys Arg Ser Thr Gly

65 70 75 80

Ser Trp Ser Thr Leu Lys Thr Gln Asp Gln Lys Thr Val Arg Lys Ala

85 90 95

Glu Cys Arg Ala Ile His Cys Pro Arg Pro His Asp Phe Glu Asn Gly

100 105 110

Glu Tyr Trp Pro Arg Ser Pro Tyr Tyr Asn Val Ser Asp Glu Ile Ser

115 120 125

Phe His Cys Tyr Asp Gly Tyr Thr Leu Arg Gly Ser Ala Asn Arg Thr

130 135 140

Cys Gln Val Asn Gly Arg Trp Ser Gly Gln Thr Ala Ile Cys Asp Asn

145 150 155 160

Gly Ala Gly Tyr Cys Ser Asn Pro Gly Ile Pro Ile Gly Thr Arg Lys

165 170 175

Val Gly Ser Gln Tyr Arg Leu Glu Asp Ser Val Thr Tyr His Cys Ser

180 185 190

Arg Gly Leu Thr Leu Arg Gly Ser Gln Arg Arg Thr Cys Gln Glu Gly

195 200 205

Gly Ser Trp Ser Gly Thr Glu Pro Ser Cys Gln Asp Ser Phe Met Tyr

210 215 220

Asp Thr Pro Gln Glu Val Ala Glu Ala Phe Leu Ser Ser Leu Thr Glu

225 230 235 240

Thr Ile Glu Gly Val Asp Ala Glu Asp Gly His Gly Pro Gly Glu Gln

245 250 255

Gln Lys Arg Lys Ile Val Leu Asp Pro Ser Gly Ser Met Asn Ile Tyr

260 265 270

Leu Val Leu Asp Gly Ser Asp Ser Ile Gly Ala Ser Asn Phe Thr Gly

275 280 285

Ala Lys Lys Cys Leu Val Asn Leu Ile Glu Lys Val Ala Ser Tyr Gly

290 295 300

Val Lys Pro Arg Tyr Gly Leu Val Thr Tyr Ala Thr Tyr Pro Lys Ile

305 310 315 320

Trp Val Lys Val Ser Glu Ala Asp Ser Ser Asn Ala Asp Trp Val Thr

325 330 335

Lys Gln Leu Asn Glu Ile Asn Tyr Glu Asp His Lys Leu Lys Ser Gly

340 345 350

Thr Asn Thr Lys Lys Ala Leu Gln Ala Val Tyr Ser Met Met Ser Trp

355 360 365

Pro Asp Asp Val Pro Pro Glu Gly Trp Asn Arg Thr Arg His Val Ile

370 375 380

Ile Leu Met Thr Asp Gly Leu His Asn Met Gly Gly Asp Pro Ile Thr

385 390 395 400

Val Ile Asp Glu Ile Arg Asp Leu Leu Tyr Ile Gly Lys Asp Arg Lys

405 410 415

Asn Pro Arg Glu Asp Tyr Leu Asp Val Tyr Val Phe Gly Val Gly Pro

420 425 430

Leu Val Asn Gln Val Asn Ile Asn Ala Leu Ala Ser Lys Lys Asp Asn

435 440 445

Glu Gln His Val Phe Lys Val Lys Asp Met Glu Asn Leu Glu Asp Val

450 455 460

Phe Tyr Gln Met Ile Asp Glu Ser Gln Ser Leu Ser Leu Cys Gly Met

465 470 475 480

Val Trp Glu His Arg Lys Gly Thr Asp Tyr His Lys Gln Pro Trp Gln

485 490 495

Ala Lys Ile Ser Val Ile Arg Pro Ser Lys Gly His Glu Ser Cys Met

500 505 510

Gly Ala Val Val Ser Glu Tyr Phe Val Leu Thr Ala Ala His Cys Phe

515 520 525

Thr Val Asp Asp Lys Glu His Ser Ile Lys Val Ser Val Gly Gly Glu

530 535 540

Lys Arg Asp Leu Glu Ile Glu Val Val Leu Phe His Pro Asn Tyr Asn

545 550 555 560

Ile Asn Gly Lys Lys Glu Ala Gly Ile Pro Glu Phe Tyr Asp Tyr Asp

565 570 575

Val Ala Leu Ile Lys Leu Lys Asn Lys Leu Lys Tyr Gly Gln Thr Ile

580 585 590

Arg Pro Ile Cys Leu Pro Cys Thr Glu Gly Thr Thr Arg Ala Leu Arg

595 600 605

Leu Pro Pro Thr Thr Thr Cys Gln Gln Gln Lys Glu Glu Leu Leu Pro

610 615 620

Ala Gln Asp Ile Lys Ala Leu Phe Val Ser Glu Glu Glu Lys Lys Leu

625 630 635 640

Thr Arg Lys Glu Val Tyr Ile Lys Asn Gly Asp Lys Lys Gly Ser Cys

645 650 655

Glu Arg Asp Ala Gln Tyr Ala Pro Gly Tyr Asp Lys Val Lys Asp Ile

660 665 670

Ser Glu Val Val Thr Pro Arg Phe Leu Cys Thr Gly Gly Val Ser Pro

675 680 685

Tyr Ala Asp Pro Asn Thr Cys Arg Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Ile

690 695 700

Val His Lys Arg Ser Arg Phe Ile Gln Val Gly Val Ile Ser Trp Gly

705 710 715 720

Val Val Asp Val Cys Lys Asn Gln Lys Arg Gln Lys Gln Val Pro Ala

725 730 735

His Ala Arg Asp Phe His Ile Asn Leu Phe Gln Val Leu Pro Trp Leu

740 745 750

Lys Glu Lys Leu Gln Asp Glu Asp Leu Gly Phe Leu

755 760

Claims

1.一种特异性结合因子Bb的抗体(“抗因子B抗体”)，所述抗体用于诱导细胞表面上的补体活性，其包括使所述细胞与有效量的所述抗因子B抗体接触，其中所述抗因子B抗体抑制C3bBb复合物的解离。

2.根据权利要求1所述使用的抗体，其中所述抗因子B抗体除因子Bb外特异性结合因子B。

3.根据权利要求1或2所述使用的抗体，其中所述抗因子B抗体具有一个或多个选自下组的性质：(i)与C3bBb复合物特异性结合，(ii)降低、抑制、或防止C3bBb复合物的降解，(iii)诱导血清中C3裂解，(iv)降低C3的血清浓度，(v)诱导所述细胞表面上C3b的积累；(vi)诱导血清补体活性的丧失，(vii)诱导所述细胞表面上的膜攻击沉积，和(viii)其任何组合。

4.根据权利要求1-3任一项所述使用的抗体，其中所述抗因子B抗体具有选自下组的一个或多个性质：

(a)抗因子B抗体包含重链可变区(VH)的互补决定区-1(CDR1)、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VH CDR3包含SEQ ID NO:3或具有一处或两处氨基酸取代的SEQ ID NO:3；

(b)抗因子B抗体包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VH CDR1包含SEQ ID NO:1或具有一处或两处氨基酸取代的SEQID NO:1；

(c)抗因子B抗体包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VH CDR2包含SEQ ID NO:2或具有一处或两处氨基酸取代的SEQID NO:2；

(d)抗因子B抗体包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VL CDR1包含SEQ ID NO:4或具有一处或两处氨基酸取代的SEQID NO:4；

(e)抗因子B抗体包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VL CDR2包含SEQ ID NO:5或具有一处或两处氨基酸取代的SEQID NO:5；和

(f)抗因子B抗体包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VL CDR3包含SEQ ID NO:6或具有一处或两处氨基酸取代的SEQID NO:6。

5.根据权利要求1-4任一项所述使用的抗体，其中所述抗因子B抗体通过诱导细胞死亡来治疗疾病或病况。

6.根据权利要求5所述使用的抗体，其中所述疾病或病况包括癌症、感染或自身免疫性疾病。

7.一种双特异性抗体，包含(i)特异性结合因子Bb(“抗因子B结合域”)并抑制C3bBb复合物的解离的抗原结合域和(ii)组织或细胞特异性的第二抗原结合域。

8.根据权利要求7所述的双特异性抗体，其中所述抗因子B结合域除因子Bb外特异性结合因子B。

9.根据权利要求7或8所述的双特异性抗体，其中所述抗因子B结合域具有选自下组的一个或多个性质：(i)与C3bBb复合物特异性结合，(ii)降低、抑制或防止C3bBb复合物的降解，(iii)诱导补体活性，(iv)诱导血清中C3裂解，(v)降低C3的血清浓度，(vi)诱导所述细胞表面上C3b的积累；(vii)诱导所述细胞表面上的膜攻击复合物沉积，和(viii)其任何组合。

10.根据权利要求7-9任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗因子B结合域降低或阻断CD55-介导的C3bBb复合物的解离。

11.根据权利要求7-10任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗因子B结合域降低或阻断因子-H-介导的C3bBb复合物的解离。

12.根据权利要求7-11任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗体的抗因子B结合域具有选自下组的一个或多个性质：

(a)抗因子B结合域包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VH CDR3包含SEQ ID NO:3或具有一处或两处氨基酸取代的SEQID NO:3；

(b)抗因子B结合域包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VH CDR1包含SEQ ID NO:1或具有一处或两处氨基酸取代的SEQID NO:1；

(c)抗因子B结合域包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VH CDR2包含SEQ ID NO:2或具有一处或两处氨基酸取代的SEQID NO:2；

(d)抗因子B结合域包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VL CDR1包含SEQ ID NO:4或具有一处或两处氨基酸取代的SEQID NO:4；

(e)抗因子B结合域包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VL CDR2包含SEQ ID NO:5或具有一处或两处氨基酸取代的SEQID NO:5；和

(f)抗因子B结合域包含重链可变区(VH)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(VL)的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述VL CDR3包含SEQ ID NO:6或具有一处或两处氨基酸取代的SEQID NO:6。

13.一种多特异性抗体，其包含(i)权利要求7-12任一项所述的双特异性结合域，(ii)所述组织或细胞特异性的第二抗原结合域，和(ii)第三抗原结合域。

14.一种多核苷酸，其包含编码权利要求7-12任一项所述的双特异性抗体或权利要求13所述的多特异性抗体的核酸。

15.权利要求7-12任一项所述的双特异性抗体或权利要求13所述的多特异性抗体，其用于诱导细胞表面上的补体活性，其中所述抗因子B结合域抑制C3bBb复合物的解离。