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CN119836306A - 与cdcp1结合的抗体药物缀合物和其用途 - Google Patents

与cdcp1结合的抗体药物缀合物和其用途 Download PDF

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CN119836306A
CN119836306A CN202380064580.8A CN202380064580A CN119836306A CN 119836306 A CN119836306 A CN 119836306A CN 202380064580 A CN202380064580 A CN 202380064580A CN 119836306 A CN119836306 A CN 119836306A
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CN
China
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antibody
amino acid
acid sequence
seq
complementarity determining
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Application number
CN202380064580.8A
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P·J·M·杰克逊
G·普罗科皮奥
D·E·瑟斯顿
L·扎内拉
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Fei En Treatment Co ltd
Original Assignee
Fei En Treatment Co ltd
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Abstract

本公开提供了可用于治疗癌症的抗体‑药物缀合物(ADC)、接头和其化合物。

Description

与CDCP1结合的抗体药物缀合物和其用途
相关申请交叉引用
本申请要求保护于2022年7月15日提交的美国临时申请第63/389,743号、于2022年8月24日提交的美国临时申请第63/400,703号、于2023年3月10日提交的美国临时申请第63/489,473号和于2023年3月10日提交的美国临时申请第63/489,474号的优先权，所有美国临时申请通过引用以其整体并入本文。
技术领域
本公开总体上涉及抗体-药物缀合物和用于治疗癌症和其它疾病的方法，包括靶向含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)的疗法。
背景技术
虽然已经开发了各种化学治疗剂，但许多化学治疗剂通常表现出不可接受的毒性和或相较于对非癌性组织的特异性对癌细胞缺乏特异性。为了避免化学治疗剂的非特异性细胞毒性作用，靶向性抗体疗法已经通过几种表现出临床潜力的单克隆抗体彻底改革了癌症治疗。因为针对肿瘤特异性抗原的抗体通常缺乏治疗活性，所以所述抗体已经与细胞毒性剂缀合，以将化学疗法的有效性与抗体的靶向性组合。原则上，细胞毒性剂通过抗体结合到达特定肿瘤组织的选择性递送应降低传统小分子化学治疗剂的全身毒性。
由于成功的抗体药物缀合物(ADC)方法必须成功地与靶抗原结合，以将毒性有效载荷递送到靶细胞而不与非靶细胞显著结合，因此至关重要的是，ADC能够将毒性有效载荷递送到靶细胞、由此被内化，并且然后在位于细胞内的适当隔室内部时释放有效载荷。
CDCP1在人上皮组织中广泛表达。CDCP1在参与肿瘤侵袭和转移的细胞事件的酪氨酸磷酸化依赖性调节中起作用，但其磷酸化仅在以有丝分裂方式脱离或脱落的细胞中观察到，这与其在细胞粘附的负调节中的作用一致。CDCP1的磷酸化可见于许多癌症中，包括一些侵袭前癌症以及侵袭性肿瘤和肿瘤转移中。
尽管对用于使用ADC疗法进行靶向的肿瘤特异性蛋白的了解有所加深，但本领域对在癌症的治疗中可以用于治疗目的的特定靶向CDCP1的ADC的需要仍然未得到满足。
发明内容
在各方面中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或其结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
L是式-R*-L1-LA-的接头；
R*是琥珀酰亚胺；
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-；
LA是-[CH2CH2O]p-(CH2)1-5-C(O)-XAA-，其中p是5至10的整数，并且XAA是具有2个氨基酸部分的氨基酸序列；
D选自
在一些实施例中，L1是在一些实施例中，p是7或8。在一些实施例中，p是8。在一些实施例中，XAA选自Val-Ala、Tyr-Arg、Phe-Arg、Val-Gln、Val-Cit、Tyr-Met、Leu-Gln、Val-Arg、Met-Thr、Phe-Gln、Thr-Thr、Val-Thr、Ala-Ala、Val-Met、Leu-Met、Ala-Asn、D-Val-D-Gln、D-Ala-D-Ala和Phe-Met。在一些实施例中，XAA是缬氨酸-丙氨酸。在一些实施例中，其中LA是-[CH2CH2O]p-(CH2)1-3-C(O)-XAA-。在一些实施例中，LA是-[CH2CH2O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-。在一些实施例中，所述接头L具有式：
在一些实施例中，D是在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，n是4至8的整数。在一些实施例中，n是4。在一些实施例中，n是8。在一些实施例中，所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
在一些实施例中，所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
在一些实施例中，所述抗体或其结合片段包含VH和/或VL，所述VH包含与SEQ IDNO:1的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列，所述VL包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施例中，所述抗体或其结合片段包含VH和/或VL，所述VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。在一些实施例中，所述抗体或其结合片段包含重链和/或轻链，所述重链包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列，所述轻链包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施例中，所述抗体或其结合片段包含重链和/或轻链，所述重链包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。在一些实施例中，所述抗体-药物缀合物的药物-抗体比率(DAR)在约1至约10的范围内，任选地其中所述DAR是约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9或约10，任选地DAR是约4，任选地DAR是约8。
在各方面中，本公开提供了一种药物组合物，其包含式(I)的抗体药物缀合物；以及药学上可接受的载剂。
在各方面中，本公开提供了一种治疗癌症的方法，所述方法包含向有需要的受试者施用治疗有效量的式(I)的抗体药物缀合物或本公开的药物组合物。在一些实施例中，在将所述治疗有效量的所述抗体-药物缀合物施用于所述受试者后约24小时，少于约50％的所述抗体-药物缀合物转化为代谢物。在一些实施例中，在将所述治疗有效量的所述抗体-药物缀合物施用于所述受试者后约96小时，约50％的所述抗体-药物缀合物转化为代谢物。在一些实施例中，将所述抗体-药物缀合物转化为式300的代谢物：
在一些实施例中，将所述抗体-药物缀合物转化为式301的代谢物：
在一些实施例中，将所述抗体-药物缀合物转化为式302的代谢物：
在一些实施例中，在体内将所述抗体-药物缀合物转化为代谢物。在一些实施例中，在体外将所述抗体-药物缀合物转化为代谢物。在一些实施例中，所述癌症选自由以下组成的组：胰腺癌(pancreatic cancer)、乳腺癌(breast cancer)、前列腺癌(prostatecancer)、淋巴瘤、皮肤癌、结肠癌(colon cancer)、黑色素瘤、恶性黑色素瘤、卵巢癌(ovarian cancer)、脑癌、原发性脑癌、头颈癌(head-neck cancer)、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、肝癌、膀胱癌(bladder cancer)、非小细胞肺癌、头颈癌(head or neck carcinoma)、乳腺癌(breast carcinoma)、卵巢癌(ovarian carcinoma)、肺癌、小细胞肺癌(small-celllung carcinoma)、威尔姆氏瘤(Wilms'tumor)、宫颈癌、睾丸癌、膀胱癌(bladdercarcinoma)、胰腺癌(pancreatic carcinoma)、胃癌、结肠癌(colon carcinoma)、前列腺癌(prostatic carcinoma)、泌尿生殖系统癌、甲状腺癌、食管癌、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、肾上腺癌、肾细胞癌、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、恶性胰腺胰岛素瘤、恶性类癌、绒毛膜癌、蕈样肉芽肿、恶性高钙血症、宫颈增生、白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、毛细胞性白血病、神经母细胞瘤、横纹肌肉瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi'ssarcoma)、真性红细胞增多症(polycythemia vera)、原发性血小板增多症、霍奇金氏病(Hodgkin's disease)、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin'slymphoma)、软组织肉瘤、成骨肉瘤、原发性巨球蛋白血症或视网膜母细胞瘤等。在其它实施例中，所述癌症是听神经瘤、腺癌、血管肉瘤、星形细胞瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌(TNBC)、支气管原癌、宫颈癌、脊索瘤、绒毛膜癌、结肠癌、结直肠癌、颅咽管瘤、囊腺癌、胚胎性癌、内皮癌、室管膜瘤、上皮癌、食道癌、尤文氏瘤(Ewing'stumor)、纤维肉瘤、胃癌(gastric cancer)、多形性胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、头颈癌、血管母细胞瘤、肝细胞瘤、肾癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、肺癌、淋巴管内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、髓样癌、髓母细胞瘤、黑色素瘤、脑膜瘤、间皮瘤、粘液肉瘤、鼻癌、神经母细胞瘤、少突神经胶质瘤、口腔癌、成骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳头状腺癌、乳头状癌、松果体瘤、前列腺癌、横纹肌肉瘤、直肠癌、肾细胞癌、视网膜母细胞瘤、肉瘤、皮脂腺癌、精原细胞瘤、皮肤癌、鳞状细胞癌、胃癌(stomach cancer)、汗腺癌、滑膜瘤、睾丸癌、小细胞肺癌、喉癌、子宫癌、威尔姆氏瘤、血癌、急性红白血病性白血病、急性淋巴母细胞性B细胞白血病、急性淋巴母细胞性T细胞白血病、急性淋巴母细胞性白血病、急性巨核细胞母细胞性白血病、急性单核母细胞性白血病、急性髓母细胞性白血病、急性髓单核细胞性白血病、急性非淋巴细胞性白血病、急性早幼粒细胞性白血病、急性未分化性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、毛细胞性白血病、多发性骨髓瘤、重链病、霍奇金氏病、多发性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、真性红细胞增多症或华氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia)。在一些实施例中，三阴性乳腺癌(TNBC)中的所述癌症。
在各方面中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
D包含药物部分；
n是1至20的整数；并且
L具有式：
在一些实施例中，所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
在一些实施例中，所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
在一些实施例中，所述药物部分选自
在一些实施例中，所述药物部分选自在一些实施例中，所述抗体-药物缀合物的药物-抗体比率(DAR)在约1至约10的范围内，任选地其中所述DAR是约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9或约10，任选地DAR是约4，任选地DAR是约8。
在各方面中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
n是1至20的整数；并且
L-D具有式：
在一些实施例中，所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
在一些实施例中，所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
在一些实施例中，所述抗体-药物缀合物的药物-抗体比率(DAR)在约1至约10的范围内，任选地其中所述DAR是约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9或约10，任选地DAR是约4，任选地DAR是约8。在一些实施例中，n是1至10、2至8或4至8的整数，任选地n是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，任选地n是4或8，任选地n是4，任选地n是8。
在各方面中，本公开提供了一种抗体-药物缀合物，其具有式1030-1064或1100-1118中的任一项，其中Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合。
在各方面中，本公开提供了一种实施例(I)-(XVII)中的任一项的抗体-药物缀合物。
在各方面中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
n是1；
L-D具有式：
其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
在各方面中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
n是4；
L-D具有式：
其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
在各方面中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
n是8；
L-D具有式：
其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
在各方面中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
n是1；
L-D具有式：
其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
在各方面中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
n是4；
L-D具有式：
其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
在各方面中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
n是8；
L-D具有式：
其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
在各方面中，本公开提供了一种治疗癌症的方法，所述方法包含向有需要的受试者施用治疗有效量的式(I)的抗体-药物缀合物。
附图说明
当结合附图阅读时，将更好地理解前述发明内容以及本公开的实施例的以下具体描述。
图1示出了谱，所述谱示出了CDCP1mAb的SEC概况。
图2示出了谱，所述谱示出了CDCP1mAb的HIC概况。
图3示出了谱，所述谱示出了CDCP1mAb的PLRP迹线。重(H0)链峰和轻(L0)链峰表示为峰。
图4示出了谱，所述谱示出了用于向基于CDCP1的ADC3分配DAR的PLRP分析的谱。示出了mAb的轻链和重链(L标记和H标记)。计算出平均DAR为7.3。
图5示出了谱，所述谱示出了用于对基于CDCP1的ADC3进行纯化的SEC分析。SEC分析表明，单体纯度为97.5％。
图6示出了谱，所述谱示出了ADC4的HIC概况。在如所指出的DAR种类分配的情况下，平均DAR计算为4。
图7示出了谱，所述谱示出了用于对基于CDCP1的ADC4进行纯化的SEC分析。SEC分析表明，单体纯度为97.6％。
图8示出了谱，所述谱示出了用于向基于CDCP1的ADC5分配DAR的PLRP分析。不同的颜色表示不同的缀合时间(30分钟、60分钟和90分钟)，观察到概况的差异很小。计算出平均DAR为6.7。
图9示出了谱，所述谱示出了用于对基于CDCP1的ADC5进行纯化的SEC分析。不同的颜色表示不同的缀合时间(30分钟、60分钟和90分钟)，其中观察到概况的差异很小并且未经缀合的有效载荷最少。
图10是示出实验数据的图，所述实验数据表明在针对MDA-MB-231以10mg/kg和6mg/kg给药一次ADC3后的平均肿瘤体积相对于时间。
图11是示出实验数据的图，所述实验数据表明在针对MDA-MB-231以10mg/kg、6mg/kg和3mg/kg给药三次ADC3后的平均肿瘤体积相对于时间。
图12A是示出实验数据的图，所述实验数据表明mAb和ADC3在雄性CD1小鼠血浆中的PK概况。图12B示出了多剂量ADC3与单剂量ADC3之间的比较。
图13是示出实验数据的图，所述实验数据表明在针对MDA-MB-231以10mg/kg给药一次ADC4后的平均肿瘤体积相对于时间。
图14是示出实验数据的图，所述实验数据表明在针对MDA-MB-231以10mg/kg和6mg/kg给药三次ADC4后的平均肿瘤体积相对于时间。
图15A是示出实验数据的图，所述实验数据表明在雄性CD-1小鼠血浆中10mg/kg的ADC4的PK概况相对于相同剂量下的未经缀合的mAb的PK概况。ADC的PK概况是有利的，其中在mAb与ADC之间观察到清除率差异很小。图15B示出了实验数据，所述实验数据表明ADC4在MDA-MB-231中的多剂量施用。
图16示出了实验数据，所述实验数据表明，10A-MMAE(DAR＝4)在MDA-MB-231中在多剂量基础上产生完全消退。剂量增加到5mg/kg(多剂量)，并且已观察到完全消退。靶标10的抗原拷贝数＝约89,438。
图17是图像，所述图像示出了用于交联研究的TyrT DNA片段的标记的链的序列。
图18是变性聚丙烯酰胺凝胶的放射自显影图，所述放射自显影图研究在37℃下以各种浓度过夜温育后26与线性32P端标记的TyrT DNA的DNA相互作用的机制。
图19是变性聚丙烯酰胺凝胶的放射自显影图，所述放射自显影图显示出在37℃下以各种浓度过夜温育后PBD二聚体他利林(Talirine)与线性32P端标记的TyrT DNA的DNA链间交联。
图20是示出了包括19和26的多种G烷基化剂与MS1DNA片段(左和左中)和HexA(右中)的相互作用的DNA足迹以及示出PBD二聚体他利林与MS1(右)的相互作用的DNA足迹的图像。配体浓度示出在凝胶的顶部。标记为“GA”的轨道是特定嘌呤的标志物。
图21示出了HexA DNA片段的序列，其示出了通过所分析的化合物产生的可能的单烷基化的加合物。强DNA足迹由实线表示，并且较弱的足迹由交叉阴影线表示。
图22示出了谱，所述谱示出了ADC1的HIC概况。在如所指出的DAR(药物抗体比率)种类分配的情况下，平均DAR计算为1.8。
图23示出了谱，所述谱示出了ADC1的SEC概况；94.3％单体。
图24示出了谱，所述谱示出了ADC1样品的游离毒素接头迹线。在ADC迹线中可以检测到<2％的游离毒素接头。红色：100pmol NAC-FGX11。蓝色：蛋白质沉淀后的CDCP1-27；鉴定出的峰表明残留的蛋白质材料。
图25示出了谱，所述谱示出了ADC2的HIC概况。在如所指出的DAR种类分配的情况下，平均DAR计算为4.2。
图26示出了谱，所述谱示出了ADC2的SEC概况；94.4％单体。
图27示出了谱，所述谱示出了ADC2样品的游离毒素接头迹线。在ADC迹线中可以检测到0.4％的游离毒素接头。红色：100pmol NAC产物，蓝色：蛋白质沉淀后的ADC2；鉴定出的峰表明残留的蛋白质材料。
图28示出了谱，所述谱示出了ADC7的HIC概况。在如所指出的DAR种类分配的情况下，平均DAR计算为2.1。
图29示出了谱，所述谱示出了用于对ADC7进行纯化的SEC分析的实例。ADC含有97.5％的单体。
图30是实验数据的图，所述实验数据表明ADC与抗原阳性细胞系(A427)的结合。所有ADC与未经缀合的CDCP1mAb具有相似的结合亲和力。数据还表明，未经缀合的非靶向性同种型对照mAb不与抗原结合。
图31是实验数据的图，所述实验数据表明在针对K562给药一次ADC1(第1天)后的平均肿瘤体积相对于时间。观察到剂量依赖性消退。
图32是实验数据的图，所述实验数据表明mAb和ADC1在雄性CD1小鼠血浆中的PK概况。ADC的PK概况是有利的，其中在mAb与ADC之间观察到清除率差异很小。
图33是实验数据的图，所述实验数据表明在针对K562给药一次ADC2(第1天)后的平均肿瘤体积相对于时间。观察到消退，无重量损失。
图34是实验数据的图，所述实验数据表明在针对MDA-MB-231以5mg/kg和10mg/kg两者给药一次ADC2(第1天)后的平均肿瘤体积相对于时间。在较高剂量下观察到完全消退，无重量损失。未经缀合的mAb的影响可忽略，这表明ADC的靶向性细胞杀伤能力。
图35是实验数据的图，所述实验数据表明在针对MDA-MB-231以5mg/kg和10mg/kg两者多次给药ADC2(第1天、第8天和第15天或第1天、第22天和第43天)后的平均肿瘤体积相对于时间。在较高剂量下观察到完全消退，无重量损失。未经缀合的mAb的影响可忽略，这表明ADC的靶向性细胞杀伤能力。
图36是实验数据的图，所述实验数据表明在针对PC3以1mg/kg至10mg/kg的剂量单次给药ADC2(第1天)后的平均肿瘤体积相对于时间。观察到浓度依赖性消退，无重量损失。
图37是实验数据的图，所述实验数据表明在针对A427以10mg/kg给药三次ADC2(第1天、第7天和第14天)后的平均肿瘤体积相对于时间。
图38是实验数据的图，所述实验数据表明mAb和ADC2在雄性CD1小鼠血浆中的PK概况。ADC的PK概况是有利的，其中在mAb与ADC之间观察到清除率差异很小。
图39A是实验数据的图，所述实验数据表明在针对NSCLC CALU-6首次给药(Q7dx3)3mg/kg、6mg/kg和10mg/kg的ADC3(DAR为8)和1mg/kg、3mg/kg和6mg/kg的CDCP1-MMAE(DAR为4)后的平均肿瘤体积相对于天数。图39B是免疫组织化学(IHC)图像，所述图像示出了CDCP1在NSCLC细胞系中的表达。
图40A是实验数据的图，所述实验数据表明在针对TNBC MDA-MB-231首次给药(Q7dx3)3mg/kg、6mg/kg和10mg/kg的ADC3(DAR为8)和1mg/kg、3mg/kg和6mg/kg的CDCP1-MMAE(DAR为4)后的平均肿瘤体积相对于天数。图40B是IHC图像，所述图像示出了CDCP1在TNBC细胞系预处理中的表达。
图41是来自在食蟹猴中使用4mg/kg、6mg/kg和8mg/kg的CDCP1-vcMMAE(DAR为4)以及15mg/kg、30mg/kg和45mg/kg的ADC3(DAR为8)进行的剂量范围发现(DRF)和PK研究的数据的汇总。
图42是用于检查食蟹猴中的ADC3(DAR为8)的非限制性良好实验室规范(GLP)毒理学研究设计框架的框架。
图43A是实验数据的图，所述实验数据表明在食蟹猴中以6mg/kg 3次给药后的CDCP1-vcMMAE的PK概况相较于相同剂量下的未经缀合的mAb和未经缀合的有效载荷的PK概况。图43B是表，其汇总了在食蟹猴中(在食蟹猴血浆中)以8mg/kg、6mg/kg和4mg/kg给药3次CDCP1-vcMMAE后的另外的PK数据。
图44A是实验数据的图，所述实验数据表明未经缀合的CDCP1-mAb与huCDCP1(F30-T667Q525)-8×His_T3的结合。图44B是实验数据的图，所述实验数据表明CDCP1-vcMMAE(DAR为4)与huCDCP1(F30-T667Q525)-8×His_T3的结合。图44C是实验数据的图，所述实验数据表明ADC2(DAR为4)与huCDCP1(F30-T667Q525)-8×His_T3的结合。图44D是实验数据的图，所述实验数据表明ADC4(DAR为4)与huCDCP1(F30-T667Q525)-8×His_T3的结合。图44E是实验数据的图，所述实验数据表明ADC3(DAR为8)与huCDCP1(F30-T667Q525)-8×His_T3的结合。图44F是表，其汇总了未经缀合的CDCP1-mAb和ADC与重组CDCP1ECD huCDCP1(F30-T667Q525)-8×His_T3的另外的结合数据。CDCP1-mAb＝序列1。
图45A是实验数据的图，所述实验数据表明在CDCP1+切割后未经缀合的CDCP1-mAb和CDCP1-vcMMAE与MDA-MB-468细胞的结合。图45B是实验数据的图，所述实验数据表明在CDCP1++切割后未经缀合的CDCP1-mAb和CDCP1-vcMMAE与PC3细胞的结合。图45C是实验数据的图，所述实验数据表明在CDCP1+++切割后未经缀合的CDCP1-mAb和CDCP1-vcMMAE与DU145细胞的结合。图45D是实验数据的图，所述实验数据表明在CDCP1切割后未经缀合的CDCP1-mAb和CDCP1-vcMMAE与OVMZ-6细胞的结合。图45E是聚丙烯酰胺凝胶结合测定的图像。
图46A是实验数据的图，所述实验数据表明未经缀合的CDCP1-mAb与CDCP1+细胞的结合亲和力。图46B是实验数据的图，所述实验数据表明ADC3(DAR为8)与CDCP1+细胞的结合亲和力。图46C是实验数据的图，所述实验数据表明CDCP1-vcMMAE(DAR为4)与CDCP1+细胞的结合亲和力。
图47A是实验数据的图，所述实验数据表明相对细胞存活率(％)相对于CDCP1-vcMMAE(DAR为4)的浓度。图47B是实验数据的图，所述实验数据表明相对细胞存活率(％)相对于ADC3(DAR为8)的浓度。
图48A是实验数据的图，所述实验数据表明相对细胞存活率(％)相对于CDCP1-vcMMAE(DAR为4)的浓度。图48B是实验数据的图，所述实验数据表明相对细胞存活率(％)相对于ADC3(DAR为8)的浓度。
图49A是实验数据的图像，所述实验数据表明在PC3集落形成测定中ADC3(DAR为8)的细胞毒性。图49B是实验数据的图像，所述实验数据表明在PC3集落形成测定中同种型对照依喜替康(exatecan)的细胞毒性。图49C是实验数据的图，所述实验数据表明集落形成(相对于未经处理的集落归一化)相对于未经缀合的CDCP1-mAb或ADC的浓度(μg/mL)。
图50A-50B示出了用于评价本公开的抗体药物缀合物的药代动力学策略的非限制性实例。图50A示出了对ADC、总mAb和有效载荷(例如，CDCP1-vcMMAE)的基于LC-MS的分析的非限制性实例。图50B示出了对ADC、总mAb的基于ELISA的分析以及对有效载荷(例如，ADC3)的LC-MS的非限制性实例。
图51A-51B示出了实验数据，所述实验数据表明ADC3的功效和耐受性数据。图51A示出了实验数据的图，所述实验数据表明MDA-MB-231(TNBC)处理时间相较于肿瘤体积(给药第0天、第7天、第14天)。拷贝数＝73,654(FACS)。图51B是实验数据的表，所述实验数据表明三剂量(Q3W)非人灵长类动物非GLP毒性研究。基准数据：HNSTD＝30mg/kg，NOAEL＝15mg/kg(食蟹猴)；在食蟹猴中在更高剂量下观察到ILD。
图52示出了实验数据，所述实验数据表明，ADC3在小鼠/人/食蟹猴血浆中是高度稳定的。
图53A-53C示出了实验数据，所述实验数据表明，发现在体外研究中，曲妥珠单抗(trastuzumab)-化合物30在HER2+++品系中的效力低于T-Dxd ADC在所述品系中的效力(图53A和53C)，但是游离有效载荷的效力大致相等(图53B)。图53A是表，其示出了化合物在HER2+++品系中的EC50值。图53B示出了基于Dxd、依喜替康或TOPO1抑制剂对照的浓度的活细胞百分比。图53C示出了基于ADC(曲妥珠单抗-化合物30、同种型-化合物30或曲妥珠单抗-Dxd)的浓度的活细胞百分比。
图54示出了实验数据，所述实验数据证明，体内功效显示出使用ADC3实现的消退比使用实现的消退更延长/持续。JIMT-1CDX体内功效(HER2+)。
图55示出了化合物30中的Val-Ala键的所提出的切割机制。
图56示出了实验数据的表，所述实验数据表明各种接头/有效载荷在与木瓜蛋白酶反应24小时和96小时之后的切割速率。
图57示出了化合物30、化合物33和AZ-0133的结构。
图58示出了德鲁替康(deruxtecan)和化合物50的结构。
图59示出了曲妥珠单抗-DM1的结构。
图60示出了在肝和食蟹猴微粒体研究中遵循的代谢物的结构。
图61A-61F是实验数据的图，所述实验数据表明在与曲妥珠单抗-化合物30(图61A)、曲妥珠单抗-化合物33(图61B)、曲妥珠单抗-化合物50(图61C)、曲妥珠单抗-AZ-0133(图61D)、曲妥珠单抗-德鲁替康(图61E)和曲妥珠单抗-恩美(图61F)一起温育时依喜替康的形成。
图62A-62F是实验数据的图，所述实验数据表明在与曲妥珠单抗-化合物30(图62A)一起温育时Cys-化合物20(M1)的形成；在与曲妥珠单抗-化合物33一起温育时Cys-Mal-胺基-PEG8-Val-Ala-PABC-依喜替康的形成(图62B)；在与曲妥珠单抗-化合物50一起温育时Cys-Mal-胺基-PEG8-依喜替康的形成(图62C)；在与曲妥珠单抗-AZ-0133一起温育时Cys-Mal-胺基-PEG8-Val-Ala-PABC-AZ-1033的形成(图62D)；在与曲妥珠单抗-德鲁替康一起温育时Cys-Mc-GGFG-DxD的形成(图62E)；以及在与曲妥珠单抗-恩美一起温育时Lys-MCC-DM1的形成(图62F)。
具体实施方式
除非另外规定，否则本文中所使用的所有技术术语和科学术语具有与本公开所属领域的技术人员通常所理解的含义相同的含义。本文提及的所有专利和出版物均通过引用整体并入。
定义
如本文所用，术语“施用(administer)”、“施用(administration)”或“施用(administering)”是指(1)根据本公开，由健康从业者或其授权代理人或在其指示下提供、给予、给药和/或开处方，和/或(2)根据本公开，由哺乳动物放入体内、服用或食用。
如本文所用，术语“共施用(co-administration)”、“共施用(co-administering)”、“与……组合施用(administered in combination with)”、“与……组合施用(administering in combination with)”、“同时(simultaneous)”和“并行(concurrent)”涵盖向受试者施用两种或更多种活性药物成分，使得两种活性药物成分和/或其代谢物同时存在于受试者体内。共同施用包括以单独组合物的形式同时施用、以单独组合物的形式在不同时间施用或以存在两种或更多种活性药物成分的组合物的形式施用。以单独组合物的形式同时施用和以存在两种药剂的组合物的形式施用是优选的。
术语“活性药物成分”和“药物”本文所述的抗体、缀合物和化合物。术语“活性药物成分”和“药物”还可以包括与蛋白质(包括但不限于CDCP1)结合并且由此调节蛋白质活性的本文所述的那些化合物。
术语“等排体”是指其化学和/或物理特性与另一种基团或分子的化学和/或物理特性相似的基团或分子。“生物等排体”是等排体的一种类型，并且是指其生物特性与另一种基团或分子的生物特性相似的基团或分子。例如，羧酸可以被羧酸的以下生物等排体中的一种替代，所述生物等排体包括但不限于烷基酯(COOR)、酰基磺酰胺(CONR-SO2R)、羟肟酸(CONR-OH)、异羟肟酸(CONR-OR)、四唑、羟基异噁唑、异噁唑-3-酮和磺酰胺(SO2NR)，其中每个R可以独立地表示氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。
术语“体内”是指发生在受试者体内的事件。
术语“体外”是指发生在受试者身体外部的事件。体外测定涵盖采用活的或死的细胞的基于细胞的测定，并且还可以涵盖不采用完整细胞的不含细胞的测定。
术语“有效量”或“治疗有效量”是指如本文所描述的足以实现预期应用的化合物或化合物组合的量，所述预期应用包括但不限于疾病治疗。治疗有效量可以根据预期应用(体外或体内)或受试者和所治疗的疾病病状(例如，受试者的体重、年龄和性别)、疾病病状的严重程度、施用方式等而变化，这可以由本领域的普通技术人员容易地确定。所述术语还适用于将诱导靶细胞中的特定应答(例如，血小板粘附和/或细胞迁移减少)的剂量。具体剂量将根据所选择的特定化合物、要遵循的给药方案、所述化合物是否与其它化合物组合施用、施用时间、化合物所施用的组织和化合物被承载的物理递送系统而变化。
如所述术语在本文中所使用的，“治疗效果”涵盖治疗益处和/或预防益处。预防效果包括延迟或消除疾病或病状的出现、延迟或消除疾病或病状的症状发作、减缓、停止或逆转疾病或病状的进展或其任何组合。
如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”和/或“治疗(treating)”可以指以治愈、改善、稳定和/或控制疾病、病症、病理性病状或其症状为目的对所述疾病、病症或病理性病状或其症状进行管理。关于疾病、病症或病理性病状的控制，更具体地，“控制”可以包括如通过对本文所述方法的应答所评估的不存在病状进展，其中此类应答可以是完全的(例如，使疾病得到缓解)或部分的(例如，减轻或改善与病状相关的任何症状)。如本文所用，术语“预防(prevent)”、“预防(preventing)”和/或“预防(prevention)”可以指降低患上疾病、病症或病理性病状的风险。
如本文所用，术语“调节(modulate)”和“调节(modulation)”是指生物分子(例如，蛋白质、基因、肽、抗体等)的生物活性发生变化，其中此类变化可以与生物分子的生物活性的提高(例如，活性增加、激动、激活、表达、上调、和/或表达增加)或生物活性的降低(例如，活性降低、拮抗、抑制、灭活、下调、和/或表达减少)相关。
术语“QD”、“qd”或“q.d.”意指每天一次(quaque die、once a day或once daily)。术语“BID”、“bid”或“b.i.d.”意指每天两次(bis in die、twice a day或twice daily)。术语“TID”、“tid”或“t.i.d.”意指每天三次(ter in die、three times a day或three timesdaily)。术语“QID”、“qid”或“q.i.d.”意指每天四次(quater in die、four times a day或four times daily)。
术语“药学上可接受的盐”是指衍生自本领域已知的各种有机和无机反离子的盐。药学上可接受的酸加成盐可以通过无机酸和有机酸形成。可以衍生出盐的优选无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸和磷酸。可以衍生出盐的优选有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸和水杨酸。药学上可接受的碱加成盐可以通过无机碱和有机碱形成。可以衍生出盐的无机碱包括例如，钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰和铝。可以衍生出盐的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺、经取代的胺，包括天然存在的经取代的胺、环胺和碱性离子交换树脂。具体实例包括异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺和乙醇胺。在一些实施例中，药学上可接受的碱加成盐选自铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。术语“共晶体”是指衍生自本领域已知的多种共晶体形成体的分子复合物。与盐不同，共晶体通常不涉及共晶体与药物之间的氢转移，而是涉及分子间相互作用，如氢键合、芳香族环堆叠或晶体结构中的共晶体形成体与药物之间的分散力。
“药学上可接受的载剂”或“药学上可接受的赋形剂”或“生理上相容的”载剂或载剂介质旨在包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和延迟吸收剂以及惰性成分。此类药学上可接受的载剂或药学上可接受的赋形剂用于活性药物成分的用途是本领域众所周知的。除了任何常规的药学上可接受的载剂或药学上可接受的赋形剂与活性药物成分不相容的情况之外，设想了其在本公开的治疗组合物中的用途。另外的活性药物成分(如其它药物)也可以并入到所描述的组合物和方法中。
“前药”是指本文所描述的化合物的衍生物，其药理作用是由在体内通过化学或代谢过程转化为活性化合物产生的。前药包括其中氨基酸残基或两个或更多个(例如，两个、三个或四个)氨基酸残基的多肽链通过酰胺键或酯键与游离氨基、羟基或羧酸基团共价连接的化合物。氨基酸残基包括但不限于通常由单字母或三字母符号表示的20种天然存在的氨基酸，但还包括例如4-羟脯氨酸、羟赖氨酸、锁链素、异锁链素、3-甲基组氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、瓜氨酸、高半胱氨酸、高丝氨酸、鸟氨酸和甲硫氨酸砜。还涵盖另外类型的前药。例如，游离羧基可以衍生为酰胺或烷基酯(例如，甲酯和乙酰氧基甲酯)。如本文所采用的前药酯包括通过采用本领域的技术人员已知的程序使本公开的方法的化合物的一个或多个羟基与烷基、烷氧基或芳基取代的酰化剂反应以产生乙酸酯、新戊酸酯、碳酸甲酯、苯甲酸酯等而形成的酯和碳酸酯。作为另外的实例，游离羟基可以使用包括但不限于半琥珀酸酯、磷酸酯、二甲氨基乙酸酯和磷酰氧基甲氧基羰基的基团衍生，如《先进药物递送评论(Advanced Drug Delivery Reviews)》,1996,19,115中所概述的。还包括羟基和氨基的氨基甲酸酯前药，如羟基的碳酸酯前药、磺酸酯前药、磺酸酯和硫酸酯。游离胺还可以衍生为酰胺、磺酰胺或磷酰胺。所有所阐述的前药部分可以并入包括但不限于醚、胺和羧酸官能团的基团。此外，可以在体内转化以提供生物活性剂的任何化合物都是本公开的范围内的前药。各种形式的前药在本领域中是众所周知的。前药和前药衍生物的综合描述描述于：(a)《药物化学实践(The Practice of Medicinal Chemistry)》,Camille G.Wermuth等人,(学术出版社(Academic Press),1996)；(b)《前药设计(Design of Prodrugs)》,H.Bundgaard编辑,(爱思唯尔出版社(Elsevier),1985)；(c)《药物设计与开发教科书(A Textbook ofDrug Design and Development)》,P.Krogsgaard-Larson和H.Bundgaard编辑,(哈伍德学术出版社(Harwood Academic Publishers),1991)。一般来说，前药可以被设计成改进药物跨生物膜的渗透，以获得经改进的药物吸收、延长药物作用的持续时间(母体药物从前药中缓慢释放、药物的首过代谢减少)、靶向药物作用(例如，器官或肿瘤靶向、淋巴细胞靶向)、改变或提高药物的水溶解度(例如，静脉内制剂和滴眼剂)、改善局部药物递送(例如，皮肤和眼部药物递送)、提高药物的化学/酶促稳定性、或降低脱靶药物效应，并且更一般地，改善本公开中使用的化合物的治疗功效。
除非另外说明，否则本文所描绘的化学结构还旨在包括仅在一个或多个同位素富集的原子的存在方面不同的化合物。例如，其中一个或多个氢原子被氘或氚替代或其中一个或多个碳原子被13C或14C富集的碳替代的化合物在本公开的范围内。
“烷基”是指仅由碳原子和氢原子组成的不含不饱和度的具有一个至十个碳原子(例如，(C1-10)烷基或C1-10烷基)的直链或支链烃链基团。无论何时出现在本文中，如“1至10”等数字范围是指在给定范围内的每个整数，例如，“1个至10个碳原子”意指烷基可以由1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等、至多10个(并且包括10个)碳原子组成，尽管所述定义也旨在涵盖在没有具体指定数字范围的情况下术语“烷基”的出现。典型的烷基包括但决不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基。烷基部分可以通过单个键附接到分子的其余部分，例如甲基(Me)、乙基(Et)、正丙基(Pr)、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基、1,1-二甲基乙基(叔丁基)和3-甲基己基。除非在说明书中另有具体说明，否则烷基任选地被独立地是以下的取代基中的一种或多种取代基取代：杂烷基、酰基磺酰胺基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、异羟肟酸、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、羟基、卤代、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、三甲基硅烷基、-ORa、-SRa、-S(O)tRa-(其中t是1或2)、-OC(O)-Ra、-N(Ra)2、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-OC(O)N(Ra)2、-C(O)N(Ra)2、-N(Ra)C(O)ORa、-N(Ra)C(O)Ra、-N(Ra)C(O)N(Ra)2、N(Ra)C(NRa)N(Ra)2、-N(Ra)S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tORa(其中t是1或2)、-S(O)tN(Ra)2(其中t是1或2)或PO(ORa)2，其中每个Ra独立地是氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。
“烷基芳基”是指-(烷基)芳基，其中芳基和烷基如本文所公开的，并且其任选地被分别被描述为芳基和烷基的合适取代基的取代基中的一种或多种取代基取代。
“烷基杂芳基”是指-(烷基)杂芳基，其中杂芳基和烷基如本文所公开的，并且其任选地被分别被描述为芳基和烷基的合适取代基的取代基中的一种或多种取代基取代。
“烷基杂环烷基”是指-(烷基)杂环基，其中烷基和杂环烷基如本文所公开的，并且其任选地被分别被描述为杂环烷基和烷基的合适取代基的取代基中的一种或多种取代基取代。
“烯烃”部分是指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的基团，并且“炔烃”部分是指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳三键组成的基团。烷基部分，无论是饱和的还是不饱和的，都可以是支链的、直链的或环状的。
“烯基”是指仅由碳原子和氢原子组成的含有至少一个双键并且具有两个至十个碳原子(即，(C2-10)烯基或C2-10烯基)的直链或支链烃链基团。每当在本文中出现时，如“2至10”等数字范围是指在给定范围内的每个整数，例如，“2个至10个碳原子”意指烯基可以由2个碳原子、3个碳原子等、至多10个(并且包括10个)碳原子组成。烯基部分可以通过单个键附接到分子的其余部分，例如乙烯基(ethenyl)(即，乙烯基(vinyl))、丙-1-烯基(即，烯丙基)、丁-1-烯基、戊-1-烯基和戊-1,4-二烯基。除非在说明书中另有具体说明，否则烯基任选地被一种或多种独立地是以下的取代基取代：烷基、杂烷基、酰基磺酰胺基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、异羟肟酸、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、羟基、卤代、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、三甲基硅烷基、-ORa、-SRa、-S(O)tRa-(其中t是1或2)、-OC(O)-Ra、-N(Ra)2、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-OC(O)N(Ra)2、-C(O)N(Ra)2、-N(Ra)C(O)ORa、-N(Ra)C(O)Ra、-N(Ra)C(O)N(Ra)2、N(Ra)C(NRa)N(Ra)2、-N(Ra)S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tORa(其中t是1或2)、-S(O)tN(Ra)2(其中t是1或2)或PO(ORa)2，其中每个Ra独立地是氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。
“烯基-环烷基”是指-(烯基)环烷基，其中烯基和环烷基如本文所公开的，并且其任选地被分别被描述为烯基和环烷基的合适取代基的取代基中的一种或多种取代基取代。
“炔基”是指仅由碳原子和氢原子组成的含有至少一个三键的具有两个至十个碳原子(即，(C2-10)炔基或C2-10炔基)的直链或支链烃链基团。每当在本文中出现时，如“2至10”等数字范围是指在给定范围内的每个整数，例如，“2个至10个碳原子”意指炔基可以由2个碳原子、3个碳原子等、至多10个(并且包括10个)碳原子组成。炔基可以通过单个键附接到分子的其余部分，例如乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基和己炔基。除非在说明书中另有具体说明，否则炔基任选地被一种或多种独立地是以下的取代基取代：烷基、杂烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、异羟肟酸、酰基磺酰胺基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、羟基、卤代、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、三甲基硅烷基、-ORa、-SRa、-S(O)tRa-(其中t是1或2)、-OC(O)-Ra、-N(Ra)2、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-OC(O)N(Ra)2、-C(O)N(Ra)2、-N(Ra)C(O)ORa、-N(Ra)C(O)Ra、-N(Ra)C(O)N(Ra)2、N(Ra)C(NRa)N(Ra)2、-N(Ra)S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tORa(其中t是1或2)、-S(O)tN(Ra)2(其中t是1或2)或PO(ORa)2，其中每个Ra独立地是氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。
“炔基-环烷基”是指-(炔基)环烷基，其中炔基和环烷基如本文所公开的，并且其任选地被分别描述为炔基和环烷基的合适取代基的取代基中的一种或多种取代基取代。
“酰基磺酰胺”是指基团–C(＝O)NRa-S(＝O)2Ra，其中每个Ra独立地是氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。
“咪唑甲醛”是指(C＝O)H基团。
“羰基”是指基团-C(＝O)-。羰基可以被以下示例性取代基取代：烷基、杂烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、异羟肟酸、酰基磺酰胺基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、羟基、卤代、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、三甲基硅烷基、-ORa、-SRa、-S(O)tRa-(其中t是1或2)、-OC(O)-Ra、-N(Ra)2、-C(O)Ra、-NRa-ORa-、-C(O)ORa、-OC(O)N(Ra)2、-C(O)N(Ra)2、-N(Ra)C(O)ORa、-N(Ra)C(O)Ra、-N(Ra)C(O)N(Ra)2、N(Ra)C(NRa)N(Ra)2、-N(Ra)S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tORa(其中t是1或2)、-S(O)tN(Ra)2(其中t是1或2)或PO(ORa)2，其中每个Ra独立地是氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。
“羧基”是指-(C＝O)OH基团。
“氰基”是指-CN基团。
“环烷基”是指仅含有碳和氢的单环或多环基团，并且可以是饱和的，或部分不饱和的。环烷基包括具有3个至10个环原子的基团(即，(C3-10)环烷基或C3-10环烷基)。每当在本文中出现时，如“3至10”等数字范围是指在给定范围内的每个整数，例如，“3个至10个碳原子”意指环烷基可以由3个碳原子等、至多10个(并且包括10个)碳原子组成。环烷基的说明性实例包括但不限于以下部分：环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、降冰片基等。除非在说明书中另有具体说明，否则环烷基任选地被一种或多种独立地是以下的取代基取代：烷基、杂烷基、烯基、炔基、环烷基、酰基磺酰胺基、杂环烷基、异羟肟酸、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、羟基、卤代、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、三甲基硅烷基、-ORa、-SRa、-S(O)tRa-(其中t是1或2)、-S(O)tRa-(其中t是1或2)、-OC(O)-Ra、-N(Ra)2、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-OC(O)N(Ra)2、-C(O)N(Ra)2、-N(Ra)C(O)ORa、-N(Ra)C(O)Ra、-N(Ra)C(O)N(Ra)2、N(Ra)C(NRa)N(Ra)2、-N(Ra)S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tORa(其中t是1或2)、-S(O)tN(Ra)2(其中t是1或2)或PO(ORa)2，其中每个Ra独立地是氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。
“环烷基-烯基”是指-(环烷基)烯基，其中环烷基和烯基如本文所公开的，并且其任选地被分别被描述为环烷基和烯基的合适取代基的取代基中的一种或多种取代基取代。
“环烷基-杂环烷基”是指-(环烷基)杂环烷基，其中环烷基和杂环烷基如本文所公开的，并且其任选地被分别被描述为环烷基和杂环烷基的合适取代基的取代基中的一种或多种取代基取代。
“环烷基-杂芳基”是指-(环烷基)杂芳基，其中环烷基和杂芳基如本文所公开的，并且其任选地被分别描述为环烷基和杂芳基的合适取代基的取代基中的一种或多种取代基取代。
术语“烷氧基”是指基团-O-烷基，包括通过氧附接到母体结构的直链、支链、环状构型和其组合的1个至8个碳原子。实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、环丙氧基和环己氧基。“低级烷氧基”是指含有一个至六个碳的烷氧基。
术语“经取代的烷氧基”是指其中烷基成分被取代的烷氧基(即，-O-(取代的烷基))。除非在说明书中另有具体说明，否则烷氧基的烷基部分任选地被一种或多种独立地是以下的取代基取代：烷基、杂烷基、烯基、酰基磺酰胺基、炔基、环烷基、杂环烷基、异羟肟酸、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、羟基、卤代、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、三甲基硅烷基、-ORa、-SRa、-S(O)tRa-(其中t是1或2)、-OC(O)-Ra、-N(Ra)2、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-OC(O)N(Ra)2、-C(O)N(Ra)2、-N(Ra)C(O)ORa、-N(Ra)C(O)Ra、-N(Ra)C(O)N(Ra)2、N(Ra)C(NRa)N(Ra)2、-N(Ra)S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tORa(其中t是1或2)、-S(O)tN(Ra)2(其中t是1或2)或PO(ORa)2，其中每个Ra独立地是氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。
术语“烷氧基羰基”是指通过羰基碳附接的式(烷氧基)(C＝O)-的基团，其中所述烷氧基具有指示数量的碳原子。由此，(C1-6)烷氧基羰基是通过其氧与羰基接头附接的具有1个至6个碳原子的烷氧基。“低级烷氧基羰基”是指其中烷氧基是低级烷氧基的烷氧基羰基。
术语“经取代的烷氧基羰基”是指基团(经取代的烷基)-O-C(O)-，其中所述基团通过羰基官能团附接到母体结构。除非在说明书中另有具体说明，否则烷氧基羰基的烷基部分任选地被一种或多种独立地是以下的取代基取代：烷基、杂烷基、酰基磺酰胺基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、异羟肟酸、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、羟基、卤代、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、三甲基硅烷基、-ORa、-SRa、-S(O)tRa-(其中t是1或2)、-OC(O)-Ra、-N(Ra)2、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-OC(O)N(Ra)2、-C(O)N(Ra)2、-N(Ra)C(O)ORa、-N(Ra)C(O)Ra、-N(Ra)C(O)N(Ra)2、N(Ra)C(NRa)N(Ra)2、-N(Ra)S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tORa(其中t是1或2)、-S(O)tN(Ra)2(其中t是1或2)或PO(ORa)2，其中每个Ra独立地是氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。
“酰基”是指基团(烷基)-C(O)-、(芳基)-C(O)-、(杂芳基)-C(O)-、(杂烷基)-C(O)-和(杂环烷基)-C(O)-，其中所述基团通过羰基官能团附接到母体结构。如果R基团是杂芳基或杂环烷基，则杂环或链原子对链或环原子的总数有贡献。除非在说明书中另有具体说明，否则酰基的烷基、芳基或杂芳基部分任选地被一种或多种独立地是以下的取代基取代：烷基、杂烷基、酰基磺酰胺基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、异羟肟酸、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、羟基、卤代、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、三甲基硅烷基、-ORa、-SRa、-S(O)tRa-(其中t是1或2)、-OC(O)-Ra、-N(Ra)2、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-OC(O)N(Ra)2、-C(O)N(Ra)2、-N(Ra)C(O)ORa、-N(Ra)C(O)Ra、-N(Ra)C(O)N(Ra)2、N(Ra)C(NRa)N(Ra)2、-N(Ra)S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tORa(其中t是1或2)、-S(O)tN(Ra)2(其中t是1或2)或PO(ORa)2，其中每个Ra独立地是氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。
“酰氧基”是指R(C＝O)O-基团，其中R是如本文所述的烷基、芳基、杂芳基、杂烷基或杂环烷基。如果R基团是杂芳基或杂环烷基，则杂环或链原子对链或环原子的总数有贡献。除非在说明书中另有具体说明，否则酰氧基的R任选地被一种或多种独立地是以下的取代基取代：烷基、杂烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、异羟肟酸、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、羟基、卤代、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、三甲基硅烷基、-ORa、-SRa、-S(O)tRa-(其中t是1或2)、-OC(O)-Ra、-N(Ra)2、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-OC(O)N(Ra)2、-C(O)N(Ra)2、-N(Ra)C(O)ORa、-N(Ra)C(O)Ra、-N(Ra)C(O)N(Ra)2、N(Ra)C(NRa)N(Ra)2、-N(Ra)S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tORa(其中t是1或2)、-S(O)tN(Ra)2(其中t是1或2)或PO(ORa)2，其中每个Ra独立地是氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。
“氨基”或“胺”是指-N(Ra)2基团，其中每个Ra独立地是氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基，除非在说明书中另有具体说明。在-N(Ra)2基团具有除氢之外的两个Ra取代基时，其可以与氮原子组合以形成4元、5元、6元或7元环。例如，-N(Ra)2旨在包括但不限于1-吡咯烷基和4-吗啉基。除非在说明书中另有具体说明，否则氨基任选地被一种或多种独立地是以下的取代基取代：烷基、酰基磺酰胺基、杂烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、异羟肟酸、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、羟基、卤代、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、三甲基硅烷基、-ORa、-SRa、-S(O)tRa-(其中t是1或2)、-OC(O)-Ra、-N(Ra)2、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-OC(O)N(Ra)2、-C(O)N(Ra)2、-N(Ra)C(O)ORa、-N(Ra)C(O)Ra、-N(Ra)C(O)N(Ra)2、N(Ra)C(NRa)N(Ra)2、-N(Ra)S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tORa(其中t是1或2)、-S(O)tN(Ra)2(其中t是1或2)或PO(ORa)2，其中每个Ra独立地是氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。
术语“经取代的氨基”还指各自如上所述的基团-NHRd和NRdRd的N-氧化物。N-氧化物可以通过用例如过氧化氢或间氯过氧化苯甲酸对对应的氨基进行处理来制备。
“酰胺”或“胺基”是指具有式C(O)NRaRb或-NRaC(O)Rb的化学部分，其中Ra和Rb选自由以下组成的组：氢、烷基、环烷基、芳基、杂芳基(通过环碳键合)和杂脂环族化合物(通过环碳键合)，所述部分中的每个部分本身可以是任选取代的。-C(O)N RaRb酰胺的Ra和Rb可以任选地与其所附接的氮一起形成4元、5元、6元或7元环。除非说明书中另外具体说明，否则胺基任选地独立地被烷基、氨基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基的如本文所述的取代基中的一种或多种取代基取代。酰胺可以是附接到本文所公开的化合物由此形成前药的氨基酸或肽分子。用于制备此类酰胺的程序和特定基团是本领域的技术人员已知的，并且可以容易地在开创性来源中找到，如Greene和Wuts,《有机合成中的保护基团(ProtectiveGroups in Organic Synthesis)》,第3版,纽约州纽约的约翰威利父子出版公司(JohnWiley&Sons,New York,N.Y.),1999，所述文献通过引用以其整体并入本文。
“芳香族”或“芳基”或“Ar”是指具有六个至十个环原子(例如，C6-C10芳香族化合物或C6-C10芳基)的芳香族基团，所述环原子具有至少一个环，所述至少一个环具有是碳环(例如，苯基、芴基和萘基)的共轭π电子系统。由经取代的苯衍生物形成并在环原子处具有自由价的二价基团被命名为经取代的亚苯基。通过从具有自由价的碳原子中去除一个氢原子而衍生自名称以“-基”结尾的一价多环烃基的二价基团通过将“亚基”添加到对应一价基团的名称来命名，例如，具有两个附接点的萘基被称为亚萘基。每当在本文中出现时，如“6至10”等数字范围是指在给定范围内的每个整数，例如，“6个至10个环原子”意指芳基可以由6个环原子、7个环原子等、至多10个(并且包括10个)环原子组成。所述术语包括单环或稠环多环(即，共有相邻的环原子对的环)基团。除非在说明书中另有具体说明，否则芳基部分任选地被一种或多种独立地是以下的取代基取代：烷基、杂烷基、酰基磺酰胺基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、异羟肟酸、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、羟基、卤代、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、三甲基硅烷基、-ORa、-SRa、-S(O)tRa-(其中t是1或2)、-OC(O)-Ra、-N(Ra)2、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-OC(O)N(Ra)2、-C(O)N(Ra)2、-N(Ra)C(O)ORa、-N(Ra)C(O)Ra、-N(Ra)C(O)N(Ra)2、N(Ra)C(NRa)N(Ra)2、-N(Ra)S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tORa(其中t是1或2)、-S(O)tN(Ra)2(其中t是1或2)或PO(ORa)2，其中每个Ra独立地是氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。
“芳烷基”或“芳基烷基”是指(芳基)烷基，其中芳基和烷基如本文所公开的，并且其任选地被分别被描述为芳基和烷基的合适取代基的取代基中的一种或多种取代基取代。
“酯”是指式-COOR的化学基团，其中R选自由以下组成的组：烷基、环烷基、芳基、杂芳基(通过环碳键合)和杂脂环族化合物(通过环碳键合)。用于制备酯的程序和特定基团是本领域的技术人员已知的，并且可以容易地在开创性来源中找到，如Greene和Wuts,《有机合成中的保护基团》,第3版,纽约州纽约的约翰威利父子出版公司,1999，所述文献通过引用以其整体并入本文。除非在说明书中另有具体说明，否则酯基团任选地被一种或多种独立地是以下的取代基取代：烷基、酰基磺酰胺基、杂烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、异羟肟酸、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、羟基、卤代、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、三甲基硅烷基、-ORa、-SRa、-S(O)tRa-(其中t是1或2)、-OC(O)-Ra、-N(Ra)2、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-OC(O)N(Ra)2、-C(O)N(Ra)2、-N(Ra)C(O)ORa、-N(Ra)C(O)Ra、-N(Ra)C(O)N(Ra)2、N(Ra)C(NRa)N(Ra)2、-N(Ra)S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tORa(其中t是1或2)、-S(O)tN(Ra)2(其中t是1或2)或PO(ORa)2，其中每个Ra独立地是氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。
“氟烷基”是指如上文所定义的被一种或多种如上文所定义的氟基团取代的烷基，例如三氟甲基、二氟甲基、2,2,2-三氟乙基、1-氟甲基-2-氟乙基等。氟烷基的烷基部分可以是如上文针对烷基所定义的任选取代的。
“卤代”、“卤化物”或可替代地“卤素”旨在意指氟、氯、溴或碘。术语“卤代烷基”、“卤代烯基”、“卤代炔基”和“卤代烷氧基”包括被一种或多种卤代基团或其组合取代的烷基、烯基、炔基和烷氧基结构。例如，术语“氟烷基”和“氟烷氧基”分别包括卤代烷基和卤代烷氧基，其中所述卤代是氟。
“杂烷基”、“杂烯基”和“杂炔基”是指任选取代的烷基、烯基和炔基，并且其具有一个或多个选自除碳以外的原子的骨架链原子，例如，氧、氮、硫、磷或其组合。可以给出数字范围，例如，C1-C4杂烷基，其是指总共的链长度，在此实例中，所述链长度是4个原子长。杂烷基可以被一种或多种独立地是以下的取代基取代：烷基、杂烷基、烯基、炔基、酰基磺酰胺基、环烷基、杂环烷基、异羟肟酸、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、羟基、卤代、氰基、硝基、氧代、硫氧代、三甲基硅烷基、-ORa、-SRa、-S(O)tRa-(其中t是1或2)、-OC(O)-Ra、-N(Ra)2、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-OC(O)N(Ra)2、-C(O)N(Ra)2、-N(Ra)C(O)ORa、-N(Ra)C(O)Ra、-N(Ra)C(O)N(Ra)2、N(Ra)C(NRa)N(Ra)2、-N(Ra)S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tORa(其中t是1或2)、-S(O)tN(Ra)2(其中t是1或2)或PO(ORa)2，其中每个Ra独立地是氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。
“杂烷基芳基”是指-(杂烷基)芳基，其中杂烷基和芳基如本文所公开的，并且其任选地被分别被描述为杂烷基和芳基的合适取代基的取代基中的一种或多种取代基取代。
“杂烷基杂芳基”是指-(杂烷基)杂芳基，其中杂烷基和杂芳基如本文所公开的，并且其任选地被分别被描述为杂烷基和杂芳基的合适取代基的取代基中的一种或多种取代基取代。
“杂烷基杂环烷基”是指-(杂烷基)杂环烷基，其中杂烷基和杂环烷基如本文所公开的，并且其任选地被分别被描述为杂烷基和杂环烷基的合适取代基的取代基中的一种或多种取代基取代。
“杂烷基环烷基”是指-(杂烷基)环烷基，其中杂烷基和环烷基如本文所公开的，并且其任选地被分别被描述为杂烷基和环烷基的合适取代基的取代基中的一种或多种取代基取代。
“杂芳基”或“杂芳香族化合物”或“HetAr”是指包括一个或多个选自氮、氧和硫的环杂原子并且可以是单环、双环、三环或四环环系统的5元至18元芳香族基团(例如，C5-C13杂芳基)。每当在本文中出现时，如“5至18”等数字范围是指在给定范围内的每个整数，例如，“5个至18个环原子”意指杂芳基可以由5个环原子、6个环原子等、至多18个(并且包括18个)环原子组成。通过从具有自由价的原子中去除一个氢原子而衍生自名称以“-基”结尾的一价杂芳基的二价基团通过将“亚基”添加到对应一价基团的名称来命名，例如，具有两个附接点的吡啶基为亚吡啶基。含N的“杂芳香族”或“杂芳基”部分是指其中环的骨架原子中的至少一个骨架原子是氮原子的芳香族基团。多环杂芳基可以是稠合的或非稠合的。杂芳基中的杂原子是任选氧化的。一个或多个氮原子(如果存在)是任选季铵化的。杂芳基可以通过环的任何原子附接到分子的其余部分。杂芳基的实例包括但不限于氮杂环庚烯基、吖啶基、苯并咪唑基、苯并吲哚基、1,3-苯并二氧杂环戊熳基、苯并呋喃基、苯并噁唑基、苯并[d]噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[b][1,4]二氧杂环庚三烯基、苯并[b][1,4]噁嗪基、1,4-苯并二噁烷基、苯并萘并呋喃基、苯并噁唑基、苯并二氧杂环戊熳基、苯并二氧杂环己熳基、苯并噁唑基、苯并吡喃基、苯并吡喃酮基、苯并呋喃基、苯并吡喃酮基、苯并呋咱基、苯并噻唑基、苯并噻吩基(苯并硫苯基)、苯并噻吩[3,2-d]嘧啶基、苯并三唑基、苯并[4,6]咪唑并[1,2-a]吡啶基、咔唑基、噌啉基、环戊烯并[d]嘧啶基、6,7-二氢-5H-环戊烯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、5,6-二氢苯并[h]喹唑啉基、5,6-二氢苯并[h]噌啉基、6,7-二氢-5H-苯并[6,7]环庚[1,2-c]哒嗪基、二苯并呋喃基、二苯并噻吩基、呋喃基、呋咱基、呋喃酮基、呋喃并[3,2-c]吡啶基、5,6,7,8,9,10-六氢环辛烷并[d]嘧啶基、5,6,7,8,9,10-六氢环辛烷并[d]哒嗪基、5,6,7,8,9,10-六氢环辛烷并[d]吡啶基、异噻唑基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、吲唑基、异吲哚基、吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、吲哚嗪基、异噁唑基、异噁唑-3-酮、5,8-甲醇-5,6,7,8-四氢喹唑啉基、萘啶基、1,6-萘啶酮基、噁二唑基、2-氧代氮杂环庚烯基、噁唑基、环氧乙烷基、5,6,6a,7,8,9,10,10a-八氢苯并[h]喹唑啉基、1-苯基-1H-吡咯基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡咯基、吡唑基、吡唑并[3,4-d]嘧啶基、吡啶基、吡啶并[3,2-d]嘧啶基、吡啶并[3,4-d]嘧啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吡咯基、喹唑啉基、喹喔啉基、喹啉基、异喹啉基、四氢喹啉基、5,6,7,8-四氢喹唑啉基、5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、6,7,8,9-四氢-5H-环庚[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、5,6,7,8-四氢吡啶并[4,5-c]哒嗪基、噻唑基、噻二唑基、噻吡喃基(thiapyranyl)、三唑基、四唑基、三嗪基、噻吩并[2,3-d]嘧啶基、噻吩并[3,2-d]嘧啶基、噻吩并[2,3-c]吡啶基和苯硫基(即，噻吩基)。除非在说明书中另有具体说明，否则杂芳基部分任选地被一种或多种独立地是以下的取代基取代：烷基、酰基磺酰胺基、杂烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、异羟肟酸、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、羟基、卤代、氰基、硝基、氧代、硫氧代、三甲基硅烷基、-ORa、-SRa、-S(O)tRa-(其中t是1或2)、-OC(O)-Ra、-N(Ra)2、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-OC(O)N(Ra)2、-C(O)N(Ra)2、-N(Ra)C(O)ORa、-N(Ra)C(O)Ra、-N(Ra)C(O)N(Ra)2、N(Ra)C(NRa)N(Ra)2、-N(Ra)S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tORa(其中t是1或2)、-S(O)tN(Ra)2(其中t是1或2)或PO(ORa)2，其中每个Ra独立地是氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。
经取代的杂芳基还包括被一种或多种氧化物(-O-)取代基(例如吡啶基N-氧化物)取代的环系统。
“杂芳基烷基”是指具有如本文所述的芳基部分的与如本文所述的亚烷基部分连接的部分，其中与分子的其余部分的连接是通过亚烷基进行的。
“杂环烷基”是指包含两个至十二个碳原子和一个至六个选自氮、氧和硫的杂原子的稳定的3元至18元非芳香族环基团。每当在本文中出现时，如“3至18”等数字范围是指在给定范围内的每个整数，例如，“3个至18个环原子”意指杂环烷基可以由3个环原子、4个环原子等、至多18个(并且包括18个)环原子组成。除非在说明书中另有具体说明，否则杂环烷基是可以包括稠环或桥环系统的单环、双环、三环或四环环系统。杂环烷基中的杂原子可以是任选氧化的。一个或多个氮原子(如果存在)是任选季铵化的。杂环烷基是部分或完全饱和的。杂环烷基可以通过环的任何原子附接到分子的其余部分。此类杂环烷基的实例包括但不限于二氧戊环基、噻吩基[1,3]二噻烷基、十氢异喹啉基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噻唑烷基、异噁唑烷基、吗啉基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、噁唑烷基、哌啶基、哌嗪基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑烷基、喹宁环基、噻唑烷基、四氢呋喃基、三噻喃基、四氢吡喃基、硫代吗啉基、硫杂吗啉基、1-氧代-硫代吗啉基和1,1-二氧代-硫代吗啉基。除非在说明书中另有具体说明，否则杂环烷基部分任选地被一种或多种独立地是以下的取代基取代：烷基、酰基磺酰胺基、杂烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、异羟肟酸、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、羟基、卤代、氰基、硝基、氧代、硫氧代、三甲基硅烷基、-ORa、-SRa、-S(O)tRa-(其中t是1或2)、-OC(O)-Ra、-N(Ra)2、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-OC(O)N(Ra)2、-C(O)N(Ra)2、-N(Ra)C(O)ORa、-N(Ra)C(O)Ra、-N(Ra)C(O)N(Ra)2、N(Ra)C(NRa)N(Ra)2、-N(Ra)S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tRa(其中t是1或2)、-S(O)tORa(其中t是1或2)、-S(O)tN(Ra)2(其中t是1或2)或PO(ORa)2，其中每个Ra独立地是氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。
“杂环烷基”还包括双环系统，其中除了1-3个独立地选自氧、硫和氮的杂原子以及包含前述杂原子中的至少一种杂原子的组合之外，一个非芳香族环(通常具有3个至7个环原子)含有至少2个碳原子；并且另一个环(通常具有3个至7个环原子)任选地含有1-3个独立地选自氧、硫和氮的杂原子，并且不是芳香族的。
“异羟肟酸”是指–C(O)NRaORa部分，其中每个Ra独立地是氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。
“硝基”是指-NO2基团。
“氧杂”是指-O-基团。
“氧代”是指＝O基团。
“异构体”是具有相同分子式的不同化合物。“立体异构体”是指仅在原子在空间中布置的方式方面不同(即具有不同的立体化学构型)的异构体。“对映异构体”是一对作为彼此的不可重叠的镜像的立体异构体。对映异构体对的1:1混合物是“外消旋”混合物。术语“(±)”在适当情况下用于表示外消旋混合物。“非对映异构体”是具有至少两个不对称原子，但不是彼此的镜像的立体异构体。绝对立体化学是根据卡恩-英格尔-普雷洛格(Cahn-Ingold-Prelog)R-S系统指定的。在化合物是纯的对映异构体时，每个手性碳的立体化学可以由(R)或(S)指定。绝对构型未知的经拆分的化合物可以被指定为(+)或(-)，这取决于其在钠D线波长下旋转平面偏振光的方向(右旋或左旋)。本文所描述的某些化合物含有一个或多个不对称中心，并且由此可以产生对映异构体、非对映异构体和可以在绝对立体化学方面定义为(R)-或(S)的其它立体异构形式。本发明化学实体、药物组合物和方法旨在包括所有此类可能的异构体，包括外消旋混合物、光学上纯的形式和中间体混合物。光学活性的(R)-和(S)-异构体可以使用手性合成子或手性试剂制备，或使用常规技术拆分。在本文所述的化合物含有烯烃双键或其它几何不对称中心时，并且除非另有说明，否则意图是所述化合物包括E几何异构体和Z几何异构体两者。
如本文所用，“对映异构体纯度”是指一种特定对映异构体相对于另一种对映异构体的存在的相对量，以百分比表示。例如，如果可能潜在地具有(R)-或(S)-异构体构型的化合物以外消旋混合物的形式存在，则对映异构体纯度相对于(R)-或(S)-异构体为约50％。如果所述化合物的一种异构体形式比另一种异构体形式占优势，例如80％的(S)-异构体和20％的(R)-异构体，则所述化合物的相对于(S)-异构体形式的对映异构体纯度为80％。化合物的对映异构体纯度可以以本领域已知的多种方式确定，所述方式包括但不限于使用手性载体的色谱法、偏振光旋转的测定偏振的测量、使用手性位移试剂(包括但不限于含镧系元素的手性络合物或Pirkle试剂)的核磁共振波谱法或者使用如莫氏酸(Mosher's acid)等手性化合物进行的化合物衍生化以及之后的色谱法或核磁共振波谱法。
在一些实施例中，就每单位质量的治疗效用而言，对映异构体富集的组合物的效力比所述组合物的外消旋混合物的效力更高。对映异构体可以通过本领域的技术人员已知的方法从混合物中分离，所述方法包括手性高压液相色谱法(HPLC)和手性盐的形成和结晶；或优选的对映异构体可以通过不对称合成制备。参见例如Jacques等人,《对映异构体、外消旋体和拆分(Enantiomers,Racemates and Resolutions)》纽约的威利国际科学出版公司(Wiley Interscience,New York),1981；E.L.Eliel,《碳化合物的立体化学(Stereochemistry of Carbon Compounds)》,纽约的麦克劳-希尔出版公司(McGraw-Hill,New York)1962；以及E.L.Eliel和S.H.Wilen,《有机化合物立体化学(Stereochemistry ofOrganic Compounds)》,纽约的威利-国际科学出版社,1994。
如本文所用，术语“对映异构体富集的”和“非外消旋的”是指其中一种对映异构体的重量百分比大于那种对映异构体在外消旋组合物的对照混合物中的量(例如，按重量计，大于1:1)的组合物。例如，(S)-对映异构体的对映异构体富集的制剂意指相对于(R)-对映异构体具有大于50重量％(如至少75重量％或如至少80重量％)的(S)-对映异构体的化合物的制剂。在一些实施例中，富集可以显著大于80重量％，从而提供“基本上对映异构体富集的”或“基本上非外消旋的”制剂，所述制剂是指相对于一种对映异构体具有至少85重量％(如至少90重量％或如至少95重量％)的另一种对映异构体的组合物的制剂。术语“对映异构体纯的”或“基本上对映异构体纯的”是指包含至少98％的单一对映异构体和少于2％的相对对映异构体的组合物。
“部分”是指分子的特定区段或官能团。化学部分通常是嵌入在分子中或附加到分子的公认化学实体。
“互变异构体”是通过互变异构化相互转化的结构上不同的异构体。“互变异构化”是异构化的一种形式，并且包括质子异变的互变异构化或质子移位的互变异构化，被视为是酸碱化学的子集。“质子异变的互变异构化”或“质子移位的互变异构化”涉及质子迁移，伴随着键序变化，通常是单个键与相邻的双键的互换。在互变异构化可能发生的情况下(例如，在溶液中)，可以达到互变异构体的化学平衡。互变异构化的实例是酮-烯醇互变异构化。酮-烯醇互变异构化的具体实例是戊烷-2,4-二酮和4-羟基戊-3-烯-2-酮互变异构体的相互转化。互变异构化的另一个实例是苯酚-酮互变异构化。苯酚-酮互变异构化的具体实例是吡啶-4-醇和吡啶-4(1H)-酮互变异构体的相互转化。
“离去基团或原子”是在反应条件下将从起始材料中切割由此促进在特定位点处的反应的任何基团或原子。除非另有说明，否则此类基团的实例包括卤素原子和甲磺酰氧基、对硝基苯磺酰氧基和甲苯磺酰基氧基。
“保护基团”旨在意指选择性地阻断多官能化合物中一个或多个反应性位点，使得化学反应可以选择性地在另一个未受保护的反应性位点上进行的基团，并且所述基团然后可以在选择性反应完成后容易地去除或脱保护。多种保护基团公开于例如T.H.Greene和P.G.M.Wuts,《有机合成中的保护基团》,第3版,纽约的约翰威利父子出版公司(1999)中。
“溶剂化物”是指与药学上可接受的溶剂的一个或多个分子物理缔合的化合物。
“经取代的”意指所引用的基团可以与一个或多个单独且独立地选自以下的另外的基团、自由基或部分附接：例如酰基、烷基、烷基芳基、环烷基、芳烷基、芳基、碳水化合物、碳酸酯、杂芳基、杂环烷基、异羟肟酸、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、烷硫基、芳硫基、氰基、卤代、羰基、酯、硫代羰基、异氰酸基、硫氰酸基、异硫氰酸基、硝基、氧代、全卤代烷基、全氟烷基、磷酸酯、甲硅烷基、亚磺酰基、磺酰基、磺酰胺基、磺酰氧基、磺酸酯、脲和氨基(包括单取代和双取代的氨基)以及其受保护的衍生物。取代基本身可以是经取代的，例如，环烷基取代基本身在其一个或多个其环碳上可以具有卤化物取代基。术语“任选取代的”意指用特定基团、自由基或部分进行的任选取代。
“硫烷基”是指包括-S-(任选取代的烷基)、-S-(任选取代的芳基)、-S-(任选取代的杂芳基)和-S-(任选取代的杂环烷基)的基团。
“亚磺酰基”是指包括-S(O)-H、-S(O)-(任选取代的烷基)、-S(O)-(任选取代的氨基)、-S(O)-(任选取代的芳基)、-S(O)-(任选取代的杂芳基)和-S(O)-(任选取代的杂环烷基)的基团。
“磺酰基”是指包括-S(O2)-H、-S(O2)-(任选取代的烷基)、-S(O2)-(任选取代的氨基)、-S(O2)-(任选取代的芳基)、-S(O2)-(任选取代的杂芳基)和-S(O2)-(任选取代的杂环烷基)的基团。
“磺酰胺基”或“磺酰氨基”是指-S(＝O)2-NRR基团，其中每个R独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、环烷基、芳基、杂芳基(通过环碳键合)和杂脂环族化合物(通过环碳键合)。-S(＝O)2-NRR基团的-NRR中的R基团可以与其所附接的氮一起形成4元、5元、6元或7元环。磺酰胺基任选地被分别针对烷基、环烷基、芳基、杂芳基描述的取代基中的一种或多种取代基取代。
“磺酰氧基”是指-S(＝O)2OH基团。
“磺酸酯”是指S(＝O)2-OR基团，其中R选自由以下组成的组：烷基、环烷基、芳基、杂芳基(通过环碳键合)和杂脂环族化合物(通过环碳键合)。磺酸酯基团任选地在R上被分别针对烷基、环烷基、芳基、杂芳基描述的取代基中的一种或多种取代基取代。
本公开的化合物还包括那些化合物的结晶形式和无定形形式，包括例如化合物的多晶型物、伪多晶型物、溶剂化物、水合物、未溶剂化的多晶型物(包括无水合物)、构象多晶型物和无定形形式以及其混合物。“结晶形式”和“多晶型物”旨在包括化合物的所有结晶形式和无定形形式，包括例如多晶型物、伪多晶型物、溶剂化物、水合物、未溶剂化的多晶型物(包括无水合物)、构象多晶型物和无定形形式以及其混合物，除非提及特定结晶形式或无定形形式。
本文的术语“抗体”以最广泛的意义使用，并且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体和多特异性抗体(例如，双特异性抗体)。
如IgG等示例性抗体包含两条重链和两条轻链。每条重链包含重链可变区(在本文中缩写为VH)和重链恒定区。每条轻链包含轻链可变区(在本文中缩写为VL)和轻链恒定区。VH区和VL区可以被进一步细分为散布有更为保守的被称为框架区(FR)的区的高变区，被称为互补决定区(CDR)。每个VH和VL包含由从氨基末端到羧基末端按照以下顺序布置的三个CDR和四个FR：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
高变区通常涵盖来自以下的氨基酸残基：轻链可变区中的约氨基酸残基24-34(LCDR1；“L”表示轻链)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)以及重链可变区中的大约31-35B(HCDR1；“H”表示重链)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)；Kabat等人,《具有免疫学意义的蛋白质序列(SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST)》,第5版马里兰州贝塞斯达的美国国立卫生研究院公共卫生服务部(Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.)(1991)；和/或形成高变环的残基(例如，轻链可变区中的残基26-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和91-96(LCDR3)以及重链可变区中的26-32(HCDR1)、53-55(HCDR2)和96-101(HCDR3)；Chothia和Lesk(1987)《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》196:901-917。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指从基本上均质的抗体的群体中获得的抗体，例如，除了可能的变体抗体，例如，含有天然存在的突变或在单克隆抗体制剂的产生期间产生的变体抗体之外，包含所述群体的单独抗体是相同的和/或与相同的表位结合，此类变体通常以少量存在。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相比，单克隆抗体制剂的每种单克隆抗体都针对抗原上的单个决定簇。因此，修饰语“单克隆”表示抗体的特征是从基本上均质的抗体群体获得的，并且不应被解释为需要通过任何方法产生抗体。例如，要根据本发明使用的单克隆抗体可以通过多种技术制备，包括但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法和利用含有人免疫球蛋白基因座的全部或一部分的转基因动物的方法，此类方法和用于制备单克隆抗体的其它示例性方法在本文中进行了描述。
术语“嵌合抗体”是指其中重链和/或轻链的一部分源自于特定来源或物种，而重链和/或轻链的其余部分源自于不同来源或物种的重组抗体。
“人抗体”是具有与由人产生的抗体的氨基酸序列相对应的氨基酸序列和/或已使用本领域的技术人员已知的用于制备人抗体的技术中的任何技术制备的抗体。这种人抗体的定义明确排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。人抗体可以使用本领域已知的各种技术产生，包括以下中所述的方法：Cole等人,《单克隆抗体与癌症疗法(MonoclonalAntibodies and Cancer Therapy)》,Alan R.Liss,第77页(1985)；Boerner等人,《免疫学杂志(J.Immunol)》,147(I):86-95(1991)。还参见van Dijk和van de Winkel,《当前药理学观点(Curr.Opin.Pharmacol.)》,5:368-74(2001)。人抗体可以通过将抗原施用于已被修饰成响应于抗原激发来产生此类抗体但其内源基因座已被禁用的转基因动物，例如，经免疫处理的HuMab小鼠(关于HuMab小鼠，参见例如Nils Lonberg等人,1994,《自然(Nature)》368:856-859；WO 98/24884；WO 94/25585；WO 93/1227；WO 92/22645；WO 92/03918；以及WO01/09187)、异种小鼠(关于XENOMOUSETM技术，参见例如美国专利第6,075,181号和第6,150,584号)或Trianni小鼠(参见例如，WO 2013/063391、WO 2017/035252和WO 2017/136734)来制备。
术语“人源化抗体”是指已被工程化为包含可变区中的一个或多个人框架区以及重链和/或轻链的非人(例如，小鼠、大鼠或仓鼠)互补决定区(CDR)的抗体。在某些实施例中，人源化抗体包含除CDR区之外的完全是人的序列。相对于非人源化抗体，人源化抗体通常对人的免疫原性较低，并且因此在某些情况下提供治疗益处。本领域的技术人员将了解人源化抗体，并且还将了解用于其产生的合适技术。参见例如Hwang,W.Y.K.等人,《方法(Methods)》36:35,2005；Queen等人,《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》,86:10029-10033,1989；Jones等人,《自然》,321:522-25,1986；Riechmann等人,《自然》,332:323-27,1988；Verhoeyen等人,《科学(Science)》,239:1534-36,1988；Orlandi等人,《美国国家科学院院刊》,86:3833-37,1989；美国专利第5,225,539号；第5,530,101号；第5,585,089号；第5,693,761号；第5,693,762号；第6,180,370号；以及Selick等人,WO 90/07861，所述文献中的每个文献通过引用以其整体并入本文。
抗体的“类别”是指其重链所具有的恒定结构域或恒定区的类型。存在五种主要类别的抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些类别中的若干种可以进一步分为亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。与不同类别的免疫球蛋白相对应的重链恒定结构域分别被称为α、δ、ε、γ和μ。
抗体的术语“抗原结合结构域”(或简称抗体的“结合结构域”)或类似术语是指抗体的保留与抗原复合物特异性地结合的能力的一个或多个片段。抗体的术语“抗原结合部分”内涵盖的结合片段的实例包括(i)Fab片段，即由VL结构域、VH结构域、CL结构域和CH结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，即包含在铰链区处通过二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，其是由VH结构域和CH结构域组成的；(iv)Fv片段，其是由抗体的单个臂的VL结构域和VH结构域组成的，(v)dAb片段(Ward等人,(1989)《自然》341:544-546)，其是由VH结构域组成的；(vi)分离的互补决定区(CDR)；以及(vii)可以任选地通过合成接头连接的两个或更多个分离的CDR的组合。
“互补决定区”或“CDR”作为术语在本文中用于指代重链多肽和轻链多肽两者的可变区内的主要负责介导特异性抗原识别的短多肽序列。在每个VL和每个VH内存在三个CDR(被称为CDR1、CDR2和CDR3)。
如本领域的技术人员将理解的，在不同的编号系统中，CDR的精确编号和放置可以有所不同。然而，应理解，可变重序列和/或可变轻序列的公开内容包括相关联的CDR的公开内容。因此，每个可变重区的公开内容是vhCDR(例如，vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3)的公开内容，并且每个可变轻区的公开内容是vlCDR(例如，vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3)的公开内容。
在某些实施例中，抗体的CDR可以根据以下文献中所述的IMGT编号系统来确定：Lefranc M-P,(1999)《免疫学者(The Immunologist)》7:132-136和Lefranc M-P等人,(1999)《核酸研究(Nucleic Acids Res)》27:209-212，所述文献中的每一个通过引用以其整体并入本文。除非本文另有说明，否则对抗体的可变结构域中的残基数量的提及意指通过IMGT编号系统进行的残基编号。
在其它实施例中，抗体的CDR可以根据MacCallum RM等人,(1996)《分子生物学杂志》262:732-745来确定，所述文献在此通过引用以其整体并入。还参见例如Martin,A.“抗体可变结构域的蛋白质序列和结构分析(Protein Sequence and Structure Analysis ofAntibody Variable Domains)”,《抗体工程(Antibody Engineering)》,Kontermann和Diibel编辑,第31章,第422-439页,柏林的施普林格出版社(Springer-Verlag,Berlin)(2001)，所述文献在此通过引用以其整体并入。在其它实施例中，抗体的CDR可以根据AbM编号方案来确定，所述AbM编号方案是指AbM高变区，其表示Kabat CDR与Chothia结构环之间的折衷，并且由牛津分子公司(Oxford Molecular)的AbM抗体建模软件(牛津分子集团公司(Oxford Molecular Group,Inc.))使用，所述文献在此通过引用以其整体并入。
“框架”或“框架区”或“FR”是指除高变区(HVR)残基之外的可变结构域残基。可变结构域的FR通常由四个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3和FR4。
“人共有框架”是表示一系列人免疫球蛋白VL或VH框架序列中最常存在的氨基酸残基的框架。通常，所述系列的人免疫球蛋白VL或VH序列来自可变结构域序列的亚组。通常，序列的亚组是如Kabat等人,《具有免疫学意义的蛋白质序列》,第五版,NIH出版社(NIHPublication)91-3242,马里兰州贝塞斯达(1991),第1-3卷中的亚组。在一个实施例中，对于VL，所述亚组是如Kabat等人,同上中的亚组κI。在一个实施例中，对于VH，所述亚组是如Kabat等人,同上中的亚组Ill。
“铰链区”通常被定义为从人IgG1的216-238(EU编号)或226-251(Kabat编号)的拉伸。铰链可以被进一步分为三个不同的区：上部铰链、中间(例如，核心)铰链和下部铰链。
本文中的术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的含有恒定区的至少一部分的C末端区。所述术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。在一个实施例中，人IgG重链Fc区从Cys226或Pro230延伸到重链的羧基末端。然而，Fc区的C末端赖氨酸(Lys447)可以存在或可以不存在。除非本文另外说明，否则Fc区或恒定区中的氨基酸残基的编号是根据EU编号系统(还被称为EU索引)进行的，如Kabat等人,《具有免疫学意义的蛋白质序列》,第5版,马里兰州贝塞斯达的美国国立卫生研究院公共卫生服务部(1991)中所述。
“阻断”抗体或“拮抗剂”抗体是抑制或降低其所结合的抗原的生物活性的抗体。某些阻断抗体或拮抗剂抗体基本上或完全抑制抗原的生物活性。
与和参考抗体所结合的表位“相同的表位结合的抗体”是指与参考抗体相比接触抗原的氨基酸残基的重叠集合或在竞争测定中阻断参考抗体与其抗原的结合的50％或更多的抗体。抗体的接触抗原的氨基酸残基可以例如通过确定抗体在与抗原的复合物中的晶体结构或通过进行氢/氘交换来确定。在一些实施例中，抗体的在距抗原内的残基被视为接触抗原。在一些实施例中，与和参考抗体所结合的表位相同的表位结合的抗体在竞争测定中阻断参考抗体与其抗原的结合的50％或更多，并且相反，参考抗体在竞争测定中阻断抗体与其抗原的结合的50％或更多。
术语“抗体片段”是指除了完整抗体之外包含完整抗体的与所述完整抗体所结合的抗原结合的部分的分子。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab)2；双功能抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如，scFv)。抗体的木瓜蛋白酶消化产生其两个相同的结合片段，被称为“Fab”片段和残余的“Fc”片段，此名称反映易于结晶的能力。Fab片段由整个轻(L)链以及重(H)链的可变区结构域(VH)和一条重链的第一恒定结构域(CH1)组成。抗体的胃蛋白酶处理产生单个大F(ab)2片段，所述片段大致对应于具有二价抗原-结合活性的两个二硫键连接的Fab片段并且仍然能够使抗原交联。Fab片段与Fab'片段的不同之处在于在CH1结构域的羧基末端处具有另外的少量残基，所述结构域包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH是本文对于Fab'的命名，其中恒定结构域的半胱氨酸残基携带游离硫醇基。F(ab')2抗体片段最初是以其间具有铰链半胱氨酸的Fab'片段对的形式产生的。抗体片段的其它化学偶联也是已知的。
“Fv”由紧密的非共价缔合的一个重链可变区结构域和一个轻链可变区结构域的二聚体组成。通过这两个结构域的折叠产生了六个高变环(来自链H和L链的各3个环)，所述高变环为抗原结合贡献氨基酸残基，并赋予抗体抗原结合特异性。
也缩写为“sFv”或“scFv”的“单链Fv”是包含连接成单个多肽链的VH抗体结构域和VL抗体结构域的抗体片段。优选地，sFv多肽进一步包含位于VH结构域与VL结构域之间的多肽接头，所述多肽接头使sFv能够形成用于抗原结合的期望结构。关于sFv的综述，参见Plückthun于《单克隆抗体药理学(The Pharmacology of Monoclonal Antibodies)》,第113卷,Rosenburg和Moore编辑,纽约的斯普林格出版社(Springer-Verlag,New York),第269-315页(1994)中。
当用于描述本文所公开的各种抗体时，术语“分离的抗体”意指已从所述抗体所表达的细胞或细胞培养物中鉴定出且分开和/或回收的抗体。其天然环境的污染物组分是将典型地干扰多肽的诊断或治疗用途的材料，并且可以包括酶、激素和其它蛋白质或非蛋白质溶质。在一些实施例中，将抗体纯化至大于95％或99％纯度，如通过例如电泳(例如，SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或色谱法(例如，离子交换或反相HPLC)方法所确定的。有关用于评估抗体纯度的方法的综述，参见例如Flatman等人,《色谱法杂志B辑(J.Chromatogr.B)》848:79-87(2007)。在一实施例中，抗体将被纯化(1)到足以通过使用旋转杯测序仪获得N末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度，或(2)通过在使用考马斯蓝(Coomassie blue)或优选地银染色的非还原或还原条件下进行的SDS-PAGE达到均质性。
关于抗体与靶分子的结合，术语与特定多肽或特定多肽靶标上的表位“特异性结合(specific binding)”或“特异性地结合(specifically binds to)”或“对其具有特异性(is specific for)”意指可测量地不同于非特异性相互作用的结合。例如，特异性结合可以通过相较于对照分子的结合确定分子的结合来测量。例如，特异性结合可以通过与类似于靶标(例如，过量的未标记的靶标)的对照分子的竞争来确定。在这种情况下，如果所标记的靶标与探针的结合被过量的未标记的靶标竞争性地抑制，则指示特异性结合。如本文所用，术语与特定多肽或特定多肽靶标上的表位“特异性结合”或“特异性地结合”或“对其具有特异性”可以例如通过对于靶标的Kd为10-4M或更低、可替代地10-5M或更低、可替代地10-6M或更低、可替代地10-7M或更低、可替代地10-8M或更低、可替代地10-9M或更低、可替代地10-10M或更低、可替代地10-11M或更低、可替代地10-12M或更低或Kd在10-4M至10-6M、或10-6M至10-10M或10-7M至10-9M的范围内的分子来展示。如本领域的技术人员将理解的，亲和力与KD值呈反相关。对抗原的高亲和力是通过低KD值测得的。在一个实施例中，术语“特异性结合”是指分子与特定多肽或特定多肽上的表位结合而基本上不与任何其它多肽或多肽表位结合的结合。如本文所用，术语“特异性结合”、“特异性地结合”和“选择性地结合”是指抗体与CDCP1的表位的结合。
如本文所用，术语“亲和力”意指抗体与表位的结合强度。抗体的亲和力由解离常数Kd给出，定义为[Ab]×[Ag]/[Ab-Ag]，其中[Ab-Ag]是抗体-抗原复合物的摩尔浓度，[Ab]是未结合的抗体的摩尔浓度，并且[Ag]是未结合的抗原的摩尔浓度。亲和力常数Ka由1/Kd定义。用于确定mAb的亲和力的方法可见于：Harlow等人,《抗体：实验室手册(Antibodies:ALaboratory Manual)》,纽约冷泉港的冷泉港实验室出版社(Cold Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.),1988；Coligan等人编辑,《当代免疫学指南(Current Protocols in Immunology)》,纽约的格林出版协会(Greene PublishingAssoc.)和威利跨学科出版公司(Wiley Interscience),(1992,1993)；以及Muller,《酶学方法(Meth.Enzymol.)》92:589-601(1983)，所述参考文献通过引用整体地并入本文。本领域众所周知的用于确定mAb的亲和力的一种标准方法是使用表面等离子体共振(SPR)筛选(如通过用BIAcoreTMSPR分析装置进行的分析)。
“表位”是本领域的表示抗体与其抗原之间的相互作用的一个或多个位点的术语。如通过以下所述(Janeway,C,Jr.,P.Travers等人(2001).《免疫生物学：健康和疾病中的免疫系统(Immunobiology:the immune systemin health and disease)》.第II部分,第3-8节,纽约的加兰出版公司(New York,Garland Publishing,Inc.):“抗体通常仅识别如蛋白质等大分子的表面上的小区……(An antibody generally recognizes only a smallregion on the surface of a large molecule such as a protein...)”。[某些表位]可能是由来自[抗原]多肽链的通过蛋白质折叠聚集在一起的不同部分的氨基酸构成的。这种种类的抗原决定簇被称为构象或不连续表位，因为所识别的结构是由蛋白质的区段构成的，所述区段在抗原的氨基酸序列中是不连续的，但在三维结构中聚集在一起。相比之下，由多肽链的单个区段构成的表位被称为连续或线性表位(Janeway,C.Jr.,P.Travers等人(2001).《免疫生物学：健康和疾病中的免疫系统》.第II部分,第3-8节,纽约的加兰出版公司。
如本文所用，术语“KD”旨在指特定抗体-抗原相互作用的解离常数。其由下式计算：K脱离/K结合＝KD。
如本文所用，术语“IC50”旨在指实例5：在人DB细胞测定中抑制STAT3激活中所述的生物测定中的中和人淋巴瘤DB细胞上的IL-23的生物活性的50％所需的本发明的抗体的有效浓度。
与药剂和特定活性(例如，与细胞结合、抑制酶促活性、激活或抑制免疫细胞的特定活性)相关的“EC50”是指所述药剂的相对于此活性产生其最大应答或效应的50％的有效浓度。与药剂和特定活性相关的“EC100”是指所述药剂的相对于此类活性产生其基本上最大应答的有效浓度。
抗体
在一个方面中，本公开提供了可用于本文所述的抗体-药物缀合物(ADC)、接头和其它化合物和/或缀合物内的抗体和抗体片段。在一些实施例中，抗体和/或抗体片段与CDCP1结合。在一些实施例中，抗体和/或抗体片段是对CDCP1具有特异性的抗体或其抗原结合部分。
含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)
CDCP1(HGNC：24357；NCBI Entrez基因：64866；Ensembl：ENSG00000163814；UniProtKB/Swiss-Prot：Q9H5V8)具有含有三个CUB结构域的大细胞外结构域(大小为665个氨基酸)，所述CUB结构域介导蛋白质-蛋白质相互作用，并且可能参与细胞粘附和与细胞外基质的相互作用的CUB结构域。已发现CDCP1基因在癌症中强烈表达，并且先前已在至少WO2020/097336和WO 2018/112334中作为治疗靶标公开，所述专利通过引用以其整体并入本文。
跨膜蛋白CDCP1与Src和PKCδ缔合，并且在CDCP1被激活时，所有三种蛋白质都表现出酪氨酸磷酸化增加。Src使CDCP1磷酸化并与其结合，之后是CDCP1与作为PKCδ的调节结构域的一部分的C2结构域结合。Tyr-734被鉴定为通过Src和Src家族激酶磷酸化的位点，并且因此，P-Tyr-734是CDCP1激活的生物标志物。全长CDCP1蛋白是135kDa，但在一些细胞中，细胞外结构域以蛋白水解方式被切割成约75kDa跨膜蛋白。
表1：示例性CDCP1序列
在一些方面中，CDCP1是人CDCP1。在一些方面中，CDCP1是食蟹猴(cynomologusmonkey/cyno)CDCP1。在一些方面中，CDCP1是小鼠CDCP1。在一些方面中，CDCP1是灵长类动物CDCP1。示例性CDCP1序列提供在表1中。
CDCP1抗体
如本文所用，术语“抗体”涵盖最广泛的意义，并且具体地涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、二聚体、多聚体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要这些抗体表现出期望的生物活性即可。抗体可以是鼠抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体或源自于其它物种。抗体是由免疫系统产生的能够识别特异性抗原并与其结合的蛋白质。(Janeway,C.,Travers,P.,Walport,M.,Shlomchik(2001)《免疫生物学(Immuno Biology)》,第5版,纽约的加兰出版社)。靶抗原通常具有由多种抗体上的CDR识别的许多结合位点，还被称为表位。与不同表位特异性地结合的每种抗体具有不同结构。由此，一种抗原可以具有多于一种对应抗体。抗体包括全长免疫球蛋白分子或全长免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有抗原结合位点的分子，所述抗原结合位点与所关注的靶标或其部分的抗原免疫特异性地结合，此类靶标包括但不限于癌细胞或产生与自身免疫性疾病相关的自身免疫性抗体的细胞。
本文所公开的免疫球蛋白可以属于免疫球蛋白分子的任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)、类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。免疫球蛋白可以源自于任何物种。然而，在一个方面中，免疫球蛋白属于人、鼠或兔来源。
抗体的“其结合片段”是指全长抗体的保留与抗原特异性地结合的能力(优选地具有基本上相同的结合亲和力)的片段。其结合片段的实例包括(i)Fab片段，即由VL结构域、VH结构域、CL结构域和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，即包含在铰链区处由二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，所述Fd片段由VH结构域和CH1结构域组成；(iv)Fv片段，所述Fv片段由抗体的单个臂的VL结构域和VH结构域组成；(v)dAb片段(Ward等人,1989《自然》341:544-546)，所述dAb片段由VH结构域组成；以及(vi)分离的互补决定区(CDR)、二硫键Fv(dsFv)和抗独特型(抗Id)抗体和胞内抗体。此外，虽然Fv片段的两个结构域VL和VH由单独的基因编码，但是所述两个结构域可以使用重组方法(例如，通过合成接头)连接，由此使得其能够以单个蛋白质链的形式产生，在所述单个蛋白质链中，VL区和VH区配对以形成单价分子(被称为单链Fv(scFv))；参见例如Bird等人,《科学》242:423-426(1988)；以及Huston等人,1988《美国国家科学院院刊》85:5879-5883)。还涵盖其它形式的单链抗体，如双功能抗体。双功能抗体是双价双特异性抗体，其中VH结构域和VL结构域在单个多肽链上表达，但是使用的接头过短以至于无法允许在同一条链上的两个结构域之间配对，由此迫使结构域与另一条链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点(参见例如，Holliger等人,1993,《美国国家科学院院刊》90:6444-6448；Poljak等人,1994,《结构(Structure)》2:1121-1123)。
抗体“可变结构域”是指单独的或组合的抗体轻链(VL)的可变区或抗体重链(VH)的可变区。如本领域中已知的，重链和轻链的可变区各自由通过三个互补决定区(CDR)连接的四个框架区(FR)组成，并有助于抗体的抗原结合位点的形成。
互补决定区(CDR)可以根据Kabat、Chothia的定义、Kabat和Chothia两者的积累、AbM、接触、North和/或构象定义或本领域众所周知的任何CDR确定方法来鉴定。参见例如Kabat等人,1991,《具有免疫学意义的蛋白质序列》,第5版(高变区)；Chothia等人,1989,《自然》342:877-883(结构环结构)。可以使用本领域众所周知的方法确定特定抗体中的构成CDR的氨基酸残基的同一性。CDR的AbM定义是Kabat与Chothia之间的妥协，并且使用牛津分子公司的AbM抗体建模软件
CDR的“接触”定义基于MacCallum等人,1996,《分子生物学杂志》262:732-745中所述的观察到的抗原接触。CDR的“构象”定义基于对抗原结合作出焓贡献的残基(参见例如Makabe等人,2008,《生物化学杂志(J.Biol.Chem.)》283:1156-1166)。North已经使用CDR定义的不同的优选集合鉴定出经典CDR构象(North等人,2011,《分子生物学杂志》406:228-256)。在本文被称为CDR的“构象定义”的另一种方法中，CDR的位置可以被鉴定为对抗原结合作出焓贡献的残基(Makabe等人,2008,《生物化学杂志》283:1156-1166)。
其它CDR边界定义仍可以不严格遵循上述方法中的一种，但尽管如此将与KabatCDR的至少一部分重叠，但是鉴于特定残基或残基组或甚至整体CDR不显著影响抗原结合的预测或实验发现，所述边界定义可以被缩短或加长。
如本文所用，CDR可以指通过本领域已知的任何方法(包括方法的组合)定义的CDR。本文所使用的方法可以利用根据这些方法中的任何方法定义的CDR。对于含有多于一个CDR的任何给定实施例，CDR(或抗体的其它残基)可以根据Kabat、Chothia、North、延伸、AbM、接触和/或构象定义中的任何定义来定义。
根据Kabat对可变结构域中的残基进行编号，所述Kabat是用于抗体编译的重链可变结构域或轻链可变结构域的编号系统。参见Kabat等人,1991,《具有免疫学意义的蛋白质序列》,第5版马里兰州贝塞斯达的美国国立卫生研究院公共卫生服务部。使用此编号系统，实际线性氨基酸序列可以含有对应于可变结构域的FR或CDR的缩短或到其中的插入的较少或额外的氨基酸。例如，重链可变结构域可以包括在H2的残基52之后的单个氨基酸插入物(根据Kabat的残基52a)和在重链FR残基82之后的所插入的残基(例如，根据Kabat的残基82a、82b和82c)。通过在抗体序列的同源区处与“标准”Kabat编号序列比对，可以确定给定抗体的Kabat残基编号。用于分配Kabat编号的各种算法是可用的。在本文中使用在Abysis的版本2.3.3发布(www.abysis.org)中实施的算法以将Kabat编号分配给可变区CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和CDRH3。
在一些实施例中，抗体中的具体氨基酸残基位置也可以根据Kabat进行编号。在一些实施例中，抗CDCP1靶向剂包含表2A和/或表2B中列出的CDR中的一个或多个CDR。
“框架”(FR)残基是除CDR残基之外的抗体可变结构域残基。VH结构域框架或VL结构域框架包含呈以下结构的散布有CDR的四个框架子区FR1、FR2、FR3和FR4：FR1–CDR1–FR2–CDR2–FR3–CDR3–FR4。
“表位”是指抗原的抗体特异性地结合的区域或区，例如包含与抗体相互作用的残基的区域或区。表位可以是线性的或构象的。
术语“互补位”从“表位”的以上定义中通过反转视角衍生，并且是指抗体分子的参与抗原结合的区域或区，例如包含与抗原相互作用的残基的区域或区。互补位可以是线性的或构象的(如CDR中的不连续残基)。
给定抗原/抗体结合对的表位/互补位可以使用各种实验和计算表位作图方法以不同详细程度定义和表征。实验方法包括诱变、X射线晶体学、核磁共振(NMR)光谱法、氢/氘交换质谱法(HX-MS)和各种竞争结合方法。
在其最详细水平下，用于抗体(Ab)与抗原(Ag)之间的相互作用的表位/互补位可以由限定Ag-Ab相互作用中存在的原子接触的空间坐标以及关于其对结合热力学的相对贡献的信息来定义。在一个水平下，表位/互补位残基的特征可以在于限定Ag与Ab之间的原子接触的空间坐标。
在一个方面中，表位/互补位残基可以由具体标准限定，例如Ab中的原子与Ag之间的距离(例如，与同源抗体的重原子和抗原的重原子相距等于或小于约的距离)。在另一个方面中，表位/互补位残基可以表征为参与和同源抗体/抗原或水分子的氢键相互作用，所述水分子也与同源抗体/抗原氢键合(水介导的氢键合)。在另一个方面中，表位/互补位残基可以表征为与同源抗体/抗原的残基形成盐桥。在又另一个方面中，表位/互补位残基可以表征为包埋表面积(BSA)由于与同源抗体/抗原的相互作用而具有非零变化的残基。
在不太详细的水平下，表位/互补位可以通过功能来表征，例如通过与其它Ab的竞争结合来表征。表位/互补位也可以更一般地定义为包含另一个氨基酸对其的取代将改变Ab与Ag之间的相互作用的特性(例如，丙氨酸扫描)的氨基酸残基。
与表位“优先地结合”或“特异性地结合”(在本文中可互换地使用)的抗体是本领域中众所周知的术语，并且用于确定这种特异性或优先地结合的方法也是本领域中众所周知的。如果分子与特定细胞或物质反应或缔合的频率、速度、持续时间和/或亲和力比其与替代性细胞或物质反应或缔合的频率更高、速度更高、持续时间更长和/或亲和力更大，则所述分子被称为表现出“特异性结合”或“优先结合”。如果抗体与靶标结合的亲和力、亲合力、容易性和/或持续时间比其与其它物质结合的亲和力、亲合力更大、容易性更大和/或持续时间更长，则所述抗体与靶标“特异性地结合”或“优先地结合”。在一非限制性实例中，与CDCP1表位特异性地或优先地结合的抗体是与此表位以比其与其它与CDCP1表位或非CDCP1表位结合的亲和力、亲合力更大、容易性更大和/或持续时间更长的亲和力、亲合力、容易性和/或持续时间结合的抗体。通过阅读此定义还应理解，例如，与第一靶标特异性地或优先地结合的抗体(或部分、靶向剂或表位)可以或可以不与第二靶标特异性地或优先地结合。因此，“特异性结合”或“优先结合”不一定需要(尽管其可以包括)排他性结合。通常，但不是必然地，提及结合意指优先结合。
“特异性结合”或“优先结合”包括识别特异性分子并与其结合，但基本上不识别样品中的其它分子或与其结合的化合物，例如蛋白质、核酸、抗体等。例如，识别样品中的其同源抗原并与其结合但基本上不识别样品中的其它分子并与其结合的抗体与所述同源抗原特异性地结合。因此，在指定的测定条件下，指定的结合部分(例如，抗体或其抗原结合部分)与特定靶分子优先地结合，并且不以显著量与测试样品中存在的其它组分结合。
可以使用多种测定来选择与所关注的分子特异性地结合的抗体或肽。例如，固相ELISA免疫测定、免疫沉淀、BIAcoreTM(新泽西州皮斯卡塔韦的通用电气医疗集团(GEHealthcare,Piscataway,NJ))、荧光激活的细胞分选(FACS)、OctetTM(加州门洛帕克的FortéBio公司(FortéBio,Inc.,Menlo Park,CA))和蛋白质印迹分析(Western blot analysis)是可以用于鉴定与抗原或受体或其与同源配体或结合伴侣特异性地结合的配体结合部分特异性地反应的抗体的许多测定。典型地，特异性或选择性反应将是至少两倍背景信号或噪声，并且更典型地多于10倍背景，甚至更具体地，在平衡解离常数(KD)值≤1μM，如≤100nM、≤10nM、≤100pM、≤10pM或≤1pM时，抗体被称为与抗原“特异性地结合”。
如本文关于抗体所使用的，术语“竞争”意指第一抗体或其抗原结合部分与抗原的结合减少第二抗体或其抗原结合部分对同一抗原的后续结合。一般来说，与第一抗体结合产生空间阻隔、构象变化或与共同表位(或其一部分)的结合，使得第二抗体与同一抗原的结合减少。可以使用标准竞争测定来确定两种抗体是否彼此竞争。一种适用于抗体竞争的测定涉及使用Biacore技术，所述技术可以使用表面等离子体共振(SPR)技术，典型地使用生物传感器系统(如系统)来测量相互作用的程度。例如，SPR可以用于体外竞争性结合抑制测定中以确定一种抗体抑制第二抗体的结合的能力。用于测量抗体竞争的另一种测定使用基于ELISA的方法。
此外，用于基于抗体的竞争而与抗体“结合”的高通量方法描述于国际专利申请第WO2003/48731号中，所述专利申请通过引用以其整体并入本文。如果一种抗体(或片段)减少另一种抗体(或片段)与靶标(例如CDCP1)的结合，则存在竞争。例如，可以使用顺序结合竞争测定，其中不同的抗体是依序添加的。可以添加第一抗体，以达到接近饱和的结合。然后，添加第二抗体。在一非限制性实例中，如果与不存在第一抗体的平行测定相比，第二抗体的结合(例如，与CDCP1的结合)未检测到或显著减少(例如，至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％或至少约90％的降低)(所述值可以设置为100％)，则认为两种抗体彼此竞争。
“抗原结合部分”(或可互换地“其结合片段”)包含全长抗体的一部分，通常地抗原结合区或可变区。抗原结合部分的实例包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双功能抗体；线性抗体；通过Fab表达文库产生的片段、抗独特型(抗Id)抗体、CDR(互补决定区)和以上任一种的与癌细胞抗原、病毒抗原或微生物抗原、单链抗体分子免疫特异性地结合的表位结合片段；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。在一些实施例中，抗体或其抗原结合部分选自单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv、单链Fv、双功能抗体、线性抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体和包含抗体的抗原结合部分的融合蛋白。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指从基本上均质的抗体群体中获得的抗体，即，除了可以少量存在的可能天然存在的突变之外，包含所述群体的单独抗体是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，针对单个抗原位点。此外，与包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相比，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除了其特异性之外，单克隆抗体的有利之处还在于，可以在不受其它抗体污染的情况下合成这些抗体。修饰语“单克隆”表示抗体的特性是从基本上均质的抗体群体获得的，并且不应被解释为需要通过任何特定方法来产生抗体。例如，要根据本发明使用的单克隆抗体可以通过由Kohler等人,(1975)《自然》256:495首次描述的杂交瘤方法制备，或者可以通过重组DNA方法制备。
“Fv”是含有完整抗原识别位点和抗原结合位点的最小抗体片段。这个区由紧密的非共价缔合的一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域的二聚体组成。正是在这种构型中，每个可变结构域的三个高变区相互作用，以将抗原结合位点限定在VH-VL二聚体的表面上。总的来说，六个高变区赋予抗体抗原结合特异性。然而，即使是单个可变结构域(或包含对抗原具有特异性的仅三个高变区的Fv的一半)也具有识别抗原并与抗原结合的能力，但是所述结合是以比整个结合位点的亲和力更低的亲和力进行的。
Fab片段还含有轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域(CH1)。Fab'片段与Fab片段的不同之处在于，在包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸的重链CH1结构域的羧基末端处添加几个残基。Fab'-SH是本文对于Fab'的命名，其中恒定结构域的半胱氨酸残基携带至少一个游离硫醇基。F(ab')2抗体片段最初是作为其间具有铰链半胱氨酸的Fab'片段对产生的。抗体片段的其它化学偶联也是已知的。
来自任何脊椎动物物种的抗体的轻链可以基于其恒定结构域的氨基酸序列而被指定为被称为卡帕(κ)和拉姆达(λ)的两种明显不同类型中的一种。
单链Fv或scFv意指包含抗体的VH结构域和VL结构域的单链可变区抗体片段，其中这些结构域存在于单个多肽链中。Fv多肽可以进一步包含位于VH结构域与VL结构域之间的多肽接头，所述多肽接头使scFv能够形成抗原结合所期望的结构。
术语“双功能抗体”是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，所述片段包含与同一条多肽链(VH-VL)中的可变轻结构域(VL)连接的可变重结构域(VH)。通过使用短到允许同一条链上的两个结构域之间配对的接头，所述结构域被迫与另一条链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。
非人(例如，啮齿动物)抗体的“人源化”形式是含有衍生自非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗体。对于大多数部分，人源化抗体是其中来自受体的高变区的残基被来自如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物等具有期望的特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)的高变区的残基替代的人免疫球蛋白(受体抗体)。在一些情况下，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基被对应的非人残基替代。
此外，人源化抗体可以包含受体抗体或供体抗体中不存在的残基。进行这些修饰以进一步改善抗体性能。通常，人源化抗体将包含其中所有或基本上所有高变环与非人免疫球蛋白的区相对应并且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的FR的至少一个并且典型地两个可变结构域中的基本上所有可变结构域。
“分离的抗体”是已经从其环境的组分中鉴定出和分开和/或回收的抗体。其天然环境中的污染物组分是会干扰抗体的诊断或治疗用途并且可以包括酶、激素和其它蛋白质或非蛋白质溶质的材料。在一些实施例中，抗体可以被纯化(1)至如通过洛瑞方法(Lowrymethod)确定的大于95重量％或大于99重量％的抗体，(2)至足以通过使用旋转杯蛋白测序仪获得N末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度，或(3)通过在使用考马斯蓝或银染色的还原或非还原条件下进行的SDS-PAGE达到均质性。分离的抗体包括原位位于重组细胞内的抗体，因为抗体的天然环境中的至少一种组分将不存在。然而，通常，将通过至少一个纯化步骤来制备分离的抗体。
在一些实施例中，本文所公开的靶向剂、抗体或其结合片段可以包含一个或多个保守氨基酸取代。本领域的技术人员将认识到，保守氨基酸取代是一种氨基酸被另一种具有类似结构或化学特性(例如，类似侧链)的氨基酸取代。示例性保守取代在本领域中描述于例如Watson等人,《基因的分子生物学》,本杰明/卡明斯出版公司,第4版(1987)中。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含可变重链序列，所述可变重链序列包含与SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列具有至少约95％、约96％、约97％、约98％或约99％序列同一性的氨基酸序列。在其它实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段保留靶向剂、抗体或其结合片段的结合和/或功能活性，所述靶向剂、所述抗体或其片段包含SEQ ID NO:2、3或4的可变重链序列。在仍另外的实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含SEQ ID NO:1、2、3或4的可变重链序列，并且在重链可变序列中具有一个或多个保守氨基酸取代，例如，1个、2个、3个、4个、5个、1-2个、1-3个、1-4个或1-5个保守氨基酸取代。在又另外的实施例中，一个或多个保守氨基酸取代落入在SEQ ID NO:1、2、3或4中的一个或多个框架区内(基于Kabat的编号系统)。
在特定实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含与SEQ ID NO:1、2、3或4中所示的结合蛋白重链可变区序列具有至少约95％、约96％、约97％、约98％或约99％序列同一性的可变重链序列，在框架区中包含一个或多个保守氨基酸取代(基于Kabat的编号系统)，并且保留包含如SEQ ID NO:1、2、3或4中所示的可变重链序列和如SEQ ID NO:5、6、7或8中所示的可变轻链序列的结合蛋白的结合和/或功能活性。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段可变轻链序列，所述可变轻链序列包含与SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列具有至少约95％、约96％、约97％、约98％或约99％序列同一性的氨基酸序列。在其它实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段保留靶向剂、抗体或其结合片段的结合和/或功能活性，所述靶向剂、所述抗体或其片段包含SEQ ID No:5、6、7、8的可变轻链序列。在仍另外的实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含SEQ ID NO:5、6、7或8的可变轻链序列，并且在轻链可变序列中具有一个或多个保守氨基酸取代，例如，1个、2个、3个、4个、5个、1-2个、1-3个、1-4个或1-5个保守氨基酸取代。在又另外的实施例中，一个或多个保守氨基酸取代落入在SEQ ID NO:5、6、7或8中的一个或多个框架区内(基于Kabat的编号系统)。
在特定实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含与SEQ ID NO:5、6、7或8中所示的结合蛋白轻链可变区序列具有至少约95％、约96％、约97％、约98％或约99％序列同一性的可变轻链序列，在框架区中包含一个或多个保守氨基酸取代(基于Kabat的编号系统)，并且保留包含如SEQ ID NO:1、2、3或4中所示的可变重链序列和如SEQ ID NO:5、6、7或8中所示的可变轻链序列的结合蛋白的结合和/或功能活性。
在一个方面中，本公开提供了可用于本公开的缀合物(例如，抗体-药物缀合物)和化合物内的靶向剂(例如，抗体和抗体片段)。本公开设想了任何靶向剂(例如，抗体和抗体片段)。
在一些实施例中，靶向剂(例如，抗体和其其结合片段)与CDCP1特异性地结合。示例性抗体的序列示出在WO 2018/112334中，所述文献通过引用以其整体并入本文。在一些实施例中，使用ADC来治疗癌症。
在一些实施例中，抗CDCP1靶向剂、抗体或其结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列，所述轻链可变区包含VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列。
在一些实施例中，抗CDCP1靶向剂、抗体或其结合片段进一步包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列，所述轻链可变区包含VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列。
在一些实施例中，抗CDCP1靶向剂、抗体或其结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列，所述轻链可变区包含VL互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
表2A：抗CDCP1序列
表2B：抗CDCP1序列
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含重链可变区(VH)，所述VH包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含VH，所述VH包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含VH，所述VH包含与SEQ ID NO:4的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含VL，所述VL包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含轻链可变区(VL)，所述VL包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含VL，所述VL包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含VL，所述VL包含与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含轻链可变区(VL)，所述VL包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含VL，所述VL包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含VH并且包含VL，所述VH包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列和/或由其组成，所述VL包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列和/或由其组成。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含VH，所述VH包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列100％相同的氨基酸序列和/或由其组成。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含VL，所述VL包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列100％相同的氨基酸序列和/或由其组成。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含VL，所述VL包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含轻链可变区(VL)，所述VL包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含VL，所述VL包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含VL，所述VL包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含轻链可变区(VL)，所述VL包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含VL，所述VL包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含VH并且包含VL，所述VH包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列和/或由其组成，所述VL包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列和/或由其组成。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含VH，所述VH包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列100％相同的氨基酸序列和/或由其组成。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含VL，所述VL包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列100％相同的氨基酸序列和/或由其组成。
本公开还涵盖表A中示出的VH序列和VL序列的任何组合。
表A：抗CDCP1抗体重链区(或重链可变区)和抗体轻链区(或轻链可变区)
在专利文献中公开了若干种人、人源化的和嵌合抗CDCP1抗体(参见例如上面描绘此类抗体的重链、重链可变区、轻链和/或轻链可变区的表A)。此类序列可以在例如日本申请公开第JP 2007/112734号、PCT申请公开第WO 2022/212876号以及美国申请公开第2023/0050380A1号、第2022/0389113A1号、第2022/011954A1号、第2008/0008719A1号和美国专利第9,346,886号中找到，所述专利通过引用并入本文。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含重链(或重链可变区)和轻链(或轻链可变区)，所述重链包含与SEQ ID NO:23-158中的任一个的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列，所述轻链包含与SEQ ID NO:159-295的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含重链，所述重链包含与SEQ IDNO:1的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含轻链，所述轻链包含与SEQ IDNO:5的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含重链，所述重链包含与SEQ IDNO:10的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含轻链，所述轻链包含与SEQ IDNO:11的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)CDRH1，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRH2，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRH3，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)CDRL1，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRL2，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRL3，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)CDRH1，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRH2，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRH3，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)CDRL1，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRL2，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRL3，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含重链，所述重链包含与SEQ IDNO:16、17和/或18的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含重链，所述重链包含与SEQ IDNO:15的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含轻链，所述轻链包含与SEQ IDNO:20、21和/或22的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含轻链，所述轻链包含与SEQ IDNO:19的氨基酸序列至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)CDRH1，所述CDRH1包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRH2，所述CDRH2包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRH3，所述CDRH3包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)CDRL1，所述CDRL1包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRL2，所述CDRL2包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRL3，所述CDRL3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列和/或由其组成。
在某些实施例中，本文所述的靶向剂、抗体或其结合片段包含Fc结构域。Fc结构域可以衍生自IgA(例如，IgA1或IgA2)、IgG、IgE或IgG(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。在一些实施例中，Fc结构域包含Fc结构域的野生型序列。在一些实施例中，Fc结构域包含一个或多个导致生物活性改变的突变。例如，可以将突变引入到Fc结构域中，以增加重组蛋白产生期间的均质性。在一些实施例中，Fc结构域是人IgG的Fc结构域。在一些实施例中，使位于Fc结构域的C末端位置处的赖氨酸缺失，以增加重组蛋白产生期间的均质性。在一些实施例中，位于Fc结构域的C末端位置处的赖氨酸存在。
在某些实施例中，由cDNA多核苷酸序列对包含本文所述的靶向剂、抗体或其结合片段的多肽进行编码。如本领域充分理解的，将cDNA引入到感受态哺乳动物细胞中将产生包含靶向剂、抗体或其结合片段的多肽。通过这些手段产生抗体的示例性方法公开于至少美国专利第8,008,449号、第10,934,571号和第11,339,215号中，所述美国专利通过引用并入本文。
在一个实施例中，cDNA包含编码多肽的多核苷酸，所述多肽包含免疫球蛋白重链或其片段，所述免疫球蛋白重链包含VH，所述VH包含分别具有SEQ ID NO:2、3和4中所示的氨基酸序列的CDR H1、CDR H2和CDR H3。
在一个实施例中，cDNA包含编码多肽的多核苷酸，所述多肽包含免疫球蛋白重链或其片段，所述免疫球蛋白重链包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的VH。
在一个实施例中，cDNA包含编码多肽的多核苷酸，所述多肽包含免疫球蛋白轻链或其片段，所述免疫球蛋白轻链或其片段包含VL，所述VL包含分别具有SEQ ID NO:6、7和8中所示的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2和CDR L3。
在一个实施例中，cDNA包含编码多肽的多核苷酸，所述多肽包含免疫球蛋白重链或其片段，所述免疫球蛋白重链包含具有SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的VL。
本公开还提供了一种与和本文所述的抗体或其结合片段中的任一种的表位相同的表位(例如，CDCP1)结合的靶向剂、抗体或其结合片段。例如，可以通过表面等离子体共振(SPR)或生物层干涉法(BLI)来评估抗体竞争测定(和重叠表位分析)，如本文详细描述的。
本发明所提供的抗体和其结合片段包括单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段(例如，Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、Fc等)、嵌合抗体、双特异性抗体、异源缀合抗体(例如，抗体-药物缀合物)、单链(ScFv)、其突变体、包含抗体部分的融合蛋白、结构域抗体(dAb)、人源化抗体以及免疫球蛋白分子的包含具有所需要的特异性的抗原识别位点的任何其它经修饰的构型，包括抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体和经共价修饰的抗体。抗体和其结合片段可以是鼠、大鼠、人或任何其它来源(包括嵌合抗体或人源化抗体)。在一些实施例中，抗体是单克隆抗体。在一些实施例中，抗体是嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在某些实施例中，抗体是抗体-药物缀合物。
在一些实施例中，抗CDCP1抗体或其抗体片段包含一个或多个保守氨基酸取代。本领域的技术人员将认识到，保守氨基酸取代是一种氨基酸被另一种具有类似结构或化学特性(例如，类似侧链)的氨基酸取代。示例性保守取代在本领域中描述于例如Watson等人,《基因的分子生物学(Molecular Biology of the Gene)》,本杰明/卡明斯出版公司(TheBenjamin/Cummings Publication Company),第4版(1987)中。
“保守修饰”是指不显著影响或改变含有氨基酸序列的抗体的结合特性的氨基酸修饰。保守修饰包括氨基酸取代、添加和缺失。保守取代是其中氨基酸被具有类似侧链的氨基酸残基替代的取代。具有类似侧链的氨基酸残基家族被明确定义，并且包括具有以下的氨基酸：酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、非带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、色氨酸)、芳香族侧链(例如，苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸、酪氨酸)、脂肪族侧链(例如，甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸)、酰胺(例如，天冬酰胺、谷氨酰胺)、β支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和含硫侧链(半胱氨酸、甲硫氨酸)。此外，也可以用丙氨酸取代多肽中的任何天然残基，正如先前针对丙氨酸扫描诱变所描述的(MacLennan等人(1998)《斯堪的纳维亚生理学学报(Acta Physiol Scand)》增刊643:55-67；Sasaki等人,(1998)《生物物理学进展(Adv Biophys)》35:1-24)。对本发明的抗体的氨基酸取代可以通过已知方法，例如通过PCR诱变(美国专利第4,683,195号)进行。
在一些实施例中，抗体或其片段包含可变重链序列，所述可变重链序列包含与SEQID NO:1；15；23-158中所示的氨基酸序列具有至少约95％、约96％、约97％、约98％或约99％序列同一性的氨基酸序列。在其它实施例中，抗体或其片段保留抗体或其片段的结合和/或功能活性，所述抗体或其片段包含SEQ ID NO:1；15；23-158的可变重链序列。在仍另外的实施例中，抗体或其片段包含SEQ ID NO:1；15；23-158的可变重链序列，并且在重链可变序列中具有一个或多个保守氨基酸取代，例如，1个、2个、3个、4个、5个、1-2个、1-3个、1-4个或1-5个保守氨基酸取代。
在特定实施例中，抗体或其片段包含与SEQ ID NO:1；15；23-158中所示的抗体或其片段重链可变区序列具有至少约95％、约96％、约97％、约98％或约99％序列同一性的可变重链序列，在框架区中包含一个或多个保守氨基酸取代(基于Kabat的编号系统)，并且保留包含如SEQ ID NO:1；15；23-158中所示的可变重链序列和如SEQ ID NO:5；19；159-295中所示的可变轻链序列的抗体或其片段的结合和/或功能活性。
在一些实施例中，抗体或其片段包含可变轻链序列，所述可变轻链序列包含与SEQID NO:5；19；159-295中所示的氨基酸序列具有至少约95％、约96％、约97％、约98％或约99％序列同一性的氨基酸序列。在其它实施例中，抗体或其片段保留抗体或其片段的结合和/或功能活性，所述抗体或其片段包含SEQ ID NO:5；19；159-295的可变轻链序列。在仍另外的实施例中，抗体或其片段包含SEQ ID No:5；19；159-295的可变轻链序列，并且在轻链可变序列中具有一个或多个保守氨基酸取代，例如，1个、2个、3个、4个、5个、1-2个、1-3个、1-4个或1-5个保守氨基酸取代。
在特定实施例中，抗体或其片段包含与SEQ ID NO:5；19；159-295中所示的抗体或其片段轻链可变区序列具有至少约95％、约96％、约97％、约98％或约99％序列同一性的可变轻链序列，在框架区中包含一个或多个保守氨基酸取代(基于Kabat的编号系统)，并且保留包含如SEQ ID NO:1；15；23-158中所示的可变重链序列和如SEQ ID NO:5；19；159-295中所示的可变轻链序列的抗体或其片段的结合和/或功能活性。
靶向剂或抗体的结合亲和力可以以平衡解离常数(KD)值表示，所述KD是指特定抗原-抗体相互作用的解离速率。KD是解离速率(还被称为“脱离速率(k脱离)”)与缔合速率或“结合速率(k结合)”的比率。因此，KD等于k脱离/k结合(解离/缔合)并且以摩尔浓度(M)表示，并且KD越小，结合亲和力越强。抗体的KD值可以使用本领域中确立的方法来确定。除非另有说明，否则“结合亲和力”是指单价相互作用(内在活性；例如，抗体与抗原通过单价相互作用结合)。
在某些实施例中，本发明的靶向剂、抗体或其结合片段的亲和力(KD)值或小于约350nM、约325nM、约323.10nM、约300nM、约286.44nM、约275nM、约250nM、约232.13nM、约225nM、约219.13nM、约200nM、约195.54nM、约175nM、约158nM、约150nM、约125nM或约100nM。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段与表位(例如，CDCP1)以或小于约95nM、约90nM、约80nM、约79.89nM、约75nM、约70nM、约69.50nM、约65nM、约63.44nM、约60nM、约55nM、约52.88nM、约50nM、约45nM、约44.50nM、约41.99nM、约40nM、约35nM、约30nM、约25nM、约20nM、约10nM、约5nM或约1nM的KD值结合。
在一些实施例中，靶向剂、抗体或其结合片段与表位(例如，CDCP1)以或小于约5nM、约4.5nM、约4nM、约3.5nM、约3.12nM、约3nM、约2.90nM、约2.5nM、约2nM、约1.5nM、约1nM、约900pM、约800pM、约700pM、约600pM、约500pM、约400pM、约300pM、约250pM、约200pM、约150pM、约100pM、约50pM、约40pM、约30pM、约25pM、约20pM、约15pM、约10pM、约5pM或约1pM的KD值结合。
KD的值可以通过众所周知的方法直接确定，并且甚至可以针对复杂混合物通过例如Caceci等人,(1984,《字节(Byte)》9:340-362)中所示的方法等方法计算。例如，KD可以使用双过滤器硝酸纤维素过滤器结合测定，如Wong和Lohman(1993,《美国国家科学院院刊》90:5428-5432)所公开的测定来确立。用于评价配体(如抗体)对靶抗原的结合能力的其它标准测定是本领域已知的，包括例如，ELISA、蛋白质印迹、RIA和流式细胞术分析以及本文其它地方例示的其它测定。
用于测量结合亲和力(KD)值的一种示例性方法是表面等离子体共振(SPR)，典型地使用生物传感器系统(如系统)的SPR。SPR是指允许通过例如使用系统检测生物传感器基质内的蛋白质浓度的改变来分析实时生物特异性相互作用的光学现象。BIAcore动力学分析包含分析抗原在具有固定的分子(例如，包含抗原结合结构域的分子)的芯片的表面上与所述芯片结合和解离；或抗体或其结合片段与具有固定的抗原的芯片解离。
在某些实施例中，SPR测量是使用T100或T200仪器进行的。例如，用于表面等离子体共振的标准测定条件可以基于对IgG在SPR芯片上的大约100-500个响应单元(RU)的抗体固定化进行。将经纯化的靶蛋白在缓冲液中稀释到一定范围的最终浓度，并以必要的流速(例如，10-100微升/分钟)注入，以允许计算Ka。允许解离继续以确立脱离速率，之后是3M MgCl2(或20mM NaOH)以用于芯片表面再生。然后使用动力学评价软件包来分析传感图。在一示例性实施例中，根据如实例中阐述的条件进行SPR测定。
在某些实施例中，使用基于溶液的动力学排斥测定(KinExATM)来测量结合亲和力(KD)值。在一特定实施例中，使用KinExATM3200仪器(Sapidyne公司(Sapidyne))来进行KinExA测量。动力学排斥测定(KinExATM)是能够测量抗原/抗体相互作用的平衡解离常数以及缔合速率常数和解离速率常数的通用免疫测定平台(基本上，流分光荧光计)。由于KinExATM是在已获得平衡之后执行的，因此其是用于测量高亲和力相互作用的KD的有利技术，在所述高亲和力相互作用的情况下，相互作用的脱离速率可能非常慢。KinExATM方法通常可以如Drake等人,(2004)《分析生物化学(Analytical Biochem.)》328,35-43中所述进行。
用于确定抗体的KD的另一种方法是通过使用生物层干涉法(BLI)，典型地，使用来自ForteBio公司(ForteBio)的技术(例如，Octet QKe系统)进行的。在某些实施例中，BLI测量是根据以下进行的：通过浸入在运行缓冲液(如含有0.05％tween-20的10mMHepes缓冲盐水(HBS))中120秒来使涂覆有专有抗人抗体(ForteBio公司)的传感器尖端经历BLI信号稳定化。然后通过将传感器浸入到运行缓冲溶液中(缓冲液可以含有1-10ug/mL抗体)300秒来捕获抗体。然后通过将传感器尖端浸入回到运行缓冲液中120秒来使信号稳定。然后将尖端转移到含有同源抗原的溶液中。在将传感器尖端转移到运行缓冲液中之前，在180秒内测量抗体-抗原的结合，以监测在180秒内的受体解离。
在CDCP1的情况下，通常测量抗原的7点剂量应答(在倍比稀释中可以在1-2nM的范围内)。另外，使未捕获到抗体的传感器尖端暴露于抗原，以监测受体与传感器尖端的非特异性结合。第2参考类型还包括其上捕获有抗体但随后仅暴露于无抗原的运行缓冲液的尖端。这允许双重引用以消除非特异性结合以及系统噪声和归因于抗体与抗人Fc传感器尖端解离的底层基线漂移。原始材料经历双重参考扣除，并且然后拟合到1:1朗缪尔型结合模型(Langmuir type binding model)，以确定亲和力和动力学参数。
在一些实施例中，CDCP1是人CDCP1、食蟹猴CDCP1或小鼠CDCP1。通常，抗CDCP1抗体应以高亲和力与CDCP1结合。期望的是，抗CDCP1抗体对人CDCP1具有结合亲和力(KD)，所述KD在低纳摩尔范围内，如约40nM或更低。在一些实施例中，CDCP1是人CDCP1，并且KD值为约40nM、约45nM或约50nM。在一些实施例中，CDCP1是食蟹猴CDCP1，并且KD值为约62nM、约64nM、约66nm、约68nM或约70nM。
药物部分
在一些实施例中，药物部分是细胞毒性剂、免疫调节剂、成像剂、化学治疗剂或治疗性蛋白质。
在一些实施例中，药物部分是分子量优选地<约5kDa、更优选地<约4kDa、更优选地<约3kDa、最优选地<约1.5kDa或<约1kDa的小分子。
在一些实施例中，药物部分的IC50约小于约1nM。
在一些实施例中，药物部分的IC50约大于1nM，例如，治疗剂的IC50为约1nM至约50nM。
IC50大于约1nM的一些药物部分(例如，“低效药物”)不适用于使用本领域公认的缀合技术与抗体缀合。在不希望受理论束缚的情况下，此类药物部分的效力使用常规技术不足以用于靶向性抗体-药物缀合物，因为使用本领域公认的技术，在不导致缀合物的药代动力学和物理化学特性降低的情况下，药物的足够拷贝(即，超过8个)不可以缀合。然而，可以使用本文所述的缀合策略来实现这些低效药物的足够高的负载，由此在维持期望的药代动力学和物理化学特性的同时使治疗剂的负载高。因此，在一些实施例中，本公开还涉及一种抗体-药物缀合物，其包括抗体、接头和至少八个药物部分部分，其中所述治疗剂的IC50大于约1nM。
在一些实施例中，本公开中使用的小分子治疗剂(例如，能够通过本公开的接头与靶向部分连接的抗增殖(细胞毒性和细胞抑制)剂)包括细胞毒性化合物(例如，广谱)、血管生成抑制剂、天花板周期进展抑制剂、PI3K/m-TOR/AKT通路抑制剂、MAPK信号传导通路抑制剂、激酶抑制剂、蛋白质伴侣蛋白抑制剂、HDAC抑制剂、PARP抑制剂、烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)抑制剂、Wnt Hedgehog信号传导通路抑制剂和RNA聚合酶抑制剂。
广谱细胞毒素包括但不限于DNA结合剂、插入剂或烷基化剂、微管稳定剂和去稳定剂、铂化合物、拓扑异构酶抑制剂(包括拓扑异构酶I抑制剂和拓扑异构酶II抑制剂)和蛋白质合成抑制剂。
在一些实施例中，药物部分包含一种或多种cGAS/干扰素基因刺激因子(STING)通路激动剂。STING激动剂的非限制性实例包括DMXAA、ADUS100/MIW815、MK-1454、MK-2118、SB11285、GSK3745417、BMS-986301、BI-STING(BI 1387446)、E7766、TAK-676、SNX281、SYNB1891。STING激动剂以及与其它细胞毒性剂和/或ENPP1抑制剂的组合的另外的非限制性实例可以见于Amouzegar等人,《癌症(Cancers)》13:2695(2021)，所述文献通过引用以其整体并入本文。
示例性DNA结合剂、插入剂或烷基化剂包括但不限于CC-1065和其类似物、蒽环类(多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、伊达比星(idarubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、奈莫柔比星(nemorubicin)和其衍生物、PNU-159682)、双萘酰亚胺化合物如依利奈法德(elinafide)(LU79553)和其类似物、烷基化剂如卡奇霉素(calicheamicin)、放线菌素D(dactinomycin)、丝裂霉素、吡咯并苯并二氮杂环庚熳、吲哚并苯并二氮杂环庚熳等。示例性CC-1065类似物包括但不限于倍癌霉素SA(duocarmycin SA)、倍癌霉素A、倍癌霉素CI、倍癌霉素C2、倍癌霉素B1、倍癌霉素B2、倍癌霉素D、DU-86、KW-2189、阿多来新(adozelesin)、比折来新(bizelesin)、卡折来新(carzelesin)、开环-阿多来新以及相关类似物和前药形式，其实例描述于美国专利第5,475,092号；第5,595,499号；第5,846,545号；第6,534,660号；第6,586,618号；第6,756,397号；以及第7,049,316号中。多柔比星和其类似物包括美国专利第6,630,579号中描述的多柔比星和其类似物。卡奇霉素包括例如烯二炔类，例如埃斯培拉霉素(esperamicin)以及美国专利第5,714,586号和第5,739,116号中描述的烯二炔类。倍癌霉素包括以下中描述的倍癌霉素：美国专利第5,070,092号；第5,101,038号；第5,187,186号；第6,548,530号；第6,660,742号；以及第7,553,816B2号；以及Li等人,《理论经济学快报(Tel Letts.)》,50:2932-2935(2009)，所有这些专利的公开内容通过引用以其整体并入本文。
示例性拓扑异构酶抑制剂(例如，拓扑异构酶I和/或拓扑异构酶II)包括但不限于喜树碱、喜树碱衍生物、喜树碱类似物和非天然喜树碱，例如依喜替康、Dxd、Sn-38(7-乙基-10-羟基-喜树碱)、CPT-1 1(依立替康)、GI-147211C、拓扑替康(topotecan)、9-氨基喜树碱、7-羟甲基喜树碱、7-氨基甲基喜树碱、10-羟基喜树碱、(20S)-喜树碱、鲁比替康(rubitecan)、吉马替康(gimatecan)、卡瑞尼汀(karenitecin)、斯拉替康(silatecan)、勒托替康(lurtotecan)、二氟替康(diflomotecan)、贝洛替康(belotecan)、勒托替康和S39625以及其任何类似物。可以用于本公开的其它拓扑异构酶抑制剂(例如，拓扑异构酶I和/或拓扑异构酶II)的非限制性实例包括WO 2020/00880和WO 2021/148501中描述的拓扑异构酶抑制剂，所述文献中的每一个的公开内容通过引用以其整体并入本文。可以用于本公开的其它喜树碱化合物的非限制性实例包括以下中描述的喜树碱化合物：《药物化学杂志(J.Med.Chem.)》,29:2358-2363(1986)；《药物化学杂志》,23:554(1980)；《药物化学杂志》,30:1774(1987)，所述文献中的每个文献的公开内容通过引用以其整体并入本文。在一些实施例中，药物部分是依喜替康和/或其类似物。在一些实施例中，药物部分是Dxd和/或其类似物。
吡咯并苯并二氮杂环庚熳(PBD)和其类似物的非限制性实例包括但不限于以下中描述的PBD和其类似物：Denny,《治疗性专利专家意见(Exp.Opin.Ther.Patents.)》,10(4):459-474(2000)；Antonow和Thurston,《化学评论(Chem Rev.)》,2815-2864(2010)；Min等人,《美国化学会Omega刊(ACS Omega)》5:25798-25809(2020)；以及Hartley《生物治疗专家意见(Exp.Opin.Biol.Therapy)》,7:931-943(2020)，所述文献中的每个文献的公开内容通过引用以其整体并入本文。
示例性微管稳定剂和去稳定剂包括但不限于紫杉烷化合物，如紫杉醇、多西他赛(docetaxel)、替西他塞(tesetaxel)和卡巴他赛(carbazitaxel)；美登素类化合物(maytansinoid)、奥瑞他汀(auristatin)和其类似物、长春花生物碱衍生物、埃博霉素(epothilone)和念珠藻素(cryptophycin)。
示例性美登素类化合物或美登素类化合物类似物包括但不限于美登醇(maytansinol)和美登醇类似物，美登素或DM-i和DM-4是美国专利第5,208,020号；第5,416,064号；第6,333.410号；第6,441,163号；第6,716,821号；第RE39,151号；以及第7,276,497号中描述的美登素或DM-i和DM-4。在某些实施例中，细胞毒性剂是美登素类化合物、另一组的抗微管蛋白剂(ImmunoGen公司(ImmunoGen,Inc.)；还参见Chari等人,1992,《癌症研究(Cancer Res.)》52:127-131)、美登素类化合物或美登素类化合物类似物。合适的美登素类化合物的实例包括但不限于美登醇和美登醇类似物。合适的美登素类化合物的非限制性实例公开于美国专利第4,424,219号；第4,256,746号；第4,294,757号；第4,307,016号；第4,313,946号；第4,315,929号；第4,331,598号；第4,361,650号；第4,362,663号；第4,364,866号；第4,450,254号；第4,322,348号；第4,371,533号；第6,333,410号；第5,475,092号；第5,585,499号；以及第5,846,545号中，所述文献通过引用以其整体并入本文。
示例性奥瑞他汀包括但不限于奥瑞他汀E(还被称为海兔毒素-10(dolastatin-10)的衍生物)、奥瑞他汀EB(AEB)、奥瑞他汀EFP(AEFP)、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)、单甲基奥瑞他汀F(MMAF)、奥瑞他汀F、奥瑞他汀F苯二胺(AFP)、奥瑞他汀F羟丙基酰胺(AF FTP A)、单甲基奥瑞他汀F羟丙基酰胺(MMAF HP A)和海兔毒素。合适的奥瑞他汀的非限制性实例也描述于美国公开第2003/0083263号；第2011/0020343号；以及第2011/0070248号；PCT申请公开第WO 09/117531号；第WO 2005/081711号；第WO 04/010957号；第WO 02/088172号；和第WO 01/24763号；以及美国专利第7,498,298号；第6,884,869号；第6,323,315号；第6,239,104号；第6,124,431号；第6,034,065号；第5,780,588号；第5,767,237号；第5,665,860号；第5,663,149号；第5,635,483号；第5,599,902号；第5,554,725号；第5,530,097号；第5,521,284号；第5,504,191号；第5,410,024号；第5,138,036号；第5,076,973号；第4,986,988号；第4,978,744号；第4,879,278号；第4,816,444号；以及第4,486,414号中，所述文献通过引用以其整体并入本文。在一些实施例中，药物部分是单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和/或其类似物。
示例性长春花生物碱包括但不限于长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、长春地辛(vindesine)和诺维苯(navelbine)(长春瑞滨(vinorelbine))。可以用于本公开中的合适的长春花生物碱也公开于美国专利第2002/0103136号和第2010/0305149号以及美国专利第7,303,749Bl中，所述专利中的每一个的公开内容通过引用以其整体并入本文。
示例性埃博霉素化合物包括但不限于埃博霉素A、B、C、D、E和F以及其衍生物。合适的埃博霉素化合物和其衍生物描述于例如美国专利第6,956,036号；第6,989,450号；第6,121,029号；第6,117,659号；第6,096,757号；第6,043,372号；第5,969,145号；以及第5,886,026号；以及第WO 97/19086号；第WO 98/08849号；第WO 98/22461号；第WO 98/25929号；第WO 98/38192号；第WO 99/01124号；第WO 99/02514号；第WO 99/03848号；第WO 99/07692号；第WO 99/27890号；以及第WO 99/28324号中，所述专利中的全部专利的公开内容通过引用以其整体并入本文。
念珠藻素化合物的非限制性实例描述于美国专利第6,680,311号和第6,747,021号中，所述美国专利中的每一个的公开内容通过引用以其整体并入本文。
示例性铂化合物包括但不限于顺铂(cisplatin)卡铂(carboplatin)奥沙利铂(oxaliplatin)异丙铂(iproplatin)、奥马铂(ormaplatin)和四铂(tetraplatin)。
其它类别的化合物或具有这些或其它细胞毒性作用模式的化合物的非限制性实例可以选择，包括例如丝裂霉素C、丝裂霉素A、柔红霉素、多柔比星、吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、氨基蝶呤、博莱霉素、1-(氯甲基)-2,3-二氢-1H-苯并[e]吲哚-5-醇、吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)、吡咯并苯并二氮杂环庚熳(PBD)和聚酰胺以及其二聚体。其它合适的细胞毒性剂的非限制性实例包括嘌呤霉素(puromycin)、拓扑替康、根瘤菌素(rhizoxin)、棘霉素(echinomycin)、康普瑞汀(combretastatin)、纺锤菌素(netropsin)、雌莫司汀(estramustine)、念珠藻素(cryptophycin)、西马多汀(cemadotin)、圆皮海绵内酯(discodermolide)、五加素(eleutherobin)和米托蒽醌(mitoxantrone)。
血管生成抑制剂包括但不限于MetAP2抑制剂、VEGF抑制剂、PIGF抑制剂、VGFR抑制剂、PDGFR抑制剂、MetAP2抑制剂。示例性VGFR和PDGFR抑制剂包括但不限于索拉非尼(sorafenib)(Nexavar)、舒尼替尼(sunitinib)(Sutent)和瓦他拉尼(vatalanib)。示例性MetAP2抑制剂包括烟曲霉醇类似物(fumagillol analog)，这意指包括烟曲霉素(fumagillin)核心结构的抑制MetAP-2从蛋白质中去除NH2末端甲硫氨酸的能力的任何化合物，包括烟曲霉胺(fumagiilamine)，如Rodeschini等人,《有机化学杂志(J.Org.Chem.)》,69,357-373,2004以及Liu等人,《科学》282,1324-1327,1998中所述，“烟曲霉醇类似物”的非限制性实例公开于《有机化学杂志》,69,357,2004；《有机化学杂志》,70,6870,2005；欧洲专利申请0 354 787；《药物化学杂志(J.Med.Chem.)》,49,5645,2006；《生物有机与药物化学(Bioorg.Med.Chem.)》,1 1,5051,2003；《生物有机与药物化学》,14,91,2004；《理论经济学快报》40,4797,1999；WO 99/61432；美国专利第6,603,812号；第5,789,405号；第5,767,293号；第6,566,541号；以及第6,207,704中，所述文献中的全部文献的公开内容通过引用以其整体并入本文。
示例性天花板周期进展抑制剂包括但不限于CDK抑制剂，如BMS-387032和PD0332991；Rho激酶抑制剂，如GSK429286；检查点激酶抑制剂，如AZD7762；极光激酶抑制剂，如AZD1 152、MLN8054和MLN8237；PLK抑制剂，如BI 2536、BI6727(伏拉塞替(Volasertib))、GSK461364、ON-01910(Estybon)；以及KSP抑制剂，如SB 743921、SB 715992(伊斯平斯(ispinesib))、MK-0731、AZD8477、AZ3146和ARRY-520。
示例性PBK/m-TOR/AKT信号传导通路抑制剂包括但不限于磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂、GSK-3抑制剂、ATM抑制剂、DNA-PK抑制剂和PDK-1抑制剂。
示例性PI3激酶抑制剂的非限制性实例公开于美国专利第6,608,053号中(所述文献的公开内容通过引用以其整体并入本文)，并且包括BEZ235、BGT226、BKM120、CAL101、CAL263、去甲氧绿胶霉素(demethoxyviridin)、GDC-0941、GSK615、IC871 14、LY294002、Pafomid 529、哌立福辛(perifosine)、PI-103、PF-04691502、PX-866、SAR245408、SAR245409、SF 1 126、渥曼青霉素(Wortmannin)、XL 147和XL765。
示例性AKT抑制剂包括但不限于AT7867。
示例性MAPK信号传导通路抑制剂包括但不限于MEK、Ras、JNK、B-Raf和p38MAPK抑制剂。
非限制性示例性MEK抑制剂公开于美国专利第7,517,994号中(所述文献的公开内容通过引用以其整体并入本文)，并且包括GDC-0973、GSK1120212、MSC1936369B、AS703026、R05126766和R04987655、PD0325901、AZD6244、AZD 8330和GDC-0973。
示范性B-raf抑制剂包括但不限于CDC-0879、PLX-4032和SB590885。
示例性B p38M APK抑制剂包括但不限于BIRB 796、LY2228820和SB 202190。
受体酪氨酸激酶(RTK)是细胞表面受体，其通常与刺激癌细胞的不受控的增殖和血管生成的信号传导通路相关。已经鉴定出过表达或具有导致对受体的组成型激活的突变的许多RTK，包括但不限于VEGFR、EGFR、FGFR、PDGFR、EphR和RET受体家族受体。示例性特异性RTK靶标包括但不限于ErbB2、FLT-3、c-Kit和c-Met。
ErbB2受体(EGFR家族)的示例性抑制剂包括但不限于AEE788(NVP-AEE 788)、BIBW2992、(阿法替尼(Afatinib))、拉帕替尼(Lapatinib)、埃罗替尼(Erlotinib，Tarceva)和吉非替尼(Gefitinib，Iressa)。
靶向多于一个信号传导通路的示例性RTK抑制剂(多靶向性激酶抑制剂)包括但不限于AP24534(帕纳替尼(Ponatinib))，其靶向FGFR受体、FLT-3受体、VEGFR-PDGFR受体和Bcr-Abl受体；ABT-869(利尼伐尼(Linifanib))，其靶向FLT-3受体和VEGFR-PDGFR受体；AZD2171，其靶向VEGFR-PDGFR受体、Flt-1受体和VEGF受体；CHR-258(多韦替尼(Dovitinib))，其靶向VEGFR-PDGFR受体、FGFR受体、Flt-3受体和c-Kit受体；舒尼替尼(Sutent)，其靶向VEGFR、PDGFR、KIT、FLT-3和CSF-IR；索拉非尼(Nexavar)和瓦他拉尼，其靶向VEGFR、PDGFR以及Raf/Mek/Erk通路中的细胞内丝氨酸/苏氨酸激酶。
示例性蛋白质伴侣蛋白抑制剂包括但不限于HSP90抑制剂。
示例性HSP90抑制剂包括但不限于17AAG衍生物、BIIB021、BIIB028、S X-5422、NVP-AUY-922和KW-2478。
示例性WD AC抑制剂包括但不限于贝利司他(Belinostat，PXD101)、CUDC-101、屈昔司他(Droxinostat)、ITF2357(吉维司他(Givinostat)、佳维诺司他(Gavinostat))、JNJ-26481585、LAQ824(NVP-LAQ824，达诺司他(Dacinostat))、LBH-589(帕比司他(Panobinostat))、MC I 568、MGCD0103(莫塞替诺司他(Mocetinostat))、MS-275(恩替司他(Entinostat))、PCI-24781、吡咯酰胺(Pyroxamide，NSC 696085)、SB939、曲古抑菌素A(Trichostatin A)和伏立诺他(Vorinostat，SAHA)。
示例性PARP抑制剂包括但不限于依尼帕尼(iniparib，BSI 201)、奥拉帕尼(olaparib，AZD-2281)、ABT-888(维利帕尼(Veliparib))、AG014699、CEP 9722、MK 4827、KU-0059436(AZD2281)、LT-673、3-氨基苯甲酰胺、A-966492和AZD2461。
示例性NAMPT抑制剂包括但不限于FK866(AP0866)和CHS828、GPP 78、GMX1778(CHS828)、STF-1 18804、STF-31、CB 300919、CB 30865、GNE-617、IS001、TP201565、Nampt-IN-1、P7C3、MPC-9528、CB30865、MPI0479883和(￡)-N-(5-((4-(((2-(1H-吲哚-3-基)乙基)(异丙基)氨基)甲基)苯基)氨基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺。
示例性Wnt/Hedgehog信号传导通路抑制剂包括但不限于维莫德吉(vismodegib，RG3616/GDC-0449)、环巴胺(11-脱氧蒜藜芦碱(11-deoxojervine))(Hedgehog通路抑制剂)和XAV-939(Wnt通路抑制剂)。
示例性RNA聚合酶抑制剂包括但不限于鹅膏毒素(amatoxin)。示例性鹅膏毒素包括a-鹅膏蕈碱、β-鹅膏蕈碱、γ-鹅膏蕈碱、ε-鹅膏蕈碱、鹅膏蕈(amanullin)、鹅膏蕈酸(amanullic acid)、鹅膏酰胺(amaninamide)、鹅育毒素(amanin)和前鹅膏无毒环肽(proamanullin)。
示例性蛋白质合成抑制剂包括但不限于单端孢霉烯化合物(trichothecenecompound)。
在一些实施例中，药物部分是拓扑异构酶抑制剂(例如，非天然喜树碱化合物)、长春花生物碱、激酶抑制剂(例如，PI3激酶抑制剂(GDC-0941和PI-103))、MEK抑制剂、KSP抑制剂、RNA聚合酶抑制剂、蛋白质合成抑制剂、PARP抑制剂、NAMPT抑制剂、多西他赛、紫杉醇、多柔比星、倍癌霉素、奥瑞他汀、海兔毒素、卡奇霉素、拓扑替康、SN38、喜树碱、依喜替康、奈莫柔比星和其衍生物、PNU-1.59682、CC1065、依利奈法德、单端孢霉烯、吡咯并苯并二氮杂环庚熳、美登素类化合物、DNA结合药物或铂化合物和其类似物。在一些实施例中，药物是Sn-38、喜树碱、拓扑替康、依喜替康、卡奇霉素、奈莫柔比星、PNU-159682、蒽环霉素、美登素类化合物、紫杉烷、单端孢霉烯、CC1065、依利奈法德、长春地辛、长春碱、PI-103、AZD 8330、海兔毒素、奥瑞他汀E、奥瑞他汀F、倍癌霉素化合物、伊斯平斯、吡咯并苯并二氮杂环庚熳、ARRY-520以及其立体异构体、等排体和类似物的衍生物。
在一些实施例中，药物部分D是具有以下式的结构的拓扑异构酶抑制剂：
在一些实施例中，本公开中使用的药物部分是两种或更多种药物的组合，例如，PI3激酶抑制剂和MEK抑制剂、广谱细胞毒性化合物和铂化合物；PARI3抑制剂、NAMPT抑制剂和铂化合物、广谱细胞毒性化合物和PARP抑制剂。
在一些实施例中，本公开中使用的药物部分是奥瑞他汀F-羟丙基酰胺-L-丙氨酸。
接头
在一个方面中，药物部分可以直接或间接与靶向剂(例如，抗体或抗体结合片段)连接，以提供靶向性缀合物。在一些实施例中，本公开的抗体药物缀合物(ADC)(例如式(I)的ADC)含有接头基团，其中靶向剂(例如，抗体或抗体结合片段)通过所述接头基团附接到药物部分。在一些实施例中，本公开的化合物(例如式(III)的化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物)含有接头基团，其中靶向剂(例如，抗体或抗体结合片段)通过所述接头基团附接到药物部分。在一些实施例中，接头是单个键。在一非限制性实例中，在接头是单个键时，药物部分直接附接到靶向剂(例如，抗体或抗体结合片段)。在一些实施例中，多种靶缀合物是本领域中已知的，并且可以与式(III)化合物以及其盐或溶剂化物一起使用。在一非限制性实例中，靶缀合物是其中一种或多种式(III)化合物与抗体连接的抗体-药物缀合物。在实施例中，本公开的抗体药物缀合物含有一种或多种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物。
本公开设想了适于将药物部分附接到靶向剂(例如，抗体或抗体结合片段)的任何接头，如本领域的普通技术人员将理解的。
在一些实施例中，接头是键或具有1-200个选自C、N、O、S或卤素的非氢原子的部分，并且任选地并入烷基部分、醚部分、氧代部分、羧基部分、甲酰胺部分、甲酰胺基部分、酯部分、尿烷基部分、支链部分、环状部分、不饱和部分、氨基酸部分、杂环基部分、芳基部分或杂芳基部分。在实施例中，接头是非支链的或支链的、柔性的或刚性的、短的或长的，并且任选地并入被视为有用的部分的任何组合。在一些实施例中，接头的至少一部分具有聚亚烷基氧化物聚合物区。在一非限制性实例中，聚亚烷基氧化物聚合物区能够增强药物部分的溶解度。在一些实施例中，接头具有乙二醇重复单元。
在一些实施例中，接头具有在约1至约25的范围内或介于其之间的数量的许多重复乙二醇单元。在一些实施例中，接头包括约3个至约20个、约3个至约5个、约4个至约15个、约4个至约8个、约4个至约6个、约5个至约12个、约6个至约10个或约7个至约9个乙二醇单元。在一些实施例中，接头包括约8个乙二醇单元。
在一些实施例中，接头的至少一部分包括一个或多个氨基酸部分。在一非限制性实例中，一个或多个氨基酸部分增强药物部分的溶解度和/或提供用于增强靶结合、增强与靶向剂的相容性和/或增强靶结合识别的氨基酸序列。在一些实施例中，接头包括一个或多个提供适用于蛋白酶的底物基序的氨基酸部分。在一非限制性实例中，在将一组氨基酸部分并入到提供对所选蛋白酶具有特异性的底物基序的接头中时，药物部分可以从靶标结合的缀合物中释放，以提供局部化的细胞毒性效应。
在一些实施例中，接头包括亚烷基链。在一些实施例中，亚烷基链的长度为1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个或12个碳；并且适当地，亚烷基链包含-CH2-基团。在一些实施例中，这些底物基序是本领域已知的，并且根据需要并入到接头中，以提供从靶标结合的缀合物中的选择性释放。在一非限制性实例中，这种选择性是基于已知缀合物药物的局部递送区内存在期望的蛋白酶。在一些实施例中，可以将其它聚合物类型的部分并入在接头中，包括但不限于多酸、多糖或多胺。在一些实施例中，使用如经取代的芳香族或杂芳香族部分等其它部分，以增强刚性或在其中的取代基上提供可合成地接近的位点，以用于与反应性部分或药物部分连接。
在一非限制性实例中，接头包括乙二醇重复单元和/或氨基酸序列。
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
-[CH2CH2O]p-XAA-
其中XAA是氨基酸序列，并且p是0至50的整数。在一些实施例中，p是1至10、4至10、6至10或7至9的整数。在一些实施例中，p是8。
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
-[CH2CH2O]p-XAA-
其中XAA是氨基酸序列，并且p是0至50的整数。在一些实施例中，p是1至40的整数。在一些实施例中，p是1至30的整数。在一些实施例中，p是6至40的整数。在一些实施例中，p是8至30的整数。在一些实施例中，p是6至20的整数。在一些实施例中，p是6至20的整数。在一些实施例中，p是8至20的整数。在一些实施例中，p是10至30的整数。在一些实施例中，p是10至20的整数。在一些实施例中，p是1至25、4至20、5至15、6至12或5至10的整数。在一些实施例中，p是1至10、4至10、6至10或7至9的整数。在一些实施例中，p是8。
在一些实施例中，接头(例如，LA)包含下式或由其组成：
-[CH2CH2O]p-(CH2)1-5-C(O)-XAA-
其中XAA是氨基酸序列，并且p是0至50的整数。在一些实施例中，p是1至40的整数。在一些实施例中，p是1至30的整数。在一些实施例中，p是6至40的整数。在一些实施例中，p是8至30的整数。在一些实施例中，p是6至20的整数。在一些实施例中，p是6至20的整数。在一些实施例中，p是8至20的整数。在一些实施例中，p是10至30的整数。在一些实施例中，p是10至20的整数。在一些实施例中，p是1至25、4至20、5至15、6至12或5至10的整数。在一些实施例中，p是1至10、4至10、6至10或7至9的整数。在一些实施例中，p是8。
在一些实施例中，接头(例如，LA)包含下式或由其组成：
-[CH2CH2O]p-(CH2)1-5-C(O)-XAA-
其中XAA是氨基酸序列，并且p是0至50的整数，其中XAA不是Val-Cit或Phe-Lys。在一些实施例中，p是1至40的整数。在一些实施例中，p是1至30的整数。在一些实施例中，p是6至40的整数。在一些实施例中，p是8至30的整数。在一些实施例中，p是6至20的整数。在一些实施例中，p是6至20的整数。在一些实施例中，p是8至20的整数。在一些实施例中，p是10至30的整数。在一些实施例中，p是10至20的整数。在一些实施例中，p是1至25、4至20、5至15、6至12或5至10的整数。在一些实施例中，p是1至10、4至10、6至10或7至9的整数。在一些实施例中，p是8。在一些实施例中，-(CH2)1-5-是-(CH2)1-3-。
在一些实施例中，接头(例如，LA)包含下式或由其组成：
-[CH2CH2O]p-(CH2)1-3-C(O)-XAA-
其中XAA是氨基酸序列，并且p是0至50的整数。在一些实施例中，p是1至40的整数。在一些实施例中，p是1至30的整数。在一些实施例中，p是6至40的整数。在一些实施例中，p是8至30的整数。在一些实施例中，p是6至20的整数。在一些实施例中，p是6至20的整数。在一些实施例中，p是8至20的整数。在一些实施例中，p是10至30的整数。在一些实施例中，p是10至20的整数。在一些实施例中，p是1至25、4至20、5至15、6至12或5至10的整数。在一些实施例中，p是1至10、4至10、6至10或7至9的整数。在一些实施例中，p是8。
在一些实施例中，接头(例如，LA)包含下式或由其组成：
-[CH2CH2O]p-(CH2)1-3-C(O)-XAA-
其中XAA是氨基酸序列，并且p是0至50的整数，其中XAA不是Val-Cit或Phe-Lys。在一些实施例中，p是1至40的整数。在一些实施例中，p是1至30的整数。在一些实施例中，p是6至40的整数。在一些实施例中，p是8至30的整数。在一些实施例中，p是6至20的整数。在一些实施例中，p是6至20的整数。在一些实施例中，p是8至20的整数。在一些实施例中，p是10至30的整数。在一些实施例中，p是10至20的整数。在一些实施例中，p是1至25、4至20、5至15、6至12或5至10的整数。在一些实施例中，p是1至10、4至10、6至10或7至9的整数。在一些实施例中，p是8。
在一些实施例中，接头(例如，LA)包含下式或由其组成：
-[CH2CH2O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中XAA是氨基酸序列，并且p是0至50的整数。在一些实施例中，p是1至40的整数。在一些实施例中，p是1至30的整数。在一些实施例中，p是6至40的整数。在一些实施例中，p是8至30的整数。在一些实施例中，p是6至20的整数。在一些实施例中，p是6至20的整数。在一些实施例中，p是8至20的整数。在一些实施例中，p是10至30的整数。在一些实施例中，p是10至20的整数。在一些实施例中，p是1至25、4至20、5至15、6至12或5至10的整数。在一些实施例中，p是1至10、4至10、6至10或7至9的整数。在一些实施例中，p是8。
在一些实施例中，接头(例如，LA)包含下式或由其组成：
-[CH2CH2O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中XAA是氨基酸序列，并且p是0至50的整数，其中XAA不是Val-Cit或Phe-Lys。在一些实施例中，p是1至40的整数。在一些实施例中，p是1至30的整数。在一些实施例中，p是6至40的整数。在一些实施例中，p是8至30的整数。在一些实施例中，p是6至20的整数。在一些实施例中，p是6至20的整数。在一些实施例中，p是8至20的整数。在一些实施例中，p是10至30的整数。在一些实施例中，p是10至20的整数。在一些实施例中，p是1至25、4至20、5至15、6至12或5至10的整数。在一些实施例中，p是1至10、4至10、6至10或7至9的整数。在一些实施例中，p是8。
在一些实施例中，接头中可以使用合适数量的乙二醇单元。在一些实施例中，接头包括1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、15个、16个、19个、20个、23个、24个、35个、36个、37个、48个、49个或更多个乙二醇单元。在一些实施例中，接头包括1个至10个、4个至10个、6个至10个或7个至9个乙二醇单元。在一些实施例中，接头包括8个乙二醇单元。适用于接头中的可商购获得的乙二醇基团(聚乙二醇，PEG)的非限制性实例包括具有离散(“d”)聚乙二醇的所述离散聚乙二醇具有8个乙二醇重复单元。其它离散PEG单元的非限制性实例是可商购获得的，并且是本领域的技术人员已知的，如可通过Advanced ChemTech公司(Advanced ChemTech)商购获得和已知的。在一些实施例中，接头包含式：
-HN-PEG-C(O)-XAA-
其中PEG具有1-50个乙二醇单元，并且XAA是氨基酸序列。在一些实施例中，PEG具有1-10个乙二醇单元、约4-10个乙二醇单元或约7-9个乙二醇单元。在一些实施例中，PEG具有8个乙二醇单元。
在一些实施例中，接头包含式：
-HN-PEG-C(O)-XAA-
其中PEG具有1-50个乙二醇单元，并且XAA是氨基酸序列，条件是XAA不是Val-Cit或Phe-Lys。在一些实施例中，PEG具有1-10个乙二醇单元、约4-10个乙二醇单元或约7-9个乙二醇单元。在一些实施例中，PEG具有8个乙二醇单元。
在一些实施例中，接头(例如，LA)包含式：
-HN-PEG-(CH2)1-5-C(O)-XAA-
其中PEG具有1-50个乙二醇单元，并且XAA是氨基酸序列。在一些实施例中，PEG具有1-10个乙二醇单元、约4-10个乙二醇单元或约7-9个乙二醇单元。在一些实施例中，PEG具有8个乙二醇单元。在一些实施例中，p是8。
在一些实施例中，接头(例如，LA)包含式：
-HN-PEG-(CH2)1-5-C(O)-XAA-
其中PEG具有1-50个乙二醇单元，并且XAA是氨基酸序列，条件是XAA不是Val-Cit或Phe-Lys。在一些实施例中，PEG具有1-10个乙二醇单元、约4-10个乙二醇单元或约7-9个乙二醇单元。在一些实施例中，PEG具有8个乙二醇单元。
在一些实施例中，接头(例如，LA)包含式：
-HN-PEG-(CH2)1-3-C(O)-XAA-
其中PEG具有1-50个乙二醇单元，并且XAA是氨基酸序列。在一些实施例中，PEG具有1-10个乙二醇单元、约4-10个乙二醇单元或约7-9个乙二醇单元。在一些实施例中，PEG具有8个乙二醇单元。在一些实施例中，p是8。
在一些实施例中，接头(例如，LA)包含式：
-HN-PEG-(CH2)1-3-C(O)-XAA-
其中PEG具有1-50个乙二醇单元，并且XAA是氨基酸序列，条件是XAA不是Val-Cit或Phe-Lys。在一些实施例中，PEG具有1-10个乙二醇单元、约4-10个乙二醇单元或约7-9个乙二醇单元。在一些实施例中，PEG具有8个乙二醇单元。
在一些实施例中，接头(例如，LA)包含式：
-HN-PEG-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中PEG具有1-50个乙二醇单元，并且XAA是氨基酸序列。在一些实施例中，PEG具有1-10个乙二醇单元、约4-10个乙二醇单元或约7-9个乙二醇单元。在一些实施例中，PEG具有8个乙二醇单元。
在一些实施例中，接头(例如，LA)包含式：
-HN-PEG-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中PEG具有1-50个乙二醇单元，并且XAA是氨基酸序列，条件是XAA不是Val-Cit或Phe-Lys。在一些实施例中，PEG具有1-10个乙二醇单元、约4-10个乙二醇单元或约7-9个乙二醇单元。在一些实施例中，PEG具有8个乙二醇单元。
在另一个非限制性实例中，接头包括亚烷基链和/或氨基酸序列。在一些实施例中，接头包含式：
-[CH2]0-12-XAA-
其中XAA是氨基酸序列；并且接头包括0个、1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个或12个-CH2-单元。
在另一个非限制性实例中，接头包括亚烷基链和/或氨基酸序列。在一些实施例中，接头包含式：
-[CH2]0-12-XAA-
其中XAA是氨基酸序列；并且接头包括0个、1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个或12个-CH2-单元，条件是XAA不是Val-Cit或Phe-Lys。
在一些实施例中，接头包含式：
-[CH2]0-12-XAA-
其中XAA是氨基酸序列；并且接头包括0个、1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个或12个-CH2-单元，条件是XAA不是Val-Cit或Phe-Lys。
在一些实施例中，接头包含式：
-HN-PEG8-C(O)-Val-Ala-
其中PEG具有8个乙二醇单元。
在一些实施例中，接头包含式：
-HN-PEG8-(CH2)1-5-C(O)-Val-Ala-
其中PEG具有8个乙二醇单元。
在一些实施例中，接头包含式：
-HN-PEG8-(CH2)1-3-C(O)-Val-Ala-
其中PEG具有8个乙二醇单元。
在一些实施例中，接头包含式：
-HN-PEG8-(CH2)2-C(O)-Val-Ala-
其中PEG具有8个乙二醇单元。
在一些实施例中，接头还包括将乙二醇部分与氨基酸序列连接或将乙二醇或氨基酸序列与靶向剂(例如，抗体或抗体结合片段)或药物部分连接的各种其它连接基团。例如，氨基酸序列可以通过4-氨基羧酸苄酯基团与药物部分连接。在一些实施例中，乙二醇部分可以直接与靶向剂(例如，抗体或抗体结合片段)连接。在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，HN基团直接与靶向剂(例如，抗体或抗体结合片段)连接。
在实施例中，接头是或包含：
(i)(ii)(iii)(iv)
(v)(vi)(vii)
(viii](ix)
(x)或(xi)
其中XAA是氨基酸序列；并且K2是-[CH2CH2O]0-50-或-[CH2]0-12-。在一些实施例中，接头在任一方向上附接到靶向剂(例如，抗体或抗体结合片段)和药物部分。在一些实施例中，接头是(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(vi)、(viii)或(ix)。
在实施例中，接头是或包含：
(i)(ii)(ii)(iv)
(v)(vi)(vii)
(viii)(ix)
(x)或(xi)
其中XAA是氨基酸序列；并且K2是-[CH2CH2O]0-50-[CH2]0-12-C(O)-。在一些实施例中，接头在任一方向上附接到靶向剂(例如，抗体或抗体结合片段)和药物部分。在一些实施例中，接头是(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(vi)、(viii)或(ix)。
在一些实施例中，接头是或包含：
(iv)(viii)
或(x)
在一些实施例中，接头进一步包含1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、15个、16个、19个、20个、23个、24个、35个、36个、37个、48个、49个或50个乙二醇单元。在一些实施例中，接头包含0个、1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个或12个-CH2-单元。在一些实施例中，HN基团直接与靶向剂(例如，抗体或抗体结合片段)连接。
在一些实施例中，接头包含氨基酸部分，所述氨基酸部分包括任何合适数量的如上所述的氨基酸部分。在一非限制性实例中，氨基酸序列XAA包括1个至100个氨基酸部分、或1个至10个氨基酸部分或1个至5个氨基酸部分。在一些实施例中，接头包括1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个氨基酸部分。在一些实施例中，接头包括2个氨基酸部分。在一些实施例中，XAA是缬氨酸-丙氨酸。
在一些实施例中，氨基酸序列XAA是：
在一些实施例中，氨基酸序列XAA是：
在一些实施例中，接头包含一个或多个选自以下的组：C1-C6烷基、C＝O、-NH-、乙二醇、任选地2-10个乙二醇单元、缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)、6-马来酰亚胺基己酰基(mc)、6-琥珀酰亚胺基己酰基、6-(2,5-二氧代-3λ3-吡咯烷-1-基)己酰基、甲氧基-聚乙二醇马来酰亚胺6(MalPeg6)、对氨基苄基氨基甲酸酯(PABC)、二甲基氨基乙醇(DMAE)、3-马来酰亚胺基丙酰基(MP)、3-琥珀酰亚胺基丙酰基、3-(2,5-二氧代-3λ3-吡咯烷-1-基)丙酰基、经水解的Peg-马来酰亚胺、经水解的马来酰亚胺、经水解的琥珀酰亚胺、缬氨酸-丙氨酸(Val-Ala)、丙氨酸-苯丙氨酸(ala-phe)、对氨基苄氧基羰基(PAB)、4-(2-吡啶基硫代)戊酸N-琥珀酰亚胺酯(SPP)、4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1羧酸N-琥珀酰亚胺酯(SMCC)、(4-碘代-乙酰基)氨基苯甲酸N-琥珀酰亚胺酯(SIAB)、6-马来酰亚胺基己酰基-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄氧基羰基(mc-val-cit-PAB)和6-马来酰亚胺基己酰基-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄基氨基甲酸酯(mc-val-cit-PABC)和氨基酸，任选地(D)-缬氨酸、(L)-缬氨酸、(D)-丙氨酸和/或(L)-丙氨酸和马来酰亚胺。
在一些实施例中，接头包含C1-C6烷基、C＝O、-NH-、聚乙二醇(PEG)、任选地2-10个PEG基团、氨基酸、任选地(D)-缬氨酸、(L)-缬氨酸、(D)-丙氨酸和/或(L)-丙氨酸和马来酰亚胺、琥珀酰亚胺或2,5-二氧代-3λ3-吡咯烷-1-基中的一种或多种。在一些实施例中，接头包含缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)和/或由其组成。在一些实施例中，接头包含缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)-对氨基苄氧基羰基(PAB)和/或由其组成。
在一些实施例中，接头包含一个或多个能够与靶向剂反应的反应性部分和/或靶向剂(例如抗体或抗体片段)。反应性部分的非限制性实例包括叠氮化物、炔烃、双砜、碳酰肼、肼、羟胺、碘乙酰胺、异硫氰酸酯、马来酰亚胺、膦、吡啶并哒嗪、半酰肼、琥珀酰亚胺基酯、磺基二氯苯酚酯、磺酰卤化物、磺基琥珀酰亚胺基酯、4-磺基四氟苯基酯、四氟苯基酯、噻唑和NHNH2。靶向剂的非限制性实例包括蛋白质、蛋白质的一部分、多肽、核酸、激素、抗体或抗体片段。在一些实施例中，靶向剂是抗体或抗体片段。
在一些实施例中，接头包含R*，其中R*是能够与靶向剂反应的反应性部分、将接头与靶向剂连接的连接部分，或者是靶向剂。在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
R*-L
其中R*是反应性部分、连接部分或靶向剂。
在一些实施例中，R*是反应性部分，并且能够与如醛、胺、二硫化物、酮、硫醇等官能团在靶向剂中反应或在施陶丁格反应(Staudinger reaction)、皮克特-施彭格勒反应(Pictet-Spengler reaction)和/或点击化学中与靶向剂反应。对于一些反应性部分，使用合适的偶联试剂以使反应性部分与靶向剂反应，例如在R*是羧酸的情况下，可以使用碳二亚胺偶联试剂。在一些实施例中，R*选自叠氮化物、炔烃、双砜、碳酰肼、羟胺、碘乙酰胺、异硫氰酸酯、马来酰亚胺、膦、半酰肼、琥珀酰亚胺基酯和磺酰卤化物。
在一些实施例中，R*是或包含马来酰亚胺：
在一些实施例中，R*是或包含双砜。在一些实施例中，双砜是或包含在一些实施例中，双砜是或包含
在一些实施例中，R*是或包含叠氮化物、炔烃、双砜、碳酰肼、羟胺、碘乙酰胺、异硫氰酸酯、马来酰亚胺、膦、半酰肼、琥珀酰亚胺基酯和磺酰卤化物。
其它化学物的非限制性实例已知用于将化合物附接到抗体。US 7,595,292(Brocchini等人)提及与硫在抗体的二硫键中形成硫酯的接头。US 7,985,783(Carico等人)提及将醛残基引入到抗体中，所述抗体用于将化合物与抗体偶联，所有这些文献通过引用以其整体并入本文。
在一些实施例中，R*是靶向剂，其中所述靶向剂选自蛋白质、蛋白质的一部分、肽、核酸、激素、抗体或抗体片段。在一些实施例中，靶向剂与肿瘤相关抗原、癌症干细胞相关抗原或病毒抗原结合。
在一些实施例中，靶向剂选自蛋白质、蛋白质的一部分、多肽、核酸、抗体或抗体片段。在一些实施例中，靶向剂是抗体或抗体片段。在一些实施例中，靶向剂是抗体。
在各个实施例中，靶向剂可以与选自以下的靶标结合：急性髓系白血病(AML M4)细胞、急性早幼粒细胞性白血病细胞、急性淋巴母细胞性白血病细胞、急性淋巴细胞性白血病细胞、慢性淋巴细胞性白血病细胞、慢性髓系白血病细胞、慢性T细胞淋巴细胞性白血病、骨髓增生异常综合征细胞、多发性骨髓瘤细胞、前列腺癌细胞、肾细胞腺癌细胞、胰腺腺癌细胞、肺癌细胞或胃腺癌细胞、胃腺癌细胞、乳腺癌细胞、结肠癌细胞、黑色素瘤细胞、甲状腺癌细胞、卵巢癌细胞、膀胱癌细胞、肝癌细胞、头颈癌细胞、食管癌细胞、霍奇金氏淋巴瘤细胞、非霍奇金氏淋巴瘤细胞、间皮瘤细胞、神经母细胞瘤细胞、神经内分泌肿瘤细胞、神经纤维瘤病1型(NF1)细胞、神经纤维瘤病2型(NF2)细胞或骨肉瘤细胞。
在一些实施例中，反应性部分和/或靶向剂进一步包含连接部分。在一些实施例中，连接部分附接到反应性部分和/或靶向剂和接头，以将反应性部分和/或靶向剂与接头连接。在一些实施例中，连接部分包含一个或多个选自以下的组：-[CH2]0-12、-[CH2CH2O]0-50-和-[CH2]0-12-C(O)NH-。
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。在一些实施例中，接头LA与药物部分缀合。
在一些实施例中，接头LA包含下式或由其组成：
-[CH2CH2O]p-XAA-
其中XAA是氨基酸序列，并且p是0至50的整数。在一些实施例中，接头LA进一步包含
在一些实施例中，接头LA包含下式或由其组成：
-[CH2CH2O]p-(CH2)1-5-C(O)-XAA-
其中XAA是氨基酸序列，并且p是0至50的整数。在一些实施例中，接头LA进一步包含
在一些实施例中，接头LA包含下式或由其组成：
-[CH2CH2O]p-(CH2)1-3-C(O)-XAA-
其中XAA是氨基酸序列，并且p是0至50的整数。在一些实施例中，接头LA进一步包含
在一些实施例中，接头LA包含下式或由其组成：
-[CH2CH2O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中XAA是氨基酸序列，并且p是0至50的整数。在一些实施例中，接头LA进一步包含
在一些实施例中，R*是反应性部分。在一些实施例中，反应性部分是马来酰亚胺。在一些实施例中，反应性部分是双砜。
在一些实施例中，L1是包含一个或多个选自以下的组：-[CH2]0-12、-[CH2CH2O]0-50-和-[CH2]0-12-C(O)NH-。在一些实施例中，L1是[CH2]0-12-C(O)NH-。在一些实施例中，L1是-[CH2]2-C(O)NH-。在一些实施例中，-[CH2]5-C(O)NH-。
在一些实施例中，L1是[CH2]1-3-C(O)NH-。
在一些实施例中，L1进一步包含连接部分，所述连接部分是通过反应性部分与如醛、胺、二硫化物、酮、硫醇等官能团在靶向剂中反应或在靶向剂的施陶丁格反应、皮克特-施彭格勒反应和/或点击化学中反应产生的。在一些实施例中，L1进一步包含选自三唑、酰胺、硫醚和琥珀酰亚胺的连接部分。
在一些实施例中，L1进一步包含琥珀酰亚胺(即，琥珀酰亚胺基部分，“2,5-二氧代-3λ3-吡咯烷-1-基”)：
在一些实施例中，L1是或包含在一些实施例中，L1是或包含在一些实施例中，L1是或包含在一些实施例中，L1是或包含在一些实施例中，L1是或包含在一些实施例中，L1进一步包含
在一些实施例中，R*是已与如醛、胺、二硫化物、酮、硫醇等官能团在靶向剂(例如，具有式(I)的Ab)中反应或在靶向剂(例如，具有式(I)的Ab)的施陶丁格反应、皮克特-施彭格勒反应和/或点击化学中反应的反应性部分。在一些实施例中，R*选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚。
在一些实施例中，L是式-R*-L1-LA的接头。在一非限制性实例中，R*是反应性部分，已与靶向剂的官能团反应(例如，与抗体或抗体片段的半胱氨酸部分，如呈式(I)的形式的半胱氨酸部分反应)。在一些实施例中，R*选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚。
在一些实施例中，R*是琥珀酰亚胺(即，琥珀酰亚胺基部分，“2,5-二氧代-3λ3-吡咯烷-1-基”)：
在一些实施例中，R*是在一些实施例中，R*是在一些实施例中，R*是在一些实施例中，R*是在一些实施例中，R*是在一些实施例中，R*是
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，R*是靶向剂。在一些实施例中，靶向剂是抗体或抗体片段。在一些实施例中，靶向剂是抗体。
化合物
在一个方面中，本公开提供了包含一个或多个接头和一个或多个药物部分的化合物。在一些实施例中，本公开的抗体-药物缀合物(例如，式(I))包含式(III)化合物。
在一些实施例中，化合物具有式(III)或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
其中在式(III)中：
L是接头；并且
D包含药物部分。
在一些实施例中，式(III)的接头L与已与靶向部分反应以与靶向部分形成共价键的靶部分(例如，抗体或抗体结合片段，包括但不限于式(III)的Ab)反应。在一非限制性实例中，式(III)的接头L包含与抗体或抗体片段Ab反应以提供式(I)的缀合物的反应性基团R*，其中式(I)的接头L是包含R*与靶向部分的反应产物的式(III)的接头(例如，R*是式(III)中的马来酰亚胺，并且是式(I)中的琥珀酰亚胺，并且另外，L在式(I)和式(III)中的每一个中是等同的。
在一些实施例中，抗体是本文所公开的任何抗体或抗体片段。在一些实施例中，抗体或抗体片段是抗CDCP1抗体。
在一些实施例中，药物部分D选自依喜替康、Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。在一些实施例中，依喜替康包含或具有式：在一些实施例中，PDD包含或具有式：在一些实施例中，PDD包含或具有式：在一些实施例中，PDD包含或具有式：在一些实施例中，Sn-38包含或具有式：
在一些实施例中，化合物包含下式或由其组成：
在一些实施例中，化合物包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，化合物具有式(III)或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
其中在式(III)中：
L是式R*-L1-LA-的接头；
R*是马来酰亚胺；
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-；
LA是-[CH2CH2O]p-(CH2)1-5-C(O)-XAA-、任选地-[CH2CH2O]p-(CH2)1-3-C(O)-XAA-、任选地-[CH2CH2O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-，其中p是5至10的整数，并且XAA是具有2个氨基酸部分的氨基酸序列；并且
D是Dxd或Sn-38。
在一些实施例中，化合物具有式(III)或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
其中在式(III)中：
L是式R*-L1-LA-的接头；
R*是马来酰亚胺；
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-；
LA是-[CH2CH2O]p-(CH2)1-5-C(O)-XAA-、任选地-[CH2CH2O]p-(CH2)1-3-C(O)-XAA-、任选地-[CH2CH2O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-，其中p是5至10的整数，并且XAA是具有2个氨基酸部分的氨基酸序列；并且
D选自
在一些实施例中，XAA选自Val-Ala、Tyr-Arg、Phe-Arg、Val-Gln、Val-Cit、Tyr-Met、Leu-Gln、Val-Arg、Met-Thr、Phe-Gln、Thr-Thr、Val-Thr、Ala-Ala、Val-Met、Leu-Met、Ala-Asn、D-Val-D-Gln、D-Ala-D-Ala和Phe-Met。
在一些实施例中，XAA是Val-Ala。
在一些实施例中，化合物具有式(III-A)或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
R*-L1-[CH2CH2O]p-(CH2)1-5-C(O)-XAA 1-XAA 2-D
式(III-A)
其中在式(III-A)中：
R*是
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-；
p是6至20的整数；
XAA 1和XAA 2是独立选择的氨基酸部分；并且
D是拓扑异构酶抑制剂。
在一些实施例中，式(III-A)是具有式-[CH2CH2O]p-(CH2)1-3-C(O)-XAA-。在一些实施例中，式(III-A)是具有式[CH2CH2O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-。
在一些实施例中，XAA 1选自Val、Tyr、Phe、Leu、Met、Thr、Ala、D-Val和D-Ala。在一些实施例中，XAA 1是Val。
在一些实施例中，XAA 2选自Ala、Arg、Gln、Cit、Met、Thr、Asn、D-Gln和D-Ala。在一些实施例中，XAA 2是Ala。
在一些实施例中，-XAA 1-XAA 2-选自Val-Ala、Tyr-Arg、Phe-Arg、Val-Gln、Val-Cit、Tyr-Met、Leu-Gln、Val-Arg、Met-Thr、Phe-Gln、Thr-Thr、Val-Thr、Ala-Ala、Val-Met、Leu-Met、Ala-Asn、D-Val-D-Gln、D-Ala-D-Ala和Phe-Met。
在一些实施例中，-XAA 1-XAA 2-是Val-Ala。
在一些实施例中，式(III)化合物或式(III-A)化合物选自式30或3031-3064中的任一项的化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
在一些实施例中，式(III)化合物或式(III-A)化合物选自式30或3100-3118中的任一项的化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
在一个实施例(CI)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
其中在式(III)中：
L是接头；并且
D包含药物部分。
接头具有下式：
R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)1-5-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是选自以下的反应性部分：叠氮化物、炔烃、双砜、碳酰肼、羟胺、碘乙酰胺、异硫氰酸酯、马来酰亚胺、膦、半酰肼、琥珀酰亚胺基酯和磺酰卤化物。此外，R*是或包含任选地双砜，任选地双砜是或包含
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(CI)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
其中在式(III)中：
L是接头；并且
D包含药物部分。
接头具有下式：
R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)1-3-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是选自以下的反应性部分：叠氮化物、炔烃、双砜、碳酰肼、羟胺、碘乙酰胺、异硫氰酸酯、马来酰亚胺、膦、半酰肼、琥珀酰亚胺基酯和磺酰卤化物。此外，R*是或包含任选地双砜，任选地双砜是或包含
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(CIb)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
其中在式(III)中：
L是接头；并且
D包含药物部分。
接头具有下式：
R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是选自以下的反应性部分：叠氮化物、炔烃、双砜、碳酰肼、羟胺、碘乙酰胺、异硫氰酸酯、马来酰亚胺、膦、半酰肼、琥珀酰亚胺基酯和磺酰卤化物。此外，R*是或包含任选地双砜，任选地双砜是或包含
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(CII)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
其中在式(III)中：
L是接头；并且
D包含药物部分。
接头具有下式：
R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)1-5-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是选自以下的反应性部分：叠氮化物、炔烃、双砜、碳酰肼、羟胺、碘乙酰胺、异硫氰酸酯、马来酰亚胺、膦、半酰肼、琥珀酰亚胺基酯和磺酰卤化物。此外，R*是或包含任选地双砜，任选地双砜是或包含
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自：
在一个实施例(CIIa)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
其中在式(III)中：
L是接头；并且
D包含药物部分。
接头具有下式：
R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)1-3-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是选自以下的反应性部分：叠氮化物、炔烃、双砜、碳酰肼、羟胺、碘乙酰胺、异硫氰酸酯、马来酰亚胺、膦、半酰肼、琥珀酰亚胺基酯和磺酰卤化物。此外，R*是或包含任选地双砜，任选地双砜是或包含
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自：
在一个实施例(CIIb)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
其中在式(III)中：
L是接头；并且
D包含药物部分。
接头具有下式：
R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是选自以下的反应性部分：叠氮化物、炔烃、双砜、碳酰肼、羟胺、碘乙酰胺、异硫氰酸酯、马来酰亚胺、膦、半酰肼、琥珀酰亚胺基酯和磺酰卤化物。此外，R*是或包含任选地双砜，任选地双砜是或包含
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自：
在一个实施例(CIII)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
其中在式(III)中：
L是接头；并且
D包含药物部分。
接头具有下式：
R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是非极性二肽，
p是5至10的整数，例如，5、6、7、8、9或10。
R*是选自以下的反应性部分：叠氮化物、炔烃、双砜、碳酰肼、羟胺、碘乙酰胺、异硫氰酸酯、马来酰亚胺、膦、半酰肼、琥珀酰亚胺基酯和磺酰卤化物。此外，R*是或包含任选地双砜，任选地双砜是或包含
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(CIV)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
其中在式(III)中：
L是接头；并且
D包含药物部分。
接头具有下式：
R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是马来酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(CV)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
其中在式(III)中：
L是接头；并且
D包含药物部分。
接头具有下式：
R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是非极性二肽，
p是5至10的整数，例如，5、6、7、8、9或10。
R*是马来酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(CVI)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
其中在式(III)中：
L是接头；并且
D包含药物部分。
接头具有下式：
R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是选自以下的反应性部分：叠氮化物、炔烃、双砜、碳酰肼、羟胺、碘乙酰胺、异硫氰酸酯、马来酰亚胺、膦、半酰肼、琥珀酰亚胺基酯和磺酰卤化物。此外，R*是或包含任选地双砜，任选地双砜是或包含
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(CVII)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
其中在式(III)中：
L是接头；并且
D包含药物部分。
接头具有下式：
R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是选自以下的反应性部分：叠氮化物、炔烃、双砜、碳酰肼、羟胺、碘乙酰胺、异硫氰酸酯、马来酰亚胺、膦、半酰肼、琥珀酰亚胺基酯和磺酰卤化物。此外，R*是或包含任选地双砜，任选地双砜是或包含
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(CVIII)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
其中在式(III)中：
L是接头；并且
D包含药物部分。
接头具有下式：
R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是马来酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(CIX)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
其中在式(III)中：
L是接头；并且
D包含药物部分。
接头具有下式：
R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是马来酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(CX)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
如实施例(CI)至(CX)中的任一项所定义的，其中指数p是8。
在一个实施例(CXI)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
如实施例(CI)至(CX)中的任一项所定义的，其中L1是-[CH2]2-C(O)NH-。
在一个实施例(CXII)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
如实施例(CI)至(CXI)中的任一项所定义的，其中药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd和SN-38。
在一个实施例(XIII)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
如实施例(CI)至(CXII)中的任一项所定义的，其中药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd和SN-38。
在一个实施例(XIV)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
如实施例(CI)至(CXIII)中的任一项所定义的，其中药物部分是具有下式的依喜替康：
在一个实施例(CXV)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
如实施例(CI)至(CXIV)中的任一项所定义的，其中XAA不是Val-Cit或Phe-Lys。
在一个实施例(CXVI)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
其中部分L-D具有以下结构
在一个方面中，本公开提供了式(II)的缀合物：
Ab-L-
式(II)
其中Ab是抗体或抗体片段，L是接头。
本文所公开的任何抗体、抗体片段和/或接头涵盖在式(II)内。在一些实施例中，接头包含部分结构和/或由其组成，所述部分结构进一步与药物部分缀合。在一些实施例中，接头包含完整结构和/或由其组成，所述完整结构进一步与药物部分缀合。
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头具有式：
在一些实施例中，接头具有式：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合。
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含以下中的一种或多种：
(a)CDRH1，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRH2，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRH3，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
和/或(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含以下中的一种或多种：
(a)CDRL1，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRL2，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRL3，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含VH和/或包含VL，所述VH包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列和/或由其组成，所述VL包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列和/或由其组成。
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含重链和/或包含轻链，所述重链包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
抗体-药物缀合物
在一个方面中，本公开提供了一种抗体-药物缀合物，其包含一个或多个接头和一个或多个药物部分。在一些实施例中，抗体-药物缀合物包含本文所述的抗体、抗体片段、接头和/或药物部分(例如，式(II)和/或式(III))。在一些实施例中，抗体和/或抗体片段与接头-药物部分通过抗体和/或抗体片段上的含硫部分(例如，硫醇)缀合。在一些实施例中，含硫部分包含抗体和/或抗体片段的一个或多个链间二硫桥的硫部分和/或由其组成。在一非限制性实例中，使用还原剂破坏将抗体(例如，mAb)和/或抗体片段的臂保持在一起的链间二硫桥，并且接头和/或有效载荷与二硫桥的硫部分缀合。在一非限制性实例中，来自链间二硫化物的所有可用的硫醇由于抗体(例如，mAb)中存在4个链间二硫化物而被占据负载(DAR)8。在一些实施例中，抗体和/或抗体片段通过抗体和/或抗体片段上的一个或多个氨基酸残基而与接头-药物部分缀合，所述氨基酸残基包括但不限于包含含硫侧链(例如半胱氨酸和/或甲硫氨酸)的氨基酸残基。在一些实施例中，抗体和/或抗体片段通过抗体和/或抗体片段上的一个或多个半胱氨酸残基与接头-药物部分缀合。在一些实施例中，抗体和/或抗体片段通过抗体上的一个或多个半胱氨酸残基与接头-药物部分缀合。在一些实施例中，氨基酸残基是未经工程化的(例如，未经工程化的半胱氨酸残基和/或未经工程化的甲硫氨酸残基)。在一些实施例中，氨基酸残基是经工程化的(例如，经工程化的半胱氨酸残基和/或经工程化的甲硫氨酸残基)。在一些实施例中，接头选自本文所述的任何接头。在一些实施例中，药物部分选自本文所述的任何药物部分。
在一个方面中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物(ADC)：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D包含药物部分；并且
n是1至20的整数。
本文所公开的任何抗体、抗体片段、接头和/或药物部分涵盖在式(III)内。
在一些实施例中，式(I)的接头L是已经与抗体或抗体结合片段Ab反应的式(III)的接头(例如，接头包含与抗体或抗体片段Ab反应的反应性基团R*)。
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含下式或由其组成：
在一些实施例中，接头包含缬氨酸-瓜氨酸或由其组成。
在一些实施例中，药物部分D选自依喜替康、Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。在一些实施例中，依喜替康包含或具有式：在一些实施例中，PDD包含或具有式：在一些实施例中，PDD包含或具有式：在一些实施例中，PDD包含或具有式：在一些实施例中，Sn-38包含或具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式-val-cit-MMAE。
在一些实施例中，L-D具有式-val-cit。PAB-MMAE。
在一些实施例中，抗体-药物缀合物具有式(I-A)：
Ab-[L1-(CH2CH2O)p-XAA 1-XAA 2-D]n
式(I-A)
其中在式(I-A)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段；
L1是
p是6至20的整数；
XAA 1和XAA 2是独立选择的氨基酸部分；
D是拓扑异构酶抑制剂；并且
n是1至20的整数。
在一些实施例中，式(I)的缀合物或式(I-A)的缀合物选自式1030-1064中的任一项的缀合物：
在一些实施例中，式(I)的缀合物或式(I-A)的缀合物选自式1030或1100-1118中的任一项的缀合物：
在一些实施例中，n是1至10的整数。在一些实施例中，n是4至8的整数。在一些实施例中，n是2至8的整数。在一些实施例中，n是1。在一些实施例中，n是2。在一些实施例中，n是3。在一些实施例中，n是4。在一些实施例中，n是5。在一些实施例中，n是6。在一些实施例中，n是7。在一些实施例中，n是8。在一些实施例中，n是9。在一些实施例中，n是10。
在一个实施例(I)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)1-5-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(I)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)1-3-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(Ib)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(Ic)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)1-5-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自：
在一个实施例(Id)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)1-3-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自：
在一个实施例(Ie)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。药物部分选自：
在一个实施例(II)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
Ab是与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合的抗体或其结合片段。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)1-5-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。此外，R*是或包含任选地双砜，任选地双砜是或包含
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(IIa)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
Ab是与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合的抗体或其结合片段。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)1-5-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。此外，R*是或包含任选地双砜，任选地双砜是或包含
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自：
在一个实施例(IIb)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
Ab是与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合的抗体或其结合片段。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)1-5-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。此外，R*是或包含任选地双砜，任选地双砜是或包含
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自：
在一个实施例(III)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
抗体或其结合片段包含
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(IV)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
抗体或其结合片段包含
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(V)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
抗体或其结合片段Ab包含VH和/或包含VL，所述VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列和/或由其组成，所述VL包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(VI)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
抗体或其结合片段Ab包含重链和/或包含轻链，所述重链包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(VII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是非极性二肽，
p是5至10的整数，例如，5、6、7、8、9或10。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(VIII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
Ab是与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合的抗体或其结合片段。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是非极性二肽，
p是5至10的整数，例如，5、6、7、8、9或10。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(IX)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
抗体或其结合片段包含
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是非极性二肽，
p是5至10的整数，例如，5、6、7、8、9或10。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(X)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
抗体或其结合片段包含
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是非极性二肽，
p是5至10的整数，例如，5、6、7、8、9或10。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XI)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
抗体或其结合片段Ab包含VH和/或包含VL，所述VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列和/或由其组成，所述VL包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是非极性二肽，
p是5至10的整数，例如，5、6、7、8、9或10。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
抗体或其结合片段Ab包含重链和/或包含轻链，所述重链包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是非极性二肽，
p是5至10的整数，例如，5、6、7、8、9或10。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XIII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XIV)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
Ab是与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合的抗体或其结合片段。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XV)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
抗体或其结合片段包含
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XVI)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
抗体或其结合片段包含
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XVII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
抗体或其结合片段Ab包含VH和/或包含VL，所述VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列和/或由其组成，所述VL包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XVIII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
抗体或其结合片段Ab包含重链和/或包含轻链，所述重链包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是二肽，
p是0至50的整数。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XIX)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是非极性二肽，
p是5至10的整数，例如，5、6、7、8、9或10。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XX)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
Ab是与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合的抗体或其结合片段。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是非极性二肽，
p是5至10的整数，例如，5、6、7、8、9或10。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XXI)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
抗体或其结合片段包含
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是非极性二肽，
p是5至10的整数，例如，5、6、7、8、9或10。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XXII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
抗体或其结合片段包含
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是非极性二肽，
p是5至10的整数，例如，5、6、7、8、9或10。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XXIII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
抗体或其结合片段Ab包含VH和/或包含VL，所述VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列和/或由其组成，所述VL包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是非极性二肽，
p是5至10的整数，例如，5、6、7、8、9或10。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XXIV)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。
抗体或其结合片段Ab包含重链和/或包含轻链，所述重链包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是非极性二肽，
p是5至10的整数，例如，5、6、7、8、9或10。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XXV)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XVI)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
Ab是与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合的抗体或其结合片段。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XXVII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
抗体或其结合片段包含
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XXVIII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
抗体或其结合片段包含
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XXIX)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
抗体或其结合片段Ab包含VH和/或包含VL，所述VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列和/或由其组成，所述VL包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XXX)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
抗体或其结合片段Ab包含重链和/或包含轻链，所述重链包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XXXI)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XXXII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
Ab是与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合的抗体或其结合片段。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XXXIII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
抗体或其结合片段包含
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XXXIV)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
抗体或其结合片段包含
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XXXV)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
抗体或其结合片段Ab包含VH和/或包含VL，所述VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列和/或由其组成，所述VL包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XXXVI)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
抗体或其结合片段Ab包含重链和/或包含轻链，所述重链包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。
L1是-[CH2]0-12-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XXXVII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XXXVIII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
Ab是与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合的抗体或其结合片段。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XXXIX)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
抗体或其结合片段包含
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XL)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
抗体或其结合片段包含
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XLI)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
抗体或其结合片段Ab包含VH和/或包含VL，所述VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列和/或由其组成，所述VL包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XLII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
抗体或其结合片段Ab包含重链和/或包含轻链，所述重链包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
Alk表示C2-C4-亚烷基，
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XLIII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XLIV)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
Ab是与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合的抗体或其结合片段。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XLV)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
抗体或其结合片段包含
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XLVI)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
抗体或其结合片段包含
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XLVII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
抗体或其结合片段Ab包含VH和/或包含VL，所述VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列和/或由其组成，所述VL包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列和/或由其组成。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XLVIII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是接头；
D是药物部分；并且
n是1至10的整数，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
抗体或其结合片段Ab包含重链和/或包含轻链，所述重链包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
接头具有下式：
-R*-L1-LA-
其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂。
接头LA具有下式：
-[CH2-CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中
XAA是Val-Ala，
p是7或8。
R*是琥珀酰亚胺。
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-。
药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
在一个实施例(XLIX)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
如实施例(I)至(XLVIII)中的任一项所定义的，其中指数p是8。
在一个实施例(L)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
如实施例(I)至(XLIX)中的任一项所定义的，其中L1是-[CH2]2-C(O)NH-。
在一个实施例(LI)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
如实施例(I)至(L)中的任一项所定义的，其中药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd和SN-38。
在一个实施例(LII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
如实施例(I)至(L)中的任一项所定义的，其中药物部分选自具有下式的依喜替康：
Dxd和SN-38。
在一个实施例(LII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
如实施例(I)至(LI)中的任一项所定义的，其中药物部分是具有下式的依喜替康：
在一个实施例(LIII)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
如实施例(I)至(LII)中的任一项所定义的，其中XAA不是Val-Cit或Phe-Lys。
在一个实施例(LIV)中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中部分–[L-D]n具有以下结构
其中部分Ab-如实施例(I)至(VI)中的任一项所定义的，并且其中所述部分Ab-与马来酰亚胺基团反应。
在一个实施例(LV)中，本公开提供了一种式(III)化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、异构体或混合物：
L-D
式(III)
其中在式(III)中：
L是接头；并且
D包含药物部分，
实施例(I)至(LIV)中的任一项的对应于式(I)的所述式(III)，其中Ab不存在，并且n是1。
在实施例中，本公开提供了一种具有式(I)的抗体-药物缀合物(ADC)：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab是抗体或抗体结合片段；
L是具有式-R*-L1-LA-的接头，其中LA是接头，L1是连接部分，并且R*是反应性部分或靶向剂；
D是药物部分；并且
n是1至20的整数。在实施例中，R*是选自琥珀酰亚胺、三唑、酰胺和硫醚的反应性部分。在实施例中，R*是琥珀酰亚胺。在实施例中，L1是[CH2]0-12-C(O)NH-。在一些实施例中，接头LA具有式-[Alk-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-。在一些实施例中，接头LA具有式-[CH2CH2-O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-，其中p是5至10的整数。在实施例中，XAA选自Val-Ala、Tyr-Arg、Phe-Arg、Val-Gln、Val-Cit、Tyr-Met、Leu-Gln、Val-Arg、Met-Thr、Phe-Gln、Thr-Thr、Val-Thr、Ala-Ala、Val-Met、Leu-Met、Ala-Asn、D-Val-D-Gln、D-Ala-D-Ala和Phe-Met。在一些实施例中，XAA是Val-Ala。在一些实施例中，L1是[CH2]1-3-C(O)NH-。在一些实施例中，L1是-[CH2]2-C(O)NH-。在一些实施例中，p是7或8。在一些实施例中，p是8。
在一些实施例中，抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合。
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含以下中的一种或多种：
(a)CDRH1，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRH2，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRH3，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
和/或(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含以下中的一种或多种：
(a)CDRL1，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRL2，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRL3，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含VH和/或包含VL，所述VH包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列和/或由其组成，所述VL包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列和/或由其组成。
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含重链和/或包含轻链，所述重链包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含以下中的一种或多种：
(a)CDRH1，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRH2，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRH3，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
和/或(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含以下中的一种或多种：
(a)CDRL1，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRL2，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRL3，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成，并且药物部分D是或包含依喜替康。
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含以下中的一种或多种：
(a)CDRH1，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRH2，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRH3，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
和/或(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含以下中的一种或多种：
(a)CDRL1，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRL2，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRL3，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成，并且其中所述药物部分D是或包含Dxd。
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含以下中的一种或多种：
(a)CDRH1，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRH2，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRH3，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
和/或(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含以下中的一种或多种：
(a)CDRL1，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRL2，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRL3，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成，并且其中药物部分D是或包含MMAE。在一些实施例中，接头是或包含val-cit。在一些实施例中，接头包含val-cit-PAB。
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含以下中的一种或多种：
(a)CDRH1，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRH2，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRH3，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
和/或(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含以下中的一种或多种：
(a)CDRL1，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRL2，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRL3，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成，并且其中药物部分D是或包含吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。在一些实施例中，PDD包含或具有式：在一些实施例中，PDD包含或具有式：在一些实施例中，PDD包含或具有式：
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含以下中的一种或多种：
(a)CDRH1，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRH2，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRH3，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
和/或(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含以下中的一种或多种：
(a)CDRL1，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)CDRL2，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)CDRL3，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成，并且其中所述药物部分D是或包含Sn-38。
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列和/或由其组成，所述VL包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列和/或由其组成，并且其中药物部分D是或包含依喜替康。
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列和/或由其组成，所述VL包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列和/或由其组成，并且其中药物部分D是或包含Dxd。
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列和/或由其组成，所述VL包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列和/或由其组成，并且其中药物部分D是或包含MMAE。在一些实施例中，接头是或包含val-cit。在一些实施例中，接头包含val-cit-PAB。
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列和/或由其组成，所述VL包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列和/或由其组成，并且其中药物部分D是或包含吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。在一些实施例中，PDD包含或具有式：在一些实施例中，PDD包含或具有式：在一些实施例中，PDD包含或具有式：
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列和/或由其组成，所述VL包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列和/或由其组成，并且其中药物部分D是或包含Sn-38。
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含重链和轻链，所述重链包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列，并且其中药物部分D是或包含依喜替康。
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含重链和轻链，所述重链包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列，并且其中药物部分D是或包含Dxd。
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含重链和轻链，所述重链包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列，并且其中药物部分D是或包含MMAE。
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含重链和轻链，所述重链包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列，并且其中药物部分D是或包含吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。在一些实施例中，PDD包含或具有式：在一些实施例中，PDD包含或具有式：在一些实施例中，PDD包含或具有式：
在一些实施例中，抗体或其结合片段Ab包含重链和轻链，所述重链包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列，并且其中药物部分D是或包含Sn-38。
在一些实施例中，抗体是本文所公开的任何抗体或其结合片段。在一些实施例中，抗体或其结合片段优先地与包含SEQ ID NO:9的多肽的任何部分结合。在一些实施例中，抗体或其结合片段是抗CDCP1抗体。
在一些实施例中，抗CDCP1抗体包含CDR，所述CDR选自由SEQ ID NO:2、3、4、6、7和8组成的组。
在一些实施例中，缀合物是ADC1。在一些实施例中，缀合物是ADC2。在一些实施例中，缀合物是ADC3。在一些实施例中，缀合物是ADC4。在一些实施例中，缀合物是ADC5。
在一些实施例中，如本文所述的抗体药物缀合物与CDCP1在pH 7.4下以或小于约1000nM、约500nM、约400nM、约300nM、约200nM、约180nM、约160nM、约140nM、约120nM或约100nM的KD值结合。
在一些实施例中，可以产生或生成具有以下的ADC：(a)抗体或其结合片段(例如，与CDCP1结合的抗体或其结合片段)；(b)接头以及(c)药物部分。药物-抗体比率(DAR)或药物负荷表示每种抗体所缀合的药物(D)分子和/或部分的数量。在一些实施例中，附接到抗体的接头-药物部分的数量可以是适于开发ADC的任何数量。在一些实施例中，每种抗体的接头-药物部分的数量在约1至约10的范围内。在一些实施例中，每种抗体的接头-药物部分的数量为约10。在一些实施例中，每种抗体的接头-药物部分的数量为约9。在一些实施例中，每种抗体的接头-药物部分的数量为约8。在一些实施例中，每种抗体的接头-药物部分的数量为约7。在一些实施例中，每种抗体的接头-药物部分的数量为约6。在一些实施例中，每种抗体的接头-药物部分的数量为约5。在一些实施例中，每种抗体的接头-药物部分的数量为约4。在一些实施例中，每种抗体的接头-药物部分的数量为约3。在一些实施例中，每种抗体的接头-药物部分的数量为约2。在一些实施例中，每种抗体的接头-药物部分的数量为约1。在一些实施例中，每种抗体的接头-药物部分的数量大于4，如每种抗体5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个或大于12个接头-药物部分。用于确定DAR的非限制性实例包括各种常规手段，如UV光谱法、质谱法、ELISA测定、放射性测量方法、疏水相互作用色谱法(HIC)、电泳和HPLC。在一些实施例中，本公开的ADC的DAR等同于式(I)中提及的“n”。
在一些实施例中，本公开的抗体药物缀合物(ADC)(例如，包含通过接头与药物部分缀合的抗体和/或抗体片段(如但不限于CDCP1抗体和/或抗体片段)的本公开的ADC)能够被内化。在另一个实施例中，本公开的抗体药物缀合物(ADC)能够诱导内源性地表达CDCP1的细胞的细胞死亡。
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式：
在一些实施例中，L-D具有式-val-cit-MMAE。
在一些实施例中，L-D具有式-val-cit-PAB-MMAE。
在一些实施例中，本文所述的抗体-药物缀合物(例如，式(I))能够在体内形成代谢物。在一些实施例中，抗体-药物缀合物能够在体外形成代谢物。
在一些实施例中，本文所述的抗体-药物缀合物(例如，式(I))能够形成式300的代谢物：
在一些实施例中，本文所述的抗体-药物缀合物(例如，式(III))能够形成式301的代谢物：
在一些实施例中，本文所述的抗体-药物缀合物(例如，式(III))能够形成式302的代谢物：
在一些实施例中，本文所述的抗体-药物缀合物(例如，式(I))能够形成式303的代谢物：
在一些实施例中，式300的代谢物能够形成式301的代谢物。在一些实施例中，式300的代谢物能够形成式302的代谢物。在一些实施例中，式300的代谢物能够形成式303的代谢物。在一些实施例中，式301的代谢物能够形成式302的代谢物。在一些实施例中，式301的代谢物能够形成式303的代谢物。在一些实施例中，式300的代谢物能够形成式301的代谢物，并且式301的代谢物能够形成式302的代谢物。在一些实施例中，式300的代谢物能够形成式301的代谢物，式301的代谢物能够形成式302的代谢物，并且式302的代谢物能够形成式303的代谢物。
治疗方法
在一个方面中，本文所述的缀合物(例如ADC)、化合物和组合物(例如，式(I)、式(II)和/或式(III))可以在用于治疗疾病的方法中使用。在一些实施例中，疾病是癌症。在一个实施例中，疾病是过度增殖性疾病。在一些实施例中，过度增殖性病症是癌症。在一些实施例中，癌症是胰腺癌(pancreatic cancer)、乳腺癌(breast cancer)、前列腺癌(prostate cancer)、淋巴瘤、皮肤癌、结肠癌(colon cancer)、黑色素瘤、恶性黑色素瘤、卵巢癌(ovarian cancer)、脑癌、原发性脑癌、头颈癌(head-neck cancer)、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、肝癌、膀胱癌(bladder cancer)、非小细胞肺癌、头颈癌(head or neckcarcinoma)、乳腺癌(breast carcinoma)、卵巢癌(ovarian carcinoma)、肺癌、小细胞肺癌(small-cell lung carcinoma)、威尔姆氏瘤、宫颈癌、睾丸癌、膀胱癌(bladdercarcinoma)、胰腺癌(pancreatic carcinoma)、胃癌、结肠癌(colon carcinoma)、前列腺癌(prostatic carcinoma)、泌尿生殖系统癌、甲状腺癌、食管癌、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、肾上腺癌、肾细胞癌、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、恶性胰腺胰岛素瘤、恶性类癌、绒毛膜癌、蕈样肉芽肿、恶性高钙血症、宫颈增生、白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、毛细胞性白血病、神经母细胞瘤、横纹肌肉瘤、卡波西氏肉瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤、软组织肉瘤、成骨肉瘤、原发性巨球蛋白血症或视网膜母细胞瘤等。在其它实施例中，所述癌症是听神经瘤、腺癌、血管肉瘤、星形细胞瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌(TNBC)、支气管原癌、宫颈癌、脊索瘤、绒毛膜癌、结肠癌、结直肠癌、颅咽管瘤、囊腺癌、胚胎性癌、内皮癌、室管膜瘤、上皮癌、食道癌、尤文氏瘤、纤维肉瘤、胃癌(gastric cancer)、多形性胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、头颈癌、血管母细胞瘤、肝细胞瘤、肾癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、肺癌、淋巴管内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、髓样癌、髓母细胞瘤、黑色素瘤、脑膜瘤、间皮瘤、粘液肉瘤、鼻癌、神经母细胞瘤、少突神经胶质瘤、口腔癌、成骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳头状腺癌、乳头状癌、松果体瘤、前列腺癌、横纹肌肉瘤、直肠癌、肾细胞癌、视网膜母细胞瘤、肉瘤、皮脂腺癌、精原细胞瘤、皮肤癌、鳞状细胞癌、胃癌(stomach cancer)、汗腺癌、滑膜瘤、睾丸癌、小细胞肺癌、喉癌、子宫癌、威尔姆氏瘤、血癌、急性红白血病性白血病、急性淋巴母细胞性B细胞白血病、急性淋巴母细胞性T细胞白血病、急性淋巴母细胞性白血病、急性巨核细胞母细胞性白血病、急性单核母细胞性白血病、急性髓母细胞性白血病、急性髓单核细胞性白血病、急性非淋巴细胞性白血病、急性早幼粒细胞性白血病、急性未分化性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、毛细胞性白血病、多发性骨髓瘤、重链病、霍奇金氏病、多发性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、真性红细胞增多症或华氏巨球蛋白血症。在一些实施例中，疾病是三阴性乳腺癌(TNBC)。
在一些实施例中，与乳腺癌MDA-MB-231模型中的未经处理的对照中的平均肿瘤体积相比，如本文所述的抗体药物缀合物使平均肿瘤体积减小至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在一些实施例中，与乳腺癌患者源性异种移植模型中的未经处理的对照中的平均肿瘤体积相比，抗体药物缀合物使平均肿瘤体积减小至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
在一些实施例中，治疗癌症的方法包含向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的抗体-药物缀合物(例如，式(I))或其药物组合物。
在一些实施例中，在将治疗有效量的抗体-药物缀合物施用于受试者后，所述抗体-药物缀合物转化为代谢物。
在一些实施例中，在将所述治疗有效量的所述抗体-药物缀合物施用于所述受试者后约24小时，少于约75％的所述抗体-药物缀合物转化为代谢物。在一些实施例中，在将治疗有效量的抗体-药物缀合物施用于受试者后约24小时，少于约10％、少于约15％、少于约20％、少于约25％、少于约30％、少于约35％、少于约40％、少于约45％、少于约50％、少于约55％、少于约60％、少于约65％或少于约70％的抗体-药物缀合物转化为代谢物。
在一些实施例中，在将治疗有效量的抗体-药物缀合物施用于受试者后约24小时，约10％至少于约50％的抗体-药物缀合物转化为代谢物。在一些实施例中，在将治疗有效量的抗体-药物缀合物施用于受试者后约24小时、约36小时、约48小时、约60小时、约72小时或约84小时，少于约50％的抗体-药物缀合物转化为代谢物。在一些实施例中，在将所述治疗有效量的所述抗体-药物缀合物施用于所述受试者后约24小时，少于约50％的所述抗体-药物缀合物转化为代谢物。
在一些实施例中，在将治疗有效量的抗体-药物缀合物施用于受试者后约24小时、约36小时、约48小时、约60小时、约72小时、约84小时或约96小时，约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％或约75％的抗体-药物缀合物转化为代谢物。在一些实施例中，在将治疗有效量的抗体-药物缀合物施用于受试者后约36小时至约96小时，约10％至约50％的抗体-药物缀合物转化为代谢物。在一些实施例中，在将治疗有效量的抗体-药物缀合物施用于受试者后约36小时、约48小时、约60小时、约72小时、约84小时或约96小时，约50％的抗体-药物缀合物转化为代谢物。在一些实施例中，在将所述治疗有效量的所述抗体-药物缀合物施用于所述受试者后约96小时，约50％的所述抗体-药物缀合物转化为代谢物。
在一些实施例中，在将治疗有效量的抗体-药物缀合物施用于受试者后，抗体-药物缀合物转化为式300的代谢物：
在一些实施例中，在将治疗有效量的抗体-药物缀合物施用于受试者后，抗体-药物缀合物转化为式301的代谢物：
在一些实施例中，在将治疗有效量的抗体-药物缀合物施用于受试者后，抗体-药物缀合物转化为式302的代谢物：
在一些实施例中，将式300的代谢物转化为式301的代谢物。在一些实施例中，将式300的代谢物转化为式302的代谢物。在一些实施例中，将式301的代谢物转化为式302的代谢物。在一些实施例中，将式300的代谢物转化为式301的代谢物，并且将式301的代谢物转化为式302的代谢物。
在一些实施例中，在体内将所述抗体-药物缀合物转化为代谢物。在一些实施例中，在体外将所述抗体-药物缀合物转化为代谢物。
在一非限制性实例中，转化为代谢物的抗体-药物缀合物的百分比基于施用于受试者的抗体-药物缀合物的治疗有效量。抗体-药物缀合物向代谢物的转化可以使用本领域已知的任何方法来确定。可用于确定转化的方法的非限制性实例包括质谱法。
组合疗法/缀合剂
如本文所述，在各个实施例中，本发明涉及抗肿瘤剂，所述抗肿瘤剂可以是本发明的缀合物和/或化合物的一部分或可以用于本发明所涵盖的各种组合疗法的上下文中。
组合疗法涵盖施用抗体-药物缀合物和另一种治疗剂作为特定治疗方案的一部分，所述特定治疗方案任选地包括维持阶段，所述部分旨在从这些治疗剂的共同作用中提供有益效果。组合的有益效果包括但不限于由治疗剂的组合产生的药代动力学或药效动力学共同作用。这些治疗剂的组合施用通常是在限定的时间段(通常数分钟、数小时、数天或数周，这取决于所选择的组合)内进行的。组合疗法通常不旨在涵盖施用这些治疗剂中的两种或更多种作为单独的单一疗法方案的一部分，所述疗法方案偶然地并且任意地产生本发明的组合。
组合疗法涵盖以顺序方式施用这些治疗剂，即，其中每种治疗剂在不同时间施用，以及这些治疗剂或治疗剂中的至少两种治疗剂以基本上同时的方式施用。可以通过任何适当的途径来实现每种治疗剂的顺序施用或基本上同时施用，所述途径包括但不限于口服途径、静脉内途径、肌肉内、皮下途径和穿过粘膜组织的直接吸收。可以通过相同途径或通过不同途径施用所述治疗剂。例如，可以口服施用第一治疗剂(例如，化学治疗剂)，并且可以静脉内施用第二药剂(例如，ADC)。此外，可以通过静脉内注射施用所选择的组合的第一治疗剂，同时可以口服施用所述组合的其它治疗剂。可替代地，例如，两种治疗剂可以通过静脉内注射或皮下注射来施用。
在本公开中，除非另有说明，否则术语顺序方式的特征在于常规顺序或次序，例如，在剂量方案包括施用ADC和化学治疗剂的情况下，顺序给药方案可以包括在施用化学治疗剂之前、同时、基本上同时或之后施用ADC，但两种药剂都将以常规顺序或次序施用。除非另有说明，否则术语分开意指保持一种药剂与另一种药剂分开。除非另有说明，否则术语同时意指同时发生或完成，即，同时施用本发明的化合物。术语基本上同时意指化合物在彼此几分钟内(例如，在彼此10分钟内)施用，并且旨在涵盖联合施用以及连续施用，但如果施用是连续的，则其在时间上分开仅很短的时间段(例如，医药从业者单独地施用两种化合物所花费的时间)。如本文所用，并行施用和基本上同时施用可互换使用。顺序施用是指ADC和化学治疗剂在时间上分开施用。
在一些实施例中，化学治疗剂选自烷基化剂，如塞替派(thiotepa)和环磷酰胺(cyclosphosphamide)；磺酸烷基酯，如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮杂环丙烷，如苯佐替哌(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedopa)和乌瑞替派(uredopa)；乙烯亚胺和甲基蜜胺，包括六甲蜜胺(altretamine)、三亚乙基蜜胺(triethylenemelamine)、三亚乙基磷酰胺(trietylenephosphoramide)、三亚乙基硫代磷酰胺(triethiylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylolomelamine)；番蒸枝内酯类(acetogenins)(例如，布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；喜树碱(包括合成类似物拓扑替康)；苔藓抑素(bryostatin)；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；念珠藻素(例如，念珠藻素1和念珠藻素8)；海兔毒素；倍癌霉素(包括合成类似物KW-2189和CB 1-TM1)；五加素；水鬼蕉碱(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵抑素(spongistatin)；氮芥类(nitrogen mustard)，如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlomaphazine)、氯磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、盐酸甲氧氮芥(mechlorethamine oxidehydrochloride)、美法仑(melphalan)、新恩比兴(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲洛磷胺(trofosfamide)、嘧啶氮芥(uracil mustard)；亚硝基脲(nitrosourea)，如卡莫司汀(carmustine)、氯脲霉素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，如烯二炔类抗生素(例如，卡奇霉素，尤其是卡奇霉素γII和卡奇霉素ωII)(参见，例如，《德国应用化学国际版英文版(Agnew,Chem.Intl.Ed.Engl.)》,33:183-186(1994))；达内霉素(dynemicin)，包括达内霉素A；二膦酸酯类(bisphosphonate)，如氯膦酸盐(clodronate)；埃斯培拉霉素；以及新制癌菌素发色团(neocarzinostatin chromophore)和相关的色素蛋白烯二炔抗生素发色团)、阿克拉霉素(aclacinomysin)、放线菌素(actinomycin)、安曲霉素(authramycin)、重氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、卡拉比星(carabicin)、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycinis)、放线菌素D、柔红霉素、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉-多柔比星和脱氧多柔比星(deoxydoxorubicin))、表柔比星、依索比星(esorubicin)、伊达比星、马塞罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素(mitomycin)如丝裂霉素C、霉酚酸(mycophenolic acid)、诺加霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(porfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、切拉霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链脲菌素(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物类，如氨甲蝶呤(methotrexate)和5-氟脲嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，如二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、蝶罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮杂尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双脱氧尿苷(dideoxyuridine)、脱氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)氟脲苷(floxuridine)；雄激素，如卡普睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone)；抗肾上腺类，如氨鲁米特(minoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，如亚叶酸(folinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；贝拉布昔(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依氟鸟氨酸(elformthine)；依利醋铵(elliptinium acetate)；埃博霉素；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓(gallium nitrate)；羟基脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；美登素类化合物，如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK多糖复合物(JHS天然产物，俄勒冈州尤金(Eugene,Oreg.))；雷佐生(razoxane)；根毒素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2”-三氯三乙胺；单端孢霉烯(例如，T-2毒素、疣孢菌素A(verracurin A)、杆孢菌素A(roridin A)和蛇形菌素(anguidin))；尿烷(urethan)；长春地辛；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；盖克托辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷(arabinoside)(“Ara-C”)；环磷酰胺；噻替派、紫杉烷，例如，TAXOL紫杉醇、不含氢化蓖麻油的ABRAXANE(ABRAXANE Cremophor-free)、白蛋白工程化的紫杉醇纳米颗粒制剂(绍姆堡镇的美国制药合伙人公司(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg)，111.)和TAXOTERE多西他赛(法国安东尼的罗纳普朗克乐安制药有限公司(Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France))；苯丁酸氮芥(chloranbucil)；GEMZAR吉西他滨(GEMZAR gemcitabine)；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤；铂类似物，如顺铂、奥沙利铂和卡铂；长春碱；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitroxantrone)；长春新碱；NAVELBINE、长春瑞滨；诺消灵(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；希罗达(xeloda)；伊班膦酸盐(ibandronate)；伊立替康(irinotecan)(开普拓(Camptosar)，CPT-11)(包括伊立替康与5-FU和左亚叶酸的治疗方案)；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(difluorometlhylornithine，DMFO)；维甲酸，如视黄酸；卡培他滨(capecitabine)；康普瑞汀(combretastatin)；左亚叶酸(LV)；奥沙利铂，包括奥沙利铂治疗方案(FOLFOX)、拉帕替尼(lapatinib)(Tykerb)；PKC-α、Raf、H-Ras、EGFR(例如，埃罗替尼(erlotinib)(塔西瓦(Tarceva))和VEGF-A的抑制剂，所述抑制剂减少细胞增殖；以及以上药物中的任何药物的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
在一些实施例中，抗肿瘤剂是细胞毒性剂。在一些实施例中，细胞毒性剂选自甲氨喋呤、氨基蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖孢苷、5-氟尿嘧啶达卡巴嗪；烷基化剂，如甲氯乙胺、噻替派、苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀(BSNU)、丝裂霉素C、洛莫司汀(CCNU)、1-甲基亚硝基脲、环磷酰胺、甲氯乙胺、白消安、二溴甘露醇、链脲霉素、丝裂霉素C、顺式-二氯二胺铂(II)(DDP)、顺铂和卡铂(paraplatin)；蒽环类包括柔红霉素、多柔比星(阿霉素)、地托比星(detorubicin)、洋红霉素、伊达比星、表柔比星、米托蒽醌和双蒽醌；抗生素包括放线菌素D(dactinomycin/actinomycin D)、博莱霉素、卡奇霉素、光神霉素(mithramycin)和安曲霉素(anthramycin，AMC)；以及抗有丝分裂剂，如长春花生物碱、长春新碱和长春碱和其混合物。
在一些实施例中，细胞毒性剂选自紫杉醇(taxol)、蓖麻毒素、假单胞菌外毒素、吉西他滨、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、吐根碱(emetine)、依托泊苷、替诺泊苷(tenoposide)、秋水仙碱、二羟基蒽二酮、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因(procaine)、四卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛尔(propranolol)、嘌呤霉素、丙卡巴肼(procarbazine)、羟基脲和其混合物。
在一些实施例中，本发明的组合物和方法可与检查点抑制剂组合使用，例如，用于治疗各种癌症。例如，本发明的组合物和方法可以例如通过改善患者对其的应答(例如，通过将非应答者转化为应答者，和/或增加治疗应答的量值，和/或减少治疗应答所需的剂量或方案，和/或减少基于检查点抑制剂的癌症疗法的一种或多种副作用)来补充基于检查点抑制剂的癌症疗法。
在一些实施例中，检查点抑制剂是靶向TIM-3、BTLA、PD-1、CTLA-4、B7-H4、GITR、半乳凝素-9、HVEM、PD-L1、PD-L2、B7-H3、CD244、CD160、TIGIT、SIRPα、ICOS、CD172a和TMIGD2中的一种的药剂。
在一些实施例中，免疫检查点免疫疗法药剂调节PD-1。在一些实施例中，靶向PD-1的药剂是对PD-1具有特异性的抗体或其抗原结合部分，任选地选自纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)和派迪利珠单抗(pidilizumab)。在一些实施例中，对PD-1具有特异性的抗体或其抗原结合部分是纳武单抗，并且可以每2周以240mg施用。在一些实施例中，对PD-1具有特异性的抗体或其抗原结合部分是派姆单抗，并且可以每3周以200mg施用。在一些实施例中，对PD-1具有特异性的抗体或其抗原结合部分是派迪利珠单抗，并且可以每3周以200mg施用。
在一些实施例中，免疫检查点免疫疗法剂调节PD-L1。在一些实施例中，调节PD-L1的药剂是对PD-L1具有特异性的抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，对PD-L1具有特异性的抗体或其抗原结合部分选自阿特珠单抗(Atezolizumab)、阿维鲁单抗(Avelumab)、度伐鲁单抗(Durvalumab)和BMS-936559。在一些实施例中，对PD-L1具有特异性的抗体或其抗原结合部分是BMS-936559，并且可以每2周以0.1mg/kg施用。在一些实施例中，对PD-L1具有特异性的抗体或其抗原结合部分是阿特珠单抗，并且可以每3周以1200mg施用。在一些实施例中，对PD-L1具有特异性的抗体或其抗原结合部分是阿维鲁单抗，并且可以每2周以10mg/kg施用。在一些实施例中，对PD-L1具有特异性的抗体或其抗原结合部分是度伐鲁单抗，并且可以每2周以10mg/kg施用。
在一些实施例中，靶向CTLA-4的药剂是对CTLA-4具有特异性的抗体或其抗原结合部分，任选地选自伊匹单抗(ipilimumab)和曲美木单抗(tremelimumab)。在一些实施例中，对CTLA-4具有特异性的抗体或其抗原结合部分是曲美木单抗，并且可以以3mg/kg、6mg/kg或10mg/kg施用。在一些实施例中，对CTLA-4具有特异性的抗体或其抗原结合部分是伊匹单抗，并且可以5mg/mL施用12周。
在一些实施例中，通过本文所述的化合物和组合物治疗的过度增殖性病症(例如，癌症)包括具有p38αMAPK蛋白和/或p38αMAPK相关蛋白表达的细胞。
在一个实施例中，本公开涉及一种治疗通过抑制有需要的患者体内的p38αMAPK蛋白得到缓解的疾病的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的p38αMAPK抑制剂或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶体或前药以及一种或多种另外的治疗剂，包括化学治疗剂和/或免疫治疗剂，其中所述p38αMAPK抑制剂是能够与p38αMAPK的ED底物对接位点附近的袋结合的化合物。
可以使用本领域已知的各种模型测试本文所述的化合物和化合物的组合在治疗所指示的疾病或病症中的功效，所述模型为人类疾病的治疗提供指导。任何和所有所描述的治疗方法可以包括用于确定在经历用本文所述的化合物和/或组合物进行的治疗的受试者中实现的治疗或预防作用的医疗随访。
药物组合物
在一实施例中，活性药物成分或活性药物成分的组合(如本公开的缀合物、药物部分、接头、化合物和/或组合物中的任一种)以药学上可接受的组合物的形式提供。
在一个实施例中，本公开涉及一种药物组合物，其包括治疗有效量的一种或多种本公开的缀合物、药物部分、接头、化合物和/或组合物(例如，式(I)、式(II)和/或式(III))或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶体或前药；以及生理上相容的载剂介质，其中所述疾病是癌症。在一个实施例中，疾病是癌症，如听神经瘤、腺癌、血管肉瘤、星形细胞瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、支气管原癌、宫颈癌、脊索瘤、绒毛膜癌、结肠癌、结直肠癌、颅咽管瘤、囊腺癌、胚胎性癌、内皮癌、室管膜瘤、上皮癌、食道癌、尤文氏瘤、纤维肉瘤、胃癌(gastric cancer)、多形性胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、头颈癌、血管母细胞瘤、肝细胞瘤、肾癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、肺癌、淋巴管内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、髓样癌、髓母细胞瘤、黑色素瘤、脑膜瘤、间皮瘤、粘液肉瘤、鼻癌、神经母细胞瘤、少突神经胶质瘤、口腔癌、成骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳头状腺癌、乳头状癌、松果体瘤、前列腺癌、横纹肌肉瘤、直肠癌、肾细胞癌、视网膜母细胞瘤、肉瘤、皮脂腺癌、精原细胞瘤、皮肤癌、鳞状细胞癌、胃癌(stomach cancer)、汗腺癌、滑膜瘤、睾丸癌、小细胞肺癌、喉癌、三阴性乳腺癌(TNBC)、子宫癌、威尔姆氏瘤、血癌、急性红白血病性白血病、急性淋巴母细胞性B细胞白血病、急性淋巴母细胞性T细胞白血病、急性淋巴母细胞性白血病、急性巨核细胞母细胞性白血病、急性单核母细胞性白血病、急性髓母细胞性白血病、急性髓单核细胞性白血病、急性非淋巴细胞性白血病、急性早幼粒细胞性白血病、急性未分化性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、毛细胞性白血病、多发性骨髓瘤、重链病、霍奇金氏病、多发性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、真性红细胞增多症或华氏巨球蛋白血症。在一些实施例中，疾病是三阴性乳腺癌(TNBC)。
在一些实施例中，提供在本公开的药物组合物中的每种活性药物成分(如本公开的任何缀合物、药物部分、接头、化合物和/或组合物(例如，式(I)、式(II)和/或式(III)))的浓度小于所述药物组合物的例如100％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％、0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％、0.005％、0.004％、0.003％、0.002％、0.001％、0.0009％、0.0008％、0.0007％、0.0006％、0.0005％、0.0004％、0.0003％、0.0002％或0.0001％w/w、w/v或v/v。
在一些实施例中，提供在本公开的药物组合物中的每种活性药物成分(如本公开的任何缀合物、药物部分、接头、化合物和/或组合物(例如，式(I)、式(II)和/或式(III)))的浓度大于所述药物组合物的90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、19.75％、19.50％、19.25％、19％、18.75％、18.50％、18.25％、18％、17.75％、17.50％、17.25％、17％、16.75％、16.50％、16.25％、16％、15.75％、15.50％、15.25％、15％、14.75％、14.50％、14.25％、14％、13.75％、13.50％、13.25％、13％、12.75％、12.50％、12.25％、12％、11.75％、11.50％、11.25％、11％、10.75％、10.50％、10.25％、10％、9.75％、9.50％、9.25％、9％、8.75％、8.50％、8.25％、8％、7.75％、7.50％、7.25％、7％、6.75％、6.50％、6.25％、6％、5.75％、5.50％、5.25％、5％、4.75％、4.50％、4.25％、4％、3.75％、3.50％、3.25％、3％、2.75％、2.50％、2.25％、2％、1.75％、1.50％、125％、1％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％、0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％、0.005％、0.004％、0.003％、0.002％、0.001％、0.0009％、0.0008％、0.0007％、0.0006％、0.0005％、0.0004％、0.0003％、0.0002％或0.0001％w/w、w/v或v/v。
在一些实施例中，提供在本公开的药物组合物中的每种活性药物成分(如本公开的任何缀合物、药物部分、接头、化合物和/或组合物(例如，式(I)、式(II)和/或式(III)))的浓度在占所述药物组合物的约0.0001％至约50％、约0.001％至约40％、约0.01％至约30％、约0.02％至约29％、约0.03％至约28％、约0.04％至约27％、约0.05％至约26％、约0.06％至约25％、约0.07％至约24％、约0.08％至约23％、约0.09％至约22％、约0.1％至约21％、约0.2％至约20％、约0.3％至约19％、约0.4％至约18％、约0.5％至约17％、约0.6％至约16％、约0.7％至约15％、约0.8％至约14％、约0.9％至约12％或约1％至约10％w/w、w/v或v/v的范围内。
在一些实施例中，提供在本公开的药物组合物中的每种活性药物成分(如本公开的任何缀合物、药物部分、接头、化合物和/或组合物(例如，式(I)、式(II)和/或式(III)))的浓度在占所述药物组合物的约0.001％至约10％、约0.01％至约5％、约0.02％至约4.5％、约0.03％至约4％、约0.04％至约3.5％、约0.05％至约3％、约0.06％至约2.5％、约0.07％至约2％、约0.08％至约1.5％、约0.09％至约1％、约0.1％至约0.9％w/w、w/v或v/v的范围内。
在一些实施例中，提供在本公开的药物组合物中的每种活性药物成分(如本公开的任何前述缀合物、药物部分、接头、化合物和/或组合物(例如，式(I)、式(II)和/或式(III)))的量等于或小于10g、9.5g、9.0g、8.5g、8.0g、7.5g、7.0g、6.5g、6.0g、5.5g、5.0g、4.5g、4.0g、3.5g、3.0g、2.5g、2.0g、1.5g、1.0g、0.95g、0.9g、0.85g、0.8g、0.75g、0.7g、0.65g、0.6g、0.55g、0.5g、0.45g、0.4g、0.35g、0.3g、0.25g、0.2g、0.15g、0.1g、0.09g、0.08g、0.07g、0.06g、0.05g、0.04g、0.03g、0.02g、0.01g、0.009g、0.008g、0.007g、0.006g、0.005g、0.004g、0.003g、0.002g、0.001g、0.0009g、0.0008g、0.0007g、0.0006g、0.0005g、0.0004g、0.0003g、0.0002g或0.0001g。
在一些实施例中，提供在本公开的药物组合物中的每种活性药物成分(如本公开的任何缀合物、药物部分、接头、化合物和/或组合物(例如，式(I)、式(II)和/或式(III)))的量大于0.0001g、0.0002g、0.0003g、0.0004g、0.0005g、0.0006g、0.0007g、0.0008g、0.0009g、0.001g、0.0015g、0.002g、0.0025g、0.003g、0.0035g、0.004g、0.0045g、0.005g、0.0055g、0.006g、0.0065g、0.007g、0.0075g、0.008g、0.0085g、0.009g、0.0095g、0.01g、0.015g、0.02g、0.025g、0.03g、0.035g、0.04g、0.045g、0.05g、0.055g、0.06g、0.065g、0.07g、0.075g、0.08g、0.085g、0.09g、0.095g、0.1g、0.15g、0.2g、0.25g、0.3g、0.35g、0.4g、0.45g、0.5g、0.55g、0.6g、0.65g、0.7g、0.75g、0.8g、0.85g、0.9g、0.95g、1g、1.5g、2g、2.5、3g、3.5、4g、4.5g、5g、5.5g、6g、6.5g、7g、7.5g、8g、8.5g、9g、9.5g或10g。
根据本公开的每种活性药物成分在宽剂量范围内是有效的。例如，在治疗成人时，范围独立地为0.01mg至1000mg每天、0.5mg至100mg每天、1mg至50mg每天以及5mg至40mg每天的剂量是可以使用的剂量的实例。确切的剂量将取决于施用途径、化合物所施用的形式、要治疗的受试者的性别和年龄、要治疗的受试者的体重以及主治医师的偏好和经验。如果适当的话，也可以使用本公开的缀合物、药物部分、接头、化合物和/或组合物(例如，本公开的式(I)式(II)和/或式(III))的临床确定的剂量。
在一实施例中，药物组合物中的两种活性药物成分的摩尔比在10:1至1:10，优选地2.5:1至1:2.5、并且更优选地约1:1的范围内。在一实施例中，药物组合物中的两种活性药物成分的摩尔比的重量比选自由以下组成的组：20:1、19:1、18:1、17:1、16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19和1:20。在一实施例中，药物组合物中的两种活性药物成分的摩尔比的重量比选自由以下组成的组：20:1、19:1、18:1、17:1、16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19和1:20。
下文描述了非限制性药物组合物和其制备方法。
用于口服施用的药物组合物
在一实施例中，本公开提供了一种用于口服施用的药物组合物，所述药物组合物含有本文所述的活性药物成分或活性药物成分的组合(如本公开的缀合物、药物部分、接头、化合物和/或组合物(例如，式(I)、式(II)和/或式(III)))以及适于口服施用的药物赋形剂。
在一些实施例中，本公开提供了一种用于口服施用的固体药物组合物，所述固体药物组合物含有：(i)有效量的活性药物成分或活性药物成分的组合，以及(ii)适于口服施用的药物赋形剂。在选定实施例中，所述组合物进一步含有(iii)有效量的第三活性药物成分，以及任选地(iv)有效量的第四活性药物成分。
在一些实施例中，所述药物组合物可以是适于口服消耗的液体药物组合物。适于口服施用的本公开的药物组合物可以以离散剂型形式呈现，如胶囊、小袋或片剂、或各自含有预定量的呈粉剂或颗粒剂形式的活性成分的液体或气雾喷雾剂、溶液、或水性或非水性液体中的悬浮液、水包油乳剂或油包水液体乳剂、用于复原的粉剂、用于口服消耗的粉剂、瓶(包括瓶中的粉剂或液体)、口腔溶解膜、锭剂、糊剂、管、胶和包装。此类剂型可以通过任何药剂学方法制备，但是所有方法都包括使活性成分与载剂缔合的步骤，所述载剂构成一种或多种必需成分。通常，通过使活性成分与液体载剂或细粉状固体载剂或两者均匀且紧密混合，并且然后在必要时使产物成形为期望的呈现形式来制备组合物。例如，可以通过压缩或模制，任选地用一种或多种辅助成分来制备片剂。可以通过在合适的机器中压制任选地与赋形剂混合的呈自由流动形式(如粉剂或颗粒)的活性成分来制备压制片剂，所述赋形剂如但不限于粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂和/或表面活性剂或分散剂。可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉末状化合物的混合物来制造模制片剂。
本公开进一步涵盖无水药物组合物和剂型，因为水可以促进一些化合物的降解。例如，在药物领域中，可以添加水(例如，5％)，作为模拟长期储存的手段，以确定制剂随时间推移变化的特性，如存放期或稳定性。可以使用无水或低水分含量的成分以及低水分或低湿度条件来制备本公开的无水药物组合物和剂型。如果预期在制造、包装和/或储存期间会与水分和/或湿气发生实质性接触，则可以使含有乳糖的本公开的药物组合物和剂型是无水的。可以以使得无水药物组合物的无水性质得以维持的方式来制备和储存无水药物组合物。因此，可以使用已知防止暴露于水的材料来包装无水组合物，使得所述无水组合物可以包括在合适的处方试剂盒中。合适的包装的实例包括但不限于气密密封的箔、塑料等、单位剂量容器、泡罩包和条带包。
可以根据常规药物配混技术将每种活性药物成分与药物载剂紧密混合。载剂可以采用多种形式，这取决于施用所需的制剂的形式。在制备口服剂型的组合物时，在口服液体制剂(如悬浮液、溶液和酏剂)或气雾剂的情况下，可以采用任何常用的药物介质作为载剂，例如水、乙二醇、油、醇、调味剂、防腐剂、着色剂等；或者在口服固体制剂的情况下，可以使用如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂等载剂，在一些实施例中，不使用乳糖。例如，合适的载剂包括具有固体口服制剂的粉剂、胶囊和片剂。如果期望的话，可以通过标准水性或非水性技术来对片剂进行包衣。
适于药物组合物和剂型中使用的粘合剂包括但不限于玉米淀粉、马铃薯淀粉或其它淀粉、明胶、天然和合成胶(如阿拉伯胶、海藻酸钠、海藻酸、其它海藻酸盐、粉末状黄芪胶、瓜尔豆胶)、纤维素和其衍生物(例如，乙基纤维素、乙酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠)、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、预胶凝化淀粉、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素以及其混合物。
适于在本文所公开的药物组合物和剂型中使用的填充剂的实例包括但不限于滑石、碳酸钙(例如，颗粒剂或粉剂)、微晶纤维素、粉末状纤维素、葡萄糖结合剂(dextrates)、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉、预胶凝化淀粉以及其混合物。
可以在本公开的组合物中使用崩解剂以提供在暴露于水性环境时崩解的片剂。崩解剂过多可以产生在瓶中崩解的片剂。崩解剂过少可能不足以使崩解发生，由此改变活性成分从剂型中释放的速率和程度。因此，可以使用足够量的崩解剂(不会因过少或过多而不利地改变活性成分的释放)，以形成本文所公开的化合物的剂型。所使用的崩解剂的量可以基于制剂的类型和施用模式而变化，并且可以容易为本领域的普通技术人员所辨别。药物组合物中可以使用约0.5重量％至约15重量％的崩解剂或约1重量％至约5重量％的崩解剂。可以用于形成本公开的药物组合物和剂型的崩解剂包括但不限于琼脂-琼脂、海藻酸、碳酸钙、微晶纤维素、交联羧甲纤维素钠、交联聚维酮、波拉克林钾(polacrilinpotassium)、羟基乙酸淀粉钠、马铃薯或木薯淀粉、其它淀粉、预胶凝化淀粉、其它淀粉、粘土、其它藻胶、其它纤维素、胶或其混合物。
可以用于形成本公开的药物组合物和剂型的润滑剂包括但不限于硬脂酸钙、硬脂酸镁、硬脂酰富马酸钠、矿物油、轻质矿物油、甘油、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇、其它二醇、硬脂酸、月桂基硫酸钠、滑石、氢化植物油(例如，花生油、棉籽油、向日葵油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油)、硬脂酸锌、油酸乙酯、月桂酸乙酯、琼脂或其混合物。另外的润滑剂包括例如合成硅胶、合成二氧化硅的凝结型气溶胶、硅化微晶纤维素或其混合物。润滑剂可以任选地以占药物组合物的小于约0.5％或小于约1％(按重量计)的量添加。
在期望水性悬浮液和/或酏剂用于口服施用时，可以将活性药物成分与各种甜味剂或调味剂、着色剂或染料以及(如果期望的话)乳化剂和/或悬浮剂以及如水、乙醇、丙二醇、甘油和其各种组合等稀释剂组合。
片剂可以是未包衣的或者可以通过已知技术进行包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，并且由此提供在较长时段内的持续作用。例如，可以采用如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯等时延材料。用于口服使用的制剂还可以以硬明胶胶囊或软明胶胶囊的形式呈现，在所述硬明胶胶囊的情况下，活性成分与惰性固体稀释剂(例如，碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合，在所述软明胶胶囊的情况下，活性成分与水或油介质(例如，花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。
可以用于形成本公开的药物组合物和剂型的表面活性剂包括但不限于亲水性表面活性剂、亲脂性表面活性剂和其混合物。也就是说，可以采用亲水性表面活性剂的混合物，可以采用亲脂性表面活性剂的混合物，或者可以采用至少一种亲水性表面活性剂和至少一种亲脂性表面活性剂的混合物。
合适的亲水性表面活性剂的HLB值通常可以为至少10，而合适的亲脂性表面活性剂的HLB值通常可以为或小于约10。用于表征非离子型两亲性化合物的相对亲水性和疏水性的经验参数是亲水亲脂平衡(“HLB”值)。HLB值较低的表面活性剂的亲脂性或疏水性更强并且在油中的溶解度更大，而HLB值较高的表面活性剂的亲水性更强并且在水溶液中的溶解度更大。亲水性表面活性剂通常被视为是HLB值大于约10的化合物，以及HLB尺度通常不适用的阴离子型、阳离子型或两性离子型化合物。类似地，亲脂性(即，疏水性)表面活性剂是HLB值等于或小于约10的化合物。然而，表面活性剂的HLB值仅仅是通常用于实现工业、药物和化妆品乳剂的调配的粗略指导。
亲水性表面活性剂可以是离子型的或非离子型的。合适的离子型表面活性剂包括但不限于烷基铵盐；夫西地酸盐；氨基酸、寡肽和多肽的脂肪酸衍生物；氨基酸、寡肽和多肽的甘油酯衍生物；卵磷脂和氢化卵磷脂；溶血卵磷脂和氢化溶血卵磷脂；磷脂和其衍生物；溶血磷脂和其衍生物；肉碱脂肪酸酯盐；烷基硫酸盐；脂肪酸盐；多库酯钠；酰基乳酸酯；单酸甘油酯和二酸甘油酯的单乙酰化的和二乙酰化的酒石酸酯；琥珀酰化的单酸甘油酯和二酸甘油酯；单酸甘油酯和二酸甘油酯的柠檬酸酯；以及其混合物。
在前述组内，离子型表面活性剂包括例如：卵磷脂、溶血卵磷脂、磷脂、溶血磷脂和其衍生物；肉碱脂肪酸酯盐；烷基硫酸盐；脂肪酸盐；多库酯钠；酰基乳酸盐；单酸甘油酯和二酸甘油酯的单乙酰化的和二乙酰化的酒石酸酯；琥珀酰化的单酸甘油酯和二酸甘油酯；单酸甘油酯和二酸甘油酯的柠檬酸酯；以及其混合物。
离子型表面活性剂可以是以下的离子化形式：卵磷脂、溶血卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰丝氨酸、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、溶血磷脂酸、溶血磷脂酰丝氨酸、PEG-磷脂酰乙醇胺、PVP-磷脂酰乙醇胺、脂肪酸的乳酸酯、硬脂酰-2-乳酸酯、硬脂酰乳酸酯、琥珀酰化的单酸甘油酯、单酸甘油酯/二酸甘油酯的单乙酰化的/二乙酰化的酒石酸酯、单酸甘油酯/二酸甘油酯的柠檬酸酯、胆酰肌氨酸、己酸酯、辛酸酯、癸酸酯、月桂酸酯、肉豆蔻酸酯、棕榈酸酯、油酸酯、蓖麻酸酯、亚油酸酯、亚麻酸酯、硬脂酸酯、十二烷基硫酸酯、十四烷基硫酸酯、多库酯、月桂酰肉碱、棕榈酰肉碱、肉豆蔻酰肉碱以及其盐和混合物。
亲水性非离子型表面活性剂可以包括但不限于烷基葡糖苷；烷基麦芽糖苷；烷基硫代葡萄糖苷；月桂酸聚乙二醇甘油酯；聚氧化烯烷基醚，如聚乙二醇烷基醚；聚氧化烯烷基酚，如聚乙二醇烷基酚；聚氧化烯烷基酚脂肪酸酯，如聚乙二醇脂肪酸单酯和聚乙二醇脂肪酸二酯；聚乙二醇甘油脂肪酸酯；聚甘油脂肪酸酯；聚氧化烯山梨醇酐脂肪酸酯，如聚乙二醇山梨醇酐脂肪酸酯；具有至少一个由甘油酯、植物油、氢化植物油、脂肪酸和甾醇组成的组中的成员的多元醇的疏水性酯交换产物；聚氧乙烯甾醇、其衍生物和类似物；聚氧乙烯化维生素和其衍生物；聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物；以及其混合物；聚乙二醇山梨醇酐脂肪酸酯和具有至少一个由三酸甘油酯、植物油和氢化植物油组成的组中的成员的多元醇的亲水性酯交换产物。多元醇可以是甘油、乙二醇、聚乙二醇、山梨醇、丙二醇、季戊四醇或糖。
其它亲水性非离子型表面活性剂包括但不限于PEG-10月桂酸酯、PEG-12月桂酸酯、PEG-20月桂酸酯、PEG-32月桂酸酯、PEG-32二月桂酸酯、PEG-12油酸酯、PEG-15油酸酯、PEG-20油酸酯、PEG-20二油酸酯、PEG-32油酸酯、PEG-200油酸酯、PEG-400油酸酯、PEG-15硬脂酸酯、PEG-32二硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、PEG-20二月桂酸酯、PEG-25三油酸甘油酯、PEG-32二油酸酯、PEG-20甘油月桂酸酯、PEG-30甘油月桂酸酯、PEG-20甘油硬脂酸酯、PEG-20甘油油酸酯、PEG-30甘油油酸酯、PEG-30甘油月桂酸酯、PEG-40甘油月桂酸酯、PEG-40棕榈仁油、PEG-50氢化蓖麻油、PEG-40蓖麻油、PEG-35蓖麻油、PEG-60蓖麻油、PEG-40氢化蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油、PEG-60玉米油、PEG-6癸酸/辛酸甘油酯、PEG-8癸酸/辛酸甘油酯、聚甘油-10月桂酸酯、PEG-30胆固醇、PEG-25植物甾醇、PEG-30大豆甾醇、PEG-20三油酸酯、PEG-40山梨糖醇酐油酸酯、PEG-80山梨糖醇酐月桂酸酯、聚山梨糖醇酯20、聚山梨糖醇酯80、POE-9十二烷基醚、POE-23十二烷基醚、POE-10油烯基醚、POE-20油烯基醚、POE-20硬脂基醚、生育酚PEG-100琥珀酸酯、PEG-24胆固醇、聚甘油-10油酸酯、Tween40、Tween 60、蔗糖单硬脂酸酯、蔗糖单月桂酸酯、蔗糖单棕榈酸酯、PEG 10-100壬基酚系列、PEG 15-100辛基酚系列和泊洛沙姆。
仅举例来说，合适的亲脂性表面活性剂包括：脂肪醇；甘油脂肪酸酯；乙酰化的甘油脂肪酸酯；低级醇脂肪酸酯；丙二醇脂肪酸酯；脱水山梨醇脂肪酸酯；聚乙二醇脱水山梨醇脂肪酸酯；甾醇和甾醇衍生物；聚氧乙烯化的甾醇和甾醇衍生物；聚乙二醇烷基醚；糖酯；糖醚；单酸甘油酯和二酸甘油酯的乳酸衍生物；具有至少一个由甘油酯、植物油、氢化植物油、脂肪酸和甾醇组成的组中的成员的多元醇的疏水性酯交换产物；油溶性维生素/微生物衍生物；以及其混合物。在此组内，优选的亲脂性表面活性剂包括甘油脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯和其混合物，或者是具有至少一个由植物油、氢化植物油和三酸甘油酯组成的组中的成员的多元醇的疏水性酯交换产物。
在一实施例中，组合物可以包括增溶剂，以确保本公开的化合物的良好增溶和/或溶解并使本公开的化合物的沉淀最小化。这对于用于非口服用途的组合物，例如，注射用组合物来说，可能是特别重要的。还可以添加增溶剂以提高亲水性药物和/或如表面活性剂等其它组分的溶解度或使组合物保持呈稳定的或均质的溶液或分散剂的形式。
合适的增溶剂的实例包括但不限于以下：醇和多元醇，如乙醇、异丙醇、丁醇、苯甲醇、乙二醇、丙二醇、丁二醇和其异构体、甘油、季戊四醇、山梨醇、甘露醇、还氧二元醇、二甲基异山梨醇、聚乙二醇、聚丙二醇、聚乙烯醇、羟丙基甲基纤维素和其它纤维素衍生物、环糊精和环糊精衍生物；平均分子量为约200至约6000的聚乙二醇醚，如四氢糠醇PEG醚(糖原质)或甲氧基PEG；酰胺和其它含氮化合物，如2-吡咯烷酮、2-哌啶酮、ε-己内酰胺、N-烷基吡咯烷酮、N-羟基烷基吡咯烷酮、N-烷基哌啶酮、N-烷基己内酰胺、二甲基乙酰胺和聚乙烯吡咯烷酮；酯，如丙酸乙酯、柠檬酸三丁酯、乙酰柠檬酸三乙酯、乙酰柠檬酸三丁酯、柠檬酸三乙酯、油酸乙酯、辛酸乙酯、丁酸乙酯、三醋精、丙二醇单乙酸酯、丙二醇二乙酸酯、ε-己内酯和其异构体、δ-戊内酯和其异构体、β-丁内酯和其异构体；以及本领域已知的其它增溶剂，如二甲基乙酰胺、二甲基异山梨醇、N-甲基吡咯烷酮、辛酸单甘油酯、二乙二醇单乙醚和水。
还可以使用增溶剂的混合物。实例包括但不限于三醋精、柠檬酸三乙酯、油酸乙酯、辛酸乙酯、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、N-羟乙基吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、羟丙基环糊精、乙醇、聚乙二醇200-100、糖原质、还氧二元醇、丙二醇和二甲基异山梨醇。特别优选的增溶剂包括山梨醇、甘油、三醋精、乙醇、PEG-400、糖原质和丙二醇。
可以包括的增溶剂的量没有特别限制。给定增溶剂的量可以限于本领域的技术人员可以容易地确定的生物可接受的量。在一些情况下，可能有利的是，包括量远超过生物可接受的量例如以使药物的浓度最大化的增溶剂，其中过量的增溶剂在向患者提供组合物之前使用如蒸馏或蒸发等常规技术去除。因此，如果存在的话，基于药物和其它赋形剂的组合重量，增溶剂的重量比可以为10重量％、25重量％、50重量％、100重量％或至多约200重量％。如果需要，也可以使用非常少量的增溶剂，如5％、2％、1％或甚至更少。典型地，增溶剂可以以约1重量％至约100重量％、更典型地约5重量％至约25重量％的量存在。
所述组合物可以进一步包括一种或多种药学上可接受的添加剂和赋形剂。此类添加剂和赋形剂包括但不限于防粘剂、消泡剂、缓冲剂、聚合物、抗氧化剂、防腐剂、螯合剂、粘度调节剂、张力调节剂(tonicifier)、香味剂、着色剂、增味剂、遮光剂、悬浮剂、粘合剂、填充剂、增塑剂、润滑剂和其混合物。
另外，可以将酸或碱掺入到组合物中以促进加工、增强稳定性或实现其它目的。药学上可接受的碱的实例包括氨基酸、氨基酸酯、氢氧化铵、氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸氢钠、氢氧化铝、碳酸钙、氢氧化镁、硅酸镁铝、合成硅酸铝、合成水方解石(hydrocalcite)、氢氧化镁铝、二异丙基乙胺、乙醇胺、乙二胺、三乙醇胺、三乙胺、三异丙醇胺、三甲胺、三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)等。同样适合的是作为药学上可接受的酸的盐的碱，所述药学上可接受的酸如乙酸、丙烯酸、己二酸、藻酸、链烷磺酸、氨基酸、抗坏血酸、苯甲酸、硼酸、丁酸、碳酸、柠檬酸、脂肪酸、甲酸、富马酸、葡萄糖酸、氢醌磺酸(hydroquinosulfonic acid)、异抗坏血酸、乳酸、马来酸、草酸、对溴苯磺酸、丙酸、对甲苯磺酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、单宁酸、酒石酸、巯基乙酸、甲苯磺酸、尿酸等。还可以使用多质子酸的盐，如磷酸钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠。在碱是盐时，阳离子可以是任何方便且药学上可接受的阳离子，如铵、碱金属和碱土金属。实例可以包括但不限于钠、钾、锂、镁、钙和铵。
合适的酸是药学上可接受的有机酸或无机酸。合适的无机酸的实例包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、硼酸、磷酸等。合适的有机酸的实例包括乙酸、丙烯酸、己二酸、藻酸、链烷磺酸、氨基酸、抗坏血酸、苯甲酸、硼酸、丁酸、碳酸、柠檬酸、脂肪酸、甲酸、富马酸、葡萄糖酸、氢醌磺酸、异抗坏血酸、乳酸、马来酸、甲磺酸、草酸、对溴苯磺酸、丙酸、对甲苯磺酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、单宁酸、酒石酸、巯基乙酸、甲苯磺酸和尿酸。
注射用药物组合物
在一些实施例中，提供了一种注射用药物组合物，其含有活性药物成分或活性药物成分的组合(如本公开的缀合物、药物部分、接头、化合物和/或组合物(例如，式(I)、式(II)和/或式(III))以及适于注射的药物赋形剂。
本公开的组合物可以掺入以通过注射施用的形式包括具有芝麻油、玉米油、棉籽油或花生油以及酏剂、甘露醇、右旋糖或无菌水溶液和类似药物媒剂的水性或油悬浮液或乳剂。
常规地还使用盐水中的水溶液进行注射。还可以采用乙醇、甘油、丙二醇和液体聚乙二醇(以及其适合的混合物)、环糊精衍生物和植物油。可以例如通过使用如卵磷脂等包衣以在分散剂的情况下并且通过使用表面活性剂来维持期望的粒度来维持适当的流动性。可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂，例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸和硫柳汞来实现对微生物的作用的预防。
通过将所需量的活性药物成分或活性药物成分的组合与以上枚举的各种其它成分一起根据需要掺入在适当的溶剂中，之后是进行过滤灭菌来制备无菌可注射溶液。通常，通过将各种经灭菌的活性成分掺入到无菌媒剂中来制备分散剂，所述无菌媒剂含有基础分散介质和来自以上枚举的成分的所需的其它成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉剂的情况下，某些令人期望的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，所述技术产生活性成分加上来自其先前经无菌过滤的溶液的任何另外的期望成分的粉剂。
用于局部递送的药物组合物
在一些实施例中，提供了一种用于经皮递送的药物组合物，所述药物组合物含有活性药物成分或活性药物成分的组合(如本公开的缀合物、药物部分、接头、化合物和/或组合物(例如，式(I)、式(II)和/或式(III)))以及适于经皮递送的药物赋形剂。
本公开的组合物可以被调配成呈适于局部(local)或局部(topical)施用的固体、半固体或液体形式的制剂，如凝胶、水溶性胶状物、霜剂、洗剂、悬浮液、泡沫、粉剂、浆液、软膏剂、溶液、油、糊剂、栓剂、喷雾剂、乳剂、盐水溶液、基于二甲亚砜(DMSO)的溶液。一般来说，具有较高密度的载剂能够提供长时间暴露于活性成分的区域。相比之下，溶液制剂可以使活性成分更直接暴露于所选区域。
药物组合物还可以包含合适的固相或凝胶相载剂或赋形剂，所述固相或凝胶相载剂或赋形剂是使治疗性分子跨皮肤的角质层渗透性屏障的渗透增加或帮助跨皮肤的角质层渗透性屏障递送治疗性分子的化合物。对于在局部制剂领域受过训练的技术人员而言，存在许多这些渗透增强性分子。此类载剂和赋形剂的实例包括但不限于湿润剂(例如，脲)、二醇(例如，丙二醇)、醇(例如，乙醇)、脂肪酸(例如，油酸)、表面活性剂(例如，肉豆蔻酸异丙酯和十二烷基硫酸钠)、吡咯烷酮、甘油单月桂酸酯、亚砜、萜烯(例如，薄荷醇)、胺、酰胺、烷烃、烷醇、水、碳酸钙、磷酸钙、各种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和如聚乙二醇等聚合物。
用于本公开的方法的另一种示例性制剂采用经皮递送装置(“贴剂”)。此类经皮贴剂可以用于提供受控量的活性药物成分或活性药物成分的组合在具有或不具有另一种活性药物成分的情况下的连续或不连续输注。
用于递送药剂的经皮贴剂的构造和用途是本领域众所周知的。参见例如美国专利第5,023,252号；第4,992,445号；以及第5,001,139号，所述美国专利的全部内容通过引用并入本文。此类贴剂可以被构造为用于连续、脉冲式或按需递送药剂。
用于吸入的药物组合物
用于吸入或吹入的组合物包括药学上可接受的水性或有机溶剂或其混合物形式的溶液和悬浮液以及粉剂。液体或固体组合物可以含有如上所描述的合适的药学上可接受的赋形剂和本公开的缀合物、药物部分、接头、化合物和/或组合物(例如式(I)、式(II)和/或式(III))。优选地，组合物通过口或鼻呼吸途径施用以产生局部或全身作用。可以通过使用惰性气体来雾化呈优选地药学上可接受的溶剂形式的组合物。雾化溶液可以直接从雾化装置中吸入，或者雾化装置可以附接到面罩帐篷或间歇性正压呼吸机。可以通过以适当方式递送制剂的装置优选地口服地或经鼻地施用溶液、悬浮液或粉剂组合物。还可以使用干粉吸入器来提供组合物的吸入递送。
其它药物组合物
也可以由本文所述的组合物和一种或多种适于舌下、颊、直肠、骨内、眼内、鼻内、硬膜外或脊柱内施用的药学上可接受的赋形剂制备本公开的缀合物、药物部分、接头、化合物和/或组合物(例如式(I)、式(II)和/或式(III))的药物组合物。此类药物组合物的制备在本领域中是众所周知的。参见例如Anderson,Philip O.；Knoben,James E.；Troutman,William G编辑,《临床药物数据手册(Handbook of Clinical Drug Data)》,第十版,McGraw-Hill,2002；以及Pratt和Taylor编辑,《药物作用原理(Principles of DrugAction)》,第三版,纽约州的丘吉尔利文斯顿(Churchill Livingston,N.Y.),1990，这些文献中的每一个通过引用以其整体并入本文。
活性药物成分或活性药物成分的组合或其药物组合物的施用可以通过使得能够将化合物递送到作用位点的任何方法来实现。这些方法包括口服途径、十二指肠内途径、肠胃外注射(包括静脉内、动脉内、皮下、肌内、血管内、腹膜内或输注)、局部(例如，经皮施涂)、直肠施用、通过导管或支架进行的局部递送或通过吸入。活性药物成分或活性药物成分的组合也可以脂肪内或鞘内施用。
示例性肠胃外施用形式包括活性化合物于无菌水溶液(例如，丙二醇水溶液或葡萄糖水溶液)中的溶液或悬浮液。如果需要的话，此类剂型可以适当地缓冲。
试剂盒
本公开还提供了试剂盒。试剂盒包括单独或组合在合适的包装中的活性药物成分或活性药物成分的组合以及书面材料，所述书面材料可以包括使用说明、临床研究讨论和副作用列表。此类试剂盒还可以包括指示或确立组合物的活性和/或优点和/或描述信剂量、施用、副作用、药物相互作用的信息(如科学文献参考、包装插页材料、临床试验结果和/或这些的汇总等)或对卫生保健提供者有用的其它信息。此类信息可以基于各种研究的结果，例如，使用涉及体内模型的实验动物的研究和基于人类临床试验的研究。试剂盒可以进一步含有另一种活性药物成分。在选定实施例中，活性药物成分或活性药物成分的组合在试剂盒内的单独容器中以单独组合物形式提供。在选定实施例中，活性药物成分或活性药物成分的组合在试剂盒内的容器中以单一组合物的形式提供。合适的包装和另外的使用物品(例如，用于液体制剂的量杯、最小化暴露于空气的箔包装等)是本领域已知的，并且可以包括在试剂盒中。本文所述的试剂盒可以提供、销售和/或推广给健康提供者，包括医师、护士、药剂师、处方官员等。在选定实施例中，试剂盒也可以直接销售给消费者。
在一些实施例中，本公开提供了一种试剂盒，其包含组合物，所述组合物包含治疗有效量的活性药物成分(例如，本公开的缀合物、药物部分、接头、化合物和/或组合物(例如，式(I)、式(II)和/或式(III)))或活性药物成分的组合或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶体或前药。这些组合物典型地是药物组合物。试剂盒用于同时或单独地共同施用活性药物成分或活性药物成分的组合。
在一些实施例中，本公开提供了一种试剂盒，其包含(1)组合物，所述组合物包含治疗有效量的活性药物成分(例如，本公开的缀合物、药物部分、接头、化合物和/或组合物(例如，式(I)、式(II)和/或式(III)))或活性药物成分的组合或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶体或前药，以及(2)用于确定患者的癌症是否是癌症的特定亚型的诊断测试。试剂盒中可以使用任何前述诊断方法。
以上所述的试剂盒优选地用于治疗本文所述的疾病和病状。在一些实施例中，试剂盒用于治疗过度增殖性病症，如癌症。
在一特定实施例中，本文所述的试剂盒用于治疗癌症。在一些实施例中，本文所述的试剂盒用于治疗选自由以下组成的组的癌症：听神经瘤、腺癌、血管肉瘤、星形细胞瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、支气管原癌、宫颈癌、脊索瘤、绒毛膜癌、结肠癌、结直肠癌、颅咽管瘤、囊腺癌、胚胎性癌、内皮癌、室管膜瘤、上皮癌、食道癌、尤文氏瘤、纤维肉瘤、胃癌(gastric cancer)、多形性胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、头颈癌、血管母细胞瘤、肝细胞瘤、肾癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、肺癌、淋巴管内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、髓样癌、髓母细胞瘤、黑色素瘤、脑膜瘤、间皮瘤、粘液肉瘤、鼻癌、神经母细胞瘤、少突神经胶质瘤、口腔癌、成骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳头状腺癌、乳头状癌、松果体瘤、前列腺癌、横纹肌肉瘤、直肠癌、肾细胞癌、视网膜母细胞瘤、肉瘤、皮脂腺癌、精原细胞瘤、皮肤癌、鳞状细胞癌、胃癌(stomach cancer)、汗腺癌、滑膜瘤、睾丸癌、小细胞肺癌、喉癌、三阴性乳腺癌(TNBC)、子宫癌、威尔姆氏瘤、血癌、急性红白血病性白血病、急性淋巴母细胞性B细胞白血病、急性淋巴母细胞性T细胞白血病、急性淋巴母细胞性白血病、急性巨核细胞母细胞性白血病、急性单核母细胞性白血病、急性髓母细胞性白血病、急性髓单核细胞性白血病、急性非淋巴细胞性白血病、急性早幼粒细胞性白血病、急性未分化性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、毛细胞性白血病、多发性骨髓瘤、重链病、霍奇金氏病、多发性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、真性红细胞增多症或华氏巨球蛋白血症。在一些实施例中，疾病是三阴性乳腺癌(TNBC)。
剂量和给药方案
使用本文的方法施用的药物组合物的量(如本公开的缀合物、药物部分、接头、化合物和/或组合物(例如，式(I)、式(II)和/或式(III))的剂量)将取决于所治疗的人或哺乳动物、病症或病状的严重程度、施用率、活性药物成分的处置和开处方的医师的判断。然而，在单剂量或分剂量下，有效剂量在约0.001mg/kg体重每天至约100mg/kg体重每天，如约1mg/kg/天至约35mg/kg/天的范围内。对于70kg的人，这将相当于约0.05g/天至7g/天，如约0.05g/天至约2.5g/天。在一些情况下，低于前述范围的下限的剂量水平可以超过足够量，而在其它情况下，可以在不会引起任何有害的副作用的情况下采用仍更大的剂量，例如通过将此类较大剂量分成若干个小剂量以供全天施用。药物组合物和活性药物成分的剂量可以以mg/kg身体质量或mg/m2体表面积为单位提供。
在一些实施例中，药物组合物或活性药物成分以单剂量施用。这种施用可以是通过注射，例如，静脉内注射，以快速引入活性药物成分。然而，可以在适当时使用其它途径，包括优选的口服途径。也可以使用单剂量的药物组合物来治疗急性病状。
在一些实施例中，以多剂量施用药物组合物或活性药物成分。在一实施例中，以多剂量施用药物组合物。给药可以是每天一次、每天两次、每天三次、每天四次、每天五次、每天六次或每天多于六次。给药可以是每月一次、每两周一次、一周一次或每隔一天一次。在其它实施例中，约每天一次至约每天6次施用药物组合物。在一些实施例中，每天一次施用药物组合物，而在其它实施例中，每天两次施用药物组合物，并且在其它实施例中，每天三次施用药物组合物。
只要有必要，活性药物成分的施用可以继续进行。在选定实施例中，药物组合物施用多于1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、14天或28天。在一些实施例中，药物组合物施用少于28天、14天、7天、6天、5天、4天、3天、2天或1天。在一些实施例中，药物组合物在持续的基础上慢性地施用，例如，用于治疗慢性效应。在一些实施例中，药物组合物的施用继续少于约7天。在又另一个实施例中，施用继续多于约6天、10天、14天、28天、两个月、六个月或一年。在一些情况下，实现持续给药并且只要有必要，维持所述持续给药。
在一些实施例中，本文所公开的活性药物成分(例如本公开的任何缀合物、药物部分、接头、化合物和/或组合物(例如式(I)、式(II)和/或式(III)))的有效剂量在约1mg至约500mg、约10mg至约300mg、约20mg至约250mg、约25mg至约200mg、约10mg至约200mg、约20mg至约150mg、约30mg至约120mg、约10mg至约90mg、约20mg至约80mg、约30mg至约70mg、约40mg至约60mg、约45mg至约55mg、约48mg至约52mg、约50mg至约150mg、约60mg至约140mg、约70mg至约130mg、约80mg至约120mg、约90mg至约110mg、约95mg至约105mg、约150mg至约250mg、约160mg至约240mg、约170mg至约230mg、约180mg至约220mg、约190mg至约210mg、约195mg至约205mg或约198至约202mg的范围内。在一些实施例中，本文所公开的活性药物成分的有效剂量小于约25mg、小于约50mg、小于约75mg、小于约100mg、小于约125mg、小于约150mg、小于约175mg、小于约200mg、小于约225mg或小于约250mg。在一些实施例中，本文所公开的活性药物成分的有效剂量大于约25mg、大于约50mg、大于约75mg、大于约100mg、大于约125mg、大于约150mg、大于约175mg、大于约200mg、大于约225mg或大于约250mg。
在一些实施例中，本文所公开的活性药物成分(例如本公开的任何缀合物、药物部分、接头、化合物和/或组合物(例如式(I)、式(II)和/或式(III)))的有效剂量在约0.01mg/kg至约200mg/kg、或约0.1mg/kg至100mg/kg、或约1mg/kg至50mg/kg的范围内。
在一些实施例中，活性药物成分以10mg BID至200mg BID的剂量施用，包括50mgBID、60mg BID、70mg BID、80mg BID、90mg BID、100mg BID、150mg BID或200mg BID。在一些实施例中，活性药物成分以10mg BID至500mg BID的剂量施用，包括1mg BID、5mg BID、10mgBID、15mg BID、25mg BID、50mg BID、75mg BID、100mg BID、150mg BID、200mg BID、300mgBID、400mg BID或500mg BID。
在一些情况下，低于前述范围的下限的剂量水平可以超过足够量，而在其它情况下，可以在不会引起任何有害的副作用的情况下采用仍更大的剂量，例如通过将此类较大剂量分成若干个小剂量以供全天施用。当然，如本领域技术人员将理解的，实际施用的剂量将取决于所治疗的病状、接受者的年龄、健康状况和体重、并行治疗(如果有的话)的类型以及治疗的频率。此外，有效剂量可以由本领域的技术人员在常规经验活性测试的基础上确定，以测量化合物在生物测定中的生物活性，并且由此确立要施用的适当剂量。
有效量的活性药物成分的组合可以通过任何具有类似效用的药剂所接受的施用模式以单剂量或多剂量施用，所述施用模式包括直肠、颊、鼻内和经皮途径、动脉内注射、静脉内、腹膜内、肠胃外、肌内、皮下、口服、局部或作为吸入剂。
在一些实施例中，本文所述的组合物进一步包括用于施用本文所述的化合物的控释、持释或缓释治疗剂型，所述治疗剂型涉及将化合物掺入到某些组合物的制剂中的合适递送系统中。此剂型以某种方式控制化合物的释放，使得在血液中的浓度保持相对恒定的情况下，化合物在血流中的有效浓度可以维持延长的时间段内，以提高治疗效果和/或使副作用最小化。另外，控释系统将提供化合物的血浆水平的最小峰谷波动。
带编号的实施例
在以下实施例中将进一步描述本公开，所述实施例不限制权利要求书中所描述的本公开的范围。
实施例1：一种式(II)缀合物：
Ab-L-
式(II)
其中A是靶向部分，任选地抗体或抗体片段，L是接头。
实施例2：根据实施例1所述的缀合物，其任选地进一步包含药物部分，其中所述药物部分选自依喜替康、Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
实施例3：根据实施例1或2所述的缀合物，其中所述依喜替康包含或具有式：
或其中所述PDD包含或具有式：
或其中所述PDD包含或具有式：
或其中所述PDD包含或具有式：
或其中所述Sn-38包含或具有式：
实施例3a：根据实施例1或实施例2所述的缀合物，其中所述缀合物进一步包含选自以下的药物部分：
实施例4：根据实施例1至3中任一项所述的缀合物，其中所述接头L包含下式或由其组成：
L1-LA-
其中LA是接头，并且L1是连接部分。
实施例5：根据实施例3所述的缀合物，其中所述接头LA包含下式或由其组成：
-[CH2CH2O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中XAA是氨基酸序列，并且p是0至50的整数，任选地其中接头LA进一步包含
实施例6：根据实施例5所述的缀合物，其中p是4，或者p是8，或者p是0。
实施例7：根据实施例5或实施例6所述的缀合物，其中XAA是缬氨酸-丙氨酸。
实施例8：根据实施例3至7中任一项所述的缀合物，其中L1是或包含任选地任选地任选地进一步包含
实施例9：根据实施例1所述的缀合物，其中所述接头L包含以下或由以下组成：
实施例10：根据实施例1至9中任一项所述的缀合物，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合。
实施例11：根据实施例10所述的缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
实施例12：根据实施例10所述的缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
实施例13：根据实施例1至12中任一项所述的缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含VH和VL，所述VH包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列，所述VL包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。
实施例14：根据实施例13所述的缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
实施例15：根据实施例1至14中任一项所述的缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含重链和轻链，所述重链包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列，所述轻链包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。
实施例16：根据实施例15所述的缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
实施例17：一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
L是接头；
D包含药物部分；并且
n是1至20的整数。
实施例18：根据实施例16所述的抗体-药物缀合物，其中所述药物部分D选自依喜替康、Dxd、Sn-38、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)和吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)。
实施例19：根据实施例17或18所述的抗体-药物缀合物，其中所述依喜替康包含或具有式：
或其中所述PDD包含或具有式：
或其中所述PDD包含或具有式：
或其中所述PDD包含或具有式：
或其中所述Sn-38包含或具有式：
实施例19a：根据实施例17至19中任一项所述的缀合物，其中所述药物部分D选自：
实施例20：根据实施例17至19中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述接头L包含下式或由其组成：
L1-LA-
其中LA是接头，并且L1是连接部分。
实施例21：根据实施例20所述的抗体-药物缀合物，其中所述接头LA包含下式或由其组成：
-[CH2CH2O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-
其中XAA是氨基酸序列，并且p是0至50的整数，任选地其中接头LA进一步包含
实施例22：根据实施例21所述的抗体-药物缀合物，其中p是8，或者p是0。
实施例23：根据实施例21或22所述的抗体-药物缀合物，其中XAA是缬氨酸-丙氨酸。
实施例24：根据实施例21至23中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中L1是或包含任选地任选地
实施例25：根据实施例24所述的抗体-药物缀合物，其中L1进一步包含
实施例26：根据实施例17至25中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述接头L包含以下或由其组成：
实施例27：根据实施例17所述的抗体-药物缀合物，其中L-D具有式：
实施例28：根据实施例17所述的抗体-药物缀合物，其中L-D具有式：
实施例29：根据实施例17至28中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中n是1至10、2至8或4至8的整数，任选地n是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，任选地n是4或8。
实施例30：根据实施例17至29中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
实施例31：根据实施例17至29中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
实施例32：根据实施例17至31中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含VH和VL，所述VH包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列，所述VL包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。
实施例33：根据实施例32所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
实施例34：根据实施例17至33中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含重链和轻链，所述重链包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列，所述轻链包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。
实施例35：根据实施例34所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
实施例36：根据实施例17至35中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物的药物-抗体比率(DAR)在约1至约10的范围内，任选地其中所述DAR是约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9或约10，任选地DAR是约4，任选地DAR是约8。
实施例37：一种药物组合物，其包含根据实施例17至36中任一项所述的抗体药物缀合物；以及药学上可接受的载剂。
实施例38：一种治疗癌症的方法，所述方法包含向有需要的受试者施用治疗有效量的根据实施例16至35中任一项所述的抗体药物缀合物或根据实施例36所述的药物组合物。
实施例39：根据实施例37所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组：胰腺癌(pancreatic cancer)、乳腺癌(breast cancer)、前列腺癌(prostate cancer)、淋巴瘤、皮肤癌、结肠癌(colon cancer)、黑色素瘤、恶性黑色素瘤、卵巢癌(ovarian cancer)、脑癌、原发性脑癌、头颈癌(head-neck cancer)、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、肝癌、膀胱癌(bladder cancer)、非小细胞肺癌、头颈癌(head or neck carcinoma)、乳腺癌(breastcarcinoma)、卵巢癌(ovarian carcinoma)、肺癌、小细胞肺癌(small-cell lungcarcinoma)、威尔姆氏瘤(Wilms'tumor)、宫颈癌、睾丸癌、膀胱癌(bladder carcinoma)、胰腺癌(pancreatic carcinoma)、胃癌、结肠癌(colon carcinoma)、前列腺癌(prostaticcarcinoma)、泌尿生殖系统癌、甲状腺癌、食管癌、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、肾上腺癌、肾细胞癌、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、恶性胰腺胰岛素瘤、恶性类癌、绒毛膜癌、蕈样肉芽肿、恶性高钙血症、宫颈增生、白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、毛细胞性白血病、神经母细胞瘤、横纹肌肉瘤、卡波西氏肉瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤、软组织肉瘤、成骨肉瘤、原发性巨球蛋白血症或视网膜母细胞瘤等。在其它实施例中，所述癌症是听神经瘤、腺癌、血管肉瘤、星形细胞瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌(TNBC)、支气管原癌、宫颈癌、脊索瘤、绒毛膜癌、结肠癌、结直肠癌、颅咽管瘤、囊腺癌、胚胎性癌、内皮癌、室管膜瘤、上皮癌、食道癌、尤文氏瘤、纤维肉瘤、胃癌(gastric cancer)、多形性胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、头颈癌、血管母细胞瘤、肝细胞瘤、肾癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、肺癌、淋巴管内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、髓样癌、髓母细胞瘤、黑色素瘤、脑膜瘤、间皮瘤、粘液肉瘤、鼻癌、神经母细胞瘤、少突神经胶质瘤、口腔癌、成骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳头状腺癌、乳头状癌、松果体瘤、前列腺癌、横纹肌肉瘤、直肠癌、肾细胞癌、视网膜母细胞瘤、肉瘤、皮脂腺癌、精原细胞瘤、皮肤癌、鳞状细胞癌、胃癌(stomach cancer)、汗腺癌、滑膜瘤、睾丸癌、小细胞肺癌、喉癌、子宫癌、威尔姆氏瘤、血癌、急性红白血病性白血病、急性淋巴母细胞性B细胞白血病、急性淋巴母细胞性T细胞白血病、急性淋巴母细胞性白血病、急性巨核细胞母细胞性白血病、急性单核母细胞性白血病、急性髓母细胞性白血病、急性髓单核细胞性白血病、急性非淋巴细胞性白血病、急性早幼粒细胞性白血病、急性未分化性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、毛细胞性白血病、多发性骨髓瘤、重链病、霍奇金氏病、多发性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、真性红细胞增多症或华氏巨球蛋白血症。
实施例40：根据实施例37或38所述的方法，其中三阴性乳腺癌(TNBC)中的所述癌症。
实施例41：一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
D包含药物部分；
n是1至20的整数；并且
L具有式：
实施例42：根据实施例41所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
实施例43：根据实施例41所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
实施例44：根据实施例41至43中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述药物部分包含依喜替康。
实施例44A：根据实施例41至43中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述接头L具有式：
实施例45：根据实施例41至43中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述药物部分包含Dxd。
实施例46：根据实施例41至43中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述药物部分包含单甲基奥瑞他汀E(MMAE)。
实施例47：根据实施例41至43中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述药物部分包含吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)，任选地其中所述PDD包含或具有式：
任选地，其中所述PDD包含或具有式：
任选地，其中所述PDD包含或具有式：
实施例48：根据实施例41至43中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述药物部分包含Sn-38。
实施例49：根据实施例41至48中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物的药物-抗体比率(DAR)在约1至约10的范围内，任选地其中所述DAR是约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9或约10，任选地DAR是约4，任选地DAR是约8。
实施例50：一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
D包含药物部分；
n是1至20的整数；并且
L具有式：
实施例51：根据实施例49所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
实施例52：根据实施例59所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
实施例53：根据实施例49至51中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述药物部分包含依喜替康。
实施例54：根据实施例49至51中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述药物部分包含Dxd。
实施例55：根据实施例49至51中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述药物部分包含单甲基奥瑞他汀E(MMAE)。
实施例56：根据实施例49至51中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述药物部分包含吡啶并苯并二氮杂环庚熳(PDD)，任选地其中所述PDD包含或具有式：
任选地，其中所述PDD包含或具有式：
任选地，其中所述PDD包含或具有式：
实施例57：根据实施例49至51中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述药物部分包含Sn-38。
实施例58：根据实施例49至56中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物的药物-抗体比率(DAR)在约1至约10的范围内，任选地其中所述DAR是约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9或约10，任选地DAR是约4，任选地DAR是约8。
实施例59：一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段；
n是1至20的整数；并且
L-D具有式：
实施例60：一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段；
n是1至20的整数；并且
L-D具有式：
实施例61：一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段；
n是1至20的整数；并且
L-D具有式：
实施例62：一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段；
n是1至20的整数；并且
L-D具有式：
实施例63：一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段；
n是1至20的整数；并且
L-D具有式：
实施例64：一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段；
n是1至20的整数；并且
L-D具有式：
实施例65：根据实施例58至63中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物的药物-抗体比率(DAR)在约1至约10的范围内，任选地其中所述DAR是约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9或约10，任选地DAR是约4，任选地DAR是约8。
实施例66：根据实施例58至65中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中n是1至10、2至8或4至8的整数，任选地n是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，任选地n是4或8，任选地n是4，任选地n是8。
以下实例进一步详细地描述了本公开。这些实例仅出于说明目的提供，并且不应被视为限制本公开。
实例
实例1：化学合成
总体评论
从标准商业供应商购买所有试剂和溶剂，并如所购买的使用所有试剂和溶剂。在氩气的惰性气氛下使用无水溶剂进行无水反应，所述无水溶剂如所购买的在不进一步干燥的情况下使用。在硅胶铝板(默克公司(Merck)60，F254)上进行薄层色谱法(TLC)，并且使用拜泰齐公司(Biotage)Isolera One(自动化快速色谱法系统)在通过UV(254nm)和TLC进行监测的同时进行闪速柱色谱法。
使用具有Cryoprobe的布鲁克公司(Bruker)600MHz Ultrashield(具有Cryoplatform的布鲁克公司Avance NEO控制台)或瓦里安公司(Varian)Mercury Vx安捷伦公司(400MHz)光谱仪在室温下获得所有核磁共振(NMR)光谱，对于所述光谱，化学位移以相对于溶剂的ppm表示，并且偶联常数以Hz表示。在拜泰齐公司Initiator+微波合成仪上进行微波反应。在赛默飞世尔科技公司(Thermo Scientific)-Exactive HCD Orbitrap质谱仪上进行高分辨率质谱法(HRMS)。除非另有规定，否则产率是指分离的材料(通过TLC和NMR，均质的)，并且名称是根据IUPAC命名法分配的。
在沃特世公司(Waters)Alliance 2695上用包含流动相的水溶液(A)和乙腈(B)执行液相色谱法质谱法(LCMS)分析方法A-C。将甲酸(0.1％)添加到乙腈和水两者中，以确保整个分析中的酸性条件。功能类型：二极管阵列(535次扫描)。柱类型：整体C18 50X4.60mm。使用与HPLC联接的沃特世公司Micromass ZQ仪器与沃特世公司2996PDA收集质谱法数据。所使用的沃特世公司Micromass ZQ参数为：毛细管电压(kV)，3.38；锥孔电压(V)，35；萃取电压(V)，3.0；源温度(℃)，100；脱溶剂化温度(℃)，200；锥孔流速(升/小时)，50；脱溶剂化流速(升/小时)，250。梯度条件描述如下。
方法A(10分钟)：在3分钟内从95％的A/5％的B至50％的B。然后，在2分钟内从50％的B至80％的B。然后，在1.5分钟内从80％的B至95％的B，并保持恒定，持续1.5分钟。然后，将其在0.2分钟内降低到5％的B，并维持为5％的B，持续1.8分钟。流速为0.5毫升/分钟，将200μL通过零死体积T件分流，所分流的200μL被传递到质谱仪中。UV检测器的波长范围为220-400nm。
方法B(5分钟)：在3分钟内从95％的A/5％的B至90％的B。然后，在0.5分钟内从90％的B至95％的B，并保持恒定，持续1分钟。然后，将其在0.5分钟内降低到5％的B。流速为1.0毫升/分钟，将100μL通过零死体积T件分流，所分流的100μL被传递到质谱仪中。UV检测器的波长范围为220-500nm。
方法C(5分钟)：从95％的A/5％的B在3分钟内增加到90％的B，并且在另外0.5分钟内增加到95％的B。然后将梯度保持在95％的B下，持续1分钟，并且然后在0.5分钟内返回到5％的B。运行的总持续时间为5分钟，并且溶剂流速为1毫升/分钟，将100μL通过零死体积T件分流，所分流的100μL被传递到质谱仪中。UV检测器的波长范围为220-500nm。
在岛津株式会社(Shimadzu)LC-20AD系列、二元泵、二极管阵列检测器上执行液相色谱法质谱法(LCMS)分析方法D-G。柱类型：安捷伦公司Poroshell 120EC-C18，2.7μm，4.6×50mm。流动相：A：0.05％甲酸水溶液(v/v)；B：含0.05％甲酸的乙腈(v/v)。流速：在25℃下1毫升/分钟。检测器：214nm，254nm。梯度停止时间：5分钟。MS：2020，四极杆LC/MS，离子源：API-ESI，TIC：100-1300m/z，干燥气体流速：15升/分钟，雾化器压力：1.5升/分钟，干燥气体温度：250℃，V毛细管：4500V。样品制备：将样品以1-10μg/mL溶解于甲醇中，然后通过0.22μm滤膜过滤。进样体积：1-10μL。梯度条件描述如下。
方法D(5分钟)：20％的A/80％的B，持续0.5分钟，将其在3.5分钟内增加到100％的B，然后保持在100％的B下，持续0.5分钟。然后将此返回到20％的A/80％的B，持续0.5分钟。
方法E(5分钟)：50％的A/50％的B，持续0.5分钟，将其在3.5分钟内增加到100％的B，然后保持在100％的B下，持续0.5分钟。然后将此返回到50％的A/50％的B，持续0.5分钟。
方法F(5分钟)：85％的A/15％的B，持续0.5分钟，将其在3.5分钟内增加到100％的B，然后保持在100％的B下，持续0.5分钟。然后将此返回到85％的A/15％的B，持续0.5分钟。
方法G(5分钟)：97％的A/3％的B，持续0.5分钟，将其在3.5分钟内增加到30％的A/70％的B，然后在0.5分钟内增加到100％的B。然后将此返回到97％的A/3％的B，持续0.5分钟。
在SGWzz-1自动偏振仪(上海沈光光仪器有限公司(Shanghai Shen GuangInstrument Co.,Ltd.))或Bellingham-Stanley公司(Bellingham-Stanley)ADP 440+偏振仪上测量光学旋转。
4-(苄氧基)-3-甲氧基苯甲醛(2)
使化合物香草醛(1)(200g，1.31mol)、溴化苄(236g，1.38mol)和碳酸钾(545g，3.94mol)于甲醇(1.20L)中的混合物回流5小时。将反应混合物过滤，并且使滤液在减压下蒸发，以产生呈淡黄色固体的标题化合物(271g，85％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.83(s,1H),7.47-7.35(m,6H),7.33(d,J＝7.2Hz,1H),6.98(d,J＝8.2Hz,1H),5.24(s,2H),3.94(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ191.0,153.6,150.1,136.0,130.3,128.7,128.2,127.2,126.6,112.3,109.3,70.9,56.1；MS(ES+):m/z＝243(M+H)+；LCMS(方法A):tR＝7.53分钟。
4-(苄氧基)-5-甲氧基-2-硝基苯甲醛(3)
在0℃下，逐滴向4-(苄氧基)-3-甲氧基苯甲醛(2)(130g，537mmol)于三氟乙酸(600mL)中的溶液中装入硝酸钾(65g，644mmol)于三氟乙酸(600mL)中的溶液。将反应混合物搅拌1小时，并然后用水(2.40L)稀释。将所产生的沉淀物过滤，并用冷水(500mL×2)洗涤，以产生呈黄色固体的标题化合物(125g，81％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.43(s,1H),7.67(s,1H),7.46-7.30(m,6H),5.27(s,2H),4.02(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ187.8,153.7,151.4,134.85,129.0,128.9,128.7,127.6,125.7,110.0,108.9,71.6,56.7；MS(ES-):m/z＝286(M-H)-；LCMS(方法A):tR＝7.87分钟。
4-羟基-5-甲氧基-2-硝基苯甲醛(4)
向4-(苄氧基)-5-甲氧基-2-硝基苯甲醛(3)(100g，348mmol)于冰乙酸(800mL)中的溶液中装入氢溴酸水溶液(48％v/v，88.0mL，522mmol)，并加热到85℃，在搅拌下持续1小时，之后通过TLC判断反应完成。在使所产生的混合物冷却到室温之后，将其在水(1.60L)中稀释，并且将所产生的沉淀物过滤，并用冷水(100mL×3)洗涤，以产生呈黄色固体的标题化合物(50.0g，73％)，所述标题化合物在不进一步纯化的情况下立即用于后续步骤。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.11(br s,1H),10.15(br s,1H),7.50(s,1H),7.35(s,1H),3.94(s,3H)；MS(ES-):m/z＝196(M-H)-；LCMS(方法B):tR＝2.55分钟。
5-甲氧基-2-硝基-4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)苯甲醛(5)
将4-羟基-5-甲氧基-2-硝基苯甲醛(4)(50.0g，254mmol)、三异丙基甲硅烷基氯(59.7mL，279mmol)和咪唑(51.8g，761mmol)的混合物加热，并在100℃下搅拌30分钟。将反应混合物倒入到冰水中，并用乙酸乙酯(500mL×3)萃取。使有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所产生的残余物通过用40-60℃的乙酸乙酯/石油精(5％)洗脱进行的闪速柱色谱法(二氧化硅)进行纯化，以产生呈黄色固体的标题化合物(57.5g，64％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.42(s,1H),7.59(s,1H),7.40(s,1H),3.95(s,3H),1.33-1.24(m,3H),1.07(s,18H)。
5-甲氧基-2-硝基-4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)苯甲酸(6)
在室温下，将亚氯酸钠(80％，46.0g，407mmol)和磷酸钠一元二水合物(35.5g，228mmol)于水(200mL)中的溶液添加到5-甲氧基-2-硝基-4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)苯甲醛(5)(57.5g，163mmol)于四氢呋喃(800mL)中的溶液中。将过氧化氢(30％w/w，235mL，2.28mol)立即添加到经剧烈搅拌的双相混合物中。使起始材料溶解，并且反应混合物的温度上升到45℃。30分钟后，通过TLC判断反应已完成。随后将混合物用柠檬酸酸化到pH＝3-4，并且用乙酸乙酯(500mL×3)萃取。将合并的有机萃取物用水(150mL)和盐水(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并在真空中浓缩。然后将残余物通过用40-60℃的乙酸乙酯/石油精(10％)洗脱然后用甲醇/二氯甲烷(10％)洗脱进行的闪速柱色谱法(二氧化硅)进行纯化，以产生呈黄色油状物的标题化合物(38.0g，63％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.81(s,1H),7.35(s,1H),7.25(s,1H),3.91(s,3H),1.26(q,J＝7.4Hz,3H),1.09(d,J＝7.4Hz,18H)；MS(ES–):m/z＝368(M-H)-；LCMS(方法B):tR＝4.75分钟。
(S)-(2-(羟甲基)哌啶-1-基)(5-甲氧基-2-硝基-4((三异丙基甲硅烷基)氧基)苯基)甲酮(7)
将5-甲氧基-2-硝基-4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)苯甲酸(6)(28.0g，75.8mmol)、HATU(31.7g，83.4mmol)和干三乙胺(44mL)于干二氯甲烷(300mL)中的溶液在室温下搅拌30分钟。添加(S)-哌啶-2-基甲醇(11.4g，98.5mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物在二氯甲烷(500mL×2)与水(100mL)之间分配。然后将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤，并在真空中浓缩。将所产生的残余物通过用40-60℃的乙酸乙酯/石油精(50％至75％)洗脱进行的柱色谱法(二氧化硅)进行纯化，以产生呈黄色固体的标题化合物(20.0g，57％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)旋转异构体的混合物,δ7.68-7.65(m,1H),7.03-6.65(m,1H),5.04-4.69(m,1H),4.12-4.05(m,0.4H),4.01-3.95(m,0.5H),3.92-3.89(m,2.6H),3.83-3.74(m,1.5H),3.64-3.59(m,0.4H),3.45-3.40(m,0.3H),3.21-3.01(m,1.4H),2.87-2.79(m,0.4H),1.97-1.94(m,0.6H),1.88-1.77(m,0.6H),1.73-1.62(m,3H),1.56-1.44(m,2H),1.29-1.24(m,3H),1.09(d,J＝7.3Hz,18H)；MS(ES+):m/z＝467(M+H)+；LCMS(方法B):tR＝4.75分钟。
(S)-(2-氨基-5-甲氧基-4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)苯基)(2-(羟甲基)哌啶-1-基)甲酮(8)
向(S)-(2-(羟甲基)哌啶-1-基)(5-甲氧基-2-硝基-4((三异丙基甲硅烷基)氧基)苯基)甲酮(7)(1.00g，2.14mmol)于四氢呋喃(5mL)中的溶液中装入活性炭负载钯(10wt.％，100mg)、甲酸铵(1.10g，17.1mmol)和水(1mL)，并在室温下在氩气下搅拌2小时。将所产生的混合物通过硅藻土过滤，将滤饼用乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)洗涤，并且将滤液分离。然后将有机相用盐水(50mL x 2)萃取，经硫酸镁干燥，过滤，并在真空中浓缩。通过用40-60℃的乙酸乙酯/石油精(50％至67％)洗脱进行的闪速柱色谱法(二氧化硅)进行的纯化产生呈黄色固体的标题化合物(892mg，95％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.67(s,1H),6.30(s,1H),4.00-3.81(m,4H),3.72(s,3H),3.57(s,1H),3.08(s,1H),1.68-1.64(m,4H),1.57-1.43(m,2H),1.28-1.17(m,3H),1.08(d,J＝7.4Hz,18H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ171.8,147.9,143.7,133.2,112.5,110.0,109.5,68.7,61.0,56.4,30.9,25.8,19.9,17.9,12.9；MS(ES+):m/z＝437(M+H)+；LCMS(方法C):tR＝4.07分钟。
(S)-(2-(2-(羟甲基)哌啶-1-羰基)-4-甲氧基-5-((三异丙基甲硅烷基)氧基)苯基)氨基甲酸烯丙酯(9)
使(S)-(2-氨基-5-甲氧基-4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)苯基)(2-(羟甲基)哌啶-1-基)甲酮(8)(892mg，2.04mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液冷却到-10℃，并在氩气下逐滴装入吡啶(380μL)和氯甲酸烯丙酯(228μL，2.14mmol)。35分钟后，将反应混合物用二氯甲烷(10mL)稀释，然后用饱和硫酸铜水溶液(10mL×2)和盐水(10mL)萃取，经硫酸镁干燥，过滤，并在真空中浓缩。通过用40-60℃的乙酸乙酯/石油精(50％至75％)洗脱进行的闪速柱色谱法(二氧化硅)进行的纯化产生呈淡黄色固体的标题化合物(907mg，85％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.08(s,1H),7.62(s,1H),6.75(s,1H),5.92(ddt,J＝17.2,10.7,5.5Hz,1H),5.32(dt,J＝17.3,1.7Hz,1H),5.20(dt,J＝10.6,1.4Hz,1H),4.61(dt,J＝5.5,1.5Hz,2H),3.88(t,J＝10.7Hz,1H),3.76(s,3H),3.61-3.57(m,1H),3.20-3.02(m,2H),2.03(s,1H),1.65-1.62(m,3H),1.53-1.40(m,2H),1.29-1.24(m,4H),1.11-1.08(m,18H)；MS(ES+):m/z＝522(M+H)+；LCMS(方法A):tR＝9.62分钟。
(6aS)-6-羟基-2-甲氧基-12-氧代-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)-6,6a,7,8,9,10-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-5(12H)-甲酸烯丙酯(10)
向(S)-(2-(2-(羟甲基)哌啶-1-羰基)-4-甲氧基-5-((三异丙基甲硅烷基)氧基)苯基)氨基甲酸烯丙酯(9)(17.0g，32.7mmol)于二氯甲烷(150mL)中的溶液中装入(二乙酰氧基碘)苯(12.6g，39.2mmol)和2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基(510mg，3.30mmol)，并在室温下搅拌16小时。然后将所产生的混合物用二氯甲烷(350mL)稀释，并且依序用饱和焦亚硫酸钠水溶液(100mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)洗涤。然后将有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤，并在真空中浓缩。然后将所产生的残余物通过用40-60℃的乙酸乙酯/石油精(25％至50％)洗脱进行的闪速柱色谱法(二氧化硅)进行纯化，以产生呈淡黄色固体的标题化合物(13.0g，77％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.13(s,1H),6.65(s,1H),5.90(d,J＝10.3Hz,1H),5.76(s,1H),5.14(t,J＝12.1Hz,2H),4.59(dd,J＝13.1,5.3Hz,1H),4.44(dd,J＝12.9,5.1Hz,1H),4.34(dt,J＝13.5,4.1Hz,1H),3.83(s,3H),3.77(br,1H),3.45(ddd,J＝10.1,5.9,4.0Hz,1H),3.10-2.99(m,1H),2.09-1.98(m,1H),1.82-1.67(m,2H),1.67-1.56(m,3H),1.28-1.15(m,3H),1.06(dd,J＝7.4,2.5Hz,18H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ169.2,156.2,150.6,147.6,131.9,127.0,125.7,121.2,118.2,110.9,82.3,66.9,55.5,55.3,38.6,23.2,23.0,18.2,17.8,12.8；MS(ES+):m/z＝519(M+H)+；LCMS(方法A):tR＝8.67分钟。
(6aS)-2-甲氧基-12-氧代-6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)-6,6a,7,8,9,10-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-5(12H)-甲酸烯丙酯(11)
向(6aS)-6-羟基-2-甲氧基-12-氧代-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)-6,6a,7,8,9,10-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-5(12H)-甲酸烯丙酯(10)(14.0g，27.0mmol)于四氢呋喃(130mL)中的溶液中装入3,4-二氢-2H-吡喃(24.6g，270mmol)和对甲苯磺酸一水合物(140mg，0.76mmol)，并在室温下搅拌18小时。然后将所产生的混合物用乙酸乙酯(360mL)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)和盐水(100mL)洗涤。将有机相经硫酸钠干燥，过滤，并在真空中浓缩。通过用40-60℃的乙酸乙酯/石油精(17％)洗脱进行的闪速柱色谱法(二氧化硅)进行的纯化产生呈黄色油状物的标题化合物(12.5g，77％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),1:1非对映异构体的混合物,δ7.13(s,0.4H),7.10(s,0.5H),6.90(s,0.5H),6.52(s,0.4H),6.15(d,J＝10.0Hz,0.4H),5.98(d,J＝10.0Hz,0.5H),5.80-5.68(m,1H),5.17-4.94(m,3H),4.64-4.21(m,3H),3.91-3.85(m,1H),3.83(d,J＝1.8Hz,3H),3.66-3.39(m,2H),3.14-3.00(m,1H),2.08-1.87(m,1H),1.83-1.33(m,12H),1.26-1.19(m,3H),1.08-1.05(m,18H)；MS(ES+):m/z＝603(M+H)+；LCMS(方法A):tR＝9.95分钟。
(6aS)-3-羟基-2-甲氧基-12-氧代-6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-6,6a,7,8,9,10-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-5(12H)-甲酸烯丙酯(12)
在室温下向(6aS)-2-甲氧基-12-氧代-6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)-6,6a,7,8,9,10-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-5(12H)-甲酸烯丙酯(11)(10.5g，17.4mmol)于四氢呋喃(33mL)中的溶液中装入四丁基氟化铵(1M于四氢呋喃中，26.1mL，26.1mmol)，并将其搅拌，以产生瞬时橙色。10分钟后，将反应混合物在真空中浓缩，然后立即通过用40-60℃的乙酸乙酯/石油精(0％至100％)洗脱进行的闪速柱色谱法(二氧化硅)进行纯化，以产生呈白色固体的标题化合物(7.13g，92％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),非对映异构体的混合物,δ7.16(s,0.4H),7.13(s,0.6H),6.91(br,0.5H),6.62(br,0.3H),6.16(d,J＝10.1Hz,0.4H),5.99(d,J＝10.1Hz,0.6H),5.76(ddd,J＝15.8,10.3,5.0Hz,0.8H),5.14-5.03(m,2H),4.98(br,0.5H),4.61(dd,J＝13.7,4.9Hz,0.8H),4.55-4.48(m,0.3H),4.48(br,0.3H),4.40(dd,J＝13.9,5.2Hz,0.5H),4.32-4.20(m,1H),3.90(s,3H),3.88-3.81(m,1H),3.63(br,0.4H),3.59-3.52(m,0.6H),3.49-3.43(m,1H),3.11-2.98(m,1H),1.97-1.89(m,1H),1.80-1.47(m,12H)；13C NMR(100MHz,CDCl3),非对映异构体的混合物,δ169.4,169.2,155.8,147.9,147.7,146.6,146.4,132.2,132.0,128.4,128.2,125.9,125.5,117.0,116.4,115.8,110.2,109.8,100.5,95.3,88.0,84.1,66.5,66.3,63.8,63.2,60.4,56.2,56.1,55.4,55.2,38.8,38.8,31.0,30.6,25.2,25.1,23.22,23.1,23.0,23.0,20.1,19.7,18.4,18.2；MS(ES+):m/z＝447(M+H)+；LCMS(方法A):tR＝6.87分钟。
(6aS)-2-甲氧基-3-(4-甲氧基-4-氧代丁氧基)-12-氧代-6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-6,6a,7,8,9,10-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-5(12H)-甲酸烯丙酯(13)
向(6aS)-3-羟基-2-甲氧基-12-氧代-6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-6,6a,7,8,9,10-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-5(12H)-甲酸烯丙酯(12)(1.0g，2.24mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中装入碳酸钾(464mg，3.36mmol)和4-溴丁酸甲酯(296μL，2.35mmol)，并将所产生的混合物在室温下快速搅拌16小时。在稀释到乙酸乙酯(100mL)中之后，将溶液用盐水(2x50mL)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤,并且在真空中浓缩。通过用甲醇/二氯甲烷(0％至2％)洗脱进行的闪速柱色谱法(二氧化硅)进行的纯化产生呈乳膏状固体的标题化合物(1.02g，84％)(非对映异构体的混合物)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.50(s,0.6H),7.02(s,0.4H),6.74(s,0.4H),6.48(s,0.6H),6.07(d,J＝9.8Hz,0.6H),5.9(d,J＝10.2Hz,0.4H),5.70-5.62(m,1H),5.01-4.92(m,3H),4.55-4.20(m,2H),4.18-4.13(m,1H),3.96-3.91(m,3H),3.78(s,3H),3.55(s,3H),3.40-3.34(m,2H),3.00-2.91(m,1H),2.24(t,J＝7.0Hz,2H),2.05-2.02(m,2H),1.67-1.43(m,12H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ173.4,168.5,150.1,149.2,133.2,127.6,126.4,116.9,114.6,110.8,99.8,94.7,88.0,83.9,68.0,66.0,63.3,62.5,56.2,55.4,51.8,38.6,30.6,30.2,25.3,24.3,23.1,19.7,18.3；MS(ES+):m/z＝547(M+H)+；LCMS(方法A):tR＝7.70分钟。
4-(((6aS)-5-((烯丙基氧基)羰基)-2-甲氧基-12-氧代-6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-5,6,6a,7,8,9,10,12-八氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-3-基)氧基)丁酸(14)
向(6aS)-2-甲氧基-3-(4-甲氧基-4-氧代丁氧基)-12-氧代-6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-6,6a,7,8,9,10-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-5(12H)-甲酸烯丙酯(13)(770mg，1.40mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中装入氢氧化钠水溶液(1M，10.0mL，10.00mmol)，并且将所产生的混合物在室温下搅拌2小时，之后在真空中浓缩。然后添加水(20mL)，并且通过谨慎添加乙酸水溶液(5M，10mL，50mmol)来实现中和。在用乙酸乙酯(2x50mL)萃取之后，然后将合并的有机萃取物用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并在真空中浓缩，以产生呈黄色油状物的标题化合物(700mg，93％)(非对映异构体的混合物)。所述产物在不进行任何进一步纯化的情况下用于后续步骤。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(br.s.,1H),7.03(s,0.6H),7.01(s,0.4H),6.86(s,0.6H),6.78(s,0.4H),6.01(d,J＝10.1,0.6H),5.92(d,J＝9.8,0.4H),5.83-5.69(m,1H),5.11-4.96(m,3H),4.64-4.36(m,2H),4.16-4.02(m,1H),400-3.92(m,2H),3.80(s,3H),3.79-3.70(m,2H),3.54-3.46(m,1H),2.89-2.83(m,1H),2.36(t,J＝7.2Hz,2H),1.96-1.89(m,2H),1.71-1.41(m,12H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ174.5,174.4,168.5,168.5,150.1,149.1,133.1,127.6,126.3,114.5,110.7,109.1,99.7,84.4,68.0,67.9,56.2,52.9,38.5,30.6,30.3,30.2,25.4,25.3,23.1,23.0,18.3；MS(ES+/-):m/z＝533(M+H)+,531(M-H)-；LCMS(方法A):tR＝6.98分钟。
(1-甲基-5-((4-(2,2,2-三氟乙酰胺基)苯基)氨基甲酰基)-1H-吡咯-3-基)氨基甲酸叔丁酯(15)
将4-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸(647mg，2.69mmol)、4-(二甲基氨基)吡啶(898mg，7.35mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.2g，6.25mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的溶液搅拌30分钟，之后，然后添加N-(4-氨基苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺(500mg，2.45mmol)。将所产生的溶液在室温下搅拌18小时，并且然后用饱和碳酸氢钠水溶液(15mL)淬灭。在用乙酸乙酯(2x50mL)萃取之后，使合并的有机萃取物经硫酸镁干燥，并且然后在真空中浓缩。将所产生的残余物通过用40-60℃的乙酸乙酯/石油精(0％至100％)洗脱进行的闪速柱色谱法(二氧化硅)进行纯化，以产生呈乳膏状固体的标题化合物(839mg，80％)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.17(s,1H),9.85(s,1H),9.11(s,1H),7.74(d,J＝9.0Hz,2H),7.58(d,J＝9.0Hz,2H),6.94(s,1H),3.81(s,3H),1.46(s,9H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ160.2,153.3,1375,131.6,123.1,122.9,121.8,120.8,118.4,117.3,115.4,105.2,78.8,36.6,28.7；MS(ES+):m/z＝427(M+H)+；LCMS(方法B):tR＝3.83分钟。
4-氨基-1-甲基-N-(4-(2,2,2-三氟乙酰胺基)苯基)-1H-吡咯-2-甲酰胺盐酸盐(16)
向(1-甲基-5-((4-(2,2,2-三氟乙酰胺基)苯基)氨基甲酰基)-1H-吡咯-3-基)氨基甲酸叔丁酯(15)(200mg，0.469mmol)于二氯甲烷/甲醇(9:1，1mL)中的溶液中装入HCl(4M于1,4-二噁烷中，1mL)，并在室温下搅拌20分钟，之后在真空中浓缩。然后将二乙醚(10mL)添加到残余物中，之后再次浓缩，并且然后施加强真空1小时，以产生呈白色固体的标题化合物(170mg，粗品)，所述产物在不进一步纯化的情况下立即用于后续步骤。
MS(ES+):m/z＝327(M+H)+；LCMS(方法A):tR＝4.80分钟。
(6aS)-2-甲氧基-3-(4-((1-甲基-5-((4-(2,2,2-三氟乙酰胺基)苯基)氨基甲酰基)-1H-吡咯-3-基)氨基)-4-氧代丁氧基)-12-氧代-6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-6,6a,7,8,9,10-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-5(12H)-甲酸烯丙酯(17)
将4-氨基-1-甲基-N-(4-(2,2,2-三氟乙酰胺基)苯基)-1H-吡咯-2-甲酰胺盐酸盐(16)(68mg，0.19mmol)添加到4-(((6aS)-5-((烯丙氧基)羰基)-2-甲氧基-12-氧代-6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-5,6,6a,7,8,9,10,12-八氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-3-基)氧基)丁酸(14)(11.0mg，0.21mmol)、4-(二甲基氨基)吡啶(69mg，0.56mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(90mg，0.47mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物中，所述混合物先前被搅拌30分钟。将所产生的溶液在室温下搅拌18小时。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)淬灭，并用盐水(50mL)稀释。将水相用乙酸乙酯(2x30mL)萃取，并且然后将合并的有机萃取物在真空中浓缩。将所产生的残余物通过用甲醇/二氯甲烷(0％至10％)洗脱进行的柱色谱法(二氧化硅)进行纯化，以产生呈粘性棕色油状物的标题化合物(140mg，87％)(非对映异构体的混合物)。
1H NMR(600MHz,MeOD)δ8.01(s,1H),7.66(d,J＝9.0Hz,2H),7.63-7.60(m,2H),7.16-7.14(m,1H),6.90(s,1H),6.85(s,1H),5.97(d,J＝8.1Hz,1H),5.80(s,1H),5.09(d,J＝11.3Hz,2H),4.31-4.19(m,2H),4.15-4.02(m,4H),3.91-3.81(m,9H),3.52(dt,J＝10.2,4.1Hz,1H),2.56(t,J＝7.2Hz,2H),2.21-2.16(m,2H),1.81-1.53(m,12H)；13C NMR(150MHz,MeOD)δ172.6,171.5,162.3,157,0,156.6,152.0,150.7,137.9,133.7,133.5,129.4,126.7,124.5,123.2,122.7,122.4,118.5,118.0,116.6,115.8,111.7,106.8,101.4,83.6,69.6,67.6,63.3,58.0,56.8,54.9,50.0,40.1,37.0,31.7,26.6,24.1,20.6,19.3,18.5；MS(ES+):m/z＝842(M+H)+；LCMS(方法B):tR＝4.00分钟。
(6aS)-3-(4-((5-((4-氨基苯基)氨基甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基)-4-氧代丁氧基)-2-甲氧基-12-氧代-6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-6,6a,7,8,9,10-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-5(12H)-甲酸烯丙酯(18)
向(6aS)-2-甲氧基-3-(4-((1-甲基-5-((4-(2,2,2-三氟乙酰胺基)苯基)氨基甲酰基)-1H-吡咯-3-基)氨基)-4-氧代丁氧基)-12-氧代-6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-6,6a,7,8,9,10-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-5(12H)-甲酸烯丙酯(17)(138mg，0.164mmol)于1,4-二噁烷(5mL)中的溶液中装入氢氧化钠水溶液(1M，5.0mL，5.00mmol)。将反应混合物在室温下搅拌4小时，并且然后在真空中浓缩，之后然后将其稀释到盐水(20mL)中。将水层用乙酸乙酯(2x20mL)萃取，并且然后将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤，并在真空中浓缩，以产生呈灰色固体的标题化合物(120mg，98％)(非对映异构体的混合物)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.85(s,1H),9.41(s,1H),7.28(d,J＝8.7Hz,2H),7.17(s,1H),7.06(s,1H),6.90(s,1H),6.81(s,1H),6.51(d,J＝8.7Hz,2H),5.98(dd,J＝57.3,9.9Hz,1H),5.80-5.69(m,1H),5.18-4.69(m,5H),4.67-4.35(m,2H),4.09-3.93(m,3H),3.82(s,3H),3.79(d,J＝3.0Hz,3H),3.79-3.72(m,2H),3.56-3.45(m,1H),2.90(s,1H),2.42(t,J＝7.1Hz,2H),2.04-1.97(m,2H),1.75-1.32(m,12H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ169.3,168.6,162.8,159.8,150.3,149.2,145.2,133.2,128.7,127.7,126.3,123.6,122.6,122.4,118.5,116.8,114.5,114.1,110.9,104.4,94.7,83.9,68.5,66.1,56.2,55.3,38.7,36.5,36.2,32.1,31.2,30.6,25.4,25.2,24.9,23.1,23.0,19.4,18.3；MS(ES+):m/z＝745(M+H)+；LCMS(方法A):tR＝5.88分钟。
(S)-N-(4-氨基苯基)-4-(4-((2-甲氧基-12-氧代-6a,7,8,9,10,12-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-3-基)氧基)丁酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(19)
向(6aS)-3-(4-((5-((4-氨基苯基)氨基甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基)-4-氧代丁氧基)-2-甲氧基-12-氧代-6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-6,6a,7,8,9,10-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-5(12H)-甲酸烯丙酯(18)(43mg，0.05mmol)于二氯甲烷(2mL)中的溶液中装入四(三苯基膦)钯(0)(3mg，5mol％)和吡咯烷(5μL，0.06mmol)。将所产生的混合物在室温下搅拌30分钟，并且然后在真空中浓缩，并经受强真空40分钟。通过用甲醇/二氯甲烷(0％至10％)洗脱进行的闪速柱色谱法(二氧化硅)进行的纯化产生呈乳膏状固体的标题化合物(21.8mg，78％)。
[α]D 20＝93.0°(c 1.36,DMSO)；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.85(s,1H),9.43(s,1H),8.00(d,J＝5.7Hz,1H),7.31-7.26(m,3H),7.17(d,J＝1.8Hz,1H),6.83(d,J＝1.8Hz,1H),6.80(s,1H),6.51(d,J＝8.8Hz,2H),4.84(s,2H),4.14-4.05(m,2H),3.82(s,3H),3.79(s,3H),3.74-3.64(m,3H),2.43(t,J＝7.4Hz,2H),2.04(dt,J＝13.9,6.8Hz,2H),1.90-1.83(m,1H),1.76-1.55(m,5H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ168.8,166.3,164.7,159.3,150.2,147.1,144.7,139.9,128.2,123.2,122.1,121.9,120.7,118.1,113.7,111.4,109.5,104.0,67.8,55.6,54.9,48.6,39.5,36.01,31.9,24.7,23.7,22.6,17.7；MS(ES+):m/z＝559(M+H)+；LCMS(方法B):tR＝2.53分钟；HRMS(ESI,m/z):C30H35N6O5 +([M]+H)+计算值，559.2663，实验值，559.2651。
N-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)丙酰胺基)苯基)-4-(4-(((S)-2-甲氧基-12-氧代-6a,7,8,9,10,12-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-3-基)氧基)丁酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(20)
使(S)-N-(4-氨基苯基)-4-(4-((2-甲氧基-12-氧代-6a,7,8,9,10,12-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-3-基)氧基)丁酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(19)(350mg，0.63mmol)和(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基)-L-缬氨酰基-L-丙氨酸(252mg，0.95mmol)于二氯甲烷/甲醇(19:1，20mL)中的溶液冷却到0℃，并向其装入1,2-二氢-2-乙氧基喹啉-1-甲酸乙酯(234mg，0.95mmol)。将所产生的混合物在室温下搅拌18小时，此时，将其稀释到40-60℃(300mL)石油精中，并在减压下过滤。用甲醇/二氯甲烷(5％)洗脱进行的制备型TLC(二氧化硅)产生呈黄色固体的标题化合物(158mg，27％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.91(s,1H),9.84(s,1H),9.76(s,1H),8.13(d,J＝6.8Hz,1H),8.00(d,J＝5.6Hz,1H),7.82(d,J＝8.6Hz,1H),7.65-7.58(m,2H),7.57-7.46(m,2H),7.27(s,1H),7.21(s,1H),6.99(s,2H),6.97-6.91(d,J＝1.9Hz,1H),6.80(s,1H),4.37(t,J＝7.2Hz,1H),4.20-4.08(m,3H),4.07-3.89(m,2H),3.87-3.64(m,7H),3.17(d,J＝5.2Hz,2H),2.44(t,J＝7.4Hz,2H),2.24-2.10(m,2H),2.05(h,J＝7.6,7.2Hz,3H),1.96(q,J＝6.8Hz,1H),1.89-1.41(m,10H),1.30(d,J＝7.0Hz,3H),1.23(s,1H),0.84(dd,J＝16.0,6.8Hz,6H)；MS(ES+):m/z＝922(M+H)+；LCMS(方法F):tR＝3.02分钟。
4-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(21)
向4-溴-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(500mg，2.3mmol)于乙腈(10mL)和水(5mL)中的溶液中装入(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(805mg，2.52mmol)、碳酸钾(954mg，6.9mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(140mg，5mol％)，并且将所产生的混合物用氩气冲洗，并且然后用微波在100℃下照射2分钟。然后将混合物通过硅藻土垫过滤，所述硅藻土垫用乙酸乙酯洗涤，并且将所产生的有机滤液在真空中浓缩。通过用40-60℃的乙酸乙酯/石油精(0％至40％)洗脱进行的闪速柱色谱法(二氧化硅)进行的纯化产生呈白色固体的标题化合物(475mg，63％)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),7.50(d,J＝2.0Hz,1H),7.46-7.39(m,4H),7.15(d,J＝2.1Hz,1H),3.87(s,3H),3.76(s,3H),1.47(s,9H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ160.8,152.7,137.5,128.0,126.8,124.8,122.8,122.2,118.4,113.7,78.9,50.9,36.5,28.1；MS(ES+):m/z＝331(M+H)+；LCMS(方法B):tR＝4.22分钟。
4-(4-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(22)
逐滴向4-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(21)(950mg，2.88mmol)于1,4-二噁烷(4mL)和甲醇(4mL)中的溶液中装入氯化氢(4M于1,4-二噁烷中，8mL)。将所产生的混合物搅拌3小时，并且然后在真空中浓缩。然后将残余物添加到4-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸(830mg，3.45mmol)、4-(二甲基氨基)吡啶(1.05g，8.64mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.38g，7.20mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的混合物中，所述混合物先前搅拌了30分钟。然后将所产生的混合物在室温下搅拌18小时，之后稀释到饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)和盐水(150mL)中。将此产物用乙酸乙酯(2x80mL)萃取，并且然后将合并的有机萃取物在真空中浓缩。通过用40-60℃的丙酮/石油精(0％至40％)洗脱进行的闪速柱色谱法(二氧化硅)进行的纯化产生呈乳膏状固体的标题化合物(860mg，66％)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.76(s,1H),9.11(s,1H),7.69(d,J＝8.7Hz,2H),7.55(d,J＝2.0Hz,1H),7.50(d,J＝8.7Hz,2H),7.19(d,J＝2.1Hz,1H),6.93(d,J＝6.2Hz,2H),3.89(s,3H),3.81(s,3H),3.77(s,3H),1.46(s,9H)；13CNMR(150MHz,DMSO-d6)δ160.8,159.6,152.9,137.4,128.8,127.0,124.6,122.8,122.4,122.2,120.4,117.7,113.8.,104.6,78.3,51.0,36.5,36.1,28.2；MS(ES+):m/z＝453(M+H)+；LCMS(方法B):tR＝4.07分钟。
(6aS)-2-甲氧基-3-(4-((5-((4-(5-(甲氧基羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)苯基)氨基甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基)-4-氧代丁氧基)-12-氧代-6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-6,6a,7,8,9,10-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-5(12H)-甲酸烯丙酯(23)
逐滴向4-(4-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(22)(250mg，0.552mmol)于1,4-二噁烷(1mL)和甲醇(1mL)中的溶液中装入氯化氢(4M于1,4-二噁烷中，3mL)。将所产生的混合物搅拌4小时，并且然后在真空中浓缩。将残余物添加到4-(((6aS)-5-((烯丙氧基)羰基)-2-甲氧基-12-氧代-6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-5,6,6a,7,8,9,10,12-八氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-3-基)氧基)丁酸(14)(272mg，0.511mmol)、4-(二甲基氨基)吡啶(208mg，1.70mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(272mg，1.42mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的混合物中，所述混合物先前搅拌了30分钟。将所产生的溶液在室温下搅拌18小时，之后稀释到乙酸乙酯(60mL)中，并用盐水(50mL)洗涤。将有机相在真空中浓缩。通过用丙酮/二氯甲烷(0％至30％)洗脱进行的闪速柱色谱法(二氧化硅)进行的纯化产生呈棕色固体的标题化合物(242mg，51％)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.89(s,1H),9.78(s,1H),7.68(d,J＝8.8Hz,2H),7.55(d,J＝1.9Hz,1H),7.51(d,J＝8.7Hz,2H),7.22(d,J＝1.7Hz,1H),7.20(d,J＝2.0Hz,1H),7.06(d,J＝4.2Hz,1H),6.94(d,J＝1.8Hz,1H),6.90(s,1H),5.99-5.97(m,1H),5.82-5.66(m,1H),5.26-4.91(m,3H),4.60-4.39(m,2H),4.15-3.93(m,4H),3.89(s,3H),3.84-3.80(m,7H),3.77(s,3H),3.54-3.45(m,1H),2.90(d,J＝10.9Hz,1H),2.43(t,J＝7.1Hz,2H),2.05-2.00(m,2H),1.72-1.38(m,12H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ168.9,168.8,168.1,168.1,160.8,159.6,155.3,149.8,148.7,137.3,132.7,128.9,127.2,127.0,125.8,124.6,122.8,122.7,122.3,122.1,120.4,118.8,116.4,114.0,113.8,110.4,104.7,94.3,83.4,68.1,65.6,62.0,55.7,54.8,51.0,39.5,38.2,36.5,36.1,31.7,30.5,30.2,24.9,24.8,24.5,22.6,22.6,18.9,17.8；MS(ES+):m/z＝867(M+H)+；LCMS(方法B):tR＝4.17分钟。
4-(4-(4-(4-(((6aS)-5-((烯丙氧基)羰基)-2-甲氧基-12-氧代-6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-5,6,6a,7,8,9,10,12-八氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-3-基)氧基)丁酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸(24)
向(6aS)-2-甲氧基-3-(4-((5-((4-(5-(甲氧基羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)苯基)氨基甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基)-4-氧代丁氧基)-12-氧代-6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-6,6a,7,8,9,10-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-5(12H)-甲酸烯丙酯(23)(600mg，0.69mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中装入氢氧化水溶液(1M，10mL)，并且将所产生的混合物在室温下搅拌18小时，然后在真空中浓缩。然后添加水(100mL)，并且通过逐滴添加冰乙酸使混合物酸化到pH＝5。在用乙酸乙酯(2x100mL)萃取之后，将合并的有机萃取物浓缩，以产生呈乳膏状固体的标题化合物(558mg，97％)(非对映异构体的混合物)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.26(s,1H),9.89(s,1H),9.78(s,1H),7.68(d,J＝8.1Hz,2H),7.54-7.44(m,3H),7.22(s,1H),7.14(d,J＝2.0Hz,1H),7.06(d,J＝4.3Hz,1H),6.98-6.77(m,2H),6.14(d,J＝9.9Hz,1H),5.83-5.75(m,1H),5.24-4.91(m,3H),4.69-4.35(m,2H),4.18-3.93(m,3H),3.88(s,3H),3.86-3.69(m,8H),3.56-3.44(m,1H),2.89(dd,J＝23.0,10.8Hz,1H),2.44(t,J＝6.9Hz,2H),2.04(dp,J＝20.8,6.9Hz,2H),1.76-1.29(m,12H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ169.3,168.6,168.5,162.4,160.1,155.3,149.8,149.2,149.0,137.7,133.2,129.7,127.7,126.9,125.0,123.8,123.2,122.9,122.6,120.9,119.2,117.0,114.5,114.2,110.8,105.2,99.7,94.7,88.0,83.9,68.5,68.3,66.0,63.2,62.5,56.2,55.4,38.7,37.0,36.6,32.2,30.6,25.4,25.2,23.1,19.6,18.3；MS(ES+):m/z＝853(M+H)+；LCMS(方法B):tR＝3.83分钟。
(6aS)-3-(4-((5-((4-(5-((4-氨基苯基)氨基甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)苯基)氨基甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基)-4-氧代丁氧基)-2-甲氧基-12-氧代-6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-6,6a,7,8,9,10-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-5(12H)-甲酸烯丙酯(25)
向4-(4-(4-(4-(((6aS)-5-((烯丙氧基)羰基)-2-甲氧基-12-氧代-6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-5,6,6a,7,8,9,10,12-八氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-3-基)氧基)丁酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸(24)(210mg，0.246mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的溶液中装入4-(二甲基氨基)吡啶(90mg，0.74mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(118mg，0.615mmol)，并且将其在室温下搅拌30分钟。向所产生的混合物中添加1,4-苯二胺(40mg，0.370mmol)，并搅拌另外18小时。然后将反应混合物稀释到饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)中，并用乙酸乙酯(2x40mL)萃取。将合并的有机萃取物在真空中浓缩。通过用甲醇/二氯甲烷(0％至20％)洗脱进行的闪速柱色谱法(二氧化硅)进行的纯化得到呈乳膏状固体的标题化合物(110mg，47％)(非对映异构体的混合物)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.89(s,1H),9.78(s,1H),9.48(s,1H),7.70(d,J＝8.6Hz,2H),7.48(d,J＝8.5Hz,2H),7.39(d,J＝1.7Hz,1H),7.36-7.32(m,2H),7.30(d,J＝1.8Hz,1H),7.23-7.20(m,1H),7.06(d,J＝4.1Hz,1H),6.97-6.94(m,1H),6.80(s,1H),6.57-6.52(m,2H),6.03(d,J＝10.0Hz,1H),5.81-5.72(m,1H),5.26-4.95(m,3H),4.92(s,2H),4.64-4.36(m,2H),4.14-3.95(m,3H),3.89(s,3H),3.83(dd,J＝6.0,2.4Hz,6H),3.81-3.70(m,1H),3.55-3.34(m,2H),3.00-2.82(m,1H),2.44(t,J＝7.0Hz,2H),2.09-1.99(m,2H),1.94-1.35(m,12H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ169.4,168.6,160.1,159.7,149.2,145.1,137.5,133.2,128.8,127.1,125.1,124.8,123.2,122.6,122.4,122.3,121.0,119.2,117.0,114.3,110.9,110.8,110.1,105.2,99.7,94.7,88.0,83.9,68.5,68.3,66.0,63.2,56.2,55.4,38.7,38.6,36.8,36.6,32.2,32.1,30.9,30.6,25.4,25.2,24.9,23.1,23.0,19.6,19.4,18.3；MS(ES+):m/z＝943(M+H)+；LCMS(方法B):tR＝3.45分钟。
(S)-N-(4-氨基苯基)-4-(4-(4-(4-((2-甲氧基-12-氧代-6a,7,8,9,10,12-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-3-基)氧基)丁酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(26)
向(6aS)-3-(4-((5-((4-(5-((4-氨基苯基)氨基甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)苯基)氨基甲酰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基)-4-氧代丁氧基)-2-甲氧基-12-氧代-6-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-6,6a,7,8,9,10-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-5(12H)-甲酸烯丙酯(25)(250mg，0.265mmol)于二氯甲烷(3mL)中的溶液中装入四(三苯基膦)钯(0)(15mg，5mol％)和吡咯烷(26μL，0.32mmol)，并且将所产生的混合物在室温下搅拌20分钟，之后经受强真空30分钟。然后将所产生的残余物通过用甲醇/二氯甲烷(0％至10％)洗脱进行的闪速柱色谱法(二氧化硅)纯化，以产生呈乳膏状固体的标题化合物(118mg，59％)。
[α]D 23＝85°(c 0.143,DMSO)；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.90(s,1H),9.78(s,1H),9.48(s,1H),8.00(d,J＝5.6Hz,1H),7.70(d,J＝8.6Hz,2H),7.48(d,J＝8.6Hz,2H),7.39(d,J＝1.5Hz,1H),7.33(d,J＝8.7Hz,2H),7.30(d,J＝1.5Hz,1H),7.27(s,1H),7.21(d,J＝1.4Hz,1H),6.96(d,J＝1.5Hz,1H),6.80(s,1H),6.53(d,J＝8.7Hz,2H),4.86(s,2H),4.13(dt,J＝9.6,6.3Hz,1H),4.07-3.97(m,2H),3.88(s,3H),3.83(d,J＝5.1Hz,6H),3.72(dt,J＝8.4,4.1Hz,1H),3.16-3.08(m,1H),2.44(t,J＝7.4Hz,2H),2.07-2.02(m,3H),1.89-1.59(m,5H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ168.9,166.3,164.7,159.6,159.2,150.2,147.2,144.8,139.9,137.0,129.7,128.2,126.7,124.7,124.4,122.7,122.1,121.9,121.8,120.7,120.5,118.8,113.7,111.4,109.6,109.5,104.8,67.8,55.6,49.3,36.3,36.2,31.9,24.7,23.7,22.6,17.7；MS(ES+):m/z＝757(M+H)+；LCMS(方法A):tR＝5.80分钟；HRMS(EI,m/z):C42H45N8O6 +(M+H)+计算值：757.3457，实验值，757.3457。
N-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)丙酰胺基)苯基)-4-(4-(4-(4-(((S)-2-甲氧基-12-氧代-6a,7,8,9,10,12-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-3-基)氧基)丁酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(27)
使(S)-N-(4-氨基苯基)-4-(4-(4-(4-((2-甲氧基-12-氧代-6a,7,8,9,10,12-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-3-基)氧基)丁酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(26)(200mg，0.264mmol)于二氯甲烷(3mL)和甲醇(300μL)中的溶液冷却到0℃，然后向其装入2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1,2-二氢喹啉(98mg，0.396mmol)和(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基)-L-缬氨酰基-L-丙氨酸(106mg,0.277mmol)。将所产生的混合物在室温下搅拌16小时，并且然后在真空中浓缩。通过用甲醇/二氯甲烷(0％至10％)洗脱进行的闪速柱色谱法(二氧化硅)进行的纯化产生呈白色固体的标题化合物(150mg，51％)。
[α]D 22＝85°(c 0.200,DMSO)；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.90(s,1H),9.84(s,1H),9.79(s,2H),8.12(d,J＝7.0Hz,1H),8.00(d,J＝5.7Hz,1H),7.81(d,J＝8.6Hz,1H),7.71(d,J＝8.7Hz,2H),7.65(d,J＝9.0Hz,2H),7.54(d,J＝9.0Hz,2H),7.49(d,J＝8.6Hz,2H),7.44(d,J＝1.5Hz,1H),7.38(d,J＝1.7Hz,1H),7.27(s,1H),7.22(t,J＝1.7Hz,1H),6.99(s,2H),6.97(d,J＝1.6Hz,1H),6.80(s,1H),4.42-4.35(m,1H),4.17(dd,J＝8.6,6.9Hz,1H),4.14-3.93(m,4H),3.91(s,3H),3.83(d,J＝5.7Hz,6H),3.74-3.65(m,3H),3.37(t,J＝7.1Hz,2H),3.15-3.08(m,1H),2.47-2.42(m,2H),2.21-1.93(m,4H),1.90-1.73(m,2H),1.60-1.44(m,4H),1.31(d,J＝7.1Hz,3H),1.22-1.14(m,4H),0.85(dd,J＝23.3,6.8Hz,6H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ172.3,171.0,171.0,170.7,168.9,166.3,164.7,159.6,159.5,150.7,150.2,147.1,139.9,137.1,134.8,134.4,129.5,126.2,125.3,124.4,122.7,122.1,121.9,120.7,120.5,120.3,119.3,111.4,110.3,109.5,104.8,67.8,57.5,55.9,55.6,49.3,48.9,39.5,37.0,36.5,36.2,34.9,31.9,30.4,27.7,25.8,24.9,23.7,22.6,19.2,18.2,18.0,17.7；MS(ES+):m/z＝1121(M+H)+；LCMS(方法B):tR＝3.57分钟；HRMS(ESI,m/z):C60H70N11O11 +(M+H)+计算值，1120.5250，实验值，1120.5257。
((2S)-1-(((2S)-1-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,12,13,13a,14-八氢-1H-苯并[de]吡喃并[3',4':5,6]茚并[1,2-b]喹啉-1-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(28)
向(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酰基-L-丙氨酸(54.7mg，0.19mmol)、甲磺酸依喜替康(100mg，0.19mmol)和N,N-二异丙基乙胺(100μL，0.57mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中装入HATU(80mg，0.19mmol)，并且将所产生的混合物在室温下搅拌10分钟，此时，将所述混合物在真空中浓缩，以产生标题化合物，所述标题化合物在不进行任何进一步纯化的情况下用于后续步骤。
(2S)-2-氨基-N-((2S)-1-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,12,13,13a,14-八氢-1H-苯并[de]吡喃并[3',4':5,6]茚并[1,2-b]喹啉-1-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-3-甲基丁酰胺三氟乙酸盐(29)
使((2S)-1-(((2S)-1-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,12,13,13a,14-八氢-1H-苯并[de]吡喃并[3',4':5,6]茚并[1,2-b]喹啉-1-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(28)(134mg，粗品)溶解于三氟乙酸(1.5mL)和二氯甲烷(3mL)中，并且将所产生的混合物搅拌15分钟，此时，将所述混合物通过反相制备型HPLC(0.1％三氟乙酸水溶液/乙腈)纯化并冻干，以产生标题化合物(96mg，71％，两个步骤)。
1-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)-N-((2S)-1-(((2S)-1-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,12,13,13a,14-八氢-1H-苯并[de]吡喃并[3',4':5,6]茚并[1,2-b]喹啉-1-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧杂二十七烷-27-酰胺(30)
向1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-3-氧代-7,10,13,16,19,22,25,28-八氧杂-4-氮杂三十一烷-31-酸(46mg，0.078mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中装入N,N-二异丙基乙胺(47μL，0.27mmol)和HATU(30mg，0.079mmol)。在室温下搅拌1分钟后，添加(2S)-2-氨基-N-((2S)-1-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,12,13,13a,14-八氢-1H-苯并[de]吡喃并[3',4':5,6]茚并[1,2-b]喹啉-1-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-3-甲基丁酰胺三氟乙酸盐(29)(56mg，0.078mmol)，并继续搅拌另外10分钟。将所产生的混合物通过反相制备型HPLC(0.1％三氟乙酸水溶液/乙腈)纯化，并将纯的级分冻干，以产生呈黄色固体的标题化合物(60mg，65％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)7.61-7.60(m,2H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),7.04(d,J＝8.0Hz,1H),6.94(d,J＝8.0Hz,1H),6.69(s,2H),6.48(br s,1H),5.74(d,J＝12.0Hz,1H),5.56-5.55(m,1H),5.47(d,J＝16.0Hz,1H),5.28(d,J＝12.0Hz,1H),5.04(d,J＝16.0Hz,1H),4.57-4.54(m,1H),3.96(t,J＝4.0Hz,1H),3.83-3.80(m,3H),3.63-3.59(m,29H),3.52(t,J＝4.0Hz,2H),3.40(q,J＝4.0Hz,2H),3.26-3.22(m,1H),3.11-3.05(m,1H),2.56-2.52(m,3H),2.40-2.33(m,6H),2.28-2.13(m,3H),1.93-1.84(m,2H),1.47(d,J＝8.0Hz,3H),1.03(t,J＝6.0Hz,3H),0.91(t,J＝6.0Hz,6H)；MS(ES+):m/z＝1180.5(M+H)+；LCMS(5分钟):tR＝1.87分钟；HPLC(15分钟):8.91分钟(99.1％纯度，220nm).
((2S)-1-(((2S)-1-((4-(((((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,12,13,13a,14-八氢-1H-苯并[de]吡喃并[3',4':5,6]茚并[1,2-b]喹啉-1-基)氨基甲酰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(31)
向((S)-3-甲基-1-(((S)-1-((4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(141mg，0.21mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中装入甲磺酸依喜替康(100mg，0.19mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(10mg，0.073mmol)和N,N-二异丙基乙胺(83μL，0.48mmol)，并且然后在室温下搅拌6小时。所产生的混合物在不进行任何进一步操控的情况下用于后续步骤。
((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,12,13,13a,14-八氢-1H-苯并[de]吡喃并[3',4':5,6]茚并[1,2-b]喹啉-1-基)氨基甲酸4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)丙酰胺基)苄酯三氟乙酸盐(32)
逐滴向含有含((2S)-1-(((2S)-1-((4-(((((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,12,13,13a,14-八氢-1H-苯并[de]吡喃并[3',4':5,6]茚并[1,2-b]喹啉-1-基)氨基甲酰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(31)(184mg，粗品)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)的反应混合物中装入1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(0.18mL，1.20mmol)，并且然后搅拌10分钟，之后将其通过反相制备型HPLC(0.1％三氟乙酸水溶液/乙腈)纯化并冻干，以产生标题化合物(89mg，54％，两个步骤)。
((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,12,13,13a,14-八氢-1H-苯并[de]吡喃并[3',4':5,6]茚并[1,2-b]喹啉-1-基)氨基甲酸4-((2S,5S)-37-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5-异丙基-2-甲基-4,7,35-三氧代-10,13,16,19,22,25,28,31-八氧杂-3,6,34-三氮杂三十七烷酰胺基)苄酯(33)
向1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-3-氧代-7,10,13,16,19,22,25,28-八氧杂-4-氮杂三十一烷-31-酸(37mg，0.062mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中装入N,N-二异丙基乙胺(0.039mL，0.22mmol)和HATU(24mg，0.063mmol)，并且将所产生的混合物在室温下搅拌1分钟，之后添加((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,12,13,13a,14-八氢-1H-苯并[de]吡喃并[3',4':5,6]茚并[1,2-b]喹啉-1-基)氨基甲酸4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)丙酰胺基)苄酯三氟乙酸盐(32)(54mg，0.062mmol)并搅拌另外10分钟。通过反相制备型HPLC(0.1％三氟乙酸水溶液/乙腈)进行纯化之后是冻干产生呈黄色固体的标题化合物(57mg，69％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)8.61(s,1H),7.63-7.54(m,4H),7.30(s,2H),7.12(s,1H),7.02(s,1H),6.67(s,2H),6.45(s,1H),5.69(d,J＝12.0Hz,1H),5.50-5.31(m,4H),5.20(d,J＝8.0Hz,1H),5.08(d,J＝8.0Hz,1H),4.62(br s,1H),4.23(br s,1H),3.84-3.70(m,4H),3.67-3.59(m,28H),3.49(t,J＝4.0Hz,2H),3.37(q,J＝4.0Hz,2H),3.16(br s,2H),2.68-2.65(m,1H),2.49-2.46(m,3H),2.41(s,3H),2.35-2.27(m,3H),1.90(br s,5H),1.42(d,J＝8.0Hz,3H),1.04-1.00(m,9H)；MS(ES+):m/z＝1329.8(M+H)+；LCMS(5分钟):tR＝2.05分钟；HPLC(15分钟):10.48分钟(100％纯度，220nm)。
((S)-4,11-二乙基-9-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚并[1,2-b]喹啉-4-基)碳酸
4-((78S,81S,84S,89S,92S)-78-((2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-二十四氧杂七十三烷-73-基)氨基甲酰基)-81-(3-(((S)-1-(((S)-1-((4-((((((S)-4,11-二乙基-9-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚并[1,2-b]喹啉-4-基)氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-3-氧代丙基)-89-异丙基-92-甲基-75,80,83,87,90-五氧代-84-(4-(3-甲苯磺酰基-2-(甲苯磺酰基甲基)丙酰基)苯甲酰胺
基)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-二十四氧杂-74,79,82,88,91-五氮杂九十三烷-93-酰胺基)苄酯(34)
使((S)-4,11-二乙基-9-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚并[1,2-b]喹啉-4-基)碳酸4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)丙酰胺基)苄酯(41mg，0.00576mmol)和(78S,81S,84S)-78-((2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-二十四氧杂七十三烷-73-基)氨基甲酰基)-81-(2-羧乙基)-75,80,83-三氧代-84-(4-(3-甲苯磺酰基-2-(甲苯磺酰基甲基)丙酰基)苯甲酰胺基)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-二十四氧杂-74,79,82-三氮杂八十七烷-87-酸(80mg，0.00264mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液冷却到0℃。然后添加HATU(26mg，0.00687mmol)，之后是添加NMM(17.5μL，0.00158mmol)。将所产生的混合物在0℃下搅拌45分钟，然后在真空中浓缩。通过使用梯度方法：14-70％的水-MeCN(0.05％甲酸)的吉尔森公司(Gilson)制备型HPLC(飞诺美公司(Phenomenex)，Luna 5μm C18(2)LC柱150x21.2mm)进行纯化，之后是冻干产生了呈黄色固体的标题化合物(52.5mg，45％)。
理论精确质量：4413.1；实验值：2207.55(M+2H)2+，1472.03(M+3H)3+，1104.28(M+4H)4+。
HPLC(14分钟)：7.70分钟(97.8％纯度，254nm)。
((S)-1-(((S)-1-((4-(4-(4-(4-(4-(((S)-2-甲氧基-12-氧代-6a,7,8,9,10,12-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-3-基)氧基)丁酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(35)
将由(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-L-缬氨酰基-L-丙氨酸(325mg，0.793mmol)和1,2-二氢-2-乙氧基喹啉-1-甲酸乙酯(326mg，1.32mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)组成的混合物在室温下搅拌1小时，之后添加(S)-N-(4-氨基苯基)-4-(4-(4-(4-((2-甲氧基-12-氧代-6a,7,8,9,10,12-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-3-基)氧基)丁酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(26)(500mg，0.661mmol)，并且将所产生的混合物在0℃下搅拌5小时，然后加热到室温，并搅拌另外13小时。在通过LCMS判断反应完成之后，将反应混合物稀释到二氯甲烷/甲基叔丁基醚(1:8，200mL)中，并搅拌另外1小时，之后在减压下过滤。使滤饼在强真空下干燥，以产生呈黄色固体的标题化合物(500mg，66％)，所述标题化合物在不进行进一步纯化的情况下用于后续步骤。
MS(ES+):m/z＝1149(M+H)+；LCMS(方法F):tR＝3.92分钟。
N-(4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)丙酰胺基)苯基)-4-(4-(4-(4-(((S)-2-甲氧基-12-氧代-6a,7,8,9,10,12-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-3-基)氧基)丁酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(36)
将由((S)-1-(((S)-1-((4-(4-(4-(4-(4-(((S)-2-甲氧基-12-氧代-6a,7,8,9,10,12-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-3-基)氧基)丁酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(35)(500mg，0.435mmol)和哌啶(111mg，1.31mmol)组成的于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的混合物在室温下搅拌16小时，之后LCMS显示起始材料消耗。在稀释到二氯甲烷/甲基叔丁基醚(1:8，200mL)中之后，将残余物搅拌1小时，之后在减压下过滤。然后使滤饼在减压下干燥，以产生呈黄色固体的标题化合物(400mg，99％)。
MS(ES+):m/z＝927(M+H)+；LCMS(方法F):tR＝2.81分钟。
(S)-N5-((S)-1-(((S)-1-((4-(4-(4-(4-(4-(((S)-2-甲氧基-12-氧代-6a,7,8,9,10,12-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-3-基)氧基)丁酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)-2-(4-(3-甲苯磺酰基-2-(甲苯磺酰基甲基)丙酰基)苯甲酰胺基)-N1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-二十四氧杂七十三烷-73-基)戊二酰胺(37)
使(S)-75-氧代-76-(4-(3-甲苯磺酰基-2-(甲苯磺酰基甲基)丙酰基)苯甲酰胺基)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-二十四氧杂-74-氮杂七十九烷-79-酸(85mg，0.05mmol)和N-(4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)丙酰胺基)苯基)-4-(4-(4-(4-(((S)-2-甲氧基-12-氧代-6a,7,8,9,10,12-六氢苯并[e]吡啶并[1,2-a][1,4]二氮杂环庚熳-3-基)氧基)丁酰胺基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺基)苯基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(36)(51mg，0.055mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液冷却到0℃，并向其装入HATU(27mg，0.07mmol)和NMM(16.5μL，0.15mmol)，然后在此温度下搅拌1小时。将反应混合物通过反相色谱法通过使用梯度方法：14-70％的水-MeCN(无调节剂)的吉尔森公司制备型HPLC(飞诺美公司，Luna 5μm C18(2)LC柱150x21.2mm)进行纯化，之后是冻干，以产生呈白色固体的标题化合物(64mg，49％)。
理论精确质量：2607.2；实验值：1304.6(M+2H)2+，870.1(M+3H)3+，652.8(M+4H)4+。
HPLC(14分钟)：7.46分钟(97.6％纯度，254nm)。
化合物编号和结构示出在下表A中。
表A：化合物编号和结构。
实例2：与CDCP1mAb缀合和体内功效
有效载荷与抗体缀合
使用类似方法完成所有ADC缀合，所述方法的实例在下面提供。向21.5mg IgG1抗体(8.0mg/ml于PBS中)中装入EDTA，达到2mM的最终浓度。通过添加1.27摩尔当量的TCEP(10mM于水中)并在20℃下温育2小时来实现还原。1.5小时后，进行与所确立的有效载荷(例如，Mal-vcMMAE)的还原过程中测试缀合，并且通过HIC进行分析以测试还原水平。由于未达到目标还原水平，因此添加另外0.1摩尔当量的TCEP，并且还原时间延长1小时。0.5小时后，运行第二次过程中测试。在证实期望的还原水平后，将20％(v/v)丙二醇添加到经还原的抗体中，之后添加6.4摩尔当量的82(10mM储备液于DMSO中)。将溶液在室温下温育1小时。通过添加6.4摩尔当量的N-乙酰半胱氨酸(10mM于水中)来淬灭反应。将ADC通过G25缓冲液交换到PBS中，并且通过死端过滤(Vivaspin-20，30kDa MWCO，0.0006m2)洗涤10个DV。提取样品以通过HIC、SEC、PLRP、游离毒素接头、Endosafe进行分析，并且使用SEC校准曲线确定浓度。在层流下进行等分试样，并且将产物储存在-80℃下。仅使用一次性无菌的且不含热原/DNA/RNA的塑料器具。
抗原结合亲和力(FACS)
在FACS缓冲液(PBS，1％BSA，0.1％NaN3)中制备测试样品，并用10μg/mL起始浓度和3倍8点连续稀释进行研究。将A427(抗原阳性)细胞以96孔测定板(BD公司(BD)351177)每孔1x105的密度接种，并以100μL每孔添加样品。将测定板在冰上温育30分钟。
30分钟后，对测定板进行离心，丢弃上清液，并且用FACS缓冲液洗涤细胞。每孔添加100μL 1:800山羊pAb抗人IgG(Fc特异性)PE。然后将测定板在冰上温育另外30分钟。
在此时间点，将测定板离心，丢弃上清液，并且用FACS缓冲液洗涤细胞。每孔添加100μL碧迪公司Cellfix(1:10稀释)水溶液。数据读出由荧光组成，并且使用赛默飞世尔公司Attune NxT聚焦细胞仪测量。
体内功效
在通过将相关细胞系(例如，在ADC3的情况下，MDA-MB-231)接种在小鼠体内获得的肿瘤异种移植模型(癌症源性和患者源性两者)中评估所选ADC的抗肿瘤活性。
在单剂量的基础上，在6-8只CD1小鼠(或等效形式)上以多种浓度确立相关ADC的最大耐受剂量(MTD)。在确定单剂量MTD后，以最大耐受剂量下的剂量启动功效研究。
简言之，使用23号针将肿瘤植入到小鼠的侧腹上，并且将所述小鼠随机分配到组(例如，对照或ADC)。植入后，使用数字卡尺每周3次测量肿瘤。测量肿瘤的长度和宽度，并且使用下式计算体积：体积＝(长度x宽度2)/2。每周3次测量并记录研究中的所有小鼠的体重。每天观察小鼠以及任何痛苦迹象或一般状况的变化(例如，星形皮毛、缺乏运动、难以呼吸)。设定了提前终止的具体标准，并且此提前终止仅在肿瘤体积超过1500mm3、发生≥15％的体重损失或动物变得受损(例如，无法进食/饮水)时发生。
将小鼠圈养在IVC笼中(每个笼5只小鼠)，其中单独小鼠通过耳针进行标识。使用前对笼、垫料和水进行消毒。向动物提供玉米棒富集垫料，以提供环境富集和筑巢材料。所有动物可免费获得标准认证的商业饮食和水。动物饲养室维持如下-室温为20-24℃，湿度为30-70％，并且使用12小时光/暗循环。笼每周改变一次，其中食物和水在必要时更换。所有程序均在动物(科学程序)法案1986(Animal(Scientific Procedures)Act 1986)的指导原则下进行。
抗体QC
抗体的质量良好，其中通过尺寸排阻色谱法(SEC)(图1)和HIC(图2)，单体含量为99％。PLRP显示出轻链和重链减少的预期模式。在主L0和H0之后洗脱的次要峰可能是链内二硫化物还原的结果(图3)。抗体的轻链可变区、重链可变区和CDR的序列(SEQ ID NO:1-4和5-8)可见于表2A中(序列在本文中也可以被当成“序列1”)。
30与CDCP1mAb缀合
使30以随机方式与靶向到CDCP1的IgG1抗体缀合，以制备形成平均DAR为7.3的ADC的ADC3。图4和5分别示出了PLRP分析和SEC分析。SEC分析表明，单体纯度为97.5％。
使30以随机方式与靶向到CDCP1的IgG1抗体缀合，以制备形成平均DAR为4的ADC的ADC4。图6和7分别示出了PLRP分析和SEC分析。SEC分析表明，单体纯度为97.6％。
33与CDCP1mAb缀合
使33以随机方式与靶向到CDCP1的IgG1抗体缀合，以制备形成平均DAR为6.7的ADC的ADC5。图8和9分别示出了PLRP分析和SEC分析。
在MDA-MB-231(三阴性乳腺癌)(CDCP1+模型)中在10mg/kg和6mg/kg单剂量下检查ADC3，并且发现相较于媒剂，其使肿瘤生长速率降低(图10)。
在MDA-MB-231(三阴性乳腺癌)(CDCP1+模型)中以10mg/kg、6mg/kg和3mg/kg给药三次后检查ADC3，并且发现相较于媒剂，其使肿瘤生长速率降低(图11)。
在雄性CD1小鼠血浆中检查未经缀合的mAb和ADC3的PK概况。ADC的PK概况是有利的，其中在mAb与ADC之间观察到清除率差异很小(图12)。
在MDA-MB-231(三阴性乳腺癌)(CDCP1+模型)中在10mg/kg单剂量下检查ADC4，并且发现相较于媒剂，其使肿瘤生长速率降低(图13)。
在MDA-MB-231(三阴性乳腺癌)(CDCP1+模型)中以10mg/kg和6mg/kg给药三次后检查ADC4，并且发现相较于媒剂，其使肿瘤生长速率降低(图14)。
在雄性CD1小鼠血浆中检查未经缀合的mAb和ADC4的PK概况。ADC4的PK概况是有利的，其中在mAb与ADC4之间观察到清除率差异很小(图12)。
27与IgG1抗体缀合
使27以随机方式与靶向到CDCP1的IgG1抗体缀合，以制备ADC1。通过HIC进行DAR(药物抗体比率)分配是可能的(图22)。平均DAR被计算为1.8。
缀合过程引起的聚集与所产生的具有由94.3％单体构成的ADC的起始抗体引起的聚集相比不显著(图23)。
在图24中示出的ADC样品中不可以检测到游离毒素接头。
20与CDCP1mAb缀合
使20以随机方式与靶向到CDCP1的IgG1抗体缀合，以制备形成平均DAR为4.2的ADC的ADC2。缀合过程引起的聚集与起始抗体所产生的聚集相比不显著。
在图27中示出的ADC样品中可以检测到有限的游离毒素接头。
37与CDCP1mAb缀合(形式ADC7)
使33以随机方式与靶向到CDCP1的IgG1抗体缀合，以制备形成平均DAR为2.1的ADC的ADC7(图28)。ADC含有97.5％的单体(图29)。
ADC的体内耐受性
CDCP1mAb与鼠抗原不具有交叉反应性，因此未确定正式最大耐受剂量。表3中所示的以下剂量是耐受的，并且体重损失<10％：
表3：ADC剂量
ADC 在小鼠中测试的最高剂量(单剂量，mg/kg)
ADC1 15
ADC2 50
ADC3 80
ADC4 80
图30示出了所制备的ADC对抗原阳性细胞的结合亲和力。FACS数据，其示出了ADC与抗原阳性细胞系(A427)的结合。所有ADC与未经缀合的CDCP1mAb具有相似的结合亲和力。数据还表明，未经缀合的非靶向性同种型对照mAb不与抗原结合。图31示出了在针对K562给药一次ADC1(第1天)后的平均肿瘤体积相对于时间。图32示出了mAb和ADC1在雄性CD1小鼠血浆中的PK概况。图33示出了在针对K562给药一次ADC2(第1天)后的平均肿瘤体积相对于时间。图34示出了在针对MDA-MB-231以5mg/kg和10mg/kg两者给药一次ADC2(第1天)后的平均肿瘤体积相对于时间。在较高剂量下观察到完全消退，无重量损失。未经缀合的mAb的影响可忽略，这表明ADC的靶向性细胞杀伤能力。图35示出了在针对MDA-MB-231以5mg/kg和10mg/kg两者多次给药ADC2(第1天、第8天和第15天或第1天、第22天和第43天)后的平均肿瘤体积相对于时间。在较高剂量下观察到完全消退，无重量损失。未经缀合的mAb的影响可忽略，这表明ADC的靶向性细胞杀伤能力。图36示出了在针对PC3以1mg/kg至10mg/kg的剂量单次给药ADC2(第1天)后的平均肿瘤体积相对于时间。观察到浓度依赖性消退，无重量损失。图37是示出了在针对A427以10mg/kg给药三次ADC2(第1天、第7天和第14天)后的平均肿瘤体积相对于时间。图38示出了mAb和ADC2在雄性CD1小鼠血浆中的PK概况。ADC的PK概况是有利的，其中在mAb与ADC之间观察到清除率差异很小。
方法
1.1DNA足迹法
先前已经描述了TyrT DNA片段的制备。简言之，通过用HindIII和EcoRI进行切割来获得已克隆到pUC18的BamHI位点中的序列。通过使用Klenow DNA聚合酶(外切酶-)用[α-32P]dATP填充HindIII位点的3'端来制备放射性标记的DNA片段。
在6％非变性聚丙烯酰胺凝胶上将放射性标记的DNA片段与质粒DNA的其余部分分离。使凝胶(20cm长，0.3mm厚)在1x TBE运行缓冲液中在400V下运行约1-2小时，直到溴苯酚蓝大部分已沿凝胶运行。将玻璃板分离，并且通过短时间(1分钟)暴露于X射线胶片来确立所标记的DNA片段的位置。然后从凝胶中切割相关带，并且通过添加pH 7.5的含有0.1mMEDTA的300μL 10mM Tris-HCl并在室温下轻轻搅动过夜来洗脱放射性标记的DNA。最终用乙醇使经洗脱的DNA沉淀，并使其重悬于合适体积的pH 7.5的含有0.1mM EDTA缓冲液的10mMTris-HCl中，以在手持式盖格计数器(Geiger counter)上产生至少10个计数/秒/μL。在新鲜质粒和α-32P-dATP的情况下，此过程典型地产生约150μL放射性标记的片段DNA。DNA的绝对浓度并不重要，并且其通常低于10nM。
如使用先前描述的方法使用DNA片段HexA和HexB以及MS1进行足迹法反应，所述HexA和所述HexB一起含有全部64个对称六核苷酸序列，所述MS1含有全部可能的134个四核苷酸序列。通过用HindIII和SacI(对于HexA和MS1)或EcoRI和PstI(对于HexB)切割亲本质粒来获得DNA片段，并且使用逆转录酶或外切酶-Klenow片段用[α-32P]dATP在HindIII或EcoRI位点的3'端处对其进行标记。凝胶纯化后，使放射性标记的DNA以如在手持式盖格计数器上确定的约10c.p.s/μL的浓度溶解在pH 7.5的含有0.1mM EDTA的10mM Tris-HCl中。将1.5μL放射性标记的DNA与1.5μL配体混合，所述配体已新近稀释在pH 7.5的含有10mMNaCl的10mM Tris-HCl中。使复合物平衡至少12小时，之后用2μL DNA酶I消化(最终浓度约0.01个单位/mL)。1分钟后通过添加4μL含有10mM EDTA和溴苯酚蓝(0.1％w/v)的甲酰胺来停止反应。然后将样品在100℃下加热3分钟，之后上样到含有8M脲的8％变性聚丙烯酰胺凝胶上。将凝胶固定在10％乙酸中，转移到3MM纸，干燥，并暴露于磷屏过夜，之后用Typhoon磷成像仪进行分析。
2.交联测定
2.1.制备配体-DNA复合物
将放射性标记的DNA(1.5μL)与各种浓度(10μM-10nM)的1.5μL配体溶液混合，并在37℃下温育过夜。
2.2交联测定
过夜温育后，将样品与7μL上样溶液(含有10mM EDTA、10mM NaOH、0.1％溴苯酚蓝的80％甲酰胺)混合，并且在65℃下温育5分钟。天然双链DNA的对照1(C1)由1.5μL标记的DNA、pH 7.5的含有0.1mM EDTA的1.5μL 10mM Tris-HCl和7μL 1x上样染料组成。经变性的天然单链DNA的对照2(C2)由1.5μL标记的DNA、pH 7.5的含有0.1mM EDTA的1.5μL 10mMTris-HCl构成，所述对照在65℃下温育5分钟。天然双链DNA的对照3(C3)由1.5μL标记的DNA、pH 7.5的含有0.1mM EDTA的1.5μL 10mM Tris-HCl和7μL SSB组成。经变性的天然单链DNA的对照4(C4)由1.5μL标记的DNA、pH 7.5的含有0.1mM EDTA的1.5μL 10mM Tris-HCl和7μL SSB构成，所述对照在65℃下温育5分钟。在7.5％变性聚丙烯酰胺凝胶(20cm长，0.3mm厚)上以500V进行分离，持续约4小时，直到染料到达凝胶的底部为止。然后将凝胶板分离，将凝胶通过浸入在10％(v/v)乙酸中固定，之后转移到Whatmann 3MM纸并在真空下在80℃下干燥。然后将经干燥的凝胶暴露于磷成像仪屏过夜，之后使用Typhon FLA 7000仪器扫描。
实例3：体内ADC研究
此研究的主要关注点是开发一种针对癌症的治疗，特别是针对已知表达CDCP1抗原的癌症类型的治疗，所述癌症类型中的一种是三阴性乳腺癌(TNBC)。考虑到此目标，靶向CDCP1的依喜替康缀合物(ACD3)的初始动物研究开始于评估在MDA-MB-231异种移植模型中的功效。以6mg/kg或10mg/kg的单剂量(图10)或3mg/kg、6mg/kg或10mg/kg的每周三次剂量(图11)向受试者施用，两种的DAR均为8。在四周实验中，每隔一天测量肿瘤体积。
相对于用媒剂对照进行的治疗，用ADC3进行的治疗引起剂量依赖性肿瘤体积减小，其中在某些条件下完全消退。对于单剂量方案，最初在两种所测试浓度下观察到显著效应，包括肿瘤生长停滞了约14天。然而，在此停滞时间段之后，生长再次开始，但在停滞后生长的速率方面，观察到某种剂量依赖性(图10)。
这些结果引起了在同一模型系统中对每周多剂量方案的评估。和之前一样，在所有所测试的浓度下，相对于媒剂对照，在初始给药后肿瘤生长停滞(图11)。在第7天和第14天进行后续施用的情况下，6mg/kg浓度和10mg/kg浓度两者均趋于消退，而3mg/kg多剂量继续表现出相对于对照显著有所减小。在较高剂量(10mg/kg)下到第50天观察到完全消退，此后出现再生长。
接下来评估ADC3的特定药代动力学和任一种给药方案对受试者体重的影响。首先，将10mg/kg ADC3的半衰期与相同浓度的未经缀合的抗体的半衰期进行比较，其中向雄性CD-1小鼠施用单剂量的每种化合物，并且每天测量血浆浓度。结果表明，缀合使半衰期仅比未经缀合的抗体实现的半衰期略微减少，ADC3的半衰期为182小时，相比之下，对照的半衰期为224小时(图12A)。
接下来，在健康动物中使用单剂量方案或每周多剂量方案(在第1天、第8天和第15天施用10mg/kg ADC3；DAR为8)测量动物体重。在33天观察窗口内，在任一条件下均未观察到与媒剂对照的显著差异(图12B)。事实上，在所有条件下，体重稳定增加，但是施用单剂量方案或多剂量方案的动物在大约前8天的治疗中经历体重的初始下降，之后开始增加。
在约8的DAR下已看到阳性结果，因此使用较低的DAR进行另外的研究。向MDA-MB-231异种移植小鼠施用媒剂或10mg/kg ADC4作为单剂量方案的一部分。每隔一天测量肿瘤生长。与较高DAR类似，单剂量的ADC4使肿瘤生长停滞了大约20天，之后生长再次发生(图13)。
还向小鼠施用多剂量方案(以6mg/kg或10mg/kg ADC4每周施用三次)。与在较高DAR实验中一样，观察到剂量依赖性效应(图14)。此外，较高浓度使肿瘤生长完全消退。药代动力学分析发现，ADC4在雄性CD-1小鼠血浆中保持可检测到的时间为至少七天，尽管水平低于未经缀合的抗体对照的水平(图15A)。与先前的结果类似，动物体重在为4的DAR下在单剂量方案或多剂量方案下没有显著减少，其中动物随时间推移稳定地获得重量(图15B)。
最后，先前观察到的抗癌效应是基于测试相同的TNBC模型中的相关靶向CDCP1的缀合物获得的。以修改的多剂量方案以5mg/kg施用CDCP1-vcMMAE(DAR为4)，其中施用发生在第1天、第3天和第5天。结果表明，肿瘤体积相较于使用媒剂对照的肿瘤体积有所减小，并且在32天的实验窗口结束时完全消退(图16)。与其它实验一样，未观察到对体重的影响，并且靶标10的抗原拷贝数为约89,438。
实例4：游离有效载荷的生物和生物物理表征
生物物理表征
1.DNA交联测定
使用涉及线性双链TyrT片段的测定来评价26与DNA交联的能力(图17)。使用PBD二聚体他利林(SGD1882)作为阳性对照，因为PBD二聚体先前已显示出与DNA交联。
在变性条件(用甲酰胺处理并在65℃下加热5分钟)后，DNA链完全分离(参见对照C2，图18和19)。链间交联的存在使经变性的链保持紧密接近，并且因此经交联的加合物在聚丙烯酰胺凝胶上以双链DNA的形式运行。
以六种不同的浓度对两种化合物进行测试，并且重复测定两次。图18中示出了26的交联能力。在任何浓度(即，10μM至低至0.1nM)下不可检测到交联，而PBD二聚体他利林在低至10nM的浓度下产生交联(图19)。这些结果表明，26和其它基于PDD的药剂(如19)不能够与DNA交联，因为其仅含有一个亚胺基，这与其所提出的单烷基化作用机制一致。
2.DNA足迹法
使用对先前确立的DNA足迹法测定的修改来研究分子的DNA序列选择性概况。在配体-DNA复合物过夜温育后，将混合物与含有10mM EDTA、10mM NaOH、0.1％溴苯酚蓝、80％甲酰胺的链分离缓冲液混合，并在100℃下温育3分钟。然后使混合物在冰上立即冷却，并在8％变性凝胶上运行。对所获得的凝胶的检查(图20)显示出在HexA DNA序列上通过分子产生的足迹。有趣的是，尽管HexA DNA片段含有26的多个潜在结合位点(即，潜在G烷基化位点的多个实例)，但在HexA的情况下在此实验期间仅观察到五个优选位点。这些数据还表明，G-烷基化剂均在与PBD二聚体他利林的序列选择性概况不同的序列选择性概况下以高度序列选择性方式起作用(绿色块，图21)。在图20和21中分别示出了在HexA序列内形成的可能的加合物。
生物物理学汇总
上面呈现的生物物理数据提供了26有效地使具有高度序列特异性的DNA稳定的有力证据。尽管不希望受任何特定理论的束缚，但这些数据表明所衍生的DNA加合物类型的群体可以考虑此化合物家族在细胞中的细胞毒性。此外，DNA足迹法研究指示对类别(17和26两者)的序列选择性的程度，其中DNA结合位点通常对应于XGXWWWW，其中X表示任何碱基，并且W表示腺嘌呤或胸腺嘧啶。尽管不希望受任何特定理论的束缚，但总体上这些数据表明，针对有效载荷的PDD类别观察到的强细胞毒性与其DNA结合亲和力和序列选择性直接相关。
实例5：体内功效和毒理学研究
在肿瘤异种移植小鼠模型中评估ADC3(DAR为8)和CDCP1-vcMMAE(DAR为4)针对肺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)的体内功效。
在NSCLC CALU-6(肺癌)模型中在按Q7dx3以3mg/kg、6mg/kg和10mg/kg给药后检查ADC3(DAR为8)，并且发现在每种剂量下，相较于媒剂，所述ADC3使肿瘤生长速率降低(图39A)。在NSCLC CALU-6(肺癌)模型中在按Q7dx3以1mg/kg、3mg/kg和6mg/kg给药后检查CDCP1-vcMMAE(DAR为4)，并且发现在剂量3mg/kg和6mg/kg下，相较于媒剂，所述CDCP1-vcMMAE使肿瘤生长速率降低(图39A)。示出CDCP1在NSCLC细胞系中的表达的免疫组织化学(IHC)图像示出在图39B中。
在MDA-MB-231(TNBC)模型中在按Q7dx3以3mg/kg、6mg/kg和10mg/kg给药后检查ADC3(DAR为8)，并且发现在每种剂量下，相较于媒剂，所述ADC3使肿瘤生长速率降低(图40A)。在MDA-MB-231(TNBC)模型中在按Q7dx3以1mg/kg、3mg/kg和6mg/kg给药后检查CDCP1-vcMMAE(DAR为4)，并且发现在每种剂量下，相较于媒剂，所述CDCP1-vcMMAE使肿瘤生长速率降低(图40A)。示出CDCP1在TNBC细胞系预处理中的表达的IHC图像示出在图40B中。
图41中的来自在食蟹猴中进行的DRF和PK研究的数据没有识别出使用CDCP1-vcMMAE(DAR为4)或ADC3(DAR为8)的任何严重问题，并且虽然不希望受任何特定理论的束缚，但任何观察到的毒性都被视为与靶标无关并且与有效载荷的作用机制(MOA)一致。ADC3(DAR为8)未观察到肺问题或间质性肺病(ILD)。TPS评分(阳性肿瘤细胞的数量除以活的肿瘤细胞的总数乘以100％)。
图42中示出的用于测试食蟹猴中的ADC3(DAR为8)的所提出的GLP毒理学研究设计框架使用交错式给药布置，并且使得活体内方法具有灵活性。
在食蟹猴中在以6mg/kg进行3次给药后检查CDCP1-vcMMAE、未经缀合的mAb和未经缀合的有效载荷的PK概况(图43A)。总ADC CDCP1-vcMMAE的半衰期(t1/2)为38-45小时，并且未经缀合的mAb和未经缀合的有效载荷的t1/2分别为61小时和87-110小时。t1/2值有利地与其它MMAE ADC的t1/2值比较(Adcetris：ADC食蟹猴t1/2＝45-72小时)。图43B中示出了在食蟹猴中以8mg/kg、6mg/kg和4mg/kg给药3次CDCP1-vcMMAE后的另外的PK数据。
实例6：体外药理学和IHC mAb测定开发
在未经缀合的CDCP1-mAb和ADC与重组CDCP1ECD的结合实验中评估体外药理学。
图44A是实验数据的图，所述实验数据表明未经缀合的CDCP1-mAb与huCDCP1(F30-T667Q525)-8×His_T3的结合。图44B是实验数据的图，所述实验数据表明CDCP1-vcMMAE(DAR为4)与huCDCP1(F30-T667Q525)-8×His_T3的结合。图44C是实验数据的图，所述实验数据表明ADC2(DAR为4)与huCDCP1(F30-T667Q525)-8×His_T3的结合。图44D是实验数据的图，所述实验数据表明ADC4(DAR为4)与huCDCP1(F30-T667Q525)-8×His_T3的结合。图44E是实验数据的图，所述实验数据表明ADC3(DAR为8)与huCDCP1(F30-T667Q525)-8×His_T3的结合。图44F是表，其汇总了未经缀合的CDCP1-mAb和ADC与重组CDCP1ECD huCDCP1(F30-T667Q525)-8×His_T3的另外的结合数据。图44A-44F中示出的数据证明，未经缀合的CDCP1-mAb与CDCP1ECD以约1nM的KD结合，如通过SPR确定的。数据还证明，CDCP1-mAb与MMAE、化合物20和化合物30的有效载荷的缀合未改变KD。
图45A是实验数据的图，所述实验数据表明在CDCP1+切割后未经缀合的CDCP1-mAb和CDCP1-vcMMAE与MDA-MB-468细胞的结合。图45B是实验数据的图，所述实验数据表明在CDCP1++切割后未经缀合的CDCP1-mAb和CDCP1-vcMMAE与PC3细胞的结合。图45C是实验数据的图，所述实验数据表明在CDCP1+++切割后未经缀合的CDCP1-mAb和CDCP1-vcMMAE与DU145细胞的结合。图45D是实验数据的图，所述实验数据表明在CDCP1切割后未经缀合的CDCP1-mAb和CDCP1-vcMMAE与OVMZ-6细胞的结合。图45E是聚丙烯酰胺凝胶结合测定的图像。图45A-45E中示出的数据证明，无论mAb是否与CDCP1的膜近侧区或远侧区结合，CDCP1-mAb切割都不会显著影响体外结合。mAb-CDCPA1序列1(近侧区)抗体、mAb-CDCPA1序列2(远侧区)抗体和mAb-CDCPA1Ch41-2(远侧区)抗体在与CDCP1+细胞结合方面未显示出显著差异。“序列2”的轻链可变区、重链可变区和CDR的序列(SEQ ID NO:15-22)可见于表2B中。
图46A是实验数据的图，所述实验数据表明未经缀合的CDCP1-mAb与CDCP1+细胞的结合亲和力。图46B是实验数据的图，所述实验数据表明ADC3(DAR为8)与CDCP1+细胞的结合亲和力。图46C是实验数据的图，所述实验数据表明CDCP1-vcMMAE(DAR为4)与CDCP1+细胞的结合亲和力。图46A-46C中示出的数据证明，未经缀合的CDCP1-mAb、ADC3(DAR为8)和CDCP1-vcMMAE(DAR为4)相当地与CDCP1+细胞结合。未经缀合的CDCP1-mAb、ADC3(DAR为8)和CDCP1-vcMMAE(DAR为4)对CDCP1+细胞的结合亲和力均在约nM范围内。CDCP1抗体与MMAE和化合物30有效载荷的缀合未改变结合亲和力。
图47A和47B中示出了CDCP1-vcMMAE(DAR为4)和ADC3(DAR为8)的初步体外细胞毒性。图47A是实验数据的图，所述实验数据表明相对细胞存活率(％)相对于CDCP1-vcMMAE(DAR为4)的浓度。图47B是实验数据的图，所述实验数据表明相对细胞存活率(％)相对于ADC3(DAR为8)的浓度。CDCP1-vcMMAE(DAR为4)ADC显示出适度体外细胞毒性，其中在CDCP1阴性OVMZ-6细胞中无活性。ADC3(DAR为8)显示出最小的体外细胞毒性。
图48A是实验数据的图，所述实验数据表明相对细胞存活率(％)相对于CDCP1-vcMMAE(DAR为4)的浓度。图48B是实验数据的图，所述实验数据表明相对细胞存活率(％)相对于ADC3(DAR为8)的浓度。尽管不希望受任何特定理论的束缚，但假设未观察到ADC3(DAR为8)的体外细胞毒性的可能机制包括：ADC与细胞表面缺乏结合；鉴于可体外获得的细胞内依喜替康暴露，3-5天测定不足以杀伤细胞；抗原表达水平过低；内化效率低；细胞内依喜替康释放不足；和/或溶酶体捕集有效载荷。进行用于评价体外细胞毒性的研究，并且所述研究包括评价T-依喜替康相较于T-DXd在N87中在体外的HEK-293过表达和基准(HER2+++)。ADC3结合得到证实，并且使用集落形成测定评估体外杀伤。
T-依喜替康相较于T-DXd的基准研究的非限制性实例包括以5mg/kg和10mg/kg单剂量施用T-依喜替康和T-DXd，以及以5mg/kg和10mg/kg多剂量施用(例如，Q7dx3)T-依喜替康和T-DXd。
ADC3(DAR为8)在集落形成测定中表现出细胞毒性。图49A是实验数据的图像，所述实验数据表明在PC3集落形成测定中ADC3(DAR为8)的细胞毒性。图49B是实验数据的图像，所述实验数据表明在PC3集落形成测定中同种型对照依喜替康的细胞毒性。图49C是实验数据的图，所述实验数据表明集落形成(相对于未经处理的集落归一化)相对于未经缀合的CDCP1-mAb或ADC的浓度(μg/mL)。图50A-50C中示出的数据表明，ADC3(DAR为8)和同种型对照依喜替康具有CDCP1特异性活性。
图50A-50B示出了用于评价本公开的抗体药物缀合物的药代动力学策略的非限制性实例。图50A示出了对ADC、总mAb和有效载荷(例如，CDCP1-vcMMAE)的基于LC-MS的分析的非限制性实例。图50B示出了对ADC、总mAb的基于ELISA的分析以及对有效载荷(例如，ADC3)的LC-MS、CRL的非限制性实例。已经明确确立了针对MMAE的基于LC-MS的策略。对于依喜替康有效载荷，成功开发了针对ADC3的总抗体(ELISA)和有效载荷(LC-MS)方法。然而，抗TOPO1抗体未能检测到总ADC的依喜替康。虽然不希望受任何特定理论的束缚，但假设对精确依喜替康结构具有特异性的mAb可能是有用的，并且利用LC-MS方法。
实例7：针对ADC3的另外的体外和体内数据
发现ADC3的功效和耐受性优异(图51A-51B)。ADC3的毒性与依喜替康有效载荷作用机制一致，并且未观察到明显的靶上毒性。此外，使用ADC3未观察到肺问题或间质性肺病(ILD)。在食蟹猴血浆中未检测到游离有效载荷(依喜替康)(<0.0001ug/ml)。虽然不希望受任何特定理论束缚，但此结果表明ADC3具有优异的稳定性。观察到<3mg/kg的MED。
还发现ADC3在小鼠/人/食蟹猴血浆中是稳定的，并且显著比其等同的基于MMAE的ADC(CDCP1-MMAE)更稳定(图52)。在血浆稳定性中，在与小鼠/人/食蟹猴血浆一起温育时，ADC3(DAR8)在7天后表现出约25％的接头-有效载荷损失；相比之下，在与小鼠/人/食蟹猴血浆一起温育时，CDCP1-MMAE(DAR4)在7天后表现出约60-75％的接头-有效载荷损失。为8的ADC3DAR变为DAR6，而对于CDCP1-MMAE，为4的DAR变为DAR1。ADC3也未表现出游离有效载荷明显损失。虽然不希望受任何特定理论的束缚，但此结果可能是由于Val-Ala键的稳定性引起的。相比之下，在CDCP1-MMAE的情况下观察到游离有效载荷。虽然不希望受任何特定理论束缚，但此结果可能是由于CDCP1-MMAE ADC的Val-Cit-PAB部分的不稳定性造成的。虽然不希望受任何特定理论的束缚，但在两种ADC的情况下，假设逆向迈克尔(retro-Michael)(由于马来酰亚胺键)是接头-有效载荷损失的主导机制。
在化合物30相对于Dxd(在曲妥珠单抗骨架上，两者的DAR为8)的比较性重复给药大鼠毒性研究中，ADC在以20mg/kg或60mg/kg每3周一次IV处理进行总计两次给药后耐受性良好。观察到的毒性主要与拓扑异构酶抑制作用机制相关，并且包括通过一些红细胞参数的降低证明的对造血系统的影响。仅在T-Dxd群组中观察到显著变化，其中在化合物30群组中观察到的影响可忽略不计。
实例8：化合物30的另外的体外数据
尽管游离有效载荷的效力大致相等(图53B)，但发现曲妥珠单抗-化合物30ADC在HER2+++细胞系中的效力低于T-Dxd ADC在所述细胞系中的效力(图53A和图53C)。尽管不希望受任何特定理论的束缚，但此结果支持化合物30的缓慢切割作用机制。
图54示出了实验数据，所述实验数据证明，体内功效显示出使用ADC3实现的消退比使用实现的消退更延长/持续。JIMT-1CDX体内功效(HER2+)。尽管不希望受任何特定理论的束缚，但此结果支持化合物30的释放作用机制。在一非限制性实例中，评估游离有效载荷在曲妥珠单抗-化合物30和曲妥珠单抗-Dxd群组两者中的水平。
预期Val-Ala键的切割机制是通过组织蛋白酶B来释放依喜替康；然而，在用木瓜蛋白酶(组织蛋白酶B替代品)处理化合物30和ADC3时，游离有效载荷未被释放(图55)。相反，观察到Val-Ala-依喜替康和Ala-依喜替康的质量(Ala-依喜替康被证实是基于MS的分析的伪影)。然而，发现Val-Ala-依喜替康是与木瓜蛋白酶反应后的真正代谢物。
发现化合物30以比具有组织蛋白酶B切割机制的其它TOPO1抑制剂切割的速率慢的速率进行切割(图56)。发现化合物30以比其它基于TOPO1的接头/有效载荷(例如，德鲁替康-图57)和其它含Val-Ala的接头-有效载荷(例如，化合物33、AZ-0133(图58))切割的速率慢得多的速率进行切割。虽然不希望受任何特定理论的束缚，但由于过早切割与毒性增强相关，因此在非GLP食蟹猴研究中观察到ADC3缺乏毒性可能部分是由于化合物30的稳定性增强引起的。虽然不希望受任何特定理论的束缚，但假设化合物30中的Ala与依喜替康之间的烷基酰胺键固有地比Ala与依喜替康(例如，AZ-1033)之间的芳基酰胺键更稳定，这使得烷基酰胺键不易于切割。
实例9：S9肝微粒体研究
使用曲妥珠单抗骨架在DAR8处产生一系列含TOPO1抑制剂的ADC。通过对蛋白酶可切割的间隔子(例如，与依喜替康连接的烷基酰胺相对于与依喜替康连接的芳基酰胺、GGFG相对于二肽间隔子)的修饰或释放机制(例如，具有和不具有可切割和裂解间隔子)来改变每种ADC上的接头-有效载荷。
在5μM的初始测试浓度下，在24小时的时间段内，在轻度酸性条件下使用人肝S9级分和猴肝S9级分研究了六种抗体-药物缀合物(即，曲妥珠单抗-化合物30、曲妥珠单抗-化合物33、曲妥珠单抗-化合物50、曲妥珠单抗-AZ'0133、曲妥珠单抗-德鲁替康和曲妥珠单抗-恩美)的含有效载荷的分解代谢物形成。使用LC/QE-orbitrap-MS分析样品。
在每个可切割间隔子的情况下，人S9和食蟹猴S9两者中的释放的构建体被证明是TOPO1抑制剂(即，依喜替康或Dxd)。T-DM1被包括在内作为对照(图59)，并且尽管被分类为不可切割接头，但观察到DM1(细胞毒素)是所释放的药剂。类似地，不含有二肽间隔子的依喜替康衍生物(并且因此被分类为不可切割的；化合物50(图58))在人S9和食蟹猴S9两者中也在较长的时间点(例如24小时)释放少量依喜替康。参见下表4。
总之，遵循四种有效载荷-代谢物和六种有效载荷-接头-氨基酸代谢物的形成。这些代谢物是曲妥珠单抗-化合物30的依喜替康和Cys-化合物30(M1)、曲妥珠单抗-化合物33的依喜替康和Cys-mal-胺基-peg8-val-ala-PABC-依喜替康、曲妥珠单抗-化合物50的依喜替康和Cys-mal-胺基-PEG8-依喜替康、曲妥珠单抗-AZ'0133的4NH2-依喜替康和Cys-mal-胺基-PEG8-Val-Ala-PABC-AZ'0132、曲妥珠单抗-德鲁替康的DXd和Cys-Mc-GGFG-DXd以及曲妥珠单抗-恩美的DM1和Lys-MCC-DM1。通过与1μM参考化合物进行比较来估计所释放的有效载荷的量。图60示出了所遵循的代谢物的结构。
一般来说，有效载荷和有效载荷-接头-氨基酸代谢物在与人肝S9级分一起温育时的释放比在与猴肝S9级分一起温育时的释放高得多(超过10倍)，并且在24小时时间点观察到最高水平。
在与曲妥珠单抗-化合物30一起温育时，在人肝S9级分或猴肝S9级分中均未释放依喜替康。仅在培养基中的对照温育中形成少量依喜替康(<1nM)。对照温育包括未添加S9的每种ADC。图61A示出，在猴肝S9温育和人肝S9温育中未观察到依喜替康浓度，而在1440分钟后，在培养基对照中形成的依喜替康的浓度未被鉴定出高于0.7nM。虽然不一定希望受任何特定理论的束缚，但假设在对照温育中鉴定出依喜替康是由于伪影造成的。相反，在人肝S9温育中形成了高水平的cys-化合物30(M1)，而在与猴肝S9级分一起的温育中，形成了水平比在人S9中的水平低得多的cys-化合物30(M1)(大约5％)。如图62A中所示，用于鉴定cys-化合物30(M1)的LC/MS峰面积在1440分钟后为约160MM，相比之下，用于鉴定曲妥珠单抗-化合物33的LC/MS峰面积为10MM。
在与曲妥珠单抗-化合物33一起温育时形成了高浓度的依喜替康，并且在人肝S9中形成了最高量(24小时时间点时13μM)。在与猴肝S9一起温育时在24小时时间点时仅形成了约0.8μM。在缓冲液中以约0.3μM的量与对照一起温育时在24小时时间点时形成了依喜替康。在人肝S9温育中形成的曲妥珠单抗-化合物33的有效负载-接头-氨基酸(Cys-mal-胺基-peg8-val-ala-PABC-依喜替康)比在猴肝S9温育中形成的所述有效载荷-接头-氨基酸多，但在两者中仅以低水平形成。
在与曲妥珠单抗-化合物50一起温育时，仅痕量水平的有效载荷依喜替康被释放(在人S9中在24小时时间点时小于1.1nM)，而在人肝S9温育中形成了高水平的Cys-Mal-胺基-PEG8-依喜替康，并且在与猴肝S9一起的温育中形成了较低水平的Cys-Mal-胺基-PEG8-依喜替康(约6％)。
在人肝S9级分的情况下，在与曲妥珠单抗-AZ'0133一起温育时，在24小时时间点时，估计1000nM的量的有效载荷(4NH2-依喜替康)被释放，而在猴肝S9级分的情况下，低得多的水平(约55nM)的有效载荷被释放。类似地，在与人肝S9级分一起的温育中高水平的有效载荷-接头-氨基酸(Cys-mal-胺基-PEG8-Val-Ala-PABC-AZ'0132)也被释放，并且在与猴肝S9级分一起的温育中低得多的水平(占人中释放的水平的约4％)被释放。在与培养基一起的对照温育中，曲妥珠单抗-AZ-0133的少量的有效载荷和有效载荷-接头-氨基酸两者也被释放。
在与曲妥珠单抗-德鲁替康一起温育时，在人肝S9级分的情况下，估计670nM的量的有效载荷德鲁替康(DXd)被释放。在猴肝S9级分和培养基对照温育中仅少量的DXd被释放(在24小时时间点时，分别地，45nM和38nM)。在人肝S9级分中，高水平的含有半胱氨酸残基的有效载荷-接头(Cys-Mc-GGFG-DXd)被释放，并且释放的水平为在猴肝S9级分中的释放的水平的约1/10。在猴温育中2.6nM、人温育中2.0nM以及缓冲液中5.1nM的情况下，在24小时时间点时还检测到低水平的依喜替康。虽然不希望受任何特定理论的束缚，但假设依喜替康可以由德鲁替康通过水解形成。
在与曲妥珠单抗-恩美一起温育时，在所有时间点时并且在所有温育条件下均观察到低水平的有效载荷DM1，而在人肝S9级分中在整个温育时间段内观察到含有赖氨酸残基的有效载荷-接头(Lys-MCC-DM1)的恒定释放。
含化合物30的构建体分化，因为发现任何所释放的部分都含有接头-有效载荷化合物30。未观察到游离依喜替康。这不同于传统的可切割接头-有效载荷，但也不同于传统的不可切割接头-有效载荷(例如，DM1)。
表4：S9肝微粒体数据
表5：获得的以下分解代谢物的UPLC/ESI/QE-orbitrap-MS数据
材料和方法
表5中呈现了针对检测到的代谢物获得的UPLC/QE-orbitrap-MS数据。所有代谢物暂且是使用准确的质量数据鉴定的，并且鉴定在表5中示出(图60示出了遵循的代谢物的结构)。基于与1μM参考化合物的比较来估计所释放的有效载荷依喜替康、4-NH2-依喜替康、DXd和DM1的量，并且结果(nM)示于表6和图61中。参考有效载荷和有效载荷的峰面积示出在表8和9中。表7和图62中示出了以检测到的有效载荷-接头-氨基酸(半胱氨酸或赖氨酸)的峰面积表示的分解代谢概况。
表6：不同温育中的所释放的有效载荷的浓度(nM)
表7：不同温育的有效载荷-接头-氨基酸峰面积。
表8：1000nM参考有效载荷的LC/MS峰面积
表9：不同温育中的所释放的有效载荷的LC/MS峰面积
化学品和供应商。
HPLC级甲醇和乙腈：默克公司(德国的达姆施塔特(Darmstadt,Germany))。HPLC级甲酸、乙酸和甲酸铵：BDH公司(BDH)实验室用品(英国的普尔(Poole,UK))，其它化学品：西格玛奥德里奇公司(Sigma Aldrich)(芬兰的赫尔辛基(Helsinki,Finland))，可获得的最高纯度。用Direct-Q3(芬兰埃斯波的密理博公司(Millipore Oy,Espoo,Finland))纯化系统和UP级(超纯，18.2MΩ)在内部新鲜制备水溶液。
在缓冲液中获得研究化合物(即，曲妥珠单抗-化合物30、曲妥珠单抗-化合物33、曲妥珠单抗-化合物50、曲妥珠单抗-AZ'0133、曲妥珠单抗-德鲁替康和曲妥珠单抗-恩美)，并且获得参照化合物甲磺酸依喜替康(10mM)、Dxd(1mM)、DM1(1mM)和4NH2-依喜替康(1mM)，作为DMSO储备溶液。表10示出了温育材料和在pH 5.0的肝S9中的程序。
表10：温育材料和在pH 5.0的肝S9中的程序
本文引用了许多专利和非专利出版物，以描述本公开内容所属的技术领域。这些出版物中的每一个的全部公开内容通过引用并入本文。
虽然上文已经描述和/或例示了本公开的某些实施例，但是根据前述公开，各种其它实施例对本领域的技术人员将显而易见。因此，本公开不限于所描述和/或例示的特定实施例，而是能够在不脱离所附权利要求的范围和精神的情况下进行相当大的变化和修改。
此外，如本文所用，术语“约”意指量、大小、制剂、参数、形状和其它量和特性不是并且不必是精确的，而是根据需要可以是近似的和/或更大或更小，从而反映公差、转换因子、舍入、测量误差等以及本领域的技术人员已知的其它因素。通常，量、大小、制剂、参数、形状或其它量或特性是“约”或“近似的”，无论是否明确如此陈述。
此外，过渡性术语“包含(comprising)”、“大体上由……组成(consistingessentially of)”和“由……组成(consisting of)”在以原始形式和修改形式用于所附权利要求书时限定相对于哪些未列出的另外的权利要求要素或步骤(如果存在的话)排除在权利要求的范围之外的权利要求范围。术语“包含”旨在是包含性的或开放式的并且不排除任何另外的未列出的要素、方法、步骤或材料。术语“由……组成”排除除了权利要求书中指定的要素、步骤或材料之外的任何要素、步骤或材料，并且在后一种情况下，排除与所指定的材料普通相关的杂质。术语“大体上由……组成”将权利要求书的范围限制于所指定的要素、步骤或材料和实质上不影响所要求保护的公开内容的基本和新颖特性的要素、步骤或材料。在替代实施例中，体现本公开内容的本文所述的所有化合物、组合物、制剂和方法可以更具体地由过渡性术语“包含”、“大体上由……组成”和“由……组成”中的任一者限定。

Claims (52)

1.一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或其结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
L是式-R*-L1-LA-的接头；
R*是琥珀酰亚胺；
L1是-[CH2]1-3-C(O)NH-；
LA是-[CH2CH2O]p-(CH2)1-5-C(O)-XAA-，其中p是5至10的整数，并且XAA是具有2个氨基酸部分的氨基酸序列；
D选自
2.根据权利要求1所述的抗体-药物缀合物，其中L1是
3.根据权利要求1或2所述的抗体-药物缀合物，其中p是7或8。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中p是8。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中XAA选自Val-Ala、Tyr-Arg、Phe-Arg、Val-Gln、Val-Cit、Tyr-Met、Leu-Gln、Val-Arg、Met-Thr、Phe-Gln、Thr-Thr、Val-Thr、Ala-Ala、Val-Met、Leu-Met、Ala-Asn、D-Val-D-Gln、D-Ala-D-Ala和Phe-Met。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中XAA是缬氨酸-丙氨酸。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中LA是-[CH2CH2O]p-(CH2)1-3-C(O)-XAA-。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中LA是-[CH2CH2O]p-(CH2)2-C(O)-XAA-。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述接头L具有式：
10.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中D是
11.根据权利要求1至10中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中L-D具有式：
12.根据权利要求1至11中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中n是4至8的整数。
13.根据权利要求12所述的抗体-药物缀合物，其中n是4。
14.根据权利要求12所述的抗体-药物缀合物，其中n是8。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
16.根据权利要求1至14中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含VH和/或VL，所述VH包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列，所述VL包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。
18.根据权利要求17所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含VH和/或VL，所述VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含重链和/或轻链，所述重链包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列，所述轻链包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。
20.根据权利要求19所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含重链和/或轻链，所述重链包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物的药物-抗体比率(DAR)在约1至约10的范围内，任选地其中所述DAR是约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9或约10，任选地DAR是约4，任选地DAR是约8。
22.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至21中任一项所述的抗体药物缀合物；以及药学上可接受的载剂。
23.一种治疗癌症的方法，所述方法包含向有需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至21中任一项所述的抗体药物缀合物或根据权利要求22所述的药物组合物。
24.根据权利要求23所述的方法，其中在将所述治疗有效量的所述抗体-药物缀合物施用于所述受试者后约24小时，少于约50％的所述抗体-药物缀合物转化为代谢物。
25.根据权利要求23或24所述的方法，其中在将所述治疗有效量的所述抗体-药物缀合物施用于所述受试者后约96小时，约50％的所述抗体-药物缀合物转化为代谢物。
26.根据权利要求23至25中任一项所述的方法，其中将所述抗体-药物缀合物转化为式300的代谢物：
27.根据权利要求23至26中任一项所述的方法，其中将所述抗体-药物缀合物转化为式301的代谢物：
28.根据权利要求23至27中任一项所述的方法，其中将所述抗体-药物缀合物转化为式302的代谢物：
29.根据权利要求23至28中任一项所述的方法，其中在体内将所述抗体-药物缀合物转化为代谢物。
30.根据权利要求23至28中任一项所述的方法，其中在体外将所述抗体-药物缀合物转化为代谢物。
31.根据权利要求23至30中任一项所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组：胰腺癌(pancreatic cancer)、乳腺癌(breast cancer)、前列腺癌(prostate cancer)、淋巴瘤、皮肤癌、结肠癌(colon cancer)、黑色素瘤、恶性黑色素瘤、卵巢癌(ovarian cancer)、脑癌、原发性脑癌、头颈癌(head-neck cancer)、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、肝癌、膀胱癌(bladder cancer)、非小细胞肺癌、头颈癌(head or neck carcinoma)、乳腺癌(breastcarcinoma)、卵巢癌(ovarian carcinoma)、肺癌、小细胞肺癌(small-cell lungcarcinoma)、威尔姆氏瘤(Wilms'tumor)、宫颈癌、睾丸癌、膀胱癌(bladder carcinoma)、胰腺癌(pancreatic carcinoma)、胃癌、结肠癌(colon carcinoma)、前列腺癌(prostaticcarcinoma)、泌尿生殖系统癌、甲状腺癌、食管癌、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、肾上腺癌、肾细胞癌、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、恶性胰腺胰岛素瘤、恶性类癌、绒毛膜癌、蕈样肉芽肿、恶性高钙血症、宫颈增生、白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、毛细胞性白血病、神经母细胞瘤、横纹肌肉瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、真性红细胞增多症(polycythemia vera)、原发性血小板增多症、霍奇金氏病(Hodgkin's disease)、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)、软组织肉瘤、成骨肉瘤、原发性巨球蛋白血症或视网膜母细胞瘤等，在其它实施例中，所述癌症是听神经瘤、腺癌、血管肉瘤、星形细胞瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌(TNBC)、支气管原癌、宫颈癌、脊索瘤、绒毛膜癌、结肠癌、结直肠癌、颅咽管瘤、囊腺癌、胚胎性癌、内皮癌、室管膜瘤、上皮癌、食道癌、尤文氏瘤(Ewing's tumor)、纤维肉瘤、胃癌(gastric cancer)、多形性胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、头颈癌、血管母细胞瘤、肝细胞瘤、肾癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、肺癌、淋巴管内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、髓样癌、髓母细胞瘤、黑色素瘤、脑膜瘤、间皮瘤、粘液肉瘤、鼻癌、神经母细胞瘤、少突神经胶质瘤、口腔癌、成骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳头状腺癌、乳头状癌、松果体瘤、前列腺癌、横纹肌肉瘤、直肠癌、肾细胞癌、视网膜母细胞瘤、肉瘤、皮脂腺癌、精原细胞瘤、皮肤癌、鳞状细胞癌、胃癌(stomach cancer)、汗腺癌、滑膜瘤、睾丸癌、小细胞肺癌、喉癌、子宫癌、威尔姆氏瘤、血癌、急性红白血病性白血病、急性淋巴母细胞性B细胞白血病、急性淋巴母细胞性T细胞白血病、急性淋巴母细胞性白血病、急性巨核细胞母细胞性白血病、急性单核母细胞性白血病、急性髓母细胞性白血病、急性髓单核细胞性白血病、急性非淋巴细胞性白血病、急性早幼粒细胞性白血病、急性未分化性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、毛细胞性白血病、多发性骨髓瘤、重链病、霍奇金氏病、多发性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、真性红细胞增多症或华氏巨球蛋白血症(Waldenstrom'smacroglobulinemia)。
32.根据权利要求23至31中任一项所述的方法，其中三阴性乳腺癌(TNBC)中的所述癌症。
33.一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
D包含药物部分；
n是1至20的整数；并且
L具有式：
34.根据权利要求33所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
35.根据权利要求33所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
36.根据权利要求34至36中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述药物部分选自
37.根据权利要求33至36中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述药物部分选自
38.根据权利要求33至37中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物的药物-抗体比率(DAR)在约1至约10的范围内，任选地其中所述DAR是约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9或约10，任选地DAR是约4，任选地DAR是约8。
39.一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
n是1至20的整数；并且
L-D具有式：
40.根据权利要求39所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
41.根据权利要求40所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
42.根据权利要求39至42中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物的药物-抗体比率(DAR)在约1至约10的范围内，任选地其中所述DAR是约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9或约10，任选地DAR是约4，任选地DAR是约8。
43.根据权利要求39至42中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中n是1至10、2至8或4至8的整数，任选地n是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，任选地n是4或8，任选地n是4，任选地n是8。
44.一种抗体-药物缀合物，其具有式1030-1064或1100-1118中的任一项，其中Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合。
45.一种实施例(I)-(XVII)中的任一项的抗体-药物缀合物。
46.一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
n是1；
L-D具有式：
其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
47.一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
n是4；
L-D具有式：
其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
48.一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
n是8；
L-D具有式：
其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
49.一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
n是1；
L-D具有式：
其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
50.一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
n是4；
L-D具有式：
其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
51.一种具有式(I)的抗体-药物缀合物：
Ab-[L-D]n
式(I)
其中在式(I)中：
Ab包含抗体或抗体结合片段，其中所述抗体或其结合片段与含CUB结构域的蛋白1(CDCP1)特异性地结合；
n是8；
L-D具有式：
其中所述抗体或其结合片段包含：
(i)重链可变区(VH)，所述VH包含：
(a)VH互补决定区一(CDRH1)，所述CDRH1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VH互补决定区二(CDRH2)，所述CDRH2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VH互补决定区三(CDRH3)，所述CDRH3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和/或由其组成，
以及(ii)轻链可变区(VL)，所述VL包含：
(a)VL互补决定区一(CDRL1)，所述CDRL1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和/或由其组成，
(b)VL互补决定区二(CDRL2)，所述CDRL2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和/或由其组成，以及
(c)VL互补决定区三(CDRL3)，所述CDRL3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列和/或由其组成。
52.一种治疗癌症的方法，所述方法包含向有需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求33至51中任一项所述的抗体-药物缀合物。
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