CN116981692A

CN116981692A - 递送mRNA编码的抗体的方法和组合物

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Publication number: CN116981692A
Application number: CN202280019388.2A
Authority: CN
Inventors: L·博格林; C·格纳德; K·A·特兰; A·迪亚斯; F·德罗萨
Original assignee: Translation Bio Co
Current assignee: Translation Bio Co
Priority date: 2021-01-14
Filing date: 2022-01-14
Publication date: 2023-10-31
Also published as: JP2024504614A; EP4277929A1; US20230355524A1; WO2022155404A1

Abstract

本发明尤其提供了一种治疗受试者的免疫疾病的方法，所述方法包括：向有需要的受试者施用编码抗体的重链和轻链的一种或多种mRNA，所述抗体结合选自IL‑4、IL‑5、IL‑6、IL‑9、IL‑13、IL‑25或IL‑33、IL‑4R、IL‑5R、IL‑6R、IL‑9R、IL‑13R、IL‑25R或IL‑33R的蛋白质靶标，并且其中所述一种或多种mRNA被包封在脂质纳米颗粒(LNP)中。本发明还尤其提供了一种组合物，所述组合物包含编码抗体的重链和轻链的一种或多种mRNA，所述抗体结合选自IL‑4、IL‑5、IL‑6、IL‑9、IL‑13、IL‑25或IL‑33、IL‑4R、IL‑5R、IL‑6R、IL‑9R、IL‑13R、IL‑25R或IL‑33R的蛋白质靶标，并且其中所述一种或多种mRNA被包封在脂质纳米颗粒(LNP)中。

Description

递送mRNA编码的抗体的方法和组合物

相关申请的交叉引用

本申请要求2021年1月14日提交的美国临时申请号63/137,528的优先权和权益，将其内容通过引用以其整体特此并入。

通过引用序列表并入

将2022年1月6日创建的大小为168KB的名为“MRT-2210WO_Seq_Listing_ST25.txt”的文本文件的内容通过引用以其整体特此并入。

背景技术

抗体具有强大的治疗效果，目前用于治疗包括癌症、免疫疾病、心血管疾病和移植排斥反应在内的一系列疾病。传统意义上，治疗性抗体是通过重组技术产生，经配制并且然后被施用于需要抗体疗法的患者。然而，抗体的生产和配制是非常昂贵的。此外，许多抗体在体内仅具有非常短的半衰期，因此在被降解之前可能无法到达其靶抗原或靶组织。为了实现预期功效，抗体疗法通常需要高剂量和频繁施用，这可导致不希望的脱靶效应。

发明内容

本发明尤其提供了一种治疗受试者的疾病的方法。在一些方面，本发明提供了一种治疗受试者的免疫疾病的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向受试者施用包含编码靶向2型炎症驱动因子的抗体的mRNA的组合物，所述靶标包括例如IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-13、IL-25或IL-33、IL-4受体(IL-4R，例如IL-4Rα)、IL-5受体(IL-5R)、IL-6受体(IL-6R)、IL-9受体(IL-9R)、IL-13受体(IL-13R)、IL-25受体(IL-25R)或IL-33受体(IL-33R)。在一些实施方案中，所述方法包括向受试者施用包含编码结合和/或抑制2型炎症驱动因子的抗体的mRNA的组合物，此类靶标包括例如IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-13、IL-25或IL-33、IL-4受体(IL-4R，例如IL-4Rα)、IL-5受体(IL-5R)、IL-6受体(IL-6R)、IL-9受体(IL-9R)、IL-13受体(IL-13R)、IL-25受体(IL-25R)或IL-33受体(IL-33R)。诸位发明人出人意料地发现了一种稳健而有效的方式来递送包封在脂质纳米颗粒(LNP)中的编码抗体的mRNA，所述抗体靶向与免疫疾病有关的特定细胞因子。本文公开的方法和组合物可用于治疗多种疾病，例如与肺相关免疫疾病相关的疾病。此类肺相关免疫疾病的例子包括哮喘、慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、系统性硬化病-间质性肺病(SSc-ILD)、特发性肺纤维化IPF、结节病或过敏反应。诸位发明人还出人意料地发现，通过吸入或雾化施用本文所述的组合物导致低或无全身性暴露，从而潜在地避免不期望的全身性副作用。

在一些方面，一种治疗受试者的免疫疾病的方法，所述方法包括：向有需要的受试者施用编码抗体的重链和轻链的一种或多种mRNA，所述抗体结合和/或抑制选自IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-13、IL-25或IL-33、IL-4受体(IL-4R，例如IL-4Rα)、IL-5受体(IL-5R)、IL-6受体(IL-6R)、IL-9受体(IL-9R)、IL-13受体(IL-13R)、IL-25受体(IL-25R)或IL-33受体(IL-33R，例如ST2，也称为IL1RL1)的蛋白质靶标，并且其中所述一种或多种mRNA被包封在脂质纳米颗粒(LNP)中。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-4。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-5。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-6。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-9。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-13。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-25。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-33。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-4受体(IL-4R，例如IL-4Rα)。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-5受体(IL-5R)。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-6受体(IL-6R)。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-9受体(IL-9R)。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-13受体(IL-13R)。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-25受体(IL-25R)。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-33受体(IL-33R，例如ST2，也称为IL1RL1)。

在一些方面，本文提供了一种治疗受试者的免疫疾病的方法，所述方法包括：向有需要的受试者施用编码抗体的重链和轻链的一种或多种mRNA，所述抗体结合和/或抑制选自IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-13、IL-25或IL-33、IL-4受体(IL-4R，例如IL-4Rα)、IL-5受体(IL-5R)、IL-6受体(IL-6R)、IL-9受体(IL-9R)、IL-13受体(IL-13R)、IL-25受体(IL-25R)或IL-33受体(IL-33R，例如ST2，也称为IL1RL1)的蛋白质，并且其中所述一种或多种mRNA被包封在脂质纳米颗粒(LNP)中。在一些实施方案中，所述抗体结合和/或抑制IL-4。在一些实施方案中，所述抗体结合和/或抑制IL-5。在一些实施方案中，所述抗体结合和/或抑制IL-6。在一些实施方案中，所述抗体结合和/或抑制IL-9。在一些实施方案中，所述抗体结合和/或抑制IL-13。在一些实施方案中，所述抗体结合和/或抑制IL-25。在一些实施方案中，所述抗体结合和/或抑制IL-33。在一些实施方案中，所述抗体结合和/或抑制IL-4受体(IL-4R，例如IL-4Rα)。在一些实施方案中，所述抗体结合和/或抑制IL-5受体(IL-5R)、IL-6受体(IL-6R)、IL-9受体(IL-9R)、IL-13受体(IL-13R)、IL-25受体(IL-25R)或IL-33受体(IL-33R，例如ST2，也称为IL1RL1)。

在一些实施方案中，所述抗体是抗IL6R抗体或抗IL4Rα抗体。在一些实施方案中，所述抗体是抗IL6R抗体。在一些实施方案中，所述抗体是抗IL4Rα抗体。

在一些实施方案中，所述免疫疾病与2型炎症相关细胞因子的增加相关。

在一些实施方案中，所述免疫疾病选自哮喘、慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、系统性硬化病-间质性肺病(SSc-ILD)、特发性肺纤维化IPF、结节病或过敏反应。在一些实施方案中，所述免疫疾病是哮喘。在一些实施方案中，所述免疫疾病是具有鼻息肉的慢性鼻-鼻窦炎(CRSwNP)。在一些实施方案中，所述免疫疾病是慢性阻塞性肺疾病(COPD)。在一些实施方案中，所述免疫疾病是系统性硬化病-间质性肺病(SSc-ILD)。在一些实施方案中，所述免疫疾病是特发性肺纤维化IPF。在一些实施方案中，所述免疫疾病是结节病。在一些实施方案中，所述免疫疾病是过敏反应。

在一些实施方案中，所述施用是通过雾化、气管内递送或吸入进行的。在一些实施方案中，所述施用是通过雾化进行的。在一些实施方案中，肺部递送是通过使用雾化器、优选网状雾化器将化合物雾化来进行的。在一些实施方案中，雾化器将化合物以气雾剂的形式递送至肺细胞。在一些实施方案中，肺细胞是肺上皮细胞。在一些实施方案中，具有平均大小为约50-70nm的脂质纳米颗粒的组合物特别适用于通过雾化进行肺部递送。

在一些实施方案中，所述施用是通过气管内递送进行的。在一些实施方案中，所述施用是通过吸入进行的。

在一些实施方案中，所述施用导致将mRNA施用到肺组织。

在一些实施方案中，所述施用导致抗体表达至少约48小时、72小时、96小时或120小时。因此，在一些实施方案中，所述施用导致抗体表达至少约48小时。在一些实施方案中，所述施用导致抗体表达至少约72小时。在一些实施方案中，所述施用导致抗体表达至少约96小时。在一些实施方案中，所述施用导致抗体表达至少约120小时。在一些实施方案中，所述施用导致抗体表达在约72与120小时之间。在一些实施方案中，所述施用导致抗体表达在约96与120小时之间。

在一些实施方案中，将所述组合物施用于受试者的肺之后，发生所述mRNA的低或无全身性暴露。

在一些实施方案中，所述免疫疾病选自自身免疫性皮炎或特应性皮炎。因此，在一些实施方案中，所述免疫疾病是自身免疫性皮炎。在一些实施方案中，所述免疫疾病是特应性皮炎。

在一些实施方案中，所述施用是静脉内进行的。在一些实施方案中，所述施用是腹膜内进行的。在一些实施方案中，所述抗体全身性表达，例如，当静脉内或腹膜内施用时。

在一些实施方案中，所述LNP包含阳离子脂质、非阳离子脂质和经PEG修饰的脂质中的一种或多种。

在一些实施方案中，所述LNP进一步包含胆固醇。

在一些实施方案中，所述LNP的一种或多种阳离子脂质与一种或多种非阳离子脂质与一种或多种经PEG修饰的脂质的摩尔比对应地在约30-60:25-35:1-15之间。

在一些实施方案中，其中所述非阳离子脂质选自1,2-二芥酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DEPE)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(POPC)、棕榈酰油酰-磷脂酰乙醇胺(POPE)、二油酰-磷脂酰乙醇胺4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-1-甲酸酯(DOPE-mal)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰磷酸乙醇胺(DMPE)、二硬脂酰-磷脂酰-乙醇胺(DSPE)、16-O-单甲基PE、16-O-二甲基PE、18-1-反式PE、或1-硬脂酰-2-油酰-磷脂酰乙醇胺(SOPE)。

在一些实施方案中，所述LNP包含DMG-PEG-2000、Guan-SS-Chol和DOPE。在一些实施方案中，所述LNP包含DMG-PEG-2000。在一些实施方案中，所述LNP包含Guan-SS-Chol。在一些实施方案中，所述LNP包含DOPE。

在一些实施方案中，所述DMG-PEG-2000、Guan-SS-Chol和DOPE以约1-15:30-60:25-35的比率存在。在一些实施方案中，所述DMG-PEG-2000、Guan-SS-Chol和DOPE以约5:60:35的比率存在。

在一些实施方案中，所述重链和轻链被编码于单个mRNA中。

在一些实施方案中，所述重链和轻链被编码在单独的mRNA中。

在一些实施方案中，所述LNP具有不大于150nm的大小。

在一些实施方案中，所述LNP具有不大于100nm的大小。

在一些实施方案中，所述LNP具有不大于75nm的大小。

在一些实施方案中，所述LNP具有约60nm的大小。

在一些实施方案中，所述一种或多种mRNA被修饰以增强稳定性。

在一些实施方案中，所述一种或多种mRNA被修饰为包括修饰的核苷酸、帽结构、聚A尾、5'和/或3’非翻译区。

在一些实施方案中，所述一种或多种mRNA是未修饰的。

在一些方面，提供了一种组合物，其包含编码抗体的重链和轻链的一种或多种mRNA，所述抗体结合和/或抑制选自IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-13、IL-25或IL-33、IL-4受体(IL-4R，例如IL-4Rα)、IL-5受体(IL-5R)、IL-6受体(IL-6R)、IL-9受体(IL-9R)、IL-13受体(IL-13R)、IL-25受体(IL-25R)或IL-33受体(IL-33R，例如ST2，也称为IL1RL1)的蛋白质靶标，并且其中所述一种或多种mRNA被包封在脂质纳米颗粒(LNP)中。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-4。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-5。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-6。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-9。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-13。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-25。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-33。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-4受体(IL-4R，例如IL-4Rα)。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-5受体(IL-5R)。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-6受体(IL-6R)。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-9受体(IL-9R)。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-13受体(IL-13R)。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-25受体(IL-25R)。在一些实施方案中，所述蛋白质靶标是IL-33受体(IL-33R，例如ST2，也称为IL1RL1)。

在一些实施方案中，其中所述LNP包含阳离子脂质、非阳离子脂质和经PEG修饰的脂质中的一种或多种。

在一些实施方案中，所述LNP进一步包含胆固醇。

在一些实施方案中，所述LNP的一种或多种阳离子脂质与一种或多种非阳离子脂质与一种或多种经PEG修饰的脂质的摩尔比分别在约30-60:25-35:1-15之间。

在一些实施方案中，所述LNP包含DMG-PEG-2000、Guan-SS-Chol和DOPE。

在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL6R抗体重链，所述抗IL6R抗体重链包含与以下至少80％相同的序列：

EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASRFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAENSLFLQMNGLRAEDTALYYCAKGRDSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVTYLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:18)。在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL6R抗体重链，所述抗IL6R抗体重链包含与SEQ ID NO:18 70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多相同的序列。在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL6R抗体重链，所述抗IL6R抗体重链包含与SEQ ID NO:18相同的序列。

在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL6R抗体重链，所述抗IL6R抗体重链进一步包含与以下至少80％相同的分泌序列：

MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSAFPTIPLS(SEQ ID NO:26)。在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL6R抗体重链，所述抗IL6R抗体重链进一步包含与SEQ ID NO:26 70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多相同的分泌序列。在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL6R抗体重链，所述抗IL6R抗体重链进一步包含SEQ ID NO:26的分泌序列。

在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL6R抗体轻链，所述抗IL6R抗体轻链包含与以下至少80％相同的序列：

DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFASYYCQQANSFPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO:19)。在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL6R抗体轻链，所述抗IL6R抗体轻链包含与SEQ ID NO:1970％、75％、80％、85％、90％、95％或更多相同的序列。在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL6R抗体轻链，所述抗IL6R抗体轻链包含与SEQ ID NO:19相同的序列。

在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL6R抗体轻链，所述抗IL6R抗体轻链进一步包含与以下至少80％相同的分泌序列：

MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSAFPTIPLS(SEQ ID NO:26)。在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL6R抗体轻链，所述抗IL6R抗体轻链进一步包含与SEQ ID NO:26 70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多相同的序列。在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL6R抗体轻链，所述抗IL6R抗体轻链进一步包含SEQ ID NO:26的分泌序列。

在一些实施方案中，编码所述抗IL6R抗体重链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与以下序列之一至少80％相同的序列：

(A)

ATGGCCACTGGAAGCCGGACAAGCCTGCTGCTGGCCTTTGGCCTGCTGTGTCTGCCTTGGCTGCAGGAGGGAAGCGCATTTCCAACAATTCCTCTGAGCGAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGAGGAGGCCTCGTGCAGCCAGGCAGATCCCTGAGGCTCTCCTGCGCCGCTAGCAGATTCACTTTCGACGACTACGCCATGCACTGGGTGCGGCAGGCACCTGGCAAGGGACTGGAATGGGTGTCCGGCATTTCTTGGAACAGCGGGCGGATCGGGTACGCGGACAGCGTGAAAGGAAGGTTTACAATCTCCCGGGACAATGCTGAGAACTCCCTGTTCCTGCAGATGAACGGCCTGAGAGCTGAAGACACAGCACTGTACTATTGCGCAAAAGGCCGCGACTCCTTTGACATCTGGGGGCAGGGCACAATGGTGACCGTGTCTAGCGCCTCCACAAAAGGACCTAGCGTTTTCCCACTGGCTCCATCTAGCAAGTCTACATCCGGGGGCACCGCCGCTCTGGGCTGTCTGGTGAAGGATTACTTCCCTGAGCCCGTCACTGTCAGCTGGAACTCCGGAGCTCTGACCTCAGGCGTGCACACTTTTCCCGCTGTGCTGCAGAGCTCTGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTTGTGACCGTGCCTAGCTCATCCCTCGGCACCCAGACCTATATCTGCAACGTCAACCACAAACCTTCCAACACCAAAGTGGACAAGAAAGTGGAACCTAAGTCCTGCGATAAGACTCATACTTGCCCTCCTTGTCCAGCACCAGAGCTGCTGGGGGGGCCAAGCGTGTTTCTCTTTCCACCTAAGCCTAAAGACACCCTGATGATCTCCAGGACCCCAGAGGTGACATGTGTGGTGGTGGACGTGTCTCATGAGGACCCTGAGGTGAAATTCAATTGGTATGTGGACGGCGTTGAGGTTCACAACGCAAAGACCAAGCCAAGGGAGGAGCAGTATAATAGCACCTATCGCGTGGTGTCCGTCCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTATAAGTGTAAAGTGAGCAACAAGGCACTGCCTGCTCCTATCGAGAAGACTATCAGCAAAGCTAAAGGACAGCCAAGAGAGCCCCAGGTGACCTACCTGCCACCTTCTCGGGACGAACTGACCAAAAACCAGGTGAGCCTGACTTGCCTGGTGAAGGGCTTTTATCCCTCTGATATTGCAGTGGAGTGGGAGAGTAACGGGCAGCCCGAGAACAACTACAAGACTACTCCACCAGTTCTGGATTCCGACGGCAGCTTCTTCCTGTATAGCAAACTGACAGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTTTTTAGCTGCAGCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCATTACACACAGAAGTCTCTGTCTCTGTCCCCCGGAAAGTGA(SEQ ID NO:2)；

(B)

ATGGCCACCGGGTCTCGGACAAGCCTCCTGCTCGCATTCGGGCTCCTGTGTCTGCCTTGGCTGCAAGAAGGATCCGCATTTCCCACCATTCCACTGTCTGAGGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGAGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCAGGTCTCTGAGGCTGTCTTGCGCTGCCAGCCGGTTTACCTTTGATGATTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGCAAAGGACTGGAATGGGTGTCCGGAATTTCCTGGAATAGTGGCAGGATCGGCTATGCCGACTCTGTCAAAGGCCGGTTTACAATCTCCCGCGACAACGCTGAGAACTCCCTGTTCCTGCAGATGAACGGCCTGAGAGCTGAAGATACCGCCCTGTACTATTGCGCCAAGGGGCGCGACAGCTTCGACATTTGGGGCCAGGGAACCATGGTGACTGTGAGCAGCGCATCCACAAAAGGGCCCTCCGTGTTCCCCCTGGCACCTTCCAGTAAATCCACTTCTGGCGGAACAGCAGCTCTCGGCTGTCTGGTGAAGGATTATTTCCCCGAGCCAGTGACAGTGTCTTGGAATTCTGGCGCACTCACCAGTGGAGTCCACACTTTTCCAGCCGTGCTGCAGAGCTCCGGACTGTATTCCCTGAGCTCCGTCGTGACAGTGCCATCCTCTTCTCTGGGAACTCAGACATATATTTGCAACGTTAATCATAAGCCTTCTAACACCAAGGTGGATAAGAAAGTGGAGCCCAAATCCTGCGACAAGACACACACTTGCCCACCATGCCCTGCCCCTGAACTGCTGGGAGGACCAAGCGTGTTTCTCTTCCCTCCTAAGCCTAAGGATACCCTGATGATCTCTAGGACCCCAGAGGTGACATGCGTGGTGGTTGACGTCTCCCATGAAGATCCTGAAGTGAAATTTAACTGGTACGTGGACGGAGTGGAAGTGCACAATGCAAAGACCAAACCCCGCGAGGAACAGTACAACTCCACTTACCGGGTGGTTTCCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGAAAAGAGTATAAGTGCAAAGTGAGCAATAAGGCCCTGCCCGCCCCTATTGAGAAGACCATCTCTAAGGCTAAAGGCCAGCCTCGCGAACCCCAGGTTACCTATCTGCCTCCAAGCAGAGATGAGCTCACCAAAAACCAGGTGTCTCTGACCTGTCTGGTGAAAGGCTTCTATCCAAGCGATATCGCCGTGGAGTGGGAGTCCAACGGACAGCCAGAAAACAATTACAAGACTACCCCACCTGTCCTGGACAGCGACGGGAGCTTCTTTCTGTACTCTAAGCTGACAGTCGACAAAAGCCGGTGGCAGCAAGGCAACGTCTTCAGCTGCAGCGTCATGCACGAGGCCCTGCATAATCATTATACTCAGAAGTCTCTGAGCCTGAGCCCTGGCAAGTAG(SEQ ID NO:3)；

(C)

ATGGCCACTGGAAGCAGAACCTCCCTGCTGCTGGCATTCGGACTGCTGTGCCTGCCATGGCTGCAGGAGGGATCCGCTTTCCCAACCATCCCCCTCAGCGAGGTGCAGCTCGTTGAATCTGGAGGAGGACTGGTGCAACCAGGACGCTCCCTGAGACTGTCTTGTGCTGCTTCCAGGTTTACTTTTGACGATTATGCTATGCACTGGGTGAGACAGGCCCCAGGAAAAGGACTGGAATGGGTGTCTGGAATTTCTTGGAACAGCGGACGCATTGGCTACGCCGACTCTGTGAAGGGAAGGTTTACTATCTCCAGGGATAACGCGGAAAACTCCCTCTTCCTCCAGATGAACGGCCTGAGGGCAGAGGACACCGCTCTGTACTACTGCGCCAAAGGAAGAGATAGCTTCGATATCTGGGGACAGGGGACCATGGTGACAGTTTCCAGCGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCACTGGCCCCATCCTCCAAGAGCACTTCTGGCGGGACTGCTGCACTGGGCTGCCTGGTGAAGGATTATTTCCCTGAGCCTGTGACAGTGAGCTGGAACTCAGGAGCACTGACTTCCGGGGTGCATACATTCCCCGCTGTGCTGCAGTCTTCTGGGCTGTATTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTCCCTTCCTCAAGCCTGGGAACCCAGACATATATTTGTAACGTGAACCACAAGCCAAGCAATACAAAGGTGGATAAGAAGGTGGAGCCTAAGTCCTGTGACAAAACACACACATGTCCCCCATGTCCAGCTCCTGAACTGCTTGGCGGACCATCCGTCTTCCTGTTTCCACCCAAACCAAAGGATACACTGATGATCAGCCGGACACCAGAGGTGACTTGCGTCGTCGTGGACGTCAGCCATGAAGACCCCGAGGTGAAGTTTAATTGGTATGTGGACGGGGTGGAGGTCCACAACGCCAAGACCAAACCCAGGGAGGAGCAGTACAACTCCACTTATCGCGTGGTTTCTGTGCTGACAGTCCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAATGCAAAGTGTCCAATAAGGCCCTGCCCGCCCCAATCGAGAAAACTATTTCAAAGGCCAAAGGACAGCCCAGAGAGCCACAGGTGACCTACCTCCCTCCTTCCAGGGACGAGCTCACTAAGAATCAGGTGTCTCTGACTTGCCTGGTGAAAGGCTTTTATCCTTCTGACATCGCAGTGGAGTGGGAGAGCAATGGCCAGCCCGAGAACAATTATAAAACAACACCACCCGTCCTGGACTCTGATGGCAGCTTTTTCCTGTATAGCAAGCTGACAGTGGACAAATCACGCTGGCAGCAGGGGAATGTCTTCAGCTGTAGCGTGATGCACGAAGCTCTGCACAATCACTATACACAGAAGTCCCTGTCCCTGAGCCCAGGAAAATAA(SEQ ID NO:4)；或

(D)

ATGGCTACCGGCAGCAGGACTAGCCTGCTGCTGGCTTTCGGCCTGCTGTGTCTGCCTTGGCTGCAAGAGGGGTCCGCTTTCCCTACTATCCCTCTGTCCGAAGTGCAGCTGGTCGAGAGCGGAGGGGGCCTGGTGCAGCCTGGAAGAAGTCTGCGCCTGTCCTGCGCAGCAAGCAGGTTTACATTTGACGACTACGCAATGCACTGGGTGCGCCAAGCTCCAGGCAAAGGCTTAGAATGGGTGTCTGGCATCAGCTGGAACTCAGGGCGGATCGGCTACGCAGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACTATCTCTAGGGACAACGCCGAGAACTCCCTGTTCCTGCAGATGAATGGGCTGCGGGCAGAAGACACTGCACTGTATTATTGTGCTAAGGGGAGAGACTCTTTCGACATCTGGGGCCAGGGCACAATGGTGACTGTGTCCTCTGCCTCTACCAAGGGCCCTTCCGTGTTCCCACTGGCACCAAGCAGCAAATCCACATCCGGGGGGACCGCAGCTCTCGGATGTCTGGTGAAAGACTATTTCCCTGAGCCCGTCACAGTGTCTTGGAATTCCGGCGCCCTGACAAGCGGCGTGCACACTTTTCCTGCCGTTCTGCAGAGCTCCGGCCTATACTCCCTGTCCAGCGTGGTGACAGTCCCTTCTAGCAGTCTGGGCACACAGACTTATATTTGCAACGTGAATCACAAGCCATCTAACACCAAGGTGGATAAGAAGGTGGAACCAAAGTCCTGTGATAAAACCCATACCTGTCCTCCATGTCCAGCTCCTGAACTCCTGGGGGGACCCTCTGTGTTCCTGTTCCCACCTAAGCCTAAAGACACTCTGATGATTTCCAGAACTCCTGAGGTGACTTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCATGAGGATCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGAGTCGAGGTGCATAACGCTAAAACTAAACCAAGAGAGGAACAGTATAATTCCACTTATAGAGTTGTGAGCGTCCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGAAAAGAATACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCACTCCCCGCACCAATTGAGAAGACCATTTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCTCAGGTGACCTATCTGCCTCCAAGCCGGGACGAACTGACAAAGAATCAGGTCAGCCTGACTTGCCTGGTGAAGGGGTTTTACCCTTCTGACATCGCCGTGGAATGGGAGTCTAATGGACAGCCCGAAAACAACTACAAGACCACACCACCCGTGCTGGACAGCGATGGCTCCTTTTTCCTGTATAGTAAACTGACCGTCGACAAGTCTCGCTGGCAGCAGGGCAACGTGTTTTCTTGCAGCGTTATGCATGAAGCCCTCCACAACCACTATACACAGAAAAGCCTGTCTCTCAGCCCTGGGAAGTGA(SEQ ID NO:5)。

在一些实施方案中，编码所述抗IL6R抗体重链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ ID NO:2、3、4或5之一70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多相同的序列。在一些实施方案中，编码所述抗IL6R抗体重链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ IDNO:2、3、4或5之一相同的序列。因此，在一些实施方案中，编码抗IL6R抗体重链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ ID NO:2相同的序列。在一些实施方案中，编码抗IL6R抗体重链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ ID NO:3相同的序列。在一些实施方案中，编码抗IL6R抗体重链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ ID NO:4相同的序列。在一些实施方案中，编码抗IL6R抗体重链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ ID NO:5相同的序列。

在一些实施方案中，编码所述抗IL6R抗体轻链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与以下序列之一至少80％相同的序列：

(A)

ATGGCCACTGGAAGCCGGACAAGCCTGCTGCTGGCCTTTGGCCTGCTGTGTCTGCCTTGGCTGCAGGAGGGAAGCGCATTTCCAACAATTCCTCTGAGCGACATTCAGATGACACAGAGCCCCAGCAGCGTGTCCGCATCAGTGGGAGACAGGGTGACTATCACATGTAGAGCTTCTCAAGGAATTAGCTCTTGGCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTATGGAGCTAGCTCTCTGGAGTCTGGGGTGCCATCTAGGTTCAGTGGCTCCGGCAGCGGAACAGACTTCACACTGACTATCAGCAGCCTGCAGCCTGAGGACTTTGCCAGCTACTACTGCCAGCAGGCAAATAGCTTTCCCTATACTTTCGGACAGGGCACCAAGCTGGAGATTAAGCGGACCGTTGCTGCTCCAAGCGTGTTCATCTTCCCACCTTCCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAATTTCTATCCCCGTGAAGCCAAAGTGCAGTGGAAGGTGGATAACGCTCTCCAGTCTGGCAATTCCCAGGAGAGCGTGACAGAGCAGGATTCTAAGGATTCTACCTACTCCCTGTCCAGCACACTGACCCTGAGCAAGGCCGATTACGAAAAACACAAAGTGTACGCCTGCGAAGTCACACACCAGGGGCTGAGCTCCCCAGTGACAAAGAGCTTTAATAGAGGGGAGTGCTGA(SEQ IDNO:6)；

(B)

ATGGCTACAGGGAGCCGCACTAGCCTGCTGCTGGCTTTTGGCCTGCTGTGCCTGCCATGGCTGCAAGAGGGGTCCGCCTTTCCTACCATCCCCCTGTCCGATATTCAGATGACCCAGTCCCCTAGCAGCGTGTCTGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACTATCACCTGTAGGGCCAGCCAGGGCATTTCTAGCTGGCTGGCTTGGTACCAGCAGAAGCCAGGAAAGGCTCCCAAACTGCTGATCTACGGGGCATCCTCTCTGGAGTCCGGAGTGCCAAGCAGATTCTCTGGGAGCGGCAGCGGGACCGATTTCACACTGACCATTAGCAGCCTGCAGCCAGAAGACTTCGCCAGCTACTATTGTCAGCAGGCAAACTCTTTTCCTTATACCTTCGGGCAGGGGACTAAACTGGAAATCAAGCGGACAGTGGCTGCTCCAAGCGTGTTCATCTTCCCACCTTCCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACAGCTTCCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTTTATCCAAGGGAAGCTAAAGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCTCTGCAGTCTGGAAATAGCCAGGAATCCGTGACTGAGCAGGATAGCAAAGACAGCACATACAGCCTGTCTTCCACTCTGACCCTGAGCAAGGCAGACTACGAGAAACACAAAGTGTATGCCTGTGAGGTGACCCATCAGGGCCTGTCTAGCCCAGTGACCAAGTCCTTTAACAGAGGCGAATGTTGA(SEQ IDNO:7)；

(C)

ATGGCAACTGGATCCCGGACCTCTCTGCTGCTGGCCTTCGGACTGCTGTGCCTGCCATGGCTGCAGGAGGGGAGCGCTTTTCCTACTATCCCCCTGTCTGACATCCAGATGACTCAGAGCCCAAGCTCTGTGTCCGCAAGCGTGGGGGACAGGGTGACAATCACTTGCAGGGCATCCCAGGGAATCTCCTCTTGGCTGGCATGGTACCAGCAGAAACCTGGAAAAGCCCCAAAACTGCTGATTTATGGCGCTTCCAGCCTCGAATCCGGAGTGCCATCCCGGTTTTCTGGCTCCGGCAGCGGGACAGATTTTACTCTGACCATCTCTAGCCTGCAGCCAGAGGATTTTGCCTCCTATTATTGCCAGCAGGCCAACAGCTTTCCTTATACCTTTGGACAGGGAACTAAGCTGGAGATCAAGAGGACAGTGGCTGCTCCTAGCGTGTTCATCTTCCCACCTTCTGACGAACAGCTGAAGTCTGGAACAGCCTCTGTGGTGTGCCTCCTCAACAACTTCTATCCCCGGGAGGCTAAGGTCCAGTGGAAAGTGGACAACGCCCTGCAGTCCGGAAACTCCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGATAGCACTTATTCCCTGTCCTCCACCCTGACTCTGTCCAAGGCCGACTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCCTGCGAAGTCACTCATCAGGGACTGAGCTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAATAGGGGAGAATGTTAG(SEQ IDNO:8)；或

(D)

ATGGCAACTGGCTCCAGGACTAGCCTGCTGCTGGCATTTGGCCTCCTGTGTCTGCCATGGCTGCAGGAGGGCTCCGCCTTCCCAACAATTCCACTGTCCGACATCCAGATGACACAGTCCCCTAGCAGCGTGAGCGCCTCCGTGGGAGATAGAGTGACAATTACCTGTCGCGCAAGCCAGGGGATCAGCAGCTGGCTGGCCTGGTATCAACAGAAACCTGGAAAAGCCCCCAAGCTCCTGATCTATGGCGCCAGCAGCCTGGAAAGCGGGGTTCCAAGCCGGTTTTCCGGGTCCGGCAGCGGAACTGACTTCACCCTGACAATTTCAAGCCTGCAGCCCGAGGATTTTGCAAGCTACTACTGTCAGCAGGCTAATAGCTTTCCTTACACATTCGGCCAGGGCACCAAGCTCGAAATTAAAAGAACTGTGGCTGCCCCATCCGTGTTTATCTTCCCACCCTCTGACGAACAGCTGAAGTCCGGGACAGCCTCTGTGGTGTGCCTGCTGAACAATTTTTACCCCAGGGAGGCTAAGGTCCAATGGAAGGTCGACAATGCTCTGCAGTCTGGAAACTCCCAGGAGTCTGTGACTGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTATAGCCTGTCTTCCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGATTACGAAAAGCACAAGGTGTATGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGACTGTCTAGCCCAGTGACTAAATCCTTTAATAGAGGCGAATGCTGA(SEQ IDNO:9)。

在一些实施方案中，编码所述抗IL6R抗体轻链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与以下SEQ ID NO:6、7、8或9之一70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多相同的序列。在一些实施方案中，编码所述抗IL6R抗体轻链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQID NO:6、7、8或9之一相同的序列。在一些实施方案中，编码抗IL6R抗体轻链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ ID NO:6相同的序列。在一些实施方案中，编码抗IL6R抗体轻链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ ID NO:7相同的序列。在一些实施方案中，编码抗IL6R抗体轻链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ ID NO:8相同的序列。在一些实施方案中，编码抗IL6R抗体轻链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ ID NO:9相同的序列。

在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL4Rα抗体重链，所述抗IL4Rα抗体重链包含与以下至少80％相同的序列：

EVQLVESGGGLEQPGGSLRLSCAGSGFTFRDYAMTWVRQAPGKGLEWVSSISGSGGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRLSITIRPRYYGLDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG(SEQ ID NO:20)。

在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL4Rα抗体重链，所述抗IL4Rα抗体重链包含与SEQ ID NO:20 70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多相同的序列。在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL4Rα抗体重链，所述抗IL4Rα抗体重链包含与SEQ ID NO:20相同的序列。

在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL4Rα抗体重链，所述抗IL4Rα抗体重链进一步包含与以下至少80％相同的分泌序列：

MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSAFPTIPLS(SEQ ID NO:26)。在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL4Rα抗体重链，所述抗IL4Rα抗体重链进一步包含与SEQ ID NO:2670％、80％、85％、90％、95％或更多相同的分泌序列。在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL4Rα抗体重链，所述抗IL4Rα抗体重链进一步包含与SEQ ID NO:26相同的分泌序列。

在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL4Rα抗体轻链，所述抗IL4Rα抗体轻链包含与以下至少80％相同的序列：

DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSIGYNYLDWYLQKSGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGFYYCMQALQTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:21)。在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL4Rα抗体轻链，所述抗IL4Rα抗体轻链包含与SEQ ID NO:21 70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多相同的序列。在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL4Rα抗体轻链，所述抗IL4Rα抗体轻链包含与SEQ ID NO:21相同的序列。

在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL4Rα抗体轻链，所述抗IL4Rα抗体轻链进一步包含与以下至少80％相同的分泌序列：MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSAFPTIPLS(SEQ IDNO:26)。在一些实施方案中，所述mRNA编码抗IL4Rα抗体轻链，所述抗IL4Rα抗体轻链进一步包含与SEQ ID NO:2670％、75％、80％、85％、90％、95％或更多相同的序列。

在一些实施方案中，编码所述抗IL4Rα抗体重链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与以下序列之一至少80％相同的序列：

(A)

ATGGCCACAGGCTCTAGGACATCCCTGCTGCTGGCCTTCGGACTGCTGTGTCTGCCTTGGCTGCAGGAGGGATCTGCATTCCCAACTATCCCTCTGTCCGAGGTTCAGCTGGTGGAAAGCGGGGGAGGGCTGGAGCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTGTCCTGCGCTGGATCCGGCTTCACTTTTCGCGATTATGCCATGACATGGGTGCGGCAGGCCCCCGGCAAAGGACTGGAGTGGGTTTCCAGCATTTCTGGCAGCGGAGGGAACACCTACTATGCCGATAGCGTGAAGGGAAGGTTTACAATCAGCCGCGATAACAGCAAGAATACCCTCTATCTGCAGATGAATTCTCTGAGGGCAGAGGACACTGCCGTGTATTATTGCGCAAAGGATAGGCTGAGCATCACTATCCGCCCACGCTACTACGGGCTGGACGTGTGGGGGCAGGGAACTACCGTTACCGTGTCTTCCGCCAGCACAAAGGGACCTTCTGTGTTCCCCCTGGCTCCCTGTAGCAGATCCACCTCTGAGAGCACCGCTGCCCTGGGATGCCTGGTGAAGGATTATTTCCCAGAGCCCGTGACTGTGAGCTGGAATTCAGGCGCACTCACCTCTGGGGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGTCCAGCGGCCTGTATTCTCTCTCCAGCGTCGTGACCGTGCCTTCCAGTAGCCTGGGAACTAAAACATATACCTGTAACGTGGATCACAAGCCCTCCAATACCAAGGTGGACAAGCGGGTCGAGAGCAAGTACGGACCCCCATGTCCTCCCTGTCCAGCTCCTGAGTTCCTGGGGGGCCCTTCAGTGTTCCTGTTTCCCCCTAAGCCAAAGGACACTCTCATGATCTCCAGGACTCCAGAGGTGACATGCGTGGTGGTGGATGTCAGCCAGGAGGATCCAGAGGTCCAGTTCAATTGGTACGTCGACGGGGTGGAGGTGCATAACGCCAAGACTAAGCCCCGCGAGGAACAGTTTAATTCCACTTACAGGGTGGTCTCTGTGCTGACTGTCCTGCATCAGGATTGGCTGAACGGAAAGGAGTATAAGTGCAAAGTGTCTAATAAGGGGCTGCCCAGCTCCATCGAGAAAACAATCTCTAAGGCTAAGGGGCAGCCTCGGGAGCCTCAGGTGTACACTCTGCCCCCTTCACAGGAAGAGATGACCAAAAATCAGGTGTCCCTGACTTGCCTGGTGAAGGGGTTTTATCCCTCTGACATCGCAGTGGAATGGGAGTCCAACGGCCAGCCTGAAAACAACTATAAGACAACCCCTCCCGTGCTGGATAGCGACGGGAGCTTTTTCCTGTACAGCAGACTGACTGTGGATAAATCTAGGTGGCAGGAGGGAAACGTGTTTTCTTGCAGCGTCATGCACGAAGCCCTGCACAATCACTACACACAGAAATCCCTGTCCCTGTCCCTGGGCTGA(SEQ ID NO:10)；

(B)

ATGGCTACCGGGTCCAGGACATCTCTGCTGCTGGCCTTCGGACTGCTGTGCCTGCCATGGCTGCAGGAAGGCTCAGCCTTTCCAACAATCCCACTGTCCGAAGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTTGAACAACCTGGAGGCTCTTTGAGACTGTCATGCGCCGGGTCCGGATTTACCTTTCGCGACTACGCAATGACTTGGGTGCGCCAGGCTCCCGGAAAGGGACTGGAATGGGTTTCCTCTATTAGCGGGTCCGGCGGCAACACTTATTACGCAGATAGCGTGAAGGGGCGCTTCACTATTAGCAGGGACAATTCTAAAAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCTTAAGAGCCGAAGACACAGCTGTGTACTACTGCGCTAAAGACAGACTCTCCATTACAATCCGCCCAAGGTATTACGGCCTGGACGTGTGGGGCCAGGGAACAACAGTGACCGTGAGCTCTGCTTCCACTAAGGGCCCTAGCGTGTTCCCCCTGGCTCCATGCTCCCGCAGCACATCAGAGTCTACCGCCGCACTGGGATGTCTGGTGAAGGATTACTTCCCCGAGCCTGTGACTGTGAGCTGGAATAGCGGGGCCCTGACCTCTGGAGTTCATACATTCCCAGCCGTGCTGCAGTCTTCCGGCCTGTACTCTCTGAGCTCTGTGGTGACCGTCCCATCCTCTTCTCTGGGCACAAAGACCTACACATGTAACGTTGACCACAAGCCATCCAATACCAAGGTGGACAAGAGAGTGGAATCCAAGTATGGCCCTCCTTGTCCCCCTTGTCCTGCTCCAGAGTTCCTGGGAGGGCCATCCGTCTTCCTCTTCCCTCCCAAGCCTAAGGATACACTGATGATCTCCAGGACCCCTGAAGTGACATGTGTCGTGGTGGACGTGAGCCAAGAAGACCCCGAGGTGCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGAGTCGAGGTGCACAACGCTAAAACAAAGCCCCGCGAGGAGCAGTTCAACTCCACATACCGGGTGGTCTCAGTGCTGACTGTGCTTCATCAGGATTGGCTGAATGGGAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGGACTGCCATCTAGCATCGAGAAAACAATCAGCAAGGCTAAGGGACAGCCAAGGGAACCTCAGGTGTATACTCTGCCACCCTCCCAGGAAGAGATGACTAAGAATCAGGTCTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGATTCTACCCTAGCGACATTGCTGTCGAGTGGGAGTCCAACGGGCAGCCAGAAAATAATTACAAGACCACACCTCCAGTGCTGGACAGCGATGGATCCTTCTTCCTGTACTCTCGGCTGACCGTGGATAAGAGCCGGTGGCAGGAGGGCAACGTTTTCTCTTGCAGCGTGATGCACGAGGCTCTGCATAATCACTATACACAGAAGTCTCTAAGCCTGTCTCTGGGATGA(SEQ ID NO:11)；

(C)

ATGGCTACAGGATCCCGGACTAGCCTGCTGCTGGCCTTCGGCCTGTTGTGCCTGCCTTGGCTGCAGGAGGGGTCTGCCTTTCCAACAATCCCACTGTCTGAGGTCCAGCTGGTGGAGTCCGGCGGAGGGCTAGAACAGCCTGGGGGATCTCTGAGGCTCTCTTGCGCAGGATCCGGCTTTACATTCAGAGACTACGCAATGACTTGGGTCAGACAGGCCCCTGGAAAGGGGCTGGAGTGGGTTTCCAGCATTTCCGGATCCGGGGGCAACACATATTACGCTGACTCTGTGAAGGGCAGGTTCACAATCAGCAGGGATAACTCCAAGAACACCCTCTATCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGATACCGCAGTGTACTACTGTGCCAAAGATAGGCTGAGCATCACAATCCGCCCTAGGTATTATGGGCTCGACGTGTGGGGCCAGGGAACTACAGTGACAGTGTCCTCGGCATCCACCAAAGGCCCCTCCGTTTTCCCCCTGGCACCCTGTAGCCGCTCTACTTCTGAGAGTACTGCTGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGATTACTTTCCAGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAATTCTGGGGCTCTGACTTCTGGCGTGCACACATTCCCCGCAGTGCTGCAGTCTTCTGGCCTGTACTCTCTGTCTTCTGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACTAAGACATATACCTGTAATGTTGACCACAAACCTTCCAACACTAAGGTGGACAAGAGGGTGGAGTCTAAGTATGGACCTCCCTGTCCACCTTGTCCTGCTCCAGAGTTCCTCGGGGGACCAAGCGTTTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCAAAGGACACTCTGATGATTAGCCGCACTCCCGAAGTGACTTGTGTTGTGGTGGACGTCTCTCAGGAGGATCCTGAGGTGCAGTTTAATTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACAAAACCACGGGAGGAACAGTTCAATAGCACCTATAGGGTCGTGTCCGTCCTGACAGTGCTCCACCAGGATTGGCTCAACGGAAAAGAATACAAATGCAAGGTGTCTAACAAGGGGCTGCCTTCCAGCATCGAGAAGACTATTAGCAAGGCAAAGGGGCAGCCAAGAGAGCCTCAGGTGTATACCCTGCCCCCATCTCAGGAGGAGATGACAAAGAACCAGGTCTCCCTGACTTGTCTGGTCAAGGGGTTCTACCCATCTGACATCGCTGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAACCCGAGAATAACTACAAAACAACCCCACCCGTGCTGGACAGCGATGGATCCTTCTTCCTGTATTCCAGGTTGACCGTGGACAAATCTCGCTGGCAGGAGGGAAACGTTTTCTCTTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACACAGAAATCTCTCTCTCTGTCTCTGGGGTGA(SEQ ID NO:12)；或

(D)

ATGGCTACAGGGTCTCGGACAAGTCTGCTGCTGGCATTCGGGCTGCTGTGCCTGCCATGGCTGCAAGAGGGAAGCGCATTCCCAACCATTCCACTCAGCGAGGTGCAGCTGGTCGAAAGCGGGGGGGGACTGGAACAACCTGGAGGATCCCTGCGGCTGTCATGCGCAGGCTCCGGCTTTACCTTCAGGGACTACGCCATGACATGGGTGAGACAGGCTCCTGGGAAGGGGCTCGAGTGGGTGAGCAGCATTTCCGGAAGCGGGGGAAACACCTATTACGCAGATAGTGTTAAGGGCCGCTTTACTATCTCTAGGGACAATTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGAGCCGAGGACACCGCAGTGTATTACTGTGCCAAGGACCGGCTCTCTATTACCATTAGACCTAGGTATTACGGGCTGGACGTGTGGGGACAGGGAACAACAGTGACCGTGTCTTCTGCCTCCACAAAAGGGCCCTCTGTGTTCCCTCTGGCACCTTGCTCCAGGTCTACCTCCGAGAGCACAGCTGCACTGGGATGTCTGGTTAAAGATTACTTTCCAGAACCAGTTACTGTGAGCTGGAACTCTGGAGCTCTGACCTCCGGAGTTCACACATTCCCTGCAGTGCTGCAGTCTAGCGGCCTGTATTCCCTGTCCTCCGTCGTGACCGTGCCTTCCTCCTCTCTGGGCACTAAGACCTACACTTGCAACGTGGATCACAAACCTAGCAATACAAAGGTCGATAAACGGGTTGAGAGCAAATACGGCCCTCCATGTCCTCCTTGTCCAGCCCCTGAATTCCTGGGCGGACCCTCCGTTTTCCTGTTCCCACCCAAGCCCAAGGACACACTGATGATTTCTAGGACTCCTGAAGTGACATGCGTGGTCGTGGATGTCTCCCAGGAGGATCCAGAAGTCCAGTTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACAAAGCCAAGGGAGGAGCAGTTTAACTCTACTTACAGAGTGGTGAGCGTGCTCACAGTGCTGCATCAGGATTGGCTCAACGGAAAAGAGTACAAGTGTAAGGTCAGCAATAAGGGCCTGCCATCCTCCATTGAGAAAACCATCTCCAAGGCAAAGGGGCAGCCAAGAGAACCTCAGGTCTACACCCTGCCACCATCTCAAGAGGAGATGACCAAGAATCAGGTGAGCCTCACTTGCCTGGTGAAGGGATTCTACCCTAGCGACATTGCCGTGGAGTGGGAATCTAACGGGCAGCCAGAGAACAACTACAAGACAACTCCTCCCGTGCTGGATAGCGACGGGTCTTTCTTCCTGTATAGCAGGCTGACAGTGGATAAGAGCCGCTGGCAAGAGGGCAACGTCTTTTCTTGTTCCGTCATGCACGAGGCTCTGCATAACCACTATACCCAGAAGTCACTGTCCCTCTCCCTGGGGTGA(SEQ ID NO:13)。

在一些实施方案中，编码所述抗IL4Rα抗体重链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ ID NO:10、11、12或13之一70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多相同的序列。在一些实施方案中，编码所述抗IL4Rα抗体重链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQID NO:10、11、12或13之一相同的序列。因此，在一些实施方案中，编码抗IL4Rα抗体重链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ ID NO:10相同的序列。在一些实施方案中，编码抗IL4Rα抗体重链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ ID NO:11相同的序列。在一些实施方案中，编码抗IL4Rα抗体重链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ ID NO:12相同的序列。在一些实施方案中，编码抗IL4Rα抗体重链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ ID NO:13相同的序列。

在一些实施方案中，编码所述抗IL4Rα抗体轻链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与以下序列之一至少80％相同的序列：

(A)

ATGGCCACAGGCTCTAGGACATCCCTGCTGCTGGCCTTCGGACTGCTGTGTCTGCCTTGGCTGCAGGAGGGATCTGCATTCCCAACTATCCCTCTGTCCGATATTGTGATGACCCAGAGCCCCCTGAGCCTGCCAGTGACTCCTGGGGAGCCCGCATCTATCAGCTGCCGGTCCTCTCAGTCTCTGCTGTATTCTATCGGGTACAACTACCTGGATTGGTACCTGCAGAAAAGTGGGCAGAGCCCCCAGCTGCTCATCTATCTGGGGTCCAACAGGGCTAGTGGCGTGCCAGACCGGTTCTCCGGATCCGGCTCCGGAACAGACTTTACACTGAAAATTAGCCGCGTGGAGGCCGAGGACGTGGGGTTTTATTATTGTATGCAGGCCCTGCAGACCCCATACACATTTGGCCAGGGGACAAAGCTGGAAATTAAGCGCACTGTGGCCGCTCCGTCTGTGTTCATCTTTCCTCCCAGCGATGAACAGCTGAAGTCTGGGACCGCTAGCGTCGTGTGCCTGCTGAACAATTTTTACCCCAGGGAGGCTAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGGAACAGCCAGGAGAGTGTTACTGAGCAGGATTCTAAAGATTCCACCTATTCCCTGTCTTCCACCCTGACTCTGTCTAAGGCCGATTACGAAAAACATAAGGTGTACGCATGCGAGGTGACCCACCAGGGGCTGAGCTCTCCCGTGACTAAGAGCTTCAATCGCGGAGAGTGCTGA(SEQ ID NO:14)；

(B)

ATGGCTACAGGCAGCAGAACCAGCCTGCTGCTGGCATTTGGCCTGCTGTGCCTGCCTTGGCTGCAGGAGGGGAGCGCTTTTCCCACAATTCCTCTGTCTGATATCGTCATGACCCAATCTCCCCTGTCCCTGCCTGTGACTCCAGGAGAGCCCGCTAGCATTTCTTGCAGGTCTTCCCAGAGCCTGCTGTACAGCATCGGCTATAACTACCTGGATTGGTATCTGCAGAAAAGCGGGCAGTCTCCTCAGCTGCTGATCTACCTGGGCTCTAACAGAGCCTCTGGGGTCCCCGACAGGTTTTCCGGAAGCGGCTCTGGCACCGACTTTACTCTCAAAATCAGCCGCGTGGAGGCAGAGGACGTGGGCTTCTATTACTGCATGCAGGCCCTGCAGACACCATATACATTCGGACAGGGGACCAAGCTGGAGATTAAGAGAACAGTGGCTGCCCCAAGCGTGTTTATCTTTCCTCCCTCCGATGAACAGCTGAAAAGCGGCACTGCTTCCGTGGTGTGCCTGCTGAATAATTTCTACCCTAGAGAGGCCAAAGTCCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGGAACAGCCAGGAAAGTGTCACCGAGCAGGATTCCAAGGATTCCACATATTCTCTGTCCAGCACTCTGACACTGTCCAAGGCAGACTACGAAAAACACAAGGTCTACGCCTGCGAAGTGACCCACCAGGGACTGTCTAGCCCTGTGACTAAGTCTTTTAATAGGGGGGAGTGTTAG(SEQ ID NO:15)；

(C)

ATGGCTACTGGCAGCAGAACCAGCCTGCTGCTGGCATTCGGGCTGCTCTGCCTGCCATGGCTGCAGGAGGGATCCGCCTTCCCAACTATCCCCCTGAGCGATATCGTGATGACCCAGTCTCCCCTGAGCCTGCCAGTTACACCCGGCGAACCTGCTAGCATCAGCTGCAGATCCTCCCAGTCTCTCCTGTACTCCATCGGGTACAATTATCTGGATTGGTATCTGCAGAAGTCTGGCCAATCCCCCCAGCTGCTGATCTACCTGGGCTCCAACAGAGCAAGCGGCGTGCCCGATAGATTCAGCGGCAGCGGGAGCGGCACTGATTTTACTCTGAAGATCAGCAGGGTGGAGGCCGAAGATGTGGGATTTTACTACTGCATGCAAGCACTGCAGACTCCTTACACATTCGGCCAGGGAACTAAGCTGGAGATCAAAAGAACCGTGGCAGCTCCAAGCGTCTTCATTTTCCCACCTTCTGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACAGCTTCCGTCGTGTGCCTCCTGAACAACTTCTACCCCAGGGAGGCAAAGGTGCAATGGAAAGTGGACAACGCTCTGCAGAGCGGAAACAGTCAGGAGTCCGTGACCGAGCAGGACAGCAAAGACTCCACTTACAGCCTGAGCTCTACTCTGACCCTGAGCAAAGCTGACTACGAGAAGCATAAGGTGTATGCTTGCGAGGTCACCCACCAGGGCCTCTCTTCTCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGCGAGTGCTGA(SEQ ID NO:16)；或

(D)

ATGGCAACTGGAAGCAGGACCTCCCTGCTCCTGGCTTTCGGCCTGCTCTGTCTGCCATGGCTGCAAGAAGGATCTGCCTTTCCTACAATTCCACTGTCCGACATCGTGATGACACAGTCCCCCCTGTCTCTGCCTGTCACCCCAGGCGAACCAGCCTCTATTTCTTGTCGGTCCTCTCAGTCCCTGCTGTATAGCATCGGATATAATTATCTGGACTGGTACCTGCAAAAATCCGGCCAGTCTCCTCAGCTGCTGATCTATCTGGGCTCCAACCGGGCTAGCGGAGTCCCAGACCGGTTTTCCGGGTCTGGCAGTGGGACAGATTTTACACTGAAAATTTCCCGGGTGGAGGCTGAGGACGTGGGATTTTACTACTGTATGCAGGCCCTGCAAACCCCATATACTTTCGGACAGGGAACAAAGCTGGAGATCAAAAGAACCGTGGCCGCCCCCAGCGTTTTCATCTTCCCACCAAGCGACGAGCAGCTCAAATCTGGGACCGCTAGCGTGGTCTGTCTGCTGAATAACTTCTACCCAAGGGAAGCAAAGGTGCAGTGGAAGGTCGACAACGCACTGCAGAGCGGGAACTCCCAGGAGAGCGTGACTGAACAGGACAGCAAGGACAGCACCTATAGCCTCAGCAGCACTCTGACCCTGTCTAAAGCTGATTACGAAAAACACAAGGTGTATGCTTGTGAAGTGACTCACCAGGGCCTGTCTTCCCCTGTTACAAAGTCCTTCAATAGAGGAGAATGTTAA(SEQ ID NO:17)。

在一些实施方案中，编码所述抗IL4Rα抗体轻链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ ID NO:14、15、16或17 70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多相同的序列。在一些实施方案中，编码所述抗IL4Rα抗体轻链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ IDNO:14、15、16或17相同的序列。因此，在一些实施方案中，编码抗IL4Rα抗体轻链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ ID NO:14相同的序列。在一些实施方案中，编码抗IL4Rα抗体轻链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ ID NO:15相同的序列。在一些实施方案中，编码抗IL4Rα抗体轻链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQ ID NO:16相同的序列。在一些实施方案中，编码抗IL4Rα抗体轻链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与SEQID NO:17相同的序列。

在一些实施方案中，所述mRNA包含5’UTR和3’UTR序列。在一些实施方案中，所述5’UTR序列包含与以下具有至少80％同一性的序列：GGACAGATCGCCTGGAGACGCCATCCACGCTGTTTTGACCTCCATAGAAGACACCGGGACCGATCCAGCCTCCGCGGCCGGGAACGGTGCATTGGAACGCGGATTCCCCGTGCCAAGAGTGACTCACCGTCCTTGACACG(SEQ ID NO:27)。在一些实施方案中，所述5’UTR序列包含与SEQ ID NO:27 70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多相同的序列。在一些实施方案中，所述5’UTR序列包含与SEQ ID NO:27相同的序列。

在一些实施方案中，所述3’UTR序列包含与以下具有至少80％同一性的序列：CGGGTGGCATCCCTGTGACCCCTCCCCAGTGCCTCTCCTGGCCCTGGAAGTTGCCACTCCAGTGCCCACCAGCCTTGTCCTAATAAAATTAAGTTGCATC(SEQ ID NO:28)。在一些实施方案中，所述3’UTR序列包含与SEQID NO:28 70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多相同的序列。在一些实施方案中，所述3’UTR序列包含与SEQ ID NO:28相同的序列。

在本申请中，除非另外陈述，否则“或”的使用意指“和/或”。如本公开文本所用，术语“包含”和该术语的变体(例如“包含(comprising)”和“包含(comprises)”)不旨在排除其他添加物、组分、整数或步骤。如本申请中所用，术语“约”和“大约”作为等同词使用。这两个术语旨在涵盖相关领域普通技术人员所理解的任何正常波动。

本发明的其他特征、目的和优势在下文的详细说明、图式和权利要求中是清楚的。然而，应理解，尽管所述详细说明、所述图式和所述权利要求陈述了本发明的实施方案，但它们是仅以说明而非限制的方式给出的。本发明范围内的各种改变和修改对于本领域技术人员将变得清楚。

附图说明

附图仅作说明目的，而非限制。

图1是将在小鼠中施用编码抗IL6R或抗IL4Rα抗体的mRNA后72h支气管肺泡灌洗液(BALF)中的人IgG水平与被施用生理盐水对照的对照小鼠中的人IgG水平进行比较的示例图。

定义

为了更容易地理解本发明，下文首先定义了某些术语。以下术语和其他术语的另外的定义陈述于整个说明书中。本文中提到的用于描述本发明的背景和提供关于本发明实践的另外的细节的出版物和其他参考材料通过引用特此并入。

抗体：如本文所用，术语“抗体”涵盖完整抗体和活性抗体片段。通常，完整“抗体”是一种与特定抗原特异性结合的免疫球蛋白。抗体可以是任何免疫球蛋白类别的成员，包括以下人类别免疫球蛋白中的任一种：IgG、IgM、IgA、IgE和IgD。已知本领域所理解的典型免疫球蛋白(抗体)结构单元包含四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链构成，每对具有一条“轻”链(大约25kD)和一条“重”链(大约50-70kD)。每条链的N末端限定了约100至110个或更多个氨基酸的可变区，其主要负责抗原识别。术语“可变轻链(VL)”和“可变重链(VH)”分别指这些轻链和重链。每个可变区被进一步细分为高变区(HV)和框架区(FR)。所述高变区包括三个称为互补决定区(CDR 1、CDR 2和CDR 3)的高变异性序列区域，由四个框架区(FR1、FR2、FR2和FR4)隔开，框架区形成β折叠结构，并作为支架将HV区保持在适当位置。每条重链和轻链的C末端限定恒定区，该恒定区由轻链的一个结构域(CL)和重链的三个结构域(CH1、CH2和CH3)组成。在一些实施方案中，术语“完整抗体”或“完全组装抗体”关于抗体使用以表示其与天然产生的抗体一样，含有任选地通过二硫键关联的两条重链和两条轻链。在一些实施方案中，根据本发明的抗体是抗体片段。如本文所用，“抗体片段”包含完整抗体的一部分，例如抗体的抗原结合区或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段；三抗体；四抗体；线性抗体；单链抗体分子；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。例如，抗体片段包括分离的片段，由重链和轻链的可变区组成的“Fv”片段，其中轻链和重链可变区通过肽接头连接的重组单链多肽分子(“ScFv蛋白”)，以及由模拟高变区的氨基酸残基组成的最小识别单元。在许多实施方案中，抗体片段含有亲本抗体的足够的序列，其是与亲本抗体结合相同抗原的片段；在一些实施方案中，片段以与亲本抗体可比的亲和力结合抗原和/或与亲本抗体竞争结合抗原。抗体的抗原结合片段的例子包括但不限于Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、scFv片段、Fv片段、dsFv双抗体、dAb片段、Fd’片段、Fd片段和分离的互补决定区(CDR)区域。

大约或约：如本文所用，如应用于一个或多个目的值的术语“大约”或“约”是指与所述参考值类似的值。在某些实施方案中，术语“大约”或“约”是指落入所述参考值的任一方向(大于或小于)的25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更少内的一系列值，除非另有说明或以其他方式从上下文显而易见(这个数字会超过可能值的100％的情况除外)。

递送：如本文所用，术语“递送”涵盖局部和全身递送二者。例如，mRNA的递送涵盖如下情况，其中将mRNA递送至靶组织并且所编码的蛋白质被表达和保留于靶组织内(也称为“局部分布”或“局部递送”)；以及如下情况，其中将mRNA递送至靶组织并且所编码的蛋白质被表达和分泌至患者的循环系统(例如，血清)中，并且全身分布且由其他组织吸收(也称为“全身分布”或“全身递送)。在一些实施方案中，递送是肺部递送，例如，包括雾化。

包封：如本文所用，术语“包封”或其语法等效物是指将mRNA分子限制在纳米颗粒内的过程。

工程化或突变体：如本文所用，术语“工程化”或“突变体”或语法等效物是指与其天然存在的序列相比包含一种或多种修饰的核苷酸或蛋白质序列，所述一种或多种修饰包括但不限于缺失、异源核酸或氨基酸的插入、倒位、取代或其组合。

表达：如本文所用，核酸序列的“表达”是指将mRNA翻译为多肽、将多个多肽(例如，抗体的重链或轻链)组装为完整蛋白质(例如，抗体)和/或对多肽或完全组装的蛋白质(例如，抗体)的翻译后修饰。在本申请中，术语“表达”和“产生”和语法等效物可互换使用。

功能性：如本文所用，“功能性”生物分子是呈如下形式的生物分子，在所述形式中，其展现其特征性的特性和/或活性。

半衰期：如本文所用，术语“半衰期”是诸如核酸或蛋白质浓度或活性的量下降到如在时间段开始时测量的所述量的值的一半所需的时间。

改进、增加或减少：如本文所用，术语“改进”、“增加”或“减少”或语法等效物指示相对于基线测量值的值，所述基线测量值如在开始本文所述的治疗之前在同一个体中的测量值，或者在不存在本文所述的治疗的情况下在对照受试者(或多名对照受试者)中的测量值。“对照受试者”是受与所治疗受试者所患疾病相同的疾病形式折磨的受试者，其年龄与所治疗受试者大致相同。

杂质：如本文所用，术语“杂质”是指限制量的液体、气体或固体内部与目标材料或化合物的化学组成不同的物质。杂质也称为污染物。

体外：如本文所用，术语“体外”是指在人工环境中(例如，在试管或反应器皿中、在细胞培养中等)，而不是在多细胞生物体内发生的事件。

体内：如本文所用，术语“体内”是指在多细胞生物体(如人和非人动物)内发生的事件。在基于细胞的系统的情境下，所述术语可以用于指代在活细胞内(与例如体外系统相反)发生的事件。

分离的：如本文所用，术语“分离的”是指如下物质和/或实体：已经被(1)与最初产生时(在自然界中和/或在实验环境中)与其相关联的至少一些组分分开，和/或(2)人工地产生、制备和/或制造。分离的物质和/或实体可以与约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或超过约99％的最初与其相关联的其他组分分开。在一些实施方案中，分离的药剂为约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或超过约99％纯。如本文所用，如果物质基本上不含其他组分，则所述物质是“纯的”。如本文所用，分离的物质和/或实体的纯度百分比的计算不应包括赋形剂(例如，缓冲液、溶剂、水等)。

信使RNA(mRNA)：如本文所用，术语“信使RNA(mRNA)”是指编码至少一种多肽的多核苷酸。如本文所用的mRNA涵盖修饰的和未修饰的RNA。mRNA可以含有一个或多个编码区和非编码区。mRNA可以从天然来源纯化，使用重组表达系统产生并任选地纯化，化学合成等。在合适的情况下，例如，在化学合成分子的情形中，mRNA可以包含核苷类似物(如具有化学修饰的碱基或糖的类似物)、骨架修饰等。除非另有指示，否则mRNA序列以5'至3'方向呈现。

“雾化”是指以通常通过雾化器吸入肺部的细喷雾或分散悬浮液递送药物组合物。

“雾化器”是使用推进剂或其他合适的能源(如氧气、压缩空气或超声波)将液体或颗粒转化为细喷雾或薄雾或分散悬浮液(通常是可以直接吸入的气雾剂形式)的装置。在一些实施方案中，本发明所使用的雾化器含有压电元件，以产生网格的振动。振动将液体药物组合物泵送通过网格。液体以液滴的形式从网格中喷射，产生气雾剂。此类雾化器通常称为(振动)网状雾化器。在一些实施方案中，雾化器用于雾化用于肺部递送的药物组合物。从雾化器吸入是通过由受试者使用的吸嘴进行

核酸：如本文所用，术语“核酸”以其最广泛含义指代被掺入或可以被掺入多核苷酸链中的任何化合物和/或物质。在一些实施方案中，核酸是经由磷酸二酯连接被掺入或可以被掺入多核苷酸链中的化合物和/或物质。在一些实施方案中，“核酸”是指单独的核酸残基(例如，核苷酸和/或核苷)。在一些实施方案中，“核酸”是指包含单独的核酸残基的多核苷酸链。在一些实施方案中，“核酸”涵盖RNA以及单链和/或双链DNA和/或cDNA。此外，术语“核酸”、“DNA”、“RNA”和/或类似术语包括核酸类似物，即，具有除磷酸二酯骨架之外的类似物。例如，本领域中已知且在骨架中用肽键代替磷酸二酯键的所谓的“肽核酸”被认为在本发明的范围内。术语“编码氨基酸序列的核苷酸序列”包括互为简并形式和/或编码相同氨基酸序列的所有核苷酸序列。编码蛋白质和/或RNA的核苷酸序列可以包括内含子。在一些实施方案中，核酸从天然来源纯化，使用重组表达系统产生并任选地纯化，化学合成等。在合适的情况下，例如，在化学合成分子的情形中，核酸可以包含核苷类似物(如具有化学修饰的碱基或糖的类似物)、骨架修饰等。除非另有指示，否则核酸序列以5'至3'方向呈现。在一些实施方案中，核酸是或包含天然核苷(例如，腺苷、胸苷、鸟苷、胞苷、尿苷、脱氧腺苷、脱氧胸苷、脱氧鸟苷和脱氧胞苷)；核苷类似物(例如，2-氨基腺苷、2-硫代胸苷、肌苷、吡咯并-嘧啶、3-甲基腺苷、5-甲基胞苷、C-5丙炔基-胞苷、C-5丙炔基-尿苷、2-氨基腺苷、C5-溴尿苷、C5-氟尿苷、C5-碘尿苷、C5-丙炔基-尿苷、C5-丙炔基-胞苷、C5-甲基胞苷、2-氨基腺苷、7-脱氮腺苷、7-脱氮鸟苷、8-氧代腺苷、8-氧代鸟苷、O(6)-甲基鸟嘌呤和2-硫代胞苷)；化学修饰的碱基；生物修饰的碱基(例如，甲基化的碱基)；嵌入的碱基；修饰的糖(例如，2'-氟核糖、核糖、2'-脱氧核糖、阿拉伯糖和己糖)；和/或修饰的磷酸基(例如，硫代磷酸酯和5'-N-亚磷酰胺连接)。在一些实施方案中，本发明具体涉及“未修饰的核酸”，意指尚未进行化学修饰以促进或实现递送的核酸(例如，多核苷酸和残基，包括核苷酸和/或核苷)。在一些实施方案中，核苷酸T和U在序列描述中可互换使用。

患者：如本文所用，术语“患者”或“受试者”是指可以被施用所提供的组合物的任何生物体，例如，用于实验、诊断、预防、化妆和/或治疗目的。典型的患者包括动物(例如，哺乳动物，如小鼠、大鼠、兔、非人灵长类动物和/或人)。在一些实施方案中，患者是人。人包括出生前和出生后形式。

药学上可接受的：如本文所用的术语“药学上可接受的”是指如下物质：在合理的医学判断的范围内适用于与人和动物的组织接触且没有过度毒性、刺激、过敏反应或者其他问题或并发症，与合理的收益/风险比相称。

“肺部递送”是指通过将所述药物组合物递送至肺来在体内将本文所述的药物组合物施用于肺细胞。肺部递送的非限制性方法包括：雾化和气管内施用/气管内滴注。

稳定：如本文所用，术语“稳定”蛋白质或其语法等效物是指保持其物理稳定性和/或生物活性的蛋白质。在一个实施方案中，蛋白质稳定性是基于溶液中单体蛋白质的百分比，确定为具有低百分比的降解(例如，片段化)和/或聚集的蛋白质。在一个实施方案中，与野生型蛋白相比，稳定的工程化蛋白保留或展现出增强的半衰期。在一个实施方案中，与野生型蛋白相比，稳定的工程化蛋白不太容易发生导致蛋白水解的泛素化。

受试者：如本文所用，术语“受试者”是指人或任何非人动物(例如，小鼠、大鼠、兔、狗、猫、牛、猪、绵羊、马或灵长类动物)。人包括出生前和出生后形式。在许多实施方案中，受试者是人。受试者可以是患者，其是指呈现给医疗提供者用于诊断或治疗疾病的人。术语“受试者”在本文中可与“个体”或“患者”互换使用。受试者可能受疾病或障碍折磨或者易患疾病或障碍，但是可能展示或可能不展示所述疾病或障碍的症状。

基本上：如本文所用，术语“基本上”是指展现目的特征或特性的总体或接近总体范围或程度的定性情况。生物领域的普通技术人员将理解，生物和化学现象很少(如果有过的话)完成和/或进行至完成或者实现或避免绝对结果。因此，术语“基本上”在本文中用于捕捉在许多生物和化学现象中固有的潜在完整性缺乏。

治疗：如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”是指用于部分或完全减轻、改善、缓解、抑制、预防特定疾病、障碍和/或病症的一种或多种症状或特征、延迟其发作、降低其严重性和/或降低其发病率的任何方法。可以将治疗施用至未展现疾病体征和/或仅展现疾病早期体征的受试者，用于降低发展与所述疾病相关的病状的风险的目的。

具体实施方式

本发明尤其提供了用于递送包封在脂质纳米颗粒内的mRNA的改进的方法和组合物，其中所述mRNA编码靶向II型炎症驱动因子的抗体。例如，与II型炎症相关的合适的蛋白质靶标包括IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-13、IL-25或IL-33、IL-4受体(IL-4R，例如IL-4Rα)、IL-5受体(IL-5R)、IL-6受体(IL-6R)、IL-9受体(IL-9R)、IL-13受体(IL-13R)、IL-25受体(IL-25R)或IL-33受体(IL-33R，例如ST2，也称为IL1RL1)。例如，本发明的抗体结合和/或抑制IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-13、IL-25或IL-33、IL-4受体(IL-4R，例如IL-4Rα)、IL-5受体(IL-5R)、IL-6受体(IL-6R)、IL-9受体(IL-9R)、IL-13受体(IL-13R)、IL-25受体(IL-25R)或IL-33受体(IL-33R，例如ST2，也称为IL1RL1)。以下进一步描述本发明的各个方面。

mRNA编码的抗体

本公开文本提供了mRNA编码的抗体，其可用于治疗各种疾病，包括例如免疫相关疾病。各种免疫相关疾病是本领域已知的，并且通常可分为肺的免疫相关疾病和与肺无关的免疫相关疾病。本文提供的mRNA编码的抗体的方法和组合物可用于治疗肺相关或非肺相关免疫疾病。肺相关免疫疾病的例子包括例如哮喘、慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、系统性硬化病-间质性肺病(SSc-ILD)、特发性肺纤维化IPF、结节病或过敏反应。非肺相关疾病的例子包括自身免疫性肝炎和特应性皮炎。

提供了治疗受试者的免疫疾病的方法，所述方法包括：向有需要的受试者施用编码抗体的重链和轻链的一种或多种mRNA，所述抗体结合和/或抑制选自IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-13、IL-25或IL-33、IL-4受体(IL-4R，例如IL-4Rα)、IL-5受体(IL-5R)、IL-6受体(IL-6R)、IL-9受体(IL-9R)、IL-13受体(IL-13R)、IL-25受体(IL-25R)或IL-33受体(IL-33R，例如ST2，也称为IL1RL1)的蛋白质靶标，并且其中所述一种或多种mRNA被包封在脂质纳米颗粒(LNP)中。

提供了治疗受试者中的免疫疾病的方法，包括给有需要的受试者施用编码抗体的重链和轻链的一种或多种mRNA，所述抗体结合选自IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-13、IL-25或IL-33的蛋白质靶标，并且其中所述一种或多种mRNA被包封在脂质纳米颗粒(LNP)中。

提供了治疗受试者的免疫疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用编码抗体的重链和轻链的一种或多种mRNA，所述抗体结合选自IL-4受体(IL-4R，例如IL-4Rα)、IL-5受体(IL-5R)、IL-6受体(IL-6R)、IL-9受体(IL-9R)、IL-13受体(IL-13R)、IL-25受体(IL-25R)或IL-33受体(IL-33R，例如ST2，也称为IL1RL1)的蛋白质靶标，并且其中所述一种或多种mRNA被包封在脂质纳米颗粒(LNP)中。

提供了治疗受试者中的免疫疾病的方法，包括给有需要的受试者施用编码抗体的重链和轻链的一种或多种mRNA，所述抗体抑制选自IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-13、IL-25或IL-33的蛋白质靶标，并且其中所述一种或多种mRNA被包封在脂质纳米颗粒(LNP)中。

提供了治疗受试者的免疫疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用编码抗体的重链和轻链的一种或多种mRNA，所述抗体抑制选自IL-4受体(IL-4R，例如IL-4Rα)、IL-5受体(IL-5R)、IL-6受体(IL-6R)、IL-9受体(IL-9R)、IL-13受体(IL-13R)、IL-25受体(IL-25R)或IL-33受体(IL-33R，例如ST2，也称为IL1RL1)的蛋白质靶标，并且其中所述一种或多种mRNA被包封在脂质纳米颗粒(LNP)中。

在一些方面，包封在LNP中的mRNA编码的抗体用于治疗肺相关免疫疾病。在这种情况下，将编码抗体并被包封在LNP内的mRNA通过吸入、雾化或通过气管内滴注而递送至肺组织。这种施用方法的一个优点是，对于肺相关疾病，它允许低至无全身性暴露，从而避免不期望的全身副作用。因此，在一些实施方案中，通过吸入或雾化施用编码抗体的mRNA不会导致全身性暴露。在一些实施方案中，通过吸入或雾化施用编码抗体的mRNA具有低的全身性暴露。在一些实施方案中，通过吸入或雾化施用编码抗体的mRNA导致将包封在LNP中的mRNA递送至肺组织。

在一些实施方案中，mRNA编码的抗体是抗IL6R抗体。各种抗IL6R抗体是本领域中已知的，并且包括例如萨瑞鲁单抗和托珠单抗的那些。抗IL6R抗体已被用于治疗各种疾病，包括类风湿性关节炎、多关节幼年型特发性关节炎、全身性幼年关节炎，以及用于治疗在重度冠状病毒感染或Covid-19疾病情况下的细胞因子风暴。

在一些实施方案中，本文提供的mRNA编码的抗体用于治疗类风湿性关节炎。在一些实施方案中，本文提供的抗IL6R mRNA编码的抗体用于治疗类风湿性关节炎。在一些实施方案中，本文提供的抗IL6R mRNA编码的抗体用于治疗多关节幼年型特发性关节炎。在一些实施方案中，本文提供的抗IL6R mRNA编码的抗体用于治疗全身性幼年关节炎。在这些情况下，通过静脉内或腹膜内递送抗IL6R mRNA编码的抗体。

在一些实施方案中，本文提供的mRNA编码的抗体用于减少或治疗患有冠状病毒感染或Covid-19疾病的受试者的细胞因子风暴。在一些实施方案中，本文提供的mRNA编码的抗体可以用于治疗患有冠状病毒感染或Covid-19疾病的受试者。在这种情况下，通过吸入或雾化递送mRNA编码的抗体。

在一些实施方案中，mRNA编码的抗体是抗IL4α抗体。在本领域中已知各种抗IL4α抗体，并且包括例如度匹鲁单抗。抗-IL4α抗体已用于治疗各种疾病，包括例如，治疗特应性皮炎、伴有嗜酸性粒细胞性表型的哮喘或伴有口服皮质类固醇依赖性哮喘的哮喘、慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉，并对所述抗体针对由2型炎症驱动的疾病，如小儿特应性皮炎、小儿哮喘、嗜酸细胞性食管炎、COPD、结节性痒疹、慢性自发性荨麻疹和大疱性类天疱疮进行评价。抗IL4α抗体也被用于治疗草花粉过敏和花生过敏。

在一些实施方案中，本文提供的mRNA编码的抗体可用于治疗以下中的一种或多种：特应性皮炎、伴有嗜酸性粒细胞性表型或伴有口服皮质类固醇依赖性哮喘的哮喘、慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉、小儿特应性皮炎、小儿哮喘、嗜酸细胞性食管炎、COPD、结节性痒疹、慢性自发性荨麻疹和大疱性类天疱疮、草花粉过敏和花生过敏。

因此，在一些实施方案中，本文提供的抗IL4αmRNA编码的抗体用于治疗特应性皮炎。在一些实施方案中，本文提供的抗IL4αmRNA编码的抗体用于治疗中度特应性皮炎。在一些实施方案中，本文提供的抗IL4αmRNA编码的抗体用于治疗重度特应性皮炎。在一些实施方案中，本文提供的抗IL4αmRNA编码的抗体用于治疗哮喘。在一些实施方案中，本文提供的抗IL4αmRNA编码的抗体用于治疗重度哮喘。在一些实施方案中，本文提供的抗IL4αmRNA编码的抗体用于治疗中度哮喘。在一些实施方案中，本文提供的抗IL4αmRNA编码的抗体用于治疗慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉。在一些实施方案中，本文提供的抗IL4αmRNA编码的抗体用于治疗结节性痒疹。在一些实施方案中，本文提供的抗IL4αmRNA编码的抗体用于治疗嗜酸细胞性食管炎。在一些实施方案中，本文提供的抗IL4αmRNA编码的抗体用于治疗大疱性类天疱疮。在一些实施方案中，本文提供的抗IL4αmRNA编码的抗体用于治疗慢性自发性荨麻疹。在一些实施方案中，本文提供的抗IL4αmRNA编码的抗体用于治疗COPD。在一些实施方案中，本文提供的抗IL4αmRNA编码的抗体用于治疗草花粉过敏。在一些实施方案中，本文提供的抗IL4αmRNA编码的抗体用于治疗花生过敏。

编码本文所述抗体的mRNA的示例性序列在下表中提供。在一些实施方案中，核苷酸序列是经密码子优化的序列。

表1.经密码子优化的抗IL6和抗IL4重链和轻链核苷酸序列

示例性重链和轻链抗体序列在下表中提供。

表2.重链和轻链抗IL6和抗IL4Rα抗体序列

如本文所用，术语“抗体”涵盖完整抗体和抗体片段。通常，完整“抗体”是一种与特定抗原特异性结合的免疫球蛋白。抗体可以是任何免疫球蛋白类别的成员，包括以下人类别免疫球蛋白中的任一种：IgG、IgM、IgE、IgA和IgD。通常，完整抗体是四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链构成，每对具有一条“轻”链(大约25kD)和一条“重”链(大约50-70kD)。每条链的N末端限定了约100至110个或更多个氨基酸的可变区，其主要负责抗原识别。术语“可变轻链”(VL)和“可变重链”(VH)分别指轻链和重链上的这些对应区域。每个可变区可进一步细分为高变(HV)区和框架区(FR)。所述高变区包括三个称为互补决定区(CDR 1、CDR 2和CDR 3)的高变异性序列区域，由四个框架区(FR1、FR2、FR2和FR4)隔开，框架区形成β折叠结构，并作为支架将HV区保持在适当位置。每条重链和轻链的C末端限定恒定区，该恒定区由轻链的一个结构域(CL)和重链的三个结构域(CH1、CH2和CH3)组成。免疫球蛋白的轻链可以进一步分化为同种型κ和λ。

在一些实施方案中，术语“完整抗体”或“完全组装抗体”关于抗体使用，其与天然产生的抗体一样含有任选地通过二硫键关联的两条重链和两条轻链。在一些实施方案中，根据本发明的抗体是抗体片段。

在一些实施方案中，本发明可用于递送“抗体片段”。如本文所用，“抗体片段”包含完整抗体的一部分，例如抗体的抗原结合区或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段；三抗体；四抗体；线性抗体；单链抗体分子；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。例如，抗体片段包括分离的片段，由重链和轻链的可变区组成的“Fv”片段，其中轻链和重链可变区通过肽接头连接的重组单链多肽分子(“ScFv蛋白”)，以及由模拟高变区的氨基酸残基组成的最小识别单元。在许多实施方案中，抗体片段含有亲本抗体的足够的序列，其是与亲本抗体结合相同抗原的片段；在一些实施方案中，片段以与亲本抗体可比的亲和力结合抗原和/或与亲本抗体竞争结合抗原。抗体的抗原结合片段的例子包括但不限于Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、scFv片段、Fv片段、dsFv双抗体、dAb片段、Fd’片段、Fd片段和分离的互补决定区(CDR)。

本发明可用于递送本领域已知的任何抗体以及可使用标准方法产生的针对所期望抗原的抗体。本发明可用于递送单克隆抗体、多克隆抗体、抗体混合物或混合型抗体、人或人源化抗体、嵌合抗体或双特异性抗体。

mRNA的合成

根据本发明的mRNA可以根据各种已知方法中的任一种来合成。例如，根据本发明的mRNA可以通过体外转录(IVT)来合成。简言之，IVT通常用以下来进行：含有启动子的直链或环状DNA模板、核糖核苷酸三磷酸库、可以包括DTT和镁离子的缓冲系统以及适当的RNA聚合酶(例如，T3、T7或SP6 RNA聚合酶)、DNA酶I、焦磷酸酶和/或RNA酶抑制剂。确切条件将根据具体应用而变化。

在一些实施方案中，对于根据本发明的mRNA的制备，在体外转录DNA模板。合适的DNA模板通常具有用于体外转录的启动子(例如，T3、T7或SP6启动子)，之后为所需mRNA的所需核苷酸序列以及终止信号。

使用SP6 RNA聚合酶合成mRNA

在一些实施方案中，使用SP6 RNA聚合酶产生mRNA。SP6 RNA聚合酶是DNA依赖性RNA聚合酶，且对SP6启动子序列具有高序列特异性。SP6聚合酶在其启动子下游的单链DNA或双链DNA上催化5′→3′体外合成RNA；其将天然核糖核苷酸和/或修饰的核糖核苷酸和/或标记的核糖核苷酸掺入聚合的转录物中。此类标记的核糖核苷酸的例子包括生物素、荧光素、地高辛配基、氨基烯丙基和同位素标记的核苷酸。

噬菌体SP6 RNA聚合酶的序列最初被描述(GenBank：Y00105.1)为具有以下氨基酸序列：

MQDLHAIQLQLEEEMFNGGIRRFEADQQRQIAAGSESDTAWNRRLLSELIAPMAEGIQAYKEEYEGKKGRAPRALAFLQCVENEVAAYITMKVVMDMLNTDATLQAIAMSVAERIEDQVRFSKLEGHAAKYFEKVKKSLKASRTKSYRHAHNVAVVAEKSVAEKDADFDRWEAWPKETQLQIGTTLLEILEGSVFYNGEPVFMRAMRTYGGKTIYYLQTSESVGQWISAFKEHVAQLSPAYAPCVIPPRPWRTPFNGGFHTEKVASRIRLVKGNREHVRKLTQKQMPKVYKAINALQNTQWQINKDVLAVIEEVIRLDLGYGVPSFKPLIDKENKPANPVPVEFQHLRGRELKEMLSPEQWQQFINWKGECARLYTAETKRGSKSAAVVRMVGQARKYSAFESIYFVYAMDSRSRVYVQSSTLSPQSNDLGKALLRFTEGRPVNGVEALKWFCINGANLWGWDKKTFDVRVSNVLDEEFQDMCRDIAADPLTFTQWAKADAPYEFLAWCFEYAQYLDLVDEGRADEFRTHLPVHQDGSCSGIQHYSAMLRDEVGAKAVNLKPSDAPQDIYGAVAQVVIKKNALYMDADDATTFTSGSVTLSGTELRAMASAWDSIGITRSLTKKPVMTLPYGSTRLTCRESVIDYIVDLEEKEAQKAVAEGRTANKVHPFEDDRQDYLTPGAAYNYMTALIWPSISEVVKAPIVAMKMIRQLARFAAKRNEGLMYTLPTGFILEQKIMATEMLRVRTCLMGDIKMSLQVETDIVDEAAMMGAAAPNFVHGHDASHLILTVCELVDKGVTSIAVIHDSFGTHADNTLTLRVALKGQMVAMYIDGNALQKLLEEHEVRWMVDTGIEVPEQGEFDLNEIMDSEYVFA(SEQ ID NO:1)。

适用于本发明的SP6 RNA聚合酶可以是具有与噬菌体SP6 RNA聚合酶基本上相同的聚合酶活性的任何酶。因此，在一些实施方案中，适用于本发明的SP6 RNA聚合酶可以从SEQ ID NO:1修饰而来。例如，合适的SP6 RNA聚合酶可以含有一个或多个氨基酸取代、缺失或添加。在一些实施方案中，合适的SP6 RNA聚合酶具有与SEQ ID NO:1约99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％、91％、90％、89％、88％、87％、86％、85％、84％、83％、82％、81％、80％、75％、70％、65％或60％相同或同源的氨基酸序列。在一些实施方案中，合适的SP6 RNA聚合酶可以是(从N末端、C末端或内部)截短的蛋白质，但保留聚合酶活性。在一些实施方案中，合适的SP6 RNA聚合酶是融合蛋白。

适用于本发明的SP6 RNA聚合酶可以是可商购产品，例如，来自Aldevron、Ambion、New England Biolabs(NEB)、Promega和Roche。SP6可以是根据如本文所述的SEQ ID NO:1的氨基酸序列或SEQ ID NO:1的变体从商业来源或非商业来源订购和/或定制设计的。SP6可以是标准保真度聚合酶；或者可以是高保真度/高效率/高容量，其已被修饰以促进RNA聚合酶活性，例如，SP6 RNA聚合酶基因中的突变或SP6 RNA聚合酶本身的翻译后修饰。此类修饰的SP6的例子包括来自Ambion的SP6 RNA Polymerase-Plus^TM、来自NEB的HiScribe SP6以及来自Promega的RiboMAX^TM和系统。

在一些实施方案中，合适的SP6 RNA聚合酶是融合蛋白。例如，SP6 RNA聚合酶可以包含一个或多个标签以促进酶的分离、纯化或溶解性。合适的标签可以位于N末端、C末端和/或内部。合适的标签的非限制性例子包括钙调蛋白结合蛋白(CBP)；肝片吸虫8-kDa抗原(Fh8)；FLAG标签肽；谷胱甘肽-S-转移酶(GST)；组氨酸标签(例如，六组氨酸标签(His6(SEQ ID NO:29))；麦芽糖结合蛋白(MBP)；氮利用物质(NusA)；小泛素相关修饰剂(SUMO)融合标签；链霉亲和素结合肽(STREP)；串联亲和纯化(TAP)；和硫氧还蛋白(TrxA)。在本发明中可以使用其他标签。例如在Costa等人Frontiers in Microbiology 5(2014):63以及PCT/US16/57044中已经描述了这些和其他融合标签，将其内容通过引用以其整体并入本文。在某些实施方案中，His标签位于SP6的N末端。

DNA模板

通常，DNA模板完全是双链，或大部分是单链且具有双链SP6启动子序列。

线性化的质粒DNA(通过一种或多种限制性酶线性化)、线性化的基因组DNA片段(通过限制性酶和/或物理手段)、PCR产物和/或合成DNA寡核苷酸可用作用SP6进行体外转录的模板，条件是它们在待转录的DNA序列的上游(并且在正确的取向上)含有双链SP6启动子。

在一些实施方案中，线性化的DNA模板具有钝端。

在一些实施方案中，可以对待转录的DNA序列进行优化，以促进更高效的转录和/或翻译。例如，可以关于顺式调节元件(例如，TATA盒、终止信号和蛋白质结合位点)、人工重组位点、chi位点、CpG二核苷酸含量、阴性CpG岛、GC含量、聚合酶滑移位点和/或其他与转录相关的元件对DNA序列进行优化；可以关于隐蔽剪接位点、mRNA二级结构、mRNA的稳定自由能、重复序列、RNA不稳定基序和/或与mRNA加工和稳定性相关的其他元件对DNA序列进行优化；可以关于密码子使用偏好、密码子适应性、内部chi位点、核糖体结合位点(例如IRES)、过早聚A位点、夏因-达尔加诺(SD)序列和/或与翻译相关的其他元件对DNA序列进行优化；和/或可以关于密码子背景、密码子-反密码子相互作用、翻译暂停位点和/或与蛋白质折叠相关的其他元件对DNA序列进行优化。本领域已知的优化方法可用于本发明，例如ThermoFisher的GeneOptimizer和OptimumGene^TM，它们描述于US20110081708中，其内容通过引用以其整体并入本文。

在一些实施方案中，DNA模板包括5’和/或3’非翻译区。在一些实施方案中，5’非翻译区包括一种或多种影响mRNA稳定性或翻译的元件，例如铁应答元件。在一些实施方案中，5’非翻译区的长度可以在约50与500个核苷酸之间。

在一些实施方案中，3’非翻译区包括以下中的一种或多种：多腺苷酸化信号、影响mRNA在细胞中的位置稳定性的蛋白质的结合位点、或miRNA的一个或多个结合位点。在一些实施方案中，3’非翻译区的长度可以在50与500个核苷酸之间或更长。

示例性的3’和/或5’UTR序列可以源自稳定的mRNA分子(例如，珠蛋白、肌动蛋白、GAPDH、微管蛋白、组蛋白或柠檬酸循环酶)，以增加有义mRNA分子的稳定性。例如，5'UTR序列可以包括部分序列的CMV立即早期1(IE1)基因或其片段，以改善mRNA的核酸酶抗性和/或改善多核苷酸的半衰期。还考虑了将编码人生长激素(hGH)的序列或其片段包含到多核苷酸(例如，mRNA)的3'端或非翻译区中，以进一步稳定多核苷酸。通常，相对于其未经修饰的对应物，这些修饰可以改善多核苷酸的稳定性和/或药代动力学特性(例如，半衰期)，并且包括例如为改善多核苷酸对体内核酸酶消化的这种抗性而进行的修饰。

大规模mRNA合成

在一些实施方案中，本发明可用于大规模生产稳定的LNP包封的mRNA。在一些实施方案中，根据本发明的方法在单个批次中合成至少100mg、150mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1g、5g、10g、25g、50g、75g、100g、250g、500g、750g、1kg、5kg、10kg、50kg、100kg、1000kg或更多的mRNA。如本文所用，术语“批次”是指一次合成(例如，根据单一制造环境产生)的mRNA的数量或量。批次可指在一组条件下通过酶的单一等分试样和/或DNA模板的单一等分试样进行连续合成的一次反应中合成的mRNA的量。在单个批次中合成的mRNA将不包括在不同时间合成的、组合以达到所需量的mRNA。通常，反应混合物包括SP6 RNA聚合酶、线性DNA模板和RNA聚合酶反应缓冲液(其可能包括核糖核苷酸或可能需要添加核糖核苷酸)。

根据本发明，通常对于每克(g)的mRNA的产生，使用1-100mg的SP6聚合酶。在一些实施方案中，对于每克的mRNA的产生，使用约1-90mg、1-80mg、1-60mg、1-50mg、1-40mg、10-100mg、10-80mg、10-60mg、10-50mg的SP6聚合酶。在一些实施方案中，使用约5-20mg的SP6聚合酶产生约1g的mRNA。在一些实施方案中，使用约0.5至2g的SP6聚合酶产生约100g的mRNA。在一些实施方案中，使用约5至20g的SP6聚合酶产生约1kg的mRNA。在一些实施方案中，使用至少5mg的SP6聚合酶产生至少1g的mRNA。在一些实施方案中，使用至少500mg的SP6聚合酶产生至少100g的mRNA。在一些实施方案中，使用至少5g的SP6聚合酶产生至少1kg的mRNA。在一些实施方案中，对于每g的mRNA的产生，使用约10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg或100mg的质粒DNA。在一些实施方案中，使用约10-30mg的质粒DNA产生约1g的mRNA。在一些实施方案中，使用约1至3g的质粒DNA产生约100g的mRNA。在一些实施方案中，使用约10至30g的质粒DNA产生约1kg的mRNA。在一些实施方案中，使用至少10mg的质粒DNA产生至少1g的mRNA。在一些实施方案中，使用至少1g的质粒DNA产生至少100g的mRNA。在一些实施方案中，使用至少10g的质粒DNA产生至少1kg的mRNA。

在一些实施方案中，反应混合物中SP6 RNA聚合酶的浓度可以是约1至100nM、1至90nM、1至80nM、1至70nM、1至60nM、1至50nM、1至40nM、1至30nM、1至20nM或约1至10nM。在一些实施方案中，SP6 RNA聚合酶的浓度是约10至50nM、20至50nM或30至50nM。可以使用100至10000个单位/ml的SP6 RNA聚合酶浓度，例如可以使用如下浓度：100至9000个单位/ml、100至8000个单位/ml、100至7000个单位/ml、100至6000个单位/ml、100至5000个单位/ml、100至1000个单位/ml、200至2000个单位/ml、500至1000个单位/ml、500至2000个单位/ml、500至3000个单位/ml、500至4000个单位/ml、500至5000个单位/ml、500至6000个单位/ml、1000至7500个单位/ml和2500至5000个单位/ml。

反应混合物中每个核糖核苷酸(例如，ATP、UTP、GTP和CTP)的浓度在约0.1mM与约10mM之间，例如在约1mM与约10mM之间、在约2mM与约10mM之间、在约3mM与约10mM之间、在约1mM与约8mM之间、在约1mM与约6mM之间、在约3mM与约10mM之间、在约3mM与约8mM之间、在约3mM与约6mM之间、在约4mM与约5mM之间。在一些实施方案中，每个核糖核苷酸在反应混合物中为约5mM。在一些实施方案中，反应中使用的rNTP(例如，ATP、GTP、CTP和UTP组合)的总浓度在1mM与40mM之间的范围内。在一些实施方案中，反应中使用的rNTP(例如，ATP、GTP、CTP和UTP组合)的总浓度在1mM与30mM之间或在1mM与28mM之间或在1mM与25mM之间或在1mM与20mM之间的范围内。在一些实施方案中，总rNTP浓度小于30mM。在一些实施方案中，总rNTP浓度小于25mM。在一些实施方案中，总rNTP浓度小于20mM。在一些实施方案中，总rNTP浓度小于15mM。在一些实施方案中，总rNTP浓度小于10mM。

RNA聚合酶反应缓冲液通常包括盐/缓冲剂，例如，Tris、HEPES、硫酸铵、碳酸氢钠、柠檬酸钠、乙酸钠、磷酸钾、磷酸钠、氯化钠和氯化镁。

反应混合物的pH可以在约6至8.5、6.5至8.0、7.0至7.5之间，并且在一些实施方案中，pH是7.5。

将线性或线性化的DNA模板(例如，如上所述并且以足以提供所需量的RNA的量/浓度)、RNA聚合酶反应缓冲液和SP6 RNA聚合酶组合以形成反应混合物。将反应混合物在约37℃与约42℃之间孵育三十分钟至六小时，例如，约六十分钟至约九十分钟。

在一些实施方案中，将在合适的RNA聚合酶反应缓冲液(约7.5的最终反应混合物pH)中的约5mM NTP、约0.05mg/mL SP6聚合酶和约0.1mg/ml DNA模板在约37℃至约42℃下孵育六十至九十分钟。

在一些实施方案中，反应混合物含有具有SP6聚合酶特异性启动子的线性化双链DNA模板、SP6 RNA聚合酶、RNA酶抑制剂、焦磷酸酶、29mM NTP、10mM DTT和反应缓冲液(当在10x下时，为800mM HEPES、20mm亚精胺、250mM MgCl₂(pH 7.7))并添加足量(QS)的水达到所需的反应体积；然后将该反应混合物在37℃下孵育60分钟。然后通过添加DNA酶I和DNA酶I缓冲液(当在10x下时，为100mM Tris-HCl、5mM MgCl₂和25mM CaCl₂(pH 7.6))以促进双链DNA模板的消化来淬灭聚合酶反应，以准备用于纯化。该实施方案已显示足以产生100克mRNA。

在一些实施方案中，反应混合物包含在1-10mM范围内的浓度下的NTP、在0.01-0.5mg/ml范围内的浓度下的DNA模板和在0.01-0.1mg/ml范围内的浓度下的SP6RNA聚合酶，例如，反应混合物包含浓度为5mM的NTP、浓度为0.1mg/ml的DNA模板和浓度为0.05mg/ml的SP6 RNA聚合酶。

核苷酸

根据本发明，各种天然存在的或修饰的核苷可以用于产生mRNA。在一些实施方案中，mRNA是或包含天然核苷(例如，腺苷、鸟苷、胞苷、尿苷)；核苷类似物(例如，2-氨基腺苷、2-硫代胸苷、肌苷、吡咯并-嘧啶、3-甲基腺苷、5-甲基胞苷、C-5丙炔基-胞苷、C-5丙炔基-尿苷、2-氨基腺苷、C5-溴尿苷、C5-氟尿苷、C5-碘尿苷、C5-丙炔基-尿苷、C5-丙炔基-胞苷、C5-甲基胞苷、2-氨基腺苷、7-脱氮腺苷、7-脱氮鸟苷、8-氧代腺苷、8-氧代鸟苷、O(6)-甲基鸟嘌呤、假尿苷(例如，N-1-甲基-假尿苷)、2-硫代尿苷和2-硫代胞苷)；化学修饰的碱基；生物修饰的碱基(例如，甲基化的碱基)；嵌入的碱基；修饰的糖(例如，2'-氟核糖、核糖、2'-脱氧核糖、阿拉伯糖和己糖)；和/或修饰的磷酸基(例如，硫代磷酸酯和5'-N-亚磷酰胺连接)。

在一些实施方案中，mRNA包含一个或多个非标准核苷酸残基。非标准核苷酸残基可以包括例如，5-甲基-胞苷(“5mC”)、假尿苷(“ψU”)和/或2-硫代尿苷(“2sU”)。关于此类残基及其掺入mRNA的讨论，参见例如美国专利号8,278,036或WO 2011012316。mRNA可以是这样的RNA，其被定义为其中25％的U残基是2-硫代尿苷和25％的C残基是5-甲基胞苷的RNA。关于使用RNA的教导披露于美国专利公开US20120195936和国际公开WO 2011012316中，将这两个专利均通过引用以其整体并入于此。非标准核苷酸残基的存在可能使mRNA比具有相同序列但仅含有标准残基的对照mRNA更稳定和/或更少免疫原性。在其他实施方案中，mRNA可以包含一个或多个选自以下的非标准核苷酸残基：异胞嘧啶、假异胞嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶、6-氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、肌苷、二氨基嘌呤和2-氯-6-氨基嘌呤胞嘧啶以及这些修饰和其他核碱基修饰的组合。一些实施方案可以进一步包括对呋喃糖环或核碱基的另外的修饰。另外的修饰可以包括例如糖修饰或取代(例如，2'-O-烷基修饰、锁核酸(LNA)中的一种或多种)。在一些实施方案中，RNA可以与另外的多核苷酸和/或肽多核苷酸(PNA)复合或杂交。在糖修饰是2'-O-烷基修饰的一些实施方案中，这种修饰可以包括但不限于2'-脱氧-2'-氟修饰、2'-O-甲基修饰、2’-O-甲氧基乙基修饰和2’-脱氧修饰。在一些实施方案中，这些修饰中的任何一个可以单独地或组合地存在于0-100％的核苷酸中，例如多于0％、1％、10％、25％、50％、75％、85％、90％、95％或100％的组成核苷酸中。

合成后加工

典型地，在合成后可以添加5’帽和/或3'尾。帽的存在对于提供在大多数真核细胞中发现的对核酸酶的抗性很重要。“尾”的存在用于保护mRNA免于外切核酸酶降解。

通常如下添加5'帽：首先，RNA末端磷酸酶从5’核苷酸去除末端磷酸基团中的一个，留下两个末端磷酸；然后经由鸟苷酰基转移酶将鸟苷三磷酸(GTP)添加至末端磷酸，产生5'5'5三磷酸连接；然后鸟嘌呤的7-氮被甲基转移酶甲基化。帽结构的例子包括但不限于m7G(5')ppp(5'(A,G(5')ppp(5')A和G(5')ppp(5')G。在公布的美国申请号US 2016/0032356和在2017年2月27日提交的美国临时申请62/464,327中描述了另外的帽结构，其通过引用并入本文。

典型地，尾结构包括聚(A)和/或聚(C)尾。mRNA的3’末端上的聚A或聚C尾通常分别包含至少50个腺苷或胞嘧啶核苷酸、至少150个腺苷或胞嘧啶核苷酸、至少200个腺苷或胞嘧啶核苷酸、至少250个腺苷或胞嘧啶核苷酸、至少300个腺苷或胞嘧啶核苷酸、至少350个腺苷或胞嘧啶核苷酸、至少400个腺苷或胞嘧啶核苷酸、至少450个腺苷或胞嘧啶核苷酸、至少500个腺苷或胞嘧啶核苷酸、至少550个腺苷或胞嘧啶核苷酸、至少600个腺苷或胞嘧啶核苷酸、至少650个腺苷或胞嘧啶核苷酸、至少700个腺苷或胞嘧啶核苷酸、至少750个腺苷或胞嘧啶核苷酸、至少800个腺苷或胞嘧啶核苷酸、至少850个腺苷或胞嘧啶核苷酸、至少900个腺苷或胞嘧啶核苷酸、至少950个腺苷或胞嘧啶核苷酸或至少1kb腺苷或胞嘧啶核苷酸。在一些实施方案中，聚A或聚C尾可以分别为约10至800个腺苷或胞嘧啶核苷酸(例如，约10至200个腺苷或胞嘧啶核苷酸、约10至300个腺苷或胞嘧啶核苷酸、约10至400个腺苷或胞嘧啶核苷酸、约10至500个腺苷或胞嘧啶核苷酸、约10至550个腺苷或胞嘧啶核苷酸、约10至600个腺苷或胞嘧啶核苷酸、约50至600个腺苷或胞嘧啶核苷酸、约100至600个腺苷或胞嘧啶核苷酸、约150至600个腺苷或胞嘧啶核苷酸、约200至600个腺苷或胞嘧啶核苷酸、约250至600个腺苷或胞嘧啶核苷酸、约300至600个腺苷或胞嘧啶核苷酸、约350至600个腺苷或胞嘧啶核苷酸、约400至600个腺苷或胞嘧啶核苷酸、约450至600个腺苷或胞嘧啶核苷酸、约500至600个腺苷或胞嘧啶核苷酸、约10至150个腺苷或胞嘧啶核苷酸、约10至100个腺苷或胞嘧啶核苷酸、约20至70个腺苷或胞嘧啶核苷酸或者约20至60个腺苷或胞嘧啶核苷酸)。在一些实施方案中，尾结构包括本文所述的具有各种长度的聚(A)与聚(C)尾的组合。在一些实施方案中，尾结构包括至少50％、55％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的腺苷核苷酸。在一些实施方案中，尾结构包括至少50％、55％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的胞嘧啶核苷酸。

如本文所述，添加5’帽和/或3’尾有助于检测在体外合成期间生成的流产转录物，因为在没有加帽和/或加尾的情况下，那些过早流产的mRNA转录物的大小可能太小而无法被检测。因此，在一些实施方案中，在测试mRNA的纯度(例如，mRNA中存在的流产转录物的水平)之前，将5'帽和/或3'尾添加至合成的mRNA中。在一些实施方案中，在如本文所述纯化mRNA之前，将5'帽和/或3'尾添加至合成的mRNA中。在其他实施方案中，在如本文所述纯化mRNA之后，将5'帽和/或3'尾添加至合成的mRNA中。

可以在没有进一步纯化的情况下使用根据本发明合成的mRNA。特别地，可以在没有去除短体的步骤的情况下使用根据本发明合成的mRNA。在一些实施方案中，可以进一步纯化根据本发明合成的mRNA。可以使用各种方法来纯化根据本发明合成的mRNA。例如，mRNA的纯化可以使用离心、过滤和/或色谱法来进行。在一些实施方案中，通过乙醇沉淀或过滤或色谱或者凝胶纯化或任何其他合适的手段来纯化合成的mRNA。在一些实施方案中，通过HPLC纯化mRNA。在一些实施方案中，在本领域技术人员熟知的标准苯酚:氯仿:异戊醇溶液中提取mRNA。在一些实施方案中，使用切向流过滤纯化mRNA。适合的纯化方法包括描述于US2016/0040154、US2015/0376220、2018年2月27日提交的题为“信使RNA的纯化方法”的PCT申请PCT/US18/19954、2018年2月27日提交的题为“信使RNA的纯化方法”的PCT申请PCT/US18/19978中的那些并且可以用于实践本发明，所有这些文献均通过引用并入本文。

在一些实施方案中，在加帽和加尾之前纯化mRNA。在一些实施方案中，在加帽和加尾之后纯化mRNA。在一些实施方案中，既在加帽和加尾之前也在加帽和加尾之后纯化mRNA。

在一些实施方案中，在加帽和加尾之前或之后，或者既在加帽和加尾之前也在加帽和加尾之后，通过离心纯化mRNA。

在一些实施方案中，在加帽和加尾之前或之后，或者既在加帽和加尾之前也在加帽和加尾之后，通过过滤纯化mRNA。

在一些实施方案中，在加帽和加尾之前或之后，或者既在加帽和加尾之前也在加帽和加尾之后，通过切向流过滤(TFF)纯化mRNA。

在一些实施方案中，在加帽和加尾之前或之后，或者既在加帽和加尾之前也在加帽和加尾之后，通过色谱法纯化mRNA。

mRNA的表征

可以使用本领域中可用的任何方法检测和定量mRNA的全长或流产转录物。在一些实施方案中，使用印迹、毛细管电泳、色谱、荧光、凝胶电泳、HPLC、银染色、光谱法、紫外线(UV)或UPLC或其组合来检测合成的mRNA分子。本领域中已知的其他检测方法包括在本发明中。在一些实施方案中，使用UV吸收光谱法检测合成的mRNA分子，并通过毛细管电泳进行分离。在一些实施方案中，在凝胶电泳(“乙二醛凝胶电泳”)之前首先通过乙二醛染料使mRNA变性。在一些实施方案中，在加帽或加尾之前对合成的mRNA进行表征。在一些实施方案中，在加帽和加尾之后对合成的mRNA进行表征。

在一些实施方案中，通过本文公开的方法产生的mRNA包含小于10％、小于9％、小于8％、小于7％、小于6％、小于5％、小于4％、小于3％、小于2％、小于1％、小于0.5％、小于0.1％的除了全长mRNA外的杂质。所述杂质包括IVT污染物，例如蛋白质、酶、游离核苷酸和/或短体。

在一些实施方案中，根据本发明产生的mRNA基本上不含短体或流产转录物。特别地，根据本发明产生的mRNA含有通过毛细管电泳或乙二醛凝胶电泳检测不到的水平的短体或流产转录物。如本文所用，术语“短体”或“流产转录物”是指小于全长的任何转录物。在一些实施方案中，“短体”或“流产转录物”的长度小于100个核苷酸，长度小于90、小于80、小于70、小于60、小于50、小于40、小于30、小于20或小于10个核苷酸。在一些实施方案中，在添加5'-帽和/或3'-聚A尾之后对短体进行检测或定量。

mRNA溶液

在一些实施方案中，可以将mRNA提供在与脂质溶液混合的溶液中，使得mRNA可以被包封在脂质纳米颗粒中。合适的mRNA溶液可以是任何含有有待以各种浓度包封的mRNA的水溶液。例如，合适的mRNA溶液可以含有浓度为或大于约0.01mg/ml、0.05mg/ml、0.06mg/ml、0.07mg/ml、0.08mg/ml、0.09mg/ml、0.1mg/ml、0.15mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.7mg/ml、0.8mg/ml、0.9mg/ml或1.0mg/ml的mRNA。在一些实施方案中，合适的mRNA溶液可以含有浓度范围为约0.01-1.0mg/ml、0.01-0.9mg/ml、0.01-0.8mg/ml、0.01-0.7mg/ml、0.01-0.6mg/ml、0.01-0.5mg/ml、0.01-0.4mg/ml、0.01-0.3mg/ml、0.01-0.2mg/ml、0.01-0.1mg/ml、0.05-1.0mg/ml、0.05-0.9mg/ml、0.05-0.8mg/ml、0.05-0.7mg/ml、0.05-0.6mg/ml、0.05-0.5mg/ml、0.05-0.4mg/ml、0.05-0.3mg/ml、0.05-0.2mg/ml、0.05-0.1mg/ml、0.1-1.0mg/ml、0.2-0.9mg/ml、0.3-0.8mg/ml、0.4-0.7mg/ml或0.5-0.6mg/ml的mRNA。在一些实施方案中，合适的mRNA溶液可以含有浓度高达约5.0mg/ml、4.0mg/ml、3.0mg/ml、2.0mg/ml、1.0mg/ml、0.09mg/ml、0.08mg/ml、0.07mg/ml、0.06mg/ml或0.05mg/ml的mRNA。

通常，合适的mRNA溶液还可以含有缓冲剂和/或盐。通常，缓冲剂可以包括HEPES、硫酸铵、碳酸氢钠、柠檬酸钠、乙酸钠、磷酸钾和磷酸钠。在一些实施方案中，缓冲剂的合适的浓度的范围可以为约0.1mM至100mM、0.5mM至90mM、1.0mM至80mM、2mM至70mM、3mM至60mM、4mM至50mM、5mM至40mM、6mM至30mM、7mM至20mM、8mM至15mM或9至12mM。在一些实施方案中，缓冲剂的合适的浓度为或大于约0.1mM、0.5mM、1mM、2mM、4mM、6mM、8mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM或50mM。

示例性盐可以包括氯化钠、氯化镁和氯化钾。在一些实施方案中，mRNA溶液中合适的盐浓度的范围可以为约1mM至500mM、5mM至400mM、10mM至350mM、15mM至300mM、20mM至250mM、30mM至200mM、40mM至190mM、50mM至180mM、50mM至170mM、50mM至160mM、50mM至150mM或50mM至100mM。合适的mRNA溶液中的盐浓度为或大于约1mM、5mM、10mM、20mM、30mM、40mM、50mM、60mM、70mM、80mM、90mM或100mM。

在一些实施方案中，合适的mRNA溶液的pH范围可以为约3.5-6.5、3.5-6.0、3.5-5.5、3.5-5.0、3.5-4.5、4.0-5.5、4.0-5.0、4.0-4.9、4.0-4.8、4.0-4.7、4.0-4.6或4.0-4.5。在一些实施方案中，合适的mRNA溶液的pH可以为或不大于约3.5、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.2、5.4、5.6、5.8、6.0、6.1、6.3和6.5。

可以使用多种方法来制备适用于本发明的mRNA溶液。在一些实施方案中，可以将mRNA直接溶解于本文所述的缓冲溶液中。在一些实施方案中，可以在与脂质溶液混合以供包封之前通过将mRNA储备溶液与缓冲溶液混合来生成mRNA溶液。在一些实施方案中，可以在与脂质溶液混合以供包封之后立即通过将mRNA储备溶液与缓冲溶液混合来生成mRNA溶液。在一些实施方案中，合适的mRNA储备溶液可以含有在水中浓度为或大于约0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml、1.2mg/ml、1.4mg/ml、1.5mg/ml或1.6mg/ml、2.0mg/ml、2.5mg/ml、3.0mg/ml、3.5mg/ml、4.0mg/ml、4.5mg/ml或5.0mg/ml的mRNA。

在一些实施方案中，使用泵将mRNA储备溶液与缓冲溶液混合。示例性泵包括但不限于齿轮泵、蠕动泵和离心泵。

通常，将缓冲溶液以大于mRNA储备溶液的速率的速率进行混合。例如，可以将缓冲溶液以比mRNA储备溶液的速率大至少1x、2x、3x、4x、5x、6x、7x、8x、9x、10x、15x或20x的速率进行混合。在一些实施方案中，将缓冲溶液以范围在约100-6000ml/分钟(例如，约100-300ml/分钟、300-600ml/分钟、600-1200ml/分钟、1200-2400ml/分钟、2400-3600ml/分钟、3600-4800ml/分钟、4800-6000ml/分钟或60-420ml/分钟)之间的流速进行混合。在一些实施方案中，将缓冲溶液以为或大于约60ml/分钟、100ml/分钟、140ml/分钟、180ml/分钟、220ml/分钟、260ml/分钟、300ml/分钟、340ml/分钟、380ml/分钟、420ml/分钟、480ml/分钟、540ml/分钟、600ml/分钟、1200ml/分钟、2400ml/分钟、3600ml/分钟、4800ml/分钟或6000ml/分钟的流速混合。

在一些实施方案中，将mRNA储备溶液以范围在约10-600ml/分钟(例如，约5-50ml/分钟、约10-30ml/分钟、约30-60ml/分钟、约60-120ml/分钟、约120-240ml/分钟、约240-360ml/分钟、约360-480ml/分钟或约480-600ml/分钟)之间的流速进行混合。在一些实施方案中，将mRNA储备溶液以为或大于约5ml/分钟、10ml/分钟、15ml/分钟、20ml/分钟、25ml/分钟、30ml/分钟、35ml/分钟、40ml/分钟、45ml/分钟、50ml/分钟、60ml/分钟、80ml/分钟、100ml/分钟、200ml/分钟、300ml/分钟、400ml/分钟、500ml/分钟或600ml/分钟的流速进行混合。

递送媒介物

本文描述的稳定的脂质纳米颗粒配制品适合作为mRNA的递送媒介物。

如本文所用，术语“递送媒介物”、“转移媒介物”、“纳米颗粒”或语法等效物可互换使用。

递送媒介物可以与一种或多种另外的核酸、载体、靶向配体或稳定试剂组合配制，或者配制于药物组合物(其中将所述媒介物与合适的赋形剂混合)中。用于药物配制和施用的技术可以发现于以下文献中：“Remington's Pharmaceutical Sciences,”MackPublishing Co.,Easton,Pa.,最新版。基于促进将核酸转染至靶细胞中的能力来选择特定递送媒介物。

脂质体递送媒介物

在一些实施方案中，合适的递送媒介物是脂质体递送媒介物，例如，脂质纳米颗粒。如本文所用，脂质体递送媒介物(例如，脂质纳米颗粒)通常特征为微型囊泡，其具有通过一个或多个双层的膜与外部介质隔离的内部水空间。脂质体的双层膜通常由两亲性分子形成，所述两亲性分子如合成或天然来源的脂质，其包含空间上分开的亲水结构域和疏水结构域(Lasic,Trends Biotechnol.,16:307-321,1998)。脂质体的双层膜也可以由两亲性聚合物和表面活性剂(例如，聚合物体(polymerosome)、非离子表面活性剂囊泡等)形成。在本发明的情境下，脂质体递送媒介物通常用于将所需mRNA运输至靶细胞或靶组织。在一些实施方案中，纳米颗粒递送媒介物是脂质体。在一些实施方案中，脂质体包含一种或多种阳离子脂质、一种或多种非阳离子脂质、一种和多种基于胆固醇的脂质和一种或多种经PEG修饰的脂质。在一些实施方案中，脂质体包含不超过三种不同的脂质组分。在一些实施方案中，一种不同的脂质组分是基于固醇的阳离子脂质。

阳离子脂质

如本文所用，短语“阳离子脂质”是指多个脂质种类中的任一种，其在所选pH、如生理pH下具有净正电荷。

用于本发明的组合物和方法中的合适的阳离子脂质包括如国际专利公开案WO2010/144740中所述的阳离子脂质，所述专利通过引用并入本文。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质(6Z,9Z,28Z,31Z)-三十七烷-6,9,28,31-四烯-19-基4-(二甲氨基)丁酸酯：

及其药学上可接受的盐。

用于本发明的组合物和方法中的其他合适的阳离子脂质包括如国际专利公开案WO 2013/149140中所述的可电离的阳离子脂质，所述专利通过引用并入本文。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法包括下式之一的阳离子脂质：

或其药学上可接受的盐，其中R₁和R₂各自独立地选自氢、任选经取代的可变地饱和或不饱和C₁-C₂₀烷基以及任选经取代的可变地饱和或不饱和C₆-C₂₀酰基；其中L₁和L₂各自独立地选自氢、任选经取代的C₁-C₃₀烷基、任选经取代的可变地不饱和C₁-C₃₀烯基以及任选经取代的C₁-C₃₀炔基；其中m和o各自独立地选自零和任何正整数(例如，在m为三的情况下)；并且其中n为零或任何正整数(例如，在n为一的情况下)。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质(15Z,18Z)-N,N-二甲基-6-(9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯-l-基)二十四烷-15,18-二烯-1-胺(“HGT5000”)：

及其药学上可接受的盐。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质(15Z,18Z)-N,N-二甲基-6-((9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯-1-基)二十四烷-4,15,18-三烯-l-胺(“HGT5001”)：

及其药学上可接受的盐。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质和(15Z,18Z)-N,N-二甲基-6-((9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯-1-基)二十四烷-5,15,18-三烯-1-胺(“HGT5002”)：

及其药学上可接受的盐。

用于本发明的组合物和方法中的其他合适的阳离子脂质包括国际专利公开案WO2010/053572中描述为氨基醇类脂质(lipidoid)的阳离子脂质，所述专利通过引用并入本文。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质：

及其药学上可接受的盐。

用于本发明的组合物和方法中的其他合适的阳离子脂质包括如国际专利公开案WO 2016/118725中所述的阳离子脂质，所述专利通过引用并入本文。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质：

及其药学上可接受的盐。

用于本发明的组合物和方法中的其他合适的阳离子脂质包括如国际专利公开案WO 2016/118724中所述的阳离子脂质，所述专利通过引用并入本文。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质：

及其药学上可接受的盐。

用于本发明的组合物和方法中的其他合适的阳离子脂质包括具有14,25-双十三烷基15,18,21,24-四氮杂-三十八烷的式的阳离子脂质及其药学上可接受的盐。

用于本发明的组合物和方法中的其他合适的阳离子脂质包括如国际专利公开案WO 2013/063468和WO 2016/205691中所述的阳离子脂质，所述专利各自通过引用并入本文。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法包括下式的阳离子脂质：

或其药学上可接受的盐，其中R^L的每种情况独立地为任选经取代的C₆-C₄₀烯基。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质：

及其药学上可接受的盐。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质：

及其药学上可接受的盐。

用于本发明的组合物和方法中的其他合适的阳离子脂质包括如国际专利公开案WO 2015/184256中所述的阳离子脂质，所述专利通过引用并入本文。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法包括下式的阳离子脂质：

或其药学上可接受的盐，其中每个X独立地为O或S；每个Y独立地为O或S；每个m独立地为0至20；每个n独立地为1至6；每个R_A独立地为氢、任选经取代的C1-50烷基、任选经取代的C2-50烯基、任选经取代的C2-50炔基、任选经取代的C3-10碳环基、任选经取代的3-14元杂环基、任选经取代的C6-14芳基、任选经取代的5-14元杂芳基或卤素；并且每个R_B独立地为氢、任选经取代的C1-50烷基、任选经取代的C2-50烯基、任选经取代的C2-50炔基、任选经取代的C3-10碳环基、任选经取代的3-14元杂环基、任选经取代的C6-14芳基、任选经取代的5-14元杂芳基或卤素。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质“靶标23”：

及其药学上可接受的盐。

用于本发明的组合物和方法中的其他合适的阳离子脂质包括如国际专利公开案WO 2016/004202中所述的阳离子脂质，所述专利通过引用并入本文。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质：

或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质：

或其药学上可接受的盐。

用于本发明的组合物和方法中的其他合适的阳离子脂质包括如美国临时专利申请序列号62/758,179中所述的阳离子脂质，所述申请通过引用并入本文。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法包括下式的阳离子脂质：

或其药学上可接受的盐，其中每个R¹和R²独立地为H或C₁-C₆脂肪族基团；每个m独立地为具有1至4的值的整数；每个A独立地为共价键或亚芳基；每个L¹独立地为酯、硫代酸酯、二硫化物或酸酐基团；每个L²独立地为C₂-C₁₀脂肪族基团；每个X¹独立地为H或OH；并且每个R³独立地为C₆-C₂₀脂肪族基团。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法包括下式的阳离子脂质：

或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法包括下式的阳离子脂质：

或其药学上可接受的盐。

用于本发明的组合物和方法中的其他合适的阳离子脂质包括如以下文献中所述的阳离子脂质：J.McClellan,M.C.King,Cell 2010,141,210-217和Whitehead等人,NatureCommunications(2014)5:4277，所述文献通过引用并入本文。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法的阳离子脂质包括具有以下化合物结构的阳离子脂质：

及其药学上可接受的盐。

用于本发明的组合物和方法中的其他合适的阳离子脂质包括如国际专利公开案WO 2015/199952中所述的阳离子脂质，所述专利通过引用并入本文。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质：

及其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质：

及其药学上可接受的盐。

用于本发明的组合物和方法中的其他合适的阳离子脂质包括如国际专利公开案WO 2017/004143中所述的阳离子脂质，所述专利通过引用并入本文。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质：

及其药学上可接受的盐。

用于本发明的组合物和方法中的其他合适的阳离子脂质包括如国际专利公开案WO 2017/075531中所述的阳离子脂质，所述专利通过引用并入本文。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法包括下式的阳离子脂质：

或其药学上可接受的盐，其中L¹或L²中的一个是-O(C＝O)-、-(C＝O)O-、-C(＝O)-、-O-、-S(O)_x、-S-S-、-C(＝O)S-、-SC(＝O)-、-NR^aC(＝O)-、-C(＝O)NR^a-、NR^aC(＝O)NR^a-、-OC(＝O)NR^a-或-NR^aC(＝O)O-；并且L¹或L²中的另一个是-O(C＝O)-、-(C＝O)O-、-C(＝O)-、-O-、-S(O)_x、-S-S-、-C(＝O)S-、SC(＝O)-、-NR^aC(＝O)-、-C(＝O)NR^a-、NR^aC(＝O)NR^a-、-OC(＝O)NR^a-或-NR^aC(＝O)O-或直接键；G¹和G²各自独立地为未取代的C₁-C₁₂亚烷基或C₁-C₁₂亚烯基；G³是C₁-C₂₄亚烷基、C₁-C₂₄亚烯基、C₃-C₈亚环烷基、C₃-C₈亚环烯基；R^a是H或C₁-C₁₂烷基；R¹和R²各自独立地为C₆-C₂₄烷基或C₆-C₂₄烯基；R³是H、OR⁵、CN、-C(＝O)OR⁴、-OC(＝O)R⁴或-NR⁵ C(＝O)R⁴；R⁴是C₁-C₁₂烷基；R⁵是H或C₁-C₆烷基；并且x是0、1或2。

用于本发明的组合物和方法中的其他合适的阳离子脂质包括如国际专利公开案WO 2017/117528中所述的阳离子脂质，所述专利通过引用并入本文。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质：

及其药学上可接受的盐。

用于本发明的组合物和方法中的其他合适的阳离子脂质包括如国际专利公开案WO 2017/049245中所述的阳离子脂质，所述专利通过引用并入本文。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法的阳离子脂质包括下式之一的化合物：

及其药学上可接受的盐。对于这四个式中的任一个，R₄独立地选自-(CH₂)_nQ和-(CH₂)_nCHQR；Q选自-OR、-OH、-O(CH₂)_nN(R)₂、-OC(O)R、-CX₃、-CN、-N(R)C(O)R、-N(H)C(O)R、-N(R)S(O)₂R、-N(H)S(O)₂R、-N(R)C(O)N(R)₂、-N(H)C(O)N(R)₂、-N(H)C(O)N(H)(R)、-N(R)C(S)N(R)₂、-N(H)C(S)N(R)₂、-N(H)C(S)N(H)(R)和杂环；并且n是1、2或3。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质：

及其药学上可接受的盐。

用于本发明的组合物和方法中的其他合适的阳离子脂质包括如国际专利公开案WO 2017/173054和WO 2015/095340中所述的阳离子脂质，所述专利各自通过引用并入本文。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质：

及其药学上可接受的盐。

用于本发明的组合物和方法中的其他合适的阳离子脂质包括如国际专利公开案WO 2012/170889中所述的可切割的阳离子脂质，所述专利通过引用并入本文。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法包括下式的阳离子脂质：

其中R₁选自咪唑、胍、氨基、亚胺、烯胺、任选地取代的烷基氨基(例如，烷基氨基，如二甲氨基)和吡啶基；其中R₂选自以下两个式中的一个：

并且其中R₃和R₄各自独立地选自任选经取代的可变地饱和或不饱和C₆-C₂₀烷基以及任选经取代的可变地饱和或不饱和C₆-C₂₀酰基；并且其中n为零或任何正整数(例如，一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十或更大)。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质“HGT4001”：

及其药学上可接受的盐。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质“HGT4002”(本文也称为“Guan-SS-Chol”)：

及其药学上可接受的盐。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质“HGT4003”：

及其药学上可接受的盐。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质“HGT4004”：

及其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有以下化合物结构的阳离子脂质“HGT4005”：

及其药学上可接受的盐。

用于本发明的组合物和方法中的其他合适的阳离子脂质包括如2018年5月16日提交的美国临时申请号62/672,194中所述的可切割阳离子脂质，并且所述申请通过引用并入本文。在一些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有美国临时申请号62/672,194中所述通式中的任一个或结构(1a)-(21a)和(1b)-(21b)和(22)-(237)中的任一个的阳离子脂质。在某些实施方案中，本发明的组合物和方法包括具有根据式(I')的结构的阳离子脂质，

其中：

R^X独立地为-H、-L¹-R¹或-L^5A-L^5B-B'；

L¹、L²和L³中的每一个独立地为共价键、-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)S-或-C(O)NR^L-；

每个L^4A和L^5A独立地为-C(O)-、-C(O)O-或-C(O)NR^L-；

每个L^4B和L^5B独立地为C₁-C₂₀亚烷基；C₂-C₂₀亚烯基；或C₂-C₂₀亚炔基；

每个B和B'是NR⁴R⁵或5至10元含氮杂芳基；

每个R¹、R²和R³独立地为C₆-C₃₀烷基、C₆-C₃₀烯基或C₆-C₃₀炔基；

每个R⁴和R⁵独立地为氢、C₁-C₁₀烷基；C₂-C₁₀烯基；或C₂-C₁₀炔基；并且

每个R^L独立地为氢、C₁-C₂₀烷基、C₂-C₂₀烯基或C₂-C₂₀炔基。

在一些实施方案中，本发明的组合物和方法包括作为申请号62/672,194的化合物(139)的阳离子脂质，其具有以下化合物结构：

在一些实施方案中，本发明的组合物和方法包括阳离子脂质N-[l-(2,3-二油酰基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵(“DOTMA”)。(Feigner等人,(Proc.Nat'l Acad.Sci.84,7413(1987),美国专利4,897,355号，其通过引用并入本文)。适用于本发明的组合物和方法的其他阳离子脂质包括，例如，5-羧基精胺基甘氨酸双十八烷基酰胺(“DOGS”)；2,3-二油酰基氧基-N-[2(精胺-甲酰胺基)乙基]-N,N-二甲基-l-丙铵(“DOSPA”)(Behr等人Proc.Nat.'l Acad.Sci.86,6982(1989)，美国专利号5,171,678；美国专利号5,334,761)；l,2-二油酰基-3-二甲铵-丙烷(“DODAP”)；l,2-二油酰基-3-三甲铵-丙烷(“DOTAP”)。

适用于本发明的组合物和方法的另外的示例性阳离子脂质还包括：l,2-二硬脂酰基氧基-N,N-二甲基-3-氨基丙烷(“DSDMA”)；1,2-二油酰基氧基-N,N-二甲基-3-氨基丙烷(“DODMA”)；1,2-二亚油酰基氧基-N,N-二甲基-3-氨基丙烷(“DLinDMA”)；l,2-二亚麻酰基氧基-N,N-二甲基-3-氨基丙烷(“DLenDMA”)；N-二油酰基-N,N-二甲基氯化铵(“DODAC”)；N,N-二硬脂酰基-N,N-二甲基溴化铵(“DDAB”)；N-(l,2-二肉豆蔻基氧基丙-3-基)-N,N-二甲基-N-羟乙基溴化铵(“DMRIE”)；3-二甲氨基-2-(胆甾-5-烯-3-β-氧基丁-4-氧基)-l-(顺,顺-9,12-十八碳二烯氧基)丙烷(“CLinDMA”)；2-[5'-(胆甾-5-烯-3-β-氧基)-3'-氧杂戊氧基)-3-二甲基-l-(顺,顺-9',l-2'-十八碳二烯氧基)丙烷(“CpLinDMA”)；N,N-二甲基-3,4-二油酰基氧基苄胺(“DMOBA”)；1,2-N,N'-二油酰基氨甲酰基-3-二甲氨基丙烷(“DOcarbDAP”)；2,3-二亚油酰氧基-Ν,Ν-二甲基丙胺(“DLinDAP”)；l,2-N,N'-二亚油酰基氨甲酰基-3-二甲氨基丙烷(“DLincarbDAP”)；l,2-二亚油酰氨甲酰基-3-二甲氨基丙烷(“DLinCDAP”)；2,2-二亚油酰基-4-二甲氨基甲基-[l,3]-二氧戊烷(“DLin-K-DMA”)；2-((8-[(3P)-胆甾-5-烯-3-基氧基]辛基)氧基)-N,N-二甲基-3-[(9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯-1-基氧基]丙烷-1-胺(“辛基-CLinDMA”)；(2R)-2-((8-[(3β)-胆甾-5-烯-3-基氧基]辛基)氧基)-N,N-二甲基-3-[(9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯-1-基氧基]丙-1-胺(“辛基-CLinDMA(2R)”)；(2S)-2-((8-[(3P)-胆甾-5-烯-3-基氧基]辛基)氧基)-N,fsl-二甲基3-[(9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯-1-基氧基]丙-1-胺(“辛基-CLinDMA(2S)”)；2,2-二亚油酰基-4-二甲氨基乙基-[l,3]-二氧戊烷(“DLin-K-XTC2-DMA”)；以及2-(2,2-二((9Z,12Z)-十八烷-9,l 2-二烯-1-基)-l,3-二氧戊烷-4-基)-N,N-二甲基乙胺(“DLin-KC2-DMA”)(参见，WO 2010/042877，将其通过引用并入本文；Semple等人,Nature Biotech.28:172-176(2010))。(Heyes,J.等人,JControlled Release 107:276-287(2005)；Morrissey,DV.等人,Nat.Biotechnol.23(8):1003-1007(2005)；国际专利公开号WO 2005/121348)。在一些实施方案中，一种或多种阳离子脂质包含咪唑、二烷基氨基或胍部分中的至少一种。在一些实施方案中，适用于本发明的组合物和方法的一种或多种阳离子脂质包括2,2-二亚油酰基-4-二甲氨基乙基-[1,3]-二氧戊烷(“XTC”)；(3aR,5s,6aS)-N,N-二甲基-2,2-二((9Z,12Z)-十八烷-9,12-二烯基)四氢-3aH-环戊[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-胺(“ALNY-100”)和/或4,7,13-三(3-氧代-3-(十一烷基氨基)丙基)-N1,N16-双十一烷基-4,7,10,13-四氮杂十六烷-1,16-二酰胺(“NC98-5”)。

在一些实施方案中，适用于本发明的组合物和方法的一种或多种阳离子脂质包括具有以下化合物结构的阳离子脂质TL1-04D-DMA：

在一些实施方案中，适用于本发明的组合物和方法的一种或多种阳离子脂质包括具有以下化合物结构的阳离子脂质GL-TES-SA-DME-E18-2：

在一些实施方案中，适用于本发明的组合物和方法的一种或多种阳离子脂质包括具有以下化合物结构的阳离子脂质SY-3-E14-DMAPr：

在一些实施方案中，适用于本发明的组合物和方法的一种或多种阳离子脂质包括具有以下化合物结构的阳离子脂质TL1-01D-DMA：

在一些实施方案中，适用于本发明的组合物和方法的一种或多种阳离子脂质包括具有以下化合物结构的阳离子脂质TL1-10D-DMA：

在一些实施方案中，适用于本发明的组合物和方法的一种或多种阳离子脂质包括具有以下化合物结构的阳离子脂质GL-TES-SA-DMP-E18-2：

在一些实施方案中，适用于本发明的组合物和方法的一种或多种阳离子脂质包括具有以下化合物结构的阳离子脂质HEP-E4-E10：

在一些实施方案中，适用于本发明的组合物和方法的一种或多种阳离子脂质包括具有以下化合物结构的阳离子脂质HEP-E3-E10：

在一些实施方案中，本发明的组合物包括一种或多种阳离子脂质，按重量测量，其构成组合物(例如，脂质纳米颗粒)中的总脂质含量的至少约5％、10％、20％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％或70％。在一些实施方案中，本发明的组合物包括一种或多种阳离子脂质，按mol％测量，其构成组合物(例如，脂质纳米颗粒)中的总脂质含量的至少约5％、10％、20％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％或70％。在一些实施方案中，本发明的组合物包括一种或多种阳离子脂质，按重量测量，其构成组合物(例如，脂质纳米颗粒)中的总脂质含量的约30％-70％(例如，约30％-65％、约30％-60％、约30％-55％、约30％-50％、约30％-45％、约30％-40％、约35％-50％、约35％-45％或约35％-40％)。在一些实施方案中，本发明的组合物包括一种或多种阳离子脂质，按mol％测量，其构成组合物(例如，脂质纳米颗粒)中的总脂质含量的约30％-70％(例如，约30％-65％、约30％-60％、约30％-55％、约30％-50％、约30％-45％、约30％-40％、约35％-50％、约35％-45％或约35％-40％)。

非阳离子/辅助脂质

在一些实施方案中，所提供的脂质体含有一种或多种非阳离子(“辅助”)脂质。如本文所用，短语“非阳离子脂质”是指任何中性、两性离子或阴离子脂质。如本文所用，短语“阴离子脂质”是指多个脂质种类中的任一种，其在所选pH、如生理pH下携带净负电荷。非阳离子脂质包括但不限于二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(POPC)、棕榈酰油酰-磷脂酰乙醇胺(POPE)、二油酰-磷脂酰乙醇胺4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-l-甲酸酯(DOPE-mal)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰磷酸乙醇胺(DMPE)、二硬脂酰-磷脂酰-乙醇胺(DSPE)、磷脂酰丝氨酸、鞘脂、脑苷脂、神经节苷脂、16-O-单甲基PE、16-O-二甲基PE、18-1-反式PE、l-硬脂酰-2-油酰-磷脂酰乙醇胺(SOPE)或其混合物。

在一些实施方案中，这样的非阳离子脂质可以单独使用，但是优选地与其他脂质(例如，阳离子脂质)组合使用。在一些实施方案中，非阳离子脂质可占脂质体中存在的总脂质的如下摩尔比：约5％至约90％，或约10％至约70％。在一些实施方案中，非阳离子脂质是中性脂质，即，在配制和/或施用组合物的条件下不携带净电荷的脂质。在一些实施方案中，脂质体中非阳离子脂质的百分比可以为大于5％、大于10％、大于20％、大于30％或大于40％。

基于胆固醇的脂质

在一些实施方案中，所提供的脂质体包含一种或多种基于胆固醇的脂质。例如，合适的基于胆固醇的阳离子脂质包括，例如，DC-Choi(N,N-二甲基-N-乙基甲酰胺胆固醇)、l,4-双(3-N-油胺基-丙基)哌嗪(Gao等人Biochem.Biophys.Res.Comm.179,280(1991)；Wolf等人BioTechniques 23,139(1997)；美国专利号5,744,335)或ICE。在一些实施方案中，基于胆固醇的脂质可占脂质体中存在的总脂质的如下摩尔比：约2％至约30％，或约5％至约20％。在一些实施方案中，脂质纳米颗粒中基于胆固醇的脂质的百分比可以为大于5％、大于10％、大于20％、大于30％或大于40％。

经PEG修饰的脂质

本发明还考虑使用经聚乙二醇(PEG)修饰的磷脂和衍生脂质如衍生神经酰胺(PEG-CER)(包括N-辛酰基-鞘氨醇-1-[琥珀酰基(甲氧基聚乙二醇)-2000](C8 PEG-2000神经酰胺))，其为单独的或优选地与其他脂质配制品(与其一起构成转移媒介物(例如，脂质纳米颗粒))组合。所考虑的经PEG修饰的脂质包括但不限于共价附接至具有一条或多条C₆-C₂₀长度的烷基链的脂质的长度最大为S kDa的聚乙二醇链。此类组分的添加可以防止复合物聚集，并且提供用于增加脂质-核酸组合物的循环寿命并且增加其向靶组织的递送的手段(Klibanov等人(1990)FEBS Letters,268(1):235-237)，或者它们可以被选择为在体内快速交换出配制品(参见美国专利号5,885,613)。特别有用的可交换脂质是具有较短酰基链(例如，C14或C18)的PEG-神经酰胺。本发明的经PEG修饰的磷脂和衍生脂质可占脂质体转移媒介物中存在的总脂质的如下摩尔比：约0％至约20％、约0.5％至约20％、约1％至约15％、约4％至约10％、或约2％。

根据多个实施方案，构成脂质纳米颗粒的阳离子脂质、非阳离子脂质、和/或经PEG修饰的脂质的选择，以及这些脂质相对于彼此的相对摩尔比是基于一种或多种所选脂质的特征、既定靶细胞的性质、要被递送的MCNA的特征。另外的考虑包括例如烷基链的饱和，以及一种或多种所选脂质的大小、电荷、pH、pKa、融合原性(fusogenicity)和毒性。因此，可以相应地调整摩尔比。

聚合物

在一些实施方案中，合适的递送媒介物是使用聚合物作为载体来配制，所述聚合物是单独的或者与包括本文所述的各种脂质在内的其他载体组合。因此，在一些实施方案中，如本文所用的脂质体递送媒介物还涵盖包含聚合物的纳米颗粒。合适的聚合物可以包括例如聚丙烯酸酯、聚烷基氰基丙烯酸酯、聚丙交酯、聚丙交酯-聚乙交酯共聚物、聚己内酯、葡聚糖、白蛋白、明胶、藻酸盐、胶原蛋白、壳聚糖、环糊精、鱼精蛋白、PEG化鱼精蛋白、PLL、PEG化PLL和聚乙烯亚胺(PEI)。在PEI存在时，其可以是分子量范围为10至40kDa的支链PEI，例如，25kDa支链PEI(Sigma#408727)。

适用于本发明的脂质体

用于本发明的合适的脂质体可以以多个比率包括任何本文所述的阳离子脂质、非阳离子脂质、胆固醇脂质、经PEG修饰的脂质和/或聚合物中的一种或多种。作为非限制性例子，合适的脂质体配制品可以包括选自以下的组合：cKK-E12、DOPE、胆固醇和DMG-PEG2K；C12-200、DOPE、胆固醇和DMG-PEG2K；HGT4003、DOPE、胆固醇和DMG-PEG2K；ICE、DOPE、胆固醇和DMG-PEG2K；或者ICE、DOPE和DMG-PEG2K。

在多个实施方案中，按摩尔比，阳离子脂质(例如，cKK-E12、C12-200、ICE和/或HGT4003)构成脂质体的约30％-60％(例如，约30％-55％、约30％-50％、约30％-45％、约30％-40％、约35％-50％、约35％-45％或约35％-40％)。在一些实施方案中，按摩尔比，阳离子脂质(例如，cKK-E12、C12-200、ICE和/或HGT4003)的百分比是脂质体的为或大于约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％或约60％。

在一些实施方案中，一种或多种阳离子脂质与一种或多种非阳离子脂质与一种或多种基于胆固醇的脂质与一种或多种经PEG修饰的脂质的比率可以分别在约30-60:25-35:20-30:1-15之间。在一些实施方案中，一种或多种阳离子脂质与一种或多种非阳离子脂质与一种或多种基于胆固醇的脂质与一种或多种经PEG修饰的脂质的比率分别为大约40:30:20:10。在一些实施方案中，一种或多种阳离子脂质与一种或多种非阳离子脂质与一种或多种基于胆固醇的脂质与一种或多种经PEG修饰的脂质的比率分别为大约40:30:25:5。在一些实施方案中，一种或多种阳离子脂质与一种或多种非阳离子脂质与一种或多种基于胆固醇的脂质与一种或多种经PEG修饰的脂质的比率分别为大约40:32:25:3。在一些实施方案中，一种或多种阳离子脂质与一种或多种非阳离子脂质与一种或多种基于胆固醇的脂质与一种或多种经PEG修饰的脂质的比率为大约50:25:20:5。

在特定实施方案中，用于本发明的脂质体包括由阳离子脂质、非阳离子脂质(例如DOPE或DEPE)、经PEG修饰的脂质(例如DMG-PEG2K)和任选地胆固醇组成的脂质组分。特别适用于包含在这种脂质体中的阳离子脂质包括GL-TES-SA-DME-E18-2、TL1-01D-DMA、SY-3-E14-DMAPr、TL1-10D-DMA、HGT4002(在本文中也称为Guan-SS-Chol)、GL-TES-SA-DMP-E18-2、HEP-E4-E10、HEP-E3-E10和TL1-04D-DMA。已经发现这些阳离子脂质特别适用于通过经由雾化的肺部递送施用的脂质体。其中，HEP-E4-E10、HEP-E3-E10、GL-TES-SA-DME-E18-2、GL-TES-SA-DMP-E18-2、TL1-01D-DMA和TL1-04D-DMA表现特别好。

示例性脂质体包括GL-TES-SA-DME-E18-2、TL1-01D-DMA、SY-3-E14-DMAPr、TL1-10D-DMA、GL-TES-SA-DMP-E18-2、HEP-E4-E10、HEP-E3-E10和TL1-04D-DMA中的一种作为阳离子脂质组分，DOPE作为非阳离子脂质组分，胆固醇作为辅助脂质组分和DMG-PEG2K作为经PEG修饰的脂质组分。在一些实施方案中，阳离子脂质与非阳离子脂质与胆固醇与经PEG修饰的脂质的摩尔比可以分别在约30-60:25-35:20-30:1-15之间。在一些实施方案中，阳离子脂质与非阳离子脂质与胆固醇与经PEG修饰的脂质的摩尔比分别为大约40:30:20:10。在一些实施方案中，阳离子脂质与非阳离子脂质与胆固醇与经PEG修饰的脂质的摩尔比分别为大约40:30:25:5。在一些实施方案中，阳离子脂质与非阳离子脂质与胆固醇与经PEG修饰的脂质的摩尔比分别为大约40:32:25:3。在一些实施方案中，阳离子脂质与非阳离子脂质与胆固醇与经PEG修饰的脂质的摩尔比为大约50:25:20:5。

在一些实施方案中，特别适用于肺部递送的脂质体的脂质组分由HGT4002(本文中也称为Guan-SS-Chol)、DOPE和DMG-PEG2K组成。在一些实施方案中，阳离子脂质与非阳离子脂质与经PEG修饰的脂质的摩尔比为大约60:35:5。

不同的脂质组分的比率

在脂质纳米颗粒包含脂质的三种且不超过三种不同的组分的实施方案中，总脂质含量的比率(即，脂质组分(1):脂质组分(2):脂质组分(3)的比率)可以表示为x:y:z，其中

(y+z)＝100-x。

在一些实施方案中，“x”、“y”和“z”各自表示脂质的三种不同组分的摩尔百分比，并且所述比率是摩尔比。

在一些实施方案中，“x”、“y”和“z”各自表示脂质的三种不同组分的重量百分比，并且所述比率是重量比。

在一些实施方案中，由变量“x”表示的脂质组分(1)是基于固醇的阳离子脂质。

在一些实施方案中，由变量“y”表示的脂质组分(2)是辅助脂质。

在一些实施方案中，由变量“z”表示的脂质组分(3)是PEG脂质。

在一些实施方案中，表示脂质组分(1)(例如，基于固醇的阳离子脂质)的摩尔百分比的变量“x”为至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或约95％。

在一些实施方案中，表示脂质组分(1)(例如，基于固醇的阳离子脂质)的摩尔百分比的变量“x”为不超过约95％、约90％、约85％、约80％、约75％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约40％、约30％、约20％或约10％。在实施方案中，变量“x”为不超过约65％、约60％、约55％、约50％、约40％。

在一些实施方案中，表示脂质组分(1)(例如，基于固醇的阳离子脂质)的摩尔百分比的变量“x”为：至少约50％但小于约95％；至少约50％但小于约90％；至少约50％但小于约85％；至少约50％但小于约80％；至少约50％但小于约75％；至少约50％但小于约70％；至少约50％但小于约65％；或者至少约50％但小于约60％。在实施方案中，变量“x”为至少约50％但小于约70％；至少约50％但小于约65％；或者至少约50％但小于约60％。

在一些实施方案中，代表脂质组分(1)(例如，基于固醇的阳离子脂质)的重量百分比的变量“x”为至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或约95％。

在一些实施方案中，代表脂质组分(1)(例如，基于固醇的阳离子脂质)的重量百分比的变量“x”为不超过约95％、约90％、约85％、约80％、约75％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约40％、约30％、约20％或约10％。在实施方案中，变量“x”为不超过约65％、约60％、约55％、约50％、约40％。

在一些实施方案中，表示脂质组分(1)(例如，基于固醇的阳离子脂质)的重量百分比的变量“x”为：至少约50％但小于约95％；至少约50％但小于约90％；至少约50％但小于约85％；至少约50％但小于约80％；至少约50％但小于约75％；至少约50％但小于约70％；至少约50％但小于约65％；或者至少约50％但小于约60％。在实施方案中，变量“x”为至少约50％但小于约70％；至少约50％但小于约65％；或者至少约50％但小于约60％。

在一些实施方案中，表示脂质组分(3)(例如，PEG脂质)的摩尔百分比的变量“z”为不超过约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％或25％。在实施方案中，表示脂质组分(3)(例如，PEG脂质)的摩尔百分比的变量“z”为约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％。在实施方案中，表示脂质组分(3)(例如，PEG脂质)的摩尔百分比的变量“z”为约1％至约10％、约2％至约10％、约3％至约10％、约4％至约10％、约1％至约7.5％、约2.5％至约10％、约2.5％至约7.5％、约2.5％至约5％、约5％至约7.5％或约5％至约10％。

在一些实施方案中，表示脂质组分(3)(例如，PEG脂质)的重量百分比的变量“z”为不超过约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％或25％。在实施方案中，表示脂质组分(3)(例如，PEG脂质)的重量百分比的变量“z”为约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％。在实施方案中，表示脂质组分(3)(例如，PEG脂质)的重量百分比的变量“z”为约1％至约10％、约2％至约10％、约3％至约10％、约4％至约10％、约1％至约7.5％、约2.5％至约10％、约2.5％至约7.5％、约2.5％至约5％、约5％至约7.5％或约5％至约10％。

对于具有三种且仅三种不同的脂质组分的组合物，变量“x”、“y”和“z”可以呈任何组合，只要三个变量的总和相加为总脂质含量的100％即可。

包封mRNA的脂质体的形成

用于本发明组合物的脂质体转移媒介物可以通过本领域目前已知的各种技术制备。用于所提供的组合物的脂质体可以通过本领域目前已知的各种技术制备。例如，可以根据常规技术制备多层囊泡(MLV)，诸如通过使所选择的脂质沉积在合适的容器或器皿的内壁上(通过将脂质溶解在适当的溶剂中，然后蒸发溶剂以在器皿内部留下薄膜)或通过喷雾干燥来制备。然后可以伴随涡旋运动向器皿中添加水相，这导致MLV的形成。然后可以通过均质化、超声处理或挤出多层囊泡来形成单层囊泡(ULV)。另外，可以通过洗涤剂去除技术形成单层囊泡。

在某些实施方案中，所提供的组合物包含脂质体，其中mRNA既缔合于所述脂质体的表面上且包封在同一脂质体内。例如，在本发明的组合物的制备期间，阳离子脂质体可以经由静电相互作用与mRNA缔合。例如，在本发明的组合物的制备期间，阳离子脂质体可以经由静电相互作用与mRNA缔合。

在一些实施方案中，本发明的组合物和方法包括包封在脂质体中的mRNA。在一些实施方案中，可以将一种或多种mRNA种类包封在同一脂质体中。在一些实施方案中，可以将一种或多种mRNA种类包封在不同脂质体中。在一些实施方案中，将mRNA包封在一种或多种脂质体中，所述脂质体在其脂质组成、脂质组分的摩尔比、大小、电荷(ζ电位)、靶向配体和/或其组合的方面是不同的。在一些实施方案中，一种或多种脂质体可以具有基于固醇的阳离子脂质、中性脂质、经PEG修饰的脂质和/或其组合的不同组成。在一些实施方案中，一种或多种脂质体可以具有不同摩尔比的用于产生脂质体的基于胆固醇的阳离子脂质、中性脂质和经PEG修饰的脂质。

将所需mRNA掺入脂质体中的过程常称为“加载”。示例性方法描述于Lasic,等人,FEBS Lett.,312:255-258,1992中，将其通过引用并入本文。掺入脂质体的核酸可以完全或部分位于脂质体的内部空间中，脂质体的双层膜内，或与脂质体膜的外表面相关联。将核酸掺入脂质体中在本文中也称为“包封”，其中核酸完全或基本上包含在脂质体的内部空间内。将mRNA掺入转运媒介物(如脂质体)中的目的往往是为了保护核酸免受可能含有降解核酸的酶或化学物质和/或导致核酸快速排泄的系统或受体的环境的影响。因此，在一些实施方案中，合适的递送媒介物能够增强其中所含mRNA的稳定性和/或促进将mRNA递送至靶细胞或组织。

根据本发明可制成不同大小的合适脂质体。在一些实施方案中，所提供的脂质体可以制成比先前已知的mRNA包封脂质体更小。在一些实施方案中，脂质体大小的减小与mRNA的更有效递送相关。选择适当的脂质体大小可以考虑靶细胞或组织的位点以及在某种程度上脂质体将被制造用于的应用。

在一些实施方案中，选择适当大小的脂质体以促进由mRNA编码的抗体的全身分布。在一些实施方案中，可能希望将mRNA的转染限制在某些细胞或组织中。例如，为了靶向肝细胞，脂质体的大小可以设定为使得其尺寸小于肝中肝窦内皮层的窗孔；在这样的情况下，脂质体可以很容易地穿透这样的内皮窗孔到达靶肝细胞。

可替代地或另外地，脂质体的大小可以设定为使得脂质体的尺寸具有足够的直径以限制或明确避免分布到某些细胞或组织中。

本领域已知的各种替代方法可用于脂质体群体的大小设定。一种这样的大小设定方法描述于美国专利号4,737,323中，其通过引用并入本文。通过水浴或探头超声对脂质体悬浮液进行超声处理，可使直径的大小逐渐减小得到小于约0.05微米的小ULV。均质化是另一种依靠剪切能量将大脂质体破碎成小脂质体的方法。在典型的均质化程序中，MLV通过标准乳液均化器再循环，直到观察到选定的脂质体大小，通常在约0.1与0.5微米之间。脂质体的大小可以通过准电光散射(QELS)来确定，如Bloomfield,Ann.Rev.Biophys.Bioeng.,10:421-150(1981)所述，其通过引用并入本文。可以通过对所形成的脂质体进行超声处理来减小平均脂质体直径。间歇超声处理循环可以与QELS评估交替，以指导有效的脂质体合成。

组合物的治疗用途

在一个方面，本发明尤其提供了一种用于治疗目的的包封mRNA的LNP配制品。例如，在一些实施方案中，LNP包封的mRNA编码用于治疗受试者的疾病(如免疫疾病)的抗体。

在一些实施方案中，mRNA是经密码子优化的。本领域已知各种密码子优化的方法。

雾化

雾化用于肺部递送的药物组合物的功效取决于气雾剂小液滴的大小。总体上，液滴大小越小，其渗透和滞留在肺部的机会就越大。大液滴(直径>10μm)最有可能沉积在口腔和喉部，中等液滴(直径为5-10μm)更容易沉积在口腔与气道之间，而小液滴(直径小于5μm)则最有可能沉积并保留在肺部。

粒度为1-5μm的吸入性气雾剂液滴可渗透进入下气道的狭窄分支。直径更大的气雾剂液滴通常被口腔内衬的上皮细胞吸收，并且不太可能到达下气道上皮和深部肺泡肺组织。

气雾剂中的粒度通常参考质量中值空气动力学直径(MMAD)来描述。基于颗粒的重量和大小，MMAD与几何标准差(GSD)一起统计描述了任何气雾剂的粒度分布。计算气雾剂的MMAD的方法是本领域熟知的。

1959年，Mitchell等人首次描述了使用级联冲击器计算MMAD的具体方法。用于测量粒度的级联冲击器由一系列喷嘴构成，每个喷嘴后面都有一个冲击滑道，并且是基于以下原理：如果运动气流中的颗粒的动量足以克服气流在滑道周围运动时施加的阻力，则运动气流中的颗粒会冲击置于其路径上的滑道。由于每一个喷嘴都比前一个喷嘴小，随着气雾剂穿过冲击器，气流的速度以及因此分散颗粒的速度都会增加。因此，更小的颗粒最终获得了足够的动量来冲击滑道，从而实现了气雾剂的完整粒度分类。在本文用于测量本发明的药物组合物的MMAD的改进的下一代冲击器由Marple等人于2003年首次描述，并且此后在药典中已被广泛使用。

描述气雾剂中粒度的另一个参数是体积中值直径(VMD)。VMD还描述了基于颗粒体积的气雾剂的粒度分布。计算气雾剂的VMD的方法是本领域熟知的。用于测定VMD的具体方法是激光衍射，其在本文中用于测量本发明的药物组合物的VMD(参见例如，Clark,1995,Int J Pharm.115:69-78)。

在一些实施方案中，雾化药物组合物的平均粒度在约4μm与6μm之间，例如，约4μm、约4.5μm、约5μm、大约5.5μm或约6μm。

细颗粒分数(FPF)被定义为气雾剂中MMAD或VMD小于指定值的颗粒的比例。在一些实施方案中，粒度<5μm的雾化药物组合物的FPF为至少约30％，更典型地为至少约40％，例如，至少约50％，更典型地为至少约60％。

在一些实施方案中，雾化以这样的方式进行，即平均可呼吸喷射剂量(即粒度<5μm的FPF的百分比；例如，如由具有15L/min提取率的下一代冲击器测定的)为喷射剂量的至少约30％，例如，至少约31％、至少约32％、至少约33％、至少约34％，或喷射剂量的至少约35％。在一些实施方案中，雾化是以这样的方式进行的，即平均可呼吸递送剂量(即粒度<5μm的FPF的百分比；例如，如由具有15L/min提取率的下一代冲击器测定的)是喷射剂量的至少约15％，例如，喷射剂量的至少16％或16.5％。

雾化器

雾化可以通过本领域中已知的任何雾化器来实现。雾化器将液体转化为雾状，使其更容易被吸入肺部。雾化器对婴儿、儿童和成人都有效。雾化器能够雾化大剂量的吸入药物。通常，用于本发明的雾化器包括可拆卸的吸嘴。这是重要的，因为在施用本发明的药物组合物时，应只使用不含RNA酶的清洁的吸嘴。

在一些实施方案中，雾化器的储器体积范围在约5.0mL至约8.0mL。在一些实施方案中，雾化器的储器体积为约5.0mL。在一些实施方案中，雾化器的储器体积为约6.0mL。在一些实施方案中，雾化器的储器体积为约7.0mL。在一些实施方案中，雾化器的储器体积为约8.0mL。

一种类型的雾化器是射流雾化器，其包括连接到压缩机的管道，使压缩空气或氧气以高速流过液体药物，以使液体药物变成气雾剂，然后被患者吸入。

另一种类型的雾化器是超声波雾化器，其包括产生高频超声波的电子振荡器，引起与储液器接触的压电元件的机械振动。液体的高频振动足以产生蒸气雾。示例性的超声波雾化器是Omron NE-U17和Beurer雾化器IH30。

第三种类型的雾化器是网状雾化器，如包括振动网状技术(VMT)的振动网状雾化器。VMT雾化器通常包括具有1000-7000个孔的网格/膜，该网格/膜在储液器的顶部振动，从而通过网格/膜中的孔压出非常细的气雾剂液滴薄雾。适用于递送本发明的药物组合物的VMT雾化器包括以下中的任何一种：eFlow(PARI Medical Ltd.)、i-Neb(RespironicsRespiratory Drug Delivery Ltd)、雾化器IH50(Beurer Ltd.)、AeroNeb Go(AerogenLtd.)、InnoSpire Go(Respironics Respiratory Drug Delivery Ltd)、网状雾化器(Shenzhen Homed Medical Device Co,Ltd.)、便携式雾化器(Microbase TechnologyCorporation)和Airworks(Convexity Scientific LLC)。在一些实施方案中，VMT雾化器的网格或膜被制造为通过压电元件发生振动。在一些实施方案中，VMT雾化器的网格或膜被制造为通过超声发生振动。

已经发现VMT雾化器特别适用于实践本发明，因为它们不影响寡核苷酸在本发明的药物组合物中的完整性。通常，本发明的药物组合物中至少约50％，例如至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、或至少约95％的寡核苷酸在雾化后保持其完整性。

在一些实施方案中，雾化在吸入和呼出期间是连续的。更典型的是，雾化是由呼吸引动的。用于本发明的合适的雾化器具有>0.2mL/min的雾化速率。在一些实施方案中，雾化速率为>0.25mL/min。在一些实施方案中，雾化速率为>0.3mL/min。在一些实施方案中，雾化速率为>0.45mL/min。在典型的实施方案中，雾化速率的范围在0.2mL/分钟与0.5mL/分钟之间。

当雾化体积超过10mL时，人受试者可能在治疗过程中表现出不良反应。特别是，当施用大于20mL的体积时，这样的不良反应可能更常见。在一些实施方案中，雾化体积不超过20mL。

在一些实施方案中，可以将本发明的药物组合物的单个剂量在每次雾化治疗中仅采用一次或两次再填充进行施用。例如，如果要给患者施用的药物组合物的总体积是13mL，那么当使用具有8mL储器的雾化器时，仅需要一次再填充来施用完整的体积，但是当使用具有5mL储器的雾化器时，需要两次再填充以施用相同的体积。在另一个实施方案中，每次雾化治疗需要至少三次再填充，例如，为了施用26mL的体积，当使用具有8mL储器的雾化器时需要至少三次再填充。在又另外的实施方案中，需要至少四次再填充。例如，要用具有5mL储器的雾化器递送42mL，需要至少八次再填充。通常，施用本发明的药物组合物将需要不超过1-3次再填充。

通常将本发明的药物组合物以范围为0.2mL/分钟至0.5mL/分钟的速率雾化。已经发现0.5mg/ml至0.8mg/ml浓度的寡核苷酸(例如约0.6mg/ml)是特别合适的，特别是当用振动网状雾化器施用时如此。

在一些实施方案中，单次雾化过程中使用的雾化器数量范围为2-8个。在一些实施方案中，单次雾化过程中使用的雾化器数量范围为1-8个。在一些实施方案中，单次雾化过程中使用1个雾化器。在一些实施方案中，单次雾化过程中使用2个雾化器。在一些实施方案中，单次雾化过程中使用3个雾化器。在一些实施方案中，单次雾化过程中使用4个雾化器。在一些实施方案中，单次雾化过程中使用5个雾化器。在一些实施方案中，单次雾化过程中使用6个雾化器。在一些实施方案中，单次雾化过程中使用7个雾化器。在一些实施方案中，单次雾化过程中使用8个雾化器。

实施例

尽管已经根据某些实施方案专门描述了本发明的某些化合物、组合物和方法，但以下实施例仅用于说明且不意图限制本发明的化合物。

实施例1.将编码抗体的mRNA包封在脂质纳米颗粒(LNP)中

该实施例说明了将mRNA编码的抗体包封在脂质纳米颗粒(LNP)中，以及制备包含编码抗体的mRNA的LNP配制品。

通过包封寡核苷酸的常规方法通过以下方式制备示例性LNP配制品：将寡核苷酸与脂质混合物混合，而无需首先将脂质预形成脂质纳米颗粒，如US2016/0038432(方法A)中所述。

制备示例性编码抗IL6R的mRNA的LNP配制品，其包含10％海藻糖(w/v)和5:60:0:35的DMG-PEG_2000(PEG):Guan-SS-chol(阳离子脂质):胆固醇:DOPE(辅助脂质)的示例性LNP组合物。实现了99.36％的高包封效率。获得的粒度为约58nm，多分散性指数为0.16。

用5:60:0:35的DMG-PEG_2000(PEG):Guan-SS-chol(阳离子脂质):胆固醇:DOPE(辅助脂质)的示例性LNP组合物制备另一示例性编码抗IL4Rα的mRNA的LNP配制品，并且类似地，实现了98％的高包封效率。获得的粒度为约60nm，多分散性指数为0.18。LNP配制品描述于下表3中。

表3.包含编码抗体的信使RNA的LNP配制品

该实施例表明，实现了具有高包封效率的脂质纳米颗粒，其包含编码抗体如抗IL6R和抗IL4Rα的mRNA。

实施例2.mRNA编码的抗体在小鼠体内的药效学研究

该实施例说明了在被施用mRNA编码的抗体的小鼠中进行的药效学研究。随后相对于被施用盐水的对照小鼠，对被施用mRNA编码的抗体的小鼠中的抗体水平进行了评价。研究设计概述于下表4。

表4.小鼠研究设计

测试物质	组编号	剂量水平(μg/只动物)	浓度(mg/ml)	剂量体积(μL/只动物)
					盐水	4	NA	NA	50
抗IL6R	8	15	0.3	50
					抗IL4Rα	8	15	0.3	50

将包封在LNP中的编码针对各种免疫靶标的抗体的信使RNA施用于小鼠。示例性靶标包括IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-13、IL-25、IL-33、IL-4受体(IL-4R，例如IL-4Rα)、IL-5受体(IL-5R)、IL-6受体(IL-6R)、IL-9受体(IL-9R)、IL-13受体(IL-13R)、IL-25受体(IL-25R)或IL-33受体(IL-33R，例如ST2，也称为IL1RL1)和其他2型炎症驱动因子，以及其他靶标。在该实施例中，测试了包封抗IL6R和抗IL4Rα的mRNA LNP。

通过气管内施用，以约15微克/只动物的剂量向约8-10周龄CD1小鼠施用包封抗IL6R或抗IL4Rα的mRNA-LNP。向对照小鼠施用盐水。在第4天，采集血液用于血清制备。处死小鼠，并采集包括支气管肺泡灌洗液(BALF)、肺和肝在内的组织标品。通过五次依序的液体浸入收集BALF样品。收集到的第一个BALF级分是富含细胞因子的BALF和BAL细胞颗粒。在液氮中快速冷冻整个左肺和右肺以及来自肝脏的两个8mm活检冲出物。

相对于接受盐水对照的小鼠，在施用mRNA疗法后72小时测量在来自用抗IL6R或抗IL4Rα抗体治疗的小鼠的BALF中的人IgG的水平。对抗体水平进行了定量，并且数据示于图1和表5中。

表5.来自BALF中的mRNA LNP的抗体水平

此实施例证明了编码抗体的mRNA被递送，并且人抗体在靶肺组织中得以表达。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献都通过引用以其整体并入。此外，材料、方法以及实施例仅仅是说明性的并不意在是限制性的。除非另外定义，否则在此使用的所有技术和科学术语具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。尽管与本文所述的方法和材料类似或等同的方法和材料可以用于本发明的实践或测试，但本文描述了合适的方法和材料。

等效内容

本领域的技术人员仅使用常规实验就将认识到或能够确定本文所述的本发明的具体实施方案的许多等效方案。本发明的范围并不意图受限于上文说明，而是如以下权利要求中所述。

序列表

<110> 翻译生物公司

<120> 递送mRNA编码的抗体的方法和组合物

<130> MRT-2210WO

<140>

<141>

<150> 63/137,528

<151> 2021-01-14

<160> 29

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 874

<212> PRT

<213> 志贺氏病毒Sf6

<400> 1

Met Gln Asp Leu His Ala Ile Gln Leu Gln Leu Glu Glu Glu Met Phe

1 5 10 15

Asn Gly Gly Ile Arg Arg Phe Glu Ala Asp Gln Gln Arg Gln Ile Ala

20 25 30

Ala Gly Ser Glu Ser Asp Thr Ala Trp Asn Arg Arg Leu Leu Ser Glu

35 40 45

Leu Ile Ala Pro Met Ala Glu Gly Ile Gln Ala Tyr Lys Glu Glu Tyr

50 55 60

Glu Gly Lys Lys Gly Arg Ala Pro Arg Ala Leu Ala Phe Leu Gln Cys

65 70 75 80

Val Glu Asn Glu Val Ala Ala Tyr Ile Thr Met Lys Val Val Met Asp

85 90 95

Met Leu Asn Thr Asp Ala Thr Leu Gln Ala Ile Ala Met Ser Val Ala

100 105 110

Glu Arg Ile Glu Asp Gln Val Arg Phe Ser Lys Leu Glu Gly His Ala

115 120 125

Ala Lys Tyr Phe Glu Lys Val Lys Lys Ser Leu Lys Ala Ser Arg Thr

130 135 140

Lys Ser Tyr Arg His Ala His Asn Val Ala Val Val Ala Glu Lys Ser

145 150 155 160

Val Ala Glu Lys Asp Ala Asp Phe Asp Arg Trp Glu Ala Trp Pro Lys

165 170 175

Glu Thr Gln Leu Gln Ile Gly Thr Thr Leu Leu Glu Ile Leu Glu Gly

180 185 190

Ser Val Phe Tyr Asn Gly Glu Pro Val Phe Met Arg Ala Met Arg Thr

195 200 205

Tyr Gly Gly Lys Thr Ile Tyr Tyr Leu Gln Thr Ser Glu Ser Val Gly

210 215 220

Gln Trp Ile Ser Ala Phe Lys Glu His Val Ala Gln Leu Ser Pro Ala

225 230 235 240

Tyr Ala Pro Cys Val Ile Pro Pro Arg Pro Trp Arg Thr Pro Phe Asn

245 250 255

Gly Gly Phe His Thr Glu Lys Val Ala Ser Arg Ile Arg Leu Val Lys

260 265 270

Gly Asn Arg Glu His Val Arg Lys Leu Thr Gln Lys Gln Met Pro Lys

275 280 285

Val Tyr Lys Ala Ile Asn Ala Leu Gln Asn Thr Gln Trp Gln Ile Asn

290 295 300

Lys Asp Val Leu Ala Val Ile Glu Glu Val Ile Arg Leu Asp Leu Gly

305 310 315 320

Tyr Gly Val Pro Ser Phe Lys Pro Leu Ile Asp Lys Glu Asn Lys Pro

325 330 335

Ala Asn Pro Val Pro Val Glu Phe Gln His Leu Arg Gly Arg Glu Leu

340 345 350

Lys Glu Met Leu Ser Pro Glu Gln Trp Gln Gln Phe Ile Asn Trp Lys

355 360 365

Gly Glu Cys Ala Arg Leu Tyr Thr Ala Glu Thr Lys Arg Gly Ser Lys

370 375 380

Ser Ala Ala Val Val Arg Met Val Gly Gln Ala Arg Lys Tyr Ser Ala

385 390 395 400

Phe Glu Ser Ile Tyr Phe Val Tyr Ala Met Asp Ser Arg Ser Arg Val

405 410 415

Tyr Val Gln Ser Ser Thr Leu Ser Pro Gln Ser Asn Asp Leu Gly Lys

420 425 430

Ala Leu Leu Arg Phe Thr Glu Gly Arg Pro Val Asn Gly Val Glu Ala

435 440 445

Leu Lys Trp Phe Cys Ile Asn Gly Ala Asn Leu Trp Gly Trp Asp Lys

450 455 460

Lys Thr Phe Asp Val Arg Val Ser Asn Val Leu Asp Glu Glu Phe Gln

465 470 475 480

Asp Met Cys Arg Asp Ile Ala Ala Asp Pro Leu Thr Phe Thr Gln Trp

485 490 495

Ala Lys Ala Asp Ala Pro Tyr Glu Phe Leu Ala Trp Cys Phe Glu Tyr

500 505 510

Ala Gln Tyr Leu Asp Leu Val Asp Glu Gly Arg Ala Asp Glu Phe Arg

515 520 525

Thr His Leu Pro Val His Gln Asp Gly Ser Cys Ser Gly Ile Gln His

530 535 540

Tyr Ser Ala Met Leu Arg Asp Glu Val Gly Ala Lys Ala Val Asn Leu

545 550 555 560

Lys Pro Ser Asp Ala Pro Gln Asp Ile Tyr Gly Ala Val Ala Gln Val

565 570 575

Val Ile Lys Lys Asn Ala Leu Tyr Met Asp Ala Asp Asp Ala Thr Thr

580 585 590

Phe Thr Ser Gly Ser Val Thr Leu Ser Gly Thr Glu Leu Arg Ala Met

595 600 605

Ala Ser Ala Trp Asp Ser Ile Gly Ile Thr Arg Ser Leu Thr Lys Lys

610 615 620

Pro Val Met Thr Leu Pro Tyr Gly Ser Thr Arg Leu Thr Cys Arg Glu

625 630 635 640

Ser Val Ile Asp Tyr Ile Val Asp Leu Glu Glu Lys Glu Ala Gln Lys

645 650 655

Ala Val Ala Glu Gly Arg Thr Ala Asn Lys Val His Pro Phe Glu Asp

660 665 670

Asp Arg Gln Asp Tyr Leu Thr Pro Gly Ala Ala Tyr Asn Tyr Met Thr

675 680 685

Ala Leu Ile Trp Pro Ser Ile Ser Glu Val Val Lys Ala Pro Ile Val

690 695 700

Ala Met Lys Met Ile Arg Gln Leu Ala Arg Phe Ala Ala Lys Arg Asn

705 710 715 720

Glu Gly Leu Met Tyr Thr Leu Pro Thr Gly Phe Ile Leu Glu Gln Lys

725 730 735

Ile Met Ala Thr Glu Met Leu Arg Val Arg Thr Cys Leu Met Gly Asp

740 745 750

Ile Lys Met Ser Leu Gln Val Glu Thr Asp Ile Val Asp Glu Ala Ala

755 760 765

Met Met Gly Ala Ala Ala Pro Asn Phe Val His Gly His Asp Ala Ser

770 775 780

His Leu Ile Leu Thr Val Cys Glu Leu Val Asp Lys Gly Val Thr Ser

785 790 795 800

Ile Ala Val Ile His Asp Ser Phe Gly Thr His Ala Asp Asn Thr Leu

805 810 815

Thr Leu Arg Val Ala Leu Lys Gly Gln Met Val Ala Met Tyr Ile Asp

820 825 830

Gly Asn Ala Leu Gln Lys Leu Leu Glu Glu His Glu Val Arg Trp Met

835 840 845

Val Asp Thr Gly Ile Glu Val Pro Glu Gln Gly Glu Phe Asp Leu Asn

850 855 860

Glu Ile Met Asp Ser Glu Tyr Val Phe Ala

865 870

<210> 2

<211> 1440

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多核苷酸"

<400> 2

atggccactg gaagccggac aagcctgctg ctggcctttg gcctgctgtg tctgccttgg 60

ctgcaggagg gaagcgcatt tccaacaatt cctctgagcg aagtgcagct ggtggagtct 120

ggaggaggcc tcgtgcagcc aggcagatcc ctgaggctct cctgcgccgc tagcagattc 180

actttcgacg actacgccat gcactgggtg cggcaggcac ctggcaaggg actggaatgg 240

gtgtccggca tttcttggaa cagcgggcgg atcgggtacg cggacagcgt gaaaggaagg 300

tttacaatct cccgggacaa tgctgagaac tccctgttcc tgcagatgaa cggcctgaga 360

gctgaagaca cagcactgta ctattgcgca aaaggccgcg actcctttga catctggggg 420

cagggcacaa tggtgaccgt gtctagcgcc tccacaaaag gacctagcgt tttcccactg 480

gctccatcta gcaagtctac atccgggggc accgccgctc tgggctgtct ggtgaaggat 540

tacttccctg agcccgtcac tgtcagctgg aactccggag ctctgacctc aggcgtgcac 600

acttttcccg ctgtgctgca gagctctggc ctgtacagcc tgagcagcgt tgtgaccgtg 660

cctagctcat ccctcggcac ccagacctat atctgcaacg tcaaccacaa accttccaac 720

accaaagtgg acaagaaagt ggaacctaag tcctgcgata agactcatac ttgccctcct 780

tgtccagcac cagagctgct gggggggcca agcgtgtttc tctttccacc taagcctaaa 840

gacaccctga tgatctccag gaccccagag gtgacatgtg tggtggtgga cgtgtctcat 900

gaggaccctg aggtgaaatt caattggtat gtggacggcg ttgaggttca caacgcaaag 960

accaagccaa gggaggagca gtataatagc acctatcgcg tggtgtccgt cctgacagtg 1020

ctgcaccagg actggctgaa cgggaaggag tataagtgta aagtgagcaa caaggcactg 1080

cctgctccta tcgagaagac tatcagcaaa gctaaaggac agccaagaga gccccaggtg 1140

acctacctgc caccttctcg ggacgaactg accaaaaacc aggtgagcct gacttgcctg 1200

gtgaagggct tttatccctc tgatattgca gtggagtggg agagtaacgg gcagcccgag 1260

aacaactaca agactactcc accagttctg gattccgacg gcagcttctt cctgtatagc 1320

aaactgacag tggacaagtc ccggtggcag cagggcaacg tttttagctg cagcgtgatg 1380

catgaggctc tgcacaacca ttacacacag aagtctctgt ctctgtcccc cggaaagtga 1440

<210> 3

<211> 1440

<212> DNA

<213> 人工序列

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<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多核苷酸"

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atggccaccg ggtctcggac aagcctcctg ctcgcattcg ggctcctgtg tctgccttgg 60

ctgcaagaag gatccgcatt tcccaccatt ccactgtctg aggtgcagct ggtcgagtct 120

ggaggaggac tggtgcagcc tggcaggtct ctgaggctgt cttgcgctgc cagccggttt 180

acctttgatg attacgccat gcactgggtg aggcaggctc ccggcaaagg actggaatgg 240

gtgtccggaa tttcctggaa tagtggcagg atcggctatg ccgactctgt caaaggccgg 300

tttacaatct cccgcgacaa cgctgagaac tccctgttcc tgcagatgaa cggcctgaga 360

gctgaagata ccgccctgta ctattgcgcc aaggggcgcg acagcttcga catttggggc 420

cagggaacca tggtgactgt gagcagcgca tccacaaaag ggccctccgt gttccccctg 480

gcaccttcca gtaaatccac ttctggcgga acagcagctc tcggctgtct ggtgaaggat 540

tatttccccg agccagtgac agtgtcttgg aattctggcg cactcaccag tggagtccac 600

acttttccag ccgtgctgca gagctccgga ctgtattccc tgagctccgt cgtgacagtg 660

ccatcctctt ctctgggaac tcagacatat atttgcaacg ttaatcataa gccttctaac 720

accaaggtgg ataagaaagt ggagcccaaa tcctgcgaca agacacacac ttgcccacca 780

tgccctgccc ctgaactgct gggaggacca agcgtgtttc tcttccctcc taagcctaag 840

gataccctga tgatctctag gaccccagag gtgacatgcg tggtggttga cgtctcccat 900

gaagatcctg aagtgaaatt taactggtac gtggacggag tggaagtgca caatgcaaag 960

accaaacccc gcgaggaaca gtacaactcc acttaccggg tggtttccgt gctgacagtg 1020

ctgcaccagg attggctgaa cggaaaagag tataagtgca aagtgagcaa taaggccctg 1080

cccgccccta ttgagaagac catctctaag gctaaaggcc agcctcgcga accccaggtt 1140

acctatctgc ctccaagcag agatgagctc accaaaaacc aggtgtctct gacctgtctg 1200

gtgaaaggct tctatccaag cgatatcgcc gtggagtggg agtccaacgg acagccagaa 1260

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<213> 人工序列

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多核苷酸"

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atggccactg gaagcagaac ctccctgctg ctggcattcg gactgctgtg cctgccatgg 60

ctgcaggagg gatccgcttt cccaaccatc cccctcagcg aggtgcagct cgttgaatct 120

ggaggaggac tggtgcaacc aggacgctcc ctgagactgt cttgtgctgc ttccaggttt 180

acttttgacg attatgctat gcactgggtg agacaggccc caggaaaagg actggaatgg 240

gtgtctggaa tttcttggaa cagcggacgc attggctacg ccgactctgt gaagggaagg 300

tttactatct ccagggataa cgcggaaaac tccctcttcc tccagatgaa cggcctgagg 360

gcagaggaca ccgctctgta ctactgcgcc aaaggaagag atagcttcga tatctgggga 420

caggggacca tggtgacagt ttccagcgct agcaccaagg gccccagcgt gttcccactg 480

gccccatcct ccaagagcac ttctggcggg actgctgcac tgggctgcct ggtgaaggat 540

tatttccctg agcctgtgac agtgagctgg aactcaggag cactgacttc cggggtgcat 600

acattccccg ctgtgctgca gtcttctggg ctgtattccc tcagcagcgt ggtgaccgtc 660

ccttcctcaa gcctgggaac ccagacatat atttgtaacg tgaaccacaa gccaagcaat 720

acaaaggtgg ataagaaggt ggagcctaag tcctgtgaca aaacacacac atgtccccca 780

tgtccagctc ctgaactgct tggcggacca tccgtcttcc tgtttccacc caaaccaaag 840

gatacactga tgatcagccg gacaccagag gtgacttgcg tcgtcgtgga cgtcagccat 900

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accaaaccca gggaggagca gtacaactcc acttatcgcg tggtttctgt gctgacagtc 1020

ctgcaccagg attggctgaa cgggaaggag tacaaatgca aagtgtccaa taaggccctg 1080

cccgccccaa tcgagaaaac tatttcaaag gccaaaggac agcccagaga gccacaggtg 1140

acctacctcc ctccttccag ggacgagctc actaagaatc aggtgtctct gacttgcctg 1200

gtgaaaggct tttatccttc tgacatcgca gtggagtggg agagcaatgg ccagcccgag 1260

aacaattata aaacaacacc acccgtcctg gactctgatg gcagcttttt cctgtatagc 1320

aagctgacag tggacaaatc acgctggcag caggggaatg tcttcagctg tagcgtgatg 1380

cacgaagctc tgcacaatca ctatacacag aagtccctgt ccctgagccc aggaaaataa 1440

<210> 5

<211> 1440

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多核苷酸"

<400> 5

atggctaccg gcagcaggac tagcctgctg ctggctttcg gcctgctgtg tctgccttgg 60

ctgcaagagg ggtccgcttt ccctactatc cctctgtccg aagtgcagct ggtcgagagc 120

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gcagaagaca ctgcactgta ttattgtgct aaggggagag actctttcga catctggggc 420

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gcaccaagca gcaaatccac atccgggggg accgcagctc tcggatgtct ggtgaaagac 540

tatttccctg agcccgtcac agtgtcttgg aattccggcg ccctgacaag cggcgtgcac 600

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ccttctagca gtctgggcac acagacttat atttgcaacg tgaatcacaa gccatctaac 720

accaaggtgg ataagaaggt ggaaccaaag tcctgtgata aaacccatac ctgtcctcca 780

tgtccagctc ctgaactcct ggggggaccc tctgtgttcc tgttcccacc taagcctaaa 840

gacactctga tgatttccag aactcctgag gtgacttgcg tggtggtgga tgtgtcccat 900

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acctatctgc ctccaagccg ggacgaactg acaaagaatc aggtcagcct gacttgcctg 1200

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多核苷酸"

<400> 6

atggccactg gaagccggac aagcctgctg ctggcctttg gcctgctgtg tctgccttgg 60

ctgcaggagg gaagcgcatt tccaacaatt cctctgagcg acattcagat gacacagagc 120

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<210> 7

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多核苷酸"

<400> 7

atggctacag ggagccgcac tagcctgctg ctggcttttg gcctgctgtg cctgccatgg 60

ctgcaagagg ggtccgcctt tcctaccatc cccctgtccg atattcagat gacccagtcc 120

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多核苷酸"

<400> 8

atggcaactg gatcccggac ctctctgctg ctggccttcg gactgctgtg cctgccatgg 60

ctgcaggagg ggagcgcttt tcctactatc cccctgtctg acatccagat gactcagagc 120

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多核苷酸"

<400> 9

atggcaactg gctccaggac tagcctgctg ctggcatttg gcctcctgtg tctgccatgg 60

ctgcaggagg gctccgcctt cccaacaatt ccactgtccg acatccagat gacacagtcc 120

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<210> 10

<211> 1455

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多核苷酸"

<400> 10

atggccacag gctctaggac atccctgctg ctggccttcg gactgctgtg tctgccttgg 60

ctgcaggagg gatctgcatt cccaactatc cctctgtccg aggttcagct ggtggaaagc 120

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多核苷酸"

<400> 11

atggctaccg ggtccaggac atctctgctg ctggccttcg gactgctgtg cctgccatgg 60

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ttcactatta gcagggacaa ttctaaaaac accctgtacc tgcagatgaa cagcttaaga 360

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多核苷酸"

<400> 12

atggctacag gatcccggac tagcctgctg ctggccttcg gcctgttgtg cctgccttgg 60

ctgcaggagg ggtctgcctt tccaacaatc ccactgtctg aggtccagct ggtggagtcc 120

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多核苷酸"

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ggccctccat gtcctccttg tccagcccct gaattcctgg gcggaccctc cgttttcctg 840

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gtcgtggatg tctcccagga ggatccagaa gtccagttca attggtacgt ggatggagtg 960

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gtcagcaata agggcctgcc atcctccatt gagaaaacca tctccaaggc aaaggggcag 1140

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gtgagcctca cttgcctggt gaagggattc taccctagcg acattgccgt ggagtgggaa 1260

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

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多核苷酸"

<400> 14

atggccacag gctctaggac atccctgctg ctggccttcg gactgctgtg tctgccttgg 60

ctgcaggagg gatctgcatt cccaactatc cctctgtccg atattgtgat gacccagagc 120

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gaacagctga agtctgggac cgctagcgtc gtgtgcctgc tgaacaattt ttaccccagg 540

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<213> 人工序列

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<221> 来源

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多核苷酸"

<400> 15

atggctacag gcagcagaac cagcctgctg ctggcatttg gcctgctgtg cctgccttgg 60

ctgcaggagg ggagcgcttt tcccacaatt cctctgtctg atatcgtcat gacccaatct 120

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agcctgctgt acagcatcgg ctataactac ctggattggt atctgcagaa aagcgggcag 240

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aaggcagact acgaaaaaca caaggtctac gcctgcgaag tgacccacca gggactgtct 720

agccctgtga ctaagtcttt taataggggg gagtgttag 759

<210> 16

<211> 759

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多核苷酸"

<400> 16

atggctactg gcagcagaac cagcctgctg ctggcattcg ggctgctctg cctgccatgg 60

ctgcaggagg gatccgcctt cccaactatc cccctgagcg atatcgtgat gacccagtct 120

cccctgagcc tgccagttac acccggcgaa cctgctagca tcagctgcag atcctcccag 180

tctctcctgt actccatcgg gtacaattat ctggattggt atctgcagaa gtctggccaa 240

tccccccagc tgctgatcta cctgggctcc aacagagcaa gcggcgtgcc cgatagattc 300

agcggcagcg ggagcggcac tgattttact ctgaagatca gcagggtgga ggccgaagat 360

gtgggatttt actactgcat gcaagcactg cagactcctt acacattcgg ccagggaact 420

aagctggaga tcaaaagaac cgtggcagct ccaagcgtct tcattttccc accttctgac 480

gagcagctga agtccggcac agcttccgtc gtgtgcctcc tgaacaactt ctaccccagg 540

gaggcaaagg tgcaatggaa agtggacaac gctctgcaga gcggaaacag tcaggagtcc 600

gtgaccgagc aggacagcaa agactccact tacagcctga gctctactct gaccctgagc 660

aaagctgact acgagaagca taaggtgtat gcttgcgagg tcacccacca gggcctctct 720

tctcccgtga ccaagagctt caacagaggc gagtgctga 759

<210> 17

<211> 759

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多核苷酸"

<400> 17

atggcaactg gaagcaggac ctccctgctc ctggctttcg gcctgctctg tctgccatgg 60

ctgcaagaag gatctgcctt tcctacaatt ccactgtccg acatcgtgat gacacagtcc 120

cccctgtctc tgcctgtcac cccaggcgaa ccagcctcta tttcttgtcg gtcctctcag 180

tccctgctgt atagcatcgg atataattat ctggactggt acctgcaaaa atccggccag 240

tctcctcagc tgctgatcta tctgggctcc aaccgggcta gcggagtccc agaccggttt 300

tccgggtctg gcagtgggac agattttaca ctgaaaattt cccgggtgga ggctgaggac 360

gtgggatttt actactgtat gcaggccctg caaaccccat atactttcgg acagggaaca 420

aagctggaga tcaaaagaac cgtggccgcc cccagcgttt tcatcttccc accaagcgac 480

gagcagctca aatctgggac cgctagcgtg gtctgtctgc tgaataactt ctacccaagg 540

gaagcaaagg tgcagtggaa ggtcgacaac gcactgcaga gcgggaactc ccaggagagc 600

gtgactgaac aggacagcaa ggacagcacc tatagcctca gcagcactct gaccctgtct 660

aaagctgatt acgaaaaaca caaggtgtat gcttgtgaag tgactcacca gggcctgtct 720

tcccctgtta caaagtcctt caatagagga gaatgttaa 759

<210> 18

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多肽"

<400> 18

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Arg Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Ser Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Gly Arg Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Thr Tyr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 19

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多肽"

<400> 19

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 20

<211> 451

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多肽"

<400> 20

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu

100 105 110

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr

115 120 125

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser

130 135 140

Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu

145 150 155 160

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His

165 170 175

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser

180 185 190

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys

195 200 205

Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu

210 215 220

Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Gly

450

<210> 21

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多肽"

<400> 21

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

20 25 30

Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 22

<211> 479

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多肽"

<400> 22

Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu

1 5 10 15

Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Phe Pro Thr Ile Pro Leu

20 25 30

Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly

35 40 45

Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Thr Phe Asp Asp

50 55 60

Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

65 70 75 80

Val Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Arg Ile Gly Tyr Ala Asp Ser

85 90 95

Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Ser Leu

100 105 110

Phe Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr

115 120 125

Cys Ala Lys Gly Arg Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met

130 135 140

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

145 150 155 160

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

165 170 175

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

180 185 190

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

195 200 205

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

210 215 220

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

225 230 235 240

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

245 250 255

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

260 265 270

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

275 280 285

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

290 295 300

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

305 310 315 320

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

325 330 335

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

340 345 350

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

355 360 365

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Thr Tyr Leu Pro

370 375 380

Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

385 390 395 400

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

405 410 415

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

420 425 430

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

435 440 445

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

450 455 460

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

465 470 475

<210> 23

<211> 247

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多肽"

<400> 23

Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu

1 5 10 15

Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Phe Pro Thr Ile Pro Leu

20 25 30

Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val

35 40 45

Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser

50 55 60

Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu

65 70 75 80

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser

85 90 95

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln

100 105 110

Pro Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro

115 120 125

Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

130 135 140

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

145 150 155 160

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

165 170 175

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

180 185 190

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

195 200 205

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

210 215 220

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

225 230 235 240

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

245

<210> 24

<211> 484

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多肽"

<400> 24

Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu

1 5 10 15

Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Phe Pro Thr Ile Pro Leu

20 25 30

Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly

35 40 45

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp

50 55 60

Tyr Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

65 70 75 80

Val Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

85 90 95

Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu

100 105 110

Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

115 120 125

Cys Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly

130 135 140

Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser

145 150 155 160

Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr

165 170 175

Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro

180 185 190

Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val

195 200 205

His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser

210 215 220

Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr

225 230 235 240

Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val

245 250 255

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe

260 265 270

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

275 280 285

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

290 295 300

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

305 310 315 320

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser

325 330 335

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

340 345 350

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

355 360 365

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

370 375 380

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

385 390 395 400

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

405 410 415

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

420 425 430

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

435 440 445

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

450 455 460

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

465 470 475 480

Leu Ser Leu Gly

<210> 25

<211> 252

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多肽"

<400> 25

Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu

1 5 10 15

Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Phe Pro Thr Ile Pro Leu

20 25 30

Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro

35 40 45

Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr

50 55 60

Ser Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln

65 70 75 80

Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val

85 90 95

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys

100 105 110

Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln

115 120 125

Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

130 135 140

Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp

145 150 155 160

Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn

165 170 175

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu

180 185 190

Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

195 200 205

Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

210 215 220

Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

225 230 235 240

Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

245 250

<210> 26

<211> 33

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多肽"

<400> 26

Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu

1 5 10 15

Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Phe Pro Thr Ile Pro Leu

20 25 30

Ser

<210> 27

<211> 140

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多核苷酸"

<400> 27

ggacagatcg cctggagacg ccatccacgc tgttttgacc tccatagaag acaccgggac 60

cgatccagcc tccgcggccg ggaacggtgc attggaacgc ggattccccg tgccaagagt 120

gactcaccgt ccttgacacg 140

<210> 28

<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

多核苷酸"

<400> 28

cgggtggcat ccctgtgacc cctccccagt gcctctcctg gccctggaag ttgccactcc 60

agtgcccacc agccttgtcc taataaaatt aagttgcatc 100

<210> 29

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成

6xHis标签"

<400> 29

His His His His His His

1 5

Claims

1.一种治疗受试者的免疫疾病的方法，所述方法包括：

向有需要的受试者施用编码抗体的重链和轻链的一种或多种mRNA，所述抗体结合选自IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-13、IL-25或IL-33的蛋白质靶标，并且其中所述一种或多种mRNA被包封在脂质纳米颗粒(LNP)中。

2.一种治疗受试者的免疫疾病的方法，所述方法包括：

向有需要的受试者施用编码抗体的重链和轻链的一种或多种mRNA，所述抗体结合选自IL-4受体(IL-4R，例如IL-4Rα)、IL-5受体(IL-5R)、IL-6受体(IL-6R)、IL-9受体(IL-9R)、IL-13受体(IL-13R)、IL-25受体(IL-25R)或IL-33受体(IL-33R，例如ST2、IL1RL1)的蛋白质靶标，并且其中所述一种或多种mRNA被包封在脂质纳米颗粒(LNP)中。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述抗体抑制选自IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-13、IL-25或IL-33、IL-4受体(IL-4R，例如IL-4Rα)、IL-5受体(IL-5R)、IL-6受体(IL-6R)、IL-9受体(IL-9R)、IL-13受体(IL-13R)、IL-25受体(IL-25R)或IL-33受体(IL-33R，例如ST2，也称为IL1RL1)的蛋白质靶标，并且其中所述一种或多种mRNA被包封在脂质纳米颗粒(LNP)中。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述抗体是抗IL6R抗体或抗IL4Rα抗体。

5.根据权利要求1-4所述的方法，其中所述免疫疾病选自哮喘、慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、系统性硬化病-间质性肺病(SSc-ILD)、特发性肺纤维化IPF、结节病或过敏反应。

6.根据权利要求1-4所述的方法，其中所述免疫疾病选自特应性皮炎、伴有嗜酸性粒细胞性表型或伴有口服皮质类固醇依赖性哮喘的哮喘、慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉、小儿特应性皮炎、小儿哮喘、嗜酸细胞性食管炎、COPD、结节性痒疹、慢性自发性荨麻疹和大疱性类天疱疮、草花粉过敏和花生过敏。

7.根据权利要求1-4所述的方法，其中所述免疫疾病选自类风湿性关节炎、多关节幼年型特发性关节炎、全身型幼年关节炎或重度Covid-19疾病。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述施用是通过雾化、气管内递送或吸入进行的。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述施用导致将所述mRNA施用至肺组织。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述施用导致抗体表达至少约48小时、72小时、96小时或120小时。

11.根据权利要求9所述的方法，其中发生所述mRNA的低或无全身性暴露。

12.根据权利要求1-4所述的方法，其中所述免疫疾病选自自身免疫性皮炎或特应性皮炎。

13.根据权利要求1-12所述的方法，其中所述施用是静脉内进行的。

14.根据权利要求1-12所述的方法，其中所述施用是腹膜内进行的。

15.根据权利要求13或14所述的方法，其中所述抗体被全身表达。

16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述LNP包含阳离子脂质、非阳离子脂质和经PEG修饰的脂质中的一种或多种。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述LNP进一步包含胆固醇。

18.根据权利要求16所述的方法，其中所述LNP的一种或多种阳离子脂质与一种或多种非阳离子脂质与一种或多种经PEG修饰的脂质的摩尔比分别在约30-60:25-35:1-15之间。

19.根据权利要求16-18中任一项所述的方法，其中所述非阳离子脂质选自1,2-二芥酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DEPE)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(POPC)、棕榈酰油酰-磷脂酰乙醇胺(POPE)、二油酰-磷脂酰乙醇胺4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-1-甲酸酯(DOPE-mal)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰磷酸乙醇胺(DMPE)、二硬脂酰-磷脂酰-乙醇胺(DSPE)、16-O-单甲基PE、16-O-二甲基PE、18-1-反式PE、或1-硬脂酰-2-油酰-磷脂酰乙醇胺(SOPE)。

20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述LNP包含DMG-PEG-2000、Guan-SS-Chol和DOPE。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述DMG-PEG-2000、Guan-SS-Chol和DOPE以约5:60:35的比率存在。

22.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述重链和所述轻链被编码于单个mRNA中。

23.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述重链和所述轻链被编码于单独的mRNA中。

24.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述LNP具有不大于150nm的大小。

25.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述LNP具有不大于100nm的大小。

26.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述LNP具有不大于75nm的大小。

27.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述LNP具有约60nm的大小。

28.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种mRNA被修饰以增强稳定性。

29.根据权利要求26所述的方法，其中所述一种或多种mRNA被修饰为包含修饰的核苷酸、帽结构、聚A尾、5'和/或3'非翻译区。

30.根据权利要求1-29中任一项所述的方法，其中所述一种或多种mRNA是未修饰的。

31.一种组合物，其包含编码抗体的重链和轻链的一种或多种mRNA，所述抗体结合选自IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-13、IL-25或IL-33的蛋白质靶标，并且其中所述一种或多种mRNA被包封在脂质纳米颗粒(LNP)中。

32.一种组合物，其包含编码抗体的重链和轻链的一种或多种mRNA，所述抗体结合选自IL-4受体(IL-4R，例如IL-4Rα)、IL-5受体(IL-5R)、IL-6受体(IL-6R)、IL-9受体(IL-9R)、IL-13受体(IL-13R)、IL-25受体(IL-25R)或IL-33受体(IL-33R，例如ST2、IL1RL1)的蛋白质靶标，并且其中所述一种或多种mRNA被包封在脂质纳米颗粒(LNP)中。

33.根据权利要求31或32所述的组合物，其中所述抗体抑制选自IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-13、IL-25或IL-33、IL-4受体(IL-4R，例如IL-4Rα)、IL-5受体(IL-5R)、IL-6受体(IL-6R)、IL-9受体(IL-9R)、IL-13受体(IL-13R)、IL-25受体(IL-25R)或IL-33受体(IL-33R，例如ST2，也称为IL1RL1)的蛋白质靶标，并且其中所述一种或多种mRNA被包封在脂质纳米颗粒(LNP)中。

34.根据权利要求31-33所述的组合物，其中所述抗体是抗IL6R抗体或抗IL4Rα抗体。

35.根据权利要求31-34中任一项所述的组合物，其中所述LNP包含阳离子脂质、非阳离子脂质和经PEG修饰的脂质中的一种或多种。

36.根据权利要求35所述的组合物，其中所述LNP进一步包含胆固醇。

37.根据权利要求36所述的组合物，其中所述LNP的一种或多种阳离子脂质与一种或多种非阳离子脂质与一种或多种经PEG修饰的脂质的摩尔比分别在约30-60:25-35:1-15之间。

38.根据权利要求35-37所述的组合物，其中所述非阳离子脂质选自1,2-二芥酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DEPE)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(POPC)、棕榈酰油酰-磷脂酰乙醇胺(POPE)、二油酰-磷脂酰乙醇胺4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-1-甲酸酯(DOPE-mal)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰磷酸乙醇胺(DMPE)、二硬脂酰-磷脂酰-乙醇胺(DSPE)、16-O-单甲基PE、16-O-二甲基PE、18-1-反式PE、或1-硬脂酰-2-油酰-磷脂酰乙醇胺(SOPE)。

39.根据权利要求31-38中任一项所述的组合物，其中所述LNP包含DMG-PEG-2000、Guan-SS-Chol和DOPE。

40.根据权利要求39所述的组合物，其中所述DMG-PEG-2000、Guan-SS-Chol和DOPE以约5:60:35的比率存在。

41.根据权利要求34所述的组合物，其中所述mRNA编码抗IL6R抗体重链，所述抗IL6R抗体重链包含与以下至少80％相同的序列：

EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASRFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAENSLFLQMNGLRAEDTALYYCAKGRDSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVTYLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO:18)。

42.根据权利要求41所述的组合物，其中所述mRNA编码抗IL6R抗体重链，所述抗IL6R抗体重链进一步包含与以下至少80％相同的分泌序列：

MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSAFPTIPLS(SEQ ID NO:26)。

43.根据权利要求41所述的组合物，其中所述mRNA编码抗IL6R抗体轻链，所述抗IL6R抗体轻链包含与以下至少80％相同的序列：

DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFASYYCQQANSFPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:19)。

44.根据权利要求41所述的组合物，其中所述mRNA编码抗IL6R抗体轻链，所述抗IL6R抗体轻链进一步包含与以下至少80％相同的分泌序列：

MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSAFPTIPLS(SEQ ID NO:26)。

45.根据权利要求42所述的组合物，其中编码所述抗IL6R抗体重链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与以下序列之一至少80％相同的序列：

(A)

(B)

(C)

(D)

46.根据权利要求44所述的组合物，其中编码所述抗IL6R抗体轻链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与以下序列之一至少80％相同的序列：

(A)

ATGGCCACTGGAAGCCGGACAAGCCTGCTGCTGGCCTTTGGCCTGCTGTGTCTGCCTTGGCTGCAGGAGGGAAGCGCATTTCCAACAATTCCTCTGAGCGACATTCAGATGACACAGAGCCCCAGCAGCGTGTCCGCATCAGTGGGAGACAGGGTGACTATCACATGTAGAGCTTCTCAAGGAATTAGCTCTTGGCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTATGGAGCTAGCTCTCTGGAGTCTGGGGTGCCATCTAGGTTCAGTGGCTCCGGCAGCGGAACAGACTTCACACTGACTATCAGCAGCCTGCAGCCTGAGGACTTTGCCAGCTACTACTGCCAGCAGGCAAATAGCTTTCCCTATACTTTCGGACAGGGCACCAAGCTGGAGATTAAGCGGACCGTTGCTGCTCCAAGCGTGTTCATCTTCCCACCTTCCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAATTTCTATCCCCGTGAAGCCAAAGTGCAGTGGAAGGTGGATAACGCTCTCCAGTCTGGCAATTCCCAGGAGAGCGTGACAGAGCAGGATTCTAAGGATTCTACCTACTCCCTGTCCAGCACACTGACCCTGAGCAAGGCCGATTACGAAAAACACAAAGTGTACGCCTGCGAAGTCACACACCAGGGGCTGAGCTCCCCAGTGACAAAGAGCTTTAATAGAGGGGAGTGCTGA(SEQ ID NO:6)；

(B)

ATGGCTACAGGGAGCCGCACTAGCCTGCTGCTGGCTTTTGGCCTGCTGTGCCTGCCATGGCTGCAAGAGGGGTCCGCCTTTCCTACCATCCCCCTGTCCGATATTCAGATGACCCAGTCCCCTAGCAGCGTGTCTGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACTATCACCTGTAGGGCCAGCCAGGGCATTTCTAGCTGGCTGGCTTGGTACCAGCAGAAGCCAGGAAAGGCTCCCAAACTGCTGATCTACGGGGCATCCTCTCTGGAGTCCGGAGTGCCAAGCAGATTCTCTGGGAGCGGCAGCGGGACCGATTTCACACTGACCATTAGCAGCCTGCAGCCAGAAGACTTCGCCAGCTACTATTGTCAGCAGGCAAACTCTTTTCCTTATACCTTCGGGCAGGGGACTAAACTGGAAATCAAGCGGACAGTGGCTGCTCCAAGCGTGTTCATCTTCCCACCTTCCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACAGCTTCCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTTTATCCAAGGGAAGCTAAAGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCTCTGCAGTCTGGAAATAGCCAGGAATCCGTGACTGAGCAGGATAGCAAAGACAGCACATACAGCCTGTCTTCCACTCTGACCCTGAGCAAGGCAGACTACGAGAAACACAAAGTGTATGCCTGTGAGGTGACCCATCAGGGCCTGTCTAGCCCAGTGACCAAGTCCTTTAACAGAGGCGAATGTTGA(SEQ ID NO:7)；

(C)

ATGGCAACTGGATCCCGGACCTCTCTGCTGCTGGCCTTCGGACTGCTGTGCCTGCCATGGCTGCAGGAGGGGAGCGCTTTTCCTACTATCCCCCTGTCTGACATCCAGATGACTCAGAGCCCAAGCTCTGTGTCCGCAAGCGTGGGGGACAGGGTGACAATCACTTGCAGGGCATCCCAGGGAATCTCCTCTTGGCTGGCATGGTACCAGCAGAAACCTGGAAAAGCCCCAAAACTGCTGATTTATGGCGCTTCCAGCCTCGAATCCGGAGTGCCATCCCGGTTTTCTGGCTCCGGCAGCGGGACAGATTTTACTCTGACCATCTCTAGCCTGCAGCCAGAGGATTTTGCCTCCTATTATTGCCAGCAGGCCAACAGCTTTCCTTATACCTTTGGACAGGGAACTAAGCTGGAGATCAAGAGGACAGTGGCTGCTCCTAGCGTGTTCATCTTCCCACCTTCTGACGAACAGCTGAAGTCTGGAACAGCCTCTGTGGTGTGCCTCCTCAACAACTTCTATCCCCGGGAGGCTAAGGTCCAGTGGAAAGTGGACAACGCCCTGCAGTCCGGAAACTCCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGATAGCACTTATTCCCTGTCCTCCACCCTGACTCTGTCCAAGGCCGACTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCCTGCGAAGTCACTCATCAGGGACTGAGCTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAATAGGGGAGAATGTTAG(SEQ ID NO:8)；或

(D)

ATGGCAACTGGCTCCAGGACTAGCCTGCTGCTGGCATTTGGCCTCCTGTGTCTGCCATGGCTGCAGGAGGGCTCCGCCTTCCCAACAATTCCACTGTCCGACATCCAGATGACACAGTCCCCTAGCAGCGTGAGCGCCTCCGTGGGAGATAGAGTGACAATTACCTGTCGCGCAAGCCAGGGGATCAGCAGCTGGCTGGCCTGGTATCAACAGAAACCTGGAAAAGCCCCCAAGCTCCTGATCTATGGCGCCAGCAGCCTGGAAAGCGGGGTTCCAAGCCGGTTTTCCGGGTCCGGCAGCGGAACTGACTTCACCCTGACAATTTCAAGCCTGCAGCCCGAGGATTTTGCAAGCTACTACTGTCAGCAGGCTAATAGCTTTCCTTACACATTCGGCCAGGGCACCAAGCTCGAAATTAAAAGAACTGTGGCTGCCCCATCCGTGTTTATCTTCCCACCCTCTGACGAACAGCTGAAGTCCGGGACAGCCTCTGTGGTGTGCCTGCTGAACAATTTTTACCCCAGGGAGGCTAAGGTCCAATGGAAGGTCGACAATGCTCTGCAGTCTGGAAACTCCCAGGAGTCTGTGACTGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTATAGCCTGTCTTCCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGATTACGAAAAGCACAAGGTGTATGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGACTGTCTAGCCCAGTGACTAAATCCTTTAATAGAGGCGAATGCTGA(SEQ ID NO:9)。

47.根据权利要求34所述的组合物，其中所述mRNA编码抗IL4Rα抗体重链，所述抗IL4Rα抗体重链包含与以下至少80％相同的序列：

48.根据权利要求47所述的组合物，其中所述mRNA编码抗IL4Rα抗体重链，所述抗IL4Rα抗体重链进一步包含与以下至少80％相同的分泌序列：

MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSAFPTIPLS(SEQ ID NO:26)。

49.根据权利要求34所述的组合物，其中所述mRNA编码抗IL4Rα抗体轻链，所述抗IL4Rα抗体轻链包含与以下至少80％相同的序列：

DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSIGYNYLDWYLQKSGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGFYYCMQALQTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQID NO:21)。

50.根据权利要求49所述的组合物，其中所述mRNA编码抗IL4Rα抗体轻链，所述抗IL4Rα抗体轻链进一步包含与以下至少80％相同的分泌序列：

MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSAFPTIPLS(SEQ ID NO:26)。

51.根据权利要求50所述的组合物，其中编码所述抗IL4Rα抗体重链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与以下序列之一至少80％相同的序列：

(A)

(B)

(C)

(D)

52.根据权利要求50所述的组合物，其中编码所述抗IL4Rα抗体轻链的mRNA是经密码子优化的，并且包含与以下序列之一至少80％相同的序列：

(A)

(B)

(C)

(D)

53.根据权利要求31-52中任一项所述的组合物，其中所述mRNA包含5’UTR和3’UTR序列。

54.根据权利要求53所述的组合物，其中所述5’UTR序列包含与以下具有至少80％同一性的序列：

GGACAGATCGCCTGGAGACGCCATCCACGCTGTTTTGACCTCCATAGAAGACACC GGGACCGATCCAGCCTCCGCGGCCGGGAACGGTGCATTGGAACGCGGATTCCCCG TGCCAAGAGTGACTCACCGTCCTTGACACG(SEQ IDNO:27)。

55.根据权利要求53或54中任一项所述的组合物，其中所述3’UTR序列包含与以下具有至少80％同一性的序列：

CGGGTGGCATCCCTGTGACCCCTCCCCAGTGCCTCTCCTGGCCCTGGAAGTTGCCA CTCCAGTGCCCACCAGCCTTGTCCTAATAAAATTAAGTTGCATC(SEQ ID NO:28)。