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CN116803995B - 一类氨基酰胺类脂质化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一类氨基酰胺类脂质化合物及其制备方法和应用 Download PDF

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CN116803995B CN202310546656.2A CN202310546656A CN116803995B CN 116803995 B CN116803995 B CN 116803995B CN 202310546656 A CN202310546656 A CN 202310546656A CN 116803995 B CN116803995 B CN 116803995B
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acceptable salt
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葛昆
张金超
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Hebei University
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Abstract

本发明涉及一类氨基酰胺类脂质化合物，化学式（I）所示的化合物、或其药学上可接受的盐、前药，

Description

一类氨基酰胺类脂质化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及酰胺类脂质化合物，尤其是一类可用于递送基因至细胞中的氨基酰胺类脂质化合物及其制备方法和用途。
背景技术
基因治疗是一类非常具有前景的治疗手段，其通过人工手段将具有特定遗传信息的基因输送到靶细胞，在靶细胞中通过抑制或表达目标蛋白，对由于基因缺陷造成的疾病进行调节和治疗。然而，裸露的核酸药物极易被血液中的核酸降解酶降解，达不到治疗的目的。另外，由于核酸带负电，细胞膜也带负电，难以直接进入细胞中。因此，为了使核酸药物高效的进入细胞并发挥效果，需要借助递送载体来实现。
脂质纳米颗粒(lipid nanoparticles，LNPs)由于其制备容易，运输储存方便，无免疫原性等优点，作为核酸药物递送载体，表现出巨大的应用潜力。脂质分子作为脂质纳米颗粒的核心成分，通常来说包括阳离子脂质分子和可离子化的脂质分子两大类。阳离子脂质虽然可高效的包覆核酸药物，但是由于阳离子脂质带正电荷，进入血液中表现出毒副作用，因此限制了其进一步的应用。可离子化的脂质分子，在血液环境(pH 7.4)中带电中性。在细胞内吞后，LNP/核酸药物会被运送至溶酶体囊泡中，LNP环境逐渐从中性变为酸性，此时可离子化的脂质分子被质子化，从电中性变为正电性，LNPs双分子层膜发生裂解，使包覆的核酸药物释放到细胞质中，进而发挥药效，此为核酸药物的溶酶体逃逸过程。现有的脂质分子普遍具有比较低的溶酶体逃逸效率，基因药物递送效率低下。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供一种可用于递送基因至细胞中的氨基酰胺类脂质化合物及其制备方法和用途。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种氨基酰胺类脂质化合物，或其药学上可接受的盐、前药，具有化学式(I)所示的结构：
其中，R1为含有仲胺基团或叔胺基团的直链烷烃，或为含有一个或多个杂原子的取代或未取代的4至10元杂环，所述杂原子独立地选自氮、硫或氧；
所述R2、R3和R4各自独立地选自取代或未取代的C4-C20烷基、C4-C20烯基、C4-C20酯基，取代的C4-C20烷基、C4-C20烯基、C4-C20酯基的取代基为C1-C6烃基。
作为优选，所述R1选自CN1、CN2、CN3、CN4、CN5、CN6、CN7、CN8、CN9、CN10、CN11、CN12、CN13、CN14、CN15、CN16、CN17、CN18中的一种；
所述R2、R3、R4各自独立地选自A5、A6、A7、A8、A9、A10、A11、A12、A13、A14、A15、A16、A17、A18、A19、A20、A21、A22中的一种；
所述CN1、CN2、CN3、CN4、CN5、CN6、CN7、CN8、CN9、CN10、CN11、CN12、CN13、CN14、CN15、CN16、CN17、CN18如下：
所述A5、A6、A7、A8、A9、A10、A11、A12、A13、A14、A15、A16、A17、A18、A19、A20、A21、A22如下：
A5：-(CH2)4CH3；A6：-(CH2)5CH3；A7：-(CH2)6CH3；A8：-(CH2)7CH3；
A9：-(CH2)8CH3；A10：-(CH2)9CH3；A11：-(CH2)10CH3；A12：-(CH2)11CH3；
A13：-(CH2)12CH3；A14：-(CH2)13CH3；A15：-(CH2)14CH3；A16：-(CH2)15CH3；
A17：-(CH2)16CH3；A18：-(CH2)17CH3；A19：-(CH2)18CH3；A20：-(CH2)19CH3；
更优选地，本发明所述氨基酰胺类脂质化合物选自如下化合物：
其中，R2、R3和R4各自独立地为
一种酰胺类脂质化合物或其药学上可接受的盐、前药的制备方法，包括如下制备步骤：
首先，将化合物R2-CHO溶于溶剂中，搅拌下加入化合物R3-NH2，加热反应，得到亚胺中间体R2-CH＝N-R3，再向亚胺中间体R2-CH＝N-R3溶液中依次加入化合物R4-COOH与R1-NC，搅拌反应，即得到化合物(I)，结构式如下：
其中，
所述R1是选自CN1、CN2、CN3、CN4、CN5、CN6、CN7、CN8、CN9、CN10、CN11、CN12、CN13、CN14、CN15、CN16、CN17、CN18中的一种；
所述R2、R3、R4各自独立地选自A5、A6、A7、A8、A9、A10、A11、A12、A13、A14、A15、A16、A17、A18、A19、A20、A21、A22中的一种；
所述CN1、CN2、CN3、CN4、CN5、CN6、CN7、CN8、CN9、CN10、CN11、CN12、CN13、CN14、CN15、CN16、CN17、CN18如下：
所述A5、A6、A7、A8、A9、A10、A11、A12、A13、A14、A15、A16、A17、A18、A19、A20、A21、A22如下：
A5：-(CH2)4CH3；A6：-(CH2)5CH3；A7：-(CH2)6CH3；A8：-(CH2)7CH3；
A9：-(CH2)8CH3；A10：-(CH2)9CH3；A11：-(CH2)10CH3；A12：-(CH2)11CH3；
A13：-(CH2)12CH3；A14：-(CH2)13CH3；A15：-(CH2)14CH3；A16：-(CH2)15CH3；
A17：-(CH2)16CH3；A18：-(CH2)17CH3；A19：-(CH2)18CH3；A20：-(CH2)19CH3；
本发明还提供一种前述任一一项所述的氨基酰胺类脂质化合物在制备脂质纳米颗粒中的用途。
具体地，所述脂质纳米颗粒的制备步骤如下：
将本发明中所述的氨基酰胺脂质化合物与胆固醇、磷脂以及聚乙二醇-脂质分子以一定比例混合溶解在无水乙醇中。再将混合溶液快速注入到3倍体积柠檬酸钠缓冲溶液中，搅拌1分钟，制成pre-LNP溶液。
优选地，所述氨基酰胺类脂质化合物选自以下代表性化合物：
表1本申请的代表性化合物
优选地，所述磷脂为DOPE，所述聚乙二醇-脂质分子为DMG-PEG2000。
优选地，所述氨基酰胺脂质化合物、胆固醇、磷脂以及聚乙二醇-脂质分子各自所占的比例为：氨基酰胺类脂质化合物：胆固醇：磷脂：聚乙二醇-脂质分子＝20-50％：30-50％：10-30％：0.5-5％。
更优选地，所述氨基酰胺脂质化合物、胆固醇、磷脂以及聚乙二醇-脂质分子各自所占的比例为：氨基酰胺类脂质化合物：胆固醇：磷脂：聚乙二醇-脂质分子＝30％：10％：45％：0.5％。
本发明还提供一种前述任一一项所述的氨基酰胺类脂质化合物或其药学上可接受的盐在制备用于基因治疗、基因疫苗接种、反义治疗、干扰RNA或核酸转移的药物中的用途。
其中，所述核酸为RNA或DNA。
优选的，所述核酸为反义寡核苷酸；所述RNA为mRNA、rRNA、miRNA、tRNA、siRNA、snRNA中的任意一种；所述DNA为质粒。
上述的“取代”为任选的取代，即与原子或基团连接的一个或多个氢原子独立的未被取代，或被一个或多个取代基取代，取代基独立地选自：-Cl、-Br、-I、-OH、-SH、-CN、C1-C6烷基，C2-C6烯基、C2-C6炔基、环烷基(优选C3-C8环烷基)、芳基、酰基、烷氧基、杂环基(优选3-8元杂环基)、杂芳基、杂芳基C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-O(C1-C6)烷基、-O(C2-C6)烯基、C1-C6烷基-OH、C1-C6烷基-SH、-NH2、C1-C6烷基-NH2、-N(C1-C6烷基)2、-NH(C1-C6烷基)、-NO2、-COOH、-CO-O-(C1-C6烷基)、-CO(C1-C6烷基)、-CO(C1-C6卤代烷基)、-CO-O-(C1-C6卤代烷基)、-O-CO(C1-C6烷基)、-O-CO(C1-C6卤代烷基)、-CO-NH-(C1-C6烷基)、-CO-N(C1-C6烷基)-(C1-C6烷基)、-NH-CO-(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)-CO-(C1-C6烷基)、-S(O)2-C1-C6烷基、-S(O)-C1-C6烷基、-S(O)2-C1-C6卤代烷基、-S(O)2-NH2、-S(O)2-NH(C1-C6烷基)、-NH-S(O)2(C1-C6烷基)、-NH-S(O)2(C1-C6卤代烷基)。当一个原子或基团被多个取代基取代时，多个取代基可以相同或不同。
其中的“烃基”是指脂肪烃失去一个氢原子后剩余的基团，包括直链的或支链的、饱和的或不饱和的烃基，烃基包括烷基、烯基和炔基。
其中的“酰基”是指烃基-羰基，优选所述酰基是C4-C18酰基。
其中的“烷氧基”是指烷基-氧基，优选所述的烷氧基是C1-C18烷氧基。
其中的“杂环”是指包含选自N、O、S等杂原子的饱和或不饱和的环状基团，所述杂环可以任选被一个或多个取代基取代。
本发明的有益效果：
本发明提供了一种新型的可离子化脂质分子，所述氨基酰胺类脂质化合物以生物体内常见到的酰胺键来构建脂质分子的骨架，酰胺键可以通过人体内酰胺酶降解，使得脂质分子毒副作用较小。该氨基酰胺类脂质化合物含有长链的非极性基团以及可离子化氨基部分，不但具有疏水性特征，而且具有亲水性特征，能够有效地将核酸递送至细胞的细胞质中。尤其因所述氨基酰胺类脂质化合物同时具有三个疏水尾，增加了其在溶酶体中的逃逸能力，显著增强了脂质纳米颗粒的递送效率。
此外，与传统脂质分子采用多步合成相比，本申请所述氨基酰胺类脂质化合物的合成采用“一锅法”制备，简化了工艺操作，避免了物料转移和分离提纯过程中杂质的带入和操作误差，大大提高了生产效率，合成得到的氨基酰胺类脂质化合物生物相容性良好，能够实现多种药物安全、高效的胞内递送。
附图说明
图1为实施例1化合物Lp1的1H-NMR图谱。
图2为实施例2化合物Lp2的1H-NMR图谱。
图3为实施例3化合物Lp3的1H-NMR图谱。
图4为实施例4化合物Lp4的1H-NMR图谱。
具体实施方式
为了更清楚的说明本发明实施例的目的、技术方案和优点，下面将结合附图及实施例对本发明作进一步说明，进行清楚、完整的描述。所描述的实施例是本发明的部分实施例，而不是全部实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性的前提下所获得的所有其他实施例，也都属于本发明的保护范围。
实施例1化合物Lp1的合成路线
取4.2mmol月桂醛溶于5mL的无水甲醇，搅拌下加入4.2mmoL的十胺，加热至50℃反应5h，得到亚胺。分别称取4.2mmol的软脂酸和异腈各自溶于5mL无水甲醇，并依次加入到烧瓶中，25℃反应30h，通过薄层色谱分析检测反应进度。待反应结束后，将粗产品进行柱层析分离，淋洗剂为二氯甲烷/甲醇＝20/1，得黄色油状物，产率13.8％，并进行质谱，核磁分析。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ6.00(s,1H),3.72(t,J＝7.1Hz,1H),3.16(t,J＝5.1Hz,3H),2.61(t,J＝4.9Hz,3H),2.51(s,2H),2.38(s,3H),1.64(p,J＝7.4Hz,2H),1.46(dp,J＝13.7,6.4Hz,2H),1.27(d,J＝5.6Hz,59H),0.90(t,J＝6.7Hz,9H)(图1)。ESI-MS(m/z):[M+H]+calcd.for C46H90N4O3,747.7；found,747.7。
实施例2化合物Lp2的合成路线
取4.2mmol月桂醛溶于5mL的无水甲醇，搅拌下加入4.2mmoL的十二胺，加热至50℃反应5h，得到亚胺。分别称取4.2mmol的硬脂酸和异腈各自溶于5mL无水甲醇，并依次加入到烧瓶中，25℃反应30h，通过薄层色谱分析检测反应进度。待反应结束后，将粗产品进行柱层析分离，淋洗剂为二氯甲烷/甲醇＝20/1，得黄色油状物，产率15.1％，并进行质谱，核磁分析。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ5.99(s,1H),3.69(t,J＝7.1Hz,1H),3.14(t,J＝5.0Hz,4H),2.57(t,J＝5.1Hz,4H),2.50(t,J＝7.3Hz,2H),2.37(s,3H),1.75(d,J＝7.5Hz,2H),1.44(dh,J＝11.5,6.0,5.4Hz,4H),1.26(d,J＝5.5Hz,64H),0.90(t,J＝6.7Hz,9H)(图2)。ESI-MS(m/z):[M+H]+calcd.for C50H98N4O3,803.7；found,803.7。
实施例3化合物Lp3的合成
取4.2mmol月桂醛溶于5mL的无水甲醇，搅拌下加入4.2mmoL的十二胺，加热至50℃反应5h，得到亚胺。分别称取4.2mmol的十二酸和异腈各自溶于5mL无水甲醇，并依次加入到烧瓶中，25℃反应30h，通过薄层色谱分析检测反应进度。待反应结束后，将粗产品进行柱层析分离，淋洗剂为乙酸乙酯/甲醇＝10/1，得黄色油状物，产率19％，并进行质谱，核磁分析。1HNMR(400MHz,Chloroform-d):δ0.89(t,J＝3.56Hz,9H),1.27(s,59H),1.6(t,J＝6.4Hz,2H),1.78(t,J＝7.12Hz,2H),2.29(t,J＝9.16Hz,1H),2.38(s,3H),2.51(t,J＝10.04Hz,2H),2.62(t,J＝10.48Hz,4H),3.15(t,J＝12.6Hz,4H),3.71(t,J＝14.84Hz,1H),6.00(s,1H)(图3)。ESI-MS(m/z):[M+H]+calcd.for C44H86N4O3,719.6；found,719.6。
实施例4化合物Lp4的合成
取4.2mmol月桂醛溶于5mL的无水甲醇，搅拌下加入4.2mmoL的正己胺，加热至50℃反应5h，得到亚胺。分别称取4.2mmol的十六酸和哌啶基异腈各自溶于5mL无水甲醇，并依次加入到烧瓶中，25℃反应30h，通过薄层色谱分析检测反应进度。待反应结束后，将粗产品进行柱层析分离，淋洗剂为二氯甲烷/甲醇＝20/1，得黄色油状物，产率20.6％，并进行质谱，核磁分析。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.10(s,1H),4.31–4.19(m,3H),4.15(s,3H),3.47(q,J＝5.5Hz,4H),2.67(t,J＝5.9Hz,3H),2.60(t,J＝6.1Hz,4H),2.25(t,J＝7.7Hz,2H),1.69(q,J＝5.8Hz,8H),1.58(d,J＝7.1Hz,2H),1.52–1.46(m,4H),1.26(d,J＝16.5Hz,50H),0.87(t,J＝6.5Hz,9H)(图4)。ESI-MS(m/z):[M+H]+calcd.for C44H86N4O3,719.7；found,719.7。
实施例5化合物Lp5的合成
取4.2mmol月桂醛溶于5mL的无水甲醇，搅拌下加入4.2mmoL的正己胺，加热至50℃反应5h，得到亚胺。分别称取4.2mmol的十六酸和吗啉基异腈各自溶于5mL无水甲醇，并依次加入到烧瓶中，25℃反应30h，通过薄层色谱分析检测反应进度。待反应结束后，将粗产品进行柱层析分离，淋洗剂为二氯甲烷/甲醇＝20/1，得黄色油状物，产率19％，并进行质谱，核磁分析。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ4.69(s,6H),4.13(s,12H),3.69(t,J＝4.7Hz,28H),3.37(q,J＝5.7Hz,13H),2.53(t,J＝6.1Hz,12H),2.47(t,J＝4.6Hz,28H),1.56(p,J＝7.4Hz,3H),1.27–1.18(m,48H),0.83(t,J＝6.6Hz,9H)。ESI-MS(m/z):[M+H]+calcd.forC44H86N4O3,721.7；found,721.7。
实施例6化合物Lp6的合成
取4.2mmol月桂醛溶于5mL的无水甲醇，搅拌下加入4.2mmoL的十二胺，加热至50℃反应5h，得到亚胺。分别称取4.2mmol的油酸和异腈各自溶于5mL无水甲醇，并依次加入到烧瓶中，25℃反应30h，通过薄层色谱分析检测反应进度。待反应结束后，将粗产品进行柱层析分离，淋洗剂为乙酸乙酯/甲醇＝10/1，得黄色油状物，产率24.6％，并进行质谱，核磁分析。1HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ5.38(s,2H),4.32(s,1H),3.69(s,3H),3.45(s,2H),2.54–2.44(m,4H),2.36(t,J＝17.8Hz,6H),2.05(t,J＝19.0Hz,8H),1.65(t,J＝6.60Hz,3H),1.29(s,53H),0.91(t,J＝3.64Hz,9H)。ESI-MS(m/z):[M+H]+calcd.for C48H92N4O3,773.7；found,773.7。
实施例7氨基酰胺类脂质化合物制备的脂质纳米颗粒
将本发明中所述的氨基酰胺脂质化合物与DOPE、胆固醇、PEG2000-DMG以优选摩尔比50:10:38.5:1.5的比例混合溶解在无水乙醇中。再将溶液快速注入到3倍体积的pH为4的柠檬酸钠缓冲溶液中，搅拌1分钟，制成pre-LNP溶液。使用MalvernZetasizer Nano ZS，以173°反向散射检测模式通过动态光散射测定脂质纳米颗粒的大小及多分散指数PDI。测试结果见表2，制备的脂质纳米颗粒的粒径分布在100-200nm范围，能够满足体内递送的需求。
实施例8氨基酰胺类脂质化合物制备的脂质纳米颗粒的溶血性能评价
按照实施例7中的方法首先制成pre-LNP溶液。然后制备pH7.4和pH5.5的D-PBS缓冲液，分别将透析后的pre-LNP稀释成12.5、25、50、100、200和400μg/mL。取小鼠新鲜血液，离心去掉上清后，用pH 7.4的D-PBS清洗血细胞数次，至上清无色透明。再将红细胞分别用pH 7.4和pH 5.5的缓冲液重悬。按照V红细胞悬液:VLNP＝1:4，依次将不同pH的细胞悬液加入到相应pH不同浓度的LNP溶液中，轻轻混合均匀后共孵育。4h后离心，取上清，测定波长540nm处的吸光度。通过以下方程将获得的OD值用于计算样品的溶血率。
溶血率％＝[(OD样品-OD阴性)/(OD阳性–OD阴性)]×100％
结果如表2所示，本发明所述氨基酰胺类脂质化合物制备的脂质纳米颗粒在pH7.4时，溶血活性较低(5％–15％)，表明在人体血液循环系统中，该脂质纳米颗粒不易引起人体红细胞破裂溶解而对人体产生伤害；而pH为5.5时，溶血率较高(78％–96％)，表明在酸性条件下，该脂质纳米颗粒包覆的核酸就容易释放出来。因此，本发明所述氨基酰胺类脂质化合物有利于进一步的开发应用。
实施例9氨基酰胺类脂质化合物制备的脂质纳米颗粒的荧光素酶mRNA细胞水平转染性能评价
制剂方法：首先，按照实施例7中的方法，制成pre-LNP溶液。将荧光素酶mRNA(FlucmRNA)溶解在DEPC水溶液中，加入等体积的50％的乙醇溶液，配制成终浓度为25％的乙醇溶液。然后，将体积比为1.5：1的pre-LNP溶液与mRNA乙醇溶液混合。于50℃孵育20分钟，得到包载mRNA的脂质纳米颗粒，在PBS缓冲液中透析2小时。
根据制造商的说明，使用Quant-itRibogreenRNA定量测定试剂盒，测定脂质纳米颗粒的负载率，测试结果见表2，表明本发明的氨基酰胺类脂质化合物制备的载体对核酸分子包封率高，可将核酸分子成功转运至细胞中并进行表达。
表2
溶血率*表示浓度为100ug/ml时的比率。
将处于对数生长期的人胚肾细胞系Hek293t以25×103个/孔接种于48孔细胞培养板中，待细胞贴壁后，加入本发明所述代表性氨基酰胺类脂质化合物制备的负载mRNA的脂质纳米颗粒进行细胞转染(200ng mRNA/孔)，每个样品做3个复孔。转染6h后，弃去培养基，加入PLB裂解液50μL/孔，裂解细胞20min。细胞培养板离心后，吸取10μL裂解液至96孔黑板，加入50μL/孔荧光素酶底物后立即用酶标仪检测样品荧光强度。
各组样品荧光强度与Luc-mRNA转染荧光蛋白效率相关。如表3所示，以市场上转染效率较高的商业化SM-102可离子化离子脂质为对照组(100％)，可见细胞转染后，本发明所述多个氨基酰胺类脂质纳米颗粒负载荧光素酶mRNA的荧光强度与商业化SM-102脂质纳米颗粒负载荧光素酶mRNA的荧光强度相似，甚至，1#(108％)、2#(112％)、4#(129％)脂质分子转染荧光强度还要优于对照SM-102(100％)。表明本发明代表性氨基酰胺类脂质化合物制备的脂质纳米颗粒包载的mRNA具有较好的转染活性，本发明的氨基酰胺类脂质化合物能够有效地递送核酸分子。
表3
以上对本发明做了详尽的描述，其目的在于让熟悉此领域技术的认识能够了解本发明的内容并加以实施，并不能限制本发明的保护范围，凡根据本发明的精神实质所作的等效变化或修饰，都涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (7)

1.一种氨基酰胺类脂质化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，其结构如式（I）所示：
;
其中，
所述R1是选自CN1、CN2、CN3、CN4、CN5、CN6、CN7、CN8、CN9、CN10、CN11、CN12、CN14、CN17、CN18中的一种；
所述R2、R3、R4各自独立地选自A6、A7、A8、A9、A10、A11、A12、A13、A14、A15、A16、A17、A18、A21中的一种；
所述CN1、CN2、CN3、CN4、CN5、CN6、CN7、CN8、CN9、CN10、CN11、CN12、CN14、CN17、CN18如下：
;
所述A6、A7、A8、A9、A10、A11、A12、A13、A14、A15、A16、A17、A18、A21如下：
A6：-(CH2)5CH3；A7：-(CH2)6CH3；A8：-(CH2)7CH3；
A9：-(CH2)8CH3；A10：-(CH2)9CH3；A11：-(CH2)10CH3；A12：-(CH2)11CH3；
A13：-(CH2)12CH3；A14：-(CH2)13CH3；A15：-(CH2)14CH3；A16：-(CH2)15CH3；
A17：-(CH2)16CH3；A18：-(CH2)17CH3；
A21：。
2.根据权利要求1所述的氨基酰胺类脂质化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述氨基酰胺类脂质化合物选自：
;
其中，R2、R3和R4如权利要求1中定义。
3.一种氨基酰胺类脂质化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
首先，将化合物R2-CHO溶于溶剂中，搅拌下加入化合物R3-NH2，加热反应，得到亚胺中间体R2-CH=N-R3，然后，向亚胺中间体R2-CH=N-R3溶液中依次加入化合物R4-COOH与R1-NC，搅拌反应，即得到化合物(I)，结构式如下：
；其中，R1、R2、R3和R4如权利要求2中定义。
4.一种如权利要求1-2任一项所述氨基酰胺类脂质化合物或其药学上可接受的盐在制备脂质纳米颗粒中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，包括将氨基酰胺类脂质化合物与胆固醇、磷脂、聚乙二醇-脂质分子通过合成得LNP脂质体纳米颗粒，所述LNP能提高负载物-mRNA在细胞内的翻译表达水平。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述氨基酰胺类脂质化合物选自：
;
其中，R2、R3和R4如权利要求2中定义。
7.一种如权利要求1-2任一项所述氨基酰胺类脂质化合物或其药学上可接受的盐在制备用于基因治疗、基因疫苗接种或核酸转移的药物中的应用。
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