CN116782903A

CN116782903A - 取代的吡啶酮化合物及应用

Info

Publication number: CN116782903A
Application number: CN202180070837.1A
Authority: CN
Inventors: 李桢; 唐锋; 刘乐; 赵春艳; 陈平; 唐任宏; 任晋生
Original assignee: Nanjing Zaiming Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Nanjing Zaiming Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2020-10-15
Filing date: 2021-10-13
Publication date: 2023-09-19
Also published as: WO2022078403A1

Abstract

本发明提供了通式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐、药物组合物及其制备方法，以及作为MAT2A抑制剂的用途。

Description

取代的吡啶酮化合物及应用

本发明要求2020年10月15日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202011105645.3，发明名称为“取代的吡啶酮化合物及应用”，2021年2月10日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202110182410.2，发明名称为“取代的吡啶酮化合物及应用”以及2021年4月2日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202110361446.7，发明名称为“取代的吡啶酮化合物及应用”的在先申请的优先权。上述在先申请的全文通过引用的方式结合于本发明中。

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种新型的吡啶酮类化合物或其药学上可接受的盐，含有它们的药物组合物以及作为MAT2A抑制剂的用途。

背景技术

甲硫氨酸腺苷转移酶(methionine adenosyltransferase,MAT)，又称S-腺苷甲硫氨酸合成酶，是能够催化甲硫氨酸(methionine,Met)与ATP反应生成S-腺苷甲硫氨酸(S-Adenosyl-L-methionine,SAM)的一类酶。SAM是体内主要的甲基供体，能够通过转甲基反应调控基因的表达、转录与翻译，进而对细胞的生长、死亡及分化产生重要影响。不仅如此，SAM还参与多胺以及谷胱甘肽的生物合成。

MAT酶主要有三个亚型，MAT1A、MAT2A与MAT2B。MAT1A主要存在于正常肝细胞中，而MAT2A则广泛分布于肝外细胞。这两个亚型在催化效率及调控方式上存在差异。MAT2B不具有催化合成SAM的能力，而是作为MAT2A的调节亚基，与MAT2A形成复合物后，调节MAT2A的催化活性。

研究指出，在肝癌细胞中，MAT1A的表达水平下调和MAT2A的表达增加，进而促进肝癌细胞的增殖。除此以外，MAT2A表达水平异常升高的现象同样存在于多类其他肿瘤，并且通过沉默编码MAT2A的基因能够导致癌细胞的死亡。进一步，Marjon等人(MTAP deletions in cancer create vulnerability to targeting of the MAT2A/PRMT5/RIOK1 axis.Marjon K,et al.Cell Reports.2016,15(3),574–587)发现MTAP缺失的癌细胞系对MAT2A抑制敏感。MTAP又称甲硫腺苷磷酸化酶，其在正常的组织细胞中广泛表达。该酶能够催化甲硫腺苷(MTA)转化为5-甲基硫代核糖-1-磷酸及腺嘌呤。这一过程也是人体内甲硫氨酸补偿途径的重要环节。当MTAP缺失后，MTA的代谢途径受到抑制，进而导致体内MTA大量蓄积，最终造成癌细胞对MAT2A抑制的敏感性增强。

编码人MTAP的基因位于染色体9p21区域(chr9p21)，其在所有肿瘤中纯合缺失的频率约为15％左右，且在不同肿瘤中的缺失频率有所不同。缺失频率较高的瘤种包括胶质瘤、间皮瘤、黑色素瘤、胃癌、食管癌、膀胱癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、星形细胞瘤、骨肉瘤、头颈癌、粘液性软骨肉瘤、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、软组织肉瘤、非霍奇金淋巴瘤等。

在人染色体9p21区域不仅包含编码MTAP的基因，该区域还包含肿瘤抑制基因p16INK4A(又称CDKN2A)及p15INK4B。在80％-90％的CDKN2A缺失的肿瘤中，MTAP也同样处于缺失的状态。

鉴于MAT2A的表达水平在多类肿瘤中异常升高，包括胃癌、结肠癌、肝癌和胰腺癌等，并且选择性抑制MAT2A能够降低MTAP缺失癌细胞的增殖活性。因此，选择性抑制MAT2A能够作为一种有效的肿瘤治疗手段。

WO2018039972、WO2018045071和WO2019191470公开了用于治疗肿瘤的MAT2A抑制剂杂环化合物。

发明内容

本发明提供一种通式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐：

其中，环Q为5-6元杂环基、C ₆-C ₁₀芳基或5-10元杂芳基，所述5-6元杂环基、C ₆-C ₁₀芳基或5-10元杂芳基任选被R ^a取代，所述R ^a选自F、Cl、Br、I、OH、CN、C ₂-C ₃炔基、C ₁-C ₁₀烷基、C ₃-C ₁₀环烷基或C ₁-C ₁₀烷氧基，所述C ₁-C ₁₀烷基、C ₃-C ₁₀环烷基或C ₁-C ₁₀烷氧基任选被R ^b取代；

R ^b选自F、Cl、Br、I、OH或CN；

环W为苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡啶酮基、哒嗪酮基或其中环M为5-10元杂芳基或4-10元杂环基，所述苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡啶酮基、哒嗪酮基或环M任选被R ^c取代，所述R ^c选自OH、＝O或任选被R ^c1取代的下列基团：C ₁-C ₁₀烷基、C ₁-C ₁₀烷氧基、C ₃-C ₁₀环烷基、P(O)(C ₁-C ₃烷基) ₂、4-6元杂环烷基、NHC(O)(C ₁-C ₆烷基)；X ₁选自C或N，当X ₁选自C时，表示双键，当X ₁选自N时，表示单键；

R ^c1选自氘、F、Cl、Br、I、CN、OH、NH ₂或任选被R ^c2取代的下列基团：C ₁-C ₃烷基、C ₁-C ₃烷氧基、NHC(O)O(C ₁-C ₆烷基)、(C ₁-C ₆烷基)NHC(O)O、NH(C ₁-C ₃烷基)、S(O) ₂(C ₁-C ₃烷基)、4-10元杂环基、4-10元杂环基氧基、(C ₃-C ₁₀环烷基)CH ₂O、5-6元杂芳基、5-6元杂芳基氧基；

R ^c2选自4-6元杂环烷基、＝O、C ₁-C ₃烷基、卤代C ₁-C ₃烷基、F、Cl、Br、I、CN、OH、CH ₂OH或NH ₂；

X选自O、S或NR ²；

L选自O、NH或化学键；

R ¹、R ²独立地选自H、C ₁-C ₁₀烷基、C ₃-C ₁₀环烷基或4-10元杂环基，所述C ₁-C ₁₀烷基、C ₃-C ₁₀环烷基或4-10元杂环基任选被R ^d取代，所述R ^d选自F、Cl、Br、I、OH、CN或C ₁-C ₃烷基。

在一些实施方案中，环Q为5-6元杂环基、C ₆-C ₁₀芳基或5-10元杂芳基，所述5-6元杂环基、C ₆-C ₁₀芳基或5-10元杂芳基任选被R ^a取代，所述R ^a选自F、Cl、Br、I、OH、CN或任选被R ^b取代的下列基团：C ₁-C ₁₀烷基、C ₃-C ₁₀环烷基、C ₁-C ₁₀烷氧基；

R ^b选自F、Cl、Br、I、OH或CN；

环W为苯基、吡啶基、吡啶酮基、哒嗪酮基或其中环M为5-6元杂芳基或4-10元杂环基，所述苯基、吡啶基、吡啶酮基、哒嗪酮基或环M任选被R ^c取代，所述R ^c选自OH、＝O或任选被R ^c1取代的下列基团：C ₁-C ₁₀烷基、C ₁-C ₁₀烷氧基、C ₃-C ₁₀环烷基、P(O)(C ₁-C ₃烷基) ₂、4-6元杂环烷基、NHC(O)(C ₁-C ₆烷基)；X ₁选自C或N，当X ₁选自C时，表示双键，当X ₁选自N时，表示单键；

R ^c2选自4-6元杂环烷基、＝O、C ₁-C ₃烷基、卤代C ₁-C ₃烷基、F、Cl、Br、I、CN、OH、 CH ₂OH或NH ₂；

X选自O、S或NR ²；

L选自O或NH；

R ¹、R ²独立地选自H、C ₁-C ₁₀烷基或C ₃-C ₁₀环烷基，所述C ₁-C ₁₀烷基或C ₃-C ₁₀环烷基任选被R ^d取代，所述R ^d选自F、Cl、Br、I、OH、CN或C ₁-C ₃烷基。

R ^b选自F、Cl、Br、I、OH或CN；

环W为苯基、吡啶基、吡啶酮基或9-10元杂芳基，所述苯基、吡啶基、吡啶酮基或9-10元杂芳基任选被R ^c取代，所述R ^c选自OH或任选被R ^c1取代的下列基团：C ₁-C ₁₀烷基、C ₁-C ₁₀烷氧基、C ₃-C ₁₀环烷基、P(O)(C ₁-C ₃烷基) ₂、4-6元杂环烷基；

R ^c1选自F、Cl、Br、I、CN、OH、NH ₂或任选被R ^c2取代的下列基团：C ₁-C ₃烷基、C ₁-C ₃烷氧基、NHC(O)O(C ₁-C ₆烷基)、(C ₁-C ₆烷基)NHC(O)O、NH(C ₁-C ₃烷基)、S(O) ₂(C ₁-C ₃烷基)、4-10元杂环基、4-10元杂环基氧基、(C ₃-C ₁₀环烷基)CH ₂O、5-6元杂芳基、5-6元杂芳基氧基；

X选自O、S或NR ²；

L选自O或NH；

在一些实施方案中，环Q为5-6元杂环基、苯基或5-6元杂芳基，所述5-6元杂环基、苯基或5-6元杂芳基任选被R ^a取代。

在一些实施方案中，环Q为苯基或5-6元杂芳基，所述苯基或5-6元杂芳基任选被R ^a取代。

在一些实施方案中，环Q为哌啶基、苯基或吡啶基，所述哌啶基、苯基或吡啶基任选被R ^a取代。

在一些实施方案中，环Q为苯基或吡啶基，所述苯基或吡啶基任选被R ^a取代。

在一些实施方案中，环Q为任选被R ^a取代的苯基。

在一些实施方案中，R ^a为F、Cl、Br、I、CN、C ₂-C ₃炔基、C ₁-C ₆烷基、C ₃-C ₆环烷基或任选被F取代的C ₁-C ₆烷氧基。

在一些实施方案中，R ^a为F、Cl、Br、I、C ₁-C ₆烷基、C ₃-C ₆环烷基或任选被F取代的C ₁-C ₆烷氧基。在一些实施方案中，R ^a为F、Cl、Br、I、CN、甲基、环丙基、乙炔基、丙-1-炔基或任选被F取代的甲氧基。

在一些实施方案中，R ^a为F、Cl、Br、I、甲基、环丙基或任选被F取代的甲氧基。

在一些实施方案中，R ^a为任选被F取代的甲氧基。

在一些实施方案中，R ^a为F、Cl、Br、I、CN、甲基、环丙基、乙炔基、丙-1-炔基、二氟甲氧基、三氟甲氧基或甲氧基。

在一些实施方案中，R ^a为二氟甲氧基。

在一些实施方案中，环Q选自

在一些实施方案中，环W为苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、2-吡啶酮基、其中环M为5-10元杂芳基或5-10元杂环基，所述苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、2-吡啶酮基、或环M任选被R ^c取代。在一些实施方案中，环W为苯基、吡啶基、2-吡啶酮基、其中环M为5-6元杂芳基或5-10元杂环基，所述苯基、2-吡啶酮基、吡啶基、或环M任选被R ^c取代。

在一些实施方案中，环W为苯基、吡啶基、2-吡啶酮基或9-10元杂芳基，所述苯基、2-吡啶酮基、吡啶基或9-10元杂芳基任选被R ^c取代。

在一些实施方案中，环W为任选被R ^c取代的下列基团：苯基、9-10元杂芳基。

在一些实施方案中，环M为5-6元杂芳基、9-10杂芳基或5-9元杂环基，所述环M任选被R ^c取代。

在一些实施方案中，环M为5-6元杂芳基或6-8元杂环基，所述环M任选被R ^c取代。

在一些实施方案中，环W为其中环M为5-6元杂芳基、9-10杂芳基或5-9元杂环基，所述环M任选被R ^c取代。

在一些实施方案中，环W为其中环M为5-6元杂芳基或6-8元杂环基，所述环M任选被R ^c取代。

在一些实施方案中，环W为其中环M为5-6元杂芳基，所述环M任选被R ^c取代。

在一些实施方案中，环W为任选被R ^c取代的以下基团：苯基、

在一些实施方案中，R ^c选自＝O或任选被R ^c1取代的下列基团：C ₁-C ₆烷基、C ₁-C ₆烷氧基、NHC(O)(C ₁-C ₆烷基)。

在一些实施方案中，R ^c选自＝O或任选被R ^c1取代的下列基团：甲基、甲氧基、 NHC(O)CH ₃。

在一些实施方案中，R ^c选自任选被R ^c1取代的下列基团：C ₁-C ₆烷基、C ₁-C ₆烷氧基。

在一些实施方案中，R ^c选自任选被R ^c1取代的下列基团：甲基、甲氧基、

在一些实施方案中，R ^c选自任选被R ^c1取代的甲基或任选被R ^c1取代的甲氧基。

在一些实施方案中，R ^c1选自氘原子、F、Cl、Br、I、CN、OH、NH ₂或乙氧基。

在一些实施方案中，R ^c1选自氘原子、F、Cl、Br、I、CN、OH。

在一些实施方案中，R ^c1选自F、Cl、Br、I、CN、OH。

在一些实施方案中，R ^c选自CH ₂OH、甲基、甲氧基、CHF ₂、 CD ₃、NHC(＝O)CH ₃、＝O、

在一些实施方案中，R ^c选自CH ₂OH、甲基、甲氧基、CHF ₂、 CD ₃、NHC(＝O)CH ₃或＝O。

在一些实施方案中，R ^c选自CH ₂OH、甲基、甲氧基、CHF ₂或

在一些实施方案中，R ^c选自任选被OH取代的甲基或任选被OH取代的甲氧基。

在一些实施方案中，环W选自

在一些实施方案中，X选自O、S或NH。

在一些实施方案中，X选自S或O。

在一些实施方案中，X选自S。

在一些实施方案中，R ¹选自H、4-6元杂环基、任选被C ₁-C ₃烷基取代的C ₃-C ₆环烷基或任选被F取代的C ₁-C ₆烷基。

在一些实施方案中，R ¹选自H、任选被C ₁-C ₃烷基取代的C ₃-C ₆环烷基或任选被F取代的C ₁-C ₆烷基。

在一些实施方案中，R ¹选自4-6元杂环基或者任选被F取代的C ₁-C ₆烷基。

在一些实施方案中，R ¹选自4元杂环基或者任选被F取代的C ₁-C ₃烷基。

在一些实施方案中，R ¹选自C ₁-C ₆烷基。

在一些实施方案中，R ¹选自甲基、乙基、正丙基、或三氟甲基。

在一些实施方案中，R ¹选自乙基。

在一些实施方案中，L选自O或化学键。

在一些实施方案中，L选自O。

在一些实施方案中，选自甲氧基、乙氧基、正丙基氧基、或三氟甲基。

在一些实施方案中，所述通式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐选自式(B)化合物或其药学上可接受的盐：

其中环W、R ^a、R ¹如上文定义，n选自0、1、2、3、4或5。

在一些实施方案中，所述通式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐选自式(C)化合物或其药学上可接受的盐：

其中环W、R ^a、R ¹如上文定义。

在一些实施方案中，所述通式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐选自式(D)化合物或其药学上可接受的盐：

其中环W如上文定义。

在一些实施方案中，所述通式(A)所示的化合物或药学可接受的盐，选自以下化合物或药学可接受的盐：

本发明还提供药物组合物，其包含通式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的辅料。

本发明涉及通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在制备预防或者治疗肿瘤的药物中的用途。

进一步，本发明涉及通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在制备预防或者治疗MTAP活性降低或缺失的肿瘤的药物中的用途。

本发明涉及通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在预防或者治疗肿瘤的用途。

进一步，本发明涉及通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在预防或者治疗MTAP活性降低或缺失的肿瘤的用途。

本发明涉及预防或者治疗肿瘤的通式(A)化合物或其药学上可接受的盐，或其药物组合物。

进一步，本发明涉及预防或者治疗MTAP活性降低或缺失的肿瘤的通式(A)化合物或其药学上可接受的盐，或其药物组合物。

本发明还涉及治疗肿瘤的方法，该方法包括给以患者治疗上有效剂量的包含本发明所述的通式(A)化合物或其药学上可接受的盐的药物制剂。

进一步地，本发明还涉及治疗MTAP活性降低或缺失的肿瘤的方法，该方法包括给以患者治疗上有效剂量的包含本发明所述的通式(A)化合物或其药学上可接受的盐的药物制剂。

本发明的优选方案，其中所述的肿瘤或MTAP活性降低或缺失的肿瘤包括但不限于胶质瘤、间皮瘤、黑色素瘤、胃癌、食管癌、膀胱癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、星形细胞瘤、骨肉瘤、头颈癌、粘液性软骨肉瘤、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、软组织肉瘤、非霍奇金淋巴瘤等。

术语定义和说明

除非另有说明，本申请说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构，应当属于本申请说明书记载的范围内。一个特定的术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照本领域普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。

本文中表示连接位点。

术语“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的无毒酸或碱的盐，包括无机酸和碱、有机酸和碱的盐。

本文中消旋体或者对映体纯的化合物的图示法来自Maehr，J.Chem.Ed.1985，62:114-120。除非另有说明，用楔形键和虚楔键表示一个立体中心的绝对构型，用黑实键和虚键表示一个立体中心的相对构型(如脂环化合物的顺反构型)。当本文所述化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心，除非另有规定，它们包括E、Z几何异构体。同样地，所有的互变异构形式均包括在本发明的范围之内。

术语“互变异构体”是指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体。本发明化合物可表现出互变异构现象。互变异构的化合物可以存在两种或多种可相互转化的种类。互变异构体一般以平衡形式存在，尝试分离单一互变异构体时通常产生一种混合物，其理化性质与化合物的混合物是一致的。平衡的位置取决于分子内的化学特性。例如，在很多脂族醛和酮如乙醛中，酮型占优势；而在酚中，烯醇型占优势。本发明包含化合物的所有互变异构形式。

术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体、非对应异构体和构象异构体。

本发明的化合物可以具有不对称原子如碳原子、硫原子、氮原子、磷原子或不对称双键，因此本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。特定的几何或立体异构体形式可以是顺式和反式异构体、E型和Z型几何异构体、(-)-和(+)-对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，以及其外消旋混合物或其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，以上所有这些异构体以及它们的混合物都属于本申请化合物的定义范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子、不对称硫原子、不对称氮原子或不对称磷原子，所有取代基中涉及到的这些异构体以及它们的混合物，也均包括在本申请化合物的定义范围之内。本申请的含有不对称原子的化合物可以以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来，光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。

术语“药物组合物”表示一种或多种文本所述化合物或其生理学/药学上可接受的盐或前体药物与其它化学组分的混合物，其它组分例如生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。

术语“被取代”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧代(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代，氧代不会发生在芳香基上。

术语“任选”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可以发生或不发生，该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。例如，乙基“任选”被卤素取代，指乙基可以是未被取代的(CH ₂CH ₃)、单取代的(如CH ₂CH ₂F、CH ₂CH ₂Cl等)、多取代的(如CHFCH ₂F、CH ₂CHF ₂、CHFCH ₂Cl、CH ₂CHCl ₂等)或完全被取代的(CF ₂CF ₃、CF ₂CCl ₃、CCl ₂CCl ₃等)。本领域技术人员可理解，对于包含一个或多个取代基的任何基团，不会引入任何在空间上不可能存在和/或不能合成的取代或取代模式。

当任何变量(例如R ^a、R ^b)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。例如，如果一个基团被2个R ^b所取代，则每个R ^b都有独立的选项。

当一个连接基团的数量为0时，比如-(CH ₂) ₀-，表示该连接基团为键。

当其中一个变量选自化学键或不存在时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表键时表示该结构实际上是A-Z。

当一个取代基的键交叉连接到一个环上的两个原子时，这种取代基可以与这个环上的任意原子相键合。例如，结构单元表示R ⁵可在苯环上的任意一个位置发生取代。

本文中的C _m-C _n，是指具有m-n范围中的整数个碳原子。例如“C ₁-C ₁₀”是指该基团可具有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子、6个碳原子、7个碳原子、8个碳原子、9个碳原子或10个碳原子。

术语“烷基”是指通式为C _nH _2n+1的烃基。该烷基可以是直链或支链的。例如，术语“C ₁-C ₁₀烷基”应理解为表示具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。所述烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1，2-二甲基丙基、新戊基、1，1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基或1，2-二甲基丁基等；“C ₁-C ₆烷基”应理解为表示具有1、2、3、4、5、6个碳原子的直链或支链饱和一价烃基；“C ₁-C ₃烷基”指甲基、乙基、丙基、异丙基。

本文所述“C ₁-C ₁₀烷基”可以包含“C ₁-C ₆烷基”或“C ₁-C ₃烷基”，所述“C ₁-C ₆烷基”可以进一步包含“C ₁-C ₃烷基”。

术语“烷氧基”可理解为“烷基氧基”或“烷基-O-”，指直链状或支链状醇类失去羟基上的氢原子产生的一价基团，例如术语“C ₁-C ₁₀烷氧基”可理解为“C ₁-C ₁₀烷基氧基”或“C ₁-C ₁₀烷基 -O-”，术语“C ₁-C ₆烷氧基”可理解为“C ₁-C ₆烷基氧基”或“C ₁-C ₆烷基-O-”，优选地，“C ₁-C ₁₀烷氧基”可以包含“C ₁-C ₆烷氧基”和“C ₁-C ₃烷氧基”等范围。

术语“卤代C ₁-C ₃烷基”包含单卤代C ₁-C ₃烷基或多卤代C ₁-C ₃烷基，实例包括但不限于三氟甲基、2,2,2-三氯乙基或3-氟丙基。

术语“炔基”是指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的具有至少一个三键的不饱和脂肪族烃基。术语“C ₂-C ₁₀炔基”可理解为表示直链或支链的不饱和烃基，其包含一个或多个三键并且具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子。“C ₂-C ₁₀炔基”的实例包括但不限于乙炔基(-C≡CH)、丙炔基(-C≡CCH _3、-CH ₂C≡CH)、丁-1-炔基、丁-2-炔基或丁-3-炔基。“C ₂-C ₁₀炔基”可以包含“C ₂-C ₃炔基”，“C ₂-C ₃炔基”实例包括乙炔基(-C≡CH)、丙-1-炔基(-C≡CCH ₃)、丙-2-炔基(-CH ₂C≡CH)。

术语“C ₃-C ₁₀环烷基”应理解为表示饱和的一价单环或双环烃环，其具有3～10个碳原子。如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基或环癸基，或者是双环烃基如十氢化萘环。术语“C ₃-C ₆环烷基”应理解为表示饱和的一价单环或双环烃环，其具有3～6个碳原子。

术语“环烷氧基”可理解为“环烷基氧基”或“环烷基-O-”。

术语“杂环基”是指完全饱和的或部分饱和的(整体上不是具有芳香性的杂芳族)单环、并环、螺环或桥环基团，其环原子中含有1-5个杂原子或杂原子团(即含有杂原子的原子团)，所述“杂原子或杂原子团”包括但不限于氮原子(N)、氧原子(O)、硫原子(S)、磷原子(P)、硼原子(B)、-S(＝O) ₂-、-S(＝O)-、-P(＝O) ₂-、-P(＝O)-、-NH-、-S(＝O)(＝NH)-、-C(＝O)NH-或-NHC(＝O)NH-等。

术语“4-10元杂环基”是指环原子数目为4、5、6、7、8、9或10的杂环基，且其环原子中含有1-5个独立选自上文所述的杂原子或杂原子团。“4-10元杂环基”包括“4-7元杂环基”，其中，4元杂环基的具体实例包括但不限于氮杂环丁烷基或氧杂环丁烷基；5元杂环基的具体实例包括但不限于四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基、4,5-二氢噁唑基或2,5-二氢-1H-吡咯基；6元杂环基的具体实例包括但不限于四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基、三噻烷基、四氢吡啶基或4H-[1,3,4]噻二嗪基；7元杂环基的具体实例包括但不限于二氮杂环庚烷基。所述杂环基还可以是双环基，其中，5,5元双环基的具体实例包括但不限于六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基；5,6元双环基的具体实例包括但不限于六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪基或5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪基。任选地，所述杂环基可以是上述4-7元杂环基的苯并稠合环基，具体实例包括但不限于二氢异喹啉基等。优选地，“4-10元杂环基”可以包含“5-10元杂环基”、“5-9元杂环基”、“4-6元杂环基”、“5-6元杂环基”、“6-9元杂环基”、“6-8元杂环基”、“5-10元杂环烷基”、“5-9元杂环烷基”、“4-6元杂环烷基”、“5-6元杂环烷基”、“6-8元杂环烷基”等范围。根据本发明，尽管有些双环类杂环基部分地含有一个苯环或一个杂芳环，但所述杂环基整体上仍是无芳香性的。

术语“杂环基氧基”可理解为“杂环基-O-”。

术语“杂环烷基”是指完全饱和的并且可以以单环、并环、桥环或螺环存在的4-10元环状基团。除非另有指示，该杂环的环原子中含有1-5个杂原子或杂原子团(即含有杂原子的原子团)，所述“杂原子或杂原子团”包括但不限于氮原子(N)、氧原子(O)、硫原子(S)、磷原子(P)、硼原子(B)、-S(＝O) ₂-、-S(＝O)-、-NH-、-S(＝O)(＝NH)-、-C(＝O)NH-或-NHC(＝O)NH-等。术语“4-6元杂环烷基”意指环原子数目为4、5或6的杂环烷基，且其环原子中含有1-3个独立选自上文所述的杂原子或杂原子团，其中，4元杂环烷基的非限制性实例包括但不限于吖丁啶基、噁丁环基、噻丁环基，5元杂环烷基的实例包括但不限于四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、异噁唑烷基、噁唑烷基、异噻唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基、四氢吡唑基，6元杂环烷基的实例包括但不限于哌啶基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、吗啉基、哌嗪基、1,4- 噻噁烷基、1,4-二氧六环基、硫代吗啉基、1,3-二噻烷基、1,4-二噻烷基。

术语“芳基”是指具有共轭的π电子体系的全碳单环或稠合多环的芳香环基团。例如，芳基可以具有6-20个碳原子，6-14个碳原子或6-12个碳原子。术语“C ₆-C ₁₀芳基”应理解为优选表示具有6～10个碳原子的芳香性或部分芳香性的全碳单环或双环基团，特别是具有6个碳原子的环(“C ₆芳基”)，例如苯基；或者具有9个碳原子的环(“C ₉芳基”)，例如茚满基或茚基，或者具有10个碳原子的环(“C ₁₀芳基”)，例如四氢化萘基、二氢萘基或萘基。

术语“杂芳基”是指具有芳香性的单环或稠合多环体系，其中含有至少一个选自N、O、S的环原子，其余环原子为C的芳香环基。术语“5-10元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环或双环芳族环系：其具有5、6、7、8、9或10个环原子，特别是5或6或9或10个环原子，且其包含1-5个，优选1-3个独立选自N、O和S的杂原子。并且，另外在每一种情况下可为苯并稠合的。特别地，杂芳基选自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基等以及它们的苯并衍生物，例如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基等；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等，以及它们的苯并衍生物，例如喹啉基、喹唑啉基、异喹啉基等；或吖辛因基、吲嗪基、嘌呤基等以及它们的苯并衍生物；或噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基等。术语“5-6元杂芳基”指具有5或6个环原子的芳族环系，且其包含1-3个，优选1-2个独立选自N、O和S的杂原子。术语“9-10元杂芳基”指具有9或10个环原子的芳族环系，且其包含1-5个，优选1-3个独立选自N、O和S的杂原子。

术语“杂芳基氧基”可理解为“杂芳基-O-”。

术语“辅料”是指可药用惰性成分。

术语“赋形剂”的种类实例非限制性地包括粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、稳定剂、填充剂和稀释剂等。赋形剂能增强药物制剂的操作特性，即通过增加流动性和/或粘着性使制剂更适于直接压缩。适用于上述制剂的典型的“药学上可接受的载体”的实例为：糖类，淀粉类，纤维素及其衍生物等在药物制剂中常用到的辅料。

术语“治疗”意为将本申请所述化合物或制剂进行给药以预防、改善或消除疾病或与所述疾病相关的一个或多个症状，且包括：

(i)预防疾病或疾病状态在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病状态，但尚未被诊断为已患有该疾病状态时；

(ii)抑制疾病或疾病状态，即遏制其发展；

(iii)缓解疾病或疾病状态，即使该疾病或疾病状态消退。

术语“治疗有效量”意指(i)治疗或预防特定疾病、病况或障碍，(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文中所述的特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状发作的本发明化合物的用量。构成“治疗有效量”的本发明化合物的量取决于该化合物、疾病状态及其严重性、给药方式以及待被治疗的哺乳动物的年龄而改变，但可例行性地由本领域技术人员根据其自身的知识及本公开内容而确定。

术语“药学上可接受的辅料”是指对有机体无明显刺激作用，而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些辅料。合适的辅料是本领域技术人员熟知的，例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或水可膨胀的聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。

词语“包括(comprise)”、“含有(comprise)”或“包含(comprise)”及其英文变体例如comprises或comprising应理解为开放的、非排他性的意义，即“包括但不限于”。

本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。

本申请还包括与本文中记载的那些相同的，但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本申请化合物。可结合到本申请化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如分别为 ²H、 ³H、 ¹¹C、 ¹³C、 ¹⁴C、 ¹³N、 ¹⁵N、 ¹⁵O、 ¹⁷O、 ¹⁸O、 ³¹P、 ³²P、 ³⁵S、 ¹⁸F、 ¹²³I、 ¹²⁵I和 ³⁶Cl等。

某些同位素标记的本申请化合物(例如用 ³H及 ¹⁴C标记的那些)可用于化合物和/或底物组织分布分析中。氚化(即 ³H)和碳-14(即 ¹⁴C)同位素对于由于它们易于制备和可检测性是尤其优选的。正电子发射同位素，诸如 ¹⁵O、 ¹³N、 ¹¹C和 ¹⁸F可用于正电子发射断层扫描(PET)研究以测定底物占有率。通常可以通过与公开于下文的方案和/或实施例中的那些类似的下列程序，通过同位素标记试剂取代未经同位素标记的试剂来制备同位素标记的本申请化合物。

本申请的药物组合物可通过将本申请的化合物与适宜的药学上可接受的辅料组合而制备，例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。

给予本申请化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、局部、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。

本申请的药物组合物可以采用本领域众所周知的方法制造，如常规的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣药丸法、磨细法、乳化法、冷冻干燥法等。

在一些实施方案中，药物组合物是口服形式。对于口服给药，可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的辅料混合，来配制该药物组合物。这些辅料能使本申请的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等，用于对患者的口服给药。

可以通过常规的混合、填充或压片方法来制备固体口服组合物。例如，可通过下述方法获得：将所述的活性化合物与固体辅料混合，任选地碾磨所得的混合物，如果需要则加入其它合适的辅料，然后将该混合物加工成颗粒，得到了片剂或糖衣剂的核心。适合的辅料包括但不限于：粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂或矫味剂等。

药物组合物还可适用于肠胃外给药，如合适的单位剂型的无菌溶液剂、混悬剂或冻干产品。

本文所述的通式Ⅰ化合物的所有施用方法中，每天给药的剂量为0.01到100mg/kg体重，优选为0.05到50mg/kg体重，更优选0.1到30mg/kg体重，以单独或分开剂量的形式。

本发明具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本发明的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本发明的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。

具体实施方式

以下实施例详细说明发明的技术方案，但本发明的保护范围包括但不限于此。

除非另作说明，混合溶剂表示的比例是体积混合比例。

除非另作说明，否则，％是指重量百分比wt％。

洗脱剂或流动相可由两种或两种以上溶剂组成的混合洗脱剂或流动相，其比值为各溶剂的体积比，如“0～10％甲醇/二氯甲烷”表示混合洗脱剂或流动相中的甲醇与二氯甲烷的体积用量比为0:100～10:100。

化合物经手工或软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。

化合物的结构是通过核磁共振(NMR)和/或质谱(MS)来确定的。NMR位移的单位为10 ^-6(ppm)。NMR测定的溶剂为氘代二甲基亚砜、氘代氯仿、氘代甲醇等，内标为四甲基硅烷(TMS)。“IC ₅₀”指半数抑制浓度，指达到最大抑制效果一半时的浓度。“DCM”指二氯甲烷，“PE”指石油醚，“EA”指乙酸乙酯。

实施例1、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(2-(羟甲基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物1)

步骤1：N-((5-溴-6-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲硫杂酰)苯甲酰胺(中间体1-2)的合成

将起始原料1-1(1g,4.93mmol)溶于四氢呋喃(15mL)，在0℃加入苯甲酰基异硫氰酸酯(763.59mg,4.68mmol),在0℃搅拌反应1小时,再在25℃搅拌反应16小时。LCMS检测原料反应完全,减压浓缩除去溶剂，得到标题化合物(1.8g)，直接用于下步反应。

MS m/z(ESI):365.9[M+H] ⁺。

步骤2：1-(5-溴-6-甲氧基吡啶-2-基)硫脲(中间体1-3)的合成

将中间体1-2(1.8g,4.91mmol)溶于水(1.5mL)和四氢呋喃(8mL)，加氢氧化钠(5M,1.18mL),加热至80℃,搅拌反应3小时。LCMS检测原料反应完全,减压浓缩除去溶剂，加水(50mL),乙酸乙酯(50mL),用盐酸调pH＝1,再加入混合溶剂异丙醇:二氯甲烷＝1:3(120mL)萃取,合并有机相,硫酸钠干燥,过滤，减压浓缩,残余物经过快速柱色谱纯化( 20g 快速硅胶柱,流动相5-25％四氢呋喃/石油醚(5％DCM)梯度@30mL/min)得标题化合物(1.1g)。

MS m/z(ESI):261.8[M+H] ⁺。

步骤3：6-溴-5-甲氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-2-胺(中间体1-4)的合成

将中间体1-3(1g,3.81mmol)溶于氯仿(20mL)，冷至0℃，将液溴(621.86mg,3.89mmol)溶于氯仿(5mL)并滴加至反应液中。反应液在0℃反应30分钟,加热至65℃反应2.5小时。LCMS检测原料反应完全,将反应液冷至-20℃，过滤，并用正戊烷洗滤饼。得标题化合物(1.1g)，直接用于下步反应。

MS m/z(ESI):260.0[M+H] ⁺。

步骤4：2-氨基-6-溴噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体1-5)的合成

将中间体1-4(600mg,2.31mmol)溶于1,2-二氯乙烷(15mL)后加入三溴化硼(2.23g,8.90mmol),反应液在50℃搅拌反应16小时。LCMS检测原料反应完全,反应液用1,2-二氯乙烷稀释，在0℃氮气保护下滴入甲醇(15mL)。反应液浓缩得固体,加甲醇(15mL),氨水调节pH＝9，过滤，得标题化合物(100mg)。

MS m/z(ESI):247.9[M+H] ⁺。

步骤5：6-溴-2-氯噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体1-6)的合成

将氯化铜(327.82mg,2.44mmol)和亚硝酸叔丁酯(399.00mg,3.87mmol)溶于乙腈(6 mL),随后将中间体1-5(300mg,1.22mmol)溶于乙腈(4mL)，0℃下滴加至反应液中。反应液在25℃下搅拌反应16小时。LCMS检测原料反应完全,向反应液中滴加6M HCl(2mL),搅拌30分钟,用碳酸氢钠调节pH至8,用混合溶剂甲醇和二氯甲烷(10:1)萃取,有机相合并浓缩得标题化合物(310mg)。

MS m/z(ESI):264.9[M+H] ⁺。

步骤6：6-溴-2-乙氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体1-7)的合成

将中间体1-6(400mg,1.51mmol)溶于乙醇(15mL)后加乙醇钠(512.59mg,7.53mmol)，在25℃搅拌反应16小时后,向反应液加入饱和氯化铵,搅拌15分钟,用混合有机溶剂乙醇和二氯甲烷(10:1，100mL*5)萃取，硫酸钠干燥,减压浓缩除去溶剂。残余物经制备薄层色谱纯化(二氧化硅,石油醚:四氢呋喃＝3:2)，得标题化合物(130mg)。

MS m/z(ESI):275[M+H] ⁺。

步骤7：6-溴-4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体1-8)的合成

将中间体1-7(120mg,436.17μmol)溶于二氯甲烷(5mL)，加(4-(二氟甲氧基)苯基)硼酸(163.94mg,872.34μmol)，醋酸铜(87.15mg,479.79μmol)，吡啶(103.50mg,1.31mmol)，在氧气氛下40℃搅拌反应16小时，随后加水(5mL),氨水(0.5mL)和乙酸乙酯(5mL)，萃取，随后合并有机相并浓缩。残余物经制备薄层色谱纯化(二氧化硅,石油醚:四氢呋喃＝1:1).所标题化合物(110mg)。

MS m/z(ESI):417[M+H] ⁺。

步骤8：4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(2-(羟甲基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物1)的合成

将中间体1-8(110mg,263.65μmol)和中间体1-9(120mg,416.45μmol)溶于二氧六环(2mL)和水(0.5mL)中，向反应体系加入碳酸铯(171.80mg,527.29μmol),在氮气氛下，加入Pd(dtbpf)Cl ₂(17.18mg,26.36μmol)。反应液在90℃搅拌反应16小时。向反应液中加入水(15mL),用乙酸乙酯(10mL)萃取，有机相用硫酸钠干燥,减压浓缩。残余物经制备高效液相色谱纯化(碱性条件,柱子:Phenomenex Luna C18 100*30mm*5μm；流动相:[水(0.05％氨水v/v)-乙腈]；B％:43％-63％,9分钟)。得标题化合物(12mg)。

MS m/z(ESI):499.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,METHANOL-d ₄)δ8.18(s,1H),7.89(s,1H),7.65(d,J＝8.4Hz,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,1H),7.45(d,J＝8.9Hz,2H),7.33(d,J＝8.8Hz,2H),6.96(t,J＝73.8Hz,1H),4.81(s,2H),4.39(q,J＝7.1Hz,2H),3.92(s,3H),1.36(t,J＝7.1Hz,3H)。

实施例2、4-[4-(二氟甲氧基)苯基]-2-乙氧基-6-(4-甲氧基苯基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物2)

步骤1：4-[4-(二氟甲氧基)苯基]-2-乙氧基-6-(4-甲氧基苯基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物2)的合成

将中间体1-8(110mg,263.65μmol)和反应物2-1(92.58mg,395.48μmol)溶于二氧六环(3mL)和水(0.75mL)，加入碳酸铯(171.80mg,527.30μmol)和Pd(dtbpf)Cl ₂(17.18mg,26.37 μmol)，随后在氮气氛围下，加热至90℃，反应16小时。LCMS检测反应完毕。反应液加水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL)萃取2次，有机相经减压浓缩除去溶剂。残留物经制备薄层板纯化(二氧化硅,四氢呋喃/石油醚＝2/1),又经过制备高效液相纯化(碱性条件，柱子:Boston Prime C18 150*30mm*5μm；流动相:[A:水(0.05％氨水v/v),B:乙腈]；B％:50％-80％,9分钟)。得标题化合物(2.6mg)。

MS m/z(ESI):445.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,Methanol-d ₄)δ8.05(s,1H),7.60(d,J＝8.8Hz,2H),7.44-7.40(m,2H),7.35-7.29(m,2H),6.96(t,J＝73Hz,1H),6.94(m,2H),4.38(q,J＝7.3Hz,2H),3.82(s,3H),1.35(t,J＝7.1Hz,3H)。

实施例3、4-[4-(二氟甲氧基)苯基]-2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物3)

将中间体1-8(60mg,143.81μmol)和中间体3-1(50.71mg,215.71μmol)溶于二氧六环(2mL)和水(0.5mL)，加入碳酸铯(93.71mg,287.61μmol)和Pd(dtbpf)Cl ₂(9.37mg,14.38μmol)，随后在氮气氛围下，加热至90℃，反应16小时。LCMS检测反应完毕。反应液加水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL)萃取2次，有机相经减压浓缩除去溶剂。残留物经制备薄层板纯化(二氧化硅,四氢呋喃/石油醚＝2/1),又经过制备高效液相纯化(碱性条件，柱子:Boston Prime C18 150*30mm*5μm；流动相:[水(0.05％氨水v/v)-乙腈]；B％:42％-72％,9分钟)。得标题化合物(3.2mg)。

MS m/z(ESI):446.0[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,Methanol-d ₄)δ8.20(d,J＝2.4Hz,1H),8.14(s,1H),7.90(dd,J＝2.6,9.4Hz,1H),7.46-7.38(m,2H),7.36-7.28(m,2H),6.95(t,J＝73.7Hz,1H),6.60(d,J＝9.4Hz,1H),4.38(q,J＝7.1Hz,2H),3.62(s,3H),1.35(t,J＝7.1Hz,3H)。

实施例4、4-(4-(二氟甲氧基苯基)-2-乙氧基-6-(1-异丁基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物4)

将中间体4-1(53mg,191.74μmol,可根据专利WO2019102256文本第48页报道方法合成)和中间体1-8(40mg,95.87μmol)溶于二氧六环(1mL)和水(0.25mL)中，向其中加入碳酸铯(62.47mg,191.74μmol)和Pd(dtbpf)Cl ₂(6.25mg,9.59μmol)，反应液于氮气保护下100℃搅拌2h。LC-MS检测反应完毕。反应液过滤，减压浓缩至干，经制备高效液相色谱纯化(column:Gemini NX C18 5μm*10*150mm；流动相:A:水(0.225％碳酸氢铵v/v),B:乙腈；B％:30％-50％,11min)得标题化合物(10.0mg)。

MS m/z(ESI):488.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.25–8.14(m,2H),7.75–7.67(m,1H),7.42–7.35(m,2H),7.30(t,J＝72Hz 1H),7.29–7.22(m,2H),6.37(d,J＝9.5Hz,1H),4.31–4.19(m,2H),3.67(d,J＝7.4Hz,2H),2.11–1.90(m,1H),1.24(t,J＝7.0Hz,3H),0.80(d,J＝6.7Hz,6H).

实施例5、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物5)

将中间体1-8(40mg,95.87μmol)和中间体5-1(35mg,134.22μmol)溶于二氧六环(1mL)和水(0.2mL)中，向其中加入碳酸铯(62.47mg,191.74μmol)和Pd(dtbpf)Cl ₂(6.25mg,9.59μmol)，反应液于氮气保护下90℃搅拌2h。LC-MS检测反应完毕。反应液过滤，减压浓缩至干，经制备高效液相色谱纯化(column:Gemini NX C18 5μm*10*150mm；流动相:A:水(0.225％三氟乙酸v/v),B:乙腈；B％:30％-50％,11min)得标题化合物(23.0mg)。

MS m/z(ESI):469.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ9.23(s,1H),8.31(s,1H),8.19(s,1H),7.91–7.79(m,2H),7.47–7.40(m,2H),7.37–7.30(m,2H),7.20(t,J＝72.0Hz,1H),4.38–4.25(m,2H),4.01(s,3H),1.31(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例6、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-6-(1-(二氟甲基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-乙氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物6)

步骤1：4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体6-1)的合成

将化合物1-8(4.2g,10mmol)和双联频哪醇硼酸酯(3.8g,15mmol)溶于无水二氧六环(42mL)，向其中加入乙酸钾(1.9g,20mmol)和Pd(dppf)Cl ₂(1.1g,1.5mmol)，反应液于氮气保护下100℃搅拌15h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，旋蒸除去溶剂，依次加入水(40mL)和乙酸乙酯(50mL)，有机相用水(15mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。经制备薄层色谱法(二氧化硅,石油醚:乙酸乙酯＝4:1)得标题化合物(3.2g)。

MS m/z(ESI):465.1[M+H] ⁺。

步骤2：4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-6-(1-(二氟甲基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-乙氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物6)的合成

将中间体6-2(50mg,0.22mmol)和中间体6-1(124.5mg,0.268mmol)溶于无水二氧六环溶液(0.5mL)中，向其中加入水(0.1mL)，碳酸铯(145.5mg,0.446mmol)和Pd(dtbpf)Cl ₂(14.6mg,0.022mmol)，反应液于氮气保护下100℃搅拌2h。LC-MS检测反应完毕。反应液过滤，减压浓缩至干，通过高压制备纯化[YMC-Actus Triart C18柱5μm 二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.05％NH ₄HCO ₃)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例55％-80％,洗脱时间12分钟]得标题化合物(15mg)。

MS m/z(ESI):482.0[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.43(s,1H),8.36(s,1H),7.99-7.70(m,2H),7.49-7.12(m,5H),6.55(d,J＝9.8Hz,1H),4.29-4.23(m,2H),1.24(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例7、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5-(4H)-酮(化合物7)

步骤1：4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5-(4H)-酮(化合物)的合成

将中间体1-8(40mg,95.87μmol)和中间体7-1(48.7mg,191.74μmol)溶于二氧六环(2mL)中，向其中加入乙酸钾(28.2mg,287.61μmol)和Pd(dppf)Cl ₂(7.0mg,9.59μmol)，反应液于氮气保护下90℃搅拌1h。LC-MS检测反应完毕。再向反应液中加入中间体7-2(36mg,191.74μmol),碳酸铯(62.6mg,191.74μmol),Pd(dtbpf)Cl ₂(6.3mg,9.5μmol)和水(0.5mL)，于氮气保护下90℃搅拌1h。LC-MS检测反应完毕。反应液过滤，减压浓缩至干，经制备高效液相色谱纯化(column:Gemini NX C18 5μm*10*150mm；流动相:A:水(0.225％碳酸氢铵v/v),B:乙腈；B％:30％-50％,11min)得标题化合物(10.6mg)。

MS m/z(ESI):447.1[M+H] ⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.51(s,1H),8.01(d,J＝9.7Hz,1H),7.48(d,J＝8.9Hz,2H),7.37(t,J＝76.0Hz,1H),7.33(d,J＝8.8Hz,2H),6.93(d,J＝9.7Hz,1H),4.47–4.25(m,2H),3.72(s,3H),1.31(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例8、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(1-(甲基-d ₃)-1H苯并[d]咪唑-6-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物8)

步骤1：6-溴-1-(甲基-d ₃)-1H-苯并[d]咪唑(中间体8-2)的合成

将反应物8-1(5.0g,25.38mmol)溶于四氢呋喃溶液(50mL)中,0-5℃下加入氢化钠(60％)(1.12g, 27.91mmol),反应液于5℃搅拌0.5h，往反应液中加入CD ₃I(4.41g,30.45mmol),加完室温搅拌12h。LC-MS检测反应结束，将反应液缓慢倒入饱和氯化铵水溶液(50mL)，用乙酸乙酯(60mL*2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，洗涤后的有机相用适量的无水硫酸钠干燥得粗产品5.0g,将1.0g粗产品经超临界液相色谱制备(柱子:DAICEL CHIRALPAK IG(250mm*50mm,10μm)；流动相:[A为CO ₂，B:含0.1％氨水的乙醇溶液]；B％:35％)得标题化合物(400mg)。

MS m/z(ESI):214.0[M+H] ⁺。

步骤2：4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(1-(甲基-d ₃)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物8)的合成

将中间体6-1(150mg,0.32mmol)和中间体8-2(83mg,0.39mmol)溶于无水二氧六环溶液(2mL)中，向其中加入水(0.4mL)，碳酸铯(211mg,0.65mmol)和1,1-二(叔丁基磷)二茂铁氯化钯(Pd(dtbpf)Cl ₂)(21mg,0.03mmol)，反应液于氮气保护下100℃搅拌2h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，通过高效液相制备色谱纯化[YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.05％NH ₄HCO ₃)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例55％-80％,洗脱时间13分钟]得标题化合物(16mg)。

MS m/z(ESI):472.0[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.34(s,1H),8.20(s,1H),7.97(d,J＝1.6Hz,1H),7.66(d,J＝8.5Hz,1H),7.57–7.21(m,6H),4.36–4.31(m,2H),1.35–1.31(m,3H).

实施例9、N-(6-(4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-5-氧代-4,5-二氢噻唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙酰胺(化合物9)

步骤1：N-(6-(4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-5-氧代-4,5-二氢噻唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙酰胺(化合物9)的合成

将中间体9-1(67mg,0.25mmol)和中间体6-1(115mg,0.30mmol)溶于二氧六环(2mL)和水(0.5mL)中，向其中加入碳酸铯(164mg,0.50mmol)和1,1-二(叔丁基磷)二茂铁氯化钯(Pd(dtbpf)Cl ₂)(24mg,0.04mmol)，反应液于氮气保护下80℃搅拌16h。LC-MS检测反应完毕。反应液过滤，减压浓缩至干，经制备高效液相色谱纯化YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.05％NH ₄HCO ₃)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例30％-50％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(11mg)。

MS m/z(ESI):526.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ10.62(s,1H),8.31(s,1H),7.87(s,1H),7.60–7.43(m,4H),7.39–7.30(m,3H),4.35–4.30(m,2H),3.30(s,3H),2.16(s,3H),1.32(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例10、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(4-氧代-1,2,3,9b-四氢-4λ ⁴-苯并[c]噻吩并[2,1-e]异噻唑-8-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物10)

将中间体10-1(200mg,0.52mmol,可根据文献”Tetrahydrobenzo[c]thieno-[2,1-e]isothiazole 4-Oxides:Three-Dimensional Heterocycles as Cross-Coupling Building Blocks”报道方法合成)及中间体6-1(201mg,0.62mmol)溶于二氧六环(2mL)和水(0.4mL)中，向其中加入磷酸钾(330mg,1.56mmol)和1,1-二(叔丁基磷)二茂铁氯化钯(Pd(dtbpf)Cl ₂)(33mg,0.05mmol)，反应液于氮气保护下100℃搅拌16h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，依次加入水(30mL)和乙酸乙酯(40mL)，有机相用水(30mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。经薄层色谱法(二氧化硅，二氯甲烷：甲醇＝5:1)得粗品(210mg)，然后再经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.05％三氟乙酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例40％-60％,洗脱时间13分钟)得标题化合物(30mg)。

MS m/z(ESI):530.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.16(s,1H),7.61(d,J＝1.9Hz,1H),7.57–7.11(m,6H),6.76(d,J＝8.3Hz,1H),4.91–4.84(m,1H),4.36–4.25(m,2H),3.77–3.67(m,1H),3.62–3.49(m,1H),2.79–2.67(m,1H),2.22–2.13(m,1H),2.14–2.05(m,1H),1.67–1.51(m,1H),1.35–1.21(m,3H).

实施例11、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-6-(2,3-二氢-1H-苯并[d]吡咯并[1,2-a]咪唑-7-基)-2-乙氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物11)

将中间体11-1(149mg,628.03μmol,可根据文献”Metal-Free Sequential C(sp2)-H/OH and C(sp3)-H Aminations of Nitrosoarenes and N-Heterocycles to Ring-Fused Imidazoles”报道方法合成)和中间体6-1(200mg,523.36μmol)溶于二氧六环(2mL)和水(0.5mL)中，向其中加入碳酸铯(341mg,1.05mmol)和1,1-二(叔丁基磷)二茂铁氯化钯(Pd(dtbpf)Cl ₂)(34mg,52.01μmol)，反应液于氮气保护下90℃搅拌2h。LC-MS检测反应完毕。反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例30％-50％,洗脱时间11分钟)得标题化合物(57.0mg)。

MS m/z(ESI):495.0[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.29(s,1H),7.86(s,1H),7.56–7.19(m,6H),4.35-4.29(m,2H),4.09(t,J＝7.0Hz,2H),2.96–2.94(m,2H),2.67–2.64(m,2H),1.32(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例12、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(2-甲基-2H-吲唑-5-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物12)的合成

将中间体1-8(150mg,0.36mmol)和中间体12-1(111mg,0.43mmol)溶于无水二氧六环溶液(2mL)中，向其中加入水(0.4mL)，碳酸铯(234mg,0.72mmol)和1,1-二(叔丁基磷)二茂铁氯化钯(Pd(dtbpf)Cl ₂)(23mg,0.03mmol)，反应液于氮气保护下100℃搅拌2h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，将反应液过滤，减压浓缩至干，通过制备高效液相色谱纯化[YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.05％NH ₄HCO ₃)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例55％-80％,洗脱时间14分钟]得标题化合物(12mg)。

MS m/z(ESI):469.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.36(s,1H),8.27(s,1H),8.05(s,1H),7.59–7.19(m,7H),4.34–4.29(m,2H),4.17(s,3H),1.33–1.30(m,3H).

实施例13、4-(6-环丙基吡啶-3-基)-2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物13)

步骤1：6-溴-4-(6-环丙基吡啶-3-基)-2-乙氧基噻唑并[4,5-b]吡啶--5(4H)-酮(中间体13-2)的合成

在氧气氛围下，将中间体1-7(80.0mg)溶于二氯乙烷(DCE)溶液(2mL)中，向反应液中加入中间体13-1(56.87mg)，醋酸铜(105.6mg),和吡啶(69.0mg),加毕升温至45℃搅拌24h。随后，反应液减压浓缩至干，残余物通过硅胶柱层析(PE/EA＝5/1-2/1)纯化。得标题化合物(40mg)。

MS m/z(ESI):392[M+H] ⁺。

步骤2：4-(6-环丙基吡啶-3-基)-2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物13)的合成

在氮气氛围下，将中间体13-2(40.0mg)溶于二氧六环溶液(0.4mL)中，向反应液中加入中间体3-1(28.8mg)，磷酸钾(43.3mg),水(0.08mL)和Pd(dtbpf)Cl ₂(6.7mg),加毕升温至100℃搅拌2h。随后，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物通过高压制备纯化[YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.05％NH ₄HCO ₃)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例55％-80％,洗脱时间13分钟]，得标题化合物(2mg)。

MS m/z(ESI):421[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.32(s,1H),8.22(d,J＝2.6Hz,1H),8.20(s,1H),7.71–7.69(m,1H),7.66–7.63(m,1H),7.41(d,J＝8.3Hz,1H),6.37(d,J＝9.5Hz,1H),4.28–4.23(m,2H),3.39(s,3H),2.20–2.10(m,1H),1.24(t,J＝7.0Hz,3H),0.99–0.86(m,4H).

实施例14、2-(2,2-二氟乙氧基)-4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3- 基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物14)

步骤1：6-溴-2-(2,2-二氟乙氧基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体14-2)合成

将中间体14-1(150mg)溶于四氢呋喃(THF)(2mL)中，冰水浴下加入NaH(77mg,60％wt)。加完，室温搅拌0.5小时。冰水浴下加入2,2-二氟乙醇(119mg)。加毕，室温搅拌12小时。随后，将反应液倒入饱和氯化铵水溶液(5mL)中，用乙酸乙酯(5mL*3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得标题化合物(110mg)。

MS m/z(ESI):311.0[M+H] ⁺。

步骤2：6-溴-2-(2,2-二氟乙氧基)-4-(4-(二氟甲氧基)苯基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体14-4)的合成

将中间体14-2(120mg)溶于二氯乙烷(2mL)，向反应液中加入醋酸铜(140mg)，吡啶(92mg)，中间体14-3(824mg)。加毕，向反应液中通入空气，将反应液升温至60℃搅拌12h。随后，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物通过柱层析纯化(DCM/MeOH＝10/1)，得标题化合物(90mg)。

MS m/z(ESI):453.0[M+H] ⁺。

步骤3：2-(2,2-二氟乙氧基)-4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物14)的合成

在氮气氛围下，将中间体14-4(90mg)溶于二氧六环溶液(1mL)中，加入中间体3-1(56mg)，碳酸铯(129mg)，水(0.2mL)和Pd(dtbpf)Cl ₂(13mg)，加毕升温至100℃搅拌2小时。随后，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物通过高压制备液相色谱纯化[YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.05％NH ₄HCO ₃)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例55％-80％,洗脱时间13分钟]，得标题化合物(25mg)。

MS m/z(ESI):482.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.24–8.21(m,2H),7.72–7.69(m,1H),7.49–7.12(m,5H),6.43–6.15(m,2H),4.57–4.49(m,2H),3.40(s,3H).

实施例15、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(6-甲氧基哒嗪-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物15)

步骤1：(4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-5-氧代-4,5-二氢噻唑并[4,5-b]吡啶-6-基)硼酸(中间体15-1)的合成

将中间体1-8(4.2g)和双联频哪醇硼酸酯(3.8g)溶于无水二氧六环(42mL)，向其中加入乙酸钾(1.9g)和Pd(dppf)Cl ₂(1.1g)，反应液于氮气保护下100℃搅拌15h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，旋蒸除去溶剂，依次加入水(40mL)和乙酸乙酯(50mL)，有机相用水(15mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干。残余物经制备高效液相色谱纯化(色谱柱:Gemini NX C18 5μm*10*150mm；流动相:A:水(0.225％甲酸v/v),B:乙腈；B％:30％-50％)得标题化合物(3.2g)。

MS m/z(ESI):383.1[M+H] ⁺。

步骤2：4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(6-甲氧基哒嗪-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物15)的合成

将中间体15-1(36.6mg)和中间体15-2(36.24mg)溶于二氧六环(1mL)和水(0.25mL)中，向其中加入碳酸铯(62.48mg)和Pd(dtbpf)Cl ₂(6.25mg)，反应液于氮气保护下90℃搅拌16h。随后，反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(色谱柱:Gemini NX C18 5μm*10*150mm；流动相:A:水(0.225％甲酸v/v),B:乙腈；B％:30％-50％,11min)得标题化合物(9.0mg)。

MS m/z(ESI):447.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.86(s,1H),8.32(d,J＝9.3Hz,1H),7.56–7.19(m,6H),4.37-4.31(m,2H),4.06(s,3H),1.32(t,J＝6.0Hz,3H).

实施例16、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(2-甲氧基嘧啶-5-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物16)

将中间体1-8(40mg)和中间体16-1(45mg)溶于二氧六环(1mL)和水(0.2mL)，加入碳酸铯(62.47mg)，Pd(dtbpf)Cl ₂(6.25mg)，通氮气,在90℃搅拌反应1h。反应液中加入巯基硅胶(50mg)，搅拌30min，过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(柱子:Phenomenex Luna C18 100*30mm*5μm；流动相:[水(0.05％CF ₃COOH,v/v)-乙腈]；B％:43％-63％,9分钟)得得标题化合物(10mg).

MS m/z(ESI):447.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(s,2H),8.42(s,1H),7.56–7.19(m,5H),4.37–4.31(m,2H),3.96(s,3H),1.32(t,J＝6.0Hz,3H).

实施例17、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(2-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物17)

步骤1：2-(6-溴-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙烷-2-醇(中间体17-2)的合成

将中间体17-1(500mg)溶于稀盐酸(4mL,2N)中，加入2-羟基-2-甲基丙酸(388mg)，反应液于100℃下搅拌反应8h。反应完毕后，待反应冷却至室温，依次加入水(15mL)和乙酸乙酯(20mL)，有机相用水(10mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥，过滤后，减压浓缩至干，残余物经柱层析法纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)，得标题化合物(610mg)。

MS m/z(ESI):269.0[M+H] ⁺

步骤2：4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(2-(2-羟基丙烷-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物17)的合成

将中间体6-1(150mg)和中间体17-2(104mg)溶于1,4-二氧六环(1.2mL)和水(0.3mL)中，加入Pd(dtbpf)Cl ₂(32mg)，Cs ₂CO ₃(211mg)，反应液于氮气保护下100℃搅拌4h。反应完毕后，待反应冷却至室温，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经柱层析法纯化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)得到粗品，再通过制备高效液相色谱纯化[YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例30％-60％,洗脱时间15分钟]得标题化合物(3.1mg)。

MS m/z(ESI):527.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.17(s,1H),7.86(s,1H),7.65–7.63(m,1H),7.53–7.51(m,1H),7.46–7.44(m,2H),7.34–7.32(m,2H),7.14–6.77(m,1H),4.42–4.36(m,2H),4.10(s,3H),1.74(s,6H),1.36(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例18、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-6-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-2-乙氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物18)

将中间体6-1(80mg)和中间体18-1(51mg)溶于1,4-二氧六环(1.2mL)和水(0.3mL)中，向其中加入Pd(dtbpf)Cl ₂(17mg)，Cs ₂CO ₃(112mg)，反应液于氮气保护下100℃搅拌10h。反应完毕后，待反应冷却至室温，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经柱层析法纯化(二氯甲烷：甲醇＝20:1)得到粗品,再通过制备高效液相色谱纯化[YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例40％-70％，洗脱时间15分钟]得标题化合物(9mg)。

MS m/z(ESI):457.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.16(s,1H),7.57(s,1H),7.56–7.17(m,6H),6.77(d,J＝8.3Hz,1H),4.55(t,J＝8.7Hz,2H),4.33–4.28(m,2H),3.19(t,J＝8.7Hz,2H),1.31(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例19、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-6-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(氧杂环丁-3-基氧基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物19)

步骤1：2,6-二溴-5-甲氧基噻唑并[4,5-b]吡啶(中间体19-1)的合成

将溴化铜(103g)和亚硝酸异戊酯(86g)溶于乙腈(1000mL)，冷却至0℃，将中间体1-4(60g)分批加入反应瓶，随后反应液在25℃下搅拌反应16h。将反应液倒入稀HCl溶液中搅拌30min，用碳酸氢钠调pH＝8，用混合溶剂二氯甲烷:甲醇＝10:1(200mL*3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥。经制备薄层色谱法(二氧化硅，二氯甲烷)得到标题化合物(12g)。

MS m/z(ESI):323.1[M+H] ⁺。

步骤2：2,6-二溴噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体19-2)的合成

将中间体19-1(8g)溶于乙酸(50mL)，加入48％氢溴酸(52mL)，反应液在80℃下搅拌反应5h。反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，向其中加入饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)，过滤，用水(40mL*2)洗涤滤饼得到标题化合物(9.5g)。

MS m/z(ESI):309.1[M+H] ⁺。

步骤3：6-溴-2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体19-3)的合成

将3-氧杂环丁醇(358.5mg,4.84mmol)溶于四氢呋喃(10mL)，0℃下加入NaH(193.6mg,4.84mmol)，加完搅拌10分钟，再加入中间体19-2(500mg,1.61mmol),室温搅拌3h。反应液中加入水(10mL)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(20mL*3),有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干。残余物经柱层析纯化(DCM：CH ₃OH＝10：1)得到标题化合物(52.0mg)。

MS m/z(ESI):303.1[M+H] ⁺。

步骤4：6-溴-4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体19-4)的合成

将中间体19-3(50mg)和4-(二氟甲氧基)苯硼酸(62mg)溶于二氯乙烷(2ml)中，再加入Cu(OAc) ₂(44.9mg,),吡啶(39.14mg),45℃反应12h。反应液减压浓缩至干。残余物经柱层析纯化(DCM：CH ₃OH＝10：1)得到标题化合物(57.9mg)。

MS m/z(ESI):445.1[M+H] ⁺

步骤5：4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-6-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(氧杂环丁-3-基氧基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物19)的合成

将中间体5-1(57.97mg)和中间体19-1(50mg)溶于二氧六环(1mL)和水(0.2mL)中，向其中加入碳酸铯(73.17mg)和Pd(dtbpf)Cl ₂(7.32mg)，反应液于氮气保护下90℃搅拌16h。随后反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(色谱柱:Gemini NX C18 5μm*10*150mm；流动相:A:水(0.225％甲酸v/v),B:乙腈；B％:30％-50％,11min)得标题化合物(9.8mg)。

MS m/z(ESI):497.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.27(s,1H),8.13(s,1H),7.88(s,1H),7.59-7.49(m,1H),7.45-7.12(m,6H),5.43-5.40(m,1H)4.63-4.60(m,2H)4.55-4.52(m,2H),3.76(s,3H).

实施例20、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物20)

将中间体15-1(40mg)和中间体20-1(24.75mg)溶于二氧六环(1mL)和水(0.25mL)中，向其中加入碳酸铯(68.2mg)和Pd(dtbpf)Cl ₂(6.82mg)，反应液于氮气保护下90℃搅拌16h。随后，反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(色谱柱:Gemini NX C185μm*10*150mm；流动相:A:水(0.225％甲酸v/v),B:乙腈；B％:30％-50％,11min)得标题化合物(18.0mg)。

MS m/z(ESI):455.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.14(s,1H),8.45(s,1H),7.98(s,1H),7.60-7.19(m,8H),4.36-4.31(m,2H),1.31(t,J＝7.1Hz,3H).

实施例21：4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(1-甲基-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑[1,2-a]咪唑-6-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物21)

将化合物28(57mg)溶于无水四氢呋喃(0.8mL)中，0℃下向其中加入双三甲基硅基胺基锂溶液(1mol/L的THF溶液,0.15mL)，30min后再加入碘甲烷(33mg)，反应液于30℃下搅拌反应4h。反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，残余物通过制备高效液相色谱纯化[YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例40％-70％，洗脱时间14分钟]得标题化合物(16mg)。

MS m/z(ESI):510.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.20–8.16(m,1H),7.59–7.09(m,8H),4.33–4.28(m,2H),4.14–4.08(m,2H),3.94–3.85(m,2H),2.93(s,3H),1.31(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例22、6-(苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]嘧啶-7-基)-4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物22)

将中间体22-1(48.69mg)和中间体15-1(50mg)溶于二氧六环(2mL)和水(0.5mL)中，向其中加入碳酸铯(85.26mg)和Pd(dtbpf)Cl ₂(8.53mg)，反应液于氮气保护下90℃搅拌16h。随后，反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(色谱柱:Gemini NX C18 5μm*10*150mm；流动相:A:水(0.225％甲酸v/v),B:乙腈；B％:30％-50％,11min)得标题化合物(4.5mg)。

MS m/z(ESI):506.0[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ9.56–9.54(m,1H),8.84–8.82(m,1H),8.74(s,1H),8.38(s,1H),7.88(s,2H),7.56–7.14(m,6H),4.37-4.31(m,2H),1.32(t,J＝8.0Hz,3H).

实施例23、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-6-(1-(甲基-d ₃)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(三氟甲基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物23)

步骤1：1-(甲基-d ₃)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-1H-苯并[d]咪唑(中间体23-1)的合成

在氮气氛围下，将中间体8-2(1.0g)溶于二氧六环溶液(10mL)中，加入醋酸钾(917mg)，双联频那醇硼酸酯(1.42g)和Pd(dppf)Cl ₂(342mg)。将反应液升温至100℃搅拌2h。随后，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物通过柱层析(PE/EA＝5/1-3/1)纯化，得标题化合物(500mg)。

MS m/z(ESI):262.0[M+H] ⁺。

步骤2：2,6-二溴-4-(4-(二氟甲氧基)苯基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体23-3)的合成

将中间体23-2(450mg)溶于1,2-二氯乙烷中(5mL),加入醋酸铜(318mg),吡啶(0.4mL),中间体14-3(409mg),加完向反应中通空气鼓泡，将反应液升温至60℃搅拌48h。随后，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物通过柱层析色谱纯化(DCM:MeOH＝20:1),得标题化合物(450mg)。

MS m/z(ESI):451.0[M+H] ⁺。

步骤3：6-溴-4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-(三氟甲基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体23-4)的合成

在氮气氛围下，将中间体23-3(400mg)溶于DMF(5mL)中，加入碘化亚铜(202mg)和2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸甲酯(204mg)。将反应液升温至100℃下搅拌12h。然后，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物通过柱层析色谱(DCM:MeOH＝20/1-10/1)纯化，得标题化合物(150mg)。

MS m/z(ESI):441.0[M+H] ⁺。

步骤4：4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-6-(1-(甲基-d ₃)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(三氟甲基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物23)的合成

在氮气氛围下，将中间体23-4(120.0mg)溶于二氧六环溶液(2mL)中，加入中间体23-1(71mg)，碳酸铯(177mg),水(0.2mL)和Pd(dtbpf)Cl ₂(18mg)。加毕，升温至100℃搅拌2h。随后，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物通过高压制备液相色谱纯化[YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.05％NH ₄HCO ₃)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例55％-80％,洗脱时间13分钟]，得标题化合物(25mg)。

MS m/z(ESI):496.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.66(s,1H),8.27(s,1H),8.03(s,1H),7.73(d,J＝8.4Hz,1H),7.60–7.24(m,6H).

实施例24、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-甲氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物24)

步骤1：6-溴-4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-甲氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体24-1)的合成

将中间体23-3(250mg)溶于甲醇(5mL)中，向其中加入甲醇钠(120mg)，25℃下反应5h，随后，反应液减压浓缩去除溶剂，残余物用水(10mL)洗涤，乙酸乙酯(10mL*2)萃取，有机相用适量无水硫酸钠干燥，经制备薄层色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝2：1)得标题化合物(172mg)。

MS m/z(ESI):402.9[M+H] ⁺。

步骤2：4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-甲氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物24)的合成

将中间体24-1(80mg)和中间体3-1(70mg)溶于1,4-二氧六环(1.2mL)和水(0.3mL)中，向其中加入Pd(dtbpf)Cl ₂(19mg)和碳酸铯(196mg)，在氮气氛围下100℃反应4h，随后，反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(色谱柱:Gemini NX C185μm*10*150mm；流动相:A:水(0.225％甲酸v/v),B:乙腈；B％:30％-50％,17min)得标题化合物(13mg)。

MS m/z(ESI):432.0[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.30(d,J＝2.5Hz,1H),8.26(s,1H),7.79–7.76(m,1H),7.62–7.14(m,5H),6.44(d,J＝9.5Hz,1H),3.97(s,3H),3.46(s,3H).

实施例25、2-乙氧基-4-(4-氟苯基)-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物25)

步骤1：6-溴-2-乙氧基-4-(4-氟苯基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体25-2)的合成

将中间体1-7(100mg)和中间体25-1(156mg)溶于无水1,2-二氯乙烷(5mL)中，加入吡啶(86mg)和醋酸铜(79mg)，加毕，反应液40℃下搅拌4小时。随后，反应液过滤，滤液经减压浓缩除去溶剂。残余物经残柱层析法纯化(二氯甲烷：甲醇＝20：1)得标题化合物(100mg)。

MS m/z(ESI):368.0[M+H] ⁺。

步骤2：2-乙氧基-4-(4-氟苯基)-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物25)的合成

将中间体25-2(55mg)溶于1,4-二氧六环溶液(5mL)和水(0.5mL)中,向其中加入中间体3-1(73mg)，Pd(dppf)Cl ₂(11mg)和碳酸铯(151mg)，反应液于氮气保护下100℃搅拌12小时。待反应冷却至室温，依次加入水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)，有机相用水(5mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。过滤后，有机相经减压浓缩除去溶剂，残余物用制备高效液相色谱法纯化(柱子:Waters Xbridge BEH C18 100*25mm*5μm；流动相:[A:水(0.225％甲酸),B:乙腈]；B％:23％-50％,12分钟)得标题化合物(38mg)。

MS m/z(ESI):398.0[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.32(d,J＝2.6Hz,1H),8.27(s,1H),7.80(dd,J＝9.5,2.7Hz,1H),7.48–7.44(m,2H),7.42–7.34(m,2H),6.46(d,J＝9.5Hz,1H),4.36–4.30(m,2H),1.32(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例26、4-(3-氯苯基)-2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物26)

步骤1：6-溴-4-(3-氯苯基)-2-乙氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体26-2)的合成

将中间体1-7(100mg)和中间体26-1(156mg)溶于无水1,2-二氯乙烷(5mL)中，加入吡啶(86mg)和醋酸铜(79mg)，加毕，反应液于40℃下搅拌4小时。随后，反应液过滤，滤液经减压浓缩除去溶剂。残余物经残余物经柱层析法纯化(二氯甲烷：甲醇＝20：1)得标题化合物(170mg)。

MS m/z(ESI):385.0[M+H] ⁺。

步骤2：4-(3-氯苯基)-2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物26)的合成

将中间体26-2(60mg)溶于1,4-二氧六环溶液(5mL)和水(0.5mL)中，向其中加入中间体3-1(73mg)，Pd(dppf)Cl ₂(11mg)和碳酸铯(151mg)，反应液于氮气保护下100℃搅拌12小时。待反应冷却至室温，依次加入水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)，有机相用水(5mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。过滤后，有机相经减压浓缩除去溶剂，残余物通过制备高效液相色谱法纯化(柱子:Waters Xbridge BEH C18 100*25mm*5μm；流动相:[A:水(0.225％甲酸),B:乙腈]；B％:23％-50％,12分钟)得标题化合物(38mg)。

MS m/z(ESI):414.0[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.31(d,J＝2.6Hz,1H),8.27(s,1H),7.80(dd,J＝9.5,2.6Hz,1H),7.62–7.51(m,3H),7.42–7.38(m,1H),6.45(d,J＝9.5Hz,1H),4.44–4.18(m,2H),3.48(s,3H),1.32(t,J＝7.1Hz,3H).

实施例27、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-6-(3,4-二氢-2H-苯并[4,5]咪唑并[2,1-b][1,3]噁嗪-7-基)-2-乙氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物27)

步骤1：1-(3-羟丙基)-3-(4-碘苯基)硫脲(中间体27-3)的合成

将中间体27-1(1.0g)和中间体27-2(261.5mg)溶于无水四氢呋喃(10mL)中，室温搅拌2h。反应液经减压浓缩，得标题化合物(1.1g)。

MS m/z(ESI):337.1[M+H] ⁺。

步骤2：N-(4-碘苯基)-5,6-二氢-4H-1,3-噁嗪-2-胺(中间体27-4)的合成

将中间体27-3(1.1g)溶于四氢呋喃(20mL)，加入氢氧化钠(327.19mg)的水(5mL)溶液，室温搅拌10min。再向其中加入对甲苯磺酰氯(TsCl,748.56mg)，室温搅拌3h。随后，反应液经减压浓缩，乙酸乙酯(40ml)萃取，有机相饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干。残余物经柱层析纯化(EA：Et ₃N＝100：1)，得到标题化合物(1.1g)。

MS m/z(ESI):303.1[M+H] ⁺。

步骤3：7-碘代-3,4-二氢-2H-苯并[4,5]咪唑并[2,1-b][1,3]噁嗪(中间体27-6)的合成

将中间体27-4(200mg)溶于乙腈(10mL)中，0℃下加入中间体27-5，室温搅拌2h。随后，反应液经饱和碳酸氢钠溶液(10mL)洗涤，再用二氯甲烷(20mL)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经柱层析纯化(EA：Et ₃N＝100：1)，得到标题化合物(110mg)。

MS m/z(ESI):301.1[M+H] ⁺。

步骤4：4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-6-(3,4-二氢-2H-苯并[4,5]咪唑并[2,1-b][1,3]噁嗪-7-基)-2-乙氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物27)的合成

将中间体27-6(94.23mg)和中间体15-1(60mg)溶于二氧六环(2mL)和水(0.5mL)中，向其中加入碳酸铯(102.31mg)和Pd(dtbpf)Cl ₂(10.22mg)，反应液于氮气保护下90℃搅拌16h。随后，反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(色谱柱:Gemini NX C18 5μm*10*150mm；流动相:A:水(0.225％甲酸v/v),B:乙腈；B％:30％-50％,11min)得标题化合物(14mg)。

MS m/z(ESI):511.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,Methanol-d ₄)δ8.26(s,1H),7.73(s,1H),7.56-7.19(m,7H),4.53-4.50(m,2H),4.34-4.29(m,2H),4.11-4.08(m,2H),2.26-2.23(m,2H),1.31(t,J＝7.0Hz,3H)

实施例28、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-6-(2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑并[1,2-a]咪唑-6-基)-2-乙氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物28)

步骤1：2-((6-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)氨基)乙-1-醇(中间体28-2)的合成

将中间体28-1(4.6g)溶于乙醇胺(3.6mL)中，反应液于140℃下搅拌反应14h。反应完毕后，待反应冷却至室温，向其中加入饱和碳酸氢钠溶液(25mL)，析出固体，反应液过滤，滤饼用水(40mL)洗涤并干燥得标题化合物粗品(4.1g)。

MS m/z(ESI):255.9[M+H] ⁺

步骤2：6-溴-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑并[1,2-a]咪唑(中间体28-3)的合成

将中间体28-2(2.6g)溶于1,2-二氯乙烷(20mL)中，向其中加入亚硫酰氯(0.9mL)。反应液于80℃下搅拌反应50min。反应完毕后，待反应液冷却至室温，减压浓缩去除溶剂，向残余物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)，用二氯甲烷/甲醇的共溶剂(25mL*2)萃取，有机相用适量无水硫酸钠干燥，过滤后，减压浓缩除去溶剂，向残余物中加入二甲苯(20mL)，反应液于110℃下搅拌反应20h。待反应液冷却至室温，生成的沉淀物通过过滤收集，用石油醚洗涤并干燥得到标题化合物(2.2g)。

MS m/z(ESI):238.0[M+H] ⁺

步骤3：4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-6-(2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑并[1,2-a]咪唑-6-基)-2-乙氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物28)的合成

将中间体6-1(180mg)和中间体28-3(138mg)溶于二氧六环(1.2mL)和水(0.3mL)中，向其中加入碳酸铯(253mg)和Pd(dtbpf)Cl ₂(38mg)，反应液于氮气保护下100℃搅拌4h。反应完毕后，待反应液冷却至室温，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物通过制备高效液相色谱纯化[YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例40％-70％，洗脱时间12分钟]得标题化合物(88.4mg)。

MS m/z(ESI):496.0[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.21–8.18(m,1H),7.55(s,1H),7.52–7.08(m,7H),6.96(d,J＝17.1Hz,1H),4.33–4.28(m,2H),4.04–4.08(m,2H),3.98–3.95(m,2H),1.31(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例29、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(1-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物29)

步骤1：1-(5-溴-2-硝基苯基)吡咯烷-2,5-二酮(中间体29-1)的合成

将4-溴硝基苯(1g)和丁二酰亚胺(588mg)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入碳酸钾(2.38g)，25℃搅拌12小时。反应结束后，依次加入水(50mL)和乙酸乙酯(50mL*3)，有机相用饱和食盐水(25mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥，过滤后，有机相经减压浓缩除去溶剂，残余物经柱层析色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)纯化，得标题化合物(1g)。

MS m/z(ESI):299.0[M+H] ⁺

步骤2：1-(2-氨基-5-溴苯基)吡咯烷-2,5-二酮(中间体29-2)的合成

将中间体29-1(1g)溶于醋酸(10mL)中,向反应液中加入铁粉(1.87g)，反应液于25℃搅拌12小时。待反应结束后，依次加入水(100mL)和乙酸乙酯(100mL)，有机相用水(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。过滤后，有机相经减压浓缩除去溶剂，残余物经柱层析色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)，得标题化合物(0.6g)。

MS m/z(ESI):269.0[M+H] ⁺

步骤3：7-溴-2,3-二氢-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-1-酮(中间体29-3)的合成

将中间体29-2(1g)溶于醋酸(10mL)中，反应液于40℃搅拌12小时。待反应结束后，依次加入水(100mL)和乙酸乙酯(100mL)，有机相用水(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。过滤后，有机相经减压浓缩除去溶剂，残余物经柱层析色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)，得标题化合物(0.2g)。

MS m/z(ESI):251.0[M+H] ⁺

步骤4：4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(三甲基锡基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体29-4)的合成

在氮气保护下，将中间体1-8(50mg)加入到无水二氧六环(6mL)中,向反应液中加入四(三苯基膦)钯(13,8mg)和六甲基二锡(58mg)。随后，反应液在氮气保护下120℃搅拌16小时。反应结束后，反应物经过滤，减压浓缩至干。残余物经制备薄层色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)得标题化合物(40mg)。

MS m/z(ESI):503.0[M+H] ⁺

步骤5：4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(1-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]吡咯[1,2-a]咪唑-7-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物29)的合成

氮气保护下，将中间体29-4(40mg)和中间体29-3(10mg)加入到无水二氧六环(6mL)中,向反应液中加入四(三苯基膦)钯(9.2mg)。随后，反应液在氮气保护下120℃搅拌16小时。反应结束后，反应物经过滤后，减压浓缩除去溶剂。残余物通过制备高效液相色谱纯化(柱子:Waters Xbridge BEH C18 100*25mm*5μm；流动相:[A:水(0.225％甲酸),B:乙腈]；B％:27％-47％,14分钟)得标题化合物(1.5mg)。

MS m/z(ESI):509.0[M+H] ⁺

¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.01(d,J＝1.6Hz,1H),7.93(d,J＝8.4Hz,1H),7.85(s,1H),7.79–7.77(m,1H),7.42(s,1H),7.40(s,1H),7.28(s,2H),6.58(t,J＝73.6Hz,1H),4.41–4.36(m,2H),3.35–3.32(m,2H),3.26–3.23(m,2H),1.39(t,J＝7.1Hz,3H).

实施例30、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-6-(1-(甲基-d ₃)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-丙氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物30)

步骤1：6-溴-4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-丙氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体30-1)的合成

将氢化钠(133mg)溶于无水四氢呋喃(2mL)中，0℃下向其中加入正丙醇(198mg)，30min后向其中加入中间体23-3(150mg)，随后反应液于25℃搅拌4小时。反应完毕后，用稀盐酸(2N)调pH至7，减压浓缩去除溶剂，加入水(10mL)，乙酸乙酯(10mL*2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，滤液减压浓缩至干，残余物经柱层析法纯化(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)得标题化合物(71mg)。

MS m/z(ESI):431.8[M+H] ⁺

步骤2：4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-6-(1-(甲基-d ₃)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-丙氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物30)的合成

将中间体30-1(68mg)和中间体23-1(62mg)溶于二氧六环(1.2mL)和水(0.3mL)中，向其中加入碳酸铯(103mg)和Pd(dtbpf)Cl ₂(15mg)，反应液于氮气保护下90℃搅拌10h。反应完毕后，待反应冷却至室温，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，通过制备高效液相色谱纯化[YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例40％-70％，洗脱时间14分钟]得标题化合物(17mg)。

MS m/z(ESI):486.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.32–8.27(m,1H),8.19–8.18(m,1H),7.96(s,1H),7.70–7.36(m,5H),7.36–7.31(m,2H),4.25–4.22(m,2H),1.77–1.68(m,2H),0.91(t,J＝7.4Hz,3H).

实施例31、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(2-(甲基-d ₃)-2H-吲唑-5-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物31)

在氮气氛围下，将中间体6-1(100mg)溶于二氧六环溶液(1mL)中，加入中间体31-1(55mg)，碳酸铯(140mg),水(0.2mL)和Pd(dtbpf)Cl ₂(14mg)。将反应液升温至100℃搅拌2h。随后，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物通过高压制备液相色谱纯化[YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.05％NH ₄HCO ₃)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例55％-80％,洗脱时间13分钟]，得标题化合物(15mg)。

MS m/z(ESI):472.1[M+H] ⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.35(s,1H),8.28(s,1H),8.05(s,1H),7.59–7.19(m,7H),4.35–4.29(m,2H),1.32(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例32、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(2-(乙氧基甲基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物32)

步骤1：6-溴-2-(乙氧基甲基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑(中间体32-2)的合成

将中间体32-1(200mg)溶于THF(2mL)中，冰水浴下加入NaH(66mg,60％wt),加完室温搅拌0.5小时。冰水浴下，加入碘乙烷(388mg)，随后，室温搅拌12h。TLC检测显示反应结束，将反应液倒入饱和氯化铵水溶液(5mL)中，用乙酸乙酯(5mL*3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，减压旋除溶剂，得标题化合物(140mg)。

MS m/z(ESI):269.0[M+H] ⁺

步骤2：4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(2-(乙氧基甲基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物32)的合成

氮气氛围下，将中间体32-2(75mg)溶于二氧六环(1mL)中，加入中间体6-1(129mg)，碳酸铯(182mg),水(0.2mL)和Pd(dtbpf)Cl ₂(18mg)。将反应液升温至100℃搅拌2h。随后，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物通过高压制备液相色谱纯化[YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.05％NH ₄HCO ₃)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例55％-80％,洗脱时间13分钟]，得标题化合物(25mg)。

MS m/z(ESI):527.1[M+H] ⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.34(s,1H),7.95(s,1H),7.63–7.20(m,7H),4.75(s,2H),4.33(t,J＝7.0Hz,2H),3.82(s,3H),3.53(t,J＝7.0Hz,2H),1.33(t,J＝7.0Hz,3H),1.16(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例33、6-(2-(氨基甲基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物33)

步骤1：2-(叠氮甲基)-6-溴-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑(中间体33-1)的合成

将中间体32-1(500mg)溶于THF(5mL)中，加入1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)(474mg),叠氮磷酸二苯酯(DPPA)(685mg),室温搅拌12h。随后，将反应液倒入水(5mL)中，用乙酸乙酯(5mL*3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，减压旋除溶剂，残余物通过柱层析色谱(PE/EA＝5/1-2/1)纯化，得标题化合物(450mg)。

MS m/z(ESI):266.0[M+H] ⁺

步骤2：(6-溴-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲胺(中间体33-2)的合成

将中间体33-1(500mg)溶于THF(5mL)中，加入水(1mL)，三苯基膦(591mg)。加毕，室温搅拌12h。随后，将反应液倒入水(5mL)中，乙酸乙酯(5mL*3)萃取，合并有机相，饱和食盐水(10mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，减压旋除溶剂，浓缩后的残余物柱层析纯化(DCM/MeOH＝20/1)，得标题化合物(160mg)。

MS m/z(ESI):240.0[M+H] ⁺

步骤3：6-(2-(氨基甲基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物33)的合成

在氮气氛围下，将中间体6-1(100mg)溶于二氧六环溶液(1mL)中，加入中间体33-2(52mg)，碳酸铯(140mg),水(0.2mL)和Pd(dtbpf)Cl ₂(14mg),。将反应液升温至100℃搅拌2h。LCMS监测显示反应结束，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物通过高压制备液相色谱纯化[YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.05％NH ₄HCO ₃)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例55％-80％,洗脱时间13分钟]，得标题化合物(13mg)。

MS m/z(ESI):498.1[M+H] ⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.31(s,1H),7.89(s,1H),7.57–7.55(m,1H),7.50–7.19(m,6H),4.32(d,J＝7.1Hz,2H),3.98(s,2H),3.77(s,3H),1.32(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例34、2-乙氧基-4-(4-乙炔基苯基)-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物34)

步骤1：6-溴-2-乙氧基-4-(4-碘苯基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体34-2)的合成

将中间体1-7(100mg)和中间体34-1(135mg)溶于无水1,2-二氯乙烷(5mL)中，向其中滴加入吡啶(86mg)和醋酸铜(79mg)，加毕，在40℃下搅拌4小时。反应结束后经减压浓缩除去溶剂。残余物经制备高效液相色谱纯化(柱子:Waters Xbridge BEH C18 100*25mm*5μm；流动相:[A:水(0.225％甲酸),B:乙腈]；B％:23％-50％,12分钟)得标题化合物(170mg)。

MS m/z(ESI):477.0[M+H] ⁺

步骤2：6-溴-2-乙氧基-4-(4-((三甲基硅基)乙炔基)苯基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体34-3)的合成

将中间体34-2(100mg)和1-(三甲基硅基)乙炔(25mg)溶于无水四氢呋喃溶液(5mL)中,加入碘化亚铜(12mg)，三乙胺(21mg)和四三苯基膦钯(12.10mg)。反应液于氮气保护下25℃搅拌12小时。待反应冷却至室温，依次加入水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)，有机相用水(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。过滤后，有机相经减压浓缩除去溶剂，残余物经柱层层析色谱纯化(二氯甲烷：甲醇＝20：1)得标题化合物(70mg)。

MS m/z(ESI):447.0[M+H] ⁺

步骤3：2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-4-(4-((三甲基硅基)乙炔基)苯基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体34-4)的合成

将中间体34-3(70mg)溶于1,4-二氧六环(5mL)和水(0.5mL)中,向其中加入中间体3-1(73.56mg)，Pd(dppf)Cl ₂(11mg)和磷酸钾(99mg)，反应液于氮气保护下100℃搅拌12小时。待反应冷却至室温，依次加入水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)，有机相用水(5mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。过滤后，有机相经减压浓缩除去溶剂，残余物通过制备高效液相色谱纯化(柱子:Waters Xbridge BEH C18 100*25mm*5μm；流动相:[A:水(0.225％甲酸),B:乙腈]；B％:23％-50％,12分钟)得标题化合物(40mg)。

MS m/z(ESI):476.0[M+H] ⁺

步骤4：2-乙氧基-4-(4-乙炔基苯基)-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物34)的合成

将中间体34-4(40mg)溶于无水乙醇溶液(2mL)中,向其中加入碳酸钾(35mg)，反应液于下25℃搅拌2小时。待反应完毕，过滤后，有机相经减压浓缩除去溶剂，残余物经制备高效液相色谱法纯化(柱子:Waters Xbridge BEH C18 100*25mm*5μm；流动相:[A:水(0.225％甲酸),B:乙腈]；B％:23％-50％,12分钟)得标题化合物(15mg)。

MS m/z(ESI):404.0[M+H] ⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.30(d,J＝2.6Hz,1H),8.25(s,1H),7.78(dd,J＝9.5,2.7Hz,1H),7.66–7.62(m,2H),7.45–7.35(m,2H),6.44(d,J＝9.5Hz,1H),4.31(d,J＝6.8Hz,3H),3.46(s,3H),1.30(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例35、2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-4-(4-(丙-1-炔-1-基)苯基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物35)

步骤1：6-溴-2-乙氧基-4-(4-(丙-1-炔-1-基)苯基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体35-1)的合成

将中间体34-2(100mg)和1-(三甲基硅基)丙炔(25mg)溶于无水四氢呋喃溶液(5mL)中,加入碘化亚铜(12mg)，三乙胺(21mg),四丁基氟化铵(58mg)和四三苯基膦钯(12.10mg)，反应液于氮气保护下25℃搅拌12小时。待反应冷却至室温，依次加入水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)，有机相用水(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。过滤后，有机相经减压浓缩除去溶剂，残余物经柱层析法纯化(二氯甲烷：甲醇＝20：1)得标题化合物(60mg)。

MS m/z(ESI):389.0[M+H] ⁺

步骤2：2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-4-(4-(丙-1-炔-1-基)苯基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物35)的合成

将中间体35-1(60mg)溶于1,4-二氧六环(5mL)和水(0.5mL)中，向其中加入中间体3-1(73mg)，Pd(dppf)Cl ₂(11mg)和磷酸钾(99mg)。反应液于氮气保护下100℃搅拌12小时。待反应冷却至室温，依次加入水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)，有机相用水(5mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。过滤后，有机相经减压浓缩除去溶剂，残余物通过制备高效液相色谱纯化(柱子:Waters Xbridge BEH C18 100*25mm*5μm；流动相:[A:水(0.225％甲酸),B:乙腈]；B％:23％-50％,12分钟)得标题化合物(40mg)。

MS m/z(ESI):418.0[M+H] ⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.31(d,J＝2.6Hz,1H),8.26(s,1H),7.79(dd,J＝9.5,2.7Hz,1H),7.58-7.51(m,2H),7.41-7.32(m,2H),6.45(d,J＝9.6Hz,1H),4.32(q,J＝7.0Hz,2H),3.47(s,3H),2.10(s,3H),1.31(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例36、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物36)

将中间体6-1(80mg)和中间体36-1(65mg)溶于1,4-二氧六环(1.2mL)和水(0.3mL)中，向其中加入Pd(dtbpf)Cl ₂(21mg)，Cs ₂CO ₃(143mg)，反应液于氮气保护下100℃搅拌12h。反应完毕后，待反应冷却至室温，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经柱层析法纯化(二氯甲烷：甲醇＝20:1)得到粗品,再通过制备高效液相色谱纯化[YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例40％-70％,洗脱时间15分钟]得标题化合物(25mg)。

MS m/z(ESI):509.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.21(s,1H),7.77(s,1H),7.51–7.08(m,7H),4.29–4.20(m,2H),4.00(t,J＝5.8Hz,2H),2.89(t,J＝6.1Hz,2H),2.02–1.94(m,2H),1.89–1.85(m,2H),1.25(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例37、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(3-甲基-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-6-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物37)

步骤1：6-溴-3-甲基喹唑啉-4(3H)-酮(中间体37-2)的合成

将中间体37-1(600mg)溶于乙腈(6mL)中，向其中加入碳酸钾(1.1g)和碘甲烷(3.8g)，反应液于30℃下搅拌反应10h。反应完毕后，反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经柱层析法纯化(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)得标题化合物(305mg)。

MS m/z(ESI):238.9[M+H] ⁺

步骤2：3-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)喹唑啉-4(3H)-酮(中间体37-3)的合成

将中间体37-2(100mg)和双联频哪醇硼酸酯(170mg)溶于无水二氧六环(2mL)中，向其中加入乙酸钾(82mg)和Pd(dppf)Cl ₂(46mg)，反应液于氮气保护下100℃搅拌4h。反应完毕后，待反应冷却至室温，减压浓缩除去溶剂，依次加入水(8mL)和乙酸乙酯(10mL*2)，有机相用水(10mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥，过滤后，减压浓缩，残余物经柱层析法纯化(二氧化硅,石油醚:乙酸乙酯＝4:1)得标题化合物(105mg)。

MS m/z(ESI):287.1[M+H] ⁺

步骤3：4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(3-甲基-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-6-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物37)的合成

将中间体37-3(98mg)和中间体1-8(110mg)溶于二氧六环(1.2mL)和水(0.3mL)中，向其中加入碳酸铯(172mg)和Pd(dtbpf)Cl ₂(26mg)，反应液于氮气保护下80℃搅拌10h。反应完毕后，待反应冷却至室温，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，通过制备高效液相色谱纯化[YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例40％-70％，洗脱时间15分钟]得标题化合物(21mg)。

MS m/z(ESI):497.0[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.55(s,1H),8.44(s,1H),8.37(s,1H),8.15(d,J＝8.6Hz,1H),7.68(d,J＝8.6Hz,1H),7.58–7.15(m,5H),4.36–4.30(m,2H),3.51(s,3H),1.32(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例38、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物38)

将中间体15-1(79mg)和中间体38-1(70mg)溶于二氧六环(1.2mL)和水(0.3mL)中，向其中加入碳酸铯(136mg)和Pd(dtbpf)Cl ₂(25mg)，反应液于氮气保护下90℃搅拌7h。反应完毕后，待反应冷却至室温，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物通过制备高效液相色谱纯化[YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例40％-70％，洗脱时间18分钟]得标题化合物(28mg)。

MS m/z(ESI):483.0[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ9.66(d,J＝1.8Hz,1H),8.65(s,1H),8.40–8.26(m,2H),7.75(d,J＝9.3Hz,1H),7.60–7.11(m,5H),6.40(d,J＝6.3Hz,1H),4.38–4.32(m,2H),1.32(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例39、4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(4-甲基-3-氧基-3,4-二氢喹喔啉-6-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物39)

步骤1：7-溴-1-甲基喹喔啉-2(1H)-酮(中间体39-2)的合成

将中间体39-1(400mg)溶于乙腈(4mL)中，向其中加入碳酸钾(736mg)和碘甲烷(2.5g)，反应液于30℃下搅拌反应10h。反应完毕后，反应液过滤，滤液减压浓缩除去溶剂，残余物经柱层析法纯化(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)得标题化合物(160mg)。

MS m/z(ESI):238.9[M+H] ⁺

步骤2：1-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)喹喔啉-2(1H)-酮(中间体39-3)的合成

将中间体39-2(100mg)和双联频哪醇硼酸酯(170mg)溶于无水二氧六环(2mL)中，向其中加入乙酸钾(82mg)和Pd(dppf)Cl ₂(46mg)，反应液于氮气保护下100℃搅拌4h。反应完毕后，待反应冷却至室温，减压浓缩除去溶剂，依次加入水(8mL)和乙酸乙酯(10mL*2)，有机相用水(10mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥，过滤后，减压浓缩，残余物经柱层析法纯化(二氧化硅,石油醚:乙酸乙酯＝4:1)得标题化合物(98mg)。

MS m/z(ESI):287.1[M+H] ⁺

步骤3：4-(4-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(4-甲基-3-氧代-3,4-二氢喹喔啉-6-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物39)的合成

将中间体39-3(98mg)和中间体1-8(110mg)溶于二氧六环(1.2mL)和水(0.3mL)中，向其中加入碳酸铯(172mg)和Pd(dtbpf)Cl ₂(26mg)，反应液于氮气保护下80℃搅拌10h。反应完毕后，待反应冷却至室温，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，通过制备高效液相色谱纯化[YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例40％-70％，洗脱时间15分钟]得标题化合物(23mg)。

MS m/z(ESI):497.0[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.53(s,1H),8.21(s,1H),7.98(d,J＝1.4Hz,1H),7.84–7.82(m,1H),7.77–7.75(m,1H),7.57–7.18(m,5H),4.37–4.32(m,2H),3.62(s,3H),1.32(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例40、4-(4-(二氟甲氧基)-3-氟苯基)-2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物40)的合成

步骤1：6-溴-2-乙氧基-5-氧代噻唑并[4,5-b]吡啶-4(5H)-羧酸叔丁酯(中间体40-1)的合成

将中间体1-7(2g)溶于无水四氢呋喃(20mL)中，加入碳酸叔丁酯(2.38g),三乙胺(2.21g)和4-二甲氨基吡啶(266.43mg)，加毕，25℃搅拌12小时。反应结束后，有机相经减压浓缩除去溶剂。残余物经flash纯化( 20g Silica Flash色谱柱,梯度0-5％甲醇/二氯甲烷，80mL/分钟)，收集馏分浓缩后，得标题化合物(1.5g)。

MS m/z(ESI):375.0[M+H] ⁺

步骤2：2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-5-氧噻唑并[4,5-b]吡啶-4(5H)-羧酸叔丁酯(中间体40-2)的合成

将中间体40-1(1.5g)溶于无水1,4-二氧六环溶液(20mL)和水(5mL)中,加入中间体3-1(1.13g)，Pd(dppf)Cl ₂(260mg)和磷酸钾(2.54g,11.99mmol)，反应液于氮气保护下100℃搅拌12小时。反应完毕后，将反应冷却至室温，依次加入水(100mL)和乙酸乙酯(100mL)，有机相用水(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。过滤后，有机相经减压浓缩除去溶剂，残余物经柱层析色谱法纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)，得标题化合物(1g)。

MS m/z(ESI):404.0[M+H] ⁺

步骤3：2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体40-3)的合成

将中间体40-2(1g)溶于无水二氯甲烷(10mL)中，滴加入盐酸/二氧六环(6mL,4N)，加毕，25℃搅拌4小时。反应结束后，反应液经减压浓缩除去溶剂后，依次加入饱和碳酸氢钠(50mL)和乙酸乙酯(50mL*3)，有机相用水(20mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得标题化合物(450mg)。

MS m/z(ESI):304.0[M+H] ⁺

步骤4：(4-(二氟甲氧基)-3-氟苯基)硼酸(中间体40-4)的合成

将4-溴-1-(二氟甲氧基)-2-氟苯(300mg)和硼酸三异丙酯(375mg)溶于无水四氢呋喃溶液(3mL)中,0℃下向其中加入n-BuLi(1.6M,0.895mL)的四氢呋喃溶液，反应液于氮气保护下0℃搅拌4h。随后，将反应液减压浓缩至干，残余物通过柱层析色谱纯化(PE/EA＝10/1-3/1)，得标题化合物(120mg)。

步骤5：4-(4-(二氟甲氧基)-3-氟苯基)-2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物40)的合成

将中间体40-4(36mg)和中间体40-3(35mg)溶于1,2-二氯乙烷(1mL)中,向其中加入无水醋酸铜(25mg)和吡啶(27mg)，反应液于氮气保护下50℃搅拌12h。随后，待反应冷却至室温，将反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物通过高压制备纯化[YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.05％NH ₄HCO ₃)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例55％-75％,洗脱时间12分钟]得标题化合物(12mg)。

MS m/z(ESI):464.0[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.30(d,J＝2.7Hz,1H),8.27(s,1H),7.80–7.76(m,1H),7.65–7.61(m,1H),7.56–7.20(m,3H),6.44(d,J＝9.5Hz,1H),4.36–4.31(m,2H),3.46(s,3H),1.32(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例41、4-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物41)

步骤1：2-(二氟甲氧基)-5-碘吡啶(中间体41-2)的合成

将中间体41-1(1.11g)和二氟氯乙酸钠(1.54g)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，向其中加入碳酸铯(4.92g)，加完100℃搅拌12小时。反应结束后依次加入饱和氯化铵(100mL)和乙酸乙酯(100mL*3)，有机相用水(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥，过滤后，有机相经减压浓缩除去溶剂。残余物经柱层析法纯化(二氯甲烷：甲醇＝20：1)得标题化合物(600mg)。

MS m/z(ESI):272.0[M+H] ⁺

步骤2：(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)硼酸(中间体41-3)的合成

将中间体41-2(550mg)和硼酸三甲酯(314mg)溶于无水四氢呋喃(10mL)中，-78℃下向其中滴加正丁基锂(2.5mL,1.6M)，加毕，-78℃搅拌4小时。反应结束后依次加入盐酸(3mL,1N)，经减压浓缩除去四氢呋喃。残余物制备高效液相色谱法纯化(柱子:Waters Xbridge BEH C18 100*25mm*5μm；流动相:[A:水(0.225％甲酸),B:乙腈]；B％:23％-50％,12分钟)得标题化合物(80.0mg)。

MS m/z(ESI):189.0[M+H] ⁺

步骤3：6-溴-4-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-乙氧基噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(中间体41-4)的合成

将中间体41-3(53mg)和中间体1-7(51mg)溶于无水1,2-二氯乙烷(10mL)中，加入吡啶(66mg)和醋酸铜(51mg)，加完40℃于空气中搅拌4小时。反应结束后经减压浓缩除去溶剂。残余物通过制备高效液相色谱法纯化(柱子:Waters Xbridge BEH C18 100*25mm*5μm；流动相:[A:水(0.225％甲酸),B:乙腈]；B％:23％-50％,12分钟)得标题化合物(40mg)。

MS m/z(ESI):418.1[M+H] ⁺

步骤4：4-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物41)的合成

将中间体41-4(40mg)溶于1,4-二氧六环溶液(2mL)和水(0.5mL)中,向其中加入中间体3-1(45mg)，Pd(dppf)Cl ₂(7mg)和碳酸铯(93mg)，反应液于氮气保护下100℃搅拌12小时。待反应冷却至室温，依次加入水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)，有机相用水(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。过滤后，有机相经减压浓缩除去溶剂，残余物制备高效液相色谱法纯化(柱子:Waters Xbridge BEH C18 100*25mm*5μm；流动相:[A:水(0.225％甲酸),B:乙腈]；B％:23％-50％,12分钟)得标题化合物(10mg)。

MS m/z(ESI):447.0[M+H] ⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.37(d,J＝2.6Hz,1H),8.29(d,J＝3.7Hz,2H),8.06(dd,J＝8.7,2.6Hz,1H),7.99–7.63(m,2H),7.30(d,J＝8.7Hz,1H),6.46(d,J＝9.5Hz,1H),4.37–4.32(m,2H),3.48(s,3H),1.33(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例42、4-(4-(二氟甲氧基)-3-甲基苯基)-2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5-(4H)-酮(化合物42)

步骤1：(4-(二氟甲氧基)-3-甲基苯基)硼酸酐(中间体42-2)的合成

将中间体42-1(500mg)和硼酸三异丙酯(800mg)溶于四氢呋喃(5mL)中，-78℃下向其中滴加正丁基锂(4.26mL)，0℃搅拌2h。随后，向反应液中依次加入H ₂O(20mL)和乙酸乙酯(20mL*3)，有机相用饱和食盐水(30mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物(350mg)。

MS m/z(ESI):247.2[M+H] ⁺。

步骤2：4-(4-(二氟甲氧基)-3-甲基苯基)-2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5-(4H)-酮(化合物42)的合成

将中间体42-2(48mg)和中间体40-2(25mg)溶于二氯甲烷(2mL)中，向其中加入吡啶(10mg)和醋酸铜(4mg)，反应液于氮气保护下45℃搅拌16小时。待反应冷却至室温，依次加入水(30mL)和二氯甲烷(40mL)，有机相用饱和食盐水(30mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥、减压浓缩。残余物经制备高效液相色谱纯化(色谱柱:Gemini NX C18 5μm*10*150mm；流动相:A:0.05％TFA v/v,B:乙腈；B％:40％-45％,12min)得标题化合物(26mg)。

MS m/z(ESI):460.1[M+H] ⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.31(d,J＝2.6Hz,1H),8.26(s,1H),7.84–7.75(m,1H),7.54–7.08(m,4H),6.45(d,J＝9.5Hz,1H),4.38–4.28(m,2H),3.48(s,3H),2.29(s,3H),1.37–1.28(m,3H).

实施例43、2-(二氟甲氧基)-5-(2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-5-氧代噻唑并[4,5-b]吡啶-4(5H)-基)苯甲腈(化合物43)

步骤1：5-溴-2-(二氟甲氧基)苯腈(中间体43-2)的合成

将中间体43-1(1g)和二氟氯乙酸钠(1.54g)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，向其中加入碳酸铯(4.92g)，加完100℃搅拌12小时。反应结束后依次加入饱和氯化铵(100mL)和乙酸乙酯(100mL*3)，有机相用水(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥，过滤后，有机相经减压浓缩除去溶剂。残余物经柱层析纯化( 20g Silica Flash色谱柱,梯度0-5％甲醇/二氯甲烷，80mL/分钟)，得标题化合物(500mg)。

MS m/z(ESI):248.0[M+H] ⁺

步骤2：(3-氰基-4-(二氟甲氧基)苯基)硼酸(中间体43-3)的合成

将中间体43-2(500mg)和硼酸三甲酯(314mg)溶于无水四氢呋喃(10mL)中，-78℃下向其中滴加正丁基锂(2.5mL,1.6M)，加完-78℃搅拌4小时。反应结束后依次加入盐酸(3mL,1N)，经减压浓缩除去四氢呋喃，残余物制备高效液相色谱法纯化(柱子:Waters Xbridge BEH C18 100*25mm*5μm；流动相:[A:水(0.225％甲酸),B:乙腈]；B％:23％-50％,12分钟)得标题化合物(80.0mg)。

步骤3：2-(二氟甲氧基)-5-(2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-5-氧代噻唑并[4,5-b]吡啶-4(5H)-基)苯甲腈(化合物43)的合成

将中间体43-3(60mg)和中间体40-2(51.28mg)溶于无水1,2-二氯乙烷(10mL)中，加入吡啶(66.86mg)和醋酸铜(51mg)，加完40℃于空气中搅拌4小时。反应结束后经减压浓缩除去溶剂。残余物制备高效液相色谱法纯化(柱子:Waters Xbridge BEH C18 100*25mm*5μm；流动相:[A:水(0.225％甲酸),B:乙腈]；B％:23％-50％,12分钟)得标题化合物(10.4mg)。

MS m/z(ESI):471.0[M+H] ⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.34–8.27(m,2H),8.17(d,J＝2.5Hz,1H),7.93–7.90(m,1H),7.82–7.40(m,2H),6.47(d,J＝9.5Hz,1H),4.38–4.33(m,2H),3.49(s,3H),1.34(t,J＝7.0Hz,3H).

实施例44、3-(2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-5-氧代噻唑并[4,5-b]吡啶-4(5H)-基)苯甲腈(化合物44)

将中间体40-2(20mg)和3-氰基苯硼酸(14.53mg)溶于无水1,2-二氯乙烷(5mL)中，加入吡啶(15.65mg)和醋酸铜(11.93mg)，加毕，在40℃下搅拌4小时。反应结束后经减压浓缩除去溶剂。残余物通过制备高效液相色谱法纯化(柱子:Waters Xbridge BEH C18 100*25mm*5μm；流动相:[A:水(0.225％甲酸),B:乙腈]；B％:23％-50％,12分钟)得标题化合物(2.8mg)。

MS m/z(ESI):405.0[M+H] ⁺

¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.34(d,J＝2.7Hz,1H),7.84–7.74(m,2H),7.71–7.58(m,4H),6.64(d,J＝9.6Hz,1H),4.38–4.33(m,2H),3.58(s,3H),1.39(t,J＝7.1Hz,3H).

实施例45、4-(3-(二氟甲氧基)苯基)-2-乙氧基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5(4H)-酮(化合物45)

将中间体40-3(15mg)和中间体45-1(13.94mg)溶于无水1,2-二氯乙烷(5mL)中，加入吡啶(15.65mg)和醋酸铜(11.93mg)，加毕，40℃搅拌4小时。反应结束后，减压浓缩除去溶剂。残余物制备高效液相色谱法纯化(柱子:Waters Xbridge BEH C18100*25mm*5μm；流动相:[A:水(0.225％甲酸),B:乙腈]；B％:23％-50％,12分钟)得标题化合物(5.4mg)。

MS m/z(ESI):446.0[M+H] ⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ8.30(d,J＝2.6Hz,1H),8.26(s,1H),7.80–7.77(m,1H),7.68–7.53(m,1H),7.50–7.10(m,4H),6.44(d,J＝9.5Hz,1H),4.34–4.29(m,2H),3.46(s,3H),1.30(t,J＝7.0Hz,3H).

生物学活性及相关性质测试例

测试例1、生物化学测试

试验原理简介：L-甲硫氨酸和ATP能够在MAT2A酶催化条件下转化为SAM、无机磷酸盐和无机二磷酸盐。通过向酶促反应混合物中加入显色剂，如钼酸铵等，可以定量地检测样品中无机磷酸盐的含量，进而反应MAT2A的酶活性。

材料：MAT2A筛选试剂盒购于BPS bioscience公司(美国)；384孔板购于康宁公司(美国)。

1.MAT2a蛋白(康龙化成(北京)新药技术股份有限公司)；

2.L-甲硫氨酸(Sigma#M9625-5G)

3.ATP(Sigma#A7699-1G)

4.KCl(Sigma#60142-500ML-F)

5.Tris(Sigma#T2663-1L)

6.MgCl ₂(Sigma#M1028)

7.EDTA(Invitrogen#AM9260G)

8.BSA(Sangon Biotech#A500023-0100)

9.PiColorLock(abcam#ab270004)

检测方法：

DMSO溶解化合物，利用Echo将化合物稀释至终浓度10μM，3倍稀释，并转移80nL至384孔板中。

配制实验缓冲液(50mM Tris，50mM KCl，15mM MgCl ₂,100μM EDTA，0.005％BSA)。用实验缓冲液稀释MAT2a蛋白(终浓度为4μg/mL)。于384孔板中加入40μL 2X的MAT2a溶液，1000rpm离心1分钟，重温孵育120分钟。

用实验缓冲液稀释L-甲硫氨酸和ATP(L-甲硫氨酸终浓度为200μM，ATP终浓度为400μM)。加入40μL 2X的L-甲硫氨酸和ATP溶液启动反应，1000rpm离心1分钟，常温孵育90 分钟。

按照说明书将PiColorLock ^TM反应催化剂与PiColorLock ^TM缓冲液1:100混匀，每孔加入20μL后振荡30秒。加入8μL稳定试剂，振荡30秒。常温孵育30分钟后检测信号值。

数据分析：

计算％Compound inhibition并拟合得到化合物的IC ₅₀。

Compound inhibition＝(100-100*(Signal-Bottom)/(Top-Bottom))％

实验结果：

在本实验条件下，待测化合物对MAT2A的抑制作用可以用对酶促反应过程中磷酸产生水平抑制的IC ₅₀值表示。本发明化合物的MAT2A抑制活性具体见表1。

表1

测试例2、细胞内SAM水平检测

试验原理简介：SAM作为MAT2A的催化产物，可以通过测定细胞中SAM生成的水平来反映待测化合物对MAT2A的抑制作用。将待测MAT2A抑制剂与癌细胞共孵育一段时间后，用终止试剂裂解细胞，淬灭MAT2A酶活性。通过LC-MS/MS的方法对细胞裂解液中的MAT2A催化产物SAM进行定量测定，进而反应细胞内MAT2A的活性。

材料与细胞：HCT116 MTAP ^-/-细胞购于康源博创；胎牛血清、McCoy's 5a培养基和青霉素-链霉素购于Gibco公司(美国)，96孔板购于康宁公司(美国)，PBS购于Cytiva公司(美国)。

细胞培养：HCT116 MTAP ^-/-细胞用含10％胎牛血清+1％青霉素-链霉素的McCoy's 5a培养液于37℃、5％CO ₂条件下培养。处于对数生长期细胞方可用于实验。

LC-MS/MS检测：利用LC-MS/MS检测化合物对HCT116 MTAP ^-/-细胞株中SAM生成水平的影响。调整细胞浓度为每孔50000个，接种96孔板，置于37℃、5％CO ₂条件下培养过夜。DMSO溶解化合物，依次用DMSO和培养基稀释化合物并转移至细胞板中，终浓度为10μM，3倍稀释。置于37℃、5％CO ₂条件下继续培养6小时。吸去上清，PBS洗一遍后，加入冰醋酸裂解细胞。裂解液经过处理后，通过LC-MS/MS进样分析，测定SAM浓度。

数据分析：

计算％Compound inhibition并拟合得到化合物的IC ₅₀。

％Compound inhibition＝1-100％*(Signal-Bottom)/(Top-Bottom)

实验结果：

表2实验结果表明，本发明化合物对细胞内SAM生成的抑制达到纳摩尔水平，本发明化合物展现出了很强的MAT2A抑制活性。

表2

测试例3、人结肠癌HCT116细胞增殖抑制试验

试验原理简介：将待测MAT2A抑制剂与癌细胞共孵育一段时间后，采用基于ATP含量的细胞增殖计数方法来测量待测化合物对细胞增殖的影响。

材料与细胞：HCT116 WT细胞和HCT116 MTAP ^-/-细胞购于康源博创；胎牛血清、McCoy's5a培养基和青霉素-链霉素购于Gibco公司(美国)，96孔板购于康宁公司(美国)，Cell-Titer Glo试剂购于普洛麦格公司(美国)。

细胞培养：HCT116 WT细胞和HCT116 MTAP ^-/-细胞均用含10％胎牛血清+1％青霉素-链霉素的McCoy's 5a培养液于37℃、5％CO ₂条件下培养。处于对数生长期细胞方可用于实验。

细胞增殖活性检测：利用Cell-Titer Glo试剂检测化合物对HCT116 WT和HCT116 MTAP ^-/-两细胞株增殖的抑制活性。调整细胞浓度为每孔400个，接种96孔板，置于37℃、5％CO ₂条件下培养过夜。

DMSO溶解化合物，依次用DMSO和培养基稀释化合物并转移至细胞板中，终浓度为10μM，3倍稀释。置于37℃、5％CO ₂条件下继续培养6天。加入Cell-Titer Glo试剂，检测细胞活性。

数据分析：

计算％Compound inhibition并拟合得到化合物的IC ₅₀。

％Compound inhibition＝1-100％*(Signal-Bottom)/(Top-Bottom)

HCT116 MTAP ^-/-细胞是通过基因敲除手段对野生型HCT116(HCT116 WT)细胞进行定点敲除所获得的不表达MTAP蛋白的细胞。由于MAT2A抑制与MTAP的缺失能产生合成致死作用，导致肿瘤细胞死亡。通过测试MAT2A抑制剂对HCT116 MTAP ^-/-细胞和HCT116 WT的抗增殖会活性可以对MAT2A抑制剂的活性及选择性进行评价。

实验结果：

在本实验条件下，待测化合物对HCT116 MTAP ^-/-细胞展现出了较强的增殖抑制活性，并且相比于HCT116 MTAP ^+/+细胞表现出较好的选择性。待测化合物相应的抗细胞增殖活性具体见表3。

表3

测试例4、本发明化合物在肝微粒体中的代谢稳定性测定

本发明化合物在肝微粒体中的代谢稳定性采用如下试验方法测定。

一、试验材料及仪器

1.人肝微粒体(Corning 452117)，比格犬肝微粒体(XENOTECH D1000)，SD大鼠肝微粒体(XENOTECH R1000)和CD-1小鼠肝微粒体(XENOTECH M1000)

2.Na ₂HPO ₄(天津市光复精细化工研究所20180130)

3.KH ₂PO ₄(天津市光复精细化工研究所20180920)

4.MgCl ₂(天津市光复精细化工研究所20191216)

5.NADPH(Solarbio 1216C022)

6.阳性对照化合物维拉帕米(Sigma MKBV4993V)

7.AB Sciex API4000液质联用仪

二、试验步骤

1.100mM磷酸缓冲液(PBS)的配制：称取7.098g Na ₂HPO ₄，加入500mL纯水超声溶解，作为溶液A。称取3.400g KH ₂PO ₄，加入250mL纯水超声溶解，作为溶液B。将A溶液放置在搅拌器上缓慢加入B溶液直至pH值达到7.4即配制成100mM的PBS缓冲液。

2.反应体系的配制

按下表配制反应体系：

表4反应体系配制信息

3.将反应体系置于37℃水浴中预孵育10分钟。向反应体系中加入40μL 10mM NADPH溶液(NADPH由100mM的磷酸缓冲液溶解)，NADPH的最终浓度为1mM。用40μL磷酸缓冲液代替NADPH溶液作为阴性对照。阴性对照的作用是排除化合物自身化学稳定性的影响。

4.在反应体系中加入4μL 100μM的本发明化合物和阳性对照化合物维拉帕米启动反应，化合物的最终浓度为1μM。

5.涡旋振荡器上充分混匀后，在0.5、15、30、45和60分钟分别取出50μL孵育样品，用200μL含有内标的冰乙腈终止反应。样品在3220g转速下离心45分钟。离心结束后转移90μL上清液到进样板，加入90μL超纯水混匀，用于LC-MS/MS分析。

所有的数据均通过Microsoft Excel软件进行计算。提取离子图谱检测峰面积，通过对化合物消除百分比的自然对数与时间进行线性拟合，测定化合物的体外半衰期(t _1/2)。

体外半衰期(t _1/2)通过斜率计算：

in vitro t _1/2＝0.693/k

体外固有清除率(单位：μL/min/mg protein)用下列公式计算：

in vitro CL _int＝k×volume of incubation(μL)/amount of proteins(mg)

表4

表4的实验结果表明，本发明化合物均展现出了良好的肝微粒体代谢稳定性。

测试例5、本发明化合物的膜渗透性及转运特性测定

本发明化合物的膜渗透性及转运特性采用如下试验方法测定。

一、试验材料及仪器

1.Caco-2细胞(ATCC)

2.HEPES(Solarbio 804D049)、青霉素/链霉素(Solarbio 20200109)、PBS(Solarbio 20200620)和卡那霉素(MP Biomedicals 194531)

3.胎牛血清(FBS)(Sigma WXBD0055V)、荧光黄(Sigma MKCJ3738)和NaHCO ₃(Sigma SLBZ4647)

4.Hank’s平衡盐溶液(HBSS)(Gibco 2085528)、非必需氨基酸(NEAA)(Gibco 2211548)和Trypsin/EDTA(Gibco 2120732)

5.高糖DMEM(Corning 20319014)

6.HTS Transwell-96 Well Permeable(Corning,3391)

7.电阻检测仪(Millipore， ERS-2)

8. Vision(Nexcelom Bioscience)

9.Infinite 200 PRO酶标仪(Tecan，Infinite M200PRO)

10.阳性对照化合物Metoprolol(Sinopharm 100084-201403)、Erythromycin(MCE 84550)和Cimetidine(Sinopharm 100158-201406)

11.ABI QTrap 5500液质联用仪

二、试验步骤

1.Caco-2细胞培养

1)转运缓冲液(含25mM HEPES的HBSS，pH 7.4)的配制：精确称量5.958g HEPES和0.35g NaHCO ₃，加900mL纯水让其溶解，然后加100mL 10×HBSS搅拌均匀，调pH至7.4，过滤。

2)Caco-2细胞培养基的配制：高糖DMEM(含有L-谷氨酰胺)培养基中加入FBS、青霉素/链霉素、卡那霉素和NEAA配制成含10％FBS、100单位青霉素/0.1mg/mL链霉素、0.6μg/mL卡那霉素和1×NEAA的细胞培养基。

3)在37℃、5％CO ₂的培养箱中用T-75培养瓶培养细胞，细胞生长达到80-90％密度时弃去培养基。用5mL PBS冲洗细胞，加入1.5mL Trypsin/EDTA，然后在37℃培养箱中孵育5-10分钟直至细胞呈流沙状脱落，最后用含FBS的培养基中和Trypsin/EDTA。

4)细胞混悬液在120g下离心10分钟，弃去上清液。

5)加细胞培养基重悬细胞，调至密度为6.86×10 ⁵cells/mL的细胞悬浮液。

2.Caco-2细胞接种

1)Transwell小室每孔加入50μL培养基，下层加入25mL培养基，置于37℃，5％CO ₂培养箱中预热1小时。

2)预热的Transwell小室每孔加入50μL细胞悬浮液，最终接种密度为2.4×10 ⁵cells/cm ²。

3)培养14-18天，隔一天换一次培养基，在最初种板以后的48小时之内更换培养基。实验前一天培养基必须更换。

3.评估单层细胞膜完整性

1)细胞培养14天后融合并且分化，准备进行转运实验。

2)用电阻仪测量单层膜电阻，记录每孔电阻。

3)测量完毕后，将Transwell培养板重新孵育。

4)计算TEER值：

TEER值＝TEER测量值(Ω)×膜面积(cm ²)

单层细胞膜的电阻<230Ω·cm ²，表明单层细胞膜致密性差，不能用于试验。

4.转运实验

1)用DMSO稀释10mM的本发明化合物或阳性对照化合物的储备液得到2mM的储备液，然后用转运缓冲液稀释2mM的储备液得到10μM的本发明化合物或阳性对照化合物的工作液。

2)从培养箱中取出Caco-2细胞板，然后用预热的转运缓冲液清洗Transwell培养板两次，再置于37℃培养箱孵育30分钟。

3)为测定化合物从顶端到基底端(A→B)的转运速率，加108μL化合物的工作液到Transwell小室(顶端)，同时立即从顶端取出8μL样品至72μL转运缓冲液中，加入240μL含内标的终止液终止转运以作为初始顶端样品。同时，接收端(基底端)加入300μL转运缓冲液。试验设双样本。

4)为测定化合物从基底端到顶端(B→A)的转运速率，加308μL化合物的工作液到基底端，同时立即从基底端取出8μL样品至72μL转运缓冲液中，加入240μL含内标的终止液终止转运以作为初始基底端样品。同时，Transwell小室(顶端)加入100μL转运缓冲液。试验设双样本。

5)将细胞培养板置于37℃ CO ₂培养箱中孵育2小时。

6)转运实验结束后，从给药端(即A→B方向的顶端和B→A方向的基底端)取8μL样品至72μL转运缓冲液中，然后加入240μL含内标的终止液终止转运。从接收端(即A→B方向的基底端和B→A方向的顶端)取80μL样品至240μL含内标的终止液中，1000rpm下涡旋10分钟，3220g下离心30分钟。取100μL上清液至进样板，加入100μL超纯水混匀，用于LC-MS/MS分析。

7)转运实验结束后测量荧光值，用水配制10mM荧光黄储备液，然后用转运缓冲溶液稀释至100μM。往Transwell小室(顶端)中加入100μL荧光黄溶液，基底端加入300μL转运缓冲溶液，置于37℃的CO ₂培养箱中孵育30分钟。从顶端和基底端取80μL溶液至96孔板中，在激发波长为485nm及发射波长为530nm下用酶标仪测量细胞荧光值(检测膜完整性)。

用以下公式计算Caco-2细胞单层膜的荧光值：

LY Leakage＝{I _acceptor×0.3/(I _acceptor×0.3+I _donor×0.1)}×100％

I _acceptor指接收侧(0.3mL)的荧光密度，I _donor指给药侧(0.1mL)的荧光密度。LY>1.0％表明单层细胞膜致密性差，相应的结果将从评估中排除。

测定化合物在给药侧和接收侧的峰面积，计算化合物的表观渗透系数(P _app，单位：cm/s)和外排比(Efflux ratio)：

P _app＝{V _A×[drug] _acceptor/(Area×incubation time×[drug] _{initial donor}}

V _A为接收端溶液的体积(A→B是0.3mL，B→A是0.1mL)，Area为Transwell-96孔板膜面积(0.143cm ²)；incubation time为孵育时间(单位：s)。

P _app(B-A)为由基底端到顶端的表观渗透系数；P _app(A-B)为由顶端到基底端的表观渗透系数。

表5

化合物	P _app(A-B)(10 ^-6cm/s)	P _app(B-A)(10 ^-6cm/s)	Efflux Ratio
化合物5	3.44	4.70	1.37
化合物8	2.66	4.29	1.36
化合物9	3.65	3.95	1.08
化合物10	1.78	6.32	3.54
化合物11	2.29	3.87	1.70

Caco-2是人克隆结肠腺癌细胞，结构和功能类似于分化的小肠上皮细胞，可以用来进行模拟体内肠转运的实验。Papp(A-B)越高，说明化合物的渗透性越好，预示化合物经口服吸收的生物利用度可能越高。Efflux Ratio表明化合物受转运体影响，被转运体排出体外的可能性越大，预示化合物的膜渗透性受到转运体的影响越大，不利于化合物口服吸收及透过靶细胞膜而发挥疗效。表5结果表明，本发明化合物具有良好的膜渗透性，预示本发明化合物经口服吸收的能力较强。

测试例6、本发明化合物对CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4酶活性的抑制作用

本发明化合物对CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4酶活性的抑制采用如下试验方法测定。

一、试验材料及仪器

1.人肝微粒体(Corning 452117)

2.Na ₂HPO ₄(Sigma SLBZ6180)

3.KH ₂PO ₄(Sigma SLBT6559)

4.NADPH(Solarbio 705Y021)

5.阳性底物双氯芬酸(Sigma SLBV3438)、右美沙芬(TRC 3-EDO-175-1)和咪达唑仑(Cerilliant FE01161704)

6.阳性抑制剂磺胺苯吡唑(D.Ehrenstorfer GmbH 109012)、奎尼丁(TCI WEODL-RE)和酮康唑(Sigma 100M1091V)

7.AB Sciex Triple Quad 5500液质联用仪

二、试验步骤

2.用100mM的PBS缓冲液配制10mM的NADPH溶液。用DMSO稀释10mM的本发明化合物储备液得到200×浓度的化合物工作液(6000、2000、600、200、60、20、0μM)。用DMSO稀释阳性抑制剂储备液得到200×浓度的阳性抑制剂工作液(磺胺苯吡唑，1000、300、100、30、10、3、0μM；奎尼丁/酮康唑，100、30、10、3、1、0.3、0μM)。用水、乙腈或乙腈/甲醇配制200×浓度的底物工作液(120μM双氯芬酸、400μM右美沙芬和200μM咪达唑仑)。

3.取2μL 20mg/ml的肝微粒体溶液、1μL底物工作液、1μL化合物工作液和176μL PBS缓冲液，混合均匀，置于37℃水浴中预孵育15分钟。阳性对照组加入1μL磺胺苯吡唑、奎尼丁或酮康唑工作液代替化合物工作液。同时将10mM的NADPH溶液一起置于37℃水浴中预孵育15分钟。15分钟后，取20μL NADPH加入到各个孔中，启动反应，37℃下孵育5分钟(CYP2C9)、20分钟(CYP2D6)或5分钟(CYP3A4)。所有孵育样品设双样本。孵育相应时间后向所有样本中加入400μL含内标的冰甲醇终止反应。涡旋混匀，3220g、4℃下离心40分钟。离心结束后转移100μL上清液到进样板，加入100μL超纯水混匀，用于LC-MS/MS分析。

表6

药物相互作用(drug-druginteraction，DDI)是指2种或2种以上的药物所产生的物理或者化学变化，以及由于这些变化所造成的药效改变。了解药物相互作用，可为患者提供更好的药学服务及促进合理用药，最大化地避免不良反应的发生。药物的相互作用以代谢性相互作用为主，代谢性相互作用主要与参与药物代谢的CYP450酶有关。表6的实验结果表明，本发明化合物对CYP450的抑制能力弱，预示本发明化合物发生DDI的潜在风险较小。

Claims

一种通式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐：

其中，环Q为5-6元杂环基、C ₆-C ₁₀芳基或5-10元杂芳基，所述5-6元杂环基、C ₆-C ₁₀芳基或5-10元杂芳基任选被R ^a取代，所述R ^a选自F、Cl、Br、I、OH、CN、C ₂-C ₃炔基、C ₁-C ₁₀烷基、C ₃-C ₁₀环烷基或C ₁-C ₁₀烷氧基，所述C ₁-C ₁₀烷基、C ₃-C ₁₀环烷基或C ₁-C ₁₀烷氧基任选被R ^b取代；

R ^b选自F、Cl、Br、I、OH或CN；

环W为苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡啶酮基、哒嗪酮基或其中环M为5-10元杂芳基或4-10元杂环基，所述苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡啶酮基、哒嗪酮基或环M任选被R ^c取代，所述R ^c选自OH、＝O或任选被R ^c1取代的下列基团：C ₁-C ₁₀烷基、C ₁-C ₁₀烷氧基、C ₃-C ₁₀环烷基、P(O)(C ₁-C ₃烷基) ₂、4-6元杂环烷基、NHC(O)(C ₁-C ₆烷基)；X ₁选自C或N，当X ₁选自C时，表示双键，当X ₁选自N时，表示单键；

R ^c1选自氘、F、Cl、Br、I、CN、OH、NH ₂或任选被R ^c2取代的下列基团：C ₁-C ₃烷基、C ₁-C ₃烷氧基、NHC(O)O(C ₁-C ₆烷基)、(C ₁-C ₆烷基)NHC(O)O、NH(C ₁-C ₃烷基)、S(O) ₂(C ₁-C ₃烷基)、4-10元杂环基、4-10元杂环基氧基、(C ₃-C ₁₀环烷基)CH ₂O、5-6元杂芳基、5-6元杂芳基氧基；

R ^c2选自4-6元杂环烷基、＝O、C ₁-C ₃烷基、卤代C ₁-C ₃烷基、F、Cl、Br、I、CN、OH、CH ₂OH或NH ₂；

X选自O、S或NR ²；

L选自O、NH或化学键；

R ¹、R ²独立地选自H、C ₁-C ₁₀烷基、C ₃-C ₁₀环烷基或4-10元杂环基，所述C ₁-C ₁₀烷基、C ₃-C ₁₀环烷基或4-10元杂环基任选被R ^d取代，所述R ^d选自F、Cl、Br、I、OH、CN或C ₁-C ₃烷基。
根据权利要求1所述的通式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，环Q为苯基或5-6元杂芳基，所述苯基或5-6元杂芳基任选被R ^a取代。
根据权利要求1所述的通式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，环W为苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、2-吡啶酮基、其中环M为5-10元杂芳基或5-10元杂环基，所述苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、2-吡啶酮基、或环M任选被R ^c取代。
根据权利要求1所述的通式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，环W为任选被R ^c取代的以下基团：苯基、
根据权利要求1所述的通式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R ^a为F、Cl、Br、I、CN、C ₂-C ₃炔基、C ₁-C ₆烷基、C ₃-C ₆环烷基或任选被F取代的C ₁-C ₆烷氧基。
根据权利要求1所述的通式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R ^c选自＝O或任选被R ^c1取代的下列基团：C ₁-C ₆烷基、C ₁-C ₆烷氧基、NHC(O)(C ₁-C ₆烷基)，所述R ^c1选自氘原子、F、Cl、Br、I、CN、OH、NH ₂或乙氧基。
根据权利要求1所述的通式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，环W选自
根据权利要求1所述的通式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，环Q选自
根据权利要求1所述的通式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述R ¹选自H、4-6元杂环基、任选被C ₁-C ₃烷基取代的C ₃-C ₆环烷基或任选被F取代的C ₁-C ₆烷基。
根据权利要求1所述的通式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述通式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐选自式(B)所示化合物或药学上可接受的盐：

其中环W、R ^a、R ¹如权利要求1定义，n选自0、1、2、3、4或5。
根据权利要求1所述的通式(A)化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述通式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐选自式(C)化合物或药学上可接受的盐：

其中环W、R ^a、R ¹如权利要求1定义。
根据权利要求1所述的通式(A)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物选自以下结构之一：
一种药物组合物，所述组合物包含权利要求1至12任一项的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的辅料。
权利要求1至12任一项的化合物或其药学上可接受的盐、或权利要求13所述的药物组合物在制备预防或者治疗MTAP活性降低或缺失的肿瘤的药物中的用途。