CN116763786A - 一种调节Treg细胞比例的组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

一种调节T_reg细胞比例的组合物及其应用,针对T_reg数量或功能不足导致免疫耐受机制失效和自身反应性T_H1、T_H17增加从而诱发干眼发病，通过针对T_reg的干眼治疗，以T_reg调节剂、医用敷料和眼用缓冲液组成的组合物，将其以滴眼液的形式用于眼表，可以增加体内T_reg细胞含量，从而实现干眼治疗。

Description

一种调节Treg细胞比例的组合物及其应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种调节T_reg细胞比例的组合物及其应用。

背景技术

干眼是由泪液分泌不足或泪液蒸发过快引起的慢性眼表疾病，可严重影响开车、阅读、电脑使用和烹饪等日常活动，降低患者的生活质量。据统计，我国的干眼患者超过3亿，由此造成的经济负担已达千亿以上。因此，开发干眼药物/创新疗法对于改善患者生活质量、降低经济负担具有极为重要的意义。

尽管诱发干眼的起始因素多种多样，如睑板腺功能障碍、药物（抗高血压药物、抗抑郁药物等）、自身免疫疾病、糖尿病等，其结局都是泪膜失衡，最终导致眼表炎症的循环往复。因此，抗炎是中重度干眼的一线治疗手段。截至目前，FDA总共批准了4款适应症为干眼的创新药，即0.25%依碳酸氯替泼诺混悬液（EYSUVIS, Kala Pharmaceuticals）、0.05%环孢霉素眼用乳液（Restasis, Allergan）、5%立他司特滴眼液（Xiidra, Novartis）和0.09%环孢霉素纳米胶束滴眼液（Cequa, Sun Pharmaceutical Industries），这些药物皆通过抗炎发挥治疗作用，其中依碳酸氯替泼诺为激素，环孢霉素和立他司特为免疫抑制剂。激素通过胞浆糖皮质激素受体发挥作用，起效速度快，但长期使用容易引起高眼压和白内障；环孢霉素和立他司特分别通过抑制T细胞增殖和免疫细胞的细胞粘附行为发挥作用，长期安全性好，但治疗效果一般。

干眼的发生、发展大致可以分为五个阶段：①某些疾病或环境因素导致泪液渗透压升高，进而引起眼表急性炎症反应，角膜/结膜上皮组织的炎症介质浓度升高；②眼表的抗原提呈细胞（APC）在炎症介质作用下活化、成熟；③成熟APC与初始T细胞（T_H0）形成免疫突触，刺激后者分化产生T_H1、T_H17、T_reg等T细胞亚型；④T_H1、T_H17具有自身反应性，两者将反过来参与APC活化，并通过IFN-γ、IL-7导致结膜杯状细胞减少、角膜/结膜上皮凋亡、眼表屏障破坏及泪膜稳态失衡；⑤T_reg可以调节T_H1、T_H17产生或抑制两者活性，进而将免疫反应的强度控制在合理范围，直至其恢复生理状态，当T_reg数量或功能不足时，前面四个阶段就会不断自我强化，形成恶性循环，最终表现为慢性炎症和眼表损伤。由此可见，T_reg数量或功能不足导致免疫耐受机制失效和自身反应性T_H1、T_H17增加是干眼发病的重要原因。考虑到临床还没有针对T_reg的干眼治疗手段，以此为靶点开发创新疗法具有巨大的临床价值。

发明内容

为了解决现有技术存在的技术缺陷与不足，本发明提供了一种调节T_reg细胞比例的组合物及其应用，通过增加患者的T_reg细胞比例实现干眼症状的有效缓解。

本发明采用的技术解决方案是：一种调节T_reg细胞比例的组合物,所述的调节T_reg细胞比例的组合物包括T_reg调节剂、医用敷料和眼用缓冲液，所述的T_reg调节剂为具有如下所示结构，或由如下所示结构制成的盐组成：

所述的医用敷料为环糊精、维生素E聚乙二醇琥珀酸酯、卡波姆、聚山梨醇酯80、蓖麻油和甘油中的一种或几种。

所述的环糊精包括天然环糊精以及环糊精的羟丙基衍生物、磺丁基衍生物和甲基衍生物。

所述的眼用缓冲液为柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或硼酸盐缓冲液中的一种。

所述的眼用缓冲液pH为6-8。

一种调节T_reg细胞比例的组合物在制备治疗干眼药物上的应用。

本发明的有益效果是：本发明提供了一种调节T_reg细胞比例的组合物及其应用,针对T_reg数量或功能不足导致免疫耐受机制失效和自身反应性T_H1、T_H17增加从而诱发干眼发病，通过针对T_reg的干眼治疗，以T_reg调节剂、医用敷料和眼用缓冲液组成的组合物，将其以滴眼液的形式用于眼表，可以增加体内T_reg细胞含量，从而实现干眼治疗。

附图说明

图1调节T_reg细胞比例的组合物可以增加干眼小鼠的T_reg比例。^***P<0.0005,Unpaired t test, N=6。

图2调节T_reg细胞比例的组合物可以降低干眼小鼠的荧光素钠染色评分。^****P<0.0001, Mann Whitney test, N=9。

图3 调节T_reg细胞比例的组合物可以增加干眼小鼠的结膜杯状细胞密度。^***P<0.0005, Unpaired t test, N=3。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1 调节T_reg细胞比例的组合物的制备方案1

纯水配制100mM环糊精溶液，加入过量T_reg调节剂；60℃超声60min；室温、避光搅拌7天；0.45μm滤膜过滤；过滤所得溶液用纯水和眼用缓冲液浓缩液稀释，调整T_reg调节剂浓度为1-5000μg/mL，即得调节T_reg细胞比例的组合物。

实施例2 调节T_reg细胞比例的组合物的制备方案2

称取1-7500μg Treg调节剂、150mg 维生素E聚乙二醇琥珀酸酯，溶于3mL氯仿；40℃旋转蒸发，使氯仿完全挥发；氯仿挥发形成的薄膜置于冷冻干燥机干燥；干燥的薄膜用10mL眼用缓冲液复溶；37℃震荡孵育48h，0.45μm滤膜过滤即得调节T_reg细胞比例的组合物。

实施例3 调节T_reg细胞比例的组合物的制备方案3

眼用缓冲液加入卡波姆、聚山梨醇酯80、蓖麻油和甘油，使其终浓度（wt%）分别为0.05%、1.00%、1.25%及2.20%；向前述溶液加入适量T_reg调节剂，使其终浓度为1-5000μg/mL，即得调节T_reg细胞比例的组合物。

实施例4 调节T_reg细胞比例的组合物增加小鼠干眼模型的T_reg比例

取雌性C57BL/6小鼠；连续10天，每天给予1.5mg东莨菪碱（皮下注射，分3次），诱发小鼠干眼；造模后小鼠分两组，一组眼表给予PBS治疗，另一组眼表给予实施例1、2或3的产物（每天2次）；治疗7天后分离颈部淋巴结；制备单细胞悬液；流式分析CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺ T_reg细胞比例。由图1可知，接受调节T_reg细胞比例的组合物治疗的小鼠T_reg细胞比例显著增加。

实施例5 调节T_reg细胞比例的组合物降低小鼠干眼模型的眼表损伤

取雌性C57BL/6小鼠；连续10天，每天给予1.5mg东莨菪碱（皮下注射，分3次），诱发小鼠干眼；造模后小鼠分两组，一组眼表给予PBS治疗，另一组眼表给予实施例1、2或3的产物（每天2次）；治疗7天后行角膜荧光素钠染色，并用NEI/Industry Grading System进行评分；由图2可知，接受调节T_reg细胞比例的组合物治疗的小鼠荧光素钠染色评分明显降低，即眼表损伤缓解。

实施例6 调节T_reg细胞比例的组合物增加干眼小鼠的结膜杯状细胞密度

取雌性C57BL/6小鼠；连续10天，每天给予1.5mg东莨菪碱（皮下注射，分3次），诱发小鼠干眼；造模后小鼠分两组，一组眼表给予PBS治疗，另一组眼表给予实施例1、2或3的产物（每天2次）；治疗7天后分离球结膜和睑结膜组织；行石蜡包埋和PAS染色；计算每个眼球的结膜杯状细胞数目；由图3可知，接受调节T_reg细胞比例的组合物治疗的小鼠结膜杯状细胞数目（即密度）明显增加。

各位技术人员须知：虽然本发明已按照上述具体实施方式做了描述，但是本发明的发明思想并不仅限于此发明，任何运用本发明思想的改装，都将纳入本专利专利权保护范围内。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种调节T_reg细胞比例的组合物,其特征在于, 所述的调节T_reg细胞比例的组合物包括T_reg调节剂、医用敷料和眼用缓冲液，所述的T_reg调节剂为具有如下所示结构，或由如下所示结构制成的盐组成：

2.根据权利要求1所述的一种调节T_reg细胞比例的组合物，其特征在于，所述的医用敷料为环糊精、维生素E聚乙二醇琥珀酸酯、卡波姆、聚山梨醇酯80、蓖麻油和甘油中的一种或几种。

3.根据权利要求2所述的一种调节T_reg细胞比例的组合物，其特征在于，所述的环糊精包括天然环糊精以及环糊精的羟丙基衍生物、磺丁基衍生物和甲基衍生物。

4.根据权利要求1所述的一种调节T_reg细胞比例的组合物，其特征在于，所述的眼用缓冲液为柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或硼酸盐缓冲液中的一种。

5.根据权利要求1所述的一种调节T_reg细胞比例的组合物，其特征在于，所述的眼用缓冲液pH为6-8。

6.一种权利要求1-5任意一项所述的调节T_reg细胞比例的组合物在制备治疗干眼药物上的应用。