CN111632128B - 短链胜肽组合物在预防或治疗干眼症的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明关于一种短链胜肽组合物在预防或治疗干眼症的应用。本发明的短链胜肽组合物包含一由5～10个氨基酸组成的短链胜肽，具有促进角膜修复、增加眼睛湿度及改善干眼症的功效。
Description
技术领域
本发明关于一种用于预防或治疗干眼症的短链胜肽组合物。更特别地，本发明关于一种包含一或多种其结构是具有5～10个选自丝氨酸(Serine)与赖氨酸(Lysine)和其他氨基酸的组合的氨基酸的寡肽的短链胜肽组合物，用于促进角膜修复、增加眼睛湿度及改善干眼症的用途。
背景技术
干眼症(Dry eye disease,DED)，又名干性角结膜炎(keratoconjunctivitissicca,KCS)，是一种眼睛干涩的状态，主要是因为眼睛泪液分泌量不足够或是分布不均匀或泪液过度蒸发，造成泪液无法适当的保持眼球表面的湿润。常见的症状包括眼睛干涩、容易疲倦、有异物感、痛灼热感、眼皮紧绷沉重、分泌物粘稠、怕风、畏光，较严重者眼睛会红、肿、充血、角质化，长期伤害则会造成角结膜病变，并会影响视力。
正常的眼睛表面有一层泪液层，覆盖在眼角膜及结膜上，形成一个润滑保护膜，最后通过鼻泪管排除掉。泪液层由外而内又可分为三层：油脂层：由眼睑的皮脂腺所分泌，可延缓水层液的蒸发，润滑眼睑及眼球表面；水液层：由泪腺所分泌，在中间层，主要功用是提供角膜氧气、有杀菌作用、以及清除代谢产物的功用；粘液素层：由结膜的杯状细胞所分泌，在最内层，使泪液水层能均匀分布在角结膜表面。
这三层泪液的组成如果有一层分泌不足或是分布不均匀，都会造成干眼的症状。而水液层泪腺泪液分泌不足是最常见的干眼原因，最近的医学研究指出，年纪老化泪腺功能降低是主要的问题。而近年电脑成为人们工作上不可或缺的工具及人手不离的手机，抑或空气污染PM2.5的问题，更促成干眼症年龄层的年轻化。根据国际期刊报导，干眼症目前仍都缺乏有效的治疗药物。干眼症西医的治疗方法，大都是使用人工泪液药水及人工泪液药膏，大都是暂时性有效，而很多患者还是病情愈来愈严重。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于预防或治疗干眼症的短链胜肽组合物，通过试验证明，本发明的短链胜肽具有促进角膜修复、增加眼睛湿度及改善急性和长期干眼症的功效。
为了实现上述目的，本发明提供一种用于预防或治疗干眼症的短链胜肽组合物，包含一或多种具有5～10个选自丝氨酸与赖氨酸和其他氨基酸的组合的氨基酸的短链胜肽，其中丝氨酸和赖氨酸必须同时存在该短链胜肽中。较佳地，所述的短链胜肽具有分子量为550～1100Da。
在本发明的一些具体实施例所述的短链胜肽具有促进角膜修复的功效。在本发明的其他具体实施例所述的短链胜肽具有增加眼睛湿度以改善急性和长期干眼症的功效。在本发明的一具体实施例所述的干眼症为急性干眼症。
在本发明的另一方面，关于一种具有5～10个选自丝氨酸与赖氨酸和其他氨基酸的组合的氨基酸的短链胜肽作为制备预防或治疗干眼症的医药品的用途，其中丝氨酸和赖氨酸必须同时存在该短链胜肽中。较佳地，所述的短链胜肽具有分子量为550～1100Da。
在本发明的一些具体实施例所述的干眼症为急性干眼症。在本发明的另一些具体实施例所述的干眼症为长期干眼症。
本发明的有益效果在于：
本发明提供一种用于预防或治疗干眼症的短链胜肽组合物，通过试验证明，本发明的短链胜肽具有促进角膜修复、增加眼睛湿度及改善急性和长期干眼症的功效。
附图说明
图1为以盐酸造成兔子急性干眼症的14天实验的眼睛湿度测量结果。其中，控制组(◇)是无施予盐酸处理的正常眼睛；控制组
是施予盐酸处理的受损眼睛；AE250组(▲)是施予盐酸处理并滴加短链胜肽组合物AE250的用药眼睛。
图2为使用孟加拉玫瑰红钠盐染色死亡眼角膜细胞，用以评估AE 250对眼角膜细胞修复作用的眼部拍照图片。A.为施予0.12N盐酸处理及滴药AE250处理第三天及第七天的观察结果；B.为停止盐酸处理及滴药AE250处理后第三天及第十天的观察结果。
具体实施方式
在本发明使用的短链胜肽组合物是一种由一或多种具有5～10个选自丝氨酸与赖氨酸和其他氨基酸的组合的氨基酸的短链胜肽与必要载剂或赋形剂组成的组合物，各短链胜肽的分子量为550～1100Da。构成本发明短链胜肽结构的氨基酸必定包括丝氨酸与赖氨酸。丝氨酸是一种具有羟基(hydroxyl group)的极性、不带电氨基酸氨基酸，是生合成反应中最主要捐出一个碳的化合物，可促进脂肪和脂肪酸的新陈代谢，促进肌肉生长，协助体内制造抗体有助于维持，帮助神经纤维形成髓鞘；赖氨酸是一种人体必需的氨基酸，胶原蛋白中含有的羟基赖氨酸是由赖氨酸经羟基化而来，常被用于需要蛋白质修复的患者及需要额外增加肌肉量的运动员。
用于本发明的实施例，将具有五肽序列(Ala-Asn-Ser-Ile-Lys，SEQ ID No.1)的短链胜肽溶于生理食盐水，制得浓度为250μg/ml的短链胜肽溶液(以下简称AE250)，再用过滤膜无菌处理后备用。
本发明的其他特色及优点将在下列实施例中被进一步举例与说明，而该实施例仅作为辅助说明，并非用于限制本发明的范围。
实施例一、短链胜肽组合物促进眼睛角膜修复
本实施例使用500μl盐酸(0.12N，pH＝2)腐蚀兔子眼角膜后，造成眼睛湿度降低，进行14天兔子干眼症实验，以评估AE250在干眼症保护上的功效。药物是AE250每天滴加4次，200μl/次只有滴加7天，第8天停止滴加AE250；做左/右眼的眼睛湿度测试。结果如图1所示。
由图1的结果显示，兔子眼睛第8天停止滴加AE250后，与损伤组比较，眼睛湿度增加40～50％确实能改善干眼症。兔子眼睛第8天停止滴加AE250后，与损伤组比较，AE250确实能持续7天，明显改善兔子急性的干眼症。证实AE250具有长时间性改善干眼症。
角膜修复试验：用500μl盐酸(0.12N，pH＝2)腐蚀眼角膜1次，再用1％孟加拉玫瑰红钠盐(Rose Bengal sodium salt,500μl)，由上眼睑滴入，2分钟后，以10ml无汞配方的生理缓冲液，洗去多余的染剂，则死亡眼角膜细胞染成红色，用拍照扫描计算死亡眼角膜细胞面积，用以评估AE250对眼角膜细胞修复作用。
由图2的结果显示，在处理第三天，盐酸(pH2.0)会对兔子眼睛造成第二级(轻中度)损伤，经染色呈现红(上皮细胞死亡)且干。而点药AE250(4次/天)的处理组，在间隔最后点药8小时后观察，仍呈现良好的角膜状态，甚至比控制组好，表示本发明的短链胜肽组合物具有明显的角膜细胞修护效果，且由眼睛湿润程度来看确实具有保湿作用，可在干眼症急性期产生保护作用。而在处理第七天观察，可发现盐酸处理组的损伤程度达到最严重，而持续点药AE250的处理组，仍呈现很好的角膜修护效果。
在盐酸处理七天后停止施用盐酸及AE250点药，之后仍持续观察十天。在停止盐酸处理后第3天，发现盐酸处理组原先受损伤的角膜产生自愈修补，而稍减缓干眼症症状。而停止AE250点药3天，虽排除保湿作用但仍具很好角膜修护效果。在停止盐酸处理后第10天观察，受盐酸腐蚀的眼角膜已经逐渐自愈，而AE250点药处理组的角膜呈现最少的上皮死细胞，显示本发明的短链胜肽组合物具有减缓平日正常的上皮代谢雕亡的长期保护效用，对于干眼症可产生预防性功效。
实施例二、短链胜肽组合物改善急性干眼症
兔子眼睛是动物中最敏感的，因此本实施例使用兔子进行急性干眼症实验。托平卡胺(Tropicamide)是一种短效性的睫状肌松弛剂，可抑制眼球副交感神经的生理活性。泪液是由副交感神经控制的，所以抑制副交感神经就抑制泪液分泌，可用以造成兔子急性的干眼症。干眼症动物试验模式的建立：使用托平卡胺(Tropicamide)(0.4％溶于生理食盐水的溶液，用以拮抗副交感蕈毒型M3接受体)在12小时中给予5次滴加兔子眼睛，在最后一次滴加兔子眼睛后1小时，滴加测试药品：托平卡胺组，滴加不含短链胜肽的生理食盐水；托平卡胺+AE250组，滴加含有AE250短链胜肽组合物的生理食盐水。在滴加测试药品后1小时，测试兔子左/右眼的眼睛湿度(mm，试纸的水分延伸的距离)。结果列于表1。
表1.兔子急性干眼症模式的左/右眼眼睛湿度测试结果
兔子(N＝12)，三次独立实验，平均值±标准差。
正常兔子眼睛滴加人工泪液后，与生理食盐水滴加组(对照组)的眼睛比较，其眼睛湿度增加42～44％，表示人工泪液能改善干眼症，因此本实施例使用的兔子模式，确实可用于评估测试药物的干眼症改善能力。
使用托平卡胺滴加兔子眼睛，与生理食盐水滴加组比较，眼睛湿度减少36～62％，表示托平卡胺在此动物模式确实能造成兔子急性的干眼症。而使用AE250滴加兔子眼睛，与托平卡胺滴加组的兔子眼睛比较，眼睛湿度增加71～213％，显示本发明的短链胜肽组合物确实能明显改善兔子急性的干眼症。
SEQUENCE LISTING
<110> 三凡生技研发股份有限公司
<120> 短链胜肽组合物在预防或治疗干眼症的应用
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Ala Asn Ser Ile Lys
1 5
Claims (6)
1.一种用于预防或治疗干眼症的短链胜肽组合物，其特征在于，包含一或多种由5个氨基酸组成的短链胜肽，其中该氨基酸选自丝氨酸和赖氨酸和其他氨基酸的组合，条件为丝氨酸和赖氨酸同时存在该短链胜肽中；
该短链胜肽具有分子量为550 ~1100Da；
该短链胜肽为五肽，具有结构 Ala-Asn-Ser-Ile-Lys。
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，该短链胜肽具有促进角膜修复的功效。
3.一种由5个氨基酸组成的短链胜肽作为制备预防或治疗干眼症的医药品的用途，其特征在于，该氨基酸选自丝氨酸和赖氨酸和其他氨基酸的组合，条件为丝氨酸和赖氨酸同时存在该短链胜肽中；
该短链胜肽具有分子量为550 ~1100Da；
该短链胜肽为五肽，具有结构 Ala-Asn-Ser-Ile-Lys。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，该干眼症为急性干眼症。
5.如权利要求3所述的用途，其特征在于，该干眼症为长期的眼睛干涩状态。
6.如权利要求3所述的用途，其特征在于，该短链胜肽用于促进角膜修复。
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