CN116036069A

CN116036069A - 用于治疗心血管疾病的方法

Info

Publication number: CN116036069A
Application number: CN202211496660.4A
Authority: CN
Inventors: 卡罗·马切蒂
Original assignee: Olatec Therapeutics LLC
Current assignee: Olatec Therapeutics LLC
Priority date: 2017-01-06
Filing date: 2018-01-05
Publication date: 2023-05-02
Also published as: CN110167538B; JP2020503358A; JP7444432B2; ES2970485T3; US11576888B2; WO2018129347A1; MX393185B; EP3565540B1; US20190307718A1; CA3048494A1; EP3565540A1; EP3565540A4; MX2019007942A; CN110167538A; US20230277496A1; US12318361B2

Abstract

本发明涉及一种用于治疗心血管疾病的方法，所述心血管疾病如急性心肌梗死、动脉粥样硬化、心力衰竭、中风、血栓形成、心脏炎(包含急性心肌炎、急性心包炎和复杂性心包炎)、同种心脏移植物排斥反应、心肌病和外周血管疾病。所述方法包括以有效量向有此需要的受试者施用达泮舒腈。施用的优选途径是口服施用。

Description

用于治疗心血管疾病的方法

本申请是2018年1月5日提交的名称为“用于治疗心血管疾病的方法”，申请号为201880005629.1的中国发明申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及用于通过施用有效量的达泮舒腈(dapansutrile)来治疗心血管疾病的方法，如急性心肌梗死(AMI)、动脉粥样硬化、心力衰竭(HF)、中风、血栓形成、心脏炎(包含急性心肌炎、急性心包炎和复杂性心包炎)、同种心脏移植物排斥反应、心肌病和外周血管疾病。

背景技术

急性心肌梗死(AMI)是全世界发病率和死亡率的主要原因。AMI是由突然发作的心肌缺血和随之而来的坏死引起的。

AMI发生后的几年里，幸存者仍然处于死亡的高风险中。AMI最常见的并发症是发生左心室(LV)功能障碍和心力衰竭。心肌的初始缺血性损伤活化了一系列最终导致不良心脏重塑和心力衰竭以及随之而来的发病率和死亡率过高的事件。IL-1家族成员白细胞介素-1(IL-1)受体拮抗剂(IL-1Ra)是表现为急性期反应物的天然存在的抗炎蛋白。与其它急性期反应物一样，IL-1Ra水平在AMI期间升高，并且其水平与预后相关。(Abbate等人，《循环(Circulation)》，117：2670-2683，2008)。

动脉粥样硬化是造成血管病状的潜在疾病过程，其导致西方世界三分之一以上人口的死亡。动脉粥样硬化是动脉壁中的慢性炎性应答，其在很大程度上是由于巨噬细胞白细胞的累积造成的并且在没有通过功能性高密度脂蛋白(HDL)充分移除来自巨噬细胞的脂肪和胆固醇的情况下受到低密度脂蛋白促进。动脉粥样硬化是由动脉内多个斑块的形成而引起的，这会导致动脉硬化。随着疾病的进展，在随之而来的斑块上会有内皮细胞迁移。这些斑块由胆固醇、活化的血小板、巨噬细胞和积累的脂蛋白构成。这些斑块、炎症和内皮细胞迁移的组合导致此动脉硬化和血管损失弹性。

当心脏肌肉虚弱并且无法输送足够的血液来满足身体对血液和氧气的需求时，就会发生心力衰竭(HF)。

心肌炎是可以由多种病因引起的心脏肌肉(心肌)的炎性疾病。虽然大多数病例是由病毒感染产生的，但是毒素、药物和过敏性免疫反应也可能引起心脏肌肉的炎症。急性心肌炎是心脏肌肉的炎性病症，其中损伤的严重程度取决于违规剂(即病毒)的性质和随之而来的炎症两者。

心包炎是心包(心脏周围的纤维囊)的炎症。典型症状包含突然发作剧烈胸痛。

中风是指大脑血流不畅导致细胞死亡。中风有两种主要类型：由于缺乏血流的缺血性中风和由于出血的出血性中风。它们导致大脑的一部分无法正常运转。中风的体征和症状可以包含无法移动或感觉到身体的一侧、理解或说话方面的问题、感觉周围的环境在旋转或者失去一侧的视力以及其它体征和症状。

STEMI是ST段抬高心肌梗死(MI)的常用名称，后者是对一种心脏病发作类型的更精确定义。STEMI是由影响大面积心脏的长时间血液供应阻塞引起的。也可能发生非STEMI心肌梗死。

血栓形成是在血管内形成血凝块，其会阻碍血液通过循环系统。当血管受伤时，身体会使用血小板(凝血细胞)和纤维蛋白形成血凝块从而防止失血。即使当血管没有受伤时，在某些条件下体内也可能形成血凝块。自由破裂并且开始围绕身体移动的凝块或一块凝块被称为栓子。血栓形成可能发生在静脉(静脉血栓形成)或动脉中。静脉血栓形成导致身体的受影响部位充血，同时动脉血栓形成(以及罕见严重的静脉血栓形成)影响血液供应并且导致由该动脉供应的组织损伤(缺血和坏死)。

NLRP3(NOD样受体家族、含有3的pyrin结构域)也称为NALP3或cryopyrin，是炎性体的传感器之一、是参与白细胞介素-1β(IL-1β)加工和IL-18加工的大分子结构。NLRP3在细胞内感染(细菌和病毒蛋白)或组织损伤(缺血)期间感知细胞内危险。NLRP3活化导致募集ASC(含有羧基末端半胱天冬酶募集结构域的凋亡相关的斑点样蛋白)和导致炎性体形成并且最终导致细胞死亡的半胱天冬酶-1。越来越多的证据表明了炎性体在AMI导致进一步的功能障碍和HF后在不良心脏重塑中的核心作用。然而，心脏重塑和HF不是限于AMI的并发症，并且也可能在非缺血性损伤后发生。

Toldo等人(《抗氧化剂和氧化还原信号(Antioxid.Redox Signal.)》，22：1146-1161，2015)报道在缺血性损伤后，炎性体(通过加工白细胞介素-1β和IL-18以及促进细胞死亡而放大反应的大分子结构)的形成会促进不良心脏重塑和心力衰竭。

Marchetti等人(《Cardiovasc Pharmacol(心血管药理学杂志)》，66：1-8，2015)报道NLRP3炎性体的药理抑制会限制小鼠在缺血性和非缺血性损伤后的细胞死亡和LV收缩功能障碍。

需要一种用于治疗心血管疾病的方法。所述方法应当有效并且没有明显的副作用。

附图说明

图1示出了从在体外用达泮舒腈治疗的人类巨噬细胞中抑制IL-1β和IL-18。

图2示出了与未治疗的小鼠相比，在用达泮舒腈治疗的小鼠中滑膜中的IL-1β的水平显著降低。

图3A示出了在小鼠J774A.1细胞中在脂多糖(LPS)/三磷酸腺苷(ATP)刺激后来自J774A.1细胞的细胞裂解物(Lys)和上清液(Sup)的半胱天冬酶-1(p45和p10)的蛋白质印迹的结果。图3B示出了在存在50μM达泮舒腈(或实验室代码，OLT1177)的情况下在LPS和尼日利亚菌素(nigericin)(NIG)刺激后J774A.1细胞裂解物中的半胱天冬酶-1活性的平均值±SEM的结果。

图4示出了在存在OLT1177(50μM)的情况下在LPS/ATP刺激后来自4个健康供体的人单核细胞衍生的巨噬细胞(HMDM)的FRET强度的平均值±SEM的百分比变化。

图5示出了在达泮舒腈治疗和体内LPS激发后小鼠心脏中的IL-1β、IL-6和IL-1α的细胞因子水平。

图6示出了用OLT1177治疗小鼠的急性心肌梗死减少了梗死面积并且保护了左心室收缩功能。

图7示出了用于测量用媒剂和60mg/kg OLT1177治疗的小鼠的梗死面积的三苯基四唑氯化物和酞菁蓝染色的心室心脏切片的代表性图像。

图8示出了研究部分A中在再灌注时施用6mg/kg、60mg/kg或600mg/kg OLT1177或媒剂的小鼠在缺血/再灌注后24小时的左心室梗死面积的平均值(±SEM)百分比。

图9A和图9B示出了研究部分A中在再灌注时施用6mg/kg、60mg/kg或600mg/kgOLT1177或媒剂的小鼠在缺血/再灌注后24小时的平均(±SEM)左心室缩短分数(图9A)和左心室射血分数(图9B)。

图10示出了与研究部分A中在再灌注时相比，研究部分B中在再灌注后施用60mg/kg OLT1177 60分钟、120分钟或180分钟的小鼠在缺血/再灌注后24小时的左心室梗死面积的平均值(±SEM)百分比。

图11A和图11B示出了与研究部分A中在再灌注时相比，研究部分B中在再灌注时施用60mg/kg OLT1177 60分钟、120分钟或180分钟的小鼠在缺血/再灌注后24小时的平均(±SEM)左心室缩短分数(图11A)和左心室射血分数(图11B)。

具体实施方式

NLRP3炎性体的活化会扩大对组织损伤的炎性反应并且介导进一步的损伤。达泮舒腈是选择性的NLRP3炎性体抑制剂；达泮舒腈通过防止活化NLRP3炎症小体来减轻炎症。达泮舒腈在体外抑制从人类巨噬细胞中产生IL-1β和IL-18。达泮舒腈在体外抑制人类嗜中性粒细胞和小鼠巨噬细胞中的半胱天冬酶-1活化。

通过此作用机制，达泮舒腈阻止半胱天冬酶-1的活化并且抑制在动物和人类受试者中形成NLRP3炎性体。达泮舒腈通过阻断NLRP3炎性体的组装防止炎症的破坏性影响并防止IL-1β和IL-18的产生。达泮舒腈可有效减少梗死面积以及在受试者中进行心肌缺血/再灌注后减轻左心室收缩功能障碍。达泮舒腈可有效保护受试者在缺血性和非缺血性损伤后的心脏功能。

本发明涉及治疗心血管疾病的方法，所述心血管疾病如急性心肌梗死、动脉粥样硬化、心力衰竭、中风、血栓形成、心脏炎(包含急性心肌炎、急性心包炎和复杂性心包炎)、同种心脏移植物排斥反应、心肌病和外周血管疾病。

化合物

本发明使用达泮舒腈的经纯化化合物(3-甲磺酰基-丙腈)或其药学上可接受的盐：

如本文所使用的，“药学上可接受的盐”是保留母体化合物的所需生物活性并且不会产生不希望的毒理学效应的盐。药学上可接受的盐形式包含不同的盐的各种结晶多晶型物以及无定形形式。可以用金属或有机抗衡离子形成药学上可接受的盐，并且所述药学上可接受的盐包含但不限于碱金属盐，如钠或钾；碱土金属盐，如镁或钙；以及铵或四烷基铵盐，即NX₄+(其中X为C_1-4)。

药物组合物

在药物组合物中活性化合物达泮舒腈或其药学上可接受的盐或溶剂合物的量一般对于可注射配制品为约0.1-5％，对于片剂配制品为约1-90％，对于胶囊配制品为约1-100％，对于局部配制品为约0.01-20％、0.05-20％、0.1-20％、0.2-15％、0.5-10％或1-5％(w/w)，并且对于贴片配制品为约0.1-5％。

如本申请所使用的，“约”是指所列举值的±10％。

本领域技术人员可以使用常规标准来选择作为非活性成分的药学上可接受的载体。药学上可接受的载体包含但不限于非水基溶液、悬浮液、乳液、微乳液、胶束溶液、凝胶和软膏。药学上可接受的载体还可以含有包含但不限于以下的成分：盐水和电解质水溶液；离子和非离子渗透剂，如氯化钠、氯化钾、甘油和葡萄糖；pH调节剂和缓冲剂，如氢氧化物盐、磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、硼酸盐；以及三乙醇胺；抗氧化剂，如亚硫酸氢盐、亚硫酸盐、偏亚硫酸氢盐、硫代亚硫酸盐、抗坏血酸、乙酰半胱氨酸、半胱氨酸、谷胱甘肽、丁基化羟基茴香醚、丁基化羟基甲苯、生育酚和抗坏血酸棕榈酸酯的盐、酸和/或碱；表面活性剂，如卵磷脂、磷脂，包含但不限于磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇；泊洛沙姆(poloxamer)和泊洛沙胺(ploxamine)；聚山梨醇酯，如聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯20；聚醚，如聚乙二醇和聚丙二醇；聚乙烯，如聚乙烯醇和聚维酮；纤维素衍生物，如甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素及其盐；石油衍生物，如矿物油和白凡士林；脂肪，如羊毛脂、花生油、棕榈油、豆油；甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯；丙烯酸的聚合物，如羧基聚亚甲基凝胶和疏水改性的交联丙烯酸酯共聚物；多糖，如葡聚糖；以及糖胺聚糖，如透明质酸钠。可以使用众所周知的防腐剂来保护这些药学上可接受的载体免受细菌污染，这些防腐剂包含但不限于苯扎氯铵、乙二胺四乙酸及其盐、苄索氯铵、氯己定、氯丁醇、对羟基苯甲酸甲酯、硫柳汞和苯乙醇，或者可以将所述药学上可接受的载体配制成用于单次或多次使用的非防腐制剂。

例如，达泮舒腈的片剂配制品或胶囊配制品可以含有不具有生物活性且不与活性化合物反应的其它赋形剂。片剂的赋形剂可以包含填充剂、粘合剂、润滑剂以及助滑剂、崩解剂、润湿剂和释放速率调节剂。粘合剂促进配制品颗粒的粘附并且对片剂配制品很重要。粘合剂的实例包含但不限于羧甲基纤维素、纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、刺梧桐树胶、淀粉、淀粉和黄蓍胶、聚(丙烯酸)和聚乙烯吡咯烷酮。

例如，达泮舒腈的贴片配制品可以包括一些非活性成分，如1，3-丁二醇、氨乙酸二羟基铝、乙二胺四乙酸二钠、D-山梨糖醇、明胶、高岭土、对羟基苯甲酸甲酯、聚山梨醇酯80、聚维酮、丙二醇、对羟基苯甲酸丙酯、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸钠、酒石酸、二氧化钛和纯净水。贴片配制品还可以含有皮肤渗透性增强剂，如乳酸酯(例如，月桂基乳酸酯)或二乙二醇单乙醚。

包含达泮舒腈的局部配制品可以是凝胶、霜剂、洗剂、液体、乳液、软膏、喷雾剂、溶液和悬浮液的形式。局部配制品中的非活性成分例如包含但不限于乳酸月桂酯(润肤剂/渗透增强剂)、二乙二醇单乙醚(润肤剂/渗透增强剂)、DMSO(溶解度增强剂)、硅氧烷弹性体(流变学/质地改性剂)、辛酸/癸酸甘油三酯(润肤剂)、辛水杨酯(润肤剂/UV过滤剂)、硅油(润肤剂/稀释剂)、角鲨烯(润肤剂)、葵花籽油(润肤剂)和二氧化硅(增稠剂)。在一个实施例中，二乙二醇单乙醚包含在局部凝胶配制品中。

使用方法

通过抑制NLRP3炎性体的组装，达泮舒腈分别会阻止半胱天冬酶-1的活化以及随后会使pro-IL-1β和pro-IL-18成熟为促炎细胞因子IL-1β和IL-18。

达泮舒腈会抑制IL-1β的加工和释放，但是不会抑制IL-1β前体和其它炎性体组分(包含NLRP3和ASC)的合成。达泮舒腈也会抑制半胱天冬酶-1活化。此外，达泮舒腈通过不抑制如NLRC4和AIM2的其它炎性体、不抑制组成型细胞因子以及通过防止细胞死亡来保护身体的免疫监视。

本发明涉及治疗心血管疾病的方法，所述心血管疾病如急性心肌梗死、动脉粥样硬化、心力衰竭、中风、血栓形成、心脏炎(包含急性心肌炎、急性心包炎和复杂性心包炎)、同种心脏移植物排斥反应、心肌病和外周血管疾病。上文的心血管疾病都具有作为疾病的病因或作为事件的结果的炎性组分。所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的达泮舒腈的步骤。如本文所使用的，“有效量”是通过改善病理状况和/或减少、改进和/或消除疾病症状来有效治疗疾病的量。

在一个实施例中，本发明可有效治疗急性心包炎，包含难治性/复发性急性心包炎。在一个实施例中，本发明可有效预防急性心包炎的复发。通过向患有急性心包炎的受试者(例如，患者)施用达泮舒腈，患者已经减轻了与急性心包炎相关的症状，如胸痛、疲劳、发热、胸闷、广泛的ST段抬高、以前未报道的PR抑郁、心包积液、复发性疼痛、发热、心包摩擦、ECG改变、心包积液的超声心动图证据、白细胞计数升高、红细胞沉降率、高敏性C反应蛋白(hsCRP)水平、CRP水平、心包填塞、建构性心包炎、呼吸短促和/或急性心包炎减轻或无复发。

在一个实施例中，本发明可有效治疗复杂性心包炎，包含难治性/复发性复杂性心包炎。在一个实施例中，本发明可有效预防复杂性心包炎的复发。通过向患有急性心包炎的患者施用达泮舒腈，患者已经减轻了与急性心包炎相关的症状，如胸痛、疲劳、发热、胸闷、广泛的ST段抬高、以前未报道的PR抑郁、心包积液、复发性疼痛、发热、心包摩擦、ECG改变、心包积液的超声心动图证据、白细胞计数升高、红细胞沉降率、hsCRP水平、心包填塞、建构性心包炎、呼吸短促和/或急性心包炎减轻或无复发。

在一个实施例中，本发明可有效治疗心肌炎，包含难治性/复发性心肌炎。在一个实施例中，本发明可有效预防心肌炎的复发。通过向患有心肌炎的患者施用达泮舒腈，患者改进了与心肌炎相关的以下症状中一种或多种：胸痛、头晕、疲劳、不适、心律异常、杂音、心悸、呼吸急促、呼吸短促和患者四肢中的一处或多处的肿胀。

在一个实施例中，本发明可有效治疗同种心脏移植物排斥反应，包含难治性/复发性同种心脏移植物排斥反应。在一个实施例中，本发明可有效预防同种心脏移植物排斥反应的复发。通过向患有同种心脏移植物排斥反应的患者施用达泮舒腈，患者具有改进的hsCRP水平、IL-1β水平和/或IL-6水平、改进的心肺运动测试(CPX)值、改进的移植物接受和/或移植物存活、减轻的炎症以及随后没有住院治疗与同种心脏移植物排斥反应相关的适应症。

在一个实施例中，本发明可有效治疗心力衰竭，包含难治性/复发性心力衰竭。在一个实施例中，本发明可有效预防心力衰竭的复发。通过向患有心力衰竭的患者施用达泮舒腈，患者具有改进的药效终点和/或生物标志物终点，如血浆hsCRP水平、IL-1β和IL-6和/或B型利钠肽(BNP)。患者通常还会拥有改进的CPX评分、改进的ECG记录和/或改进的生物阻抗分析并且/或者会降低再次住院治疗与心力衰竭相关的适应症的风险。在一个实施例中，本发明可有效治疗STEMI以预防心力衰竭。

在一个实施例中，本发明可有效治疗AMI，包含难治性/复发性AMI。在一个实施例中，本发明可有效预防AMI的复发。通过向患有AMI的患者施用达泮舒腈，患者的左心室舒张末期直径、收缩末期直径、受损心脏组织的面积和/或梗死面积减小。

用达泮舒腈治疗可抑制缺血/再灌注AMI或非再灌注AMI模型中的NLRP3炎性体形成，并且会导致在病理研究中或作为血清心肌肌钙蛋白I水平测量的梗死面积显著减小。抑制NLRP3炎性体可保护心脏功能并且在缺血性和非缺血性损伤后减弱LV收缩功能障碍。

在一个实施例中，本发明可有效治疗动脉粥样硬化，包含难治性/复发性动脉粥样硬化。在一个实施例中，本发明可有效预防动脉粥样硬化的复发。通过向患有动脉粥样硬化的患者施用达泮舒腈，患者具有改进的平均血管壁面积比、一个或多个受影响血管中的改进的斑块负荷、一个或多个受影响血管的改进的扩张性、改进的峰值氧消耗评分、改进的峰值氧消耗(峰值VO₂)改变、改进的通气效率、改进的左心室射血分数、改进的舒张功能、随后减少或没有住院治疗与动脉粥样硬化相关的一种或多种适应症、改进的脉搏波速度、改进的斑块组合物、减少的主动脉劳损、改进的hsCRP水平、改进的空腹血糖(fasting plasmaglucose)、改进的HbA1c水平、口服葡萄糖耐量试验后改进的葡萄糖、改进的β细胞功能(HOMA-B)、改进的胰岛素抵抗(HOMA-IR)和/或降低的血清淀粉样蛋白A(SAA)水平。

在一个实施例中，本发明可有效治疗心肌病，包含难治性/复发性心肌病。在一个实施例中，本发明可有效预防心肌病的复发。通过向患有心肌病的患者施用达泮舒腈，患者的胸痛减轻、头晕减少、疲劳减缓、食欲增加、心律改善、心率降低、心脏杂音发生率降低、腹胀减缓、腹部液体减少、咳嗽减少、呼吸短促缓解、患者四肢肿中的一处或多处的肿胀减轻和/或体重增加减少。

在一个实施例中，本发明可有效治疗中风，包含难治性/复发性中风。在一个实施例中，本发明可有效预防中风的复发。通过向患有中风的患者施用达泮舒腈，患者的损伤体积减小、大脑炎性水平降低、恢复mRS评分的可能性增加和/或细胞毒性水肿减轻。

在一个实施例中，本发明可有效治疗血栓形成，包含难治性/复发性血栓形成。在一个实施例中，本发明可有效预防血栓形成的复发。通过向患有血栓形成的患者施用达泮舒腈，患者改进了具有一个或多个血栓或暴露于一个或多个血栓的一个或多个血管中的血流减少(例如，血流量增加)、在形成一个或多个血栓之前增加了循环流量变化(如闭塞性血栓)、减少了凝块数量、减少了血栓形成和/或减少了血栓形成的组织学证据。

在一个实施例中，本发明可有效治疗外周血管疾病，包含难治性/复发性外周血管疾病。在一个实施例中，本发明可有效预防外周血管疾病的复发。通过向患有外周血管疾病的患者施用达泮舒腈，患者的一个或多个血管壁面积比率降低、SAA水平和/或比率降低和/或hsCRP水平和/或比率降低。

可以通过全身性施用或局部施用来施加本发明的药物组合物。全身性施用包含但不限于口服施用、肠胃外施用(如静脉内施用、肌肉内施用、皮下施用或直肠施用)和吸入施用。在全身性施用中，活性化合物首先到达血浆并且然后分布到靶组织中。口服施用是本发明的优选的施用途径。局部(local)施用包含局部(topical)施用。

组合物的剂量可以基于损伤的程度和每个患者的个体反应而变化。对于全身性施用，所递送活性化合物的血浆浓度可以变化；但是通常为1x10^-10-1x10^-4摩尔/升，并且优选地为1x10^-8-1x10^-5摩尔/升。

在一个实施例中，将药物组合物口服施用给受试者。口服施用的剂量通常为0.1-100mg/kg/天、0.1-20mg/kg/天或1-50mg/kg/天，这取决于受试者的年龄和身体状况。例如，对于人类受试者，口服施用的剂量为0.1-10mg/kg/天、0.5-10mg/kg/天、1-10mg/kg/天、1-5mg/kg/天或5-50mg/kg/天。在一个实施例中，可以以1-100剂量、10-50剂量、20-1000剂量、20-500剂量、100-800剂量或200-600mg/剂量每天1_4次地向人类受试者口服施加活性化合物，这取决于患者的年龄和身体状况。

在一个实施例中，将药物组合物静脉内施用给受试者。静脉内弹丸注射或静脉内输注的剂量通常为0.03到5mg/kg/天或0.03到1mg/kg/天。

在一个实施例中，将药物组合物皮下施用给受试者。皮下施用的剂量通常为0.3-20mg/kg/天、0.3-3mg/kg/天或0.1-1mg/kg/天。

在一个实施例中，局部施加组合物。根据医学问题和疾病病理学，每天至少局部施加组合物1次或2次或者每天3次到4次。通常，局部组合物包括约0.01-20％、或0.05-20％、或0.1-20％、或0.2-15％、0.5-10或1-5％(w/w)的活性化合物。典型地，向个体施加每剂量0.2-10mL的局部组合物。

本领域技术人员将认识到，多种递送机制也适用于本发明。

本发明可用于治疗哺乳动物受试者，如人、马和犬和猫。本发明在治疗人类方面尤其有效。

以下实例进一步说明了本发明。这些实例仅旨在说明本发明并且不应被解释为限制本发明。

实例

实例1.抑制从人单核细胞衍生的巨噬细胞中释放IL-1β和Il-18

从6个健康人供体的血液中分离出外周血单核细胞(PBMC)，并且所述细胞使用GM-CSF(5ng/ml)持续5天以分化(differenciate)成巨噬细胞。在0时，以1μg/mL用脂多糖(LPS，致敏期)刺激所述分离的外周血单核细胞。在30分钟时，用0.001-100μM的不同浓度的达泮舒腈(OLT1177)培养所述分离的外周血单核细胞。在4小时时，加入10μM的尼日利亚菌素(NIG，释放期)。在5小时的培养期结束时，采集上清液并且遵照供应商的方案使用相应的ELISA试剂盒来测定IL-1β或IL-18。结果示出在图1(A和B)中。

图1a示出了在用脂多糖(致敏期)和尼日利亚菌素(释放期)刺激后抑制从人单核细胞衍生的巨噬细胞中释放IL-1β的数据。在1μM的达泮舒腈处观测到了最大抑制效果。

图1b示出了在用脂多糖和NIG刺激后抑制从人单核细胞衍生的巨噬细胞中释放IL-18的数据。在10-50μM的达泮舒腈处观测到了最大抑制效果。

结果表明，达泮舒腈抑制从刺激后的单核细胞衍生的巨噬细胞中释放IL-1β(图1a)和IL-18(图1b)。与对照处理相比，***：P＜0.001，*：P＜0.05。

实例2.小鼠IL-1β水平

直接注射到小鼠膝关节中的酵母聚糖引发炎性反应并且被用作关节炎的模型(Verschure等人，《风湿病年鉴(Ann.Rheum Dis.)》53：455-460，1994)。

在此模型中测量的终点包含膝关节肿胀评分、滑膜组织中的细胞因子水平和膝盖的微观病理。

通过向每只小鼠的两膝的膝关节(在0时)在关节内注射酵母聚糖(180μg)来诱导小鼠关节炎。在-25小时、-13小时和-1小时时，通过口服强饲法用媒剂(盐水，n＝5)或含达泮舒腈(药物)的媒剂(600mg/kg，n＝4)

来治疗小鼠。在于0时注射酵母聚糖后，在+11小时和+23小时时用媒剂或达泮舒腈(600mg/kg)来进一步治疗小鼠。在注射酵母聚糖24小时后杀死小鼠。

在去除皮肤后，用范围从0到3的评分系统评估所有膝盖的肉眼可见的关节肿胀，其中0表示无肿胀，并且3表示严重肿胀。结果显示，与媒剂治疗的小鼠相比，达泮舒腈治疗的小鼠的关节肿胀显著减轻。

另外，从每只小鼠的一只膝盖取出滑膜，并且遵照制造商的方案，使用来自R&DSystems，Inc.的ELISA试剂盒来裂解细胞以测量小鼠IL-1β。结果显示为平均值±平均值的标准误差，并且进行统计学评估(参见图2)。图2示出了与未治疗的小鼠相比，在用达泮舒腈治疗的小鼠中滑膜中的IL-1β的水平显著降低。

实例3.通过达泮舒腈抑制半胱天冬酶-1活化

用1μg/ml脂多糖(LPS)刺激J774A.1小鼠巨噬细胞4小时，并且加入尼日利亚菌素(NIG，10μM)或ATP(5mM)1小时。在LPS刺激后30分钟或与ATP同时将OLT1177加入细胞中。

图3A示出了在小鼠J774A.1细胞中的LPS/ATP刺激后来自J774A.1细胞的细胞裂解物(Lys)和上清液(Sup)的半胱天冬酶-1(p45和p10)的蛋白质印迹的结果。在存在达泮舒腈(OLT)的情况下J774A.1细胞中的活化的半胱天冬酶-1(P10)的A亚单位减少了。

图3B示出了在存在50μM达泮舒腈(OLT1177)的情况下在LPS和NIG刺激后J774A.1细胞裂解物中的半胱天冬酶-1活性的平均值±SEM的结果。半胱天冬酶-1活性表示为每种测定的平均值的百分比变化(n＝3)，其中LPS/NIG设定为100％。与对照相比，在存在达泮舒腈的情况下，在来自经刺激细胞的细胞裂解物的酶测定中，半胱天冬酶-1活性降低了35％(p＜0.05)。

结果表明，达泮舒腈(OLT1177)抑制了J774A.1细胞系中的半胱天冬酶-1活化。

实例4.通过达泮舒腈抑制炎性体组装/聚集

在载玻片上用GM-CSF培养人单核细胞衍生的巨噬细胞(HMDM)5天、用1μg/ml LPS刺激4小时并且然后用5mM ATP治疗1小时。在LPS刺激后30分钟或与ATP同时将达泮舒腈(OLT1177，50μM)加入细胞中。

在用PBS洗涤后，如Gamboni等人在《生理学报告(Physiol Rep.)》，2(7)，2014中所描述的，将细胞固定并用70-30丙酮-甲醇进行透化。简言之，将细胞置于加湿的载玻片室中，在10％正常驴血清(Jackson Immunologicals，宾夕法尼亚州韦斯特葛罗夫)中封闭1小时。去除驴血清后，加入人NLRP3(Cryo-2，AdipoGen，加利福尼亚州圣地亚哥(San Diego，CA))、人半胱天冬酶-1(sc-515，Santa Cruz Biotechnology)或同种异体、物种特异性抗IgG(R&D Systems)的一抗并将其在4℃下保持过夜。然后用PBS洗涤载玻片3次，并且将细胞在室温下与驴抗小鼠Alexa555(Life Technologies)或驴抗兔Alexa488(LifeTechnologies)荧光染料缀合的二抗一起孵育1小时。用DAPI(Life Technologies)来染色细胞核。如Gamboni等人所描述的，采用使用Zeiss 639Plan-Apochromat物镜(1.4N/A)、Sutter氙光源和Cooke SensiCam的马里亚纳(Marianas)成像站来获取FRET图像。如Berney等人在：《生物物理学杂志(Biophys J.)》，84：3992-4010，2003中所报告的，校正后的FRET被计算为FRET＝转移-Fd/D供体-Fa/Aa受体。

在用LPS和ATP刺激后，在HMDM中使用免疫荧光和荧光共振能量转移(FRET)分析来检查NLRP3炎性体的形成。在未刺激的细胞中，半胱天冬酶-1(绿色)和NLRP3(红色)在细胞中扩散。在LPS/ATP之后，半胱天冬酶-1和NLRP3定位于亚膜区域，并且FRET分析显示，半胱天冬酶-1在刺激后与NLRP3缔合。FRET阳性要求两个分子之间的距离在NLRP3和半胱天冬酶-1这种情况下小于30nm。在存在50μM OLT1177的情况下，缔合性降低(P＜0.01)。

图4示出了在存在OLT1177(50μM)的情况下在LPS/ATP刺激后来自4个健康供体的HMDM的FRET强度的平均值±SEM的百分比变化。**：P＜0.01。FRET显微镜检查的结果表明对达泮舒腈治疗的细胞中的炎性体组装/聚集的抑制。FRET数据与半胱天冬酶-1的达泮舒腈抑制以及IL-1β加工的抑制一致。

实例5.体内脂多糖激发后的细胞因子水平

用200μl的盐水或匹配体积的媒剂(盐水)中的200mg/kg达泮舒腈(OLT1177)每12小时持续5剂地在腹膜内(IP)治疗22-26克的C57BL/6J小鼠雄性小鼠(杰克逊实验室(Jackson Laboratories)，缅因州巴尔港(Bar Harbor，ME))。在施用最后一剂或盐水1小时后，5mg/kg地给动物IP注射200μl的脂多糖(LPS，大肠杆菌，055：B5，Sigma-Aldrich)，并且在2小时后将其处死。在心脏匀浆中测量细胞因子。使用含有蛋白酶抑制剂(Roche，印第安纳州印第安纳波利斯(Indianapolis，IN))混合物的RIPA缓冲液(Sigma-Aldrich)来裂解组织匀浆，所述混合物在4℃下以13,000g被离心20分钟，并且测定上清液的IL-1β、IL-6和IL-1α的细胞因子水平。针对总蛋白质含量来校正细胞因子浓度。

图5示出，与盐水媒剂治疗相比，在药物治疗后，LPS激发后的小鼠心脏中的IL-1β、IL-6和IL-1α的细胞因子水平降低，其中P值＜0.05。结果表明，达泮舒腈在炎症过程中减轻了心脏炎症。本研究中使用的LPS剂量涵盖缺血性炎症、血管炎症和细胞介导的炎症。

实例6.用达泮舒腈治疗动物的急性心肌梗死(缺血/再灌注)的方案

使小鼠在麻醉状态下进行口腔气管插管(戊巴比妥，50-70mg/kg)、置于右侧卧位并且然后进行左胸廓切开术、心包切除术和左前降支(LAD)冠状动脉结扎术。在胸腔闭合前30分钟后释放结扎的冠状动脉。进行假手术-动物在没有冠状动脉结扎的情况下经历相同的外科手术。在再灌注时用达泮舒腈(60mg/kg)或媒剂(盐水)在腹膜内治疗小鼠，并且然后在再灌注24小时后将其杀死以测量心肌肌钙蛋白I水平并且评估梗死面积。

对于肌钙蛋白I水平测量，从下腔静脉中抽取每只小鼠的血液并且将其收集在真空采血管(Vacutainer tube)(BD Vacutainer，新泽西州富兰克林湖(Franklin Lakes，NJ))中用于血清分离。小鼠肌钙蛋白I水平是由酶联免疫吸附测定(Life Diagnostic Inc，宾夕法尼亚州西切斯特(West Chester，PA))确定的。根据Toldo等人，《分子和细胞心脏病学杂志(J Mol Cell Cardiol)》51：244-51，2011进行梗死面积评估。

实例7.用达泮舒腈治疗动物的急性心肌梗死(永久性结扎)的方案

此模型反映了比实例6的模型更严重的AMI。使小鼠在麻醉状态下进行口腔气管插管(戊巴比妥，50-70mg/kg)、置于右侧卧位并且然后进行左胸廓切开术、心包切除术和左前降支(LAD)冠状动脉永久结扎术。进行假手术-动物在没有冠状动脉结扎的情况下经历相同的外科手术。在结扎后立即用达泮舒腈(60mg/kg)或媒剂(盐水)在腹膜内治疗小鼠，并且然后在进行超声心动图后的第7天将其杀死以便进行病理研究，从而测量LV尺寸和功能。根据Abbate等人，《循环》，117：2670-83，2008进行梗死面积评估。

实例8.动物体内达泮舒腈的梗死保留效应

成人CD1雄性小鼠的急性心肌梗死是通过进行左冠状动脉的瞬时手术结扎30分钟然后再灌注24小时来诱导的：3只小鼠接受在再灌注后立即腹膜内给予的OLT1177(60mg/kg)并且8只小鼠接受等体积的媒剂(0.9％NaCl)。24小时后，使用经胸超声心动图来测量左心室缩短分数(心脏收缩功能的替代指标)。在使用超声心动图后，使用三苯基-四唑氯化物(TTC)和伊文思蓝(Evans Blue)技术来制备小鼠以测量梗死面积，并且然后将其处死：被认为是非缺血区域(非风险区域)的心脏区域出现蓝色、具有风险但能成活的心脏区域出现红色、梗死心肌显得苍白。图6的左图描绘了用媒剂治疗的一只小鼠和用OLT1177治疗的一只小鼠的TTC/伊文思蓝染色：显然，媒剂中的梗死面积要大得多。中间的图量化了以相对于风险区域的百分比形式表达的梗死面积，其示出，与用媒剂治疗的小鼠相比，用OLT1177治疗的小鼠的梗死面积显著更小。右图示出了与用媒剂治疗的小鼠相比，用OLT117治疗的小鼠保留左心室收缩功能。

实例9.用达泮舒腈治疗动物的急性心肌梗死

目的：确定以下的功效：(1)在再灌注时施用的单剂量的OLT1177(6mg/kg、60mg/kg和600mg/kg)(部分A)和(2)在再灌注后在实验小鼠AMI模型中施用60分钟、120分钟或180分钟的单剂量的60mg/kg OLT1177。

方法：雄性CD-1小鼠经历左冠状动脉的瞬时手术结扎30分钟然后经历再灌注24小时。在再灌注时在腹膜内(IP)施用单剂量的OLT1177(6mg/kg、60mg/kg或600mg/kg)或匹配的媒剂(N＝5-9/组，研究部分A)或者在延迟60分钟、120分钟或180分钟后施用OLT1177(60mg/kg)(N＝4-7/组，研究部分B)。进行超声心动图以测量左心室(LV)缩短分数(FS)。通过三苯基-四唑氯化物(TTC)和酞菁蓝染色在病理学上测量梗死面积并且将梗死面积表达为处于风险中的心肌的百分比。

对于60mg/kg剂量，在0.65ml的0.9％的生理盐水溶液中稀释OLT1177(13mg/瓶)以达到20mg/ml的浓度。对于6mg/kg剂量，将20mg/ml剂量稀释10次(0.1ml OLT1177 20mg/kg+0.9ml 0.9％生理盐水)以达到2mg/ml的最终浓度。对于600mg/kg剂量，用0.1ml的盐水来稀释每瓶OLT1177(13mg/瓶)，以达到130mg/ml的最终浓度。组合多瓶的含量。将每个相应的管在37℃下进行涡流和加热，直到药物物质完全溶解。

在确认再灌注后，通过腹膜内途径以6mg/kg、60mg/kg或600mg/kg的剂量水平向雄性小鼠给药OLT1177(每只大约33g的小鼠接受100μl的给药溶液；150μl为较高剂量)(研究部分A)。在部分B中，从再灌注时间起延迟60分钟、120分钟或180分钟地注射60mg/kgOLT1177(每只小鼠100μl的给药溶液)。

成年远系繁殖的雄性CD1小鼠(8-10周龄)由Envigo(印第安纳州印第安纳波利斯)提供。单人操作员进行了所有手术。通过瞬时冠状动脉结扎30分钟来诱导实验性AMI从而诱导前壁和顶端(可见为苍白)的缺血然后是再灌注，并且这会导致涉及大约15％的左心室的梗死。用戊巴比妥钠(70mg/kg)深度镇静小鼠、使用23G导管插管小鼠并且将小鼠置于右侧卧位。对小鼠进行剃毛并且用聚维酮溶液和异丙醇清洁其皮肤。然后将小鼠与呼吸机连接并且进行左胸廓切开术，接着进行心包切除术和近端左冠状动脉结扎。将1mm直径的聚乙烯管插入结扎结内、固定并留在适当位置以阻塞冠状动脉流30分钟。在缺血时间结束时，移除管并且观察冠状动脉血流重建。此时，在确认再灌注后，将剂量为6mg/kg、60mg/kg或600mg/kg的OLT1177或用作媒剂(总体积0.1ml)的生理盐水(0.9％NaCl)注入腹腔(部分A)。在关闭胸腔通路后，使小鼠恢复24小时。使用皮下注射的丁丙诺啡(丁丙诺啡SR^TM实验室，0.5mg/kg)实现疼痛管理。对于研究部分B，在从再灌注时刻起60分钟、120分钟或180分钟后，给小鼠组注射60mg/kg的OLT1177。

只有在手术期间的目视检查中显示出缺血证据并且涉及整个顶端的小鼠才被不参与感兴趣的终点判定的外科助手随机分配到治疗组。

在处死前(再灌注后24小时)，小鼠在用戊巴比妥钠(50mg/kg)轻度麻醉的情况下经历经胸超声心动图检查。使用Vevo770成像系统(VisualSonics Inc，加拿大安大略多伦多)和30MHz探针进行超声心动图检查。根据胸骨旁短轴和顶端视图以B模式使心脏可视化。测量M-模式下的左心室(LV)舒张末期直径(LVEDD)和LV收缩末期直径(LVESD)。根据这些评估，计算LV缩短分数(FS)：

通过Vevo软件使用Teichholz公式计算射血分数(EF)。执行和阅读超声心动图的研究者对治疗分配不知情。

在手术24小时后测量梗死面积。给小鼠放血并且用含有肝素(40U/ml)的pH为7.4的磷酸盐缓冲盐水(PBS)1X快速灌注心脏。在洗去血液后，将含10％三苯基四唑氯化物的PBS 1X灌注到冠状动脉中，再次关闭结扎的冠状动脉(coronary artery)并且在含5mM腺苷的PBS 1X中用1％酞菁蓝染料(Quantum Ink，美国肯塔基州路易斯维尔)顺行注入冠状动脉(coronary)中直到心脏的大部分变成蓝色。使用细针通过LV顶端灌注PBS和TTC；使用静脉内导管从主动脉注射蓝色染料。

之后，将心脏移出、冷冻并且从顶端到底部切成相等厚度(即约1mm)的6-8个横切片。将心脏解冻到37℃持续5分钟并且将10％福尔马林(formaline)加入到心脏切片中持续30分钟以提高颜色对比。使用Image Pro Plus 6.0软件(Media Cybernetics，马里兰州银泉)通过计算机形态测量法测量梗死组织(呈现白色)和活组织(鲜红色)。将梗死面积报道为相对于左心室面积的百分比。

成果：在本研究中测量的参数包含(N＝4-9只动物/组)：

·左心室(LV)舒张末期直径

·左心室(LV)收缩末期直径

·梗死面积

结果：在再灌注时以单次腹膜内注射施用的OLT1177(6mg/kg、60mg/kg和600mg/kg)提供了显著减小的梗死面积(p＜0.001)，伴随保持左心室收缩功能(表1-5)。

与媒剂对照相比，低剂量的6mg/kg OLT1177显示梗死面积减小了36％。与媒剂对照相比，中剂量组和高剂量组(60mg/kg和600mg/kg)的平均梗死面积减小了超过60％。梗死面积的减小也伴随保持左心室收缩功能。事实上，相对于媒剂对照组，对于所有剂量的OLT1177，在再灌注24小时后计算的LV缩短分数和射血分数两者显著更高(p＜0.05)。

研究部分A中在再灌注时以腹膜内注射施用的OLT1177当单独与媒剂相比时导致用TTC测量的梗死面积显著减小(图7)。与分别用6mg/kg、60mg/kg或600mg/kg单剂量的OLT1177治疗后的9.9％、5.1％和6.0％的梗死面积相比，媒剂治疗组中的平均梗死面积为15.4％(图8；p＜0.001)。中剂量组和高剂量组之间的梗死面积没有显著差异(p＞0.05)。梗死面积的减小也伴随保持左心室收缩功能。事实上，相对于媒剂对照组，对于所有剂量的OLT1177，在再灌注24小时后计算的LV缩短分数和射血分数两者显著更高(图9A和9B；p＜0.05)。

作为研究部分A的最小有效剂量，选择60mg/kg OLT1177在部分B中再灌注后施用60分钟、120分钟或180分钟。如此，在再灌注后延迟60分钟后给予的OLT1177在减小梗死面积和保持LV功能时与部分A中没有拖延地给予的治疗一样有效。当在再灌注120分钟或180分钟后施用60mg/kg OLT1177时，梗死面积没有显著改变(图10)。在治疗延迟60分钟或120分钟后，与媒剂治疗的小鼠相比，LV缩短分数和射血分数显著改进(图11A和11B；p＜0.01)。然而，在治疗延迟180分钟后，OLT1177未能防止缩短分数下降或减少梗死面积。

表1.研究设计和剂量组

BID：每天两次；IP：腹膜内

¹相对于再灌注的时间

²一个样品未正确染色；因此，N＝8用于分析

³在一只动物中未观察到梗塞；因此，N＝4用于分析

⁴一只动物没有再灌注；因此，N＝6用于分析

表2.汇总数据分组-缺血30分钟后的梗死面积和再灌注时的测试物品给药(部分A)

LV：左心室；LV_ent：整个LV；LV_cav：LV腔；NA：不适用；ND：未确定；SE：标准误差

¹相对于盐水组

²未配对的双尾t检验

³未正确染色

⁴未观察到梗死

表3.汇总数据分组-缺血30分钟后测试物品给药延迟60分钟、120分钟或180分钟的梗死面积(部分B)

¹相对于部分A中的盐水组(第1组)

²未配对的双尾t检验

³相对于在再灌注时施用的60mg/kg(第3组)

表4.汇总超声心动图数据分组-缺血30分钟后的参数和再灌注时的测试物品给药(部分A)

AWDT：前壁舒张期厚度；AWST：前壁收缩期厚度；LVEDD：左心室舒张末期直径；LVEF：左心室射血分数；LVESD：左心室收缩末期直径；LVFS：左心室缩短分数；PWDT：后壁舒张期厚度；PWST：后壁收缩期厚度；SEM：平均值标准误差

¹相对于盐水组(第1组)的未配对的双尾t检验

表5.汇总超声心动图数据分组-缺血30分钟后OLT1177给药延迟60分钟、120分钟或180分钟的参数(部分B)

¹相对于盐水组(第1组，部分A)的未配对的双尾t检验

实例10.用达泮舒腈治疗急性心肌梗死(预示实例)

目的：研究达泮舒腈的功效，所述达泮舒腈被配制成用于在治疗患者和/或改进AMI后的患者效果时向患者口服施用的胶囊。

配制品：此实例中使用的配制品是含有100mg达泮舒腈和

PH-101的共混物的胶囊。每个安慰剂胶囊仅含有

PH-101。达泮舒腈胶囊和安慰剂胶囊两者被配制为口服施用。

方法：随机、双盲、安慰剂对照、事件驱动的临床活动研究，研究在具有升高的高敏C反应蛋白(hsCRP或CRP)的稳定的后MI患者中治疗AMI时每日口服施用的达泮舒腈。

提供患有前AMI(＞30天)和升高的CRP(CRP＞2mg/l])的左心室射血分数降低(LVEF＜50％)且有心力衰竭症状(纽约心脏病协会症状“NYHA”II-III级)的患者参加此研究。患者在开始治疗前在初始时间时经历心肺运动试验(CPX)，并且然后在3个月和12个月时重复心肺运动试验，并且在初始时间和12个月时经历经胸超声心动图检查。

·入选标准：

·书面知情同意书

·无生育潜力的男性或女性

·年龄≥18岁

·在随机化前的至少30天出现自发性心肌梗死(MI)

·hsCRP≥2mg/L

·LVEF＜50％

·NYHA II-III级

排除标准：

·孕妇或哺乳期(nursing)(哺乳期(lactating))妇女

·有生育潜力的妇女

·以下伴随性疾病中的任何疾病

ο计划的冠状动脉血管重建PCI或CABG

ο过去6个月内的主要非心脏手术或内窥镜手术

ο过去3年内的多支血管CABG手术

ο患有IV级HF的症状性患者

ο不受控制的高血压

ο不受控制的糖尿病

·无法完成跑步机运动试验

·妨碍解读心肺试验的条件(心律失常、缺血、高血压、肺病)

评估标准(可以包含以下各项中的一项或多项，但不限于以下各项中的任一项)：

临床活动：

该研究执行连续心肺运动试验(CPX)以前瞻性地测量具有以下特征的患者的有氧运动能力的变化：前MI、升高的CRP水平和收缩功能减弱、随机分配达泮舒腈或安慰剂的症状心力衰竭。

入选本研究的受试者在试验的最初12个月内经历了重复的CPX和超声心动图检查。

研究终点：

一级临床活动终点是：

·峰值耗氧量(VO₂)[时间范围：3个月]

ο安慰剂的间期变化(安慰剂校正的间期变化)与从初始时间起到口服单剂量100mg达泮舒腈或口服双剂量100mg达泮舒腈后3个月时的峰值VO₂的间期变化出现差异。

二级临床活动终点是：

·峰值VO₂变化[时间范围：12个月]

ο比较达泮舒腈(双剂量)与安慰剂，从初始时间到12个月峰值VO2的间期变化出现差异。

·通气效率(VE/VCO₂斜率)变化[时间范围：12个月]

ο比较达泮舒腈(双剂量)与安慰剂，从初始时间到3个月VE/VCO₂斜率的间期变化出现差异。

·氧利用效率斜率(OUES)[时间范围：12个月]

ο比较达泮舒腈(双剂量)与安慰剂，从初始时间到12个月OUES的间期变化出现差异。

·LVEF变化[时间范围：12个月]

ο比较达泮舒腈(双剂量)与安慰剂，从初始时间到12个月LVEF的间期变化出现差异。

·舒张功能变化[时间范围：12个月]

ο比较达泮舒腈(双剂量)与安慰剂，从初始时间到12个月E/E′(舒张功能)的间期变化出现差异。

实例11.用达泮舒腈治疗动脉粥样硬化(预示实例)

目的：研究达泮舒腈的功效，所述达泮舒腈被配制成用于在治疗动脉粥样硬化时向患者口服施用的胶囊。更具体地，评估相比于安慰剂每日口服施用达泮舒腈胶囊对通过整合血管MRI测量的患者斑块负荷的作用。

配制品：此实例中使用的配制品是含有100mg达泮舒腈和

PH-101的共混物的胶囊。每个安慰剂胶囊仅含有

PH-101。达泮舒腈胶囊和安慰剂胶囊两者被配制为口服施用。

方法：随机、双盲、安慰剂对照、事件驱动的临床活动研究，研究在具有升高的hsCRP的稳定的后MI患者中治疗动脉粥样硬化时每日口服施用的达泮舒腈。

入选标准：

·书面知情同意书

·无生育潜力的男性或女性

·年龄≥18岁

·在随机化前的至少30天出现自发性MI。hsCRP≥2mg/L

·通过成像实验室获取双侧颈动脉的可评估初始时间MRI图像

排除标准：

·孕妇或哺乳期(nursing)(哺乳期(lactating))妇女

·有生育潜力的妇女

·以下伴随性疾病中的任何疾病

ο计划的冠状动脉血管重建(PCI或CABG)

ο过去6个月内的主要非心脏手术或内窥镜手术

ο过去3年内的多支血管CABG手术

ο患有IV级心力衰竭(HF)的症状性患者

ο不受控制的高血压

ο不受控制的糖尿病

ο有颈动脉血管成形术、支架置入术或颈动脉粥样硬化斑块切除术史的患者

ο患有MRI检查禁忌症的患者(脑动脉瘤夹、植入式神经刺激器、植入式心脏起搏器、起搏器导线或除颤器、人工心脏瓣膜、人工耳蜗、眼部异物或其它植入体、纹身、植入式胰岛素泵、金属弹片或子弹)

ο容易出现幽闭恐怖症或已知焦虑病症的患者

临床活动：

该研究确定了在在具有升高的hsCRP的稳定的后心肌梗死患者中预防和/或治疗动脉粥样硬化方面每日口服施用的达泮舒腈的功效。

研究终点：

一级临床活动终点可以包含但不限于：

·12个月比初始时间的平均血管壁面积比率[时间范围：初始时间、给药后12个月]

ο使用磁共振成像(MRI)横截面切片测量的外周动脉壁面积(浅表股动脉)。平均血管壁面积(mm²)是通过乘以1000、除以用于体积计算的切片数并且除以切片厚度(3mm)来将血管的总斑块体积(TPV)(mL)转换为mm³而得到的。根据重复的测量混合效应模型测量12个月比初始时间的比率的最小二乘平均值，其中访视、治疗、访视治疗相互作用、初始时间和初始时间访视相互作用作为固定效应。

·颈动脉指数的分叉区域中的颈动脉斑块负荷的初始时间变化[时间范围：36个月]

·有不良事件、严重不良事件和死亡的参与者人数[时间范围：12个月]

ο在整个研究中监测参与者的不良事件、严重不良事件和死亡，如非致死性MI、非致死性中风或心血管死亡。

·主动脉弹性的初始时间变化[时间范围：初始时间、3个月、12个月]

ο在屏气期间获取两个轴向、ECG-门控、稳态自由进动(SSFP)“电影”图像以确定主动脉扩张性。在右肺动脉水平处通过上行和近端下降主动脉获得第一图像、通过膈膜下的远端主动脉获得第二图像。主动脉成像还允许估计斑块负荷和另外的血管功能测量。

·斑块负荷的初始时间变化(主动脉血管壁面积和颈动脉血管壁面积)[时间范围：初始时间、3个月、12个月]

ο为了评估主动脉的动脉粥样硬化斑块负荷，用超声心动图(ECG)门控双反转恢复(黑色血液)快速自旋回波序列应用屏气来获取主动脉的血管壁图像。使用主动脉的斜矢状图像作为中试，获取连续轴向图像以覆盖下行胸主动脉的一部分。将横断面中的右肺动脉的中点用作对初始时间和后续扫描中的第一切片的解剖参考。为了评估颈动脉中的动脉粥样硬化斑块负荷，用轴向ECG门控PD(质子密度)加权的黑色血液序列来获取血管壁图像。将颈动脉杈用作对所有三个成像时间点(初始时间、12周、48周)的解剖参考，其中在分叉区域下方获得轴向切片平面。此处报告颈动脉的平均值报告近端常见颈动脉区域。

二级临床活动终点可以包含但不限于：

·住院治疗导致紧急血管重建的不稳定心绞痛。

·在时间-事件分析中随机化时患有前驱糖尿病的患者中的新发2型糖尿病的发病率

·指数颈动脉的第3个月时总血管壁面积的初始时间变化。[时间范围：36个月]

·第3个月和第24个月时跨左颈动脉和右颈动脉的平均总血管壁面积。

[时间范围：36个月]

·左颈动脉和右颈动脉中对应总血管壁面积的初始时间变化。[时间范围：36个月]

·通过治疗相互作用存在的初始时间总血管壁面积以及跨亚组的治功效果的一致性。[时间范围：36个月]

·脉搏波速度和脉搏波速度误差的初始时间变化[时间范围：初始时间、3个月、12个月]

ο利用SphygmoCor装置，将ECG导联放置在颈动脉和股动脉处，所述ECG导联在该特定的动脉位置处提供对脉搏波的测量。两个血管床之间的距离除以脉搏波时移，提供对脉搏波速度的测量。

·斑块组合物的初始时间变化[时间范围：初始时间、3个月、12个月]

ο在颈动脉MRI获得期间，除了质子密度(PD)加权的ECG门控双反转快速自旋回波序列之外，还获得了T1和T2加权序列。结合PD加权图像，分析多对比度图像以确定感兴趣的区域，其中对比图案与在分叉区域中有复杂颈动脉斑块存在的参与者中存在的坏死脂质核、钙化和纤维组织一致。

·主动脉应变的初始时间变化[时间范围：初始时间、3个月、12个月]

ο根据电影稳态自由进动(SSFP)图像和心动周期内的管腔直径变化来直接计算动脉应变。所述值与脉压无关并且是分别根据最大管腔直径到最小管腔直径舒张和收缩得到的无单位比率。

·hsCRP的初始时间变化[时间范围：初始时间、3个月、12个月]

ο收集血液样品来分析hsCRP。

·空腹血糖的初始时间变化[时间范围：初始时间、3个月、12个月]

ο收集血液样品来分析空腹血糖。

·血红蛋白A1c(HbA1c)的初始时间变化[时间范围：初始时间、3个月、12个月]

ο收集血液样品来分析HbA1c。

·口服葡萄糖耐量试验(OGTT)后2小时葡萄糖的初始时间变化[时间范围：初始时间、3个月、12个月]

ο收集血液样品来分析OGTT后2小时葡萄糖。

·β细胞功能(HOMA-B)的初始时间变化[时间范围：初始时间、3个月、12个月]

ο收集血液样品来分析β细胞功能。通过稳态模型评估(β细胞功能(HOMA-B))来如下地计算β细胞功能：HOMA-B：20和基础胰岛素(μU/mL)水平的乘积除以基础葡萄糖(mmol/L)浓度的值减去3.5[即，HOMA-B＝20*基础胰岛素/(基础葡萄糖-3.5)]。

·初始时间胰岛素抵抗(HOMA-IR)变化[时间范围：初始时间、3个月、12个月]

ο收集血液样品来分析胰岛素抵抗。通过胰岛素抵抗的稳态模型评估(HOMA-IR)来如下地计算胰岛素抵抗：HOMA-IR：基础葡萄糖(mmol/L)和胰岛素(μU/mL)水平的乘积除以22.5[即，HOMA-IR＝基础葡萄糖*基础胰岛素/22.5]。

·12个月比初始时间的血清淀粉样蛋白A(SAA)水平比率[时间范围：初始时间、给药后12个月]

ο根据重复的测量混合效应模型测量12个月比初始时间的比率的最小二乘平均值，其中访视、治疗、访视治疗相互作用、初始时间和初始时间访视相互作用作为固定效应。

·12个月比初始时间的hsCRP比率[时间范围：初始时间、给药后12个月]

实例12.通过达泮舒腈来抑制麻醉大鼠的血栓形成

为了估计达泮舒腈对体内血栓形成的影响，执行以下的实验性方案。

用戊巴比妥钠(70mg/kg i.p.)麻醉大鼠(CD-1；雄性；大约350克；Charles River，北卡罗来纳州罗利)。对腹部进行剃毛并且将22号静脉导管插入侧尾静脉中。制作正中切口，并且将肠子包裹在盐水浸湿的纱布中并将其安置，从而可易于接近腹主动脉。小心地分离下腔静脉和腹主动脉并且解剖腹主动脉(靠近分叉的肾动脉的远端)的一部分(大约1cm)。此部分主动脉的所有分支均用4-0丝线进行缝合。将与跨音速(Transonic)流量计量仪连接的2.5mm直径的流量探测器置于动脉上并且记录初始时间(狭窄前)流量。在动脉周围放置两个夹子，这使血管直径减小了大约80％。进行第二次初始时间流量测量(狭窄后)并且测试充血反应。然后经由尾静脉导管在静脉内用Rho激酶抑制剂化合物或盐水来治疗动物。在通过用止血钳反复外部压缩血管治疗后诱导血栓形成5分钟。在损伤后两分钟，重复血管压缩并且开始10分钟的流量监测。在损伤后的至少最初10分钟里连续监测动物。20分钟后(损伤后)，重复流量测量并且使动物安乐死。采集包含损伤部分的主动脉部分并且将其置于10％福尔马林中用于组织学评估。用达泮舒腈化合物治疗导致减少了血管损伤诱导的血流降低和血栓形成的组织学证据。

实例13.通过达泮舒腈来抑制麻醉犬的血栓形成

为了估计公式I或公式II的化合物对体内动态血栓形成的影响，执行以下的实验性方案，所述方案类似于J.L.Romson等人(《血栓形成研究(Thromb.Res.)》17：841-853，1980)的方法。

外科手术准备和仪器简言之，麻醉、插管目的繁殖的犬并且用室内空气对其进行通风。在第五肋间隙通过左胸廓切开术暴露心脏并且将心脏悬挂在心包托架中。通过钝性解剖分离冠状动脉左旋支(LCCA)的2-3cm区段。用流量探测器、刺激电极和Goldblatt夹具从近端到远端地装备动脉。流量探测器监测平均LCCA血流速度和相位LCCA血流速度。前文已经描述了刺激电极和其在LCCA中的位置以及诱导闭塞性冠状动脉血栓的方法(J.K.Mickelson等人，《循环》81：617-627，1990；R.J.Shebuski等人，《循环》82：169-177，1990；J.F.Tschopp等人，《冠状动脉疾病(Coron.Artery Dis.)》4：809-817，1993)。

实验性方案：将犬随机分到四种治疗方案中的一种方案，其中对照组在静脉内接受盐水并且将三个药物治疗的组在静脉内施用Rho激酶抑制剂化合物。在通过外科手术干预稳定后，犬接受不同浓度的盐水或化合物。大约30分钟后，向LCCA持续施加阳极电流180分钟。记录先于闭塞性血栓形成的循环流量变化(CFV)的数量和频率。这些循环现象是由作为血小板聚集的结果的在狭窄的管腔中形成的血小板血栓引起的(J.D.Folts等人，《循环》54：365-370，1976；(Bush等人，《循环》，69：1161-1170，1984)。持续至少30分钟的LCCA中的零流量表明缺乏抗血栓形成功效(L.G.Frederick等人，《循环》93：129-134，1996)。用达泮舒腈化合物治疗显著增加了先于闭塞性血栓形成的循环流量变化的数量和频率。

实例14.用达泮舒腈治疗血栓形成(预示实例)

目的：研究达泮舒腈的功效，所述达泮舒腈被配制成用于在治疗和/或改进正在经历或曾经患有血栓形成的患者结果时向患者口服施用的胶囊。

配制品：此实例中使用的配制品是含有100mg达泮舒腈和

PH-101的共混物的胶囊。每个安慰剂胶囊仅含有

PH-101。达泮舒腈胶囊和安慰剂胶囊两者被配制为口服施用。

方法：随机、双盲、安慰剂对照、平行治疗的临床活动研究。

患有单侧近端DVT的患者和患有下肢SVT的患者被包含在本研究中。作为对照，招募未患有DVT或SVT并且没有血栓栓塞史的志愿者。

入选标准(可以包含以下各项中的一项或多项，但不限于以下各项)：

·＞18岁

·急性、特发性或激发性、单侧近端DVT(涉及胭静脉或进一步的近端静脉)

·下肢的SVT(压缩超声波检查长度超过5cm)

·在排除DVT或SVT后，从志愿者中招募年龄和性别匹配的对照，并且所述志愿者没有血栓形成和肺栓塞病史

排除标准(可以包含以下各项中的一项或多项，但不限于以下各项)：

·下肢的前DVT或SVT史

·肺栓塞史

·双边DVT或SVT

·与静脉注射的药物滥用、前10天的下肢手术或前30天的硬化疗法相关的DVT

·认为随访不可行

·心力衰竭(HYHAIII或IV)

·急性冠脉综合征(＜7天)

·严重的肺动脉高压(肺动脉压＞90mmHg)

·怀孕

评估标准(可以包含以下各项中的一项或多项，但不限于以下各项)：

研究终点：

一级临床活动终点是：

·改进的通过患者血管中的一个或多个血管的血流量

二级临床活动终点是：

·减少的血栓形成的组织学证据

·减少的血块数量

·减少的一种或多种血栓的形成

实例15.用达泮舒腈治疗复杂性心包炎(预示实例)

目的：研究达泮舒腈的功效，所述达泮舒腈被配制成用于在在患有复杂性心包炎的患者中治疗患者和/或改进患者结果时向患者口服施用的胶囊。

配制品：此实例中使用的配制品是含有100mg达泮舒腈和

PH-101的共混物的胶囊。每个安慰剂胶囊仅含有

PH-101。达泮舒腈胶囊和安慰剂胶囊两者被配制为口服施用。

方法：随机、双盲、安慰剂对照、事件驱动的临床活动研究，研究在治疗患有复杂性心包炎的患者时每日口服施用的达泮舒腈。

筛选患有复杂性心包炎的患者以将其包含在此研究中。根据初始临床表现，使用以下技术中的一种或多种技术-心脏磁共振(CMR)、胸部X光、超声心动图、计算机化轴向断层(CAT)扫描、病毒血清学和其它特定测试-来实现对复杂性心包炎的诊断。当怀疑细菌或肿瘤病因时、如果怀疑心包填塞或者如果怀疑没有药物治疗反应的严重心包积液，则进行心包穿刺术。另外，还可以测量患者的心包厚度(例如，使用T₁或T₂加权快速自旋回波图像)、心包水肿(例如，T₂短Tau反转恢复快速自旋回波图像)、心包炎症(例如，晚期钆增强)和心室相互依赖性(例如，短轴图像在基础水平上的电影成像，指导患者深呼吸)。

研究终点：

一级临床活动终点是：

·减少以下症状中的任何两种或更多种症状：

ο发热

ο胸前疼痛

ο摩擦音

ο标准化(或显著降低的)hsCRP水平

实例16.用达泮舒腈治疗小鼠的急性心包炎(预示实例)

酵母聚糖小鼠心包炎模型概述：将已知特异性地活化NLRP3炎性体的酵母壁产物酵母聚糖直接注射到每只小鼠心脏的心包空间。通过超声心动图(心包增厚和心包积液)和病理学研究(心包增厚、活性炎性体的表达)来测量心包炎症，并且然后用如秋水仙碱等抗炎疗法测试治疗。

目的：研究引起酵母聚糖心包内注射的急性心包炎的小鼠模型中的达泮舒腈功效。

方法：麻醉哈兰实验室(Harlan Laboratories)(Harlan Sprague Dawley Inc.)提供的成年小鼠(8-12周龄)并且如下文所描述的进行初始经胸超声心动图检查。小鼠经历左胸廓切开术并且直接可视化，使用30号针头将溶解在50μl的无菌0.9％NaCl中的1mg的酵母聚糖注射到心包空间中。通过用镊子小心地提起心包囊将酵母聚糖溶液分配到心包中直到发生通常完全分布。通过注射等体积的无菌0.9％NaCl行假手术。

在腹膜内或通过口服强饲法(最终体积100μl)来施用达泮舒腈并且将等体积的匹配媒剂用作对照。

为了测试达泮舒腈在急性心包炎模型中的作用，使用以下输出：

1.与酵母聚糖同时给予的达泮舒腈(6mg/kg、10mg/kg、60mg/kg和600mg/kg)的急性剂量反应，以确定功效；

2.在酵母聚糖注射后第3天给予的达泮舒腈(使用具有最大功效的最低剂量)延迟治疗；

3.在酵母聚糖之前1-2周通过口服强饲法(或者食物或水)给予的用慢性施用达泮舒腈测试的慢性预防策略

在轻度麻醉下使用Vevo770成像系统(VisualSonics，加拿大多伦多)。可视化二维模式(B模式)下的中心室水平处的胸骨旁短轴视图中的左心室。针对前壁来优化图像，并且放大图像以使前心包结构可视化。在优化图像之后，获取单维模式(M模式)以获得最佳时空分辨率并且允许测量心包液，其被限定为心包的2层之间的无回声空间。在手术前进行超声心动图检查，并且在处死前3天、7天和14天再次进行所述检查。试验研究表明，在第3天与第7天之间无菌炎症达到峰值，并且在第14天获得分辨率。在M-模式和B-模式两者下，对组分配不知情的人测量距离最大的心包积液。

在7天或14天后移出心脏并且对其进行病理学处理。用苏木精和伊红染色福尔马林固定的石蜡包埋的心脏横切片。使用Image Pro Plus 6.0软件(Media Cybernetics，马里兰州银泉)用计算机形态测量法对组分配不知情的人测量心包厚度。

在细胞中形成的NLRP3炎性体是在ASC染色后在光学显微术下可见的单个斑点(例如，含有半胱天冬酶募集结构域的凋亡相关的斑点样蛋白)。将双重免疫荧光用于与抗α-心肌肌动蛋白组合的ASC以区分心包结构和心肌结构。

实例17.用达泮舒腈治疗急性心包炎(预示实例)

目的：研究达泮舒腈的功效，所述达泮舒腈被配制成用于在在患有急性心包炎的患者中治疗患者和/或改进患者结果时向患者口服施用的胶囊。

配制品：此实例中使用的配制品是含有100mg达泮舒腈和

PH-101的共混物的胶囊。每个安慰剂胶囊仅含有

PH-101。达泮舒腈胶囊和安慰剂胶囊两者被配制为口服施用。

方法：随机、双盲、安慰剂对照、事件驱动的临床活动研究，研究在治疗急性心包炎患者时每日口服施用的达泮舒腈。

筛选从症状出现开始24小时内的急性心包炎的所有连续病例以将其纳入研究。根据初始临床表现，通过胸部X光、超声心动图检查、病毒血清学和其它特定测试来达到对特发性或病毒性急性心包炎的最终诊断。当怀疑细菌或肿瘤病因时、如果怀疑心包填塞或者如果怀疑在治疗1周后没有观察到药物治疗反应的严重心包积液，则进行心包穿刺术。

急性心包炎的诊断标准包含心包炎性胸痛、心包摩擦、广泛的ST段抬高和/或先前未报道的PR抑郁以及新的或恶化的心包积液。当这些标准中的至少两个标准存在时，进行急性心包炎的临床诊断。诊断复发的标准包含复发性疼痛和以下体征中的一种或多种体征：发热、心包摩擦、ECG变化、心包积液的超声心动图证据以及白细胞计数、红细胞沉降率或CRP的升高。

临床活动：

该研究执行串行心肺运动试验(CPX)以前瞻性地测量具有以下特征的患者的有氧运动能力的变化：前MI、升高的CRP水平和收缩功能减弱、随机分配达泮舒腈或安慰剂的症状心力衰竭。

研究终点：

一级临床活动终点是：

·使以下项中的任何项降低和/或不存：心包炎性胸痛、心包摩擦、广泛的ST段抬高和/或之前未报道的PR抑郁以及新的或恶化的心包积液、复发性疼痛、发热、心包摩擦、ECG变化、心包积液的超声心动图证据和白细胞计数、红细胞沉降率或CRP的升高。

·使以下项中的任何项降低和/或不存：

ο治疗一周内的症状

ο复发

ο心包填塞

ο缩窄性心包炎

实例18.用达泮舒腈治疗大鼠的同种心脏移植物排斥反应(预示实例)

目的：研究达泮舒腈的功效，所述达泮舒腈被配制成用于在治疗减少副作用和/或改进正在经历或曾经患有同种心脏移植物排斥反应的大鼠结果时向大鼠口服施用的胶囊。

配制品：此实例中使用的配制品是含有达泮舒腈和

PH-101的共混物的胶囊。每个安慰剂胶囊仅含有

PH-101。配制达泮舒腈胶囊和安慰剂胶囊以用于口服施用并且基于每只小鼠的重量来确定剂量。

方法：利用由Ono和Lindsey最初描述的改进技术(Ono，K，和Lindsey，E.S“改进的大鼠心脏移植技术”，《开胸心血管外科杂志(J.Thorac.Cardiovasc.Surg.)》57：225，1969)进行异位血管化腹内心脏移植。通过腹部触诊每天评估移植物的心跳。排斥是由经移植器官中不存在的可触知收缩确定的。切除后，使用合适的技术和/或其它合适的分析方法来制备用于组织学的心脏组织。在不同的时间点处死来自四个不同组(无移植的安慰剂、移植的安慰剂、无移植的达泮舒腈和移植的达泮舒腈)中的每组的大鼠并且分析关于大鼠生理机能的若干因素。将这些因子与一个或多个对照进行比较，包含但不限于安慰剂组。

研究终点：

·hsCRP

·IL-1β

·IL-6

·CPX

·根据移植物存活天数(或月数或年数)的同种移植物接受性

·减少炎症

·无再住院治疗

实例19.用达泮舒腈治疗心力衰竭(预示实例)

目的：研究达泮舒腈的功效，将所述达泮舒腈配制成用于在治疗正在经历或曾经患有如NYHA II-III收缩期心力衰竭等心力衰竭的患者时向患者口服施用的胶囊。

配制品：此实例中使用的配置品是含有100mg达泮舒腈和

PH-101的共混物的胶囊。每个安慰剂胶囊仅含有

PH-101。配制达泮舒腈胶囊和安慰剂胶囊两者以用于口服施用。

剂量和施用模式：通过口腔自我施用达泮舒腈胶囊或安慰剂胶囊一次或两次，这取决于组群，每天从初始时间访视开始并且持续到计划的第14天访视。当在现场人员的监督下在研究门诊时施用第一剂研究性产品。

剂量选择：组群1的剂量由每天施用一次的5个100mg达泮舒腈胶囊组成(每天总共500mg达泮舒腈药物)。组群2的剂量由每天施用两次的5个100mg达泮舒腈胶囊组成(BID，每天总共1,000mg达泮舒腈药物物质)。

伴随性药物：在每次研究访视时记录并且审查伴随性药物使用。受试者保持稳定剂量的允许的伴随性药物。禁用的伴随性药物包含口服皮质类固醇(在入选前两周内)或其它免疫调节疗法(在入选前五个半衰期内)。从研究入选列中排除使用或打算使用禁用的伴随性药物的受试者。

方法：这是一项随机、双盲、单中心安全性和药效学研究，所述研究是对于在显示全身性炎症迹象(高敏血浆C反应蛋白[hsCRP]＞2mg/L)的受试者(患有稳定的收缩期HF，并且LVEF＜40％，并且具有NYHA功能分级II-III的症状)中进行达泮舒腈或安慰剂(4∶1的比率)的连续组群、剂量递增、重复给药通过随机分配，在2个连续组群中总共招募了大约20名受试者(每个组群中8个活性物和2个安慰剂)。在第28天访视第一组群中的最后一个受试者后，进展到具有剂量递增的组群2。

对受试者进行两次筛选和评估以确定其合格性：1)在筛选时(随机化前至多28天)；和2)在随机化之前的初始时间访视时。在初始时间时，进行评估并且如果受试者合格，则在完成所有评估和收集初始时间参数后在临床试验点处施用第一剂的研究性产品(达泮舒腈胶囊或相同的安慰剂胶囊)。根据组群，受试者每天自我施用研究性产品一次或两次，从初始时间访视时开始多达连续十四(14)天并且持续到计划的第14天访视。受试者在第4天、第8天、第14天和第28天返回研究门诊进行随访。另外，在第42天联系受试者进行电话随访。

通过监测不良事件(AE)的发生和简化的体格检查发现、生命体征和临床安全性实验室检测结果(化学、血液学和心脏生物标志物)和通过生物阻抗分析测量到的身体组成的变化来评估安全性和耐受性。药效学/生物标志物终点包含对血浆hsCRP、IL-1β和白细胞介素-6(IL-6)等的血液采样。心肺健康评估包含使用心肺运动测试(CPX)来测量峰值氧消耗(峰值VO₂)和通气效率(VE/VCO₂斜率)。通过经胸多普勒超声心动图和生活质量问卷(堪萨斯城心肌病问卷和杜克活动状态指数)来测量心脏收缩功能和舒张功能。另外地，收集血液样品用于达泮舒腈暴露的药代动力学评估。

在第1组中随机化大约十(10)个受试者，同时允许替换在第14天之前停止参与的受试者。在组群1的所有受试者完成第28天的访视后，进行临时数据分析并且通过医疗监测员一独立心脏病专家和首席研究员对数据进行审查，并且做出将本研究进展到招收组群2的决定。

入选标准(可以包含以下项中的一项或多项，但不限于以下项)：

·18岁或超过18岁的男性受试者和女性受试者。

·左心室射血分数降低的有症状并且稳定的HF(NYHA II-III级)(LVEF≤40％，在入组6个月内测量-在过去2个月内无心脏药物变化或新装置植入)。

·受呼吸短促限制并且伴随呼吸交换比率(RER)＞1.00相关的运动峰值(反映最大有氧力)

·根据在初始时间时的年龄/性别，有氧运动能力峰值(峰值VO2)降低到预测值的80％以下。

·筛选时血浆hsCRP水平＞2mg/L。

·首席研究员认为的可安全纳入并且完成研究的可接受的整体医疗病状(特别关注心血管病状、肾脏病状和肝脏病状)。

·在开始任何与本研究相关的程序之前能够提供书面的知情同意书，并且在首席研究员看来能够理解并遵守本研究的所有要求。

排除标准(可以包含以下项中的一项或多项，但不限于以下项)：

·在研究期间怀孕、哺乳或备孕。

·CPX期间发生的异常血压或心率响应、心绞痛或ECG变化(缺血或心律失常)

·自身免疫病状的存在或已知病史(例如，全身性红斑狼疮、下垂体炎等)

·初始时间访视时活动性肺结核(TB)感染的历史或证据或者肺结核的风险因素中的一个因素，如但不限于或排它性地为：

ο以下各项中任一项的历史：居住在集体环境中(例如，监狱(jail)或牢狱(prison)、无家可归者收容所或长期护理机构)、药物滥用(例如，注射或非注射)、在识别和纠正受试者的空气传播预防措施之前与处于TB高风险的受试者或患有TB疾病的受试者无保护地接触的保健工作人员，或者

ο在过去的12个月内与患有活动性肺TB疾病的人密切接触(即在家庭或其它封闭环境中长时间(数天或数周，而不是数分钟或数小时)共享相同的空间)。

·在治疗期间使用任何禁用的伴随性药物/疗法或计划性地使用任何禁用的伴随性药物/疗法

·在首席研究员看来，任何其它的一种或多种伴随性医疗或精神病状、一种或多种疾病或一种或多种先前的手术将会损害安全参与试验和/或完成方案要求的受试者，所述损害包含但不限于：

ο身体无法在跑步机上行走或跑步

ο代偿失调性HF(水肿、NYHA IV)

ο显著的缺血性心脏病、心绞痛

ο动脉低血压(血压[BP]收缩压＜90mmHg)

ο动脉高血压(静息BP收缩压＞160mmHg)

ο心房颤动且心室反应迅速

ο严重的瓣膜病

ο严重的慢性阻塞性或限制性肺病

ο中重度贫血(Hgb＜10g/dL)

ο严重的糖尿病性神经病变或肌病

·初始时间访视前的活动性或近期(2周内)感染

·HIV史或已知的HIV阳性、乙型肝炎表面抗原或丙型肝炎病毒抗体

·在过去6个月内接受化疗治疗的活动性恶性肿瘤或近期恶性肿瘤

·在初始时间访视之前的接下来的30天内纳入任何试验和/或使用任何研究性产品或装置

·以前接触过研究性产品

所有随机化受试者的试验持续时间大约为42天，其将由对研究位点的6次访视组成：筛查(初始时间前最多28天)、初始时间(第1天)、第4天(±1天)、第8天(±2天)、第14天(±2天)和第28天(±2天)。另外地，在第42天(±3天)联系受试者进行电话随访。

安全标准：

·体格检查(简化的一般和位点特异性检查)

·生命体征(脉搏、静息血压、体温、呼吸率)

·安全实验室措施(化学、血液学和心脏生物标志物)

·生物阻抗分析

·心肺运动试验

·经胸多普勒超声心动图

·血浆NT-proBNP水平

·临床试验期间的不良事件

药效学结果：在每次研究访视时收集血液样品以进行PD/生物标志物分析，包含：

·hsCRP的水平

·循环细胞因子的水平(例如，IL-1β、IL-6)

药代动力学结果包含但不限于确定达泮舒腈的血浆浓度。

通过堪萨斯城心肌病问卷调查(Kansas City Cardiomyopathy Questionnaire)和杜克活动状态指数(Duke Activity Status Index)来评估生活质量结果，以测量症状变化。

研究终点：

·一级临床活动终点是：

ο在研究的第28天后，患者的药效学/生物标志物终点将包含对血浆hsCRP、IL-1β和白细胞介素-6(IL-6)、B型利钠肽(BNP)等进行血液采样。

ο改进患者的一个或多个CPX评分、ECG和/或生物阻抗分析

ο患者是否已经再次住院治疗

·二级临床活动终点包含患者的单剂量和多剂量药代动力学特征。

实例20.用达泮舒腈治疗中风(预示实例)

目的：研究达泮舒腈的功效，所述达泮舒腈被配制成用于在治疗和/或改进正在经历或已经患有一种或多种中风的患者结果时向患者口服施用的胶囊。

配制品：此实例中使用的配制品是含有100mg达泮舒腈和

PH-101的共混物的胶囊。每个安慰剂胶囊仅含有

PH-101。达泮舒腈胶囊和安慰剂胶囊两者被配制为口服施用。

将患有脑前循环闭塞和发作时间超过4.5小时但是持续时间少于48小时的中风的患者随机分为两组，包含(1)标准管理和安慰剂、(2)标准管理加达泮舒腈(每天口服100mg连续14天、或者(3)标准管理加达泮舒腈(每天口服200mg连续14天。在初始时间MRI后1小时内并且不晚于症状发作后48小时地开始施用安慰剂或任一剂量的达泮舒腈。

从开始治疗算起到治疗28天，对患者的不良事件和神经学结果进行监测。数据安全监测委员会(DSMB)以持续的方式对数据进行审查。除非药物相关的毒性在剂量组群内达到一个剂量限制性不良事件(4个受治疗不良事件中的1个不良事件)的预定水平，否则持续进行剂量递增，在这种情况下，以该剂量治疗5个患者的第二个组群(4∶1)。在以下情况的剂量水平处终止本研究：在活性治疗中4名患者中的2名患者或8名患者中的3名患者具有严重的剂量限制性毒性，或者当已经完成所有计划的剂量组群时。

·＞18岁

·前循环缺血性中风

ο所有患有局灶性神经功能缺损症状和同时放射学证据(磁共振成像，MRI)的缺血性脑损伤患者

·可测量的神经功能缺损(NIHSS＞5)

·症状发作和入院之间的时间间隔大于4.5小时并且小于48小时

ο所有患者在出现症状4.5小时后被招募并且已经超过溶栓治疗的可接受时间窗口

·出血性中风和其它器官的严重出血

·中枢神经系统(CNS)的其它疾病

·糖尿病

·肿瘤或血液学系统疾病

·急性缺血性中风前的任何感染

·同时使用抗肿瘤或免疫调节疗法

·MRI的禁忌症

评估标准(可以包含以下项中的一项或多项，但不限于以下项)：

研究终点：

一级临床活动终点是：

·病变体积的变化[时间范围：从初始时间到第7天的病变体积]

·脑炎症水平(BMS)[时间范围：第7天]

·临床改进程度[时间范围：从初始时间到第7天和第14天]

二级临床活动终点是：

·极好恢复的概率[时间范围：在第90天]限定为mRS的评分0或评分1

·细胞毒性水肿[时间范围：第3天](ADC值)

实例21.用达泮舒腈治疗外周血管疾病(预示实例)

目的：研究达泮舒腈的功效，所述达泮舒腈被配制成用于在治疗、减少副作用和/或改进正在经历或已经患有外周血管疾病的患者结果时向患者口服施用的胶囊。特别地，本研究被设计成评估达泮舒腈对患有动脉粥样硬化性外周动脉疾病和步行腿痛患者的腿动脉结构和身体活动的安全性、耐受性和功效。

配制品：此实例中使用的配制品是含有100mg达泮舒腈和

PH-101的共混物的胶囊。每个安慰剂胶囊仅含有

PH-101。达泮舒腈胶囊和安慰剂胶囊两者被配制为口服施用。

方法：多中心、随机、双盲、安慰剂对照研究，研究患有间歇性跛行的患者的动脉结构和达泮舒腈功能的安全性、耐受性和效果。

·签署知情同意书

·年龄介于18岁与85岁之间

·经历与行走相关的腿部疼痛并且踝臂指数在0.40与0.9之间

·持续稳定的阿司匹林(aspirin)剂量和斯达汀(statin)剂量至少6周

·血压在方案规定的范围内

·能够良好沟通并且理解和遵守研究程序

·近期使用任何其它的实验性药物

·孕妇或哺乳期妇女

·有生育潜力的妇女，除非愿意使用如在方案中所详述的避孕措施

·无法步行15米(50英尺)

·服用如在方案中所列的限制性药物的人员

·研究开始后3个月内的任何开放性伤口或未愈合伤口或者2周内或研究开始后的感染

·重大心脏病

·不受控制的糖尿病

·显著的肾脏疾病或肝脏疾病

·在研究开始后3个月内接种疫苗

·未经治疗的肺结核或活动性肺结核(TB)病史

·如在本方案中所详述的体内有金属的患者(排除由于MRI扫描的情况)。

研究终点：

·12个月比初始时间的平均血管壁面积比率[时间范围：初始时间，给药后12个月]

ο使用磁共振成像(MRI)横截面切片测量的外周动脉壁面积(浅表股动脉)。

·平均血管壁面积(mm²)是通过乘以1000、除以用于体积计算的切片数并且除以切片厚度(3mm)来将血管的总斑块体积(TPV)(mL)转换为mm³而得到的。根据重复的测量混合效应模型测量12个月比初始时间的比率的最小二乘平均值，其中访视、治疗、访视治疗相互作用、初始时间和初始时间访视相互作用作为固定效应

二级临床活动终点是：

·12个月内有不良事件的患者数量[时间范围：初始时间到给药后12个月]

ο报告关于不良事件的汇总统计数据。所述汇总统计数据分类为总不良事件(不严重的AE和严重的AE)、严重不良事件、死亡的患者数量。

·12个月比初始时间的血清淀粉样蛋白A(SAA)水平比率[时间范围：初始时间，给药后12个月]

·12个月比初始时间的hsCRP比率[时间范围：初始时间，给药后12个月]

应当理解，前文描述了本发明的优选实施例并且可以在不脱离如在权利要求中所阐述的本发明的范围的情况下对其进行修改。

Claims

1.3-甲磺酰基丙腈在制备用于治疗心血管疾病的药物中的用途，其中，所述心血管疾病选自：动脉粥样硬化，中风，血栓形成，心脏炎，同种心脏移植物排斥反应，心肌病，和外周血管疾病。

2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述心血管疾病是动脉粥样硬化。

3.根据权利要求1所述的用途，其中，所述心血管疾病是急性心肌炎，急性心包炎，或复杂性心包炎。

4.根据权利要求1所述的用途，其中，所述心血管疾病是同种心脏移植物排斥反应。

5.根据权利要求1所述的用途，其中，所述3-甲磺酰基丙腈为全身性配制品。

6.根据权利要求1所述的用途，其中，所述3-甲磺酰基丙腈为口服配制品。