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CN103765212A - 治疗癌症和自体免疫性疾病的方法和组合物 - Google Patents

治疗癌症和自体免疫性疾病的方法和组合物 Download PDF

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CN103765212A
CN103765212A CN201280041959.9A CN201280041959A CN103765212A CN 103765212 A CN103765212 A CN 103765212A CN 201280041959 A CN201280041959 A CN 201280041959A CN 103765212 A CN103765212 A CN 103765212A
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benzene sulfonic
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styryl
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CN201280041959.9A
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凯文·戴维·米尔斯
穆尼尔·古拉姆侯赛因·哈萨姆
卡罗琳·加德纳·麦克菲
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Jackson Laboratory
Original Assignee
Jackson Laboratory
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Abstract

本发明所述的技术涉及诱导细胞死亡的方法。本发明所述的技术进一步涉及对包括癌症和自体免疫性疾病在内的病症进行治疗，所述治疗包含给予双链断裂修复抑制剂。本发明还描述了双链断裂修复抑制剂和筛选此类抑制剂的方法。

Description

治疗癌症和自体免疫性疾病的方法和组合物
相关申请的交叉引用
根据35U.S.C.§119（e），本申请要求2011年6月27日提交的美国临时申请号61/501,522的优先权，以引用的方式将其整体内容并入本文。
序列表
本申请包括序列表，该序列表已经以ASCII形式通过EFS-Web提交，并以引用的方式将其整体内容并入本文。所述ASCII副本创建于2012年6月7日，命名为060636PC.txt，其大小为547,092字节。
技术领域
本文所述的技术涉及治疗癌症和自体免疫性疾病的方法，所述疾病表达活化诱导的胞苷脱氨酶（AID），通过抑制DNA双链断裂修复机制进行所述治疗。
背景技术
2010年中，对于白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤而言，仅在美国预计就有137,000例新发病例，并且这些癌症中有超过54,000例死亡。白血病/淋巴瘤治疗中的现行治疗标准经常包括密集、长期的化学治疗，这将对患者造成身体负担。传统化学治疗通常的副作用包括免疫系统失调、骨髓抑制、骨髓破坏、恶心、疲劳、肝中毒、体重减轻、脱发、长期性认知损伤和治疗相关的继发性肿瘤。标准化学疗法的主要问题在于对癌症患者其它健康细胞和组织造成的损害。现有治疗经常不能获得长期缓解，并且幸存的患者通常长期遭遇与化学治疗相关的健康问题，这使得他们从未真正恢复健康。
将疗法以特异性的方式选择性靶向癌细胞可改善这些破坏性副作用中的大多数。不幸的是，几乎毫无例外，选择性靶向在技术上是困难的或者不可行的。因此，对癌细胞进行选择性靶向、同时最小化脱靶副作用的其它方法或替代方法是极度需要的。
发明内容
本文所述的技术针对的是使用DNA修复抑制剂对具有活性DNA编辑酶的细胞进行治疗。本文所使用的“DNA编辑酶”指的是正常催化DNA片段的突变、交换或切除的酶，特别是能产生或促进产生点突变、DNA单链断裂、DNA双链断裂或蛋白质-DNA加合物的酶。本文所指的DNA编辑酶在其活动中并非必然是位点特异性的。类似地，其并非必然是细胞特异性的。在一些实施方式中，所述细胞为表达可检测量的该酶的B细胞。DNA编辑酶的非限制性实例包括但不限于：重组激活基因1（RAG1；NCBI基因ID：5896，例如SEQ ID NO:0157；NCBI号：NM_000448（mRNA）和SEQ ID NO:0158；NCBI号：NP_000439（多肽））、重组激活基因2（RAG2；NCBI基因ID：5897，例如SEQ ID NO:0159；NCBI号：NM_001243785（mPNA）和SEQ ID NO:160；NCBI号：NP_001230714（多肽））、孢子形成特异性蛋白11（SPO11；NCBI基因ID：23626，例如SEQ ID NO:0161；NCBI号：NM_012444（mRNA）和SEQ ID NO:0162；NCBI号：NP_036576（多肽））、APOBEC族成员和/或AID。在一些实施方式中，所述DNA编辑酶可以是AID。
在一些实施方式中，DNA编辑酶可以为APOBEC（载脂蛋白B mRNA编辑酶，催化多肽样）家族。本文所使用的“APOBEC家族”指的是胞苷脱氨酶的家族，所述酶具有N-末端锌依从性胞苷脱氨酶催化域和C-末端伪催化域。APOBEC族的非限制性实例包括AID、APOBEC1、APOBEC2、APOBEC3A、APOBEC3C、APOBEC3E、APOBEC3F、APOBEC3G、APOBEC3H、以及APOBEC4。
本文所述技术的实施方式使用DNA编辑酶，如活化诱导的胞苷脱氨酶（AID或AICDA）、B细胞重组酶（当在细胞中表达时导致普遍的基因组断裂）。此外，发明人已经发现，当DNA同源重组能力（双链断裂修复）受到削弱和/或抑制时，DNA编辑酶（如AID）的这一活性将导致细胞死亡。具体而言，如本文的说明，在表达AID的细胞中对DNA双链断裂（DSB）修复的抑制导致了细胞毒性，所述细胞毒性归因于由AID产生的未校正的脱靶双链断裂。
在一方面，本文提供了一种癌症治疗模式，该模式选择性地诱导表达AID的细胞自毁，所述表达AID的细胞例如：癌性B细胞或自体免疫性疾病的B细胞；或者其他癌性细胞，如肠癌细胞、结肠癌细胞、肺癌细胞、肝癌细胞、上皮癌细胞、乳腺癌细胞、食道癌细胞、甲状腺癌细胞、前列腺癌细胞、肾癌、黑素瘤等。在一些实施方式中，所述方法通过利用DNA重组系统诱导肿瘤细胞自毁，从而选择性地对例如癌细胞进行治疗（同时使正常细胞免受影响）。这一方法利用了“AID在具有削弱的DNA同源重组能力的细胞中诱导广泛的基因组断裂和细胞死亡”这一发现。如本文所述，发明人已经确定了当使用双链断裂（DSB）修复抑制剂对以升高的AID表达为特征的细胞群体进行治疗时，发生细胞死亡。因此，提供了以双链断裂修复抑制剂对患有癌症或自体免疫性疾病的患者进行治疗的方法，所述疾病具有升高的AID表达。
DSB修复抑制剂可以是使DSB修复所需的任何基因或蛋白质的表达或活性得以降低的抑制剂。在本文提供的一些实施方式中，DSB修复抑制剂是降低或抑制下列表达或活性的抑制剂：Rad51；Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；Rad51D；XRCC2；XRCC3；RAD54；RAD52；BRCA1；BRCA2；ATM；ATR；MRE11；RAD50；NBS1；WRN；BLM；RECQ4；LIG4（DNA连接酶4）；XRCC4；PRKDC（DNA-PKcs7XRCC7）；DCLRE1C；XRCC6（Ku70）；XRCC5（Ku80）和/或XLF（NHEJ1；XRCC4样因子）。在本文提供的某些实施方式中，DSB修复抑制剂为降低下列表达或活性的抑制剂：Rad51；Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；Rad51D；XRCC3；RAD54；RAD52；BRCA1；BRCA2；ATM；ATR；MRE11；RAD50；NBS1；WRN；BLM；RECQ4；LIG4（DNA连接酶4）；XRCC4；PRKDC（DNA-PKcs7XRCC7）；DCLRE1C；XRCC6（Ku70）；XRCC5（Ku80）和/或XLF（NHEJ1；XRCC4样因子）。在一些实施方式中，双链断裂修复的抑制剂可对Rad51家族成员（例如，Rad51；Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；Rad51D；XRCC2；XRCC3）进行抑制。在一些实施方式中，双链断裂修复抑制剂可对非同源性末端连接（NHEJ）蛋白成员（例如，LIG4；XRCC4；PRKDC；DCLRE1C；XRCC6；XRCC5；XLF）进行抑制。
在本文提供的某些实施方式中，DSB抑制剂为RAD51介导的链交换修复抑制剂，并且是二苯乙烯（stilbene）衍生物。茋衍生物可包括但不限于：二苯乙烯（(E)-1,2-二苯基乙烯）、反式二苯乙烯、（(E)-1,2-二苯乙烯、反-1,2-二苯基乙烯）衍生物、顺式二苯乙烯衍生物、康普瑞汀（combretastatin，5-[(2R)-2-羟基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)乙基]-2-甲氧基苯酚）、白藜芦醇（resveratrol，反-3,5,4′-三羟基二苯乙烯；(E)-5-(4-羟基苯乙烯基)苯-1,3-二醇）、己烯雌酚（diethylstilboestrol，4,4′-(3E)-己-3-烯-3,4-二基联苯酚）、以及秋水仙碱（colchicine，(S)N-(5,6,7,9-四氢化-1,2,3,10-四甲氧基-9-氧代苯并[α]庚搭烯-7-基)乙酰胺）。在一个实施方式中，RAD51介导的链交换修复抑制剂为4,4′-二异硫氰酰二苯乙烯-2,2′-二磺酸（DIDS）。已经报道DIDS破坏Rad51复合物并抑制非同源双链体形成。（Ishida，T.等，Nucleic Acids Res，2009，37（10）：3367-76页）。
在本文提供的一些实施方式中，DSB修复抑制剂为水杨嗪酸（salazinic acid）或其衍生物，在本文提供的某些实施方式中，DSB修复抑制剂为斑点酸（stictic acid）或其衍生物。在本文提供的一些实施方式中，DSB修复抑制剂为STK856883或其衍生物。在本文提供的一些实施方式中，DSB修复抑制剂为4′-溴-3′-硝基苯丙酮（NS-123）或其衍生物（Lally等，Cancer Res2007，67；8791）。
任何具有升高水平的DNA编辑酶的癌症可根据本文所述的方法和组合物得以治疗。例如，癌症可以为乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、脑癌、皮肤癌、结肠直肠癌（结肠癌、大肠癌）、肝癌、淋巴瘤、肺癌、口腔癌、头颈癌、脾腺癌、淋巴结癌、小肠癌、血细胞癌、胃癌、肾癌、胰腺癌、子宫内膜癌、睾丸癌、皮肤癌、食道癌、骨髓癌、血癌、宫颈癌、膀胱癌、Ewing氏肉瘤、甲状腺癌、神经胶质瘤、和/或胃肠癌。本发明适用于本文所讨论的其他癌症，包括癌前病变（pre-cancers）。在某些实施方式中，待治疗的癌症为B细胞癌症，例如慢性淋巴细胞性白血病（CLL）。
可对任何表达AID的癌症进行治疗。在某些实施方式中，待治疗的癌症为淋巴瘤或白血病。在某些实施方式中，将治疗的淋巴瘤为非Hodgkin氏淋巴瘤，例如包括但不限于：Burkitt氏淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤（follicular lymphoma）、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）、B细胞急性淋巴细胞性白血病（B-ALL）、急性淋巴母细胞性白血病、毛细胞性白血病、脾边缘区淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL、DLBL、DLCL）和/或浆细胞瘤。在某些实施方式中，待治疗的癌症为白血病，例如包括但不限于：Hodgkin氏病、急性骨髓性白血病（AML）、慢性骨髓性白血病（CML）、MALT淋巴瘤和/或T细胞白血病和T细胞淋巴瘤。在某些实施方式中，将治疗的癌症为肉瘤、癌、结肠癌、肝癌、胃癌、肠癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾癌、黑素瘤、甲状腺癌、食道癌、和/或胆管癌。
可对任何具有升高水平的DNA编辑酶的自体免疫性疾病进行治疗。在某些实施方式中，DNA编辑酶为AID。在某些实施方式中，待治疗的自体免疫性疾病病为红斑狼疮、Wiskott-Aldrich综合征、自体免疫性淋巴组织增生综合征、重症肌无力、类风湿性关节炎（RA）、狼疮性肾炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、皮肤性红斑狼疮（包括冻疮样红斑狼疮）、慢性关节炎、Sjogren氏综合征、自体免疫性肾炎、自体免疫性脉管炎、自体免疫性肝炎、自体免疫性心脏炎、自体免疫性脑炎、自体免疫介导的血液系统疾病、炎症性慢性鼻窦炎、结肠炎、乳糜泻（celiac disease）、炎症性肠病、Barrett氏食道症、和/或炎症性胃炎。
在某些实施方式中，DSB修复抑制剂包含于组合物中，所述组合物包含所述抑制剂和药学上可接受的载体。在进一步的实施方式中，DSB修复抑制剂可包含于组合物中，所述组合物包含药学上可接受的载体和另一化学治疗化合物。在某些实施方式中，可将包含DSB修复抑制剂的组合物给予同时接受对癌症进行的另一治疗的患者。在某些实施方式中，可将包含DSB修复抑制剂的组合物给予还接受对自体免疫性疾病进行的另一治疗的患者。
在某些实施方式中，与使用DSB修复抑制剂治疗前、或者与未接受使用DSB修复抑制剂进行的治疗的患者的指标、标记物、症状、严重程度、转移、复发和/或肿瘤大小相比，使用DSB修复抑制剂对具有高AID表达的癌症患者进行治疗使得所述癌症的指标、标记物、症状、严重程度、转移速率、复发和/或肿瘤大小降低至少10%，例如：至少20%、至少30%、至少50%、至少75%、至少80%、至少90%以上。
在某些实施方式中，与使用DSB修复抑制剂治疗前、或与未接受使用DSB修复抑制剂进行的治疗的患者的指标、标记物、症状、严重程度、转移、复发和/或肿瘤大小相比，使用DSB修复抑制剂对具有高AID表达的自体免疫性疾病患者进行治疗使得所述自体免疫性疾病的指标、标记物、症状、和/或严重程度降低至少10%，例如：至少20%、至少30%、至少50%、至少75%、至少80%、至少90%以上。
本文还提供了对患者中的癌症或自体免疫性疾病是否对通过DSB修复抑制剂进行的治疗产生响应进行测定的方法，所述测定通过对该患者的细胞中AID的蛋白质或mRNA水平进行测定来进行。在一些实施方式中，对由受试者获得的癌细胞中AID mRNA和/或蛋白质的水平进行测定。在一些实施方式中，对由受试者中获得的自体反应性细胞中AIDmRNA和/或蛋白质的水平进行测定。AID表达产物（即，mRNA或蛋白）的高水平表明该疾病可通过DSB修复抑制剂进行治疗。例如，可通过对由怀疑具有升的水平的患者获得的细胞测试样品中的AID蛋白或mRNA的水平进行测量、并将该水平与由健康受试者获得的同类型细胞样品中发现的AID水平进行比较，来对具有表达升高水平的AID的细胞的患者进行识别，其中，测试样品中AID的量上升表明需要使用双链断裂修复抑制剂对受试者进行治疗。
在某些实施方式中，对AID蛋白水平的测定包括使用下列分析中的一种或多种：Western印迹、免疫沉淀、酶联免疫吸附分析（ELISA）、放射免疫分析（RIA）、夹心法分析、荧光原位杂交（FISH）、免疫组织化学染色、放射免疫分析、凝胶扩散沉淀反应、免疫扩散分析、原位免疫分析、沉淀反应、凝集分析（agglutination assay）、补体结合分析（complment fixation assay）、免疫荧光分析、A蛋白分析、质谱和/或免疫电泳分析。在某些实施方式中，对AID蛋白水平的测定包括使用抗体、抗体片段、包含抗体的表位结合片段的多肽、单克隆抗体、单克隆抗体片段、蛋白质结合蛋白、和/或AID结合肽。
在某些实施方式中，对AID mRNA水平的测定包括使用以下分析中的一种或多种：RT-PCR、定量RT-PCR、RNA-seq、Northern印迹、基于微阵列的表达分析、转录扩增和/或自持序列复制。在某些实施方式中，对AID mRNA水平的测定包括使用抗体、抗体片段、单克隆抗体、和/或单克隆抗体片段和/或蛋白质结合蛋白。在某些实施方式中，RT-PCR的AID引物包括但不限于SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:102。
在某些实施方式中，通过AID活性对AID水平进行测定，并可通过其靶基因和/或由靶基因编码的转录子进行序列分析、PCR或FISH分析对AID水平进行测定。AID靶基因可包括但不限于：IGH（NCBI基因ID3492）、BCL6（NCBI基因ID604；SEQ ID NO:001）、MYC（NCBI基因ID4609；SEQ ID NO:002）、BCL11A（NCBI基因ID53335；SEQ IDNO:003）、CD93（NCBI基因ID22918；SEQ ID NO:004）、PIM1（NCBI基因ID5292；SEQ ID NO:005）和/或PAX5（NCBI基因ID5079；SEQID NO:006）。
检测到基因位点的超突变（hypermutations）表明AID活性。在某些实施方式中，通过全基因组测序（whole genome sequencing/full genomesequencing）、并测定全基因组的超突变水平或特定靶基因中的超突变水平，来对AID活性进行测定，所述特定靶基因包括IGH、BCL6、MYC、BCL11a、CD93、PIM1和/或PAX5。
在某些实施方式中，通过使用FISH分析检测双链断裂（例如DNA断裂检测FISH（DBD-FISH））来对AID活性进行测定（Volpi和Bridger，BioTechniques，Vol.45，No.4，385-409）。
在某些实施方式中，通过使用磷酸化H2AX分析对AID活性进行测定（Rakiman等，Advance Biotech2008，39-42）。
在一些实施方式中，使用可检测的标签对测定AID mRNA或蛋白水平的抗体、抗体片段、单克隆抗体、单克隆抗体片段、蛋白质结合蛋白、和/或AID-结合肽进行标记。
在某些实施方式中，可将有效剂量的DSB修复抑制剂一次性给予患者。在某些实施方式中，可将有效剂量的DSB修复抑制剂重复给予患者。
在一方面，本文所述的技术涉及致使细胞死亡的方法，所述方法包括：（a）向细胞给予有效量的DNA编辑酶；以及（b）随后使步骤（a）的细胞与双链断裂修复抑制剂进行接触，从而致使细胞死亡。在一方面，本文所述的技术涉及使细胞对细胞死亡敏化的方法，所述方法包括：（a）向受试者给予治疗有效量的DNA编辑酶，使得细胞对于通过使用双链断裂修复抑制剂导致的细胞死亡敏化；以及（b）随后向受试者给予双链断裂修复抑制剂。在一些实施方式中，以选自于由下列物质所组成的组的形式给予DNA编辑酶：多肽；编码DNA编辑酶的核酸；以及包含编码DNA编辑酶的核酸的载体。在一些实施方式中，DNA编辑酶可以是APOBEC家族的成员。在一些实施方式中，DNA编辑酶可以是活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）。
下文说明中对各实施方式的细节进行了阐述。本文所述技术的其它特征、对象和优点根据说明书和附图、以及权利要求书而言是显而易见的。
附图说明
图1示出的流式细胞术数据图表明XRCC2敲减（knockdown）导致活化诱导的细胞毒性。刺激3天后，对转导有表达Xrcc2特异的shRNA（XKD）或对照shRNA（Ctrl）构建体的野生型和Trp53-/-小鼠脾细胞的eGFP+细胞进行流式细胞术分析。示出了转导有Ctrl的野生型（WT）细胞（白色柱）、转导有XKD的野生型细胞（黑色柱）和转导有XKD的Trp53-/-细胞（灰色柱）。数据代表了具有三次重复的两组实验，实验（平均值和S.E.M.）。
图2示出转导有Xrcc2特异的（XKD）或对照shRNA（Ctrl）的活化（Act）和未活化（Non）的野生型（Aicda+/+，空心柱）或Aicda-/-小鼠脾细胞（实心柱）的流式细胞术数据图。对eGFP+细胞的流式细胞术分析在刺激3天后进行。数据代表了具有四次重复的两组实验，实验（平均值和S.E.M.）。
图3示出转导有Xrcc2特异的shRNA并通过抗-CD40加IL-4刺激0、2或3天的B细胞的流式细胞术数据图；用仅以抗-CD40刺激的细胞计数对用抗-CD40加IL-4活化的总细胞计数进行归一化。第0天的数据以白色柱示出，第2天的数据以灰色柱示出，第3天的数据以黑色柱示出。数据代表了具有四次重复的两组实验，实验（平均值和S.E.M.）。x轴示出细胞的基因型。
图4示出在未活化（Non）或活化（Act）条件下生长的Aicda+/+和Aicda-/-、XKD和对照（Ctrl）脾B细胞中γ-H2AX的灶点（foci），以γ-H2AX+细胞（一个以上灶点；实心柱）与γ-H2AX-细胞（无灶点；空心柱）的比例表示。
图5为示出Aicda+/+和Aicda-/-、XKD和对照（Ctrl）脾B细胞中DSB修复灶点的数目的图。y轴表示γ-H2AX灶点的数目；空心柱代表未活化、实心柱代表活化条件的用XKD或对照（Ctrl）shRNA处理的Aicda+/+和Aicda-/-脾B细胞。*P<0.05和**P<0.01（双样本t-检验）。数据代表了四次实验（误差棒，S.E.M.）。
图6示出在活化的XKD或对照（Ctrl）小鼠CH12-F3细胞中γ-H2AX灶点的灶点分布。
图7为示出细胞计数的图，该计数表明DIDS处理降低了刺激后脾细胞的存活。从野生型（AID+/+；实心标记）或AICDA敲除型（AID-/-；空心标记）小鼠的脾分离的细胞在第0天和第2天用抗-CD40抗体和IL-4刺激。以0μM、50μM、100μM和150μM的浓度在第0天和第2天加入DIDS。存活细胞的总数在第1、2、3、4和6天用台盼蓝染色确定。
图8A-图8B示出的图表明癌细胞显示出高水平的AICDA表达。x轴的每一栏/刻度代表不同的细胞或组织类型；y轴以相对于数据集中位数水平的倍数变化表示AICDA的表达水平。图8A示出一组来自于59个癌衍生人细胞系的表达数据。图8B示出来自于原代人组织和癌的表达数据。
图9为示出使用Guava EasyCyte流式细胞仪的脾细胞活力的图。从野生型（WT）或AICDA敲除型（-/-）小鼠的脾分离的细胞在第0天和第2天用抗-CD40抗体和IL-4进行刺激。以0或150μM的浓度在第0天和第2天加入DIDS。以抗-CD40抗体加IL-4刺激并用DIDS处理的WT细胞以实心框示出；以抗-CD40抗体加IL-4刺激并用DIDS处理的AICDA-/-细胞以圆示出；以抗-CD40抗体加IL-4刺激的WT细胞以空心菱形示出；以抗-CD40抗体加IL-4刺激的AICDA-/-细胞以空心三角形示出。每隔一天确定存活细胞的总数。数据在x轴示出，存活细胞的分数在y轴示出。
图10为示出用MultiTox-Fluor叠加细胞毒性分析系统对DIDS衍生物的筛选结果。x轴示出化合物标识，y轴示出存活细胞的分数。
图11示出用DIDS对原代人CLL细胞处理，该原代人CLL细胞来自于14个原发性慢性淋巴细胞性白血病（CLL）患者。以0μM（n=5，对照）、150μM（n=4）或600μM（n=2）处理CLL细胞；DIDS处理的存活细胞计数在培养的第2、4、6、8天通过血细胞计数器手动测定。误差棒表示平均值的标准误。
图12示出将原代AID-敲除小鼠的脾细胞以1×106细胞/mL的浓度接种至添加有抗CD-40+IL-4（以活化B细胞）的RPMI培养基中培养第0天的图。每种培养物中添加0（圆）、0.5μM（三角形）、5μM（菱形）、50μM（方形）或500μM（圆）的NS-123，在第1、2、3和4天进行台盼蓝染色后对存活细胞计数。
图13为示出原代AID敲除小鼠脾细胞活力对NS-123的剂量响应曲线的图，该原代AID敲除小鼠脾细胞为以1×106细胞/mL的浓度接种至添加有抗CD-40+IL-4（以活化B细胞）的RPMI培养基中培养第0天。检测了0μM、5μM、10μM、20μM、30μM和50μM的NS-123浓度。
图14示出原代小鼠B细胞及其对DIDS响应的图。细胞经历0（实心圆）或2.5Gy（=250rads，空心圆）的处理。误差棒代表三次独立实验的平均值的标准误（S.E.M.）。
图15A示出用各种DIDS浓度处理的未活化的CH12-F3细胞的总细胞数。图15B示出用各种DIDS浓度处理的活化的CH12-F3细胞的总细胞数。0μM DIDS的结果以实心方形示出，50μM DIDS的结果以实心圆示出，100μM DIDS的结果以空心方形示出，150μM DIDS的结果以空心圆示出。
图16示出在以150μM DIDS处理激活的从AID敲除小鼠和B6野生型小鼠分离的AID-缺失（AID-/-）和AID阳性（AID+/+）脾细胞中检测到的灶点的数目。图16B示出phospho-H2AX阳性细胞（实心柱）相对于phospho-H2AX阴性细胞（空心柱）的比例，对AID+/+与AID-/-的培养的比较进行定量。图16C示出对于DIDS处理的AID+/+（实心柱）相比于AID-/-（空心柱）细胞，对每个细胞中灶点的数目进行定量。
图17示出经过或不经30μM DIDS处理的AID-表达（AID+）或AID-阴性（AID-）原代人CLL细胞的细胞活力。
图18A示出原代人CLL细胞中AID表达的RT-PCR。图18B示出原代人CLL细胞的细胞活力对DIDS的响应。
图19A为示出经25mg/kg DIDS处理的BXSB.Yaa Cd8/IL15-/-小鼠的体重。图19B为示出经25mg/kg DIDS处理的BXSB.Yaa Cd8/IL15-/-小鼠的IgG2b血清含量。
图20A-图20B示出经25mg/kg DIDS（图20A）或50mg/kg DIDS（图20B）处理的BXSB.Yaa Cd8/Il15-/-小鼠的对数秩Mantel Cox存活曲线，以开始处理后的天数示出。
图21A-图21B示出经25mg/kg DIDS（图21A）或50mg/kg DIDS（图21B）处理的BXSB.Yaa Cd8/Il15-/-小鼠的存活，以经Gehan-Breslow-Wilcoxan检验的天数示出小鼠寿命。
图22为示出DIDS破坏DNA损伤后RAD51灶点的形成。未暴露至DIDS（0mM）的经辐射的细胞显示出有效的灶点形成。暴露至DIDS（150mM）完全抑制了辐射诱导的RAD51灶点形成，降低了Rad51灶点+细胞相对于基线水平（相当于未经辐射的细胞，0Gy样品）的分数。误差棒示出三次独立实验的平均值的标准误（S.E.M.）。
图23A-图23B示出AID-阳性（AID+）和AID-阴性（AID-）人细胞中phosphor-H2AX灶点数目依赖于DIDS处理。灶点的数目在x轴示出。图23A描述了以0μM DIDS对照处理的结果，图23B描述了以30μM DIDS处理的结果。误差棒代表AID-/-样品的4个独立培养物（空心柱）和AID+/+样品的5个独立培养物（实心柱）的平均值的标准误（S.E.M.）。
图24示出活化的胱天蛋白酶3（AC3）阳性细胞依赖于DIDS处理和AID表达。误差棒代表AID-（AID-/-）样品的4个独立培养物（空心柱）和AID+样品的5个独立培养物（实心柱）的平均值的标准误（S.E.M.）。
图25A示出为检验系统性DIDS处理在小鼠模型中效果的实验设计。图25B示出对照小鼠体重的分数的变化。图25C示出DIDS处理小鼠体重的分数的变化。
图26为示出对经DNP-KLH免疫并经0mg/kg、10mg/kg或50mg/kgDIDS处理的AID-/-和AID+/+小鼠的骨髓、脾和外周血的终点流式细胞术点图分析。该图示出淋巴细胞门中对表达B220（y轴）和CD19（x轴）染色的细胞群体。每张图的右上角的数字提供了每个分析中B220+/CD19+细胞的百分比。B细胞从早/前GC至后GC的成熟过程在下方示出。
图27示出对Epstein-Barr病毒转化的外周人B淋巴细胞中AID和GAPDH（对照）进行的RT-PCR表达分析。
具体实施方式
定义
为了方便起见，以下提供了说明书、实施例和所附权利要求中使用的某些术语和短语的含义。若术语在本领域中和在本文所提供的定义中的用法存在明显差异，则应采用说明书中所提供的定义。
细胞生物学和分子生物学中的常用术语的定义可在下列出版物中找到：“The Merck Manual of Diagnosis and Therapy”，第18版、由MerckResearch Laboratories出版，2006（ISBN0-911910-18-2）；Robert S.Porter等（编），The Encyclopedia of Molecular Biology，由Blackwell Science Ltd.出版，1994（ISBN0-632-02182-9）；以及Robert A.Meyers（编），MolecularBiology and Biotechnology:a Comprehensive Desk Reference，由VCHPublishers,Inc.出版，1995（ISBN1-56081-569-8）；Crowther J.R.所著的The ELISA guidebook（Methods in Molecular Biology149）（2000）；Jeffrey Travis所著的Fundamentals of RIA and Other Ligand Assays，1979，Scientific Newsletters；Werner Luttmann著，Elsevier出版的Immunology，2006。分子生物学中的常用术语还可在下列出版物中找到：BenjaminLewin，Genes IX，由Jones&Bartlett Publishing出版，2007（ISBN-13:9780763740634）；Kendrew等（编），Molecular Biology and Biotechnology:a Comprehensive Desk Reference，由VCH Publishers，Inc.出版，1995（ISBN1-56081-569-8）以及Current Protocols in Protein Sciences2009，WileyIntersciences，Coligan等，编。
除非另有说明，否则本文所述的技术使用标准程序执行，例如在下列出版物中的描述：Methods in Enzymology，Volume289：Solid-PhasePeptide Synthesis，J.N.Abelson，M.I.Simon，G.B.Fields（编者），AcademicPress；第1版（1997）（ISBN-13：978-0121821906）；美国专利号：4,965,343，以及5,849,954；Maniatis等，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.，USA（1982）；Sambrook等，Molecular Cloning：A Laboratory Manual（第3版），Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.，USA（2000）；Davis等，Basic Methods in Molecular Biology，Elsevier SciencePublishing，Inc.，New York，USA（1995）；或者Methods in Enzymology：Guide to Molecular Cloning Techniques Vol.152，S.L.Berger和A.R.Kimmel编，Academic Press Inc.，San Diego，USA（1987）；Current Protocolsin Protein Science（CPPS）（John E.Coligan等编，John Wiley and Sons，Inc.），Current Protocols in Cell Biology（CPCB）（Juan S.Bonifacino等编，John Wiley and Sons，Inc.），以及Culture of Animal Cells：A Manualof Basic Technique by R.Ian Freshney，Publisher：Wiley-Liss；第5版（2005），Animal Cell Culture Methods（Methods in Cell Biology，Vol.57，Jennie P.Mather and David Barnes editors，Academic Press，第1版，1998）；以引用的方式将全部所述出版物的整体内容并入本文。
除非上下文另有明确指定，否则单数术语“一”（a/an/the）包括复数指代。类似地，除非上下文另有明确指定，否则“或”一词旨在包括“和”。虽然可将与本文所述的方法和材料类似或等同的方法和材料用于本公开的实施或测试，然而下文中对合适的方法和材料进行了描述。缩写“e.g.”源自于拉丁文exempli gratia，并在本文中用于指代非限制性实例。因此，那缩写“e.g.”与术语“例如”具有相同的含义。
除非在实施例中或者另有说明，否则本文所使用的所有表示成分用量或反应条件的数值在全部情况下均应理解为由术语“约”加以修饰。当与百分比相关使用时，术语“约”可以是指±1%。
本文所使用的术语“给予”是指通过方法或途径将组合物置入受试者，使得所述组合物至少部分地定位于期望位点，从而产生期望的效果。可通过任何本领域已知的合适途径给予本文所述的化合物或组合物，所述途径包括但不限于：口服、肠内或胃肠外途径（包括静脉内给药、肌内给药、皮下给药、经皮给药、呼吸道（气雾剂）给药、肺部给药、鼻部给药、鼻内给药、直肠给药、以及局部给药（包括口腔给药和舌下给药））。
示例性的给药方式包括但不限于：注射、输注、滴注、吸入或摄入。“注射”不受限制地包括：静脉内、肌内、动脉内、鞘内、心室内、囊内、眶内、心内、真皮内、腹内、经气管、皮下、角质层下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、脑髓内、以及胸骨内的注射和输注。在优选的实施方式中，通过静脉内输注或注射给予组合物。
本文使用的术语“自体免疫性疾病”或“自体免疫性疾患”指的是归因于攻击自体组织的免疫介导的病症，例如当受试者的自身抗体与宿主组织起反应时，但也可包括针对微生物的免疫反应。此类病症包括但不限于：红斑狼疮、Wiskott-Aldrich综合征、自体免疫性淋巴组织增生综合征、重症肌无力、类风湿性关节炎（RA）、狼疮性肾炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、盘状狼疮、亚急性皮肤性红斑狼疮、皮肤性红斑狼疮（包括冻疮样红斑狼疮）、慢性关节炎、Sjogren氏综合征、炎症性慢性鼻窦炎、结肠炎、乳糜泻（celiac disease）、炎症性肠病、Barrett氏食道症、炎症性胃炎、自体免疫性肾炎、自体免疫性脉管炎、自体免疫性肝炎、自体免疫性心脏炎、自体免疫性脑炎、以及自体免疫介导的血液系统疾病。
本文所使用的全部术语“减少”（decrease）、“降低”（reduce/reduction）或“抑制”（inhibit/inhibition）通常是指以在统计学上显著的量减少。然而，为了避免疑问，“减少”、“降低”或者“抑制”是指与参比水平相比减少至少5%，例如：与参比水平相比，减少至少约10%、或至少约20%、或至少约30%、或至少约40%、或至少约50%、或至少约60%、或至少约70%、或至少约80%、或至少约90%、或至少约95%、或至少约98%、或至少约99%以上。
本文所使用的全部术语“增加”（increased/increase）、“增强”（enhance）、“活化”（activate）或“升高”（elevated）通常是指以在统计学上显著的量增加；为了避免疑问，“增加”、“增强”、“活化”或者“升高”是指在统计学上显著的增加，如与参比水平相比增加至少5%，例如：与参比水平相比，增加至少约10%、或至少约20%、或至少约30%、或至少约40%、或至少约50%、或至少约60%、或至少约70%、或至少约80%、或至少约90%、或直至并包括100%的增加或者任何5%-100%之间的增加，或者，与参比水平相比，增加至少约2倍、或至少约3倍、或至少约4倍、或至少约5倍、或至少约10倍、或者2倍-10倍之间的任何增加或更大量的增加。
术语“在统计学上显著”或“在统计学上”指的是统计显著性，通常意为正常值以上或以下的2倍标准偏差、或标记物浓度以上或以下的2倍标准偏差。该术语指的是表明存在差异的统计学证据。将其定义为当零假设事实上为真时，作出拒绝零假设的决策的几率。通常使用p值作出所述决策。
本文所使用的术语“化合物”（compound）或“试剂”（agent）可交换使用，并且是指抑制DSB修复的分子和/或组合物。所述化合物/试剂包括但不限于化合物和化合物的混合物，例如：小分子有机分子或无机分子；糖类；寡糖；多糖；生物大分子（例如多肽、蛋白质、以及肽类似物和衍生物）；模拟肽；核酸、核酸类似物和衍生物；由生物材料（如细菌、植物、真菌或哺乳动物细胞或组织）制得的提取物；天然存在的组合物或合成的组合物；肽；适配体；以及抗体或其片段。
本文所使用的术语“测试化合物”或“测试试剂（test agent）”指的是待筛选的化合物或试剂和/或其组合物，如本文所指明，根据其对于在DSB修复中所涉及的基因或蛋白质的表达和/或活性进行抑制的能力进行所述筛选。
本文所使用的术语“DSB修复抑制剂”为任何对双链DNA断裂修复进行抑制的化合物或试剂。在某些实施方式中，此类抑制剂可包括抑制同源重组和非同源末端接合（NHEJ）。在某些实施方式中，此类抑制剂可包括RAD51介导的链交换的抑制剂。在一些实施方式中，此类抑制剂可包括下列的抑制剂，例如：Rad51；Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；Rad51D；XRCC2；XRCC3；RAD54；RAD52；BRCA1；BRCA2；ATM；ATR；MRE11；RAD50；NBS1；WRN；BLM；RECQ4；LIG4；XRCC4；PRKDC；DCLRE1C；XRCC6；XRCC5；以及XLF。
本文所使用的术语“抗体”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即，包含抗原结合位点的分子，所述抗原结合位点特异性地与包含一个或多个表位的抗原进行结合。所述术语还指由两条免疫球蛋白重链和两条免疫球蛋白轻链所组成的抗体、以及抗体以外的各种形式；包括例如：Fv、Fab、以及F(ab)′2以及双官能杂合抗体（bifunctionalhybrid antibodies）（例如，Lanzavecchia等，Eur.J.Immunol.17，105（1987））和单链（例如，Huston等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，85，5879-5883（1988）和Bird等，Science242，423-426（1988），以引用的方式将其并入本文）以及单域抗体（sdAb）（包括例如纳米抗体、骆驼抗体（camelids，VHH片段）和免疫球蛋白新抗原受体（IgNAR））（Harmsen等，2007，Appl.Microbiol.Biotechnol.77（1）：13-22；Holt等，2003，Trends inBiotechnology21（11）：484-490；以引用的方式将其整体内容并入本文）。（通常参见：Hood等，Immunology，Benjamin，N.Y.，第二版（1984）、Harlow和Lane，Antibodies.A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory（1988）以及Hunkapiller和Hood，Nature，323，15-16（1986)，以引用的方式将其并入本文）。所述术语还包括胞内抗体（intrabodies），即在细胞内工作并结合至胞内蛋白的抗体。胞内抗体可包括整个抗体或其抗体结合片段，例如：单一Fv、Fab和F(ab)′2等。本文所使用的术语“表位”指的是在动物（优选哺乳动物、最优选人类）中具有抗原性或免疫原性活性的多肽、蛋白质或非蛋白质分子的片段。具有免疫原性活性的表位为在动物中引发抗体反应的多肽或蛋白质的片段。与抗体免疫特异性结合的表位可通过本领域技术人员公知的任何方法（例如免疫分析）确定。抗原性表位并非必须具有免疫原性。
术语“蛋白质结合蛋白”指的是非免疫球蛋白结合蛋白，并选自于下列所组成的组：抗体亚结构（例如Fc片段）、迷你抗体（minibody）、adnectin、anticalin、affibody、affilin、锚蛋白重复序列蛋白、DARPin、knottin、glubody、C型植物凝血素样结构域蛋白、四连接素、Kringle结构域（KD）、kunitz结构域蛋白、硫氧化还原蛋白、细胞色素b562、锌指支架、葡萄球菌核酸酶支架、纤连蛋白或纤连蛋白二聚体、腱生蛋白、N-钙粘着蛋白、E-钙粘着蛋白、ICAM、肌联蛋白、GCSF受体、细胞因子受体、糖苷酶抑制剂、抗菌素色素蛋白、髓鞘膜粘着分子P0、CD8、CD4、CD2、I类MHC、T细胞抗原受体、CD1、VCAM-1的C2和I-set结构域、肌球蛋白结合蛋白C的1-set免疫球蛋白结构域、肌球蛋白-结合蛋白H的1-set免疫球蛋白结构域、telokin的1-set免疫球蛋白结构域、NCAM、颤搐蛋白、神经胶质蛋白、生长激素受体、促红细胞生成因子受体、催乳激素受体、干扰素-γ受体、β-半乳糖苷酶/葡糖苷酸酶、β-葡糖苷酸酶、转谷酰胺酶、T细胞抗原受体、过氧化物歧化酶、组织因子结构域、细胞色素F、绿色荧光性蛋白、GroEL、以及奇甜蛋白（thaumatin）。用于制备此类非免疫球蛋白结合蛋白的方法在本领域中是公知的（Binz等，2005，Nat Biotechnol1257-6；Lee等，2010，Proc Natl Acad Sci USA107（21）：9567-71；Gebauer和Skerra，2009，Curr Opin Chem Biol.13（3）：245-255）。
术语“表达”指的是参与生产RNA和蛋白质、并视情况而定地分泌蛋白质的细胞过程，在适用情况下包括但不限于例如：转录、翻译、折叠、修饰和加工。术语“表达产物”包括由基因转录的RNA、以及对由基因转录的mRNA进行翻译而获得的多肽。在一些实施方式中，表达产物转录自并不编码多肽的序列，如微RNA或RNAi。
本文所使用的术语“互补”或“互补碱基对”指的是DNA中的A:T、G:C和RNA中的A:U。多数DNA由仅四种含氮碱基的核苷酸序列组成：碱基或者腺嘌呤碱基（A）、胸腺嘧啶碱基（T）、鸟嘌呤碱基（G）和胞嘧啶碱基（C）。这些碱基共同形成基因字母表（genetic alphabet），并且其长的有序序列以编码形式含有基因中存在的许多信息。多数RNA也由仅四种碱基的序列组成。然而，在RNA中，以尿嘧啶核苷（U）代替胸腺嘧啶。
本文中使用的术语“核酸”或“核酸序列”指的是单链或双链形式的包含下述物质的单元的任何分子、优选聚合物分子：核糖核酸、脱氧核糖核酸或其类似物；多核苷酸，如脱氧核糖核酸（DNA）、以及适当情况下的核糖核酸（RNA）；上述物质的聚合物。单链核酸可以是变性的（denatured）双链DNA的一条核酸链。或者，其可以是并不源于任何双链DNA的单链核酸。在一方面，模板核酸为DNA。在另一方面，模板为RNA。合适的核酸分子为DNA，包括基因组DNA、核糖体DNA和cDNA。其他合适的核酸分子为RNA，包括mRNA、rRNA和tRNA。核酸分子可以是天然存在的（如于基因组DNA中天然存在），或所述核酸分子可以是合成的（即，基于人类行为而制备），或者可为上述二者的组合。除非有具体限定，否则该术语涵盖了含有天然核苷酸的已知类似物的核酸，所述核酸具有与所参照的核酸相类似的结合特性，并且以类似于天然存在的核苷酸代谢的方式进行代谢。除非另有说明，否则特定的核酸序列还隐含地涵盖了其适当修饰的变体（例如，简并密码子替换）和互补序列、以及清楚表明的序列。具体而言，简并密码子替换可通过生成如下的序列而实现：在所述序列中，以混合的碱基和/或脱氧肌苷残基对一个或多个选定的（或全部）密码子的第三位进行置换（Batzer等，Nucleic Acid Res.19:5081（1991）；Ohtsuka等，J.Biol.Chem.260:2605-2608（1985），以及Rossolini等，Mol.Cell.Probes8:91-98（1994））。核酸分子还可具有某些修饰，如2′-脱氧、2′-脱氧-2′-氟代、2′-O-甲基、2′-O-甲氧基乙基（2′-O-MOE）、2′-O-氨基丙基（2′-O-AP）、2′-O-二甲基氨基乙基（2′-O-DMAOE）、2′-O-二甲基氨基丙基（2′-O-DMAP）、2′-O-二甲基氨基乙氧基乙基（2′-O-DMAEOE）、或者2′-O-N-甲基乙酰胺基（2′-O-NMA）、胆固醇加成、以及硫代磷酸酯主链（如美国专利申请20070213292中的描述）；以及某些核糖核苷，所述核糖核苷使用亚甲基单元连接2′-氧原子和4′-碳原子（如美国专利号6,268,490中的描述）；其中，以引用的方式将该专利申请和专利两者整体并入本文。术语“核酸”还应理解为包括：由核苷酸类似物形成的RNA或DNA的类似物变体、衍生物和等同物；以及单链（正义或反义）和双链多核苷酸。
术语“基因”意为可操作地连接至适当的调控序列时，在体外或体内转录至RNA的核酸序列（DNA）。基因可包括或不包括编码区的前序和后续区域，例如5′未翻译的（5′UTR）或“引导”序列、3′UTR或“尾随”序列、以及个别编码片段（外显子）之间的间插序列（内含子）。
本文中使用的术语“蛋白质”和“多肽”在本文中相互替代使用，表示一系列氨基酸残基通过相邻残基的α-氨基基团和羧基基团之间的肽键连接至另一残基。术语“蛋白质”、“多肽”和“肽“在本文中相互替代使用，指的是氨基酸聚合物，包括修饰氨基酸（例如，磷酸化、糖化、糖基化等）和氨基酸类似物，而不考虑其大小或功能。尽管“蛋白质”经常用于指代相对大的多肽，且“肽”经常用于指代小的多肽，然而这些术语在本领域中的使用是相互重叠并且可变的。除非另有说明，否则本文中使用的术语“肽”指的是肽、多肽、蛋白质和蛋白质片段。当指的是基因产物及其片段时，术语“蛋白质”、“多肽”和“肽”在本文中相互替代使用。因此，示例性的肽或蛋白质包括基因产物、天然存在的蛋白质、同系物、直系同源物、旁系同源物、片段以及上述物质的其它等同物、变体、片段和类似物。
本文使用的术语“载体”指的是设计用于递送至宿主细胞或在不同宿主细胞之间转运的核酸构建体。本文所使用的载体可以是病毒载体或非病毒载体。载体可包括但不限于：克隆载体、表达载体、质粒、噬菌体、转位子、粘粒、细菌人工染色体（BAC）、酵母人工染色体（YAC）、病毒、病毒体（virion）、逆转录病毒等。在一些实施方式中，载体为游离型载体（episomal）。合适的游离型载体的使用提供了以高复制数的染色体外DNA将感兴趣的核酸保持在受试者体内的手段，从而消除潜在的染色体整合效应。
本文所使用的术语“表达载体”指的是能够在细胞中引入和表达非同源核酸片段的载体。表达载体可包含额外元件，例如，表达载体可具有两个复制系统，因此允许将其保存于两个有机体内，例如在人类细胞内表达并在原核生物宿主内复制和扩增。表达载体可指导由连接至载体上的转录调控序列的序列表达RNA或多肽。所表达的序列通常将（但并非必然）与细胞是非同源的。表达载体可包含额外元件，例如，表达载体可具有两个复制系统，因此允许将其保存于两个生物体内，例如在人类细胞内表达并在原核生物宿主内复制和扩增。
本文所使用的术语“病毒载体”指的是包括至少一个病毒来源的元件、并能够封装入病毒载体粒子的核酸载体构建体。病毒载体可含有靶基因，代替非必需病毒基因。可将载体和/或粒子用于在体外或体内将任何核酸转运入细胞中。病毒载体的多种形式在本领域中是已知的，包括但不限于：巨细胞病毒、腺病毒、慢病毒、痘病毒、疱疹病毒、逆转录病毒（例如MMLV、HIV-1或ALV）。可将病毒用作核酸调节化合物进入细胞的运载体。例如，可将含有调节化合物的构建体整合并封装入非复制性缺陷病毒基因组以感染或转导进入细胞，所述非复制性缺陷病毒基因组例如：腺病毒、腺相关病毒（AAV）、或单纯疱疹病毒（HSV）或其它病毒（包括逆转录病毒载体和慢病毒载体）。或者，可将所述构建体引入能够进行游离型复制的载体（例如EPV载体和EBV载体）。当表达控制序列控制并调节多核苷酸序列的转录和翻译时，可将引入载体的核酸操作性地连接至表达控制序列。
本文所使用的术语“操作性地连接”（operatively linked）或“可操作地连接”（operably linked）是指核酸与第二核酸功能性相连。术语“可操作地连接”涵盖了两个或多个核酸分子的功能性连接，例如将待转录的寡核苷酸或多核苷酸与调控元件（如启动子或增强子元件）相连，所述调控元件允许将待转录的寡核苷酸或多核苷酸进行转录。在一些实例中，核酸调节化合物的转录受到启动子序列（或其它转录调节序列）的控制，所述序列在预期进行表达的细胞类型中控制核酸的表达。还将理解的是，所述调节核酸可受到转录调节序列的控制，所述转录调节序列与对天然存在的蛋白质形式的转录进行控制的序列相同或不同。在一些情况下，启动子序列由引发转录特定基因所需的细胞的合成系统或引入的合成系统进行识别。启动子序列可以是“组织特异性启动子”，意为起到启动子的作用（即，调节可操作地连接至启动子的选定的核酸序列的表达）的核酸序列在特定细胞（例如淋巴细胞或上皮细胞）中影响选定的核酸序列的表达。该术语还涉及所谓的“渗漏（leaky）”启动子，其主要在一种组织中调节选定的核酸的表达，但也导致在其他组织中的表达。
本文所使用的术语“非同源核酸片段”是指在该细胞中并非天然存在的核酸序列。例如，当将非同源基因、如DNA编辑酶（例如AID）插入细菌或病毒的基因组中时，由于细菌和病毒基因组并非天然具有DNA编辑酶基因，因此该基因对于该受体细菌或病毒而言为非同源的。
本文所使用的术语“复制不全（replication incompetent）”指的是病毒载体不能进一步复制和封装其基因组。例如，当受试者的细胞被复制不全的重组腺相关病毒（rAAV）病毒体感染时，非同源基因（又称转基因）在患者细胞中表达，然而rAAV存在复制缺陷（例如，缺少对用于封装病毒的必要蛋白质进行编码的附加基因）、并且不能在患者细胞中形成病毒粒子。
本文所使用的术语“分离”或“部分纯化”在核酸或多肽的情况下是指核酸或多肽与至少一种其它组分（例如，核酸或多肽）相分离，所述其它组分与所述核酸或多肽在其天然来源中共同存在、和/或在由细胞表达或（在分泌的多肽的情况下）分泌时将与所述核酸或多肽共同存在。化学合成的核酸或多肽或使用体外转录/翻译合成的核酸或多肽被认为是“分离”的。
在本文的疾病的上下文中所述的术语“治疗”指的是使本文所述的癌症的指标、症状、标记物、实体参数、肿瘤大小或复发的严重性得以降低。在本文所述的、涉及本文列举的病症的技术的上下文中，术语“治疗”意指减轻、缓和、改善、抑制、减缓、延缓、逆转、或停止该癌症或自体免疫性疾患相关的至少一种症状或并发症的发展、加重、恶化、进展、预期进展或严重程度，或者延缓所述疾病或疾患的发作。在一个实施方式中，癌症或自体免疫性疾患的症状得以减轻至少5%、至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、或至少50%。
在疾病或疾患的标记物或症状的上下文中，“更低”是指其水平在统计学上显著的下降。所述下降可以是例如至少10%、至少20%、至少30%、至少40%以上，并且优选低至落入未患有该疾病或疾患的个体的正常范围内的水平。
在疾病或疾患的标记物或症状的上下文中，“更高”是指其水平在统计学上显著的上升。所述上升可以是例如至少10%、至少20%、至少30%、至少40%以上，并且优选高至落入未患有该疾病或疾患的个体的正常范围内的水平。
本文所使用的短语“治疗有效量”、“有效量”或“有效剂量”指的是在治疗中提供治疗益处、预防或处理本文所述的病症（例如癌症或自体免疫性疾病）的量，例如提供在统计学上显著地降低此类病症的至少一种症状的量。本领域技术人员完全有能力对治疗有效量进行确定。通常而言，治疗有效量可随受试者的病史、年龄、病症、性别和受试者医学病症的严重性和种类、以及其它药物活性剂的给药而变化。
本文所使用的术语“药物组合物”指的是活性剂与药学上可接受的载体相组合，所述载体普遍用于制药工业。
此处使用的术语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内，适合用于接触人类和动物的组织，而不具备过度毒性、刺激性、过敏反应、或者其它问题或并发症，与合理的收益/风险比相称的化合物、材料、组合物和/或剂型。
本文所使用的术语“药学上可接受的载体”指的是任何药学上可接受的材料、组合物、介质或辅料，如液体或固体填料、稀释剂、赋形剂（例如，染料、呈味剂、粘合剂、软化剂、填料、润滑剂、防腐剂、玉米淀粉、乳糖、滑石、硬脂酸镁、蔗糖、明胶、硬脂酸钙、二氧化硅、虫胶和釉料）、溶剂或封装材料、涂料、表面活性剂、吸收延缓剂、制造助剂（例如，润滑剂、滑石镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌、或硬脂酸）、或溶剂封装材料、盐、防腐剂、稳定剂、凝胶、崩解剂、甜味剂、以上物质的类似材料和组合，这些对于本领域普通技术人员而言是已知的（参见，例如：Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack PrintingCompany，1990，第1289-1329页）。对于任何传统载体而言，除非其与活性成分不相容，否则其在治疗剂或药物组合物中的用途均在考虑之列。每一载体必须是在与配方的其它成分相容、且对患者无害的意义上为“可接受的”。例如，载体不降低试剂在治疗方面的影响。换言之，载体是药学上惰性的。可作为药学上可接受的载体起作用的材料的一些实例包括但不限于：（1）糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；（2）淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；（3）纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、乙基纤维素、微晶纤维素和纤维素乙酸酯；（4）粉末化的黄蓍胶；（5）麦芽；（6）明胶；（7）润滑剂，如硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠和滑石；（8）赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；（9）油类，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；（10）二醇类，如丙二醇；（11）多元醇，如甘油、山梨醇、甘露糖醇和聚乙二醇（PEG）；（12）酯类，如乙基油酸酯和乙基月桂酸酯；（13）琼脂；（14）缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；（15）海藻酸；（16）无热原水；（17）等渗盐水；（18）Ringer氏溶液；（19）乙醇；（20）pH缓冲溶液；（21）聚酯、聚碳酸酯和/或聚酸酐；（22）填充剂，如多肽和氨基酸；（23）血清组分，如血清白蛋白、HDL和LDL；（24）C2-C12醇，如乙醇；以及（25）药物配方中采用的其它非毒性相容性化合物。配方中还可存在润湿剂、结合剂、填料、润滑剂、崩解剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、防腐剂、水、盐溶液、醇、抗氧化剂、聚乙二醇、明胶、乳糖、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石、硅酸、粘性石蜡、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等。术语如“赋形剂”、“载体”、“药学上可接受的载体”等在本文中可替代使用。
本文所使用的术语“小分子”指的是下述化学试剂，包括但不限于：肽、模拟肽、氨基酸、氨基酸类似物、多核苷酸、多核苷酸类似物、适配体、核苷酸、核苷酸类似物、分子量小于约10,000g/mol的有机化合物或无机化合物（即，包括杂有机化合物（heteroorganic）和有机金属化合物）、分子量小于约5,000g/mol的有机化合物或无机化合物、分子量小于约1,000g/mol的有机化合物或无机化合物、分子量小于约500g/mol的有机化合物或无机化合物、以及此类化合物的盐、酯和其它药学上可接受的形式。
本文所使用的“受试者”是指人或动物。在一个实施方式中，动物为脊椎动物如灵长类、啮齿类、家养动物、鸟类、鱼类或狩猎动物。术语“患者”、“个体”和“受试者”在本文中可替代使用。
受试者优选为哺乳动物。哺乳动物可以为人、非人类灵长类、小鼠、大鼠、狗、猫、马或牛，但并不限于这些实例。可将除人以外的哺乳动物有利地用作受试者，表示与癌症、自体免疫性疾病或炎性疾病的动物模型。另外，本文所述的方法和组合物可用于治疗驯养动物和/或宠物。受试者可以为雄性或雌性。受试者可以为先前诊断患有癌症或自体免疫性疾病的受试者，或者识别为患有与癌症或自体免疫性疾病相关的一种或多种并发症的受试者，并任选但并非必要地已经历对癌症或自体免疫性疾病、或与癌症或自体免疫性疾病相关的一种或多种并发症的治疗。受试者还可以是未患有癌症或自体免疫性疾病的个体。例如，受试者可以是显出一种或多种风险因素的个体，所述风险因素为癌症或自体免疫性疾病的风险因素、或者为与癌症或自体免疫性疾病相关的一种或多种并发症的风险因素。受试者可以是没有癌症或自体免疫性疾病症状、或没有与癌症或自体免疫性疾病相关的一种或多种并发症的症状的个体。在一个实施方式中，将受试者选定为患有癌症或自体免疫性疾病、或处于患有癌症或自体免疫性疾病风险中的受试者。受试者还可以为先前诊断或识别为患有与癌症或自体免疫性疾病相关的一种或多种并发症，或者，受试者可为先前未曾诊断或识别为患有与癌症或自体免疫性疾病相关的一种或多种并发症。
本文所使用的术语“烷基”指的是直链、直链或环状的饱和烃基原子团。术语“烷基”包括环烷基。另外，烷基主链可包含一个或多个杂原子，如O、N或S。烷基原子团的实例包括但不限于：甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、新戊基、正己基和正辛基原子团。
本文所使用的术语“烯基”指的是具有至少一个碳碳双键的直链、支链或环状的不饱和烃基原子团。术语“烯基”包括环烯基。另外，烯基的主链可包含一个或多个杂原子，如O、N或S。烯基原子团的实例包括但不限于：烯丙基、丁烯基和己烯基原子团。
本文所使用的术语“炔基”指的是具有至少一个碳碳三键的不饱和烃基原子团。另外，炔基的主链可包含一个或多个杂原子，如O、N或S。典型的炔基基团包括但不限于：乙炔基、1-丙炔基、1-丁炔基、异戊炔基、1,3-己二炔基、正己炔基、3-戊炔基、1-己烯-3-炔基等。
本文所使用的术语“卤素”指的是选自氟、氯、溴和碘的原子。术语“卤素放射性同位素”指的是选自氟、氯、溴和碘的原子的放射性核素。
本文所使用的术语“环基”（cyclyl）指的是具有3-12个碳、优选3-8个碳、更优选3-6个碳的饱和与部分不饱和的环状烃基基团，其中，环基可任选地进行取代。环基的实例不受限制地包括：环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基和环辛基。
本文所使用的术语“杂环基”指的是具有1-3个杂原子（单环）、1-6个杂原子（双环）或1-9个杂原子（三环）的、非芳香性的5-8元单环、8-12元二环、或11-14元三环体系，所述杂原子选自O、N或S（例如，在单环、二环或三环的情况下，分别为碳原子和1-3个、1-6个或1-9个N、O或S的杂原子），其中，各个环的0个、1个、2个或3个原子可被取代基取代。杂环基团的实例包括哌嗪基、吡咯烷基、二氧杂环己烷基、吗啉基、四氢呋喃基等。
本文所使用的术语“芳基”指的是6碳单环、10碳双环、14碳三环体系，其中，各个环上可具有1-4个取代基。芳基基团的实例包括但不限于：苯基、甲基苯基、萘基和蒽基。
本文所使用的术语“杂芳基”指的是具有1-3个杂原子（单环）、1-6个杂原子（双环）或1-9个杂原子（三环）的、芳香性的5-8元单环、8-12元二环、或11-14元三环体系，所述杂原子选自O、N或S（例如，在单环、二环或三环的情况下，分别为碳原子和1-3个、1-6个或1-9个N、O或S的杂原子），其中，各个环可具有1至5个取代基。杂芳基基团的实例包括：吡啶基、呋喃基（furyl/furanyl）、咪唑基、苯并咪唑基、嘧啶基、吡咯基、吡嗪基、噻吩基（thiophenyl/thienyl）、喹啉基、吲哚基、噻唑基等。
本文所使用的术语“取代”指的是独立地将所取代的部分上的一个或多个氢原子替换为取代基，所述取代基独立地选自但不限于：烷基、烯基、杂环烷基、烷氧基、芳基氧基、羟基、氨基、酰胺基、烷基氨基、芳基氨基、氰基、卤代、巯基、硝基、羰基、酰基、芳基和杂芳基基团。
本文所使用的术语“异构体”指的是具有相同分子式、但结构不同的化合物。仅在构型和/或构象上有所不同的异构体称为“立体异构体”。术语“异构体”还被用于指代对映体。
术语“对映体”被用于描述彼此互为镜像且不可重叠的一对异构体分子之一。其它用于指明或指代对映体的术语包括“立体异构体”（这是由于手性中心周围的不同分布或立体化学；尽管全部对映体均为立体异构体，但是并非全部立体异构体均为对映体）或“旋光异构体”（这是因为纯对映体的旋光度，即不同的纯对映体使偏振光朝不同方向偏转的能力）。对映体通常而言具有相同的物理性质（如熔点和沸点），并具有相同的光谱特性。对映体可在其与平面偏振光的相互作用方面和生物活性方面相互区别。
术语“外消旋混合物”、“外消旋化合物”或“外消旋体”指的是一种化合物的两种对映体的混合物。理想的外消旋混合物为化合物的两种对映体的50:50混合物，从而使得（+）对映体的旋光性与（-）对映体的旋光性相抵消。
当用于指代外消旋混合物时，术语“拆分”（resolving/resolution）是指将外消旋体分离为其两种对映形式（即，（+）和（-）；或（R）和（S）形式）。该术语还可指代对映选择性地将外消旋体的一种异构体转化为产物。
术语“对映体过量”或“ee”指的是反应产物中产生的一种对映体超出另一种，并定义用于（+）和（-）对映体混合物，其组成以摩尔分数、重量分数或体积分数F（+）和F（-）给出（F（+）与F（-）的和=1）。对映体过量定义为[F（+）-F（-）]，并将对映体过量百分比定为100×[F（+）-F（-）]。对映体的“纯度”通过其ee或ee百分比（%ee）值来描述。
无论表示为“纯化的对映体”、“纯净的对映体”、“拆分的对映体”还是“对映体过量化合物”，该术语意指表明一种对映体的量超出另一种对映体的量。因此，当指的是对映体制剂时，主要对映体的百分比（例如以摩尔、以重量或以体积计）和（或）主要对映体的对映体过量百分比两者（或之一）可用于确定该制剂是否为纯化的对映体制剂。
异构体的“对映体纯度”这一术语指的是对纯化的对映体进行的定性或定量测量；通常而言，基于ee或对映体过量对该测量进行表示。
术语“实质上纯化的对映体”、“实质上拆分的对映体”、“实质上纯化的对映体制剂”意为指代下述制剂（例如，源自非旋光活性的起始材料、底物、或中间体），其中，已将一种对映体相对于另一对映体进行富集；并且更优选地，另一对映体占对映体或对映体制剂的少于20%、更优选少于10%、更优选少于5%、且更加优选地少于2%。
术语“纯化的对映体”、“拆分的对映体”和“纯化的对映体制剂”意为指代下述制剂（例如，源自非旋光活性的起始材料、底物、或中间体），其中，已将一种对映体（例如R-对映体）相对于另一对映体进行富集；并且更优选地，另一对映体（例如S-对映体）占制剂的少于30%、优选少于20%、更优选少于10%（例如，在这一特定情况下，R-对映体实质上不含S-对映体）、更优选少于5%、且更加优选地少于2%。可实质上以不含另一对映体的方式合成纯化的对映体；或者可在立体选择的程序中合成纯化的对映体，随后进行分离步骤；或者纯化的对映体可源自外消旋混合物。
术语“对映选择性”还称为对映体比率，由符号“E”表示，指的是酶在外消旋混合物产品中由外消旋基底产生一种对映体的选择能力（相对于另一对映体而言）；换言之，该术语为酶在对映体之间进行区分的能力的量度。非选择性反应的E为1，而E高于20的分辨率通常认为可用于合成或拆分。对映体选择性在于所讨论的对映体之间转化速率中存在区别。获得的反应产物富集有对映体之一；相反，残留的底物富集有另一对映体。为了实际目的，通常期望大量过量地获得对映体之一。这可通过在转化一定程度时终止转化过程而实现。
本发明的化合物可以前药形式存在。本文所使用的术语“前药”旨在包括任何释放活性母体药物或化合物的载体，当将该前药给予受试者时，所述母体药物或化合物在体内代谢形成活性药物或者其它在体内用于本发明的方法中的化合物。由于已知前药能增强许多期望的药学品质（例如，溶解度、生物利用度、制造等），因此如果期望的话，可使用前药形式递送用于本发明的一些方法中的化合物。因此，本发明涵盖了本发明的化合物的前药以及递送前药的方法。本发明中使用的化合物的前药可通过对化合物中存在的官能团进行修饰而得以制备，以该修饰在常规操作下或在体内裂解为母体化合物的形式进行所述修饰。因此，前药包括例如本文所述的化合物，其中将羟基、氨基或羧基键合至任何基团，当将前药给予受试者时，分别裂解形成游离羟基、游离氨基或游离羧酸。其它实例包括但不限于：醇和胺官能团的乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯；以及烷基、碳环、芳基和烷基芳基的酯，如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、环丙基、苯基、苯甲基、和苯基乙基的酯等。
本文所使用的术语“药学上可接受的盐”指的是治疗剂或化合物或前药的无机盐和有机盐、传统上无毒的盐或季铵盐，例如，来自非毒性有机酸或无机酸的盐。这些盐可在给药辅料中或来自生产工序的剂型中原位制备，或通过独立地将处于其游离碱或酸形式的治疗剂与合适的有机或无机酸或碱进行反应，并在随后的纯化期间将这样形成的盐进行分离而制备。传统上无毒的盐包括：源自无机酸的盐，所述无机酸如硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等；以及由有机酸制备的盐，所述有机酸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、棕榈酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、磺胺酸（sulfanilic acid）、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、异硫羰酸（isothionic acid）、己二酸、天冬氨酸、碳酸、葡糖酸、葡糖醛酸、丙二酸、油酸、双羟萘酸（pamoic acid）等。参见，例如，Berge等，“Pharmaceutical Salts”，J.PHarm.Sci.66:1-19（1977）或者P.H.Stahl和C.G.Wermuth编，Handbookof PharmaceuticalSalts:Properties,Selection and Use，Weinheim/Zürich:Wiley-VCH/VHCA，2002，以引用的方式将其整体内容并入本文。术语“盐”与“药学上可接受的盐”可替代使用。
在本文所述的方面的一些实施方式中，典型的盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、醋酸盐、琥珀酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、顺丁烯二酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘甲酸盐（napthylate）、甲磺酸盐、磷酸一氢盐、葡庚酸盐、乳糖醛酸盐、月桂基磺酸盐、焦磷酸盐、焦硫酸盐、以及钠盐等。
为了描述和公开例如在此类出版物中所述的可能与本发明所述的技术有关的方法的目的，以引用的方式将在本文中标明的所有专利与其它出版物整体并入本文。这些出版物仅由于其披露先于本申请的提交日而被提供。就这一方面而言，任何内容均不得解释为承认发明人由于在先发明或由于其它任何原因而无权优先于此类披露。对于这些文献的日期的所有陈述或对这些文献的内容的描述基于申请人可获得的信息，并且不构成对这些文献的日期或内容的正确性的任何承认。
DNA编辑酶和双链DNA断裂修复
本文所述技术的实施方式基于如下发现：活化诱导的胞苷脱氨酶（AID或AICDA，还称为ARP2、CDA2或HIGM2）为载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽类（APOBEC）成员的DNA编辑酶，将在具有削弱的同源重组能力的细胞（例如，具有削弱的DNA双链断裂修复能力的细胞）中导致广泛的基因组断裂和细胞死亡。因此，本文提供了致使细胞死亡的方法，包括在细胞中检测DNA编辑酶（如AID）表达增加，并随后使细胞与双链断裂修复抑制剂相接触；从而导致细胞死亡。因此，本文提供了致使细胞死亡的方法，包括在细胞中提高DNA编辑酶（如AID）的表达，并随后使细胞与双链断裂修复抑制剂进行接触；从而导致细胞死亡。因此，本文提供了致使细胞死亡的方法，包括向细胞给予治疗有效量的DNA编辑酶（如AID），并随后使细胞与双链断裂修复抑制剂进行接触；从而导致细胞死亡。
AID由AICDA基因（NCBI Gene ID:57379）编码，为正确的B细胞功能所需，并且在中央母细胞B细胞中最显著地表达。所述蛋白质参与体细胞超突变、基因转换、以及免疫球蛋白基因的类别转换重组。AID通常几乎仅在抗原活化的生发中心B细胞中表达，其引发免疫球蛋白同型类别转换（Manis等，2002，Trends Immunol，23，31-39；Chaudhuri与Alt，Nat Rev Immunol，2004，4，541-552；Longerich等，Curr OpinImmunol，2006，18，164-174；Chaudhuri等，Adv Immunol2007，94，157-214）。AID在活化B细胞中为体细胞超突变和免疫球蛋白的类别转换所需。AID表达通过CD40配体、B细胞受体、IL4R或Toll样受体刺激得以调节（Crouch等，J Exp Med2007204：1145-1156；Muramatsu等，J Biol Chem1999274：18470-6）。在活化后，AID在短时间内上调，导致在免疫球蛋白基因内以序列非特异性的方式发生点突变或DNA双链断裂，并随后下调（Longerich等，Curr Opin Immunol，2006，18，164-176；Chaudhuri等，Adv Immunol2007，94，157-214）。总的来说，在任何给定时间时，AID仅在正常细胞的微小群体（抗原活化的B细胞）中活化。由AID控制的基因组重排和突变导致产生抗原识别多样性、受体编辑和淋巴效应子功能，这些功能为功能性适应性免疫所需（Mills等，ImmunolRev2003194：77-95）。近来，已经报道AID具有脱靶（off-target）点突变活性（Liu，M.等，Nature2008，451，841-845；Liu and Schatz，TrendsImmunol.2009，30，173-181；Pérez-Durán等，Carcinogenesis.2007，28（12）：2427-33）。Robbiani等已经报道了AID在B细胞，尤其是c-myc/IgH易位中具有脱靶活性（Robbiani等，Mol Cell2009，36（4）：631-41）。在Bcl6转基因小鼠中，AID表达加快肿瘤的发展速率（Pasqualucci等，2008，Nat.Genet.40，108-112）。然而，在B细胞中就其本身而言，解除调节的AID并不必然导致恶性或迁移相关癌症（Muto等，2006，Proc.Natl.Acad.Sci.USA103，2752-2757；Okazaki等，2003，J.Exp.Med.197，1173-1181；Shen等，2008，Mol.Immunol.45，1883-1892）。另外，尽管其在c-myc/IgH易位中起必需作用，然而AID在IL-6转基因或姥鲛烷（pristane）处理的小鼠中的浆细胞增多症或浆细胞瘤的发病中并非必需（Kovalchuk等，2007，J.Exp.Med.204，2989-3001；Ramiro等，2004，J.Exp.Med.200，1103-1110）。然而，大部分人B细胞淋巴瘤相关的易位不涉及c-myc，且大多不涉及Ig基因（Kuppers，2005，Oncogene20，5580-5594）。
已经报道在慢性淋巴细胞性白血病（CLL）中存在AID的超量表达（Hancer等Leuk Lymphoma.2011Jan；52（1）：79-84；Heintel等，Leukemia.2004Apr；18（4）：756-62）。此外，AID表达已证明与母细胞危象B系白血病和骨髓性白血病中的治疗抗性有关，并且与慢性B淋巴细胞性白血病通常的预后不良相关（Mao等，Br J Dermatol2001，145：117-122；Chaudhuri等，Nature2004，430：992-8）。AID在多种癌症的肿瘤细胞中的进一步表达已有报道，包括但不限于：肺癌、乳腺癌、胃癌、结肠癌、肠癌、肝癌和胆管癌（choriangiocarcinoma）（Greeve等，Blood2003，1010，3574-3580；Feldhahn等，J Exp Med2007，204，1157-1166；Kotani等，PNAS USA2007，104，1616-1620；Engels等，2008，Appl Immunohistochem Mol Morphol16，521-529；Klemm等，2009，Cancer Cell6，232-245；Palacios等，2010，Blood115（22），4488-4496；Leuenberger等，2009，Mod Pathol32，177-186；Gruber等，2010，CancerRes70，7411-7420）；炎性癌症（Marusawa2008，Int J Biochem CellBiol.40，399-402）；滤泡性淋巴瘤（Hardianti等，2004，Leukemia18，826-831；Shikata等，2012，Cancer Sci.103（3）：415-21）；甲状腺癌（Qiu等，2012，Mod Pathol25（1），36-45）；乳腺癌（Borchert等，2011，BMCCancer11：347）；Marusawa，等，2011，Adv Immunol111：109-41；Zhang等，2012，Hum Pathol43（3）：423-34；Komori等，2008，Hepatology47（3）：888-896；Hockley2010，Leukemia24（5）：1084-6；成人T细胞白血病（Nakamura等，2011，Br J Dermatol.165（2）：437-9）。以引用的方式将以上段落中的文献整体并入本文。
已报导在关节炎中具有升高的水平的AID（Xu等，Scand.J.Immunol.2009，296，2033-6）和MRL/Fas(Ipr/Ipr)小鼠狼疮模型（White等，2001，Autoimmunity44（8），585-98）。以引用的方式将以上段落中的文献整体并入本文。
本文证明了，当DSB修复受到抑制时，由AID产生的DSB的程度大大高于先前的预期，并且基因组损害的程度如此严重以至于导致细胞死亡。因此，在本文所述技术的一个实施方式中，提供了一种治疗方法，包括：（a）选择具有表达升高水平的活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）的细胞的受试者；以及（b）向所述受试者给予治疗有效量的双链断裂修复抑制剂；其中，升高水平的AID为比健康个体同类型细胞的AID水平更高的AID水平。在一些实施方式中，表达升高水平AID的细胞为B细胞。在一些实施方式中，表达升高水平AID的B细胞为癌性B细胞或与自体免疫性疾病相关的B细胞。在一些实施方式中，所述受试者可以为人类受试者。
本文提供的方法通过抑制DNA双链断裂修复来对癌症和/或自体免疫性疾病进行治疗。这一抑制证明对于表达AID的细胞而言是致命的，这是由于AID产生广泛的基因组断裂，并且以双链断裂修复抑制剂进行的治疗阻止对这些由细胞自身产生的损害进行修复。这将导致受试者体内的细胞死亡，所述细胞死亡对于表达AID的细胞（例如癌性B细胞和/或自体免疫细胞）而言是特异性的。因此，如本文所述，在一个实施方式中，提供了选择性诱导某些疾病细胞自毁、同时降低健康组织中的非预期的副作用的治疗范例。
RAD51介导的链交换修复是同源重组的组成部分，其被用于修复由辐射、交联药物或由于酶（如AID）的活性而产生的DNA双链断裂（DSB）（Klein2008，DNA Repair，7：686-93）。
RAD51（NCBI Gene ID:5888）是真核生物重组酶，具有ATP依从性DNA结合活性，并参与哺乳动物中的减数分裂重组和DNA修复。RAD51结合至DSB的单链的3′尾部，并促进与同源序列配对。进一步的步骤包括链侵入和修复（参见San Filippo等，Annual Review ofBiochemistry2008，77：229-257）。此外，RAD51已证明在抗体成熟期间具有类别转换重组的功能（Li等，PNAS1996，93：10222-7）。在某些实施方式中，DSB修复抑制剂对RAD51的表达或活性进行抑制。
在某些实施方式中，DSB修复抑制剂对下列蛋白质和/或转录子的一种或多种的表达或活性进行抑制，所述蛋白质和/或转录子包括但不限于：Rad51AP1（NCBI Gene ID:10635；例如SEQ ID NO:007（mRNA）和SEQ ID NO:114（蛋白质））；Rad51B（NCBI Gene ID:5890；例如SEQID NO:008（mRNA）和SEQ ID NO:115（蛋白质））；Rad51C（NCBI GeneID:5889例如SEQ ID NO:0163（mRNA；NM_058216）和SEQ ID NO:0164（蛋白质；NP_478123）或SEQ ID NO:0165（mRNA；NM_002876）和SEQ ID NO:0166（蛋白质；NP_002867）；Rad51D（NCBI Gene ID:5892；例如SEQ ID NO:009（mRNA）和SEQ ID NO:116（蛋白质））；XRCC2（NCBI Gene ID:7516；例如SEQ ID NO:010（mRNA）和SEQ ID NO:117（蛋白质））；XRCC3（NCBI Gene ID:7517；例如SEQ ID NO:011（mRNA）和SEQ ID NO:118（蛋白质））；RAD54（NCBI Gene ID:546；例如SEQ IDNO:012（mRNA）和SEQ ID NO:119（蛋白质））；RAD52（NCBI Gene ID:5893；例如SEQ ID NO:013（mRNA）和SEQ ID NO:120（蛋白质））；BRCA1（NCBI Gene ID:672；例如SEQ ID NO:014（mRNA）和SEQ IDNO:121（蛋白质））；BRCA2（NCBI Gene ID:675；例如SEQ ID NO:015（mRNA）和SEQ ID NO:122（蛋白质））；ATM（NCBI Gene ID:472；例如SEQ ID NO:016（mRNA）和SEQ ID NO:123（蛋白质））；ATR（NCBIGene ID:545；例如SEQ ID NO:017（mRNA）和SEQ ID NO:124（蛋白质））；MRE11（NCBI Gene ID:4361；例如SEQ ID NO:018（mRNA）和SEQ ID NO:125（蛋白质））；RAD50（NCBI Gene ID:10111:例如SEQ IDNO:019（mRNA）和SEQ ID NO:126（蛋白质））；NBS1（NCBI Gene ID:4683；例如SEQ ID NO:020（mRNA）和SEQ ID NO:127（蛋白质））；WRN（NCBI Gene ID:7486；例如SEQ ID NO:021（mRNA）和SEQ IDNO:128（蛋白质））；BLM（NCBI Gene ID:641；例如SEQ ID NO:022（mRNA）和SEQ ID NO:129））；RECQ4（NCBI Gene ID:9401；例如SEQ ID NO:023（mRNA）和SEQ ID NO:130（蛋白质））；LIG4（DNA连接酶4；NCBI Gene ID:3981；例如SEQ ID NO:024（mRNA）和SEQ IDNO:131（蛋白质））；XRCC4（NCBI Gene ID:7518；例如SEQ ID NO:025（mRNA）和SEQ ID NO:132（蛋白质））；PRKDC（DNA-PKcs7；XRCC7；NCBI Gene ID:5591；例如SEQ ID NO:026（mRNA）和SEQ ID NO:133（蛋白质））；DCLRE1C（NCBI Gene ID:64421；例如SEQ ID NO:027（mRNA）和SEQ ID NO:134（蛋白质））；XRCC6（Ku70；NCBI Gene ID:2547；例如SEQ ID NO:028（mRNA）和SEQ ID NO:135（蛋白质））；XRCC5（Ku80；NCBI Gene ID:7520；例如SEQ ID NO:029（mRNA）和SEQ ID NO:136（蛋白质））和/或XLF（NHEJ1；XRCC4样因子；NCBIGene ID:79840；例如SEQ ID NO:030（mRNA）和SEQ ID NO:137（蛋白质））。
在某些实施方式中，DSB修复抑制剂对由基因编码的一种或多种蛋白质和/或转录子的表达或活性进行抑制，所述基因选自于由下列基因所组成的组：Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；Rad51D；XRCC3；RAD54；RAD52；BRCA1；BRCA2；ATM；ATR；MRE11；RAD50；NBS1；WRN；BLM；RECQ4；LIG4；XRCC4；PRKDC；DCLRE1C；XRCC6；XRCC5；以及XLF。
在某些实施方式中，DSB修复抑制剂对由基因编码的一种或多种蛋白质和/或转录子的表达或活性进行抑制，所述基因选自于由下列基因所组成的组：Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；Rad51D；RAD54；RAD52；BRCA1；BRCA2；ATM；ATR；MRE11；RAD50；NBS1；WRN；BLM；RECQ4；LIG4；以及PRKDC。
在某些实施方式中，DSB修复抑制剂结合至下列蛋白质和/或转录子的一种或多种，所述蛋白质和/或转录子包括但不限于：Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；和/或Rad51D。
在一些实施方式中，双链断裂修复抑制剂可对Rad51家族成员（例如，Rad51；Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；Rad51D；XRCC2；XRCC3）的表达或活性进行抑制。在一些实施方式中，双链断裂修复抑制剂可对非同源性末端连接（NHEJ）蛋白成员（例如，LIG4；XRCC4；PRKDC；DCLRE1C；XRCC6；XRCC5；XLF）进行抑制。
在酵母中，Rad52已经显出介导将Rad51结合至ssDNA。BRCA2还显出起到重组中介体的作用；促进将将RAD51结合至ssDNA并可能介导Rad51易位至细胞核。RAD51B、RAD51C、RAD51D、XRCC2和XRCC3是RAD51的旁系同源基因，并且全部都在DSBR通道的HR中起作用（Yokoyama等，J Biol Chem.2003，278（4）：2767-72；Thacker，TrendsGenet.1999，15：166-168；Schild D,等，J.Biol.Chem.2000，275：16443-16449）。Rad51AP1为RAD51缔合蛋白质，促进结合至分支的DNA分子（Modesti等，Mol Cell2007，28:468-481；Dunlop等，2012，J BiolChem6，287，12343-7）。RAD54为具有dsDNA依从性ATP酶活性的蛋白质，这一活性通过RAD51的存在而得以提高。在酵母中，Rad54促进对DNA同源性的搜索、重塑染色质、形成侵入复合物、以及最终由dsRNA除去Rad51。在人体中，其已经显出在Holliday连结体的分支迁移中发挥作用。Holliday连结体为DNA修复和重组中的关键中间体（San Filippo等，Annual Review of Biochemistry2008，77:229-257；Mazina等，2012，J Biol Chem6，287（15):11820-32）。BRCA1促进RAD51介导的DSB修复并抑制交叉型修复（Cousineau等，Cancer Res，2005，65:11384-91）。ATM和ATR为蛋白质激酶。当检测到DSB时，ATM使目标磷酸化，暂停细胞周期。MRE11、RAD50和NBS1形成MRN复合物，后者使ATM应用于DSB。相反，ATR通过ssDNA活化。WRN、BLM和RECQ4是RECQ解旋酶家族成员。WRN为解旋酶和核酸外切酶，被认为能解开HR期间形成的Holliday连结体，从而减少不正确的重组（Yang等，JBiolChem Biol Chem，2002，277，31980-7）。BLM和RECQ4两者均为解旋酶，通过与RAD51相互作用而活化（Brosh等，2000，J Biol Chem，275：23500-8；Rossi等，2010，DNA Repair，9：796-804）。
XRCC2为哺乳动物同源重组因子RAD51家族的关键成员（Thacker，Biochimie1999，81：77-85；Braybrooke等，J Biol Chem2000，275：29110-6；Deans等，EMBO J2000，19：6675-6685），并且以其DSB修复功能为人所知（Johnson等，Nature1999，401：397-9）。在人类基因组中，XRCC2位于7号染色体的q36区段（cytoband q36）处（7q36），该处为在各种癌症中经常发生重排的区域（Dohner等，Blood1998，92：4031-5；Simmons等，Leukemia2002，16：2408-2416；Mao等，Br J Dermatol2001，145：117-122）。XRCC2缺陷细胞显示出增殖缺陷、对电离辐射和其它DNA破坏剂呈现超敏性、以及自发的染色体不稳定性（Deans等，EMBO J2000，19：6675-6685；Liu等，J Biomed Biotechnol2002，2：106-113；Deans等，Cancer Res2003，63：8181-7）。在早期发育的B细胞中，XRCC2对于成功增殖和基因组完整性而言是必须的（Caddle,等，2008，Mol.Cell.Biol.28，2295-2303）。具有XRCC2纯合性缺失的小鼠在妊娠中期期间死亡，这与广泛的细胞死亡有关（Deans等，EMBO J2000，19：6675-6685；Orii等，PNAS2006,103：10017-10022；Adam等，DNA Repair（Amst.）2007，6：224-234）。如本文所述和Hasham等（Nature Immunology，2010，11（9），820-826）中的描述，发明人已经发现，XRCC2缺陷的成熟B细胞中的AID表达导致广泛的、高度细胞毒性的DSB。
XRCC3为RecA/Rad51相关蛋白家族的一员，参与同源重组，从而保持染色体稳定性并修复DNA损伤。XRCC4为DNA双链断裂修复基因，对于基因组稳定性而言是重要的。已知XRCC4与DNA连接酶IV相互作用。
DSB修复抑制剂
在一些实施方式中，DSB修复抑制剂（例如，RAD51介导的链交换修复的抑制剂）可以为二苯乙烯（stilbene）衍生物。二苯乙烯衍生物可包括但不限于：二苯乙烯、反-二苯乙烯衍生物、顺-二苯乙烯衍生物、顺-二苯乙烯氧化物、反-二苯乙烯氧化物、4,4′-双(2-苯并噁唑基)二苯乙烯、4-硝基-4′-(十八烷基氨基)二苯乙烯、α,β-双(苯偶氮基)二苯乙烯、内消旋-1,2-二溴-1,2-二苯乙烷、(Z)-1,2-二苯基-1,2-亚乙基二硼酸双(频哪醇)酯、2,4-二硝基-3′,4′-(亚甲二氧基)-二苯乙烯、聚甲氧基二苯乙烯、二氢二苯乙烯、康普力停（combretastatin）、康普力停A-4、3,5,4′-三甲氧基-反-二苯乙烯、3,4,5,4′-四甲氧基二苯乙烯、白藜芦醇（resveratrol）、二乙基己烯雌酚、2,4,6-三氢菲-2-O-葡糖苷、白藜芦醇-2-C-葡糖苷、顺-ε-葡萄素（viniferin）二葡糖苷、反-ε-葡萄素二葡糖苷、pallidol葡糖苷、pallido二葡糖苷、顺-3,4′,5-三甲氧基-3′-氨基二苯乙烯、顺-3,4′,5-三甲氧基-3′-羟基二苯乙烯、秋水仙素（cholchicine）、康普力停A4-磷酸酯、脱氧丹叶大黄素（desoxyrhapontigenin）、二甲基氨基硝基二苯乙烯、丹叶大黄素、白皮杉醇（piceatannol）、4-羟基二苯乙烯、4,4′-二羟基二苯乙烯、3,5-二羟基二苯乙烯、三甲基白藜芦醇、silbamidine、二乙基己烯雌酚、parthenocissine、pallidol、quadrangularin A、quadrangularin B、quadrangularin C、ZD6126。二苯乙烯衍生物的非限制性实例包括在下列文献中公开的结构：美国专利号4,723,034、4,326,055、4,723,028、4,892,949、6,562,834、5,589,506、7,655,696、4,996,237、5,561,122、5,525,632、5,430,062、5,731,353、7,781,580、美国专利公开号US2004/0147788、US2008/071364、日本专利公开号JP-A-7-225558、JP-A-8-301831和JP-A-10-81673；Roberti等，J.Med.Chem200346：3546-54；Baderschneider and Winterhalter J of Agricultural and Food Chem200048：2681-6；Hillis and Ishikura，Journal of Chromatography A196832：323-336；Kim等，J Med Chem200245：160-4；Young等，J Am Chem Soc197294：3976-81；Iliya等，Phytochemistry200362：601-6；Aguamah等，Phytochemistry198120：1381-3；以及Kim等，J Biol Chem2002277：16340-4；以引用的方式将上述文献整体并入本文。已知的化合物和将在未来发现的二苯乙烯化合物（若此类新发现的化合物分类为二苯乙烯衍生物）归入本文所述的技术中的二苯乙烯衍生物之中。本文所述技术的二苯乙烯衍生物还包括可在受试者体内转化为二苯乙烯衍生物的生物前体或化合物。美国专利号5,525,632和以上列出的出版物中公开了二苯乙烯衍生物（可处于药学上可接受的盐、酯、水合物和溶剂化物的形式）的制造、以及包含二苯乙烯衍生物、其惰性的药学上可接受的载体和/或稀释剂的药物组合物的制造。某些二苯乙烯衍生物还是市售的，例如：顺-二苯乙烯（#S2259Sigma-Aldrich，St.Louis MO）、反-二苯乙烯（#S6382Sigma-Aldrich，St.Louis MO）、白藜芦醇（#R5010Sigma-Aldrich，St.LouisMO）、或者4,4′二异硫氰基二苯乙烯-2,2′-二磺酸（#D3514Sigma-Aldrich，St.Louis MO）。
在某些实施方式中，DSB修复抑制剂可以为RAD51介导的链交换修复抑制剂4,4′-二异硫氰基二苯乙烯-2,2′-二磺酸（DIDS；式XXVI）。
Figure BDA0000470509870000371
在一些实施方式中，本文所述为式（V）的二苯乙烯或二苯乙烯衍生物：
Figure BDA0000470509870000372
R1可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基。优选地，R1为氢、OR21、NO2、N(R22)2、OP(O)(OH)2、或者SO3R21，其中，R21和R22分别为H或C1-C4烷基。在一些实施方式中，R1为氢、OH、OCH3、NO2、NH2，OP(O)(OH)2、SO3H，或者SO3Na。
R2可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基。优选地，R2为氢、OR21、NO2、N(R22)2、OP(O)(OH)2、或者SO3R21，其中，R21和R22分别为H或C1-C4烷基。在一些实施方式中，R2为氢、OH、OCH3、NO2、NH2，OP(O)(OH)2、SO3H，或者SO3Na。
R3可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基。优选地，R3为氢、杂环基、OR21、NO2、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHSO2R21、N(R22)2、NHC(O)N(R22)2、NHC(S)N(R22)2、或者NHSO2N(R22)2，其中，R21和R22分别为H或C1-C4烷基。在一些实施方式中，R3为氢、OH、OCH3、N=C=S、NH2、NHCH3、NO2、NH-十八烷、NHC(O)CH3、NHC(O)CH(CH3)2、NHC(O)CH2OCH3、NHSO2CH3、NHSO2-环丙烷、NHSO2CH(CH3)2、NHSO2N(CH3)2、NHC(S)NHCH3、NHC(S)NHCH(CH3)2、NHC(S)NH-环丙烷、NHC(O)NHCH3、NHC(O)NHCH(CH3)2、苯并噁唑基、或者NHC(O)NH-环丙烷。
R4可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基。优选地，R4为氢、OR21、NO2、N(R22)2、OP(O)(OH)2、或者SO3R21，其中，R21和R22分别为H或C1-C4烷基。在一些实施方式中，R4为氢、OH、OCH3、NO2、NH2，OP(O)(OH)2、SO3H，或者SO3Na。
R5可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基。优选地，R5为氢、OR21、NO2、N(R22)2、OP(O)(OH)2、或者SO3R21，其中，R21和R22分别为H或C1-C4烷基。在一些实施方式中，R5为氢、OH、OCH3、NO2、NH2，OP(O)(OH)2、SO3H，或者SO3Na。
R6可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基。优选地，R6为氢、OR21、NO2、N(R22)2、OP(O)(OH)2、或者SO3R21，其中，R21和R22分别为H或C1-C4烷基。在一些实施方式中，R6为氢、OH、OCH3、NO2、NH2，OP(O)(OH)2、SO3H，或者SO3Na。
R7可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基。优选地，R7为氢、OR21、NO2、N(R22)2、OP(O)(OH)2、或者SO3R21，其中，R21和R22分别为H或C1-C4烷基。在一些实施方式中，R7为氢、OH、OCH3、NO2、NH2，OP(O)(OH)2、SO3H，或者SO3Na。
R8可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基。优选地，R8为氢、杂环基、OR21、NO2、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHSO2R21、N(R22)2、NHC(O)N(R22)2、NHC(S)N(R22)2、或者NHSO2N(R22)2，其中，R21和R22分别为H或C1-C4烷基。在一些实施方式中，R8为氢、OH、OCH3、N=C=S、NH2、NHCH3、NO2、NH-十八烷、NHC(O)CH3、NHC(O)CH(CH3)2、NHC(O)CH2OCH3、NHSO2CH3、NHSO2-环丙烷、NHSO2CH(CH3)2、NHSO2N(CH3)2、NHC(S)NHCH3、NHC(S)NHCH(CH3)2、NHC(S)NH-环丙烷、NHC(O)NHCH3、NHC(O)NHCH(CH3)2、苯并噁唑基、或者NHC(O)NH-环丙烷。
R9可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基。优选地，R9为氢、OR21、NO2、N(R22)2、OP(O)(OH)2、或者SO3R21，其中，R21和R22分别为H或C1-C4烷基。在一些实施方式中，R9为氢、OH、OCH3、NO2、NH2，OP(O)(OH)2、SO3H，或者SO3Na。
R10可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基。优选地，R10为氢、OR21、NO2、N(R22)2、OP(O)(OH)2、或者SO3R21，其中，R21和R22分别为H或C1-C4烷基。在一些实施方式中，R10为氢、OH、OCH3、NO2、NH2，OP(O)(OH)2、SO3H，或者SO3Na。
X可选自于由下列基团所组成的组：C(R21)2、-C(O)N(R22)-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-SO2-、-CH(R11)CH(R12)-、-C(R11)=C(R12)-、以及
Figure BDA0000470509870000411
优选地，X为-C(R11)=C(R12)-或者将要理解的是，当X为-C(R11)=C(R12)-或者
Figure BDA0000470509870000413
时，取代基R11和R12可以顺式或反式构象存在。另外，当X为
Figure BDA0000470509870000414
时，连接至R11和R12的碳可各自独立地具有R构型或S构型。因此，X可以为
Figure BDA0000470509870000415
Figure BDA0000470509870000416
或
Figure BDA0000470509870000417
R11可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基。优选地，R11为氢、C1-C10烷基、卤素、OR21、环基、或杂环基。在一些实施方式中，R11为氢、甲基、乙基、OH、OCH3、Br、N2-苯基、
Figure BDA0000470509870000421
R12可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基。在一些实施方式中，R12为氢。
另外，R11和R12可以相同或不同。在一些实施方式中，R11和R12均为氢。在一些实施方式中，X为-CH2CH2-、-CH=CH-、
Figure BDA0000470509870000422
或
每一R21均可独立地选自于由下列基团所组成的组：氢、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、以及以上基团的任意组合。优选地，R21为氢或者直链或支链的C1-C10亚烷基。在一些实施方式中，R21可以为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、叔丁基、环丙基、或者CH2OCH3。
每一R22均可独立地选自于由下列基团所组成的组：氢、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、以及以上基团的任意组合。优选地，R22为氢或者直链或支链的C1-C10亚烷基。在一些实施方式中，R22可以为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、叔丁基、或者环丙基。
R3和R8可相同或不同。因此，在一些实施方式中，R3和R8可独立地选自于由下列基团所组成的组：氢、杂环基、OR21、NO2、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHSO2R21、N(R22)2、NHC(O)N(R22)2、NHC(S)N(R22)2、以及NHSO2N(R22)2，其中，R21可以为H或C1-C4烷基，且R22可以为H或C1-C10烷基。例如，R3和R8可独立地选自于由下列基团所组成的组：氢、OH、OCH3、N=C=S、NH2、NHCH3、NO2、NH-十八烷、NHC(O)CH3、NHC(O)CH(CH3)2、NHC(O)CH2OCH3、NHSO2CH3、NHSO2-环丙烷、NHSO2CH(CH3)2、NHSO2N(CH3)2、NHC(S)NHCH3、NHC(S)NHCH(CH3)2、NHC(S)NH-环丙烷、NHC(O)NHCH3、NHC(O)NHCH(CH3)2、苯并噁唑基、或者NHC(O)NH-环丙烷。
在一些实施方式中，R3和R8的至少一者不为氢。在一些实施方式中，R3和R8均不为氢。
在一些实施方式中，R3和R8是不同的，并独立地选自于由下列基团所组成的组：氢、OH、OCH3、N=C=S、NH2、NHCH3、NO2、NH-十八烷、NHC(O)CH3、NHC(O)CH(CH3)2、NHC(O)CH2OCH3、NHSO2CH3、NHSO2-环丙烷、NHSO2CH(CH3)2、NHSO2N(CH3)2、NHC(S)NHCH3、NHC(S)NHCH(CH3)2、NHC(S)NH-环丙烷、NHC(O)NHCH3、NHC(O)NHCH(CH3)2、苯并噁唑基、或者NHC(O)NH-环丙烷。例如，R3和R8之一可以为H且另一者可以为NH2；R3和R8之一可以为H且另一者可以为NHCH3；R3和R8之一可以为H且另一者可以为N(CH3)2；R3和R8之一可以为H且另一者可以为NHC(O)CH3；R3和R8之一可以为H且另一者可以为NHC(O)CH(CH3)2；R3和R8之一可以为H且另一者可以为NHC(O)CH2OCH3；R3和R8之一可以为H且另一者可以为NHSO2-CH3；R3和R8之一可以为H且另一者可以为NHSO2-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为H且另一者可以为NHSO2-环丙烷；R3和R8之一可以为H且另一者可以为NHSO2-NHCH3；R3和R8之一可以为H且另一者可以为NHSO2-N(CH3)2；R3和R8之一可以为H且另一者可以为NHSO2-NHCH(CH3)2；R3和R8之一可以为H且另一者可以为NHSO2-NH-环丙烷；R3和R8之一可以为H且另一者可以为NHC(S)NH-CH3；R3和R8之一可以为H且另一者可以为NHC(S)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为H且另一者可以为NHC(S)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为H且另一者可以为NHC(O)NH-CH3；R3和R8之一可以为H且另一者可以为NHC(O)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为H且另一者可以为NHC(O)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NH2且另一者可以为NHCH3；R3和R8之一可以为NH2且另一者可以为N(CH3)2；R3和R8之一可以为NH2且另一者可以为NHC(O)CH3；R3和R8之一可以为NH2且另一者可以为NHC(O)CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NH2且另一者可以为NHC(O)CH2OCH3；R3和R8之一可以为NH2且另一者可以为NHSO2-CH3；R3和R8之一可以为NH2且另一者可以为NHSO2-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NH2且另一者可以为NHSO2-环丙烷；R3和R8之一可以为NH2且另一者可以为NHSO2-NHCH3；R3和R8之一可以为NH2且另一者可以为NHSO2-N(CH3)2；R3和R8之一可以为NH2且另一者可以为NHSO2-NHCH(CH3)2；R3和R8之一可以为NH2且另一者可以为NHSO2-NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NH2且另一者可以为NHC(S)NH-CH3；R3和R8之一可以为NH2且另一者可以为NHC(S)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NH2且另一者可以为NHC(S)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NH2且另一者可以为NHC(O)NH-CH3；R3和R8之一可以为NH2且另一者可以为NHC(O)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NH2且另一者可以为NHC(O)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHCH3且另一者可以为N(CH3)2；R3和R8之一可以为NHCH3且另一者可以为NHC(O)CH3；R3和R8之一可以为NHCH3且另一者可以为NHC(O)CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHCH3且另一者可以为NHC(O)CH2OCH3；R3和R8之一可以为NHCH3且另一者可以为NHSO2-CH3；R3和R8之一可以为NHCH3且另一者可以为NHSO2-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHCH3且另一者可以为NHSO2-环丙烷；R3和R8之一可以为NHCH3且另一者可以为NHSO2-NHCH3；R3和R8之一可以为NHCH3且另一者可以为NHSO2-N(CH3)2；R3和R8之一可以为NHCH3且另一者可以为NHSO2-NHCH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHCH3且另一者可以为NHSO2-NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHCH3且另一者可以为NHC(S)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHCH3且另一者可以为NHC(S)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHCH3且另一者可以为NHC(S)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHCH3且另一者可以为NHCO)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHCH3且另一者可以为NHC(O)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHCH3且另一者可以为NHC(O)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为N(CH3)2且另一者可以为NHC(O)CH3；R3和R8之一可以为N(CH3)2且另一者可以为NHC(O)CH(CH3)2；R3和R8之一可以为N(CH3)2且另一者可以为NHC(O)CH2OCH3；R3和R8之一可以为N(CH3)2且另一者可以为NHSO2-CH3；R3和R8之一可以为N(CH3)2且另一者可以为NHSO2-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为N(CH3)2且另一者可以为NHSO2-环丙烷；R3和R8之一可以为N(CH3)2且另一者可以为NHSO2-NHCH3；R3和R8之一可以为N(CH3)2且另一者可以为NHSO2-N(CH3)2；R3和R8之一可以为N(CH3)2且另一者可以为NHSO2-NHCH(CH3)2；R3和R8之一可以为N(CH3)2且另一者可以为NHSO2-NH-环丙烷；R3和R8之一可以为N(CH3)2且另一者可以为NHC(S)NH-CH3；R3和R8之一可以为N(CH3)2且另一者可以为NHC(S)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为N(CH3)2且另一者可以为NHC(S)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为N(CH3)2且另一者可以为NHC(O)NH-CH3；R3和R8之一可以为N(CH3)2且另一者可以为NHC(O)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为N(CH3)2且另一者可以为NHC(O)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHC(O)CH3且另一者可以为NHC(O)CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(O)CH3且另一者可以为NHC(O)CH2OCH3；R3和R8之一可以为NHC(O)CH3且另一者可以为NHSO2-CH3；R3和R8之一可以为NHC(O)CH3且另一者可以为NHSO2-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(O)CH3且另一者可以为NHSO2-环丙烷；R3和R8之一可以为NHC(O)CH3且另一者可以为NHSO2-NHCH3；R3和R8之一可以为NHC(O)CH3且另一者可以为NHSO2-N(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(O)CH3且另一者可以为NHSO2-NHCH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(O)CH3且另一者可以为NHSO2-NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHC(O)CH3且另一者可以为NHC(S)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHC(O)CH3且另一者可以为NHC(S)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(O)CH3且另一者可以为NHC(S)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHC(O)CH3且另一者可以为NHC(O)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHC(O)CH3且另一者可以为NHC(O)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(O)CH3且另一者可以为NHC(O)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHC(O)CH(CH3)2且另一者可以为NHC(O)CH2OCH3；R3和R8之一可以为NHC(O)CH(CH3)2且另一者可以为NHSO2-CH3；R3和R8之一可以为NHC(O)CH(CH3)2且另一者可以为NHSO2-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(O)CH(CH3)2且另一者可以为NHSO2-环丙烷；R3和R8之一可以为NHC(O)CH(CH3)2且另一者可以为NHSO2-NHCH3；R3和R8之一可以为NHC(O)CH(CH3)2且另一者可以为NHSO2-N(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(O)CH(CH3)2且另一者可以为NHSO2-NHCH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(O)CH(CH3)2且另一者可以为NHSO2-NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHC(O)CH(CH3)2且另一者可以为NHC(S)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHC(O)CH(CH3)2且另一者可以为NHC(S)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(O)CH(CH3)2且另一者可以为NHC(S)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHC(O)CH(CH3)2且另一者可以为NHC(O)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHC(O)CH(CH3)2且另一者可以为NHC(O)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(O)CH(CH3)2且另一者可以为NHC(O)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHC(O)CH2OCH3且另一者可以为NHSO2-CH3；R3和R8之一可以为NHC(O)CH2OCH3且另一者可以为NHSO2-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(O)CH2OCH3且另一者可以为NHSO2-环丙烷；R3和R8之一可以为NHC(O)CH2OCH3且另一者可以为NHSO2-NHCH3；R3和R8之一可以为NHC(O)CH2OCH3且另一者可以为NHSO2-N(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(O)CH2OCH3且另一者可以为NHSO2-NHCH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(O)CH2OCH3且另一者可以为NHSO2-NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHC(O)CH2OCH3且另一者可以为NHC(S)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHC(O)CH2OCH3且另一者可以为NHC(S)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(O)CH2OCH3且另一者可以为NHC(S)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHC(O)CH2OCH3且另一者可以为NHC(O)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHC(O)CH2OCH3且另一者可以为NHC(O)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(O)CH2OCH3且另一者可以为NHC(O)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-CH3且另一者可以为NHSO2-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-CH3且另一者可以为NHSO2-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-CH3且另一者可以为NHSO2-NHCH3；R3和R8之一可以为NHSO2-CH3且另一者可以为NHSO2-N(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-CH3且另一者可以为NHSO2-NHCH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-CH3且另一者可以为NHSO2-NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-CH3且另一者可以为NHC(S)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHSO2-CH3且另一者可以为NHC(S)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-CH3且另一者可以为NHC(S)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-CH3且另一者可以为NHC(O)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHSO2-CH3且另一者可以为NHC(O)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-CH3且另一者可以为NHC(O)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-CH(CH3)2且另一者可以为NHSO2-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-CH(CH3)2且另一者可以为NHSO2-NHCH3；R3和R8之一可以为NHSO2-CH(CH3)2且另一者可以为NHSO2-N(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-CH(CH3)2且另一者可以为NHSO2-NHCH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-CH(CH3)2且另一者可以为NHSO2-NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-CH(CH3)2且另一者可以为NHC(S)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHSO2-CH(CH3)2且另一者可以为NHC(S)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-CH(CH3)2且另一者可以为NHC(S)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-CH(CH3)2且另一者可以为NHC(O)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHSO2-CH(CH3)2且另一者可以为NHC(O)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-CH(CH3)2且另一者可以为NHC(O)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-环丙烷且另一者可以为NHSO2-NHCH3；R3和R8之一可以为NHSO2-环丙烷且另一者可以为NHSO2-N(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-环丙烷且另一者可以为NHSO2-NHCH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-环丙烷且另一者可以为NHSO2-NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-环丙烷且另一者可以为NHC(S)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHSO2-环丙烷且另一者可以为NHC(S)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-环丙烷且另一者可以为NHC(S)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-环丙烷且另一者可以为NHC(O)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHSO2-环丙烷且另一者可以为NHC(O)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-环丙烷且另一者可以为NHC(O)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-NHCH3且另一者可以为NHSO2-N(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-NHCH3且另一者可以为NHSO2-NHCH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-NHCH3且另一者可以为NHSO2-NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-NHCH3且另一者可以为NHC(S)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHSO2-NHCH3且另一者可以为NHC(S)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-NHCH3且另一者可以为NHC(S)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-NHCH3且另一者可以为NHC(O)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHSO2-NHCH3且另一者可以为NHC(O)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-NHCH3且另一者可以为NHC(O)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-N(CH3)2且另一者可以为NHSO2-NHCH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-N(CH3)2且另一者可以为NHSO2-NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-N(CH3)2且另一者可以为NHC(S)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHSO2-N(CH3)2且另一者可以为NHC(S)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-N(CH3)2且另一者可以为NHC(S)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-N(CH3)2且另一者可以为NHC(O)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHSO2-N(CH3)2且另一者可以为NHC(O)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-N(CH3)2且另一者可以为NHC(O)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-NHCH(CH3)2且另一者可以为NHSO2-NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-NHCH(CH3)2且另一者可以为NHC(S)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHSO2-NHCH(CH3)2且另一者可以为NHC(S)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-NHCH(CH3)2且另一者可以为NHC(S)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-NHCH(CH3)2且另一者可以为NHC(O)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHSO2-NHCH(CH3)2且另一者可以为NHC(O)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-NHCH(CH3)2且另一者可以为NHC(O)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-NH-环丙烷且另一者可以为NHC(S)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHSO2-NH-环丙烷且另一者可以为NHC(S)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-NH-环丙烷且另一者可以为NHC(S)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHSO2-NH-环丙烷且另一者可以为NHC(O)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHSO2-NH-环丙烷且另一者可以为NHC(O)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHSO2-NH-环丙烷且另一者可以为NHC(O)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHC(S)NHCH3且另一者可以为NHC(S)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(S)NHCH3且另一者可以为NHC(S)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHC(S)NHCH3且另一者可以为NHC(O)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHC(S)NHCH3且另一者可以为NHC(O)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(S)NHCH3且另一者可以为NHC(O)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHC(S)NH-CH(CH3)2且另一者可以为NHC(S)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHC(S)NH-CH(CH3)2且另一者可以为NHC(O)NH-CH3；R3和R8之一可以为NHC(S)NH-CH(CH3)2且另一者可以为NHC(O)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(S)NH-CH(CH3)2且另一者可以为NHC(O)NH-环丙烷；R3和R8之一可以为NHC(O)NH-CH3且另一者可以为NHC(O)NH-CH(CH3)2；R3和R8之一可以为NHC(O)NH-CH3且另一者可以为NHC(O)NH-环丙烷；或者R3和R8之一可以为NHC(O)NH-CH(CH3)2且另一者可以为NHC(O)NH-CH(CH3)2.
在一些实施方式中，R3和R8两者可均为N=C=S、NH2、NHC(O)CH3、NHC(O)CH(CH3)2、NHC(O)CH2OCH3、NHSO2CH3、NHSO2-环丙烷、NHSO2CH(CH3)2、NHSO2N(CH3)2、NHC(S)NHCH3、NHC(S)NHCH(CH3)2、NHC(S)NH-环丙烷、NHC(O)NHCH3、NHC(O)NHCH(CH3)2、或者NHC(O)NH-环丙烷。
在一些实施方式中，R1和R6中的至少一个（例如，之一或两者）为SO3R21。例如，R1和R6中的至少一个（例如，之一或两者）为SO3H或其盐。
在一些实施方式中，R1和R6中的至少一个（例如，之一或两者）可以为SO3R21，且R3和R8可独立地选自于由下列基团所组成的组：氢、杂环基、OR21、NO2、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHSO2R21、N(R22)2、NHC(O)N(R22)2、NHC(S)N(R22)2、以及NHSO2N(R22)2，其中，R21和R22独立地为H或C1-C4烷基。例如，R1和R6中的至少一个（例如，之一或两者）可以为SO3H，且R3和R8可独立地选自于由下列基团所组成的组：氢、OH、OCH3、N=C=S、NH2、NHCH3、NO2、NH-十八烷、NHC(O)CH3、NHC(O)CH(CH3)2、NHC(O)CH2OCH3、NHSO2CH3、NHSO2-环丙烷、NHSO2CH(CH3)2、NHSO2N(CH3)2、NHC(S)NHCH3、NHC(S)NHCH(CH3)2、NHC(S)NH-环丙烷、NHC(O)NHCH3、NHC(O)NHCH(CH3)2、苯并噁唑基、或者NHC(O)NH-环丙烷。
在一些实施方式中，R1和R6中的至少一个（例如，之一或两者）可以为SO3R21，且R3和R8相同，选自于由下列基团所组成的组：氢、N=C=S、NHC(O)R21、NHSO2R21、N(R22)2、NHC(O)N(R22)2、NHC(S)N(R22)2、以及NHSO2N(R22)2。例如，R1和R6中的至少一个（例如，之一或两者）可以为SO3H，且R3和R8相同，可选自于由下列基团所组成的组：氢、N=C=S、NH2、NHC(O)CH3、NHC(O)CH(CH3)2、NHC(O)CH2OCH3、NHSO2CH3、NHSO2-环丙烷、NHSO2CH(CH3)2、NHSO2N(CH3)2、NHC(S)NHCH3、NHC(S)NHCH(CH3)2、NHC(S)NH-环丙烷、NHC(O)NHCH3、NHC(O)NHCH(CH3)2、以及NHC(O)NH-环丙烷。
在一些实施方式中，R1-R10中的1个、2个、3个、4个、5个或6个为OH或OCH3。
式（V）的化合物包括其药学上可接受的盐、立体异构体混合物和对映体。本文所述技术的化合物还可包括式（V）的化合物的生理学上可接受的盐。式（V）的化合物可以外消旋混合物存在、或以实质上纯的立体异构体或对映体存在。
制造二苯乙烯的方法在本领域中是公知的，并且在例如下列文献中有描述：美国专利号7,321,050；6,022,998；6,177,220；5,068,300；3,387,050；5,563,298；7,820,848；8,101,804；6,218,108；以及7,714,161；美国专利公开号2007/0276172和2004/0143023；Likhtenstein，Gertz I，“StilbenesSynthesis and Applications”，Kirk-Othmer Encyclopedia of ChemicalTechnology.2000，John Wiley&Sons，Inc.；Likhtenshtein,G，“StilbenesPreparation and Analysis，Applications in Chemistry,Life Sciences andMaterials Science，2010，Wiley-VCH；以引用的方式将其整体并入本文。二苯乙烯和二苯乙烯衍生物的合成还可作为商业服务获得（例如，Mercachem，Nijmegen，Netherlands；Proteros，Martinsried，Germany；AMRI，Albany，NY；WuXi Apptec，Shanghai，China；以及RichmanChemical Inc.，Gwynedd，PA）。在一些实施方式中，可将二苯乙烯进一步官能化为酰胺和磺酰胺衍生物。
式（V）的一些示例性化合物为：(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))二乙酰胺；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(2-甲基丙酰胺)；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(2-甲氧基乙酰胺)；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))二甲烷磺酰胺；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))二环丙烷磺酰胺；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(丙烷-2-磺酰胺)；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(二甲基氨基-磺酰胺)；(E)-N-(4-(4-氨基苯乙烯基)苯基)丙烷-2-磺酰胺；(E)-1,1′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(3-甲基硫脲)；(E)-1,1′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(3-异丙基硫脲)；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)乙酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)异丁酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-2-甲氧基乙酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)甲烷磺酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)环丙烷磺酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)丙烷-2-磺酰胺；N′-(4-{(E)-2-[4-(二甲基氨基)苯基]-1-乙烯基}苯基)-N,N-二甲基磺酰胺；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-甲基硫脲；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-异丙基硫脲；(E)-1-环丙基-3-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)硫脲；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-甲基脲；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-异丙基脲；(E)-1-环丙基-3-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)脲；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-乙酰胺基苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-异丁酰胺基苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(2-甲氧基乙酰胺基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(环丙烷磺酰胺基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(1-甲基乙基磺酰胺基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-乙酰胺基苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-异丁酰胺基苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(2-甲氧基乙酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(甲基磺酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(环丙烷磺酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(1-甲基乙基磺酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-环丙基硫脲基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-乙基脲基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸)钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(环丙烷磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-环丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(甲基磺酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-环丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-乙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-乙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-甲基硫脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-甲基硫脲基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-异丙基硫脲基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-乙基脲基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸)钠；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N-甲基苯甲酰胺)；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N-异丙基苯甲酰胺)；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N,N-二甲基苯甲酰胺)；(E)-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(吗啉代甲酮)；以及(E)-5-(4-羟基苯乙烯基)苯-1,3-二醇(3,5,4′-三羟基-反-二苯乙烯)。
在一些实施方式中，所述二苯乙烯衍生物可选自于由下列化合物所组成的组：(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(环丙烷磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(环丙烷磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠（式VI，本文中也称为BB5-4）；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)环丙烷磺酰胺（式VII，本文中也称为BB2-5）；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(丙烷-2-磺酰胺)（式VIII，本文中也称为BB1-6）；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(二甲基氨基-磺酰胺)（式IX，本文中也称为BB1-7）；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)丙烷-2-磺酰胺（式X，本文中也称为BB2-6）；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠（式XI，本文中也称为BB5-39）；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸）；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸)钠（式XII，本文中也称为BB4B-2）；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠（式XIII，本文中也称为BB5-47）；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N-甲基苯甲酰胺)（式XIV，本文中也称为BB8-1）；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠（式XXIII，本文中也称为BB5-6）；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-环丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠（式XXVII）；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠（式XXVIII）；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠（式XXIX）；以及(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠（式XXX）。
Figure BDA0000470509870000551
Figure BDA0000470509870000561
Figure BDA0000470509870000571
在某些实施方式中，二苯乙烯衍生物可选自于下列化合物所组成的组：(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(环丙烷磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠（式VI）；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-环丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠（式XXVII）；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠（式XXIX）；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠（式XXVIII）；以及6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸钠（式XII，本文中也称为BB4B-2）。
在一些实施方式中，二苯乙烯衍生物可以为(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(环丙烷磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐。在一些实施方式中，二苯乙烯衍生物可具有式XXIV的结构：
其中，X可以为任何药学上可接受的盐阳离子。作为非限制性实例，X可以为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
在一些实施方式中，二苯乙烯衍生物可以为(E)-5-乙酰胺基-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐。在一些实施方式中，二苯乙烯衍生物可具有式XXV的结构：
Figure BDA0000470509870000573
其中，X可以为任何药学上可接受的盐阳离子。作为非限制性实例，X可以为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
在一些实施方式中，二苯乙烯衍生物可以为(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-环丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐。在一些实施方式中，二苯乙烯衍生物可具有式XXXI的结构：
Figure BDA0000470509870000581
其中，X可以为任何药学上可接受的盐阳离子。作为非限制性实例，X可以为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
在一些实施方式中，二苯乙烯衍生物可以为(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐。在一些实施方式中，二苯乙烯衍生物可具有式XXXII的结构：
Figure BDA0000470509870000582
其中，X可以为任何药学上可接受的盐阳离子。作为非限制性实例，X可以为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
在一些实施方式中，二苯乙烯衍生物可以为(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐。在一些实施方式中，二苯乙烯衍生物可具有式XXXIII的结构：
Figure BDA0000470509870000583
其中，X可以为任何药学上可接受的盐阳离子。作为非限制性实例，X可以为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
在一些实施方式中，二苯乙烯衍生物可以为6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸盐)。在一些实施方式中，二苯乙烯衍生物可具有式XXXIV的结构：
Figure BDA0000470509870000591
其中，X可以为任何药学上可接受的盐阳离子。作为非限制性实例，X可以为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
在一些实施方式中，二苯乙烯衍生物可以为(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐。在一些实施方式中，二苯乙烯衍生物可具有式XXXV的结构：
Figure BDA0000470509870000592
其中，X可以为任何药学上可接受的盐阳离子。作为非限制性实例，X可以为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
在一些实施方式中，本文以上所述的二苯乙烯和二苯乙烯衍生物可以是双链断裂修复抑制剂。在一些实施方式中，可将本文以上所述的二苯乙烯和二苯乙烯衍生物用于本文所述的方法。
在一些实施方式中，双链断裂修复抑制剂可以为二苯乙烯类化合物（stilbenoid）。本文所使用的“二苯乙烯类化合物”为氢化的二苯乙烯衍生物。二苯乙烯类化合物的非限制性实例包括但不限于：白藜芦醇；糖苷配基（aglycones）；picetannol；赤松素；紫檀芪（pterostilbene）；α-葡萄素；蛇葡萄素A（ampelopsin A）；蛇葡萄素E；diptoindonesin C；diptoindonesin F；ε-葡萄素；flexuosol A；gnetin H；hemsleyanol D；hopeaphenol；反-diptoindonesin B；vaticanol B；astringin；云杉新甙（piceid）；diptoindonesin A。
在本文提供的某些实施方式中，抑制剂可以为藻纹苔酸（salazinicacid，式I）（Pubchem Substance ID:24840333；Compound A03）。藻纹苔酸也可称为1,4,10-三羟基-5-(羟基甲基)-8-甲基-3,7-二氧代-1,3-二氢-7H-2,6,12-三氧杂苯并[5,6]环庚[1,2-e]茚-11-甲醛。
Figure BDA0000470509870000601
在本文提供的某些实施方式中，抑制剂可以为斑点酸（stictic acid，式II）（Pubchem Substance ID:24840609；Compound A10）。这一化合物也称为NSC-87511、scopularic acid、sterocaulonic acid；以及1,3-二氢-1,4-二羟基-10-甲氧基-5,8-二甲基-3,7-二氧代-7H-异苯并呋喃并[4,5-b][1,4]苯并二氧杂环庚烯-11-甲醛。
Figure BDA0000470509870000602
在本文提供的某些实施方式中，抑制剂可以为STK856883（式III）（Pubchem Substance ID:24787209；Compound B02）。这一化合物也可称为3-苯甲基-2-[(E)-2-吡啶-3-基乙烯基]喹唑啉-4-酮。STK856883已被认定为是RAD51抑制剂（Huang等，ACS Chem Biol.2011Mar23）。
Figure BDA0000470509870000603
在本文提供的某些实施方式中，抑制剂可以为4′-溴-3′硝基苯丙酮（式IV）（Calbiochem Cat:No.323115）。4′-溴-3′-硝基苯丙酮也称为NS-123或1-(4-溴-3-硝基苯基)丙-1-酮，如WO2009036297中的描述，为细胞可透过性硝基苯丙酮化合物，可优先地增强电离辐射的肿瘤生长抑制效应（在U251、HT-29和A549肿瘤细胞中为5μM，并且在U251异种移植大鼠模型中为50mg/kg，i.p.）并且对正常人类胶质细胞、斑马鱼胚胎和裸小鼠不具有明显影响。其已经显出增强未修复双链DNA断裂的累积、并延长损伤依从性信号传递。
在一些实施方式中，抑制剂可选自于由下列化合物所组成的组：4-甲基喹唑啉-2-甲醛（式XV）；苯并[h]异喹啉-6-胺（式XVI）；5,6-二甲基-2-巯基甲基苯并咪唑（式XVII）；(E)-1-(2-羟基苯基)-3-(吡啶-3-基)丙-2-烯-1-酮（式XVIII）；N4-丁基-6-氯嘧啶-2,4-二胺（式XIX）；1-黄华碱（1-thermopsine，式XX）；6-氨基-5-亚硝基-2-苯基嘧啶-4(1H)-酮（式XXI）；以及4-(2-氨基-4-硝基苯基氨基)苯酚（式XXII）。
Figure BDA0000470509870000612
Figure BDA0000470509870000621
在一些实施方式中，抑制剂可选自于由下列化合物所组成的组：7-氮杂吲哚-3-甲醛（CAS4649-09-6）；2-氨基-4-苯基苯酚（CAS1134-36-7）；3-(1-甲基-3-吡咯烷基)吲哚（CAS3671-00-9）；1-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-a]喹诺酮（CAS35359-22-9）；2-氨基-5-硝基-1H-苯并咪唑（CAS6232-92-4）；2-(5-硝基-2-亚糠基)氨基乙醇-N-氧化物（CAS19561-70-7；硝呋隆（Nifuratrone））；α-巯基-N,2-萘基乙酰胺基（CAS93-42-5；巯萘剂（Thionalide））；（CAS486-90-8；1-thermospine）；N4-丁基-6-氯-2,4-嘧啶二胺（CAS5457-91-0）；2-(2-羟基-6-丙烷-2-基氧基-环己基)乙酸（CAS7248-04-6）；6-氨基-5-亚硝基-2-苯基-1H-嘧啶-4-酮（CAS5466-66-0）；4-氨基-2-羟基苯基)胂酸（CAS6318-57-6）；螺[1,2-二氢茚-3,5′-咪唑啉]-2′,4′-二酮（CAS6252-98-8）；N～4～-(4-甲氧基苯基)-6-甲基嘧啶-2,4-二胺（CAS93001-35-5）；2-氨基-9-戊基-3H-嘌呤-6-硫酮（CAS24397-98-6）；2-(4-甲氧基苯基)-3-(吡啶-3-基)丙-2-烯腈（CAS92437-25-7）；2-氯嘧啶-4,6-二甲酰胺（CAS7150-30-3）；2-氨基-3H-吩噁嗪-3-酮（CAS1916-59-2）；2-甲基-N-苯甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；4-(苯甲基氨基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶;NSC-106570（CAS1866-43-9；罗咯啶（Rolodine））；2-氨基-1-萘磺酸（CAS81-16-3）；N-仲丁基-3-甲基苯甲酰胺（NSC34983）；苯并[h]异喹啉-6-胺；以及2-(2-甲基环己亚基)肼甲酰胺。
在某些实施方式中，DSB修复抑制剂可以为ATM抑制剂。在某些实施方式中，所述抑制剂为2-吗啉-4-基-6-噻蒽-1-基-吡喃-4-酮（KU-55933，S1092Selleck Chemicals LLC：Houston，TX；WO/03070726）或2-((2R,6S)-2,6-二甲基-吗啉-4-基)-N-[5-(6-吗啉-4-基-4-氧代-4H-吡喃-2-基)-9H-噻吨-2-基]-乙酰胺（KU-60019或KU60019；WO/2007/026157；S1570Selleck Chemicals LLC；Houston TX；Mol Cancer Ther2009，8（10）：2894-2902）。同样作为非限制性实例，DSB修复抑制剂可以为如欧洲专利EP1946757以及WO03/070726和WO2005/016919中描述的化合物。
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在本文提供的某些实施方式中，DSB修复抑制剂是使任何促进DSB修复的基因或蛋白的表达或活性降低的抑制剂。这些基因或蛋白可以是参与DSB修复和RAD51-介导的链交换的酶，或对参与DSB修复的酶活性进行控制的调控或支架基因或蛋白。如果基因或蛋白的表达或活性的降低导致DSB修复的降低，则认为该基因或蛋白是促进DSB修复的基因或蛋白。相对于对照（所测试的基因或蛋白的正常表达或活性），DSB修复的降低可以是约5%、约10%、约20%、约30%、约40%、约50%、约60%、约70%、约80%、约90%、约100%、约125%、约150%以上。可以通过本领域技术人员公知的方法测定DSB修复。通过非限定性实例的方式，可通过比色或免疫荧光检测H2AX-S139PO4（γ-H2AX，磷酸化的组蛋白2A）灶点测定DSB修复（Rogakou等，J Biol Chem1998，273:5858-5868；Rothkamm和
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，Proc Natl Acad Sci USA，2003，100（9):5057-5062；Redon等，Aging2011，3（2）:168-74；Rakiman等2008，Advanced Biotech39）。通过非限定实例的方式，可通过检测γ-H2AX的磷酸化来测定DSB的修复。通过非限定实例的方式，可通过COMET分析测定DSB修复（Orlow等2008，J.Clin.Oncol.26，3560-3566；Muller等1994，International Journal of Radiation Biology65，315-319；Fairbairn等1995，Mutation Research/Reviews in Genetic Toxicology339，37-59）。通过非限定实例的方式，可通过测定RAD51介导的链交换（DSB修复的组成）评估DSB修复。可根据Ishida等，Nucleic Acids Res200937:3367-3376描述的体外链交换分析来测定RAD51介导的链交换。上述段落中的全部参考文献以引用的方式将其实体并入本文。
在本文提供的某些实施方式中，DSB修复抑制剂是使一种或多种下列蛋白的表达或活性降低的抑制剂，包括但不限于：Rad51AP1（NCBIGene ID：10635；SEQ ID NO：007）；Rad51B（NCBI Gene ID：5890；SEQ ID NO：008）；Rad51D（NCBI Gene ID：5892；SEQ ID NO；009）；Rad51C（NCBI Gene ID：5889，如SEQ ID NO：0163（mRNA；NM_058216）和SEQ ID NO：0164（蛋白；NP_478123）或SEQ ID NO：0165（mRNA；NM_002876）和SEQ ID NO：0166（蛋白；NP_002867）；XRCC2（NCBIGene ID：7516；SEQ ID NO：010）；XRCC3（NCBI Gene ID：7517；SEQID NO：011）；RAD54（NCBI Gene ID：546；SEQ ID NO：012）；RAD52（NCBI Gene ID：5893；SEQ ID NO：013）；BRCA1（NCBI Gene ID：672；SEQ ID NO：014）；BRCA2（NCBI Gene ID：675；SEQ ID NO：015）；ATM（NCBI Gene ID：472；SEQ ID NO：016）；ATR（NCBI GeneID：545；SEQ ID NO：017）；MRE11（NCBI Gene ID：4361；SEQ ID NO：018）；RAD50（NCBI Gene ID：10111；SEQ ID NO：019）；NBS1（NCBIGene ID：4683；SEQ ID NO：020）；WRN（NCBI Gene ID：7486；SEQID NO：021）；BLM（NCBI Gene ID：641；SEQ ID NO：022）；RECQ4（NCBI Gene ID：9401；SEQ ID NO：023）；LIG4（DNA连接酶4；NCBIGene ID：3981；SEQ ID NO：024；XRCC4（NCBI Gene ID：7518；SEQID NO：025）；PRKDC（DNA-PKcs7；XRCC7；NCBI Gene ID：5591；SEQ ID NO：026）；DCLRE1C（NCBI Gene ID：64421；SEQ ID NO：027）；XRCC6（Ku70；NCBI Gene ID：2547；SEQ ID NO：028）；XRCC5（Ku80；NCBI Gene ID：7520；SEQ ID NO：029）和/或XLF（NHEJ1；XRCC4样因子；NCBI Gene ID：79840；SEQ ID NO：030）。
DSB修复抑制剂可以是核酸（DNA或RNA）、小分子、适配体、蛋白、肽、抗体、含有抗体的表位结合片段的多肽、抗体片段、肽核酸（PNA）、锁核酸（LNA）或核酶。在一些实施方式中，DSB修复抑制剂可选自于由下列抑制剂所组成的组：小分子、适配体、蛋白、肽、抗体、含有抗体的表位结合片段的多肽、抗体片段和肽核酸（PNA）。
LNA碱基是核糖核苷酸类似物，其在核糖环的2′氧和4′碳之间含有亚甲基连接（Koshkin A.A.，1998，Tetrahedron，54:3607-3630；Obika S.，1998，Tetrahedron Lett.，39:5401-5404）。糖部分的约束引起锁紧的3′-内部构型，从而将杂交的碱基预排列，并将解链温度（Tm）值升高约10℃/碱基（Wengel J.，1999，Acc.Chem.Res.，32:301-310；Braasch D.A.和Corey，D.R.，2001,Chem.Biol.，8:1-7）。可通过用于DNA合成的标准方案将LNA碱基加入寡核苷酸当。加至寡聚物的5′和3′端时，LNA碱基的引入还赋予了对核酸酶的耐受性（Crinelli R.等，2002，Nucleic AcidsRes.，30:2435-2443）。在一些实施方式中，所述基因沉默剂是LNA-DNA嵌合体。含有LNA的寡聚物的合成为本领域所知，例如在美国专利号6316198、6670461、6794499、6977295、6998484、7053195以及美国专利公开号US2004/0014959中所述，上述全部文献以引用的方式将其实体并入本文。
在一些实施方式中，DSB抑制剂包含的RNA干涉序列选自于由下列序列所组成的组：
SEQ ID NO:050，SEQ ID NO：051，SEQ ID NO：052，SEQ ID NO：053，SEQ ID NO:054，SEQ ID NO：055，SEO ID NO：056，WEQ ID NO：057，SEQ ID NO：058，SEQ ID NO：059，SEQ ID NO)：060，SEQ ID NO：061,SEQ ID NO：062，SEQ ID NO：063，SEQ ID NO：064，SEQ ID NO：065，SEQ ID NO：066,SEQ ID NO：067，SEQ ID NO：068，SEQ ID NO：069，SEQ ID NO：070，SEQ ID NO：071,SEQ ID NO：072，SEQ ID NO：073，SEQ ID NO：074，SEQ ID NO：075，SEQ ID NO：076,SEQ ID NO：077，SEQ ID NO：078，SEQ ID NO：079，SEQ ID NO：080，SEQ ID NO：081,SEQ ID NO：082，SEQ ID NO：083，SEQ ID NO：084，SEQ ID NO：085，SEQ ID NO：086,SEQ ID NO：087，SEQ ID NO：088，SEQ ID NO：089，SEQ ID NO：090，SEQ ID NO：091,SEQ ID NO：092，SEQ ID NO：093，SEQ ID NO：094，SEQ ID NO：095，SEQ ID NO：096,SEQ ID NO：097，SEQ ID NO:098.
可用本领域技术人员公知的方法重组生成DSB修复抑制剂（见Sambrook等，Molecular Cloning：A Laboratory Manual（第二版），ColdSpring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.，USA（1989））。或者，DSB修复抑制剂可商购获得（例如DIDS（#38440Sigma-Aldrich；St.Louis，MO）；4′-溴-3′-硝基苯丙酮（Calbiochem Cat：No.323115））或化学合成。
可对测试化合物和试剂筛选其DSB修复抑制的能力。可在体内或体外监测DSB修复的抑制。在一个实施方式中，通过评估表达DNA编辑酶的细胞中存在的双链断裂（DSBs）的水平（例如存在或缺少测试化合物时的AID；例如通过本文所述的染色体核型分析），来监测DSB修复的破坏。在一个实施方式中，通过γ-H2AX灶点形成测定DSB。在一个实施方式中，通过53BP1或Rad50灶点形成测定DSB修复。在一个实施方式中，在体内监测测试化合物破坏DSB修复的能力，例如通过在确定其预防或降低癌症的肿瘤生长、症状或生物标记物的能力，其中癌细胞表达AID。也可通过Ishida等，Nucleic Acids Res200937:3367-3376所述的链交换分析体外来测定DSB修复。
在一个实施方式中，通过监测连接核酸分子的生成进行体外链交换分析。例如，在含有45mM NaCl、0.03mM EDTA、0.6mM2-巯基乙醇、3%甘油、1mM MgCl2、1mM DTT、1mM ATP、0.1mg/mL牛血清白蛋白、2mM CaCl2、20mM磷酸肌酸和75μg/ml肌酸激酶的10μl26mMHEPES缓冲液（pH7.5）中，在测试试剂的存在下将φX174环状ssDNA（20μM）与RAD51（6μM）在37℃孵育10min。所述孵育后，向反应混合物中加入2μM RPA，再将混合物在37℃孵育10min。通过加入20μMφX174线性dsDNA引发所述反应，并进行60min。通过加入0.1%SDS和1.97mg/ml蛋白酶K（Roche Applied Science，Basel，Switzerland）终止反应，再在37℃孵育20min。加入6×上样染料后，通过1%琼脂糖凝胶电泳分离去除蛋白的反应产物（1×TAE缓冲液，3.3V/cm进行4小时）。用SYBR Gold（Invitrogen，Carlsbad，CA，USA）染色使得产物可见。
在分析的另一实施方式中，通过32P标记的dsDNA进行反应。将胶干燥，暴露在成像板上并使用FLA-7000成像分析仪（Fujifilm，Tokyo，Japan）使得成像板可见。
当实现反应可见时，所提供的过量ssDNA和dsDNA分子也可见。如果发生DSB修复，可检测到更大的连接分子。DSB修复抑制剂会引起可见的连接分子的量降低。
通常，首先对测试试剂抑制基因表达或蛋白活性的能力进行体外筛选，并识别出对基因表达或蛋白活性具有抑制效果的测试试剂。然后通过体内或体外分析测试阳性抑制试剂对于DSB修复抑制的效力。
通常，可在能够在合适的时间内调制表达或蛋白活性（相对于对照）的任何浓度测试化合物。在一些实施方式中，可在约0.1nM至约1000mM的浓度范围测试化合物。在一个实施方式中，可在约0.1μM至约20μM的范围、约0.1μM至约10μM的范围、或约0.1μM至约5μM的范围测试化合物。在一个实施方式中，在1μM测试化合物。
依赖于所实施的特定实施方式，测试化合物可以溶液中的游离形式提供，或者可以附着于载体或固体支持物（例如，珠子）。大量适当的固体支持物可用于固定测试化合物。适当的固体支持物的实例包括琼脂糖、纤维素、葡聚糖（例如作为Sephadex，Sepharose可商购）、羧甲基纤维素、聚苯乙烯、聚乙二醇（PEG）、滤纸、硝化纤维素、离子交换树脂、塑料膜、聚胺甲基乙烯基醚（polyaminemethylvinylether）马来酸共聚物、玻璃珠、氨基酸共聚物、乙烯-马来酸共聚物、尼龙、和丝等。另外，对于本文所述的方法，测试化合物可以单独筛选或成组筛选。在预期有效测试化合物的命中率低至给定组中不会有超过1个阳性结果的情况下，成组筛选特别有用。
为筛选测试试剂，可采用体外分析系统和/或基于细胞的分析系统。例如，可筛选测试试剂与基因或基因所编码的蛋白的结合；可筛选其改变基因表达水平；或筛选其调制由基因编码的蛋白的活性/功能。
在一个实施方式中，可对蛋白/肽测试试剂（包括抗体或其片段）结合所编码的蛋白的能力进行体外评估。直接结合分析的实例包括但不限于，标记的体外蛋白-蛋白结合分析、电泳迁移率变动分析、蛋白结合的免疫分析、ELISA分析、免疫共沉淀分析、竞争性分析（如与已知的结合物）等，参见例如美国专利4,366,241、4,376,110、4,517,288和4,837,168，以及Bevan等，Trends in Biotechnology13:115-122，1995；Ecker和Crooke，1995，Biotechnology（NY）13:351-360；以及Hodgson，Biotechnology（NY）10:973-980，1992。也可通过检测表明试剂至结合感兴趣蛋白的信号（例如荧光淬灭或FRET）来识别测试试剂。还可监测测试试剂多肽体外结合核酸的能力，例如对于用于分析蛋白结合至核酸的凝胶阻滞实验（EMSA）而言，可将ELISA形式的分析作为一种方便的替代方式。测试试剂与所编码的蛋白的结合为该试剂可能抑制蛋白活性提供了指征。
在一个实施方式中，对测试试剂下调由基因编码的蛋白的生物活性或功能的能力进行分析。所用的分析依赖于蛋白的功能，并易由技术人员所确定，例如体外监测对RAD51介导修复的抑制。
在一个实施方式中，对测试试剂抑制基因转录的能力进行分析。转录分析为本领域技术人员所公知（参见例如美国专利7,319,933和6,913,880）。例如，在基于细胞的系统中，可通过瞬时或稳定地将报告表达载体转染至培养的细胞系，对基因表达的调制进行检测。可分析测试化合物在基因的转录调控元件（例如启动子序列）控制下，抑制或增加报告基因（例如萤光素酶基因）表达的能力。可将含有转录调控元件并可操作地连接至报告基因的分析载体（assay vector）转染至任何哺乳动物细胞系，用于分析启动子的活性。报告基因通常对宿主细胞中天然缺少的多肽进行编码，该多肽的酶活性易于分析。真核启动子的典型报告多肽包括例如：氯霉素乙酰转移酶（CAT）、萤火虫或水母萤光素酶、β-半乳糖苷酶、β-葡糖醛酸酶、碱性磷酸酶、Dendra2、mCherry、mRaspberry、mPlum、tdTomato、绿色荧光蛋白（GFP）、黄色荧光蛋白（YFP）、增强型绿色荧光蛋白（EGFP）、红色荧光蛋白（RFP）、青色荧光蛋白（CFP）等。可使用惯用技术和分子生物学方法制备在基因转录调控元件控制下表达报告基因的载体（参见例如，Sambrook等，见上文；Brent等，见上文）。
除了报告基因，载体还可包含用于在宿主细胞中增殖或维持的必要元件，以及诸如多腺苷酸化序列和转录终止子这些元件。分析载体的实例包括pGL3系列载体（Promega，Madison，WI；美国专利号5,670,356），该载体含有位于萤光素酶基因5′的多接头序列。本领域描述了细胞培养、转染和报告基因分析的一般方法，例如Sambrook等，见上文和Transfection Guide，Promega Corporation，Madison，WI（1998）。可使用任何可容易转染的哺乳动物细胞系分析来自载体的报告基因的表达，所述可转染的哺乳动物细胞系例如3T3、Caco-2、CCRF-CEM、CHO、COS-7、HCT116、HEK293、CH12-F3、MCF-7、HepG2、Jurkat、Mo-B、KG-1、K-562、MOLT-4和HL-60细胞。
或者，可使用例如生物化学和分子生物学技术分析对mRNA水平的测定进行评估，所述生物化学和分子生物学技术如Northern印迹或其它杂交分析、核酸酶保护分析、逆转录（定量RT-PCR）技术、RNA-Seq、高通量测序等。这类分析为本领域所公知。在一个实施方式中，使用核连缀转录分析法（nuclear“run-on”（或“run-off”）transcription assay）（参见例如Methods in Molecular Biology，49卷，1995-9-27，第229-238页）。也可使用阵列；对阵列和用该阵列分析mRNA的方法已有描述，例如在EP0834575、EP0834576、WO96/31622、美国专利号5,837,832或WO98/30883中。WO97/10365提供了通过高密度寡核苷酸阵列监测多个基因表达水平的方法。
在一个实施方式中，获得来自待测受试者的一个或多个细胞，并从所述细胞中分离RNA。当获取所述细胞时，优选获得的样品主要含有所希望类型细胞，例如，细胞样品中至少约50%、优选至少约60%、更优选至少约70%、80%、更优选至少约90%的细胞为所希望的类型。可根据本领域已知的方法获取组织样品。
也可由受试者获得细胞样品，随后富集所希望的细胞类型。例如，可使用多种技术从其它细胞中分离细胞，所述技术例如通过抗体与所需细胞类型的细胞表面的表位结合从而分离。当所希望的细胞处于固态组织中，可将特定细胞切割出，例如通过显微切割或激光捕获显微切割（LCM）。
当从个体的组织样品或细胞中分离RNA时，重要的是，防止组织或细胞从受试者移除后基因表达的任何其它改变。已知在下列干扰下表达水平会迅速发生改变，例如热激、或通过脂多糖（LPS）或其它试剂活化。此外，组织和细胞中的RNA可能快速降解。据此，在优选的实施方式中，将从受试者获得的组织或细胞速冻或尽可能快地用RNAlater处理。
可通过多种方法从组织样品中提取RNA，所述方法例如异硫氰酸胍裂解后进行CsCl离心（Chirgwin et al.，1979，Biochemistry18:5294-5299）。可根据例如在Dulac，C.（1998）Curr.Top.Dev.Biol.36，245以及Jena等（1996）J.Immunol.Methods190:199中所述，由单细胞制备cDNA文库的方法获取单细胞RNA。必须小心避免RNA降解（例如通过加入RNAsin）。
随后可富集特定类群的RNA样品。在一个实施方式中，从RNA样品中分离poly(A)+RNA。通常，利用mRNA的poly-A尾进行所述纯化。特别是如上指出的，将poly-T寡核苷酸固定至固态支持物，并作为mRNA的亲和配体。用于这一目的的试剂盒可商购获得，例如
Figure BDA0000470509870000701
 kit（Epicentre Biotechnologies，Madison，WI；Oligotex Direct mRNA kit，Qiagen，Valencia，CA）。
本文所述方法中可使用的探针的种类包括cDNA、核糖核酸探针（riboprobes）、合成寡核苷酸和基因组探针。所用的探针的种类通常由特定情况决定，例如，如核糖核酸探针用于原位杂交、cDNA用于Northern印迹。在一个实施方式中，探针针对RNA所独有的核苷酸区域。探针可短至足以区分识别可调控蛋白的mRNA转录物，可短至例如15个碱基；然而，可使用至少17、18、19或20个以上碱基的探针。在一个实施方式中，引物和探针在严格条件下特异性地杂交至DNA片段，该DNA片段具有的核酸序列对应于编码待分析蛋白的基因。本文所用的术语“严格条件”意味着仅当核酸序列具有至少95%一致性时才发生杂交。在另一实施方式中，当序列间具有至少97%一致性，杂交在“严格条件”下发生。
在一个实施方式中，分析测试试剂对基因翻译的抑制能力。基因翻译可通过对由基因表达的蛋白进行定量来测定，例如通过Western印迹、通过蛋白免疫检测、ELISA（酶联免疫吸附分析）、放射免疫测定（RIA）或其它免疫分析、以及荧光活化细胞分析（FACS）、质谱或蛋白测序来检测蛋白。
开发基于小分子、聚合物和基因组的库的方法在例如Ding等，J Am.Chem.Soc.124：1594-1596（2002）和Lynn等，J.Am.Chem.Soc.123：8155-8156（2001）中描述。商用的化合物库可通过例如ArQule、Pharmacopia、graffinity、Panvera、Vitas-M Lab、Biomol International、Selleck Chemicals和Oxford Chemicals Limited获得。可使用本文所述方法筛选这些库对于DSB修复抑制的能力。
在某些实施方式中，DSB修复抑制剂是核酸，该核酸能够抑制对促进DSB修复蛋白进行编码的基因的表达。通过非限定实例的方式，DSB修复抑制剂可以是DSB修复的反义抑制剂，例如如美国专利公开号2002/0137698中所公开的RAD51的反义抑制剂。可使用基因沉默或RNAi。在某些实施方式中，令细胞与DSB修复抑制剂接触，从而相对于在不存在miRNA或RNA干扰分子的细胞中出现的mRNA水平，细胞中靶基因的mRNA水平降低至少约5%、约10%、约20%、约30%、约40%、约50%、约60%、约70%、约80%、约90%、约95%、约99%、约100%。在一个实施方式中，mRNA水平降低至少约70%、约80%、约90%、约95%、约99%、约100%。在某些实施方式中，DSB修复抑制剂包含含有RNAi分子的表达载体或病毒载体。
本文所用的术语“RNAi”是指任何类型的干扰RNA，包括但不限于RNAi、siRNA、shRNA、内源性microRNA和人工microRNA。例如该术语包括预先识别为siRNA的序列，而与RNA的下游加工机制无关（即，虽然认为siRNA具有特定的体内加工方法导致mRNA断裂，可将这样的序列加入本文所述的载体的侧翼序列中）。术语“RNAi”和“RNA干扰”在本文所述技术的试剂方面可互换使用。
本文所用的术语“siRNA”是指形成双链RNA的核酸，当siRNA与靶基因存在于或表达于相同细胞时，该双链RNA具有降低或抑制基因或靶基因表达的能力。可通过链互补形成双链的RNA siRNA。在一个实施方式中，siRNA是指能够形成双链siRNA的核酸。siRNA的序列可对应于靶基因的全长或其子序列。通常，siRNA具有的长度为至少约15-50个核苷酸（例如，双链siRNA的每个互补序列长度为约15-50个核苷酸，双链siRNA长度为约15-50个碱基对，优选长度为约19-30个碱基的核苷酸、优选长度约20-25个核苷酸，例如，长度为20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸）。
本文所用的“shRNA”或“小发卡RNA”（也称茎环）是siRNA的一种。在一个实施方式中，这些shRNA由下述部分所组成：短的（例如约19个至约25个核苷酸）反义链；其后为具有约5个至约9个核苷酸的核苷酸环；以及类似物正义链。或者，正义链可在核苷酸环结构之前而反义链可位于其后。
可通过纳米颗粒（例如在Schiffelers和Storm，Expert Opin Drug Deliv.2006-5，3（3）:445-54中所述）或脂质体（例如Hughes等，Methods MolBiol.2010，605：445-59）辅助输送RNAi。
在某些实施方式中，作为核酸的DSB修复抑制剂可以是反义RNA。
在某些实施方式中，作为核酸的DSB修复抑制剂可以是核酶。可将设计用以催化切断细胞mRNA转录物的核酶分子用于防止细胞mRNA翻译和表达细胞多肽，或二者兼具（参见例如PCT国际公开号W090111364；Sarver等1990，Science247，1222-1225以及美国专利号5,093,246）。当可将在位点特异性识别序列处切断mRNA的核酶用于破坏细胞mRNA时，优选使用锤头状核酶。锤头状核酶在与靶mRNA形成互补碱基对的侧翼区域所规定的位置处切断mRNA。唯一要求是靶mRNA具有如下的两碱基序列：5′-UG-3′。锤头状核酶的构建和制备为本领域所公知，并在Haseloff和Gerlach1988，Nature334:585-591中更全面地描述。可对核酶工程化，使得切断识别位点位于临近细胞mRNA的5′端，从而提高效率并使得细胞内积累的非功能mRNA转录物最少化。
本文的方法和组合物中的核酶还包括RNA内切核糖核酸酶（以下称为“Cech型核酶”），例如天然存在于嗜热四膜虫（Tetrahymenathermophila）中并由Cech及其合作者大量描述的Cech型核酶（已知为IVS或L-19IVS RNA）（Zaug等1984，Science224:574-578；Zaug等1986，Science231:470-475；Zaug等1986Nature324:429-433；公开的国际专利申请号W088/04300；Been等1986，Cell47:207-216）。Cech型核酶具有与靶RNA序列杂交的8碱基对活性位点，随后发生靶RNA的切断。本发明的方法和组合物包括靶向于细胞内基因存在的8碱基对活性位点序列的Cech型核酶。
在反义方式中，所述核酶可由修饰的寡核苷酸组成（例如为改善稳定性、靶向性等），并应输送至体内表达DNA编辑酶基因的细胞中。输送方法优选包括使用对受组成型强启动子pol HI或pol II控制的核酶进行编码的DNA构建体，从而转染细胞能够产生足够量的核酶去破坏内源细胞信使并抑制翻译。由于不同于反义分子，核酶具有催化性，更低的细胞内浓度即具所需效果。
本文互换使用的术语“microRNA”或“miRNA”为内源RNA，已知其中一些microRNA在转录后水平调控对蛋白进行编码的基因的表达。内源microRNA是天然存在于基因组中的小RNA，能够调制mRNA的有效利用。术语人工microRNA包括除内源microRNA外的任何类型的RNA序列，该人工microRNA能够调制mRNA的有效利用。microRNA序列在出版物中描述，所述出版物例如Lim等，Genes&Development，17，p.991-1008（2003）；Lim等，Science299，1540（2003）；Lee和Ambros，Science，294，862（2001）；Lau等，Science294，858-861（2001）；Lagos-Quintana等，Current Biology，12，735-739（2002）；Lagos Quintana等，Science294，853-857（2001）和Lagos-Quintana等，RNA，9，175-179（2003），上述出版物通过引用的方式并入本文。可在前体分子中加入多种microRNA。此外，为通过miRNA和/或RNAi通路调控内源基因的表达，可在细胞中表达miRNA样茎环，作为输送人工miRNA和短干扰RNA（siRNA）的媒介。
本文所用的“双链RNA”或“dsRNA”意味着RNA分子由两条链组成。双链分子包括由单链RNA组成，折回至自身形成双链结构的分子。例如，衍生出单链miRNA的祖分子（progenitor molecules）的茎环结构、也被称为前miRNA（Bartel等，2004，Cell116:281-297）包括dsRNA分子。
选择可作为靶基因表达的抑制子或活化子的核酸序列（例如RNAi、siRNA、shRNA）的方法为本领域技术人员公知并熟练使用。可用多种计算机程序设计针对特定核酸序列的RNAi试剂。可从给定的靶基因序列（例如RAD51）选择RNAi的靶向区域（例如siRNA等），从起始密码子下游的约第25-50个核苷酸、从约50-75个核苷酸、或从约第75-100个核苷酸开始。核酸序列可含有5′或3′UTR和临近起始密码子的区域。对本文所述技术的siRNA分子进行设计的一种方法包括识别23个核苷酸序列基序AA(N19)TT（其中N可为任意核苷酸）（SEQ ID NO：156），并选择至少25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%或75%的G/C含量的命中。该序列的所述“TT”部分为任选。或者，如果未找到这样的序列，可使用基序NA(N21)进行拓展研究，其中N可为任意核苷酸。在这种情况下，为能够对于正义和反义3′突出端的序列组成来产生对称双链体，可将正义siRNA的3′端替换为TT。随后可合成与23个核苷酸序列基序的第1-21位置核苷酸互补的反义RNAi分子。使用对称的3′TT突出端可有利地保证：例如，以大约等比例的正义和反义靶RNA-切断siRNP小干扰核糖核蛋白颗粒（siRNPs）（Elbashir等，2001，见上文）。
在一些实施方式中，RNAi试剂靶向于所识别靶基因序列中的至少5个连续的核苷酸。在一个实施方式中，RNAi试剂靶向于所识别靶序列中的至少6、7、8、9或10个连续的核苷酸。在一些实施方式中，RNAi试剂靶向于所识别靶序列中的至少11、12、13、14、15、16、17、18、19个连续的核苷酸。
在一些实施方式中，为增强本文公开的RNAi试剂对核酸酶的耐受性，可在RNAi试剂的一个或多个非RNase H-活化区域引入非磷酸二酯的骨架连接，例如甲基膦酸酯、硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯连接或其混合。为增强结合亲和力和双链体稳定性，这种非活化区域还可另外包括2′-取代基，并可包括手性选择的骨架连接。可在寡核苷酸序列中加入其它官能团以加入多种所希望的性能，例如：增强寡核苷酸序列穿过细胞膜的吞入性，增强稳定性或增加与靶核酸的杂合体的形成，或促进与靶的交联（如与补骨脂素光交联取代基）。参见例如，PCT公开号WO92/02532，通过引用的方式并入本文。
在一些实施方式中，DSB修复抑制剂是抗体、单克隆抗体或抗体片段（通常参见，Hood等，Immunology，Benjamin，N.Y.，第二版（1984）；Harlow和Lane，Antibodies.A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory（1988）和Hunkapiller和Hood，Nature，323，15-16（1986），通过引用的方式并入本文）。使用本领域技术人员公知的方法制备抗体。典型地，通常通过与骨髓瘤细胞融合，将经所希望的抗原免疫的动物来源的脾细胞无限增殖化（见Kohler和Milstein（1976）Eur.J.Immunol.6:511-519，通过引用的方式并入本文）。无限增殖化的其它方法包括用Epstein Barr病毒、原癌基因或逆转录病毒、或其它本领域所知的方法进行转化。在产生对于抗原具有所希望的特异性和亲和力的抗体方面，对由单个无限增殖化细胞产生的群落进行筛选，可通过多种技术（包括注射入脊椎动物宿主的腹膜腔）增加由这样的细胞产生的单克隆抗体的产率。或者，可通过筛选人B细胞DNA库（根据Huse等（1989），Science246:1275-1281所概述的通用方案）或筛选噬菌体展示库（参见例如WO91/17271和WO92/01047），分离对单克隆抗体、或抗体片段或其结合片段进行编码的DNA序列。在某些实施方式中，RAD51介导链交换修复的抑制剂是胞内抗体。产生胞内抗体的方法为本领域普通技术人员所公知，例如如WO2002/086096中所述。通常，抗体与至少约1mM、例如1mM以下、300μM以下、30μM以下、10μM以下、3μM以下、1μM以下、100nM以下或10nM以下的KD进行结合。
在某些实施方式中，DSB修复抑制剂是蛋白或肽。肽试剂可为天然存在的蛋白的片段，或RAD51介导的交换修复蛋白的模仿物或模拟肽。为调制参与本文所述DSB修复的基因或蛋白，即调制基因表达或所编码蛋白的活性，可设计蛋白形式和/或肽形式或其片段形式的试剂。这样的试剂旨在包含通常不存在的蛋白和通常在细胞中内源表达（例如在很低水平表达）的蛋白。可使用的蛋白的实例为突变蛋白，遗传工程化蛋白、肽、合成肽、重组蛋白、嵌合蛋白、人源化蛋白、改性蛋白及其片段。可直接或间接调制基因表达或蛋白活性。在一个实施方式中，蛋白/肽试剂直接结合至由本文指明的基因编码的蛋白，或直接结合至本文指明的基因的核酸。
可对肽的抑制活性进行筛选。可在没有序列偏好或没有任何位置保持不变的情况下，将肽库（例如肽或其它化合物的组合库）完全随机化。或者，可将库偏置，即序列中的某些位置或保持不变，或选自有限数目的可能性。例如，在一些情况下，在设定类别内将核酸或氨基酸残基随机化，所述设定的类别例如疏水氨基酸、亲水残基、空间位阻有偏（小或大）的残基、为交联倾向于生成半胱氨酸、为SH-3结构域生成脯氨酸、为磷酸化位点形成丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸或组氨酸、或对于嘌呤。
测试试剂可为天然存在的蛋白或其片段。这样的测试试剂可由天然来源（例如细胞或组织的裂解物）获得。也可制备多肽试剂的库，例如从可商购的cDNA库或用常规方法生成。测试试剂也可为肽，例如约5个至约30个氨基酸的肽、优选约5个至约20个氨基酸的肽、更优选约7个至约15个氨基酸的肽。所述肽可为天然存在蛋白的消化物、随机肽或“偏置的”随机肽。在一些实施方式中，所述测试试剂是多肽、肽或蛋白。测试试剂也可为核酸。核酸测试试剂可为天然存在的核酸、随机核酸或“偏置的”随机核酸。例如，与上文所述蛋白类似，可使用原核或真核基因组的消化物。
待筛选的测试试剂库也可基于由本文指明的基因编码的蛋白或其片段的结构研究而生成。这样的结构研究使得能够识别更可能结合该蛋白并调制其活性的测试试剂。可用多种方式研究蛋白的三维结构，例如晶体结构和分子建模。使用X-射线晶体学研究蛋白结构的方法在文献中是公知的。参见Physical Bio-chemistry，Van Holde，K.E.（Prentice-Hall，New Jersey1971），pp.221-239以及Physical Chemistry with Applicationsto the Life Sciences，D.Eisenberg&D.C.Crothers（Benjamin Cummings，Menlo Park1979）。对结构进行的计算机建模提供了设计测试试剂用于筛选调制剂的另一方法，分子建模方法在文献（例如标题为“System andmethod for molecular modeling utilizing a sensitivity factor”的美国专利号5,612,894及标题为“Molecular modeling method and system”的美国专利号5,583,973）中描述。此外，也可通过中子衍射和核磁共振（NMR）确定蛋白结构。参见例如，Physical Chemistry，第四版，Moore,W.J.（Prentice-Hall，New Jersey1972）及NMR of Proteins and Nucleic Acids，K.Wuthrich（Wiley-Interscience，New York1986）。
在一些实施方式中，相比于未处理的对照，筛选并识别出的抑制本文指明基因的表达、或识别出的抑制由本文指明基因编码的蛋白活性的测试化合物能够以至少5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、1倍、1.1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、50倍、100倍以上抑制DSB修复。
DSB修复抑制化合物或试剂可以给药的形式直接发挥功能。或者，可在细胞内对该试剂修饰或应用而生成对基因进行调制的物质，例如将核酸序列引入细胞，其转录引起基因表达或蛋白活性的抑制子或活化子的生成。
治疗
在一些实施方式中，本文所述的技术涉及治疗方法，所述方法包含（a）选定受试者，该受试者具有表达升高水平的DNA编辑酶的细胞；以及（b）给予受试者治疗有效量的双链断裂修复抑制剂；其中，升高水平是比来自健康个体同类细胞的DNA编辑酶水平更高的AID水平。在一些实施方式中，本文所述的技术涉及治疗方法，所述方法包含（a）选定受试者，该受试者具有表达升高水平的DNA编辑酶的B细胞；以及（b）给予受试者治疗有效量的双链断裂修复抑制剂；其中，所述升高水平是比来自健康个体B细胞中的DNA编辑酶水平更高的DNA编辑酶水平。在一些实施方式中，健康受试者中检测不到DNA编辑酶表达。在一些实施方式中，受试者可为人类受试者。
在一些实施方式中，通过确定由受试者获得的细胞样品中DNA编辑酶蛋白和/或mRNA的水平，识别出相比于健康个体同类细胞的DNA编辑酶水平，具有表达升高水平DNA编辑酶的细胞的受试者。在一些实施方式中，在表达升高水平DNA编辑酶的细胞中DNA编辑酶的水平显著高于健康受试者的正常细胞。在一些实施方式中，在一些实施方式中，在表达升高水平DNA编辑酶的细胞中，DNA编辑酶的水平显著高于健康受试者未活化的B细胞中表达的DNA编辑酶水平。在一些实施方式中，在表达升高水平DNA编辑酶的B细胞中DNA编辑酶的水平显著高于健康受试者未活化B细胞中表达的AID水平。
在一些实施方式中，本文所述的技术涉及治疗方法，所述方法包含（a）选定受试者，该受试者具有表达升高水平的活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）的细胞；以及（b）给予受试者治疗有效量的双链断裂修复抑制剂；其中，所述升高水平是比来自健康个体同类细胞的AID水平更高的AID水平。在一些实施方式中，本文所述的技术涉及治疗方法，所述方法包含（a）选定受试者，该受试者具有表达升高水平的AID的B细胞；以及（b）给予受试者治疗有效量的双链断裂修复抑制剂；其中，所述升高水平是比来自健康个体B细胞的AID水平更高的AID水平。在一些实施方式中，健康受试者中检测不到AID的表达。
在一些实施方式中，通过确定由受试者获得的细胞样品中AID蛋白和/或mRNA的水平，识别出相比于健康个体同类细胞的AID水平，具有表达升高水平AID的细胞的受试者。在一些实施方式中，在表达升高水平AID的细胞中，AID的水平显著高于健康受试者的正常细胞。在一些实施方式中，在表达升高水平AID的细胞中，AID的水平显著高于健康受试者未活化的B细胞中表达的AID水平。在一些实施方式中，在表达升高水平AID的B细胞中，AID的水平显著高于健康受试者未活化B细胞中表达的AID水平。
本文还提供了通过确定受试者细胞中DNA编辑酶（如AID）的蛋白、mRNA的水平和/或活性，确定受试者的病症（例如癌症或自体免疫性疾病）是否响应于DSB修复抑制剂的治疗的方法。受试者细胞（测试样品）中高水平DNA编辑酶的存在表明受试者将响应于DSB修复抑制剂的治疗。可通过评估由受试者获得的生物样品中的水平，并将观测水平与对照参比样品中DNA编辑酶的水平进行比较，确定DNA编辑酶的水平。在一些实施方式中，DNA编辑酶是AID。
在一个实施方式中，待治疗的病症（例如癌症或自体免疫性疾病）具有高水平的DNA编辑酶已经为本领域技术人员所知，意味着用DSB修复抑制剂治疗而不需要测定从患者获得的生物样品中DNA编辑酶蛋白、mRNA的水平和/或表达。在某些实施方式中，DNA编辑酶是AID。本文所用的“生物样品”是指由患者、优选人类患者获得的生物材料样品，包括组织样品（例如组织的活组织切片，如针吸活体组织切片、刷活体组织切片、表面活体组织切片、穿刺活体组织切片、钻孔活体组织切片、切除活体组织切片、开放活体组织切片，切取活体组织切片或内镜活体组织切片）或细胞样品（例如上皮细胞或淋巴细胞）。生物样品也可为生物流体样品，例如精液、尿液、血液、血清、唾液、脑脊液和细胞裂解上清液（如淋巴细胞碎片）。本文所述技术的一些实施方式还包括在本文所述的方法中分离生物样品的用途。
对照参比样品可以是由健康个体（即未患癌症或自体免疫性疾病的个体）获得的（同类型）生物样品。对照参比样品也可以是含有与由健康个体获得的相同类型生物样品中的正常DNA编辑酶浓度相同的标准样品。例如，DNA编辑酶量的标准参比对照样品通常可在例如特定细胞碎片（例如淋巴细胞）、精液、尿液、血液、脑脊液或组织中得到。在一个实施方式中，对照参比样品是含有平均或中值浓度的DNA编辑酶mRNA或DNA编辑酶蛋白的标准参比样品，所述平均或中值浓度见于未患癌症或自体免疫性疾病健康个体群体的细胞中。在一个实施方式中，例如，当细胞是B细胞，参比水平是健康个体未活化B淋巴细胞群体中DNA编辑酶蛋白或mRNA水平。在一个实施方式中，对照参比样品是患者的健康细胞或组织来源的患者生物样品，例如，如果患者患有淋巴瘤，可用脸颊拭子（cheek swab）或皮肤活体组织切片作为参比样品。在一些实施方式中，经过类型转换的B细胞群体中DNA编辑酶的mRNA、蛋白水平和/或活性不适于作为对照参比样品。
与代表健康受试者同类细胞中DNA编辑酶水平的参比对照样品中DNA编辑酶的蛋白、mRNA的水平和/或活性相比，如果受试者细胞中（例如包含癌或自身免疫细胞的生物样品）检测到的DNA编辑酶蛋白水平、DNA编辑酶mRNA水平和/或DNA编辑酶活性以统计学上显著的量更高，由受试者获得的细胞的特征在于，具有增加或升高水平的DNA编辑酶和/或mRNA。DNA编辑酶的水平可用任意单位表示，例如由密度计、光度计或酶标仪等获得的单位。在某些实施方式中，DNA编辑酶是AID。
本文所用的术语“高水平”、“升高水平”和/或“增加水平”的DNA编辑酶蛋白、mRNA和/或活性互换使用，是指DNA编辑酶蛋白、mRNA的量和/或活性显著高于对照参比样品中DNA编辑酶蛋白、mRNA的量和/或活性，所述对照参比样品代表了健康个体同类细胞中DNA编辑酶的水平。在某些实施方式中，DNA编辑酶是AID。
在一些实施方式中，对照参比样品可包含与待测定DNA编辑酶水平的细胞相同类型的健康细胞。在一些实施方式中，对照参比样品的细胞可与待测定DNA编辑酶表达水平的细胞具有相同的年龄、发育状态、性别和/或细胞类型。在一些实施方式中，对照参比样品可由与待测定DNA编辑酶水平的细胞处于相同年龄、发育状态和/或性别的健康生物体获得。在一些实施方式中，试样和对照参比样品为相同类型，即由相同生物来源获得并包含相同组分，例如，相同的细胞数目和类型。在某些实施方式中，DNA编辑酶是AID。
在一些实施方式中，对照参比样品可包含健康、未活化和/或未转化的B细胞。在一些实施方式中，DNA编辑酶的升高水平是显著高于健康、未活化和/或未转化的B细胞中DNA编辑酶水平的水平。在一些实施方式中，认为经过类型转换的B细胞不能用作参考样品。在某些实施方式中，DNA编辑酶是AID。
在多数正常细胞中检测不到AID蛋白/mRNA，因此在一些实施方式中，相比于健康个体细胞中检测不到的水平，可认为测得的少量AID为增加的水平。在一些实施方式中，升高水平的AID可以是使用RT-PCR分析（例如如本文实施例11进一步描述的利用引物SEQ ID NO：101和SEQ ID NO：102）可检测水平的AID。
在一些实施方式中，可检测水平的AID可以是每1mL血液1pg以上AID mRNA，例如10pg/mL、100pg/mL、1ng/mL、10ng/mL以上。在一些实施方式中，可检测水平的AID可以是每1mL血液10pg以上AIDmRNA。在一些实施方式中，可检测水平的AID可以是每1mL血液100pg以上AID mRNA。在一些实施方式中，可检测水平的AID可以是每1mL血液1ng以上AID mRNA。在一些实施方式中，可检测水平的AID可以是每1mL血液10ng以上AID mRNA。在一些实施方式中，可检测水平的AID可以是每1mL血液100ng以上AID mRNA。
在一些实施方式中，可检测水平的AID可以是每细胞5拷贝（例如转录物）以上AID mRNA，例如每细胞10拷贝、100拷贝、1,000拷贝以上。
在一些实施方式中，通过免疫组化测定的可检测水平的AID可以是每20平方微米组织切片1个以上AID多肽，例如每20平方微米组织切片1个多肽、10个多肽、100个多肽、1,000个多肽以上。
在一些实施方式中，可检测水平的AID可以是每mL血液或血清0.1pg以上AID多肽，例如每mL血液0.1pg、1pg、10pg、100pg、1ng、10ng以上。在一些实施方式中，可检测水平的AID可以是每mL血液或血清0.1pg以上AID多肽。在一些实施方式中，可检测水平的AID可以是每mL血液10pg以上AID多肽。在一些实施方式中，可检测水平的AID可以是每mL血液100pg以上AID多肽。在一些实施方式中，可检测水平的AID可以是每mL血液1ng以上AID多肽。在一些实施方式中，可检测水平的AID可以是每mL血液10ng以上AID多肽。在一些实施方式中，可检测水平的AID可以是每mL血液100ng以上AID多肽。
在一些实施方式中，可首先去除包含血清的样品中的血清白蛋白以提高灵敏度。在一些实施方式中，在检测DNA编辑酶水平前，可富集包含血液的样品中的B细胞或癌细胞。在一些实施方式中，可用软件（例如Microsoft
Figure BDA0000470509870000811
电子表格和Affymetrix
Figure BDA0000470509870000812
软件）对表达数值定量和分析。
在一些实施方式中，如果受试者细胞中AID水平显著高于对照参比样品中存在的AID水平，受试者是根据本文所述方法治疗的候选者。在一些实施方式中，如果受试者细胞中AID水平至少为对照参比样品中存在的AID水平的1.5倍、2倍、5倍、10倍以上，例如1.5倍以上、2倍以上、3倍以上、4倍以上、5倍以上或6倍以上，受试者是根据本文所述方法治疗的候选者。
在一些实施方式中，健康受试者和/或无需按照本文所述方法治疗的受试者可以是细胞中不表达可检测水平的DNA编辑酶的受试者。在一些实施方式中，DNA编辑酶可以是AID。
可通过本领域技术人员已知的任何方法测定本文所述的AID水平。在某些实施方式中，AID蛋白水平的确定涉及使用一种或多种下列分析：Western印迹、免疫共沉淀、酶联免疫吸附分析（ELISA）、放射免疫测定（radioimmunological assay，RIA）、夹心法分析、荧光原位杂交（FISH）、免疫组化染色、放射免疫计量分析（radioimmunometric assay）、凝胶扩散沉淀反应、免疫扩散分析、原位免疫分析、沉淀反应、凝集分析、补体结合分析、免疫荧光分析、蛋白A分析、质谱和/或免疫电泳分析。在某些实施方式中，AID蛋白水平的确定涉及使用抗体、抗体片段、单克隆抗体、单克隆抗体片段、结合蛋白的蛋白和/或AID结合肽。
在某些实施方式中，AID mRNA水平的确定涉及使用一种或多种下列分析：RT-PCR、定量RT-PCR、杂交分析、RNA-Seq、Northern印迹、高通量测序、基于微阵列的表达分析、转录扩增和/或自持序列复制。在某些实施方式中，AID mRNA水平的确定包括使用抗体、抗体片段、单克隆抗体和/或单克隆抗体片段。
评估mRNA水平的方法为本领域技术人员所公知。本文描述了优选的实施方式。激光捕获显微切割（LCM）为本领域技术人员所知，参见例如Simon等（1998）Trends in Genetics14:272和Emmert-Buck等（1996）Science274:998-1001。在本文所述技术的一个实施方式中获取肿瘤样品或活体组织切片，使用LCM获得用于分析的遗传物质，如mRNA。可使用任何本领域公知的多种操作从特定生物样品中分离核酸分子，选定的特定分离操作适用于特定的生物样品。例如，冻融和碱裂解操作可用于从固态材料中获取核酸分子；加热和碱裂解操作可用于从尿液中获取核酸分子；蛋白酶K提取可用于获取血液中的核酸（Rolff，A等，PCR：Clinical Diagnostics and Research，Springer（1994））。
实时PCR为可用于确定mRNA表达水平的扩增技术（参见例如，Gibson等，Genome Research6:995-1001，1996；Heid等，Genome Research6:986-994，1996）。实时PCR在扩增期间对PCR产物的积累水平进行评价。这一技术允许对多个样品的mRNA水平进行定量评价。对于mRNA水平，从生物样品（例如肿瘤和正常组织）中提取mRNA，然后使用标准技术制备cDNA。例如可使用Perkin Elmer/Applied Biosystems（FosterCity，Calif.）7700Prism仪器进行实时PCR。使用例如由PerkinElmer/Applied Biosystems（Foster City，Calif.）提供的引物表达程序来为感兴趣的基因设计配对引物和荧光探针。引物和探针的最佳浓度可由本领域技术人员初步测定，对照（例如，β-肌动蛋白）引物和探针可从例如Perkin Elmer/Applied Biosystems（Foster City，Calif.）商购获得。
使用对照生成标准曲线来对样品中感兴趣的特定核酸进行定量。标准曲线可使用实时PCR中测定的Ct值来生成，所述Ct值与用于分析的感兴趣的核酸的初始浓度有关。感兴趣基因的10-106拷贝的标准稀释液通常就足够了。另外，生成对照序列的标准曲线。这允许以对照的量来标准化组织样品中感兴趣核酸的初始含量，以用于比较目的。使用TaqMan探针的实时定量PCR方法已为本领域所公知。用于RNA的实时定量PCR的详细方案在例如Gibson等，1996，Genome Res.，10:995-1001中提供；用于DNA的实时定量PCR的详细方案在离Heid等，1996，Genome Res.，10:986-994中提供。
也可用基于TaqMan的分析定量表达水平。基于TaqMan的分析使用荧光寡核苷酸探针，所述探针包含5′荧光染料和3′淬灭剂。所述探针杂交至PCR产物，但其本身由于3′端的封闭剂而不能被延伸。当PCR产物在随后的循环中被扩增时，聚合酶（例如，AmpliTaq）的5′核酸酶活性使得所述TaqMan探针断裂。这一断裂将5′荧光染料与3′淬灭剂分离，因此使得荧光作为扩增的函数而增强。
在另一实施方式中，例如，RNA转录物的检测可通过Northern印迹来完成，其中，将RNA制品在变性琼脂糖凝胶上进行制备，并转移至适合的支持物（如活化的纤维素膜、硝酸纤维素膜、或玻璃膜、或尼龙膜）。然后将被标记（例如，放射性同位素标记的）cDNA或RNA杂交至该制品上，清洗并由如放射自显影的方法进行分析。
为监测mRNA的水平，例如从待测试的生物样品中提取的mRNA，反转录并生成荧光标记的cDNA探针。用标记的cDNA探针探测能够杂交至由转录物编码的调控蛋白生成的cDNA的微阵列，扫描玻片并测定荧光强度。这一强度与杂交强度和表达水平相关。
可对富集或非特定种类或序列的RNA群体进行进一步扩增。本文所定义的“扩增过程”设计为RNA中的分子的加强、增加或增多。例如，当RNA是mRNA时，可利用如RT-PCR的扩增过程来扩增mRNA，从而可检测到信号或检测到的信号增强。当生物、组织或肿瘤样品尺寸或体积小时，这样的扩增过程特别有益。
可进一步使用已知的扩增方法来完成RNA转录物的检测。例如，如下方法均在本发明的保护范围内：将mRNA反转录成cDNA、然后进行聚合酶链式反应（RT-PCR）；或如美国专利号5,322,770中所述的，使用单个酶进行上述两步骤；或者将mRNA反转录成cDNA、然后进行对称缺口连接酶链反应（symmetric gap lipase chain reaction（RT-AGLCR））（如R.L.Marshall等，PCR Methods and Applications4:80-84（1994）所述）。也可使用实时PCR。其它合适的方法为等温检测方法，包括但不限于连接酶链反应（LCR）（参见例如Wu和Wallace1989，Genomics4，560；Landegren等1988，Science241，1077）；自持序列复制（SSR）（参见例如Guatelli等1990，PNAS USA，87，1874）；转录扩增（参见例如，Kwoh等1989，PNAS USA，86，1173）；链置换扩增（G.T.Walker等，1996，Clin.Chem.42:9-13和欧洲专利申请号684315）；滚环扩增；环介导等温扩增；嵌合引物引发的等温核酸扩增；Q-β扩增系统（欧洲专利申请（EPA）号4544610）；或者OneCutEventAmplificatioN（OCEAN；Clinical Chemistry52，1855-1863（2006））。等温检测方法还可利用核酸酶链式反应（NCR）、RNA酶介导的核酸酶链式反应（RNCR）、聚合酶核酸酶链式反应（PNCR）、RNA酶介导的检测（RMD）、串联重复限制性酶促（TR-REF）链式反应或反式反向互补限制性酶促（IRC-REF）链式反应。本文可用的其它已知的扩增方法包括但不限于所谓的“NASBA”（依赖核酸序列的扩增）或“3SR”（自持序列复制）技术（在PNAS USA87:1874-1878（1990）中描述，也在Nature350（No.6313）:91-92（1991）以及Mollasalehi等，2012，Anal Biochem，425，91-95中描述）；和目标介导的扩增（如PCT公开WO9322461和PCT公开WO2010/019898A1所述）。
在一些实施方式中，可利用测序方法检测AID核酸，所述方法例如高通量测序、全转录组鸟枪法测序或RNA-seq。可利用多种商购的第二代测序技术（例如454SEQUENCINGTM或ILLUMINATM）生成高通量测序的全转录组或其部分，进行RNA-seq。RNA在例如Ryan等（2008）BioTechniques45（1）:81-94；Wang Z等（2009）Nature Reviews Genetics10（1）:57-63；Maher CA等（2009）Nature458（7234）:97-101中描述，以引用的方式将其实体并入本文。
在另一实施方式中，可利用“自持序列复制”检测AID核酸。这是一种利用靶核酸序列的核酸扩增方法，所述靶核酸序列利用3种对逆转录病毒复制而言必不可少的酶在等温条件下体外指数扩增（复制），所述3种酶为：（1）逆转录酶，（2）RNase H以及（3）DNA依赖的RNA聚合酶（Guatelli等1990，Proc.Natl.Acad.Sci.USA87:1874-1878）。通过模仿利用cDNA中间体的RNA复制策略，这一反应积累了原始靶标的cDNA和RNA拷贝。实质上等温意味着在约1小时的反应过程中温度在37℃至50℃范围内变化。或者，可选定一个温度进行全部反应。优选在45℃进行自持序列复制。
在另一实施方式中，可利用“转录扩增”检测AID核酸。在这一核酸扩增方式中，每一循环由两步组成。在第一步中，制作RNA或DNA的cDNA拷贝；在第二步中，生成每一cDNA拷贝的多个RNA转录物（参见例如Kwoh（1989）Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:1173）。
也可采用原位杂交可视化，其中放射性标记的反义RNA探针与活体组织切片样品的薄切片杂交，清洗，用RNA酶切断并暴露于放射自显影的感光乳剂。为示出样品的组织学成分，可用苏木精对样品染色，并且由使用适当滤光器的暗场成像示出显影后的乳剂。也可使用非放射性标记、如地高辛。
或者，可在DNA阵列、芯片或微阵列上检测mRNA表达。在此类实施方式中，将对应于DNA编辑酶的核酸固定在芯片上，然后将所述芯片与从患者中获得的试样的经标记的核酸进行杂交。由含有DNA编辑酶转录物的样品得到阳性杂交信号。制备DNA阵列的方法及其用途已为本领域所公知（参见，例如，美国专利号：6,618,6796、6,379,897、6,664,377、6,451,536、548,257、U.S.20030157485；以及Schena等，1995Science20:467-470；Gerhold等，1999Trends in Biochem.Sci.24，168-173；以及Lennon等，2000Drug discovery Today，5：59-65，以引用的方式将其实体并入本文）。还可进行基因表达系列分析（SAGE）（参见例如，美国专利申请20030215858）。为监测mRNA水平，例如，从待测试生物样品中将mRNA提取出来、反转录、并生成荧光标记的cDNA探针。然后将能杂交至DNA编辑酶cDNA的微阵列用标记的cDNA探针进行探测、扫描所述玻片、并测定荧光强度。这一强度与杂交强度和表达水平有关。“定量”扩增的定量PCR方法已为本领域技术人员所公知。例如，定量PCR涉及使用相同引物同时共扩增已知量的对照序列。这提供了可用于校准（calibrate）PCR反应的内标（internal standard）。定量PCR的详细方案已在如下文献中提供：例如，Innis等，（1990）PCR Protocols，A Guide toMethods and Applications，Academic Press，Inc.N.Y.。
特别是当生物样品是流体样品、如细胞裂解液时，也可测定DNA编辑酶蛋白水平或DNA编辑酶活性。在一个实施方式中，可通过将生物样品与抗体部分或特异性结合至DNA编辑酶或DNA编辑酶片段的蛋白质结合蛋白接触，测定DNA编辑酶的蛋白水平。然后，可检测抗体-DNA编辑酶复合物的形成，作为DNA编辑酶水平的测定。可商购得到或根据本文其它部分所述的方法制备识别DNA编辑酶（例如AID）的抗体。
可测定AID蛋白水平或AID活性。在一个实施方式中，可通过将生物样品与抗体部分或特异性结合至AID或AID片段的蛋白质结合蛋白接触，测定AID的蛋白水平。然后，可检测抗体-AID复合物的形成，作为AID水平的测定。可商购得到（ab59361、ab93596或ab77401；AbCamCambridge，MA）或根据本文其它部分所述的方法制备识别AID的抗体。可将组织样品制成切片（例如冷冻或固定切片）并用抗体染色。可用例如ELISA或流式细胞分析对液态样品进行分析。
在一个实施方式中，对抗体部分进行可检测地标记。本文所用的“标记的抗体”包括由可检测方法标记的抗体，包括但不限于：酶标抗体、放射性标记的抗体、荧光标记的抗体和化学发光标记的抗体。也可用可检测的标签对抗体进行标记，所述标签如c-Myc、HA、VSV-G、HSV、FLAG、V5或HIS。在使用基于抗体的结合部分的、用于检测AID的本文所述的诊断和预后方法中，生物样品中存在的AID水平与可检测地标记的抗体发出的信号强度相关。在一个优选实施方式中，通过将抗体与酶相连接，基于抗体的结合部分被可检测地标记。另一方面，当所述酶暴露于其底物，其以产生可检测的化学部分（例如通过分光光度法、荧光法或可视方法）的方式与底物发生反应。可用于对本文所述技术的抗体进行可检测地标记的酶包括但不限于：苹果酸脱氢酶、葡萄球菌核酸酶、Δ-V-类固醇异构酶、酵母乙醇脱氢酶、α-磷酸甘油脱氢酶、磷酸丙糖异构酶、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、天冬酰胺酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、核糖核酸酶、脲酶、过氧化氢酶、VI-磷酸葡萄糖脱氢酶、葡糖淀粉酶和乙酰胆碱酯酶。
可使用任意多种其它免疫分析实现检测。例如，通过对抗体进行放射性标记，能够通过使用放射免疫分析来检测抗体。可通过使用伽马计数器或闪烁计数器或放射自显影来等手段检测放射性同位素。为本文所述技术的目的特别适用的同位素为3H、131I、35S、14C，优选125I。也可用荧光化合物对抗体进行标记。当经荧光标记的抗体暴露于适当波长的光时，能够根据荧光检测其存在。最常用的荧光标记化合物为CYE染料、异硫氰酸荧光素、罗丹明、藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、邻苯二甲醛和荧光胺。还可用荧光发射金属如152Eu或其它镧系元素对抗体进行可检测地标记。可用金属螯合基团、如二亚乙基三胺五乙酸（DTPA）或乙二胺四乙酸（EDTA）将这些金属连接到抗体上。也可将抗体耦合至化学发光化合物对抗体进行可检测地标记。通过检测化学反应过程中出现的发光作用的存在，确定化学发光的抗体存在。特别有用的化学发光标记化合物的实例为鲁米诺、萤光素、异鲁米诺、热性吖啶鎓酯、咪唑、吖啶鎓盐和草酸酯。
在一个实施方式中，通过免疫分析检测AID蛋白水平，所述免疫分析如酶联免疫吸附分析（ELISA）、Western印迹、免疫细胞化学或流式细胞术。诸如ELISA、流式细胞术或RIA这些免疫分析可非常快速。还可应用抗体阵列或蛋白芯片，参见例如美国专利申请号20030013208A1、20020155493A1、20030017515和美国专利号6,329,209和6,365,418，以引用的方式将其实体并入本文。
最常见的酶免疫测定为酶联免疫吸附分析（ELISA）。ELISA为使用抗体的标记（例如，酶联）形式对抗原的浓度进行检测和测定的技术。存在不同形式的ELISA，这是本领域技术人员众所周知的。本领域已知的ELISA标准技术描述于“Methods in Immunodiagnosis”，第二版，Rose和Bigazzi著，John Wiley&Sons，1980；Campbell等，“Methods andImmunology”，W.A.Benjamin,Inc.，1964；以及Oellerich,M.，1984，J.Clin.Chem.Clin.Biochem.，22:895-904中。
在“夹心ELISA（Sandwich ELISA）”中，将抗体（例如抗-AID）连接至固相（即，微量滴定板），并接触含有抗原（例如AID）的生物样品。然后漂洗所述固相以除去未结合的抗原。随后将标记（例如，酶联）的抗体结合至结合的抗原（如果存在的话），形成抗体-抗原-抗体夹心。可与抗体连接的酶的实例为碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、荧光素酶、脲酶（urease）、以及β-半乳糖苷酶。酶联抗体与底物反应形成可测定的有色反应产物。
在“竞争ELISA”中，将抗体与含有抗原（即，AID）的样品一起孵育。然后将该抗原-抗体混合物与包覆有抗原（即AID）的固相（例如，微量滴定板）接触。存在于样品中的抗原越多，可用于与固相结合的游离抗体将越少。然后将标记（例如，酶联）的第二抗体加至所述固相，从而测定出与固相结合的第一抗体的量。在“免疫组化分析”中，通过将组织切片与抗体（对经分析的蛋白具有特异性）接触来对所述组织进行特定蛋白的检测。免疫组化分析可包括但不限于，原位免疫荧光或宽场荧光显微术和免疫荧光显微术。
也可使用“沉淀分析”或“凝胶扩散沉淀反应”检测AID蛋白。将抗体与含抗原（即AID）的样品孵育。当到达等当点时会形成沉淀。在凝胶扩散沉淀反应中，通常在不同位点处将抗原和抗体加入琼脂胶，使其在凝胶中自由扩散。当反应物以最优比例接触时会形成沉淀。各种沉淀分析包括但不限于：放射免疫扩散、凝胶双扩散沉淀和Ouchterlony双向免疫扩散（Ouchterlony double immunodiffusion）。定量沉淀分析为本领域技术人员所知（Basic Techniques in Biochemistry and MolecularBiology，Sharma和Sangha（编），I.K.International Publishers Pvt.Lt，New Delhi，India（2009）；Essentials of Immunology and Serology，Stanley，J.Thomson，Albany，New York，（2002））。
通过多种方法确定蛋白的存在和存在量，从而对抗体进行可视化。用于对抗体可视化方法的实例例如：通过连接至抗体的酶（例如萤光素酶、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶或β-半乳糖苷酶）或化学方法（例如DAB/底物色团)。或者可应用“放射免疫测定”。放射免疫测定为使用抗原的标记（例如，放射性标记或荧光标记）形式对抗原的浓度进行检测和测定的技术。用于抗原的放射性标记的实例包括3H、14C和125I。通过使生物样品中的抗原与标记（例如，放射性标记）的抗原竞争结合抗所述抗原的抗体来测定生物样品中抗原酶的浓度。为保证标记抗原和未标记抗原之间竞争结合，所述标记抗原以足够饱和抗体结合位点的浓度存在。样品中抗原浓度越高，结合至抗体的标记抗原的浓度越低。
在一些实施方式中，可使用蛋白原位阵列（PISA）测定DNA编辑酶的水平。简略说来，PISA包括在阵列表面包含游离或固定的PCR DNA的阵列，该PCR DNA作为在无细胞体系（例如兔网织红细胞提取物）中蛋白合成的模板；并通过与预包被在阵列表面的捕获试剂结合的标签序列，同步固定所述蛋白。PISA在例如专利公开号WO02/14860中描述，以引用的方式将其实体并入本文。在某些实施方式中，DNA编辑酶是AID。
在某些实施方式中，可使用定量原位蛋白分析（例如AQUATM）测定DNA编辑酶的水平。AQUATM在例如Stemmann O.，Zou H.，Gerber S.A.，Gygi S.P.，Kirschner M.W.；Dual inhibition of sister chromatidseparation at metaphase，Cell2001，Dec14，107:715-726和Keshishian等2007，Molecular&Cellular Proteomics6.12，2212-2229中描述，以引用的方式将其实体并入本文。在某些实施方式中，DNA编辑酶是AID。
也可根据实践者的偏好，基于本公开，采用其它检测DNA编辑酶的技术。此类技术中的一种是Western印迹（Towbin等，Proc.Nat.Acad.Sci.76:4350（1979）），其中，在转至固态支持物（如硝酸纤维素滤膜）之前，将适当处理的样品在SDS-PAGE凝胶上进行电泳。然后使用可检测标记的抗-DNA编辑酶抗体评估DNA编辑酶水平，其中可检测标记的信号强度对应于存在的DNA编辑酶的量。可用例如密度法（densitometry）对水平进行定量。在某些实施方式中，DNA编辑酶是AID。
此外，可采用质谱法检测DNA编辑酶，所述质谱法如MALDI/TOF（飞行时间）；SELDI/TOF；液相色谱-质谱联用（LC-MS）；气相色谱-质谱联用（GC-MS）；高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）；毛细管电泳-质谱联用；核磁共振谱；或串联质谱（例如，MS/MS、MS/MS/MS、ESI-MS/MS等）。参见例如，美国专利申请号20030199001、20030134304、20030077616，以引用的方式将其实体并入本文。质谱方法为本领域所公知并已经用于定量和/或识别生物分子，如蛋白（参见例如，Li等（2000）Tibtech18:151-160；Rowley等（2000）Methods20:383-397以及Kuster和Mann（1998）Curr.Opin.Structural Biol.8:393-400）。此外，质谱技术已经发展到允许分离的蛋白至少部分重新测序。Chait等，Science262:89-92（1993）；Keough等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.96:7131-6（1999）；Bergman，EXS88:133-44（2000）中综述。在某些实施方式中，使用气相离子分光光度计。在某些实施方式中，DNA编辑酶是AID。
在其它实施方式中，采用激光解吸/电离质谱分析样品。现代激光解吸/电离质谱（“LDI-MS”）可以两个主要变例实施：基质辅助激光解吸/电离（“MALDI”）质谱和表面加强激光解吸/电离（“SELDI”）。在MALDI中，将分析物与含基质的溶液混合并将液滴置于底物的表面。然后将基质溶液与生物分子共结晶。将底物插入质谱仪。将激光能量引至底物表面，所述底物表面解吸和离子化生物分子，而不使其明显片段化。然而，MALDI作为分析工具有局限性。它不提供对样品分级（fractionating）的手段；特别是对于低分子量的分析物，基质材料可能干扰检测。参见例如，美国专利号5,118,937（Hillenkamp等）和美国专利号5,045,694（Beavis&Chait）。在SELDI中，对底物表面进行修饰，使其成为解吸过程中的活性参与者。在一个变例中，用选择性结合感兴趣蛋白的吸附剂和/或捕捉剂使表面衍生化（derivatized）。在另一个变例中，用激光穿击时不解吸的能量吸收分子使表面衍生化。在另一个变例中，采用与感兴趣的蛋白结合并含有光解键（在应用激光时会断裂）的分子使表面衍生化。在这些方法的每一个中，衍生剂一般局限在施用样品的底物表面上的特定位置。参见例如，美国专利号5,719,060和WO98/59361。所述两个方法可结合，例如通过使用SELDI亲和表面捕获分析物，并在捕获的分析物中加入含有基质的液体以提供能量吸收物质进行结合。
有关质谱仪的更多信息，参见例如Principles of InstrumentalAnalysis，第3版，Skoog，Saunders College Publishing，Philadelphia，1985；和Kirk-Othmer Encyclopedia of Chemical Technology，第4版，第15巻（John Wiley&Sons,New York1995），第1071-1094页。对存在的DNA编辑酶mRNA或蛋白的检测典型地包括检测信号强度。所述信号强度转而可反映结合至底物的多肽的量和特征。例如，在某些实施方式中，可比较第一样品和第二样品的光谱峰值的信号强度（例如目测、通过计算机分析等)，以确定具体生物分子的相对的量。可用软件程序诸如Biomarker Wizard程序（Ciphergen Biosystems，Inc.，Fremont，Calif.）分析质谱。质谱仪及其技术为本领域专业技术人员公知。
在一些实施方式中，可通过确定细胞全部或部分基因组的总体突变状态测定DNA编辑酶的活性。相比于参比细胞中的总体突变状态，总体突变状态至少超过2%，例如超过2%以上、超过3%以上、超过5%以上、超过10%以上、或超过20%以上，可作为DNA编辑酶活性水平增加、升高和/或显著的表征。在一些实施方式中，可确定超突变水平。在一些实施方式中，可用FISH、全基因组测序、高通量测序、全基因组或外显子组测序、杂交和/或PCR测定全基因组或其部分的总体突变状态。在一些实施方式中，可通过确定特定靶基因超突变的水平测定DNA编辑酶的活性，所述特定靶基因包括但不限于：IGH、BCL6、MYC、BCL11A、CD93、PIM1和/或PAX5。在某些实施方式中，DNA编辑酶是AID。基因座超突变的检测是AID活性的指征。在一些实施方式中，相比于参比细胞中IGH、BCL6、MYC、BCL11A、CD93、PIM1和/或PAX5的突变水平，特定靶基因（包括IGH、BCL6、MYC、BCL11A、CD93、PIM1和/或PAX5）的突变水平至少超过2%，例如超过2%以上、超过3%以上、超过5%以上、超过10%以上、或超过20%以上，可作为AID活性水平增加、升高和/或显著的指征。
在一些实施方式中，利用FISH分析检测DNA双链断裂、例如DNA断裂检测FISH（DBD-FISH）（Volpi和Bridger，BioTechniques，第45卷，No.4，October2008，第385-409页），从而检测DNA编辑酶的活性。在某些实施方式中，DNA编辑酶是AID。
在一些实施方式中，DNA编辑酶活性的确定利用phospho-H2AX分析（例如Rakiman等，Advance Biotech2008，39-42；以引用的方式将其实体并入本文）、53BP1分析（例如Schultz等，Journal of Cell Biology2000，151:1381-1390；以引用的方式将其实体并入本文）或RAD51分析（例如Hochegger和Takeda（2006），Subcell Biochem.，40，313-325；以引用的方式将其实体并入本文）。在某些实施方式中，DNA编辑酶是AID。
本文所用的短语“需要至少一种DSB修复抑制剂的受试者”可意味着诊断或识别为患有癌症的受试者，其癌细胞具有增加水平的DNA编辑酶蛋白、或DNA编辑酶mRNA、或DNA编辑酶活性。本文所用的短语“需要至少一种DSB修复抑制剂的受试者”也可意味着诊断或识别为患有自体免疫性疾病的受试者，其自体免疫性疾病细胞含有增加水平的DNA编辑酶蛋白、或DNA编辑酶mRNA、或DNA编辑酶活性。可采用本文所述的任何确定生物样品中存在的mRNA或蛋白水平、或DNA编辑酶活性的方法，识别需要至少一种DSB修复抑制剂的受试者。或者，短语“需要至少一种DSB修复抑制剂的受试者”可意味着诊断或识别为患有B细胞疾病或自体免疫性疾患或癌症的受试者。受试者的癌细胞或B细胞可具有增加水平的DNA编辑酶蛋白、或DNA编辑酶mRNA或DNA编辑酶活性。B细胞疾病的非限定性实例包括B细胞癌（例如淋巴瘤或白血病），其特征在于异常的B细胞增殖、类型转换和/或活化的自体免疫性疾病。在一些实施方式中，自体免疫性疾病的特征在于细胞中DNA编辑酶活性的异常。具有异常DNA编辑酶活性的自体免疫性疾病包括但不限于：红斑狼疮；Wiskott-Aldrich综合征；自身免疫性淋巴细胞增生综合征；重症肌无力；类风湿性关节炎（RA）；狼疮性肾炎；多发性硬化症；系统性红斑狼疮；亚急性皮肤性红斑狼疮；皮肤性红斑狼疮（包括冻疮样红斑狼疮）；慢性关节炎；Sjogren氏综合征（Sjogren′ssyndrome）；自身免疫性肾炎；自身免疫性血管炎；自身免疫性肝炎；自身免疫性心脏炎；自身免疫性脑炎；炎症性慢性鼻窦炎；结肠炎；乳糜泻；炎症性肠病；Barrett氏食道症（Barrett′s esophagus）；炎症性胃炎和自体免疫介导的血液病。在某些实施方式中，DNA编辑酶是AID。
在一些实施方式中，本文所述的方法还包括选择被识别为需要至少一种DSB修复抑制剂的受试者。可基于DNA编辑酶mRNA、或DNA编辑酶蛋白或DNA编辑酶活性选择需要至少一种DSB修复抑制剂的受试者。在某些实施方式中，DNA编辑酶是AID。
在一些实施方式中，除DNA编辑酶蛋白或DNA编辑酶mRNA水平或DNA编辑酶活性增加，被识别为需要至少一种DSB修复抑制剂的受试者还表现出IGH的超突变。在某些实施方式中，DNA编辑酶是AID。以DNA编辑酶异常表达为特征的癌症的治疗方法
如本文所述，本发明的一些实施方式涉及治疗方法，该方法包含（a）选定受试者，该受试者具有表达DNA编辑酶（例如活化诱导的胞苷脱氨酶（AID））的细胞；以及（b）给予受试者治疗有效量的双链断裂修复抑制剂。
本发明的一些实施方式涉及治疗方法，该方法包含（a）选定受试者，该受试者具有表达升高水平的DNA编辑酶（例如活化诱导的胞苷脱氨酶（AID））的细胞；以及（b）给予受试者治疗有效量的双链断裂修复抑制剂，其中，所述DNA编辑酶的升高水平是比来自健康个体相同细胞类型的DNA编辑酶水平更高的DNA编辑酶水平。在一些实施方式中，所述治疗方法包含（a）选定受试者，该受试者具有表达DNA编辑酶的B细胞；以及（b）给予受试者治疗有效量的双链断裂修复抑制剂。在一些实施方式中，所述治疗方法包含（a）选定受试者，该受试者具有表达升高水平的DNA编辑酶的B细胞；以及（b）给予受试者治疗有效量的双链断裂修复抑制剂；其中，所述DNA编辑酶的升高水平是比来自健康个体B细胞的DNA编辑酶水平更高的DNA编辑酶水平。在一些实施方式中，表达DNA编辑酶的细胞是癌细胞。在一些实施方式中，表达DNA编辑酶的B细胞是癌细胞。在一些实施方式中，DNA编辑酶是AID。本文所用的术语“癌细胞”是指细胞以不受调控的方式增殖。在一些实施方式中，具有表达升高水平的DNA编辑酶的癌B细胞的受试者可以是如下文所述患有或诊断为患有B细胞癌（例如B细胞淋巴瘤或白血病）的受试者。在一些实施方式中，DNA编辑酶是AID。在一些实施方式中，在血液、血清或活体组织切片样品中检测到高水平的DNA编辑酶。
在某些实施方式中，通过利用重组和DNA修复系统诱导肿瘤细胞自毁，本文所述的方法选择性地治疗B细胞肿瘤、淋巴瘤和白血病。这一方法利用了“DNA编辑酶在同源重组能力减弱的原代B细胞中诱导广泛的基因组断裂和细胞死亡”这一发现。如本文所述，确定了如果用DSB修复抑制剂治疗以AID表达增加为特征的细胞群体，会导致细胞死亡。据此，本文提供了用DSB修复抑制剂治疗具有高DNA编辑酶（例如AID）表达的癌症患者的方法。
在某些实施方式中，待治疗的癌是具有DNA编辑酶高表达的类型。在某些实施方式中，待治疗的癌是B细胞肿瘤。在某些实施方式中，待治疗的癌是淋巴瘤。在某些实施方式中，待治疗的癌是Burkitt氏淋巴瘤（Burkitt′s lymphoma）、滤泡性淋巴瘤、MALT淋巴瘤、多发性骨髓瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、大B细胞淋巴瘤和/或T-细胞淋巴瘤。淋巴瘤是在免疫系统的淋巴细胞（例如B细胞、T细胞或自然杀伤（NK）细胞）中的恶性肿瘤。淋巴瘤通常在淋巴结中起源，并表现为实体瘤。它们可转移至其它器官如脑、骨或皮肤。结外位点通常位于腹部。淋巴瘤与淋巴白血病密切相关；在一些情况下特定形式的癌症被同时分类为淋巴瘤和白血病。
最新存在的几种淋巴瘤分类系统由世界卫生组织于2001年开发并于2008年更新（Jaffe，E.S.等编，World Health Organization Classification ofTumors，Pathology and Genetics of tumors of hematopoietic and lymphoidtissues IARC Press：Lyon，France2001）。WHO体系将淋巴瘤分为主要3类：成熟B细胞淋巴瘤、成熟T细胞淋巴瘤和成熟NK细胞淋巴瘤。独立分类中包含了Hodgkin淋巴瘤（由异常B细胞组成）和大量其它不常见的淋巴瘤。
可通过活体组织切片诊断淋巴瘤。对由活体组织切片获得的组织进行组织学检查，确定恶性细胞的存在、类型和排列。并对该细胞进行测试以确定它们是否为淋巴细胞；以及在是淋巴细胞的情况下，为何种类型的淋巴细胞。为确定淋巴瘤的范围和在体内的位置而进行的进一步测试包括进一步的活体组织切片、核医学、X光、CT扫描或MRI（见美国专利公开US2003/0129665）。除疾病特征的其它异常细胞模式以外，可通过Reed-Sternberg细胞的存在诊断Hodgkin氏淋巴瘤。区分每一类型的淋巴瘤的标记物和组织学标志为本领域技术人员所知（Jaffe，E.S.等编，World Health Organization Classification of Tumors，Pathology and Geneticsof tumors of hematopoietic and lymphoid tissues IARC Press：Lyon，France2001）。
在某些实施方式中，待治疗的癌是白血病。白血病是造血组织的恶性肿瘤。白血病可分为两类主要形式：慢性和急性。急性白血病的特征在于未成熟血细胞的迅速增加，这损害了骨髓产生健康血细胞的能力。慢性白血病的特征在于由相对成熟但异常的白细胞的组成。异常细胞以比正常细胞高得多的速度产生，从而导致异常的白细胞在血液中积累。尽管如此分类，然而，正常造血功能的病理损伤是所有白血病的标志。
此外，根据会影响何种血细胞对白血病进行细分。例如，可将白血病分为淋巴母细胞性或淋巴细胞性白血病、以及骨髓性白血病。在淋巴母细胞性或淋巴细胞性白血病中，通常前淋巴细胞受到影响，损害从淋巴细胞衍生的抗感染性细胞。大多数淋巴细胞性白血病包含B细胞（B细胞为淋巴细胞的特定亚型）。在骨髓性白血病中，通常白细胞前体和其它类型的红细胞、血小板受到影响。因此，一般可将白血病分为四类：急性淋巴母细胞性白血病（ALL）、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）、急性骨髓性白血病（AML）和慢性骨髓性白血病（CML）。各亚型的特定表现形式可包含B细胞。在一些实施方式中，术语白血病包括Burkitt白血病；慢性淋巴细胞性白血病（CLL）、急性骨髓性白血病（AML）；B细胞急性淋巴细胞性白血病（B-ALL）和T细胞急性淋巴细胞性白血病（T-ALL）。在一个实施方式中，本文所述的术语白血病也包括毛细胞白血病（hairy cell leukemia），通常认为这种白血病在上述的分类方式之外。
可用任何本领域已知的方法诊断白血病。通常首先进行完整血细胞计数（CBC）。CBC对血样中白细胞、红细胞和血小板的数目进行计数。具有大量白细胞和低水平红细胞或血小板的血样可表明有白血病，异常肝肾功能测试可表明白血病是否影响到这些器官。可用流式细胞术作更精细的诊断，例如，利用成熟髓细胞标记物如CD11b和Gr-1确定细胞类型、细胞数目和/或细胞形态。区分各类癌的标记物和组织学标志为本领域技术人员所知（Jaffe，E.S.等编，World Health Organization Classificationof Tumors，Pathology and Genetics of tumors of hematopoietic and lymphoidtissues IARC Press：Lyon，France2001）。对于AML，会出现红细胞、血小板和正常白细胞数量下降。所述症状包括疲乏、呼吸急促、易擦伤和出血，以及感染风险的增加。所述症状是由白血病细胞替换了正常骨髓造成的，所述白血病细胞主要为在骨髓中积累的未成熟的异常白细胞，干扰正常血细胞的产生。
在某些实施方式中，待治疗的癌是B细胞肿瘤、B细胞白血病、B细胞急性淋巴母细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、Burkitt氏淋巴瘤、急性骨髓性白血病和/或T-ALL。当中和外部抗原时，最常见为B细胞成熟的减少或实质上减少。然而，偶发地，特定B细胞持续增殖而不弱化；这样的增殖可导致癌（称为“B细胞淋巴瘤”或“B细胞白血病”）。在某些实施方式中，待治疗的癌是慢性淋巴细胞性白血病（CLL）或慢性骨髓性白血病（CML）。
在一个实施方式中，利用骨髓活体组织切片辅助诊断白血病。骨髓活体组织切片样品可包括骨髓组织或骨髓和骨的混合物。在另一实施方式中，利用细胞遗传学检查个体细胞的染色体。细胞遗传测试利用抽血或骨髓或淋巴结活体组织切片样品。显微检查样品的染色体畸形表明细胞的DNA损伤，以支持对白血病的诊断。在在另一实施方式中，在白血病的诊断中利用脊椎穿刺。通常，从背下部（腰部）取出脑脊液样品。对流体样品的白血病细胞和其它异常进行检查。MRI（核磁共振成像）、CT（电子计算机轴向X射线断层摄影）扫描以及X光为可支持白血病诊断的成像技术。
在某些实施方式中，待治疗的癌是浆细胞肿瘤。浆细胞肿瘤的实例包括多发性骨髓瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞白血病和浆细胞瘤。
可用DSB修复抑制剂治疗以高水平的DNA编辑酶表达为特征的任何癌。例如，肉瘤、上皮细胞癌（肿瘤）、结肠癌、胃癌、肠癌、肝癌、肝细胞癌、乳腺癌、甲状腺癌、食道癌、肺癌、脑癌、头颈癌、黑素瘤、肾癌、前列腺癌、血管瘤、横纹肌肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、纤维肉瘤和胆管癌可能以高水平的DNA编辑酶（例如AID）表达为特征。在某些实施方式中，待治疗的癌是结肠癌、肝癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、肺癌、甲状腺癌和/或胆管癌。可用本领域已知的方法对这些癌中任意一个进行诊断。可用活体组织切片、结肠镜、粪便样品、成像或其它本领域已知的手段检测肿瘤和/或息肉的存在。对由这些方法获得的组织进行组织学检查以确定恶性细胞的存在、种类和排列。区分每一类型淋巴瘤的标记物和组织学标志为本领域技术人员所知（Diagnostic Histopathology ofTumors，Fletcher，C.D.M.（编）第三版，Churchill Livingstone Elsevier，China（2007）；Methods of Cancer Diagnosis，Therapy and Prognosis；Hayat，M.A.（编），（第三卷，Springer（2009））。确定癌的范围及其在体内的位置的进一步测试还可包括进一步的活体组织切片、核医学、X光、CT扫描或MRI。
在某些实施方式中，与用DSB修复抑制剂治疗前或未接受DSB修复抑制剂治疗的患者的癌症的指标、标记物、症状、严重程度、转移、复发和/或肿瘤大小相比，用DSB修复抑制剂治疗DNA编辑酶（例如AID）高表达的癌症患者的癌症的指标、标记物、症状、严重程度、转移、复发和/或肿瘤大小降低至少10%，例如至少20%、至少30%、至少50%、至少75%、至少100%、至少200%以上。
本文所述的技术可涉及至少一种DSB修复抑制剂和含有至少一种所述DSB修复抑制剂的组合物在治疗癌症方面的用途，所述癌症具有升高水平的AID蛋白或mRNA。例如，用含有DSB修复抑制剂的组合物降低肿瘤大小、肿瘤生长、癌细胞计数和癌细胞的扩张或癌症转移。例如，用含有DSB修复抑制剂的组合物降低与以下病症之一相关的症状的严重程度、病程或数量，所述病症仅通过示例的方式给出：B细胞癌、白血病、淋巴瘤、结肠癌、肝癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、肺癌、甲状腺癌、脑癌、肾癌、黑色素瘤、前列腺癌或胆管癌。
本文所述的技术还可涉及使用RAD51介导的链交换修复的至少一种抑制剂或包含RAD51介导的链交换修复抑制剂的组合物的用途，所述用途为：与未经DSB修复抑制剂治疗的患者相比，使用DSB修复抑制剂治疗的患者期望寿命增加或缓解时间增加。
在某些实施方式中，含有DSB修复抑制剂的组合物包含DSB修复抑制剂和药学上可接受的载体。在其它实施方式中，含有DSB修复抑制剂的组合物包含药学上可接受的载体和另一种药学上有效的化合物。
本文所述技术的药物组合物可单独给予或与其它治疗方法共同给予，所述治疗方法包括但不限于免疫治疗或免疫治疗剂，或有利于癌症患者的其它治疗方法或其组合。同在考虑之列的是，本文所述技术的治疗剂可与其它任何对本文所述的癌症之一有效的治疗共同给予。当两种以上治疗剂共同给予时，它们可同时给予或具有给药间的延时（即按最优输送方式）。在其它实施方式中，本文所述技术的药物组合物可包含至少一种DSB修复抑制剂和至少一种其它药剂。
本文所用的术语“免疫治疗”是指用抗体或基予抗体的疗法治疗受试者。本文所用的免疫治疗可以是被动或主动的。本文定义的被动免疫治疗是使抗体被动地转移至受试者（患者）。主动免疫是在受试者（患者）中诱导抗体和/或T细胞应答。
示例的免疫治疗剂包括贝伐珠单抗（bevacizumab）
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阿仑珠单抗（alemtuzumab）
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西妥昔单抗（cetuximab）（Erbitux）、替伊莫单抗（ibritumomab tiuxetan）（Zevalin）、帕尼单抗（panitumumab）（Vectibix）、利妥昔单抗（rituximab）
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和131I的托西莫单抗（tositumomab）
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Corixia Corp.）。利妥昔单抗通过选择性地消耗CD20+B细胞行使功能。利妥昔单抗的治疗效果在Collins-Burow等，Rituximab and its Role as Maintenance Therapy in non-HodgkinLymphoma，Expert Rev Anticancer Ther7（3）:257-73（2007）；Marcus等，The Therapeutic Use of Rituximab in non-Hodgkin′s Lymphoma,Eur JHaemotal Suppl（67）：5-14（2007）；Plosker等，Rituximab：A Review ofits Use in non-Hodgkin′s Lymphoma and Chronic Lymphocytic Leukaemia，Drugs（2003）中描述，以引用的方式将其实体并入本文。贝伐珠单抗（
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Genentech/Roche）阻断血管生成，用于治疗多种癌症；西妥昔单抗（IMC-C225；）是嵌合的（小鼠/人）单克隆抗体，是针对上皮生长因子受体（EGFR）的抑制剂，通过静脉输注给予，用于治疗结肠直肠癌和头颈部鳞状细胞癌的转移。替伊莫单抗（Zevalin）是结合至CD20抗原的单克隆抗体，用于放射性治疗处理某些形式B细胞非Hodgkin氏淋巴瘤。帕尼单抗是特异性结合至上皮生长因子受体（也称为EGF受体、EGFR、ErbB-1和HER1）的全人单克隆抗体，用于治疗结肠直肠癌。
本文所述的某些癌症的其它形式的治疗为干细胞移植。
在一些实施方式中，可在其它治疗之后或之前给予本文所述技术的药物组合物，所述其它治疗包括但不限于免疫治疗剂、化疗剂、放射治疗或对癌症患者有利的其它治疗或其组合。
在一些实施方式中，对受试者给予的周期治疗包含给予含有本文所述DSB修复抑制剂的组合物。随后，在给予受试者的周期治疗中，包含给予另一种化疗、免疫治疗、放射或对癌症患者有利的其它治疗或其组合。每个治疗周期可包含一1次以上给予组合物或治疗，即1次给药、2次给药、5次给药、10次给药、20次给药以上。每个治疗周期可持续至少1天，即至少1天、至少2天、至少1周、至少2周、至少3周、至少4周、至少6周以上。在一些实施方式中，治疗周期间存在的间歇或间隔为至少1天，即即至少1天、至少2天、至少1周、至少2周、至少3周、至少4周、至少6周以上。疗程包含：通过本文所述DSB修复抑制剂的治疗周期，任选地具有间隔；以及通过另一化疗、免疫治疗、放射或对癌症患者有利的其它治疗或其组合的治疗周期，任选地具有部分或整体重复的第二间隔。在一些实施方式中，通过DSB修复抑制剂的治疗周期是第二周期，对癌症患者有利的其它治疗或其组合在第一周期中使用。在一些实施方式中，其它化疗、免疫治疗、放射或对癌症患者有利的其它治疗或其组合包含导致受试者DNA损伤的治疗。在一些实施方式中，其它化疗、免疫治疗、放射或对癌症患者有利的其它治疗或其组合包含多柔比星（doxorubicin）。在一些实施方式中，其它化疗、免疫治疗、放射或对癌症患者有利的其它治疗或其组合包含氟达拉滨（fludarabine）。
其它治疗包括但不限于，在本文所述的方法之前、之中或之后进行的化疗。在一个实施方式中，在给予本文所述组合物或方法之前或之后，而非之中给予化疗。化疗的非限定性实例包括放射或用化疗剂治疗，所述化疗剂如放线菌素（actinomycin）、安吖啶（amsacrine，
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）、蒽环类（anthracyclines）、博来霉素（bleomycin，
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）、白消安（busulfan）、喜树碱（camptothecin）、卡铂（carboplatin，）、苯丁酸氮芥（chlorambucil，
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）、顺铂（cisplatin）、环磷酰胺（cyclophosphamide，
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）、克拉屈滨（cladribine）、阿糖胞苷（cytarabine，
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）、癌得星（cytoxan）、达卡巴嗪（dacarbazine，
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）、更生霉素（dactinomycin）、柔红霉素（daunorubicin）、地塞米松（dexamethasone，
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）、多西他赛（docetaxel）、多柔比星（doxorubicin，
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）、表柔比星（epirubicin）、依托泊苷（etoposide、
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）、氟达拉滨（
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）、六甲蜜胺（hexamethylmelamine）、奥沙利铂（oxaliplatin）、异环磷酰胺（ifosfamide，
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）、异环磷酸胺（iphosphamide）、美法仑（melphalan）、甲氯乙胺（merchlorethamine）、氨甲蝶呤（methotrexate）、丝裂霉素（mitomycin）、米托蒽醌（mitoxantrone）、亚硝基脲（nitrosourea）、紫杉醇（paclitaxel）、普卡霉素（plicamycin）、泼尼松（prednisone）、丙卡巴肼（procarbazine）、替尼泊苷（teniposide）、三亚乙基硫代磷酰胺（triethylenethiophosphoramide）、依托泊苷（etoposide、VPI6），长春新碱（vincristine、
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）、长春花碱（vinblastine）、苯达莫司汀（bendamustine，Ribomustin和Treanda）、CHOP治疗剂、单克隆抗体和c-myc基因抑制剂、DNA甲基转移酶、蛋白酶体和细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclin-dependent kinases）。
化疗可包括引发DNA损伤的试剂。这类试剂的非限定性实例可包括烷基化剂、亚硝基脲、抗代谢物、植物生物碱、植物提取物或放射性同位素。
治疗过程还包括但不限于，1）CODOX-M/IVAC治疗（Magrath方案）-两周期CODOX-M（环磷酰胺、长春新碱、多柔比星和高剂量甲氨蝶呤）与IVAC（异环磷酰胺、依托泊苷和高剂量阿糖胞苷）交替；2）三周期CODOX-M。还包括这类组合治疗的修改版本，如United KingdomLymphoma Group和the Dana-Farber Cancer Institute的适应性Magrath方案。
治疗自体免疫性疾患的方法
如本文所述，本发明的一些实施方式涉及治疗方法，所述治疗方法包含：（a）选定受试者，该受试者具有表达升高水平的活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）的细胞；以及（b）给予受试者治疗有效量的双链断裂修复抑制剂；其中，所述AID的升高水平是比来自健康个体同类细胞的AID水平更高的AID水平。在一些实施方式中，表达升高水平AID的细胞是自体免疫细胞。本文所用的“自体免疫细胞（autoimmune cell）”或“自体反应细胞（autoreactive cell）”是指下述免疫细胞：其针对衍生出该细胞的生物体的细胞或生物组分具有活性或识别出该细胞或生物组分。可作为自体免疫细胞的实例包括但不限于：成体脾细胞、T细胞和B细胞。在一些实施方式中，受试者可为人类受试者。
在一些实施方式中，治疗方法包含（a）选定受试者，该受试者的B细胞表达升高水平的活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）；以及（b）给予受试者治疗有效量的双链断裂修复抑制剂；其中，所述AID的升高水平是比来自健康个体B细胞的AID水平更高的AID水平。在一些实施方式中，表达升高水平AID的B细胞是与自体免疫性疾病相关的B细胞。本文所用的术语“与自体免疫性疾病相关的B细胞”是指在特定的自体免疫性疾病中具有异常功能、行为和/或增殖的B细胞。在一些实施方式中，与自体免疫性疾病相关的B细胞可以是由于其异常功能、行为和/或增殖引发疾病的B细胞。在一些实施方式中，与自体免疫性疾病相关的B细胞可以是由于其异常功能、行为和/或增殖造成一种以上自体免疫性疾病症状的B细胞。在一些实施方式中，具有与自体免疫性疾病相关的B细胞的受试者可以是患有或诊断患有以异常功能、行为和/或增殖的B细胞为特征或原因的自体免疫性疾病的受试者。通过非限定性实例的方式，在系统性红斑狼疮中，受试者的B细胞异常产生自体抗原特异性抗体；在类风湿性关节炎中，受试者的B细胞与受试者的T细胞异常地相互作用。
在某些实施方式中，本文所述的方法利用淋巴重组系统在保留正常细胞的同时诱导患病B细胞自毁，从而选择性地治疗自体免疫性疾病。这一方法利用了“B细胞重组酶AID在同源重组能力减弱的原代B细胞中诱导广泛的基因组断裂和细胞死亡”这一发现。如本文所述，确定了如果用DSB修复抑制剂治疗以DNA编辑酶（例如AID）表达增加为特征的细胞群体，会导致细胞死亡。据此，本文提供了以异常B细胞增殖、类型转换或活化为特征的自体免疫性疾病患者的治疗方法。在一些实施方式中，自体免疫性疾病以增加的B细胞增殖、类型转换或激活为特征。在一些实施方式中，自体免疫性疾病以具有高AID表达的B细胞为特征。在一些实施方式中，所述方法涉及用DSB修复抑制剂对具有高DNA编辑酶表达的细胞的自体免疫性疾病患者进行治疗的方法。在一些实施方式中，所述方法涉及用DSB修复抑制剂对具有高AID表达的B细胞的自体免疫性疾病患者进行治疗的方法。在某些实施方式中，待治疗的自体免疫性疾病是具有AID高表达的B细胞的类型。已知自体免疫性疾病以异常的B细胞增殖、类型转换和/或活化为特征，包括但不限于:红斑狼疮；Wiskott-Aldrich综合征；自体免疫性淋巴细胞增生综合征；重症肌无力；类风湿性关节炎（RA）；狼疮性肾炎；多发性硬化症；系统性红斑狼疮；盘状狼疮；亚急性皮肤性红斑狼疮；皮肤性红斑狼疮（包括冻疮样红斑狼疮）；慢性关节炎；Sjogren氏综合征；自体免疫性肾炎；自体免疫性血管炎；自体免疫性肝炎；自体免疫性心脏炎；自体免疫性脑炎和自体免疫介导的血液病。在某些实施方式中，自体免疫性疾病以DNA编辑酶异常表达为特征。在某些实施方式中，待治疗的自体免疫性疾病是Crohn氏病、溃疡性结肠炎、脉管炎；强直性脊柱炎；
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氏病（
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 disease）；副肿瘤性自体免疫或皮肌炎。在一些实施方式中，待用本文所述的方法治疗的自体免疫性疾病以B细胞增殖异常为特征。
狼疮或红斑狼疮或系统性红斑狼疮（SLE）是会引起机体多部位（特别是皮肤、关节、血和肾）慢性发炎的自体免疫性疾患。机体的免疫系统正常制造的蛋白称为抗体，保护机体对抗病毒、细菌和其它外源材料（即抗原）。在自体免疫性疾患如狼疮或红斑狼疮或SLE中，免疫系统丧失辨别抗原和其自身细胞或组织的能力，从而制造的抗体直接针对其自身的细胞和组织，形成免疫复合物。这些免疫复合物可在组织中逐步形成并引起组织的感染、伤害和/或疼痛。三类最常见类型的狼疮包括系统性红斑狼疮（SLE）、皮肤性红斑狼疮（CLE）和药物诱发的狼疮。其它类型的自体免疫性疾患包括但不限于：亚急性皮肤性红斑狼疮、皮肤性红斑狼疮（包括冻疮样红斑狼疮）、类风湿性关节炎、慢性关节炎、Sjogren氏综合征、自体免疫性肾炎、自体免疫性血管炎、自体免疫性肝炎、自体免疫性心脏炎、自体免疫性脑炎和自体免疫介导的血液病。狼疮或红斑狼疮在Wallace，2000，The Lupus Book：A Guide for Patients andTheir Families，Oxford University Press，修订扩充版；Kuhn等，2004，Cutaneous Lupus Erythematosus，Springer，第一版；以及Lahita，1999，Systemic Lupus Erythematosus，Academic Press，第三版中更加具体地描述，以引用的方式将其实体并入本文。
诊断红斑狼疮的方法为本领域所公知。狼疮存在的实验室测试包括LE Cell测试、反核抗体测试（Anti-Nuclear Antibody Test）以及抗-DNA抗体测试。然而，狼疮通常由特定临床表现识别，包括：（i）关节炎（在90-95%的系统性狼疮人群中出现）；（ii）皮肤变化，如光敏感引发的鼻梁、脸颊和/或眼下方的“蝴蝶”疹，和/或全身各处的红色、凸起的鳞状斑，称为盘状狼疮（在75-80%的狼疮人群中出现）；（iii）血液学异常，如贫血、白细胞减少、血小板减少（在约50%的狼疮人群中出现）；（iv）肾损伤（在50%的系统性狼疮人群中出现）；（v）心或肺病，如心脏或肺内壁的刺激引起心包炎或胸膜炎（在30%的狼疮人群中出现）；以及（vi）神经精神病学的改变（在10%-20%的狼疮人群中出现）。通过非限定性实例的方式，与未诊断为系统性红斑狼疮的受试者的自体抗体水平相比，具有升高水平的至少一种自体抗体的受试者可诊断为系统性红斑狼疮。用于诊断系统性红斑狼疮的自体抗体的实例包括但不限于：抗核抗体（ANA）、抗双链DNA抗体（抗dsDNA）、抗Sm核抗原抗体（抗Sm）、抗磷脂抗体、及其任意组合。相比于未被诊断为系统性红斑狼疮的受试者，这种升高水平可为至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍或至少10倍以上。或者，相比于未诊断为系统性红斑狼疮的受试者，具有升高水平的干扰素-β或干扰素-β基因表达的受试者可诊断为系统性红斑狼疮。相比于未被诊断为系统性红斑狼疮的受试者，这种升高水平可为至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍或至少10倍以上。
在某些实施方式中，与用DSB修复抑制剂治疗前或未接受DSB修复抑制剂治疗的患者的自体免疫性疾病的指标、标记物、症状和/或严重度相比，用DSB修复抑制剂治疗具有高AID表达的B细胞的、患有自体免疫性疾病或自体免疫性疾患的患者，其自体免疫性疾病的指标、标记物、症状和/或严重度减少至少10%，例如至少20%、至少30%、至少50%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%以上。
本文所述的技术可涉及至少一种DSB修复抑制剂和含有至少一种所述DSB修复抑制剂的组合物在治疗自体免疫性疾病或自体免疫性疾患方面的用途，所述自体免疫性疾病或自体免疫性疾患具有下述B细胞，所述B细胞具有升高水平的AID蛋白或mRNA。例如，含有DSB修复抑制剂的组合物用于降低与以下一种病症相关的症状的严重程度、病程或数目，所述病症仅通过实例的方式给出：红斑狼疮；系统性红斑狼疮（SLE）；皮肤性红斑狼疮（CLE）；药物诱导的狼疮；亚急性皮肤性红斑狼疮；皮肤性红斑狼疮（包括冻疮样红斑狼疮）；类风湿性关节炎；Sjogren氏综合征；自体免疫性肾炎；自体免疫性血管炎；自体免疫性肝炎；自体免疫性心脏炎；自体免疫性脑炎和自体免疫介导的血液病。在这一上下文中，“减少”意味着在统计学上显著地减少这一水平。减少可以是例如至少10%、至少20%、至少50%、至少90%或以上。
在某些实施方式中，含有DSB修复抑制剂的组合物包含DSB修复抑制剂和药学上可接受的载体。在其它实施方式中，含有DSB修复抑制剂的组合物包含药学上可接受的载体和另一种药学上有效的化合物。
本文所述技术的药物组合物可单独给予或与其它治疗共同使用，所述治疗包括但不限于抗炎药或其它有利于自体免疫性疾病患者的治疗或其组合。同在考虑之列的是，本文所述技术的治疗剂可与其它任何对本文所述的一种自体免疫性疾病有效的治疗共同给予。当两种或多种治疗剂共同给予时，它们可同时给予或具有给药间的延时（即按最优输送方式）。在其它实施方式中，本文所述技术的药学组合物可包含至少一种DSB修复抑制剂和至少一种其它药剂。
红斑狼疮的治疗剂包括但不限于：非甾体抗炎药（NSAIDs）、皮质类固醇、抗疟疾药（如氯喹、羟氯喹和奎纳克林），免疫抑制剂（例如硫唑嘌呤（azathioprine）、环孢菌素A、烷基化剂、氮芥（nitrogen mustards）、苯丁酸氮芥（chlorambucil）或环磷酰胺）、肝素、阿司匹林、达那唑（danazol，Danocrine）、脱氢表雄酮（dehydroepiandrosterone，DHEA）、长春新碱（vincristine，Oncovin）、华法林（warfarin）、甲基强的松龙（methylprednisolone）脉冲治疗、氨苯砜（dapsone）、沙利度胺（thalidomide，Synovir）、甲基强的松龙琥珀酸钠（methylprednisolonesodium succinate，A-Methapred和Solu-Medrol）、氨甲喋呤（Rheumatrex）、羟氯喹（Plaquenil）、去炎松（triamcinolone，Aristospan）、类视黄醇（如维甲异酸（istretinoin）和依曲替酯（etretinate））。抗炎药（NSAIDs）的非限制性实例包括如阿司匹林、水杨酸、布洛芬、萘普生、奇诺力（clinoril）、奥沙普秦（oxaprozin）和托美丁（tolmetin）。
在一些实施方式中，本文所述技术的药物组合物可在其它治疗之后或之前给予，所述其它治疗包括但不限于抗炎药或免疫抑制剂或其它有益于自体免疫性疾病患者的治疗或其组合。
敏化致死细胞
在某些实施方式中，本文提供了敏化细胞致死和/或诱导或引起细胞死亡的方法。在一些实施方式中，本文提供的引起细胞死亡的方法包含：对细胞给予有效量的DNA编辑酶；随后将细胞与双链断裂修复抑制剂接触；由此引起细胞死亡。在一些实施方式中，本文提供的敏化细胞致死的方法包含：对受试者给予治疗有效量的DNA编辑酶；随后给与受试者双链断裂修复抑制剂；由此将受试者中的细胞敏化导致细胞死亡。在一些实施方式中，DNA编辑酶是APOBEC家族成员、或AID、Rag1或Rag2或SPO11。
在一些实施方式中，DNA编辑酶可以是APOBEC家族成员。APOBEC家族成员的非限定性实例包括APOBEC1（例如SEQ ID NO：138）；APOBEC2（例如SEQ ID NO：139），APOBEC3A（例如SEQ ID NO：140）；APOBEC3C（例如SEQ ID NO：141）；APOBEC3E（例如SEQ IDNO：142）；APOBEC3F（例如SEQ ID NO：143）；APOBEC3G（例如SEQ ID NO：144）；APOBEC3H（例如SEQ ID NO：145）以及APOBEC4（SEQ ID NO：146）。
在一些实施方式中，可通过多肽、对DNA编辑酶进行编码的核酸或包含对DNA编辑酶进行编码的核酸的载体的形式给予DNA编辑酶。在一些实施方式中，DNA编辑酶可以是AID。在一些实施方式中，给予细胞的DNA编辑酶是包含SEQ ID NO：099或其变体、功能片段或同源序列的多肽。在一些实施方式中，给予细胞的DNA编辑酶是编码AID多肽的核酸，例如包含SEQ ID NO：100核酸序列的核酸，从而AID或其变体、功能片段或同源序列会在给予核酸的细胞中表达。
同在考虑之列的是，基因治疗的组合物和方法也用于本文所述的方法。这样的方法允许临床医生将对感兴趣的多肽或RNA分子进行编码的DNA直接导入患者（体内基因治疗）或患者或捐献者分离的细胞（间接体内基因治疗）。相比于直接给与蛋白，基因治疗后转导的细胞产生的治疗蛋白可在例如癌细胞（例如受试者的肿瘤）中维持相对恒定的水平。这样的治疗剂（如AID和/或DNA双链断裂修复抑制剂）的持续产生在慢性病、如癌症的治疗中非常适用。
此外，在本发明所述的一些实施方式中，已开发出使用小分子诱导物的可调控遗传构建物，其可包含于所使用的载体中（Rivera等（1996）Nat.Med.2:1028-32；No等（1996）Proc.Natl.Acad.Sci.USA，93:3346-51；Gossen和Bujard（1992）Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:5547-51；thesystem（Valentis,Inc.,Burlingame,Calif.））。这些系统基于使用工程化的转录因子（该转录因子的活性受到小分子药物的控制）以及反式基因（transgene），其基因表达由调控的转录因子启动（Rivera等（1996）Nat.Med.2:1028-32；Pollock等（2000）Proc.Natl.Acad.Sci.USA97:13221-26；美国专利号6,043,082和6,649,595；Rivera等（1999）Proc.Natl.Acad.Sci.USA96:8657-62）。
本文所述的方法中有用的载体包括但不限于：质粒、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、疱疹病毒和痘病毒载体。
本文所用的术语“转导”是指使用病毒颗粒或病毒将外源核酸导入细胞。
本文所用的术语“转染”是指用方法（如化学方法）将外源核酸（如本文所述的对增加AID的活性和/或水平的试剂进行编码的核酸序列）导入细胞。本文所用的术语转染不包括将外源核酸导入细胞的基于病毒的方法。转染方法包括物理处理（电穿孔、纳米颗粒、磁转染）和基于化学的转染方法。基于化学的转染方法包括但不限于使用环糊精、聚合物、脂质体、纳米颗粒、阳离子脂质体或其混合物（例如，DOPA、Lipofectamine和UptiFectin）、以及阳离子聚合物（如DEAE-葡聚糖或聚乙烯亚胺）的方法。
如本文所述，双链断裂修复抑制剂可以是例如：小分子、多肽、蛋白、RNAi试剂、二苯乙烯衍生物、抗体或本文所述的含有抗体的表位结合片段的多肽。
在一些实施方式中，所述细胞可以是体外细胞、细胞培养物中的细胞或由受试者获得的样品中的细胞。在一些实施方式中，可将DNA编辑酶和/或双链断裂修复抑制剂加入例如维持细胞的细胞培养基。在一些实施方式中，DNA编辑酶和/或双链断裂修复抑制剂可包含例如介导或增强其进入细胞的组合物。用于将试剂输送入体内或体外细胞的合适的组合物在下文中描述，例如脂质体。
在一些实施方式中，所述细胞可以是体内细胞，例如受试者的细胞。
在一些实施方式中，希望靶向特定的细胞或感兴趣的组织（靶细胞或靶组织），例如从而增强载体有效性、最小化有效剂量和/或最小化脱靶效果的副作用。靶向于特定细胞类型的试剂的方法为本领域所公知。对于综述，参见Peng等，“Viral Vector Targeting”，Curr.Opin.Biotechnol.10:454-457，1999；Gunzburg等，“Retroviral Vector Targeting for GeneTherapy”，Cytokines Mol.Ther.2:177-184，1996；Wickham，“TargetingAdenovirus”，Gene Ther.7:110-114，2000；Dachs等，“Targeting GeneTherapy to Cancer：A Review”，Oncol.Res.9:313-325，1997；Curiel，“Strategies to Adapt Adenoviral Vectors for Targeted Delivery”，Ann NYAcad.Sci.886:158171，1999；Findeis等，“Targeted Delivery of DNA forGene Therapy via Receptors”，Trends Biotechnol.11:202205，1993；上述段落中的全部参考文献以引用的方式将其实体并入本文。
一些靶向策略利用细胞受体及其的天然配体的整体或部分。参见例如，Cristiano等，“Strategies to Accomplish Gene Delivery Via theReceptor-Mediated Endocytosis Pathway”,Cancer Gene Ther.,第3卷，No.1，第49-57页,1996年1月-2月；S.C.Philips，“Receptor-Mediated DNADelivery Approaches to Human Gene Therapy”，Biologicals，第23卷，No.1，第13-6页，1995年3月；Michael等，“Strategies to Achieve TargetedGene Delivery Via the Receptor-Mediated Endocytosis Pathway”，GeneTher.，第1卷，No.4,第223-32页，1994年7月；Lin等，“AntiangiogenicGene Therapy Targeting The Endothelium-Specific Receptor TyrosineKinase Tie2”，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，第95卷，第8829-8834页，1998。Sudimack等，“Targeted Drug Delivery Via the Folate Receptor”，Adv.Drug Deliv.，第147-62页，2000年3月；Fan等，“TherapeuticApplication of Anti-Growth Factor Receptor Antibodies”,Curr.Opin.Oncol.，第10卷，No.1，第67-73页，1998年1月；Wadhwa等，“ReceptorMediated Glycotargeting”，J.Drug Target，第3卷，No.2第111-27页，1995；Perales等，“An Evaluation of Receptor-Mediated Gene Transfer UsingSynthetic DNA-Ligand Complexes”，Eur.J.Biochem，第1卷，No2，第226、255-66页，1994年12月；Smith等，“Hepatocyte Directed GeneDelivery by Receptor-Mediated Endocytosis”，Semin Liver Dis.，第19卷，No.1，第83-92页，1999；上述段落中的全部参考文献以引用的方式将其实体并入本文。
可用特定细胞类型表面抗原特异性的抗体、特别是单链抗体作为靶元件。参见例如，Kuroki等，“Specific Targeting Strategies of Cancer GeneTherapy Using a Single-Chain Variable Fragment(scFv)with a High Affinityfor CEA”，Anticancer Res.，第4067-71页，2000；美国专利号6,146,885,toDornburg，标题为“Cell-Type Specific Gene Transfer Using RetroviralVectors Containing Antibody-Envelope Fusion Proteins”；Jiang等，“In VivoCell Type-Specific Gene Delivery With Retroviral Vectors That DisplaySingle Chain Antibodies”，Gene Ther.1999，6:1982-7；Engelstadter等，“Targeting Human T Cells By Retroviral Vectors Displaying AntibodyDomains Selected From A Phage Display Library”，Hum.Gene Ther.2000，11:293-303；Jiang等，“Cell-Type-Specific Gene Transfer Into Human CellsWith Retroviral Vectors That Display Single-Chain Antibodies”，J.Virol1998，72:10148-56；Chu等，“Toward Highly Efficient Cell-Type-SpecificGene Transfer With Retroviral Vectors Displaying Single-ChainAntibodies”，J.Virol1997，71:720-5；Chu等，Retroviral Vector ParticlesDisplaying The Antigen-Binding Site Of An Antibody EnableCell-Type-Specific Gene Transfer，J.Virol1995，69:2659-63；以及Chu等，“Cell Targeting With Retroviral Vector Particles ContainingAntibody-Envelope Fusion Proteins”，Gene Ther.1994，1:292-9；上述段落中的全部参考文献以引用的方式将其实体并入本文。
给药和剂量
可在相同的药物组合物或不同的药物组合物（同时或不同时）中给予受试者DSB修复抑制剂和第二药物活性剂。当不同时给予时，DSB修复抑制剂和药物活性剂可在给予另一种5分钟、10分钟、20分钟、60分钟、2小时、3小时、4小时、8小时、12小时、24小时、48小时、72小时、1周、2周、3周以上之内给予。DSB修复抑制剂和药物活性剂可在不同的药物组合物中给予，给药途径可不同。例如，DSB修复抑制剂可通过本领域已知的合适途径给予，包括但不限于口服或胃肠道外途径，包括静脉内给药、肌肉内给药、瘤内、病灶内、皮内、腹膜内、皮下给药、经皮给药、气道给药（气雾剂）、肺部给药、鼻部给药、直肠给药和局部给药（包括口腔含化药和舌下给药），药物活性剂可通过不同途径给予，例如本领域惯用的给予所述药物活性剂的途径。在非限定性实例中，DSB修复抑制剂可口服给予，而药物活性剂可皮下给予。
给予DSB修复抑制剂的剂量范围取决于化合物的形式、效能以及期望癌症症状、标记物或指标降低至何种程度，例如期望症状、恶心、肿瘤大小等降低的百分比。在某些实施方式中，剂量不能大到引起不良的副作用。通常，剂量随病人的年龄、条件和性别改变，并可由本领域技术人员确定。所述剂量也可由私人医师在并发症（complication）中调整。
在某些实施方式中，一次性给予患者DSB修复抑制剂的有效剂量。在某些实施方式中，重复给予患者DSB修复抑制剂的有效剂量。可给予患者治疗剂量的DSB修复抑制剂，如0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、40mg/kg或50mg/kg。可在一段时间（如在5分钟、10分钟、15分钟、20分钟或25分钟的时间内）静脉输注给予DSB修复抑制剂。例如规律地重复给药，如按小时给药3小时、6小时、12小时以上，或如按两周（即每两周）给药1个月、2个月、3个月、4个月以上。在初步治疗方案后，可基于降低的频率给药治疗。例如，在每两周给药3个月后，每月重复给药共6个月或1年以上。给予DSB修复抑制剂可将癌症的标记物水平或症状（例如，肿瘤大小）降低至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或至少90%以上。
在给予全剂量的DSB修复抑制剂前，可以较小量给予患者，如5%输注，并监测不良效果、如过敏反应。
由于其对癌或自体免疫的效果，DSB修复抑制剂或由其制备的药物组合物可增强生命的质量。
效力测定
可通过例如测定癌症的标记物、指标或症状或其它合适的可测参数，评估治疗或预防疾病的效力。通过测定所述参数中的任意一种或参数的任意组合，从而监测治疗或预防的效力，为本领域技术人员能力所及。
当癌症的一个或多个参数存在统计学上显著的改善或当预期到的恶化或症状产生并未发生时，治疗是明显的。作为实例，可测的癌症参数的有益变化为至少10%，优选为至少20%、30%、40%、50%以上可作为有效治疗的指示。如本领域已知，给定DSB修复抑制剂或药物配方的效力可使用癌症的实验动物模型来评定。使用实验动物模型时，观测到标记物在统计学上显著地增高，则治疗的效力是明显的。
临床技术人员可确定给定RAD51链交换修复抑制剂的效力。然而，用本文所述的化合物治疗后，如果癌症的任意或全部标志、症状或标记物以有利的方式改变，其它临床可接受的症状改善甚至减轻了例如至少10%，治疗被认为是如本文所用术语的“有效的治疗”。可通过住院治疗或所需的医疗干预评估个体恶化的停滞（即，使得疾病的病程停止），从而测定效力。测定这些指标的方法为本领域技术人员所知和/或在本文中描述。例如，治疗白血病包括对个体或动物（一些非限定性实例包括人或动物）的白血病进行任何治疗，包括：（1）抑制疾病，如阻滞或减缓新血管的病态生长；或（2）减缓疾病，例如引起症状的退化，减少白血病引发细胞的数量；以及（3）预防或降低发生白血病的可能性。治疗疾病的有效量意味着当给予有需要的哺乳动物时，足以对该疾病引起如术语所定义的有效的治疗。可通过评估例如白血病的物理指标（如高的白细胞数目、对感染的免疫应答受损、白血病引发细胞的存在等），对试剂的效力进行确定。可在癌症的动物模型中评估效力，例如在移植人癌细胞的小鼠中，以及任何引起癌症的至少一种症状、标记物或参数降低的组合物或配方的治疗或给药。
可通过本文所述癌症的任意症状的减少测定效力，所述症状例如：挫伤、出血、瘀伤（petechiae）、感染、呼吸困难（dyspnea）、面色苍白（pallor）、恶心、发烧、发冷、夜间盗汗、流感样症状、疲乏、饱腹感和/或血小板、白细胞和/或红细胞的增加。
也可通过住院治疗或所需的医疗干预评估个体恶化的停滞（即，使得疾病的病程停止或至少减慢），从而测定效力。
本文所述的治疗效力的另一标记物是存活。具体癌症的统计存活率已很好地建立——当根据本文所述的方法治疗个体或个体的群体时，如果存活超过预期时间或大于预期存活率，治疗被认为是有效的。
可在治疗过程中使用本文所述的方法进行效力测试。在开始治疗前以及在开始治疗一段时间后的一个更晚的具体时间段记录对与特定病痛（aliment）相关的症状的数目和严重程度的测定。例如，白血病在骨髓中起始并可能在检出前扩散至其它器官，因此在其它癌症类型中常规进行的惯例的肿瘤分期，在对白血病的分期中并不有效。反而，医师依赖于细胞学（细胞的）分类系统识别白血病的类型和亚型。特定白血病的预后或结果、以及对于治疗的可能的响应可用这种细胞分类系统进行确定。在一个实施方式中，对急性白血病的分类方法为法美英协作组（FAB）系统。根据FAB分类，急性白血病可分为8种急性骨髓性白血病（AML）亚型和3种急性淋巴细胞性白血病（ALL）亚型。本领域技术人员知晓确定各种不同的白血病的疾病严重程度的方法，并易于基于这种分类方式诊断白血病的严重程度。
根据本文所述的方法的治疗的效力可通过如下的替代或间接的癌症标记物进行评估。不为限定的目的，此类指示癌症的治疗效力的标记物包括红细胞或血小板数目的增加、白细胞计数的正常化、肝和肾功能测试的改善、乳糖脱氢酶水平的降低、滤泡性淋巴瘤预后国际指数（FLIPI）的改善（Lopez-Guillermo，A.等，J Clin Oncol1994；12:1343-1348；Solal-Céligny等，Blood2004104:1258-1265）、CD11b+和Gr-1+细胞的减少、通过骨髓活体组织切片确定的骨髓形态的改善、通过细胞学测试确定的细胞中异常DNA的减少，以及脑脊液中存在的癌细胞的减少。每种类型癌症的特定测试为本领域技术人员所知。通过非限定性实例的方式，通过检测免疫表型为CD20+、CD10+、Bcl-6+、Bcl-2－、TdT－以及单型为sIg+的细胞和基本上全部细胞Ki67+（增殖），以及c-myc和IgH或IgL参与的易位（translocation），而无bcl-2或bcl-6基因参与的重排，可诊断和监测Burkitt氏淋巴瘤。
本领域技术人员将理解的是，为改善研究中诊断的问题，有多种方式使用对两种或多种标记物的测定。在一个非常简单但通常有效的方式中，如果对于所研究的至少一个标记物样品是阳性的，则假设为阳性结果。例如或通过检测免疫表型为CD20+、CD10+、Bcl-6+、Bcl-2－、TdT－以及单型为sIg+的细胞以及基本上全部细胞Ki67+（增殖），以及c-myc和IgH或IgL参与的易位，而无bcl-2或bcl-6基因参与的重排，即为诊断患有癌症（Burkitt淋巴瘤）的情况。然而通常在数学上/统计学上评估标记物的组合。优选测定标记物表中标记物的值（例如Burkitt淋巴瘤的免疫表型）和血细胞计数，并在数学上组合，其组合值与所代表的诊断问题相关。优选诊断问题为DSB修复抑制剂在治疗癌症中的有效性。优选与未接受DSB修复抑制剂的对照相比较来给出相对风险。优选对照在年龄和其它协变量上相匹配。
可运用任何本领域合适的数学方法对标记物的值进行组合。将标记物的组合与疾病或疾病发生风险相联系的公知数学方法使用例如下述方法：判别分析（DA）（即线性DA、二次DA和正则化DA）、Kernel方法（即SVM）、非参数方法（即k-最邻近分类法）、PLS（偏最小二乘）、基于树型结构的方法（即逻辑回归、CART、随机森林方法、Boosting/Bagging方法）、广义线性模型（即Logisti回归）、基于主成分分析的方法（即SIMCA）、广义可加模型、基于模糊逻辑的方法、神经网络和基于遗传算法的方法。本领域技术人员对于选择合适的方法评估本文所述技术的标记物组合毫无问题。建立标记物相关性（例如存在或不存在癌症）所使用的方法优选选自：DA（即线性判别分析、二次判别分析和正则化判别分析）、Kernel方法（即SVM）、非参数方法（即k-最邻近分类法）、PLS（偏最小二乘）、基于树型结构的方法（即逻辑回归、CART、随机森林方法、Boosting方法）或广义线性模型（即Logisti回归）。这些统计方法的细节在下列参考文献中找到：Ruczinski，I.，J.of Computational andGraphical Statistics，12（2003）475-511；Friedman，J.H.，RegularizedDiscriminant Analysis，JASA84（1989）165-175；Hastie，T.，Tibshirani，R.，Friedman，J.，The Elements of Statistical Learning,Springer Series inStatistics，2001；Breiman，L.，Friedman，J.H.，Olshen，R.A.，Stone，C.J.，（1984）Classification and regression trees，California：Wadsworth；Breiman，L.Random Forests，Machine Learning，45（2001）5-32；Pepe，M.S.，The Statistical Evaluation of Medical Tests for Classification andPrediction，Oxford Statistical Science Series，28（2003）以及Duda，R.O.，Hart，P.E.，Stork，D.G.，Pattern Classification，Wiley Interscience，第二版（2001）。
在一些实施方式中，可利用相关生物标记物组合的最优多元取舍，用于例如区分具有低、中和高的癌症发生风险的病人。在这类多元分析中，所述标记物并非独立而形成标记物表。
诊断方法的精确度最好通过其接受者操作特性（ROC）描述（特别参见Zweig，M.H.和Campbell，G.，Clin.Chem.39（1993）561-577）。ROC图是在观测数据的全范围内由连续变化的判定阈值获得的全部灵敏度/特异性对的图。
实验室测试的临床表现依赖于其诊断的精确度或将受试者正确归类至临床相关子群的能力。诊断精确度测定了所述测试正确区分所研究的受试者的两种不同情况的能力。所述情况分别为例如健康和疾病，或良性与恶性疾病。
在各种情况下，通过绘制判定阈值全部范围内灵敏性相对于第一特异性的ROC图，描绘了两种分布的重叠。y轴是灵敏度，或正确-阳性分数[定义为(正确-阳性结果数目)/(正确-阳性数目+错误-阴性数目)]。这还被称为疾病或病症存在的阳性率。仅从受影响的子群中计算所述阳性率。x轴是错误-阳性分数，或第一特异性[定义为(错误-阳性结果数目)/(正确-阴性数目+错误-阳性数目)]。这一特异性指数完全由不受影响的子群计算。由于通过使用两个不同子群的检验结果对正确-阳性和错误-阳性分数进行完全独立地计算，ROC图独立于样品的患病率。ROC图的每个点代表了一个对应于特定判定阈值的灵敏度/第一特异性对。具有完美区分度的检验（两个分布结果无重叠）其ROC图通过左上角，其中正确-阳性分数是1.0或100%（完美的灵敏度），而错误-阳性分数是0（完美的特异性）。无区分度（两组结果的分布相同）检验的理论图是从左下角至右上角的45度对角线。大部分点落在两个极值之间。（如果ROC图完全落在45度对角线上，容易通过将“阳性”标准反转为“大于”或“小于”进行修正，或反之亦然。）定量上讲，绘制点越接近左上角，检验的总体精确度越高。
对实验室测试的诊断精确性定量的一个便利的目标是通过单个数字表示其性能。最常用的整体测量是ROC的曲线下面积。惯例上，所述面积通常>0.5（如果不是这样，可逆向判定规则以使得成立）。数值范围在1.0（对两组的检验值完美区分）和0.5（两组的检验值无明显的分布差别）。所述面积不仅依赖于图的特定部分（如最接近对角线的点或90%特异性处的灵敏度），还依赖于图的整体。这是ROC图有多接近完美图（面积=1.0）的定量描述性表示。
剂量限制性毒性（DLT）的定义
使用NCI CTC第三版的标准并考虑某些药物已知和可接受的毒性，将为评估剂量增加的目的而确定的DLT定义如下。药物处理前达到的毒性不考虑在DLT中。DLT的标准包括：药物处理前给予最大量止吐药的情况下，任何恶心和3级或以上的呕吐；全部的其它药物相关的3级或以上非血液学毒性；持续>7天中性粒细胞数目<500细胞/μL；给药后任何发热性中性粒细胞减少（定义为T>101F）且中性粒细胞数目<500细胞/μL；血小板数目<10,000细胞/μL或3级，以及有出血迫使血液产生或血小板渗流（transfusion）的证据；促红细胞生成素共给药的情况下，4级以上的血红蛋白毒性。所述响应通过标准准则测定。在每两轮治疗后对病人进行重新评估。除基线/筛选扫描外，最初记载受试者响应的4周后获得验证性扫描。
药物组合物
对受试者给予的组合物可通过药学上可接受的组合物给予。这些药学上可接受的组合物包含治疗有效量的至少一种本文所述的DSB修复抑制剂，所述DSB修复抑制剂与一种以上药学上可接受的载体（添加剂）和/或填充剂共同制成制剂。如下详述，本文所述技术的药物组合物可被具体配制用于以固体或液体形式给药，包括适宜于下列给药的形式：（1）口服给药，例如顿服药（drenches，水性或非水性的溶液或悬浮液）、灌服药（gavage）、锭剂（lozenge）、糖衣剂（dragee）、胶囊剂、丸剂、片剂（例如，目标是用于口含吸收、舌下吸收和全身吸收的片剂）、大丸剂（boluse）、散剂、颗粒剂、应用于舌部的膏剂；（2）胃肠道外给药，例如，作为如无菌溶液或悬浮液或缓释制剂经皮下注射（subcutaneous）、肌内注射（intramuscular）、静脉注射（intravenous）或硬膜外注射（epiduralinjection）给药；（3）局部施用，例如，作为霜剂、乳液、凝胶、油膏或控释贴剂或喷雾剂施用于皮肤；（4）阴道内给药或直肠内给药，例如作为阴道栓剂（pessary）、霜剂或泡沫剂；（5）舌下给药（sublingually）；（6）眼部给药（ocularly）；（7）经皮给药（transdermally）；（8）经粘膜给药（transmucosally）；或（9）鼻部给药（nasally）。此外，可使用药物递送系统将化合物注射入或植入患者体内。参见例如，Urquhart等，Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.24：199-236(1984)；Lewis编著，“ControlledRelease of Pesticides and Pharmaceuticals”（Plenum Press，New York，1981）；美国专利No.3,773,919；以及美国专利No.353,270,960。
已研究了多种组织化的表面活性结构并用于药的配方。所述表面活性结构包括单层、胶束、双层和囊泡。囊泡（例如脂质体）因其在药物递送方面提供的特异性和作用持续性而备受关注。脂质体是具有亲脂性材料和水性内部形成的膜的单层或多层囊泡。水性部分包含待输送的组合物。脂质体可为阳离子型（Wang等，Biochem.Biophys.Res.Commun.，1987，147，980-985）、阴离子型（Zhou等，Journal of Controlled Release，1992，19，269-274）或非离子型（Hu等S.T.P.Pharma.Sci.,，1994，4，6，466）。脂质体可包含多种不同的磷脂、脂类、糖脂和/或聚合物，所属聚合物能够赋予特定性质并用于某些应用，所述脂质体在现有技术中描述（Allen等，FEBS Letters，1987，223，42；Wu等，Cancer Research，1993，53，3765；Papahadjopoulos等，Ann.N.Y.Acad.Sci.，1987，507，64；Gabizon等，PNAS，1988，85，6949；Klibanov等，FEBS Lett.，1990，268，235；Sunamoto等，Bull.Chem.Soc.Jpn.，1980，53，2778；Illum等，FEBS Lett.，1984，167，79；Blume等，Biochimica et Biophysica Acta，1990，1029，91；Hughes等，Methods Mol Biol.2010；605:445-59；美国专利号4,837,028；5,543,152；4,426,330；4,534,899；5,013,556；5,356,633；5,213,804；5,225,212；5,540,935；5,556,948；5,264,221；5,665,710；欧洲专利EP0445131B1；EP0496813B1以及欧洲专利公开号WO88/04924；WO97/13499；WO90/04384；WO91/05545；WO94/20073；WO96/10391；WO96/40062；WO97/0478）。
本文所述技术的组合物可制备和配置成乳剂或微乳剂的剂型。乳剂通常为一种液体分散至另一种液体的非均相体系的液滴形式，所述液滴通常直径超过0.1μm，并在本领域中描述。微乳剂可定义为水、油和两亲物的体系，为单一的旋光各向同性的和热力学稳定的液体溶液。这些药物输送系统的方法全部在本领域中描述（参见例如，Ansel′sPharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，Allen，LV.，Popovich NG.和Ansel HC.，2004，Lippincott Williams&Wilkins编（第8版），New York，NY；Idson，in Pharmaceutical Dosage Forms，Lieberman，Rieger和Banker（编），1988，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，第1卷，p.199；Rosoff，in Pharmaceutical Dosage Forms，Lieberman，Rieger和Banker（编）1988，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，第1卷，p.245;Block，in Pharmaceutical Dosage Forms，Lieberman，Riegerand Banker（编）1988，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，第2卷，p.199、245&335；Higuchi等，in Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，1985，p.301；Leung和Shah，in:Controlled Release of Drugs:Polymers and Aggregate Systems，Rosoff,M.编，1989，VCH Publishers，New York，第185-215页；Schott，in Remington′sPharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，1985，p.271；Constantinides等，Pharmaceutical Research，1994，11，1385-1390；Ritschel，Meth.Find.Exp.Clin.Pharmacol.，1993，13，205；Ho等，J.Pharm.Sci.，1996，85，138-143；Lee等，Critical Reviews in Therapeutic Drug CarrierSystems，1991，p.92；美国专利号6,191,105；7,063,860；7,070,802；7,157,099）。
在一个实施方式中，脂质体或乳剂配方包含表面活性剂。表面活性剂在如乳剂（包括微乳剂）和脂质体的剂型中广泛应用。亲水基团（也称为“头部”）的性质为对制剂中使用的不同表面活性剂进行分类提供了最有效的手段（Rieger，in Pharmaceutical Dosage Forms，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，1988，p.285）。合适的表面活性剂包括脂肪酸和/或其酯或盐、胆汁酸及其盐。在一些实施方式中，表面活性剂可以是阴离子、阳离子或非离子。已有表面活性剂在药物制品、制剂和乳剂中的用途的综述（Rieger，in Pharmaceutical Dosage Forms，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，1988，p.285）。
在一个实施方式中，本文所述的技术运用多种渗透增强剂作用于DSB修复抑制剂的跨膜输送效率。渗透增强剂可分属于5大类群（即表面活性剂、脂肪酸、胆盐、螯合剂和非螯合非表面活性剂）之一，全部另有描述（参见例如，Malmsten，M.，Surfactants and polymers in drugdelivery，Informa Health Care，New York，NY，2002；Lee等，CriticalReviews in Therapeutic Drug CarrierSystems，1991，p.92；Takahashi等，J.Pharm.Pharmacol.，1988，40，252；Touitou，E.等，Enhancement in DrugDelivery，CRC Press，Danvers，MA，2006；Muranishi，Critical Reviewsin Therapeutic Drug Carrier Systems，1990，7，1-33；El Hariri等，J.Pharm.Pharmacol.，1992，44，651-654；Brunton，Goodman&Gilman′s ThePharmacological Basis of Therapeutics第38章，第9版，Hardman等编，McGraw-Hill，New York，1996，pp.934-935；Swinyard，Remington′sPharmaceutical Sciences第39章，第18版，Gennaro编，Mack PublishingCo.，Easton，Pa.，1990，第782-783页；Yamamoto等，J.Pharm.Exp.Ther.，1992，263，25；Yamashita等，J.Pharm.Sci.，1990，79，579-583；Jarrett，J.Chromatogr.，1993，618，315-339；Katdare，A.等，Excipient developmentfor pharmaceutical，biotechnology，and drug delivery，CRC Press，Danvers，MA，2006；Buur等，J.Control Rel.，1990，14，43-51）。
口服制剂及其制备在美国专利6,887,906、美国专利公开号20030027780和美国专利号中6,747,014具体描述，上述文献以引用的方式将其实体并入本文。胃肠道外、实质内、鞘内、脑室内或肝内给药的组合物和制剂可包括灭菌水溶液，还可含有缓冲剂、稀释剂和其它合适的添加剂（例如但不限于，渗透增强剂、载体化合物和其它药学上可接受的载体或赋形剂）。水性悬浮剂还可含有增加悬浮剂粘性的物质，包括例如羧甲基纤维素钠、山梨醇和/或葡聚糖。悬浮液还可含有稳定剂。
本发明的组合物还可额外含有通常在药物组合物中存在的辅助成分，其含量为本领域已知的使用水平。因此，例如，所述组合物可以含有额外的、相容性的药物活性材料、如止痒剂、收敛剂、局部麻醉剂或抗炎剂，或可以含有用于物理配制不同剂型的本发明所述技术的组合物的额外材料、如染料、调味剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、增稠剂和稳定剂。然而，这样的材料在加入后不应过度地干扰本发文所述技术的组合物组分的生物学活性。所述制剂能够灭菌并且在需要时，能够与不会破坏性地与配方中DSB修复抑制剂相互作用的辅助试剂进行混合，所述辅助试剂例如，润滑剂、防腐剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、影响渗透压的盐、缓冲剂、着色剂、调味剂和/或芳香物质等。
合适的乳化剂包括合成的非离子型乳化剂，例如：乙氧基化醚、乙氧基化酯、聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段共聚物和磷脂。也可使用天然存在的磷脂、如卵磷脂或大豆磷脂，以及改性或人工处理的磷脂或其混合物。在一些实施方式中，乳化剂为卵磷脂和大豆磷脂。卵黄磷脂包含磷脂酰胆碱、卵磷脂和磷脂酰乙醇胺。
本文所述技术的组合物还可包含稳定剂。阴离子型稳定剂包括例如：与聚乙二醇缀合的磷脂酰乙醇胺（PEG-PE）；和磷脂酰甘油，其具体实例为二肉豆蔻酰磷脂酰甘油（DMPG）。其它稳定剂包括但不限于：油酸及其钠盐；胆酸与脱氧胆酸和它们各自的盐；阳离子型脂质（例如硬脂胺和油胺）；和3|3-[N-(N′,N′-二甲基氨基乙烷)氨甲酰基]胆固醇（DC-Chol）。
可通过加入合适的张力调节剂将本文所述技术的组合物制成与血液等渗。甘油是最常用的张力调节剂。替代性的张力调节剂包括木糖醇、甘露醇和山梨醇。药物组合物通常配制为生理学中性pH，通常在6.0-8.5范围内。通过加入碱可以调节pH，所述碱例如NaOH或NaHCO3；或者在一些情况下加入酸，例如HCl。
所述技术的组合物可与药学上安全的油-水乳剂共同配置，所述油-水乳剂包含植物油、磷脂乳化剂（通常为蛋卵磷脂或大豆卵磷脂）和张力调节剂（如例如
Figure BDA0000470509870001191
（Abbott Laboratories，NorthChicago，IL）和
Figure BDA0000470509870001192
（Fresenius Kabi AB，Uppsala，Sweden））或其它类似的油-水乳剂。
可在细胞培养或实验动物中通过标准药学程序测定毒性和疗效，例如测定LD50（使50%的群体致死的剂量）和ED50（对50%的群体在治疗上有效的剂量）。毒性和疗效之间的剂量比为治疗指数，可以用LD50/ED50的比值来表示。优选显示出治疗指数大的组合物。鼠遗传学已产生大量用于研究DSB修复抑制剂的小鼠模型。此类模型可用于DSB修复抑制剂的体内测试以及确定治疗有效剂量。合适的小鼠模型是，例如本文所述的AICDA-/-或用患者衍生组织移植（PDX）开发的模型。在本文所述技术有利于研究DSB修复抑制剂的某些实施方式中，将原代的人癌细胞（如白血病）移入免疫功能低下的小鼠品系，如Nod-scid、NSG（NOD-scid Il2ry-null；NOD.Cg-Prkdc-scid<Il2rg>/Wjl/SzJ）或NRG（NOD-RagIl2ry-null；NOD-Rag1<null>IL2rg<null>/Wjl/SzJ）。
可将由细胞培养分析和动物研究得到的数据用于得出人用剂量的范围。该化合物的剂量优选处于包括ED50并几乎没有毒性或没有毒性的循环浓度范围内。该剂量可在这一范围内根据所使用的剂型和所利用的给药途径而变化。
可由细胞培养分析初步评估所述治疗有效剂量。可在动物模型中得出达到循环血浆浓度范围的剂量，所述范围包括在细胞培养中测定的IC50（即，达到症状的半最大抑制（half-maximum inhibition）的治疗剂浓度）。可通过例如高效液相色谱测定血浆中的水平。可通过合适的生物分析监测任何特定剂量的效果。
可与载体材料结合产生单一剂型的DSB修复抑制剂的量通常是产生治疗效果的化合物的量。一般在100个百分点中，这一剂量的范围为约0.1%-99%的化合物，优选为约5%-约70%、最优选为10%-约30%。
可由医师确定剂量，如果有必要的话，可将剂量调整至适合所观察到的治疗效果。一般而言，给予组合物以使得给予的DSB修复抑制剂的剂量为1μg/kg至150mg/kg、1μg/kg至100mg/kg、1μg/kg至50mg/kg、1μg/kg至20mg/kg、1μg/kg至10mg/kg、1μg/kg至1mg/kg、100μg/kg至100mg/kg、100μg/kg至50mg/kg、100μg/kg至20mg/kg、100μg/kg至10mg/kg、100μg/kg至1mg/kg、1mg/kg至100mg/kg、1mg/kg至50mg/kg、1mg/kg至20mg/kg、1mg/kg至10mg/kg、10mg/kg至100mg/kg、10mg/kg至50mg/kg、或10mg/kg至20mg/kg。将会理解的是，这里给出的范围包含了所有的中间范围，例如：1mg/kg至10mg/kg的范围包括1mg/kg至2mg/kg、1mg/kg至3mg/kg、1mg/kg至4mg/kg、1mg/kg至5mg/kg、1mg/kg至6mg/kg、1mg/kg至7mg/kg、1mg/kg至8mg/kg、1mg/kg至9mg/kg、2mg/kg至10mg/kg、3mg/kg至10mg/kg、4mg/kg至10mg/kg、5mg/kg至10mg/kg、6mg/kg至10mg/kg、7mg/kg至10mg/kg、8mg/kg至10mg/kg、9mg/kg至10mg/kg等。将进一步理解的是，上述给定范围中间的范围也在本发明的范围内，例如，在1mg/kg至10mg/kg的范围内包含了例如2mg/kg至8mg/kg、3mg/kg至7mg/kg、4mg/kg至6mg/kg等范围。
关于治疗持续时间和频率，对熟练的临床医师而言，一般对受试者进行监测以确定所述治疗何时提供治疗效益，并确定是否增加或减少剂量、是否增加或减少给药频率、是否中止治疗、是否恢复治疗或是否对治疗方案进行其它改变。给药计划可根据多个临床因素（如，受试者对DSB修复抑制剂的敏感性）在一周一次至一天一次的范围内变动。可一次给予期望的剂量，或分成亚剂量（subdose，例如，2-4份亚剂量）并在一段时间内（例如，以一天中的合适间隔或其它合适的计划）给予期望的剂量。这样的亚剂量可以采用单位剂量形式进行给药。在一些实施方式中，给药是长期的，例如，在数周或数月的时间段内每天给予一份或多份剂量。给药计划的实例为：在1周、2周、3周、4周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月或6个月或以上的时间段内每日给予1次、每日给予2次、每日给予3次或每日给予4次以上。可使用连续输注或控释制剂输送给予所需剂量。在该情况下，在每个子剂量中含有的DSB修复抑制剂需相应更小，以完成每日剂量。剂量单元还可为用于在几天内输送（例如使用传统的缓释制剂，该缓释制剂在几天的时间内提供了DSB修复抑制剂的缓释）的化合物。缓释剂制剂为本领域所公知，并特别有利于将药剂输送至具体位点，从而能够用于本文所述技术的试剂。在一些实施方式中，剂量单元含有对应的每日剂量的倍数。
本领域技术人员将理解的是，某些因素可影响需要对受试者进行有效治疗的剂量和时间点，包括但不限于疾病或疾患的严重程度、以前的治疗、受试者的综合健康状况和/或年龄、以及存在的其它疾病。此外，用治疗有效量的组合物治疗受试者可包括单次治疗或系列治疗。可使用传统方法或基于使用本文其它部分所述的合适的动物模型进行体内测试，评估本文所述DSB修复抑制剂的有效剂量和体内半衰期。
在一些实施方式中，药物组合物可包括（a）一种或多种DSB修复抑制剂和（b）一种或多种本文所述药学上有效的化合物。
筛选分析
在一些实施方式中，本文所述技术涉及确定一种药剂是否为DNA双链断裂修复抑制剂的方法，例如筛选试剂以确定其中的一种或多种是否为DNA双链断裂修复抑制剂。
在一些实施方式中，确定一种测试试剂是否为DNA双链断裂修复抑制剂的方法包含：（a）将测试试剂与表达DNA编辑酶的细胞进行接触，以及（b）确定细胞的活力；其中细胞活力的降低意味着测试试剂为DNA双链断裂修复抑制剂。
在一些实施方式中，确定一种测试试剂是否为DNA双链断裂修复抑制剂的方法包含：（a）将测试试剂与表达DNA编辑酶的细胞进行接触，以及（b）确定步骤（a）中细胞的活力；（c）将测试试剂与不表达DNA编辑酶的细胞进行接触；（d）确定步骤（c）中细胞的活力；以及（e）用步骤（b）中活细胞的分数除以步骤（d）中活细胞的分数从而确定比例；其中比例小于0.8意味着测试试剂是DNA双链断裂修复抑制剂。
在本文所述筛选方法的上下文中，“表达DNA编辑酶的细胞”是以比对照参比细胞水平更高的水平表达DNA编辑酶的细胞。在一些实施方式中，对照参比细胞可为未活化、未转化、健康的B细胞。在一些实施方式中，“表达DNA编辑酶的细胞”可以是与在未活化、未转化、健康的人B细胞中观测的总体突变率相比，具有更高总体突变率的细胞。在一些实施方式中，表达DNA编辑酶的细胞是表达升高水平AID的细胞。
在一些实施方式中，与测试试剂接触的表达DNA编辑酶的细胞可以是每细胞表达至少1拷贝DNA编辑酶mRNA的细胞，例如，每细胞1拷贝以上、每细胞10拷贝以上、或每细胞100拷贝以上。在一些实施方式中，与测试试剂接触的表达DNA编辑酶的细胞可以是每细胞表达至少5拷贝DNA编辑酶的细胞。在一些实施方式中，与测试试剂接触的表达DNA编辑酶的细胞可以是每细胞表达至少10拷贝DNA编辑酶的细胞。在一些实施方式中，与测试试剂接触的表达DNA编辑酶的细胞可以是每细胞表达至少100拷贝DNA编辑酶的细胞。
在一些实施方式中，与测试试剂接触的表达DNA编辑酶的细胞可以是每细胞表达至少100拷贝DNA编辑酶多肽的细胞，例如，每细胞100拷贝以上、每细胞200拷贝以上、每细胞300拷贝以上、每细胞400拷贝以上、每细胞500拷贝以上、每细胞600拷贝以上、每细胞1000拷贝以上、每细胞5000拷贝以上胞、或每细胞10,000拷贝以上。在一些实施方式中，与测试试剂接触的表达DNA编辑酶的细胞可以是每细胞表达至少200拷贝DNA编辑酶多肽的细胞。在一些实施方式中，与测试试剂接触的表达DNA编辑酶的细胞可以是每细胞表达至少300拷贝DNA编辑酶多肽的细胞。在一些实施方式中，与测试试剂接触的表达DNA编辑酶的细胞可以是每细胞表达至少400拷贝DNA编辑酶多肽的细胞。在一些实施方式中，与测试试剂接触的表达DNA编辑酶的细胞可以是每细胞表达至少500拷贝DNA编辑酶多肽的细胞。在一些实施方式中，与测试试剂接触的表达DNA编辑酶的细胞可以是每细胞表达至少600拷贝DNA编辑酶多肽的细胞。在一些实施方式中，与测试试剂接触的表达DNA编辑酶的细胞可以是每细胞表达至少1,000拷贝DNA编辑酶多肽的细胞。在一些实施方式中，与测试试剂接触的表达DNA编辑酶的细胞可以是每细胞表达至少5,000拷贝DNA编辑酶多肽的细胞。在一些实施方式中，与测试试剂接触的表达DNA编辑酶的细胞可以是每细胞表达至少10,000拷贝DNA编辑酶多肽的细胞。
在一些实施方式中，与测试试剂接触的细胞可选自于由如下细胞组成的组：刺激后的B细胞、脾B细胞、癌细胞或自体免疫细胞。在一些实施方式中，癌细胞可以是患有疾病的受试者的B细胞，所述疾病选自于由下列疾病所组成的组：淋巴瘤、白血病、Burkitt氏淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥散性大B细胞淋巴瘤、B细胞白血病、B细胞急性淋巴母细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）、急性骨髓性白血病（AML）、慢性骨髓性白血病（CML）；以及Epstein-Barr病毒转化的人外周血B淋巴细胞衍生细胞系GM05881、GM07323和GM13689。
在一些实施方式中，与测试试剂接触的细胞可以是稳定转染的细胞系，所述细胞系转染有对DNA编辑酶进行编码的载体。适于转染的细胞系包括但不限于：3T3、CH12F3、Caco-2、CCRF-CEM、CHO、CH12-F3、COS-7、HCT116、HEK293、HL-60、HepG2、Jurkat、KG-1、K-562、MCF-7、MDCK、MG-63、Mo-B、MOLT-4、Ramos（RA1）和U2-OS。此外，由原代细胞、胚胎干细胞和诱导多能干细胞（iPS）建立的细胞系可用于筛选。
在一些实施方式中，所述细胞可以是经处理从而表达更高水平DNA编辑酶的细胞，例如刺激后的B细胞或含有外源多肽（其包含DNA编辑酶）和/或编码DNA编辑酶的外源核酸的细胞。
在本文所述筛选方法的上下文中，“测试试剂”或“测试化合物”可以是核酸（DNA或RNA）、小分子、适配体、蛋白、肽、抗体、含有抗体的表位结合片段的多肽、抗体片段、肽核酸（PNA）、锁核酸（LNA）、有机或无机小分子、糖类、寡糖、多糖、生物大分子（例如肽、蛋白以及肽类似物和衍生物）、模拟肽（peptidomimetics）、核酸、核酸类似物和衍生物、生物材料提取物（所述生物材料如细菌、植物、真菌或哺乳动物细胞或组织）、天然存在或合成的组合物、肽、适配体和抗体及其片段。在一些实施方式中，测试试剂可以是二苯乙烯、二苯乙烯衍生物或本文所述的二苯乙烯类化合物。二苯乙烯、二苯乙烯衍生物、二苯乙烯类化合物和其它DNA双链断裂修复抑制剂如上文所述。测试试剂和化合物也如上文所述。
在本文所述筛选方法的上下文中，“确定细胞活力”是指测定或检测细胞代谢、生长、结构和/或增殖的任何方面（指示着健康细胞、存活细胞或死细胞/不具活力的细胞）。可利用本领域已知的比色、发光、辐射和/或荧光分析。在一些实施方式中，确定细胞活力可包含使用血细胞计数器进行手动细胞计数。在一些实施方式中，确定细胞活力可包含使用活-死细胞染色，例如对活细胞或死细胞进行染色。
通过非限定性实例的方式，用于确定细胞活力的比色技术包括台盼蓝拒染法。简单说来，使用血细胞计数器对可被台盼蓝染色的细胞进行计数。存活细胞排斥染料而已死细胞和将死的细胞摄取蓝色染料，从而易于在光学显微镜下区分。中性红被存活细胞摄取而在细胞的溶酶体中聚集；可通过对中性红染色细胞的数目进行定量而在光学显微镜下确定存活细胞。
通过非限定性实例的方式，用于确定细胞活力的荧光技术包括荧光DNA插入剂碘化丙啶。碘化丙啶被存活细胞排斥而对死细胞的核进行染色。可使用碘化丙啶标记细胞的流式细胞术对存活细胞和死细胞进行定量。乳酸脱氢酶（LDH）的释放意味着细胞的结构损伤和细胞死亡，可通过分光光度酶分析对其进行测定。溴脱氧尿苷（BrdU）插入新合成的DNA，可用荧光标记的抗体对其进行检测。荧光染料Hoechst33258对DNA进行标记，可用于定量细胞的增殖（例如流式细胞术）。荧光染料羧基荧光素二乙酸酯琥珀酰亚胺酯（CFSE或CFDA-SE）的定量加入可提供对细胞分裂的分析（例如流式细胞术）。这一技术可在体外或体内使用。7-氨基放线菌素D（7-AAD）是与DNA缔合时产生光谱位移的荧光嵌入剂，能够提供细胞分裂分析（例如流式细胞仪）。
通过非限定性实例的方式，用于确定细胞增殖的辐射方法包括[3H]-胸苷，其插入活细胞新合成的DNA，常用于确定细胞的增殖。可通过闪烁计数定量死细胞的铬（51Cr）释放，从而定量细胞活力。
通过非限定性实例的方式，用于确定细胞活力的发光技术包括CellTiter-Glo发光细胞活力分析（Promega Madison Wis.）。这一技术对存在的ATP量进行定量，确定存活细胞的数目。
确定细胞活力的试剂盒可商购得到，例如MUTLITOX-FLOURTM叠加细胞毒性分析（Cat.No.G9200；Promega，Inc.；Madison，WI）。
在一些实施方式中，确定细胞活力的方法可包含高通量方法，例如可利用能够检测荧光的multiplate reader检测活-死细胞染色。在一些实施方式中，可通过自动化的图像获取和分析进行成像分析。
本文所述技术的一些实施方式可限定为下列编号段落中的任何一项。
1.一种治疗方法，所述方法包括：
（a）获取源自受试者的生物样品；
（b）测定DNA编辑酶的水平；以及
（c）向具有可检测水平的DNA编辑酶的受试者给予治疗有效量的DNA双链断裂修复抑制剂。
2.一种治疗方法，所述方法包括：
向确定具有可检测水平的DNA编辑酶的受试者给予治疗有效量的DNA双链断裂修复抑制剂。
3.一种治疗方法，所述方法包括：
（a）选择具有下述细胞的受试者，所述细胞表达升高水平的DNA编辑酶；以及
（b）向所述受试者给予治疗有效量的DNA双链断裂修复抑制剂；
其中，所述DNA编辑酶的升高水平是比来自健康个体的相同类型细胞中的DNA编辑酶水平更高的DNA编辑酶水平。
4.如段落1所述的方法，其中，所述生物样品包含血细胞。
5.如段落1所述的方法，其中，所述生物样品包含B细胞。
6.如段落1-5中任一项所述的方法，其中，在表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的细胞中，DNA编辑酶的水平统计上显著地高于来自健康受试者的正常细胞中的DNA编辑酶水平。
7.如段落1-6中任一项所述的方法，其中，所述DNA编辑酶选自于由下列酶所组成的组：
重组激活基因1（RAG1）；重组激活基因2（RAG2）；孢子形成特异性蛋白11（SPO11）；载脂蛋白B mRNA编辑酶，催化多肽样（APOBEC）家族成员；以及活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）。
8.如段落7所述的方法，其中，所述DNA编辑酶为活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）。
9.如段落8所述的方法，其中，在表达升高水平的AID的B细胞中，活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）的水平显著高于来自健康受试者的未活化B细胞中表达的AID水平。
10.如段落1-9中任一项所述的方法，其中，所述受试者为人类受试者。
11.如段落1-10中任一项所述的方法，其中，所述表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的细胞或生物样品为癌细胞。
12.如段落1-11中任一项所述的方法，其中，所述受试者患有癌症。
13.如段落1-11中任一项所述的方法，其中，所述表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的细胞或生物样品为自体免疫细胞。
14.如段落1-13中任一项所述的方法，其中，所述受试者患有选自于由下列病症所组成的组中的病症：
淋巴瘤、白血病以及浆细胞肿瘤。
15.如段落14所述的方法，其中，所述淋巴瘤选自于由下列淋巴瘤所组成的组：
非Hodgkin氏淋巴瘤；Burkiit氏淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤；淋巴浆细胞性淋巴瘤；MALT淋巴瘤；滤泡性淋巴瘤；扩散性大B细胞淋巴瘤；以及T细胞淋巴瘤。
16.如段落14所述的方法，其中，所述白血病选自于由下列白血病所组成的组：
急性淋巴母细胞性白血病（ALL）、Burkitt氏白血病；B细胞白血病；B细胞急性淋巴母细胞性白血病；慢性淋巴细胞性白血病（CLL）；急性骨髓性白血病（AML）；慢性骨髓性白血病（CML）；以及T细胞急性淋巴母细胞性白血病（T-ALL）。
17.如段落14所述的方法，其中，所述浆细胞肿瘤选自于由下列浆细胞肿瘤所组成的组：
多发性骨髓瘤；浆细胞骨髓瘤；浆细胞性白血病；以及浆细胞瘤。
18.如段落12所述的方法，其中，所述受试者患有癌症，所述癌症选自于由下列癌症所组成的组：
上皮细胞癌；结肠癌、肝癌、胃癌；肠癌；食道癌；乳腺癌；肺癌；以及甲状腺癌。
19.如段落1-10和13中任一项所述的方法，其中，所述受试者患有自体免疫性疾病。
20.如段落19所述的方法，其中，所述自体免疫性疾病选自于由下列疾病所组成的组：
红斑狼疮；Wiskott-Aldrich综合征；自体免疫性淋巴组织增生综合征；重症肌无力；类风湿性关节炎（RA）；狼疮性肾炎；多发性硬化；系统性红斑狼疮、盘状狼疮、亚急性皮肤性红斑狼疮、包括冻疮样红斑狼疮在内的皮肤性红斑狼疮、慢性关节炎、Sjogren氏综合征、炎症性慢性鼻窦炎、结肠炎、乳糜泻、炎症性肠病、Barrett氏食道症、炎症性胃炎、自体免疫性肾炎、自体免疫性脉管炎、自体免疫性肝炎、自体免疫性心脏炎、自体免疫性脑炎、以及自体免疫介导的血液系统疾病。
21.如段落1-20中任一项所述的方法，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂降低一种或多种基因的表达或活性，所述基因选自于由下列基因所组成的组：
Rad51；Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；Rad51D；XRCC2；XRCC3；RAD54；RAD52；BRCA1；BRCA2；ATM；ATR；MRE11；RAD50；NBS1；WRN；BLM；RECQ4；LIG4；XRCC4；PRKDC；DCLRE1C；XRCC6；XRCC5；以及XLF。
22.如段落1-21中任一项所述的方法，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂选自于由下列物质所组成的组：
小分子；蛋白质；肽；抗体；抗体片段；蛋白质结合蛋白；核糖核酸；脱氧核糖核酸；适配体；肽核酸（PNA）；以及锁核酸（LNA）。
23.如段落1-20中任一项所述的方法，其中，DNA双链断裂修复抑制剂为二苯乙烯、二苯乙烯类化合物或上述物质的衍生物。
24.如段落23所述的方法，其中，所述二苯乙烯或二苯乙烯衍生物为式V的化合物：
或者其立体异构体、对映体、前药或药学上可接受的盐；
其中，R1可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R2可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R3可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R4可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R5可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R6可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R7可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R8可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R9可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R10可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，X可选自于由下列基团所组成的组：C(R21)2、-C(O)N(R22)-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-SO2-、-CH(R11)CH(R12)-、-C(R11)=C(R12)-、以及
其中，R11可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R12可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，每一R21可独立地选自于由下列基团所组成的组：氢、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、以及以上基团的任意组合；
其中，每一R22可独立地选自于由下列基团所组成的组：氢、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、以及以上基团的任意组合。
25.如段落21所述的方法，其中，所述二苯乙烯衍生物为4,4′-二异硫氰基二苯乙烯-2,2′-二磺酸（DIDS）。
26.如段落21所述的方法，其中，所述二苯乙烯或二苯乙烯衍生物选自于由下列物质所组成的组：
(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))二乙酰胺；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(2-甲基丙酰胺)；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(2-甲氧基乙酰胺)；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))二甲烷磺酰胺；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))二环丙烷磺酰胺；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(丙烷-2-磺酰胺)；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(二甲基氨基-磺酰胺)；(E)-N-(4-(4-氨基苯乙烯基)苯基)丙烷-2-磺酰胺；(E)-1,1′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(3-甲基硫脲)；(E)-1,1′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(3-异丙基硫脲)；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)乙酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)异丁酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-2-甲氧基乙酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)甲烷磺酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)环丙烷磺酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)丙烷-2-磺酰胺；N′-(4-{(E)-2-[4-(二甲基氨基)苯基]-1-乙烯基}苯基)-N,N-二甲基磺酰胺；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-甲基硫脲；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-异丙基硫脲；(E)-1-环丙基-3-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)硫脲；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-甲基脲；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-异丙基脲；(E)-1-环丙基-3-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)脲；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-乙酰胺基苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-异丁酰胺基苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(2-甲氧基乙酰胺基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(环丙烷磺酰胺基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(1-甲基乙基磺酰胺基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-乙酰胺基苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-异丁酰胺基苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(2-甲氧基乙酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(甲基磺酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(环丙烷磺酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(1-甲基乙基磺酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-环丙基硫脲基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-乙基脲基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸)钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(环丙烷磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-环丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(甲基磺酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-环丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-乙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-乙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-甲基硫脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-甲基硫脲基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-异丙基硫脲基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-乙基脲基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸)钠；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N-甲基苯甲酰胺)；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N-异丙基苯甲酰胺)；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N,N-二甲基苯甲酰胺)；(E)-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(吗啉代甲酮)；(E)-5-(4-羟基苯乙烯基)苯-1,3-二醇(3,5,4′-三羟基-反-二苯乙烯)；以及白藜芦醇。
27.如段落21所述的方法，其中，所述二苯乙烯或二苯乙烯衍生物选自于由下列物质所组成的组：
(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(丙烷-2-磺酰胺)；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)环丙烷磺酰胺；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(环丙烷磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(二甲基氨基-磺酰胺)；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)丙烷-2-磺酰胺；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸)钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N-甲基苯甲酰胺)；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-环丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸盐/酯)；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(环丙烷磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；以及(E)-5-乙酰胺基-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯。
28.如段落20所述的方法，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂选自于由下列物质所组成的组：
4-甲基喹唑啉-2-甲酰胺；苯并[h]异喹啉-6-胺；5,6-二甲基-2-巯基甲基苯并咪唑；(E)-1-(2-羟基苯基)-3-(吡啶-3-基)丙-2-烯-1-酮；N4-丁基-6-氯代嘧啶-2,4-二胺；1-黄华碱；6-氨基-5-亚硝基-2-苯基嘧啶-4(1H)-酮；以及4-(2-氨基-4-硝基苯基氨基)苯酚。
29.如段落20所述的方法，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂选自于由下列物质所组成的组：
7-氮杂吲哚-3-甲醛；2-氨基-4-苯基苯酚；3-(1-甲基-3-吡咯烷基)吲哚；1-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-a]喹诺酮；2-氨基-5-硝基-1H-苯并咪唑；2-(5-硝基-2-亚糠基)氨基乙醇-N-氧化物；硝呋隆；α-巯基-N,2-萘基乙酰胺；1-thermospine；N4-丁基-6-氯-2,4-嘧啶二胺；2-(2-羟基-6-丙烷-2-基氧基-环己基)乙酸；6-氨基-5-亚硝基-2-苯基-1H-嘧啶-4-酮；4-氨基-2-羟基苯基)胂酸；螺[1,2-二氢化茚-3,5′-咪唑啉]-2′,4′-二酮；N～4～-(4-甲氧基苯基)-6-甲基嘧啶-2,4-二胺；2-氨基-9-戊基-3H-嘌呤-6-硫酮；2-(4-甲氧基苯基)-3-(吡啶-3-基)丙-2-烯腈；2-氯嘧啶-4,6-二甲酰胺；2-氨基-3H-吩噁嗪-3-酮；2-甲基-N-苯甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；4-(苯甲基氨基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶；2-氨基-1-萘磺酸；N-仲丁基-3-甲基苯甲酰胺；苯并[h]异喹啉-6-胺；以及2-(2-甲基环己亚基)肼甲酰胺。
30.如段落1-20中任一项所述的方法，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂为抗体或多肽，所述抗体或多肽包含蛋白质结合蛋白或抗体的抗原结合片段。
31.如段落1-20中任一项所述的方法，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂为RNAi试剂，所述RNAi试剂选自于由下列物质所组成的组：
MiRNA；shRNA；siRNA；amiRNA；dsRNA，反义RNA或者核糖酶。
32.如段落1-31中任一项所述的方法，其中所述DNA双链断裂修复抑制剂进一步包含药学上可接受的载体。
33.如段落1-32中任一项所述的方法，所述方法进一步包含给予治疗剂。
34.如段落1-33中任一项所述的方法，其中，通过对由怀疑具有可检测水平或升高水平的受试者获得的生物样品中的DNA编辑酶多肽、mRNA或活性的水平进行测量，来识别具有表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的细胞的受试者。
35.如段落1-34中任一项所述的方法，其中，通过对由怀疑具有升高水平的受试者获得的生物样品中的DNA编辑酶多肽、mRNA或活性的水平进行测量，并与由健康受试者获得的生物样品中发现的DNA编辑酶多肽、mRNA或活性的水平进行比较，来识别具有表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的细胞的受试者，其中，测试样品中DNA编辑酶多肽、mRNA或活性的量增加表示需要以DNA双链断裂修复抑制剂对受试者进行治疗。
36.如段落34或35所述的方法，其中，对DNA编辑酶多肽的水平进行测量包含使用一种或多种分析，所述分析选自于由下列分析所组成的组：
Western印迹；免疫沉淀；酶联免疫吸附分析（ELISA）；放射免疫分析（RIA）；夹心法分析；蛋白质原位阵列；免疫组织染色；放射免疫计量分析；凝胶扩散沉淀反应；免疫扩散分析；原位免疫分析；沉淀反应；免疫荧光分析；定量原位蛋白质分析（AQUA）；质谱和免疫电泳分析。
37.如段落34-36中任一项所述的方法，其中，对DNA编辑酶多肽水平的测定包含使用分析，所述分析使用结合至所述DNA编辑酶多肽的抗体、抗体片段、蛋白质结合蛋白或者肽。
38.如段落34-37中任一项所述的方法，其中，所述抗体或抗体片段为单克隆抗体。
39.如段落34-38中任一项所述的方法，其中，使用可检测的标签对结合至所述DNA编辑酶多肽的抗体、抗体片段、蛋白质结合蛋白或肽进行标记。
40.如段落34或35所述的方法，其中，对DNA编辑酶mRNA的水平进行测量包含使用一种或多种分析，所述分析选自于由下列分析所组成的组：
RT-PCR；定量RT-PCR；杂交分析；Northern印迹；基于微阵列的表达分析；转录扩增；自持序列复制；高通量测序；以及RNA-Seq。
41.如段落1-40中任一项所述的方法，其中，对DNA编辑酶的活性进行测量包含使用一种或多种分析对基因组或基因组的一部分的总体突变状态进行测定，所述分析选自于由下列分析所组成的组：
杂交；高通量测序；外显子组测序；荧光原位杂交（FISH）、PCR、以及基因组测序；
其中，突变状态比正常突变状态高出2%以上表明DNA编辑酶具有活性。
42.如段落35-36或41中任一项所述的方法，其中，对活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）的活性的测量包含使用一种或多种分析对靶基因IGH、BCL6、MYC、BCL11A、CD93、PIM1和/或PAX5中的超突变进行测定，所述分析选自于由以下分析所组成的组：
杂交；高通量测序；外显子组测序；荧光原位杂交（FISH）、PCR、以及基因组测序。
43.如段落35或36所述的方法，其中，对活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）的活性的测量包含使用磷酸化H2AX分析、53BP1分析或RAD51分析。
44.一种致使细胞死亡的方法，所述方法包含：
（a）向细胞给予有效量的DNA编辑酶；以及
（b）随后使步骤（a）的细胞与DNA双链断裂修复抑制剂进行接触；
从而致使细胞死亡。
45.一种使细胞对细胞死亡敏化的方法，所述方法包含：
（c）向受试者给予治疗有效量的DNA编辑酶，使细胞对使用DNA双链断裂修复抑制剂导致的细胞死亡敏化；以及
（d）随后向所述受试者给予DNA双链断裂修复抑制剂。
46.如段落44-45中任一项所述的方法，其中，以选自于由下列形式所组成的组中的形式给予所述DNA编辑酶：
多肽；编码DNA编辑酶的核酸；以及包含编码DNA编辑酶的核酸的载体。
47.如段落44-46中任一项所述的方法，其中，所述DNA编辑酶选自于由下列酶所组成的组：
重组激活基因1（RAG1）；重组激活基因2（RAG2）；孢子形成特异性蛋白11（SPO11）；载脂蛋白B mRNA编辑酶，催化多肽样（APOBEC）家族成员；以及活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）。
48.如段落44-47中任一项所述的方法，其中，所述DNA编辑酶为活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）。
49.一种对测试试剂是否为DNA双链断裂修复抑制剂进行确定的方法，所述方法包含：
a）使表达DNA编辑酶的细胞与测试试剂相接触；以及
b）测定步骤a）的细胞的细胞活力；
其中，细胞活力降低表明所述测试试剂为DNA双链断裂修复抑制剂。
50.如段落49所述的方法，所述方法进一步包含：
c）使不表达DNA编辑酶的细胞与所述测试试剂进行接触；
d）测定步骤c）的细胞的细胞活力；以及
e）对步骤b）的活细胞的分数与步骤d）中活细胞的分数的比值进行测定；
其中，比值低于0.8表明所述测试试剂为DNA双链断裂修复抑制剂。
51.如段落49或50所述的方法，其中，所述表达DNA编辑酶的细胞为表达AID的细胞。
52.如段落51所述的方法，其中，所述表达AID的细胞为刺激后的B细胞。
53.如段落49-52中任一项所述的方法，其中，所述细胞为癌细胞。
54.如段落49-53中任一项所述的方法，其中，使用编码DNA编辑酶的核酸载体对所述细胞进行转染。
55.如段落49-54中任一项所述的方法，其中，所述细胞为选自于由下列细胞系所组成的组的细胞系：CH12-F3、3T3、CH12F3、Caco-2、CCRF-CEM、CHO、CH12-F3、COS-7、HCT116、HEK293、HL-60、HepG2、Jurkat、KG-1、K-562、MCF-7、MDCK、MG-63、Mo-B、MOLT-4、Ramos（RA1）以及U2-OS。
56.如段落49-55中任一项所述的方法，其中，所述细胞为自体免疫细胞。
57.一种式XXIV的化合物：
上述化合物的立体异构体或前药；
其中，X为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
58.如段落57所述的化合物，其中，X为钠。
59.一种式VIII的化合物；
Figure BDA0000470509870001392
上述化合物的立体异构体、前药或药学上可接受的盐。
60.一种式X的化合物；
Figure BDA0000470509870001401
上述化合物的立体异构体、前药或药学上可接受的盐。61.一种式XXV的化合物；
Figure BDA0000470509870001402
上述化合物的立体异构体或前药；
其中，X为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
62.如段落61所述的化合物，其中，X为钠。
63.一种式XXXI的化合物；
上述化合物的立体异构体或前药；
其中，X为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
64.如段落63所述的化合物，其中，X为钠。
65.一种式XXXII的化合物；
上述化合物的立体异构体或前药；
其中，X为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
66.如段落65所述的化合物，其中，X为钠。
67.一种式XXXIII的化合物；
Figure BDA0000470509870001411
上述化合物的立体异构体或前药；
其中，X为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
68.如段落67所述的化合物，其中，X为钠。
69.一种式XXXIV的化合物；
Figure BDA0000470509870001412
上述化合物的立体异构体或前药；
其中，X为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
70.如段落69所述的化合物，其中，X为钠。
71.一种式XXXV的化合物；
上述化合物的立体异构体或前药；
其中，X为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
72.如段落71所述的化合物，其中，X为钠。
73.DNA双链断裂修复抑制剂在治疗确定具有可检测水平的DNA编辑酶的受试者中的用途。
74.如段落73所述的用途，其中，通过下列步骤确定所述受试者具有可检测水平的DNA编辑酶：
（a）获取源自所述受试者的生物样品；以及
（b）测量DNA编辑酶的水平。
75.DNA双链断裂修复抑制剂在治疗受试者中的用途，所述方法包含：
（a）选择具有表达升高水平的DNA编辑酶的细胞的受试者；以及
（b）向所述受试者给予治疗有效量的DNA双链断裂修复抑制剂；
其中，所述DNA编辑酶的升高水平为高于来自健康个体的同类型细胞中的DNA编辑酶水平的DNA编辑酶水平；
76.如段落73所述的用途，其中，所述生物样品包含血细胞。
77.如段落73所述的用途，其中，所述生物样品包含B细胞。
78.如段落73-77中任一项所述的用途，其中，在所述表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的细胞中，DNA编辑酶的水平在统计上显著地高于来自健康受试者的正常细胞中的DNA编辑酶水平。
79.如段落73-78中任一项所述的用途，其中，所述DNA编辑酶选自于由下列酶所组成的组：
重组激活基因1（RAG1）；重组激活基因2（RAG2）；孢子形成特异性蛋白11（SPO11）；载脂蛋白B mRNA编辑酶，催化多肽样（APOBEC）家族成员；以及活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）。
80.如段落79所述的用途，其中，所述DNA编辑酶为活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）。
81.如段落80所述的用途，其中，在表达升高水平的AID的B细胞中，活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）的水平显著高于来自健康受试者的未活化B细胞中表达的AID水平。
82.如段落73-81中任一项所述的用途，其中，所述受试者为人类受试者。
83.如段落73-82中任一项所述的用途，其中，表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的生物样品或细胞为癌细胞。
84.如段落73-83中任一项所述的用途，其中，所述受试者患有癌症。
85.如段落73-84中任一项所述的用途，其中，表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的生物样品或细胞为自体免疫细胞。
86.如段落73-85中任一项所述的用途，其中，所述受试者患有选自于由下列病症所组成的组中的病症：
淋巴瘤、白血病以及浆细胞肿瘤。
87.如段落86所述的用途，其中，所述淋巴瘤选自于由下列淋巴瘤所组成的组：
非Hodgkin氏淋巴瘤；Burkiit氏淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤；淋巴浆细胞性淋巴瘤；MALT淋巴瘤；滤泡性淋巴瘤；扩散性大B细胞淋巴瘤；以及T细胞淋巴瘤。
88.如段落86所述的用途，其中，所述白血病选自于由下列白血病所组成的组：
急性淋巴母细胞性白血病（ALL）、Burkitt氏白血病；B细胞白血病；B细胞急性淋巴母细胞性白血病；慢性淋巴细胞性白血病（CLL）；急性骨髓性白血病（AML）；慢性骨髓性白血病（CML）；以及T细胞急性淋巴母细胞性白血病（T-ALL）。
89.如段落86所述的用途，其中，所述浆细胞肿瘤选自于由下列浆细胞肿瘤所组成的组：
多发性骨髓瘤；浆细胞骨髓瘤；浆细胞性白血病；以及浆细胞瘤。
90.如段落86所述的用途，其中，所述受试者患有癌症，所述癌症选自于由下列癌症所组成的组：
上皮细胞癌；结肠癌、肝癌、胃癌；肠癌；食道癌；乳腺癌；肺癌；以及甲状腺癌。
91.如段落73-82和85中任一项所述的用途，其中，所述受试者患有自体免疫性疾病。
92.如段落91所述的用途，其中，所述自体免疫性疾病选自于由下列疾病所组成的组：
红斑狼疮；Wiskott-Aldrich综合征；自体免疫性淋巴组织增生综合征；重症肌无力；类风湿性关节炎（RA）；狼疮性肾炎；多发性硬化；系统性红斑狼疮、盘状狼疮、亚急性皮肤性红斑狼疮、包括冻疮样红斑狼疮在内的皮肤性红斑狼疮、慢性关节炎、Sjogren氏综合征、炎症性慢性鼻窦炎、结肠炎、乳糜泻、炎症性肠病、Barrett氏食道症、炎症性胃炎、自体免疫性肾炎、自体免疫性脉管炎、自体免疫性肝炎、自体免疫性心脏炎、自体免疫性脑炎、以及自体免疫介导的血液系统疾病。
93.如段落73-92中任一项所述的用途，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂降低一种或多种基因的表达或活性，所述基因选自于由下列基因所组成的组：
Rad51；Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；Rad51D；XRCC2；XRCC3；RAD54；RAD52；BRCA1；BRCA2；ATM；ATR；MRE11；RAD50；NBS1；WRN；BLM；RECQ4；LIG4；XRCC4；PRKDC；DCLRE1C；XRCC6；XRCC5；以及XLF。
94.如段落73-93中任一项所述的用途，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂选自于由下列物质所组成的组：
小分子；蛋白质；肽；抗体；抗体片段；蛋白质结合蛋白；核糖核酸；脱氧核糖核酸；适配体；肽核酸（PNA）；以及锁核酸（LNA）。
95.如段落73-93中任一项所述的用途，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂为二苯乙烯、二苯乙烯类化合物或上述物质的衍生物。
96.如段落95所述的用途，其中，所述二苯乙烯或二苯乙烯衍生物为式V的化合物：
或者上述化合物的立体异构体、对映体、前药或药学上可接受的盐；
其中，R1可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R2可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R3可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R4可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R5可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R6可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R7可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R8可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R9可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R10可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，X可选自于由下列基团所组成的组：C(R21)2、-C(O)N(R22)-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-SO2-、-CH(R11)CH(R12)-、-C(R11)=C(R12)-、以及
其中，R11可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R12可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，每一R21可选自于由下列基团所组成的组：氢、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、以及以上基团的任意组合;
其中，每一R22可选自于由下列基团所组成的组：氢、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、以及以上基团的任意组合。
97.如段落95所述的用途，其中，所述二苯乙烯衍生物为4,4′-二异硫氰基二苯乙烯-2,2′-二磺酸（DIDS）。
98.如段落95所述的用途，其中，所述二苯乙烯或二苯乙烯衍生物选自于由下列物质所组成的组：
(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))二乙酰胺；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(2-甲基丙酰胺)；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(2-甲氧基乙酰胺)；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))二甲烷磺酰胺；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))二环丙烷磺酰胺；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(丙烷-2-磺酰胺)；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(二甲基氨基-磺酰胺)；(E)-N-(4-(4-氨基苯乙烯基)苯基)丙烷-2-磺酰胺；(E)-1,1′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(3-甲基硫脲)；(E)-1,1′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(3-异丙基硫脲)；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)乙酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)异丁酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-2-甲氧基乙酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)甲烷磺酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)环丙烷磺酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)丙烷-2-磺酰胺；N′-(4-{(E)-2-[4-(二甲基氨基)苯基]-1-乙烯基}苯基)-N,N-二甲基磺酰胺；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-甲基硫脲；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-异丙基硫脲；(E)-1-环丙基-3-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)硫脲；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-甲基脲；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-异丙基脲；(E)-1-环丙基-3-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)脲；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-乙酰胺基苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-异丁酰胺基苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(2-甲氧基乙酰胺基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(环丙烷磺酰胺基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(1-甲基乙基磺酰胺基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-乙酰胺基苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-异丁酰胺基苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(2-甲氧基乙酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(甲基磺酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(环丙烷磺酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(1-甲基乙基磺酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-环丙基硫脲基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-乙基脲基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸)钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(环丙烷磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-环丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(甲基磺酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-环丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-乙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-乙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-甲基硫脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-甲基硫脲基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-异丙基硫脲基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-乙基脲基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸)钠；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N-甲基苯甲酰胺)；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N-异丙基苯甲酰胺)；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N,N-二甲基苯甲酰胺)；(E)-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(吗啉代甲酮)；(E)-5-(4-羟基苯乙烯基)苯-1,3-二醇(3,5,4′-三羟基-反-二苯乙烯)；以及白藜芦醇。
99.如段落95所述的用途，其中，所述二苯乙烯或二苯乙烯衍生物选自于由下列物质所组成的组：
(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(丙烷-2-磺酰胺)；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)环丙烷磺酰胺；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(环丙烷磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(二甲基氨基-磺酰胺)；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)丙烷-2-磺酰胺；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸)钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N-甲基苯甲酰胺)；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-环丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸盐/酯)；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(环丙烷磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；以及(E)-5-乙酰胺基-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯。
100.如段落94所述的用途，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂选自于由下列物质所组成的组：
4-甲基喹唑啉-2-甲酰胺；苯并[h]异喹啉-6-胺；5,6-二甲基-2-巯基甲基苯并咪唑；(E)-1-(2-羟基苯基)-3-(吡啶-3-基)丙-2-烯-1-酮；N4-丁基-6-氯嘧啶-2,4-二胺；1-黄华碱；6-氨基-5-亚硝基-2-苯基嘧啶-4(1H)-酮；以及4-(2-氨基-4-硝基苯基氨基)苯酚。
101.如段落94所述的用途，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂选自于由下列物质所组成的组：
7-氮杂吲哚-3-甲醛；2-氨基-4-苯基苯酚；3-(1-甲基-3-吡咯烷基)吲哚；1-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-a]喹诺酮；2-氨基-5-硝基-1H-苯并咪唑；2-(5-硝基-2-亚糠基)氨基乙醇-N-氧化物；硝呋隆；α-巯基-N,2-萘基乙酰胺；1-thermospine；N4-丁基-6-氯-2,4-嘧啶二胺；2-(2-羟基-6-丙烷-2-基氧基-环己基)乙酸；6-氨基-5-亚硝基-2-苯基-1H-嘧啶-4-酮；4-氨基-2-羟基苯基)胂酸；螺[1,2-二氢化茚-3,5′-咪唑啉]-2′,4′-二酮；N～4～-(4-甲氧基苯基)-6-甲基嘧啶-2,4-二胺；2-氨基-9-戊基-3H-嘌呤-6-硫酮；2-(4-甲氧基苯基)-3-(吡啶-3-基)丙-2-烯腈；2-氯嘧啶-4,6-二甲酰胺；2-氨基-3H-吩噁嗪-3-酮；2-甲基-N-苯甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；4-(苯甲基氨基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶；2-氨基-1-萘磺酸；N-仲丁基-3-甲基苯甲酰胺；苯并[h]异喹啉-6-胺；以及2-(2-甲基环己亚基)肼甲酰胺。
102.如段落73-94中任一项所述的用途，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂为抗体或多肽，所述抗体或多肽包含蛋白质结合蛋白或抗体的抗原结合片段。
103.如段落73-94中任一项所述的用途，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂为RNAi试剂，所述RNAi试剂选自于由下列物质所组成的组：
miRNA；shRNA；siRNA；amiRNA；dsRNA；反义RNA或核糖酶。
104.如段落73-103中任一项所述的用途，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂进一步包含药学上可接受的载体。
105.如段落73-104中任一项所述的用途，所述用途进一步包含给予治疗剂。
106.如段落73-105中任一项所述的用途，其中，通过对由怀疑具有可检测水平或升高水平的受试者获得的生物样品中的DNA编辑酶多肽、mRNA或活性的水平进行测量，来识别具有表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的细胞的受试者。
107.如段落73-106中任一项所述的用途，其中，通过对由怀疑具有升高水平的受试者获得的生物样品中的DNA编辑酶多肽、mRNA或活性的水平进行测量，并与由健康受试者获得的生物样品中发现的DNA编辑酶多肽、mRNA或活性的水平进行比较，来识别具有表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的细胞的受试者，其中，测试样品中DNA编辑酶多肽、mRNA或活性的量增加表示需要以DNA双链断裂修复抑制剂对受试者进行治疗。
108.如段落106或107所述的用途，其中，对DNA编辑酶多肽的水平进行测量包含使用一种或多种分析，所述分析选自于由下列分析所组成的组：
Western印迹；免疫沉淀；酶联免疫吸附分析（ELISA）；放射免疫分析（RIA）；夹心法分析；蛋白质原位阵列；免疫组织染色；放射免疫计量分析；凝胶扩散沉淀反应；免疫扩散分析；原位免疫分析；沉淀反应；免疫荧光分析；定量原位蛋白质分析（AQUA）；质谱和免疫电泳分析。
109.如段落106或107所述的方法，其中，对DNA编辑酶多肽水平的测定包含使用分析，所述分析使用结合至所述DNA编辑酶多肽的抗体、抗体片段、蛋白质结合蛋白或者肽。
110.如段落106-109中任一项所述的用途，其中，所述抗体或抗体片段为单克隆抗体。
111.如段落106-110中任一项所述的用途，其中，使用可检测的标签对结合至所述DNA编辑酶多肽的抗体、抗体片段、蛋白质结合蛋白或肽进行标记。
112.如段落106或107所述的用途，其中，对DNA编辑酶mRNA的水平进行测量包含使用一种或多种分析，所述分析选自于由下列分析所组成的组：
RT-PCR；定量RT-PCR；杂交分析；Northern印迹；基于微阵列的表达分析；转录扩增；自持序列复制；高通量测序；以及RNA-Seq。
113.如段落106或107所述的用途，其中，对DNA编辑酶的活性进行测量包含使用一种或多种分析对基因组或基因组的一部分的总体突变状态进行测定，所述分析选自于由下列分析所组成的组：
杂交；高通量测序；外显子组测序；荧光原位杂交（FISH）、PCR、以及基因组测序；
其中，突变状态比正常突变状态高出2%以上表明DNA编辑酶具有活性。
114.如段落106-107和113中任一项所述的用途，其中，对活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）的活性的测量包含使用一种或多种分析对靶基因IGH、BCL6、MYC、BCL11A、CD93、PIM1和/或PAX5中的超突变进行测定，所述分析选自于由以下分析所组成的组：
杂交；高通量测序；外显子组测序；荧光原位杂交（FISH）、PCR、以及基因组测序。
115.如段落106或107所述的用途，其中，对活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）的活性的测量包含使用磷酸化H2AX分析、53BP1分析或RAD51分析。
实施例
实施例1：脾细胞中XRCC2的抑制
分离4至6月龄C57BL6/J小鼠的成熟脾细胞。通过机械破碎制备单细胞悬浮液，通过无菌细网将所述脾分散至加入有2-10mM L-谷氨酸（Gibco）和10%（vol/vol）热失活胎牛血清（FBS，Gibco）的RPMI-1640培养基中。用低渗裂解液（pH为7.5的0.01M Tris-HCl缓冲液中有8.3g/L氯化铵）去除红细胞。剩余的脾细胞在添加有2-10mM L-谷氨酸并添加有10%胎牛血清（FBS）的补充RPMI-1640培养基中，在5%CO2湿润环境中于37℃培养。用靶向于Xrcc2的慢病毒（lentiviral）shRNA载体（TRCN0000071023、TRCN0000071024和TRCN0000071027，来自Sigma）转导细胞。通过将各shRNA载体直接转导并对嘌呤霉素耐受性进行选择，生成稳定表达Xrcc2-特异的短发卡RNA（shRNA）或对照shRNA（具有杂乱序列）的CH12-F3衍生细胞系。对于原代脾细胞的转导，将原始载体中嘌呤霉素耐受性基因盒替换为表达增强型绿色荧光蛋白（eGFP）（Clontech），从而对原始载体进行修饰。作为对照，使用空白的pLKO.1-eGFP载体或表达杂乱shRNA的载体。可将载体包封入假型病毒并用于转导原代细胞，所述原代细胞如Hasham和Tsygankov，2004，Virology320，313-329中所述。用Xrcc2特异性的shNRA转导的细胞称为XKD细胞；对照标示为Ctrl。一个子群体仅用1μg/ml CD40的抗体（抗-CD40；HM40-3；Pharmingen）培养，诱导增殖而不发生类型转换，作为未活化（Non）；另一个群体用1μg/ml抗-CD40和25ng/ml白介素4（IL-4；Peprotech，Cat.No.214-14）活化（Act），引起增殖和类型转换重组。2天后补充培养基和细胞因子。刺激3天后利用eGFP表达对细胞的活力进行评估。图1示出所有未活化细胞表现相同。在活化的细胞中，Xrcc2的敲减导致细胞数目的大量减少。图1还示出p53缺失（Trp53-/-）可部分拯救Xrcc2shRNA表达组观测到的细胞毒性。
实施例2：AID-表达细胞与AID-缺乏细胞的比较
如实施例1所述从野生型小鼠（AID+/+）或AID缺乏型（AID-/-）小鼠（Muramatsu等，2000，Cell102:553-63）分离并培养脾细胞，并如实施例1所述用Xrcc2shRNA（XKD）和对照shRNA转导所述细胞。AID+/+B细胞中XRCC2的敲减危及了活化后的存活（图2）。与之相反，AID-/-小鼠中XKD B细胞的活化不产生细胞活力或存活方面的可测变化。当通过基于磁珠的细胞分选（120-000-302；Miltenyi）去除CD43-表达细胞从而在XKD细胞中特异性富集B220+IgM+B细胞，并在活化后的不同时间点对细胞的活力或存活进行分析时，AID-/-细胞中未观测到变化（图3）。在表达AID的B细胞（WT）中，第2天和第3天观测到细胞死亡的增多。
用1μg/mL抗-CD40（未活化，Non）或1μg/mL抗-CD40加25ng/mlIL-4（活化，Act）培养AID+/+或AID-/-XKD B细胞培养物，随后使用针对磷酸化γ-H2AX的多克隆抗体（1:400稀释；A300-018A；BethylLaboratories，Montgomery，TX）对细胞的γ-H2AX的灶点染色，该γ-H2AX为未修复的双链断裂（DSBs）的标记物（Rogakou等，J Biol Chem1998，273:5858-5868）。活化后，对照和XKD B细胞培养物均显示出依赖于AID的更大分数的γ-H2AX+细胞（细胞含有一个γ-H2AX灶点或多个γ-H2AX灶点）（图4）。活化后，转导有对照shRNA的AID-/-培养物或AID-/-XKD培养物未示出γ-H2AX阳性率的变化（图5）。然而，当对γ-H2AX+部分中每细胞的灶点进行定量时，发现XKD细胞中，每细胞γ-H2AX灶点的数目特异性显著升高（由活化前的约2灶点/细胞升至活化后的大于4灶点/细胞；图5）。这一现象并未在AID-/-细胞中见到，说明其依赖于AID。
相似的γ-H2AX响应在类型转换感受态小鼠B细胞系CH12-F3中被观测到（Nakamura，M.等，1996，Int.Immunol.8，193-201），该细胞系含有与原代细胞（CH12-XKD细胞）所用相同的Xrcc2-敲减构建体（图6）。CH12-F3细胞在添加有2-10mM L-谷氨酸（Gibco）、10%（vol/vol）热失活胎牛血清（FBS）（Omega Scientific）和5%（vol/vol）NCTC109培养基（Gibco）的RPMI-1640培养基中维持。通过将各shRNA载体直接转导并对嘌呤霉素耐受性进行选择，生成稳定表达Xrcc2-特异性shRNA或对照shRNA（具有杂乱序列）的CH12-F3-衍生系。在XKD细胞中特异性地观测到活化诱导的灶点的积累，而在使用DNA损伤应答因子53BP1（另一DNA DSB标记物）的对照细胞中未观测到。
总之，本文示范了AID可无规律地攻击B细胞基因组，产生广泛的DSB。本文还示范了同源重组因子XRCC2对AID诱导的附带损害的耐受性是关键的，保证了B细胞的活力和基因组稳定性。特别地，这些发现表明，与引起发育编程DSB相同的机制可携带全基因组的固有同步风险。这表明不仅对正常淋巴细胞发育，而且对预防淋巴疾病（如免疫缺陷或癌症）而言，同源重组都是重要的。
实施例3：DIDS降低感受细胞的细胞活性
为了验证DIDS作为潜在的试剂并证实其DSB修复抑制活性，在暴露至DIDS后测定原代野生型小鼠脾细胞的辐射敏感性。总共2×106个脾细胞悬浮于0、300μM、600μM或1000μM DIDS的培养基或仅有辅料的对照中，使用137Cs辐照器（Shepard）立即给予2.5Gy的电离辐射。然后将细胞培养在含有相同DIDS浓度的培养基中，36小时的复苏时间后测定细胞计数。相比于辅料对照，DIDS处理导致以剂量依赖的方式对2.5Gy辐射的超敏性。在0和300μM DIDS，细胞计数与仅有辅料时相同。然而，600μM DIDS中培养的细胞显示出约25%的活力减少，1000μMDIDS中培养的细胞显示出约87%的活力减少。这些数据显示DIDS处理赋予原代脾细胞所期望的辐射敏感性，这与其已知的RAD51抑制功能一致。
从C57BL6/J成年小鼠（AID+/+）和AID敲除小鼠（AID-/-）的脾细胞中分离原代小鼠B细胞（参见实施例1和实施例2）。将1×106原代B细胞接种至组织培养皿，在第0天和第2天用1μg/ml抗-CD40抗体（抗-CD40；BD Pharmingen；Cat.No.553721）和25ng/ml IL-4或仅用抗-CD40刺激。当培养物体积调整至适应细胞生长时，在培养开始后0天和2天的时间点加入0、50μM、100μM或150μM DIDS。将细胞培养6天。在第1、2、3、4和6天使用血细胞计数器对台盼蓝染色后的存活细胞数目计数。图7中示出用DIDS处理后，C57BL/6J小鼠（AID+/+）和AID-敲除小鼠（AID-/-）活性原代B细胞的数目。在AID+/+B细胞中，150μMDIDS从第3天起大幅降低细胞活力。B细胞活力的降低也在浓度为100μM DIDS中观测到。当AID+/+B细胞未用抗-CD40+IL-4刺激时，DIDS不影响细胞的活力。此外AID-/-细胞不受DIDS的影响，未显示出细胞活力的明显变化。
对从野生型或AID敲除（-/-）小鼠脾中分离的细胞进行培养并用抗-CD40抗体和IL-4在第0天和第2天刺激。DIDS在第0天和第2天以0或150μM的浓度加入。每隔一天用Guava EasyCyte流式细胞仪分析确定存活细胞的总数。用150μM DIDS处理的刺激后的细胞显示出更低的活力（图9）。
实施例4：AID基因表达谱
对NCI-60系列中衍生自多个组织（脑、血和骨髓、乳腺、结肠、肾、肺、卵巢、前列腺和皮肤）的59个人癌细胞系中AID表达进行制谱。如图8A所示，在淋巴瘤和白血病细胞系中检测到AID高表达。进一步在原代人细胞/组织中对表达进行表征，在白血病和淋巴瘤样品中检测到高表达（图8B）。
实施例5：筛选新的生物活性化合物
为识别生物活性的DIDS衍生物，通过将磺酸酯或异硫氰酸酯基团替换为其它化学实体，或改变连接二苯乙烯骨架两个环的双键，生成105个DIDS化学变型的库。所有化合物在二甲基亚砜（DMSO）中重悬至100微摩尔的储存浓度，并通过连续稀释生成工作浓度（10μM、50μM或150μM）使用。用加样枪将其加入96孔微培养板，并复制生成两板10μM、两板50μM和两板150μM的化合物。在每个系列中，一个培养板接种100,000个通过基于磁珠分选分离富集B220+IgM+B细胞的正常C57BL/6J脾B细胞（AID+/+）；一个培养板接种100,000个同样分离的AID-/-小鼠的脾B细胞。每个培养物在第0天通过加入1μg/ml抗-CD40加25ng/ml IL-4进行刺激，诱导增殖和类型转换重组。2天后，通过再次加入1μg/ml抗-CD40加25ng/ml IL-4再次刺激每个培养物。再次培养2天后，对于总共4天的刺激，使用MultiTox-Fluor叠加细胞毒性分析（Promega，Inc.）确定每个板的每个孔中存活细胞的数目。对于活力测定，在每个孔中加入100微升的2X MultiTox-Fluor叠加细胞毒性剂，混合后在37℃孵育30min。然后将板转移至可读荧光的酶标仪并用400nm激发、505nm检测出射光进行分析，测定剩余的活细胞的分数。作为对照，每板上包括仅含有辅料（DMSO）或150μM DIDS的孔。用正常B细胞板中活细胞的分数除以相应的AID敲除板中活细胞的分数确定每种化合物的活力得分。产生正常/AID敲除比例位于或低于DIDS比例水平的化合物被认为是用于进一步验证和测试的候选化合物。在不存在DIDS的情况下，下述化合物作为初步阳性命中而得分：该化合物导致AID+/+细胞的细胞活性（相对于AID-/-细胞）选择性地降低，从而引起AID+/+:AID-/-比例小于1。初步筛选识别了10种衍生物：BB5-6、BB1-6、BB1-7、BB2-6、BB2-5、BB5-39、BB4B-2、BB5-4、BB5-47和BB8-1（图10）。
实施例6：DIDS对人CLL细胞的效果
从外周血收集患者的血样（8-16mL）并在BD Vacutainer CPT管（BD，Franklin Lakes，NJ）中离心，根据制造商说明使红细胞隔离在分离凝胶下，并在24小时内转移至Jackson实验室。接收后，根据制造商说明从样品中分离外周血单核细胞（PBMC）。从14个原发性淋巴细胞性白血病（CLL）人类患者的样品中由全血数目（CBC）通过作差计算白细胞（WBC）数目。细胞分离和过夜运输（overnight shipping）后将计算值与经验细胞计数比较。这表明分离效率的惊人一致。将原代CLL样品（WBC）稀释至标准浓度，将3.0×106细胞接种至培养基。添加0μM（n=5）、150μM DIDS（n=4）或600μM DIDS（n=2）重复培养。在培养的第2、4、6和8天用血细胞计数器手动计数确定活力细胞数目。相对于未处理的对照，DIDS处理的培养物显示出存活细胞数目的显著降低（图11）。
实施例7：4′-溴-3′-硝基苯丙酮对于脾细胞的作用
如实施例1所述从成年AID-/-小鼠的脾分离原代小鼠B细胞。在加入10%FBS的RPMI-1640培养基中以1×106细胞/mL的浓度建立培养物。用抗-CD40抗体加IL-4来活化培养物，并用4′-溴-3′-硝基苯丙酮（NS-123）（购自Calbiochem；CAS No.101860-83-7）以0.5μM、5μM、50μM或500μM的浓度处理。培养2天后用抗-CD40加IL-4再次活化。在培养的第1、2、3和4天通过台盼蓝染色确定细胞计数。在50μM和500μM浓度的NS-123下，AID-缺失脾细胞无活。与未处理的脾细胞相比，在5μM浓度的NS-123下，脾细胞的活力降低（图12）。
在第0天，将原代AID-敲除小鼠脾细胞接种至培养物，以1×106细胞/ml的浓度处于添加有抗-CD40加IL-4的RPMI-1640培养基，从而活化B细胞。各培养物添加0、5μM、10μM、20μM、30μM、40μM、或50μM NS-123并在第1、2、3和4天台盼蓝染色后对存活细胞计数（图13）。AID-缺失脾细胞中NS-123的LD50确定为14μM。为示出NS-123的有效性，可对由野生型小鼠（表达AID）分离的、并与AID-/-小鼠的脾细胞（活化和未活化）进行比较后的脾细胞进行测试。
实施例8：DSB修复抑制剂的体内测试
用DSB修复抑制剂处理广泛或组织特异性过表达AID的小鼠。一种这类适合的小鼠模型是B6.Cg-Tg(Igk-Aicda)14Mnz/J，其中AID在B淋巴细胞（B细胞）中过表达；或C57BL/6-Tg(CAG-Aicda)B1Hon/HonRbrc，其中AID用CAG（鸡β-肌动蛋白启动子、兔β-球蛋白多聚A和CMV-IE增强子）启动子（Okazaki等，J Exp Med.2003，197（9）:1173-81）广泛表达。已报道这类小鼠模型确实发育有淋巴瘤和其它癌症病灶。可给予小鼠DSB修复抑制剂（例如二苯乙烯、DIDS、NS-123或白芦藜醇）。可通过静脉内（i.v.）注射、腹膜内（i.p.）注射、肌肉内（i.m.）注射或皮下（s.c.）注射进行给予，或使用渗透泵连续处理或通过饮用水进行给予。
在C57BL/6-Tg(CAG-Aicda)小鼠的情况下，已报道这些小鼠发育有T细胞肿瘤，并依赖于反式基因的插入在40-80周死亡（Okazaki等，J ExpMed.2003，197（9）:1173-81）。用DSB修复抑制剂处理可引起淋巴瘤的减小并延长寿命。
实施例9：异种移植小鼠模型
将来自原发性慢性淋巴细胞性白血病（CLL）患者具有AID活性的5×106个原代白细胞（WBC）在0.1mL PBS中悬浮，并i.v.注射或通过渗透泵给予至免疫缺陷小鼠，例如NOD-scid或NOD-scid IL2Rgamma（NSG）。肿瘤形成后，可对小鼠的外周血随机指定下列4组之一的流体：辅料对照、在加入30%丙二醇的DMSO中混合有5mg/kg DIDS、25mg/kgDIDS和50mg/kg DIDS；并以1周的间隔i.v.注射4-8周。未接受DIDS的组可用相同体积的溶于30%丙二醇的DMSO单独处理。以1周的间隔通过流式细胞术对外周血进行分析。研究最后处死小鼠并进行组织学分析。
实施例10：用AID+或AID-人肿瘤样品异种移植的小鼠模型
可将AID+或AID-人肿瘤样品移入NOD-scid IL2Rgamma（NSG小鼠），形成多重复制的体内模型，该模型尽可能近地反映患者的疾病。该模型可用于测试基因化学疗法的体内效力、将效力关联至AID表达水平以及评估基因化学疗法潜在的副作用。
为从每个患者样品产生多个接受者（至多15），通过静脉内注射、脾内注射或（如有需要的话）骨髓注射，将每个患者样品的1×106个外周血单核细胞（PBMC）导入6周龄雄性NSG小鼠。已有的研究指出，对NSG小鼠移入B淋巴癌的成功率高于60%（Immunol，2005，174（10），6477-89；Leukemia.24（11），1859-66；Ann NY Acad Sci，2007.1103:p.90-3）。随后可将每组移植接受者细分为处理小组，每个处理小组至多5只小鼠。在注射后的一周至一个月，用DIDS（使用实际确定的浓度）、辅料对照处理小鼠（至多5只的组）或保持不处理。作为初始方案，用DIDS或其它化合物以1周为间隔i.v.注射4-8周，通过流式细胞术监测人淋巴细胞循环，在药物注射间隔的1周收集外周血。处理4-8周后，对所有作为接受者的小鼠实施安乐死，随后确定每个处理组的所有小鼠的肿瘤发展、负担、退行和存活时间。
肿瘤负担：处死时，通过流式细胞术或免疫荧光来分析外周血和淋巴器官组织的人白血病细胞。为检测人细胞并将其与小鼠细胞区分，对人白血病诊断标记物hCD19、hCD22、hCD79a以及小鼠标记物如mCD19进行共染色。可比较未处理、辅料处理和DIDS处理的接受者中人细胞的数目。如果DIDS引起基因化学疗法响应，则预计相对于对照，处理组有更少的人白血病细胞。
凋亡：可通过荧光标记的Annexin V染色并用DNA结合染料7-氨基放线菌素D（7-AAD）复染测定。可如上区分人细胞和小鼠细胞。凋亡细胞的百分比可通过流式细胞术确定。或者，可通过免疫荧光显微术检测AC3从而测定凋亡。
处理后组织病理学分析。为评估患者衍生的异体移植小鼠对基因化学疗法的响应与耐受性，可对全部药物处理小鼠和对照小鼠进行详细的组织病理学分析。现有研究表明，若无细胞毒性化学疗法，骨髓微环境中的白血病细胞可存活。因此可对骨髓、其它淋巴微环境和潜在的逃避位点（如肿瘤细胞侵占的CNS）进行分析，也可对人B细胞标记物（如CD5、CD19、CD22、CD23或CD79a）进行染色。可使用合适的小鼠组织染色和标记物实施并行的小鼠组织药理学从而检验药物处理对于微环境自身的效果。可将所有收集用于组织病理学的组织（骨髓、脾或其它示出异常证据的组织）在福尔马林中固定，修整并用石蜡包埋。全部固定后，可用苏木精和曙红（H&E）对组织染色。用这些分析可找出小鼠中存在的人白血病以及药物处理方案导致的解剖学上的畸形。可用人CD19、CD22和CD79a（B细胞白血病标记物）特异性地对福尔马林固定且石蜡包埋的异体移植小鼠的股骨和脾切片进行免疫染色，并用一组品系标记物作为阴性对照（例如CD33、CD34髓标记物），从而查明骨髓中的人细胞成分和次生造血器官。这些分析的目的是测定残余的人细胞，并识别其占据的微环境。
实施例11：AID表达分析和基因型分型
对于RNA和DNA的制备，用标准分子生物学方案提取1×106个细胞至5×107个细胞。可借助定量逆转录PCR（qRT-PCR）测定每个样品中AID mRNA的表达。检测人AID转录物的寡核苷酸引物序列为：hAIDfwd5′-TCCTTTTCACTGGACTTTGG-3′（SEQ ID NO：101）以及hAID rev5′-GACTGAGGTTGGGGTTCC-3′（SEQ ID NO：102）。用这些引物的RT-PCR生成人AID特异的196bp反应产物。人GAPDH转录物（一类加样对照）的引物序列为hGAPDH fwd5′-GAGTCAACGGATTTGGTCGT-3′（SEQ ID NO：103）；以及hGAPDH rev5′-TTGATTTTGGAGGGATCTCG-3′（SEQ ID NO：104）。用这些引物的RT-PCR生成人GAPDH基因特异的238bp反应产物。按照Woo等Oncogene2007，26（41），6010-20，应用多重归一化方案（multiplenormalization protocol）对表达水平进行定量，保证在肿瘤细胞集内对样品与样品进行比较时最高水平的可信度。在每个qRT-PCR分析中，可包括AID阴性对照，如正常人成纤维细胞（NHF）。可将示出的AID mRNA水平超过阴性对照基线的肿瘤归类为AID-表达（+）；AID mRNA水平处于或低于对照水平的样品可归类为AID-阴性（-）类。可将临床诊断信息（特别是表面Ig和体细胞超突变状态）整合至AID表达数据。在AID+类群样品中，可根据AID mRNA表达水平、以及存在或不存在体细胞Ig基因座的超突变（通过标准临床替代指标或直接对接下来的样品集进行测序而确定）进行分级。
实施例12：测序从而测定AID活性
基因化学疗法的基础是肿瘤细胞中AID的活性。由此可进行基因组序列分析从而测定AID突变活性。已知AID作用于Igh（主要的生理靶标）以及许多非Ig的基因，包括Myc，Bcl6、Bcl11a（全部为高频率靶向的原癌基因）、CD93以及以各种频率的其它基因。对于全部已知编码蛋白的人基因（约26,000个基因），可用自动捕获系统分离基因组DNA的侧翼启动子元件（每基因1-2kb）。通过这种方法，已知和未知的AID靶标以及非靶标（阴性对照）基因均能得到分析。可对所有捕获序列标记条形码并复用（每道2-4样品），用HiSeq仪（Illumina，San Diego，CA）测序。由于标准HiSeq道目前提供大于两百亿个核苷酸序列，4X复用可提供足够的覆盖范围以检测任何以小于2%频率出现的单基因突变（见分析策略，如下）。已知AID靶标（IGH（NCBI Gene ID3492）、BCL6（NCBI Gene ID604）、MYC（NCBI Gene ID4609）、BCL11A（NCBIGene ID53335）、CD93（NCBI Gene ID22918）、PIM1（NCBI Gene ID5292）和/或PAX5）以及MEF2B CD93（NCBI Gene ID100271849）和LTB（NCBI Gene ID4050），可分析两个基因极偶然地由于点突变或DNA断裂（阴性对照）被AID靶向。对在含有癌和非癌细胞的非同源混合细胞群体中检测非选择性的体细胞突变，这一方法是理想的。在用Burrows-Wheeler Aligner（BWA）将序列与人参比基因组序列进行比对后，可识别出自发出现的体细胞突变，该突变的序列差异在于：（1）在每个样品出现于至少两个独立读数中，由此不太可能是测序错误；以及（2）以小于50%的频率出现，由此为非克隆性（non-clonal）体细胞事件，而非生殖细胞系多态性（Bioinformatics2009，25（14）：1754-60）。对于大部分样品，可从多个患者的血中分选非CLL细胞，用作内在的患者特异性样品；针对这些样品可测定AID依赖性的肿瘤突变率。
表1：XKD细胞中的染色体损伤。小鼠淋巴细胞系CH12-F3细胞的染色体组型：转导有对照shRNA（CH12-Ctrl）和未处理（无培养添加物）或在未活化条件（抗-CD40）或活化条件（抗-CD40加IL-4加TGF-β）下培养的CH12-XKD细胞：
Figure BDA0000470509870001631
实施例13：DIDS放射增敏原代小鼠B（细胞）
如实施例1所述从正常野生型C57BL/6J小鼠分离原代小鼠脾B细胞，并用磁珠（Miltenyi）分选，富集B220+IgM+B细胞。纯化的B细胞在加入0、50微摩、100微摩、或150微摩DIDS并加入10%FBS的完全RPMI-1640培养基中培养。细胞在137Cs辐照器中经受0（图14，实心圆）或2.5Gy（=250rads；图14，空心圆）的伽马辐射。在辐射24小时后使用血细胞计数器和台盼蓝拒染，通过手动血细胞计数，为每种条件下的细胞活力打分并画出相对于无DIDS条件的图。用相应的0μMDIDS条件进行归一化，记录存活细胞的比例。误差棒代表三次独立实验平均值的标准误（S.E.M.）。数据显示，从50微摩尔浓度的DIDS开始，辐射处理结合DIDS显著降低了活力。
实施例14：DIDS与AID（AICDA）的协同抑制了转化后B细胞的生长并损害其存活
在添加有2-10mM L-谷氨酸（Gibco）、10%（vol/vol）热失活胎牛血清（Omega Scientific）和5%（vol/vol）NCTC109培养基（Gibco）的RPMI-1640培养基（完全RPMI；未活化）或含有1μg/ml抗-CD40抗体、25ng/ml IL-4和1ng/ml转化生长因子β1（TGF-β1）的完全RPMI-1640培养基（活化）中，培养小鼠B淋巴性白血病细胞系CH12-F3。在培养物中添加0、50微摩、100微摩、或150微摩DIDS，在培养后第0、1、2、3、4或6天通过手动血细胞计数确定细胞总数目。在图15A中，用多种浓度的DIDS处理的未活化细胞未显示出细胞活力或细胞增殖的差异。相反，在暴露至150微摩尔DIDS的活化CH12-F3细胞中观测到细胞总数的大幅减少（图15B）。
实施例15：DIDS处理预防了对AID生成的DNA损伤的修复
如实施例1所述从8-12周龄的野生型（AID+/+）或AID敲除（AID-/-）小鼠中分离小鼠原代脾细胞，该原代脾细胞暴露至150微摩尔DIDS，并用抗-CD40抗体加白介素-4进行活化，固定并用DNA断裂标志物phospho-H2AX染色，使用DNA荧光染料4′,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）对核DNA染色。在图16A中，在AID+/+（实心柱）和AID-/-（空心柱）细胞中，对含有0、1-2个或多于2个phospho-H2AX阳性灶点的细胞的分数进行定量。在DIDS处理的AID+/+细胞中，特异性观测到具有大于2个灶点的细胞的分数显著更高。在图16B中，将AID+/+和AID-/-培养物的比较中，对phospho-H2AX阳性细胞（实心柱）相比于phospho-H2AX阴性细胞（空心柱）的比例进行定量。AID+/+细胞显示出更高百分比的phospho-H2AX阳性细胞。在图16C中，对DIDS处理的AID+/+（实心柱）相比于AID-/-（空心柱）细胞，将每细胞中灶点的数目进行定量。数据以细胞的绝对数量（y轴）示出，隐含表明phosphor-H2AX灶点的数目（从0至>20；x轴）。
实施例16：AID（AICDA）表达状态是识别进行基因化学疗法的候选患者的生物标记物
AID（AICDA）表达状态与IGVH超突变状态联合，是进一步对基因化学疗法的候选患者进行分选的生物标记物。标准在做法中，相比于IGVH突变阴性（偏离参比序列小于2%），IGVH突变阳性（偏离参比序列超过2%）的CLL通常与更好的预后相关联。从原代人慢性淋巴细胞性白血病（CLL）细胞中分离基因组DNA，通过PCR扩增特定IGVH片段，并用标准Sanger测序法进行测序。用于扩增IGVH基因片段的引物序列为：
VH1-FR15′-GGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAG-3’（SEQ IDNO：107)；
VH2-FR15′-GTCTGGTCCTACGCTGGTGAAACCC-3'(SEQ ID NO：108)；
VH3-FR15′-CTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTG-3'(SEQ ID NO：109)；
VH4-FR15′-CTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTG-3’(SEQ ID NO：110)；
VH5-FR15′-CCGGGAGTCTCTGAAGATCTCCTGT-3’(SEQ ID NO：111);
VH6-FR15′-TCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTG-3'(SEQ ID NO：112);
JH consensus5′-CTTACCTGAGGAGACGGTGACC(SEQ ID NO:113).
当核苷酸不同于参比基因组序列，则识别为突变，并以总核苷酸的百分比进行定量。识别每个临床诊断标准的突变阳性样品（偏离参比2%以上的样品）。表2中的突变阳性样品为JE1010、JE1014、JE1015、JE1021、JE1030、JE1048和JE1061。样品JE1050未示出突变。样品JE1010、JE1014、JE1048和JE1050均为AID表达阳性。
表2：IgVH超突变分析
Figure BDA0000470509870001651
实施例17：DIDS与AID（AICDA）的协同降低CLL细胞的存活
如实施例4所述培养AID-表达（AID+）或AID-阴性（AID-）原代人CLL细胞。在未添加（未处理；图17中三角形）或添加30微摩尔DIDS的基本RPMI-1640培养基中培养细胞。空心圆代表用30微摩尔DIDS处理AID-阴性细胞的数据；实心框代表用30微摩尔DIDS处理AID-阳性细胞的数据。在暴露后第2、4或8天通过手动血细胞计数对细胞存活进行打分。未处理和DIDS处理的AID-细胞培养物不能区分，而DIDS处理的AID+培养物显示出细胞活力的降低。
实施例18：AID表达作为识别响应于DIDS基因化学疗法的CLL患者的生物标记物的用途
用人AID或人GAPDH（加样对照）特异性的寡核苷酸引物逆转录（RT）-PCR，对4个独立的AID-表达（AID+）人CLL样品（JE1010、JE1036、JE1070、JE1075）和4个独立的AID-阴性（AID-）人CLL样品（JE1015、JE1019、JE1031、JE1057）进行识别。按照制造商的方案（Qiagen）用一步RT-PCR试剂盒实施RT-PCR。已有对用于检测Xrcc2和GAPDH的寡核苷酸引物和PCR条件的描述（Deans等，EMBO J200019:6675-6685）。作为敲减研究的特异性对照，用RT-PCR检测相关基因Rad51。检测AID转录物的寡核苷酸为hAID fwd5′-TCCTTTTCACTGGACTTTGG-3′（SEQ ID NO：101）和hAID rev5′-GACTGAGGTTGGGGTTCC-3′（SEQ ID NO：102）。用这些引物的RT-PCR生成人AID特异性的196bp反应产物。用于检测人GAPDH的寡核苷酸为5′-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3′（SEQ ID NO：105）和5′-TCCACCACCCTGTGGCTGTA-3′（SEQ ID NO：106），生成238bp的反应产物。逆转录和PCR条件为：第1步50℃、30min；第2步95℃、15min；第3步94℃、1min；第4步55℃、30sec；第5步℃、1min；第6步循环第3-5步35次；第7步72℃、10min；第8步4℃一直保持。
在1.0%琼脂糖凝胶（溴化乙锭）中电泳分离RT-PCR产物，并用Bio-Rad Gel Doc系统可视化。
这一分析快速灵敏地识别AID+和AID-患者样品，如图18A所示，示出8个代表性样品。在加入30微摩尔DIDS的基本RPMI-1640培养基中培养8个AID+和8个AID-CLL样品，在2、4、6或8天后通过对存活细胞的手动血细胞计数对存活情况打分。这一分析表明，相比于AID-阴性的原代人CLL细胞，DIDS更大地降低AID-阳性细胞的活力。这也表明AID表达作为单一标记物，有效地识别响应DIDS的样品。当用10μMDIDS处理表达AID的CLL细胞时，确定了对于细胞活力的显著效果。总共研究了117个淋巴瘤或白血病患者，其中106个为CLL患者。用RT-PCR确定其中47%AID表达。
实施例19：DIDS对于小鼠系统性红斑狼疮（SLE）模型的效果
BXSB.Yaa Cd8/IL15-/-小鼠是已建立的SLE模型。这些小鼠表现出多种人SLE的特征，包括高丙种球蛋白血症、循环抗核抗体和免疫复合物介导的肾小球肾炎，最终在约24周龄时死于疾病（Andrews等，1978，J Exp Med148:1198-215；Dixon等，1978，Arthritis Rheum21:S64-7；Izui等2000，Int Rev Immunol19:447-72）。从模型中将Cd8a和IL15进行基因删除导致更早出现相似的临床表型，平均存活期为14周龄（McPhee等，2011，J Immunol187:4695-4704）。
对六周龄的雄性BXSB.Cg-Cd8a<tm1Mak>IL15<tm1Imx>/Dcr（简写为BXSB.Yaa Cd8/IL15-/-）小鼠进行眼窝取血并放入装有肝素的管子收集血清。在第0天以及每7天（共五周），将加入有25mg/kg（n=5）或50mg/kgDIDS（n=6）的4%碳酸氢钾的PBS或等体积的4%碳酸氢钾（n=2和n=4）进行腹腔注射给药。在5周的时间内每周对小鼠称重，并以14天的间隔收集血清。这些小鼠存活至衰老。通过ELISA分析血清中IgG1和IgG2b含量。用山羊抗小鼠Ig（IgG1和IgG2b）包被ELISA板，40℃孵育过夜。将板进行清洗，并以合适的稀释倍数加入血清样品以及小鼠同型标样并在37℃孵育1小时。将板清洗3次，用缀合有碱性磷酸酶的山羊抗小鼠抗体孵育1小时。将板清洗3次，并加入磷酸对硝基苯酯（p-NPP，AMRESCO），孵育至标样充分显影，在SpectraMax ELISA酶标仪上用SoftmaxPro软件读数。基于同型特异性纯化的小鼠标样的滴定，将数据以IgG的浓度（mg/ml）表示。图19A示出对照和处理的动物无重量差别。然而，IgG2b的分析显示出显著下降，表明对狼疮的治疗有效（图20B）。IgG1未观测到显著区别（数据未示出）。用Graphpad Prism软件分析存活数据，并同时使用对数秩Mantel Cox（图20A：对于25mg/kg组，具有0.4289的p值；图20B：对于50mg/kg组，具有0.3698的p值）以及Gehan-Breslow-Wilcoxan检验（图21A：对于25mg/kg组，具有0.7003的p值；图21B：对于50mg/kg组，具有0.7505的p值）评估其统计显著性。
实施例20：DIDS破坏DNA损伤后RAD51灶点形成
从野生型C57BL/6J小鼠分离原代小鼠脾B细胞，用基于磁珠（Miltenyi）分选纯化B220+IgM+B细胞。在存在0或150μM DIDS的情况下，在加入有10%FBS的标准RPMI-1640培养基中培养B细胞，并在137Cs辐照器中暴露于0或2.5Gy的电离辐射，随后用免疫荧光对同源重组因子RAD51的灶点染色。记录每个培养物中细胞核内显示RAD51灶点形成的细胞分数。未用DIDS（0μM）培养的辐射后的细胞显示出有效的灶点形成。如图22所示，DIDS暴露（150μM）完全抑制了辐射诱导的RAD51灶点形成，将Rad51灶点+细胞分数降低至基线水平（等同于未经照射的0Gy样品）。误差棒示出三次独立实验平均值的标准误（S.E.M.）。
实施例21：DIDS处理导致在AID-表达原代人慢性淋巴细胞性白血病（CLL）细胞中phospho-H2AX灶点的水平倾向于增加
在常规临床监测中收集外周血，获得来自人CLL患者的原代细胞。借助常规静脉穿刺将原代外周血样品收集至BD Vacutainer CPT细胞分离管（Becton Dickinson）。对样品离心以分离红细胞（RBC），并在其自身血浆中颠倒重悬单核细胞。样品在收集地点室温储存过夜，并快递运输至分析地点。通过逆转录PCR（RT-PCR）检测人AID mRNA的存在，从而测试每个样品的AID表达状态（见实施例11）。将样品分为AID+（显示出可检测水平的AID mRNA）和AID-（未示出可检测的大于背景的AID mRNA）组。用含有10%FBS并加入0或30μM DIDS的标准RPMI-1640培养基从不同的AID+和AID-样品开始进行多个独立培养。培养2天后，用多聚甲醛固定来自每个培养物/条件的细胞，安放至显微镜盖玻片，用弱去污剂清洗透明化，处理并用免疫荧光检测DNA双链断裂标记物phosphor-H2AX（一抗：cat.No.A300-081A，Bethyl Laboratories；1:400稀释）。染色后用Nikon90i正置荧光显微镜拍摄细胞图像，每个样品拍摄100个独立的核。使用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）对核DNA进行复染。图23A和图23B中示出显示1-2个（Low）、3-10个（Mod）或大于10个（High）phosphor-H2AX灶点的细胞的平均百分比。误差棒表示4个独立培养的AID-样品（空心柱）和5个独立培养的AID+样品（实心柱）的平均值的标准误（S.E.M.）。这些数据显示DIDS抑制AID介导的基因组DNA双链断裂（DSBs）的修复。
实施例22：DIDS处理导致AID+原代人CLL细胞优先凋亡
在常规临床监测中收集外周血，获得来自人CLL患者的原代细胞。借助常规静脉穿刺将原代外周血样品收集至BD Vacutainer CPT细胞分离管（Becton Dickinson）。对样品离心以分离红细胞（RBC），并在其自身血浆中颠倒重悬单核细胞。样品在收集地点室温储存过夜，并快递运输至分析地点。通过逆转录PCR（RT-PCR）检测人AID mRNA的存在，从而测试每个样品的AID表达状态（见实施例11）。将样品分为AID+（显示出可检测水平的AID mRNA）和AID-（未示出可检测的大于背景的AID mRNA）组。用含有10%FBS并加入0或30μM DIDS的标准RPMI-1640培养基从不同的AID+和AID-样品开始进行多个独立培养。培养3天后，用多聚甲醛固定来自每个培养物/条件的细胞，安放至显微镜盖玻片，用弱去污剂清洗透明化，处理并用免疫荧光检测细胞凋亡标记物活化的胱天蛋白酶3（AC3）（一抗：cat.No.ab13847，Abcam；1:100稀释）。用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）对核DNA进行复染。染色后用Nikon90i正置荧光显微镜拍摄细胞图像。示出AID+（图24，实心柱）和AID-样品（图24，空心柱）中AC3染色阳性细胞的分数。误差棒表示4个独立培养的AID-样品（空心柱）和5个独立培养的AID+样品（实心柱）的平均值的标准误（S.E.M.）。30μM DIDS处理的AID-阳性细胞显示的AC3阳性细胞分数更高。
实施例23：AID表达及其与原发性人慢性淋巴性白血病预后的关系
AID表达与原发性人慢性淋巴细胞性白血病的疾病整体恶化相关。基于高白细胞（WBC）计数（大于58,000/微升）选择8个AID+和8个AID-的原发性人CLL样品。分析这些样品诊断和治疗时年龄的平均值和中位数（年龄Dx）。AID+样品显示出更低的诊断平均年龄（63.75对比68岁）和诊断中位年龄（62.5对比68.5岁）（表3）。此外，4/8的AID+患者接受治疗，而1/8的AID-患者接受治疗
Figure BDA0000470509870001701
实施例24：小鼠模型中AID的体内测试
为测试DIDS的体内效果，以1周为间隔向AID+/+（C57BL/6）或AID-/-小鼠（Muramatsu等，2000，见上文）给予DIDS（10mg/kg或50mg/kg），并在第1周用含有二硝基苯酚缀合的钥孔傶血兰蛋白（DNP-KLH）的完全Freund′s佐剂（CFA）刺激淋巴细胞的活化，4周后用DNP-KLH（在不完全Freund′s佐剂中，IFA）加强。在总共7周后（图25A）将小鼠安乐死。所述组的大小n=5。相比于未处理的对照组，对照或DIDS处理组均未出现明显的毒性标志。5周后，相比于AID-/-小鼠，AID+/+小鼠显示出轻微的体重上升，然而这种效果不依赖于DIDS暴露，对于0mg/kg对照和50mg/kg实验的影响相同（图25B）。每周对这些小鼠称重，数据表示了5只动物体重平均分数变化，误差棒表示S.E.M.。
7周的试验期后，对处理和对照动物的组织固定、切片并用苏木精和曙红（H&E）染色分析。对脾切片的分析表明，未处理和DIDS处理的动物之间，没有显见的组织缺陷或生发中心（GC）结构的不同；AID+/+小鼠和AID-/-对照之间没有区别。这些结果表明，在AID+/+或AID-/-小鼠中，至少高达50mg/kg的DIDS剂量不引起明显的毒性或产生脾生理性缺陷。为确定DIDS是否诱导与AID相关的B细胞特异性表型，用流式细胞术对来自DIDS处理的AID+/+和AID-/-小鼠的骨髓、脾和外周血存在的B220+CD19+B细胞进行分析（图26）。观测到10μM和50μM处理的AID+/+小鼠骨髓中BB220+CD19+B细胞均少量（25%）减少，然而AID+/+或AID-/-小鼠脾B细胞中百分数没有相应的差别。作为对比，10μM和50μM DIDS均诱导循环B淋巴细胞的显著（9-11倍）减少，尤其是在AID+/+而非AID-/-小鼠中。图26中示出，对经DNP-KLH免疫并用0mg/kg、10mg/kg或50mg/kg DIDS处理的AID-/-和AID+/+小鼠的骨髓、脾和外周血进行最终流式细胞术点图分析。该图示出淋巴细胞门中对表达B220（y轴）和CD19（x轴）染色的细胞群体。每张图的右上角的数字提供了每个分析中B220+/CD19+细胞的比例。B细胞从早/前GC至后GC的成熟过程在下方示出。
这些数据显示，体内系统性的DIDS处理选择性地影响成熟的后生发中心的B细胞，而对早或前GC B细胞的影响可忽略。这与本文所述的细胞培养数据一致，表明由于AID和DIDS的联合作用，引起协同的细胞毒性。显然，无论AID+/+或AID-/-组，DIDS处理的动物均未示出明显的非B细胞毒性。总体说来，这些数据强有力地表明，体内给予DIDS特定地敏化AID-表达的B细胞——经历生发中心反应或异位表达AID的细胞。
实施例25：Epstein-Barr病毒转化的外周人B淋巴细胞中AID表达分析
Epstein-Barr病毒转化的外周人B淋巴细胞衍生细胞系GM05881、GM07323和GM13689（由Corriell Institute，NIGMS Human Genetic CellRepository获得）很好地代表了人的非Hodgkin氏淋巴瘤。在添加2mM谷氨酸和15%胎牛血清的RPMI1640培养基中培养这些细胞。通过标准核糖核酸提取方法（实施例11）从每个培养细胞系、或从人原代刺激后B细胞（Stim B）、或从人胚胎肾细胞系HEK293T制备全RNA。然后，用与实施例11所述相同的AID转录物和GAPDH转录物（加样对照）的引物进行逆转录（RT）-PCR从而分析RNA。这些数据表明AID在这些转化的B细胞系中高表达，其水平甚至高于纯化的活化原代B细胞（参见图27）。
表4：SEQ ID NO
SEQ ID NO 描述
001 BCL6mRNA；NM_001130845
002 MYC mRNA；NM_002467
003 BCL11A mRNA；NM_018014
004 CD93mRNA；NM_012072
005 PIM1mRNA；NM_002648
006 PAX5mRNA；NM_016734
007 Rad51AP1mRNA；NM_001130862
008 Rad51B mRNA；NM_002877
009 Rad51D mRNA；NM_002878
010 XRCC2mRNA；NM_005431
011 XRCC3mRNA；NM_001100119
012 RAD54mRNA；NM_000489
013 RAD52mRNA；NM_134424
014 BRCA1mRNA；NM_007300
015 BRCA2mRNA；NM_000059
016 ATM mRNA；NM_000051
017 ATR mRNA；NM_001184
018 MRE11mRNA；NM_005591
019 RAD50mRNA；NM_005732
020 NBS1mRNA；NM_002485
021 WRN mRNA；NM_000553
022 BLM mRNA；NM_000057
023 RECQ4mRNA；NM_004260
024 LIG4mRNA；NM_001098268
025 XRCC4mRNA；NM_003401
026 PRKDC mRNA；NM_006904
027 DCLRE1C mRNA；NM_001033855
028 XRCC6mRNA；NM_001469
029 XRCC5mRNA；NM_021141
030 XLF mRNA；NM_024782
050 XRCC2抑制性RNA
051 XRCC2抑制性RNA
052 XRCC2抑制性RNA
053 XRCC2抑制性RNA
054 XRCC2抑制性RNA
055 XRCC2抑制性RNA
056 XRCC2抑制性RNA
057 XRCC2抑制性RNA
058 XRCC2抑制性RNA
059 XRCC3抑制性RNA
060 XRCC3抑制性RNA
061 XRCC3抑制性RNA
062 XRCC3抑制性RNA
063 XRCC3抑制性RNA
064 RAD51抑制性RNA
065 RAD51抑制性RNA
066 RAD51抑制性RNA
067 RAD51抑制性RNA
068 RAD51抑制性RNA
069 RAD51抑制性RNA
070 RAD51抑制性RNA
071 RAD51抑制性RNA
072 RAD51抑制性RNA
073 RAD51B抑制性RNA
074 RAD51B抑制性RNA
075 RAD51B抑制性RNA
076 RAD51B抑制性RNA
077 RAD51B抑制性RNA
078 RAD51B抑制性RNA
079 RAD51B抑制性RNA
080 RAD51B抑制性RNA
081 RAD51C抑制性RNA
082 RAD51C抑制性RNA
083 RAD51C抑制性RNA
084 RAD51C抑制性RNA
085 RAD51C抑制性RNA
086 RAD51C抑制性RNA
087 RAD51C抑制性RNA
088 RAD51C抑制性RNA
089 RAD51C抑制性RNA
090 RAD51D抑制性RNA
091 RAD51D抑制性RNA
092 RAD51D抑制性RNA
093 RAD51D抑制性RNA
094 RAD51D抑制性RNA
095 RAD51D抑制性RNA
096 RAD51D抑制性RNA
097 RAD51D抑制性RNA
098 RAD51D抑制性RNA
099 AID氨基酸序列；NCBI Ref Seq：NP_065712
0100 AID mRNA序列；NCBI Ref Seq：NP_020661
0101 hAID正向引物
0102 hAID反向引物
0103 hGAPDH正向引物
0104 hGAPDH反向引物
0105 GAPDH引物
0106 GAPDH引物
0107 VH1-FR1
0108 VH2-FR1
0109 VH3-FR1
0110 VH4-FR1
0111 VH5-FR1
0112 VH6-FR1
0113 JH consensus
0114 Rad51AP1氨基酸序列；NCBI Ref：NP_001124334
0115 RAD51B氨基酸序列；NCBI Ref：NP_002868
0116 RAD51D氨基酸序列；NCBI Ref：NP_001136043
0117 XRCC2氨基酸序列；NCBI Ref：NP_005422
0118 XRCC3氨基酸序列；NCBI Ref：NP_001093588
0119 RAD54氨基酸序列；NCBI Ref：NP_000480
0120 RAD52氨基酸序列；NCBI Ref：NP_602296
0121 BRCA1氨基酸序列；NCBI Ref：NP_009225
0122 BRCA2氨基酸序列；NCBI Ref：NP_000050
0123 ATM氨基酸序列；NCBI Ref：NP_000042
0124 ATR氨基酸序列；NCBI Ref：NP_001175
0125 MRE11氨基酸序列；NCBI Ref：NP_005582
0126 RAD50氨基酸序列；NCBI Ref：NP_005723
0127 NBS1氨基酸序列；NCBI Ref：NP_002476
0128 WRN氨基酸序列；NCBI Ref：NP_000544
0129 BLM氨基酸序列；NCBI Ref：NP_000048
0130 RECQ4氨基酸序列；NCBI Ref：NP_004251
0131 LIG4氨基酸序列；NCBI Ref：NP_001091738
0132 XRCC4氨基酸序列；NCBI Ref：NP_071801
0133 PRKDC氨基酸序列；NCBI Ref：NP_008835
0134 DCLRE1C氨基酸序列；NCBI Ref：NP_001029027
0135 XRCC6氨基酸序列；NCBI Ref：NP_001460
0136 XRCC5氨基酸序列；NCBI Ref：NP_066964
0137 XLF氨基酸序列；NCBI Ref：NP_079058
0138 APOBEC1氨基酸序列；NCBI Ref：NP_001635
0139 APOBEC2氨基酸序列；NCBI Ref：NP_006780
0140 APOBEC3A氨基酸序列；NCBI Ref：NNP_663745
0141 APOBEC3C氨基酸序列；NCBI Ref：NP_055323
0142 APOBEC3E氨基酸序列；NCBI Ref：NP_689639
0143 APOBEC3F氨基酸序列；NCBI Ref：NP_660341
0144 APOBEC3G氨基酸序列；NCBI Ref：NP_068594
0145 APOBEC3H氨基酸序列；NCBI Ref：NP_001159475
0146 APOBEC4氨基酸序列；NCBI Ref：NP_982279
0157 RAG1mRNA序列；NCBI Ref：NM_00448
0158 RAG1氨基酸序列；NCBI Ref：NP_000439
0159 RAG2mRNA序列；NCBI Ref：NM_001243785
0160 RAG2氨基酸序列；NCBI Ref：NP_001230714
0161 SPO11mRNA序列；NCBI Ref：NM_012444
0162 SPO11氨基酸序列；NCBI Ref：NP_036576
0163 Rad51C同型物1mRNA序列；NCBI Ref：NM_058216
0164 Rad51C同型物1氨基酸序列；NCBI Ref：NP_478123
0165 Rad51C同型物2mRNA序列；NCBI Ref：NM_002876
0166 Rad51C同型物2氨基酸序列；NCBI Ref：NP_002867
Figure IDA0000470509930000011
Figure IDA0000470509930000021
Figure IDA0000470509930000031
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Claims (115)

1.一种治疗方法，所述方法包括：
（d）获取源自受试者的生物样品；
（e）测定DNA编辑酶的水平；以及
（f）向具有可检测水平的DNA编辑酶的受试者给予治疗有效量的DNA双链断裂修复抑制剂。
2.一种治疗方法，所述方法包括：
向确定具有可检测水平的DNA编辑酶的受试者给予治疗有效量的DNA双链断裂修复抑制剂。
3.一种治疗方法，所述方法包括：
（c）选择具有下述细胞的受试者，所述细胞表达升高水平的DNA编辑酶；以及
（d）向所述受试者给予治疗有效量的DNA双链断裂修复抑制剂；
其中，所述DNA编辑酶的升高水平是比来自健康个体的相同类型细胞中的DNA编辑酶水平更高的DNA编辑酶水平。
4.如权利要求1所述的方法，其中，所述生物样品包含血细胞。
5.如权利要求1所述的方法，其中，所述生物样品包含B细胞。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中，在表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的细胞中，DNA编辑酶的水平统计上显著地高于来自健康受试者的正常细胞中的DNA编辑酶水平。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中，所述DNA编辑酶选自于由下列酶所组成的组：
重组激活基因1（RAG1）；重组激活基因2（RAG2）；孢子形成特异性蛋白11（SPO11）；载脂蛋白B mRNA编辑酶，催化多肽样（APOBEC）家族成员；以及活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）。
8.如权利要求7所述的方法，其中，所述DNA编辑酶为活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）。
9.如权利要求8所述的方法，其中，在表达升高水平的AID的B细胞中，活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）的水平显著高于来自健康受试者的未活化B细胞中表达的AID水平。
10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中，所述受试者为人类受试者。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中，所述表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的细胞或生物样品为癌细胞。
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中，所述受试者患有癌症。
13.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中，所述表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的细胞或生物样品为自体免疫细胞。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中，所述受试者患有选自于由下列病症所组成的组中的病症：
淋巴瘤、白血病以及浆细胞肿瘤。
15.如权利要求14所述的方法，其中，所述淋巴瘤选自于由下列淋巴瘤所组成的组：
非Hodgkin氏淋巴瘤；Burkiit氏淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤；淋巴浆细胞性淋巴瘤；MALT淋巴瘤；滤泡性淋巴瘤；扩散性大B细胞淋巴瘤；以及T细胞淋巴瘤。
16.如权利要求14所述的方法，其中，所述白血病选自于由下列白血病所组成的组：
急性淋巴母细胞性白血病（ALL）、Burkitt氏白血病；B细胞白血病；B细胞急性淋巴母细胞性白血病；慢性淋巴细胞性白血病（CLL）；急性骨髓性白血病（AML）；慢性骨髓性白血病（CML）；以及T细胞急性淋巴母细胞性白血病（T-ALL）。
17.如权利要求14所述的方法，其中，所述浆细胞肿瘤选自于由下列浆细胞肿瘤所组成的组：
多发性骨髓瘤；浆细胞骨髓瘤；浆细胞性白血病；以及浆细胞瘤。
18.如权利要求12所述的方法，其中，所述受试者患有癌症，所述癌症选自于由下列癌症所组成的组：
上皮细胞癌；结肠癌、肝癌、胃癌；肠癌；食道癌；乳腺癌；肺癌；以及甲状腺癌。
19.如权利要求1-10和13中任一项所述的方法，其中，所述受试者患有自体免疫性疾病。
20.如权利要求19所述的方法，其中，所述自体免疫性疾病选自于由下列疾病所组成的组：
红斑狼疮；Wiskott-Aldrich综合征；自体免疫性淋巴组织增生综合征；重症肌无力；类风湿性关节炎（RA）；狼疮性肾炎；多发性硬化；系统性红斑狼疮、盘状狼疮、亚急性皮肤性红斑狼疮、包括冻疮样红斑狼疮在内的皮肤性红斑狼疮、慢性关节炎、Sjogren氏综合征、炎症性慢性鼻窦炎、结肠炎、乳糜泻、炎症性肠病、Barrett氏食道症、炎症性胃炎、自体免疫性肾炎、自体免疫性脉管炎、自体免疫性肝炎、自体免疫性心脏炎、自体免疫性脑炎、以及自体免疫介导的血液系统疾病。
21.如权利要求1-20中任一项所述的方法，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂降低一种或多种基因的表达或活性，所述基因选自于由下列基因所组成的组：
Rad51；Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；Rad51D；XRCC2；XRCC3；RAD54；RAD52；BRCA1；BRCA2；ATM；ATR；MRE11；RAD50；NBS1；WRN；BLM；RECQ4；LIG4；XRCC4；PRKDC；DCLRE1C；XRCC6；XRCC5；以及XLF。
22.如权利要求1-21中任一项所述的方法，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂选自于由下列物质所组成的组：
小分子；蛋白质；肽；抗体；抗体片段；蛋白质结合蛋白；核糖核酸；脱氧核糖核酸；适配体；肽核酸（PNA）；以及锁核酸（LNA）。
23.如权利要求1-20中任一项所述的方法，其中，DNA双链断裂修复抑制剂为二苯乙烯、二苯乙烯类化合物或上述物质的衍生物。
24.如权利要求23所述的方法，其中，所述二苯乙烯或二苯乙烯衍生物为式V的化合物：
Figure FDA0000470509860000041
或者其立体异构体、对映体、前药或药学上可接受的盐；
其中，R1可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R2可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R3可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R4可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R5可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R6可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R7可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R8可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R9可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R10可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，X可选自于由下列基团所组成的组：C(R21)2、-C(O)N(R22)-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-SO2-、-CH(R11)CH(R12)-、-C(R11)=C(R12)-、以及
Figure FDA0000470509860000071
其中，R11可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R12可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，每一R21可独立地选自于由下列基团所组成的组：氢、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、以及以上基团的任意组合；
其中，每一R22可独立地选自于由下列基团所组成的组：氢、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、以及以上基团的任意组合。
25.如权利要求21所述的方法，其中，所述二苯乙烯衍生物为4,4′-二异硫氰基二苯乙烯-2,2′-二磺酸（DIDS）。
26.如权利要求21所述的方法，其中，所述二苯乙烯或二苯乙烯衍生物选自于由下列物质所组成的组：
(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))二乙酰胺；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(2-甲基丙酰胺)；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(2-甲氧基乙酰胺)；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))二甲烷磺酰胺；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))二环丙烷磺酰胺；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(丙烷-2-磺酰胺)；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(二甲基氨基-磺酰胺)；(E)-N-(4-(4-氨基苯乙烯基)苯基)丙烷-2-磺酰胺；(E)-1,1′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(3-甲基硫脲)；(E)-1,1′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(3-异丙基硫脲)；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)乙酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)异丁酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-2-甲氧基乙酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)甲烷磺酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)环丙烷磺酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)丙烷-2-磺酰胺；N′-(4-{(E)-2-[4-(二甲基氨基)苯基]-1-乙烯基}苯基)-N,N-二甲基磺酰胺；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-甲基硫脲；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-异丙基硫脲；(E)-1-环丙基-3-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)硫脲；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-甲基脲；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-异丙基脲；(E)-1-环丙基-3-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)脲；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-乙酰胺基苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-异丁酰胺基苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(2-甲氧基乙酰胺基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(环丙烷磺酰胺基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(1-甲基乙基磺酰胺基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-乙酰胺基苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-异丁酰胺基苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(2-甲氧基乙酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(甲基磺酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(环丙烷磺酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(1-甲基乙基磺酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-环丙基硫脲基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-乙基脲基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸)钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(环丙烷磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-环丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(甲基磺酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-环丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-乙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-乙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-甲基硫脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-甲基硫脲基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-异丙基硫脲基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-乙基脲基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸)钠；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N-甲基苯甲酰胺)；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N-异丙基苯甲酰胺)；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N,N-二甲基苯甲酰胺)；(E)-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(吗啉代甲酮)；(E)-5-(4-羟基苯乙烯基)苯-1,3-二醇(3,5,4′-三羟基-反-二苯乙烯)；以及白藜芦醇。
27.如权利要求21所述的方法，其中，所述二苯乙烯或二苯乙烯衍生物选自于由下列物质所组成的组：
(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(丙烷-2-磺酰胺)；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)环丙烷磺酰胺；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(环丙烷磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(二甲基氨基-磺酰胺)；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)丙烷-2-磺酰胺；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸)钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N-甲基苯甲酰胺)；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-环丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸盐/酯)；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(环丙烷磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；以及(E)-5-乙酰胺基-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯。
28.如权利要求20所述的方法，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂选自于由下列物质所组成的组：
4-甲基喹唑啉-2-甲酰胺；苯并[h]异喹啉-6-胺；5,6-二甲基-2-巯基甲基苯并咪唑；(E)-1-(2-羟基苯基)-3-(吡啶-3-基)丙-2-烯-1-酮；N4-丁基-6-氯代嘧啶-2,4-二胺；1-黄华碱；6-氨基-5-亚硝基-2-苯基嘧啶-4(1H)-酮；以及4-(2-氨基-4-硝基苯基氨基)苯酚。
29.如权利要求20所述的方法，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂选自于由下列物质所组成的组：
7-氮杂吲哚-3-甲醛；2-氨基-4-苯基苯酚；3-(1-甲基-3-吡咯烷基)吲哚；1-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-a]喹诺酮；2-氨基-5-硝基-1H-苯并咪唑；2-(5-硝基-2-亚糠基)氨基乙醇-N-氧化物；硝呋隆；α-巯基-N,2-萘基乙酰胺；1-thermospine；N4-丁基-6-氯-2,4-嘧啶二胺；2-(2-羟基-6-丙烷-2-基氧基-环己基)乙酸；6-氨基-5-亚硝基-2-苯基-1H-嘧啶-4-酮；4-氨基-2-羟基苯基)胂酸；螺[1,2-二氢化茚-3,5′-咪唑啉]-2′,4′-二酮；N～4～-(4-甲氧基苯基)-6-甲基嘧啶-2,4-二胺；2-氨基-9-戊基-3H-嘌呤-6-硫酮；2-(4-甲氧基苯基)-3-(吡啶-3-基)丙-2-烯腈；2-氯嘧啶-4,6-二甲酰胺；2-氨基-3H-吩噁嗪-3-酮；2-甲基-N-苯甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；4-(苯甲基氨基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶；2-氨基-1-萘磺酸；N-仲丁基-3-甲基苯甲酰胺；苯并[h]异喹啉-6-胺；以及2-(2-甲基环己亚基)肼甲酰胺。
30.如权利要求1-20中任一项所述的方法，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂为抗体或多肽，所述抗体或多肽包含蛋白质结合蛋白或抗体的抗原结合片段。
31.如权利要求1-20中任一项所述的方法，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂为RNAi试剂，所述RNAi试剂选自于由下列物质所组成的组：
MiRNA；shRNA；siRNA；amiRNA；dsRNA，反义RNA或者核糖酶。
32.如权利要求1-31中任一项所述的方法，其中所述DNA双链断裂修复抑制剂进一步包含药学上可接受的载体。
33.如权利要求1-32中任一项所述的方法，所述方法进一步包含给予治疗剂。
34.如权利要求1-33中任一项所述的方法，其中，通过对由怀疑具有可检测水平或升高水平的受试者获得的生物样品中的DNA编辑酶多肽、mRNA或活性的水平进行测量，来识别具有表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的细胞的受试者。
35.如权利要求1-34中任一项所述的方法，其中，通过对由怀疑具有升高水平的受试者获得的生物样品中的DNA编辑酶多肽、mRNA或活性的水平进行测量，并与由健康受试者获得的生物样品中发现的DNA编辑酶多肽、mRNA或活性的水平进行比较，来识别具有表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的细胞的受试者，其中，测试样品中DNA编辑酶多肽、mRNA或活性的量增加表示需要以DNA双链断裂修复抑制剂对受试者进行治疗。
36.如权利要求34或35所述的方法，其中，对DNA编辑酶多肽的水平进行测量包含使用一种或多种分析，所述分析选自于由下列分析所组成的组：
Western印迹；免疫沉淀；酶联免疫吸附分析（ELISA）；放射免疫分析（RIA）；夹心法分析；蛋白质原位阵列；免疫组织染色；放射免疫计量分析；凝胶扩散沉淀反应；免疫扩散分析；原位免疫分析；沉淀反应；免疫荧光分析；定量原位蛋白质分析（AQUA）；质谱和免疫电泳分析。
37.如权利要求34-36中任一项所述的方法，其中，对DNA编辑酶多肽水平的测定包含使用分析，所述分析使用结合至所述DNA编辑酶多肽的抗体、抗体片段、蛋白质结合蛋白或者肽。
38.如权利要求34-37中任一项所述的方法，其中，所述抗体或抗体片段为单克隆抗体。
39.如权利要求34-38中任一项所述的方法，其中，使用可检测的标签对结合至所述DNA编辑酶多肽的抗体、抗体片段、蛋白质结合蛋白或肽进行标记。
40.如权利要求34或35所述的方法，其中，对DNA编辑酶mRNA的水平进行测量包含使用一种或多种分析，所述分析选自于由下列分析所组成的组：
RT-PCR；定量RT-PCR；杂交分析；Northern印迹；基于微阵列的表达分析；转录扩增；自持序列复制；高通量测序；以及RNA-Seq。
41.如权利要求1-40中任一项所述的方法，其中，对DNA编辑酶的活性进行测量包含使用一种或多种分析对基因组或基因组的一部分的总体突变状态进行测定，所述分析选自于由下列分析所组成的组：
杂交；高通量测序；外显子组测序；荧光原位杂交（FISH）、PCR、以及基因组测序；
其中，突变状态比正常突变状态高出2%以上表明DNA编辑酶具有活性。
42.如权利要求35-36或41中任一项所述的方法，其中，对活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）的活性的测量包含使用一种或多种分析对靶基因IGH、BCL6、MYC、BCL11A、CD93、PIM1和/或PAX5中的超突变进行测定，所述分析选自于由以下分析所组成的组：
杂交；高通量测序；外显子组测序；荧光原位杂交（FISH）、PCR、以及基因组测序。
43.如权利要求35或36所述的方法，其中，对活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）的活性的测量包含使用磷酸化H2AX分析、53BP1分析或RAD51分析。
44.一种致使细胞死亡的方法，所述方法包含：
（e）向细胞给予有效量的DNA编辑酶；以及
（f）随后使步骤（e）的细胞与DNA双链断裂修复抑制剂进行接触；
从而致使细胞死亡。
45.一种使细胞对细胞死亡敏化的方法，所述方法包含：
（g）向受试者给予治疗有效量的DNA编辑酶，使细胞对使用DNA双链断裂修复抑制剂导致的细胞死亡敏化；以及
（h）随后向所述受试者给予DNA双链断裂修复抑制剂。
46.如权利要求44-45中任一项所述的方法，其中，以选自于由下列形式所组成的组中的形式给予所述DNA编辑酶：
多肽；编码DNA编辑酶的核酸；以及包含编码DNA编辑酶的核酸的载体。
47.如权利要求44-46中任一项所述的方法，其中，所述DNA编辑酶选自于由下列酶所组成的组：
重组激活基因1（RAG1）；重组激活基因2（RAG2）；孢子形成特异性蛋白11（SPO11）；载脂蛋白B mRNA编辑酶，催化多肽样（APOBEC）家族成员；以及活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）。
48.如权利要求44-47中任一项所述的方法，其中，所述DNA编辑酶为活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）。
49.一种对测试试剂是否为DNA双链断裂修复抑制剂进行确定的方法，所述方法包含：
a）使表达DNA编辑酶的细胞与测试试剂相接触；以及
b）测定步骤a）的细胞的细胞活力；
其中，细胞活力降低表明所述测试试剂为DNA双链断裂修复抑制剂。
50.如权利要求49所述的方法，所述方法进一步包含：
c）使不表达DNA编辑酶的细胞与所述测试试剂进行接触；
d）测定步骤c）的细胞的细胞活力；以及
e）对步骤b）的活细胞的分数与步骤d）中活细胞的分数的比值进行测定；
其中，比值低于0.8表明所述测试试剂为DNA双链断裂修复抑制剂。
51.如权利要求49或50所述的方法，其中，所述表达DNA编辑酶的细胞为表达AID的细胞。
52.如权利要求51所述的方法，其中，所述表达AID的细胞为刺激后的B细胞。
53.如权利要求49-52中任一项所述的方法，其中，所述细胞为癌细胞。
54.如权利要求49-53中任一项所述的方法，其中，使用编码DNA编辑酶的核酸载体对所述细胞进行转染。
55.如权利要求49-54中任一项所述的方法，其中，所述细胞为选自于由下列细胞系所组成的组的细胞系：CH12-F3、3T3、CH12F3、Caco-2、CCRF-CEM、CHO、CH12-F3、COS-7、HCT116、HEK293、HL-60、HepG2、Jurkat、KG-1、K-562、MCF-7、MDCK、MG-63、Mo-B、MOLT-4、Ramos（RA1）以及U2-OS。
56.如权利要求49-55中任一项所述的方法，其中，所述细胞为自体免疫细胞。
57.一种式XXIV的化合物：
Figure FDA0000470509860000161
上述化合物的立体异构体或前药；
其中，X为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
58.如权利要求57所述的化合物，其中，X为钠。
59.一种式VIII的化合物；
Figure FDA0000470509860000171
上述化合物的立体异构体、前药或药学上可接受的盐。
60.一种式X的化合物；
Figure FDA0000470509860000172
上述化合物的立体异构体、前药或药学上可接受的盐。
61.一种式XXV的化合物；
Figure FDA0000470509860000173
上述化合物的立体异构体或前药；
其中，X为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
62.如权利要求61所述的化合物，其中，X为钠。
63.一种式XXXI的化合物；
Figure FDA0000470509860000181
上述化合物的立体异构体或前药；
其中，X为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
64.如权利要求63所述的化合物，其中，X为钠。
65.一种式XXXII的化合物；
Figure FDA0000470509860000182
上述化合物的立体异构体或前药；
其中，X为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
66.如权利要求65所述的化合物，其中，X为钠。
67.一种式XXXIII的化合物；
Figure FDA0000470509860000183
上述化合物的立体异构体或前药；
其中，X为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
68.如权利要求67所述的化合物，其中，X为钠。
69.一种式XXXIV的化合物；
Figure FDA0000470509860000191
上述化合物的立体异构体或前药；
其中，X为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
70.如权利要求69所述的化合物，其中，X为钠。
71.一种式XXXV的化合物；
上述化合物的立体异构体或前药；
其中，X为钠、钾、铝、钙、锂、镁、钡或锌。
72.如权利要求71所述的化合物，其中，X为钠。
73.DNA双链断裂修复抑制剂在治疗确定具有可检测水平的DNA编辑酶的受试者中的用途。
74.如权利要求73所述的用途，其中，通过下列步骤确定所述受试者具有可检测水平的DNA编辑酶：
（c）获取源自所述受试者的生物样品；以及
（d）测量DNA编辑酶的水平。
75.DNA双链断裂修复抑制剂在治疗受试者中的用途，所述方法包含：
（c）选择具有表达升高水平的DNA编辑酶的细胞的受试者；以及
（d）向所述受试者给予治疗有效量的DNA双链断裂修复抑制剂；
其中，所述DNA编辑酶的升高水平为高于来自健康个体的同类型细胞中的DNA编辑酶水平的DNA编辑酶水平；
76.如权利要求73所述的用途，其中，所述生物样品包含血细胞。
77.如权利要求73所述的用途，其中，所述生物样品包含B细胞。
78.如权利要求73-77中任一项所述的用途，其中，在所述表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的细胞中，DNA编辑酶的水平在统计上显著地高于来自健康受试者的正常细胞中的DNA编辑酶水平。
79.如权利要求73-78中任一项所述的用途，其中，所述DNA编辑酶选自于由下列酶所组成的组：
重组激活基因1（RAG1）；重组激活基因2（RAG2）；孢子形成特异性蛋白11（SPO11）；载脂蛋白B mRNA编辑酶，催化多肽样（APOBEC）家族成员；以及活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）。
80.如权利要求79所述的用途，其中，所述DNA编辑酶为活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）。
81.如权利要求80所述的用途，其中，在表达升高水平的AID的B细胞中，活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）的水平显著高于来自健康受试者的未活化B细胞中表达的AID水平。
82.如权利要求73-81中任一项所述的用途，其中，所述受试者为人类受试者。
83.如权利要求73-82中任一项所述的用途，其中，表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的生物样品或细胞为癌细胞。
84.如权利要求73-83中任一项所述的用途，其中，所述受试者患有癌症。
85.如权利要求73-84中任一项所述的用途，其中，表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的生物样品或细胞为自体免疫细胞。
86.如权利要求73-85中任一项所述的用途，其中，所述受试者患有选自于由下列病症所组成的组中的病症：
淋巴瘤、白血病以及浆细胞肿瘤。
87.如权利要求86所述的用途，其中，所述淋巴瘤选自于由下列淋巴瘤所组成的组：
非Hodgkin氏淋巴瘤；Burkiit氏淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤；淋巴浆细胞性淋巴瘤；MALT淋巴瘤；滤泡性淋巴瘤；扩散性大B细胞淋巴瘤；以及T细胞淋巴瘤。
88.如权利要求86所述的用途，其中，所述白血病选自于由下列白血病所组成的组：
急性淋巴母细胞性白血病（ALL）、Burkitt氏白血病；B细胞白血病；B细胞急性淋巴母细胞性白血病；慢性淋巴细胞性白血病（CLL）；急性骨髓性白血病（AML）；慢性骨髓性白血病（CML）；以及T细胞急性淋巴母细胞性白血病（T-ALL）。
89.如权利要求86所述的用途，其中，所述浆细胞肿瘤选自于由下列浆细胞肿瘤所组成的组：
多发性骨髓瘤；浆细胞骨髓瘤；浆细胞性白血病；以及浆细胞瘤。
90.如权利要求86所述的用途，其中，所述受试者患有癌症，所述癌症选自于由下列癌症所组成的组：
上皮细胞癌；结肠癌、肝癌、胃癌；肠癌；食道癌；乳腺癌；肺癌；以及甲状腺癌。
91.如权利要求73-82和85中任一项所述的用途，其中，所述受试者患有自体免疫性疾病。
92.如权利要求91所述的用途，其中，所述自体免疫性疾病选自于由下列疾病所组成的组：
红斑狼疮；Wiskott-Aldrich综合征；自体免疫性淋巴组织增生综合征；重症肌无力；类风湿性关节炎（RA）；狼疮性肾炎；多发性硬化；系统性红斑狼疮、盘状狼疮、亚急性皮肤性红斑狼疮、包括冻疮样红斑狼疮在内的皮肤性红斑狼疮、慢性关节炎、Sjogren氏综合征、炎症性慢性鼻窦炎、结肠炎、乳糜泻、炎症性肠病、Barrett氏食道症、炎症性胃炎、自体免疫性肾炎、自体免疫性脉管炎、自体免疫性肝炎、自体免疫性心脏炎、自体免疫性脑炎、以及自体免疫介导的血液系统疾病。
93.如权利要求73-92中任一项所述的用途，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂降低一种或多种基因的表达或活性，所述基因选自于由下列基因所组成的组：
Rad51；Rad51AP1；Rad51B；Rad51C；Rad51D；XRCC2；XRCC3；RAD54；RAD52；BRCA1；BRCA2；ATM；ATR；MRE11；RAD50；NBS1；WRN；BLM；RECQ4；LIG4；XRCC4；PRKDC；DCLRE1C；XRCC6；XRCC5；以及XLF。
94.如权利要求73-93中任一项所述的用途，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂选自于由下列物质所组成的组：
小分子；蛋白质；肽；抗体；抗体片段；蛋白质结合蛋白；核糖核酸；脱氧核糖核酸；适配体；肽核酸（PNA）；以及锁核酸（LNA）。
95.如权利要求73-93中任一项所述的用途，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂为二苯乙烯、二苯乙烯类化合物或上述物质的衍生物。
96.如权利要求95所述的用途，其中，所述二苯乙烯或二苯乙烯衍生物为式V的化合物：
Figure FDA0000470509860000231
或者上述化合物的立体异构体、对映体、前药或药学上可接受的盐；
其中，R1可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R2可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R3可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R4可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R5可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R6可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R7可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R8可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R9可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R10可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、N=C=S、NHC(O)R21、NHC(O)OR21、NHC(S)R21、NHC(S)N(R22)2、NHSO2R21、NHSO2N(R22)2、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，X可选自于由下列基团所组成的组：C(R21)2、-C(O)N(R22)-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-SO2-、-CH(R11)CH(R12)-、-C(R11)=C(R12)-、以及
Figure FDA0000470509860000251
其中，R11可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，R12可选自于由下列基团所组成的组：氢、卤素、CF3、CN、C(O)R21、CO2R21、C(O)N(R22)2、OH、OR21、N(R22)2、NC(O)R21、NC(O)OR21、NC(S)R21、NC(S)N(R22)2、NSO2R21、NO2、N2-R22、SOR21、SO2R21、SO3R21、OP(O)(OH)2、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、以及任选取代的杂芳基；
其中，每一R21可选自于由下列基团所组成的组：氢、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、以及以上基团的任意组合;
其中，每一R22可选自于由下列基团所组成的组：氢、任选取代的直链或支链C1-C10烷基、任选取代的直链或支链C2-C10烯基、任选取代的直链或支链C2-C10炔基、任选取代的环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、以及以上基团的任意组合。
97.如权利要求95所述的用途，其中，所述二苯乙烯衍生物为4,4′-二异硫氰基二苯乙烯-2,2′-二磺酸（DIDS）。
98.如权利要求95所述的用途，其中，所述二苯乙烯或二苯乙烯衍生物选自于由下列物质所组成的组：
(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))二乙酰胺；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(2-甲基丙酰胺)；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(2-甲氧基乙酰胺)；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))二甲烷磺酰胺；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))二环丙烷磺酰胺；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(丙烷-2-磺酰胺)；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(二甲基氨基-磺酰胺)；(E)-N-(4-(4-氨基苯乙烯基)苯基)丙烷-2-磺酰胺；(E)-1,1′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(3-甲基硫脲)；(E)-1,1′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(3-异丙基硫脲)；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)乙酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)异丁酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-2-甲氧基乙酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)甲烷磺酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)环丙烷磺酰胺；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)丙烷-2-磺酰胺；N′-(4-{(E)-2-[4-(二甲基氨基)苯基]-1-乙烯基}苯基)-N,N-二甲基磺酰胺；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-甲基硫脲；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-异丙基硫脲；(E)-1-环丙基-3-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)硫脲；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-甲基脲；(E)-1-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)-3-异丙基脲；(E)-1-环丙基-3-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)脲；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-乙酰胺基苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-异丁酰胺基苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(2-甲氧基乙酰胺基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(环丙烷磺酰胺基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(1-甲基乙基磺酰胺基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-乙酰胺基苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-异丁酰胺基苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(2-甲氧基乙酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(甲基磺酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(环丙烷磺酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(1-甲基乙基磺酰胺基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-环丙基硫脲基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-乙基脲基)苯磺酸)钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸)钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(环丙烷磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-环丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(甲基磺酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-环丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-乙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-异丁酰胺基-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(4-(甲基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-乙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-异丁酰胺基-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-甲基硫脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基硫脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-5-(3-异丙基脲基)-2-(2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-甲基硫脲基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-异丙基硫脲基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-乙基脲基)苯磺酸)钠；(E)-6,6′-(乙烯-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸)钠；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N-甲基苯甲酰胺)；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N-异丙基苯甲酰胺)；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N,N-二甲基苯甲酰胺)；(E)-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(吗啉代甲酮)；(E)-5-(4-羟基苯乙烯基)苯-1,3-二醇(3,5,4′-三羟基-反-二苯乙烯)；以及白藜芦醇。
99.如权利要求95所述的用途，其中，所述二苯乙烯或二苯乙烯衍生物选自于由下列物质所组成的组：
(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(丙烷-2-磺酰胺)；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)环丙烷磺酰胺；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(环丙烷磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-N,N′-(乙烯-1,2-二基双(4,1-亚苯基))双(二甲基氨基-磺酰胺)；(E)-N-(4-(4-(二甲基氨基)苯乙烯基)苯基)丙烷-2-磺酰胺；(E)-5-(3-环丙基硫脲基)-2-(4-(1-甲基乙基磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸)钠；(E)-5-(3-乙基脲基)-2-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸钠；(E)-4,4′-(乙烯-1,2-二基)双(N-甲基苯甲酰胺)；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-环丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；(E)-5-(环丙烷磺酰胺基)-2-(4-(3-异丙基脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；(E)-5-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-(4-(3-甲基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；6,6′-(乙烷-1,2-二基)双(3-(3-异丙基脲基)苯磺酸盐/酯)；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(3-异丙基硫脲基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；(E)-5-乙酰胺基-2-(4-(环丙烷磺酰胺基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯；以及(E)-5-乙酰胺基-2-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)-2-磺酸根苯乙烯基)苯磺酸盐/酯。
100.如权利要求94所述的用途，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂选自于由下列物质所组成的组：
4-甲基喹唑啉-2-甲酰胺；苯并[h]异喹啉-6-胺；5,6-二甲基-2-巯基甲基苯并咪唑；(E)-1-(2-羟基苯基)-3-(吡啶-3-基)丙-2-烯-1-酮；N4-丁基-6-氯嘧啶-2,4-二胺；1-黄华碱；6-氨基-5-亚硝基-2-苯基嘧啶-4(1H)-酮；以及4-(2-氨基-4-硝基苯基氨基)苯酚。
101.如权利要求94所述的用途，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂选自于由下列物质所组成的组：
7-氮杂吲哚-3-甲醛；2-氨基-4-苯基苯酚；3-(1-甲基-3-吡咯烷基)吲哚；1-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-a]喹诺酮；2-氨基-5-硝基-1H-苯并咪唑；2-(5-硝基-2-亚糠基)氨基乙醇-N-氧化物；硝呋隆；α-巯基-N,2-萘基乙酰胺；1-thermospine；N4-丁基-6-氯-2,4-嘧啶二胺；2-(2-羟基-6-丙烷-2-基氧基-环己基)乙酸；6-氨基-5-亚硝基-2-苯基-1H-嘧啶-4-酮；4-氨基-2-羟基苯基)胂酸；螺[1,2-二氢化茚-3,5′-咪唑啉]-2′,4′-二酮；N～4～-(4-甲氧基苯基)-6-甲基嘧啶-2,4-二胺；2-氨基-9-戊基-3H-嘌呤-6-硫酮；2-(4-甲氧基苯基)-3-(吡啶-3-基)丙-2-烯腈；2-氯嘧啶-4,6-二甲酰胺；2-氨基-3H-吩噁嗪-3-酮；2-甲基-N-苯甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；4-(苯甲基氨基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶；2-氨基-1-萘磺酸；N-仲丁基-3-甲基苯甲酰胺；苯并[h]异喹啉-6-胺；以及2-(2-甲基环己亚基)肼甲酰胺。
102.如权利要求73-94中任一项所述的用途，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂为抗体或多肽，所述抗体或多肽包含蛋白质结合蛋白或抗体的抗原结合片段。
103.如权利要求73-94中任一项所述的用途，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂为RNAi试剂，所述RNAi试剂选自于由下列物质所组成的组：
miRNA；shRNA；siRNA；amiRNA；dsRNA；反义RNA或核糖酶。
104.如权利要求73-103中任一项所述的用途，其中，所述DNA双链断裂修复抑制剂进一步包含药学上可接受的载体。
105.如权利要求73-104中任一项所述的用途，所述用途进一步包含给予治疗剂。
106.如权利要求73-105中任一项所述的用途，其中，通过对由怀疑具有可检测水平或升高水平的受试者获得的生物样品中的DNA编辑酶多肽、mRNA或活性的水平进行测量，来识别具有表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的细胞的受试者。
107.如权利要求73-106中任一项所述的用途，其中，通过对由怀疑具有升高水平的受试者获得的生物样品中的DNA编辑酶多肽、mRNA或活性的水平进行测量，并与由健康受试者获得的生物样品中发现的DNA编辑酶多肽、mRNA或活性的水平进行比较，来识别具有表达可检测水平或升高水平的DNA编辑酶的细胞的受试者，其中，测试样品中DNA编辑酶多肽、mRNA或活性的量增加表示需要以DNA双链断裂修复抑制剂对受试者进行治疗。
108.如权利要求106或107所述的用途，其中，对DNA编辑酶多肽的水平进行测量包含使用一种或多种分析，所述分析选自于由下列分析所组成的组：
Western印迹；免疫沉淀；酶联免疫吸附分析（ELISA）；放射免疫分析（RIA）；夹心法分析；蛋白质原位阵列；免疫组织染色；放射免疫计量分析；凝胶扩散沉淀反应；免疫扩散分析；原位免疫分析；沉淀反应；免疫荧光分析；定量原位蛋白质分析（AQUA）；质谱和免疫电泳分析。
109.如权利要求106或107所述的方法，其中，对DNA编辑酶多肽水平的测定包含使用分析，所述分析使用结合至所述DNA编辑酶多肽的抗体、抗体片段、蛋白质结合蛋白或者肽。
110.如权利要求106-109中任一项所述的用途，其中，所述抗体或抗体片段为单克隆抗体。
111.如权利要求106-110中任一项所述的用途，其中，使用可检测的标签对结合至所述DNA编辑酶多肽的抗体、抗体片段、蛋白质结合蛋白或肽进行标记。
112.如权利要求106或107所述的用途，其中，对DNA编辑酶mRNA的水平进行测量包含使用一种或多种分析，所述分析选自于由下列分析所组成的组：
RT-PCR；定量RT-PCR；杂交分析；Northern印迹；基于微阵列的表达分析；转录扩增；自持序列复制；高通量测序；以及RNA-Seq。
113.如权利要求106或107所述的用途，其中，对DNA编辑酶的活性进行测量包含使用一种或多种分析对基因组或基因组的一部分的总体突变状态进行测定，所述分析选自于由下列分析所组成的组：
杂交；高通量测序；外显子组测序；荧光原位杂交（FISH）、PCR、以及基因组测序；
其中，突变状态比正常突变状态高出2%以上表明DNA编辑酶具有活性。
114.如权利要求106-107和113中任一项所述的用途，其中，对活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）的活性的测量包含使用一种或多种分析对靶基因IGH、BCL6、MYC、BCL11A、CD93、PIM1和/或PAX5中的超突变进行测定，所述分析选自于由以下分析所组成的组：
杂交；高通量测序；外显子组测序；荧光原位杂交（FISH）、PCR、以及基因组测序。
115.如权利要求106或107所述的用途，其中，对活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）的活性的测量包含使用磷酸化H2AX分析、53BP1分析或RAD51分析。
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