CN102911918B - 一种基因工程细胞及其在nk细胞扩增中的应用 - Google Patents
一种基因工程细胞及其在nk细胞扩增中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102911918B CN102911918B CN201210237023.5A CN201210237023A CN102911918B CN 102911918 B CN102911918 B CN 102911918B CN 201210237023 A CN201210237023 A CN 201210237023A CN 102911918 B CN102911918 B CN 102911918B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- 1bbl
- cells
- cell
- mbil
- genetically engineered
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Ceased
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 title description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 77
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims abstract description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 claims abstract description 15
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims abstract description 14
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 102100032101 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9 Human genes 0.000 claims description 12
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 claims description 11
- 108010082808 4-1BB Ligand Proteins 0.000 claims description 10
- 102000008579 Transposases Human genes 0.000 claims description 10
- 108010020764 Transposases Proteins 0.000 claims description 10
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims description 7
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 claims description 4
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 4
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 claims description 4
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 claims description 2
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 2
- 101000638251 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9 Proteins 0.000 claims 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 abstract description 7
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 abstract description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 5
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 abstract description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 abstract description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 102100030704 Interleukin-21 Human genes 0.000 description 7
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 6
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 6
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 102000004495 STAT3 Transcription Factor Human genes 0.000 description 4
- 108010017324 STAT3 Transcription Factor Proteins 0.000 description 4
- 101100519160 Arabidopsis thaliana PCR4 gene Proteins 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000007019 Oxalis corniculata Species 0.000 description 3
- NISPVUDLMHQFRQ-MKIKIEMVSA-N cucurbitacin I Chemical compound C([C@H]1[C@]2(C)C[C@@H](O)[C@@H]([C@]2(CC(=O)[C@]11C)C)[C@@](C)(O)C(=O)/C=C/C(C)(O)C)C=C2[C@H]1C=C(O)C(=O)C2(C)C NISPVUDLMHQFRQ-MKIKIEMVSA-N 0.000 description 3
- NISPVUDLMHQFRQ-ILFSFOJUSA-N cucurbitacin I Natural products CC(C)(O)C=CC(=O)[C@](C)(O)[C@H]1[C@H](O)C[C@@]2(C)[C@@H]3CC=C4[C@@H](C=C(O)C(=O)C4(C)C)[C@]3(C)C(=O)C[C@]12C NISPVUDLMHQFRQ-ILFSFOJUSA-N 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 2
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 description 2
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 108091008877 NK cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000010648 Natural Killer Cell Receptors Human genes 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 1
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 description 1
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000037451 immune surveillance Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种基因工程细胞及其在NK细胞扩增中的应用，提供了一种高效和高细胞毒性的自然杀伤（NK）细胞体外扩增方法。通过基因工程技术在细胞膜表面稳定表达4-1BB配体（4-1BBL）和膜固定白介素21（mbIL-21），构建4-1BBL-mbIL-21-基因工程细胞（4-1BBL-mbIL-21-GeneEngineeringCells,4-1BBL-mbIL-21-GEC），如4-1BBL-mbIL-21-K562细胞等，以此作为扩增的饲养细胞，从外周血单核细胞中直接扩增NK细胞，更加简单和易于操作。细胞计数、流式细胞分析、细胞毒性试验等研究表明细胞扩增倍数高，NK细胞纯度好、细胞毒性强、具有明显的肿瘤细胞杀伤效应。
Description
技术领域
本发明涉及疾病免疫治疗，尤其涉及NK细胞免疫治疗中NK细胞的体外制备。
背景技术
NK细胞（natural killer cell，自然杀伤细胞）是一类大颗粒淋巴细胞，是机体固有免疫和适应性免疫的重要桥梁，在机体抗感染性疾病和恶性肿瘤免疫监视过程中发挥重要作用。继发性NK细胞移植能产生良好的抗肿瘤效应，而其自身很少被受体排斥，且不会引起任何GVHD（Graft Versus Host Disease）。因此，继发性NK细胞治疗（Adoptive NK cell therapy）已成为目前最热门和最有前途的恶性肿瘤治疗方法之一。
尽管继发性NK细胞免疫治疗具有良好的抗肿瘤效应和巨大的应用前景，但NK细胞免疫治疗仍然难以进行常规临床应用，其中最主要障碍在于，在外周血单核细胞（PBMC）中，NK细胞只是一个很小的群体，仅占人外周血单核细胞的10～15%，难以满足巨大的临床需要。为解决这一难题，首先要在数量上保证NK细胞的有效供给。因此，探索各种有效的NK细胞体外扩增（Ex vivo expansion）方法已成为NK细胞免疫治疗的必然趋势。
应用基因工程细胞（ Gene engineering cells, GEC）作为饲养细胞（feeder cell）进行NK细胞体外扩增是一种重要的NK细胞扩增新策略。在以往的研究中有研究者应用CD64、CD86修饰K562细胞构建人工抗原递呈细胞(Antigen present cell, aAPC)，然后将4-1BBL（CD137L）和膜固定IL15（membrane-bound IL-15, mIL-15）等导入此细胞中，构建CD64-CD86-4-1BBL-mIL15-aAPC，并利用此人工抗原递呈细胞进行NK细胞体外扩增，这种方法可以获得较强细胞毒性的NK细胞，但NK细胞增殖受到限制，5-6周后细胞不再扩增。本发明中，我们通过基因工程技术将4-1BBL和膜固定IL21（mbIL-21）直接修饰到K562细胞表面，构建4-1BBL-mbIL-21-GEC。与以往的人工抗原递呈细胞相比，本发明更加简单和易于操作。研究表明，4-1BBL-mbIL-21-GEC可以诱导产生大规模功能性的NK细胞，在NK细胞免疫治疗临床应用和科学研究中具有重大应用价值。
发明内容
本发明的目的是，提供一种基因工程细胞。
本发明的第二个目的是，提供一种基因工程细胞的制备方法。
本发明的第三个目的是，提供一种基因工程细胞在NK细胞扩增中的应用。
本发明的第四个目的是，提供一种NK细胞扩增方法。
为了解决本发明第一个目的，本发明提供了一种基因工程细胞，所述基因工程细胞为4-1BBL-mbIL-21-GEC，其细胞膜表面稳定表达4-1BB配体和膜固定白介素21（mbIL-21）。
作为一个优选，所述基因工程细胞为4-1BBL-mbIL-21-K562细胞。
为了解决本发明第二个目的，本发明提供了基因工程细胞的制备方法，包括以下步骤：
（1）构建4-1BBL表达的转座子；
（2）4-1BBL转座子与转座酶SB11共转染相应细胞，流式细胞分选，获得4-1BBL稳定表达细胞4-1BBL-GEC；
（3）在步骤（2）获得的4-1BBL-GEC 基础上导入在细胞膜表面稳定表达的IL-21（membrane-bound IL-21, mbIL-21），建立4-1BBL-mbIL-21 -GEC。
作为一个优选，所述基因工程细胞为4-1BBL-mbIL-21-K562细胞。
为了解决本发明第三个目的，本发明提供了基因工程细胞在NK细胞扩增中的应用。
为了解决本发明第四个目的，本发明提供了一种NK细胞扩增方法，利用上述基因工程细胞进行扩增，包括以下步骤：
（1）构建4-1BBL表达的转座子；
（2）4-1BBL转座子与转座酶SB11共转染相应细胞，流式细胞分选，获得4-1BBL稳定表达细胞4-1BBL-GEC；
（3）在步骤（2）获得的4-1BBL-GEC 基础上导入在细胞膜表面稳定表达的IL-21（mbIL-21），建立4-1BBL-mbIL-21 -GEC；
（4）致死性照射或丝裂霉素处理步骤（3）获得的基因工程细胞，按2: 1与外周血单核细胞混合，在NK细胞扩增培养液中共培育；
（5）每周重复刺激1次，连续数周，以获得足够量的NK细胞。
作为一个优选，所述基因工程细胞为4-1BBL-mbIL-21-K562细胞。
本发明的优点在于，为建立一种高效和高细胞毒性的NK细胞体外扩增方法，我们通过在细胞膜表面稳定表达4-1BB配体（4-1BBL）和膜固定白介素21（mbIL-21），构建新型基因工程细胞4-1BBL-mbIL-21-GEC，如4-1BBL-mbIL-21-K562细胞，以此作为扩增的饲养细胞，从外周血单核细胞中直接扩增NK细胞，而不是先构建人工抗原递呈细胞，然后在此基础上遗传修饰。与以往的人工抗原递呈细胞相比，本发明更加简单和易于操作。流式细胞分析、细胞毒性试验等表明所扩增的NK细胞纯度好、细胞毒性强，具有明显的肿瘤细胞杀伤效应。本发明提供的NK细胞扩增方法简单、易于操作；扩增效率好、纯度高；扩增持续时间长、肿瘤细胞杀伤效应明显。
附图说明
图1为本发明的工作示意图。
图2为4-1BBL和mbIL-21在4-1BBL-mbIL-21-K562基因工程细胞中的表达。
图3为扩增细胞中NK细胞的纯度（W代表扩增周数）。
图4为扩增细胞的总数目。
图5为扩增前后NK细胞的受体表达（W代表扩增周数，0 W代表PBMC）。
图6为扩增前后NK细胞的肿瘤细胞杀伤效率。
图7为STAT3抑制剂JSI-124抑制扩增NK细胞受体表达。
图8为STAT3抑制剂JSI-124损害扩增NK细胞的形态、增殖和细胞杀伤效力。
具体实施方式
下面结合附图对本发明提供的4-1BBL-mbIL-21-K562的制备方法和NK细胞扩增方法的具体实施方式做详细说明，图1为本发明的工作示意图。
实施例1、基因工程细胞4-1BBL-mbIL-21-K562的制备方法
1.从Open Biosysems (Thermo Fisher Scientific, CO, USA)购买4-1BBL/PCR4 TOPO 质粒，PCR扩增，然后插入GlySer-EGFP(CoOp)-pSBSO睡美人表达载体的Nhe I-XhoI位点，构建4-1BBL/pSBSO转座子。
2.将4-1BBL/pSBSO转座子与转座酶SB11共转染K562细胞，流式细胞分选，获得4-1BBL稳定表达的K562细胞（4-1BBL-K562）。
3.将IL-21-Fc(CoOp)-pSBSO与转座酶SB11共转染4-1BBL-K562细胞，流式细胞分选，建立4-1BBL-mbIL-21-K562基因工程细胞。流式细胞分析证实4-1BBL-mbIL-21-K562细胞表面有明显的4-1BBL和IL-21的表达（图2）。
实施例2、NK细胞扩增方法
1.从Open Biosysems (Thermo Fisher Scientific, CO, USA)购买4-1BBL/PCR4 TOPO 质粒，PCR扩增，然后插入GlySer-EGFP(CoOp)-pSBSO睡美人表达载体的Nhe I-XhoI位点，构建4-1BBL/pSBSO转座子。
2.将4-1BBL/pSBSO转座子与转座酶SB11共转染K562细胞，流式细胞分选，获得4-1BBL稳定表达的K562细胞（4-1BBL-K562）。
3.将IL-21-Fc(CoOp)-pSBSO与转座酶SB11共转染4-1BBL-K562细胞，流式细胞分选，建立4-1BBL-mbIL-21- K562基因工程细胞。
4.用淋巴细胞分离液分离人外周血单核细胞。
5.100Gy放射线照射构建的基因工程细胞，或15ug/mL丝裂霉素处理构建的基因工程细胞4小时；之后，细胞用PBS洗2~3次。
6.预处理过的基因工程细胞与淋巴细胞按2:1混合，在含有10%FBS、1% P/S、2 mM L-谷氨酰胺、50U/ml IL-2的RPMI1640培养液中于5% CO2培养箱中共培育，每2天更换新鲜培养基一次。
7.按步骤5和6程序每周重复刺激扩增后细胞1次。
8.在不同时间点，检测NK细胞纯度（见图3）、细胞总数目（见图4）、NK细胞表面受体表达（见图5）和对肿瘤细胞的杀伤效力（见图6）。
实施例3、NK细胞扩增机理研究
1.从Open Biosysems (Thermo Fisher Scientific, CO, USA)购买4-1BBL/PCR4 TOPO 质粒，PCR扩增，然后插入GlySer-EGFP(CoOp)-pSBSO睡美人表达载体的Nhe I-XhoI位点，构建4-1BBL/pSBSO转座子。
2.将4-1BBL/pSBSO转座子与转座酶SB11共转染K562细胞，流式细胞分选，获得4-1BBL稳定表达的K562细胞（4-1BBL-K562）。
3.将IL-21-Fc(CoOp)-pSBSO与转座酶SB11共转染4-1BBL-K562细胞，流式细胞分选，建立4-1BBL-mbIL-21- K562基因工程细胞。
4.用淋巴细胞分离液分离人外周血单核细胞。
5.100Gy放射线照射构建的基因工程细胞，或15μg/mL的丝裂霉素处理构建的基因工程细胞4小时；之后，细胞用PBS洗2~3次。
6.预处理过的基因工程细胞与淋巴细胞按2:1混合，在含有10%FBS、1% P/S、2 mM L-谷氨酰胺、50U/ml IL-2的RPMI1640培养液中于5% CO2培养箱中共培育，每2天更换新鲜培养基一次。
7. 1周后按步骤5和6程序重复刺激扩增后细胞。
8. 1周后按步骤5和6程序重复刺激步骤7所得扩增细胞，设2 个组，在培养基中分别加入0.1μM的JSI-124和等体积的DMSO。
9. 第3天流式细胞分析检测NK细胞受体表达（图7），第5天在相差显微镜下观察NK细胞形态并拍照（图8A），第0、3、7天计数NK细胞数目（图8B），第7天检测NK细胞对肿瘤细胞的杀伤效力（图8C）。
通过构建4-1BBL-mbIL-21- K562新型基因工程细胞，以此作为扩增的饲养细胞，从外周血单核细胞中直接扩增NK细胞。细胞计数、流式细胞分析、细胞毒性试验等表明细胞扩增倍数高、NK细胞纯度好、细胞毒性强，具有明显的肿瘤细胞杀伤效应。进一步的机理研究表明，本发明所诱导的NK细胞扩增是STAT3依赖性的，抑制STAT3磷酸化将损害NK细胞的扩增。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，如用其它类型的细胞如721.221、U937等细胞替代K562细胞，用其它方式实现4-1BBL和mbIL-21在细胞膜表面的表达，在4-1BBL和mbIL-21基础上再修饰其它基因，应用其它组织来源细胞如脾细胞进行扩增，对扩增条件和程序进行改进等等，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (2)
1.基因工程细胞4-1BBL-mbIL-21- K562在NK细胞扩增中的应用，其特征在于，其中4-1BBL代表CD137L，mbIL-21代表膜固定IL-21，所述基因工程细胞4-1BBL-mbIL-21-K562通过如下方法构建：
（1）构建4-1BBL表达的转座子；
（2）4-1BBL转座子与转座酶SB11共转染相应细胞，流式细胞分选，获得4-1BBL稳定表达的细胞4-1BBL- K562；
（3）在步骤（2）获得的4-1BBL- K562 基础上导入在细胞膜表面稳定表达的IL-21，建立4-1BBL-mbIL-21 - K562。
2. 一种NK细胞扩增方法，其特征在于，利用基因工程细胞4-1BBL-mbIL-21- K562进行扩增，其中4-1BBL代表CD137L，mbIL-21代表膜固定IL-21，包括以下步骤：
（1）构建4-1BBL表达的转座子；
（2）4-1BBL转座子与转座酶SB11共转染相应细胞，流式细胞分选，获得4-1BBL稳定表达的细胞4-1BBL- K562；
（3）在步骤（2）获得的4-1BBL- K562 基础上导入在细胞膜表面稳定表达的IL-21，建立4-1BBL-mbIL-21 - K562；
（4）致死性照射或丝裂霉素处理步骤（3）获得的基因工程细胞，按2: 1与外周血单核细胞混合，在NK细胞扩增培养液中共培育；
（5）每周重复刺激1次，连续数周，以获得足够量的NK细胞。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210237023.5A CN102911918B (zh) | 2011-12-29 | 2012-07-10 | 一种基因工程细胞及其在nk细胞扩增中的应用 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201110449527 CN102559600A (zh) | 2011-12-29 | 2011-12-29 | 一种人工抗原递呈细胞及其在nk细胞扩增中的应用 |
| CN201110449527.9 | 2011-12-29 | ||
| CN201210237023.5A CN102911918B (zh) | 2011-12-29 | 2012-07-10 | 一种基因工程细胞及其在nk细胞扩增中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102911918A CN102911918A (zh) | 2013-02-06 |
| CN102911918B true CN102911918B (zh) | 2014-12-10 |
Family
ID=46406209
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 201110449527 Withdrawn CN102559600A (zh) | 2011-12-29 | 2011-12-29 | 一种人工抗原递呈细胞及其在nk细胞扩增中的应用 |
| CN201210237023.5A Ceased CN102911918B (zh) | 2011-12-29 | 2012-07-10 | 一种基因工程细胞及其在nk细胞扩增中的应用 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 201110449527 Withdrawn CN102559600A (zh) | 2011-12-29 | 2011-12-29 | 一种人工抗原递呈细胞及其在nk细胞扩增中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (2) | CN102559600A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US12453773B2 (en) | 2019-02-20 | 2025-10-28 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Expansion of natural killer and chimeric antigen receptor-modified cells |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6603209B2 (ja) * | 2013-05-10 | 2019-11-06 | ホワイトヘッド・インスティテュート・フォー・バイオメディカル・リサーチ | ソルターゼ（Ｓｏｒｔａｓｅ）を用いた生存細胞のタンパク質修飾 |
| JP6599848B2 (ja) | 2013-05-10 | 2019-10-30 | ホワイトヘッド・インスティテュート・フォー・バイオメディカル・リサーチ | ソルタギング可能なタンパク質を有する赤血球のｉｎｖｉｔｒｏ生成 |
| CN103484429A (zh) * | 2013-09-28 | 2014-01-01 | 青岛麦迪赛斯生物科技有限公司 | 一种nk细胞的制备方法 |
| WO2015073746A2 (en) | 2013-11-13 | 2015-05-21 | Whitehead Institute For Biomedical Research | 18f labeling of proteins using sortases |
| WO2015103792A1 (zh) * | 2014-01-13 | 2015-07-16 | 深圳市汉科生物工程有限公司 | 保藏淋巴细胞体外培养增效剂的方法 |
| BR112017008696A2 (pt) * | 2014-10-27 | 2017-12-26 | Univ Central Florida Res Found Inc | métodos e composições para células exterminadoras naturais |
| CN105602899B (zh) * | 2014-11-25 | 2019-03-08 | 天津天锐生物科技有限公司 | 一种白细胞介素21和4-1bbl诱导外周血单个核细胞中nk细胞增殖的方法 |
| KR101697473B1 (ko) | 2014-11-26 | 2017-01-18 | 주식회사 녹십자랩셀 | T 세포를 이용한 자연살해세포의 배양방법 |
| EP3359573B1 (en) | 2015-10-01 | 2023-01-04 | The Whitehead Institute for Biomedical Research | Labeling of antibodies |
| CN105296422B (zh) * | 2015-11-26 | 2018-09-11 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种nk细胞培养组合物及其培养方法 |
| CN105838677B (zh) * | 2016-05-20 | 2019-07-02 | 杭州优善生物科技有限公司 | 一种高效扩增冷冻保存nk细胞的方法及其应用 |
| CN108300697A (zh) * | 2017-01-13 | 2018-07-20 | 上海恒润达生生物科技有限公司 | 一种滋养细胞刺激nk细胞扩增的方法和用途 |
| CN110662834B (zh) * | 2017-05-26 | 2023-09-12 | Gc细胞治疗 | 使用转化的t细胞培养自然杀伤细胞的方法 |
| CN109306340B (zh) * | 2017-07-27 | 2023-06-06 | 上海细胞治疗研究院 | 一种高效扩增全t细胞的人工抗原递呈细胞及其用途 |
| CN109337872B (zh) * | 2017-07-27 | 2023-06-23 | 上海细胞治疗研究院 | 高效扩增car-t细胞的人工抗原递呈细胞及其用途 |
| CN107400659A (zh) * | 2017-09-25 | 2017-11-28 | 滨州医学院 | 一种nk细胞的培养方法 |
| CN108823171A (zh) * | 2018-07-24 | 2018-11-16 | 武汉赛云博生物科技有限公司 | 一种基因工程细胞及体外高效扩增nk细胞的方法 |
| SG11202104662UA (en) * | 2018-11-14 | 2021-06-29 | Green Cross Lab Cell Corp | Method for culturing cord blood-derived natural killer cells using transformed t-cells |
| WO2020101361A1 (ko) * | 2018-11-14 | 2020-05-22 | 주식회사 녹십자랩셀 | 형질전환된 t세포를 이용한 제대혈 유래 자연살해세포의 배양방법 |
| SG11202107904PA (en) * | 2019-01-24 | 2021-08-30 | University Of Central Florida Research Foundation Inc | Compositions and methods for stimulating natural killer cells |
| CN109810197B (zh) * | 2019-02-25 | 2020-05-12 | 上海尚泰生物技术有限公司 | 用于高效扩增nk的人工抗原递呈细胞及其构建方法 |
| CN110331132B (zh) * | 2019-08-09 | 2021-08-24 | 侯宗柳 | 一种体外大规模诱导nk细胞扩增的方法 |
| CN110592014A (zh) * | 2019-08-14 | 2019-12-20 | 广东美赛尔细胞生物科技有限公司 | 一种在nk细胞治疗中免辐照体外体内持续去除饲养细胞的方法 |
| CN112391349B (zh) * | 2019-08-19 | 2023-05-23 | 刘韬 | 滋养层细胞株及其制备方法和体外诱导扩增nk细胞的方法 |
| CN111073856A (zh) * | 2019-12-28 | 2020-04-28 | 郑州大学第一附属医院 | 一种滋养细胞及其制备方法和在nk细胞扩增中的应用 |
| CN111349601A (zh) * | 2020-01-14 | 2020-06-30 | 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所) | 一种高效体外扩增培养具有强杀伤力的自然杀伤性细胞的方法 |
| CN111358953A (zh) * | 2020-03-25 | 2020-07-03 | 上海市公共卫生临床中心 | 一种高效诱导机体体液免疫应答的疫苗载体、其制备方法及用途 |
| CN111424012A (zh) * | 2020-03-30 | 2020-07-17 | 威海市中心医院 | 一种nk细胞培养用的饲养细胞去增殖能力的处理方法 |
| CN115678854A (zh) * | 2021-07-29 | 2023-02-03 | 上海中医药大学 | 一种基因工程细胞及其制备方法和应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005044996A2 (en) * | 2003-11-05 | 2005-05-19 | St Jude Children's Research Hospital | Chimeric receptors with 4-1bb stimulatory signaling domain |
| WO2011060205A1 (en) * | 2009-11-11 | 2011-05-19 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Methods, compositions, and assays for determining the effect of an immune cell on a cell from an infectious or neoplastic disease |
-
2011
- 2011-12-29 CN CN 201110449527 patent/CN102559600A/zh not_active Withdrawn
-
2012
- 2012-07-10 CN CN201210237023.5A patent/CN102911918B/zh not_active Ceased
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005044996A2 (en) * | 2003-11-05 | 2005-05-19 | St Jude Children's Research Hospital | Chimeric receptors with 4-1bb stimulatory signaling domain |
| WO2011060205A1 (en) * | 2009-11-11 | 2011-05-19 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Methods, compositions, and assays for determining the effect of an immune cell on a cell from an infectious or neoplastic disease |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| Expansion of Highly Cytotoxic Human Natural Killer Cells for Cancer Cell Therapy;Hiroyuki Fujisak et al;《Cancer Res》;20090421;第69卷(第9期);第4010页摘要、右栏第4段，图1 * |
| Hiroyuki Fujisak et al.Expansion of Highly Cytotoxic Human Natural Killer Cells for Cancer Cell Therapy.《Cancer Res》.2009,第69卷(第9期), * |
| Kresten Skak，et al.Interleukin-21 activates human natural killer cells and modulates their surface receptor expression.《Immunology》.2007,第123卷 * |
| NK细胞的选择性扩增;赵敬湘等;《细胞与分子免疫学杂志》;20091231;第25卷(第2期);第179页左栏第1段 * |
| 赵敬湘等.NK细胞的选择性扩增.《细胞与分子免疫学杂志》.2009,第25卷(第2期), * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US12453773B2 (en) | 2019-02-20 | 2025-10-28 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Expansion of natural killer and chimeric antigen receptor-modified cells |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102559600A (zh) | 2012-07-11 |
| CN102911918A (zh) | 2013-02-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102911918B (zh) | 一种基因工程细胞及其在nk细胞扩增中的应用 | |
| CN103756964B (zh) | 一种高效扩增cd3-cd56+的自然杀伤细胞培养系统的方法 | |
| CN104321425B (zh) | 用于诱导和扩增源自外周血单个核细胞的自然杀伤细胞的方法 | |
| JP2023065668A (ja) | 養子細胞療法のための改良型細胞培養方法 | |
| KR101644984B1 (ko) | 자연살해세포의 제조방법, 이러한 방법에 의해 제조된 자연살해세포 및 이를 포함하는 종양 및 감염성 질환 치료용 조성물 | |
| JP5358683B2 (ja) | ナチュラルキラー細胞の増殖方法 | |
| Zuliani et al. | Value of large scale expansion of tumor infiltrating lymphocytes in a compartmentalised gas-permeable bag: interests for adoptive immunotherapy | |
| CN107002039B (zh) | 使用t细胞用于培养自然杀伤细胞的方法 | |
| JP2012521215A5 (zh) | ||
| EP3265555B1 (en) | T cell expansion | |
| CN107922925A (zh) | 用于自然杀伤细胞扩增的方法 | |
| TWI410495B (zh) | 新穎之人類ｔ細胞群 | |
| CN107083361B (zh) | 一种细胞培养方法 | |
| JP6942466B2 (ja) | 抗原特異的ｔ細胞受容体遺伝子を有する多能性幹細胞の製造方法 | |
| CN102676453A (zh) | 一种nk和/或nkt细胞的培养方法 | |
| JP4929174B2 (ja) | リンパ球の製造方法 | |
| KR20190111804A (ko) | 자연살해세포의 제조방법 | |
| HK1250378A1 (zh) | T细胞增生技术 | |
| AU2006288348A1 (en) | Method for activation treatment of antigen-presenting cell | |
| WO2015014291A1 (zh) | 通过无血清培养扩增活化淋巴细胞的方法 | |
| JP2001149069A (ja) | ナチュラルキラー細胞の増殖方法 | |
| CN105593362A (zh) | 遗传修饰动物细胞的改进方法 | |
| CN107151654A (zh) | 一种人源t淋巴细胞的培养基及其制备方法和应用 | |
| CN110484504B (zh) | 一种用于免疫治疗原发性肝细胞肝癌的细胞亚群及其制备方法 | |
| CN109593723A (zh) | 一种高效抑制免疫反应的间充质干细胞及其制备方法与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20141210 Termination date: 20200710 |
|
| IW01 | Full invalidation of patent right | ||
| IW01 | Full invalidation of patent right |
Decision date of declaring invalidation: 20160920 Decision number of declaring invalidation: 30084 Granted publication date: 20141210 |