CN101484125A

CN101484125A - 治疗具有细胞增殖和血管生成特点的皮肤病的组合物和方法

Info

Publication number: CN101484125A
Application number: CNA2006800550908A
Authority: CN
Inventors: 大卫·I·谢瑞斯
Original assignee: Paloma Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Paloma Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2006-04-27
Filing date: 2006-10-12
Publication date: 2009-07-15
Anticipated expiration: 2026-10-12
Also published as: US20060257337A1; EP2364700A1; EP2517702A1; EP2025058A2; EP2543367A1; EP2025058A4; JP2009535331A; CA2651244A1; MX2008013799A; BRPI0621638A2; US20110268679A1; WO2007133249A3; NZ572584A; CN101484125B; US20140221471A1; WO2007133249A2; EP2364700B1; AU2006343534A1; EP2545913A1; NO20084974L

Abstract

本文描述了利用一种或多种苯并[c]苯并吡喃－6－酮衍生物来预防和/或治疗包括但不仅限于银屑病和特异性皮炎的涉及异常血管生成和增生的皮肤病、对涉及异常血管生成和增生的皮肤提供其结果是减少皱纹和老化皮肤的出现、改善肤色、治疗光损害皮肤、改善皮肤光泽度和透明度和光洁度、以及呈现全面健康和年轻皮肤的抗老化效果的组合物和方法。

Description

治疗具有细胞增殖和血管生成特点的皮肤病的组合物和方法

相关申请

本专利申请要求申请日为2006年4月27日、申请号为11/412,618的美国专利申请的优先权和利益，其中该申请号为11/412,618的美国专利申请要求申请日为2005年4月28日、申请号为60/675,707的美国临时申请的优先权和利益。

技术领域

本发明涉及预防和/或治疗与细胞增殖和/或血管生成相关的皮肤病的组合物和方法。本发明部分针对一系列已证明对涉及异常细胞增殖、异常血管生成或这两者的结合的疾病有治疗作用的苯并(c)苯并吡喃-6-酮(benzo(c)chromen-6-one)化学组合物。

背景技术

构成心血管系统的血管可以大致分成动脉、静脉和毛细血管。动脉以相对高的压力将心脏的血液运走；静脉以低的压力将血液运回心脏，而毛细血管则在动脉和静脉的血液供应间提供连结。在胚胎发育阶段，首先利用多能内皮细胞前体通过血管发生(vasculogenesis)形成血管。随后，通过动脉生成(arteriogenesis)形成较大的血管，其具有结构更为复杂的内皮细胞、平滑肌细胞和周细胞(中膜)。尽管认为成人不会出现动脉生成，但是成人可以通过血管发生以及被特别称作血管生成(angiogenesis)的过程形成血管。正常条件下，在比如创伤修复、缺血恢复以及女性生殖周期(产生形成黄体的子宫内膜以及在妊娠期间形成胎盘)的情形中会出现血管生成的新生血管。通过血管生成形成的相对简单的血管、即毛细血管缺乏发育膜(developed tunica)，因为其主要由内皮细胞组成，较少程度的为血管周细胞和基底膜。

银屑病和特异性皮炎具有相似性，表现在它们都呈现出具有角质细胞增生、血管生成和可包括活性T细胞、肥大细胞和单核细胞的单核细胞浸润特点的慢性炎症状态。皮肤在真皮皮下分界处形成血管，并在表皮层下直接生成互相连接的网络。在银屑病和特异性皮炎中，这种血管网络随新形成的异常新血管而扩张。血管生成的刺激物、特别是血管内皮细胞生长因子(VEGF)和其它血管生成细胞因子，最初生成于表皮，并进一步由侵入到扩张的血管形成中的免疫细胞来维持。在银屑病皮损的表皮中已经发现了高水平的VEGF，其被认为在银屑病的发病机制中起着重要的作用。在初期，银屑病和特异性皮炎的皮肤会利用附近正常的血管来提供养分和氧。然而，随着这些皮肤病的发展，皮肤诱发血管生成来建立额外的血管支持。银屑病斑块中的毛细血管是伸长的、弯曲的、膨胀的，并且显示出增加的内皮细胞增殖，其与特异性皮炎中看到的并无不同。通常，血管生成受身体自然生成的血管生成抑制因子阻止从而抵消了血管生成因子。然而，改变了的皮肤组织通过经固有源、成纤维细胞或角质细胞或者细胞的浸润产生血管生成生长因子改变了这种平衡，从而有利于血管生长，上述细胞可以提供多于血管生成抑制因子的血管生成生长因子。皮肤病引发的血管生成与正常血管生长时观察到的血管生成没有不同。血管生成因子从异常皮肤或细胞渗入物穿入到正常的内皮，与内皮细胞结合，激发内皮细胞并诱发引起内皮细胞增殖的内皮信号事件。随着毛细血管环路的形成，内皮管开始自动朝着异常的皮肤形成。然后毛细血管经历一个成熟的过程来稳定环路结构。

皮肤病、银屑病和特异性皮炎仅仅是与病理性新生血管相关的一种情形。光损害皮肤临床上表现为粗糙、毛细管扩张(引起凸起的暗红斑点的毛细管的肿胀)、起皱纹、离散的色素增加(hyperpigmented)和色素减少(hypopigmented)区域、萎缩，最终发展为肿瘤。光损害皮肤还呈现增加的血管生成和细胞浸润的特点。

血管生成被认为可能是皮肤病和光损害皮肤发病机理中的关键组成部分。如果通过治疗干预可以使血管生成减缓或消除，那么抗血管生成剂将有望消除或减轻多种与新生血管相关的皮肤病和光损害皮肤。抗血管生成治疗通过阻断皮肤血液供应从而抑制了引起炎症和增加的血管形成的细胞浸润，在抑制异常皮肤组织方面将可能是非常有效的。此外，抑制表皮的角质细胞增生的双重抗血管生成活性和抗增殖活性也将有望对减轻由这种皮肤疾病和光损害引起的损伤有所帮助。

因此，仍需要开发能证明对人内皮细胞具有抗增殖活性从而来治疗多种皮肤病和光损害老化皮肤的药剂。除了对患病或老化皮肤中的内皮细胞具有抑制作用外，还可以对增殖的角质细胞具有直接抑制作用，从而用来治疗皮肤病或老化皮肤，或者还可以进一步有利于对作为皮肤病和老化皮肤血管生成的引发剂的其它细胞的抑制作用。本发明即试图满足这些和其它的需要。

发明内容

本发明涉及用于治疗与细胞增殖和/或血管生成有关的皮肤病的组合物和方法。本发明所针对的皮肤病包括但不仅限于银屑病、特异性皮炎和老化皮肤，以改善或预防起皱纹的、有线条的、干燥的、鳞状的、老化的或光损害的皮肤以及改善表皮厚度、弹性、柔韧性、光泽度和丰满弹性，其方法包括将所述的化合物应用到皮肤或预防性应用到正常健康的皮肤以预防或减少衰退性变化或先存在于与细胞增殖和/或血管生成相关的老化皮肤中。本发明部分针对一系列化学组合物，其已证明对涉及异常细胞增殖、异常血管生成或这两者的结合的疾病有治疗效果。

本发明的一个实施例针对用于预防和/或治疗与皮肤病有关的异常细胞增殖的组合物。一方面，本发明针对一系列苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物，其已证明能增强抗人内皮细胞增殖的活性，从而用于多种皮肤病和老化皮肤的治疗。

在另一个实施例中，本发明针对给予需要接受治疗的主体有效治疗量的一种或多种苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物组合物的方法。一方面，目标主体已经被诊断为或倾向于患有与异常细胞增殖/血管生成(包括老化皮肤)有关的一种或多种皮肤病。

从下面对其实施例的具体描述中，本发明的其它特点和优点将变得显而易见。

附图说明

图1是表示旨在说明本发明的化合物抑制内皮细胞增殖效果的实验所得数据的柱状图；

图2是表示本发明化合物的凋亡诱导能力的数据的柱状图；以及

图3是表示对角质细胞的凋亡诱导活性的数据的柱状图。

具体实施方式

本发明涉及用于预防和/或治疗与有害的细胞增殖和/或血管生成有关的皮肤病的组合物和方法。本发明部分针对一系列化学组合物，其已证明对涉及异常细胞增殖、异常血管生成或这两者的结合的疾病有治疗效果。特别的方面是，本发明涉及苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物，已证明它们对具有异常增殖、异常血管生成或这两者的结合的特点的疾病有作用。

术语“衍生物”是本领域的技术人员所公知的。例如，衍生物可以被理解为由结构类似的另一个化合物经一步或多步得到的化合物，比如表I(下文)所列举的苯并[c]苯并吡喃-6-酮。

目前正在开发的皮肤病治疗剂基于多种靶向策略。一种策略是使用血管生成的天然抑制剂比如血小板反应素(thrombospondin)。另一种策略是使用对刺激血管生成所需受体进行阻断的药剂，比如血管内皮生长因子(VEGF)受体拮抗剂。

血管生成由于其效应的选择性成为皮肤病和老化皮肤的有吸引力的治疗靶标。生长中的皮肤病和老化皮肤中的血管处于有助于细胞活化和快速增殖的微环境中，然而大多数正常组织中的血管是静态的。该诱发细胞活化和快速增殖的微环境被认为是能使抗血管生成剂选择性地将异常皮肤中的血管作为靶标的生理学上的差异。

本发明涉及包含一种或多种用于治疗有害的细胞增殖和/或血管生成和/或角质细胞增殖的组合物的治疗组方。

根据本发明，提供了包含有效治疗量的一种或多种具有下列表I所述结构的苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物的药物组合物。

表I：苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物的结构式

表I中的化合物显示出抗血管生成和/或抗角质细胞活性。本领域的技术人员会领会到本发明还包括其它具有抗细胞增殖、和/或抗血管生成、和/或抗角质细胞活性的苯并[c]-苯并吡喃-6-酮衍生物。可以利用下述和其它文献中所述的实验为每个受试衍生物确定其特性。

苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物影响细胞生长的过程有待全面地研究然而苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物可以诱发细胞周期发展过程中涉及的多种蛋白水平和活性的改变。这些包括DNA复制和修复的辅助因子(cofactors)，比如，增殖的细胞核抗原和细胞分裂周期激酶(cell divisioncycle kinases)(以及调节子)。苯并[c]苯并吡喃-6-酮还可以上调死亡受体5(Death Receptor 5)和硫胱氨酸蛋白酶8(caspase 8)。

与活化和抑制细胞增殖的机理相关的实验是本技术领域所公知的。例如，由对微管蛋白聚合活性起作用而介导的抗有丝分裂活性可以通过检测苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物在体外抑制微管蛋白聚合和微管组装的能力来评价。其它的这种实验包括通过代谢实验或将标记的(放射化学，例如3H-胸腺嘧啶或荧光标记的)或免疫反应性的(BrdU)核苷酸结合到DNA中来对组织培养板中的细胞进行计数或对细胞数进行估计。此外，抗血管生成活性还可以通过在大鼠主动脉环(rat aortic rings)的体外模型中的内皮细胞迁移、内皮细胞小管的形成或血管派生来评价。

本发明还涉及包含本文所述的一种或多种组合物或其前药组成的局部敷贴、植入体或其它装置，其中，组合物或前药加入生物可降解的或生物不可降解的剂型中用以缓释。生物不可降解的剂型通过物理或者机械过程来控释药物，而这种剂型本身却不会降解。生物可降解的剂型设计成能通过体内的自然过程被逐渐地水解或溶解，从而使掺入的药物或者前药逐渐地释放。生物可降解的和生物不可降解的剂型以及将药物制成控释剂型的过程对于本领域的技术人员来说都是公知的。这些局部敷贴、植入体或者装置可以被植入在需要输送处附近，例如，在异常皮肤位置或者异常血管的附近。

本发明的组合物可以与植入体或装置结合。这种结合可以通过将组合物共轭到植入体或装置(在内部和/或外部表面上)而促进，组合物可以被多价螯合在植入体或装置等内。这种共轭可以是共价的或非共价的。这种共轭可以是可水解的。本领域的技术人员十分了解促进这种共轭的各种方法。

本发明还涉及共轭前药及其用途。更具体地说，本发明涉及苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物的共轭物以及这种共轭物在预防或治疗与非典型性细胞增殖和/或非典型性血管生成有关的情形中的用途。这种疾病包括但不仅限于角质细胞、内皮细胞或其它病理相关细胞的过度异常刺激或增殖。

本发明还提供了与生物活性改良剂共轭的苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物的共轭前药，例如其肽、抗体或片段或体内可水解的酯比如甲酯、磷酸酯或硫酸酯基团，以及酰胺或氨基甲酸酯。将苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物结合到随疾病而定的有活性的前药中，能显著改善治疗一种或多种上文提到的疾病情形的效力和选择性。

除了本发明的化合物外，本发明的药物组合物还可以包含一种或多种对治疗上文提到的一种或多种病情有效的药剂或与这些药剂联合给药(同时或先后)。这样的药剂包括但不仅限于本领域的技术人员所公知的具有抗内皮细胞或抗角质细胞活性的药物制剂以及本领域的技术人员所公知的抗炎剂。

此外，可以将苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物或其前药加入生物可降解的或不可降解的剂型中用以缓释。例如，将该制剂植入皮肤病或老化皮肤处需要输送的位置附近或异常血管的附近。可选择地，药物制剂可以被包在具有提供特异性的化学组成部分的载体内。例如，该组成部分可以是抗体或者某些其它指引和促进活性药剂输送到所需位置(皮肤病或老化皮肤)的分子—比如本领域的技术人员所公知的与一个或多个所关心的受体相互作用的配体。

本发明还涉及包含根据本发明的苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物或其前药的药物组合物连同药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的给药方式。

本发明还涉及预防或治疗任何与具有非典型性细胞增殖和/或非典型性血管生成和/或炎症特征的皮肤病或老化皮肤相关的情形的方法所述方法包括给予需要这种预防或治疗的主体有效量的根据上文所述的本发明的苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物或其前药。(应该理解所述情形的预防或治疗包括所述情形的改善。)

“有效量”是指能部分或完全减轻与特定疾病或综合病症相关的症状的有效治疗量。比较熟练的专业人员根据治疗情况、给药途径以及其它对于本领域的技术人员来说是公知的相关因素可以很容易地确定该量。这样的技术人员很容易就能确定出合适的剂量、给药方式和给药频率。

苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物或其前药的药学上可接受的盐可以以任何常规的方式来制备。体内可水解的酯，比如甲酯、磷酸酯或硫酸酯基以及酰胺或氨基甲酸酯可以以任何常规的方式来制备。

可以使用公知的技术将苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物或其前药加入生理上可接受的制剂中，而且这些制剂可以通过标准途径给药。组合物可以通过但不仅限于局部、口服、直肠或胃肠道外如静脉内、皮下或肌肉途径的方式给药，此外，组合物还可以被制成缓释制剂，将该制剂植入需要输送处附近，例如，在皮肤疾病或老化皮肤处，或在异常血管的附近。组合物的剂量会依治疗的情况、使用的具体衍生物以及其他临床因素比如体重和主体的情况以及化合物的给药途径而定——所有的这些都是本领域技术人员所了解的。例如，本领域的技术人员能够参照标准教程，比如Remington(雷明顿)的《Pharmaceuticals Sciences》(《药剂学》)第17版(这里以参考引用的方式将其全部教导合并于此)，来确定如何制备制剂以及如何给药。

上述制剂包括但不仅限于那些适于口服、直肠、鼻腔、吸入、局部(包括但不仅限于皮肤、经皮、口腔和舌下)、阴道或胃肠道外(包括但不仅限于皮下、肌内、静脉内、皮内和吸入给药的制剂。上述制剂可以用单位剂量形式方便地呈现，并且可以通过常规的制药技术来制备。这样的技术包括将活性成分和药物载体或赋形剂混合在一起的步骤。通过将液体载体或极细的固体载体或者这两者与活性成分均匀、密切地混合在一起来制备上述制剂，如果需要，然后再将产物成型。

本发明适合口服给药的制剂可以呈现为离散的单元，比如各含有预定量活性成分的胶囊剂、扁囊剂或片剂；粉末或颗粒；水性液或非水液中的溶液或混悬液；或水包油型液体乳剂或油包水型乳剂等。

片剂可以优选与一种或多种助剂一起被压缩或模塑制成。压制片可以在适合的机器中将易流动形态的活性成份比如粉末或颗粒，优选与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合在一起，通过压缩制成。模制片可以在适合的机器中将用惰性液体稀释剂润湿的粉碎化合物的混合物通过模塑制成。片剂还可以选择包衣或刻痕，并且可以制成使其中的活性成份缓释或控释的制剂。

适合于经口给药的制剂包括含有在调味基质、通常为蔗糖和阿拉伯树胶或黄芪胶中的成分的锭剂(lozenge)；含有在惰性基质比如明胶和甘油、或蔗糖和阿拉伯树胶中的活性成份的软锭剂(pastille)；以及含有以合适的液体载体给药的成分的含漱液。

适合于皮肤局部给药的制剂可以是包含在制药上的、药妆品的或化妆品的可接受载体中给药的成分的软膏剂、乳膏剂、凝胶剂和糊剂。一种可行的给药系统是含给药成分的经皮贴剂。

根据本发明的组合物还包含制药学上的或化妆品上可接受的媒介物作为苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物或其前药在组合物中的稀释剂、分散剂或载体，以利于当组合物应用于皮肤时它的分布。

除了水之外的媒介物可以包括液体或固体润滑剂、溶剂、湿润剂、增稠剂和粉料。一方面，非水载体是聚二甲基硅氧烷和/或聚二甲基苯基硅氧烷。本发明的硅酮可以是那些在25℃时在约10至10000mm²/s(厘司)范围内变化的任何粘度的硅酮。优选低粘度硅酮和高粘度硅酮的混合物。这些硅酮的200至500系列可以从通用电气公司购得。可用于本发明组合物中的硅酮量为5％至95％之间的任何量，按组合物的重量计为25％至90％。

制药学上的或化妆品可接受的媒介物通常为5％至99.9％，一方面，按组合物的重量计为25％至80％，也可以没有其它化妆品添加剂，形成组合物平衡。一方面，按媒介物的重量计，媒介物有至少80％重量的水。另一方面，按组合物的重量计，水包含本发明组合物至少50％的重量，为60％～80％的重量。

在本发明的一个实施例中，组合物还包括a-羟酸。羟酸类化合物增加了正常皮肤的脱落，从而形成更光滑、更年轻态的皮肤。羟酸可以选自a-羟酸类、β-羟酸类(例如水杨酸)、其它的羟基羧酸类(例如二羟基羧酸、羟基-二羧基、羟基三羧基)及其混合物或者他们的立体异构体(DL、D或L型)的组合。

包含苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物或其前药的组合物可以包括乙醇酸和/或乳酸，因为现有技术已知的效果已经表明它们在化妆品应用方面有独特的效果。

另一方面，上述羟酸选自乳酸、2-羟基辛酸、羟基月桂酸乙醇酸及其混合物。

应该理解，根据组合物的pH，羟基酸可以是盐，如铵、钾或钠盐。该组合物可以具有2.5至10范围内的任何pH值。

用油剂或含油物质与乳化剂一起提供油包水型乳剂或水包油型乳剂，制成油包水型乳剂还是水包油型乳剂在很大程度上取决于所选用乳化剂的亲水亲油平衡值的平均值。

上述组合物可以包括遮光剂。遮光剂包括那些通常用来阻挡紫外线的物质。示例性的化合物有对氨基苯甲酸(PABA)衍生物、肉桂酸酯和水杨酸酯。例如，可以使用甲氧基肉桂酸辛酯和2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮(也称羟苯甲酮)。可以从市场上购得商标分别为Parsol MCX和Benzophenone-3的甲氧基肉桂酸辛酯和2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮。乳剂中使用的遮光剂的精确量可以依据对阳光紫外线辐射所需防护的等级来改变。

通常将润滑剂加入到药物或化妆品组合物中。润滑剂的水平按总的组合物重量计，可以在0.5％至50％范围内变化或者可以在5％至30％之间。润滑剂可以根据通用的化学分类法被分成酯类、脂肪酸类和醇类、多元醇类和烃类。

酯类可以是单酯或双酯。可接受的脂肪双酯类的例子包括己二酸二丁酯、癸二酸二乙酯、二异丙基二聚酯和琥珀酸二辛基酯。可接受的支链脂肪酯类包括豆蔻酸2-乙基-己基酯、硬脂酸异丙基酯和棕榈酸异甾醇酯。可接受的三元酸酯包括三亚油酸三异丙基酯和柠檬酸三月桂醇酯。可接受的直链脂肪酯类包括棕榈酸月桂醇酯、乳酸肉豆蔻酯和油酸硬脂醇酯。合适的酯类包括可可辛酸酯/癸酸酯(可可辛酸酯和可可癸酸酯的混合物)、醋酸丙二醇肉豆蔻醚酯、己二酸二异丙酯和辛酸鲸蜡基酯。

合适的脂肪醇和酸包括那些具有10至20个碳原子的化合物——这样的化合物如鲸蜡基、肉豆蔻基、棕榈的和硬脂酰的醇和酸。

可以用作润滑剂的多元醇是直链或支链烃基多羟基化合物。例如，优选丙二醇、山梨醇和丙三醇。还可以使用的是聚合多元醇，比如聚丙二醇和聚乙二醇。丁二醇和丙二醇还可以尤其优选作为促渗剂。

可以用作润滑剂的示例性烃类是那些具有12至30个之间任何数量碳原子的烃链。具体的例子包括矿物油、石蜡油、鲨烯和异链烷烃。

化妆品组合物中的另一类功能性成分是增稠剂。增稠剂通常为0.1％至20％范围内任何数量的重量份，以组合物重量计为约0.5％至10％。示例性的增稠剂为百路驰公司(B.F.Goodrich Company)的商标为Carbopolform的交连聚丙烯酸酯材料。还可以使用树胶，比如黄原胶、角叉菜胶、明胶、刺梧桐胶、果胶和刺槐豆胶。在一定的环境下，增稠的功能可以通过还用作硅树脂或润滑剂的材料来实现。例如，粘度大于10厘司的硅胶和如硬脂酸乙二醇酯的酯类具有双重功能。

可以将粉料加入药物或化妆品组合物中。这些粉料包括白垩、滑石粉、高岭土、淀粉、蒙脱石粘土、化学修饰的硅酸镁铝、有机改性蒙脱土、含水硅酸铝、气相二氧化硅、淀粉辛烯基琥珀酯铝盐及其混合物。

还可以将其它辅助的微量组分加入到药物或化妆品组合物中。这些成分可以包括着色剂、遮光剂、香料。这些其它辅助的微量组分的量以组合物的重量计可以是0.001％至20％范围内的的任何数量。

药物或者化妆品组合物主要被用作皮肤的局部用药，尤其是用作调节皮肤、使皮肤增加水分和变得光滑，并预防或减少皮肤出现线条、皱纹或老化。在使用中，将例如1至100mL的少量组合物从合适的容器或涂药器中应用于皮肤的裸露面，如果必要，接着用手或手指或合适的器具涂抹开和/或揉搓进皮肤。局部皮肤治疗的组合物可以被制成洗剂、霜剂或凝胶剂。组合物可以被封装在合适的容器中以适应其粘度并方便消费者使用。例如，洗剂或霜剂可以被封装在瓶子或滚球型涂药器，或喷雾剂驱动的喷雾装置或装有适于手指操作的泵的容器。当组合物是霜剂时，其可以被方便保存在不变形的瓶子或可挤压容器中，比如管子或有盖的大口瓶。组合物还可以被包在胶囊剂中。

直肠给药的制剂可以是具有合适基质的栓剂，该基质包含如可可脂或水杨酸盐。

载体为固体的适合于鼻腔给药的制剂包括具有粒度在例如20至500微米范围内的粗粉，该制剂以鼻腔吸入的方式给药，例如通过从贴近鼻子的装有粉末的容器经鼻腔通道快速吸入。合适的制剂包括其载体是用于给药的液体，例如包括活性成份的水或油溶液的鼻喷雾剂或鼻滴剂。

适合于阴道给药的制剂可以是除了活性成份之外还包含比如本技术领域中公知的适当的载体成份的阴道栓剂、棉塞(tampons)、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂。

适合于吸入的制剂可以是除了活性成份之外还包含比如本领域技术领域中公知的载体成份的薄雾剂(mists)、粉尘剂(dusts)、粉末剂(powders)或喷雾剂。

适合于胃肠道外给药的制剂包括水和非水无菌注射液，该注射液可以包含抗氧化剂、缓冲液、抗菌剂和使该制剂与目标受体的血液等张的溶质；以及水和非水无菌混悬液，其可以包括助悬剂和增稠剂。该制剂可以盛装在例如密封的安瓿和小瓶的单剂量或多剂量容器中，并且可以是冻干储存、仅需在使用前加入无菌液体如注射用水的冻干状态。现配的注射液和混悬液可以由无菌的上述各种粉末、颗粒和药片制备。

可接受的单位剂量的制剂是那些包含给药成分的如上所述的每日剂量或单位、每日分剂量或其适当部分的制剂。

除了上面提到的成分外，本发明的制剂还可以包括考虑到所针对的制剂类型而所需的本技术领域的其它常规试剂，例如，适合于口服给药的制剂可以包括调味剂。

本发明包括约100％至约90％纯异构体的组合物。另一方面，本发明涉及约90％至约80％纯异构体的组合物。另一方面，本发明涉及约80％至约70％纯异构体的组合物。另一方面，本发明涉及约70％至约60％纯异构体的组合物。更进一步的方面，本发明涉及约60％至约50％纯异构体的组合物。然而，标为α或β的立体化学异构体可以是两者任意比例的混合物，这可以由本领域的技术人员在化学上实现。此外，本发明所包括的是经典的和非经典的生物电子等排原子和取代基置换，并且是本领域技术人员所公知的。这种生物电子等排的置换包括例如用＝O取代＝S或＝NH。

根据本发明所用的已知化合物以及根据本发明的新化合物的前体可以购自商业来源，比如西格玛-奥德里奇(Sigma-Aldrich)。根据本发明的其它化合物可以根据本领域的技术人员所熟知的已知方法合成。

苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物SG00292和SG00392的合成路线总结于下文的方案1中。该合成路线呈现了一种制备该系列衍生物的可能方法，其它的合成路线(包括改变合成步骤的次序或试剂)对于本领域的技术人员来说也是可能的。在特定的实例中，为了获得所需产物，保护基的性质或反应的次序可以改变。这些对总体合成方案的改变对于本领域的技术人员来说是熟知的。

实施例

根据本发明，苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物可以使用下列反应方案——方案1和合成方法方案2来制备。

本发明还包括以方案1为起始步骤制备的苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物。这些类似物的合成示于方案3所表示的合成方法中，并表示了表I所示的苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物的示例。

方案1

方案2

合成5-苄氧基-2-溴-4-甲氧基苯甲醛(2)

将2-溴-5-羟基-4-甲氧基苯甲醛(25g，0.108mol)和碳酸钾(K₂CO₃)(30g，0.216mol)加入乙腈(250ml)中，并充入氩气。加入苄基溴(20g，0.12mol)，并在氩气环境中50℃下加热该混合物20小时。冷却后，将该混合物倒入水(200ml)中，并用二氯甲烷(300ml)萃取。用水(3x100mL)洗涤二氯甲烷溶液，干燥并浓缩。用异丙醇:水(3:1)溶液重结晶，得28.8g(83％)的浅棕色固体2。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：dH 3.96(3H，单峰，OCH₃)，5.16(2H，单峰，CH₂Ph)，7.07-7.48(7H，多重峰，ArH+CH₂Ph)，10.16(1H，单峰，CHO)。

5-苄氧基-2-溴-4-甲氧基苯酚(3)

将5-苄氧基-2-溴-4-甲氧基-苯甲醛2(5g，16.0mmol)加入二氯甲烷(40mL)中，充入氩气，于冰浴中冷却。逐滴加入间氯过氧苯甲酸(mCPBA)(5.2g)的二氯甲烷(50mL)溶液。一旦完成加入步骤，就将反应混合物在氩环境下回流14小时。冷却后，将混合物用饱和碳酸氢钠(3 x 50mL)盐水洗涤，干燥并浓缩。残留物用乙酸乙酯/正己烷重结晶，得4.1g(85％)的大的棕褐色针晶3。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：dH3.88(3H，单峰，OCH₃)，5.10(2H，单峰，CH₂Ph)，6.74(1H，单峰，ArH)，7.08(1H，单峰，ArH)，7.34-7.40(5H，多重峰，CH₂Ph)，8.25(1H，单峰，OH)。

1-苄氧基-4-溴-2，5-对苯二甲醚(4)

将5-苄氧基-2-溴-4-甲氧基-苯酚3(2.76g，89.0mmol)和氢化钠(0.89g，13.0mmol，60％分散于油中)加到烧瓶中，充入氩气。加入干燥的四氢呋喃(THF)(50mL)，在冰浴中搅拌混悬液20分钟。加入碘化甲烷(CH₃I)(1.7mL，27.0mmol，碱性氧化铝过滤)，在氩环境中室温下搅拌混合液18小时。于冰浴中将反应混合物冷却之后，缓慢地加入水。用乙酸乙酯萃取混合液，干燥、浓缩，得到真空条件下凝固的黄色油状物。将该油状物通过使用硅胶的硅胶柱层析纯化(10％的乙酸乙酯/正己烷洗脱)，得2.5g(88％)的白色固体4。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：dH 3.75(3H，单峰，OCH₃)，3.84(3H，单峰，OCH₃)，5.15(2H，单峰，CH₂Ph)，6.57(1H，单峰，ArH)，7.07(1H，单峰，ArH)，7.32-7.42(5H，多重峰，CH₂Ph)。

4-苄氧基-2，5-二甲氧基苯硼酸(5b)

将1-苄氧基-4-溴-2，5-对苯二甲醚4(7.48g，23.0mmol)置于干燥的烧瓶中，充入氩气。加入干燥的THF(75mL)，在干冰/丙酮浴中，将溶液冷却至-78℃。加入正丁基锂(nBuLi)(11mL，2.5M的正己烷溶液)，-78℃下搅拌混合物20分钟。加入硼酸三异丙酯(Triisopropyl borate)(10.7mL、0.463mol)，-78℃下搅拌反应2小时，然后放置至室温，此时开始生成白色沉淀。继续搅拌20小时后，用饱和的氯化铵(NH₄Cl)(25mL)终止反应。将有机层分离之后，用乙酸乙酯(2 x 50mL)萃取水层。合并有机层，干燥、浓缩。残留物用正己烷磨洗，过滤得4.1g(62％)的淡米白色乳脂状固体5b。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：dH3.70(3H，单峰，OCH₃)，3.79(3H，单峰，OCH₃)，5.16(2H，单峰，CH₂Ph)，6.77(1H，单峰，ArH)，7.18(1H，单峰，ArH)，7.33-7.52(5H，多重峰，CH₂Ph)。

5-乙酰基-2-三氟甲烷磺酰氧苯甲酸甲酯(6)

氩环境中，0℃下，将5-乙酰水杨酸甲酯(25.0g，0.129mol)溶于二氯甲烷(CH₂Cl₂)(250mL)和吡啶(pyridine)(60mL)中。然后加入三氟甲磺酸酐(37.9g，0.133mol)，放置20分钟以上。再搅拌反应混合物30分钟，然后用水(500mL)终止反应。分离有机层，用5％的盐酸(80mL)洗涤三次。除去溶液，所得固体真空干燥得40.3g(96％)的产物6。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：dH 2.56(3H，单峰，COCH₃)，3.89(3H，单峰，OCH₃)，7.32(1H，双峰，ArH)，8.12(1H，双峰，ArH)，8.52(1H，单峰，ArH)。

4-乙酰基-4′-苄氧基-2′-甲氧基联苯-2-羧酸甲酯(7b)

将4-苄氧基-2，5-二甲氧基苯硼酸5b(4.15g，14.4mmol)、5-乙酰基-2-三氟甲烷磺酰氧-苯甲酸甲酯6(4.69g，14.4mmol)和碳酸钾(3.98g，28.8mmol)加入到烧瓶中，并充入氩气。加入无水乙醇(83mL)和二甲醚(DME)(94mL)，再加入三苯基磷酸钯(Pd(PPh₃)4)(0.87g，0.785mmol)，回流反应混合物4小时。冷却后，加入水(100mL)、乙酸乙酯(100mL)和盐水(50mL)。用盐水(2 x 50mL)洗涤有机层，再用乙酸乙酯反萃取混合水溶液部分。干燥混合有机液部分，浓缩，乙酸乙酯/正己烷中重结晶得6.5g(99％)的黄色固体7b。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)，dH 2.65(3H，单峰，COCH₃)，3.58(3H，单峰，OCH₃)，3.68(3H，单峰，OCH₃)，3.88(3H，单峰，OCH₃)，5.21(21H，单峰，CH₂Ph)，6.55(1H，单峰，ArH)，6.86(1H，单峰，ArH)，7.30-7.48(6H，多重峰，ArH+CH₂Ph)，8.10(1H，双峰，ArH)，8.37(1H，单峰，ArH)。

4-乙酰基-4′-苄氧基-2′-甲氧基联苯-2-羧酸(8b)

向4-乙酰基-4′-苄氧基-2′-甲氧基联苯-2-羧酸甲酯7b(4.06g，9.7mmol)和氢氧化钠(0.773g，19.4mmol)中加入甲醇(60mL)和水(60mL)。氩环境中回流反应7小时，然后冷却到室温。置冰浴中，加入1M盐酸，得黄色沉淀，过滤，沉淀用水洗涤，在四氢呋喃/正己烷中重结晶，得2.7g(69％)的黄色晶体8b。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：dH2.68(3H，单峰，COCH₃)，3.62(3H，单峰，OCH₃)，5.16(2H，单峰，CH₂Ph)，6.77(1H，单峰，ArH)，7.18(1H，单峰，ArH)，7.33-7.52(5H，多重峰，CH₂Ph)，3.90(3H，单峰，OCH₃)，5.22(2H，单峰，CH₂Ph)，6.58(1H，单峰，ArH)，6.90(1H，单峰，ArH)，7.34-7.50(6H，多重峰，ArH+Ch₂Ph)，8.17(1H，双峰，ArH)，8.50(1H，单峰，ArH)。

8-乙酰基-3-苄氧基-2-甲氧基苯并[c]苯并吡喃-6-酮(9b)

将4-乙酰基-4′-苄氧基-2′-甲氧基联苯-2-羧酸8b(1.0g，2.5mmol)悬浮于1，2-二氯乙烷(30mL)中。加入氯化亚砜(SOCl₂)(200mL，2.7mmol)，氩环境中将反应混合物回流2小时。冷却到室温(有沉淀形成)，加入三氯化铝(0.262g，0.002mol)，混合物变成红色，室温下搅拌反应17小时，然后用水(30mL)终止反应，用二氯甲烷(100mL)稀释。盐水(2 x 50mL)洗涤有机层，然后干燥、浓缩。用热的二氯甲烷溶解残留物，然后冷却。加入正己烷帮助产物沉淀。二次结晶得到0.3g(32％)的黄色固体9b。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：dH 2.73(3H，单峰，COCH₃)，4.05(3H，单峰，OCH₃)，5.28(2H，单峰，CH₂Ph)，6.94(1H，单峰，ArH)，7.35-7.50(6H，单峰，ArH+CH₂Ph)，8.07(1H，双峰，ArH)，8.42(1H，双峰，ArH)，8.92(1H，单峰，ArH)。

8-乙酰基-3-羟基-2-甲氧基苯并[c]苯并吡喃-6-酮(10)

在备有顶置式搅拌器和加热套的3升三颈瓶中，将甲酸钠(2.18g，32mmol)和甲酸(4.2mL，106.8mmole)加入到9b(10.0g，26.71mmol)的干燥四氢呋喃和无水乙醇(1.5L)1：1混合溶液的混悬液中。在该混合溶液中加入100mg、10％的钯碳催化剂，氩环境中回流反应混合物7小时。此时，所有的起始物9b都溶解在溶液中。趁热过滤溶液，滤掉催化剂，通过旋转蒸发除掉溶剂。(如果使溶液逐渐冷却，产物将沉淀出来，可以通过用6升甲醇回流萃取固体，从催化剂中将其分离出来)。所得固体(7.8g)用如下所述的硅胶柱层析进行纯化。

在典型的方式中，将3.12g的粗品10与20g的硅胶混合，将混合物悬浮在200mL的甲醇中，通过旋转蒸发除掉溶剂。将样品置于硅胶柱(6cmx36cm，400g的硅胶)的顶部，并用1％的丙酮/二氯甲烷、10％的丙酮/二氯甲烷和100％的丙酮梯度洗脱。合并所有纯的部分，挥干得2.4g(80％的产率)的所需中间体10。¹H(300MHz)(DMSO-d6)：d2.07(3H，单峰)，2.66(3H，单峰)，3.92(3H，单峰)，6.81(1H，单峰)，7.78(1H，单峰)，8.33(1H，双峰，J＝8.7Hz)，8.46(1H，双峰，J＝8.7Hz)和8.66(1H，双峰，J＝1.8Hz)。

方案3

SG00393 将SG00392(1.0g，2.67mmol)和硼氢化钠(0.1g，2.67mmol)加入到THF(20mL)和无水乙醇(10mL)2:1的混合液中，搅拌1.5小时。将反应混合物置冰浴中冷却，加入0.5N HCl，直到颜色从黄色变得澄清。加入水(20mL)，用二氯甲烷萃取混合液，干燥，浓缩，通过硅胶快速柱层析纯化残留物，用二氯甲烷：丙酮(8/1)洗脱得0.71g的SG00393。

SG00394 将SG0093(0.1g，0.27mmol)加入到无水的二氯甲烷(6mL)中，冷却到-78℃，得非均匀的混合物。逐滴加入二异丁基氢化铝(DIBAL)(1M的正己烷溶液，0.66mL，0.66mmol)2小时以上。再额外加入DIBAL(0.2mL)，总共2.5小时后通过加入甲醇(0.8mL)来终止反应。将反应混合物放置至室温，加入二氯甲烷(100mL)、冰和少量的丙酮，将混合物搅拌15分钟。将二氯甲烷层用饱和的碳酸氢钠盐水洗涤，干燥，浓缩。残留物重新溶解在丙酮(40mL)中，并预吸附到硅胶(1g)上。将丙酮蒸干后，残留物通过硅胶快速柱层析纯化，用二氯甲烷：丙酮(6/1)洗脱，得69mg的SG0094。

SG00395 将粗的SG00394(1.18g，3.12mmol)、三乙胺(1.73mL，12.5mmol)、乙酸酐(1.18mL，12.5mmol)和无水二氯甲烷(50mL)在室温、氮气下搅拌。加入4-二甲氨基吡啶(DMAP)的结晶后，将反应混合物搅拌15分钟，然后用二氯甲烷萃取。二氯甲烷层用饱和的碳酸氢钠盐水洗涤，干燥，浓缩，并通过硅胶快速柱层析纯化，用二氯甲烷：丙酮(10/1)洗脱，得0.89g的SG00395。

SG00396 将SG00395(0.83g，0.197mmol)加入到无水二氯甲烷(25mL)中，并于氮气下置甲醇/干冰浴中冷却。加入三乙基硅烷(Et3SiH)(0.631mL，3.95mmol)，接着逐滴加入三氟化硼乙醚(BF3Et2O)(0.375mL，2.96mmol)，剧烈搅拌0.5小时。从冷却浴中移出反应混合物，45分钟后用饱和的碳酸氢钠(3mL)终止反应。用二氯甲烷萃取反应混合物，用饱和的碳酸氢钠盐溶液洗涤，干燥，浓缩，并通过硅胶快速柱层析纯化，用乙酸乙酯：正己烷(1/2)洗脱，得0.71g的SG00396。

SG00397 将SG00396(0.135g，0.334mmol)、甲酸(0.525mL，1.34mmol)、甲酸钠(27mg，0.4mmol)、10％的钯/碳(0.3mol％)、无水四氢呋喃(4mL)和无水乙醇(4mL)氮气下加热回流1.5小时。冷却反应物，将约一半的反应混合物蒸发。将硅胶残留物通过硅胶快速柱层析纯化，用乙酸乙酯：正己烷(1/2)洗脱，得50mg的SG00397。

SG00398 在制备SG00397中剩余的一半反应混合物中另外加入10％的钯/碳，将反应物回流0.5小时。过滤掉钯/碳，用甲醇洗涤，并将硅胶加到滤液中。浓缩后，将硅胶残留物通过硅胶快速柱层析纯化，用乙酸乙酯：正己烷(1/2)洗脱，得32mg的SG00398。

SG00399 氮气环境下，将SG00395(0.44g，1.09mmol)和Amberlyst-15树脂(12-15珠)在甲醇(10mL)中搅拌2小时。滤掉Amberlyst，用甲醇洗涤并将滤液浓缩，残留物通过硅胶快速柱层析纯化用乙酸乙酯：正己烷(1/2)洗脱，得0.4g的SG00399。

SG00400 将SG00397(95mg，0.304mmol)加入到甲醇(2mL)中。向混合液中加入碳酸钾(0.126g，0.912mmol)和水(0.1mL)，氮气下反应物搅拌3小时。加入1％的盐酸(0.1mL)和甲醇(10mL)以终止反应。加入硅胶，蒸发掉溶剂，残留物通过硅胶快速柱层析纯化，用乙酸乙酯：正己烷(1/1)洗脱，得72mg的SG00400。

SG00477 将SG00292(0.18g，0.63mmol)加入到无水二氯甲烷(7mL)中，氮气下搅拌。加入三乙胺(Et₃N)(0.35mL，2.53mmol)、乙酸酐(0.24mL，2.53mmol)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)的一种晶体。搅拌15分钟后，加入二氯甲烷，混合物用饱和的碳酸氢钠盐溶液洗涤，干燥，浓缩，预吸附于硅胶上。上硅胶快速柱层析，用乙酸乙酯：正己烷(2/1)洗脱得80mg的SG00477。

SG00490 将SG00396(122mg，0.3mmol)、碳酸钾(125mg，0.9mmol)和水(0.13mL)加入到甲醇(3.3mL)中，氮气下搅拌1.5小时，然后用1％的硫酸终止反应。用二氯甲烷萃取反应物，并分成两等份。一份浓缩，用硅胶快速柱层析纯化，乙酸乙酯：正己烷(1/1)洗脱得48mg的SG00490。剩下的一份转变成SG00491。

SG00491 将剩下的一份粗的SG00490用戴斯-马丁(Dess-Martin)试剂(37.3mg，0.9mmol)氧化超过1小时。反应物用二氯甲烷萃取，用饱和的碳酸氢钠盐溶液洗涤，干燥，浓缩，用硅胶快速柱层析纯化，乙酸乙酯：正己烷(1/1)洗脱得40mg的SG00491。

SG00492 按照SG00392的方法，以SG00491为起始物来制备。得产物44mg。

SG00493 将SG492(116mg，0.41mmol)、碳酸钾(112mg，0.82mmol)和碘化甲烷(1mL)加入到丙酮(10mL)中，回流2天。在反应混合物中加入硅胶，浓缩，用硅胶快速柱层析纯化，二氯甲烷：丙酮(9/1)洗脱，得100mg的SG00493。

SG00494 按照SG00493的方法，用1-(2-氯乙基)哌啶盐酸盐来制备。得产物52mg。

SG00495 按照SG00493的方法，用溴乙烷来制备。得产物20mg。

SG00496 在冰浴中，将SG00393(116mg，0.308mmol)加入到无水四氢呋喃(10mL)中。加入氢化钠(60％分散在油中，22mg，0.92mmol)，将反应物搅拌20分钟。逐滴加入碘化甲烷，将反应物搅拌0.5小时。撤走冰浴，将反应物搅拌过夜。另外加入碘化甲烷，将反应混合物回流5小时。用水终止反应，将过量的碘化甲烷蒸馏除去。加入二氯甲烷和水，分离后，将二氯甲烷层干燥，浓缩，用硅胶快速柱层析纯化，乙酸乙酯：正己烷(1/1)洗脱，得SG00496。

SG00510 按照SG00393的方法，用SG00493来制备。得产物48mg。

SG00511 按照SG00493的方法，用2-(溴甲基)氢溴酸盐来制备。得产物170mg。

SG00512 按照SG00493的方法，用溴乙烷来制备。得产物63mg。

SG00513 按照SG00493的方法用异丙基溴来制备。得产物220mg。

SG00514 按照SG00493的方法，用7-羟基香豆素和苄基溴来制备。得产物1.3g。

SG00519 按照SG00493的方法，用东莨菪内酯和苄基溴来制备。得产物17mg。

SG00520 按照SG00393的方法，用SG00494来制备。得产物75mg。

SG00521 按照SG00393的方法用SG00512来制备。得产物118mg。

SG00526 将SG00511(50mg，0.133mmol)和硼氢化钠(5.0mg，0.133mmol)加入到乙醇和四氢呋喃1：1的混合液(共10mL)中，搅拌48小时，然后回流2小时。冷却后，用1N盐酸将反应混合物调节酸性到pH2，然后用饱和的碳酸氢钠溶液调节到pH8，用乙酸乙酯(3 x 20mL)萃取。用水、盐水洗涤合并的有机层，干燥，浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化，用正己烷：氯仿(1/1)、氯仿、3％的甲醇/氯仿梯度洗脱，得40mg的SG00526。

SG00527 将SG292(100mg，0.35mmol)加入到氢化钠(15.4mg，0.4mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(10mL)混合液中，将反应混合物回流2小时。冷却至室温后，加入溶于DMF的4-甲氧基苄溴(4-methoxybenzyl bromide)(0.57mL，0.42mmol)，将反应混合物加热至70℃保持9小时。加入水(10mL)，反应混合物用氯仿(3x20mL)萃取，合并的有机层用水、盐水洗涤，干燥，浓缩。残留物用正己烷：氯仿(1/2)、氯仿依次纯化，得85mg的SG00527。

SG00528 按照SG00526的方法，用SG00530来制备。得产物20mg。

SG00529 按照SG00526的方法，用SG00527来制备。得产物40mg。

SG00530 按照SG00527的方法，用3-甲氧基苄溴来制备。得产物110mg。

SG00531 按照SG00393的方法，用SG00495来制备。得产物36mg。

SG00532 按照SG00393的方法，用SG00513来制备。得产物71mg。

SG00533 按照SG00393的方法，用SG00273来制备。得产物8mg。

SG00541 按照SG00527的方法，用2-甲氧基苄氯来制备。得产物80mg。

SG00542 按照SG00527的方法，用2-(氯甲基)乙酸苯酯来制备。得产物80mg。

SG00543 向SG00392(0.19g，0.51mmol)的无水二氯甲烷(8mL)溶液中逐滴加入CH₃MgI(0.2mL，1.6mM)，于室温、氮气下搅拌。25分钟后，再另外加入CH₃MgI(0.2mL，1.6mM)。1小时后再另外加入CH₃MgI(0.2mL，1.6mM)。分出二氯甲烷，用微酸性的水洗涤，加入硅胶，将二氯甲烷蒸发以预吸附粗的反应物。用硅胶快速柱层析纯化二甲基醇化物(dimethylalcohol)，乙酸乙酯：正己烷(2/1)洗脱，并用于下一步。按照SG00292的方法，使二甲基醇化物(58mg，0.15mmol)脱苄基得SG00543。得产物32mg。

SG00544 按照SG00526的方法，用2-氯甲基乙酸苯酯来制备。得产物15mg。

SG00545 按照SG00526的方法，用SG00541来制备。得产物40mg。

SG00546 按照SG00527的方法，用3，5-二甲氧基苄氯来制备。得产物80mg。

SG00547 按照SG00526的方法，以SG00546为起始物来制备。得产物30mg。

SG00548 将制备SG00543时生成的二甲基醇化物(56mg，0.14mmol)加入到含催化剂量的Amberlyst-15和硫酸镁的无水二氯甲烷(3mL)中，搅拌6小时，然后放置冷柜中过夜。过滤后，用硅胶快速柱层析纯化粗的脱水产物，乙酸乙酯：正己烷(1/2)洗脱，并用于下一步。将纯化的脱水产物溶解于无水乙醇(3mL)中，加入10％的钯-碳(30mg)无水乙醇混悬液(1.5mL)，连接至充有氢气的气囊。搅拌7小时后，将催化剂过滤掉，将粗的反应物预吸附到硅胶上，并用硅胶快速柱层析纯化乙酸乙酯正己烷(1/2)洗脱得SG00548。

SG00549 在氢化钠(0.02g，0.55mmol)的无水DMF混悬液(5mL)中加入SG00391(0.1g，0.37mmol)。将最终的黄色不透明混合液回流1小时。加入苄基溴(0.05mL，0.41mmol)，混合液变成橙色/黄色的澄清溶液。将反应混合物冷却，加入水(15mL)中，用乙酸乙酯(3 x 12mL)萃取。有机层用盐水洗涤，干燥，浓缩，快速硅胶层析纯化，15％的乙酸乙酯正己烷溶液洗脱得定量产率的SG00549。

SG00550 按照SG00549的方法，用4-甲氧基苄基溴来制备。得产物100mg。

SG00551 按照SG00549的方法，用2-甲氧基苄基溴来制备。得产物62mg。

SG00552 按照SG00549的方法，用3-甲氧基苄基溴来制备。得产物70mg。

SG00553 按照SG00526的方法，以SG00555为起始物来制备。得产物20mg。

SG00554 按照SG00526的方法，以SG00556为起始物来制备。得产物24mg。

SG00555 按照SG00527的方法，用3-氯甲基嘧啶盐酸盐来制备。得产物53mg。

SG00556 按照SG00527的方法，用4-氯甲基嘧啶盐酸盐来制备。得产物45mg。

SG00557 按照SG00527的方法，用4-(氯甲基)乙酸苯酯来制备。得产物5mg。

SG00558 按照SG00527的方法，用4-(氯甲基)苯基来制备。得产物45mg。

SG00559 按照SG00527的方法，用4-甲基苄基溴来制备。得产物58mg。

SG00560 按照SG00549的方法用4-溴苄基溴来制备。得产物60mg。

SG00561 按照SG00549的方法，用3-溴苄基溴来制备。得产物100mg。

SG00562 按照SG00549的方法用3-氯苄基溴来制备。得产物80mg。

SG00568 按照SG00527的方法用2-溴乙基苯来制备。得产物18mg。

SG00569 按照SG00543的方法，用PhMgBr来制备。得产物19mg。

SG00570 按照在合成SG00548中脱水产物的制备方法，使用在制备SG00549中产生的二醇副产物来制备。得产物21mg。

SG00571 按照SG00549的方法用4-氯苄基溴来制备。得产物90mg。

SG00572 按照SG00549的方法，用4-氟苄基溴来制备。得产物110mg。

SG00573 按照SG00549的方法，用4-(溴甲基)苯甲酸甲酯来制备。得产物40mg。

SG00574 按照SG00549的方法，用4-溴甲基二苯甲酮来制备。得产物30mg。

SG00575 按照SG00526的方法，以SG00559为起始物来制备。得产物25mg。

SG00576 按照SG00527的方法，用3-甲基苄基溴来制备。得产物30mg。

SG00577 按照SG00527的方法，用3，4，5-三甲氧基苄基溴来制备。得产物45mg。

SG00592 按照SG00527的方法，用4-甲氧基苄基氯和3-(4-溴苯基)-7-羟基香豆素来制备。得产物62mg。

SG00593 按照SG00592的方法，用3，5-二甲氧基苄基溴来制备。得产物74mg。

SG00594 按照SG00527的方法，用4-三氟甲基苄基氯来制备。得产物22mg。

SG00595 按照SG00527的方法用4-氟苄基氯来制备。得产物43mg。

SG00596 按照SG00549的方法，用3，5-二甲氧基苄基溴来制备。得产物30mg。

SG00597 按照SG00527的方法，用乙基溴乙酸乙酯来制备。得产物15mg。

SG00598 按照SG00527的方法，用SG00293(SG00292的酮还原成醇)来制备。得产物16mg。

SG00599 从制备SG00569的反应中也能分离出SG00599。得产物3.3mg。

SG00609 按照SG00526的方法，以SG00577为起始物来制备。得产物32mg。

SG00612 将SG00292(0.1g，0.35mmol)搅拌加入到无水二氯甲烷(10mL)中，加入吡啶(0.05mL)和苯甲酰氯(0.1mL)，反应物搅拌1小时。将反应物倒入5％的盐酸中，用二氯甲烷萃取，用饱和的碳酸氢钠洗涤，干燥，浓缩，用快速硅胶层析纯化，乙酸乙酯：正己烷(1/1)洗脱，得25mg的SG00612。

SG00613 按照SG00612的方法，用4-甲氧基苄基氯来制备。得产物2.3mg。

SG00614 将SG00547(50mg，0.114mmol)溶解于无水二乙醚和二氯甲烷1：1的混合液(6mL)中。加入三溴化磷(124mg，0.46mmol)，室温下将反应物搅拌过一个周末。加入饱和的碳酸氢钠，用二氯甲烷萃取反应物，盐水洗涤，干燥，浓缩，快速硅胶层析纯化，用正己烷、氯仿、含1％甲醇的氯仿依次洗脱，得20mg的SG00614。

SG00615 按照SG00543的方法，以SG00546和EtMgBr为起始物来制备。得产物55mg。

SG00616 按照SG00543的方法，以SG00546和CH3MgI为起始物来制备。得产物74mg。

SG00617 按照SG00527的方法，用SG00293(SG00292的酮还原成醇)和4-溴甲基二苯甲酮来制备。得产物13mg。

SG00618 将4-苄氧基苯甲酸(1g，4.4mmol)加入到无水二氯甲烷(11mL)中。加入催化剂量的DMF(5滴)以及乙二酰氯的二氯甲烷溶液(2M，5.75mL)，将反应搅拌2小时。将溶剂蒸干，直接使用粗的4-苄氧基苯甲酰氯。按照SG00612的方法，用4-苄基苯甲酰氯来制备SG00618。得产物49mg。

SG00619 按照SG00527的方法，但是使用SG00293(SG00292的甲基酮还原成醇)和4-甲酸苄基溴(由二异丁基氢化铝(DIBAL)还原成4-氰苄基溴制得)来制备。得产物45mg。

SG00620 按照SG00527的方法，用4-硝基苄基溴来制备。得产物20mg。

实验数据

下面的例子涉及对表1所示的化合物的代表性说明。前述的化合物被发现具有抗增殖、抗血管生成的特性和/或下面所述的其它的有意义的活性。

实施例1：体外测定的如抑制内皮细胞增殖并且缺乏结合至雌激素受体α和β的抗血管生成活性。

人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖。对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的抑制已被表明是对抗血管生成活性的一种检测。HUVECs和所需的中间补体购自Cascade Biologies(俄勒冈州波特兰)，培养物的生长和维持按照制造商所描述的来进行。增殖实验通过将HUVECs以1,000细胞/孔的密度接种于96孔板的完全培养基中来完成。24小时的平板期后，在用含10ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)或定量范围的b-FGF或血管内皮生长因子(VEGF)的SG(“信号基因(Signal Gene)”，现在是“Palomid”)血管生成抑制剂的完全培养基处理前，将细胞在0.5％的血清中进行饥饿培养24小时。48小时后，采用供应商(普洛麦格公司(PromegaCorp.)，威斯康星州麦迪逊)所描述的量热法来测定细胞数。结果以不用血管生成抑制剂的最高b-FGF或VEGF表达的百分数来表示。通过令96孔板中的HUVECs生长到静息期并用血管生成抑制剂处理48小时来测定非增殖内皮细胞。最初，以5000细胞/孔接种，第二天将其合并。将板再培养24小时以确保用血管生成抑制剂处理之前生长停滞。如上所述检测细胞数。

雌激素受体(estrogen receptors，ER)结合实验。通过雌激素受体结合并转换信号的衍生物被认为不具有积极的活性、比如能增强癌生长以及诱发血管生成的活性。而很少或不结合雌激素受体(“ER”)的衍生物可能有所需的活性。可选择地，结合于雌激素受体但不转换信号的衍生物也可能被认为具有积极的活性。人类互补脱氧核糖核酸(cDNAs)编码的ERa和ERb用作体外表达受体蛋白的模板。该蛋白用普洛麦格(Promega)(体外转录翻译试剂盒(TNT kit))提供的兔网织红细胞裂解液生成，其在单一反应中偶联转录和翻译。每个反应中使用的模板数量主要由经验确定，并且以平行反应来监视表达，其中，[³⁵S]蛋氨酸结合到受体，接着凝胶电泳并曝光到底片。结合反应在终体积为100mL的TEG缓冲液(10mM tris、pH7.5、1.5mM EDTA、10％丙三醇)中完成。在每次结合实验中使用5mL含0.5nM的[³H]雌二醇(E₂)的体外转录-翻译受体。所有的化合物均从10^-11M到10^-6M进行例行检测，并用乙醇稀释。将反应物4℃下培养过夜，并通过加入200mL葡聚糖包被的活性炭来定量被结合的E₂。4℃下旋转15分钟后，将管离心10分钟，在150mL上清液中加入5mL闪烁液(scintillation cocktail)，通过液体闪烁计数(liquid scintillation counting)测定计数率(cpms)。每次试验中包括使用5mL非程序化的兔网织红细胞裂解液的空白对照。所有的值减去空白对照值，该空白对照最高计数值典型地为10-15％。通过仅用乙醇媒介来竞争结合的E₂来测定最大结合。该值被设定为100％(最大E₂结合)。基于最大的E₂结合来计算抑制的百分比值。将数据绘图并使用Prism软件计算Ki值。将试验至少重复操作三次。

结果示于表II和图1中。衍生物的活性通过对血管生成细胞因子刺激的内皮细胞的增殖抑制来显示其抗血管生成活性。大多数衍生物缺乏结合至雌激素受体α和β的能力，因此不认为是通过这些受体、血管生成的可能刺激物来发信号。

na：无活性；HUVECp：增殖的人脐静脉内皮细胞；HUVECq：静止的人脐静脉内皮细胞；hERa：人雌激素受体α；hERb，人雌激素受体β

实施例2：衍生物的凋亡活性

凋亡实验。进行凋亡实验以测定衍生物是否通过诱导程序性的细胞死亡来抑制细胞增殖。对于内皮细胞，其显示出了典型的凋亡活性，暗示其对其它的增殖细胞比如角质细胞也有该活性。内皮细胞的凋亡是表示抗血管生成活性的另一种方法。通过定量积聚在细胞中的细胞质组蛋白相关的DNA片段的数量来监测细胞死亡。细胞凋亡检测试剂盒(Apoptosisassay kit)由含ELISA检测和单克隆抗组蛋白抗体的罗氏(cat # 1 544 675)提供。简言之，HUVECs或角质细胞用胰蛋白酶消化，稀释，并以50000细胞/管的浓度等分到微量离心管中。37℃下用化合物处理6小时，接着进行细胞裂解，并使用厂商提供的检测试剂盒来分析。以405nm下的吸光度来量热定量凋亡。对照组包含阴性载体(ctl)对照(1％的乙醇)和4mg/mL喜树碱(CAM)乙醇溶液的阳性对照。角质细胞实验中，加入100μM的可由Paloma药业获得的最主要的临床候选药物Palomid529。结果示于图2和图3。(Palomid529是“SG00529”，见表I)。

实施例3：体外测定的如抑制角质细胞增殖和诱导凋亡的抗角质细胞活性

皮肤病至少部分是由角质细胞的异常存在和增殖引起的。抑制所述疾病中所述的角质细胞增殖和/或诱导角质细胞凋亡的能力的方法被认为会有助于异常皮肤的病理改善。下面表示支持本推测的例证性数据。

角质细胞增殖。用下面的方案测定苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物、Palomid529。低代次的人角质细胞(NHEK，新生库的，p3-5，Cambrex，CC2507)以每孔1000细胞数接种于含完全培养基(KBM，Cambrex)的黑色96孔板，培养过夜。然后弃去细胞培养基，换成加有Palomid529或媒介物(1％ DMSO)的新鲜生长培养基。在9个浓度(以100μM为起始浓度1：2稀释)下检测Palomid529。重复6次检测各实验组和对照组。持续培养3天，然后通过用荧光标记法(阿尔玛蓝(Alamar Blue)，Invitrogen公司，以1：20在生长培养基中稀释，培养5小时后读数，530ex/580em)测定代谢活跃的细胞来分析细胞增殖。

角质细胞凋亡。用下面的方案检测Palomid529。低代次的人角质细胞(NHEK，新生库的，p3-5，Cambrex，CC2507)以每孔3000细胞数接种于含完全培养基(KBM，Cambrex)的黑色96孔板，培养过夜(与细胞存活率检测一样的板，相邻孔)。然后除去细胞培养基，换成加有Palomid529或媒介物(1％DMSO)的新鲜生长培养基。在7个浓度(100、30、10、1、0.3、0.1和0.03μM)下检测Palomid 529。重复3次检测各实验组和对照组。培养过夜后，除去培养基，用罗氏细胞死亡ELISA(酶联免疫吸附实验)检测试剂盒(Cell Death ELISA plus kit)提供的裂解剂裂解细胞。然后将裂解的细胞转移到干净的离心管(eppendorf tubes)，于200×g离心，弃去细胞核和细胞碎片。然后将含细胞质部分(包括细胞质的核小体)的上清液转移到链霉亲和素包被的板中，用(生物素标记的)抗组蛋白和(过氧化物酶(POD)标记的)抗DNA抗体培养2小时。然后小心地洗孔。然后将2，2’-连氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)加入到孔中，完成颜色的变化后(约30分钟)，通过加入ABTS终止液终止反应。然后以490nm的波长为参照背景波长通过读取405nm下的光密度(OD)值测定凋亡。

Claims

1.一种预防或治疗皮肤病的组合物，其特征在于，该组合物包含处于可接受的载体中的苯并(c)苯并吡喃-6-酮衍生物。

2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述皮肤病具有有害的细胞增殖的特点。

3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述的皮肤病具有一个或多个选自由角质细胞增生、血管生成、炎症、单核细胞浸润及其组合所组成的群组的特征的特点。

4.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述的皮肤病选自由银屑病、特异性皮炎和老化皮肤组成的群组。

5.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的皮肤病具有光损害皮肤的特点。

6.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的组合物是一个或多个选自由表I组成的群组的组合物。

7.如权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述的表I包含苯并(c)苯并吡喃-6-酮衍生物SG00272、SG00273、SG00373、SG00477、SG00519、SG00526、SG00527、SG00528、SG00529、SG00530、SG00531、SG00532、SG00533、SG00535、SG00536、SG00537、SG00538、SG00539、SG00540、SG00541、SG00542、SG00543、SG00544、SG00545、SG00546、SG00547、SG00548、SG00549、SG00550、SG00551、SG00552、SG00553、SG00554、SG00555、SG00556、SG00557、SG00558、SG00559、SG00560、SG00561、SG00562、SG00563、SG00564、SG00565、SG00566、SG00567、SG00568、SG00569、SG00570、SG00571、SG00572、SG00573、SG00574、SG00575、SG00576、SG00577、SG00579、SG00580、SG00581、SG00582、SG00583、SG00584、SG00585、SG00586、SG00587、SG00588、SG00589、SG00590、SG00591、SG00592、SG00593、SG00594、SG00595、SG00596、SG00597、SG00598、SG00599、SG00600、SG00601、SG00602、SG00603、SG00604、SG00605、SG00606、SG00607、SG00608、SG00609、SG00610、SG00611、SG00612、SG00613、SG00614、SG00615、SG00616、SG00617、SG00618、SG00619和SG00620。

8.如权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述的组合物呈现抗血管生成活性和/或抗角质细胞增殖和/或抗炎活性。

9.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的组合物包含一种或多种遮光剂。

10.如权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述的遮光剂选自由对氨基苯甲酸、肉桂酸酯和水杨酸酯组成的群组。

11.如权利要求10所述的组合物，其特征在于，所述的遮光剂选自由甲氧基肉桂酸辛酯或2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮组成的群组。

12.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的组合物包括a-羟酸。

13.如权利要求12所述的组合物，其特征在于，所述的羟酸选自由a-羟酸类、β-羟酸类、羟基羧酸类及其组合所组成的群组。

14.如权利要求13所述的组合物，其特征在于，所述的羟基羧酸选自由二羟基羧酸、羟基-二羧基、羟基三羧基及其组合所组成的群组。

15.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，将所述的组合物制成生物可降解的或不可降解的缓释剂型。

16.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，将所述的组合物共轭成前药。

17.如权利要求16所述的组合物，其特征在于，所述的前药选自由肽、抗体、抗体片段、可水解的酯酰胺和氨基甲酸酯组成的群组。

18.如权利要求16所述的组合物，其特征在于，所述的前药选自由乙醇酸、乳酸、2-羟基辛酸、羟基月桂乙醇酸及其组合所组成的群组。

19.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的组合物包含一种或多种润滑剂。

20.如权利要求19所述的组合物，其特征在于，所述的润滑剂选自由酯类、脂肪酸类、醇类、多元醇类和烃类组成的群组。

21.如权利要求20所述的组合物，其特征在于，所述的酯选自由己二酸二丁酯、癸二酸二乙酯、二异丙基二聚酯、琥珀酸二辛基酯、豆蔻酸2-乙基-己基酯、硬脂酸异丙基酯和棕榈酸异甾醇酯、三亚油酸三异丙基酯、柠檬酸三月桂醇酯、棕榈酸月桂醇酯、乳酸肉豆蔻酯、油酸硬脂醇酯、可可辛酸酯/癸酸酯、醋酸丙二醇肉豆蔻醚酯、己二酸二异丙酯和辛酸鲸蜡基酯组成的群组。

22.如权利要求20所述的组合物，其特征在于，所述的脂肪酸和醇选自由鲸蜡基、肉豆蔻基、棕榈的和硬脂酰的醇和酸组成的群组。

23.如权利要求20所述的组合物，其特征在于，所述的多元醇选自由丙二醇、山梨醇、丙三醇、聚丙二醇、聚乙二醇、丁二醇和丙二醇组成的群组。

24.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的组合物进一步包含增稠剂。

25.如权利要求24所述的组合物，其特征在于，所述的增稠剂为交连聚丙烯酸酯基材料或树胶。

26.如权利要求25所述的组合物，其特征在于，所述的树胶选自由黄原胶、角叉菜胶、明胶、刺梧桐胶、果胶、刺槐豆胶及其组合所组成的群组。

27.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的组合物进一步包含粉料。

28.如权利要求27所述的组合物，其特征在于，所述的粉料选自由白垩、滑石粉、淀粉、蒙脱石粘土、化学修饰的硅酸镁铝、有机改性蒙脱土、含水硅酸铝、气相二氧化硅、淀粉辛烯基琥珀酯铝盐及其组合所组成的群组。

29.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的苯并(c)苯并吡喃-6-酮衍生物的组合物纯度为约100％至约90％。

30.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的苯并(c)苯并吡喃-6-酮衍生物的组合物纯度为约90％至约80％。

31.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的苯并(c)苯并吡喃-6-酮衍生物的组合物纯度为约80％至约70％。

32.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的苯并(c)苯并吡喃-6-酮衍生物的组合物纯度为约70％至约60％。

33.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的苯并(c)苯并吡喃-6-酮衍生物的组合物纯度为约60％至约50％。

34.一种预防和/或治疗皮肤病的方法，包含给予主体有效治疗量的一种或多种选自表I的苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物的组合物。

35.如权利要求34所述的方法，其特征在于，所述的组合物进一步包含可接受的载体。

36.如权利要求34所述的方法，其特征在于，所述的主体患有或倾向于患有皮肤病。

37.如权利要求36所述的方法，其特征在于，所述的皮肤病具有有害的细胞增殖的特点。

38.如权利要求36所述的方法，其特征在于，所述的皮肤病具有一种或多种选自由角质细胞增生、血管生成、炎症、单核细胞浸润及其组合所组成的群组的特征的特点。

39.如权利要求34所述的方法，其特征在于，所述的皮肤病选自由银屑病、特异性皮炎和老化皮肤组成的群组。

40.如权利要求34所述的方法，其特征在于，所述的皮肤病为光损害皮肤。

41.如权利要求34所述的方法，其特征在于，进一步包含向所述主体联合给予所述的苯并(c)苯并吡喃-6-酮衍生物和另外的针对治疗和/或预防所述皮肤病的治疗剂。

42.如权利要求34所述的方法，其特征在于，所述的给予包括局部、口服、鼻腔、直肠和胃肠道外给予所述的苯并(c)苯并吡喃-6-酮衍生物的组合物。

43.如权利要求42所述的方法其特征在于，所述的给予为局部给药。

44.如权利要求34所述的方法，其特征在于，所述的苯并(c)苯并吡喃-6-酮衍生物的组合物与植入体缔合。

45.如权利要求34所述的方法，其特征在于，所述的苯并(c)苯并吡喃-6-酮衍生物的组合物与装置缔合。