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CN108299314A - 用于治疗脊髓性肌萎缩的化合物 - Google Patents

用于治疗脊髓性肌萎缩的化合物 Download PDF

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CN108299314A CN201810234432.7A CN201810234432A CN108299314A CN 108299314 A CN108299314 A CN 108299314A CN 201810234432 A CN201810234432 A CN 201810234432A CN 108299314 A CN108299314 A CN 108299314A
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Abstract

本文提供了用于治疗脊髓性肌萎缩的化合物、其组合物及其用途。

Description

用于治疗脊髓性肌萎缩的化合物
本文描述的技术尚未在美国政府支持下提出。
交叉引用
本申请是申请日为2013年2月8日，申请号为201380019368.6，名称为“用于治疗脊髓性肌萎缩的化合物”的中国发明专利申请的分案申请。本申请要求2012年2月10日提交的美国临时申请系列号No.61/597,523的优先权的权益，将其全部内容通过引用并入本文用于所有目的。
关于共同研究协议的声明
所公开的主题是所主张发明的有效申请日或有效申请日之前生效的共同研究协议、由一方或多方或以其名义进行研究且完成所主张的发明；
所主张的发明作为在共同研究协议的范围内所进行的活动的结果完成；和
所主张的发明的申请专利公开了或经修正公开了共同研究协议的各方的名称。
引言
本文提供了用于治疗脊髓性肌萎缩的化合物、其组合物及其用途。
背景技术
脊髓性肌萎缩(SMA)在其最广泛意义上描述了一类遗传性和获得性中枢神经系统(CNS)疾病，其特征为脊髓和脑干的进行性运动神经元损失，导致肌无力和肌肉萎缩。SMA的最常见形式是由存活运动神经元(SMN)基因的突变引起，且在影响婴儿至成人的广泛严重性范围内显现(Crawford and Pardo,Neurobiol.Dis.,1996,3:97)。
婴儿的SMA是该神经变性病症的最严重形式。症状包括肌无力、肌张力差、叫喊无力、跛行或有倒下的倾向、吮吸或吞咽困难、分泌物累积在肺部或咽喉、进食困难和对呼吸道感染的敏感性增加。腿倾向于比臂更无力且不能达到发育里程碑，例如抬头或坐起。一般而言，这些症状出现的越早，寿命越短。当运动神经元细胞噁化时，症状随后不久出现。该疾病的严重形式是致命性的，且所有形式都没有已知的治愈方法。SMA的病程与运动神经元细胞退化的速率及所导致的无力严重程度直接相关。患有严重形式的SMA的婴儿经常因支撑呼吸的肌肉虚弱而死于呼吸系统疾病。患有较轻形式的SMA的儿童活得长的多，尽管他们可能需要广泛的医学支持，特别是处于该范围的较严重末端者。SMA病症的临床范围已经被分成以下五组∶
(a)0型SMA(子宫内SMA)是该疾病的最严重形式，且在出生之前就开始。通常，0型SMA的第一个症状是胎儿运动减少，这可在妊娠的30至36周之间首先观察到。在出生之后，这些新生儿几乎不运动，且具有吞服和呼吸困难。
(b)1型SMA(婴儿SMA或韦德尼希-霍夫曼病(Werdnig-Hoffmann disease))通常在0至6个月之间出现症状。该形式的SMA也非常严重。患者决不能坐，并且在没有通风支持的情况下，一般在头2年之内死亡。
(c)2型SMA(中等SMA)具有的发病年龄为7-18个月。患者能够独立地坐，但是决不能独立地站立或行走。该组的预后主要取决于呼吸参与的程度。
(d)3型SMA(青少年SMA或Kugelberg-Welander疾病)通常在18个月之后诊断出。3型SMA个体能够在该疾病过程期间的一些时间点独立地行走，但是在少年或成年期间经常变成坐轮椅。
(e)4型SMA(成人发病的SMA)。无力通常在青年晚期在舌头、手或脚中开始，然后发展至身体其它区域。成人SMA的病程慢得多且对预期寿命的影响很少或没有。
已经通过对染色体5q中的复杂区域进行连锁分析来对SMN基因定位。在人类中，该区域包含50万个碱基对(kb)反向复制，产生SMN gene的两个几乎相同的副本。SMA是由两个染色体中telomeric基因副本(SMN1)的失活性突变或缺失导致SMN1基因功能损失而引起的。然而，所有患者都保持centromeric基因副本(SMN2)，并且SMA患者中SMN2基因的拷贝数通常与疾病严重性反相关；即，患有较不严重的SMA的患者具有更多SMN2副本。然而，SMN2不能完全地抵消SMN1功能的丧失，因为外显子7中转译沉默的C至T突变引起外显子7的可变剪接。因此，大部分的转录物由缺乏外显子7的SMN2(SMN2Δ7)产生，且编码截短的Smn蛋白质，该蛋白质具有减弱的功能且快速降解。
Smn蛋白质被认为在RNA加工和代谢中起作用，具有介导特性种类的RNA-蛋白质复合物(称为snRNP)组件的充分表征的功能。Smn在运动神经元中可具有其它功能，然而，其在预防运动神经元的选择性退化中的作用并不非常确定。
在大多数情况下，SMA是基于临床症状和SMN1基因中不存在外显子7的所有副本来诊断的，如通过基因检测来确定。然而，在约5％的病例中，SMA是由不同于整个SMN1基因缺失或不同于SMN1基因中全部外显子7的缺失的突变引起的，某些已知的和其他的突变还不确定。在这样的情况下，当SMN1基因试验不可行或SMN1基因序列没有显示任何异常时，可以指定其它试验例如肌电图描记法(EMG)或肌活组织检查。
对于SMA患者的医疗护理目前限于支持疗法，包括呼吸、营养和康复护理；还没有已知解决该疾病的根本原因的药物。目前SMA的治疗是由预防和控制慢性运动单元丧失的继发效应组成。1型SMA的主要控制问题是肺部问题的预防和早期治疗，肺部问题是大部分病例中死亡的主要原因。虽然一些患有SMA的婴儿长成成人，但是患有1型SMA的那些婴儿的预期寿命小于两年。
已经研究了SMA的几个小鼠模型。特别地，SMNΔ7模型(Le et al.,Hum.Mol.Genet.,2005,14:845)同时携带SMN2基因和SMN2Δ7cDNA的几个副本，且概括1型SMA的许多表型特征。SMNΔ7模型可用于SMN2表达研究以及评估运动功能和存活。C/C-等位基因小鼠模型(Jackson Laboratory种系No.:008714)提供较不严重的SMA疾病模型，该小鼠具有的SMN2全长(SMN2 FL)mRNA和Smn蛋白质水平都降低了。C/C-等位基因小鼠表型具有SMN2基因和进行可变剪接的杂交mSmn1-SMN2基因，但是不具有明显的肌无力。C/C-等位基因小鼠模型用于SMN2表达研究。
由于提高了对SMA的遗传学基础和病理生理学的了解，因此已经研究了一些治疗策略，但是仍然无人证实在临床中取得成功。
使用病毒递送载体进行SMN1的基因置换和使用分化的SMN1+/+干细胞进行细胞置换都在SMA的动物模型中证实了功效。需要更多研究以在这些方法可用于人类之前确定安全性和免疫应答且解决对新生儿阶段开始治疗的需求。
也使用作为治疗剂的合成核苷酸实现培养细胞中SMN2的可变剪接的校正∶(i)靶向SMN2前-mRNA中的序列元件且使剪切反应的结果移向产生全长SMN2 mRNA的反义寡核苷酸(Passini et al.,Sci.Transl.Med.,2011,3:72ra18；和Hua et al.,Nature,2011,478:123)和(ii)提供全功能RNA序列的反剪切RNA分子，该全功能RNA序列在剪切期间替换突变体片段且产生全长SMN1mRNA(Coady and Lorson,J Neurosci.,2010,30:126)。
其他正在研究的方法包括寻找提高Smn水平、增强残余Smn的功能或补偿Smn损失的药物。氨基糖苷类已显示可通过促进对异常终止密码子的翻译通读来增强由SMN2Δ7mRNA产生的稳定化Smn蛋白质的表达，但是对于中枢神经系统渗透性较差且在反复剂量施用之后是有毒性的。化疗剂，例如阿柔比星，已经显示出增加细胞培养物中的Smn蛋白质；然而，这些药物的毒性特性阻止其长期用于SMA患者中。在临床研究下用于治疗SMA的某些药物包括转录转录，例如组蛋白脱乙酰酶(“HDAC”)抑制剂(例如，丁酸酯、丙戊酸和羟基脲)，及mRNA稳定剂(得自Repligen的mRNA的脱帽(decapping)抑制剂RG3039)，其旨在提高由SMN2基因转录的总RNA的量。然而，使用HDAC抑制剂或mRNA稳定剂不能解决SMA的根本原因，并且可能引起转录和基因表达的全面增强，给人类带来潜在安全问题。
在一种替代的方法中，已经选择神经保护剂例如奥利索西(olesoxime)用于研究。这样的策略并非旨在增强功能性Smn的产生以用于治疗SMA，而是正在研究保护Smn-缺乏的运动神经元以防止发生神经变性。
设计用于鉴别增强使SMN的外显子7包含到来自SMN2基因转录的RNA中的化合物的系统和由此鉴别的某些苯并噁唑和苯并异噁唑化合物已经描述在2009年5月27日提交的国际申请PCT/US2009/003238(公布为国际公开号WO2009/151546和美国公开号US2011/0086833)中。设计用于鉴别增强由SMN2Δ7mRNA产生稳定的Smn蛋白质的化合物的系统和由此鉴别的某些异吲哚酮化合物已经描述在2009年8月13日提交的国际申请PCT/US2009/004625(公布为国际公开号WO2010/019236和美国公开号US2011/0172284)中。将上述文件的每篇全文并入本文且用于所有目的。
本文提及的所有其他文献均如同本文完全列出的一样通过引用并入本申请中。
尽管在理解SMA的遗传学基础和病理生理学方面取得了进展，但是仍需要鉴别可改变脊髓性肌萎缩(最具破坏性儿童神经病学疾病之一)的病程的化合物。
发明简述
在一个方面，本文提供了式(I)的化合物∶
或其形式，其中w1、w2、w3、w4、w5、w6和w7为如本文定义的。在一个实施方式中，本文提供了一种药物组合物，其包含式(I)的化合物或其形式，及可药用载体、赋形剂或稀释剂。在一种具体实施方式中，本文提供了式(I)的化合物或其形式，或其药物组合物，用于治疗脊髓性肌萎缩(SMA)。
SMA是由SMN1基因的缺失或突变导致Smn-缺乏的运动神经元的选择性退化所引起。尽管人类受试者保留SMN2基因的一些副本，但是SMN2表达的少量功能性Smn蛋白质不能完全地补偿从SMN1基因表达的Smn的损失。本文所述的化合物、其组合物及其用途部分是基于本申请人的发现：式(I)的化合物增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2小基因转录的mRNA中。小基因复制SMN2的外显子7的可变剪接反应，其导致大部分SMN2转录物中遗漏外显子7。因此，式(I)的化合物或其形式可用于调节SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中。本申请人也发现式(I)的化合物增强SMN1的外显子7包含到从SMN1小基因转录的mRNA中。因此，式(I)的化合物或其形式可用于调节SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的mRNA中。
在一个具体实施方式中，本文提供了式(I)的化合物或其形式，其可用于调节SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中。在另一个特定的实施方式中，本文提供了式(I)的化合物或其形式，其可用于调节SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的mRNA中。在又一种实施方式中，本文提供了式(I)的化合物或其形式，其可用于调节SMN1和SMN2的外显子7包含到分别从SMN1和SMN2基因转录的mRNA中。
在另一个方面，本文提供了式(I)的化合物或其形式用于治疗SMA的用途。在一个具体实施方式中，本文提供了一种治疗需要其的人类受试者中SMA的方法，其包括向所述受试者施用有效量的式(I)的化合物或其形式。式(I)的化合物或其形式优选地以药物组合物施用至人类受试者。在另一种具体实施方式中，本文提供了式(I)的化合物用于治疗SMA的用途，其中所述化合物增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中。不受理论的限制，式(I)的化合物增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中，并且提高由SMN2基因产生的Smn蛋白质的水平，因此，可用于治疗需要其的人类受试者中的SMA。
在另一个方面，本文提供了下文生物学实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物，例如SEQ ID NO.1、7、8、11或13，和/或SEQ ID NO.2、9或12，和/或SMN探针例如SEQ IDNO.3或10)，及那些引物和/或探针的用途。在一种具体实施方式中，本文提供了包含SEQ IDNO.1、2、3、7、8、9、10、11、12或13的分离的核苷酸序列。在另一种具体实施方式中，本文提供了基本上由SEQID NO.1、2、3、7、8、9、10、11、12或13组成的分离的核苷酸序列。在另一个具体实施方式中，本文提供了由SEQ ID NO.1、2、3、7、8、9、10、11、12或13组成的分离的核苷酸序列。
在某些实施方式中，从SMN1基因和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量可用作SMA的生物标记物，例如本文公开的。在其他实施方式中，从SMN1基因和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量可用作用化合物治疗患者的生物标记物，例如本文公开的。在一个具体实施方式中，患者为SMA患者。在另一个具体实施方式中，患者不为SMA患者。
在某些实施方式中，从SMN1和/或SMN2基因转录且包括和/或SMN2的外显子7的mRNA的量以及从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量可用作用化合物治疗患者的生物标记物,例如本文公开的。在一个具体实施方式中，患者为SMA患者。在另一个具体实施方式中，患者不为SMA患者。
根据这些实施方式，如下所述的SMN引物和/或SMN探针可用于测定中，例如PCR(例如qPCR)、滚环扩增和RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)以评价和/或定量从SMN1基因和/或SMN2基因转录且包括或不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。
在一个具体实施方式中，下文生物学实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物例如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12，和/或SMN探针例如SEQ IDNO.3或10)用于测定中，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、RNA印迹或DNA印迹(例如，例如在下文生物学实施例中所述的测定)，以确定化合物(例如，式(I)的化合物或其形式)是否增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中。
在一个具体实施方式中，下文生物学实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物例如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12，和/或SMN探针例如SEQ IDNO.3或10)用于测定中，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、RNA印迹或DNA印迹(例如，例如在下文生物学实施例中所述的测定)，以确定化合物(例如，式(I)的化合物或其形式)是否增强将SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的mRNA中。
在一个具体实施方式中，下文生物学实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物例如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12，和/或SMN探针例如SEQ IDNO.3或10)用于测定中，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、RNA印迹或DNA印迹(例如，例如在下文生物学实施例中所述的测定)，以确定化合物(例如，式(I)的化合物或其形式)是否增强将SMN1和/或SMN2的外显子7包含到从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中。
在另一个实施方式中，下文生物学实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物例如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12，和/或SMN探针例如SEQ ID NO.3或10)用于测定中，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、RNA印迹或DNA印迹(例如，例如在下文生物学实施例中所述的测定)，以监测患者样品中从SMN2基因转录且包括SMN2的外显子7的mRNA的量。在一个具体实施方式中，患者为SMA患者。在另一个具体实施方式中，患者不为SMA患者。
在另一个实施方式中，下文生物学实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物例如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12，和/或SMN探针例如SEQ ID NO.3或10)用于测定中，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、RNA印迹或DNA印迹(例如，例如在下文生物学实施例中所述的测定)，以监测患者样品中从SMN1基因转录且包括SMN1的外显子7的mRNA的量。在一个具体实施方式中，患者为SMA患者。在另一个具体实施方式中，患者不为SMA患者。
在另一个实施方式中，下文生物学实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物例如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12，和/或SMN探针例如SEQ ID NO.3或10)用于测定中，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、RNA印迹或DNA印迹(例如，例如在下文生物学实施例中所述的测定)，以监测患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在一个具体实施方式中，患者为SMA患者。在另一个具体实施方式中，患者不为SMA患者。
在另一个实施方式中，下文生物学实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物例如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12，和/或SMN探针例如SEQ ID NO.3或10)用于测定中，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、RNA印迹或DNA印迹(例如，例如在下文生物学实施例中所述的测定)，以监测患者对化合物(例如，式(I)的化合物或其形式)的反应。在一个具体实施方式中，患者为SMA患者。在另一个具体实施方式中，患者不为SMA患者。
在另一个实施方式中，本文提供了一种测定化合物(例如，本文公开的式(I)的化合物)是否增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中，其包括(a)使从本文所述或2009年8月13日提交的国际申请PCT US2009/004625(公布为国际公开号WO2010/019236)或美国公开号US2011/0172284中的SMN2小基因转录的mRNA与用于例如RT-PCR、RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR或滚环扩增的可用组分一起在化合物(例如，本文公开的式(I)的化合物)的存在下，与本文所述引物(例如，SEQ ID NO.1和/或2)接触；和(b)检测从小基因转录且包括SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于不存在所述化合物下从小基因转录且包括SMN2的外显子7的mRNA的量，在所述化合物的存在下从小基因转录且包括SMN2的外显子7的mRNA的量增加指示该化合物增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中；和(2)相对于在不存在所述化合物下从小基因转录且包括SMN2的外显子7的mRNA的量，在所述化合物的存在下从小基因转录且包括SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示该化合物没有增强SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中。
在另一个实施方式中，本文提供了一种测定化合物(例如，本文公开的式(I)的化合物)是否增强将SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的mRNA中，其包括(a)使从本文所述或2009年8月13日提交的国际申请PCT US2009/004625(公布为国际公开号WO2010/019236)或美国公开号US2011/0172284中的SMN1小基因转录的mRNA与用于例如RT-PCR、RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR或滚环扩增的可用组分一起在化合物(例如，本文公开的式(I)的化合物)的存在下，与本文所述引物(例如，SEQ ID NO.1和/或2)接触；和(b)检测从小基因转录且包括SMN1的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于在不存在所述化合物下从小基因转录且包括SMN1的外显子7的mRNA的量，在所述化合物的存在下从小基因转录且包括SMN1的外显子7的mRNA的量增加指示该化合物增强SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的mRNA中；和(2)相对于在不存在所述化合物下从小基因转录且包括SMN1的外显子7的mRNA的量，在所述化合物的存在下从小基因转录且包括SMN1的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示该化合物没有增强SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的mRNA中。
在另一个实施方式中，本文提供了一种测定化合物(例如，本文公开的式(I)的化合物)是否增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中的方法，其包括(a)使从本文所述或2009年8月13日提交的国际申请PCT US2009/004625(公布为国际公开号WO2010/019236)或美国公开号US2011/0172284中的SMN2小基因转录的mRNA与用于例如RT-PCR、RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR或滚环扩增及可适用时RNA印迹或DNA印迹的可用组分一起在化合物(例如，本文公开的式(I)的化合物)的存在下，与本文所述探针(例如，SEQ IDNO.3和/或10)接触；和(b)检测从小基因转录且包括SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于在不存在所述化合物下从小基因转录且包括SMN2的外显子7的mRNA的量，在所述化合物的存在下从小基因转录且包括SMN2的外显子7的mRNA的量增加指示该化合物增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中；和(2)相对于在不存在所述化合物下从小基因转录且包括SMN2的外显子7的mRNA的量，在所述化合物的存在下从小基因转录且包括SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示该化合物没有增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中。
在另一个实施方式中，本文提供了一种测定化合物(例如，本文公开的式(I)的化合物)是否增强将SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的mRNA中的方法，其包括(a)使从本文所述或2009年8月13日提交的国际申请PCT US2009/004625(公布为国际公开号WO2010/019236)或美国公开号US2011/0172284中的SMN1小基因转录的mRNA与用于例如RT-PCR、RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR或滚环扩增及可适用时RNA印迹或DNA印迹的可用组分一起在化合物(例如，本文公开的式(I)的化合物)的存在下，与本文所述探针(例如，SEQ IDNO.3和/或10)接触；和(b)检测从小基因转录且包括SMN1的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于在不存在所述化合物下从小基因转录且包括SMN1的外显子7的mRNA的量，在所述化合物的存在下从小基因转录且包括SMN1的外显子7的mRNA的量增加指示该化合物增强SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的mRNA中；和(2)相对于在不存在所述化合物下从小基因转录且包括SMN1的外显子7的mRNA的量，在所述化合物的存在下从小基因转录且包括SMN1的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示该化合物没有增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中。
在另一个实施方式中，本文提供了一种测定化合物(例如，本文公开的式(I)的化合物)是否增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中的方法，其包括(a)使从本文所述或2009年8月11日提交的国际申请PCT US2009/004625(公布为国际公开号WO202/019216)或美国公开号US2011/0172284中的SMN2小基因转录的mRNA与用于例如RT-PCR、RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR或滚环扩增及可适用时RNA印迹或DNA印迹的可用组分一起在化合物(例如，本文公开的式(I)的化合物)的存在下，与本文所述引物(例如，SEQ ID NO.1或2)和/或探针(例如，SEQ ID NO.3和/或10)接触；和(b)检测从小基因转录且包括SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于在不存在所述化合物下从小基因转录且包括SMN2的外显子7的mRNA的量，在所述化合物的存在下从小基因转录且包括SMN2的外显子7的mRNA的量增加指示该化合物增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中；和(2)相对于在不存在所述化合物下从小基因转录且包括SMN2的外显子7的mRNA的量，在所述化合物的存在下从小基因转录且包括SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示该化合物没有增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中。
在另一个实施方式中，本文提供了一种测定化合物(例如，本文公开的式(I)的化合物)是否增强将SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的mRNA中的方法，其包括(a)使从本文所述或2009年8月11日提交的国际申请PCT US2009/004625(公布为国际公开号WO202/019216)或美国公开号US2011/0172284中的SMN1小基因转录的mRNA与用于例如RT-PCR、RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR或滚环扩增及可适用时RNA印迹或DNA印迹的可用组分一起在化合物(例如，本文公开的式(I)的化合物)的存在下，与本文所述引物(例如，SEQ ID NO.1或2)和/或探针(例如，SEQ ID NO.3和/或10)接触；和(b)检测从小基因转录且包括SMN1的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于在不存在所述化合物下从小基因转录且包括SMN1的外显子7的mRNA的量，在所述化合物的存在下从小基因转录且包括SMN1的外显子7的mRNA的量增加指示该化合物增强SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的mRNA中；和(2)相对于在不存在所述化合物下从小基因转录且包括SMN1的外显子7的mRNA的量，在所述化合物的存在下从小基因转录且包括SMN1的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示该化合物没有增强将SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的mRNA中。
在另一个方面，本文提供了包含下文生物学实施例中所述引物和/或探针(例如，SMN引物，例如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12，和/或SMN探针例如SEQID NO.3或10)的试剂盒及其用途。
附图简述
图1，在生物学实施例1中提及，是SMN2-A小基因构建物的示意图，该构建物产生两个可变剪接的mRNA转录物：包含外显子7的全长mRNA和缺乏外显子7的Δ7mRNA。插入SMN2-A的外显子7中位于核酸残基48之后的腺嘌呤核苷酸由字母“A.”代表。可选地，核苷酸也可选自胞嘧啶或胸腺嘧啶。由于在核酸残基48之后插入核苷酸(A、C或T)，因此全长mRNA在SMN开放读码框中不包含终止密码子，而Δ7mRNA在外显子8中具有由词语“终止”指示的终止密码子。
图2，在生物学实施例1中提及，提供来自SMN2-A小基因构建物SEQ ID NO.21的小基因的DNA序列(图2a)。如图2b所示，可以发现下述子序列∶
1-70:5’UTR(deg)；
71-79:外显子6∶起始密码子和BamHI位点(atgggatcc)；
80-190:外显子6；
191-5959:内含子6；
5960-6014:外显子7，具有腺嘌呤核苷酸“A”插入物(位置6008)；
6015-6458:内含子7；
6459-6481:外显子8的一部分；
6482-8146:BamHI位点(位于5'端的序列)、从密码子2开始的荧光素酶编码序列(没有起始密码子)、NotI位点(位于3'端的序列)，TAA终止密码子；和
8147-8266:3’UTR(deg)。
为了产生小基因的SMN1变型，使用位点定向诱变将SMN2-A小基因构建物的外显子7的第六个核苷酸(胸腺嘧啶残基)转变为胞嘧啶。因此，类似于SMN2-A小基因构建物，SMN1小基因构建物具有在外显子7的核酸残基48之后插入的单个腺嘌呤残基。SMN1小基因构建物称为SMN1-A。类似地，插入SMN1小基因构建物中在外显子7的核酸残基48之后的核苷酸也可以可替代地选自胞嘧啶或胸腺嘧啶。
图3，在生物学实施例2中提及，显示在用递增浓度的化合物6(图3a)和化合物170(图3b)处理24hr时期的细胞中SMN2小基因可变剪接的校正。使用逆转录-定量PCR(RT-qPCR)定量全长SMN2小基因mRNA的水平。将在化合物处理的样品中全长SMN2小基因mRNA的水平标准化为在载体处理的样品中的所述水平，并作为化合物浓度的函数作图。
图4，在生物学实施例3中提及，显示在用递增浓度的化合物6(图4a)和化合物170(图4b)处理24hr时期的1型SMA患者成纤维细胞中SMN2可变剪接的校正。使用RT-qPCR定量全长和Δ7 SMN2 mRNA的水平。将化合物处理的样品中全长和Δ7 SMN2 mRNA的水平标准化为载体处理的样品中的所述水平，并作为化合物浓度的函数作图。
图5，在生物学实施例4中提及，显示在用递增浓度的化合物6(图5a)和化合物170(图5b)处理25hr时期的1型SMA患者成纤维细胞中SMN2可变剪接的校正。使用逆转录-终点PCR(RT-PCR)扩增全长和Δ7 SMN2 mRNA，并使用琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物。顶带(topband)和底带(bottom band)分别对应于全长和Δ7 SMN2 mRNA。各带的强度与样品中存在的RNA的量成比例。
图6，在生物学实施例5中提及，显示用10mg/kg的化合物6(图6a)和化合物170(图6b)处理10天(每天2次，BID)引起C/C-等位基因SMA小鼠模型的脑和肌肉组织中SMN2可变剪接(在SMN2基因和杂交小鼠Smn1-SMN2基因中)的校正。使用RT-qPCR定量全长和Δ7 SMN2mRNA的水平，将全长和Δ7 SMN2 mRNA的组合量设定为1，并且计算全长和Δ7 SMN2的分数量。
图7，在生物学实施例6中提及，显示用10mg/kg的化合物6(图7a)和化合物170(图7b)处理10天(BID)引起C/C-等位基因SMA小鼠模型的脑和肌肉组织中SMN2可变剪接(在SMN2基因和杂交小鼠Smn1-SMN2基因中)的校正。使用逆RT-PCR扩增全长和Δ7 SMN2 mRNA。使用琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物。顶带和底带分别对应于全长和Δ7 SMN2 mRNA。各带的强度与样品中存在的RNA的量成比例。
图8，在生物学实施例7中提及，显示用化合物6(图8a)和化合物170(图8b)处理48小时时期的SMA 1型人成纤维细胞中Smn蛋白质表达的剂量依赖性增加。
图9，在生物学实施例8中提及，显示化合物6(图9a)和化合物170(图9b)处理48小时时期的1型SMA患者成纤维细胞中核斑计数(gems)增加。使用荧光显微镜对斑计数。将化合物处理的样品中斑的数量标准化为载体处理的样品中的所述数量，并作为化合物浓度的函数作图。
图10，在生物学实施例9中提及，显示由化合物6(图10)处理72小时时期的1型SMA患者成纤维细胞产生的iPS细胞所产生的运动神经元中的Smn蛋白质表达的增加(黑色圈)。使用Smn免疫染色和共焦荧光显微镜定量Smn蛋白质的水平。将化合物处理的样品中Smn蛋白质的水平标准化为载体处理的样品中的所述水平，并作为化合物浓度的函数作图。
图11，在生物学实施例11中提及，显示用100mg/kg的化合物6(图11a，n＝10)和10mg/kg的化合物170(图11b，n＝5)处理10天(BID)引起C/C-等位基因SMA小鼠模型的脑、脊髓和肌肉组织中Smn蛋白质表达增加。各图中的ANOVA的p值用三个星号(***)代表p＜0.001。
图12，在生物学实施例12中提及，显示用化合物6(脑，图12a；脊髓，图12b；肌肉，图12c；及皮肤，图12d，n＝6至9)和化合物170(脑，图12e；脊髓，图12f；肌肉，图12g，n＝7)处理7天(每天一次，QD)引起新生的Δ7 SMA小鼠模型的组织中Smn蛋白质表达的剂量依赖性增加。各图中的ANOVA的p值用一个星号(*)代表p＜0.05，用两个星号号(**)代表p＜0.01且用三个星号(***)代表p＜0.001。
图13，在生物学实施例13中提及，显示用化合物6(图13a)处理直至出生后(PND)第59天和用化合物170(图13b)处理直至PND 92引起新生的Δ7 SMA小鼠模型的体重差异。
图14，在生物学实施例14中提及，显示用化合物6(图14a)和化合物170(图14b)处理引起新生的Δ7 SMA小鼠模型中翻正反射提高。
图15，在生物学实施例15中提及，显示用化合物6(图15a)和化合物170(图15b)处理引起新生的Δ7 SMA小鼠模型的存活率提高。
图16，在生物学实施例15中提及，显示分别相对于载体处理的和小鼠和年龄匹配的杂合小鼠，用化合物6处理直至PND 156(图16a)和用化合物170处理直至PND 185(图16b)引起Δ7 SMA小鼠模型的脑、脊髓和肌肉组织中Smn蛋白质表达增加。
图17，在生物学实施例16中提及，显示用化合物6(图17a)和化合物170(图17b)处理7小时时期的HEK293H人类细胞中的SMN1小基因FL mRNA出现剂量依赖性增加和SMN1小基因Δ7mRNA出现剂量依赖性降低。使用RT-PCR各自扩增全长和Δ7 SMN1小基因mRNA，并使用琼脂糖凝胶电泳分离得到的PCR产物。顶带和底带分别对应于全长和Δ7 SMN1小基因mRNA。各个带的强度与样品中存在的RNA的量成比例。
详细说明
本文提供了式(I)的化合物∶
或其形式，其中：
w1和w5独立地为C-Ra或N；
w2为C-Rb或N；
w3、w4和w7独立地为C-R1、C-R2、C-Ra或N；
w6为C-R1、C-R2、C-Rc或N；
其中w3、w4、w6和w7中的一个为C-R1，且w3、w4、w6和w7中的另一个为C-R2，条件是且，
当w3为C-R1时，则w6为C-R2且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w3为C-R2时，则w6为C-R1且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w4为C-R1时，则w7为C-R2且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc或N；
或
当w4为C-R2时，则w7为C-R1且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc或N；
和
其中，w1、w2、w3、w4、w5、w6和w7的任一个、两个或三个可以任选地为N；
R1为C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、(氨基-C1-8烷基)2-氨基、(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、氨基-C2-8烯基、C1-8烷基-氨基-C2-8烯基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基、氨基-C2-8炔基、C1-8烷基-氨基-C2-8炔基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基、卤代-C1-8烷基-氨基、(卤代-C1-8烷基)2-氨基、(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基、[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；
其中，每种情况下的杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基任选地被一个、两个或三个R3取代基且任选地被1个另外的R4取代基取代；或
其中，可选地，每种情况下的杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基任选地被一个、两个、三个或四个R3取代基取代；
R2为芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基；
其中，每种情况下的芳基、杂环基和杂芳基任选地被一个、两个或三个R6取代基且任选地被一个另外的R7取代基取代；
Ra在每种情况下独立地选自氢、卤素或C1-8烷基；
Rb为氢、卤素、C1-8烷基或C1-8烷氧基；
Rc为氢、卤素或C1-8烷基；
R3在每种情况下独立地选自氰基、卤素、羟基、氧代、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷基-羰基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-羰基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基]2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-羰基-氨基、C1-8烷氧基-羰基-氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基或(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基；
R4为C3-14环烷基、C3-14环烷基-C1-8烷基、C3-14环烷基-氨基、芳基-C1-8烷基、芳基-C1-8烷氧基-羰基、芳基-磺酰氧基-C1-8烷基、杂环基或杂环基-C1-8烷基；其中，每种情况下的C3-14环烷基、芳基和杂环基任选地被一个、两个或三个R5取代基取代；
R5在每种情况下独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫基；
R6在每种情况下独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、C1-8烷基、C2-8烯基、卤代-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫基；和
R7为C3-14环烷基、C3-14环烷基-氧基、芳基、杂环基或杂芳基。
具体实施方式
在式(I)的化合物的一个实施方式中，w1为C-Ra。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，w1为N。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，w2为C-Rb。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，w2为N。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，w3为C-Ra。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，w3为N。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，w4为C-Ra。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w4为N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w5为C-Ra。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w5为N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w6为C-Rc。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w6为N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w7为C-Ra。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w7为N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w3为C-R1且w6为C-R2。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w3为C-R2且w6为C-R1。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w4为C-R1且w7为C-R2。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w4为C-R2且w7为C-R1。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2且w1、w4、w5和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb或N。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1且w1、w4、w5和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb或N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w1、w3和w5独立地为C-Ra或N，w2为C-Rb或N，且w6为C-Rc或N。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w1、w3和w5独立地为C-Ra或N，w2为C-Rb或N且w6为C-Rc或N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w1和w2为N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w1和w3为N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w1和w4为N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w1和w5为N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w1和w6为N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w1和w7为N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，
R1为C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、(氨基-C1-8烷基)2-氨基、(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、氨基-C2-8烯基、C1-8烷基-氨基-C2-8烯基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基、氨基-C2-8炔基、C1-8烷基-氨基-C2-8炔基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基、卤代-C1-8烷基-氨基、(卤代-C1-8烷基)2-氨基、(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基、[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中每种情况下的杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1为氨基、(C1-8烷基)2-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、(氨基-C1-8烷基)2-氨基、(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、氨基-C2-8烯基、C1-8烷基-氨基-C2-8烯基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基、氨基-C2-8炔基、C1-8烷基-氨基-C2-8炔基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基、卤代-C1-8烷基-氨基、(卤代-C1-8烷基)2-氨基、(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基、[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中每种情况下的杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1为C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、(氨基-C1-8烷基)2-氨基、(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、氨基-C2-8烯基、C1-8烷基-氨基-C2-8烯基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基、氨基-C2-8炔基、C1-8烷基-氨基-C2-8炔基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基、卤代-C1-8烷基-氨基、(卤代-C1-8烷基)2-氨基、(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基、[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基或[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1为杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基,(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中每种情况下的杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1为杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基或杂环基-羰基-氧基；其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1为杂环基，任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1为C3-14环烷基，任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1为芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中每种情况下的芳基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1为芳基-C1-8烷基-氨基，任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1为杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基,(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中每种情况下的杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1为杂芳基，任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，
R1为杂环基，选自氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,2,5,6-四氢吡啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、八氢-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶基、八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aR,7aR)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aS,7aS)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(2H)-酮、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(7R,8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1R,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基、(1R,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、1,4-二氮杂双环[3.2.2]壬基、氮杂螺[3.3]庚基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚基、2,7-二氮杂螺[3.5]壬基、5,8-二氮杂螺[3.5]壬基、2,7-二氮杂螺[4.4]壬基或6,9-二氮杂螺[4.5]癸基；其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1为杂环基，选自氮杂环丁烷-1-基、四氢呋喃-3-基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、哌啶-4-基、哌嗪-1-基、1,4-二氮杂环庚烷-1-基、1,2,5,6-四氢吡啶-5-基、1,2,3,6-四氢吡啶-4-基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-1(2H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-1(2H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基、六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基、(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基、八氢-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5-基、八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(4aR,7aR)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(4aS,7aS)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-6(2H)-酮、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(7R,8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aS)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aR)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基、3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯-3-基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯-3-基、9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、(1R,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基、(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基、2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛-2-基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基、(1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基、1,4-二氮杂双环[3.2.2]壬-4-基、氮杂螺[3.3]庚-2-基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基、2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基、5,8-二氮杂螺[3.5]壬-8-基、2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基或6,9-二氮杂螺[4.5]癸-9-基；其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1为取代的杂环基，选自4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基、(3aS,6aS)-1-甲基六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基、(3aS,6aS)-5-甲基六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-1(2H)-基、(3aR,6aR)-1-甲基六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基、(3aR,6aS)-5-甲基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基、(3aR,6aS)-5-(2-羟基乙基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基、(3aR,6aS)-5-(丙烷-2-基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基、(3aR,6aS)-5-乙基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基、(4aR,7aR)-1-甲基八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(4aR,7aR)-1-乙基八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(4aR,7aR)-1-(2-羟基乙基)八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(4aS,7aS)-1-甲基八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(4aS,7aS)-1-(2-羟基乙基)八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(7R,8aS)-7-羟基六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aS)-8a-甲基八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aR)-8a-甲基八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(1R,5S,6s)-6-(二甲基氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基、(1R,5S)-8-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基、9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、(3-exo)-9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、(1R,5S)-9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、(1S,4S)-5-甲基-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基或(1S,4S)-5-乙基-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1为杂环基-C1-8烷基，其中杂环基选自吗啉基、哌啶基、哌嗪基、咪唑基或吡咯烷基；和其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1为杂环基-C1-8烷基，选自吗啉-4-基-甲基,吗啉-4-基-乙基、吗啉-4-基-丙基、哌啶-1-基-甲基、哌嗪-1-基-甲基、哌嗪-1-基-乙基、哌嗪-1-基-丙基、哌嗪-1-基-丁基、咪唑-1-基-甲基、咪唑-1-基-乙基、咪唑-1-基-丙基、咪唑-1-基-丁基、吡咯烷-1-基-甲基、吡咯烷-1-基-乙基、吡咯烷-1-基-丙基或吡咯烷-1-基-丁基；其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R1为杂环基-C1-8烷氧基，其中杂环基选自吡咯烷基、哌啶基或吗啉基；和其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1为杂环基-C1-8烷氧基，选自吡咯烷-2-基-甲氧基、吡咯烷-2-基-乙氧基、吡咯烷-1-基-甲氧基、吡咯烷-1-基-乙氧基、哌啶-1-基-甲氧基、哌啶-1-基-乙氧基、吗啉-4-基-甲氧基或吗啉-4-基-乙氧基；其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1为杂环基-氨基，其中杂环基选自氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基或(1R,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬基；和其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，R1为杂环基-氨基，选自氮杂环丁烷-3-基-氨基、吡咯烷-3-基-氨基、哌啶-4-基-氨基、9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基-氨基、(1R,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基-氨基、9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基-氨基、(3-exo)-9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基-氨基或(1R,5S)-9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基-氨基；其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1为(杂环基)(C1-8烷基)氨基，其中杂环基选自吡咯烷基或哌啶基；和其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1为(杂环基)(C1-8烷基)氨基，选自(吡咯烷-3-基)(甲基)氨基或(哌啶-4-基)(甲基)氨基；其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1为杂环基-氨基-C1-8烷基，其中杂环基选自四氢呋喃基；和其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1为杂环基-氨基-C1-8烷基，选自3-(四氢呋喃-3-基-氨基)丙基；其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1为杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基，其中杂环基选自四氢呋喃基、噻吩基或吡啶基；和其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1为杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基,选自3-[(四氢呋喃-2-基甲基)氨基]丙基、3-[(噻吩-3-基甲基)氨基]丙基、3-[(吡啶-2-基甲基)氨基]丙基或3-[(吡啶-4-基甲基)氨基]丙基；其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1为杂环基-氧基，其中杂环基选自吡咯烷基或哌啶基；和其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1为杂环基-氧基，选自吡咯烷-3-基-氧基或哌啶-4-基-氧基；其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1为杂环基-羰基，其中杂环基选自哌嗪基；和其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1为杂环基-羰基，选自哌嗪-1-基-羰基；其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1为杂环基-羰基-氧基，其中杂环基选自哌嗪基；和其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1为杂环基-羰基-氧基，选自哌嗪-1-基-羰基-氧基；其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1为C3-14环烷基，选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基或环庚基；其中每种情况下的C3-14环烷基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1为C3-8环烷基，选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基或环庚基；其中每种情况下的C3-14环烷基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1为芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基，其中芳基选自苯基；和其中每种情况下的芳基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1为芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基，选自3-(苯甲基氨基)丙基；其中每种情况下的芳基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1为杂芳基，其中杂芳基选自吡啶基；和其中每种情况下的杂芳基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1为杂芳基，选自吡啶-4-基；其中每种情况下的杂芳基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1为杂芳基-C1-8烷基，其中杂芳基，选自1H-咪唑基；和其中每种情况下的杂芳基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1为杂芳基-C1-8烷基，选自1H-咪唑-1-基-甲基；其中每种情况下的杂芳基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1为(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基，其中杂芳基选自吡啶基；和其中每种情况下的杂芳基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，R1为(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基，选自(吡啶-3-基甲基)(甲基)氨基；其中每种情况下的杂芳基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R1为杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基，其中杂芳基选自噻吩基或吡啶基；和其中每种情况下的杂芳基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1为杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基，选自噻吩-3-基-甲基-氨基-丙基、吡啶-2-基-甲基-氨基-丙基、吡啶-3-基-甲基-氨基-丙基或吡啶-4-基-甲基-氨基-丙基；其中每种情况下的杂芳基任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R3选自氰基、卤素、羟基、氧代、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷基-羰基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-羰基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷基-羰基-氨基、C1-8烷氧基-羰基-氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基或(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，R3选自氰基、卤素、羟基、氧代、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-羰基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷氧基-羰基-氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基或(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R3为C1-8烷基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基或叔-丁基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R3为C1-8烷基，选自乙基、丙基、异丙基或叔-丁基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R3为卤代-C1-8烷基，选自三卤代-甲基、二卤代-甲基、卤代-甲基、三卤代-乙基、二卤代-乙基、卤代-乙基、三卤代-丙基、二卤代-丙基或卤代-丙基；其中卤素选自氟、氯、溴或碘。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，R3为卤代-C1-8烷基，选自三卤代-甲基、二卤代-甲基、卤代-甲基、三卤代-乙基、二卤代-乙基、三卤代-丙基或二卤代-丙基；其中卤素选自氟、氯、溴或碘。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R3为羟基-C1-8烷基，选自羟基-甲基、羟基-乙基、羟基-丙基、二羟基-丙基、羟基-丁基或二羟基-丁基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R3为羟基-C1-8烷基，选自羟基-甲基,二羟基-丙基、羟基-丁基或二羟基-丁基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R3为C1-8烷氧基，选自甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R3为卤代-C1-8烷氧基，选自三卤代-甲氧基、二卤代-甲氧基、卤代-甲氧基、三卤代-乙氧基、二卤代-乙氧基、卤代-乙氧基、三卤代-丙氧基、二卤代-丙氧基或卤代-丙氧基；其中卤素选自氟、氯、溴或碘。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R3为C1-8烷氧基-羰基-氨基，选自甲氧基-羰基-氨基、乙氧基-羰基-氨基、丙氧基-羰基-氨基、异丙氧基-羰基-氨基、叔-丁氧基-羰基-氨基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R4为C3-14环烷基，选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；其中每种情况下的C3-14环烷基任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R4为C3-8环烷基，选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；其中每种情况下的C3-8环烷基任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R4为C3-14环烷基-C1-8烷基，其中C3-14环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；和其中每种情况下的C3-14环烷基任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R4为C3-8环烷基-C1-8烷基，其中C3-8环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；和其中每种情况下的C3-8环烷基任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R4为C3-14环烷基-氨基，其中C3-14环烷基，选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；和其中每种情况下的C3-14环烷基任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R4为C3-8环烷基-氨基，其中C3-8环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；和其中每种情况下的C3-8环烷基任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R4为芳基-C1-8烷基、芳基-C1-8烷氧基-羰基或芳基-磺酰氧基-C1-8烷基，其中芳基选自苯基；和其中每种情况下的芳基任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R4为芳基-C1-8烷基或芳基-C1-8烷氧基-羰基，其中每种情况下的芳基任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R4为杂环基，选自氧杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、1,3-二噁烷基或吗啉基，其中每种情况下的杂环基任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R4为杂环基，选自氧杂环丁烷-3-基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、哌嗪-1-基、1,3-二噁烷-5-基或吗啉-4-基，其中每种情况下的杂环基任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R4为杂环基-C1-8烷基，其中每种情况下的杂环基选自吡咯烷基或哌啶基；和其中每种情况下的杂环基任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R4为杂环基-C1-8烷基，选自吡咯烷-1-基-C1-8烷基或哌啶-1-基-C1-8烷基，其中每种情况下的杂环基任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R5选自卤素、羟基、氰基、硝基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫基；其中卤素或卤代选自氟、氯、溴或碘。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R5为羟基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R5为C1-8烷基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基、正-丁基或叔-丁基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R5为C1-8烷基，选自乙基、丙基、异丙基或叔丁基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R5为卤代-C1-8烷基，选自三卤代-甲基、二卤代-甲基、卤代-甲基、三卤代-乙基、二卤代-乙基、卤代-乙基、三卤代-丙基、二卤代-丙基或卤代-丙基；其中卤素选自氟、氯、溴或碘。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R5为C1-8烷氧基，选自甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R5为卤代-C1-8烷氧基，选自三卤代-甲氧基、二卤代-甲氧基、卤代-甲氧基、三卤代-乙氧基、二卤代-乙氧基、卤代-乙氧基、三卤代-丙氧基、二卤代-丙氧基或卤代-丙氧基；其中卤素选自氟、氯、溴或碘。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R2为芳基，选自任选地被R6和R7取代基取代的苯基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R2为芳基-氨基，其中芳基选自苯基；和其中每种情况下的芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R2为芳基-氨基，选自苯基-氨基；其中每种情况下的芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R2为芳基-氨基-羰基，其中芳基选自苯基；和其中每种情况下的芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R2为芳基-氨基-羰基，选自苯基-氨基-羰基；其中每种情况下的芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，
R2为杂环基，选自1,2,3,6-四氢吡啶基、1,3-苯并二氧杂环戊烯基(benzodioxolyl)或2,3-二氢-1,4-苯并二氧杂环己烯基(benzodioxinyl)；其中每种情况下的杂环基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R2为杂环基，选自1,2,3,6-四氢吡啶-4-基、1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基或2,3-二氢-1,4-苯并二氧杂环己烯-6-基；其中每种情况下的杂环基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R2为杂芳基，选自噻吩基、1H-吡唑基、1H-咪唑基、1,3-噻唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、1H-吲哚基、2H-吲哚基、1H-吲唑基、2H-吲唑基、吲嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、1H-苯并咪唑基、1,3-苯并噻唑基、1,3-苯并噁唑基、9H-嘌呤基、呋喃并[3,2-b]吡啶基、呋喃并[3,2-c]吡啶基、呋喃并[2,3-c]吡啶基、噻吩并[3,2-c]吡啶基、噻吩并[2,3-d]嘧啶基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、吡咯并[1,2-a]嘧啶基、吡咯并[1,2-a]吡嗪基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡嗪基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-c]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑基、咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑基、[1,3]噁唑并[4,5-b]吡啶基或喹喔啉基；其中每种情况下的杂芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R2为杂芳基，选自噻吩-2-基、噻吩-3-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、1H-吡唑-5-基、1H-咪唑-1-基、1H-咪唑-4-基、1,3-噻唑-2-基、1,2,4-噁二唑-3-基、1,3,4-噁二唑-2-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、嘧啶-4-基、1H-吲哚-3-基、1H-吲哚-4-基、1H-吲哚-5-基、1H-吲哚-6-基、1H-吲唑-5-基、2H-吲唑-5-基、吲嗪-2-基、苯并呋喃-2-基、苯并呋喃-5-基、苯并噻吩-2-基、苯并噻吩-3-基、1H-苯并咪唑-2-基、1H-苯并咪唑-6-基、1,3-苯并噁唑-2-基、1,3-苯并噁唑-5-基、1,3-苯并噁唑-6-基、1,3-苯并噻唑-2-基、1,3-苯并噻唑-5-基、1,3-苯并噻唑-6-基、9H-嘌呤-8-基、呋喃并[3,2-b]吡啶-2-基、呋喃并[3,2-c]吡啶-2-基、呋喃并[2,3-c]吡啶-2-基、噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基、噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基、吡咯并[1,2-a]嘧啶-7-基、吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基、吡咯并[1,2-b]哒嗪-2-基、吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基、吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基、咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基、咪唑并[1,2-a]嘧啶-6-基、咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-基、咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-基、咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基、咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑-6-基、[1,3]噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基或喹喔啉-2-基；其中每种情况下的杂芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R2为取代的杂芳基，选自4-甲基噻吩-2-基、1-甲基-1H-吡唑-3-基、4-甲基-1H-吡唑-3-基、1-苯基-1H-吡唑-3-基、1-苯基-1H-咪唑-4-基、2-甲基-1-(吡啶-2-基)-1H-咪唑-4-基、4-甲基-1,3-噻唑-2-基、4-(三氟甲基)-1,3-噻唑-2-基、4-苯基-1,3-噻唑-2-基、5-苯基-1,2,4-噁二唑-3-基、3-氟吡啶-4-基、6-氟吡啶-2-基、2-氯吡啶-4-基、4-氯吡啶-3-基、5-氯吡啶-2-基、6-甲基吡啶-3-基、2-(三氟甲基)吡啶-3-基、4-(三氟甲基)吡啶-2-基、6-(三氟甲基)吡啶-2-基、2-甲氧基吡啶-4-基、4-甲氧基吡啶-3-基、6-甲氧基吡啶-2-基、2-乙氧基吡啶-3-基、6-乙氧基吡啶-2-基、6-(丙烷-2-基氧基)吡啶-2-基、6-(二甲基氨基)吡啶-3-基、6-(甲基硫烷基)吡啶-2-基、6-(环丁基氧基)吡啶-2-基、6-(吡咯烷-1-基)吡啶-2-基、2-甲基嘧啶-4-基、2-(丙烷-2-基)嘧啶-4-基、2-环丙基嘧啶-4-基、1-甲基-1H-吲哚-3-基、2-甲基-2H-吲唑-5-基、2-甲基-1-苯并呋喃-5-基、1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基、4-甲基-1H-苯并咪唑-2-基、5-氟-1H-苯并咪唑-2-基、4-氟-1,3-苯并噁唑-2-基、5-氟-1,3-苯并噁唑-2-基、4-氯-1,3-苯并噁唑-2-基、4-碘-1,3-苯并噁唑-2-基、2-甲基-1,3-苯并噁唑-6-基、4-甲基-1,3-苯并噁唑-2-基、4-(三氟甲基)-1,3-苯并噁唑-2-基、7-(三氟甲基)-1,3-苯并噁唑-2-基、2-甲基-1,3-苯并噻唑-2-基、2-甲基-1,3-苯并噻唑-5-基、2-甲基-1,3-苯并噻唑-6-基、4-氯-1,3-苯并噻唑-2-基、7-氯-1,3-苯并噻唑-2-基、4-(三氟甲基)-1,3-苯并噻唑-2-基、5-甲基呋喃并[3,2-b]吡啶-2-基、4,6-二甲基呋喃并[3,2-c]吡啶-2-基、5,7-二甲基呋喃并[2,3-c]吡啶-2-基、4,6-二甲基噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基、2,4-二甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-基、1-甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基、3-甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基、1,3-二甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基、2-甲基吡咯并[1,2-b]哒嗪-2-基、4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基、5-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基、4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基、2-氯咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基、2-甲基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基、3-甲基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基、2-乙基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基、2-甲基咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑-6-基、6-氰基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基(也称为2-咪唑并[1,2-a]吡啶-6-腈)、6-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、6,8-二氟咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、6-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、7-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、7-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-乙基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、7-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、6-氟-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-氟-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-氯-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、6-甲基-8-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、2,3-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、2-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、8-氯-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、8-氟-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、6-氟咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基、6-氯咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基、6-甲基咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基、7-甲基咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基、2-甲基咪唑并[1,2-a]嘧啶-6-基、6-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-基、2-甲基-3-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基、6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、8-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、6-氯-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、6-甲基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、8-(甲基硫烷基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、2-甲基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基、3-甲基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基或2-甲基咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑-6-基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R2为杂芳基，选自噻吩基、1H-吡唑基、1H-咪唑基、1,3-噻唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、1H-吲哚基、2H-吲哚基、1H-吲唑基、2H-吲唑基、吲嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、1H-苯并咪唑基、1,3-苯并噻唑基、1,3-苯并噁唑基、9H-嘌呤基；其中每种情况下的杂芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R2为杂芳基，选自呋喃并[3,2-b]吡啶基、呋喃并[3,2-c]吡啶基、呋喃并[2,3-c]吡啶基、噻吩并[3,2-c]吡啶基、噻吩并[2,3-d]嘧啶基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、吡咯并[1,2-a]嘧啶基、吡咯并[1,2-a]吡嗪基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡嗪基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-c]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑基、咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑基、[1,3]噁唑并[4,5-b]吡啶基或喹喔啉基；其中每种情况下的杂芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R2为杂芳基-氨基，其中杂芳基选自吡啶基或嘧啶基；和其中每种情况下的杂芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R2为杂芳基-氨基，选自吡啶-2-基-氨基、吡啶-3-基-氨基或嘧啶-2-基-氨基；其中每种情况下的杂芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R6选自卤素、羟基、氰基、硝基、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫基；其中卤素或卤代选自氟、氯、溴或碘。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R6为C1-8烷基，选自甲基、乙基、丙基、异丙基或叔-丁基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R6为C1-8烷基，选自乙基、丙基、异丙基或叔-丁基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R6为C2-8链烯基，选自乙烯基烯丙基或丁-1,3-二烯基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R6为C2-8链烯基，选自乙烯基或烯丙基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R6为卤代-C1-8烷基，选自三卤代-甲基、二卤代-甲基、卤代-甲基、三卤代-乙基、二卤代-乙基、卤代-乙基、三卤代-丙基、二卤代-丙基或卤代-丙基；其中卤素选自氟、氯、溴或碘。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，R6为羟基-C1-8烷基，选自羟基-甲基、羟基-乙基、羟基-丙基、二羟基-丙基、羟基-丁基或二羟基-丁基。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，R6为羟基-C1-8烷基，选自羟基-甲基,二羟基-丙基、羟基-丁基或二羟基-丁基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R6为C1-8烷氧基，选自甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R6为卤代-C1-8烷氧基，选自三卤代-甲氧基、二卤代-甲氧基、卤代-甲氧基、三卤代-乙氧基、二卤代-乙氧基、卤代-乙氧基、三卤代-丙氧基、二卤代-丙氧基或卤代-丙氧基；其中卤素选自氟、氯、溴或碘。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R7为C3-14环烷基、C3-14环烷基-氧基、芳基、杂环基或杂芳基；其中C3-14环烷基选自环丙基或环丁氧基(cyclobutoxy)；其中芳基选自苯基；其中杂环基选自氧杂环丁烷基、吡咯烷基或1,2,3,6-四氢吡啶基；和其中杂芳基选自噻吩基或吡啶基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R7为C3-14环烷基或C3-14环烷基-氧基，其中每种情况下的C3-14环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R7为C3-8环烷基或C3-8环烷基-氧基，其中每种情况下的C3-8环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R7为芳基，选自苯基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R7为杂环基，选自氧杂环丁烷基、吡咯烷基或1,2,3,6-四氢吡啶基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R7为杂环基，选自氧杂环丁烷-3-基、吡咯烷-1-基或1,2,3,6-四氢吡啶-4-基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R7为杂芳基，选自噻吩基或吡啶基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R7为杂芳基，选自吡啶基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R7为杂芳基，选自噻吩-2-基或吡啶-2-基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R7为杂芳基，选自吡啶-2-基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，Rc选自氢或C1-8烷基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1为杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基,(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中每种情况下的杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基任选地被R3和R4取代基取代；和
其中，杂环基选自氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,2,5,6-四氢吡啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、八氢-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶基、八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aR,7aR)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aS,7aS)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(2H)-酮、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(7R,8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1R,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基、(1R,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、1,4-二氮杂双环[3.2.2]壬基、氮杂螺[3.3]庚基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚基、2,7-二氮杂螺[3.5]壬基、5,8-二氮杂螺[3.5]壬基、2,7-二氮杂螺[4.4]壬基或6,9-二氮杂螺[4.5]癸基。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，
R2为芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基；
其中芳基为苯基；
其中，杂环基选自1,2,3,6-四氢吡啶基、1,3-苯并二氧杂环戊烯基或2,3-二氢-1,4-苯并二氧杂环己烯基；
其中杂芳基选自噻吩基、1H-吡唑基、1H-咪唑基、1,3-噻唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、1H-吲哚基、2H-吲哚基、1H-吲唑基、2H-吲唑基、吲嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、1H-苯并咪唑基、1,3-苯并噻唑基、1,3-苯并噁唑基、9H-嘌呤基、呋喃并[3,2-b]吡啶基、呋喃并[3,2-c]吡啶基、呋喃并[2,3-c]吡啶基、噻吩并[3,2-c]吡啶基、噻吩并[2,3-d]嘧啶基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、吡咯并[1,2-a]嘧啶基、吡咯并[1,2-a]吡嗪基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡嗪基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-c]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑基、咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑基、[1,3]噁唑并[4,5-b]吡啶基或喹喔啉基；和其中每种情况下的芳基、杂环基和杂芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，
R1为杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基,(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；
其中杂环基选自氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,2,5,6-四氢吡啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、八氢-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶基、八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aR,7aR)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aS,7aS)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(2H)-酮、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(7R,8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1R,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基、(1R,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、1,4-二氮杂双环[3.2.2]壬基、氮杂螺[3.3]庚基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚基、2,7-二氮杂螺[3.5]壬基、5,8-二氮杂螺[3.5]壬基、2,7-二氮杂螺[4.4]壬基或6,9-二氮杂螺[4.5]癸基；和其中每种情况下的杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基任选地被R3和R4取代基取代；和
R2为芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基；
其中，杂环基选自1,2,3,6-四氢吡啶-4-基、1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基或2,3-二氢-1,4-苯并二氧杂环己烯-6-基；
其中，杂芳基选自噻吩基、1H-吡唑基、1H-咪唑基、1,3-噻唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、1H-吲哚基、2H-吲哚基、1H-吲唑基、2H-吲唑基、吲嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、1H-苯并咪唑基、1,3-苯并噻唑基、1,3-苯并噁唑基、9H-嘌呤基、呋喃并[3,2-b]吡啶基、呋喃并[3,2-c]吡啶基、呋喃并[2,3-c]吡啶基、噻吩并[3,2-c]吡啶基、噻吩并[2,3-d]嘧啶基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、吡咯并[1,2-a]嘧啶基、吡咯并[1,2-a]吡嗪基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡嗪基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-c]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑基、咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑基、[1,3]噁唑并[4,5-b]吡啶基或喹喔啉基；和其中每种情况下的杂环基和杂芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，
R1为C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、(氨基-C1-8烷基)2-氨基、(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、氨基-C2-8烯基、C1-8烷基-氨基-C2-8烯基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基、氨基-C2-8炔基、C1-8烷基-氨基-C2-8炔基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基、卤代-C1-8烷基-氨基、(卤代-C1-8烷基)2-氨基、(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基、[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基或[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基；和
R2为芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中每种情况下的芳基、杂环基和杂芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，
R1为杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中每种情况下的杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基任选地任选地被R3和R4取代基取代；和
R2为芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中每种情况下的芳基、杂环基和杂芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，
R1为杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基或杂环基-羰基-氧基；其中每种情况下的杂环基任选地被R3和R4取代基取代；和
R2为芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中每种情况下的芳基、杂环基和杂芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，
R1为杂环基，任选地被R3和R4取代基取代；和
R2为芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，每种情况下的芳基、杂环基和杂芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，
R1为C3-14环烷基任选地被R3和R4取代基取代；和
R2为芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，每种情况下的芳基、杂环基和杂芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，
R1为芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中每种情况下的芳基任选地被R3和R4取代基取代；和
R2为芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，每种情况下的芳基、杂环基和杂芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，
R1为芳基-C1-8烷基-氨基，任选地被R3和R4取代基取代；和
R2为芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，每种情况下的芳基、杂环基和杂芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，
R1为杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中每种情况下的杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基任选地被R3和R4取代基取代；和
R2为芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，每种情况下的芳基、杂环基和杂芳基任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，
R1为杂芳基，任选地被R3和R4取代基取代；和
R2为芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，每种情况下的芳基、杂环基和杂芳基任选地被R6和R7取代基取代。
式(I)的化合物的一个实施方式是选自下述的化合物：式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VII)、式(VIII)、式(IX)、式(X)、式(XI)、式(XII)、式(XIII)或式(XIV)：
或其形式。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，w3为C-R1,w6为C-R2，w1、w4、w5和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb或N。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1，w1、w4、w5和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w1、w3和w5独立地为C-Ra or N,w2为C-Rb或N且w6为C-Rc为N。
在式(I)的化合物的另一个实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w1、w3和w5独立地为C-Ra or N,w2为C-Rb或N且w6为C-Rc为N。
在式(II)的化合物的一个实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2，w4、w5和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(II)的化合物的另一个实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1，w4、w5和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(II)的化合物的另一个实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w3和w5独立地为C-Ra或N，w2为C-Rb或N且w6为C-Rc为N。
在式(II)的化合物的另一个实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w3和w5独立地为C-Ra或N，w2为C-Rb或N且w6为C-Rc为N。
在式(III)的化合物的一个实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2且w1、w4、w5和w7独立地为C-Ra为N。
在式(III)的化合物的另一个实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1且w1、w4、w5和w7独立地为C-Ra为N。
在式(III)的化合物的另一个实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w1、w3和w5独立地为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(III)的化合物的另一个实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w1、w3和w5独立地为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。，w1和
在式(IV)的化合物的一个实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w1和w5独立地为C-Ra或N，w2为C-Rb或N且w6为C-Rc为N。
在式(IV)的化合物的另一个实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w1和w5独立地为C-Ra或N，w2为C-Rb或N且w6为C-Rc为N。
在式(V)的化合物的一个实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2,w1,w5和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(V)的化合物的另一个实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1，w1、w5和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(VI)的化合物的一个实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2，w1、w4和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(VI)的化合物的另一个实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1，w1、w4和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(VI)的化合物的另一个实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w1和w3独立地为C-Ra或N，w2为C-Rb或N且w6为C-Rc为N。
在式(VI)的化合物的另一个实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w1和w3独立地为C-Ra或N，w2为C-Rb或N且w6为C-Rc为N。
在式(VII)的化合物的另一个实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w1、w3和w5 are C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(VII)的化合物的另一个实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w1、w3和w5 are C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(VIII)的化合物的另一个实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2，w1、w4和w5为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(VIII)的化合物的另一个实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1，w1、w4和w5为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(IX)的化合物的一个实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2，w4和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(IX)的化合物的另一个实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1，w4和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(IX)的化合物的另一个实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w2为C-Rb或N，w3为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(IX)的化合物的另一个实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w2为C-Rb或N，w3为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(X)的化合物的一个实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2，w2为C-Rb或N且w5和w7独立地为C-Ra为N。
在式(X)的化合物的另一个实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1，w2为C-Rb或N且w5和w7独立地为C-Ra为N。
在式(XI)的化合物的一个实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w2为C-Rb或N，w5为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(XI)的化合物的另一个实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w2为C-Rb或N，w5为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(XII)的化合物的一个实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2且w4、w5和w7独立地为C-Ra为N。
在式(XII)的化合物的另一个实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1且w4、w5和w7独立地为C-Ra为N。
在式(XII)的化合物的另一个实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w3和w5独立地为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(XII)的化合物的另一个实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w3和w5独立地为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(XIII)的化合物的一个实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2，w2为C-Rb或N且w4和w5独立地为C-Ra为N。
在式(XIII)的化合物的另一个实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1，w2为C-Rb或N且w4和w5独立地为C-Ra为N。
在式(XIV)的化合物的一个实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w2为C-Rb或N且w3和w5独立地为C-Ra为N。
在式(XIV)的化合物的另一个实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w2为C-Rb或N且w3和w5独立地为C-Ra为N。
式(I)的化合物的另一个实施方式选自下述化合物：式(II)、式(III)、式(IX)、式(XI)或式(XII)：
或其形式。
式(I)的化合物的另一个实施方式是式(II)的化合物∶
或其形式。
式(I)的化合物的另一个实施方式是式(III)的化合物∶
或其形式。
式(I)的化合物的另一个实施方式是式(IV)的化合物∶
或其形式。
式(I)的化合物的另一个实施方式是式(V)的化合物∶
或其形式。
式(I)的化合物的另一个实施方式是式(VI)的化合物∶
或其形式。
式(I)的化合物的另一个实施方式是式(VII)的化合物∶
或其形式。
式(I)的化合物的另一个实施方式是式(VIII)的化合物∶
或其形式。
式(I)的化合物的另一个实施方式是式(IX)的化合物∶
或其形式。
式(I)的化合物的另一个实施方式是式(X)的化合物∶
或其形式。
式(I)的化合物的另一个实施方式是式(XI)的化合物∶
或其形式。
式(I)的化合物的另一个实施方式是式(XII)的化合物∶
或其形式。
式(I)的化合物的另一个实施方式是式(XIII)的化合物∶
或其形式。
式(I)的化合物的另一个实施方式是式(XIV)的化合物∶
或其形式。
式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VII)、式(VIII)、式(IX)、式(X)、式(XI)、式(XII)、式(XIII)或式(XIV)的化合物的一个实施方式分别为选自式(Ia)、式(IIa)、式(IIIa)、式(IVa)、式(Va)、式(VIa)、式(VIIa)、式(VIIIa)、式(IXa)、式(Xa)、式(XIa)、式(XIIa)、式(XIIIa)或式(XIVa)的化合物。
或其形式。
在式(Ia)的化合物的一个实施方式中，w3、w4、w6和w7中一个为C-R1且w3、w4、w6和w7中另一个为C-R2，条件是
当w3为C-R1时，则w6为C-R2且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w3为C-R2时，则w6为C-R1且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w4为C-R1时，则w7为C-R2且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc或N；或
当w4为C-R2时，则w7为C-R1且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(IIa)的化合物的一个实施方式中，w3、w4、w6和w7中一个为C-R1且w3、w4、w6和w7中另一个为C-R2，条件是
当w3为C-R1时，则w6为C-R2且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w3为C-R2时，则w6为C-R1且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w4为C-R1时，则w7为C-R2且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc或N；或
当w4为C-R2时，则w7为C-R1且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(IIIa)的化合物的一个实施方式中，w3、w4、w6和w7中一个为C-R1且w3、w4、w6和w7中另一个为C-R2，条件是
当w3为C-R1时，则w6为C-R2且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w3为C-R2时，则w6为C-R1且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w4为C-R1时，则w7为C-R2and w3为C-Ra或N且w6为C-Rc或N；或
当w4为C-R2时，则w7为C-R1且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(IVa)的化合物的一个实施方式中，w4和w7中一个为C-R1且另一个为C-R2，条件是，当w4为C-R1时，则w7为C-R2；或，当w4为C-R2时，则w7为C-R1。
在式(Va)的化合物的一个实施方式中，w3和w6中一个为为C-R1且另一个为C-R2，条件是，当w3为C-R1时，则w6为C-R2；或，当w3为C-R2时，则w6为C-R1。
在式(VIa)的化合物的一个实施方式中，w3、w4、w6和w7中一个为C-R1且w3、w4、w6和w7中另一个为C-R2，条件是
当w3为C-R1时，则w6为C-R2且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w3为C-R2时，则w6为C-R1且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w4为C-R1时，则w7为C-R2且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc或N；或
当w4为C-R2时，则w7为C-R1且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(VIIa)的化合物的一个实施方式中，w4和w7中一个为C-R1且另一个为C-R2，条件是，当w4为C-R1时，则w7为C-R2；或，当w4为C-R2时，则w7为C-R1。
在式(VIIIa)的化合物的一个实施方式中，w3和w6中一个为C-R1且另一个为C-R2，条件是，当w3为C-R1时，则w6为C-R2；或，当w3为C-R2时，则w6为C-R1。
在式(IXa)的化合物的一个实施方式中，w3、w4、w6和w7中一个为C-R1且w3、w4、w6和w7中另一个为C-R2，条件是
当w3为C-R1时，则w6为C-R2且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w3为C-R2时，则w6为C-R1且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w4为C-R1时，则w7为C-R2且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc或N；或
当w4为C-R2时，则w7为C-R1且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(Xa)的化合物的一个实施方式中，w3和w6中一个为C-R1且另一个为C-R2，条件是，当w3为C-R1时，则w6为C-R2；或，当w3为C-R2时，则w6为C-R1。
在式(XIa)的化合物的一个实施方式中，w4和w7中一个为C-R1且另一个为C-R2，条件是，当w4为C-R1时，则w7为C-R2；或，当w4为C-R2时，则w7为C-R1。
在式(XIIa)的化合物的一个实施方式中，w3、w4、w6和w7中一个为C-R1且w3、w4、w6和w7中另一个为C-R2，条件是
当w3为C-R1时，则w6为C-R2且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w3为C-R2时，则w6为C-R1且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w4为C-R1时，则w7为C-R2且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc或N；或
当w4为C-R2时，则w7为C-R1且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(XIIIa)的化合物的一个实施方式中，w3和w6中一个为C-R1且另一个为C-R2，条件是，当w3为C-R1时，则w6为C-R2；或，当w3为C-R2时，则w6为C-R1。
在式(XIVa)的化合物的一个实施方式中，w4和w7中一个为C-R1且另一个为C-R2，条件是，当w4为C-R1时，则w7为C-R2；或，当w4为C-R2时，则w7为C-R1。
式(I)、式(II)、式(III)、式(IX)、式(XI)或式(XII)的化合物的一个实施方式分别为选自下述的化合物：式(Ia)、式(IIa)、式(IIIa)、式(IXa)、式(XIa)或式(XIIa)：
或其形式。
式(I)的化合物的另一个实施方式是式(Ia)的化合物∶
或其形式。
式(II)的化合物的另一个实施方式是式(IIa)的化合物∶
或其形式。
式(III)的化合物的另一个实施方式是式(IIIa)的化合物∶
或其形式。
式(IV)的化合物的另一个实施方式是式(IVa)的化合物∶
或其形式。
式(V)的化合物的另一个实施方式是式(Va)的化合物∶
或其形式。
式(VI)的化合物的另一个实施方式是式(VIa)的化合物∶
或其形式。
式(VII)的化合物的另一个实施方式是式(VIIa)的化合物∶
或其形式。
式(VIII)的化合物的另一个实施方式是式(VIIIa)的化合物∶
或其形式。
式(IX)的化合物的另一个实施方式是式(IXa)的化合物∶
或其形式。
式(X)的化合物的另一个实施方式是式(Xa)的化合物∶
或其形式。
式(XI)的化合物的另一个实施方式是式(XIa)的化合物∶
或其形式。
式(XII)的化合物的另一个实施方式是式(XIIa)的化合物∶
或其形式。
式(XIII)的化合物的另一个实施方式是式(XIIIa)的化合物∶
或其形式。
式(XIV)的化合物的另一个实施方式是式(XIVa)的化合物∶
或其形式。
式(Ia)的化合物的一个实施方式是式(Ia1)、式(Ia2)、式(Ia3)或式(Ia4)的化合物∶
或其形式。
式(IIa)的化合物的一个实施方式是式(IIa1)、式(IIa2)、式(IIa3)或式(IIa4)的化合物∶
或其形式。
式(IIIa)的化合物的一个实施方式是式(IIIa1)、式(IIIa2)、式(IIIa3)或式(IIIa4)的化合物∶
或其形式。
式(IVa)的化合物的一个实施方式包括式(IVa1)或式(IVa2)的化合物：
或其形式。
式(Va)的化合物的一个实施方式是式(Va1)或式(Va2)的化合物：
或其形式。
式(VIa)的化合物的一个实施方式是式(VIa1)、式(VIa2)、式(VIa3)或式(VIa4)的化合物∶
或其形式。
式(VIIa)的化合物的一个实施方式包括式(VIIa1)或式(VIIa2)的化合物：
或其形式。
式(VIIIa)的化合物的一个实施方式是式(VIIIa1)或式(VIIIa2)的化合物：
或其形式。
式(IXa)的化合物的一个实施方式是式(IXa1)、式(IXa2)、式(IXa3)或式(IXa4)的化合物∶
或其形式。
式(Xa)的化合物的一个实施方式是式(Xa1)或式(Xa2)的化合物：
或其形式。
式(XIa)的化合物的一个实施方式是式(XIa1)或式(XIa2)的化合物：
或其形式。
式(XIIa)的化合物的一个实施方式是式(XIIa1)、式(XIIa2)、式(XIIa3)或式(XIIa4)的化合物∶
或其形式。
式(XIIIa)的化合物的一个实施方式是式(XIIIa1)或式(XIIIa2)的化合物：
或其形式。
式(XIVa)的化合物的一个实施方式是式(XIVa1)或式(XIVa2)的化合物：
或其形式。
式(1a)的化合物的一个实施方式是式(Ia1)的化合物∶
或其形式。
式(1a)的化合物的一个实施方式是式(Ia2)的化合物∶
或其形式。
式(1a)的化合物的一个实施方式是式(Ia3)的化合物∶
或其形式。
式(1a)的化合物的一个实施方式是式(Ia4)的化合物∶
或其形式。
式(IIa)的化合物的一个实施方式是式(IIa1)的化合物∶
或其形式。
式(IIa)的化合物的一个实施方式是式(IIa2)的化合物∶
或其形式。
式(IIa)的化合物的一个实施方式是式(IIa3)的化合物∶
或其形式。
式(IIa)的化合物的一个实施方式是式(IIa4)的化合物∶
或其形式。
式(IIIa)的化合物的一个实施方式是式(IIIa1)的化合物∶
或其形式。
式(IIIa)的化合物的一个实施方式是式(IIIa2)的化合物∶
或其形式。
式(IIIa)的化合物的一个实施方式是式(IIIa3)的化合物∶
或其形式。
式(IIIa)的化合物的一个实施方式是式(IIIa4)的化合物∶
或其形式。
式(IVa)的化合物的一个实施方式是式(IVa1)的化合物∶
或其形式。
式(IVa)的化合物的一个实施方式是式(IVa2)的化合物∶
或其形式。
式(Va)的化合物的一个实施方式是式(Va1)的化合物∶
或其形式。
式(Va)的化合物的一个实施方式是式(Va2)的化合物∶
或其形式。
式(VIa)的化合物的一个实施方式是式(VIa1)的化合物∶
或其形式。
式(VIa)的化合物的一个实施方式是式(VIa2)的化合物∶
或其形式。
式(VIa)的化合物的一个实施方式是式(VIa3)的化合物∶
或其形式。
式(VIa)的化合物的一个实施方式是式(VIa4)的化合物∶
或其形式。
式(VIIa)的化合物的一个实施方式是式(VIIa1)的化合物∶
或其形式。
式(VIIa)的化合物的一个实施方式是式(VIIa2)的化合物∶
或其形式。
式(VIIIa)的化合物的一个实施方式是式(VIIIa1)的化合物∶
或其形式。
式(VIIIa)的化合物的一个实施方式是式(VIIIa2)的化合物∶
或其形式。
式(IXa)的化合物的一个实施方式是式(IXa1)的化合物∶
或其形式。
式(IXa)的化合物的一个实施方式是式(IXa2)的化合物∶
或其形式。
式(IXa)的化合物的一个实施方式是式(IXa3)的化合物∶
或其形式。
式(IXa)的化合物的一个实施方式是式(IXa4)的化合物∶
或其形式。
式(Xa)的化合物的一个实施方式是式(Xa1)的化合物∶
或其形式。
式(Xa)的化合物的一个实施方式是式(Xa2)的化合物∶
或其形式。
式(XIa)的化合物的一个实施方式是式(XIa1)的化合物∶
或其形式。
式(XIa)的化合物的一个实施方式是式(XIa2)的化合物∶
或其形式。
式(XIIa)的化合物的一个实施方式是式(XIIa1)的化合物∶
或其形式。
式(XIIa)的化合物的一个实施方式是式(XIIa2)的化合物∶
或其形式。
式(XIIa)的化合物的一个实施方式是式(XIIa3)的化合物∶
或其形式。
式(XIIa)的化合物的一个实施方式是式(XIIa4)的化合物∶
或其形式。
式(XIIIa)的化合物的一个实施方式是式(XIIIa1)的化合物∶
或其形式。
式(XIIIa)的化合物的一个实施方式是式(XIIIa2)的化合物∶
或其形式。
式(XIVa)的化合物的一个实施方式是式(XIVa1)的化合物∶
或其形式。
式(XIVa)的化合物的一个实施方式是式(XIVa2)的化合物∶
或其形式。
在式(I)的化合物的一个实施方式中，所述化合物选自∶
或其形式。
术语
除非另外特别地定义，否则本领域普通技术人员应当理解，上文和整个本文说明书中使用的化学术语具有下述指定的含义。
如本文使用的术语“C1-8烷基”一般指在直链或支链构型中具有1至8个碳原子的饱和烃基团，包括、但不限于甲基、乙基、正-丙基(也称为丙基或丙烷基)、异丙基、n-丁基(也称为丁基或丁烷基)、异丁基、仲-丁基、叔-丁基、正-戊基(也称为戊基或戊烷基)、正-己基(也称为己基或己烷基)、正-庚基(也称为庚基或庚烷基)、正-辛基等。在某些实施方式中，C1-8烷基包括但不限于C1-6烷基、C1-4烷基等。C1-8烷基基团任选地被如本文所述的取代基种类所取代(在可用化合价允许的情况下)。
如本文使用的术语“C2-8链烯基”一般指在直链支链构型中具有2至8个碳原子和其中一个或多个碳-碳双键的部分不饱和烃基团，包括，但不限于乙烯基(ethenyl)(也称为乙烯基(vinyl))、烯丙基、丙烯基等。在某些实施方式中，C2-8链烯基包括，但不限于C2-6链烯基、C2-4链烯基等。C2-8链烯基基团任选地被如本文所述的取代基种类所取代(在可用化合价允许的情况下)。
如本文使用的术语“C2-8炔基"一般指在直链支链构型中具有2至8个碳原子和其中一个或多个碳-碳三键的部分不饱和烃基团，包括，但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基等。在某些实施方式中，C2-8炔基包括，但不限于C2-6炔基、C2-4炔基等。C2-8炔基基团任选地被如本文所述的取代基种类所取代(在可用化合价允许的情况下)。
如本文使用的术语“C1-8烷氧基”一般指在直链或支链构型中具有1至8个碳原子的饱和烃基团，其具有式∶-O-C1-8烷基，包括但不限于甲氧基、乙氧基、正-丙氧基、异丙氧基、正-丁氧基、异丁氧基、仲-丁氧基、叔-丁氧基、正-戊氧基、正-己氧基等。在某些实施方式中，C1-8烷氧基包括，但不限于C1-6烷氧基、C1-4烷氧基等。C1-8烷氧基基团任选地被如本文所述的取代基种类所取代(当可用化合价允许的情况下)。
如本文使用的术语“C3-14环烷基”一般指饱和的或部分不饱和的单环、二环或多环烃基团，包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、环庚基、环辛基、1H-茚满基、茚基、四氢-萘基等。在某些实施方式中，C3-14环烷基包括，但不限于C3-8环烷基、C5-8环烷基、C3-10环烷基等。C3-14环烷基基团任选地被如本文所述的取代基种类所取代(当可用化合价允许的情况下)。
如本文使用的术语“芳基”一般指单环、二环或多环芳碳原子环结构基团，包括但不限于苯基、萘基、蒽基、芴基、薁基、菲基等。芳基任选地被如本文所述的取代基种类所取代(当可用化合价允许的情况下)。
如本文使用的术语“杂芳基”一般指单环、二环或多环芳碳原子环结构基团，其中在结构稳定性允许的情况下，一个或多个碳原子环成员已经被一个或多个杂原子(例如O、S或N原子)取代，包括但不限于，呋喃基(furanyl)(呋喃基(furyl))、噻吩基(也称为硫代苯基)、吡咯基、2H-吡咯基、3H-吡咯基、吡唑基、1H-吡唑基、咪唑基、1H-咪唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁唑基、1,3-噻唑基、三唑基(例如1H-1,2,3-三唑基等)、噁二唑基(例如1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基等)、噻二唑基、四唑基(例如1H-四唑基、2H-四唑基等)、吡啶基(也称为吡啶基)、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、吲哚基、1H-吲哚基、吲唑基、1H-吲唑基、2H-吲唑基、吲嗪基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基(也称为苯并硫代苯基)、苯并咪唑基、1H-苯并咪唑基、1,3-苯并噻唑基、1,3-苯并噁唑基(benzotxazolyl)(也称为1,3-苯并噁唑基(benzooxazolyl))、嘌呤基、9H-嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、1,3-二嗪基、1,2-二嗪基、1,2-二唑基、1,4-二氮杂萘基、吖啶基、呋喃并[3,2-b]吡啶基、呋喃并[3,2-c]吡啶基、呋喃并[2,3-c]吡啶基、6H-噻吩并[2,3-b]吡咯基、噻吩并[3,2-c]吡啶基、噻吩并[2,3-d]嘧啶基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、1H-吡咯并[3,2-b]吡啶基、吡咯并[1,2-a]吡嗪基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡嗪基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、3H-咪唑并[4,5-b]吡啶基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-c]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑基、咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑基、[1,2,4]三唑[1,5-a]吡啶基、[1,2,4]三唑[4,3-a]吡啶基等。在可用化合价允许的情况下，杂芳基基团在碳或氮原子环成员上任选地被如本文所述的取代基种类取代。
如本文使用的术语“杂环基”一般指饱和的或部分不饱和的单环、二环或多环碳原子环结构基团，其中在结构稳定性允许的情况下，一个或多个碳原子环成员已经被杂原子例如O、S或N原子取代，包括但不限于环氧乙烷基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯啉基、吡咯烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噁唑啉基、异噁唑烷基、异噻唑啉基、异噻唑烷基、噁唑啉基、噁唑烷基、噻唑啉基、噻唑烷基、三唑啉基、三唑烷基、噁二唑啉基、噁二唑烷基、噻二唑啉基、噻二唑烷基、四唑啉基、四唑烷基、吡喃基、二氢-2H-吡喃基、噻喃基、1,3-二噁烷基、1,2,5,6-四氢吡啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,3-苯并二氧杂环戊烯基(也称为苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯基)、1,4-苯并二噁烷基、2,3-二氢-1,4-苯并二氧杂环己烯基(也称为2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯基)、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、八氢-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶基、八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aR,7aR)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aS,7aS)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(7R,8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(2H)-酮、八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1R,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基、(1R,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、1,4-二氮杂双环[3.2.2]壬基、氮杂螺[3.3]庚基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚基、2,7-二氮杂螺[3.5]壬基、5,8-二氮杂螺[3.5]壬基、2,7-二氮杂螺[4.4]壬基、6,9-二氮杂螺[4.5]癸基等。在可用化合价允许的情况下，杂环基基团在碳或氮原子环成员上任选地被如本文所述的取代基种类取代。
如本文使用的术语“C1-8烷氧基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-O-C1-8烷基。
如本文使用的术语“C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基”指下式的基团：-NH-C1-8烷基-O-C1-8烷基。
如本文使用的术语“(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基-O-C1-8烷基)2.
如本文使用的术语“C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基”指下式的基团：-O-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-O-C1-8烷基。
如本文使用的术语“(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基”指下式的基团：-O-C1-8烷基-N(C1-8烷基-O-C1-8烷基)2.
如本文使用的术语“(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基”指下式的基团：-O-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-O-C1-8烷基).
如本文使用的术语“C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-O-C1-8烷基。
如本文使用的术语“(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-N(C1-8烷基-O-C1-8烷基)2.
如本文使用的术语“(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-O-C1-8烷基).
如本文使用的术语“C1-8烷氧基-羰基”指下式的基团：-C(O)-O-C1-8烷基。
如本文使用的术语“C1-8烷氧基-羰基-C2-8链烯基”指下式的基团：-C2-8链烯基-C(O)-O-C1-8烷基。
如本文使用的术语“C1-8烷氧基-羰基-氨基”指下式的基团：-NH-C(O)-O-C1-8烷基。
如本文使用的术语“C1-8烷基-氨基”指下式的基团：-NH-C1-8烷基。
如本文使用的术语“(C1-8烷基)2-氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基)2.
如本文使用的术语“C1-8烷基-氨基-C2-8链烯基”指下式的基团：-C2-8链烯基-NH-C1-8烷基。
如本文使用的术语“(C1-8烷基)2-氨基-C2-8链烯基”指下式的基团：-C2-8链烯基-N(C1-8烷基)2。
如本文使用的术语“C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基”指下式的基团：-O-C1-8烷基-NH-C1-8烷基。
如本文使用的术语“(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基”指下式的基团：-O-C1-8烷基-N(C1-8烷基)2。
如本文使用的术语“C1-8烷基-氨基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-NH-C1-8烷基。
如本文使用的术语“(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-N(C1-8烷基)2。
如本文使用的术语“C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基”指下式的基团：-NH-C1-8烷基-NH-C1-8烷基。
如本文使用的术语“(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基”指下式的基团：-NH-C1-8烷基-N(C1-8烷基)2。
如本文使用的术语“(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基-NH-C1-8烷基)2。
如本文使用的术语“[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基]2-氨基”指下式的基团：-N[C1-8烷基-N(C1-8烷基)2]2。
如本文使用的术语“(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-NH-C1-8烷基)。
如本文使用的术语“[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基)[C1-8烷基-N(C1-8烷基)2]。
如本文使用的术语“C1-8烷基-氨基-C2-8炔基”指下式的基团：-C2-8炔基-NH-C1-8烷基。
如本文使用的术语“(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基”指下式的基团：-C2-8炔基-N(C1-8烷基)2。
如本文使用的术语“C1-8烷基-羰基”指下式的基团：-C(O)-C1-8烷基。
如本文使用的术语“C1-8烷基-羰基-氨基”指下式的基团：-NH-C(O)-C1-8烷基。
如本文使用的术语“C1-8烷基-硫代”指下式的基团：-S-C1-8烷基。
如本文使用的术语“氨基-C2-8链烯基”指下式的基团：-C2-8链烯基-NH2。
如本文使用的术语“氨基-C1-8烷氧基”指下式的基团：-O-C1-8烷基-NH2。
如本文使用的术语“氨基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-NH2。
如本文使用的术语“氨基-C1-8烷基-氨基”指下式的基团：-NH-C1-8烷基-NH2。
如本文使用的术语“(氨基-C1-8烷基)2-氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基-NH2)2。
如本文使用的术语“(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-NH2)。
如本文使用的术语“氨基-C2-8炔基”指下式的基团：-C2-8炔基-NH2。
如本文使用的术语“芳基-C1-8烷氧基-羰基”指下式的基团：-C(O)-O-C1-8烷基-芳基。
如本文使用的术语“芳基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-芳基。
如本文使用的术语“芳基-C1-8烷基-氨基”指下式的基团：-NH-C1-8烷基-芳基。
如本文使用的术语“(芳基-C1-8烷基)2-氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基-芳基)2。
如本文使用的术语“(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-芳基)。
如本文使用的术语“芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-芳基。
如本文使用的术语“(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-N(C1-8烷基-芳基)2。
如本文使用的术语“(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-芳基)。
如本文使用的术语“芳基-氨基”指下式的基团：-NH-芳基。
如本文使用的术语“芳基-氨基-羰基”指下式的基团：-C(O)-NH-芳基。
如本文使用的术语“芳基-磺酰氧基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-O-SO2-芳基。
如本文使用的术语“苯甲酰氧基-羰基”指下式的基团：-C(O)O-CH2-苯基。
如本文使用的术语“C3-14环烷基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-C3-14环烷基。
如本文使用的术语“C3-14环烷基-氨基”指下式的基团：-NH-C3-14环烷基。
如本文使用的术语“C3-14环烷基-氧基”指下式的基团：-O-C3-14环烷基。
如本文使用的术语“卤代”或“卤素”一般指卤素原子基团，包括氟、氯、溴和碘。
如本文使用的术语“卤代-C1-8烷氧基”指下式的基团：-O-C1-8烷基-卤代，其中C1-8烷基部分或完全地被一个或多个卤素原子取代(在可用化合价允许的情况下)。
如本文使用的术语“卤代-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-卤代，其中C1-8烷基部分或完全地被一个或多个卤素原子取代(在可用化合价允许的情况下)。
如本文使用的术语“卤代-C1-8烷基-氨基”指下式的基团：-NH-C1-8烷基-卤代。
如本文使用的术语“(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-卤代)。
如本文使用的术语“(卤代-C1-8烷基)2-氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基-卤代)2。
如本文使用的术语“杂芳基-C1-8烷氧基”指下式的基团：-O-C1-8烷基-杂芳基。
如本文使用的术语“杂芳基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-杂芳基。
如本文使用的术语“杂芳基-C1-8烷基-氨基”指下式的基团：-NH-C1-8烷基-杂芳基。
如本文使用的术语“(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基-杂芳基)2。
如本文使用的术语“(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-杂芳基).
如本文使用的术语“杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-杂芳基。
如本文使用的术语“(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-N(C1-8烷基-杂芳基)2。
如本文使用的术语“(杂芳基-C1-8烷基(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-杂芳基)。
如本文使用的术语“杂芳基-氨基”指下式的基团：-NH-杂芳基。
如本文使用的术语“杂环基-C1-8烷氧基”指下式的基团：-O-C1-8烷基-杂环基。
如本文使用的术语“杂环基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-杂环基。
如本文使用的术语“杂环基-C1-8烷基-氨基”指下式的基团：-NH-C1-8烷基-杂环基。
如本文使用的术语“(杂环基-C1-8烷基)2-氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基-杂环基)2.
如本文使用的术语“(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-杂环基)。
如本文使用的术语“杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-杂环基。
如本文使用的术语“(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-N(C1-8烷基-杂环基)2。
如本文使用的术语“(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-杂环基)。
如本文使用的术语“杂环基-氨基”指下式的基团：-NH-杂环基。
如本文使用的术语“(杂环基)(C1-8烷基)氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基)(杂环基)。
如本文使用的术语“杂环基-氨基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-NH-杂环基。
如本文使用的术语“杂环基-羰基”指下式的基团：-C(O)-杂环基。
如本文使用的术语“杂环基-羰基-氧基”指下式的基团：-O-C(O)-杂环基。
如本文使用的术语“杂环基-氧基”指下式的基团：-O-杂环基。
如本文使用的术语“羟基”指下式的基团：-OH。
如本文使用的术语“羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-O-C1-8烷基-OH。
如本文使用的术语“羟基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-OH，其中C1-8烷基部分或完全地被一个或多个羟基基团取代(在可用化合价允许的情况下)。
如本文使用的术语“羟基-C1-8烷基-氨基”指下式的基团：-NH-C1-8烷基-OH。
如本文使用的术语“(羟基-C1-8烷基)2-氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基-OH)2。
如本文使用的术语“(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-OH)。
如本文使用的术语“羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-OH。
如本文使用的术语“(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-N(C1-8烷基-OH)2。
如本文使用的术语“(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基”指下式的基团：-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-OH)。
如本文使用的术语“羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基”指下式的基团：-O-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-OH。
如本文使用的术语“(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基”指下式的基团：-O-C1-8烷基-N(C1-8烷基-OH)2。
如本文使用的术语“(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基”指下式的基团：-O-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-OH)。
如本文使用的术语“羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基”指下式的基团：-NH-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-OH。
如本文使用的术语“(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基-NH-C1-8烷基-OH)2。
如本文使用的术语“(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基”指下式的基团：-NH-C1-8烷基-N(C1-8烷基-OH)2。
如本文使用的术语“(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-NH-C1-8烷基-OH)。
如本文使用的术语“[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基)[C1-8烷基-N(C1-8烷基-OH)2]
如本文使用的术语“(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基”指下式的基团：-NH-C1-8烷基-N(C1-8烷基,C1-8烷基-OH)。
如本文使用的术语“[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基”指下式的基团：-N(C1-8烷基)[C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-OH)]。
如本文使用的术语“取代基”指位于核分子的原子上的位置变量，其连接于指定原子位置，替代指定原子上的一个或多个氢原子，条件是连接的原子不超过可用化合价或共用化合价，使得取代产生稳定的化合物。因此，只有当这样的组合产生稳定的化合物时，取代基和/或变量的组合才是可允许的。还应当注意，假定如本文所述或所示化合价水平看起来不饱和的任何碳以及杂原子具有足以满足所述或所示化合价的氢原子数量。
为了本说明书的目的，在式(I)的化合物的一个或多个取代基变量涵盖并入式(I)的化合物的官能团的情况下，出现在所公开化合物的任何位置的每个官能团may b独立地选择，并且根据需要独立地和/或任选地被取代。
如本文使用的，术语“独立地选择”或“各自选择”指在核分子的结构上可连接取代基列表中官能性变量，其中在每次出现时的取代模式与在其他任一次出现时的模式无关。进一步，应当理解在本文提供的化合物的核结构上使用一般取代基包括用特定种类之内所包括的特定取代基取代一般取代基，例如可以用苯基或萘基(naphthalenyl)(也称为萘基(naphthyl))等独立地替代芳基，使得所得到的化合物预期包括在本文所述化合物的范围之内。
如本文使用的术语“每种情况下的”当用于短语例如“芳基、芳基-C1-8烷基、杂环基和杂环基-C1-8烷基，其中每种情况下的芳基和杂环基任选地被一个或两个取代基取代”时，其预期包括每个芳基和杂环基环上及在芳基-C1-8烷基和杂环基-C1-8烷基的芳基和杂环基部分上的任选、独立地取代。
如本文使用的术语“任选地被取代”指指定的取代基变量、基团(groups)、基团(radicals)或部分代表种类的范围，且根据需要可以独立地选择以替代核分子上指定连接的原子上的一个或多个氢原子。
如本文使用的术语“稳定的化合物”或“稳定的结构”指足够稳固以使从反应混合物和其制剂分离有用的纯度而成为有效治疗剂的化合物。
本文提供的化合物名称是使用ACD Labs提供的ACD Labs Index Name软件和/或提供的ChemDraw Ultra软件。当本文所述化合物名称与所绘结构不一致时，则为了定义指定化合物，以所示结构为准，而不是使用所述名称为准。本文所定义取代基基团的命名法可能与其所来源的化学名称稍不同，本领域技术人员应当认识到取代基基团的定义预期包括如化学名称中存在的基团。
除非本文另有说明，否则术语“SMN”指人类SMN1基因、DNA或RNA、和/或人类SMN2基因、DNA或RNA。在一个具体实施方式中，术语“SMN1”指人类SMN1基因、DNA或RNA。在另一个具体实施方式中，术语“SMN2”指人类SMN2基因、DNA或RNA。
人类SMN1和SMN2基因的核酸序列是本领域已知的。关于人类SMN1的核酸序列，参见例如GenBank登记号DQ894095、NM_000344、NM_022874和BC062723。关于人类SMN2的核酸序列，参见例如NM_022875、NM_022876、NM_022877、NM_017411、DQ894734(LifeTechnologies、Inc.(formerly Invitrogen)、Carlsbad、Calif.)、BC000908、BC070242、CR595484、CR598529、CR609539、U21914和BC015308。
SMN1基因可以发现于人类染色体5的正链(forward strand)(从约核苷酸70,220,768至约核苷酸70,249,769)上。SMN1的外显子6、7和8和内含子6和7在人类染色体5上的大致位置如下∶
70,241,893至70,242,003外显子6；
70,242,004至70,247,767内含子6；
70,247,768至70,247,821外显子7；
70,247,822至70,248,265内含子7；和
70,248,266至70,248,839外显子8。
SMN2基因可以发现于人类染色体5的正链(约核苷酸69,345,350至约核苷酸69,374,349)。
SMN2的外显子6、7和8和内含子6和7在人类染色体5上的大致位置如下∶
69,366,468至69,366,578外显子6；
69,366,579至69,372,347内含子6；
69,372,348至69,372,401外显子7；
69,372,402至69,372,845内含子7；和
69,372,846至69,373,419外显子8。
在具体实施方式中，在本文所述SMN1小基因核酸构建物中使用对于SMN1的外显子6、7和8和内含子6和7所述核苷酸序列。在其它具体实施方式中，在本文所述SMN2小基因核酸构建物中使用上述提供的实例中SMN2的外显子6、7和8和内含子6和7的核苷酸序列。
除非本文另有说明，否则术语“Smn”或“Smn蛋白质”指由SMN1基因和/或SMN2基因的外显子1至7所编码的氨基酸残基的人类Smn蛋白质。在一个具体实施方式中，Smn蛋白质在体外和/或体内是稳定的及功能性的，如利用本领域技术人员已知的方法所评估的。在另一个具体实施方式中，Smn蛋白质是人类SMN1基因和/或SMN2基因编码的全长蛋白质。在另一个具体实施方式中，Smn蛋白质具有在以GenBank Accession No.NP_000335、AAC50473.1、AAA66242.1或NP_059107发现的氨基酸序列。
除非本文另有说明，否则如本文使用的术语“增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中”及类似术语指如通过本领域技术人员已知的方法评估的，在体外和/或体内将SMN2的外显子7的全部、完整的、非截短序列包含到从SMN2基因转录的成熟mRNA中(即，使得产生全长SMN2 mRNA)，使得在体外和/或体内由SMN2基因产生Smn蛋白质的水平增加，如通过本领域技术人员已知的方法评估的；或者，使得在体外和/或体内由SMN2基因产生稳定的和功能性Smn蛋白质的表达增加，如通过本领域技术人员已知的方法评估的；或者，使得小基因编码的融合蛋白的表达在体外和/或体内增加，如通过本领域技术人员已知的方法评估的；或者，使得需要其的受试者(例如，SMA的动物模型或人类患者或SMA患者)中由SMN2基因产生的Smn蛋白质的表达增加。
除非本文另有说明，否则如本文使用的术语“增强将SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的mRNA中”及类似术语指如通过本领域技术人员已知的方法评估的，在体外和/或体内将SMN1的外显子7的全部、完整的、非截短序列包含到从SMN1基因转录的成熟mRNA中(即，使得产生全长SMN1mRNA)，使得在体外和/或体内从SMN1基因产生Smn蛋白质的水平增加，通过本领域技术人员已知的方法评估的；或者，使得在体外和/或体内由SMN1基因产生稳定的和功能性Smn蛋白质的表达增加，如通过本领域技术人员已知的方法评估的；或者，使得小基因编码的融合蛋白的表达在体外和/或体内增加，如通过本领域技术人员已知的方法评估的；或者，使得需要其的受试者(例如，SMA的动物模型或人类患者或SMA患者)中由SMN1基因产生的Smn蛋白质的表达增加。
如本文在mRNA的量的上下文中使用的术语“实质性改变”指mRNA的量的变化没有超过统计学显著的量，例如，p值小于选自0.1、0.05、0.01、0.005、0.001、0.0005、0.0001、0.00005或0.00001的值。
如本文使用的术语“受试者”和“患者”可互换地用于指具有自主运动的感觉和力量的动物或任何活生物，其存在需要氧和有机食物。非限制性实例包括人类、马、猪科、牛类、鼠属、鼠科、犬科和猫科物种的成员。在某些实施方式中，受试者为哺乳动物或温血脊椎动物。在某些实施方式中，受试者为非人类动物。在具体实施方式中，受试者为人类。在一个具体实施方式中，受试者为人类SMA患者。
如本文使用的术语“老年人”指65岁或以上的人。
如本文使用的术语“成年人”指18岁或以上的人。
如本文使用的术语“儿童”指1岁至18岁的人。
如本文使用的术语“婴儿”指新生儿至1岁的人。
如本文使用的术语“学步的小孩(toddler)”指1岁至3岁的人。
化合物形式
如本文使用的术语“式(Ia)的化合物”、“式(Ia1)的化合物”、“式(Ia2)的化合物”、“式(Ia3)的化合物”、“式(Ia4)的化合物”、“式(II)的化合物”、“式(IIa)的化合物”、“式(IIa1)的化合物”、“式(IIa2)的化合物”、“式(IIa3)的化合物”、“式(IIa4)的化合物”、“式(III)的化合物”、“式(IIIa)的化合物”、“式(IIIa1)的化合物”、“式(IIIa2)的化合物”、“式(IIIa3)的化合物”、“式(IIIa4)的化合物”、“式(IV)的化合物”、“式(IVa)的化合物”、“式(IVa1)的化合物”、“式(IVa2)的化合物”、“式(V)的化合物”、“式(Va)的化合物”、“式(Va1)的化合物”、“式(Va2)的化合物”、“式(VI)的化合物”、“式(VIa)的化合物”、“式(VIa1)的化合物”、“式(VIa2)的化合物”、“式(VIa3)的化合物”、“式(VIa4)的化合物”、“式(VII)的化合物”、“式(VIIa)的化合物”、“式(VIIa1)的化合物”、“式(VIIa2)的化合物”、“式(VIII)的化合物”、“式(VIIIa)的化合物”、“式(VIIIa1)的化合物”、“式(VIIIa2)的化合物”、“式(IX)的化合物”、“式(IXa)的化合物”、“式(IXa1)的化合物”、“式(IXa2)的化合物”、“式(IXa3)的化合物”、“式(IXa4)的化合物”、“式(X)的化合物”、“式(Xa)的化合物”、“式(Xa1)的化合物”、“式(Xa2)的化合物”、“式(XI)的化合物”、“式(XIa)的化合物”、“式(XIa1)的化合物”、“式(XIa2)的化合物”、“式(XII)的化合物”、“式(XIIa)的化合物”、“式(XIIa1)的化合物”、“式(XIIa2)的化合物”、“式(XIIa3)的化合物”、“式(XIIa4)的化合物”、“式(XIII)的化合物”、“式(XIIIa)的化合物”、“式(XIIIa1)的化合物”、“式(XIIIa2)的化合物”、“式(XIV)的化合物”、“式(XIVa)的化合物”、“式(XIVa1)的化合物”和“式(XIVa2)的化合物”各自指式(I)的化合物或其形式的亚类。
不同于式(I)的化合物的不同亚类的重复实施方式，在某些实施方式中，术语“式(I)的化合物或其形式”用于包含性地分别或一起指式(Ia)的化合物或其形式、式(Ia1)的化合物或其形式、式(Ia2)的化合物或其形式、式(Ia3)的化合物或其形式、式(Ia4)的化合物或其形式、式(II)的化合物或其形式、式(IIa)的化合物或其形式、式(IIa1)的化合物或其形式、式(IIa2)的化合物或其形式、式(IIa3)的化合物或其形式、式(IIa4)的化合物或其形式、式(III)的化合物或其形式、式(IIIa)的化合物或其形式、式(IIIa1)的化合物或其形式、式(IIIa2)的化合物或其形式、式(IIIa3)的化合物或其形式、式(IIIa4)的化合物或其形式、式(IV)的化合物或其形式、式(IVa)的化合物或其形式、式(IVa1)的化合物或其形式、式(IVa2)的化合物或其形式、式(V)的化合物或其形式、式(Va)的化合物或其形式、式(Va1)的化合物或其形式、式(Va2)的化合物或其形式、式(VI)的化合物或其形式、式(VIa)的化合物或其形式、式(VIa1)的化合物或其形式、式(VIa2)的化合物或其形式、式(VIa3)的化合物或其形式、式(VIa4)的化合物或其形式、式(VII)的化合物或其形式、式(VIIa)的化合物或其形式、式(VIIa1)的化合物或其形式、式(VIIa2)的化合物或其形式、式(VIII)的化合物或其形式、式(VIIIa)的化合物或其形式、式(VIIIa1)的化合物或其形式、式(VIIIa2)的化合物或其形式、式(IX)的化合物或其形式、式(IXa)的化合物或其形式、式(IXa1)的化合物或其形式、式(IXa2)的化合物或其形式、式(IXa3)的化合物或其形式、式(IXa4)的化合物或其形式、式(X)的化合物或其形式、式(Xa)的化合物或其形式、式(Xa1)的化合物或其形式、式(Xa2)的化合物或其形式、式(XI)的化合物或其形式、式(XIa)的化合物或其形式、式(XIa1)的化合物或其形式、式(XIa2)的化合物或其形式、式(XII)的化合物或其形式、式(XIIa)的化合物或其形式、式(XIIa1)的化合物或其形式、式(XIIa2)的化合物或其形式、式(XIIa3)的化合物或其形式、式(XIIa4)的化合物或其形式、式(XIII)的化合物或其形式、式(XIIIa)的化合物或其形式、式(XIIIa1)的化合物或其形式、式(XIIIa2)的化合物或其形式、式(XIV)的化合物或其形式、式(XIVa)的化合物或其形式、式(XIVa1)的化合物或其形式或式(XIVa2)的化合物或其形式。
因此，“式(I)的化合物”的实施方式和提及"式(I)的化合物"意味着包括下述化合物：式(Ia)、式(Ia1)、式(Ia2)、式(Ia3)、式(Ia4)、式(II)、式(IIa)、式(IIa1)、式(IIa2)、式(IIa3)、式(IIa4)、式(III)、式(IIIa)、式(IIIa1)、式(IIIa2)、式(IIIa3)、式(IIIa4)、式(IV)、式(IVa)、式(IVa1)、式(IVa2)、式(V)、式(Va)、式(Va1)、式(Va2)、式(VI)、式(VIa)、式(VIa1)、式(VIa2)、式(VIa3)、式(VIa4)、式(VII)、式(VIIa)、式(VIIa1)、式(VIIa2)、式(VIII)、式(VIIIa)、式(VIIIa1)、式(VIIIa2)、式(IX)、式(IXa)、式(IXa1)、式(IXa2)、式(IXa3)、式(IXa4)、式(X)、式(Xa)、式(Xa1)、式(Xa2)、式(XI)、式(XIa)、式(XIa1)、式(XIa2)、式(XII)、式(XIIa)、式(XIIa1)、式(XIIa2)、式(XIIa3)、式(XIIa4)、式(XIII)、式(XIIIa)、式(XIIIa1)、式(XIIIa2)、式(XIV)、式(XIVa)、式(XIVa1)和式(XIVa2)。
如本文使用的术语“形式”指式(I)的化合物选自其游离酸、游离碱、盐、同位素体、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或互变异构体。
在本文所述某些实施方式中，式(I)的化合物的形式选自其盐、同位素体、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或互变异构体。
在本文所述某些实施方式中，式(I)的化合物的形式选自其游离酸、同位素体、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或互变异构体。
在本文所述某些实施方式中，式(I)的化合物的形式选自其游离碱、同位素体、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或互变异构体。
在本文所述某些实施方式中，式(I)的化合物的形式为其游离酸、游离碱或盐。
在本文所述某些实施方式中，式(I)的化合物的形式为其同位素体。
在本文所述某些实施方式中，式(I)的化合物的形式为其立体异构体、外消旋体、对映异构体或非对映异构体。
在本文所述某些实施方式中，式(I)的化合物的形式为其互变异构体。
在本文所述某些实施方式中，式(I)的化合物的形式为可药用形式。
在本文所述某些实施方式中，式(I)的化合物或其形式是分离后使用。
如本文使用的术语“分离的”指根据本文描述的或本领域技术人员熟知的一种或多种分离或纯化方法(例如，色谱、重结晶等)从合成过程(例如，从反应混合物)或天然来源或其组合分离和/或纯化至足以通过本文描述的或本领域技术人员熟知的标准分析技术表征的纯度之后式(I)的化合物或其形式的物理状态。
如本文使用的术语“保护的”指式(I)的化合物上的官能团呈修饰的形式，以便当该化合物进行反应时防止在保护位点发生不期望的副反应。合适的保护基是本领域普通技术人员参考以下标准教科书可识别的：例如例如T.W.Greene et al,Protective Groupsin Organic Synthesis(1991),Wiley,New York。
本文也涵盖式(I)的化合物或其形式的前药。
如本文使用的术语“前药”指式(I)的化合物上的官能团呈在体内转化可产生活性或更强活性的式(I)的化合物或其形式的形式(例如，充当活性或非活性药物前体)。转化可以通过不同的机制(例如，代谢性和/或非代谢性化学过程)发生，例如例如通过在血液、肝脏和/或其它器官和组织中的水解和/或代谢。前药用途的论述提供于V.J..Stella,et.al.,“Biotechnology:Pharmaceutical Aspects,Prodrugs:Challenges andRewards,”American Association of Pharmaceutical Scientists and SpringerPress,2007中。
在一个实例中，当式(I)的化合物或其形式包含羧酸官能团时，前药可以包括通过用官能团例如烷基等替代酸基的氢原子形成的酯。在另一个实例中，当式(I)的化合物或其形式包含醇官能团时，前药可以通过用官能团例如烷基或取代的羰基等替代醇基的氢原子形成。在另一个实例中，当式(I)的化合物或其形式包含胺官能团时，前药可以通过用官能团例如烷基或取代的羰基一个或多个胺氢原子形成。在另一个实例中，当式(I)的化合物或其形式包含氢取代基时，前药可以通过用烷基取代基替代一个或多个氢原子形成。
式(I)的化合物或其形式的可药用前药包括用一种或多种下述基团取代的那些化合物：羧酸酯、磺酸酯、-氨基酸酯、膦酸酯、单磷酸酯、二磷酸酯、或三磷酸酯或烷基取代基(当合适时)。如本文所述，本领域普通技术人员应当理解一种或多种这样的取代基可用于提供用作前药的式(I)的化合物或其形式。
式(I)的化合物可以形成预期包括在本说明书的范围内的盐。除非另有说明，否则本文提及式(I)的化合物理解为包括提及其盐。如本文使用的术语“盐”指与无机酸和/或有机酸形成的酸性盐，以及与无机碱和/或有机碱形成的碱性盐。另外，当式(I)的化合物同时包含碱性部分，例如但不限于吡啶或咪唑，和酸性部分例如但不限于羧酸时，可以形成两性离子("内盐")且其包括在如本文使用的术语“盐”之内。
如本文使用的术语“可药用盐”指本文所述化合物的那些盐，其安全有效地(即，无毒、生理学可接受的)用于哺乳动物且具有生物活性，但是其他盐也是有用的。式(I)的化合物的盐可如下形成，例如使式(I)的化合物与一定量(例如一当量或化学计量的量)的酸或碱在介质(例如其中盐沉淀的介质或水介质中)反应，接着冷冻干燥。
可药用盐包括本文所述化合物中存在的酸性或碱性基团的一种或多种盐。酸加成盐的实施方式包括，但不限于乙酸盐、双乙酸盐、酸式磷酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、氯化物、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、龙胆酸盐、葡糖酸盐、葡糖二酸盐(glucaronate)、谷氨酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、二盐酸盐、三盐酸盐、氢碘酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、磷酸盐、丙酸盐、糖酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫代氰酸盐、甲苯磺酸盐(也称为甲苯磺酸盐)、三氟醋酸盐(trifluoroacetate)、三氟乙酸盐(trifluoroacetic acid salt)等。酸加成盐的一种或多种实施方式包括氯化物、盐酸盐、二盐酸盐、三盐酸盐、乙酸盐、双乙酸盐、三氟乙酸盐(trifluoroacetate)、三氟乙酸盐(trifluoroacetic acid salt)等。更特别的实施方式包括氯化物、盐酸盐、二盐酸盐、三氟醋酸盐(trifluoroacetate)、三氟乙酸盐(trifluoroacetic acid salt)等。
另外，通常考虑适用于从碱性药物化合物形成药学有用的盐的酸论述于例如P.Stahl et al,Camille G.(eds.)Handbook of Pharmaceutical Salts.Properties,Selection and Use.(2002)Zurich:Wiley-VCH；S.Berge et al,Journal ofPharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould,International J.ofPharmaceutics(1986)33,201-217；Anderson et al,The Practice of MedicinalChemistry(1996),Academic Press,New York；和The Orange Book(参见Food&DrugAdministration网站,Washington,D.C.)中。将这些内容通过引用并入本文中。
合适的碱性盐包括，但不限于铝盐、铵盐、钙盐、锂盐、镁盐、钾盐、钠盐、锌盐和二乙醇胺盐。本文所述某些化合物也可以与有机碱(例如，有机胺，例如但不限于二环己胺、叔丁基胺等)形成可药用盐，且与不同氨基酸(例如但不限于精氨酸、赖氨酸等)形成可药用盐。含碱性氮的基团可以用如下这样的试剂季铵化：例如低级烷基卤化物(例如、甲基、乙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物)、二烷基硫酸酯(例如，二甲基、二乙基和二丁基硫酸酯)、长链卤化物(例如，癸基、月桂基和十八烷酰基氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(例如，苯甲基和苯乙基溴化物)等。
所有这样的酸性盐和碱性盐预期都为本文说明书的范围内的可药用盐，并且所有这样的酸性盐和碱性盐都被认为等效于用于本文所述目的的相应化合物的游离形式。
式I的化合物及其形式可以进一步以互变异构形式存在。所有这样的互变异构形式在本文中都预期作为本发明说明书的一部分。
式(I)的化合物可以包含不对称或手性中心，因此，可以以不同的立体异构形式存在。本说明书预期包括式(I)的化合物的所有立体异构形式以及其混合物，包括外消旋混合物。
本文所述式(I)的化合物可以包括一个或多个手性中心，因此可以呈外消旋混合物(R/S)或基本上纯的对映异构体和非对映异构体存在。所述化合物也可以呈基本上纯的(R)或(S)对映异构体(当存在一个手性中心时)存在。在一个实施方式中，本文所述式(I)的化合物为(S)异构体，并且可以呈基本上仅包含(S)异构体的对映异构体纯的组合物存在。在另一个实施方式中，本文所述式(I)的化合物为(R)异构体，且可以呈基本上仅包含(R)异构体的对映异构体纯的组合物存在。如本领域技术人员将认识到的，当存在多于一个手性中心时，本文所述式(I)的化合物也可包括以(R,R)、(R,S)、(S,R)或(S,S)异构体描述的部分，如根据IUPAC命名建议(iUPAC Nomenclature Recommendations)所定义的。
如本文使用的术语“基本上纯的”指化合物基本上由如下量的单一异构体组成：大于或等于90％的量、大于或等于92％％的量、大于或等于95％％的量、大于或等于98％％的量、大于或等于99％％的量、或大于或等于100％的量的单一异构体。
在一个方面，式(I)的化合物为基本上纯的(S)对映异构体，其存在量为大于或等于90％、大于或等于92％、大于或等于95％、大于或等于98％、大于或等于99％、或等于100％。
在一个方面，式(I)的化合物为基本上纯的(R)对映异构体，其存在量为大于或等于90％、大于或等于92％、大于或等于95％、大于或等于98％、大于或等于99％、或等于100％。
如本文使用的“外消旋体”为不为“对映异构体纯的”异构体形式(isometricforms)的任何混合物，包括例如且不限于下述比例的混合物：约50/50、约60/40、约70/30、约80/20、约85/15或约90/10。
另外，本说明书涵盖所有几何异构体和位置异构体。例如，如果式(I)的化合物引入双键或稠环，则顺式-和反式-形式、以及混合物都涵盖在本文说明书的范围之内。
非对映异构体混合物可以基于其物理化学差异，通过本领域技术人员熟知的方法例如例如色谱和/或分步结晶分离成其单独的非对映异构体。可以通过使用手性HPLC柱或本领域技术人员已知的其它色谱方法分离对映异构体。
可如下分离对映异构体：通过与合适的光学活性化合物(例如手性助剂，例如手性醇或马绍耳(Mosher's)酰基氯)反应将对映异构体混合物转化为非对映异构体混合物，分离非对映异构体，并且将单独非对映异构体转化(例如水解)为相应的纯对映异构体。而且，一些式(I)的化合物可以是阻转异构体(例如，取代的二芳基)，且被认为是该说明书的一部分。
本发明化合物(包括其盐、溶剂化物、酯和前药及已转化的前药)的所有立体异构体形式(例如，几何学异构体、光学异构体、位置异构体等)，其可以由于各个取代基上的不对称碳而存在，包括对映异构体形式(其甚至可以在不存在不对称碳下存在)、旋转异构形式、阻转异构体、非对映异构体形式和区域异构体形式预期都在本说明书的范围之内。例如，如果式(I)的化合物引入双键或稠环，则顺式-和反式-形式、以及其混合物都涵盖在本文说明书的范围之内。而且，例如，所述化合物的所有酮-烯醇和亚胺-烯胺互变异构形式都包括在本说明书中。本文所述式(I)的化合物的单独的立体异构体可以例如基本上不含其它异构体，或者以外消旋混合物存在，如上所述。
使用术语“盐”、“前药”和“转化的前药”预期同样适用于本发明化合物的所有预期的同位素体、立体异构体、外消旋体或互变异构体的盐、前药和转化的前药。
术语“同位素体”指同位素-富集的化合物，其与本文所列举的化合物相同，但是一个或多个原子已经被具有原子质量或质量数不同于自然界中通常发现的原子质量或质量数的原子所替代。可并入本文所述化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟及氯的同位素，例如分别为H2、H3、C13、C14、N15、O18、O17、P31、P32、S35、F18、Cl35和Cl36，其中每个都在本说明书的范围之内。
本文所述的某些同位素-富集的化合物(例如，用H3和C14标记的那些)用于化合物和/或底物组织分布分析中。氚化的(即，H3)和碳-14(即，C14)同位素因其容易制备和检测能力是特别优选的。此外，用较重同位素(例如氘(即，“氘富集的”)取代可提供某些由更高的代谢稳定性所产生的治疗优点(例如，体内半衰期增加或剂量需求降低)，且因此在一些情况下可以是优选的。式(I)的同位素-富集的化合物通常可以使用本领域普通技术人员已知的方法，通过用合适的同位素-富集的试剂代替非同位素-富集的试剂来制备。
当化合物富集氘时，分子的氘代原子上氘与氢的比例基本上超过天然存在的氘与氢的比例。
本文所述实施方式可以包括式(I)的化合物的同位素体形式，其中同位素体在式(I)的化合物的一个或多个原子成员上被一个或多个氘原子代替一个或多个氢原子所取代。
本文所述一个实施方式可以包括式(I)的化合物和其形式，其中碳原子可以具有1至3个任选地被氘替代的氢原子。
本文所述的一种或多种化合物可以以非溶剂化形式以及与可药用溶剂例如水、乙醇等形成的溶剂化形式存在，并且本文说明书预期同时涵盖溶剂化形式和非溶剂化形式。
如本文使用的术语“溶剂化物”指本文所述化合物与一种或多种溶剂分子的物理结合。该物理结合包括不同程度的离子键合和共价键合，包括氢键键合。在某些情况下，能够分离出溶剂化物，例如当一个或多个溶剂分子并入结晶固体的晶格中时。如本文使用的“溶剂化物”同时涵盖溶液相和可分离的溶剂化物。合适的溶剂化物的非限制性实例包括乙醇化物、甲醇化物等。
一种或多种本文所述化合物可以任选地转化为溶剂化物。溶剂化物的制备通常是已知的。一种典型的、非限制性方法包括在高于环境温度下，将化合物溶于期望量的期望溶剂(有机溶剂或水或其混合物)中，并以足以形成晶体的速率冷却该溶液，然后通过标准方法分离。分析技术例如例如红外光谱，显示在呈溶剂化物(或水合物)的晶体中存在溶剂(或水)。
如本文使用的术语“水合物”指其中溶剂分子为水的溶剂化物。
式(I)的化合物、以及式(I)的化合物的盐、溶剂化物、酯和前药的多晶型结晶形式和非晶形形式进一步预期包括在本文所述化合物的范围之内。
化合物用途
本文描述了增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中的式(I)的化合物或其形式。使用本文所述的测定(参见，生物学实施例部分，如下)，这样的式(I)的化合物或其形式已经显示出增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中。因此，式(I)的化合物或其形式用作将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中的增强剂。
本文描述了用于增强将SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的mRNA中的式(I)的化合物或其形式。这样的式(I)的化合物可以增强将SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的mRNA中(使用利用SMN1小基因测定)。因此，式(I)的化合物或其形式可以用作将SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的mRNA中的增强剂。
在一个方面，本文提供用于调节将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的RNA中的方法，包括使式(I)的化合物或其形式与人类细胞接触。在一个具体实施方式中，本文提供用于调节将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的RNA中的方法，包括使式(I)的化合物或其形式与人类细胞接触，所述式(I)的化合物或其形式调节本文中或国际公开WO2009/151546或美国专利申请公开第2011/0086833号中描述的SMN2小基因的表达，将其中每篇的全部内容通过引用并入本文。在一个实施方式中，小基因为在国际公开WO2009/151546或美国专利申请公开第2011/0086833的实施例中描述的小基因。在另一个实施方式中，小基因为如下生物学实施例1中描述的小基因。人类细胞可以与式(I)的化合物或其形式在体外和/或体内接触，例如在非人类动物或在人类中。在一个具体实施方式中，人类细胞来自或在人类中。在另一个具体实施方式中，人类细胞来自或在人类SMA患者中。在另一个具体实施方式中，人类细胞来自或在人类SMA患者中，其中SMA是由于两种染色体上的SMN1基因失活性突变或缺失导致SMN1基因功能损失引起的。在另一个实施方式中，人类细胞为来自人类SMA患者的人类细胞。在某些实施方式中，人类细胞来自细胞系，例如GM03813、GM00232、GM09677和/或GM23240(可得自Coriell Institute)。在一种实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式。
在一种具体实施方式中，本文提供用于调节将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中的方法，包括使式(I)的化合物或其形式与人类细胞接触。在另一个实施方式中，本文提供用于增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中的方法，包括使式(I)的化合物或其形式与人类细胞接触，所述式(I)的化合物或其形式增强本文中或国际公开WO2009/151546或美国专利申请公开2011/0086833中描述的SMN2小基因的表达，将其中每篇的全部内容通过引用并入本文。在一个实施方式中，小基因为在国际公开WO2009/151546或美国专利申请公开2011/0086833的实施例中描述的小基因。在另一种实施方式中，小基因为如下生物学实施例1中描述的小基因。人类细胞可以与式(I)的化合物或其形式在体外和/或体内接触，例如在非人类动物或在人类中。在一种具体实施方式中，人类细胞来自或在人类中。在另一种具体实施方式中，人类细胞来自或在人类SMA患者中。在另一种具体实施方式中，人类细胞来自或在人类SMA患者中，其中SMA是由于两种染色体上的SMN1基因失活性突变或缺失导致SMN1基因功能损失引起的。在另一种实施方式中，人类细胞为来自人类SMA患者的人类细胞。在某些实施方式中，人类细胞来自细胞系，例如GM03813、GM00232、GM09677和/或GM23240(可得自Coriell Institute)。在一个实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供用于增强将SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的RNA中的方法，包括使式(I)的化合物或其形式与人类细胞接触。在一种具体实施方式中，本文提供用于增强将SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的RNA中的方法，包括使式(I)的化合物或其形式与人类细胞接触。在另一种具体实施方式中，本文提供用于增强将SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的RNA中的方法，包括使式(I)的化合物或其形式与人类细胞接触，所述式(I)的化合物或其形式增加本文中或国际公开WO2009/151546或美国专利申请公开2011/0086833中描述的SMN1小基因表达，将其中每篇的全部内容通过引用并入本文。在一种实施方式中，小基因为在国际公开WO2009/151546或美国专利申请公开2011/0086833的实施例中描述的小基因。人类细胞可以与式(I)的化合物或其形式在体外和/或体内接触，例如在非人类动物或在人类中。在一种具体实施方式中，人类细胞来自或在人类中。在另一种具体实施方式中，人类细胞来自或在人类SMA患者中。在一种实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式。
在一种具体实施方式中，本文提供用于增强将SMN1的外显子7包含到从SMN1和SMN2基因转录的RNA中的方法，其包括用式(I)的化合物或其形式接触人类细胞。人类细胞可以与式(I)的化合物或其形式在体外和/或体内接触，例如在非人类动物或在人类中。在一个具体实施方式中，人类细胞来自或在人类中。在另一个具体实施方式中，人类细胞来自或在人类SMA患者中。在一种实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供了一种用于调节将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的RNA中的方法，其包括向非人类SMA动物模型施用式(I)的化合物或其形式。在一种具体实施方式中，本文提供一种用于调节将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的RNA中的方法，其包括向非人类SMA动物模型施用式(I)的化合物或其形式，所述式(I)的化合物或其形式增强本文中或国际公开WO2009/151546或美国专利申请公开2011/0086833中描述的SMN2小基因的表达，将其中全部内容通过引用并入本文。在一个实施方式中，小基因为在国际公开WO2009/151546或美国专利申请公开2011/0086833的实施例中描述的小基因。在另一种实施方式中，小基因为如下生物学实施例1中描述的小基因。在一种具体实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式。
在一种具体实施方式中，本文提供了一种用于增加将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中的方法，其包括向非人类SMA动物模型施用式(I)的化合物或其形式。在另一种具体实施方式中，本文提供一种用于增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中的方法，其包括向非人类SMA动物模型施用式(I)的化合物或其形式，所述式(I)的化合物或其形式增强本文中或国际公开WO2009/151546或美国专利申请公开2011/0086833中描述的SMN2小基因的表达，将其全部内容通过引用并入本文。在一种实施方式中，小基因为在国际公开WO2009/151546或美国专利申请公开2011/0086833的实施例中描述的小基因。在另一个实施方式中，小基因为如下生物学实施例1中描述的小基因。在一个具体实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供了一种用于增强将SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的RNA中的方法，其包括向非人类SMA动物模型施用式(I)的化合物或其形式。在一种具体实施方式中，本文提供一种用于增强将SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的RNA中的方法，其包括向非人类SMA动物模型施用式(I)的化合物或其形式，所述式(I)的化合物或其形式增强本文中或国际公开WO2009/151546或美国专利申请公开2011/0086833中描述的SMN1小基因的表达，将其中每篇的全部内容通过引用并入本文。在一种实施方式中，小基因为在国际公开WO2009/151546或美国专利申请公开2011/0086833的实施例中描述的小基因。在一种具体实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式。
在一种具体实施方式中，本文提供了一种用于增强将SMN1的外显子7包含到从SMN1和SMN2基因转录的RNA中的方法，其包括向非人类SMA动物模型施用式(I)的化合物或其形式。在一种具体实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供了一种增加Smn蛋白质的量的方法，包括使式(I)的化合物或其形式与人类细胞接触。在一种具体实施方式中，本文提供一种用于增加Smn蛋白质的量的方法，包括使式(I)的化合物与人类细胞接触，所述式(I)的化合物增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中。在另一种具体实施方式中，本文提供了一种用于增加Smn蛋白质的量的方法，其包括用式(I)的化合物接触人类细胞所述式(I)的化合物增强将SMN1的外显子7包含到从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中。人类细胞可以与式(I)的化合物或其形式在体外和/或体内接触，例如在非人类动物或在人类中。在一种具体实施方式中，人类细胞来自或在人类中。在另一种具体实施方式中，人类细胞来自或在人类SMA患者中。在另一种具体实施方式中，人类细胞来自或在人类SMA患者中，其中SMA是由于两种染色体上的SMN1基因失活性突变或缺失导致SMN1基因功能损失引起的。在另一种实施方式中，人类细胞为来自人类SMA患者的人类细胞。在某些实施方式中，人类细胞来自细胞系，例如GM03813、GM00232、GM09677和/或GM23240(可得自Coriell Institute)。在一种实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供了一种用于增加Smn蛋白质的量的方法，包括向非人类SMA动物模型施用式(I)的化合物或其形式。在一种具体实施方式中，本文提供一种用于增加Smn蛋白质的量的方法，包括向非人类SMA动物模型施用式(I)的化合物，在例如基于细胞或无细胞测定中，例如在如下生物学实施例中描述的，所述式(I)的化合物增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中。在另一个具体实施方式中，本文提供一种用于增加Smn蛋白质的量的方法，包括向非人类SMA动物模型施用式(I)的化合物，在例如基于细胞或无细胞测定中，所述式(I)的化合物增强将SMN1和/或SMN2的外显子7包含到从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中。
在一个实施方式中，式(I)的化合物增强本文中或国际公开WO2009/151546或美国专利申请公开2011/0086833中描述的小基因的表达，将其中每篇的全部内容通过引用并入本文。在一个具体实施方式中，式(I)的化合物增强本文中或国际公开WO2009/151546或美国专利申请公开2011/0086833的实施例中描述的小基因的表达。在另一个具体实施方式中，式(I)的化合物增强如下生物学实施例1中描述的小基因的表达。在一个实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式。
在一个实施方式中，本文提供了式(I)的化合物或其形式在制备用于增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA的药物中的用途。在另一个实施方式中，本文提供式(I)的化合物或其形式在制备用于增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA，从而在需要其的人类受试者中增强Smn蛋白质表达的药物中的用途。在一种具体实施方式中，在本文所述测定(参见，例如如下生物学实施例中)，式(I)的化合物或其形式增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中。在一种具体实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式。
在一种实施方式中，本文提供了式(I)的化合物或其形式在制备用于增强将SMN1和/或SMN2的外显子7包含到从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA的药物中的用途。在另一种实施方式中，本文提供了式(I)的化合物或其形式在制备用于增强将SMN1和/或SMN2的外显子7包含到从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA，从而在需要其的人类受试者中增强Smn蛋白质表达的药物中的用途。在一种具体实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供在需要其的人类受试者中增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中的方法，其包括向所述人类受试者施用有效量的式(I)的化合物或其形式。在一个具体实施方式中，本文提供一种在需要其的人类受试者中增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中的方法，其包括向所述人类受试者施用有效量式(I)的化合物或其形式，如在本文所述测定(参见，例如如下生物学实施例中)中测定的，该式(I)的化合物或其形式增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中。在具体实施方式中，有效量的式(I)的化合物或其形式是以包含可药用载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物施用于人类受试者。在具体实施方式中，在本文所述测定(参见，例如如下生物学实施例中)，式(I)的化合物或其形式增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中。在一种具体实施方式中，人类受试者为人类SMA患者。在另一个具体实施方式中，人类受试者为人类SMA患者，其中SMA是由于两种染色体上的SMN1基因失活性突变或缺失导致SMN1基因功能损失引起的。在一种实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供了在需要其的人类受试者中增强将SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的mRNA中的方法，其包括向所述人类受试者施用有效量的式(I)的化合物或其形式。在具体实施方式中，在国际公开WO2009/151546或美国专利申请公开2011/0086833中描述的测定中，式(I)的化合物或其形式增强将SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的mRNA中。在具体实施方式中，有效量的式(I)的化合物或其形式是以包含可药用载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物施用于人类受试者。在一个具体实施方式中，人类受试者为人类SMA患者。在一个实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供了一种在需要其的人类受试者中增强将SMN1和SMN2的外显子7包含到从SMN1和SMN2基因转录的mRNA中的方法，其包括向该人类受试者施用有效量的式(I)的化合物或其形式。在具体实施方式中，在国际公开WO2009/151546或美国专利申请公开2011/0086833(参见，例如这些公开中的实施例)中描述的测定中，式(I)的化合物或其形式增强将SMN1的外显子7包含到从SMN1基因转录的mRNA中，将其中每篇的全部内容通过引用并入本文。在具体实施方式中，有效量的式(I)的化合物或其形式是以包含可药用载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物施用于人类受试者。在一个具体实施方式中，人类受试者为人类SMA患者。在另一个具体实施方式中，人类受试者为人类SMA患者，其中SMA是由于两种染色体上的SMN1基因失活性突变或缺失导致SMN1基因功能损失引起的。在一个实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供了在需要其的人类受试者中增强Smn蛋白质的表达的方法，其包括向所述人类受试者施用有效量的式(I)的化合物或其形式。在一种具体实施方式中，本文提供了一种在需要其的人类受试者中增强Smn蛋白质表达的方法，其包括向所述人类受试者施用有效量的式(I)的化合物或其形式，该式(I)的化合物或其形式增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中。在另一种具体实施方式中，本文提供了一种在需要其的人类受试者中增强Smn蛋白质表达的方法，包括向所述人类受试者施用有效量的式(I)的化合物或其形式，该式(I)的化合物或其形式增强将SMN1和/或SMN2的外显子7包含到从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中。在具体实施方式中，有效量的式(I)的化合物或其形式是以包含可药用载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物施用于人类受试者。在具体实施方式中，在本文中(参见，例如如下生物学实施例)或在国际公开WO2009/151546或国际专利申请公开WO2009/0086833(参见，例如这些公开中的实施例)中描述的测定中，式(I)的化合物或其形式增强将SMN1和/或SMN2的外显子7包含到从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中，将其中每篇的全部内容通过引用并入本文。
在一个具体实施方式中，人类受试者为人类SMA患者。在另一个具体实施方式中，人类受试者为人类SMA患者，其中SMA是由于两种染色体上的SMN1基因的teleomeric副本的失活性突变或缺失导致SMN1基因功能损失引起的。在一个实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式。
在另一个实施方式中，本文提供式(I)的化合物或其形式在制备在需要其的人类受试者中增强Smn蛋白质的表达的药物中的用途。在具体实施方式中，式(I)的化合物或其形式增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中，如在本文所述测定(参见，例如如下生物学实施例中)中测定的。在另一种实施方式中，在本文中(参见，例如如下生物学实施例)或在国际公开WO2009/151546或国际专利申请公开WO2009/0086833(参见，例如这些公开中的实施例)中描述的测定中测定的，式(I)的化合物或其形式增强将SMN1和/或SMN2的外显子7包含到从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中，将其中每篇的全部内容通过引用并入本文。在一个具体实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供了用于治疗脊髓性肌萎缩(SMA)的方法，其包括向受试者施用有效量的式(I)的化合物或其形式。在一种具体实施方式中，本文提供一种治疗需要其的人类受试者中的SMA的方法，其包括向所述受试者施用有效量的式(I)的化合物或其形式。在另一个具体实施方式中，本文提供一种治疗需要其的人类受试者中的SMA的方法，其包括向所述受试者施用包含有效量的式(I)的化合物或其形式、及可药用载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物。在一个实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式。
在另一种实施方式中，本文提供了一种治疗需要其的人类受试者中的SMA的方法，其包括向所述受试者施用有效量的式(I)的化合物或其形式，所述式(I)的化合物或其形式增强将smn2的外显子7包含到从smn2基因转录的mRNA中。。在一种具体实施方式中，本文提供了一种治疗需要其的人类受试者中的SMA的方法，其包括向所述受试者施用包含有效量的式(I)的化合物或其形式、及可药用载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物，所述式(I)的化合物或其形式增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中。在另一种具体实施方式中，本文提供了一种治疗需要其的人类受试者中的SMA的方法，包括向所述受试者施用包含有效量的式(I)的化合物或其形式、及可药用载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物，所述式(I)的化合物或其形式增强将SMN1和/或SMN2的外显子7包含到从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中。在具体实施方式中，在本文描述的测定中(参见，例如如下生物学实施例)，式(I)的化合物或其形式增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中。在另一种实施方式中，在本文中(参见，例如如下生物学实施例)或在国际公开WO2009/151546或美国专利申请公开WO2009/0086833(参见，例如这些公开中的实施例)中描述的测定中测定的，式(I)的化合物或其形式增强将SMN1和/或SMN2的外显子7包含到从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中，将其中每篇的全部内容通过引用并入本文。在一个具体实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式。
在另一种实施方式中，本文提供了式(I)的化合物或其形式在制备治疗需要其的人类受试者中的SMA的药物中的用途。在具体实施方式中，如在本文描述的测定中测定的(参见，例如如下生物学实施例)，式(I)的化合物或其形式增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中。在另一个实施方式中，在本文中(参见，例如如下生物学实施例)或在国际公开WO2009/151546或美国专利申请公开WO2009/0086833(参见，例如这些公开中的实施例)中描述的测定中测定的，式(I)的化合物或其形式增强将SMN1和/或SMN2的外显子7包含到从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中，将其中每篇的全部内容通过引用并入本文。在一种具体实施方式中，化合物为式(I)的化合物或其形式.
在本文提供的用途或方法的一种实施方式中，式(I)的化合物或其形式与一种或多种另外的药剂组合使用。可以在向受试者施用另外的药剂或与细胞接触之前、同时或之后，将式(I)的化合物或其形式向受试者施用或与细胞接触。式(I)的化合物或其形式和另外的药剂可以在单一组合物或不同的组合物中向受试者施用或与细胞接触。在一个具体实施方式中，式(I)的化合物或其形式与SMN1的基因置换(例如，使用病毒递送载体)组合使用。在另一个具体实施方式中，式(I)的化合物或其形式与使用分化的SMN1+/+和/或SMN2+/+干细胞的细胞置换组合使用。在另一种具体实施方式中，式(I)的化合物或其形式与使用分化的SMN1+/+干细胞的细胞置换组合使用。在另一种具体实施方式中，式(I)的化合物或其形式与使用分化的SMN2+/+干细胞的细胞置换组合使用。在另一种具体实施方式中，式(I)的化合物或其形式与阿柔比星组合使用。在另一种具体实施方式中，式(I)的化合物或其形式与转录活化剂例如组蛋白脱乙酰酶(“HDAC”)抑制剂(例如，丁酸盐、丙戊酸和羟基脲)和mRNA稳定剂(例如，得自Repligen的mRNA去帽抑制剂)组合使用。
在一个实施方式中，本文提供了式(I)的化合物或其形式与支持疗法(包括呼吸性、营养性或康复性护理)组合的用途。
在一些实施方式中，用式(I)的化合物或其形式(单独或与另外的药剂组合)治疗SMA具有治疗效果和/或有益效果。在一个具体实施方式中，用(I)的化合物或其形式(单独或与另外的药剂组合)治疗SMA产生一个、两个或多个下述效果∶(i)降低或改善SMA的严重程度；(ii)延迟SMA发病；(iii)抑制SMA的进展；(iv)减少受试者的住院治疗；(v)减少的住院治疗时长；(vi)提高受试者的存活率；(vii)改善受试者的生活质量；(viii)减少与SMA有关的症状数量；(ix)降低或改善与SMA有关的症状的严重程度；(x)与SMA有关的症状的持续时间；(xi)预防与SMA有关的症状的复发；(xii)抑制SMA的症状的发展或发作；和/或(xiii)抑制与SMA有关的症状的进展。
SMA的症状包括肌无力、肌张力差、无力叫喊、无力咳嗽、跛行或有倒下的倾向、吮吸或吞咽困难、呼吸困难、分泌物蓄积在肺或咽喉中、握拳伴手出汗、舌头颤动/振动、头经常向一侧倾斜(即使当躺下时)、腿倾向于弱于臂、腿频繁呈现“蛙腿”姿势、进食困难、对呼吸道感染的敏感性增加、肠/膀胱虚弱、低于正常体重、不能在无支撑下坐、不能行走、不能爬行和张力减退、无反射、和与前角细胞损失有关的多发性先天性挛缩(关节弯曲)。
在一种具体实施方式中，用(I)的化合物或其形式(单独或与另外的药剂组合)治疗SMA产生一个、两个或多个下述效果∶(i)肌肉力量损失减少；(ii)肌肉力量增强；(iii)肌肉萎缩减轻；(iv)运动功能损失减少；(v)运动神经元增加；(vii)运动神经元的损失减少；(viii)防止缺乏运动神经元的SMN退化；(ix)运动功能增强；(x)肺功能增强；和/或(xi)肺功能损失减少。
在另一种实施方式中，用(I)的化合物或其形式(单独或与另外的药剂组合)治疗SMA使人类婴儿或人类学步的小孩产生坐起的功能能力或有助于保持该功能能力。在另一个实施方式中，用(I)的化合物或其形式(单独或与另外的药剂组合)治疗SMA使人类婴儿、人类学步的小孩、人类儿童或成年人产生独立站起的功能能力或有助于保持该功能能力。在另一个实施方式中，用(I)的化合物或其形式(单独或与另外的药剂组合)治疗SMA使人类婴儿、人类学步的小孩、人类儿童或成年人产生独立行走的功能能力或有助于保持该功能能力。在另一个实施方式中，用(I)的化合物或其形式(单独或与另外的药剂组合)治疗SMA使人类婴儿、人类学步的小孩、人类儿童或成年人产生独立奔跑的功能能力或有助于保持该功能能力。在另一个实施方式中，用(I)的化合物或其形式(单独或与另外的药剂组合)治疗SMA使人类婴儿、人类学步的小孩、人类儿童或成年人产生独立呼吸的功能能力或有助于保持该功能能力。在另一个实施方式中，用(I)的化合物或其形式(单独或与另外的药剂组合)治疗SMA使人类婴儿、人类学步的小孩、人类儿童或成年人产生在睡眠期间独立翻身的功能能力或有助于保持该功能能力。在另一个实施方式中，用(I)的化合物或其形式(单独或与另外的药剂组合)治疗SMA使人类婴儿、人类学步的小孩、人类儿童或成年人产生独立吞咽的功能能力或有助于保持该功能能力。
在一些实施方式中，下文生物学实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物例如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12，和/或SMN探针例如SEQ ID NO.3或10)用于测定中，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、RNA印迹法或DNA印迹法，以确定式(I)的化合物或其形式是否增强将SMN1和/或SMN2的外显子7包含到从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中。在某些实施方式中，下文生物学实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物例如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12，和/或SMN探针例如SEQ ID NO.3或10)用于测定中，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、RNA印迹法或DNA印迹法，或如下所述药物或测定试剂盒，以监测患者对式(I)的化合物或其形式的反应。
在一种实施方式中，如本文所述使用式(I)的化合物∶
或其形式，其中：
w1和w5独立地为C-Ra或N；
w2为C-Rb或N；
w3、w4和w7独立地为C-R1、C-R2、C-Ra或N；
w6为C-R1、C-R2、C-Rc或N；
其中，w3、w4、w6和w7中的一个为C-R1且w3、w4、w6和w7中的另一个为C-R2，条件是
当w3为C-R1时，则w6为C-R2且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w3为C-R2时，则w6为C-R1且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w4为C-R1时，则w7为C-R2且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc或N；或
当w4为C-R2时，则w7为C-R1且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc或N；和
其中，w1、w2、w3、w4、w5、w6和w7中的任一个、两个或三个可以任选地为N；
R1为C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、(氨基-C1-8烷基)2-氨基、(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、氨基-C2-8烯基、C1-8烷基-氨基-C2-8烯基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基、氨基-C2-8炔基、C1-8烷基-氨基-C2-8炔基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基、卤代-C1-8烷基-氨基、(卤代-C1-8烷基)2-氨基、(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基、[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；
其中，每种情况下的杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基任选地被一个、两个或三个R3取代基和任选地被一个另外R4取代基取代；或
其中，每种情况下的杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基任选地被一个、两个、三个或四个R3取代基取代；
R2为芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基；
其中，每种情况下的芳基、杂环基和杂芳基任选地被一个、两个或三个R6取代基和任选地被一个另外的R7取代基取代；
Ra在每种情况下独立地选自氢、卤素或C1-8烷基；
Rb为氢、卤素、C1-8烷基或C1-8烷氧基；
R3在每种情况下独立地选自氰基、卤素、羟基、氧代、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷基-羰基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-羰基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基]2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-羰基-氨基、C1-8烷氧基-羰基-氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基或(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基；
R4为C3-14环烷基、C3-14环烷基-C1-8烷基、C3-14环烷基-氨基、芳基-C1-8烷基、芳基-C1-8烷氧基-羰基、芳基-磺酰氧基-C1-8烷基、杂环基或杂环基-C1-8烷基；其中每种情况下的C3-14环烷基、芳基和杂环基任选地被一个、两个或三个R5取代基取代；
R5在每种情况下独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫基；
R6在每种情况下独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、C1-8烷基、C2-8烯基、卤代-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫基；和
R7为C3-14环烷基、C3-14环烷基-氧基、芳基、杂环基或杂芳基。
式(I)的化合物的用途的实施方式是选自式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VII)、式(VIII)、式(IX)、式(X)、式(XI)、式(XII)、式(XIII)或式(XIV)的化合物的用途：
或其形式。
在式(I)的化合物的用途的一种实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2，w1、w4,w5和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(I)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1，w1、w4,w5和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(I)的化合物的用途的另一种实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w1、w3和w5独立地为C-Ra或N，w2为C-Rb或N且w6为C-Rc为N。
在式(I)的化合物的用途的另一种实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w1、w3和w5独立地为C-Ra或N，w2为C-Rb或N且w6为C-Rc为N。
在式(II)的化合物的用途的一种实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2，w4、w5和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(II)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1，w4、w5和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(II)的化合物的用途的另一种实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w3和w5独立地为C-Ra或N，w2为C-Rb或N且w6为C-Rc为N。
在式(II)的化合物的用途的另一种实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w3和w5独立地为C-Ra或N，w2为C-Rb或N且w6为C-Rc为N。
在式(III)的化合物的用途的一种实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2且w1、w4、w5和w7独立地为C-Ra为N。
在式(III)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1且w1、w4、w5和w7独立地为C-Ra为N。
在式(III)的化合物的用途的另一种实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w1、w3和w5独立地为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(III)的化合物的用途的另一种实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w1、w3和w5独立地为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(IV)的化合物的用途的一种实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w1和w5独立地为C-Ra或N，w2为C-Rb或N且w6为C-Rc为N。
在式(IV)的化合物的用途的另一种实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w1和w5独立地为C-Ra或N，w2为C-Rb或N且w6为C-Rc为N。
在式(V)的化合物的用途的一种实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2，w1、w5和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式的化合物的用途的另一种实施方式中，(V),w3为C-R2，w6为C-R1，w1、w5和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(VI)的化合物的用途的一种实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2，w1、w4和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(VI)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1，w1、w4和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(VI)的化合物的用途的另一种实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w1和w3独立地为C-Ra或N，w2为C-Rb或N且w6为C-Rc为N。
在式(VI)的化合物的用途的另一种实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w1和w3独立地为C-Ra或N，w2为C-Rb或N且w6为C-Rc为N。
在式(VII)的化合物的用途的另一种实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w1、w3和w5为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(VII)的化合物的用途的另一种实施方式中，为C-R2，w7为C-R1，w1、w3和w5为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(VIII)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2，w1、w4和w5为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(VIII)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1，w1、w4和w5为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(IX)的化合物的用途的一种实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2，w4和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(IX)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1，w4和w7独立地为C-Ra或N且w2为C-Rb为N。
在式(IX)的化合物的用途的另一种实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w2为C-Rb或N，w3为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(IX)的化合物的用途的另一种实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w2为C-Rb或N，w3为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(X)的化合物的用途的一种实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2，w2为C-Rb或N且w5和w7独立地为C-Ra为N。
在式(X)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1，w2为C-Rb或N且w5和w7独立地为C-Ra为N。
在式(XI)的化合物的用途的一种实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w2为C-Rb或N，w5为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(XI)的化合物的用途的另一种实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w2为C-Rb或N，w5为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(XII)的化合物的用途的一种实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2且w4、w5和w7独立地为C-Ra为N。
在式(XII)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1且w4、w5和w7独立地为C-Ra为N。
在式(XII)的化合物的用途的另一种实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w3和w5独立地为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(XII)的化合物的用途的另一种实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w3和w5独立地为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(XIII)的化合物的用途的一种实施方式中，w3为C-R1，w6为C-R2，w2为C-Rb或N且w4和w5独立地为C-Ra为N。
在式(XIII)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3为C-R2，w6为C-R1，w2为C-Rb或N且w4和w5独立地为C-Ra为N。
在式(XIV)的化合物的用途的一种实施方式中，w4为C-R1，w7为C-R2，w2为C-Rb或N且w3和w5独立地为C-Ra为N。
在式(XIV)的化合物的用途的另一种实施方式中，w4为C-R2，w7为C-R1，w2为C-Rb或N且w3和w5独立地为C-Ra为N。
式(I)的化合物的用途的另一种实施方式是选自式(II)、式(III)、式(IX)、式(XI)或式(XII)的化合物或其形式的用途。
式(I)的化合物的用途的另一种实施方式是式(II)的化合物或其形式的用途。
式(I)的化合物的用途的另一种实施方式是式(III)的化合物或其形式的用途。
式(I)的化合物的用途的另一种实施方式是式(IV)的化合物或其形式的用途。
式(I)的化合物的用途的另一种实施方式是式(V)的化合物或其形式的用途。
式(I)的化合物的用途的另一种实施方式是式(VI)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)的化合物的用途的另一个实施方式是式(VII)的化合物或其形式的用途。
式(I)的化合物的用途的另一种实施方式是式(VIII)的化合物或其形式的用途。
式(I)的化合物的用途的另一种实施方式是式(IX)的化合物或其形式的用途。
式(I)的化合物的用途的另一种实施方式是式(X)的化合物或其形式的用途。
式(I)的化合物的用途的另一种实施方式是式(XI)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)的化合物的用途的另一种实施方式是式(XII)的化合物或其形式的用途。
式(I)的化合物的用途的另一种实施方式是式(XIII)的化合物或其形式的用途。
式(I)的化合物的用途的另一个实施方式是式(XIV)的化合物或其形式的用途。
式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VII)、式(VIII)、式(IX)、式(X)、式(XI)、式(XII)、式(XIII)或式(XIV)的化合物的用途的实施方式分别为选自式(Ia)、式(IIa)、式(IIIa)、式(IVa)、式(Va)、式(VIa)、式(VIIa)、式(VIIIa)、式(IXa)、式(Xa)、式(XIa)、式(XIIa)、式(XIIIa)或式(XIVa)的化合物或其形式的用途。
在式(Ia)的化合物的用途的一种实施方式中，w3、w4、w6和w7中的一个为C-R1且w3、w4、w6和w7中的另一个为C-R2，条件是
当w3为C-R1时，则w6为C-R2且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w3为C-R2时，则w6为C-R1且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w4为C-R1时，则w7为C-R2且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc或N；或
当w4为C-R2时，则w7为C-R1且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(IIa)的化合物的用途的一种实施方式中，w3、w4、w6和w7中的一个为C-R1且w3、w4、w6和w7中的另一个为C-R2，条件是
当w3为C-R1时，则w6为C-R2且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w3为C-R2时，则w6为C-R1且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w4为C-R1时，则w7为C-R2且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc或N；或
当w4为C-R2时，则w7为C-R1且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(IIIa)的化合物的用途的一种实施方式中，w3、w4、w6和w7中的一个为C-R1且w3、w4、w6和w7中的另一个为C-R2，条件是
当w3为C-R1时，则w6为C-R2且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w3为C-R2时，则w6为C-R1且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w4为C-R1时，则w7为C-R2且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc或N；或
当w4为C-R2时，则w7为C-R1且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(IVa)的化合物的用途的一种实施方式中，w4和w7中的一个为C-R1且另一个为C-R2，条件是，当w4为C-R1时，则w7为C-R2；或，当w4为C-R2时，则w7为C-R1。
在式(Va)的化合物的用途的一种实施方式中，w3和w6中的一个为C-R1且另一个为C-R2，条件是，当w3为C-R1时，则w6为C-R2；或，当w3为C-R2时，则w6为C-R1。
在式(VIa)的化合物的用途的一种实施方式中，w3、w4、w6和w7中的一个为C-R1且w3、w4、w6和w7中的另一个为C-R2，条件是
当w3为C-R1时，则w6为C-R2且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w3为C-R2时，则w6为C-R1且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w4为C-R1时，则w7为C-R2且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc或N；或
当w4为C-R2时，则w7为C-R1且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(VIIa)的化合物的用途的一种实施方式中，w4和w7中的一个为C-R1且另一个为C-R2，条件是，当w4为C-R1时，则w7为C-R2；或，当w4为C-R2时，则w7为C-R1。
在式(VIIIa)的化合物的用途的一种实施方式中，w3和w6中的一个为C-R1且另一个为C-R2，条件是，当w3为C-R1时，则w6为C-R2；或，当w3为C-R2时，则w6为C-R1。
在式(IXa)的化合物的用途的一种实施方式中，w3、w4、w6和w7中的一个为C-R1且w3、w4、w6和w7中的另一个为C-R2，条件是
当w3为C-R1时，则w6为C-R2且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w3为C-R2时，则w6为C-R1且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w4为C-R1时，则w7为C-R2且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc或N；或
当w4为C-R2时，则w7为C-R1且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(Xa)的化合物的用途的一种实施方式中，w3和w6中的一个为C-R1且另一个为C-R2，条件是，当w3为C-R1时，则w6为C-R2；或，当w3为C-R2时，则w6为C-R1。
在式(XIa)的化合物的用途的一种实施方式中，w4和w7中的一个为C-R1且另一个为C-R2，条件是，当w4为C-R1时，则w7为C-R2；或，当w4为C-R2时，则w7为C-R1。
在式(XIIa)的化合物的用途的一种实施方式中，w3、w4、w6和w7中的一个为C-R1且w3、w4、w6和w7中另一个为C-R2，条件是
当w3为C-R1时，则w6为C-R2且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w3为C-R2时，则w6为C-R1且w4和w7独立地为C-Ra或N；或
当w4为C-R1时，则w7为C-R2且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc或N；或
当w4为C-R2时，则w7为C-R1且w3为C-Ra或N且w6为C-Rc为N。
在式(XIIIa)的化合物的用途的一种实施方式中，w3和w6中的一个为C-R1且另一个为C-R2，条件是，当w3为C-R1时，则w6为C-R2；或，当w3为C-R2时，则w6为C-R1。
在式(XIVa)的化合物的用途的一种实施方式中，w4和w7中的一个为C-R1且另一个为C-R2，条件是，当w4为C-R1时，则w7为C-R2；或，当w4为C-R2时，则w7为C-R1。
式(I)、式(II)、式(III)、式(IX)、式(XI)或式(XII)的化合物的用途的实施方式分别为选自式(Ia)、式(IIa)、式(IIIa)、式(IXa)、式(XIa)或式(XIIa)的化合物或其形式的用途。
式(I)的化合物的用途的另一个实施方式是式(Ia)的化合物或其形式的用途。
式(I)的化合物的用途的另一种实施方式是式(IIa)的化合物或其形式的用途。
式(III)的化合物的用途的另一种实施方式是式(IIIa)的化合物或其形式的用途。
式(IV)的化合物的用途的另一个实施方式是式(IVa)的化合物或其形式的用途。
式(V)的化合物的用途的另一种实施方式是式(Va)的化合物或其形式的用途。
式(VI)的化合物的用途的另一种实施方式是式(VIa)的化合物或其形式的用途。
式(VII)的化合物的用途的另一种实施方式是式(VIIa)的化合物或其形式的用途。
式(VIII)的化合物的用途的另一种实施方式是式(VIIIa)的化合物的用途：
或其形式。
式(IX)的化合物的用途的另一种实施方式是式(IXa)的化合物或其形式的用途。
式(I)的化合物的用途的另一种实施方式是式(Xa)的化合物或其形式的用途。
式(XI)的化合物的用途的另一种实施方式是式(XIa)的化合物或其形式的用途。
式(XII)的化合物的用途的另一个实施方式是式(XIIa)的化合物的或其形式用途。
式(XIII)的化合物的用途的另一个实施方式是式(XIIIa)的化合物或其形式的用途。
式(XIV)的化合物的用途的另一种实施方式是式(XIVa)的化合物的或其形式用途。
式(Ia)的化合物的用途的一种实施方式是式(Ia1)、式(Ia2)、式(Ia3)或式(Ia4)的化合物或其形式的用途。
式(IIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IIa1)、式(IIa2)、式(IIa3)或式(IIa4)的化合物或其形式的用途。
式(IIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IIIa1)、式(IIIa2)、式(IIIa3)或式(IIIa4)的化合物或其形式的用途。
式(IVa)的化合物的用途的一个实施方式是式(IVa1)或式(IVa2)的化合物的或其形式用途。
式(Va)的化合物的用途的一种实施方式是式(Va1)或式(Va2)的化合物或其形式的用途。
式(VIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIa1)、式(VIa2)、式(VIa3)或式(VIa4)的化合物或其形式的用途。
式(VIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIIa1)或式(VIIa2)的化合物或其形式的用途。
式(VIIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIIIa1)或式(VIIIa2)的化合物的或其形式用途。
式(IXa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IXa1)、式(IXa2)、式(IXa3)或式(IXa4)的化合物或其形式的用途。
式(Xa)的化合物的用途的一种实施方式是式(Xa1)或式(Xa2)的化合物的或其形式用途。
式(XIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(XIa1)或式(XIa2)的化合物或其形式的用途。
式(XIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(XIIa1)、式(XIIa2)、式(XIIa3)或式(XIIa4)的化合物或其形式的用途。
式(XIIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(XIIIa1)或式(XIIIa2)的化合物或其形式的用途。
式(XIVa)的化合物的一种实施方式是式(XIVa1)或式(XIVa2)的化合物的或其形式用途。
式(1a)的化合物的用途的一种实施方式是式(Ia1)的化合物或其形式的用途。
式(1a)的化合物的用途的一种实施方式是式(Ia2)的化合物或其形式的用途：
式(1a)的化合物的用途的一种实施方式是式(Ia3)的化合物或其形式的用途：
式(1a)的化合物的用途的一种实施方式是式(Ia4)的化合物或其形式的用途。
式(IIa)的化合物的用途的一个实施方式是式(IIa1)的化合物或其形式的用途。
式(IIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IIa2)的化合物或其形式的用途。
式(IIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IIa3)的化合物或其形式的用途。
式(IIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IIa4)的化合物或其形式的用途。
式(IIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IIIa1)的化合物或其形式的用途。
式(IIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IIIa2)的化合物或其形式的用途。
式(IIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IIIa3)的化合物或其形式的用途。
式(IIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IIIa4)的化合物或其形式的用途。
式(IVa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IVa1)的化合物或其形式的用途。
式(IVa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IVa2)的化合物或其形式的用途。
式(Va)的化合物的用途的一种实施方式是式(Va1)的化合物或其形式的用途。
式(Va)的化合物的用途的一种实施方式是式(Va2)的化合物或其形式的用途。
式(VIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIa1)的化合物或其形式的用途。
式(VIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIa2)的化合物或其形式的用途。
式(VIa3)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIa)的化合物或其形式的用途。
式(VIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIa4)的化合物或其形式的用途。
式(VIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIIa1)的化合物或其形式的用途。
式(VIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIIa2)的化合物或其形式的用途。
式(VIIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIIIa1)的化合物或其形式的用途。
式(VIIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(VIIIa2)的化合物或其形式的用途。
式(IXa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IXa1)的化合物或其形式的用途。
式(IXa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IXa2)的化合物或其形式的用途。
式(IXa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IXa3)的化合物或其形式的用途。
式(IXa)的化合物的用途的一种实施方式是式(IXa4)的化合物或其形式的用途。
式(Xa)的化合物的用途的一种实施方式是式(Xa1)的化合物或其形式的用途。
式(Xa)的化合物的用途的一种实施方式是式(Xa2)的化合物或其形式的用途。
式(XIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(XIa1)的化合物或其形式的用途。
式(XIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(XIa2)的化合物或其形式的用途。
式(XIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(XIIa1)的化合物或其形式的用途。
式(XIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(XIIa2)的化合物或其形式的用途。
式(XIIa)的化合物的用途的一种实施方式是式(XIIa3)的化合物或其形式的用途。
式(XIIa)的化合物的用途的一个实施方式是式(XIIa4)的化合物或其形式的用途。
式(XIIIa)的化合物的用途的一个实施方式是式(XIIIa1)的化合物或其形式的用途。
式(XIIIa)的化合物的用途的一个实施方式是式(XIIIa2)的化合物或其形式的用途。
式(XIVa)的化合物的用途的一个实施方式是式(XIVa1)的化合物或其形式的用途。
式(XIVa)的化合物的用途的一个实施方式是式(XIVa2)的化合物或其形式的用途。
患者群体
在某些实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于患有SMA的受试者。在其他实施方式中，式(I)的化合物或其形式施用于易患或易感染SMA的受试者。在一个具体实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于患有SMA的人类受试者，其中SMA是由于两种染色体上的SMN1基因的失活性突变或缺失导致SMN1基因功能损失引起的。在一些实施方式中，在施用式(I)的化合物或其形式或其药物组合物之前，对人类受试者进行基因分型(genotyped)，以确定受试者是否具有两种染色体上的SMN1基因的teleomeric副本的失活性突变或缺失导致SMN1基因功能损失。在某些实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于患有0型SMA的受试者。在某些实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于患有1型SMA的受试者。在其他实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于患有2型SMA的受试者。在其他实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于患有3型SMA的受试者。在某些实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于患有4型SMA的受试者。在一些实施方式中，所述人类受试者为SMA患者。
在一些实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于将会或可能受益于增强将SMN1和/或SMN2的外显子7包含到从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中的受试者。在具体实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于将会或可能受益于增加Smn蛋白质表达的受试者。
在一些实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于具有如下年龄范围的人类：约0个月至约6个月龄、约6至约12个月龄、约6至约18个月龄、约18至约36个月龄、约1至约5岁龄、约5至约10岁龄、约10至约15岁龄、约15至约20岁龄、约20至约25岁龄、约25至约30岁龄、约30至约35岁龄、约35至约40岁龄、约40至约45岁龄、约45至约50岁龄、约50至约55岁龄、约55至约60岁龄、约60至约65岁龄、约65至约70岁龄、约70至约75岁龄、约75至约80岁龄、约80至约85岁龄、约85至约90岁龄、约90至约95years old or约95至约100years old.
在某些实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于人类婴儿。在其他实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于人类学步的小孩。在其他实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于人类儿童。在其他实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于成年人。在仍然其他实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于老年人。
在某些实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于患者以预防处于发展为SMA的风险中的患者中SMA的发病。在其他实施方式中，将有效量的式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于患者以预防处于发展为SMA的风险中的患者中SMA的发病。在其他实施方式中，将预防有效量的式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于患者以预防处于发展为SMA的风险中的患者中SMA的发病。在其他实施方式中，将治疗有效量的式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于患者以预防处于发展为SMA的风险中的患者中SMA的发病。
在某些实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于SMA患者以治疗或改善SMA。在其他实施方式中，将有效量的式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于SMA患者以治疗或改善SMA。在其他实施方式中，将预防有效量的式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于SMA患者以预防SMA的发展。在其他实施方式中，将治疗有效量的式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于SMA患者以治疗或改善SMA。
在某些实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物施用于患有SMA的受试者。在其他实施方式中，式(I)的化合物或其形式施用于易患或易感染SMA的受试者。在一个具体实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物施用于患有SMA的人类受试者，其中SMA是由于两种染色体上的SMN1基因的失活性突变或缺失导致SMN1基因功能损失引起的。在一些实施方式中，在施用式(I)的化合物或其形式或其药物之前，对人类受试者进行基因分型，以确定受试者是否具有两种染色体上的SMN1基因的teleomeric副本的失活性突变或缺失导致SMN1基因功能损失。在某些实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物施用于患有0型SMA的受试者。在某些实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物施用于患有1型SMA的受试者。在其他实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物施用于患有2型SMA的受试者。在其他实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物施用于患有3型SMA的受试者。在某些实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物施用于患有4型SMA的受试者。在某些实施方式中，所述人类受试者是SMA患者。
在一些实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物施用于将会或可能受益于增强将SMN1和/或SMN2的外显子7包含到从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中的受试者。在具体实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物施用于将会或可能受益于增加Smn蛋白质表达的受试者。
在一些实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物施用于具有如下年龄范围的人类：约0个月至约6个月龄、约6至约12个月龄、约6至约18个月龄、约18至约36个月龄、约1至约5岁龄、约5至约10岁龄、约10至约15岁龄、约15至约20岁龄、约20至约25岁龄、约25至约30岁龄、约30至约35岁龄、约35至约40岁龄、约40至约45岁龄、约45至约50岁龄、约50至约55岁龄、约55至约60岁龄、约60至约65岁龄、约65至约70岁龄、约70至约75岁龄、约75至约80岁龄、约80至约85岁龄、约85至约90岁龄、约90至约95岁龄或约95至约100岁龄。
在某些实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物施用于人类婴儿。在其他实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物施用于人类学步的小孩。在其他实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物施用于人类儿童。在其他实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物施用于成年人。在仍然其他实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物施用于老年人。
在某些实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物施用于施用于患者以预防处于发展为SMA的风险中的患者中SMA的发病。在其他实施方式中，有效量的式(I)的化合物或其形式或其药物施用于施用于患者以预防处于发展为SMA的风险中的患者中SMA的发病。在其他实施方式中，预防有效量的式(I)的化合物或其形式或其药物施用于施用于患者以预防处于发展为SMA的风险中的患者中SMA的发病。在其他实施方式中，治疗有效量的式(I)的化合物或其形式或其药物施用于施用于患者以预防处于发展为SMA的风险中的患者中SMA的发病。
在某些实施方式中，式(I)的化合物或其形式或其药物施用于SMA患者以治疗或改善SMA。在其他实施方式中，有效量的式(I)的化合物或其形式或其药物施用于SMA患者以治疗或改善SMA。在其他实施方式中，预防有效量的式(I)的化合物或其形式或其药物施用于SMA患者以预防SMA的发展。在其他实施方式中，治疗有效量的式(I)的化合物或其形式或其药物施用于SMA患者以治疗或改善SMA。
施用方式
当施用于患者时，式(I)的化合物或其形式优选地作为组合物的组分施用，该组合物任选地包含可药用载体、赋形剂或稀释剂。该组合物可以口服施用，或者通过任何其它方便的途径，例如输注或快速推注，经由上皮或粘膜皮肤内层(例如，口腔粘膜、直肠和肠粘膜)吸收，并且可以与另外的生物活性剂一起施用。施用可以是全身的或局部的。各种递送系统是已知的，例如包囊在脂质体、微粒、微胶囊、胶囊中，并且可以用于施用所述化合物。
施用方法包括但不限于肠胃外、皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外、经口、舌下、鼻内、脑内、阴道内、透皮、直肠、通过吸入或局部施用，特别是施用于耳、鼻、眼或皮肤。施用方式由执业医师确定。大多数情况下，施用将引起化合物释放到血流中。在一个具体实施方式中，化合物是口服施用。
剂量和剂型
将有效地治疗SMA的式(I)的化合物或其形式的量取决于例如给药途径、SMA类型、受试者的一般健康状况、受试者的种族、年龄、体重和性别、饮食、时间和SMA的严重程度，并且应当根据执业医师的判断和各个患者或受试者的情形决定。
在具体实施方式中，在施用式(I)的化合物或其形式或其组合物或药物内容中的“有效量”、“预防有效量”或“治疗有效量”指具有治疗效果和/或有益效果的式(I)的化合物的量。在一些具体实施方式中，在施用式(I)的化合物或其形式或其组合物或药物内容中的“有效量”、“预防有效量”或“治疗有效量”产生一种、两种或多种下述作用∶(i)降低或改善SMA的严重程度；(ii)延迟SMA发病；(iii)抑制SMA的进展；(iv)减少受试者的住院治疗；(v)减少的住院治疗时长；(vi)提高受试者的存活率；(vii)改善受试者的生活质量；(viii)减少与SMA有关的症状数量；(ix)降低或改善与SMA有关的症状的严重程度；(x)与SMA有关的症状的持续时间；(xi)预防与SMA有关的症状的复发；(xii)抑制SMA的症状的发展或发作；和/或(xiii)抑制与SMA有关的症状的进展。在一些实施方式中，有效量的式(I)的化合物或其形式为有效地增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的SMN2 mRNA中且提高从SMN2基因产生的Smn蛋白质的水平的量，并且因而在需要其的受试者中产生期望的有益效果。在某些情况下，可以通过分析或定量如下来确定预期效果∶(1)SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中；或(2)由SMN2基因产生Smn蛋白质的水平。式(I)的化合物或其形式的有效量的非限制性实例为本文描述的。
例如，有效量可以为治疗需要其的人类受试者中的SMA所需的量、或在需要其的人类受试者中增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中所需的量、或在需要其的人类受试者中提高由SMN2基因产生的Smn蛋白质的水平的量。在一个具体实施方式中，人类受试者为SMA患者。
一般而言，对于体重范围为约1kg至约200kg的患者或受试者，有效量的范围为约0.001mg/kg/天至约500mg/kg/天。预期典型的成年人受试者具有的中值体重范围为约70至约100kg。
在本说明书的范围之内，用于制备药物、制备药物试剂盒或在治疗需要其的人类受试者中的SMA的方法中使用的式(I)的化合物或其形式的“有效量”预期包括在约0.001mg至约35,000mg范围内的量。在一个具体实施方式中，人类受试者为SMA患者。
本文所述组合物配制为经由本领域已知的任何药物递送途径施用于受试者。非限制性的实例包括口服、眼、直肠、含服、局部、鼻、眼部、皮下、肌内、静脉内(快速推注和输注)、脑内、透皮和肺部施用途径。
药物组合物
本文所述实施方式包括式(I)的化合物或其形式在药物组合物中的用途。在一个具体实施方式中，本文描述式(I)的化合物或其形式在治疗需要其的人类受试者中的SMA的药物组合物中的用途，其包括施用有效量的式(I)的化合物或其形式in与可药用赋形剂的混合物。在一个具体实施方式中，人类受试者为SMA患者。
式(I)的化合物或其形式可以任选地呈包含所述化合物或其形式和任选的载体、赋形剂或稀释剂的组合物形式。本文提供的其它实施方式包括包含有效量的式(I)的化合物或其形式和可药用载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物。在一个具体实施方式中，药物组合物适于兽医和/或人类施用。本文提供的药物组合物可以呈允许该组合物施用于受试者的任何形式。
在一个具体实施方式和在上下文中，术语“可药用”指联邦或州政府的管理机构批准的或在美国药典或其它通常公认的药典列出用于动物，更特别是人类的载体、赋形剂或稀释剂。术语“载体”指与治疗剂一起施用的稀释剂、助剂(例如弗氏佐剂(完全和不完全))、赋形剂或载体。这样的药物载体可以为无菌液体，例如水和油，指石油、动物、植物或合成来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等水是用于静脉内施用药物组合物的特定载体。盐水溶液及葡萄糖和甘油水溶液也可以用作液体载体，特别地用于可注射的溶液。
典型的组合物和剂型包括一种或多种赋形剂。合适的赋形剂是药物领域技术人员熟知的，合适的赋形剂的非限制性实例包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化钠、脱脂乳粉、甘油、丙二醇、水、乙醇等。特定的赋形剂是否适于掺入药物组合物或剂型中取决于本领域众所周知的多种因素，包括，但不限于将该剂型施用于患者的方式和剂型中的特定活性成分。本文进一步提供包含如本文所述的式(I)的化合物或其形式的无水药物组合物和剂型。所述组合物和单一单位剂型可以采取以下形式：溶液或糖浆(任选地含有矫味剂)、悬浮液(任选地含有矫味剂)、乳剂、片剂(例如，咀嚼片)、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂(任选地用于重构)、遮味或缓释制剂等。
适用于口服施用的本文提供的药物组合物可以制成独立剂型，例如，但不限于片剂、囊片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂和液体。这样的剂型包含预定量的活性成分，且可以用本领域那些技术人员熟知的制药方法来制备。
可以用于本文提供的口服剂型的赋形剂的实例包括，但不限于粘合剂、填充剂、崩解剂和润滑剂。
生物标记物
在一些实施方式中，在某些实施方式中，从SMN1基因和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量可用作SMA的生物标记物。在一些实施方式中，在某些实施方式中，从SMN1基因和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量可用作SMA的生物标记物。在其他实施方式中，从SMN1基因和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量用作用例如本文公开的化合物治疗SMA患者的生物标记物。在其他实施方式中，从SMN1基因和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量用作用例如本文公开的化合物治疗SMA患者的生物标记物。在某些实施方式中，从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的变化和从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的相应变化为用例如本文公开的治疗的患者的生物标记物。在一个具体实施方式中，患者为SMA患者。
在一种具体实施方式中，在施用化合物(例如，本文公开的式(I)的化合物)之后，从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加和从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的相应降低指示该化合物可以有效地治疗SMA。在另一个具体实施方式中，在施用化合物(例如，本文公开的式(I)的化合物)之后，从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的降低和从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的相应增加指示该化合物不能有效地治疗SMA。根据这些实施方式，如下所述的SMN引物和/或SMN探针可用于测定中，例如PCR(例如qPCR)和RT-PCR(例如，RT-qPCR或终点RT-PCR)来评价和/或定量从SMN1基因和/或SMN2基因转录且包括或不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。
在一种实施方式中，本文提供用于扩增编码人类SMN1和/或SMN2或由人类SMN1和/或SMN2编码的核苷酸的SMN引物和/或SMN探针(例如，具有核苷酸序列SEQ ID NO.1、7、8、11或13的正向引物；和/或具有核苷酸序列SEQ ID NO.9或12的反向引物；和/或SMN探针例如SEQ ID NO.3或10)。这些引物可用作例如RT-PCR(如本文所述的或如本领域技术人员已知的RT-PCR、终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如qPCR)或滚环扩增中的引物，和用作杂交测定例如RNA印迹和/或DNA印迹测定中的探针。如本文生物学实施例中使用的，终点RT-PCR是如下进行的逆转录-聚合酶链反应：进行一定次数的扩增循环(或直到起始原料耗尽)，接着使用例如凝胶电泳分离、荧光染料染色、荧光定量等来定量每种DNA产物。
SEQ ID NO.1杂交于包含对应于SMN1和/或SMN2的外显子7的核苷酸22至40的核苷酸的DNA或RNA，SEQ ID NO.2杂交于包含对应于萤火虫荧光素酶编码序列的核苷酸4至26的核苷酸的DNA或RNA；SEQ ID NO.7杂交于包含对应于SMN1和/或SMN2的外显子7的核苷酸32至54的核苷酸和SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸1至4的核酸序列(例如，DNA的有义链)，SEQ ID NO.8杂交于包含依次对应于SMN1和/或SMN2的外显子7的核苷酸87至111及SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸1至3的核苷酸的核酸序列(例如，DNA的有义链)，SEQ ID NO.9杂交于包含对应于SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸39至62的核苷酸的核酸序列(例如，DNA或RNA的反义链)，SEQ ID NO.11杂交于包含对应于SMN1和/或SMN2的外显子6的核苷酸43至63的核苷酸的核酸序列(例如，DNA的有义链)，SEQ ID NO.12杂交于包含依次对应于SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸51至73的核苷酸的核酸序列(例如，DNA的反义链)，SEQ IDNO.13杂交于包含对应于SMN1和/或SMN2的外显子6的核苷酸22至46的核苷酸的核酸序列(例如，DNA或RNA的有义链)。
因此，对应于SEQ ID NO.9、11、12和/或13的寡核苷酸可用于扩增反应中以扩增编码人类SMN1和/或SMN2或由人类SMN1和/或SMN2编码的且缺乏人类SMN1和/或SMN2的外显子7的核苷酸，及扩增编码人类SMN1和/或SMN2或由人类SMN1和/或SMN2编码的且包括人类SMN1和/或SMN2的外显子7的核苷酸。相反，对应于SEQ ID NO.8的寡核苷酸连同下游反向引物(例如，SEQ ID NO.9或12)可用于扩增编码人类SMN1和/或SMN2或由人类SMN1和/或SMN2编码的且缺乏人类SMN1和/或SMN2的外显子7的核苷酸，并且对应于SEQ ID NO.1和7的寡核苷酸连同下游反向引物(例如，SEQ ID NO.9或12)可用于扩增编码人类SMN1和/或SMN2或由人类SMN1和/或SMN2编码的且包括人类SMN1和/或SMN2的外显子7的核苷酸。
SEQ ID NO.3杂交于包含依次对应于人类SMN1和/或SMN2的外显子7的核苷酸50至54及人类SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸1至21的核苷酸的核酸序列(例如，DNA的有义链)，且SEQ ID NO.10杂交于包含对应于人类SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸7至36的核苷酸的核酸序列(例如，DNA的有义链)。SEQ ID NO.3用作探针以检测从小基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA(本文描述的或在国际公开WO 2009/151546或美国专利申请公开第2011/0086833号中描述的，将其中每篇的全部内容通过引用并入本文)，和检测从人类SMN1和/或SMN2转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA。另外，SEQ ID NO.10用作探针以检测从小基因转录且包括或不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA，和检测从人类SMN1和/或SMN2转录的mRNA(本文描述的或在国际公开WO 2009/151546或美国专利申请公开第2011/0086833号中描述的，将其中每篇的全部内容通过引用并入本文)。
在一个具体实施方式中，下文生物学实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物例如SEQ ID NO.1、7、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12，和/或SMN探针例如SEQ ID NO.3或10)用于测定中，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增及可适用时RNA印迹或DNA印迹(例如，例如在下文生物学实施例中所述的测定)，以确定化合物(例如，式(I)的化合物或其形式)是否增强将SMN1和/或SMN2的外显子7包含到从smn1和/或SMN2基因转录的mRNA中。
在另一个实施方式中，下文生物学实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物例如SEQ ID NO.1、7、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12，和/或SMN探针例如SEQ ID NO.3或10)用于测定中，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增及可适用时RNA印迹或DNA印迹(例如，例如在下文生物学实施例中所述的测定)，以监测患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在一个具体实施方式中，患者为SMA患者。
在另一个实施方式中，下文生物学实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物例如SEQ ID NO.1、7、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12，和/或SMN探针例如SEQ ID NO.3或10)用于测定中，例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增及可适用时RNA印迹或DNA印迹(例如，例如在下文生物学实施例中所述的测定)，以监测患者对化合物(例如，式(I)的化合物或其形式)的反应。在一个具体实施方式中，患者为SMA患者。
来自患者的样品(例如，血液样品、PBMC或组织样品例如皮肤或肌肉组织样品)可以使用本领域技术人员已知的技术获得，并且下文生物学实施例中所述的引物和/或探针可用于测定中(例如PCR、RT-PCR、RT-qPCR、qPCR、终点RT-PCR、滚环扩增、RNA印迹或DNA印迹)以测定从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA的量(例如，从SMN2基因转录的包括SMN2的外显子7的mRNA的量)。来源于患者的样品指在使用本领域技术人员已知的技术从患者获得之后加工和/或操作的样品。例如，来自患者的样品可以使用本领域技术人员已知的技术加工以例如提取RNA。来自患者的样品可以加工以例如提取RNA和将RNA逆转录以产生cDNA。在一个具体实施方式中，患者为SMA患者。
在一种具体实施方式中，本文提供一种用于检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的方法，其包括∶(a)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)；(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在一些实施方式中，样品来自或来源于施用化合物如本文所述式(I)的化合物或其形式的患者。在一种具体实施方式中，患者为SMA患者。
在另一种具体实施方式中，本文提供一种用于检测从SMN1和SMN2基因转录的mRNA的量的方法，其包括∶(a)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)与用于例如RT-(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)；和(b)检测从SMN1和SMN2基因转录的mRNA的量。在一些实施方式中，样品来自或来源于施用化合物如本文所述式(I)的化合物或其形式的患者。在一种具体实施方式中，患者为SMA患者。
从人类SMN1和SMN2基因转录且包括SMN1和SMN2的外显子7的mRNA的量与从人类SMN1和SMN2基因转录且不包括SMN1和SMN2的外显子7的mRNA的量可以通过例如从包括SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2 mRNA和从不包括SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2mRNA产生的RNA或DNA片段的尺寸彼此区别。
在另一种具体实施方式中，本文提供了一种用于检测从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的方法，包括∶(a)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在一些实施方式中，样品来自或来源于施用化合物如本文所述式(I)的化合物或其形式的患者。在一种具体实施方式中，患者为SMA患者。
在另一种具体实施方式中，本文提供了一种用于检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的方法，包括∶(a)用如下所述SMN探针(例如，SEQ ID NO.3或10)与例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增及可适用的RNA印迹或DNA印迹的可用组分一起接触患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在一些实施方式中，样品来自或来源于施用化合物如本文所述式(I)的化合物或其形式的患者。在一个具体实施方式中，患者为SMA患者。
在另一个具体实施方式中，本文提供了一种用于检测从SMN1和SMN2基因转录的mRNA的量的方法，包括∶(a)用如下所述SMN探针(例如，SEQ ID NO.3或10)与例如用于RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增及可适用的RNA印迹或DNA印迹的可用组分一起接触患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)；和(b)检测从SMN1和SMN2基因转录的mRNA的量。
从人类SMN1和SMN2基因转录且包括SMN1和SMN2的外显子7的mRNA的量与从人类SMN1和SMN2基因转录且不包括SMN1和SMN2的外显子7的mRNA的量可以通过例如从包括SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2 mRNA和从不包括SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2mRNA产生的RNA或DNA片段的尺寸彼此区别。在一些实施方式中，样品来自或来源于施用化合物如本文所述式(I)的化合物或其形式的患者。在一个具体实施方式中，患者为SMA患者。
在另一种具体实施方式中，本文提供一种用于检测从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的方法，其包括∶(a)用如下所述SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)与例如用于RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)、滚环扩增或的RNA印迹或DNA印迹的可用组分一起接触患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在一些实施方式中，样品来自或来源于施用化合物如本文所述式(I)的化合物或其形式的患者。在一种具体实施方式中，患者为SMA患者。
在一种具体实施方式中，本文提供了一种用于检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的方法，其包括∶(a)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或本文所述SMN探针(例如，SEQ ID NO.3或10)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在一些实施方式中，样品来自或来源于施用化合物如本文所述式(I)的化合物或其形式的患者。在一种具体实施方式中，患者为SMA患者。
在一种具体实施方式中，本文提供了一种用于检测从SMN1和SMN2基因转录的mRNA的量的方法，其包括∶(a)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、8、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或本文所述SMN探针(例如，SEQ IDNO.3或10)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或可适用时的滚环扩增的可用组分一起接触患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)；和(b)检测从SMN1和SMN2基因转录的mRNA的量。在一个具体实施方式中，患者为SMA患者。
从人类SMN1和SMN2基因转录且包括SMN1和SMN2的外显子7的mRNA的量与从人类SMN1和SMN2基因转录且不包括SMN1和SMN2的外显子7的mRNA的量可以通过例如从包括SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2 mRNA和从不包括SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2mRNA产生的RNA或DNA片段的尺寸彼此区别。在一些实施方式中，样品来自或来源于施用化合物如本文所述式(I)的化合物或其形式的患者。在一种具体实施方式中，患者为SMA患者。
在一种具体实施方式中，本文提供了一种用于检测从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的方法，包括∶(a)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或本文所述SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在一些实施方式中，样品来自或来源于施用化合物如本文所述式(I)的化合物或其形式的患者。在一种具体实施方式中，患者为SMA患者。
在一种具体实施方式中，本文提供了一种用于评估SMA患者对化合物的反应的方法，包括∶(a)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)，其中所述样品来自或来源于施用化合物(例如，本文所述化合物)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上评估患者的反应。
在另一种具体实施方式中，本文提供了一种用于评估SMA患者对化合物的反应的方法，其包括∶(a)向SMA患者施用化合物；(b)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触得自或来源于患者的样品(例如，血液样品或组织样品)；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上评估患者的反应。
在一种具体实施方式中，本文提供了一种用于评估SMA患者对化合物的反应的方法，其包括∶(a)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ ID NO.3或10)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)，其中所述样品来自或来源于施用化合物(例如，本文所述式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上评估患者的反应。
在另一种具体实施方式中，本文提供了一种用于评估SMA患者对化合物的反应的方法，包括∶(a)向SMA患者施用化合物；(b)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ IDNO.3或10)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触得自或来源于患者的样品(例如，血液样品或组织样品)；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上评估患者的反应。
在一种具体实施方式中，本文提供了一种用于评估SMA患者对化合物的反应的方法，其包括∶(a)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)，其中所述样品来自或来源于施用化合物(例如，本文所述式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上评估患者的反应。
在另一个具体实施方式中，本文提供一种用于评估SMA患者对化合物的反应的方法，包括∶(a)向SMA患者施用化合物；(b)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触得自或来源于患者的样品(例如，血液样品或组织样品)；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上评估患者的反应。
在一种具体实施方式中，本文提供了一种用于评估SMA患者对化合物的反应的方法，包括∶(a)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针((例如，SEQ ID NO.10)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)，其中所述样品来自或来源于施用化合物(例如，本文所述式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上评估患者的反应。
在另一种具体实施方式中，本文提供了一种用于评估SMA患者对化合物的反应的方法，其包括∶(a)向SMA患者施用化合物；(b)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ IDNO.10)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触得自或来源于患者的样品(例如，血液样品或组织样品)；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上评估患者的反应。
在一种具体实施方式中，本文提供了一种用于评估SMA患者对化合物的反应的方法，其包括∶(a)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品))，其中所述样品来自或来源于施用化合物(例如，本文所述式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加，和(ii)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低，指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化，和(ii)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化，指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上评估患者的反应。
在另一种具体实施方式中，本文提供了一种用于评估SMA患者对化合物的反应的方法，包括∶(a)向SMA患者施用化合物；(b)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触得自或来源于患者的样品(例如，血液样品或组织样品)；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加，和(ii)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低，指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化，和(ii)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化，指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上评估患者的反应。
在一种具体实施方式中，本文提供了一种用于评估SMA患者对化合物的反应的方法，包括∶(a)用SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)，其中所述样品来自或来源于施用化合物(例如，本文所述式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加，和(ii)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低，指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化，和(ii)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化，指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上评估患者的反应。
在另一种具体实施方式中，本文提供了一种用于评估SMA患者对化合物的反应的方法，其包括∶(a)向SMA患者施用化合物；(b)用SMN探针((例如，SEQ ID NO.10)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触得自或来源于患者的样品((例如，血液样品或组织样品)；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加，和(ii)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低，指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化，和(ii)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化，指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上评估患者的反应。
在一种具体实施方式中，本文提供了一种用于评估SMA患者对化合物的反应的方法，包括∶(a)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)，其中所述样品来自或来源于施用化合物(例如，本文所述式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加，和(ii)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低，指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化，和(ii)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品)例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化，指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上评估患者的反应。
在另一种具体实施方式中，本文提供了一种用于评估SMA患者对化合物的反应的方法，其包括∶:(a)向SMA患者施用化合物；(b)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ IDNO.11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQID NO.10)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR))、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触得自或来源于患者的样品(例如，血液样品或组织样品)；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加，和(ii)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低，指示SMN1患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化，和(ii)相对于从施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化，指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上评估患者的反应。
在一种具体实施方式中，本文提供了一种用于监测SMA患者对化合物的反应的方法，其包括∶(a)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)，其中所述样品来自或来源于施用化合物(例如，本文所述式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上监测患者的反应。在某些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或以上剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在连续施用化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)数日、数周、数月或数年的期间或之后，监测患者的反应。
在另一种具体实施方式中，本文提供了一种用于监测SMA患者对化合物的反应的方法，包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触得自或来源于患者的样品(例如，血液样品或组织样品)；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、3小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上监测患者的反应。在某些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或以上剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在连续施用化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)的数日、数周、数月或数年的期间或之后，监测患者的反应。
在一种具体实施方式中，本文提供了一种用于监测SMA患者对化合物的反应的方法，包括：(a)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ ID NO.3或10)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)，其中所述样品来自或来源于施用化合物(例如，本文所述式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上监测患者的反应。在某些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或以上剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在连续施用化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)的数日、数周、数月或数年的期间或之后，监测患者的反应。
在另一种具体实施方式中，本文提供了一种用于监测SMA患者对化合物的反应的方法，包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ IDNO.3或10)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触得自或来源于患者的样品(例如，血液样品或组织样品)；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上监测患者的反应。在某些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或以上剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在连续施用化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)的数日、数周、数月或数年的期间或之后，监测患者的反应。
在一种具体实施方式中，本文提供了一种用于监测SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)，其中所述样品来自或来源于施用化合物(例如，本文所述式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低，指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上监测患者的反应。在某些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或以上剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在连续施用化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)的数日、数周、数月或数年的期间或之后，监测患者的反应。
在另一种具体实施方式中，本文提供了一种用于监测SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触得自或来源于患者的样品(例如，血液样品或组织样品)；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低，指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上监测患者的反应。在某些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或以上剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在连续施用化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)的数日、数周、数月或数年期间，监测患者的反应。
在一种具体实施方式中，本文提供了一种用于监测SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)，其中所述样品来自或来源于施用化合物(例如，本文所述式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低，指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、3小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上监测患者的反应。在某些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或以上剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在连续施用化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)的数日、数周、数月或数年的期间或之后，监测患者的反应。
在另一种具体实施方式中，本文提供了一种用于监测SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ IDNO.3或10)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触得自或来源于患者的样品(例如，血液样品或组织样品)；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低，指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上监测患者的反应。在某些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或以上剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在连续施用化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)的数日、数周、数月或数年的期间或之后，监测患者的反应。
在一种具体实施方式中，本文提供了一种用于监测SMA患者对化合物的反应的方法，其包括∶(a)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)，其中所述样品来自或来源于施用化合物(例如，本文所述式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加，和(ii)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低，指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化，和(ii)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上监测患者的反应。在某些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或以上剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在连续施用化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)的数日、数周、数月或数年的期间或之后，监测患者的反应。
在另一种具体实施方式中，本文提供了一种用于监测SMA患者对化合物的反应的方法，其包括∶(a)向SMA患者施用化合物；(b)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触得自或来源于患者的样品(例如，血液样品或组织样品)；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加(ii)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低，指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化，和(ii)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上监测患者的反应。在某些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或以上剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在连续施用化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)的数日、数周、数月或数年的期间或之后，监测患者的反应。
在一种具体实施方式中，本文提供了一种用于监测SMA患者对化合物的反应的方法，其包括∶(a)用SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)，其中所述样品来自或来源于施用化合物(例如，本文所述式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加，和(ii)相对于施用所述化合物或一定剂量数的化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低，指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化，和(ii)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上监测患者的反应。在某些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或以上剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在连续施用化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)的数日、数周、数月或数年的期间或之后，监测患者的反应。
在另一种具体实施方式中，本文提供了一种用于监测SMA患者对化合物的反应的方法，其包括∶(a)向SMA患者施用化合物；(b)用SMN探针(例如SEQ ID NO.10)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触得自或来源于患者的样品(例如，血液样品或组织样品)；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加(ii)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低，指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化，和(ii)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上监测患者的反应。在某些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或以上剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在连续施用化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)的数日、数周、数月或数年的期间或之后，监测患者的反应。
在一种具体实施方式中，本文提供了一种用于监测SMA患者对化合物的反应的方法，其包括∶(a)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已经加工以提取RNA的血液样品或组织样品)，其中所述样品来自或来源于施用化合物(例如，本文所述式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加，和(ii)相对于施用所述化合物或一定剂量数的化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低，指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化，和(ii)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上监测患者的反应。在某些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或以上剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在连续施用化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)的数日、数周、数月或数年的期间或之后，监测患者的反应。
在另一种具体实施方式中，本文提供了一种用于监测SMA患者对化合物的反应的方法，其包括∶(a)向SMA患者施用化合物；(b)用如下所述正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ IDNO.10)与用于例如RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增的可用组分一起接触得自或来源于患者的样品(例如，血液样品或组织样品)；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量增加，和(ii)相对于施用所述化合物或一定剂量数的化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量降低，指示患者对该化合物有反应且该化合物对患者可能为或为有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化，和(ii)相对于施用所述化合物或一定剂量数的所述化合物之前或某一更早日期来自患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量没有变化或没有实质性变化，指示患者对该化合物无反应且该化合物对患者是无益的和/或不具有治疗价值。在一些实施方式中，在施用化合物例如本文所述式(I)的化合物或其形式之后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或以上监测患者的反应。在某些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或以上剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)之后，监测患者的反应。在某些实施方式中，在连续施用化合物(例如本文所述式(I)的化合物或其形式)的数日、数周、数月或数年的期间或之后，监测患者的反应。
在具体的实施方式中，患者中的SMA是由于两种染色体上的SMN1基因失活性突变或缺失导致SMN1基因功能损失引起的。
试剂盒
在一个方面，本文提供药物或测定试剂盒，其包含在一个或多个容器中本文所述SMN引物或探针，及使用说明书。在一个实施方式中，药物或测定试剂盒包括在一个容器中的一种或多种SMN反向引物(例如，SEQ ID NO.2、9和/或12)和/或一种或多种SMN正向引物(SEQ ID NO.1、7、8、11和/或13))，及使用说明书。在另一个实施方式中，药物或测定试剂盒包括在一个容器中的SMN反向引物(例如，SEQ ID NO.2、9和/或12)、SMN正向引物(SEQ IDNO.1、7、8、11和/或13))，及使用说明书。
在一种实施方式中，药物或测定试剂盒在分开的容器中包括在一个容器中的SMN反向引物(例如，SEQ ID NO.2、9和/或12)、在另一个容器中的SMN正向引物(SEQ ID NO.1、7、8、11和/或13))，及使用说明书。
在一些实施方式中，在这样的试剂盒中包括PCR(例如，qPCR)、RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)或滚环扩增所需的可用组分，例如聚合酶、三磷酸脱氧核苷等。在某些实施方式中，在这样的试剂盒中包括杂交所需的组分。包含这样的引物的药物或测定试剂盒可用于PCR和RT-PCR中，例如∶(i)评估治疗剂(例如式(I)的化合物或其形式)是否增强将SMN1和/或SMN2的外显子7包含到从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中，(ii)监测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，和/或(iii)监测受试者对治疗剂(例如，式(I)的化合物或其形式)的反应。在其他实施方式中，受试者为人类受试者。在其他实施方式中，人类受试者为人类患者。在一些其他实施方式中，人类患者为人类SMA患者。
在一个具体实施方式中，药物或测定试剂盒包括在一个容器中具有SEQ ID NO.1所示序列的正向引物和在另一个容器中具有SEQ ID NO.2所示序列的反向引物。在一些实施方式中，这些引物用在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如qPCR)或滚环扩增中，用于扩增由人类SMN1小基因或人类SMN2小基因编码的核苷酸序列，例如本文所述那些或在国际公开No.WO 2009/151546或U.S.专利申请公开No.2011/0086833中所述那些，将其中每篇的全部内容通过引用并入本文。在其他实施方式中，这些引物作为探针用于例如杂交测定中，例如DNA印迹或RNA印迹。
在一种具体实施方式中，药物或测定试剂盒包括在一个容器中具有SEQ ID NO.7所示核苷酸核苷酸序列的正向引物和在另一个容器中具有SEQ ID NO.9所示核苷酸核苷酸序列的反向引物。在一些实施方式中，这些引物用在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如qPCR)或滚环扩增中，用于扩增由内源性人类SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他实施方式中，这些引物作为探针用于例如杂交测定中，例如DNA印迹或RNA印迹。
在另一种具体实施方式中，药物或测定试剂盒包括在一个容器中具有SEQ IDNO.8所示核苷酸核苷酸序列的正向引物和在另一个容器中具有SEQ ID NO.9所示核苷酸核苷酸序列的反向引物。在一些实施方式中，这些引物用在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如qPCR)或滚环扩增中，用于扩增由内源性人类SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他实施方式中，这些引物作为探针用于例如杂交测定中，例如DNA印迹或RNA印迹。
在一种具体实施方式中，药物或测定试剂盒包括在一个容器中具有SEQ ID NO.7所示核苷酸核苷酸序列的正向引物、在另一个容器中具有SEQ ID NO.8所示核苷酸核苷酸序列的正向引物、和在另一个容器中具有SEQ ID NO.9所示核苷酸序列的反向引物。在一些实施方式中，这些引物用在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如qPCR)或滚环扩增中，用于扩增由内源性人类SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他实施方式中，这些引物作为探针用于例如杂交测定中，例如DNA印迹或RNA印迹。
在一种具体实施方式中，药物或测定试剂盒包括在一个容器中具有SEQ ID NO.11所示核苷酸核苷酸序列的正向引物和在另一个容器中具有SEQ ID NO.12所示核苷酸核苷酸序列的反向引物。在一些实施方式中，这些引物用在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如qPCR)或滚环扩增中，用于扩增由内源性人类SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他实施方式中，这些引物作为探针用于例如杂交测定中，例如DNA印迹或RNA印迹。
在一种具体实施方式中，药物或测定试剂盒包括在一个容器中具有SEQ ID NO.11所示核苷酸核苷酸序列的正向引物和在另一个容器中具有SEQ ID NO.9所示核苷酸核苷酸序列的反向引物。在一些实施方式中，这些引物用在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如qPCR)或滚环扩增中，用于扩增由内源性人类SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他实施方式中，这些引物作为探针用于例如杂交测定中，例如DNA印迹或RNA印迹。
在一种具体实施方式中，药物或测定试剂盒包括在一个容器中具有SEQ ID NO.13所示核苷酸核苷酸序列的正向引物和在另一个容器中具有SEQ ID NO.12所示核苷酸核苷酸序列的反向引物。在一些实施方式中，这些引物用在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如qPCR)或滚环扩增中，用于扩增由内源性人类SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他实施方式中，这些引物作为探针用于例如杂交测定中，例如DNA印迹或RNA印迹。
在一种具体实施方式中，药物或测定试剂盒包括在一个容器中具有SEQ ID NO.13所示核苷酸核苷酸序列的正向引物和在另一个容器中具有SEQ ID NO.9所示核苷酸核苷酸序列的反向引物。在一些实施方式中，这些引物用在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如qPCR)或滚环扩增中，用于扩增由内源性人类SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他实施方式中，这些引物作为探针用于例如杂交测定中，例如DNA印迹或RNA印迹。
在一种具体实施方式中，药物或测定试剂盒包括在一个容器中具有SEQ ID NO.1所示核苷酸核苷酸序列的正向引物和在另一个容器中具有SEQ ID NO.9所示核苷酸核苷酸序列的反向引物。在一些实施方式中，这些引物用在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如qPCR)或滚环扩增中，用于扩增由内源性人类SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他实施方式中，这些引物作为探针用于例如杂交测定中，例如DNA印迹或RNA印迹。
在一种具体实施方式中，药物或测定试剂盒包括在一个容器中具有SEQ ID NO.1所示核苷酸核苷酸序列的正向引物和在另一个容器中具有SEQ ID NO.12所示核苷酸核苷酸序列的反向引物。在一些实施方式中，这些引物用在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如qPCR)或滚环扩增中，用于扩增由内源性人类SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他实施方式中，这些引物作为探针用于例如杂交测定中，例如DNA印迹或RNA印迹。
在另一种实施方式中，药物或测定试剂盒包括在一个容器中的本文所述SMN探针(例如，SEQ ID NO.3或10)。在其他实施方式中，所述探针用于例如杂交测定中，例如DNA印迹或RNA印迹。在一个具体实施方式中，所述探针用于RT-qPCR或qPCR中。在一些实施方式中，在这样的试剂盒中包括PCR(例如，qPCR)、RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)或滚环扩增所需的可用组分，例如聚合酶、三磷酸脱氧核苷、引物等。在某些实施方式中，在这样的试剂盒中包括杂交所需的组分。
在一种实施方式中，药物或测定试剂盒包括在一个容器中的SMN反向引物(例如，SEQ ID NO.2、9和/或12)、在另一个容器中的SMN正向引物(SEQ ID NO.1、7、8、11和/或13)、和在另一个容器中的SMN探针(例如，SEQ ID NO.3或10)，及使用说明书。在另一个实施方式中，药物或测定试剂盒包括在一个容器中的一种或多种SMN反向引物(例如，SEQ ID NO.2、9和/或12)、在另一个容器中的一种或多种SMN正向引物(SEQ ID NO.1、7、8、11和/或10))、和在另一个容器中的一种或多种SMN探针(例如，SEQ ID NO.3或10)，及使用说明书。
在一些实施方式中，在这样的试剂盒中包括运行PCR、RT-PCR或滚环扩增所需的组分，例如聚合酶、三磷酸脱氧核苷等。包含这样的探针和/或引物的药物或测定试剂盒可用于PCR和RT-PCR中，例如∶(i)评估治疗剂(例如式(I)的化合物或其形式)是否增强将SMN1和/或SMN2的外显子7包含到从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中，(ii)监测从SMN1和/或SMN2基因转录且包括外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录且不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，和/或(iii)监测受试者对治疗剂(例如，式(I)的化合物或其形式)的反应。在其他实施方式中，受试者为人类受试者。在其他实施方式中，人类受试者为人类患者。在一些其他实施方式中，人类患者为人类SMA患者。
在另一个方面，本文提供药物试剂盒，其包括在容器中的式(I)的化合物或其形式和该化合物或其形式的使用说明书。在一个具体实施方式中，本文提供一种药物试剂盒，其包含式(I)的化合物其形式和可药用载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物，及使用说明书。在另一个具体实施方式中，本文提供一种药物试剂盒，其包含有效量的式(I)的化合物其形式和可药用载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物，及使用说明书。在一个实施方式中，使用说明书说明下述的一个、两个或三个：向受试者施用式(I)的化合物或其形式的剂量、施用途径、施用频率和副作用。在其他实施方式中，受试者为人类受试者。在其他实施方式中，人类受试者为人类患者。在一些其他实施方式中，人类患者为人类SMA患者。
如本文公开的，用于制备如本文所述式(I)的化合物或其形式的一般方法是经由标准、众所周知的合成方法获得。许多起始原料是市售可获得的，或者当不可获得时，可以使用本领域技术人员已知的技术，使用如下所述途径制备。本文提供的合成方案包括多个反应步骤，每个反应步骤都预期独立且可以在有或者没有任何前述或后续步骤的情况下进行。换句话说，独立地涵盖本文提供的合成方案的每个独立反应步骤。
一般合成方法
方案A
其中R2为单环或二环芳基、杂环基或杂芳基环系统的式(I)的化合物可以如下方案A所述制备。
在合适的溶剂(例如THF等)中，在碱(例如NaH等)的存在下，甲基酮化合物A1与碳酸二烷酯化合物A1a(其中Rx为C1-4烷基等)反应，得到化合物A3。或者，在合适的溶剂(例如THF等)中，在碱(例如LDA等)的存在下，酯化合物A2与乙酸酯化合物A2a(其中Ry为C1-4烷基等)反应，得到化合物A3。在醇(例如MeOH等)和酸催化剂(例如p-TsOH等)的存在下，化合物A3进一步反应，得到缩醛化合物A4(其中Rz为C1-4烷基等)。在酸(例如PPA、p-TsOH等)和合适的溶剂(例如DMA等)的存在下，化合物A3或化合物A4与化合物A5(其中X代表各种反应基团，其可通过使用本领域普通技术人员已知的技术，使合适的起始原料与化合物A5或化合物A6反应，用于提供多个R1官能团取代基)反应，得到化合物A6。
方案B
其中R2为单环或二环杂环基或杂芳基环系统的式(I)的化合物可以如下方案B所述制备。
化合物B1与化合物B2在合适的溶剂(例如MeOH等)中反应，得到化合物B3，该化合物B2为任选取代的杂环基或杂芳基环系统(其中术语“Het”指脒样部分，例如但不限于2-氨基吡啶、2-氨基嘧啶、2-氨基吡嗪、3-氨基哒嗪、2-氨基噻唑、4-氨基噻唑、4-氨基嘧啶等)，得到化合物B3。在合适的溶剂(例如THF等)中，在碱(例如LDA等)的存在下，化合物B3与乙酸酯化合物A2a(其中Ry为C1-4烷基等)反应，得到化合物B4。在酸(例如PPA、p-TsOH等)和合适的溶剂(例如DMA等)的存在下，化合物B4与化合物A5反应，得到化合物B5。
方案C
其中R2为单环或二环杂芳基环系统的式(I)的化合物可以如下方案C所述制备。
在碱(例如K2CO3等)和合适的溶剂(例如丙酮等)的存在下，2,4-二酯吡唑化合物C1与α-氯酮化合物C2反应，得到化合物C3。在合适的溶剂(例如AcOH等)中，用乙酸铵处理化合物C3，得到化合物C4。用氯化试剂(例如POCl3等)化合物C4，得到化合物C5。在合适的溶剂(例如DMF等)中，在催化剂(例如Pd(dppf)Cl2等)和碱(例如K2CO3等)的存在下，化合物C5与烷基硼酸(其中Z为B(OH)2且Rz为C1-4烷基等)或烷基硼酸酯(其中Z为B2(pin)2，也称为双(频哪醇酯(pinacolato))二硼，且Rz为C1-4烷基等)反应，进行Suzuki交叉偶联，得到化合物C6。在合适的溶剂(例如THF等)中，在碱(例如LDA等)的存在下，化合物C6与乙酸酯化合物A2a(其中Ry为C1-4烷基等)反应，得到化合物C7。在酸(例如p-TsOH、PPT等)和合适的溶剂的存在下，化合物C7与化合物A5反应，得到化合物C8。
方案D
其中R2为单环或二环芳基或杂芳基环系统的式(I)的化合物可以如下方案D所述制备。
化合物A5与丙二酸酯化合物D1(其中Rw为C1-4烷基、2,4,6-三氯苯基等)反应，得到化合物D2。用氯化试剂(例如POCl3等)处理化合物D2，得到化合物D3。在合适的溶剂(例如DMF等)中，在催化剂例如Pd(dppf)Cl2等)和碱(例如K2CO3等)的存在下，化合物D3与R2(其中R2为芳基或杂芳基)取代的烷基硼酸(其中Z为B(OH)2)或烷基硼酸酯(其中Z为B2(pin)2)反应，进行Suzuki交叉偶联，得到化合物A6。
方案E
其中R2为单环或二环杂芳基环系统的式(I)的化合物可以如下方案E所述制备。
在合适的溶剂(例如DMF等)中，在催化剂(例如Pd(dppf)Cl2等)和碱((例如K2CO3等)的存在下，化合物E1与化合物D3反应，进行Suzuki交叉偶联，得到化合物E2。在合适的溶剂(例如DMSO等)中，化合物E2与化合物C2反应，得到化合物E3。
方案F
其中R2为单环或二环杂芳基环系统的式(I)的化合物可以如下方案F所述制备。
任选取代的2-氨基吡啶化合物F1与溴化试剂(例如Br2和NBS等)反应，得到化合物F2。在合适的溶剂(例如DMSO等)中，化合物F2与化合物C2反应，得到化合物F3。在合适的溶剂(例如乙腈等)中，在催化剂(例如Pd(dppf)Cl2等)和碱(例如KOAc等)的存在下，化合物F3与化合物F3a反应，得到化合物F4。在合适的溶剂(例如DMF等)中，在催化剂(例如Pd(dppf)Cl2等)和碱(例如K2CO3等)的存在下，化合物F4与化合物D3反应，进行Suzuki交叉偶联，得到化合物F5。
方案G
其中R2为单环或二环杂芳基环系统的式(I)的化合物可以如下方案G所述制备。
在合适的溶剂(例如DMSO等)中，任选取代的吡咯化合物G1(其中术语“Het”指吡咯环系统，当可用化合价允许时，任选地进一步含有一个、两个或三个另外的氮环成员)与化合物D3反应，得到化合物G2。
方案H
其中R2为单环或二环芳基、杂环基或杂芳基环系统的式(I)的化合物可以如下方案H所述制备。
化合物H1(其中R2为单环或二环芳基、杂环基或杂芳基环系统)与Bredereck试剂化合物H2(或DMF-DMA等)反应，形成化合物H3。化合物H3与化合物H4(其中X代表各种反应基团，其可以通过使用本领域普通技术人员已知的技术，使合适的起始原料与化合物H4或化合物H5反应，用于提供多个R1官能团取代基)，得到化合物H5。
方案I
其中R2为单环或二环芳基或杂芳基环系统的式(I)的化合物可以如下方案I所述制备。
在合适的溶剂(例如DMF等)中，在催化剂(例如Pd(dppf)Cl2等)和碱(例如K2CO3等)的存在下，化合物D3(其中X是溴等)与R2(其中R2为单环或二环芳基或杂芳基环系统等)取代的烷基硼酸(其中Z为B(OH)2)或烷基硼酸酯(其中Z为B2(pin)2)反应，进行Suzuki交叉偶联，得到化合物I1。在合适的溶剂(例如DMSO等)中，化合物I1与R1-H(其中R1含有亲核氨基或羟基等)反应，得到化合物I3。
在合适的溶剂(例如DMF等)中，在钯催化剂例如Pd(dppf)Cl2等)和碱(例如K2CO3等)的存在下，化合物I1也可以与R1取代的烷基硼酸(其中Z为B(OH)2)或烷基硼酸酯(其中Z为B2(pin)2)反应，进行Suzuki交叉偶联，得到化合物I3。
可选地，在合适的溶剂(例如DMSO等)中，化合物D3(其中X是溴等)可以与R1-H(其中R1含有亲核-氨基-或羟基等)反应，得到化合物I2。在合适的溶剂(例如DMF等)中，在钯催化剂例如Pd(dppf)Cl2等)和碱(例如K2CO3等)的存在下，化合物I2与R2取代的烷基硼酸(其中Z为B(OH)2)或烷基硼酸酯(其中Z为B2(pin)2)反应，进行Suzuki交叉偶联，得到化合物I3。
方案J
其中R2为单环或二环芳基、杂环基或杂芳基环系统的式(I)的化合物可以如下方案J所述制备。
在碱(例如TEA或DIEA等)、路易斯酸(例如MgCl2等)和合适的溶剂(例如ACN等)的存在下，化合物J1(其中R2为单环或二环芳基、杂环基或杂芳基环系统)与丙二酸酯化合物D1反应，得到化合物J2。在碱(例如Hünig's碱等)的存在下，化合物J2与氯化试剂(例如POCl3等)反应，得到化合物J3。
在碱(例如NaH等)和合适的溶剂(例如DMF等)的存在下，化合物J3与化合物J4(其中X代表各种反应基团，其可通过使用本领域普通技术人员已知的技术，使合适的起始原料与化合物J4、化合物J5或化合物J6反应，用于提供多个R1官能团取代基)反应，得到化合物J5。在合适的溶剂(例如水等)中，化合物J5的羧酸酯基团可以在酸性条件(例如TFA等)下水解和脱羧基，得到化合物J6。
在合适的溶剂(例如1,4-二噁烷等)的存在下，在碱(例如Cs2CO3等)、金属催化剂(例如CuI等)和配体(例如2-烟酸等)的存在下，化合物J7(其中X代表各种反应基团，其可通过使用本领域普通技术人员已知的技术，通过使合适的起始原料与化合物J7、化合物J8或化合物J4反应，用于提供多个R1官能团取代基)与丙二酸二酯化合物D1反应，得到二酯化合物J8。在合适的溶剂系统(例如MeOH和水等)中，使用碱(例如NaOH等)可以水解化合物J8的羧酸酯基团，然后脱羧基并在合适的溶剂(例如水等)中，使用酸(例如HCl等)酸化，得到化合物J4。
具体合成实施例
为了更详细地描述且有助于理解，提供下述非限制性实例以更完整地说明本文所述化合物的范围，且不应理解为特别地限制其范围。本领域技术人员视界之内能够确定的目前已知或以后研发的本文所述化合物的这样的变化被认为落入如本文所述和下文所主张的化合物范围之内。这些实施例说明了某些化合物的制备。本领域技术人员应当理解在这些实施例中描述的技术代表如本领域普通技术人员所述的、在合成实践中充分起作用的、且因而构成其实施优选方式的技术。然而，根据本发明公开的内容，本领域技术人员应当理解，可以在不背离本说明书的精神和范围的下，对所公开的具体方法做出多种改变，并且仍然获得相似或类似的结果。
除了所具体描述化合物的下述实施例之外，除非有相反指示，否则本说明书和权利要求书中使用的表示成分数量、反应条件、实验数据等的所有数值都应当理解为由术语“约”修饰。因此，所有这样的数值均代表近似值，其可以根据反应获得或作为可变实验条件的结果寻求的期望性质而改变。因此，在试验可重现性的预期范围之内，在所得数据的上下文中的术语“约”指数据范围，条件是其可以根据平均值的标准偏差而变化。同样，对于所提供的试验结果，得到的数据在不损失有效数字下可以一致地向上或向下舍入以呈现本发明数据。最低限度而不是尝试限制等同原则的应用于权利要求的范围，各个数值参数根据有效数字的数目和本领域技术人员使用的舍入技术来解释。
虽然列出本说明书宽范围的数值范围和参数为近似值，但是下述实施例中列出的数值尽可能精确地报道。然而任何数值均固有地含有某些误差，这样的误差是由其各自试验测定中所发现的标准偏差必然产生的。
化合物实施例
如上述和在整个本说明书中使用的，除非另有说明，否则下述缩写应当理解为具有下述含义∶
实施例1
化合物72的制备
步骤A∶将3′-氟-4′-甲氧基苯乙酮(336mg，2mmol)溶于THF(4mL)中。向该溶液中顺序加入碳酸二甲酯(0.42mL,5mmol)和氢化钠(200mg，5mmol，在矿物油中60％分散液。将混合物加热至60℃，保持30分钟。在冷却至0℃之后，用1N HCl水溶液(20mL)淬灭剩余氢化钠。用EtOAc(20mL)萃取混合物。用盐水洗涤有机层，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。用在己烷中的EtOAc(25％)从硅胶洗脱残余物，得到呈浅黄色油状物的3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-3-氧代丙酸甲酯(405mg，89％)。MS m/z 227.2[M+H]+；1H NMR(CDCl3,500MHz)：δ7.76(1H,dd,J＝8.6Hz,2.1Hz),7.72(1H,dd,J＝11.7Hz,2.2Hz),7.04(1H,t,J＝8.4Hz),3.99(3H,s),3.97(2H,s),3.78(3H,s)。
步骤B：将3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-3-氧代丙酸甲酯(405mg，1.8mmol)溶于甲醇(1mL)中。向溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(17mg,0.09mmol)，接着加入原甲酸三甲酯(0.30mL,2.7mmol)。在60℃下，搅拌该溶液1小时。挥发物随氮气流移除，得到粗3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-3,3-二甲氧基丙酸甲酯。1H NMR(DMSO-d6,500MHz)：δ7.18-7.15(3H,m),3.85(3H,s),3.38(3H,s),3.10(6H,s),2.98(2H,s)。
步骤C：向来自步骤B的粗物质(1.8mmol)中加入5-氟吡啶-2-胺(213mg，1.9mmol)。在未掺水下，加热该混合物至160℃，保持1小时，得到7-氟-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(475mg,92％)。MS m/z 289.2[M+H]+；1H NMR(CDCl3,500MHz)：δ8.99(1H,m),7.92(1H,dd,J＝12.5Hz,2.2Hz),7.90(1H,d,8.5Hz),7.88(1H,m),7.73(1H,m),7.10(1H,t,J＝8.5Hz),6.85(1H,s),3.99(3H,s)。
步骤D：将7-氟-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(200mg,0.7mmol)与哌嗪(430mg,3.5mmol)在二甲基乙酰胺(0.5mL)中混合。在150℃下，搅拌该混合物0.5小时，然后在硅胶上色谱层析，用在CH2Cl2中0％至8％的MeOH(3％NH3)洗脱。得到呈黄色粉末的标题化合物(175mg，71％)。M.P.191-195℃；MS m/z 355.0[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)：δ8.20(1H,d,J＝2.7Hz),8.07-8.02(3H,m),7.67(1H,d,J＝9.7Hz),7.28(1H,t,J＝8.7Hz),6.93(1H,s),3.13(4H,m),2.90(3H,s),2.88(4H,m),2.34(1H,br s)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例1通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例2
化合物239的制备
步骤A：在80℃下，在氩气氛下搅拌7-溴-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(250mg,0.72mmol)、(R)-3-(甲基氨基)吡咯烷-1-羧酸叔-丁酯(180mg,0.90mmol)、Pd2dba3(61mg,0.065mmol)、二环己基(2',6'-二甲氧基联苯基-2-基)膦(SPhos,78mg,0.19mmol)、Cs2CO3(500mg,1.53mmol)和1,2-二甲氧基乙烷(DME,2.0mL)的混合物18小时。然后，用CH2Cl2/MeOH(9:1)稀释反应混合物，并过滤以除去固体。在真空下浓缩滤液。通过硅胶色谱(在CH2Cl2中10％至20％丙酮)纯化，接着用乙醚洗涤，得到呈浅褐色固体的(R)-3-((2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)(甲基)氨基)吡咯烷-1-羧酸叔-丁酯(132mg,39％)。MS m/z 469.0[M+H]+。
步骤B：在室温下，搅拌(R)-3-((2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)(甲基)氨基)吡咯烷-1-羧酸叔-丁酯(130mg,0.28mmol)在CH2Cl2(2.0mL)和TFA(500ìL)中的溶液30分钟。将该混合物倾倒到1NNaOH溶液(50mL)中。将产物萃取到CH2Cl2/EtOH(9:1)中。在真空下浓缩有机层。通过硅胶色谱(CH2Cl2/MeOH/NH4OH＝9/1/0.1)纯化，得到呈黄色固体的(R)-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-(甲基(吡咯烷-3-基)氨基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(82mg,79％)。MS m/z 369.1[M+H]+。
步骤C：在室温下，搅拌(R)-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-(甲基(吡咯烷-3-基)氨基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(45mg,0.12mmol)、DCE(500μL)、甲醛(37％w/w，在H2O中，200μL)和NaBH(OAc)3(85mg,0.40mmol)的混合物15分钟。向K2CO3水溶液中加入反应混合物，并将标题产物萃取到CH2Cl2中。在真空下浓缩有机层。通过硅胶色谱(在CH2Cl2中10％MeOH)纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物(39mg，85％)。M.P.143-149℃；MS m/z383.5[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.13(d,1H,J＝3Hz),8.0-8.1(m,3H),.7.69(d,1H,J＝10Hz),7.29(t,1H,J＝9.0Hz),6.90(s,1H),4.58(m,1H),3.92(s,3H),2.93(3H,s),2.81(m,1H),2.75(m,1H),2.49(m,1H,由DMSO-d6遮蔽),2.20(m,2H),2.28(s,3H),1.76(m,1H)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例2通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例3
化合物6的制备
步骤A：在150℃下，加热3-(3,4-二甲氧基苯基)-3-氧代丙酸乙酯(2.02g,8.0mmol)、2-氨基-5-氟吡啶(0.897g,8.0mmol)和p-TsOH(152mg,0.8mmol)的混合物。将该混合物熔融，然后固化。在1小时之后，将混合物冷却至室温，并用MeCN洗涤，得到呈黄色固体的2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(1.356g,56％)。MS m/z367.5[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.92(1H,dd,J＝2.9Hz,4.8Hz),8.11-8.07(1H,m),7.85-7.82(1H,m),7.77(1H,d,J＝2.1Hz),7.09(1H,d,J＝8.6Hz),7.06(1H,s),6.93(1H,s),3.88(3H,s),3.84(3H,s)。
步骤B：在120℃下，加热2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(1.50g,5.0mmol)、哌嗪(1.29g,15mmol)和DIEA(1.3mL,7.5mmol)在DMSO(10mL)中的混合物。在15小时之后，除去挥发物，并用MeCN洗涤残余物，得到呈黄色固体的标题化合物(1.674g，91％)。M.P.182-184℃；MS m/z 367.5[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.20(1H,d,J＝2.7Hz),8.04(1H,dd,J＝2.8Hz,9.8Hz),7.79(1H,dd,J＝2.1Hz,8.5Hz),7.74(1H,d,J＝2.1Hz),7.67(1H,d,J＝9.7Hz),7.07(1H,d,J＝8.5Hz),6.93(1H,s),3.87(3H,s),3.83(3H,s),3.12(4H,m),2.88(4H,m)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例3通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例4
化合物1的制备
步骤A：在120℃下，加热3-(3-甲氧基苯基)-3-氧代丙酸乙酯(2.68mL,14.0mmol)和2-氨基-5-氟吡啶(1.12g,10.0mmol)在PPA(～5g)中的混合物。在0.5小时之后，将暗紫色混合物冷却至室温，并用冰水处理。过滤沉淀物，用水和MeCN洗涤，得到呈微黄色固体的2-(4-甲氧基苯基)-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(1.758g,65％)。MS m/z 271.2[M+H]+。
步骤B：按照实施例3步骤B中的方法，由在DMSO(1mL)中的7-氟-2-(4-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(81mg,0.3mmol)和哌嗪(129mg,1.5mmol)得到呈黄色固体的标题化合物(66mg,66％)。M.P.182-184℃；MS m/z 337.3[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.20(1H,d,J＝2.6Hz),8.16(2H,dd,J＝2.0Hz,7.0Hz),8.05(1H,dd,J＝2.7Hz,9.7Hz),7.67(1H,d,J＝9.7Hz),7.05(2H,d,J＝1.9Hz,7.0Hz),6.86(1H,s),3.83(3H,s),3.12(4H,m),2.87(4H,m)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例4通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例5
化合物81和化合物82的制备
步骤A：向4-甲氧基-3-(三氟甲氧基)苯甲醛(1.0g,4.5mmol)在丙酮(30mL)中的溶液中加入Jone’s试剂(5mL)。在室温下搅拌15小时之后，加入甲醇(2mL)，并过滤该混合物。浓缩滤液，溶于EtOAc中并用水洗涤。将有机物干燥并浓缩，得到呈白色固体的4-甲氧基-3-(三氟甲氧基)-苯甲酸(1.02g，96％)，MS m/z 235.2[M-H]。
步骤B：向4-甲氧基-3-(三氟甲氧基)苯甲酸(1.02g,4.32mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入草酰氯(5mL)。在回流6小时之后，浓缩溶液，得到4-甲氧基-3-(三氟甲氧基)-苯甲酰氯。将粗酸性氯化物溶于DCM(10mL)中，并冷却至0℃。加入二异丙基乙胺(1.56mL,9.0mmol)和N,O-二甲基羟基胺(0.658g,6.7mmol)。在室温下搅拌2小时之后，用水洗涤该混合物。将有机物干燥，浓缩并进行色谱层析(在CH2Cl2中的5％EtOAc)，得到呈琥珀色油状物的4-二甲氧基-N-甲基-3-(三氟甲氧基)苯甲酰胺(0.58g,48％)。
步骤C：在0℃下，向4-二甲氧基-N-甲基-3-(三氟甲氧基)-苯甲酰胺(0.58g,2.08mmol)在THF(8mL)中的溶液中加入MeMgBr(3.0M,0.83mL,2.5mmol)。在室温下搅拌15小时之后，用水洗涤溶液。将有机物干燥并浓缩，得到呈白色固体的11-(4-甲氧基-3-(三氟甲氧基)苯基)乙酮(0.45g,96％)。
步骤D：在室温下，向粗1-(2-氟-4,5-二甲氧基苯基)-乙酮(0.45g,2.0mmol)和碳酸二甲酯(1.5mL,18.2mmol)在THF(8mL)中的溶液中加入NaH(60％,0.44g,10.9mmol)。在75℃下加热20分之后，用NH4Cl(饱和的)淬灭。混合物的pH用1N HCl调节至中性。用EtOAc萃取该混合物。将有机物干燥并浓缩，得到3-(4-甲氧基-3-(三氟甲氧基)苯基)-3-氧代丙酸甲酯。MS m/z 299.1[M+H]+。粗产物直接用于下一步中。
步骤E：在60℃下，加热来自步骤D的粗3-(4-甲氧基-3-(三氟甲氧基)苯基)-3-氧代丙酸甲酯(2mmol)、p-TsOH(38mg,0.2mmol)和三甲氧基甲烷在MeOH(4mL)中的溶液。在1小时之后，除去挥发物，并加入2-氨基-5-氟吡啶(0.224g,2.0mmol)。在150℃下，加热混合物1小时，冷却至室温并用MeCN洗涤，得到7-氟-2-(4-甲氧基-3-(三氟甲氧基)苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(146mg,21％)。MS m/z 355.1[M+H]+。
步骤F：在120℃下，加热7-氟-2-(4-甲氧基-3-(三氟甲氧基)苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(71mg,0.2mmol)、哌嗪(38mg,0.4mmol)和二异丙基乙胺(69uL,0.4mmol)在DMSO(0.5mL)中的混合物。在15小时之后，除去挥发物，并对残余物进行色谱层析(在DCM中的20％MeOH)，得到两种产物：
得到呈黄色固体的化合物81(8mg,9％)。M.P.158-162℃；MS m/z 421.1[M+H]+；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.26(1H,d,J＝2.6Hz),8.24(1H,dd,J＝2.2Hz,8.8Hz),8.19(1H,m),8.08(1H,dd,J＝2.8Hz,9.7Hz),7.75(1H,d,J＝9.7Hz),7.37(1H,d,J＝8.8Hz),6.99(1H,s),3.94(3H,s),3.07(4H,m),2.50(4H,m,由DMSO-d6遮蔽；和
得到呈黄色固体的化合物82(9mg，11％)。M.P.245-248℃；MS m/z407.2[M+H]+；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.21(1H,d,J＝2.7Hz),8.11(1H,m),8.07-8.03(2H,m),7.68(1H,d,J＝9.7Hz),7.11(1H,d,J＝8.6Hz),6.87(1H,s),3.14(4H,m),2.88(4H,m)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例5通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例6
化合物70的制备
向2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-氟-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(38mg,0.1mmol，通过实施例3步骤A和B中的方法制备)在MeOH(0.5mL)中的悬浮液中加入NaOMe(在MeOH中0.5M，1mL,0.5mmol)。在80℃下加热15小时之后，除去挥发物，并对残余物进行色谱层析(10-15％MeOH/CH2Cl2))，得到呈黄色固体的标题化合物(18mg，45％)。M.P.185-187℃；MS m/z 397.3[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.20(1H,d,J＝2.5Hz),7.80(2H,m),7.08(1H,d,J＝9.0Hz),7.00(1H,s),6.97(1H,d,J＝2.5Hz),3.89(3H,s),3.87(3H,s),3.83(3H,s),3.30(4H,m),2.98(4H,m)。
实施例7
化合物74的制备
步骤A：向2-氨基-5-甲基吡嗪(1.09g,10mmol)在DME(10mL)中的溶液中加入3-溴-2-氧代丙酸乙酯(1.57mL,12.5mmol)。在室温下，搅拌混合物45分钟，过滤沉淀物，用Et2O洗涤并干燥，得到黄色固体。将该固体悬浮在EtOH(20mL)中，并在90℃下加热。在1.5小时之后，浓缩得到的褐色溶液，并调节至pH 7。用EtOAc萃取混合物。将有机物浓缩，研磨残余物，并用MeCN洗涤，得到呈褐色固体的6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-羧酸乙酯(0.993g,48％)。MS m/z 206.2[M+H]+。
步骤B：在室温下，向6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-羧酸乙酯(0.971g,4.73mmol)和EtOAc(0.98mL,10mmol)在甲苯(2mL)和Me-THF(8mL)中的溶液中加入NaH(60％,0.503mg,12.6mmol)。在70℃下加热30分钟之后，将混合物冷却至室温，用冰淬灭，用1N HCl调节至pH7并用EtOAc萃取。将有机物合并，干燥，浓缩并进行色谱层析，得到呈浅褐色油状物的3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(0.93g,78％)。
步骤C：按照实施例1步骤B中的方法，由在MeOH(10mL)中的3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(0.913g,3.7mmol)、对甲苯磺酸一水合物(70mg,0.37mmol)和原甲酸三甲酯(0.81mL,7.4mmol)得到缩酮，其直接用于下一步中。
步骤D：按照实施例1步骤C中的方法，由粗二甲氧基丙酸酯(来自步骤2)和2-氨基-5-氟-吡啶(0.422g,3.7mmol)得到呈浅褐色固体的7-氟-2-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(0.344g，31％)。MS m/z 295.9[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ9.09(1H,s),8.97-8.96(1H,m),8.67(1H,s),8.47(1H,s),8.15-8.11(1H,m),7.85-7.82(1H,m),7.08(1H,s),2.42(3H,S)。
步骤E：按照实施例3步骤B中的方法，由在DMSO(0.5mL)中的7-氟-2-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(59mg,0.2mmol)和哌嗪(52mg,0.6mmol)得到呈黄色固体的标题化合物(28mg，39％)。M.P.221-225℃；MS m/z 362.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ9.07(1H,s),8.62(1H,s),8.46(1H,s),8.25(1H,d,J＝2.6Hz),8.09(1H,d,J＝2.7Hz,9.7Hz),7.67(1H,d,J＝9.7Hz),7.00(1H,s),3.16(4H,m),2.90(4H,m),2.44(3H,s)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例7通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例8
化合物29的制备
步骤A：按照实施例7步骤A中的方法，由在MeOH(50mL)中的2-氨基-5-甲基吡啶(5.41g,50mmol)和3-溴-2-氧代丙酸乙酯(7.0mL,50mmol)得到呈浅黄色固体的6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯(9.50g,93％)，MS m/z 205.1[M+H]+。
步骤B：按照在实施例7步骤B中的方法，由在甲苯(5mL)中的6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯(0.55g,2.5mmol)、EtOAc(0.29mL,5.0mmol)和NaH(60％,0.20g,5mmol)得到呈黄色固体的3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(0.62g,100％)，MSm/z 243.1[M+H]+。
步骤C：按照实施例4步骤A中的方法，由在PPA(～5g)中的3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(246mg,1.0mmol)和2-氨基-5-氟吡啶(334mg,1.2mmol)得到呈黄色固体的7-氟-2-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(17mg,6％)，MS m/z 295.2[M+H]+。
步骤D：按照实施例3步骤B中的方法，由在DMSO(10mL)中的7-氟-2-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(17mg,0.06mmol)和哌嗪(30mg,0.3mmol)得到呈浅褐色固体的标题化合物(19mg，83％)。M.P.193-198℃；MS m/z 361.3[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.48(1H,s),8.41(1H,s),8.25(1H,d,J＝2.6Hz),8.06(1H,dd,J＝2.7Hz,9.7Hz),7.66(1H,d,J＝9.7Hz),7.55(1H,d,9.3Hz),7.18(1H,d,J＝9.3Hz),6.96(1H,s),3.23(4H,m),3.01(4H,m),2.29(3H,s)。
实施例9
化合物170的制备
步骤A：向1H-吡唑-3,5-二羧酸二乙酯(10.0g,47mmol)和氯丙酮(3.76mL,47mmol)在丙酮(200mL)中的溶液中加入碳酸钾(7.2g,52mmol)。在30℃下加热6小时之后，浓缩混合物，得到挥发物。将该残余物收集到EtOAc中，并用水洗涤。经MgSO4干燥有机物并浓缩，得到呈浅褐色固体的1-(2-氧代丙基)-1H-吡唑-3,5-二羧酸二乙酯，其直接用于下一步中，MSm/z269.1[M+H]+。
步骤B：向1-(2-氧代丙基)-1H-吡唑-3,5-二羧酸二乙酯(～47mmol)在乙酸(300mL)中的溶液中加入乙酸铵(72g，940mmol)。在回流48小时之后，将混合物浓缩至最小体积且用水稀释。过滤沉淀物，用水和MeCN洗涤，得到呈褐色固体的4-羟基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羧酸乙酯(6.7g,64％)，MS m/z 222.1[M+H]+。
步骤C：将4-羟基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羧酸乙酯(7.18g,32.5mmol)在POCl3(80mL)中的混合物回流15小时。将深色混合物浓缩并用MeCN洗涤，得到呈灰白色固体的4-氯-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羧酸乙酯(5.197g)。浓缩滤液，并进行色谱层析，得到另外1.42g产物(6.617g,85％)。MS m/z 240.1[M+H]+,242.1[M+2+H]+。
步骤D：使4-氯-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羧酸乙酯(5.197g,21.7mmol)、MeB(OH)2(3.90g,65.1mmol)、K2CO3(14.8g,107.5mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(456mg,0.65mmol)在DMF(100mL)中的混合物脱气，并在N2下加热15小时。在旋转蒸发器(rotovap)上浓缩混合物以除去大部分DMF，并用水洗涤。对残余物进行色谱层析(在CH2Cl2中2％至5％MeOH)，得到呈黄色固体的4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羧酸乙酯(3.90g,82％)，MS m/z 220.1[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.54(1H,s),7.49(1H,s),4.36(2H,q,J＝7.2Hz),2.70(3H,s),2.42(3H,s),1.34(3H,t,J＝7.2Hz)。
步骤E：在-78℃下，向乙酸叔-丁基酯(1.63mL,12.1mmol)在THF(50mL)中的溶液中加入LDA(1.5M,0.97mL,14.5mmol)。在0.5小时之后，在-30℃下，将该溶液经导管引入4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羧酸乙酯(1.33g,6.07mmol)在THF(100mL)中的溶液中。在1小时之后，用饱和的NH4Cl淬灭该混合物，调节至pH 5-6，并用EtOAc萃取。将合并的有机物干燥并浓缩。对残余物进行色谱层析(2％至4％MeOH/CH2Cl2)，得到呈黄色油状物的3-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-3-氧代丙酸叔-丁酯(1.696g,97％),，MS m/z 290.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.57(1H,s),7.50(1H,s),4.02(2H,s),2.70(3H,s),2.43(3H,s),1.38(9H,s)。
步骤F：在封盖管中，在120℃下，加热3-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-3-氧代丙酸叔-丁酯(4.86g,16.8mmol)在EtOH(30mmol)中的溶液。在1小时之后，将该溶液冷却至室温，并除去挥发物，得到呈黄色固体的3-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(4.44g,98％)，MS m/z 262.2[M+H]+。
步骤G：在130℃下，加热2-氨基-5-氟-吡啶(134mg,1.2mmol)、3-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(261mg,1.0mmol)和PPTs(12.6mg,0.05mmol)的混合物。在8小时之后，将该混合物冷却至室温，并进行色谱层析，得到呈黄色固体的2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(220mg,71％)。MSm/z 310.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.97-8.95(1H,m),8.55(1H,s),8.16-8.12(1H,m),7.87-7.85(1H,m),7.56(1H,s),7.03(1H,s),2.73,(3H,s),2.43(3H,s)。
步骤H∶按照实施例3步骤B中的方法，由在DMA(1.0mL)中的2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(309mg,1.0mmol)和哌嗪(1.1mL,10mmol)得到呈黄色固体的标题化合物(313mg,80％)。M.P.254-256℃；MS m/z 390.4[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.55(1H,s),8.27(1H,d,J＝2.7Hz),8.12(1H,dd,J＝2.8Hz,9.7Hz),7.71(1H,d,J＝9.7Hz),7.54(1H,s),6.95(1H,s),3.25(4H,m),2.72(3H,s),2.51(4H,m,由DMSO-d6遮蔽),2.43(3H,s),2.25(3H,s)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例9通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例10
化合物163的制备
步骤A：按照实施例5步骤E中的方法，由2-乙酰基-4-甲基噻唑(706mg,5mmol)、碳酸二甲酯(15mL,178mmol)和NaH(在矿物油中的60％分散液，1.14g,28.5mmol)，得到3-(4-甲基噻唑-2-基)-3-氧代丙酸甲酯。粗产物直接用于下一步中。MS m/z 200.1[M+H]+。
步骤B：按照实施例1步骤B中的方法，由在MeOH(1.5mL)中的3-(4-甲基噻唑-2-基)-3-氧代丙酸酯(199mg,1.0mmo)、原甲酸三甲酯(0.25mL,2.25mmol)和甲苯磺酸一水合物(14.3mg,0.075mmol)得到二甲氧基丙酸酯。
步骤C：按照实施例1步骤C中的方法，由在DMA(1.5mL)中的来自步骤B的二甲氧基丙酸酯和2-氨基-4-氟-吡啶(201.8mg,1.8mmol)得到7-氟-2-(4-甲基噻唑-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(175.5mg,67％)。MS m/z 262.1[M+H]+。
步骤D：按照实施例3步骤B中的方法，由在DMSO(0.8mL)中的7-氟-2-(4-甲基噻唑-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(52.2mg,0.2mmol)和哌嗪(86mg,1mmol)得到标题化合物(20mg，30％)。M.P.142-147℃；MS m/z328.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.27(1H,dd,J＝2.7Hz,18.6Hz),8.11-8.16(1H,m),7.73(1H,t,J＝9.2Hz),7.56(1H,s),6.88(1H,d,J＝3.2Hz),3.29-3.31(2H,m),3.16-3.18(2H,m),2.89-2.91(2H,m),2.67-2.69(2H,m),2.47(3H,s)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例10通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。.
实施例11
化合物92的制备
步骤A：将5-氟烟酸(1.0g,7.1mmol)溶于THF(10mL)中，并冷却至0℃。向溶液中滴加溴化甲基镁在THF:甲苯(3:1)(11.2mL,15.6mmol)中的1.4M溶液。使该溶液温热至室温。在室温下，搅拌该溶液4小时，接着缓慢地加入1N HCl水溶液(50mL)。将混合物分配到EtOAc(200mL)和1N NaOH水溶液(200mL)中。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。对残余物进行在二氧化硅上的色谱层析，用在己烷中EtOAc(0％至50％)洗脱，得到呈白色粉末的1-(5-氟吡啶-3-基)乙酮(290mg,29％)。
步骤B：按照实施例5步骤D中的方法，由在THF(6mL)中的来自步骤A的甲基酮、碳酸二甲酯(0.44mL,5.25mmol)和氢化钠(210mg，在矿物油中的60％分散液，5.25mmol)，得到呈灰白色粉末的3-(5-氟吡啶-3-基)-3-氧代丙酸甲酯(278mg,67％)。
步骤C：将3-(5-氟吡啶-3-基)-3-氧代丙酸甲酯(138mg,0.7mmol)与5-氟吡啶-2-胺(90mg,0.8mmol)和甲苯磺酸一水合物(6mg,0.03mmol)在二甲基乙酰胺(0.5mL)中混合。将混合物加热至160℃1小时。将混合物冷却至120℃，之后加入哌嗪(300mg,3.5mmol)。在120℃下，搅拌混合物1小时。将在CH2Cl2中的混合物负载到二氧化硅上，并用在CH2Cl2中的0％至8％MeOH(3％NH3)洗脱。得到呈黄色粉末的标题化合物(37mg，16％)。M.P.201-208℃；MS m/z 326.2[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)：δ9.25(1H,s),8.70(1H,d,J＝2.8Hz),8.42(1H,d,J＝10.2Hz),8.22(1H,d,2.7Hz),8.12(1H,dd,J＝9.8Hz,2.8Hz),7.74(1H,d,J＝9.7Hz),7.11(1H,s),3.16(4H,m),2.89(4H,m),2.37(1H,br s)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例11通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例12
化合物98的制备
步骤A：将1H-吲哚-5-羧酸(1.0g,6.2mmol)与N,O-二甲基羟基胺盐酸盐(907mg,9.3mmol)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(1.78g,9.3mmol)和N,N-二异丙基乙胺(3.2mL,18.6mmol)在CH2Cl2(12mL)中混合。在室温下搅拌4小时之后，用HCl水溶液(1N,20mL)洗涤混合物。将有机层经Na2SO4干燥并浓缩。粗产物直接用于下一步中。
步骤B：将来自步骤A的粗产物溶于THF(20mL)中。向溶液中滴加溴化甲基镁(11.2mL,15.6mmol)在THF：甲苯(3:1)中的1.4M溶液。使该溶液温热至室温。在50℃下，搅拌该溶液1小时，接着缓慢地加入1N HCl水溶液(50mL)。将混合物分配到EtOAc(200mL)和1NNaOH水溶液(200mL)中。用盐水洗涤有机层，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。对残余物进行在二氧化硅上的色谱层析，用在己烷中的EtOAc(0％至50％)洗脱，得到呈白色粉末的1-(1H-吲哚-5-基)乙酮(323mg,33％)。
步骤C：按照实施例5步骤E中的方法，由在THF(6mL)中的来自步骤B的甲基酮、碳酸二甲酯(0.46mL,5.5mmol)和氢化钠(220mg，在矿物油中的60％分散液，5.5mmol)，得到呈灰白色粉末的3-(1H-吲哚-5-基)-3-氧代丙酸甲酯(120mg,27％)。MS m/z 216.1[M-H]-。
步骤D：按照实施例11步骤C的方法，由在二甲基乙酰胺(0.5mL)中的3-(1H-吲哚-5-基)-3-氧代丙酸甲酯(98mg,0.45mmol)、5-氟吡啶-2-胺(56mg,0.5mmol)、甲苯磺酸一水合物(9mg,0.05mmol)和哌嗪(194mg,2.25mmol)得到呈灰白色粉末的标题化合物(40mg,26％)。M.P.266-272℃.MS m/z 346.2[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)：δ11.3(1H,s),8.46(1H,s),8.22(1H,d,J＝2.8Hz),8.04(1H,dd,J＝9.7Hz,2.8Hz),7.95(1H,d,J＝8.7Hz),7.69(1H,d,J＝9.7Hz),7.49(1H,d,J＝8.6Hz),7.42(1H,t,J＝2.7Hz),6.90(1H,s),6.57(1H,m),3.14(4H,m),2.89(4H,m),2.36(1H,br s)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例12通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例13
化合物107的制备
步骤A：按照实施例12步骤A中的方法，由在CH2Cl2(12mL)中的咪唑并[1,2-a]吡啶-7-羧酸(1.0g,6.2mmol)、N,O-二甲基羟基胺盐酸盐(907mg,9.3mmol)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.78g,9.3mmol)和N,N-二异丙基乙胺(3.2mL,18.6mmol)，得到N-甲氧基-N-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-甲酰胺(505mg,40％)。
步骤B：按照实施例12步骤B中的方法，由在THF(10mL)中的来自步骤A的产物(505mg,2.5mmol)、溴化甲基镁(3.6mmol)，得到1-(咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)乙酮(275mg,70％)。
步骤C：按照实施例5步骤E中的方法，由在THF(5mL)中的来自甲基步骤B的甲基酮(275mg,1.7mmol)、碳酸二甲酯(0.35mL,4.25mmol)和氢化钠(170mg,，在矿物油中的60％分散液，4.25mmol)，得到呈灰白色粉末的3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)-3-氧代丙酸甲酯(215mg,58％)。
步骤D：按照实施例11步骤C的方法，由在二甲基乙酰胺(1.0mL)中的3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)-3-氧代丙酸甲酯(215mg,1.0mmol)、5-氟吡啶-2-胺(123mg,1.1mmol)、甲苯磺酸一水合物(19mg,0.1mmol)和哌嗪(430mg,5mmol)，得到呈灰白色粉末的标题化合物(40mg，12％)M.P.258-270℃；MS m/z 347.0[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)：δ8.65(1H,d,J＝7.2Hz),8.46(1H,s),8.24(1H,d,J＝2.7Hz),8.11(1H,dd,J＝9.7Hz,2.7Hz),8.06(1H,s),7.75(1H,d,J＝9.7Hz),7.73(1H,dd,J＝7.2Hz,2.7Hz),7.71(1H,s),7.10(1H,s),3.16(4H,m),2.89(4H,m),2.34(1H,br s)。
实施例14
化合物171的制备
第1部分，步骤A：在23℃下，加热2-氨基-5-氟吡啶(11.20g,0.10mol)和丙二酸二甲酯(57.0mL,0.50mol)的混合物1.5小时。在冷却至室温之后，过滤沉淀物，并用ACN(3x)洗涤，得到呈深色固体的7-氟-2-羟基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(14g)，其直接用于下一步中。MS m/z 181.3[M+H]+。
第1部分，步骤B：在110℃下，加热粗7-氟-2-羟基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(14g,～77mmol)在POCl3(50mL)和DIEA(13.3mL,77mmol)中的深色混合物15小时。除去挥发物，并用冰-水处理深色残余物，用水(3x)洗涤并干燥，得到褐色固体。对粗褐色固体进行色谱层析(在CH2Cl2中的5％MeOH)，得到呈黄色固体的2-氯-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(9.84g,50％,2个步骤)，MS m/z 199.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.99(1H,dd,J＝2.8Hz,4.7Hz),8.27-8.23(1H,m),7.85(1H,dd,J＝5.4Hz,9.8Hz),6.56(1H,s)。
第2部分：使6-溴-2-甲基苯并[d]]噁唑(1.06g,5.0mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.40g,5.5mmol)、KOAc(1.47g,15mmol)和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(122mg,0.15mmol)在二噁烷(8ml)中的混合物脱气，并在85℃下于N2下加热。在15小时之后，用EtOAc稀释混合物，过滤穿过硅藻土并浓缩。对残余物进行色谱层析，得到呈淡橙色固体的2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯并[d]噁唑(1.30g,100％)，MS m/z 260.4[M+H]+。
第3部分，步骤A：使2-氯-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(0.436g,2.2mmol)、2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯并[d]噁唑(0.647g,2.5mmol)、在DCM中的Pd(dppf)Cl2(90mg,0.11mmol)、K2CO3(2M,3.0mL,6.0mmol)和ACN(6mL)的混合物脱气，然后在60℃下于N2下加热3.5小时。除去挥发物，并对残余物进行色谱层析(2.5％MeOH/CH2Cl2)，得到呈灰白色固体的7-氟-2-(2-甲基苯并[d]噁唑-6-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(0.64g,98％)。MS m/z 296.4[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.96-8.95(1H,m),8.51(1H,d,J＝1.6Hz),8.26(1H,dd,J＝8.5Hz,1.6Hz),8.16-8.12(1H,m),7.91-7.88(1H,m),7.78(1H,d,J＝8.4Hz),7.17(1H,s),2.67(3H,s)。
第3部分，步骤B：在120℃下，加热7-氟-2-(2-甲基苯并[d]噁唑-6-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(60mg,0.2mmol)和1-甲基哌嗪(0.11mL,1.0mmol)在DMA(0.3mL)中的混合物15小时。除去挥发物，并对残余物进行色谱层析，得到呈黄色固体的标题化合物(46mg,61％)。M.P.178-183℃；MS m/z 376.5[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.47(1H,d,J＝1.5Hz),8.25(1H,d,J＝2.7Hz),8.23(1H,dd,J＝1.6Hz,8.4Hz),8.11(1H,dd,J＝2.8Hz,9.7Hz),7.76(1H,d,J＝8.6Hz),7.74(1H,d,J＝9.9Hz),7.06(1H,s),3.25(4H,m),2.66(3H,s),2.25(3H,s)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例14通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例15
109的制备
步骤A：将2-氯-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(990mg,5mmol，根据实施例14第1部分的方法制备)与2-氨基吡啶-5-硼酸频哪醇酯(1.21g,5.5mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(281mg,0.25mmol)、CH3CN(10mL)和水性K2CO3(1M,10mL)混合。在80℃下加热混合物6小时。将混合物冷却至室温，然后过滤。用CH3CN洗涤收集的沉淀物，并在真空下干燥，得到呈黄色粉末的2-(6-氨基吡啶-3-基)-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(1.13g,88％)。MSm/z 257.0[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)：δ8.90(1H,m),8.83(1H,d,J＝2.1Hz),8.17(1H,dd,J＝8.8Hz,2.5Hz),8.07(1H,m),7.78(1H,dd,J＝9.8Hz,5.3Hz),6.87(1H,s),6.58(2H,s),6.53(1H,d,8.9Hz)。
步骤B。将2-(6-氨基吡啶-3-基)-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(254mg,1.0mmol)与氯丙酮(100μL,1.2mmol)在DMSO(360μL,1.65mmol)中混合。将混合物加热至120℃30分钟。在冷却至室温之后，将混合物分配到CH2Cl2和饱和的NaHCO3水溶液中。浓缩有机层。用在CH2Cl2中的MeOH(0％至6％)从二氧化硅洗脱残余物，得到呈褐色粉末状的7-氟-2-(2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(136mg,46％)。MS m/z295.0[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)：δ9.40(1H,s),8.95(1H,m),8.14(1H,m),7.96(1H,dd,J＝9.5Hz,1.9Hz),7.85(2H,m),7.54(1H,J＝9.4),7.08(1H,s),2.36(3H,s)。
步骤C：将7-氟-2-(2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(45mg,0.15mmol)与哌嗪(65mg,0.75mmol)在二甲基乙酰胺(0.5mL)中混合。将混合物加热至150℃1小时。将混合物负载到二氧化硅上，并用在CH2Cl2中的0％至8％MeOH(3％NH3)洗脱，得到呈褐色粉末状的标题化合物(33mg，61％)。M.P.259-267℃；MS m/z 361.1[M+H]+；1HNMR(DMSO-d6,500MHz)：δ9.36(1H,s),8.23(1H,d,J＝2.7Hz),8.10(1H,dd,J＝9.7Hz,2.7Hz),7.94(1H,dd,J＝9.5Hz,1.8Hz),7.82(1H,s),7.70(1H,d,J＝9.7Hz),7.52(1H,d,J＝9.5Hz),6.96(1H,s),3.15(4H,m),2.89(4H,m),2.36(3H,s)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例15通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例16
化合物209的制备
步骤A：将3-氟吡啶-2-胺(5.0g,45mmol)与N-溴代琥珀酰亚胺(8.0g,45mmol)在CH3CN(40mL)中混合。在室温下，搅拌混合物30分钟。向该混合物中加入氯丙酮(4.3mL,54mmol)。将该混合物加热至100℃，使CH3CN蒸发。在小时之后，温度升高至120℃，保持2小时。混合物在冷却时固化。将固体物质溶于H2O(50mL)中。向水溶液中加入100mL饱和的NaHCO3水溶液。形成沉淀物，并通过真空过滤收集。将固体物质用H2O洗涤并在真空下干燥。将在CH2Cl2中的该物质负载到二氧化硅上，并用在CH2Cl2中的EtOAc(0％至30％)洗脱，得到呈褐色粉末的6-溴-8-氟-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(4.65g,45％)。MS m/z 229.2[M+H]+,231.2[M+2+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)：δ8.72(1H,s),7.79(1H,s),7.39(1H,d,J＝10.7Hz),2.35(3H,s)。
步骤B：按照实施例14第2部分中的方法，由6-溴-8-氟-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(912mg,4mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.32g,4.8mmol)、[1,1′-双(二苯膦基)二茂铁]-二氯钯(II)(163mg，0.2mmol)和乙酸钾(784mg，8mmol)得到8-氟-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶。粗产物直接用于下一步中。
步骤C：按照实施例14第3部分步骤A的方法，由来自步骤A的粗产物8-氟-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶和2-氯-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(4mmol，在实施例14第1部分步骤B中制备)、四(三苯基膦)钯(0)(225mg,0.2mmol)和K2CO3水溶液(1M,8mL)，得到呈褐色粉末的7-氟-2-(8-氟-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(860mg,69％)。MS m/z 313.0[M+H]+。
步骤D：按照在实施例14第3部分步骤B中的方法，由-氟-2-(8-氟-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(65mg,0.21mmol)和哌嗪(90mg,1.05mmol)得到呈褐色粉末的标题化合物(34mg，43％)。M.P.282-288℃；MS m/z 379.4[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)：δ9.26(1H,s),8.21(1H,d,J＝2.6Hz),8.10(1H,dd,J＝9.7Hz,2.7Hz),7.93(1H,d,J＝2.3Hz),7.84(1H,d,J＝12.7Hz),7.68(1H,d,J＝9.8Hz),6.98(1H,s),3.14(4H,m),2.88(4H,m),2.39(3H,s),2.35(1H,br s)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例16通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例17
化合物182的制备
步骤A：按照实施例14第3部分步骤A的方法，由3-氟-2-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(～4.85mmol，由实施例14第2部分的方法制备的粗产物)和2-氯-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(0.64g,3.23mmol，在实施例14第1部分中制备的)得到呈褐色固体的7-氟-2-(5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(1.0g,100％)。MS m/z 290.4[M+H]+。
步骤B：在120℃下，加热7-氟-2-(5-氟-6-甲氧基吡啶-3-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(145mg,0.5mmol)和哌嗪(43mg,0.5mmol)在DMA(1mL)中的混合物。在4小时之后，除去挥发物，并对残余物进行色谱层析(20％MeOH/CH2Cl2)，得到呈黄色固体的标题化合物(63mg，36％)。M.P.166-170℃；MS m/z 356.4[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.83(1H,d,J＝1.9Hz),8.39(1H,dd,J＝1.9Hz,11.8Hz),8.23(1H,d,J＝2.6Hz),8.10(1H,dd,J＝2.7Hz,9.7Hz),7.71(1H,d,J＝9.7Hz),7.02(1H,s),4.03(3H,s),3.20(4H,m),2.94(4H,m)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例17通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例18
化合物191的制备
步骤A：按照实施例14第3部分步骤A中的方法，由在CH3CN/H2O(1.0mL/1.0mL)中的2-氯-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(199mg,1mmol,实施例14第1部分中制备)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(239.2mg 1.15mmol)、Pd(PPh3)4(57.8mg,0.05mmol)和K2CO3(276.4mg,2mmol)，得到7-氟-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(97.6mg,40％)。MS m/z 245.1[M+H]+。
步骤B：按照实施例14第3部分步骤B中的方法，由在DMSO(0.5mL)中的7-氟-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(48.8mg,0.2mmol)和(S)-2-甲基哌嗪(100mg,1mmol)得到标题化合物(32.1mg，49.5％)。M.P.168-170℃；MS m/z 325.2[M+H]+；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.35(1H,s),8.18(1H,d,J＝2.8Hz),8.06(1H,s),8.02(1H,dd,J＝9.7Hz,2.6Hz),7.56(1H,d,J＝9.8Hz),6.63(1H,s),3.89(3H,s),3.54-3.57(2H,m),2.99-3.02(1H,m),2.80-2.85(2H,m),2.58-2.64(1H,m),2.24-2.28(1H,m),1.05(3H,d,J＝6.3Hz)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例18通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例19
化合物128的制备
步骤A：在室温下，向2-氯-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(199mg,1.0mmol，实施例14第1部分中制备)在2mL的乙腈中的溶液中加入5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(293mg,1.2mmol)、四(三苯基)膦Pd(0)(57.8mg,0.05mmol)和K2CO3水溶液(在水中1M，2mmol)。在85℃下，搅拌该混合物3小时，并冷却至室温。过滤出固体，并用二氯甲烷、水和乙腈洗涤，得到7-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(249mg,89％)。MS m/z 281.1[M+H]+。
步骤B：在室温下，用哌嗪(154mg,1.79mmol)处理7-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(100mg,0.36mmol)在DMSO(1mL)中的溶液。在160℃下，搅拌该溶液30分钟，并冷却至室温。将反应混合物负载到硅胶上而不浓缩，并用在CH2Cl2中的MeOH(0％至20％)洗脱，得到标题化合物(74.8mg，60％)。M.P.252-255℃；MS m/z347.1[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)δ11.8(1H,s),8.95(1H,d,J＝2.0Hz)),8.64(1H,d,J＝1.7Hz),8.14(1H,d,J＝2.3Hz),8.0-7.9(1H,m),7.62(1H,d,J＝9.6Hz),7.45(1H,m),6.9(1H,s),6.48(1H,br.m).3.1(4H,m),2.85(4H,m)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例19通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例20
化合物153的制备
步骤A：将2-(3-氟-4-羟基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(180mg,0.53mmol)(根据实施例14第3部分步骤A中的方法，通过Suzuki偶联制备)与二碳酸二-叔-丁酯(131mg,0.6mmol)和三乙胺(85μL,0.6mmol)在MeOH(4mL)中混合。在50℃下，搅拌该混合物2小时。过滤该混合物，得到黄色粉末，用MeOH洗涤并在真空下干燥，得到4-(2-(3-氟-4-羟基苯基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)哌嗪-1-羧酸叔-丁酯(230mg,99％)。MS m/z 441.0[M+H]+。
步骤B：将4-(2-(3-氟-4-羟基苯基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)哌嗪-1-羧酸叔-丁酯(60mg,0.14mmol)与K2CO3(39mg,0.28mmol)和碘乙烷(48μL,0.21mmol)在DMF(1mL)中混合。在50℃下，搅拌混合物1小时。在冷却至室温之后，向混合物中滴加H2O(0.5mL)。收集沉淀物，用H2O洗涤，并在真空下干燥。
步骤C：向来自步骤B的粗产物中加入三氟乙酸(1mL)。在静置10分钟之后，除去挥发物。将残余物分配在CH2Cl2(4mL)和K2CO3(1M,2mL)中。移除有机层并浓缩，得到标题化合物(36mg,70％)。M.P.180-186℃；MS m/z 369.1[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)：δ8.21(1H,d,J＝2.7Hz),8.02(3H,m),7.68(1H,d,J＝9.7Hz),7.27(1H,t,J＝8.8Hz),6.93(1H,s),4.20(2H,q,J＝7.0Hz),3.14(4H,m),2.88(4H,m),2.36(1H,br),1.39(3H,t,J＝7.0Hz)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例20通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例21
化合物179的制备
步骤A：在90℃下，加热2-氯-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(300mg,1.5mmol)和4-甲基-1H-咪唑(429mg,6.0mmol)在DMSO(1.5mL)中的混合物15小时。将该混合物冷却至室温，并用CH3CN稀释。过滤沉淀物，用CH3CN(3x)洗涤并干燥，得到呈灰白色固体的2-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(225mg,61％)。MS m/z345.4[M+H]+。
步骤B：在120℃下，加热2-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(73mg,0.3mmol)和哌嗪(129mg,1.5mmol)在DMA(0.6mL)中的混合物4小时。除去DMA，并用CH3CN稀释混合物。过滤沉淀物，用CH3CN(3x)洗涤并干燥，得到呈黄色固体的标题化合物(310mg,95％)。M.P.204-206℃；MS m/z 311.1[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.47(1H,d,J＝1.2Hz),8.22(1H,d,J＝2.7Hz),8.13(1H,dd,J＝2.8Hz,9.6Hz),7.69(1H,d,J＝1.1Hz),7.63(1H,d,J＝9.6Hz),6.68(1H,s),3.14(4H,m),2.87(4H,m),2.16(3H,s)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例21通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例22
化合物143的制备
步骤A：按照实施例1步骤A中的方法，由在甲醇(50mL)中的3-(3,4-二甲氧基苯基)-3-氧代丙酸甲酯(5.0gram,20mmol)、原甲酸三甲酯(3.5mL,30mmol)和对甲苯磺酸一水合物(380mg,2mmol)得到3-(3,4-二甲氧基苯基)-3,3-二甲氧基丙酸甲酯。1H NMR(DMSO-d6,500MHz)：δ6.93(3H,m),3.82(2H,q,J＝7.2Hz),3.75(3H,s),3.73(3H,s),3.12(6H,s),2.92(2H,s),0.92(3H,t,J＝7.1Hz)。
步骤B：向上述缩酮中间体中加入5-溴吡啶-2-胺(3.5g,20mmol)。将混合物加热至150℃，保持2小时，然后冷却至室温。将粗产物与乙腈一起研磨，并过滤，得到呈白色固体的标题化合物(6.8克，94％)。MS m/z 360.9[M+H]+,362.9[M+2+H]+。
步骤C：按照实施例14第3部分步骤A中的方法，由在乙腈(2mL)中的7-溴-2-(3,4-二甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(181mg,0.5mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔-丁酯(170mg,0.55mmol)、碳酸钾(207mg,1.5mmol)和Pd(dppf)Cl2(36.5mg,0.05mmol)得到呈白色固体的4-(2-(3,4-二甲氧基苯基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔-丁酯(0.22mg,95％)。MS m/z 464.1[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.82(s,1H),8.24(dd,J＝1.5,9Hz,1H),7.85(dd,J＝2,8.5Hz,1H),7.78(d,J＝2Hz,1H),7.73(d,J＝9.5Hz,1H),7.10(d,J＝9Hz,1H),7.05(s,1H),6.54(s,1H),4.09(bs,2H),3.89(s,3H),3.85(s,3H),3.60-3.59(m,2H),2.64-2.63(m,2H),1.45(s,9H)。
步骤D：将从步骤A得到的中间体悬浮在HCl在二噁烷(4M,4mL)中的溶液中。在室温下，搅拌反应混合物2小时。浓缩该混合物，并将残余物分配到二氯甲烷和饱和的碳酸氢钠水溶液之间。将有机物干燥，浓缩，并进行在碱性氧化铝柱上的色谱层析，用二氯甲烷与甲醇(10％)洗脱，得到呈白色固体的标题化合物(150mg，88％)。M.P.196-198℃；MS m/z364.1[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.77(d,J＝2Hz,1H),8.24(dd,J＝2,9.5Hz,1H),7.85(dd,J＝2,8.5Hz,1H),7.78(d,J＝2Hz,1H),7.71(d,J＝9.5Hz,1H),7.09(d,J＝8.5Hz,1H),7.03(s,1H),6.60(s,1H),3.89(s,3H),3.85(s,3H),3.45(d,J＝2.5Hz,2H),2.97(t,J＝5.5Hz,2H),2.41(bs,2H)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例22通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例23
化合物188的制备
搅拌2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(30mg,0.08mmol)、甲醛(0.05mL,37％,～0.8mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(50mg,0.24mmol)在二氯甲烷(1mL)中的混合物2小时。将反应混合物用二氯甲烷稀释并用碳酸氢钠中和。干燥有机物并浓缩，得到呈白色固体的标题化合物(26mg，83％)。M.P.165-168℃；MS m/z 378.4[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.79(d,J＝2Hz,1H),8.25(dd,J＝2,9.5Hz,1H),7.85(dd,J＝2,8.5Hz,1H),7.78(d,J＝2Hz,1H),7.71(d,J＝9.5Hz,1H),7.10(d,J＝8.5Hz,1H),7.04(s,1H),6.56(s,1H),3.89(s,3H),3.85(s,3H),3.09(bs,2H),2.64-2.61(m,2H),2.56(bs,2H),2.51(s,3H)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例23通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例24
化合物144的制备
步骤A：在1个大气压的氢气下，搅拌4-(2-(3,4-二甲氧基苯基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔-丁酯(100mg,0.22mmol，如实施例22步骤C所述制备)和Pd/C(10％)(10mg)在乙酸乙酯(25mL)中的混合物过夜。使反应混合物过滤穿过硅藻土，浓缩并进行在二氧化硅柱上的色谱层析，用EtOAc/CH2Cl2(30/70)洗脱，得到呈白色固体的4-(2-(3,4-二甲氧基苯基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)哌啶-1-羧酸叔-丁酯(75mg,75％)，其直接用于下一步中而无需进一步纯化。MS m/z 466.4[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.57(s,1H),7.80(dd,J＝2.5,9.5Hz,1H),7.64(dd,J＝2,8.5Hz,1H),7.57(d,J＝2Hz,1H),7.53(d,J＝9Hz,1H),6.9(d,J＝9Hz,1H),6.82(s,1H),3.92(bs,2H),3.69(s,3H),3.65(s,3H),2.78-2.71(m,2H),2.69-2.65(1H,m),1.69-1.67(m,2H),1.41-1.38(m,2H),1.24(s,9H)。
步骤B：按照实施例22步骤D的方法，由来自步骤A的上述产物和在二噁烷中的HCl(4M,3mL)，得到呈白色固体的标题化合物(49mg，83％)。M.P.214-217℃；MS m/z 366.4[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.88(d,J＝2Hz,1H),8.09(dd,J＝2,9.5Hz,1H),7.98(dd,J＝2,8.5Hz,1H),7.91(d,J＝2Hz,1H),7.88(d,J＝9Hz,1H),7.23(d,J＝8.5Hz,1H),7.15(s,1H),4.02(s,3H),3.98(s,3H),3.30(d,J＝11.5Hz,2H),3.01(tt,J＝2Hz,12Hz,1H),2.87(t,J＝12Hz,2H),2.02(d,J＝12.5Hz,2H),1.80-1.73(m,2H)。
实施例25
化合物164的制备
按照实施例23中的方法，由在二氯甲烷(0.5mL)中的2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(哌啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(10mg,0.027mmol)、甲醛(10μL,37％,0.13mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(17mg,5.7mmol)得到呈白色固体的标题化合物(7.6mg,73％)。M.P.181-183℃；MS m/z 380.1[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.76(d,J＝2Hz,1H),8.0(dd,J＝2,9Hz,1H),7.84(dd,J＝2,8.5Hz,1H),7.77(d,J＝2Hz,1H),7.72(d,J＝9.5Hz,1H),7.09(d,J＝8.5Hz,1H),7.01(s,1H),3.89(s,3H),3.84(s,3H),2.91(d,J＝9.5Hz,2H),2.73-2.64(m,1H),2.22(s,3H),2.01(t,J＝8.5Hz,2H),1.88-1.85(m,2H),1.71-1.69(m,2H)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例25通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例26
化合物263的制备
第1部分：按照实施例14第2部分的方法，由在二噁烷(5mL)中的2,7-溴-2-(3,4-二甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(661mg,1.8mmol)(实施例22步骤B中制备)、KOAc(530mg,5.4mmol)、双(频哪醇酯基)二硼(700mg,2.7mmol)和Pd(dppf)Cl2(60mg,0.09mmol)得到呈白色固体的2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(560mg,76％)。硼酸的MS m/z 327.1[M+H]+。
第2部分：在氩气下，在-78℃下，向3-氧代哌啶-1-羧酸叔-丁酯(482mg,2.4mmol)在2-甲基四氢呋喃(2.5mL)中的溶液中滴加双(三甲基硅烷基)氨基钠(2.6mL,2.6mmol,在THF中1.0M)。在-78℃下，搅拌混合物1小时，接着加入N-(5-氯吡啶-2-基)-1,1,1-三氟-N-(三氟甲基磺酰基)-甲磺酰胺(1.0gram,2.5mmol)在2-甲基四氢呋喃(2.5mL)中的溶液，然后经2小时使反应温热至室温。在室温下搅拌过夜之后，用饱和的碳酸钠水溶液淬灭反应物，用乙醚稀释，并用洗涤有机物，干燥且浓缩。对粗产物进行在碱性氧化铝柱上的色谱层析，用在己烷中的5％乙酸乙酯洗脱，得到呈无色油状物的标题化合物(290mg，37％)。
第3部分，步骤A：按照实施例14第3部分步骤A的方法，由在乙腈(4mL)中的2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(370mg,0.91mmol)、叔丁基3-(三氟甲基磺酰氧基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(290mg,0.88mmol)、碳酸钾(364mg,2.6mmol)和Pd(dppf)Cl2(58mg,0.08mmol)得到呈白色固体的叔丁基3-(2-(3,4-二甲氧基苯基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(0.22mg,62％)。MS m/z 464.3[M+H]+。
第3部分，步骤B：按照实施例22步骤B中的方法，由3-(2-(3,4-二甲氧基苯基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔-丁酯(220mg,0.47mmol)和在二噁烷中的HCl(4M,5mL)得到标题化合物(160mg,79％)。M.P.146-150℃；MSm/z 364.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.73(d,J＝2Hz,1H),8.23(dd,J＝2,9.5Hz,1H),7.85(dd,J＝2,8.5Hz,1H),7.78(d,J＝2.5Hz,1H),7.71(d,J＝9.5Hz,1H),7.10(d,J＝8.5Hz,1H),7.05(s,1H),6.60(s,1H),3.89(s,3H),3.85(s,3H),3.29(bs,2H),2.40-2.36(m,4H)。
实施例27
化合物237的制备
步骤A：在室温下，将NaH(在矿物油中的60％分散液，12mg,0.3mmol)缓慢地加入到在无水THF中的1-Boc-4-羟基哌啶(48.3mg,0.24mmol)中。在室温下，搅拌反应混合物10分钟，并加入2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-F-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(60mg,0.2mmol)。然后，在70℃下，加热反应混合物3小时。加入少量冰水以淬灭反应。在蒸发大部分THF后，向混合物中加入乙醚，过滤沉淀物并干燥，得到4-(2-(3,4-二甲氧基苯基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基氧基)哌啶-1-羧酸叔-丁酯，其用于下一步中而无需进一步纯化。
步骤B：在0℃下，将4-(2-(3,4-二甲氧基苯基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基氧基)哌啶-1-羧酸叔-丁酯溶于CH2Cl2/TFA(0.5mL/0.5mL)中。在0℃下，搅拌混合物2小时，指导起始原料消失。在蒸发大部分的TFA之后，将冰冷饱和的NaHCO3加入到反应混合物中。用CH2Cl2萃取混合物。经MgSO4干燥有机层并浓缩，得到标题化合物(57mg，2个步骤74.8％)。M.P.221-224℃；MS m/z 382.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.58(1H,d,J＝2.9Hz),,7.81-7.86(2H,m),7.73-7.78(2H,m),7.08(1H,d,J＝8.7Hz),7.01(1H,s),4.82-4.86(1H,m),3.87(3H,s),3.83(3H,s),3.23-3.27(2H,m),3.04-3.09(2H,m),2.13-2.18(2H,m),1.85-1.91(2H,m)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例27通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例28
化合物52的制备
步骤A：将2-(3,4-二甲氧基苯基)乙酸乙酯(673mg,3mmol)与1-叔-丁氧基-N,N,N',N'-四甲基甲烷二胺(0.68mL,3.3mmol)混合。将该混合物加热至60℃，保持2小时。该混合物直接用于下一步中而无需后处理。
步骤B：将4-氯吡啶-2-胺(424mg,3.3mmol)直接加入到混合物中。将混合物加热至120℃，保持20小时。混合物直接用于下一步中而无需后处理。
步骤C：将哌嗪(1.3g,15mmol)加入到来自步骤B的混合物中，在120℃下再搅拌30分钟。对混合物进行在二氧化硅(使用在CH2Cl2中的10％MeOH(1％三乙胺))上的色谱层析，得到呈黄色粉末的标题化合物(120mg，11％)。M.P.175-179℃；MS m/z 367.2[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)：δ8.84(1H,d,J＝8.2Hz),8.40(1H,s),7.44(1H,d,J＝2.1Hz),7.34(1H,dd,J＝8.4Hz,2.1Hz),7.28(1H,dd,J＝8.2Hz,2.8Hz),6.99(1H,d,J＝8.5Hz),6.73(1H,d,J＝2.8Hz),3.80(3H,s),3.78(3H,s),3.48(4H,m),2.82(4H,m)。
实施例29
化合物220的制备
步骤A：将7-溴-2-氯-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(130mg,0.5mmol)(根据实施例14第1部分制备)与哌嗪-1-羧酸叔-丁酯(140mg,0.75mmol)和三乙胺(0.14mL,1.0mmol)在EtOH(2mL)中混合。将混合物加热至80℃，保持1小时。将反应混合物冷却至室温，然后过滤。对收集的物质进行在二氧化硅(使用在CH2Cl2中的0％至50％的EtOAc)上的色谱层析，得到4-(7-溴-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔-丁酯(130mg,64％)。MS m/z 409.4[M+H]+。
步骤B：将来自步骤A的中间体(0.3mmol)与3-氟-4-甲氧基苯基硼酸(77mg,0.45mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(35mg,0.03mmol)在CH3CN(2mL)和K2CO3水溶液中(1M,2mL)混合。在氩气下，在强力搅拌下，在80℃下加热混合物2小时。除去有机层并浓缩。对残余物进行在二氧化硅(使用在CH2Cl2中的0％至50％的EtOAc)上的色谱层析。
步骤C：将来自步骤B的Boc-保护的中间体溶于三氟乙酸(1mL)中。在20分钟之后，除去挥发物。将残余物分配在CH2Cl2和K2CO3水溶液(1M)中。移除有机层并浓缩，得到呈白色粉末的标题化合物(30mg,17％)。M.P.202-206℃；MS m/z 355.0[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)：δ8.93(1H,d,J＝2.0Hz),8.15(1H,dd,J＝9.3Hz,2.3Hz),7.67(1H,dd,J＝12.7Hz,2.3Hz),7.54(1H,m),7.37(1H,d,J＝9.2),7.30(1H,t,J＝8.8Hz),5.62(1H,s),3.90(3H,s),3.57(4H,m),2.75(4H,m),2.42(1H,br s)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例29通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例30
化合物276的制备
步骤A.将7-溴-2-氯-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(1.29g,5mmol)与3-氟-4-甲氧基苯基硼酸(850mg,5mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(281mg,0.25mmol)、CH3CN(10mL)和K2CO3水溶液(1M,10mL)混合。将混合物加热至80℃，保持6小时。在冷却至室温之后，将混合物分配到CH2Cl2(75mL)和H2O(50mL)之间。收集有机层并浓缩。对残余物进行在二氧化硅上的色谱层析，用在CH2Cl2中的EtOAc(0％至50％)洗脱，得到呈白色粉末的2-氯-7-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(520mg,34％)。MS m/z 305.0[M+H]+。
步骤B。将2-氯-7-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(180mg,0.6mmol)与4-氨基哌啶(90mg,0.9mmol)和三乙胺(165μL,1.2mmol)在DMSO(0.75mL)中混合。将混合物加热至120℃，保持30分钟。在冷却至室温之后，向混合物中加入CH3CN(2mL)。过滤混合物。将收集的物质用CH3CN洗涤，并在真空下干燥，得到呈白色粉末的标题化合物(115mg，52％)。M.P.268-283℃；MS m/z 369.3[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)：δ8.94(1H,d,J＝2.0Hz),8.16(1H,dd,J＝9.3Hz,2.3Hz),7.68(1H,dd,J＝12.7Hz,2.3Hz),7.55(1H,d,J＝8.5Hz),7.39(1H,d,J＝9.2),7.30(1H,t,J＝8.9Hz),5.70(1H,s),5.20(2H,br),4.36(2H,br),3.92(3H,s),3.04(3H,m),1.87(2H,m),1.32(2H,m)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例30通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。.
实施例31
化合物85的制备
第1部分，步骤A：在0℃下，向MgCl2(2.85g,30mmol)在乙腈(27mL)中的悬浮液中滴加丙二酸二乙酯(3.4mL,30mmol)和三乙胺(8.3mL,60mmol)。在0℃下，搅拌混合物30分钟。然后，分批加入3,4-二甲氧基苯甲酰氯)5.0g,25mmol)。在室温下，使混合物搅拌过夜，随后用1N HCl处理，用乙醚萃取，干燥并蒸发。在二氧化硅(使用在己烷中的乙酸乙酯(5％至40％))上纯化残余物，得到2-(3,4-二甲氧基苯甲酰基)丙二酸二甲酯(7.38g,100％)。MSm/z 297.1[M+H]+。
第1部分，步骤B：在室温下，向2-(3,4-二甲氧基苯甲酰基)丙二酸二甲酯(2.96g,10mmol)在POCl3(9.4mL,100mmol)中的溶液中滴加DIPEA(2.75mL,16.7mmol)。然后，在100℃下，搅拌该混合物3小时。在真空下除去POCl3，用冰水处理残余物并用乙醚萃取。用1NHCl洗涤有机层，干燥并蒸发。在二氧化硅(使用在己烷中的乙酸乙酯(5％至50％)上纯化残余物，得到标题化合物(2.0g，64％)。MS m/z 282.9[M+H]+。
第2部分：在-78℃下，向LDA(1.5M,13.3mL,20mmol)在THF(15mL)中的溶液中滴加2,5-二氟吡啶(1.15g,10mmol)在THF(10mL)中的溶液。然后，使温度升高至室温，并在室温下搅拌混合物2小时，之后用NH4Cl水溶液淬灭。用乙酸乙酯萃取混合物，干燥并蒸发。在二氧化硅(使用在己烷中的乙酸乙酯(5％至50％)上纯化残余物，得到2-(5-氟吡啶-2-基)乙腈(0.8g,59％)。MS m/z 137.0[M+H]+。
第3部分，步骤A：向2-(5-氟吡啶-2-基)乙腈(44mg,0.325mmol)在DMF(0.5mL)中的溶液中加入60％NaH(20mg,0.325mmol)。在室温下，搅拌混合物10分钟，然后用2-(氯(3,4-二甲氧基苯基)亚甲基)丙二酸二甲酯(102mg,0.325mmol)处理。搅拌混合物15分钟，并用饱和的NH4Cl溶液淬灭反应。过滤混合物。用水洗涤固体，并直接用于下一步中而无需进一步纯化。
第3部分，步骤B：用TFA(2.0mL)和水(0.2mL)处理来自步骤A的粗固体。在100℃下搅拌混合物过夜。然后，在真空下除去溶剂，粗产物用于下一步中而无需进一步纯化。在100℃下，搅拌混合物过夜。然后，在真空下除去溶剂，粗产物用于下一步中而无需进一步纯化。
第3部分，步骤C：在120℃下，加热来自步骤B的粗产物与在DMSO(1.0mL)中的哌嗪(86mg,1.0mmol)过夜。通过N2除去溶剂，接着使用在二氯甲烷中的甲醇(10％)、经二氧化硅纯化，得到标题化合物(30mg,25％)。M.P.199-202℃；MS m/z 391.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ：8.60(1H,d,J＝2.2Hz),7.98(1H,d,J＝9.8Hz),7.59(1H,dd,J＝9.5,2.5Hz),7.20(1H,dd,J＝8.5,2.2Hz),7.12(1H,d,J＝2.2Hz),6.93(1H,d,J＝8.2Hz),6.52(1H,s),3.89(3H,s),3.88(3H,s),3.23-3.21(4H,m),3.05-3.03(4H,m)。
实施例32
化合物91的制备
步骤A：向2-(5-氟吡啶-2-基)乙腈(0.78g,5.7mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中滴加三甲基硅烷基氯化物(4.4mL,34.4mmol)。在50℃下，搅拌混合物过夜。在真空下除去有机挥发物，并将残余物分配在乙醚和碳酸氢钠水溶液之间。用乙醚萃取水层。合并乙醚萃取物，干燥并蒸发，得到呈油状物的2-(5-氟吡啶-2-基)乙酸甲酯(0.9g,93％)，使用其而无需进一步纯化。MS m/z 170.1[M+H]+。
步骤B：按照实施例31第3部分步骤A中的方法，由在DMF(3.0mL)中的2-(5-氟吡啶-2-基)乙酸甲酯(0.34g,2.0mmol)、60％NaH(176mg,4.4mmol)和2-(氯(3,4-二甲氧基苯基)亚甲基)丙二酸二甲酯(0.69g,2.2mmol，实施例31第1部分步骤B中制备)得到所需2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-氟-4-氧代-4H-喹嗪-1,3-二羧酸二甲酯(0.2g,24％)。MS m/z 416.1[M+H]+。
步骤C：用LiOH水溶液(2.0N,2.0mL,4.0mmol)处理2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-氟-4-氧代-4H-喹嗪-1,3-二羧酸二甲酯(0.2g,0.48mmol)在甲醇(6.0mL)中的溶液，并在90℃下搅拌2小时。进行水处理，接着蒸发，得到深色残余物，用TFA(2.0mL)和水(0.2mL)处理，并在100℃下搅拌1小时。通过N2除去溶剂，接着进行色谱层析(用在己烷中的乙酸乙酯(25％至75％))，得到2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-氟-4H-喹嗪-4-酮(30mg,21％)。MS m/z 300.2[M+H]+。
步骤D：在120℃下，搅拌2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-氟-4H-喹嗪-4-酮(30mg,0.1mmol)、(S)-2-甲基哌嗪(30mg,0.3mmol)和K2CO3(27mg,0.2mmol)在DMSO(0.2mL)中的溶液48小时。通过N2除去溶剂，接着通过二氯甲烷和甲醇(10％)纯化，得到标题化合物(24mg,63％)。M.P.243-245℃；MS m/z 380.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ：8.52(1H,d,J＝2.2Hz),7.46(1H,d,J＝9.8Hz),7.30(2H,dt,J＝10.4,2.2Hz),7.22(1H,d,J＝1.9Hz),6.98(1H,d,J＝8.5Hz),6.84(2H,s),3.96(3H,s),3.95(3H,s),3.58-3.54(2H,m),3.50(1H,s),3.21-3.19(1H,m),3.12-3.04(2H,m),2.85-2.80(1H,m),2.49(1H,t,J＝11.1Hz),1.20(3H,d,J＝6.6Hz)。
实施例33
化合物106的制备
步骤A：在氩气氛下，在室温下，向Pd2(dba)3(0.55g,0.6mmol)和DavePhos(0.50g,1.26mmol)在甲苯(40mL)中的混合物中滴加LHMDS在己烷(1.0M×50mL,50mmol)中的溶液。搅拌混合物10分钟，然后冷却至-10℃，向其加入乙酸叔丁酯(6.2mL,46mmol)，并再搅拌10分钟。然后，分批加入2-溴-5-氟吡啶(3.52g,20mmol)。当加入完成时，使温度升高至室温，并再搅拌混合物1小时。然后，通过饱和的NH4Cl溶液淬灭反应。进行水处理，接着进行色谱层析)在己烷中的乙酸乙酯(0％至20％))，得到2-(5-氟吡啶-2-基)乙酸叔-丁酯(2.6g,62％)。
步骤B：按照实施例31第3部分步骤A中的方法，由在DMF(1.0mL)中的2-(5-氟吡啶-2-基)乙酸叔-丁酯、60％NaH(80mg,2.0mmol)和2-(氯(3,4-二甲氧基苯基)-亚甲基)丙二酸二甲酯(0.32g,1.0mmol，在实施例31第2部分步骤B中制备)得到2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-氟-4-氧代-4H-喹嗪-1,3-二羧酸1-叔丁基3-甲酯。粗固体直接用于下一步中而无需纯化。
步骤C：按照实施例31第3部分步骤B中的方法，由来自步骤B的粗固体、TFA(5mL)和水(2mL)，得到2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-氟-4H-喹嗪-4-酮(145mg,48％)。MS m/z 300.2[M+H]+。
步骤D：按照实施例31第3部分步骤C中的方法，由在DMSO(0.5mL)中的2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-氟-4H-喹嗪-4-酮(75mg,0.25mmol)和哌嗪(75mg,0.87mmol)得到标题化合物(30mg,33％)。M.P.170-172℃；MS m/z 366.1[M+H]+；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.53(1H,d,J＝2.2Hz),7.46(1H,d,J＝9.5Hz),7.32-7.27(2H,m),7.22(1H,d,J＝1.9Hz),6.97(1H,d,J＝8.5Hz),6.84(2H,s),3.98(3H,s),3.95(3H,s),3.25-3.20(4H,m),3.13-3.07(4H,m)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例33通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例34
化合物245的制备
步骤A：在氮气气氛下，在90℃下，搅拌5-溴-2-碘吡啶(2.84g,10mmol)、丙二酸叔丁酯乙酯(3.76g,20mmol)、Cs2CO3(9.77g,30mmol)、CuI(0.19g,1.0mmol)和2-烟酸(0.246g,2.0mmol)在二噁烷(20mmol)中的混合物过夜。然后，用水处理混合物，用乙酸乙酯萃取，干燥并蒸发。将残余物溶于MeOH(100mL)和水(40mL)中，并加入NaOH(1.2g,30mmol)。在室温下，搅拌混合物3小时，然后用1N HCl酸化至pH 4，用乙酸乙酯萃取，干燥并进行色谱层析(在己烷中的乙酸乙酯(10％至50％))，得到2-(5-溴吡啶-2-基)乙酸叔-丁酯(1.2g,44％)。
步骤B：按照实施例33步骤B和C中的方法，用在DMF(2.0mL)中的NaH(在矿物油中60％，0.16g,4.0mmol)处理2-(5-溴吡啶-2-基)乙酸叔-丁酯(0.54g,2.0mmol)，接着与2-(氯(3,4-二甲氧基苯基)亚甲基)丙二酸酯(2.0mmol)反应。在100℃下，在TFA(5.0mL)和水(2.0mL)中脱保护和脱羧基，得到7-溴-2-(3,4-二甲氧基苯基)-4H-喹嗪-4-酮(0.17g,68％)。MS m/z 360.1[M+H]+,362.0[M+2+H]+。
步骤C：在100℃下，搅拌7-溴-2-(3,4-二甲氧基苯基)-4H-喹嗪-4-酮(0.17g,0.47mmol)、叔丁基4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(0.18g,0.57mmol)、PdCl2dppf(38mg,0.047mmol)、K2CO3(2.0M×0.75mL,1.5mmol)在乙腈(1.5mL)中的混合物16小时。然后，用水处理混合物，用二氯甲烷萃取，干燥并进行色谱层析(在二氯甲烷中的乙酸乙酯(20％至100％)，得到叔丁基4-(2-(3,4-二甲氧基苯基)-4-氧代-4H-喹嗪-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(0.16g,73％)。MS m/z463.3[M+H]+。
步骤D：用二氯甲烷(1.0mL)和TFA(1.0mL)处理叔丁基4-(2-(3,4-二甲氧基苯基)-4-氧代-4H-喹嗪-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(80mg,0.17mmol)，并在室温下搅拌1小时。然后，将混合物蒸发，用二氯甲烷处理，并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。将有机层干燥并蒸发，得到标题化合物(63mg,100％)。M.P.174-176℃；MS m/z 363.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ：9.04(1H,s),7.53(1H,dd,J＝9.2,1.9Hz),7.47(1H,d,J＝9.2Hz),7.31(1H,dd,J＝8.5,2.2Hz),7.23(1H,d,J＝2.2Hz),6.99(1H,J＝8.2Hz),6.86(2H,br s),6.36(1H,s),3.99(3H,s),3.97(3H,s),3.67-3.60(2H,m),3.24-3.13(2H,m),2.62-2.55(2H,m),2.21(1H,br s)。
实施例35
化合物249的制备
按照实施例23中的方法，由在10％甲醇的二氯甲烷溶液(1.0mL)中的2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-喹嗪-4-酮(30mg,0.083mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(53mg,0.25mmol)和甲醛的水溶液(30％,14μL,0.166mmol)得到标题化合物(26mg，83％)。M.P.194-196℃；MS m/z377.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ：9.03(1H,s),7.51-7.44(2H,m),7.29(1H,dd,J＝8.5,2.2Hz),7.21(1H,d,J＝1.9Hz),6.98(1H,J＝8.2Hz),6.87-6.82(2H,m),6.26(1H,s),3.98(3H,s),3.95(3H,s),3.48(2H,br s),3.06-2.97(2H,m),2.90-2.80(2H,m),2.65(3H,s)。
实施例36
化合物306的制备
第1部分，步骤A：向2-(苄氧基)-4-溴-6-氟苯胺(3.74g,12.6mmol)(根据已知的方法(WO2007/067612)以3个步骤，由1,3-二氟-2-硝基苯制备)在THF(25mL)中的溶液中加入PtO2(0.23g,1.0mmol)。在氢气(1atm,气球)下，在室温下搅拌23小时之后，将混合物过滤穿过硅藻土。浓缩滤液，得到呈褐色固体的2-氨基-5-溴-3-氟苯酚，其用于下一步中而无需进一步纯化。MS m/z 206.1[M+H]+,208.0[M+2+H]+。
第1部分，步骤B：在室温下，向来自步骤A的粗2-氨基-5-溴-3-氟苯酚在1,1,1-三乙氧基乙烷(10mL)中的溶液中加入TFA(0.96mL,12.6mmol)。在15小时之后，用Na2CO3中和混合物并过滤。浓缩滤液，并进行色谱层析(CH2Cl2)，得到呈褐色固体的6-溴-4-氟-2-甲基苯并[d]噁唑(2.531g,88％)。MS m/z 230.0[M+H]+,232.1[M+2+H]+。
第1部分，步骤C：使6-溴-4-氟-2-甲基苯并[d]噁唑(2.531g,11.0mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(3.087g,12.2mmol)、KOAc(3.25g,33.2mmol)和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(449mg,0.55mmol)在二噁烷(25ml)中的混合物脱气，并在85℃下于N2下加热。在15小时之后，LC-MS指示起始原料消失，且产物为硼酸与硼频哪醇酯以～2/1比例的混合物：硼酸产物：MS m/z 196.1[M+H]+；硼酸频哪醇酯产物：MSm/z 278.2[M+H]+。将反应混合物浓缩至干，并用于下一步中。
第2部分，步骤A：使来自第1部分的粗硼酸频哪醇酯/硼酸(～4g,～4mmol)、2-氯-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(0.792g,4.0mmol，实施例14第1部分中制备的)、Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(146mg,0.20mmol)、K2CO3(2M,6.0mL,12.0mmol)和CH3CN(12mL)脱气，然后在N2下、在60℃下加热2.5小时。除去挥发物，并用水和CH3CN洗涤残余物，得到呈浅灰色固体的7-氟-2-(4-氟-2-甲基苯并[d]噁唑-6-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(1.119g,89％)。MS m/z 314.2[M+H]+.1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.88-9.01(1H,m),8.39-8.48(1H,m),8.11-8.20(2H,m),7.86-7.96(1H,m),7.21-7.29(1H,m),2.69(3H,s)。
第2部分，步骤B：在120℃下，加热7-氟-2-(4-氟-2-甲基苯并[d]噁唑-6-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(63mg,0.2mmol)和(S)-2-甲基哌嗪(30mg,0.3mmol)在DMA(0.5mL)中的混合物15小时。除去挥发物，并对残余物进行色谱层析(在CH2Cl2中10-15％的MeOH)，得到呈黄色固体的标题化合物(26mg，33％)。M.P.207-209℃；MS m/z 394.3[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.39(1H,d,J＝1.3Hz),8.20-8.24(1H,m),8.05-8.16(2H,m),7.71-7.77(1H,m),7.11(1H,s),3.56-3.68(2H,m),2.98-3.06(1H,m),2.78-2.88(2H,m),2.68(3H,s),2.62-2.68(1H,m),2.27-2.34(1H,m),1.06(3H,d,J＝6.3Hz)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例36通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例37
化合物443的制备
步骤A：使7-溴-2-(3,4-二甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(516mg,2.0mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔-丁酯(740mg,2.4mmol)、碳酸钾(828mg,6.0mmol)和Pd(dppf)Cl2(144mg,0.2mmol)在乙腈(4mL)中的混合物脱气，然后在N2下，在60℃下加热过夜。除去挥发物，并对残余物进行色谱层析(30％EtOAc/CH2Cl2)，得到呈黄色固体的叔丁基4-(2-(3,4-二甲氧基苯基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(579mg,80％)。MS m/z 362.8[M+H]+。
步骤B：向来自步骤A的产物(400mg,1.1mmol)中加入1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑(220mg,1.2mmol)、Pd(dppf)Cl2(40mg,0.05mmol)、碳酸钾(455mg,3.3mmol)和CH3CN(2mL)。使混合物脱气，然后在75℃下加热过夜。用水和CH3CN洗涤混合物。除去挥发物，并对残余物进行色谱层析(在CH2Cl2中的0-2％MeOH)，得到呈灰白色固体的叔丁基4-(2-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(327mg,65％)。MS m/z458.5[M+H]+.
步骤C：按照实施例22步骤D中的方法，由来自步骤B的上述产物(327mg,0.72mmol)和在二噁烷中的HCl(4M,5mL)得到呈灰白色固体的标题化合物(194mg,76％)。M.P.200-203℃；MS m/z 358.2[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)δ8.80(d,J＝1.6Hz,1H),8.72(d,J＝1.6Hz,1H),8.30-8.26(m,2H),8.22(d,J＝1.6Hz,1H),7.77(d,J＝1.6Hz,2H),7.09(s,1H),6.62(s,1H),4.11(s,3H),3.46-3.44(m,2H),2.98-2.96(m,2H),2.43-2.39(m,2H)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例37通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例38
化合物342的制备
步骤A：按照实施例9步骤G中的方法，由2-氨基-5-溴-吡啶(415mg,2.4mmol)、3-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(520mg,2.0mmol)和PPTs(25mg,0.1mmol)得到呈黄色固体的2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-7-溴-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(498mg,67％)。MS m/z 370.2[M+H]+,372.2[M+2+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.99-9.09(1H,m),8.53-8.62(1H,m),8.08-8.18(1H,m),7.68-7.75(1H,m),7.55-7.63(1H,m),7.01-7.09(1H,m),2.74(3H,s),2.44(3H,s)。
步骤B：按照实施例22步骤C中的方法，由在乙腈(3ml)中的7-溴-2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(498mg,1.3mmol)、叔丁基4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(482mg,1.56mmol)、碳酸钾(538mg,3.9mmol)和Pd(dppf)Cl2(95mg,0.13mmol)得到呈灰白色固体的4-(2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔-丁酯(0.57g,84％)。MS m/z 473.5[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.80-8.89(1H,m),8.53-8.61(1H,m),8.23-8.32(1H,m),7.71-7.79(1H,m),7.55-7.61(1H,m),6.99-7.04(1H,m),4.03-4.14(2H,m),3.55-3.65(2H,m),2.74(3H,s),2.53-2.58(2H,m),2.43(3H,s),1.44(9H,s)。
步骤C：按照实施例22步骤D中的方法，由在CH2Cl2(4mL)中的叔丁基4-(2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯、HCl(2mL,在二噁烷中4N)得到呈灰白色固体的标题化合物(234mg,84％)。M.P.207-210℃；MS m/z 373.4[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.80(1H,s),8.55-8.60(1H,m),8.27-8.32(1H,m),7.73-7.78(1H,m),7.58-7.63(1H,m),7.00-7.05(1H,m),6.57-6.65(1H,m),3.42-3.47(2H,m),2.93-2.98(2H,m),2.72-2.76(2H,m),2.44(3H,s),2.39(3H,s)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例38通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例39
化合物629的制备
搅拌(R)-2-(4-乙基-6-甲基吡唑并[15-a]吡嗪-2-基)-7-(3-甲基哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(48mg,0.12mmol,根据实施例9制备)、甲醛(0.039ml,0.48mmol,在水中37％)和三乙酰氧基硼氢化钠(51mg,0.24mmol)在二氯甲烷(1mL)中的混合物1小时。用二氯甲烷稀释反应混合物，并用碳酸氢钠中和。将有机物干燥，浓缩，并进行色谱层析(0-5％MeOH/CH2Cl2)，得到呈黄色固体的标题化合物(45mg，90％)。M.P.257-259℃；MS m/z 418.5[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.56(1H,s),8.25-8.26(1H,m),8.12-8.14(1H,m),7.72-7.74(1H,m),7.55(1H,s),6.95(1H,s),3.60-3.65(2H,m),3.08(2H,q,J＝7.6Hz),2.84-2.89(2H,m),2.43-2.52(2H,m,obscured by DMSO-d6),2.45(3H,s),2.29–2.31(1H,m),2.24(3H,s),1.33(3H,t,J＝7.6Hz),1.91(3H,d,J＝6.2Hz)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例39通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例40
化合物625和化合物626的制备
步骤A：在30℃下，搅拌4-氯-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羧酸乙酯(2.39g,10mmol，在实施例9步骤C中制备)和甲醇钠(60mL,30mmol,在MeOH中0.5M)的混合物1小时。浓缩混合物以除去大部分甲醇，用水稀释并用6N HCl中和。沉淀出白色固体并过滤，用水和CH3CN洗涤，并干燥，得到呈白色固体的4-甲氧基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羧酸乙酯(1.387g,62％)。MS m/z 222.2[M-CH3+H]+。
步骤B：按照实施例9步骤E中的方法，由乙酸叔丁酯(1.6mL,12.3mmol)、LDA(10.2mL,15.4mmol,在THF中1.5M)和4-甲氧基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羧酸乙酯(1.387g,6.2mmol)得到呈油状物的3-(4-甲氧基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-3-氧代丙酸叔-丁基酯(1.35g,72％)。MS m/z 306.3[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.35(1H,s),7.27(1H,s)4.05(3H,s),4.01(2H,s),2.36(3H,s),1.38(9H,s)。
步骤C：按照实施例9步骤F中的方法，由3-(4-甲氧基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-3-氧代丙酸叔-丁酯(1.35g,4.43mmol))和EtOH(10mL)得到呈浅黄色固体的3-(4-甲氧基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-3-氧代丙酸乙酯，其直接用于下一步中而无需进一步纯化。MS m/z 278.3[M+H]+。
步骤D：在130℃下，加热3-(4-甲氧基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(～4.43mmol)、2-氨基-5-氟-吡啶(0.596g,5.3mmol)、PPTs(100mg,0.4mmol)和原硅酸四乙酯(1.0mL,4.43mmol)在间二甲苯(2.2mL)中的混合物。在15分钟之后，将混合物冷却至室温，并用CH2Cl2洗涤，得到呈黄色固体的7-氟-2-(4-甲氧基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(1.015g,70％)。MS m/z 326.3[M+H]+。
步骤E：在130℃下，加热7-氟-2-(4-甲氧基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(98mg,0.30mmol)和N-甲基-哌嗪(150mg,1.5mmol)在DMA(0.6mL)中的混合物。在6小时之后，将混合物冷却至室温，并进行色谱层析(5％MeOH/CH2Cl2和在MeOH中的10％3.5N NH3/CH2Cl2)，得到各自呈黄色固体的化合物625(12mg,10％)和化合物626(8.5mg,7％)。
化合物625：M.P.242-244℃；MS m/z 406.5[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.33-8.38(1H,m),8.24-8.30(1H,m),8.09-8.15(1H,m),7.70-7.74(1H,m),7.34-7.39(1H,m),6.92-6.96(1H,m),4.07(3H,s),3.21-3.29(4H,m),2.5(4H,m,由DMSO-d6遮蔽),2.37(3H,s),2.26(3H,s)。
化合物626：M.P.280-283℃；MS m/z 392.4[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.4(1H,s),8.24-8.28(1H,m),8.09-8.14(1H,m),7.70-7.75(1H,m),7.63-7.67(1H,m),7.48(1H,s),6.88(1H,s),3.22-3.29(4H,m),2.51-2.56(4H,m),2.24-2.30(3H,s),2.15(3H,s)。
实施例41
化合物688的制备
步骤A：在60℃下，加热4-氯-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羧酸乙酯(0.956g,4mmol,在实施例9步骤C中制备)、二甲胺(2.1mL,4.2mmol,2.0M在THF)和Et3N(0.84mL,6.0mmol)的混合物。在15小时之后，浓缩混合物，将残余物溶于EtOAc中，用水洗涤，干燥并浓缩，得到呈灰白色固体的4-(二甲基氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羧酸乙酯(0.99g,99％)。MS m/z 249.3[M+H]+。
步骤B：在-20℃下，向4-(二甲基氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羧酸乙酯(0.99g,4.0mmol)和EtOAc(1.95mL,20mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入LiHMDS(11.1mL,10mmol,在THF中0.9M)。在1小时之后，用饱和的NH4Cl淬灭混合物，用EtOAc萃取。将有机物浓缩，并进行色谱层析(2％MeOH/DCM)，得到呈浅黄色油状物的3-(4-(二甲基氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(0.48g,40％)。MS m/z 291.3[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.73(1H,s),7.05(1H,s),5.43(2H,s),3.96(2H,q,J＝7.0Hz),3.28(6H,s),2.20(3H,s),1.16(3H,t,J＝7.0Hz)
步骤C：按照实施例40步骤D的方法，由在间二甲苯(0.8mL)中的3-(4-(二甲基氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(0.48g,1.6mmol)、2-氨基-5-氟-吡啶(179mg,1.6mmol)、PPTs(40mg,0.16mmol)和原硅酸四乙酯(0.36mL,1.6mmol)得到呈黄色固体的2-(4-(二甲基氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(0.39g,72％)。MS m/z 339.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.92-9.00(1H,m),8.06-8.18(1H,m),7.91-7.94(1H,m),7.85-7.91(1H,m),7.55-7.61(1H,m),6.98-7.08(1H,m),3.36(6H,s),2.25(3H,s)。
步骤D：在150℃下，加热7-氟-2-(4-甲氧基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(50mg,0.15mmol)和哌嗪(86mg,1.0mmol)在DMA(0.5mL)中的混合物。在2小时之后，将混合物冷却至室温，并用CH3CN洗涤，得到呈黄色固体的标题化合物(60mg,98％)。M.P.245-248℃；MS m/z 405.4[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.23-8.28(1H,m),8.06-8.11(1H,m),7.89-7.92(1H,m),7.69-7.75(1H,m),7.50-7.55(1H,m),6.92(1H,s),3.35(6H,s),3.12-3.19(4H,m),2.87-2.92(4H,m),2.80(1H,s),2.24(3H,s)。
实施例42
化合物694的制备
步骤A：向2-(4-乙基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-7-(哌啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(78mg,0.2mmol,根据实施例38和24中的方法制备)和2,2-二甲基-1,3-二噁烷-5-酮(72mg,0.5mmol,90％工业级)在二氯乙烷(1mL(中的混合物中加入NaBH(OAc)3(106mg,0.5mmol)和1滴AcOH。在60℃下，搅拌混合物。在1小时之后，用饱和的NaHCO3淬灭混合物，用CH2Cl2萃取，浓缩并进行色谱层析(2-5％MeOH/CH2Cl2)，得到呈白色固体的7-(1-(2,2-二甲基-1,3-二噁烷-5-基)哌啶-4-基)-2-(4-乙基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(70mg,70％)。MS m/z 503.5[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.75-8.82(1H,m),8.54-8.61(1H,m),8.00-8.10(1H,m),7.72-7.79(1H,m),7.58-7.63(1H,m),6.99-7.03(1H,m),3.86-3.95(2H,m),3.71-3.81(2H,m),3.06-3.15(2H,m),3.00-3.06(2H,m),2.70-2.80(1H,m),2.53-2.59(1H,m),2.45(3H,s),2.28-2.38(2H,m),1.82-1.90(2H,m),1.59-1.71(2H,m),1.32-1.37(6H,m),1.27(3H,s)。
步骤B：向7-(1-(2,2-二甲基-1,3-二噁烷-5-基)哌啶-4-基)-2-(4-乙基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(50mg,0.1mmol)在THF(10mL)中的混合物中加入HCl(1.3mL,2.6mmol,2N)。在室温下搅拌该混合物。在15小时之后，用过量的在MeOH中的7N NH3处理混合物，浓缩并进行色谱层析(10％2.5N NH3，在MeOH/CH2Cl2中)，得到呈黄色固体的标题化合物(45mg,97％)。M.P.228-230℃；MS m/z 463.6[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.77-8.84(1H,m),8.54-8.61(1H,m),8.02-8.10(1H,m),7.90-7.94(1H,m),7.74-7.79(1H,m),7.57-7.63(1H,m),6.99-7.05(1H,m),4.21-4.31(2H,m),3.42-3.59(4H,m),3.10(2H,q,J＝7.5Hz),2.89-3.00(2H,m),2.70-2.72(1H,m),2.57-2.62(1H,m),2.45(3H,s),1.79-1.89(2H,m),1.63-1.75(2H,m),1.34(3H,t,J＝7.5Hz)。
实施例43
化合物662的制备
在80℃下，加热2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(56mg,0.15mmol，根据实施例24的方法制备)、1-溴-2-氟乙烷(23mg,0.18mmol)和K2CO3(23mg,0.18mmol)在DMF(1mL)中的混合物。在7小时之后，将混合物冷却至室温，并进行色谱层析(5％MeOH/CH2Cl2)，得到呈黄色固体的标题化合物(29mg，44％)。M.P.197-199℃；MS m/z 421.4[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.79-8.85(1H,m),8.55-8.60(1H,m),8.05-8.11(1H,m),7.73-7.80(1H,m),7.57-7.62(1H,m),7.02(1H,s),4.59-4.65(1H,m),4.48-4.55(1H,m),3.01-3.07(2H,m),2.69-2.75(1H,m),2.74(3H,s),2.68-2.72(1H,m),2.62-2.67(1H,m),2.43(3H,s),2.12-2.21(2H,m),1.85-1.88(2H,m),1.70-1.88(2H,m)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例43通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。.
实施例44
化合物798的制备
第1部分，步骤A：向2,6-二甲基哌啶-4-酮(1.27g,10mmol，～1.5/1比例的反式/顺式异构体的混合物)和二碳酸二叔丁酯(2.40g,11mmol)在乙醚中的溶液中加入NaOH(11mL,11mmol,在水中1N)。在室温下，搅拌混合物。在36小时之后，用乙醚萃取混合物。将有机物浓缩，并进行色谱层析(5-30％EtOAc/己烷)，得到呈～1.2/1比例的反式/顺式混合物的叔丁基2,6-二甲基-4-氧代哌啶-1-羧酸酯(1.99g,87％,澄清油状物)。当静置过夜之后，从油状物中沉淀出固体，过滤并用乙醚洗涤，得到反式-叔丁基2,6-二甲基-4-氧代哌啶-1-羧酸酯(0.376g,16％)(95％反式，根据1H NMR)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ4.33-4.45(2H,m),2.80-2.90(2H,m),2.33-2.44(2H,m),1.50(9H,s),1.26(6H,d,J＝6.9Hz)。1H NMR与顺式和反式异构体的混合物中的反式异构体的1H NMR一致(US200839454,JOC,1993,58,1109-1117)。
第1部分，步骤B：在-78℃下，向反式-叔丁基2,6-二甲基-4-氧代哌啶-1-羧酸酯(266mg,1.17mmol)在THF(7mL)中的溶液中加入NaHMDS。在1小时之后，加入在THF(3mL)中的N-苯基-双(三氟甲烷磺酰亚胺)(0.50g,1.4mmol)。在室温下，搅拌反应混合物2小时，用饱和的NH4Cl淬灭，并用乙醚萃取。浓缩有机物，并进行色谱层析(1％EtOAc/己烷)，得到反式-叔丁基2,6-二甲基-4-(三氟甲基磺酰氧基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(0.415g,98％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.77-5.85(1H,m),4.29-4.44(2H,m),2.81-2.90(1H,m),2.15-2.23(1H,m),1.48(9H,s),1.37(3H,d,J＝6.6Hz),1.24(3H,d,J＝6.6Hz)。
第2部分，步骤A：按照实施例14第2部分的方法，由在二噁烷(6mL)中的7-溴-2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(0.74g,2.0mmol，实施例38步骤A中制备)、KOAc(590mg,6.0mmol)、双(频哪醇酯基)二硼(560mg,2.2mmol)和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(82mg,0.1mmol))得到2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基硼酸。粗中间体直接用于下一步中。MS m/z 336.3[M+H]+.
第2部分，步骤B：按照实施例14第3部分步骤A的方法，由在乙腈(10mL)中的2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基硼酸(～2mmol)、反式-2,6-二甲基-4-(三氟甲基磺酰氧基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔-丁酯(0.415g,1.15mmol)、碳酸钾(3.5mL,2.0M)和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(82mg,0.1mmol)得到呈黄色固体的叔丁基4-(2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)-反式-2,6-二甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(0.5g,87％)。MS m/z501.4[M+H]+。
第2部分，步骤C：按照实施例38步骤C中的方法，由在二噁烷(4M,0.5mL)中的叔丁基4-(2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)-反式-2,6-二甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(50mg,0.1mmol)和HCl得到呈黄色固体的标题化合物(25mg，62％)。M.P.228-231℃；MS m/z 401.3[M+H]+；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.77-8.82(1H,m),8.54-8.58(1H,m),8.25-8.32(1H,m),7.70-7.76(1H,m),7.57(1H,s),7.02(1H,s),6.50-6.58(1H,m),3.64-3.75(1H,m),3.08-3.18(1H,m),2.73(3H,s),2.41-2.44(1H,m),2.43(3H,s),1.99-2.08(1H,m),1.21(3H,d,J＝6.6Hz),1.16(3H,d,J＝6.3Hz)。
实施例45
化合物764的制备
步骤A：按照实施例9步骤H中的方法，由2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(618mg,2.0mmol)、(R)-吡咯烷-3-基甲基氨基甲酸叔-丁酯(481mg,2.4mmo)和DMA(2.0mL)得到呈黄色固体的(S)-(1-(2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)吡咯烷-3-基)甲基氨基甲酸叔-丁酯(0.90g,92％)。MS m/z490.5[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.50-8.59(1H,m),7.97-8.03(1H,m),7.72-7.82(2H,m),7.48-7.57(1H,m),7.04-7.08(1H,m),6.87-6.94(1H,m),3.41-3.50(2H,m),3.35-3.41(1H,m),2.97-3.16(3H,m),2.73(3H,s),2.47-2.51(1H,m,由DMSO-d6遮蔽),2.43(3H,s),2.04-2.16(1H,m),1.71-1.83(1H,m),1.39(9H,s)。
步骤B：按照实施例38步骤C中的方法，(S)-(1-(2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)吡咯烷-3-基)甲基氨基甲酸叔-丁酯(0.39g,0.8mmol)、HCl(2.0mL,在二噁烷中4M)和CH2Cl2(10mL)得到呈黄色固体的标题化合物(0.19g,62％)。M.P.244-246℃；MS m/z 390.4[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.52-8.57(1H,m),7.96-8.03(1H,m),7.73-7.80(2H,m),7.52(1H,s),6.90(1H,s),3.42-3.50(2H,m),3.34-3.41(1H,m),3.10-3.18(1H,m),2.73(3H,s),2.59-2.70(2H,m),2.43(3H,s),2.34-2.42(1H,m),2.09-2.16(1H,m),1.73-1.82(1H,m)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例45通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例46
化合物294的制备
步骤A：将2-氯-7-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(182mg,0.6mmol)(根据实施例30步骤A制备)与4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔-丁酯(222mg,0.72mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(67mg，0.06mmol)、CH3CN(2mL)和K2CO3水溶液(1M,2mL)混合。在80℃下，加热混合物18小时。在冷却至室温之后，过滤混合物，得到呈粗产物的4-(7-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔-丁酯，其直接用于下一步中。
步骤B：将来自步骤A的4-(7-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔-丁酯溶于TFA(2mL)中。在10分钟之后，用氮气流除去挥发物。将残余物分配在CH2Cl2和K2CO3水溶液(1M)之间。将有机层负载到硅胶上，用在CH2Cl2中的0-10％MeOH(3％NH3)洗脱，得到呈现白色粉末的标题化合物(150mg,72％)。M.P.188-192℃；MS m/z 352.1[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)：δ9.05(1H,d,J＝2.3Hz),8.28(1H,dd,J＝9.4Hz,2.2Hz),7.76(1H,dd,J＝12.7Hz,2.3Hz),7.70(1H,d,J＝9.3Hz),7.63(1H,m),7.33(1H,t,J＝8.8Hz),7.14(1H,m),6.44(1H,s),3.92(3H,s),3.46(2H,m),2.91(2H,m),2.39(2H,m)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例46通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例47
化合物714的制备
步骤A：将3-溴-2-硝基吡啶(2.0g,10mmol)溶于THF(20mL)中。将-二环己基膦基-2',6'-二甲氧基联苯基(205mg,0.5mmol)和乙酸钯(II)(113mg,0.5mmol)加入到混合物中。向该混合物中加入溴化环丙基锌(15mmol，在THF中0.5M)。在室温下，搅拌混合物3小时。将混合物浓缩并在硅胶上进行色谱层析，用在CH2Cl2中的0-5％EtOAc洗脱，得到呈白色固体的3-环丙基-2-硝基吡啶(1.1g,67％)。MS m/z 165.2[M+H]+。
步骤B：将3-环丙基-2-硝基吡啶(1.1g,6.7mmol)溶于MeOH(150mL)中。使溶液在30℃下，在H2(30巴)下通过含有10％Pd/C的柱筒。浓缩溶液，得到呈无色油状物的3-环丙基-2-氨基吡啶(898mg,定量)。MS m/z135.1[M+H]+。
步骤C：按照实施例16步骤A中的方法，由3-环丙基-2-氨基吡啶(898mg,6.7mmol)、N-溴琥珀酰亚胺(1.3g,7.4mmol)、CH3CN(15mL)和氯丙酮(0.81mL,10mmol)得到呈褐色粉末的6-溴-8-环丙基-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(255mg,15％)。MS m/z 251.1[M+H]+,253.1[M+2+H]+。
步骤D：按照实施例14第2部分中的方法，由6-溴-8-氟-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(255mg,1.0mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(380mg,1.5mmol)、[1,1′-双(二苯膦基)二茂铁]-二氯钯(II)(41mg,0.05mmol)和乙酸钾(196mg，2mmol)得到8-环丙基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶。粗产物直接用于下一步中。
步骤E：按照实施例14第3部分步骤A的方法，由来自步骤D的粗产物8-环丙基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶和2-氯-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(1mmol，在实施例14第1部分步骤B中制备)、四(三苯基膦)钯(0)(112mg,0.1mmol)、CH3CN(4mL)和K2CO3水溶液(1M,4mL)，得到呈褐色粉末的2-(8-环丙基-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(330mg,99％)。MS m/z335.2[M+H]+.
步骤F：按照实施例14第3部分步骤B中的方法，由2-(8-环丙基-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(50mg,0.15mmol)和哌嗪(65mg,0.75mmol)得到呈褐色粉末的标题化合物(38mg,63％)。M.P.274-277℃；MS m/z 401.4[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)：δ9.14(1H,d,J＝1.7Hz),8.21(1H,d,J＝2.9Hz),8.07(1H,dd,J＝9.7Hz,2.8Hz),7.79(1H,d,J＝1.0Hz),7.67(1H,d,J＝9.2Hz),7.43(1H,m),6.99(1H,s),3.14(4H,m),2.89(4H,m),2.48(1H,m),2.37(3H,s),2.35(1H,br s),1.13(2H,m),1.04(2H,m)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例47通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例48
化合物674的制备
步骤A：将2-氨基烟酸(4.8g,35mmol)悬浮在THF(100mL)中。向该混合物中加入硼烷THF复合物(40mmol，在THF中1M)。在室温下，搅拌混合物18小时。通过加入氢氧化钾水溶液(2M,15mL)淬灭过量的试剂。剧烈搅拌该混合物10分钟。收集有机层并浓缩。对残余物进行在硅胶上色谱层析，用在CH2Cl2中的0-10％MeOH洗脱，得到呈白色固体的(2-氨基吡啶-3-基)甲醇(1.0g,23％)。MS m/z 125.1[M+H]+。
步骤B：按照实施例16步骤A中的方法，由(2-氨基吡啶-3-基)甲醇(1.0g,8mmol)、N-溴代琥珀酰亚胺(1.57g,8.8mmol)、CH3CN(16mL)和氯丙酮(0.81mL,10mmol)得到呈褐色粉末的(6-溴-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)甲醇(82mg,4％)。MS m/z 241.1[M+H]+,243.1[M+2+H]+。
步骤C：按照实施例14第2部分中的方法，由6-溴-8-氟-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(85mg,0.35mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(133mg,0.53mmol)、[1,1′-双(二苯膦基)二茂铁]-二氯钯(II)(30mg,0.035mmol)和乙酸钾(69mg,0.7mmol)得到(2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)甲醇。粗产物直接用于下一步中。
步骤D：按照实施例14第3部分步骤A中的方法，由来自步骤C的(2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)甲醇和2-氯-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(0.35mmol，在实施例14第1部分步骤B中制备)、四(三苯基膦)钯(0)(39mg,0.035mmol)、CH3CN(2mL)和K2CO3水溶液(1M,2mL)得到呈褐色粉末的7-氟-2-(8-(羟基甲基)-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(100mg,88％)。MS m/z325.2[M+H]+。
步骤E：按照实施例14第3部分步骤B中的方法，由7-氟-2-(8-(羟基甲基)-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(120mg,0.15mmol)和哌嗪(65mg,0.75mmol)得到呈褐色粉末的标题化合物(120mg,99％)。M.P.>320℃；MS m/z 391.3[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)：δ9.23(1H,s),8.24(1H,d,J＝2.6Hz),8.07(1H,dd,J＝9.7Hz,2.6Hz),7.96(1H,s),7.79(1H,s),7.73(1H,d,J＝6.7Hz),6.87(1H,s),4.86(2H,s),3.14(4H,m),2.89(4H,m),2.37(3H,s)。
实施例49
化合物353的制备
步骤A：将3-(3,4-二甲氧基苯基)-3-氧代丙酸乙酯(907mg,3.6mmol)溶于甲醇(2mL)中。向溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(34.2mg,0.18mmol)，接着加入原甲酸三甲酯(0.59mL,5.4mmol)。在80℃下搅拌该溶液1小时。用氮气流除去挥发物。向原料中加入5-溴嘧啶-2-胺(550mg,3.1mmol)和二苯醚(2mL)。在170℃下，加热混合物10分钟。使反应混合物穿过快速二氧化硅柱(33％己烷/CH2Cl2)，得到呈黄色固体的-3-(-5-溴嘧啶-2(1H)-亚基氨基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙烯酸乙酯。MS m/z 408.0[M+H]+,410.0[M+2+H]+。
步骤B：向3-(-5-溴嘧啶-2(1H)-亚基氨基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙烯酸乙酯(2mL)中加入二苯醚(2mL)。将反应物加热至220℃，保持1.5小时。通过色谱层析(100％CH2Cl2)纯化混合物，得到呈黄色固体的7-溴-2-(3,4-二甲氧基苯基)-4H-嘧啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(314mg,28％(2步骤))。MS m/z361.9[M+H]+,363.9[M+2+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ9.30(1H,d,J＝2.7Hz),9.20(1H,d,J＝2.9Hz),7.88(1H,dd,J＝8.5Hz,2.6Hz),7.79(1H,d,J＝2.2Hz),7.15(1H,s),7.11(1H,d,J＝8.5Hz),3.88(3H,s),3.85(3H,s)。
步骤C：使7-溴-2-(3,4-二甲氧基苯基)-4H-嘧啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(53.7mg,0.15mmol)、叔丁基4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(50.5mg,0.016mmol)、Pd(dppf)Cl2(11mg,0.015mmol)、K2CO3(62.2mg,0.45mmol)和ACN(1mL)的混合物脱气，然后在N2下，在80℃下加热过夜。除去挥发物，残余物用于下一步中而无需纯化。MS m/z 465.4[M+H]+。
步骤D：在0℃下，搅拌叔丁基4-(2-(3,4-二甲氧基苯基)-4-氧代-4H-嘧啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯在CH2Cl2/TFA(0.5mL/0.5mL)中的溶液2小时。在通过旋转蒸发除去大部分TFA和CH2Cl2之后，向反应混合物中加入冰冷的饱和NaHCO3。用CH2Cl2萃取混合物。经MgSO4干燥有机层，浓缩并进行色谱层析(5％MeOH/CH2Cl2)，得到呈黄色固体的标题化合物。MS m/z 365.1[M+H+]。
实施例50
化合物486的制备
步骤A：使2-氯-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(995mg,5mmol,实施例14第1部分中制备)、CuI(19.0mg,0.1mmol)、PdCl2(PPh3)2(70.2mg,0.1mmol)、乙炔基三甲基硅烷(2.1mL,15mmol)、三乙胺(2.1mL,15mmol)在DMF(10mL)中的混合物脱气，然后在N2下，在50℃下加热过夜。除去挥发物，粗7-氟-2-((三甲基硅烷基)乙炔基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮直接用于下一步中。MS m/z 261.1[M+H+]。
步骤B：将碳酸钾(1.0g,7.5mmol)加入到粗7-氟-2-((三甲基硅烷基)乙炔基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮在MeOH(33mL)中的溶液中。在0℃下搅拌混合物0.5小时。在通过旋转蒸发除去MeOH之后，加入水。过滤沉淀物，并通过二氧化硅色谱层析(8％EtOAc/CH2Cl2)纯化，得到呈黄色固体的2-乙炔基-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(192.1mg,20％(2个步骤))。MS m/z 189.1[M+H+]。
步骤C：使2-乙炔基-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(192.1mg,1.0mmol)、4-碘-2,6-二甲基吡啶-3-醇(305.3mg,1.2mmol)、CuI(9.7mg,0.05mmol)、PdCl2(PPh3)2(35.8mg,0.05mmol)、三乙胺(288mL,2mmol)在DMF(1.7mL)中的混合物脱气，然后在N2下在40℃下加热过夜。在除去大部分的DMF之后，加入水。过滤沉淀物，并通过色谱层析(14％EtOAC/CH2Cl2)纯化，得到呈黄色固体的2-(5,7-二甲基呋喃并[2,3-c]吡啶-2-基)-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(126.3mg,41％)。MS m/z 310.1[M+H+].
步骤D：将哌嗪(64.6mg,0.75mmol)加入到2-(5,7-二甲基呋喃并[2,3-c]吡啶-2-基)-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(46.4mg,0.15mmol)在DMA(0.5mL)中的溶液中。在120℃下，加热反应混合物2小时。在除去大部分DMA之后，向反应混合物中加入CH3CN，且形成沉淀物。过滤沉淀物，用水洗涤并干燥，得到呈黄色固体的标题化合物(30mg,53％)。M.P.198-200℃；MS m/z 376.3[M+H+]；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.25(1H,d,J＝2.5Hz),8.13(1H,dd,J＝9.9Hz,2.5Hz),7.73(1H,d,J＝9.8Hz),7.64(1H,s),7.41(1H,s),6.94(1H,s),3.17(4H,m),2.90(4H,m),2.71(3H,s),2.51(3H,s),2.07(1H,s)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例50通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。.
实施例51
化合物603的制备
步骤A：使5-溴吡啶-2-胺(433mg,2.5mmol)、叔丁基4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(928mg,3.0mmol)、PdCl2dppf(204mg,0.25mmol)、K2CO3(1.04g,7.5mmol)在乙腈(8.0mL)中的混合物脱气，然后在80℃下搅拌过夜。除去挥发物，并对残余物进行色谱层析(在CH2Cl2中的7％MeOH)，得到呈浅黄色油状物的4-(6-氨基吡啶-3-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔-丁酯(599mg,87％)。MS m/z 276.3[M+H]+。
步骤B：在Parr搅拌器(60psi)中，使用Pd/C(10％,60mg)氢化来自步骤A的产物(599mg,2.2mmol)在甲醇(10mL)中的溶液过夜。将混合物过滤穿过硅藻土，蒸发并进行色谱层析(在DCM中的7％MeOH)，得到呈褐色油状物的叔丁基4-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-1-羧酸酯(600mg,99％)。MS m/z 278.3[M+H]+。
步骤C：在室温下，搅拌来自步骤B的产物(600mg,2.2mmol)和双(2,4,6-三氯苯基)丙二酸酯(1.0g,2.2mmol)在THF(8.0mL)中的混合物1小时。然后过滤该混合物，并用DCM洗涤固体。收集滤饼并干燥，得到呈灰白色固体的叔丁基4-(2-羟基-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)哌啶-1-羧酸酯(455mg,63％)。MS m/z 346.4[M+H]+。
步骤D：在室温下，向来自步骤C的产物在DMF(6mL)中的溶液中加入NaH(60％,62mg,1.6mmol)。搅拌混合物15分钟，然后一次性加入N-苯基双(三氟甲烷磺酰亚胺)(511mg,1.4mmol)。在室温下搅拌该混合物过夜。进行水处理，接着用在CH2Cl2中的3％MeOH纯化，得到呈灰白色固体的叔丁基4-(4-氧代-2-(三氟甲基磺酰氧基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)哌啶-1-羧酸酯(521mg,84％)。
步骤E：使来自步骤D的产物(300mg,0.62mmol)、1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑(142mg,0.81mmol)、PdCl2dppf(51mg,0.062mmol)、K3PO4(193mg,0.93mmol)在二噁烷(2.0mL)中的混合物脱气，然后在100℃下搅拌过夜。除去挥发物，并对残余物进行色谱层析(在CH2Cl2中的10％MeOH)，得到含有一些杂质的叔丁基4-(2-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)哌啶-1-羧酸酯(～300mg)，其直接用于下一步中。MS m/z 460.5[M+H]+。
步骤F：按照实施例22步骤D中的方法，由来自步骤E的上述产物(～300mg)和在二噁烷中的HCl(4M,5mL)得到呈灰白色固体的标题化合物(196mg,88％，两个步骤)。M.P.268-270℃；MS m/z 360.4[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)δ8.75(s,1H),8.70(s,1H),8.27(dd,J＝9.0Hz,1.6Hz,1H),8.21(s,1H),8.00(dd,J＝9Hz,1.6Hz,1H),7.76(d,J＝9Hz,2H),7.06(s,1H),4.10(s,3H),3.06(d,J＝10Hz,2H),2.84-2.79(m,1H),2.64-2.59(m,2H),2.04(bs,1H),1.81(d,J＝10Hz,2H),1.56-1.53(m,2H)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例51通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例52
化合物769的制备
步骤A：向填充氩气的烘干的烧瓶中加入7-溴-2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(270mg,0.73mmol，实施例38步骤A中制备)、CuI(3.4mg,5％)、PdCl2(PPh3)2(30mg,5％)、三乙胺(1mL)和DMF(1mL)。用氩气吹扫得到的混合物三次，然后加入叔丁基丙-2-炔基氨基甲酸酯(0.14g,0.88mmol)在DMF(1mL)中的溶液。在80℃下加热混合物过夜，然后冷却至室温。在加入水之后，过滤得到的固体，并顺序用水和CH3CN洗涤，得到叔丁基3-(2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)丙-2-炔基氨基甲酸酯(260mg,80％)。MS m/z 445.2[M+H]+。
步骤B：按照实施例22步骤D中的方法，由来自步骤A的上述产物(100mg,0.23mmol)和在二噁烷中的HCl(4M,3mL)得到呈灰白色固体的7-(3-氨基丙-1-炔基)-2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(50mg,66％)。MS m/z 345.4[M+H]+。
步骤C：将来自步骤C的上述产物(50mg,0.15mmol)与Pd/C(10％,5mg)在二氯甲烷/甲醇(1:1,2mL)中混合，并在1个大气压的氢气下搅拌过夜。将反应混合物过滤穿过硅藻土，浓缩并进行在二氧化硅柱上的色谱层析，用CH2Cl2/MeOH(85/15)洗脱，得到7-(3-氨基丙基)-2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(45mg,89％)。MS m/z349.3[M+H]+。
步骤D：按照实施例23中的方法，由在二氯甲烷/甲醇(10:1,1mL)中的来自步骤B的上述产物(45mg,0.13mmol)、甲醛(0.05mL,37％,～0.8mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(50mg,0.24mmol)得到呈白色固体的标题化合物(20mg,41％)。M.P.136-138℃；MS m/z 377.3[M+H]+；1H NMR(DMSO-d6,500MHz)δ8.84(d,J＝1.6Hz,1H),8.58(d,J＝1.6Hz,1H),8.00(d,J＝9Hz,1H),7.77(d,J＝9Hz,1H),7.60(d,J＝1.6Hz,1H),7.02(s,1H),2.79-2.75(m,5H),2.45(s,3H),2.25(t,J＝10Hz,2H),2.15(bs,6H),1.83-1.76(m,2H)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例52通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。.
实施例53
化合物407的制备
步骤A：在氩气下，在90℃下加热7-溴-2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(1.5g,4.0mmol,以实施例22步骤A和B中示例的方式制备)、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(660μL,5.05mmol)、S-Phos(140mg,0.34mmol)、Pd2(dba)3(92mg,0.1mmol)、Cs2CO3(3.0g,9.2mmol)和DME(12mL)的混合物3小时。然后，将反应混合物悬浮在CH2Cl2和丙酮溶液中，并过滤。在真空下浓缩滤液。通过硅胶色谱(1:1CH2Cl2/EtOAc，然后在CH2Cl2中20％丙酮)纯化，接着用1:1的己烷/乙醚研磨，得到呈黄色固体的2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]decan-8-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(878mg,50％)。MS m/z 438.2[M+H]+。
步骤B：用6N HCl(7mL)处理2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(875mg,2.0mmol)在CH2Cl2/二噁烷(1:1v/v,28mL)中的溶液。在室温下，搅拌混合物20分钟，然后用K2CO3水溶液使其呈碱性。将混合物萃取到CH2Cl2中。经MgSO4干燥有机层，过滤并在真空下浓缩。用1:1的己烷/丙酮研磨，得到呈黄色固体的2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-(4-氧代哌啶-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(758mg,96％)。MS m/z 394.3[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.27(1H,dJ＝2.5Hz),8.08(1H,s),7.85(1H,dd,J＝8.5Hz,2.5Hz),7.81(1H,m),7.09(1H,d,J＝8.5Hz),6.96(1H,s),3.88(3H,s),3.84(3H,s),3.67(4H,t,J＝6Hz),2.64(3H,s),2.53(4H,m,由DMSO-d6遮蔽)。
步骤C：在70℃下，将2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-(4-氧代哌啶-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(50mg,0.13mmol)、NaBH(OAc)3(65mg,0.31mmol)、DCE(500μL)和正-丙胺(40μL,0.49mmol)的混合物加热15分钟。将反应混合物分配到K2CO3水溶液和CH2Cl2之间。在真空下浓缩有机层，通过硅胶色谱层析(在CH2Cl2中的10％MeOH，接着9:1:0.1的CH2Cl2:MeOH:NH4OH)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(47mg,87％)。M.P.178-184℃；MSm/z 437.5[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.17(1H,d,J＝3Hz),8.00(1H,m),7.84(1H,dd,J＝8.5Hz,2Hz),7.80(1H,d,J＝2Hz),7.08(1H,d,J＝8.5Hz),6.95(1H,s),3.88(3H,s),3.84(3H,s),3.67(2H,d,J＝12.5Hz),2.84(2H,t,J＝12.5Hz),2.61(3H,s),2.57(1H,m),2.54(2H,m,由DMSO-d6峰遮蔽),1.95(2H,d,J＝12.5Hz),1.41(4H,m),0.89(3H,t,J＝7.5Hz)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例53通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例54
化合物322的制备
步骤A：向2-甲基苯并[d]噁唑-6-羧酸(2.54g,14.4mmol)和SOCl2(2.05g,17.2mmol)在甲苯(70mL)中的混合物中加入6滴DMF。然后，在70℃下搅拌混合物3小时，冷却并蒸发，得到呈油状物的2-甲基苯并[d]噁唑-6-碳酰氯，其在静置时固化(2.9g,100％)。1HNMR(500MHz,CDCl3)8.27-8.30(1H,m),8.13(1H,dd,J＝8.4,1.7Hz),7.74(1H,dd,J＝8.5,0.6Hz),2.73(3H,s)。
步骤B：按照实施例31第1部分中的方法，2-甲基苯并[d]噁唑-6-碳酰氯(2.9g,14.4mmol)、丙二酸二甲酯(1.9g,14.4mmol)、MgCl2(1.37g,14.4mmol)和三乙胺(2.9mL,28.8mmol)在乙腈(15mL)中反应，得到2-(2-甲基苯并[d]噁唑-6-羰基丙二酸二甲酯(2.75g,66％)。MS m/z 292.0[M+H]+。
步骤C：按照实施例31第1部分步骤B中的方法，2-(2-甲基苯并[d]噁唑-6-羰基)丙二酸二甲酯(2.75g,9.5mmol)、POCl3(10mL)和DIPEA(2.6mL,15.8mmol)反应，得到得到2-(氯(2-甲基苯并[d]噁唑-6-基)亚甲基)丙二酸二甲酯(0.7g,24％)。MS m/z 310.1[M+H]+。
步骤D：按照实施例33步骤B和C中的方法，2-(氯(2-甲基苯并[d]噁唑-6-基)亚甲基)丙二酸二甲酯(0.7g,2.3mmol)、2-(5-氟吡啶-2-基)乙酸叔-丁酯(0.57g,2.7mmol)(如实施例33步骤A制备)、NaH(0.18g,4.5mmol)在DMF中反应，接着在100℃下与TFA和水反应，得到2-(4-氨基-3-羟基苯基)-7-氟-4H-喹嗪-4-酮(0.3g,48％)。MS m/z 271.2[M+H]+。
步骤E：向2-(4-氨基-3-羟基苯基)-7-氟-4H-喹嗪-4-酮(0.3g,1.1mmol)和原甲酸三甲酯(1.4mL,11.1mmol)的混合物中加入TFA(0.13mL,1.8mmol)。在室温下，搅拌混合物2小时，然后蒸发，得到7-氟-2-(2-甲基苯并[d]噁唑-6-基)-4H-喹嗪-4-酮(0.3g,99％)。MSm/z 295.2[M+H]+。
步骤F：在130℃下，搅拌7-氟-2-(2-甲基苯并[d]噁唑-6-基)-4H-喹嗪-4-酮(0.15g,0.51mmol)和(S)-2-甲基哌嗪(0.2g,2.0mmol)在DMA(1.0mL)中的混合物。通过氮气流除去溶剂，并用在二氯甲烷中的甲醇(10％)纯化残余物，得到呈黄色固体的标题化合物(63mg，36％)。M.P.115-117℃；MS m/z 375.3[M+H]+；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.55(1H,d,J＝2.2Hz),7.79(1H,d,J＝1.3Hz),7.73(1H,d,J＝7.9Hz),7.64(1H,dd,J＝8.2,1.6Hz),7.49(1H,d,J＝9.5Hz),7.33(1H,d,J＝2.5Hz),6.86-6.91(2H,m),3.60(2H,br.s.),3.25-3.34(1H,m),3.10-3.22(2H,m),2.93-3.03(1H,m),2.62-2.70(4H,m),1.31(3H,d,J＝6.3Hz)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例54通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。.
实施例55
化合物380的制备
第1部分，步骤A：在100℃下，搅拌6-氯哒嗪-3-胺(0.26g,2.0mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔-丁酯(0.62g,2.0mmol)、PdCl2dppf(0.16g,0.2mmol)、K2CO3(2.0M,3.0mL,6.0mmol)在乙腈(6.0ml)中的混合物过夜。进行水处理，接着用在二氯甲烷中的甲醇(0-10％)纯化，得到4-(6-氨基哒嗪-3-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔-丁酯(0.51g,93％)。MS m/z 277.2[M+H]+。
第1部分，步骤B：在Parr搅拌器(60psi)中，使用在碳上的Pd(OH)2(20％,0.2g)氢化叔丁基4-(6-氨基哒嗪-3-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(0.4g,1.4mmol)在乙醇(25mL)中的溶液过夜。使混合物过滤穿过硅藻土，蒸发并用在二氯甲烷中的甲醇(0-10％)纯化，得到叔丁基4-(6-氨基哒嗪-3-基)哌啶-1-羧酸酯(0.25g,62％)。MS m/z 279.2[M+H]+。
第2部分，在-20℃下，向6-碘-2-甲基苯并[d]噻唑(2.24g,7.3mmol)在THF(15mL)中的溶液中加入在THF中的i-PrMgCl(2.0M,3.7mL,7.4mmol)。将混合物保持在-10℃至-20℃下1小时，然后经由导管转移至5-(双(甲硫基)亚甲基)-2,2-二甲基-1,3-二噁烷-4,6-二酮(1.4g,5.6mmol)在THF(15mL)中的溶液中。反应稍微放热。在室温下，搅拌混合物90分钟，之后用NH4Cl水溶液淬灭。进行水处理，接着用在二氯甲烷中的乙酸乙酯(0-10％)纯化，得到2,2-二甲基-5-((2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)(甲硫基)亚甲基)-1,3-二噁烷-4,6-二酮(1.26g,64％)。MS m/z 350.1[M+H]+。
第3部分，在140℃下，搅拌2,2-二甲基-5-((2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)(甲硫基)亚甲基)-1,3-二噁烷-4,6-二酮(0.13g,0.36mmol)和叔丁基4-(6-氨基哒嗪-3-基)哌啶-1-羧酸酯(0.1g,0.36mmol)在二苯醚(2.0mL)中混合物1小时。然后，使温度升高至240℃，并搅拌30分钟。蒸发混合物，并通过制备HPLC纯化残余物，得到呈黄色固体的标题化合物(33mg，24％)(三氟乙酸盐)。M.P.230-235℃；MS m/z 378.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.87-8.92(1H,m),8.28-8.33(1H,m),8.08(1H,d,J＝9.1Hz),7.99-8.04(1H,m),7.79(1H,s),7.26(1H,s),3.41-3.48(2H,m),3.22-3.32(1H,m),3.03-3.11(2H,m),2.84(3H,s),2.14-2.22(2H,m),2.08(1H,s),1.92-2.03(2H,m)。
实施例56
化合物398的制备
步骤A：按照实施例9步骤G中的方法，由6-氯哒嗪-3-胺(0.65g,5.0mmol)、3-(3,4-二甲氧基苯基)-3-氧代丙酸乙酯(1.77g,7.0mmol)和PPTs(63mg,0.25mmol)的反应得到7-氯-2-(3,4-二甲氧基苯基)-4H-嘧啶并[1,2-b]哒嗪-4-酮(0.23g,14％)。MS m/z 318.1[M+H]+。
步骤B：按照实施例34步骤C中的方法，由7-氯-2-(3,4-二甲氧基苯基)-4H-嘧啶并[1,2-b]哒嗪-4-酮(0.12g,0.38mmol)、叔丁基4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(0.14g,0.45mmol)、PdCl2dppf(35mg,0.038mmol)、K2CO3(2.0M,0.6mL,1.2mmol)在乙腈(1.2ml)中反应，得到叔丁基4-(2-(3,4-二甲氧基苯基)-4-氧代-4H-嘧啶并[1,2-b]哒嗪-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(100mg,56％)。MS m/z465.3[M+H]+。
步骤C：按照实施例34步骤D中的方法，用TFA(1.0mL)和二氯甲烷(1.0mL)处理叔丁基4-(2-(3,4-二甲氧基苯基)-4-氧代-4H-嘧啶并[1,2-b]哒嗪-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(100mg,0.21mmol)得到呈黄色固体的标题化合物(50mg,65％)。M.P.195-200℃；MS m/z 365.3[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.13(1H,d,J＝9.8Hz),7.96(1H,d,J＝9.8Hz),7.82(1H,dd,J＝8.5,2.2Hz),7.74(1H,d,J＝2.2Hz),7.15(1H,s),7.08(1H,d,J＝8.8Hz),7.01(1H,br.s.),3.87(3H,s),3.83(3H,s),3.57(2H,br.s.),3.00(2H,br.s.),2.58(2H,br.s.)。
实施例57
化合物402的制备
步骤A：在88℃下，搅拌5-溴吡嗪-2-胺(0.17g,1.0mmol)和双(2,4,6-三氯苯基)丙二酸酯(0.56g,1.2mmol)在THF(4.0mL)中的混合物1小时。然后，过滤该混合物，并用乙酸乙酯洗涤固体。收集滤饼并干燥，得到7-溴-2-羟基-4H-吡嗪并[1,2-a]嘧啶-4-酮(0.18g,74％)。MS m/z 242.0[M+H]+,244.0[M+2+H]+。
步骤B：按照实施例34步骤C中的方法，由7-溴-2-羟基-4H-吡嗪并[1,2-a]嘧啶-4-酮(0.18g,0.74mmol)、叔丁基4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(0.27g,0.89mmol)、PdCl2dppf(60mg,0.074mmol)、K2CO3(0.31g,2.2mmol)在DMF(2.5mL)中反应得到叔丁基4-(2-羟基-4-氧代-4H-吡嗪并[1,2-a]嘧啶-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(0.18g,70％)。MS m/z 345.3[M+H]+。
步骤C：在室温下，向叔丁基4-(2-羟基-4-氧代-4H-吡嗪并[1,2-a]嘧啶-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(0.18g,0.52mmol)在DMF(3.0mL)中的溶液中加入NaH(60％,23mg,0.57mmol)。搅拌混合物15分钟，然后一次性加入PhNTf2(0.22g,0.62mmol)。搅拌混合物过夜。进行水处理，接着用在二氯甲烷中的乙酸乙酯(0-20％)纯化，得到4-(4-氧代-2-(三氟甲基磺酰氧基)-4H-吡嗪并[1,2-a]嘧啶-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔-丁酯(0.1g,40％)。MS m/z 377.1[M-Boc+H]+。
步骤D：在100℃下，搅拌叔丁基4-(4-氧代-2-(三氟甲基磺酰氧基)-4H-吡嗪并[1,2-a]嘧啶-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(80mg,0.17mmol)、3,4-二甲氧基苯基硼酸(46mg,0.25mmol)、PdCl2dppf(14mg,0.017mmol)、K3PO4(54mg,0.25mmol)在二噁烷(2.0ml)中的混合物24小时。过滤该混合物，蒸发并用在二氯甲烷中的乙酸乙酯(0-20％)纯化，得到叔丁基4-(2-(3,4-二甲氧基苯基)-4-氧代-4H-吡嗪并[1,2-a]嘧啶-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(43mg,55％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.10(1H,s),8.61(1H,s),7.72(1H,s),7.70(1H,d,J＝1.8Hz),7.00(3H,m),4.19-4.26(2H,m),4.03(3H,s),3.98(3H,s),3.69-3.76(2H,m),2.56-2.67(2H,m),1.51(9H,s)。
步骤E：按照实施例34步骤D中的方法，用TFA(1.0mL)和二氯甲烷(1.0mL)处理叔丁基4-(2-(3,4-二甲氧基苯基)-4-氧代-4H-吡嗪并[1,2-a]嘧啶-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(43mg,0.09mmol)得到呈黄色固体的标题化合物(34mg，100％)。M.P.205-208℃；MS m/z 365.4[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.15(1H,d,J＝0.9Hz),8.41(1H,s),7.85-7.94(1H,m),7.78(1H,d,J＝1.9Hz),7.27(1H,s),7.11(1H,d,J＝8.5Hz),6.97-7.05(1H,m),3.89(3H,s),3.84(3H,s),3.58(2H,br.s.),3.21-3.42(3H,m),3.07(2H,t,J＝5.7Hz)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例57通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例58
化合物499的制备
步骤A：在40℃下，搅拌叔丁基4-(6-氨基哒嗪-3-基)哌啶-1-羧酸酯(0.88g,3.2mmol)和双(2,4,6-三氯苯基)丙二酸酯(1.76g,3.8mmol)在THF(12mL)中的混合物1小时。然后蒸发混合物，并用在二氯甲烷中的甲醇(0-10％)纯化，得到叔丁基4-(2-羟基-4-氧代-4H-嘧啶并[1,2-b]哒嗪-7-基)哌啶-1-羧酸基酯(0.69g,63％)。MS m/z 347.2[M+H]+。
步骤B：按照实施例57步骤C中的方法，由叔丁基4-(2-羟基-4-氧代-4H-嘧啶并[1,2-b]哒嗪-7-基)哌啶-1-羧酸酯(0.69g,2.0mmol)、NaH(60％,88mg,2.2mmol)、PhNTf2(0.79g,2.2mmol)在DMF(12mL)中反应得到叔丁基4-(4-氧代-2-(三氟甲基磺酰氧基)-4H-嘧啶并[1,2-b]哒嗪-7-基)哌啶-1-羧酸酯(0.87g,91％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.90(1H,d,J＝9.5Hz),7.61(1H,d,J＝9.5Hz),6.45(1H,s),4.28-4.36(2H,m),3.20-3.30(1H,m),2.82-2.93(2H,m),1.94-2.02(2H,m),1.75-1.85(2H,m),1.49(9H,s)。
步骤C：在90℃下，搅拌叔丁基4-(4-氧代-2-(三氟甲基磺酰氧基)-4H-嘧啶并[1,2-b]哒嗪-7-基)哌啶-1-羧酸酯(0.24g,0.5mmol)、2-甲基-6-(三甲基甲锡烷基)苯并[d]噁唑(0.18g,0.6mmol)、Pd(PPh3)4(58mg,0.05mmol)、CuI(23mg,0.12mmol)在二噁烷(2.0mL)中的混合物过夜。浓缩混合物并用在二氯甲烷中的甲醇(0-10％)纯化。合并期望的级分并蒸发。用TFA(1.0mL)和二氯甲烷(1.0mL)处理残余物，并如实施例34步骤D中所述进行处理，得到呈黄色固体的标题化合物(86mg，48％)。M.P.126-128℃；MS m/z 362.2[M+H]+；1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.20(1H,s),7.91-7.99(2H,m),7.67(2H,d,J＝8.2Hz),7.07(1H,s),3.45(2H,d,J＝12.3Hz),3.07-3.21(2H,m),3.30–3.24(1H,m),2.61(3H,s),2.14(4H,br.s.)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例58通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例59
化合物502的制备
步骤A：在60℃下，搅拌叔丁基4-(5-氨基吡嗪-2-基)哌啶-1-羧酸酯(0.2g,0.72mmol)、3-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(0.21g,0.79mmol)、Si(OEt)4(0.16mL,0.72mmol)、PPTs(18mg,0.072mmol)在间二甲苯(0.36mL)中的混合物1小时，然后在130℃下，搅拌过夜。将混合物冷却，并直接负载到二氧化硅柱上，通过在二氯甲烷中的甲醇(0-10％)纯化。用在二氯甲烷中的乙酸乙酯(20-100％)进一步纯化，得到叔丁基4-(2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4-氧代-4H-吡嗪并[1,2-a]嘧啶-7-基)哌啶-1-羧酸酯(0.117g,34％)。MS m/z 476.4[M+H]+。
步骤B：按照实施例34步骤D中的方法，用TFA(1.0mL)和二氯甲烷(2.0mL)处理叔丁基4-(2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4-氧代-4H-吡嗪并[1,2-a]嘧啶-7-基)哌啶-1-羧酸酯(117mg,0.25mmol)得到呈黄色固体的标题化合物(93mg，100％)。MS m/z376.4[M+H]+；1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ9.13(1H,d,J＝1.3Hz),8.53(1H,s),8.27(1H,d,J＝0.6Hz),7.55(1H,d,J＝1.3Hz),7.28(1H,s),3.27-3.34(2H,m),2.99-3.09(1H,m),2.85-2.96(2H,m),2.75(3H,s),2.47(3H,d,J＝0.9Hz),2.05-2.14(2H,m),1.84-1.95(2H,m)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例59通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。.
实施例60
化合物512的制备
步骤A：按照实施例59步骤A中的方法，由叔丁基4-(6-氨基哒嗪-3-基)哌啶-1-羧酸酯(0.28g,1.0mmol)、3-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(0.28g,1.1mmol)、Si(OEt)4(0.22mL,1.0mL)、PPTs(25mg,0.1mmol)在间二甲苯(0.5ml)中反应得到叔丁基4-(2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4-氧代-4H-嘧啶并[1,2-b]哒嗪-7-基)哌啶-1-羧酸酯(60mg,13％)。MS m/z 476.4[M+H]+。
步骤B：按照实施例34步骤D中的方法，用TFA(1.0mL)和二氯甲烷(1.0mL)处理叔丁基4-(2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4-氧代-4H-嘧啶并[1,2-b]哒嗪-7-基)哌啶-1-羧酸酯(60mg,0.13mmol)得到呈黄色固体的标题化合物(47mg，100％)。MS m/z 376.4[M+H]+；1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.27-8.31(1H,m),8.06(1H,d,J＝9.5Hz),7.78(1H,s),7.57(1H,d,J＝0.9Hz),7.39(1H,s),3.25-3.30(2H,m),3.15-3.23(1H,m),2.82-2.90(2H,m),2.79(3H,s),2.51(3H,d,J＝0.9Hz),2.02-2.09(2H,m),1.85-1.96(2H,m)。
实施例61
化合物586的制备
步骤A：在120℃下，搅拌2,5-二溴吡嗪(1.45g,6.1mmol)、叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(1.13g,6.1mmol)和K2CO3(1.26g,9.2mmol)在NMP(6.0mL)中的混合物过夜。将混合物冷却，然后进行水处理，记者用在二氯甲烷中的乙酸乙酯(0-15％)纯化，得到叔丁基4-(5-溴吡嗪-2-基)哌嗪-1-羧酸酯(1.45g,69％)。MS m/z 343.3[M+H]+,345.3[M+2+H]+。
步骤B：在Ar气氛下，在40℃下，搅拌叔丁基4-(5-溴吡嗪-2-基)哌嗪-1-羧酸酯(1.25g,3.6mmol)、LiHMDS(1.0M,4.4mL,4.4mmol)、Pd(dba)2(105mg,0.18mmol)、PtBu3HBF4(53mg,0.18mmol)在甲苯(4.4mL)中的混合物过夜。然后，将混合物冷却，用乙腈(2.0mL)和1N HCl(0.2mL)处理，搅拌15分钟，并经硅胶(在二氯甲烷中的甲醇(0-10％))纯化，得到叔丁基4-(5-氨基吡嗪-2-基)哌嗪-1-羧酸酯(0.96g,94％)。MS m/z 280.2[M+H]+。
步骤C：在室温下，搅拌叔丁基4-(5-氨基吡嗪-2-基)哌嗪-1-羧酸酯(0.68g,2.4mmol)、双(2,4,6-三氯苯基)丙二酸酯(1.36g,2.9mmol)在THF(15mL)中的混合物64小时。然后，过滤混合物。用乙酸乙酯洗涤固体并干燥，得到叔丁基4-(2-羟基-4-氧代-4H-吡嗪并[1,2-a]嘧啶-7-基)哌嗪-1-羧酸酯(0.65g,77％)。MS m/z 348.3[M+H]+。
步骤D：按照实施例57步骤C中的方法，由叔丁基4-(2-羟基-4-氧代-4H-吡嗪并[1,2-a]嘧啶-7-基)哌嗪-1-羧酸酯(0.65g,1.9mmol)、NaH(60％,82mg,2.1mmol)和PhNTf2(0.74g,2.1mmol)在DMF(10ml)中反应，得到叔丁基4-(4-氧代-2-(三氟甲基磺酰氧基)-4H-吡嗪并[1,2-a]嘧啶-7-基)哌嗪-1-羧酸酯(0.72g,80％)。MS m/z 480.2[M+H]+。
步骤E：按照实施例57步骤D中的方法，由叔丁基4-(4-氧代-2-(三氟甲基磺酰氧基)-4H-吡嗪并[1,2-a]嘧啶-7-基)哌嗪-1-羧酸酯(0.38g,0.79mmol)和2-甲基-2H-吲唑-5-基硼酸(0.21g,1.2mmol)在PdCl2dppf(64mg,0.08mmol)和K3PO4(0.25g,1.2mmol)的存在下在二噁烷(6.0mL)中反应得到叔丁基4-(2-(2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氧代-4H-吡嗪并[1,2-a]嘧啶-7-基)哌嗪-1-羧酸酯(0.22g,60％)。MS m/z 462.3[M+H]+。
步骤F：按照实施例34步骤D中的方法，用TFA(1.0mL)和二氯甲烷(1.0mL)处理叔丁基4-(2-(2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氧代-4H-吡嗪并[1,2-a]嘧啶-7-基)哌嗪-1-羧酸酯(0.22g,0.48mmol)得到呈黄色固体的标题化合物(0.17mg，99％)。M.P.160-162℃；MS m/z362.3[M+H]+；1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ9.04(1H,d,J＝1.3Hz),8.50(1H,dd,J＝1.6,0.9Hz),8.18(1H,s),7.97-8.02(2H,m),7.71(1H,d,J＝9.1Hz),7.01(1H,s),4.23(3H,s),3.61-3.67(4H,m),3.13-3.20(4H,m)。
实施例62
化合物695的制备
第1部分，步骤A：在-78℃下，经30分钟向1-(1H-吡咯-2-基)乙酮(2.18g,20mmol)在二氯甲烷(100mL)中的悬浮液中加入溴(1.23mL,24mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液。在加入之后，在-78℃下，搅拌混合物10分钟，然后倾倒入冰-水中。用二氯甲烷萃取水层。合并有机萃取物，干燥并蒸发。通过在二氯甲烷中的乙酸乙酯(0-20％)纯化残余物，得到1-(4-溴-1H-吡咯-2-基)乙酮(3.48g,92％)。MS m/z 188.0[M+H]+,190.0[M+2+H]+。
第1部分，步骤B：在0℃下，向1-(4-溴-1H-吡咯-2-基)乙酮(3.48g,18.5mmol)在DMF(40mL)中的溶液中滴加NaH(60％,0.81g,20.4mmol)。使温度升高至室温，并滴加1-氯丙-2-酮(1.54mL,19.4mmol)。在室温下，在室温下该混合物过夜。进行水处理，接着用在己烷中的乙酸乙酯(5-30％)纯化，得到1-(2-乙酰基-4-溴-1H-吡咯-1-基)丙-2-酮(2.9g,64％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.99(1H,d,J＝1.9Hz),6.77(1H,d,J＝1.6Hz),5.00(2H,s),2.39(3H,s),2.25(3H,s)。
第1部分，步骤C：在120℃下，搅拌1-(2-乙酰基-4-溴-1H-吡咯-1-基)丙-2-酮(2.9g,11.9mmol)和乙酸铵(18g,238mmol)在乙酸(100mL)中的混合物过夜。然后，通过旋转蒸发除去乙酸，接着向残余物中加入冰水，并用NaOH使混合物呈碱性(pH 9)。用乙酸乙酯萃取该混合物。合并有机萃取物，干燥并蒸发。用在二氯甲烷中的乙酸乙酯(0-10％)纯化残余物，得到7-溴-1,3-二甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪(2.4g,90％)。MS m/z 225.1[M+H]+,227.1[M+2+H]+。
第1部分，步骤D：按照实施例14第2部分中的方法，由7-溴-1,3-二甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪(0.67g,3.0mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(0.99g,3.9mmol)、PdCl2dppf(0.24g,0.3mmol)、KOAc(0.88g,9.0mmol)在二噁烷(10ml)中反应，得到1,3-二甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡咯并[1,2-a]吡嗪，其直接用于下一步中而无需进一步纯化。MS m/z 191.2[M-频哪醇+H]+。
第2部分，步骤A：按照实施例14第3部分步骤A中的方法，由2-氯-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(0.3g,1.5mmol)与1,3-二甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡咯并[1,2-a]吡嗪(1.5mmol)反应得到2-(1,3-二甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基)-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(0.34g,74％)。MS m/z 309.2[M+H]+。
第2部分，步骤B：按照实施例14第3部分步骤B中的方法，由2-(1,3-二甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基)-7-氟-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(0.14g,0.45mmol)与2,6-二甲基哌嗪(0.26g,2.27mmol)反应得到呈黄色固体的标题化合物(57mg，32％)。M.P.254-256℃；MS m/z 403.4[M+H]+；1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.20(1H,d,J＝2.8Hz),7.99(1H,d,J＝1.6Hz),7.84-7.90(1H,m),7.72(1H,d,J＝0.6Hz),7.58(1H,d,J＝9.5Hz),7.25(1H,t,J＝1.1Hz),6.69(1H,s),3.60(2H,d,J＝9.5Hz),3.03-3.11(2H,m),2.62(3H,s),2.37(2H,t,J＝11.3Hz),2.31(3H,d,J＝0.9Hz),1.21(6H,d,J＝6.3Hz)。
如下表1所示，本文公开的另外的化合物可以根据实施例62通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。
实施例63
化合物731的制备
第1部分，步骤A：按照实施例57步骤A中的方法，由5-氯吡啶-2-胺(2.57g,20mmol)和双(2,4,6-三氯苯基)丙二酸酯(10.2g,22mmol)在THF(100mL)中反应，得到7-氯-2-羟基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(3.89g,97％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.01(1H,br.s.),8.89(1H,d,J＝2.2Hz),8.10(1H,dd,J＝9.3,2.4Hz),7.44(1H,d,J＝9.5Hz),5.19(1H,br.s.)。
第1部分，步骤B：按照实施例57步骤C中的方法，由7-氯-2-羟基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-(3.89g,19.8mmol)与NaH(60％,0.87g,21.8mmol)和PhNTf2(7.78g,21.8mmol)在DMF(50mL)中反应，得到7-氯-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-2-基三氟甲烷磺酸酯(5.9g,91％)。MS m/z 370.0[M+H]+。
第2部分，步骤A：在-78℃下，向7-溴-1,3-二甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪(1.1g,4.9mmol)在THF(20mL)中的溶液中滴加BuLi(1.6M,4.7mL,7.5mmol)。在-78℃下，搅拌混合物30分钟，加入硼酸三异丙酯(1.7mL,7.4mmol)。使温度慢慢地升高至室温。用水(1.0mL)淬灭反应，并将混合物在真空下蒸干。I向残余物中加入7-氯-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-2-基三氟甲烷磺酸酯(1.6g,4.9mmol)、PdCl2dppf(0.4g,0.49mmol)、K3PO4(1.55g,7.3mmol)和二噁烷(40mL)。在Ar气氛下，在100℃下，搅拌混合物过夜，随后将混合物冷却，蒸发并通过二氧化硅(在二氯甲烷中的甲醇(0-10％))纯化，得到7-氯-2-(1,3-二甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(0.34g,22％)。MS m/z 325.2[M+H]+。
第2部分，步骤B：在Ar气氛下，在85℃下，搅拌7-氯-2-(1,3-二甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(0.2g,0.62mmol)、叔丁基4-甲基哌啶-4-基氨基甲酸酯(0.17g,0.8mmol)、RuPhos-Pd(22mg,0.031mmol)、RuPhos(14mg,0.031mmol)和叔丁氧化钠(83mg，0.87mmol)在THF(1.5mL)中的混合物过夜。然后，将混合物冷却，向其中乙酸(1.4eq)，接着经二氧化硅(在二氯甲烷中的甲醇(0-10％))纯化，得到叔丁基1-(2-(1,3-二甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)-4-甲基哌啶-4-基氨基甲酸酯(70mg,22％)。MS m/z 503.4[M+H]+。
第2部分，步骤C：化合物叔丁基1-(2-(1,3-二甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)-4-甲基哌啶-4-基氨基甲酸酯(70mg,0.14mmol)用在二噁烷中的HCl(4N,1.0mL)处理30分钟。然后，除去溶剂。将残余物用在甲醇中的氨再处理并蒸发。用在二氯甲烷中的甲醇(0-10％)纯化残余物，得到呈黄色固体的标题化合物(36mg,64％)。M.P.244-246℃；MS m/z 403.3[M+H]+；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.22-8.27(2H,m),8.04(1H,dd,J＝9.8,2.8Hz),7.96(1H,s),7.60(1H,d,J＝9.8Hz),7.41(1H,t,J＝1.3Hz),6.82(1H,s),3.25-3.30(4H,m),2.58(3H,s),2.27(3H,d,J＝0.9Hz),1.47-1.65(6H,m),1.10(3H,s)。
实施例64
化合物743的制备
步骤A：在110℃下，搅拌7-氯-2-(1,3-二甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(0.14g,0.43mmol)和叔丁基4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(0.2g,0.65mmol)、Pd(OAc)2(1.9mg,0.0086mmol)、SPhos(7.0mg,0.0172mmol)和K3PO4(0.18g,0.86mmol)在THF(1.0mL)和水(0.5mL)中的混合物过夜。进行水处理，接着用在二氯甲烷中的甲醇(0-10％)纯化，得到叔丁基4-(2-(1,3-二甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(0.13g,65％)。MS m/z 472.3[M+H]+。
步骤B：按照实施例63第2部分步骤中的方法，用在二噁烷中的HCl(1.0mL)处理叔丁基4-(2-(1,3-二甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(0.13g,0.28mmol)，得到呈黄色固体的标题化合物(5mg，5％)。M.P.189-191℃；MS m/z 372.3[M+H]+；1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.81(1H,d,J＝1.9Hz),8.03(2H,d,J＝1.6Hz),7.71(1H,s),7.62(1H,d,J＝9.5Hz),7.28(1H,s),6.76(1H,s),6.41-6.50(1H,m),3.58(2H,d,J＝2.5Hz),3.15(2H,t,J＝5.8Hz),2.63(3H,s),2.54(2H,br.s.),2.32(3H,d,J＝0.6Hz)。
实施例65
化合物804的制备
步骤A：将5-氟-2-硝基吡啶(200mg,1.41mmol)、2,7-二氮杂螺[3.5]-壬烷-2-羧酸叔-丁酯(319mg,1.41mmol)和K2CO3(195mg,1.41mmol)化合成二甲亚砜(8ml)。所述反应混合物受热在70℃为了15小时和冷却至室温，在所述溶剂为蒸发之前。萃取(CH2Cl2和H2O)，接着进行硅胶色谱层析(CH2Cl2/MeOH：98/2)，得到呈黄色固体的叔丁基7-(6-硝基-吡啶-3-基)-2,7-二氮杂-螺[3.5]壬烷-2-羧酸酯(320mg,65％)。MS m/z 349.5[M+H]+。
步骤B：将叔丁基7-(6-硝基-吡啶-3-基)-2,7-二氮杂-螺[3.5]壬烷-2-羧酸酯(315mg,0.90mmol)和Pd/C(32mg)在MeOH(40mL)中合并，并置于氢气氛(H2气球)下15小时。使反应混合物过滤穿过硅藻土，并进行硅胶色谱层析(CH2Cl2/MeOH：98/2)得到呈灰白色固体的7-(6-氨基-吡啶-3-基)-2,7-二氮杂-螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔-丁酯(227mg,78％)。MSm/z 319.6[M+H]+。
步骤C：在160℃下，加热叔丁基7-(6-氨基-吡啶-3-基)-2,7-二氮杂-螺[3.5]壬烷-2-羧酸酯(100mg,0.31mmol)、3-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(90mg,0.31mmol，按照实施例9步骤A至F中描述的制备)和PPTs(87mg,0.345mmol)在甲基-1-丁醇(2mL)中的混合物加热15小时。将混合物冷却至室温，倾倒入NaOH(1M)水溶液中，并用CH2Cl2萃取。经Na2SO4干燥合并的有机相，对残余物进行硅胶色谱层析(CH2Cl2/MeOH：9/1；和1％NH3水溶液)，得到呈黄色固体的标题产物(40mg，31％)。MS m/z 416.2[M+H]+.1HNMR(CDCl3,600MHz)δ8.18(d,J＝1.1Hz,1H),8.15(s,1H),7.45(dd,1H)7.80(d,1H),7.32(s,1H),7.11(s,1H),3.51(m,2H),3.42(d,1H),3.36(d,1H),3.15(m,2H),3.00(d,1H),2.97(d,1H),2.79(s,3H),2.52(s,3H),2.10(m,2H),1.89(m,2H)。
实施例66
化合物811的制备
步骤A：将在Ar下冷却至-78℃的在THF(20mL)中的5-溴吡啶-2-胺(1.0g,5.8mmol)与n-BuLi(3.6ml,5.8mmol,在己烷中1.6M)混合，并搅拌0.5小时。加入在THF(10mL)中的1,2-双(氯二甲基硅烷基)乙烷(1.2g,5.8mmol)，并经1小时使混合物温热至环境温度。然后，将该混合物再冷却至-78℃，加入第二当量的n-BuLi(3.6ml,5.8mmol,在己烷中1.6M)。在-78℃下，搅拌混合物0.5小时，然后经1小时使其温热至环境温度。接着，将混合物再冷却至-78℃，加入第三当量的n-BuLi(3.6ml,5.8mmol,在己烷中1.6M)。在-78℃下，搅拌混合物1小时，然后，加入在THF(10mL)中的4-氧代哌啶-1-羧酸叔-丁酯(1.3g,6.4mmol)，并使反应物达到环境温度。将混合物用EtOAc稀释，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩。用在正庚烷中的EtOAc(0-100％)从二氧化硅洗脱残余物，得到呈黄色固体的叔丁基4-(6-氨基吡啶-3-基)-4-羟基哌啶-1-羧酸酯(1.1g,64％)。MS m/z 294.2[M+H]+。
步骤B：在60℃下，在甲苯(10mL)中加热双(2,4,6-三氯苯基)丙二酸酯(0.80g,1.7mmol)和叔丁基4-(6-氨基吡啶-3-基)-4-羟基哌啶-1-羧酸酯(0.50g,1.7mmol)的混合物2小时。浓缩反应物以除去挥发物。用在CH2Cl2中的MeOH(0-20％)从二氧化硅洗脱残余物，得到呈浅黄色固体的叔丁基4-羟基-4-(2-羟基-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)哌啶-1-羧酸酯(0.43g,70％)。MS m/z 362.3[M+H]+.。
步骤C：在环境温度下，搅拌叔丁基4-羟基-4-(2-羟基-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)哌啶-1-羧酸酯(0.17g,0.5mmol)、1,1,1-三氟--N-苯基-N-(三氟甲基磺酰基)甲磺酰胺(0.19g，0.5mmol)和碳酸钾(0.13g，0.9mmol)在DMF(3ml)中的混合物。在1小时之后，将混合物用EtOAc稀释，用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩。用在正庚烷中的EtOAc(10-50％)从二氧化硅洗脱残余物，得到呈结晶黄色固体的叔丁基4-羟基-4-(4-氧代-2-(三氟甲基磺酰氧基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)哌啶-1-羧酸酯(0.08g,35％)。MS m/z494.3[M+H]+。
步骤D：按照实施例15步骤A中的方法，由在MeCN/水(2ml/0.3mL)中的叔丁基4-羟基-4-(4-氧代-2-(三氟甲基磺酰氧基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)哌啶-1-羧酸酯(80mg,0.16mmol)、8-氟-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶(67mg,0.24mmol，在实施例16步骤B中制备)、四(三苯基膦)钯(0)(9mg,0.01mmol)和K2CO3(31mg,0.32mmol)得到呈灰白色结晶固体的叔丁基4-(2-(8-氟-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-7-基)-4-羟基哌啶-1-羧酸酯(60mg,75％)。MS m/z 494.5[M+H]+。
步骤E：按照实施例24步骤B中的方法，由来自步骤D的上述产物与在二噁烷中的HCl(4M,2mL)得到呈白色固体的2-(8-氟-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-7-(4-羟基哌啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(11mg,49％)。MS m/z 394.4[M+H]+。1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ9.31(d,J＝1.2Hz,1H),9.01(d,J＝1.8Hz,1H),8.12(dd,J＝9.3,1.8Hz,1H),7.96(d,J＝2.4Hz,1H),7.88(dd,J＝12.6,1.2Hz,1H),7.75(d,J＝9.3Hz,1H),7.06(s,1H),5.34(br s,1H),2.91(明显的t,J＝12.0Hz,2H),2.79(d,J＝12.0Hz,2H),2.39(s,3H),1.89-1.84(m,2H),1.60(d,J＝12.0Hz,2H)。
表1提供式(I)的化合物的游离碱形式的分离化合物，其可以根据所指定实施例的方法，通过替代合适的起始原料、试剂和反应条件来制备。还预期由式(I)的化合物的游离碱形式制备任何盐、同位素体、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，并且进一步包括在本说明书的范围之内。当化合物的游离碱形式不是从盐形式分离时，本领域普通技术人员可以预期进行必需的反应以制备和分离化合物的游离碱形式。.
术语“化合物(Cpd)”代表化合物编号，术语“实施例(Ex)”代表“实施例编号”(其中*指示上文提供化合物的相应实施例)，术语“M.P.”代表“熔点(℃)”,术语“MS”代表“质谱峰m/z[M+H]+、[M+2+H]+、[M-H]-或[M+2-H]-”，术语“D”代表“分解/分解的”，术语“DR”代表“分解范围”，术语“S”代表“软化”，术语“ND”指示值“未确定”，和术语“NI”指示化合物“未分离”。
表1
或其盐、同位素体、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或互变异构体。
表2进一步提供式(I)的化合物的盐形式的某些分离化合物，其可以根据所指定实施例的方法，通过使用合适的反应物、试剂和反应条件来制备。还预期由式(I)的化合物的盐形式制备任何游离碱、同位素体、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或互变异构体，并且进一步包括在本说明书的范围之内。当化合物的游离碱形式不是从盐形式分离时，本领域普通技术人员可以预期进行必需的反应以制备和分离化合物的游离碱形式。
术语“化合物(Cpd)”代表化合物编号，术语“实施例(Ex)”代表“实施例编号”(其中*指示上文提供化合物的相应实施例)，术语“M.P.”代表“熔点(℃)”,术语“MS”代表“质谱峰m/z[M+H]+、[M+2+H]+、[M-H]-或[M+2-H]-”，术语“D”代表“分解/分解的”，术语“DR”代表“分解范围”，术语“S”代表“软化”和术语“ND”指示值“未确定”。
表2
或其游离碱、同位素体、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或互变异构体。
生物学实施例
为了更详细地描述且有助于理解本说明书，提供下述非限制性生物学实例以更完整地说明本说明书的范围，且不应理解为特别地限制其范围。本领域技术人员视界之内能够确定的目前已知或以后研发的本说明书的这样的变化被认为落入如本说明书和下文所主张的范围之内。这些实施例阐述了本文所述的某些化合物在体外和/或体内的测试，并且证实了所述化合物通过增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中治疗SMA的有用性。式(I)的化合物增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中，并且提高由SMN2基因产生的Smn蛋白质的水平，因此，可用于治疗需要其的人类受试者中的SMA。
实施例1
SMN2小基因构建物
小基因构建物的制备
通过PCR，使用下述引物扩增对应于从外显子的5’端
(ATAATTCCCCC)(SEQ ID NO.14)开始且终止于外显子8的核酸残基23(CAGCAC)(SEQ ID NO.15)的SMN2基因区域的DNA∶
正向引物：5’-CGCGGATCCATAATTCCCCCACCACCTC-3’(SEQ ID NO.16)
反向引物∶5’-CGCGGATCCGTGCTGCTCTATGCCAGCA-3’(SEQ ID NO.17)
每个引物的5'端设计为在外显子6的5'端(GGATCC)(SEQ ID NO.18)和外显子8的第23个核苷酸后的3'端加入BamHI限制性核酸内切酶识别位点。使用该BamHI限制性核酸内切酶识别位点，将PCR片段克隆到原始pcDNA 3.1/Hygro载体的衍生物中，该载体如在美国专利公开US2005/0048549中公开的修饰。
使用HindIII位点和BamHI限制性位点，将新的UTR加入到修饰的载体中，其包含5'DEG UTR：
5’-TAGCTTCTTACCCGTACTCCACCGTTGGCAGCACGATCGCACGTCCCACGTGAACCATTGGTAAACCCTG-3’(SEQ ID NO.19)与BamHI限制性位点上游的起始密码子一起克隆到修饰的pcDNA3.1/Hygro载体中，和；
使用NotI限制性核酸内切酶识别位点和XhoI限制性核酸内切酶识别位点，将3′DEG UTR：
5’-ATCGAAAGTACAGGACTAGCCTTCCTAGCAACCGCGGGCTGGGAGTCTGAGACATCACTCAAGATATATGCTCGGTAACGTATGCTCTAGCCATCTAACTATTCCCTATGTCTTATAGGG-3’(SEQ ID NO.20)与紧邻NotI限制性位点下游的终止密码子一起克隆到修饰的pcDNA3.1/Hygro载体中。另外，使用BamHI和NotI限制性位点，将缺乏起始密码子的荧光虫荧光素酶基因克隆到载体中。
得到的小基因包含(以5’至3’顺序)：5’-DEG UTR、起始密码子、形成BamHI限制性位点的六个另外的核苷酸、外显子6的核酸残基、SMN2的内含子6的核酸残基、SMN2的外显子7的核酸残基、SMN2的内含子7的核酸残基、和SMN2的外显子8的起始23个核酸残基、形成BamHI限制性位点的另外六个核苷酸和缺乏起始密码子的荧光虫荧光素酶基因。
通过定位诱变将单个腺嘌呤残基插入SMN2的外显子7的核苷酸48之后。该小基因构建物称为SMN2-A。
来源于含有外显子6至8和插入内含子的小基因的SMN2转录物概括其内源性pre-mRNA的剪接(Lorson et al,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,1999,96(11),6307)。产生包含外显子6至8和插入内含子及随后的荧光素酶指示基因的SMN2-可变剪接报告基因构建物(reporter construct)。该构建物的显著特征是荧光素酶基因中缺乏起始密码子，通过将核苷酸插入外显子7的核酸48之后使外显子7的终止密码子失活(在编码SMN蛋白质的开放读码框中)，以及紧邻外显子6的上游加入起始密码子(ATG)。单个腺嘌呤(SMN2-A)插入外显子7的核酸残基48之后。
SMN2小基因被设计为使得当外显子7存在于mRNA中时荧光素酶报导体与紧邻外显子6的上游的ATG起始密码子在框内，并且如果SMN2的外显子7早pre-mRNA的剪接期间除去，则荧光素酶报导体与紧邻外显子6的上游的ATG起始密码子在框外。另外，在不存在外显子7下，从紧邻外显子6的ATG起始密码子开始的开放读码框在SMN的外显子8的片段中包含终止密码子。因此，在增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中的化合物的存在下，产生包含外显子7的更多转录物和更功能性的报导体。该说明的示意图可以发现于图1中
来自SMN2-A构建物SEQ ID NO.21的小基因的DNA序列提供于图2a中。小基因SMN2-A子序列的图显示在图2b中。
实施例2
培养细胞中SMN2小基因mRNA剪接RT-qPCR测定
使用基于逆转录-定量PCR(RT-qPCR)测定来定量在HEK293H细胞系中含有SMN2外显子7的全长SMN2小基因mRNA的水平，所述HEK293H细胞系用所述小基因稳定地转染且用试验化合物处理。
材料
试验设计。将用上述SMN2-A小基因构建物稳定转染的HEK293H细胞(10,000个细胞/孔)以200μL的细胞培养基(DMEM+10％FBS,含有200μg/ml的潮霉素)接种在96孔平底培养板中，并且立即使培养板漩涡以确保细胞合适地分散，形成均匀的单细胞层。使细胞附着至少4-6小时。将试验化合物在100％DMSO中连续稀释3.16倍，产生7点浓度曲线。将试验化合物的溶液(1μL，在DMSO中200x)加入到含每种细胞的孔中，并且将培养板在细胞培养恒温箱(37℃，5％CO2，100％相对湿度)中培养24小时。每种试验化合物浓度制备两次平行测定。然后，将细胞溶解在Cells-To-Ct裂解缓冲液中，并且将溶解产物贮存在-80℃下。
使用表3中提供的下述引物和探针，定量全长SMN2-A小基因和GAPDH mRNA。引物SMN正向A(SEQ ID NO.1)杂交至外显子7中的核苷酸序列(核苷酸22核苷酸40)，引物SMN反向A(SEQ ID NO.2)杂交至荧光虫荧光素酶的编码序列中的核苷酸序列，SMN探针A(SEQ IDNO.3)杂交至外显子7中的核苷酸序列(核苷酸50至核苷酸54)和外显子8中的核苷酸序列(核苷酸1至核苷酸21)。这三种寡核苷酸的组合仅检测SMN1或SMN2小基因(RT-qPCR)，且不能检测内源性SMN1或SMN2基因。
表3
1引物和探针是由PTCTherapeutics,Inc.设计的；2从Life Technologies,Inc.(之前为Invitrogen)市售可获得的。
SMN正向引物和反向引物以0.4μM的最终浓度使用。SMN探针以0.15μM的最终浓度使用。GAPDH引物以0.2μM的最终浓度使用，探针以0.15μM的最终浓度使用。
SMN2-小基因GAPDH混合物(15μL总体积)是通过混合下述制备的∶7.5μL的2x RT-PCR缓冲液、0.4μL的25x RT-PCR酶混合物、0.75μL的20x GAPDH引物-探针混合物、4.0075μL的水、2μL的10-倍稀释的细胞溶解产物、0.06μL的100μM SMN正向引物、0.06μL的100μM SMN反向引物、和0.225μL的100μM SMN探针。
PCR是在下述温度下进行指定的时间∶步骤1：48℃(15min)；步骤2：95℃(10min)；步骤3：95℃(15sec)；步骤4：60℃(1min)；然后重复步骤3和4，总共40个循环。
各个反应混合物同时包含SMN2-A小基因和GAPDH引物/探针集(多路设计)，从而允许同时测量两种转录物的水平。
两种SMN剪接产物是由SMN2小基因产生的。对应于全长SMN2mRNA的含有外显子7的第一个剪接产物在本文中使用术语"SMN2小基因FL"提及。缺乏外显子7的第二个剪接产物在本文中使用术语"SMN2小基因Δ7"提及。
相对于用载体对照处理的细胞中SMN2小基因FL mRNA的增加是使用修改的ΔΔCt方法(如Livak and Schmittgen,Methods,2001,25:402-8)中所述由实时PCR数据确定。扩增效率(E)是分别由SMN2小基因FL和GAPDH的扩增曲线的斜率计算的。然后，将SMN2小基因FL和GAPDH的丰度计算为(1+E)-Ct，其中Ct为各个扩增子的阈值。将SMN2小基因FL的丰度标准化为GAPDH丰度。然后，用来自试验化合物-处理的样品的标准化的SMN2小基因FL丰度除以来自载体处理的细胞的标准化的SMN2小基因FL丰度，以确定相对于载体对照的SMN2 FLmRNA的水平。
结果。如图3所示，在低浓度下，用化合物6(图3a)和化合物170(图3b)处理的细胞增加了SMN2小基因FL mRNA。相对未处理的细胞，两种试验化合物死外显子7包含完全恢复。
对于本文公开的式(I)的化合物或其形式，表4提供产生全长SMN2 mRNA的EC1.5x，其得自从根据生物学实施例2的方法产生每种试验化合物的7-点浓度数据。术语“产生全长SMN2 mRNA的EC1.5x”定义为试验化合物的浓度，其有效地提高全长SMN2 mRNA的量至相对于载体处理的细胞更大1.5倍的水平。产生全长SMN2 mRNA的EC1.5x在＞3μM至≤30μM之间用一个星号(*)指示，EC1.5x在＞1μM至≤3μM之间用两个星号(**)指示，EC1.5x在＞0.3μM至≤1μM之间用三个星号(***)指示，EC1.5x在＞0.1μM至≤0.3μM之间用四个星号(****)指示，且EC1.5x≤0.1μM用五个星号(*****)指示。
表4
实施例3
培养细胞中内源性SMN2 mRNA RT-qPCR剪接测定
使用基于逆转录-定量PCR(RT-qPCR)测定来定量用试验化合物处理的含有SMN2基因的初级细胞和细胞系中全长和Δ7 SMN2 mRNA的水平。
材料
试验设计。将GM03813 SMA患者细胞(5,000个细胞/孔)以200μL的细胞培养基(DMEM+10％FBS)接种在96孔平底培养板中，并且立即使培养板漩涡以确保细胞合适地分散，形成均匀的单细胞层。使细胞附着至少4-6小时。将试验化合物在100％DMSO中连续稀释3.16倍，产生7点浓度曲线。将试验化合物的溶液(1μL，在DMSO中200x)加入到每个试验孔中，并向每个对照孔中加入1μL的DMSO。将培养板在细胞培养恒温箱(37℃，5％CO2，100％相对湿度)中培养24小时。然后，将细胞溶解在Cells-To-Ct裂解缓冲液中，并且将溶解产物贮存在-80℃下。
使用表5中提供的下述引物和探针，定量SMN2-特定剪接产物和GAPDH mRNA。引物SMN FL正向B(ID NO.7)杂交至外显子7中的核苷酸序列(核苷酸32核苷酸54)和外显子8中的核苷酸序列(核苷酸1至核苷酸4)，引物SMNΔ7正向B(SEQ ID NO.8)杂交至外显子6中的核苷酸序列(核苷酸87至核苷酸111)和外显子8中的核苷酸序列(核苷酸1至核苷酸3)，引物SMN反向B(SEQ ID NO.9)杂交至外显子8中的核苷酸序列(核苷酸39至核苷酸62)，探针SMNProbe B(SEQ ID NO.10)杂交至外显子8中的核苷酸序列(核苷酸7至核苷酸36)。这些引物和探针杂交至人类SMN1和SMN2 mRNA共有的核苷酸序列。因为在实施例3中使用的SMA患者细胞仅含有SMN2基因，因此，RT-qPCR仅可以定量SMN2全长和Δ7mRNA。
表5
1引物和探针是由PTC Therapeutics,Inc.设计的；2从Life Technologies,Inc.(之前为Invitrogen)市售可获得的。
SMN正向引物和反向引物以0.4μM的最终浓度使用。SMN探针以0.15μM的最终浓度使用。GAPDH引物以0.1μM的最终浓度使用，且探针以0.075μM的最终浓度使用。
SMN-GAPDH混合物(10μL总体积)是通过混合如下物质制备的∶5μL的2x RT-PCR缓冲液、0.4μL的25x RT-PCR酶混合物、0.25μL的20x GAPDH引物-探针混合物、1.755μL的水、2.5μL的细胞溶解产物、0.04μL的100μM SMN FL或SMNΔ7正向引物、0.04μL的100μM SMN反向引物、和0.015μL的100μM探针。
PCR是在下述温度下进行指定的时间∶步骤1：48℃(15min)；步骤2：95℃(10min)；步骤3：95℃(15sec)；步骤4：60℃(1min)；然后重复步骤3和4，总共40个循环。
各个反应混合物同时包含SMN2 FL和GAPDH或SMN2 Δ7和GAPDH引物/探针集(多路设计)，从而允许同时测量两种转录物的水平。
内源性SMN2基因产生两种可变剪接的mRNA。含有外显子7的全长SMN2 mRNA在本文中使用术语"SMN2 FL"提及。缺乏外显子7的截短的mRNA在本文中使用术语“SMN2 Δ7”提及。
相对于在用载体对照处理的细胞中的SMN2 FL的增加和SMN2 Δ7 mRNA的减少是使用修改的ΔΔCt方法(如Livak and Schmittgen,Methods,2001,25:402-8)中描述的，从实时PCR数据确定的。扩增效率(E)是分别由SMN2 FL、SMN2 Δ7和GAPDH的扩增曲线的斜率计算的。然后，将SMN2 FL、SMN2 Δ7和GAPDH的丰度计算为(1+E)-Ct，其中Ct为各个扩增子的阈值。将SMN2 FL和SMN2 Δ7的丰度标准化为GAPDH丰度。然后，用来自试验化合物-处理的样品的标准化的SMN2 FL和SMN2 Δ7丰度分别除以来自载体处理的细胞的标准化的SMN2FL和SMN2 Δ7丰度，以确定相对于载体对照的SMN2 FL和SMN2 Δ7 mRNA的水平。
结果。如图4所示，相对于用载体处理的细胞，用递增浓度的化合物6(图4a)和化合物170(图4b)处理的细胞含有逐渐更多的SMN2 FL mRNA和更少的SMN2 Δ7 mRNA，指示SMN2可变剪接得到校正。
实施例4
培养细胞中内源性SMN2 mRNA终点半定量分析RT-PCR剪接测定
使用终点逆转录-PCR剪接测定显现(visualize)和定量用试验化合物处理的含有SMN2基因的初级细胞和细胞系中全长和Δ7 SMN2 mRNA的水平。
材料
试验设计。将GM03813 SMA患者细胞(5,000个细胞/孔)以200μL的细胞培养基(DMEM+10％FBS)接种在96孔平底培养板中，并且立即使培养板漩涡以确保细胞合适地分散，形成均匀的单细胞层。使细胞附着至少4-6小时。将试验化合物在100％DMSO中连续稀释3.16倍，产生7点浓度曲线。将试验化合物的溶液(1μL，在DMSO中200x)加入到每个试验孔中，并向每个对照孔中加入1μL的DMSO。将培养板在细胞培养恒温箱(37℃，5％CO2，100％相对湿度)中培养24小时。然后，将细胞溶解在Cells-To-Ct裂解缓冲液中，并且将溶解产物贮存在-80℃下。
使用表6中提供的下述引物，定量SMN FL和Δ7mRNA。这些引物杂交至人类SMN1和SMN2 mRNA共有的外显子6中的核苷酸序列(SMN正向C，SEQ ID NO.11)(核苷酸43至核苷酸63)和外显子8中的核苷酸序列(SMN反向C，SEQ ID NO.12)(核苷酸51至核苷酸73)。因为在实施例4中使用的SMA患者细胞仅含有SMN2基因，因此RT-PCR仅可以显现和定量全长和SMN2Δ7 mRNA。
表6
1引物由PTC Therapeutics,Inc设计。
为了合成cDNA，将5μL的溶解产物、4μL的5xiScript反应混合物、1μL逆转录酶和10μL水混合，并在25℃下培养5分钟，接着在42℃下培养30分钟，之后在85℃下培养5分钟。将cDNA溶液储存在-20℃下。
为了进行终点PCR，在96孔semiskirted PCR培养板中混合5μL的cDNA、0.2μL的100μM正向引物、0.2μL的100μM反向引物、和22.5μL的聚合酶超级混合物。PCR是在下述温度下进行指定的时间∶步骤1：94℃(2min)，步骤2∶94℃(30sec)，步骤3∶55℃(30sec)，步骤4∶68℃(1min)，然后重复步骤2至4，总共33个周期，然后保持在4℃下。
将10μl的每种PCR样品在2％琼脂糖E-凝胶上电泳分离14分钟，用双链DNA(dsDNA)染色剂(例如，溴化乙锭)染色，并使用凝胶成像器显现。
结果。如图5所示，用递增浓度的化合物6(图5a)或化合物170(图5b)处理的细胞含有逐渐更多的SMN2 FL mRNA和更少的SMN2 Δ7 mRNA，指示SMN2可变剪接得到校正。
实施例5
动物组织中SMN2 mRNA RT-qPCR剪接测定
使用基于逆转录-定量PCR(RT-qPCR)测定定量来自用试验化合物处理的小鼠的组织中全长和Δ7 SMN2 mRNA的水平。
材料
试验设计。通过用再悬浮在0.5％HPMC和0.1％吐温-80中的试验化合物每天经口管饲两次(BID)处理C/C-等位基因SMA小鼠，共处理10天。收集组织样品，并且瞬时冷冻供RNA纯化。
在TissueLyser II中，使用不锈钢珠粒，在20Hz下，将组织样品(20-40mg)在QIAzol溶解试剂中均质化2分钟。在加入氯仿之后，将匀浆液通过离心分离成水相和有机相。萃取分配到上层水相中的RNA，并加入乙醇以提供合适的结合条件。然后，将样品施用于来自RNeasy微型试剂盒的RNeasy离心柱，其中全部RNA结合到膜。将RNA洗脱在不含RNase的水中，然后储存在-20℃下，接着在7900HT热循环仪上使用TaqMan RT-qPCR分析。将全部RNA稀释10倍，且向TaqMan RT-qPCR混合物中加入2.5μL稀释的样品。
使用表7中提供的下述引物和探针，鉴别SMN2剪接产物。引物SMN FL正向B(SEQ IDNO.7)杂交至外显子7和8中的核苷酸序列，引物SMNΔ7正向B(SEQ ID NO.8)杂交至外显子6和8中的核苷酸序列，引物SMN反向B(SEQ ID NO.9)杂交至外显子8中的核苷酸序列，探针SMN Probe B(SEQ ID NO.10)杂交至外显子8中的核苷酸序列。这些引物和探针杂交至人类SMN1和SMN2 mRNA共有的核苷酸序列。因为在实施例5中使用的SMA患者细胞仅含有SMN2基因，因此，RT-qPCR仅可以定量SMN2全长和Δ7 mRNA。
表7
1引物和探针是由PTC Therapeutics,Inc设计。
SMN正向和反向引物以0.4μM的最终浓度使用。SMN探针以0.15μM的最终浓度使用。SMN-GAPDH混合物(10μL总体积)是通过混合如下物质制备的∶5μL的2x RT-PCR缓冲液、0.4μL的25x RT-PCR酶混合物、0.5μL的20x GAPDH引物-探针混合物、1.505μL的水、2.5μL的RNA溶液、0.04μL的100μM正向引物、0.04μL的100μM反向引物、和0.015μL的100μM SMN探针。
每个PCR循环是在下述温度下进行指定的时间∶步骤1：48℃(15min)；步骤2：95℃(10min)；步骤3：95℃(15sec)；步骤4：60℃(1min)；然后重复步骤3和4，总共40个循环。
各个反应混合物同时包含SMN2 FL和GAPDH或SMN2 Δ7和GAPDH引物/探针集(多路设计)，从而允许同时测量两种转录物的水平。
相对于在用载体对照处理的动物组织中的SMN2 FL的增加和SMN2 Δ7 mRNA的减少是使用修改的ΔΔCt方法(如Livak and Schmittgen,Methods,2001,25:402-8)中描述的，从实时PCR数据确定的。扩增效率(E)是分别由SMN2 FL、SMN2 Δ7和GAPDH的扩增曲线的斜率计算的。然后，将SMN2 FL、SMN2 Δ7和GAPDH的丰度计算为(1+E)-Ct，其中Ct为各个扩增子的阈值。将SMN2 FL和SMN2 Δ7的丰度标准化为GAPDH丰度。然后，用来自试验化合物-处理的样品的标准化的SMN2 FL和SMN2 Δ7丰度分别除以来自载体处理的细胞的标准化的SMN2 FL和SMN2 Δ7丰度，以确定相对于载体对照的SMN2 FL和SMN2 Δ7 mRNA的水平。
结果。如图6所示，相对于用载体处理的组织，用递增浓度的化合物6(图6a)和化合物170(图6b)处理的动物组织含有逐渐更多的SMN2 FL mRNA和更少的SMN2 Δ7 mRNA，指示SMN2可变剪接得到校正。
实施例6
动物组织中内源性SMN2 mRNA终点半定量分析RT-PCR剪接测定
使用终点逆转录-PCR(RT-qPCR)剪接测定定量来自用试验化合物处理的小鼠的组织中全长和Δ7 SMN2 mRNA的水平。
材料
试验设计。通过用再悬浮在0.5％HPMC和0.1％吐温-80中的试验化合物每天经口管饲BID处理C/C-等位基因SMA小鼠，共处理10天。收集组织样品，并且瞬时冷冻供RNA纯化。
在TissueLyser II中，使用不锈钢珠粒，在20Hz下，将组织样品(20-40mg)在QIAzol溶解试剂中均质化2分钟。在加入氯仿之后，将匀浆液通过离心分离成水相和有机相。萃取分配到上层水相中的RNA，并加入乙醇以提供合适的结合条件。然后，将样品施用于来自RNeasy微型试剂盒的RNeasy离心柱，其中全部RNA结合到膜。将RNA洗脱在不含RNase的水中，然后储存在-20℃下。
使用表8中提供的下述扩增引物，鉴别SMN2剪接产物。这些引物和探针杂交至人类SMN1和SMN2 mRNA共有的外显子6中的核苷酸序列(SMN正向D，SEQ ID NO.13)(核苷酸22至核苷酸46)和外显子8中的核苷酸序列(SMN反向C，SEQ ID NO.12)。
表8
1引物由PTC Therapeutics,Inc.设计。
为了合成cDNA，将1μL的RNA溶液(25-50ng)、4μL的5xiScript反应混合物、1μL的逆转录酶、和10μL的水混合，并在25℃下培养5分钟，接着在42℃下培养30分钟，之后在85℃下培养5分钟。将cDNA溶液储存在-20℃下。
为了进行终点PCR，在96孔semiskirted PCR培养板中混合5μL的cDNA、0.2μL的100μM正向引物、0.2μL的100μM反向引物、和22.5μL的聚合酶超级混合物。PCR是在下述温度下进行指定的时间∶步骤1：94℃(2min)，步骤2∶94℃(30sec)，步骤3∶55℃(30sec)，步骤4∶68℃(1min)，然后重复步骤2至4，总共33个周期，然后保持在4℃下。
将10μl的每种PCR样品在2％琼脂糖E-凝胶上电泳分离14分钟，用dsDNA染色剂(例如，溴化乙锭)染色，并使用凝胶成像器显现。
结果。如图7所示，用递增浓度的化合物6(图7a)和化合物170(图7b)处理的组织含有逐渐更多的SMN2 FL mRNA和更少的SMN2 Δ7 mRNA，指示SMN2可变剪接得到校正。
实施例7
培养细胞中的Smn蛋白质测定
使用SMN HTRF(均相时间分辨荧光)测定用于定量用试验化合物处理的SMA患者成纤维细胞中Smn蛋白质的水平。将测定结果显示在表9中。
材料
试验设计。将细胞解冻并培养在DMEM-10％FBS中72小时。将细胞用胰蛋白酶处理，计数并再悬浮于DMEM-10％FBS中至浓度为25,000个细胞/mL。将细胞悬液以5,000个细胞/孔接种在96孔微量滴定板中，并培养3至5小时。为了提供对照信号，96孔培养板中的三(3)个孔不接收细胞，因此，充当空白对照孔。将试验化合物在100％中连续稀释3.16倍以产生7点浓度曲线。将1μL的试验化合物溶液转移到含有细胞的孔中，并且将细胞在细胞培养恒温箱(37℃，5％CO2，100％相对湿度)中培养48小时。每种试验化合物浓度配置样品一式三份。在48小时之后，从孔中除去上清液，并且向各孔中加入25μL含有蛋白酶抑制剂的RIPA裂解缓冲液，并在室温下振荡培养1小时。加入25μl的稀释剂，然后将35μl所得溶解产物转移到384-孔培养板中，其中各孔含有5μl的抗体溶液(抗-SMN d2和抗-SMN kryptate在SMN重构缓冲液中1:100稀释)。将培养板离心1分钟以使溶液到达孔底，然后，在室温下培养过夜。在EnVision多标记平板读数器(Perkin-Elmer)上测量培养板的各孔在665nm和620nm的荧光。
通过将在665nm的信号除以在620nm的信号来计算各个样品、空白和载体对照孔的标准化荧光信号。标准化信号可解释由于溶解产物的基质效应产生的可能荧光猝灭。如下计算各个样品孔的ΔF值(以％值测量Smn蛋白质丰度)：从各个样品孔的标准化荧光减去空白对照孔的标准化平均荧光，然后将该差值除以空白对照孔的标准化平均荧光且将得到的值乘以100。各个样品孔的ΔF值代表从试验化合物处理的样品的Smn蛋白质丰度。将各个样品孔的ΔF值除以载体对照孔的ΔF值，以计算Smn蛋白质丰度相对于载体对照的增加倍数。
结果。如图8所示，用化合物6(图8a)和化合物170(图8b)处理的SMA1型患者成纤维细胞显示Smn蛋白质表达的剂量依赖性增强，如通过SMN HTRF测定所测量的。
对于本文公开的式(I)的化合物或其形式，表9提供Smn蛋白质表达的EC1.5x，其得自从根据生物学实施例7的方法产生每种试验化合物的7-点浓度数据。术语“Smn蛋白质表达的EC1.5x”定义为试验化合物的浓度，其使SMA患者成纤维细胞中有效地产生与由DMSO载体对照产生的量相比1.5倍的量的Smn蛋白质。Smn蛋白质表达的EC1.5x在＞3μM至≤10μM之间用一个星号(*)指示，EC1.5x在＞1μM至≤3μM之间用两个星号(**)指示，EC1.5x在＞0.3μM至≤1μM之间用三个星号(***)指示，且EC1.5x≤0.3μM用五个星号(*****)指示。
表9
对于本文公开的式(I)的化合物或其形式，表10提供Smn蛋白质的最大增加倍数(倍数)，其得自从根据生物学实施例7的方法产生每种试验化合物的7-点浓度数据。最大增加倍数≤1.2用一个星号(*)指示，增加倍数在＞1.2且≤1.35之间用两个星号(**)指示，增加倍数在＞1.35且≤1.5之间用用三个星号(***)指示，增加倍数在＞1.5且≤1.65之间用四个星号(****)指示，且增加倍数＞1.65之间用五个星号(*****)指示。
表10
实施例8
Gems计数(Smn-依赖性核斑计数)测定
Smn蛋白质的水平与核灶(也称为gems)的量直接相关，该核灶是在用荧光标记的抗-Smn抗体染色细胞时所产生的(Liu and Dreyfuss,EMBO J.,1996,15:3555)。Gems为多蛋白质复合物，其形成是由Smn蛋白质成核，并且使用gems计数测定来评估细胞中Smn蛋白质的水平。如本文所述，gems计数测定用于定量用试验化合物处理的SMA患者成纤维细胞中Smn蛋白质的水平。
材料
试验设计∶将细胞解冻，并在DMEM-10％FBS中培养72小时，然后用胰蛋白酶处理，计数并再悬浮在DMEM-10％FBS中至100,000个细胞/mL。将细胞悬液(2mL)铺板在具有无菌盖玻片的6-孔细胞培养板中，并培养3至5小时。将试验化合物在100％DMSO中连续稀释3.16倍以产生7点稀释曲线。将10μL的试验化合物溶液加入到各个含细胞的孔中，并在细胞培养恒温箱(37℃，5％CO2，100％相对湿度)中培养48小时。每种试验化合物浓度配置一式两份。使用0.5％最终浓度的含细胞DMSO作为对照。
从含有盖玻片的孔中吸出细胞培养基，并用冷PBS轻轻地洗涤三次。通过在室温下同时在低聚甲醛中培养20分钟固定细胞。接着，用冷PBS洗涤细胞两次，之后在室温下用在PBS中的0.05％Triton X-100培养5分钟，以便渗透细胞。在用冷PBS洗涤固定的细胞三次之后，用10％FBS将其阻断1小时。加入60μL的在阻断缓冲液中以1:1000稀释的一抗，并在室温下培养该混合物1小时。将细胞用PBS洗涤三次，并加入60μL的在阻断缓冲液中以1:1500稀释的二抗，然后，在室温下培养该混合物1小时。借助于封固剂将盖玻片固定在载玻片上，并使其干燥过夜。将指甲油应用于盖玻片的侧面且将载玻片避光储存。使用具有63x Plan-Apochromat,NA＝1.4物镜的Zeiss Axovert 135进行免疫荧光检测和计数。计数每≥150核的gems的数目，并使用DMSO和10nM硼替佐米作为对照计算活化的％。对于每种试验化合物，在所有波长下检查细胞以鉴别具有固有荧光的试验化合物。
结果。如图9所示，相对于用DMSO处理的细胞，用化合物6(图9a)和化合物170(图9b)处理的SMA 1型患者的细胞含有逐渐更多的gems。
实施例9
人运动神经元中的Smn蛋白质测定
使用Smn免疫荧光共焦显微镜定量用试验化合物处理的人运动神经元中的Smn蛋白质的水平。
试验设计。用各种浓度的试验化合物处理来源于SMA iPS细胞(Ebert et al.,Nature,2009,457:2770；和Rubin et al.,BMC Biology,2011,9:42)的人类运动神经元72小时。使用基本上如中描述的Makhortova et al.,Nature Chemical Biology,2011,7:544Smn免疫染色和共荧光显微镜焦定量细胞核中Smn蛋白质的水平。将化合物处理的样品中Smn蛋白质的水平标准化为载体处理的样品中的水平，并呈化合物浓度的函数绘图。
结果。如图10所示，用递增浓度的化合物6处理72小时的人类运动神经元在核中含有逐渐更多的Smn蛋白质。
实施例10
动物组织中的Smn蛋白质测定
该Smn蛋白质测定比较来自试验化合物处理的小鼠的组织与来自DMSO载体处理的小鼠的组织，以确定由人类SMN2基因产生的Smn蛋白质的水平增加。
材料
试验设计。称重Safe-Lock管中的组织样品，并基于各种类型的组织的重量与体积比加入一定体积的含有蛋白酶抑制剂混合物的RIPA缓冲液∶脑(50mg/mL)、肌肉(50mg/mL)和脊髓(25mg/mL)。
使用TissueLyzer，通过珠磨使组织均质化。向样品中加入5mm不锈钢珠粒，并在TissueLyzer中在30Hz下用力振摇5分钟。然后，将样品在微量离心机中以14,000×g离心20分钟，并将匀浆液转移到PCR培养板。对于HTRF，将匀浆液在RIPA缓冲液中稀释至约1mg/mL，并且对于使用BCA蛋白质测定的总蛋白测量，稀释至约0.5mg/mL。对于SMN HTRF测定，将35μL的组织匀浆转移到含有5μL的抗体溶液(每种抗SMNd2和抗SMN Kryptate在重构缓冲液中1:100稀释)的384孔培养板中。为了提供对照信号，在培养板中的三(3)个孔仅含有RIPA裂解缓冲液，因此充当空白对照孔。将培养板离心1分钟以使溶液到达孔底，然后，在室温下培养过夜。在EnVision多标记平板读数器(Perkin-Elmer)上测量培养板的各孔在665nm和620nm的荧光。使用BCA测定，根据制造商的方案测量组织匀浆中的总蛋白质。
通过将在665nm的信号除以在620nm的信号来计算各个样品、空白和载体对照孔的标准化荧光信号。标准化信号可解释由于组织匀浆的基质效应产生的可能荧光猝灭。如下计算各个组织样品孔的ΔF值(以％值测量Smn蛋白质丰度)：从各个样品孔的标准化荧光减去空白对照孔的标准化平均荧光，然后将该差值除以空白对照孔的标准化平均荧光且将得到的值乘以100。将各个组织样品孔的ΔF值除以总该组织样品的总蛋白质量(使用BCA测定来测定)。各个组织样品的Smn蛋白质丰度相对于载体对照的变化是以在试验化合物存在下组织样品的ΔF值与载体对照信号的平均ΔF值的百分比差值除以载体对照信号的平均ΔF值。
实施例11
成年C/C-等位基因SMA小鼠组织中的Smn蛋白质测定
成年C/C-等位基因SMA小鼠的Smn蛋白质测定中使用的组织是如实施例10描述的制备的。该测定评估用试验化合物处理的C/C-等位基因SMA小鼠10天是否使由SMN2基因产生的Smn蛋白质的水平提高。
材料
试验设计。C/C-等位基因SMA小鼠每天以10 mg/kg经口BID(在具有0.1％吐温80的0.5％羟丙基甲基纤维素(HPMC)中)给予试验化合物或载体，共施用10天。年龄-匹配的杂合小鼠给予载体作为对照。收集组织以便根据实施例10分析蛋白质水平。
结果。如图11所示，相对于载体组，用化合物6以100 mg/kg BID处理10天(图11a)和化合物170以10 mg/kg BID处理10天(图11b)的成年C/C-等位基因SMA小鼠的脑、脊髓和肌肉组织中总蛋白标准化的Smn水平增加。
实施例12
新生Δ7 SMA小鼠组织中的Smn蛋白质
使用新生SMA小鼠组织中Smn蛋白质的测定确定用试验化合物处理是否提高由SMN2基因产生的Smn蛋白质水平。
材料
试验设计。SMA D7纯合敲除小鼠在出生后(PND)第3天至PND 9腹膜内(iP)给予试验化合物或载体(100％DMSO)一天一次(QD)。收集组织进行根据实施例10的蛋白质水平的分析。
结果。如图12所示，用指定剂量的化合物6处理新生SMA D7纯合敲除小鼠的脑、脊髓、肌肉和皮肤组织(分别为图12a、12b、12c和12d)以及用化合物170处理新生SMA D7纯合敲除小鼠的脑、脊髓和肌肉(分别为图12e、12f和12g)中总蛋白标准化的Smn水平剂量依赖性增加。
实施例13
新生Δ7 SMA小鼠的体重
使用新生SMA小鼠的体重变化来确定用试验化合物处理是否改善体重。
材料
试验设计。腹膜内(iP)给予SMA D7纯合敲除小鼠试验化合物或载体(100％DMSO)QD，从PND 3直到给予方案转变成经口给予BID具有0.1％吐温80的的0.5％羟丙基甲基纤维素(HPMC)，所给予剂量高于IP所用剂量的3.16倍。每天记录用试验化合物或载体处理的SMAD7小鼠和年龄匹配的杂合小鼠的体重。
结果.如图13所示，用化合物6从PND 3至PND 30 IP QD给予，接着从PND 31 BID口服给予直到研究结束(图13a)和化合物170 IP QD给予从PND 3至PND 23，然后BID经口给予从PND 24直到研究结束(图13b)处理的新生SMA D7纯合敲除小鼠的体重与载体处理的小鼠相比得到改善。
实施例14
新生Δ7 SMA小鼠的翻正反射
使用新生SMA小鼠的翻正反射的功能性变化来确定用试验化合物处理是否改善翻正反射。
材料
试验设计。腹膜内(iP)QD给予SMA D7纯合敲除小鼠试验化合物或载体(100％DMSO)，从PND 3直到给予方案转变成经口给予BID具有0.1％吐温80的的0.5％羟丙基甲基纤维素(HPMC)，所给予剂量高于IP所用剂量的3.16倍。翻正反射时间是小鼠在其背躺下来后翻转站立(flip over onto its feet)所花费的时间。每只小鼠的翻正反射测量5次(每次试验的最长时间为30秒)，每次测量间隔5分钟。在PND 10、14和18测量用试验化合物或载体处理的SMA D7纯合敲除小鼠和年龄-匹配杂合小鼠的翻正反射时间，并绘图。
结果.如图14所示，从PND 3 IP QD给予化合物6(图14a)和化合物170(图14b)处理的新生SMA D7纯合敲除小鼠的翻正反射与载体处理的小鼠相比得到改善。在PND 18，用化合物处理的新生SMA D7纯合敲除小鼠的翻正时间类似于与年龄匹配的杂合小鼠的翻正时间。
实施例15
新生Δ7 SMA小鼠的存活率
使用存活小鼠的数量随时间推移的变化确定用试验化合物处理是否改善存活率。
材料
试验设计.腹膜内(iP)QD给予SMA D7纯合敲除小鼠试验化合物或载体(100％DMSO)，从PND 3直到给予方案转变成以高于IP所用剂量的3.16倍的剂量经口给予BID具有0.1％吐温80的0.5％羟丙基甲基纤维素(HPMC)，随后转变成以高于IP所用剂量的6.32倍的剂量经口给予QD具有0.1％吐温80的0.5％羟丙基甲基纤维素(HPMC)。每天记录各组中存活小鼠的书目，且作为小鼠总数的百分比绘图。收集SMA D7和年龄匹配的杂合小鼠的组织进行Smn蛋白质水平的测量，并且如实施例10中详述进行加工。将组织中所测量的总蛋白质标准化的Smn蛋白质水平作为年龄-匹配的杂合小鼠组织中的Smn蛋白质水平的百分比绘图，杂合小鼠的Smn水平设定为100％。试验化合物处理的小鼠组织中Smn蛋白质的水平(相对于杂合小鼠组织中)以图中每个条上百分比值表示。
结果。如图15所示，用化合物6从PND 3至PND 30 IP QD给予，接着从PND 31 BID口服给予直到研究结束(图15a)和化合物170 IP QD给予从PND 3至PND 23，然后BID经口给予从PND 24直到研究结束(图15b)处理的新生SMA D7纯合敲除小鼠的存活率与载体处理的小鼠相比得到改善。如图16所示，测量用化合物6从PND 3至PND 30 IP QD给予10mg/kg，接着从PND 31至PND 156 BID口服给予30mg/kg(图16a)处理后和用化合物170从PND 3至PND 23IP QD给予3mg/kg，接着从PND 24至PND 88 BID口服给予10mg/kg，从PND 89至PND 185 QD给予20mg/kg(图16b)来处理的SMA D7纯合敲除小鼠的脑、脊髓和肌肉组织中的Smn蛋白质水平，并相对于载体处理的年龄匹配的杂合小鼠绘图。
实施例16
培养细胞中人类SMN1小基因mRNA终点半定量分析RT-PCR剪接测定
使用RT-PCR测定来显现和定量用试验化合物处理的表达人类SMN1小基因构建物的初级细胞和细胞系中人类SMN1小基因全长和Δ7mRNA的水平。
材料
SMN1小基因构建物
小基因构建物的制备
使用生物学实施例1中描述关于制备SMN2小基因构建物的方法，通过使用位点定向诱变，用胞嘧啶替代SMN2-A小基因构建物的外显子7的第六个核苷酸(胸腺嘧啶残基)产生小基因的SMN1型式。因此，类似于SMN2-A小基因构建物，SMN1小基因构建物在外显子7的核苷酸残基48之后插有单一腺嘌呤残基。SMN1小基因构建物称为SMN1-A。
试验设计.在每孔具有15ng的SMN1-A小基因报导体质粒的96孔培养板中，使用FuGENE-6试剂转染HEK293H细胞(10,000个细胞/孔/199μL)。在转染之后，将细胞培养24小时。将试验化合物在100％DMSO中连续稀释3.16倍，以产生7-点浓度曲线。向每个试验孔中加入试验化合物的溶液(1μL，在DMSO中200x)。向每个对照孔中加入1μL的DMSO。将培养板在细胞培养恒温箱(37℃，5％CO2，100％相对湿度)中培养7小时。然后，将细胞溶解在Cells-To-Ct裂解缓冲液中，并且将溶解产物贮存在-80℃下。
从SMN1小基因产生两种SMN剪接的mRNA。术语“SMN1小基因FL”指含有外显子7、对应于全长SMN1mRNA的第一个剪接产物。术语“SMN1小基因Δ7”指缺乏外显子7的第二个产物。
使用表11中的引物扩增SMN小基因FL和Δ7mRNA。引物SMN正向C(SEQ ID NO.11)杂交至外显子6中的核苷酸序列(核苷酸43至核苷酸63)、引物SMN反向A(SEQ ID NO.2)杂交至荧光虫荧光素酶的编码序列中的核苷酸序列。这两种寡核苷酸的组合仅检测SMN1或SMN2小基因(RT-PCR)，且不能检测内源性SMN1或SMN2基因。因为实施例16中使用的HEK293H患者细胞仅用人类SMN1小基因转染，因此RT-PCR可仅显现和定量SMN1小基因全长和SMN1小基因Δ7mRNA。
表11
1引物由PTC Therapeutics,Inc.设计。
为了合成cDNA，将5μL的溶解产物、4μL的5xiScript反应混合物、1μL逆转录酶和10μL水混合，并在25℃下培养5分钟，接着在42℃下培养30分钟，之后在85℃下培养5分钟。将cDNA溶液储存在-20℃下。
为了进行终点PCR，5μL的cDNA,0.2μL的100μM正向引物,0.2μL的100μM反向引物、和22.5μL的在96孔semiskirted PCR培养板中混合聚合酶超级混合物。PCR是在下述温度下进行指定的时间∶步骤1：94℃(2min)，步骤2∶94℃(30sec)，步骤3∶55℃(30sec)，步骤4∶68℃(1min)，然后重复步骤2至4，总共33个周期，然后保持在4℃下。
将10μL的每种PCR样品在2％琼脂糖E-凝胶上电泳分离14分钟，用dsDNA染色剂(例如，溴化乙锭)染色，并使用凝胶成像器显现。
结果.如图17所示，用递增浓度的化合物6(图17a)和化合物170(图17b)处理的细胞含有逐渐更多的SMN1小基因FL mRNA和更少的SMN1 Δ7 mRNA，指示SMN1可变剪接得到校正。
不论本文引用的文献是否特别地和分别地指出通过引用并入，本文提及的所有文献都以如同将每篇参考文献在本文中完整地列出一样的程度通过引用并入本申请中用于任何和所有目的。
尽管已经如上详细描述了某些实施方式，但是本领域普通技术人员应当清楚地理解在不背离其教导下在实施方式中进行许多修饰是可能的。所有这样的修饰都预期涵盖在如本文所述的权利要求范围之内。
序列表
<110> PTC治疗公司;弗.哈夫曼-拉罗切有限公司
<120> 用于治疗脊髓性肌萎缩的化合物
<130> 109843-146257
<140> PCT/US2013/025292
<141> 2013-02-08
<150> US 61/597,523
<151> 2012-02-10
<160> 21
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SMN正向引物A
<400> 1
gaaggaaggt gctcacatt 19
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SMN反向引物A
<400> 2
tctttatgtt tttggcgtct tc 22
<210> 3
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SMN正向探针A
<400> 3
aaggagaaat gctggcatag agcagc 26
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hGAPDH正向探针
<400> 4
cgcctggtca ccagggctgc t 21
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hGAPDH正向引物
<400> 5
caacggattt ggtcgtattg g 21
<210> 6
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hGAPDH反向引物
<400> 6
tgatggcaac aatatccact ttacc 25
<210> 7
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SMN FL正向引物B
<400> 7
gctcacattc cttaaattaa ggagaaa 27
<210> 8
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SMN δ-7正向引物B
<400> 8
tggctatcat actggctatt atatggaa 28
<210> 9
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SMN反向引物B
<400> 9
tccagatctg tctgatcgtt tctt 24
<210> 10
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SMN正向探针B
<400> 10
ctggcataga gcagcactaa atgacaccac 30
<210> 11
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SMN反向C
<400> 11
gatgctgatg ctttgggaag t 21
<210> 12
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SMN Reverse C
<400> 12
cgcttcacat tccagatctg tc 22
<210> 13
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SMN反向D
<400> 13
atatgtccag attctcttga tgatg 25
<210> 14
<211> 11
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 5-prime end of exon 6 of the SMN2 gene
<400> 14
ataattcccc c 11
<210> 15
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SMN2基因的外显子8的核酸残基23
<400> 15
cagcac 6
<210> 16
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR正向引物
<400> 16
cgcggatcca taattccccc accacctc 28
<210> 17
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR 反向引物
<400> 17
cgcggatccg tgctgctcta tgccagca 28
<210> 18
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BamHI限制性内切酶识别序列
<400> 18
ggatcc 6
<210> 19
<211> 70
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 5-端DEG UTR
<400> 19
tagcttctta cccgtactcc accgttggca gcacgatcgc acgtcccacg tgaaccattg 60
gtaaaccctg 70
<210> 20
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-端DEG UTR
<400> 20
atcgaaagta caggactagc cttcctagca accgcgggct gggagtctga gacatcactc 60
aagatatatg ctcggtaacg tatgctctag ccatctaact attccctatg tcttataggg 120
<210> 21
<211> 8266
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SMN2-A小基因的DNA序列
<400> 21
tagcttctta cccgtactcc accgttggca gcacgatcgc acgtcccacg tgaaccattg 60
gtaaaccctg atgggatcca taattccccc accacctccc atatgtccag attctcttga 120
tgatgctgat gctttgggaa gtatgttaat ttcatggtac atgagtggct atcatactgg 180
ctattatatg gtaagtaatc actcagcatc ttttcctgac aatttttttg tagttatgtg 240
actttgtttt gtaaatttat aaaatactac ttgcttctct ctttatatta ctaaaaaata 300
aaaataaaaa aatacaactg tctgaggctt aaattactct tgcattgtcc ctaagtataa 360
ttttagttaa ttttaaaaag ctttcatgct attgttagat tattttgatt atacactttt 420
gaattgaaat tatacttttt ctaaataatg ttttaatctc tgatttgaaa ttgattgtag 480
ggaatggaaa agatgggata atttttcata aatgaaaaat gaaattcttt tttttttttt 540
tttttttttg agacggagtc ttgctctgtt gcccaggctg gagtgcaatg gcgtgatctt 600
ggctcacagc aagctctgcc tcctggattc acgccattct cctgcctcag cctcagaggt 660
agctgggact acaggtgcct gccaccacgc ctgtctaatt ttttgtattt ttttgtaaag 720
acagggtttc actgtgttag ccaggatggt ctcaatctcc tgaccccgtg atccacccgc 780
ctcggccttc caagagaaat gaaatttttt taatgcacaa agatctgggg taatgtgtac 840
cacattgaac cttggggagt atggcttcaa acttgtcact ttatacgtta gtctcctacg 900
gacatgttct attgtatttt agtcagaaca tttaaaatta ttttatttta ttttattttt 960
tttttttttt tgagacggag tctcgctctg tcacccaggc tggagtacag tggcgcagtc 1020
tcggctcact gcaagctccg cctcccgggt tcacgccatt ctcctgcctc agcctctccg 1080
agtagctggg actacaggcg cccgccacca cgcccggcta attttttttt atttttagta 1140
gagacggggt ttcaccgtgg tctcgatctc ctgacctcgt gatccacccg cctcggcctc 1200
ccaaagtgct gggattacaa gcgtgagcca ccgcgcccgg cctaaaatta tttttaaaag 1260
taagctcttg tgccctgcta aaattatgat gtgatattgt aggcacttgt atttttagta 1320
aattaatata gaagaaacaa ctgacttaaa ggtgtatgtt tttaaatgta tcatctgtgt 1380
gtgcccccat taatattctt atttaaaagt taaggccaga catggtggct tacaactgta 1440
atcccaacag tttgtgaggc cgaggcaggc agatcacttg aggtcaggag tttgagacca 1500
gcctggccaa catgatgaaa ccttgtctct actaaaaata ccaaaaaaaa tttagccagg 1560
catggtggca catgcctgta atccgagcta cttgggaggc tgtggcagga aaattgcttt 1620
aatctgggag gcagaggttg cagtgagttg agattgtgcc actgcactcc acccttggtg 1680
acagagtgag attccatctc aaaaaaagaa aaaggcctgg cacggtggct cacacctata 1740
atcccagtac tttgggaggt agaggcaggt ggatcacttg aggttaggag ttcaggacca 1800
gcctggccaa catggtgact actccatttc tactaaatac acaaaactta gcccagtggc 1860
gggcagttgt aatcccagct acttgagagg ttgaggcagg agaatcactt gaacctggga 1920
ggcagaggtt gcagtgagcc gagatcacac cgctgcactc tagcctggcc aacagagtga 1980
gaatttgcgg agggaaaaaa aagtcacgct tcagttgttg tagtataacc ttggtatatt 2040
gtatgtatca tgaattcctc attttaatga ccaaaaagta ataaatcaac agcttgtaat 2100
ttgttttgag atcagttatc tgactgtaac actgtaggct tttgtgtttt ttaaattatg 2160
aaatatttga aaaaaataca taatgtatat ataaagtatt ggtataattt atgttctaaa 2220
taactttctt gagaaataat tcacatggtg tgcagtttac ctttgaaagt atacaagttg 2280
gctgggcaca atggctcacg cctgtaatcc cagcactttg ggaggccagg gcaggtggat 2340
cacgaggtca ggagatcgag accatcctgg ctaacatggt gaaaccccgt ctctactaaa 2400
agtacaaaaa caaattagcc gggcatgttg gcgggcacct tttgtcccag ctgctcggga 2460
ggctgaggca ggagagtggc gtgaacccag gaggtggagc ttgcagtgag ccgagattgt 2520
gccagtgcac tccagcctgg gcgacagagc gagactctgt ctcaaaaaat aaaataaaaa 2580
agaaagtata caagtcagtg gttttggttt tcagttatgc aaccatcact acaatttaag 2640
aacattttca tcaccccaaa aagaaaccct gttaccttca ttttccccag ccctaggcag 2700
tcagtacact ttctgtctct atgaatttgt ctattttaga tattatatat aaacggaatt 2760
atacgatatg tggtcttttg tgtctggctt ctttcactta gcatgctatt ttcaagattc 2820
atccatgctg tagaatgcac cagtactgca ttccttctta ttgctgaata ttctgttgtt 2880
tggttatatc acattttatc cattcatcag ttcatggaca tttaggttgt ttttattttt 2940
gggctataat gaataatgtt gctatgaaca ttcgtttgtg ttctttttgt ttttttggtt 3000
ttttgggttt tttttgtttt gtttttgttt ttgagacagt cttgctctgt ctcctaagct 3060
ggagtgcagt ggcatgatct tggcttactg caagctctgc ctcccgggtt cacaccattc 3120
tcctgcctca gcccgacaag tagctgggac tacaggcgtg tgccaccatg cacggctaat 3180
tttttgtatt tttagtagag atggggtttc accgtgttag ccaggatggt ctcgatctcc 3240
tgacctcgtg atctgcctgc ctaggcctcc caaagtgctg ggattacagg cgtgagccac 3300
tgcacctggc cttaagtgtt tttaatacgt cattgcctta agctaacaat tcttaacctt 3360
tgttctactg aagccacgtg gttgagatag gctctgagtc tagcttttaa cctctatctt 3420
tttgtcttag aaatctaagc agaatgcaaa tgactaagaa taatgttgtt gaaataacat 3480
aaaataggtt ataactttga tactcattag taacaaatct ttcaatacat cttacggtct 3540
gttaggtgta gattagtaat gaagtgggaa gccactgcaa gctagtatac atgtagggaa 3600
agatagaaag cattgaagcc agaagagaga cagaggacat ttgggctaga tctgacaaga 3660
aaaacaaatg ttttagtatt aatttttgac tttaaatttt ttttttattt agtgaatact 3720
ggtgtttaat ggtctcattt taataagtat gacacaggta gtttaaggtc atatatttta 3780
tttgatgaaa ataaggtata ggccgggcac ggtggctcac acctgtaatc ccagcacttt 3840
gggaggccga ggcaggcgga tcacctgagg tcgggagtta gagactagcc tcaacatgga 3900
gaaaccccgt ctctactaaa aaaaatacaa aattaggcgg gcgtggtggt gcatgcctgt 3960
aatcccagct actcaggagg ctgaggcagg agaattgctt gaacctggga ggtggaggtt 4020
gcggtgagcc gagatcacct cattgcactc cagcctgggc aacaagagca aaactccatc 4080
tcaaaaaaaa aaaaataagg tataagcggg ctcaggaaca tcattggaca tactgaaaga 4140
agaaaaatca gctgggcgca gtggctcacg ccggtaatcc caacactttg ggaggccaag 4200
gcaggcgaat cacctgaagt cgggagttcc agatcagcct gaccaacatg gagaaaccct 4260
gtctctacta aaaatacaaa actagccggg catggtggcg catgcctgta atcccagcta 4320
cttgggaggc tgaggcagga gaattgcttg aaccgagaag gcggaggttg cggtgagcca 4380
agattgcacc attgcactcc agcctgggca acaagagcga aactccgtct caaaaaaaaa 4440
aggaagaaaa atattttttt aaattaatta gtttatttat tttttaagat ggagttttgc 4500
cctgtcaccc aggctggggt gcaatggtgc aatctcggct cactgcaacc tccgcctcct 4560
gggttcaagt gattctcctg cctcagcttc ccgagtagct gtgattacag ccatatgcca 4620
ccacgcccag ccagttttgt gttttgtttt gttttttgtt tttttttttt gagagggtgt 4680
cttgctctgt cccccaagct ggagtgcagc ggcgcgatct tggctcactg caagctctgc 4740
ctcccaggtt cacaccattc tcttgcctca gcctcccgag tagctgggac tacaggtgcc 4800
cgccaccaca cccggctaat ttttttgtgt ttttagtaga gatggggttt cactgtgtta 4860
gccaggatgg tctcgatctc ctgacctttt gatccacccg cctcagcctc cccaagtgct 4920
gggattatag gcgtgagcca ctgtgcccgg cctagtcttg tatttttagt agagtcggga 4980
tttctccatg ttggtcaggc tgttctccaa atccgacctc aggtgatccg cccgccttgg 5040
cctccaaaag tgcaaggcaa ggcattacag gcatgagcca ctgtgaccgg caatgttttt 5100
aaatttttta catttaaatt ttatttttta gagaccaggt ctcactctat tgctcaggct 5160
ggagtgcaag ggcacattca cagctcactg cagccttgac ctccagggct caagcagtcc 5220
tctcacctca gtttcccgag tagctgggac tacagtgata atgccactgc acctggctaa 5280
tttttatttt tatttattta tttttttttg agacagagtc ttgctctgtc acccaggctg 5340
gagtgcagtg gtgtaaatct cagctcactg cagcctccgc ctcctgggtt caagtgattc 5400
tcctgcctca acctcccaag tagctgggat tagaggtccc caccaccatg cctggctaat 5460
tttttgtact ttcagtagaa acggggtttt gccatgttgg ccaggctgtt ctcgaactcc 5520
tgagctcagg tgatccaact gtctcggcct cccaaagtgc tgggattaca ggcgtgagcc 5580
actgtgccta gcctgagcca ccacgccggc ctaattttta aattttttgt agagacaggg 5640
tctcattatg ttgcccaggg tggtgtcaag ctccaggtct caagtgatcc ccctacctcc 5700
gcctcccaaa gttgtgggat tgtaggcatg agccactgca agaaaacctt aactgcagcc 5760
taataattgt tttctttggg ataactttta aagtacatta aaagactatc aacttaattt 5820
ctgatcatat tttgttgaat aaaataagta aaatgtcttg tgaaacaaaa tgctttttaa 5880
catccatata aagctatcta tatatagcta tctatatcta tatagctatt ttttttaact 5940
tcctttattt tccttacagg gttttagaca aaatcaaaaa gaaggaaggt gctcacattc 6000
cttaaatata aggagtaagt ctgccagcat tatgaaagtg aatcttactt ttgtaaaact 6060
ttatggtttg tggaaaacaa atgtttttga acatttaaaa agttcagatg ttagaaagtt 6120
gaaaggttaa tgtaaaacaa tcaatattaa agaattttga tgccaaaact attagataaa 6180
aggttaatct acatccctac tagaattctc atacttaact ggttggttgt gtggaagaaa 6240
catactttca caataaagag ctttaggata tgatgccatt ttatatcact agtaggcaga 6300
ccagcagact tttttttatt gtgatatggg ataacctagg catactgcac tgtacactct 6360
gacatatgaa gtgctctagt caagtttaac tggtgtccac agaggacatg gtttaactgg 6420
aattcgtcaa gcctctggtt ctaatttctc atttgcagga aatgctggca tagagcagca 6480
cggatccgaa gacgccaaaa acataaagaa aggcccggcg ccattctatc ctctagagga 6540
tggaaccgct ggagagcaac tgcataaggc tatgaagaga tacgccctgg ttcctggaac 6600
aattgctttt acagatgcac atatcgaggt gaacatcacg tacgcggaat acttcgaaat 6660
gtccgttcgg ttggcagaag ctatgaaacg atatgggctg aatacaaatc acagaatcgt 6720
cgtatgcagt gaaaactctc ttcaattctt tatgccggtg ttgggcgcgt tatttatcgg 6780
agttgcagtt gcgcccgcga acgacattta taatgaacgt gaattgctca acagtatgaa 6840
catttcgcag cctaccgtag tgtttgtttc caaaaagggg ttgcaaaaaa ttttgaacgt 6900
gcaaaaaaaa ttaccaataa tccagaaaat tattatcatg gattctaaaa cggattacca 6960
gggatttcag tcgatgtaca cgttcgtcac atctcatcta cctcccggtt ttaatgaata 7020
cgattttgta ccagagtcct ttgatcgtga caaaacaatt gcactgataa tgaattcctc 7080
tggatctact gggttaccta agggtgtggc ccttccgcat agaactgcct gcgtcagatt 7140
ctcgcatgcc agagatccta tttttggcaa tcaaatcatt ccggatactg cgattttaag 7200
tgttgttcca ttccatcacg gttttggaat gtttactaca ctcggatatt tgatatgtgg 7260
atttcgagtc gtcttaatgt atagatttga agaagagctg tttttacgat cccttcagga 7320
ttacaaaatt caaagtgcgt tgctagtacc aaccctattt tcattcttcg ccaaaagcac 7380
tctgattgac aaatacgatt tatctaattt acacgaaatt gcttctgggg gcgcacctct 7440
ttcgaaagaa gtcggggaag cggttgcaaa acgcttccat cttccaggga tacgacaagg 7500
atatgggctc actgagacta catcagctat tctgattaca cccgaggggg atgataaacc 7560
gggcgcggtc ggtaaagttg ttccattttt tgaagcgaag gttgtggatc tggataccgg 7620
gaaaacgctg ggcgttaatc agagaggcga attatgtgtc agaggaccta tgattatgtc 7680
cggttatgta aacaatccgg aagcgaccaa cgccttgatt gacaaggatg gatggctaca 7740
ttctggagac atagcttact gggacgaaga cgaacacttc ttcatagttg accgcttgaa 7800
gtctttaatt aaatacaaag gatatcaggt ggcccccgct gaattggaat cgatattgtt 7860
acaacacccc aacatcttcg acgcgggcgt ggcaggtctt cccgacgatg acgccggtga 7920
acttcccgcc gccgttgttg ttttggagca cggaaagacg atgacggaaa aagagatcgt 7980
ggattacgtc gccagtcaag taacaaccgc gaaaaagttg cgcggaggag ttgtgtttgt 8040
ggacgaagta ccgaaaggtc ttaccggaaa actcgacgca agaaaaatca gagagatcct 8100
cataaaggcc aagaagggcg gaaagtccaa attgcgcggc cgctaaatcg aaagtacagg 8160
actagccttc ctagcaaccg cgggctggga gtctgagaca tcactcaaga tatatgctcg 8220
gtaacgtatg ctctagccat ctaactattc cctatgtctt ataggg 8266

Claims (13)

1.式(IIa1)的化合物或其形式：
其中：
R1是杂环基，选自环氧乙烷基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯烷基、咪唑烷基、异噁唑烷基、异噻唑烷基、噁唑烷基、噻唑烷基、三唑烷基、噁二唑烷基、噻二唑烷基、四唑烷基、吡喃基、二氢-2H-吡喃基、噻喃基、1,3-二噁烷基、1,2,5,6-四氢吡啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、1,4-二氮杂环庚烷基、苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯基、1,4-苯并二噁烷基、2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、八氢-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶基、八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aR,7aR)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aS,7aS)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(7R,8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(2H)-酮、八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1R,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基、(1R,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、1,4-二氮杂双环[3.2.2]壬基、氮杂螺[3.3]庚基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚基、2,7-二氮杂螺[3.5]壬基、5,8-二氮杂螺[3.5]壬基、2,7-二氮杂螺[4.4]壬基、或6,9-二氮杂螺[4.5]癸基；
其中，R1任选地被一个、两个或三个R3取代基取代且任选地被一个另外的R4取代基取代；或
其中，R1任选地被一个、两个、三个或四个R3取代基取代；
R2是苯基；
其中，R2任选地被一个、两个或三个R6取代基和任选地被一个另外的R7取代基取代；
Ra在每种情况下独立地选自氢、卤素或C1-8烷基；
Rb是氢、卤素、C1-8烷基或C1-8烷氧基；
Rc是氢、卤素或C1-8烷基；
R3在每种情况下独立地选自氰基、卤素、羟基、氧代、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷基-羰基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-羰基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基]2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-羰基-氨基、C1-8烷氧基-羰基-氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基或(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基；
R4是C3-14环烷基、C3-14环烷基-C1-8烷基、C3-14环烷基-氨基、芳基-C1-8烷基、芳基-C1-8烷氧基-羰基、芳基-磺酰氧基-C1-8烷基、杂环基或杂环基-C1-8烷基；其中，每种情况下的C3-14环烷基、芳基和杂环基任选地被一个、两个或三个R5取代基取代；
R5在每种情况下独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫基；
R6在每种情况下独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、C1-8烷基、C2-8烯基、卤代-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫基；和
R7是C3-14环烷基、C3-14环烷基-氧基、芳基、杂环基或杂芳基。
2.权利要求1所述的化合物，其中，R1是杂环基，选自氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,2,5,6-四氢吡啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、八氢-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶基、八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aR,7aR)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aS,7aS)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(2H)-酮、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(7R,8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1R,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基、(1R,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、1,4-二氮杂双环[3.2.2]壬基、氮杂螺[3.3]庚基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚基、2,7-二氮杂螺[3.5]壬基、5,8-二氮杂螺[3.5]壬基、2,7-二氮杂螺[4.4]壬基和6,9-二氮杂螺[4.5]癸基；其中，杂环基在每种情况下任选地被一个、两个或三个R3取代基取代且任选地被一个另外的R4取代基取代。
3.权利要求1所述的化合物，其中，所述形式选自其游离酸、游离碱、盐、同位素体、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或互变异构体。
4.权利要求3所述的化合物，其中，所述盐为氯化物、氢溴酸盐、盐酸盐、二盐酸盐、乙酸盐、三氟醋酸盐或三氟乙酸盐。
5.一种用于增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中的方法，包括使权利要求1所述的化合物与人类细胞接触。
6.权利要求5所述的方法，其中，所述人类细胞是来自人类脊髓性肌萎缩患者的人类细胞。
7.一种用于提高Smn蛋白质的量的方法，包括使权利要求1所述的化合物与人类细胞接触。
8.权利要求7所述的方法，其中，所述人类细胞是来自人类脊髓性肌萎缩患者的人类细胞。
9.权利要求1所述的化合物，其中，所述化合物选自：
2-(4-甲氧基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(4-甲氧基苯基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(4-甲氧基苯基)-7-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-2-(4-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2-(4-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(3,3-二甲基哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(4-乙基哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2-(3,4-二甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(4-甲氧基苯基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(4-丙基哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(4-甲氧基苯基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-(3,3-二甲基哌嗪-1-基)-2-(4-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-甲氧基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-甲氧基苯基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-甲氧基苯基)-7-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-2-(3-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-(3-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2-(3-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-甲氧基苯基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-苯基-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2-苯基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氯苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(4-氯苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-(哌嗪-1-基)-2-[3-(三氟甲基)苯基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-(哌嗪-1-基)-2-[4-(三氟甲基)苯基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-甲基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(4-氟苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(4-硝基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-氟-7-(哌啶-4-基氨基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[4-(二甲基氨基)苯基]-9-氟-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[4-(二甲基氨基)苯基]-9-氟-7-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(2-氟苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
3-(3,4-二甲氧基苯基)-8-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[4-(二甲基氨基)苯基]-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[4-(二甲基氨基)苯基]-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲基苯基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[3-(二甲基氨基)苯基]-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[3-(二甲基氨基)苯基]-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[4-(二氟甲氧基)苯基]-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[4-(二氟甲氧基)苯基]-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-硝基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(4-甲基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(2-氟-4,5-二甲氧基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(2-氟-4,5-二甲氧基苯基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-2-(3,4-二甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基]-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基]-7-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基]-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲氧基-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,5-二氟-4-羟基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
4-[4-氧代-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-2-基]苯甲腈
2-[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[4-氟-3-(三氟甲基)苯基]-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[2-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基]-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,5-二氟苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-(哌嗪-1-基)-2-[3-(三氟甲氧基)苯基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[4-甲氧基-3-(三氟甲氧基)苯基]-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[4-羟基-3-(三氟甲氧基)苯基]-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[4-甲氧基-3-(三氟甲氧基)苯基]-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[4-羟基-3-(三氟甲氧基)苯基]-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(2,4-二甲氧基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(2,4-二甲氧基苯基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[3-(二氟甲氧基)-4-甲氧基苯基]-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[3-(二氟甲氧基)-4-羟基苯基]-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[3-(二氟甲氧基)-4-甲氧基苯基]-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[3-(二氟甲氧基)-4-羟基苯基]-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,5-二氟苯基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氯-4-甲氧基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氯-4-甲氧基苯基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-(4-氨基哌啶-1-基)-2-(3,4-二甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-5-甲氧基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-5-甲氧基苯基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(哌啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4,5-二甲氧基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(4-羟基哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[(3S)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
3-[4-氧代-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-2-基]苯甲腈
2-甲氧基-5-[4-氧代-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-2-基]苯甲腈
2-(3-氟-4-羟基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(4-乙氧基-3-氟苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[3-氟-4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基]-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲基苯基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-[(3S)-3-氨基吡咯烷-1-基]-2-(3,4-二甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(1-甲基哌啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[(3S)-3-(丙烷-2-基氨基)吡咯烷-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(4-甲氧基-3-硝基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-[3-氟-4-(甲基硫烷基)苯基]-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-{[2-(甲基氨基)乙基]氨基}-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,5-二氟-4-甲氧基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,5-二氟-4-甲氧基苯基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(哌啶-4-基氨基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氯-5-氟苯基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氯-5-氟苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-(1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-[(3S)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-[(3R,4R)-3-(二甲基氨基)-4-羟基吡咯烷-1-基]-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-(4-氨基哌啶-1-基)-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-[4-(甲基氨基)哌啶-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-[(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-[(3aR,6aS)-5-甲基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[1-(2-羟基乙基)哌啶-4-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(4-氟-3-甲氧基苯基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(4-氟-3-甲氧基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二氟-5-甲氧基苯基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二氟-5-甲氧基苯基)-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-(3-氟-4-甲氧基苯基)-2-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-[(3S)-3-(甲基氨基)吡咯烷-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-{4-[(甲基氨基)甲基]哌啶-1-基}-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-[(3S)-3-氨基吡咯烷-1-基]-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-{[(3R)-1-甲基吡咯烷-3-基]氨基}-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-{4-[(二甲基氨基)甲基]哌啶-1-基}-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
3-氟-5-{7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-2-基}苯甲腈
3-氟-5-[4-氧代-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-2-基]苯甲腈
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-[(3'S,4'S)-4'-羟基-1,3'-二吡咯烷-1'-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-{甲基[(3R)-吡咯烷-3-基]氨基}-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[(1-甲基哌啶-4-基)氧基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[(3S)-吡咯烷-3-基氧基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(哌啶-4-基氧基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-{甲基[(3R)-1-甲基吡咯烷-3-基]氨基}-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-[(3aR,6aR)-1-甲基六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[1-(2-羟基乙基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-(哌啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-(1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-(1-甲基哌啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-[(3aR,6aS)-5-甲基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-[(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯-3-基]-2-(3,4-二甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(1,2,5,6-四氢吡啶-3-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-[(3aR,6aS)-5-(2-羟基乙基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-[(3aS,6aS)-1-甲基六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-[(3aR,6aS)-5-(丙烷-2-基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-[(3R)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-[(4aR,7aR)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-[(3aR,6aS)-5-乙基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-9-甲基-7-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-[(4aR,7aR)-1-甲基八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-9-甲基-7-(1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[(1R,5S)-8-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[(2R)-2-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-9-甲基-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-9-甲基-7-(1-甲基哌啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-[4-(环丙基氨基)哌啶-1-基]-2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[(3R)-3,4-二甲基哌嗪-1-基]-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]-9-乙基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[1-(2-羟基乙基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基]-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-嘧啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-[4-(甲基氨基)哌啶-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[4-(乙基氨基)哌啶-1-基]-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-8-甲基-7-(哌嗪-1-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[4-(丙烷-2-基氨基)哌啶-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-(1-环丁基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-2-(3,4-二甲氧基苯基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[1-(丙烷-2-基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[1-(氧杂环丁烷-3-基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(1-丙基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[4-(甲基氨基)环己-1-烯-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[4-(二甲基氨基)环己-1-烯-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-{4-[乙基(甲基)氨基]环己-1-烯-1-基}-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-{4-[甲基(丙基)氨基]环己-1-烯-1-基}-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(1-乙基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-(1-丙基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-(1-环丁基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-[1-(氧杂环丁烷-3-基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-[1-(丙烷-2-基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(1-乙基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-8-甲基-7-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-(1-环丙基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-8-甲基-7-(1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-嘧啶并[1,2-b]哒嗪-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-吡嗪并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-(哌啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(1-乙基哌啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[顺式4-(甲基氨基)环己基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-(哌啶-3-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-[4-(丙基氨基)哌啶-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-乙基-7-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[(8aR)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基]-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-乙基-7-(1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-[4-(丙烷-2-基氨基)哌啶-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[(8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基]-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-乙基-7-(1-乙基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-7-[4-(吗啉-4-基)哌啶-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-{4-[(2-羟基乙基)氨基]哌啶-1-基}-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-乙基-7-(1-甲基哌啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-[4-(二乙基氨基)哌啶-1-基]-2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-乙基-7-(1-乙基哌啶-4-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-{4-[(2-羟基乙基)(甲基)氨基]哌啶-1-基}-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-乙基-7-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-9-乙基-7-[(8aR)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-{4-[(2-甲氧基乙基)氨基]哌啶-1-基}-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-{4-[(二甲基氨基)甲基]哌啶-1-基}-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[4-(吡咯烷-1-基甲基)哌啶-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(3,4-二甲氧基苯基)-7-[4-(哌啶-1-基甲基)哌啶-1-基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-(3-氨基丙-1-炔-1-基2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-[3-(二甲基氨基)丙基]-2-(4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-{[2-(二甲基氨基)乙基]氨基}-2-(4-乙基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-{[2-(二甲基氨基)乙基](甲基)氨基}-2-(4-乙基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(4-乙基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-7-{甲基[2-(甲基氨基)乙基]氨基}-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-[(3S)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]-2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-(4-乙基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-9-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
7-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-(4-乙基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(4-乙基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-7-(哌啶-4-基甲氧基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(4-乙基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-7-[2-(哌啶-1-基)乙氧基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、
2-(4-乙基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-7-[3-(吗啉-4-基)丙氧基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮、或
7-[3-(二甲基氨基)丙氧基]-2-(4-乙基-6-甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮，
或其盐、同位素体、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或互变异构体。
10.一种用于增强将SMN2的外显子7包含到从SMN2基因转录的mRNA中的方法，包括使权利要求9所述的化合物与人类细胞接触。
11.权利要求10所述的方法，其中，所述人类细胞是来自人类脊髓性肌萎缩患者的人类细胞。
12.一种用于提高Smn蛋白质的量的方法，包括使权利要求9所述的化合物与人类细胞接触。
13.权利要求12所述的方法，其中，所述人类细胞是来自人类脊髓性肌萎缩患者的人类细胞。
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