CN107303303B - 制备东革阿里有效成分及组合应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于植物天然产物提取领域，具体涉及全新的制备东革阿里有效成分及组合应用的方法。具体为：在一定温度下东革阿里粉碎与水溶液逆流超声提取获得水提取液；水提取液用大孔树脂吸附，结合组分使用洗脱液梯度洗脱，收集目标成分，制得有效成分A；大孔树脂流出部分使用滤膜分级分离，收集目标组分，制得有效成分B；按照一定比例混合有效成分A与B，制成有效成分组合。本方法使用控温超声水溶液提取并用大孔树脂吸附分离和膜分离，保留了有效成分的生物活性并选择性将其地富集，最终合理调配制成全新的具有增强性功能、提高生育率、提神抗疲劳、增强免疫力、增加体能、缓解痛风的东革阿里有效成分组合。
Description
技术领域
本发明属于植物天然产物提取领域，具体涉及制备东革阿里植物有效成分及组合应用的方法。
背景介绍
东革阿里(Eurycoma longifolia)为苦木科东革阿里属植物，野生灌木，生长于赤道附近原始热带雨林潮湿砂质土壤中，在马来西亚、印度尼西亚、越南等东南亚国家分布较广。现代研究表明，东革阿里具有很高的药用价值。东革阿里植物根据各种不同处理方式获得的组分分别具有抗癌活性，抗疟活性，改善性功能等作用。除此之外，其在降血糖、抗菌、治疗痛风、骨质疏松等方面也有一定的效果。从东革阿里不同部位中分离出来的化学成分以含苦木素骨架的二萜类与铁屎米酮类生物碱为主，如eurycomaoside，eurycolactone，eurycomalactone，eurycomanone(宽缨酮)和pasakbumin-B。此外，还含有联苯木质素、角鲨烯衍生物、活性多糖、糖肽和多种氨基酸。目前，经过我们的研究发现，印尼引进的东革阿里采用本方法提取获得的有效成分组合具有增强性功能、提高生育率、提神抗疲劳、增强免疫力、增加体能、缓解痛风的作用。
东革阿里植物直接作为饮片使用的情况较为普遍，但是东革阿里冲泡存在口感苦涩、药效作用低和药物利用率低等方面的问题。因此，研究东革阿里有效成分含量高，制备工艺可靠、药用效果明确、口感良好的产品就变得十分重要。研究资料显示，东革阿里提取主要采用溶剂回流提取或高温水提取过程，如专利CN104757424A采用煎煮法提取；专利US20070224300A1采用沸水提取；“东革阿里对运动训练大鼠睾酮含量、物质代谢及抗运动疲劳能力的影响”文章采用沸水制备；“东革阿里化学成分的分离与鉴定”文章采用水回流提取。专利CN103408564A将东革阿里以有机溶剂提取；“东革阿里提取物抗疲劳作用的实验研究”文章使用醇提取工艺。以上两种方式虽然提取产物量相对较多，但是沸水提取和有机溶剂提取方式会使植物当中的多种活性成分分解或变性，降低了药物作用效果，同时能源消耗多，环保难度高，溶剂成本大，提取过程危害性强。
多方面的研究结果表明，东革阿里植物确实具有明显的增强性功能、提高生育率、提神抗疲劳、增强免疫力、增强体能、缓解痛风的作用，以各种不同方式获得的提取物普遍具有一定的增强活力效果，但其中的化学单一组分始终没有完全确认。综合多方面的文章报道和自身研究数据，我们发现以宽缨酮为代表的苦木素类物质和以活性多糖、糖肽和氨基酸类为主的水溶性生物活性成分是其中的主要有效成分。我们根据研究和实践证实，这两部分有效成分共同使用具有一定的协同增效作用。
发明内容
本发明提供具有增强性功能、提高生育率、提神抗疲劳、增强免疫力、增加体能、缓解痛风的东革阿里有效成分组合制备方法。本方法不仅使用超声水溶液提取有效成分而且选用大孔树脂进行吸附分离和膜分离，保留了东革阿里植物中有效成分的生物活性并选择性地将其富集。
本发明提及的东革阿里有效成分其制备方法如下：
具有增强性功能、提高生育率、提神抗疲劳、增强免疫力、增强体能、缓解痛风的东革阿里有效成分组合制备方法，将东革阿里粉碎后与水溶液混合，经过连续逆流超声水提取处理，获得东革阿里水提取液；
a.水提取液过滤离心去除沉淀后直接经过大孔树脂吸附，吸附后树脂柱经洗脱液洗脱并收集目标组分，乙醇沉淀去除杂质，浓缩干燥，获得东革阿里有效成分组A；
b.水提取液经大孔树脂吸附后的流出液，采用滤膜分级分离，收集目标组分，减压浓缩、冷冻干燥或喷雾干燥，获得东革阿里有效成分组B；
c.按照一定比例，混合东革阿里有效成分组A和B，制成东革阿里有效成分组合。
具体为东革阿里与水溶液的质量体积比为1∶1～30，混合物连续超声提取5min～5h，超声提取温度为10～70℃。东革阿里超声水提取液过滤离心后，上清液用大孔树脂富集，树脂类型优选HP-20、D101、DM130、AB-8。吸附后大孔树脂柱采用乙醇、乙酸乙酯、水中的一种或几种溶剂混合梯度洗脱。收集含有苦木素类目标成分(宽缨酮)的洗脱液，减压浓缩，无水乙醇沉淀2次去除杂质，最终制得东革阿里有效成分组A。大孔树脂吸附后的流出液经，采用膜过滤方法，分离东革阿里水溶活性多糖、糖肽和氨基酸等组分，喷雾或冷冻干燥，获得东革阿里有效成分组B。东革阿里有效成分组A与东革阿里有效成分组B按照比例混合，形成东革阿里有效成分组合。本方法制得的东革阿里有效成分组合中多种成分共存，特征物质苦木素类成分含量在1～50％，多种活性多糖、糖肽、氨基酸等营养成分含量在1～20％。本发明制备的东革阿里有效成分组合具有增强性功能、提高生育率、提神抗疲劳、增强免疫力、增强体能、缓解痛风的作用。
采用本发明新的工艺技术首先控制提取温度在10～70℃之间，辅助超声提取方法，能够保留两类物质组分的活性。制备的东革阿里有效成分组合工艺流程简便、生产过程安全、环保，有效成分提取率、产率均高，适合大规模生产。其次提出将东革阿里不同部位有效成分混合使用的方法制备东革阿里有效成分组合，增强整体的药物作用效果。生产的东革阿里有效成分组合经过多方面实验验证，具有增强性功能、提高生育率、提神抗疲劳、增强免疫力、增强体能、缓解痛风的作用，可以应用于男性非器质性性功能下降、精神压力大、容易疲劳等人群以及更年期综合症的老年人。
具体实施方式
在下面的具体实施方案中进一步说明了本发明，这并不限制本发明的范围。在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段，做出各种替换和变更，均应包括在本发明的范围内。
1.制备方法
取东革阿里根100.0克粉碎，加入蒸馏水2L浸泡，水温控制在50℃。利用超声提取设备，将粉碎的东革阿里与水混合并进行连续超声提取2小时，再经过过滤、离心，获得东革阿里水提取液。东革阿里的水提取液直接使用D101树脂循环吸附至饱和，用乙醇水溶液对吸附柱进行洗脱，收集苦木素类目标成分，获得乙醇水洗脱液，减压浓缩，获得东革阿里粗品4.4克。东革阿里粗品用无水乙醇溶解，抽滤去除产生的沉淀，得到东革阿里有效成分乙醇溶液，减压浓缩，进一步获得东革阿里有效成分组A。大孔树脂吸附后流出液体采用膜设备过滤，经过微滤膜、超滤膜、纳滤膜等分离，收集纳滤膜和超滤膜截留成分，分离其中的活性多糖、糖肽和氨基酸，最终获得1.2g东革阿里有效成分组B。按照2∶1的比例混合东革阿里有效成分组A和B，制备成东革阿里有效成分组合。
2.小鼠急性毒性实验
将东革阿里有效成分组合按照腹腔注射给药方式给予ICR小鼠，实验获得近似致死剂量、最大无毒性剂量。雄性小鼠近似致死剂量范围为100.0-120.0mg/kg，最大无毒性剂量为80mg/kg；雌性小鼠近似致死剂量范围为180.0-225.0mg/kg，最大无毒性剂量为80mg/kg。对死亡动物进行解剖，肉眼观察主要内脏器官未见异常病理变化。
将东革阿里有效成分组合按照灌胃给药方式给予ICR小鼠，结果表明给药500mg/kg，小鼠未发现毒性表现。
Claims (7)
1.制备东革阿里(又名东哥阿里)有效成分组合的方法，其过程为：将东革阿里粉碎后与水溶液混合，在一定温度下，经过连续逆流超声水提取处理，获得东革阿里水提取液，所述连续逆流超声提取过程中东革阿里与水溶液的质量体积比为1:1～30，混合物连续超声提取5min～5h，超声提取温度为10～70℃；
a.水提取液过滤离心去除沉淀后直接经过大孔树脂吸附，吸附后树脂柱洗脱液洗脱并收集目标组分，乙醇沉淀去除杂质，清液浓缩干燥，获得东革阿里有效成分组A，有效成分组A为含有苦木素类物质；
b.水提取液经大孔树脂吸附后的流出液，采用滤膜分级分离，收集目标组分，减压浓缩、干燥，获得东革阿里有效成分组B，有效成分组B为水溶性活性多糖、糖肽和氨基酸；
c.按照一定比例，混合东革阿里有效成分组A和B，制成东革阿里有效成分组合，有效成分组合中多种成分共存，苦木素类成分含量在1～50％，水溶性活性多糖、糖肽、氨基酸含量在1～20％。
2.根据权利要求1所述东革阿里有效成分组合的制备方法，其原料为东革阿里树根。
3.根据权利要求1所述东革阿里有效成分组合的制备方法，其富集特征在于水提取液用大孔树脂吸附富集，树脂类型HP-20、D101、DM130、AB-8。
4.根据权利要求1所述东革阿里有效成分组合的制备方法，其树脂柱吸附成分洗脱特征在于树脂柱采用乙醇、乙酸乙酯、水中的一种或几种溶剂混合梯度洗脱。
5.根据权利要求1所述东革阿里有效成分组合的制备方法，其滤膜分级分离选择微滤膜、超滤膜、反渗透膜和钠滤膜一种或几种梯度处理。
6.根据权利要求1所述东革阿里有效成分组合的制备方法，所述苦木素类物质为宽缨酮，含量在1～35％。
7.权利要求1所述东革阿里有效成分组合在制备增强性功能、提高生育率、提神抗疲劳、增强免疫力、增加体能、缓解痛风药物中的应用。
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