CN105916516A

CN105916516A - 利用乳酸菌中的氧化应激途径促进肠道内稳态

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Publication number: CN105916516A
Application number: CN201480056168.2A
Authority: CN
Inventors: 温迪·S·格瑞特; 帕特里克·韦加; 索尼亚·阿罗拉·巴拉尔; 约翰·万海尔克卡玛·玮力格; 加埃勒·奎勒; 佩吉·加罗
Original assignee: Gervais Danone SA; Harvard University
Current assignee: Gervais Danone SA; Harvard University
Priority date: 2013-08-13
Filing date: 2014-08-13
Publication date: 2016-08-31
Also published as: BR112016002963A2; EP3033438A1; RU2016104820A3; WO2015023788A1; CA2921539A1; MA38856A1; MX2016001937A; EP3033438A4; WO2015023268A1; RU2016104820A

Abstract

本文中公开了用于向受试者提供抗氧化作用，例如，调节或以其它方式改善氧化应激途径和/或中和或减少有害反应性氧物质(ROS)的组合物和方法。

Description

利用乳酸菌中的氧化应激途径促进肠道内稳态

相关申请

本申请是2013年8月13日提交的国际申请第PCT/US2013/054811号(其完整教导通过引用并入本文)的部分延续。

发明背景

疾病控制和预防中心估计，在美国有多达140万患者受炎性肠疾病影响。炎性肠疾病的两个最常见形式溃疡性结肠炎和克罗恩病各自的特征在于在胃肠道的复发性炎症。

溃疡性结肠炎的特征在于被限制在结肠和直肠中并且与伴随粘液和血液排出的腹泻、痉挛、腹部疼痛、炎症以及粘膜水肿和溃疡斑相关的弥漫性粘膜炎症。克罗恩病主要影响回肠和空肠，在较低的程度上影响结肠，并且常常与腹泻、痉挛、食欲缺乏和体重减轻以及局部脓肿和疤痕形成的损失相关。

响应于急性和慢性炎症，受试者(例如，哺乳动物)常常产生能引起组织损伤的反应性氧物质(例如，超氧化物和过氧化氢)，特别是在不能有效降解或中和此类反应性氧物质的受试者中。累积反应性氧物质可通过它们氧化和降解必不可少的细胞成分(包括诱发对细胞核酸的损伤)的能力促进炎症。另外，反应性氧物质可充当促炎信号转导剂，也可激活已知上调参与炎症应答的基因的表达的某些转录因子(ConnorEM，等Inflammatory Bowel Diseases；2(2):133-147(1996))。因为胃肠道经受响应损伤或其它病理状态的氧化应激，因此反应性氧物质的存在和积累可进一步促成表征炎性肠病的炎症。

存在对提供抗氧化作用的方法的需要，以及对预防和/或治疗氧化作用，例如因反应性氧物质和/或氧化应激而产生的或与其相关的氧化作用的方法的需要。

还需要用于治疗和/或预防影响胃肠道的炎性疾病，诸如炎性肠病的新疗法或防范性措施。特别需要的是能够减轻(例如，减少或改善症状)反应性氧物质对胃肠道的细胞和组织施加的损伤性作用的安全有效的疗法。还需要的是可成功地诱发炎性肠病的缓解和预防其复发的新疗法。

发明概述

本文中提供的是治疗或预防炎性病况，特别是影响了细胞和胃肠道的组织的那些炎性病况(例如，溃疡性结肠炎、克罗恩病、导流结肠炎、隐窝炎、肠易激综合征、胃肠道癌症、肥胖症和II型糖尿病)的新型组合物(例如，预防性或治疗性组合物)和方法。在某些实施方案中，所公开的组合物和方法可用于在受试者中提供抗氧化作用(例如，减少或以其它方式中和反应性氧物质(ROS)的损伤性作用，减少氧化应激等)，和/或诱导炎性肠病的缓解和/或预防其复发。

在一些实施方案中，本发明涉及具有特别期望的性质(例如，抗氧化性质)的酶(例如，超氧化物歧化酶(SOD)酶诸如超氧化物歧化酶A酶)。在某些实施方案中，通过乳酸菌诸如乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)(例如，从乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株)产生，从其衍生或从其分离所述酶(例如，SOD酶)。

在一些实施方案中，本发明涉及向受试者提供抗氧化作用的方法，所述包括向所述受试者施用有效量的组合物，其中所述组合物包含从乳酸菌菌株(例如，乳酸乳球菌诸如乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株)获得且任选分离的超氧化物歧化酶(SOD)酶或其功能性部分。本发明还涉及用于为受试者提供抗氧化作用的组合物，所述组合物包含从乳酸菌菌株(例如，乳酸乳球菌，诸如乳酸乳球菌CNCM I-1613菌株)获得且任选分离的超氧化物歧化酶(SOD)的酶或其功能性部分。本发明还涉及组合物用于制造用于为受试者提供抗氧化作用的药剂(包括功能性食品)的用途，所述组合物包含从乳酸菌菌株(例如，乳酸乳球菌诸如乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株)获得且任选分离的超氧化物歧化酶(SOD)的酶或其功能性部分。

在某些实施方案中，本发明涉及组合物用于制造用于在有需要的受试者中减轻ROS诱发的损伤或治疗炎性病况的药剂的用途，所述组合物包含从乳酸乳球菌菌株获得的超氧化物歧化酶(SOD)酶或其功能性部分。例如，在一些实施方案中，所述ROS诱发的损伤由选自由以下组成的组的一个或多个病况导致：炎性肠病、溃疡性结肠炎、改道性结肠炎、克罗恩病、胃肠道癌症、肠易激综合征、肥胖症和II型糖尿病。在一些实施方案中，乳酸乳球菌菌株为CNCM I-1631。在一些实施方案中，SOD酶是超氧化物歧化酶A(SOD-A)酶或包含含有SEQID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或其功能性部分的分离的多肽。在一些实施方案中，抗氧化作用涉及减少反应性氧物质(ROS)诱发的对受试者的胃肠道的损伤，并且所述方法包括向所述受试者施用有效量的组合物，从而减少ROS诱发的损伤，其中所述组合物包含从乳酸菌(例如，乳酸乳球菌诸如乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株)获得且任选分离的酶或其功能性部分。

在一些实施方案中，抗氧化作用涉及减少受试者中的氧化应激，并且所述方法包括向受试者施用效量的组合物施用，并由此减少氧化应激，其中所述组合物包含获自乳酸菌(例如，乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)诸如乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株)且任选地分离的酶或其功能性部分。

在一些实施方案中，所述酶是抗氧化酶。在一些实施方案中，所述酶是超氧化物歧化酶(SOD)。在一些实施方案中，所述酶是超氧化物歧化酶A(SOD-A)酶。在一些实施方案中，所述酶包括包含含有SEQ IDNO:1或其功能性部分的分离的多肽。在一些实施方案中，所述SOD-A由包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3或其功能性部分的多核苷酸编码。在一些实施方案中，所述酶是分离的。在一些实施方案中，所述组合物包括至少一种细菌菌株。

在一些实施方案中，所述受试者是哺乳动物，诸如人。在一些实施方案中，口服施用所述组合物。在一些实施方案中，所述组合物选自由以下组成的组：食品(例如，医疗食品或功能性食品)、药物和膳食补充剂。

在一些实施方案中，ROS诱发的损伤由选自由以下组成的组的一个或多个病况导致：炎性肠病、溃疡性结肠炎、改道性结肠炎、克罗恩病、胃肠道癌症、肠易激综合征、肥胖症和II型糖尿病。在一些实施方案中，所述氧化应激涉及受试者的胃肠道的组织。在一些实施方案中，所述氧化应激是选自由以下组成的病况的组的一个或多个病况的结果：炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、改道性结肠炎、隐窝炎、衰老、胃肠道癌症、肠易激综合征、肥胖症和II型糖尿病。在某些实施方案中，所述氧化应激在肠道炎症的过程中产生，以及在一些实施方案中，所述氧化应激包括反应性氧物质(ROS)诱发的对胃肠道的组织的损伤。

本发明还涉及鉴定候选治疗性乳酸菌的方法，其中所述方法包括如下步骤：(a)筛选乳酸菌，以鉴定表达酶的候选细菌；和(b)在合适的模型中测试所述候选细菌的至少一种治疗性质以鉴定候选治疗性细菌。

在一些实施方案中，所述酶是抗氧化酶。在一些实施方案中，所述酶是超氧化物歧化酶(SOD)酶。在一些实施方案中，所述酶是SOD-A。

在一些实施方案中，(a)的乳酸菌选自由以下组成的组：乳球菌属(Lactococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、片球菌属(Pediococcus)和链球菌属(Streptococcus)。在一些实施方案中，乳酸菌为乳酸乳球菌。

在一些实施方案中，至少一种治疗性质是选自由以组成的组的一个或多个性质：中和反应性氧物质(ROS)的能力、减少ROS诱发的损伤的能力、减少氧化应激的能力、抗氧化作用、治疗炎性病况的能力和治疗炎性肠病的能力。在一些实施方案中，所述至少一种治疗性质是治疗溃疡性结肠炎的能力，并且所述模型是一个TRUC鼠模型。在一些实施方案中，所述至少一种治疗性质是治疗溃疡性结肠炎的能力，并且所述模型是一个IL10^-/-小鼠模型。在一些实施方案中，所述治疗性乳酸菌具有类似于乳酸乳球菌CNCM I-1631细菌的性质。

本发明还涉及表达从乳球乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株分离的超氧化物歧化酶(SOD)酶或其功能性部分的分离的细菌菌株，其中所述分离的细菌菌株不是乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株。在一些实施方案中，SOD酶是SOD-A。在一些实施方案中，所述细菌菌株是乳酸乳球菌菌株。在一些实施方案中，用包含编码SOD酶或其功能部分的多核苷酸的质粒(例如，编码从乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株分离的SOD-A的质粒)转染所述菌株。

本发明还涉及表达载体，所述表达载体包含编码来自乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的超氧化物歧化酶A(SOD-A)酶或其功能性部分的多核苷酸。在一些实施方案中，所述载体是病毒或质粒。

本发明还涉及治疗患有炎性病况的受试者的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用有效量的组合物，并由此治疗所述炎性病况，其中所述组合物包含从乳酸菌菌株分离的酶或其功能性部分。在一些实施方案中，乳酸菌菌株选自由以下组成的组：乳杆菌属(Lactobacillus)、明串珠菌属、片球菌属(Pediococcus)、链球菌属和乳球菌属。在一些实施方案中，乳酸菌是乳酸乳球菌。在某些实施方案中，乳酸菌是乳酸乳球菌CNCM I-1631细菌。

在一些实施方案中，所述酶是抗氧化酶。在一些实施方案中，所述酶是SOD，例如，SOD-A。在一些实施方案中，炎性病症是由反应性氧物质(ROS)诱发的。

在一些实施方案中，组合物包含不天然(本身)产生酶且已被工程化来表达所述酶的细菌菌株。

在某些实施方案中，所述至少一个细菌天然(本身)产生抗氧化酶。在某些实施方案中，至少一种细菌被工程化来表达抗氧化酶(例如，SOD酶诸如SOD-A)或其功能性部分(例如，由包含SEQ ID NO:3的多核苷酸序列编码此类酶的功能性部分)。在某些实施方案中，所述至少一种细菌天然产生抗氧化酶并且被工程化来产生抗氧化酶(例如，工程化来产生额外量的相同酶或其部分或产生一个或多个另外的不同的酶或部分)。所述组合物还可包括细菌的混合物，例如不同细菌属的混合物、不同细菌种类的混合物、天然存在的和工程化细菌的混合物等。

例如，细菌(例如，乳酸菌)可包含一个或多个相较于此类细菌的天然菌种、野生型菌种或其它未修饰的菌种导致抗氧化酶(例如，SOD-A)的过表达的遗传修饰。所述细菌可以是，例如，选自由以下组成的组的乳酸菌：乳杆菌属、明串珠菌属、片球菌属、链球菌属和乳球菌属。

在一些实施方案中，所述组合物包含乳酸菌(例如，乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株)，以及一种或多种分离的酶(例如，抗氧化酶)或其部分。

当结合所附实施例采用时，通过参考以下本发明的详细描述，本发明的上面讨论的和许多其它特征和伴随的有利方面将变得更好理解。

附图简述

图1举例说明被施予水对照、牛奶对照、含有乳酸乳球菌CNCMI-1631菌株的五菌株的发酵乳制品或乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品的T-bet^-/-Rag2^-/-(TRUC)小鼠的组织学结肠炎评分。施用产品，持续四周。进行利用Dunn事后检验的单因素方差分析(one-wayANOVA)以评估统计显着性，****表示p值<0.0001。

图2举例说明被施予水对照、牛奶对照或乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品(FMP)的Il10^-/-小鼠的组织学结肠炎评分。施用产品，持续四周。进行利用Dunn事后检验的单因素方差分析以评估统计显着性，*表示p值<0.05。

图3举例说明利用右旋葡聚糖硫酸钠处理5天(实验第3天至第8天)并且被施予水对照、牛奶对照或乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品(从实验的第1天至第10天)的野生型小鼠中的组织学结肠炎评分。进行利用Dunn事后检验的单因素方差分析以评估统计显着性，*表示p值<0.0001。

图4举例说明反应性氧物质在溃疡性结肠炎的TRUC鼠模型的末端结肠中相对于对照RAG2^-/-小鼠升高。空心条棒代表对照RAG2^-/-小鼠，阴影条棒代表TRUC小鼠(每组5至8只小鼠)。将平均值绘图；误差棒代表±SD，对于TRUC1个月与TRUC 2-6个月之间的所有比较，p<0.001。

图5显示DNA加合物，特别是反应性氧物质诱发的8-羟基-2'-脱氧鸟嘌呤DNA加合物在溃疡性结肠炎的TRUC鼠模型中相对于对照RAG2^-/-小鼠显著增加。空心条棒代表对照RAG2^-/-小鼠，阴影条棒代表TRUC小鼠(每组6至9只小鼠)。将平均值绘图；误差棒代表±SD，对于TRUC1个月与TRUC 2-6个月之间的所有比较，p<0.001。

图6显示利用介质、乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品或缺乏SOD-A的乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株孵育的原代结肠上皮细胞的超氧化物水平。黄嘌呤-黄嘌呤氧化物用于刺激上皮细胞的过氧化物水平，溴化二氢乙锭用于染色细胞以检测超氧化物水平，并且分析细胞，以及使用流式细胞术计算平均荧光强度。每一个符号表示获自2-4只小鼠的上皮细胞。显示P值，水平线指定被比较的组，Kruskall-Wallis检验。

图7举例说明被施予乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品四周、被施予已删除基因组SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品四周或被施予补充表达SOD-A的质粒的已删除基因组SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品四周的T-bet^-/-Rag2^-/-小鼠的组织学结肠炎评分。进行利用Dunn事后检验的单因素方差分析以评估统计显着性，****表示p值<0.0001。

图8举例说明利用右旋葡聚糖硫酸钠处理5天(实验的第3天至第8天)并且被施予乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品(从实验的第1天至第10天)、已删除基因组SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCMI-1631菌株的发酵乳制品(从实验的第1天至第10天)，或补充表达SOD-A的质粒的已删除基因组SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品(从实验的第1天至第10天)的野生型小鼠的组织学结肠炎评分。进行利用Dunn事后检验的单因素方差分析以评估统计显着性，**表示p值<0.01。

图9举例说明从乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株中分离的超氧化物歧化酶A(SOD-A)酶的氨基酸序列(SEQ ID NO：1)。

图10举例说明包含从乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株中分离的编码区的超氧化物歧化酶(SOD-A)酶的多核苷酸序列的部分(SEQ ID NO：2)。

图11举例说明编码从乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株分离的超氧化物歧化酶A(SOD-A)酶的功能性部分的多核苷酸序列(SEQ ID NO：3)。

发明详述

本文所述的发明总体上涉及赋予受试者抗氧化作用和/或治疗炎性病况诸如炎性肠病的新型组合物(例如，治疗性或预防性组合物)和相关方法。提供了用于炎性肠疾病的治疗和表征炎性肠病的症状的抑制的新型疗法。具体地，本发明提供赋予抗氧化作用，诸如减少、减轻或以其它方式中和反应性氧物质(ROS)的损伤作用(特别是在胃肠道中)，和/或减少或以其它方式中和氧化应激以及此类氧化应激例如对胃肠道的细胞和组织施加的损伤作用的装置。

如本文中所使，短语“炎性病况”一般指牵涉炎症或否则具有炎性组分(例如，受试者因对损害或损伤或病理状态的暴露而发展的炎症应答)的任何疾病、病症或病理状态。示例性炎性病况包括炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、转道性结肠炎、隐窝炎、衰老、肠易激综合征和胃肠道癌症、肥胖症和II型糖尿病；这些疾病表现出氧化应激和ROS诱导的损伤的体征。

如本文中所用，短语“炎性肠病”广泛地指一组慢性、特发性、免疫介导的病症，其导致胃肠道的炎症，并且此类短语总体上包括溃疡性结肠炎、克罗恩病、肠易激综合征、转道性结肠炎、胃肠道癌症和隐窝炎。

虽然炎性肠病的潜在原因尚未完全阐明，但ROS似乎在炎症过程中起作用，以及此类ROS对胃肠道的细胞和组织施加损害作用。如本文中所用，术语“反应性氧物质”和“ROS”一般是指氧或含氧化合物诸如过氧化氢和超氧化物的自由基形式。ROS是可在患有炎性肠病的受试者的胃肠道中积累的化学反应性代谢副产物。积累ROS诸如超氧化物和过氧化氢能够通过氧化DNA碱基促进DNA损伤并且以超过DNA修复机制的速度产生DNA加合物，从而进一步促成表征炎性肠病的炎症(Garrett等Cancer Cell 16:208–219(2009))。

累积ROS增加受影响的受试者，尤其是此类受试者的细胞和细胞结构被暴露于其的氧化应激。如本文中所用，短语“氧化应激”广泛地指导致ROS水平升高超过受试者的自然抗氧化能力的状况(例如，可通过受试者可能暴露于其的免疫和/或环境应激物诱发的状态)。因此，氧化应激的特征在于氧化和抗氧化反应的不平衡，其中此类失衡在氧化状态的方向移动，由此导致氧化损伤。此类不平衡导致ROS的积累，这反过来又可促进炎症状态，并导致对细胞结构的损伤。其中受试者可处于氧化应激之下或处于发生氧化应激的风险中的状况包括炎性肠病、衰老、肠易激综合征、胃肠道癌症、肥胖症和糖尿病(例如，II型糖尿病)。

如本文中所述，由乳酸菌(例如，乳酸乳球菌菌株)产生的某些酶(例如，抗氧化酶诸如超氧化物歧化酶(SOD)酶)可用于治疗或预防某些病理病况，包括炎性肠病。不希望受理论的束缚，据信所述酶减少或以其它方式中和ROS，从而治疗或预防可部分地因由积累ROS引起的氧化作用而导致的病理病况(例如，炎性肠病)。

乳酸菌为产生乳酸作为碳水化合物发酵的主要代谢终产物的革兰阳性棒状杆菌或球菌。示例性乳酸菌包括乳酸杆菌属、明串珠菌属、片球菌属、链球菌属和乳球菌属。在某些实施方案中，本发明涉及由乳酸菌产生的、从其衍生的酶(例如，具有抗氧化性质的酶)，以及这些酶的功能性部分、编码这些酶和部分的多核苷酸、包含所述多核苷酸或产生所述酶或部分(天然/本身地，或作为引起不天然地产生所述酶的菌株产生所述酶的遗传工程的结果，或作为引起菌株产生相较于天然菌株增加的量的所述酶的遗传工程的结果)的细胞以及用途。

在某些实施方案中，乳酸菌包括乳球菌属菌株(例如，乳酸乳球菌)。一个这样的细菌菌株(其在本文中称为“乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株”或“乳酸乳球菌DN 030 066菌株”已公开于国际公开第WO/1997/016529号，其全部内容通过引用并入本文。乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株(其是革兰阳性的，主要为双球菌属微生物)已于1995年10月24日于登录号I-1631下根据布达佩斯条约的条款和条件保藏在法国微生物菌种保藏中心(Collection Nationale de Cultures de Microorganisms)。

如本文中所述，乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株在溃疡性结肠炎的鼠模型中以SOD-A依赖性方式有效地减小结肠炎评分。该菌株能够减少或以其其它方式中和ROS，并由此治疗可将氧化应激其作为其特性，或可并发于氧化应激的病况(例如，炎性肠病、肠易激综合征、胃肠道癌症、II型糖尿病、衰老和/或肥胖症)。因此，在某些实施方案中，本发明涉及包含从乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株分离的酶(例如，SOD-A酶)的组合物以及使用此类组合物治疗氧化应激的相关方法。例如，本文中公开的组合物和相关方法对于氧化应激的治疗是有用的，所述氧化应激是在受试者中响应于急性或慢性炎性病况或响应于填充受试者的胃肠道的共生细菌种类而被诱发的。在某些实施方案中，所述分离的酶(例如，抗氧化剂酶，诸如SOD-A酶)可用于在胃肠道中减少氧化还原应激或维持或促进胃肠道的动态平衡。然而，在其它实施方案中，所述分离的酶(例如，SOD-A酶)和包含此类酶的组合物(例如，细菌)可被施用来为有需要的受试者(患有因ROS的存在或积累而引起的炎性病况或否则受其折磨的受试者)提供给抗氧化作用物。

本文中还公开的是被表征为具有抗氧化性质的酶或其功能部分(例如，从乳酸菌分离的酶)。如本文中所用，短语“抗氧化酶”是指具有抗氧化性质或另外地能够减缓、延迟或抑制氧化或氧化应激的酶或其功能性部分。在某些实施方案中，此类抗氧化酶分离自乳酸菌(例如，乳酸乳球菌)。在某些实施方案中，此类抗氧化酶分离自乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株。示例性抗氧化酶可以是，例如，超氧化物歧化酶(SOD)。

如在本文中用于描述细胞或酶(例如，SOD酶或SOD-A酶)一样，术语“分离的”通常意指已被取出或从天然环境中分离出来。例如，可从表达或产生(例如，本身/天然地)所述酶的乳酸乳球菌菌株分离分离的SOD-A酶。

如本文中所用，短语“抗氧化作用”通常是指化合物或组合物(例如，包含SOD-A的组合物)减少、减缓、延迟或以其它方式抑制氧化应激(例如，减少或抑制ROS诱发的对细胞组分诸如DNA的氧化损伤)的能力。

本发明的组合物可用于治疗或减少ROS诱发的损伤(例如，ROS诱发的对受试者的胃肠道的损伤)。例如，本文中公开的是包括向有需要的受试者施用组合物的治疗方法，所述组合物包含来自(例如，由其产生或从其分离的)乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的抗氧化酶(例如，SOD，诸如SOD-A)。此类组合物可包含一种或多种细菌(例如，已被工程化或遗传修饰以便它们表达SOD酶或导致抗氧化酶的过表达的细菌)。

本文中还提供了已被修饰(例如，遗传修饰)以便它们产生一种或多种抗氧化酶或增加所述一种或多种酶(SOD，如SOD-A)的量的分离的细胞，所述酶由乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株产生。例如，可用包含编码所述酶或其功能性部分的多核苷酸的质粒转染分离的细胞(例如，细菌细胞)。优选地细胞将是不天然产生所述酶的细胞(例如，如果SOD酶来源于乳酸乳球菌CNCM I-1631，则所述遗传修饰的菌株不是乳酸乳球菌CNCM I-1631)。然而，在某些实施方案中，细胞天然表达所述酶和并且遗传修饰导致所述酶的过量产量。在将此类核酸整合进分离的细胞的基因组中并表达后，此类细胞将产生或分泌抗抗氧化酶(例如，来自乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的SOD-A酶)。可从培养基分离(例如，收获)此类抗氧化酶并按照本发明的教导将其向受试者施用，以减少或治疗氧化性应激或炎性病况的。或者，可向受试者施用所述培养基或细菌细胞本身。在某些实施方案中，所述分离的细胞包含导致抗氧化酶(例如，相对于未修饰的细胞)的过表达的一种或多种遗传修饰。例如，可遗传修饰一种或多种本身产生抗氧化酶(例如，SOD-A)的分离的细胞，以便增加此类产生的抗氧化酶的量(例如，增加2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-、10-倍或更多)。

编码来自乳酸乳球菌CNCM I-1631的SOD-A酶的多核苷酸序列示于SEQ ID NO:2(图10)中。SOD-A酶(或本文中公开的其它酶)的功能性部分可使用本领域中已知的方法来鉴定。例如，可以使用标准方法产生所述酶的部分，并测试其目标性质(例如，在鼠模型中治疗溃疡性结肠炎的能力，减少或中和ROS的能力等)。如本文中所用，酶的“功能性部分”是与亲代(完整)酶共享一个或多个功能性性质的部分。在某些实施方案中，所述酶的功能部分是由包含SEQ ID NO:3的乳酸乳球菌CNCM I-1631的多核苷酸序列编码的SOD-A酶的功能性部分。优选地，共享性质或属性是与本文所述的方法相关那些性质，诸如中和反应性氧种(ROS)的能力、减少ROS诱发的损伤的能力、减少氧化应激的能力、抗氧化作用、治疗炎性病症的能力和/或治疗炎性肠病的能力。

本文中还提供了可用于遗传修饰一种或多种分离的细胞(例如，细菌细胞)的表达载体。可按照本发明的教导使用经遗传修饰的细胞和其表达产物(例如，SOD-A酶或其功能性部分)。在某些实施方案中，所述表达载体包含编码来自乳酸菌的酶或其功能性部分(例如，SOD、SOD-A或其部分)的多核苷酸。在某些实施方案中，此类表达载体包含编码来自乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的酶或其功能性部分(例如，SOD、SOD-A或其部分)多核苷酸。此类表达载体可以是，例如，如本领域中已知的病毒、质粒等。

在某些方面，本发明的方法包括向具有其中牵涉氧化应激的疾病或病况(例如，炎性病况诸如溃疡性结肠炎)的受试者施用有效量的一种或多种酶(例如，SOD-A酶，诸如从乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株分离的酶)。乳酸乳球菌CNCM I-1631的SOD-A酶的氨基酸序列在本文中提供为SEQ ID NO:1(图9)。如本文中所用，术语“受试者”意指任何哺乳动物，包括人。在本发明的某些实施方案中，所述受试者是成人或青少年。

如本文中所用，短语“有效量”意指足以实现有意义的益处(例如，中和有害ROS或减少炎性肠病的症状)的量。本发明的组合物中的酶(例如，SOD-A酶)的有效量一般可基于此类酶发挥抗氧化作用的能力来确定。通常，向受试者施用的酶(例如，SOD、SOD-A酶)的量将决于受试者的特征和受试者者的氧化应激、疾病或炎性病况的严重程度。在某些实施方案中，可每日一次、每日两次、每日三次、每日四次、每日五次、每日六次、每日七次、每日八次或更多次向受试者施用(例如，口服施用)所述组合物。

可通过任何合适的施用途径向受试者施用本发明的组合物。优选地，在施用此类组合物后，在胃肠道的组织中(例如，胃肠道的内腔内)实现和/或维持酶的治疗性浓度(例如，SOD或SOD-A酶)。在某些实施方案中，将所述组合物与合适的赋形剂组合并配制用于经肠或直肠施用。或者，在某些实施方案中，可制备本发明的组合物以用于胃肠外施用。适用于本发明的组合物的配制和施用的一般技术可见于“Remington’s Pharmaceutical Sciences,”Mack Publishing Co.,Easton,Pa.，最新版中。还可将本发明的组合物作为治疗方案的部分与其它合适的治疗剂或预防剂一起施用或共施用(例如，同时或依次施用)。

在其中向受试者口服施用组合物的实施方案中，可将此类组合物制备或配制为食品(例如，乳制品，优选地发酵乳制品诸如酸奶)，或功能性食品(例如，营养补充剂)。在其它实施方案中，可将此类组合物制备或配制例如为药物、膳食补充剂和/或医疗食品。在一个实施方案中，可通过利用乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株以及任选地其它菌株(诸如，例如，保加利亚乳杆菌(L.Bugaricus)和嗜热链球菌(S.thermophilus)菌株的混合物)发醇培养基(优选地牛奶)来获得发酵乳制品。

本发明提供鉴定另外的候选治疗性乳酸菌，以及鉴定和分离这些细菌的有益抗氧化酶(例如，SOD酶)的方法。

例如，本领域技术人员可容易地筛选乳酸菌，以鉴定表达抗氧化酶的候选细菌，然后在适当的模型中测试这些候选细菌的至少一个治疗性质，以鉴定另外的候选治疗性细菌。一旦鉴定此类细菌，就分离抗氧化酶并且测试其如本文中所述以及如本领域技术人员容易知道的类似的治疗性质。通过这些方法鉴定的另外的细菌和SOD基因可用于如本文所述的方法(例如，治疗方法)。

如本文中在说明书和权利要求中所用，除非明确指出相反，否则冠词“一个/种(a)”和“一个/种(an)”应被理解为包括复数所指对象。除非指出相反或另外地根据上下文明显相反，否则如果组成员的一个、不止一个或全部存在于，应用于给定的产品或方法中或另外地与其相关，则在一组的一个或多个成员之间包括“或”的权利要求或说明被认为是满意的。本发明包括其中组的正好一个成员存在于，应用于给定的产品或方法中，或另外地与其相关的实施方案。本发明还包括在其中不止一个或整个组的成员存在于，应用于给定的产品或方法中，或另外地与其相关的实施方案。此外，应理解的是，除非另有所指或除非对于本领域普通技术人员来说很明显的是将产生矛盾或不致，否则本发明包括其中来自一个或多个所列权利要求的一个或多个限制、元素、条款、说明性术语等被引入从属于所述相同的基本权利要求的另一个权利要求(或，作为相关的任何其它权利要求)的所有变化、组合和排列。当将要素以列表(例如，以Markush群或类似格式)呈现时，应当理解，要素的每一个亚组也被披露，并且可从该组除去任何元件。应当理解的是，一般地，当本发明或本发明的各方面包含/涉及包含特定要素、特征等时，本发明的某些实施方案或本发明的各方面由此类要素、特征等组成或基本由其组成。为了简单起见，这些实施方案在每一种情况下在本文中的这么多的话语中未被特别陈述。还应该理解的是，可从权利要求明确排除本发明的任何实施方案或方面，无认特定排除是否记载在说明书中。在整个本申请中引述的所有参考资料(包括参考文献，授权的专利和公开的专利申请和网站)的全部内容由此通过引用明确地并入。

本文所述的实施方案将通过以下实施例(其不应被解释为限制)进一步说明。

实施例1

TRUC(T-bet^-/-x RAG2^-/-)鼠模型代表了评估本发明减轻或以其它方式治疗炎性肠病的能力的合适的模型。TRUC小鼠产生特征在于功能障碍和上皮屏障完整性的丧失的自发性、高度渗透的、攻击性的共生依赖性溃疡性结肠炎，这由先天免疫系统中的T-bet缺乏引起(Garrett等Cell 131(1):33-45(2007)；Garret等Cytokine48(1-2):144-147(2009))。TRUC小鼠因而提供了用于评估乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株缓解在此类TRUC小鼠中诱发的结肠炎的能力和评估本发明的功效的有用模型。

本研究通过用水对照(n＝5)、牛奶对照(n＝13)、含有乳酸乳杆菌CNCM I-1631菌株的五菌株的发酵乳制品(n＝5)或乳酸乳球菌CNCMI-1631菌株的发酵乳制品(n＝19)处理TRUC小鼠4周来进行本研究。在每一种情况下，通过温和的口服滴注将对照和包含所述乳酸乳球菌细菌的发酵乳制品递送至小鼠。

在4周的处理后，处死小鼠，取出它们的结肠，将其从肛门至盲肠的远端分离开来，除去结肠内容物，并用PBS清洁结肠，随后在4％PFA或10％中性缓冲的福尔马林中固定，随后进行常规石蜡包埋。在石蜡包埋后，切成0.5微米切片，对其进行染色和检查。基于赋予的组织学结肠炎评分来评估结肠炎。

如图1中所举例说明的，含有乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品的施用改善在处理的TRUC小鼠中诱发的结肠炎，如通过组织学评估证明的。相反地，水和牛奶对照的每一种的施用不能缓解诱发的结肠炎。前述结果表明，乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株能够改善或以其它方式缓解该TRUC小鼠模型中的结肠炎。

实施例2

本发明人还评估了乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株在结肠炎的白细胞介素10敲除(Il10^-/-)小鼠模型中影响组织学结肠炎评分的能力，所述小鼠模型与人炎性肠病的许多方面相似。

向所述Il10^-/-小鼠施用水对照(n＝8)、牛奶对照(n＝8)或乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品(n＝9)，持续4周。在每一种情况下，通过温和的口服滴注将所述对照和含有乳酸乳球菌细菌的发酵乳制品递送至小鼠。

在4周的处理后，处死Il10^-/-小鼠，取出它们的结肠，将其从肛门至盲肠的远端分离开来，除去结肠内容物，并用PBS清洁结肠，随后在4％PFA或10％中性缓冲的福尔马林中固定，随后进行常规石蜡包埋。在石蜡包埋后，切成0.5微米切片，对其进行染色和检查。基于赋予的组织学结肠炎评分来评估结肠炎。

如图2中举例说明的，含有乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品的施用改善在Il10^-/-小鼠中诱发的结肠炎，如通过组织学结肠炎评分证明的。相反地，水和牛奶对照的每一种的施用不能缓解在Il10^-/-小鼠中诱发的结肠炎，如也通过组织学结肠炎评分证明的。前述结果表明，乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株能够改善或以其它方式缓解该Il10^-/-小鼠模型中的结肠炎。

实施例3

右旋葡聚糖硫酸钠的施用导致结肠中的上皮损伤和强烈炎症应答，所述损伤和炎症应答持续数天，是急性结肠炎的已确认的小鼠炎症损伤模型。进行本研究以评估乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株影响被施予右旋葡聚糖硫酸钠5天的野生型小鼠的组织学结肠炎评分的能力。

用右旋葡聚糖硫酸钠处理(实验的第3天至第8天)野生型小鼠，并从实验的第1天至第10天向其施用水对照(n＝8)、牛奶对照(n＝8)或乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品。

在10天的处理后，处死右旋葡聚糖硫酸钠处理的小鼠，取出它们的结肠，将其从肛门至盲肠的远端分离开来，除去结肠内容物，并用PBS清洁结肠，随后在4％PFA或10％中性缓冲的福尔马林中固定，随后进行常规石蜡包埋。在石蜡包埋后，切成0.5微米切片，对其进行染色和检查。基于赋予的组织学结肠炎评分来评估结肠炎。

如图3中举例说明的，乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品的施用缓解在右旋葡聚糖硫酸钠处理的小鼠中诱发的结肠炎，如通过组织学结肠炎评分证明的。相反地，水和牛奶对照的每一种的施用不能缓解在右旋葡聚糖硫酸钠处理的小鼠中诱发的结肠炎，如也通过组织学结肠炎评分证明的。前述结果进一步表明，乳酸乳球菌CNCMI-1631菌株能够改善或以其它方式缓解用右旋葡聚糖硫酸钠处理的野生型小鼠中的结肠炎。

实施例4

TRUC(T-bet^-/-x RAG2^-/-)鼠模型也表示了评估本发明减少有害反应性氧物质的能力的合适的模型。如图4中举例说明的，TRUC小鼠的远端结肠相对于RAG2^-/-小鼠的远端结肠富含反应性氧物质。如图5中所示，如通过8-羟基-2-脱氧鸟苷的水平测量的DNA加合物的存在是在TRUC小鼠中测量的反应性氧的不利结果，并且这些加合物的水平在TRUC小鼠中在1至2个月中增加至3倍，并且在4个月和6个月的老TRUC小鼠中最高(Garrett等，Cancer Cell 16:208–219(2009))。因此TRUC小鼠为评估本发明减少或以其它方式中和反应性氧的能力提供有用的模型。

为了评估本发明影响原代结肠上皮细胞中的超氧化物水平的能力，用对照介质、乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株或缺乏SOD-A的乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株孵育原代结肠上皮细胞。将黄嘌呤-黄嘌呤氧化物用于刺激上皮过氧化物水平，将溴化二氢乙锭用于对细胞进行染色以检测超氧化物水平，并使用流式细胞术分析细胞和计算平均荧光强度。

如图6举例说明的，含有乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品的施用相对于对照介质和缺乏SOD-A的乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株降低结肠上皮细胞中的超氧化物水平，如通过平均荧光强度的降低所证明的。因此前述结果表明，乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株能够以SOD-A依赖性方式减少结肠上皮细胞中的超氧化物水平。

实施例5

为了进一步证明乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株以SOD-A依赖性方式改善结肠炎，进行了进一步研究以证明乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株影响TRUC(T-bet^-/-Rag2^-/-)小鼠的组织学结肠炎评分的能力。

向TRUC小鼠施用野生型乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品(n＝9)、已删除基因组SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品(n＝20)、或具有用表达SOD-A的质粒补充的表达的已删除基因组SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品(n＝12)。在4周的处理后，处死小鼠，取出它们的结肠，将其从肛门至盲肠的远端分离开来，除去结肠内容物，并用PBS清洁结肠，随后在4％PFA或10％中性缓冲的福尔马林中固定，随后进行常规石蜡包埋。在石蜡包埋后，切成0.5微米切片，对其进行染色和检查。基于赋予的组织学结肠炎评分来评估结肠炎。

如图7中举例说明的，野生型乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品以及具有利用表达SOD-A的质粒补充的表达的已删除基因组SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品的施用，改善了在处理的TRUC小鼠中诱发的结肠炎，如通过组织学评估证明的。相反地，已删除基因组SOD-A基因乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品的施用未能缓解诱发的结肠炎。前述结果进一步表明，表达SOD-A的乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株能够在TRUC小鼠模型中以SOD-A依赖性方式改善或以其他方式缓解结肠炎。

实施例6

如先前所论述的，右旋葡聚糖硫酸钠的施用导致结肠的上皮损伤和强烈的炎症应答(持续若干天并且为急性结肠炎的已建立的鼠炎症损伤模型)。还评估了乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株影响用右旋葡聚糖硫酸钠处理5天(实验的第3天至第8天)的野生型小鼠的组织学结肠炎评分的能力。

用右旋葡聚糖硫酸钠处理野生型小鼠，并向其施用乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品(从实验的第1天至第10天，n＝5)、已删除基因组SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品(从实验的第1天至第10天，n＝11)或具有利用表达SOD-A的质粒补充的表达的已删除基因组SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品(从实验的第1天至第10天，n＝5)。

处理后，处死小鼠，并取出它们的结肠，将其从肛门至盲肠的远端分离开来，除去结肠内容物，并用PBS清洁结肠，随后在4％PFA或10％中性缓冲的福尔马林中固定，随后进行常规石蜡包埋。在石蜡包埋后，切成0.5微米切片，对其进行染色和检查。基于赋予的组织学结肠炎评分来评估结肠炎。

如图8中所举例说明的，野生型乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品和具有利用表达SOD-A的质粒补充的表达的已删除基因组SOD-A基因的乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的发酵乳制品的施用，改善了在右旋葡聚糖硫酸钠处理的小鼠中诱发的结肠炎，如通过组织学评估证明的。相反地，已删除基因组SOD-A基因乳酸乳球菌CNCMI-1631菌株的发酵乳制品的施用未能缓解右旋葡聚糖硫酸钠诱发的结肠炎。前述结果提供了进一步的表明：表达SOD-A的乳酸乳球菌CNCMI-1631菌株能够在右旋葡聚糖硫酸钠处理的小鼠中改善或以其他方式缓解结肠炎，并且观察到的作用以SOD-A依赖性方式发生。

前述研究因此证明，乳酸乳球菌，特别是表达SOD-A的乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株，或从乳酸乳球菌CNCM I-1631分离的SOD-A的施用可成功地减少反应性氧物质(ROS)，减少氧化应激，以及改善或以其它方式缓解炎性肠病(例如，结肠炎)，从而治疗炎性肠病、诱导其缓解以及预防其复发。

Claims

1.一种向受试者提供抗氧化作用的方法，其中所述方法包括向受试者施用组合物，所述组合物包含从乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)菌株获得且任选分离的超氧化物歧化酶(SOD)酶或其功能性部分。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗氧化作用涉及减少反应性氧物质(ROS)诱发的对受试者的胃肠道的损伤，并且其中所述方法包括向所述受试者施用有效量的组合物，从而减少ROS诱发的损伤，其中所述组合物包含从乳酸乳球菌菌株获得且任选分离的酶或其功能性部分。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述ROS诱发的损伤由选自由以下组成的组的一个或多个病况导致：炎性肠病、溃疡性结肠炎、改道性结肠炎、克罗恩病、胃肠道癌症、肠易激综合征、肥胖症和II型糖尿病。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗氧化作用涉及减少受试者中的氧化应激，并且其中所述方法包括向所述受试者施用有效量的组合物，从而减少所述氧化应激，其中所述组合物包含从乳酸乳球菌菌株获得且任选分离的酶或其功能性部分。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述氧化应激涉及所述受试者的胃肠道的组织。

6.根据权利要求4或5中任一项所述的方法，其中所述氧化应激是选自由以下组成的组的一个或多个病况的结果：炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、改道性结肠炎、隐窝炎、衰老、胃肠道癌症、肠易激综合征、肥胖症和II型糖尿病。

7.根据权利要求4-6中任一项所述的方法，其中所述氧化应激在肠炎症过程中产生。

8.根据权利要求4-7中任一项所述的方法，其中所述氧化应激包含反应性氧物质(ROS)诱发的对所述胃肠道的组织的损伤。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述酶为抗氧化酶。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述酶为超氧化物歧化酶(SOD)。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述酶为超氧化物歧化酶A(SOD-A)酶。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述SOD-A由包含SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:3，或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的功能性部分的多核苷酸编码。

13.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述酶包含含有SEQ ID NO:1或其功能性部分的分离的多肽。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述组合物至少包含所述菌株。

15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述乳酸乳球菌菌株为CNCM I-1631。

16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述酶是分离的。

17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述受试者为哺乳动物。

18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述受试者为人。

19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中口服施用所述组合物。

20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述组合物选自由以下组成的组：食品、药物和膳食补充剂。

21.根据权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述组合物为医疗食品或功能性食品。

22.一种鉴定候选治疗性乳酸菌的方法，其中所述方法包括如下步骤：(a)筛选乳酸菌，以鉴定表达酶的候选细菌；和(b)在合适的模型中测试所述候选细菌的至少一种治疗性质以鉴定候选治疗性细菌。

23.根据权利要求22所述的方法，其中所述酶是抗氧化酶。

24.根据权利要求22或23中任一项所述的方法，其中所述酶是超氧化物歧化酶(SOD)酶。

25.根据权利要求22-24中任一项所述的方法，其中所述酶为SOD-A。

26.根据权利要求22-25中任一项所述的方法，其中(a)的乳酸菌选自由以下组成的组：乳球菌属(Lactococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、片球菌属(Pediococcus)和链球菌属(Streptococcus)。

27.根据权利要求26所述的方法，其中所述乳酸菌为乳酸乳球菌。

28.根据权利要求21-27中任一项所述的方法，其中所述至少一个治疗性质为选自由以下组成的组的一个或多个性质：中和反应性氧物质(ROS)的能力、减少ROS诱发的损伤的能力、减少氧化应激的能力、抗氧化作用、治疗炎性病况的能力和治疗炎性肠病的能力。

29.根据权利要求22-28中任一项所述的方法，其中所述至少一个治疗性质是治疗溃疡性结肠炎的能力，并且所述模型选自由TRUC鼠模型和Il10^-/-鼠模型组成的组。

30.根据权利要求22-29中任一项所述的方法，其中所述治疗性乳酸菌具有与乳酸乳球菌CNCM I-1631细菌类似的性质。

31.一种表达从乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株分离的超氧化物歧化酶(SOD)酶或其功能性部分的分离的菌株，其中所述分离的菌株不是乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株。

32.根据权利要求31所述的分离的菌株，其中所述SOD酶为SOD-A。

33.根据权利要求31或32中任一项所述的分离的菌株，其中所述菌株为乳酸乳球菌菌株。

34.根据权利要求31-33中任一项所述的分离的菌株，其中用包含编码所述SOD酶或其功能性部分的多核苷酸的质粒转染所述菌株。

35.一种表达载体，所述表达载体包含编码来自乳酸乳球菌CNCM I-1631菌株的超氧化物歧化酶A(SOD-A)酶或其功能性部分的多核苷酸。

36.根据权利要求35所述的表达载体，其中所述载体是病毒。

37.根据权利要求35所述的表达载体，其中所述载体是质粒。

38.一种治疗具有炎性病况的受试者的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用有效量的组合物，从而治疗所述炎性病况，其中所述组合物包含从乳酸菌分离的酶或其功能性部分。

39.根据权利要求38所述的方法，其中所述乳酸菌选自由以下组成的组：乳杆菌属、明串珠菌属、片球菌属、链球菌属和乳球菌属。

40.根据权利要求38或39中任一项所述的方法，其中所述乳酸菌为乳酸乳球菌。

41.根据权利要求38-40中任一项所述的方法，其中所述乳酸菌为乳酸乳球菌CNCM I-1631细菌。

42.根据权利要求38-41中任一项所述的方法，其中所述酶为抗氧化酶。

43.根据权利要求38-42中任一项所述的方法，其中所述酶为SOD。

44.根据权利要求38-43中任一项所述的方法，其中所述酶为SOD-A。

45.根据权利要求38-44中任一项所述的方法，其中所述炎性病况由反应性氧物质(ROS)诱发。

46.根据权利要求38-45中任一项所述的方法，其中所述组合物包含不天然产生所述酶且已被工程化来表达所述酶的菌株。

47.一种组合物在制造用于在有需要的受试者中减少ROS诱发的损伤的药剂中的用途，所述组合物包含从乳酸乳球菌菌株获得的超氧化物歧化酶(SOD)酶或其功能性部分。

48.一种组合物在制造用于治疗炎性病况的药剂中的用途，所述组合物包含从乳酸乳球菌菌株获得的超氧化物歧化酶(SOD)酶或其功能性部分。

49.根据权利要求47-48中任一项所述的用途，其中所述乳酸乳球菌菌株为CNCM I-1631。

50.根据权利要求47-49中任一项所述的用途，其中所述SOD酶包含含有SEQ ID NO:1或其功能性部分的分离的多肽。

51.根据权利要求47-50中任一项所述的用途，其中所述SOD酶为超氧化物歧化酶A(SOD-A)酶。

52.根据权利要求51所述的用途，其中所述SOD-A酶由包含SEQID NO:2、SEQ ID NO:3、或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的功能性部分的多核苷酸编码。

53.根据权利要求47-52中任一项所述的用途，其中所述ROS诱发的损伤或炎性病况由选自由以下组成的组的一个或多个病况导致：炎性肠病、溃疡性结肠炎、改道性结肠炎、克罗恩病、胃肠道癌症、肠易激综合征、肥胖症和II型糖尿病。