CN105392372A - 具有小型光滑芯的颗粒 - Google Patents

Abstract

本发明的教导内容提供了一种包含小型光滑芯粒子的改良的颗粒群。还提供了制备和使用方法。

Description

具有小型光滑芯的颗粒

相关专利申请的交叉引用

本专利申请要求于2013年6月19日提交的美国临时申请USSN61/837,122的优先权权益，该临时申请全文以引用方式并入本文。

技术领域

本公开涉及改良的含活性剂的颗粒群及其制备和使用方法。

背景技术

将活性剂(诸如酶)应用于工业和消费者应用中的干产品制剂(诸如洗涤剂、纺织物组合物、烘焙制品、食品和动物饲料)已成为惯常做法。已知酶用于分解污渍，改变织物颜色和纹理，改变生面团和食品的粘度，以及通过提高食品和动物饲料中的营养物质诸如可溶性磷酸盐的利用率及减少抗营养因子诸如植酸来改善食品和动物饲料的可消化性，从而提高动物生产能力。

在干产品制剂中储存期间可能会发生酶失活，所述干产品制剂诸如为洗衣洗涤剂和餐具洗涤剂、纺织物加工共混物、烘焙面粉以及由诸如谷物(如玉米或大豆)、维生素、矿物质和营养物质(如氯化胆碱)等成分组成的动物饲料，以及此外在工业加工(如动物饲料的蒸汽造粒)期间可能会因暴露于高温、蒸汽或高湿度、压力或剪切应力以及化学物质(如酸、碱、表面活性剂、漂白剂或有机溶剂)。如果酶在加工后(例如，在蒸汽处理和造粒后冷却时)重新活化，则失活是至少部分可逆的；然而，失活通常是不可逆的，使得酶的催化活性在加工后(例如，在蒸汽处理和造粒后冷却时)不能完全恢复。酶的不可逆失活以及活性降低在诸如蒸汽造粒的过程中通常是不期望的。

与干饲料混合物相比，饲料粒料具有工业青睐的性质，诸如提高的饲料质量、减少的病原体、制造期间的粉尘水平较低、易于处理以及成分配给更均一。优选的工业造粒工艺在被称为调质的过程中利用蒸汽注入，即在造粒步骤前加入水分并升高温度，然后通过造粒步骤迫使经蒸汽加热的饲料成分或经调质的醪通过模具。造粒工艺温度可为约70℃至95℃或更高。

由于造粒过程中所用的蒸汽、温度、压力和化学物质，酶的活性或效力通常在加工及后续储存过程中显著降低。事实上，通常供工业使用的饲料酶采用稳定的液体产品的形式，其可在造粒过程后喷洒到饲料粒料上以避免酶失活。然而，当在造粒后施用酶(例如通过将酶喷洒到粒料上)时，难以实现均匀配料，并且用于在造粒后添加酶的设备成本很高。备选地，可在造粒前将液体酶制剂或干混酶制剂加入混合器中。在某些情况下，可添加比原本所需的更高含量的酶，以补偿造粒过程中的损失。

在洗涤剂、纺织物、烘焙、食品和饲料行业均需要稳定、耐用的酶颗粒充当产品和预混物制剂中的组分，所述组分能储存多达数月或数年，或经受工业加工操作诸如混合或蒸汽处理造粒过程，而没有明显的酶活性损失。

用于避免在工业过程中使酶不可逆地失活或降低酶活性的问题的方法包括鉴定酶的新来源(例如，鉴定极端嗜热微生物中的已知酶)或鉴定用于稳定已知酶的方式。Klibanov,1983，(StabilizationofEnzymesagainstThermalInactivation,AdvancesinAppliedMicrobiology,volume29,page1-28)(Klibanov，1983年，“抵抗热灭活的酶稳定性”，《应用微生物学进展》，第29卷，第1-28页)公开了用于稳定酶的三种基本方式：(1)固定化、(2)化学修饰以及(3)加入添加剂。然而，Klibanov(1983)还公开了这些方法中的任一种均可能导致稳定化或去稳定化，或完全无影响。尽管先前的配制方法已在该领域取得了一定进展(参见例如WO97/23606、WO9854980、WO9739116、WO2007044968、EP1224273B1、WO2009/102770、美国专利6,602,841、EP1804592B1、EP0098631B1和EP1996028)，但本发明的教导内容通过采用改进的颗粒结构在克服这些问题中的一些方面又取得了新的进展。

通常希望提供具有高浓度活性酶的颗粒状或粒状形式的固体制剂。使用被设计用于保护酶免于失活的包衣、隔离包衣以及添加剂或赋形剂来配制粒状颗粒。为了最大程度降低这些保护性包衣、添加剂和赋形剂的成本，并且将产品运输成本的影响减到最小，希望用活性酶与非活性成分的最合适的比率来配制颗粒状酶。然而，如果颗粒的粒度在酶浓度或有效负载增加时保持不变，那么针对配给到最终产品或应用中的给定量的酶的粒子数量减少。然而，每一加料量的粒子数量降低过多可导致产品的单独加料量之间差异性极大。例如，一勺洗涤剂、纺织物处理共混物、烘焙用生面团或一份动物饲料中低的平均数量的酶颗粒可导致酶浓度在单独加料量或份量之间的不均匀分布，从而造成各加料量之间酶处理功效的差异。

为了获得增加的酶有效负载的经济效益，同时避免由于每一加料量的粒子不足造成的差异性问题，可以尝试减小酶颗粒的平均粒径，以使每一加料量均维持足够数量的粒子。然而，在诸如流化床喷雾包衣、锅包衣、滚筒包衣等包衣工艺中，很难将酶包衣和保护性隔离包衣应用到较小的芯粒子上。由于芯粒子的直径变得较小，特别是小于约250微米、小于200微米、小于175微米、小于150微米，因此粒子团聚的趋势增加。此外，将给定重量百分比的包衣材料施加到较小的芯上将得到更薄的包衣，从而得到更少保护性的包衣。向小型芯施加均匀包衣的问题在粒子形状不规则时变得尤为突出。向表面上具有尖的或有棱角的拐角和边缘的芯施加包衣可产生薄的或不连续的包衣的区域。施加到不规则包衣上的包衣也可能不粘连，或可产生其中相邻芯粒子上的表面微凸体或表面突起彼此接触的团聚体。在不发生团聚的前提下通过施加较厚的包衣对此进行补偿往往会增加成本。

因而需要改进的方法，所述方法将酶包衣施加到芯上而不会引起显著团聚，同时确保得到有效且连续的保护性包衣。在较小粒子上实现这种高质量的包衣将能够在加工和储存期间提供增强的酶稳定性，同时提供较高的有效负载，并且同时还维持混合物的足够均匀性，使得不增加各加料量之间的差异性。

发明内容

本发明的目标是确保或提高酶在单独储存、工业加工过程中或在与其他成分混合的混合物中的稳定性，同时提高将具有一致的最小厚度的连续包衣(即减少的缺陷或薄弱点数量与施加到芯或含酶芯上的包衣材料的重量百分比成一定关系的包衣)施加到粒子上的能力。

我们惊讶地发现，提供具有更光滑、更规则表面以及窄粒度分布的芯使得可将具有一致的最小厚度的改良包衣施加到较小的粒子上。在一些实施方案中，通过如下方式获得改良的包衣酶颗粒：从光滑度指数小于2.5、加权平均粒径小于300微米且粒度分散度指数(PSDI)小于2.0的一组芯入手，用包含占最终颗粒的至少7％w/w的聚合物的另外的包衣对含酶芯进行包衣。

附图说明

图1示出了根据本发明教导内容的示例性小型光滑芯粒子，并与小但不规则的其他芯粒子比较。

图2示出了根据本发明教导内容的一些示例性数据。

图3示出了根据本发明教导内容的一些示例性数据。

图4为示出了三个代表性颗粒批次的造粒结果的图。黑条代表醪活性，而深灰色条和浅灰色条分别代表在90℃和95℃下的回收率。

图5为示出了三个代表性植酸酶标准TPT批次的造粒结果的图。黑条代表醪活性，而深灰色条和浅灰色条分别代表在90℃和95℃下的回收率。

具体实施方式

除非另外指明，否则本发明教导内容的实践将采用传统的分子生物学技术(包括重组技术)、微生物学技术、细胞生物学技术、生物化学技术、制粒技术以及动物饲料造粒技术，这些技术均在本领域技术范围内。这些技术在以下文献中进行了完整阐释，例如MolecularCloning:A LaboratoryManual,secondedition(Sambrooketal.,1989)(《分子克隆实验指 南》，第二版，Sambrook等人，1989年)；OligonucleotideSynthesis(M.J. Gait,ed.,1984)(《寡核苷酸合成》，M.J.Gait编辑，1984年)；Current ProtocolsinMolecularBiology(F.M.Ausubeletal.,eds.,1994)(《现代分子 生物学实验技术》，F.M.Ausubel等人编辑，1994年)；PCR:The PolymeraseChainReaction(Mullisetal.,eds.,1994)(《PCR：聚合酶链反 应》，Mullis等人编辑，1994年)；GeneTransferandExpression:A LaboratoryManual(Kriegler,1990)(《基因转移和表达：实验室手册》， Kriegler，1990年)，GranulationTechnologyforBioproducts(Kadam,1990) (《生物产品制粒技术》，Kadam，1990年)，以及Fairfield,D.1994.Chapter10,PelletingCostCenter.InFeedManufacturingTechnologyIV.(McEllhiney,editor),AmericanFeedIndustryAssociation,Arlington,Va.,pp.110-139(Fairfield,D.，1994年，《饲料制造技术IV》第10章造粒成本中心，McEllhiney编辑，美国饲料工业协会，弗吉尼亚州阿林顿，第110-139页)。

除非本文另外定义，否则本文中所用的所有科技术语的含义与本发明教导内容所属领域的普通技术人员通常理解的一样。Singleton,etal.,DictionaryofMicrobiologyandMolecularBiology,seconded.,JohnWileyandSons,NewYork(1994)(Singleton等人，《微生物学与分子生物学词典》，第2版，约翰威立出版社，纽约，1994年)，以及Hale&Markham,TheHarperCollinsDictionaryofBiology,HarperPerennial,NY(1991)(Hale和Markham，《哈珀柯林斯生物学词典》，HarperPerennial出版社，纽约，1991年)为技术人员提供了本发明中所用的许多术语的通用词典。与本文所述方法和材料类似或等同的任何方法和材料均可用于本发明教导内容的实践或测试。

为了便于参考，我们已在一个或多个标题下描述了本发明教导内容的要素。值得注意的是，每个标题下的教导内容也适用于其他标题下的教导内容。例如，涉及本发明教导内容的使用的每个所述实施方案和方面等同于涉及本发明教导内容的方法或本发明教导内容的组合物的实施方案或方面。同样，涉及本发明教导内容的方法或用途的每个所述实施方案和方面等同于涉及本发明教导内容的组合物的实施方案或方面。在本专利申请中，除非另外明确指明，否则单数的使用包括复数。

本文所引用的所有专利、专利申请、出版物、文档和文章均以引用方式全文并入本文。

本文提供的数值范围包括限定范围的端值在内。

定义

如本文所用，术语“颗粒”是指包含芯(通常为小型光滑芯粒子)、活性剂(通常为酶)以及任选地至少一种附加包衣的粒子。

如本文所用，术语“芯”是指颗粒的内核，并且通常包括“小型光滑芯粒子”。本发明教导内容的芯可通过多种制造技术制成，所述制造技术包括：旋转雾化、湿法制粒、干法制粒、喷雾干燥、圆盘制粒、挤出、锅包衣、滚圆制粒、滚筒制粒、流化床团聚、高剪切制粒、流化床喷雾包衣、结晶、沉淀、乳化凝胶法、涡流盘雾化以及其他铸造方法和造粒工艺。这些工艺是本领域已知的，并且在美国专利No.4689297和美国专利No.5324649(流化床加工)；EP656058B1和美国专利No.454332(挤出工艺)；美国专利No.6248706(制粒、高剪切)；以及EP804532B1和美国专利No.6534466(利用流化床芯和混合器包衣的组合工艺)中有所描述。

活性剂通常围绕芯包覆。适合用于本发明教导内容的芯可为符合如本文所提供的光滑度指数、质量中位直径和粒度分散度定义的任何材料。在本发明教导内容的一个实施方案中，所述芯包含氯化钠或硫酸钠晶体。在本发明教导内容的另一个实施方案中，所述芯包含蔗糖晶种。由无机盐和/或糖类和/或小有机分子组成的粒子可用作本发明教导内容的芯。用于掺入到芯中的合适水溶性成分包括：无机盐诸如氯化钠、硫酸铵、硫酸钠、硫酸镁、硫酸锌；或尿素；柠檬酸；糖类诸如蔗糖、乳糖等。在一些实施方案中，芯粒子为结晶无机盐。在一些实施例中，芯粒子为结晶硫酸钠。

如本文所用的术语“小型光滑芯粒子”是指显示具有如本文提供的某些光滑度指数、质量中位直径和粒度分散度指数测量值的粒子，通常是颗粒的内部粒子。

如本文所用的术语“光滑度指数”是指经验比表面积与针对芯的代表性样品计算的包层比表面积的比率。

如本文所用，“芯的代表性样品”是指至少15个芯粒子的随机样品。

如本文所用的术语“经验比表面积”是指根据经验测量的代表性芯样品的每克表面积(以平方米/克测量)，如使用BET(Brunauer-Emmett-Teller)气体吸附法(S.Brunauer,P.H.EmmettandE.Teller,J.Am.Chem.Soc.,1938,60,309.doi:10.1021/ja01269a023)(S.Brunauer、P.H.Emmett和E.Teller，《美国化学会志》，1938年，第60卷，第309页，DOI：10.1021/ja01269a023)测得。BET方法的具体细节描述于下文的“方法”部分中。

如本文所用的术语“包层比表面积”是指使用所有芯粒子均为标准球体的理想化假设，基于代表性芯样品的测得的粒度分布和平均真实密度计算的比表面积(单位为平方米/克)。用于计算包层比表面积的算法描述于下文的“方法”部分中。

如本文所用的术语“粒度分布”(缩写为PSD)是指存在于若干粒径区间的每一个中的小型光滑芯粒子的按质量百分比计的相对量。芯样品的PSD通过激光散射(参见例如T.Allen,ParticleSizeMeasurement,Vol.1(ChapmanandHall,1997)(T.Allen，《粒度测量》，第1卷，Chapman和Hall，1997年)测量。在本申请中，PSD通过三种质量百分位直径来表征，质量百分位直径可由PSD的对数正态分布图确定。

D₅₀或MMD(质量中位直径)：对数正态分布质量中位直径。MMD被视为质量平均粒径，代表性样品中50％w/w的粒子具有低于该值的直径。

D₁₀：第十百分位直径(TPD)，即代表性样品中10％w/w的粒子具有小于该值的直径。

D₉₀：第九十百分位直径(NPD)，即代表性样品中90％w/w的粒子具有小于该值的直径。

通常，D₁₀、D₅₀和D₉₀以微米表示。

芯样品的“粒度分散度指数”(缩写为PSDI)为代表性样品的D₉₀/D₁₀比率。

如本文所用的术语“包衣”是指围绕基础材料的一层材料。第一包衣层通常包封芯以便形成基本上连续的层，使得芯表面具有极少未包衣区域或没有未包衣区域，并且通常为活性剂包衣。后续的附加包衣层可包封生长的颗粒，以形成一个或多个基本上连续的附加层(“附加包衣”)。颗粒中所用的材料(例如，本文详述的活性剂和组分)可以(但无需)适合用于食品和/或动物饲料，因此可为食品级或饲料级。

本发明教导内容的包衣还可包含下列中的一种或多种：无机盐、有机酸的盐、糖、糖醇、淀粉(天然淀粉、预糊化淀粉、水解淀粉或化学改性淀粉)以及其他多糖、树胶、另外的活性剂、饲料级或食品级聚合物、颜料、粘土、增塑剂、表面活性剂、纤维材料、抗粘剂、填料、增充剂和已知用于包衣的其他化合物。合适聚合物包括聚乙烯醇(PVA)，包括部分和完全水解的PVA、聚乙二醇、聚环氧乙烷、聚乙烯吡咯烷以及碳水化合物聚合物(诸如淀粉、直链淀粉、支链淀粉、α-葡聚糖和β-葡聚糖、果胶、糖原)，还包括其混合物和衍生物。用于包衣的合适填料包括用于增加堆积体积和降低成本或用于调节最终得到的颗粒中的预期酶活性的惰性材料。此类填料的例子包括但不限于水溶剂(诸如盐、糖类)和水分散剂(诸如粘土、滑石、硅酸盐)、纤维素和淀粉，以及纤维素和淀粉衍生物。用于本发明教导内容的包衣的合适增塑剂为低分子量有机化合物，并且对于被增塑的聚合物具有高度特异性。例子包括但不限于糖类(诸如，葡萄糖、果糖和蔗糖)、糖醇(诸如，山梨糖醇、木糖醇和麦芽糖醇以及其他二醇)、极性低分子量有机化合物诸如尿素，或其他已知的增塑剂诸如水或饲料级增塑剂。用于本发明教导内容的包衣的合适纤维材料包括但不限于：纤维素，以及纤维素衍生物诸如HPMC(羟基丙基甲基纤维素)、CMC(羧基甲基纤维素)、HEC(羟基乙基纤维素)。在本发明教导内容的一个实施方案中，尤其是对于饲料应用，包衣包含水溶性或水分散性的玉米棒材料或糖或盐晶体。在特别适合用于家居清洁应用的另一个实施方案中，包衣包含水溶性或水分散性的糖或盐晶体或糖球(nonpareil)。本领域的技术人员将认识到，对于饲料和食品应用，包衣(以及任何聚合物、填料、增塑剂、纤维材料和增充剂)对于食品和/或饲料应用是可接受的。对于家居清洁应用，不需施加此类限制。

如本文所用的术语“活性剂包衣”是指包含活性剂(通常为酶)的包衣。通常，将活性剂包衣施加到小型光滑芯粒子上，然后可任选地施加附加包衣。

如本文所用的术语“附加包衣”是指任选地施加到小型光滑芯粒子上的一层或多层包衣。通常，将附加包衣施加到包含小型光滑芯粒子和活性剂包衣的新生颗粒。附加包衣的非限制性例子包括防水包衣和补水包衣。

如本文所用的术语“防水包衣”是指包含防水材料的包衣。

如本文所用的术语“补水包衣”是指包含补水材料的包衣。

术语“防水材料”是指排除、防止或基本上阻碍水吸收的材料。这些材料通常为疏水性的或两亲性的，可提供对水的隔离，不会固有地吸收和/或结合水，并且包括但不限于成膜材料。防水材料的例子包括阻透聚合物、蛋白质、脂质、脂肪和油、脂肪酸和树胶。成膜防水材料的例子为天然和改性的阻透聚合物(诸如阿拉伯树胶、乳清、乳清浓缩蛋白)、PVA(包括改性PVA和全水解PVA)以及合成聚合物(诸如胶乳、HPMC以及酸解羟丙基淀粉，例如，PureCote^TM、氧化淀粉和改性淀粉)。非成膜防水材料包括例如蜡、脂肪、油和脂质以及卵磷脂。所选的不易于氧化的防水材料为例如胶乳聚合物和阻透聚合物如阿拉伯树胶。

术语“补水材料”是指通过多种机制之一吸收含水液体诸如水的材料。在第一非限制性机制中，该材料吸收游离水。在第二非限制性机制中，该材料吸收通常以水合物的结晶水形式存在的结合水。因此，该材料可作为部分或完全水合的材料或作为非水合材料提供，其将吸收或结合含水液体，以及延缓或降低此类液体迁移至活性剂的速率或程度。在第三非限制性机制中，补水材料通过延迟向颗粒内的活性剂进行的热传递以及通过将活性剂维持在低于颗粒外表面温度的温度下，使活性剂绝热。补水材料包括碳水化合物和无机盐，包括水合盐，如硫酸镁、硫酸钠和硫酸铵；麦芽糖糊精；糖类，如蔗糖；淀粉，包括玉米淀粉。

如本文所用，术语“粒料”和“造粒”是指固体、圆形、球形和圆柱形片剂或球剂，以及用于形成此类固体形状，尤其是饲料粒料和固体挤出动物饲料的工艺。已知的食品和动物饲料造粒制造工艺通常包括将食品或饲料成分在室温下一起混合约1至约5分钟，将所得混合物转移至缓冲斗，将混合物运输至蒸汽调质器，任选地将经蒸汽调质的混合物转移至膨胀器，将混合物转移至造粒机或挤出机，最后将粒料转移至粒料冷却器中。Fairfield,D.1994.Chapter10,PelletingCostCenter.InFeedManufacturingTechnologyIV.(McEllhiney,editor),AmericanFeedIndustryAssociation,Arlington,Va.,pp.110-139(Fairfield,D.，1994年，《饲料制造技术IV》第10章造粒成本中心，McEllhiney编辑，美国饲料工业协会，弗吉尼亚州阿林顿，第110-139页)。

如本文所用，术语“未粒化混合物”是指预混物或前体、基料混合物、醪和稀释剂。预混物通常包含维生素和微量矿物质。基料混合物通常包含食品和饲料成分，诸如磷酸二钙、石灰石、盐和维生素以及矿物质预混物，但不包含谷物和蛋白质成分。稀释剂包括但不限于谷物(例如麦麸和米糠)和粘土诸如层状硅酸盐(硅酸镁海泡石、膨润土、高岭土、蒙脱石、锂蒙脱石、滑石粉、贝得石、绿坡缕石和硅镁石)。粘土还充当饲料预混物的载体和流化剂或稀释剂。醪通常包括完整的动物饲料。

如本文所用，术语“恢复的活性”是指如下两者的比率：(i)活性剂在经过处理后的活性，该处理涉及以下一种或多种应激源：加热、增大的压力、升高的pH、降低的pH、储存、干燥、暴露于一种或多种表面活性剂、暴露于一种或多种溶剂(包括水/水分)以及机械应力，与(ii)植酸酶在处理前的活性。恢复的活性可表示为百分比。

恢复的活性百分比按下式计算：

在造粒实验的背景中，“处理前的活性”可通过测量存在于未经处理的醪中的活性剂活性来估算，所述估算方式与经过处理的活性剂的方式在其他方面匹配。

例如，在与经处理(例如，粒化)的醪中的活性剂相似的条件下对未经处理的醪中的活性剂进行处置并储存相似的时间，以控制特定处理本身以外可能的相互作用或其他影响。

如本文所用，术语“活性剂”可以是待添加至颗粒以提供用于给定用途的预期功能的任何材料。活性剂可以是在生物学上可行的材料、食品或饲料成分、抗微生物剂、抗生素替代试剂、益生元、益生菌、农用化学品成分(诸如杀虫剂、肥料或除草剂)、药物成分、家居护理活性成分或它们的组合。在一个优选的实施方案中，活性成分为蛋白质、酶、肽、多肽、氨基酸、碳水化合物、脂质或油、维生素、复合维生素、激素或它们的组合。在另一个实施方案中，活性成分为酶、漂白剂、漂白活化剂、香料或其他生物活性成分。内在热稳定的活性剂涵盖于本发明教导内容中，并且在颗粒中可显示具有增强的热稳定性。用于食品和饲料应用的最优选的活性成分为酶、肽和多肽、氨基酸、抗微生物剂、肠道健康促进剂、维生素以及它们的组合。可使用任何酶，并且酶的非限制性列表包括植酸酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、磷酸酶、蛋白酶、淀粉酶(α-淀粉酶或β-淀粉酶或葡萄糖淀粉酶)、纤维素酶、脂肪酶、角质酶、氧化酶、转移酶、还原酶、半纤维素酶、甘露聚糖酶、酯酶、异构酶、果胶酶、乳糖酶、过氧化物酶、漆酶、其他氧化还原酶以及它们的混合物。特别优选的酶包括来自里氏木霉(Trichodermareesei)的木聚糖酶以及来自里氏木霉的木聚糖酶变体(二者均得自DuPontIndustrialBiosciences)，或EP1222256B1中所述的内在热稳定的木聚糖酶，以及来自黑曲霉(Aspergillusniger)、白曲霉(Aspergilluskawachii)、塔宾曲霉(Aspergillustubigensis)、棒曲霉(Aspergillusclavatus)、环状芽孢杆菌(Bacilluscirculans)、短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、轮枝镰刀菌(Fusariumverticilloides)、尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)、瘤胃真菌(Neocallimastixpatriciarum)、青霉属物种(Penicilliumspecies)、变铅青链霉菌(Streptomyceslividans)、热紫链霉菌(Streptomycesthermoviolaceus)、褐色高温单孢菌(Thermomonosporafusca)、哈茨木霉(Trichodermaharzianum)、里氏木霉、绿色木霉(Trichodermaviride)的其他木聚糖酶。另外的特别优选的酶包括植酸酶，例如来自曲霉属物种(Aspergillussp.)的植酸酶Finase得自ABEnzymes,Darmstadt,Germany；来自大肠杆菌(E.Coli)的植酸酶Phyzyme^TMXP和来自布丘氏菌(Buttiauxella)的植酸酶AxtraPhy，二者均得自DaniscoAnimalNutrition,DuPont；来自例如以下生物体的其他植酸酶：木霉属(Trichoderma)、青霉属(Penicillium)、镰孢属(Fusarium)、布丘氏菌属、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)、肠杆菌属(Enterobacter)、青霉属、腐质霉属(Humicola)、哈夫尼菌属(Hafnia)、芽孢杆菌属(Bacillus)和隔孢伏革属(Peniophora)；以及美国专利申请61/595,923和61/595,941中所述的那些植酸酶，这两篇专利申请均提交于2012年2月12日。纤维素酶的例子为BGL，这是一种得自DaniscoAnimalNutrition,DuPont的纤维素酶(β葡聚糖酶)；以及来自诸如曲霉属、木霉属、青霉属、腐质霉属、芽孢杆菌属、纤维单胞菌属(Cellulomonas)、青霉属、高温单孢菌属(Thermomonospore)、梭菌属(Clostridium)和肉座菌属(Hypocrea)的物种的其他纤维素酶。还可使用US20060193897A1中所述的纤维素酶和内切葡聚糖酶。淀粉酶可例如来自诸如曲霉属、木霉属、青霉属、芽孢杆菌属(例如枯草芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)、迟缓芽孢杆菌(B.lentus)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)、凝结芽孢杆菌(B.coagulans)和解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens))的物种。合适的真菌淀粉酶来源于曲霉属，诸如米曲霉(A.oryzae)和黑曲霉(A.niger)。蛋白酶可来自解淀粉芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌，以及曲霉属和木霉属物种。植酸酶、木聚糖酶、磷酸酶、蛋白酶、淀粉酶、酯酶、氧化还原酶、脂肪酶、转移酶、纤维素酶和β-葡聚糖酶是常用于添加到动物饲料中的酶。适于添加到家居护理应用所用片剂中的酶是相似的，尤其是蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、果胶酸裂合酶、甘露聚糖酶、半纤维素酶、氧化还原酶、过氧化物酶、转移酶和纤维素酶。在本发明教导内容的特别优选的方面，酶选自植酸酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、酯酶以及它们的混合物。在本发明的一个实施方案中，在颗粒中提供了两种酶，即木聚糖酶和β-葡聚糖酶。在本发明的另一个实施方案中，在颗粒中提供的两种酶为蛋白酶和淀粉酶。可将所述酶混合在一起，或单独施加至颗粒。在另一个实施方案中，在颗粒中提供了三种酶，即β-葡聚糖酶、木聚糖酶和植酸酶。上文列出的酶仅为举例说明，而并不意指是排他性的。任何酶均可用于本发明教导内容的颗粒中，包括细菌、真菌、酵母、植物、昆虫和动物来源的野生型酶、重组酶和变体酶，以及酸性酶、中性酶或碱性酶。本领域的技术人员应该认识到，所用酶的量将至少部分地取决于所选酶的类型和性质及其预期用途。

方法

BET比表面积测量。

为了测量芯粒子的比表面积，使用BET方法通过MicromeriticsASAP2420型快速孔隙度与表面积分析仪(AcceleratedPorosimetryandSurfaceAreaSystem)测定氪气吸附/脱附来评估芯的孔隙分布。BJH方法(ElliottP. Barrett,LeslieG.Joyner,PaulP.Halenda,J.Am.Chem.Soc.,1951,73(1)，pp373–380,DOI:10.1021/ja01145a126)(ElliottP.Barrett、LeslieG.Joyner和PaulP.Halenda，《美国化学会会志》，1951年，第73卷第1期，第373–380页，DOI：10.1021/ja01145a126)用于测定在范围内的孔体积分布。将质量为大约4-6克的样品在150℃温度下真空释气过夜，以移除吸附的水和/或挥发性污染物。对样品重新称重并转移至孔隙率计，置于真空下并冷却至77K，此时通过压力测量记录气体(Kr)吸附等温线。由Micromeritics所提供的ASAP2420V2.07J软件包自动计算表面积覆盖率。

包层比表面积计算。

包层比表面积代表等同的完全光滑球形粒子理想化样品的比表面积，该球形粒子的PSD与实际芯样品的PSD匹配。通过激光衍射(参考ISO13320-1:1999)，使用MalvernMastersizer2000并以己烷作为再循环回路的背景流体来测定芯的粒度分布(PSD)。添加足够质量的芯样品量以达到大约10％的激光遮蔽。使用米氏散射理论由衍射图自动计算PSD。就硫酸钠而言，粒子的复折射率取为1.468+0.01i，并且流体的折射率取为1.375。生成的PSD为微分质量分数，示出了在81个间距以对数增长的料斗的每一个中大小在0.01微米至10,000微米范围内的粒子的百分比。如有必要，应对PSD进行校正并再归一化以排除假像诸如粉尘细粒或团聚体，尤其是细于60微米或大于500微米的任何粒子。

每种尺寸的料斗的尺寸上限和尺寸下限的几何平均直径通过取尺寸上限和尺寸下限的乘积的平方根来计算。由6/(d*ρ)得出给定料斗的包层比表面积(以平方米/克计)，其中d为粒径(以cm计)，ρ为微粒固体的真密度(排除空隙后的密度)(以g/cm³计)。就硫酸钠而言，ρ＝2.664g/cm³。由于PSD为质量加权分布，因此通过将每种尺寸料斗的微分质量分数乘以相应尺寸料斗的比表面积，然后对所有尺寸料斗的值求和，从而计算总的包层表面积。

示例性实施方案

在一些实施方案中，本发明教导内容提供了一种颗粒组合物，其相比于含有非小型光滑芯的颗粒令人惊讶地具有等同的稳定性，从而可以节省材料成本。例如，本发明教导内容的颗粒组合物可具有令人惊讶的等同储存稳定性。所需的储存稳定性可存在于多种环境的任一种中，包括餐具洗涤剂、衣物洗涤剂、动物饲料、纺织物和人类食品。本发明教导内容的颗粒可在这些不同条件下表现出与同样储存的不含本发明教导内容的小型光滑芯粒子的颗粒相比改善的稳定性。在一些实施方案中，本发明教导内容据信提供了与含有更大和/或非光滑芯的颗粒相比改善的稳定性。

在一些实施方案中，本发明教导内容提供了与含有非小型光滑芯的颗粒相比具有等同的抗粉尘生成能力的颗粒组合物，如通过Heubach粉尘测试测得。

在一些实施方案中，本发明教导内容据信提供了与含有非小型光滑芯的颗粒相比具有改善的抗粉尘生成能力的颗粒组合物。

在一些实施方案中，本发明教导内容提供了与含有非小型光滑芯的颗粒相比具有等同的蒸汽造粒耐受能力的颗粒组合物。例如，可针对本发明教导内容的颗粒测定如上文所定义的“恢复的活性”的程度，并与含有与本发明教导内容的小型光滑芯粒子不同的芯但经过相同处理的颗粒进行比较。在一些实施方案中，本发明教导内容据信提供了与包含小型光滑芯的颗粒相比具有改善的蒸汽造粒耐受能力的颗粒组合物。

采用本发明教导内容的颗粒的另外的应用和方法在下文的非限制性部分中有所描述。

用于烘焙和食品制备的组合物和方法

本发明教导内容还涉及“食品组合物”，包括但不限于包含本发明的颗粒组合物的食物产品、动物饲料和/或食物/饲料添加剂，以及用于制备此类食品组合物的方法，或其用途，所述方法包括将本发明的颗粒组合物与一种或多种食品成分混合。

本发明的颗粒组合物可用于制备食品组合物，其中所述食品组合物在添加本发明的颗粒组合物后进行烘焙。如本文所用，术语“烘焙组合物”是指在提供烘焙食物产品的过程中制备的任何组合物和/或添加剂，包括但不限于高筋面粉、生面团、烘焙添加剂和/或烘焙产品。食品组合物或添加剂可为液体或固体。

如本文所用，术语“面粉”是指经碾磨或研磨的谷粒。术语“面粉”还可指已经过研磨或捣碎的西米或块茎产品。在一些实施方案中，面粉还可包含除经过碾磨或捣碎的谷类或植物物质之外的组分。另外的组分的例子为膨发剂，但该例子并非旨在限制。谷粒包括小麦、燕麦、黑麦和大麦。块茎产品包括木薯淀粉、木薯粉和蛋糊粉。术语“面粉”还包括细玉米粉、玉米面、粘米粉、全麦粉、自发面粉、木薯淀粉、木薯粉、米粉、强化面粉和蛋糊粉。

对于用于烘培和食品生产的商用和家用面粉，将面粉中的酶活性维持在适当水平很重要。活性水平过高可能会导致产品发粘和/或软稠，从而无法上市销售。酶活性不足的面粉可能不包含对于正常酵母功能足够的糖类，其导致面包或烘培产品过干或碎裂。因此，可将与一种或多种α-淀粉酶结合的本发明颗粒组合物添加到面粉中，增强面粉中内源酶的活性水平。

本发明颗粒组合物中的淀粉酶可单独添加，也可结合其他淀粉酶添加，用于避免或延迟烘焙产品老化(即内部组织硬化)。抗老化淀粉酶的量通常在每千克面粉0.01至10mg酶蛋白的范围内，如0.5mg/kg(干物质)。可使用的额外的抗老化淀粉酶包括内淀粉酶，如芽孢杆菌属产生的细菌内淀粉酶。这种额外的淀粉酶可以是例如芽孢杆菌属产生的另一种生麦芽糖α-淀粉酶(EC3.2.1.133)。是示例性的生麦芽糖α-淀粉酶，其由嗜热脂肪芽孢杆菌的NCIB11837菌株产生，在例如Christophersenetal.(1997)Starch50:39-45中有所描述。抗老化内淀粉酶的其他例子包括来源于芽孢杆菌属例如地衣芽孢杆菌或解淀粉芽孢杆菌的细菌α-淀粉酶。抗老化淀粉酶可以是外淀粉酶，比如β-淀粉酶，这种外淀粉酶例如源于植物，如大豆，或源于微生物，如芽孢杆菌属。

包含本发明颗粒组合物的烘焙组合物还可包含磷脂酶，或具有磷脂酶活性的酶。具有磷脂酶活性的酶的活性可用脂肪酶单位(LU)计量。磷脂酶可以具有A₁或A₂活性，故而能从磷脂移除脂肪酸，形成溶血磷脂。磷脂酶可能有或没有脂肪酶活性(即，对甘油三酯底物的活性)。通常情况下，使磷脂酶具有在30至90℃范围内，如30至70℃范围内的最适温度。添加的磷脂酶可能源于动物，例如源于胰腺(如牛或猪的胰腺)、蛇毒或蜂毒。或者，磷脂酶可能源于微生物，例如源于丝状真菌、酵母或细菌。

添加的磷脂酶量可改善面包在烘焙好后初期(尤其是在最初的24小时内)的柔软度。磷脂酶的量通常在每千克面粉0.01至10mg酶蛋白的范围内，如0.1至5mg/kg。也就是说，磷脂酶活性通常在每千克面粉20至1000LU的范围内，其中一个脂肪酶单位(LU)被定义为以阿拉伯树胶为乳化剂，三丁酸甘油酯为底物，在30℃和pH7.0的条件下，每分钟释出1μmol丁酸所需的酶量。

生面团的成分通常包括小麦粗粉或小麦面粉和/或其他类型的粗粉、面粉或淀粉，例如玉米粉、玉米淀粉、黑麦粗粉、黑麦面粉、燕麦面粉、燕麦粗粉、大豆粉、高粱粗粉、高粱面粉、马铃薯粗粉、马铃薯面粉或马铃薯淀粉。生面团可以是新鲜的、冷冻的或部分烘焙的。生面团可能是已发酵的生面团或准备发酵的生面团。生面团可以多种方式发酵，例如通过添加化学发酵剂如碳酸氢钠或通过添加发酵物(即发酵生面团)发酵。生面团还可通过添加适宜的酵母培养物如酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)(面包酵母)的培养物发酵，其中酿酒酵母如其市售菌株。

生面团还可含有其他常规的生面团成分，例如蛋白质，如奶粉、谷蛋白和大豆蛋白；蛋类(如全蛋、蛋黄或蛋清)；氧化剂，如抗坏血酸、溴酸钾、碘酸钾、偶氮二甲酰胺(ADA)或过硫酸铵；氨基酸，如L-半胱氨酸；糖；或盐，如氯化钠、乙酸钙、硫酸钠或硫酸钙。生面团还可包含脂肪(即甘油三酯)，如颗粒脂肪或起酥油。生面团还可包含乳化剂，如甘油单酯或甘油二酯、甘油单酯或甘油二酯的二乙酰酒石酸酯、脂肪酸的糖酯、脂肪酸的聚甘油酯、甘油单酯的乳酸酯、甘油单酯的乙酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯或溶血卵磷脂。例如，生面团可以在不添加乳化剂的情况下制作。

生面团产品可以是任何经处理的生面团产品，包括煎、炸、烤、烘培、蒸和煮过的生面团，如馒头和米糕。在一个实施方案中，食物产品为烘焙产品。典型的烘焙(烤过)产品包括面包，如长面包、面包卷、小圆面包、硬面包圈、比萨饼饼底等；面制糕点，如椒盐卷饼、玉米粉圆饼、蛋糕、曲奇饼、软饼、薄脆饼干等。

任选地，可将额外的酶连同抗老化淀粉酶和磷脂酶一起使用。额外的酶可以是第二种淀粉酶，如淀粉葡糖苷酶、β-淀粉酶、环糊精葡聚糖转移酶；也可以是肽酶(尤其是外肽酶)、转谷氨酰胺酶、脂肪酶、纤维素酶、木聚糖酶、蛋白酶、蛋白质二硫键异构酶(如WO95/00636中公开的蛋白质二硫键异构酶)，例如，糖基转移酶、分支酶(1,4-α-葡聚糖分支酶)、4-α-葡聚糖转移酶(糊精糖基转移酶)或氧化还原酶，如过氧化物酶、漆酶、葡萄糖氧化酶、吡喃糖氧化酶、脂氧合酶、L-氨基酸氧化酶或碳水化合物氧化酶。额外的酶可以源于任何生物，包括哺乳动物和植物，尤其可源于微生物(细菌、酵母或真菌)，而且可用本领域的常规技术获得。

木聚糖酶通常源于微生物，例如，源于细菌或真菌，如曲霉属的菌株。木聚糖酶例如包括和Novozym这两种木聚糖酶是由里氏木霉生产的木聚糖酶制剂，可商购获得。淀粉葡糖苷酶可以是黑曲霉产生的淀粉葡糖苷酶(如)。其他可用的淀粉酶产品包括A1000或A5000(GrindstedProducts,Denmark)，以及H或P(DSM)。葡萄糖氧化酶可以是真菌产生的葡萄糖氧化酶，尤其是黑曲霉产生的葡萄糖氧化酶(如)。示例性的蛋白酶包括

上述过程可用于由生面团制备的任何种类烘焙产品，所述烘焙产品可以是柔软的或松脆的，是白色、浅色或深色类型的。示例是面包，尤其是通常为长面包或面包卷形态的白色全麦或黑麦面包，例如但不限于法式长棍面包、口袋面包、玉米粉圆饼、蛋糕、薄烤饼、软饼、曲奇饼、馅饼皮、面包干、馒头、比萨饼等。

本发明的颗粒组合物可用于预混料中，该预混料除含有面粉外，还包含抗老化淀粉酶、磷脂酶和/或磷脂。该预混料可能还含有其他用于改善生面团和/或面包的性质的添加剂，例如上文提到的任一种添加剂(包括酶在内)。本发明的颗粒组合物可以是包含抗老化淀粉酶和磷脂酶的酶制剂的组分，用作烘焙添加剂。

可通过封装混合料的方式实现加载递送载体的存储、处理和掺入。这种封装混合料可含有本发明的颗粒组合物。然而，这种封装混合料还可应制造商或烘焙师的要求含有额外的成分。烘焙师在将本发明的颗粒组合物掺入生面团后，按照烘焙产品的正常制作流程完成后续操作。

我们构思了一种包含本发明颗粒组合物的食品组合物，这种食品组合物为油脂、肉类、猪油的组合物。由此而论，术语“[油脂/肉类/猪油]组合物”分别指以油脂、肉类或猪油为基础，由油脂、肉类或猪油制成，并且/或者含有油脂、肉类或猪油的任一种组合物。设想了一种制备包含本发明颗粒组合物的油脂或肉类或猪油组合物和/或添加剂的方法，包括将本发明的颗粒组合物与油脂/肉类/猪油组合物和/或添加剂成分混合起来。

这种食品组合物可以是包含本发明颗粒组合物的动物饲料组合物、动物饲料添加剂和/或宠物食品。还设想了一种制备这种动物饲料组合物、动物饲料添加剂组合物和/或宠物食品的方法，包括将本发明的颗粒组合物与一种或多种动物饲料成分和/或动物饲料添加剂成分和/或宠物食品成分混合起来。可以在制备动物饲料组合物和/或动物饲料添加剂组合物和/或宠物食品的过程中使用本发明的颗粒组合物。

术语“动物”包括所有非反刍动物和反刍动物。在具体实施方案中，动物为非反刍动物，例如马和单胃动物。单胃动物的例子包括但不限于猪(pig)和猪(swine)，如乳猪、生长猪、母猪；家禽，如火鸡、鸭子、小鸡、肉雏鸡、产卵鸡；鱼类，如鲑鱼、鳟鱼、罗非鱼、鲶鱼和鲤鱼；以及甲壳纲动物，如虾米和对虾。在另外的实施方案中，动物为反刍动物，包括但不限于牛、牛犊、山羊、绵羊、长颈鹿、北美野牛、驼鹿、麋鹿、牦牛、水牛、鹿、骆驼、羊驼、美洲驼、羚羊、叉角羚和蓝牛。

在本发明上下文中，应当理解，术语“宠物食品”是指供家养动物食用的食物，这些家养动物例如但不限于狗、猫、沙鼠、仓鼠、毛丝鼠、褐鼠、豚鼠；鸟类宠物，如金丝雀、长尾鹦鹉和鹦鹉；爬行类动物宠物，如龟、蜥蜴、蛇；以及水栖宠物，如热带鱼和蛙类动物。

术语“动物饲料组合物”、“饲料”和“秣料”可互换使用，并且可包含选自下列的一种或多种喂料：a)谷类，例如小粒谷类(如小麦、大麦、黑麦、燕麦和它们的组合)和/或大粒谷类，如玉蜀黍或高粱；b)谷类副产品，例如玉米面筋粉、干酒糟及其可溶物(DDGS)(尤其是玉米干酒糟及其可溶物(cDDGS))、麸皮、粉头、小麦次粉、米糠、稻壳、燕麦壳、棕榈仁和柑橘渣；c)源自例如以下物质的蛋白质：黄豆、向日葵、花生、羽扇豆、豌豆、蚕豆、棉花、卡诺拉油菜、鱼粉、干燥血浆蛋白粉、肉骨粉、土豆蛋白、乳清、干椰子肉、芝麻；d)从植物和动物来源获得的油脂和脂肪；e)矿物质和维生素。

使纺织物退浆的组合物及其用途

还设想了使用本发明的颗粒组合物处理织物(如，以使纺织物退浆)的组合物及方法。处理织物的方法是本领域众所周知的(参见例如美国专利No.6,077,316)。举例来说，可将织物与本发明颗粒组合物的溶液接触，以此方法改善织物的手感和外观。可在压力下用这种溶液处理织物。

本发明颗粒组合物可以在编织纺织物期间或编织出纺织物后、退浆阶段期间、或者一个或多个另外的布料处理步骤期间施加。在编织纺织物的过程中，织物的纱线要承受相当大的机械应力。在用纺织机编织前，通常把上浆淀粉或淀粉衍生物涂于经纱表面，提高经纱的抗拉强度，避免断裂。可以在编织期间或编织完成后施加本发明的颗粒组合物，以除去这些上浆淀粉或淀粉衍生物。如果在编织完成后施加本发明的颗粒组合物除去了上浆涂层，接着就可进一步处理织物，确保其具备均匀的质地和良好的耐水洗性。

本发明的颗粒组合物可单独使用，也可与其他退浆化学试剂和/或退浆酶一起使用(在这种情况下作为洗涤剂添加剂)，例如以水性组合物的形式使布料(包括含棉布料)退浆。本发明的颗粒组合物还可用于在靛蓝染色的牛仔布料及服装上产生石洗外观的组合物和方法中。就制作衣服来说，可能会先裁剪布料，将其缝制为衣服或服装，再整理这些衣服或服装。具体地讲，已开发出多种不同的酶整理方法来制作牛仔裤。整理牛仔服装通常以酶法退浆步骤开始，该步骤期间，在淀粉分解酶作用下服装的布料变得柔软，而且布料中的棉质在该步骤后，更容易接受后续酶整理步骤的处理。本发明的颗粒组合物可用于整理牛仔服装的方法(如“生物打磨工艺”、酶退浆方法、使布料变得柔软的方法和/或整理工艺。

清洁组合物

本发明的组合物及方法的一个方面是清洁组合物，其包括本发明的颗粒组合物作为组分。可将蛋白酶多肽或其他相关的酶用作洗涤剂组合物的组分，这些洗涤剂组合物用于洗手、洗衣、洗涤盘碟和清洁其他硬质表面。

优选地将本发明的颗粒组合物以洗涤剂中常用的淀粉酶浓度或以近似这种浓度的浓度掺入洗涤剂。例如，蛋白酶多肽的添加量可对应每升洗涤液/盘碟洗涤液添加0.00001至1mg(按纯的酶蛋白计)淀粉酶。本文提供了示例性的配方，例示如下：

蛋白酶多肽可以是洗涤剂组合物中仅有的酶组分；或者，洗涤剂组合物除蛋白酶多肽外，还包含其他酶(包括其他淀粉分解酶在内)。因此，洗涤剂组合物中包含的蛋白酶多肽可以是本发明颗粒组合物的形式。如果使用了蜡质包衣材料，那么这种材料的非限制性例子是平均分子量为1,000至20,000的聚环氧乙烷产品(聚乙二醇，PEG)；具有16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚；乙氧基化的脂肪醇，其中醇含12至20个碳原子，并且有15至80个环氧乙烷单元；脂肪醇；脂肪酸；和脂肪酸的甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯。适合于应用流化床技术的成膜包衣材料的例子列于例如GB1483591中。

洗涤剂组合物可包含一种或多种表面活性剂，每种表面活性剂可以是阴离子型、非离子型、阳离子型或两性离子型。洗涤剂一般含0％至约50％的阴离子型表面活性剂，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烷基硫酸盐(脂肪醇硫酸盐)(AS)、醇乙氧基硫酸盐(AEOS或AES)、仲烷基磺酸盐(SAS)、α-磺基脂肪酸甲酯、烷基或烯基琥珀酸，或者肥皂。洗涤剂组合物还可含0％至约40％的非离子型表面活性剂，例如醇乙氧基化物(AEO或AE)、羧基化醇乙氧基化物、壬基酚乙氧基化物、烷基多糖苷、烷基二甲基胺氧化物、乙氧基化脂肪酸单乙醇胺、脂肪酸单乙醇胺或多羟基烷基脂肪酸酰胺(例如WO92/06154中所述)。

洗涤剂组合物可额外包含一种或多种其他酶，例如任意组合的另一种蛋白酶、另一种淀粉分解酶、角质酶、脂肪酶、纤维素酶、果胶酸裂合酶、过水解酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、过氧化物酶和/或漆酶。

洗涤剂组合物可包含约1％至约65％的洗涤剂助剂或络合剂，例如沸石、二磷酸盐、三磷酸盐、膦酸盐、柠檬酸盐、次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTMPA)、烷基或烯基琥珀酸、可溶性硅酸盐或层状硅酸盐(如，Hoechst出品的SKS-6)。洗涤剂组合物也可以无需复配，也就是说，基本上不含洗涤剂助剂。可以在多种组合物中使用酶，尤其是淀粉酶，这些酶有无淀粉结合结构域均可；这些组合物包括用来洗衣、洗涤盘碟、清洁表面的组合物，和以淀粉或生物质为原料用来生产乙醇的组合物。

洗涤剂可包含一种或多种聚合物。例子包括羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)、聚羧酸酯(如聚丙烯酸酯)、马来酸/丙烯酸共聚物、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物。

洗涤剂组合物可包含漂白体系，该漂白体系可含有H₂O₂源如过硼酸盐或过碳酸盐，其可与形成过酸的漂白活化剂如四乙酰乙二胺(TAED)或壬酰氧基苯磺酸盐(NOBS)组合起效。或者，漂白体系可含有过氧酸(如酰胺、二酰亚胺或砜型的过氧酸)。漂白体系也可以是酶漂白体系，例如过水解酶，如国际PCT专利申请WO2005/056783中描述的那种过水解酶。

可用常规的稳定剂稳定洗涤剂组合物中的酶，这些稳定剂是例如多元醇，如丙二醇或甘油；糖或糖醇；乳酸；硼酸或硼酸衍生物，如芳香族硼酸酯；可按例如专利WO92/19709和WO92/19708中描述的方法配制组合物。

洗涤剂还可包含其他的常规洗涤剂成分，例如织物调理剂，包括粘土、泡沫促进剂、抑泡剂、耐腐蚀剂、污垢悬浮剂、抗污垢再沉淀剂、染料、杀菌剂、晦暗抑制剂、荧光增白剂或香料。

pH(在使用浓度的水溶液中测得)通常为中性或碱性，例如pH为约7.0至约11.0。

本发明的教导内容包括的洗涤剂组合物的具体形式将在下文详细描述。

重役型干燥/固体(HDD)衣物洗涤剂组合物

示例性的HDD衣物洗涤剂组合物包含去污表面活性剂，包括阴离子型去污表面活性剂(如直链、支链或无规链的，取代或未取代的烷基硫酸盐、烷基磺酸盐、烷基烷氧基化硫酸盐、烷基磷酸盐、烷基膦酸盐、烷基羧酸盐和/或这些物质的混合物)、非离子型去污表面活性剂(如直链、支链或无规链的，取代或未取代的C₈至C₁₈烷基乙氧基化物和/或C₆至C₁₂烷基酚烷氧基化物)、阳离子型去污表面活性剂(如烷基吡啶盐化合物、烷基季铵化合物、烷基季化合物、烷基叔锍化合物，以及这些物质的混合物)、两性离子型和/或两亲型去污表面活性剂(如链烷醇胺磺基甜菜碱)、两性表面活性剂、半极性非离子型表面活性剂以及这些表面活性剂的混合物；助剂，包括不含磷酸盐的助剂(例如沸石助剂，其例子包括沸石A、沸石X、沸石P和沸石MAP，含量在0重量％至小于10重量％的范围内)、磷酸盐助剂(例如三聚磷酸钠，含量在0重量％至小于10重量％的范围内)、柠檬酸、柠檬酸盐、次氮基三乙酸、硅酸盐(如硅酸钠、硅酸钾或偏硅酸钠，含量在0重量％至小于10重量％的范围内；或层状硅酸盐(SKS-6))；碳酸盐(如碳酸钠和/或碳酸氢钠，含量在0重量％至小于80重量％的范围内)；以及漂白剂，包括光致漂白剂(如磺化酞菁锌、磺化酞菁铝、氧杂蒽染料，和这些物质的混合物)、疏水性或亲水性漂白活化剂(如十二烷酰基羟苯磺酸盐、癸酰基羟苯磺酸盐、癸酰基邻羟苯甲酸或其盐、3,5,5-三甲基己酰基羟苯磺酸盐、四乙酰乙二胺(TAED)、壬酰基羟苯磺酸盐(NOBS)、腈季化物，和这些物质的混合物)、过氧化氢源(如无机过氧化氢合物盐，其例子包括过硼酸盐、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐或过硅酸盐的一水合钠盐或四水合钠盐)、预先形成的亲水性和/或疏水性过酸(如过羧酸及其盐、过碳酸及其盐、过亚胺酸及其盐、过氧单硫酸及其盐，和这些物质的混合物)和/或漂白催化剂(如亚胺漂白促进剂(其例子包括亚胺阳离子和聚离子)、亚胺两性离子、改性胺、改性氧化胺、N-磺酰亚胺、N-膦酰亚胺、N-酰亚胺、噻二唑二氧化物、全氟亚胺、环糖酮和这些物质的混合物；以及含金属的漂白催化剂(如铜、铁、钛、钌、钨、钼或锰阳离子，其连同辅助金属阳离子(如锌或铝)和螯合剂如乙二胺四乙酸、乙二胺四亚甲基膦酸及它们的水溶性盐)起效。

这种组合物优选地包含酶，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、胆碱氧化酶、过氧化物酶/氧化酶、果胶酸裂合酶、甘露聚糖酶、角质酶、漆酶、磷脂酶、溶血磷脂酶、酰基转移酶、过水解酶、芳基酯酶，和这些酶的任意混合物。

这种组合物可任选地包含额外的洗涤剂成分，包括香料微胶囊、用淀粉包封的谐香剂、调色剂、附加聚合物(包括维持织物完整性的聚合物和阳离子聚合物)、锁住染料的成分、织物软化剂、增白剂(例如C.I.荧光增白剂)、絮凝剂、螯合剂、烷氧基化聚胺、织物沉积助剂和/或环糊精。

自动盘碟洗涤(ADW)洗涤剂组合物

示例性的ADW洗涤剂组合物包含非离子型表面活性剂，其含量在0重量％至10重量％范围内，包括乙氧基化非离子型表面活性剂、醇烷氧基化表面活性剂、环氧封端的聚(烷氧基化)醇或氧化胺表面活性剂；助剂，其含量在5重量％至60重量％范围内，包括磷酸盐助剂(如，单磷酸盐、二磷酸盐、三聚磷酸盐、其他低聚多磷酸盐、三聚磷酸钠(STPP))和不含磷酸盐的助剂(如氨基酸型化合物，包括甲基甘氨酸二乙酰乙酸(MGDA)及其盐和衍生物、谷氨酸-N,N-二乙酰乙酸(GLDA)及其盐和衍生物、亚氨基二琥珀酸(IDS)及其盐和衍生物、羧甲基菊粉及其盐和衍生物、次氮基三乙酸(NTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、B-丙氨酸二乙酰乙酸(B-ADA)及其盐)；聚羧酸的均聚物和共聚物及其部分或完全中和的盐、聚羧酸和羟基羧酸的单体及其盐，其含量在0.5重量％至50重量％的范围内；磺化/羧酸化的聚合物，其含量在约0.1重量％至约50重量％的范围内，用于提供尺寸稳定性；助干剂，其含量在约0.1重量％至约10重量％的范围内(如聚酯，尤其是阴离子型聚酯，任选地连同具有3至6个官能度的另外的单体一起使用，这些官能度通常为酸、醇或酯官能度，有利于发生缩聚反应，形成聚碳酸酯-聚硅氧烷、聚氨酯-聚硅氧烷和/或聚脲-聚硅氧烷化合物或这些化合物的前体化合物，尤其是活性环状碳酸酯型和脲型前体化合物)；硅酸盐，其含量在约1重量％至约20重量％的范围内(包括硅酸钠或硅酸钾，例如二硅酸钠、偏硅酸钠、结晶层状硅酸盐)；无机漂白剂(例如过氧化氢合物盐，如过硼酸盐、过碳酸盐、过磷酸盐、过硫酸盐、过硅酸盐)和有机漂白剂(例如有机过氧酸，包括二酰基过氧化物和四酰基过氧化物，如二过氧基十二烷二元酸、二过氧基十四烷二元酸、二过氧基十六烷二元酸)；漂白活化剂(即有机过酸前体，其含量在约0.1重量％至约10重量％的范围内)；漂白催化剂(如三氮杂环壬烷锰及相关络合物，二吡啶基胺合Co、Cu、Mn和Fe及相关络合物，戊胺醋酸酯合钴(III)及相关络合物)；金属护理剂，其含量在约0.1重量％至5重量％的范围内(如苯并三唑，金属盐及其络合物，和/或硅酸盐)；酶，其含量在每克自动盘碟洗涤剂组合物约0.01至5.0mg活性酶的范围内(如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、胆碱氧化酶、过氧化物酶/氧化酶、果胶酸裂合酶、甘露聚糖酶、角质酶、漆酶、磷脂酶、溶血磷脂酶、酰基转移酶、水解酶、芳基酯酶，和这些酶的混合物)；以及酶稳定剂组分(如寡糖、多糖、无机二价金属盐)。

另外的洗涤剂组合物

下文在多个编号段落中描述了可向其中添加本发明颗粒组合物中的各种相关酶的另外的示例性洗涤剂配方。

1)一种被配制为颗粒料的洗涤剂组合物，其堆密度为至少600g/L，含约7％至约12％的直链烷基苯磺酸盐(按酸计)；约1％至约4％的醇乙氧基硫酸盐(如C_12-18醇，1至2个环氧乙烷(EO)单元)或烷基硫酸盐(如C_16-18烷基硫酸盐)；约5％至约9％的醇乙氧基化物(如C_14-15醇，7个EO单元)；约14％至约20％的碳酸钠(如Na₂CO₃)；约2％至约6％的可溶性硅酸盐(如Na₂O·2SiO₂)；约15％至约22％的沸石(如NaA1SiO₄)；0％至约6％的硫酸钠(如Na₂SO₄)；约0％至约15％的柠檬酸钠/柠檬酸(如C₆H₅Na₃O₇/C₆H₈O₇)；约11％至约18％的过硼酸钠(如NaBO₃H₂O)；约2％至约6％的TAED；0％至约2％的羧甲基纤维素(CMC)；0％至3％的聚合物(如马来酸/丙烯酸共聚物、PVP、PEG)；0.0001％至0.1％的酶蛋白(按纯酶计)；和0％至5％的微量成分(如抑泡剂、香料、荧光增白剂、光致漂白剂)。

2)一种被配制为颗粒料的洗涤剂组合物，其堆密度为至少600g/L，含约6％至约11％的直链烷基苯磺酸盐(按酸计)；约1％至约3％的醇乙氧基硫酸盐(如C_12-18醇，1至2个EO单元)或烷基硫酸盐(如C_16-18烷基硫酸盐)；约5％至约9％的醇乙氧基化物(如C_14-15醇，7个EO单元)；约15％至约21％的碳酸钠(如Na₂CO₃)；约1％至约4％的可溶性硅酸盐(如Na₂O·2SiO₂)；约24％至约34％的沸石(如NaA1SiO₄)；约4％至约10％的硫酸钠(如Na₂SO₄)；0％至约15％的柠檬酸钠/柠檬酸(如C₆H₅Na₃O₇/C₆H₈O₇)；0％至约2％的羧甲基纤维素(CMC)；1％至6％的聚合物(如马来酸/丙烯酸共聚物、PVP、PEG)；0.0001％至0.1％的酶(按纯酶蛋白计)；和0％至5％的微量成分(如抑泡剂、香料)。

3)一种被配制为颗粒料的洗涤剂组合物，其堆密度为至少600g/L，含约5％至约9％的直链烷基苯磺酸盐(按酸计)；约7％至约14％的醇乙氧基化物(如C_12-15醇，7个EO单元)；约1至约3％的脂肪酸肥皂(如C_16-22脂肪酸)；约10％至约17％的碳酸钠(Na₂CO₃)；约3％至约9％的可溶性硅酸盐(如Na₂O·2SiO₂)；约23％至约33％的沸石(NaA1SiO₄)；0％至约4％的硫酸钠(如Na₂SO₄)；约8％至约16％的过硼酸钠(如NaBO₃H₂O)；约2％至约8％的TAED；0％至约1％的膦酸盐(如EDTMPA)；0％至约2％的羧甲基纤维素(CMC)；0％至3％的聚合物(如马来酸/丙烯酸共聚物、PVP、PEG)；0.0001％至0.1％的酶(按纯酶蛋白计)；和0％至5％的微量成分(如抑泡剂、香料、荧光增白剂)。

4)一种被配制为颗粒料的洗涤剂组合物，其堆密度为至少600g/L，含约8％至约12％的直链烷基苯磺酸盐(按酸计)；约10％至约25％的醇乙氧基化物(如C_12-15醇，7个EO单元)；约14％至约22％的碳酸钠(Na₂CO₃)；约1％至约5％的可溶性硅酸盐(如Na₂O·2SiO₂)；约25％至约35％的沸石(如NaA1SiO₄)；0％至约10％的硫酸钠(如Na₂SO₄)；0％至约2％的羧甲基纤维素(CMC)；1％至3％的聚合物(如马来酸/丙烯酸共聚物、PVP、PEG)；0.0001％至0.1％的酶(按纯酶蛋白计)；和0％至5％的微量成分(如抑泡剂、香料)。

5)一种含水液体洗涤剂组合物，含约15％至约21％的直链烷基苯磺酸盐(按酸计)；约12％至约18％的醇乙氧基化物(如C_12-15醇，7个EO单元；或C_12-15醇，5个EO单元)；约3％至约13％的脂肪酸肥皂(如油酸)；0％至约13％的烯基琥珀酸(C_12-14烯基琥珀酸)；约8％至约18％的氨基乙醇；约2％至约8％的柠檬酸；0％至约3％的膦酸盐；0％至约3％的聚合物(如PVP、PEG)；0％至约2％的硼酸盐(如B₄O₇)；0％至约3％的乙醇；约8％至约14％的丙二醇；0.0001％至0.1％的酶(按纯酶蛋白计)；和0％至5％的微量成分(如分散剂、抑泡剂、香料、荧光增白剂)。

6)一种结构型含水液体洗涤剂组合物，含约15％至约21％的直链烷基苯磺酸盐(按酸计)；3％至9％的醇乙氧基化物(如C_12-15醇，7个EO单元；或C_12-15醇，5个EO单元)；约3％至约10％的脂肪酸肥皂(如油酸肥皂)；约14％至约22％的沸石(NaA1SiO₄)；约9％至约18％的柠檬酸钾；0％至约2％的硼酸盐(如B₄O₇)；0％至约2％的羧甲基纤维素(CMC)；0％至约3％的聚合物(如PEG、PVP)；0％至约3％的锚定聚合物(如甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物，摩尔比25:1，MW3800)；0％至约5％的甘油；0.0001％至0.1％的酶(按纯酶蛋白计)；和0％至5％的微量成分(如分散剂、抑泡剂、香料、荧光增白剂)。

7)一种被配制为颗粒料的洗涤剂组合物，其堆密度为至少600g/L，含约5％至约10％的脂肪醇硫酸盐；约3％至约9％的乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺；0％至3％的脂肪酸肥皂；约5％至约10％的碳酸钠(如Na₂CO₃)；约1％至约4％的可溶性硅酸盐(如Na₂O·2SiO₂)；约20％至约40％的沸石(如NaA1SiO₄)；约2％至约8％的硫酸钠(如Na₂SO₄)；约12％至约18％的过硼酸钠(如NaBO₃H₂O)；约2％至约7％的TAED；约1％至约5％的聚合物(如马来酸/丙烯酸共聚物、PEG)；0.0001至0.1％的酶(按纯酶蛋白计)；和0％至5％的微量成分(如荧光增白剂、抑泡剂、香料)。

8)一种被配制为颗粒料的洗涤剂组合物，含约8％至约14％的直链烷基苯磺酸盐(按酸计)；约5％至约11％的乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺；0％至约3％的脂肪酸肥皂；约4％至约10％的碳酸钠(如Na₂CO₃)；约1％至约4％的可溶性硅酸盐(Na₂O·2SiO₂)；约30％至约50％的沸石(如NaA1SiO₄)；约3％至约11％的硫酸钠(如Na₂SO₄)；约5％至约12％的柠檬酸钠(如C₆H₅Na₃O₇)；约1％至约5％的聚合物(如PVP、马来酸/丙烯酸共聚物、PEG)；0.0001％至0.1％的酶(按纯酶蛋白计)；和0％至5％的微量成分(如抑泡剂、香料)。

9)一种被配制为颗粒料的洗涤剂组合物，含约6％至约12％的直链烷基苯磺酸盐(按酸计)；约1％至约4％的非离子型表面活性剂；约2％至约6％的脂肪酸肥皂；约14％至约22％的碳酸钠(如Na₂CO₃)；约18％至约32％的沸石(如NaA1SiO₄)；约5％至约20％的硫酸钠(如Na₂SO₄)；约3％至约8％的柠檬酸钠(如C₆H₅Na₃O₇)；约4％至约9％的过硼酸钠(如NaBO₃H₂O)；约1％至约5％的漂白活化剂(如NOBS或TAED)；0％至约2％的羧甲基纤维素(CMC)；约1％至约5％的聚合物(如聚羧酸酯或PEG)；0.0001％至0.1％的酶(按纯酶蛋白计)；和0％至5％的微量成分(如荧光增白剂、香料)。

10)一种含水液体洗涤剂组合物，含约15％至约23％的直链烷基苯磺酸盐(按酸计)；约8％至约15％的醇乙氧基硫酸盐(如C_12-15醇，2至3个EO单元)；约3％至约9％的醇乙氧基化物(如C_{12- 15}醇，7个EO单元；或C_12-15醇，5个EO单元)；0％至约3％的脂肪酸肥皂(如月桂酸肥皂)；约1％至约5％的氨基乙醇；约5％至约10％的柠檬酸钠；约2％至约6％的助水溶物(如甲苯磺酸钠)；0％至约2％的硼酸盐(如B₄O₇)；0％至约1％的羧甲基纤维素；约1％至约3％的乙醇；约2％至约5％的丙二醇；0.0001％至0.1％的酶(按纯酶蛋白计)；和0％至5％的微量成分(如聚合物、分散剂、香料、荧光增白剂)。

11)一种含水液体洗涤剂组合物，含约20％至约32％的直链烷基苯磺酸盐(按酸计)；6％至12％的醇乙氧基化物(如C_12-15醇，7个EO单元；或C_12-15醇，5个EO单元)；约2％至约6％的氨基乙醇；约8％至约14％的柠檬酸；约1％至约3％的硼酸盐(如B₄O₇)；0％至约3％的聚合物(例如马来酸/丙烯酸共聚物，锚定聚合物如甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物)；约3％至约8％的甘油；0.0001％至0.1％的酶(按纯酶蛋白计)；和0％至5％的微量成分(如助水溶物、分散剂、香料、荧光增白剂)。

12)一种被配制为颗粒料的洗涤剂组合物，其堆密度为至少600g/L，含约25％至约40％的阴离子型表面活性剂(直链烷基苯磺酸盐、烷基硫酸盐、α-烯烃磺酸盐、α-磺基脂肪酸甲酯、链烷磺酸盐、肥皂)；约1％至约10％的非离子型表面活性剂(如醇乙氧基化物)；约8％至约25％的碳酸钠(如Na₂CO₃)；约5％至约15％的可溶性硅酸盐(如Na₂O·2SiO₂)；0％至约5％的硫酸钠(如Na₂SO₄)；约15％至约28％的沸石(NaA1SiO₄)；0％至约20％的过硼酸钠(如NaBO₃4H₂O)；约0％至约5％的漂白活化剂(TAED或NOBS)；0.0001％至0.1％的酶(按纯酶蛋白计)；和0％至3％的微量成分(如香料、荧光增白剂)。

13)如上文的第1)至第12)所描述的洗涤剂组合物，其中所有或部分的直链烷基苯磺酸盐被(C₁₂-C₁₈)烷基硫酸盐替代。

14)一种被配制为颗粒料的洗涤剂组合物，其堆密度为至少600g/L，含约9％至约15％的(C₁₂-C₁₈)烷基硫酸盐；约3％至约6％的醇乙氧基化物；约1％至约5％的多羟基烷基脂肪酸酰胺；约10％至约20％的沸石(如NaA1SiO₄)；约10％至约20％的层状二硅酸盐(如Hoechst出品的SK56)；约3％至约12％的碳酸钠(如Na₂CO₃)；0％至约6％的可溶性硅酸盐(如Na₂O·2SiO₂)；约4％至约8％的柠檬酸钠；约13％至约22％的过碳酸钠；约3％至约8％的TAED；0％至约5％的聚合物(如聚羧酸酯和PVP)；0.0001％至0.1％的酶(按纯酶蛋白计)；和0％至5％的微量成分(如荧光增白剂、光致漂白剂、香料、抑泡剂)。

15)一种被配制为颗粒料的洗涤剂组合物，其堆密度为至少600g/L，含约4％至约8％的(C₁₂-C₁₈)烷基硫酸盐；约11％至约15％的醇乙氧基化物；约1％至约4％的肥皂；约35％至约45％的沸石MAP或沸石A；约2％至约8％的碳酸钠(Na₂CO₃)；0％至约4％的可溶性硅酸盐(如Na₂O·2SiO₂)；约13％至约22％的过碳酸钠；1％至8％的TAED；0％至约3％的羧甲基纤维素(CMC)；0％至约3％的聚合物(如聚羧酸酯和PVP)；0.0001％至0.1％的酶(按纯酶蛋白计)；和0％至3％的微量成分(如荧光增白剂、膦酸盐、香料)。

16)如上文的第1)至第15)项中所描述的洗涤剂配方，含稳定的或包封的过酸，这种过酸为附加组分，或为之前规定的漂白体系的替代物。

17)如上文的第1)、3)、7)、9)和第12)项中所描述的洗涤剂组合物，其中过硼酸盐被过碳酸盐替代。

18)如上文的第1)、3)、7)、9)、12)、14)和第15)项中所描述的洗涤剂组合物，其额外含有锰催化剂。锰催化剂例如为“Efficientmanganesecatalystsforlow-temperaturebleaching”Nature369:637-639(1994)(“用于低温漂白的高效锰催化剂”，《自然》，第369卷，第637-639页，1994年)中描述的一种化合物。

19)一种被配制为非水性洗涤剂液体的洗涤剂组合物，含液体非离子型表面活性剂(如直链烷氧基化伯醇)、助剂体系(如磷酸盐)、一种或多种酶，和碱。洗涤剂还可包含阴离子型表面活性剂和/或漂白体系。

如上所述，可将本发明的酶以洗涤剂中常用的浓度掺入。目前设想的是，洗涤剂组合物中添加的酶量可对应每升洗涤液添加0.00001至1.0mg酶多肽(按纯酶蛋白计)。

洗涤剂组合物还可包含其他常规的洗涤剂成分，如抗絮凝剂、填充材料、泡沫抑制剂、耐腐蚀剂、污垢悬浮剂、螯合剂、抗污垢再沉淀剂、脱水剂、染料、杀菌剂、荧光剂、增稠剂和香料。

洗涤剂组合物可被配制为手洗(手动)或机洗(自动)衣物洗涤剂组合物，包括适用于预处理脏污织物的洗衣添加剂组合物和漂洗附加织物软化剂组合物；或被配制为用于普通家庭硬质表面清洁操作的洗涤剂组合物；或被配制用于手动或自动盘碟操作。

本文描述的任一种清洁组合物都可包含任意多种额外的酶。一般来讲，上述一种或多种酶应当与选择的洗涤剂相容(如相对于最佳pH，与其他酶成分和非酶成分等相容)，而且这些酶应当以有效量添加。提供下列酶作为示例。

蛋白酶：合适的蛋白酶包括源于动物、植物或微生物的蛋白酶。化学改性突变体或蛋白质工程突变体以及天然加工的蛋白质也包括在内。蛋白酶可为丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶、碱性微生物蛋白酶、胰蛋白酶样蛋白酶或糜蛋白酶样蛋白酶。碱性蛋白酶的例子是枯草杆菌蛋白酶，例如来源于芽孢杆菌属的那些，如枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168(参见例如WO89/06279)。胰蛋白酶样蛋白酶的例子是胰蛋白酶(例如源于猪或牛的胰蛋白酶)和镰孢属蛋白酶(参见例如，WO89/06270和WO94/25583)。可用的蛋白酶的例子还包括但不限于WO92/19729、WO98/20115、WO98/20116和WO98/34946中所述的变体。可商购获得的蛋白酶包括但不限于：PRIMASE^TM、DURALASE^TM、KANNASE^TM和BLAZE^TM(NovoNordiskA/S和NovozymesA/S)；MAXACAL^TM、MAXAPEM^TM、PURAFECTOXP^TM、FN2^TM和FN3^TM(DaniscoUSInc.)。其他示例性蛋白酶包括源自解淀粉芽孢杆菌的NprE和源自纤维单胞菌属菌株69B4的ASP。

脂肪酶：合适的脂肪酶包括源于细菌或真菌的脂肪酶。包括化学改性的突变体、蛋白水解改性的突变体或蛋白质工程突变体。可用的脂肪酶的例子包括但不限于来源于腐质霉属(同义词嗜热真菌属(Thermomyces))的脂肪酶，例如来源于疏棉状腐质霉(H.lanuginosa)(疏棉状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus))(参见例如，EP258068和EP305216)、来源于特异腐质霉(H.insolens)(参见例如，WO96/13580)的脂肪酶；假单胞菌属(Pseudomonas)脂肪酶，例如，来源于产碱假单胞菌(P.alcaligenes)或类产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)(参见例如，EP218272)、洋葱假单胞菌(P.cepacia)(参见例如，EP331376)、施氏假单孢菌(P.stutzeri)(参见例如，GB1,372,034)、荧光假单胞菌(P.fluorescens)、假单胞菌属菌株SD705(参见例如，WO95/06720和WO96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(参见例如，WO96/12012)的脂肪酶；芽孢杆菌属脂肪酶，例如来源于枯草芽孢杆菌(参见例如，Dartoisetal.BiochemicaetBiophysicaActa,1131:253-360(1993)(Dartois等人，《生物化学与生物物理学报》，第1131卷，第253-360页，1993年))、嗜热脂肪芽孢杆菌(参见例如，JP64/744992)或短小芽孢杆菌(参见例如，WO91/16422)的脂肪酶。设想用于制剂中的额外的脂肪酶变体包括例如WO92/05249、WO94/01541、WO95/35381、WO96/00292、WO95/30744、WO94/25578、WO95/14783、WO95/22615、WO97/04079、WO97/07202、EP407225和EP260105中所述的那些。一些可商购获得的脂肪酶包括和LIPOLASEULTRA^TM(NovoNordiskA/S和NovozymesA/S)。

聚酯酶：组合物中可包含合适的聚酯酶，例如WO01/34899、WO01/14629和US6933140中所述的那些。

淀粉酶：该组合物可与淀粉酶混合，例如不能提高产量的淀粉酶。所述淀粉酶可包括可商购获得的淀粉酶，例如但不限于 和BAN^TM(NovoNordiskA/S和NovozymesA/S)；和(得自DaniscoUSInc.)。

纤维素酶：可将纤维素酶添加到组合物中。合适的纤维素酶包括源于细菌或真菌的纤维素酶。还包括化学改性的突变体或蛋白质工程突变体。合适的纤维素酶包括来源于芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、草根霉属(Thielavia)、支顶孢属(Acremonium)的纤维素酶，例如，由例如美国专利No.4,435,307、No.5,648,263、No.5,691,178、No.5,776,757和WO89/09259中所公开的特异腐质霉(Humicolainsolens)、嗜热毁丝霉(Myceliophthorathermophila)和尖孢镰刀菌产生的真菌纤维素酶。设想使用的示例性纤维素酶是对纺织物具有颜色护理有益效果的纤维素酶。此类纤维素酶的例子为例如EP0495257、EP0531372、WO96/11262、WO96/29397和WO98/08940中所述的纤维素酶。其他例子为纤维素酶变体，例如WO94/07998、WO98/12307、WO95/24471、PCT/DK98/00299、EP531315、美国专利No.5,457,046、No.5,686,593和No.5,763,254中所述的那些。可商购获得的纤维素酶包括和(NovoNordiskA/S和NovozymesA/S)；(DaniscoUSInc.)；以及KAC-500(B)^TM(KaoCorporation)。

过氧化物酶/氧化酶：设想用于组合物中的合适的过氧化物酶/氧化酶包括源于植物、细菌或真菌的那些。包括化学改性的突变体或蛋白质工程突变体。可用的过氧化物酶的例子包括WO93/24618、WO95/10602和WO98/15257中所述的来源于鬼伞属(Coprinus)，例如来源于灰盖鬼伞(C.cinereus)的过氧化物酶，及其变体。可商购获得的过氧化物酶包括例如GUARDZYME^TM(NovoNordiskA/S和NovozymesA/S)。

洗涤剂组合物还可包含2,6-β-D-果聚糖水解酶，该酶可有效去除/清洁家居和/或工业纺织物/衣物上存在的生物膜。

可通过添加含有一种或多种酶的单独添加剂，或通过添加含有所有这些酶的混合添加剂，将洗涤剂酶包含于洗涤剂组合物中。洗涤剂添加剂，即单独添加剂或混合添加剂可被配制为例如颗粒料、液体、浆料等。示例性洗涤剂添加剂制剂包括但不限于颗粒料(具体地讲是非粉尘颗粒)、液体(具体地讲是稳定的液体)或浆料。

还可制成低粉尘颗粒料，并添加本发明的颗粒组合物，例如美国专利No.4,106,991和No.4,661,452中所述，并且可任选地使用本领域已知的方法对其进行包衣。蜡质包衣材料的例子是聚环氧乙烷产品(例如，聚乙二醇，PEG)，平均摩尔重量为1,000至20,000；具有16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚；乙氧基化脂肪醇，其中醇含有12至20个碳原子，并且其中有15至80个环氧乙烷单元；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯。适合于应用流化床技术的成膜包衣材料的例子列于例如GB1483591中。例如，可根据已建立的方法，通过添加多元醇例如丙二醇、糖或糖醇、乳酸或硼酸使液体酶制品稳定化。

洗涤剂组合物可为任意便利的形式，例如，棒状、片剂、粉末、颗粒、糊剂或液体。液体洗涤剂可为水性的，通常含有最多约70％的水和0％至约30％的有机溶剂。也可以设想含有约30％或更少的水的致密洗涤剂凝胶。洗涤剂组合物可以任选地包含一种或多种表面活性剂，该表面活性剂可为非离子型，包括半极性和/或阴离子型和/或阳离子型和/或两性离子型。表面活性剂可以约0.1重量％至约60重量％的宽范围存在。

当包含在其中时，洗涤剂将一般含约1％至约40％的阴离子型表面活性剂，例如直链烷基苯磺酸盐、α-烯烃磺酸盐、烷基硫酸盐(脂肪醇硫酸盐)、醇乙氧基硫酸盐、仲链烷磺酸盐、α-磺基脂肪酸甲酯、烷基或烯基琥珀酸，或者肥皂。

当包含在其中时，洗涤剂将一般含约0.2％至约40％的非离子型表面活性剂，例如醇乙氧基化物、壬基酚乙氧基化物、烷基多苷、烷基二甲基胺氧化物、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺、脂肪酸单乙醇酰胺、多羟基烷基脂肪酸酰胺或葡糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(“葡糖酰胺”)。

洗涤剂组合物可包含0％至约65％的洗涤剂助剂或络合剂，例如沸石、二磷酸盐、三磷酸盐、膦酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、次氮基三乙酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸、烷基或烯基琥珀酸、可溶性硅酸盐或层状硅酸盐(如，Hoechst出品的SKS-6)。

洗涤剂可包含一种或多种聚合物。示例性聚合物包括羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)、聚(乙烯基吡啶-N-氧化物)、聚(乙烯基咪唑)、聚羧酸酯如聚丙烯酸酯、马来酸/丙烯酸共聚物，以及甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物。

可用常规的稳定剂稳定洗涤剂组合物中的酶，这些稳定剂为例如多元醇(如丙二醇或甘油)；糖或糖醇；乳酸；硼酸或硼酸衍生物(如芳族硼酸酯)；或苯基硼酸衍生物(如4-甲酰基苯基硼酸)。该组合物可根据WO92/19709和WO92/19708所述方法进行配制。

预期在含酶的洗涤剂组合物中，可按照以下相应量加入：每升洗涤液体中加入约0.01至约100mg酶蛋白(例如，每升洗涤液体中加入约0.05至约5.0mg酶蛋白，或者每升洗涤液体中加入0.1至约1.0mg酶蛋白)。

尽管本发明的组合物和方法结合以下详细信息进行了描述，但应当理解，可对其作出各种修改。

许多酶清洁测定法是本领域已知的，包括样本和微型样本测定。

酿造组合物

本发明的颗粒组合物可以是在提供发酵饮料(如啤酒)的工艺中使用的酿造组合物的组分。据信，不可发酵碳水化合物形成最终啤酒中的大部分溶解固体。这一残余的保留是因为麦芽淀粉酶不能水解淀粉的α-1,6键。不可发酵碳水化合物为每12盎司(约340克)啤酒贡献约50卡路里。本发明的颗粒组合物通常与葡糖淀粉酶和任选的支链淀粉酶和/或异淀粉酶结合，有助于将淀粉转换为糊精和可发酵糖，减少最终啤酒中的残余不可发酵碳水化合物。

制作这些饮料所用的主要原料是水、啤酒花和麦芽。此外，但排他性地，诸如普通玉米糁、精制玉米糁、啤酒碾磨酵母、水稻、高粱、精制玉米淀粉、大麦、大麦淀粉、脱壳大麦、小麦、小麦淀粉、烘烤谷物、谷类薄片、黑麦、燕麦、马铃薯、木薯淀粉和糖浆，如玉米糖浆、甘蔗糖浆、转化糖浆、大麦和/或小麦糖浆等附属物可以用作淀粉的来源。

由于一些原因，主要由所选大麦品种制成的麦芽对于啤酒的整体性质和质量起重要作用。第一，麦芽是啤酒的主要调味剂。第二，麦芽提供绝大部分的可发酵糖。第三，麦芽提供蛋白质，可影响啤酒的酒体和泡沫特性。第四，麦芽在淀粉糖化过程中提供必要的酶活性。啤酒花也对啤酒质量，包括口味有显著影响。具体地讲，啤酒花(或啤酒花组分)向啤酒中添加所需的苦味物质。此外，啤酒花可作为蛋白质沉淀剂，形成防腐剂并有助于泡沫的形成和稳定。

谷物(谷粒)如大麦、燕麦、小麦，以及玉米和水稻通常用于工业和家庭酿造，此外通常还添加其他植物组分，例如啤酒花。酿造中使用的组分可以是未发芽的，也可以是发芽的，即部分萌发的，从而导致酶的水平增加，包括α-淀粉酶。为实现成功酿造，需要足够的α-淀粉酶酶活水平，以确保有适当水平的糖用于发酵。还可将本发明的颗粒组合物添加到用于酿造的组分中。

如本文所用，术语“原料”是指被压碎或破碎的谷物和植物组分。例如，在啤酒生产中所用的大麦是已被粗磨或破碎的颗粒，以得到适用于制备发酵用醪的稠度。如本文所用，术语“原料”包括任何上述类型的被粉碎或粗磨形式的植物和谷物。本文所述的方法可用于测定面粉和原料中的α-淀粉酶活性水平。

制备啤酒的工艺是本领域所熟知的。参见例如，WolfgangKunze(2004)“TechnologyBrewingandMalting,”ResearchandTeachingInstituteofBrewing,Berlin(VLB),3rdedition(WolfgangKunze，2004年，“麦芽制作及酿造技术”，柏林啤酒酿造学院(VLB)，第三版)。简而言之，该工艺涉及：(a)制备醪，(b)过滤醪以制备麦芽汁，并且(c)发酵麦芽汁以获得发酵饮料，例如啤酒。通常，将碾磨或粉碎的麦芽、麦芽和助剂、或助剂与水混合并在可控温度下保持一段时间，使得麦芽和/或助剂中存在的酶将麦芽中存在的淀粉转化为可发酵糖。然后将醪转移到醪过滤器中，将液体与谷物残余分离。这一甜液体被称为“麦芽汁”，剩余的谷物残余被称为“酒糟”。通常要对醪进行提取，其涉及向醪中加水以回收酒糟中残余的可溶性提取物。然后将麦芽汁充分煮沸，以对麦芽汁灭菌并帮助调节颜色、口味和气味。在煮沸过程中的某一时刻加入啤酒花。待麦芽汁冷却后，将其转移到发酵罐中。

然后麦芽汁在发酵罐中与酵母接触。发酵罐可以冷却以停止发酵。除去可能絮凝的酵母。最终，将啤酒冷却并保存一段时间，在这段时间内啤酒变得澄清，其口味形成，并且将可能损害啤酒外观、口味和保质期的任何材料沉淀出来。啤酒通常含有约2％至约10％v/v的酒精，但也可获得酒精含量较高的啤酒，例如18％v/v。包装之前，将啤酒充碳酸气并任选地进行过滤和巴氏灭菌。

对于通常但不是必须地与一种或多种外源酶(例如葡糖淀粉酶、支链淀粉酶和/或异淀粉酶以及它们的任意组合)结合的包含α-淀粉酶的酿造组合物，可将其添加到上面步骤(a)(即在醪的制备过程中)的醪中。作为另外一种选择或除此之外，可将酿造组合物添加到上面步骤(b)(例如在过滤醪的过程中)的醪中。作为另外一种选择或除此之外，可将酿造组合物添加到上面步骤(c)(例如在发酵麦芽汁的过程中)的麦芽汁中。

具体实施方案涉及任何上述用途、方法或发酵饮料，其中所述发酵饮料是啤酒，例如全麦芽啤酒、“纯净法”酿造的啤酒、麦芽酒、印度淡啤酒、贮藏啤酒、苦啤酒、发泡酒(第二啤酒)、第三啤酒、干啤酒、淡啤酒、淡爽型啤酒、低醇啤酒、低热量啤酒、黑啤酒、博克啤酒、烈性啤酒、麦芽烈啤酒、无醇啤酒、无醇麦芽酒等等，以及其他谷类和麦芽饮料，例如水果味麦芽饮料，如柑橘味、如柠檬味、橙味、酸橙味或浆果味麦芽饮料，酒味麦芽饮料，如伏特加、朗姆或龙舌兰味麦芽饮料，或咖啡味麦芽饮料，如咖啡因味麦芽酒，等等。

其他动物饲料实施方案

在一些实施方案中，特别是在动物饲料应用的背景中，本发明教导内容的颗粒可与下列酶中的至少一种共同使用：

木聚糖酶

淀粉酶

蛋白酶

植酸酶

纤维素酶

其他

仅举例来说，鸡(如肉鸡)的饲料在例如下表给出的阶段％中可由下表列出的一种或多种成分组成：

成分	育雏(％)	育成(％)
			玉米	46.2	46.7
麦麸	6.7	10.0
			玉米DDGS	7.0	7.0
豆粕48％CP	32.8	26.2
			动物/植物脂肪共混物	3.0	5.8
L-赖氨酸HCl	0.3	0.3
			消旋甲硫氨酸	0.3	0.3
L-苏氨酸	0.1	0.1
			盐类	0.3	0.4
石灰石	1.1	1.1
			磷酸二钙	1.2	1.2
家禽维生素和微量矿物质	0.3	0.3

仅举例来说，鸡(如肉鸡)的饮食标准可如下表所示：

饮食标准
			粗蛋白(％)	23.00	20.40
家禽代谢能(kcal/kg)	2950	3100
			钙(％)	0.85	0.85
有效磷(％)	0.38	0.38
			钠(％)	0.18	0.19
可消化赖氨酸(％)	1.21	1.07
			可消化甲硫氨酸(％)	0.62	0.57
可消化甲硫氨酸+半胱氨酸(％)	0.86	0.78
			可消化苏氨酸(％)	0.76	0.68

仅举例来说，蛋鸡的饲料在例如下表给出的阶段％中可由下表列出的一种或多种成分组成：

仅举例来说，蛋鸡的饮食标准可如下表所示：

饮食标准
		粗蛋白(％)	16.10
家禽代谢能(kcal/kg)	2700
		赖氨酸(％)	0.85
甲硫氨酸(％)	0.42
		甲硫氨酸+半胱氨酸(％)	0.71
苏氨酸(％)	0.60
		钙(％)	3.85
有效磷(％)	0.42
		钠(％)	0.16

仅举例来说，火鸡的饲料在例如下表给出的阶段％中可由下表列出的一种或多种成分组成：

成分	阶段1(％)	阶段2(％)	阶段3(％)	阶段4(％)
					小麦	33.6	42.3	52.4	61.6
玉米DDGS	7.0	7.0	7.0	7.0
					豆粕48％CP	44.6	36.6	27.2	19.2
菜籽粕	4.0	4.0	4.0	4.0
					大豆油	4.4	4.2	3.9	3.6
L-赖氨酸HCl	0.5	0.5	0.4	0.4
					消旋甲硫氨酸	0.4	0.4	0.3	0.2
L-苏氨酸	0.2	0.2	0.1	0.1
					盐	0.3	0.3	0.3	0.3
石灰石	1.0	1.1	1.1	1.0
					磷酸二钙	3.5	3.0	2.7	2.0
家禽维生素和微量矿物质	0.4	0.4	0.4	0.4

仅举例来说，火鸡的饮食标准可如下表所示：

饮食标准
					粗蛋白(％)	29.35	26.37	22.93	20.00
家禽代谢能(kcal/kg)	2.850	2.900	2.950	3.001
					钙(％)	1.43	1.33	1.22	1.02
有效磷(％)	0.80	0.71	0.65	0.53
					钠(％)	0.16	0.17	0.17	0.17
可消化赖氨酸(％)	1.77	1.53	1.27	1.04
					可消化甲硫氨酸(％)	0.79	0.71	0.62	0.48
可消化甲硫氨酸+半胱氨酸(％)	1.12	1.02	0.90	0.74
					可消化苏氨酸(％)	1.03	0.89	0.73	0.59

仅举例来说，仔猪的饲料在例如下表给出的阶段％中可由下表列出的一种或多种成分组成：

成分	阶段1(％)	阶段2(％)
			玉米	20.0	7.0
小麦	25.9	46.6
			黑麦	4.0	10.0
麦麸	4.0	4.0
			玉米DDGS	6.0	8.0
豆粕48％CP	25.7	19.9
			乳清粉	10.0	0.0
大豆油	1.0	0.7
			L-赖氨酸HCl	0.4	0.5
消旋甲硫氨酸	0.2	0.2
			L-苏氨酸	0.1	0.2
L-色氨酸	0.03	0.04
			石灰石	0.6	0.7
磷酸二钙	1.6	1.6
			猪维生素和微量矿物质	0.2	0.2
盐	0.2	0.4

仅举例来说，仔猪的饮食标准可如下表所示：

仅举例来说，生长猪/育肥猪的饲料在例如下表给出的阶段％中可由下表列出的一种或多种成分组成：

成分	生长/育肥(％)
		玉米	27.5
豆粕48％CP	15.4
		玉米DDGS	20.0
麦麸	11.1
		米糠	12.0
卡诺拉油菜菜粕	10.0
		石灰石	1.6
磷酸二钙	0.01
		盐	0.4
猪维生素和微量矿物质	0.3
		赖氨酸-HCl	0.2
植物油	0.5

仅举例来说，生长猪/育肥猪的饮食标准可如下表所示：

饮食标准
		粗蛋白(％)	22.60
猪代谢能(kcal/kg)	3030
		钙(％)	0.75
有效磷(％)	0.29
		可消化赖氨酸(％)	1.01
可消化甲硫氨酸+半胱氨酸(％)	0.73
		可消化苏氨酸(％)	0.66

定量给料

可将根据本发明所述的饲料添加剂组合物设计为单次给料，还可将其设计为每天给料。

结合本发明使用的组合物(以及其中的各组分)的最佳量将取决于待处理产品和/或产品与组合物接触的方法和/或其预期用途。

组合物中使用的酶的量应该是足够量的，这样才能有效并充分高效保持对包含所述组合物的动物饲料产品的性能改善。这一有效性时长应该延长到至少利用产品(例如饲料添加剂组合物或包含它的饲料)之时的时间。

在饲料应用中与其他组分结合

本文所述的酶可与其他组分结合使用。

该组分可为益生元。益生元通常为非消化性碳水化合物(寡糖或多糖)或在上消化道内不会降解或吸收的糖醇。商业产品中所用的和根据本发明可用的已知益生元包括菊粉(低聚果糖或FOS)和反式低聚半乳糖(GOS或TOS)。合适的益生元包括低聚异麦芽酮糖、大豆低聚糖、藻酸盐、黄原胶、果胶、刺槐豆胶(LBG)、菊粉、瓜尔豆胶、低聚半乳糖(GOS)、低聚果糖(FOS)、不可降解的淀粉、乳蔗糖、乳果糖、乳糖醇、麦芽糖醇、麦芽糖糊精、聚右旋糖(即)、乳糖醇、低聚乳果糖、大豆低聚糖、异麦芽酮糖、异麦芽低聚糖、低聚葡萄糖和低聚木糖。

益生元可与根据本发明的饲料添加剂组合物(或其组分)同时施用(例如与其混合到一起或者通过相同或不同途径同时递送)，也可以与其按照顺序递送(例如通过相同或不同途径)。

本发明的组合的其他组分包括聚右旋糖(如)和/或麦芽糖糊精和/或乳糖醇。可将这些其他组分任选地添加至饲料添加剂组合物中，以协助干燥过程。

其他合适的组分的另外例子包括下列中的一个或多个：增稠剂、胶凝剂、乳化剂、粘合剂、晶体改性剂、甜味剂(包括人工甜味剂)、流变改性剂、稳定剂、抗氧化剂、染料、酶、载体、运载体、赋形剂、稀释剂、润滑剂、调味剂、着色物质、助悬剂、崩解剂、制粒粘合剂等。这些其他组分可以是天然的。这些其他组分可通过使用化学和/或酶技术进行制备。

在一个优选的实施方案中，本发明使用的酶可与一种或多种脂质结合使用。

例如，本发明使用的酶可与一种或多种脂质微团结合使用。该脂质微团可为简单脂质微团或复杂脂质微团。

该脂质微团可能是两亲性物质的定向分子的聚集体，例如脂质和/或油。

本发明的教导内容另外还提供了一种增加受试者(即家禽或猪)体重的方法，包括将包含根据本发明的饲料添加剂组合物的饲料喂养给所述受试者。

通过结合下面的实施例，可进一步理解本发明，这些实施例通过举例说明的方式提供，并不意在限制。

实施例：

实施例1

硫酸钠芯的粒度分布和光滑度指数

从以下两个供应商处获得了七种无水结晶硫酸钠芯粒子样品：MineradeSantaMarta(Villarubio,Spain)和Saltex(ForthWorth,Texas)。

使用MalvernMastersizer2000激光衍射粒度分析仪通过激光散射得出样品的粒度分布。使用“方法”部分所述的算法以及无水硫酸钠的真实密度(2.664g/cm³)，计算这些粒度分布的包层比表面积。使用“方法”部分所述的MicromeriticsASAP2420型快速孔隙度与表面积分析仪测定BET比表面积。计算这两个比表面积的比值，得到每个样品的光滑度指数。两批芯的代表性图像如图1所示。

表1：

实施例2

使用硫酸钠芯制备洗涤剂酶颗粒样品

将购自MineradeSantaMarta(实施例1的表1中的MSM批号3)的79.8kg硫酸钠芯装入150kg批次大小的中试规模流化床涂布机中。通过光散射，这些芯的质量中位直径(D₅₀)为258微米，D10为182微米，D90为358微米；通过筛分，D₅₀为210微米。基于这一点，MSM批号3的PSDI为362/182＝1.99。

根据实施例1的表1，MSM批号3芯的光滑度指数为1.1，与完全光滑的粒子的光滑度指数1.0非常接近。芯的光学显微镜照片和扫描电子显微镜照片如图1所示。在同一图中可以看出，这些芯比购自Saltex的芯的对比样品更为光滑。表1示出了Saltex批号1的光滑度指数为3.9，表明与完全光滑度指数1.0具有显著偏差。

芯在41℃的流化床温度下进行流化，将含有1％w/w的部分水解聚乙烯醇(酶/PVA的最终负载固体％w/w为16％)和0.5％w/w消泡剂(聚乙二醇EP436E(批号1L05091501))的浓度为20％w/w固体(3450PU/g)的蛋白酶水溶液(Purafast)喷洒到芯上，雾化空气压力从3.5巴(初始)梯度上升到3.9巴(最终)。

酶喷洒完成后，将含有硫酸钠和硫酸镁(MgSO47H20，30.5％，Na2SO4，15％)的混合物的溶液喷洒到芯上，使其占芯的净20％w/w(基于最终颗粒重量)。在45℃流化床温度下，以3.5巴的雾化空气压力喷洒盐溶液。

将由部分水解的聚乙烯醇(Celvol5-88)、二氧化钛和Lutensol非离子型表面活性剂组成的最终包衣溶液喷洒到盐包覆的酶芯上，使其占总包衣重量的净11％w/w。在55℃流化床温度下，以从初始5.3巴梯度下降至4.8巴的雾化空气压力喷洒包衣溶液。

待该批次包衣颗粒冷却后，从流化床涂布机上收获150kg产品。最终颗粒的D50为308μm(通过筛分分析)，堆密度为1.18g/cm3。该颗粒的Hunter白度L值为73，Heubach酶总粉尘为3.2mg/片。

实施例3

按照实施例2中所述的配方和方法，仅改变包覆在芯上的Purafast酶浓缩溶液的量、芯粒度并按需调节芯载量以适应不同水平的酶固体，从而制备另外四批Purafast颗粒。未改变另外的包衣和处理参数。

在不同的“压力”储存条件下，将下列酶样品放在衣物粉末洗涤剂中进行储存测试。通过性能和生物化学分析评估其稳定性。

储存测试：样品制备

将对应量的酶(参见下文)添加到10g衣物洗涤剂中并放至塑料杯(150mL)中，在70％相对湿度下于37、45和60℃驯化室中开放储存。

A.10g衣物粉末洗涤剂+样品A1

B.10g衣物粉末洗涤剂+样品B1

C.10g衣物粉末洗涤剂+样品B2

D.10g衣物粉末洗涤剂+样品C1

E.10g衣物粉末洗涤剂+样品C2

在开始时、储存1小时后、2小时后、3天后(60℃)；以及1天、3天和8天(37℃和45℃)后，对样品进行分析。

性能评估

30℃、25FH下，在所谓的Laundr-O-meter中进行洗涤测试15分钟。

将10g储存的样品溶于烧杯内的2.5升25℉H水(参见下文)中，搅拌2分钟。将300mL该溶液放入LOM烧杯中，并加入下列污渍，以得到液体与布料的比L/C为约90(无钢球)。

要制备25L25℉H＝250ppmCa⁺²/Mg⁺²＝2/1，使用24583.25mL去离子水稀释416.75mL15.000ppm原液(以制备25升)原液15.000ppm：14.70克CaCl2.2H2O+10.165克MgCl2.6H2O，溶于1升去离子水中。

每个烧杯中的污渍(之前使用反射计测定的样本的初始反射率[L*a*b，D65照明体]：

洗涤污渍后，在流动的自来水下冲洗3分钟(17FH，Ca/Mg＝4/1)，旋转干燥并在环境条件下过夜风干(使用深色布料覆盖)。

通过使用反射计测量三次样本的最终反射率[L*a*b，D65照射体]。根据下式计算δ污垢去除％(dE％)：

其中L_参照＝96.0

a_参照＝0.55

b_参照＝1.95

生物化学评估

这种方法用于测定Properase对发酵、回收和最终产品样品(液体和颗粒)的蛋白水解活性。该方法是比色法，并监测N-琥珀酰-丙氨酰-丙氨酰-脯氨酰-苯丙氨酰-对硝基苯胺底物的降解速率。使用Konelab分析仪在405nm处测量底物的对硝基苯胺的释放。通过指定的标准对该测定法进行校准。

样品制备：

-将100gTris缓冲液(0.1MTRIS，0.01MCaCL₂，0.005％TritonX-100，pH8.6)加入10g洗涤剂样品中并搅拌30min。之后取2mL先前的溶出物至微量离心管中，以14000rpm离心10min。

-使用HAMILTON稀释机和Tris缓冲液制备第二溶出物(10X)。

-稀释后涡旋样品，并将其倒入对应的Konelab比色管中。同样设置对照(在这些情况下，PU/g)。将比色管置于样品架上。将该样品架插入仪器中。

运行Konelab分析：

-制备工作底物溶液[N-琥珀酰-丙氨酰-丙氨酰-脯氨酰-苯丙氨酰-对硝基苯胺(AAPF)(Sigma货号S7388)]并倒入试剂容器中，置于试剂转盘上(基底＝20mL容器，代码＝AAPF)。

试剂制备

1.底物溶液原液(100mg/mL)：将500mgAAPF溶于5mLDMSO中。在室温下避光保存。如果溶液变为黄色，则丢弃该溶液。稳定1个月。

2.中间底物溶液(20mg/mL)：向3.2mLDMSO中加入800μL底物溶液原液并混合。在室温下避光保存。如果溶液变为黄色，则丢弃该溶液。稳定1个月。

3.工作底物溶液(1mg/mL)：向4.75mL分析缓冲液中加入250μL中间底物溶液并混合。按需配制。如果在冰上保存，通常稳定1小时。如果溶液变为黄色，则丢弃该溶液。

-在软件中标记样品杯并定义将要在Konelab中运行的测试(六个重复样)。运行并检查校准。计算颗粒样品的活性(该公式假定溶出混合物的比重为1g＝1mL)：

PU/g颗粒＝[(PU/mL)×(工作稀释液)]×[溶出缓冲液重量+颗粒(mL)/颗粒重量(g)]

-计算每个样品的重复样的平均值。计算CV％(变异系数)。

在该实施例中，“微型”颗粒是指包含根据本发明教导内容的小型光滑芯的颗粒。

数据示于图2中。

实施例4

三种代表性批次植酸酶的制备

将购自MineradeSantaMarta(MSM批号41418.B)的45kg硫酸钠芯装入150kg批次大小的中试规模流化床涂布机中。通过光散射，芯的质量中位直径为199微米。

将芯进行流化，将含有2％w/w的部分水解聚乙烯醇(Celvol5-88)和0.5％w/w植酸钠溶液(Dr.Straetmans；DermofeelPA-3；批号NA2062)的浓度为17.5％w/w固体的植酸酶水溶液(批次488115613)喷洒到芯上。

喷洒酶后，将含有硫酸钠(MSM批号13130405)的溶液喷洒到芯上，使其占最终颗粒重量的净50％w/w。

将由部分水解的聚乙烯醇(Celvol5-88)和滑石(MicrotalcFCCG-AW，批号13/00328)组成的最终包衣溶液喷洒到盐包覆的酶芯上，使其占总包衣重量的净9％。

待各批次包衣颗粒冷却后，从流化床涂布机上收获136kg、140kg和134kg产品。通过光散射，最终颗粒的D50平均为362μm，堆密度为1,27g/cm3。

图4示出了3种代表性颗粒批次3115、3116和3117的造粒结果。造粒试验是在DanishTeknologicalInstitute进行的。

实施例5

三种代表性批次植酸酶标准TPT颗粒的从相同浓缩批次以中试规模的 生产

将购自MineradeSantaMarta(MSMNa-G.III-EE，批号41235,12)的65kg硫酸钠芯装入150kg批次大小的中试规模流化床涂布机中。通过光散射，芯的质量中位直径通常为290微米。

表3：MSMNa-G.IIIEE的部分产品规格

将芯进行流化，将含有2％w/w的部分水解聚乙烯醇(Celvol5-88)和0.5％w/w植酸钠溶液(Dr.Straetmans；DermofeelPA-3；批号NA2062)的浓度为17.5％w/w固体的植酸酶水溶液(批次488115613)喷洒到芯上。

喷洒酶后，将含有硫酸钠(MSM批号13130405)的溶液喷洒到芯上，使其占最终颗粒重量的净40％w/w。

将由部分水解的聚乙烯醇(Celvol5-88)和滑石(MicrotalcFCCG-AW，批号13/00328)组成的最终包衣溶液喷洒到盐包覆的酶芯上，使其占总包衣重量的净9％w/w。

待各批次包衣颗粒冷却后，从流化床涂布机上收获151kg、151kg和150kg产品。通过光散射，最终颗粒的D50平均为388μm，堆密度为1.39g/cm3。

三种代表性植酸酶标准TPT批次的造粒结果示于图5中。

Claims (26)

1.一种颗粒群，其中所述颗粒包含：

小型光滑芯粒子，以及

活性剂，

其中包含在所述群中的所述小型光滑芯粒子具有：

小于3的光滑度指数、

小于300微米的质量中位直径、

小于2.5的粒度分散度指数。

2.根据权利要求1所述的颗粒群，其中所述活性剂是酶。

3.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒群，其中所述活性剂是围绕所述光滑芯粒子的活性剂包衣。

4.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒群，所述颗粒群还包含至少一层附加包衣。

5.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒群，所述颗粒群还包含至少一层附加包衣，其中所述至少一层附加包衣中的每一层占所述最终颗粒的至少5％w/w。

6.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒群，其中所述小型光滑芯粒子包含盐晶体。

7.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒群，其中所述小型光滑芯粒子包含硫酸钠晶体。

8.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒群，其中所述活性剂包含酶，其中所述酶是植酸酶、蛋白酶或淀粉酶中的至少一种。

9.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒群，其中所述小型光滑芯粒子具有：

小于2.8、小于2.5或小于2的光滑度指数；

小于250微米、小于225微米、小于200微米、小于175微米、小于150微米、小于125微米或小于100微米的质量中位直径；以及

小于2.5、小于2或小于1.5的粒度分散度指数。

10.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒群，所述颗粒群还包含至少一层附加包衣，其中所述至少一层附加包衣中的每一层占所述最终颗粒的至少6％、7％、8％、9％或10％w/w。

11.一种颗粒群，所述颗粒群包含：

小型光滑芯粒子，其中所述小型光滑芯粒子具有

小于2.5但不小于1.25的光滑度指数、

小于250微米但不小于100微米的质量中位直径、

小于2.5但不小于1.5的粒度分散度指数；

包含酶的活性剂包衣，其中所述酶是植酸酶、蛋白酶或淀粉酶中的至少一种；以及

至少一层附加包衣，其中所述至少一层附加包衣中的每一层占所述最终颗粒的至少7％但不超过10％w/w。

12.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒群，所述颗粒群还包含：

第一防水包衣，所述第一防水包衣包含防水材料；以及

围绕所述第一防水包衣的补水包衣，所述补水包衣包含补水材料。

13.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒群，其中所述防水材料选自阻透聚合物、蛋白质、脂质、脂肪和油、脂肪酸和树胶。

14.根据前述权利要求中任一项所述的颗粒群，其中所述补水材料选自淀粉、无机盐和糖类。

15.一种动物饲料粒料，所述动物饲料粒料包含权利要求1至14中任一项所述的颗粒群。

16.一种动物饲料未粒化混合物，所述动物饲料未粒化混合物包含权利要求1至14中任一项所述的颗粒群。

17.一种衣物洗涤剂组合物，所述衣物洗涤剂组合物包含权利要求1至14中任一项所述的颗粒群。

18.一种餐具洗涤剂组合物，所述餐具洗涤剂组合物包含权利要求1至14中任一项所述的颗粒群。

19.一种纺织物处理组合物，所述纺织物处理组合物包含权利要求1至14中任一项所述的颗粒群。

20.一种烘焙组合物，所述烘焙组合物包含权利要求1至14中任一项所述的颗粒群。

21.一种制备颗粒群的方法，所述方法包括：

用含有酶的活性剂包衣包覆小型光滑芯粒子，其中所述小型光滑芯粒子具有：

小于2.5但不小于1.25的光滑度指数、

小于300微米但不小于150微米的质量中位直径，以及

小于3.0但不小于1.5的粒度分散度指数。

22.一种用于制备动物饲料组合物的方法，所述方法包括：

制备权利要求1至14中任一项所述的颗粒群；

将所述颗粒与饲料原料混合在一起，得到未粒化混合物；以及

在70℃-95℃的温度下对所述未粒化混合物进行造粒。

23.一种制备饲料添加剂颗粒群的方法，所述方法包括：

制备权利要求1至14中任一项所述的颗粒群，

将所述颗粒与饲料可接受载体、稀释剂或赋形剂混合，

并(任选地)包装。

24.根据权利要求1至14中任一项所述的颗粒群在蒸汽处理或造粒过程中的应用。

25.一种提高储存稳定性的方法，所述方法包括制备权利要求1至14中任一项所述的颗粒，以及将储存稳定性与缺少小型光滑芯粒子的颗粒群的代表性样品进行比较。

26.一种减少粉尘的方法，所述方法包括制备权利要求1至14中任一项所述的颗粒，以及将粉尘水平与缺少小型光滑芯粒子的颗粒群的代表性样品进行比较。