CN104303060A - 选择或鉴别用于v1B拮抗剂治疗的受试者的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种用于检测生物样品中的HPA轴功能标记的方法。所述方法可以用于确定患者是否是V_1B拮抗剂治疗的合适候选人。所述HPA标记可以是基因组标记、非基因组标记，或它们的组合。取决于HPA标记的类型，所述检测方法可以是例如免疫测定或基因分型。

Description

选择或鉴别用于v1B拮抗剂治疗的受试者的方法

本申请要求2012年3月13日提交的美国申请号61/610,101的权益，它们的内容通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及确定受试者是否是V_1B拮抗剂治疗的合适候选人的方法。

背景技术

近年来，加压素或精氨酸加压素(AVP)在不同病理学状态中的作用已经成为密集研究的对象，并且不同加压素受体的选择性拮抗作用已经打开了通向新颖临床远景的途径。已知4种受体介导AVP的作用：缩宫素、V_1A、V_1B或V₃和V₂。与它在垂体和中枢神经系统(CNS)边缘脑区域中的位置一致，V_1B受体的拮抗剂在动物模型中显示出抗焦虑作用和抗抑郁作用。参见Griebel等人, PNAS 99, 6370 (2002)；和Serradeid-Le Gal等人, J. Pharm. Exp. Ther. 300, 1122 (2002)。尽管没有理解由V_1B受体介导的加压素的特定CNS作用，但是所述动物模型效应似乎经由垂体和CNS受体二者来介导。

AVP从下丘脑释放，并且是下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴活性的关键介质。AVP经由V_1B受体而作用于垂体，以刺激促肾上腺皮质激素(ACTH)的释放，所述促肾上腺皮质激素又作用于肾上腺以模拟应激激素皮质醇的释放。通过降低皮质醇的水平，可以使用V_1B拮抗剂来有效地治疗以下丘脑-垂体肾上腺轴(HPA轴)调节异常为特征的障碍。

通常，并非所有具有障碍的受试者类似地对治疗良好应答。使受试者能够与所述受试者最可能对其做出应答的治疗匹配的方法可以改善健康护理。要克服的一个主要缺点是，不存在鉴别可能对V_1B拮抗剂治疗有利地应答的受试者的方法。目前，为V_1B拮抗剂治疗选择受试者的唯一方式是，在治疗过程中观察疾病的临床进程。这可能延迟受试者将接受有效治疗的时候，由此增加发病率风险和降低生活质量。因此，需要鉴别与障碍有关的一种或多种生物学标记、遗传标记或它们的组合，所述障碍与对V_1B拮抗剂的应答有关。

发明内容

在一个方面，本发明涉及一种确定受试者是否是V_1B拮抗剂治疗的合适候选人的方法。所述方法可以包括：提供得自受试者的生物样品，并然后检测所述样品中的HPA轴功能标记。可替换地，所述方法包括：检测得自所述受试者的生物样品中的HPA轴功能标记。所述标记的存在指示，所述受试者是V_1B拮抗剂治疗的合适候选人。以大于正常受试者样品中的标记分布的约第60百分位(优选地大于约第65、第70、第75、第80、第85、第90或第95百分位)的水平存在的HPA轴功能标记指示，所述受试者是V_1B拮抗剂治疗的特别合适的候选人。所述受试者可具有以HPA轴功能障碍为特征的障碍。

所述HPA轴功能标记可以是：包含SEQ ID NO:1 (LHPP res7088418)的核苷酸序列和包含SEQ ID NO:2 (AKRID1 rs17169521)的核苷酸序列；包含NR3C1基因型的核苷酸序列，或它们的组合。所述NR3C1基因型可以是SEQ ID NO:3 (rs10482672)或SEQ ID NO:4 (rs17100236)。所述标记可以通过基因分型来检测，诸如扩增包含所述标记的核酸，并然后检测扩增的核酸，由此检测所述标记。所述标记可以通过测序来检测。

在另一个方面，本发明涉及一种确定受试者是否是V_1B拮抗剂治疗的合适候选人的方法。所述方法可以包括：提供得自受试者的生物样品，并然后检测所述样品中的HPA轴功能标记。如果所述HPA轴功能标记以大于正常受试者样品中的标记分布的约第60百分位的水平存在，所述受试者是V_1B拮抗剂治疗的合适候选人。所述受试者可具有以HPA轴功能障碍为特征的障碍。所述HPA轴功能标记可以以大于正常受试者样品中的HPA轴功能标记分布的约第65、第70、第75、第80、第85、第90和第95百分位的水平存在。所述标记可以是AVP、肽素、皮质醇、可的松、ACTH、皮质醇的肝代谢物、可的松的肝代谢物、CRH或它们的组合。所述肽素可以是血浆肽素。所述AVP可以是血浆AVP。所述皮质醇的肝代谢物可以是α-四氢皮质醇、β-四氢皮质醇、α-皮甾五醇、β-皮甾五醇、α-cortolic acid、β-cortolic acid或它们的组合。所述可的松的肝代谢物可以是四氢可的松、皮酮四醇、cortolonic acid或它们的组合。根据本发明的某些实施方案，本文描述的确定受试者是否是V_1B拮抗剂治疗的合适候选人的方法是一种体外方法。所述生物样品可以是含有核酸的样品、血清、血浆、血液、尿或唾液。所述生物样品可以是尿。所述标记可以是皮质醇、可的松、α-四氢皮质醇、β-四氢皮质醇和四氢可的松的尿量的总和。所述标记可以是α-四氢皮质醇、β-四氢皮质醇和四氢可的松的尿量的总和。所述标记可以是所有皮质醇和可的松代谢物的总和。所述标记可以是皮质醇和可的松代谢物的尿量的总和除以相同尿样品中肌酸酐的量。所述尿样品可以是得自所述受试者的24-小时尿收集物。所述尿样品可以是得自所述受试者的过夜尿收集物。所述尿样品可以在单次排泄中收集自所述受试者。所述样品可以是含有大于或等于9 pg/mL AVP的血浆样品，这通过放射免疫测定确定。所述样品可以是含有大于或等于2.75 ng/mL肽素的血浆样品，这通过酶免疫测定确定。所述样品可以是含有大于或等于3.44 mg/mg肌酸酐的皮质醇、可的松、α-四氢可的松、β-四氢皮质醇和四氢可的松的总和的尿样品。根据所述方法的一个特定实施方案，所述样品是血浆样品，且所述样品中大于或等于9 pg/mL AVP的量指示，所述受试者是V_1B拮抗剂治疗的合适候选人。在该实施方案中，AVP的量可以通过放射免疫测定来确定。根据所述方法的另一个特定实施方案，所述样品是血浆样品，且所述样品中大于或等于2.75 ng/mL肽素的量指示，所述受试者是V_1B拮抗剂治疗的合适候选人。在该实施方案中，肽素的量可以通过酶免疫测定来确定。根据所述方法的另一个特定实施方案，所述样品是尿样品，且大于或等于3.44 mg/mg肌酸酐的样品中的皮质醇、可的松、α-四氢可的松、β-四氢皮质醇和四氢可的松的总和指示，所述受试者是V_1B拮抗剂治疗的合适候选人。

在本文所述的方法中，所述样品可以是含有核酸的样品、血清、血浆、血液、尿或唾液。所述标记可以通过免疫测定来检测。所述标记可以通过质谱法来检测。

具体地，将上述方法用于处于具有以HPA轴调节异常为特征的障碍的风险中或者疑似具有所述障碍的受试者。所述障碍可以是库欣综合征、痴呆、认知损害、心境障碍、焦虑障碍、物质相关的障碍、骨质疏松症、关节炎、糖尿病、血脂异常、肥胖、高血压、疼痛、青光眼或它们的组合。所述心境障碍可以是抑郁症。所述抑郁症可以是严重抑郁障碍。所述焦虑障碍可以是创伤后应激障碍、广泛性焦虑障碍或惊恐障碍。所述物质相关的障碍可以是酒精依赖性或滥用或药物依赖性或滥用。所述痴呆可以是阿尔茨海默型。所述认知损害可以是由阿尔茨海默氏病引起的轻度认知损害。

在另一个方面，本发明涉及一种监测受试者对V_1B拮抗剂治疗的应答的方法。所述方法可以包括：提供得自受试者的生物样品，并然后检测所述样品中的HPA轴功能标记。可替换地，所述方法包括：检测得自接受V_1B拮抗剂治疗的受试者的生物样品中的HPA轴功能标记。如果与基线相比存在大于25%的标记水平变化，那么V_1B拮抗剂可用于治疗所述受试者。所述大于25%的变化可以是与基线相比的增加或降低。所述HPA轴功能标记可以是：皮质醇；可的松；促皮质素释放激素；促肾上腺皮质激素(ACTH)；皮质醇的肝代谢物，可的松的肝代谢物，或它们的组合。所述可的松的肝代谢物可以是四氢可的松、皮酮四醇、cortolonic acid或它们的组合。所述标记可以是皮质醇、可的松、α-四氢皮质醇、β-四氢皮质醇和四氢可的松的尿量的总和。所述标记可以是α-四氢皮质醇、β-四氢皮质醇和四氢可的松的尿量的总和。可以将尿量的总和除以相同尿样品中的肌酸酐的量。所述基线可以是3 pg/mL至13 pg/mL之间的水平的皮质醇。皮质醇的基线可以使用酶免疫测定来确定。所述基线可以指示在开始V_1B拮抗剂治疗之前取自所述受试者的样品中的HPA轴功能标记的水平。所述ACTH可以是血浆ACTH。根据本发明的某些实施方案，本文描述的监测受试者对V_1B拮抗剂治疗的应答的方法是一种体外方法。所述生物样品可以是含有核酸的样品、血清、血浆、血液、尿或唾液。具体地，将所述方法用于具有以HPA轴调节异常为特征的障碍的受试者。所述障碍可以是库欣综合征、痴呆、认知损害、心境障碍、焦虑障碍、物质相关的障碍、骨质疏松症、关节炎、糖尿病、血脂异常、肥胖、高血压、疼痛、青光眼或它们的组合。所述心境障碍可以是抑郁症。所述抑郁症可以是严重抑郁障碍。所述焦虑障碍可以是创伤后应激障碍、广泛性焦虑障碍或惊恐障碍。所述物质相关的障碍可以是酒精依赖性或滥用或药物依赖性或滥用。所述痴呆可以是阿尔茨海默型。所述认知损害可以是由阿尔茨海默氏病引起的轻度认知损害。

所述V_1B拮抗剂可以具有式I：

其中A是芳族单环杂环，其中所述杂环是5或6元环且包含至多4个选自N、O和S的杂原子，其中不超过一个杂原子是氧或硫原子，且A可以被基团R11、R12和/或R13取代，其中R11、R12和R13在每次出现时彼此独立地选自氢、氯、溴、碘、氟、CN、CF₃、OCF₃、NO₂、OH、O-C₁-C₄-烷基、O-苯基、O-C₁-C₄-亚烷基-苯基、苯基、C₁-C₆-烷基、C₂-C₆-烯基、C₂-C₆-炔基、NH₂、NH(C₁-C₄-烷基)和N(C₁-C₄-烷基)₂，R₃和R₄彼此独立地选自氢、氯、溴、碘、氟、CN、CF₃、OCF₃、NO₂、OH、O-C₁-C₄-烷基、O-苯基、O-C₁-C₄-亚烷基-苯基、苯基、C₁-C₆-烷基、C₂-C₆-烯基、C₂-C₆-炔基、NH₂、NH(C₁-C₄-烷基)和N(C₁-C₄-烷基)₂，或R₃和R₄连接以产生-CH=CH-CH=CH-、-(CH₂)₄-或-(CH₂)₃-，

R5是

其中W选自NR54、NR54-(C₁-C₄-亚烷基)和键，R54独立地选自氢、C₁-C₆-烷基、C₂-C₆-烯基、C₂-C₆-炔基、苯基和C₁-C₄-亚烷基-苯基，其中苯基环可以被至多2个基团R59取代，R59独立地选自氢、氯、溴、碘、氟、CN、CF₃、OCF₃、NO₂、OH、O-C₁-C₄-烷基、C₁-C₆-烷基、C₂-C₆-烯基、C₂-C₆-炔基、NH₂、NH(C₁-C₄-烷基)和N(C₁-C₄-烷基)₂，R63彼此独立地选自氢、氯、溴、碘、氟、CN、CF₃、OCF₃、NO₂、OH、O-C₁-C₄-烷基、O-苯基、O-C₁-C₄-亚烷基-苯基、苯基、C₁-C₆-烷基、C₂-C₆-烯基、C₂-C₆-炔基、NH₂、NH(C₁-C₄-烷基)和N(C₁-C₄-烷基)₂，R6和R7彼此独立地选自氢、氯、溴、碘、氟、CN、CF₃、OCF₃、NO₂、OH、O-C₁-C₄-烷基原子、O-苯基、O-C₁-C₄-亚烷基-苯基、苯基、C₁-C₆-烷基、C₂-C₆-烯基、C₂-C₆-炔基、NH₂、NH(C₁-C₄-烷基)和N(C₁-C₄-烷基)₂，和它们的互变异构形式、它们的对映异构形式和非对映异构形式。

A可以是包含1或2个杂原子的芳族杂单环系统，其中2个杂原子之一是氮。

A可以是嘧啶、吡啶、哒嗪、吡嗪、噻唑、咪唑、噻吩-和呋喃。

所述V_1B拮抗剂可以是：

(化合物A)。

所述V_1B拮抗剂可以是：

(化合物B)。

本文中描述的方法可以用于筛选受试者对于临床试验的合格性。所述方法可以用于分级受试者就临床试验而言的随机化。所述方法可以用于分级临床试验的分析。

在另一个方面，本发明涉及一种用于稳定血浆样品中的AVP的试剂盒，其中所述试剂盒包含一个或多个收集试管，所述收集试管包含一种或多种蛋白酶抑制剂。所述试剂盒可以用在本文所述的方法中。

在另一个方面，本发明涉及一种用于测定血液衍生的基体中的AVP的试剂盒，其中所述试剂盒包含收集试管和关于在室温稳定AVP的说明书。

本发明提供了如本文中所述的V_1B拮抗剂，其用于通过本文描述的方法治疗被鉴别为合适候选人的受试者。具体地，要治疗的受试者是处于具有以HPA轴调节异常为特征的障碍的风险中的受试者或者具有所述障碍的受试者，其中HPA轴功能标记存在于得自所述受试者的样品中。本发明还提供了用于治疗受试者的如本文中所述的V_1B拮抗剂，其中如果得自所述受试者的生物样品中的HPA轴功能标记水平与基线相比存在大于25%的变化，那么继续所述治疗。本发明还进一步提供了用于治疗受试者的如本文中所述的V_1B拮抗剂，其中如果得自所述受试者的生物样品中的HPA轴功能标记水平与基线相比的变化是25%或更低，那么中断所述治疗。优选地，所述V_1B拮抗剂选自ABT-436和ABT-558。

附图说明

图1显示了与得自健康正常志愿者(HNV)的AVP水平相比，得自具有严重抑郁障碍(MDD)的临床试验受试者的基线AVP水平。在大约上午8点抽取样品。虚线代表使用受试者-操作特征分析定义的高AVP的8.6 pg/mL截止值，用在MASQ的GDM子量表上具有≤-0.53点的征状变化作为因变量。

图2显示了与AVP (高相对于正常)和治疗(化合物A (800 mg QD)相对于安慰剂)的相互作用有关的数据，其中因变量是在研究药物施用的第7天的心境和焦虑征状问卷调查(MASQ)量表评分和汉密顿抑郁评级量表(HAM-D)评分。将高AVP定义为，在研究药物施用开始前一天在大约上午8点或下午2点抽取的样品中，≥8.6 pg/mL。显示了得自协方差分析的最小二乘法平均值和标准误差，所述协方差分析包括第-1天(基线)评分作为协变量以及研究人员、治疗、AVP种类和治疗*AVP种类相互作用的因子。

图3显示了与AVP (高相对于正常)和治疗(化合物A相对于安慰剂)的相互作用有关的数据，其中所述因变量是对CRH攻击的皮质醇反应性(最大CRH后血清皮质醇除以CRH前血清皮质醇)。将高AVP定义为，在研究药物施用开始前一天在大约上午8点或下午2点抽取的样品中，≥8.6 pg/mL。第7天皮质醇反应性的协方差分析模型包括第-1天(基线)皮质醇反应性作为协变量以及研究人员、治疗、AVP种类和治疗*AVP种类相互作用的因子。

图4显示了得自具有严重抑郁障碍(MDD)的临床试验受试者的基线肽素和AVP水平之间的关联图。在研究药物开始之前大约上午8点、下午2点和下午10点以及在第六剂研究药物施用后抽取样品。黑色线代表使用受试者-操作特征分析定义的高AVP的8.6 pg/mL截止值和高肽素的2.8 ng/mL截止值，用在MASQ的GDM子量表上具有≤-0.53点的征状变化作为因变量。深灰色线代表AVP和肽素的最佳拟合关联。Spearman秩相关系数是0.56。

图5显示了一组HPA或抑郁相关的变体和基线AVP水平之间的联系图。如果个体具有rs7088418 AA和rs17169521 GG基因型二者，则认为药物遗传学试验结果是阳性的。在大约下午2点抽取AVP样品。灰色菱形代表组平均值和平均值的置信区间。

图6显示了与肽素(高相对于正常)和治疗(化合物A相对于安慰剂)的相互作用有关的数据，其中因变量是在研究药物施用的第7天的心境和焦虑征状问卷调查(MASQ)量表评分和汉密顿抑郁评级量表(HAM-D)评分。将高肽素定义为，在研究药物施用开始前一天在大约上午8点或下午2点抽取的样品中，≥2.8 ng/mL。显示了得自协方差分析的最小二乘法平均值和标准误差，所述协方差分析包括第-1天(基线)评分作为协变量以及研究人员、治疗、肽素种类和治疗* 肽素种类相互作用的因子。

图7显示了与药物遗传学试验结果(阳性相对于阴性)和治疗(化合物A相对于安慰剂)的相互作用有关的数据，其中因变量是在研究药物施用的第7天的MASQ量表评分和HAM-D评分。如果个体具有rs7088418 AA和rs17169521 GG基因型二者，则认为药物遗传学试验结果是阳性的。显示了得自协方差分析的最小二乘法平均值和标准误差，所述协方差分析包括第-1天(基线)评分作为协变量以及研究人员、治疗、药物遗传学试验结果和治疗* 药物遗传学试验结果相互作用的因子。

图8显示了与药物遗传学试验结果(GG相对于A+ (AG或AA))和治疗(化合物A相对于安慰剂)的相互作用有关的数据，其中因变量是在研究药物施用的第7天的MASQ量表评分和HAM-D评分。药物遗传学试验结果是基于rs 17100236。显示了得自协方差分析的最小二乘法平均值和标准误差，所述协方差分析包括第-1天(基线)评分作为协变量以及研究人员、治疗、药物遗传学试验结果和治疗* 药物遗传学试验结果相互作用的因子。

图9显示了与尿糖皮质激素量除以尿肌酸酐量(较高相对于较低)和治疗(化合物A相对于安慰剂)的相互作用有关的数据，其中因变量是在研究药物施用的第7天的心境和焦虑征状问卷调查(MASQ)量表评分和汉密顿抑郁评级量表(HAM-D)评分。将较高的尿糖皮质激素量定义为，在研究药物施用开始前一天的24小时收集物中，≥3.44 mg/mg肌酸酐。显示了得自协方差分析的最小二乘法平均值和标准误差，所述协方差分析包括第-1天(基线)评分作为协变量以及研究人员、治疗、尿糖皮质激素种类和治疗*尿糖皮质激素种类相互作用的因子。

图10显示了与在研究药物施用之前尿糖皮质激素量除以尿肌酸酐量(较高相对于较低)和治疗(化合物A相对于安慰剂)的相互作用有关的数据，其中因变量是在研究药物施用过程中的尿糖皮质激素量除以尿肌酸酐量。将较高的尿糖皮质激素定义为，在研究药物施用开始前一天的24小时收集物中，≥3.44 mg/mg肌酸酐。第6天至第7天尿糖皮质激素的协方差分析模型包括第-2天至第-1天(基线)尿糖皮质激素作为协变量以及研究人员、治疗和治疗*基线尿糖皮质激素相互作用的因子。

具体实施方式

发明人已经做出惊人发现：在与HPA轴功能障碍有关的障碍和某些生物学标记和遗传标记以及这些标记对V_1B拮抗剂的应答的预测临床值之间存在关联。得自受试者的样品中的这些标记中的一种或多种或HPA轴功能标记(“HPA标记”)的遗传鉴别、生化鉴别或它们的组合，可以用于预测受试者是否对V_1B拮抗剂治疗应答，筛选受试者对于临床试验而言的合格性，分级受试者对于临床试验而言的随机化，或分级临床试验的分析。

靶向基于HPA功能标记谱预期会表现出最高临床益处的群体的能力，可以为了受试者的益处而改善药物的利用。

(1) HPA轴系统生物学

HPA轴系统通过激素产生器官的协调活性而起作用，其形成信号传递系统并最终导致皮质醇从肾上腺释放。参见Chrousos和Gold (1992) J. Amer. Med. Assoc. 267, 1244-1252；和Kaltas和Chrousos (2007), Handbook of Psychophysiology, 第303-318页, New York: Cambridge University Press。由大细胞神经元产生的AVP被神经分泌颗粒携带至后叶垂体。AVP然后由垂体储存，直到它被释放进血液中。在下丘脑的室旁核(PVN)中的小细胞神经元将促皮质素释放激素(CRH)和AVP分泌进门静脉循环中以作用于垂体前叶。尽管CRH和AVP刺激垂体中的促肾上腺皮质细胞释放促肾上腺皮质激素(ACTH)，但是AVP特异性地作用于垂体受体V_1B。ACTH经由血液移动至肾上腺，在此处它触发皮质类固醇的释放，所述皮质类固醇包括皮质醇和脱氢表雄酮(DHEA)。

皮质醇减少HPA轴系统的PVN中的CRH。HPA轴系统是一个自动调节系统，其可以经由负反馈回路降低它的活性。CRH的减少导致由肾上腺产生的皮质醇和DHEA的减少。该自动调节保护多个组织免于长时间暴露于高水平的皮质醇，因为皮质醇增多症可以导致多种有害的免疫学的、代谢的和心理学的副作用。参见Review of Guerry and Hastings, Clin. Child. Fam. Psychol. Rev. (2011)14:135-160。

HPA轴在白天和黑夜的昼夜节律循环中是有活性的。皮质醇水平在该昼夜节律循环中通常遵循可预测的模式。参见Lovallo和Thomas (2000) Handbook of psychophysiology, 第342-367页, Cambridge, UK.: Cambridge University Press。皮质醇水平在睡眠期结束之前可以较高，且继续增加直到它们在觉醒后30-40分钟达到峰值。这被称作“皮质醇觉醒应答”(CAR)。因此，在清醒/白天时段中，皮质醇水平可以用负斜率来描绘；皮质醇水平然后在睡眠过程中再次增加。

该每日节律可以构成“基线”或“基础”或“主调”HPA活性，其可以代表预期在给定的白天时间在血液中循环的皮质醇的量。HPA轴机能通过改变它的活性水平处于在身体对急性“应激源”的应答的中心。例如，当挑战性或威胁性事件发生时，HPA轴触发循环皮质醇水平的增加。在诱导和增加HPA轴活性以后，达到循环皮质醇的峰水平通常需要约20分钟。参见Gunnar和Talge (2006) Developmental psychophysiology: Theory, systems, and methods, 第343-366页; New York: Cambridge University Press；和Kudielka等人, (2004) Psychoneuroendocrinology, 29, 983-992。可应激事件或应激源的强度和持续时间可以影响循环皮质醇恢复至为白天时间预期的基线所需的时间的长度。当应激源的频率和抑郁症的流行也增加时，HPA轴活性的正常发展在青春期中导致较高的基础皮质醇水平和对可应激事件的较强HPA轴应答。参见Review of Guerry和Hastings, Clin. Child. Fam. Psychol. Rev. (2011)14:135-160。

2. 定义

本文中使用的术语仅仅是为了描述特定实施方案的目的，无意成为限制性的。在说明书和所附权利要求书中使用的单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数所指，除非上下文另外清楚地指明。

a. 约

本文中使用的“约”可以大约表示从所述值±10%变化。应当理解，这样的变化总是被包括在本文中提供的任意给定值中，无论是否具体提及它。

b. 同一或同一性

本文中在2个或更多个多肽或多核苷酸序列的背景下使用的“同一”或“同一性”可以是指，所述序列具有指定百分比的在指定区域上相同的残基。所述百分比可以如下计算：将2个序列进行最佳比对，在指定区域上对比所述2个序列，确定在2个序列中出现同一残基的位置的数目以产生匹配位置的数目，将匹配位置的数目除以指定区域中的位置的总数，和将结果乘以100以产生序列同一性的百分比。在2个序列具有不同长度或者所述比对产生一个或多个交错末端且指定的对比区域仅包括单个序列的情况下，将单个序列的残基包括在分母中，但是不包括在计算的分子中。

c. 分离的多核苷酸

本文中使用的“分离的多核苷酸”可以是指这样的多核苷酸(例如基因组的多核苷酸、cDNA的多核苷酸或合成来源的多核苷酸或它们的组合)：由于它的起源，所述分离的多核苷酸与在自然界中与所述“分离的多核苷酸”一起发现的多核苷酸的全部或部分无关；可操作地连接至在自然界中没有连接的多核苷酸；或在自然界中没有作为较大序列的一部分而出现。

d. 标记和可检测标记

本文中使用的“标记”和“可检测标记”表示这样的部分：其被连接至抗体或分析物以使得所述抗体和所述分析物之间的反应是可检测的，且如此标记的抗体或分析物被称作“可检测地标记的”。标记可以产生通过视觉装置或仪器装置可检测的信号。各种标记包括产生信号的物质，诸如色原体、荧光化合物、化学发光的化合物、放射性化合物等。标记的代表性例子包括产生光的部分(例如，吖啶鎓化合物)和产生荧光的部分(例如，荧光素)。本文描述了其它标记。在这点上，所述部分本身可以不是可检测的，但是可以在与另一个部分反应以后变成可检测的。术语“可检测地标记的”的应用意图包括这样的标记法。

可以使用本领域已知的任何合适的可检测标记。例如，所述可检测标记可以是放射性标记(诸如³H、¹²⁵I、³⁵S、¹⁴C、³²P和³³P)、酶标记(诸如辣根过氧化物酶、碱性过氧化物酶、葡萄糖6-磷酸脱氢酶等)、化学发光标记(诸如吖啶酯、硫代酸酯或磺酰胺；鲁米诺、异鲁米诺、菲啶鎓酯等)、荧光标记(诸如荧光素(例如，5-荧光素、6-羧基荧光素、3’6-羧基荧光素、5(6)-羧基荧光素、6-六氯-荧光素、6-四氯荧光素、异硫氰酸荧光素等))、罗丹明、藻胆蛋白、R-藻红蛋白、量子点(例如，硫化锌加帽的硒化镉)、测温标记或免疫聚合酶链式反应标记。对标记、标记方法和标记检测的介绍，参见：Polak和Van Noorden, Introduction to Immunocytochemistry, 第2版, Springer Verlag, N.Y. (1997)，和Haugland, Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals (1996)，后者为由Molecular Probes, Inc., Eugene, Oregon出版的综合手册和目录。荧光标记可以用在FPIA中(参见，例如，美国专利号5,593,896、5,573,904、5,496,925、5,359,093和5,352,803，它们特此通过引用整体并入)。吖啶鎓化合物可以在均相化学发光测定中用作可检测标记(参见，例如，Adamczyk等人, Bioorg. Med. Chem. Lett.16: 1324-1328 (2006)；Adamczyk等人, Bioorg. Med. Chem. Lett. 4: 2313-2317 (2004)；Adamczyk等人, Biorg. Med. Chem. Lett. 14: 3917-3921 (2004)；和Adamczyk等人, Org. Lett. 5: 3779-3782 (2003))。

在一个方面，所述吖啶鎓化合物是吖啶鎓-9-甲酰胺。制备吖啶鎓9-甲酰胺的方法描述在：Mattingly, J. Biolumin. Chemilumin. 6: 107-114 (1991); Adamczyk等人, J. Org. Chem. 63: 5636-5639 (1998); Adamczyk等人, Tetrahedron 55: 10899-10914 (1999); Adamczyk等人, Org. Lett. 1: 779-781 (1999); Adamczyk等人, Bioconjugate Chem. 11: 714-724 (2000); Mattingly等人, In Luminescence Biotechnology: Instruments and Applications; Dyke, K. V. 编; CRC Press: Boca Raton, 第77-105页(2002); Adamczyk等人, Org. Lett. 5: 3779-3782 (2003)；和美国专利号5,468,646、5,543,524和5,783,699 (它们中的每一篇关于这方面的教导通过引用整体并入本文)。

吖啶鎓化合物的另一个例子是吖啶鎓-9-甲酸芳基酯。式II的吖啶鎓-9-甲酸芳基酯的一个例子是10-甲基-9-(苯氧基羰基)吖啶鎓氟代磺酸盐(可得自Cayman Chemical, Ann Arbor, MI)。制备吖啶鎓-9-甲酸芳基酯的方法描述在McCapra等人, Photochem. Photobiol.4: 1111-21 (1965); Razavi等人, Luminescence 15: 245-249 (2000); Razavi等人, Luminescence 15: 239-244 (2000)；和美国专利号5,241,070 (它们中的每一篇关于这方面的教导通过引用整体并入本文)。这样的吖啶鎓-9-甲酸芳基酯在信号强度或信号迅速方面是至少一种氧化酶对分析物的氧化中产生的过氧化氢的有效化学发光指示剂。吖啶鎓-9-甲酸芳基酯的化学发光发射的进程快速地(即，在1秒以下)完成，而吖啶鎓-9-甲酰胺化学发光发射延长超过2秒。但是，吖啶鎓-9-甲酸芳基酯在有蛋白存在下丧失它的化学发光性能。因此，它的应用要求在信号产生和检测过程中不存在蛋白。分离或除去样品中的蛋白的方法是本领域技术人员众所周知的，且包括、但不限于：超滤、提取、沉淀、透析、色谱法或消化(参见，例如，Wells, High Throughput Bioanalytical Sample Preparation. Methods and Automation Strategies, Elsevier (2003))。从试验样品除去或分离的蛋白的量可以是约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%或约95%。关于吖啶鎓-9-甲酸芳基酯和它的用途的其它细节阐述在2007年4月9日提交的美国专利申请号11/697,835中。可以将吖啶鎓-9-甲酸芳基酯溶解在任意合适的溶剂中，诸如脱气的无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)或胆酸钠水溶液。

e. 正常受试者样品

本文中使用的“正常受试者样品”可以表示，得自不具有与HPA轴功能障碍有关的疾病或障碍的受试者的样品。所述正常受试者样品可以是对照。所述正常受试者样品可以得自老年医学或儿科受试者。

f. 预定截止值和预定水平

“预定截止值”和“预定水平”通常表示测定截止值，其用于通过将测定结果与预定截止值/水平进行对比来评估诊断/预后/治疗效果，其中预定截止值/水平已经与各种临床参数(例如，疾病的严重程度、进展/非进展/改进等)联系或相关。本公开内容提供了示例性的预定水平。但是，众所周知的是，截止值可以随免疫测定(例如，采用的抗体等)的性质而变化。另外，完全在本领域技术人员的一般技能内的是，基于本公开内容改进本文公开内容用于其它免疫测定以获得关于那些其它免疫测定的免疫测定特异性的截止值。鉴于预定截止值/水平的精确值可以在测定之间变化，如本文中所述的关联应当是普遍适用的。

g. 质量控制试剂

在本文所述免疫测定和试剂盒的上下文中，“质量控制试剂”包括但不限于校准物、对照、和灵敏度实验对象组。为了确立校准(标准)曲线以内插分析物(例如，抗体或分析物)的浓度，通常使用“校准物”或“标准品”(例如，一种或多种，例如多种)。可替换地，可以使用接近预定阳性/阴性截止值的单个校准物。可以联合使用多种校准物(即，多于一个校准物或不同量的校准物)，从而构成“灵敏度实验对象组”。

h. 校准组合物的系列

“校准组合物的系列”表示多个包含已知的浓度的HPA标记的组合物，其中每个组合物与该系列中的其它组合物的差别在于HPA标记的浓度。

i. 固相

“固相”表示不溶性的或可以通过后续反应变成不溶性的任意材料。可以针对它的吸引和固定捕获试剂的固有能力来选择固相。可替换地，固相可以具有附着于其上面的连接试剂，所述连接试剂具有吸引和固定捕获试剂的能力。所述连接试剂可以例如包括带电荷物质，所述带电荷物质的电荷就捕获试剂本身或与捕获试剂缀合的带电荷物质而言是相反的。一般而言，所述连接试剂可以是固定至(连接至)固相上且具有通过结合反应而固定捕获试剂的能力的任意结合配偶体(优选地特异性的)。在测定执行之前或在测定执行过程中，所述连接试剂能够实现捕获试剂与固相材料的间接结合。所述固相可以例如是塑料、衍生化的塑料、磁性或非磁性金属、玻璃或硅，包括、例如，试管、微量滴定孔、薄板、珠子、微粒、芯片和本领域普通技术人员已知的其它构型。

j. 特异性结合

本文中使用的“特异性结合”或“特异性地结合”可以表示抗体、蛋白或肽与第二种化学物质的相互作用，其中所述相互作用取决于特定结构(例如，抗原决定簇或表位)在所述化学物质上的存在；例如，抗体会识别和结合特定蛋白结构，而不是普遍地识别和结合蛋白。如果抗体对表位“A”是特异性的，那么在含有标记的“A”和抗体的反应中，含有表位A(或游离的未标记的A)的分子的存在会减少与抗体结合的标记的A的量。

k. 特异性结合配偶体

“特异性结合配偶体”是特异性结合对的一个成员。特异性结合对包含2个不同的分子，所述分子通过化学或物理方式彼此特异性地结合。因此，除了普通免疫测定的抗原和抗体特异性结合对以外，其它特异性结合对可以包括生物素和抗生物素蛋白(或抗生蛋白链菌素)、碳水化合物和凝集素、互补的核苷酸序列、效应物和受体分子、辅因子和酶、酶和酶抑制剂等。另外，特异性结合对可以包括作为最初特异性结合成员的类似物的成员，例如分析物类似物。免疫反应性的特异性结合成员包括抗原、抗原片段和抗体，包括单克隆和多克隆抗体以及它们的复合物和片段，无论是分离的还是重组地生产的。

l. 严谨条件

“严谨条件”在本文中用于描述，在约45℃在6x氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中与滤器结合的DNA的杂交，继之以一次或多次在约50-65℃在0.2xSSC/0.1%SDS中的洗涤。术语“在高严谨条件下”表示，在约45℃在6xSSC中与滤器结合的核酸的杂交，继之以一次或多次在约68℃在0.1xSSC/0.2%SDS中或在其它相关的条件下的洗涤。参见，例如，Ausubel, F. M. 等人, 编, 1989, Current Protocols in Molecular Biology, 第I卷, Green Publishing Associates, Inc. 和John Wiley & Sons, Inc., New York，第6.3.1-6.3.6页和第2.10.3页。

m. 处理或治疗

“处理”或“治疗”各自在本文中互换地用于描述逆转、减轻或抑制这样的术语应用的障碍/疾病的进展，或这样的疾病的一种或多种征状。取决于受试者的病症，该术语也表示预防疾病，且包括预防疾病的发作，或预防与疾病有关的征状。治疗可以以急性或慢性方式执行。该术语也表示，在罹患疾病之前，减轻疾病的严重程度或与这样的疾病有关的征状。这样的在罹患之前预防或减轻疾病的严重程度表示，将本发明的抗体或药物组合物施用给在施用时没有罹患疾病的受试者。“预防”也表示阻止疾病的复发或与这样的疾病有关的一种或多种征状的复发。“治疗”和“治疗上”表示治疗的动作，与如上面所定义的“治疗”一样。

n. 变体

“变体”在本文中用于描述这样的肽或多肽：其在氨基酸序列中的差别在于氨基酸的插入、缺失或保守置换，但是保留至少一种生物活性。“生物活性”的代表性例子包括，被特异性抗体结合或促进免疫应答的能力。变体也在本文中用于描述这样的蛋白：其氨基酸序列与参照蛋白基本上相同，所述参照蛋白具有保留至少一种生物活性的氨基酸序列。氨基酸的保守置换，即，用具有类似性能(例如，亲水性、带电荷区域的程度和分布)的不同氨基酸替换一个氨基酸，在本领域中被公认为通常涉及微小变化。如本领域所理解的，可以部分地通过考虑氨基酸的亲水指数而鉴定这些微小变化。Kyte等人, J. Mol. Biol. 157:105-132 (1982)。氨基酸的亲水指数是基于对其疏水性和电荷的考虑。本领域中已知，具有类似亲水指数的氨基酸可以被置换，且仍然保留蛋白功能。在一个方面，具有±2的亲水指数的氨基酸被置换。氨基酸的亲水性还可以用于揭示会产生保留生物学功能的蛋白的置换。在肽的上下文中，对氨基酸的亲水性的考虑允许对该肽的最大局部平均亲水性的计算，这是据报道与抗原性和免疫原性良好关联的有用的量度。美国专利号4,554,101，其通过引用整体并入本文中。如本领域所理解的，具有相似亲水性值的氨基酸的置换可以产生保留生物学活性(例如免疫原性)的肽。置换可以用具有彼此在±2以内的亲水性值的氨基酸实现。氨基酸的疏水性指数和亲水性值受该氨基酸的特定侧链影响。与该观察一致，将与生物学功能相容的氨基酸置换理解为取决于氨基酸(尤其是那些氨基酸的侧链)的相对相似性，如通过疏水性、亲水性、电荷、大小和其它特性所揭示的。“变体”也可以用于表示抗-HPA标记抗体的抗原反应性片段，其在氨基酸序列上不同于抗-HPA标记抗体的对应片段，但是仍然是抗原反应性的，且可以与抗-HPA标记抗体的对应片段竞争与HPA标记的结合。“变体”也可以用于描述已经经过差别加工(诸如通过蛋白酶解、磷酸化或其它翻译后修饰)但是保留它的抗原反应性的多肽或其片段。

就本文中列举的数字范围而言，明确地预见到具有相同精确度的在二者之间的每个插入数字。例如，就6-9的范围而言，除了6和9以外还预见到数字7和8，且就范围6.0-7.0而言，明确地预见到数字6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9和7.0。

3. 鉴别HPA轴功能标记的方法

本文提供了一种用于检测生物样品中的HPA轴功能标记的方法。所述样品可以得自罹患以HPA轴调节异常为特征的障碍的受试者。所述HPA标记可以是基因组、非基因组或它们的组合。取决于HPA标记的类型，所述检测方法可以是例如免疫测定或基因分型。根据本发明的某些实施方案，所述方法是一种体外方法。

a. 确定受试者是否适合于V_1B拮抗剂治疗的方法

检测HPA轴标记的方法可以应用于确定受试者是否是V_1B拮抗剂治疗的合适候选人的方法，其中所述受试者具有与HPA轴功能障碍有关的障碍。所述方法包括：提供得自所述受试者的生物样品，和检测HPA轴功能标记，其中HPA标记在受试者的样品中的存在或相对于正常受试者样品的HPA标记的特定水平可以指示，所述受试者适合于V_1B拮抗剂治疗。可替换地，所述方法包括：检测得自所述受试者的生物样品中的HPA轴功能标记，其中HPA标记在受试者的样品中的存在或相对于正常受试者样品的HPA标记的特定水平指示，所述受试者适合于V_1B拮抗剂治疗。与HPA功能障碍有关的特定标记的存在或其水平的知识，将允许人们根据受试者的HPA轴功能标记谱来定制预防或治疗。例如，可以将至少一种V_1B拮抗剂施用给(即，用其治疗)根据本文所述的方法被鉴别为合适候选人的受试者。所述HPA标记可以是基因组。所述HPA标记可以是非基因组，诸如激素、蛋白、其片段或它们的任意组合。用于鉴别HPA标记的方法也可以用于筛选受试者对于临床试验而言的合格性，分级受试者对于临床试验而言的随机化，分级临床试验的分析，或它们的组合。

b.监测受试者对V_1B拮抗剂治疗的应答的方法

本文提供了一种用于鉴别得自受试者的样品中的一种或多种“监测性”HPA标记的方法，所述方法可以应用于监测受试者对V_1B拮抗剂治疗的应答的方法。

可以在得自受试者的生物样品中检测监测性HPA轴标记。标记水平与基线相比大于25%的变化可以指示，所述受试者正在对V_1B拮抗剂治疗做出应答，并且V_1B拮抗剂可以用于治疗所述受试者。该变化可以是与基线相比的增加变化或减少变化。所述受试者可能具有与HPA轴功能障碍有关的障碍。如果根据本文所述的方法确定所述受试者正在对V_1B拮抗剂治疗做出应答，那么可以继续V_1B拮抗剂治疗。如果根据本文所述的方法确定所述受试者没有对V_1B拮抗剂治疗做出应答，那么可以中断V_1B拮抗剂治疗。

c. HPA标记–用在鉴别HPA轴功能标记的方法中

上述方法的HPA标记可以是基因组HPA标记、非基因组HPA标记或它们的组合。可以在得自受试者的样品中检测HPA轴标记。基因组标记的存在可以指示，所述受试者是V_1B拮抗剂治疗的合适候选人。如果所述方法方法检测到非基因组HPA轴标记的存在，那么可以测量HPA标记的水平。如果所述水平高于正常受试者样品中的标记分布的特定百分比，那么所述受试者可以是V_1B拮抗剂治疗的合适候选人。

(a)基因组HPA标记

所述遗传标记可以是缺失、置换、插入或多态性。基因组HPA标记可以是LHPP、AKR1D1或NR3C1基因或其片段中的任一个的多态性。HPA标记可以是遗传标记的任意组合。所述多态性可以是单核苷酸多态性。在一个群体内，可以给标记分配微小等位基因频率。在受试者群体之间可以存在变化。在一个地理或祖先群体中常见的标记可以在另一个群体中更罕见。所述标记可以在具有与HPA轴调节异常有关的障碍的受试者群体中过度表现。基于年龄、性别、祖先或它们的组合，可以将具有与HPA轴调节异常有关的障碍的受试者分组。

(a) LHPP

基因LHPP是一个严重抑郁障碍(MDD)有关的基因，其编码被称作磷酸赖氨酸磷酸组氨酸无机焦磷酸盐磷酸酶的酶，且术语“LHPP”表示在功能上调节其表达的对应的信使RNA和DNA序列。LHPP最初在1957年从猪脑纯化出(参见，Seal等人, J Biol Chem 228:193-9 (1957))，随后已经从几种其它哺乳动物来源纯化出(参见，Felix等人, J Biochem 147:111-8 (1975)；Yoshida等人, Cancer Research 42:3256-31 (1982)；Hachimori等人, J Biochem 93:257-64 (1983)；Smirnova等人, Arch Biochem Biophys 287:135-40 (1991)；Hiraishi等人, Arch Biochem Biophys 341:153-9 (1997))。已经在体外将该酶表征为有效地催化磷酸组氨酸和磷酸赖氨酸中的P—N键的水解，且效率更低地分别催化亚胺二磷酸盐和焦磷酸盐中的P--N或P—O键的水解。LHPP可以是蛋白组氨酸或赖氨酸磷酰胺酶，即，修饰其它蛋白的N-连接的磷酸化状态的酶。已经克隆了人LHPP。在大肠杆菌中异源表达以后，已经纯化出功能性的人LHPP酶(参见，Yokoi等人, J Biochem 133:607-14 (2003))。LHPP已经在遗传上与严重抑郁障碍联系和关联。参见Neff等人, Mol. Psychiatry, 14:621-630 (2009)。

遗传标记可以是包含SEQ ID NO:1 (LHPP rs7088418)的核苷酸序列。

(b) AKR1D1

基因AKR1D1编码在肝脏中将皮质醇和可的松转化成四氢代谢物的蛋白。更具体地，由该基因编码的酶负责携带δ(4)-3-酮结构的胆汁酸中间体和类固醇激素的5-β-还原的催化。该酶的缺乏可以促进肝功能障碍。已经发现了该基因的3种编码不同异形体的转录物变体。

遗传标记可以是SEQ ID NO:2 (AKRID1 rs17169521)。

(c) NR3C1

基因NR3C1编码可以以下述2种方式起作用的糖皮质激素受体：作为转录因子，其结合糖皮质激素应答基因的启动子中的糖皮质激素应答元件以活化它们的转录，和作为其它转录因子的调节剂。该受体通常存在于细胞质中，但是在配体结合后，被运输进细胞核中。它参与靶组织中的炎症应答、细胞增殖和分化。该基因中的突变与泛发性糖皮质激素抗性有关。

遗传标记可以是包含NR3C1基因型的核苷酸序列。所述NR3C1基因型可以是包含SEQ ID NO:3 (rs10482672)、SEQ ID NO:4 (rs17100236)或它们的组合的核酸。

(b)非基因组HPA标记

HPA标记可以是非基因组HPA标记，诸如蛋白或肽。所述肽可以是肽激素，诸如精氨酸加压素(AVP)，或前加压素原的片段，诸如肽素或后叶激素运载蛋白II。非基因组HPA标记可以是皮质醇、可的松、促皮质素释放激素、促肾上腺皮质激素或它们的组合。通过本文所述的方法，可以确定得自一种或多种样品(诸如尿)的皮质醇、可的松和它们的肝代谢物的总和。

(a) AVP

AVP可以具有下述氨基酸序列：Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2 (SEQ ID NO:5)。所述受试者可能具有高于得自正常受试者的样品中的AVP或实验室参照中的AVP的分布的第60百分位、第70百分位、第80百分位、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98或第99百分位的基线AVP水平。具有与HPA轴功能有关的障碍的受试者可能具有以下基线血液、血清或血浆AVP水平：大于2 pg/mL至15 pg/mL之间的浓度，大于5 pg/mL至15 pg/mL之间的浓度，大于5 pg/mL至14 pg/mL之间的浓度，大于5 pg/mL至13 pg/mL之间的浓度，大于6 pg/mL至12 pg/mL之间的浓度，大于7 pg/mL至11 pg/mL之间的浓度，或大于8 pg/mL至10 pg/mL之间的浓度。具有与HPA轴功能有关的障碍的受试者可能具有以下基线血液、血清或血浆AVP水平：大于2 pg/mL、3 pg/mL、4 pg/mL、5 pg/mL、6 pg/mL、7 pg/mL，大于8 pg/mL，大于8.1 pg/mL，大于8.2 pg/mL，大于8.3 pg/mL，大于8.4 pg/mL，大于8.5 pg/mL，大于8.6 pg/mL，大于8.7 pg/mL，大于8.8 pg/mL，大于8.9 pg/mL，大于9 pg/mL，大于9.5 pg/mL，大于10 pg/mL，或大于11 pg/mL。具有与HPA轴功能有关的障碍的受试者可能具有以下基线血液、血清或血浆AVP水平：2 pg/mL、3 pg/mL、4 pg/mL、5 pg/mL、6 pg/mL、7 pg/mL、8 pg/mL、8.1 pg/mL、8.2 pg/mL、8.3 pg/mL、8.4 pg/mL、8.5 pg/mL、8.6 pg/mL、8.7 pg/mL、8.8、pg/mL、8.9 pg/mL、9 pg/mL、9.5 pg/mL、10 pg/mL或11 pg/mL。所述水平可以相对于实验室参照来确定。血液、血清或血浆AVP水平可以在任意时间测量；例如，在任意给定天的上午、下午或晚上。

使用商购可得的免疫测定服务或试剂盒测得，所述受试者可能具有以下基线血液、血清或血浆AVP水平：大于2 pg/mL、3 pg/mL、4 pg/mL、5 pg/mL、6 pg/mL、7 pg/mL、8 pg/mL、8.1 pg/mL、8.2 pg/mL、8.3 pg/mL、8.4 pg/mL、8.5 pg/mL、8.6 pg/mL、8.7 pg/mL、8.8 pg/mL、8.9 pg/mL、9 pg/mL、9.1 pg/mL、9.2 pg/mL、9.3 pg/mL、9.4 pg/mL、9.5 pg/mL、9.6 pg/mL、9.7 pg/mL、9.8 pg/mL、9.9 pg/mL 10 pg/mL、11 pg/mL、12 pg/mL、13 pg/mL、13.1 pg/mL、13.2 pg/mL、13.3 pg/mL、13.4 pg/mL、13.5 pg/mL、13.6 pg/mL、13.7 pg/mL、13.8 pg/mL、13.9 pg/mL、14 pg/mL、14.1 pg/mL、14.2 pg/mL、14.3 pg/mL、14.4 pg/mL、14.5 pg/mL、14.6 pg/mL、14.7 pg/mL、14.8 pg/mL、14.9 pg/mL或15 pg/mL。使用商购可得的免疫测定服务或试剂盒测得，所述受试者可能具有以下基线血液、血清或血浆AVP水平：2 pg/mL、3 pg/mL、4 pg/mL、5 pg/mL、6 pg/mL、7 pg/mL、8 pg/mL、8.1 pg/mL、8.2 pg/mL、8.3 pg/mL、8.4 pg/mL、8.5 pg/mL、8.6 pg/mL、8.7 pg/mL、8.8 pg/mL、8.9 pg/mL、9 pg/mL、9.1 pg/mL、9.2 pg/mL、9.3 pg/mL、9.4 pg/mL、9.5 pg/mL、9.6 pg/mL、9.7 pg/mL、9.8 pg/mL、9.9 pg/mL 10 pg/mL、11 pg/mL、12 pg/mL、13 pg/mL、13.1 pg/mL、13.2 pg/mL、13.3 pg/mL、13.4 pg/mL、13.5 pg/mL、13.6 pg/mL、13.7 pg/mL、13.8 pg/mL、13.9 pg/mL、14 pg/mL、14.1 pg/mL、14.2 pg/mL、14.3 pg/mL、14.4 pg/mL、14.5 pg/mL、14.6 pg/mL、14.7 pg/mL、14.8 pg/mL、14.9 pg/mL或15 pg/mL。例如，通过这样的服务的商业提供者的实验室中的免疫测定，可以测量AVP水平。一个这样的提供者是Quest Diagnostics，其法人总部位于3 Giralda Farms, Madison, N.J. 07940, United States of America。另一个提供者可以是Thermo Fisher Scientific, Inc.。取决于服务的提供者和执行的免疫测定的种类，实验室参照范围或标准可以不同于另一个提供者或免疫测定的相应项目。

就测定AVP而言，可能存在实际限制。例如，除非冷冻，否则AVP离体在血浆中是不稳定的。不稳定性可以是由于二硫键的还原，这有助于维持AVP的活性构象。通过有限数目的参照实验室可以得到试验，这通常具有相对较长的结果出报告时间。另外，测定标准供应是不可靠的。这些潜在限制可以通过测定一种或多种如本文中所述的替代标记(例如，一种或多种遗传标记、蛋白标记或其它激素)来克服。

(b)肽素

如上所述，AVP的分析前不稳定性具有有限的与该激素有关的预先试验，但是稳定的糖肽肽素可以充当替代物，因为它与AVP共分泌。发现肽素(一种39-氨基酸糖肽，其包含AVP前体的C-端部分)是AVP释放的稳定的且灵敏的替代标记。血清肽素被糖基化，且含有糖部分。

所述受试者可能具有高于得自正常受试者的样品中的肽素或实验室参照中的肽素的第60百分位、第70百分位、第80百分位、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98或第99百分位的基线肽素水平。具有与HPA轴功能有关的障碍的受试者可能具有以下基线血液、血清或血浆肽素水平：大于1.0 ng/mL至8.0 ng/mL之间、2 ng/mL至7 ng/mL之间、3 ng/mL至6 ng/mL之间、3 ng/mL至8 ng/mL之间、1.5 ng/mL至6 ng/mL之间、2 ng/mL至5 ng/mL之间或3 ng/mL至5 ng/mL之间的浓度。具有与HPA轴功能有关的障碍的受试者可能具有以下基线血液、血清或血浆肽素水平：大于1.5 ng/mL、大于2 ng/mL、大于2.5 ng/mL、大于2.75 ng/mL、大于2.8 ng/mL、大于3 ng/mL、大于4 ng/mL、大于5 ng/mL、大于6 ng/mL、大于7 ng/mL或大于7.5 ng/mL。具有与HPA轴功能有关的障碍的受试者可能具有以下基线血液、血清或血浆肽素水平：1.5 ng/mL、2 ng/mL、2.1 ng/mL、2.2 ng/mL、2.3 ng/mL、2.4 ng/mL、2.5 ng/mL、2.6 ng/mL、2.7 ng/mL、2.8 ng/mL、2.9 ng/mL、3 ng/mL、4 ng/mL、5 ng/mL、6 ng/mL、7 ng/mL或7.5 ng/mL。所述水平可以相对于实验室参照来确定。所述血液、血清或血浆肽素水平可以在任意时间测量；例如，在任意给定天的上午、下午或晚上。

使用商购可得的免疫测定服务或试剂盒测得，所述受试者可能具有以下基线血液、血清或血浆肽素水平：大于2.0 ng/mL、2.25 ng/mL、2.50 ng/mL、2.75 ng/mL或3.0 ng/mL。使用商购可得的免疫测定服务或试剂盒测得，所述受试者可能具有以下基线血液、血清或血浆肽素水平：1.5 ng/mL、2 ng/mL、2.1 ng/mL、2.2 ng/mL、2.3 ng/mL、2.4 ng/mL、2.5 ng/mL、2.6 ng/mL、2.7 ng/mL、2.8 ng/mL、2.9 ng/mL、3 ng/mL、4 ng/mL、5 ng/mL、6 ng/mL、7 ng/mL或7.5 ng/mL。例如，通过这样的服务的商业提供者的实验室中的免疫测定，可以测量肽素水平。一个这样的提供者是Quest Diagnostics，其法人总部位于3 Giralda Farms, Madison, N.J. 07940, United States of America。一种这样的商购可得的测定是Thermo Fisher Scientific, Inc.的B·R·A·H·M·S* 肽素免疫测定。取决于服务的提供者和执行的免疫测定的种类，实验室参照范围或标准可以不同于另一个提供者或免疫测定的相应项目。血液、血清或血浆肽素的水平可以以pM为单位表示。

皮质醇

如上所述，皮质醇产生是HPA轴中的事件的复杂协调的结果。更具体地，皮质醇是束状带中的肾上腺产生的类固醇激素之一。针对要从肾上腺释放的皮质醇，发生信号传递级联。从下丘脑释放的促皮质素释放激素和AVP会刺激垂体前叶中的促肾上腺皮质激素细胞释放ACTH，所述ACTH会将信号传递给肾上腺皮质。在这里，束状带和网状带响应于ACTH而分泌糖皮质激素，尤其是皮质醇。所述皮质醇可以是皮质醇的肝代谢物。所述皮质醇的肝代谢物可以是α-四氢皮质醇、β-四氢皮质醇、α-皮甾五醇、β-皮甾五醇、α-cortolic acid、β-cortolic acid或它们的组合。

所述受试者可能具有高于得自正常受试者的样品中的皮质醇或实验室参照中的皮质醇的第60百分位、第70百分位、第80百分位、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98或第99百分位的基线皮质醇水平。具有与HPA轴功能有关的障碍的受试者可能具有以下基线唾液、尿、血液、血清或血浆皮质醇水平：大于0.5 pg/mL至6 pg/mL之间、1 pg/mL至5 pg/mL之间或2 pg/mL至4 pg/mL之间的浓度。具有与HPA轴功能有关的障碍的受试者可能具有以下基线血液、尿、血清、唾液或血浆皮质醇水平：大于0.5 pg/mL、大于2 pg/mL、大于2.5 pg/mL、大于2.75 pg/mL、大于3 pg/mL、大于3.5 pg/mL、大于4.0 pg/mL、大于4.5 pg/mL、大于4.75 pg/mL、大于5 pg/mL、大于5.5 pg/mL或大于6 pg/mL。所述水平可以相对于实验室参照来确定。所述血液、尿、血清、唾液或血浆皮质醇水平可以在任意时间测量；例如，在任意给定天的上午、下午或晚上。例如，可以在单个时间测量尿皮质醇。可以在24小时收集物或过夜收集物中测量尿皮质醇。所述过夜收集物可以是例如5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时或13小时收集物。可以通过尿肌酸酐来标准化尿皮质醇，这对于单个时间测量或过夜收集物而言可以是有用的。可以将血液中的皮质醇水平测量为总皮质醇。可以估计或计算游离皮质醇或未与蛋白结合的皮质醇。例如，尿或唾液中的皮质醇水平可以是游离皮质醇，即未与蛋白结合。

通过这样的服务的商业提供者的实验室中的质谱法或免疫测定法，可以测量皮质醇水平。一个这样的提供者是Quest Diagnostics，其法人总部位于3 Giralda Farms, Madison, N.J. 07940, United States of America。另一个提供者可以是生物分析实验室诸如Pharmaceutical Product Development, Inc.或“PPD”。另一个提供者可以是Thermo Fisher Scientific, Inc, 或Abbott Laboratories。商购可得的测定试剂盒可以得自Abbott Laboratories。取决于服务的提供者和执行的免疫测定的种类，实验室参照范围或标准可以不同于另一个提供者或免疫测定的相应项目。

(c)可的松

可的松是被称作类固醇生成的过程的几种最终产物之一。该过程开始于胆固醇的合成，所述胆固醇然后在肾上腺(肾上)中进行一系列修饰，以变成许多类固醇激素中的任一种。该途径的一种最终产物是如上所述的皮质醇。在周围组织中，皮质醇被酶11-β-类固醇脱氢酶转化成可的松。可的松通过11-酮-基团的氢化而活化，并且皮质醇因而有时被称作氢化可的松。

所述受试者可能具有高于得自正常受试者的样品中的可的松或实验室参照中的可的松的第60百分位、第70百分位、第80百分位、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98或第99百分位的基线可的松水平，尽管所述水平就血液相对于尿而言可能是不同的，例如，因为某些蛋白或其它组分的存在或缺失。具有与HPA轴功能有关的障碍的受试者可能具有以下基线唾液、尿、血液、血清或血浆可的松水平：大于0.5 pg/mL至10 pg/mL之间、1 pg/mL至9 pg/mL之间、2 pg/mL至8 pg/mL之间、3 pg/mL至7 pg/mL之间、4 pg/mL至6 pg/mL之间、2 pg/mL至4 pg/mL之间或1 pg/mL至4 pg/mL之间的浓度。具有与HPA轴功能有关的障碍的受试者可能具有以下基线唾液、尿、血液、血清或血浆可的松水平：大于0.5 pg/mL、大于2 pg/mL、大于2.5 pg/mL、大于2.75 pg/mL、大于3 pg/mL、大于3.5 pg/mL、大于4.0 pg/mL、大于4.5 pg/mL、大于5 pg/mL、大于5.5 pg/mL、大于6 pg/mL、大于6.5 pg/mL、大于7 pg/mL、大于7.5 pg/mL、大于8 pg/mL、大于8.5 pg/mL、大于9 pg/mL或大于9.5 pg/mL。所述水平可以相对于实验室参照来确定。所述唾液、尿、血液、血清或血浆可的松水平可以在任意时间测量；例如，在任意给定天的上午、下午或晚上。

可的松可以是可的松的肝代谢物。可的松的肝代谢物可以是四氢可的松、皮酮四醇、cortolonic acid或它们的组合。在尿样品中，可的松的肝代谢物可以占总糖皮质激素的约10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%或约30%。这些量可以包括皮质醇的肝代谢物的水平。四氢代谢物可以占总糖皮质激素的约60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%或约80%。可的松可以占尿样品中的总糖皮质激素的约1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%。皮质醇可以占尿样品中的总糖皮质激素的约1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%。

通过这样的服务的商业提供者的实验室中的质谱法或免疫测定法，可以测量可的松水平。一个这样的提供者是Quest Diagnostics，其法人总部位于3 Giralda Farms, Madison, N.J. 07940, United States of America。另一个提供者可以是生物分析实验室诸如Pharmaceutical Product Development, Inc.或“PPD”。取决于服务的提供者和执行的免疫测定的种类，实验室参照范围或标准可以不同于另一个提供者或免疫测定的相应项目。可以通过质谱法来测量可的松。

(d)促皮质素释放激素(CRH)

CRH是从191-氨基酸前激素原衍生出的41-氨基酸肽。CRH由下丘脑的室旁核(PVN)响应于应激而分泌。除了在下丘脑中产生以外，CRH也在周围组织(诸如T淋巴细胞)中合成，并且在胎盘中高度表达。

所述受试者可能具有高于得自正常受试者的样品中的CRH或实验室参照中的CRH的第60百分位、第70百分位、第80百分位、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98或第99百分位的基线肽素水平。具有与HPA轴功能有关的障碍的受试者可能具有以下基线尿、唾液、血液、血清或血浆CRH水平：大于0.5 pg/mL至10 pg/mL之间、1 pg/mL至9 pg/mL之间、2 pg/mL至8 pg/mL之间、3 pg/mL至7 pg/mL之间、4 pg/mL至6 pg/mL之间、2 pg/mL至4 pg/mL之间或1 pg/mL至4 pg/mL之间的浓度。具有与HPA轴功能有关的障碍的受试者可能具有以下基线血液、血清或血浆CRH水平：大于0.5 pg/mL、大于1 pg/mL、大于2 pg/mL、大于2.5 pg/mL、大于2.75 pg/mL、大于3 pg/mL、大于3.5 pg/mL、大于4.0 pg/mL、大于4.5 pg/mL、大于5 pg/mL、大于5.5 pg/mL、大于6 pg/mL、大于6.5 pg/mL、大于7 pg/mL、大于7.5 pg/mL、大于8 pg/mL、大于8.5 pg/mL、大于9 pg/mL或大于9.5 pg/mL。所述水平可以相对于实验室参照来确定。所述尿、唾液、血液、血清或血浆CRH水平可以在任意时间测量；例如，在任意给定天的上午、下午或晚上。

通过这样的服务的商业提供者的实验室中的免疫测定，可以测量CRH水平。一个这样的提供者是Quest Diagnostics，其法人总部位于3 Giralda Farms, Madison, N.J. 07940, United States of America。取决于服务的提供者和执行的免疫测定的种类，实验室参照范围或标准可以不同于另一个提供者或免疫测定的相应项目。

(e)促肾上腺皮质激素(ACTH)

ACTH是由前叶垂体产生和分泌的多肽促激素。如上所述，它是HPA轴的组分。ACTH会增加皮质类固醇和皮质醇从肾上腺皮质的产生和释放。

所述受试者可能具有高于得自正常受试者的样品中的ACTH或实验室参照中的ACTH的第60百分位、第70百分位、第80百分位、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98或第99百分位的基线ACTH水平。具有与HPA轴功能有关的障碍的受试者可能具有以下基线血液、血清或血浆ACTH水平：大于0.5 pg/mL至10 pg/mL之间、1 pg/mL至9 pg/mL之间、2 pg/mL至8 pg/mL之间、3 pg/mL至7 pg/mL之间、4 pg/mL至6 pg/mL之间、2 pg/mL至4 pg/mL之间或1 pg/mL至4 pg/mL之间的浓度。具有与HPA轴功能有关的障碍的受试者可能具有以下基线血液、血清或血浆ACTH水平：大于0.5 pg/mL、大于2 pg/mL、大于2.5 pg/mL、大于2.75 pg/mL、大于3 pg/mL、大于3.5 pg/mL、大于4.0 pg/mL、大于4.5 pg/mL、大于5 pg/mL、大于5.5 pg/mL、大于6 pg/mL、大于6.5 pg/mL、大于7 pg/mL、大于7.5 pg/mL、大于8 pg/mL、大于8.5 pg/mL、大于9 pg/mL或大于9.5 pg/mL。所述水平可以相对于实验室参照来确定。所述血液、血清或血浆ACTH水平可以在任意时间测量；例如，在任意给定天的上午、下午或晚上。ACTH的水平的变化可以与在MASQ上的征状变化有关。

通过这样的服务的商业提供者的实验室中的免疫测定，可以测量ACTH水平。一个这样的提供者是Quest Diagnostics，其法人总部位于3 Giralda Farms, Madison, N.J. 07940, United States of America。另一个提供者可以是Thermo Fisher Scientific, Inc或Abbott Laboratories。商购可得的测定试剂盒可以得自Thermo Fisher Scientific, Inc或Abbott Laboratories。取决于服务的提供者和执行的免疫测定的种类，实验室参照范围或标准可以不同于另一个提供者或免疫测定的相应项目。

(f)后叶激素运载蛋白II

后叶激素运载蛋白II是结合加压素的载体蛋白。它从前加压素原产生。

所述受试者可能具有高于得自正常受试者的样品中的后叶激素运载蛋白II或实验室参照中的后叶激素运载蛋白II的第60百分位、第70百分位、第80百分位、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98或第99百分位的后叶激素运载蛋白II水平。具有与HPA轴功能有关的障碍的受试者可能具有以下基线血液、血清或血浆后叶激素运载蛋白II水平：大于1.0 ng/mL至8.0 ng/mL之间、2 ng/mL至7 ng/mL之间、3 ng/mL至6 ng/mL之间、3 ng/mL至8 ng/mL之间、1.5 ng/mL至6 ng/mL之间、2 ng/mL至5 ng/mL之间或3 ng/mL至5 ng/mL之间的浓度。具有与HPA轴功能有关的障碍的受试者可能具有以下基线血液、血清或血浆后叶激素运载蛋白II水平：大于1.5 ng/mL、大于2 ng/mL、大于2.5 ng/mL、大于2.75 ng/mL、大于3 ng/mL、大于4 ng/mL、大于5 ng/mL、大于6 ng/mL、大于7 ng/mL或大于7.5 ng/mL。所述水平可以相对于实验室参照来确定。所述血液、血清或血浆后叶激素运载蛋白II水平可以在任意时间测量；例如，在任意给定天的上午、下午或晚上。

使用商购可得的免疫测定服务或试剂盒测得，所述受试者可能具有大于2.0 ng/mL、2.25 ng/mL、2.50 ng/mL、2.75 ng/mL或3.0 ng/mL的基线血液、血清或血浆后叶激素运载蛋白II水平。例如，通过这样的服务的商业提供者的实验室中的免疫测定，可以测量后叶激素运载蛋白II水平。取决于服务的提供者和执行的免疫测定的种类，实验室参照范围或标准可以不同于另一个提供者或免疫测定的相应项目。血液、血清或血浆后叶激素运载蛋白II的水平可以以pM为单位表示。

(g)糖皮质激素

糖皮质激素(GC)可以通过影响心血管系统、通过它们对肾小球和肾小管功能的影响或者二者的组合而影响胎儿肾和成熟肾中的肾发育和功能。由内源性GC过度产生(在库欣综合征中)或外源GC施用引起的过量GC可以导致高血压和造成增加的心输出量、总外周阻力和肾血流量。糖皮质激素可以包括四氢代谢物，所述四氢代谢物可以源自通过5-类固醇还原酶的作用而在肝脏中被代谢的皮质醇和可的松。糖皮质激素可以包括皮甾五醇、皮酮四醇、cortolic acid和cortolonic acid。糖皮质激素还可以包括皮质醇、可的松、α-四氢皮质醇、β-四氢皮质醇和四氢可的松。

患有高皮质醇血症的受试者可能在他们的尿中具有增加的皮质醇排泄。可以将该排泄与肌酸酐排泄进行对比，所述肌酸酐排泄在具有正常肾功能的受试者中可以是相当恒定的。患有与HPA轴功能障碍有关的障碍的受试者的尿糖皮质激素:肌酸酐比率可以大于2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4. 3.41、3.42、3.43、3.44、3.45、3.46、3.47、3.48、3.49、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、5、6、7、8、9、10、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.55、11.6、11.65、11.7、11.8、11.9、12、13、14、15、16、17、18、19或20。

通过这样的服务的商业提供者的实验室中的质谱法或免疫测定法，可以测量糖皮质激素和肌酸酐水平。一个这样的提供者可以是生物分析实验室诸如Pharmaceutical Product Development, Inc.或“PPD”。取决于服务的提供者和执行的质谱法或免疫测定法的种类，实验室参照范围或标准可以不同于另一个提供者、质谱法或免疫测定法的相应项目。

d. 受试者

鉴别HPA标记的方法可以应用于得自受试者的样品。所述受试者可以是人。所述受试者可以有此需要。例如，所述受试者可以被诊断出具有与HPA轴功能障碍有关的障碍。该诊断可以在使用本文所述的方法之前、过程中或之后进行。HPA轴功能障碍可以驱动皮质醇升高，所述皮质醇升高如果罕见地延长的话，可以变成有害的并导致障碍。Kaltas和Chrousos (2007), Handbook of psychophysiology, 第303-318页, New York: Cambridge University Press；以及Lovallo和Thomas (2000) Handbook of psychophysiology, 第342-367页, Cambridge, UK: Cambridge University Press。例如，延长的皮质醇升高可以导致组织分解代谢、降低的免疫功能和神经心理学效应诸如嗜睡和破坏的情绪功能。皮质醇增多症的副作用类似于抑郁症的征状。参见Guguis等人, 1990, Biological Psychiatry, 27, 1156-1164。HPA轴功能障碍可以是HPA驱动的或破坏的白天模式的缺乏。所述受试者可以罹患一种或多种其它的HPA轴调节异常相关的障碍，包括心境障碍、焦虑障碍、物质相关的障碍、库欣综合征或疾病、阿尔茨海默型痴呆、由阿尔茨海默氏病引起的轻度认知损害、骨质疏松症、关节炎、糖尿病、血脂异常、肥胖、高血压、创伤、疼痛和青光眼。所述心境障碍可以是例如抑郁症或严重抑郁障碍。所述焦虑障碍可以是例如创伤后应激障碍、广泛性焦虑障碍或惊恐障碍。所述物质相关的障碍可以是例如酒精依赖性或滥用或药物依赖性或滥用。

所述受试者可以是正常受试者。所述正常受试者可以不具有与HPA轴功能障碍有关的障碍。所述正常受试者可以是健康的且不具有任何障碍或病症。

e. 样品

可以在其中用上述方法检测HPA标记的样品可以是任意组织，且包含得自受试者的蛋白、激素、核酸或它们的组合。所述激素可以是例如类固醇激素，诸如皮质醇、ACTH、CRH、可的松和皮质醇或可的松代谢物。所述核酸可以是DNA或RNA。所述核酸可以是基因组。所述样品可以按照从受试者得到的状态直接使用，或者在预处理以改变样品的特性以后使用。预处理可以包括提取、浓缩、灭活干扰组分、添加试剂或它们的组合。所述样品可以得自具有以HPA轴调节异常为特征的障碍的受试者，或者它可以是对照样品。

所述HPA轴功能标记可以在任意细胞类型、组织或体液样品中检测。这样的细胞类型、组织和流体的样品可以包括：组织的切片(诸如活组织检查和尸体剖检样品)，为了组织学目的采集的冷冻切片，血液，血浆，血清，唾液，痰，粪便，泪液，粘液，淋巴液，腹水液(ascetic fluid)，妇科流体，尿，腹膜液，脑脊液，通过阴道冲洗(vaginal rinsing)收集的流体，或通过阴道冲洗(vaginal flushing)收集的流体。组织或细胞类型可以通过从动物取出细胞样品来提供，但是还可以通过使用先前分离的细胞(例如，由另一个人在另一个时间和/或为了另一个目的而分离)来完成。还可以使用存档的组织，诸如具有治疗或结果史的那些。核酸纯化可能不是必要的。任何样品(诸如尿样品)可以是得自受试者的样品的24小时收集物。所述样品可以是得自受试者的样品的过夜收集物。所述样品可以在单次排泄中收集自所述受试者。

(1) 对照/基线

可能合乎需要的是，包括用在上述方法中的对照或基线样品或一系列校准组合物。可以与得自如上所述受试者的样品并行地分析对照样品。可以将得自受试者样品的结果与得自对照样品的结果进行对比。可以提供标准曲线，可以将生物样品的测定结果与所述标准曲线进行对比。如果使用荧光标记的话，这样的标准曲线呈现了随测定单位而变化的标记水平，即荧光信号强度。使用取自多个供体的样品，可以为正常组织中的HPA标记的对照水平以及为取自供体的组织中的HPA标记的“危险”水平提供标准曲线，所述供体可能具有一个或多个上述特征。

所述对照可以是得自正常受试者的样品。所述对照可以是已知水平的HPA标记，诸如“实验室参照”，或所述对照可以是已知范围的HPA标记水平，诸如“实验室参照范围”。

所述实验室参照范围可以随测定或测定服务提供者而变化。例如，血浆AVP的实验室参照范围可以是0.5 pg/mL至15 pg/mL之间、1 pg/mL至13.3 pg/mL之间、1 pg/mL至15 pg/mL之间、2 pg/mL至14 pg/mL之间、3 pg/mL至13 pg/mL之间、4 pg/mL至12 pg/mL之间、5 pg/mL至11 pg/mL之间、6 pg/mL至10 pg/mL之间、7 pg/mL至9 pg/mL之间或11 pg/mL至13.3 pg/mL之间。

肽素的实验室参照范围可以是2 pmol/L至20 pmol/L之间、3 pmol/mL至19 pmol/L之间、4 pmol/mL至18 pmol/mL之间、4.8 pmol/L至17.4 pmol/L之间、5 pmol/L至16 pmol/L之间、7 pmol/L至14 pmol/L之间、8 pmol/L至11 pmol/L之间、9 pmol/L至10 pmol/L之间、10 pmol/L至17.4 pmol/L之间、13 pmol/L至17.4 pmol/L之间或14 pmol/L至17.4 pmol/L之间。

女性受试者的肽素的实验室参照范围可以是2 pmol/L至20 pmol/L之间、3 pmol/mL至19 pmol/L之间、4 pmol/mL至18 pmol/mL、4.8 pmol/L至14 pmol/L之间、5 pmol/L至14 pmol/L之间、8 pmol/L至14 pmol/L之间、9 pmol/L至14 pmol/L之间、10 pmol/L至14 pmol/L之间、11 pmol/L至14 pmol/L之间、12 pmol/L至14 pmol/L或4 pmol/L至9 pmol/L之间。女性中的肽素的实验室参照范围可以是4.8 pmol/L至12.9 pmol/L之间。

男性受试者的肽素的实验室参照范围可以是4.8 pmol/L至20 pmol/L之间、5 pmol/L至20 pmol/L之间、8 pmol/L至15 pmol/L之间、15 pmol/L至25 pmol/L之间、16 pmol/L至24 pmol/L之间、17 pmol/L至23 pmol/L之间、18 pmol/L至22 pmol/L之间或19 pmol/L至21 pmol/L。男性的肽素的实验室参照范围可以是4.8 pmol/L至19.1 pmol/L之间。

肽素的实验室参照范围可以是0.5 pg/mL至10 pg/mL之间、1 pg/mL至9 pg/mL之间、2 pg/mL至8 pg/mL之间、3 pg/mL至7 pg/mL之间、4 pg/mL至6 pg/mL之间、2 pg/mL至4 pg/mL之间或1 pg/mL至4 pg/mL之间。所述实验室参照范围可以是针对任意男性或女性受试者。

皮质醇nmol/L:肌酸酐mmol/L比率的实验室参照范围可以是1-20、2-19、3-18、4-17、5-16、6-15、7-14、8-13、9-12、或10-11。参见，例如，Reynolds, 等人, “Establishing a reference range for urine cortisol:creatinine ratio,”Endocrine Abstracts (2007)13, P270。

通过这样的服务的商业提供者的实验室中的质谱法或免疫测定法，可以测量上述的非基因组标记中的任一种。一个这样的提供者是Quest Diagnostics，其法人总部位于3 Giralda Farms, Madison, N.J. 07940, United States of America。另一个提供者可以是Thermo Fisher Scientific, Inc.。商购可得的测定试剂盒可以得自Thermo Fisher Scientific, Inc.、Perkin Elmer、Abbott Laboratories或Ortho Diagnostics。取决于服务的提供者和执行的质谱法或免疫测定法的种类，实验室参照范围或标准可以不同于另一个提供者、质谱法或免疫测定法的相应项目。

f. 检测

可以检测样品中的HPA标记。许多方法可用于检测受试者中的标记或得自受试者的样品中的标记，且可以与本文中描述的方法结合使用。所述方法包括各种免疫测定、SNP基因分型、外切核酸酶抗性的核苷酸检测、基于溶液的方法、遗传咬合分析、引物引导的核苷酸掺入、等位基因特异性杂交和其它技术。任何检测标记的方法可以使用标记的抗体、蛋白或寡核苷酸。

通过例如质谱法、免疫测定或免疫组织化学(例如使用得自组织活组织检查的切片)，使用针对HPA标记的抗体(单克隆的或多克隆的)或其片段，可以容易地确定样品中的HPA标记的存在或量。通过本领域众所周知的方法，可以生产抗-HPA标记抗体及其片段。其它检测方法包括在例如以下文献中描述的那些：美国专利号6,143,576、6,113,855、6,019,944、5,985,579、5,947,124、5,939,272、5,922,615、5,885,527、5,851,776、5,824,799、5,679,526、5,525,524和5,480,792，它们中的每一篇特此通过引用整体并入。

(1) 免疫测定

使用免疫测定，可以分析HPA标记、其肽或它们的组合。使用抗体并检测与HPA标记的特异性结合，可以确定HPA标记的存在或量。例如，所述抗体或其片段可以特异性地结合肽素或AVP。

可以使用任意免疫测定。所述免疫测定可以是例如酶联免疫测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、竞争性抑制测定(诸如正向或反向竞争性抑制测定)、荧光偏振测定或竞争性结合测定。所述ELISA可以是夹心ELISA。经由直接标记(诸如与抗体连接的荧光标签或发光标签、金属和放射性核素)或经由间接标记(诸如碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶)，可以检测抗体与HPA标记的特异性免疫学结合。

可以将固定化的抗体或其片段的应用掺入免疫测定中。可以将抗体固定化在多种支持物上，诸如磁性颗粒或色谱基体颗粒，测定板(诸如微量滴定孔)的表面，固体基底材料的碎片，等。通过将抗体或阵列中的多个抗体包被在固体支持物上，可以制备测定条。然后可以将该条浸入试验生物样品中，然后通过洗涤和检测步骤快速地处理，以产生可测量的信号，诸如有色斑点。

(a) 夹心ELISA

夹心ELISA测量2个抗体(即捕获和检测抗体)层之间的抗原的量。要测量的HPA标记可以含有至少2个能够结合抗体的抗原位点。单克隆或多克隆抗体可以用作夹心ELISA中的捕获和检测抗体。

通常，采用至少2种抗体来分离和定量试验样品中的HPA标记。更具体地，所述至少2种抗体结合HPA标记的某些表位，从而形成被称作“三明治”的免疫复合物。可以使用一种或多种抗体来捕获试验样品中的HPA标记(这些抗体经常被称作“捕获”抗体)，且使用一种或多种抗体来使可检测的(即，可计量的)标记结合至夹心(这些抗体经常被称作“检测”抗体)。在夹心测定中，所述测定中任意其它抗体与它各自的表位的结合，不会减少与它们的表位结合的两种抗体。换而言之，可以选择抗体，使得与疑似含有HPA标记的试验样品接触的一种或多种第一抗体不会结合被第二或后续抗体识别的全部或部分表位由此干扰一种或多种第二检测抗体结合HPA标记的能力。

所述抗体可以在所述免疫测定中用作第一抗体。优选地，所述抗体免疫特异性地结合包含HPA标记的至少三(3)个连续氨基酸的表位。除了本发明的抗体以外，所述免疫测定可以包含第二抗体，所述第二抗体免疫特异性地结合具有包含HPA标记的至少三(3)个连续氨基酸的氨基酸序列的表位，其中所述第二抗体结合的连续(3个)氨基酸不同于所述第一抗体结合的连续(3个)氨基酸。

在一个优选的实施方案中，可以使疑似含有HPA标记的试验样品同时或依次与至少一种第一捕获抗体(或抗体)和至少一种第二检测抗体接触。在夹心测定形式中，首先使疑似含有HPA标记的试验样品与至少一种第一捕获抗体接触，所述第一捕获抗体在允许形成第一抗体-HPA标记复合物的条件下特异性地结合特定表位。如果使用超过一种捕获抗体，形成第一/多种捕获抗体-HPA标记复合物。在夹心测定中，抗体(优选地，至少一种捕获抗体)以在试验样品中预见到的HPA标记的最大量的摩尔过量使用。例如，可以使用约5μg/ml至约1 mg/ml抗体/ml微粒包被缓冲液。

任选地，在使试验样品与至少一种第一捕获抗体接触之前，至少一种第一捕获抗体可以结合至固体支持物，所述固体支持物会促进第一抗体-HPA标记复合物从试验样品中的分离。可以使用本领域已知的任意固体支持物，包括、但不限于，呈孔、管或珠子形式的由聚合材料制成的固体支持物。所述抗体(或多种抗体)可以通过吸附、通过共价键合(使用化学偶联剂)或通过本领域已知的其它方式结合至固体支持物，前提条件是，这样的结合不会干扰抗体的结合HPA标记的能力。此外，如果必要的话，可以将固体支持物衍生化，以实现与抗体上的不同官能团的反应性。这样的衍生化需要使用某些偶联剂，例如，但不限于，马来酸酐、N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺。

在使疑似含有HPA标记的试验样品与至少一种第一捕获抗体接触以后，将试验样品温育，以便允许形成第一捕获抗体(或多种抗体)-HPA复合物。所述温育可以在约4.5至约10.0的pH、约2℃至约45℃的温度进行至少约一(1)分钟至约十八(18)小时、约2-6分钟或约3-4分钟的时段。

在形成第一/多种捕获抗体-HPA标记复合物以后，然后使所述复合物与至少一种第二检测抗体接触(在允许形成第一/多种抗体-HPA标记-第二抗体复合物的条件下)。如果使第一抗体-HPA标记复合物与超过一种检测抗体接触，那么形成第一/多种捕获抗体-HPA标记-多种抗体检测复合物。与第一抗体一样，当使至少第二(和后续)抗体与第一抗体-HPA标记复合物接触时，第一/多种抗体-HPA标记-第二/多种抗体复合物的形成需要在与上述那些类似的条件下的温育时段。优选地，至少一种第二抗体含有可检测标记。在形成第一/多种抗体-HPA标记-第二/多种抗体复合物之前、同时或之后，所述可检测标记可以结合至少一种第二抗体。可以使用本领域已知的任意可检测标记。

(b) 正向竞争性抑制

在正向竞争形式中，使用已知浓度的经标记的HPA标记的等分试样与试验样品中的HPA标记竞争对HPA标记抗体的结合。

在正向竞争测定中，可以使固定化的抗体依次或同时与试验样品和经标记的HPA标记接触。所述HPA标记可以用与抗-HPA标记抗体有关的任意可检测标记进行标记。在该测定中，可以将抗体固定化在固体支持物上。可替换地，可以将抗体偶联至已经被固定化在固体支持物(诸如微粒)上的抗体(诸如抗物种抗体)。

在与上面关于夹心测定形式描述的那些类似的条件下，温育经标记的HPA标记、试验样品和抗体。然后可以制备抗体-HPA标记复合物的2种不同物种。具体地，制备的抗体-HPA标记复合物之一含有可检测标记，而另一种抗体-HPA标记复合物不含有可检测标记。在定量可检测标记之前，所述抗体-HPA标记复合物可以、但不一定与试验样品的其它部分分离。不论抗体-标记复合物是否与试验样品的其它部分分离，然后定量抗体-HPA标记复合物中的可检测标记的量。然后可以通过将抗体-HPA标记复合物中的可检测标记的量与标准曲线进行对比来确定试验样品中的HPA标记的浓度。使用已知浓度的HPA标记的系列稀释物，通过质谱法、通过比重测定法和通过本领域已知的其它技术，可以制备标准曲线。

可以如下从试验样品分离抗体-HPA标记复合物：使所述抗体结合至固体支持物，诸如上面关于夹心测定形式讨论的固体支持物，然后使试验样品的其它部分不与所述固体支持物接触。

(c) 反向竞争测定

在反向竞争测定中，可以使固定化的HPA标记依次或同时与试验样品和至少一种标记的抗体接触。优选地，所述抗体特异性地结合具有包含HPA标记的至少三(3)个连续氨基酸的氨基酸序列的表位。所述HPA标记可以结合至固体支持物，诸如上面关于夹心测定形式讨论的固体支持物。

在与上面关于夹心测定形式描述的那些类似的条件下，温育固定化的HPA标记、试验样品和至少一种标记的抗体。然后制备HPA标记复合物的2种不同物种。具体地，制备的HPA标记-抗体复合物之一被固定化且含有可检测标记，而另一种HPA标记-抗体复合物没有被固定化且含有可检测标记。通过本领域已知的技术，诸如洗涤，从固定化的HPA标记-抗体复合物的存在除去未固定化的HPA标记-抗体复合物和试验样品的其它部分。除去未固定化的HPA标记抗体复合物以后，然后定量固定化的HPA标记-抗体复合物中的可检测标记的量。然后可以通过将HPA标记-复合物中的可检测标记的量与标准曲线进行对比来确定试验样品中的HPA标记的浓度。使用已知浓度的HPA标记的系列稀释物，通过质谱法、通过比重测定法和通过本领域已知的其它技术，可以制备标准曲线。

(d) 荧光偏振

在荧光偏振测定中，可以首先使抗体或其功能活性片段与疑似含有HPA标记的未标记的试验样品接触，以形成未标记的HPA标记-抗体复合物。然后使未标记的HPA标记-抗体复合物与荧光地标记的HPA标记接触。标记的HPA标记与任何试验样品中的任何未标记的HPA标记竞争对抗体或其功能活性片段的结合。确定形成的经标记的HPA标记-抗体复合物的量，并通过使用标准曲线来确定试验样品中的HPA标记的量。

在荧光偏振测定中使用的抗体可以特异性地结合具有包含HPA标记的至少三(3)个氨基酸的氨基酸序列的表位。

可以在与上面关于夹心免疫测定描述的那些类似的条件下，温育抗体、经标记的HPA标记和试验样品和至少一种标记的抗体。

可替换地，可以使抗体或其功能活性片段可以与荧光地标记的HPA标记和疑似含有HPA标记的未标记的试验样品同时接触，以形成经标记的HPA标记-抗体复合物和未标记的HPA标记-抗体复合物。确定形成的经标记的HPA标记-抗体复合物的量，并通过使用标准曲线来确定试验样品中的HPA标记的量。

可替换地，首先使抗体或其功能活性片段与荧光地标记的其HPA标记接触，以形成经标记的HPA标记-抗体复合物。然后使经标记的HPA标记-抗体复合物与疑似含有HPA标记的未标记的试验样品接触。试验样品中的任何未标记的HPA标记会与标记的HPA标记竞争对抗体或其功能活性片段的结合。确定形成的经标记的HPA标记-抗体复合物的量，并通过使用标准曲线来确定试验样品中的HPA标记的量。在该免疫测定中使用的抗体可以特异性地结合具有包含HPA标记的至少三(3)个氨基酸的氨基酸序列的表位。

(2) 质谱法

质谱法(MS)分析可以单独使用或与其它方法联合使用。其它方法包括免疫测定和上述的检测特定多核苷酸的那些方法。质谱法方法可以用于确定一种或多种生物学标记的存在和/或量。MS分析可以包含基质辅助的激光解吸/电离(MALDI)飞行时间(TOF) MS分析，例如，定点MALDI-TOF或液相色谱法MALDI-TOF质谱法分析。在某些实施方案中，所述MS分析包含电喷射电离(ESI) MS，诸如液相色谱法(LC) ESI-MS。使用商业可得到的波谱仪可以完成质量分析。可以使用利用MS分析(包括MALDI-TOF MS和ESI-MS)来检测生物样品中的HPA标记的存在和量的方法。关于指导，参见，例如，美国专利号6,925,389、6,989,100和6,890,763，它们中的每一篇通过引用并入本文。

(3) 基因分型

(a) SNP基因分型

大规模SNP基因分型可以包括动态的等位基因特异性的杂交(DASH)、微量培养板阵列对角线凝胶电泳(MADGE)、焦磷酸测序、寡核苷酸特异性的连接或各种DNA“芯片”技术(诸如Affymetrix SNP芯片)中的任一种。这些方法可能需要扩增靶基因区域。扩增可以通过聚合酶链式反应(PCR)来完成。

(b) 外切核酸酶抗性的核苷酸

使用如在美国专利号4,656,127(其通过引用并入本文)中描述的专门的外切核酸酶抗性的核苷酸，可以检测PI-标记。可以允许与多态位点的3'侧紧邻处的等位基因序列互补的引物与得自受试者的靶分子杂交。如果靶分子上的多态位点含有与存在的特定外切核酸酶抗性的核苷酸衍生物互补的核苷酸，那么该衍生物可以掺入在杂交的引物的末端上。这样的掺入可以给所述引物赋予外切核酸酶抗性，并由此允许它的检测。由于所述样品的外切核酸酶抗性的衍生物的身份可以是已知的，引物已经变成具有外切核酸酶抗性的发现会揭示，在靶分子的多态位点中存在的核苷酸与在反应中使用的核苷酸衍生物互补。该方法可能不需要确定大量外来序列数据。

(c) 基于溶液的方法

基于溶液的方法可以用于确定PI-标记的身份，如在通过引用并入本文的PCT申请号WO91/02087中所述。可以采用与多态位点的3'侧紧邻处的等位基因序列互补的引物。所述方法可以使用标记的二脱氧核苷酸衍生物确定该位点的核苷酸的身份，所述标记的二脱氧核苷酸衍生物如果与多态位点的核苷酸互补，那么将变成掺入在引物的末端上。

(d) 遗传咬合分析

遗传咬合分析可以使用标记的终止子和引物的混合物，所述引物与多态位点的3'侧的序列互补。可以掺入标记的终止子，其中它取决于存在于要评价的靶分子的多态位点中的核苷酸并与所述核苷酸互补。可以将引物或靶分子固定化至固相。

(e) 引物引导的核苷酸掺入

引物引导的核苷酸掺入方法可以用于测定核酸中的PI-标记，如在以下文献中所述：Nyren, P. 等人, Anal. Biochem. 208:171-175 (1993)，其通过引用并入本文。这样的方法可以依赖于标记的脱氧核苷酸的掺入，以辨别多态位点处的碱基。在这样的形式中，由于信号与掺入的脱氧核苷酸的数目成比例，在相同核苷酸的运行中发生的多态性可以产生与运行的持续时间成比例的信号。

(f) 等位基因特异性杂交

等位基因特异性杂交可以用于检测PI-标记。该方法可以使用能够与靶等位基因杂交的探针。可以将探针标记。探针可以是寡核苷酸。所述靶等位基因可以在标记周围具有3-50个核苷酸。所述靶等位基因可以在标记周围具有5-50、10-40、15-40或20-30个核苷酸。可以将探针连接至固相支持物，例如，芯片。可以通过多种方法将寡核苷酸结合至固体支持物，所述方法包括平版印刷术。芯片可以包含核酸的靶区域的超过一种等位基因变体，例如，基因的2个或更多个多态区域的等位基因变体。

(g) 其它技术

用于检测等位基因的其它技术的例子包括选择性的寡核苷酸杂交、选择性的扩增或选择性的引物延伸。可以制备寡核苷酸引物，其中将已知的突变或核苷酸差异放置在中央，然后在允许杂交(如果发现完美匹配的话)的条件下与靶DNA杂交。当寡核苷酸与PCR扩增的靶DNA或许多不同突变或多态区域杂交时，当将寡核苷酸连接至杂交膜并与标记的靶DNA杂交时，这样的等位基因特异性的寡核苷酸杂交技术可以用于在每个反应中试验一个突变或多态区域。

依赖于选择性PCR扩增的等位基因特异性的扩增技术可以与本发明结合使用。用作特异性扩增的引物的寡核苷酸可以在分子的中央携带目标突变或多态区域。扩增然后可以依赖于示差杂交，如在以下文献中所述：Gibbs等人(1989) Nucleic Acids Res. 17:2437-2448)，其通过引用并入本文，或者在一个引物的极端3'末端，其中在适当的条件下，错配可以阻止或减少聚合酶延伸。

直接DNA测序(手工测序或自动化的荧光测序)可以检测序列变异。另一个方案是单链构象多态性测定(SSCP)，如在以下文献中所述：Orita M, 等人(1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:2766-2770，其通过引用并入本文。可以对在SSCP凝胶上具有转移的迁移率的片段测序，以确定DNA序列变异的精确性质。基于2个互补DNA链之间的错配的检测的其它方案包括：夹紧变性凝胶电泳(CDGE)，如在Sheffield V C, 等人(1991) Am. J. Hum. Genet. 49:699-706(其通过引用并入本文)中所述；异源双链体分析(HA)，如在White M B, 等人(1992) Genomics 12:301-306(其通过引用并入本文)中所述；和化学错配裂解(CMC)，如在Grompe M, 等人, (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:5855-5892(其通过引用并入本文)中所述。目前可得到的检测DNA序列变异的方法的综述，可以参见Grompe (1993)的综述，其通过引用并入本文。Grompe M (1993) Nature Genetics 5:111-117。已知突变以后，可以利用等位基因特异性的检测方案(诸如等位基因特异性的寡核苷酸(ASO)杂交)来针对该相同突变快速地筛选大量其它样品。这样的技术可以利用探针，所述探针可以用金纳米颗粒标记以产生视觉颜色结果，如在Elghanian R, 等人(1997) Science 277:1078-1081(其通过引用并入本文)中所述。

通过寻找用一种或多种限制性酶、优选地用大量限制性酶切割的DNA的一系列DNA印迹，可以进行检测DNA序列中的多态性的快速初步分析。

(4) 扩增

任何检测方法可以包括扩增HPA-标记的步骤。可以扩增然后检测HPA-标记。核酸扩增技术可以包括克隆、聚合酶链式反应(PCR)、特定等位基因(ASA)的PCR、连接酶链式反应(LCR)、套式聚合酶链式反应、自我持续序列复制、转录扩增系统和Q-β复制酶，如在Kwoh, D. Y. 等人, 1988, Bio/Technology 6:1197(其通过引用并入本文)中所述。

通过尺寸分析、限制酶切消化继之以尺寸分析、检测反应产物中的特异性的标记的寡核苷酸引物、等位基因特异性的寡核苷酸(ASO)杂交、等位基因特异性的5' 外切核酸酶检测、测序、杂交或它们的组合，可以测定扩增产物。

基于PCR的检测方法可以包括同时扩增多个标记。可以选择PCR引物以产生在大小上不会重叠且可以同时分析的PCR产物。可替换地，可以用差别地标记的引物来扩增不同的标记。仍然会可以差别地检测每种标记。基于杂交的检测方法可以实现样品中的多种PCR产物的示差检测。

g. V_1B拮抗剂

本文提供了用在治疗有此需要的受试者的方法中的V_1B拮抗剂。所述V_1B拮抗剂可以具有下式(式I)：

其中A是芳族单环杂环，其中所述杂环是5或6元环且包含至多4个选自N、O和S的杂原子，其中不超过一个杂原子是氧或硫原子，且A可以被基团R11、R12和/或R13取代，其中R11、R12和R13在每次出现时彼此独立地选自氢、氯、溴、碘、氟、CN、CF₃、OCF₃、NO₂、OH、O-C₁-C₄-烷基、O-苯基、O-C₁-C₄-亚烷基-苯基、苯基、C₁-C₆-烷基、C₂-C₆-烯基、C₂-C₆-炔基、NH₂、NH(C₁-C₄-烷基)和N(C₁-C₄-烷基)₂，R₃和R₄彼此独立地选自氢、氯、溴、碘、氟、CN、CF₃、OCF₃、NO₂、OH、O-C₁-C₄-烷基、O-苯基、O-C₁-C₄-亚烷基-苯基、苯基、C₁-C₆-烷基、C₂-C₆-烯基、C₂-C₆-炔基、NH₂、NH(C₁-C₄-烷基)和N(C₁-C₄-烷基)₂，或R₃和R₄连接以产生-CH=CH-CH=CH-、-(CH₂)₄-或-(CH₂)₃-，

R5是

其中W选自NR54、NR54-(C₁-C₄-亚烷基)和键，R54独立地选自氢、C₁-C₆-烷基、C₂-C₆-烯基、C₂-C₆-炔基、苯基和C₁-C₄-亚烷基-苯基，其中苯基环可以被至多2个基团R59取代，R59独立地选自氢、氯、溴、碘、氟、CN、CF₃、OCF₃、NO₂、OH、O-C₁-C₄-烷基、C₁-C₆-烷基、C₂-C₆-烯基、C₂-C₆-炔基、NH₂、NH(C₁-C₄-烷基)和N(C₁-C₄-烷基)₂，R63彼此独立地选自氢、氯、溴、碘、氟、CN、CF₃、OCF₃、NO₂、OH、O-C₁-C₄-烷基、O-苯基、O-C₁-C₄-亚烷基-苯基、苯基、C₁-C₆-烷基、C₂-C₆-烯基、C₂-C₆-炔基、NH₂、NH(C₁-C₄-烷基)和N(C₁-C₄-烷基)₂，R6和R7彼此独立地选自氢、氯、溴、碘、氟、CN、CF₃、OCF₃、NO₂、OH、O-C₁-C₄-烷基原子、O-苯基、O-C₁-C₄-亚烷基-苯基、苯基、C₁-C₆-烷基、C₂-C₆-烯基、C₂-C₆-炔基、NH₂、NH(C₁-C₄-烷基)和N(C₁-C₄-烷基)₂，和它们的互变异构形式、它们的对映异构形式和非对映异构形式。

A可以是包含1或2个杂原子的芳族杂单环系统，其中2个杂原子之一是氮。

A可以是嘧啶、吡啶、哒嗪、吡嗪、噻唑、咪唑、噻吩-或呋喃。

所述V_1B拮抗剂可以是：

 (化合物A)。

所述V_1B拮抗剂可以是：

(化合物B)。

4. 试剂盒

本文提供了试剂盒，其可以用于执行本文所述的方法中的任一种。所述试剂盒可以包含HPA标记检测试剂和任选的用于将所述试剂施用给例如样品的装置。另外，所述试剂盒可以包含如本文中所述的V_1B拮抗剂。所述试剂盒可以包含蛋白酶抑制剂试剂。所述试剂盒可以包含pH调节剂、载体或它们的组合。所述试剂盒还可以包含关于使用所述试剂盒和进行分析、监测或治疗的说明书。所述试剂盒可以用于稳定含有AVP的样品。根据一个实施方案，用在本发明的方法中的试剂盒包含HPA标记检测试剂和任选的其它组分，所述其它组分选自蛋白酶抑制剂试剂、pH调节剂、载体和它们的组合。根据另一个实施方案，用在本发明的方法中的试剂盒包含HPA标记检测试剂和如本文中所述的V_1B拮抗剂和任选的其它组分，所述其它组分选自蛋白酶抑制剂试剂、pH调节剂、载体和它们的组合。

所述试剂盒还可以包含一个或多个容器，诸如管形瓶、收集试管或瓶子，其中每个容器含有单独的试剂。例如，可以用容器中的一种或多种蛋白酶抑制剂、生物活性的载体处理含有AVP的血浆样品。所述试剂盒还可以包含书面说明书，其可以描述如何在室温稳定AVP，如何执行或解释本文描述的分析、监测、治疗或方法。

本发明具有由下述非限制性实施例例证的多个方面。

实施例

实施例1

血浆AVP分析

在具有MDD的受试者中进行化合物A的安全性和药效动力学的随机化的、安慰剂对照的、双盲临床研究。将51位具有M.I.N.I.证实的初步MDD诊断和严重程度为3或4的临床总体印象的受试者随机化至800 mg化合物A QD (n = 31)或匹配安慰剂(n = 20)持续7天。从初次研究药物施用之前2天直到最后一剂研究药物以后24小时，将受试者限制在临床场所中。在研究药物施用之前和在第6次和第7次给药当天，彻底评估HPA轴功能。测定了一组与HPA轴功能有关的遗传变体。该研究的一个宣称目的是，定义在化合物A施用之前，用于鉴别更可能对化合物A做出应答的MDD受试者的方式。

在MDD受试者中，33% (17/51)表现出高于健康正常志愿者(HNV)中的分布的大约90% (8.6 pg/mL)的血浆AVP水平。与得自另一个HNV临床研究的可比较数据一起显示了在该临床研究中的基线AVP数据。这些HNV数据与报告的实验室参照范围(1.0-13.3 pg/mL)一致，而大多数高AVP MDD受试者表现出高于实验室参照范围的血浆AVP水平。参见图1。

AVP是最初作为化合物A应答的潜在预测因子分析的唯一参数，因为在研究药物施用之前在一天的3次(大约上午8点、下午2点和下午10点)中的任一次中测量的日间血浆水平是在该研究中的MDD受试者和其它研究的HNV受试者之间的基线HPA轴功能的最突出差异。将MASQ用作最初征状变化量度，以获知高和正常AVP受试者是否表现出化合物A的差别益处。

使用受试者操作特征(ROC)分析。在第一个ROC中，因变量是治疗，自变量是MASQ子量表。该ROC的目的是，定义MASQ量表评分变化，该变化是接受化合物A的受试者所特有的，且不是接受安慰剂的那些受试者所特有的。可以认为这样的评分变化将化合物A应答者与化合物A无应答者区分开。在5个MASQ子量表中，一般性痛苦混合的(GDM)和抑郁的(GDD)子量表会将化合物A与安慰剂受试者区分开。参见表1。这基于ANCOVA结果预见到，所述结果包括在那些量表上，但是不在抑郁性快感缺乏(AD)、焦虑唤醒(AA)或一般性痛苦焦虑(GDA)上，对治疗的统计上显著的因子。当将因变量分析为相对于基线的百分比(而不是绝对)变化时，得到类似的结果。

表1

在第二个ROC中，因变量是基于-0.53的GDM截止值的应答者状态。选择GDM，因为它具有比GDD更好的特异性。自变量是基线下午血浆AVP。最佳截止值是8.6 pg/mL。这提供了39% (9/23的化合物A应答者被包括)的灵敏度和86% (6/7的化合物A无应答者被排除)的特异性。由于缺少基线下午血浆AVP，一位化合物A受试者没有被包括在该分析中。

个体的AVP水平没有表现出实质白天变异，因而大多数通过下午测量定义为高AVP的受试者通过上午测量也是如此，并且就低AVP受试者而言类似。一位上午测量为低AVP且下午测量为高AVP的受试者在所有后续分析中被认为是高AVP。一位上午测量为低AVP且缺失下午测量的受试者在所有后续分析中被认为是低AVP。

下面显示了AVP (高相对于正常)和治疗(化合物A相对于安慰剂)的相互作用。因变量是第7天的MASQ量表评分和汉密顿抑郁评级量表(HAM-D) - 版本评分。在第-2天的对应量表评分是每个模型中的协变量。每个模型包括研究人员、AVP、治疗以及AVP和治疗的相互作用的因子。最后一个仅对于MASQ GDD而言是统计上显著的，但是就MASQ GDM和AD以及HAM-D的7-项版本而言，存在数字上有利的趋势。在附图中，条代表每个AVP组中的化合物A和安慰剂之间的最小二乘法平均值的差异，且短线代表差异的标准误差。将MASQ总评分标准化至1-5标度。参见图2。

在研究药物施用之前，高AVP和正常AVP MDD受试者在HPA轴功能的大多数其它量度(血浆ACTH、血清皮质醇、尿皮质醇和总糖皮质激素、以及对CRH攻击的ACTH和皮质醇应答)方面没有差异。正常AVP受试者表现出稍微较高的清醒唾液皮质醇和可的松，但是在下午或晚上唾液皮质醇或可的松方面与高AVP受试者没有差异。高和正常AVP MDD受试者没有表现出任何明显的征状差异，如通过MASQ、HAM-D或感觉应激量表上的总评分所评估的。所述2个组在化合物A对血浆ACTH、血清皮质醇或尿皮质醇和总糖皮质激素的神经内分泌影响方面也没有差异。在化合物A治疗过程中的唾液皮质醇和可的松在所述2个组之间是类似的，这意味着在正常AVP受试者中相对于研究药物施用之前的稍微较大的变化。

与接受安慰剂的那些受试者相比，接受化合物A的高AVP MDD受试者表现出对应激源(CRH攻击)的较低生理学应答。相比而言，在接受化合物A或安慰剂的正常AVP MDD受试者之间存在有限的或者没有应激应答差异。参见图3。高AVP受试者是其HPA轴活性的减弱与他们对应激和抑郁征状的生理学应答有关的那些，且因此是使用V_1B拮抗剂治疗MDD的适当群体。

实施例2

肽素和AVP-相关的遗传标记

肽素是具有长体内半衰期且因而在离体血浆中稳定的AVP前体蛋白的片段。在实施例1所述的临床研究中，肽素水平与AVP水平较好地关联。显示的数据是在研究药物开始之前和在第六个每日研究药物剂量施用之后的上午、下午和晚上水平。参见图4。

另外，在研究药物施用之前评估了一组HPA或抑郁相关的遗传变体和基线AVP水平之间的关联。2种基因型LHPP rs7088418 AA和AKR1D1 rs17169521 GG的组合看起来将高AVP个体与大多数正常AVP个体分离。参见图5。

肽素(使用2.8 ng/mL作为高肽素的截止值)与AVP类似地作为化合物A-相关的抑郁征状变化的预测因子起作用。肽素看起来是化合物A-相关的HAM-D评分的变化的优良预测因子。相对于AVP的差异可以在很大程度上归因于表现出大HAM-D-17下降，正常AVP和高肽素的单个受试者。由于AVP的分析前不稳定性，该受试者以及表现出正常AVP和高肽素的4位其它受试者的AVP值可能是在正常范围内。参见图6。

在实施例1描述的临床研究中，2种基因型的组合与高AVP类似地充当抑郁征状变化的预测因子。PG-阳性的状态是rs7088418 AA和rs17169521 GG基因型的组合，并且在48位受试者中的24位(50%)中观察到。得自3位受试者的一种或两种基因型数据在使用的多路测定中缺失。参见图7。

实施例3

评估了相同HPA或抑郁相关的遗传变体组与受试者中的征状改善的关联。关于某些NR3C1基因型，观察到一些关联证据。与AVP、肽素和rs7088418/rs17169521基因型(其区分在化合物A施用后表现出MASQ和HAM-D的更有利征状变化的受试者的子集)相比，NR3C1基因型区分在化合物A施用后表现出MASQ和HAM-D的不利征状变化的受试者的子集。下述数据是关于rs10482672；关于rs17100236得到了类似的结果。36/48 (75%)的受试者具有rs10482672基因型GG。得自3位受试者的rs10482672数据在使用的多路测定中缺失。参见图8。AVP水平与rs10482672和rs17100236基因型没有关联。

实施例4

皮质醇和可的松通过5-类固醇还原酶的作用主要在肝脏中代谢为四氢代谢物。这些四氢代谢物经由尿快速地排泄，并且是最普遍的尿糖皮质激素，通常占总尿糖皮质激素的大约70%。未代谢的皮质醇和可的松从肾直接排泄进尿中，且通常占总尿糖皮质激素的大约5%。其它重要的尿糖皮质激素包括皮甾五醇、皮酮四醇、cortolic acids和cortolonic acid。

在ROC分析中，因变量是基于-0.53的GDM截止值的应答者状态。自变量是在24-小时区间中收集的尿糖皮质激素的基线量(皮质醇、可的松、α-四氢皮质醇、β-四氢皮质醇和四氢可的松的总和)除以在相同尿收集物中的肌酸酐的量。最佳截止值是3.44 mg糖皮质激素/mg肌酸酐。这提供了58% (14/24的化合物A应答者被包括)的灵敏度和67% (4/6的化合物A无应答者被排除)的特异性。由于缺少尿糖皮质激素数据，一位化合物A受试者没有被包括在该分析中。

下面显示了尿糖皮质激素除以肌酸酐(较高相对于较低)和治疗(化合物A相对于安慰剂)的相互作用。因变量是第7天的MASQ量表评分和汉密顿抑郁评级量表(HAM-D) - 版本评分。在该分析中，从GDA省略3个关于胃肠征状的MASQ项目，其可能损害该特定量表的心理测验有效性。在第-2天的对应量表评分是每个模型中的协变量。每个模型包括研究人员、AVP、治疗以及AVP和治疗的相互作用的因子。最后一个对于任意因变量而言不是统计上显著的，但是就MASQ GDM、GDD、GDA和AA以及HAM-D的17-和7-项版本而言，存在数字上有利的趋势。在附图中，条代表每个尿糖皮质激素组中的化合物A和安慰剂之间的最小二乘法平均值的差异，且短线代表差异的标准误差。将MASQ总评分标准化至1-5标度。参见图9。

与接受安慰剂的那些受试者相比，接受化合物A的较高尿糖皮质激素MDD受试者表现出较大的尿糖皮质激素下降。相比而言，在接受化合物A或安慰剂的较低尿糖皮质激素MDD受试者之间存在有限的或者没有尿糖皮质激素下降差异。参见图10。在接受化合物A或安慰剂的健康成年人中已经观察到相同关联。较高尿糖皮质激素受试者是其中化合物A实现紧张性HPA轴活性(tonic HPA axis activity)的较大下降的那些，且因此是使用V_1B拮抗剂治疗MDD的适当群体。

当使用得自过夜(10-小时)收集物的尿糖皮质激素和肌酸酐的量替代得自24小时收集物的那些量时，得到了类似的结果。

Claims (63)

1.一种确定受试者是否是V_1B拮抗剂治疗的合适候选人和治疗被鉴别为所述治疗的合适候选人的受试者的方法，所述方法包括下述步骤：

(a) 提供得自所述受试者的生物样品；和

(b) 检测下丘脑-垂体-肾上腺(“HPA”)轴功能标记；

其中所述受试者具有以HPA轴调节异常为特征的障碍；

其中所述标记的存在指示，所述受试者是V_1B拮抗剂治疗的合适候选人；和

(c) 用V_1B拮抗剂治疗在步骤(b)中被鉴别为合适候选人的受试者。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述HPA轴功能标记选自：包含SEQ ID NO:1 (LHPP rs7088418)的核苷酸序列和包含SEQ ID NO:2 (AKRID1 rs17169521)的核苷酸序列；包含NR3C1基因型的核苷酸序列；和它们的组合。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述NR3C1基因型选自：SEQ ID NO:3 (rs10482672)和SEQ ID NO:4 (rs17100236)。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述标记通过基因分型来检测。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述基因分型包括：

(a) 扩增包含所述标记的核酸；和

(b) 检测扩增的核酸，由此检测所述标记。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述标记通过测序来检测。

7.一种确定受试者是否是V_1B拮抗剂治疗的合适候选人和治疗被鉴别为所述治疗的合适候选人的受试者的方法，所述方法包括下述步骤：

(a) 提供得自所述受试者的生物样品；和

(b) 检测下丘脑-垂体-肾上腺(“HPA”)轴功能标记；

其中所述受试者具有以HPA轴调节异常为特征的障碍；

其中如果所述HPA轴功能标记以高于正常受试者样品中的标记分布的约第60百分位的水平存在，所述受试者适合于V_1B拮抗剂治疗；和

(c) 用V_1B拮抗剂治疗在步骤(b)中被鉴别为适合治疗的受试者。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述HPA轴功能标记以大于正常受试者样品中的HPA轴功能标记的分布的下述百分位的水平存在，所述百分位选自正常受试者样品中的HPA轴功能标记分布的约第65、第70、第75、第80、第85、第90和第95百分位。

9.根据权利要求7所述的方法，其中所述标记选自：AVP、肽素、皮质醇、可的松、ACTH、皮质醇的肝代谢物、可的松的肝代谢物、CRH，和它们的组合。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述肽素是血浆肽素。

11.根据权利要求9所述的方法，其中所述AVP是血浆AVP。

12.根据权利要求9所述的方法，其中所述皮质醇的肝代谢物选自：α-四氢皮质醇、β-四氢皮质醇、α-皮甾五醇、β-皮甾五醇、α-cortolic acid、β-cortolic acid，和它们的组合。

13.根据权利要求9所述的方法，其中所述可的松的肝代谢物选自：四氢可的松、皮酮四醇、cortolonic acid，和它们的组合。

14.根据权利要求1或7所述的方法，其中所述生物样品选自：含有核酸的样品、血清、血浆、血液、尿和唾液。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述生物样品是尿。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述标记是皮质醇、可的松、α-四氢皮质醇、β-四氢皮质醇和四氢可的松的尿量的总和。

17.根据权利要求15所述的方法，其中所述标记是α-四氢皮质醇、β-四氢皮质醇和四氢可的松的尿量的总和。

18.根据权利要求16或17所述的方法，其中将所述尿量的总和除以相同尿样品中的肌酸酐的量。

19.根据权利要求16、17或18所述的方法，其中所述尿样品是得自所述受试者的24-小时尿收集物。

20.根据权利要求16、17或18所述的方法，其中所述尿样品是得自所述受试者的过夜尿收集物。

21.根据权利要求16、17或18所述的方法，其中所述尿样品在单次排泄中收集自受试者。

22.根据权利要求7所述的方法，其中所述样品是含有大于或等于8.6 pg/mL AVP的血浆样品，如通过放射免疫测定所测得。

23.根据权利要求7所述的方法，其中所述样品是含有大于或等于2.8 ng/mL肽素的血浆样品，如通过酶免疫测定所测得。

24.根据权利要求7所述的方法，其中所述样品是含有大于或等于3.44 mg/mg肌酸酐的皮质醇、可的松、α-四氢可的松、β-四氢皮质醇和四氢可的松的总和的尿样品。

25.根据权利要求7所述的方法，其中所述标记通过免疫测定来检测。

26.根据权利要求7所述的方法，其中所述标记通过质谱法来检测。

27.根据权利要求1或7所述的方法，其中所述障碍选自：库欣综合征、痴呆、认知损害、心境障碍、焦虑障碍、物质相关的障碍、骨质疏松症、关节炎、糖尿病、血脂异常、肥胖、高血压、疼痛、青光眼，和它们的组合。

28.根据权利要求27所述的方法，其中所述心境障碍是抑郁症。

29.根据权利要求28所述的方法，其中所述抑郁症是严重抑郁障碍。

30.根据权利要求27所述的方法，其中所述焦虑障碍选自：创伤后应激障碍、广泛性焦虑障碍和惊恐障碍。

31.根据权利要求27所述的方法，其中所述物质相关的障碍选自：酒精依赖性或滥用，和药物依赖性或滥用。

32.根据权利要求27所述的方法，其中所述痴呆是阿尔茨海默型。

33.根据权利要求27所述的方法，其中所述认知损害是由阿尔茨海默氏病引起的轻度认知损害。

34.一种监测受试者对V_1B拮抗剂治疗的应答的方法，所述方法包括：

(a) 提供得自接受V_1B拮抗剂治疗的受试者的生物样品；

(b) 检测下丘脑-垂体-肾上腺(“HPA”)轴功能标记；

其中所述受试者具有以HPA轴调节异常为特征的障碍；和

其中标记水平与基线相比大于25%的变化指示，V_1B拮抗剂可用于治疗所述受试者；和

(c) 基于在步骤(b)中检测到的标记水平相对于基线的变化，继续或中断受试者中的V_1B拮抗剂治疗。

35.根据权利要求34所述的方法，其中所述HPA轴功能标记选自：皮质醇；可的松；促皮质素释放激素，促肾上腺皮质激素(ACTH)；皮质醇的肝代谢物，可的松的肝代谢物，和它们的组合。

36.根据权利要求35所述的方法，其中所述可的松的肝代谢物选自：四氢可的松、皮酮四醇、cortolonic acid，和它们的组合。

37.根据权利要求35所述的方法，其中所述标记是皮质醇、可的松、α-四氢皮质醇、β-四氢皮质醇和四氢可的松的尿量的总和。

38.根据权利要求35所述的方法，其中所述标记是α-四氢皮质醇、β-四氢皮质醇和四氢可的松的尿量的总和。

39.根据权利要求37或38所述的方法，其中将所述尿量的总和除以相同尿样品中的肌酸酐的量。

40.根据权利要求34所述的方法，其中所述基线是在3 pg/mL至13 pg/mL之间的水平的皮质醇。

41.根据权利要求34所述的方法，其中使用酶免疫测定确定所述皮质醇基线。

42.根据权利要求34所述的方法，其中所述基线指示在开始V_1B拮抗剂治疗之前取自所述受试者的样品中的HPA轴功能标记的水平。

43.根据权利要求35所述的方法，其中所述ACTH是血浆ACTH。

44.根据权利要求34所述的方法，其中所述生物样品选自：含有核酸的样品、血清、血浆、血液、尿和唾液。

45.根据权利要求34所述的方法，其中所述障碍选自：库欣综合征、痴呆、认知损害、心境障碍、焦虑障碍、物质相关的障碍、骨质疏松症、关节炎、糖尿病、血脂异常、肥胖、高血压、疼痛、青光眼，和它们的组合。

46.根据权利要求45所述的方法，其中所述心境障碍是抑郁症。

47.根据权利要求46所述的方法，其中所述抑郁症是严重抑郁障碍。

48.根据权利要求45所述的方法，其中所述焦虑障碍选自：创伤后应激障碍、广泛性焦虑障碍和惊恐障碍。

49.根据权利要求45所述的方法，其中所述物质相关的障碍选自：酒精依赖性或滥用，和药物依赖性或滥用。

50.根据权利要求45所述的方法，其中所述痴呆是阿尔茨海默型。

51.根据权利要求45所述的方法，其中所述认知损害是由阿尔茨海默氏病引起的轻度认知损害。

52.根据权利要求34所述的方法，其中标记水平的大于25%的变化是相对于基线增加的变化。

53.根据权利要求34所述的方法，其中标记水平的大于25%的变化是相对于基线降低的变化。

54.根据权利要求1、7或34所述的方法，其中所述V_1B拮抗剂具有式I：

其中A是芳族单环杂环，其中所述杂环是5或6元环且包含至多4个选自N、O和S的杂原子，其中不超过一个杂原子是氧或硫原子，且A可以被基团R11、R12和/或R13取代，其中R11、R12和R13在每次出现时彼此独立地选自氢、氯、溴、碘、氟、CN、CF₃、OCF₃、NO₂、OH、O-C₁-C₄-烷基、O-苯基、O-C₁-C₄-亚烷基-苯基、苯基、C₁-C₆-烷基、C₂-C₆-烯基、C₂-C₆-炔基、NH₂、NH(C₁-C₄-烷基)和N(C₁-C₄-烷基)₂，R₃和R₄彼此独立地选自氢、氯、溴、碘、氟、CN、CF₃、OCF₃、NO₂、OH、O-C₁-C₄-烷基、O-苯基、O-C₁-C₄-亚烷基-苯基、苯基、C₁-C₆-烷基、C₂-C₆-烯基、C₂-C₆-炔基、NH₂、NH(C₁-C₄-烷基)和N(C₁-C₄-烷基)₂，或R₃和R₄连接以产生-CH=CH-CH=CH-、-(CH₂)₄-或-(CH₂)₃-，

R5是

其中W选自NR54、NR54-(C₁-C₄-亚烷基)和键，R54独立地选自氢、C₁-C₆-烷基、C₂-C₆-烯基、C₂-C₆-炔基、苯基和C₁-C₄-亚烷基-苯基，其中苯基环可以被至多2个基团R59取代，R59独立地选自氢、氯、溴、碘、氟、CN、CF₃、OCF₃、NO₂、OH、O-C₁-C₄-烷基、C₁-C₆-烷基、C₂-C₆-烯基、C₂-C₆-炔基、NH₂、NH(C₁-C₄-烷基)和N(C₁-C₄-烷基)₂，R63彼此独立地选自氢、氯、溴、碘、氟、CN、CF₃、OCF₃、NO₂、OH、O-C₁-C₄-烷基、O-苯基、O-C₁-C₄-亚烷基-苯基、苯基、C₁-C₆-烷基、C₂-C₆-烯基、C₂-C₆-炔基、NH₂、NH(C₁-C₄-烷基)和N(C₁-C₄-烷基)₂，R6和R7彼此独立地选自氢、氯、溴、碘、氟、CN、CF₃、OCF₃、NO₂、OH、O-C₁-C₄-烷基原子、O-苯基、O-C₁-C₄-亚烷基-苯基、苯基、C₁-C₆-烷基、C₂-C₆-烯基、C₂-C₆-炔基、NH₂、NH(C₁-C₄-烷基)和N(C₁-C₄-烷基)₂，和它们的互变异构形式、它们的对映异构形式和非对映异构形式。

55.根据权利要求54所述的方法，其中A是包含1或2个杂原子的芳族杂单环系统，其中2个杂原子之一是氮。

56.根据权利要求54所述的方法，其中A选自嘧啶、吡啶、哒嗪、吡嗪、噻唑、咪唑、噻吩-和呋喃。

57.根据权利要求54所述的方法，其中所述V_1B拮抗剂是：

(化合物A)。

58.根据权利要求54所述的方法，其中所述V_1B拮抗剂是：

(化合物B)。

59.根据权利要求1或7所述的方法，其中所述方法用于筛选受试者对于临床试验而言的合格性。

60.根据权利要求1或7所述的方法，其中所述方法用于分级受试者对于临床试验而言的随机化。

61.根据权利要求1或7所述的方法，其中所述方法用于分级临床试验的分析。

62.一种用于稳定血浆样品中的AVP的试剂盒，其中所述试剂盒包含一个或多个收集试管，所述收集试管包含一种或多种蛋白酶抑制剂。

63.一种用于测定血液衍生的基体中的AVP的试剂盒，其中所述试剂盒包含收集试管和关于在室温稳定AVP的说明书。