[0001] In einem ersten Aspekt betrifft diese Erfindung einen biologisch wirksamen Komplex, der eine Verbindung zwischen mindestens einer auf der Ebene der Mitochondrial-DNA biologisch wirksamen Komponente und einer auf der Ebene der Zell-DNA biologisch wirksamen Komponente zum Zwecke der Verjüngung des Erscheinungsbildes der Haut enthält.
Technisches Gebiet
[0002] Diese Erfindung hat ihren Ursprung auf dem Gebiet der kosmetischen Präparate zur äusserlichen Anwendung für die Behandlung der Haut, insbesondere mit dem Ziel der Verjüngung des Erscheinungsbildes der Haut.
Bekannte Technik
[0003] Wie bekannt, ist die Alterung der Haut der Prozess, durch den unser Organismus zeitliche Veränderungen anzeigt: Die Haut ist in der Tat der Bestandteil unseres Körpers, der sich im Verlaufe der Zeit am meisten sichtbar verändert.
[0004] Wenn die Zellen altern, häufen sich DNA-Schäden über die Reparaturgeschwindigkeit hinaus an, die zu einer Reduzierung der Proteinsynthese führen. Weil die Proteine in der Zelle zahlreiche lebenswichtige Funktionen ausführen, wird die Zelle langsam in Mitleidenschaft gezogen und stirbt schliesslich. Wenn in einem Gewebe wie der Haut eine ausreichende Zahl von Zellen einen solchen Zustand erreicht, wird das Gewebe selbst beeinträchtigt, und es beginnen sich die ersten Alterungssymptome zu zeigen.
[0005] Die Alterung der Haut ist ein involutiver physiologischer Prozess, der sowohl von individuellen genetischen Faktoren als auch vom persönlichen Lebensstil beeinflusst wird.
[0006] Das Erbgut steuert und regelt zusammen mit den endokrinen Faktoren die inhärente Alterung der Haut, auch als Alterung in der Zeit bekannt. Im Gegensatz zu den Umgebungsfaktoren bleiben die genetischen Faktoren ein ganzes Leben lang konstant.
[0007] Sie stellen eine Art "biologische Uhr" dar, die die Zeit der Alterung aller Zellen des menschlichen Körpers skandiert.
[0008] Die durch genetische Faktoren verursachte Alterung der Haut beginnt, sehr langsam und individuell sehr unterschiedlich, in einem Alter ab 25 Jahren, und wird ab einem Alter von 40 Jahren und danach sichtbar. Die inhärente Alterung führt zu einer Verlangsamung in der Produktion von Zellen, Kollagen und Elastin, zum Gewebe-, Fett- und Muskelschwund, zu einer Verminderung der Schweissdrüsen und zur Produktion von Talg und schliesslich zu einer Schädigung auf DNA-Ebene. Die feststellbaren Hauptveränderungen erfolgen durch einen Verlust an Feuchtigkeit und Elastizität der Haut. Die durch inhärente Alterung verursachten Runzeln sind ziemlich fein, die Haut wird dünner, durchsichtiger und zeigt eine Erschlaffungsneigung.
[0009] Die Umgebungsfaktoren dagegen, wie übermässige Sonneneinstrahlung, Belastung durch schädliche Umwelteinflüsse, ein falscher Lebensstil (zu starker Alkoholkonsum und eine falsche Ernährungsweise) und das Rauchen, die eine erhöhte Produktion von freien Radikalen und die Aktivierung von Metallproteinasen verursachen, sind für die Veränderungen in der morphologischen Struktur, die für die externe Alterung der Haut oder das Photoaging typisch sind, verantwortlich. Die typischen Anzeichen sind sehr tiefe Runzeln, Flecken und Hautverdickungen.
[0010] Eine grosse Anzahl gegenwärtig im Handel erhältlicher kosmetischer Formulierungen hat das Ziel, die Wirksamkeit der physiologischen Mechanismen der Hautzellen zu verbessern oder zu konservieren.
[0011] Insbesondere zahlreiche kommerzielle Antialterungskosmetikprodukte enthalten Wirkstoffe, die den freien Radikalen entgegenwirken, wie Vitamin E, Betakaroten, Vitamin C-Derivate, das Coenzym Q und andere. Die freien Radikalen (ROS) entstehen aus Oxidationsreaktionen und sind instabile Molekulararten, weil mit einem oder mehreren freien Elektronen versehen. Deswegen sind sie in der Lage, besonders leicht mit organischen Substanzen zu reagieren und führen zu einer Zelldegeneration, mit Änderungen der biologischen Struktur, die besonders in der Haut sichtbar werden.
[0012] Die ROS werden in vielen internen Zellprozessen erzeugt. Membranproteine, Citosol-Enzyme (wie die Cyclogenasen), Metabolismus der Lipiden in den Peroxysomen, alle beinhalten eine kleine Produktion freier Radikaler, aber die grosse Mehrheit von ROS (auf ca. 90% geschätzt) wird von den Mitochondrien während der oxidierenden Phosphorilierung produziert.
[0013] Während dieses Prozesses werden das NADH oder das FADH2 benutzt, um einen Protonengradienten zwischen der Matrix und dem Membranzwischenraum zu erzeugen. Normalerweise passieren die vom NADH erzeugten Elektronen die Atemkette und werden zur Erzeugung von Wasser und zur Transferierung von Protonen in den Membranzwischenraum benutzt und erzeugen ein Membranpotenzial. Manchmal jedoch können diese Elektronen mit einem Sauerstoffmolekül reagieren, um das O2-Superoxidanion zu bilden.
[0014] Der Sauerstoff kann durch das manganabhängig vertauschte Superoxidenzym (in der Matrix vorhanden) oder durch das kupfer/schwefelabhängig vertauschte Superoxidenzym (im Cytoplasma oder im Membranzwischenraum vorhanden) in Wasserstoffsuperoxid (H2O2) umgewandelt werden. Das Wasserstoffsuperoxid ist stabiler als O2- und kann sich durch die Membran ausserhalb des Mitochondrions bis zum Kern ausbreiten oder durch das Glutathion-Peroxidase-Enzym oder das Catalaseenzym desaktiviert werden. Jedoch kann H2O2in Anwesenheit von reduzierten Transitionsmetallen auch in das stark reaktive Spezies Hydroxylradikal (.OH) umgewandelt werden. Da die Mitochondrien die Haupt-ROS-Quelle in der Zelle sind, werden sie im Allgemeinen auch stärker von der Zelloxidationsbeanspruchung betroffen.
[0015] Die sogenannte "Mitochondriale Theorie des Alterns" behauptet, dass eine von den freien Radikalen und insbesondere von den reaktiven Spezies des Sauerstoffs (ROS) verursachte zufällige Häufung einer Oxidationsschädigung der biologischen Makromoleküle für die degenerativen Alterungserscheinungen verantwortlich ist. Die ROS werden unter normalen Bedingungen von Enzymen, wie die verschiedenen Formen vertauschten Superoxids und von Glutathion-Peroxidase und der Catalase, sowie von nicht-enzymatischen "scavengers", wie Glutathion, Coenzym Q und andere Verbindungen, neutralisiert. Unter Bedingungen oxidativer Beanspruchung, d.h. bei zu starker Beanspruchung der Selbstschutzfähigkeit der Zelle, können die ROS gelegentlich Nukleinsäuren, Proteine und Lipide in Mitleidenschaft ziehen.
Die Mitochondrien-Makromoleküle würden die am stärksten exponierten sein, weil die Mitochondrien, die ca. 90% des Zellsauerstoffs metabolisieren, eine bevorzugte ROS-Quelle bilden. Besonders verwundbar scheint die mtDNA zu sein, weil sie nackt ist, d.h. ohne Histon-Protein, und physisch in der Nähe der Haupt ROS-Quelle angeordnet. Die Mitochondrial-DNA ist mehrfach in den Mitochondrien vorhanden und eng mit den verschiedenen Proteinen verbunden.
[0016] Aufgrund der Anwesenheit von ROS in der Nähe der inneren Mitochondrialmembran, des Wegfalls der Schutzfunktion der Histone und der begrenzten Reparaturfähigkeit der mtDNA, verglichen mit der der Kern-DNA, ist die Mitochondrial-DNA sehr viel stärker oxidativer Schädigung ausgesetzt.
[0017] Folglich wird die mtDNA im Laufe des Lebens mehrfach beschädigt, und mit der Zeit verlieren die erzeugten Mitochondrien immer mehr ihre Fähigkeit zur Energieerzeugung.
[0018] Mit der Alterung der Zelle gehen ständige Mutationen einher, teilweise durch schädliche Unterprodukte (reaktive Spezies oder Radikale) des Sauerstoffs, den wir einatmen. Der Organismus besitzt jedoch eine inhärente DNA-Reparaturfunktion, um durch diese Unterprodukte verursachten Schäden zu begegnen. In den gealterten Zellen jedoch nimmt die Reparaturaktivität ab, weil die Enzyme, die sich mit der Reparatur befassen, auf ihrem Weg zum Schadensort innerhalb der Mitochondrien blockiert werden. Fast die Hälfte der Wirkung der Enzyme wird ausserhalb der Mitochondrien blockiert und erreicht die zu reparierende DNA nicht.
[0019] Es wird angenommen, dass sich in der Mitochondrial-DNA aus diesen Gründen die Defekte schneller als in der Kern-DNA anhäufen. Die somatischen Mitochondrial-Mutationen sind die Hauptursache für den Energieverfall, der Seneszenz charakterisiert. Die Reduzierung der Funktionalität der Atemkette vermindert nicht nur die ATP-Synthese, sondern verstärkt die Produktion von Radikalen des Sauerstoffs in einem Teufelskreis zwischen Schädigung der Atemwege, Anhäufung von freien Radikalen und Mutationen der Mitochondrial-DNA. Die Mitochondrien, die die Hauptenergiequelle der Zellen darstellen, sind daher für ihre fortgesetzte Gesundheit und lange Lebensdauer von wesentlicher Bedeutung.
[0020] Zum gegenwärtigen Zeitpunkt besteht daher ein Erfordernis nach kosmetischen Präparaten mit einem Antihautalterungseffekt auf der Basis von biologisch aktiven Komponenten, die in der Lage sind, auf der Ebene von Zellmechanismen zu wirken, die die Prozesse der Zellalterung regeln.
Zusammenfassung der Erfindung
[0021] Der Anmelder hat festgestellt, dass es durch Verbindung zwischen mindestens einem auf der Ebene des Mitochondrial-DNA wirksamen spezifischen biologischen Prinzips und mindestens einem auf der Ebene der Kern-DNA wirksamen biologischen Prinzips möglich ist, einen zur Verjüngung des Erscheinungsbildes der Haut geeigneten biologisch wirksamen Komplex zu erhalten.
[0022] Insbesondere ist es möglich, das Auftreten und die Sichtbarkeit der Hautalterungserscheinungen zu beschränken und die lange Zelllebensdauer zu konservieren und die Verjüngung der Haut zu unterstützen, indem in einem biologisch aktiven Prozess eine oder zwei ausgewählte biologische Komponenten, die hauptsächlich auf der Ebene der Mitochondrial-DNA wirken, mit einer oder zwei ausgewählten biologischen Komponenten verbunden werden, die hauptsächlich auf der Ebene der Kern-DNA wirken.
[0023] Nach einem ersten Aspekt liefert diese Erfindung einen biologisch aktiven Komplex, um der Hautalterung vorzubeugen und/oder sie zu verzögern, beinhaltend die Verbindung von
A) mindestens einem auf der Ebene der Mitochondrial-DNA biologisch aktiven Prinzip, ausgewählt zwischen a) einem die Aminosäuren Serin, Cystein, Isoleucin, Asparagin, Threonin enthaltenden Pentapeptid, b) einem Sojaproteinhydrolisat und einem Gemisch aus a) und b) mit
B) mindestens einem auf der Ebene der Kern-DNA biologisch aktiven Prinzip, ausgewählt zwischen c) Teprenon und d) einem Myrtus Communis Extrakt und einem Gemisch aus c) und d).
[0024] Die Verbindung der zu den zwei erwähnten Gruppen A und B gehörenden biologisch aktiven Prinzipien a) und/oder b) mit c) und/oder d) erlaubt die Aufrechterhaltung und Verlängerung der Aktivität und Funktionalität der Zellen der Epidermis und Lederhaut, ermöglicht einen ausreichenden Zellstoffwechsel und die Behinderung von Reaktionen, die die Zellen selbst schädigen und ihre Alterung und vorzeitiges Absterben verursachen.
[0025] Der die biologisch aktiven Prinzipien A-B der Erfindung enthaltende Komplex verzögert die Zellalterung und fördert die lange Zelllebensdauer. Im Besonderen hat die Anwendung einer biologisch wirksamen Menge der vier biologisch aktiven Prinzipien a-d auf die Haut den besonders ausgeprägten Effekt einer Verjüngung des Erscheinungsbildes der Haut. Nach einer Form der Ausführung enthält der biologisch wirksame Komplex zur Verjüngung des Erscheinungsbildes der Haut ein Pentapeptid, das die Aminosäuren Serin, Cystein, Isoleucin, Asparagin, Threonin enthält, b) ein Sojaproteinhydrolisat, das Aminosäuren und Proteine mit einem Molekulargewicht unter 5 kDa enthält, c) Teprenon, d) einen Myrtus Communis Extrakt, wobei jede der Komponenten a-d normalerweise in einer kosmetisch aktiven und akzeptablen Menge vorhanden ist.
Detaillierte Beschreibung der Erfindung
[0026] Jede der Komponenten a-d des biologisch aktiven Komplexes realisiert eine spezifische Wirkung auf der Ebene der Komponenten der Hautzellen. Insbesondere haben die biologisch aktiven Prinzipien der Gruppe A) eine Schutzwirkung auf die Struktur und die Funktionalität der Mitochondrial-DNA, indem sie ihre Wirksamkeit in der Zeit aufrechterhalten.
[0027] Nach einer Form der Ausführung ist eines der auf der Ebene der Mitochondrial-DNA wirksamen biologischen Prinzipien der Gruppe A ein Sojaproteinhydrolisat, das im Vergleich zu den Proteinen der Atemkette typischerweise reich an biomimetischen Peptiden ist.
[0028] Nach einer Form der Ausführung enthält das Sojaproteinhydrolisat ausser Polyphenolen und Kohlehydraten Aminosäuren und Proteine mit einem Molekulargewicht unter 5 kDa.
[0029] Nach einer Form der Ausführung enthält das Sojahydrolisat die in den tierischen Proteinen vorhandenen acht wesentlichen Aminosäuren, bzw. Phenylalanin, Isoleucin, Leucin, Lysin, Methionin, Threonin, Tryptophan, Valin.
[0030] Normalerweise erhält man das Sojahydrolisat durch Enzymhydrolyse und Reinigung, z.B. durch Ultrafilterung. Das Molekulargewicht der Proteine wird durch Elektrophorese untersucht.
[0031] Das Sojahydrolisat hat eine spezifische Wirkung auf der Ebene der Mitochondrial-DNA, hauptsächlich durch die Expressionsmechanismen des Mitochoindrial-Sirtuin-Gens SIRT-3. Dieses Gen, wie auch das Gen SIRT-4, ist in der Lage, die Mitochondrien zu beschützen und ist wichtig für die Aufrechterhaltung ihrer Gesundheit und Langlebigkeit. Wenn die Wirksamkeit der Mitochondrien abzunehmen beginnt, reduziert sich die Energie der Zellen, und es werden der Prozess der Alterung und der mitochondrialen Degeneration ausgelöst. Dank der Wirkung der SIRT-3-Gene, aber auch eventuell der SIRT-4-Gene, bleiben die Mitochondrien länger aktiv und liefern den Zellen mehr Energie und verlängern ihre Lebensdauer.
[0032] Es wurde insbesondere beobachtet, dass das Gen SIRT3 auf der Ebene der Innenmembran der Mitochondrien angeordnet ist und eine wichtige Rolle im Energiestoffwechsel spielt. Indem es an der adaptiven Thermogenese beteiligt ist, reduziert es das Membranpotenzial und die ROS-Produktion und stimuliert die Produktion und Erneuerung der Antioxidations-Mitochondrien.
[0033] Zum Nachweis der Aktivität des Sojahydrolisats innerhalb des Komplexes der Erfindung wurden einige Labortests unter Verwendung von mit 1% aktivem Prinzip behandelten und nicht behandelten Humanfibroblasten über 24 und 48 Stunden durchgeführt. Die Expression des Mitochondrial-Sirtuins SIRT-3 wurde durch Immunfluoreszenz im Vergleich mit der Kontrolle bewertet.
[0034] Die Ergebnisse waren wie folgt:
Nach 24h: + 10,23% höhere SIRT-3-Expression
Nach 48h: + 30,16% höhere SIRT-3-Expression
[0035] Unter Verwendung von Haut aus Biopsien wurde ein weiterer Test durchgeführt, und zwar durch ihre Behandlung mit oder ohne 1% Sojahydrolisat. Durch Immunfluoreszenz wird die SIRT-3-Produktion ermittelt und damit die Genexpression des Gens für das Sirtuin 3. festgestellt.
[0036] Fotografisch wurde beobachtet, dass die behandelte Haut, bezogen auf die Kontrolle nach 48 Stunden, eine höhere Expression des Gens SIRT-3 aufweist: + 20,7% höhere SIRT-3-Expression.
[0037] Das Sojaproteinhydrolisat ist, ausser dass es eine besondere Wirkung auf mitochondrialer Ebene aufweist, besonders wirksam in der Förderung der Wirkung der Cytochrom-C-Oxidase.
[0038] Das Cytochrom C ist ein kleines Hämoprotein, das sich in der Innenmembran der Mitochondrien findet, und gehört zur Klasse der Cvtochrome C. Es ist, anders als andere Cytochrome, ein lösliches Protein und ein wesentlicher Bestandteil der Beförderungskette der Elektronen.
Das Cytochrom C ist in die 3. Phase der Zellatmung eingebunden, die oxidierende Phosphorilierung, bei der das Cytochrom C 4 Elektronen an das Sauerstoffmolekül abgibt und 2 Wassermoleküle bildet. Die Reaktion wird durch die Cytochrom C Oxidase (oder Komplex IV) katalysiert, die der letzte in die Beförderungskette der Elektronen eingebundene Enzymkomplex ist: 4 Ferrocytochrome C + O2+ 4 H<+> -> 4 Ferricytochrome C + 2 H2O.
[0039] Auch als Cytochrom a3 oder Wartburg-Atmungsferment bekannt, ist dieses Enzym eine integrales Protein der inneren Mitochondrialmembran und enthält eine Porfyrin-Gruppe, die Fe<2+>-lonen enthält (wenn das Cytochrom reduziert ist), oder Fe<3+>-lonen (wenn das Cytochrom oxidiert ist). Die Reduktion des Sauerstoffs wird von der Extrusion von vier Protonen aus dem intermitochondrialen Raum begleitet. Der Verbrauch von vier Wasserstoffionen pro Sauerstoffmolekül und die Translokation von vier weiteren Wasserstoffionen durch die innere Mitochondrialmembran sind für die Aufrechterhaltung eines pH-Gradienten auf beiden Seiten dieser Membran verantwortlich. Von diesem Gradienten hängen die Phosphorilierung von ADP zu ATP und die Energieerzeugung der Zelle ab.
Auch aus diesem Grund führt die Anwesenheit der Sojaproteinhydrolisat-Komponente im Komplex der Erfindung zu einer Erhöhung der Energieproduktion in Form von ATP und des Schutzes gegen ROS induzierte Schädigung der Mitochondrien, wodurch die Lebensfähigkeit und die Langlebigkeit von Zellen und Haut erhalten bleiben.
[0040] Zur Bewertung der Wirkung dieses Sojaproteinhydrolisats auf die Förderung der Wirkung der Cytochrom-C-Oxidase wurde an mit 1% Sojaproteinhydrolisat behandelten und nicht behandelten Fibroblasten ein In-vitro-Test durchgeführt.
[0041] Die Wirkung des Cytochrom C wird nach Inkubation von 3 und 24 Stunden bewertet und mit der Kontrolle verglichen.
[0042] Die mit den vom Anmelder angegebenen hydrolisierten Sojaproteinen behandelten Zellen erhöhen die Wirkung der Cytochrom-C-Oxidase bezogen auf die Kontrolle erheblich, wie nachfolgend dargestellt:
nach 3 h: + 132% bezogen auf die Kontrolle
nach 24 h: + 623% bezogen auf die Kontrolle.
[0043] Das Sojahydrolisat zeigt daher auf der Ebene der Cytochrom-C-Oxidase eine stimulierende Wirkung auf die mitochondriale Atemklette zur dauerhaften Erhöhung der Hautenergie.
[0044] Die erhöhte Wirkung des Enzyms bedeutet in der Tat eine verstärkte Zellatmung und eine daraus folgende höhere Energieproduktion.
[0045] Zum Nachweis der erhöhten ATP-Synthese wurde ausserdem ein zweiter In-vitro-Test durchgeführt.
[0046] Fibroblaste wurden mit 1% Sojaproteinhydrolisat behandelt. Dann wird nach einer Inkubation von 1 und 3 Stunden die ATP-Menge durch Bioluminiszenz ermittelt.
[0047] Das Sojahydrolisat erhöht die ATP-Synthese nach 1 Stunde erheblich, und zwar um 40%. Die Auswertung zeigt ausserdem, dass die ATP-Zunahme bis zu 3 Stunden mit +28% erzeugtem ATP anhält. Nach einer weiteren Form der Ausführung ist eines der auf der Ebene der Mitochondrial-DNA wirksamen biologischen Prinzipien der Gruppe A) ein Pentapeptid, das als Schutz der Zellen gegen eine oxidative Schädigung der Mitochondrial-DNA wirkt.
[0048] Typischerweise ist das Pentapeptid synthetischen Ursprungs und enthält die folgenden 5 Aminosäuren: Serin, Cystein, Isoleucin, Asparagin und Threonin. Nach einer Form der Ausführung ist die Sequenz des Peptids: Serin-Cystein-Isoleucin-Asparagin-Threonin. Nach einer weiteren Form der Ausführung ist die Sequenz: Ser-Cys-Ile-Asn-Thr-NH2.
[0049] Das Pentapeptid hat eine besonders sichtbare Wirkung auf der Ebene der Aconitase, das in der ersten Phase des Krebs-Zyklus in die Zellatmung eingebundene Protein. Diese Wirkung ist besonders beachtenswert, weil die Schädigung der Mitochondrial-DNA direkt für die mangelnde Energieversorgung auf Zellebene und damit für die Zellalterung verantwortlich ist.
[0050] Einige wissenschaftliche Studien haben bewiesen, dass die mit der Mitochondrial-DNA verbundenen Proteine in der Lage sind, als Schutz gegen oxidative Schäden zu wirken.
[0051] Die Schutzwirkung des in der Formulierung des Komplexes der Erfindung vorhandenen Pentapeptids für die mtDNA wurde durch einen In-vitro-Test bewertet.
[0052] Zu diesem Zweck wurden humane Cheratinozyten mit und ohne 1% Pentapeptid für 48 Stunden kultiviert und wiederholter Beanspruchung unterzogen (mit UVB-Strahlen), um die Bildung der ROS zu produzieren und die Zellalterung zu induzieren: Sie wurden 3-mal UVB-Bestrahlung einer Leistung gleich 75mJ/cm<2>ausgesetzt. Die mtDNA der gealterten Cheratinozyten erfährt besondere Veränderungen, mit Bildung von Deletionen, Fragmenten von mtDNA. Diese Deletionen fungieren als Marker der Mutationen in der mtDNA.
[0053] Die PCR-Technik erlaubt die Untersuchung der Frequenz der Deletion. Der PCR folgt der Elektrophorese-Lauf, der die Trennung und optische Kennzeichnung (Farbband) der Fragmente der mtDNA erlaubt. Einer grösseren Farbintensität des Bandes entspricht eine höhere Deletionsfrequenz.
[0054] Die Deletionen werden im Zellextrakt der nicht bestrahlten Cheratinozyten (Kontrolle), der bestrahlten Cheratinozyten und der bestrahlten, aber mit 1% Wirkmittel behandelten Cheratinozyten untersucht.
[0055] Das Pentapeptid hat bewiesen, dass es zu einem vollen Schutz der mtDNA führt: 100% ohne Bildung von Deletionen.
[0056] Ein zweiter Test hat die Wirkung des Aconitaseenzyms bewertet. Das Aconitaseenzym hat eine Schlüsselrolle in der Zellatmung, der Hauptweg der Energieproduktion. Es ist eines der Enzyme des Krebs-Zyklus und verwandelt die Zitrussäure in Isocitronensäure. Fibroblaste werden für 72 Stunden in Anwesenheit von 1% des Wirkmittels inkubiert. Dann wurde die Wirkung des mitochondrialen Aconitaseenzyms durch Vergleich mit der Kontrolle bewertet.
[0057] Das Ergebnis war wie folgt:
1% Pentapeptid: + 26% Wirkung der Aconitase verglichen mit der Kontrolle.
[0058] Innerhalb des Komplexes der Erfindung enthalten die biologisch wirksamen Prinzipien der Gruppe B), die auf der Ebene der Zell-DNA wirksam sind, einen Myrtus Communis Extrakt und das Teprenon.
[0059] Die Anwesenheit von mindestens einem dieser biologisch wirksamen Prinzipien im Komplex der Erfindung erlaubt eine Verlangsamung der vorzeitigen Alterung der Haut durch vorbeugende Wirkung gegen eine Schädigung der Zell-DNA.
[0060] Nach einer Form der Ausführung ist eines der auf der Ebene der Zell-DNA wirksamen biologischen Prinzipien der Gruppe B ein pflanzlicher Myrtenextrakt (Myrtus communis), ein Mittelmeerstrauch, der reich an Oligogalakturonen ist.
[0061] Normalerweise erhält man den Pflanzenextrakt aus Myrtenblättern, und er enthält einen kohlehydratreichen Wirkanteil, hauptsächlich Galakturonsäure, aber auch Glukose, Arabinose, Glactose, Rhamnose, Xylose, Fructose. Der Pflanzenextrakt hat sich als besonders wirksamer Schutz für die Zell-DNA erwiesen.
[0062] Insbesondere wurde beobachtet, dass der pflanzliche Myrtenextrakt, wenn er Zellkulturen hinzugefügt wird, durch Aktivierung des Gens SIRT-1 die Sirtu in Produktion und eine Reduzierung in der Expression der Zellalterungsfaktoren induziert.
[0063] Die Sirtuine (silent information regulators) sind eine Enzymfamilie, die in die Regelung des genetischen Ausdrucks, die Zellapoptose, den Stoffwechsel der Fettsäuren, die Regelung der Verlängerung des Zelllebens eingreift. Die Sirtuine sind mit den Genen verbunden, die die Funktionen der Zellen koordinieren und optimieren, insofern diese in einer stressigen Umgebung um ihr Überleben kämpfen, wie im Falle der Hautzellen, die ständig Angriffen durch externe Einflüsse ausgesetzt sind.
[0064] Zu dieser Familie gehört das Gen SIRT-1, das ein gleichnamiges Protein codiert, das die Aufgabe hat, die DNA jung zu halten und zu kontrollieren, dass nur die "Gene der Jugend" aktiv sind, und die Stabilität des Genoms aufrechterhalten. Das SIRT-1 kontrolliert den richtigen Gensatz in den Zellen jedes Gewebes und koordiniert und optimiert die Zellfunktionen.
[0065] Das Protein SIRT-1 ist eine Histon-Deacetylase und verlangt die Anwesenheit von NAD+ zur Ausübung seiner Tätigkeit der Genregelung als Antwort auf Veränderungen im oxidativ-reduktiven Zustand der Zelle. Als Antwort auf eine hohe Beanspruchungsdosis (UVB-Strahlung) wirkt SIRT-1 mit dem Protein p53 zusammen und bewirkt eine Unterdrückung der Zelltranskription und -apoptose, um die Proliferation anormaler Zellen zu vermeiden, während das SIRT-1 als Antwort auf eine niedrige Beanspruchungsdosis mit dem Protein Ku70 zusammenwirkt, um die Zellvermehrung zu unterbinden und den DNA-Reparaturprozess zu begünstigen.
[0066] SIRT-1 ist daher ein Schlüsselregulator der Zellverteidigung und des Überlebens der Zellen als Antwort auf Stress und Photoaging.
[0067] SIRT-1 übt seine Wirkung auf Zellebene in allen Hauptzellen der Lederhaut und der Epidermis aus, insbesondere in der Basalschicht, die für die Aufrechterhaltung des Zellaustauschs verantwortlich ist (Regenerierung und Erneuerung der Haut).
[0068] SIRT-1 ist an der Zellteilung und am Zellstoffwechsel, an der DNA-Reparatur, an der Apoptose, am Zellzyklus, an der Bildung des Heterochromatins, an der Entgiftung des Superoxidanions beteiligt. Die Sirtuine und damit das SIRT-1 selbst befinden sich in der menschlichen Haut sowohl in den Cheratinozyten als auch in den Fibroblasten, in der Zone zwischen der unteren Epidermis, der oberen Lederhaut und der Verbindung zwischen Unter- und Oberhaut. In dieser Zone befinden sich ungefähr 20 Seneszenz-Marker, die sich mit der Alterung verändern und an der Bildung der Runzeln, am Verlust von Kompaktheit, Pigmentfehlern, Hauttrockenheit und anderen typischen Alterungserscheinungen beteiligt sind.
[0069] Die Hautzellen der unteren und oberen Basalschicht sowie die Lederhautzellen sind Ausdruck des Proteins SIRT-1 im Kern. Ausserdem haben Immunfluoreszenzstudien gezeigt, wie das SIRT-1 in normalen Epidermischeratinozyten und in den in vitro kultivierten Lederhautfibroblasten ausgedrückt wird.
[0070] SIRT-1 hat eine weitere Aufgabe als Schutz gegen Umgebungsbeanspruchungen, z.B. durch UV-Strahlung, und andere Alterungsfaktoren der Haut.
[0071] Nach einem Aspekt der Erfindung führt die Induzierung der SIRT-1-Produktion in gealterten Zellen der menschlichen Haut durch Sirtuin-Aktivator-Verbindungen zu einer Reduzierung der Expression der Alterungsindikatoren und der Verlängerung der Lebensdauer dieser Zellen. Ausserdem zeichnen sich mit einer Sirtuin-Aktivator-Verbindung behandelte und UVB bestrahlte Humanfibroblaste durch eine Reduzierung der DNA-Degradierung bezogen auf die Kontrolle aus und weisen eine Erhöhung der Unversehrtheit der in der Kern-DNA enthaltenen genetischen Informationen auf, all dies dank der Wirkung der Sirtuine.
[0072] Die Erhöhung der Zellvitalität in Zellen, in die die Expression des SIRT-1 induziert wird, variiert, bezogen auf eine Kontrolle, wo das SIRT-1 nicht induziert wird, zwischen 9 und 28% (dies hängt vom Alter der Zellen ab). Das Gen SIRT-1 spielt während der mit der Alterung verbundenen Stoffwechseländerungen eine wichtige Rolle. Das Gen SIRT-1 ist an der Regelung des Proteins p53 beteiligt, ein Faktor, der an der Zellapoptose mitwirkt. Bei Zellstressbedingungen und wenn die DNA beschädigt ist, wird das Gen für das p53 azetyliert und aktiviert. SIRT-1 ist in der Lage, das p53 zu deazetylieren und die Transkription dieses Gens zu blockieren und damit die Zelllebensdauer zu verlängern.
[0073] Es wurde beobachtet, dass durch aufeinanderfolgende Zellreplikationsdurchgänge gealterte Humanfibroblaste eine Reduzierung der Expression des Gens SIRT-1 und seines jeweiligen SIRT-1-Proteins aufweisen (-23% bezogen auf die Kontrolle).
[0074] Eine weitere wichtige Funktion des Extrakts der gemeinen Myrte besteht in seiner Fähigkeit, die Proteinglykation, eine typische Erscheinung des Alterungsprozesses, zu beschränken.
[0075] Mit Proteinglykation bezeichnet man die Reaktion, durch die die Zucker sich mit einigen Proteingruppen verbinden. Nach Befestigung an den Proteinen des Organismus sind die Glykationsprodukte für einige Gewebeschädigungen verantwortlich. Insbesondere führt die Glykationreaktion zur Bildung von Produkten, die anormale und irreversible Molekularbrücken zwischen den die extra-zelluläre Matrix bildenden Makromolekülen (Kollagen) bilden. Die so glykierten Proteine sind durch die Veränderung der mechanischen Eigenschaften der Lederhaut, wie z.B. ihre Elastizität, an der Alterung der Haut beteiligt. Zum Nachweis der Eigenschaften des Myrteextrakts und seiner Wirksamkeit für die Zelllanglebigkeit wurde seine Wirkung auf die SIRT-1-Synthese durch Untersuchung normaler und gealterter Humanfibroblaste quantifiziert.
[0076] Insbesondere wurde durch Western Blot-Untersuchungen an normalen (Kontrolle) und gealterten Humanfibroblasten nach sukzessiven Behandlungen mit H2O2n eine Wirksamkeitsstudie durchgeführt.
[0077] Die mit einem geeigneten Medium inkubierten Fibroblaste werden mit verschiedenen Konzentrationen des untersuchten Wirkmittels inokuliert und nicht inokuliert. Nach 4 Tagen werden die Zellextrakte vor Untersuchung des SIRT-1 homogenisiert und unter -80[deg.]C gelagert.
[0078] Es wird dann der Western Blot-Test durchgeführt, der durch Elektrophorese, Immuntypisierung und optische Darstellung durch Bildanalyse die Semiquantifizierung der produzierten SIRT-1-Menge erlaubt.
[0079] Die durch das Wirkmittel induzierte Erhöhung der SIRT-1-Synthese für die normalen Fibroblaste war im Vergleich mit der nicht behandelten Kontrolle wie folgt:
0,25% Wirkmittel: + 2%
0,5% Wirkmittel: + 11%
1% Wirkmittel: + 36%
[0080] Die durch das Wirkmittel induzierte Erhöhung der SIRT-1-Synthese für die gealterten Fibroblaste war im Vergleich mit der nicht behandelten Kontrolle wie folgt:
0,25% Wirkmittel: + 11%
0,5% Wirkmittel: + 20%
1% Wirkmittel: + 31%
[0081] Zur Bewertung der Fähigkeit der Galakturonsäure, in den Glykationsprozess einzugreifen, wurde ihre Fähigkeit, die Glykationsreaktion des Kollagens zu beschränken, ermittelt.
[0082] Glykiertes und nicht glykiertes Kollagen wird mit dem fraglichen Wirkmittel inkubiert und nicht inkubiert, und die Reduzierung des Glykationsprozesses wird durch Messung der von den glykierten Produkten abgegebenen Fluoreszenz mittels Spektrofluormeter nach Einbringen einer Glykolaldehydlösung in die Proben bewertet.
[0083] Der Prozentsatz der Reduzierung des Glykationsprozesses des Kollagens durch das Wirkmittel bezogen auf das glykierte Kollagen ohne Wirkmittel ist wie folgt:
1% Wirkmittel: -16%
2,5% Wirkmittel: -33%
5% Wirkmittel: -40%
[0084] Nach einer Form der Ausführung enthält der Myrteextrakt Galakturonsäure, und zwar typischerweise in einer hohen Konzentration, z.B. zwischen 20 und 70 Gew.-% bezogen auf das Gesamtgewicht des Extrakts, und wünschenswerter zwischen 30 und 50 Gew.-%.
[0085] Der durchgeführte Versuch bestätigt, dass der Myrteblätterextrakt und insbesondere sein Hauptbestandteil, Galakturonsäure, Einfluss auf die an der Bestimmung der Zell- und Gewebelebensdauer beteiligten Zellmechanismen hat. Er stimuliert die Expression des Langlebigkeitsgens SIRT-1 und kontrolliert die Zwischenzellsignale, die für die Aufrechterhaltung der Proliferationsfähigkeit der Zellen von wesentlicher Bedeutung sind.
[0086] Nach einer weiteren Form der Ausführung enthält eines der auf der Zell-DNA-Ebene aktiven biologischen Prinzipien der Gruppe B Teprenon (Geranylgeranon).
[0087] Das Teprenon ist ein Wirkprinzip mit synthetischem Ursprung, dem im Einzelnen in der internationalen Patentanmeldung WO/2002/003 981, deren Inhalt hierin als Referenz aufgenommen ist, beschriebenen natürlichen Isopren ähnlich.
[0088] Das Teprenon ist eine biologisch wirksame Verbindung, die die Zellalterung verzögert, indem sie die Reduzierung der Länge der Zelltelomere wesentlich verlangsamt und dadurch zur Erhöhung der Zelllebensdauer beiträgt.
[0089] Es wurde festgestellt, dass die vorbeugende Wirkung des Teprenons gegen Hautalterungserscheinungen, für die Regenerierung der Hautzellen und als Schutz gegen Beanspruchungen nur zum Teil auf seine die Telomere, eine aus hoch repetitivem DNA bestehende Endregion des Chromosoms, die kein Proteinprodukt codiert und eine entscheidende Rolle bei der Vermeidung von Informationsverlust während der Chromsomenduplizierung spielt, stabilisierende Wirkung zurückzuführen ist.
[0090] Typischerweise verbessert die Verabreichung von Teprenon auf der Ebene der Haut die Zellkommunikation und verzögert die Alterung der Zellen und verlängert ihre Lebensdauer.
[0091] Diese Wirkung des Teprenons ist teilweise auf eine die Synthese des Thioredoxins, ein kleines Protein mit hoher Antioxidationskraft, das den intrazellulären Redoxzustand kontrolliert und den Zell- und Gewebewiderstand gegen Beanspruchungen und die Funktionalität von Prenyl-Proteinen erhöht und die Erhöhung des Schutzes der Telomere erlaubt, stimulierende Wirkung zurückzuführen.
[0092] Innerhalb der Formulierung des biologisch wirksamen Komplexes zur Vorbeugung gegen und/oder Verzögerung der Alterung der Haut kann jede der vorher beschriebenen 4 biologisch wirksamen Komponenten in veränderlichen Anteilen zugegen sein, z.B. zwischen 0,0001 und 30 Gew.-%, je nachdem ob eine Wirkart Vorrang vor der anderen haben soll.
[0093] Nach einem Aspekt der Erfindung kann der biologisch wirksame Komplex nach einer der vorstehend beschriebenen Ausführungsformen auf eine kosmetische Basis oder auf einen kosmetisch akzeptablen Träger zur Realisierung einer kosmetischen Komposition, die zur Reaktivierung der Langlebigkeit, der Vitalität und zur Regenerierung der Epidermis- und Dermazellen und/oder zur Verlängerung der Zelllebensdauer und Unterstützung der Verjüngung des Erscheinungsbildes der Haut geeignet sind, verteilt werden.
[0094] Nach einem weiteren Aspekt der Erfindung wird eine kosmetische Komposition für die Verjüngung des Erscheinungsbildes der Haut geliefert, die einen biologisch wirksamen Komplex enthält, der die synergetische Verbindung zwischen folgendem beinhaltet
A) Einem auf der Ebene der Mitochondrial-DNA biologisch wirksamen Prinzip, ausgewählt zwischen a) einem die Aminosäuren Serin, Cystein, Isoleucin, Asparagin, Threonin enthaltenden Pentapeptid und b) einem vorzugsweise Peptide in einem Molekulargewicht unter 5000 kDa enthaltenden Sojaproteinhydrolisat und Gemischen aus a) und b) und
B) einem biologisch wirksamen Prinzip auf der Ebene der Zell-DNA, ausgewählt zwischen c) Teprenon und d) einem Myrtus Communis Extrakt und Gemischen aus c) und d).
[0095] Nach einer Ausführungsform wird die kosmetische Komposition der Erfindung unter Verteilung eines biologisch wirksamen Komplexes auf der Grundlage einer Verbindung von Pentapeptid, Sojaproteinhydrolisat, Extrakt aus Blättern der gemeinen Myrte und Teprenon so angesetzt, dass besagter biologisch wirksame Komplex in veränderlichen Konzentrationen zwischen 1 und 50 Gew.-%, vorzugsweise zwischen 3 und 35 Gew.-%, wünschenswerter zwischen 5 und 15 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht der kosmetischen Komposition, anwesend ist.
[0096] Die Verteilung des biologisch wirksamen Komplexes auf die kosmetische Basis kann vom Anwender zum Zeitpunkt der Anwendung erfolgen, oder es kann eine gebrauchsfertige kosmetische Komposition geliefert werden, die eine kosmetisch wirksame Menge besagten, schon auf einen kosmetisch akzeptablen geeigneten Träger verteilten Komplexes, enthält.
[0097] Nach einer Ausführungsform enthält die kosmetische Komposition der Erfindung einen oder mehrere geeignete kosmetisch akzeptable Träger und/oder unterstützende Substanzen und/oder Kosmetikmittel. Typische für die Formulierung der kosmetischen Komposition der Erfindung nutzbare Kosmetikmittel enthalten eine oder mehrere zwischen Ölen, Verdickern, Konservierungsstoffen, Wasser, Alkoholen, Glyzerin, Stabilisatoren, Antioxidationsmitteln, Antibakteriziden, Befeuchtungsmitteln, Emulgatoren, Wachsen ausgewählte Substanzen.
[0098] Nach einer Ausführungsform kann die Komposition der Erfindung eine feste Form haben, z.B. als Creme, z.B. für die direkte Aufbringung auf die Haut des Gesichts oder des Körpers mit einem Stift, z.B. auf die Lippen, durch transdermale Pflaster oder als Make-up (Fondotinta, Gesichtspuder, Rouge, Lidschatten, Wimperntusche, Kajalstift, Lippenstift, etc.). Alternativ kann die kosmetische Komposition eine flüssige Form haben, z.B. als Lotion, wie die hydrophilen, hydroalkoholischen Lotions, oder Kosmetikmilch, Oleoliti, Shampoo, Schaumbad, Dispersionen, Suspensionen, direkt oder durch Spray anwendbare Lösungen. Die kosmetische Komposition kann auch eine halbfeste Form haben, z.B. entweder als Öl-Wasser- oder Wasser-Öl-Emulsion, Serum, hydrophiles oder hypophiles Gel, hydrophiles oder ölhaltiges Abschminkgel.
[0099] Nach einer weiteren Ausführungsform enthält die kosmetische Komposition weiterhin in auf die für die üblichen kosmetischen Formulierungen abgestimmten Mengen und in kosmetisch akzeptabler Form einen oder mehrere Verdicker, Konservierungsstoffe, Wasser, Alkohole, Glyzerin, Stabilisatoren, Antioxidationsmittel und Antibakterizide.
[0100] In Übereinstimmung mit einer Ausführungsform können die biologisch wirksamen Prinzipien in den Kompositionen der Erfindung in unterschiedlicher Menge vorhanden sein, z.B. kann der Myrtenblätterextrakt mit 0,0001 bis 30% Gew.-% vorhanden sein, wünschenswerter mit 0,5 bis 10%, noch wünschenswerter mit 1 bis 5 Gew.-%, das Sojaproteinhydrolisat kann mit 0,0001 bis 30 Gew.-% vorhanden sein, wünschenswerter mit 0,5 bis 10%, noch wünschenswerter mit 1 bis 5 Gew.-%, das Teprenon kann mit 0,0001 bis 30 Gew.-% vorhanden sein, wünschenswerter mit 0,5 bis 10%, noch wünschenswerter mit 1 bis 5 Gew.-%, und das Pentapeptid kann mit 0,0001 bis 30 Gew.-% vorhanden sein, wünschenswerter mit 0,5 bis 10%, noch wünschenswerter mit 1 bis 5 Gew.-%.
[0101] In die Komposition der Erfindung können in für die kosmetischen Kompositionen typischen Mengen auch Zusatzstoffe inkorporiert werden, die typischerweise in der Basisformulierung von Kosmetikprodukten benutzt werden, wie Öle, Glyzerin, Weichmacher, Dispergiermittel.
[0102] Bei Formulierungen in Form von Lösung, Suspension, Lotion oder halbflüssiger Form ist das Wasser als Verdünner oder Lösungsmittel vorhanden, optional vermengt mit anderen für die Formulierung von kosmetischen Kompositionen benutzten Flüssigkeiten, wie Ethylalkohol, Glykole wie das Ethylglykol.
[0103] In der Formulierung der kosmetischen Komposition der Erfindung können weitere Wirkstoffe vorhanden sein, wie zum Beispiel Vitamine, insbesondere Vitamin A, Vitamin E und ihre Derivate, wirksame Pflanzenextrakte, wie zum Beispiel die Extrakte aus Blättern grünen Tees, oder andere kosmetisch aktive wie Lezithin, Coenzym Q, Hyaluronsäure, Fruchtsäuren, Substanzen mit Peelingeffekt.
[0104] Nach einem weiteren Aspekt der Erfindung wird der Gebrauch einer kosmetischen Zusammensetzung wie vorbeschrieben für die Behandlung der gealterten Haut angezeigt, die sich typischerweise mit Runzeln, Verlust von Teint und Geschmeidigkeit, Blässe, geringere Dichte der Lederhaut und Hauterschlaffung darstellt.
[0105] Nach einem weiteren Aspekt liefert diese Erfindung ein Verfahren der kosmetischen Behandlung, das die Aufbringung einer kosmetisch wirksamen und akzeptablen Menge einer kosmetischen Komposition für die Verjüngung des Erscheinungsbildes der Haut auf die Haut beinhaltet und die synergetische Verbindung von A) mindestens einer auf der Ebene der Mitochondrial-DNA biologisch wirksamen Komponente, ausgewählt zwischen einem die Aminosäuren Serin, Cystein, Isoleucin, Asparagin, Threonin, ein Sojaproteinhydrolisat und ein Gemisch aus ihnen enthaltenden Pentapeptid, mit B) mindestens einer auf der Ebene der Zell-DNA biologisch aktiven Komponente, ausgewählt zwischen Teprenon, einem Myrtus Communis Pflanzenextrakt und einem Gemisch aus ihnen enthält.
[0106] Die folgenden Beispiele werden nur zur Illustrierung dieser Erfindung geliefert und sollen nicht als den Schutzumfang, wie sich aus den beigefügten Ansprüchen ergebend, einschränkend verstanden werden.
Beispiel 1
[0107] Es wurde ein biologisch wirksamer Komplex angesetzt, der die folgende Formulierung hat:
<tb>Extrakt aus Blättern der gemeinen Myrte<sep>0,1-30%
<tb>Teprenon<sep>0,1-30%
<tb>Sojaproteinhydrolisat<sep>0,1-30%
<tb>Pentapeptid<sep>0,1-30%
Beispiel 2
[0108] Der Komplex auf der Grundlage biologisch wirksamer Prinzipien des Beispiels 1 wurde schliesslich einem Test in vivo vs. Placebo unterzogen, um seine Runzeln verhütende Wirkung zu bewerten. Die Untersuchung wurde an 20 Freiwilligen im Alter zwischen 43 und 69 Jahren durchgeführt, die auf das Umfeld der Augen zweimal täglich an 56 Tagen eine Emulsion mit oder ohne 4% Wirkmittel (Placebo) aufgetragen haben. Die Reduzierung der Runzeln wurde durch profilometrische Untersuchung der von dem durch Krähenfüsse gekennzeichneten Umfeld der Augen genommenen Silikonrepliken bewertet.
[0109] Die erhaltenen Ergebnisse waren folgende:
nach 28 Tagen:
Anzahl Runzeln: -16% bezogen auf Placebo
Gesamtrunzelfläche: -33% bezogen auf Placebo Gesamtrunzellänge: -25% bezogen auf Placebo
nach 56 Tagen:
Anzahl Runzeln: -30% bezogen auf Placebo
Gesamtrunzelfläche: -39% bezogen auf Placebo
Gesamtrunzellänge: -36% bezogen auf Placebo
[0110] Ausserdem hat das Studium der Verteilung der Ergebnisse gezeigt, dass bei 89% der Freiwilligen nach einer Behandlung von 56 Tagen eine Reduzierung der Gesamtrunzelfläche der Krähenfüsse eingetreten ist.
Beispiel 3
[0111] Biologisch wirksame kosmetische Komposition mit der folgenden Formulierung:
<tb>Wasser<sep>qb 100
<tb>Cyclopentasiloxan<sep>28.0%
<tb>Glyzerin<sep>3.0%
<tb>Silikone<sep>3-4%
<tb>Emulgatoren<sep>2,5-4%
<tb>Xylitol<sep>1.0%
<tb>Stearinsäure<sep>0.8%
<tb>Limnante-Öl<sep>0.8%
<tb>Vitamin E<sep>0.4%
<tb>Extrakt von Blättern der gemeinen Myrte<sep>0.0001-30%
<tb>Teprenon<sep>0.0001-30%
<tb>Sojaproteinhydrolisat<sep>0.0001-30%
<tb>Pentapeptid<sep>0,0001-30%
<tb>Natriumchlorid<sep>0.2%
<tb>Allantoina<sep>0.1%
<tb>Lecithin<sep>0.1%
<tb>Hyaluronsäure<sep>0.07%
<tb>Xanthangummi<sep>0.07%
<tb>Karite-Butter<sep>0.10%
<tb>Silizium<sep>0.05%
<tb>Grüner Tee<sep>0.01%
<tb>Ethylhydroxyzellulose<sep>0.01%
<tb>Parfüm<sep>qb
<tb>Lösungsvermittler<sep>qb
<tb>Chelatbildner<sep>qb
<tb>Konservierungsstoffe<sep>qb
<tb>Antioxydationsmittel<sep>qb
<tb>q.b. = quanto basta = genügend<sep>
Beispiel 4
[0112] Biologisch wirksame Verbindung für die direkte Aufbringung auf die Haut oder löslich in einer kosmetischen Basis mit folgender Formulierung: q.b. = quanto basta = genügend
<tb>Glyzerylstearat<sep>5,00%
<tb>Cetylstearyl (12)OE <sep>1-5%
<tb>Polysorbat 80<sep>0.5-1%
<tb>Cetylalkohol<sep>1-3%
<tb>Otyl-Decanol<sep>1-3%
<tb>Triglyzreid C 8-10<sep>10-20%
<tb>Dimetylpolisiloxan<sep>0.01-0.1%
<tb>Weizenkeimöl<sep>0.8%
<tb>Tocopherolazetat<sep>0.1%
<tb>Extrakt von Blättern der gemeinen Myrte<sep>0,0001-30%
<tb>Teprenon<sep>0.0001-30%
<tb>Pentapeptid<sep>0.0001-30%
<tb>Sojaproteinhydrolisat<sep>0,0001-30%
<tb>Antioxidationsmittel und Konservierungsstoffe<sep>q.b.
<tb>Wasser<sep>q.b.a 100
Beispiel 5
[0113] Biologisch wirksame Komposition für die direkte Aufbringung auf die Gesichtshaut mit folgender Formulierung: q.b. = quanto basta = genügend
<tb>Wasser<sep>q.b. 100
<tb>Caprylyl/Capryl Triglyzerid<sep>17,000
<tb>Ceteareth-12<sep>5,000
<tb>Cetearyl-Isononanoat<sep>3,000
<tb>Oxtyldodecanol<sep>3,000
<tb>Glyzerylstearat<sep>5,100
<tb>Cetylalkohol<sep>2,000
<tb>Hydrolisierter Extrakt von Meerlattich<sep>0,330
<tb>Polysorbat 80<sep>0,500
<tb>Sojaproteinhydrolisat<sep>1,000
<tb>Hydrolisierte Pflanzenproteine<sep>0,400
<tb>Vitamin E<sep>0,2
<tb>Extrakt von Blättern der Gemeinen Myrte<sep>0.0001-30%
<tb>Sojaproteinhydrolisat<sep>0.0001-30%
<tb>Teprenon<sep>0.0001-30%
<tb>Pentapeptid<sep>0.0001-30%
<tb>Antioxidationsmittel und Konservierungsstoffe<sep>q.b.
In a first aspect, this invention relates to a biologically active complex comprising a compound between at least one mitochondrial DNA biologically active component and a cell biologically active component for the purpose of rejuvenating the appearance of the cell Contains skin.
Technical area
This invention has its origin in the field of cosmetic preparations for external use for the treatment of the skin, especially with the aim of rejuvenating the appearance of the skin.
Well-known technology
As is known, the aging of the skin is the process by which our organism indicates temporal changes: the skin is indeed the part of our body that changes most visibly over time.
As the cells age, DNA damage accumulates beyond the rate of repair leading to a reduction in protein synthesis. Because the proteins in the cell perform many vital functions, the cell is slowly affected and eventually dies. When a sufficient number of cells reach such a state in a tissue such as the skin, the tissue itself is compromised and the first signs of aging begin to appear.
Aging of the skin is an involutive physiological process that is influenced by both individual genetic factors and personal lifestyle.
The genetic material controls and regulates, together with the endocrine factors, the inherent aging of the skin, also known as aging in time. Unlike environmental factors, genetic factors remain constant throughout their lives.
They represent a kind of "biological clock" that chants the time of aging of all cells of the human body.
The aging of the skin caused by genetic factors begins very slowly and individually very differently, at the age of 25 years, and becomes visible from an age of 40 years and thereafter. Inherent aging slows down the production of cells, collagen and elastin, tissue, fat and muscle atrophy, reduces sweat glands and sebum production, and eventually DNA damage. The detectable major changes are due to a loss of moisture and elasticity of the skin. The wrinkles caused by inherent aging are quite fine, the skin becomes thinner, more transparent, and shows a tendency to sag.
By contrast, environmental factors such as excessive exposure to the sun, exposure to harmful environmental factors, a wrong lifestyle (excessive consumption of alcohol and improper diet), and smoking that cause increased free radical production and activation of metalloproteinases are contributing to the changes in the morphological structure, which are typical for the external aging of the skin or the photoaging responsible. The typical signs are very deep wrinkles, spots and thickening of the skin.
A large number of currently commercially available cosmetic formulations has the aim to improve or preserve the efficacy of the physiological mechanisms of the skin cells.
In particular, many commercial anti-aging cosmetic products contain anti-free radical agents such as vitamin E, beta-carotene, vitamin C derivatives, coenzyme Q and others. The free radicals (ROS) arise from oxidation reactions and are unstable molecular species because of being provided with one or more free electrons. Therefore, they are able to react very easily with organic substances and lead to cell degeneration, with changes in the biological structure, which are particularly visible in the skin.
The ROS are generated in many internal cell processes. Membrane proteins, Citosol enzymes (such as the cyclogenases), metabolism of lipids in the peroxysomes, all involve a small production of free radicals, but the vast majority of ROS (estimated at around 90%) is produced by the mitochondria during oxidative phosphorylation.
During this process, the NADH or FADH2 are used to create a proton gradient between the matrix and the membrane interspace. Normally, NADH-generated electrons pass through the respiratory chain and are used to generate water and transfer protons into the membrane space, creating a membrane potential. Sometimes, however, these electrons can react with an oxygen molecule to form the O2 superoxide anion.
The oxygen can be converted by the manganese-dependent exchanged superoxide enzyme (present in the matrix) or by the copper / sulfur-dependent exchanged superoxide enzyme (present in the cytoplasm or in the membrane interspace) into hydrogen peroxide (H2O2). The hydrogen peroxide is more stable than O2 and may spread through the membrane outside of the mitochondrion to the nucleus or be inactivated by the glutathione peroxidase enzyme or catalase enzyme. However, in the presence of reduced transition metals, H2O2 can also be converted into the highly reactive species hydroxyl radical (.OH). Because the mitochondria are the major ROS source in the cell, they generally also become more affected by cell oxidation stress.
The so-called "mitochondrial theory of aging" claims that a random accumulation of oxidation damage of the biological macromolecules caused by the free radicals and in particular by the reactive species of oxygen (ROS) is responsible for the degenerative aging phenomena. The ROS are neutralized under normal conditions by enzymes such as the various forms of reversed superoxide and glutathione peroxidase and catalase, as well as non-enzymatic "scavengers" such as glutathione, coenzyme Q and other compounds. Under conditions of oxidative stress, i. If the self-protection capacity of the cell is too high, the ROS can occasionally affect nucleic acids, proteins and lipids.
The mitochondrial macromolecules would be the most exposed because the mitochondria, which metabolize about 90% of the cell oxygen, are a preferred ROS source. The mtDNA seems to be particularly vulnerable because it is naked, i. without histone protein, and physically located near the main ROS source. The mitochondrial DNA is abundant in the mitochondria and closely linked to the various proteins.
Due to the presence of ROS in the vicinity of the inner mitochondrial membrane, the elimination of the protective function of the histones, and the limited repairability of the mtDNA compared to that of the nuclear DNA, the mitochondrial DNA is much more exposed to oxidative damage.
Consequently, the mtDNA is damaged several times in the course of life, and over time, the generated mitochondria lose their ability to generate energy more and more.
The aging of the cell is accompanied by constant mutations, in part by harmful sub-products (reactive species or radicals) of the oxygen we breathe. However, the organism has an inherent DNA repair function to counteract damage caused by these subproducts. In the aged cells, however, repair activity decreases because the enzymes involved in repair are blocked on their way to the site of damage within the mitochondria. Nearly half of the enzyme's action is blocked outside the mitochondria and does not reach the DNA to be repaired.
For these reasons, it is believed that in the mitochondrial DNA, the defects accumulate faster than in the core DNA. The somatic mitochondrial mutations are the main cause of the energy degeneration that characterizes senescence. Reducing the functionality of the respiratory chain not only reduces ATP synthesis, but also enhances the production of oxygen radicals in a vicious circle between respiratory injury, free radical accumulation, and mitochondrial DNA mutations. The mitochondria, which are the main source of energy for the cells, are therefore essential for their continued health and longevity.
At the present time, therefore, there is a need for cosmetic preparations having an anti-skin aging effect based on biologically active components capable of acting at the level of cellular mechanisms governing cell aging processes.
Summary of the invention
The Applicant has found that by combining at least one specific biological principle effective at the level of the mitochondrial DNA and at least one biological principle effective at the level of the nuclear DNA, one suitable for rejuvenating the appearance of the skin to obtain biologically active complex.
In particular, it is possible to limit the appearance and visibility of the skin aging phenomena and to preserve the long cell life and to assist the rejuvenation of the skin by using one or two selected biological components in a biologically active process, mainly at the level of the skin Mitochondrial DNA may interact with one or two selected biological components that act primarily at the nuclear DNA level.
In a first aspect, this invention provides a biologically active complex to prevent and / or delay skin aging, including the compound of
A) at least one biologically active principle at the mitochondrial DNA level, selected between a) a pentapeptide containing the amino acids serine, cysteine, isoleucine, asparagine, threonine, b) a soy protein hydrolyzate and a mixture of a) and b) with
B) at least one biologically active principle at the nuclear DNA level, selected between c) teprenone and d) a Myrtus communis extract and a mixture of c) and d).
The combination of the biologically active principles a) and / or b) belonging to the two mentioned groups A and B with c) and / or d) makes it possible to maintain and prolong the activity and functionality of the cells of the epidermis and dermis sufficient cell metabolism and obstruction of reactions that damage the cells themselves and cause their aging and premature death.
The complex containing the biologically active principles A-B of the invention delays cell aging and promotes long cell life. In particular, the application of a biologically effective amount of the four biologically active principles a-d to the skin has the particularly pronounced effect of rejuvenation of the appearance of the skin. In one embodiment, the biologically-active skin rejuvenation complex contains a pentapeptide containing the amino acids serine, cysteine, isoleucine, asparagine, threonine, b) a soy protein hydrolyzate containing amino acids and proteins with a molecular weight below 5 kDa, c) Teprenone, d) a Myrtus Communis extract, each of the ad components normally being present in a cosmetically active and acceptable amount.
Detailed description of the invention
Each of the components a-d of the biologically active complex realizes a specific action at the level of the components of the skin cells. In particular, the biologically active principles of group A) have a protective effect on the structure and functionality of mitochondrial DNA by maintaining their effectiveness over time.
In one form of embodiment, one of the mitochondrial DNA-active biological principles of Group A is a soy protein hydrolyzate that is typically rich in biomimetic peptides compared to the respiratory chain proteins.
According to one embodiment of the invention, the soy protein hydrolyzate contains, in addition to polyphenols and carbohydrates, amino acids and proteins with a molecular weight of less than 5 kDa.
According to one embodiment of the invention, the soya hydrolysate contains the eight essential amino acids present in the animal proteins, or phenylalanine, isoleucine, leucine, lysine, methionine, threonine, tryptophan, valine.
Normally, the soy hydrolyzate is obtained by enzyme hydrolysis and purification, e.g. through ultrafiltration. The molecular weight of the proteins is examined by electrophoresis.
The soy hydrolyzate has a specific action at the level of mitochondrial DNA, mainly by the expression mechanisms of the mitochoindrial sirtuin gene SIRT-3. This gene, like the SIRT-4 gene, is able to protect the mitochondria and is important for maintaining its health and longevity. As mitochondrial efficacy begins to decrease, the energy of the cells decreases and the process of aging and mitochondrial degeneration is triggered. Thanks to the effect of the SIRT-3 genes, but also possibly of the SIRT-4 genes, the mitochondria remain active for longer, providing the cells with more energy and extending their lifespan.
In particular, it has been observed that the gene SIRT3 is located at the level of the inner membrane of mitochondria and plays an important role in energy metabolism. By participating in adaptive thermogenesis, it reduces membrane potential and ROS production and stimulates the production and regeneration of antioxidant mitochondria.
To demonstrate the activity of the soy hydrolyzate within the complex of the invention, some laboratory tests were conducted using 1% active principle treated and untreated human fibroblasts for 24 and 48 hours. The expression of mitochondrial sirtuin SIRT-3 was assessed by immunofluorescence as compared to the control.
The results were as follows:
After 24h: + 10.23% higher SIRT-3 expression
After 48h: + 30.16% higher SIRT-3 expression
Using skin from biopsies, another test was performed by their treatment with or without 1% soy hydrolyzate. By immunofluorescence, the SIRT-3 production is determined and thus the gene expression of the gene for the sirtuin 3 found.
Photographically, it was observed that the treated skin, based on the control at 48 hours, has a higher expression of the SIRT-3 gene: + 20.7% higher SIRT-3 expression.
The soy protein hydrolyzate, except that it has a particular effect on the mitochondrial level, is particularly effective in promoting the action of cytochrome C oxidase.
Cytochrome C is a small hemoprotein found in the inner membrane of the mitochondria and belongs to the class of Ctochromes C. It is unlike other cytochromes, a soluble protein and an essential part of the transport chain of electrons.
Cytochrome C is involved in the third phase of cellular respiration, oxidative phosphorylation, in which cytochrome C releases 4 electrons to the oxygen molecule and forms 2 water molecules. The reaction is catalyzed by the cytochrome C oxidase (or complex IV), which is the last enzyme complex involved in the chain of electrons: 4 ferrocytochromes C + O2 + 4 H <+> -> 4 ferricytochromes C + 2 H2O.
Also known as cytochrome a3 or Wartburg respiratory ferment, this enzyme is an integral protein of the inner mitochondrial membrane and contains a porfyrin group, the Fe <2+> - contains ions (when the cytochrome is reduced), or Fe <3 +> - ions (when the cytochrome is oxidized). The reduction of oxygen is accompanied by the extrusion of four protons from the intermitochondrial space. The consumption of four hydrogen ions per oxygen molecule and the translocation of four additional hydrogen ions through the inner mitochondrial membrane are responsible for maintaining a pH gradient on both sides of this membrane. From this gradient, the phosphorylation of ADP to ATP and the energy production of the cell depend.
Also for this reason, the presence of the soy protein hydrolyzate component in the complex of the invention results in an increase in energy production in the form of ATP and protection against ROS-induced mitochondrial damage, thereby preserving the viability and longevity of cells and skin.
To evaluate the effect of this soy protein hydrolyzate on promoting the action of cytochrome C oxidase, an in vitro test was performed on 1% soy protein hydrolyzate-treated and untreated fibroblasts.
The effect of cytochrome C is evaluated after incubation for 3 and 24 hours and compared with the control.
The cells treated with the hydrolyzed soy proteins identified by the Applicant significantly increase the effect of the cytochrome C oxidase on the control, as shown below:
after 3 h: + 132% based on the control
after 24 h: + 623% based on the control.
The soy hydrolyzate therefore exhibits at the level of cytochrome C oxidase a stimulating effect on the mitochondrial respiratory crutches to permanently increase the skin energy.
The increased effect of the enzyme indeed means increased cellular respiration and consequent higher energy production.
In addition, a second in vitro test was carried out to demonstrate the increased ATP synthesis.
Fibroblasts were treated with 1% soy protein hydrolyzate. Then, after incubation for 1 and 3 hours, the amount of ATP is determined by bioluminescence.
The soy hydrolyzate significantly increases the ATP synthesis after 1 hour, by 40%. The analysis also shows that the ATP increase persists up to 3 hours with + 28% ATP produced. In another form of embodiment, one of the mitochondrial DNA-active biological principles of group A) is a pentapeptide which acts to protect the cells against oxidative damage to the mitochondrial DNA.
Typically, the pentapeptide is of synthetic origin and contains the following 5 amino acids: serine, cysteine, isoleucine, asparagine and threonine. In one form of embodiment, the sequence of the peptide is serine-cysteine-isoleucine-asparagine-threonine. In another embodiment, the sequence is Ser-Cys-Ile-Asn-Thr-NH2.
The pentapeptide has a particularly visible effect at the level of aconitase, the protein involved in cell respiration in the first phase of the Krebs cycle. This effect is particularly noteworthy because damage to mitochondrial DNA is directly responsible for the lack of energy supply at the cell level and thus for cell aging.
Some scientific studies have proven that mitochondrial DNA-associated proteins are capable of acting as protection against oxidative damage.
The protective effect of the pentapeptide present in the formulation of the complex of the invention for the mtDNA was evaluated by an in vitro test.
For this purpose, human keratinocytes were cultured with and without 1% pentapeptide for 48 hours and subjected to repeated exposure (with UVB rays) to produce the formation of ROS and induce cell aging: they were exposed 3 times to UVB. Irradiation of a power equal to 75mJ / cm <2> exposed. The mtDNA of aged keratinocytes undergoes special changes, with formation of deletions, fragments of mtDNA. These deletions act as markers of the mutations in the mtDNA.
The PCR technique allows the study of the frequency of the deletion. The PCR is followed by the electrophoresis run, which allows the separation and optical characterization (ribbon) of the fragments of the mtDNA. A greater color intensity of the band corresponds to a higher deletion frequency.
The deletions are examined in the cell extract of the unirradiated cheratinocytes (control), the irradiated keratinocytes and the irradiated, but treated with 1% active agent keratinocytes.
The pentapeptide has been shown to give full protection of the mtDNA: 100% without formation of deletions.
A second test has evaluated the effect of the aconitase enzyme. The aconitase enzyme plays a key role in cellular respiration, the main pathway of energy production. It is one of the enzymes of the Krebs cycle and turns citrus acid into isocitric acid. Fibroblasts are incubated for 72 hours in the presence of 1% of the active ingredient. Then, the effect of the mitochondrial aconitase enzyme was evaluated by comparison with the control.
The result was as follows:
1% pentapeptide: + 26% effect of Aconitase compared to the control.
Within the complex of the invention, the biologically active principles of group B), which are effective at the level of the cellular DNA, contain a myrtle communis extract and the teprenone.
The presence of at least one of these biologically active principles in the complex of the invention allows a slowing of the premature aging of the skin by preventive action against damage to the cell DNA.
According to one form of embodiment, one of the cell B-level biological principles that is effective at the cellular DNA level is a myrtle plant extract (Myrtus communis), a Mediterranean shrub rich in oligogalacturons.
Normally, the plant extract of myrtle leaves, and it contains a carbohydrate-rich active ingredient, mainly galacturonic acid, but also glucose, arabinose, glactose, rhamnose, xylose, fructose. The plant extract has proven to be a particularly effective protection for cell DNA.
In particular, it has been observed that the herbal myrtle extract, when added to cell cultures, induces the sirtu in production and a reduction in the expression of cell aging factors by activating the SIRT-1 gene.
The sirtuins (silent information regulators) are an enzyme family, which intervenes in the regulation of genetic expression, cell apoptosis, the metabolism of fatty acids, the regulation of the extension of cell life. The sirtuins are linked to the genes that coordinate and optimize the functions of the cells as they struggle to survive in a stressful environment, such as the skin cells that are constantly exposed to attacks from external influences.
This family includes the gene SIRT-1, which encodes a protein of the same name, which has the task to keep the DNA young and to control that only the "genes of youth" are active, and to maintain the stability of the genome , The SIRT-1 controls the correct set of genes in the cells of each tissue and coordinates and optimizes cell functions.
The protein SIRT-1 is a histone deacetylase and requires the presence of NAD + to perform its gene regulation activity in response to changes in the oxidative-reductive state of the cell. In response to a high exposure dose (UVB radiation), SIRT-1 interacts with the p53 protein to suppress cell transcription and apoptosis to prevent the proliferation of abnormal cells, while the SIRT-1 reacts in response to a low-dose challenge co-operates with the protein Ku70 to inhibit cell proliferation and favor the DNA repair process.
SIRT-1 is therefore a key regulator of cell defense and cell survival in response to stress and photoaging.
SIRT-1 exerts its action at the cellular level in all major cells of the dermis and the epidermis, in particular in the basal layer, which is responsible for the maintenance of cell exchange (regeneration and renewal of the skin).
SIRT-1 is involved in cell division and metabolism, DNA repair, apoptosis, cell cycle, heterochromatin formation, detoxification of superoxide anion. The sirtuins and thus the SIRT-1 itself are found in the human skin both in the keratinocytes and in the fibroblasts, in the zone between the lower epidermis, the upper dermis and the connection between the lower and the outer skin. There are approximately 20 senescence markers in this zone, which change with age and are involved in the formation of wrinkles, loss of compactness, pigmentation defects, skin dryness, and other typical signs of aging.
The skin cells of the lower and upper basal layer and the dermal cells are expression of the protein SIRT-1 in the nucleus. In addition, immunofluorescence studies have shown how SIRT-1 is expressed in normal epidermal antinocytes and in in vitro cultured dermal fibroblasts.
SIRT-1 has another object as protection against environmental stresses, e.g. by UV radiation, and other aging factors of the skin.
In one aspect of the invention, the induction of SIRT-1 production in aged cells of human skin by sirtuin activator compounds results in a reduction in the expression of the aging indicators and the extension of the life of these cells. In addition, sirtuin-activator compound-treated and UVB-irradiated human fibroblasts are characterized by a reduction in DNA degradation relative to the control and an increase in the integrity of the genetic information contained in the core DNA, all thanks to the effect of sirtuins.
The increase in cell vitality in cells into which the expression of SIRT-1 is induced varies between 9 and 28%, based on a control where SIRT-1 is not induced (this depends on the age of the cells ). The SIRT-1 gene plays an important role in aging-related metabolic changes. The gene SIRT-1 is involved in the regulation of the protein p53, a factor involved in cell apoptosis. Under cell stress conditions and when the DNA is damaged, the gene for the p53 is acetylated and activated. SIRT-1 is able to deacetylate p53 and block the transcription of this gene, thereby prolonging cell life.
[0073] It has been observed that human fibroblasts aged by successive cell replication runs have a reduction in the expression of the SIRT-1 gene and its respective SIRT-1 protein (-23% based on the control).
Another important function of the common myrtle extract is its ability to limit protein glycation, a typical manifestation of the aging process.
Protein glycation is the reaction by which the sugars combine with some protein groups. After attachment to the proteins of the organism, the glycation products are responsible for some tissue damage. In particular, the glycation reaction results in the formation of products that form abnormal and irreversible molecular bridges between the extracellular matrix-forming macromolecules (collagen). The proteins thus glycated are characterized by the alteration of the mechanical properties of the dermis, e.g. their elasticity, involved in the aging of the skin. To demonstrate the properties of the myrtle extract and its efficacy for cell longevity, its effect on SIRT-1 synthesis was quantified by examining normal and aged human fibroblasts.
In particular, an efficacy study was performed by Western blot studies on normal (control) and aged human fibroblasts following successive H2O2n treatments.
The fibroblasts incubated with a suitable medium are inoculated with various concentrations of the tested active agent and not inoculated. After 4 days, the cell extracts are homogenized before examination of SIRT-1 and stored below -80 ° C.
The Western blot test is then carried out, which allows by electrophoresis, immunotyping and visualization by image analysis, the semi-quantification of the produced SIRT-1 amount.
The agent-induced increase in SIRT-1 synthesis for the normal fibroblast was as follows compared to the untreated control:
0.25% active ingredient: + 2%
0.5% active ingredient: + 11%
1% active ingredient: + 36%
The agent-induced increase in SIRT-1 synthesis for the aged fibroblasts was as follows when compared to the untreated control:
0.25% active ingredient: + 11%
0.5% active ingredient: + 20%
1% active ingredient: + 31%
To assess the ability of galacturonic acid to interfere with the glycation process, its ability to limit the glycation response of collagen was determined.
Glycated and non-glycated collagen is incubated with the active agent in question and not incubated, and the reduction of the glycation process is assessed by measuring the fluorescence emitted by the glycated products by means of a spectrofluorometer after introducing a glycol aldehyde solution into the samples.
The percentage of reduction of the glycation process of the collagen by the active agent based on the glycated collagen without active agent is as follows:
1% active ingredient: -16%
2.5% active ingredient: -33%
5% active ingredient: -40%
According to one form of embodiment, the myrtle extract contains galacturonic acid, typically at a high concentration, e.g. between 20 and 70% by weight based on the total weight of the extract, and more desirably between 30 and 50% by weight.
The experiment carried out confirms that the myrtle leaf extract, and in particular its main constituent, galacturonic acid, has an influence on the cell mechanisms involved in the determination of the cell and tissue lifetimes. It stimulates the expression of the longevity gene SIRT-1 and controls the intermediate cell signals, which are essential for the maintenance of the proliferation ability of the cells.
In another embodiment of the invention, one of the group B biological principles active at the cellular DNA level contains teprenone (geranyl geranone).
The teprenone is a synthetic principle of synthetic origin, similar to the natural isoprene described in detail in international patent application WO / 2002/003 981, the contents of which are incorporated herein by reference.
Teprenone is a biologically active compound that retards cell aging by substantially slowing down the cell telomere length reduction and thereby increasing cell life.
It has been found that the preventive effect of Teprenon against skin aging phenomena, for the regeneration of skin cells and as protection against stress only partially on its telomeres, a high-repetitive DNA end region of the chromosome which encodes no protein product and a crucial role in preventing information loss plays during chromosome duplication, stabilizing effect is due.
Typically, the administration of teprenone at the skin level improves cell communication and delays the aging of the cells and prolongs their life span.
This action of teprenone is due in part to the synthesis of thioredoxin, a small protein with high antioxidant power that controls the intracellular redox state and increases cell and tissue resistance to stress and the functionality of prenyl proteins, and to increase the protection of the prenyl proteins Telomeres allowed to cause stimulating effects.
Within the formulation of the biologically active complex for preventing and / or delaying the aging of the skin, each of the above-described 4 biologically active components may be present in varying proportions, e.g. between 0.0001 and 30% by weight, depending on whether one mode of action should take precedence over the other.
According to one aspect of the invention, the biologically active complex according to any of the embodiments described above may be based on a cosmetic base or on a cosmetically acceptable carrier for the realization of a cosmetic composition for reactivating the longevity, vitality and regeneration of the epidermis and Dermacells and / or to prolong the cell life and support the rejuvenation of the appearance of the skin are suitable to be distributed.
According to a further aspect of the invention, there is provided a cosmetic composition for the rejuvenation of the appearance of the skin, which contains a biologically active complex comprising the synergistic compound between
A) A biologically active principle at the level of the mitochondrial DNA selected from a) a pentapeptide containing the amino acids serine, cysteine, isoleucine, asparagine, threonine and b) a soy protein hydrolyzate preferably containing peptides having a molecular weight of less than 5000 kDa and mixtures of a ) and b) and
B) a biologically active principle at the level of cell DNA selected between c) teprenone and d) a Myrtus Communis extract and mixtures of c) and d).
According to one embodiment, the cosmetic composition of the invention is prepared by distributing a biologically active complex based on a compound of pentapeptide, soy protein hydrolyzate, extract of common myrtle leaves and teprenone so that said biologically active complex in varying concentrations between 1 and 50% by weight, preferably between 3 and 35% by weight, more desirably between 5 and 15% by weight, based on the total weight of the cosmetic composition.
The distribution of the biologically active complex to the cosmetic base may be carried out by the user at the time of application, or a ready-to-use cosmetic composition containing a cosmetically effective amount of said complex already distributed on a cosmetically acceptable suitable carrier may be provided ,
In one embodiment, the cosmetic composition of the invention contains one or more suitable cosmetically acceptable carriers and / or adjuvants and / or cosmetic agents. Typical cosmetics useful in formulating the cosmetic composition of the invention include one or more selected from among oils, thickeners, preservatives, water, alcohols, glycerine, stabilizers, antioxidants, antibacterials, humectants, emulsifiers, waxes.
In one embodiment, the composition of the invention may have a solid form, e.g. as a cream, e.g. for direct application to the skin of the face or body with a pen, e.g. on the lips, by transdermal patches or as a make-up (Fondotinta, face powder, blush, eye shadow, mascara, kohl pencil, lipstick, etc.). Alternatively, the cosmetic composition may have a liquid form, e.g. as a lotion, such as the hydrophilic, hydroalcoholic lotion, or cosmetic milk, oleoliti, shampoo, bubble bath, dispersions, suspensions, directly or spray applicable solutions. The cosmetic composition may also have a semi-solid form, e.g. either as oil-water or water-oil emulsion, serum, hydrophilic or hypophilic gel, hydrophilic or oily make-up.
According to a further embodiment, the cosmetic composition further comprises in the agreed for the usual cosmetic formulations amounts and in cosmetically acceptable form one or more thickeners, preservatives, water, alcohols, glycerol, stabilizers, antioxidants and antibacterial agents.
In accordance with one embodiment, the biologically active principles may be present in different amounts in the compositions of the invention, e.g. For example, the myrtle leaf extract may be present at 0.0001 to 30% by weight, more desirably at 0.5 to 10%, even more desirably at 1 to 5% by weight, the soy protein hydrolyzate may contain from 0.0001 to 30% by weight. more preferably from 0.5 to 10%, more desirably from 1 to 5% by weight, the teprenone may be present at from 0.0001 to 30% by weight, more desirably from 0.5 to 10%, more desirably from 1 to 5% by weight, and the pentapeptide may be present at from 0.0001 to 30% by weight, more desirably from 0.5 to 10%, even more desirably from 1 to 5% by weight.
Also included in the composition of the invention in amounts typical of the cosmetic compositions are additives typically used in the base formulation of cosmetic products, such as oils, glycerine, plasticizers, dispersants.
For formulations in the form of solution, suspension, lotion or semi-liquid form, the water is present as a diluent or solvent, optionally admixed with other liquids used for the formulation of cosmetic compositions, such as ethyl alcohol, glycols such as ethyl glycol.
In the formulation of the cosmetic composition of the invention, other active ingredients may be present, such as vitamins, especially vitamin A, vitamin E and their derivatives, active plant extracts, such as extracts of leaves of green tea, or other cosmetically active, such as Lecithin, coenzyme Q, hyaluronic acid, fruit acids, substances with peeling effect.
According to another aspect of the invention, there is indicated the use of a cosmetic composition as described above for the treatment of aged skin which typically presents with wrinkles, loss of complexion and suppleness, paleness, lower density of the dermis and skin slackness.
In a further aspect, this invention provides a method of cosmetic treatment which comprises applying to the skin a cosmetically effective and acceptable amount of a cosmetic composition for rejuvenating the appearance of the skin and the synergistic compound of A) at least one of Mitochondrial DNA biologically active component layer selected from a pentapeptide containing the amino acids serine, cysteine, isoleucine, asparagine, threonine, a soy protein hydrolyzate and a mixture of them, with B) at least one biologically active component at the cellular DNA level, selected between Teprenon, a Myrtus Communis plant extract and a mixture of them.
The following examples are provided for illustration of this invention only and are not to be taken as limiting the scope of the invention as set forth in the appended claims.
example 1
A biologically active complex was used which has the following formulation:
<tb> Extract of common myrtle leaves <Sep> 0.1-30%
<Tb> teprenone <Sep> 0.1-30%
<Tb> Sojaproteinhydrolisat <Sep> 0.1-30%
<Tb> pentapeptide <Sep> 0.1-30%
Example 2
The complex based on biologically effective principles of Example 1 was finally tested in vivo. Placebo subjected to evaluate its anti-wrinkle effect. The study was performed on 20 volunteers between the ages of 43 and 69 who applied an emulsion with or without 4% agent (placebo) to the environment of the eyes twice daily for 56 days. The reduction of the wrinkles was assessed by profilometric examination of silicone replicas taken from the crow's eye environment of the eyes.
The results obtained were as follows:
after 28 days:
Number of wrinkles: -16% relative to placebo
Total dark area: -33% relative to placebo Total tincture: -25% relative to placebo
after 56 days:
Number of wrinkles: -30% relative to placebo
Total skin area: -39% relative to placebo
Total cell length: -36% relative to placebo
In addition, the study of the distribution of results has shown that in 89% of the volunteers after 56 days of treatment a reduction in the total roughness of crow's feet has occurred.
Example 3
Biologically active cosmetic composition having the following formulation:
<Tb> Water <sep> qb 100
<Tb> cyclopentasiloxane <Sep> 28.0%
<Tb> Glycerol <Sep> 3.0%
<Tb> Silicones <Sep> 3-4%
<Tb> emulsifiers <Sep> 2.5-4%
<Tb> Xylitol <Sep> 1.0%
<Tb> stearic acid <Sep> 0.8%
<Tb> Limnante oil <Sep> 0.8%
<tb> Vitamin E <Sep> 0.4%
<tb> Extract of common myrtle leaves <Sep> 0.0001-30%
<Tb> teprenone <Sep> 0.0001-30%
<Tb> Sojaproteinhydrolisat <Sep> 0.0001-30%
<Tb> pentapeptide <Sep> 0.0001 to 30%
<Tb> sodium chloride <Sep> 0.2%
<Tb> Allantoina <Sep> 0.1%
<Tb> Lecithin <Sep> 0.1%
<Tb> hyaluronic acid <Sep> 0.07% to
<Tb> xanthan gum <Sep> 0.07% to
<Tb> Shea Butter <Sep> 0.10% to
<Tb> silicon <Sep> 0.05%
<tb> Green tea <Sep> 00:01%
<Tb> Ethylhydroxyzellulose <Sep> 00:01%
<Tb> Perfume <Sep> qb
<Tb> solubilizers <Sep> qb
<Tb> chelator <Sep> qb
<Tb> preservatives <Sep> qb
<Tb> antioxidant <Sep> qb
<Tb> q.b. = quanto basta = enough <Sep>
Example 4
Biologically active compound for direct application to the skin or soluble in a cosmetic base having the following formulation: q.b. = quanto basta = enough
<Tb> Glyzerylstearat <Sep> 5.00%
<tb> Cetylstearyl (12) OE <Sep> 1-5%
<tb> Polysorbate 80 <Sep> 0.5-1%
<Tb> cetyl alcohol <Sep> 1-3%
<Tb> Otyl-decanol <Sep> 1-3%
<tb> Triglyceride C 8-10 <Sep> 10-20%
<Tb> Dimetylpolisiloxan <Sep> 0.01-0.1%
<Tb> Wheat germ oil <Sep> 0.8%
<Tb> tocopherolate <Sep> 0.1%
<tb> Extract of common myrtle leaves <Sep> 0.0001 to 30%
<Tb> teprenone <Sep> 0.0001-30%
<Tb> pentapeptide <Sep> 0.0001-30%
<Tb> Sojaproteinhydrolisat <Sep> 0.0001 to 30%
<tb> Antioxidants and preservatives <Sep> q.b.
<Tb> Water <sep> q.b.a 100
Example 5
Biologically active composition for direct application to the facial skin with the following formulation: q.b. = quanto basta = enough
<Tb> Water <Sep> q.b. 100
<tb> Caprylyl / Capryl triglyceride <Sep> 17,000
<Tb> Ceteareth-12 <Sep> 5.000
<Tb> cetearyl isononanoate <Sep> 3.000
<Tb> Oxtyldodecanol <Sep> 3.000
<Tb> Glyzerylstearat <Sep> 5,100
<Tb> cetyl alcohol <Sep> 2,000
<tb> Hydrolyzed extract of sea lettuce <Sep> 0.330
<tb> Polysorbate 80 <Sep> 0.500
<Tb> Sojaproteinhydrolisat <Sep> 1.000
<tb> Hydrolysed vegetable proteins <Sep> 0.400
<tb> Vitamin E <Sep> 0.2
<tb> Extract of leaves of common myrtle <Sep> 0.0001-30%
<Tb> Sojaproteinhydrolisat <Sep> 0.0001-30%
<Tb> teprenone <Sep> 0.0001-30%
<Tb> pentapeptide <Sep> 0.0001-30%
<tb> Antioxidants and preservatives <Sep> q.b.