CH681203A5

CH681203A5 -

Info

Publication number: CH681203A5
Application number: CH886/89A
Authority: CH
Inventors: Frederick B Rudolph; Buren Charles T Van
Original assignee: Sandoz Ag
Priority date: 1988-03-11
Filing date: 1989-03-09
Publication date: 1993-02-15
Also published as: JPH01279835A; NL8900581A; BE1002937A5; FR2628320A1; IT1232819B; SE8900835L; GB2216416A; GB8905179D0; SE8900835D0; DE3907842A1; IT8947733A0; GB2216416B

Description

5 5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

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40 40

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55 55

CH 681 203 A5 CH 681 203 A5

Beschreibung description

Die Erfindung befasst sich mit dem Einfluss von Nukleobasen auf die Immunfunktion. The invention deals with the influence of nucleobases on the immune function.

Purine und Pyrimidine werden in Zellen mit Aminosäuren als hauptsächlichen Vorläufern synthetisiert. Es wurde nun erkannt, dass eine unterdrückte Immunantwort bei Tieren durch Zugabe einer Nukleobase-quelle zur Formulierung umgekehrt werden kann. Purines and pyrimidines are synthesized in cells with amino acids as the main precursors. It has now been recognized that a suppressed immune response in animals can be reversed by adding a nucleobase source to the formulation.

Der stimulierende Einfluss von Nukleobasequellen auf das Immunsystem ist durch Versuche gezeigt worden, beispielsweise an Mäusen mit unterdrückter T-Lymphozytenfunktion infolge einer Missernährung durch Proteine. Weiter zeigen Tierversuche, dass eine unterdrückte Immunfunktion bei Tieren, die unter einer proteinfreien Diät gehalten wurden, durch eine Proteinübersättigung nicht wieder genügend hergestellt werden kann, obwohl hierdurch eine Wiederherstellung des Körpergewichts möglich ist, sondern dass hierzu die Verabreichung einer Nukleobasequelle erforderlich ist. The stimulating influence of nucleobase sources on the immune system has been shown in experiments, for example in mice with suppressed T-lymphocyte function due to protein malnutrition. Animal experiments further show that suppressed immune function in animals who were on a protein-free diet cannot be restored sufficiently by protein supersaturation, although this makes it possible to restore body weight, but instead requires the administration of a nucleobase source.

Gegenstand der Erfindung ist demnach die Verwendung einer Nukleobasequelle zur Herstellung eines Arzneimittels oder einer diätetischen Zusammensetzung zur Stimulierung der Immunfunktion im menschlichen oder tierischen Körper. Die so erhaltenen Arzneimittel oder diätetischen Zusammensetzungen können einem behandlungsbedürftigen Menschen oder Tier in einer das Immunsystem stimulierenden Menge einer Nukleobasequelle auf irgendeinem herkömmlichen Weg in fester oder flüssiger Form, insbesondere enterai, wie oral oder nasal, oder parenteral, wie in Form injizierbarer Lösungen oder Suspensionen, verabreicht werden. The invention accordingly relates to the use of a nucleobase source for the production of a medicament or a dietary composition for stimulating the immune function in the human or animal body. The drugs or dietary compositions thus obtained can be given to a person or animal in need of treatment in an amount of a nucleobase source which stimulates the immune system by any conventional route in solid or liquid form, in particular enteric, such as orally or nasally, or parenterally, such as in the form of injectable solutions or suspensions, be administered.

Zu Beispielen für herkömmliche pharmazeutisch annehmbare Formulierungsformen gehören Tabletten, Kapseln und injizierbare Formen, die den Wirkstoff im Gemisch mit üblichen pharmazeutisch annehmbaren Hilfsstoffen enthalten können, beispielsweise inerten Verdünnungsmitteln oder Trägern, wie Calciumcarbonat, Lactose oder Talkum, Granulierhilfsmitteln und Zerfallhilfsmitteln, wie Stärke oder Algin-säure, Aromastoffen, Farbstoffen und süssmachenden Mitteln, Bindemitteln, wie Stärke oder Gelatine, Gleitmitteln, wie Magnesiumstearat oder Talkum. Examples of conventional pharmaceutically acceptable formulation forms include tablets, capsules and injectable forms which can contain the active ingredient in admixture with conventional pharmaceutically acceptable auxiliaries, for example inert diluents or carriers, such as calcium carbonate, lactose or talc, granulation auxiliaries and disintegration aids, such as starch or alginine. Acid, flavors, colorants and sweeteners, binders such as starch or gelatin, lubricants such as magnesium stearate or talc.

Zu Beispielen für herkömmliche emährungsmässig annehmbare Formulierungsformen gehören die üblichen Diäten, beispielsweise Formuladiäten, welche die Nukleobasequelle im Gemisch mit Quellen für essentielle Aminosäuren und Energiespender, wie Proteine, Kohlenhydrate und/oder Fett, enthalten. Examples of conventional nutritionally acceptable formulation forms include the usual diets, for example formula diets, which contain the nucleobase source in a mixture with sources of essential amino acids and energy sources such as proteins, carbohydrates and / or fat.

Solche diätetische Zusammensetzungen können beispielsweise auf 400 bis 2000 Kilokalorien, wie 1500 Kilokalorien, pro Tag ausgerichtet sein. Die erfindungsgemäss durch Verwendung einer Nukleobasequelle hergestelten Zusammensetzungen können mit Vitaminen, wie Vitamin C, Mineralstoffen, wie Eisen, Spurenelementen, wie Selen, und gegebenenfalls anderen Elementen angereichert sein, und all dies hängt von den Bedürfnissen des jeweils zu behandelnden Empfängers ab. For example, such dietary compositions may target 400 to 2000 kilocalories, such as 1500 kilocalories, per day. The compositions produced according to the invention by using a nucleobase source can be enriched with vitamins, such as vitamin C, minerals, such as iron, trace elements, such as selenium, and optionally other elements, and all this depends on the needs of the recipient to be treated in each case.

Formulierungen für eine enterale Anwendung liegen zweckmässigerweise in fester oder flüssiger Form vor. Formulations for enteral use are expediently in solid or liquid form.

Nukleobasequellen, die sich zur Anwendung beim erfindungsgemässen Verfahren eignen, enthalten und bestehen vorzugsweise im wesentlichen aus natürlichen Nukleobasen, Nukleosiden, Nukleotiden, RNA, DNA, Äquivalenten hiervon und/oder Gemischen hiervon, die eine oder mehrere dieser Verbindungen enthalten. Nucleobase sources which are suitable for use in the method according to the invention contain and preferably consist essentially of natural nucleobases, nucleosides, nucleotides, RNA, DNA, equivalents thereof and / or mixtures thereof which contain one or more of these compounds.

Zu natürlichen Nukleobasen gehören die Purine Adenin und Guanin sowie die Pyrimidine Cytosin, Thymin und Uracil. Natural nucleobases include the purines adenine and guanine as well as the pyrimidines cytosine, thymine and uracil.

Zu natürlichen Nukleosiden gehören die Ribosenukleoside Adenosin, Guanosin, Uridin und Cytidin sowie die Desoxyribosenukleoside Desoxyadenosin, Desoxyguanosin, Desoxythymidin und Desoxycytidin. Natural nucleosides include the ribose nucleosides adenosine, guanosine, uridine and cytidine as well as the deoxyribose nucleosides deoxyadenosine, deoxyguanosine, deoxythymidine and deoxycytidine.

Zu natürlichen Nukleotiden gehören Phosphatester natürlicher Nukleoside, wie die Monophosphate Adenylat (AMP), Guanylat (GMP), Uridylat (UMP), Cytidylat (CMP), Desoxythymidylat (dTMP), Desoxycytidylat (dCMP) und Diphosphate sowie Triphosphate von natürlichen Nukleosiden, wie von ADP und ATP. Natural nucleotides include phosphate esters of natural nucleosides, such as the monophosphates adenylate (AMP), guanylate (GMP), uridylate (UMP), cytidylate (CMP), deoxythymidylate (dTMP), deoxycytidylate (dCMP) and diphosphates as well as triphosphates and natural nucleosides ADP and ATP.

Die zu verwendende Menge an Nukleobasequelle hängt unter anderem ab von der Art der gewünschten Behandlung, wie, ob es sich dabei um eine prophylaktische oder eine therapeutische Behandlung handelt, und dem zu behandelnden Empfänger, wie den jeweiligen Essgewohnheiten und der Frage, ob der zu behandelnde Empfänger ein Kind oder ein erwachsener Mensch ist, und dergleichen. Ein starker Fleischesser braucht daher eine grössere Menge an Nukleobasequelle als ein Vegetarier. Im allgemeinen werden bei grösseren Säugetieren unter Einschluss des Menschen zufriedenstellende Ergebnisse durch Verabreichung von Mitteln erreicht, die die 1- bis 50fache Menge der bei etwa 0,5 bis 1,5 g RNA liegenden normalen Tagesdosis enthalten, was einer Menge von etwa 0,1 bis 75 mg an RNA, DNA und Nukleosiden oder Nukleotiden pro Einheitsdosis oder einer äquivalenten Menge in Form von Nukleobasen entspricht. The amount of nucleobase source to be used depends, among other things, on the type of treatment desired, such as whether it is a prophylactic or a therapeutic treatment, and the recipient to be treated, such as the respective eating habits and the question of whether the treatment is to be carried out Recipient is a child or an adult, and the like. A strong meat eater therefore needs a larger amount of nucleobase source than a vegetarian. In general, in larger mammals, including humans, satisfactory results are achieved by administration of agents containing 1 to 50 times the normal daily dose of about 0.5 to 1.5 g of RNA, which is an amount of about 0.1 up to 75 mg of RNA, DNA and nucleosides or nucleotides per unit dose or an equivalent amount in the form of nucleobases.

Für die erfindungsgemässen Zwecke wird eine Gewichtseinheit an Nukleobase als vergleichbar mit 2,5 bis 3 Gewichtseinheiten an RNA, DNA, Nukleosiden oder Nukleotiden angesehen. Der Einfachheit halber sind die folgenden zu verwendenden Mengen Nukleobasequelle pro Einheitsdosis lediglich in g RNA ausgedrückt. For the purposes of the invention, a unit of weight of nucleobase is considered to be comparable to 2.5 to 3 units of weight of RNA, DNA, nucleosides or nucleotides. For the sake of simplicity, the following amounts of nucleobase source to be used per unit dose are expressed only in g of RNA.

Für eine Langzeitanwendung oder eine nahrungsmässige Anwendung liegt die pro Einheitsdosis zu verwendende Menge an Nukleobasequelle zweckmässigerweise innerhalb des Bereichs von 0,1 bis 4 g RNA, vorzugsweise innerhalb des Bereichs von 1 bis 3 g RNA, und insbesondere innerhalb des Bereichs von 1,5 bis 2,5 g RNA. For long-term use or nutritional use, the amount of nucleobase source to be used per unit dose is expediently within the range from 0.1 to 4 g RNA, preferably within the range from 1 to 3 g RNA, and in particular within the range from 1.5 to 2.5 g RNA.

2 2nd

5 5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

60 60

65 65

CH 681 203 A5 CH 681 203 A5

Für eine Kurzzeitanwendung oder eine therapeutische Anwendung ist die pro Einheitsdosis zu verwendende Menge im allgemeinen höher. Für eine akute Behandlung mit hohen Mengen an Nukleobasequellen werden vorzugsweise Pyrimidinnukleobasequellen angewandt, wie Uridin oder Uracil. Die für eine therapeutische Anwendung bevorzugten pro Einheitsdosis zu verwendenden Mengen liegen um 100 bis 2000% höher als die normalen Mengen und entsprechen im allgemeinen etwa 0,5 bis 30 g RNA. Vorzugsweise liegen diese Mengen im Bereich von etwa 1 bis 20 g RNA, und insbesondere im Bereich von 1 bis 7,5 g RNA pro Tag. Pharmazeutische Zusammensetzungen können entweder eine Tagesdosis oder Teilmengen hiervon enthalten und beispielsweise Einheitsdosierungsformen sein, die drei- oder viermal täglich verabreicht werden können. For short-term use or therapeutic use, the amount to be used per unit dose is generally higher. For acute treatment with high amounts of nucleobase sources, pyrimidine nucleobase sources such as uridine or uracil are preferably used. The preferred amounts to be used for a therapeutic application per unit dose are 100 to 2000% higher than the normal amounts and generally correspond to about 0.5 to 30 g of RNA. These amounts are preferably in the range from about 1 to 20 g of RNA, and in particular in the range from 1 to 7.5 g of RNA per day. Pharmaceutical compositions can contain either a daily dose or aliquots thereof, for example, unit dosage forms that can be administered three or four times a day.

Die erfindungsgemässe durch Verwendung einer Nukleobasequelle hergestellten Zusammensetzungen können überall dort angewandt werden, wo eine Stimulierung der Immunfunktion erwünscht ist, wie zur Wiederherstellung einer normalen Immunantwort bei einem Säugetier mit einer mangelnden Immunantwort, zur Abschwächung der immunsuppressiven Wirkung eines Immunsuppressivums, zur Förderung der Entwicklung des Immunsystems bei einem sich entwickelnden Säugetier, zur Verbesserung der Wirksamkeit eines alternden Immunsystems bei einem Säugetier und dergleichen. The compositions according to the invention produced by using a nucleobase source can be used wherever stimulation of the immune function is desired, such as for restoring a normal immune response in a mammal with a deficient immune response, for weakening the immunosuppressive effect of an immunosuppressant, for promoting the development of the immune system in a developing mammal, to improve the effectiveness of an aging immune system in a mammal, and the like.

In den folgenden Beispielen, Tabellen und Figuren zur Erläuterung der Erfindung werden folgende Abkürzungen verwendet: The following abbreviations are used in the following examples, tables and figures to explain the invention:

F = Standardlaborfutter der Firma Purina mit der Produktbezeichnung 5008, das 23,5 Gewichtsprozent einer Proteinquelle aus Sojabohnen, Fischknochenmehl und Milch enthält. F = standard laboratory feed from Purina with the product name 5008, which contains 23.5 percent by weight of a protein source from soybeans, fish bone meal and milk.

NF = nukleotidfreie Diät der Firma Purina mit der Produktnummer 5755, die 21 Gewichtsprozent Kasein als Proteinquelle und lediglich Spuren (aufgrund einer HPLC-Analyse weniger als 0,001 Gewichtsprozent) an Nukleotiden enthält. NF entspricht bezüglich des Kaloriengehalts und Stickstoffgehalts dem F. NF = nucleotide-free diet from Purina with the product number 5755, which contains 21 percent by weight casein as a protein source and only traces (based on HPLC analysis less than 0.001 percent by weight) of nucleotides. NF corresponds to F. in terms of calorie and nitrogen content

NFR = mit RNA (gereinigte Hefe-RNA) ergänztes NF. NFR = NF supplemented with RNA (purified yeast RNA).

NFR (0,25%) = mit 0,25 Gewichtsprozent gereinigter Hefe-RNA ergänztes NFR. NFR (0.25%) = NFR supplemented with 0.25% by weight of purified yeast RNA.

NFA = mit Adenin ergänztes NF. NFA = NF supplemented with adenine.

NFU = mit Uracil ergänztes NF. NFU = NF supplemented with uracil.

PF = NF ohne Protein der Firma Purina mit der Produktnummer 5765. PF = NF without protein from Purina with product number 5765.

PLN = Popliteallymphknoten. PLN = popliteal lymph node.

Fig. 1 zeigt den Einfluss einer proteinfreien Diät auf das Körpergewicht von Mäusen. Fig. 1 shows the influence of a protein-free diet on the body weight of mice.

Aus Fig. 2 gehen die PLN-Delta-Werte nach Behandlung mit einer proteinfreien Diät hervor. 2 shows the PLN delta values after treatment with a protein-free diet.

Der Fig. 3 ist die Dosisantwort PF -- NFR, NFU -- PLN zu entnehmen. 3 shows the dose response PF-NFR, NFU-PLN.

Die Fig. 4 zeigt das MOLT-4-Wachstum ± Nukleoside. Figure 4 shows MOLT-4 growth ± nucleosides.

Der Stimulationsindex wird wie folgt berechnet: The stimulation index is calculated as follows:

Gewicht der allogensensitivierten PLN in mg Weight of the allogen-sensitive PLN in mg

Stimulationsindex (S.I.) = —- Stimulation index (S.I.) = —-

Gewicht der syngensensitivierten PLN in mg Weight of syngene-sensitive PLN in mg

BEISPIEL 1 EXAMPLE 1

Diätnukleotide - Einfluss auf die Immunwiederherstelluna: Dietary Nucleotides - Influence on Immune Recovery:

Mäuse werden auf eine proteinfreie Diät (PF-Purina 5765) gesetzt. Die Tiere werden entweder sechs Tage oder elf Tage auf dieser Diät gehalten und dann mit Futter (F), 5755 (NF) oder 5755 gefüttert, das mit verschiedenen Mengen an RNA (NFR) oder Uracil (NFU) ergänzt ist. Mice are put on a protein-free diet (PF-Purina 5765). The animals are kept on this diet for either six days or eleven days and then fed with feed (F), 5755 (NF) or 5755 supplemented with various amounts of RNA (NFR) or uracil (NFU).

Sechs bis acht Wochen nach dem Übergang von RF auf F, NF, NFR oder NFA werden alle Tiere der folgenden in vivo Prüfung unterzogen: Six to eight weeks after the transition from RF to F, NF, NFR or NFA, all animals are subjected to the following in vivo tests:

Die Tiere werden mit bestrahlten (3000 R) 107 C57BI/6 allogenen Milzzellen in die rechte Hinterpfote gespritzt, während die linke Hinterpfote als Kontrolle dient und lediglich mit (3000 R) 107 Balb/C syngenen Milzzellen gespritzt wird. The animals are injected into the right hind paw with irradiated (3000 R) 107 C57BI / 6 allogeneic spleen cells, while the left hind paw serves as a control and is only injected with (3000 R) 107 Balb / C syngeneic spleen cells.

Sieben Tage nach den Inokulationen tötet man die Mäuse, exzisiert die Popliteallymphknoten (PLN) und wiegt sie. Das Gewicht der einzelnen Mäuse am sechsten Versuchstag geht aus der Fig. 1 hervor, und die PLN-Delta-Werte sind der Fig. 2 zu entnehmen. Die tatsächlichen Werte sind in der Tabelle 1 angegeben. Die Gruppe F erhält während des gesamten Versuchs das Futter (F) und keine proteinfreie Diät, so dass diese Tiergruppe eine normale Kontrolle darstellt. Seven days after the inoculations, the mice are sacrificed, the popliteal lymph nodes (PLN) excised and weighed. The weight of the individual mice on the sixth day of the experiment is shown in FIG. 1, and the PLN delta values can be found in FIG. 2. The actual values are given in Table 1. Group F receives the feed (F) and no protein-free diet throughout the experiment, so this group of animals is a normal control.

Diese Studie zeigt, dass eine Übersättigung an Protein unter gleichzeitiger Wiederherstellung des Körpergewichts für eine Wiederherstellung irgendeiner immunantwort bei diesen Mäusen nicht ausreicht, während ein Zusatz von RNA innerhalb einer verhältnismässig kurzen Zeitdauer zu einer beachtlichen Wiederherstellung der zellulären Immunfunktion führt. This study shows that supersaturation of protein while restoring body weight is not sufficient to restore any immune response in these mice, while adding RNA within a relatively short period of time leads to a substantial restoration of cellular immune function.

3 3rd

5 5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

CH 681 203 A5 CH 681 203 A5

Das gleiche System wird auch zur Bestimmung der dosisabhängigen Einflüsse von Nukleotiden verwendet. Mäuse werden während 13 Tagen auf der proteinfreien Diät gehalten, worauf auf die Diät 5755 (NF) umgestiegen wird, welche 0,025% RNA (1/10 normal), 2,5% RNA (10fache normale Menge) oder 0,6% Uracil (10fache normale Menge) enthält, und die PLN-Prüfung begonnen wird. Die dabei erhaltenen Ergebnisse können der Fig. 3 entnommen werden, wobei die Versuchswerte aus den Tabellen 2, 4 und 5 hervorgehen. The same system is also used to determine the dose-dependent influences of nucleotides. Mice are kept on the protein-free diet for 13 days, then switch to diet 5755 (NF), which contains 0.025% RNA (1/10 normal), 2.5% RNA (10 times normal amount) or 0.6% uracil ( 10 times the normal amount), and the PLN check is started. The results obtained can be seen in FIG. 3, the test values being shown in Tables 2, 4 and 5.

Bei einem getrennten Versuch, der in Tabelle 3 gezeigt ist, geht man bei einer Gruppe an Mäusen, die unter einer proteinfreien Diät gehalten wird, auf eine Futterdiät über und vergleicht die erhaltenen Daten mit denen von Tiergruppen mit 2,5% RNA und 0,6% Uracil. Die Rückgewinnung der Aktivität ist hierbei signifikant niedriger bei der Futterdiät als bei beiden Gruppen, welche hohe Mengen an Nukleotid erhalten. Diese Studien machen deutlich, dass sich durch höhere Mengen an Uracil oder RNA, als sie normalenweise in der Diät vorhanden sind, ein Verlust an Immunfunktion wirksamer wiederherstellen lässt. In a separate experiment, which is shown in Table 3, a group of mice kept on a protein-free diet is switched to a feed diet and the data obtained are compared with those of animal groups with 2.5% RNA and 0, 6% uracil. The recovery of activity is significantly lower in the feed diet than in both groups, which receive high amounts of nucleotide. These studies make it clear that higher amounts of uracil or RNA than are normally present in the diet can more effectively restore a loss of immune function.

Tabelle 1 Table 1

Durch eine proteinfreie Diät induzierte Immunsuppression und deren Reversibilität mit diätetischen Nukleotiden Immunosuppression induced by a protein-free diet and its reversibility with dietary nucleotides

Diät allogene Lymphknoten (mg) Diet allogeneic lymph nodes (mg)

syngene Lymphknoten (mg) syngeneic lymph nodes (mg)

Delta-Werte1 Delta values 1

Stimulationsindex2 Stimulation index 2

F F

10,7 10.7

3,1 3.1

7,6 7.6

3,45 3.45

9,3 9.3

4,0 4.0

5,3 5.3

2,33 2.33

8,4 8.4

2,0 2.0

6,4 6.4

4,20 4.20

6,2 6.2

2,3 2.3

3,9 3.9

2,69 2.69

6,5 6.5

1,4 1.4

5,1 5.1

4,64 4.64

X± Standardfehler X ± standard error

8,2 ±0,9 8.2 ± 0.9

2,6 ±0,5 2.6 ± 0.5

5,7 ±0,6 5.7 ± 0.6

3,5 ±0,4 3.5 ± 0.4

PF auf NF PF to NF

1,6 1.6

1,9 1.9

-0,3 -0.3

0,84 0.84

1,7 1.7

0,0 0.0

1,00 1.00

1,6 1.6

2,0 2.0

-0,4 -0.4

0,80 0.80

1,2 1.2

2,2 2.2

-1,0 -1.0

0,55 0.55

2,5 2.5

1,2 1.2

1,3 1.3

2,08 2.08

X ± Standardfehler X ± standard error

1,7 ±0,2 1.7 ± 0.2

1,8 ±0,2 1.8 ± 0.2

-0,8 ±0,4 -0.8 ± 0.4

1,1 ±0,3 1.1 ± 0.3

PF auf NFR PF on NFR

4,3 4.3

0,8 0.8

3,5 3.5

5,38 5.38

3,7 3.7

1,8 1.8

1,9 1.9

2,05 2.05

3,1 3.1

0,6 0.6

2,5 2.5

5,16 5.16

4,6 4.6

1,2 1.2

3,4 3.4

3,83 3.83

2,8 2.8

0,4 0.4

2,4 2.4

7,00 7.00

X ± Standardfehler X ± standard error

3,7 ±0,3 3.7 ± 0.3

1,0 ±0,3 1.0 ± 0.3

2,8 ±0,3 2.8 ± 0.3

4,7 ±0,8 4.7 ± 0.8

PF allein PF alone

0,66 0.66

0,90 0.90

-0,24 -0.24

0,73 0.73

0,72 0.72

0,92 0.92

-0,20 -0.20

0,78 0.78

0,94 0.94

0,75 0.75

0,19 0.19

1,25 1.25

0,85 0.85

1,00 1.00

-0,15 -0.15

0,85 0.85

1,45 1.45

1,10 1.10

0,35 0.35

1,32 1.32

X± Standardfehler X ± standard error

0,9 ±0,1 0.9 ± 0.1

0,9 ±0,06 0.9 ± 0.06

-0,01 ±0,01 a -0.01 ± 0.01 a

1,0 ±0,1 1.0 ± 0.1

1 : Delta = allogene Lymphknoten minus syngene Lymphknoten 1: Delta = allogeneic lymph nodes minus syngeneic lymph nodes

2: Stimulationsindex = S.I. = Gewicht der allogenen Lymphknoten dividiert durch das Gewicht der syn- 2: stimulation index = S.I. = Weight of the allogeneic lymph nodes divided by the weight of the syn-

genen Lymphknoten a: PF vs. F, PF auf NFR p < 0,002 gene lymph nodes a: PF vs. F, PF on NFR p <0.002

PFvs. PF, NFp <0,85 PFvs. PF, NFp <0.85

4 4th

5 5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

60 60

65 65

CH 681 203 A5 CH 681 203 A5

Tabelle 2 Table 2

Körpergewicht (g) am 18. Tag des Versuchs mit PLN Body weight (g) on the 18th day of the experiment with PLN

Diätgruppe Diet group

Tag 1 day 1

Tag 11 Day 11

Tag 18 Day 18

PF PF

23,5 ±0,7 23.5 ± 0.7

18,2 ± 1,3 18.2 ± 1.3

16,6 ±0,9 16.6 ± 0.9

PF-NFR (0,025%) PF-NFR (0.025%)

22,8 ±1,7 22.8 ± 1.7

18,3 ±1,0 18.3 ± 1.0

23,1 ±1,5 23.1 ± 1.5

PF-NFR (2,5%) PF-NFR (2.5%)

23,0 ±2,5 23.0 ± 2.5

18,5 ±2,1 18.5 ± 2.1

23,5 ±2,7 23.5 ± 2.7

PF-NFU (0,6%) PF-NFU (0.6%)

22,6 ±1,9 22.6 ± 1.9

17,3 ±1,3 17.3 ± 1.3

24,4 ±1,9 24.4 ± 1.9

F F

22,0 ±0,8 22.0 ± 0.8

22,7 ±0,9 22.7 ± 0.9

23,0 ±0,9 23.0 ± 0.9

Tag 1 = Fütterung der Mäuse mit der Diät PF Day 1 = feeding the mice with the PF diet

Tag 11= Diätänderung und Beginn der Prüfung mit PLN Day 11 = change of diet and start of the exam with PLN

Tag 18 = Bestimmung von PLN und Versuchsergebnisse Day 18 = determination of PLN and test results

5 5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

60 60

65 65

CH 681 203 A5 CH 681 203 A5

Tabelle 3 Table 3

Dosis-Wirkungs-Daten bei diätetischer Verabreichung von Nukleotiden im Anschluss an eine durch PF induzierte Immunsuppression Dose-response data for dietary administration of nucleotides following PF-induced immunosuppression

Diätgruppe Diet group

Allo LNs (mg) Allo LNs (mg)

Syn LNs (mg) Syn LNs (mg)

Delta • (allogen-syngen) Delta • (allogeneic-syngeneic)

Stimulationsindex (al!ogen:syngen) Stimulation index (al! Ogen: syngen)

PF PF

3,3 3.3

0,7 0.7

2,6 2.6

4,7 4.7

4,2 4.2

1,0 1.0

3,2 3.2

4,2 4.2

2,9 2.9

2,0 2.0

0,9 0.9

1,4 1.4

4,0 4.0

1,3 1.3

2,7 2.7

3,1 3.1

0,9 0.9

0,0 0.0

1.0 1.0

3,1 ±0,6 3.1 ± 0.6

1,2 ±0,2 1.2 ± 0.2

1,2 ±0,6 1.2 ± 0.6

2,9 ±0,7 2.9 ± 0.7

PF-NFR (0,025%) PF-NFR (0.025%)

6,5 6.5

1,3 1.3

5,2 5.2

5,0 5.0

8,6 8.6

1,8 1.8

6,8 6.8

4,8 4.8

8,7 8.7

2,0 2.0

6,7 6.7

4,3 4.3

7,7 7.7

2,1 2.1

5,6 5.6

3,7 3.7

5,6 5.6

1,5 1.5

4,1 4.1

3,7 3.7

7,4 ±0,6 7.4 ± 0.6

1,7 ±0,2 1.7 ± 0.2

5,7 + 0,5 5.7 + 0.5

4,3 ±0,3 4.3 ± 0.3

PF-NFR (2,5%) PF-NFR (2.5%)

9,7 9.7

1,5 1.5

8,2 8.2

6,5 6.5

5,9 5.9

1,3 1.3

4,6 4.6

4,5 4.5

4,7 4.7

1,9 1.9

2,8 2.8

2,5 2.5

7,2 7.2

1,0 1.0

6,2 6.2

7,2 7.2

7,4 7.4

1,2 1.2

6,2 6.2

7,0 ±0,8 7.0 ± 0.8

1,4 ±0,2 1.4 ± 0.2

5,6 ±0,9 5.6 ± 0.9

5,4 ±0,8 5.4 ± 0.8

PF-NFU (0,6%) PF-NFU (0.6%)

10,3 10.3

1,5 1.5

8,8 8.8

6,7 6.7

9,2 9.2

1,5 1.5

6,7 6.7

6,1 6.1

9,5 9.5

1,6 1.6

7,9 7.9

5,9 5.9

13,0 13.0

2,1 2.1

11,1 11.1

6,2 6.2

6,8 6.8

1,6 1.6

5,2 5.2

4,2 4.2

9,8 ±1,0 9.8 ± 1.0

1,7 ±0,3 1.7 ± 0.3

7,9 ±1,0 7.9 ± 1.0

5,8 ±1,0 5.8 ± 1.0

F-F F-F

6,0 6.0

1,8 1.8

4,2 4.2

3,3 3.3

11,6 11.6

1,4 1.4

10,2 10.2

8,3 8.3

2,2 2.2

6,1 6.1

3,8 3.8

6,2 6.2

0,7 0.7

5,5 5.5

8,9 8.9

10,9 10.9

1,2 1.2

9,7 9.7

9,1 9.1

8,6 ±1,2 8.6 ± 1.2

1,5 ±0,3 1.5 ± 0.3

7,1 ±1,2 7.1 ± 1.2

6,7 ±1,3 6.7 ± 1.3

AlloLNs: C57BI/6 Lymphknoten SynLNs: Balb/c Lymphknoten AlloLNs: C57BI / 6 lymph nodes SynLNs: Balb / c lymph nodes

Beginn mit PF am ersten Tag, dosierte Diäten und Prüfung von PLN am 11. Tag, Bestimmung von LNS am 18. Tag Start with PF on the first day, dosed diets and testing PLN on the 11th day, determination of LNS on the 18th day

PFvs. PF-NFR0,025%, p<0,01, N.S. PFvs. PF-NFR 0.025%, p <0.01, N.S.

PFvs. PF-NFR2,5%, p <0,01, <0,05 PF vs. PF - NFU 0,6%, p < 0,001, <0,05 PFvs. PF-NFR 2.5%, p <0.01, <0.05 PF vs. PF - NFU 0.6%, p <0.001, <0.05

PF vs. F, p< 0,01, <0,05 PF vs. F, p <0.01, <0.05

6 6

5 5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

CH 681 203 A5 CH 681 203 A5

Tabelle 4 , __, Table 4, __,

Dosis-Wirkungs-Daten bei diätetischer Verabreichung von Nukleotiden im Anschluss an eine durch PF m- Dose-response data for dietary administration of nucleotides following one by PF m

duzierte Immunsuppression _____ reduced immunosuppression _____

R R

Diätgruppe Diet group

Allo LNs (mg) Allo LNs (mg)

Syn LNs (mg) Syn LNs (mg)

Delta allogen-syngen Delta allogeneic-syngeneic

Stimulationsindex (allogen:syngen) Stimulation index (allogeneic: syngeneic)

PF PF

1.8 1.8

0,5 0.5

1,3 1.3

3,6 3.6

1,6 1.6

0,8 0.8

2,0 2.0

1,0 1.0

0,6 0.6

0,4 0.4

1,7 1.7

1,6 1.6

1,9 1.9

-0,3 -0.3

0,8 0.8

2,2 2.2

1,2 1.2

1,0 1.0

1,8 1.8

Mittelwert ± Mean ±

1,6 ±0,2 1.6 ± 0.2

1,0 ±0,3 1.0 ± 0.3

0,6 ±0,3 0.6 ± 0.3

2,0 ±0,5 2.0 ± 0.5

Standardfehler Standard error

PF—F PF — F

3,1 3.1

1,5 1.5

1,6 1.6

2,1 2.1

3,6 3.6

1,4 1.4

2,2 2.2

2,6 2.6

5,4 5.4

2,0 2.0

3,4 3.4

2,7 2.7

4,7 4.7

1,1 1.1

3,6 3.6

4,3 4.3

10,4 10.4

3,6 3.6

6,8 6.8

2,9 2.9

5,4 ±1,3 5.4 ± 1.3

1,9 ±0,4 1.9 ± 0.4

3,5 ±0,9 3.5 ± 0.9

2,9 ±0,4 2.9 ± 0.4

PF-NF PF-NF

2,3 2.3

1,6 1.6

0,7 0.7

1,4 1.4

4,1 4.1

2,0 2.0

2,1 2.1

6,1 6.1

2,5 2.5

3,6 3.6

2,4 2.4

3,7 3.7

2,8 2.8

0,9 0.9

1,3 1.3

3,6 3.6

1,4 1.4

2,2 2.2

2,6 2.6

4,0 ±0,6 4.0 ± 0.6

2,1 ±0,3 2.1 ± 0.3

1,9 ±0,5 1.9 ± 0.5

2,0 ±0,6 2.0 ± 0.6

PF-NFR (0,025%) PF-NFR (0.025%)

4,2 4.2

1,5 1.5

2,7 2.7

2,8 2.8

3,8 3.8

2,5 2.5

1,3 1.3

1,5 1.5

3,5 3.5

1,5 1.5

2,0 2.0

2,3 2.3

3,4 3.4

1,4 1.4

2,0 2.0

2,4 2.4

4,2 4.2

1,8 1.8

2.4 2.4

2,3 2.3

3,8 ±0,8 3.8 ± 0.8

1,7 ±0,2 1.7 ± 0.2

2,1 ±0,2 2.1 ± 0.2

2,3 ±0,2 2.3 ± 0.2

PF-NFR (0,25%) PF-NFR (0.25%)

5,1 5.1

2,8 2.8

2,3 2.3

1,8 1.8

3,9 3.9

1,5 1.5

2,4 2.4

2,6 2.6

3,9 3.9

1,7 1.7

2,2 2.2

2,3 2.3

5,6 5.6

1,8 1.8

3,8 3.8

3,1 3.1

6,4 6.4

1,3 1.3

5,1 5.1

4,9 4.9

5,0 ±0,5 5.0 ± 0.5

2,0 ±0,3 2.0 ± 0.3

3,2 ±0,6 3.2 ± 0.6

2,9 ±0,5 2.9 ± 0.5

PF-NFR (2,5%) PF-NFR (2.5%)

7,0 7.0

2,7 2.7

4,3 4.3

2,6 2.6

8,7 8.7

3,6 3.6

5,1 5.1

2,4 2.4

8,5 8.5

3,1 3.1

5,4 5.4

2,7 2.7

6,2 6.2

3,0 3.0

3,2 3.2

2,1 2.1

7,4 7.4

2,8 2.8

4,6 4.6

2,6 2.6

7,6 ±0,5 7.6 ± 0.5

3,0 ±0,2 3.0 ± 0.2

4,5 ±0,4 4.5 ± 0.4

2,5 ±0,1 2.5 ± 0.1

>0,1 > 0.1

>0,2 > 0.2

>0,8 > 0.8

>0,2 > 0.2

>0,01 > 0.01

7 7

5 5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

CH 681 203 A5 CH 681 203 A5

Tabelle 4 (Fortsetzung) Table 4 (continued)

Diätgruppe Diet group

Allo LNs (mg) Allo LNs (mg)

Syn LNs (mg) Syn LNs (mg)

Delta ailogen-syngen Delta ailogen-syngene

Stimulationsindex (aIlogen:syngen) Stimulation index (analog: syngene)

R R

PF-NFU (0,06%) PF-NFU (0.06%)

4,6 4.6

2,4 2.4

2,2 2.2

1,9 1.9

4,4 4.4

1,6 1.6

2,8 2.8

5,5 5.5

0,9 0.9

4,6 4.6

6,1 6.1

9,2 9.2

2,1 2.1

7,1 7.1

4,4 4.4

8,2 8.2

2,6 2.6

5,6 5.6

3,2 3.2

6,4 ±1,0 6.4 ± 1.0

1,9 ±0,3 1.9 ± 0.3

4,9 ±0,9 4.9 ± 0.9

3,7 ±0,7 3.7 ± 0.7

>0,01 > 0.01

PF-NFU (0,6%) PF-NFU (0.6%)

4,2 4.2

0,5 0.5

3,7 3.7

8,4 8.4

4,9 4.9

1.3 1.3

3,6 3.6

3,8 3.8

5,5 5.5

1.4 1.4

4,1 4.1

3,9 3.9

6,2 6.2

1.5 1.5

4,7 4.7

4,1 4.1

6,3 6.3

1,6 1.6

4,7 4.7

3,9 3.9

5,4 ±0,4 5.4 ± 0.4

1,3 ±0,2 1.3 ± 0.2

4,2 ±0,2 4.2 ± 0.2

4,8 ±0,9 4.8 ± 0.9

>0,01 > 0.01

F-F F-F

8,3 8.3

1.7 1.7

6,6 6.6

4,9 4.9

8,8 8.8

2,2 2.2

6,6 6.6

4.0 4.0

8,7 8.7

2,7 2.7

6,0 6.0

3,2 3.2

6,8 6.8

1,9 1.9

4,9 4.9

3,6 3.6

6,4 6.4

2,1 2.1

4,3 4.3

3,0 3.0

7,8 ±0,5 7.8 ± 0.5

2,1 ±0,2 2.1 ± 0.2

5,7 ±0,5 5.7 ± 0.5

3,7 ±0,8 3.7 ± 0.8

>0,001 > 0.001

AIloLNs: C57BI/6 Lymphknoten SynLNs: Balb/c Lymphknoten AIloLNs: C57BI / 6 lymph nodes SynLNs: Balb / c lymph nodes

Beginn mit PF am ersten Tag, dosierte Diäten und Prüfung von PLN am 9. Tag, Bestimmung von LNS am 16. Tag p-Werte = PF-HF vs. einzelne Gruppen (berechnet nach dem Student-T-Test) Start with PF on the first day, dosed diets and testing PLN on the 9th day, determination of LNS on the 16th day p-values = PF-HF vs. individual groups (calculated according to the Student T test)

Tabelle 5 Table 5

Körpergewicht (g) am 16. Tag des Versuchs mit PLN Body weight (g) on the 16th day of the experiment with PLN

Diätgruppe Diet group

Tag 8 Day 8

Tag 12 Day 12

Tag 16 Day 16

PF PF

15,2 ±0,9 15.2 ± 0.9

17,2 ±0,6 17.2 ± 0.6

13,7 ±0,6 13.7 ± 0.6

NFU (0,6%) NFU (0.6%)

19,7 ±0,7 19.7 ± 0.7

22,0 ±0,9 22.0 ± 0.9

21,7 ±0,7 21.7 ± 0.7

NFU (0,06%) NFU (0.06%)

18,8 ±0,5 18.8 ± 0.5

22,3 ±0,6 22.3 ± 0.6

19,4 ±1,1 19.4 ± 1.1

NFR (2,5%) NFR (2.5%)

18,6 ±0,9 18.6 ± 0.9

21,7 ±0,4 21.7 ± 0.4

22,5 ±0,5 22.5 ± 0.5

NFR (0,25%) NFR (0.25%)

18,7 ±0,3 18.7 ± 0.3

21,6 ±0,5 21.6 ± 0.5

20,2 ±0,6 20.2 ± 0.6

NFR (0,025%) NFR (0.025%)

17,2 ±0,6 17.2 ± 0.6

20,5 ±0,6 20.5 ± 0.6

19,8 ±0,6 19.8 ± 0.6

NF NF

19,7 ±0,8 19.7 ± 0.8

23,3 ±0,9 23.3 ± 0.9

22,5 ±0,8 22.5 ± 0.8

PF--F PF - F

18,5 ±0,3 18.5 ± 0.3

23,2 ±0,4 23.2 ± 0.4

22,1 ±0,4 22.1 ± 0.4

F F

23,6 ±0,7 23.6 ± 0.7

23,3 ±0,4 23.3 ± 0.4

21,5 ±0,6 21.5 ± 0.6

BEISPIEL 2 EXAMPLE 2

Wachstum humaner MOLT-4 T-Lymphoplasten in serumfreiem RPMI-1640 + humanem IL-2 + Nucleosiden in vitro Growth of human MOLT-4 T lymphoplasts in serum-free RPMI-1640 + human IL-2 + nucleosides in vitro

Versuche haben gezeigt, dass die von IL-2 abhängige T-Zellhiifslinie (HT-2) der Maus Nukleotide (Uridin und Inosin) für einen optimalen Phasenübergang von Gi zu S in serumfreien Medien erfordert. Uridin allein ist dabei besonders wirksam. Zur Bestimmung des Bedarfs an Nukleosiden bei gezüchteten menschlichen T-Zellinien werden zunächst orientierende Versuche zur Ermittlung der Wachstumskinetik unter Verwendung der humanen T-Lymphoplasten Zellinie MOLT-4 durchgeführt. Diese Zellinie produziert IL-2 nach Stimulation mit Lectinen und Phorbolestern. Eine Langzeitzüchtung dieser Zellinie ist Experiments have shown that the IL-2-dependent mouse T-cell line (HT-2) requires nucleotides (uridine and inosine) for an optimal phase transition from Gi to S in serum-free media. Uridine alone is particularly effective. To determine the need for nucleosides in cultured human T-cell lines, preliminary experiments are first carried out to determine the growth kinetics using the human T-lymphoplast cell line MOLT-4. This cell line produces IL-2 after stimulation with lectins and phorbol esters. Long-term cultivation of this cell line is

8 8th

5 5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

60 60

65 65

CH 681 203 A5 CH 681 203 A5

nicht abhängig von IL-2, reagiert jedoch auf IL-2. Zellen MOLT-4 werden nach intensivem Waschen und Entfernen von fetalem Rinderserum an der Phase Gq/Gi zum Stillstand gebracht. Zellkulturen werden in einer Zelldichte von 5x10* Zellen pro mi RPMI-1640 mit 20 uMol HEPES (4-(2-Hydroxyethyl)-1-pipera-zinethansulfonsäure) und 2 uMol L-Glutamin angesetzt. Die Zellkulturen werden zur Zeit 0 mit humanem IL-2 (5 ji/ml) und Uridin (100 uMol) versetzt, und die Anzahl der lebenden Zellen wird während 72 Stunden zu verschiedenen Zeitpunkten geprüft. not dependent on IL-2, but reacts to IL-2. MOLT-4 cells are brought to a standstill on phase Gq / Gi after intensive washing and removal of fetal bovine serum. Cell cultures are set up in a cell density of 5x10 * cells per ml of RPMI-1640 with 20 μmol HEPES (4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinethanesulfonic acid) and 2 μmol L-glutamine. Human IL-2 (5 μl / ml) and uridine (100 μmol) are added to the cell cultures at time 0, and the number of living cells is checked at different times during 72 hours.

Die Ergebnisse, welche in Fig. 4 dargestellt sind, zeigen, dass sich durch Zusatz von Uridin (100 uMol) zu serumfreien Kulturen von MOLT-4 in Anwesenheit von IL-2 eine Erhöhung des Phasenübergangs von Gi zu S hinsichtlich der Anzahl der lebenden Zellen und während eines bestimmten Zeitverlaufs ergibt (der Phasenübergang von Gt zu S tritt bei 20 Stunden in Kulturen mit Uridin und bei 40 Stunden in Kulturen ohne Uridin auf). Andere Versuche zeigen, dass Kombinationen von Adenosin + Inosin + Uridin wirksamer sind als Uridin allein. The results, which are shown in Fig. 4, show that adding uridine (100 µmol) to serum-free cultures of MOLT-4 in the presence of IL-2 increases the phase transition from Gi to S in terms of the number of living cells and over a period of time (the phase transition from Gt to S occurs at 20 hours in cultures with uridine and at 40 hours in cultures without uridine). Other experiments show that combinations of adenosine + inosine + uridine are more effective than uridine alone.

Claims

1. Use of a nucleobase source for the manufacture of a medicament or a dietary composition for stimulating the immune function in the human or animal body.

2. Use according to claim 1, characterized in that yeast RNA is used as a nucleobase source.

3. Use according to claim 1 or 2, characterized in that a protein-free drug or a protein-free dietary composition is produced.

4. Use according to any one of claims 1 to 3 for the preparation of an agent for restoring normal immune action in a person with a defective immune action or for weakening the immunosuppressive effect of an immunosuppressant or for improving the development of the immune system in a developing person or for improving the Aging immune system activity.

5. Use according to one of claims 1 to 4, characterized in that an agent is produced which contains 0.1 to 75 g of RNA, DNA, nucleotides or nucleosides or a comparable amount per unit dose in the form of nucleobases.

6. Use according to claim 5, characterized in that a dietary composition is prepared which contains 0.1 to 4 g of RNA, DNA, nucleosides or nucleotides per unit dose or nucleobases in an amount comparable to this.

7. Use according to claim 6, characterized in that a dietary composition is prepared which contains 1 to 3 g of RNA, DNA, nucleosides or nucleotides per unit dose or nucleobases in an amount comparable to this.

8. Use according to claim 7, characterized in that a dietary composition is prepared which contains 1.5 to 2.5 g of RNA, DNA, nucleosides or nucleotides per unit dose or nucleobases in an amount comparable to this.

9. Use according to claim 5, characterized in that a pharmaceutical composition is produced which contains 0.5 to 30 g of RNA, DNA, nucleotides or nucleosides per unit dose or nucleobases in an amount comparable to this.

10. Use according to claim 9, characterized in that a pharmaceutical composition is produced which contains 1 to 20 g of RNA, DNA, nucleotides or nucleosides per unit dose or nucleobases in an amount comparable to this.

11. Use according to claim 10, characterized in that a pharmaceutical composition is produced which contains 1 to 7.5 g RNA, DNA, nucleotides or nucleosides per unit dose or nucleobases in an amount comparable to this.

12. Use according to one of claims 9 to 11, characterized in that a pharmaceutical composition for the treatment of conditions of immunosuppression, which make treatment with increased daily amounts of a nucleobase source necessary, is produced, wherein a pyrimidine nucleobase source, such as uridine or uracil, is used .

9