AR086525A1 - Metodo de purificacion de anticuerpos - Google Patents

Abstract

Reivindicación 1: Un método para purificar una proteína de una disolución que comprende: (a) una primera etapa de cromatografía que comprende: pasar dicha disolución sobre una primera columna de cromatografía; eluir un eluyente de proteína cruda de la primera columna de cromatografía usando un primer tampón de elución; y (b) una segunda etapa de cromatografía que comprende: pasar el eluyente de proteína cruda obtenido al final de la etapa (a) sobre una segunda columna de cromatografía; recuperar la proteína purificada de la segunda columna de cromatografía usando un segundo tampón de elusión, en el que cada uno de los tampones comprende Bis Tris.Reivindicación 38: Un método para preparar tampones adecuados para usarse en el método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 37, que comprende las etapas de: i) crear una disolución con una concentración final de 15 a 25 mM Bis Tris y de 15 a 25 mM NaCl; ii) ajustar el pH de la disolución a un valor comprendido entre 7 y 8 con ácido acético; iii) recoger la mitad de la disolución, obteniendo de esta manera un tampón de equilibrado; iv) ajustar el pH de la mitad restante de la disolución de la etapa (iii) a un valor comprendido entre 4 y 5 con ácido acético; v) recoger la mitad de la disolución obtenida en la etapa (iv), obteniendo de esta manera un tampón de elusión; vi) ajustar el pH de la mitad restante de la disolución de la etapa (v) a un valor comprendido entre 3 y 4 con ácido acético, obteniendo de esta manera un tampón de elusión más; vii) recoger la mitad del tampón de equilibrado obtenido en la etapa (iii) y añadir NaCl para obtener una concentración final de NaCl comprendida entre 0,9 a 1,1 mM, obteniendo de esta manera un tampón de lavado y limpieza. Reivindicación 42: Uso de un tampón que comprende o consiste en Bis Tris, ácido acético, NaCl, y agua para purificar una proteína de una disolución por al menos una etapa de cromatografía.