[go: up one dir, main page]

NO20130460L - Fremgangsmater og blandinger for behandling av gastrointestinale forstyrrelser - Google Patents

Fremgangsmater og blandinger for behandling av gastrointestinale forstyrrelser

Info

Publication number
NO20130460L
NO20130460L NO20130460A NO20130460A NO20130460L NO 20130460 L NO20130460 L NO 20130460L NO 20130460 A NO20130460 A NO 20130460A NO 20130460 A NO20130460 A NO 20130460A NO 20130460 L NO20130460 L NO 20130460L
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
cys
tyr
polypeptide
amino acid
peptide
Prior art date
Application number
NO20130460A
Other languages
English (en)
Other versions
NO336768B1 (no
Inventor
Mark G Currie
Shalina Mahajan-Miklos
Thea Norman
G Todd Milne
Original Assignee
Ironwood Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=32854294&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO20130460(L) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Publication of NO20130460L publication Critical patent/NO20130460L/no
Application filed by Ironwood Pharmaceuticals Inc filed Critical Ironwood Pharmaceuticals Inc
Publication of NO336768B1 publication Critical patent/NO336768B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/08—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for nausea, cinetosis or vertigo; Antiemetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/10—Laxatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/10—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for impotence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/20—Hypnotics; Sedatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/12—Drugs for disorders of the metabolism for electrolyte homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/10—Antioedematous agents; Diuretics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/24—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
    • C07K14/245—Escherichia (G)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)

Abstract

Foreliggende oppfinnelse vedrører farmasøytiske preparater og forbindelser for behandling av gastrointestinale forstyrrelser.

Description

Foreliggende oppfinnelse angår fremgangsmåter og blandinger for behandling av forskjellige forstyrrelser, omfattende gastrointestinale forstyrrelser, fedme, kongestiv hjertesvikt og benign prostata hyperplasi.
BAKGRUNN
Irritabel tarm-syndrom (IBS) er en vanlig kronisk forstyrrelse i tarmen som rammer 20 til 60 millioner individer bare i USA (Lehman Brothers, Global Healthcare-lrritable bowel syndrome industry update, September 1999). IBS er den mest vanlige forstyrrelsen diagnoser! av mage- og tarmspesialister (28% av undersøkte pasienter) og står for 12% av besøkene til leger i primærhelsetjenesten (Camilleri 2001, Gastroenterology 120:652-668). I USA er den økonomiske innvirkningen av IBS anslått til 25 millioner US dollar årlig, gjennom direkte kostnader for bruk av helseomsorg og indirekte kostnader av arbeidsfravær (Talley 1995, Gastroenterology 109:1736-1741). Pasienter med IBS har tre ganger mer fravær fra arbeid og melder om en redusert livskvalitet. De som lider av IBS kan være ute av stand til eller uvillige til å delta i sosiale hendelser, opprettholde arbeid, eller reise selv korte avstander (Drossman 1993, Dig Dis Sei 38:1569-1580). Det er et enormt udekket medisinsk behov i denne populasjonen siden det er få valgmuligheter med hensyn til medisiner for behandling av IBS.
Pasienter med IBS lider av abdominal smerte og et forstyrret mønster i tarmen. Tre undergrupper av IBS-pasienter har blitt definert basert på fremherskende tendens med hensyn til tarmen: forstoppelsesdominert (c-IBS), diarédominert (d-IBS) eller vekslende mellom de to (a-IBS). Overslag av individer som lider av c-IBS varierer fra 20-50% av IBS-pasientene hvor 30% ofte angis. Til forskjell fra de andre to undergruppene som har en lik kjønns-ratio, er c-IBS mer vanlig hos kvinner (ratio på 3:1) (Talley et al. 1995, Am J Epidemiol 142:76-83).
Definisjonen og de diagnostiske kriteriene for IBS har blitt formalisert i "Rome Criteria"
(Drossman et al. 1999, Gut 45:Suppl II: 1-81), som er velakseptert i klinisk praksis. Imidlertid har ikke kompleksiteten av symptomer blitt forklart ved anatomiske abnormiteter eller metabolske endringer. Dette har ført til klassifisering av IBS som en funksjonell Gl-forstyrrelse, som diagnostiseres på grunnlag av Rome-kriteriene og begrenset vurdering for å utelukke organisk sykdom. (Ringel et al. 2001, Annu Rev Med 52: 319-338). IBS er ansett for å være en "biopsykososial" forstyrrelse som følger som et resultat av en kombinasjon av tre interagerende mekanismer: endret motilitet av tarmen, en økt sensitivitet i tarmen eller colon for smertestimuli (visceral sensitivitet) og psykososiale faktorer (Camilleri 2001, Gastroenterology 120:652-668). I det siste har det vært økende
belegg for at inflammasjon har en rolle i etiologien av IBS. Utredninger angir at undergrupper av IBS-pasienter har små men signifikante økninger i coloniske inflammatoriske og mastceller, økt induserbart nitrogenoksid (NO) og syntase (iNOS) og endret ekspresjon av inflammatoriske cytokiner (gjennomgått av Talley 2000, Medscape Coverage of DDW week).
OPPSUMMERING
Foreliggende oppfinnelse angår blandinger og relaterte fremgangsmåter for behandling av IBS og andre gastrointestinale forstyrrelser og tilstander (foreksempel, gastrointestinale motilitetsforstyrrelser, funksjonelle gastrointestinale forstyrrelser, gastroøsofagal reflukssykdom (GERD), Crohns sykdom, colitis ulcerosa, inflammatorisk tarmsykdom, funksjonell kardialgi, dyspepsi (omfattende funksjonell dyspepsi eller non-ulcer dyspepsi), gastroparese, kronisk intestinal pseudoobstruksjon (eller colonisk pseudoobstruksjon), og forstyrrelser og tilstander forbundet med konstipasjon, for eksempel konstipasjon forbundet med anvendelse av opiumsholdige smertestillende midler, postkirurgisk konstipasjon og konstipasjon forbundet med neuropatiske lidelser så vel som andre tilstander og forstyrrelser. Blandingene angår peptider som aktiverer guanylat syklase C (GC-C)-reseptoren.
Foreliggende oppfinnelse angår også blandinger og relaterte fremgangsmåter for behandling av fedme, kongestiv hjertesvikt og benign prostata hyperplasi (BPH).
Uten å være bundet av noen som helst bestemt teori, er peptidene i tilfellet av IBS og andre gastrointestinale forstyrrelser anvendelige fordi de kan forøke gastrointestinal motilitet.
Uten å være bundet av noensom helst bestemt teori, er peptidene i tilfellet av IBS og andre gastrointestinale forstyrrelser anvendelige, delvis, fordi de kan redusere inflammasjon.
Uten å være bundet av noensom helst bestemt teori, er peptidene i tilfellet av IBS og andre gastrointestinale forstyrrelser også anvendelige fordi de kan redusere gastrointestinal smerte eller visceral smerte.
Foreliggende oppfinnelse angår farmasøytiske blandinger omfattende bestemte peptider som er i stand til å aktivere guanylat syklase C (GC-C)-reseptoren. Oppfinnelsen omfatter også farmasøytiske blandinger omfattende et peptid ifølge oppfinnelsen så vel som kombinasjonsblandinger omfattende et peptid ifølge oppfinnelsen og et andre terapeutisk middel, for eksempel et middel for å behandle konstipasjon (for eksempel SPI-0211; Sucampo Pharmaceuticals, Inc.; Bethesda, MD) eller noen andre gastrointestinale forstyrrelser. Eksempler på et andre terapeutisk middel omfatter: syrereduserende midler slik som protonpumpeinhibitorer og H2-reseptor-blokkere, motilitetsfremmende midler slik som 5HT reseptoragonister (for eksempel Zelnorm<®>), antiinflammatoriske midler, krampestillende midler, antidepressiva, sentralt virkende analgesiske midler slik som opiod-reseptoragonister, opiod-reseptor-antagonister, midler for behandling av inflammatorisk tarmsykdom, Crohns sykdom og colitis ulcerosa (for eksempel Traficet-EN™ (ChemoCentryx, Inc.; San Carlos, CA) midler som behandler gastrointestinal eller visceral smerte og cGMP fosfodiesterase-hemmere (motapizon, zaprinast og suldinak sulfon). Følgelig kan de farmasøytiske blandingene omfatte, for eksempel, et analgesisk middel valgt fra gruppen bestående av: Ca-kanal-blokkere (for eksempel ziconotid), 5HT-reseptorantagonister (for eksempel 5HT3, 5HT4 og 5HT1-reseptorantagonister), opioid-reseptoragonister (for eksempel loperamid, fedotozine og fentanyl, naloxon, naltrexon, metylnalozone, nalmefen, cypridime, betafunaltrexamine, naloxonazine, naltrindol og nor-binaltorfimine, morfin, difenyloksylat, enkefalin pentapeptid, og trimebutin), NK1-reseptorantagonister (for eksempel ezlopitant og SR-14033), CCK-reseptoragonister (for eksempel loxiglumid), NK1-reseptorantagonister, NK3-reseptorantagonister (for eksempel talnetant, osanetant (SR-142801)), noradrenalin-serotonin gjenopptak-inhibitorer (NSRI; for eksempel milnacipran), vanilloid og cannabanoid-reseptoragonister (for eksempel arvanil), sialorphin, sialorphin-relaterte peptider omfattende aminosyresekvensen QHNPR (SEKV ID NR:111 ) for eksempel VQHNPR (SEKV ID NR: 112); VRQHNPR (SEKV ID NR:113); VRGQHNPR (SEKV ID NR:114 ); VRGPQHNPR (SEKV ID NR:115 ); VRGPRQHNPR (SEKV ID NR:116 ); VRGPRRQHNPR (SEKV ID NR:119 ); og RQHNPR (SEKV ID NR:118), forbindelser eller peptider som er inhibitorer av neprilysin, frakefamide (H-Tyr-D-Ala- Phe(F)-Phe-NH2; WO 01/019849AI), loperamid, Tyr-Arg (kyotorfin), CCK-reseptoragonister (caerulein), conotoxin-peptider, peptidanaloger av thymulin, loxiglumid, dexloxiglumid (R-isomeren av loxiglumid) (WO 88/05774) og andre analgesiske peptider eller forbindelser kan anvendes med eller bundet til peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse.
Foreliggende oppfinnelse omfatter fremgangsmåter for behandling av forskjellige gastrointestinale forstyrrelser ved å administrere et peptid som virker som en delvis eller fullstendig agonist for GC-C-reseptoren. Peptidet omfatter minst seks cysteiner som danner tre disulfidbindinger. I visse utførelsesformer erstattes disulfidbindingene av andre kovalente tverrbindinger og i noen tilfeller erstattes cysteinene med andre rester for å tillate alternative kovalente tverrbindinger. Peptidene kan også omfatte minst ett kløyvingssete fortrypsin eller chymotrypsin og/eller et karboksyterminalt analgesisk peptid eller lite molekyl, for eksempel, AspPhe eller et annet analgesisk peptid. Når det er til stede i peptidet, kan et kløyvingssete for chymotrypsin eller trypsin være foran det analgesiske peptidet eller lille molekylet hvilket tillater frigivelse av det analgesiske peptidet eller lille molekylet. Peptidene og fremgangsmåtene ifølge foreliggende oppfinnelse er også anvendelige for behandling av smerte og inflammasjon forbundet med forskjellige forstyrrelser, omfattende gastrointestinale forstyrrelser. Visse peptider omfatter et funksjonelt kløyvingssete for chymotrypsin eller trypsin plassert slik at det tillater inaktivering av peptidet ved kløyving. Visse peptider som har et funksjonelt kløyvingssete gjennomgår kløyving og gradvis inaktivering i fordøyelseskanalen, og dette er ønskelig under noen omstendigheter. I visse peptider, er et funksjonelt sete for chymotrypsin endret, hvilket øker stabiliteten av peptidet in vivo.
Foreliggende oppfinnelse omfatter fremgangsmåter for behandling av andre lidelser slik som kongestiv hjertesvikt og benign prostata hyperplasi ved å administrere et peptid eller lite molekyl (parenteralt eller oralt) som fungerer som en agonist for GC-C-reseptoren. Slike agenser kan anvendes i kombinasjon med natriuretisk peptider (for eksempel atrial natriuretisk peptid, hjerne natriuretisk peptid eller C-type natriuretisk peptid), et diuretikum eller en inhibitor for angiotensinomdannende enzym.
Foreliggende oppfinnelse angår fremgangsmåter og blandinger for å forøke intestinal motilitet. Intestinal motilitet omfatter spontane samordnede "dissentions" og sammentrekninger av magen, tarmene, colon og rektum for å føre mat gjennom magetarmkanalen under fordøyelsesprosessen.
I visse utførelsesformer omfatter peptidene enten to eller flere sammenhengende negativt ladede aminosyrer (for eksempel Asp eller Glu) eller én eller to eller flere sammenhengende positivt ladede rester (for eksempel Lys eller Arg) eller én eller to eller flere sammenhengende positivt eller negativt ladede aminosyrer ved den karboksyterminale enden. I disse utførelsesformene er alle de flankerende aminosyrene ved den karboksyterminale enden enten positivt eller negativt ladet. I andre utførelsesformer er de karboksyterminale ladede aminosyrene innledet av en Leu. For eksempel kan de følgende aminosyresekvensene tilføyes til peptidets karboksyterminale ende: Asp; Asp Lys; Lys Lys Lys Lys Lys Lys (SEKV ID NR: 123); Asp Lys Lys Lys Lys Lys Lys (SEKV.ID.NR.124); Leu Lys Lys; og Leu Asp. Det er også mulig å ganske enkelt tilføye Leu til den karboksyterminale enden.
I et første aspekt angår foreliggende oppfinnelse et peptid omfattende, bestående av, eller bestående hovedsakelig av aminosyresekvensen (I): Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaa9Cys10CysnXaa12Xaa13Xaa14Cys15Xaa16Xaa17Cys18Xaaig Xaa20Xaa21(SEKV ID NR:119)hvori: Xaa, Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5er Asn Ser Ser Asn Tyr (SEKV ID NR:121) eller er fraværende eller XaaiXaa2Xaa3Xaa4er fraværende. I visse utførelsesformer kan Xaa8, Xaa9, Xaa12, Xaa13, Xaa14, Xaa17og Xaa19være hvilken som helst aminosyre. I visse utførelsesformer er Xaa5Asn, Trp, Tyr, Asp eller Phe. I andre utførelsesformer kan Xaa5også være Thr eller Ile. I andre utførelsesformer erXaa5Tyr, Asp eller Trp. I noen utførelsesformer er Xaa8Glu, Asp, Gin, Gly eller Pro. I andre utførelsesformer er Xaa8Glu; i noen utførelsesformer er Xaa9Leu, Ile, Val, Ala, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe i noen utførelsesformer erXaag Leu, Ile, Val, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe.
I visse utførelsesformer kan en aminosyre erstattes av en ikke-naturlig forekommende aminosyre eller en naturlig eller ikke-naturlig forekommende aminosyreanalog. For eksempel kan en aromatisk aminosyre erstattes av 3,4-dihydroksy-L-fenylalanin, 3-jodo-L-tyrosin, trijodotyronin, L-tyroxin, fenylglysin (Phg) eller nor-tyrosin (norTyr). Phg og norTyr og andre aminosyrer inkludert Phe og Tyr kan erstattes med, for eksempel, et halogen, - CH3, -OH, -CH2NH3, -C(0)H, -CH2CH3, -CN, -CH2CH2CH3, -SH eller en annen gruppe.
I noen utførelsesformer er Xaa12Asn, Tyr, Asp eller Ala. I andre utførelsesformer er Xaa12Asn. I noen utførelsesformer er Xaa13Ala, Pro eller Gly, og i andre utførelsesformer er den Pro. I noen utførelsesformer er Xaa14Ala, Leu, Ser, Gly, Val, Glu, Gin, Ile, Leu, Lys, Arg eller Asp, og i andre utførelsesformer er den Ala eller Gly, og i enda andre utførelsesformer er den Ala. I noen utførelsesformer erXaa16Thr, Ala, Asn, Lys, Arg, Trp; Xaai7erGly, Pro eller Ala; Xaa^er valgt fra Trp, Tyr, Phe, Asn og Leu eller Xaa^ er valgt fra Trp, Tyr og Phe eller Xaa^ er valgt fra Leu, Ile og Val; eller Xaa^ er His eller Xaa^ er valgt fra Trp, Tyr, Phe, Asn, Ile, Val, His og Leu; og Xaa20Xaa21er AspPhe eller er fraværende eller Xaa20er Asn eller Glu og Xaa2ier fraværende eller Xaai9Xaa20Xaa2ier fraværende. Oppfinnelsen angår også fremgangsmåter for behandling av en gastrointestinal forstyrrelse (for eksempel en gastrointestinal motilitetsforstyrrelse, en funksjonell gastrointestinal forstyrrelse, gastroøsofagal reflukssykdom, funksjonell kardialgi, dyspepsi og funksjonell dyspepsi, non-ulcer dyspepsi, gastroparese, kronisk intestinal pseudoobstruksjon (eller colonisk pseudoobstruksjon), fedme, kongestiv hjertesvikt eller benign prostata hyperplasi ved å administrere en blanding omfattende et tidligere nevnt peptid
Når Xaag er Trp, Tyr eller Phe eller når Xaai6er Trp har peptidet et potensielt funksjonelt kløyvingssete for chymotrypsin som er lokalisert ved en posisjon hvor kløyving vil inaktivere GC-C-reseptorbinding for peptidet. NårXaa9er Lys eller Arg eller nårXaa16er Lys eller Arg, har peptidet et potensielt funksjonelt kløyvingssete for trypsin som er lokalisert ved en posisjon hvor kløyving vil inaktivere GC-C-reseptorbinding for peptidet.
NårXaa19er Trp, Tyr eller Phe, har peptidet et kløyvingssete for chymotrypsin som er lokalisert ved en posisjon hvor kløyving vil frigi den andelen av peptidet som ligger karboksyterminalt forXaa19. NårXaaig er Leu, Ile eller Val, kan peptidet ha et kløyvingssete for chymotrypsin som er lokalisert ved en posisjon hvor kløyving vil frigi den andelen av peptidet som finnes aminoterminalt forXaaig. Ved relativt høy pH ses den samme effekten nårXaa19er His. NårXaa19er Lys eller Arg, har peptidet et kløyvingssete for trypsin som er lokalisert ved en posisjon hvor kløyving vil frigi den delen av peptidet som finnes karboksyterminalt forXaaig. Dersom peptidet omfatter et analgesisk peptid karboksyterminalt forXaa19, vil peptidet følgelig bli frigitt i fordøyelseskanalen ved eksponering for den passende proteasen. Blant de analgesiske peptidene som kan omfattes i peptidet er: AspPhe (som Xaa2oXaa2i), endomorfin-1, endomorfin-2, nocistatin, dalargin, lupron og substans P og andre analgesiske peptider beskrevet heri. Disse peptidene kan, for eksempel, anvendes for å erstatte Xaa20Xaa21.
NårXaa1eller den aminoterminale aminosyren av peptidet ifølge foreliggende oppfinnelse (for eksempel Xaa2eller Xaa3) er Trp, Tyr eller Phe, har peptidet et kløyvingssete for
chymotrypsin som er lokalisert ved en posisjon hvor kløyving vil frigi den delen av peptidet som er aminoterminalt for Xaai(eller Xaa2eller Xaa3) sammen med Xaa1tXaa2eller Xaa3. NårXaa-i eller den aminoterminale aminosyren av peptidet ifølge foreliggende oppfinnelse (for eksempel Xaa2eller Xaa3) er Lys eller Arg, har peptidet et kløyvingssete for trypsin
som er lokalisert ved en posisjon hvor kløyving vil frigi den delen av peptidet som er aminoterminalt for Xaaisammen med Xaa1tXaa2eller Xaa3). NårXaa1eller den aminoterminale aminosyren av peptidet ifølge foreliggende oppfinnelse er Leu, Ile eller Val, kan peptidet ha et kløyvingssete for chymotrypsin som er lokalisert ved en posisjon hvor kløyving vil frigi den andelen av peptidet som er aminoterminalt for Xaa^ Ved relativt høy pH ses den samme effekten når Xaa^er His. Dersom peptidet for eksempel omfatter et analgesisk peptid aminoterminal forXaa1tvil peptidet følgelig bli frigitt i fordøyelseskanalen ved eksponering for den passende proteasen. Blant de analgesiske peptidene som kan omfattes i peptidet er: AspPhe, endomorfin-1, endomorfin-2, nocistatin, dalargin, lupron og substans P og andre analgesiske peptider beskrevet heri.
Når det er fullstendig foldet er disulfidbindinger til stede mellom: Cys6og Cys^; Cys7og Cys15; og Cys10og Cys18. Peptidene ifølge foreliggende har noe sekvenslikhet med ST-peptider. Imidlertid omfatter de aminosyreendringer og/eller tilføyelser som forbedrer funksjonalitet. Disse endringene kan, for eksempel, øke eller redusere aktivitet (for eksempel øke eller redusere peptidets evne til å stimulere intestinal motilitet), endre peptidets evne til å foldes korrekt, peptidets stabilitet, peptidets evne til å binde til GC-C-reseptoren og/eller redusere toksisitet. I noen tilfeller kan peptidene fungere mer ønskelig enn villtype ST-peptid. For eksempel kan de begrense uønskelige bivirkninger slik som diaré og dehydrering.
I noen utførelsesformer kan ett eller begge medlemmene av ett eller flere par av Cys-rester som normalt danner en disulfidbinding erstattes av homocystein, 3- merkaptoprolin (Kolodziej et al. 1996 Int J Pept Protein Res 48:274); (3, B-dimetylcystein (Hunt et al. 1993 Int J Pept Protein Res 42:249) eller diaminopropionsyre (Smith et al. 1978 J Med Chem 21:117) for å danne alternative indre tverrbindinger ved de normale disulfidbindingenes posisjoner.
I tillegg kan én eller flere disulfidbindinger erstattes av alternative kovalente tverrbindinger, foreksempel en amidbinding, en esterbinding, en alkylbinding, en tioesterbinding, en lactam-bro, en karbamoylbinding, en ureabinding, en tioureabinding, en fosfonat-esterbinding, en alkylbinding, og alkenylbinding, en eter, en thioeterbinding eller en aminobinding. Foreksempel beskrev Ledu et al. (Proceedings Nat'l Acad. Sei. 100:11263-78, 2003) fremgangsmåter for fremstilling av laktam og amid-tverrbindinger. Schafmeister et al. (J. Am. Chem. Soc. 122:5891, 2000) beskriver stabile, rene karbon-tverrbindinger. I noen tilfeller krever frembringelse av slike alternative kryssbindinger erstatning av Cys-restene med andre rester slik som Lys eller Glu eller ikke-naturlig forekommende aminosyrer.
I tilfelle av et peptid omfattende sekvensen (I):): Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xa3g CysiQCysiiXaai2Xaai3Xaai4Cysi5Xaai@Xaa*|7 Cysi8Xaaig Xaa2QXaa2i(SEKV ID NR:119) hvori: XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5er fraværende og/eller sekvensen Xaa19Xaa20Xaa21er fraværende, kan peptidet fortsatt inneholde ytterligere karboksyterminale eller aminoterminale aminosyrer eller begge. Peptidet kan for eksempel omfatte en aminoterminal sekvens som letter rekombinant fremstilling av peptidet, og kløyves før administrering av peptidet til en pasient. Peptidet kan også omfatte andre aminoterminale eller karboksyterminale aminosyrer. I noen tilfeller beskytter de ytterligere aminosyrene peptidet, stabiliserer peptidet eller endrer aktiviteten av peptidet. I noen tilfeller fjernes noen eller alle disse ytterligere aminosyrene før administrering av peptidet til en pasient. Peptidet kan omfatte 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70 80, 90, 100 eller flere aminosyrer ved dets aminoterminale eller karboksyterminale ende eller begge. Antallet flankerende aminosyrer behøver ikke å være det samme. For eksempel kan det være 10 ytterligere aminosyrer ved peptidets aminoterminale ende og ingen ved den karboksyterminale enden. ;I én utførelsesform omfatter peptidet aminosyresekvensen (I): Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaa9Cys10CysnXaa12Xaa13Xaa14Cys15Xaa16Xaa17Cys18Xaa19Xaa20Xaa21(SEKV ID NR:119) hvori: XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5er fraværende; Xaa8er Glu; Xaa9er Leu, Ile, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe; Xaa12er Asn; Xaa13er Pro; Xaa14er Ala; Xaai6er Thr, Ala, Lys, Arg, Trp; Xaa17er Gly; Xaai9er Tyr eller Leu; og Xaa20Xaa2ier AspPhe eller fraværende. Når Xaa20Xaa21og/eller Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5er fraværende, kan det finnes ytterligere flankerende aminosyrer i noen utførelsesformer. ;I et andre aspekt omfatter foreliggende oppfinnelse også en terapeutisk eller profylaktisk fremgangsmåte som omfatter å administrere et peptid omfattende aminosyresekvensen (I): Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaa9Cys10CysnXaa12Xaa13Xaa14Cys15Xaa16Xaa17Cys18Xaa19Xaa20Xaa21(SEKV ID NR: 120) hvori: Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5er Asn Ser Ser Asn Tyr (SEKV ID NR:121) eller er fraværende ellerXaaiXaa2 Xaa3 Xaa4 er fraværende og Xaa5er Asn, Trp, Tyr, Asp, Ile, Thr, eller Phe; Xaa8er Glu, Asp, Gin, Gly eller Pro; Xaa9er Leu, Ile, Val, Ala, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe; Xaa12er Asn, Tyr, Asp eller Ala; Xaa13er Pro eller Gly; Xaa14er Ala, Leu, Ser, Gly, Val, Glu, Gin, Ile, Leu, Lys, Arg og Asp; Xaa16er Thr, Ala, Asn, Lys, Arg, Trp; Xaai7er Gly, Pro eller Ala; Xaai9er Trp, Tyr, Phe eller Leu; og Xaa20Xaa21er AspPhe eller fraværende eller Xaa20er Asn eller Glu og Xaa21er fraværende eller Xaa19Xaa20Xaa21er fraværende. ;I visse utførelsesformer av de terapeutiske eller profylaktiske fremgangsmåtene: omfatter peptidet aminosyresekvensen (I): XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaa9CysioCysnXaa12Xaa13Xaa14Cys15Xaa16Xaa17Cys18Xaa19Xaa20Xaa21(SEKV ID NR:119) hvori: Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5er fraværende; Xaa8er Glu; Xaa9er Leu, Ile, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe; Xaa12er Asn; Xaa13er Pro; Xaa14er Ala; Xaa16er Thr, Ala, Lys, Arg, Trp eller Xaa16er hvilken som helst aminosyre eller Xaa16er Thr, Ala, Lys, Arg, Trp eller Xaai6er hvilken som helst ikke-aromatisk aminosyre; Xaai7er Gly; Xaa19er Tyr eller Leu; og Xaa20Xaa21er AspPhe eller fraværende. ;I visse utførelsesformer angår foreliggende oppfinnelse et renset polypeptid omfattende aminosyresekvensen (II): XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaa9Cys10CysnAsn12Pro13Ala14Cys15Xaa16Glyi7Cysis Xaa^ Xaa20Xaa2i(SEKV ID NR:120) hvori: XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5er Asn Ser Ser Asn Tyr eller er fraværende eller XaaiXaa2Xaa3Xaa4er fraværende og Xaa5er Asn; ;Xaa8 er Glu eller Asp; ;Xaa9er Leu, Ile, Val, Trp, Tyr eller Phe; ;Xaai6er Thr, Ala, Trp; ;Xaa19er Trp, Tyr, Phe eller Leu eller er fraværende; og Xaa20Xaa21er AspPhe. ;I forskjellige foretrukne utførelsesformer presenterer foreliggende oppfinnelse et renset polypeptid omfattende aminosyresekvensen (II): Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaa9Cys-i0Cys-i-i Asn-i2 Pro-i3 Ala-i4Cys-i5Xaa16Gly17Cys-i8Xaa19Xaa20Xaa2i(SEKV ID NR:120) hvori, Xaa9er Leu, Ile eller Val og Xaai6er Trp, Tyr eller Phe; Xaa9erTrp, Tyr eller Phe og Xaa16er Thr eller Ala; Xaa19er Trp, Tyr, Phe og Xaa20Xaa21er AspPhe; og XaaiXaa2Xaa3Xaa4er fraværende og Xaa5er Asn; hvor peptidet omfatter færre enn 50, 40, 30 eller 25 aminosyrer; og færre enn fem aminosyrer er foran Cys6. ;Peptidene kan administreres sammen med eller bindes, for eksempel, bindes kovalent til hvilket som helst av mange forskjellige andre peptider inkludert analgesiske peptider eller analgesiske forbindelser. For eksempel kan et terapeutisk peptid ifølge oppfinnelsen bindes til et analgesisk agens valgt fra gruppen bestående av: Ca-kanal-blokkere (for eksempel ziconotid), fullstendige eller partielle 5HT-reseptorantagonister (for eksempel 5HT3, 5HT4 og 5HT1-reseptorantagonister), fullstendige eller partielle 5HT-reseptoragonister inkludert 5HT3, 5HT4 (for eksempel tegaserod, mosapride og renzapride) og 5HT1-reseptoragonister, CRF-reseptoragonister (NBI-34041), B-3-adrenoreseptoragonister, opioid-reseptoragonister (for eksempel loperamid, fedotozine og fentanyl, naloxon, naltrexon, metylnalozone, nalmefen, cypridime, betafunaltrexamine, naloxonazine, naltrindol og nor-binaltorfimine, morfin, difenyloksylat, enkefalin pentapeptid, asimadoline og trimebutin), NK1-reseptorantagonister (for eksempel ezlopitant og SR-14033), CCK-reseptoragonister (for eksempel loxiglumid), NK1-reseptorantagonister, NK3-reseptorantagonister (for eksempel talnetant, osanetant (SR-142801)), norepinefrin-serotonin gjenopptak-inhibitorer(NSRI; foreksempel milnacipran), vanilloid og cannabanoid reseptoragonister (for eksempel arvanil), sialorphin, sialorphin-relaterte peptider omfattende aminosyresekvensen QHNPR (SEKV ID NR:111 ) for eksempel VQHNPR (SEKV ID NR:112 ); VRQHNPR (SEKV ID NR: 113 ); VRGQHNPR ;(SEKV ID NR:114 ); VRGPQHNPR (SEKV ID NR: 115 ); VRGPRQHNPR (SEKV ID ;NR:116 ); VRGPRRQHNPR (SEKV ID NR : 117); og RQHNPR (SEKV ID NR: 118), forbindelser eller peptider som er inhibitorer for neprilysin, frakefamide (H-Tyr-D-Ala-Phe (F)-Phe-NH2; WO 01/019849A1), loperamid, Tyr-Arg (kyotorfin), CCK-reseptoragonister (caerulein), conotoxin-peptider, peptidanaloger av thymulin, loxiglumid, dexloxiglumid (R-isomeren av loxiglumid) (WO 88/05774) og andre analgesiske peptider eller forbindelser kan anvendes med eller bundet til peptidene iølge oppfinnelsen. ;Aminosyre, ikke-aminosyre, peptid og ikke-peptid-spacere kan anbringes mellom et peptid som er en GC-C-reseptoragonist og et peptid som har en annen biologisk funksjon, for eksempel, et analgesisk peptid eller et peptid anvendt for å behandle fedme. Linkeren kan være en som kløyves fra de flankerende peptidene in vivo eller en som forblir bundet til de flankerende peptidene in vivo. Foreksempel kan glysin, beta-alanin, glysyl-glysin, glysyl-beta-alanin, gamma-aminosmørsyre, 6-aminokapronsyre, L-fenylalanin, L-tryptofan og glycil-L-valil-L-fenylalanin anvendes som en spacer (Chaltin et al. 2003 Helvetica Chimica Acta 86:533-547; Caliceti et al. 1993 FARMCO 48:919-32) i likhet med polyetylenglykoler (Butterworth et al. 1987 J. Med. Chem 30:1295-302) og maleimid-derivater (King et al. ;2002 Tetrahedron Lett. 43:1987-1990). Forskjellige andre linkere er beskrevet i litteraturen (Nestler 1996 Molecular Diversity 2:35-42; Finn et al. 1984 Biochemistry 23:2554-8; Cook et al. 1994 Tetrahedron Lett. 35:6777-80; Brokx et al. 2002 Journal of Controlled Release 78:115-123; Griffin et al. 2003 J. Am. Chem. Soc. 125:6517-6531; Robinson et al. 1998 Proe. Nati. Acad. Sei. USA 95:5929-5934. ;Peptidene kan omfatte aminosyresekvensen for et peptid som forekommer naturlig hos en virveldyr (for eksempel pattedyreart eller hos en bakterieart. I tillegg kan peptidene være delvis eller fullstendig ikke-naturlig forekommende peptider. Også innenfor oppfinnelsen er peptidetterligninger ("peptidomimetics") som svarer til peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse. I forskjellige utførelsesformer lider pasienten av en gastrointestinal forstyrrelse; pasienten lider av en forstyrrelse valgt fra gruppen bestående av: en gastrointestinal motilitetsforstyrrelse, irritabel tarm-syndrom, kronisk konstipasjon, en funksjonell gastrointestinal forstyrrelse, gastroøsofagal reflukssykdom, funksjonell kardialgi, dyspepsi, funksjonell dyspepsi, non-ulcer dyspepsi, gastroparese, kronisk intestinal pseudoobstruksjon, Crohns sykdom, colitis uleerosa, irritabel tarm-syndrom, colonisk pseudoobstruksjon, fedme, kongestiv hjertesvikt, eller benign prostata hyperplasi; blandingen administreres oralt; peptidet omfatter 30 eller færre aminosyrer, peptidet omfatter 20 eller færre aminosyrer og peptidet onfatter ikke mer enn 5 aminosyrer før Cys6; peptidet omfatter 150, 140, 130, 120, 110, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40 eller 30 eller færre aminosyrer. I andre utførelsesformer omfatter peptidet 20 eller færre aminosyrer. I andre utførelsesformer omfatter peptidet ikke mer enn 20,15, 10 eller 5 peptider etter Cys18. I visse utførelsesformer er Xaa19 et kløyvingssete for chymotrypsin eller trypsin og et analgesisk peptid er til stede umiddelbart etter Xaa19. ;I et tredje aspekt presenterer foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for å behandle en pasient som lider av konstipasjon. Klinisk aksepterte kriterier som definerer konstipasjon varierer fra hyppigheten av tarmbevegelser, konsistensen av feces og bekvemmeligheten av avføring. En felles definisjon på konstipasjon er mindre enn tre avføringer pr. uke. Andre definisjoner omfatter unormalt hard avføring eller avføring som krever urimelig anstrengelse (Schiller 2001, Aliment Pharmacol Ther 15:749-763). Konstipasjon kan være idiopatisk (funksjonell konstipasjon eller "slow transit" konstipasjon) eller sekundær til andre årsaker inkludert neurologiske, metabolske eller endokrine lidelser. Disse lidelsene omfatter diabetes mellitus, hypotyroidisme, hypertyroidisme, hypokalsemi, multippel sklerose, Parkinsons sykdom, ryggmargskader, neurofibromatose, autonom neuropati, Chagas sykdom, Hirschsprungs sykdom og cystisk fibrose. Konstipasjon kan også være resultatet av kirurgi (postoperativ ileus) eller skyldes anvendelse av medikamenter slik som analgetika (som opioder), antihypertensiva, anticonvulsiva, antidepressiva, krampestillende midler og antipsykotiske midler. ;Fremgangsmåten omfatter å administrere en blanding som omfatter et renset polypeptid omfattende aminosyresekvensen (I): XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaa9Cys10CysnXaa12Xaa13Xaa14Cys15Xaa16Xaa17Cys18Xaa19Xaa20Xaa21(SEKV ID NR:120) hvori: Xaa-, Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5er Asn Ser Ser Asn Tyr (SEKV ID NR:121) eller er fraværende eller Xaa-i Xaa2Xaa3Xaa4er fraværende og Xaa5er Asn, Trp, Tyr, Asp, Ile, Thr eller Phe; Xaa8er Glu, Asp, Gin, Gly eller Pro; Xaa9er Leu, Ile, Val, Ala, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe; Xaai2 er Asn, Tyr, Asp eller Ala; Xaai3 er Pro eller Gly; Xaai4 er Ala, Leu, Ser, Gly, Val, Glu, Gin, Ile, Leu, Lys, Arg og Asp; Xaa16erThr, Ala, Asn, Lys, Arg, Trp; Xaai7er Gly, Pro eller Ala; Xaai9er Trp, Tyr, Phe eller Leu; Xaai9er Lys eller Arg; Xaa20Xaa21er AspPhe eller fraværende eller Xaa20er Asn eller Glu og Xaa21er fraværende eller Xaa19Xaa20Xaa21er fraværende. ;I én utførelsesform ifølge fremgangsmåten omfatter peptidet aminosyresekvensen (I): Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaa9Cys10CysnXaa12Xaa13Xaa14Cys15Xaa16Xaa17Cys18Xaa19Xaa20Xaa21(SEKV ID NR:119) hvori: XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5er fraværende, Xaa8er Glu; Xaa9er Leu, Ile, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe; Xaa12er Asn; Xaa13 er Pro; Xaa14 er Ala; Xaa16 er Thr, Ala, Lys, Arg, Trp; Xaa17 er Gly; Xaa19er Tyr eller Leu; Xaaig er Lys eller Arg; Xaa2o Xaa2i er AspPhe eller fraværende. ;I forskjellige foretrukne utførelsesformer er konstipasjonen forbundet med anvendelse av et terapeutisk middel; konstipasjonen er forbundet med en neuropatisk forstyrrelse; konstipasjonen er post-kirurgisk konstipasjon (postoperativ ileus); og konstipasjonen er forbundet med en gastrointestinal forstyrrelse; konstipasjonen er idiopatisk (funksjonell konstipasjon eller "slow transit" konstipasjon); konstipasjonen er forbundet med neuropatisk, metabolsk eller endokrin forstyrrelse (for eksempel diabetes mellitus, hypotyroidisme, hypertyroidisme, hypokalsemi, multippel sklerose, Parkinsons sykdom, rykkmargskader, neurofibromatose, autonom neuropati, Chagas sykdom, Hirschsprungs sykdom eller cystisk fibrose). Konstipasjon kan også være resultatet av kirurgi (postoperativ ileus) eller skyldes anvendelse av medikamenter slik som analgetika (for eksempel opioder), antihypertensiva, anticonvulsiva, antidepressiva, krampestillende midler og antipsykotiske midler. ;I et fjerde aspekt angår foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for behandling av en pasient som lider av en gastrointestinal forstyrrelse, hvor fremgangsmåten omfatter å administrere til pasienten en blanding omfattende et renset polypeptid omfattende aminosyresekvensen (I): Xaa1Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Cys6Cys7 Xaa8 Xaa9 Cys10CysnXaai2 Xaa^ Xaa14 Cysi5 Xaai6 Xaai7 Cys18 Xaa^ Xaa20 Xaa2i (SEKV ID NR: 120) hvori: Xaa^Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 er Asn Ser Ser Asn Tyr (SEKV ID NR:121) eller er fraværende eller Xaa!Xaa2 Xaa3 Xaa4 er fraværende og Xaa5 er Asn, Trp, Tyr, Asp, Ile, Thr eller Phe; Xaa8er Glu, Asp, Gin, Gly eller Pro; Xaa9er Leu, Ile, Val, Ala, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe; Xaai2 er Asn, Tyr, Asp eller Ala; Xaai3er Pro eller Gly; Xaai4er Ala, Leu, Ser, Gly, Val, Glu, Gin, Ile, Leu, Lys, Arg og Asp; Xaa16 er Thr, Ala, Asn, Lys, Arg, Trp; Xaa17 er Gly, Pro eller Ala; Xaa^ er Trp, Tyr, Phe eller Leu; Xaa19er Lys eller Arg; Xaa20 Xaa2i er AspPhe eller er fraværende eller Xaa20er Asn eller Glu og Xaa21er fraværende eller Xaa19Xaa20Xaa21er fraværende. ;I én utførelsesform ifølge fremgangsmåten omfatter peptidet aminosyresekvensen (I): Xaa1Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Cys6Cys7 Xaa8 Xaag Cys10CysnXaa12 Xaa13 Xaa14 Cys15Xaa16 Xaa17 Cys18 Xaaig Xaa20 Xaa21 (SEKV ID NR:119) hvori: XaaiXaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 er fraværende; Xaa8 er Glu; Xaag er Leu, Ile, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe; Xaa12 er Asn; Xaai3 er Pro; Xaai4 er Ala; Xaai6 er Thr, Ala, Lys, Arg, Trp; Xaai7 er Gly; Xaaig er Tyr eller Leu; Xaaig er Lys eller Arg; Xaa20 Xaa21 er AspPhe eller fraværende. ;I forskjellige utførelsesformer lider pasienten av en gastrointestinal forstyrrelse; pasienten lider av en forstyrrelse valgt fra gruppen bestående av: en gastrointestinal motilitetsforstyrrelse, irritabel tarm-syndrom, kronisk konstipasjon, en funksjonell gastrointestinal forstyrrelse, gastroøsofagal reflukssykdom, funksjonell kardialgi, dyspepsi, funksjonell dyspepsi, non-ulcer dyspepsi, gastroparese, kronisk intestinal pseudoobstruksjon, Crohns sykdom, colitis ulcerosa, inflammatorisk tarmsykdom, colonisk pseudoobstruksjon, fedme, kongestiv hjertesvikt eller benign prostata hyperplasi. ;I forskjellige foretrukne utførelsesformer erXaag Leu, Ile eller Val og Xaai6er Trp, Tyr eller Phe; Xaa9er Trp, Tyr eller Phe og Xaa16er Thr eller Ala; Xaa19er Trp, Tyr, Phe; Xaa19er Lys eller Arg; Xaa2oXaa2ier AspPhe; XaaiXaa2Xaa3Xaa4er fraværende og Xaa5er Asn. ;I et femte aspekt angår foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for å øke gastrointestinal motilitet hos en pasient, hvor fremgangsmåten omfatter: å administrere til pasienten en blanding omfattende et renset polypeptid omfattende aminosyresekvensen (I): XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaa9Cys10CysnXaa12Xaa13Xaa14Cys15Xaa16Xaa17Cys18Xaa19Xaa20Xaa21(SEKV ID NR: 120) hvori: XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5er Asn Ser Ser Asn Tyr (SEKV ID NR:121) eller er fraværende ellerXaaiXaa2 Xaa3 Xaa4 er fraværende og Xaa5er Asn, Trp, Tyr, Asp, Ile, Thr eller Phe; Xaa8er Glu, Asp, Gin, Gly eller Pro; Xaa9er Leu, Ile, Val, Ala, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe; Xaai2er Asn, Tyr, Asp eller Ala; Xaa13er Pro eller Gly; Xaa14erAla, Leu, Ser, Gly, Val, Glu, Gin, Ile, Leu, Lys, Arg og Asp; Xaa16er Thr, Ala, Asn, Lys, Arg, Trp; Xaa17er Gly, Pro eller Ala; Xaa19er Trp, Tyr, Phe eller Leu; Xaa19er Lys eller Arg; Xaa20Xaa21er AspPhe eller er fraværende eller Xaa20er Asn eller Glu og Xaa21er fraværende eller Xaa19Xaa20Xaa21er fraværende. ;I én utførelsesform omfatter peptidet aminosyresekvensen (I): Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaa9Cys10CysnXaa12Xaa13Xaa14Cys15Xaa16Xaa17Cys18Xaa19Xaa20Xaa21(SEKV ID NR:119) hvori: XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5er fraværende; Xaa8er Glu; Xaa9er Leu, Ile, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe; Xaai2er Asn; Xaai3er Pro; Xaai4er Ala; Xaa16er Thr, Ala, Lys, Arg, Trp; Xaa17er Gly; Xaa19er Tyr eller Leu; Xaa19er Lys eller Arg; Xaa20Xaa2ier AspPhe eller er fraværende. ;I et sjette aspekt angår foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for å øke aktiviteten av en intestinal guanylat syklase (GC-C)-reseptor hos en pasient, hvor fremgangsmåten omfatter: å administrere til pasienten en blanding som omfatter et renset polypeptid omfattende aminosyresekvensen (I): XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaa9;Cys10CysnXaa12Xaa13Xaa14Cys15Xaa16Xaa17Cys18Xaa19Xaa2oXaa21(SEKV ID ;NR:120) hvori: Xaa-, Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5er Asn Ser Ser Asn Tyr (SEKV ID NR:121) eller er fraværende eller Xaa^Xaa2Xaa3Xaa4er fraværende og Xaa5er Asn, Trp, Tyr, Asp, Ile, Thr eller Phe; Xaa8er Glu, Asp, Gin, Gly eller Pro; Xaa9er Leu, Ile, Val, Ala, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe; Xaa12 er Asn, Tyr, Asp eller Ala; Xaa13 er Pro eller Gly; Xaa14 er Ala, Leu, Ser, Gly, Val, Glu, Gin, Ile, Leu, Lys, Arg og Asp; Xaai6er Thr, Ala, Asn, Lys, Arg, Trp; Xaa^ er Gly, Pro eller Ala; Xaai9er Trp, Tyr, Phe eller Leu; Xaai9er Lys eller Arg; Xaa20Xaa21er AspPhe eller er fraværende eller Xaa20er Asn eller Glu og Xaa21er fraværende eller Xaa19Xaa20Xaa21er fraværende. ;I én utførelsesform omfatter peptidet aminosyresekvensen (I): Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaa9Cys10CysnXaa12Xaa13Xaa14Cys15Xaa16Xaa17Cys18Xaa19Xaa20Xaa2i(SEKV ID NR:119) hvori: XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5er fraværende; Xaa8er Glu; Xaa9er Leu, Ile, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe; Xaai2er Asn; Xaai3er Pro; Xaai4er Ala; Xaa16er Thr, Ala, Lys, Arg, Trp; Xaa17er Gly; Xaa19er Tyr eller Leu; Xaa19er Lys eller Arg; Xaa20Xaa2ier AspPhe eller er fraværende. ;I et sjuende aspekt angår foreliggende oppfinnelse et isolert nukleinsyremolekyl som omfatter en nukleotidsekvens som koder for et polypeptid omfattende aminosyresekvensen: (I): Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaa9Cys10CysnXaai2 Xaai3Xaa14Cysi5Xaai6Xaai7Cys18Xaai9Xaa20Xaa2i(SEKV ID NR: 120) hvori: Xaa^Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5er Asn Ser Ser Asn Tyr (SEKV ID NR:121) eller er fraværende eller Xaa!Xaa2 Xaa3 Xaa4 er fraværende og Xaa5er Asn, Trp, Tyr, Asp, Ile, Thr eller Phe; Xaa8er Glu, Asp, Gin, Gly eller Pro; Xaa9er Leu, Ile, Val, Ala, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe; Xaai2er Asn, Tyr, Asp eller Ala; Xaai3er Pro eller Gly; Xaai4er Ala, Leu, Ser, Gly, Val, Glu, Gin, Ile, Leu, Lys, Arg og Asp; Xaa16er Thr, Ala, Asn, Lys, Arg, Trp; Xaa17er Gly, Pro eller Ala; Xaai9erTrp, Tyr, Phe eller Leu; Xaai9er Lys eller Arg; Xaa20Xaa2ier AspPhe eller er fraværende eller Xaa20er Asn eller Glu og Xaa21er fraværende eller Xaa19Xaa20Xaa21er fraværende. ;I én utførelsesform omfatter peptidet aminosyresekvensen (I): XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaa9Cys10Cys^ Xaa12Xaa13Xaa14Cys15Xaa16Xaa17Cys18Xaa19Xaa20Xaa2i(SEKV ID NR:119) hvori: XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5er fraværende; Xaa8er Glu; Xaa9er Leu, Ile, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe; Xaa12er Asn; Xaa13er Pro; Xaa14er Ala; Xaa16er Thr, Ala, Lys, Arg, Trp; Xaa17er Gly; Xaa19er Tyr eller Leu; Xaa19er Lys eller Arg; Xaa20Xaa2ier AspPhe eller er fraværende. ;I et åttende aspekt presenterer foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for å behandle konstipasjon, hvor fremgangsmåten omfatter å administrere en agonist for intestinal guanylat syklase (GC-C)-reseptoren. I forskjellige utførelsesformer: agonisten er et peptid, peptidet inkluderer fire Cys som danner to disulfidbindinger, og peptidet inkluderer seks Cys som danner tre disulfidbindinger. ;I et niende aspekt presenterer foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for behandling av en gastrointestinal forstyrrelse, en gastrointestinal motilitetsforstyrrelse, irritabel tarm-syndrom, kronisk konstipasjon, en funksjonell gastrointestinal forstyrrelse, gastroøsofagal reflukssykdom, funksjonell kardialgi, dyspepsi, funksjonell dyspepsi, non-ulcer dyspepsi, gastroparese, kronisk intestinal pseudoobstruksjon, colonisk pseudoobstruksjon, Crohns sykdom, colitis ulcerosa, inflammatorisk tarmsykdom, fedme, kongestiv hjertesvikt, eller benign prostata hyperplasi, hvor fremgangsmåten omfatter å administrere en agonist for intestinal guanylat syklase (GC-C)-reseptoren enten oralt, ved rektalt suppositorium, eller parenteralt. I forskjellige utførelsesformer: agonisten er et peptid, peptidet inkluderer fire Cys som danner to disulfidbindinger, og peptidet inkluderer seks Cys som danner tre disulfidbindinger. ;I et tiende aspekt presenterer foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for behandling av en gastrointestinal forstyrrelse valgt fra gruppen bestående av: en gastrointestinal motilitetsforstyrrelse, irritabel tarm-syndrom, kronisk konstipasjon, en funksjonell gastrointestinal forstyrrelse, gastroøsofagal reflukssykdom, funksjonell kardialgi, dyspepsi, funksjonell dyspepsi, non-ulcer dyspepsi, gastroparese, kronisk intestinal pseudoobstruksjon, colonisk pseudoobstruksjon, Crohns sykdom, colitis ulcerosa, Inflammatorisk tarmsykdom, hvor fremgangsmåten omfatter å administrere en agonist for den intestinale guanylat syklase (GC-C)-reseptoren. I forskjellige utførelsesformer administreres blandingen oralt; peptidet omfatter 30 eller færre aminosyrer, peptidet omfatter 20 eller færre aminosyrer, og peptidet omfatter ikke mer enn 5 aminosyrer før Cys5. ;I forskjellige utførelsesformer: agonisten er et peptid, peptidet inkluderer fire Cys som danner to disulfidbindinger, og peptidet inkluderer seks Cys som danner tre disulfidbindinger. ;I et ellevte aspekt angår foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for behandling av fedme, hvor fremgangsmåten omfatter å administrere en agonist for den intestinale guanylat syklase (GC-C)-reseptoren. I forskjellige utførelsesformer: agonisten er et peptid, peptidet inkluderer fire Cys som danner to disulfidbindinger, og peptidet inkluderer seks Cys som danner tre disulfidbindinger. ;I et tolvte aspekt angår foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for behandling av fedme, hvor fremgangsmåten omfatter å administrere et polypeptid omfattende aminosyresekvensen: (I): Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaag Cys10CysnXaa^ Xaa^ Xaa14Cysi5Xaai6Xaa^ Cys18Xaa^ Xaa20Xaa2i(SEKV ID NR: 120) hvori: Xaa^Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5er Asn Ser Ser Asn Tyr (SEKV ID NR:121) eller er fraværende eller XaaiXaa2 Xaa3 Xaa4 er fraværende og Xaa5er Asn, Trp, Tyr, Asp, Ile, Thr eller Phe; Xaa8er Glu, Asp, Gin, Gly eller Pro; Xaa9er Leu, Ile, Val, Ala, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe; Xaa12er Asn, Tyr, Asp eller Ala; Xaa13er Pro eller Gly; Xaa14er Ala, Leu, Ser, Gly, Val, Glu, Gin, Ile, Leu, Lys, Arg, og Asp; Xaa16er Thr, Ala, Asn, Lys, Arg, Trp; Xaa17er Gly, Pro eller Ala; Xaa^ er Trp, Tyr, Phe eller Leu; og Xaa20Xaa2ier AspPhe eller fraværende eller Xaa20er Asn eller Glu og Xaa21er fraværende eller Xaa19Xaa20Xaa21er fraværende. Peptidet kan administreres alene eller i kombinasjon med et annet agens for behandling av fedme, for eksempel sibutramin eller et annet agens, for eksempel et agens beskrevet heri. ;I én utførelsesform omfatter peptidet aminosyresekvensen (I): Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaa9Cys10CysnXaa12Xaa13Xaa14Cys15Xaa16Xaa17Cys18Xaa19Xaa20Xaa2i(SEKV ID NR:119) hvori: XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5er fraværende; Xaa8er Glu; Xaag er Leu, Ile, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe; Xaa12er Asn; Xaa13er Pro; Xaa14er Ala; Xaa16er Thr, Ala, Lys, Arg, Trp; Xaa17er Gly; Xaaig er Tyr eller Leu; og Xaa20Xaa21er AspPhe eller er fraværende. ;I et trettende aspekt angår foreliggende oppfinnelse en farmasøytisk blanding omfattende et polypeptid beskrevet heri. ;I et fjortende aspekt presenterer foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for behandling av kongestiv hjertesvikt, hvor fremgangsmåten omfatter: å administrere til pasienten en blanding omfattende et renset polypeptid omfattende aminosyresekvensen (I): Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaag Cys10CysnXaa12Xaa13Xaa14Cys15Xaa16Xaa17Cys18Xaaig Xaa20Xaa21(SEKV ID NR: 120) hvori: XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5er Asn Ser Ser Asn Tyr (SEKV ID NR:121) eller er fraværende ellerXaa!Xaa2 Xaa3 Xaa4 er fraværende og Xaa5er Asn, Trp, Tyr, Asp, Ile, Thr eller Phe; Xaa8er Glu, Asp, Gin, Gly eller Pro; Xaag er Leu, Ile, Val, Ala, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe; Xaa12er Asn, Tyr, Asp eller Ala; Xaa13er Pro eller Gly; Xaa14erAla, Leu, Ser, Gly, Val, Glu, Gin, Ile, Leu, Lys, Arg og Asp; Xaa16er Thr, Ala, Asn, Lys, Arg, Trp; Xaa17er Gly, Pro eller Ala; Xaa19er Trp, Tyr, Phe eller Leu; og Xaa20Xaa2ier AspPhe eller er er fraværende eller Xaa20er Asn eller Glu og Xaa21er fraværende eller Xaa19Xaa20Xaa21er fraværende. Peptidet kan administreres i kombinasjon med et annet agens for behandling av kongestiv hjertesvikt, foreksempel, et natriuretisk peptid slik som atrial natriuretisk peptid, hjerne natriuretisk peptid eller C-type natriuretisk peptid), et diuretikum eller en inhibitor for angiotensinomdannende enzym. ;I én utførelsesform omfatter peptidet aminosyresekvensen (I): Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaa9Cys10CysnXaa12Xaa13Xaa14Cys15Xaa16Xaa17Cys18Xaa19Xaa20Xaa21(SEKV ID NR:119) hvori: XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5er fraværende; Xaa8er Glu; Xaa9er Leu, Ile, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe; Xaa12er Asn; Xaa13er Pro; Xaa14er Ala; Xaai6er Thr, Ala, Lys, Arg, Trp; Xaa17er Gly; Xaai9er Tyr eller Leu; Xaai9er Lys eller Arg; Xaa20Xaa2ier AspPhe eller er fraværende. ;I et femtende aspekt presenterer foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for behandling av benign prostata hyperplasi, hvor fremgangsmåten omfatter: å administrere til pasienten en blanding omfattende et renset polypeptid som omfatter aminosyresekvensen (I): XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaa9Cys10Cysn Xaai2 Xaai3Xaa14Cysi5Xaai6Xaai7Cys18Xaai9Xaa20Xaa2i(SEKV ID NR: 120) hvori: XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5er Asn Ser Ser Asn Tyr (SEKV ID NR:121) eller er fraværende eller Xaa!Xaa2 Xaa3 Xaa4 er fraværende og Xaa5 er Asn, Trp, Tyr, Asp, Ile, Thr eller Phe; Xaa8er Glu, Asp, Gin, Gly eller Pro; Xaa9er Leu, Ile, Val, Ala, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe; Xaa12er Asn, Tyr, Asp eller Ala; Xaa13er Pro eller Gly; Xaa14er Ala, Leu, Ser, Gly, Val, Glu, Gin, Ile, Leu, Lys, Arg og Asp; Xaai6er Thr, Ala, Asn, Lys, Arg, Trp; Xaai7er Gly, Pro eller Ala; Xaa19er Trp, Tyr, Phe eller Leu; Xaa19er Lys eller Arg; Xaa20Xaa21er AspPhe eller er fraværende eller Xaa20er Asn eller Glu og Xaa21er fraværende eller Xaa19Xaa20Xaa2ier fraværende. ;Peptidet kan administreres i kombinasjon med et annet agens for behandling av BPH, for eksempel en 5-alfa reduktase-inhibitor (for eksempel finasterid) eller en alfa adrenergisk inhibitor (for eksempel doxazosin). ;I én utførelsesform omfatter peptidet aminosyresekvensen (I): Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaa9Cysi0CysnXaai2Xaai3XaaM Cysi5Xaai6Xaai7Cysi8Xaai9Xaa20Xaa21(SEKV ID NR:119) hvori: XaaiXaa2Xaa3Xaa4Xaa5er fraværende; Xaa8er Glu; Xaa9er Leu, Ile, Lys, Arg, Trp, Tyr eller Phe; Xaa12er Asn; Xaa13er Pro; Xaa14er Ala; Xaa16 er Thr, Ala, Lys, Arg, Trp; Xaa17 er Gly; Xaa19er Tyr eller Leu; og Xaa2o Xaa2i er AspPhe eller er fraværende. ;I et sekstende aspekt angår foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for å behandle eller redusere smerte, inkludert visceral smerte, smerte forbundet med en gastrointestinal forstyrrelse eller smerte forbundet med en annen lidelse, hvor fremgangsmåten omfatter: å administrere til en pasient en blanding som omfatter et renset polypeptid omfattende aminosyresekvensen (I): Xaa1Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5Cys6Cys7Xaa8Xaa9Cys10Cys^ Xaai2 Xaa^ Xaa14 Cysi5Xaai6 Xaai7 Cys18Xaa^ Xaa20 Xaa2i (SEKV ID NR:119), for eksempel et renset polypeptid omfattende en aminosyresekvens fremlagt heri. ;I et syttende aspekt angår foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for behandling av inflammasjon, inkludert inflammasjon i magetarm-kanalen, for eksempel inflammasjon forbundet med en gastrointestinal forstyrrelse eller infeksjon eller en annen lidelse, hvor fremgangsmåten omfatter: å administrere til en pasient en blanding som omfatter et renset polypeptid omfattende aminosyresekvensen (I): Xaa1Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Cys6Cys7Xaa8Xaa9Cys10CysnXaa12 Xaa13 Xaa14 Cys15Xaa16 Xaa17 Cys18Xaa19Xaa20Xaa21(SEKV ID NR:119), for eksempel et renset polypeptid omfattende en aminosyresekvens fremlagt heri. ;I visse utførelsesformer omfatter peptidet et peptid som omfatter eller består av aminosyresekvensen Xaa^Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Cys Cys Glu Xaa9Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys TyrXaa20 Xaa2i (II) (SEKV ID NR:66) hvori Xaa9er hvilken som helst aminosyre, hvori Xaa9er hvilken som helst aminosyre andre enn Leu, hvori Xaa9er valgt fra Phe, Trp og Tyr; hvori Xaa9er valgt fra hvilken som helst naturlig eller ikke-naturlig aromatisk aminosyre, hvori Xaa9er Tyr; hvori Xaa-i Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 er Asn Ser Ser Asn Tyr (SEKV ID NR:121); hvori XaaiXaa2 Xaa3 Xaa4 og Xaa5 er fraværende; hvori XaaiXaa2 Xaa3 Xaa4 er fraværende; hvori Xaa1Xaa2 og Xaa3 er fraværende; hvori Xaa1og Xaa2 er fraværende; hvori Xaaier fraværende; hvori Xaa20 Xaa21 er AspPhe eller er fraværende eller Xaa20er Asn eller Glu og Xaa2ier fraværende eller Xaai9Xaa20 Xaa21 er fraværende. I tilfelle av et peptid omfattende sekvensen (I): Xaa1Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5Cys6Cys7Xaa8 Xaa9 Cys10CysnXaa12 Xaa13 Xaa14 Cys15Xaa16 Xaa17 Cys18Xaa19Xaa20Xaa21(SEKV ID NR:119) hvori: XaaiXaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 er fraværende og/eller sekvensen Xaa19Xaa20 Xaa21 er fraværende kan peptidet fortsatt inneholde ytterligere karboksyterminale eller aminoterminale aminosyrer eller begge ;Blant de nyttige peptidene er peptider omfattende, bestående av eller bestående hovedsakelig av aminosyresekvensen Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Cys Cys Glu Xaag Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr Xaa20Xaa21(II) (SEKV ID NR:67) er de følgende peptidene: ; I et attende aspekt presenterer foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for behandling av kongestiv hjertesvikt, hvor fremgangsmåten omfatter å administrere en fullstendig eller partiell agonist for intestinal guanylat syklase (GC-C)-reseptoren. Agonisten kan administreres i kombinasjon med et annet agens for behandling av kongestiv hjertesvikt, for eksempel et natriuretisk peptid, hjerne natriuretisk peptid eller C-type natriuretisk peptid), et diuretikum eller en inhibitor for angiotensinomdannende enzym. ;I et nittende aspekt angår foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for behandling av BPH, hvor fremgangsmåten omfatter å administrere en fullstendig eller partiell agonist for intestinal guanylat syklase (GC-C)-reseptoren. Agonisten kan administreres i kombinasjon med et annet agens for behandling av BPH, for eksempel en 5-alfa reduktase-hemmer (for eksempel finasterid) eller en alfa adrenergisk inhibitor (for eksempel doksazosin). ;I et tjuende aspekt angår foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for behandling av fedme, hvor fremgangsmåten omfatter å administrere en fullstendig eller partiell agonist for intestinal guanylat syklase (GC-C)-reseptoren. Agonisten kan administreres i kombinasjon med et annet agens for behandling av fedme, for eksempel tarm hormon fragment peptid YY3.36(PYY3.36) ( N. Engl. J. Med. 349:941, 2003; ikpeapge daspeelnry yaslrhylnl vtrqry) glp-1 (glukagonlignende peptid-1), exendin-4 (en inhibitor for glp-1), sibutramin, fentermin, fendimetrazin, benzfetaminhydroklorid (Didrex), orlistat (Xenical), dietylpropionhydroklorid (Tenuate), fluoksetin (Prozac), bupropion, efedra, krom, garcinia cambogia, benzokain, blæretang (focus vesiculosus), chitosan, nomame herba, galega (Geitvikke, fransk syrin ("French Lilac")), konjugert linolsyre, L-karnitin, fiber (psyllium, plantago, guarfiber), koffein, dehydroepiandrosteron, germander (teucrium chamaedrys), B-hydroksy-B-metylbutyrat og pyruvat. Et peptid nyttig for behandling av fedme kan administreres som en felles behandling med et peptid ifølge foreliggende oppfinnelse enten som et atskilt molekyl eller som del av et fusjonsprotein med et peptid ifølge foreliggende oppfinnelse. Følgelig kan for eksempel PYY3.36fusjoneres til den karboksy-eller aminoterminale enden av et peptid ifølge foreliggende oppfinnelse. Et slikt fusjonsprotein kan omfatte et kløyvingssete for chymotrypsin eller trypsin som kan tillate kløyving for å atskille de to peptidene. ;Peptidene og agonisten for intestinal guanylat syklase (GC-C)-reseptoren kan anvendes for å behandle konstipasjon eller redusert intestinal motilitet, langsom fordøyelse eller langsom magetømming. Peptidene kan anvendes for å lindre ett eller flere symptomer på IBS (oppblåsthet, smerte, konstipasjon), GERD (syrerefluks inn i spiserøret), funksjonell dyspepsi eller gastroparese (kvalme, oppkasting, oppblåsthet, forsinket magetømming) og andre lidelser beskrevet heri. ;Detaljene for én eller flere utførelsesformer ifølge oppfinnelsen er forklart i den ledsagende beskrivelsen. Alle publikasjonene, patentene og patentsøknadene er herved innlemmet ved referanse. ;FIGURER ;Figur 1a viser resultatene av LCMS-analyse av rekombinant MM-416776 (SEKV ID NR: 26)peptid og MD-915 (SEKV ID NR: 28)peptid. Figurene 1b og c viser resultatene av LCMS-analyse av syntetisk MD-1100(SEKV ID NR: ;31)peptid og den tomme kontrollen. ;Figur 2 viser resultatene av intestinal GC-C reseptor-aktivitetsanalyse av syntetisk MM-416776(SEKV ID NR: 26)peptid, MD-915 (SEKV ID NR: 28)peptid og to forskjellige MD-1100(SEKV ID NR: 31)peptider. Figur 3a viser effekten av rekombinant MM-416776 (SEKV ID NR: 26)peptid og Zelnorm<®>i en murin gastrointestinal transitt-modell. Figur 3b viser effekten av syntetisk MD-1100 (SEKV ID NR: 31)peptid og Zelnorm<®>i en akutt murin gastrointestinal transitt-modell. Figurene 4a og 4b viser effekten of peptidene MD-915 (SEKV ID NR: 28), MD-1100 (SEKV ID NR: 31)og MM-416776 (SEKV ID NR: 26) i en akutt murin gastrointestinal transitt-modell. Figur 4c viser effekten av et MD-1100 (SEKV ID NR: 31)peptid i en kronisk murin gastrointestinal transitt-model. Figur 5a viser effekten av MM-416776 (SEKV ID NR: 26)peptid og Zelnorm<®>i en nyfødt mus intestinal sekresjonsmodell. Figur 5b viser effektene av MD-1100 (SEKV ID NR: 31)og Zelnorm® i en muse intestinal sekresjons-modell. Figurene 6a og 6b viser effektene av MM 416776 (SEKV ID NR: 26), MD-1100 (SEKV ID NR: 31)og MD-915 (SEKV ID NR: 28)peptidene i en muse intestinal sekresjons-modell. Figur 7 viser resultatene av eksperiment hvor MD-1100 (SEKV ID NR: 31)aktivitet ble analysert i TNBS colonisk distensjonsmodell. Figurene 8a og 8b viser effektene av forskjellige doser av MD-915 (SEKV ID NR: 28)og MD-1100 (SEKV ID NR: 31)i PBQ vridnings-analysen. Figur 9 viser resultatene av Kd-bestemmelsesanalyse ved anvendelse av MD-1100 (SEKV ID NR: 31 )i en kompetitiv radioligand-bindingsanalyse. Figurene 10a og 10b viser biotilgjengelighetsdata for IV og oralt administert MD-1100 (SEKV ID NR: 31)som detektert ved en ELISA-analyse og LCMS. ;DETALJERT BESKRIVELSE ;Peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse binder til intestinal guanylat syklase (GC-C)-reseptoren, en viktig regulator for væske og elektrolyttbalanse i tarmen. Når den stimuleres forårsaker denne reseptoren, som er lokalisert på den apikale membranen av tarmepiteloverflaten, en økning i intestinal epitelial syklisk GMP (cGMP). Denne økningen i cGMP er antatt å forårsake en reduksjon i absorpsjon av vann og natrium og en økning i sekresjon av klorid og kalium-ioner, hvilket fører til endringer i intestinal væske og elektrolytt-transport og økt intestinal motilitet. Den intestinale GC-C-reseptoren har en ekstracellulær ligandbindingsregion, en transmembranregion, en intracellulær proteinkinase-lignede region og et syklase katalytisk domene. Foreslåtte funksjoner for GC-C-reseptoren er væske og elektrolytt homeostase, regulering av epitelcelle-proliferasjon og induksjon av apoptose (Shalubhai 2002 Curr Opin Drug Dis Devel 5:261-268). ;I tillegg til at den uttrykkes i tarmen av gastrointestinale epitelceller, uttrykkes GC-C i ekstra-intestinale vev inkludert nyre, lunge, pankreas, hypofysen, binyre, lever som utvikler seg (gjennomgått i Vaandrager2002, Mol Cell Biochem 230:73- 83) og mannlig og kvinnelig reproduktive vev (gjennomgått i Vaandrager 2002 Mol Cell Biochem 230:73-83)) Dette antyder at GC-C-reseptoragonistene kan anvendes for behandling av forstyrrelser utenfor Gl-kanalen, for eksempel, kongestiv hjertesvikt og benign prostata hyperplasi. ;Grelin, et peptidhormon sekreter! av magen, er en viktig regulator av appetitt hos mennesker. Ekspresjonsnivåer av grelin reguleres ved fasting og ved magetømming (Kim et al., 2003, Neurorepr! 14:1317-20; Gualillo et al., 2003, FEBS Letts 552:105-9). Ved å øke gastrointestinal motilitet kan følgelig GC-C-reseptoragonister også anvendes for å regulere fedme. ;Hos mennesker aktiveres GC-C-reseptoren ved guanylin (Gn) (U.S. patent 5,96,097), uroguanylin (Ugn) (U.S. patent 5,140,102) og lymphoguanylin (Forte et al., 1999, Endocrinology 140:1800-1806). Interessant nok er disse agensene 10-100 ganger mindre potente enn en klasse av bakterielt avledede peptider, betegnet ST (gjennomgått i Gianella 1995 J Lab Clin Med 125:173-181). ST-peptider anses som superagonister for GC-C og er svært resistente mot proteolytisk nedbrytning. ;ST-peptid er i stand til å stimulere det enteriske nervesystemet (Rolfe et al., 1994, J Physiolo 475: 531-537; Rolfe et al., 1999, Gut 44: 615-619; Nzegwu et al., 1996, Exp Physiol 81:313-315). Også cGMP har blitt angitt å ha antinociceptive effekter i multiple dyremodeller for smerte (Lazaro Ibanez et al., 2001, Eur J Pharmacol 426: 39-44; Soares et al., 2001, British J Pharmacol 134: 127-131; Jain et al., 2001, Brain Res 909:170-178; Amarante et al., 2002, Eur J Pharmacol 454:19-23). Følgelig kan GC-C-agonister ha både en analgesisk så vel som en anti-inflammatorisk effekt. ;Hos bakterier er ST-peptider avledet fra et preproprotein som generelt har minst 70 aminosyrer. Pre og pro-regionene kløyves som del av sekresjonsprosessen, og det resulterende modne proteinet, som generelt omfatter færre enn 20 aminosyrer, er biologisk aktivt. ;Blant de kjente bakterielle ST-peptidene er: E. co//'ST Ib (Moseley et al. (1983) Infect. Immun. 39:1167) som har den modne aminosyresekvensen Asn Ser Ser Asn Tyr Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr (SEKV ID NR: 1); E. coli ST la (So og McCarthy (1980) Proe. Nati. Acad. Sei. USA 77:4011) som har den modne aminosyresekvensen Asn Thr Phe Tyr Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Ala Gly Cys Tyr (SEKV ID NR: 2); E. coli ST I<*>(Chan og Giannella (1981) J. Biol. Chem. 256:7744) som har den modne aminosyresekvensen Asn Thr Phe Tyr Cys Cys Glu Leu Cys Cys Tyr Pro Ala Cys Ala Gly Cys Asn (SEKV ID NR: 3); C. fæundii ST-peptid (Guarino et al. (1989) Infect. Immun. 57:649) som har den modne aminosyresekvensen Asn Thr Phe Tyr Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Ala Gly Cys Tyr (SEKV ID NR: 4); Y. enterocolitica ST-peptider, Y-ST(Y-STa), Y- STb og Y-STc (gjennomgått i Huang et al. (1997) Microb. Pathog. 22:89) som harde følgende pro-form aminosyresekvensene: Gin Ala Cys Asp Pro Pro Ser Pro Pro Ala Glu Val Ser Ser Asp Trp Asp Cys Cys Asp Val Cys Cys Asn Pro Ala Cys Ala Gly Cys (SEKV ID NR: 5) (så vel som en Ser-7 til Leu-7-variant av Y-STa (SEKV ID NR: 122), (Takao et al. (1985) Eur. J. Biochem. 152:199)); Lys Ala Cys Asp Thr Gin Thr Pro Ser Pro Ser Glu Glu Asn Asp Asp Trp Cys Cys Glu Val Cys Cys Asn Pro Ala Cys Ala Gly Cys (SEKV ID NR: 6); Gin Glu Thr Ala Ser Gly Gin Val Gly Asp Val Ser Ser Ser Thr Ile Ala Thr Glu Val Ser Glu Ala Glu Cys Gly Thr Gin Ser Ala Thr Thr Gin Gly Glu Asn Asp Trp Asp Trp Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Phe Gly Cys (SEKV ID NR: 7), henholdsvis; Y. kristensen» ST-peptid som har den modne aminosyresekvensen Ser Asp Trp Cys Cys Glu Val Cys Cys Asn Pro Ala Cys Ala Gly Cys (SEKV ID NR: 8); V. cholerae non-01 ST-peptid (Takao et al. (1985) FEBS lett. 193:250) som har den modne aminosyresekvensen Ile Asp Cys Cys Glu Ile Cys Cys Asn Pro Ala Cys Phe Gly Cys Leu Asn (SEKV ID NR: 9); og V. mimicus ST-peptid (Arita (1991) et al. FEMS Microbiol. Lett. 79:105) som har den modne aminosyresekvensen Ile Asp Cys Cys Glu Ile Cys Cys Asn Pro Ala Cys Phe Gly Cys Leu Asn (SEKV ID NR: 10). Tabellen nedenfor gir sekvenser av hele eller en del av flere modne ST-peptider.
Den umodne (inkludert pre og pro-regioner) formen av E. coli ST-1A (ST-P)-protein har sekvensen: mkklmlaifisvlsfpsfsqstesldsskekitletkkcdvvknnsekksenmnntfyccelccnpacagcy (SEKV ID NR:20); se GenBank<®>Aksesjonsnummer P01559 (gi:123711). Pre-sekvensen strekker seg fra aa 1-19. Pro-sekvensen strekker seg fra aa 20-54. Det modne proteinet strekker seg fra 55-72. Den umodne (inkludert pre og pro-regioner) formen av E. coli ST-1B (ST-H)-proteinet har sekvensen: mkksilfiflsvlsfspfaqdakpvesskekitleskkcniakksnksgpesmnssnyccelccnpactgcy (SEKV ID NR:21); se GenBank<®>Aksesjonsnummer P07965 (gi: 3915589). Den umodne (inkludert pre og pro-regioner) formen av Y. enterocolitica ST-proteinet har sekvensen: mkkivfvlvlmlssfgafgqetvsgqfsdalstpitaevykqacdpplppaevssdwdccdvccnpacagc (SEKV ID NR:22); se GenBank® Aksesjonsnummer S25659 (gi: 282047).
Peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse har, i likhet med de bakterielle ST-peptidene, seks Cys-rester. Disse seks Cys-restene danner tre disulfidbindinger i den modne og aktive formen av peptidet. Dersom de seks Cys-restene er identifisert, fra den amino til den karboksyterminale enden av peptidet, som A, B, C, D, E og F, dannes disulfidbindingene som følger: A-D, B-E, og C-F. Dannelsen av disse bindingene er ansett for å være viktig for GC-C-reseptorbinding. Visse av peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter et potensielt funksjonelt kløyvingssete for chymotrypsin, for eksempel, en Trp, Tyr eller Phe lokalisert mellom enten Cys B og Cys D eller mellom Cys E og Cys F. Kløyving ved hvilket som helst kløyvingssete for chymotrypsin reduserer eller fjerner peptidets evne til å binde til GC-C-reseptoren.
I menneskekroppen produseres en inaktiv form av chymotrypsin, chymotrypsinogen i pankreas. Når dette inaktive enzymet når tynntarmen omdannes det til aktivt chymotrypsin ved fjerning av to dipeptider. Aktivt chymotrypsin kan potensielt kløyve peptider ved peptidbindingen på den karboksyterminale siden av Trp, Tyr eller Phe. Tilstedeværelsen av aktivt chymotrypsin i fordøyelseskanalen kan potensielt føre til kløyving av visse av peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse som har et passende plassert funksjonelt kløyvingssete for chymotrypsin. Det er forventet at kløyving med chymotrypsin vil moderere virkningen av et peptid ifølge foreliggende oppfinnelse som har et passende plassert chymotrypsin-kløyvingssete ettersom peptidet passerer gjennom fordøyelseskanalen.
Trypsinogen er, i likhet med chymotrypsin, en serinprotease som produseres i pankreas og er til stede i fordøyelseskanalen. Den aktive formen, trypsin, vil kløyve peptider som har en Lys eller Arg. Tilstedeværelsen av aktivt chymotrypsin i fordøyelseskanalen kan føre til kløyving av visse av peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse som har et passende plassert funksjonelt kløyvingssete for chymotrypsin. Det er forventet at kløyving med chymotrypsin vil moderere virkningen av et peptid ifølge foreliggende oppfinnelse som har et passende plassert trypsin-kløyvingssete ettersom peptidet passerer gjennom fordøyelseskanalen.
Mange gastrointestinale forstyrrelser, inkludert IBS, er forbundet med abdominal eller visceral smerte. Visse peptider ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter analgesiske eller antinociceptive tag's slik som den karboksyterminale sekvensen AspPhe umiddelbart etter en Trp, Tyr eller Phe som danner et funksjonelt kløyvingssete for chymotrypsin eller etter Lys eller Arg som danner et funksjonelt kløyvingssete for trypsin. Chymotrypsin i fordøyelseskanalen kan potensielt kløyve slike peptider umiddelbart karboksyterminalt for Trp, Phe eller Tyr-resten, hvilket frigir dipeptidet, AspPhe. Dette dipeptidet har blitt vist å ha analgesisk aktivitet i dyremodeller (Abdikkahi et al. 2001, Fundam Clin Pharmacol 15:117-23; Nikfaretal 1997, 29:583-6; Edmundson et al 1998, Clin Pharmacol Ther 63:580-93). På denne måten kan slike peptider behandle både smerte og inflammasjon. Andre analgesiske peptider kan være til stede ved den karboksyterminale enden av peptidet (etter et funksjonelt kløyvingssete) inkludert: endomorfin-1, endomorfin-2, nocistatin, dalargin, lupron og substans P. Flere av de nyttige peptidene er basert på kjernesekvensen: Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr (SEKV ID NR:29). For å danne en variant som har et potensielt funksjonelt kløyvingssete for chymotrypsin i stand til å inaktivere peptidet, kan enten Leu (understreket) eller Thr (understreket) erstattes med Trp, Phe eller Tyr eller både Leu og Thr kan ersattes med
(uavhengig) Trp, Phe eller Tyr. For å danne en variant som har et analgesisk dipeptid, etterfølges kjernesekvensen av Asp Phe. Den karboksyterminale Tyr i kjernesekvensen kan tillate at dipeptidet Asp Phe frigis ved chymotrypsin i fordøyelseskanalen. Kjernesekvensen kan eventuelt innledes av Asn Ser Ser Asn Tyr eller Asn.
Anvendelige varianter basert på kjernesekvensen omfatter følgelig:
I noen tilfeller fremstilles peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse som et prepro-protein som omfatter den aminoterminale ledersekvensen: mkksilfiflsvlsfspfaqdakpvesskekitleskkcniakksnksgpesmn (SEKV ID NR: 23). Når peptidet produseres av en bakteriecelle, for eksempel E. coli, vil den foregående ledersekvensen kløyves og det modne peptidet vil bli sekreter! effektivt fra bakteriecellen. U.S. patent nr. 5,395,490 beskriver vektorer, ekspresjonssystemer og fremgangsmåter for effektiv fremstilling av ST-peptider i bakterieceller og fremgangsmåter for å oppnå effektiv sekresjon av modne ST-peptider. Vektorene, ekspresjonssystemene og fremgangsmåtene beskrevet i U.S. patent nr. 5,395,490 kan anvendes for å fremstille ST-peptidene og varianter av ST-peptider ifølge foreliggende oppfinnelse
Varianter av peptider
Foreliggende oppfinnelse omfatter varianter av peptider som kan omfatte én, to, tre, fire, fem, seks, sju, åtte, ni eller ti (i noen utførelsesformer færre enn 5 eller færre enn 3 eller 2 eller færre) aminosyresubstitusjoner sammenlignet med SEKV ID NR:25 til59 og 66 til 110. Substitusjonen(e) kan være konservative eller ikke-konservative. De naturlig forekommende aminosyrene kan substitueres med D-isomerer av hvilken som helst aminosyre, ikke-naturlige aminosyrer og andre grupper. En konservativ aminosyresubstitusjon fører til endring av en aminosyre med en likt fungerende aminosyre, eller aminosyre med lik ladning, polaritet eller hydrofobisitet. Ved noen posisjoner kan til og med konservative aminosyresubstitusjoner redusere aktiviteten av peptidet. Blant de naturlig forekommende aminosyrene er substitusjonene som generelt anses som konservative:
Under noen omstendigheter kan det være ønskelig å behandle pasienter med en variant av et peptid som binder til og aktiverer intestinal GC-C-reseptor, men er mindre aktiv enn ikke-variant formen av peptidet. Denne reduserte aktiviteten kan komme av redusert affinitet for reseptoren eller en redusert evne til å aktivere reseptoren når den først er bundet eller redusert stabilitet av peptidet.
I noen peptider med par av Cys-rester som vanligvis danner en disulfidbinding kan ett eller begge medlemmene av paret erstattes av homocystein, 3-merkaptoprolin (Kolodziej et al. 1996 Int J Pept Protein Res 48:274); B,B-dimetylcystein (Hunt et al. 1993 Int J Pept Protein Res 42:249) eller diaminopropionsyre (Smith et al.1978 J Med Chem 21:117) for å danne alternative indre kryssbindinger ved posisjonene for de normale disulfidbindingene.
Fremstilling av peptider
Nyttige peptider kan produseres enten i bakterier omfattende, uten begrensning, E. coli, eller i andre eksisterende systemer for peptid eller proteinproduksjon (for eksempel
Bacillus subtilis, baculovirus-ekspresjonssystemer ved anvendelse av Drosophila Sf9-celler, gjær eller filamentøs sopp-ekspresjonssystemer, mammalsk celle-ekspresjonssystemer), eller de kan fremstilles kjemisk.
Dersom peptidet eller varianten av peptidet skal fremstilles i bakterier, for eksempel E. coli, vil nukleinsyremolekylet som koder for peptidet foretrukket også kode for en ledersekvens som tillater sekresjon av det modne peptidet fra cellen. Følgelig kan sekvensen som koder for peptidet omfatte pre-sekvensen og pro-sekvensen av, for eksempel, et naturlig forekommende bakterielt ST-peptid. Det sekreterte modne peptidet kan renses fra dyrkningsmediet.
Sekvensen som koder for et peptid ifølge foreliggende oppfinnelse inserteres foretrukket inn i en vektor i stand til å levere og opprettholde nukleinsyremolekylet i en bakteriecelle. DNA-molekylet kan inserteres inn i en autonomt replikerende vektor (egnede vektorer omfatter, foreksempel, pGEM3Z og pcDNA3, og derivater derav). Vektorens nukleinsyre kan være et bakterie- eller bakteriofag-DNA slik som bakteriofag lambda eller M13 og derivater derav. Konstruksjon av en vektor inneholdende en nukleinsyre beskrevet heri kan etterfølges av transformasjon av en vertscelle slik som en bakterie. Egnede bakterieverter omfatter men er ikke begrenset til, E. coli, B. subtilis, Pseudomonas, Salmonella. Den genetiske konstruksjonen omfatter også, i tillegg til det kodende nukleinsyremolekylet, elementer som muliggjør ekspresjon, slik som en promoter og reguleringsssekvenser. Ekspresjonsvektorene kan inneholde transkripsjons-kontrollsekvenser som styrer initiering av transkripsjon, slik som promoter, enhancer, operator og repressor-sekvenser. Mange forskjellige transkripsjons-kontrollsekvenser er velkjente for fagfolk på området. Ekspresjonsvektoren kan også omfatte en reguleringssekvens for translasjon (for eksempel en utranslatert 5-sekvens, en utranslatert 3'-sekvens, eller et indre ribosombindingssete). Vektoren kan være i stand til autonom replikasjon eller den kan integrere inn i verts-DNA for å sikre stabilitet under peptidproduksjon.
Den proteinkodende sekvensen som omfatter et peptid ifølge foreliggende oppfinnelse kan også fusjoneres til en nukleinsyre som koder for en polypeptid affinitets-tag, for eksempel glutation S-transferase (GST), maltose E-bindende protein, protein A, FLAG-tag, heksa-histidin, myc-tag eller influensa HA-tag, for å lette rensing. Affinitets-tag'en eller markørfusjonen forbinder leserammen for peptidet av interesse til leserammen for genet som koder for affinitets-tag'en slik at det frembringes en translasjonen fusjon. Ekspresjon av fusjonsgenet fører til translasjon av et enkelt polypeptid som omfatter både peptidet av interesse og affinitets-tag'en. I noen tilfeller hvor affinitets-tag benyttes, vil DNA-sekvens som koder for et gjenkjenningssete for protease fusjoneres mellom leserammene for affinitets-tag'en og peptidet av interesse.
Genetiske konstruksjoner og fremgangsmåter egnet for fremstilling av umodne og modne former av peptidene og variantene ifølge foreliggende oppfinnelse i protein-ekspresjonssystemer andre enn bakterier, og velkjente for fagfolk på området, kan også anvendes for å fremstille peptider i et biologisk system.
Modne peptider og varianter derav kan syntetiseres ved fastfase-metoden ved anvendelse av en automatisert peptid-syntetiserer. Peptidet kan for eksempel syntetiseres på Cyc(4-CH2Bxl)-OCH2-4-(oksymetyl)-fenylacetamidometyl-resin ved anvendelse av et dobbelt koblings ("double coupling")-program. Beskyttelsesgrupper må anvendes passende for å danne det riktige disulfidbindingsmønsteret. For eksempel kan de følgende beskyttelsesgruppene anvendes: t-butyloksykarbonyl (alfa-aminogrupper); acetamidometyl (thiol-grupper av Cys-restene B og E); 4-metylbenyl (thiol-grupper av Cys-restene C og F); benzyl (y-karboksyl av glutaminsyre og hydroksylgruppen av treonin, dersom til stede); og brombenzyl (fenolgruppe av tyrosin, dersom til stede). Kobling bevirkes med symmetrisk anhydrid av t-butoksylkarbonylaminosyrer eller hydroksybenzotriazolester (for asparagin eller glutamin-rester), og beskyttelsesgrupper fjernes fra peptidet og det kløyves fra den faste bæreren i hydrogenfluorid, dimetylsulfid, anisol og p-tiokresol ved anvendelse av 8/1/1/0,5-ratio (volum/volum/volum/vekt) ved 0°C i 60 min. Etter fjerning av hydrogenfluorid og dimetylsulfid ved redusert trykk og anisol og p-tiokresol ved ekstraksjon med etyleter og etylacetat sekvensielt, ekstraheres uforedlede peptider med en blanding av 0,5M natriumfosfatbuffer, pH 8,0 og N,N-dimetylformamid ved anvendelse av en ratio på 1/1, volum/volum. Disulfidbindingen for Cys-restene B og E dannes ved anvendelse av dimetylsulfoksid (Tam et al.(1991) J. Am. Chem. Soc. 113:6657-62). Det resulterende peptidet renses deretter ved reversfase kromatografi. Disulfidbindingen mellom Cys-restene C og F dannes ved først å oppløse peptidet i 50% eddiksyre i vann. Mettet jodløsning i glasial eddiksyre tilsettes (1 ml jodløsning pr. 100 ml løsning). Etter inkubasjon ved romtemperatur i to dager i en lukket glassbeholder, fortynnes løsningen fem ganger med avionisert vann og ekstraheres med etyleter fire ganger for å fjerne ureagert jod. Etter fjerning av den gjenværende mengden av etyleter ved rotasjonsfordampning blir løsningen av uforedlet produkt lyofolisert og renset ved suksessiv reversfase kromatografi.
Intestinal GC- C reseptor- bindingsanalyse
Evnen for peptider og andre agenser til å binde til den intestinale GC-C-reseptoren kan undersøkes som følger. Celler fra den T84 humane colon karcinom-cellelinjen (American Type Cu I tu re Collection (Bethesda, Md.) dyrkes til konfluens i 24-brønners dyrkingsplater med en 1:1-blanding av HanrVs F12-medium og Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM), supplert med 5% føtalt kalveserum. Celler anvendt i analysen er typisk mellom passasjene 54-60.1 korthet vaskes T84 celle-monolag i 24-brønners plater to ganger med 1 ml bindingsbuffer (DMEM inneholdende 0,05% bovint serumalbumin og 25 mM HEPES, pH 7,2), inkuberes deretter i 30 min ved 37°C i nærvær av modent radioaktivt merket E. coli ST-peptid og prøvematerialet ved forskjellige konsentrasjoner. Cellene blir deretter vasket fire ganger med 1 ml DMEM og solubilisert med 0,5 ml/brønn 1N NaOH. Nivået av radioaktivitet i det solubiliserte materialet bestemmes deretter ved anvendelse av standardmetoder.
Eksempel 1: Fremstilling av varianter av ST-peptider og villtype ST-peptid
1a: Fremstilling av rekombinante varianter av ST-peptider og villtype ST-peptid
En variant av ST-peptid, referert til som SEKV ID NR: 28, ble fremstilt rekombinant og undersøkt i en dyremodell. SEKV ID NR: 28 har sekvensen: Asn Ser Ser Asn Tyr Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr (SEKV ID NR:28). Et peptid som har sekvensen av villtype ST-peptid ble også dannet (SEKV ID NR: 26)
SEKV ID NR: 28 og SEKV ID NR: 26 ble fremstilt som prepro-proteiner ved anvendelse av vektorer fremstilt som følger. En sekvens som koder for en varmestabil enterotoksin pre-pro-sekvens ble amplifisert fra pGK51/pGSK51 (ATCC 67728) ved anvendelse av oligonukleotid M03514 (5'CACACCATATGAAGAAATCAATATTATTTATTTTTCTTTCTG 3' (SEKV ID NR:60)) og oligonukleotid M03515 (5'
CACACCTCGAGTTAGGTCTCCATGCTTTCAGGACCACTTTTATTAC 3' (SEKV ID
NR:61)). Amplifiseringsproduktfragmentet ble kløyvet med Ndel/Xhol og ligert til T7-ekspresjonsvektoren, pET26b(+) (Novagen) kløyvet med Ndel/Xhol for å danne plasmid MB3976. Regionen som koder for pre-pro-proteinet ble sekvensert og funnet å kode for aminosyresekvensen: mkksilfiflsvlsfspfaqdakpagsskekitleskkcnivkksnksgpesm (SEKV ID NR:24) som skiller seg fra aminosyresekvensen av varmestabilt enterotoksin a2 forløper (sta2; mkksilfiflsvlsfspfaqdakpagsskekitleskkcnivkknnesspesm (SEKV ID NR:25); GenBank<®>Aksesjonsnummer Q47185, Gl: 3913876) ved tre posisjoner (angitt ved understrekning og fet skrift) nær den C-terminale enden. For å danne ekspresjonsvektorer med pre-prosekvensen, ble komplemetære oligo som koder for hver ST-peptidvariant eller villtype ST-peptid hybridisert og klonet inn i ekspresjonsvektoren MB3976. For å danne MB3984 (som koder for SEKV ID NR: 26 peptid full-lengde villtype ST-peptid som et prepro-protein), inneholdende aminosyresekvensen, NSSNYCCELCCNPACTGCY (SEKV ID NR:26) fusjonert nedstrøms for pre-prosekvensen, ble MB 3976 kløyvet med Bsal/Xhol og ligert til hybridiserte oligos M03621 (5' CAGTAATTGCTACTATTC3' (SEKV ID NR:63). For å danne MB3985 (som koder for SEKV ID NR: 28 som et prepro-protein) inneholdende den følgende aminosyresekvensen, NSSNYCCEYCCNPACTGCY fusjonert nedstrøms for pre-prosekvensen, ble MB 3976 kløyvet med Bsal/Xhol og ligert til hybridiserte oligos M03529 (5'
SEKV ID NR: 28-peptidet og SEKV ID NR: 26-peptidet ble fremstilt som følger. Ekspresjonsvektorene ble transformert inn i E. co//-bakterievert BL21 A DE3 (Invitrogen). En enkelt koloni ble inokulert og dyrket med risting over natten ved 30°C i L medium + 25 mg/l kanamycin. Overnatt-kulturen ble tilsatt til 3,2 I batch-medium (Glukose 25 g/l, casminosyrer 5 g/l, gjærekstrakt 5 g/l, KH2P0413,3 g/l, (NH4)2HP024 g/l, MgS04-7H20 1,2 g/l, sitronsyre 1,7 g/l, EDTA 8,4 mg/l, CoCI2-6H20 2,5 mg/l, MnCI2-4H20 15 mg/l, CuCI2-4H20 1,5 mg/l, H3B033 mg/l, Na2Mo04-2H20 2,5 mg/l, Zn-acetat-2H20 13 mg/l, jern(lll)-citrat 100 mg/l, kanamycin 25 mg/l, antiskum DF2041 ml/l) og fermentert ved anvendelse av de følgende prosessparametrene: pH 6,7 - kontroll med kun base (28% NH4H), 30°C, lufting: 5 liter pr. minutt. Etter det initielle konsumet av batch-glukose (basert på overvåking av nivåer av oppløst oksygen (DO)), ble 1,5 I næringsmedium (glukose 700 g/l, casaminosyrer 10 g/l, gjærekstrakt 10 g/l, MgS04-7H20 4 g/l, EDTA 13 mg/l, CoCI2-6H20 4 mg/l, MnCI2-4H20 23,5 mg/l, CuCI2-4H20 2,5 mg/l, H3B035 mg/l, Na2Mo04-2H20 4 mg/l, Zn-acetat-2H20 16 mg/l, jern(lll)-citrat 40 mg/l, antiskum DF2041 ml/l) tilsatt ved en tilførselshastighet regulert for å opprettholde 20% DO. IPTG ble tilsatt til 0,2 mM 2 timer etter oppstart av tilførsel. Den totale gangtiden var omtrent 40-45 timer (til tømming av tilførsel).
Celler ble oppsamlet ved sentrifugenng ved 5,000 g i 10 minutter. Cellepelleten ble kastet og supernatanten ble passert gjennom en 50 Kd ultrafiltreringsenhet. The 50 Kd filtratet (0,6 liter) ble fylt på en 110 ml Q-Sepharose fast Flow-kolonne (Amersham Pharmacia, ekvilibrert med 20 mMTris-HCI pH 7,5) ved en strømningshastighet på 400 ml/time. Kolonnen ble vasket med seks volumer 20 mM Tris-HCI pH 7,5 og proteiner ble eluert med 50 mM eddiksyre og fraksjoner på 50 ml ble oppsamlet. Fraksjoner inneholdende variant av ST-peptid eller villtype ST-peptid ble samlet og løsningsmidlet ble fjernet ved rotasjonsfordampning. De tørkede proteinene ble resuspendert i 10 ml 8% eddiksyre, 0,1% trifluoreddiksyre (TFA) og fylt på en Varian Polaris C18-A-kolonne (250 X 21,2 mm
10 um, ekvilibrert med samme buffer) ved en strømningshastighet på 20 ml/min. Kolonnen ble vasket med 100 ml 8% metanol, 0,1% TFA og utviklet med en gradient (300 ml) på 24 til 48% metanol, 0,1% TFA, og fraksjoner på 5 ml ble oppsamlet. Fraksjoner inneholdende peptid ble samlet og løsningsmidlet ble fjernet ved rotasjonsfordampning. Peptidene ble
oppløst i 0,1% TFA og lyofilisert.
SEKV ID NR: 28-peptidet og SEKV ID NR: 26-peptidfraksjonene ble analysert ved standard LCMS og HPLC. LCMS-analyse avslørte at SEKV ID NR: 28er mer homogen enn SEKV ID NR: 26 (se Figur 1a; legg merke til at MD-915-peptid fremviser færre topper (Panel B) enn SEKV ID NR: 26 (Panel A)).
1b: Fremstilling av syntetiske varianter av ST-peptider og villtype ST-peptid Peptider ble syntetisert kjemisk av et kommersielt peptidsyntese-firma. Det ble oppnådd forskjellige utbytter av peptider avhengig av effektiviteten av kjemisk syntese. Følgelig var de fire peptidene, i rekkefølge med hensyn til minskende utbytte: Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr (SEKV ID NR:- ; MD-1100), 10-20% utbytte; Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr (SEKV ID NR:- ; MM416774); Asn Ser Ser Asn Tyr Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr (SEKV ID NR:- ; MD-915); Asn Ser Ser Asn Tyr Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr (SEKV ID NR:-MM-416776), <5% utbytte. Følgelig kan de spesifikke aminosyreendringene innført i peptidene danne forbedrede fremstillingsegenskaper. Figur 1 b viser den totale ionekromatografprofilen for syntetisk fremstilt SEKV ID NR: 31. Figur 1c viser den totale ionekromatografprofilen for den tomme kontrollprøven. Det er én stor topp til stede i SEKV ID NR: 31-prøven som ikke er til stede i kontrollprøven. Kvantitativ analyse antyder at SEKV ID NR: 31 er >98% ren.
Eksempel 2: Aktivering av intestinal GC-C-reseptor ved en variant av ST-peptid og ST-peptid
Evnen til SEKV ID NR:28, SEKV ID NR: 26 og SEKV ID NR: 31 til å aktivere intestinal GC-C-reseptor ble vurdert i en analyse ved anvendelse av den humane colon karcinom-cellelinjen T84 (American Type Culture Collection (Bethesda, Md.). For analysen ble celler dyrket til konfluens i 24-brønners dyrkningsplater med en 1:1-blanding av HarrVs F12-medium og Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM), supplert med 5% føtalt kalveserum og ble anvendt ved mellom passasjene 54 og 60.
I korthet ble monolag av T84-celler i 24-brønners plater vasket to ganger med 1 ml/brønn DMEM, og deretter inkubert ved 37°C i 10 min med 0,45 ml DMEM inneholdende 1 mM isobutylmetylxantin (IBMX), en syklisk nukleotid fosfodiesterase-inhibitor. Test-peptider (50 ul) ble deretter tilsatt og inkubert i 30 minutter ved 37°C. Mediene ble aspirert og reaksjonen ble deretter avsluttet ved tilsetning av iskald 0,5 ml 0,1N HCI. Prøvene ble holdt på is i 20 minutter og deretter evaporert til tørrhet ved anvendelse av en varmepistol eller vakuumsentrifugering. De tørkede prøvene ble resuspendert i 0,5 ml fosfatbuffer tilveiebrakt i Cayman Chemical Cyclic GMP EIA-kit (Cayman Chemical, Ann Arbor, Ml). Syklisk GMP ble målt ved EIA i i henhold til fremgangsmåter vist i Cayman Chemical Cyclic GMP EIA-kifet.
Figur 2 viser aktiviteten av kjemisk syntetiserte peptid-varianter i denne GC-reseptoraktivitets-analysen. I denne analysen hadde SEKV ID NR: 26 og to forskjellige SEKV ID NR: 31-peptider (SEKV ID NR: 31 (a) og SEKV ID NR: 31 (b), syntetisert ved to forskjellige metoder) aktivitet komparabel med SEKV ID NR: 26. SEKV ID NR: 28 og SEKV ID NR: 26-peptid ble syntetisert kjemisk på en måte identisk med den for SEKV ID NR: 31(b).
Eksempel 3: MD-915 og MM-416776 øker intestinal transitt hos mus
For å bestemme hvorvidt peptidene øker hastigheten av gastrointestinal transitt, ble peptidene og kontroller undersøkt ved anvendelse av en murin gastrointestinal transitt (GIT)-analyse (Moon et al. Infection and Immunity 25:127', 1979). I denne analysen administreres trekull, som lett kan visualiseres i magetarmkanalen til mus etter administrering av en prøve-forbindelse. Avstanden tilbakelagt av trekullet måles og uttrykkes som prosentandel av den totale lengden av colon.
Mus ble fastet med fri tilgang til vann i 12 til 16 timer før behandlingen med peptid eller kontrollbuffer. Peptidene ble administrert oralt ved 1 ug/kg - 1 mg/kg peptid i buffer (20 mM Tris pH 7,5) 7 minutter før det ble gitt en oral dose av 5% aktivert karbon (Aldrich 242276-250G). Til kontrollmus ble det kun administrert buffer før det ble gitt en dose aktivert karbon. Etter 15 minutter ble musene avlivet og deres tarmer fra magen til caecum ble dissekert. Den totale lengden av tarmen så vel som avstanden tilbakelagt fra magen til trekull-fronten ble målt for hvert dyr og resultatene er uttrykt som prosenten av den totale lengden av tarmen tilbakelagt av trekull-fronten. Alle resultatene er angitt som gjennomsnittet for 10 mus ± standardavvik. En sammenligning av avstanden tilbakelagt av trekullet mellom musene behandlet med peptid versus musene behandlet med vehikkel alene ble utført ved anvendelse av en Students t-test og en statistisk sigifikant forskjell ble tatt i betraktning for P<0,05. P-verdier er beregnet ved anvendelse av en tosidet T-Test forutsatt ulike varianser.
Som det kan ses i Figur 3a, b, øker villtype ST-peptid (SEKV ID NR: 26, (Sigma-Aldrich, St Louis, MO; 0,1 mg/kg), syntetisk fremstilt SEKV ID NR: 31 og Zelnorm<®>(0,1 mg/kg), et medikament godkjent for IBS som er en agonist for serotonin-reseptoren 5HT4, den gastrointestinale hastigheten av transitt i den modellen. Figur 4a viser resultatet av en undersøkelse som viser at intestinal transitt-rate øker med en økende dose av enten rekombinant syntetisert SEKV ID NR: 26 eller SEKV ID NR: 28. Figur 4b viser resultatene av en undersøkelse som viser at både kjemisk syntetisert SEKV ID NR: 26 eller SEKV ID NR: 31-peptid øker intestinale transitt-rater mer enn både Tris-buffer alene eller en ekvivalent dose Zelnorm<®>.
Et identisk eksperiment ble utført for å bestemme om SEKV ID NR: 31 er effektiv i et behandlingsregime med kronisk dosering. I korthet doseres 8 uker gamle CD1 hunn-mus oralt én gang pr. dag i 5 dager med enten SEKV ID NR: 31 (0,06 mg/kg eller 0,25 mg/kg i 20mM Tris pH 7,5) eller vehikkel alene (20mM Tris pH 7,5). På den femte dagen utføres en GIT-analyse identisk med den ovenfor med unntak av at 200 ul av en 10% trekull-løsning administreres. Figur 4c viser resultatene av en undersøkelse som viser at både kjemisk syntetisert SEKV ID NR: 31 eller Zelnorm<®>er effektive i en mus gastrointestinal motilitetsanalyse ved kronisk dosering (daglig i 5 dager). Resultatene er vist side om side med akutt dosering (1 dag).
Eksempel 4: SEKV ID NR: 28-peptid og SEKV ID NR: 26-peptid øker intestinal sekresjon hos nyfødte mus (SuMi assay)
SEKV ID NR: 26-peptid og SEKV ID NR: 28 ble undersøkt med hensyn til deres evne til å øke intestinal sekresjon ved anvendelse av en nyfødt mus-modell for intestinal sekresjon.
I denne modellen administreres en test-forbindelse til nyfødt mus som er mellom 7 og 9 dager gamle. Etter at musene er avlivet, dissekeres magetarmkanalen fra magen til caecum ("tarmer"). Restene ("kadaveret") så vel som tarmer veies og ratioen av tarm- til kadaver-vekten beregnes. Dersom ratioen er over 0,09, kan det konkluderes med at test-forbindelsen øker intestinal sekresjon. Figur 5a viser en dose respons-kurve for villtype ST-peptid (SEKV ID NR:26) i denne modellen. Figur 5b viser dose respons-kurve for SEKV ID NR: 31-peptidet i denne modellen. Disse data viser at villtype ST-peptid (ervervet fra TDT, Inc. West Chester, PA) og SEKV ID NR: 31-peptidet øker intestinal sekresjon. Effekten av Zelnorm<®>ble også undersøkt. Som det kan ses fra Figur 5, øker ikke Zelnorm<®>ved 0,2 mg/kg intestinal sekresjon i denne modellen. Figur 6a viser en dose respons-kurve for det rekombinante SEKV ID NR: 26-peptidet beskrevet ovenfor og det rekombinante SEKV ID NR: 28-peptidet beskrevet ovenfor. Som det kan ses fra Figur 6a, øker begge peptider intestinal sekresjon i denne modellen. På lignenede måte viser figur 6b en dose respons-kurve for kjemisk syntetisert SEKV ID NR: 28, SEKV ID NR: 31og SEKV ID NR: 26 så vel som villtype ST-peptid (ervervet fra Sigma-Aldrich, St Louis, MO).
Dyremodeller for colonisk hyperalgesi
Hypersensitivitet for colorektal distensjon er vanlig hos pasienter med IBS og kan være ansvarlig for det viktigste symptomet på smerte. Både inflammatoriske og ikke-inflammatoriske dyremodeller for visceral hyperalgesi for distensjon har blitt utviklet for å undersøke effekten av forbindelser på visceral smerte ved IBS.
I. Trinitrobenzensulfonsyre ( TNBS)- indusert rektal allodvnia- modell
Hann Wistar-rotter (220-250 g) ble premedisinert med 0,5 mg/kg acepromazin injisert intraperitonealt (IP) og anestesert ved intramuskulær administrering av 100 mg/kg ketamin. Par av nikrom metalltråd elektroder (60 cm i lengde og 80 um i diameter) ble implantert i den tverrstripede muskel i abdomen, 2 cm lateralt fra den hvite linje. De frie endene av elektrodene ble eksternalisert på baksiden av nakken og beskyttet av en plasthylse festet til huden. Elektromyografiske (EMG) registreringer ble startet opp 5 dager etter kirurgi. Elektrisk aktivitet av abdominal tverrstripet muskel ble registrert med en elektroencefalograf-maskin (Mini VIII, Alvar, Paris, Frankrike) ved anvendelse av en short time konstant (0,03 sek.) for å fjerne lavfrekvente signaler (<3 Hz).
Ti dager etter kirurgisk implantasjon, ble trinitrobenzensulfonsyre (TNBS) administrert for å indusere rektal inflammasjon. TNBS (80 mg kg"<1>i 0,3 ml 50 % etanol) ble administrert intrarektalt gjennom et silikon gummi-kateter innført 3 cm fra anus under lett dietyleter-anestesi, som beskrevet (Morteau et al. 1994 Dig Dis Sei 39:1239). Etter administrering av TNBS ble rotter anbrakt i plast-tunneller hvor de ble strengt begrenset når det gjelder mobilitet i mange dager før kolorektal distensjon (CRD). Eksperimentell forbindelse ble administrert én time før CRD som ble utført ved å innføre inn i rektum, ved 1 cm fra anus, en 4 cm lang ballong konstruert fra et latex-kondom (Gue et al, 1997 Neurogastroenterol. Motil. 9: 271). Ballongen ble festet på et stivt kateter tatt fra en embolektomi-sonde (Fogarty). Ballongen festet til kateteret ble festet ved haleroten. Ballongen forbundet til en barostat, ble blåst opp progressivt ved trinn på 15 mmHg, fra 0 til 60 mmHg, hvor hvert trinn for oppblåsing varte i 5 min. Evaluering av rektal sensitivitet, som målt ved EMG, ble utført før (1-2 dager) og 3 dager etter rektal inngytelse av TNBS.
Antallet topp-utbrudd som korresponderer med abdominale kontraksjoner ble bestemt pr. 5 min perioder. Statistisk analyse av antallet av abdominale kontraksjoner og evaluering av dose-effekt-forhold ble utført ved en enveis variansanalyse (ANOVA) fulgt av en post-hoc (Student eller Dunnett test) og regresjonsanalyse for ED50 dersom hensiktsmessig. Figur 7 viser resultatene av eksperiment i hvilket SEKV ID NR: 31-aktivitet ble analysert i den TNBS colorektale modellen. Signifikante reduksjoner i abdominal respons er observert ved 0,3 ug/kg og 3 ug/kg SEKV ID NR: 31. Disse resultatene viser at SEKV ID NR: 31 reduserer smerte forbundet med colorektal distensjon i denne dyremodellen.
II. Stress- indusert hvperalgesi- modell
I hann Wistar-rotter (200-250 g) implanteres kirurgisk nikrom metalltråd elektroder som i TNBS-modellen. Ti dager etter kirurgisk implantasjon utføres partiell tvang ("partial restraint") stress (PRS) som beskrevet av Williams et al. i to timer (Williams et al. 1988 Gastroenterology 64:611). I korthet ble, under lett anestesi med etyleter, skuldrene, de øvre forlemmene og brystkassen innhyllet i en begrensende sele av papirtape for å begrense, men ikke forhindre kroppsbevegelser. Kontroller, simulert-stressede dyr, blir anestesert men blir ikke pakket inn. Tretti minutter før slutten av PRS-sesjonen, ble test-forbindelse eller vehikkel administrert til dyrene. Tretti minutter til én time etter fullførelse av PRS, ble CRD-distensjonsmetoden utført som beskrevet ovenfor for TNBS-modellen med barostat ved trykk på 15, 30, 45 og 60mm Hg. Statistisk analyse av antallet utbrudd bestemmes og analyseres som i TNBS-modellen ovenfor.
Fenylbenzoquinon- indusert vridningsmodell
Den PBQ-induserte vridningsmodellen kan anvendes for å vurdere smerte kontroll-aktivitet for peptidene og GC-C-reseptoragonister ifølge foreliggende oppfinnelse. Denne modellen er beskrevet av Siegmund et al. (1957 Proe. Soc. Exp. Bio. Med. 95:729-731). I korthet injiseres, én time etter oral dosering med en test-forbindelse, for eksempel, et peptid, morfin eller vehikkel, 0,02% fenylbenzoquinon (PBQ)-løsning (12,5 ml/kg) ved intraperitoneal rute inn i musen. Antallet tøyninger og vridninger registreres fra femte til tiende minutt etter injeksjon av PBQ, og kan også telles mellom det 35. og 40. minuttet og mellom det 60. og 65. minuttet for å gi en kinetisk bedømmelse. Resultatene er uttrykt som antall tøyninger og vridninger (middelverdi ± SEM) og prosentandelen av variasjon av den nociceptive terskelen beregnet fra middelverdien for den vehikkel-behandlede gruppen. Den statistiske signifikansen av enhver forskjell mellom de behandlede gruppene og kontrollgruppen bestemmes ved en Dunnetts test ved anvendelse av residual varians etter en enveis variansanalyse (P< 0,05) ved anvendelse av SigmaStat Software.
Figurene 8a og 8b viser effekten av forskjellige doser av SEKV ID NR: 28 og SEKV ID NR: 31 i PBQ vridnings-analysen. Indometacin, et NSAID (ikke-steroidalt anti-inflammatorisk medikament) med kjent effekt med hensyn til smertekontroll, ble anvendt som den positive kontrollen i analysen. Signifikante reduksjoner i vridninger ble observert for SEKV ID NR: 28 (1 mg/kg dose) og SEKV ID NR: 31 (2,5 mg/kg dose) sammenlignet med vehikkel-kontrollen. Tap av virkekraft ved den høyeste dosen som undersøkes har også blitt observert for mange andre forbindelser (slik som 5HT-3-antagonister) undersøkt i lignende analyser. Resultatene av denne undersøkelsen antyder at både SEKV ID NR: 28 og SEKV ID NR: 31 har antinociceptive effekter i denne modellen for visceral smerte sammenlignet med de intermediære dosene av indometacin.
Eksempel 5: MD-1100 Kd-bestemmelse
For å bestemme affiniteten av SEKV ID NR: 31 for GC-C-reseptorer funnet i intestinal mukosa hos rotte, ble det utført en konkurrerende bindingsanalyse ved anvendelse av tarmepitelceller fra rotte. Epitelceller fra tynntarmen fra rotter ble oppnådd som beskrevet av Kessler et al. ( J. Biol. Chem. 245: 5281-5288 (1970)). I korthet ble dyr avlivet og deres bukhule avdekket. Tynntarmen ble renset med 300 ml iskald saltoppløsning eller PBS. 10 cm av tynntarmen målt ved 10 cm fra pylorus ble fjernet og kuttet i segmenter på 1 inch. Intestinal mukosa ble presset ut fra tarmen ved svakt trykk mellom et stykke parafilm og en P-1000 pipettespiss. Tarmepitelceller ble anbrakt i 2 ml PBS og pipettert opp og ned med en 5 ml pipette for å danne en suspensjon av celler. Proteinkonsentrasjon i suspensjonen ble målt ved anvendelse av Bradford-metoden ( Anal. Biochem. 72: 248-254
(1976)).
En konkurrerende bindingsanalyse ble utført basert på fremgangsmåten ifølge Giannella et al. { Am. J Physiol. 245: G492-G498) mellom [<125>1]-merket SEKV ID NR: 26 og SEKV ID NR: 31. Analyseblandingen inneholdt: 0,5 ml DME med 20 mM HEPES-KOH pH 7,0, 0,9 mg av cellesuspensjonen listet opp ovenfor, 21,4 fmol [<125>l]- SEKV ID NR: 26 (42,8 pM), og ulike konsentrasjoner av konkurrent SEKV ID NR: 31 (0,01 til 1000 nM). Blandingen ble inkubert ved romtemperatur i 1 time, og reaksjonen ble stoppet ved å anbringe blandingen på GF/B glassfiber-filtere (Whatman). Filtrene ble vasket med 5 ml iskald PBS og radioaktivitet ble målt. Figur 9 viser at Kd for MD-1100 i denne analysen er 4,5 nm. % B/Bo er prosentandelen av ratioen av radioaktivitet i hver prøve (B) sammenlignet med radioaktiviteten bibeholdt i en kontrollprøve uten noen kald konkurrent (Bo). Giannella et al. { Am. J. Physio. 245: G492-G498) observerte at Kd for villtype ST-peptid i denne samme analysen var~13 nm.
Eksempel 6: Farmakokinetiske egenskaper for MD-1100
For å undersøke farmakokinetikken for SEKV ID NR: 31, ble absorberbarheten undersøkt
i mus ved å administrere SEKV ID NR: 31 intravanøst via injeksjon i halen eller gitt oralt til 8 uker gamle CD1-mus. Serum ble oppsamlet fra dyrene ved forskjellige tidspunkter og undersøkt for tilstedeværelse av SEKV ID NR: 31 ved anvendelse av kompetitiv enzym-bundet immunoabsorbent assay (Oxoid, ST EIA kit, Cat#TD0700). Analysen benyttet monoklonale antistoffer mot ST-peptid (antistoffer gis i Oxoid-kifet) og syntetisk fremstilt SEKV ID NR: 31. Figur 10a viser absorpsjonsdata for intravenøst og oralt administrert SEKV ID NR: 31 som detektert ved ELISA-analysen. SEKV ID NR: 31 synes å bli minimalt systemisk absorbert og er < 2,2% biotilgjengelig.
Et lignende biotilgjengelighetsstudie ble utført i hvilket det ble anvendt LCMS heller enn ELISA for å detektere SEKV ID NR: 31. Initielt ble serumprøver ekstrahert fra helblod fra eksponerte mus og kontrollmus, deretter injisert direkte (10 ml) til en in-line fastfase-ekstraksjon (SPE)-kolonne (Waters Oasis HLB 25mm column, 2,0 x 15mm direkte forbundet) uten ytterligere bearbeidelse. Prøven på SPE-kolonnen ble vasket med en løsning av 5% metanol, 95% dH20 (2,1 ml/min, 1,0 minutt), derettert fylt i en analytisk kolonne ved anvendelse av en ventilbryter som plasserer SPE-kolonnen i en invertert strømingsbane på den analytiske kolonnen (Waters Xterra MS C8 5mm IS-kolonne, 2,1 x 20mm). Prøven ble eluert fra den analytiske kolonnen med en reversfase-gradient (Mobil fase A: 10 mM ammoniumhydroksid i dH20, Mobil fase B: 10 mM ammoniumhydroksid i 80% acetonitril og 20% metanol; 20% B i de første 3 minuttene og deretter opptrapping til 95% B i løpet av 4 min. og holdt oppe i 2 min., alt ved en strømningshastighet på 0,4 ml/min.). Ved 9,1 minutter, går gradienten tilbake til de initielle betingelsene på 20% B i 1 min. SEKV ID NR: 31 ble eluert fra den analytiske kolonnen ved 1,45 minutter, og ble detektert ved trippelkvadrupol massespektrometri (MRM, 764 (+2 charge state)> 182 (+1 charge state) Da; cone voltage = 30V; collision = 20 eV; parent resolution = 2 Da ved base peak; daughter resolution = 2 Da ved base peak). Instrumentrespons ble omregnet til konsentrasjonsenheter ved sammenligning med en standardkurve ved anvendelse av kjente mengder av kjemisk syntetisert SEKV ID NR: 31 fremstilt og injisert i museserum ved anvendelse av samme fremgangsmåte.
Figur 10b viser absorpsjonsdata for IV og oralt administrert SEKV ID NR: 31 som detektert ved LCMS. I denne analysen synes SEKV ID NR: 31 på lignende måte minimalt systemisk absorbert og er < 0,11 % biotilgjengelig.
Administrering av peptider og GC- C- reseptoragonister
For behandling av gastrointestinale forstyrrelser, administreres peptidene og agonistene ifølge foreliggende oppfinnelse foretrukket oralt, for eksempel, som en tablett, gel, pasta, suspensjon, væske, pulver eller i annen form. Oralt administrerte blandinger kan omfatte bindemidler, smakstilsetninger og fuktighetsbevarer. Peptidene og agonistene kan administreres sammen med andre agenser anvendt for å behandle gastrointestinale forstyrrelser inkludert men ikke begrenset til syreundertrykkende agenser slik som Histamin-2 reseptoragonister (H2A) og protonpumpeinhibitorer (PPI). Peptidene og agonistene kan også administreres ved rektalt suppositorium. For behandling av forstyrrelser utenfor magetarmkanalen slik som kongestiv hjertesvikt og benign prostata hypertrofi, administreres peptider og agonister foretrukket parenteralt eller oralt. Peptidene beskrevet heri kan anvendes alene eller i kombinasjon med andre agenser. For eksempel kan peptidene administreres sammen med et analgesisk peptid eller forbindelse. Det analgesiske peptidet eller forbindelsen kan være kovalent bundet til et peptid beskrevet heri eller det kan være et atskilt agens som administreres sammen med eller sekvensielt med et peptid beskrevet heri i en kombinasjonsterapi.
Kombinasjonsterapi kan oppnås ved å administrere to eller flere agenser, for eksempel et peptid beskrevet heri og et analgesisk peptid eller forbindelse, av hvilke hver formuleres og administreres separat, eller ved å administrere to eller flere agenser i en enkelt formulering. Andre kombinasjoner er også omfattet ved kombinasjonsterapi. For eksempel kan to agenser formuleres sammen og administreres i forbindelse med en separat formulering inneholdende et tredje agens. Selv om de to eller flere agensene i kombinasjonsterapien kan administreres samtidig, er ikke dette nødvendig. For eksempel kan administrering av et første agens (eller kombinasjon av agenser) gå forut for administrering av et andre agens (eller kombinasjon av agenser) med minutter, timer, dager eller uker. Følgelig kan de to eller flere agensene administreres innen minutter i forhold til hverandre eller innen 1,2, 3, 6, 9, 12, 15, 18 eller 24 timer i forhold til hverandre eller innen 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14 dager i forhold til hverandre eller innen 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 eller 10 uker i forhold til hverandre. I noen tilfeller er det til og med mulig med lengre intervaller. Selv om det i mange tilfeller er ønskelig at de to eller flere agensene som anvendes i en kombinasjonsterapi er til stede i pasientens kropp samtidig, er ikke dette nødvendig.
Kombinasjonsterapi kan også omfatte to eller flere administreringer av ett eller flere av agensene anvendt i kombinasjonen. Dersom, for eksempel, agens X og agens Y anvendes i en kombinasjon, kunne de administreres sekvensielt i hvilken som helst kombinasjon én eller flere ganger, for eksempel ifølge systemet X-Y-X, X-X-Y, Y-X-Y, Y-Y-X, X-X-Y-Y, osv.
Agensene, alene eller i kombinasjon, kan kombineres med hvilken som helst farmasøytisk akseptabel bærer eller medium. Følgelig kan de kombineres med materialer som ikke produserer en ugunstig, allergisk eller på annen måte uønsket reaksjon ved administrering til en pasient. Bærerne eller mediene som anvendes kan omfatte løsningsmidler, dispergeringsmidler, belegg, absorpsjonsfremmende agenser, agenser for kontrollert frigivelse, osv.
Agensene, enten i deres frie form eller som et salt, kan kombineres med en polymer slik som polymelke-glykoloic syre (PLGA), poly-(l)-melke-glykol-vinsyre (P (I) LGT) (WO 01/12233), polyglykolsyre (U.S. 3,773,919), polymelkesyre (U.S. 4,767,628); poly(e-kaprolakton) for å danne en formulering for vedvarende frigivelse. Slike formuleringer kan anvendes for implantater som frigir et peptid eller et annet agens over en periode på noen få dager, noen få uker eller mange måneder avhengig av polymeren, polymerens partikkelstørrelse og størrelsen av implantatet (se, for eksempel, U.S. 6,620,422). Andre formuleringer for vedvarende frigivelse er beskrevet i EP 0 467 389 A2, WO 93/241150, U.S. 5,612,052 ; WO 97/40085, WO 94/155587, U.S. 5,672,659, U.S. 5,893,985, U.S. 5,134,122, U.S. 5,192,741, U.S. 5,192,741 og U.S. 5,445,832. I slike formuleringer for vedvarende frigivelse er mikropartikler av peptid kombinert med mikropartikler av polymer. Ett eller flere implantater for vedvarende frigivelse kan plasseres i tykktarmen, tynntarmen eller begge.
Agensene kan administreres, for eksempel, ved intravenøs injeksjon, intramuskulær injeksjon, subkutan injeksjon eller ved andre ruter. Agensene kan administreres oralt, for eksempel, som en tablett, gel, pasta, suspensjon, væske, pulver eller i annen form. Oralt administrerte blandinger kan omfatte bindemidler, smaksstoffer og fuktighetsbevarere. Agensene kan inkluderes i tannpasta eller munnvann. Følgelig kan orale formuleringer omfatte slipemidler og skummingsmidler. Agensene kan også administreres transdermalt eller i form av et suppositorium.
Agensene kan være en fri syre eller base, eller et farmakologisk akseptabelt salt derav. Faste stoffer kan oppløses eller dispergeres umiddelbart før administrering eller tidligere. Under noen omstendigheter omfatter preparatene et konserveringsmiddel for å forhindre vekst av mikroorganismer. De farmasøytiske formene egnet for injeksjon kan omfatte sterile vandige eller organiske løsninger eller dispergeringer som omfatter, for eksempel, vann, en alkohol, et organisk løsningsmiddel, en olje eller annet løsningsmiddel eller dispergeringsmiddel (for eksempel glyserol, propylenglykol, polyetylenglykol og vegetabilske oljer). Farmasøytiske agenser kan steriliseres ved f i Ite rste ri I ise ri n g eller ved andre passende metoder.
Egnede farmasøytiske blandinger i overensstemmelse med foreliggende oppfinnelse vil generelt omfatte en mengde av de(n) aktive forbindelsen(e) med et akseptabelt farmasøytisk fortynningsmiddel eller eksipiens, slik som en steril vandig løsning, for å gi et spekter av endelige konsentrasjoner, avhengig av den tiltenkte anvendelsen. Teknikkene for fremstilling er generelt velkjente på området, som eksemplifisert ved Remington's Pharmaceutical Sciences (18th Edition, Mack Publishing Company, 1995).
Agensene beskrevet heri og agenser for kombinasjonsterapi kan pakkes som et kit som omfatter enkelt- eller multiple doser av ett eller flere agenser, som hvert er pakket eller formulert individuelt i kombinasjon. Følgelig kan ett eller flere agenser være til stede i en første beholder, og kifet kan eventuelt omfatte ett eller flere agenser i en andre beholder. Beholderen eller beholderne plasseres inne i en pakke, og pakken kan eventuelt omfatte instruksjoner for administrering eller dosering. Et kit kan omfatte ytterligere komponenter slik som sprøyter eller andre midler for å administrere agensene så vel som fortynningsmidler eller andre midler for formulering.
Analgesiske midler
Peptidene beskrevet heri kan anvendes i kombinasjonsterapi med et analgesisk middel, for eksempel en analgesisk forbindelse eller et analgesisk peptid. Det analgesiske midlet kan eventuelt være kovalent bundet til et peptid beskrevet heri. Blant anvendelige analgesiske midler er: Ca-kanal-blokkere, 5HT-reseptorantagonister (for eksempel 5HT3, 5HT4 og 5HT1-reseptorantagonister), opioid-reseptoragonister (loperamid, fedotozine og fentanyl), NK1-reseptorantagonister, CCK-reseptoragonister (for eksempel loksiglumid), NK1-reseptorantagonister, NK3-reseptorantagonister, norepinefrin-serotonin gjenopptak-inhibitorer (NSRI), vanilloid- og cannabanoid-reseptoragonister og sialorphin. Analgesiske midler innen de forskjellige klassene er beskrevet i litteraturen.
Blant de anvendelige analgesiske peptidene er sialorphin-relaterte peptider, inkludert de som omfatter aminosyresekvensen QHNPR (SEKV ID NR: 111 ), inkludert: VQHNPR (SEKV ID NR: 112 ); VRQHNPR (SEKV ID NR: 113 ); VRGQHNPR (SEKV ID NR: 114);
VRGPQHNPR (SEKV ID NR:115 ); VRGPRQHNPR (SEKV ID NR:116 );
VRGPRRQHNPR (SEKV ID NR: 117 ); og RQHNPR (SEKV ID NR: 118). Sialorphin-relaterte peptider bindes til neprilysin og hemmer neprilysin-mediert nedbrytning av substans P og Met-enkefalin. Følgelig er forbindelser eller peptider som er inhibitorer for neprilysin anvendelige analgesiske agenser som kan administreres med peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse i en tilleggsbehandling ("co-therapy") eller bundet til peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse, for eksempel ved en kovalent binding. Sialophin og relaterte peptider er beskrevet i U.S. patent 6,589,750; U.S. 20030078200 A1; og WO 02/051435 A2.
Opioid-reseptorantagonister og agonister kan administreres med peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse som tilleggsbehandling eller bundet til peptidet ifølge foreliggende oppfinnelse, for eksempel ved en kovalent binding. For eksempel er opioid-reseptorantagonister slik som nalokson, naltrexon, metylnalozone, nalmefen, cypridime, beta funaltrexamin, naloksonazine, naltrindol og nor-binaltorfimine antatt å være anvendelige ved behandling av IBS. Det kan være nyttig å formulere opioide antagonister av denne typen som en formulering med forsinket og vedvarende frigivelse slik at initiell frigivelse av antagonisten er mellom den distale tynntarmen og /eller ascendens colon. Slike antagonister er beskrevet i WO 01/32180 A2. Enkefalin pentapeptid (HOE825; Tyr-D-Lys-Gly-Phe-L-homoserin) er en agonist for mu og delta opioid-reseptorer og er antatt å være nyttig for å øke intestinal motilitet ( Eur. J. Pharm. 219: 445, 1992), og dette peptidet kan anvendes i konjunksjon med peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse. Også anvendelig er trimebutin som er antatt å binde til mu/delta/kappa opioid-reseptorer og aktivere frigivelse av motilin og modulere frigivelse av gastrin, vasoaktivt intestinalt peptid, gastrin og glukagoner. Kappa opioid-reseptoragonister slik som fedotozine, ketocyclazocine og forbindelser beskrevet i WO 03/097051 A2 kan anvendes med eller bundet til peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse. I tillegg kan mu-opioid-reseptoragonister slik som morfin, difenyloksylat, frakefamide (H-Tyr-D-Ala-Phe (F)-Phe-NH2; WO 01/019849 Al) og loperamid anvendes.
Tyr-Arg (kyotorfin) er et dipeptid som virker ved å stimulere frigivelsen av met-enkefaliner for å frembringe en analgesisk effekt ( J. Biol. Chem 262: 8165,1987). Kyotorfin kan anvendes med eller bundet til peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse.
CCK-reseptoragonister slik som caerulein fra amfibier og andre arter er anvendelige analgetiske midler som kan anvendes med eller bundet til peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse.
Conotoksin-peptider representerer en stor klasse av analgesiske peptider som fungerer ved spenningsvoktede Ca-kanaler, NMDA-reseptorer eller nikotinreseptorer. Disse peptidene kan anvendes med eller bundet til peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse.
Peptidanaloger av thymulin (FR søknad 2830451) kan ha analgesisk virkning og kan anvendes med eller bundet til peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse.
CCK(CCKa eller CCKb)-reseptorantagonister, inkludert loxiglumid og dexloxiglumid (R-isomeren av loxiglumid) (WO 88/05774) kan ha analgesisk aktivitet og kan anvendes med eller bundet til peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse.
Andre anvendelige analgesiske midler omfatter 5-HT4-agonister slik som tegaserod/zelnorm og lirexaprid. Slike agonister er beskrevet i: EP1321142 A1, WO 03/053432A1, EP 505322 A1, EP 505322 B1, US 5,510,353, EP 507672 A1, EP 507672 B1 og US 5,273,983.
Kalsium-kanal-blokkere slik som ziconotid og relaterte forbindelser beskrevet i, for eksempel, EP625162B1, US 5,364,842, US 5,587,454, US 5,824,645, US 5,859,186, US 5,994,305, US 6,087,091, US 6,136,786, WO 93/13128 A1, EP 1336409 A1, EP 835126 A1, EP 835126 B1, US 5,795,864, US 5,891,849, US 6,054,429, WO 97/01351 A1, kan anvendes med eller bundet til peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse.
Forskjellige antagonister for NK-1, NK-2 og NK-3-reseptorene (foren gjennomgang se Giardina et al.2003 Drugs 6:758) kan anvendes med eller bundet til peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse.
NK1-reseptorantagonister slik som: aprepitant (Merck & Co Inc), vofopitant, ezlopitant (Pfizer, Inc.), R-673 (Hoffmann-La Roche Ltd), SR-14033 og relaterte forbindelser beskrevet i, foreksempel, EP 873753 A1, US 20010006972 A1, US 20030109417 A1, WO01/52844 A1, kan anvendes med eller bundet til peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse.
NK-2 reseptorantagonister slik som nepadutant (Menarini Ricerche SpA), saredutant (Sanofi-Synthelabo), SR-144190 (Sanofi-Synthelabo) og UK-290795 (Pfizer Inc) kan anvendes med eller bundet til peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse.
NK3-reseptorantagonister slik som osanetant (Sanofi-Synthelabo), talnetant og relaterte forbindelser beskrevet i, for eksempel, WO 02/094187 A2, EP 876347 A1, WO 97/21680 A1, US 6,277,862, WO 98/11090, WO 95/28418, WO 97/19927, og Boden et al. ( J Med Chem. 39:1664-75, 1996) kan anvendes med eller bundet til peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse.
Norepinefrin-serotonin gjenopptak-inhibitorer slik som milnacipran og relaterte forbindelser beskrevet i WO 03/077897 A1 kan anvendes med eller bundet til peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse.
Vanilloid-reseptorantagonister slik som arvanil og relaterte forbindelser beskrevet i WO 01/64212 A1 kan anvendes med eller bundet til peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse.
Når analgetikumet er et peptid og er kovalent bundet til et peptid beskrevet heri kan det resulterende peptidet også omfatte minst ett kløyvingssete for trypsin eller chymotrypsin. Når det er til stede inne i peptidet, kan det analgesiske peptidet innledes med (dersom det er ved den karboksyterminale enden) eller etterfølges av (hvis det er ved den aminoterminale enden) et kløyvingssete for chymotrypsin eller trypsin som tillater frigivelse av det analgesiske peptidet.
I tillegg til sialorphin-relaterte peptider, omfatter analgesiske peptider: AspPhe, endomorfin-1, endomorfin-2, nocistatin, dalargin, lupron, zicnotide og substans P.
Fremgangsmåter for behandling
Peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse kan anvendes for å behandle eller forebygge kreft, prekankrøs vekst eller metastatisk vekst. De kan for eksempel anvendes for å forhindre eller behandle: kolorektal/lokal metastatisk kolorektal kreft, kreft i magetarmkanal, lungekreft, kreft eller prekankrøs vekst eller metastatisk vekst av epitelceller, polypper, bryst, kolorektal, lunge, ovarie, pankreatisk, prostata, nyre, mage, blære, lever, øsofagus og testikkelkarsinom, karsinom (for eksempel basalcelle, baso-skvamøs, Brown-Pearce, duktalt karsinom, Ehrlich tumor, Krebs, Merkelcelle, oat eller non-oat, småcellet, papillo, bronkiolo, plateepitel, T-celle, Walker), leukemi (for eksempel B-celle, T-celle, HTLV, akutt eller kronisk lymfe, mastcelle, myeloid), histiocytonia, retikulose, Hodgkins sykdom, non-Hodgkin lymfom, plasmacytom, retikuloendoteliose, adenom, adenokarsinom, adenofibrom, adenocystoma papillare lymphomatosum, ameloblastom, angiokeratom, angiolymfoid hyperplasi med eosinofili, skleroserende angiom, angiomatose, apudom, branchionia, malign karsinoid syndrom, karsinoid hjertesykdom, karsinosarkom, cementoma, kolangiom, kolesteatom, kondrosarkom, kondroblastom, kondrosarkom, kordom, choristom, kraniofaryngeom, chrondrorna, sylindrom, cystadenokarcinom, cystadenom, cystosarconia phyllodes, dysgenninoma, ependymom, Ewing-tumor, fibrom, fibrosarkom, kjempecelletumor i benvev, ganglioneurom, glioblastom, glomangiom, granulosacelletumor, gynandroblastom, hamartom, hemangioendoteliom, hemangiom, hemangiopericytom, hemangiosarkom, hepatom, øycelletumor, Kaposis sarkom, leiomyom, leiomyosarkom, leukosarkom, Leydigcelle-tumor, lipom, liposarkom, lymphaugioma, lymfangiomyom, lymfangiosarkom, medulloblastom, meningiom, mesenkymom, mesonefrom, mesoteliom, myoblastom, myom, myosarkom, myksom, myksosarkom, neurilemmom, neurom, neuroblastom, neuroepiteliom, neurofibrom, neurofibromatose, odontoblastom, osteom, osteogent sarkom, papillom, paragangliom, paraganglionia, nonchroinaffin, pinealom, rabdomyom, rabdomyosarkom, androblastoma, teratom, tekacelletumor og andre sykdommer hvor celler er blitt dysplastiske, immortaliserte eller transformerte.
Peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse kan anvendes for å behandle eller forebygge: Familiær adenomatøs polypose (FAP) (autosomalt dominant syndrom) som går forut for coloncancer, hereditær non-polypøs kolorektal cancer (HNPCC) og arvelig autosomal dominant syndrom.
For behandling eller forebyggelse av cancer, prekankrøs vekst og metastatisk vekst, kan peptidene anvendes i kombinasjonsterapi med bestråling eller kjemoterapeutiske midler, en inhibitor for en cGMP-avhengig fosfodiesterase eller en selektiv syklooksygenase-2-inhibitor (flere selektive syklooksygenase-2-inhibitorer er beskrevet i WO02062369, herved inkorporert ved referanse).
Peptidene kan være for behandling eller forebyggelse av inflammasjon. Følgelig kan de anvendes alene eller i kombinasjon med inhibitor for cGMP-avhengig fosfodiesterase eller en selektiv syklooksygenase-2-inhibitor for behandling av: organ inflammasjon, IBD (for eksempel Crohns sykdom, colitis ulcerosa), astma, nefritt, hepatitt, pankreatitt, bronkitt, cystisk fibrose, iskemiske tarmsykdommer, intestinale inflammasjoner/allergier, cøliak sykdom, proktitt, eosinofil gastroenteritt, mastocytose og andre inflammatoriske lidelser.
Peptidene kan også anvendes for å behandle eller forebygge insulinrelaterte lidelser, for eksempel: II diabetes mellitus, hyperglykemi, fedme, lidelser forbundet med forstyrrelser i glukose eller elektrolytt-transport og insulinsekresjon i celler, eller endokrine lidelser. De kan også anvendes i insulinresistens-behandling og post-kirurgisk og ikke-post kirurgisk reduksjon i insulinfølsomhet.
Peptidene kan anvendes for å forebygge eller behandle respiratoriske lidelser, inkludert inhalerings-, ventilerings- og mukus-sekresjonsforstyrrelser, pulmonal hypertensjon, kronisk obstruksjon av kar og luftveier og irreversible obstruksjoner av kar og bronkier.
Peptidene kan anvendes i kombinasjonsterapi med en fosfodiesteraseinhibitor (eksempler på slike inhibitorer kan finnes i US patent nr. 6,333,354, herved innlemmet ved referanse).
Peptidene kan også anvendes for å forebygge eller behandle: retinopati, neuropati, diabetisk angiopati og ødemdannelse
Peptidene kan også anvendes for å forebygge eller behandle neurologiske forstyrrelser, for eksempel hodepine, angst, bevegelsesforstyrrelser, agresjon, psykose, anfall, panikkangrep, hysteri, søvnlidelser, depresjon, schizoaffektive lidelser, søvnapné, oppmerksomhetssvikt-syndromer, hukommelsestap og narkolepsi. De kan også anvendes som et sedativ.
Peptidene og detekterbart merkede peptider kan anvendes som markører for å identifisere, detektere, foranstalte eller diagnostisere sykdommer og tilstander i tynntarmen, inkludert: Crohns sykdom, colitt, inflammatorisk tarmsykdom, tumorer, benigne tumorer, slik som benigne stromale tumorer, adenom, angiom, adenomatøse (pedulerende og sessile) polypper, malignante, karsinoide tumorer, endokrin celle-tumorer, lymfom, adenokarsinom, karsinom i forreste del, i midtre del og i bakerste del av tarmen, gastroinstestinal stromal tumor (GIST), slik som leiomyom, cellulært leiomyom, leiomyoblastom, og leiomyosarkom, gastrointestinal autonom nerve-tumor, malabsorpsjonssyndromer, cøliak sykdommer, divertikulose, Meckel's divertikkel, colon divertikkel, megacolon, Hirschsprungs sykdom, irritabel tarm-syndrom, mesenterisk iskemi, iskemisk kolitt, kolorektal cancer, colon polypose, polypp syndrom, intestinal adenokarsinom, Liddles syndrom, Brody myopati, infantil konvulsjon og koreoatetose.
Peptidene kan konjugeres til et annet molekyl (for eksempel et diagnostisk eller terapeutisk molekyl) for å målrette celler som bærer GCC-reseptoren, for eksempel, cystisk fibrose lesjoner og spesifikke celler som bekler fordøyelseskanalen. Følgelig kan de anvendes for å målrette radioaktive grupper eller terapeutiske andeler til tarmen for å bistå ved avbildning og diagnostisering eller behandling av kolorektal/metastatisk eller lokal kolorektal cancer og til å levere normale kopier av p53 tumorsuppressor-genet til fordøyelseskanalen.
Peptidene kan anvendes alene eller i kombinasjonsterapi for å behandle erektil dysfunksjon.
Peptidene kan anvendes alene eller i kombinasjonsterapi for å behandle lidelser i det indre øret, for eksempel, for å behandle Menieres sykdom, inkludert symptomer på sykdommen slik som svimmelhet, hørselstap, tinnitus, fornemmelse av fullhet i øret og for å opprettholde væskehomeostase i det indre øret.
Peptidene kan anvendes alene eller i kombinasjonsterapi for å behandle forstyrrelser forbundet med væske og natriumretensjon, for eksempel sykdommer i elektrolytt-vann/elektrolytt-transportsystemet inne i nyrene, tarm og urogenitalsystemet, kongestiv hjertesvikt, hypertensjon, hypotensjon, levercirrhos og nefrotisk syndrom. I tillegg kan de anvendes for å lette diurese eller kontrollere intestinal væske.
Peptidene kan anvendes alene eller i kombinasjonsterapi for å behandle lidelser forbundet med sekresjon av bikarbonat, for eksempel Cystisk fibrose.
Peptidene kan anvendes alene eller i kombinasjonsterapi for å behandle lidelser forbundet med levercelle-regenerering.

Claims (21)

1. Farmasøytisk preparat omfattende: (a) et polypeptid valgt fra: (i) et polypeptid omfattende aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Phe Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr; (ii) et polypeptid omfattende aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr; og (iii) et polypeptid omfattende aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Trp Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr; (b) et middel valgt fra: (i) en proton pumpe inhibitor; (ii) en H2 reseptorantagonist; (iii) en opioid reseptorantagonist; og (iv) en opioid reseptor-agonist; og (c) en farmasøytisk akseptabel bærer.
2. Farmasøytisk preparat ifølge krav 1 hvor opioid reseptor-agonisten er fentanyl eller morfin.
3. Farmasøytisk preparat ifølge krav 1 eller 2 hvor polypeptidet omfatter aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Phe Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr.
4. Farmasøytisk preparat ifølge krav 1 eller 2 hvor polypeptidet består av aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Phe Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr.
5. Farmasøytisk preparat ifølge krav 1 eller 2 hvor polypeptidet omfatter aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr.
6. Farmasøytisk preparat ifølge krav 1 eller 2 hvor polypeptidet består av aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr.
7. Farmasøytisk preparat ifølge krav 1 eller 2 hvor polypeptidet omfatter aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Trp Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr.
8. Farmasøytisk preparat ifølge krav 1 eller 2 hvor polypeptidet består av aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Trp Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr.
9. Fremgangsmåte for å produsere et polypeptid valgt fra: (i) et polypeptid omfattende aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Phe Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr; (ii) et polypeptid omfattende aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr; og (iii) et polypeptid omfattende aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Trp Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr; idet fremgangsmåten omfatter: (a) kjemisk syntetisering av polypeptidet; og (b) rensning av det kjemisk syntetiserte polypeptidet.
10. Fremgangsmåte for å produsere et polypeptid valgt fra: (i) et polypeptid omfattende aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Phe Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr; (ii) et polypeptid omfattende aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr; og (iii) et polypeptid omfattende aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Trp Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr; idet metoden omfatter: (a) tilveiebringing av en celle inneholdende et nukleinsyremolekyl som koder for polypeptidet; (b) dyrkning av cellen under betingelser hvor polypeptidet er uttrykt; og (c) isolering av det uttrykte polypeptidet.
11. Fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av kravene 9 til 10 hvor polypeptidet omfatter aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Phe Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr.
12. Fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av kravene 9 til 10 hvor polypeptidet består av aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Phe Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr.
13. Fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av kravene 9 til 10 hvor polypeptidet omfatter aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr.
14. Fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av kravene 9 til 10 hvor polypeptidet består av aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr.
15. Fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av kravene 9 til 10 hvor polypeptidet omfatter aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Trp Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr.
16. Fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av kravene 9 til 10 hvor polypeptidet består av aminosyresekvensen: Cys Cys Glu Trp Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr.
17. Polypeptid omfattende aminosyresekvensen Cys Cys Glu Xaa Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr hvor Xaa er valgt fra Phe, Trp eller Tyr.
18. Polypeptid ifølge krav 17 bestående av aminosyresekvensen Cys Cys Glu Xaa Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr hvor Xaa er valgt fra Phe, Trp eller Tyr.
19. Polypeptid ifølge et hvilket som helst av kravene 17 til 18 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, hvor Xaa er Phe.
20. Polypeptid ifølge et hvilket som helst av kravene 17 til 18 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, hvor Xaa er Trp.
21. Polypeptid ifølge et hvilket som helst av kravene 17 til 18 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, hvor Xaa er Tyr.
NO20130460A 2003-01-28 2013-04-05 Farmasøytisk preparat, fremgangsmåte for fremstilling og produsering av et polypeptid, samt polypeptidet. NO336768B1 (no)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US44309803P 2003-01-28 2003-01-28
US47128803P 2003-05-15 2003-05-15
US51946003P 2003-11-12 2003-11-12
PCT/US2004/002390 WO2004069165A2 (en) 2003-01-28 2004-01-28 Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20130460L true NO20130460L (no) 2005-10-26
NO336768B1 NO336768B1 (no) 2015-11-02

Family

ID=32854294

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20053864A NO334112B1 (no) 2003-01-28 2005-08-18 Renset polypeptid og farmasøytisk blanding anvendelig for behandling av gastrointestinale forstyrrelser.
NO20130460A NO336768B1 (no) 2003-01-28 2013-04-05 Farmasøytisk preparat, fremgangsmåte for fremstilling og produsering av et polypeptid, samt polypeptidet.
NO2014013C NO2014013I1 (no) 2003-01-28 2014-05-21 Linaclotide

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20053864A NO334112B1 (no) 2003-01-28 2005-08-18 Renset polypeptid og farmasøytisk blanding anvendelig for behandling av gastrointestinale forstyrrelser.

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO2014013C NO2014013I1 (no) 2003-01-28 2014-05-21 Linaclotide

Country Status (28)

Country Link
US (3) US20040266989A1 (no)
EP (3) EP1911763B1 (no)
JP (3) JP4584911B2 (no)
KR (2) KR101227626B1 (no)
CN (2) CN100589839C (no)
AT (2) ATE477268T1 (no)
AU (2) AU2004210161B2 (no)
BE (1) BE2013C032I2 (no)
BR (2) BRPI0407071B8 (no)
CA (1) CA2514507C (no)
CY (5) CY1110905T1 (no)
DE (2) DE602004007105T2 (no)
DK (3) DK1594517T3 (no)
ES (3) ES2285417T3 (no)
FR (2) FR13C0029I2 (no)
HU (1) HUS1300022I1 (no)
IL (2) IL169863A (no)
LT (1) LTC1594517I2 (no)
LU (2) LU92200I2 (no)
MX (1) MXPA05008097A (no)
NL (1) NL300593I2 (no)
NO (3) NO334112B1 (no)
NZ (2) NZ541595A (no)
PT (3) PT1911763E (no)
RU (2) RU2543350C2 (no)
SG (2) SG192300A1 (no)
SI (3) SI2246360T1 (no)
WO (1) WO2004069165A2 (no)

Families Citing this family (59)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2905585C (en) 2001-03-29 2020-02-18 Synergy Pharmaceuticals, Inc. Guanylate cyclase receptor agonists for the treatment and/or prevention of cancer or polyps
ATE477268T1 (de) 2003-01-28 2010-08-15 Ironwood Pharmaceuticals Inc Zusammensetzungen zur behandlung von magen-darm- störungen
US7304036B2 (en) 2003-01-28 2007-12-04 Microbia, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
US20060281682A1 (en) * 2003-01-28 2006-12-14 Currie Mark G Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
US7371727B2 (en) 2003-01-28 2008-05-13 Microbia, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
US7772188B2 (en) * 2003-01-28 2010-08-10 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
DK1644021T3 (da) 2003-06-13 2012-10-29 Ironwood Pharmaceuticals Inc Fremgangsmåder og sammensætninger til behandlingen af gastrointestinale sygdomme
US7494979B2 (en) * 2003-06-13 2009-02-24 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Method for treating congestive heart failure and other disorders
US20050266028A1 (en) * 2004-05-25 2005-12-01 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Compositions and methods for modulating an immune response
JPWO2006046746A1 (ja) * 2004-10-26 2008-05-22 味の素株式会社 内臓痛予防・治療剤
US20090253634A1 (en) * 2005-08-19 2009-10-08 Microbia, Inc. Methods and Compositions for the Treatment of Gastrointestinal Disorders
CN105381453B9 (zh) 2005-09-29 2019-01-11 益普生制药股份有限公司 用于刺激胃肠运动性的组合物和方法
US20090305993A1 (en) * 2006-02-24 2009-12-10 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Methods and composition for the treatment of gastrointestinal disorders
EP2129683A4 (en) 2007-02-26 2011-01-05 Ironwood Pharmaceuticals Inc METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATMENT OF HEART FAILURE AND OTHER DISORDERS
WO2008137318A1 (en) * 2007-05-04 2008-11-13 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating disorders associated with salt or fluid retention
US8969514B2 (en) 2007-06-04 2015-03-03 Synergy Pharmaceuticals, Inc. Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of hypercholesterolemia, atherosclerosis, coronary heart disease, gallstone, obesity and other cardiovascular diseases
US20100120694A1 (en) 2008-06-04 2010-05-13 Synergy Pharmaceuticals, Inc. Agonists of Guanylate Cyclase Useful for the Treatment of Gastrointestinal Disorders, Inflammation, Cancer and Other Disorders
JP5546451B2 (ja) 2007-06-04 2014-07-09 シナジー ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 胃腸の障害、炎症、癌および他の障害の処置に有用なグアニル酸シクラーゼのアゴニスト
WO2009149278A1 (en) 2008-06-04 2009-12-10 Synergy Pharmaceuticals Inc. Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of gastrointestinal disorders, inflammation, cancer and other disorders
US20110306125A1 (en) * 2008-06-30 2011-12-15 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Protein Expression Methods
EP3241839B1 (en) 2008-07-16 2019-09-04 Bausch Health Ireland Limited Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of gastrointestinal, inflammation, cancer and other disorders
NZ591713A (en) * 2008-08-15 2013-07-26 Ironwood Pharmaceuticals Inc Solid stable formulations of linaclotide for oral administration
MX2011005245A (es) 2008-11-19 2011-06-17 Forest Lab Holdings Ltd Forma cristalina de linaclotida.
US20100221329A1 (en) * 2008-12-03 2010-09-02 Synergy Pharmaceuticals, Inc. Formulations of guanylate cyclase c agonists and methods of use
ES2439998T3 (es) 2009-04-10 2014-01-27 Corden Pharma Colorado, Inc. Procedimiento para aislar linaclotida
JP2013501071A (ja) * 2009-08-06 2013-01-10 アイロンウッド ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド リナクロチドを含む処方物
WO2011020054A1 (en) 2009-08-13 2011-02-17 Ironwood Pharmaceuticals Inc. Method for modulating the pharmacodynamic effect of orally administered guanylate cyclase receptor agonists
UY33017A (es) * 2009-11-09 2011-06-30 Ironwood Pharmaceuticals Inc Tratamiento para trastornos gastrointestinales
CN102822194B (zh) * 2009-12-07 2016-10-26 硬木药品公司 用于胃肠病症的治疗
PL2536742T3 (pl) 2010-02-17 2017-11-30 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Leczenie zaburzeń żołądkowo-jelitowych
WO2011145062A1 (en) 2010-05-21 2011-11-24 Link Research & Grants Corporation Treatment of tinnitus and related auditory dysfunctions
WO2011156453A2 (en) 2010-06-09 2011-12-15 Combimab, Inc. Therapeutic peptides
EP3626253B8 (en) 2010-08-11 2022-04-20 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Stable formulations of linaclotide
US9616097B2 (en) 2010-09-15 2017-04-11 Synergy Pharmaceuticals, Inc. Formulations of guanylate cyclase C agonists and methods of use
EP2621509A4 (en) 2010-09-15 2016-08-03 Synergy Pharmaceuticals Inc FORMULATIONS OF GUANYLATE CYCLASE C AGONISTS AND METHOD OF USE
WO2012155101A1 (en) 2011-05-11 2012-11-15 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Treatments for gastrointestinal disorders
US9303066B2 (en) 2011-05-11 2016-04-05 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Treatments for gastrointestinal disorders
US9617305B2 (en) 2011-06-08 2017-04-11 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Treatments for gastrointestinal disorders
WO2012170766A1 (en) 2011-06-08 2012-12-13 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Treatments for gastrointestinal disorders
MD480Z (ro) * 2011-07-07 2012-09-30 Elvira Andon Metoda de tratament al colitei ulceroase nespecifice acute
DK2776055T3 (en) 2011-08-17 2017-03-06 Ironwood Pharmaceuticals Inc TREATMENTS FOR GASTROINTESTINAL DISORDERS
EA022546B1 (ru) * 2011-09-28 2016-01-29 Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Биоорганической Химии Им. Академиков М.М. Шемякина И Ю.А. Овчинникова Российской Академии Наук Способ торможения роста карциномы эрлиха у лабораторного животного
US20140018307A1 (en) * 2012-07-12 2014-01-16 Forest Laboratories Holdings Ltd. Linaclotide compositions
RU2528641C2 (ru) * 2012-08-22 2014-09-20 Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Способ лечения больных с синдромом диспепсии в сочетании с избыточной массой тела
CN102875655B (zh) * 2012-09-29 2014-12-17 深圳翰宇药业股份有限公司 一种合成利那洛肽的方法
US20150361139A1 (en) 2013-01-30 2015-12-17 Sandoz Ag Crystalline form of linaclotide
HK1220696A1 (zh) 2013-03-15 2017-05-12 Bausch Health Ireland Limited 鸟苷酸环化酶激动剂及其用途
JP6694385B2 (ja) 2013-08-09 2020-05-13 アーデリクス，インコーポレーテッド リン酸塩輸送阻害のための化合物及び方法
CN114716514A (zh) * 2015-05-01 2022-07-08 硬木药品公司 用于结肠清洁和胃肠病症治疗的组合物
EP3430056A4 (en) * 2016-03-15 2019-11-20 The Regents of the University of California METHOD AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT AND PREVENTION OF ALPHA-8-BETA-1-INTEGRIN ASSOCIATED DISEASES
CN107929718A (zh) * 2017-10-19 2018-04-20 南京星银药业集团有限公司 Glp‑1类似物及gc‑c受体激动剂组合物缓释制剂及其制备方法
WO2020082168A1 (en) * 2018-10-23 2020-04-30 Abk Biomedical Incorporated Delivery device
CN109467606A (zh) * 2018-11-15 2019-03-15 大连理工大学 一种大肠杆菌肠毒素STa-LTB-STb融合蛋白及其编码基因和应用
EP3972599B1 (en) 2019-05-21 2025-10-22 Ardelyx, Inc. Combination for lowering serum phosphate in a patient
RU2712761C1 (ru) * 2019-07-02 2020-01-31 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) Средство для стимуляции регенерации эндотелия легких при сочетании метаболического синдрома и хронической обструктивной болезни легких
CN111265653B (zh) * 2020-02-09 2023-05-09 华中科技大学同济医学院附属协和医院 心房利钠肽在制备炎症性肠病治疗药物中的应用
WO2021191865A1 (en) * 2020-03-26 2021-09-30 Dusa Pharmaceuticals, Inc. Management of dermal neurofibromatosis lesions
WO2023144292A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Fresenius Kabi Ipsum S.R.L. Process for the preparation of linaclotide
WO2025207484A1 (en) * 2024-03-25 2025-10-02 Merveille.Ai Use of aprepitant and cyclic dipeptide for weight control

Family Cites Families (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US73628A (en) * 1868-01-21 mitchell
US258687A (en) * 1882-05-30 Grain-binder
US32684A (en) * 1861-07-02 Stump-extkactob
US232013A (en) * 1880-09-07 Henry h
US121961A (en) * 1871-12-19 Improvement in devices for supporting pipe-cores
US266989A (en) * 1882-11-07 Automatic fire
US152868A (en) * 1874-07-07 Improvement in type-setting machines
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
IE52535B1 (en) 1981-02-16 1987-12-09 Ici Plc Continuous release pharmaceutical compositions
US6342373B1 (en) * 1983-11-21 2002-01-29 Ucp Gen-Pharma Ag Process for preparing recombinant eglin, protease inhibitor
IT1217123B (it) 1987-02-05 1990-03-14 Rotta Research Lab Derivati otticamente attivi dell acido 5 pentilammino 5 oxo pentanoico r ad attivita antagonista della colecistochinina e procedimento per la loro preparazione
GB2209937B (en) 1987-09-21 1991-07-03 Depiopharm S A Water insoluble polypeptides
CH679207A5 (no) 1989-07-28 1992-01-15 Debiopharm Sa
CA2046830C (en) 1990-07-19 1999-12-14 Patrick P. Deluca Drug delivery system involving inter-action between protein or polypeptide and hydrophobic biodegradable polymer
HUT64023A (en) 1991-03-22 1993-11-29 Sandoz Ag Process for producing aminoguanidine derivatives and pharmaceutical compositions comprising such compounds
FR2674849B1 (fr) 1991-04-02 1994-12-23 Logeais Labor Jacques Nouveaux derives de n-cyclohexyl benzamides ou thiobenzamides, leurs preparations et leurs applications en therapeutique.
CH683149A5 (fr) 1991-07-22 1994-01-31 Debio Rech Pharma Sa Procédé pour la préparation de microsphères en matériau polymère biodégradable.
US5140102A (en) 1991-09-23 1992-08-18 Monsanto Company Pentadecapeptide, guanylin, which stimulates intestinal guanylate cyclase
US5824645A (en) 1991-12-30 1998-10-20 Neurex Corporation Method of treating inflammation
CA2151741C (en) 1991-12-30 2001-12-11 Alan Justice Methods of producing analgesia and enhancing opiate analgesia
GB9211268D0 (en) 1992-05-28 1992-07-15 Ici Plc Salts of basic peptides with carboxyterminated polyesters
US5969097A (en) * 1992-06-23 1999-10-19 G. D. Searle & Co. Human guanylin
US5672659A (en) 1993-01-06 1997-09-30 Kinerton Limited Ionic molecular conjugates of biodegradable polyesters and bioactive polypeptides
DE69432459T2 (de) 1993-01-06 2003-11-27 Kinerton Ltd., Blanchardstown Ionische molekularkonjugate von bioabbaubaren polyestern und bioaktiven polypeptiden
US5395490A (en) * 1993-05-14 1995-03-07 Intertec, Ltd. Method for treating materials by the application of electromagnetic energy at resonant absorption frequencies
JP4194113B2 (ja) * 1993-10-26 2008-12-10 トーマス・ジェファーソン・ユニバーシティ 結腸直腸癌細胞に特異的に結合する組成物およびその使用方法
US5489670A (en) * 1993-10-29 1996-02-06 G. D. Searle & Co. Human uroguanylin
US5610145A (en) 1994-04-15 1997-03-11 Warner-Lambert Company Tachykinin antagonists
US5612052A (en) 1995-04-13 1997-03-18 Poly-Med, Inc. Hydrogel-forming, self-solvating absorbable polyester copolymers, and methods for use thereof
ATE359086T1 (de) 1995-06-27 2007-05-15 Eisai R&D Man Co Ltd Zusammensetzungen zur erzielung von analgesie und zur hemmung der progression neuropathischer schmerzerkrankungen
US5795864A (en) 1995-06-27 1998-08-18 Neurex Corporation Stable omega conopetide formulations
US6054429A (en) 1996-03-08 2000-04-25 Elan Pharmaceuticals, Inc. Epidural method of producing analgesia
GB9524104D0 (en) 1995-11-24 1996-01-24 Smithkline Beecham Spa Novel compounds
EA002124B1 (ru) 1995-11-24 2001-12-24 Смитклайн Бичам С.П.А. Производные хинолина
DE69731623D1 (de) 1996-04-23 2004-12-23 Ipsen Mfg Ireland Ltd Saure Polymilchsäure Polymere
US6589750B2 (en) 1997-02-20 2003-07-08 Institut Pasteur Therapeutic use of the SMR1 protein, the SMR1 maturation products, specifically the QHNPR pentapeptide as well as its biologically active derivatives
JP2001513097A (ja) 1997-02-28 2001-08-28 ビイク グルデン ロンベルク ヒエーミツシエ フアブリーク ゲゼルシヤフト ミツト ベシユレンクテル ハフツング Ｐｄｅ−抑制物質とアデニル酸シクラーゼ・アゴニストもしくはグアニル酸シクラーゼ・アゴニストとからなる相乗的組み合わせ組成物
US5893985A (en) 1997-03-14 1999-04-13 The Lincoln Electric Company Plasma arc torch
NZ329807A (en) 1997-04-23 2000-07-28 Pfizer NK-1 receptor antagonists and P receptor antagonists 2-Diarylmethyl-3-amino-1-azabicyclo[2.2.2]octane derivatives and amino substituted N-containing rings as agents for treating irritable bowel syndrome
ATE273996T1 (de) 1997-09-12 2004-09-15 Pharis Biotec Gmbh Zusammensetzung zur therapie von diabetes mellitus und fettsucht
US20010006972A1 (en) 1998-04-21 2001-07-05 Stephen A. Williams Nk-1 receptor antagonists for the treatment of symptoms of irritable bowel syndrome
IT1304152B1 (it) 1998-12-10 2001-03-08 Mediolanum Farmaceutici Srl Composizioni comprendenti un peptide ed acido polilattico-glicolicoatte alla preparazione di impianti sottocutanei aventi un prolungato
CN1189211C (zh) 1999-06-23 2005-02-16 巴斯德研究所 用于治疗人际关系异常和行为障碍的治疗方法和组合物
IL147802A0 (en) 1999-08-18 2002-08-14 Sod Conseils Rech Applic Sustained release formulation of a peptide
SE9903291D0 (sv) 1999-09-15 1999-09-15 Astra Ab New process
JP2003516316A (ja) 1999-10-06 2003-05-13 ファルマシア コーポレイション 腸癌阻止剤としてのウログアニリン
EP1225897B1 (en) 1999-11-01 2004-09-08 RHODES, John Composition for treatment of constipation and irritable bowel syndrome
AUPQ514600A0 (en) 2000-01-18 2000-02-10 James Cook University Brain injury treatment
WO2001064212A1 (en) 2000-03-01 2001-09-07 University College London Modulators of the endocannabinoid uptake and of the vallinoid receptors
EP1216707B1 (en) 2000-12-22 2005-02-09 Institut Pasteur Process for screening ligand molecules that specifically bind to the NEP binding site for the QHNPR pentapeptide
JP2004521123A (ja) 2001-02-02 2004-07-15 ファルマシア・コーポレーション 腸癌阻害のためのウログアニリンおよびシクロオキシゲナーゼ−２阻害薬の組合わせ
CA2905585C (en) 2001-03-29 2020-02-18 Synergy Pharmaceuticals, Inc. Guanylate cyclase receptor agonists for the treatment and/or prevention of cancer or polyps
EP1451211A2 (en) 2001-03-30 2004-09-01 University of Copenhagen Compositions and methods for modulating guanylyl cyclase signaling receptor (gc-c) activity and for treating meniere's disease
MY134211A (en) 2001-05-18 2007-11-30 Smithkline Beecham Corp Novel use
EP1392729A2 (de) 2001-06-05 2004-03-03 Yalcin Cetin Verwendung eines peptids, welches guanylat cyclase c aktiviert, für die behandlung von atemwegserkrankungen über die luftwege, arzneimittel, inhalationsvorrichtung und diagnoseverfahren
FR2830451B1 (fr) 2001-10-09 2004-04-30 Inst Nat Sante Rech Med Utilisation de peptides analogues de la thymuline(pat)pour la fabrication de medicaments contre la douleur
EP1321142A1 (en) 2001-12-21 2003-06-25 Novartis AG Solid pharmaceutical composition for oral administration of Tegaserod
US20040121961A1 (en) 2002-02-04 2004-06-24 Jaime Masferrer Uroguanylin and cyclooxygenase-2 inhibitor combinations for inhibition of intestinal cancer
US20030232013A1 (en) 2002-02-22 2003-12-18 Gary Sieckman Therapeutic and diagnostic targeting of cancers cells with tumor homing peptides
EP1531846A4 (en) 2002-02-27 2006-04-19 Us Gov Health & Human Serv Conjugates of ligand, linker and cytotoxic agent and related compositions and methods of use
PL223471B1 (pl) 2002-03-15 2016-10-31 Cypress Bioscience Inc Kompozycja farmaceutyczna zawierająca milnacypran do stosowania w leczeniu zespołu nadwrażliwości jelita grubego
JP2005531557A (ja) 2002-05-17 2005-10-20 メルク　パテント　ゲゼルシャフト　ミット　ベシュレンクテル　ハフトング 選択的オピエート受容体モジュレーターとして効果的な化合物の使用
US7304036B2 (en) 2003-01-28 2007-12-04 Microbia, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
ATE477268T1 (de) * 2003-01-28 2010-08-15 Ironwood Pharmaceuticals Inc Zusammensetzungen zur behandlung von magen-darm- störungen
US7772188B2 (en) 2003-01-28 2010-08-10 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
US7371727B2 (en) 2003-01-28 2008-05-13 Microbia, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
US20060281682A1 (en) 2003-01-28 2006-12-14 Currie Mark G Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
EP1599165A4 (en) 2003-02-10 2010-09-08 Univ Jefferson THE USE OF GCC LIGANDS
US20090253634A1 (en) * 2005-08-19 2009-10-08 Microbia, Inc. Methods and Compositions for the Treatment of Gastrointestinal Disorders

Also Published As

Publication number Publication date
HK1078768A1 (en) 2006-03-24
CA2514507C (en) 2012-03-20
FR13C0030I1 (fr) 2013-07-05
US8080526B2 (en) 2011-12-20
ES2285417T3 (es) 2007-11-16
WO2004069165A2 (en) 2004-08-19
SG168407A1 (en) 2011-02-28
EP2246360B1 (en) 2012-06-27
WO2004069165A3 (en) 2005-03-17
CN1795007A (zh) 2006-06-28
CY2013021I1 (el) 2020-05-29
BR122018074353B1 (pt) 2019-07-16
BRPI0407071B8 (pt) 2021-05-25
ATE477268T1 (de) 2010-08-15
JP2006516631A (ja) 2006-07-06
LU92200I2 (fr) 2024-03-21
SI2246360T1 (sl) 2012-10-30
CY2013022I1 (el) 2020-05-29
ES2350123T3 (es) 2011-01-18
CA2514507A1 (en) 2004-08-19
KR101227627B1 (ko) 2013-01-31
RU2353383C2 (ru) 2009-04-27
CN101787073A (zh) 2010-07-28
US20040266989A1 (en) 2004-12-30
SG192300A1 (en) 2013-08-30
US20110124583A1 (en) 2011-05-26
CY2013021I2 (el) 2025-07-04
MXPA05008097A (es) 2006-02-08
JP2013116910A (ja) 2013-06-13
RU2014153593A3 (no) 2018-08-06
NL300593I2 (nl) 2020-04-15
LU92200I1 (fr) 2020-06-02
ES2387848T3 (es) 2012-10-02
CY1110905T1 (el) 2015-06-10
PT1594517E (pt) 2007-07-20
EP1911763A3 (en) 2008-06-25
LU92201I2 (fr) 2013-11-22
CY1111058T1 (el) 2015-06-11
DK1594517T3 (da) 2007-10-29
JP5563384B2 (ja) 2014-07-30
PT2246360E (pt) 2012-08-31
AU2004210161B2 (en) 2009-11-26
IL221380A0 (en) 2012-09-24
RU2008147983A (ru) 2010-06-10
AU2009235993B2 (en) 2013-07-04
DK2246360T3 (da) 2012-08-13
BRPI0407071A (pt) 2006-01-24
BR122018074353B8 (pt) 2023-05-02
EP1911763A2 (en) 2008-04-16
IL169863A (en) 2012-10-31
JP2010222377A (ja) 2010-10-07
BE2013C032I2 (no) 2023-08-22
CN101787073B (zh) 2013-12-25
AU2004210161A1 (en) 2004-08-19
EP1594517A2 (en) 2005-11-16
KR20050106404A (ko) 2005-11-09
FR13C0029I1 (fr) 2013-07-05
RU2005127058A (ru) 2006-03-10
NO20053864L (no) 2005-10-26
US7704947B2 (en) 2010-04-27
NO2014013I2 (no) 2014-05-21
EP1594517A4 (en) 2006-03-29
KR101227626B1 (ko) 2013-02-01
NO2014013I1 (no) 2014-06-02
PT1911763E (pt) 2010-11-18
ATE365174T1 (de) 2007-07-15
AU2009235993A1 (en) 2009-11-26
HUS1300022I1 (hu) 2019-11-28
NO20053864D0 (no) 2005-08-18
JP5748791B2 (ja) 2015-07-15
RU2763796C2 (ru) 2022-01-11
RU2543350C2 (ru) 2015-02-27
EP2246360A1 (en) 2010-11-03
LTC1594517I2 (lt) 2020-03-10
DE602004007105D1 (de) 2007-08-02
CN100589839C (zh) 2010-02-17
NO334112B1 (no) 2013-12-09
DK1911763T3 (da) 2010-11-15
RU2014153593A (ru) 2016-07-20
DE602004007105T2 (de) 2008-02-28
SI1594517T1 (sl) 2007-10-31
FR13C0029I2 (fr) 2024-04-19
NO336768B1 (no) 2015-11-02
NZ541595A (en) 2008-08-29
US20090005534A1 (en) 2009-01-01
DE602004028678D1 (de) 2010-09-23
CY1113217T1 (el) 2016-04-13
KR20110114682A (ko) 2011-10-19
NL300593I1 (nl) 2015-10-21
EP1911763B1 (en) 2010-08-11
JP4584911B2 (ja) 2010-11-24
BRPI0407071B1 (pt) 2019-02-12
SI1911763T1 (sl) 2010-11-30
EP1594517B1 (en) 2007-06-20
NZ570134A (en) 2010-02-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2009235993B2 (en) Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
US8110553B2 (en) Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
US20060281682A1 (en) Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
RU2763796C9 (ru) Способы и композиции для лечения желудочно-кишечных расстройств
HK1078768B (en) Compositions for the treatment of gastrointestinal disorders

Legal Events

Date Code Title Description
MK1K Patent expired