MXPA04008711A

MXPA04008711A - Tratamiento y prevencion de trastornos inflamatorios.

Info

Publication number: MXPA04008711A
Application number: MXPA04008711A
Authority: MX
Inventors: Virginia M Ursin
Original assignee: Monsanto Technology Llc
Priority date: 2002-03-08
Filing date: 2003-03-07
Publication date: 2004-12-13
Also published as: CA2478245A1; EP1489915A4; US20040039058A1; ZA200407736B; JP2005519939A; CN101072509A; AU2003225692A1; EP1489915A1; US7163960B2; WO2003075670A1; BR0308290A; NZ535549A

Abstract

La invencion se refiere a metodos de tratamiento y prevencion de trastornos asociados con TNF-( y/o IL-( elevados a traves de la administracion de cantidades terapeuticas de acido estearidonico; tambien se proporcionan metodos para la regulacion deficiente de TNF-( y/o IL-( y pruebas para determinar la presencia, ausencia o cantidad de TNF-( y/o IL-( en un sujeto junto con un regimen de administracion de acido estearidonico.

Description

TRATAMIENTO Y PREVENCION DE TRASTORNOS INFLAMATORIOS REFERENCIA CRUZADA Esta solicitud reclama la prioridad de la Solicitud de Patente Provisional norteamericana Serie No. 60/365,872, presentada el 8 de marzo de 2002.

CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere de manera general a métodos para tratar y prevenir trastornos asociados con TNF-a y IL-1 ß administrando cantidades terapéuticamente efectivas de ácido estearidónico.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION La inflamación es la respuesta del cuerpo a lesiones causadas por daño mecánico, infección, o estimulación antigénica, y por lo tanto es un proceso útil para la salud y supervivencia. Sin embargo, la inflamación también puede ser inducida por estímulos inadecuados tal como estimulación autoantígena, la cual induce frecuentemente el desarrollo de enfermedades autoinmunes. La inflamación también puede contribuir significativamente a la patofisiología de tales enfermedades.

Las características de la inflamación incluyen fiebre, enrojecimiento, dolor, e hinchazón, las cuales por lo menos son parcialmente atribuibies a los efectos de citocinas sobre los vasos sanguíneos locales. Las citocinas son proteínas no anticuerpos secretadas por leucocitos inflamatorios y algunas células no leucocíticas, que actúan como mediadores intercelulares. Ellas difieren de las hormonas clásicas en que son producidas por un número de tipos de células o tejidos en lugar de glándulas especializadas. Las citocinas actúan localmente de manera paracrina o autocrina en lugar de una manera endocrina. Las citocinas proinflamatorias incluyen el factor de necrosis tumoral, tal como TNF-a; interleucínas, tales como IL-? ß, IFN-?, IL-8, IL-6; incluyendo el factor que estimula la colonia macrófaga de granulocitos (GM-CSF); todos juegan un papel importante para iniciar las respuestas inflamatorias e impiden que el proceso de inflamación continúe. Dichas citocinas, mediadores de inflamación, inducen los cambios en el diámetro vascular, torrente sanguíneo, y expresión de moléculas de adhesión sobre las células endoteliales de los vasos sanguíneos locales, con lo cual se induce la extravasación de células inmunes en los sitios de inflamación. Por ejemplo, IL-8 actúa como un quimioatractivo para neutrófilos, de esta manera permitiendo una extravasación más eficiente de estas células en los sitios de lesión. Los anticuerpos que bloquean IL-8 han demostrado tener un papel importante para IL-8 en la lesión de tejido asociada con neutrófilos en inflamación aguda (Harada et al., Molecular Medicine Today, 2:482,1996). IL-6 también es un mediador de la inflamación, especialmente en el sistema nervioso central. Los niveles elevados de IL-6 se encuentran en trastornos tales como lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, y meningitis viral y bacterial (Gruol et al., Molecular Neurobiology, 15:307, 1997). GM-CSF es una citosina proinflamatoria que está implicada en asma bronquial (Lee, J.R., Coll Physicians Lond, 32:56, 1998). IFN-? se ha asociado con la deposición aumentada de colágeno, que se observa en la enfermedad de huésped vs. injerto (Parkman, Curr. Opin. Hematol., 5:22 1998). El desarrollo de la diabetes que depende de insulina (Tipo I) se ha correlacionado con la acumulación de células-T producidas por IFN-? en isletas pancreáticas (Ablumunits, et al., J. Autoimmun., 1 1 :73 1988). TNF-a e IL-1 son sintetizados por monocitos y otras células en respuesta a una lesión, así como también a problemas infecciosos, inflamatorios o inmunológicos. Estas citocinas están implicadas en un sinnúmero de trastornos inflamatorios y pueden causar un daño significativo a través de sus acciones ejercidas. Entre las acciones biológicas de IL-1 están: activación de endotelio vascular, activación de linfocitos, destrucción de tejido local, y la promoción de acceso aumentado de células efectoras en los sitios de inflamación. Algunos de los efectos principales de TNF-a incluyen el drenaje fluido aumentado a nodos linfa y permeabilidad vascular aumentada, de esta manera induciendo una entrada aumentada de anticuerpos IgG, complementos y células a tejidos lesionados (Charles A. Janeway, Jr., Paul Travers, Mark Walport, and J. Donald Capra, Immunobiology, Fourth Edition, Elsevier Science Ltd/Garland Publising, 1999). IL-1 y TNF-a frecuentemente actúan sinergísticamente, por ejemplo, sobre endotelio vascular y sobre la síntesis de metabolitos de ácido araquidónico. La implicación de TNF-a en un número de enfermedades se ha demostrado clínicamente administrando un anticuerpo monoclonal anti-TNF-a a pacientes que sufren de artritis reumatoide, enfermedad de Chron, y colitis Ulcerativa (Rankin E.C.C., et al., British J. Rheum, 35: 334-342, 1997, and Stack, W. A. , et al., Lancet 349:521-524, 1997). Los niveles elevados de IL-1 se han demostrado en pacientes con enfermedad del intestino inflamado (IBD). La producción insuficiente de IL-1 endógeno puede contribuir a la patogénesis de IBD (Cominelli, et al., 1996, Ailment Pharmacol. Ther., 10, 49, 1996). IL-1 y TNF-a ambos están implicados en la enfermedad períodontal (Howells, Oral Dis., 1 , 266, 1995). Adicionalmente IL-1 , TNF-a, y GM-CSF han sido mostrados para estimular la proliferación de blastos de leucemia mielógena aguda (Bruserud, Leukemia Res., 20, 65, 1996). TNF-a y IL-1 , junto con IL-6 e IL-8, inician una respuesta de fase aguda observada en fiebre, malestar, mialgia, etc. (Beisel, Am. J. Clin. Nutr., 62:813, 1995), y de esta manera son observados comúnmente después de un trauma o invasión patógena. Los problemas serios asociados con el choque séptico son muchas veces debido a las acciones de TNF-a. El choque séptico, vasodilatación, permeabilidad vascular aumentada, y coagulación sanguínea son iniciados por TNF-a y frecuentemente inducen al fallo de los órganos tales como ríñones, hígado, corazón, y pulmones. La caquexia, la cual es un síntoma común de una infección prolongada o de un mal avanzado, resulta de la exposición crónica a TNF-a ó IL-6. Adicionalmente, los estudios en animales llevados a cabo en ratones y ratas han mostrado adicionalmente que la administración de TNF-a ó IL-1 inducen a la anorexia, pérdida de peso y depleción de lípidos y proteínas del cuerpo dentro de 7 a 10 días (Cerami et al., Immunol Lett, 1 1 :173, 1985; Fong et al., J. Exp. Med., 170:1627, 1989; Moldawer et al., Am. J. Physiol, 254:G450-G456, 1988; Fong et al., Am. J. Physiol, 256:R659-R665, 1989; McCarthy et al., Am. J. Clin. Nutr., 42:1 179-1 182, 1982). El rol de TNF-a y/o IL-1 se ha demostrado en la patofisiología de muchos trastornos inflamatorios. En años recientes, ha empezado a surgir una nueva evidencia relacionada con el rol de la inflamación en las enfermedades cardiovasculares, y particularmente en aterosclerosis. Esto es altamente relevante dado que las enfermedades cardiovasculares se encuentran como causa número uno de mortandad en el mundo. La aterosclerosis se caracteriza por la deposición de placas que contienen colesterol, material lipoide, y lipófagos en arterías de tamaño medio y grande. La formación de placas a menudo induce al flujo sanguíneo coronario inadecuado al miocardio ventricular, provocando condiciones tales como isquemia y dolor (angina péctoris) y muerte de músculo cardiaco (infarto al miocardio). Una de las señales de inflamación sistémica que es producida en el ser vivo es altamente sensitiva a la proteína C-reactiva (hsCRP). La hsCRP se ha mostrado a ser el predictor monovariente más fuerte del riesgo de eventos cardiovasculares (NEJM Vol. 342 no. 12:836). Se conoce que la modificación oxidativa del colesterol de baja densidad juega un papel en la deposición de placas en las arterias. Sin embargo, de acuerdo con Paul Ridker, un cardiólogo de Harvard, es altamente probable que la inflamación juega un papel importante en la aterosclerosis desestabilizando placas, con lo cual se induce a su movilización a través del torrente sanguíneo. Un soporte de esta teoría es el hecho de que la aspirina, la cual tiene propiedades de adelgazamiento de la sangre y anti-inflamatorias, disminuye las probabilidades de un ataque cardiaco, aún cuando la aspirina no tiene efecto sobre un perfil lípido o de colesterol. También se conoce que los ácidos grasos omega-3 de cadena larga tal como el ácido eicosapentanóico (EPA, 22:5, n-3) y ácido docosahexanóico (DHA, 22:6, n-3), los cuales se encuentran en el pescado y aceite de pescado, son responsables para muchos de los beneficios de salud atribuidos a los ácidos grasos poliinsaturados, que incluyen la inhibición de la inflamación. Los ácidos grasos omega-3 (n-3) son ácidos grasos poliinsaturados en los cuales se localiza un doble enlace entre el tercero y cuarto átomo de carbono del metilo final de la cadena de ácido graso. Ellos incluyen, pero no están limitados a, ácido a-linolénico (ALA, 18:3, n-3), ácido estearidónico (SDA, 18:4, n-3), ácido eicosapentanóico (EPA, mencionado anteriormente), ácido docosapentanóico (22:5, n-3) y ácido docosahexanóico (DHA, mencionado anteriormente) y similares. De manera relacionada, los ácidos grasos omega-6 ("n-6") tienen un primer doble enlace en el sexto carbono del metilo final de la cadena; e incluyen, pero no están limitados a, ácido linoleico (LA, 18:2), ácido ?-linolénico (GLA, 18:3, n-6), ácido araquidónico (AA, 20:4, n-6) y similares. El ácido araquidónico es el principal precursor de la síntesis de eicosanoides, los cuales incluyen leucotrienos, prostaglandinas, y tromboxanos, los cuales juegan un papel en el proceso de inflamación. La administración de un ácido graso omega-3, tal como SDA, ha sido mostrado para inhibir la biosíntesis de leucotrienos (Patente norteamericana No. 5,158,975). Los ácidos grasos omega-3 son escasos en una dieta occidental normal pero desempeñan un papel significativo de la ingestión de grasa en las dietas ricas en pescado de agua fría. Los estudios epidemiológicos en poblaciones esquimales de la costa, japonesas y poblaciones alemanas han demostrado que una ingestión alta de ácidos grasos omega-3 está correlacionada con una incidencia baja de enfermedades cardiovasculares inflamatorias, tales como asma y diabetes mellitus Tipo I. De esta manera, numerosos estudios han demostrado los beneficios de salud de los ácidos grasos omega-3. Sin embargo, previamente no se conocía que el SDA puede ser administrado para disminuir TNF-a e IL-? ß. Más aún, como se discutirá más adelante, el uso actual de fuentes naturales y sintéticas de SDA genera un número de problemas.

En la actualidad, existen tratamientos para trastornos inflamatorios que frecuentemente son acompañados por un sinnúmero de factores. Por ejemplo, ya que muchos de los fármacos que se dan para tratar enfermedades autoinmunes están basados en inhibir el sistema inmune de un paciente, estos fármacos también comprometen la capacidad del paciente para combatir infecciones. De manera más importante, estos fármacos pueden ser acompañados por serios efectos colaterales, y algunas veces efectos colaterales que atenían contra la vida. Por ejemplo, mientras los corticosteroides (también conocidos como glucocorticoides) tales como prednisona y metilprednisona, son efectivos en controlar artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico (SLE), enfermedad de huésped vs. injerto, y un número de otras enfermedades autoinmunes, sus efectos colaterales incluyen osteoporosis, retención de fluidos, aumento de peso, inicio o empeoramiento de diabetes, cataratas, e hipertensión. Otros grupo de fármacos, clasificados generalmente como ¡nmunosupresivos tales como metotrexato, azatioprina, ciclosporina, y leflunomida también son efectivos en regular el sistema inmune. Sin embargo, sus efectos colaterales incluyen problemas potenciales del hígado y una cantidad baja de glóbulos blancos (metotrexato), anormalidades de la sangre (azatioprina), hipertensión, perdida de función del riñon, temblores (ciclosporina), diarrea, "rashes" de la piel, y problemas del hígado (leflunomida). Un reciente estudio de anticuerpos monoclonales anti-TNF-a para el tratamiento de artritis reumatoide a probado ser un tratamiento exitoso para aliviar los síntomas de la enfermedad, sin embargo la administración es vía inyección y puede ser dolorosa y difícil para su uso. Consecuentemente, los ácidos grasos omega-3 pueden ser usados exitosamente para tratar un número de trastornos inflamatorios. Sin embargo, la provisión de EPA y DHA, los cuales muestran un gran potencial para tales tratamientos, pueden ser difíciles de obtener o bien, problemáticos. Existen diversas desventajas asociadas con la producción comercial de ácidos grasos poliinsaturados (PUFAs) a partir de fuentes naturales. Las fuentes naturales de PUFAs, tales como animales y plantas tienden a tener composiciones aceitosas altamente heterogéneas. Por lo tanto, estos aceites obtenidos a partir de estas fuentes pueden requerir una purificación exhaustiva para separar uno o más PUFAs deseados o para producir un aceite que es rico en uno o más PUFAs. Las fuentes naturales también están sujetas a fluctuaciones en disponibilidad no controlables. Las. especies de pescado pueden experimentar una variación natural o pueden ser disminuidas por sobrepesca. Los aceites de pescado, los cuales contienen niveles altos de EPA y DHA generalmente tienen sabores y olores no agradables. Estos atributos no deseables pueden ser de imposible separación económica del producto deseado, y pueden ofrecer tales productos no aceptables como suplementos alimenticios. Adicionalmente, los aceites de origen animal, y particularmente los aceites de pescado pueden acumular contaminantes ambientales. Los cultivos que producen PUFAs deseables tal como borraja, no se han adaptado para el crecimiento comercial y pueden no desarrollarse bien en monocultivos. El uso de microorganismos para la producción de PUFAs también puede representar problemas significativos. Por ejemplo, los microorganismos tales como Porphyrídium y Mortierella son difíciles de cultivar en una escala comercial. Adicionalmente, la fermentación a gran escala de organismos tal como Mortierella es costosa. Los suplementos alimenticios y las formulaciones farmacéuticas que contienen PUFAs pueden permanecer con las desventajas de la fuente de PUFAs. Los suplementos tales como cápsulas de aceite de pescado pueden contener niveles bajos del componente particular deseado y de esta manera requerir dosificaciones altas. Las dosificaciones altas dan como resultado una ingestión de niveles altos de componentes no deseados, que incluyen contaminantes. Los sabores y olores desagradables de los suplementos pueden hacer que tales regímenes sean no deseables, y pueden inhibir el cumplimiento por el paciente. Se debe tener cuidado al proveer suplementos de ácidos grasosos, ya que la sobre-adición puede dar como resultado una supresión de trayectorias biosintéticas endógenas e inducir a la competencia con otros ácidos grasos necesarios en varias fracciones de lípidos in vivo, induciendo a resultados no deseables. Por ejemplo, los esquimales que tienen una dieta alta en ácidos grasos ?-3 tienen una tendencia aumentada a sangrar (Patente norteamericana No. 4,874,603; Saynor and Varell, Medical Science 8:379 (1980)). De esta manera, es deseable proveer maneras novedosas y culturalmente aceptables en las cuales se utilicen PUFAs para regular las citocinas pro-inflamatorias. La invención descrita más adelante cumple con esta necesidad.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Los solicitantes han determinado que las cantidades relativamente pequeñas de SDA son moduladores terapéuticamente efectivos de las citocinas pro-inflamatorias tales como TNF-a e IL-1 ß. Debido a que la administración de cantidades pequeñas es terapéutica, la ingestión diaria de cantidades terapéuticamente efectivas de SDA puede ser realizada eficiente y eficazmente a través de la ingestión de alimentos ricos en SDA u otras composiciones comestibles. Por lo tanto, brevemente, un aspecto de la presente invención está dirigido a métodos para disminuir TNF- en un mamífero que exhibe concentraciones elevadas de TNF-a, en donde los métodos comprenden administrar cantidades terapéuticamente efectivas de ácido estearidónico al mamífero durante un período de tiempo efectivo para disminuir TNF-a. Adicionalmente, la presente invención provee métodos para disminuir IL-1 p en un mamífero que exhibe concentraciones elevadas de IL-1 ß, en donde los métodos comprenden administrar cantidades terapéuticamente efectivas de ácido estearidónico al mamífero durante un período de tiempo efectivo para disminuir IL-1 ß. En otro aspecto, la presente invención está dirigida a métodos para disminuir TNF-a y/o I L- 1 ß en un mamífero que exhibe concentraciones elevadas de TNF-a y/o IL-? ß, en donde los métodos comprenden administrar cantidades terapéuticamente efectivas de ácido estearidónico al mamífero durante un período de tiempo efectivo para disminuir TNF-a y/o IL-1 ß . En una modalidad de la invención, las concentraciones elevadas de TNF-a y/o IL- ß están presentes en un mamífero debido a un trastorno inflamatorio. El trastorno puede, en una modalidad, comprender una enfermedad cardiovascular, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedad de Crohn, enfermedad del intestino inflamado, lupus eritematoso sistémico, polimiositis, choque séptico, enfermedad de huésped vs. injerto, asma, rinitis, psoriasis, caquexia asociada con cáncer, y eccema. En otra modalidad de la invención, el mamífero es un humano. En una modalidad adicional de la invención, una cantidad terapéuticamente efectiva de ácido estearidónico administrada como se describe en la presente, es de aproximadamente 0.1 g/día a aproximadamente 10 g/día. En ciertas modalidades, las cantidades terapéuticas son de aproximadamente 0.25 g/día a aproximadamente 8 g/día, de aproximadamente 0.5 g/día a aproximadamente 5 g/día o aproximadamente 1.5 g/día. En otro aspecto más de la invención, los trastornos asociados con TNF-a y/o I L-1 ß elevados pueden ser tratados por los métodos descritos en la presente que incluyen, pero no están limitados a: una enfermedad cardiovascular, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedad de Crohn, enfermedad del intestino inflamado, lupus eritematoso sistémico, polimiositis, choque séptico, enfermedad de huésped vs injerto, asma, rinitis, psoriasis, caquexia asociada con cáncer, y eccema. Preferiblemente, los trastornos inflamatorios comprenden una enfermedad cardiovascular y artritis reumatoide, y más preferiblemente, la enfermedad cardiovascular es ateroesclerosis. En otra modalidad de la invención, las cantidades terapéuticamente efectivas de ácido estearidonico comprenden cantidades que son efectivas en alterar la concentración en la sangre de TNF-a e IL-1 ß. En otro aspecto más, la presente invención involucra métodos para prevenir un trastorno inflamatorio, en donde el trastorno inflamatorio se caracteriza por niveles elevados de TNF-a y/o IL-1 ß en un mamífero en necesidad de dicho tratamiento que comprende administrar al mamífero cantidades terapéuticamente efectivas de ácido estearidonico durante un período de tiempo efectivo para prevenir el trastorno inflamatorio. La presente invención también provee métodos para alterar el nivel de ácido eicosapentanóico en un humano, los métodos comprenden administrar cantidades terapéuticamente efectivas de ácido estearidonico. En otra modalidad, la presente invención involucra una prueba que comprende un análisis de sangre y/o tejido de un sujeto para determinar la presencia, ausencia o cantidad de TNF-a y/o IL-1 ß, en donde el análisis se lleva a cabo antes, durante o después de la administración de ácido estearidónico al sujeto.

En otra modalidad más de la presente invención, se usa una prueba para determinar una cantidad terapéuticamente efectiva de ácido estearidónico que será administrada a un sujeto. En otro aspecto más, la invención provee un método para 5 disminuir la proteína C-reactiva en un mamífero que tiene concentraciones elevadas de proteína C-reactiva, que comprende identificar a un mamífero que tiene concentraciones elevadas de proteína C-reactiva y administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de ácido estearidónico (18:4, n-3) durante un período de tiempo efectivo para disminuir la proteína C-' 10 reactiva, con lo cual se disminuye la proteína C-reactiva. En ciertas T - modalidades de la invención, el sujeto puede comprender adicionalmente niveles elevados de TNF-ot y/o ??_-1 ß y estos niveles pueden ser disminuidos administrando el SDA. En todavía otro aspecto más, la invención provee un método. 15 para prevenir un trastorno inflamatorio caracterizado por niveles elevados de proteína C-reactiva en un mamífero en necesidad de tal tratamiento que comprende identificar un mamífero con riesgo de un trastorno inflamatorio caracterizado por niveles elevados de proteína C-reactiva y administrar al mamífero una cantidad de ácido estearidónico (18:4, n-3) durante un período 20 de tiempo efectivo para prevenir el trastorno inflamatorio caracterizado por niveles elevados de proteína C-reactiva. En ciertas modalidades de la invención, el trastorno inflamatorio adicionalmente puede ser caracterizado por niveles elevados de TNF-a y/o ??_-1 ß y estos niveles se pueden disminuir administrando el SDA. En todavía otro aspecto más, la invención provee un método para reducir o eliminar los efectos deletéreos de una condición asociada con un nivel elevado de proteína C-reactiva que comprende explorar al sujeto para identificar la presencia elevada de proteína C-reactiva y administrar al sujeto una cantidad efectiva de ácido estearidónico (18:4, n-3) durante un período de tiempo suficiente para disminuir el nivel de proteína C-reactiva, en donde la proteína C-reactiva se disminuye y en donde los efectos deletéreos de la condición se reducen o eliminan. En ciertas modalidades de la invención, la condición se puede caracterizar adicionalmente por niveles elevados de TNF-a y/o IL-? ß y estos niveles se pueden disminuir administrando el SDA, en donde los efectos deletéreos de la condición se reducen o eliminan. Otros aspectos y características serán aparentes y señalados más adelante.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS La Figura 1A representa los cambios en los ácidos grasos n-3 de cadena larga en eritrocitos y la Figura 1 B representa lo mismo en los fosfolípídos de plasma que son resultado de la ingestión de 1.5 g/día de los ácidos grasos de prueba, EPA, SDA y ALA. "*" indica los valores significativamente diferentes del valor de situación basal para cada ácido graso, p<0.05.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Acrónimos: PUFA es una abreviación para ácido graso poliinsaturado. SDA es una abreviación para ácido estearidónico. EPA es una abreviación para ácido eicosapentanóico. DHA es una abreviación para ácido docosahexanóico. TNF es una abreviación para factor de necrosis tumoral. De esta manera, TNF-a es factor de necrosis tumoral-a, etc. IL es una abreviación para interleucina. De esta manera, IL- es lnterleucina-1 , etc. Los términos "tratar" y "para tratar" como se usan en la presente, significan aliviar síntomas, eliminar la causa de un trastorno inflamatorio ya sea temporal o permanentemente, retardar la apariencia de síntomas y/o progresión del trastorno, o prevenir enfermedad (es decir, tratar profilácticamente). El termino "tratamiento" incluye alivio, eliminación de la causa o prevención de un trastorno inflamatorio. Para métodos de prevención, un sujeto que será tratado generalmente es un animal con riesgo de una condición inflamatoria debida a predisposición genética, dieta, exposición a agentes que causan trastornos, exposición a agentes patógenos, y similares.

El término "mamífero" como se usa en la presente, se refiere a cualquier animal clasificado como un mamífero, que incluye humanos, animales domésticos y de granja, y animales de zoológico y de compañía, tales como perros, caballos, gatos, ganado, etc. Preferiblemente, el mamífero es un humano. El término "trastorno inflamatorio'' como se usa en la presente, se refiere a cualquier trastorno que es ya sea causado por inflamación o cuyos síntomas incluyen inflamación. A manera de ejemplo, un trastorno inflamatorio causado por inflamación puede ser un choque séptico, y un trastorno inflamatorio cuyos síntomas incluyen inflamación puede ser artritis reumatoide. Los trastornos inflamatorios de la presente invención incluyen pero no están limitados a: una enfermedad cardiovascular, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedad de Crohn, enfermedad del intestino inflamado, lupus eritematoso sistémico, polimiositis, choque séptico, enfermedad de. huésped vs. injerto, asma, rinitis, psoriasis, caquexia asociada con cáncer, y eccema. Como se usa en la presente, el término "disminución" ó "disminuir" significa disminuir una concentración de una sustancia biológica, en donde tal disminución se puede obtener por cualquiera de los mecanismos biológicos, tal como, por ejemplo, inhibición de la síntesis de la sustancia biológica. Como se usa en la presente, una "cantidad efectiva" significa la dosis o cantidad que será administrada a un paciente, y la frecuencia de administración al paciente, las cuales se determinan fácilmente por un experto en la técnica con conocimientos medios mediante el uso de técnicas conocidas y observando resultados obtenidos bajo circunstancias análogas para tratar efectivamente una enfermedad o condición dados los principios dilucidados en la presente. Para determinar la cantidad o dosis efectiva, se consideran un número de factores mediante un diagnóstico, que incluyen pero que no están limitados a, la potencia y duración de acción de los compuestos utilizados; la naturaleza y severidad de la enfermedad que será tratada, así como también el sexo, edad, peso, salud en general y respuestas individuales del paciente que será tratado; y otras circunstancias relevantes conocidas para un experto en la técnica. La frase "terapéuticamente efectiva" indica la capacidad de una gente para prevenir, o mejorar la severidad de, el trastorno, mientras que evita efectos colaterales adversos asociados típicamente con terapias alternativas.. La frase "terapéuticamente efectiva" será entendida a ser equivalente a la frase "efectiva para el tratamiento o prevención", y ambas son propuestas para calificar, por ejemplo, la cantidad de ácido estearidónico utilizado en los métodos de la presente invención que obtendrá el objetivo de mejora en la severidad de un trastorno inflamatorio o prevenir el trastorno mientras se evitan efectos colaterales adversos asociados típicamente con terapias alternativas. El término "terapéuticamente aceptable" se usa en la presente para explicar que un sustantivo modificó tal como sea apropiado para usarse en un producto farmacéutico particular. Los cationes farmacéuticamente aceptables incluyen iones metálicos e iones orgánicos. Los iones metálicos más preferidos incluyen, pero no están limitados a, sales de metal alcalino apropiadas, sales de metal alcalinotérreo y otros iones metálicos fisiológicamente aceptables. Ejemplos de iones incluyen aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio y zinc en sus valencias usuales. Los iones orgánicos preferidos incluyen aminas terciarias protonadas y cationes de amonio cuaternario, que incluyen en parte, trimetilamina, dietilamina, ?,?'-dibenciletilendiamina, cloroprocaina, colina, dietanolamina, etilendiamina, meglumina, (N-metilenglucamina) y procaina. Ejemplo de ácidos farmacéuticamente aceptables incluyen, sin limitación, ácido clorhídrico, ácido yodhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido metansulfónico, ácido acético, ácido fórmico, ácido tartárico, ácido maleíco, ácido mélico, ácido cítrico, ácido isocítrico, ácido succínico, ácido láctico, ácido glucónico, ácido glucurónico, ácido pirúvico, ácido oxalacético, ácido fumárico, ácido propiónico, ácido aspártico, ácido glutámico, ácido benzoico y similares. Los excipientes farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no están limitados a, solución salida fisiológica de Ringer, tocoferol, solución de fosfato o regulador de pH, solución salina reguladora de pH, y otros vehículos conocidos en la técnica. Las composiciones farmacéuticas también pueden incluir estabilizadores, antioxidantes, colorantes y diluyentes. Los vehículos y aditivos farmacéuticamente aceptables se seleccionan de tal manera que se minimizan los efectos colaterales del compuesto farmacéutico y el desempeño del compuesto no se cancela o inhibe en tal grado que el tratamiento sea inefectivo. Como se usa en la presente, PUFAs n-3 se refiere a un ácido graso poliinsaturado omega-3, ya sea que ocurre naturalmente o que se produce sintéticamente. Se debería notar que existen varias convenciones de nombres para describir ácidos grasos insaturados. Por ejemplo, los nombres tale como: ácido a-linolénico algunas veces son usados para describir ácidos grasos poliinsaturados. Las abreviaciones que usan tres designaciones de letras tal como ALA (para ácido a-linolénico) se usan comúnmente en la técnica para identificar un ácido graso poliinsaturado. Otra convención basada en la posición del carbono con relación al primer doble enlace a partir de la porción carboxilica del ácido graso, usa el símbolo griego ? (delta) para identificar dicho carbono (por ejemplo, 18:3?9,12,15). El sistema de nomenclatura IUPAC también numera los carbonos a partir del carboxilo final de un ácido graso (por ejemplo, ácido cis 9,12, 5-octadecatrienóico). Actualmente, una convención usada más fácilmente usa el número de carbonos en la cadena seguido de una coma, y posteriormente el símbolo griego ? (omega) o la letra "n" para describir el primer doble enlace a partir del metilo final. De esta manera, ALA (ácido cis 9,12,15-octadecatrienóico) también se puede representar como 18:3, ?-3 ó 18:3, n-3 (18 carbonos, tres dobles enlaces, el primer doble enlace se presenta en el tercer carbono a partir del metilo final). Se debería entender que un nombre asociado con un ácido graso en la presente no está previsto para poner una limitación en la misma, y la nomenclatura alternativa para describir una molécula de ácido graso poliinsaturado, diferente del nombre usado en la presente, es previsto para estar dentro del alcance de la presente invención. 5 El ácido estearidónico (18:4, n-3) es un ácido graso poliinsaturado omega-3, producido por la acción del ácido graso delta-6 que no está saturado en el ácido a-linolénico (18:3, n-3). Generalmente ese conoce en la técnica que ingerir ácidos grasos omega-3 de cadena larga tal como ácido eicosapentanóico (EPA) y ácido docosahexanóico (DHA), los 10 cuales se encuentran en el pescado y en el aceite de pescado dan como > resultado muchos beneficios en la salud. Por ejemplo, se describen ciertos beneficios de grasas omega-3 en enfermedades cardiovasculares, por ejemplo, en Simopoulos, A.P., Can. J. Physiol. Pharmacol, 75:234 (1997). Los niveles de EPA en tejidos se pueden aumentar no sólo por la ingestión de 15 EPA sino también de ácido a-linolénico (ALA), el cual se convierte en EPA en el cuerpo mediante la reacción de delta-6 no saturado. Sin embargo, esta conversión es altamente ineficiente (Mantzioris et al., Dietary substitution with an a-linolenic acid-rich vegetable oil increases eicosapentaenoic acid concentrations in tissues, Am. J. Clin. Nutr.; 59:1304-1309 (1994)). Se cree 20 que la razón de esta ineficiencia es porque delta-6 no saturado es ineficiente in vivo, de esta manera haciendo la conversión de ALA en EPA una reacción que limita la velocidad. Consecuentemente, para aumentar los niveles de EPA en tejidos, se tendrían que consumir grandes cantidades de ALA. Sin embargo, los solicitantes han descubierto que el consumo de cantidades moderadas de SDA provee una fuente eficiente de EPA. Los solicitante han determinando que SDA es aproximadamente cuatro veces más eficiente que ALA en elevar los niveles de EPA en los tejidos en humanos, de esta manera determinando las propiedades de conversión de SDA en EPA en humanos y demostrando adicionalmente los beneficios potenciales a la salud por SDA. En los mismos estudios, la administración de SDA también fue capaz de aumentar los niveles de ácido docosapentanóico (DPA) en tejidos, el cual es un producto de elongación de EPA. Los PUFAs también se pueden encontrar en un planta o microorganismo tal como ácidos grasos libres o en formas conjugadas tales como acilgliceroles, fosfolípidos, sulfolípidos o glicolípidos, y se pueden extraer a partir de la célula a través de una variedad de medios bien conocidos en la técnica. Tales medios pueden incluir la extracción con solventes orgánicos, sonificación, extracción de fluidos supercríticos usando por ejemplo dióxido de carbono, y medios físicos tal como presión, o combinaciones de los mismos. Es de particular interés la extracción con metanol y cloroformo. Cuando es deseable, la capa acuosa se puede acidificar para protonar porciones cargadas negativamente y con eso aumentar el reparto de los productos deseados en la capa orgánica. Después de la extracción, los solventes orgánicos se pueden remover mediante evaporación bajo una corriente de nitrógeno. Cuando se aislan en formas conjugadas, los productos se pueden separar enzimática o químicamente para liberar el ácido graso libre o un conjugado complejo de menor interés, y posteriormente pueden ser sujetos a manipulaciones adicionales para producir un producto final deseado. De manera deseable, las formas conjugadas de ácidos grasos se separan con hidróxido de potasio. Si se necesita purificación adicional, se pueden emplear métodos estándares. Tales métodos pueden incluir extracción, tratamiento con urea, cristalización fraccionada, HPLC, destilación fraccionada, cromatografía de gel de sílice, centrifugación a alta velocidad o destilación, o combinaciones de estas técnicas. La protección de grupos reactivos, tales como los grupos ácido o alquenilo, se pueden hacer en cualquier etapa a través de técnicas conocidas, por ejemplo alquilación o yodonación. Los métodos usados incluyen metilación de los ácidos grasos para producir ésteres metílicos. De manera similar, los grupos protectores también se pueden remover en cualquier etapa. De manera deseable, la purificación de las fracciones que contienen GLD, SDA, ARA, DHA, y EPA se pueden acompañar de un tratamiento con urea y/o destilación fraccionada. Para suplementos alimenticios, los PUFAs purificados o derivados de los mismos, se pueden incorporar dentro de aceites para cocinar, grasas o margarinas formuladas de manera que en el uso normal el recipiente recibiría la cantidad deseada. Los PUFAs también se pueden incorporar dentro de fórmulas infantiles, suplementos nutricionales, u otros productos alimenticios y se pueden usar como agentes anti-inflamatorios o agentes que disminuyen colesterol. De manera alternativa, los PUFAs se suministrar a un sujeto en donde el sujeto consume alimentos que tienen niveles elevados de SDA. El ácido estearidónico se puede administrar alimentando a un sujeto, una planta, parte (s) de plantas o derivados comestibles de los mismos. Tal planta puede producir ácido estearidónico naturalmente, o puede ser sometida a ingeniería genética para SDA aumentado. Los ejemplos de tales plantas que tienen SDA aumentado que se pueden usar con la invención se describen en la Patente norteamericana No. 6,459,018, cuya descripción se integra a la presente como referencia. Para uso farmacéutico (humano o veterinario), las composiciones generalmente se administran oralmente pero también se pueden administrar por cualquier ruta mediante la cual dichas composiciones se pueden absorber exitosamente, por ejemplo, parenteralmente (es decir, de manera subcutánea, intramuscular o intravenosa), de manera rectal o vaginal o tópica, por ejemplo, como una loción o pomada para la piel. Los PUFAs de la presente invención se pueden administrar solos o en combinación con un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable. Cuando son disponibles, las cápsulas de gelatina pueden ser una forma preferida de administración oral. Como se expuso anteriormente, el suplemento alimenticio también puede proveer mediante una ruta oral de administración. Los ácidos insaturados de la presente invención se pueden administrar en formas conjugadas, o como sales, ésteres, amidas, o profármacos de los ácidos grasos. Cualquier sal farmacéuticamente aceptable está incluida en la presente invención; especialmente son preferidas las sales de sodio, potasio o litio. También están incluidas las sales de N-alquilpolihidroxamina, tal como N-metilglucamina, que se encuentra en la publicación de PCT WO 96133155. Los ésteres preferidos comúnmente son ésteres etílicos. Como sales sólidas, los PUFAs también se pueden administrar en forma de tableta. Para administración intravenosa, los PUFAs o derivados de los mismos se pueden incorporar dentro de formulaciones comerciales tal como Intralípidos. El perfil de ácido graso en el plasma de un adulto normal típico comprende de 6.64 a 9.46% de ARA, de 1.45 a 3.1 1 % de DGLA, y de 0.02 a 0.08% de GLA. Estos PUFAs, o sus precursores metabólicos, se pueden administrar, ya sea solos o en mezclas con otros PUFAs, para obtener un perfil de ácido graso normal en un paciente. Cuando se desee, los componentes individuales de las formulaciones se pueden proveer individualmente en forma de caja, para uso solo o múltiple. Una dosificación de un ácido graso particular puede ser de 0.1 mg a 20 g, ? incluso 100 g diariamente. Sin embargo, tales cantidades varían mucho entre individuos particulares. Aquellos que sufren trastornos inflamatorios, tal como artritis reumatoide, necesitan cantidades particulares de ciertos PUFAs, tal como SDA. Los solicitantes han descubierto que el consumo de SDA induce a una disminución en los niveles sanghíneos de citocinas pro-inflamatorias TNF-a y IL-? ß. Consecuentemente, la presente invención provee métodos para disminuir TNF-a y/o IL-? ß, así como también proteína C-reactiva. Tales métodos comprenden, en una modalidad, administrar a un mamífero que exhibe concentraciones elevadas de TNF-a y/o IL-? ß y/o proteína C-reactiva cantidades terapéuticamente efectivas de SDA durante un período de tiempo efectivo para disminuir TNF-a y/o IL-1 ß y/o proteína C-reactiva. Esta es la primera demostración de que SDA puede disminuir estas citocinas. La presente invención también involucra la administración de cantidades terapéuticamente efectivas de ácido estearidonico a sujetos que pueden no exhibir concentraciones mayores que las normales de TNF-a y/o IL-1 ß y/o proteína C-reactiva, pero que están en riesgo de desarrollar un trastorno inflamatorio. Tales cantidades terapéuticamente efectivas serán aparentes para un experto en la técnica con base en los resultados descritos en la presente. Las concentraciones de TNF-a y/o IL-1 ß y/o proteína C-reactiva en humanos que no son sujetos de un trastorno inflamatorio son conocidas en las ciencias técnicas y/o se pueden determinar fácilmente sin una experimentación exhaustiva. Para otros mamíferos, las concentraciones de estás dos citocinas son ya sea conocidas en la técnica o pueden ser determinadas por un experto en la técnica con conocimientos medios sin una experimentación exhaustiva. Las concentraciones más altas que las normales de TNF-a y/o IL-1 ß y/o proteína C-reactiva en un paciente a menudo pueden ser resultado de un trastorno inflamatorio, que incluye pero que no está limitado a: una enfermedad cardiovascular, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedad de Crohn, enfermedad del intestino inflamado, lupus eritematoso sistémico, polimiositis, choque séptico, enfermedad de huésped vs. injerto, asma, rinitis, psoriasis, caquexia asociada con cáncer, y eccema. En una modalidad preferida, los trastornos inflamatorios tratados comprenden una enfermedad cardiovascular y artritis reumatoide, y más preferiblemente la enfermedad cardiovascular es aterosclerosis. La cantidad de SDA que es terapéuticamente efectiva depende de múltiples factores, tal como la gravedad del trastorno inflamatorio a ser tratado, hábitos alimenticios de un paciente, la edad del paciente, presencia de condiciones adicionales, etc. Un sujeto que consume cantidades relativamente pequeñas de SDA en su dieta normal necesitará una cantidad, más grande que uno que consume típicamente una cantidad más grande de SDA. Un experto en la técnica podría saber como determinar la cantidad terapéuticamente efectiva para un paciente con base en estas consideraciones. El período de tiempo terapéuticamente efectivo puede variar significativamente dependiendo del trastorno del paciente. De esta manera, una inflamación que es resultado de una infección bacterial puede requerir menos tiempo para ser tratada que una condición crónica o de larga duración. Por ejemplo, un trastorno crónico tal como artritis reumatoide puede requerir un tratamiento más largo que el choque séptico. La duración del tratamiento puede ser determinada por un experto en la técnica sin una experimentación exhaustiva. Un experto en la técnica puede utilizar la prueba de la presente invención como se discute más adelante, para determinar un período de tiempo terapéuticamente efectivo. Aquellos expertos en la técnica apreciarán que las dosificaciones también se pueden determinar con la guia de Goodman & Goldman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, Ninth Edition Appendix II, pp. 1707-171 1. Sin embargo, la cantidad terapéuticamente efectiva de ácido estearidónico que se puede administrar a un paciente con niveles elevados de TNF-a y/o IL-1 ß y/o proteína C-reactiva generalmente deben variar de aproximadamente 0.1 g/día a aproximadamente 10 g/día. Preferiblemente, dichas cantidades terapéuticas son de aproximadamente 0.25 g/día a aproximadamente 8 g/día. Más preferiblemente, dichas cantidades terapéuticas son de aproximadamente 0.5 g/día a aproximadamente 5 g/día. La cantidad terapéutica más preferida es de aproximadamente 1.5 g/día. La dosificación particular variará generalmente dentro de esta escala, dependiendo de la forma de dosificación empleada y la ruta de administración utilizada. La formulación exacta, la ruta de administración y la dosificación pueden ser elegidas por el médico particular de acuerdo con la condición del paciente. (Ver por ejemplo, Fingí et al., 1975, en "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Ch. 1 , p.1 ). El SDA se puede administrar a un paciente mediante rutas parenteral y enteral. La administración parenteral incluye administración subcutánea, intramuscular, intradérmica, intramamaria, intravenosa, y otros métodos de administración conocidos en la técnica. La administración enteral incluye soluciones, tabletas, cápsulas de liberación sostenida, cápsulas recubiertas entéricas, y jarabes. Cuando se administra, la composición farmacéutica puede estar a o cerca de la temperatura corporal. En una modalidad preferida, el SDA se administra oralmente vía ingestión de alimentos enriquecidos con ácido estearidónico. Los alimentos que se pueden utilizar para practicar la presente invención incluyen, pero no están limitados a: bebidas, (incluyendo bebidas refrescantes, bebidas carbonatadas, bebidas listas para mezclar y similares), alimentos de infusión (por ejemplo, frutas y verduras), salsas, condimentos, alimentos, aderezos para ensaladas, jugos de frutas, jarabes, postres (incluyendo budines, gelatina, merengues y rellenos, artículos horneados y postres congelados tales como helados y sorbetes), chocolates, dulces, productos congelados suaves (tales como cremas congeladas suaves, helados congelados suaves, y yogurts, coronamientos congelados suaves, tales como coronamientos de crema batida lácteos o no lácteos), aceites y productos emulsificados (tales como manteca, margarina, mayonesa, mantequilla, aceite para cocinar, y aderezos para ensaladas), carnes preparadas (tal como salchichas), alimento de humedad intermedia (por ejemplo, arroz, comida para perro) y similares. Los alimentos pueden ser enriquecidos en SDA mediante métodos convencionales tal como obtener SDA y distribuirlo a través de todo el alimento, para lo cual se agrega mediante disolución, o mediante suspensión, o en una emulsión. Por ejemplo, el SDA se puede disolver en un agente solubilizante comestible, o se puede mezclar con un agente solubilizante comestible, una cantidad efectiva de un dispersante, y opcionalmente una cantidad efectiva de un antioxidante. Ejemplos de antioxidante útiles incluyen, pero no están limitados a: tocoferoles, tales como a-tocoferol, ácido ascórbico, antioxidantes sintéticos económicos y mezclas de los mismos. Los alimentos también se pueden preparar a partir de plantas transgénicas modificadas con SDA aumentado. Ejemplo de tales plantas que tienen SDA aumentado que se pueden usar con la invención son descritas en la Patente norteamericana No. 6,459,018, cuya descripción se incorpora en la presente como referencia. Los vehículos efectivos para preparar emulsiones o suspensiones incluyen agua, alcoholes, polioles y mezclas de los mismos, ejemplos de dispersantes útiles incluyen, pero no están limitados a: lecitina, otros fosfolípidos, sulfato de lauril sódico, ácidos grasos, sales de ácidos grasos, ésteres de ácidos grasos, otras moléculas como detergentes, y mezclas de los mismos. De manera alternativa, los alimentos se pueden preparar mediante un método que comprende obtener SDA y mezclarlo con un agente solubilizante comestible y con una cantidad efectiva de un dispersante. De nuevo, el agente solubilizante comestible puede incluir, pero no está limitado a: monoglicéridos, diglicéridos, triglicéridos, aceites vegetales, tocoferoles, alcoholes, polioles, o mezclas de los mismos, y el dispersante puede incluir, pero no está limitado a: lecitina, otros fosfolípidos, sulfato de lauril sódico, ácidos grasos, sales de ácidos grasos, ésteres de ácidos grasos, otras moléculas como detergentes y mezclas de los mismos.

La capacidad para disminuir TNF-a y/o ??_-1 ß consumiendo SDA demuestra el potencial del uso del SDA para tratar y prevenir trastornos inflamatorios. Consecuentemente, la invención provee adicionalmente métodos para tratar un trastorno inflamatorio en un mamífero en necesidad de tal tratamiento, en donde dicho método comprende administrar al mamífero cantidades terapéuticamente efectivas de ácido estearidónico durante un período de tiempo terapéuticamente efectivo. La invención también provee métodos para prevenir una enfermedad inflamatoria administrando una cantidad terapéuticamente efectiva de SDA a un mamífero con riesgo de desarrollar una enfermedad inflamatoria. Los mamíferos con riesgo de desarrollar una enfermedad inflamatoria son identificados fácilmente por un experto en la técnica y no requieren de una experimentación exhaustiva. En una modalidad, dicho trastorno inflamatorio comprende una enfermedad cardiovascular, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedad de Crohn, enfermedad del intestino inflamado, lupus eritematoso sistémico, polimiositis, choque séptico, enfermedad de huésped vs. injerto, asma, rinitis, psoriasis, caquexia asociada con cáncer, y eccema. Preferiblemente, los trastornos inflamatorios comprenden una enfermedad cardiovascular y artritis reumatoide, y más preferiblemente dicha enfermedad cardiovascular es aterosclerosis. En otra modalidad preferida, el mamífero es un humano que tiene necesidad del tratamiento o prevención de un trastorno inflamatorio. Un mamífero con necesidad del tratamiento será reconocido por un experto en la técnica, así como un mamífero con necesidad de la prevención de un trastorno inflamatorio. Es otro objeto de la presente invención, proveer un método en donde una cantidad terapéuticamente efectiva de ácido estearidónico se administra a pacientes con necesidad de tratamiento o de prevención de un trastorno inflamatorio. En una modalidad preferida, dicha cantidad terapéutica comprende una cantidad efectiva para disminuir la concentración en la sangre de citocinas pro-inflamatorias. En una modalidad, las citocinas pro-inflamatorias comprenden TNF-a e IL-1 ß . En otra modalidad, se disminuye la concentración de TNF-a, y aún en otra modalidad, se disminuye la concentración de IL-? ß. En otra modalidad, las cantidades terapéuticas de SDA varían de aproximadamente 0.1 g/día a aproximadamente 10 g/día. Más preferiblemente, las cantidades terapéuticas de SDA varían de aproximadamente 0.25 g/día a aproximadamente 8 g/día. Aún más preferiblemente, las cantidades terapéuticas de SDA varían de aproximadamente 0.5 g/día a aproximadamente 5 g/día. Más preferiblemente, las cantidades terapéuticas son de aproximadamente 1.5 g/día. Se debería notar que la forma de dosificación y cantidad de SDA a ser administrada se puede establecer fácilmente haciendo referencia a tratamientos conocidos que involucran EPA o regímenes profilácticos. Como se mencionó previamente, la cantidad de SDA que se administra y el régimen de dosificación para tratar un trastorno inflamatorio con SDA depende de una variedad de factores, y de esta manera, pueden variar ampliamente. La dosificación generalmente será menor si los compuestos se administran localmente en lugar de sistemáticamente, y para la prevención en lugar del tratamiento. Tales tratamientos se pueden administrar tanto como sea necesario y durante el período de tiempo considerado como necesario por un médico. Un experto en la técnica apreciará que el régimen de dosificación o cantidad terapéuticamente efectiva de SDA puede requerir ser optimizada para cada individuo y se puede determinar sin una experimentación exhaustiva. La presente invención también provee un método para disminuir citocinas pro-inflamatorias administrando cantidades terapéuticamente efectivas de SDA. Las citocinas pro-inflamatorias disminuidas incluyen TNF-cc e IL-i p. Tales cantidades terapéuticamente efectivas de SDA pueden ser obtenidas por un mamífero en necesidad de las mismas a través del consumo de alimentos con niveles elevados de SDA. La presente invención provee adicionalmente métodos para alterar el nivel de ácido eicosapentanóico en un humano, en donde dicho método comprende administrar cantidades terapéuticamente efectivas de SDA a dicho humano, en donde dicho humano metaboliza el SDA en EPA, dando como resultado niveles alterados de EPA. El metabolismo de SDA en EPA ocurre a través de una elongación de cadena a un ácido graso (n-3) 20:4, seguido de la desaturación del producto elongado por delta-5 no saturado. Adicionalmente, la administración de SDA a un mamífero toma ventajas de los "canales fisiológicos", en donde el metabolismo de SDA en EPA y DHA se controla al final por el metabolismo del ácido graso del cuerpo. De esta manera, este control metabólico probablemente da como resultado una distribución más eficiente de EPA y de DHA en lípidos que en aquellos provistos por la administración directa de EPA y/o DHA. En una modalidad, los niveles alterados de EPA están presentes en tejidos seleccionados del grupo que consiste de niveles de fosfolípidos en eritrocitos, fosfolípidos en plaquetas, fosfolípidos en células mononucleares, fosfolípidos en plasma, triglicéridos, y colesterol. Sin embargo, los niveles de EPA también se pueden alterar en membranas de otras células en el cuerpo. De esta manera, los niveles alterados de EPA en tejidos diferentes que los. listados en la presente también son contemplados como incluidos dentro del alcance de la presente invención. En otra modalidad, la cantidad terapéuticamente efectiva de SDA administrada a niveles alterados de EPA está en la escala de aproximadamente 0.1 g/día a aproximadamente 10 g/día. Preferiblemente, dichas cantidades terapéuticas son de aproximadamente 0.25 g/día a aproximadamente 8 g/día. Más preferiblemente, dichas cantidades terapéuticas son de aproximadamente 0.5 g/día a aproximadamente 5 g/día. La cantidad terapéutica más preferida es de aproximadamente 1.5 g/día. La administración de SDA en combinación con otras terapias que se utilizan clínicamente para tratar trastornos inflamatorios, tales como aquellas discutidas anteriormente en el capítulo de antecedentes de la invención, también están contempladas dentro del alcance de la presente invención. A manera de ejemplo, el SDA se puede administrar en combinación con un corticosteroide o un inmunosupresivo para tratar trastornos inflamatorios que también son de origen autoinmune. El SDA se puede administrar con medicamentos anti-inflamatorios o suplementos alimenticios, tales como aquellos administrados para suprimir SOX-II. El SDA también se puede administrar con otros tratamientos terapéuticos que no están dirigidos hacia el tratamiento de trastornos inflamatorios. La presente invención también involucra una prueba que comprende un análisis de sangre y/o tejido de un sujeto para determinar la presencia, ausencia o cantidad de TNF-a y/o IL-1 ß en un sujeto; en donde dicho análisis se lleva a cabo en conjunción con, es decir, antes, durante o después de la administración de ácido estearidónico (18:4, n-3) a un sujeto. La prueba de la presente invención está caracterizada por el enlace entre el consumo de SDA y los marcadores pro-inflamatorios TNF-a e IL-1 ß. El enlace está caracterizado por el descubrimiento de que el SDA se puede administrar en cantidades terapéuticamente efectivas vía la dieta occidental típica y la disminución de TNF-a e IL-1 ß. Un análisis de los niveles de TNF- y/o IL-? ß en un sujeto se puede llevar a cabo y entonces un experto en la técnica puede determinar si es necesario o si se desea la administración de cantidades terapéuticas de ácido estearidónico. Si un sujeto ya se encuentra en un régimen de SDA, la prueba se puede utilizar para optimizar la cantidad de SDA requerida para tratar o prevenir un trastorno inflamatorio. Notablemente, los solicitantes han determinado que la cantidad terapéuticamente efectiva de ácido estearidónico generalmente igualará aproximadamente cuatro veces la cantidad terapéuticamente efectiva de EPA. En una modalidad preferida, la prueba se lleva a cabo en un sujeto con necesidad de tratamiento o prevención de un trastorno inflamatorio. Entonces a dicho sujeto se le da una dieta que contiene cantidades terapéuticamente efectivas de ácido estearidónico. La prueba se puede llevar a cabo una segunda vez en el sujeto para determinar la eficacia de la cantidad terapéutica de ácido estearidónico. La prueba de la presente invención también puede ser utilizada para propósitos experimentales o de búsqueda para determinar una cantidad terapéuticamente efectiva de SDA. Otras características, objetos y ventajas de la presente invención serán aparentes para aquellos expertos en la técnica. Las explicaciones e ilustraciones presentadas en la presente tienen por objeto poner a otros expertos en la técnica al tanto de la presente invención, sus principios, y su aplicación práctica. Aquellos expertos en la técnica pueden adaptar y aplicar la invención en sus numerosas formas, como convenga de la mejor manera a los requisitos de un uso particular. De conformidad, las modalidades específicas de la presente invención como se establecen no tienen la intención de ser exhaustivas o limitantes de la presente invención. Todas las publicaciones y solicitudes de patentes citadas en esta descripción se incorporan en la presente como referencia como cada publicación individual o solicitud de patente fue indicada, específica e individualmente para ser incorporada como referencia.

EJEMPLOS Los siguientes ejemplos se presentan de manera ilustrativa y no de limitativa.

EJEMPLO 1 Se reclutaron 45 hombres y mujeres post-menopáusicas de 19 a 65 años de edad, normolipidémicos y con un índice de masa corporal (IMB) en la escala de 20 a 30. Los criterios de exclusión incluyeron trastornos de flujo sanguíneo, hipertensión, trastornos inflamatorios, enfermedades gastrointestinales activas, uso crónico de una dosis baja de aspirina, consumo de dos veces por semana de comidas de restaurante o para llevar más, el uso de suplementos alimenticios ricos en ácidos grasos n-3 ó n-6, consumo habitual de más de una vez al mes de pescado, y niveles de EPA+DHA fosfolípidos en el plasma >7.9% de ácidos grasos totales (el nivel obtenido en el grupo de estudio fue de 4.9+1.0% de ácidos grasos totales. Los individuos se colocaron al azar en uno de tres grupos designados como ALA, SDA, y EPA. A. Diseño de estudio Después de un período de prueba de 3 semanas, los individuos ingirieron ya sea ALA, SDA, EPA suministrada como ésteres etílicos en cápsulas. Las ingestiones fueron de 0.75 g/día durante 3 semanas seguido de 1 .5 g/día para las 3 semanas subsecuentes.

CUADRO 1 Diseño de estudio Semanas -3 0 3 6 Visita 1 2 3 4 Prueba 0.75 g/d 1.5 g/d En cada visita se tomaron 36 mi de sangre mediante venepuntura después de un ayuno por la noche. La sangre se prorrateó en varios tubos para los siguientes procedimientos. B. Separaciones celulares y análisis de ácidos grasos Se agregó sangre (20ml) a tubos que contenían 4ml de EDTA en agua al 4.5% y 4ml de dextrano al 6% en una solución salina normal, pH 7.0. Se permitió que los eritrocitos se sedimentaran bajo gravedad a 37 °C durante 30 minutos. El plasma rico en leucocitos se colocó sobre LYMPHOPREP, densidad 1.077 (Nycomed Pharma, Oslo) y se centrifugó a 110 g durante 10 minutos para separar los leucocitos de las plaquetas, los cuales se quitaron. El gradiente se centrifugó adicionalmente a 200 g durante 20 minutos para separar los neutrófilos de las células mononucleares, los cuales se quitaron. Las muestras se procesaron para análisis de ácidos grasos como se describe en Mantzioris et al., Am. J. Clin. Nutr., 72:42-8 (2000). Los sedimentos de plasma, de células mononucleares y de plaquetas lavados se almacenaron a -80 °C. Los sedimentos de eritrocitos se trataron frescos con cloroformo:isopropanol (2:1 ) y los extractos de lípidos se almacenaron a 4 °C. Los sedimentos de plasma, de células mononucleares y de plaquetas se extrajeron con cloroformo: metanol. Los extractos de lípidos en plasma y celulares se fraccionaron mediante cromatografía en capa fina. Para los extractos celulares, la fracción fosfolípida se conservó y para los extractos de plasma, se conservaron las fracciones de fosfolípidos, de colesterol-éster y de triglicéridos. Estos se transestirificaron mediante metanólisis (1 % H2S04 en metanol a 70 °C durante 3horas). Los ésteres metílicos de los ácidos grasos se separaron y cuantificaron con un cromatógrafo de gas HEWLETT-PACKARD 6890 equipado con una columna capilar de 50 m recubierta con BPX-70 (0.25 pm de espesor de película; SGE Pty Ltd, Victoria, Australia) (ver Mantzíoris et al., mencionado anteriormente). Los estándares de ácidos grasos se obtuvieron a partir de NuChek Prep Inc. (Elysian, MN) y se incluyó ácido estearidónico obtenido de Sigma Aldrich Pty Ltd. (Castle Mili, NSW, Australia). Todos los solventes orgánicos contenían hidroxianisol butilatado (0.005%) como un antioxidante. C. Síntesis de eicosanoides y citocinas Se agregó sangre (4 mi) a tubos heparinizados, se agregó lipopolisacárido bacterial (LPS) (200 ng/ml), y la mezcla se incubó a 37 °C, 5% de C02, durante 24 horas. El plasma se recolectó y se valoró para prostaglandina E2 (PGE2) mediante radioinmunoanálisis (RIA), interleucina-? ß (??_-1 ß) y factor de necrosis tumoral-a (TNF-a) mediante ELISA, como se describe en Mantzioris et al., mencionado anteriormente. Se recolectó sangre (4 mi) en un tubo de coagulación, incubado a 37 °C durante 1 hora, y el suero se valoró para tromboxano B2 (TXB2) mediante RIA como se describió (ver Mantzioris et al., mencionado anteriormente). TXB2 es el producto de hidrólisis estable de TXA2. D. Concentración de lípidos en plasma Se recolectó sangre (4 mi) en tubos heparinizados, y se midió el colesterol total en plasma, colesterol de LDL y HDL, y triglicéridos en plasma en los laboratorios de diagnóstico clínico del Royal Adelaide Hospital/lnstitute of Medical and Veterinary Science (IMVS). E. Dieta Se indicó a los individuos evitar ácidos grasos n-6 y sustituir ácidos grasos monoinsaturados (n-9) cuando fuera posible. Para facilitar este patrón de ingestión, se proveyó a los individuos de aderezos para ensaladas, aceite para cocinar, y mermelada, todos estos siendo bajos en ácidos grasos n-6 y altos en ácidos grasos monoinsaturados (n-9). Se proveyó a los individuos de diarios de dieta y se les indicó elaborar registros de comida pesada en días designados (días entre semana y días de fin de semana). F. Ingestión alimenticia Los diarios de dieta se analizaron usando el programa Diet/1 para proveer datos de ingestión de macronutrientes (carbohidratos, proteínas, grasas, alcoholes, relación P.S). Este programa usa la base de datos australiana NUT-TAB. Este análisis también provee los datos de Ingestión de ácidos grasos omega-6 y omega-9. G. Análisis estadístico Para las comparaciones entre visitas dentro de cada grupo, se usaron medidas repetidas ANOVA seguidas de una prueba de comparaciones múltiples de Newman-Keuls (Kwikstat, TexaSoft, Cedar Hill, TX). Para las comparaciones entre grupos en cada visita, se usaron ANOVA seguidas de una prueba de comparaciones múltiples Newman-Keuls (Kwikstat).

EJEMPLO 2 Resultados No hubo una diferencia significativa estadísticamente en situación basal BMI entre los grupos (Cuadro 1 ). Los individuos se pesaron en cada visita y no hubo un cambio significativo en el peso durante la prueba.

CUADRO 2 BMI Grupo dietético X3;'0^ y (kg/rr EPA (25.6 ± 3.0)1 SDA 26.2 ± 3.8 ALA 27.5 ± 2.9 1s¡gnif¡ca ± DS Los datos resumidos de ingestión de energía y macronutrientes se muestran en el Cuadro 2. No hubo una diferencia significativa en la ingestión de energía o macronutrientes entre ningún grupo en situación basal (período de registro de dieta 1 ). No hubo cambios significativos estadísticamente en la ingestión de energía o macronutrientes durante el estudio (es decir, períodos de registro de dieta 1 a 3) en ningún grupo.

CUADRO 3 Ingestión de energía y macronutrientes estimados a partir de los registros de comida pesada Período de registro de dieta1 Grupo 1 2 3 Energía MJ EPA 8.99 ± 1 .912 [2161 ] 9.45 ± 1.91

[2272] 9.34 ± 1 .98

[2245] [Kcal] SDA 8.97 ± 2.08

[2157] 9.12 + 2.48

[2192] 9.26 ± 21.4

[2226] ALA 8.80 ± 1 .29 [21 14] 9.06 ± 2.04

[2178] 8.77 ± 1 .71

[2107] Proteína g EPA 99 + 23 [18.2] 107 ± 22 [18.4] 101 ± 23 [17.7] [%en] SDA 91 ± 20 [16.5] 91 ± 24 [16.1] 91 ± 27 [15.7] ALA 97 ± 24 [17.7] 98 ± 22 [17.5] 95 ± 25 [17.5] Carbohidrato g EPA 256 ± 64 [48.4] 264 ± 70 [47.5] 272 ± 82 [49.0] [%en] SDA 269 + 80 [50.6] 267 + 88 [49.2] 274 + 70 [50.5] ALA 239 + 55 [46.2] 247 ± 63 [46.6] 257 ± 67 [49.6] Total de grasa g EPA 75 ± 22 [30.9] 82 ± 26 [32.3] 82 ± 18 [32.7] [%en] SDA 75 ± 20 [30.9] 78 ± 22 [32.2] 78 ± 25 [31 .0] ALA 73 ± 16 [30.5] 80 + 36 [31.6] 67 ± 18 [28.1] Período de registro de dieta1 Grupo 1 2 3 Grasa n-6 g EPA 7.3 ± 2.2 [3.0] 8.0 + 3.4 [3.1] 8.6 + 4.8 [3.4] [%en] SDA 7.2 + 2.5 [2.9] 6.3 ± 2.0 [2.6] 6.7 ± 1 .8 [2.7] ALA 7.0 ± 2.6 [2.9] 6.7 ± 2.8 [2.7] 6.2 ± 2.0 [2.6] Mono grasa g EPA 28.1 ± 10.4 [11 .4] 30.5 ± 1 1.7 [11.8] 28.0 ± 7.9 [1 1.2] [%en] SDA 27.9 ± 7.3 [1 1.6] 28.8 ± 9.4 [1 1 .9] 29.0 ± 1 1 .0 [1 1 .5] ALA 27.4 ± 8.4 [1 1.4] 29.9 ± 13.9 [11 .7] 25.0 ± 7.4 [10.5] Grasa sat g EPA 33.3 ± 1 1.3 [13.6] 36.9 ± 11.2 [14.6] 38.0 ± 8.7 [15.2] [%en] SDA 33.0 ± 9.6 [13.6] 36.1 ± 10.7 [14.9] 35.6 ± 12.0 [14.2] ALA 31.4 ± 8.9 [13.3] 36.0 ± 18.8 [14.3] 29.5 ± 9.9 [12.3] Veríodo de registro de dieta 1 = período entre -3 a 0 semanas (prueba) Veríodo de registro de dieta 2 = período entre 0 a 3 semanas (0.75 g de ácido graso) Veríodo de registro de dieta 3 = período entre 3 a 6 semanas (1 .5 g de ácido graso) dignificado ± DS Se usó el recuento de cápsulas devueltas para determinar la conformidad de la ingestión de cápsulas. El cumplimiento fue alto y no hubo diferencia entre los grupos dietéticos en ninguno de los períodos dietéticos (Cuadro 4).

CUADRO 4 Cumplimiento Semanas 0 a 3 Semanas 3 a 6 Grupo dietético (0.75 g ácido graso de (1.5 g ácido graso de prueba) prueba) EPA 100.0 ± 4.11 98.5 ± 8.4 SDA 100.3 ± 3.8 100.5 ± 2.6 ALA 100.5 ± 4.2 98.5 ± 5.2 '"/¿cumplimiento; significa ± DS Con respecto a los ácidos grasos, en situación basal, no hubo una diferencia significativa entre los grupos dietéticos en la concentración de EPA en fosfolipidos en eritrocitos o en plasma. La ingestión de EPA ó SDA de 0.75 g/día (semanas 0 a 3) ó 1.5 g/día (semanas 3 a 6) aumentó significativamente la concentración de EPA en las fracciones de fosfolipidos de eritrocitos y plasma (Cuadro 5). La ingestión de ALA de 1.5 g/día, pero no de 0.75 g/día aumentó significativamente las concentraciones de EPA (Cuadro 5). Se observaron resultados similares para concentraciones de EPA en fosfolipidos en células mononucleares y en plaquetas, colesterol-ésteres de plasma, y triglicéridos en plasma.

CUADRO 5 EPA (% de ácidos grasos totales) Visita No. Fracción Grupo 1 2 3 4 Glóbulos A 0.85 (0.16)3 0.81 (0.14)3 1 .60 (0.31 )D1 2.56 (0.65)cl rojos B 1.00 (0.22)a 0.96 (0.19)a 1 .16 (0.17)"2 1 .44 (0.24)c2 C 0.88 (0.16)a 0.88 (0.17)a 0.92 (0.23)a3 1 .01 (0.18)M Plaqueta A 0.44 (0 12)a 0.45 (0.09)a 1.08 (0.26k, 1.68 (0.43)c1 B 0.55 (0.20)a 0.54 (0.18)a 0.72 (0.17)a¾2 0.87 (0.30)b2 C 0.44 (0.12)a 0.48 (0.11 )a 0.55 (0.14)a2 0.64 (0.21 )b2 Monocito A 0.66 (0.32)a 0.52 (0.1 1 )a 1 .38 (0.35)b1 2.25 (0.74)0, B 0.70 (0.17)a 0.61 (0.13)a 0.85 (0.16)b2 1 .12 (0.30)c2 C 0.67 (0.20)a 0.57 (0.11 )a 0.63 (0.14)a3 0.81 (0.28)b2 Plasma A 1 .10 (0.40)a 1.04 (0.23), 2.71 (0.71 )b1 4.48 (1 .35)c Fosfolípido B 1.19 (0.21 )a 1.27 (0.30), 1 .80 (0.28)b2 2.38 (0.51 )c2 C .07 (0.23)3 1.16 (0.31 )ab 1.33 (0.54)bc3 1.43 (0.40)c3 Plasma CE A 1.03 (0.34)3 1.02 (0.20). 2.95 (0.74)b1 4.53 (1.31 )c1 B 1.17 (0.26)a 1.23 (0.29), 1.81 (0.39)b2 2.37 (0.65)c2 C 1.11 (0.26)3 1.16 (0.33)ab 1 .35 (0.58)bc2 1 .41 (0.36)c3 Plasma TG A 0.31 (0.15)3 0.27 (0.09), 0.73 (0.20)6, 1 .23 (0.47)c, B 0.32 (0.10)3 0.29 (0.1 1 )a 0.46 (0.18)b2 0.63 (0.32)c2 C 0.26 (0.08) 0.27 (0.12) 0.32 (0.13)2 0.34 (0.16)2 Las letras diferentes indican diferencias entre las visitas - Medidas repetidas ANOVA. Los números diferentes indican diferencias entre los grupos - ANOVA. Sin números o sin letras - No hay diferencias significativas. Visita 1 : Inicio de prueba (-3 semanas). Visita 2: Situación basal (0 semanas). Visita 3: Después de 3 semanas en 0.75 g de ácidos grasos (3 semanas). Visita 4: Después de 3 semanas en 1.5 g de ácidos grasos (6 semanas). La ingestión de EPA de 0.75 g/día ó 1.5 g/día aumentó significativamente la concentración de DPA en las fracciones de fosfolípidos de eritrocitos y plasma (Cuadro 6). La ingestión de SDA de 1 .5 g/día, pero no de 0.75 g/día aumentó significativamente las concentraciones de DPA (Cuadro 6). Se observaron resultados similares para concentraciones de DPA en fosfolípidos de células mononucleares y de plaquetas, colesterol-ésteres en plasma, y triglicéridos en plasma.

CUADRO 6 DPA (% de ácidos grasos totales) Grupo Semana -3 0 3 6 Eritrocito EPA 2.92 ± 0.45a1'2 2.81 ± 0.24a 3.19 ± 0.30 3.71 ± 0.38° Fosfolípido SDA 3.31 ± 0.30ab 3.16 ± 0.22 3.27 ± 0.27ab 3.46 ± 0.29a ALA 3.10 + 0.40 3.08 ± 0.35 3.08 ± 0.37 3.19 + 0.38 Plasma EPA 1.31 ± 0.29a 1.34 ± 0.22a 2.02 ± 0.45b 2.46 ± 0.48c Fosfolípido SDA 1.37 ± 0.23a 1.45 + 0.19a 1 .68 ± 0.30b 1.85 + 0.34° ALA 1.29 ± 0.18a 1 .39 + 0.26a 1 .38 ± 0.18a 1.46 ± 0.34* 1significa ± DS 2Letras diferentes indican diferencias entre las visitas; p<0.05.

Ninguno de los ácidos grasos de la prueba dietética en cualquier dosis provocó un aumento en las concentraciones de DHA comparado con la situación basal. Hubo una ligera disminución, pero estadísticamente significativa en DHA de eritrocitos con ingestión de una dosis más alta de EPA y ALA (Cuadro 7). Aparte de eso, no hubo cambios significativos en las concentraciones de DHA en ningún tipo de célula o fracción de plasma. Generalmente se conoce en la técnica que el consumo de ALA ó EPA no inducirá los aumentos de DHA en tejido, en consecuencia no es sorprendente que la administración de SDA no induce los niveles elevados de DHA en tejido.

CUADRO 7 (% de ácidos grasos totales) Grupo Semana -3 0 3 6 Eritrocito EPA 5.02 ± 0.89a1'2 4.62 ± 0.69a 4.49 ± 0.68b 4.22 ± 0.68c Fosfolípido SDA 4.65 ± 1.10a 4.23 ± 0.86b 4.08 ± 0.77b 3.96 ± 0.74b ALA 4.87 ± 0.74a 4.61 ± 0.71 b 4.38 ± 0.66° 4.28 ± 0.56c Plasma EPA 3.97 ± 1 .06a 3.75 + 0.77ab 3.65 ± 0.72ab 3.48 ± 0.64b Fosfolípido SDA 3.40 ± 0.73 3.40 ± 0.79 3.27 ± 0.78 3.26 ± 0.63 ALA 3.70 ± 0.63 3.64 ± 0.65 3.54 + 0.63 3.39 ± 0.51 1signif¡ca ± DS 2Letras diferentes indican diferencias entre las visitas; p<0.05.

Cuando se examinaron los niveles en tejido de ácidos grasos n-3 de cadena larga, se encontraron SDA, EPA elevado y DPA, pero no DHA (Figura 1 ). Este patrón también se observó con la ingestión de EPA en donde los niveles de EPA y DPA en tejido fueron elevados, y los niveles de DHA se disminuyeron. Con la ingestión de ALA de 1.5 g/día, los niveles de EPA en tejido, pero no de DPA se elevaron significativamente (Figura 1 ). A una dosis de 1.5 g/día, el SDA fue 3.7 a 4.1 doblemente más efectivo que ALA, y EPA fue 3.1 a 3.6 doblemente más efectivo que SDA, en elevar los niveles de EPA en fosfolípidos de plasma y eritrocitos. Hubo disminuciones significativas estadísticamente en la síntesis de TNF estimulada por LPS con la ingestión de 1.5 g/día, pero no con 0.75 g/día de ALA ó SDA ó EPA (Cuadro 8).

CUADRO 8 Síntesis de TNF-a en sangre tratada con LPS Grupo dietético Semana -3 0 3 6 (ng/ml) EPA 36.6 ± 16.53a1'2 38.9 ± 12.5a 32.0 ± 11.8ab 27.6 ± 10.6b SDA 37.6 ± 14.6ab 43.7 ± 18.7a 37.7 ± 14.2ab 34.1 ± 12.0b ALA 30.9 ± 13.1a 36.8 ± 17.4a 32.7 + .9a 25.3 ± 7.2b 'significa + DS 2Letras diferentes indican diferencias entre las visitas; pO.05.

La ingestión de 0.75 g/día ó 1 .5 g/día de SDA ó EPA disminuyó significativamente la síntesis de IL-1 ß estimulada por LPS. No hubo efecto de ALA en ninguna dosis (Cuadro 9).

CUADRO 9 Síntesis de IL-1 ß en sangre tratada con LPS Grupo dietético Semana -3 0 3 6 (ng/ml) EPA 93.1 ± 26.8a' 2 92.0 ± 25.4a 75.3 + 27.6" 73.5 + 16.4b SDA 106.9 ± 33.0a 94.7 ± 29.3b 81 .4 ± 21.9° 77.8 ± 26.4C ALA 97.9 ± 27.4 96.9 1 30.9 87.3 + 29.9 83.3 + 24.0 significa ± DS Letras diferentes indican diferencias entre las visitas; p<0.05.

Los ácidos grasos de prueba no tuvieron un efecto consistente sobre la síntesis de PGE2 estimulada por LPS. Esto se puede concluir a partir del hecho de que los grupos tratados con ALA y SDA mostraron disminuciones significativas estadísticamente en PGE2 en la Visita 3 después de la ingestión de 0.75 g de artículos de prueba, sin embargo no se observó cambio en PGE2 en los pacientes a los cuales se les dio 1.5 g/día de cualquier ácido graso. No hubo efecto de EPA en ninguna dosis.

CUADRO 10 Síntesis de PGEg en sangre estimulada por LPS Grupo dietético Semana -3 0 3 6 (ng/ml) EPA 3.78 + 1.95^ 4.21 ± 1.59 5.05 + 2.16 4.46 ± 1.47 SDA 3.97 ± 1.48a *4.64 ± 1.09a 6.26 ± 2.56b 4.61 ± 0.95a ALA 4.00 ± 1.65a 4.63 ± 2.21a 6.25 + 3.00b 4.30 ± 1.37a significa ± DS Letras diferentes indican diferencias entre las visitas; p<0.05.

La síntesis de TXA2 durante la coagulación de la sangre no fue afectada por ninguno de los ácidos grasos de prueba. No hubo diferencias significativas entre los grupos en ninguna visita o entre visitas para ningún grupo de triglicéridos completos, colesterol total, colesterol de LDL, ó colesterol de HDL. A la luz de la descripción detallada de la invención y los ejemplos presentados anteriormente, se puede apreciar que se obtienen diversos aspectos de la invención.

EJEMPLO 3 Estudio clínico de la eficacia de SDA en disminuir la proteína C-reactiva Se reclutaron aproximadamente 35-50 hombres y mujeres post-menopáusicas de 19-65 años de edad, normolipidémicos, y con un índice de masa corporal (IMC) en la escala de 20 a 30. Los criterios de exclusión incluyen trastornos de circulación sanguínea, hipertensión, trastornos inflamatorios, enfermedades gastrointestinales activas, uso crónico de dosis baja de aspirina, consumo de alimentos vespertinos de restaurante o para llevar más de dos veces por semana, uso de suplementos alimenticios ricos en ácidos grasos n-3 ó n-6, consumo habitual de más de una comida a base de pescado al mes, niveles de EPA+DHA en fosfolípidos en plasma>7.9% de ácidos grasos totales. Los individuos se colocaron al azar en uno de tres grupos, designados como ALA, SDA, y EPA.

A. Diseño de estudio Después de un período de prueba de 3 semanas, los individuos ingirieron ya sea ALA, SDA, EPA suministrada como ésteres etílicos en cápsulas. Las ingestiones fueron de 0.75 g/día durante 3 semanas seguido de 1 .5 g/día para las 3 semanas subsecuentes. En cada visita, se tomó sangre por venepuntura después de un ayuno por la noche. La sangre se prorrateó en varios tubos para los siguientes procedimientos. B. Separaciones celulares y análisis de ácidos grasos Se agregó sangre (por ejemplo, 20ml) a tubos que contenían EDTA en agua y dextrano en una solución salina normal, pH 7.0. Se permitió que los eritrocitos se sedimentaran bajo gravedad a 37 °C durante 30 minutos. El plasma rico en leucocitos se colocó sobre LYMPHOPREP, densidad 1 .077 (Nycomed Pharma, Oslo) y se centrifugó a 1 10 g durante 10 minutos para separar los leucocitos de las plaquetas, los cuales se quitaron. El gradiente se centrifugó adicionalmente para separar los neutrófilos de las células mononucleares, los cuales se quitaron. Las muestras se procesaron para análisis de ácidos grasos como se describe en Mantzioris et al., Am. J. Clin. Nutr., 72:42-8 (2000). Los sedimentos de plasma, de células mononucleares y de plaquetas lavados se almacenaron congelados. Los sedimentos de eritrocitos se trataron frescos con cloroformo:isopropanol (2:1 ) y los extractos de lípidos se almacenaron a 4 °C. Los sedimentos de plasma, células mononucleares y plaquetas se extrajeron con cloroformo:metanol. Los extractos de lípidos en plasma y celulares se fraccionaron mediante cromatografía en capa fina. Para los extractos celulares, la fracción fosfolípida se conservó y para los extractos de plasma se conservaron las fracciones de fosfolípidos, colesterol-éster y triglicéridos. Estos se transestiríficaron mediante metanólisis (1% H2S04 en metanol a 70 °C durante 3 horas). Los ésteres metílicos de los ácidos grasos se separaron y cuantificaron con un cromatógrafo de gas HEWLETT-PACKARD 6890 equipado con una columna capilar de 50 m revestida con BPX-70 (0.25 pm de espesor de película; SGE Pty Ltd, Victoria, Australia) (ver Mantzioris et al., mencionado anteriormente). Los estándares de ácidos grasos se obtuvieron (por ejemplo, de NuChek Prep Inc. (Elysian, MN) y se incluyó ácido estearidónico obtenido de Sigma Aldrich Pty Ltd. (Castle Hill, NSW, Australia). Todos los solventes orgánicos contenían hidroxianisol butilatado (0.005%) como un antioxidante. C. Análisis de lípidos en plasma y proteína C-reactiva La proteína C-reactiva (Hs-CRP9 en plasma se puede analizar usando una prueba inmunonefelométrica aumentada con látex sobre un analizador BN II (Rifai et al. Clinical efficacy of an automated high-sensitivity C-reactive protein assay. Clin. Chem 199; 45:2136). Ó, se agregó sangre a tubos heparinizados, se agregó lipopolisacárido bacterial (LPS) y la mezcla se incubó a 37 °C, 5% de C02, durante 24 horas. El plasma se recolectó y se valoró para proteína C-reactiva mediante ELISA, usando los procedimientos descritos en Mantzioris et al., mencionado anteriormente.

Se recolectó sangre (4 mi) en tubos de heparinizados, y se midieron colesterol total en plasma, colesterol de LDL y de HDL, y triglicéridos en plasma. D. Dieta Se indicó a los individuos evitar ácidos grasos n-6 y sustituir ácidos grasos monoinsaturados n-9 cuando fuera posible. Para facilitar este patrón de ingestión, los individuos fueron provistos de comestibles bajos en ácidos grasos n-6 y altos en ácidos grasos monoinsaturados (n-9). Los individuos fueron provistos de diarios de dieta y se les indicó elaborar registros de comida pesada en días designados (días entre semana y días de fin de semana). Los diarios de dieta se analizaron para proveer datos de ingestión de macronutrientes (carbohidratos, proteínas, grasas, alcoholes, relación P:S). Este análisis también provee los datos de ingestión de ácidos grasos omega-6 y omega-9. E. Análisis estadístico Para las comparaciones entre visitas dentro de cada grupo, se usaron medidas repetidas ANOVA seguidas de una prueba de comparaciones múltiples de Newman-Keuls (por ejemplo, Kwikstat, TexaSoft, Cedar Hill, TX). Para comparaciones entre grupos en cada visita, se usaron ANOVA seguidas de una prueba de comparaciones múltiples Newman-Keuls (Kwikstat).

F. Análisis de resultados Los individuos se pesaron en cada visita para observar cambios en el peso durante la prueba. Se usó el recuento de cápsulas devueltas para determinar el cumplimiento de ingestión de cápsulas. Los ácidos grasos se analizaron entre los grupos dietéticos en concentración de EPA en fosfolípidos de plasma o de eritrocitos. El efecto de ingestión de EPA, ALA ó SDA de 0.75 g/día (semanas 0 a 3) ó 1.5 g/día (semanas 3 a 6) se determinó con respecto a la concentración de EPA en las fracciones de fosfolípidos de eritrocitos y plasma. Los efectos sobre la concentración de DPA en las fracciones de fosfolípidos de eritrocitos y de plasma también se analizaron. La correlación entre la ingestión de SDA y proteína C-reactiva se analizó, mostrando que la administración de SDA da como resultado una disminución en proteína C-reactiva. A la luz de la descripción detallada de la invención y los ejemplos presentados anteriormente, se puede apreciar que se obtienen diversos aspectos de la invención.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES 5 1 .- El uso de ácido estearidónico (18:4, n-3) para la fabricación de un medicamento para disminuir TNF-a en un mamífero que tiene concentraciones elevadas de TNF-a. 2.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho mamífero es un humano. " 10 3.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde " dicho mamífero es un animal de compañía. 4.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho medicamento provee de aproximadamente 0.1 g/día a aproximadamente 10 g/día. 15 5.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho medicamento provee de aproximadamente 0.25 g/día a aproximadamente 8 g/día. 6.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho medicamento provee de aproximadamente 0.5 g/día a 20 aproximadamente 5 g/día. 7 - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho medicamento provee aproximadamente 1.5 g/día. 8. - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dichas concentraciones elevadas de TNF- están presentes en un mamífero debido a un trastorno inflamatorio. 9. - El uso como se reclama en la reivindicación 8, en donde el trastorno inflamatorio es una enfermedad cardiovascular, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedad de Crohn, enfermedad del intestino inflamado, lupus eritematoso sistémico, polimiositis, choque séptico, enfermedad de huésped vs. injerto, asma, rinitis, psoriasis, caquexia asociada con cáncer o eccema. 10.- El uso como se reclama en la reivindicación 9, en donde el trastorno inflamatorio es artritis reumatoide. 1 1. - El uso como se reclama en la reivindicación 9, en donde la enfermedad cardiovascular es aterosclerosis. 12. - El uso de ácido estearidónico (18:4, n-3), para la fabricación de un medicamento para disminuir 1L-1 ß en un mamífero que tiene concentraciones elevadas de ??_-1 ß. 13. - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho mamífero es un humano. 14. - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho mamífero es un animal de compañía. 15. - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho medicamento provee de aproximadamente 0.1 g/día a aproximadamente 10 g/día. 16. - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho medicamento provee de aproximadamente 0.25 g/día a aproximadamente 8 g/día. 17. - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho medicamento provee de aproximadamente 0.5 g/día a aproximadamente 5 g/día. 18. - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho medicamento provee aproximadamente 1.5 g/día. 19 - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dichas concentraciones elevadas de I L- ß están presentes en un mamífero debido a un trastorno inflamatorio. 20 - El uso como se reclama en la reivindicación 19, en donde el trastorno inflamatorio es una enfermedad cardiovascular, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedad de Crohn, enfermedad del intestino inflamado, lupus eritematoso sistémico, polimiositis, choque séptico, enfermedad de huésped vs. injerto, asma, rinitis, psoriasis, caquexia asociada con cáncer o eccema. 21.- El uso como se reclama en la reivindicación 20, en donde el trastorno inflamatorio es artritis reumatoide. 22.- El uso como se reclama en la reivindicación 20, en donde la enfermedad cardiovascular es aterosclerosis. 23 - El uso de ácido estearidónico (18:4, n-3) para la fabricación de un medicamento para disminuir IL-1 ß y TNF-a en un mamífero que tiene concentraciones elevadas de l L-1 ß y TNF-a. 24. - El uso como se reclama en la reivindicación 23, en donde dicho mamífero es un humano. 25. - El uso como se reclama en la reivindicación 23, en donde dicho mamífero es un animal de compañía. 26. - El uso como se reclama en la reivindicación 23, en donde dicho medicamento provee de aproximadamente 0.1 g/día a aproximadamente 0 g/día. 27 - El uso como se reclama en la reivindicación 23, en donde dicho medicamento provee de aproximadamente 0.25 g/día a aproximadamente 8 g/día. 28 - El uso como se reclama en la reivindicación 23, en donde dicho medicamento provee de aproximadamente 0.5 g/día a aproximadamente 5 g/día. 29. - El uso como se reclama en la reivindicación 23, en donde dicho medicamento provee aproximadamente 1.5 g/día. 30. - El uso como se reclama en la reivindicación 23, en donde el trastorno inflamatorio es una enfermedad cardiovascular, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedad de Crohn, enfermedad del intestino inflamado, lupus eritematoso sistémico, polimiositis, choque séptico, enfermedad de huésped vs. injerto, asma, rinitis, psoriasis, caquexia asociada con cáncer o eccema. 31.- El uso como se reclama en la reivindicación 30, en donde el trastorno inflamatorio es artritis reumatoide. 32.- El uso como se reclama en la reivindicación 30, en donde la enfermedad cardiovascular es aterosclerosis. 33.- El uso de ácido estearidónico ( 8:4, n-3) para la fabricación de un medicamento para prevenir un trastorno inflamatorio determinado por los niveles elevados de TNF-a y/o ??_-1 ß en un mamífero. 34.- El uso como se reclama en la reivindicación 33, en donde dicho mamífero tiene concentraciones elevadas de TNF-a y/o IL-1 ß. 35 - El uso como se reclama en la reivindicación 33, en donde el mamífero es un humano. 36. - El uso como se reclama en la reivindicación 33, en donde el mamífero es un animal de compañía. 37. - El uso como se redama en la reivindicación 33, en donde dicho medicamento provee de aproximadamente 0.1 g/día a aproximadamente 10 g/día. 38. - El uso como se reclama en la reivindicación 33, en donde dicho medicamento provee de aproximadamente 0.25 g/día a aproximadamente 8 g/día. 39 - El uso como se reclama en la reivindicación 33, en donde dicho medicamento provee de aproximadamente 0.5 g/día a aproximadamente 5 g/día. 40 - El uso como se reclama en la reivindicación 33, en donde dicho medicamento provee aproximadamente 1.5 g/día. 41.- El uso como se reclama en la reivindicación 33, en donde el trastorno inflamatorio es una enfermedad cardiovascular, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedad de Crohn, enfermedad del intestino inflamado, lupus eritematoso sistémico, poümiositis, choque séptico, enfermedad de huésped vs. Injerto, asma, rinitis, psoriasis, caquexia asociada con cáncer o eccema. 42 - El uso como se reclama en la reivindicación 41 , en donde el trastorno inflamatorio es artritis reumatoide. 43. - El uso como se reclama en la reivindicación 41 , en donde la enfermedad cardiovascular es aterosclerosis. 44. - El uso de ácido estearidónico (18:4, n-3) para la fabricación de un medicamento para aumentar el nivel de ácido eicosapentanoico (20:5, n-3) en un humano, en donde el sujeto metaboliza el ácido estearidónico en ácido eicosapentanoico, resultando un ácido eicosapentanoico aumentado. 45.- El uso como se reclama en la reivindicación 44, en donde los niveles del ácido eicosapentanoico aumentado (20:5, n-3) están presentes en tejidos seleccionados del grupo que consiste de fosfolípidos de eritrocitos, fosfolípidos de plaquetas, fosfolípidos de células mononucleares, fosfolípidos de plasma, triglicéridos, y colesterol-ésteres. 46.- El uso como se reclama en la reivindicación 44, en donde el nivel de ácido eicosapentanóico aumentado disminuye TNF-a y/o IL-? ß. 5 47.- El uso como se reclama en la reivindicación 44, en donde dicho medicamento provee de aproximadamente 0.1 g/día a aproximadamente 10 g/día. 48.- El uso como se reclama en la reivindicación 44, en donde dicho medicamento provee de aproximadamente 0.25 g/día a 10 aproximadamente 8 g/día. <¦ 49.- El uso como se reclama en la reivindicación 44, en donde dicho medicamento provee de aproximadamente 0.5 g/día a aproximadamente 5 g/día. 50.- El uso como se reclama en la reivindicación 44, en donde 15 dicho medicamento provee aproximadamente 1 .5 g/día. 51 - El uso de ácido estearidónico (18:4, n-3) para la fabricación de un medicamento para reducir o eliminar los efectos deletéreos de una condición asociada con TNF-a y/o ??_-1 ß elevados, en donde dicho TNF-a y/o ??_-1 ß se disminuyen y en donde los efectos deletéreos de la condición se 20 reducen o eliminan al examinar una muestra de un sujeto para identificar una presencia elevada de TNF-a y/o IL-1 ß. 52.- El uso como se reclama en la reivindicación 51 , en donde la examinación se lleva a cabo usando muestras de sangre y/o tejido del sujeto. 53. - El uso como se reclama en la reivindicación 51 , en donde la examinación se lleva a cabo antes y después de proveer el medicamento. 54. - El uso como se reclama en la reivindicación 51 , en donde la cantidad TNF-a y/o IL-1 ß en la muestra del sujeto se utiliza para determinar la cantidad efectiva de medicamento administrable al sujeto. 55 - El uso como se reclama en la reivindicación 51 , en donde la condición es un trastorno inflamatorio. 56 - El uso como se reclama en la reivindicación 55, en donde el trastorno inflamatorio es una enfermedad cardiovascular, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedad de Crohn, enfermedad del intestino inflamado, lupus eritematoso sistémico, polimiositis, choque séptico, enfermedad de huésped vs. injerto, asma, rinitis, psoriasis, caquexia asociada con cáncer o eccema. 57. - El uso como se reclama en la reivindicación 55, en donde el trastorno inflamatorio es artritis reumatoide. 58. - El uso como se reclama en la reivindicación 56, en donde la enfermedad cardiovascular es aterosclerosis. 59. - Una composición farmacéutica para el tratamiento de un trastorno inflamatorio seleccionado del grupo que consiste en enfermedad cardiovascular, artritis reumatoide , esclerosis múltiple, enfermedad de Crohn, enfermedad del intestino inflamado, lupus eritematoso sistémico, polimiositis, choque séptico, enfermedad de huésped vs. injerto, asma, rinitis, psoriasis, caquexia asociada con cáncer o eccema, la composición caracterizada porque comprende de 0.1 g a 10g de un ácido estearidónico (18:4, n-3) y un excipiente farmacéuticamente aceptable.