MXPA04003941A - Nueva enfermedad bacteriana de las aves de corral. - Google Patents

Abstract

La invencion pertenece al campo de la salud animal y en particular a los agentes causantes de una nueva enfermedad bacteriana de las aves de corral, Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica. La invencion proporciona dichas bacterias Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica, una vacuna que comprende Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica inactivadas, y un metodo de inmunizacion para evitar la enfermedad en los pollos.

Description

UEVA ENFERMEDAD BACTERIANA DE LAS AVES DE CORRAL Campo de la invención La invención pertenece al campo de la salud animal y en particular a los agentes causantes de una nueva enfermedad bacteriana de las aves de corral, Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica . La invención proporciona dichas bacterias Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica, una vacuna que comprende Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica inactivadas, y un método de inmunización de los pollos para prevenir dicha enfermedad en los pollos. Antecedentes de la invención Durante la última década, los métodos intensivos de crianza de aves de corral en granjas para aumentar la productividad, han dado como resultado un aumento de manifestación de enfermedades en todos los principales paises productores de aves de corral . Esto ha provocado un aumento de la necesidad de nuevas y mejores vacunas y programas de vacunación para controlar estas enfermedades. Actualmente', la mayoría de los animales se inmunizan frente a varias enfermedades de origen viral y bacteriano. Ejemplos de enfermedades virales en las aves de corral son la enfermedad de Newcastle, bronquitis infecciosa, neumovirus aviar, viruela aviar, enfermedad bursal infecciosa, etc. REF.155052 Ejemplos de enfermedades bacterianas son coriza aviar causada por Haemophilus paragallinaru (del tracto respiratorio superior) , Bordetella avium (del tracto respiratorio superior) , Ornithobacterium rhinotracheale (del tracto respiratorio inferior) , infecciones por Salmonella (tracto digestivo) , Pasteurela multocida, que es el agente causante del cólera de las aves de corral (septicémico) , e infecciones por E. Coli. Por tanto, el problema técnico fundamental de esta invención fue identificar una nueva enfermedad bacteriana de las aves de corral, para proporcionar el agente causante de dicha enfermedad y proporcionar una vacuna para evitar dicha enfermedad . Breve descripción de las figuras A) A partir de brotes en el campo Fig. 1 Pollos broilers: descarga nasal y área hinchadas alrededor del ojo. Fig. 2 Pollos broilers: hemorragia en el corazón y grasa coronaria . Fig. 3 Pollos broilers: conjuntivitis e inflamación alrededor del ojo. Fig. 4 Gallinas ponedoras: descarga nasal y cresta desplazada con cianosis. Fig. 5 Gallinas ponedoras: inflamación y hemorragia alrededor del ojo.

Fig. 6 Gallinas ponedoras: hemorragia en el tejido dérmico detrás de la entrada del orificio del oido . Fig. 7 Gallinas ponedoras: inflamación de los ríñones. Fig. 8 Gallinas ponedoras: hemorragias en el oviducto. Fig. 9 Gallinas ponedoras: folículos ováricos deformados . Fig. 10 Gallinas ponedoras: hemorragia en la unión entre el pro-ventrículo y el buche. Fig. 11 Gallinas ponedoras: congestión y hemorragia en el oviducto . B) Infección experimental Fig. 12 Gallinas ponedoras: inflamación y hemorragia en el riñon. Fig. 13 SPF: postración. Fig. 14 Gallinas ponedoras: hemorragia en la articulación y en el músculo. Fig. 15 Gallinas ponedoras: descarga nasal y cresta pálida . Fig. 16 Gallinas ponedoras: hemorragia en el músculo: Fig. 17 SPF: hemorragia en el corazón y grasa coronaria. Fig. 18 Gallinas ponedoras: ave sana a la izquierda y ave enferma a la derecha con las plumas erizadas. Fig. 19 Gallinas ponedoras: diarrea verdosa. Fig. 20 SPF: hemorragia en el músculo. Fig. 21 SPF: postración (problemas locomotores) y diarrea verdosa. Fig. 22 Gallinas ponedoras: hígado agrandado con hemorragia . DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Definiciones de los términos usados en la descripción: Antes de las realizaciones de la presente invención se debe notar que como se usan aquí y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un, una", "uno, una" y "el, la" incluyen referencias al plural a no ser que el contexto indique claramente otra cosa. Por tanto, por ejemplo, la referencia a "una Pasteurella trehalosi" incluye una pluralidad de tales bacterias Pasteurella trehalosi , la referencia a la "célula" es una referencia a una o más células y sus equivalentes conocidos por los expertos en la técnica, y así sucesivamente. Es irrelevante si una palabra está en mayúsculas o no, por tanto "Arabinosa" y "arabinosa" tienen el mismo significado, a no ser que se indique otra ' cosa. A menos que se defina otra cosa, todos los términos técnicos y científicos usados aquí tienen los mismos significados que comúnmente se entienden por una persona de experiencia normal en la técnica a la que esta invención pertenece . Aunque se pueden usar todos los métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos aquí en la práctica o ensayos de la presente invención, los métodos, dispositivos, y materiales preferidos se describen ahora.

Todas las publicaciones mencionadas aquí se incorporan a esta memoria como referencia con el propósito de describir y exponer las líneas celulares, vectores, y metodologías como se expresan en las publicaciones que se pueden usar en conexión con la invención. Nada aquí debe ser interpretado como una admisión de que la invención no está autorizada para anticipar tal descripción en virtud de la invención previa. Sorprendentemente, en la presente invención se ha observado una nueva enfermedad bacteriana de las aves de corral, que aparece principalmente en gallinas ponedoras y menos frecuentemente en pollos broilers. La enfermedad se vio en pollos que habían sido vacunados frente a la bacteria Haemophilus para.gallin.arum (agente causante de la coriza aviar) , y Pasteurella multocida (agente causante del cólera de las aves de corral) . Los síntomas de esta nueva enfermedad difieren de los síntomas específicos de la coriza. Dado el hecho de que la enfermedad recientemente descubierta muestra claramente los signos clínicos de una infección del tracto respiratorio superior como se describe más adelante,' H. paragallinarum puede ser eliminado como el agente causante. La presente invención se refiere en. una primera realización a bacterias Gram-negativas, anaeróbicas facultativas, con forma de bastón pleomorfico que causan una nueva enfermedad del tracto respiratorio superior y del tracto reproductivo de las aves de corral, en la que dichas bacterias se seleccionan del grupo de Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica. Tales bacterias según las invención se pueden aislar a partir de traquea, hendidura del paladar, ovario, hígado, corazón, riñon y gónadas, infectados (pollos broiler) . Se pueden identificar como Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según la invención basándose en los ensayos listados a continuación: Beta-Hemólisis + Tinción por Gram Oxidasa + Catalasa + Ureasa Nitrato + Indol Los aislados bacterianos se pueden purificar y hacer determinación de su biotipo según el método descrito por Jaworski et al (1) . Este método también está explicado en los ejemplos. Métodos importantes para clasificar las bacterias son la hibridación DNA-DNA, REA (análisis de la enzima de restricción, véase, por ejemplo, J. Clinical Microbiol, 1993, 31:831-835) y determinación del ribotipo. Dichos métodos " pueden ser aplicados por el técnico para ver si las bacterias están dentro del alcance de la presente invención. También se explica en los ejemplos un modelo de exposición para validar los postulados de Koch. Por tanto, una importante realización de la presente invención son las Pasteu.rel2a trehalosi y/o Mannheimia haemolytica, en la que dichas Pasteurella y/o Mannheimia son beta (ß) -hemolisis-positivas, Gram-negativas, oxidasa- positivas, catalasa-positivas , ureasa-negativas , nitrato- positivas e indol- egativas . Preferiblemente, dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según la invención son también MacConkey-positivas . Incluso es más preferido, que dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según la invención sean adicionalmente glucosa- positivas, sacarosa-positivas, manitol-positivas, arabinosa- negativas, celobiosa-negativas, xilosa-positivas, salicina- negativas, ornitina-negativas, esculina-negativas, alfa- fucosidasa-negativas , beta-galactosidasa-positivas . Las más preferidas son las Pasteurella trehalosi según la invención, en las que dichas Pasteurella son también arabinosa-negativas y trehalosa-positivas . Preferiblemente también, dichas Pasteurella trehalosi según la invención son también beta (ß) - glucosidasa-negativas o -positivas, dependiendo del biotipo. También las más preferidas son las Mannheimia haemolytica según la invención, donde dichas Mannheimia son además "arabinosa-negativas y trehalosa-negativas . Preferiblemente también, dichas Mannheimia haemolytica según la invención son también beta-glucosidasa-negativas .

Estas propiedades características de las bacterias según la invención hacen que las bacterias según la invención sean nuevas en relación con otros patógenos bacterianos de las aves de corral conocidos (Diseases of Poultry, décima edición, editado por B.W. Calnek, Iowa State University Press, Iowa, U.S.A. 1997) . Otra realización preferida de la presente invención son las Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según la invención, en la que dichas aves de corral se seleccionan del grupo de pollos, pavos, patos, gansos, palomas, pichones y codornices . La invención proporciona un nuevo tipo de bacterias Gram-negativas , anaeróbicas facultativas, de forma de bastón pleomórfico, estando caracterizado dicho nuevo tipo de bacterias por las bacterias depositadas ante la American Type Culture Collection (ATCC) , 1081, University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA, con los siguientes números de depósito : Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3667 (designación interna BIV-4985) ; Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3668 (designación interna BIV-AVICOR) ; Mannheimia haemolytica ATCC N° PTA-3669 (designación interna BIV-07990) La fecha del depósito fue 22 de agosto de 2001.

Por tanto, una realización más preferida de la presente invención son las Pasteurella trehalosi depositadas con el número de registro ATCC N° PTA-3667. En la tabla 3 del ejemplo 1 se dan ejemplos adicionales de estas bacterias. Otra realización más preferida de la presente invención son Pasteurella trehalosi depositadas con el número de registro ATCC N° PTA-3668. En la tabla 2 del ejemplo 1 se dan ejemplos adicionales de estas bacterias. Otra realización más preferida de la presente invención son Mannheimia haemolytica con el número de registro ATCC N° PTA-3669. En la tabla 1 del ejemplo 1 se dan ejemplos adicionales de estas bacterias . Los resultados de los ensayos de las secciones A y B de los ejemplos (tablas 1, 2 y 3) confirman que las bacterias BIV-4895; ATCC N° PTA-3667 y BIV-AVICOR; ATCC N° PTA-3668 pertenecen a la familia Pasteurellaceae {Pasteurella trehalosi, que son trehalosa-positivas y arabinosa-negativas) , mientras que la bacteria BIV-07990; ATCC N° PTA-3669 pertenece a la familia Mannheimia {Mannheimia haemolytica, que son trehalosa-negativas y arabinosa-negativas) . La invención se refiere también al cultivo microbiológico que comprende bacterias según la invención como se ha descrito antes. El cultivo se puede preparar haciendo crecer dichas bacterias a una temperatura entre 35 y 37°C. Las bacterias pueden ser cultivadas bajo presión de oxigeno atmosférico normal . Las bacterias pueden ser cultivadas en una variedad de medios diferentes de promoción del crecimiento bacteriano con propósitos generales conocidos por los expertos, por ejemplo, caldo de triptosa (TB) , caldo de tripticaseína de soja o caldo de infusión de cerebro y corazón o cualquier medio enriquecido. Las bacterias también pueden ser cultivadas en agar con sangre de oveja incubado a 37°C durante 24 horas. Son conocidos en la técnica diferentes métodos físicos y quxmicos de inactivación bacteriana. Ejemplos de inactivación física son la radiación UV, radiación de rayos X, radiación gamma y calentamiento. Ejemplos de inactivantes químicos son beta-propiolactona, glutaraldehído, beta-etilenimina y formaldehído . Preferiblemente las bacterias según la invención se inactivan con formaldehído . Sorprendentemente, el uso de formaldehído hasta una concentración final del 0,2% es un método excelente para inactivar las bacterias según la invención. Por tanto, en otro aspecto importante, la invención se refiere a un método para la inactivación de una Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según la invención que comprende el uso de formaldehído a una concentración final del 0,2%.

Dichas bacterias según la invención que se inactivan por los métodos descritos antes y por otros métodos de inactivación de bacterias conocidos por los expertos son realizaciones de la presente invención. Por tanto, otro aspecto importante son las Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica inactivadas obtenibles por un método según la invención o por un método conocido en la técnica. Preferiblemente, dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica inactivadas según la invención se seleccionan del grupo de Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3667, Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3668 y/o Mannheimia haemolytica ATCC N° PTA-3669. Por tanto, otro aspecto importante son las Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica vivas atenuadas obtenibles por un método conocido en la técnica. Preferiblemente, dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica vivas atenuada según la invención se seleccionan del grupo de Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3667, Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3668 y/o Mannheimia haemolytica ATCC N° PTA-3669. Dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según la invención se atenúan por múltiples pases en medios de cultiva adecuados o por cualquier otro método conocido en la técnica. Inactivado como se entiende aquí significa, que las Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según la invención están muertas sin replicación posible que cause enfermedad clínica. Atenuado como se entiende aquí significa, que las Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según la invención son bacterias vivas con replicación posible pero que no causarán enfermedad clínica. Otro aspecto importante adicional son las fracciones o fragmentos de las Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica obtenibles por un método conocido en la técnica. Dichos fragmentos se pueden preparar por solubilización con detergente de las Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según la invención o por cualquier otro método conocido en la técnica. Preferiblemente, dichas fracciones o fragmentos son antígenos purificados de dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según la invención. Preferiblemente, dichas fracciones/fragmentos son proteínas de la membrana, externa de las Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según la invención. Un "fragmento" según la invención es cualquier subunidad inmunogénica de dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según la invención, es decir, un subconjunto polipetídico . Por tanto, la invención se refiere a fragmentos que contienen al menos un antígeno de las Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según la invención. Lo más preferiblemente, dichos fragmentos contienen al menos un antígeno de las bacterias seleccionadas del grupo Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3667, Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3668 y/o Mannheimia haemolytica ATCC N° PTA-3669. Dicho fragmento puede comprender células bacterianas enteras de dichas cepas, extractos bacterianos, fracciones de la membrana externa, exo- y/o endotoxinas bacterianas, y proteínas purificadas. Los polipéptidos antigénicos o sus fragmentos pueden, por ejemplo, obtenerse a partir de proteínas bacterianas purificadas o por expresión del material genético correspondiente en algunos sistemas de expresión procarióticos o eucarióticos o por síntesis organoquímica . Dichos métodos son conocidos por los expertos. La invención se refiere además a las Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica vivas, y/o vivas atenuadas, y/o inactivadas según la invención y/o a fracciones de dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica para uso en una vacuna . La invención proporciona además una vacuna derivada de las bacterias identificadas como nuevas descritas antes . Por tanto, la invención se refiere además a una composición de una vacuna que comprende una Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica viva, y/o viva atenuada, y/o inactivada según la invención y/o a fracciones de dicha Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica. El término "vacuna" como se entiende aquí es una vacuna para uso veterinario que comprende sustancias antigénicas y que se administra con el propósito de inducir una inmunidad especifica activa o pasiva frente a una enfermedad provocada por dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica. Las Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica vivas o atenuadas vivas según la invención confieren inmunidad activa que puede ser transferida pasivamente a través de los anticuerpos maternos frente a los inmunógenos que contiene y algunas veces también frente a organismos antigénicamente relacionados. Las Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica inactivadas según la invención y/o las fracciones de dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica confieren inmunidad pasiva. Componentes adicionales para potenciar la respuesta inmune son constituyentes a los que se denomina comúnmente adyuvantes, como por ejemplo, hidróxido de aluminio, aceite mineral u otros aceites o moléculas relacionadas añadidas a la vacuna o generadas por el cuerpo después de la inducción respectiva por tales componentes adicionales, semejantes, pero sin restringirse a ellos, a interferones , interleuquinas o factores de crecimiento. En una realización preferida, dicha vacuna comprende bacterias inactivadas .

Preferiblemente, una vacuna de la invención se refiere a una vacuna como se ha definido antes, en la que un componente inmunológicamente activo es una Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica viva. El término "vacuna viva" se refiere a una vacuna que comprende una partícula capaz de división/multiplicación . Preferiblemente también, una vacuna según la invención comprende Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica atenuadas según la invención y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable. Dicha vacuna puede ser administrada también como una vacuna combinada que comprende dos o más cepas de dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica vivas, y/o vivas atenuadas, y/o inactivadas de la invención y/o las fracciones de dos o mas cepas de dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica. Lo más preferiblemente dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica vivas, y/o vivas atenuadas, y/o inactivadas según la invención y/o las fracciones de dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica en la vacuna se seleccionan del grupo de Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3667, Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3668 y/o Mannheimia haemolytica ATCC N° PTA-3669. Preferiblemente también, una vacuna según la invención comprende Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica inactivadas según la invención y un vehículo o excipiente farmacéuticamenté aceptables. Dicha vacuna se puede administrar también como una vacuna combinada que comprende dos o más cepas de dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheímia haemolytica inactivadas. Además, se pueden usar también las fracciones de las células enteras como el inmunógeno relevante en la vacuna según la invención. Por tanto, preferiblemente una vacuna según la invención comprende fracciones de Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según la invención y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptables. Dicha vacuna se puede administrar también como una vacuna combinada que comprende dos o más cepas de dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica inactivadas. En particular, la invención se refiere a vacunas que comprenden fragmentos que contienen al menos un antígeno de Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según la invención. Lo más preferiblemente, la invención se refiere a vacunas que contienen fragmentos que contienen al menos un antígeno de las bacterias seleccionadas del grupo Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3667, Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3668 y/o Mannheimia haemolytica ATCC N° PTA-3669. Dicho fragmento puede comprender células bacterianas enteras, extractos bacterianos, fracciones de la membrana exterior, exo- y/o endotoxinas bacterianas, y proteínas purificadas. Los polipéptidos antigénicos o sus fragmentos, por ejemplo, p eden obtenerse a partir de proteínas bacterianas purificadas o por expresión del material genético correspondiente en algunos sistemas de expresión procarióticos o eucarióticos o por síntesis organoguímica . Dichos métodos son conocidos por los expertos . Preferiblemente, la vacuna según la invención comprende también un adyuvante. Por tanto, la invención se refiere además a una composición de una vacuna según la invención, que comprende además uno o más adyuvantes adecuados y/o excipientes y/o vehículos . Los adyuvantes como se usan aquí comprenden sustancias que refuerzan la respuesta inmune del animal inyectado. Se conocen en la técnica una serie de adyuvantes diferentes. Los adyuvantes como se usa aquí incluyen adyuvante de Freund completo e incompleto, vitamina E, polímeros de bloque no iónicos, muramildipéptidos, Quil A, aceite mineral y no mineral, aceite vegetal, y Carpobol (un homopolímero) . En una realización preferida, la vacuna según la invención, bacterina, comprende un adyuvante en emulsión de agua en aceite. Dicha vacuna se llama también una bacterina que comprende bacterias inactivadas (muertas) según la invención y un adyuvante en emulsión de agua en aceite . Otros modos para añadir adyuvantes a las bacterias conocidos por los expertos son también realizaciones de la presente invención. Preferiblemente también, la vacuna según la invención puede comprender uno o más emulsificantes adecuados, por ejemplo, Span o T een. Preferiblemente también, dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica vivas, y/o vivas atenuadas, y/o inactivadas según la invención y/o las fracciones de dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica en la vacuna se seleccionan del grupo de Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3667, Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3668 y/o Mannheimia haemolytica ATCC N° PTA-3669. Preferiblemente, la vacuna de la presente invención comprende al menos un antigeno de las bacterias seleccionadas del grupo Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3667, Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3668 y/o Mannheimia haemolytica ATCC M° PTA-3669. Dicha vacuna puede comprender, células bacterianas enteras de dichas cepas, extractos bacterianos, fracciones de la membrana externa, exo- y/o endotoxinas bacterianas, y proteínas purificadas. Los polipéptidos antigénicos o sus fragmentos, por ejemplo, se pueden obtener a partir de proteínas bacterianas purificadas o por expresión ' del material genético correspondiente en algunos sistemas de expresión procarióticos o eucarióticos o por síntesis organoquímica . Dichos métodos son conocidos por los expertos. Lo más preferiblemente, la invención se refiere además a una composición de vacuna según la invención, que comprende además al menos otro antígeno procedente de un virus o microorganismo patógeno para las aves de corral . Preferiblemente, dicho antígeno está en forma de virus o microorganismos vivos, atenuados o inactivados o sus fragmentos . Dicho fragmento puede comprender células bacterianas enteras o partículas virales, extractos bacterianos, antígenos virales, subunidades virales, fracciones de la membrana externa, exo- y/o endotoxinas bacterianas, y proteínas purificadas. Los polipéptidos antigénicos o sus fragmentos, se pueden obtener, por ejemplo, a partir de protexnas bacterianas purificadas o por expresión del material genético correspondiente en algunos sistemas de expresión procarióticos o eucarióticos o por síntesis organoguímica. Dichos métodos son conocidos por los expertos.' Los más preferiblemente, la invención se refiere además a una composición de vacuna según la invención, que comprende además al menos otro antígeno procedente de un virus o microorganismo patógeno para las aves de corral, en la que dicho virus o microorganismo se selecciona del grupo constituido por virus de la bronquitis infecciosa, virus de la enfermedad de Newcastle, virus de la enfermedad bursal infecciosa (enfermedad: Gumboro) , agente de la anemia de los pollos, reovirus aviar, Micoplasma gallisepticum, neumovirus aviar, Haemophilus paragallinarum (enfermedad: coriza) , poxvirus de los pollos, virus de la encefalomielitis aviar, Pasteurella ultocida y E. Coli , pero sin restringirse a ellos . Una "composición farmacéutica" consta esencialmente de uno o más ingredientes capaces de modificar las funciones fisiológicas, por ejemplo, funciones inmunológicas del organismo al que se administra, o de los organismos vivientes en o sobre el organismo. El término incluye, pero sin restringirse a ellos, antibióticos o antiparasitarios, asi como otros constituyentes usados comúnmente para lograr otros objetivos como características de preparación, esterilidad, estabilidad, posibilidad para administrar la composición por las vías enteral o parenteral tales como las vias oral, intranasal, intravenosa, intramuscular, subcutánea, intradérmica u otras vías adecuadas, tolerancia después de la administración, propiedades de liberación controlada. Por tanto, en otro aspecto importante de la invención, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende una Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica viva, y/o viva atenuada, y/o inactivada según la invención y/o fracciones de dicha Pasteurella trehalosi' y/o Mannheimia haemolytica. La invención se refiere a un método para tratar un animal infectado con Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica (por ejemplo, la bacteria viva que se ha descrito antes) perteneciente al grupo de las aves de corral, donde dicha Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica viva, atenuada, inactivada y/o sus fracciones y/o sus fragmentos según la invención como se ha descrito antes, se administran al ave de corral que los necesita a las dosis adecuadas como es conocido por los expertos y se hace seguimiento de la reducción de los síntomas causados por dicha infección por Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica. Dicho tratamiento preferiblemente se puede repetir. Otra realización importante adicional es un método para inmunizar las aves de corral frente a la enfermedad del tracto respiratorio y del tracto reproductivo causada por una Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica (por ejemplo, las bacterias vivas como se ha descrito antes) que comprende la administración de una cantidad inmunológicamente eficaz de una vacuna según la invención y se hace seguimiento de la reducción de los síntomas causados por dicha infección por Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica. Otra realización importante es el uso de una Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica inactivada según la invención y/o de una Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica viva según la invención y/o de una Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica viva atenuada según la invención y/o fragmentos o fracciones de dicha Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según la invención en la fabricación de una vacuna para la profilaxis de las infecciones por Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica . La invención también se refiere a un método de diagnóstico de una enfermedad causada por, que comprende las etapas de obtener una muestra de un ave de corral, en el que dicha muestra se selecciona del grupo de la sangre, suero, plasma, raspaduras, lavados y frotes de tejido y tejido y analizar dicha muestra en cuanto a la presencia de Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según la invención . En una realización preferida la presencia de Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica se determina por un ensayo inmune . Un ensayo inmune usa anticuerpos monoclonales o antisueros policlonales específicos para la Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica. La generación de los anticuerpos monoclonales es conocida en la técnica (3,4). Los ensayos inmunes incluyen los métodos de detección conocidos en la técnica tales como el ensayo ELISA (ensayo de inmunosorbente ligado a enzimas) o el llamado ensayo sándwich-ELISA, transferencias, inmunotransferenc'ias, radioinmunoensayos (radioinmunoensayo RIA) , ensayo de Ouchterlony basado en la difusión o ensayos inmunofluorescentes rocJet o ensayos de aglutinación (ensayos de aglutinación en placa rápida o en microplaca) . Otro ensayo inmune es el llamado transferencia Western (también conocido como procedimiento de transferencia Western o transferencia estern) . El propósito de la transferencia Western es transferir proteínas o polipéptidos separados por electroforesis en gel de poliacrilamida sobre un filtro de nitrocelulosa u otro vehículo adecuado y al mismo tiempo retener las posiciones relativas de las proteínas y los polipéptidos obtenidos de la electroforesis en gel . La transferencia Western es incubada después con un anticuerpo que se une específicamente a la proteína o el polipéptido en consideración. Se pueden usar estos métodos de detección por la persona experta con experiencia media para realizar la invención descrita aquí. Se listan a continuación las referencias bibliográficas en las que los expertos pueden encontrar los métodos antes mencionados y otros métodos de detección: An Introduction to Radioi munoassay and Related Techniques, Elsevier Science Publishers, Amsterdam, The Netherlands (1986); Bullock et al., Techniques in Iwmunocytochemistry, Academic Press, Orlando, FL Vol . 1 (1982), Vol. 2 (1983), Vol. 3 (1985); Tijssen, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays: Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology; Elsevier Science Plublishers, Amsterdam, the Netherlands (1985) . En otra realización más particular, se incuba la muestra como se ha descrito antes con" anticuerpos que son específicos para la Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia hae olytica y se determina el complejo antígeno/anticuerpo así formado.

En una realización particularmente preferida del método según la invención, se determina la presencia de la Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica en una muestra como se ha descrito antes por métodos de biología molecular. Los métodos de biología molecular como se usa aquí significan métodos de detección que incluyen, por ejemplo, la reacción en cadena de la polimerasa (PC ) , la reacción en cadena de la transcriptasa inversa-polimerasa (RT-PCR) o pueden ser transferencias Northern o Southern que los expertos pueden encontrar en los libros de referencia estándar (por ejemplo, Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory manual, 2nd ed. , cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York and bertram, S. and Gassen, H.G. Gentechnische Methoden, G. Fischer Verlag, Stuttgart, New York, 1991) . La invención incluye también un kit de ensayo de diagnóstico según la invención que se caracteriza porque contiene todo los elementos necesarios para detectar la Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica. Un kit de ensayo de diagnóstico es una colección de todos los componentes para llevar a cabo un método de diagnóstico según la invención. Algunos ejemplos (no una lista exhaustiva) de otros elementos para desarrollar un método según la invención incluyen recipientes tales como placas de 96 pocilios o placas de microtitulación, tubos de ensayo, otros recipientes, superficies y sustratos adecuados, membranas tales como filtro de nitrocelulosa, reactivos de lavado y tampones . Un kit de ensayo de diagnóstico puede contener - también reactivos que pueden detectar los anticuerpos unidos, tal como por ejemplo, anticuerpos secundarios marcados, cromóforos, enzimas (por ejemplo, conjugadas con anticuerpos) y sus sustratos u otras sustancias que son capaces de unirse a los anticuerpos . La invención se refiere además a un kit de ensayo de diagnóstico según la invención que se caracteriza porque contiene todos los elementos necesarios para llevar a cabo una PCR o RT-PCR para detectar el DNA o RA específicos para la Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytic . Dicho kit contiene en adición a los tubos de ensayo o placas de 96 pocilios o placas de microtitulación, otros recipientes, superficies y sustratos adecuados, membranas tales como filtro de nitrocelulosa, reactivos de lavado y tampones (que pueden variar en pH y en concentración de magnesio) , agua estéril, aceite mineral, BSA (seraalbúmina bovina), MgCl2, (NH4)2S04, DMSO (dimetilsulfóxido) , mercaptoetanol , nucleótidos (d TPs) , enzimas tales como Taq-polimerasa y transcriptasa inversa y, como matriz del DNA, el DNA o cDNA específico para la Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica, oligonucleótidos específicos para un DNA o RNA de una Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica, patrón de control, DEPC-agua, DNAsa, R Asa y compuestos adicionales conocidos por el técnico experto, pero sin limitarse a ellos. Los oligonucleótidos según la invención son moléculas de ácido nucleico cortas de aproximadamente 15 a aproximadamente 100 nucleótidos de longitud, que se unen bajo condiciones rigurosas a la secuencia de ácido nucleico que es complementaria a una proteína de la Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica. Por condiciones rigurosas los expertos quieren indicar condiciones que seleccionan más del 85%, preferiblemente más del 90% de homología (cf. Sambrook et al., (1989) Molecular Cloning:A Laboratory Manual, 2nd ed. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York and bertram, S. And gassen, H. G. Gentechnische methoden, G. Fischer verlag, Stuttgart, New York, 1991) . Los siguientes ejemplos sirven para ilustrar adicionalmente la presente invención; pero no se debe considerar a los mismos como limitantes del alcance de la invención descrita aquí . EJEMPLO I Brotes de enfermedad en el campo asociados con la Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica Señales clínicas A partir de observaciones en el campo Gallinas ponedoras Pollos Broilers Leve-tracto respiratorio superior Severo-tracto respiratorio superior /reproductivo /reproductivo Edad: 22 semanas de edad Edad:7 semanas Descarga nasal Estornudos con estertores Áreas hinchadas alrededor del ojo Cabeza hinchada Consumo bajo de alimentos Consumo bajo de alimentos Diarrea blanquecina Depresión Disminución de la producción de huevos Crecimiento no uniforme Mortandad baja Plumas erizadas Cresta descolocada Postración Cianosis de la cresta Mortandad 8% Lesiones importantes Atrofia ovárica con hemorragias y Hemorragia en las gónadas regresión Folículos ováricos deformados Parte superior de la traquea con Hemorragias Hígado agrandado Hígado agrandado con hemorragias Inflamación de los ríñones Airsaculitis Hemorragias en la grasa abdominal Bazo agrandado con hemorragias Hemorragias en la cavidad torácica Hemorragias en el músculo Hemorragias en el oviducto Hemorragias en el corazón y en el Hidropericardio Hemorragias en la grasa coronaria Hemorragias en la cavidad torácica Tres cepas de un nuevo tipo de bacterias Gram-negativas anaeróbicas facultativas, con forma de bastón pleomórfico fueron depositadas en el American Type Culture Collection (ATCC) , 1081, University Boulevard, Manassas, VA 20110 - 2209, USA, bajo el número de depósito: ATCC No. PTA-3667 para BIV-4985 Pasteurella trehalosij ATCC No. PTA-3668 para BIV- AVICO Pasteurella trehalosi y ATCC No. PTA-3669 para BIV- 07990, Mannheimia haemolytica . Siendo la fecha del depósito el 22 de agosto de 2001. Se hizo la determinación del tipo las bacterias depositadas de acuerdo con métodos de determinación estándar, usando el Bergey' s Manual of Systematic Bacteriology Volume I (1984. Williams and Wilkins, 428 East Preston Street. Baltimore, USA.) TABLA 1 Mannheimia haemolytica : BIV - 07990 (Biotipo 1) ; ATCC No. PTA-3669 Morfología macroscópica Colonias cultivadas en agar con sangre de oveja durante 24 horas, intervalo desde 1,0 a 1,5 mm de diámetro, translúcidas brillantes, convexas bajas, suaves y cremosas, con ß- hemolisis. Morfología microscópica _ Gram-negativas, no móviles, bastones pleomórficos , presentan a menudo tinción bipolar. Ensayos bioquímicos y otros ensayos Sección A Sección B Maltosa + Manitol + Arabinosa - Celobiosa - Sorbitol + Xilosa + Treahalosa - Salicina - Omitiría - Esculina - ß-Glucosidasa - a-Fucosidasa - P- + Galactosidasa TABLA 2 Pasteurella trehalosi BIV-AVICOR (Biotipo 2) ; ATCC No. PTA-3668 Morfología macroscópica Colonias cultivadas en agar con sangre de oveja durante 24 horas, intervalo desde 1,0 a 1,5 mm de diámetro, translúcidas brillantes, convexas bajas, suaves y cremosas, con ß-hemolisis . Morfología microscópica Gram-negativas, no móviles, bastones pleomórficos , presentan a menudo tinción bipolar.

Ensayos bioquímicos y otros ensayos Sección A ENSAYO REACCION Oxidasa + Catalasa + Indol - Glucosa + Sacarosa + MacConkey + Ureasa - Nitrato + Sección B a 80% son positivas TABLA 3 Pasteurella trehalosi : BIV - 4895 (Biotipo 4); ATCC No. PTA-3667 Morfología macroscópica Colonias cultivadas en agar de sangre de oveja durante 24 horas, intervalo desde 1,0 a 1,5 mm de diámetro, translúcidas brillantes, convexas bajas, suaves y cremosas; con ß-hemolisis. Morfología microscópica Gram-negativas, no móviles, bastones pleomórficos , presentan a menudo tinción bipolar.

Ensayos bioquímicos y otros ensayos Sección A Sección B Maltosa - Manitol + Arabinosa - Celobiosa - Sorbitol + Xilosa + Trehalosa + Salicina - Ornitina - Esculina - ß-Glucosidasa cc-Fucosidasa - ß-Galactosidasa + Los resultados de los ensayos de las secciones A y B (tablas 1, 2 y 3) confirman que las bacterias BIV-4895; ATCC N° PTA-3667 y BIV-AVICOR; ATCC N° PTA- 3668 pertenecen a la familia Pasteurellaceae, (Pasteurella trehalosi , que son trehalosa-positivas y arabinosa-negativas) , mientras que las bacterias BIV-07990; ATCC N° PTA-3669 pertenece a la familia Mannheimia (Mannheimia haemolytica, que son trehalosa-negativas y arabinosa-negativas) . Identificación del agente causante Se aislaron las bacterias de la traquea, hendidura del paladar, ovario, hígado, corazón, riñon y gónadas, infectados (pollos broiler) . Se identificaron como Pasteurella trehalosi y Mannheimia haemolytica basándose en los ensayos listados a continuación: Beta-Hemólisis Tinción por Gram Oxidasa + Catalasa + Mac Conkey + Ureasa Nitrato + Indol No se hicieron aislamientos de virus ni de ninguna otra bacteria .

Determinación del Biotipo: Los aislados bacterianos se purificaron y se hizo la determinación de su biotipo según el método descrito por Jaworski et al. (1). Se identificaron tres biotipos diferentes (4, 2, 1) . En resumen, a partir de los aislados purificados, se inoculó una única colonia en los tubos que contienen 3 mi de caldo de triptosa y se incubaron a 37 °C durante 8 horas. Un asa de inoculo (20 µ?) del tubo se transfirió después a otro tubo que contenía 3 mi de azúcar al 1% para ser ensayado e incubado durante 7 días a 37 °C antes de que se registrasen los resultados . Modelo de exposición: Después de la purificación de las bacterias, se cultivaron los aislados en medios de triptosa para obtener grandes cantidades de patógenos puros. Para validar los postulados de Koch, 3 grupos diferentes (20 aves por grupo) de pollos de 13 semanas de edad libres de patógenos específicos (SPF) se infectaron con cada biotipo (0,2. mi/ ave; 3 xlO8 CFU/ml) por vía intravenosa. Se observó a las aves diariamente durante 3 días en cuanto a la morbididad y mortandad. Al final del tercer día, se sacrificaron todas las -aves, se registraron las lesiones post-muerte y se recogieron muestras de órganos (hígado y gónadas) para re-aislamiento. Se registraron también las lesiones post-muerte de las aves que murieron. Resultados Señales clínicas: postración, cojera, cresta descolocada, plumas erizadas, cianosis en la punta de la cresta. Lesiones : EJEMPLO II Cultivo de las bacterias según la invención, preparación de la vacuna y vacunación de las aves SPF. Se cultivaron las cepas en caldo de triptosa (TB) . La recolección se realizó en fase de crecimiento logarítmico alrededor de 6-8 horas después de la inoculación dependiendo de la cepa. El recuento de la placa se realizó en agar con sangre de oveja para titulación. Se determinaron las unidades formadoras de colonias por mililitro (CFU/ml) usando diluciones 1:10 de la recolección. Las células se mataron añadiendo formaldehldo hasta una concentración final del 0,2%'. Después de un ensayo de esterilidad de esta suspensión, se añadió un titulo mínimo de 108 CFU/ml a la vacuna final. Se preparó la vacuna mezclando las dos cepas (BIV-4895, ATCC N° PTA-3667 y BIV-AVICOR, ATCC N° PTA-3668) y adyuvante oleoso (una emulsión de agua en aceite sobre la base de un aceite mineral con una proporción de 60% de aceite/ 40% de agua) hasta una concentración mínima de 107'0 CFU/cepa/ml . Se vacunaron los pollos libres de patógenos específicos (SPF) a las 2,5 y 9 semanas de edad por inyección de 0,5 mi de la vacuna subcutáneamente hacia la mitad del cuello. EJEMPLO III Preparación de las cepas para exposición y exposición de los grupos vacunados y los testigos . Las cepas bacterianas BIV-4895, ATCC N° PTA-3667 y BIV-AVICOR, ATCC N° PTA-3668, fueron cultivadas sobre agar con sangre de oveja durante 24 horas a 37 °C. Se recolectaron las células en caldo de triptosa (TB) hasta que se obtuvo una suspensión con una densidad óptica de 2,0, usando un espectrofotómetro a una longitud de onda de 540 nm. Para la exposición, se hicieron las preparaciones que contienen el siguiente número de células en el volumen final de exposición: 3 x 109 CFU/ml BIV-AVICOR; ATCC N° PTA-3668 1,45 x 1010 CFU/ml BIV-4895; ATCC N° PTA-3667 A las 13 semanas de edad, 20 aves vacunadas y 20 aves no vacunadas fueron expuestas por via intravenosa a 0,2 mi de inoculo (al menos 108,0 CFU/ave) . Se observaron las aves durante 3 días en cuanto a la morbididad y mortandad. Después de tres días de observación se sacrificaron todas las aves restantes y volvieron a aislar las bacterias del hígado y de las gónadas de cada ave. Se registraron también las lesiones post-muerte de las aves que murieron. RESULTADOS Grupo de aves Inoculo de Mortandad + Protección% exposición Reaislamiento Testigo negativo N/A 0 N/A Testigo positivo ATCC N° PTA-3667 77 23 Testigo positivo ATCC N° PTA-3668 54 46 Vacunado ATCC N° PTA-3667 0 100 Vacunado ATCC N° PTA-3668 5 95 EJEMPLO IV Cultivo de las bacterias según la invención, preparación de la vacuna y vacunación de las aves SPF. Se cultivaron las cepas en caldo de triptosa (TB) . La recolección se realizó en fase de crecimiento logarítmico alrededor de 6-8 horas después de la inoculación dependiendo de la cepa. El recuento de la placa se realizó en agar con sangre de oveja para titulación. Se determinaron las unidades formadoras de colonias por mililitro (CFU/ml) usando diluciones 1:10 de la recolección. Las células se mataron añadiendo formaldehído hasta una concentración final del 0,2%. Después de un ensayo de esterilidad de esta suspensión, se añadió un título mínimo de 108 CFU/ml a la vacuna final. Se preparó la vacuna mezclando las tres cepas (BIV-4895, ATCC N° PTA-3657; BIV-AVICOR, ATCC N° PTA-3668 y BIV-07990, ATCC N° PTA-3669) y adyuvante oleoso (una emulsión de agua en aceite sobre la base de un aceite mineral con una proporción de 60% de aceite/40% de agua) hasta una concentración mínima de 107'0 CFU/cepa/ml. Se vacunaron los pollos libres de patógenos específicos (SPF) a las 2,5 y 9 semanas de edad por inyección de 0,5 mi de la vacuna subcutáneamente hacia la mitad del cuello. EJEMPLO V Preparación de las cepas para exposición y exposición de los grupos vacunados y los testigos. Las cepas bacterianas BIV-4895, ATCC N° PTA-3667; BIV- AVICOR, ATCC N° PTA-3668 y BIV-07990, ATCC N° PTA-3669, fueron cultivadas sobre agar con sangre de oveja durante 24 horas a 37 °C. Se recolectaron las células en caldo de triptosa (TB) hasta que se obtuvo una suspensión con una densidad óptica de 2,0, usando un espectrofotómetro a una longitud de onda de 540 nm.

Para la exposición, se hicieron las preparaciones que contienen el siguiente número de células en el volumen final de exposición: 8.3 x 109 CFU/ml BIV-AVICOR; ATCC N° PTA-3668 2,2 x 109 CFU/ml BIV-4895; ATCC N° PTA-3667 1,0 x 1010 CFU/ml BIV-07990; ATCC N° PTA-3669 A las 13 semanas de edad, 20 aves vacunadas y 20 aves no vacunadas fueron expuestas por via intravenosa a 0,2 mi de inoculo (al menos 108"0 CFU/ave) . Se observaron las aves durante 3 días en cuanto a la morbididad y mortandad. Después de tres días de observación se sacrificaron todas las aves restantes y se volvieron a aislar las bacterias del hígado y de las gónadas de cada ave. Se registraron también las lesiones post-muerte de las aves que murieron. RESULTADOS Grupo de aves Inoculo de Mortandad + Protección (%) exposición Reaislamiento Testigo negativo vacunado N/A 0 N/A Testigo negativo N/A 0 N/A no-vacunado Vacunado ATCC N° PTA-3669 27,3 72,7 Vacunado ATCC N° PTA-3668 20,9 79,1 Vacunado ATCC N° PTA-3667 . 16,7 83,7 Testigo positivo ATCC N° PTA-3669 53,3 46,7 Testigo positivo ATCC N° PTA-3668 53,3 46,7 Testigo positivo ATCC N° PTA-3667 64,3 35,7 Ensayo serológico Se produjeron sueros hiperinmunes en conejos con el aislado que representa a cada biotipo, según el método de Biberstein et al. (2) Los aislados fueron cultivados sobre agar con sangre durante la noche, después se recogieron en solución salina que contenía 0,3% de formalina. Se lavaron las células una vez y se ajustaron hasta una transmitancia del 10% a 575 nm para inyección. Las inyecciones se realizaron por la via IV de acuerdo con el siguiente programa: 0,5 mi, 1,0, 2,0, 3,0, 3,0, 3,0 a inérvalos de 4 días y todos los conejos se sangraron 4 días después de la inyección final . Se ensayó el suero hiperinmune en cuanto a su especificidad usando las cepas de los 3 biotipos y se hicieron reaccionar con antisuero de conejo homólogo y heterólogo (diluciones de 2 veces) por aglutinación en placa rápida. Se diluyó el antisuero de cada biotipo hasta que se alcanzó el punto final para determinar la dilución más alta que fuese positiva. Dilución (log2) Antígeno Biotipo 1 Antisuero 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1 + + + + + + + + + + + 2 - - - - - - - - - - - 4 - - - - - - - - - - - Dilución (log2) Antígeno Biotipo 4 Dilución (log2) Antigeno Biotipo 2 Los sueros hiperhinmunes específicos de un biotipo se usaron después como testigo positivo en el ensayo de aglutinación del suero en micro-placas . EJEMPLO VI Preparación de las cepas para exposición y exposición de los grupos vacunados y los testigos . Las cepas bacterianas BIV-4895, ATCC N° PTA-3667; BIV- AVICOR, ATCC N° PTA-3668 y BIV-07990, ATCC N° PTA-3669, fueron cultivadas sobre agar con sangre de oveja durante 24 horas a 37 °C. Se recolectaron las células en caldo de triptosa (TB) hasta que se obtuvo una suspensión con una densidad óptica de 2 , 0 , usando un espectrofotómetro a una longitud de onda de 540 nm.

Para la exposición, se hicieron las preparaciones que contienen el siguiente número de células en el volumen final de exposición: 1.5 x 1010 CFU/ml BIV-AVICOR; ATCC N° PTA-3668 1,7 X 1010 CFU/ml BIV-4895; ATCC N° PTA-3667 1.6 x 1010 CFU/ml BIV-07990; ATCC N° PTA-3669 A las 13 semanas de edad, se expusieron 20 aves vacunadas y 20 aves no vacunadas por via intravenosa a 0,2 mi de inoculo (al menos 108'0 CFU/ave) . Se observaron las aves durante 3 dias en cuanto a la morbididad y mortandad. Después de tres días de observación se sacrificaron todas las aves restantes, se registraron las lesiones post-muerte y se volvieron a aislar las bacterias del hxgado y de las gónadas de cada ave . RESULTADOS Tabla 1. Evaluación del efecto de la vacuna basándose en la mortandad y re-aisiamiento . Inoculo de Mortandad + Re¬ Grupo de aves Protección% exposición aislamiento Testigo negativo N/A N/A N/A no vacunado Testigo positivo BIV-4895 70 30 Testigo positivo BIV-AVICOR 80 20 Testigo positivo BIV-07990 88,8 11,2 Vacunado BIV-4895 10 90 Vacunado BIV-AVICOR 10 90 Vacunado BIV-07990 15 85 Tabla 2. Evaluación del efecto de la vacuna basándo lesiones importantes después de la exposición. Grupo de Inoculo de % de lesiones Protección % aves exposición Testigo negativo N/A N/A N/A no vacunado Testigo positivo BIV-4895 74,4 25,6 Testigo positivo BIV-AVICOR 27,0 73,0 Testigo positivo BIV-07990 7,0 93,0 Vacunado BIV - 4895 4,0 96,0 Vacunado BIV - AVICOR 1,1 99,0 Vacunado BIV - 07990 2.4 98,0 Referencias Ja orski M.D., D. L. Hunter, A. C. S. Ward. Biovariants of isolates of Pasteurella from domestic and wild ruminants. J. Vet. Invest. 1988, 10: 49-55. Biberstein EL. , Meyer M.E. , and Kenedy P.C. Colonial variation of Pasteurella haemolytica isolated from sheep. J. Bact. 1958, 76: 445-452. Kearney, J.F., Radbruch A., Liesegang B., Rajewski K. A new mouse myeloma cell line that has lost imunoglobulin expression but permits construction of antibody-secreting hybrid cell lines. J. Immunol . 1979, 123: 1548-1550. - Kóhler, G. , Milstein, C. Continous culture of fused cells secreting antibody of predefined specifity. Nature 1975, 265: 495-497.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (29)

1. REIVINDICACIONES
2. Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Bacterias Gram-negativas, anaeróbicas facultativas, con forma de bastón pleomorfico caracterizadas porgue causan una nueva enfermedad del tracto respiratorio superior y del tracto reproductivo de las aves de corral, donde dichas bacterias se seleccionan del grupo de Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica. 2. Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica, caracterizada porque las Pasteurella y/o Mannheimia son beta-hemólisis-positivas , Gram-negativas, oxidasa-positivas , catalasa-positivas , ureasa-negativas , nitrato-positivas e indol-negativas .
3. 3. Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica de conformidad con la reivindicación 2, caracterizadas porque las Pasteurella y/o Mannheimia son MacConkey-positivas .
4. 4. Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2 ó 3 , caracterizadas porque las Pasteurella y/o Mannheimia son glucosa-positivas, sacarosa-positivas, manitol-positivas , arabinosa-negativas , celobiosa-negativas , xilosa-positivas , salicina-negativas, ornitina-negativas, esculina-negativas , alfa-fucosidasa-negativas , beta-galactosidasa-positivas .
5. 5. Pasteurella. trehalosi de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, caracterizadas porque Pasteurella son arabinosa-negativas y trehalosa-positivas .
6. 6. Mannheimia haemolytica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, caracterizadas porque las Mannheimia son arabinosa-negativas y trehalosa-negativas .
7. 7. Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 6, caracterizadas porque las aves de corral se seleccionan del grupo de pollos, pavos, patos, gansos, palomas, pichones y codornices .
8. 8. Pasteurella trehalosi depositada con el número de registro ATCC N° PTA-3667.
9. 9. Pasteurella trehalosi depositada con el número de registro ATCC N° PTA-3668.
10. 10. Mannheimia haemolytica depositada con el número de registro ATCC N° PTA-3669.
11. 11. Un método para la inactivación de una Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque comprende el uso de formaldehído hasta una concentración final de 0,2%.
12. 12. Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica inactivadas caracterizadas porque se obtienen por un método de conformidad con la reivindicación 11 o por un método conocido en la técnica.
13. 13. Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica inactivadas de conformidad con la reivindicación 12 , caracterizadas porque las Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica se seleccionan del grupo de Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3667, Pasteurella trehalosi ATCC'N" PTA-3668 y/o Mannheimia haemolytica ATCC N° PTA-3669.
14. 14. Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica vivas atenuadas, caracterizadas porque las Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 están atenuadas.
15. 15. Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica vivas atenuadas de conformidad con la reivindicación 14, caracterizadas porque las Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica se seleccionan del grupo de Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3667, Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3668 y/o Mannheimia haemolytica ATCC N° PTA-3669.
16. 16. Fragmentos o fracciones caracterizados porque contienen al menos un antígeno de Pasteurella trehalosi y/o
17. Mannheimia haemolytica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 . 17. Fragmentos o fracciones de conformidad con la reivindicación 16, caracterizados porque contienen al menos un antígeno de las bacterias seleccionadas del grupo de Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3667, Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3668 y/o Mannheimia haemolytica ATCC N° PTA-3S69.
18. 18. La composición de una vacuna caracterizada porque comprende una Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica inactivada de conformidad con las reivindicaciones 12 o 13 y/o Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica viva de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 y/o Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica viva atenuada según las reivindicaciones 14 o 15 y/o fragmentos o fracciones de dicha Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según las reivindicaciones 16 a 17.
19. 19. La composición de una vacuna de conformidad con la reivindicación 18, caracterizada porque comprende además uno o más adyuvantes y/o excipientes y/o vehículos adecuados.
20. 20. La composición de una vacuna de conformidad con las reivindicaciones 18 o 19, caracterizada porque comprende Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica inactivadas, en la que dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica se seleccionan del grupo de Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3667, Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3668 y/o Mannheimia haemolytica ATCC N° PTA-3669.
21. 21. La composición de una vacuna de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 18 a 20, caracterizada porque dicha vacuna comprende dos o más cepas de Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica vivas, y/o vivas atenuadas, y/o inactivadas según las reivindicaciones 1 a 10 y 12 a 15 y/o fracciones de dos o más cepas de dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según las reivindicaciones 16 o 17.
22. 22. La composición de una vacuna de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 18 a 21, caracterizada porque las Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica vivas, y/o vivas atenuadas, y/o inactivadas según la invención y/o las fracciones de dichas Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica en la vacuna se seleccionan del grupo de Pasteurella trehalosi ATCC N° PTA-3667, Pasteurella trehalosi ATCC I\T° PTA-3668 y/o Mannheimia haemolytica ATCC N° PTA-3669.
23. 23. La composición de una vacuna de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 18 a 22, caracterizada porque comprende además al menos otro antígeno procedente de un virus o microorganismo patógeno para las aves de corral .
24. 24. La composición de una vacuna de conformidad ' con cualquiera de las reivindicaciones 18 a 23, caracterizada porque el virus o microorganismo se selecciona del grupo constituido por virus de la bronquitis infecciosa, virus de la enfermedad de Newcastle, virus de la enfermedad bursal infecciosa, agente de la anemia de los pollos, reovirus aviar, Micoplasma gallisepticum, neumovirus aviar, Haemophilus paragallinarum, poxvirus de los pollos, virus de la encefalomielitis aviar, Pasteurella multocida y E. Coll .
25. 25. El uso de una Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica inactivada de conformidad con las reivindicaciones 12 ó 13 y/o Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica viva según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 y/o Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica viva atenuada según las reivindicaciones 14 ó 15 y/o fragmentos o fracciones de dicha Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica según las reivindicaciones 16 ó 17 en la fabricación de una vacuna para la profilaxis de las infecciones por Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica.
26. 26. Un método de diagnóstico in-vitro de una enfermedad causada caracterizado porque comprende las etapas de obtener una muestra de un ave de corral, en el que dicha muestra se selecciona del grupo de la sangre, suero, plasma, raspaduras, lavados y frotes de tejido y tejido y analizar dicha muestra en cuanto a la presencia de Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.
27. 27. Un método de diagnóstico in-vitro de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque la presencia de Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica se determina por un ensayo inmune .
28. 28. Un método de diagnóstico in-vitro de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque la presencia de Pasteurella trehalosi y/o Mannheimia haemolytica se determina por un método de biología molecular.
29. 29. Un kit de ensayo de diagnóstico, caracterizado porque comprende todos los componentes necesarios para llevar a cabo un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 26 a 28.