MX2013006831A - Moleculas analogas de ciclosporina modificadas en el aminoacido 1 y 3. - Google Patents

Abstract

Se describen análogos de ciclosporina-A que comprenden modificaciones de los substituyentes como las posiciones de aminoácidos 1 y 3, de acuerdo con la siguiente Fórmula (I). Los compuestos descritos incluyen compuestos que tienen afinidad para ciclofilina incluyendo ciclofilina-A, e inmunosupresión reducida en comparación con ciclosporina-A y sus análogos modificados solamente en la posición 1.

Description

MOLÉCULAS ANÁLOGAS DE CICLOSPORINA MODIFICADAS EN EL AMINOÁCIDO 1 Y 3 Campo de la Invención La presente invención se refiere a análogos novedosos de moléculas que pertenecen a la familia de ciclosporina, que incluyen análogos de ciclosporina A CsA) e incluyen análogos que tienen actividad reducida y no inmunosupresora y enlace de ciclofilina (CyP).

Antecedentes de la Invención Las ciclosporinas son miembros de una clase de polipéptidos cíclicos que tienen actividad inmunosupresora potente. Por lo menos algunos de los compuestos, tales como ciclosporina A (CsA), son producidos mediante la especie Tolypocladium inflatum, como metabolitos secundarios. El CsA es un agente inmunosupresor potente que ha demostrado suprimir la inmunidad humoral y las reacciones inmunes mediadas por células, tales como rechazo de aloinjerto, hipersensibilidad demorada, encefalomielitis alérgica experimental, artritis adyuvante de Freund e injerto contra enfermedad huésped. Este se utiliza para la profilaxis de rechazo de órganos en trasplantes de órganos; para el tratamiento de artritis reumatoide; y para el tratamiento de psoriasis.

Aunque se conoce una cantidad de compuestos en la familia de la ciclosporina, CsA es posiblemente, la que más se utiliza médicamente. Los efectos inmunosupresores del CsA están relacionados con la inhibición de los eventos de activación mediados por célula T. La inmunosupresión se logra mediante el enlace de ciclosporina a una proteína intracelular ubicua denominada ciclofilina (CyP). Este complejo, a su vez, inhibe el calcio y la actividad de fosfatasa de serina-treonina dependiente de calmodulina de la enzima calcineurina. La inhibición de la calcineurina evita la activación de los factores de transcripción, tales como NFAT p/c y NF-KB, los cuales son necesarios para la inducción de los genes de citocina (IL-2, IFN-Y, IL-4, y GM-CSF).

Debido al descubrimiento original de la ciclosporina, se ha aislado e identificado una amplia variedad de ciclosporinas de ocurrencia natural. Adicionalmente, muchas ciclosporinas que no ocurren naturalmente han sido preparadas a través de medios sintéticos parciales o totales, y mediante la aplicación de técnicas de cultivo celular modificado. Por consiguiente, la clase que comprende las ciclosporinas es substancial e incluye, por ejemplo, las ciclosporinas de la A a la Z de ocurrencia natural; varios derivados de ciclosporina de ocurrencia no natural; ciclosporinas artificiales o sintéticas que incluyen las dihidro e iso-ciclosporinas; ciclosporinas derivadas (por ejemplo, ya sea de 3'-0-átomo del residuo MeBmt pueden ser aciladas, o un sustituyente adicional puede introducirse en el residuo sarcosilo en la posición 3); ciclosporinas en las cuales, el residuo MeBmt está presente en forma isomérica (por ejemplo, en el cual, la configuración a través de las posiciones 6' y 7' del residuo MeBmt es cis en lugar de trans); y las ciclosporinas en donde los aminoácidos variantes son incorporados en posiciones específicas dentro de la secuencia de péptidos.

Los análogos de ciclosporina que contienen aminoácidos modificados en la posición 1, se describen en los documentos WO 99/18120 y WO 03/033527 los cuales están incorporados en la presente descripción como referencia en su totalidad. Estas solicitudes describen un derivado de ciclosporina conocidos como "ISATX247" o "ISA247" o "ISA." Este análogo es estructural mente idéntico al CsA, excepto por la modificación en el residuo de aminoácido 1. Los solicitantes previamente descubrieron que ciertas mezclas de isómeros cis y trans de ISA247, que incluyen mezclas que están comprendidas de manera predominante de trans ISA247, exhibieron una combinación de potencia inmunosupresora mejorada y toxicidad reducida sobre las ciclosporinas de ocurrencia natural y actualmente conocidas.

La ciclosporina tiene tres objetivos celulares bien establecidos; calcineurina, las isoformas CyP (las cuales incluyen, sin limitarse a, CyP-A, CyP-B y CyP-D), y la P-glicoproteína (PgP). El enlace de ciclosporina a calcineurina tiene como resultado una inmunosupresión significativa y es responsable de su asociación tradicional con trasplante e indicaciones autoinmunes.

La familia de ciclosporina La CyPs (número de la Comisión de Enzima (EC) 5.1.2.8) pertenece a un grupo de proteínas que tienen actividad de isomerasa cis-trans de peptidil-prolil; dichas proteínas son conocidas colectivamente como inmunofilinas y también incluyen las proteínas de enlace FK-506 y las parvulinas. Las CyPs se encuentran en todas las células y todos los organismos estudiados, tanto en procariotes como eucariotes, y se han conservado estructural mente a través de toda la evolución. Existen 7 CyPs principales en los humanos, particularmente CyP-A, CyP-B, CyP-C, CyP-D, CyP-E, CyP-40, y CyP-NK Identificadas primero a partir de las células asesinas naturales), y un total de 16 proteínas únicas (Galat A. "Peptidilprolil cis/trans isomerasas (inmunofilinas): diversidad biológica - objetivos - funciones" (Peptidy Iproly I cis/trans isomerases (immunophilins): biological diversity - targets -functions)). Curr Top Med Chem 2003,3: páginas 1315 a 1347; Waldmeier PC y asociados "Ciclofilina D como un fármaco objetivo" (Cyclophilin D as a drug target). Curr Med Chem 2003, 10: páginas 1485 a 1506).

El primer elemento de las CyPs a ser identificado en mamíferos fue la CyP-A. La CyP-A es una proteína citosólica de 18-kDa y es la proteína más abundante para el enlace CsA. Se estima que la CyP-A integra hasta el 0.6% de la proteína citosólica total (Mikol V, y asociados, "Estructura de rayos X de complejo de cristal de Ciclofilina A-ciclosporina A monomérica en resolución 2.1 A" (X-ray structure of monomeric cyclophilin A-cyclosporin A crystal complex at 2.1 A resolution). J. Mol. Biol. 1993,234: páginas 1119 a 1130; Galat A, Metcalfe SM. "Isomersasas cis/trans de peptidilprolina" (Peptidylproline cis/trans isomerases" Prog. Biophys. Mol. Biol. 1995, 63: páginas 67 a 118).

Ubicación celular de ciclofilinas Las CyPs pueden encontrarse en la mayoría de los compartimientos celulares de la mayoría de los tejidos y codifican funciones únicas. En los mamíferos, la CyP-A y CyP-40 son citosólicas mientras que la CyP-B y CyP-C tienen secuencias de señal amino-terminal que las dirigen a la trayectoria secretoria de proteína de retículo endoplásmico (revisado en la publicación de Galat, 2003; Bornan J. y asociados "Estructuras de inmunofilinas y sus complejos de ligando" (Structures of immunophilins and their ligand complexes). Curr Top Med Chem 2003,3: páginas 1392 a 1409). La CyP-tiene una secuencia de señal que la dirige a la mitocondria (Andreeva L y asociados, "Ciclofilinas y su posible papel en la respuesta a estrés" (Cyclophilins and their possible role in the stress response). Int J Exp Pathol 1999, 80: páginas 305-315; Hamilton GS y asociados "Inmunofilinas: más allá de la supresión" (Immunophilins: beyond immunosuppression). J Med Chem 1998, 41: páginas 5119 a 5143); CyP-E tiene un dominio de enlace de ARN amino-terminal y está localizado en el núcleo (Mi H y asociados "Una ciclofilina de enlace de ARN nuclear en células T de humano" (A nuclear RNA-binding cyclophilin in human T cells). FEBS Lett 1996, 398: páginas 201 a 205) y CyP-40 tiene TPRs y está localizado en el citosol (Kieffer LJ y asociados "Ciclofilina 40, una proteína con homología con el componente P59 del complejo de receptor esferoide" Clonación del ADN y caracterización adicional" (Cyclophilin-40, a protein with homology to the P59 component of the steroid receptor complex. Cloning of the cDNA and further characterization). J Biol Chem 1993, 268: páginas 12303 a 12310). La CyP-NK humana es la CyP más grande, con un término carboxilo hidrófilo y cargado positivamente, grande, y está localizada en el Citosol (Anderson SK y asociados "Una proteína relacionada con ciclofilina involucrada en la función de las células asesinas naturales" (A cyclophilin-related protein involved in the function of natural killer cells). Proc Nati Acad Sci E.U.A. 1993, 90: páginas 542 a 546; Rinfret A y asociados "El dominio homólogo de ciclofilina de terminal N de una molécula de reconocimiento de tumor de 150 kilodalton exhibe actividades tanto de pepetidilpropil cis-transisomerasa como chaperona" (The N-terminal cyclophilin-homologous domain of a 150-kilodalton tumor recognition molecule exhibits both peptidy Iproly I cis-transisomerase and chaperone activities). Biochemistry 1994, 33: páginas 1668-1673).

Función y Actividad de las Ciclofilinas Las CyPs son proteínas multifuncionales que están involucradas en muchos procesos celulares. Debido a que las CyPs se conservaron altamente a través de toda la evolución, esto sugiere un papel esencial para las CyPs. I nicialmente, se descubrió que las CyPs tienen la propiedad enzimática específica de catalizar la isomerización cis-trans de los enlaces peptidilo-prolilo (Galat, 1995; Fisher GA y asociados, "Una fase I de estudio de paclitaxel (taxol) (T) en combinación con valspodar SDZ, un modulador poderoso de resistencia a fármacos múltiples (MDR)". (A phase I study of paclitaxel (taxol) (T) in combination with SDZ valspodar, a potent modulator of multidrug resistance (MDR)). Anticancer Drugs. 1994; 5(Suppl 1): página 43). Por lo tanto, las CyPs son denominadas peptidil-prolil-cis-trans isomerasa (PPIase), la cual puede actuar como un factor de aceleración en el doblez adecuado de las proteínas sintetizadas recientemente, las PPIases también están involucradas en la reparación de las proteínas dañadas debido al estrés ambiental que incluyen estrés térmico, irradiación ultravioleta, cambios ene I pH del ambiente celular y tratamiento con oxidantes. Esta función es conocida como actividad de chaperón molecular. {Yao Q y asociados, "Roles de las Ciclofilinas en Canceres y Otros Sistemas de Órganos" (Roles of Cyclophilins in Cancers and Other Organs Systems). World J. Surg. 2005, 29: páginas 276 a 280) Además, la actividad de PPIase de las CyPs, recientemente ha demostrado estar involucrada en diversos procesos celulares, que incluyen el tráfico de proteínas intracelulares (Andreeva, 1999: Caroni P y asociados. "Miembro nuevo de la familia de ciclofilina asociado con la trayectoria secretoria" (New member of the cyclophilin family associated with the secretory pathway). J Biol Chem 1991,266: páginas 10739 a 42), "Función mitocondrial" (mitochondrial function) (Halestrap AP y asociados. "Enlace de CsA a ciclofilina mitocondrial inhibe la transición de permeabilidad deficiente y protege al corazón de isquemia/lesión por reperfusión" (CsA binding to mitochondrial cyclophilin i n h i bits the permeability transition pore and protects hearts from ischaemia/reperfusion injury). Mol Cel/ Biochem 1997, 174: páginas 167-72; Connern CP, Halestrap AP. "El reclutamiento de ciclofilina mitocondrial a la membrana interior de la mitocondria bajo condiciones de estrés oxidativo que mejoran la abertura de un canal no específico sensible al calcio" (Recruitment of mitochondrial cyclophilin to the mitochondrial inner membrane under conditions of oxidative stress that enhance the opening of a calcium-sensitive non-specific channel). Biochem J 1994,302: páginas 321 a 324), procesamiento pre-mARN (Bourquin JP y asociados "Una ciclofilina de matriz nuclear rica en serina/arginina interactúa con el dominio de terminal C de la polimerasa de ARN M" (A serine/arginine rich nuclear matrix cyclophilin interacts with the C-terminal domain of RNA polymerase II). Nucleic Acids Res 1997, 25:páginas 2055 a 2061), y el mantenimiento de la estabilidad compleja de proteínas múltiples (Andreeva, 1999).

"La ciclosporina enlaza con afinidad nanomolar a la CyP-A por medio del contacto dentro de la bolsa hidrófoba" (Cyclosporine binds with nanomolar affinity to CyP-A via contacts within the hydrophobic pocket) (Colgan J y asociados "Los ratones deficientes en Ciclofilina A son resistentes a la inmunosupresión mediante ciclosporina" (Cyclophilin A-Deficient Mice Are Resistant to Immunosuppression by Cyclosporine). The Journal of Immunology 2005, 174: páginas 6030 a 6038, Mikol, 1993) e inhibe la actividad PPIase. Además, este efecto se considera irrelevante para la inmunosupresión. En su lugar, el complejo entre CsA y CyP-A crea una superficie compuesta que se enlaza y evita que la calcineurina regule la transcripción genética de citocina (Friedman J y asociados "Dos candidatos citoplásmicos para la acción de inmunofilina son revelados por la afinidad para una ciclofilina nueva: una en la presencia y una en la ausencia de CsA" (Two cytoplasmic candidates for immunophilin action are revealed by affinity for a new cyclophilin: one in the presence and one in the absence of CsA). Cel/1991, 66: páginas 799 a 806; Liu J y asociados "La calcineurina es un objetivo común de los complejos de ciclofilina-CsA y FKBP-FK506" (Calcineurin is a common target of cyclophilin-CsA and FKBP-FK506 complexes). Cel/1991, 66: páginas 807 a 815).

Homología de las Ciclofilinas La CyP-A, el miembro prototipo de la familia, es una proteína altamente conservada en las células de mamífero (Handschumacher RE y asociados "Ciclofilina: una proteína de enlace citosólico específica para CsA" (Cyclophilin: a specific cytosolic binding protein for CsA). Science 1984, 226: páginas 544 a 547). El análisis de homología de secuencia de la CyP-A humana muestra que es altamente homóloga con la CyP-B, CyP-C Y CyP-D humana (Harding MW, Handschumacher RE, Speicher DW. "Aislamiento y secuencia de aminoácido de ciclofilina" (Isolation and amino acid sequence of cyclophilin). J Biol Chem 1986, 261: páginas 8547 a 8555). La bolsa de enlace de ciclosporina de todas las CyPs se forma a través de una región altamente conservada de aproximadamente 109 aminoácidos. De las CyPs conocidas, la CyP-D tiene la homología más alta a CyP-A. De hecho, en esta región, la identidad de secuencia es del 100% entre CyP-A y CyP-D (Waldmeier 2003; Kristal BS y asociados "La transición de permeabilidad mitocondrial como un objetivo de la neuroprotección" (The Mitochondrial Permeability Transition as a Target for Neuroprotection). Journal of Bioenergetics and Biomembranes 2004, 36(4): páginas 309 a 312). Por consiguiente, la afinidad de CyP-A es un pronosticador muy bueno de la afinidad CyP-D, y viceversa (Hansson MJ y asociados, "Los análogos de ciclosporina no inmunosupresores NI 811 y UNIL025 despliegan potencias nanomolares sobre la transición de permeabilidad en la mitocondria derivada cerebral" (The Non immunosuppressive Cyclosporine analogues NIM811 and UNIL025 Display Nanomolar Potencies on Permeability Transition in Brain-Derived Mitochondria). Journal of Bioenergetics and Biomembranes, 2004, 36(4): páginas 407-413). Esta relación se ha demostrado empíricamente de forma repetida con los análogos de Ciclosporina (Hansson, 2004; Ptak Rg y asociados, "Inhibición de replicación de virus de inmunodeficiencia humano tipo I en células de humano mediante Debio-025, un agente de enlace de ciclofilina novedoso" (Inhibition of Human I mmunodeficiency Virus Type 1 Replication in Human Cells by Debio-025, a Novel Cyclophilin Binding Agent). Antimicrobial Agents and Chemotherapy 2008: páginas 1302 a 1317; Millay DP y asociados, "Inhibición genética y farmacológica de necrosis dependiente de la mitocondria atenúa la distrofia muscular" (Genetic and pharmacologic inhibition of mitochondrial dependent necrosis attenuates muscular dystrophy) Nature Medicine 2008, 14(4): páginas 442 a 447; Harris R y asociados "El descubrimiento de éteres y tioéteres de ciclosporina no inmunosupresora novedosa con actividad HCV potente" (The Discovery of Novel Non-I mmunosuppressive Cyclosporine Ethers and Thioethers With Potent HCV Activity). Póster # 1915, 59ava reunión anula de la Asociación Americana para el Estudio de Padecimientos del hígado (59th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases) (AASLO), 2008). La homología de secuencia a través de las CyPs sugiere que todas las CyPs son objetivos potenciales para los análogos de ciclosporina. Debido a la multitud de procesos celulares en los cuales están involucradas las CyPs, esto sugiere adicionalmente que los análogos de CsA que retienen enlace significativo a CyP pueden ser útiles en el tratamiento de muchas indicaciones de enfermedad.

Enfermedades mediadas por ciclofilina Virus de Inmunodef ¡ciencia Humana (VIH) El VIH es un lentivirus de la familia de retrovirus y sirve como un ejemplo de como se involucra CyP en el proceso de infección y replicación de ciertos virus. La CyP-A se establecía hace más de una década por ser un objetivo válido en la quimioterapia anti-VIH (Rosenwirth BA, y asociados, "Ciclofilina A como un objetivo novedoso en la quimioterapia anti-VIH-1" (Cyclophilin A as a novel target in anti-HIV-1 chemotherapy) . Int. Antivir. News 1995, 3: páginas 62 a 63). La CyP-A cumple con una función esencial tempranamente en el ciclo de replicación del VIH-1 Se descubrió que se enlaza en forma específica con ia proteína Gag VIH-1 (Luban JKL, y asociados, "La proteína Gag del virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 Gag enlaza a las ciclofilinas A y B" (Human immunodeficiency virus type 1 Gag protein binds to cyclophilins A and B.) Cell 1993, 73: páginas 1067 a 1078). Una secuencia de aminoácido definida alrededor de G89 y G90 de la proteína capsida p24 (CA) se identificó como el sitio de enlace para CyP-A Bukovscky AAA y asociados, "La transferencia de sitio de enlace de ciclofilina de VIH-1 al virus de inmunodeficiencia de simio a partir de Macaca mulatta puede atribuir tanto sensibilidad a ciclosporina como dependencia de ciclosporina" (Transfer of the HIV-1 cyclophilin-binding site to simian immunodeficiency virus from Macaca mulatta can confer both cyclosporine sensitivity and cyclosporine dependence). Proc. Nati. Acad. Sci. E.U.A. 1997, 94: páginas 10943 a 10948; Gamble TRF y asociados "Estructura de cristal de ciclofilina A humana que enlaza con el dominio de terminal amino de capsida de VIH-1" (Crystal structure of human cyclophilin A bound to the amino-terminal domain of HIV-1 capsid). Cell 1996, 87: páginas 1285 a 1294). La afinidad de CyP-A para CA promueve la incorporación de CyP-A en las partículas de virión durante el ensamble (Thali MA y asociados, "Asociación funcional de ciclofilina A con viriones de VIH-1" (Functional association of cyclophilin A with HIV-1 virions), Nature 1994, 372: páginas 363-365). La evidencia experimental indica que la interacción CyP-A-CA es esencial para la replicación de VIH-1; la inhibición de esta interacción deteriora la replicación del VIH-1 en células de humano (Hatzüoannou TD y asociados, "Interacciones de ciclofilina con capsidas de virus de inmunodeficiencia humano tipo 1 entrantes con efectos opuestos sobre la ineficiencia en células de humano" (Cyclophilin interactions with incoming human immunodeficiency virus type 1 capsids with opposing effects on infectivity in human cells), J. Virol 2005, 79: páginas 176 a 183; Steinkasserer AR y asociados "Modo de acción de SDZ NIM 811, un análogo CsA no inmunosupresor con actividad contra el virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1): interferencia con eventos tempranos y tardíos en la replicación de VIH-1" (Mode of action of SDZ NIM 811, a non-immunosuppressive CsA analog with activity against human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1): interference with early and late events in HIV-1 replication). J. Virol 1995, 69: páginas 814 a 824). En el paso del ciclo de replicación viral en donde CyP-A está involucrada como se demostró para ser un evento después de la penetración de la partícula del virus y antes de la integración del ADN viral de doble trenzado en el genoma celular (Braaten DEK y asociados, "Se requiere la ciclofilina A para el paso temprano en el ciclo de vida del virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 antes del inicio de la transcripción inversa" (Cyclophilin A is required for an early step in the life cycle of human immunodeficiency virus type 1 before the initiation of reverse transcription), J. Virol 1996, 70: páginas 3551 a 3560; Mlynar ED y asociados, "El análogo SDZ NIM 811 de CsA no inmunosupresor inhibe la incorporación de ciclofilina A en viriones y replicación de virus en el virus de inmunodeficiencia humano tipo 1 con infección primaria y células T con crecimiento detenido" (The non-immunosuppressive CsA analogue SDZ NIM 811 inhibits cyclophilin A incorporation into virions and virus replication in human immunodeficiency virus type 1-infected primary and g rowth-arrested T cells). J. Gen. Virol 1996, 78: páginas 825 a 835; Steinkasserer, 1995). La actividad anti-VIH-1 de Csa se reportó primero en 1988 (Wainberg MA y asociados, "El efecto de CsA sobre la infección de células susceptibles por el virus de inmunodeficiencia humano tipo 1" (The effect of CsA on infection of susceptible cells by human immunodeficiency virus type 1), Blood 1998, 72: páginas 1904 a 1910). La evaluación de CsA y muchos derivados para la inhibición de replicación de VIH-1 reveló que los análogos CsA no inmunosupresores tienen actividades anti-VIH-1 iguales a o incluso superiores a aquellos análogos inmunosupresores (Bartz SRE y asociados "Inhibición de replicación de virus de inmunodeficiencia humano mediante los análogos no inmunosupresores de CsA" (Inhibition of human immunodeficiency virus replication by non immunosuppressive analogs of CsA). Proc. Nati. Acad. Sci. E.U.A. 1995, 92: páginas 5381 a 5385; Billich AF y asociados "Modo de acción de SDZ IM 811, un análogo CsA no inmunosupresor con actividad contra el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) tipo 1: interferencia con las interferencias de proteína-ciclofilina A de VIH" (Mode of action of SDZ NIM 811, a non-i mmunosuppressive CsA analog with activity against human immunodeficiency virus (HIV) type 1: interference with HIV protein-cyclophilin A interactions. J. Virol 1995, 69: páginas 2451 a 2461 ; Ptak, 2008).

Inflamación La inflamación en la enfermedad involucra el influjo de leucocitos (glóbulos blancos) al área de infección. Los leucocitos son extraídos al área mediante la quimiocinas, una familia de agentes de quimioatracción . Los estudios in vitro han mostrado que el CyP-A extracelular es un quimioatrayente potente para los leucocitos humanos y las células T (Kamalpreet A y asociados, "Las ciclofilinas extracelulares contribuyen a la regulación de respuestas inflamatorias" (Extracellular cyclophilins contribute to the regulation of inflammatory responses) Journal of ¡mmunology 2005; 175: páginas 517 a 522; Yurchenko VG y asociados, "Residuos de sitio activo de ciclofilina A son cruciales para su actividad de señalización por medio de CD147" (Active-site residues of cyclophilin A are crucial for its signaling activity via CD147), J. Biol. Chem. 2002; 277: páginas 22959-22965; Xu QMC y asociados "Actividad quimiotáctica de leucocitos de ciclofilina" (Leukocyte chemotactic activity of cyclophilin) J. Biol. Chem. 1992; 267: páginas 11968 a 11971; Allain FC y asociados "La interacción con glicosaminoglucanos se requiere para ciclofilina B para activar la adhesión mediada por integrina de linfocitos T de sangre periférica para la matriz extracelular" (Interaction with glycosaminoglycans is required for cyclophilin B to trigger integrin-mediated adhesión of peripheral blood T lymphocytes to extracellular matrix), Proc. Nati. Acad. Sci. E.U.A. 2002, 99: páginas 2714 a 2719). Adicionalmente, la CyP-A puede inducir una repuesta inflamatoria rápida, caracterizada por el influjo de leucocitos, cuando son inyectados in vivo (Sherry BN y asociados, "La identificación de ciclofilina como un producto de secreción proinflamatorio de macrófagos activados por lipopolisacáridos" (Identification of cyclophilin as a proinflammatory secretory product of lipopolysaccharide activated macrophages), Proc. Nati. Acad. Sci. E.U.A. 1992, 89: páginas 3511 a 3515). CyP-A es distribuido al mismo tiempo en forma intracelular, sin embargo, durante el curso de las respuestas inflamatorias, la CyP-A es liberada en los espacios de tejido extracelular tanto por células vivas como células muriendo (Sherry, 1992). De hecho, los niveles elevados de CyP-A se han reportado en varias enfermedades inflamatorias diferentes, que incluyen asepsia, artritis reumatoide y enfermedad celular de músculo suave vascular (Jin ZG y asociados, "Ciclofilina A es un factor de crecimiento secretado por el estrés oxidativo" (Cyclophilin A is a secreted growth factor induced by oxidative stress), Circ. Res. 2000; 87: páginas 789-796; Teger, 1997; Billich, 1997). En el caso de artritis reumatoide, una correlación directa entre los niveles de CyP-A y el número de neutrófilos en el fluido sinovial de los pacientes con artritis reumatoide fue reportada (Billich, 1997).

Cáncer La CyP-A recientemente ha mostrado ser sobre-expresada en muchos tejidos de cáncer y líneas celulares, que incluyen, sin limitar a, cáncer de célula pequeña y no pequeña de pulmón, vejiga, hepatocelular, pancreático y de seno (Li, 2006; Yang H y asociados "La ciclofilina A es sobre-regulada en cáncer de pulmón de célula pequeña y activa la señal ERK1/2. Biochemical and Biophysical Research Communications 2007; 361: páginas 763 a 767; Campa, 2003). En los casos en donde la CyP-A exógena, ésta fue suministrada mostrando estimular el crecimiento de células de cáncer (Li, 2006; Yang, 2007), mientras que la CsA detuvo el crecimiento (Campa, 2003). Más recientemente se ha demostrado que la CyP (A y B) está involucrada en forma intrincada en la trayectoria bioquímica que permite el crecimiento de las células de cáncer de seno en humanos y que los experimentos de destrucción de CyP disminuyó el crecimiento, proliferación y motilidad de células de cáncer (Fang F y asociados. "La expresión de Ciclofilina Bis Asociada con progresión maligna y regulación de los genes implicados en la patogénesis de cáncer de seno" (The expression of Cyclophilin Bis Associated with alignant Progression and Regulation of Genes Implicated in the Pathogenesis of Breast Cáncer), The American Journal of Pathology 2009; 174(1): páginas 297 a 308; Zheng J y asociados, "Regulación de ciclofilina A de prolil isomerasa de cinasa activada por Janus 2 y la progresión de cáncer de seno humano" (Prolyl Isomerase Cyclophilin A Regulation of Janus-Activated Kinase 2 and the Progression of Human Breast Cáncer), Cáncer Research 2008; 68 (19): páginas 7769 a 7778). De manera más interesante, el tratamiento de CsA de ratón xenoinjertado con las células de cáncer de ceno indujo la necrosis de tumor e inhibió la metástasis por completo (Zheng, 2008), Las investigaciones concluyen que la "acción de ciclofilina B puede contribuir de manera significativa a la patogénesis de cáncer de seno humano" y que "la inhibición de ciclofilina puede ser una estrategia terapéutica novedosa en el tratamiento del cáncer de seno humano" (Fang, 2009; Zheng, 2008).

Hepatitis C El virus de hepatitis C (VHC) es la enfermedad de hígado más predominante en el mundo y es considerada epidémica por la Organización Mundial de la Salud. Debido a que el VHC puede infectar a un paciente durante décadas antes de ser descubierto, con frecuencia se le denomina la epidemia "silenciosa". Los estudios sugieren que más de 200 millones de personas a nivel infección están infectadas con VHC, una incidencia general de aproximadamente el 3.2% de la población mundial. Solo en los Estados Unidos, casi 4 millones de personas son o se han infectado con el VHC y de estos, 2.7 millones tienen una infección crónica en progreso. Todos los individuos infectados con VHC están en riesgo de desarrollar enfermedades del hígado que amenazan sus vidas seriamente. La terapia estándar actual para la hepatitis C crónica consiste en la combinación de interferón pegilado en combinación con ribavirina, ambos son agentes anti-virales generalizados (Crazi A y asociados, "Resultados de ensayos clínicos de las peg-interferonas en combinación con ribavirina" (Clinical trial results of peg-interferons in combination with ribavirin), Semin Liver Dis 2003; 23(Suppl 1): páginas 35 a 46). El índice de falla para el tratamiento es de aproximadamente el 50% (Molino BF, Instituto de investigación estratégica: "3a. Cumbre mundial anual de hepatitis viral en descubrimiento y desarrollo de fármacos 2007" (3rd annual viral hepatitis in drug discovery and development world summit 2007), AMRI Technical Reports; 12(1)).

Recientemente se ha demostrado que la CyP-B es critica para la replicación eficiente del genoma de VHC (Watashi K y asociados, "La ciclofilina B es un regulador funcional de la polimerasa de ARN del virus de hepatitis C" (Cyclophilin B Is a Functional Regulator of Hepatitis C Virus RNA Polymerase), Molecular Ce 11 2005, 19: páginas 111 a 122). Los virus dependen de factores derivados del huésped, tales como CyP-B por su replicación eficiente de genoma. La CyP-B interactúa con la polimerasa de ARN de VHC NS5B para estimular directamente su actividad de enlace ARN. Tanto la reducción mediada por interferencia de ARN (ARNi) de la expresión CyP-B endógena como la pérdida inducida de enlace NS5B a CyP-B disminuye los niveles de replicación de VHC. Por lo tanto, la CyP-B funciona como un regulador estimulador de NS5B en la maquinaria de replicaciones del VHC. Este mecanismo de regulación para la replicación viral identifica la CyP-B como un objetivo para las estrategias terapéuticas antivirales.

A diferencia de otros tratamientos de VHC, la inhibición de CyP no se dirige directamente al virus de VHC. Por lo tanto, se cree que la resistencia a los fármacos de enlace de CyP ocurrirá más lentamente que con los fármacos de tratamiento de VHC actuales (Manns MP, y asociados, "El camino de avance en el descubrimiento de la trayectoria correcta para el tratamiento de VHC" (The way forward in HCV treatment-finding the right path), Nature Reviews Drug Discovery 2007; 6: páginas 991 a 1000). Además, al interferir al nivel de la interacción viral de huésped, la inhibición CyP puede abrir la vía para un método novedoso para el tratamiento anti VHC que podría ser complementario, no únicamente para el tratamiento basado en interferona, sino también para tratamientos futuros que dirigen directamente las enzimas de replicación de VHC objetivo tales como los inhibidores de proteasa y polimerasa (Flisiak R, Dumont JM, Crabbé R. "Inhibidores de ciclofilina en infección viral de hepatitis C" (Cyclophilin inhibitors in hepatitis C viral infection), Expert Opinión on I nvestigational Of Drugs 2007, 16(9): páginas 1345 a 1354). El desarrollo de los fármacos anti VHC que realizan la replicación viral de VHC ha sido impedido de manera significativa por la falta de un modelo de VHC de laboratorio adecuado. Este obstáculo únicamente ha sido desarrollado recientemente por el desarrollo de varios modelos de cultivo celular adecuados (Sistemas replicón de VHC subgenómicos) y un modelo de ratón que contiene células de hígado humano (Goto K, y asociados, "Evaluación de los efectos de virus anti-hepatitis C de inhibidores de ciclofilina, Csa, y NIM811" (Evaluation of the anti-hepatitis C virus effects of cyclophilin inhibitors, CsA, and NIM811), Biochem Biophys Res Comm 2006; 343: páginas 879-884; Mercer DF, y asociados "Replicación de virus de hepatitis C en ratones con hígados humanos quiméricos" (Hepatitis C virus replication in mice with chimeric human livers), Nat Med 2001; 7: páginas 927 a 933). La ciclosporina ha demostrado recientemente que la actividad anti-VHC en modelos de filtración y ensayos clínicos pequeños (Watashi K, y asociados, "La CsA suprime la replicación del genoma del virus de hepatitis C en hepatocitos cultivados" (CsA suppresses replication of hepatitis C virus genome in cultured hepatocytes), Hepatology 2003; 38: páginas 1282 a 1288; Inoue K, Yoshiba M. "Interferona combinada con tratamiento de ciclosporina como una contramedida efectiva contra la recurrencia del virus de hepatitis C en pacientes con trasplante de hígado con enfermedad relacionada con el virus de hepatitis C en etapa final" (Interferon combined with cyclosporine treatment as an effective countermeasure against hepatitis C virus recurrence in liver transplant patients with end-stage hepatitis C virus related disease), Transplant Proc 2005; 37: páginas 1233 a 1234).

Padecimientos degenerativos musculares La CyP-D es una parte integral del poro de transmisión de permeabilidad mitocondrial (MTP) en todas las células. La función del poro MTP es proporcionar una homeostasis de calcio dentro de la célula. Bajo condiciones normales, la abertura y cierre del poro MTP se puede revertir. Bajo condiciones patológicas que involucran un influjo excesivo de calcio dentro de la célula, esto sobrecarga a la mitocondria e induce una abertura irreversible del poro MPT, que conduce a la muerte celular o apoptosis. La CsA se ha reportado por corregir la disfunción mitocondrial y la apoptosis muscular en pacientes con distrofia muscular congénita de Ullrich y miopatía de Bethlam [(Merlini L y asociados, "La CsA corrige la disfunción mitocondrial y la apoptosis muscular en pacientes con miopatías de colágeno VI" (CsA corrects mitochondrial dysfunction and muscle apoptosis in patients with collagen VI myopathies), PNAS 2008; 105(13): páginas 5225 a 5229]. La CsA se ha demostrado en vitro por inhibir en forma dependiente de la dosis la abertura MTP en la mitocondria cardíaca aislada, evitando de esta manera la apoptosis y permitiendo tiempo celular precioso para la reparación (Gómez L y asociados, "Inhibición de la transición de permeabilidad mitocondrial mejora la recuperación funcional y reduce la mortandad después del infarto al miocardio agudo en ratones" (Inhibition of mitochondrial permeability transition improves functional recovery and reduces mortality following acute myocardial infarction in mice) Am J Physiol Heart Circ Physiol 2007, 293: páginas H1654 a H1661). Un estudio clínico en 58 pacientes que presentaron infarto al miocardio agudo demostró que la administración de CsA en el momento de la reperfusión se asoció con un infarto menor que aquel observado con placebo (Piot C y asociados "Efecto de ciclosporina en lesión de reperfusión en infarto agudo al miocardio" (Effect of Cyclosporine on Reperfusion Injury in Acute Myocardial Infarction), New England Journal of Medicine 2008; 395(5): páginas 474 a 481 ).

Enfermedades neurodegenerativas crónicas La CsA puede actuar como un agente neuroprotector en los casos de isquemia cerebral aguda y daño como resultado de trauma en la cabeza (Keep M, y asociados, "La ciclosporina intratecal prolonga la supervivencia de ratón ALS en etapa tardía" (Intrathecal cyclosporine prolongs survival of late-stage ALS mice), Brain Research 2001; 894: páginas 327 a 331). Los animales tratados con CsA mostraron un índice de supervivencia dramático del 80% en relación con únicamente un 10% de índice de supervivencia en la ausencia de tratamiento. Después se estableció que este fue en gran medida el resultado del enlace de CsA a CyP-D mitocondrial. Se ha establecido en forma subsiguiente que la utilidad del CsA se extiende a neurodegeneración crónica, como se demostró en forma subsiguiente en un modelo de rata con la enfermedad de Lou Gerhig (ALS) (Patente Norteamericana No. 5,972,924), en donde el tratamiento de CsA fue más que el doble de la duración de vida restante. También se ha demostrado recientemente que la inactivación de CyP-D en ratones discapacitados con CyP-D protege los axones en encefalomielitis autoinmune experimental, en modelo animal de esclerosis múltiple (Forte M, y asociados, La inactivación de ciclofilina D protege a los axones en la encefalomielitis autoinmune experimental, un modelo animal de esclerosis múltiple. PNAS 2007; 104(18): páginas 7558 a 7563). En un modelo de ratón con enfermedad de Alzheimer, la deficiencia de CyP-D substancialmente mejora el aprendizaje, la memoria y la función sináptica (Du H y asociados, "La deficiencia de ciclofilina D atenúa la perturbación mitocondrial y neuronal y mejora el aprendizaje y la memoria en enfermedad de Alzheimer" (Cyclophilin O deficiency attenuates mitochondrial and neuronal perturbation and ameliorates learning and memory in Alzheimer's disease) Nature Medicine 2008, 14(10): páginas 1097 a 1105). Además, la CsA ha demostrado ser efectiva en un modelo de rata de enfermedad de Huntington (Leventhal L y asociados "La CsA protege las neuronas estriatales in vitro e in vivo en toxicidad de ácido 3-nitropropiónico" (CsA protects striatal neurons in vitro and in vivo from 3-nitropropionic acid toxicity), Journal of Comparative Neurology 2000,425(4): páginas 471 a 478), y es parcialmente efectiva en un modelo de ratón de enfermedad de Parkinson (Matsuura K y asociados, "La CsA atenúa la degeneración de neuronas dopaminérgicas inducida por 6-hidroxidopamina en el cerebro de ratón" (CsA attenuates degeneration of dopaminergic neurons induced by 6-hydroxydopamine in the mouse brain), Cáncer Research 1996; 733 (1 ): páginas 101 a 104). Por lo tanto, la necrosis dependiente de la mitocondria representa un mecanismo de enfermedad prominente que sugiere que la inhibición de CyP-D podría proporcionar una estrategia nueva de tratamiento farmacológico para estas enfermedades (Du, 2008).

Lesión celular, de tejido y órganos debido a una pérdida de homeostasis de ion de calcio celular (Ca2+).

El Ca2+ está involucrado en un número de procesos fisiológicos a nivel celular, que incluyen la función mitocondrial saludable. Bajo ciertas condiciones patológicas, tales como el infarto al miocardio, ataque al corazón, hepatotoxicidad aguda, coleostasis, y lesión por almacenamiento/reperfusión de trasplante de órganos, la mitocondria pierde la capacidad para regular los niveles de calcio, y la acumulación de calcio excesiva en la matriz mitrocondrial tiene como resultado la abertura de poros grandes en la membrana mitocondrial interior. (Rasóla A. y asociados "El poro de transición de permeabilidad mitocondrial y su implicación en la muerte celular y la patogénesis de enfermedad" (The mitochondrial permeability transition pore and its involvement in cell death and in disease pathogenesis), Apoptosis 2007,12: páginas 815 a 833). La conductancia no selectiva de iones y moléculas de hasta 1.5 kilodaltons a través del poro, un proceso denominado transición de permeabilidad mitocondrial, conduce a la dilatación de la mitocondria y otros eventos que culminan en la muerte celular, que incluyen la inducción de apoptosis. Uno de los componentes del MTP es la CyP-D. CyP-D es una molécula de inmunofilina cuya actividad de isomerasa regula la abertura de MPTP, y la inhibición de actividad de isomerasa mediante los análogos de CsA o CsA inhibe la creación de la MPTP, y de esta manera evita la muerte celular.

Inhibidores de Ciclofilina de Análogo de Ciclosporina no Inmunosupresores Independientemente de los efectos ventajosos de la CsA en las indicaciones mencionadas anteriormente, los efectos concomitantes de inmunosupresión limitan la utilidad de la CsA como un inhibido de CyP en la práctica clínica. En la actualidad, existen unos pocos análogos de CsA que han demostrado tener poca actividad inmunosupresora o actividad reducida (es decir, <10% de la potencia inmunosupresora de CsA) y todavía retiene su capacidad para enlazar CyP (es decir, >10% de capacidad de enlace CyP en comparación con CsA). NIM 811 (Melle4 -ciclosporina) L NIM 811 es un producto de fermentación del hongo Tolypocladium niveum, el cual es modificado en el aminoácido 4 y no despliega actividad inmunosupresora (debido a la falta de enlace de calcineurina), todavía retiene la afinidad de enlace para CyP-A (Rosenwirth BA y asociados, "La inhibición de la replicación de virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 mediante SDZ NIM 811, un análogo de ciclosporina no inmunosupresor" (Inhibition of human immunodeficiency virus type 1 replication by SDZ NIM 811, a non-immunosuppressive Cyclosporine Analogue) Antimicrob Agents Chemother 1994, 38: páginas 1763 a 1772).

DEBIO 025 (MeAla3EtVal"-Ciclosporina) DEBIO 025 es un químico dual de modificación de CsA en los aminoácidos 3 y 4. DEBIO 025 también despliega actividad no inmunosupresora que todavía retiene afinidad de enlace para la actividad CyP-A PPIase (Kristal, 2004).

SC Y- 635 (DimetilaminoetiltioSar3-hidroxiLeu4-Ciclosporina) SCY-635 es un químico dual de modificación de CsA en los aminoácidos 3 y 4. SCY-635 también despliega actividad no inmunosupresora y todavía retiene la afinidad de enlace para la actividad CyP-A PPIase (Publicación PCT No. WO 2006/039668).

De manera general, estos compuestos tienen modificación sobre la cara de la CsA que es responsable del enlace de calcineurina, y generalmente requiere la modificación de los aminoácidos 3 y 4. La modificación de los aminoácidos 3 y 4 es laboriosa y compleja, ya que este método normalmente involucra la abertura, reemplazo y/o modificación del anillo de ciclosporina de esos aminoácidos y posteriormente el cierre del anillo para producir la ciclosporina modificada.

En contraste, la modificación de la cadena lateral de aminoácido 1 no requiere la abertura del anillo de ciclosporina. Sin embargo, el aminoácido 1 está asociado con el enlace CyP (en oposición al enlace de calcineurina) y ha sido modificado para incrementar la eficacia inmunosupresora de la CsA. Por ejemplo, la patente Norteamericana No. 6,605,593, describe una modificación única del aminoácido 1 que tiene como resultado un análogo de CsA con potencia inmunosupresora incrementada.

Por consiguiente, podría ser deseable tener una molécula análoga de ciclosporina (una "CAM") que es fácilmente sintetizada y es eficaz en el tratamiento de enfermedades mediadas por CyP. También es deseable proporcionar un análogo de CsA que proporciona pro lo menos parte de la funcionalidad de la CsA nativa, pero la cual, posee propiedades mejoradas o adicionales, efectos o funciones relativos a la CsA nativa.

Breve Descripción de la Invención De acuerdo con un aspecto, los compuestos de la presente invención comprenden análogos de ciclosporina-A que son no inmunosupresores de acuerdo con la definición de la presente invención. De acuerdo con otro aspecto, los compuestos tienen afinidad para ciclofilina, que incluyen a la ciclofilina A. De acuerdo con otros aspectos, los compuestos de la presente invención comprenden análogos de ciclosporina A que son útiles con respecto a la enfermedad o condición mediada por ciclofilina y el desarrollo de terapias con respecto a dichas enfermedades y condiciones.

De acuerdo con un aspecto, la presente invención se refiere a un compuesto de la Fórmula L: Fórmula L en donde: a. R' es H o acetilo; b. R1 es una cadena recta saturada o insaturada o cadena de carbono alifático ramificada de 2 a 15 átomos de carbono de longitud; c. R2 es es seleccionado del grupo que consiste en: i. H; ii. una amida insustituida, N-sustituida o N ,?-disustituida; iii. una amina protegida por acilo N-sustituida o insustituida; iv. un ácido carboxílico; v. una amina N-sustituida o insustituida; vi. un nitrilo; vii. un éster; viii. una acetona; ix. un hidroxi, dihidroxi, trihidroxi o polihidroxi alquilo; x. un arilo sustituido o insustituido; xi. una cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada que contiene opcionalmente un sustituyente seleccionado del grupo que consiste en hidrógeno, acetonas, hidroxilos, nitrilos, ácidos carboxílicos, ésteres, 1 ,3-dioxolanos, halógenos y oxo; xii. un grupo aromático que contiene un sustituyente seleccionado del grupo que consiste en haluros, ésteres y nitro; y xiii. una combinación de la cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada de (xi) y el grupo aromático de (xii); y d. R23 es una cadena recta saturada o insaturada o cadena de carbono alifática ramificada opcionalmente sustituida.

En un aspecto, el sustituyente R1 - R2 es seleccionado del grupo que consiste en: XXX. xxxi. ????. xxxiii. xxxiv.

XXXV. xxxvi. xxxvii. 10 xxxviii. xl. xli. xlii. 15 xliii xliv xl xlvi xlvü xlviii xlix 20 I li lii lll! liv. 25 En otro aspecto, R2 es seleccionado del grupo que consiste en en donde: i. R5 es una cadena recta saturada o insaturada o cadena rbono alifático ramificada entre 1 y 15 carbonos de longitud ; ii. R6, es una cadena recta saturada o insaturada, monohidroxilada , dihidroxilada, trihidroxilada o polihidroxilada o una cadena de carbono alifática ramificada entre 1 y 10 carbonos de longitud; En un aspecto, R1-R2, comprende una cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada de entre 2 y 5 carbonos, opcionalmente sustituidos con un sustituyentes seleccionado del grupo que consiste en hidrógeno, acetonas, hidroxilos, nitrilos, halógenos, oxo, ácidos carboxílicos, ésteres y 1 ,3-dioxolanos; En un aspecto, R23 es seleccionado del grupo que consiste en: i i . - C H 2 C H 3 iii. -CH2CHCH2 iv. -CH2CH2CH2I V. -(CH2)3CH2I vi. -(CH2)3N+ (CH3) v¡¡. -CH2CCH viii. -CH2C02(t-Bu) ix. -CH2Ph x. -CH2OH xi. -CH(OH)CH3 xü. -CH(OH)(t-Bu) xüi. -CH(OH)Ph xiv. -COOH XV. -SCH3 xvi. -S(p-Tol) En un aspecto, R23, comprende un alquilo opcionalmente sustituido, que incluye el alquilo de C1-C3 opcionalmente sustituido. Dicho alquilo puede ser sustituido con 10 aminas y puede comprender un C1-C3-Ala, en donde dicho compuesto comprende el D-epímero. En dicha modalidad, R23 puede ser MeAla. un aspecto, en la fórmula L anterior es seleccionado del grupo que consiste en: 25 En un aspecto, R23 es una cadena de carbono alifático recta o ramificada de 1 a 6, de 1 a 5, de 1 a 4, de 1 a 3 o 2 carbonos de longitud.

En un aspecto, la presente invención se refiere a un método para el tratamiento o prevención de un padecimiento mediado por ciclofilina en un mamífero que comprende la administración del compuesto que se describe en la presente al mamífero bajo condiciones para tratar el enfermedad o lesión mediados por ciclofilina, o el uso de dicho compuesto o composición para tratar dicho enfermedad o lesión, o el uso del compuesto para preparar un medicamento para dicho uso o tratamiento. Dicho enfermedad o lesión puede mediarse mediante la sobre expresión de ciclofilina o el padecimiento es una sobre expresión congénita de ciclofilina. Dicha enfermedad o lesión mediados por ciclofilina puede seleccionarse del grupo que consiste en a. una infección viral; b. una enfermedad inflamatoria; c. cáncer; d. padecimiento muscular; e. enfermedad neurológica; y f. lesión asociada con isquemia, reperfusión, pérdida de homeostasis de calcio celular, pérdida de homeostasís iónica, incremento en la producción de radicales libres o toxinas que inducen a la disfunción mitocondrial; en donde la infección viral, opcionalmente es producida por un virus seleccionado del grupo que consiste en virus de inmunodeficiencia humana, hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, hepatitis D, hepatitis E, SARS-CoV, hCoV-NL63, hCoV-HKU-1, hCoV-OC43, hCOV-229E, coronavirus, virus de peritonitis infecciosa felina y virus de gastroenteritis transmisible; en donde el padecimiento inflamatorio es seleccionado opcionalmente del grupo que consiste de asma, enfermedad autoinmune, inflamación crónica, prostatitis crónica, glomerulonefritis, padecimiento de hipersensibilidad; enfermedad intestinal inflamatoria, asepsia, enfermedad de célula de músculo suave vascular, aneurismas, enfermedad inflamatoria pélvica, lesión por reperfusión, artritis reumatoide, rechazo de trasplante y vasculitis; en donde el cáncer es seleccionado opcionalmente del grupo que consiste en cáncer de pulmón de célula pequeña y no pequeña, de vejiga, hepatocelular, pancreático, cáncer de seno, glioblastoma, cáncer colorectal, carcinoma de célula escamosa, melanoma y cáncer de próstata; en donde el padecimiento muscular es seleccionado opcionalmente del grupo que consiste en lesión de reperfusión al miocardio, distrofia muscular, miopatías de colágeno VI, síndrome de arresto post cardíaco (peAS), falla cardíaca, aterosclerosis , y aneurisma aórtico abdominal; en donde el enfermedad neurológica es seleccionado opcionalmente del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, atrofia de sistemas múltiples, esclerosis múltiple, parálisis cerebral, epilepsia, ataque al corazón, neuropatía diabética, esclerosis lateral amiotrófica (Enfermedad de Lou Gehrig), padecimiento bipolar, lesión excitotóxica, encefalopatía hepática, hipoglucemia, toxicidad de manganeso, carencia objetivo neuronal, ácidos grasos tóxicos tales como ácido aracadónico, lesión de nervios mecánicos, lesión de médula espinal, y lesión cerebral; y en donde la lesión asociada con la pérdida de homeostasis de calcio celular se selecciona opcionalmente del grupo que consiste en infarto al miocardio, ataque al corazón, hepatotoxicidad aguda, colestasis y lesión por almacenamiento/reperfusión de trasplante de órganos.

En un aspecto, la presente invención se refiere a un proceso para la preparación de un compuesto de la Fórmula L anterior, que comprende los pasos de: 1) hacer reaccionar la ciclosporina-A (CsA) con una alquilamida de litio básica, en la presencia de un solvente adecuado, seguida por la reacción con un electrófilo adecuado para generar un compuesto de la Fórmula 1: MeVal MeLeu MeLeu MeLeu D-Ala- -Ala MeLeu Val Fórmula I 2) hacer reaccionar el compuesto de la Fórmula 1 con AC20 en la presencia de un solvente adecuado para formar un compuesto de la Fórmula 2A: Fórmula 2A 3) Hacer reaccionar el compuesto de la Fórmula 2A con un oxidante para formar un compuesto de la Fórmula 3A: Fórmula 3A 4) Hacer reaccionar el compuesto de la Fórmula 3A con un electrófilo para formar un compuesto de la Fórmula 4A: Fórmula 4A 5) opcionalmente desacilar el compuesto de la Fórmula 4A.

En un aspecto, la preparación anterior de la Fórmula L comprende la adición de un exceso de LiCI en dicho solvente para formar de manera predominante el L-epímero de la Fórmula L, o dicha preparación de la Fórmula L es realizado en la ausencia de LiCI para formar de manera predominante el D-epímero de la Fórmula L. Dicha alquilamida de litio básica puede comprende diisopropilamida de litio.

En un aspecto, dicho electrófilo se selecciona del grupo definido en la siguiente tabla, para generar el R23 correspondiente establecido en dicha tabla: Electrófilo R23 yoduro de metilo -CH3 yoduro de etilo -CH2CH3 bromuro de alilo -CH2CHCH2 1 ,3-diyodopropano -CH2CH2CH2I 1 ,4-diyodobutano -(CH trimetilamonio-3-yodopropano hexafluorofosfato (CH2)3N + (CH3)3 bromuro de propargilo •CH2CCH bromoacetato de ter-butilo -CH2C02(t-Bu) bromuro de bencilo ¦CH2Ph2 formaldehído ¦CH2OH acetaldehído •CH(OH)CH3 p i v a I a I d e h í d o •CH(OH)(t-Bu)3 benzaldehído ¦CH(OH)Ph dióxido de carbono ¦COOH disulfuro de dimetilo ¦SCH3 disulfuro de p-tolilo ¦S(p-Tol) 4 En un aspecto, la presente invención se refiere a un método para la preparación de la Fórmula L como se definió anteriormente, que comprende los pasos de: 1) hacer reaccionar un compuesto de la Fórmula 1A con dimetilaminopiridina en la presencia de un solvente adecuado para formar el compuesto de la Fórmula 2: Ac20, DMAP OAc piridina [R23-Sar]3-CsA 1A opcionalmente seguido por la formación del aldehido de la Fórmula 3: 2 3 opcionalmente seguido por una reacción de Wittig para generar los compuestos de la Fórmula L, en donde R23 se selecciona del grupo que consiste en ii. -CH2CH3; iii. - C H 2 G H C H 2 ¡ iv. -CH2CH2CH2I; v. -(CH2)3CH2I; vi. -(CH2)3N + (CH3)3¡ vii. -CH2CCH; viii. -CH2C02(t-Bu); ix. -CH2Ph2; x. -CH2OH; xi. -CH(OH)CH3; xii. -CH(OH)(t-Bu) 3; xiii. -CH(OH)Ph; xiv. -COOH; xv. -SCH3; y xvi. -S(p-Tol) En un aspecto, la presente invención se refiere a la preparación de la Fórmula L como se define en la presente descripción, que comprende los pasos de: hacer reaccionar un compuesto de la Fórmula 5, con una alquilamida de litio básica, que comprende opcionalmente diisopropilamida de litio, en la presencia de un electrófilo adecuado en un solvente adecuado para formar el compuesto de la Fórmula L, en donde R23 comprende alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido.

Fórmula 5 En general, para todas las fórmulas químicas descritas en este documento: "Ácido carboxílico" incluye un grupo en el cual, la porción de ácido carboxílico está conectada con uno de los siguientes sustituyentes: 1. Alquilo, el cual puede ser sustituido (por ejemplo, alquilo de 2 a 15 carbonos); 2. Alquenilo, el cual puede ser sustituido (por ejemplo, alquenilo de 2 a 15 carbonos); y 3. Alquinilo, el cual puede ser sustituido (por ejemplo, alquinilo de 2 a 15 carbonos); Los sustituyentes descritos anteriormente pueden incluir halógeno (por ejemplo, flúor, cloro, bromo, yodo, etc.), nitro, ciano, hidroxi, tiol, el cual puede ser constituido (por ejemplo, tiol, C1-4 alquiltio, etc.), amino, el cual puede ser sustituido (por ejemplo, amino, mono-C1 -4-alquilamino, d i-C 1 -4 alquilamino, amino cíclico de 5 a 6 miembros tales como tetrahidropirrole, piperazina, piperidina, morfolino, tiomorfolino, pirróle, imidazole, etc.), C1-4 alcoxi, el cual puede ser halogenado (por ejemplo, metoxi, etoxi, propoxi, butoxi, trifluorometoxi, trifluoroetoxi, etc.), C1-4 alcoxi-C1 -4alcoxi, el cual puede ser halogenado (por ejemplo, metoximetoxi, metoxietoxi, etoxietoxi, trifluorometoxietoxi , trifluoroetoxietoxi, etc.), formilo, C2-4 alcanoilo (por ejemplo, acetilo, propionilo, etc.), C1-4 alquilsulfonilo (por ejemplo, metanosulfonilo, etanosulfonilo, etc.), y los similares, y el número de los sustituyentes preferentemente es de 1 a 3.

Además, los sustituyentes del "amino anterior que puede ser sustituido" pueden enlazarse entre sí para formar un grupo amino cíclico (por ejemplo, un grupo que está formado sustrayendo un átomo de hidrógeno del anillo que constituye el átomo de nitrógeno de un anillo de 5 a 6 miembros, tal como tetrahidropirrole, piperazina, piperidina, morfolino, tiomorfolino, pirróle, imidazole, etc., de manera que un sustituyente puede ser anexo al átomo de nitrógeno, o los similares). El grupo amino cíclico puede ser sustituido y los ejemplos del sustituyente incluyen halógeno (por ejemplo, flúor, cloro, bromo, yodo, etc.), nitro, ciano, hidroxi, tiol, el cual puede ser constituido (por ejemplo, tiol, C1-4 alquiltio, etc.), amino, el cual puede ser sustituido (por ejemplo, amino, mono-C-sub-1 -4-alquilamino, di-C1-4 alquilamino, amino cíclico de 5 a 6 miembros tales como tetrahidropirrole, piperazina, piperidina, morfolino, tiomorfolino, pirróle, imidazole, etc.), carboxilo, el cual puede ser esterificado o amidado (por ejemplo, carboxilo, C-4 alcoxi-carbonilo, carbamoilo, mono-C1-4 alquil carbamoilo, di-C1-4 alquil-carbamoil, etc.) C1-4 alcoxi, el cual puede ser halogenado (por ejemplo, metoxi, etoxi, propoxi, butoxi, trifluorometoxi, trifluoroetoxi, etc.), C1-4 alcoxi-sub.C1-4 alcoxi, el cual puede ser halogenado (por ejemplo, metoximetoxi, metoxietoxi, etoxietoxi, trifluorometoxietoxi, trifluoroetoxietoxi, etc.), formilo, C2-4 alcanoilo (por ejemplo, acetilo, propionilo, etc.), C1-4 alquilsulfonilo (por ejemplo, metanosulfonilo, etanosulfonilo), y los similares, y el número de los sustituyentes preferentemente es de 1 a 3.

"Amina" incluye un grupo, el cual puede ser insustituido o en el cual, la porción de amina es N-sustituida o N,N disustituida teniendo uno o dos sustituyentes, los cuales pueden ser seleccionados independientemente de: 1. Alquilo, el cual puede ser sustituido (por ejemplo, alquilo de 2 a 15 carbonos); 2. Alquenilo, el cual puede ser sustituido (por ejemplo, alquenilo de 2 a 15 carbonos); 3. Alquinilo, el cual puede ser sustituido (por ejemplo, alquinilo de 2 a 15 carbonos); 4. Formilo o acilo, el cual puede ser sustituido (por ejemplo, alcanoilo de 2 a 4 carbonos) por ejemplo, acetilo, propionilo, butirilo, isobutirilo, etc.), alquilsulfonilo de 1 a 4 carbonos (por ejemplo, metanosulfonilo, etanosulfonilo, etc.) y los similares); 5. Arilo, el cual puede ser sustituido (por ejemplo, fenilo, naftilo, etc.); y los similares; y conectados a un sustituyente, seleccionado independientemente de los sustituyentes definidos anteriormente como para "ácido carboxílico".

"Amida" incluye un compuesto en el cual, el grupo carboxílico de la porción amida está conectado a un sustituyente seleccionado independientemente de los sustituyentes definidos anteriormente para "ácido carboxílico", conectado al grupo amino de la porción amida es un N-sustituido o N,N disustituido que tiene uno o dos sustituyentes, respectivamente, los cuales pueden ser seleccionados independientemente de: 1. Alquilo, el cual puede ser sustituido (por ejemplo, alquilo de 2 a 15 carbonos); 2. Alquenilo, el cual puede ser sustituido (por ejemplo, alquenilo de 2 a 15 carbonos); 3. Alquinilo, el cual puede ser sustituido (por ejemplo, alquinilo de 2 a 15 carbonos); 4. Formilo o acilo, el cual puede ser sustituido (por ejemplo, alcanoilo de 2 a 4 carbonos) por ejemplo, acetilo, propionilo, butirilo, isobutirilo, etc.), alquilsulfonilo de 1 a 4 carbonos (por ejemplo, metanosulfonilo, etanosulfonilo, etc.) y los similares); 5. Arilo, el cual puede ser sustituido (por ejemplo, fenilo, naftilo, etc.); y los similares; "Arilo" puede ser ejemplificado por un grupo hidrocarburo aromático monocíclico o policíclico fusionado, y por ejemplo, un grupo arilo de C6-14, tal como fenilo, naftilo, antrilo, fenantrilo o acenaftilenilo, y los similares son los preferidos, con el fenilo siendo el preferido. Dicho arilo puede ser sustituido con uno o más sustituyentes, tales como alcoxi inferior (por ejemplo, C1-6 alcoxi, tal como metoxi, etoxi o propoxi, etc.) un átomo de halógeno (por ejemplo, flúor, cloro, bromo, yodo, etc.), alquilo inferior (por ejemplo, C1-6 alquilo, tal como metilo, etilo o propilo, etc.) alquenilo inferior (por ejemplo, C2-6 alquenilo, tal como vinilo o alilo, etc.), alquinilo inferior (por ejemplo, C.2-6alquinilo, tal como etinilo o propargilo, etc.) amino, el cual puede ser sustituido, hidroxilo, el cual puede ser sustituido, ciano, amidino el cual puede ser sustituido, carboxilo, alcoxicarbonilo inferior (por ejemplo, C1-6 alcoxicarbonilo, tal como metoxicarbonilo o etoxicarbonilo, etc.), carbamoilo, el cual puede ser sustituido (por ejemplo, carbamoilo, el cual puede ser sustituido con C1-6 alquilo o acilo (por ejemplo, formilo, C2-6 alcanoilo, benzoilo, C1-6 alcoxicarbonilo el cual puede ser halogenado, C1-6 alquilsulfonilo, el cual puede ser halogenado, bencenosulfonilo, etc.) el cual puede ser sustituido con un grupo heterocíclico monocíclico aromático de 6 a 6 miembros (por ejemplo, piridinilo, etc.), 1 -acetidinilcarbonilo, 1-pirrolidinilcarbonilo, piperidinocarbonilo, morfolinocarbonilo, tiomorfolinocarbonilo (el átomo de azufre puede ser oxidado), 1-piperazinilcarbonilo, etc.), o los similares. Cualquiera de estos sustituyentes pueden ser sustituidos independientemente en las posiciones que se pueden sustituir 1 a 3.

"Cetona" incluye un compuesto, en el cual, el grupo carbonilo de la porción centona está conectado a uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente de los sustituyentes que se definieron anteriormente para dicho "ácido carboxílico". "Éster" incluye ya sea un carboxílico o un éster de alcohol, en donde el grupo éster está compuesto de uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente de los sustituyentes como los definidos para "ácido carboxílico" o "arilo".

"Alquilo" a menos que se ha definido de otra manera, preferentemente es un alquilo de 1 a 15 unidades de carbono de longitud.

"Grupo aromático" puede ser ejemplificado por el arilo como se definió anteriormente, o un grupo heterocíclico monocíclico aromático de 5 a 6 miembros, tal como furilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, 1 ,2,3-oxadiazolilo, 1 ,2,4-oxadiazolilo, 1 ,3,4-oxadiazolilo, furazanilo, 1 ,2,3-tiadiazolilo, 1,2,4-tiadiazolilo, 1 ,3,4-tiadiazolilo, 1 ,2,3-triazolilo, 1 ,2,4-triazolilo, tetrazolilo, piridilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo o los similares; y un grupo heterocíclico fusionado aromático de 8 a 16 miembros (preferentemente de 10 a 12 miembros) "No-inmunosupresor" se refiere a la capacidad de un compuesto para exhibir un nivel substancialmente reducido de supresión del sistema inmune en comparación con CsA, como está medido por la capacidad de los compuestos para inhibir la proliferación de los linfocitos humanos en cultivo celular y preferentemente medido por el método establecido en el Ejemplo 19 que se encuentra más adelante.

"Análogo" significa un análogo estructural de CsA que difiere del CsA en uno o más grupos funcionales. Preferentemente, dichos análogos conservan por lo menos una porción substancial de la capacidad de CsA para enlazar CyP.

Las especies preferidas de la Fórmula I son aquellas en las cuales R' es H, R1 es un alquilo saturado o insaturado entre 2 y 15 carbonos de longitud y R2 se selecciona de: 1. ácido carboxílico que comprende un grupo carboxilo; 2. N-sustituida de amida ?,?-disustituida en donde los sustituyentes son seleccionados independientemente de un H, un alquilo de entre 1 y 7 carbonos de longitud, o dichos sustituyentes forman un anillo heterocíclico del cual, el heterociclo es seleccionado de O, N o S; 3. un éster de entre 1 y 7 carbonos en longitud; 4. un alquilo monohidroxilado o dihidroxilado de entre 1 y 7 carbonos en longitud; 5. una amina protegida por acilo N-sustituido o insustituido de entre 1 y 7 carbonos en longitud; 6. un nitrilo; 7. una cetona, en donde el grupo carboxílico de la cetona está conectado a R1 y la cadena de alquilo saturada o insaturada de entre 1 y 7 carbonos de longitud; 8. fenilo, opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de dióxido de nitrógeno, un flúor, una amina, un éster o un grupo carboxilo.

Los compuestos de la presente invención pueden existir en la forma de compuestos ópticamente activos. La presente invención contempla todos los enantiómeros de los compuestos ópticamente activos dentro del alcance de la fórmula anterior, tanto individualmente como en mezclas de racematos. También, la presente invención incluye profármacos de los compuestos definidos en la presente descripción.

De acuerdo con otro aspecto, los compuestos de la presente invención pueden ser útiles para el tratamiento o prevención o estudio de una enfermedad mediada por CyP en un mamífero, preferentemente un humano. Dicha enfermedad, normalmente es mediada por la sobre expresión de CyP, tal como una sobre expresión congénita de CyP.

Las enfermedades mediadas por CyP que pueden ser tratadas mediante los compuestos de la presente invención incluyen: a. una infección viral; b. un padecimiento inflamatorio; c. cáncer; d. padecimiento degenerativo muscular; e. padecimiento neurodegenerativo; y f. una lesión asociada con la pérdida de homeostasis de calcio celular.

Dicha infección viral puede ser producida por un virus seleccionado del grupo que consiste en el Virus de inmunodeficiencia humana, Hepatitis A, Hepatitis B, Hepatitis C, Hepatitis D y Hepatitis E. Dicha enfermedad inflamatoria se selecciona del grupo que consiste en asma, enfermedad autoinmune, inflamación crónica, prostatitis crónica, glomerulonefritis, enfermedad de hipersensibilidad, enfermedad intestinal inflamatoria, asepsia, enfermedad de célula de músculo suave vascular, aneurismas, enfermedad inflamatoria pélvica, lesión por reperfusión, artritis reumatoide, rechazo de trasplante y vasculitis. Dicho cáncer puede seleccionarse del grupo que consiste en c'nacer de pulmón de célula pequeña y no pequeña, de vejiga, hepatocelular, pancreático y cáncer de seno. Dicho padecimiento degenerativo muscular puede seleccionarse del grupo que consiste en lesión por reperfusión del miocardio, distrofia muscular y miopatías de colágeno VI. Dicho padecimiento neurodegenerativo puede seleccionarse del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, Atrofia de sistemas múltiples, esclerosis múltiple, parálisis cerebral, ataque al corazón, neuropatía diabética, esclerosis amiotrófica lateral (Enfermedad de Gehrig), lesión de la médula espinal y lesión cerebral. Dicha lesión asociada con la pérdida de homeostasis de calcio celular puede ser seleccionada opcionalmente del grupo que consiste en infarto al miocardio, ataque al corazón, hepatotoxicidad aguda, coleostasis y lesión por almacenamiento/reperfusión de trasplante de órganos.

Descripción Detallada de la Invención De acuerdo con un aspecto, un compuesto de la presente invención puede ser administrado limpio o con un portador farmacéutico a un animal de sangre caliente que lo necesita. El portador farmacéutico puede ser sólido o líquido. El compuesto puede ser administrado en forma oral, tópica, parenteral, por inhalación de rocío o rectalmente en formulaciones de unidad de dosificación que contienen los portadores, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables convencionales no tóxicos. El término parenteral, como se utiliza en la presente descripción, incluye inyecciones subcutáneas, intravenosas, intramusculares, inyección intrasternal o técnicas de infusión.

Las composiciones farmacéuticas que contienen la mezcla inventiva puede tener una forma adecuada para uso oral, por ejemplo, en la forma de tabletas, trociscos, pastillas, suspensiones acuosas u oleosas, polvos o gránulos que se pueden dispersar, emulsiones, cápsulas duras o suaves, y jarabes o elixires. Las composiciones pretendidas para uso oral pueden prepararse de acuerdo con los métodos conocidos en la materia para la fabricación de composiciones farmacéuticas y dichas composiciones pueden contener uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste en agente edulcorantes, agentes de sabor, agentes colorantes y agentes conservadores con el objeto de proporcionar una preparación farmacéuticamente elegante y sabrosa. Las tabletas que contienen el ingrediente activo en mezcla con excipientes farmacéuticamente aceptables no tóxicos también pueden fabricarse mediante los métodos conocidos. Los excipientes utilizados pueden ser, por ejemplo, (1) diluyentes inertes tales como carbonato de calcio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio; (2) agentes de granulación y desintegración tales como almidón de maíz o ácido algínico; (3) agentes aglutinadores, tales como almidón, gelatina o acacia, y (4) agentes de lubricación tales como estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Las tabletas pueden no estar cubiertas o pueden ser recubiertas mediante las técnicas conocidas para demorar la desintegración y absorción en el tracto gastrointestinal y de esta manera proporcionar una acción sostenida durante un período más largo. Por ejemplo, puede emplearse un material de demora de tiempo tal como monoestearato de glicerilo o distearato de glicerilo. También pueden ser recubiertas mediante las técnicas descritas en El documento de patente Norteamericana número 4,256,108; 4,160,452; y 4,265,874 para formar tabletas terapéuticas osmóticas para liberación controlada.

En algunos casos, las Formulaciones para uso oral pueden tener la forma de cápsulas de gelatina dura, en donde el ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolina. Estas también pueden tener la forma de cápsulas de gelatina suave, en donde el ingrediente activo se mezcla con agua o un medio oleoso, por ejemplo, aceite de cacahuate, parafina líquida o aceite de olivo.

Las suspensiones acuosas normalmente contienen los materiales activos mezclados con los excipientes adecuados para la fabricación de suspensiones acuosas. Dichos excipientes pueden incluir: (1) agentes de suspensión tales como carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto y goma acacia; o (2) agentes de dispersión o humectación, los cuales pueden ser un fosfatido de ocurrencia natural, tal como lecitina, un producto de condensación de un óxido de alquileno con un ácido graso, por ejemplo, estearato de polioxietileno, un producto de condensación de óxido de etileno con un alcohol de alifático de cadena larga, por ejemplo, heptadecaetilenooxicetamol, un producto de condensación de óxido de etileno con un éster parcial derivado de un ácido graso y un hexitol, tal como monooleato de sorbitol de polioxietileno, o un producto de condensación de óxido de etileno, con un éster parcial, derivado de un ácido graso y una anhídrido de exitol, por ejemplo, monooleato de sorbitán de polioxietileno.

Las suspensiones acuosas también pueden contener uno o más conservadores, por ejemplo, etilo o n-propil p-hidroxibenzoato; uno o más agentes de adición de color; uno o más agentes de adición de sabor; y uno o más agentes edulcorantes, tales como sucrosa, aspartame o sacarina.

La suspensión oleosa puede ser Formulada al suspender el ingrediente activo en un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de cacahuate, aceite de oliva, aceite de ajonjolí o aceite de coco, un aceite de pescado, el cual contiene ácido graso de omega 3, o un aceite mineral, tal como una parafina líquida. Las suspensiones oleosas pueden contener un agente de espesamiento, por ejemplo, cera de abeja, parafina dura o alcohol cetílico. Los agentes edulcorantes y agentes de adición de sabor pueden ser agregados para proporcionar una preparación oral de buen sabor. Estas composiciones pueden ser conservadas mediante la adición de un antioxidante, tal como ácido ascórbico.

Los polvos y gránulos que se pueden dispersar son adecuados para la preparación de una suspensión acuosa. Estos proporcionan el ingrediente activos en una mezcla con un agente de dispersión o humectación, un agente de suspensión y uno o más conservadores. Los agentes de dispersión o humectación adecuados y los agentes de suspensión son ejemplificados por aquellos ya mencionados anteriormente. Los excipientes adicionales, por ejemplo, aquellos agentes edulcorantes, de adición de sabor y color descritos anteriormente, también pueden estar presentes.

Las composiciones farmacéuticas que contienen la mezcla inventiva también pueden tener la forma de emulsiones de aceite en agua. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal, tal como aceite de oliva o aceite de cacahuate, o un aceite mineral tal como parafina líquida o una mezcla de los mismos. Los agentes emulsificadores adecuados pueden ser (1) gomas de ocurrencia natural tales como goma acacia y goma de tragacanto, (2) fosfatidos de ocurrencia natural, tales como frijol de soya y lecitina, (3) ésteres o éster parcial derivado de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo, monooleato de sorbitán, (4) productos de condensación de dichos ésteres parciales con óxido de etileno, por ejemplo, monooleato de sorbitán de polioxietileno. Las emulsiones también pueden contener agentes edulcorantes o de adición de sabor.

Los jarabes y elixires pueden ser Formulados con agentes edulcorantes, por ejemplo, glicerol, propilénglicol, sorbitol, aspartame o sucrosa. Dichas Formulaciones también pueden contener un emoliente, un conservador y agentes de adición de sabor y color.

Las composiciones farmacéuticas pueden tener la forma de una suspensión inyectable esterilizada acuosa u oleaginosa. Esta suspensión puede ser formulada de acuerdo con los métodos conocidos utilizando aquellos agentes de dispersión o humectación adecuados y agentes de suspensión, los cuales se han mencionado anteriormente. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o una suspensión estéril inyectable en un diluyente o solvente aceptable parenteraímente no tóxico, por ejemplo, como una solución en 1 ,3-butanodiol. Entre los vehículos y solventes aceptables que pueden emplearse, están agua, solución de Ringer y solución de cloruro de sodio isotónico. Además, los aceites estériles, fijos son empleados de manera convencional como un solvente o medio de suspensión. Para este propósito, cualquier aceite fijo blando puede emplearse, incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos tales como ácido oléico se encuentran útiles en la preparación de inyectables.

El compuesto inventivo también puede ser administrado en la forma de supositorios para administración rectal del fármaco. Las composiciones adecuadas pueden prepararse mezclando el compuesto con un excipiente no irritante adecuado, el cual es sólido a temperaturas ordinarias pero líquido a temperatura rectal y por consiguiente se fundirá en el recto para liberar el fármaco. Dichos materiales son mantequilla de cacahuate y polietilénglicoles.

Para uso tópico, pueden emplearse las cremas, ungüentos, jaleas, soluciones o suspensiones, etc., adecuados, los cuales son utilizados normalmente con ciclosporina.

En una modalidad particularmente preferida, se utiliza una solución líquida que contiene un tensoactivo, etanol, un solvente lipofílico y/o anfifílico como los ingredientes no activos. De manera específica, una fórmula de emulsión múltiple oral que contiene la mezcla análoga isomérica y los siguientes ingredientes no medicinales: succinato de polietilénglicol 1000 de d-alfa tocoferil (vitamina E TPGS), aceite triglicérido de cadena media (MCT), Tween 40 y etanol, son los utilizados. Una cápsula de gelatina suave (que comprende gelatina, glicerina, agua y sorbitol) que contienen el compuesto y los mismos ingredientes no médicos, como la solución oral, también preferentemente pueden ser utilizados.

Sin embargo, se comprenderá que el nivel de dosificación especifico para cualquier paciente particular dependerá de una variedad de factores que incluyen la actividad del compuesto específico empleado, la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo, dieta, tiempo de administración, ruta de administración, índice de excreción, combinación de fármaco y la naturaleza y severidad de la enfermedad o condición particulares de la terapia experimentada.

Metodología Las reacciones establecidas más adelante, son ejemplos generales de las reacciones químicas con la capacidad para sintetizar los compuestos deseados modificados en el residuo de aminoácido 1 (AA1) y el residuo de aminoácido 3 (AA3) del CsA. Las modificaciones al AA1 se representan como: y las modificaciones al AA3 son representadas como tanto las modificaciones a AA1 como a AA3 utilizan los reactivos que tienen propiedades químicas requisito, y aquellos expertos en la materia comprenderán que se pueden realizar sustituciones de ciertos reactivos.

La identidad y pureza de los compuestos preparados, generalmente se estableció mediante metodologías que incluyen espectrometría de masa, HPLC y espectroscopia de RMN. Los espectros de masa (ESI- S) fueron medidos en el sistema Hewlett Packard 1100 MSD. Los espectros de RMN fueron medidos en un espectrómetro Varían MercuryPlus 400 MHz en solventes deuterados (DMSO para sales de fosfonio, benceno para todos los demás compuestos). El HPLC de fase inversa analítico y preparativo fue realizado en un Sistema agilent Serie 1100.

Síntesis de Compuestos de Sal de Fosfonio Las sales de fosfonio se preparan a través de la reacción de trifenilfosfina o cualesquiera otras fosfinas adecuadas con haluros de alquilo (R-X; X = Cl, Br, o I). Los haluros de alquilo adecuado son los haluros alifáticos primarios o cualesquiera secundarios de cualquier longitud de cadena o peso molecular.

Estos haluros de alquilo pueden ser ramificados o no ramificados, saturados o insaturados.

Si la reacción es realizada en tolueno (Reacción 1), el producto se precipita directamente desde la solución de reacción. Los sustratos no reactivos, sin embargo, requieren un solvente p.olar tal como dimetilformamida (DMF) (Reacción 2) para recortar los tiempos de reacción y para lograr las producciones satisfactorias.

Reacción 1 : R10— X + PPh3 t0luen° , R10— PPh3+ X- Fórmula V En donde X es un haluro (incluyendo, sin limitar a, Cl, Br y I), y R10 es una cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada, que contiene opcionalmente un sustituyente seleccionado del grupo de acetonas, hidroxilos, nitrilos, ácidos carboxílicos, ésteres y 1 ,3-dioxolanos; un grupo aromático, que contiene opcionalmente un sustituyente seleccionado del grupo de haluros, ésteres y nitro; o una combinación de la cadena alifática saturada o insaturada, recta o ramificada mencionada anteriormente y los grupos aromáticos mencionados anteriormente.

Ejemplo 1. Síntesis del 404-15 Como un ejemplo ilustrativo, la trifenilfosfina (13 mmol) se disuelve en 50 mL de tolueno y cloroacetona (10 mmol) se agregan para producir una solución clara. La reacción es agitada bajo reflujo durante la noche. Se filtró un sólido incoloro, se lavó con tolueno y hexano y se secó al vacío.

Utilizando la Reacción 1, los siguientes compuestos son ejemplos adicionales de los compuestos que pueden ser sintetizados.

Compuesto Reactivo (R10-X) Condiciones 404-08 Bromuro de bencilo 4 horas a reflujo Yoduro de metilo TA durante la noche bromuro de 4- 6 horas a reflujo nitrobencilo cloroacetona reflujo durante la noche bromuro de 4- reflujo durante la noche fluorobencilo Metil 3- 3-6 horas a reflujo bromometilbenzoato Compuesto Reactivo (R10-X) Condiciones bromuro de 3- 6 horas a reflujo nitrobencilo 1-bromo-2-butanona TA durante la noche 4-bromobutironitrilo reflujo durante la noche De manera alternativa, las sales de fosfonio adecuadas, pueden ser sintetizadas a través de la Reacción 2 como se ilustra a continuación: Reacción 2: R11 X + PPh3 DMF ^ R11 PPh3+ X" Fórmula VI En donde X es un haluro (incluyendo, sin limitar a, Cl, Br y I), y R10 es una cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada, que contiene opcionalmente un sustituyente seleccionado del grupo de acetonas, hidroxilos, nitrilos, ácidos carboxílicos, ésteres y 1 ,3-dioxolanos; un grupo aromático, que contiene opcionalmente un sustituyente seleccionado del grupo de haluros, ésteres y nitro; o una combinación de la cadena alifática saturada o insaturada, recta o ramificada mencionada anteriormente y los grupos aromáticos mencionados anteriormente. emplo 2: Síntesis del 404-51 Como un ejemplo ilustrativo, se disolvió trifenilfosfina (11 mmol) en 10 mL de DMF y se agregó ácido 4-bromobutírico (10 mmol). La reacción es agitada durante 7 horas a una temperatura de 110°C y después se dejó enfriar durante la noche. Se agregaron cincuenta mL de tolueno y un sólido cristalino, incoloro se recolectó por filtración. El producto se lavó con tolueno y hexano y se secó al vacío durante la noche.

Si la cristalización no se ajustó en el tratamiento posterior con tolueno, el producto se extrae con 20 mL de MeOH/H20 (mezcla al 1:1). La fase acuosa se lavó con tolueno y hexano y se llevó a sequedad. El residuo es agitado con 50 mL de acetato de etilo (EtOAc) a temperatura de reflejo durante de 20 a 30 minutos. Si se obtiene un sólido cristalino, el producto es recolectado por filtración, lavado con EtOAc y hexano y es secado. En el caso de que el producto obtenido no sea un aceite o goma, el EtOAc es decantado y el producto restante es secado al vacío.

Utilizando la Reacción 2, los siguientes compuestos son ejemplos adicionales de los compuestos que pueden ser sintetizados.

Compuesto Reactivo (R11-X) Condiciones 404-14 1 -bromobutírico 6.5 horas a una temperatura de 120°C 2-fluorometil-1 ,3- 120°C durante la noche dioxolano 1-bromooctano 110°C durante la noche Ácido 5-bromovalérico 8 horas a una temperatura de 120°C Compuesto Reactivo (R11-X) Condiciones 404-78 6-bromohexanol 110°C durante la noche Ácido 4-bromobutírico 7 horas a una temperatura de 110°C 1-bromohexano 110°C durante la noche Ácido 6- 110°C durante la noche bromohexanóico Compuesto Reactivo (R1 1-X) Condiciones nitrilo de 7- 1 10°C durante la bromoheptano; noche 6-cloro-2-hexanona 1 10°C durante la noche 9-bromo-1-nonanol 1 10°C durante la metil 7- 1 10°C durante la bromohexanoato noche Compuesto Reactivo (R11-X) Condiciones Acido 11- 110°C durante la bromoundecanóico noche 3-bromopropionitrilo 110°C durante la noche Ácido 8-bromooctanóico 110°C durante la noche 6-bromohexanonitrilo 110°C durante I noche Compuesto Reactivo (R11-X) Condiciones 420-94 5-cloro-2-pentanona 110°C durante la noche Reacción de Wittig La reacción de Wittig se puede aplicar ampliamente a un intervalo amplio de sustratos o reactivos. La cadena lateral, la cual es introducida al sustrato en la reacción, puede representar a cualquier número de compuestos alifáticos ramificados o no ramificados, saturados o insaturados de longitud variable (R") y puede contener un intervalo amplio de grupos funcionales.

En la reacción de Wittig, una base, tal como ter-butóxido de potasio (KOtBu) se utiliza para generar un ilido a partir de una sal de fosfonio. Los reactivos de ilido con el grupo carbonilo del sustrato, CsA-aldehído, para formar un alqueno. Las sales de fosfonio que contienen una cadena lateral de ácido carboxílico requieren por lo menos dos equivalentes de la base para generar el ilido.

Reacción 3: Síntesis de un intermediario de análogo de Ciclosporina acetilada utilizando un compuesto de sal de fosfonio a través de una reacción de Wittig Fórmula X En donde X es un haluro (incluyendo, sin limitar a, Cl, Br y I), y R12 es una cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada, que contiene opcionalmente un sustituyente seleccionado del grupo de acetonas, hidroxilos, nitrilos, ácidos carboxílicos, ésteres y 1 ,3-dioxolanos; un grupo aromático, que contiene opcionalmente un sustituyente seleccionado del grupo de haluros, ésteres y nitro; o una combinación de la cadena alifática saturada o insaturada, recta o ramificada mencionada anteriormente y los grupos aromáticos mencionados anteriormente.

Ejemplo 3: Síntesis del Compuesto 404-20 utilizando una Sal de Fosfonio Compuesto a través de una reacción de Wittig: Como un ejemplo ilustrativo, un matraz seco en horno de 250 mL se carga bajo atmósfera de argón con bromuro de trifenilbutilfosfonio (6.0 mmol) y 40 mL de tetrahidrofurano anhidro (THF). La suspensión se enfrió a una temperatura de 0°C y se agregó ter-butóxido de potasio (6.0 mmol) para obtener un color anaranjado. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante de 1 a 2 horas, seguido por la adición de CsA-aldehído (2.0 mmol), disuelto en 20 mL de THF anhidro), la agitación se continuó durante 3 horas a temperatura ambiente. La reacción se apagó con 10 mL de NH4CI saturado y 20 mL de agua helada. Las capas son separadas y la fase acuosa es extraída con EtOAc. Las capas orgánicas son combinadas, lavadas con salmuera y secadas sobre Na2S04. El solvente es removido y el producto crudo es purificado sobre gel de sílice (hexano/acetona 3: 1).

Utilizando la Reacción 3, los siguientes compuestos son ejemplos adicionales de los compuestos que pueden ser sintetizados.

Compuesto Material de partida MS (Na+) Comentarios 404-16 404-09 1252.9 1328.9 1294.9 1373.9 agitado a una temperatura de 60°C durante la noche Compuesto Material de partida MS (Na+) Comenta 404-43 404-15 agitado a 404-59 404-51 1338.9 2 ec de KOtBu Compuesto Material de partida MS Comentarios (Na+) 404-79 404-87 agitado a TA durante la noche 404-89 404-87 agitado a TA durante 2 404-134 404-116 agitado a TA durante 2 404-161 agitado a reflujo durante 15 días Compuesto Material de partida MS Comentarios (Na+) 404-187 404-170 1305.9 agitado a TA la 420-40 420-32 1381.0 agitado a TA durante la Compuesto Material de partida MS Comenta (Na+) 420-89 420-80 1291.9 4 2 ec de KOtBu 4 1338.9 4 1347.9 Desacetilación Reacción 4: Desacetilación de Análogos de Ciclosporina Acetilados Fórmula X Fórmula XI En donde R12 es una cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada, que contiene opcionalmente un sustituyente seleccionado del grupo de acetonas, hidroxilos, nitrilos, ácidos carboxílicos, ésteres, amidas, aminas protegidas por acilo y 1 ,3-dioxolanos; un grupo aromático, que contiene opcionalmente un sustituyente seleccionado del grupo de haluros, ésteres, aminas y nitro; o una combinación de la cadena alifática saturada o insaturada, recta o ramificada mencionada anteriormente y los grupos aromáticos mencionados anteriormente.

Ejemplo 4: Síntesis del Compuesto 404-90 a través de desacetilación Como un ejemplo ilustrativo, se combinó una solución de 404-20 (0.16 mmol) en 10 ml_ de MeOH con una solución de pentahidrato de hidróxido de tetrametilamonio (0.47 mmol) en 2 mL de H20. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 días. La reacción se concentró al vacío y se agregaron 5 mL de H20. La reacción se extrajo con EtOAc, el extracto se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04 y se concentró a sequedad. El producto crudo se purificó mediante HPLC preparativo de fase inversa.

La purificación de los compuestos desacetilados generalmente se realiza sobre gel de sílice (hexano/acetona 2: 1) o mediante HPLC preparativo. En el caso de los compuestos 404-60, 404-137, 416-08, 420-98 y 420-100, (ácidos carboxílicos) , la reacción se acidificó a un pH de 2-3 con 1 M de HCI antes de la extracción.

Utilizando la Reacción 4, los siguientes compuestos son ejemplos adicionales de los compuestos que pueden ser sintetizados.

Compuesto Material de partida MS (Na+) 404-22 404-16 1210.9 Compuesto Material de partida MS (Na+) 404-66 404-65 1305.1 404-125 404-120 1304.0 Compuesto Material de partida MS(Na+) Compuesto Material de partida MS (Na+) 420-108 420-101 1305.9 Compuesto Material de partida MS (Na+) Hidrogenación del Enlace Doble El enlace doble puede ser hidrogenado bajo presión atmosférica para obtener la cadena lateral saturada. Los grupos funcionales, tales como hidroxilo, carbonilo y carboxilo son estables bajo estas condiciones y no requieren de protección. R' representa ya sea un grupo acetilo o un grupo hidrógeno. En el caso de compuestos carbonilo a,ß-insaturados, el enlace doble tiene que reducirse antes de la desacetilación para evitar el ciclado a través de la adición de nucléofilo del grupo hidroxi libre en el enlace doble activado.

Reacción 5: En donde R12 es una cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada, que contiene opcionalmente un sustituyente seleccionado del grupo de acetonas, hidroxilos, nitrilos, ácidos carboxílicos, ésteres, amidas, aminas protegidas por acilo y 1 ,3-dioxolanos; un grupo aromático, que contiene opcionalmente un sustituyente seleccionado del grupo de haluros, ésteres, aminas y nitro; o una combinación de la cadena alifática saturada o insaturada, recta o ramificada mencionada anteriormente y los grupos aromáticos mencionados anteriormente, y $' es, ya sea H o un grupo acetilo. emplo 5: Síntesis del 404-56 Como un ejemplo ilustrativo, 404-43 (0.34 mmol) se disolvió en 40 mL de EtOH anhidro y 43 mg/ Pd/C (10%) y se agregaron 0.2 mL de ácido acético. La mezcla se agitó bajo hidrógeno a presión atmosférica durante 2 días. La reacción se filtró a través de Celita y se concentró al vacío. El producto crudo se purificó mediante HPLC preparativo.

Utilizando la Reacción 5, los siguientes compuestos son ejemplos adicionales de los compuestos que pueden ser sintetizados.

Compuesto Material de partida MS(Na+) Compuesto Material de partida MS(Na+) 8 Compuesto Material de partida MS(Na+) Reducción del Grupo Nitrito La reducción del grupo nitrilo a la amina primaria correspondiente puede lograrse con boruro de níquel generado en el sitio a partir de borohidruro de sodio (NaBH4) y cloruro de Níquel(ll) (NiCb). La adición de un reactivo de captura adecuado conduce a las aminas primarias protegidas por acilo (carbamatos o amidas, respectivamente) y evita la formación de las aminas secundarias como una reacción lateral indeseada. El enlace doble es reducido parcialmente bajo las condiciones determinadas y se obtiene una mezcla del producto. Ambos, los compuestos de amina protegidos saturados como insaturados, fueron aislados y purificados. Para la reacción 420-123, la mezcla no se separó. En su lugar, la mezcla experimentó hidrogenación catalítica para producir el compuesto completamente saturado.

Reacción 6: Fórmula XV Fórmula XVI En donde el acilo es cualquiera de BOC, acetilo o butirilo, el agente de acilación es cualquiera de di-ter-butildicarbonato, anhídrido acético, y anhídrido butírico y R1 es un grupo alifático de cadena recta o ramificada saturado o insaturado. Aquellos expertos en la materia podrían comprender que los agentes de acilación descritos anteriormente pueden ser reemplazados con un amplio rango de agentes de acilación para producir un rango amplio de manera similar de aminas protegidas por acilo.

Ejemplo 6: Síntesis del 420-08 Como un ejemplo ilustrativo, 404-187 (0.257 mmol) se disolvió en 15 mL de metanol y se enfrió a una temperatura de 0°C. Se agregaron di-ter-butildicarbonato (0.514 mmol) y cloruro de níquel(ll) (0.025 mmol) para producir una solución clara. Se agregó borohidruro de sodio (3.85 mmol) en porciones durante 1 hora. La mezcla resultante es agitada a temperatura ambiente durante la noche. Se agregó borohidruro de sodio adicional (1.95 mmol) a una temperatura de 0°C y se continuó la agitación durante 3 horas a temperatura ambiente. La HPLC muestra una mezcla de 420-08-1 (compuesto de carbamato) y 420-08.2 (compuesto de carbamato con enlace doble reducido). La reacción es agitada durante 30 minutos con dietilenotriamina (0.257 mmol) y posteriormente es concentrada al vacío. El residuo es recolectado en 75 mL de EtOAc, lavado con 20 mL de solución de NaHC03 saturada y se secó sobre Na2S04. El solvente es removido al vacío. El producto crudo se purificó mediante HPLC preparativo.

Utilizando la Reacción 6, los siguientes compuestos son ejemplos adicionales de los compuestos que pueden ser sintetizados.

Compuesto Material de Partida Reactivo de MS Protección (Na+) di-ter- 1 butildicarbonato di-ter-butild¡- 1412.1 carbonato anhídrido 1379.9 butírico anhídrido 1382.1 butírico anhídrido 1394.1 acético anhídrido 1396.1 acético 420-110-1 420-101 di-ter-butildi- 1452.1 carbonato di-ter-butildi- 1454.1 carbonato anhídrido 1337.9/ acético 1339.9 anhídrido 1422.1 butírico anhídrido 1424.1 butírico 1 mezcla no separada Desprotección de Amina La amina protegida por BOC (carbamato) puede convertirse en la amina libre mediante la hidrólisis acídica utilizando ácido trifluoroacético (TFA).

Reacción 7: Fórmula XX Fórmula XXI en donde R1 es una cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada, y R' es ya sea un H o un grupo acetilo.

Ejemplo 7: Síntesis del 420-23 Como un ejemplo ilustrativo, 420-17 (0.026 mmol) se disolvió en 4 mL de DCM anhidro y 2 mL de ácido fluoroacético se agregaron a una temperatura de 0°C. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se agregaron veinte 20 mL de diclorometano. La mezcla de reacción se lavó con H20 y solución saturada de NaHC03 y se secó sobre Na2S04. El solvente es removido y el producto crudo es purificado mediante HPLC preparativo.

Utilizando la Reacción 7, los siguientes compuestos son ejemplos adicionales de los compuestos que pueden ser sintetizados.

Compuesto Material de Partida MS (M+1) Protección del Grupo Amino La función de aminoácido libre puede ser protegida utilizando un amplio rango de grupos de protección utilizando los métodos establecidos. Un rango más amplio de agentes de protección está disponible en comparación con la introducción reductiva empezando a partir de nitrilo. Juntas, las reacciones 7 y 8, ofrecen una ruta alternativa a la reacción 6 para la preparación de los compuestos amino protegidos por acilo.

Reacción 8: Fórmula XXI Fórmula XIV En donde el acilo es cualquiera de BOC, acetilo o butirilo, el agente de acilacion es cualquiera de di-ter-butildicarbonato, anhídrido acético, anhídrido butírico, un experto en la materia podría comprender que un amplio rango de agentes de acilacion que incluyen, dicarbonatos, anhídridos y haluros de acilo pueden emplearse para producir un rango amplio de aminas protegidas por acilo, y R1 es un grupo alifático de cadena recta o ramificada, saturada o insaturada. Ejemplo 8: Síntesis del 420-27 Como un ejemplo ilustrativo, 420-25 (0.039 mmol) se disolvió en 3 mL de piridina anhidra bajo nitrógeno. La reacción se enfrió a una temperatura de 0°C y se agregó anhídrido acético (0.59 mmol). La mezcla es agitada a temperatura ambiente durante la noche. El solvente es removido al vacío y el residuo es recolectado en 25 mL de EtOAc. La reacción se lavó con 2 x 10 mL 1 M de HCI, 2 x 10 mL de solución saturada de NaHC03 y 10 mL de salmuera y se secó sobre Na2S04. El solvente es removido al vacío para producir el producto en la forma de un sólido incoloro.

Desprotección de Aldehido La porción de 1 ,3-dioxolano es convertida en una función aldehido a través de hidrólisis acídica.

Reacción 9 y Ejemplo 9: Síntesis de 404-47 Fórmula XVIII Fórmula XIX Como un ejemplo ilustrativo, una solución de 404-33 (0.246 mmol) en 20 mL de ácido fórmico se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. Cien mL de agua helada y 200 mL de solución saturada de NaHC03 se agregaron lentamente a la reacción (espumado fuerte). La reacción es extraída con 2 x 150 mi de EtOAc. Los extractos combinados son lavados con solución saturada de NaHC03 y salmuera y se secan sobre Na2S0 . El solvente es removido y el producto es secado al vacío .

Reducción del Grupo Nitro El compuesto nitro aromático es reducido a anilina a través de hidrogenación catalítica. La reacción conduce a la reducción del enlace doble.

Reacción 10 y Ejemplo 10: Síntesis de 404-120 Fórmula XXII Fórmula XXIII Como un ejemplo ilustrativo, 404-89 (0.13 mmol) se disolvió en 2 mL de etanol y Níquel Raney (0.18 g, 50% en H20, se lavó tres veces con etanol, posteriormente se suspensión en 2 mL de etanol) y se agregó 0.1 mL de ácido acético. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 días. La reacción es filtrada a través de Celita y el pastel de filtro se lavó con metanol. El filtrado se llevó a sequedad El residuo es recolectado en EtOAc, lavado con solución de NaHC03 y salmuera y se secó sobre Na2S04. El solvente es removido al vacío. El producto crudo es purificado sobre gel de sílice (hexano/acetona 2: 1).

Síntesis de amida Las amidas son preparadas a partir de ácidos carboxílicos mediante la reacción de una amina con el cloruro de ácido correspondiente (Reacción 11). La síntesis también puede proceder directamente a partir del ácido mediante el uso de los reactivos de acoplamiento adecuados, tales como DCC. y HOBt (Reacción 12).

Reacción 11 : Fórmula XXV Fórmula XXVI Fórmula XXVIII en donde R1 es una cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada, R15 y R16 son independientemente hidrógeno o una cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada, o en donde NR15R16 juntos forman una porción morfolinilo.

Ejemplo 11 : Síntesis de 404-85 Como un ejemplo ilustrativo, 365-73 (0.04 mmol) y cloruro de tionilo (68 mmol) se combinan bajo atmósfera de nitrógeno y son calentados a reflujo durante 2 horas. La reacción se dejó enfriar y se concentró a sequedad. Veinte mL de tolueno son agregados y la reacción es concentrada a sequedad nuevamente (2 veces). El residuo es recolectado en 5 mL de tolueno anhidro y se agrega dietilamina (0.48 mmol) La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Cinco MI de H20 son agregados y la mezcla es extraída con 20 mL de EtOAc. El extracto es lavado con salmuera y secado sobre Na2S04. El solvente es removido al vacío y el producto crudo es purificado sobre gel de sílice (hexano/acetona 3: 1).

Utilizando la Reacción 11, los siguientes compuestos son ejemplos adicionales de los compuestos que pueden ser sintetizados.

Compuesto Material de Partida MS (Na+) Amina 404-83 365-73 1368.2 dietilamina amonio 1311.9 anhidro1 1340.1 Dimetil- amina2 pasada a través de la reacción durante 10 minutos a una temperatura de 0°C, 12 M de solución en THF Reacción 12: Fórmula XXVII Fórmula XXVIII Formula XXV en donde R1 es una cadena a I ifática recta o ramificada, saturada o insaturada, R15 y R16 son independientemente hidrógeno o una cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada, o en donde NR15R16 juntos forman una porción morfolinilo.

Ejemplo 12: Síntesis de 420-104 Como un ejemplo ilustrativo, 420-98 (0.078 mmol) se disolvió en 10 ml_ de DCM anhidro bajo atmósfera de nitrógeno. Se agregó diciciohexilcarbodiimida (DCC, 9.117 mmol) e hidrato de 1-hidroxibenzotriazole (HOBt, 0.078 mmol) a una temperatura de 0°C y la mezcla se agitó durante 15 minutos. Dietilamina (0.78 mmol) se agregó para proporcionar una solución clara, incolora. El baño de frío es removido después de 15 minutos y la agitación es continuada a temperatura ambiente durante 5 días. La reacción es transferida a un embudo de separación y se agregaron 20 mL de DCM y 10 ml_ de 0.5 M de HCI. La capa orgánica es extraída, secada sobre Na2S04 y se concentró a sequedad. El residuo es extraído en 10 ml_ de acetonitrilo. El sólido no disuelto es filtrado y el filtrado es concentrado al vacío. El producto crudo se purificó mediante HPLC preparativo.

Utilizando la Reacción 12, los siguientes compuestos son ejemplos adicionales de los compuestos que pueden ser sintetizados.

Compuesto Material de Partida MS (Na+) Amina 404-150 416-04 1380.1 Dimetil ~ 1352.1 Dimetil amina 2 1324.1 Dimetil amina2 1379.9 Morfolina 416-08 1309.8 amonio anhidro 1323.9 Propílamina 1408.1 Dimetil amina 2 1366.0 Dimetil amina 2 1338.0 amonio anhidro1 i pasada a través de la reacción durante 10 minutos a una temperatura de 0°C, 2 M de solución en THF Esterificación Los ésteres de ácido carboxílico son preparados a partir de los ácidos carboxílicos correspondiente y un alcohol, ya sea utilizando catálisis acídica (Reacción 13) o los reactivos de acoplamiento (DCC y DMAP, Reacción 14).

Reacción 13: Fórmula XXIV Fórmula XXXII en donde R1 es una cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada, y R17 es una cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada, que opcionalmente contienen un sustituyente halógeno o hidroxilo.

Ejemplo 13: Síntesis de 404-171 Como un ejemplo ilustrativo, una mezcla de 404-60 (0.059 mmol), 4 ml_ de EtOH y 2 µ? de H2S04 concentrado se calienta a reflujo durante 4 horas. El solvente es evaporado y el residuo es extraído en acetonitrilo. El producto crudo se purificó mediante HPLC preparativo.

Utilizando la Reacción 13, los siguientes compuestos son ejemplos adicionales de los compuestos que pueden ser sintetizados.

Compuesto Material de Partida S (Na ') Reactivo 404-171 404-60 1368.2 etanol 1311.9 etilén glicol1 420-103 420-98 1409.1 etanol 1366.9 etanol 13 horas a una temperatura de 90°C; producto extraído con EtOAc Reacción 14: Fórmula XXIV Formula XXXI Fórmula XXXII en donde R1 es una cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada, y R17 es una cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada, que opcionalmente contienen un sustituyente halógeno o hidroxilo.

Ejemplo 14: 420-24 Como un ejemplo ilustrativo, 404-60 (0.053 mmol) se disolvió en 4 ml_ de DCM anhidro y es enfriado a una temperatura de 0°C bajo atmósfera de nitrógeno. Dimetilaminopiridina (DMAP, 0.005 mmol), 2-fluoropropanol (0.27 mmol) y diciclohexilcarbodiimida (DCC, 0.058 mmol), son agregados y la reacción es agitada durante 15 minutos a una temperatura de 0°C. El baño de fío es removido y la agitación es continuada durante la noche a temperatura ambiente. 20 ml_ de DCM se agregó, la reacción entonces es lavada con H20 y se evaporó a sequedad. El residuo es extraído en 10 ml_ de acetonitrilo y es filtrado. El filtrado es concentrado al vacío. El producto crudo se purificó mediante HPLC preparativo.

Alcoholes Además, la síntesis directa en la reacción de Wittig, los alcoholes son obtenidos a través de un número de reacciones. La reducción de un grupo carbonilo con borohidruro de sodio conduce a alcoholes primario (partiendo de aldehido) o secundario (partiendo de cetona), respectivamente.

La oxidación de un enlace doble a través del método de hidroboración puede conducir a una mezcla de isómeros. La reacción procede de manera predominante en una orientación anti-Markovnikov. En el caso de una olefina terminal, el alcohol primario es el producto principal.

Una olefina puede ser convertida en un diol a través de la oxidación con peróxido de hidrógeno. La reacción de un compuesto carbonilo con el reactivo de Grignard conduce a alcoholes secundario (partiendo de aldehido) y terciarios (partiendo de cetona). Este método permite la extensión de la cadena de carbono.

Reacción 15: Fórmula XXXV Fórmula XXXVI En donde R' es un H o acetilo, R1 es una cadena alifática de cadena saturada o insaturada, recta o ramificada, y R20 es una cadena alifática saturada o insaturada, recta o ramificada. Ejemplo 15: Síntesis de 404-98 Como un ejemplo ilustrativo, 404-61 (0.0365 mmol) se disolvió en 4.5 mL de EtOH anhidro bajo atmósfera de nitrógeno. Borohidruro de sodio (0.15 mmol, suspendido en 0.5 mL EtOH anhidro) se agregó a una temperatura de 0°C y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se agregó borohidruro de sodio adicional (0.08 mmol) y se continuó la agitación durante la noche. La reacción es apagada con 5 mL 1 M de HCI bajo enfriamiento de baño de hielo y se extrajo con EtOAc. El extracto es lavado con salmuera, se secó sobre Na2S04 y se concentró a sequedad. El producto crudo se purificó mediante HPLC preparativo.

Utilizando la Reacción 15, los siguientes compuestos son ejemplos adicionales de los compuestos que pueden ser sintetizados.

Compuesto Material de partida 404-98 404-61 1256.9 Fórmula XXVIII Fórmula XXIX En donde R1 es una cadena alifática saturada o insaturada, recta o ramificada.

Ejemplo 16: Síntesis de 420-28-1 Como un ejemplo ilustrativo, 404-16 (0.081 mmol) se disolvió bajo atmósfera de nitrógeno en 4 mL de THF anhidro. La reacción se enfrió a una temperatura de 0°C y se agregó BH3 THF (1M de solución en THF. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El HPLC muestra la reacción que está incompleta. Se agregó BH3 THF (0.5 mmol) y se continuó la agitación durante 4 horas a temperatura ambiente. La reacción es enfriada a una temperatura de 0°C y se agregó 1.0 mL 1 M de NaOH y 0.30 mL al 30% de solución de peróxido de hidrógeno. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se extrajo con 25 mL de EtOAc, el extracto se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04 y se concentró a sequedad. El producto se purificó mediante HPLC preparativo.

Reacción 17: Fórmula XLI Fórmula XLIII en donde R1 es una cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada, y R' es ya sea un H o un grupo acetilo. Ejemplo 17: Síntesis de 420-49 Como un ejemplo ilustrativo, 420-49 (0.037 mmol) se disolvió bajo atmósfera de argón en 5 mL de THF anhidro. La reacción se enfrió a una temperatura de -70°C y se agregó alil magnesio (1M de solución en THF, 0.22 mmol). La reacción es agitada durante 15 minutos a una temperatura de -70°C y después se dejó llegar a temperatura ambiente. Después de 90 minutos, la reacción se apagó con solución saturada de NH CI.

La reacción se extrajo con 25 mL de EtOAc. El extracto es lavado con salmuera, se secó sobre Na2S04 y se concentró a sequedad. El producto se purificó mediante HPLC preparativo.

Se obtuvo una mezcla del compuesto acetilado y desacetilado.

Reacción 18: En donde R1 es una cadena alifática de cadena saturada o insaturada, recta o ramificada, y R23 es una cadena alifática saturada o insaturada, recta o ramificada.

Ejemplo 18: Síntesis de 404-126 Como un ejemplo ilustrativo, 405-16 (0.054 mmol) se disolvió en 1 mL de ácido fórmico y se agregó peróxido de hidrógeno (30% de solución acuosa, 0.52 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche y se concentró entonces a sequedad. El residuo se disolvió en 25 mL de EtOAc, y se lavó con solución saturada de NaHC03 y se secó sobre Na2S04. El solvente es removido al vacío. La reacción es extraída en 9 mL de THF y 3 mL en 1 M de NaOH, y se agitó durante 4 horas a temperatura ambiente. El solvente es removido y el residuo es dividido entre 25 mL de EtOAc y 5 mL de H20. La capa orgánica es lavada con salmuera y secado sobre Na2S04. El solvente es evaporado y el producto crudo es purificado mediante HPLC preparativo.

Ejemplo 19: Modificación de Aminoácido 3 CsA experimenta la sustitución sobre AA3 como se señala más adelante. La reacción con exceso LDA (diisopropilamida de litio) conduce a un derivado de hexaltio que contiene cuatro unidades de azaenolato de litio, así como también una unidad de alcóxido de litio sobre la cadena lateral de aminoácido 1 y una unidad de enolato de litio sobre AA3, respectivamente. La reacción subsiguiente con un electrófilo adecuado genera productos de sustitución sobre el residuo AA3 (sarcosina). Los electrófilos adecuados son, por ejemplo, haluros de alquilo, aldehidos, dióxido de carbono y disulfuros de alquilo (Tabla 1). Ambos epímeros O y L pueden obtener, con las proporciones relativas dependiendo de las condiciones de reacción. La ruta A (véase más adelante) conduce de manera predominante al producto O, mientras que la ruta B (adición de LiCI en exceso) produce una mezcla de ambos epímeros.

Ciclosporina A (segmento de aminoácido 3) Ejemplo 19: Reacción de sustitución en el AA3 de Ciclosporina A. Se obtienen los esteroisómeros D y L.

Ruta A: [D-MeSar]3-CsA Un matraz secado en horno es cargado bajo atmósfera de argón con 160 mL de THF anhidro y diisopropilamina (2.07 mL, 14.8 mmol). La solución se enfrió a una temperatura de -78°C y se agregó n-butillitio (2.5 M en hexano, 5.4 mL 13.5 mmol). Después de la agitación durante 30 minutos, se agregó CsA (2.40 g, 2.0 mmol) disuelto en 40 mL de THF acuoso). La reacción se agitó durante 1 hora a una temperatura de -78eC. Se agregó n-butillitio adicional (3.2 mL, 8.0 mmol), seguido por la adición de yoduro de metilo (1.25 mL, 20.0 mmol). La agitación es continuada a una temperatura de -78°C durante 1.5 horas, y posteriormente, la reacción se permitió entibiarse a temperatura ambiente durante 1.5 horas adicionales. Se agregaron 20 mL de H20 y el THF es removido al vacío. Se agregaron 50 mL adicionales de H20 y se realizó una extracción con 150 mL de EtOAc. El extracto es lavado con salmuera y secado sobre Na2S0 . El solvente es removido al vacío y el producto crudo es purificado sobre gel de sílice (hexano/acetona 3: 1). Producción: 0.74 g (0.61 mmol, 30%).

Ruta B: [MeSar]3-CsA Un frasco de 100 mL seco es cargado bajo atmósfera de argón con 7.5 mL de THF anhidro y diisopropilamina (0.46 mL, 3.3 mmol). La solución se enfrió a una temperatura de 0°C y se agregó n-butillitio (1.32 mL, 2.5 M de solución en hexano, 3.3 mmol). La reacción es agitada durante 20 minutos a una temperatura de 0°C y posteriormente se enfría a una temperatura de -78°C. Una solución de CsA (601 mg, 0.5 mmol) y cloruro de lito (636 mg, 15 mmol) en 12 mL de THF anhidro se preparó y enfrió a una temperatura de -78°C bajo atmósfera de argón. La solución LDA es transferida entonces en esta mezcla a través de una cánula. La reacción se agitó a una temperatura de -78°C durante 2 horas. Se agregó n-butil lito adicional (1.20 mi, 3.0 mmol), seguido por yoduro de metilo (0.62 mL, 10 mmol). La mezcla se dejó calentar a una temperatura de -20°C y se agitó a esta temperatura durante 3 horas. La reacción se dejó calentar a temperatura ambiente, se apagó con solución de NH4CI saturada, se extrajo con EtOAc (2 x 20 mL), se lavó con salmuera y se secó sobre Na2S04. El solvente es removido al vacío y el producto crudo es purificado sobre gel de sílice (hexano/acetona 3:1) Producción: [L-M eAla3]-CsA: 302 mg (0.25 mmol, 50%). [0-MeAla3]-CsA: 76 mg (0.06 mmol, 12%).

Tabla 1: Ejemplos de los electrófilos posibles utilizados la alquílación de la posición 3 de ciclosporina.

Electrófilo R231 Ruta Comentarios Yoduro de metilo -CH3 A/B Yoduro de etilo -CH2CH3 AB bromuro de alilo -CH2CHCH2 B 1.3- diyodopropano -CH2CH2CH2I B 1.4- diyodobutano -(CH2)3CH2I B hexafluorofosfato de -(CH2)3N+(CH3)3 B trimetilamonio-3-yodopropano bromuro de propargilo -CH2CCH 10 equivalentes de electrófilo; agitado durante 1 hora a temperatura ambiente después de la adición de electrófilo ter-butilo -CH2C02(t-Bu) 5 equivalentes de electrófilo; bromoacetato agitado durante 1 hora a temperatura ambiente después de la adición de electrófilo Bromuro de bencilo -CH2PH ' 15 equivalentes de LDA y 30 equivalentes de electrófilo; agitado durante 6 horas a una temperatura de -75°C y 10 horas a temperatura ambiente después de la adición del electrófilo formaldehído CH2OH Formaldehído preparado a partir de paraformaldehido a una temperatura de 170°C antes de la adición de acetaldehído -CH(OH)CH3 agitado durante 2.5 horas a una temperatura de -78°C después de la adición del electrófilo pivalaldehido -CH(OH)(t-Bu) 3 agitado durante 70 minutos a una temperatura de -78°C después de la adición del electrófilo benzaldehído -CH(OH)Ph agitado durante 2.5 horas a una temperatura de -78°C después de la adición del electrófilo dióxido de carbono -COOH Se pasó gas de C02 durante 15 minutos a través de la mezcla de reacción a una temperatura de -78°C agitado durante 1 hora a una temperatura de -78"C después de la adición del electrófilo disulfuro de dimetilo -SCHi agitado durante 18 horas a una temperatura de 0°C después de la adición del electrófilo disulfuro de p-tolilo -S(p-Tol) 4 agitado durante 18 horas a una temperatura de 0°C después de la adición del electrófilo de acuerdo con el ejemplo 192 Ph = fenilo; 3 t-Bu = ter-butilo; 4 Tol = tolilo.

Los ejemplos 20 y 21, establecidos más adelante, son ejemplos generales de las reacciones químicas con la capacidad de sintetizar los compuestos deseados modificados en el aminoácido 1 y 3 de CsA utilizando los reactivos que tienen las propiedades químicas de requisito, y un experto en la materia podría comprender que pueden realizarse las sustituciones de ciertos reactivos.

Ejemplo 20: Modificación AA1 de CsA Alquilado El ejemplo 20, proporciona una ruta sintética para la introducción de sustituyentes en la posición 3 del CsA antes de la modificación de la cadena lateral AA1. Después de la 3-alquilación, un procedimiento de 2 pasos conduce al aldehido acetilado (compuesto 3 en el ejemplo a continuación), el cual es un sustrato adecuado para la modificación de la posición 1 por medio de la reacción de Wittig. Este método permite la introducción de residuos para la cadena lateral AA1 que tiene estabilidad limitada bajo las condiciones de reacción utilizadas en los pasos 1 a 3, tales como una base fuerte y los agentes de oxidación .

Los ejemplos adicionales de los compuestos preparados utilizando esta secuencia se resume en la Tabla 2.

Paso 1: Alquilación de cadena lateral AA3 LDA/Mel CsA ? [D-MeSar]3-CsA + [L-MeSar]3-CsA La síntesis es realizada de acuerdo con la Ruta A o B, respectivamente, como se describe más adelante.

Paso 2: La acetilación del grupo hidroxi sobre la cadena lateral AA1 [D-MeSar]3-CsA 1A 2 Un matraz secado en horno es cargado bajo nitrógeno con [D-MeSar]3-CsA (1.84 g, 1.51 mmol), N,N-dimetilaminopiridina (19 mg, 0.15 mmol) y 20 mL de piridina anhidra, seguido por anhídrido acético (10 mL, 0.1 mol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla es vertida en 100 mL de agua helada y se agitó hasta que se derritió todo el hielo. Se recolectó por filtración un sólido y se secó al aire. El sólido se disolvió en 50 mL de EtOAc y se lavó con 1 m de HCI (2x), Solución saturada de NaHC03 y salmuera. La fase orgánica se secó sobre Na2S04 y se evaporó. El producto crudo es purificado sobre gel de sílice (hexano/EtOAc/MeOH 10:10:0.5).

Paso 3: Formación de aldehido A un matraz que contiene el compuesto 2 (800 mg, 0.636 mmol) se agregaron 10 mL de dioxano y 10 mL de H20. Nal04 (544 mg, 2.54 mmol) y Os04 (7.9 mM de solución en agua/dioxano 1: 1, 4.05 mL, 32 mmol) se agregan y la reacción se agita a temperatura ambiente durante la noche. 75 mL de H20 son agregados y la reacción es extraída con 3 x 25 mL de EtOAc. Los extractos fueron lavados con agua solución de NaHC03 acuoso, agua y salmuera (25 mL cada uno) y se secó sobre MgS04. El solvente es removido al vacío y el producto crudo es purificado sobre gel de sílice (hexano/EtOAc 3: 1).

Paso 4: Reacción de Wittig Un matraz seco en horno es cargado bajo atmósfera de argón con bromuro de fosfonio de ácido trifenil-6-hexanóico (90 mg, 0.195 mmol) y 5 mL de THF anhidro. Se agregó t-butóxido de potasio (1 M de solución en THF, 0.39 mL, 0.39 mmol) a una temperatura de 0°C y la solución se agitó durante 30 minutos para producir un color anaranjado brillante. El compuesto 3 (81 mg, 0.065 mmol, disuelto en 1 mL de THF anhidro) se agregó a la reacción en forma de gotas y se continuó la agitación a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se apagó con Solución saturada de NH4CI y se extrajo con EtOAc. El extracto es lavado con salmuera y secado sobre Na2S0 . El solvente es removido al vacío y el producto crudo es purificado sobre gel de sílice (tolueno/acetona 3:1) Paso 5: Desacetilación 4 El compuesto 4 (30 mg, 0.022 mmol) se disolvió en 2 mide metanol y 0.5 ml_ de agua y se agregó pentahidrato de hidróxido de tetrametilamonio (12 mg, 0.066 mmol). La reacción es agitada a temperatura ambiente durante varios días hasta que el HPLC confirma que se ha completado la desprotección. La reacción es acidificada a un pH de 2 con 1 M de HCI y se concentró al vacío. El residuo es extraído en EtOAc, es lavado con agua y secado sobre Na2S04. El solvente es evaporado y el producto crudo es purificado mediante HPLC preparativo.

MeVal MeLeu D- isómero MeLeu- -MeLeu D-Ala- -Ala- -MeLeu Val Representación esquemática de derivados de ciclosporina 1 ,3-modificados.

Utilizando el método del ejemplo 20, los siguientes compuestos son ejemplos adicionales de los compuestos que pueden ser sintetizados (X y Y en la referencia a la representación esquemática anterior; y la referencia de R en X es para indicar la unión de la estructura a AA1 de CsA).

Alquilación de los compuestos modificados de AA1 La reacción 21 introduce sustituyentes al residuo AA3 de los compuestos modificados previamente en la cadena lateral AA1. Además de los grupos disponibles a través de la reacción 19, esta ruta permite la introducción de sustituyentes en AA3 que son inestables bajo las condiciones de reacción utilizadas en la reacción 20, por ejemplo, un residuo tiometilo podría experimentar la oxidación durante la formación del aldehido en el paso 3 de este método.

Ejemplo 21 Un frasco de 25 ml_ seco es cargado bajo atmósfera de argón con 1.5 ml_ de THF anhidro y diisopropilamina (87 µ?_, 0.62 mmol). La solución se enfrió a una temperatura de 0°C y se agregó n-butillitio (2.5 M en hexano, 0.25 ml_ 0.62 mmol). La mezcla se agitó durante 20 minutos a una temperatura de 0°C y posteriormente se enfrió a una temperatura de -70°C. La solución de LDA clara es transferida en una solución de 404-76 (118 mg, 0.095 mmol) y cloruro de lito (120 mg, 2.84 mmol) en 1.5 mL de THF anhidro a una temperatura de -70°C. La agitación se continuó durante 2 horas a una temperatura de -79°C. Se agregó n-butillitio adicional (0.23 mL, 0.58 mmol) seguido por yoduro de metilo (118 µ?, 1.89 mmol). La reacción se deja calentar a una temperatura de -20°C y es mantenida en esta temperatura durante la noche. La reacción se apagó con solución saturada de NH4CI y se extrajo con EtOAc. El extracto es lavado con salmuera, se secó sobre Na2S04 y se evaporó hasta sequedad. El producto crudo es purificado sobre gel de sílice (hexano/acetona 3: 1 ? 2: 1).

Tabla 3: Ejemplos de los compuestos preparados mediante el método 21 (X y Y de acuerdo con la figura 3; y la referencia de R en X es para indicar la unión de la estructura a AA1 de CsA). isómeros no separada 2 m+ señal Las modificaciones adicionales a los grupos funcionales en el residuo AA1 (o AA3, respectivamente) pueden realizarse para obtener varios compuestos derivados, tales como ésteres, amidas, alcoholes, etc. Los compuestos saturados pueden ser obtenidos reduciendo el enlace doble creado en la reacción de Wittig.

Ejemplo 22: Formación de Amida de Ácido Carboxílico -Síntesis de 440-08 Se disolvió 440-02 (48 mg, 0.037 mmol) bajo atmósfera de nitrógeno en 5 mL de DCM anhidro y se enfrió a una temperatura de 0°C. Se agregaron diciclohexilcarbodiimida (DCC, 11.6 mg, 0.056 mmol) y 1 -hidroxibenzotriazole (HOBt, 5.0 mg, 0.037 mmol) y la mezcla se agitó durante 15 minutos a una temperatura de 0°C. Se agregó la dimetilamina (2 M de solución en THF, 0.19 mL, 0.38 mmol) y se continuó la agitación a temperatura ambiente durante 3 días. La reacción es diluida con 20 mL de DCM y se lavó con 15 mL 0.5 M de HCI. La fase orgánica es secada sobre Na2S04 y posteriormente se llevó a sequedad. La mezcla cruda se purificó mediante HPLC preparativo.

Ejemplo 23: Formación de éster - Síntesis de 440-31 440-20 440-31 440-20 (30 mg, 0.022 mmol) se disolvió en 4 mL de EtOH anhidro y 2 pL de H2S04 concentrado. La reacción es calentada a reflujo durante 3 horas y entonces se dejó enfriar a temperatura ambiente. El reacción se llevó a sequedad El producto crudo se purificó mediante HPLC preparativo.

Ejemplo 24: Formación de Amida a partir de compuesto de nitrilo (Amida inversa) - Síntesis de 440-15 440-09 440-15 Un matraz de 50 mL es cargado bajo nitrógeno con 440- 09 (80 mg, 0.061 mmol) y 5 mL de MeOH. La reacción se enfrió a una temperatura de 0°C y Ni(ll)Cb-6H20 (1.4 mg, 0.006 mmol) y se agregó anhídrido acético (19 pL, 0.20 mmol). Se agregó borohidruro de sodio (104 mg, 2.75 mmol) en 2 lotes con 2 horas de separación. La reacción se dejó entonces calentar a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Después de que se completó la reacción, 1 mL 1 M de HCI se agregó. La solución se concentró al vacío hasta aproximadamente la mitad de su volumen original. La mezcla resultante se extrajo con EtOAc, el extracto se lavó con Solución de NaHCo3 saturada y salmuera y se secó sobre Na2S04. El solvente es removido al vacío. El producto, el cual contiene algún compuesto saturado, se utilizó en el paso siguiente sin purificación adicional.

Ejemplo 25: Síntesis de 440-25 440-15 440-25 440-15 (83 mg, 0.061 mmol) se disolvió en 10 ml_ de EtOH anhidro. Se agregaron paladio (10% por peso sobre carbono, 8 mg) y 3-4 gotas de ácido acético. La reacción es hidrogenada bajo presión atmosférica a temperatura ambiente durante varios días hasta que se completó mediante HPLC. La reacción es filtrada a través de Celita y el filtrado es evaporado a sequedad. El producto crudo se purificó mediante HPLC preparativo y posteriormente se sometió al paso de desacetilación.

Ejemplo 26: Síntesis de 440-32 440-25 440-32 440-25 (41 mg, 0.03 mmol) se disolvió en 4 mL de MeOH y pentahidrato de hidróxido de tetrametilamonio (16 mg, 0.09 mmol, disuelto en 1 mL H20) se agregó. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 días. La reacción es concentrada al vacío. 5 mL de H20 son agregados y el producto es extraído con EtOAc. El extracto es lavado con salmuera, se secó sobre Na2S04 y se evaporó hasta sequedad. El producto crudo se purificó mediante HPLC preparativo.

Tabla 4: Los ejemplos de los derivados de los compuestos de ciclosporina 1 ,3-modificados obtenidos reduciendo el enlace doble creado en la reacción de Wittig (X y Y, de acuerdo con la figura 3; y la referencia de R en X es para indicar la unión de la estructura a AA1 de CsA).

Ensayo de inhibición de isomerasa de ciclofilina A Se utilizó un ensayo enzimático para medir la inhibición de la actividad CyP-A mediante los análogos 1,3 de CsA de la presente invención, de acuerdo con un protocolo descrito en la literatura científica con modificaciones menores. El ensayo se basa en la capacidad de CyP-A para catalizar un cambio de conformación en los péptidos que contienen prolina a de conformaciones isoméricas de cis a trans. En breve, un sustrato de péptido que incluye una porción de nitroanilido se suministró a una mezcla de reacción que contiene CyP-A, compuesto de prueba 10 (análogo de CsA, CsA o vehículo de dimetilsulfóxido), y una segunda enzima, alfa-cimotripsina. Cada compuesto de prueba se probó en 10 concentraciones por triplicado o cuadruplicado. El péptido se convirtió de la conformación cis a la conformación trans, mediante procedimiento tanto no catalíticos como CyP catalíticos. El trans isómero del péptido, aunque no el cis isómero, es un sustrato para alfa-cimotripsina. El nitroanilido adherido inmediatamente de alfa-cimotripsina del resto del péptido, y el nitroanilido libre acumulado a un índice proporcionar para isomerización de cis-trans. Debido a que el nitroanilido libre es un producto con color, su acumulación se cuantificó midiendo su absorbencia con un espectrofotómetro. La acumulación de nitroanilido se midió durante 6 minutos, y las constantes de índice de primer orden para cada reacción se calcularon utilizando el software Graphpad Prism. La constante de índice catalítico de CyP-A de cada reacción se determinó sustrayendo la constante de índice no catalítico (derivada de la reacción sin CyP-A) de la constante de índice de reacción total. Las gráficas de las constantes de índice catalítico como una función de las concentraciones de inhibidor demostraron las potencias de los compuestos definidas por sus valores IC50.

Protocolo Detallado A. Péptido El péptido de ensayo fue N-succinil-alanina-alanina-prolina-fenilalanina-p-nitroanilido. Este se disolvió a una concentración de 3 mM en una solución de trifluoretanolamina y cloruro de lito (TFE/LiCI). la TFE/LiCI se preparó fresca cada día disolviendo cloruro de litio en trifluoroetanolamina a una concentración de 17 mg/ml. Después de la disolución de LiCI, el contenido de agua de la solución TFE/LiCI se redujo agregando cribas moleculares secadas por calor y mezclando de manera gentil la solución durante al menos 30 minutos. El péptido se disolvió entonces en TFE/LiCI, y la solución se enfrió a una temperatura de 4°C - 8°C antes de los ensayos. La disolución del péptido en TFE/LiCI seco promovió que existiera más péptido en la conformación cis al inicio de cada reacción del ensayo. El análisis de los datos mostró que aproximadamente el 60% del péptido en nuestros ensayos empezó como un isómero cis, el cual es consistente con los datos reportados en la literatura científica. En las reacciones de enzimas, el péptido se diluyó 20 dobleces hasta una concentración de ensayo final de 150 µ?.

B. Compuestos de prueba Los compuestos de prueba consistieron en CsA, análogos de CsA, o dimetilsulfóxido (DMSO). Las soluciones de estantería de CsA y análogos de CsA se realizaron mediante la disolución en DMSO hasta una concentración de 10 mg/ml en tubos m icrocentríf ug os estériles. Las soluciones de estantería se almacenaron a una temperatura de -20°C cuando no estaban en uso. Las disoluciones adicionales de los compuestos de prueba se realizaron cada uno de los días de los ensayos. El DMSO y el CsA fueron probados en cada experimento para servir como el control de vehículo y el compuesto de referencia, respectivamente.

Los 10 mg/ml de soluciones de estantería de CsA y análogos de CsA se diluyeron con DMSO a 50 µ? en tubos microcentrífugos, con base en los pesos moleculares de los compuestos. Nueve disoluciones en serie de 3 dobleces de cada compuesto en DMSO se realizaron entonces en una placa de poliestireno de 96 depósitos. Una alícuota de DM SO-solución o vehículo de DMSO solo se diluyó a 50 dobleces en el amortiguador de reacción (véase más adelante la receta) para elaborar concentraciones finales de CsA o análogos de CsA de 1000, 333, 111, 37, 12, 4.1, 1.4, 0.46, 0.15, y 0.05 nM. Los soluciones reguladoras de reacción fueron almacenadas a temperaturas de 4°C - 8°C durante el menos una hora antes de los ensayos.

C. Amortiguador de Reacción La solución de partida (amortiguador de solución salina) para el regulador de reacción consistió en 50 mM de Hepes, 100 mM de cloruro de sodio, y 1 mg/ml de albúmina de suero humano, ajustados a un pH de 8.0 con hidróxido de sodio. El regulador de solución salina se almacenó a una temperatura de 4°C cuando no estaba en uso. En cada día de ensayo, se disolvió alfa-cimotripsina de bovino en un volumen de amortiguador de solución salina hasta una concentración de 1 mg/ml, Una alícuota de la solución de alfa-cimotripsina se removió para servir como el amortiguador de reacción de control no catalítico. Se agregó el CyP-A humano recombinante al resto de la solución de cimotripsina hasta una concentración de 5 n . La solución que contiene alfa-cimotripsina y CyP-A fue designada como el regulador de reacción y se utilizó para la preparación de las soluciones de reacción.

D. Protocolo de reacción Todas las reacciones del ensayo fueron conducidas en un cuarto frío dentro de un rango de temperatura de 4°C - 8°C. Todas las soluciones y el equipo fueron almacenados en el cuarto frío al menos durante 1 hora antes de los ensayos. La temperatura baja fue necesaria para que procedieran las reacciones a un índice suficientemente bajo para medirse con el equipe disponible. El dispositivo de medición fue un lector de microplaca BMG Polarstar configurado para lecturas de absorbencia en OD 405 nm. Las reacciones fueron realizadas en placas de ensayo de poliestireno de fondo plano de 96 depósitos. Cada ensayo ejecutado consistió en 12 reacciones separadas en una fila de la placa. El péptido fue hecho alícuota en 5 µ? por depósito con una pipeta de canal único en una fila de la placa, entonces la placa fue colocada en el sujetador de placa del lector de microplacas. Las reacciones fueron empezadas suministrando 95 µ? del amortiguador de reacción en cada depósito que contiene el péptido utilizando una pipeta de 12 canales y mezclando cada reacción en forma vigorosa mediante el movimiento repetido de pipeta para asegurar la disolución uniforme del péptido. Las 12 reacciones en cada ensayo ejecutado fueron representadas de la siguiente manera: a) 10 reacciones, que representan un duplicado para cada una de las 10 concentraciones de un compuesto de prueba (CyP-A en el amortiguador de reacción). b) 1 reacción con el 5 µ? del vehículo DMSO (CyP-A en el amortiguador de reacción) c) 1 reacción con el 5 µ? del vehículo DMSO (CyP-A A ausente del amortiguador de reacción) Los registros de absorbencia empezaron inmediatamente después del mezclado. Transcurrieron aproximadamente 15 segundos desde la adición del amortiguador de reacción hasta el primer registro OD405 debido al tiempo de mezclado y la configuración del instrumento. Las lecturas subsiguientes fueron realizadas en intervalos de 6 segundos para un total de 60 lecturas durante 360 segundos. Tres o cuatro ejecuciones de reacción se realizaron para cada compuesto de prueba para proporcionar duplicados de los datos.

E. Análisis de datos Los datos crudos consistieron en un incremento dependiente del tiempo en OD40s. En la presencia de CyP-A y la ausencia de inhibidor, el péptido se convirtió por completo al isómero trans dentro de aproximadamente 150 segundos como fue demostrado por una meseta OD4os- OD4os contra los datos de tiempo se graficaron con un software Graphpad Prism y se ajustaron con una ecuación exponencial de una fase para derivar una constante de índice de primer orden K para cada reacción. En las reacciones sin CyP-A, la constante de índice representó por completo la ¡somerización cis-a-trans térmica, no catalítica, espontánea del péptido y se definió como la constante de índice no catalítico K0. En las reacciones que contienen CyP-A, la ¡somerización ocurrió a través de los procesos tanto no catalíticos como catalizados por enzima. Por lo tanto, la constante de índice K en CyP-A que contienen las reacciones representaron la suma de la constante de índice no catalítico K0 y la constante de índice catalítico Kcat. Kcat se calculó sustrayendo K0 (obtenido de la reacción sin CyP-A) de la constante de índice total K. Kcat normalmente fue 3 dobleces superior a K0 en las reacciones con 5 nM de CyP-A, 150 µ? de sustrato de péptido, y sin inhibidor.

Las gráficas de Kcat contra concentración de inhibidor fueron ajustadas con las regresiones de respuesta de dosis sigmoidal para demostrar las potencias del inhibidor. El software calculó los valores EC50 representados de las concentraciones del compuesto de prueba que inhibieron Kcat en un 50%. Para normalizar la variabilidad entre-experimentos en las condiciones del ensayo, la CsA se ejecutó en cada experimento como un compuesto de referencia, y la potencia análoga de CsA se expresó como una potencia de doblez en relación con el CsA con base en los valores EC50. Por ejemplo, un EC50 análogo de CsA que fue 1/2 de CsA representó una potencia de 2 dobleces en comparación con CsA, mientras que un IC50 análogo de CsA fue de 5 dobleces superior que el CsA representando una potencia de 0.2 dobleces en comparación con CsA.

La tabla 5, mostrada en la figura anexa, muestra la inhibición de ciclofilina A y la inmunosupresión de los análogos de CsA modificados en la posición 1 y en las posiciones 1 y 3, de acuerdo con la presente invención.

Claims (25)

1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de la Fórmula L: MeVal MeLeu MeLeu MeLeu D-Ala- -Ala- -MeLeu Val Fórmula L en donde: a. R' es H o acetilo; b. R1 es una cadena recta saturada o insaturada o cadena de carbono alifático ramificada de 2 a 15 átomos de carbono de longitud; c. R2 es es seleccionado del grupo que consiste en: i. H; ii. una amida insustituida, N-sustituida o N,N-disustitu¡da; iii. una amina protegida por acilo N-sustituida o insustituida; iv. un ácido carboxílico; v. una amina N-sustituida o insustituida; vi. un nitrilo; v¡¡. un éster; viii. una acetona; ¡x. un hidroxi, dihidroxi, trihidroxi o polihidroxi alquilo; y x. un arilo sustituido o insustituido; xi. una cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada que contiene opcionalmente un sustituyente seleccionado del grupo que consiste en hidrógeno, acetonas, hidroxilos, nitrilos, ácidos carboxílicos, ésteres, 3-dioxolanos, halógenos y oxo; xii. un grupo aromático que contiene un sustituyente seleccionado del grupo que consiste en haluros, ésteres y nitro; y xiii. una combinación de la cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada de (xi) y el grupo aromático de (xii); y d. R23 es una cadena recta saturada o insaturada o cadena de carbono alifática ramificada opcionalmente sustituida. 2. El compuesto tal y como se describe en la reivindicación 1, caracterizado además porque el sustituyente R1-R2 se seleccionado del grupo que consiste en: ¡ -^COOH- Üi. <ÍÍ /^COOH; ??. ^(CH^COOH. V. -^(CHshCOOH¦ vi. vi i. ( XVIII. xxix. XXX. xxxi. <xxi¡. xxiii. xxiv. Í XV. xxvi. CXVÜ. xviii. xxix. xl. xli. xlii. xliii. xliv. xlv. xlvi. 3. El compuesto tal y como se describe reivindicación 1 , caracterizado además porque seleccionado del grupo que consiste en: ,NHBOC. g O . ^OEI; en donde i. R5 es una cadena recta saturada o insaturada o cadena de carbono alifático ramificada entre 1 y 15 carbonos de longitud ; ii. R6, es una cadena recta saturada o insaturada, monohidroxilada, dihidroxilada, trihidroxilada o polihidroxiiada o una cadena de carbono alifática ramificada entre 1 y 10 carbonos de longitud; 4. El compuesto tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado además porque R' es H. 5. El compuesto tal y como se describe en la reivindicación 1 o 4, caracterizado además porque el grupo R1-R2, comprende una cadena alifática recta o ramificada, saturada o insaturada de entre 2 y 5 carbonos, opcionalmente sustituidos con un sustituyentes seleccionado del grupo que consiste en hidrógeno, acetonas, hidroxilos, nitrilos, halógenos, oxo, ácidos carboxílicos, ésteres y 1 ,3-dioxolanos; 6. El compuesto tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado además porque R23 se seleccionado del grupo que consiste en: ii. CH2CH3 iii. CH2CHCH2 iv. CH2CH2CH2I V. -(CH2)3CH2! vi. -(CH2)3N+(CH3)3 vii. -CH2CCH viii. -CH2C02(t-Bu) ix. -CH2Ph X. -CH2OH xi. -CH(OH)CH3 xii. -CH(OH)(t-Bu) xiü. -CH(OH)Ph xiv. -COOH xv. SCH3 xvi. -S(p-Tol) 7. El compuesto tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado además porque R23 comprende un alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido. 8. El compuesto tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado además porque R23 es sustituido con amino. 9. El compuesto tal y como se describe en la reivindicación 7 u 8, caracterizado además porque R23 es un C1-C3-Ala y dicho compuesto comprende el D-epímero. 10. El compuesto tal y como se describe en la reivindicación 9, caracterizado además porque R23 es MeAla. 11. El compuesto tal y como se describe en la reivindicación 10, caracterizado además porque: En la Fórmula L, es seleccionado del grupo que consiste en: ?? 12. El compuesto tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado además porque R23 es una cadena de carbono alifático recta o ramificada de 1 a 6, de 1 a 5, de 1 a 4, de 1 a 3 o 2 carbonos de longitud. 13. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 y uno o más excipientes farmacéuticos. 14. Un método para el tratamiento o prevención de una enfermedad mediada por ciclofilina en un mamífero que comprende la administración del compuesto tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o la composición tal y como se describe en la reivindicación 13 al mamífero bajo condiciones para tratar la enfermedad o lesión mediada por ciclofilina, o el uso de dicho compuesto o composición para tratar dicha enfermedad o lesión. 15. El método tal y como se describe en la reivindicación 14, caracterizado además porque la enfermedad o lesión es mediada por la sobre expresión de ciclofilina o la enfermedad es una sobre expresión congénita de ciclofilina. 16. El método tal y como se describe en la reivindicación 15, caracterizado además porque la enfermedad o lesión mediada por ciclofilina se selecciona del grupo que consiste en: una infección viral; una enfermedad inflamatoria; cáncer; padecimiento muscular; enfermedad neurológica; y lesión asociada con isquemia, reperfusión, pérdida de homeostasis de calcio celular, pérdida de homeostasis iónica, incremento en la producción de radicales libres, o toxinas que inducen a la disfunción mitocontrial; en donde la infección viral, opcionalmente es producida por un virus seleccionado del grupo que consiste en virus de inmunodeficiencia humana, hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, hepatitis D, hepatitis E, SARS-CoV, hCoV-NL63, hCoV-HKU-1, hCoV-OC43, hCOV-229E, coronavirus, virus de peritonitis infecciosa felina y virus de gastroenteritis transmisible; en donde el padecimiento inflamatorio es seleccionado opcionalmente del grupo que consiste de asma, enfermedad autoinmune, inflamación crónica, prostatitis crónica, glomerulonefritis, padecimiento de hipersensibilidad; enfermedad intestinal inflamatoria, asepsia, enfermedad de célula de músculo suave vascular, aneurismas, enfermedad inflamatoria pélvica, lesión por reperfusión, artritis reumatoide, rechazo de trasplante y vasculitis; en donde el cáncer es seleccionado opcionalmente del grupo que consiste en cáncer de pulmón de célula pequeña y no pequeña, de vejiga, hepatocelular, pancreático, cáncer de seno, glioblastoma, cáncer colorectal, carcinoma de célula escamosa, melanoma y cáncer de próstata; en donde el padecimiento muscular es seleccionado opcionalmente del grupo que consiste en lesión de reperfusión al miocardio, distrofia muscular, miopatías de colágeno VI, síndrome de arresto post cardíaco (peAS), falla cardíaca, aterosclerosis , y aneurisma aórtico abdominal; en donde el enfermedad neurológica es seleccionado opcionalmente del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, atrofia de sistemas múltiples, esclerosis múltiple, parálisis cerebral, epilepsia, ataque al corazón, neuropatía diabética, esclerosis lateral amiotrófica (Enfermedad de Lou Gehrig), padecimiento bipolar, lesión excitotóxica, encefalopatía hepática, hipoglucemia, toxicidad de manganeso, carencia objetivo neuronal, ácidos grasos tóxicos tales como ácido aracadónico, lesión de nervios mecánicos, lesión de médula espinal, y lesión cerebral; y en donde la lesión asociada con la pérdida de homeostasis de calcio celular se selecciona opcionalmente del grupo que consiste en infarto al miocardio, ataque al corazón, hepatotoxicidad aguda, colestasis y lesión por almacenamiento/reperfusión de trasplante de órganos. 17. Un proceso para la preparación de un compuesto de la Fórmula L: MeVal MeLeu MeLeu MeLeu D-Ala Ala MeLeu Val Fórmula L en donde R1, R2 y R23 son tal y como se definieron en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5; que comprende los pasos de: 1) hacer reaccionar la ciclosporina-A (CsA) con una alquilamida de litio básica, en la presencia de un solvente adecuado, seguida por la reacción con un electrofilo adecuado para generar un compuesto de la Fórmula 1: Fórmula I 2) hacer reaccionar el compuesto de la Fórmula 1 con AC20 en la presencia de un solvente adecuado para formar un compuesto de la Fórmula 2A: Fórmula 2A 3) Hacer reaccionar el compuesto de la Fórmula 2A con un oxidante para formar un compuesto de la Fórmula 3A: Fórmula 3A 4) Hacer reaccionar el compuesto de la Fórmula 3A con un electrófilo para formar un compuesto de la Fórmula 4A: Fórmula 4A 5) opcionalmente desacilar el compuesto de la Fórmula 4A. 18. El proceso tal y como se describe en la reivindicación 17, caracterizado además porque dicha preparación de la Fórmula L comprende la adición de un exceso de LiCI en dicho solvente para formar de manera predominante el L-epímero de la Fórmula L, o dicha preparación de la Fórmula L es realizado en la ausencia de LiCI para formar de manera predominante el D-epímero de la Fórmula L. 19. El proceso tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 17 a 18, caracterizado además porque dicha alquilamida de litio básica es d i i so pro pi I a m id a de litio. 20. El proceso tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 17 a 19, caracterizado además porque dicho electrófilo se selecciona del grupo definido en la siguiente tabla, para generar el R23 correspondiente establecido en dicha tabla: Yoduro de metilo -CH3 Yoduro de etilo -CH2CH3 bromuro de alilo -CH2CHCH2 1,3-diyodopropano -CH2CHZCH2I 1 ,4-diyodobutano -(CH2)3CH2I hexafluorofosfato de trimetilamonio-3- -(CH2)3N+(CH3)3 yodopropano bromuro de propargilo -CH2CCH bromoacetato de ter-butilo -CH2C02(t-Bu) Bromuro de bencilo -CH2Ph 2 formaldehldo -CH2OH acetaldehldo -CH(OH)CH3 pivalaldehído -CH(OH)(t-Bu) 3 benzaldehldo -CH(OH)Ph Dióxido de carbono -COOH Disulfuro de dimetilo -SCH3 disulfuro de p-tolilo -S(p-Tol) 20. Un proceso para la preparación de la Fórmula L tal y como se describe en la reivindicación 1, caracterizada además porque comprende los pasos de: 1) hacer reaccionar un compuesto de la Fórmula 1A con dimetilaminopiridina en la presencia de un solvente adecuado para formar el compuesto de la Fórmula 2: 1A 2 opcionalmente seguido por la formación del aldehido de la Fórmula 3: 2 3 opcionalmente seguido por una reacción de Wittig para generar los compuestos de la Fórmula L, en donde R23 se selecciona del grupo que consiste en ii. -CH2CH3; iii. -CH2CHCH2; iv. -CH2CH2CH2I¡ v. -(CH2)3CH2I vi. -(CH2)3N + (CH3)3¡ vii. -CH2CCH; viii. -CH2C02(t-Bu) , ix. -CH2Ph2; x. -CH2OH. , xi. -CH(OH)CH3; xii. -CH(OH)(t-Bu) 3; xiii. -CH(OH)Ph; xiv. -COOH; xv. -SCH3; y xvi. -S(p-Tol) 22. Un proceso para la preparación de la Fórmula L tal y como se definió en la reivindicación 1, caracterizado además porque comprende los pasos de: hacer reaccionar un compuesto de la Fórmula 5, en donde R' y R1-R2 son tal y como se definieron en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, con una alquilamida de litio básica, en la presencia de un electrófilo adecuado en un solvente apropiado para formar el compuesto de la Fórmula L, en donde R23 comprende alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido. MeLeu MeLeu MeLeu D-Ala- -Ala- -MeLeu Val Fórmula 5 23. El proceso tal y como se describe en la reivindicación 22, caracterizado además porque dicha alquilamida de litio básica es diisopropilamida de litio. 24. El uso de un compuesto tal y como el que se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 o la composición tal y como se describe en la reivindicación 13 para preparar un medicamento para el tratamiento o prevención de una enfermedad o lesión mediada por ciclofilina en un mam ífero. 25. El uso tal y como se describe en la reivindicación 24, en donde dicha enfermedad o lesión mediada por ciclofilina se selecciona del grupo que consiste en: a. una infección viral; b. una enfermedad inflamatoria; c. cáncer; d. padecimiento muscular; e. enfermedad neurológica; y f. lesión asociada con isquemia, reperfusión, pérdida de homeostasis de calcio celular, pérdida de homeostasis iónica, incremento en la producción de radicales libres o toxinas que inducen a la disfunción mitocondrial; en donde la infección viral, opcionalmente es producida por un virus seleccionado del grupo que consiste en virus de inmunodeficiencia humana, hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, hepatitis D, hepatitis E, SARS-CoV, hCoV-NL63, hCoV-HKU-1, hCoV-OC43, hCOV-229E, coronavirus, virus de peritonitis infecciosa felina y virus de gastroenteritis transmisible; en donde el padecimiento inflamatorio es seleccionado opcionalmente del grupo que consiste de asma, enfermedad autoinmune, inflamación crónica, prostatitis crónica, glomerulonefritis, padecimiento de hipersensibilidad; enfermedad intestinal inflamatoria, asepsia, enfermedad de célula de músculo suave vascular, aneurismas, enfermedad inflamatoria pélvica, lesión por reperfusión, artritis reumatoide, rechazo de trasplante y vasculitis; en donde el cáncer es seleccionado opcionalmente del grupo que consiste en cáncer de pulmón de célula pequeña y no pequeña, de vejiga, hepatocelular, pancreático, cáncer de seno, glioblastoma, cáncer colorectal, carcinoma de célula escamosa, melanoma y cáncer de próstata; en donde el padecimiento muscular es seleccionado opcionalmente del grupo que consiste en lesión de reperfusión al miocardio, distrofia muscular, miopatías de colágeno VI, síndrome de arresto post cardíaco (peAS), falla cardíaca, aterosclerosis , y aneurisma aórtico abdominal; en donde el enfermedad neurológica es seleccionado opcionalmente del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, atrofia de sistemas múltiples, esclerosis múltiple, parálisis cerebral, epilepsia, ataque al corazón, neuropatía diabética, esclerosis lateral amiotrófica (Enfermedad de Lou Gehrig), padecimiento bipolar, lesión excitotóxica, encefalopatía hepática, hipoglucemia, toxicidad de manganeso, carencia objetivo neuronal, ácidos grasos tóxicos tales como ácido aracadónico, lesión de nervios mecánicos, lesión de médula espinal, y lesión cerebral; y en donde la lesión asociada con la pérdida de homeostasis de calcio celular se selecciona opcionalmente del grupo que consiste en infarto al miocardio, ataque al corazón, hepatotoxicidad aguda, colestasis y lesión por almacenamiento/reperfusión de trasplante de órganos.