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MX2013005567A - Derivados de quinolina como inhibidores de pik3. - Google Patents

Derivados de quinolina como inhibidores de pik3.

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MX2013005567A
MX2013005567A MX2013005567A MX2013005567A MX2013005567A MX 2013005567 A MX2013005567 A MX 2013005567A MX 2013005567 A MX2013005567 A MX 2013005567A MX 2013005567 A MX2013005567 A MX 2013005567A MX 2013005567 A MX2013005567 A MX 2013005567A
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MX
Mexico
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nrara
4alkyl
halo
substituted
cyano
Prior art date
Application number
MX2013005567A
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English (en)
Inventor
Timothy D Cushing
Youngsook Shin
Julia Winslow Lohman
Original Assignee
Amgen Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Amgen Inc filed Critical Amgen Inc
Publication of MX2013005567A publication Critical patent/MX2013005567A/es

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Abstract

Se describen heteroarilos bicíclicos sustituidos que tienen la fórmula general (I) y las composiciones que los contienen, para el tratamiento de la inflamación general, artritis, enfermedades reumáticas, osteoartritis, trastornos inflamatorios del intestino, trastornos inflamatorios oculares, trastornos inflamatorios o inestables de la vejiga, psoriasis, enfermedades de la piel con componentes inflamatorios, condiciones inflamatorias crónicas, entre las que se incluyen de manera enunciativa enfermedades autoinmunes tales como lupus eritematoso sistémico (SLE), miastenia gravis, artritis reumatoide, encefalomielitis diseminada aguda, purpura trombocitopénica idiopática, esclerosis múltiple, síndrome de Sjoegren y anemia hemolítica autoinmune, condiciones alérgicas entre las que se incluyen todas las formas de hipersensibilidad. La presente invención también habilita métodos para tratar cánceres que están mediados, dependen o asociados con la actividad de pi108, entre los que se incluyen de manera enunciativa leucemias, tales como leucemia mieloide aguda (AML) síndrome mielodisplásico (MDS) enfermedades mielo-proliferativas (MPD) leucemia mieloide crónica (CML) leucemia linfoblástica agudo de linfocitos T (T-ALL) leucemia de linfoblástica aguda de linfocitos B (B-TALL) linfoma que no es de Hodgkins (NHL) linfoma de linfocitos B y tumores sólidos, tales como cáncer de mama.

Description

DERIVADOS DE QUINOLINA COMO INHIBIDORES DE PIK3 CAMPO DE LA INVENCION La presente invención en general se relaciona con enzimas de fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K), y más particularmente con inhibidores selectivos de la actividad de PI3K y con los métodos para utilizar estos materiales.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La señalización celular via los fosfoinositidos 3'-fosforilados se han implicado en una variedad de procesos celulares, por ejemplo, la transformación maligna, la señalización del factor de crecimiento, la inflamación, y la inmunidad (véase Rameh et al., J. Biol Chem, 274:8347-8350 (1999) para una revisión) . La enzima responsable de generar estos productos de señalización fosforiladá, la fosfatidilinositol 3-quinasa ( Pl3-quinasa ; PI3K) , se identificó originalmente como una actividad asociada con oncoproteinas virales y las tirosina quinasas con un receptor del factor de crecimiento que fosforila el fosfatidilinositol (PI) y sus derivados fosforilados en el 3'-hidróxilo del anillo de inositol (Panayotou et al, Trends Cell Biol 2:358- 60 (1992) ) .
Los niveles de fosfatidilinositol-3 , 4 , 5-trifosfato (PIP3) , el productor principal- de la activación de la Pequinesa, aumentan con el tratamiento de las células con una variedad de estímulos. Esto incluye la señalización a través de receptores para la mayoría de factores de crecimiento y muchos estímulos inflamatorios, hormonas, neurotransmisores y antígenos, y de esta forma la activación de las PI3K representa uno, si no es que la mayoría de eventos para transducción de señal más prevalecientes, asociados con la activación del receptor de la superficie celular de mamíferos (Cantley, Ciencia 296:1655-1657 (2002); Vanhaesebroeck et al. Annu. Rev. Biochem, 70:535-602 (2001)). La activación de PI3-quinasa por lo tanto está implicada en una amplia gamma de respuestas celulares entre las que se incluyen el crecimiento, migración, diferenciación, y apoptosis celular (Parker et al, Current Biology, 5:577-99 (1995); Yao et al, Science, 267:2003-05 (1995)). Aunque los blancos en la dirección 3' de los lípidos fosforilados generados después de la activación de la Pl3-quinasa no se han caracterizado totalmente, se sabe que las proteínas que contienen un dominio de homología con plecstrina (PH) y un dominio indicador de FYVE se activan cuando se unen a diversos lípidos de fosfatidilinositpl (Sternmark et al, J Cell Sci, 112:4175-83 (1999); Lemmon et al, Trends Cell Biol, 7:237-42 (1997)). Dos grupos de efectores PI3K que contiene el dominio de PH se han estudiado · en el contexto de la señalización de células inmunes, miembros 'de la familia TEC de tirosina quinasa y la serina/treonina quinasas de la familia de AGC. Los miembros de la familia TEC que contienen dominios de PH con evidente selectividad para Ptdlns (3,4,5)P3 incluyen Tec, Btk, Itk y Etk. La unión de PH a PIP3 es decisiva para la actividad de la tirosina quinasa de los miembros de la familia TEC (Schaeffer y Schwart zberg, Curr. Opin. Immunol. 12:282-288 (2000)) los miembros de la familia AGC que se regulan por PI3K incluyen la quinasa dependiente de fosfoinositidos (PDK1), AKT (también denominado PKB) y ciertas isoformas de la proteína quinasa C (PKC) y la quinasa S6. Existen tres isoformas de AKT y la activación de AKT está asociada en gran medida con la proliferación dependiente de PI3K y las señales de supervivencia. La señal de la activación de AKT depende de la fosforilación mediante PDK1 que también tiene un dominio PH 3-fosfoinosítido-selectivo para incorporarlo a la membrana donde interactúa con AKT. Otros sustratos de PDK1 importantes son PKC y S6 quinasa (Deane y Fruman, Annu. Rev. Immunol. 22_563-598 (2004)). In vitro, algunas isoformas de la proteina quinasa C (PKC) se activan directamente mediante PIP3. ( (Burgering et al, Nature, 376:599-602 (1995)).
En la actualidad, la familia de enzimas de PI3-quinasa se han divido en tres clases con base en sus especificidades de sustrato. Las PI3K Clase I pueden fosforilar el fosfatidilinositol (PI), el fosfatidilinositol-4-fosfato, y el fosfatidilinositol- , 5-bifosfato (PIP2) para producir fosfatidilinositol-3-fosfato (PIP), fosfatidilinositol-3, -bifosfato y fosfatidilinositol-3, 4 , 5-trifosfato, respectivamente. Las PI3 Clase II fosforilan el PI y fosfatidilinositol-4-fosfato, mientras que las PIK3 Clase III sólo pueden fosforilar el PI.
La purificación inicial y la clonación molecular de la Pl3-quinasa revelan que fue un heterodimero que consiste de p85 y pllO subunidades (Otsu et al, Cell, 65:91-104 (1991); Hiles et al, Cell, 70:419-29 (1992)) . Debido a esto entonces, se han identificado cuatro distintas PI3K Clase I, designadas PI3K a, ß, d, y ?, consistiendo cada una de una subunidad catalítica distinta de 110 kDa y una subunidad reguladora. Más específicamente, tres de las subunidades catalíticas, es decir, ????a, ????ß y ????d, cada una interactúan con el misma subunidad reguladora, p85; mientras que ????? interactúa con una subunidad reguladora distinta, plOl. Como se describirá más adelante, los patrones de expresión de cada una de estas PI3K en células humanas y tejido también son distintos. Aunque se ha acumulado una abundancia de información en el pasado reciente sobre las funciones celulares de las PI3-quinasas en general, las funciones desempeñadas por las isoformas individuales no se han entendido totalmente.
Se ha descrito la clonación de pllOa bovino. Esta proteina se identificó según se relaciona con la proteina de Saccharomyces cerevisiae: Vps34p, una proteina implicada en el procesamiento de proteínas vacuolares. También se mostró que el producto pllOa recombinante está asociado con p85a, para proporcionar una actividad de PI3K en células COS-1 transfectadas. Véase, Hiles et al., Cell, 70, 419-29 (1992).
La clonación de una segunda isoforma de pllO humana, designada pllOp, se describe en Hu et al., Mol Cell Biol, 13:7677-88 (1993). Se dice que esta isoforma se asocia con p85 en las células, y que se expresará ubicuamente, ya que el ARNm de ????ß se ha encontrado en estos tejidos humanos y de ratón así como en células endoteliales de la vena umbilical humana, linfocitos T leucémicos humanos Jurkat, 293 células renales embrionarias humanas, fibroblastos 3T3 de ratón, células HeLa, y células de carcinoma vesical de ratas NBT2. Esta amplia expresión sugiere que esta isoforma es bastante importante en las trayectorias de señalización.
La identificación de la isoforma ????d de la PI3-quinasa se describe en Chantry et al, J Biol Chem, 272: 19236-41 (1997) . Se observó que la isoforma ????d humana se expresa en una forma restringida a tejidos. Se expresa a altos niveles en linfocitos y tejidos linfoides y se ha mostrado que desempeña una función clave en la señalización mediada por la Pl3-quinasa en el sistema inmunitario (Al-Alwan et al., JI, 178:2328-2335 (2007); Okkenhaug et al., JI, 177:5122-5128 (2006); Lee et al., PNAS, 103:1289-1294 (2006) ) . Se ha mostrado que ????d se expresará a niveles menores en célula de mama, melanocitos y células endoteliales (Vogt et al. Virology, 344:131-138 (2006) y se ha implicado para conferir propiedades migratorias selectivas a las células de cáncer de mama (Sawyer et al. Cáncer Res. 63: 167-1675 (2003) ) . Los detalles relacionados con la isoforma ????d también se pueden encontrar en las patentes de los Estados Unidos Nos. 5,858,753; 5,822,910; y 5,985,589. : Véanse también, Vanhaesebroeck et al, Proc Nat . Acad Sci USA, 94:4330-5 (1997), y la publicación internacional WO 97/46688.
En cada uno de Los subtipos ??3?a, ß y d, la subunidad p85 actúa para localizar la Pl3-quinasa hacia la membrana plasmática mediante la interacción de su dominio SH2 con residuos fosforilados de tirosina (presentes en un contexto de secuencia adecuado) en proteínas blanco (Rameh et al, Cell, 83:821-30 (1995)). Se han identificado cinco isoformas de p85 (?85a, ?85ß, ?55?, ?55a y ?50a) codificadas por tres genes. Las transcripciones alternativas del gen Pik3rl codifican para las proteínas p85a, p55cc y p50a (Deane y Fruman, Annu. Rev. Immunol. 22:563-598 (2004)). El p85oc se expresa ubicuamente mientras que ?85ß, se encuentra principalmente en el cerebro y los tejidos linfoides (Volinia et al., Oncogene, 7:789-93 (1992)). La asociación de la subunidad p85 con las subunidades catalíticas ????a, ß, o d de la PI3-quinasa parece ser necesaria para la actividad catalítica y estabilidad de estas enzimas. Además, la unión de proteínas Ras también sobre-regula la actividad de PI3-quinasa .
La clonación de ????? reveló una complejidad todavía adicional dentro de la familia de enzimas PI3K (Stoyanov et al., Science, 269:690-93 (1995)). La isoforma ????? está relacionada estrechamente con pllOa y ????ß (45- 48% de identidad en el dominio catalítico) , aunque según se observa no hace uso de p85 como una subunidad blanco. En lugar de esto, ????? une una subunidad plOl reguladora que también se une a las subunidades ß? de las proteínas G heterotriméricas . La subunidad reguladora plOl para la PI3Kgamma se clonó originalmente en cerdos, y el ortólogo humano identificado posteriormente (Krugmann et al., J Biol Chem, 274:17152-8 (1999)). La interacción entre la región N-terminal de plOl con la región N-terminal de ????? se sabe que activa ??3?? a través de Tß?. Recientemente, se ha identificado un homólogo plOl, p84 o p87PIKAP (proteina adaptadora de ??3?? de 87 kDa) que une ????? (Voigt et al. JBC, 281:9977-9986 (2006), Suire et al. Curr. Biol. 15:566-570 (2005) ) . p87PIKAP es homólogo para plOl en áreas que unen ????? y ?ß? y también produce la activación de ????? en la dirección 3' de los receptores acoplados a la proteina G. A diferencia de plOl, ?87????? se expresa en gran medida en el corazón y puede ser crucial para la función cardiaca con ??3??.
En la publicación internacional O 96/25488 se describe un polipéptido PI3K constitutivamente activó. Esta publicación describe la preparación de una proteina de fusión quimérica en la cual un fragmento de 102 residuo de p85 conocido como la región inter-SH2 (iSH2) se fusiona a. través de una región ligadora del término N de pllO murino. El dominio iSH2 de p85 evidentemente es capaz de activar la actividad de PI3K de una forma comparable con p85 'intacto (Klippel et al., Mol Cell Biol, 14:2675-85 (1994)).
De esta forma, las Pl3-quinasas se pueden ^definir por su identidad de aminoácidos o por su actividad. Los miembros adicionales de esta familia de genes en crecimiento incluyen más quinasas de lipidos y proteínas relacionadas distantemente que incluyen Vps34 TOR1, y TOR2 de Saccha,romyces cerevisiae (y sus homólogos de mamíferos tales como FRAP y mTOR) , el producto génico de ataxia telangiectasia (ATR) y la subunidad catalítica de la proteína quinasa dependiente de ADN (ADN-PK) . Véase en general, Hunter, Cell, 83:1-4 (1995).
La PI3-quinasa también está implicada en . varios aspectos de la activación de leucocitos. Se ha mostrado que una actividad de la Pl3-quinasa asociada con p85 se asocia físicamente con el dominio citoplásmico de CD28 que es una molécula co-estimu.ladora importante para la activación de linfocitos T en respuesta a antígenos (Pages et al., Nature, 369:327-29 (1994); Rudd, Immunity, 4:527-34 (1996)). La activación de linfocitos T a través de CD28 disminuye el umbral para la activación mediante un antígeno y aumenta la magnitud y duración de la respuesta proliferativa .' Estos efectos están vinculados para aumentos en la transcripción de número de genes entre los que se incluyen la interleucina-2 (IL2), un factor de crecimiento importante de linfocito T (Fraser et al., Science, 251:313-16 (1991)). La mutación de CD28 de tal forma que ya no pueda interactuar con la PI3- quinasa conduce a una falla para iniciar la producción de IL2, lo que sugiere una función critica para la PI3-quinasa en la activación de lirifocitos T.
Los inhibidores especificos contra miembros individuales de una familia de enzimas proporcionan herramientas invaluables para descifrar las funciones de cada enzima. Dos compuestos, LY294002 y Wortmannin, se han utilizado ampliamente como inhibidores de la PI3-quinasa. Sin embargo, estos compuestos, son inhibidores PI3K no especificos, ya que no se distinguen entre los : cuatro miembros de Pl3-quinasas Clase I. Por ejemplo, los valores IC50 de Wortmannin contra cada una de las diversas PI3-quinasas Clase I están en la variación de 1-10 nM. Similarmente, los valores IC50 para LY294002 contra cada una de estas PI3-quinasas es de aproximadamente 1 µ (Fruirían et al., Ann Rev Biochem, 67:481-507 (1998)). Por lo tanto, se limita la utilidad de estos compuestos para estudiar las funciones de las PI3-quinasas Clase I individuales.
Con base en los estudios utilizando Wortmannin, existe evidencia de que la función de la PI3-quinasa también se requiere para algunos aspectos de señalización de leucocito a través de los receptores acoplados a la piroteina G (Thelen et al., Proc Nati Acad Sci USA, 91:4960-64 (1994)). Además, se ha mostrado que la Wortmannin y LY294002 bloquean la migración de neutrófilos y la liberación de superóxidos.
Sin embargo, ya que estos compuestos no se distinguen entre las diversas isoformas de PI3K, sigue siendo poco claro a partir de estos estudios cuál isóforma o isofórmas de PI3K particulares están implicadas en estos fenómenos y qué funciones realizan las diferente enzimas PI3K Clase I en tejidos tanto normales como enfermos. La co-expresión de las diversas isoformas de PI3K en la mayoría de tejidos ha confundido los esfuerzos para segregar las actividades de cada enzima hasta la fecha.
La separación de las actividades de las diversas isoenzimas de PI3K ha avanzado recientemente con el desarrollo de ratones manipulados genéticamente que permitieron el estudio de ratones isoforma-especificos anestesiados interrumpidos y sustituidos por quinasa inerte y el desarrollo de más inhibidores selectivos para algunas de las isoformas diferentes. Se han generado ratones anestesiados con pllOa y ????ß y ambos son letales embrionarios y se puede obtener poca información dé estos ratones relacionada con la expresión y función de pllQ alfa y beta (Bi et al. amm. Genome, 13:169-172 (2002); Bi et al. J. Biol. Chem. 274:10963-10968 (1999)). Más recientemente, .se generaron ratones sustituidos anestesiados por la ;quinasa inerte pllOa con una mutación puntual única en el motivo DFG de la bosa de unión con ATP (pll0aD933A) que afecta la actividad de la quinasa pero conserva la expresión de la quinasa pllOa mutante. Contrario a los ratones interrumpidos, el procedimiento de sustituir conserva la estequiometria compleja de señalización, el andamio funciona e imita los procedimientos de moléculas pequeñas de forma más realista que los ratones interrumpidos. Similar a los ratones KO con pllOa los ratones homocigotos pll0ctD933A son letales embrionarios. Sin embargo, los ratones heterocigotos son viables y fértiles aunque exhiben una señalización severamente embotada via las proteínas del sustrato del receptor de insulina (IRS), los mediadores clave de insulina, el factor de crecimiento 1 similar a insulina y la acción de leptina. La sensibilidad defectuosa a estas hormonas conduce a hiperinsulinemia, intolerancia a la glucosa, hiperfagia, aumento de adiposidad y crecimiento general reducido en heterocigotos (Foukas, et al., Nature, 441:36-370 (2006)). Estos estudios revelaron una función definida no redundante para pllOa como un intermediario en la señalización de IGF-1, insulina y leptina que no se sustituye por otras isoformas. Se tendrá que esperar por la descripción de los ratones anestesiados con la quinasa inerte ????ß para comprender adicionalmente la función de esta isoforma (se han producido ratones aunque no se ha publicado; Vanhaesebroeck) .
Los ratones anestesiados con ????? y anestesiados con quinasa inerte se han generado y muestran en general fenotipos similares y leves con defectos primarios en la migración de células del sistema inmune innato y un defecto en el desarrollo tímico de los linfocitos T (Li et al. Science, 287:1046-1049 (2000), Sasaki et al. Science, 287:1040-1046 (2000), Patrucco et al. Cell, 118:375-387 (2004) ) .
Similar a pllOy, se han producido ratones interrumpidos con PI3K delta y sustituidos con la quinasa inerte y son viables con fenotipos leves y similares. Los ratones anestesiados con el pll06D910A mutante demostraron una función importante para delta en el desarrollo y función de linfocitos B, con linfocitos B en zona marginal y linfocitos Bl CD5+ casi iondetectbles, y la señalización del receptor del antigeno de linfocitos B y T (Clayton et al. J. Exp. Med. 196:753-763 (2002); Okkenhaug et al. Science, 297:1031-1034 (2002)). Los ratones pll06D910A se han estudiado extensamente y han aclarado la función diversa que desempeña delta en el sistema inmune. Las respuestas inmunitarias dependientes de linfocitos T e independientes de linfocitos T se atenúan severamente en pll06D910A y se perjudica con la secreción de TH1 ( INF-?) y citoquina TH2 (IL-4, IL-5) (Okkenhaug etj al. J.
Immunol. 177:5122-5128 (2006)). Un paciente humano con una mutación en ????d también se ha descrito recientemente. Un joven taiwanés con una inmunodeficiencia primaria de linfocitos B y una gamma-hipoglobulinemia de etiología desconocida con anterioridad se presentó con una sustitución única de pares de bases, m.3256G para A en el codón 1021 en el exón 24 de ????d. Esta mutación dio por resultado, en una sustitución de aminoácidos con pérdida de sentido (E a K) en el codón 1021 que se ubica en el dominio catalítico bastante conservado de la proteína ????d. El paciente no tiene otras mutaciones identificadas y su fenotipo es consistente con la deficiencia de ????d en ratones estudiados hasta ahora. (Jou et al. Int. J. Immunogenet. 33:361-369 (2006)).
Se han desarrollado compuestos de molécula pequeña isoforma selectivos con éxito variable para tod;as las isoformas de las PI3-quinasa clase I (Ito et al. J.: Pharm. Exp. Therapeut., 321:1-8 (2007)). Los inhibidores para alfa son convenientes debido a que se han identificado mutaciones en pllOct en diversos tumores sólidos; por ejemplo, una mutación de amplificación de alfa está asociada con el 50% de cáncer ovárico, cervical, pulmonar y de mama y se ha descrito una mutación de la activación en más del 50% de cánceres intestinales y 25% de mama (Hennessy et al. Nature Reviews, 4:988-1004 (2005)). Yamanouchi ha desarrollado un compuesto YM-024 que inhibe alfa y delta equi-potentemente y es 8 y 28 veces selectivo con respecto a beta y gamma respectivamente (Ito et al. J. Pharm. Exp. Therapeut., 321:1-8 (2007)). ????ß está implicado en la formación de trombos (Jackson et al. Nature Med. 11:507-514 (2005)) y se piensa que los inhibidores de molécula pequeña específicos para esta isoforma son la indicación que implica trastornos de coagulación (TGX-221: 0.007uM en beta; 14 veces selectivos sobre delta, y más de 500 veces selectivos sobre gamma y alfa) (Ito et al. J. Pharm. Exp. Therapeut., 321:1-8 (2007)) .
Los compuestos selectivos para ????? se han desarrollado por diversos grupos como agentes inmunosupresores para una enfermedad autoinmune (Rueckle et al. Nature Reviews, 5:903-918 (2006)). Digno de mención, se ha mostrado que AS 605240 será eficaz en un modelo de ratón con artritis reumatoide (Camps et al. Nature Medicine, 11:936-943 (2005)) y para retrasar la aparición de la enfermedad en un modelo de lupus eritematoso sistémico, (Baber et al. Nature Medicine, 11:933-935 (205)).
También se han descrito recientemente inhibidores delta-selectivos. La mayoría de compuestos selectivos incluyen los inhibidores de purina de quinazolinona (PIK39 e IC87114). IC87114 inhibe ????d en la alta variación nanomolar (triple dígito) y tiene más de 100 veces selectividad contra pllOa, es 52 veces selectivo contra ????d aunque carece de selectividad contra ????? (aproximadamente 8 veces). No se muestra actividad contra ninguna de las proteínas quinasas probadas (Knight et al. Cell, 125:733-747 (2006)). Utilizando los compuestos delta selectivos o ratones manipulados genéticamente (pll06D910A) se mostró que además de desempañar una función clave en la activación de linfocitos B y T, delta también está implicado parcialmente en la migración de neutrófilos y la ráfaga respiratoria de neutrófilos cebados y conduce a un bloqueo parcial de la desgranulación de mastocitos mediada por el antígeno IgE (Condliffe et al. Blood, 106:1432-1440 (2005); Ali et al. Nature, 431:1007-1011 (2002) ) . Por lo tanto, ????d está surgiendo como un mediador importante de muchas respuestas inflamatorias clave que también se sabe que participan en condiciones inflamatorias aberrantes, entre las que se incluyen de manera enunciativa una enfermedad autoinmune y alergia. Para apoyar esta idea, existe un cuerpo creciente de datos de validación blanco para ????d derivados de estudios que utilizan tanto herramientas genéticas como agentes farmacológicos. De esta forma, utilizar el compuesto delta-selectivo IC87114 y los ratones pll05D910A, Ali et al. (Nature, 431:1007-1011 (2002)) han demostrado que delta desempeña una función decisiva en un modelo murino de enfermedad alérgica. En ausencia de delta funcional, la anafilaxis cutánea pasiva (PCA) se reduce significativamente y se puede atribuir a una reducción en la activación y desgranulación de mastocitos inducida por el alérgeno IgE. Además, la inhibición de delta con CI87114 ha mostrado que mejora significativamente la inflamación y la enfermar en un modelo murino de asma utilizando inflamación de las vías respiratorias inducida por ovalbúmina (Lee el al. FASEB, 20:455-465 (2006). Estos datos utilizando los compuestos se corroboraron en ratones mutantes pll05910A utilizando el mismo modelo de inflamación alérgica de las vías respiratorias mediante un grupo diferente (Nashed et al. Eur. J. Immunol. 37:416-424 (2007)).
Existe una necesidad por una caracterización adicional de la función ??3?d en entornos inflamatorios y auto-inmunes. Además, la comprensión de PI3K8 requiere de una elaboración adicional de las interacciones estructurales de ????d, tanto con su subunidad reguladora como con otras proteínas en la célula. También sigue habiendo una necesidad por inhibidores más potentes y selectivos o específicos de PI3K delta, para evitar la toxicología potencial asociada con la actividad en las isoenzimas pllO alfa (señalización de insulina) y beta (activación de plaquetas) . En particular, los inhibidores selectivos o específicos de PI3K6 son convenientes para explorar la función de esta isoenzima adicional y para el desarrollo de productos farmacéuticos superiores para modular la actividad de la isoenzima.
SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención comprende una clase novedosa de compuestos que tienen la fórmula general: que son útiles para inhibir la actividad biológica de PI3K5 humana. Otro aspecto de la invención es proporcionar compuestos que inhiban la PI3K5 selectivamente mientras que tengan una potencia inhibidora relativamente baja contra las otras isoformas de PI3K. Otro aspecto de la invención es proporcionar métodos para caracterizar la función de la ??3?d humana. Otro aspecto de la invención es proporcionar métodos para modular, selectivamente la actividad de ??3?d humana, y con esto estimular el tratamiento médico de enfermedades producidas por una disfunción de ??3?d humana. Otros aspectos y ventajas de la invención serán fácilmente evidentes por el experto que tenga experiencia normal en la técnica.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Un aspecto de la invención se relaciona con compuestos que tienen la estructura: o cualquier sal farmacéuticamente aceptable: de los mismos, en donde: X1 es C(R10) o N; X2 es C o N; X3 es C o N; X4 es C o N; X5 es C o N; en donde al menos dos de X2, X3, X4 y X5 son C; X6 es C(R6) o N; X7 es C(R7) o N; X8 es C(R10) o N; Y es N (R8) , 0 o S; n es 0, 1, 2 ó 3; R1 se selecciona de halo, (, Ci-6alquilo, C1_4haloalquilo, ciano, nitro, -C(=0)Ra, -C(=0)0Ra, -C(=0)NRaRa, -C (=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=0)Ra, -OC (=0) NRaRa, -0C (=0)N (Ra) S (=0)2Ra, -OC2-6alquilNRaRa, -OC2-6alquilORa, -SRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Ra, -S(=0)2NRaRa, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) Ra, -S(=0)2N(Ra)C(=0)0Ra, -S(=0)2N(Ra)C(=0)NRaRa, -NRaRa, -N (Ra) C (=0) Ra, -N (Ra) C (=0) ORa, — (Ra) C (=0) NRaRa, -N (Ra) C (=NRa) NRaRa, -N (Ra) S (=0) 2Ra, -N (Ra) S (=Ó) 2NRaRa, -NRaC2-6alquilNRaRa, -NRaC2-6alquilORa, -NRaC2-6alquilC02Ra, -NRaC2-6alquilS02Rb, -CH2C(=0)Ra, -CH2C (=0) 0Ra, -CH2C (=0) NRaRa, -CH2C (=NRa) NRaRa, -CH20Ra, -CH20C (=0) Ra, -CH20C (=D) NRaRa, -CH20C (=0) N (Ra) S (=0) 2Ra, -CH2OC2.6alquilNRaRa, -CH2OC2-6alquilORa, -CH2SRa, -CH2S(=0)Ra, -CH2S(=0)2Rb, -CH2S (=0) 2NRaRa, -CH2S (=0) 2N (Ra) C (=0) Ra, -CH2S (=0) 2N (Ra) C (=0) 0Ra, -CH2S(=0)2N(Ra)C(=0)NRaRa, -CH2NRaRa, -CH2N (Ra) C (=0) Ra, -CH2N(Ra)C(=0)0Ra, -CH2N (Ra) C (=0) NRaRa, -CH2N (Ra) C (=NRa) NRaRa, -CH2N (Ra) S (-0) 2Ra, -CH2N (Ra) S (=0) 2NRaRa, -CH2NRaC2_6alquilNRaRa, -CH2NRaC2-6alquilORa, -CH2NRaC2-6alquilC02Ra y -CH2NRaC2_6alquilS02Rb; R2 se selecciona de H, halo, Ci-6alquilo, Ci-4haloalquilo, ciano, nitro, 0Ra, NRaRa, -C(=0)Ra, -C'(=0)ORa, -C(=0)NRaRa, -C (=NRa)NRaRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Ra, -S (=0) 2NRaRa, -S(=0)2N(Ra)C(=0)Ra, -S(=0)2N(Ra)C(=0)0Ra y -S (=0) 2N (Ra) C (=0) NRaRa; R3 se selecciona de H, halo, nitro, ciano, Ci_4alquilo, OCi_4alquilo, OCi-4haloalquilo, NHCi_4alquilo, N (Ci-4alquil ) Ci_4alquilo o Ci-4haloalquilo; R4 es, independientemente, en cada caso, halo, nitro, ciano, Ci-4alquilo, OCi-4alquilo, OCi_4haloalquilo, NHCi-4alquilo, N (Ci_4alquil) Ci-4alquilo, Ci-4haloalquilo o un anillo monociclico insaturado de 5-, 6- o 7-miembros que contiene 0, 1, 2, 3 ó 4 átomos seleccionados de N, 0 y S, pero que no contiene más de uno de O o S, el anillo estará sustituido por 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados de halo, Ci_4alquilo, Ci_3haloalquilo, -0Ci- alquilo, -NH2, -NHCi_4alquilo y -N (Ci_4alquil ) Ci_4alquilo; R5 es, independientemente, en cada caso, H, halo, Ci_6alquilo, Ci-4haloalquilo, o Ci-6alquilo sustituido por 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados de halo, ciano, OH, OCi_4alquilo, Ci-4alquilo, Ci_3haloalquilo, OCi-4alquilo, NH2, NHCi_4alquilo y N (Ci-4alquil ) Ci_4alquilo; o ambos grupos R5 conjuntamente forman un C3-6spiroalquilo sustituido por 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados de halo, ciano, OH, OCi_4alquilo, Ci_4alquilo, Ci-3haloalquilo, OCi-4alquilo, NH2, NHCi-4alquilo y N (C1-4alqu.il) Ci-4alquilo; R6 se selección de halo, ciano, OH, OCi_4alquilo, Ci-4alquilo, Ci-3haloalquilo, OCi-4alquilo, NHR9, N (Ci_4alquil ) Ci_ 4alquilo, -C(=0)ORa, -C (=0) N (Ra) Ra o -N (Ra) C (=0) R y un anillo heterocilico saturado o parcialmente saturado 5- ó 6-miembros que contiene 1, 2 ó 3 heteroátomos seleccionados de N, 0 y S, en donde el anillo está sustituido por 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados de halo, ciano, OH, oxo, OCi_4alquilo, Ci-4alquilo, Ci-3haloalquilo, 0Ci_4alquilo, NH2, NHCi-4alquilo y N (Ci-4alquil ) Ci-4aqluilo; 7 se selecciona de H, halo, C1_4haloalqui lo , ciano, nitro, -C(=0)Ra, -C(=0)0Ra, -C(=0)NRaRa, -C (=NRa) NRaR, -ORa, -OC(=0)Ra, -0C(=0)NRaRa, -OC (=0) N (Ra) S (=0) 2Ra, -OC2-6alquilNRaRa, -OC2-6alquilORa, -SRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Ra, -S (=0) 2NRaRa, -S (=0) 2N (Ra) -S (=0) 2N (Ra) -N ( Ra) C (=0) NRaRa, -N (Ra) C (=NRa) NRaRa, -N (Ra) S(=0) 2Ra, -N (Ra) S (=0) 2NRaRa, -NRaC2-6alquilNRaRa, -NRaC2.6alquilORa y Ci-6alquilo, en donde el Ci-6alquilo es sustituido por 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados de halo, Ci_4haloalquilo, ciano, nitro, -C(=0)Ra, -C(=0)0Ra, -C(=0)NRaRa, -C (=NRa) NRaRa, -0Ra, -0C(=0)Ra, -0C (=0) NRaRa, -0C (=0) N (Ra) S (=0) 2Ra, -0C2-6alquilNRaRa, -0C2-6alquil0Ra, -SRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Ra, -S (=0)2NRaRa, -S(=0)2N(Ra)C(=0)R\ -S (=0) 2N (Ra) C (=0) 0Ra, -S(=0)2N(Ra)C(=0)NRaRa, -NRaRa, -N (Ra) C (=0) Ra, -N ( Ra) C (=0) 0Ra, -N (Ra) C (=0) NRaRa, -N (Ra) C (=NRa) NRaRa, -N (Ra) S (=0) 2Ra, -N(Ra)S(=0)2NRaRa, -NRaC2_6alquilNRaRa y -NRaC2-6alquilORa, y el Ci-6alquilo está sustituido adicionalmente por 0 ó 1 anillo monociclicos saturado, parcialmente saturado o insaturado de 5-, 6- o 7-miembros que contiene 0, 1, 2, 3 ó átomos seleccionados de N, O y S, pero que no contienen más' de uno de 0 o S, en donde los átomos de carbono disponibles del anillo están sustituidos por 0, 1 ó 2 grupos oxo o tioxo, en donde el anillo es sustituido por 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, nitro, ciano, Ci_4alquilo, OCi-4alquilo, OCi_4haloalquilo, NHCi-^alquilo, N (Ci-4alquil) Ci-4alquilo y Ci-.4haloalquilo; o R7 y R8 conjuntamente forman un puente -C=N- en donde el átomo de carbono está sustituido por H, halo, ciano, o un anillo monociclico saturado, parcialmente saturado o insaturado de 5-, 6- ó 7-miembros que contiene 0, 1, 2, 3 ó 4 átomos seleccionados de N, 0 y S, pero que no contiene más de uno de O o S, en donde los átomos de carbono disponibles del anillo están sustituidos por 0, 1 ó 2 grupos oxo o tioxo, en donde el anillo está sustituido por 0, 1, 2, 3 ó 4 sustituyentes seleccionados de halo, Ci-6alquilo, Ci_4haloalquilo, ciano, nitro, -C(=0)Ra, -C(=0)0Ra, -C(=0)NRaRa, -C (=NRa) NRaRa, -ORa, -0C(=0)Ra, -0C(=0)NRaR% -0C (=0) N (Ra) S (=0) 2Ra, -OC2-6alquilNRaRa, -OC2-6alquilORa, -SRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Ra, -S (=0) 2NRaRa, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) Ra, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) 0Ra, -S(=0)2N(Ra)C(=0)NRaRa, -NRaRa, -N (Ra) C (=0) Ra, -N (Ra) C (=0) 0Ra, -N (Ra) C (=0) NRaRa, -N (Ra) C (=NRa) NRaRa, -N (Ra) S.(=0) 2Ra, -N (Ra) S (=0) 2NRaRa, -NRaC2-6alquilNRaRa y -NRaC2.6alquilORa; o R7 y R9 conjuntamente forman un puente -N=C- en donde el átomo de carbono está sustituido por H, halo, Ci_6alquilo, Ci_ 4haloalquilo, ciano, nitro, 0Ra, NRaRa, -C (=0) Ra, -C'(=0)0Ra, -C(=0)NRaRa, -C (=NRa)NRaRa, -S (=0) Ra, -S(=0)2Ra o -S (=0) 2NRaRa; R8 es H, Ci-6alquilo, C (=0) N (Ra) Ra, C(=0)R o Ci-4haloalquilo; R9 es H, Ci_6alquilo o Ci_4haloalquilo; R10 es independientemente en cada caso H, halo, Ci_3alquilo, Ci_3haloalquilo o ciano; R11 es un anillo monociclico saturado, parcialmente saturado o insaturado de 5- 6- o 7 miembros que contienen 0, 1, 2, 3 ó 4 átomos seleccionados de N, 0 y S, pero que no contienen más de uno de 0 o S, en donde los átomos de carbono disponibles del anillo están sustituidos por 0, 1 ó 2 grupos oxo o tioxo, en donde el anillo está sustituido por 0, 1, 2, 3 ó 4 sustituyentes seleccionados de halo, Ci_6alquilo, Ci-4haloalquilo, ciano, nitro, -C(=0)Ra, -C(=0)0Ra, -C(=0)NRaRa, -C (=NRa) NRaRa, -0Ra, -0C(=0)Ra, -0C (=0) NRaRa, -0C(=0)N(Ra)S(=0)2Ra, -OC2-6alquilNRaRa, -0C2-6alquil0Ra,; -SRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Rb, -S (=0) 2NRaRa, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) Ra, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) 0Ra, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) NRaRa, -NRaR\ -N (Ra) C (=0) Ra, -N(Ra)C(=0)0Ra, -N ( Ra) C (=0) NRaRa, -N (Ra) C (=NRa) NRaRa, -N (Ra) S (=0) 2Ra, -N (Ra) S (=0) 2NRaRa, -NRaC2.6alquilNRaRa y -NRaC2.6alquilORa; Ra es independientemente, en cada caso, H o Rb; Rb es independientemente, en cada caso, fenilo, bencilo o Ci_6alquilo, el fenilo, bencilo y Ci-6alquilo están sustituidos por 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados de halo, Ci-4alquilo, Ci_3haloalquilo, -0Ci-4alquilo, ~NH2, -NHCi_4alquilo y -N (Ci_4alquil ) Ci_alquilo; y Rc es un anillo saturado o parcialmente saturado de 4-, 5- o 6 miembros que contienen 1, 2 ó 3 heteroátomos seleccionados de N, 0 y S el anillo estará sustituido por 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados de halo, Ci-4alquilo, Ci_3haloalquilo, 0Ci- alquilo, -NH2, -NHCi_4alquilo y -N (Ci-4alquil) Ci-4alquilo .
En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores y más adelante, X1 es N.
En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores y más adelante, Y es N(R8).
En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores o más adelante, X1 es N; Y es N(H) X6 es C(NH2); X7 es C(CN) y R2 es H. ' En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores o más adelante, R1 se selecciona de Ci_6alquilo, d-4haloalquilo, -C(=0)Ra, -C(=0)ORa, -C(=0)NRaRa, -C (=NRa) NRaRa, -0Ra, -OC(=0)Ra, -0C (=0) NRaRa, -0C(=0)N(Ra)S(=0)2Ra, -OC2-6alquilNRaRa, -OC2-6alquilORa, -SRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Ra, -S (=0)2NRaRa, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) Ra, -S(=0)2N(Ra)C(=0)0Ra, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=0)Ra, -N(Ra)C(=0)0Ra, -N (Ra) C (=0) NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N (Ra) S (=0) 2Ra, -N (Ra) S (=0) 2NRaRa, -NRaC2-6alquilNRaRa, -NRaC2-6alquilORa, -NRaC2-6alquilC02Ra, -NRaC2-6alquilS02Rb, -CH2C(=0)Ra, -CH2C (=0) ORa, —CH2C ( =0) NRaRa , -CH2C (=NRa)NRaRa, -CH20Ra, -CH20C (=0) Ra, -CH20C (=0) NRaRa, -CH20C (=0) N (Ra) S (=0) 2Ra, -CH2OC2-6alq ilNRaRa, -CH2OC2-6alquilORar -CH2SRa, -CH2S(=0)Ra, -CH2S(=0)2Rb, -CH2S (=0) 2NRaRa, -CH2S(=0)2N(Ra)C(=0)Ra, -CH2S (=0) 2N (Ra) C (=0) 0Ra, -CH2S(=0)2N(Ra)C(=0)NRaRa, -CH2NRaRa, -CH2N (Ra) C (=0) Ra, -CH2N (Ra) C (=0) 0Ra, -CH2N(Ra)C(=0)NRaRa, -CH2N (Ra) C (=NRa) NRaRa, -CH2N (Ra) S (=0) 2Ra, -CH2N (Ra) S (-0) 2NRaRa, -CH2NRaC2_6alquilNRaRa, -CH2NRaC2-6alquilORa, -CH2NRaC2-6alquilC02Ra y -CH2NRaC2_6alquilS02Rb.
En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores o más adelante, R1 se selecciona de C2_6alquilo, C2-4haloalquilo, -C(=0)Ra, -C(=0)0Ra, -C(=0)NRaRa, -C (=NRa)NRaRa, -0Ra, -0C(=0)Ra, -0C (=0) NRaRa, -OC (=0)N (Ra) S (=0)2Ra, -OC2-6alquilNRaRa, -OC2-5alquilORa, -SRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Ra, -S (=0)2NRaRa, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) Ra, -S(=0)2N(Ra)C(=0)ORa, -S (=0)2N(Ra)C(=0)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=0)Ra, -N(Ra)C(=0)OR\ -N (Ra) C (=0) NRaRa, -N (Ra) C (=NRa) NRaRa, -N (Ra) S (=0) 2Ra, -N (Ra) S (=0) 2NRaRa, -NRaC2-6alquilNRaRa, -NRaC2-6alquilORa, -NRaC2_6alquilC02Ra, -NRaC2-6alquilS02Rb, -CH2C(=0)Ra, -CH2C (=0) 0Ra, -CH2C (=0) NRaRa, -CH2C (=NRa) NRaRa, -CH2ORa, -CH2OC (=0) Ra, -CH2OC (=0) NRaRa, -CH2OC (=0) N (Ra) S (=0) 2Ra, -CH2OC2_6alquilNRaRa, -CH2OC2-6alquilORa, -CH2SRa, -CH2S(=0)Ra, -CH2S (=0) 2Rb, -CH2S (=0) 2NRaRa, -CH2S (=0) 2N (Ra) C (=0) Ra, -CH2S (=0) 2N ( Ra) C (=0) ORa, -CH2S(=0)2N(Ra)C(=0)NRaRa, -CH2NRaRa, -CH2N (Ra) C (=0) Ra, -CH2N (Ra) C (=0) 0Ra, -CH2N(Ra)C(=0)NRaRa, -CH2N (Ra) C (=NRa) NRaRa, -CH2N (Ra) S (=0) 2R\ -CH2N (Ra) S (=0) 2NRaRa, -CH2NRaC2-6alquilNRaRa, -CH2NRaC2.6alquilORa, -CH2NRaC2_6alquilC02Ra y -CH2NRaC2-6alquilS02Rb.
En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores y más adelante, R1 se selecciona de C2_6alqüilo, -C(=0)NRaRa, -0Ra y -CH2NRaRa.
En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores y más adelante, R2 es H.
En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores y más adelante, R3 se selecciona de H y halo.
En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores y más adelante, R5 es independientemente en cada caso H, halo, Ci_6alquilo y Ci-haloalquilo .
En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores y más adelante, un R5 es H y el otro R5 es Ci-6alquilo .
En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores y más adelante, un R5 es H y el otro R5 es metilo.
En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores y más adelante, un R5 es H y el otro R5 es (R) -metilo .
En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores y más adelante, un R5 es H y el otro R5 es (S)-metilo .
En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores y más adelante, R6 es NHR9.
En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores y más adelante, R7 es ciano.
En otra de modalidad, junto con las modalidades anteriores y más adelante, R7 y R8 conjuntamente forman un puente -C=N- en donde el átomo de carbono está sustituido por H, halo, ciano, un anillo monociclico saturado, parcialmente saturado o insaturado 5-, 6- o 7-miembros que contiene 0, 1, 2, 3 ó 4 átomos seleccionados de N, O y S, pero que no contiene más de uno de 0 o S, en donde los átomos de carbono disponibles del anillo están sustituidos por 0, 1 ó 2 grupos oxo o tioxo, en donde el anillo está sustituido por 0, 1, 2, 3 ó 4 sustituyentes seleccionados de halo, Ci_6alquilo, Ci-4haloalquilo, ciano, nitro, -C(=0)Ra, -C(=0)ORa, -C(=0)NRaRa, -C (=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=0)Ra, -OC (=0) NRaRa, -OC (=0)N (Ra) S (=0)2Ra, -OC2_6alquilNRaRa, -OC2_6alquilORa, -SRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Ra, -S (=0) 2NRaR\ -S (=0) 2N (Ra) C (=0) Ra, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) 0Ra, -S(=0)2N(Ra)C(=0)NRaRa, ' -NRaRa, -N (Ra) C (=0) Ra, -N(Ra)C(=0)0Ra, -N (Ra) C (=0) NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N (Ra) S (=0) 2R, -N (Ra) S (=0) 2NRaRa, -NRaC2-6alquilNRaRa y -NRaC2-6alquilORa .
En otra de modalidad, junto con las modalidades anteriores y más adelante, R7 y R9 conjuntamente forman un puente -N=C- en donde el átomo de carbono está sustituido por H, halo, Ci-6alquilo, Ci-4haloalquilo, ciano, nitro, 0Ra, NRaR , -C(=0)Ra, -C(=0)0Ra, -C(=0)NRaRa, -C (=NRa) NRaRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Ra o -S (=0) 2NRaRa .
En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores y más adelante, R7 y R9 conjuntamente forman un puente -N=C- en donde el átomo de carbono está sustituido por H o halo.
En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores y más adelante, R11 es un anillo monociclico insaturado de 5 ó 6 miembros que contiene 0, 1, 2 , ' 3 ó 4 átomos seleccionados de N, 0 y S, pero que no contiene más de uno de O o S, en donde los átomos de carbono disponibles del anillo están sustituidos por 0, 1 ó 2 grupos oxo o tioxo, en donde el anillo está sustituido por 0, 1, 2, 3 ó 4 sustituyentes seleccionados de halo, Ci-6alquilo, Ci_haloalquilo, ciano, nitro, -C(=0)Ra, -C(=0)ORa, -C(=0)NRaRa, -C (=NRa) NRaRa, -ORa, -OC(=0)Ra, -OC (=0) NRaRa, -0C (=0)N (Ra) S (=0) 2Ra, -OC2-6alquilNRaRa, -OC2-6alquilORa, -SRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Ra, -S (=0)2NRaRa, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) R , -S(=0)2N(Ra)C(=0)0Ra, -S(=0)2N(Ra)C(=0)NRaRa, -NRaRa, -N (Ra) C (=0) Ra, -N (Ra) C (=0) ORa, -N (Ra) C (=0) NRaRa, -N(Ra)C(=NRa)NRaRa, -N (Ra) S (=0) 2Ra, -N (Ra) S (=0) 2NRaRa, -NRaC2-6alquilNRaRa y -NRaC2-6alquilORa .
En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores y más adelante, R11 es un anillo monociclico insaturado de 5 ó 6 miembros que contiene 0, 1, 2 ó 3 átomos seleccionados de N, 0 y S, pero que no contiene más de uno de 0 o S, en donde los átomos de carbono disponibles del anillo están sustituidos por 0, 1 ó 2 grupos oxo o tioxo, en donde el anillo está sustituido por 0, 1, 2, 3 ó 4 sustituyentes seleccionados de halo, Ci_6alquilo, Ci-4haloalquilo, ciano, nitro, -C(=0)Ra, -C(=0)0Ra, -C(=0)NRaRa, -C (=NRa) NRaRa, -0Ra, -0C(=0)Ra, -OC(=0)NRaRa, -OC (=0) N (Ra) S (=0) 2Ra, -OC2-6alquilNRaRa, -OC2.6alquilORa, -SRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Ra, -S (=0;) 2NRaRa, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) Ra, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) 0Ra, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) NRaRa, -NRaRa, -N (Ra) C (=0) Ra, -N (Ra) C (=0) 0Ra, -N (Ra) C (=0) NRaRa, -N (Ra) C (=NRa)NRaRa, -N (Ra) S (=0) 2Ra, -N (Ra) S (=0) 2NRaRa, -NRaC2-6alquilNRaRa y -NRaC2-6alquilORa .
En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores y más adelante, R11 es un anillo monociclico insaturado de 5 ó 6 miembros que contiene 0 ó 2 átomos N, y 0 ó 1 átomos seleccionados de N, 0 y S, en donde el anillo está sustituido por 0, 1, 2, 3 o 4 sustituyentes seleccionados de halo, Ci-6alquilo, Ci-4haloalquilo, ciano, nitro, -C(=0)Ra, -C (=0) 0Ra, -C (=0) NRaRa, -C (=NRa) NRaRa, -ORa, -OC (=0) Ra, -0C (=0) NRaRa, -0C .(=0)N(Ra) S (=0)2Ra, -OC2-6alquilNRaRa, -OC2-6alquilORa, -SRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Ra, -S (=0) 2NRaRa, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) R , -S (=0) 2N (Ra) C (=0) 0Ra, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) NRaRa, -NRaRa, -N (Ra) C (=0) Ra, -N (Ra) C (=0) 0Ra, -N (Ra) C (=0) NRaRa, -N (Ra) C (=NRa) NRaRa, -N (Ra) S (=0) 2Ra, -N (Ra) S (=0) 2NRRa, -NRaC2_6alquilNRaRa y -NRaC2-6alquilORa . ' En otra modalidad, junto con las modalidades anteriores y más adelante, R11 es un anillo monociclico insaturado de 5- o 6-miembros que contiene 1 ó 2 átomos N, y 0 ó 1 átomos seleccionados de N, 0 y S, en donde el; anillo está sustituido por 0, 1, 2, 3 ó 4 sustituyentes seleccionados de halo, Ci_6alquilo y Ci-4haloalquilo .
Otro aspecto de la invención se relaciona 'con un método para tratar condiciones o trastornos mediados por PI3K.
En ciertas modalidades, la condición 0 trastorno mediado por PI3K se selecciona de artritis reumatoidea, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis de psoriática, psoriasis, enfermedades inflamatorias, y enfermedades autoinmunes. En otras modalidades, la condición o trastorno mediado por PI3K se selecciona de enfermedades cardiovasculares, aterosclerosis, hipertensión, trombosis venosa profunda, ataque, infarto al miocardio, anqina inestable, tromboembolismo , embolia pulmonar, enfermedad trombolitica, isquemia arterial aguda, obstrucción trombótica periféricas, y enfermedad de la arteria coronaria. Todavía en otras modalidades, la condición o trastorno mediado por PI3K se selecciona de cáncer, cáncer del colon, glioblastoma, carcinoma endometrial, cáncer hepatocelular, cáncer pulmonar, melanoma, carcinoma celular renal, carcinoma de tiroides, linfoma celular, enfermedades linfoproliferativas , cáncer pulmonar de célula pequeña, pulmonar de célula escamosa, glioma, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer ovárico, cáncer cervical, y leucemia. Todavía en otra modalidad, la condición o trastorno mediado por PI3K se selecciona de diabetes tipo II. Todavía en otras modalidades la condición o trastorno mediado por PI3K se selecciona de enfermedades respiratorias, bronquitis, asma, y enfermedad pulmonar obstructiva crónica. En ciertas modalidades, el sujeto es un ser humano.
Otro aspecto de la invención se relaciona con el tratamiento de artritis reumatoidea, espondilitis anquilosante, osteoartritis , artritis psoriásica, psoriasis, enfermedades inflamatorias o enfermedades autoinmunes que comprenden el paso de administrar un compuesto según cualquiera de las modalidades anteriores.
Otro aspecto de la invención se relaciona con el tratamiento de artritis reumatoidea, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psoriásica, psoriasis, enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunes, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad inflamatoria del ojo, trastornos inflamatorios o inestables de la .vejiga, lesiones cutáneas con componentes inflamatorios, condición inflamatoria crónica, enfermedades autoinmunes, : lupus eritematoso sistémico (SLE) , miastenia gravis, artritis reumatoide, encefalomielitis diseminada aguda, :purpura trombocitopénica idiopática, esclerosis múltiple, síndrome de Sjoegren y anemia hemolítica autoinmune, condiciones alérgicas e hipersensibilidad que comprende el paso de administrar un compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores o más adelante.
Otro aspecto de la invención se relaciona con el tratamiento de cánceres que se producen, dependen o están asociados con la actividad de ????d, que comprende el paso de administrar un compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores o más adelante.
Otro aspecto de la invención se relaciona con el tratamiento de cánceres seleccionados de leucemia mieloide aguda, síndrome mielo-displásico, enfermedades mieloproliferativa, leucemia mieloide crónica, leucemia linfoblástica de linfocitos T aguda, leucemia linfoblástica de linfocitos B, linfoma que no es Hodgkins, linforna de linfocitos B, tumores sólidos y cáncer de mama, que comprende el paso de administrar un compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores o más adelante.
Otro aspecto de la invención se relaciona con una composición farmacéutica que comprende un compue'sto de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores y un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable.
Otro aspecto de la invención se relaciona con el uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores como un medicamento.
Otro aspecto de la invención se relaciona con el uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades anteriores en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de artritis reumatoidea, espondilitis anquilosante, osteoartritis , artritis psoriásica, psoriasis, enfermedades inflamatorias, y enfermedades autoinmunes.
Los compuestos de esta invención pueden tener en general diversos centros asimétricos y típicamente se representan en la forma de mezclas racémicas. Esta invención pretende abarcar mezclas racémicas, mezclas parcialmente racémicas, y enantiómeros y diastomeros separados.
A menos que se especifique de otra manera, se aplican las siguientes definiciones a los términos encontrados en la especificación y las reivindicaciones: "Ca-palquilo" significa un grupo alquilo que comprende un mínimo de a y un máximo de ß átomos de carbono en una relación ramificada, cíclica o lineal o cualquier combinación de las tres, en donde a y ß representan números enteros. Los grupos alquilo descritos en esta cesión .también pueden contener uno o dos enlaces dobles o triples. Los ejemplos de Ci_6alquilo incluyen, de manera enunciativa los siguientes: rupo benzo", solo o en combinación, significa radical divalente C4H4=, una representación de la misma es -CH=CH-CH=CH-, que cuando se une adyacentemente a otro anillo forma un anillo similar ' a benceno -por ejemplo, tetrahidronaftileno, indol y lo semejante.
Los términos "oxo" y "tioxo" representan los grupos =0 (como en carbonilo) y =S (como en tiocarbonilo) , respec ivamente .
"Halo" o "halógeno" significa un átomo de halógeno seleccionado de F, CI, Br y I .
"Cv-whaloalquilo" significa un grupo alquilo, como se describió anteriormente, en donde cualquier número —al menos uno— de los átomos de hidrógeno unidos a la cadena de alquilo se reemplazan por F, Cl, Br o I.
"Heterociclo" significa un anillo que comprende al menos un átomos de carbono y al menos otros, átomo seleccionado de N, O y S. Los ejemplos de heterociclos que se pueden encontrar en las reivindicaciones incluyen de manera enunciativa los siguientes: : "Átomos de nitrógeno disponibles" son aquellos átomos de nitrógeno que forman parte de un heterociclo y están unidos por dos enlaces sencillos (por ejemplo, piperidina) , que dejan un enlace externo disponible para sustitución mediante, por ejemplo H o CH3.
"Sal farmacéuticamente aceptable" significa una sal preparada por medios convencionales como se sabe por aquellos expertos en la técnica. Las "sales farmacológicamente aceptables" incluyen sales básicas de ácidos inorgánicos y orgánicos, entre los que se incluyen de manera enunciativa ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metansulfónico, ácido etansulfónico, ácido málico, ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido láctico, ácido fumárico, ácido succínico, ácido maleico, ácido salicílico, ácido benzoico, ácido fenilacético, ácido mandélico y lo semejante. Cuando los compuestos de la invención incluyen una función ácida tal como un grupo carboxi, entonces los pares de cationes farmacéuticamente aceptables adecuados para los grupos carboxi son bien conocidos por aquellos expertos en la técnica e incluyen cationes alcalinos, alcalinotérreos, de amonio, de amonio cuaternario y lo semejante. Para los ejemplos adicionales de "sales famracológicamente aceptables", véase, infra and Berge et al., J. Pharm. Sci . 66: 1 (1977) .
"Saturado, parcialmente saturado o insaturado" incluye sustituyentes saturados con átomos de hidrógeno, sustituyentes completamente insaturados con átomos de hidrógeno y sustituyentes parcialmente saturados con' átomos de hidrógeno.
"Grupo saliente" en general se refiere a grupos que se pueden desplazar fácilmente mediante un nucleófilo tal como una amina un tiol o un nucleófilo alcohólico. Estos grupos salientes son bien conocidos en la técnica. Los ejemplos de estos grupos salientes incluyen, de; manera enunciativa, N-hidroxisuccinimida, N-hidroxibenzotriazol, haluros, triflatos, tosilatos y lo semejante. Los grupos salientes preferidos se indican en la presente cuando sea adecuado .
"Grupo protector" en general se refiere a grupos bien conocidos en la técnica que se utilizan para prevenir que los grupos reactivos seleccionados, tales como carboxi, amino, hidroxi, mercapto y lo semejante, experimenten reacciones no deseadas, tales como nucleofilicas , electrofiicas , oxidación, reducción y lo semejante. Los grupos protectores preferidos se indican en la presente cuando sea adecuado. Los ejemplos de grupos protectores amino incluyen de manera enunciativa, aralquilo, aralquilo sustituido, cicloalquenilalquilo and cicloalquenilalquilo sustituido, alilo, alilo sustituido, acilo, alcoxicarbonilo, aralcoxicarbonilo, sililo y lo semejante. Los ejemplos de aralquilo incluyen, de manera enunciativa, bencilo,; orto-metilbencilo, tritilo y bencidrilo, que pueden ' estar sustituidos opcionalmente con halógeno, alquilo, alcoxi, hidroxi, nitro, acilamino, acilo y lo semejante, y sales tales como sales de fosfonio y amonio. Los ejemplos de' grupos arilo incluyen fenilo, naftilo, indanilo, antracenilo, 9- (9-fenilfluorenilo) , fenantrenilo, durenilo y lo semejante. Los ejemplos de radicales de cicloalquenilalquilo o cicloalquilenilalquilo sustituido, de preferencia tienen 6-10 átomos de carbono, incluyen, de manera enunciativa, metilciclohexenilo y lo semejante. Los grupos acilo, alcoxicarbonilo y aralcoxicarbonilo adecuados incuyen benciloxicarbonilo, t-butoxicarbonilo, iso-butoxicarbonilo, benzoilo, benzoilo sustituido, butirilo, acetilo, trifluoroacetilo, tricloroacetilo, ftaloilo y lo semejante. Se puede utilizar una mezcla de grupos protectores para proteger el mismo grupo amino, tal como el grupo amino primario puede estar protegido tanto por un grupo aralquilo como por un grupo aralcoxicarbonilo. Los grupos protectores amino también pueden formar un anillo heterociclico con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, por ejemplo, 1,2-bis (metilen) benceno, ftalimidilo, succinimidilo, maleimidilo y lo semejante y cuando estos grupos heterociclicos puedan incluir además anillos de arilo y cicloalquilo contiguos. Además, los grupos heterociclicos pueden estar mono-; di- o tri-sustituidos, tal como nitroftalimidilo . Los grupos amino también pueden estar protegidos contra reacciones no deseadas, tales como oxidación, a través de la formación de una sal de adición, tal como clorhidrato, ácido toluensulfónico, ácido trifluoracético y lo semejante.' Muchos de los grupos protectores amino también son adecuados para proteger los grupos carboxi, hidroxi y mercapto. Por ejemplo, los grupos aralquilo. Los grupos alquilo también son grupos adecuados para proteger los grupos hidroxi y mercapto, tales como ter-butilo.
Los grupos protectores de sililo son átomos de silicio sustituidos opcionalmente por uno o más · grupos alquilo, arilo y aralquilo. Los grupos protectores de sililo adecuados incluyen de manera enunciativa, trimetilsililo, trietilsililo, triisopropilsililo, ter-butildimetilsililo, dimetilfenilsililo, 1 , 2-bis (dimetilsilil ) benceno, 1,2-bis (dimetilsilil ) etano y difenilmetilsililo . La sililación de un grupos amino proporciona grupos mono- y di-sililamino . La sililación de compuestos aminoalcohólicos puede conducir a un derivado de N, N, O-trisililo . La eliminación de la función sililo de una función sililéter se lleva a cabo fácilmente mediante tratamiento con, por ejemplo, un hidróxido metálico o un reactivo de fluoruro de amonio, ya sea como un paso de reacción discreta o in situ durante una reacción con el grupo alcohólico. Los agentes sililantes adecuados son, por ejemplo, cloruro de trimetilsililo, cloruro de ter-butildimetilsililo, cloruro de fenildimetilsililo, cloruro de difenilmetilsililo o sus productos de combinación con imidazol o DMF. Los métodos para la sililación de aminas y la eliminación de grupos protectores de sililo son bien conocidos por aquellos expertos en la técnica. Los métodos para preparar estos derivados de amina a partir de los aminoácidos correspondientes, las amidas de aminoácido o los ésteres de aminoácido también son bien conocidos por aquellos expertos en la técnica de la química orgánica incluyendo el aminoácido/éster de aminoácido o la química de aminoalcoholes .
Los grupos protectores se retiran bajo condiciones que no afectarán la porción restante de la molécula. Estos métodos son bien conocidos en la técnica e incluyen hidrólisis ácida, hidrogenólisis y lo semejante. Un método preferido implica el retiro de un grupo protector, tal como el retiro de un grupo benciloxicarbonilo mediante hdrogenólisis utilizando paladio o carbono en un sistema de solventes adecuados tal como un alcohol, ácido acético, y lo semejante o mezclas de los mismos. Un grupo protector de t-butoxicarbonilo se puede retirar utilizando un ácido inorgánico u orgánico tal como HC1 o ácido trifluorácético, en un sistema de solventes adecuados, tal como dióxano o cloruro de metileno. Las sales amino resultantes se pueden neutralizar fácilmente para proporcionar la amina libre. Los grupos protectores carboxi, tales como, metilo, etilo, bencilo, ter-butilo, 4-metoxifenilmetilo y lo semejante, se pueden retirar bajo condiciones de hidrólisis e hidrogenólisis bien conocidas por aquellos expertos en la técnica .
Se debe observar que los compuestos de la invención pueden comprender grupos que pueden existir en formas tautoméricas, tales como grupos de amidina y guanidina cíclica y acíclica, grupos heteroarilo heteroátomos sustituidos (Y' = 0, S, NR) , y lo semejante, que se ilustran en los siguientes ejemplos: y aunque se menciona una forma única,- se describen, muestran y/o reivindican en la presente, todas las formas tautoméricas destinadas para estar incluidas inherentemente en este nombre, descripción, muestra y/o reivindicación.
Los profármacos de los compuestos de esta invención también contemplan por esta, invención. Un profármaco es · un compuesto activo o inactivo que se modifica químicamente a través de una acción fisiológica in vivo, tal como hidrólisis, metabolismo y lo semejante, en un compuesto de esta después de la administración del profármaco a un paciente. La conveniencia y las técnicas implicadas para realizar y utilizar los profármacos son bien conocidas por aquellos expertos en la técnica. Para un análisis general de los profármacos que implican ésteres véase Svensson and Tunek Drug Metabolism eviews 165 (1988) and Bundgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985) . Los ejemplos de un anión carboxilado enmascarado incluyen una variedad de ésteres, tales como alquilo (por ejemplo, metilo, etilo), cicloalquilo (por ejemplo, ciclohexilo) , aralquilo (por ejemplo, bencilo, p-metoxibencilo) , alquilcarboniloxialquilo (por ejemplo, pivaloiloximetilo) . Las aminas se han enmascarado como derivados arilcarboniloximetilo que segmentan mediante esterases in vivo que liberan el fármaco libre y formáldehído (Bungaard J. Med. Chem. 2503 (1989)). También, los fármacos que contienen un grupo NH ácido, tal como imidazol, imida, indol y lo semejante, se han enmascarado con grupos N- aciloximetilo (Bundgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985)).
Los grupos de hidroxi se han enmascarado como ésteres y éteres. La EP 039,051 (Sloan and Little, 4/11/81) describe profármacos de ácido hidroxámico de base Mannich, su preparación y uso.
La especificación y las reivindicaciones contienen un listado de especies que utilizan la redacción "seleccionado de... y..." y "es... o..." (algunas veces denominado como grupos Markush) . Cuando se utilice esta redacción en esta solicitud, a menos que se establezca de otra manera significa que incluirá el grupo como un todo, o cualesquiera miembros individuales del mismo o cualesquiera subgrupos del mismo. El uso de esta redacción es simplemente para fines de abreviación y no significan ninguna forma de limitar el retiro de elementos individuales o subgrupos según sea necesario.
La presente invención también incluye compuestos marcados isotópicamente, que son idénticos a aquellos mencionados en la presente, aunque para el hecho de que uno o más átomos se reemplazan por un átomo que tenga una masa atómica o un número másico diferente de la masa atómica o número másico por lo general encontrado en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que se pueden incorporar en los compuestos de la invención incluyen los isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxigeno, fósforo, fiuoro y cloro, tales como 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 160, 170, 31P, 32P, 35S, 18F y 36C1.
Los compuestos de la presente invención que contienen los isótopos mencionados anteriormente y/u otros isótopos de otros átomos están dentro del alcance de esta invención. Ciertos compuestos marcados isotópicamente de la presente invención, por ejemplo aquellos en los cuales se incorporan los isótopos radiactivos tales como 3H y 14C, son útiles en un fármaco y/o los análisis para distribución de tejidos en sustrato.
Los isótopos tritiados, es decir, 3H, y carbono-14, es decir, 14C, son particularmente preferidos por su facilidad de preparación y detección. Además, la sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio, es decir, 2H, pueden producir ciertas ventajas terapéuticas que resultan de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo una vida media in vivo aumentada o requerimientos reducidos de dosificación y, por lo tanto, se pueden preferir en :algunas circunstancias.
Los compuestos marcados isotópicamente de esta invención en general se pueden preparar al sustituir un reactivo marcado isotópicamente disponible fácilmente para un reactivo marcado no isotópicamente.
Experimentos Se utilizan las siguientes abreviaturas: aq. - Acuoso concd - Concentrado DC - Diclorometano CHCI3 - Cloroformo DMF - ?,?-Dimetilformamida DMSO - Dimetilsulfóxido Et20 - Dietiléter EtOAc - Acetato de etilo EtOH - Alcohol etílico h - Horas min - Minutos MeOH - Alcohol metílico MsCl - cloruro de metansulfonilo rt - Temperatura ambiente satd - Saturado THF - Tetrahidrofurano General Los reactivos y solventes utilizados más adelante se pueden obtener de fuentes comerciales. Los espectros de XH-NMR se registraron en un espectrómetro Bruker de 400 MHz y NMR de 500 MHz. Los picos significativos se tabularon en el orden: multiplicidad (s, singlete, d, doblete, t, triplete, q, cuartete, m, multiplete; br s, singlete amplio) las constantes de acoplamiento en Hertz (Hz) y los número de protones. Los resultados de la espectrometría de masas se reportan como la proporción de masa sobre cargo, seguida por la abundancia relativa de cada ion (entre paréntesis, el análisis de espectrometría de masas por ionización de electro-rocío (ESI) se condujo en un espectrómetro de masas por electro-rocío LC/ SD Agilent serie 1100. Todos los compuestos se podrían analizar en el modo ESI positivo utilizando acetonitrilo : agua con ácido fórmico al 0.1% según se suministre el solvente. La HPLC analítica en fase inversa se llevó a cabo utilizando una columna 5µ?? Agilent serie 1200 en un Agilent EclipseMR XDB-C18 (4.6 X 150 mm) como la fase estacionaria y eluyendo con acetonitrilo : agua con TFA al 0.1%. La HPLC semi-prep en fase inversa se llevó a cabo utilizando una columna 10 pm C18 Agilent Serie 110Ó en un Phenomenex GéminisMR (250 x 21.20 mm) como la fase estacionaria y eluyendo con acetonitrilo : H20 con TFA ai 0.1%.
Preparación de 4-amino-6-cloro-5-pirimidincarbonitrilo 4, 6-Dicloro-5-pirimidincarbaldehído Una mezcla de D F (64 mL) y P0C13 (200 mL) a 0°C se agitó durante 1 h y luego se trató con 4 , 6-pirimidindiol (50.0 g, 446 mmol) , y se agitó adicionalmente durante 0.5 h a rt. Luego la mezcla heterogénea se calentó bajo reflujo durante 3 h. Los volátiles se retiraron bajo presión reducida, y el residuo se vació en agua con hielo y se extrajo seis veces con Et20. La fase orgánica se lavó con NaHC03 acuoso, agua, se secó sobre Na2SC>4, se concentró bajo presión reducida, y se cristalizó (EtOAc-petróleo éter) para proporcionar el 4 , 6-dicloro-5-pirimidincarbaldehido; LC-MS (ESI) m/z 177 [M+H]+.
Oxlma. de 4, 6-dicloro-5-pirimidincarbaldebído Una mezcla de 4 , 6-dicloro-5-pirimidincarbaidehído (8.00 g, 44.8 mmol), NaOAc (3.7 g, 1.0 eq) y NH20H.HC1 (3.1 g, 1.0 eq) en EtOH (320 mL) se agitó a rt durante 2 h. La mezcla de reacción se filtró, se concentró y se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (carga en seco, primero DCM luego DCM/EtOAc, 1/9) para proporcionar la oxima de 4 , 6-dicloro-5-pirimidincarbaldehído como un sólido blanco. 4, 6-Dlcloro-5-pirimidincarbonitrllo Se disolvió la oxima 4 , 6-dicloro-5-pirimidincarbaldehído (8 g) en CHCI3 (40 mL) y se trató con SOCI2 (6 mL) durante 2 h a rt . El solvente se retiró y el residuo se disolvió en DCM (5 mL) . El sólido resultante se filtró y se lavó con DCM (5 mL) . El filtrado se concentró bajo presión reducida y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice utilizando DCM-hexano (3:1) para proporcionar el 4 , 6-dicloro-5-pirimidincarbonitrilo como un sólido blanco. 4-Amino-6-cloro-5-pirimidincarbón!trilo El sólido blanco de 4 , 6-dicloro-5-pirimidincarbonitrilo (5.82 g, 33.5 mmol) se disolvió en THF (66.9 mL) en un matraz de fondo redondo de 500 mL: y a la mezcla se burbujeó gas de amoniaco (0.570 g, 33.5 mmol) durante 3 min, cada 10 min, durante 50 min del tiempo de reacción con agitación. Justo después del burbujeo del gas de amoniaco, se formó un precipitado blanco (cloruro de amonio) . Después de 50 min, el precipitado se filtró y se lavó con THF (100 mL) . Se agregó gel de sílice al filtrado y se concentró bajo presión reducida. El producto de gel de sílice se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice utilizando 0 a 100% de gradiente de EtOAc en hexano ¡durante 27 min y luego 100% de EtOAC isocrático en hexano durante 20 min como eluyente para proporcionar el 4-amino-6-cloropirimidin-5-carbonitrilo como un sólido blanquecino. El sólido blanquecino se suspendió en EtOAc-hexano (1:1, 20 mL) , se filtró, se lavó con EtOAc-hexano (1:1, 30 mL) , y se secó para proporcionar el 4-amino-6-cloro-5-pirimidincarbonitrilo como un sólido blanco: XH NMR (500 MHz, DMS0-d6) d ppm 7.91- .77 (3H, m) ; LC-MS (ESI) m/z 154.9 [M+H]+.
Preparación de 3-oxo-4- (piridin-2-il)butan-2-ilcarbamato de S) -ter-butilo 1- (Metoxi (metil) amino) -l-oxopropan-2-ilcarbamato de (S) - ter-butilo A una solución de W-Boc-l-alanina (1.0 Kg, 5.29 mol, 1.0 equiv) , en DCM (15 L) se agregó carbonildiimidazol (943 g, 5.81 mol, 1.1 equiv) y la mezcla resultante se agitó durante 1 h a rt. A esta mezcla de reacción se agregó clorhidrato de N, O-dimetilhidroxilamina (577 g, 5.92 mol, 1.12 equiv) y se agitó a rt durante 16 h. La reacción se supervisó utilizando TLC (Observación: para TLC, se utilizó tinción con ninhidrina para visualizar el producto) . Se combinaron otros 800 g del lote con este lote antes del trabajo. Al término se evaporó in vacuo el DCM. El residuo crudo asi obtenido se dividió entre EtOAc (30 L) y agua (10 L) . La capa orgánica luego se lavó con HC1 1N (2 X 1:0.0 L) , NaHC03 satd aq (2 x 15.0 L) , salmuera (5 L), y se secó sobre Na2S04. La capa aq se extrajo nuevamente con EtOAc (3 X 15.0 L) y se repitió el procedimiento de trabajo. La evaporación del solvente in vacuo proporcionó el 1- (metoxi (metil) amino) -l-oxopropan-2-ilcarbamato de (S) -ter-butilo como un sólido blanco . 3-0x0-4- (piridin-2-il)butan-2-ilcarbamfito de (S) -ter- butilo a) Preparación de bromo (piridin-2-ilmetil ) magnesio : A una solución de 2-picolina (467 mL, 4.74 mol, 2.0 equiv) en THF anhidro (3.3 L) bajo atmósfera de N2 a -40°C (baño de acetona/hielo seco) se agregó metil-lito ( 1.6M en Et20, 2.96 L, 4.74 mol, 2.0 equiv) gota a gota durante a periodo de 1 h. Al término de la adición, la mezcla de reacción se dejó calentar a -20°C y se agitó durante 10 minutos. Luego la mezcla de reacción se enfrió nuevamente a -40°C y se agregó bromuro de magnesio (872 g, 4.74 mol, 2.0 equiv) en una porción. Al término de la adición, la mezcla de reacción se dejó calentar a rt y se agitó durante 1 h.' b) Preparación de 3-oxo-4- (piridin-2-il ) butan-2- ilcarbamato de (S) -ter-butilo . El 1- (metoxi (metil) amino) -1- oxopropan-2-ilcarbamato de (S) -ter-butilo (550 g, 2.37 mol, 1.0 equiv) se disolvió en THF anhidro (5.0 L) . A esta solución bajo atmósfera de 2 a -40°C (baño de acetona/hielo seco) se agregó cloruro de isopropilmagnesio (2.0M en THF, 1160 mL, 2.32 mol, 0.98 equiv) gota a gota durante 30 minutos. Después de que se obtuvo una solución clara, la solución del reactivo de Grignard preparada anteriormente se transfirieron también por vía cánula a esta solución durante 2 h.
Al término de la adición, a la mezcla de reacción se dejó calentar a rt y se agitó durante la noche. La reacción se supervisó utilizando LCMS . Al término, la mezcla de reacción se enfrió a -10°C y se inactivo con cloruro de amonio satd aq (8.0 L) . La mezcla de reacción cruda luego se extrajo con EtOAc (2 x 15.0 L) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (6.0 L) , salmuera (2.0 L) , se secaron sobre Na2S04, y se concentraron in vacuo. El residuo crudo luego se combinó con otros 540 g del lote y se purificó utilizando cromatografía en columna eluyendo con EtOAc/hexano (20:80 a 40:60) para proporcionar el 3-oxo-4- (piridin-2- il) butan-2-ilcarbamato de (S) -ter-butilo como un ' aceite castaño rojizo: LC-MS (ESI) m/z 265.1 [M+H]+.
Ejemplo 1: 4-Amino-6- ( ( (1S) -1- (6-fluoro-3 , 4-di-2- piridinil-2-quinolinil) -etil) amino) -5- pirimidincarbonitrilo y 4-Amino-6- (( (IR) -1- (6-fluoro-3 , 4- di-2-piridinil-2-quinolinil) etil) amino) -5- pirimidincarbonitrilo 2-Amino-5-fl oro-N-metoxi-N-metilbenzamida A una mezcla a 0°C de N, N-diisopropiletilamina (13.47 mL, 77 mmol) y clorhidrato de N, O-dimetilhidroxilamina (7.55 g, 77 mmol) en CHC13 (117 mL) se agregó ácido 2-amino-5-fluorobenzoico (10.00 g, 64.5 mmol) seguido por EDC (12.36 g, 64.5 mmol). La reacción se agitó de 0°C hasta rt. Después de 22 h, la mezcla se diluyó con DCM (100 mL) y se lavó con NaHC03 satd aq (1 X 100 mL) , salmuera (1 x 100 mL) , y se secó sobre Na2S04. La solución se filtró y se concentró iri vacuo para proporcionar el material crudo como un jarabe castaño. El material crudo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de 0% a 100% de EtOAc en hexano, para proporcionar la 2-amino-5-fluoro-N-metoxi-N-metilbenzamida como un aceite amarillo: 1H NMR (400 MHz, D SO-d6) d ppm 6.97-7.04 (2H, m) , 6.72 (1H, dd, J=9.4, 4.9 Hz), 5.22 (2H, s), 3.54 (3H, s), 3.22 (3H, s) ; LC-MS (ESI) m/z 199.0 [M+H]+. (2-Amino-5-fl orofen±l) (piridin-2-il)metémona A una solución a -78°C de 2-amino-5-fluoro-N-metoxi-N-metilbenzamida (9.40 g, 47.4 mmol) en THF (39.5 mL) se agregó cloruro isopropilmagnesio 2.0M en THF (47.4 mL, 94.8 mmol) a -40°C. La solución se dejó aumentar a -10°C durante 40 min luego se disminuyó de regreso a -40 °C en un baño de acetonitrilo/hielo seco. A la mezcla enfriada se agregó bromuro de 2-piridilmagnesio, 0.25 en THF (209 mL, 52.2 mmol) y la mezcla se dejó calentar a rt . Después de 22 h, la reacción se diluyó con DCM (200 mL) y se inactivo con solución de cloruro de amonio satd (200 mL) . La capa aq se extrajo con DCM (2 x 100 mL) . El extracto orgánico se secó sobre Na2S04. La solución se filtró y se concentró in vacuo. El material crudo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de 0% a 100% de EtOAc en hexano, para proporcionar la (2-amino-5-fluorofenil) (piridin-2-il) metanona como un sólido naranja: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.65-8.72 (1H, m) , 8.02 (1H, td, J=7.7, 1.8 Hz), 7.79 (1H, dt, J=7.8, 1.0 Hz) , 7.60 (1H, ddd, J=7.6, 4.9, 1.2 Hz), 7.29-7.36 (1H, m) , 7.18-7.29 (3H, m) , 6.88 (1H, dd, J=9.2, 4.7 Hz) ; LC-MS (ESI) m/z 217.0 [M+H]+. 1- (6-Fluoro-3, 4-di (piridin-2-il) cpiinolln-2- ±1) etilcarbamato de ter-butílo Una mezcla de 3-oxo-4- (piridin-2-il ) butan-2- ilcarbamato (S) -ter-butilo (0.427 g, 1.615 mmol) , (2-ámino-5- fluorofenil) (piridin-2-il) metanona (0.384 g, 1.777 mmol), y tetraclorolaurato (III) de sodio dihidratado (0.032 g, 0.081 mmol) en 2-propanol (9.50 mL) se calentó bajo reflujo. Después de 71 h, la mezcla se enfrió a rt y se evaporó hasta secar. La mezcla se disolvió en DCM (50 mL) y se lavó con salmuera (1 x 50 mL) , y se secó sobre Na2S04. La solución se filtró y se concentró in vacuo para proporcionar el material crudo. El material crudo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de 0% a 50% de EtOAc en hexano, para proporcionar el l-(6-fluoro-3, 4-di (piridin-2-il) quin-olin-2-il) etilcarbamato de ter-butilo (0.423 g, 0.952 mmol, 58.9% de rendimiento) como un sólido espeso naranja: LC-MS (ESI) m/z 445.1 [M+H]+. El sólido espeso naranja se utilizó sin purificación adicional. Durante la condensación se presentó una epimerización. 1- (6-Fluoro-3, 4-di (plridin-2-11) qainol±n-2-±l) etanamina Una mezcla de 1- ( 6-fluoro-3, 4-di (piridin-2- il ) quinolin-2-il ) etilcarbamato de ter-butilo (0.4146 g, 0.933 mmol) se disolvió en ácido clorhídrico, solución 4 M en 1,4-dioxano (4.66 mL, 18.65 mmol) y la mezcla se agitó a rt . Después de 3.5 h, la mezcla se dividió entre DCM (50 mL) y agua (50 mL) . La mezcla aq ácida se lavó con DCM (30 mL x 2) para eliminar las impurezas orgánicas y luego se basificó a pH -10 con NaOH ION (3.5 mL) , se extrajo con DCM (50 mL X 3) . Las capa orgánicas combinadas se lavaron con agua (100 mL x 1), salmuera (100 mL x 1), se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron in vacuo para proporcionar la 1-(6-fluoro-3, 4-di (piridin-2-il) quinolin-2-il) etanamina' como un jarabe naranja: LC-MS (ESI ) m/z 345.1 [M+H]+. El jarabe naranja prosiguió en crudo sin purificación adicional. 4-Amino-6- ( (1- (6-fluoro-3, 4-dl-2-pirldinll-2- qulnollnll) etil) amlno) -5-plrimidincarbonitrxlo Una mezcla de 4-amino-6-cloropirimidin-5-carbonitrilo (0.144 g, 0.932 mmol) , 1- ( 6-fluóro-3 , 4-di (piridin-2-il) quinolin-2-il) etanamina (0.321 g, 0.932 mmol), y N, N-diisopropiletilamina (0.812 mL, 4.66 mmol) en 1-butanol (9.32 mL) se agitó a 120°C. Después de 4.5. h, la mezcla se enfrió a rt y se concentró in vacuo para proporcionar un jarabe rojo. Al jarabe rojo se agregó agua (50 mL) con sonicación. El precipitado resultante se recolectó mediante filtración, se lavó con agua, y se secó con aire para proporcionar un sólido castaño. El sólido se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente of 0% a 50% de DCM : MeOH : -NH40H (89:9:1) en DCM, para proporcionar a sólido castaño. El sólido se suspendió en DCM-hexano (1:5, 10 mL) , se sónico, se filtró, y se lavó con DCM-hexano (1:5, 20 mL) para proporcionar el 4-amino-6- ( ( 1- ( 6-fluoro-3, 4-di-2-piridinil-2-quinolinil) -etil) amino) -5-pirimidincarbonitrilo como un sólido color canela: XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.63 (1H, d, J=4.5 Hz) , 8.57 (1H, d, J=4.5 Hz) , 8.21 (1H, dd, J=9.2, 5.5 Hz), 7.92 (1H, s), 7.75-7.83 (1H, m) , 7.69 (1H, td, J=7.7, 1.6 Hz), 7.56-7.65 (2H, m) , 7.33 (1H, ddd, J=7.6, 4.9, 1.2 Hz), 7.20-7.30 (3H, m) , 7.07-7.17 (3H, m) , 5.39-5.55 (1H, m) , 1.36 (3H, d, J=4.5 Hz); LC-MS (ESI) m/z 463.0 [M+H]+. 4-Amino-6- ( ( (1S) -1- (6-fluoro-3, 4-di-2-piridinil-2- quinolinil) etil) amino) -5-pirimidincarbonitrilo y 4-Amino- 6- ( ( (IR) -1- (6-fluoro-3, 4-di-2-piridinil-2- q inolinil) etil) amino) -5-pirimidincarbonitrilo La mezcla racémica (243.48 g) se separó en una comuna AD-H utilizando SFC.
Fracción 1: 4-amino-6- ( ( (1S) -1- (6-fluoro-3, 4-di-2-piridinil-2-quinolinil) -etil) amino) -5-pirimidincarbonitrilo (0.0648 g, 0.140 mmol, 26.6% de rendimiento) como un sólido color canela: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.54-8.66 (2H, m) , 8.21 (1H, dd, J=9.3, 5.6 Hz), 7.92 (1H, s), 7!.76-7.83 (1H, m) , 7.69 (1H, td, J=7.7, 1.6 Hz) , 7.57-7.64 (2H, m) , 7.33 (1H, ddd, J=7.6, 4.9, 1.2 Hz) , 7.20-7.30 (3H, m) , 7.08-7.17 (3H, m) , 5.41-5.53 (1H, m) , 1.36 (3H, d, J=4.7 Hz) ; LC-MS (ESI) m/z 463.0 [M+H]+.
Fracción 2: 4-amino-6- ( ( (lR)-l-(6-fluoro-3,4-di-2-piridinil-2-quinolinil ) etil) -amino) -5-pirimidincarbonitrilo como un sólido blanquecino: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.54-8.66 (2H, m) , 8.21 (1H, dd, J=9.2, 5.5 Hz), 7.92 (1H, s), 7.80 (1H, td, J=8.8, 2.8 Hz) , 7.69 (1H, td, J=7;.7 , 1.6 Hz), 7.57-7.66 (2H, m) , 7.31-7.36 (1H, m) , 7.19-7.30 (;3H, m) , 7.08-7.17 (3H, m) , 5.41-5.53 (1H, m) , 1.36 (3H, d, J=4:.5 Hz) ; LC-MS (ESI) m/z 463.0 [M+H]+.
Ejemplo 2: 4-Amino-6- ( ( (1S) -1- (6-fluoro-4- (5-metil-l , 3 , 4- oxadiazol-2-il) -3- (2-piridinil) -2-quinolinil) etil) amino) - 5-pirimidincarbonitrilo y 4-Ainino-6- ( ( (IR) -1- (6-fluoro-4- (5-metil-l , 3 , -oxadiazol-2-il) -3- (2-piridinil) -2- : quinolinil) etil) amino) -5-pirijaddincarbonitrilo Ácido de ter-butoxicarbonilamino) etil) -6-fluoro-3- (piridin-2-il) quinolin-4-carboxílico 3-OXO-4- (piridin-2-il) butan-2-ilcarbamato de (S)-ter-butilo (910 g, 3.44 mol, 1.0 equiv) y 5-fluoroisatina (597 g, 3.62 mol, 1.05 equiv) se disolvieron en etanol/H20 (1:1, 6.0 L cada) . A esta solución se agregaron gránulos de KOH (609 g, 10.84 mol, 3.15 equiv). La mezcla de reacción luego se calentó a 82°C (temperatura interna) durante la noche. La reacción se supervisó utilizando LCMS. Al término, la mezcla de reacción se enfrió y se evaporó in vac o para retirar el etanol. La capa aq luego se lavó con DCM (3 x 4.0 L) y se acidificó utilizando HCL concd a pH 4. (El procedimiento de acidificación prosiguió de la siguiente forma: La capa aq se extrajo en un matraz de boca ancha montado con un agitador mecánico y un medidor de pH y el matraz se enfrió utilizando un baño de agua helada. A esta solución enfriada se agregó lentamente HCL conc. Para suprimir el calor y los vapores, al interior de la solución se agregaron periódicamente pequeñas porciones de hielo triturado. Durante la adición del HC1 conc. se precipitó un sólido amarillo) . El sólido amarillo resultante se filtró inmediatamente, se lavó completamente con agua (3 X 1.0 L) , se trituró con metanol (3 x 1.0 L) , (Observación: la solubilidad del producto en metanol es muy baja) luego con hexanos (2.0 L) , y se secó bajo alto vacio a 60°C para obtener el ácido 2- (1- (ter-butoxicarbonilamino) etil) -6- fluoro-3- (piridin-2-il) quinolin-4-carboxilico como un sólido blanco cremoso: H NMR (300 MHz, DMSO-d6) : d 1.10 (s, 2H) , 1.21 (d, J= 6.3 Hz, 3H) , 1.30 (s, 7H) , 4.82-4.89 (m, 1H) , 7.10 (d, J= 7.5 Hz, 1H) , 7.45-7.49 (m, 1H) , 7.56-7.61 (m, 2H) ,7.76-7.83 (td, J= 3.0 Hz, 1H) , 7.93-7.99 (td, J= 2.0 Hz, 1H) , 8.16-8.21 (m, 1H) , 8.71 (d, J= 4.8 Hz, 1H) ; LCMS (ESI) m/z 412.2 [M+H]+. 1- (4- (2-acetllhidrazlncarbonil) -6-fluoro-3- (plrldin-2- ±1) qainol±n-2-±l) etilcarbamato de tez-butilo Una solución de ácido 2-.(l-(ter-butoxicarbonilamino) etil) -6-fluoro-3- (piridin-2-il ) quinolin-4-carboxilico (2.011 g, 4.89 mmol) e hidrazida acética (0.543 g, 7.33 mmol) en DCM (10.99 mL) y DMF (1.222 mL) se trató a 0°C con clorhidrato de 1- ( 3-dimetilaminopropil ) -3-etilcarbodiimida (EDC.HC1) (2.81 g, 14.66 mmol), 3H- [l,2,3]triazol[4,5-b]piridin-3-ol (HOAt) (1.995 g, 14.66 mmol), y bicarbonato de sodio (1.232 g, 14.66 mmol) sucesivamente a 0°C. Luego la reacción se agitó a rt . Después de 15 h, la reacción se dividió entre DCM (100 mL) y LiCl aq 1.0 M (100 mL) . La capa aq separada se extrajo con DCM (1 X 100 mL) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con LiCl aq 1.0 M (100 mL) , se secaron sobre MgS04 y se concentraron in vacuo. El material crudo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de 0% a 50% EtOAc en hexano, para proporcionar el 1- (4- (2-acetilhidrazincarbonil) -6-fluoro-3- (piridin-2- il) quinolin-2-il) etil-carbamato de ter-butilo como un sólido blanquecino: XH N R (400 MHz , DMSO-d6) d ppm 10.44 (1H, s) , 9.81 (1H, s), 8.69 (1H, d, J=4.7 Hz) , 8.37 (1H, dd, J=10.4, 2.7 Hz), 8.16 (1H, dd, J=9.2, 5.5 Hz) , 7.93 (1H, td, J=7.7, 1.8 Hz), 7.77 (1H, td, J=8.8, 2.7 Hz), 7.56 (1H, d, J=7.6 Hz), 7.47 (1H, dd, J=7.0, 5.3 Hz) , 7.02 (1H, d, J=7.6 Hz) , 4.70-4.82 (1H, m) , 1.87 (3H, s) , 1.31 (9 H, s) , 1.22 (3H, d, J=6.7 Hz); LC-MS (ESI) m/z 468.1 [M+H]+. 1- (6-fl oro-4- (5-metil-l, 3, 4-oxadiazol-2-il) -3- (piridin-2 il) quinolin-2-il) etilcarbamato de ter-butilo Una solución de 1- ( 4- (2-acetilhidrazincarbonil ) -6- fluoro-3- (piridin-2-il) quinolin-2-il) etilcarbamato dé ter- butilo (0.553 g, 1.183 mmol) y reactivo de Burgess (1.128 g, 4.73 rtimol) en dicloroetano (11.83 mL) se calentó: en el microondas a 120°C durante 1 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua (50 mL) y se extrajo con DCM (2 x 50 mL) . Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera (1 x 50 mL) , se secó sobre Na2S04, se filtraron, y se concentraron in vacuo para proporcionar el producto crudo. El material crudo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con un gradiente de 0% a 100% EtOAc en hexano, para proporcionar el 1- (6-fluoro-4- (5-metil-l, 3, 4-oxadiazql-2-il) -3- (piridin-2-il) quinolin-2-il) etilcarbamato de ter-butilo como un sólido rosa: 1ti NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.61 (1H, d, J=4.3 Hz), 8.22-8.32 (1H, m) , 7.80-7.92 (3H, m) , 7.36-7.49 (2H, m) , 7.17 (1H, d, J=7.0 Hz) , 4.88 (1H, t, J=7.1 Hz) , 2.34 (3H, s), 1.22-1.38 (12 H, m) ; LC-MS (ESI) m/z 450.1 [M+H]+. 1- (6-Fluoro-4- (5- etll-l, 3, 4-oxadlazol-2-±l) -3- (p±r±d±n-2- ±1) qulnolin-2-11) etanamina Una mezcla de 1- ( 6-fluoro-4- ( 5-metil-l , 3 , 4- oxadiazol-2-il) -3- (piridin-2-il) quinolin-2-il) etilcarbamato de ter-butilo (0.252 g, 0.561 mmol) en DCM (1.121 mL) y ácido clorhídrico, solución 4M en 1,4-dioxano (2.80 mL, 11.21 mmol) se agitó a rt. Después de 24 h, la mezcla se dividió entre DCM (50 mL) y agua (50 mL) . La mezcla aq ácida se lavó con DCM (30 mL x 2) para eliminar las impurezas orgánicas. La capa aq se basificó a pH ~13 con NaOH ION (1 mL) y se extrajo con DCM (50 mL x 3) . Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (100 mL x 1), se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron in vacuo para proporcionar la 1-(6-fluoro-4- (5-metil-l, 3, 4-oxadiazol-2-il) -3- (piridin-2-il ) -quinolin-2-il) etanamina como un sólido blanquecino: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.60-8.65 (1H, m) , 8.24-8.31 (1H, m) , 7.80-7.91 (3H, m) , 7.41-7.49 (2H, m) , 4.03 (1H, q, J=6.6 Hz), 2.34 (3H, s), 2.03 (2H, br. s.), 1.24 (3H, d, J=6.7 Hz) ; LC-MS (ESI) m/z 350.0 [ +H]+. El sólido prosiguió en crudo sin purificación adicional. 4-Amino-6- ( (1- (6-fluoro-4- (5-metll-l, 3, 4-oxad±azol-2-±l) - 3- (2-plrldlnll) -2-qa±nol±n±l) etil) amino) -5- pirimidincaxbonitrilo Una mezcla de 4-amino-6-cloropirimidin-5- carbonitrilo (0.030 g, 0.192 mmol) , 1- (6-fluoro-4- (5-metil-1,3, 4-oxadiazol-2-il) -3- (piridin-2-il ) quinolin-2-il ) -etanamina (0.067 g, 0.192 mmol) , y N, -diisopropiletilamina (0.167 mL, 0.959 mmol) en 1-butanol (1.918 mL) se agitó a 120°C. Después de 20 h, la mezcla se retiró del calor y a la mezcla enfriada se agregó agua (50 mL) y DC (50 mL) . La capa orgánica se concentró in vacuo para proporcionar el material crudo como un sólido amarillo claro. El sólido amarillo claro se absorbió sobre un tapón de gel de sílice y se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de. sílice eluyendo con un gradiente de 0% a 50% DC : MeOH : NH4OH (89:9:1) en DCM, para proporcionar el 4-amino-6- ( (1- ( 6-fluoro-4- (5-rnetil-1, 3, 4-oxadiazol-2-il ) -3- (2-piridinil) -2-quinolinil) etil) amino) -5-pirimidincarbonitrilo como un sólido blanquecino: XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.56-8.62 (1H, m) , 8.22-8.29 (1H, m) , 7.85-7.93 (3H, m) , 7.82 (1H, td, J=7.7, 1.8 Hz) , 7.58 (1H, d, J=7.2 Hz) , 7.42-7.47 (;1H, m) , 7.38 (1H, ddd, J=7.6, 4.9, 1.2 Hz) , 7.24 (2H, br. s.;), 5.54 (1H, quin, J=6.7 Hz) , 2.34 (3H, s) , 1.39 (3H, d, J=6.7 Hz) ; LC-MS (ESI) m/z 468.1 [M+H]+. 4-Amino-6- ( ( (1S) -1- (6-fluoro-4- (5-metil-l, 3, 4-oxadiazol-2- il) -3- (2-piridinil) -2-qainolinil) etil) mino) -5- pirimidincarbonitrilo y 4-Amino-6- ( ( (IR) -1- (6-flúoro-4- (5- metil-1, 3, 4-oxadiazol-2-il) -3- (2-piridinil) -2- qainolinil) etil) amino) -5-pirimiclincarbonitrilo La mezcla racémica (63.2 mg) se separó utilizando SFC.
Fracción 1 : 4-amino-6- ( ( ( 1S) -1- ( 6-fluoro-4- (5-metil-l, 3, 4-oxadiazol-2-il ) -3- (2-piridinil) -2-quinolinil) etil) amino) -5-pirimidincarbonitrilo como u sólido color canela: 1ti NMR (400 MHz , DMSO-d6) d ppm 8.59 (1H, dt, J=4.4, 1.1 Hz), 8.22-8.30 (1H, m) , 7.85-7.93 (3H, m) , 7.82 (1H, td, J=7.7, 1.8 Hz), 7.58 (1H, d, J=7.0 Hz), 7.45 (1H, d, J=7.8 Hz), 7.38 (1H, ddd, J= .6, 4.9, 1.0 Hz) , 7.24 (2H, br. s.), 5.49-5.60 (1H, m) , 2.34 (3H, s) , 1.39 (3H, d, J=6.7 Hz) ; LC- S (ESI) m/z 468.1 [M+H]+. . .
Fracción 2: 4-amino-6- (( (IR) -1- (6-fluoro-4- (5-metil-1, 3, 4-oxadiazol-2-il ) -3- (2-piridinil ) -2- quinolinil ) etil ) amino) -5-pirimidincarbonitrilo como un sólido color canela: XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.57-8.62 (1H, m) , 8.22-8.29 (1H, m) , 7.85-8.00 (3H, m) , 7.82 (1H, td, J=7.7, 1.8 Hz), 7.58 (1H, d, J=7.2 Hz) , 7.45 (1H, d, J=7.8 Hz), 7.38 (1H, ddd, J=7.6, 4.9, 1.0 Hz), 7.24 (2H, br. s.), 5.54 (1H, quin, J=6.7 Hz) , 2.34 (3H, s) , 1.39 (3H, d, J=6.7 Hz); LC-MS (ESI) m/z 468.1 [M+H]+.
Ejemplo 3; 4-amino-6- (( (1S) -1- (6-fluoro-4- (3-metil-l , 2 , 4- oxadiazol-5-il) -3- (2-piridinil) -2-quinolinil) etil) amino) - 5-pirimidincarbonitrilo y -Amino-6- ( ( (IR) -1- (6-fluoro-4- (3-metil-l , 2 , 4-oxadiazol-5-il) -3- (2-piridinil) -2- quinolinil) etil) amino) -5-pirimidincarbonitrilo 1- (6-Fluoro-4- (3-metil-l,2, 4-oxadiazol-5-il) -3- (piridin-2- il) quinolin-2-il) etilcarbamato de ter-Jbutilo A una solución de ' -hidroxiacetimidamida (0.081 g, 1.093 mmol) y tamices moleculares 4Á (polvo, 0.3 g) en THF (3.64 mL) se agregó hidruro de sodio al 60% en aceite mineral (0.109 g, 2.73 mmol) a rt y la mezcla se agitó a 50°C.
Después de ser agitada a 50°C durante 30 min, se agregó una solución de 2- (1- (ter-butoxicarbonilamino) etil) -6-fluoro-3-(piridin-2-il) quinolin-4-carboxilato de metilo (0.233 g, 0.547 mmol) en THF (1.822 mL) . La mezcla se calentó bajo reflujo. Después de 3 h, la mezcla se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de CeliteMR y la almohadilla se lavó con DCM (2 x 100 mL) . El filtrado orgánico se lavó con agua (100 mL) , se secó sobre ajSO^, se filtró, y se concentró in vacuo para proporcionar el l-(6-fluoro-4- (3-metil-l, 2, 4-oxadiazol-5-il ) -3- (piridin-2-il ) quinolin-2-il ) etilcarbamato de ter-butilo corno un jarabe amarillo claro: XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.60 (1H, d, J=4.5 Hz), 8.28 (1H, dd, J=9.3, 5.6 Hz) , 7.83-7.94 (2H, m) , 7.76 (1H, dd, J=10.0, 2.7 Hz) , 7.38-7.51 (2H, m) , 7.18 (1H, d, J=7.2 Hz), 4.89 (1H, quin, J=6.7 Hz) , 2.38 (3H, s),, 1.21-1.35 (12 H, m) ; LC-MS (ESI) m/z 450.1 [M+H] + . El jarabe amarillo claro prosiguió en crudo sin purificación para el siguiente paso. 1- (6-Fluoro-4- (3-metil-l, 2, 4-oxadiazol-5-il) -3- (pxridin-2- il) qainolin-2-il) etanamina Una mezcla de 1- (6-fluoro-4- ( 3-metil-l, 2 , 4-oxadiazol-5-il) -3- (piridin-2-il) quinolin-2-il ) etilcarbamato de ter-butilo (0.246 g, 0.547 mmol) en DCM (1.095 mL) y ácido clorhídrico, solución 4M en 1,4-dioxano (2.74 mL, 10.95 mmol) se agitó a rt. Después de 2.5 h, la mezcla se dividió entre DCM (50 mL) y agua (50 mL) . La mezcla aq ácida se lavó con DCM (30 mL x 2) para eliminar las impurezas orgánicas. La capa aq se basificó a pH ~13 con NaOH ION (1.5 mL) y se extrajo con DCM (50 mL x 3) . Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (100 mL X 1) , se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron in vacuo para proporcionar la 1- ( 6-fluoro-4- (3-metil-l, 2, 4-oxadiazol-5-il) -3- (piridin-2-il ) -quinolin-2-il ) etanamina como un jarabe amarillo claro: 1H NMR (400 Hz, DMSO-de) d ppm 8.59-8.64 (1H, m) , 8.29 (1H, dd, J=9.3, 5.6 Hz), 7.83-7.92 (2H, m) , 7.76 (1H, dd, J=10.0, 2.7 Hz), 7.50 (1H, d, J=7.8 Hz), 7.44 (1H, ddd, J=7.6, 4:.9, 1.2 Hz), 4.03 (1H, q, J=6.7 Hz), 2.38 (3H, s), 2.03 (2H, br . s.), 1.24 (3H, d, J=6.5 Hz); LC-MS (ESI) m/z 350.1 [M+H] + . El jarabe amarillo claro prosiguió en crudo sin purificación para el siguiente paso. 4-Amino-6- ( (1- (6-fl oro-4- (3-metil-l,2, 4-oxad±azol-5-±l) - 3- (2~pirldlnll) -2-qainollnil) etil) amino) -5- pirimidincarhonitrilo Una mezcla de 4-amino-6-cloropirimidin-5-carbonitrilo (0.068 g, 0.440 mmol) , 1- ( 6-fluoro-4- ( 3-metil- 1,2, 4-oxadiazol-5-il) -3- (piridin-2-il ) quinolin-2-il) - : etanamina (0.1536 g, 0.440 mmol), y n, n-diisopropiletilamina (0.383 mL, 2.198 mmol) en 1-butanol (4.40 mL) se agitó a 120°C. Después de 14.5 h, la mezcla se retiró del calor y a la mezcla enfriada se agregó agua (50 mL) y DCM (50 mL) . La capa orgánica se secó sobre Na2S04, se filtró, y se concentró in vacuo para proporcionar el material crudo. El material crudo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de 0% a 50% DCM : eOH : NH4OH (89:9:1) en DCM, para proporcionar como un sólido color canela. El sólido color canela se suspendió en DCM-hexano (1:1) y se filtró para proporcionar el 4-amino-6-( (1- (6-fluoro-4- (3-metil-l, 2, 4-oxadiazol-5-il) -3- (2-piridinil) -2-quinolinil ) etil) amino) -5-pirimidincarbonitrilo como un sólido blanco: 1H NMR (400 MHz, D S0-d6) d ppm 8.55-8.62 (1H, m) , 8.27 (1H, dd, J=9.2, 5.5 Hz), 7.86-7.93 (2H, m) , 7.76 -7.85 (2H, m) , 7.58 (1H, d, J=7.0 Hz), 7^.44-7.51 (1H, m) , 7.37 (1H, ddd, J-7.6, 4.9, 1.0 Hz) , 7.23 (2H, br . s.), 5.55 (1H, quin, J=6.7 Hz), 2.38 (3H, s), 1.39 (3H, d, J=6.7 Hz); LC-MS (ESI) m/z 468.1 [M+H]+. 4-Amino-6- ( ( (1S) -1- (6-fluoro-4- (3-metil-l, 2, 4-oxadiazol il) -3- (2-plrldlnil) -2-q .inolinil) etil) amino) -5- piri idincarbonitrilo y 4-amino-6- ( ( (IR) -1- (6-fluoro-4 metil-1,2, 4-oxadiazol-5-il) -3- (2-piridinil) -2- cpiinolinil) etil) amino) -5-pirimidincarbonitrilo La mezcla racémica (0.163 g) se separó utilizando SFC.
Fracción 1: 4-Amino-6- ( ( (1S) -1- (6-fluoro-4- (3-metil-1, 2, 4-oxadiazol-5-il ) -3- (2-piridinil) -2-quinolinil) etil) amino) -5-pirimidincarbonitrilo como un sólido blanquecino: 1ti NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.55-8.61 (1H, m) , 8.27 (1H, dd, J=9.3, 5.6 Hz) , 7.86-7.93 (2H, m) , 7.76-7.85 (2H, m) , 7.58 (1H, d, J=7.0 Hz) , 7.48 (1H, d, J=7.8 Hz) , 7.37 (1H, ddd, J=7.6, 4.9, 1.0 Hz) , 7.23 (2H, br . s.), 5.55 (1H, quin, J=6.8 Hz) , 2.38 (3H, s) , 1.39 (3H, d, J=6.7 Hz) ; LC- S (ESI) m/z 468.1 [M+H]+.
Fracción 2: 4-amino-6- (( (IR) -1- (6-fluoro-4- (3-metil-1, 2, -oxadiazol-5-il ) -3- (2-piridinil) -2-quinolinil) etil) amino) -5-pirimidincarbonitrilo como un sólido blanquecino: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.55-8.61 (1H, m) , 8.27 (1H, dd, J=9.3, 5.6 Hz), 7.86-7.93 (2H, m)', 7.76- 7.85 (2H, m) , 7.58 (1H, d, J=7.0 Hz) , 7.48 (1H, d, J=7.8 Hz) , 7.37 (1H, ddd, J=7.6, 4.9, 1.0 Hz) , 7.23 (2H, br. s.), 5.49- 5.59 (1H, m) , 2.38 (3H, s) , 1.39 (3H, d, J=6.8 Hz) ; LC-MS (ESI) m z 468.1 [M+H]+.
Ejemplo 4: -amino-6- ( ( (1S) -1- (6-fluoro-4- (3-metil-2- piridinil) -3- (2-piridinil) -2-quinolinil) etil) amino) -5- pirimidincarbonitrilo y 4-amino-6- ( ( (IR) -1- (6-fluoro-4- (3- metil-2-piridinil) -3- (2-piridinil) -2- quinolinil) etil) amino) -5-pirimidincarbonitrilo (2-Amino-5-fluorofenil) (3-metilpiridin-2-il)metanona A una solución de 2-amino-5-fluoro-N-metoxi-N-metilbenzamida (1.0 g, 5.05 mmol) en THF (4.2 mL) se agregó cloruro de isopropilmagnesio (2.0M en THF, 5.0 mL, 10.1 mmol) a -40°C. La temperatura se dejó aumentar a -10°C durante 40 min luego se disminuyó a -40 °C en un baño de acetonitrilo/hielo seco. Se agregó gota a gota bromuro de 3-metil-2-piridinilmagnesio (0.25M en THF, 20.2 mL, 5.0 mmol) y la solución se dejó aumentar a rt durante una hora. La solución se dividió entre una solución satd con cloruro de amonio y DCM; los extractos orgánicos se concentraron, luego se purificaron mediante cromatografía en columna de : gel de sílice eluyendo con un gradiente de 10-70% EtOAc en hexano para proporcionar la 2-amino-5-fluorofenil ) (3-metilpiridin-2-il)metanona como un aceite amarillo: LC- S (ESI) m/z 231.2 [M+H]+. 1- (6-£luoro-4- (3-metilp±ridin-2-±l) -3- (pirldin-2- 11) q lnolln-2-11) etilcarbamato de ter-butllo: Una solución de (2-amino-5-fluorofenil) (3-metilpiridin-2-il) metanona (0.29 g, 1.26 mmol) , 3-oxo-4- (piridin-2-il ) butan-2-ilcarbamato de ( S) -ter-butilo (0.366 g, 1.386 mmol) , y tetraclorolaurato (III) de sodio dihidratado (0.025 g, 0.063 mmol) en 2-propanol (5.0 mL) se agitó a 80°C durante 24 h bajo una atmósfera de argón, luego a temperatura ambiente durante 48 h adicionales. La solución se purificó mediante cromatografía en columna de gel de silice eluyendo con un gradiente de 10-40% EtOAc en hexano para proporcionar el 1- (6-fluoro-4- (3-metilpiridin-2-il) -3- (piridin-2-il) quinolin-2-il) etilcarbamato de ter-butilo como un' sólido oscuro: LC-MS (ESI) m/z 459.2 [M+H]+. 4-Ami ??-6- (1- (6-fluoro-4- (3-metilpir±din-2-±l) -3- (plridin- 2-11) quinolin-2-il) etilamino)pirimid±ne-5-carbon±tr±lo ? una solución de 1- ( 6-fluoro-4- (3-metilpiridin-2-il) -3- (piridin-2-il) -quinolin-2-il) etilcarbamato de ter-butilo (0.23 g, 0.50 mmol) en DCM (5 mL) se agregó ácido trifluoroacético (0.97 mL, 12.5 mmol) y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante una hora. La solución se concentró bajo presión reducida, luego se diluyó con 1-butanol (2.5 mL) seguido por la adición de 4-amino-6-cloropirimidin-5-carbonitrilo (0.082 g, 0.53 mmol) y diisopropil-etilamina (0.26 mL, 1.51 mmol) y 4-amino-6-cloropirimidin-5-carbonitrilo (0.082 g, 0.53 mmol) . La solución se agitó a 120°C durante 3 h luego se intentó la purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con 0-100% (1:10:90 NH4OH : MeOH : DCM) en DCM) . El sólido crudo resultante se volvió a purificar mediante cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo ' con un gradiente de 0-7% MeOH en DCM para proporcionar una me.zcla de (R) y (S) -4-amino-6- (1- (6-fluoro-4- (3-metilpiridin-2-il) -3-(piridin-2-il) quinolin-2-il ) etilamino) pirimidin-5-carbonitrilo como un cristal amarillo: LC- S (ESI) m/z 477.2 [M+H]+. 4-Amino-6- ( ( (1S) -1- (6-fl oro-4- (3-metil-2-piridinil) -3- (2- piridinil) -2-quinolinil) etil) amino) -5- plrimidincarbonitrllo y 4-Amino-6- ( ( (IR) -1- (6-fl oro-4- (3- metil-2-piridinil) -3- (2-piridinil) -2- quinolinil) etil) amino) -5-pirimidincarbonitrilo La mezcla de enantiómeros (0.075 g) se separó quiralmente utilizando SFC para proporcionar cuatro fracciones correspondientes a dos enantiómeros y sus atropisómeros respectivos.
Fracción 1: 4-amino-6- ( ( ( 1S) -1- ( 6-fluoro-4- (3-metil-2-piridinil) -3- (2-piridinil) -2-quinolinil ) etil) amino) -5-pirimidincarbonitrilo: XH NMR (400 Hz, DMSO-d6) d ppm 1.23 (d, J=6.65 Hz, 3H) , 1.78 (s, 3H) , 5.65 (quin, J=6.26 Hz, 1H) , 6.80 (dd, J=9.68, 2.84 Hz, 1H) , 7.12 (d, J=7.82 Hz, 1H) , 7.23-7.32 (m, 2H) , 7.35 (br. s., 2H) , 7.54-7.67 (m, 2H) , 7.74 (d, J=7.04 Hz, 1H), 7.83 (td, J=8.75, 2.84 Hz, 1H) , 8.01 (s, 1H), 8.23 (dd, J=9.29, 5.38 Hz, 1H) , 8.48 (d, J=4.11 Hz, 1H) , 8.60 (d, J=4.11 Hz, 1 H) . LC-MS (ESI) m/z 477.2 [M+H] + .: Fracción 2: -amino-6- ( ( ( IR) -1- ( 6-fluoro-4- (3-metil-2-piridinil ) -3- (2-piridinil) -2-quinolinil ) etil) amino) -5-pirimidincarbonitrilo: XH NMR (400 Hz, DMSO-d6) d ppm 1.52-1.69 (m, 3H), 1.93 (s, 3H) , 5.55 (quin, J=6.75 Hz, 1H) , 6.86 (dd, J=9.78, 2.74 Hz, 1H) , 7.13-7.45 (m, 5H) , 7.60-7.75 (m, 3H) , 7.83-7.93 (m, 1H) , 7.96 (s, 1H) , 8.34 (dd, J=9.19, 5.48 Hz, 1H), 8.56 (d, J=3.91 Hz, 1H) , 8.62 (d, J=4.30 Hz, 1 H) . LC-MS (ESI) m/z 477.2 [M+H]+.
Análisis biológicos Expresión recombinante de las PI3K Las subunidades pllO de longitud total de PI3k , ß y d, marcadas N-terminalmente con la marca polyHis, se coexpresaron con p85 con los vectores de expresión de Baculovirus en células de insecto sf9. Los heterodímeros P110/p85 se purificaron mediante cromatografía secuencial Ni- NTA, Q-HP, Superdex-100. Las isozimas a, ß y d purificadas se almacenaron a -20°C en Tris 20 mM, pH 8, NaCl 0.2M, glicerol al 50%, DTT 5 mM, colato de Na 2 mM. La ? truncada, residuos 114-1102, marcados N-terminalmente con la marca polyHis, se expresó con el Baculovirus en células de insecto Hi5. La isozima ? se purificó mediante cromatografía secuencial Ni- NTA, Superdex-200 , Q-HP. La isozima ? se almacenó congelada a -80°C en NaH2P0 , pH 8, NaCl 0.2 , etilenglicol al 1%, ß-mercaptoetanol 2 nM.
Análisis de la enzima in vitro Los análisis se realizaron en 25 con las concentraciones finales anteriores de los componentes en placas de polipropileno blanco (Costar 3355) . El fosfoaceptor de fosfatidilinositol, Ptdlns ( 4 , 5 ) P2 P4508, provino de Echelon Biosciences. La actividad ATPasa de las isozimas alfa y gamma no se estimuló en gran medida mediante Ptdlns ( 4 , 5 ) P2 bajo estas condiciones y por lo tanto se omitió del análisis de estas isozimas. Los compuestos de prueba se disolvieron en el sulfóxido de dimetilo y se diluyeron con diluciones en serie de tres veces. El compuesto en DMSO (1 µL) se' agregó por pocilios de prueba, y se determinó la inhibición con relación a las reacciones que no contuvieron el compuesto, con y sin enzima. Después de la incubación del análisis a rt, la reacción se detuvo y se determinó el ATP residual mediante la adición de un volumen igual de un kit comercial de bioluminiscencia ATP (Perkin Elmer EasyLite) de acuerdo con las instrucciones del fabricante y se detectó utilizando un luminómetro AnalystGT.
Proliferación de linfocitos B humanos estimulados por anti-IgM Aislar linfocitos B humanos: Aislar PBMC a partir de Leukopac o a partir de sangre fresca humana. Aislar linfocitos B humanos al utilizar el protocolo Miltenyi y el kit II para aislamiento de linfocitos B. Los linfocitos B humanos se purificaron al utilizar una columna Auto acsMR.
Activación de linfocitos B humanos Utilizar una placa de fondo plano de 96 pocilios, colocar en placa 50000/pocillo de linfocitos B purificados en un medio de proliferación de linfocitos B (DMEM + 5% ;FCS, 10 mM Hepes, 50 µ? 2-mercaptoetanol) ; 150 pL del medio que contiene 250 ng/mL de una proteína recombinante CD40L-LZ (Amgen) y 2 pg/mL de un anticuerpo IgM anti-humano (Jackson ImmunoReseach Lab. #109-006-129), mezclado con 50 pL de medio de linfocitos B que contiene los inhibidores de PI3K e incubar 72 h en un incubador a 37°C. Después de 72 h,' pulsar los linfocitos B marcados con 0.5-1 uCi/pocillo 3H timidina durante la noche -18 h, y recolectar las células utilizando un recolector TOM.
Proliferación de linfocitos B htímanos estimulados por IL-4 Aislar linfocitos B humanos Aislar PBMC humanos a partir de Leukopac o a partir de sangre fresca humana. Aislar los linfocitos B. humanos utilizando el protocolo Miltenyi-kit para aislamiento de linfocitos B. los linfocitos B humanos se purificaron mediante una columna AutoMacsMR.
Activación de linfocitos B humanos Utilizar una placa de fondo plano de 96 pocilios, colocar en placa 50000/pocillo de linfocitos B purificados en un medio para proliferación de linfocitos B (DMEM + 5% de FCS, 50 µ? de 2-mercaptoetanol, 10 mM de Hepes) . El medio (150 \i ) contuvo 250 ng/mL de la proteina recombinante CD40L-LZ (Amgen) y 10 ng/mL de IL-4 (R&D system #204-lL-025) , mezclado con 50-150 \i de medio de linfocitos B que contiene los compuestos e incubar 72 h en un incubador a 3 °C. ; Después de 72 h, pulsar los linfocitos B marcados con 0.5-1 uCi/pocillo 3H timidina durante la noche -18 h, y recolectar las células utilizando un recolector TOM.
Análisis de proliferación de PBMC humano inducido por el antigeno T especifico (toxoide del tétanos) Los PBMC humanos se prepararon a partir de concentraciones congeladas o se purificaron a partir de sangre humana fresca utilizando un gradiente Ficoll. Utilizar una placa de fondo redondo de 96 pocilios y colocar ,en placa 2X105 PBMC/pocillo con medio de cultivos (RPMI 1640 + 10% de FCS, 50 uM de 2-mercaptoetanol, 10 mM de Hepes) . Para las determinaciones IC50, los inhibidores de PI3K se probaron a partir de 10 µ? hasta 0.001 µ?, en incrementos logarítmicos medios y por triplicado. Se agregó el antigeno especifico de linfocitos T, del toxoide de tétanos (University of Massachusetts Lab) a 1 µg/mL y se incubó 6 días en un incubador a 37 °C. Los sobrenadantes se recolectaron : después de 6 dias para análisis de IL2 ELISA, luego las células se pulsaron con 3H-timidina durante ~18 h para medir la proliferación.
Análisis GFP para detectar la inhibición de PI3K clase la y clase III AKT1 (PKBa) se regula mediante PI3K Clase la activada por factores mitogénicos (IGF-1, PDGF, insulina, trombina, NGF, etc.). En respuesta a los estímulos mitogénicos, AKT1 se desplaza del citosol a la membrana plasmática forkhead (FKHRL1) es un sustrato para AKT1. Es citoplásmico cuando se fosforila por AKT (supervivencia/crecimiento) . La inhibición de AKT (estasis/apoptosis) -desplazamiento forkhead hacia el núcleo.
Los dominios de FYVE se unen a PI(3)P. La mayoría se genera mediante la acción constitutiva de PI3K Clase III.
Análisis de ondulación de la membrana AKT (células CHO-IR- AKT1-EGFP/GE Healthcare) Lavar las células con tampón de análisis. Tratar con los compuestos en el tampón de análisis 1 h. Agregar 10 ng/mL de insulina. Fijar después de 10 min a temperatura ambiente y formación de imágenes.
Análisis de desplazamiento forkhead (células MDA MB468 forkhead-DiversaGFP) Tratar las células con el compuesto en el medio de crecimiento 1 h. Fijar y formar imágenes.
Análisis de PI(3)P clase III (células U20S EGFP-2XFYVE/GE Healthcare) Lavar las células con tampón de análisis.; Tratar con los compuestos en el tampón de análisis 1 h. Fijar y formar imágenes.
Control para todos los 3 análisis es Wortmannin 10 uM: AKT es citoplásmico Forkhead es nuclear PI(3)P agotado a partir de endosomas Análisis del biomarcador: estimulación del receptor de linfoci os B de la expresión de CD69 o B7.2 (CD86) Sangre entera humana tratada con heparina se estimuló con 10 g/mL de anti-IgD (Southern Biotech, #9030-01) . 90 de la sangre estimulada luego se dividieron en alícuotas por pocilio de una placa de 96 pocilios y se trataron con 10 µ?. de diversas concentraciones del compuestos de bloqueo (de 10-0.0003 µ?) diluido en IMDM + ;10% FBS (Gibco) .
Las muestras se incubaron conjuntamente durante 4 h (para la expresión de CD69) hasta 6 h (para la exprésión de B7.2) a 37°C. La sangre tratada (50 pL) se transfirió a una placa de pocilio profundo, de 96 pocilios (Nunc) para la tinción de anticuerpos con 10 µL de cada uno de CD45-PerCP (BD Biosciences, #347464), CD19-FITC (BD Biosciences, #340719), y CD69-PE (BD Biosciences, #341652). Los segundos 50 µL de la sangre tratada se transfirieron a una segunda placa de pocilios profundos de 96 pocilios para la tinción de anticuerpos con 10 iL de cada uno de CD19-FITC (BD Biosciences, #340719) y CD86-PeCy5 (BD Biosciences, #555666) .
Todas las tinciones se realizaron durante 15-30 min en la oscuridad a rt . La sangre luego se lisó y se fijó utilizando 450 µ?, de solución de lisado FACS (BD Biosciences, #349202) durante 15 min a rt . Las muestras luego se lavaron 2X en PBS + 2% FBS antes del análisis FACS. Las muestras luego se desconectaron cíclicamente en ya sea células doble positivas i CD45/CD19 para la tinción de CD69, o células positiya.s CD19 para la tinción de CD86. [ Contra-clasificación gamma: Estimulación de monocitos humanos para la fosfo-AKT expresión Una línea celular de monocitos humanos, THP-1, se mantuvo en RPMI + 10% de FBS (Gibco) . Un día antes de la estimulación, las células se contaron utilizando exclusión con azul de tripano en un hemocitómetro y se suspendieron a una concentración de 1 X 106 células por mL de medio. 100 \iL de células más el medio (1 X 105 células) luego se dividió en alícuotas por pocilio de platos de pocilio profundo, de 4-96 pocilios (Nunc) para probar ocho diferentes compuestos. Las células se probaron durante la noche antes del tratamiento con diversas concentraciones (de 10-0.0003 µ?) del compuesto de bloqueo. El compuesto diluido en los medios (12 se agregó a las células durante 10 min a 37°C. MCP-1 humana (12 yL, R&D Diagnostics, #279-MC) se diluyó en los medios y se agregó a cada pocilio a una concentración final de 50 ng/mL. La estimulación transcurrió durante 2 min a rt. El tampón de Lyse/Fix Phosflow FACS pre-caliente (1 mL de 37°C) (BD Biosciences, #558049) se agregó a cada pocilio. Las placas luego se incubaron a 37 °C durante 10-15 min adicionales. Las placas se sometieron a centrifugación a 1500 rpm durante 10 min, el sobrenadante se extrajo por aspiración, y se agregó 1 mL de MeOH al 90% enfriado con hielo a cada pocilio con agitación vigorosa. Las placas luego se incubaron ya sea durante la noche a -70°C o en hielo durante 30 min antes de la tinción del anticuerpo. Las placas se sometieron a centrifugación y se lavaron 2X en PBS + 2% de FBS (Gibco) .
El lavado se aspiró y las células se suspendieron en el tampón restante. pAKT de conejo (50 pL, señalización celular, #4058L) a 1:100, se agregó a cada muestra durante 1 h a rt con agitación vigorosa. Las células se lavaron y se sometieron a centrifugación a 1500 rpm durante 10 'min. El sobrenadante se aspiró y las células se suspendieron en el tampón restante. El anticuerpo secundario, del Aléxa 647 anti-conejo de cabra (50 yL, Invitrogen, #A21245) a 1:500, se agregó durante 30 min a rt con agitación vigorosa. Las células luego se lavaron IX en tampón y se suspendieron en 150 L de tampón para análisis FACS. Es necesario que las células se dispersen muy bien mediante pipeteo antes de la ejecución sobre un citómetro de flujo. Las células se ejecutaron sobre LSR II (Becton Dickinson) y se desconectaron cíclicamente en un dispersor directo y lateral para determinar los niveles de expresión de pAKT en la población de monocitos .
Contra-clasificación gamma: Estimulación de monocitos para la expresión fosfo-AKT en médula ósea de ratón Se disecaron fémures de ratón de cinco ratones BALB/c hembra (Charles River Labs.) y se recolectaron en RPMI en medio + 10% de FBS (Gibco) . La médula ósea de ratón se retiró al cortar los extremos del fémur y al inundar con 1 mL del medio utilizando una aguja de calibre 25. En la médula ósea luego se dispersó en el medio utilizando una aguja de calibre 21. El volumen del medio se aumentó a 20 mL y las células se contaron utilizando exclusión azul de tripano en un hemocitómetro. La suspensión celular luego se aumentó a 7.5 X 106 células por 1 mL de medio y 100 L (7.5 X 105 células) se dividió en alícuotas por pocilio en platos de pocilio profundo de 4-96 pocilios (Nunc) , para probar ocho diferentes compuestos. Las células se dejaron reposar a 37°C durante 2 h antes del tratamiento con diversas concentraciones (de 10-0.0003 µ?) del compuesto de bloqueo. El compuesto diluido en el medio (12 µ?,) se agregó a las células de médula ósea durante 10 min a 37 °C. El MCP-1 de ratón (12 µ?, R&D Diagnostics, #479- JE) se diluyó en el medio y se agregó a cada pocilio a una concentración final de 50 ng/mL. La estimulación transcurrió durante 2 min a rt . 1 mL de tampón de Lyse/Fix Phosflow FACS precaliente a 7 °C (BD Biosciences, #558049) se agregó a cada pocilio. Las placas luego se incubaron a 37 °C durante 10-15 min adicionales. Las placas se sometieron a centrifugación a 1500 rpm durante 10 min. El sobrenadante se extrajo por aspiración y 1 mL de MEOH al 90% enfriado con hielo se agregó a cada pocilio con agitación vigorosa. Los platos luego se incubaron ya sea durante la noche a -70 °C o en hielo durante 30 min antes de la tinción del anticuerpo. Las placas se sometieron a centrifugación y se lavaron 2X en PBS + 2% de FBS (Gibco) . El lavado se aspiró y las células se suspendieron en el tampón restante. El bloque Fe (2 µL, BD Pharmingen, #553140) luego se agregó por pocilio durante 10 min a rt . Después de bloquear, 50 µL de anticuerpos primarios diluidos en tampón; CDllb-Alexa488 (BD Biosciences, #557672) a 1:50, CD64-PE (BD Biosciences, #558455) a 1:50, y pAKT de conejo (señalización celular, #4058L) a 1:100, se agregaron a cada muestra durante 1 h a rt con agitación vigorosa. El tampón de lavado se agregó a las células y se sometieron a centrifugación a 1500 rpm durante 10 min. El sobrenadante se aspiró y las células se suspendieron en el tampón restante. El anticuerpo secundario; Alexa 647 anti-conejo de cabra (50 µ?_, Invitrogen, #A21245) a 1:500, se agregó durante 30 min a rt con agitación vigorosa. Las células luego se lavaron IX en el tampón y se suspendieron en 100 µ?-. de tampón para análisis FACS. Las células se ejecutaron en un LSR II (Becton Dickinson) y se desconectaron cíclicamente en células doble positivas CDllb/CD64 para determinar los niveles de expresión de pAKT en la población de monocitos.
Análisis in vivo de pAKT El vehículo y los compuestos se administraron p.o. (0.2 mL) mediante gavaje (Oral Gavage Needles Popper & Sons, New Hyde Park, NY) a ratones (línea transgénica 3751, hembras, 10-12 semanas Amgen Inc, Thousand Oaks, CA) 15 min antes de la inyección i.v (0.2 mL) del anti-IgM FITC (50 ug/ratón) (Jackson Immuno Research, West Grove, PA) . Después de 45 min los ratones se sacrificaron dentro de una cámara con C02. La sangre se extrajo vía una punción cardiaca (0.3 mL) (Ice con jeringas de 25 g, Sherwood, St. Louis, MO) y se transfirió en un vial cónico de 15 mL (Nalge/Nunc International, Dinamarca) . La sangre se fijó inmediatamente con 6.0 mL de tampón de Lyse/Fix Phosflow BD (BD Bioscience, San José, CA) , se invirtió 3X y se colocó en un baño con agua a 37°C. La mitad del bazo se retiró y se transfirió a un tubo Eppendorf que contuvo 0.5 mL de PBS (Invitrogen Corp, Grand Island, NY) . El bazo se trituró utilizando un triturador de tejidos (Pellet Pestle, Kimble/Kontes, Vineland, N'J) y se fijó inmediatamente con 6.0 mL de tampón Lyse/Fix Phosflow BD, invertido 3X y se colocó en un baño con agua a 37 °C. Una vez que se habían recolectado los tejidos, el ratón se dislocó cervicalmente y el cadáver se desechó. Después de 15 min, los viales cónicos de 15 mL se retiraron del baño con agua a 37 °C y se colocaron en hielo hasta que se procesaron adicionalmente los tejidos. Los bazos triturados se filtraron a través de una criba celular de 70 µ?? (BD Bioscience, Bedford, A) en otro vial cónico de 15 mL y se lavó con 9 mL de PBS. Los esplenocitos y la sangre se sometieron a centrifugación @ 2, 000' rpm durante 10 min (en frío) y el tampón se aspiró. Las células se volvieron a suspender en 2.0 mL de alcohol metílico al 90% frió (-20°C) ( allinckrodt Chemicals, Phillipsburg, NJ) . El MeOH se agregó lentamente mientras que el vial cónico se agitó rotacionalmente de forma rápida. Los tejidos luego se almacenaron a -20 °C hasta que las células se pudieran teñir para análisis FACS.
Inmunización de multi-dósis TNP La sangre se recolectó mediante sangrados oculares retro-orbitales de ratones hembra BALB/c de 7-8 semanas de edad (Charles River Labs.) en el dia 0 antes de la inmunización. La sangre se dejó coagular durante 30 min y se centrifugó a 10,000 rpm en tubos microcontenedores de suero (Becton Dickinson) durante 10 min. Los sueros se recolectaron, se dividieron en alícuotas en tubos atrix (Matrix Tech. Corp.) y se almacenaron a -70°C hasta que se realizó un ELISA. A los ratones se les administró el compuesto oralmente antes de la inmunización y a periodos de tiempo posteriores con base en la vida de la molécula. Los ratones luego se inmunizaron con ya sea 50 µg de TNP-LPS (Biosearch Tech., #T-5065) , 50 ug de TNP-Ficoll (Biosearch Tech., #F-1300), o 100 g de TNP-KLH (Biosearch Tech., #T- 5060) más 1% de alum (Brenntag, #3501) en PBS. TNP-KLH más la solución de alum se preparó al invertir suavemente la mezcla 3-5 veces cada 10 min durante 1 h antes de la inmunización. En el día 5, después del último tratamiento, los ratones se sacrificaron con CO2 y se realizó una punción cardiaca. La sangre se dejó coagular durante 30 min y se centrifugó a 10,000 rpm en tubos micro-contenedores de suero durante 10 min. Los sueros se recolectaron, se dividieron en alícuotas en tubos Matrix, y se almacenaron a -70°C hasta que se realizó un análisis adiciona. Los niveles IgGl, IgG2a, IgG3 e IgM, TNP-especificos en los sueros luego se midieron vía ELISA. TNP-BSA (Biosearch Tech., #T-5050) se utilizó para capturar los anticuerpos TNP-especificos . Se utilizó TNP-BSA (10 ug/mL) para recubrir placas ELISA de 384 pocilios (Corning Costar) durante la noche. Las placas luego se lavaron y se bloquearon durante 1 h utilizando 10% de solución de bloqueo ELISA con BSA (KPL) . Después del bloqueo, las placas ELISA se lavaron y las muestras de suero/estándares se diluyeron en serie y se dejaron unirse a las placas durante 1 h. Las placas se lavaron y los anticuerpos secundarios conjugados con Ig-HRP (IgGl antiratón de cabra, Southern Biotech #1070-05, IgG2a anti-ratón de cabra, Southern Biotech #1080-05, IgM anti-ratón de cabra, Southern Biotech #1020-05, IgG3 anti-ratón de cabra, Southern Biotech #1100-05) se diluyeron a 1:5000 y se incubaron en las placas durante 1 h. se utilizó solución de peróxido de TMB (SureBlue Reserve TMB from KPL) para visualizar los anticuerpos. Las placas se lavaron y las muestras se; dejaron desarrollar en la solución de TMB a aproximadamente 5-20 min dependiendo del Ig analizado. La reacción se detuvo cón ácido sulfúrico 2M y las placas se leyeron a un OD de 450 nm.
Para el tratamiento de enfermedades provocadas por PI3K5, tales como artritis reumatoidea, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psoriásica, psoriasis, enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunes, los compuestos de la presente invención se pueden administrar oral, parentral, mediante aerosol para inhalación, rectal, o tópicamente en formulaciones unitarias de dosificación que contienen los portadores adyuvantes y vehículos f rmacéuticamente aceptables convencionales. El término parenteral en el sentido en el que se utiliza en la presente, incluye, técnicas de infusión, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intrasternal, o intraperitonealmente .
El tratamiento de las enfermedades y trastornos de la presente se destina también para que incluya la administración profiláctica de un compuesto de la invención, una sal farmacéutica del mismo, o una composición farmacéutica de cualquiera a un sujeto (es decir, un: animal, de preferencia un mamífero, de mayor preferencia un ser humano) que se cree tendrá la necesidad de un tratamiento preventivo, tal como por ejemplo, artritis reumatoidea, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psoriásica, psoriasis, enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunes y lo semejante. '.
El régimen de dosificación para el tratamiento de enfermedades producidas por ??3?d cáncer, y/o hiperglicemia con los compuestos de esta invención y/o composiciones de esta invención se basa en una variedad de factores, incluyendo el tipo de la enfermedad, la edad, el peso, el sexo, la condición médica del paciente, la gravedad de la condición, la vía de administración, y el compuesto particular empleado. De esta forma, el régimen de dosificación puede variar ampliamente, aunque se puede determinar rutinariamente utilizando métodos estándar. Los niveles de dosificación del orden de aproximadamente 0.01 mg hasta 30 mg por kilogramo de peso corporal al día, de preferencia de aproximadamente 0.1 mg hasta 10 mg/kg, de mayor preferencia de aproximadamente 0.25 mg hasta 1 mg/kg son útiles para todos los métodos de uso descritos en la presente .
Los compuestos farmacéuticamente activos de esta invención se pueden procesar de acuerdo con los métodos convencionales de la farmacia para producir agentes medicinales para la administración a pacientes, incluyendo seres humanos y otros mamíferos.
Para la administración oral, la composición farmacéutica puede estar en la forma de, por ejemplo, una cápsula, una tableta, una suspensión, o un líquido. La composición farmacéutica de preferencia se prepara ' en la forma de una unidad de dosificación que contenga una cantidad determinada del ingrediente activo. Por ejemplo, éstos pueden contener una cantidad de ingrediente activo de aproximadamente 1 hasta 2000 mg, de preferencia de aproximadamente 1 hasta 500 mg, de mayor preferencia de aproximadamente 5 hasta 150 mg. Una dosificación diaria adecuada para un ser humano u otro mamífero puede variar ampliamente, dependiendo de la condición del paciente y otros factores aunque, nuevamente, se puede determinar utilizando métodos de rutina.
El ingrediente activo también se puede administrar mediante inyección como una composición con portadores adecuados entre los que se incluyen solución salina, glucosa, o agua. El régimen de dosificación parenteral diaria será entre aproximadamente 0.1 a aproximadamente 30 mg/kg del peso corporal total, de preferencia entre aproximadamente 0.1 a aproximadamente 10 mg/kg, y de mayor preferencia entre aproximadamente 0.25 mg a 1 mg/kg.
Las preparaciones inyectables, tales! como suspensiones aq. u oleaginosas inyectables estériles, se pueden formular de acuerdo con las conocidas utilizando agentes de dispersión o humectación y agentes de suspensión adecuados. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución inyectable estéril o suspensión ' en un diluyente o solvente parenteralmente aceptable, no tóxico, por ejemplo como una solución en 1, 3-butandiol . Entre los vehículos aceptables y solventes que se pueden emplear se encuentran agua, solución de Ringer, y solución isotónica de cloruro de sodio. Además, se emplean convencionalmente aceites grasos, estériles, como un solvente o medio de suspensión. Para este fin, se puede emplear cualquier aceite graso insípido. Incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Además, en la preparación de soluciones inyectables son de utilidad ácidos grasos tales como ácido oleico.
Los supositorios para la administración rectal del fármaco se pueden preparar al mezclar el fármaco con un excipiente no irritante adecuado tal como mantequilla de cacao y polietilenglicoles que sean sólidos a las temperaturas normales pero líquido a la temperatura rectal y por lo tanto se fundirán en el recto y liberarán el fármaco.
Una dosis tópica adecuada del ingrediente activo de un compuesto de la invención es 0.1 mg hasta 150 mg administrado una a cuatro, de preferencia una o dos veces al día. Para administración tópica, el ingrediente activo puede comprender de 0.001% hasta 10% p/p, por ejemplo, de 1% hasta 2% en peso de la formulación, aunque puede comprender tanto como el 10% p/p, aunque de preferencia no más del 5% ; p/p, y de mayor preferencia de 0.1% hasta 1% de la formulación.
Las formulaciones adecuadas para administración tópica incluyen preparaciones liquidas o semi-líquidas adecuadas para penetración a través de la piel (por ejemplo, linimentos, lociones, unqüentos, cremas o pastas) y gotas adecuadas para administración al ojo, oreja o nariz.
Para la administración, los compuestos de esta invención se combinan normalmente con uno o más adyuvantes adecuados para la vía indicada de administración. Los compuestos se pueden combinar con lactosa, sacarosa, polvo de almidón, ásteres de celulosa o ácidos alcanóicos, ácido esteárico, talco, estearato magnésico, óxido del magnesio, sales de sodio y calcio de ácidos fosfóricos y sulfúricos, acacia, gelatina, alginato de sodio, polivinil-pirrolidona, y/o alcohol polivinilico, y en forma en tabletas o en capsular para una administración convencional.
Alternativamente, los compuestos de esta invención se pueden disolver en solución salina, agua, polietilenglicol, propilenglicol, etanol, aceite de maíz, aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de ajonjolí, goma de tragacanto y/o diversos tampones . En la técnica farmacéutica son bien conocidos otros adyuvantes y modos de administración. El portador o diluyente puede incluir material para retraso de tiempo, tal como monoesteafato de glicerilo o diestearato de glicerilo solo o con una cera, u otros materiales bien conocidos en la técnica.
Las composiciones farmacéuticas se pueden preparar en una forma sólida (incluyendo gránulos, polvos o supositorios) o en una forma liquida (por ejemplo, soluciones, suspensiones o emulsiones) . Las composiciones farmacéuticas se pueden someter a operaciones farmacéuticas convencionales tales como esterilización y/o pueden ' contener adyuvantes convencionales, tales como conservadores, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes, tampones, etc .
Las formas sólidas de dosificación para administración oral pueden incluir cápsulas, tabletas, pildoras, polvos, y gránulos. En estas formas sólidas de dosificación, el compuesto activo se puede combina con al menos un diluyente inerte tal como sacarosa, lactosa, o almidón. Estas formas de dosificación también pueden comprender, como en la práctica normal, sustancias adicionales distintas a los diluyentes inertes, por ejemplo, agentes lubricantes tales como estearato de magnesio. En el caso de cápsulas, tabletas, y pildoras, las formas de dosificación también pueden comprender agentes amortiguantes. Las tabletas y pildoras adicionalmente se pueden preparar con recubrimientos entéricos.
Las formas liquidas de dosificación para administración oral pueden incluir, emulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables que contengan diluyentes inertes, los diluyentes inertes comúnmente utilizados en la técnica, tales como agua. Estas composiciones también pueden comprender adyuvantes, tales como agentes humectantes, endulcorantes, saborizantes y aromatizantes .
Los compuestos de la presente invención pueden poseer uno o más átomos de carbono asimétricos y de esta forma son capaces de existir en la forma de isómeros ópticos asi como en la forma de mezclas racémicas o no racémicas de los mismos. Los isómeros ópticos se pueden obtener mediante la resolución de las mezclas racémicas de acuerdo con procesos convencionales, por ejemplo, mediante la formación de sales diastereoisómeros, mediante el tratamiento con un ácido o base ópticamente activo. Los ejemplos de ácidos adecuados son ácido tartárico, diacetiltartárico, dibenzoiltartárico, ditoluoiltartárico y ácido canforsulfónico y luego la separación de la mezcla de diastereoisómeros mediante cristalización seguida por la liberación de las bases ópticamente activas de estas, sales. Un proceso diferente para la separación de isómeros ópticos implica el uso de una columna de cromatografía ¡ quiral seleccionada óptimamente para aumentar al máximo la separación de los enantiómeros . Todavía otro método disponible implica la síntesis de moléculas diastereoisoméricas covalentes al hacer reaccionar los compuestos de la invención con un ácido ópticamente puro en una forma activada o un isocianato ópticamente puro. Los diastereoisómeros sintetizados se pueden separar por medios convencionales tales como cromatografía, destilación, cristalización o sublimación, y luego se pueden hidrolizar para suministrar el compuesto enantioméricamente puro. Los compuestos ópticamente activos de la invención asimismo se pueden obtener al utilizar materiales de partida activos. Estos isómeros pueden estar en la forma de un ácido libre, una base libre, un éster o una sal.
Asimismo, los compuestos de esta invención pueden existir como isómeros, es decir compuestos de la misma fórmula molecular aunque en los cuales los átomos relativos entre sí, se disponen de manera diferente. En particular, los sustituyentes de alquileno de los compuestos de esta invención, normalmente y de preferencia se disponen e insertan en las moléculas según se indica en las definiciones para cada uno de estos grupos, que se leerán de izquierda a derecha. Sin embargo, en ciertos casos, un experto en la técnica apreciará que es posible preparar los compuestos de esta invención en los cuales estos sustituyentes se invierten en la orientación con relación a los otros átomos en la molécula. Es decir, el sustituyente que se insertará puede ser igual al observado anteriormente excepto que se inserta en la molécula en la orientación inversa. Un experto en la técnica apreciará que estas formas isoméricas de los compuestos de esta invención se debe interpretar que quedan abarcadas dentro del alcance de la presente invención.
Los compuestos de la invención se pueden utilizar en la forma de sales derivadas de ácidos inorgánicos u orgánicos. Las sales incluyen, de manera enunciativa, las siguientes: acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, bencensulfonato, bisulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, digluconato, ciclopentanpropionato, dodecilsulfato, etansulfonato, glucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, fumarato, clorhidrato, hidrobromuro, hidroioduro, 2- hodroxietansulfonato, lactato, maleato, metansulfonato, nicotinato, 2-naftalensulfonato, oxalato, pálmoato, pectinato, persulfato, 2-fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, tosilato, mesilato y undecanoato. También, los grupos que contienen nitrógeno básico se pueden cuaternizar con estos agentes como haluros de alquilo inferior, tales como metilo, , etilo, propilo, y cloruro de butilo, bromuros y yoduros; sulfátos de dialquilo similares a sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo, haluros de cadena larga tales como cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo, haluros de aralquilo similares a bromuros de bencilo y fenetilo, y otros. De esta forma se obtienen productos solubles o dispersables en agua o aceite.
Los ejemplos de ácidos que se pueden emplear para formar sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen los ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico y ácido fosfórico y ácidos orgánicos tales como ácido oxálico, ácido maleico, ácido succinico y ácido cítrico. Otros ejemplos incluyen sales con metales alcalinos o metales alcalinotérreos, tales como sodio, potasio/ calcio o magnesio o con bases orgánicas.
También se abarcan en el alcance de la presente invención los ésteres farmacéuticamente aceptables' de un ácido carboxílico o un grupo que contenga hidroxilo, incluyendo un éster metabólicamente lábil o una forma de profármaco de un compuesto de esta invención. Un éster metabólicamente lábil es uno que pueda producir, por ejemplo, un aumento en los niveles sanguíneos y prolongar la eficacia de la forma no esterificada correspondiente del compuesto. Una forma de profármaco es una que no esté en una' forma activa de la molécula según se administra pero que se torné terapéuticamente activa después de alguna actividad in vivo o biotransformación tal como metablismo por ejemplo segmentación \ enzimática o hidrolítica. Para un análisis general de profármacos que implican ésteres, véase Svensson and Tunek Drug Metabolism Reviews 165 (1988) and Bundgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985). Los ejemplos de : un anión de carboxilato enmascarado incluyen una variedad de ésteres, tales como alquilo (por ejemplo, metilo, etilo) , cicloalquilo (por ejemplo, ciclohexilo) , aralquilo (por ejemplo, .bencilo, p-metoxibencilo) , y alquilcarboniloxialquilo (por ejemplo, pivaloiloximetilo) . Las aminas se han enmascarado como derivados sustituidos de arilcarboniloximetilo que se segmentan mediante esterasas que liberan in vivo el fármaco libre y el formaldehido (Bungaard J. Med. Chem. 2503 (1989)). También, los fármacos que contienen un grupo NH ácido, tal como, imidazol, imida, indol y lo semejante, se han enmascarado con grupos N-aciloximetilo (Bundgaard Design de Prodrugs, Elsevier (1985)). Los grupos hidroxi se han enmascarado como ésteres y éteres. La EP 039,051 (Sloan and Little, 4/11/81) describe profármacos de ácido hidroxámico con base annich, su preparación y uso. Los ésteres de un compuesto de esta invención pueden incluir, por ejemplo, los metil-, etil-, propil-, y butil-ésteres , asi como otros ésteres adecuados formados entre una porción ácida y una porción que contiene hidroxilo. Los ésteres metabólicamente lábiles, pueden incluir, por ejemplo, metoximetilo, etoximetilo, iso-propoximetilo, ot-metoxietilo, grupos tales como a- ( (C1-C4) -alquiloxi) etilo, por ejemplo, metoxietilo, etoxietilo, propoxietilo, iso-propoxietilo, etc.; grupos 2-oxo-1, 3-dioxolen-4-ilmetilo, tales como, 5-metil-2-oxo-1, 3, dioxolen-4-ilmetilo, etc.; grupos C1-C3 alquiltiometilo, por ejemplo, metiltiometilo, etiltiometilo, isopropiltiometilo, etc.; grupos aciloximetilo, por ejemplo, pivaloiloximetilo, a-acetoximetilo, etc.; etoxicarbonil-1-metilo; o grupos metilo a-aciloxi-a-sustituidos , por ejemplo, a-acetoxietilo .
Además, los compuestos de la invención' pueden existir como sólidos cristalinos que se pueden cristalizar a partir de solventes comunes tales como, etanol, N,N-dimetil- formamida, agua, o lo semejante. De esta forma, las formas cristalinas de los compuestos de la invención pueden ' existir como polimorfos, solvatos y/o hidratos de los compuestos originales o sus sales farmacéuticamente aceptables. Todas estas formas asimismo se debe interpretar que quedan dentro del alcance de la invención.
Mientras que los compuestos de la invención se pueden administrar como el único agente farmacéutico activo, los mismos también se pueden utilizar en combinación con uno o más compuestos de la invención u otros agentes. Cuando se administran como una combinación, los agentes terapéuticos se pueden formular como composiciones por separado que se administran al mismo tiempo o a diferentes tiempos, o los agentes terapéuticos se pueden administrar como una composición única.
Lo anterior es simplemente ilustrativo de la invención y no pretende limitar la invención a los compuestos descritos. Se pretende que las variaciones y cambios que sean evidentes para un experto en la técnica queden dentro del alcance y naturaleza de la invención que se define en las reivindicaciones anexas.
A partir de la descripción anterior, un experto en la técnica puede investigar fácilmente las características esenciales de esta invención, y sin apartarse del espíritu y alcance, de la misma, puede realizar diversos cambios y modificaciones de la invención para adaptarla a diversos y condiciones.

Claims (3)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito el presente invento, se considera como una novedad y, por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes REIVINDICACIONES :
1. Un compuesto que tiene la estructura: o cualquier sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque: X1 es C( 10) o N; X2 es C o N; X3 es C o N; X4 es C o N; X5 es C o N; en donde al menos dos de X2, X3, X4 y X5 son C; X6 es C(R6) o N; X7 es C(R7) o N; X8 es C(R10) o N ; Y es N (R8) , O o S; n es 0, 1, 2 ó 3; R1 se selecciona de halo, Ci_6alquilo, Ci_4haloalquilo, ciano, nitro, -C(=0)Ra, -C(=0)ORa, -C(=0)NRaRa, -C (=NRa)NRaRa, -ORa, -OC(=0)Ra, -OC (=0) NRaRa, -OC (=0)N (Ra) S (=0)2Ra, -OC2-6alquilNRaRa, -OC2-6alquilORa, -SRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Ra, -S (=0) 2NRaRa, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) Ra, -S (=0)2N(Ra)C(=0)0Ra, -S(=0)2N(Ra)C(=0)NRaRa, -NRaRa, -N(Ra)C(=0)Ra, -N(Ra)C(=0)ORa, -N (Ra) C (=0) NRaRa, -N (Ra) C (=NRa) NRaRa, -N (Ra) S (=0) 2Ra, -N (Ra) S (=0) 2NRaRa, -NRaC2-6alquilNRaRa, -NRaC2-6alquilORa, -NRaC2-6alquilC02Ra, -NRaC2_6alquilS02Rb, -CH2C(=0)Ra, -CH2C (=0) ORa, -CH2C (=0) NRaRa, -CH2C (=NRa) NRaRa, -CH20Ra, -CH20C (=0) Ra, -CH2OC (=0) NRaRa, -CH20C (=0) N (Ra) S (=0) 2Ra, -CH2OC2.6alquilNRaRa, -CH2OC2.6alquilORa, -CH2SRa, -CH2S(=0)Ra, -CH2S (=0) 2Rb, -CH2S (=0) 2NRaRa, -CH2S (=0) 2N (Ra) C (=0) Ra, -CH2S (=0) 2N (Ra) C (=0) 0Ra, -CH2S (=0) 2N (Ra)C (=0)NRaRa, -CH2NRaRa, -CH2N (Ra) C (=0) Ra, -CH2N(Ra)C(=0)0Ra, -CH2N(Ra)C(=0)NRaRa, -CH2N (Ra) C (=NRa) NRaRa, -CH2N (Ra) S (=0) 2Ra, -CH2N (Ra) S (=0) 2NRaRa, -CH2NRaC2-6alquilNRaRa, -CH2NRaC2-6alquilORa, -CH2NRaC2_6alquilC02Ra y -CH2NRaC2-6alquilS02Rb; R2 se selecciona de H, halo, Ci_6aÍquilo, Ci-^haloalquilo, ciano, nitro, 0Ra, NRaRa, -C(=0)Ra, -C(=0)0R , -C(=0)NRaRa, -C (=NRa) NRaRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Ra, -S (=0) 2NRaRa, -S(=0)2N(Ra)C(=0)Ra, -S(=0)2N(Ra)C(=0)ORa y -S (=0) 2N (Ra) C (=0) NRaRa; R3 se selecciona de H, halo, nitro,: ciano, Ci_4alquilo, OCi_4alquilo, OCi-4haloalquilo, NHCi_4alquilo, N (Ci-4alquil) Ci-4alquilo o Ci-4haloalquilo; R4 es, independientemente, en cada caso, halo, nitro, ciano, Ci- alquilo, OCi-^alquilo, OCi-4haloalquilo, NHCi-4alquilo, N (Ci-4alquil ) Ci-4alquilo, Ci_4haloalquilo o un anillo monociclico insaturado de 5-, 6- o 7-miembros que contiene 0, 1, 2, 3 ó 4 átomos seleccionados de N, O y S, pero que no contiene más de uno de O o S, el anilló estará sustituido por 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados de halo, Ci-4alquilo, Ci-3haloalquilo, -OCi-4alquilo, -NH2, -NHCi_4alquilo y -N (Ci_4alquil ) Ci-alquilo; R5 es, independientemente, en cada caso, H, halo, Ci_6alquilo, Ci_4haloalquilo, o Ci-galquilo sustituido por 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados de halo, ciano, OH, OCi-4alquilo, Ci-4alquilo, Ci-3haloalquilo, 0Ci-4alquilo, NH2, NHCi-4alquilo y N (Ci_4alquil ) Ci-4alquilo; o ambos grupos R5 conjuntamente forman un C3-6spiroalquilo sustituido por 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados de halo, cian , OH, OCi-4alquilo, Ci-alquilo, Ci-3haloalquilo, OCi-4alquilo, NH2, NHCi-4alquilo y N (Ci-4alquil) Ci_4alquilo; R6 se selección de halo, ciano, OH, OCi-4alquilo, Ci-4alquilo, Ci-3haloalquilo, OCi-4alquilo, NHR9, N (Ci-4alquil ) Ci_ alquilo, -C(=0)ORa, -C (=0) N (Ra) Ra o -N (Ra) C (=0) Rb y un anillo heterocilico saturado o parcialmente saturado 5- ó 6-miembros que contiene 1, 2 ó 3 heteroátomos seleccionados de N, 0 y S, en donde el anillo está sustituido por 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados de halo, ciano, OH, oxo, 0Ci-4alquilo, Ci-4alquilo, Ci-3haloalquilo, 0Ci-4alquilo, NH2, NHCi-4alquilo y N (Ci-4alquil) Ci-4aqluilo; R7 se selecciona de H, halo, Ci-4haloalquilo, ciano, nitro, -C(=0)Ra, -C(=0)0Ra, -C(=0)NRaRa, -C (=NRa) NRaRa, -0Ra, -0C(=0)Ra, -0C (=0) NRaRa, -0C (=0) N (Ra) S (=0) 2Ra, -OC2-6alqüilNRaRa, -OC2-6alquilORa, -SRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Ra, -S (=0) 2NRaRa, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) Ra, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) 0Ra, -S(=0)2N(Ra)C(=0)NRaRa, -NRaRa, -N (Ra) C (==0) Ra, -N (Ra) C (=0) 0Ra, -N (Ra) C (=0) NRaR , -N (Ra) C (=NRa) NRaRa, -N (Ra) S (=0) 2Ra, -N(Ra)S(=0)2NRaRa, -NRaC2-6alquilNRaRa, -NRaC2-6alquÜ0Ra y Ci_6alquilo, en donde el Ci-6alquilo es sustituido por :0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados de halo, Ci-^haloálquilo, ciano, nitro, -C(=0)Ra, -C(=0)0Ra, -C(=0)NRaRa, -C (=NR NRaRa, -0Ra, -0C(=0)R\ -0C(=0)NRaRa, -0C (=0) N ( Ra) S (=0)2Ra, -OC2-6alquilNRaRa, -OC2-6alquilORa, -SRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Ra -S (=0) 2NRaRa, -S(=0)2N(Ra)C(=0)Ra, -S(=0)2N(Ra)C('=0)0R -S(=0)2N(Ra)C(=0)NRaRa, -NRaRa, -N (Ra) C (=0) Ra, -N(Ra)C( :=0) 0Ra -N ( Ra ) C ( =0) NRaRa , -N (Ra) C (=NRa)NRaRa, -N(Ra)S(=0)2Ra -N (Ra) S (=0) 2NRaRa, -NRaC2_6alquilNRaRa y -NRaC2-6alquilORa, y el Ci_6alquilo está sustituido adicionalmente por 0 ó 1 anillo monocíclicos saturado, parcialmente saturado o insaturado de 5-, 6- o 7-miembros que contiene 0, 1, 2, 3 ó 4 átomos seleccionados de N, O y S, pero que no contienen más de uno de O o S, en donde los átomos de carbono disponibles del anillo están sustituidos por 0, 1 ó 2 grupos oxo o tioxo, en donde el anillo es sustituido por 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, nitro, ciano, Ci_4alquilo/ OCi_4alquilo, OCi-4haloalquilo, NHCi-alquilo, N (Ci_4alquil ) Ci_alquilo y Ci^haloalquilo; o R7 y R8 conjuntamente forman un puente -C=N- en donde el átomo de carbono está sustituido por H, halo, ciano, o un anillo monociclico saturado, parcialmente saturado o insaturado de 5-, 6- ó 7-miembros que contiene 0, 1, 2, 3 ó 4 átomos seleccionados de N, 0 y S, pero que no contiene más de uno de O o S, en donde los átomos de carbono disponibles del anillo están sustituidos por 0, 1 ó 2 grupos oxo o tioxo, en donde el anillo está sustituido por 0, 1, 2, 3 ó 4 sustituyentes seleccionados de halo, Ci-6alquilo, Ci_4haloalquilo, ¦ ciano, nitro, -C(=0)Ra, -C(=0)ORa, -C(=0)NRaRa, -C (=NRa) NRaRa;, -ORa, -OC(=0)Ra, -0C(=0)NRRa, -OC (=0) N (Ra) S (=0) 2Ra, -OC2-6alquilNRaRa, -OC2-6alquilORa, -SRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Ra, -S (=0) 2NRaRa, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) Ra, -S (=0) 2N (Ra) C (:=0) ORa, -S(=0)2N(Ra)C(=0)NRaRa, -NRaRa, -N (Ra) C (=0) Ra, -N (Ra) C (=0) 0Ra, -N (Ra) C (=0) NRaRa, -N (Ra) C (=NRa) NRaRa, -N (Ra) S (=0) 2Ra, -N (Ra) S(=0)2NRaRa, -NRaC2-6alquilNRaRa y -NRaC2-SalquilORa; o R7 y R9 conjuntamente forman un puente -N=C- en donde el átomo de carbono está sustituido por H, halo, Ci_6alquilo, Ci-4haloalquilo, ciano, nitro, 0Ra, NRaRa, -C(=0)Ra, -C(=0)0Ra, -C(=0)NRaRa, -C (=NRa) NRaRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Ra o -S (=0) 2NRaRa; R8 es H, Ci_6alquilo, C (=0) N (R ) Ra, C(=0)Rb o d-4haloalquilo; R9 es H, Ci_6alquilo o Ci-haloalquilo; R10 es independientemente en cada caso H, halo, Ci-3alquilo, Ci-3haloalquilo o ciano; R11 es un anillo monociclico saturado, parcialmente saturado o insaturado de 5- 6- o 7 miembros que contienen 0, 1, 2, 3 ó 4 átomos seleccionados de N, O y S, pero que no contienen más de uno de 0 o S, en donde los átomos de ; carbono disponibles del anillo están sustituidos por 0, 1 ó 2 grupos oxo o tioxo, en donde el anillo está sustituido por 0, 1, 2, 3 ó 4 sustituyentes seleccionados de halo, Ci_6alquilo, Ci_4haloalquilo, ciano, nitro, -C(=0)Ra, -C(=0)0Ra, -C(=0)NRaRa, -C (=NRa) NRaRa, -0Ra, -0C(=0)Ra, -0C (=0) NRaRa, -0C(=0)N(Ra)S(=0)2Ra, -OC2-6alquilNRaRa, -OC2-6alquilORa; . -SRa, -S(=0)Ra, -S(=0)2Rb, -S (=0)2NRaRa, -S (=0) 2N (Ra) C (=?0) Ra, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) 0Ra, -S (=0) 2N (Ra) C (=0) NRaRa, -NRaR , -N (Ra) C (=0) Ra, -N(Ra)C(=0)0Ra, -N (Ra) C (=0) NRaRa, -N (Ra) C (=NRa) NRaRa, -N (Ra) S (=0) 2Ra, -N (Ra) S (=0) 2NRaRa, -NRaC2-6alquilNRaRa y -NRaC2-6alquilORa; Ra es independientemente, en cada caso, H o Rb; Rb es independientemente, en cada caso, fenilo, bencilo o Ci_6alquilo, el fenilo, bencilo y Ci-6alquilo están sustituidos por 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados de halo, Ci-4alquilo, Ci_3haloalquilo, -OCi-^alquilo -NH2, -NHCi-4alquilo y -N (Ci-4alquil) Ci-4alquilo; y R° es un anillo saturado o parcialmente saturado de 4-, 5- o 6 miembros que contienen 1, 2 ó 3 heteroátomos seleccionados de N, 0 y S el anillo estará sustituido por 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados de halo, Ci-4alquilo, Ci_3haloalquilo, OCi-4alquilo, -NH2, -NHCi_4alquilo y -N (Ci-4alquil ) Ci-4alquilo .
2. El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en la preparación de un medicamento ; para el tratamiento de la artritis reumatoidea, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psoriásica, psoriasis, enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunes, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad inflamatoria del ojo, trastornos inflamatorios o inestables de la 'vejiga, lesiones cutáneas con componentes in lamatorios, condición inflamatoria crónica, enfermedades autoinmunes, ' lupus eritematoso sistémico (SLE), miastenia gravis, artritis reumatoide, encefalomielitis diseminada aguda, purpura trombocitopénica idiopática, esclerosis múltiple, síndrome de Sjoegren y anemia hemolítica autoinmune, condiciones alérgicas e hipersensibilidad en un paciente que necesita del mismo.
3. El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en . la preparación de un medicamento para el tratamiento de cánceres, los cuales se producen, dependen o están asociados con la actividad de ????d en un paciente que necesita del mismo. . Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 y un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable. RESUMEN DE LA INVENCIÓN Se describen heteroarilos biciclicos sustituidos que tienen la fórmula general (I) y las composiciones que los contienen, para el tratamiento de la inflamación general, artritis, enfermedades reumáticas, osteoartritis, trastornos inflamatorios del intestino, trastornos inflamatorios oculares, trastornos inflamatorios o inestables de la vejiga, psoriasis, enfermedades de la piel con componentes inflamatorios, condiciones inflamatorias crónicas, entre las que se incluyen de manera enunciativa enfermedades autoinmunes tales como lupus eritematoso sistémico (SLE) , miastenia gravis, artritis reumatoide, encefalomielitis diseminada aguda, purpura trombocitopénica idiopática, esclerosis múltiple, síndrome de Sjoegren y anemia hemolítica autoinmune, condiciones alérgicas entre las que se incluyen todas las formas de hipersensibilidad. La presente invención también habilita métodos para tratar cánceres que están mediados, dependen o asociados con la actividad de¦ pil08, entre los que se incluyen de manera enunciativa leucemias, tales como leucemia mieloide aguda (AML) síndrome mielodisplásico (MDS) enfermedades mielo-proliferativas ( PD) leucemia mieloide crónica (C L) leucemia linfoblástica agudo de linfocitos T (T-ALL) leucemia de linfoblástica aguda de linfocitos B (B-TALL) linfoma que no es de Hodgkins' (NHL) linfoma de linfocitos B y tumores sólidos, tales como cáncer de mama .
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