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MX2012006635A - Inhibidores del virus de la hepatitis c. - Google Patents

Inhibidores del virus de la hepatitis c.

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Publication number
MX2012006635A
MX2012006635A MX2012006635A MX2012006635A MX2012006635A MX 2012006635 A MX2012006635 A MX 2012006635A MX 2012006635 A MX2012006635 A MX 2012006635A MX 2012006635 A MX2012006635 A MX 2012006635A MX 2012006635 A MX2012006635 A MX 2012006635A
Authority
MX
Mexico
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cap
mmol
mixture
hcv
mhz
Prior art date
Application number
MX2012006635A
Other languages
English (en)
Inventor
Michael Smith
Denis R St Laurent
John A Bender
Zhong Yang
Qi Chen
Nicholas A Meanwell
N Van Nguyen
Jeffrey Lee Romine
Makonen Belema
Gan Wang
Piyasena Hewawasam
Ningning Xu
Omar D Lopez
John A Easter
bao-ning Su
Original Assignee
Squibb Bristol Myers Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
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First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=43479603&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=MX2012006635(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Squibb Bristol Myers Co filed Critical Squibb Bristol Myers Co
Publication of MX2012006635A publication Critical patent/MX2012006635A/es

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Abstract

La presente descripción se refiere a compuestos, composiciones y métodos para el tratamiento de infección por el virus de la hepatitis C (VHC). También se describen composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos y métodos para usar los compuestos en el tratamiento de infección por VHC.

Description

I HIBIDORES DEL VIRUS DE LA HEPATITIS C Descripción de la Invención La presente descripción se refiere de forma general a compuestos antivirales, y más específicamente, se refiere a compuestos que pueden inhibir la función de la proteína NS5A codificada por el virus de la hepatitis C (VHC) , a composiciones que comprenden los compuestos y a métodos para inhibir la función de la proteína NS5A.
El VHC es un importante patógeno humano que infecta a unos 170 millones de personas en todo el mundo (aproximadamente cinco veces el número de infectados por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1) . Una fracción sustancial de estos individuos infectados por el VHC desarrolla una enfermedad hepática progresiva grave, incluyendo cirrosis y carcinoma hepatocelular .
El actual tratamiento de referencia para el VHC, que usa una combinación de interferón pegilado y ribavirina, presenta una tasa de éxito subóptima para conseguir una respuesta vírica mantenida y provoca numerosos efectos secundarios. Por lo tanto, existe una clara y percibida necesidad desde hace mucho tiempo de desarrollar terapias eficaces para cubrir esta necesidad médica no satisfecha.
El VHC es un virus de ARN de polaridad positiva. Basándose en una comparación de la secuencia de aminoácidos REF . : 230845 deducida y la gran similitud en la región 5' no traducida, el VHC ha sido clasificado como un género diferente de la familia Flaviviridae. Todos los miembros de la familia Flaviviridae presentan viriones encapsulados que contienen un genoma de ARN de polaridad positiva que codifica todas las proteínas específicas del virus conocidas mediante traducción de un marco de lectura abierto, ininterrumpido y único.
Se encuentra una heterogeneidad considerable en la secuencia de nucleótidos y de aminoácidos codificados en todo el genoma del VHC debido a la alta tasa de errores de la ARN polimerasa dependiente de ARN codificado que carece de capacidad correctora. Se han caracterizado al menos seis genotipos principales y se han descrito más de 50 subtipos distribuidos por todo el mundo. La significación clínica de la heterogeneidad genética del VHC ha demostrado una propensión a la aparición de mutaciones durante el tratamiento con monoterapia, por lo tanto es deseable el uso de otras opciones de tratamiento. El posible efecto modulador de los genotipos sobre la patogénesis y la terapia sigue sin comprenderse.
El genoma de ARN monocatenario del VHC tiene una longitud de aproximadamente 9500 nucleótidos y tiene un único marco de lectura abierto (ORF, por sus siglas en inglés) que codifica una única poliproteína grande de aproximadamente 1 3000 aminoácidos. En las células infectadas, esta poliproteína es escindida en múltiples sitios por proteasas celulares y víricas para producir las proteínas estructurales y no estructurales (NS, por sus siglas en inglés) . En el caso del VHC, la generación de proteínas no estructurales maduras (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A y NS5B) es llevada a cabo por dos proteasas víricas. Se cree que la primera es una metaloproteasa y escinde la unión entre NS2 y NS3 ; la segunda es una serina proteasa contenida en la región del extremo N de NS3 (también denominada en el presente documento proteasa NS3) y actúa de mediadora de todas las posteriores escisiones cadena abajo de NS3, tanto en cis, en el sitio de escisión de NS3 y NS4A, como en trans, para el resto de los sitios NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B. La proteína NS4A parece desempeñar varias funciones, ya sea actuando de cofactor para la proteasa NS3 como ayudando en la localización en la membrana de NS3 y otros componentes de las replicasas víricas. Para la adecuada actividad de proteasa es necesaria la formación de un complejo NS3-NS4A, lo que supone una eficacia proteolítica mayor de los eventos de escisión. La proteína NS3 también muestra actividades de nucleósido trifosfatasa y AR helicasa. NS5B (también denominada VHC polimerasa) es una ARN polimerasa dependiente de ARN que está implicada en la replicación del VHC con otras proteínas del VHC, entre otras NS5A, en un complejo de replicasa.
Se desean compuestos útiles para tratar pacientes infectados por VHC que inhiban de forma selectiva la replicación viral del VHC. En particular, son deseables compuestos que sean eficaces para inhibir la función de la proteína NS5A. La proteína NS5A del VHC se describe, por ejemplo, en las siguientes referencias: S. L. Tan, et al., Virology, 284:1-12 (2001) ; K.-J. Park, et al., J. Biol . Chem. , 30711-30718 (2003) ; T. L. Tellinghuisen, et al., Nature, 435, 374 (2005) ; R. A. Love , et al., J". Virol, 83, 4395 (2009) ; N. Appel, et al., J. Biol. Chem., 281, 9833 (2006) ; L. Huang, J". Biol. Chem., 280, 36417 (2005) ; C. Rice, et al., documento WO2006/093867.
En un aspecto, la presente descripción proporciona un compuesto de fórmula (I) (i), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; en la que n es 0, 1 ó 2; X está seleccionado de entre hidrógeno, alquenilo, ciano, cicloalquilo, (cicloalquil) alquilo, halo y heterociclilo; R1 está seleccionado de entre hidrógeno y halo; R2 está seleccionado de entre hidrógeno, alquenilo, ciano, cicloalquilo, (cicloalquil) alquilo, halo y heterociclilo; o R1 y R2, junto con los átomos de carbono a los que están unidos, forman un anillo aromático de seis miembros sustituidos opcionalmente con un grupo halo; con la condición de que al menos uno de X y R2 está seleccionado de entre alquenilo, ciano, cicloalquilo, (cicloalquilalquilo) , halo y heterociclilo; cada R3 es alquilo, en el que el alquilo puede, opcionalmente, formar un anillo condensado de tres o cuatro miembros con un átomo de carbono adyacente o un anillo espirocíclico de tres o cuatro miembros con el átomo de carbono al que está unido; en el que los anillos condensados y espirocíclicos están opcionalmente sustituidos con uno o dos grupos alquilo; cada R4 está seleccionado independientemente de hidrógeno y -C(0)R5; y cada R5 está seleccionado independientemente de alcoxi, alquilo, arilalcoxi, arilalquilo, cicloalquilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, (NR°Rd) alquenilo y (NRcRd) alquilo.
En una primera modalidad del primer aspecto, la presente descripción proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que cada R5 está seleccionado de forma independiente de alcoxi, heterociclilo y (NRcRd) alquilo .
En una segunda modalidad del primer aspecto, la presente descripción proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que X es halo. En una tercera modalidad del primer aspecto, R2 es halo.
En una cuarta modalidad del primer aspecto, la presente descripción proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R1 y R2, junto con los átomos de carbono a los que están unidos, forman un anillo aromático de seis miembros opcionalmente sustituido con un grupo halo.
En una quinta modalidad del primer aspecto, la presente descripción proporciona un compuesto de Fórmula (I) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que X es hidrógeno.
En un segundo aspecto, la presente descripción proporciona una composición que comprende un compuesto de Fórmula (I) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable. En una primera modalidad del segundo aspecto, la composición comprende además al menos un compuesto adicional que tenga actividad contra el VHC. En una segunda modalidad del segundo aspecto, al menos uno de los compuestos adicionales es un interferón o una ribavirina. En una tercera modalidad del segundo aspecto, el interferón está seleccionado de entre interferón alfa-2B, interferón alfa pegilado, interferón consenso, interferón alfa-2A e interferón linfoblastoide tau.
En una cuarta modalidad del segundo aspecto, la presente descripción proporciona una composición que comprende un compuesto de la Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, un portador farmacéuticamente aceptable, y al menos un compuesto adicional que presenta actividad contra VHC, en la que al menos uno de los compuestos adicionales está seleccionado a partir de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, un compuesto que potencia el desarrollo de una respuesta de linfocitos T cooperadores de tipo 1, ARN de interferencia, ARN antisentido, Imiqimod, ribavirina, un inhibidor de inosina 5 ' -monofosfato deshidrogenasa, amantadina y rimantadina .
En una quinta modalidad del segundo aspecto, la presente descripción proporciona una composición que comprende un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, un portador farmacéuticamente aceptable y al menos un compuesto adicional que tenga actividad contra el VHC, en la que al menos uno de los compuestos adicionales es eficaz para inhibir la función de una diana seleccionada de metaloproteasa del VHC, serina proteasa del VHC, polimerasa del VHC, helicasa del VHC, proteína NS4B del VHC, entrada del VHC, ensamblaje del VHC, salida del VHC, proteína NS5A del VHC e IMPDH para el tratamiento de una infección por VHC.
En un tercer aspecto, la presente descripción proporciona un método de tratamiento de una infección por VHC en un paciente, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En una primera modalidad del tercer aspecto, el método comprende además administrar al menos un compuesto adicional que tenga actividad contra el VHC antes, después o simultáneamente al compuesto de la Fórmula (I) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En una segunda modalidad del tercer aspecto, al menos uno de los compuestos adicionales es un interferón o una ribavirina. En una tercera modalidad del tercer aspecto, el interferón está seleccionado de interferón alfa 2B, interferón alfa pegilado, interferón de consenso, interferón alfa 2A e interferón linfoblastoide tau.
En una cuarta modalidad del tercer aspecto, la presente descripción proporciona un método para tratar una infección por VHC en un paciente, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la Fórmula (I) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos un compuesto adicional que tenga actividad contra VHC antes, después o simultáneamente al compuesto de la Fórmula (I) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que al menos uno de los compuestos adicionales está seleccionado de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, un compuesto que potencia el desarrollo de una respuesta de linfocitos T auxiliares de tipo 1, ARN de interferencia, ARN antisentido, Imiqimod, ribavirina, un inhibidor de inosina 5 ' -raonofosfato deshidrogenasa, amantadina y rimantadina .
En una quinta modalidad del tercer aspecto, la presente descripción proporciona un método para tratar una infección por VHC en un paciente, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la Fórmula (I) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos un compuesto adicional que tenga actividad contra VHC antes, después o simultáneamente al compuesto de la Fórmula (I) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que al menos uno de los compuestos adicionales es eficaz para inhibir la función de una diana que está seleccionado a partir de metaloproteasa del VHC, serina proteasa del VHC, polimerasa del VHC, helicasa del VHC, proteína NS4B del VHC, entrada del VHC, ensamblaje del VHC, salida del VHC, proteína NS5A del VHC e IMPDH para el tratamiento de una infección por VHC.
Otros aspectos de la presente modalidad pueden incluir combinaciones adecuadas de modalidades descritas en el presente documento.
Se pueden encontrar aún otros aspectos y modalidades en la descripción proporcionada en el presente documento .
La descripción de la presente descripción en el presente documento se interpretaría de forma congruente con las leyes y principios de la formación de enlaces químicos. En algunos casos, puede ser necesario eliminar un átomo de hidrógeno para acomodar un sustituyente en cualquier lugar dado .
Se entenderá que los compuestos comprendidos por la presente descripción son aquellos que son adecuadamente estables para usar como un agente farmacéutico.
Se debe interpretar que la definición de cualquier sustituyente o variable en una localización particular en una molécula sea independiente de sus definiciones en otro lugar en esa molécula. Por ejemplo, cuando R1 y R2 contienen ambos un grupo R4, los dos grupos R4 pueden ser iguales o diferentes .
Todas las patentes, solicitudes de patentes y referencias bibliográficas citadas en la invención se incorporan en el presente documento por referencia en su totcilidad. En el caso de contradicciones, la presente descripción, incluyendo definiciones, prevalecerá.
Tal como se usa en el presente documento descriptivo, los siguientes términos tienen los significados indicados : Como se usa en el presente documento, las formas del singular "un", "uno" y "el/la" incluyen referencia al plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario .
A no ser que se indique de otro modo, todos los grupos arilo, cicloalquilo y heterociclilo de la presente descripción pueden estar sustituidos como se describe en cada una de sus respectivas definiciones. Por ejemplo, la parte arilo de un grupo arilalquilo puede estar sustituida como se describe en la definición del término "arilo" .
El término "alquenilo" , como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo de cadena lineal o ramificada de dos a seis átomos de carbono que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono .
El término "alqueniloxi" , tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquenilo unido a un resto molecular principal mediante un átomo de oxígeno.
El término "alqueniloxicarbonilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alqueniloxi unido a un resto molecular principal mediante un grupo carbonilo .
El término "alcoxi" , como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo unido al resto molecular principal a través de un átomo de oxígeno.
El término "alcoxialquilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno, dos o tres grupos alcoxi.
El término "alcoxialquilcarbonilo" , como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alcoxialquilo unido al grupo molecular principal a través de un grupo carbonilo .
El término "alcoxicarbonilo" , como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alcoxi unido al grupo molecular principal a través de un grupo carbonilo.
El término "alquilo," tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo derivado de un grupo hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada que contiene de uno a seis átomos de carbono. En los compuestos de la presente descripción, cuando R3 es alquilo, el alquilo puede formar, opcionalmente, un anillo de tres o cuatro miembros condensado con un átomo de carbono adyacente para proporcionar la estructura mostrada a continuación: en la que m está seleccionado de entre 1 y 2, en la que z es 0, 1, ó 2, y en la que Rs es alquilo; o en la que el alquilo puede formar, opcionalmente, un anillo espirocíclico de tres o cuatro miembros con el átomo de carbono al que está unido, para proporcionar la estructura mostrada a continuación: en la que m está seleccionado entre 1 y 2 en la que z es 0, 1 ó 2, y en la que Rs es alquilo.
El término "alquilcarbonilo" , como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo unido al resto molecular principal a través de un grupo carbonilo.
El término "alquilcarboniloxi" , tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilcarbonilo unido a un resto molecular principal mediante un átomo de oxígeno .
El término "alquilsulfañilo" , tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo unido a un resto molecular principal mediante un átomo de azufre.
El término "alquilsulfonilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo unido a un resto molecular principal mediante un grupo sulfonilo.
El término "arilo," tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo fenilo o un sistema de anillo bicíclico condensado en el que uno o ambos de los anillos es un grupo fenilo. Los sistemas de anillo bicíclico condensado están constituidos por un grupo fenilo condensado con un anillo carbocíclico aromático o no aromático de cuatro a seis miembros. Los grupos arilo de la presente descripción pueden estar unidos al resto molecular principal a través de cualquier átomo de carbono sustituible en el grupo. Ejemplos representativos de grupos arilo incluyen, aunque sin quedar limitados a los mismos, indanilo, indenilo, naftilo, fenilo y tetrahidronaftilo . Los grupos arilo de la presente descripción están opcionalmente sustituidos con uno, dos, tres, cuatro o cinco sustituyentes seleccionados independientemente de alquenilo, alcoxi, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, un segundo grupo arilo, arilalcoxi, arilalquilo, arilcarbonilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, heterociclilcarbonilo, hidroxi, hidroxialquilo, nitro, -NRxRy, (NRxRy) alquilo, oxo y -P(0)0R2, donde cada R está seleccionado independientemente de hidrógeno y alquilo; y donde la parte alquilo del arilalquilo y el heterociclilalquilo está no sustituida y donde el segundo grupo arilo, la parte arilo del arilalquilo, la parte arilo del arilcarbonilo, el heterociclilo y la parte heterociclilo del heterociclilalquilo y el heterociclilcarbonilo están además opcionalmente sustituidas con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente de alcoxi, alquilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo y nitro.
El término "arilalcoxi", tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo arilo unido al resto molecular principal a través de un grupo alcoxi .
El término "arilalcoxicarbonilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo arilalcoxi unido a un resto molecular principal a través de un grupo carbonilo .
El término "arilalquilo," tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno, dos o tres grupos arilo. La parte alquilo del arilalquilo está además opcionalmente sustituida con uno o dos grupos adicionales seleccionados independientemente de alcoxi, alquilcarboniloxi , halo, haloalcoxi, haloalquilo, heterociclilo, hidroxi y -NRcRd, estando el heterociclilo además opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente de alcoxi, alquilo, arilo no sustituido, arilalcoxi no sustituido, arilalcoxicarbonilo no sustituido, halo, haloalcoxi, haloalquilo, hidroxi, -NRxRy y oxo .
El término "arilalquilcarbonilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo arilalquilo unido a un resto molecular principal mediante un grupo carbonilo .
El término "arilcarbonilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo arilo unido a un resto molecular principal mediante un grupo carbonilo.
El término "ariloxi", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo arilo unido al resto molecular principal a través de un átomo de oxígeno.
El término "ariloxicarbonilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo ariloxi unido a un resto molecular principal a través de un grupo carbonilo.
El término "arilsulfonilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo arilo unido a un resto molecular principal mediante un grupo sulfonilo.
El término "carbonilo" , como se usa en el presente documento, se refiere a -C(0)-.
El término "carboxi," tal como se usa en el presente documento, se refiere a -C02H.
El término "ciano" , tal como se usa en el presente documento, se refiere a -CN.
El término "cicloalquilo, " tal como se usa en la presente invención, se refiere a un sistema de anillo hidrocarbonado saturado monocíclico que tiene de tres a siete átomos y ningún heteroátomo. Ejemplos representativos de grupos cicloalquilo incluyen, pero no están limitados a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo. Los grupos cicloalquilo de la presente descripción están opcionalmente sustituidos con uno, dos, tres, cuatro o cinco sustituyentes seleccionados independientemente de alcoxi, alquilo, arilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo, heterociclilo, hidroxi, hidroxialquilo, nitro y -NRxRy, estando el arilo y el heterociclilo además opcionalmente sustituidos con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente de alcoxi, alquilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo, hidroxi y nitro.
El término " (cicloalquil) alquilo" , como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno, dos, o tres grupos cicloalquilo .
El término "cicloalquiloxi" , tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo cicloalquilo unido al resto molecular principal a través de un átomo de oxígeno.
El término "cicloalquiloxicarbonilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo cicloalquiloxi unido al resto molecular principal a través de un grupo carbonilo.
El término "cicloalquilsulfonilo" , tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo cicloalquilo unido al grupo molecular principal a través de un grupo sulfonilo .
El término "formilo," tal como se usa en el presente documento, se refiere a -CHO.
El término "halo" , tal como se usa en el presente documento, se refieren a Cl, Br, F o I.
El término "haloalcoxi", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo haloalquilo unido al resto molecular principal a través de un átomo de oxígeno.
El término "haloalcoxicarbonilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo haloalcoxi unido al resto molecular principal a través de un grupo carbonilo .
El término "haloalquilo" , como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno, dos, tres o cuatro átomos de halógeno.
El término "heterociclilo", tal como se usa en el presente documento, se refiere a un anillo de cuatro, cinco, seis o siete miembros que contiene uno, dos, tres o cuatro heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno y azufre. El anillo de cuatro miembros no tiene ningún doble enlace, el anillo de cinco miembros tiene de ninguno a dos dobles enlaces y los anillos de seis y siete miembros tienen de ninguno a tres dobles enlaces. El término "heterociclilo" también incluye grupos bicíclicos en los que el anillo heterociclilo está condensado con otro grupo heterociclilo monocíclico o un anillo carbocíclico aromático o no aromático de cuatro a seis miembros; así como grupos bicíclicos con puente tales como 7-azabiciclo [2.2.1] hept-7-ilo, 2-azabiciclo [2.2.2] oct-2-ilo, 2,5-diazabiciclo [2.2.1] heptan-2ilo y 2-azabiciclo [2.2.2] oct-3-ilo. Los grupos heterociclilo de la presente descripción pueden estar unidos al resto molecular principal a través de cualquier átomo de carbono o átomo de nitrógeno en el grupo. Ejemplos de grupos heterociclilo incluyen, pero no están limitados a, benzotienilo, furilo, imidazolilo, indolinilo, indolilo, isoquinolinilo, isotiazolilo, isoxazolilo, morfolinilo, oxazolilo, piperazinilo, piperidinilo, pirazolilo, piridinilo, pirrolidinilo, pirrolopiridinilo, pirrolilo, quinolinilo, tetrahidropiranilo, tetrahidropiranilo, tiazolilo, tienilo y tiomorfolinilo . Los grupos heterociclilo de la presente descripción están opcionalmente sustituidos con uno, dos, tres, cuatro o cinco sustituyentes seleccionados independientemente de alquenilo, alcoxi, alcoxialquilo, alcoxicárbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, arilo, arilalcoxicarbonilo, arilalquilo, arilcarbonilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo, un segundo grupo heterociclilo, heterociclilalquilo, heterociclilcarbonilo, hidroxilo, hidroxialquilo, nitro, NRxRy, (NRxRy) alquilo y oxo, en los que la parte alquilo del arilalquilo y el heterociclilalquilo está no sustituida y en los que el arilo, la parte arilo del arilalquilo, la parte arilo del arilcarbonilo, el segundo grupo heterociclilo y la parte heterociclilo del heterociclilalquilo y el heterociclilcarbonilo están además opcionalmente sustituidas con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente de alcoxi, alquilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo y nitro.
El término "heterociclilalcoxi" , tal como se usa en la presente invención, se refiere a un grupo heterociclilo unido al resto molecular principal a través de un grupo alcoxi .
El término "heterociclilalcoxicarbonilo," tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo heterociclilalcoxi unido al resto molecular principal a través de un grupo carbonilo.
El término "heterociclilalquilo," tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno, dos o tres grupos heterociclilo. La parte alquilo del heterociclilalquilo está además opcionalmente sustituida con uno o dos grupos adicionales seleccionados independientemente de alcoxi, alquilcarboniloxi , arilo, halo, haloalcoxi, haloalquilo, hidroxi y -NRcRd, estando el arilo además opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente de alcoxi, alquilo, arilo no sustituido, arilalcoxi no sustituido, arilalcoxicarbonilo no sustituido, halo, haloalcoxi, haloalquilo, hidroxi y -NRxRy.
El término "heterociclilalquilcarbonilo," tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo heterociclilalquilo unido al resto molecular principal a través de un grupo carbonilo.
El término "heterociclilcarbonilo," tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo heterociclilo unido al resto molecular principal a través de un grupo carbonilo .
El término "heterocicliloxi," tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo heterociclilo unido a un resto molecular principal mediante un átomo de oxígeno.
El término "heterocicliloxicarbonilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo heterocicliloxi unido al resto molecular principal a través de un grupo carbonilo.
El término "hidroxi" , como se usa en el presente documento, se refiere a -OH.
El término "hidroxialquilo" , como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno, dos, o tres grupos hidroxilo.
El término "hidroxialquilcarbonilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo hidroxialquilo unido al resto molecular principal a través de un grupo carbonilo.
El término "nitro" , tal como se usa en el presente documento, se refiere a -N02.
El término " -NRcRd, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a dos grupos, Rc y Rd, que están unidos al resto molecular principal a través de un átomo de nitrógeno. Rc y Rd están seleccionados independientemente de hidrógeno, alqueniloxicarbonilo, alcoxialquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, cicloalquiloxi , alquilsulfonilo, arilo, arilalcoxicarbonilo, arilalquilo, arilalquilcarbonilo, arilcarbonilo, ariloxicarbonilo, arilsulfonilo, cicloalquilo, cicloalquiloxicarbonilo, cicloalquilsulfonilo, formilo, haloalcoxicarbonilo, heterociclilo, heterociclilalcoxicarbonilo, heterociclilalquilo, heterociclilalquilcarbonilo, heterociclilcarbonilo, heterocicliloxicarbonilo, hidroxialquilcarbonilo, (NReRf) alquilo, (NReRf) alquilcarbonilo, (NReRf) carbonilo, (NReRf) sulfonilo, C(NCN)OR' y -C (NCN) NRxRy, donde R' está seleccionado de alquilo y fenilo no sustituido y donde la parte alquilo del arilalquilo, el arilalquilcarbonilo, el heterociclilalquilo y el heterociclilalquilcarbonilo están además opcionalmente sustituidos con un grupo -NReRf; y donde el arilo, la parte arilo del arilalcoxicarbonilo, el arilalquilo, el arilalquilcarbonilo, el arilcarbonilo, el ariloxicarbonilo y el arilsulfonilo , el heterociclilo y la parte heterociclilo del heterociclilalcoxicarbonilo, el heterociclilalquilo, el heterociclilalquilcarbonilo, el heterociclilcarbonilo y el heterocicliloxicarbonilo están además opcionalmente sustituidos con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente de alcoxi, alquilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo y nitro.
El término " (NRcRd) alquenilo" , tal como se usa en el presente documento, se refiere a en la que Rc y Rd son como se definen en el presente documento y cada uno de Rq es independientemente hidrógeno o alquilo Ci- 3 · El término " (NRcRd) alquilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno, dos o tres grupos -NRcRd. La parte alquilo del (NRcRd) alquilo está además opcionalmente sustituida con uno o dos grupos adicionales seleccionados de alcoxi, alcoxialquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilsulfañilo, arilalcoxicarbonilo, carboxi , cicloalquilo , heterociclilo, heterociclilcarbonilo, hidroxi y (NReRf) carbonilo; estando el heterociclilo además opcionalmente sustituido con uno, dos, tres, cuatro o cinco sustituyentes seleccionados independientemente de alcoxi, alquilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo y nitro.
El término "-NReRf," tal como se usa en el presente documento, se refiere a dos grupos, Re y Rf, que están unidos al resto molecular principal a través de un átomo de nitrógeno. Re y Rf están seleccionados independientemente de hidrógeno, alquilo, arilo no sustituido, arilalquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, (cicloalquil) alquilo no sustituido, heterociclilo no sustituido, heterociclilalquilo no sustituido, (NRRy) alquilo y (NRxRy) carbonilo.
El término " (NReRf) alquilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno, dos o tres grupos -NReRf .
El término " (NReRf) alquilcarbonilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo (NReRf) alquilo unido a un resto molecular principal a través de un grupo carbonilo .
El término " (NReRf) carbonilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo -NReRf unido al resto molecular principal a través de un grupo carbonilo.
El término " (NReRf) sulfonilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo -NReRf unido al resto molecular principal a través de un grupo sulfonilo.
El término "-NRxRy," tal como se usa en el presente documento, se refiere a dos grupos, Rx y Ry, que están unidos al resto molecular principal a través de un átomo de nitrógeno. Rx y Ry están seleccionados independientemente de hidrógeno, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, arilo no sustituido, arilalcoxicarbonilo no sustituido, arilalquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterociclilo no sustituido y (NRx Ry' ) carbonilo, seleccionándose Rx' y Ry' independientemente de hidrógeno y alquilo.
El término " (NRxRy) alquilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno, dos o tres grupos -NRxRy.
El término " (NRxRy) carbonilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo -NRxRy unido al resto molecular principal a través de un grupo carbonilo.
El término "-NRxRy," tal como se usa en el presente documento, se refiere a dos grupos, Rx y Ry, que están unidos al resto molecular principal a través de un átomo de nitrógeno. Rx y Ry están seleccionados independientemente de hidrógeno y alquilo.
El término " (NRx Ry' ) carbonilo, " tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo -NRxRy' unido al resto molecular principal a través de un grupo carbonilo.
El término "oxo" , como se usa en el presente documento, se refiere a =0.
El término "sulfonilo", tal como se usa en el presente documento, se refiere a -S02-.
Existen centros asimétricos en los compuestos de la presente descripción. Estos centros se designan con los símbolos "R" o "S" , dependiendo de la configuración de los sustituyentes alrededor del átomo de carbono quiral. Debe entenderse que la descripción engloba todas las formas isoméricas estereoquímicas, o sus mezclas, que poseen la capacidad de inhibir NS5A. Se pueden preparar estereoisómeros individuales de los compuestos sintéticamente a partir de materiales iniciales comercialmente disponibles que contienen centros quirales o por preparación de mezclas de productos enantioméricos seguido de separación como por ejemplo conversión a una mezcla de diastereómeros seguido de separación o recristalización, técnicas cromatográficas o separación directa de enantiómeros en columnas cromatográficas quirales. Los compuestos de partida de estereoquímica particular, bien están comercialmente disponibles o bien se pueden preparar y resolver mediante técnicas conocidas en la técnica.
Ciertos compuestos de la presente descripción pueden existir también en formas conformacionales estables diferentes que pueden ser separables. La asimetría torsional debida a rotación restringida sobre un enlace individual asimétrico, por ejemplo debido a su impedimento estérico o tensión de anillo, puede permitir la separación de conformadores diferentes. La presente descripción incluye cada isómero conformacional de estos compuestos y mezclas de los mismos.
Los compuestos de la presente descripción también existen como tautómeros; por tanto la presente descripción también incluye formas tautoméricas .
La expresión "compuestos de la presente descripción" y expresiones equivalentes, pretenden incluir compuestos de Fórmula (I) , y sus enantiómeros , diastereoisómeros y sales farmacéuticamente aceptables. De forma similar, las referencias a los intermedios se pretende que engloben sus sales cuando el contexto lo permita.
Se pretende que la presente descripción incluya todos los isótopos de los átomos que aparecen en los presentes compuestos. Los isótopos incluyen los átomos que tienen el mismo número atómico pero diferentes números másicos. Como ejemplo general y sin limitación, los isótopos de hidrógeno incluyen deuterio y tritio. Los isótopos de carbono incluyen 13C y 14C. Los compuestos marcados con isótopos de la invención generalmente se pueden preparar por técnicas convencionales conocidas por los expertos en la técnica o mediante procesos análogos a los descritos en el presente documento, usando un reactivo marcado con isótopo apropiado en lugar del reactivo no marcado que se usa en otros casos. Tales compuestos pueden tener una diversidad de usos potenciales, por ejemplo como estándares y reactivos en determinación de actividad biológica. En el caso de los isótopos estables, los compuestos pueden tener el potencial de modificar favorablemente propiedades biológicas, farmacológicas o farmacocinéticas .
Los compuestos de la presente descripción pueden existir como sales farmacéuticamente aceptables. La expresión "sal farmacéuticamente aceptable" , como se usa en el presente documento, representa sales o formas híbridas de los compuestos de la presente descripción que son solubles en agua o solubles en aceite o dispersables , que son, dentro del alcance del juicio médico bien fundamentado, adecuadas para usar en contacto con los tejidos de pacientes sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica, u otro problema o complicación es proporcional con una relación beneficio/riesgo razonable, y son efectivos para su uso deseado. Las sales se pueden preparar durante el aislamiento y purificación finales de los compuestos o por separado haciendo reaccionar un átomo de nitrógeno adecuado con un ácido adecuado. Las sales de adición de ácido representativas incluyen acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, canforato, canforsulfonato; digluconato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, formiato, fumarato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, mesitilenosulfonato, metanosulfonato, naftilenosulfonato, nicotinato, 2-naftalenosulfonato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, 3-fenilproprionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tricloroacetato, trifluoroacetato, fosfato, glutamato, bicarbonato, para-toluenosulfonato y undecanoato.
Ejemplos de ácidos que se pueden usar para formar sales de adición farmacéuticamente aceptables incluyen ácidos inorgánicos tales como clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico y fosfórico, y ácidos orgánicos tales como ácido oxálico, maleico, succínico y cítrico.
Las sales de adición básica se pueden preparar durante el aislamiento y la purificación finales de los compuestos haciendo reaccionar un grupo carboxilo con una base adecuada tal como el hidróxido, carbonato, o bicarbonato de un catión metálico o con amoniaco o una amina primaria, secundaria, o terciaria. Los cationes de sales farmacéuticamente aceptables incluyen litio, sodio, potasio, calcio, magnesio y aluminio, así como cationes de amina cuaternario no tóxicos tales como amonio, tetrametilamonio, tetraetilamonio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina , dietilamina, etilamina, tributilamina , piridina, ?,?-dimetilanilina, N-metilpiperidina, N-metilmorfolina, diciclohexilamina, procaína, dibencilamina, N, -dibencilfenetilamina y N, N' -dibenciletilendiamina . Otras aminas orgánicas representativas útiles para la formación de sales de adición básicas incluyen etilendiamina, etanolamina, dietanolamina , piperidina y piperazina.
Cuando es posible que, para uso en terapia, se puedan administrar cantidades terapéuticamente eficaces de un compuesto de Fórmula (I) , así como sus sales farmacéuticamente aceptables, en forma de compuestos químicos en bruto, es posible presentar el ingrediente activo como una composición farmacéutica. Por consiguiente, la descripción proporciona además composiciones farmacéuticas que incluyen cantidades terapéuticamente eficaces de compuestos de Fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables, y uno o más portadores, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables. La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz," tal como se usa en el presente documento, se refiere a la cantidad total de cada ingrediente activo que es suficiente para mostrar un beneficio significativo al paciente, por ejemplo, una reducción mantenida de la carga vírica. Cuando se aplica a un principio activo individual, administrado solo, el término se refiere a ese ingrediente solo. Cuando se aplica a una combinación, el término se refiere a cantidades combinadas de los principios activos que provoca el efecto terapéutico, ya se administren combinados, en serie o de forma simultánea. Los compuestos de la Fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables, son tal como se han descrito con anterioridad. El/los portador (es) , diluyente (s) , o excipiente (s) deben ser aceptables en el sentido de que sean compatibles con los otros ingredientes de la formulación y no deletéreos para el receptor de los mismos. De acuerdo con otro aspecto de la presente descripción se proporciona también un procedimiento para la preparación de una formulación farmacéutica que incluye mezclar un compuesto de Fórmula (I) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, con uno o más portadores, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables. El término "farmacéuticamente aceptable", tal como se usa en el presente documento, se refiere a los compuestos, materiales, composiciones y/o formas farmacéuticas que son, dentro del alcance del criterio médico habitual, adecuados para usar en contacto con los tejidos de pacientes sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación acorde con una relación beneficio/riesgo razonable, y son eficaces para su uso deseado.
Las formulaciones farmacéuticas pueden presentarse en formas monodosis que contienen una cantidad predeterminada de principio activo por monodosis. En una monoterapia para la prevención y tratamiento de enfermedad mediada por VHC son típicos niveles de dosis que varían de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 250 miligramos por kilogramo ("mg/kg") de peso corporal por día, con preferencia de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por día de los compuestos de la presente descripción. Habitualmente , las composiciones farmacéuticas de la presente descripción se administrarán desde aproximadamente 1 a aproximadamente 5 veces al día o de forma alternativa, en forma de infusión continua. La administración puede usarse como terapia crónica o aguda. La cantidad de principio activo que puede combinarse con los materiales portador para producir una única forma farmacéutica variará dependiendo de la afección que se esté tratando, de la gravedad de la afección, del tiempo de administración, la vía de administración, la velocidad de excreción del compuesto usado, la duración del tratamiento y la edad, sexo, peso y afección del paciente. Las formulaciones monodosis son las que contienen una dosis o subdosis diaria, tal como se indica anteriormente en el presente documento, o una fracción apropiada de las mismas de un principio activo. Generalmente, el tratamiento se inicia con dosis pequeñas sustancialmente por debajo de la dosis óptima del compuesto. Después, la dosis se aumenta en pequeños incrementos hasta que se alcanza el efecto óptimo en las circunstancias dadas. En general, el compuesto se administra, de la forma más deseable a un nivel de concentración que generalmente conseguirá resultados antiviraímente eficaces sin provocar efectos secundarios dañinos ni perjudiciales.
Cuando las composiciones de esta descripción comprenden una combinación de un compuesto de la presente descripción y uno o más agentes terapéuticos o profilácticos adicionales, tanto el compuesto como el agente adicional habitualmente están presentes a niveles de dosis de aproximadamente 10 a 150%, y más preferentemente entre aproximadamente 10 y 80% de la dosis que normalmente se administra en una pauta de monoterapia.
Las formulaciones farmacéuticas se pueden adaptar para administración por cualquier vía apropiada, por ejemplo por la vía oral (incluyendo la bucal o la sublingual) , rectal, nasal, tópica (incluyendo bucal, sublingual, o transdérmica) , vaginal, o parenteral (incluyendo inyecciones o infusiones subcutáneas, intracutáneas , intramusculares, intraarticulares , intrasinoviales , intraesternales , intratecales , intralesionales , intravenosas, o intradérmicas) . Tales formulaciones se pueden preparar por cualquier procedimiento conocido en la técnica de farmacia, por ejemplo por unión en asociación el ingrediente activo con el/los portador (es) o excipiente (s) . Son preferentes la administración oral o la administración mediante inyección.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para administración oral pueden presentarse como unidades discretas tales como cápsulas o comprimidos; polvos o gránulos; soluciones o suspensiones en líquidos acuosos o no acuosos; espumas o batidos comestibles; o emulsiones de aceite-en-agua o emulsiones de agua-en-aceite .
Por ejemplo, para administración oral en la forma de un comprimido o una cápsula, el componente de fármaco activo se puede combinar con un portador inerte farmacéuticaraente aceptable no tóxico, oral tal como etanol, glicerol, agua y similares. Los polvos se prepararon moliendo el compuesto a un tamaño fino adecuado y mezclando con un portador farmacéutico molido de forma similar tal como un carbohidrato comestible, como, por ejemplo, almidón o manitol . También pueden estar presentes agente aromatizante, conservante, dispersante y colorante.
Las cápsulas se hacen preparando una mezcla en polvo, como se describe anteriormente y cubiertas de gelatina formadas cargadas. Se pueden añadir agentes deslizantes y lubricantes tales como sílice coloidal, talco, estearato de magnesio, estearato de. calcio, o polietilenglicol sólido a la mezcla en polvo antes de la operación de carga. Un agente disgregante o solubilizante tal como agar-agar, carbonato de calcio, o carbonato de sodio puede también añadirse para incrementar la disponibilidad del medicamento cuando la cápsula es ingerida.
Además, cuando se desee o sea necesario, también pueden incorporarse aglutinantes, lubricantes, agentes disgregantes y agentes colorantes adecuados a la mezcla. Los aglutinantes adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales tales como glucosa o beta- lactosa, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas tales como goma arábiga, goma de tragacanto o alginato sódico, carboximetilcelulosa , polietilenglicol y similares. Los lubricantes usados en estas formas de dosificación incluyen oleato de sodio, cloruro de sodio y similares. Los disgregadores incluyen, sin limitación, almidón, metilcelulosa, agar, bentonita, goma xantana, y similares. Los comprimidos se formularon, por ejemplo, preparando un mezcla en polvo, granulando o soldando con fusión incompleta, añadiendo un lubricante y disgregante, y prensando en comprimidos. Se preparó una mezcla en polvo mezclando el compuesto, molido adecuadamente, con un diluyente o base como se describe anteriormente, y opcionalmente , con un ligando tal como carboximetilcelulosa , un alginato, galatina, o polivinilpirrolidina, un retardante de solución tal como parafina, un acelerador de resorción tal como una sal cuaternaria y/o agente de absorción tal como bentonita, caolín o fosfato dicálcico. La mezcla en polvo se puede granular por humectación con un aglutinante tal como jarabe, pasta de almidón, mucílago de goma arábiga, o soluciones de materiales celulósicos o poliméricos y forzándola a pasar a través de un tamiz. Como una alternativa para granular, la mezcla en polvo puede hacerse pasar por la máquina compresora y el resultado son postas formadas imperfectamente rotas en gránulos. Los gránulos se pueden lubricar para evitar que se adhieran al comprimido formando moldes por medio de la adición de ácido esteárico, una sal de estearato, talco, o aceite mineral. La mezcla lubricada se comprime después en comprimidos . Los compuestos de la presente descripción se pueden combinar también con un portador inerte que fluye libre y se pueden comprimir en comprimidos directamente sin ir a través de las etapas de granulación o formación de postas. Se pueden proporcionar un revestimiento protector transparente u opaco constituido por un revestimiento sellante de goma laca, un revestimiento de azúcar o de material polimérico, y un revestimiento pulido de cera. Se pueden añadir tintes a estos recubrimientos para distinguir dosificaciones unitarias diferentes.
Los fluidos orales tales como una solución, jarabes y elixires se pueden preparar en forma de dosificación unitaria tal que una cantidad dada contiene una cantidad predeterminada del compuesto. Los jarabes se pueden preparar disolviendo el compuesto en una solución acuosa adecuadamente aromatizada, mientras que se prepararon elixires por el uso de un portador no tóxico. Se pueden añadir también solubilizantes y emulsionantes tales como alcoholes isoestearílicos etoxilados y éteres de polioxietileno sorbitol, conservantes, aditivo aromático tal como aceite de menta o edulcorantes naturales, o sacarina u otros edulcorantes artificiales y similares.
Donde sea apropiado, se pueden microencapsular las formulaciones de dosificación unitaria para administración oral. La formulación se pueden preparar también para prolongar o mantener la liberación como por ejemplo revistiendo o incrustando material particulado en polímeros, ceras, o similares.
Los compuestos de la Fórmula (I) , y sus sales farmacéuticamente aceptables, también pueden administrarse en forma de sistemas de administración de liposomas, tales como vesículas unilaminares , vesículas unilaminares grandes y vesículas multilaminares . Los liposomas se pueden formar a partir de una diversidad de fosfolípidos , tales como colesterol, estearilamina, o fosfatidilcolinas .
Los compuestos de la Fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables también pueden administrarse usando anticuerpos monoclonales como portadores individuales a los que se acoplan las moléculas de compuesto. Los compuestos pueden estar acoplados también con polímeros solubles como transportadores de fármacos marcables como objetivos. Tales polímeros pueden incluir polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamidafenol , polihidroxietilaspartamidafenol , o polietilenóxidopolilisina sustituida con residuos de palitoílo. Además, los compuestos pueden acoplarse a una clase de polímeros biodegradables útiles en lograr liberación controlada de un fármaco, por ejemplo, ácido poliláctico, caprolactona poliépsilon, ácido polihidroxibutírico, poliortoésteres , poliacetales , polidihidropiranos , policianoacrilatos , y copolímeros de bloque de hidrogeles reticulados o anfipáticos.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para administración transdérmica pueden presentarse como parches discretos que se desea que permanezcan en contacto íntimo con la epidermis de un receptor durante un periodo de tiempo prolongado. Por ejemplo, el ingrediente activo puede liberarse del parche por iontoforesis como se describe de forma general en Pharmaceutical Research, 3(6):318 (1986).
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para administración tópica se pueden formular como pomadas, cremas, suspensiones, lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, pulverizaciones, aerosoles o aceites.
Para tratamientos del ojo o de otros tejidos externos, por ejemplo boca y piel, las formulaciones se aplican preferentemente como una pomada o crema tópica. Cuando se formula en una pomada, el ingrediente activo se puede usar bien con una base parafínica o bien con una base de pomada mezclable en agua. Alternativamente, el ingrediente activo se puede formular en una crema con una base de aceite-en-agua o con una base de agua-en-aceite .
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para administraciones tópicas para el ojo incluyen gotas oculares en las que el ingrediente activo se disuelve o suspende en un portador adecuado, especialmente un disolvente acuoso.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para administración tópica en la boca incluyen tabletas, pastillas y enjuagues bucales.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para administración rectal pueden presentarse como supositorios o como enemas .
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para administración nasal en las que el portador es un sólido incluyen un polvo grueso que tiene un tamaño de partículas de por ejemplo en el intervalo de 20 a 500 micrómetros que se administra en la forma en que se toma rape, es decir, por inhalación rápida a través de la vía nasal desde un recipiente de polvo mantenido próximo a la nariz. Las formulaciones adecuadas en las que el transportador es un líquido, para administración como una aspersión nasal o como gotas nasales, incluyen soluciones acuosas o soluciones aceitosas del ingrediente activo.
Las formulaciones adaptadas para administración por inhalación incluyen espolvoreados o neblinas de partículas finas, que se pueden generar por medio de diversos tipos de aerosoles, nebulizadores, o insufladores presurizados en dosis medidas.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para administración vaginal pueden presentarse como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones de aspersión.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para administración parenteral incluyen soluciones de inyección estériles acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, reguladores de pH, bacteriostáticos y solutos que vuelven a la formulación isotónica con la sangre del receptor deseado; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes en suspensión y agentes espesantes. Las formulaciones pueden presentarse en recipientes de dosis unitaria o de multidosis, por ejemplo ampollas y viales sellados, y pueden almacenarse en una condición secada por congelación ( liofilizada) que requiere sólo la adición del transportador líquido estéril, por ejemplo agua para inyecciones, inmediatamente antes de usar. Se pueden preparar soluciones y suspensiones de inyección extemporáneas a partir de polvos estériles, gránulos y comprimidos.
Debería entenderse que además de los ingredientes mencionados en particular anteriormente, las formulaciones pueden incluir otros agentes convencionales en la técnica que se han considerado para el tipo de formulación en cuestión, por ejemplo aquellos adecuados para administración oral pueden incluir agentes aromatizantes.
El término "paciente" incluye seres humanos y otros mamíferos.
El término "tratar" se refiere a: (i) prevenir la aparición de una enfermedad, trastorno o estado patológico en un paciente que puede estar predispuesto a la enfermedad, trastorno y/o estado patológico pero al que todavía no se le ha diagnosticado que lo tiene; (ii) inhibir la enfermedad, trastorno o estado patológico, es decir, detener su desarrollo; y (iii) aliviar la enfermedad, trastorno o estado patológico, es decir, causando la regresión de la enfermedad, trastorno y/o estado patológico.
Los compuestos de la presente descripción también se pueden administrar con una ciclosporina , por ejemplo, ciclosporina A. Se ha demostrado que la ciclosporina A es activa contra el VHC en ensayos clínicos {Hepatology 2003, 38, 1282; Biochem. Biophys . Res. Commun . 2004, 313, 42; J.
Gastroenterol. 2003, 38, 567) .
La Tabla 1 a continuación enumera algunos ejemplos ilustrativos de compuestos que se pueden administrar con los compuestos de esta descripción. Los compuestos de la descripción se pueden administrar con otros compuestos con actividad contra el VHC en terapia de combinación, bien de forma conjunta o por separado o combinando los compuestos para formar una composición.
Tabla 1 Los compuestos de la presente descripción también se pueden usar como reactivos de laboratorio. Los compuestos pueden ser una contribución decisiva para proporcionar herramientas de investigación para diseñar ensayos de replicación del virus, validación de sistemas de ensayo en animales y estudios de biología estructural para potenciar más el conocimiento de los mecanismos de la enfermedad por VHC. Además, los compuestos de la presente descripción son útiles para establecer o determinar el sitio de unión de otros compuestos antivirales, por ejemplo, por inhibición competitiva .
Los compuestos de esta descripción también pueden ser útiles para tratar o prevenir contaminación viral de materiales y por tanto reducir el riesgo de infección viral de laboratorio o personal médico o pacientes que entren en contacto con tales materiales, por ejemplo, sangre, tejidos, instrumental y prendas quirúrgicas, instrumental y prendas de laboratorio, y aparatos y materiales para la extracción o transfusión de sangre.
Esta descripción pretende incluir compuestos que tienen la Fórmula (I) cuando se preparan por procedimientos de síntesis o por procedimientos metabólicos que incluyen los que se producen en el cuerpo humano o animal (in vivo) o procedimientos que se producen in vi ro.
Las abreviaturas usadas en la presente solicitud, incluyendo en particular en los ejemplos ilustrativos siguientes, son bien conocidas por los expertos en la técnica. Algunas de las abreviaturas usadas son las siguientes: aprox, durante unos; min para minutos; h o hr para horas; ta o TA para la temperatura ambiente Tr para tiempo de retención; Tr para el tiempo de retención; TFA para ácido trifluoroacético; DMSO para dimetilsulfóxido; Me para metilo; THF para tetrahidrofurano; t-Bu o t-Bu para tere-butilo; EDCI para 1- ( 3 -dimetilaminopropil ) -3 -etilcarbodiimida clorhidrato; DMAP para 4 -dimetilaminopiridina; DBU para 1,8-diazabicicloundec-7-eno; Ph para fenilo; DEA para dietilamina ; Et para etilo; DMF para N, -dimetilformamida ; OAc para acetato; HMDS para hexametildisilano; pTsOH para ácido paratoluenosulfónico; iPr2EtN, DIEA, o DIPEA para diisopropiletilamina; EtOAc o EtOAc o EA para acetato de etilo; Et3SiH para trietilsilano; MeOH para metanol ; TMSCHN2 para trimetilsilildiazometano; H-D-Ser-OBzl . HC1 para D-serina bencilo éster clorhidrato; EtOH para etanol; Me2 para dimetilsulfuro ; TEA o Et3N para trietilamina ; LiH DS para hexametildisilazida de litio; DIBAL para hidruro de diisobutilaluminio ; TBDMS-Cl para cloruro de terc-butildimetilsililo; i-PrOH para isopropanol; Boc, boc, o BOC para terc-butoxicarbonilo; Cbz-Cl para cloroformiato de bencilo; Bn para bencilo; DEAD para dietilazodicarboxilato; mCPBA para ácido meta-cloroperoxibenzoico; DCM para diclorometano; TMSCN para cianuro de trimetilsililo; ACN o MECN para acetonitrilo ; DPPPE para 1,5-bis (difenilfosfino) pentano; TMEDA para tetrametiletilendiamin ; DMA para N, N-dimetilacetamida ; MeOD para CD3OD; Hex para hexanos ; NaOEt para etóxido sódico; MTBE para metil tere butil éter; NCS para N-clorosuccinimida; Et20 para éter dietílico; DME para 1 , 2 -dimetoxietano; y EEDQ para N-etoxicarbonil-2-etoxi-l, 2 -dihidroquinolina.
La presente descripción se describirá ahora en relación con determinadas modalidades que no se pretende que limiten su alcance. Por el contrario, la presente descripción abarca todas las alternativas, modificaciones y equivalentes y que puedan incluirse dentro del alcance de las reivindicaciones. Así, los siguientes ejemplos, que incluyen modalidades específicas, ilustrarán una práctica de la presente descripción, entendiéndose que los ejemplos son para fines de ilustración de determinadas modalidades y se presentan para proporcionar lo que se cree que es la descripción más útil y fácilmente entendible de sus procedimientos y aspectos conceptuales.
Los materiales de partida pueden obtenerse de fuentes comerciales o prepararse mediante procedimientos ya establecidos en la bibliografía conocidos por las personas expertas en la técnica.
SÍNTESIS DE CAPS COMUNES Condiciones de análisis de los compuestos La valoración de la pureza y el análisis de masas de baja resolución se llevaron a cabo en un sistema de CL Shimadzu CL acoplado con un sistema de EM Waters MICROMASS® ZQ. Se apreciará que los tiempos de retención pueden variar ligeramente entre máquinas. Condiciones adicionales de CL aplicables a la presente sección, a no ser que se indique de otro modo.
Condiciones de EM- 1 Columna = XTERRA® 3.0 X 50 % Inicial de B % Final de B = 100 empo de gradiente = 2 min Tiempo de parada = 3 min Caudal = 5 ml/min Longitud de nm Disolvente A = TFA al 0.1 90Í Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H2O al 10? Condiciones de EM-W2 Columna = XTERRA® 3.0 X 50 rara S7 % Inicial de B = 0 % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 3 min Tiempo de parada = 4 min Caudal = 4 ml/min Longitud de nm Disolvente A = TFA al 0.1% en metanol al 10%/H2O al 90% Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H2O al 10% Condiciones de EM-W5 Columna = XTERRA® 3.0 X 50 mm S7 % Inicial de B = 0 % Final de B = 30 Tiempo de gradiente = 2 min Tiempo de parada = 3 min Caudal = 5 ml/min Longitud de nm Disolvente A = TFA al 0.1% en metanol al 10%/H2O al 90% Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H2O al 10% Condiciones-DI Columna = XTERRA® C18 3.0 X 50 mm S7 % Inicial de B = 0 % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 3 min Tiempo de parada = 4 min Caudal = 4 ml/min Longitud de nm Disolvente A = TFA al 0.1% en metanol al 10%/H2O al 90% Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H2O al 10% Condiciones-D2 Columna = PHENOMENEX® Luna 4.6 X 50 mm S10 % Inicial de B = O % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 3 min Tiempo de parada = 4 min Caudal = 4 ml/min Longitud de nm Disolvente A = TFA al 0.1% en metanol al 10%/H2O al 90; Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H2O al 10! Condiciones-M3 Columna = XTERRA® C18 3.0 X 50 mm S7 % Inicial de B = 0 % Final de B = 40 Tiempo de gradiente = 2 min Tiempo de parada = 3 min Caudal = 5 ml/min Longitud de nm Disolvente A = TFA al 0.1% en metanol al 10%/H20 al 90% Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H2O al 10! Condición I Columna = PHENOMENEX® Luna 3.0X 50 mm S10 % Inicial de B = 0 % Final de B = 100 empo de gradiente = 2 min Tiempo de parada = 3 min Caudal = 4 ml/min Longitud de nm Disolvente A = TFA al 0.1 90% Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H2O al 10% Condición II Columna = PHENO ENEX® Luna 4.6X50 mm S10 % Inicial de B = 0 % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 2 min Tiempo de parada = 3 min Caudal = 5 ml/min Longitud de nm Disolvente A = TFA al 0.1% en metanol al 10%/H2O al 90% Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H2O al 10% Condición III Columna = HPLC XTERRA® C18 3.0 x 50mm S7 % Inicial de B = 0 % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 3 min Tiempo de parada = 4 min Caudal = 4 mi/min Longitud de nm Disolvente A = TFA al 0.1% en metanol al 10%/H2O al 90% Disolvente B = TFA al 0.1% en metanol al 90%/H2O al 10s Cap-1 Ácido (R) -2- (dimetilamino) -2-fenilacético Se añadió una suspensión de Pd al 10%/C (2.0 g) en metanol (10 mi) a una mezcla de (R) -2-fenilglicina (10 g, 66.2 mmol) , formaldehído (33 mi de 37% en peso en agua), HC1 1N (30 mi) y metanol (30 mi) y se expuso a H2 (413.57 kPa) durante 3 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas (CELITE®) y el filtrado se concentró a vacío. El material bruto resultante se recristalizó en isopropanol proporcionando la sal HC1 de Cap-1 como agujas blancas (4.0 g) . Rotación óptica: -117.1° [c = 9.95 mg/ml en H20; ? = 589 nm] . RMN de ¾ (DMS0-d6, d = 2.5 ppm, 500 MHz) : d 7.43-7.34 (m, 5H) , 4.14 (s, 1H) , 2.43 (s, 6H) ; CL (Condición I): TR = 0.25; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H] + C10Hi4NO2 180.10; encontrado 180.17; EMAR: Anal. Calculado para [M+H] + C10Hi4NO2 180.1025; encontrado 180.1017.
Cap-2 Ácido (R) -2- (dietilamino) -2-fenilacético Se añadió NaBH3CN (6.22 g, 94 ramol) en porciones durante unos pocos minutos a una mezcla enfriada (hielo/agua) de (R) -2-fenilglicina (6.02 g, 39.8 mmol) y MeOH (100 mi), y se agitó durante 5 min. Se añadió acetaldehído (10 mi) gota a gota durante 10 minutos y se continuó agitando a la misma temperatura fría durante 45 minutos y a temperatura ambiente durante -6.5 horas. La mezcla de reacción se volvió a enfriar con baño de hielo- agua, se trató con agua (3 mi) y luego se inactivo con una adición gota a gota de HCl concentrado durante ~ 45 min hasta que el pH de la mezcla fue ~ 1.5-2.0. El baño de enfriamiento se retiró y se continuó agitando mientras se añadía HCl concentrado con el fin de mantener el pH de la mezcla aproximadamente a 1.5-2.0. La mezcla de reacción se agitó durante una noche, se filtró para separar la suspensión blanca y el filtrado se concentró a vacío. El material bruto se recristalizó en etanol proporcionando la sal HCl de Cap- 2 como un sólido blanco brillante en dos tandas (tanda-1: 4.16 g; tanda-2: 2.19 g) . RM de 1H (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 ???) : 10.44 (1.00, s ancho, 1H) , 7.66 (m, 2H) , 7.51 (m, 3H) , 5.30 (s, 1H) , 3.15 (m ancho, 2H) , 2.98 (m ancho, 2H) , 1.20 (s ancho aparente, 6H) . Tanda-Ir [a] 25 - 102.21° (c = 0.357, H20) ; canda-2: [a] 25 -99.7° (c = 0.357, H20) . CL (Condición I) : TR = 0.43 min; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H] + Ci2Hi8N02 : 208.13 ; encontrado 208.26 Cap-3 Se añadió secuencialmente acetaldehído (5.0 mi, 89.1 mmol) y una suspensión de Pd al 10%/C (720 mg) en metanol/H20 (4 ml/l mi) a una mezcla enfriada (~ 15 °C) de (R) -2-fenilglicina (3.096g, 20.48 mmol), HC1 1N (30 mi) y metanol (40 mi) . Se retiró el baño de enfriamiento y la mezcla de reacción se agitó bajo un globo de H2 durante 17 horas. Se añadió más acetaldehído (10 mi, 178.2 mmol) y se continuó agitando en atmósfera de H2 durante 24 horas [Nota: el suministro de H2 se reponía cuando era necesario a través de la reacción] . La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas (CELITE®) y el filtrado se concentró a vacío. El material bruto resultante se recristalizó en isopropanol proporcionando la sal HCl de ácido (R) -2- (etilamino) -2-fenilacético como un sólido blanco brillante (2.846 g) . RMN de XH (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : d 14.15 (s ancho, 1H) , 9.55 (s ancho, 2H) , 7.55-7.48 (m, 5H) , 2.88 (m ancho, 1H) , 2.73 (m ancho, 1H) , 1.20 (t aparente, J = 7.2, 3H) . CL (Condición I) : TR = 0.39 min; índice de homogeneidad >95%; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H] + Ci0Hi4 O2 : 180.10; encontrado 180.18.
Se añadió una suspensión de Pd al 10%/C (536 mg) en metanol/H20 (3 ml/1 mi) a una mezcla de ácido (R) -2- (etilamino) - 2 - fenilacético/HCl (1.492 g, 6.918 mmol), formaldehído (20 mi de 37% en peso en agua), HCl 1N (20 mi) y metanol (23 mi) . La mezcla de reacción se agitó bajo un globo de H2 durante -72 horas, en el que se el suministro de H2 se reanudaba según se necesitaba. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas ( CELITE® ) y el filtrado se concentró a vacío. El material bruto resultante se recristalizó en isopropanol (50 mi) proporcionando la sal HCl de Cap-3 como un sólido blanco (985 mg) . RMN de 1H (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : d 10.48 (s ancho, 1H), 7.59-7.51 (m, 5H) , 5.26 (s, 1H) , 3.08 (s ancho aparente, 2H) , 2.65 (s ancho, 3H) , 1.24 (m ancho, 3H) . CL (Condición I) : TR = 0.39 min; índice de homogeneidad >95%; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H] + CnHi6N02: 194.12; encontrado 194.18; EMAR: Anal. Calculado para [M+H] + CuH16N02: 194.1180; encontrado 194.1181. Ácido (R) -2- (metoxicarbonilamino) -2 - fenilacético Se añadió ClC02Me (3.2 mi, 41.4 mmol) gota a gota a una semisolución en THF enfriada (hielo/agua) (410 mi) de 2-amino-2-fenilacetato de (R) - terc-butilo/HCl (9.877 g, 40.52 mmol) y diisopropiletilamina (14.2 mi, 81.52 mmol) durante 6 min, y se agitó a una temperatura similar durante 5.5 horas. El componente volátil se eliminó a vacío, y el residuo se repartió entre agua (100 mi) y acetato de etilo (200 mi) . La fase orgánica se lavó con HCl 1N (25 mi) y solución saturada de NaHC03 (30 mi) , se secó (MgS04) , se filtró y se concentró a vacío. El aceite resultante incoloro se trituró en hexanos, se filtró y se lavó con hexanos (100 mi) proporcionando 2- (metoxicarbonilamino) -2-fenilacetato de (R) - tere-butilo como un sólido blanco (7.7 g) . RMN de ?? (DMS0-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : 7.98 (d, J = 8.0, 1H) , 7.37-7.29 (m, 5H) , 5.09 (d, J = 8, 1H) , 3.56 (s, 3H) , 1.33 (s, 9H) . CL (Condición I) : TR = 1.53 min; índice de homogeneidad -90 %; CL-EM: Anal. Calculado para [M+Na] + Ci4Hi9 Na04 : 288.12; encontrado 288.15.
Se añadió TFA (16 mi) gota a gota a una solución enfriada (hielo/agua) en CH2C12 (160 mi) del producto anterior durante 7 minutos y se retiró el baño de enfriamiento y la mezcla de reacción se agitó durante 20 horas. Puesto que la desprotección todavía no fue completa, se añadió más TFA (1.0 mi) y se continuó agitando durante otras 2 horas más. El componente volátil se eliminó a vacío, y el residuo oleoso resultante se trató con éter dietílico (15 mi) y hexanos (12 mi) proporcionando un precipitado. El precipitado se filtró y se lavó con éter dietílico/hexanos (relación -1:3; 30 mi) y se secó a vacío proporcionando Cap-4 como un sólido blanco apelusado (5.57 g) . Rotación óptica: -176.9° [c = 3.7 mg/ml en H20; ? = 589 nm] . RMN de XH (DMSO-ds, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : d 12.84 (s ancho, 1H) , 7.96 (d, J = 8.3, 1H) , 7.41-7.29 (m, 5H) , 5.14 (d, J = 8.3, 1H) , 3.55 (s, 3H) . CL (Condición I) : TR = 1.01 min; índice de homogeneidad >95%; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H]+ CioH12N04 210.08; encontrado 210.17; EMAR: Anal. Calculado para [M+H] + C10H12 O4 210.0766; encontrado 210.0756.
Se calentó a 100°C durante 21 horas una mezcla de (R) - 2 - f eni lgl i c ina (1.0 g, 6.62 mmol) , 1 , 4 - dibromobut ano (1.57 g, 7.27 mmol) y Na2C03 (2.10 g, 19.8 mmol) en etanol (40 mi) . La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se filtró, y el filtrado se concentró a vacío. El residuo se disolvió en etanol y se acidificó con HC1 1N hasta H 3-4, y el componente volátil se eliminó a vacío. El material bruto resultante se purificó por una HPLC de fase inversa ( agua/met anol /TFA) proporcionando la sal TFA de Cap-5 como una espuma blanca semiviscosa (1.0 g) . RMN de XH (DMS0-d6, d = 2.5, 500 MHz) d 10.68 (s ancho, 1H) , 7.51 (m, 5H) , 5.23 (s, 1H) , 3.34 (s ancho aparente, 2H) , 3.05 (s ancho aparente, 2H) , 1.95 (s ancho aparente, 4H) ; TR = 0.30 min (Cond. I) ; índice de homogeneidad >98% CL-EM: Anal. Calculado para [ +H] + C12H16N02 : 206.12; encontrado 206.25.
La sal TFA de Cap-6 se sintetizó a partir de ( R) - 2 - f eni lgl icina y 1 -bromo- 2 - ( 2 -bromoetoxi ) etano usando el procedimiento de preparación de Cap-5. RMN de 1 K (D SO-d6, d = 2.5, 500 MHz) d 12.20 (s ancho, 1H) , 7.50 (m, 5H) , 4.92 (s, 1H) , 3.78 (s ancho aparente, 4H) , 3.08 (s ancho aparente, 2H) , 2.81 (s ancho aparente, 2H) ; TR = 0.32 min (Condición I ) ; >98%; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H] + Ci2H16N03 : 222.11; encontrado 222.20; EMAR : Anal. Calculado para [M+H]+ C12H16N03: 222.1130; encontrado 222.1121.
Cap-7 Cap-7a: enantiómero-1 Cap-7b: enantiómero-2 Se añadió gota a gota una solución en CH2C12 (200 mi) de cloruro de p-toluenosulfonilo (8.65 g, 45.4 mmol) a una solución (-5 °C) en CH2C12 (200 mi) de 2-hidroxi-2-fenilacetato de (S) -bencilo (10.0 g, 41.3 mmol), trietilamina (5.75 mi, 41.3 mmol) y 4 -dimetilaminopiridina (0.504 g, 4.13 mmol), mientras se mantenía la temperatura de -5 °C a 0 °C. La reacción se agitó a 0 °C durante 9 horas, y luego se almacenó en un congelador (-25 °C) durante 14 horas. Se dejó descongelar hasta temperatura ambiente y se lavó con agua (200 mi) , HC1 1N (100 mi) y salmuera (100 mi) , se secó (MgS04) , se filtró y se concentró a vacío proporcionando 2-fenil-2 - (tosiloxi ) acetato de bencilo como un aceite viscoso que solidificó en reposo (16.5 g) . La integridad quiral del producto no se verificó y el producto se usó en la etapa siguiente sin purificación adicional. RMN de 1H (DMS0-d6, d = 2.5, 500 MHz) d 7.78 (d, J = 8.6, 2H) , 7.43-7.29 (m, 10H) , 7.20 (m, 2H) , 6.12 (s, 1H) , 5.16 (d, J = 12.5, 1H) , 5.10 (d, J = 12.5, 1H) , 2.39 (s, 3H) . TR = 3.00 (Condición III); índice de homogeneidad >90%; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H]+ C22H2oNa05S: 419.09; encontrado 419.04.
Se calentó a 65 °C durante 7 horas una solución en THF (75 mi) de 2-fenil-2- (tosiloxi) acetato de bencilo (6.0 g, 15.1 mmol) , 1-metilpiperazina (3.36 mi, 30.3 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (13.2 mi, 75.8 mmol). Se dejó enfriar la reacción hasta temperatura ambiente y el componente volátil se eliminó a vacío. El residuo se repartió entre acetato de etilo y agua, y la fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró a vacío. El material bruto resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, etilo acetato) proporcionando 2-(4-metilpiperazin-l-il) -2-fenilacetato de bencilo como un aceite viscoso anaranjado-pardo (4.56 g) . El análisis HPLC quiral (CHIRALCEL®OD-H) indicó que la muestra es una mezcla de estereoisómeros en una relación 38.2 a 58.7. La separación de los estereoisómeros se realizó como sigue: se disolvió el producto en 120 mi de etanol/heptano (1:1) y se inyectó (5 ml/inyección) en una columna HPLC quiral (Chiracel OJ, 5 era ID x 50 era L, 20 µp?) eluyendo con 85:15 Heptano/etanol a 75 ml/min, y se controló a 220 nm. El estereoisómero-1 ( 1.474 g ) y el estereoisómero-2 (2.2149 g) se recuperaron como aceite viscoso. RM de ¾ (CDC13, d = 7.26, 500 MHz) 7.44-7.40 (m, 2H), 7.33-7.24 (m, 6H) , 7.21-7.16 (m, 2H) , 5.13 (d, J = 12.5, 1H), 5.08 (d, J = 12.5, 1H) , 4.02 (s, 1H) , 2.65-2.38 (s ancho aparente, 8H) , 2.25 (s, 3H) . TR = 2.10 (Condición III); índice de homogeneidad >98%; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H]+ C20H25 2O2: 325.19; encontrado 325.20.
Se añadió una solución en metanol (10 mi) de cualquiera de los estereoisómeros de 2- (4-metilpiperazin-l-il) -2-fenilacetato de bencilo (1.0 g, 3.1 mmol) a una suspensión de Pd al 10%/C (120 mg) en metanol (5.0 mi) . La mezcla de reacción se expuso a un globo de hidrógeno con un control cuidadoso durante <50 min. Inmediatamente después de completarse la reacción, se filtró el catalizador a través de tierra de diatomeas (CELITE®) y el filtrado se concentró a vacío proporcionando Cap-7, contaminado con ácido fenilacético como una espuma color castaño (867.6 mg; la masa es superior al rendimiento teórico) . El producto se usó en la etapa siguiente sin purificación adicional. RMN de ""? (DMSO-d6, d = 2.5, 500 MHz) d 7.44-7.37 (m, 2H) , 7.37-7.24 (m, 3H) , 3.92 (s, 1H) , 2.63-2.48 (s ancho ap., 2H) , 2.48-2.32 (m, 6H) , 2.19 (s, 3H) ; TR = 0.31 (Condición II); índice de homogeneidad >90%; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H] + C13H19 2O2 : 235.14; encontrado 235.15; EMAR: Anal. Calculado para [M+H] + C13H19 2O2 : 235.1447; encontrado 235.1440.
La síntesis de Cap-8 y Cap- 9 se llevó a cabo de acuerdo con la síntesis de Cap- 7 usando aminas apropiadas para la etapa de desplazamiento de SN2 (es decir, 4-hidroxipiperidina para Cap-8 y (S) -3-fluoropirrolidina para Cap-9) y condiciones modificadas para la separación de los intermedios estereoisoméricos respectivos, como se describe más adelante.
Cap-8 8a: enantiómero-1 8b: enantiómero-2 La separación estereoisomérica del intermedio ( 4 -hidroxipipe idin- 1 - il ) -2 - fenil acetato de bencilo se efectuó usando las siguientes condiciones: se disolvió el compuesto (500 mg) en etanol /heptano (5 ml/45 mi) . La solución resultante se inyectó (5 ml/inyección) en una columna HPLC quiral (Chiracel OJ, 2 cm ID x 25 cm de longitud, 10 µ??) eluyendo con 80:20 de heptano/etanol a 10 ml/min, controlada a 220 nm, proporcionando 186.3 mg de estereoisómero- 1 y 209.1 mg de estereoisómero-2 como aceites viscosos amarillo claro. Estos ésteres bencílicos se sometieron a hidrogenación de acuerdo con la preparación de Cap-7 proporcionando Cap-8: RMN de 1H (DMSO-d6, d = 2.5, 500 MHz ) 7.40 (d, J = 7, 2H) , 7.28-7.20 (m, 3H) , 3.78 (s 1H) , 3.46 (m, 1H) , 2.93 (m, 1H) , 2.62 (m, 1H) , 2.20 (m, 2H) , 1.70 (m, 2H) , 1.42 (m, 2H) . TR = 0.28 (Condición II); índice de homogeneidad >98%; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H] + Ci3Hi8N03 : 236.13; encontrado 236.07; EMAR : Calculado para [M+H] + Ci3Hi8 03 : 236.1287; encontrado 236.1283.
Cap-9 9a: diastereómero-1 9b: diastereómero-2 La separación diastereomérica del intermedio 2-( (S) -3-fluoropirrolidin-l-il) -2-fenilacetato de bencilo se efectuó usando las siguientes condiciones : se separó el éster (220 mg) en una columna HPLC quiral (Chiracel OJ-H, 0.46 cm ID x 25 cm L, 5 µp?) eluyendo con 95% de C02 / 5% de metanol con 0.1% de TFA, a una presión de lOxlO5 Pa, 70 ml/min de Caudal, y una temperatura de 35 °C. Se concentró el eluato de HPLC para los estereoisómeros respectivos y el residuo se disolvió en CH2C12 (20 mi) y se lavó con un medio acuoso (10 mi agua + 1 mi de solución saturada de NaHC03) . La fase orgánica se secó (MgS04) , se filtró y se concentró a vacío proporcionando 92.5 mg de fracción-1 y 59.6 mg de fracción-2. Estos esteres bencílicos se sometieron a hidrogenación de acuerdo con la preparación de Cap-7 para preparar Caps-9a y Cap-9b. Cap-9a (diastereómero-1; la muestra es una sal TFA como resultado de la purificación en una HPLC de fase inversa usando H20/metanol/TFA como disolvente) : RMN de XH (DMS0-d6, d = 2.5, 400 MHz) 7.55-7.48 (m, 5H) , 5.38 (d de m, J = 53.7, 1H) , 5.09 (s ancho, 1H) , 3.84-2.82 (m ancho, 4H) , 2.31-2.09 (m, 2H) . TR = 0.42 (Condición I); índice de homogeneidad >95%; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H]+ C12H15ENO2: 224.11; encontrado 224.14; Cap-9b (diastereémero-2) : RM de ¾ (DMSO-dg, d = 2.5, 400 Hz) 7.43-7.21 (m, 5H), 5.19 (d de m, J = 55.9, 1H) , 3.97 (s, 1H) , 2.95-2.43 (m, 4H) , 2.19-1.78 (m, 2H) . TR = 0.44 (Cond. I); CL-EM: Anal. Calculado para [M+H]+ C12H15FNO2: 224.11; encontrado 224.14.
A una solución de D-prolina (2.0 g, 17 mmol) y f ormaldehído (2.0 mi de 37% en peso en H20) en metanol (15 mi) se añadió una suspensión de Pd al 10%/C (500 mg) en metanol (5 mi) . La mezcla se agitó bajo un globo de hidrógeno durante 23 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas (CELITE®) y se concentró a vacío proporcionando Cap- 10 como un sólido blanquecino (2.15 g) . RMN de ¾ (DMSO-ds, d = 2.5, 500 MHz) 3.42 (m, 1H) , 3.37 (dd, J = 9.4, 6.1, 1H) , 2.85-2.78 (m, 1H) , 2.66 (s, 3H), 2.21-2.13 (m, 1H) , 1.93-1.84 (m, 2H) , 1.75-1.66 (m, 1H) . TR = 0.28 (Condición II); índice de homogeneidad >98%; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H]+ C6Hi2N(¾: 130.09; encontrado 129.96.
Cap- 11 Una mezcla de ácido (2S, 4R) -4-f luoropirrolidin-2-carboxílico (0.50 g, 3.8 mmol) , formaldehído (0.5 mi de 37% en peso en H20) , HCl 12 N (0.25 mi) y Pd al 10%/C (50 mg) en metanol (20 mi) se agitó bajo un globo de hidrógeno durante 19 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas (CELITE®) y el filtrado se concentró a vacío. El residuo se recristalizó en isopropanol proporcionando la sal HCl de Cap-11 como un sólido blanco (337.7 mg) . RM de 1H (DMSO-d6, d = 2.5, 500 MHz) 5.39 (d m, J = 53.7, 1H) , 4.30 (m, 1H) , 3.90 (ddd, J = 31.5, 13.5, 4.5, 1H) , 3.33 (dd, J = 25.6, 13.4, 1H) , 2.85 (s, 3H) , 2.60-2.51 (m, 1H) , 2.39-2,26 (m, 1H) . TR = 0.28 (Condición II); índice de homogeneidad >98%; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H] + C6HnFN02 : 148.08; encontrado 148.06.
Cap- 12 (igual que Cap-52) H 0 "?- ?? O ' Ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) ropanoico Se disolvió L-alanina (2.0 g, 22.5 mmol) en solución acuosa al 10% de carbonato sódico (50 mi) , y se añadió a la misma una solución en THF (50 mi) de cloroformiato de metilo (4.0 mi) . La mezcla de reacción se agitó en condiciones ambientales durante 4.5 horas y se concentró a vacío. El sólido blanco resultante se disolvió en agua y se acidificó con HCl 1N hasta un pH ~ 2-3. Las soluciones resultantes se extrajeron con acetato de etilo (3 x 100 mi) , y la fase orgánica reunida se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró a vacío proporcionando un aceite incoloro (2.58 g) . Se purificaron 500 mg de este material por una HPLC de fase inversa (H20/metanol/TFA) proporcionando 150 mg de Cap-12 como un aceite incoloro. RMN de ¾ (DMSO-ds, d = 2.5, 500 MHz) 7.44 (d, J = 7.3, 0.8H), 7.10 (s ancho, 0.2H), 3.97 (m, 1H) , 3.53 (s, 3H) , 1.25 (d, J = 7.3, 3H) .
Cap-13 Se agitó una mezcla de L-alanina (2.5 g, 28 mmol) , formaldehído (8.4 g, 37% en peso), HCl 1N (30 mi) y Pd al 10%/C (500 mg) en metanol (30 mi) en una atmósfera de hidrógeno (344.64 kPa) durante 5 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas (CELITE®) y el filtrado se concentró a vacío proporcionando la sal HCl de Cap-13 como un aceite que solidificó en reposo a vacío (4.4 g; la masa es superior al rendimiento teórico) . El producto se usó sin purificación adicional. RMN de XH (DMSO-ds, d = 2.5, 500 MHz) d 12.1 (s ancho, 1H) , 4.06 (q, J = 7.4, 1H) , 2.76 (s, 6H) , 1.46 (d, J = 7.3, 3H) .
Cap-14 Ácido (R) -2-fenil-2- (piperidin-l-il) acético Etapa 1: Una mezcla éster Cerc-butílico de (R)-(-)- D-fenilglicina (3.00 g, 12.3 mmol) , NaBH3CN (0.773 g, 12.3 mmol) , KOH (0.690 g, 12.3 mtnol) y ácido acético (0.352 mi ( 6.15 mmol) se agitó en metanol a 0 °C. A esta mezcla se añadió dialdehído glutárico (2.23 mi, 12.3 mmol) gota a gota durante 5 minutos. La mezcla de reacción se agitó calentando hasta temperatura ambiente y se continuó agitando a la misma temperatura durante 16 horas. El disolvente se eliminó seguidamente y el residuo se repartió con NaOH acuoso al 10% y acetato de etilo. La fase orgánica se separó, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró hasta sequedad proporcionando un aceite transparente. Este material se purificó por HPLC preparativa de fase inversa (Primesphere C-18, 30 x lOOmm; CH3CN-H20-TFA al 0.1%) dando el éster intermedio (2.70 g, 56%) como un aceite transparente. RMN de XH (400 MHz, CDC13) d 7.53-7.44 (m, 3H) , 7.40-7.37 (m, 2H) , 3.87 (d, J = 10.9 Hz, 1H) , 3.59 (d, J = 10.9 Hz, 1H) , 2.99 (t, J = 11.2 Hz, 1H) , 2.59 (t, J = 11.4 Hz , 1H) , 2.07-2.02 (m, 2H) , 1.82 (d, J = 1.82 Hz, 3H) , 1.40 (s, 9H) . CL-EM: Anal. Calculado para C17H25 02 : 275; encontrado: 276 (M+H) + .
Etapa 2 : A una solución agitada del éster intermedio (1.12 g, 2.88 mmol) en diclorometano (10 mi) se añadió TFA (3 mi) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas y luego se concentró hasta sequedad dando un aceite amarillo claro. El aceite se purificó usando HPLC preparativa de fase inversa (Primesphere C-18, 30 x 100mm; CH3CN-H20-TFA al 0.1%) . Las fracciones apropiadas se reunieron y se concentraron hasta sequedad a vacío. El residuo se disolvió entonces en una cantidad mínima de metanol y se aplicó en cartuchos de extracción MCX LP (2 x 6 g) . Los cartuchos se aclararon con metanol (40 mi) y luego eluyó el compuesto deseado usando amoníaco 2M en metanol (50 mi) . Las fracciones que contenían producto se reunieron y concentraron y el residuo se suspendió en agua. La liofilización de esta solución proporcionó el compuesto del epígrafe (0.492 g, 78%) como un sólido amarillo claro. RMN de 1H (DMS0-d6) d 7.50 (s, 5H) , 5.13 (s, 1H) , 3.09 (s ancho, 2H) , 2.92-2.89 (m, 2H) , 1.74 (m, 4H) , 1.48 (s ancho, 2H) . CL-EM: Anal. Calculado para Ci3Hi7N02 : 219; encontrado: 220 (M+H) + .
Cap-15 Etapa 1: 2-Bromo-2-fenilacetato de (S) -1-feniletilo: A una mezcla de ácido OC-bromofenilacético (10.75 g, 0.050 mol), (S) - ( - ) -1-feniletanol (7.94 g, 0.065 mol) y DMAP (0.61 g, 5.0 mmol) en diclorometano seco (100 mi) se añadió EDCI sólido (12.46 g, 0.065 mol) todo de una vez. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente en Ar durante 18 horas y luego se diluyó con acetato de etilo, se lavó (H20 x 2, salmuera) , se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró dando un aceite amarillo pálido. La cromatografía ultrarrápida (Si02/ hexano-etilo acetato, 4:1) de este aceite proporcionó el compuesto del epígrafe (11.64 g, 73%) como un sólido blanco. RMN de XH (400 MHz, CDC13) d 7.53-7.17 (m, 10H) , 5.95 (q, J = 6.6 Hz, 0.5H) , 5.94 (q, J = 6.6 Hz, 0.5H) , 5.41 (s, 0.5H) , 5.39 (s, 0.5H) , 1.58 (d, J = 6.6 Hz, 1.5H) , 1.51 (d, J = 6.6 Hz, 1.5H) .
Etapa 2: (R) -2- (4-hidroxi-4-metilpiperidin-l-il) -2-fenilacetato de (S) -1-f eniletilo . A una solución de 2-bromo-2-f enilacetato de (S) -1-f eniletilo (0.464 g, 1.45 mmol) en THF (8 mi) se añadió trietilamina (0.61 mi, 4.35 mmol) , seguido por yoduro de tetrabutilamonio (0.215 g, 0.58 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos y luego se añadió una solución de 4-metil-4-hidroxipiperidina (0.251 g, 2.18 mmol) en THF (2 mi) . La mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente y luego se calentó a 55-60 °C (temperatura de baño de aceite) durante 4 horas. La mezcla de reacción enfriada se diluyó entonces con acetato de etilo (30 mi), se lavó (H20 x2, salmuera), se secó (MgS04) , se filtró y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (0-60% de etilo acetato-hexano) proporcionando primero el isómero (S,R) del compuesto del epígrafe (0.306 g, 60%) como un sólido blanco y luego el correspondiente isómero (S,S) (0.120 g, 23%), también como un sólido blanco. Isómero (S,R) : RMN de ¾ (CD30D) d 7.51-7.45 (m, 2H) , 7.41-7.25 (m, 8H) , 5.85 (q, J = 6.6 Hz, 1H) , 4.05 (S, 1H) , 2.56-2.45 (m, 2H) , 2.41-2,29 (m, 2H) , 1.71-1.49 (m, 4H) , 1.38 (d, J = 6.6 Hz, 3H) , 1.18 (s, 3H) . CL-EM: Anal. Calculado para C22H27 O3 : 353; encontrado: 354 (M+H) + . Isómero (S,S) : RMN de H (CD3OD) d 7.41-7.30 (m, 5H) , 7.20-7.14 (m, 3H) , 7.06-7.00 (m, 2H) , 5.85 (q, J = 6.6 Hz, 1H), 4.06 (s, 1H) , 2.70-2.60 (m, 1H) , 2.51 (dt, J = 6.6, 3.3 Hz, 1H) , 2.44-2.31 (m, 2H) , 1.75-1.65 (m, 1H) , 1.65-1.54 (m, 3H), 1.50 (d, J = 6.8 Hz, 3H) , 1.20 (s, 3H) . CL-EM: Anal. Calculado para C22H27N03 : 353; encontrado: 354 (M+H) + .
Etapa 3: ácido (R) -2- (4-hidroxi-4-metilpiperidin-l-il) -2-fenilacético: A una solución de (R) -2- (4-hidroxi-4-metilpiperidin-l-il) -2-fenilacetato de (S) -1-feniletilo (0.185 g, 0.52 mmol) en diclorometano (3 mi) se añadió ácido trifluoracético (1 mi) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Los volátiles se eliminaron seguidamente a vacío y el residuo se purificó por HPLC preparativa de fase inversa (Primesphere C-18, 20 x lOOmm; CH3CN-H2O-TFA al 0.1%) dando el compuesto del epígrafe (como sal TFA) como un sólido azulado pálido (0.128 g, 98%). CL-EM: Anal. Calculado para C14H19 O3 : 249; encontrado: 250 (M+H)+. (fl Cap-16 Etapa 1: 2- ( 2 - fluorofenil ) acetato de (S)-l-feniletilo. Una mezcla de ácido 2 - fluorofenilacét ico (5.45 g, 35.4 mmol) , (S) -1-feniletanol (5.62 g, 46.0 mmol) , EDCI (8.82 g, 46.0 mmol) y D AP (0.561 g, 4.60 mmol) en CH2C12 (100 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas . El disolvente se concentró a continuación y el residuo se repartió con H20-acetato de etilo. Se separaron las fases y la fase acuosa se volvió a extraer con acetato de etilo (2x) . Las fases orgánicas reunidas se lavaron (H20, salmuera) , se secaron (Na2S0 ) , se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (BIOTAGE®/ 0-20% de acetato de etilo-hexano) proporcionando el compuesto del epígrafe como un aceite incoloro (8.38 g, 92%). RMN de XH (400 MHz , CD3OD) d 7.32 - 7.23 (m, 7H) , 7.10-7.04 (m, 2), 5.85 (q, J = 6.5 Hz, 1H) , 3.71 (s, 2H) , 1.48 (d, J = 6.5 Hz, 3H) .
Etapa 2: 2- ( 2 -Fluorofenil ) -2- (piperidin-1-il) acetato de (R) - ( (S) -1-feniletilo) . A una solución de 2- (2-fluorofenil) acetato de (S) -1-feniletilo (5.00 g, 19.4 mmol) en THF (1200 ml) a 0°C se añadió DBU (6.19 g, 40.7 mmol) y la solución se dejó calentar hasta temperatura ambiente mientras se agitaba durante 30 minutos. La solución se enfrió entonces hasta -78 °C y se añadió una solución de CBr4 (13.5 g, 40.7 mmol) en THF (100 ml) y la mezcla se dejó calentar hasta -10 °C y se agitó a esta temperatura durante 2 horas. La mezcla de reacción se inactivo con NH4C1 acuoso saturado y se separaron las fases. La fase acuosa se volvió a extraer con acetato de etilo (2x) y las fases orgánicas reunidas se lavaron (H20, salmuera) , se secaron (Na2S04) , se filtraron y se concentraron a vacío. Al residuo se añadió piperidina (5.73 mi, 58.1 mmol) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. Los volátiles se concentraron entonces a vacío y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (BIOTAGE®/ 0-30% de éter dietílico-hexano) proporcionando una mezcla pura de diastereoisómeros (relación 2:1 por RMN de 1H) como un aceite amarillo (2.07 g, 31%), junto con material de partida sin reaccionar (2.53 g, 51%) . Otra cromatografía de la mezcla diastereomérica (BIOTAGE®/ 0-10% éter dietílico-tolueno) proporcionó el compuesto del epígrafe como un aceite incoloro (0.737 g, 11%). RMN de XH (400 MHz, CD30D) d 7.52 (ddd, J = 9.4, 7.6, 1.8 Hz, 1H) , 7.33-7.40 (m, 1), 7.23-7.23 (m, 4H) , 7.02-7.23 (m, 4H) , 5.86 (q, J = 6.6 Hz, 1H) , 4.45 (s, 1H) , 2.39-2.45 (m, 4H) , 1.52 - 1.58 (m, 4H) , 1.40-1.42 (m, 1H) , 1.38 (d, J = 6.6 Hz, 3H) . CL-EM: Anal. Calculado para C2iH24FN02 : 341; encontrado: 342 (M+H)+.
Etapa 3: ácido (R) -2- (2-fluorofenil) -2- (piperidin-1-il) acético : Una mezcla de 2- (2-fluorofenil) -2- (piperidin-1-iDacetato de (R) - ( (S) -1-feniletilo) (0.737 g, 2.16 mmol) y Pd(0H)2 al 20%/C (0.070 g) en etanol (30 mi) se sometió a hidrogenación a temperatura ambiente y presión atmosférica (globo de H2) durante 2 horas. La solución se purgó entonces con Ar, se filtró a través de tierra de diatomeas (CELITE®) y se concentró a vacío. Esto proporcionó el compuesto del epígrafe como un sólido incoloro (0.503 g, 98%) . RM de 1H (400 MHz , . CD3OD) d 7.65 (ddd, J = 9.1, 7.6, 1.5 Hz , 1H) , 7.47-7.53 (m, 1H) , 7.21-7.30 (m, 2H) , 3.07-3.13 (m, 4H) , 1.84 (s ancho, 4H) , 1.62 (s ancho, 2H) . CL-EM: Anal. Calculado para Ci3Hi6FN02 : 237; encontrado: 238 (M+H) + .
Cap-17 (fl Cap-17 Etapa 1: (R) -2 - (4 -hidroxi-4 -fenilpiperidin-1- il) -2 -fenilacetato de (S) -1-feniletilo . A una solución de 2-bromo-2-fenilacetato de (S) -1-feniletilo (1.50 g, 4.70 mmol) en THF (25 mi) se añadió trietilamina (1.31 mi, 9.42 mmol), seguido por yoduro de tetrabutilamonio (0.347 g, 0.94 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos y luego se añadió una solución de 4-fenil-4-hidroxipiperidina (1.00 g, 5.64 mmol) en THF (5 mi). La mezcla se agitó durante 16 horas y luego se diluyó con acetato de etilo (100 mi) , se lavó (H20 x2 , salmuera) , se secó (MgS04) , se filtró y se concentró. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (acetato de etilo 0-60%-hexano) proporcionando una mezcla aproximadamente 2:1 de diastereoisómeros , como se juzgó por RM de 1H. La separación de esos isómeros se llevó a cabo usando cromatografía de fluido supercrítico (CHIRALCEL® OJ-H, 30 x 250mm; 20% etanol en C02 a 35 °C) , dando primero el isómero (R) del compuesto del epígrafe (0.534 g, 27%) como un aceite amarillo y luego el isómero (S) correspondiente (0.271 g, 14%), también como un aceite amarillo. Isómero (S,R) : RMN de 1H (400 MHz , CD3OD) d 7.55-7.47 (m, 4H) , 7.44-7.25 (m, 10H) , 7.25-7.17 (m, 1H) , 5.88 (q, J = 6.6 Hz, 1H) , 4.12 (s, 1H) , 2.82-2.72 (m, 1H) , 2.64 (dt, J = 11.1, 2.5 Hz, 1H) , 2.58-2.52 (m, 1H) , 2.40 (dt, J = 11.1, 2.5 Hz, 1H) , 2.20 (dt, J = 12.1, 4.6 Hz, 1H) , 2.10 (dt, J = 12.1, 4.6 Hz, 1H) , 1.72-1.57 (m, 2H) , 1.53 (d, J = 6.5 Hz, 3H) . CL-EM: Anal. Calculado para C27H29NO3 : 415; encontrado: 416 (M+H)+; Isómero (S,S): RMN de *H (400 MHz, CD3OD) d 7.55-7.48 (m, 2H) , 7.45-7.39 (m, 2H) , 7.38-7.30 (m, 5H) , 7.25-7.13 (m, 4H) , 7.08-7.00 (m, 2H) , 5.88 (q, J = 6.6 Hz, 1H) , 4.12 (s, 1H) , 2.95-2.85 (m, 1H), 2.68 ( dt , J = 11.1, 2.5 Hz, 1H) , 2.57-2.52 (m, 1H) , 2.42 (dt, J = 11.1, 2.5 Hz, 1H) , 2.25 ( dt , J = 12.1, 4.6 Hz , 1H), 2.12 (dt, J = 12.1, 4.6 Hz, 1H) , 1.73 (dd, J = 13.6, 3.0 Hz, 1H) , 1.64 ( dd , J = 13.6, 3.0 Hz, 1H), 1.40 (d, J = 6.6 Hz, 3H) . CL-EM: Anal. Calculado para C27H29N03: 415; encontrado: 416 (M+H)+.
Los ésteres siguientes se prepararon de una forma similar.
Diastereómero 1: RM de ¾ (500 MHz, DMSO-dg) d ppm 1.36 (d, J=6.41 Hz, 3H) 2.23 - 2.51 (m, 4H) 3.35 (s, 4H) 4.25 (s, 1H) 5.05 (s, 2H) 5.82 (d, J=6.71 Hz, 1H) 7.15 - 7.52 (m, 15H) .
CL-EM: Análisis calculado para : C28H3o 204 458.22; encontrado: 459.44 ( +H)+.
Diastereómero 2 : RMN de ¾ (500 MHz, DMSO-ds) d ppm 1.45 (d, J=6.71 Hz, 3H) 2.27 - 2.44 (m, 4H) 3.39 (s, 4H) 4.23 (s, 1H) 5.06 (s, 2H) 5.83 (d, J=6.71 Hz, 1H) 7.12 (dd, J=6.41, 3.05 Hz, 2H) 7.19 - 7.27 (m, 3H) 7.27 - 7.44 (m, 10H) . CL-EM: Análisis calculado para: C28H30 2O4 458.22; encontrado: 459.44 (M+H)+. 25 Condiciones de SFC quiral para determinar el tiempo retención Condición I Columna: Columna CHIRALPAK® AD-H, 4.62X250 mm, 5µp? Disolventes: 90% de C02 - metanol al 10% con DEA al 1Í Temp: 35 °C Presión: 15 Pa Caudal: 2.0 ml/min.
UV controlado a 220 nm Inyección: 1.0 mg/3 mi de metanol Condición II Columna: Columna CHIRALCEL® OD-H, 4.62X250 mm, 5µp? Disolventes: 90% de C02 - metanol al 10% con DEA al 0.1% Temp: 35 °C Presión: 15 MPa Caudal: 2.0 ml/min.
UV controlado a 220 nm Inyección: 1.0 mg/ml de metanol Cap-17, Etapa 2: ácido (R) - 2 - ( 4 - hidroxi - 4 -feni lpipe idin- 1 - il ) - 2 - f eni lacét ico . A una solución de (R) - 2 - ( -hidroxi - 4 - feni lpiper idin- 1 - il ) - 2 -fenilacetato de ( S ) - 1 - feni let i lo (0.350 g, 0.84 mmol) en diclorometano (5 mi) se añadió ácido tri f luoracét ico (1 mi) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Los volátiles se eliminaron seguidamente a vacío y el residuo se purificó por HPLC preparativa de fase inversa (Primesphere C-18, 20 x 100mm; CH3CN-H20-TFA al 0.1%) dando el compuesto del epígrafe (como sal TFA) como un sólido blanco (0.230 g, 88%) . CL-EM: Anal. Calculado para Ci9H2iN03 : 311.15; encontrado: 312 (M+H)+.
Los siguientes ácidos carboxílicos se prepararon en forma ópticamente pura de una forma similar : Condiciones de CL-EM para determinar el tiempo de retención Condición I , Columna: PHENOMENEX® Luna 4.6 X 50 mm S10 % Inicial de B = 0 % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 4 min Caudal = 4 ml/min Longitud de Disolvente A = metanol al 10% - H20 al 90% - TFA al 0. V, Disolvente B = metanol al 90% - H20 al 10% - TFA al 0.1% Condición II Columna: Waters-Sunfiré 4.6 X 50 mm S5 % Inicial de B = 0 % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 2 min Caudal = 4 ml/min Longitud de Disolvente A = metanol al 10% - H20 al 90% - TFA al 0.1% Disolvente B = metanol al 90% - H20 al 10% - TFA al 0.1% Condición III Columna: PHENOMENEX® 10µ 3.0 X 50 mm % Inicial de B = 0 % Final de B = 100 Tiempo de gradiente = 2 min Caudal = 4 ml/min Longitud de Disolvente A = metanol al 10% - H20 al 90% - TFA al 0.1% Disolvente B = metanol al 90% - H20 al 10% - TFA al 0.1% Etapa 1: 2- (4-piridil) -2-bromoacetato de (R,S)-etilo: A una solución de 4-piridilacetato de etilo (1.00 g, 6.05 mmol) en THF seco (150 mi) a 0 °C en argón se añadió DBU (0.99 mi, 6.66 mmol) . La mezcla de reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente durante 30 minutos y luego se enfrió hasta -78 °C. A esta mezcla se añadió CBr4 (2.21 g, 6.66 mmol) y se continuó agitando a -78 °C durante 2 horas. Seguidamente la mezcla de reacción se inactivo con NH4C1 acuoso saturado y se separaron las fases. La fase orgánica se lavó (salmuera) , se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró a vacío. El aceite amarillo resultante se purificó inmediatamente por cromatografía ultrarrápida (Si02/ hexano-acetato de etilo, 1:1) proporcionando el compuesto del epígrafe (1.40 g, 95%) como un aceite amarillo algo estable. R N de *H (400 MHz , CDCl3) d 8.62 (dd, J = 4.6, 1.8 Hz, 2H) , 7.45 (dd, J = 4.6, 1.8 Hz, 2H) , 5.24 (s, 1H) , 4.21-4.29 (m, 2H) , 1.28 (t, J = 7.1 Hz, 3H) . CL-EM: Anal. Calculado para C9H10BrNO2: 242, 244; encontrado: 243, 245 (M+H) + .
Etapa 2: 2 - ( 4 -pi ridi 1 ) - 2 - (N , N-dimet i lamino ) acetato de (R, S) -etilo: A una solución de 2- (4 -piridil) -2 -bromoacetato de (R,S) -etilo (1.40 g, 8.48 mmol) en DMF (10 mi) a temperatura ambiente se añadió dimetilamina (2M en THF, 8.5 mi, 17.0 mmol) . Después de completarse la reacción (que se juzgó por cromatografía en capa fina) los volátiles se eliminaron a vacío y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (columna BIOTAGE®, 40+M Si02; 50%-100% de acetato de et i lo - hexano ) proporcionando el compuesto del epígrafe (0.539 g, 31%) como un aceite amarillo claro. RMN de XH (400 MHz , CDC13 ) d 8.58 (d, J = 6.0 Hz , 2H), 7.36 (d, J = 6.0 Hz, 2H) , 4.17 (m, 2H) , 3.92 (s, 1H), 2.27 (s, 6H) , 1.22 (t, J = 7.0 Hz) . CL-EM: Anal. Calculado para CnH16N202 : 208; encontrado: 209 (M+H)+.
Etapa 3: ácido ( R , S ) - 2 - ( 4 -pi ridi 1 ) - 2 - ( , -dimetilamino) acético: A una solución de 2-(4-piridil ) -2 - (N, N- dimet i lamino ) acetato de (R,S)-etilo (0.200 g, 0.960 mmol) en una mezcla de THF-met anol -H20 (1:1:1, 6 mi) se añadió LiOH en polvo (0.120 g, 4.99 mmol) a temperatura ambiente. La solución se agitó durante 3 horas y luego se acidificó hasta pH 6 usando HCl 1N. La fase acuosa se lavó con acetato de etilo y luego se liofilizó dando el diclorhidrato del compuesto del epígrafe como un sólido amarillo (que contenía LiCl) . El producto se usó como tal en las posteriores etapas. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6) d 8.49 (d, J = 5.7 Hz, 2H) , 7.34 (d, J = 5.7 Hz, 2H) , 3.56 (s, 1H) , 2.21 (s, 6H) .
Los siguientes ejemplos se prepararon de una forma similar usando el procedimiento descrito antes: Cap-37 Etapa 1: 2- (quinolin-3-il) -2- (N, N-dimetilamino) - acetato de (R,S) -etilo: Una mezcla de N, N-dimetilaminoacetato de etilo (0.462 g, 3.54 mmol) , K3P04 (1.90 g, 8.95 mmol) , Pd(t-Bu3P)2 (0.090 g, 0.176 mmol), 3 -bromoquinolina y tolueno (10 mi) se desgasificó con una corriente de burbujas de Ar durante 15 minutos. La mezcla de reacción se calentó entonces a 100 °C durante 12 horas, después de lo cual se enfrió hasta temperatura ambiente y se vertió en H20. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2x) y las fases orgánicas reunidas se lavaron (H20, salmuera) , se secaron (Na2S04) , se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo se purificó primero por HPLC preparativa de fase inversa (Primesphere C-18, 30 x lOOmm; CH3CN-H20-5 m NH40Ac) y luego por cromatografía ultrarrápida (Si02/ hexano-acetato de etilo, 1:1) proporcionando el compuesto del epígrafe (0.128 g, 17%) como un aceite naranja. RM de 1H (400 MHz, CDC13) d 8.90 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 8.32 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 8.03-8.01 (m, 2H) , 7.77 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.5 Hz, 1H) , 7.62 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.5 Hz, 1H) , 4.35 (s, 1H) , 4.13 (m, 2H) , 2.22 (s, 6H) , 1.15 (t, J = 7.0 Hz, 3H) . CL-EM: Anal. Calculado para Ci5H18N202: 258; encontrado: 259 (M+H) + .
Etapa 2: Ácido (R,S) 2- (quinolin-3-il) -2- (?,?-dimetilamino) acético : Se calentó una mezcla de 2- (quinolin-3-il) -2- (?,?-dimetilamino) acetato de (R,S) -etilo (0.122 g, 0.472 mmol) y HCl 6M (3 mi) a 100 °C durante 12 horas. El disolvente se eliminó a vacío proporcionando el diclorhidrato del compuesto del epígrafe (0.169 g, >100%) como una espuma amarillo claro. El material sin purificar se usó en las etapas siguientes sin purificación adicional. CL-EM: Anal. Calculado para C13H14 2O2 : 230; encontrado: 231 (M+H) + .
Cap-38 ° Cap-38 Etapa 1: 2 - (Dimetilamino) -2 - (2 - fluorofenil ) acetato de (R) - ( (S) - 1-feniletilo) y 2- (dimetilamino) -2- (2-fluorofenil) acetato de (S) - ( (S) -1-feniletil) : A una mezcla de ácido (RS) -2- (dimetilamino) -2- (2-fluorofenil) acético (2.60 g, 13.19 mmol), DMAP (0.209 g, 1.71 mmol) y (S) -1-feniletanol (2.09 g, 17.15 mmol) en CH2C12 (40 mi) se añadió EDCI (3.29 g, 17.15 mmol) y la mezcla se dejó agitando a temperatura ambiente durante 12 horas. El disolvente se eliminó entonces a vacío y el residuo se repartió con acetato de etilo-H20. Se separaron las fases, la fase acuosa se volvió a extraer con acetato de etilo (2x) y las fases orgánicas reunidas se lavaron (H20, salmuera) , se secaron (Na2S04) , se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (BIOTAGE®/ 0-50% de éter dietílico-hexano) . La mezcla diastereomérica pura resultante se separó entonces por HPLC preparativa de fase inversa (Primesphere C-18, 30 x lOOmm; CH3CN-H20-TFA al 0.1%) dando primero (R) -2- (dimetilamino) -2- (2-fluorofenil) acetato de (S) -1-fenetilo (0.501 g, 13%) y luego (S) -2- (dimetilamino) -2- (2-fluorofenil) -acetato de (S) -1-fenetilo (0.727 g. 18%), ambas como sus sales TFA. isómero (S,R) : RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) d 7.65 - 7.70 (m, 1H) , 7.55-7.60 (ddd, J = 9.4, 8.1, 1.5 Hz, 1H) , 7.36-7.41 (m, 2H) , 7.28-7.34 (m, 5H) , 6.04 (q, J = 6.5 Hz, 1H) , 5.60 (s, 1H) , 2.84 (s, 6H) , 1.43 (d, J = 6.5 Hz, 3H) . CL-EM: Anal. Calculado para Ci8H20FNO2 : 301; encontrado: 302 (M+H)+; isómero (S,S): RMN de XH (400 MHz, CD3OD) d 7.58-7.63 (m, 1H) , 7.18-7.31 (m, 6H) , 7.00 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz, 2H) , 6.02 (q, J = 6.5 Hz, 1H) , 5.60 (s, 1H) , 2.88 (s, 6H) , 1.54 (d, J = 6.5 Hz, 3H) . CL-EM: Anal. Calculado para C18H2oFN02: 301; encontrado: 302 (M+H) + .
Etapa 2: Ácido (R) -2- (dimetilamino) -2- (2-fluorofenil) acético: Una mezcla de 2- (dimetilamino) -2- (2- fluorofenil) acetato de (R) - ( (S) -1-feniletilo) , sal TFA (1.25 g, 3.01 mmol) y 20% de Pd(OH)2/C (0.125 g) en etanol (30 mi) se sometió a hidrogenación a temperatura ambiente y presión atmosférica (globo de H2) durante 4 horas. La solución se purgó entonces con Ar, se filtró a través de tierra de diatomeas (CELITE®) y se concentró a vacío. Esto dio el compuesto del epígrafe como un sólido incoloro (0.503 g, 98%). RMN de XH (400 MHz, CD30D) d 7.53-7.63 (m, 2H) , 7.33- 7.38 (m, 2H) , 5.36 (s, 1H) , 2.86 (s, 6H) . CL-EM: Anal. Calculado para Ci0Hi2FNO2: 197; encontrado: 198 (M+H) + .
El isómero S se podía obtener a partir de 2- (dimetilamino) -2- (2-fluorofenil) acetato de (S) - ( (S) -1- feniletilo) , sal TFA de una forma similar.
Cap-39 cap-39 Una mezcla de (R) - (2-clorofenil) glicina (0.300 g, 1.62 mmol), formaldehído (solución acuosa al 35%, 0.80 mi, 3.23 mmol) y 20% de Pd(0H)2/C (0.050 g) se sometió a hidrogenación a temperatura ambiente y presión atmosférica (globo de H2) durante 4 horas. La solución se purgó entonces con Ar, se filtró a través de tierra de diatomeas (CELITE®) y se concentró a vacío. El residuo se purificó por HPLC preparativa de fase inversa (Primesphere C-18, 30 x lOOmm; CH3CN-H20-TFA al 0.1%) dando la sal TFA del compuesto del epígrafe ácido (R) -2- (dimetilamino) -2- (2-clorofenil) acético como un aceite incoloro (0.290 g, 55%). RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) d 7.59-7.65 (m, 2H) , 7.45-7.53 (m, 2H) , 5.40 (s, 1H) , 2.87 (s, 6H) . CL-E : Anal. Calculado para Ci0Hi2ClNO2 : 213; encontrado: 214 (M+H)+.
Cap-40 cap-40 A una solución enfriada en hielo de (R)-(2-clorofeniUglicina (1.00 g, 5.38 mmol) y NaOH (0.862 g, 21.6 mmol) en H20 (5.5 mi) se añadió cloroformiato de metilo (1.00 mi, 13.5 mmol) gota a gota. La mezcla se dejó agitando a 0 °C durante 1 hora y luego se acidificó mediante la adición de HC1 concentrado (2.5 mi). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2x) y la fase orgánica reunida se lavó (H20, salmuera) , se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró a vacío dando el compuesto del epígrafe ácido (R)-2- (metoxicarbonilamino) -2- (2-clorofenil) acético como una espuma amarillo-naranja (1.31 g, 96%). RMN de 2H (400 MHz , CD3OD) d 7.39-7.43 (m, 2H) , 7.29-7.31 (m, 2H) , 5.69 (s, 1H) , 3.65 (s, 3H) . CL-EM: Anal. Calculado para Ci0Hi0ClNO4: 243; encontrado: 244 (M+H)+.
A una suspensión de ácido 2- (2- (clorometil) fenil) acético (2.00 g, 10.8 mmol) en THF (20 mi) se añadió morfolina (1.89 g, 21.7 mmol) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción se diluyó entonces con acetato de etilo y se extrajo con H20 (2x) . La fase acuosa se liofilizó y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (BIOTAGE®/ 0- 10% de metanol-CH2Cl2) dando el compuesto del epígrafe ácido 2- (2- (morfolinometil) fenil) acético como un sólido incoloro (2.22 g, 87%). R N de 1H (400 MHz , CD3OD) d 7.37-7.44 (m, 3H) , 7.29-7.33 (m, 1H) , 4.24 (a, 2H) , 3.83 (s ancho, 4H) , 3.68 (s, 2H) , 3.14 (s ancho, 4H) . CL-EM: Anal. Calculado para Ci3Hi7 03 : 235; encontrado: 236 (M+H)+.
Los siguientes ejemplos se prepararon de igual modo usando el procedimiento descrito para Cap-41: Cap-45a Cap-45a Se añadió HMDS (1.85 mi, 8.77 mmol) a una suspensión de p-toluenosulfonato del ácido (R) -2-amino-2- fenilacético (2.83 g, 8.77 mmol) en CH2C12 (10 mi) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadió isocianato de metilo (0.5 g, 8.77 mmol) en una porción continuando la agitación durante 30 minutos. La reacción se inactivo mediante adición de H20 (5 mi) y se filtró el precipitado resultante, se lavó con H20 y n-hexanos, y se secó a vacío. Se recuperó ácido (R) -2- (3-metilureido) -2-fenilacético (1.5 g; 82 %) como un sólido blanco y se usó sin purificación adicional. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6) d ppm 2.54 (d, J=4.88 Hz, 3H) 5.17 (d, J=7.93 Hz, 1H) 5.95 (q, J=4.48 Hz, 1H) 6.66 (d, J=l .93 Hz, 1H) 7.26 - 7.38 (m, 5H) 12.67 (s, 1H) . CL-EM: Anal. Calculado para C10H12 2O3 208.08 encontrado 209.121 (M+H)+; HPLC PHENOMENEX® C-18 3.0 X 46 mm, 0 a 100% de B durante 2 minutos, tiempo de mantenimiento 1 minuto, A = 90% de agua, 10% de metanol, 0.1% de TFA, B = 10% de agua, 90% de metanol, 0.1% de TFA, TR = 1.38 min, índice de homogeneidad 90 %.
Cap-46 cap-46 El producto deseado se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito para Cap-45a. RMN de 1H (500 Hz , DMSO-d6) d ppm 0.96 (t, J=7.17 Hz , 3H) 2.94 - 3.05 (m, 2H) 5.17 (d, J=7.93 Hz, 1H) 6.05 (t, J=5.19 Hz, 1H) 6.60 (d, J=7.63 Hz, 1H) 7.26 - 7.38 (m, 5H) 12.68 (s, 1H) . CL-EM: Anal. Calculado para C11H14 2O3 222.10 encontrado 223.15 (M+H) + . HPLC XTERRA® C-18 3.0 X 506 mm, 0 a 100% de B durante 2 minutos, tiempo de mantenimiento 1 minuto, A = 90% de agua, 10% de metanol, 0.2% H3P04, B = 10% de agua, 90% de metanol, 0.2% H3P04, TR = 0.87 min, índice de homogeneidad Cap-47 Etapa 1: 2 - (3 , 3 -Dimetilureido) -2 - fenilacetato de (R) - terc-butilo : A una solución agitada de (R) -terc-butil-2 -amino-2-fenilacetato (1.0 g, 4.10 mmol) y base de Hunig (1.79 mi, 10.25 mmol) en DMF (40 mi) se añadió cloruro de dimetilcarbamoílo (0.38 mi, 4.18 mmol) gota a gota durante 10 minutos. Después de agitar a temperatura ambiente durante 3 horas, la reacción se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con H20, HCl ac . 1N y salmuera, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró a presión reducida. Se obtuvo 2- (3, 3 -dimetilureido) -2-fenilacetato de (R) -terc-butilo como un sólido blanco ( 0.86 g; 75%) y se usó sin purificación posterior. RMN de 1H (500 MHz, DMS0-d6) d ppm 1.33 (s, 9H) 2.82 (s, 6H) 5.17 (d, J=7.63 Hz , 1H) 6.55 (d, J-=7.32 Hz, 1H) 7.24 - 7.41 (m, 5H) . CL-EM: Anal. Calculado para Ci5H22N203 278.16 encontrado 279.23 (M+H) + ; HPLC PHENOMENEX® LUNA C-18 4.6 X 50 mm, 0 a 100% de B durante 4 minutos, tiempo de mantenimiento 1 minuto, A = 90% de agua, 10% de metanol, 0.1% de TFA, B = 10% de agua, 90% de metanol, 0.1% de TFA, TR = 2.26 min, índice de homogeneidad 97%.
Etapa 2: Ácido (R) -2- (3 , 3 -dimetilureido) -2-fenilacético : A una solución agitada de 2- (3,3-dimetilureido) -2-fenilacetato de ( (R) - tere-butilo (0.86 g, 3.10 mmol) en CH2C12 (250 mi) se añadió TFA (15 mi) gota a gota y la solución resultante se agitó a ta durante 3 horas. El compuesto deseado precipitó entonces en solución con una mezcla de EtOAC : Hexanos (5:20), se separó por filtración y se secó a presión reducida. Se aisló ácido (R)-2-(3,3-dimetilureido) -2-fenilacético como un sólido blanco (0.59g, 86%) y se usó sin purificación posterior. RM de ""? (500 MHz, DMSO-d6) d ppm 2.82 (s, 6H) 5.22 (d, J"=7.32 Hz, 1H) 6.58 (d, J"=7.32 Hz, 1H) 7.28 (t, J=l .17 Hz , 1H) 7.33 (t, J=l .32 Hz , 2H) 7.38 - 7.43 (m, 2H) 12.65 (s, 1H) . CL-EM: Anal. Calculado para C11H14N2Q3: 222.24; encontrado: 223.21 (M+H)+. HPLC XTERRA® C-18 3.0 X 50 mm, 0 a 100% de B durante 2 minutos, tiempo de mantenimiento 1 minuto, A = 90% de agua, 10% de metanol, 0.2% H3P04, B = 10% de agua, 90% de metanol, 0.2% H3P04, TR = 0.75 min, índice de homogeneidad 93%.
B Cap-48 Etapa 1: 2- (3 -Ciclopentilureido) -2-fenilacetato (R) - tere-butilo : A una solución agitada de clorhidrato del ácido (R) -2-amino-2-fenilacético (1.0 g, 4.10 mmol) y base de Hunig (1.0 mi, 6.15 mmol) en DMF (15 mi) se añadió isocianato de ciclopentilo (0.46 mi, 4.10 mmol) gota a gota y durante 10 minutos. Después de agitar a temperatura ambiente durante 3 horas, la reacción se concentró a presión reducida y el residuo resultante se suspendió en acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con H20 y salmuera, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró a presión reducida. Se obtuvo 2- (3-ciclopentilureido) -2 - fenilacetato de (R) - tere-butilo como un aceite opaco (1.32 g; 100 %) y se usó sin purificación posterior. RMN de XH (500 MHz, CD3C1-D) d ppm 1.50 - 1.57 (m, 2H) 1.58 - 1.66 (m, 2H) 1.87 - 1.97 (m, 2H) 3.89 - 3.98 (m, 1H) 5.37 (s, 1H) 7.26 - 7.38 (m, 5H) . CL-EM: Anal. Calculado para C18H26N203 318.19 encontrado 319.21 (M+H) + ; HPLC XTERRA® C-18 3.0 x 50 mm, 0 a 100% de B durante 4 minutos, tiempo de mantenimiento 1 minuto, A = 90% de agua, 10% de metanol, 0.1% de TFA, B = 10% de agua, 90% de metanol, 0.1% de TFA, TR = 2.82 min, índice de homogeneidad 96%.
Etapa 2: Ácido (R) -2 -( 3 -ciclopentilureido) -2 -fenilacético : A una solución agitada de 2- (3-ciclopentilureido) -2-fenilacetato de (R) - tere-butilo (1.31 g, 4.10 mmol) en CH2C12 (25 mi) se añadió TFA (4 mi) y trietilsilano (1.64 mi; 10.3 mmol) gota a gota, y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas.
Los componentes volátiles se eliminaron a presión reducida y el producto bruto se recristalizó en acetato de etilo/pentanos proporcionando ácido (R)-2-(3-ciclopentilureido) -2-fenilacético como un sólido blanco (0.69 g, 64%). RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6) d ppm 1.17 - 1.35 (m# 2H) 1.42 - 1.52 (m, 2H) 1.53 - 1.64 (m, 2H) 1.67 - 1.80 (m, 2H) 3.75 - 3.89 (m, 1H) 5.17 (d, <J=7.93 Hz, 1H) 6.12 (d, J"=7.32 Hz, 1H) 6.48 (d, J=l .93 Hz, 1H) 7.24 - 7.40 (m, 5H) 12.73 (s, 1H) . CL-EM: Anal. Calculado para C14Hi8N203 : 262.31; encontrado: 263.15 (M+H)+. HPLC XTERRA® C-18 3.0 X 50 mm, 0 a 100% de B durante 2 minutos, tiempo de mantenimiento 1 minuto, A = 90% de agua, 10% de metanol, 0.2% H3P0 , B = 10% de agua, 90% de metanol, 0.2% H3P04, TR = 1.24 min, índice de homogeneidad 100%.
Cap-49 ca -49 A una solución agitada de ácido 2- (bencilamino) acético (2.0 g, 12.1 mmol) en ácido fórmico (91 mi) se añadió formaldehído (6.94 mi, 93.2 mmol) . Después de cinco horas a 70 °C, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida hasta 20 mi y precipitó un sólido blanco. Después de filtrar, las aguas madres se recogieron y se concentró además a presión reducida proporcionando el producto bruto. La purificación por HPLC preparativa de fase inversa (XTERRA® 30 X 100 mm, detección a 220 nm, Caudal 35 ml/min, 0 a 35% de B durante 8 min; A = 90% de agua, 10 % de metanol, 0.1% de TFA, B = 10% de agua, 90 % de metanol, 0.1% de TFA) proporcionó el compuesto del epígrafe ácido 2- (bencil (metil) -amino) acético como su sal TFA (723 mg, 33%) como una cera incolora. RMN de 1H (300 MHz, DMS0-d6) d ppm 2.75 (s, 3H) 4.04 (s, 2H) 4.34 (s, 2H) 7.29 - 7.68 (m, 5H) . CL-EM: Análisis calculado para: C10H13NO2 179.09; encontrado: 180.20 (M+H)+.
Cap-50 A una solución agitada de ácido 3-metil-2- (metilamino) butanoico ( 0.50 g, 3.81 mmol) en agua ( 30 mi) se añadió K2C03 (2.63 g, 19.1 mmol) y cloruro de bencilo (1.32 g, 11.4 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo (30 mi x 2) y la fase acuosa se concentró a presión reducida proporcionando el producto bruto que se purificó por HPLC preparativa de fase inversa (XTERRA® 30 x lOOmm, detección a 220 nm, Caudal 40 ml/min, 20 a 80% de B durante 6 min; A = 90% de agua, 10 % de metanol, 0.1% de TFA, B = 10% de agua, 90 % de metanol, 0.1% de TFA) proporcionando ácido 2- (bencil (metil) amino) -3-metilbutanoico, sal TFA (126 mg, 19%) como una cera incolora. RM de 1H (500 MHz , DMS0-d6) d ppm 0.98 (d, 3H) 1.07 (d, 3H) 2.33 - 2.48 (m, 1H) 2.54 - 2.78 (ra, 3H) 3.69 (s, 1H) 4.24 (s, 2H) 7.29 - 7.65 (m, 5H) . CL-EM: Análisis calculado para: Ci3H19N02 221.14; encontrado: 222.28 (M+H)+. Ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) -3-metilbutanoico Se añadió Na2C03 (1.83g, 17.2 mmol) a una solución de NaOH (33 mi de 1M/H20, 33 mmol) de L-valina (3.9 g, 33.29 mmol) y la solución resultante se enfrió con baño de hielo-agua. Se añadió gota a gota durante 15 minutos cloroformiato de metilo (2.8 mi, 36.1 mmol), se retiró el baño de enfriamiento y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3.25 horas. La mezcla de reacción se lavó con éter (50 mi, 3x) , y la fase acuosa se enfrió con un baño de hielo-agua y se acidificó con HCl concentrado hasta un pH de 1-2, y se extrajo con CH2C12 (50 mi, 3x) . La fase orgánica se secó (MgS04) y se evaporó a vacío proporcionando Cap-51 como un sólido blanco (6 g) . RMN de 1H para el rotámero dominante (DMS0-d6, d = 2.5 ppm, 500 MHz): 12.54 (s, 1H) , 7.33 (d, J = 8.6, 1H) , 3.84 (dd, J = 8.4, 6.0, 1H) , 3.54 (s, 3H) , 2.03 (m, 1?) , 0.87 (m, 6H) . EMAR: Anal. Calculado [M+H] + C7Hi4N04: 176.0923; encontrado 176.0922.
Cap-51 (ruta alternativa) Ácido (S) -metoxicarbonilamino) -3 -metilbutanoico Se añadió DIEA (137.5 ml, 0.766 mol) a una suspensión de clorhidrato de 2-amino-3-metilbutanoato de (S) -tere-butilo (75.0 g, 0.357 mol) en THF (900 ml) , y la mezcla se enfrió hasta 0 °C (baño de hielo/agua) . Se añadió gota a gota durante 45 minutos cloroformiato de metilo (29.0 ml , 0.375 mol), se retiró el baño de enfriamiento y la mezcla heterogénea se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se repartió entre EtOAc y agua (1 litro de cada uno) . La fase orgánica se lavó con H20 (1 1) y salmuera (1 1) , se secó (MgS04) , se filtró y se concentró a presión reducida. El material bruto se hizo pasar a través de un lecho corto de gel de sílice (1 kg) , eluyendo con hexanos (4 1) y EtOAc : hexanos 15:85 (4 1) proporcionando 2- (metoxicarbonilamino) -3 -metilbutanoato de (S) - tere-butilo como un aceite transparente (82.0 g, 99% de rendimiento). RMN de ? (500 MHz , DMSO-d6, d = 2.5 ppm) 7.34 (d, J = 8.6, 1 H) , 3.77 (dd, J = 8.6, 6.1, 1 H) , 3.53 (s, 3 H) , 1.94 - 2.05 (m, 1 H) , 1.39 (s, 9 H) , 0.83 - 0.92 (m, 6 H) . RMN de 13C (126 MHz , DMSO-d6< d = 39.2 ppm) 170.92, 156.84, 80.38, 60.00, 51.34, 29.76, 27.62, 18.92, 17.95. CL-EM: [M+Na] + 254.17.
Se añadieron ácido trifluoroacético (343 mi, 4.62 mol) y Et3SiH (142 mi, 0.887 mol) secuencialmente a una solución de 2- (metoxicarbonilamino) -3-metilbutanoato de (S) -tere-butilo (82.0 g, 0.355 mol) en CH2C12 (675 mi), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. El componente volátil se eliminó a presión reducida y el aceite resultante se trituró con éter de petróleo (600 mi) proporcionando un sólido blanco, que se filtró y se lavó con hexanos (500 mi) y éter de petróleo (500 mi) . La recristalización en EtOAc/éter de petróleo proporcionó Cap- 51 como cristales a modo de escamas blancos (54.8 g, 88 % de rendimiento). PF = 108.5-109.5 °C. RMN de ?? (500 MHz, DMSO-d6, d = 2.5 ppm) 12.52 (s, 1 H) , 7.31 (d, J = 8.6, 1 H) , 3.83 (dd, J = 8.6, 6.1, 1 H) , 3.53 (s, 3 H) , 1.94 - 2.07 (m, 1 H) , 0.86 (dd, J = 8.9, 7.0, 6 H) . RMN de 13C (126 MHz, DMSO-d6 d = 39.2 ppm) 173.30, 156.94, 59.48, 51.37, 29.52, 19.15, 17.98. CL-EM: [M+H] + = 176.11. Análisis calculado para C7Hi3N04: C, 47.99; H, 7.48; N, 7.99. Encontrado: C, 48.17; H, 7.55; N, 7.99. Rotación óptica: [a] D = -4.16 (12.02 mg/ml ; MeOH) . Pureza óptica: >99.5 % ee . Nota: la valoración de la pureza óptica se realizó en el derivado éster metílico de Cap-51, que se preparó según un protocolo de esterificación normalizado en TMSCHN2 (benceno/MeOH) . Condiciones del análisis de HPLC : columna, CHIRALPAK® AD-H (4.6 x 250mm, 5µp?) ; disolvente, heptano al 95% / IPA al 5% ( i socrát i co ) ; caudal, 1 ml/min; temperatura, 35 ° C ; UV controlado a 205 nm .
[Nota: Cap-51 también se podía adquirir de Flamm.] Cap- 52 (Igual que Cap- 12) Ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) propanoico Cap-52 se sintetizó a partir de L-alanina de acuerdo con el procedimiento descrito para la síntesis de Cap-51. Con fines caracterizadores , se purificó una porción del material bruto por una HPLC de fase inversa (H20/metanol/TFA) proporcionando Cap-52 como un aceite incoloro viscoso. RMN de XH (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 500 MHz) : 12.49 (s ancho, 1H) , 7.43 (d, J = 7.3, 0.88H) , 7.09 (s ancho aparente, 0.12H) , 3.97 (m, 1H) , 3.53 (s, 3H) , 1.25 (d, J = 7.3, 3H) .
Cap-53 a Cap-64 Se prepararon Cap-53 a Cap-64 a partir de materiales partida apropiados de acuerdo con el procedimiento descrito para la síntesis de Cap-51, con las modificaciones indicadas si las hubiera.
Cap-65 Se añadió cloroformiato de metilo (0.65 mi, 8.39 mmol) gota a gota durante 5 minutos a una mezcla enfriada (hielo-agua) de Na2C03 (0.449 g, 4.23 mmol), NaOH (8.2 mi de 1M/H20, 8.2 mmol) y ácido ( S ) - 2 - amino- 3 -hidroxi - 3 -met ilbutanoico (1.04 g, 7.81 mmol) . La mezcla de reacción se agitó durante 45 min, y luego se retiró el baño de enfriamiento y se continuó agitando durante otras 3.75 horas. La mezcla de reacción se lavó con CH2C12, y la fase acuosa se enfrió con baño de hielo-agua y se acidificó con HC1 concentrado hasta una región de pH de 1-2. El componente volátil se eliminó a vacío y el residuo se suspendió en una mezcla 2:1 de MeOH/CH2Cl2 (15 mi) y se filtró, y el filtrado se sometió a evaporación rotativa proporcionando Cap-65 como una espuma semiviscosa blanca (1.236 g) . RMN de 1H (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : d 6.94 (d, J = 8.5, 0.9 H) , 6.53 (s ancho, 0.1H), 3.89 (d, J = 8.8, 1H) , 2.94 (s, 3H) , 1.15 (s, 3H) , 1.13 (s, 3H) .
Cap-66 y Cap-67 se prepararon a partir de materiales de partida disponibles comercialmente usando el procedimiento descrito para la síntesis de Cap-65.
Cap-66 RMN de ? ppm, 400 MHz) : d 12.58 (s ancho, 1H) , 7.07 (d, J = 8.3, 0.13H) , 6.81 (d, J = 8.8, 0.67H), 4.10-4.02 (m, 1.15H), 3.91 (dd, J = 9.1, 3.5, 0.85H), 3.56 (s, 3H) , 1.09 (d, J = 6.2, 3H) . [Nota: solo se indican las señales dominantes de NH] .
Cap-67 RMN de XH (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz): 12.51 (s ancho, 1H) , 7.25 (d, J = 8.4, 0.75H), 7.12 (d ancho, J = 0.4, 0.05H), 6.86 (s ancho, 0.08H), 3.95-3.85 (m, 2H) , 3.54 (s, 3H) , 1.08 (d, J = 6.3, 3H) . [Nota: solo se indican las señales dominantes de NH] .
Cap-68 Se añadió cloroformiato de metilo (0.38 mi, 4.9 mmol) gota a gota a una mezcla de NaOH 1N (ac) (9.0 mi, 9.0 mmol) , NaHC03 1M (ac) (9.0 mi, 9.0 mol), éster ß-bencílico del ácido L-aspártico (1.0 g, 4.5 mmol) y dioxano (9 mi). La mezcla de reacción se agitó en condiciones ambientales durante 3 horas, y luego se lavó con acetato de etilo (50 mi, 3x) . La fase acuosa se acidificó con HCl 12N hasta un pH ~ 1-2, y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 mi) . Las fases orgánicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron (Na2S04) , se filtraron y se concentraron a vacío proporcionando Cap-68 como un aceite amarillo claro (1.37g; la masa es superior al rendimiento teórico, y el producto se usó sin purificación adicional). RMN de ""? (DMSO-d6í d = 2.5 ppm, 500 MHz) : d 12.88 (s ancho, 1H) , 7.55 (d, J = 8.5, 1H) , 7.40-7.32 (m, 5H) , 5.13 (d, J = 12.8, 1H) , 5.10 (d, J = 12.9, 1H) , 4.42-4.38 (m, 1H) , 3.55 (s, 3H) , 2.87 (dd, J = 16.2, 5.5, 1H) , 2.71 (dd, J =16.2, 8.3, 1H) . CL (Cond. II): TR = 1.90 min; CL-E : Análisis calculado para [M+H] + Ci3Hi6 06 : 282.10; encontrado 282.12.
Cap-69a y Cap-69b Cap-69a: enantiómero (R) Cap-69b: enantiómero (S) Se añadió NaCNBH3 (2.416 g, 36.5 mmol) en lotes a una solución acuosa enfriada (~15°C) (17 ml)/MeOH (10 mi) de alanina (1.338 g, 15.0 mmol) . Unos pocos minutos después se añadió gota a gota durante 4 minutos acetaldehído (4.0 mi, 71.3 mmol), se retiró entonces el baño de enfriamiento y la mezcla de reacción se agitó en condiciones ambientales durante 6 horas. Se añadió más acetaldehído (4.0 mi) y la reacción se agitó durante 2 horas. Se añadió HCl concentrado lentamente a la mezcla de reacción hasta que el pH alcanzó ~ 1.5, y la mezcla resultante se calentó durante 1 hora a 40°C. La mayoría del componente volátil se eliminó a vacío y el residuo se purificó con una resina de intercambio iónico DOWEX® 50WX8-100 (la columna se lavó con agua y el compuesto se eluyó con NH4OH diluido, preparado mezclando 18 mi de NH4OH y 282 mi de agua) proporcionando Cap-69 (2.0 g) como un sólido higroscópico blando blanquecino. RMN de 1H (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : d 3.44 (q, J = 7.1, 1H) , 2.99-2.90 (m, 2H) , 2.89-2.80 (m, 2H) , 1.23 (d, J = 7.1, 3H) , 1.13 (t, J = 7.3, 6H) .
Cap-70 a Cap-74x Cap-70 a Cap-74x se prepararon de acuerdo con el procedimiento descrito para la síntesis de Cap-69 usando materiales de partida apropiados.
Cap-74 RMN de XH (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 500 MHz) : d 7.54 (s, 1H) , 6.89 (s, 1H) , 3.81 (t, J = 6.6, k,lH), 2.82-2.71 (m, 4H) , 2.63 (dd, J = 15.6, 7.0, 1H) , 2.36 (dd, J = 15.4, 6.3, IH) , 1.09 (t, J = 7.2, 6H) .
TR = 0.125 minutos (Cond.
II) ; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H] + C8Hi7 203 : 189.12; encontrado 189.13.
Cap-74x CL-EM: Anal. Calculado para [M+H]+ C10H22NO2 : 188.17; encontrado 188.21 Cap-75 Cap-75, etapa a añadió NaBH3CN (1.6 g, 25.5 mmol) a una solución enfriada (baño de hielo/agua) en agua (25 ml)/metanol (15 mi) de H-D-Ser-OBzl HC1 (2.0 g, 8.6 mmol). Se añadió acetaldehído (1.5 mi, 12.5 mmol) gota a gota durante 5 min, se retiró el baño de enfriamiento, y la mezcla de reacción se agitó en condiciones ambientales durante 2 horas. La reacción se inactivo cuidadosamente con HCl 12N y se concentró a vacío. El residuo se disolvió en agua y se purificó con una HPLC de fase inversa ( eOH/H20/TFA) proporcionando la sal TFA de 2-(dietilamino) -3-hidroxipropanoato de (R) -bencilo como un aceite incoloro viscoso (1.9 g) . RMN de 1H (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 500 MHz) : d 9.73 (s ancho, 1H) , 7.52-7.36 (m, 5H) , 5.32 (d, J = 12.2, 1H) , 5.27 (d, J = 12.5, 1H) , 4.54-4.32 (m, 1H) , 4.05-3.97 (m, 2H) , 3.43-3.21 (m, 4H) , 1.23 (t, J = 7.2, 6H) . CL-EM (Cond. II) : TR = 1.38 min; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H]+ Ci4H22 03: 252.16; encontrado 252.19.
Cap-75 Se añadió NaH (0.0727 g, 1.82 mmol , 60%) a una solución enfriada (hielo-agua) en THF (3.0 mi) de la sal TFA de 2- (dietilamino) -3-hidroxipropanoato de (R) -bencilo (0.3019 g, 0.8264 mmol) preparada antes, y la mezcla se agitó durante 15 min. Se añadió yoduro de metilo (56 µ? , 0.90 mmol) y se continuó agitando durante 18 horas dejando que el baño se descongelara hasta condiciones ambiente. La reacción se inactivo con agua y se cargó en un cartucho MCX preacondicionado con MeOH (6 g) y se lavó con metanol seguido por elución del compuesto con NH3 2N/Metanol . La eliminación del componente volátil a vacío proporcionó Cap-75, contaminado con ácido (R) -2- (dietilamino) -3-hidroxipropanoico, como un semisólido amarillo (100 mg) . El producto se usó como tal sin purificación adicional.
Cap-76 Se añadió NaCNBH3 (1.60 g, 24.2 mmol) en cargas a una solución enfriada (-15 °C) en agua/MeOH (12 mi cada uno) de ácido (S) -4-amino-2- ( terc-butoxicarbonilamino) butanoico (2.17 g, 9.94 mmol). Unos pocos minutos después se añadió acetaldehído (2.7 mi, 48.1 mmol) gota a gota durante 2 min, se retiró el baño de enfriamiento y la mezcla de reacción se agitó en condiciones ambientales durante 3.5 horas. Se añadió más acetaldehído (2.7 mi, 48.1 mmol) y la reacción se agitó durante 20.5 horas. Se eliminó a vacío la mayoría del componente eOH, y la mezcla restante se trató con HCl concentrado hasta que su pH llegó a - 1.0 y luego se calentó durante 2 horas a 40 °C. El componente volátil se eliminó a vacío, y el residuo se trató con HCl 4 M/dioxano (20 mi) y se agitó en condiciones ambientales durante 7.5 horas. El componente volátil se eliminó a vacío y el residuo se purificó con resina de intercambio iónico DOWEX® 50WX8-100 (la columna se lavó con agua y el compuesto se eluyó con NH4OH diluido, preparado a partir de 18 mi de NH4OH y 282 mi de agua) proporcionando el intermedio ácido (S) -2-amino-4- (dietilamino) butanoico como un sólido blanquecino (1.73 g) .
Se añadió cloroformiato de metilo (0.36 mi, 4.65 mmol) gota a gota durante 11 min a una mezcla enfriada (hielo-agua) de Na2C03 (0.243 g, 2.29 mmol), NaOH (4.6 mi de 1M/H20, 4.6 mmol) y el producto anterior (802.4 mg) . La mezcla de reacción se agitó durante 55 min, y luego se retiró el baño de enfriamiento y se continuó agitando durante otras 5.25 horas. La mezcla de reacción se diluyó con un volumen igual de agua y se lavó con CH2C12 (30 mi, 2x) , y la fase acuosa se enfrió con baño de hielo-agua y se acidificó con HC1 concentrado hasta un pH en torno a 2. El componente volátil se eliminó a vacío y el material bruto se desbasificó con resina MCX (6.0g; la columna se lavó con agua, y la muestra se eluyó con NH3 2.0 M/MeOH) proporcionando Cap-76 impuro como un sólido blanquecino (704 mg) . R de XH (MeOH-d4, d = 3.29 ppm, 400 MHz) : d 3.99 (dd, J = 7.5, 4.7, 1H) , 3.62 (s, 3H) , 3.25-3.06 (m, 6H) , 2.18-2.09 (m, 1H) , 2.04-1.96 (m, 1H) , 1.28 (t, J = 7.3, 6H) . CL-EM: Anal. Calculado para [M+H]+ C10H21 2O4: 233.15; encontrado 233.24.
La síntesis de Cap-77 se llevó a cabo de acuerdo procedimiento descrito para Cap- 7 usando 7-azabiciclo [2.2.1] heptano para la etapa de desplazamiento SN2, y efectuando la separación estereoisomérica del intermedio 2-(7-azabiciclo [2.2.1] heptan-7-il) -2 - fenilacetato de bencilo usando las siguientes condiciones: el intermedio (303.7 mg) se disolvió en etanol, y la solución resultante se inyectó en una columna HPLC quiral (columna Chiracel AD-H, 30 x 250 mm, 5 um) eluyendo con 90% de CO2-10% de EtOH a 70 ml/min, y una temperatura de 35 °C proporcionando 124.5 mg de estereoisómero- 1 y 133.8 mg de estereoisómero-2. Estos ésteres bencílicos se sometieron a hidrogenación de acuerdo con la preparación de Cap-7 proporcionando Cap-77: RM de 1H (D SO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : d 7.55 (m, 2H) , 7.38-7.30 (m, 3H) , 4.16 (s, 1H) , 3.54 (s ancho aparente, 2H) , 2.08-1.88 (m, 4 H) , 1.57-1.46 (m, 4H) . CL (Cond. I): TR = 0.67 min; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H] + C14Hi8N02 : 232.13; encontrado 232.18. EMAR: Anal. Calculado para [M+H] + Ci4Hi8 02 : 232.1338; encontrado 232.1340.
Cap-78 Se añadió NaCNBH3 (0.5828 g, 9.27 mmol) a una mezcla de la sal HCl de ácido (R) -2- (etilamino) -2-fenilacético (un intermedio en la síntesis de Cap-3; 0.9923 mg, 4.60 mmol) y (1-etoxiciclopropoxi) trimetilsilano (1.640 g, 9.40 mmol) en MeOH (10 ml) , y se calentó la mezcla semiheterogénea a 50 °C con un baño de aceite durante 20 horas. Se añadieron más (1-etoxiciclopropoxi) trimetilsilano (150 mg, 0.86 mmol) y NaCNBH3 (52 mg, 0.827 mmol) y la mezcla de reacción se calentó otras 3.5 horas. Se dejó enfriar hasta temperatura ambiente y se acidificó ~ pH entorno a 2 con HCl concentrado, y la mezcla se filtró y el filtrado se evaporó en un evaporador rotatorio. El material bruto resultante se suspendió en i-PrOH (6 ml) y se calentó para efectuar la disolución y la parte no disuelta se separó por filtración y el filtrado se concentró a vacío. Se purificó aproximadamente 1/3 del material bruto resultante con una HPLC de fase inversa (H20/MeOH/TFA) proporcionando la sal TFA de Cap-78 como un aceite incoloro viscoso (353 mg) . RM de ¾ (D SO-ds, d = 2.5 ppm, 400 MHz; después de intercambio de I¾0) : d 7.56-7.49 (m, 5H) , 5.35 (S, 1H) , 3.35 (m, 1H) , 3.06 (s ancho aparente, 1H) , 2.66 (m, 1H) , 1.26 (t, J = 7.3, 3H) , 0.92 (m, 1H) , 0.83-0.44 (m, 3H) . CL (Cond. I) : TR = 0.64 min; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H]+ CUHÍSNQ,: 220.13; encontrado 220.21. EMAR: Anal. Calculado para [M+H]+ C^HiaNC^: 220.1338; encontrado 220.1343.
Cap-79 burbujeó ozono a través de una solución enfriada (-78 °C) en CH2C12 (5.0 mi) de Cap-55 (369 mg, 2.13 mmol) durante aproximadamente 50 min hasta que la mezcla de reacción alcanzó un tinte de color azul. Se añadió Me2S (10 gotas de pipeta) y la mezcla de reacción se agitó durante 35 min. Se reemplazó el baño de -78 °C con un baño a -10 °C y se continuó agitando durante otros 30 min, y luego se eliminó el componente volátil a vacío proporcionando un aceite viscoso incoloro .
Se añadió NaBH3CN (149 mg, 2.25 mmol) a una solución en MeOH (5.0 mi) del material bruto anterior y morfolina (500 µ? , 5.72 mmol) y la mezcla se agitó en condiciones ambientales durante 4 horas. Se enfrió hasta temperatura de hielo-agua y se trató con HCl concentrado para llevar el pH a -2.0, y luego se agitó durante 2.5 horas. El componente volátil se eliminó a vacío, y el residuo se purificó con una combinación de resina MCX (lavado con MeOH; elución con NH3 2.0 N/ eOH) y una HPLC de fase inversa (H20/MeOH/TFA) proporcionando Cap-79 que contenía una cantidad desconocida de morfolina.
Con el fin de consumir la morfolina contaminante, se disolvió el material anterior en CH2C12 (1.5 mi) y se trató con Et3N (0.27 mi, 1.94 mmol) seguido por anhídrido acético (0.10 mi, 1.06 mmol) y se agitó en condiciones ambientales durante 18 horas. Se añadieron THF (1.0 mi) y H20 (0.5 mi) y se continuó agitando durante 1.5 horas. El componente volátil se eliminó a vacío, y el residuo resultante se hizo pasar a través de resina MCX (lavado con MeOH; elución con NH3 2.0 N/MeOH) proporcionando Cap-79 impuro como un aceite viscoso marrón, que se usó para la etapa siguiente sin purificación adicional .
S/S S/R Se añadió SOCl2 (6.60 mi, 90.5 mmol) gota a gota durante 15 min a una mezcla enfriada (hielo-agua) de ácido (S) -3-amino-4- (benciloxi) -4 -oxobutanoico (10.04g, 44.98 mmol) y MeOH (300 mi) , se retiró el baño de enfriamiento y la mezcla de reacción se agitó en condiciones ambientales durante 29 horas. Se eliminó la mayor parte del componente volátil a vacío y el residuo se repartió cuidadosamente entre EtOAc (150 mi) y solución saturada de NaHC03. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (150 mi, 2x) , y la fase orgánica reunida se secó (MgS04) , se filtró y se concentró a vacío proporcionando 4-metil-2-aminosuccinato de (S) -1-bencilo como un aceite incoloro (9.706g) . RMN de ?. (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : d 7.40-7.32 (m, 5H) , 5.11 (s, 2H) , 3.72 (t aparente, J = 6.6, 1H) , 3.55 (s, 3H) , 2.68 (dd, J = 15.9, 6.3, 1H) , 2.58 (dd, J = 15.9, 6.8, 1H) , 1.96 (s, 2H) . CL (Cond. I) : TR = 0.90 min; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H] + Ci2H16N04: 238.11; encontrado 238.22.
Se añadió Pb(N03)2 (6.06 g, 18.3 mmol) durante 1 minuto a una solución en CH2C12 (80 mi) de 4-metil-2-aminosuccinato de (S) -1-bencilo (4.50 g, 19.0 mmol), 9-bromo-9-fenil-9H-fluoreno (6.44 g, 20.0 mmol) y Et3N (3.0 mi, 21.5 mmol) y la mezcla heterogénea se agitó en condiciones ambientales durante 48 horas. La mezcla se filtró y el filtrado se trató con MgS04 y se filtró de nuevo y el filtrado final se concentró. El material bruto resultante se sometió a una purificación en BIOTAGE® (350 g gel de sílice, elución con CH2C12) proporcionando 4-metil 2- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) succinato de (S) -1-bencilo como aceite incoloro muy viscoso (7.93 g) . RMN de XH (DMS0-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : d 7.82 (m, 2H) , 7.39-7.13 (m, 16H) , 4.71 (d, J = 12.4, 1H) , 4.51 (d, J = 12.6, 1H) , 3.78 (d, J = 9.1, H) , 3.50 (s, 3H) , 2.99 (m, 1H) , 2.50-2.41 (m, 2H, parcialmente solapado con disolvente) . CL (Cond. I) : TR = 2.16 min; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H] + C3iH28N04 : 478.20; encontrado 478.19.
Se añadió LiHMDS (9.2 mi de 1.0 M/THF, 9.2 mmol) gota a gota durante 10 min a una solución enfriada (-78 °C) THF (50 mi) de 4-metil 2- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) succinato de (S) -1-bencilo (3.907 g, 8.18 mmol) y se agitó durante ~1 horas. Se añadió Mel (0.57 mi, 9.2 mmol) gota a gota durante 8 min a la mezcla y se continuó agitando durante 16.5 horas dejando que el baño de enfriamiento se descongelara hasta temperatura ambiente. Después de inactivar con solución saturada de NH4C1 (5 mi) , se eliminó a vacío la mayor parte del componente orgánico y el residuo se repartió entre CH2C12 (100 mi) y agua (40 mi) . La fase orgánica se secó (MgS04) , se filtró y se concentró a vacío, y el material bruto resultante se purificó con un BIOTAGE® (350 g gel de sílice; 25% de EtOAc/hexanos) proporcionando 3.65 g de una mezcla de diastereoisómeros 2S/3S y 2S/3R de 4-metil 3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) succinato de 1-bencilo en una relación -1.0:0.65 (RMN de ^) . La estereoquímica del isómero dominante no se determinó en este paso y la mezcla se sometió a la etapa siguiente sin separación. Datos parciales de RMN de ?? (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : Diastereómero mayoritario, d 4.39 (d, J = 12.3, 1H de CH2) , 3.33 (s, 3H, solapado con señal de H20) , 3.50 (d, J = 10.9, NH) , 1.13 (d, J = 7.1, 3H) ; Diastereómero minoritario, d 4.27 (d, J =12.3, 1H de CH2) , 3.76 (d, J = 10.9, NH) , 3.64 (s, 3H) , 0.77 (d, J = 7.0, 3H) . CL (Cond. I) : TR = 2.19 min; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H] + C32H30 O4 : 492.22; encontrado 492.15.
Se añadió hidruro de diisobutilaluminio (20.57 mi de 1.0 M en hexanos , 20.57 mmol) gota a gota durante 10 min a una solución enfriada (-78 °C) en THF (120 mi) de 4-metil-3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) succinato de (2S) -1-bencilo (3.37 g, 6.86 mmol) preparado antes y se agitó a -78 °C durante 20 horas. La mezcla de reacción se separó del baño de enfriamiento y se vertió rápidamente en H3P04 ~1M/H20 (250 mi) con agitación y la mezcla se extrajo con éter (100 mi, 2x) . La fase orgánica reunida se lavó con salmuera, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró a vacío. Se preparó una malla de gel de sílice del material bruto y se sometió a cromatografía (25% de EtOAc/hexanos ; elución por gravedad) proporcionando 1.1 g de 4-hidroxi-3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren- 9-ilamino) butanoato de (2S, 3S) -bencilo, contaminado con alcohol bencílico, como un aceite incoloro viscoso y 4-hidroxi-3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) butanoato de (2S, 3R) -bencilo que contenía el estereoisómero (2S,3R) como una impureza. La muestra anterior se volvió a someter a las mismas condiciones de purificación de cromatografía en columna proporcionando 750 mg de material purificado como una espuma blanca. [Nota: el isómero (2S, 3S) eluye antes que el isómero (2S,3R) en las condiciones anteriores] . Isómero (2S, 3S) : RMN de XK (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : 7.81 (m, 2H) , 7.39-7.08 (m, 16H) , 4.67 (d, J = 12.3, 1H) , 4.43 (d, J = 12.4, 1H) , 4.21 (t aparente, J = 5.2, OH), 3.22 (d, J = 10.1, NH) , 3.17 (m, 1H) , 3.08 (m, 1H) , -2.5 (m, 1H, solapado con la señal del disolvente), 1.58 (m, 1H) , 0.88 (d, J = 6.8, 3H) . CL (Cond. I): TR = 2.00 min; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H]+ C3iH30NO3: 464.45; encontrado 464.22. Isómero (2S, 3R) : RMN de XH (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz): 7.81 (d, J = 7.5, 2H) , 7.39-7.10 (ra, 16H) , 4.63 (d, J= 12.1, 1H) , 4.50 (t aparente, J = 4.9, 1H), 4.32 (d, J = 12.1, 1H) , 3.59-3.53 (m, 2H) , 3.23 (m, 1H) , 2.44 (dd, J = 9.0, 8.3, 1H) , 1.70 (m, 1H) , 0.57 (d, J = 6.8, 3H) . CL (Cond. I): TR = 1.92 min; CL-EM: Anal. Calculado para [M+H] + C31H30NO3 : 464.45; encontrado 464.52.
Las asignaciones estereoquímicas relativas de los productos de reducción con DIBAL se hicieron basándose en estudios NOE llevados a cabo en derivados lactona preparados a partir de cada isómero usando el siguiente protocolo: Se añadió LiHMDS (50 µ? de 1.0 M/THF, 0.05 mmol) a una solución enfriada (hielo-agua) en THF (2.0 mi) de 4-hidroxi-3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) butanoato de (2S , 3S) -bencilo (62.7 mg, 0.135 mmol) , y la mezcla de reacción se agitó a temperatura similar durante ~2 horas. El componente volátil se eliminó a vacío y el residuo se repartió entre CH2Cl2 (30 mi) , agua (20 mi) y solución acuosa saturada de NH4C1 (1 mi) . La fase orgánica se secó (MgS04) , se filtró y se concentró a vacío, y el material bruto resultante se sometió a una purificación BIOTAGE® (40 g gel de sílice; 10-15% de EtOAc/hexanos) proporcionando (3S, 4S) -4-metil-3- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) dihidrofuran-2 (3H) -ona como una película incolora de sólido (28.1 mg) . Se elaboró 4-hidroxi-3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) butanoato de (2S, 3R) -bencilo de forma similar a (3S,4R) -4-metil-3- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) dihidrofuran-2 (3H) -ona. Isómero (3S, 4S) -lactona : RM de XK (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) , 7.83 (d, J = 7.5, 2H) , 7.46-7.17 (m, 11H) , 4.14 (t aparente, J = 8.3, 1H) , 3.60 (d, J = 5.8, NH) , 3.45 (t aparente, J = 9.2, 1H) , -2.47 (m, 1H, parcialmente solapado con la señal del disolvente), 2.16 (m, 1H), 0.27 (d, J = 6.6, 3H) . CL (Cond. I): TR = 1.98 min; CL-EM: Anal. Calculado para [M+Na] + C24H2i a02: 378.15; encontrado 378.42. Isómero (3S, 4R) -lactona: RMN de 1H (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz), 7.89 (d, J = 7.6, 1H) , 7.85 (d, J = 7.3, 1H) , 7.46-7.20 (m, 11H) , 3.95 (dd, J = 9.1, 4.8, 1H) , 3.76 (d, J = 8.8, 1H) , 2.96 (d, J = 3.0, NH) , 2.92 (dd, J = 6.8, 3, NCH) , 1.55 (m, 1H) , 0.97 (d, J = 7.0, 3H) . CL (Cond. I): TR = 2.03 min; CL-EM: Anal. Calculado para [M+Na] + C24H2iN a02: 378.15; encontrado 378.49.
Se añadieron TBDEM-Cl (48 mg, 0.312 mmol) seguido por imidazol (28.8 mg, 0.423 mmol) a una solución en CH2C12 (3 mi) de 4-hidroxi-3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) butanoato de (2S , 3S) -bencilo (119.5 mg, 0.258 mmol), y la mezcla se agitó en condiciones ambientales durante 14.25 horas. La mezcla de reacción se diluyó entonces con CH2C12 (30 mi) y se lavó con agua (15 mi) , y la fase orgánica se secó (MgS04) , se filtró y se concentró a vacío. El material bruto resultante se purificó con una BIOTAGE® (40 g gel de sílice; 5% de EtOAc/hexanos) proporcionando 4-(terc-butildimetilsililoxi) -3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren-9- ilamino) butanoato de (2S, 3S) -bencilo, contaminado con impurezas con base de TBDMS, como un aceite incoloro viscoso (124.4 mg) . Se elaboró 4-hidroxi-3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren- 9-ilamino) butanoato de (2S, 3R) -bencilo de forma similar a 4- (terc-butildimetilsililoxi) -3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren- 9-ilamino) butanoato de (2S , 3R) -bencilo . Isómero (2S, 3S) -silil éter: RMN de XK (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) , 7.82 (d, J = 4.1, 1H) , 7.80 (d, J = 4.0, 1H) , 7.38-7.07 (m, 16 H) , 4.70 (d, J = 12.4, 1H) , 4.42 (d, J = 12.3, 1H) , 3.28-3.19 (m, 3H) , 2.56 (dd, J = 10.1, 5.5, 1H) , 1.61 (m, 1H) , 0.90 (d, J = 6.8, 3H) , 0.70 (s, 9H) , -0.13 (s, 3H) , -0.16 (s, 3H) . CL (Cond. 1, donde el tiempo de ejecución de prolongó hasta 4 min) : TR = 3.26 min; CL-E : Anal. Calculado para [M+H]+ C37H44N03Si : 578.31; encontrado 578.40. Isómero (2S,3R)-silil éter: RMN de XH (DMS0-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz), 7.82 (d, J = 3.0, 1H) , 7.80 (d, J = 3.1, 1H) , 7.39-7.10 (m, 16H) , 4.66 (d, J = 12.4, 1H) , 4.39 (d, J = 12.4, 1H) , 3.61 (dd, J = 9.9, 5.6, 1H) , 3.45 (d, J = 9.5, 1H) , 3.41 (dd, J = 10, 6.2, 1H) , 2.55 (dd, J = 9.5, 7.3, 1H) , 1.74 (m, 1H) , 0.77 (s, 9H) , 0.61 (d, J = 7.1, 3H) , -0.06 (s, 3H) , -0.08 (s, 3H) .
Se unió un globo de hidrógeno a una mezcla de 4- ( erc-butildimetilsililoxi) -3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) butanoato de (2S, 3S) -bencilo (836 mg, 1.447 mmol) y Pd al 10%/C (213 mg) en EtOAc (16 mi) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante ~ 21 horas, recargándose el globo con H2 cuando fue necesario. La mezcla de reacción se diluyó con CH2C12 y se filtró a través de un lecho de tierra de diatomeas (CELITE®-545) , y se lavó el lecho con EtOAc (200 mi), EtOAc/ eOH (mezcla 1:1, 200 mi) y MeOH (750 mi). La fase orgánica combinada se concentró y se preparó una malla de gel de sílice a partir del material bruto resultante y se sometió a una cromatografía ultrarrápida (mezcla 8:2:1 de EtOAc/i-PrOH/H20) proporcionando ácido (2S , 3S) -2 -amino-4 -( terc-butildimetilsililoxi ) -3-metilbutanoico como un sólido apelusado blanco (325 mg) . Se elaboró 4-(terc-butildimetilsililoxi) -3-metil-2- (9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) butanoato de (2S, 3R) -bencilo de forma similar a ácido (2S , 3R) -2 -amino-4 - ( terc-butildimetilsililoxi ) -3 -metilbutanoico . (Isómero 2S,3S)-amino ácido: RMN de ¾ (mtanol-d4, d = 3.29 ppm, 400 MHz) , 3.76 (dd, J = 10.5, 5.2, 1H) , 3.73 (d, J = 3.0, 1H) , 3.67 (dd, J = 10.5, 7.0, 1H) , 2.37 (m, 1H) , 0.97 (d, J = 7.0, 3H) , 0.92 (s, 9H) , 0.10 (s, 6H) . CL-EM : Anal. Calculado para [M+H] + CnH26N03Si : 248.17; encontrado 248.44. Isómero (2S , 3R) -amino ácido: RMN de 1H (metanol-d4, d = 3.29 ppm, 400 MHz), 3.76-3.75 (m, 2H) , 3.60 (d, J = 4.1, 1H) , 2.16 (m, 1H) , 1.06 (d, J = 7.3, 3H) , 0.91 (s, 9H) , 0.09 (s, 6H) . Anal. Calculado para [M+H] + CiiH26N03Si: 248.17; encontrado 248.44.
Se añadieron agua (1 mi) y NaOH (0.18 mi de 1.0 M/H20, 0.18 mmol) a una mezcla de ácido (2S, 3S) -2-amino-4- ( terc-butildimetilsililoxi) -3-metilbutanoico (41.9 mg, 0.169 mmol) y 2CÜ3 (11.9 mg, 0.112 mmol), y se sometió a ultrasonidos durante aproximadamente 1 minuto para efectuar la disolución de los reactivos. La mezcla se enfrió entonces con un baño de hielo-agua, se añadió cloroformiato de metilo (0.02 mi, 0.259 mmol) se durante 30 s y se continuó con agitación vigorosa a temperatura similar durante 40 minutos y luego a temperatura ambiente durante 2.7 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (5 mi) , se enfrió con baño de hielo-agua y se trató gota a gota con solución acuosa de HC1 1.0 N HC1 (-0.23 mi). La mezcla se diluyó adicionalmente con agua (10 mi) y se extrajo con CH2C12 (15 mi, 2x) . La fase orgánica reunida se secó (MgS04) , se filtró y se concentró a vacío proporcionando Cap-80a como un sólido blanquecino. Se elaboró ácido (2S , 3R) -2 -amino-4 -( terc-butildimetilsililoxi) -3-metilbutanoico de forma similar a Cap-80b. Cap-80a: RMN de 2H (DMSO-d6; d = 2.5 ppm, 400 MHz) , 12.57 (s ancho, 1H) , 7.64 (d, J = 8.3, 0.3H), 7.19 (d, J = 8.8, 0.7H) , 4.44 (dd, J = 8.1, 4.6, 0.3H), 4.23 (dd, J = 8.7, 4.4, 0.7H) , 3.56/3.53 (dos singletes, 3H) , 3.48-3.40 (m, 2H) , 2.22-2.10 (m, 1H) , 0.85 (s, 9H) , -0.84 (d, 0.9H, solapado con la señal de t-Bu) , 0.79 (d, J = 7, 2.1H), 0.02/0.01/0.00 (tres singletes solapados, 6H) . CL-EM: Anal. Calculado para [M+Na] + C13H27 a05Si : 328.16; encontrado 328.46. Cap-80b: RMN de XH (CDC13, d = 7.24 ppm, 400 MHz), 6.00 (d ancho, J = 6.8, 1H) , 4.36 (dd, J = 7.1, 3.1, 1H) , 3.87 (dd, J = 10.5, 3.0, 1H) , 3.67 (s, 3H), 3.58 (dd, J = 10.6, 4.8, 1H) , 2.35 (m, 1H) , 1.03 (d, J = 7.1, 3H) , 0.90 (s, 9H), 0.08 (s, 6H) . CL-EM: Anal. Calculado para [M+Na]+ Ci3H27Ma05Si : 328.16; encontrado 328.53. Los productos brutos se utilizaron sin purificación adicional.
Cap-81 preparó de acuerdo con el protocolo descrito por Falb et al. Synthetic Communications, 23; 2839 (1993) Cap-82 a Cap-85 sintetizaron Cap-82 a Cap-85 a partir de materiales de partida apropiados de acuerdo con el procedimiento descrito para Cap-51 o Cap-13. Las muestras presentaron perfiles espectrales similares a los de sus estereoisómeros (es decir, Cap-4, Cap-13, Cap-51 y Cap-52, respectivamente) . Ácido (2S, 3R) -3-metoxi-2- (metoxicarbonilamino) butanoico A una mezcla de O-metil-L-treonina (3.0 g, 22.55 mmol) , NaOH (0.902 g, 22.55 mmol) en H20 (15 mi) se añadió ClC02Me (1.74 ml , 22.55 mmol) gota a gota a 0°C. La mezcla se dejó agitando durante 12 h y se acidificó hasta pH 1 usando HCl 1N. La fase acuosa se extrajo con EtOAc y (2x250 ml) y MeOH al 10% en CH2C12 (250 ml) y las fases orgánicas reunidas se concentraron a vacío proporcionando un aceite incoloro (4.18 g, 97%) que era de pureza suficiente para usar en las etapas siguientes. R N de XH (400 MHz , CDC13) d 4.19 (s, 1H) , 3.92-3.97 (m, 1H) , 3.66 (s, 3H) , 1.17 (d, J = 7.7 Hz , 3H) . CL-EM: Anal. Calculado para C7Hi3N05 : 191; encontrado: 190 (M-H) Ca -87 A una mezcla de L-homoserina (2.0 g, 9.79 mmol), Na2C03 (2.08 g, 19.59 mmol) en H20 (15 ml) se añadió ClC02Me (0.76 ml , 9.79 mmol) gota a gota a 0°C. La mezcla se dejó agitando durante 48 h y se acidificó hasta pH 1 usando HCl 1 . La fase acuosa se extrajo con EtOAc y (2X250 ml) y las fases orgánicas reunidas se concentraron a vacío proporcionando un sólido incoloro (0.719 g, 28%) que era de pureza suficiente para usar en las etapas siguientes. RMN de H (400 MHz, CDC13) d 4.23 (dd, J = 4.5, 9.1 Hz, 1H) , 3.66 (s, 3H) , 3.43-3.49 (m, 2H) , 2.08-2.14 (m, 1H) , 1.82-1.89 (m, 1H) . CL-EM: Anal. Calculado para C7Hi3N05 : 191; encontrado: 192 (M+H) + .
Cap-88 Se calentó una mezcla de L-valina (1.0 g, 8.54 mmol) , 3 -bromopiridina (1.8 mi, 18.7 mmol) , K2C03 (2.45 g, 17.7 mmol) y Cul (169 mg, 0.887 mmol) en DIVISO (10 mi) a 100°C durante 12h. La mezcla de reacción se enfrió hasta ta, se vertió en H20 (aproximadamente 150 mi) y se lavó con EtOAc (x2) . Las fases orgánicas se extrajeron con una pequeña cantidad de H20 y las fases acuosas reunidas se acidificaron hasta aproximadamente pH 2 con HC1 6N. El volumen se redujo hasta aproximadamente la tercera parte y se añadieron 20 g de resina de intercambio iónico (Strata) . La suspensión se dejó reposar durante 20 min y se cargó en un lecho de resina de intercambio catiónico (Strata) (aproximadamente 25 g) . Se lavó el lecho con H20 (200 mi) , MeOH (200 mi) y luego NH3 (3M en MeOH, 2X200 mi) . Se concentraron las fracciones apropiadas a vacío y el residuo (aproximadamente 1.1 g) se disolvió en H20, se congeló y liofilizó. El compuesto del epígrafe se obtuvo como una espuma (1.02 g, 62%). RM de XH (400 MHz, DMSO-d6) d 8.00 (s ancho, 1H) , 7.68-7.71 (m, 1H) , 7.01 (s ancho, 1H) , 6.88 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 5.75 (s ancho, 1H) , 3.54 (s, 1H) , 2.04-2.06 (m, 1H) , 0.95 (d, J = 6.0 Hz , 3H) , 0.91 (d, J = 6.6 Hz, 3H) . CL-EM: Anal. Calculado para CioH14N202: 194; encontrado: 195 (M+H) + .
Cap-89 Se calentó a 100 °C durante 12 horas una mezcla de L-valina (1.0 g, 8.54 mmol) , 5-bromopirimidina (4.03 g, 17.0 mmol) , K2C03 (2.40 g, 17.4 mmol) y Cul (179 mg, 0.94 mmol) en DMSO (10 mi) . La mezcla de reacción se enfrió hasta TA, se vertió en H20 (aproximadamente 150 mi) y se lavó con EtOAc (x2) . Las fases orgánicas se extrajeron con una pequeña cantidad de H20 y las fases acuosas reunidas se acidificaron hasta aproximadamente pH 2 con HC1 6N. El volumen se redujo hasta aproximadamente la tercera parte y se añadieron 20 g de resina de intercambio catiónico (Strata) . La suspensión se dejó reposar durante 20 minutos y se cargó en un lecho de resina de intercambio catiónico (Strata) (aproximadamente 25g) . El lecho se lavó con H20 (200 mi) , MeOH (200 mi) y luego NH3 (3M en MeOH, 2x200 mi) . Se concentraron las fracciones apropiadas a vacío y se disolvió el residuo (aproximadamente 1.1 g) en H20, se congeló y liofilizó. El compuesto del epígrafe se obtuvo como una espuma (1.02 g, 62%) . La RMN de XH (400 MHz , CD3OD) mostró que la mezcla contenía valina y no se pudo estimar la pureza. El material se usó como tal en las posteriores reacciones. CL-EM: Anal Calculado para C9H13N3O2 : 195; encontrado: 196 (M+H) + .
Se preparó Cap-90 de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación de Cap-1. El material bruto se usó como tal en las etapas posteriores. CL-EM: Anal. Calculado para CnHi5 02 : 193; encontrado: 192 (M-H)".
Cap-91 a Cap-116 Los siguientes Caps se prepararon de acuerdo con el procedimiento del usado para la preparación del Cap-51, a menos que se indique de otro modo: Cap-117 a Cap-123 Para preparación de Cap-117 a Cap-123 los Boc aminoácidos se obtuvieron de suministradores comerciales y se desprotegieron por tratamiento con TFA al 25% en CH2C12. Después de completarse la reacción que se juzgó por CL-EM se eliminaron los disolventes a vacío y se carbamoiló la sal TFA correspondiente del aminoácido con cloroformiato de metilo de acuerdo con el procedimiento descrito para el Cap-51.
Cap-124 Se llevó a cabo la carbamoilación de la sal clorhidrato de éster terc-butílico de L-treonina de acuerdo con el procedimiento para Cap- 51. La mezcla de reacción bruta se acidificó con HCl 1N hasta pH~l y la mezcla se extrajo con EtOAc (2X50 mi) . Las fases orgánicas reunidas se concentraron a vacío dando un aceite incoloro que solidificó en reposo. La capa acuosa se concentró a vacío y la mezcla resultante de producto y sales inorgánicas del producto y sales inorgánicas se trituró con EtOAc-CH2Cl2-MeOH (1:1:0.1) y luego se concentró la fase orgánica a vacío dando un aceite incoloro que por CL-EM se mostró que era el producto deseado. Ambas tandas se reunieron dando 0.52 g de un sólido. RMN de 1H (400 Hz, CD3OD) d 4.60 (m, 1H) , 4.04 (d, J = 5.0 Hz, 1H) , 1.49 (d, J = 6.3 Hz, 3H) . CL-EM: Anal. Calculado para C5H7N04 : 145; encontrado: 146 (M+H)+.
Cap-125 A una suspensión de Pd(OH)2 (20%, 100 mg) , formaldehído acuoso (37% en peso, 4 mi), ácido acético (0, 5 mi) en metanol (15 mi) se añadió ácido (S) -4-amino-2- ( terc-butoxicarbonilamino) butanoico (1 g, 4.48 mmol) . La reacción se purgó varias veces con hidrógeno y se agitó durante la noche bajo un globo de hidrógeno a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de tierra de diatomeas (CELITE®) y se eliminó el compuesto volátil a vacío. El material resultante bruto se usó como tal para la etapa siguiente. CL-EM: Anal. Calculado para C11H22 2O4 : 246; encontrado: 247 (M+H)+.
Cap-126 cj-25 cap-126 procedimiento es una modificación del que usó para preparar Cap-51. A una suspensión de 3-metil-L-histidina (0.80 g, 4.70 mmol) en THF (lOmL) y H20 (10 mi) a 0°C se añadió NaHC03 (0.88 g, 10.5 mmol). La mezcla resultante se trató con ClC02Me (0.40 mi, 5.20 mmol) y se dejó agitar la mezcla a 0°C. Después de agitar durante aproximadamente. 2h la CL-EM no mostró material de partida. La reacción se acidificó hasta pH 2 con HCl 6 N.
Los disolventes se eliminaron a vacío y el residuo se suspendió en 20 mi de MeOH al 20% en CH2C12. La mezcla se filtró y se concentró dando una espuma amarillo claro (1.21 g, ) . La CL-EM y RMN de 1H mostraron que el material era una mezcla 9:1 del éster metílico y el producto deseado. Este material se suspendió en THF (10 mi) y H20 (10 mi) , se enfrió hasta 0°C y se añadió LiOH (249.1 mg, 10.4 mmol) . Después de agitar aproximadamente lh la CL-EM mostró que no quedaba éster. Seguidamente la mezcla se acidificó con HCl 6N y los disolventes se eliminaron a vacío. La CL-EM y RMN de 1H confirmaron la ausencia del éster. El compuesto del epígrafe se obtuvo como su sal HCl contaminada con sales inorgánicas (1.91 g, >100%) . El compuesto se usó como tal en posteriores etapas sin purificación adicional. RMN de 1H (400 MHz , CD3OD) d 8.84, (s, 1H) , 7.35 (s, 1H) , 4.52 (dd, J = 5.0, 9.1 Hz, 1H) , 3.89 (s, 3H) , 3.62 (s, 3H) , 3.35 (dd, J = 4.5, 15.6 Hz , 1H, parcialmente oscurecido por disolvente), 3.12 (dd, J = 9.0, 15.6 Hz, 1H) . CL-EM: Análisis calculado para C9H13 3O4 : 227.09; encontrado: 228.09 (M+H)+.
Cap-127 cj-26 cap- 127 Se preparó Cap-127 de acuerdo con el procedimiento para Cap-126 anterior partiendo de ácido (S) -2-amino-3- ( 1 -met i 1 - 1H - imidazol - 4 -il ) propanoico (1.11 g, 6.56 mmol), NaHC03 (1.21 g, 14.4 mmol) y ClC02Me (0.56 mi, 7.28 mmol) . El compuesto del epígrafe se obtuvo como su sal HCl (1.79 g, >100%) contaminado con sales inorgánicas. La CL-EM y RMN de 1H mostraron la presencia de aproximadamente 5% del éster metílico. La mezcla bruta se usó como tal sin purificación adicional. RMN de *H (400 MHz, CD30D) d 8.90 (s, 1H), 7.35 (s, 1H) , 4.48 (dd, J = 5.0, 8.6 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H) , 3.62 (s, 3H) , 3.35 (m, 1H) , 3.08 (m, 1H) ; CL-EM: Anal. Calculado para C 9 H 1 3 N3 O 4 : 227.09 ; encontrado: 228 (M+H)+.
Preparación de Cap- cj-29 cap-128 Etapa Preparación de 2- [tere-butoxicarbonilamino) pent-4 - inoato de (S) -bencilo (cj-27b).
A una solución de cj-27a (1.01 g, 4.74 mmol) , D AP (58 mg, 0.475 mmol) y iPr2NEt (1.7 mi, 9.8 mmol) en CH2C12 (100 mi) a 0°C se añadió Cbz-Cl (0.68 mi, 4.83 mmol). La solución se dejó agitando durante 4 h a 0°C, se lavó (KHS04 1N, salmuera) , se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró a vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (TLC 6:1 hex:EtOAc) dando el compuesto del epígrafe (1.30 g, 91%) como un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDC13) d 7.35 (s, 5H) , 5.35 (d ancho, J = 8.1 Hz, 1H) , 5.23 (d, J = 12.2 Hz, 1H) , 5.17 (d, J = 12.2 Hz , 1H) , 4.48-4.53 (m, 1H) , 2.68-2.81 (m, 2H) , 2.00 (t, J = 2.5 Hz , 1H) , 1.44 (s, 9H) . CL-EM: Anal. Calculado para Ci7H2iN04 : 303; encontrado: 304 (M+H)+.
Etapa 2. Preparación de 3- (1-bencil-lH-l, 2, 3-triazol-4 - il ) -2 -( terc-butoxicarbonilamino) ropanoato de (S) -bencilo (cj ^28) .
A una mezcla de 2 -( terc-butoxicarbonilamino) pent-4 -inoato de (S) -bencilo (0.50 g, 1.65 mmol) , ascorbato sódico (0.036 g, 0.18 mmol), CuS04-5H20 (0.022 g, 0.09 mmol) y NaN3 (0.13 g, 2.1 mmol) en DMF-H20 (5 mi, 4:1) a ta se añadió BnBr (0.24 mi, 2.02 mmol) y la mezcla se calentó hasta 65°C. Después de 5 horas, la CL-EM indicó baja conversión. Se añadió una porción adicional de NaN3 (100 mg) y se continuó calentando durante 12 horas. La reacción se vertió en EtOAc y H20 y se agitó. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo tres veces con EtOAc y las fases orgánicas reunidas se lavaron (H20 x3 , salmuera), se secaron (Na2S04) , se filtraron y concentraron. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (BIOTAGE®, 40+M 0-5% de MeOH en CH2C12; TLC 3% de MeOH en CH2Cl2) proporcionando un aceite amarillo claro que solidificó en reposo (748.3 mg, 104%). La RMN fue consistente con el producto deseado pero sugirió la presencia de DMF. El material se usó como tal sin purificación adicional. RMN de H (400 MHz , DMSO-d6) d 7.84 (s, 1H) , 7.27-7.32 (m, 10H) , 5.54 (s, 2H) , 5.07 (s, 2H) , 4.25 (m, 1H) , 3.16 (dd, J = 1.0, 5.3 Hz, 1H) , 3.06 (dd, J = 5.3, 14.7 Hz), 2.96 (dd, J = 9.1, 14.7 Hz, 1H) , 1.31 (s, 9H) .
CL-EM: Anal. Calculado para C2 H28N4O4: 436; encontrado: 437 (M+H) + .
Etapa 3. Preparación de 3 - (1-bencil- 1H- 1 , 2 , 3 -triazol-4-il) -2- (metoxicarbonilamino) propanoato de (S) -bencilo (cj -29) . cj-29 Se añadió TFA (4 mi) a una solución de 3-(l-bencil-1H-1 , 2 , 3-triazol-4 -il) -2- ( erc-butoxicarbonilamino) propanoato de (S) -bencilo (0.52 g, 1.15 mmol) en CH2C12. La mezcla se dejó agitando a temperatura ambiente durante 2h. La mezcla se concentró a vacío dando un aceite incoloro que solidificó en reposo. Este material se disolvió en THF-H20 y se enfrió hasta 0°C. Se añadió NaHC03 sólido (0.25 g, 3.00 mmol) seguido por ClC02Me (0.25 mi, 3.25 mmol). Después de agitar durante 1.5h la mezcla se acidificó hasta pH~2 con HCl 6N y luego se vertió en H20-EtOAc. Las capas orgánicas se separaron y se extrajo la capa acuosa 2x con EtOAc. Las capas orgánicas reunidas se lavaron (H20, salmuera) , se secaron (Na2S04) , se filtraron y se concentraron a vacío dando un aceite incoloro (505.8 mg, 111%, la RMN sugirió la presencia de una impureza no identificada) que solidificó en reposo en la bomba. El material se usó como tal sin purificación posterior. RMN de H (400 MHz , DMS0-d6) d 7.87 (s, 1H) , 7.70 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 7.27-7.32 (m, 10H) , 5.54 (s, 2H) ( 5.10 (d, J = 12.7 Hz, 1H) , 5.06 (d, J = 12.7 Hz, 1H) , 4.32-4.37 (m, 1H) , 3.49 (s, 3H) , 3.09 (dd, J = 5.6, 14.7 Hz, 1H) , 2.98 (dd, J = 9.6, 14.7 Hz, 1H) . CL-EM: Anal. Calculado para C21H22N4O4: 394; encontrado: 395 (M+H) + .
Etapa 4. Preparación de ácido (S)-2- (metoxicarbonilamino) -3 - (1H-1 , 2 , 3-triazol -4- il ) propanoico (Cap-128) .
Cap- 128 Se sometió 3 - ( 1-bencil- 1H- 1 , 2 , 3 -triazol -4 - il ) -2 - (metoxicarbonilamino) propanoato de (S) -bencilo (502 mg, 1.11 mmol) a hidrogenación en presencia de Pd-C (82 mg) en MeOH (5 mi) a presión atmosférica durante 12h. La mezcla se filtró a través de tierra de diatomeas (CELITE®) y se concentró a vacío. Se obtuvo ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) -3- (1H-1 , 2 , 3 -triazol -4- il ) propanoico como una goma incolora (266 mg, 111%) que estaba contaminada con aproximadamente 10% del éster metílico. El material se usó sin purificación adicional .
RMN de ¾ (400 MHz , DMSO-d6) d 12.78 (s ancho, 1H) , 7.59 9s, 1H) , 7.50 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 4.19-4.24 (m, 1H) , 3.49 (s, 3H) , 3.12 (dd, J = 4.8 Hz , 14.9 Hz, 1H) , 2.96 (dd, J = 9.9, 15.0 Hz, 1H) . CL-EM: Anal. Calculado para C7H10N4O4 : 214; encontrado: 215 (M+H)+.
Preparación de Cap- 129 Etapa 1. Preparación de ácido (S)-2- (benciloxicarbonilamino) -3- (lH-pirazol-l-il) propanoico (cj -31) . cj-31 Se calentó una suspensión de 2-oxooxetan-3-ilcarbamato de (S) -bencilo (0.67 g, 3.03 mmol) y pirazol (0.22 g, 3.29 mmol) en CH3CN (12 mi) a 50°C durante 24h. La mezcla se enfrió hasta TA durante la noche y el sólido se filtró proporcionando ácido (S) -2 - (benciloxicarbonilamino) -3 - (lH-pirazol-l-il) propanoico (330.1 mg) . El filtrado se concentró a vacío y luego se trituró con una pequeña cantidad de CH3CN (aproximadamente 4 mi) proporcionando una segunda tanda (43.5 mg) . Rendimiento total 370.4 mg (44%). P.f. 165.5-168°C. p.f. bibliografía 168.5-169.5°C [Vederas et al. J. Am. Chem. Soc . 1985, 107, 7105] . RMN de XH (400 MHz, CD3OD) d 7.51 (d, J = 2.0, 1H) , 7.48 (s, J = 1.5 Hz, 1H) , 7.24-7.34 (m, 5H) , 6.23 m, 1H) , 5.05 (d, 12.7 H, 1H) , 5.03 (d, J = 12.7 Hz, 1H) , 4.59-4.66 (m, 2H) , 4.42-4,49 (m, 1H) . CL-EM: Anal. Calculado para Ci4H15 304 : 289; encontrado: 290 (M+H) + .
Etapa 2. Preparación de ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino) -3- (lH-pirazol-l-il)propanoico (Cap-129) . cap-129 Se sometió ácido (S) -2- (benciloxicarbonilamino) -3- (lH-pirazol-l-il) propanoico (0.20 g, 0.70 mmol) a hidrogenación en presencia de Pd-C (45 mg) en MeOH (5 mi) a presión atmosférica durante 2h. El producto parecía ser insoluble en MeOH, por tanto se diluyó la mezcla de reacción con 5 mi de H20 y unas pocas gotas de HCl 6N. La solución homogénea se filtró a través de tierra de diatomeas (CELITE®) , y el MeOH se eliminó a vacío. La solución restante se congeló y se liofilizó dando una espuma amarilla (188.9 mg) . Este material se suspendió en THF-H20 (1:1, 10 mi) y luego se enfrió hasta 0°C. A la mezcla fría se añadió NaHC03 (146.0 mg, 1.74 mmol) cuidadosamente (generación de C02) .
Después de cesar la generación de gas (aproximadamente 15 min) se añadió ClC02Me (0.06 mi, 0.78 mmol) gota a gota. La mezcla se dejó agitando durante 2 horas y se acidificó hasta pH~2 con HCl 6N y se vertió en EtOAc . Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAC (x5) . Las fases orgánicas reunidas se lavaron (salmuera) , se secaron (Na2S04) , se filtraron y concentraron dando el compuesto del epígrafe como un sólido incoloro (117.8 mg, 79%). RMN de XH (400 MHz , DMSO-d6) d 13.04 (s, 1H) , 7.63 (d, J = 2.6 Hz, 1H) , 7.48 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 7.44 (d, J = 1.5 Hz , 1H) , 6.19 (t aparente, J = 2.0 Hz, 1H) , 4.47 (dd, J = 3.0, 12.9 Hz, 1H) , 4.29-4,41 (m, 2H) , 3.48 (s, 3H) . CL-EM: Anal. Calculado para C8HH. 3O4 : 213; encontrado: 214 (M+H)+.
Cap-130 Se preparó Cap-130 por acilación de (R) -fenilglicina disponible comercialmente de forma análoga al procedimiento dado en: Calmes, et al., J. Tetrahedron, 43 (10) : 2285 (1987) .
Cap-131 Etapa a: Se añadió cloruro de dimetilcarbamoílo (0.92 mi, 10 mmol) lentamente a una solución de clorhidrato de 2 -amino-3 -metilbutanoato de (S) -bencilo (2.44 g; 10 mmol) y base de Hunig (3.67 mi, 21 mmol) en THF (50 mi) . La suspensión blanca resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche (16 horas) y se concentró a presión reducida. El residuo se repartió entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó (MgS0 ) , se filtró y se concentró a presión reducida. El aceite amarillo resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida, eluyendo con acetato de etilo : hexanos (1:1) . Las fracciones recogidas se concentraron a vacío proporcionando 2.35 g (85%) de aceite transparente. RMN de. *H (300 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.84 (d, J"=6.95 Hz , 3H) , 0.89 (d, J=6.59 Hz, 3H) , 1.98-2.15 (m, 1H) , 2.80 (s, 6H) , 5.01-5.09 (m, J=12.44 Hz, 1H) , 5.13 (d, J=12.44 Hz, 1H) , 6.22 (d, J"=8.05 Hz, 1H) , 7.26-7.42 (m, 5H) . CL (Cond. 1): TR = 1.76 min; EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci6H22N203 : 279.17; encontrado 279.03.
Etapa b: A una solución en MeOH (50 mi) del intermedio preparado antes (2.35 g; 8.45 mmol) se añadió Pd/C (10%; 200 mg) y la suspensión negra resultante se llenó con N2 (3x) y se colocó en 10.13 kPa de H2. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche y se filtró a través de un filtro de microfibra para separar el catalizador. La solución transparente resultante se concentró entonces a presión reducida obteniendo 1.43 g (89%) de Cap-131 como espuma blanca, que se usó sin purificación posterior. RMN de XH (500 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.87 (d, J=4.27 Hz , 3H) , 0.88 (d, J=3.97 Hz, 3H) , 1.93-2.11 (m, 1H) , 2.80 (s, 6H) , 3.90 (dd, J"=8.39, 6.87 Hz, 1H) , 5.93 (d, J=8.54 Hz, 1H) , 12.36 (s, 1H) . CL (Cond. 1) : TR = 0.33 min; EM: Análisis calculado para •[M+H] + -C8H17N203: 189.12; encontrado 189.04.
Cap-132 Cap-132 se preparó a partir de clorhidrato de 2 -aminopropanoato de (S) -bencilo de acuerdo con el procedimiento descrito para Cap-131. RMN de XH (500 MHz, DMSO-d6) d ppm 1.27 (d, J=7.32 Hz, 3H) , 2.80 (s, 6H) , 4.06 (ct, 1H) , 6.36 (d, J=7.32 Hz, 1H) , 12.27 (s, 1H) . CL (Cond. 1): TR = 0.15 min; EM : Análisis calculado para [M+H] + C6H13 203: 161.09; encontrado 161.00.
Cap-133 Cap-133 se preparó a partir de clorhidrato de 2-amino-3-metilbutanoato de (S) - tere-butilo y cloroformiato de 2-fluoroetilo de acuerdo con el procedimiento descrito para Cap-47. RMN de XH (500 MHz, DMSO-ds) d ppm 0.87 (t, J = 6.71 Hz, 6H) , 1.97-2.10 (m, 1H) , 3.83 (dd, J=8.39, 5.95 Hz, 1H) , 4.14-4.18 (m, 1H) , 4.20-4.25 (m, 1H),' 4.50-4.54 (m, 1H) , 4.59-4.65 (m, 1H) , 7.51 (d, J = 8.54 Hz , 1H) , 12.54 (s, 1H) .
Cap-134 se preparó a partir de (S) -dietil alanina y cloroformiato de metilo de acuerdo con el procedimiento descrito para Cap-51. RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.72-0.89 (m, 6H) , 1.15-1,38 (m, 4H) , 1.54-1.66 (m, 1H) , 3.46-3.63 (m, 3H) , 4.09 (dd, J = 8.85, 5.19 Hz, 1H) , 7.24 (d, J = 8.85 Hz, 1H) , 12.55 (s, 1H) . CL (Cond. 2): TR = 0.66 min; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + CgHi8N04 : 204.12; encontrado 204.02.
Una solución de ácido D-2-amino- (4-fluorofenil) acético (338 mg, 2.00 mmol) , HC1 1N en éter dietílico (2.0 mi, 2.0 mmol) y formalina (37%, 1 mi) en metanol (5 mi) se sometió a hidrogenación bajo un globo en paladio al 10% sobre carbón (60 mg) durante 16 h a 25 °C. La mezcla se filtró a través de CELITE® proporcionando la sal HCl de Cap-135 como una espuma blanca (316 mg, 80%) . RMN de XH (300 MHz , MeOH-d4) d 7.59 (dd, J = 8.80, 5.10 Hz, 2H) , 7.29 (t, J = 8.6 Hz, 2H) , 5.17 (s, 1H) , 3.05 (s muy ancho, 3H) , 2.63 (s muy ancho, 3H) ; TR = 0.19 min (Condiciones de EM-W5) ; índice de homogeneidad del 95%; EMBR: Análisis calculado para [M+H]+ C10Hi3FMO2: 198.09; encontrado: 198.10.
A una suspensión enfriada (-50 °C) de 1-bencil-lH-imidazol (1.58 g, 10.0 mmol) en éter dietílico anhidro (50 mi) en nitrógeno se añadió n-butil litio (2.5 M en hexanos, 4.0 mi, 10.0 mmol) gota a gota. Después de agitar durante 20 minutos a -50 °C, se hizo burbujear dióxido de carbono (pasado a través de Drierite) en la mezcla de reacción durante 10 minutos antes de dejar calentar hasta 25°C. El precipitado pesado que se formó al añadir dióxido de carbono a la mezcla de reacción se filtró proporcionando un sólido blanco higroscópico que se recogió en agua (7 mi) , se acidificó hasta pH = 3 , se enfrió y se indujo a cristalizar con raspado. La filtración de este precipitado dio un sólido blanco que se suspendió en metanol, se trató con HCl lN/éter dietílico (4 mi) y se concentró a vacío. La liof ilización del residuo en agua (5 mi) proporcionó la sal HCl de Cap-136, como un sólido blanco (817 mg, 40%) . RMN de H (300 MHz, DMS0-d6) d 7.94 (d, J = 1.5 Hz, 1H) , 7.71 (d, J = 1.5 Hz, 1H) , 7.50-7.31 (m, 5H) , 5.77 (s, 2H) ; TR = 0.51 min (Condiciones de EM-W5) ; índice de homogeneidad del 95%; EMBR: Análisis calculado para [M+H] + CnHi2 202 : 203.08; encontrado: 203.11.
Cap a a Una suspensión de l-cloro-3-cianoisoquinolina (188 mg, 1.00 ramol; preparada de acuerdo con el procedimiento del documento O 2003/ 099274) (188 mg, 1.00 mmol) , fluoruro de cesio (303.8 mg, 2.00 mmol), dicloruro de bis (tri- terc-butilfosfina) paladio (10 mg, 0.02 mmol) y 2- (tributilestannil ) furano (378 µ? , 1.20 mmol) en dioxano anhidro (10 mi) en nitrógeno se calentó a 80 °C durante 16 horas de enfriar hasta 25 °C y se trató con solución acuosa saturada de fluoruro potásico con agitación vigorosa durante 1 h. La mezcla se repartió entre acetato de etilo y la fase orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró. La purificación del residuo sobre gel de sílice (elución con acetato de etilo de 0% a 30%/hexanos) proporcionó Cap-137, etapa a como un sólido blanco que se usó como tal (230 mg, 105%) . TR = 1.95 min (Condiciones de EM-W2) ; índice de homogeneidad del 90%; EMBR: Análisis calculado para [M+H]+ Ci4H8N20 : 221.07; encontrado: 221.12.
A una suspensión de Cap-137, etapa a, (110 mg, 0.50 mmol) y peryodato sódico (438 mg, 2.05 mmol) en tetracloruro de carbono (1 mi), acetonitrilo (1 mi) y agua (1.5 mi) se añadió tricloruro de rutenio hidratado (2 mg, 0.011 mmol) . La mezcla se agitó a 25 °C durante 2 h y luego se repartió entre diclorometano y agua. La fase acuosa se separó, se extrajo dos veces más con diclorometano y se secaron los extractos reunidos sobre Na2S04( se filtraron y concentraron. La trituración del residuo con hexanos proporcionó Cap-137 (55 mg, 55%) como un sólido de color grisáceo. TR = 1.10 min (Condiciones de EM-W2); índice de homogeneidad del 90%; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + CnH8 202 : 200.08; encontrado: 200.08.
Caps-138 a Cap-158 Estrategia de síntesis. Procedimiento A.
A una suspensión agitada de 5 -hidroxiisoquinolina (preparada de acuerdo con el procedimiento del documento WO 2003/ 099274) (2.0 g, 13.8 mmol) y trifenilfosfina (4.3 g, 16.5 mmol) en tetrahidrofurano seco (20 mi) se añadió metanol seco (0.8 mi) y azodicarboxilato de dietilo (3.0 mi, 16.5 mmol) en varias porciones. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 h antes de diluir con acetato de etilo y se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró. El residuo se preabsorbió sobre gel de sílice y se purificó (elución con acetato de etilo al 40%/hexanos) proporcionando Cap-138, etapa a como un sólido amarillo claro (1.00 g, 45%) . RMN de 1H (CDC13, 500 MHz) d 9.19 (s, 1H), 8.51 (d, J = 6.0 Hz, 1H) , 7.99 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.52-7.50 (m, 2H), 7.00-6.99 (m, 1H), 4.01 (s, 3H); TR = 0.66 min (Cond. D2); índice de homogeneidad del 95%; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C10H10NO : 160.08; encontrado 160.10. b A una solución agitada de Cap-138, etapa a (2.34 g, 14.7 mmol) en diclorometano anhidro (50 mi) a temperatura ambiente se añadió ácido meta-cloroperbenzoico (77%, 3.42 g, 19.8 mmol) en una porción. Después de agitar durante 20 horas, se añadió carbonato potásico en polvo (2.0 g) y la mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente antes de que se filtrara y concentrara proporcionando Cap-138, etapa b como un sólido amarillo pálido que era suficientemente puro para usarse posteriormente (2.15 g, 83%) . RMN de ¾ (CDC13, 400 MHz) d 8.73 (d, J = 1.5 Hz , 1H) , 8.11 (dd, J = 7.3, 1.7 Hz, 1H) , 8.04 (d, .7=7.1 Hz , 1H) , 7.52 (t, J = 8.1 Hz, 1H) , 7.28 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 6.91 (d, J = 7.8 Hz , 1H) ,·« 4.00 (s, 3H) ; TR = 0.92 min, (Condiciones-Dl) ; índice de homogeneidad del 90%; CL-EM : Análisis calculado para [M+H] + Ci0HioN02: 176.07; encontrado: 176.0.
Cap-138, etapa c A una solución agitada de Cap-138, etapa b (0.70 g, 4.00 mmol) y trietilamina (1.1 mi, 8.00 mmol) en acetonitrilo seco (20 mi) a temperatura ambiente en nitrógeno se añadió cianuro de trimetilsililo (1.60 mi, 12.00 mmol) . La mezcla se calentó a 75 °C durante 20 h antes de enfriar hasta temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo y se lavó con solución saturada de bicarbonato sódico y salmuera antes de secar sobre Na2S04 y concentrar el disolvente. El residuo se sometió a cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (elución con acetato de etilo al 5%/hexanos) hasta acetato de etilo al 25%/en hexanos proporcionando Cap- 138, etapa c (498.7 mg) como un sólido blanco cristalino junto con 223 mg de más Cap-138, etapa c recuperado del filtrado. RMN de XH (CDC13, 500 MHz) d 8.63 (d, J = 5.5 Hz , 1H) , 8.26 (d, J = 5.5 Hz, 1H) , 7.88 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 7.69 (t, J = 8.0 Hz , 1H) , 7.08 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 4.04 (s, 3H) ; TR = 1.75 min, (Condiciones-Dl) ; índice de homogeneidad del 90%; CL-EM: Análisis calculado para [M+H]+ C^Hg^O : 185.07; encontrado: 185.10.
Cap-138 Se trató Cap-138, etapa c (0.45 g, 2.44 mmol) con solución de hidróxido sódico 5N (10 mi) y la suspensión resultante se calentó a 85 °C durante 4 h, se enfrió hasta 25 °C, se diluyó con diclorometano y se acidificó con ácido clorhídrico 1N. La fase orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04í se concentró hasta ¼ del volumen y se filtró proporcionando Cap-138 como un sólido amarillo (0.44 g, 88.9%). RMN de XH (DMS0-d6, 400 Hz) d 13.6 (s ancho, 1H) , 8.56 (d, J = 6.0 Hz, 1H) , 8.16 (d, J = 6.0 Hz, 1H) , 8.06 (d, J = 8.8 Hz, 1H) , 7.71-7.67 (m, 1H) , 7.30 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 4.02 (s, 3H) ; TR = 0.70 min (Condiciones-Dl) ; índice de homogeneidad del 95%; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + CnHi0NO3 : 204.07; encontrado: 204.05.
Estrategia de síntesis. Procedimiento B (derivado de Tetrahedron Letters, 42: 6707 (2001)).
Cap-139, etapa a A un vial a rosca de pared gruesa que contenía una suspensión desgasificada en argón de l-cloro-6-metoxiisoquinolina (1.2 g, 6.2 mmol; preparado de acuerdo con el procedimiento del documento WO 2003/ 099274) , cianuro potásico (0.40 g, 6.2 mmol), 1 , 5-bis (difenilfosfino) pentano (0.27 g, 0.62 mmol) y acetato de paladio (II) (70 mg, 0.31 mmol) en tolueno anhidro (6 mi) se añadió ?,?,?',?'-tetrametiletilendiamina (0.29 mi, 2.48 mmol). El vial se selló, se calentó hasta 150 °C durante 22 h y luego se dejó enfriar hasta 25 °C. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró. El residuo se purificó sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo al 5%/hexanos hasta acetato de etilo al 25%/hexanos proporcionando Cap-139, etapa a como un sólido blanco (669.7 mg) . RMN de ¾ (CDC13, 500 MHz) d 8.54 (d, J = 6.0 Hz, 1H) , 8.22 (d, J = 9.0 Hz, 1H) , 7.76 (d, J = 5.5 Hz, 1H) , 7.41-7.39 (m, 1H) , 7.13 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 3.98 (s, 3H) ; TR = 1.66 min (Condiciones-DI) ; índice de homogeneidad del 90%; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + CnH9N20: 185.07; encontrado: 185.20.
Cap-139 Cap-139 se preparó a partir de la hidrólisis básica de Cap-139, etapa a con NaOH 5N de acuerdo con el procedimiento descrito para Cap-138. RMN de H (400 MHz, DMSO-d6) d 13.63 s muy ancho, 1H) , 8.60 (d, J = 9.3 Hz, 1H) , 8.45 (d, J = 5.6 Hz, 1H) , 7.95 (d, J = 5.9 Hz, 1H) , 7.49 (d, J = 2.2 Hz, 1H) , 7.44 (dd, J = 9.3, 2.5 Hz, 1H) , 3.95 (s, 3H) ; TR = 0.64 min (Condiciones-DI ) ; índice de homogeneidad del 90%; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + CnHi0NO3 : 204.07; encontrado: 204.05.
A una mezcla agitada vigorosamente de 1,3-dicloro- 5 -etoxiisoquinolina (482 mg, 2.00 mmol; preparada de acuerdo con el procedimiento del documento WO 2005/ 051410) , acetato de paladio (II) (9 mg, 0.04 mmol), carbonato sódico (223 mg, 2.10 mmol) y 1 , 5 -bis (difenilfosfino) pentano (35 mg, 0.08 mmol) en dimetilacetamida seca (2 mi) a 25 °C en nitrógeno se añadió ?,?,?' ,?' -tetrametiletilendiamina (60 mi, 0.40 mmol). Después de 10 min, la mezcla se calentó hasta 150 °C, y luego se añadió una solución patrón de acetona cianohidrina (preparada a partir de 457 µ? de acetona cianohidrina en 4.34 mi de DMA) en porciones de 1 mi durante 18 h usando una bomba de jeringa. La mezcla se repartió entonces entre acetato de etilo y agua y se separó la fase orgánica, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró. El residuo se purificó sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo al 10% / hexanos hasta acetato de etilo al 40% / hexanos proporcionando Cap-140, etapa a como un sólido amarillo (160 mg, 34%) . TR = 2.46 min (Condiciones de EM-W2) ; índice de homogeneidad del 90%; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci2H9ClN20: 233.05; encontrado: 233.08.
Cap-140 se preparó por la hidrólisis ácida de Cap-140, etapa a con HCl 12N como se describe en el procedimiento para la preparación de Cap- 1 1, descrito más adelante. TR = 2.24 min (Condiciones de EM- 2) ; índice de homogeneidad del 90%; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C12HalClN03 : 252.04; encontrado: 252.02.
Cap- 141 Cap- 141, etapa a Cap-141, etapa a se preparó a partir de l-bromo-3-fluoroisoquinolina (preparada a partir de 3-amino-l-bromoisoquinolina usando el procedimiento esbozado en J. Med. Chem., 13: 613 (1970)) como se describe en el procedimiento para la preparación de Cap-140, etapa a (vide supra) . RM de H (500 MHz , CDC13) d 8.35 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 7.93 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 7.83 (t, J = 7.63 Hz, 1H) , 7.77-7.73 (m, 1H) , 7.55 (s, 1H) ; TR = 1.60 min (Condiciones -DI ) ; índice de homogeneidad del 90%; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci0H6FN2: 173.05; encontrado: 172.99.
Cap- 141 trató Cap-141, etapa a (83 mg, 0.48 mmol) con HC1 12N (3 mi) y la suspensión resultante se calentó a 80 °C durante 16 h antes de enfriar hasta temperatura ambiente y se diluyó con agua (3 mi) . La mezcla se agitó durante 10 min y luego se filtró proporcionando Cap-141 como un sólido blanquecino (44.1 mg, 48%) . El filtrado se diluyó con diclorometano y se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04 y se concentró proporcionando más Cap-141 que era suficientemente puro para usarlo posteriormente (29.30 mg, 32%). RMN de H (DMSO-d6, 500 MHz) d 14.0 (s ancho, 1H) , 8.59-8.57 (m, 1H) , 8.10 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 7.88-7.85 (m, 2H) , 7.74-7.71 (m, 1H) ; TR = 1.33 min (Condiciones -DI ) ; índice de homogeneidad del 90%; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci0H7FNO2: 192.05; encontrado: 191.97.
Cap-142 Cap- 142, etapa a se preparó a partir de N-óxido de 4 -bromoisoquinolina como se describe en el procedimiento en dos etapas para la preparación de Cap- 138, etapas b y c. TR = 1.45 min (Condiciones de EM-W1) ; índice de homogeneidad del 90%; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci0H6BrN2 : 232.97; encontrado: 233.00.
Cap-142, etapa b A una suspensión desgasificada en argón de Cap-142, etapa a (116 mg, 0.50 mmol) , fosfato potásico tribásico (170 mg, 0.80 mmol), acetato de paladio (II) (3.4 mg, 0.015 mmol) y 2- (diciclohexilfosfino) bifenilo (11 mg, 0.03 mmol) en tolueno anhidro (1 mi) se añadió morfolina (61 µ?, 0.70 mmol) . La mezcla se calentó a 100 °C durante 16 h, se enfrió hasta 25 °C y se filtró a través de tierra de diatomeas (CELITE®) . La purificación del residuo sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo del 10% a 70% / hexanos proporcionó Ca -142, etapa b (38 mg, 32%) como un sólido amarillo, que se llevó a etapas posteriores directamente. TR = 1.26 min (Condiciones de EM-W1) ; índice de homogeneidad del 90%; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci4Hi4 30 : 240.11; encontrado: 240.13.
Cap-142 Cap-142 se preparó a partir de Cap-142, etapa b con hidróxido sódico 5N como se describe en el procedimiento para Cap-138. TR = 0.72 min (Condiciones de EM-W1) ; índice de homogeneidad del 90%; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci4H15 203 : 259.11; encontrado: 259.08. 3-amino-l-bromoisoquinolina (444 mg, 2.00 mmol) en dimetilformamida anhidra (10 mi) se añadió hidruro sódico (60%, sin lavar, 96 mg, 2.4 mmol) en una porción. La mezcla se agitó a 25 °C durante 5 min antes de añadir éter 2-bromoetílico (90%, 250 µ? , 2.00 mmol) . La mezcla se agitó otra vez a 25 °C durante 5 h y a 75 °C durante 72 h antes de enfriar hasta 25 °C, se inactivo con solución saturada de cloruro amónico y se diluyó con acetato de etilo. La fase orgánica se separó, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró. La purificación del residuo sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo al 0% a 70% / hexanos proporcionó Cap- 143, etapa a como un sólido amarillo (180 mg, 31%). TR = 1.75 min (Condiciones de EM-W1) ; índice de homogeneidad del 90%; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci3Hi4BrN20: 293.03; encontrado: 293.04.
A una solución fría (-60 °C) de Cap-143, etapa a (154 mg, 0.527 mmol) en tetrahidrof urano anhidro (5 mi) se añadió una solución de n-butil litio en hexanos (2.5 M, 0.25 mi, 0.633 mmol) . Después de 10 min, se burbujeó dióxido de carbono en la mezcla de reacción durante 10 minutos antes que se inactivara con HCl 1 y se dejó calentar hasta 25 °C. La mezcla se extrajo entonces con diclorometano (3 x 30 mi) y los extractos orgánicos reunidos se concentraron a vacío. La purificación del residuo por una HPLC de fase inversa (MeOH/agua/TFA) proporcionó Cap-143 (16 mg, 12%). TR = 1.10 min (Condiciones de EM-W1) ; índice de homogeneidad del 90%; CL-EM: Análisis calculado para [M+H]+ C14H15N2O3: 259.11; encontrado: 259.08.
Cap-144 Se anadió 1 , 3 - di c loroi soquinol ina (2.75 13.89 mmol) en pequeñas porciones a una solución fría (0 °C) de ácido nítrico fumante (10 mi) y ácido sulfúrico concentrado (10 mi) . La mezcla se agitó a 0°C durante 0.5 horas antes de que se calentara gradualmente hasta 25°C a la que se agitó durante 16 horas. La mezcla se vertió entonces en un vaso de precipitados que contenía hielo triturado y agua y la suspensión resultante se agitó durante 1 hora a 0°C antes de que se filtrara proporcionando Cap-144, etapa a (2.73 g, 81%) como un sólido amarillo que se usó directamente. TR = 2.01 min. ( Condi c ione s - DI ) ; índice de homogeneidad del 95%; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C9H5C12N202 : 242.97; encontrado: 242.92.
Cap-144, etapa b Se suspendió Cap-144, etapa a (0.30 g, 1.23 mmol) en metanol (60 mi) y se trató con óxido de platino (30 mg) y la suspensión se sometió a hidrogenac ión de Parr a 48.26 kPa de H2 durante 1.5 h. A continuación, se añadieron formalina (5 mi) y más óxido de platino (30 mg) y la suspensión se volvió a someter a hidrogenación de Parr a 310.26 kPa de H2 durante 13 h. A continuación se sometión a filtración por succión a través de tierra de diatomeas (CELITE®) y se concentró hasta ¾ de su volumen. La filtración por succión del precipitado proporcionó el compuesto del epígrafe como un sólido amarillo que se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo al 5% en hexanos hasta acetato de etilo al 25% / hexanos proporcionando Cap-144, etapa b (231 mg, 78%) como un sólido amarillo pálido. TR = 2.36 min ( Condi c ione s -D1 ) ; índice de homogeneidad del 95%; RMN de 1K (400 MHz , CDC13) d 8.02 (s, 1H) , 7.95 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 7.57-7.53 (m, 1H) , 7.30 (d, J = 7.3 Hz, 1H) , 2.88 (s, 6H) ; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + CiiHnCl2N2 : 241.03 ; encontrado: 241.02. EMAR: Análisis calculado para [M+H] + CiiHiiCl2 2 : 241.0299; encontrado: 241.0296.
Cap-144, etapa c Cap-144, etapa c se preparó a partir de Cap-144, etapa b de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación de Cap-139, etapa a. TR = 2.19 min (Condiciones-Dl) ; índice de homogeneidad del 95%; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci2HnClN3 : 232.06; encontrado: 232.03. EMAR : Análisis calculado para [M+H] + Ci2HnCl 3 : 232.0642; encontrado: 232.0631.
Cap- 144 Cap-144 se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito para Cap-141. TR = 2.36 min (Condiciones-Dl) ; 90%; CL-EM: Análisis calculado para [M+H]+ C12Hi2ClN202 : 238.01 ; encontrado: 238.09.
Caps-145 a Cap-162 Se prepararon los Caps-145 a Cap-162 a partir de las 1 - c loroi soquinol inas apropiadas de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación de Cap-138 (Procedimiento A) o Cap-139 (Procedimiento B) a no ser que se describa de otro modo más adelante.
Cap-163 A una solución de ácido 2 -cetobutírico (1.0 g, 9.8 mmol) en éter dietílico (25 mi) se añadió gota a gota bromuro de fenilmagnesio (22 mi, 1M en THF) . La reacción se agitó a -25 °C en nitrógeno durante 17.5h. La reacción se acidificó con HCl 1N y el producto se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 mi) . La fase orgánica reunida se lavó con agua seguido por salmuera y se secó sobre MgS04. Después de concentrar a vacío se obtuvo un sólido blanco. El sólido se recristalizó en hexanos/acetato de etilo proporcionando Cap- 163 como agujas blancas (883.5 mg) . RM de XH (DMS0-d6, d = 2.5 ppm, 500 MHz) : 12.71 (s ancho, 1 H) , 7.54-7.52 (m, 2H) , 7.34-7.31 (m, 2H) , 7.26-7.23 (m, 1H) , 5.52-5.39 (s ancho, 1H) , 2.11 (m, 1H) , 1.88 (m, 1H) , 0.79 (t ap, J = 7.4 Hz, 3H) .
Se expuso a H2 a 344.74 kPa en un frasco de Parr durante 42 horas una mezcla de ácido 2-amino-2-fenilbutírico (1.5 g, 8.4 mmol) , formaldehído (14 mi, 37% en agua), HC1 1N (10 mi) y Pd al 10%/C (0.5 mg) en MeOH (40 mi). La reacción se filtró sobre CELITE® y se concentró a vacío, el residuo se suspendió en MeOH (36 mi) y el producto se purificó con una HPLC de fase inversa (MeOH/H20/TFA) proporcionando la sal TFA de Cap-164 como un sólido blanco (1.7 g) . RMN de XH (DMS0-d6, d = 2.5 ppm, 500 MHz) 7.54-7.47 (m, 5H) , 2.63 (m, 1H) , 2.55 (s, 6H) , 2.31 (m, 1H) , 0.95 (t ap, J = 7.3 Hz, 3H) .
A una mezcla de ácido 2-amino-2-indanocarboxílico (258.6 mg, 1.46 mmol) y ácido fórmico (0.6 mi, 15.9 mmol) en 1, 2-dicloroetano (7 mi) se añadió formaldehído (0.6 mi, 37% en agua) . La mezcla se agitó a -25 °C durante 15 min luego se calentó a 70 °C durante 8h. El componente volátil se eliminó a vacío y el residuo se disolvió en DMF (14 mi) y se purificó por una HPLC de fase inversa ( eOH/H20/TFA) proporcionando la sal TFA de Cap-165 como un aceite viscoso (120.2 mg) . RMN de XH (DMS0-d6, d = 2.5 ppm, 500 MHz) : 7.29-7.21 (m, 4 H) , 3.61 (d, J = 17.4 Hz, 2H) , 3.50 (d, J = 17.4 Hz, 2H) , 2.75 ( s , 6H) . CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C12Hi6N02 : 206.12; encontrado: 206.07.
Cap-166a y Cap-166b Cap-166a: Diastereómero-1 Cap-166b: Diastereómero-2 Caps-166a y Cap-166b se prepararon a partir de (1S, 4S) - (+) -2 -metil-2 , 5-diazabiciclo [2.2.1] heptano (2HBr) de acuerdo con el procedimiento descrito para la síntesis de Cap-7a y Cap-7b, con la salvedad de que se separó el éster bencílico intermedio usando una columna semipreparativa CHIRALCEL®OJ, 20 x 250 mm, 10 µp? eluyendo con una mezcla 85:15 de heptano/etanol a 10 ml/min de caudal de elución durante 25 min. Cap-166b: RMN de H (DMS0-d6, 5 = 2.5 ppm, 500 MHz): 7.45 (d, J = 7.3 Hz , 2H) , 7.27-7.19 (m, 3H) , 4.09 (s, 1H) , 3.34 (s ancho ap, 1H) , 3.16 (s ancho ap, 1H) , 2.83 (d, -7=10.1 Hz, 1H) , 2.71 (m, 2H) , 2.46 (m, 1H) , 2.27 ( s , 3H) , 1.77 (d, J = 9.8 Hz, 1H) , 1.63 (d, J = 9.8 Hz , 1H) . CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci4H19N202 : 247.14; encontrado: 247.11.
Se agitó una solución de ácido Boc-1, 3-dihidro-2H-isoindol carboxílico racémico (l.Og, 3.8 mmol) en TFA al 20%/CH2Cl2 a -25 °C durante 4h. Se eliminó todo el componente volátil a vacío. Se expuso una mezcla del material bruto resultante, formaldehído (15 mi, 37% en agua), HCl 1N (10 mi) y Pd al 10%/C (10 mg) en MeOH a H2 (275.71 kPa) en un frasco de Parr durante 23 h. La mezcla de reacción se filtró sobre CELITE® y se concentró a vacío proporcionando Cap- 167 como una espuma amarilla (873.5 mg) . RM de H (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 500 MHz) 7.59-7.38 (m, 4H) , 5.59 (s, 1H) , 4.84 (d, J = 14 Hz, 1H) , 4.50 (d, J = 14.1 Hz, 1H) , 3.07 (s, 3H) . CL-EM: Análisis calculado para [M4H] + Ci0H12N02 : 178.09; encontrado: 178.65.
Se preparó Cap-168 racémico a partir de ácido Boc-aminoindano-l-carboxílico racémico de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación de Cap-167. El producto bruto se usó como tal .
Se colocó una mezcla de clorhidrato de ácido 2-amino-2 -fenilpropanoico (5.0 g, 2.5 mmol) , formaldehído (15 ml( 37% en agua) , HCl 1N (15 mi) y Pd al 10%/C (1.32 g) en MeOH (60 mi) en un frasco de Parr y se agitó en hidrógeno (379.11 kPa) durante 4 días. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se concentró a vacío. El residuo se suspendió en MeOH y se purificó por HPLC preparativa de fase inversa (MeOH/agua/TFA) proporcionando la sal TFA de Cap-169 como un semisólido viscoso (2.1 g) . RMN de 1H (CDC13, 5 = 7.26 ppm, 500 MHz) : 7.58-7.52 (m, 2 H) , 7.39-7.33 (m, 3H) , 2.86 (s ancho, 3H) , 2.47 (s ancho, 3H) , 1.93 (s, 3H) . CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + CnHi6 02 : 194.12; encontrado: 194.12.
Cap-170 Ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) -2- (tetrahidro-2H-piran-4- il) acético A ácido (S) -2-amino-2- (tetrahidro-2H-piran-4-il) acético (505 mg; 3.18 mmol; obtenido de Astatech) en agua (15ml) se añadió carbonato sódico (673 mg; 6.35 mmol) y la mezcla resultante se enfrió hasta 0°C momento en el que se añadió cloroformiato de metilo (0.26ml; 3.33mmol) gota a gota durante 5 minutos. Se dejó agitando la reacción durante 18 horas llegando lentamente a temperatura ambiente a medida que se fundía el baño de hielo. La mezcla de reacción se repartió entonces entre HCl 1N y acetato de etilo. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo de nuevo con dos porciones más de acetato de etilo. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío proporcionando Cap-170 un residuo incoloro. RM de 1H (500 MHz , DMSO-d6) d ppm 12.65 (1 H, s ancho), 7.44 (1 H, d, J-=8.24 Hz) , 3.77 - 3.95 (3 H, m) , 3.54 (3 H, s) , 3.11 - 3.26 (2 H, m) , 1.82 - 1.95 (1 H, m) , 1.41 - 1.55 (2 H, m) , 1.21 - 1.39 (2 H, m) ; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + CgHi6N0s : 218.1; encontrado 218.1.
Cap-171 Una solución de 2- (benciloxicarbonilamino) -2- (oxetan-3 -iliden) acetato de metilo (200 mg, 0.721 mmol; II Fármaco (2001), 56, 609-613) en acetato de etilo (7 mi) y CH2C12 (4.00 mi) se desgasificó burbujeando nitrógeno durante lOmin. Se añadieron entonces dicarbonato de dimetilo (0.116 mi, 1.082 mmol) y Pd/C (20 mg, 0.019 mmol) , la mezcla de reacción se ajustó bajo un globo de hidrógeno y se dejó agitando a temperatura ambiente durante la noche momento en el que la TLC (95:5 CH2C12 / MeOH: visualizada con tinción realizada en lg de Ce(NH4)2S04, 6g de molibdato amónico, 6 mi de ácido sulfúrico y 100 mi de agua) indicó la conversión completa. La reacción se filtró a través de CELITE® y se concentró. El residuo se purificó por BIOTAGE® (cada con diclorometano en 25 de muestra; elución en columna 25S con diclorometano para 3CV luego 0 a 5% de MeOH / diclorometano sobre 250ml luego mantenido a 5% de MeOH / diclorometano para 250 mi; fracciones de 9 mi) . Las fracciones obtenidas que contenían material deseado y se concentraron hasta 120 mg (81%) de 2- (metoxicarbonilamino) -2- (oxetan-3-il) acetato de metilo como un aceite incoloro. RMN de ""? (500 MHz, cloroformo-d) d ppm 3.29 - 3.40 (m, J"=6.71 Hz, 1 H) 3.70 (s, 3 H) 3.74 (s( 3 H) 4.55 (t, J=6.41 Hz , 1 H) 4.58 - 4.68 (m, 2 H) 4.67 - 4.78 (m, 2 H) 5.31 (s ancho, 1 H) . CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C8H14N05 : 204.2; encontrado 204.0.
Se añadió a 2- (metoxicarbonilamino) -2- (oxetan-3-il) acetato de metilo (50 mg, 0.246 mmol) en THF (2 mi) y agua (0.5 mi) hidróxido de litio monohidratado (10.33 mg, 0.246 mmol) . La solución resultante se dejó agitando durante la noche a temperatura ambiente. La TLC (1:1 EA / Hex; tinción de Hanessian [lg de Ce(NH4)2S04, 6 g de molibdato amónico, 6 mi de ácido sulfúrico y 100 mi de agua] ) indicó que quedaba ~10% de material de partida. Se añadieron otros 3 mg de LiOH y se dejó agitando durante la noche momento en el que la TLC mostró que no quedaba material de partida. Se concentró a vacío y se colocó en alto vacío durante la noche proporcionando 55 mg de 2- (metoxicarbonilamino) -2- (oxetan-3-il) acetato de litio como un sólido incoloro. RM de (500 MHz, MeOD) d ppm 3.39 - 3.47 (m, 1 H) 3.67 (s, 3 H) 4.28 (d, J=7.93 Hz, 1 H) 4.64 (t, J"=6.26 Hz, 1 H) 4.68 (t, J=7.02 Hz , 1 H) 4.73 (d, J=7.63 Hz, 2 H) .
Cap-172, etapa a La siguiente etapa de diazotación se adaptó de Barton, A. et al., J. C. S. Perkin Trans I, 159-164 (1982): Se añadió una solución de NaN02 (166 mg, 2.4 mmol) en agua (0.6 mi) a una solución agitada, fría (0 °C) de 2-amino-5-etil-1, 3-tiazol-4-carboxilato de metilo (186 mg, 1.0 mmol), CuS04»5H20 (330 mg, 1.32 mmol), NaCl (260 mg, 4.45 mmol) y H2S04 (5.5 mi) en agua (7.5 mi) . La mezcla se agitó a 0 °C durante 45 min y se dejó calentar hasta temperatura ambiente donde se agitó durante otra 1 h antes de añadir CuCl (118 mg) . Esta mezcla se agitó de nuevo a temperatura ambiente durante 16 h antes de diluirse con salmuera y extraerse con éter dos veces. Las fases orgánicas se reunieron, se secaron sobre gS04 y se concentraron dando 2-cloro-5-etiltiazol-4-carboxilato de metilo (es decir, Cap-172, etapa a) (175 mg, 85%) como un aceite naranja (80% de pureza) que se usó directamente en la siguiente reacción. TR = 1.99 min (Condición-MDl); CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C7H9CINO2S: 206.01; encontrado: 206.05.
Cap-172 A una solución de 2-cloro-5-etiltiazol-4-carboxilato de metilo (175 mg) en THF/H20/MeOH (20 mi/ 3 mi/ 12 mi) se añadió LiOH (305 mg, 12.76 mmol) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche antes de concentrar y neutralizar con HC1 1N en éter (25 mi) . El residuo se extrajo dos veces con acetato de etilo y las fases orgánicas se reunieron, se secaron sobre MgS04 y se evaporaron proporcionando Cap-172 (60 mg, 74%) como un sólido rojo que se usó sin purificación posterior. RMN de a? (300 MHz, DMSO-d6) d ppm 13.03-13.42 (1 H, m) , 3.16 (2 H, q, J = 7.4 Hz), 1.23 (3 H, t, J = 7.5 Hz) . TR = 1.78 min (Condición-MDl); CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C6H7C1N02S : 191.99; encontrado: 191.99.
La siguiente etapa de diazotación se adaptó de Barton, A. et al., J. C. S. Perkin Trans I, 159-164 (1982) : Se añadió una solución de NaN02 (150 mg, 2.17 mmol) en agua (1.0 mi) gota a gota a una solución agitada, fría (0 °C) de 2 -amino- 5 - etil - 1 , 3 - 1iazol - 4 - carboxilato de metilo (186 mg, 1.0 mmol) en H3P02 al 50% (3.2 mi). La mezcla se agitó a 0 °C durante 1 h y se dejó calentar hasta temperatura ambiente donde se agitó durante otras 2h. Después de volver a enfriar hasta 0 °C, la mezcla se trató lentamente con una solución de NaOH (85 mg) en agua (10 mi) . La mezcla se diluyó entonces con solución saturada de NaHC03 y se extrajo dos veces con éter. Las fases orgánicas se reunieron, se secaron sobre MgS04 y se concentraron dando 5-etiltiazol-4 -carboxilato de metilo (es decir, Cap-173, etapa a) (134 mg, 78%) como un aceite naranja (85% de pureza) que se usó directamente en la siguiente reacción. TR = 1.58 min (Condición-MDl ) ; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C7H10NO2S : 172.05; encontrado: 172.05.
Cap-173 A una solución de 5-etiltiazol-4-carboxilato de metilo (134 mg) en THF/H20/MeOH (18 mi/ 2.7 mi/ 11 mi) se añadió LiOH (281 mg, 11.74 mmol) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche antes de concentrar y neutralizar con HCl 1N en éter (25 mi) . El residuo se extrajo dos veces con acetato de etilo y las fases orgánicas se reunieron, se secaron sobre MgS04 y se evaporaron proporcionando Cap-173 (90 mg, 73%) como un sólido naranja que se usó sin purificación posterior. RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6) d ppm 12.74-13.04 (1 H, m) , 3.20 (2 H, q, J = 7.3 Hz) , 1.25 (3 H, t, J = 7.5 Hz) . TR = 1.27 min (Condición-MD1) ; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C6H8N02S : 158.03; encontrado: 158.04.
Cap- 174, etapa a Se añadió anhídrido tríflico (5.0 g, 18.0 mmol) gota a gota a una solución fría (0 °C) de 3 -hidroxipicolinato de metilo (2.5 g, 16.3 mmol) y TEA (2.5 mi, 18.0 mmol) en CH2C12 (80 mi) . La mezcla se agitó a 0 °C durante lh antes de dejar calentar hasta temperatura ambiente, momento en el que se agitó durante una hora más. La mezcla se inactivo entonces con solución saturada de NaHC03 (40 mi) y la fase orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04 y se concentró dando 3 - (trifluorometilsulfoniloxi ) picolinato de metilo (es decir, Cap-174, etapa a) (3.38 g, 73%) como un aceite marrón oscuro (>95% de pureza) que se usó directamente sin purificación posterior. R N de 1H (300 MHz, CDC13) d ppm 8.72-8.79 (1 H, m) , 7.71 (1 H, d, J = 1.5 Hz), 7.58-7.65 (1 H, m) , 4.04 (3 H, s) . TR = 1.93 min (Condición-MDl) ; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C8H7F3 05S : 286.00; encontrado: 286.08.
Cap-174 A una solución de 3- (trifluorometilsulfoniloxi) picolinato de metilo (570 mg, 2.0 mmol) en DMF (20 mi) se añadió LiCl (254 mg, 6.0 mmol) , tributil (vinil) estannano (761 mg, 2.4 mmol) y dicloruro de bis (trifenilfosfina) paladio (42 mg, 0.06 mmol). La mezcla se calentó a 100 °C durante la noche antes d añadir una solución saturada de KF (20 mi) a la mezcla de reacción a temperatura ambiente. Esta mezcla se agitó durante 4 h antes de filtrar a través de CELITE® y el lecho de CELITE® se lavó con acetato de etilo. La fase acuosa del filtrado se separó entonces y se concentró a vacío. El residuo se trató con HCl 4N en dioxanos (5 mi) y la mezcla resultante se extrajo con metanol, se filtró y se evaporó proporcionando Cap-174 (260 mg) como un sólido verde que estaba ligeramente contaminado con sales inorgánicas pero que se usó sin purificación posterior. M de XH (300 MHz , DMS0-d6) d ppm 8.21 (1 H, d, J = 3.7 Hz) , 7.81-7.90 (1 H, m) , 7.09 (1 H, dd, J = 7.7, 4.8 Hz) , 6.98 (1 H, dd, J = 17.9, 11.3 Hz), 5.74 (1 H, dd, J = 17.9, 1.5 Hz) , 5.20 (1 H, d, J = 11.0 Hz) . TR = 0.39 min (Condición-MDl) ; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C8H8N02 : 150.06; encontrado: 150.07.
Cap-175 A una solución de 3- (trifluorometilsulfoniloxi) picolinato de metilo (es decir, Cap-174, etapa a) (570 mg, 2.0 mmol) , un intermedio en la preparación de Cap-174, en D F (20 mi) se añadió LiCl (254 mg, 6.0 mmol), tributil (vinil ) estannano (761 mg, 2.4 mmol) y dicloruro de bis (trifenilfosfina) paladio (42 mg, 0.06 mmol). La mezcla se calentó a 100 °C durante 4 h antes de eliminar el disolvente a vacío. El residuo se suspendió en acetonitrilo (50 mi) y hexanos (50 mi) y la mezcla resultante se lavó dos veces con hexanos. Se separó entonces la fase de acetonitrilo, se filtró a través de CELITE® y se evaporó. La purificación del residuo por cromatografía ultrarrápida en un aparato Horizon (elución con gradiente de acetato de etilo al 25% en hexanos hasta acetato de etilo al 65% en hexanos) proporcionó 3 -vinilpicolinato de metilo (es decir, Cap-175, etapa a) (130 mg, 40%) como un aceite amarillo. RMN de 1H (300 MHz, CDC13) d ppm 8.60 (1 H, dd, J = 4.6, 1.7 Hz) , 7.94 (1 H, d, J = 7.7 Hz) , 7.33-7.51 (2 H, m) , 5.72 (1 H, d, J = 17.2 Hz) , 5.47 (1 H, d, J = 11.0 Hz) , 3.99 (3 H, s) . TR = 1.29 min (Condición-MDl) ; CL-EM: Análisis calculado para [M+H]+ C9H10NO2: 164.07; encontrado: 164.06.
Cap-175, etapa b Se añadió paladio sobre carbón (10%, 25 mg) a una solución de 3 -vinilpicolinato de metilo (120 mg, 0.74 mmol) en etanol (10 mi) . La suspensión se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de hidrógeno durante 1 h antes de filtrar a través de CELITE®y se lavó el lecho de CELITE®con metanol . El filtrado se concentró hasta sequedad proporcionando 3 -etilpicolinato de metilo (es decir, Cap-175, etapa b) que se llevó directamente a la siguiente reacción. TR = 1.15 min (Condición-MDl ) ; CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C9Hi2N02 : 166.09; encontrado: 166.09.
Cap-175 A una solución de 3 -etilpicolinato de metilo en THF/H20/MeOH (5 mi/ 0.75 mi/ 3 mi) se añadió LiOH (35 mg, 1.47 mmol) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 días antes de añadir más LiOH (80 mg) . Después de otras 24 horas más a temperatura ambiente, la mezcla se filtró y el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se trató entonces con HCl 4N en dioxanos (5 mi) y la suspensión resultante se concentró hasta sequedad proporcionando Cap-175 como un sólido amarillo que se usó sin purificación posterior. RMN de XH (300 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.47 (1 H, dd, J = 4.8, 1.5 Hz), 7.82-7.89 (1 H, m) , 7.53 (1 H, dd, J = 7.7, 4.8 Hz), 2.82 (2 H, q, J = 7.3 Hz) , 1.17 (3 H, t, J = 7.5 Hz). TR = 0.36 min (Condición-MDl); CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C8Hi0NO2 : 152.07; encontrado: 152.10.
Cap-176 Ácido (S) -2 (4 , 4-difluorociclohexil) -2- (metóxicarbonilamino) acético Cap-176, etapa a Se añadió una solución de 1, 4-dioxaspiro [4.5] decan-8-ona (15 g, 96 mmol) en EtOAc (150 mi) a una solución de 2-(benciloxicarbonilamino) -2- (dimetoxifosforil ) acetato de metilo (21.21 g, 64.0 mmol) en 1 , 1 , 3 , 3 -tetrametilguanidina (10.45 mi, 83 mmol) y EtOAc (150 mi). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 72 h y luego se diluyó con EtOAc (25 mi) . La fase orgánica se lavó con HCl 1N (75 mi) , H20 (100 mi) y salmuera (100 mi) , se secó (MgS0 ) , se filtró y se concentró. El residuo se purificó por BIOTAGE® (EtOAc al 5% hasta 25 %/Hexanos; 300g columna) . Las fracciones reunidas que contenían el producto se concentraron entonces a vacío y el residuo se volvió a cristalizar en hexanos/EtOAc dando cristales blancos que corresponden a 2- (benciloxicarbonilamino) -2- (1, 4-dioxaspiro [4.5] decan-8-iliden) acetato de metilo (6.2 g) RM de XH (400 MHz , CDCl3-d) d ppm 7.30 - 7.44 (5 H, m) , 6.02 (1 H, s ancho), 5.15 (2 H, s) , 3.97 (4 H, s) , 3.76 (3 H, s ancho), 2.84 - 2.92 (2 H, m) , 2.47 (2 H, t, J=6.40 Hz) , 1.74 - 1.83 (4 H, m) . CL (Cond. OLI): TR = 2.89 min. CL-EM: Análisis calculado para [M+Na] + Ci9H23NNa06: 745.21; encontrado: 745.47 Cap-176, etapa b Se preparó el éster Cap- 176, etapa b a partir del alqueno Cap- 176, etapa a de acuerdo con el procedimiento de Burk, M. et al., (J. Am. Chem. Soc . , 117: 9375-9376 (1995) y referencias en el mismo) : Se cargó una botella a alta presión de 500 mi con el alqueno Cap-176, etapa a (3.5 g, 9.68 mmol) en MeOH desgasificado (200 mi) en una capa de N2. La solución se cargó entonces con tetrafluoroborato de (-)-l,2-bis ( (2S, 5S) -2 , 5-dimetilfosfolano) etano (ciclooctadieno) rodio (I) (0.108 g, 0.194 mmol) y la mezcla resultante se cubrió con N2 (3x) y se cargó con H2 (3x) . La solución se agitó vigorosamente a 482 kPa de H2 a temperatura ambiente durante 72 h. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo que quedó se suspendió en EtOAc . La solución pardusca se filtró entonces a través de un lecho de gel de sílice y se eluyó con EtOAc. El disolvente se concentró a vacío proporcionando un aceite transparente que correspondía al éster Cap-176, etapa b (3.4 g) , RMN de XH (500 MHz, CDCl3-d) d ppm 7.28 - 7.43 (5 H, m) , 5.32 (1 H, d, J=9.16 Hz) , 5.06 -5.16 (2 H, m) , 4.37 (1 H, dd, J=9.00, 5.04 Hz), 3.92 (4 H, t, J=3.05 Hz) , 3.75 (3 H, s) , 1.64 - 1.92 (4 H, m) , 1.37 - 1.60 (5 H, m) . CL (Cond. OLI): TR = 1.95 min. CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci9H26N06 : 364.18; encontrado: 364.27.
Cap-176, etapa c Se disolvió el éster Cap-176, etapa b (4.78 g, 13.15 mmol) en THF (15 mi) seguido por la adición secuencial de agua (10 mi), ácido acético glacial (26.4 mi, 460 mmol) y ácido dicloroacético (5.44 mi, 65.8 mmol) . La mezcla resultante se agitó durante 72 h a temperatura ambiente, y la reacción se inactivo mediante la adición lente de Na2C03 sólido con agitación vigorosa hasta que no fue visible la generación de gas. El producto bruto se extrajo en acetato de etilo al 10%-diclorometano y las fases orgánicas se reunieron, se secaron (MgS04) , se filtraron y concentraron. El residuo resultante se purificó por BIOTAGE® (EtOAc al 0 hasta 30%/Hex; 25 g de columna) proporcionando la cetona Cap-176, etapa c (3.86g) como un aceite transparente. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3-d) d ppm 7.28 - 7.41 (5 H, m) , 5.55 (1 H, d, J=8.28 Hz) , 5.09 (2 H, s) , 4.46 (1 H, dd, J"=8.16 , 5.14 Hz), 3.74 (3 H, s) , 2.18 - 2.46 (5 H, m) , 1.96 - 2.06 (1 H, m) , 1.90 (1 H, ddd, J"=12.99, 5.96, 2.89 Hz) , 1.44 - 1.68 (2 H, m, J=12.36, 12.36, 12.36, 12.36, 4.77 Hz) . CL (Cond. OLI): TR = 1.66 min. CL-EM: Análisis calculado para [M+Na] + Ci-7H2i Na05 : 342.13; encontrado: 342.10.
Cap-176, etapa d Se añadió Deoxo-Fluor® (3.13 ml , 16.97 mmol) a una solución de la cetona Cap-176, etapa c (2.71 g, 8.49 mmol) en CH2C12 (50 ml ) seguido por la adición de una cantidad catalítica de EtOH (0.149 ml , 2.55 mmol). La solución amarillenta resultante se agitó a ta durante la noche. La reacción se inactivo mediante la adición de NaHC03 acuoso saturado (25 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc (3X75 ml) ) . Las fases orgánicas reunidas se secaron (MgS04) , se filtraron y se secaron dando un aceite amarillento. El residuo se purificó por cromatografía en BIOTAGE® (EtOAc al 2% hasta 15%/Hex; 90g de columna) y se recuperó un sólido blanco correspondiente al difluoruro de difluoro aminoácido Cap-176, etapa d (1.5 g) . RMN de 1H (400 MHz , CDCl3-d) d ppm 7.29 - 7.46 (5 H, m) , 5.34 (1 H, d, J"=8.28 Hz) , 5.12 (2 H, s), 4.41 (1 H, dd, J-=8.66, 4.89 Hz) , 3.77 (3 H, s) , 2.06 - 2.20 (2 H, m) , 1.83 - 1.98 (1 H, m) , 1.60 - 1.81 (4 H, m) , 1.38 - 1.55 (2 H, m) . RMN de 19F (376 MHz , CDCl3-d) d ppm -92.15 (1 F, d, J=237.55 Hz), -102.44 (1 F, d, ,7=235.82 Hz). CL (Cond. OLI) : TR = 1.66 min. CL-EM: Análisis calculado para [2M+Na] + C34H42F4N2Na08 : 705.28; encontrado: 705.18.
Se disolvió el difluoruro Cap-176, etapa d (4 g, 11.72 mmol) en MeOH (120 mi) y se cargó con Pd/C (1.247 g, 1.172 mmol) . Se inyectó en la suspensión N2 (3x) y la mezcla de reacción se colocó bajo una presión de 101 kPa de H2 (globo) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 48 h. La suspensión se filtró entonces a través de un lecho de CELITE®y se concentró a vacío dando un aceite que corresponde al aminoácido Cap-176, etapa e (2.04 g) y que se usó sin purificación posterior. RMN de ¾ (400 MHz, DMSO-ds) d ppm 3.62 (3 H, s) , 3.20 (1 H, d, J=5.77 Hz), 1.91 - 2.09 (2 H, m) , 1.50 - 1.88 (7 H, m) , 1.20 - 1.45 (2 H, m) . RMN de 19F (376 MHz, DMSO-ds) d ppm -89.39 (1 F, d, J=232.35 Hz), -100.07 (1 F, d, J=232.35 Hz) . RMN de 13C (101 MHz, DMSO-ds) d ppm 175.51 (1 C, s) , 124.10 (1 C, t, .7=241.21, 238.90 Hz) , 57.74 (1 C, s) , 51.39 (1 C, s) , 39.23 (1 C, s ancho), 32.02 - 33.83 (2 C, m) , 25.36 (1 C, d, J"=10.02 Hz) , 23.74 (1 C, d, J=9.25 Hz) . CL (Cond. OL2) : TR = 0.95 min. CL-EM: Análisis calculado para [2M+H] + ^^F^^ - 415.22; encontrado: 415.40.
Cap-176, etapa f Se añadió cloroformiato de metilo (1.495 mi, 19.30 mmol) a una solución de aminoácido Cap-176, etapa e (2 g, 9.65 mmol) y DIEA (6.74 mi, 38.6 mmol) en CH2C12 (100 mi). La solución- resultante se agitó a ta durante 3 h y se eliminaron los volátiles a presión reducida. El residuo se purificó por BIOTAGE® (EtOAc al 0% hasta 20%/Hex; 90 g de columna) . Se recuperó un aceite transparente que solidificó en reposo a vacío y que correspondía al carbamato Cap-176, etapa f (2.22 g) . RMN de XH (500 MHz, CDCl3-d) d ppm 5.27 (1 H, d, J=8.55 Hz) , 4.39 (1 H, dd, J=8.85, 4.88 Hz) , 3.77 (3 H, s) , 3.70 (3 H, s), 2.07 - 2.20 (2 H, m) , 1.84 - 1.96 (1 H, m) , 1.64 -1.82 (4 H, m) , 1.39 - 1.51 (2 H, m) . RMN de 19F (471 MHz, CDCl3-d) d ppm -92.55 (1 F, d, J=237.13 Hz) , -102.93 (1 F, d, J=237.12 Hz) . RMN de 13C (126 MHz, CDCl3-d) d ppm 171.97 (1 C, s) , 156.69 (1 C, s) , 119.77 - 125.59 (1 C, m) , 57.24 (1 C, s ancho), 52.48 (1 C, s ancho), 52.43 (1 C, s) , 39.15 (1 C, s) , 32.50 - 33.48 (2 C, m) , 25.30 (1 C, d, J"=9.60 Hz) , 24.03 (1 C, d, J=9.60 Hz) . CL (Cond. OLI): TR = 1.49 min. CL-EM: Análisis calculado para [M+Na] + Ci1Hi7F2NNa04: 288.10; encontrado: 288.03.
Cap-176 Ácido (S) -2 (4 , 4-difluorociclohexil) -2- (metoxicarbonilamino) acético Se añadió una solución de LiOH (0.379 g, 15.83 mmol) en agua (25 mi) a una solución de carbamato Cap- 176, etapa f (2.1 g, 7.92 mmol) en THF (75 mi) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Se eliminó el THF a vacío y la fase acuosa restante se acidificó con solución de HCl 1N (2 mi) y luego se extrajo con EtOAc (2 X 50 mi) . Las fases orgánicas reunidas se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron dando una espuma que correspondía al Cap-176 (1.92 g) . RM de ?? (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 12.73 (1 H, s) , 7.50 (1 H, d, J"=8.78 Hz) , 3.97 (1 H, dd, J=8.53, 6.02 Hz) , 3.54 (3 H, s) , 1.92 - 2.08 (2 H, m) , 1.57 - 1.90 (5 H, m) , 1.34 - 1.48 (1 H, m) , 1.27 (1 H, qd, J=12.72, 3.26 Hz) . RMN de 19F (376 MHz, DMSO-d6) d ppm -89.62 (1 F, d, J=232.35 Hz) , -99.93 (1 F, d, ,7=232.35 Hz) . CL (Cond. OL2 ) : TR = 0.76 min. CL-EM: Análisis calculado para [M-H] + Ci0H14F2 04: 250.09; encontrado: 250.10.
Cap-177a-d Se añadió 1 , 1 , 3 , 3 -tetrametilguanidina (0.985 mi, 7.85 mmol) a una solución agitada de 2- (benciloxicarbonilamino) -2- (dimetoxifosforil) acetato de metilo (2.0 g, 6.0 mmol) en EtOAc (40 mi) y la mezcla se agitó a ta bajo N2 durante 10 min. A continuación se añadió dihidro-2H-piran-3 (4H) -ona [23462-75-1] (0.604 g, 6.04 mmol) y la mezcla se agitó a ta durante 16 h. La mezcla de reacción se enfrió entonces en el frigorífico 10 minutos y se neutralizó con ácido cítrico acuoso (1.5 g en 20 mi de agua) . Las dos fases se repartieron y la fase orgánica se lavó con HCl acuoso 0.25 N y salmuera, y luego se secó (MgS04) y se concentró hasta un aceite incoloro. El material bruto se purificó por cromatografía sobre sílice ultrarrápida (disolvente de carga: DCM, eluido con EtOAc/Hexanos , gradiente desde 20% hasta 30% de EtOAc) proporcionando dos productos isoméricos: El primer producto que eluyó fue (Z)-2- (benciloxicarbonilamino) -2- (2H-piran-3 (4H, 5H, 6H) -iliden) acetato de metilo (490 mg) (sólido blanco), y el segundo fue (E) -2- (benciloxicarbonilamino) -2- (2H-piran- 3 (4H, 5H, 6H) -iliden) acetato de metilo (433 mg) (sólido blanco) . Tiempo de retención de CL-EM 1.398 min (para el isómero Z) y 1.378 min (para el isómero E) ; m/z 304.08 (para el isómero Z) y 304.16 (para el isómero E) (MH-). Los datos de CL se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna PHENOMENEX® Luna lOu C18 de 3.0x50mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detección de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 4 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 minutos, un tiempo de mantenimiento de 1 minuto, y un tiempo de análisis de 4 minutos donde el disolvente A era MeOH al 5% / H20 al 95% / acetato amónico 10 mM y el disolvente B era H20 al 5% / MeOH al 95% / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma MICROMASS® para CL en modo electroaspersión . RM de ""? (400 MHz, cloroformo-d) (para el isómero Z) d ppm 7.30 - 7.44 (m, 5 H) , 6.18 (s ancho, 1 H) , 5.10 - 5.17 (m, 2 H) , 4.22 (s, 2 H) , 3.78 (s ancho, 3 H) , 2.93 - 3.02 (m, 2 H) , 1.80 (dt, J=11.7, 5.8 Hz , 2 H) , 1.62 (s, 2 H) . RMN de ? (400 MHz, cloroformo-d) (para el isómero E) d ppm 7.31 - 7.44 (m, 5 H) , 6.12 (s ancho, 1 H) , 5.13 -5.17 (m, 2 H) , 4.64 (s ancho, 2 H) , 3.70 - 3.82 (m, 5 H) , 2.49 (t, J=6.5 Hz, 2 H) , 1.80 (s ancho, 2 H) . (Nota: la regioquímica absoluta se determinó por los desplazamientos de la RMN de XH y las constantes de acoplamiento) .
Se añadió ( - ) - 1 , 2 -bis ( (2S , 5S) -2 , 5 -dimetilfosfolano) etano (ciclooctadieno) -rodio (I) tetrafluoroborato (28.2 mg, 0.051 mmol) a una solución agitada de (Z) -2- (benciloxicarbonilamino) -2- (2H-piran-3 (4H, 5H, 6H) -iliden) acetato de metilo (310 mg, 1.015 mmol) en MeOH (10 mi) y la mezcla se aspiró por succión con N2, seguido por H2, y a continuación se agitó la reacción bajo H2 (4.136 x 105 Pa) a ta durante 2d. La mezcla de reacción se concentró y el residuo se purificó por cromatografía sobre sílice ultrarrápida (disolvente de carga: DCM, eluido con EtOAc al 20% en hexanos) proporcionando (S)-2- (benciloxicarbonilamino) -2- ( (S) -tetrahidro-2H-piran-3-il) acetato de metilo (204 mg) como un aceite incoloro. Tiempo de retención de CL-EM 1.437 min; m/z 307.89 (MH+) . Los datos de CL se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna PHENOMENEX® Luna lOu C18 de 3.0x50mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detección de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 4 mi/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 minutos, un tiempo de mantenimiento de 1 minuto, y un tiempo de análisis de 4 minutos donde el disolvente A era MeOH al 5% / H20 al 95% / acetato amónico 10 mM y el disolvente B era H20 al 5% / MeOH al 95% / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma MICROMASS® para CL en modo electroaspersión. RMN de XH (400 MHz, cloroformo-d) d ppm 7.30 - 7.46 (m, 5 H) , 5.32 (d, J=8.8 Hz, 1 H) , 5.12 (s, 2 H) , 4.36 (dd, J=8.9, 5.6 Hz , 1 H) , 3.84 - 3.98 (m, 2 H) , 3.77 (s, 3 H) , 3.28 - 3.37 (m, 1 H) , 3.23 (dd, .7=11.3, 10.5 Hz , 1 H) , 2.04 - 2.16 (m, 1 H) , 1.61 - 1.75 (m, 3 H) , 1.31 - 1.43 (m, 1 H) .
El otro estereoisómero ((E) -2- (benciloxicarbonilamino) -2- (2H-piran-3 (4H, 5H, 6H) -iliden) acetato de metilo) (360 mg, 1.18 mmol) se redujo de una forma similar proporcionando (S)-2- (benciloxicarbonilamino) -2- ( (R) -tetrahidro-2H-piran-3-il) acetato de metilo (214 mg) como un aceite incoloro. Tiempo de retención de CL-EM 1.437 min; m/z 308.03 (MH+). Los datos de CL se registraron en un cromatografo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna PHENOMENEX® Luna lOu C18 de 3.0x50mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detección de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 4 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 minutos, un tiempo de mantenimiento de 1 minuto, y un tiempo de análisis de 4 minutos donde el disolvente A era MeOH al 5% / H20 al 95% / acetato amónico 10 mM y el disolvente B era H20 al 5% / MeOH al 95% / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma MICROMASS® para CL en modo electroaspersión. RMN de 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 7.30 - 7.44 (m, 5 H) , 5.31 (d, J=9.0 Hz, 1 H) , 5.12 (s, 2 H) , 4.31 (dd, J=8.7, 6.9 Hz, 1 H) , 3.80 - 3.90 (m, 2 H) , 3.77 (s, 3 H) , 3.37 (td, J=10.8, 3.5 Hz, 1 H) , 3.28 (dd, J-11.3, 9.8 Hz, 1 H) , 1.97 - 2.10 (m, 1 H) , 1.81 (d, J=11.5 Hz, 1 H) , 1.61 - 1.72 (m, 2 H) , 1.33 - 1.46 (m, 1 H) .
Los enantiómeros individuales de Cap-177a, etapa b (Cap-177c, etapa b) y Cap-177b, etapa b (Cap-177d, etapa b) se prepararon del mismo modo y con rendimientos similares utilizando tetrafluoroborato de ( - ) - 1 , 2 -bis ( (2R, 5R) -2 , 5-dimetilforfolano) etano (ciclooctadieno) -rodio ( I ) como catalizador de hidrogenación para las reducciones olefínicas de los materiales de partida estereoisoméricos individuales.
Cap-177a y Cap-177b, etapa c Se añadió Pd al 10%/C (69.3 mg, 0.065 mmol) a una solución de (S) -2- (benciloxicarbonilamino) -2- ( (S) -tetrahidro-2H-piran-3-il) acetato de metilo (200 mg, 0.651 mmol) y dicarbonato de dimetilo [4525-33-1] (0.104 mi, 0.976 mmol) en MeOH (10 mi) . La mezcla de reacción se evacuó por succión con N2, seguido por H2/ y luego se agitó la reacción bajo H2 (3.79 x 105 Pa) a ta durante 5 h. La mezcla de reacción se filtró a través de una almohadilla de CELITE®/sílice y el filtrado se concentró hasta un aceite incoloro. El aceite bruto se purificó por cromatografía sobre sílice ultrarrápida (disolvente de carga: DCM, eluido con EtOAc al 30% en hexanos) proporcionando el producto (S)-2- (metoxicarbonilaraino) -2- ( (S) -tetrahidro-2H-piran-3 -il) acetato de metilo (132 mg) como aceite incoloro. Tiempo de retención de CL-EM 0.92 min; m/z 231.97 (MH+) . Los datos de CL se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna PHENOMENEX® Luna lOu C18 de 3.0x50mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detección de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 4 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 minutos, un tiempo de mantenimiento de 1 minuto, y un tiempo de análisis de 4 minutos donde el disolvente A era MeOH al 5% / H20 al 95% / acetato amónico 10 mM y el disolvente B era H20 al 5% / MeOH al 95% / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma MICROMASS® para CL en modo electroaspersión. RMN de 1H (400 MHz, cloroformo-d) d ppm 5.24 (d, J=8.5 Hz, 1 H) , 4.34 (dd, J=8.9 , 5.6 Hz , 1 H) , 3.84 - 3.97 (m, 2 H) , 3.77 (s, 3 H) , 3.70 (s, 3 H) , 3.29 - 3.38 (m, 1 H) , 3.23 (dd, J"=11.2, 10.4 Hz, 1 H) , 2.03 - 2.14 (m, 1 H) , 1.56 - 1.75 (m, 3 H) , 1.32 - 1.43 (m, 1 H) .
Se transformó el otro diastereómero ( (S) -2- (benciloxicarbonilamino) -2- ( (R) -tetrahidro-2H-piran-3-il) acetato de metilo) de una forma similar proporcionando (S) -2- (metoxicarbonilamino) -2- ( (R) -tetrahidro-2H-piran-3-il) acetato de metilo como un aceite incoloro. Tiempo de retención de CL-EM 0.99 min; m/z 231.90 (MH+) . Los datos de CL se registraron en un cromatografo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna PHENOMENEX® Luna lOu C18 de 3.0x50mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detección de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 4 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 minutos, un tiempo de mantenimiento de 1 minuto, y un tiempo de análisis de 4 minutos donde el disolvente A era MeOH al 5% / H20 al 95% / acetato amónico 10 mM y el disolvente B era H20 al 5% / MeOH al 95% / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma MICROMASS® para CL en modo electroaspersión. RMN de 1H (400 MHz, cloroformo-d) d ppm 5.25 (d, J"=8.0 Hz, 1 H) , 4.29 (dd, J=8.4 , 7.2 Hz, 1 H) , 3.82 - 3.90 (m, 2 H) , 3.77 (s, 3 H) , 3.70 (s, 3 H) , 3.37 (td, J"=10.8, 3.3 Hz, 1 H) , 3.28 (t, J"=10.5 Hz , 1 H) , 1.96 - 2.08 (m, 1 H) , 1.81 (dd, J=12.9, 1.6 Hz, 1 H) , 1.56 - 1.72 (m, 2 H) , 1.33 - 1.46 (m, 1 H) .
Los enantiómeros individuales de Cap-177a, etapa c (Cap-177c, etapa c) y Cap-177b, etapa c (Cap-177d, etapa c) se prepararon del mismo modo y con rendimientos similares usando los materiales de partida apropiados a partir de Cap-177a-d, etapa b.
Cap-177a y Cap-177b, etapa d A una solución de (S) -2- (metoxicarbonilamino) -2-( (S) -tetrahidro-2H-piran-3-il) acetato de metilo (126 mg, 0.545 mmol) en THF (4 mi) agitando a ta se añadió una solución de LiOH 1M (1.090 mi, 1.090 mmol) en agua. La reacción se agitó a ta durante 3h, se neutralizó con HCl 1M (1.1 mi) y se extrajo con EtOAc (3x 10 mi). Los orgánicos se secaron, se filtraron y se concentraron proporcionando ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) -2- ( (S) -tetrahidro-2H-piran-3 -il) acético (Cap-177a) (125 mg) como un aceite incoloro transparente. Tiempo de retención de CL-EM 0.44 min; m/z 218.00 (MH+) . Los datos de CL se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna PHENOMENEX® Luna lOu C18 de 3.0x50mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detección de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 4 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 minutos, un tiempo de mantenimiento de 1 minuto, y un tiempo de análisis de 4 minutos donde el disolvente A era MeOH al 5% / H20 al 95% / acetato amónico 10 mM y el disolvente B era H20 al 5% / MeOH al 95% / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma MICROMASS® para CL en modo electroaspersión . RMN de 1H (400 MHz, cloroformo-d) d ppm 5.28 (d, J=8.8 Hz, 1 H) , 4.38 (dd, J=8.7, 5.6 Hz, 1 H) , 3.96 - 4.04 (m, 1 H) , 3.91 (d, J=11.0 Hz, 1 H) , 3.71 (s, 3 H) , 3.33 - 3.41 (m, 1 H) , 3.24 - 3.32 (m, 1 H) , 2.10 - 2.24 (ra, 1 H) , 1.74 - 1.83 (m, 1 H) , 1.63 - 1.71 (m, 2 H) , 1.35 - 1.49 (m, 1 H) .
Se transformó otro diastereómero ( (S) -2- (metoxicarbonilamino) -2- ( (R) -tetrahidro-2H-piran-3-il) acetato de metilo) de una forma similar proporcionando ácido (S) -2-(metoxicarbonilamino) -2- ( (R) -tetrahidro-2H-piran-3-il) acético (Cap-177b) como un aceite incoloro. Tiempo de retención de CL-EM 0.41 min; m/z 217.93 (MH+) . Los datos de CL se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna PHENOMENEX® Luna lOu C18 de 3.0x50mm usando un detector de UV-Vis SPD-10AV a una longitud de onda de detección de 220 nM. Las condiciones de elución emplearon un caudal de 4 ml/min, un gradiente de 100% de disolvente A / 0% de disolvente B hasta 0% de disolvente A / 100% de disolvente B, un tiempo de gradiente de 3 minutos, un tiempo de mantenimiento de 1 minuto, y un tiempo de análisis de 4 minutos donde el disolvente A era MeOH al 5% / H20 al 95% / acetato amónico 10 mM y el disolvente B era H20 al 5% / MeOH al 95% / acetato amónico 10 mM. Los datos de EM se determinaron usando una Plataforma MICROMASS® para CL en modo electroaspersión . RMN de 1H (400 MHz, cloroformo-d) d ppm 6.18 (s ancho, 1 H) , 5.39 (d, J=8.5 Hz, 1 H) , 4.27 - 4.37 (m, 1 H) , 3.82 - 3.96 (m, 2 H) , 3.72 (s, 3 H) , 3.42 (td, J=10.8# 3.3 Hz, 1 H) , 3.35 (t, J=10.4 Hz, 1 H) , 2.01 - 2.18 (m, 1 H) , 1.90 (d, J=11.8 Hz, 1 H) , 1.59 - 1.76 (m, 2 H) , 1.40 - 1.54 (m, 1 H) .
Los enantiómeros individuales de Cap- 177a (Cap-177c) y Cap-177b (Cap-177d) se prepararon del mismo modo y con rendimientos similares usando los materiales de partida apropiados a partir de Cap-177a-d, etapa c.
Cap a a A una solución de diacetato de (2S, 3S, 4S) -2-metil-3,4-dihidro-2H-piran-3,4-diilo (5 g, 23.34 mmol) en 20 mi de MeOH en un depósito de hidrogenación se añadió Pd/C (150 mg, 0.141 mmol). La mezcla resultante se sometió a hidrogenación a 2.757 x 105 Pa en un agitador de Parr durante 1 hora. La mezcla se filtró a continuación y el filtrado se concentró dando Cap-178, etapa a (5.0 g) como un aceite transparente, que solidificó en reposo. RMN de 1H (500 MHz , CDC13) d ppm 4.85 - 4.94 (1 H, m) , 4.69 (1 H, t, J=9.46 Hz) , 3.88 - 3.94 (1 H, m) , 3.44 (1 H, td, J=12.21, 1.83 Hz) , 3.36 (1 H, dq, J=9.42, 6.12 Hz) , 2.03 - 2.08 (1 H, m) , 2.02 (3 H, s) , 2.00 (3 H, s) , 1.70 - 1.80 (1 H, m) , 1.16 (3 H, d, J=6.10 Hz) . b A una solución de Cap-178, etapa a (5.0 g, 23 mmol) en 50 mi de MeOH se añadieron varias gotas de metóxido sódico. Después de agitar a temperatura ambiente durante 30 min, se añadió metóxido sódico (0.1 mi, 23.12 mmol) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El disolvente se eliminó entonces a vacío. El residuo se diluyó con benceno y se concentró dando el diol correspondiente como un sólido amarillo. El sólido se disolvió en 50 mi de piridina y a esta solución a -35°C se añadió cloruro de benzoilo (2.95 mi, 25.4 mmol) gota a gota. La mezcla resultante se agitó a -35 °C durante 1 hora y luego a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se diluyó con Et20 y se lavó con agua. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2X) . Las fases orgánicas reunidas se secaron con MgS04 y se concentraron. El producto bruto se purificó por cromatograf ía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 5%-15%/Hex) dando Cap-178, etapa b (4.5 g) como aceite transparente que cristalizó lentamente tras reposo prolongado. CL-EM: Análisis calculado para [M+Na] + Ci3Hi6Na04 259.09; encontrado 259.0; RMN de XH (500 MHz , CDC13) d ppm 8.02 - 8.07 (2 H, m) , 7.55 - 7.61 (1 H, m) , 7.45 (2 H, t, J"=7.78 Hz) , 5.01 (1 H, ddd, J=11.44, 8.70, 5.49 Hz) , 3.98 (1 H, ddd, J=11.90, 4.88, 1.53 Hz) , 3.54 (1 H, td, .7=12.36, 2.14 Hz) , 3.41 (1 H, t, J=9.00 Hz) , 3.31 - 3.38 (1 H, m) , 2.13 -2.19 (1 H, m) , 1.83 - 1.94 (1 H, m) , 1.36 (3 H, d, J=5.80 Hz) .
A una mezcla de NaH (1.143 g, 28.6 mmol) (60% en aceite mineral) en 6 mi de CS2 se añadió Cap-178, etapa b (4.5 g, 19 mmol) en 40 mi de CS2 gota a gota durante 15 min. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. La mezcla viró a color naranja claro con algo de sólido. Se añadió gota a gota entonces Mel (14.29 mi, 229 mmol) durante 20 min. La mezcla se agitó entonces a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se inactivo cuidadosamente con solución saturada de NH4C1. La mezcla se extrajo con EtOAc (3X) . Las fases orgánicas reunidas se secaron con MgS04 y se concentraron. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 6%/Hex) dando Cap-178, etapa c (3.13 g) como aceite transparente. CL-E : Análisis calculado para [M+Na] + Ci5Hi8Na04S2 349.05; encontrado 349.11; RMN de XH (500 MHz, CDC13) d ppm 7.94 - 8.00 (2 H, m) , 7.50 - 7.58 (1 H, m) , 7.41 (2 H, t, J=7.78 Hz) , 5.96 (1 H, t, J=9.46 Hz) , 5.28 (1 H, ddd, 17=11.37, 9.38, 5.49 Hz) , 4.02 (1 H, ddd, J=11.98, 4.96, 1.68 Hz) , 3.54 - 3.68 (2 H, m) , 2.48 (3 H, s) , 2.31 (1 H, dd) , 1.88 - 1.99 (1 H, m) , 1.28 (3 H, d) .
Cap-178, etapa d A una mezcla de Cap-178, etapa c (3.13 g, 9.59 mmol) y AIBN (120 mg, 0.731 mmol) en 40 mi de benceno a 80 °C se añadió hidruro de tri -n-butilestaño (10.24 mi, 38.4 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura de reflujo durante 20 min y luego se enfrió hasta temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con éter dietílico y se añadieron 100 mi de solución acuosa de KF (10 g) y la mezcla se agitó vigorosamente durante 30 min. Se separaron entonces las dos fases y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (2X) . La fase orgánica se secó con MgS04 y se concentró. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, desactivada con Et3N al 3% en Hexanos y se inyectó Et3N al 3% en Hexanos para eliminar el derivado de tributilestaño y luego se eluyó con EtOAc al 15%/Hex) dando Cap- 178, etapa d (1.9 g) como aceite transparente. RM de H (500 MHz, CDC13) d ppm 7.98 - 8.07 (2 H, m) , 7.52 - 7.58 (1 H, m) , 7.43 (2 H, t, J=7.63 Hz) , 5.08 - 5.17 (1 H, m) , 4.06 (1 H, ddd, J=11.90, 4.88, 1.53 Hz) , 3.50 - 3.59 (2 H, m) , 2.08 - 2.14 (1 H, m) , 1.99 - 2.06 (1 H, m) , 1.69 - 1.80 (1 H, m) , 1.41 - 1.49 (1 H, m) , 1.24 (3 H, d, J=6.10 Hz) .
Cap-178, etapa e A una mezcla de Cap-178, etapa d (1.9 g, 8.63 mmol) en 10 mi de MeOH se añadió metóxido sódico (2 mi, 4.00 mmol) (2 M en metanol) . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. El disolvente se eliminó a vacío. La mezcla se neutralizó con solución saturada de NH4CI y se extrajo con EtQAc (3X) . Las fases orgánicas se secaron con MgS04 y se concentraron dando Cap- 178, etapa e (0.8 g) como aceite transparente. El producto se usó en la etapa siguiente sin purificación posterior. RMN de "? (400 MHz, CDCl3) d ppm 4.01 (1 H, ddd, J=11.80, 5.02, 1.76 Hz) , 3.73 - 3.83 (1 H, m) , 3.36 -3.46 (2 H, m), 1.92 - 2.00 (1 H, m) , 1.88 (1 H, m) , 1.43 - 1.56 (1 H, m) , 1.23 (3 H, d) , 1.15 - 1.29 (1 H, m) .
Cap-178, etapa f añadió cloruro de tosilo (2.63 g, 13.77 mmol) una solución de Cap-178, etapa e (0.8 g, 6.89 mmol) y piridina (2.23 mi, 27.5 mmol) en 100 mi de CH2C12. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 días. Se añadieron entonces 10 mi de agua a la mezcla de reacción y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una hora. Se separaron las dos fases y la fase orgánica se lavó con agua y solución acuosa 1 N de HC1. La fase orgánica se secó con MgS04 y se concentró dando Cap-178, etapa f (1.75 g) como un sólido amarillo claro. El producto se usó en la etapa siguiente sin purificación posterior. Análisis calculado para [M+H]+ C13H19O4S 271.10; encontrado 270.90; RMN de XH (500 MHz , CDCI3) d ppm 7.79 (2 H, d, J=8.24 Hz) , 7.34 (2 H, d, J=7.93 Hz), 4.53 - 4.62 (1 H, m) , 3.94 (1 H, ddd, .7=12.13, 4.96, 1.83 Hz) , 3.29 - 3.41 (2 H, m) , 2.45 (3 H, s) , 1.90 - 1.97 (1 H, m) , 1.79 - 1.85 (1 H, m) , 1.64 - 1.75 (1 H, m) , 1.38 -1.48 (1 H, m) , 1.17 (3 H, d, J=6.10 Hz) .
Cap-178, etapa g En un tubo de microondas se colocó 2- (difenilmetilenamino) acetato de etilo (1.6 g, 5.92 mmol) y Cap-178, etapa f (1.6 g, 5.92 mmol) . Se añadieron 10 mi de tolueno. El tubo se selló y se añadió gota a gota bajo N2 LiHMDS (7.1 mi, 7.10 mmol) (1 N en tolueno) . La solución marrón oscura resultante se calentó a 100 °C bajo radiación de microondas durante 6 horas. A la mezcla se añadió entonces agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (3X) . Las fases orgánicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron con MgS04 y se concentraron dando una mezcla diastereomérica de Cap-3, etapa g (3.1 g) como un aceite naranja. La mezcla bruta se sometió a la etapa siguiente sin separación. CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C23H28 O3 366.21; encontrado 366.3.
A una solución de la mezcla diastereomérica de Cap-178 de etilo, etapa g en 20 mi de THF se añadió HC1 (30 mi, 60.0 mmol) (2 N acuoso) . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se extrajo con EtOAc y la fase acuosa se concentró dando una sal HCl de Cap-178, etapa h (1.9 g) como un aceite naranja. La sal se usó en la etapa siguiente sin purificación posterior. CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C10H2oN03 202.14; encontrado 202.1.
Cap-178, etapa i agitó una solución de 1.9 g Cap-178, etapa (sal HC1) , DiPEA (4.19 mi, 24.0 mmol) y cloroformiato de metilo (1.24 mi, 16.0 mmol) en 20 mi de CH2C12 a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se diluyó con CH2C12 y se lavó con agua. La fase orgánica se secó con Na2S04 y se concentró. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 0-20%/Hex) dando Cap-178, etapa i (1.1 g) como un aceite amarillo. Análisis calculado para [M+Na] + Ci2H2i Na05 282.13; encontrado 282.14; RMN de XH (400 MHz, CDC13) d ppm 5.16 (1 H, s ancho), 4.43 -4.58 (1 H, m) , 4.17 - 4.28 (2 H, m) , 3.89 - 4.03 (1 H, m) , 3.72 - 3.78 (2 H, m) , 3.67 - 3.72 (3 H, m) , 2.07 - 2.19 (1 H, m) , 1.35 - 1.77 (4 H, m) , 1.30 (3 H, td, J=7.09, 2.89 Hz), 1.19 (3 H, d, J=6.53 Hz) .
A una mezcla de Cap-178, etapa i (1.1 g, 4.2 mmol) en 5 mi de THF y 2 mi de agua se añadió LiOH (6.36 mi, 12.7 mmol) (2 N ac . ) . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se neutralizó entonces con HCl acuoso 1 N y se extrajo con EtOAc (3X) . Las fases orgánicas reunidas se secaron con MgS04 y se concentraron dando Cap- 178, etapa j (0.8 g) como un aceite transparente. CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C10H18NO5 232.12; encontrado 232.1; RMN de H (400 MHz, CDC13) d ppm 5.20 (1 H, d, J=8.28 Hz) , 4.54 (1 H, t, J=B .16 Hz) , 3.95 - 4.10 (1 H, m) , 3.66 - 3.85 (5 H, m) , 2.15 - 2.29 (1 H, m) , 1.41 - 1.85 (4 H, m) , 1.23 (3 H, dd, J"=6.53, 1.76 Hz) .
A una solución de Cap-178, etapa j (240 mg, 1.04 mmol), (S) -1-feniletanol (0.141 mi, 1.142 mmol) y EDC (219 mg, 1.14 mmol) en 10 mi de CH2C12 se añadió DMAP (13.95 mg, 0.114 mmol) . La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche y el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se recogió en EtOAc, se lavó con agua, se secó con MgS04 y se concentró. El producto bruto se purificó por cromatografía (gel de sílice, EtOAc al 0 -15%/Hexanos) dando Cap-178, etapa k como una mezcla de dos diastereómeros . La mezcla se separó por HPLC quiral (columna CHIRALPAK® AS, 21 x 250 mm, 10 um) eluyendo con dietilamina al 90% / heptano al 0.1% /EtOH al 10% a 15 ml/min dando Cap-178, estereoisómero 1 de la etapa k (eluye primero) y Cap-178, estereoisómero 2 de la etapa k (eluye segundo) como sólido blancos. La estereoquímica de los dos isómeros no se determinó.
Cap-178, estereoisómero 1 de la etapa k (130 CL-EM: Análisis calculado para [M+Na] + Ci8H25 Na05 358.16; encontrado 358.16; RMN de XH (500 MHz, CDC13) d ppm 7.28 -7.38 (5 H, m) , 5.94 (1 H, q, J=6.71 Hz), 5.12 (1 H, d, J=9.16 Hz) , 4.55 (1 H, t, J=9.00 Hz) , 3.72 - 3.81 (1 H, m) , 3.67 (3 H, s) , 3.60 - 3.70 (2 H, m) , 1.98 - 2.08 (1 H, m) , 1.59 (3 H, d, J"=6.71 Hz) , 1.38 - 1.47 (2 H, m) , 1.30 (2 H, t, J=5.34 Hz) , 0.93 (3 H, d, J"=6.41 Hz) .
Cap-178, estereoisómero una solución de Cap-178, estereoisómero 1 de etapa k (ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) -2 - ( (2S , 4R) -2 -metiltetrahidro-2H-piran-4-il) acético) (150 mg, 0.447 mmol) en 10 mi de EtOH se añadió Pd/C (20 mg, 0.188 mmol) y la mezcla se sometió a hidrogenación en un agitador de Parr a 2.757 x 105 Pa durante la noche. La mezcla se filtró a continuación y el filtrado se concentró dando Cap-178, estereoisómero 1 (100 mg) como un sólido blanco pegajoso. CL- EM: Análisis calculado para [M+H]+ Ci0H18NO5 232.12 ; encontrado 232.1; RM de H (500 MHz , CDCl3) d ppm 5.14 - 5.27 (1 H, m) , 4.51 (1 H, t, J=8.39 Hz) , 3.90 - 4.07 (1 H, m) , 3.60 - 3.83 (5 H, m) , 2.06 - 2.27 (1 H, m) , 1.45 - 1.77 (4 H, m) , 1.21 (3 H, d, J"=6.41 Hz) .
Cap-179 (Enantiómero-1 y enantiómero-2 ) stereoisómero 1 stereoisómero 2 pa a Se disolvió 2 , 6 -dimetil-4H-piran-4 -ona (10 g, 81 mmol) en etanol (125 mi) y se añadió Pd/C (1 g, 0.94 mmol) . La mezcla se sometió a hidrogenación en un agitador de Parr bajo H2 (0.325 g, 161 mmol) (4.825 x 105 Pa) a temperatura ambiente durante 12 horas. El catalizador se filtró a través de una almohadilla de CELITE® y se lavó con etanol. El filtrado se concentró a vacío y le residuo se purificó por BIOTAGE® (EtOAc 2% a 25 %/Hex; columna de 160 g).Se aislaron dos fracciones de aceites transparentes. La primera que eluye corresponde a (2R, 6S) -2 , 6-dimetildihidro-2H-piran-4 (3H) -ona (1.8 g) mientras que la segunda corresponde a Cap-179, etapa a (1.8 g) .
Datos de (2R, 6S) -2 , 6-dimetildihidro-2H-piran-4 (3H) -ona: RMN de XH (500 MHz , CDC13) d ppm 3.69 (2 H, ddd, ,7=11.29, 5.95, 2.29 Hz) , 2.24 - 2.36 (2 H , m) , 2.08 - 2.23 (2 H, m) , 1.18 - 1.34 (6 H, m) ; RMN de 13C (126 MHz, CDC13) d ppm 206.96 (1 C, s ancho) , 72.69 (2 C, s) , 48.70 (2 C, s) , 21.72 (2 C, s) .
Datos de Cap-179, etapa a: RMN de XK (500 MHz, CDC13) d ppm 3.69 - 3.78 (1 H, m) , 3.36 - 3.47 (2 H, m) , 2.10 (1 H, s ancho), 1.88 (2 H, dd, J=12.05, 4.73 Hz) , 1.19 (6 H, d, J=6.10 Hz) , 1.10 (2 H, q, J"=10.70 Hz) ; RMN de 13C (126 MHz, CDCI3) d ppm 71.44 (2 C, s) , 67.92 (1 C, s) , 42.59 (2 C, s) , 21.71 (2 C, s) .
Se añadió gota a gota DEAD (2.311 mi, 14.59 mmol) a una solución de Cap-179, etapa a (0.38 g, 2.92 mmol) , ácido 4-nitrobenzoico (2.195 g, 13.14 mmol) y Ph3P (3.83 g, 14.59 mmol) en benceno (25 mi) . Se detectó generación de calor y la solución ámbar resultante se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. El disolvente se eliminó a presión reducid y el residuo se purificó mediante BIOTAGE® (EtOAc al 0 a 15%/Hex; columna de 80 g) . Se aisló un sólido blanco que corresponde a Cap-179, etapa b (0.77 g) . CL-EM: Análisis calculado para [M] + C14H17N05 : 279.11; encontrado 279.12. RM de XH (500 MHz , CDC13) d ppm 8.27 - 8.32 (2 H, m) , 8.20 - 8.24 (2 H, m) , 5.45 (1 H, quin, J=2.82 Hz) , 3.92 (2 H, dqd, J"=11.90, 6.10, 6.10, 6.10, 1.53 Hz) , 1.91 (2 H, dd, .7=14.80, 2.29 Hz) , 1.57 (3 H, dt , J=14.65, 3.05 Hz) , 1.22 (6 H, d, J"=6.10 Hz) . añadió una solución de LiOH (0.330 mmol) en agua (8 ral) a una solución de Cap-179, etapa b (0.77 g, 2.76 mmol) en THF (30 mi) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Se eliminó el THF a presión reducida y la fase acuosa se diluyó con más agua (20 mi) y se extrajo con EtOAc (3 X 15 mi) . Las fases orgánicas reunidas se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron a vacío. Se recuperó un residuo oleoso con un sólido blanco. La mezcla se trituró con hexanos y el sólido se separó por filtración proporcionando un aceite transparente que corresponde a Cap-179, etapa c (0.34 g) . RMN de XH (500 MHz, CDCl3) d ppm 4.21 (1 H, quin, i7=2.82 Hz) , 3.87 - 3.95 (2 H, m) , 1.72 (1 H, s ancho), 1.63 (2 H, dd, J"=14.34, 2.14 Hz), 1.39 - 1.47 (2 H, m) , 1.17 (6 H, d, J=6.41 Hz) .
Cap-179, etapa d X ÓXTs Se añadió cloruro de p-tosilo (3.98 g, 20.89 mmol) a una solución de Cap-179, etapa c (1.36 g, 10.5 mmol) y piridina (3.38 mi, 41.8 mmol) en CH2C12 (150 mi) a temperatura ambiente y se agitó durante 24 horas y luego se concentró hasta un aceite amarillo. El residuo que queda se añadió a piridina (20 mi) y agua (30 mi) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 1/2 h. La mezcla se extrajo con Et20 (75 mi) y la fase orgánica separada se lavó concienzudamente con HCl acuoso 1 N (4 X 50 mi) . La fase orgánica se secó a continuación (MgS04) , se filtró y se concentró. Se aisló un sólido blanco que corresponde a Cap-179, etapa d (2.2 g) . CL-EM: Análisis calculado para [2M+H] + C28H4i08S2 : 569.22; encontrado 569.3. RM de *H (400 MHz , CDC13) d ppm 7.80 (2 H, d, ,7=8.28 Hz) , 7.35 (2 H, d, 7=8.03 Hz) , 4.89 (1 H, quin, J=2.82 Hz) , 3.77 - 3.88 (2 H, m) , 2.46 (3 H, s) , 1.77 (2 H, dd, .7=14.93, 2.89 Hz) , 1.36 (2 H, ddd, J=14.31, 11.54, 2.76 Hz) , 1.13 (6 H, d, J=6.27 Hz) .
Se añadió LiHMDS (4.30 mi, 4.30 mmol) a una solución de Cap-179, etapa d (1.02 g, 3.59 tnmol) y 2-(difenilmetilenamino) acetato de bencilo (1.181 g, 3.59 mmol) en tolueno (25 mi) a temperatura ambiente en un vial de microondas sellado y la mezcla resultante se agitó entonces durante 5 h a 100 °C bajo radiación de microondas. La reacción se inactivo con agua (10 mi) , se extrajo con EtOAc, se lavó con agua, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró a vacío. El residuo se purificó por BIOTAGE® (EtOAc al 0% a 6%/Hex; columna de 80 g) y se aisló un aceite amarillo que correspondía a Cap-179, etapa e (1.2 g) . Análisis calculado para [2M+Na] + C58H62 2 a06 : 905.45; encontrado 905.42. RM de H (400 MHz, CDC13) d ppm 7.64 -7.70 (4 H, m) , 7.29 - 7.44 (29 H, m) , 7.06 (4 H, dd, J=7.65, 1.63 Hz) , 5.18 (2 H, d, J=2.01 Hz), 3.89 (2 H, d, J=6.53 Hz), 3.79 - 3.87 (1 H, m) , 3.46 (5 H, dquind, J"=11.26, 5.87, 5.87, 5.87, 5.87, 1.88 Hz) , 2.47 (2 H, s) , 2.35 - 2.46 (2 H, m) , 1.78 (1 H, dd, J=14.81, 3.01 Hz) , 1.62 - 1.65 (1 H, m) , 1.61 (2 H, s) , 1.36 - 1.43 (3 H, m) , 1.19 (7 H, d, J=6.27 Hz) , 1.14 (11 H, dd, J=6.15, 2.89 Hz) , 0.86 - 0.96 (3 H, m) .
Cap-179, etapa f (enantiómero-1 y enantiómero-2) Se disolvió Cap-179, etapa e (2.08 g, 4.71 mmol) en THF (100 mi) y se trató con HC1 2 N (9.42 mi, 18.84 mmol). La solución transparente resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y luego se eliminó el THF a presión reducida. La fase acuosa que quedó se extrajo con hexanos (3 X 20 mi) y, después de diluir con H20 (20 mi) , se basificó la fase acuosa con NaOH 1 N hasta pH = 10 y se extrajo con EtOAc (3 x 10 mi) . Las fases orgánicas reunidas se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo resultante se recogió en CH2C12 (100 mi) y se cargó con DIEA (2.468 mi, 14.13 mmol) y cloroformiato de metilo (0.401 mi, 5.18 mmol) . La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se inactivo con agua (10 mi) y la fase orgánica se eliminó a presión reducida. La fase acuosa se extrajo entonces con EtOAc (3 x 10 mi) y las fases orgánicas reunidas se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por BIOTAGE® (EtOAc al 10%/Hex; columna de 25 g) . Se recuperó un aceite incoloro transparente que correspondía a Cap-179, etapa f (1.05 g) . CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci8H26 05 : 336.18; encontrado 336.3. RMN de XH (500 MHz , CDCl3) d ppm 7.32 - 7.40 (5 H, m) , 5.26 (1 H, d, J=8.24 Hz) , 5.13 - 5.24 (2 H, m) , 4.36 (1 H, dd, J=8.85, 4.88 Hz) , 3.68 (3 H, s), 3.32 - 3.46 (2 H, m) , 2.02 - 2.14 (1 H, m) , 1.52 (1 H, d, J=12.82 Hz) , 1.32 (1 H, d, J=12.51 Hz) , 1.11 - 1.18 (6 H, m) , 0.89 - 1.07 (2 H, m) .
Se desarrolló un procedimiento de SFC quiral para separar la mezcla racémica usando metanol al 12% como modificador en una columna CHIRALPAK® AD-H (30 x 250mm, 5µp?) (Temp = 35 °C, Presión = 150 x 105 Pa, Longitud de nm, Caudal = 70 ml/min durante 8 min, Disolvente A = C02, Disolvente B = MeOH) . Los dos isómeros separados , Cap-179 etapa f (enantiómero-1) (eluye primero) y Cap-179 etapa f (enantiómero-2 ) (eluye segundo) presentaron los mismos datos analíticos que la mezcla correspondiente (véase más arriba) . Cap-179 (Enantiómero-1 y enantiómero-2) Se disolvió Cap-179 etapa f (Enantiómero-1) (0.35 g, 1.044 mmol) en MeOH (50 mi) en un aparato de Parr y se cargó con Pd/C (0.111 g, 1.044 mmol). La suspensión se colocó entonces en un agitador de Parr y se inyectó N2 (3X) a la mezcla, se colocó bajo 2.757 x 105 Pa de H2 (2.104 mg, 1.044 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. El catalizador se separó por filtración a través de una almohadilla de CELITE® y el disolvente se eliminó a presión reducida, proporcionando un sólido ámbar que corresponde a Cap-179 Enantiómero-1 (0.25 g) . RMN de ? (500 MHz , DMSO-d6) d ppm 12.74 (4 H, s ancho), 7.35 (4 H, d, J=6.10 Hz) , 3.85 (4 H, s ancho), 3.53 (3 H, s) , 3.35 (2 H, ddd, J=15.95, 9.99, 6.10 Hz) , 1.97 (1 H, s ancho), 1.48 (2 H, t, J"=13.28 Hz), I.06 (6 H, d, J=6.10 Hz) , 0.82 - 1.00 (2 H, m) Se preparó Cap-179 Enantiómero-2 de igual forma: RMN de XH (500 MHz, DMSO-d6) d ppm 12.50 (1 H, s ancho), 7.31 (1 H, s ancho), 3.84 (1 H, t, J=7.32 Hz) , 3.53 (3 H, s) , 3.29 - 3.41 (2 H, m) , 1.99 (1 H, s) , 1.48 (2 H, t, J=14.34 Hz), 1.06 (6 H, d, J=6.10 Hz) , 0.95 (1 H, q, J=12.21 Hz) , 0.87 (1 H, q, J=11.80 Hz) . [Nota: la menor variación en el perfil de RMN de 1H de los enantiómeros es probablemente un resultado de una diferencia en la concentración de muestra.] Cap-180 Mezcla racémica Cap-180, etapa a Se añadió cloruro de p-tosilo (4.39 g, 23.0 mmol) a una solución de Cap- 179, etapa a (1.50 g, 11.5 mmol) y piridina (3.73 mi, 46.1 mmol) en CH2C12 (50 mi) a temperatura ambiente y se agitó durante 2 días. La reacción se diluyó con CH2C12, se lavó con agua y luego con HC1 1 N. La fase orgánica se secó (MgS04) y se concentró hasta un aceite amarillo que se purificó por BIOTAGE® (EtOAc al 5% a 20%/Hex; columna de 40 g) . Se aisló un aceite transparente que solidificó a vacío y que corresponde a Cap-180 etapa a (2.89 g) . CL-E : Análisis calculado para [2M+Na] + C28H40NaO8S2 : 591.21; encontrado 591.3. RMN de XH (500 MHz, CDCl3) d ppm 7.80 (2 H, d, ,7=8.24 Hz) , 7.35 (2 H, d, J=7.93 Hz), 4.59 (1 H, tt, J=11.37, 4.96 Hz) , 3.36 - 3.46 (2 H, m) , 2.46 (3 H, s) , 1.91 (2 H, dd, J=12.05, 5.04 Hz) , 1.37 (2 H, dt , J=12.67, 11.52 Hz) , 1.19 (6 H, d, J=6.10 Hz) . añadió LiHMDS 1 N (7.09 mi, 7.09 mmol) a una solución de Cap-180, etapa a (1.68 g, 5.91 mmol) y 2-(difenilmetilenamino) acetato de etilo (1.579 g, 5.91 mmol) en tolueno (30 mi) a temperatura ambiente y la mezcla resultante se agitó entonces durante 16 h a 85 °C. La reacción se inactivo con agua (50 mi) , se extrajo con EtOAc, se lavó con agua, se secó sobre MgS0 , se filtró y se concentró en vacuo. El residuo se purificó por BIOTAGE® (EtOAc al 0% a 15%/Hex; columna de 40 g) . Se aisló un aceite amarillento transparente que corresponde a Cap-180, etapa b (mezcla racémica) (0.64 g) . CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C24H30 O3 : 380.22; encontrado 380.03. RMN de H (400 MHz, CDC13) d ppm 7.64 -7.70 (2 H, m) , 7.45 - 7.51 (3 H, m) , 7.38 - 7.44 (1 H, m) , 7.31 - 7.37 (2 H, m) , 7.13 - 7.19 (2 H, m) , 4.39 (1 H, d, .7=10.54 Hz) , 4.16 - 4.26 (2 H, m) , 3.29 - 3.39 (1 H, m) , 2.93 - 3.03 (1 H, m) , 2.70 (1 H, m, J=9.41, 4.14 Hz), 1.42 - 1.49 (2 H, m) , 1.31 - 1.37 (1 H, m) , 1.29 (4 H, t, J=7.15 Hz) , 1.04 (6 H, dd, J=7.78, 6.27 Hz) .
Se disolvió Cap-180, etapa b (0.36 g, 0.949 mmol) en THF (10 mi) y se trató con HCl 2 N (1.897 mi, 3.79 mmol). La solución transparente resultante se agitó a temperatura ambiente durante 20 h y se eliminó el THF a presión reducida. La fase acuosa que quedó se extrajo con hexanos (3 X 20 mi) y, después de diluir con H20 (20 mi) , se basificó la fase acuosa con NaOH 1 N hasta pH = 10 y se extrajo con EtOAc (3 x 10 mi) . Las fases orgánicas reunidas se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo resultante se recogió en CH2C12 (10.00 mi) y se cargó con DIEA (0.497 mi, 2.85 mmol) y cloroformiato de metilo (0.081 mi, 1.044 mmol). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y la mezcla de reacción se inactivo con agua (10 mi) y la fase orgánica se eliminó a presión reducida. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 10 mi) y las fases orgánicas reunidas se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron. Se recuperó un sólido ámbar que corresponde a Cap-180, etapa c (0.21 g) y se usó sin purificación posterior. CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C13H24 O5: 273.17; encontrado 274.06. RM de ? (400 Hz , CDCl3) d ppm 5.20 (1 H, d, J=8.03 Hz) , 4.59 (1 H, t, .7=10.16 Hz), 4.11 - 4.27 (3 H, m) , 3.69 -3.82 (2 H, m) , 3.64 (3 H, s) , 1.95 - 2.07 (1 H, m) , 1.63 (1 H, d, J=13.80 Hz) , 1.41 (2 H, dd, J=8.03, 4.02 Hz) , 1.31 - I.37 (1 H, m) , 1.26 (3 H, t, J=7.15 Hz) , 1.16 (1 H, d, J=6.27 Hz) , 1.12 (6 H, dd, J=6.15, 3.89 Hz) .
Cap-180 (Mezcla racémica) Se disolvió Cap-180, etapa c (0.32 g, 1.2 mmol) en THF (10 mi) y se cargó con LiOH (0.056 g, 2.342 mmol) en agua (3.33 mi) a 0 °C. La solución resultante se agitó a ta durante 2 h. Se eliminó el THF a presión reducida y el residuo que quedó se diluyó con agua (15 mi) y se lavó con Et20 (2 x 10 mi) . La fase acuosa se acidificó seguidamente con HCl 1 N hasta pH ~ 2 y se extrajo con EtOAc (3 x 15 mi) . Las fases orgánicas reunidas se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron a vacío proporcionando Cap-180 (mezcla racémica) (0.2 g) como una espuma blanca. CL-EM: Análisis calculado para [M+H]+ CnH2o 05: 246.13; encontrado 246.00. RMN de ¾ (400 MHz, CDC13) d ppm 5.14 (1 H, d, J=9.03 Hz) , 4.65 (1 H, t, J=9.91 Hz) , 3.63 - 3.89 (5 H, m) , 1.99 - 2.13 (1 H, m) , 1.56 -1.73 (2 H, m) , 1.48 - 1.55 (1 H, m) , 1.35 - 1.48 (1 H, m) , 1.27 (1 H, s ancho), 1.17 (6 H, d, J=6.02 Hz) .
Cap- 185 (Enantiómero-1 y Enantiómero -2) Cap-185, etapa a Y A una mezcla de furano (1.075 mi, 14.69 mmol) y zinc (1.585 g, 24.24 mmol) en 1 mi de THF se añadió 1,1,3,3-tetrabromopropan-2 -ona (8.23 g, 22.03 mmol) y trietil borato (5.25 mi, 30.8 mmol) en 4 mi de THF gota a gota durante 1 hora en la oscuridad. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente en la oscuridad durante 17 horas. La mezcla marrón oscuro resultante se enfrió hasta -15 °C, y se añadieron 6 mi de agua. La mezcla se calentó hasta 0 °C y se agitó a esta temperatura durante 30 min. La mezcla se filtró entonces y se lavó con éter. El filtrado se diluyó con agua y se extrajo con éter (3x) . Las fases orgánicas reunidas se secaron con MgS04 y se concentraron proporcionando aceite marrón oscuro. El aceite marrón oscuro se disolvió en 6 mi de MeOH y la solución se añadió gota a gota a una mezcla de zinc (4.99 g, 76 mmol), cloruro de cobre(I) (0.756 g, 7.64 mmol) y cloruro amónico (5.4 g, 101 mmol) en 20 mi de MeOH. La temperatura de reacción se mantuvo por debajo de 15 °C durante la adición. La mezcla se agitó entonces a temperatura ambiente durante 20 horas, se filtró, y el filtrado se diluyó con agua y se extrajo con CH2C12 (3X) . Las fases orgánicas reunidas se secaron con MgS04 y se concentraron. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 0-14%/Hex) proporcionando Cap- 185, etapa a como un sólido blanco (1.0 g) como un sólido blanco, que viró rápidamente a amarillo. RMN de XH (500 MHz, CDC13) d ppm 6.24 (2 H, s) , 5.01 (2 H, d, J=4.88 Hz) , 2.73 (2 H, dd, J=16.94, 5.04 Hz) , 2.31 (2 H, d, J"=16.79 Hz) .
Cap-185, etapa b A una solución de Cap-185, etapa a (240 mg, 1.933 mmol) en 2 mi de THF a -78 °C se añadió L-selectrida (3.87 mi, 3.87 mmol) (1 M en THF) gota a gota durante 100 min. La mezcla resultante se agitó a -78 °C durante 1 hora y luego a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se enfrió entonces hasta 0 °C, se añadieron 4 mi de solución acuosa de NaOH al 20%, seguida por 2 mi de H202 (solución acuosa al 30%) gota a gota. La mezcla resultante se agitó durante 1 hora y luego se neutralizó con HC1 6N (~5 mi) . La fase acuosa se saturó con NaCl y se extrajo con CH2Cl2 (3X) . Las fases orgánicas reunidas se secaron con MgS04 y se concentraron. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 0-40%/Hex) proporcionando Cap-185, etapa b (180 mg) como aceite transparente. RMN de 1H (400 MHz, CDC13) d ppm 6.49 (2 H, s) , 4.76 (2 H, d, J=4.27 Hz), 3.99 (1 H, t, J"=5.77 Hz) , 2.29 (2 H, ddd, J-=15.18, 5.65, 4.02 Hz) , 1.70 - 1.78 (2 H, m) .
Cap-185, etapa c Se añadió cloruro de p-tosilo (544 mg, 2.85 mmol) a una solución de Cap- 185, etapa b (180 mg, 1.427 mmol) y piridina (0.462 mi, 5.71 mmol) en 5 mi de CH2C12 (5 mi) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 días. La reacción se diluyó con CH2C12 y se lavó con HC1 acuoso 1 N. La fase acuosa se extrajo con CH2C12 (2X) . Las fases orgánicas reunidas se secaron con MgS04 y se concentraron. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 0-15%/Hex) proporcionando Cap- 185, etapa c (210 mg) como un sólido blanco. RMN de 1H (500 MHz, CDC13) d ppm 7.73 (2 H, d, J=8.24 Hz) , 7.32 (2 H, d, J=8.24 Hz) , 6.25 (2 H, s) , 4.76 (1 H, t, J=5.65 Hz) , 4.64 (2 H, d, J"=3.66 Hz) , 2.44 (3 H, s) , 2.18 (2 H, td, J"=10.07, 5.49 Hz), 1.71 (2 H, d, J"=15.56 Hz) .
Se cargó un tubo de microondas con 2- (difenilmetilenamino) acetato de bencilo (1.5 g, 4.57 mmol) y Cap-185, etapa c (1.28 g, 4.57 mmol) en 5 mi de tolueno. El tubo se selló y se añadió gota a gota bajo N2 LiHMDS (5.5 mi, 5.5 mmol) (1 N en tolueno). La solución marrón oscura resultante se calentó a 100 °C en microondas durante 5 horas. A la mezcla se añadió entonces agua y EtOAc. Se separaron las fases y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (2X) . Las fases orgánicas reunidas se concentraron proporcionando Cap-185, etapa d como una mezcla racémica. La mezcla bruta se sometió a la etapa siguiente sin purificación o separación. CL-EM: Análisis calculado para [M+H]+ C29H2803438.21; encontrado 438.4.
A una solución de la mezcla racémica de Cap-185, etapa d en 30 mi de THF se añadió HCl (20 mi) (2 N ac.) . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después de la reacción se completó como se juzgó por TLC, se separaron las dos capas. La fase acuosa se lavó con EtOAc, se neutralizó con solución acuosa saturada de NaHC03 y luego se extrajo con EtOAc (3X) . Las fases orgánicas reunidas se secaron con MgS04 y se concentraron proporcionando Cap-185, etapa e. CL-EM: Análisis calculado para [M+H]+ Ci6H2o03 274.14; encontrado 274.12.
Una solución de Cap-185, etapa e bruto, DiPEA (1.24 ml, 7.1 mmol) y cloroformiato de metilo (0.55 ml , 7.1 mmol) en 5 ml de CH2C12 se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se diluyó luego con CH2C12 y se lavó con agua. La fase orgánica se secó con Na2S04 y se concentró. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 0-40%/Hex) proporcionando 700 mg de la mezcla racémica. La mezcla se separó entonces por HPLC quiral (Columna CHIRALPAK® AD-H, 30 x 250 mm, 5 um) eluyendo con C02 al 88%-EtOH al 12% a 70 ml/min proporcionando 240 mg de Enantiómero-1 y 310 mg de Enantiómero-2 de Cap-1, etapa f como sólidos blancos. Enantiómero-1: CL-EM: Análisis calculado para [M+H]+ Ci8H22 05 332.15; encontrado 332.3. RM de ¾ (500 MHz, CDC13) d ppm 7.30 - 7.40 (5 H, m) , 6.03 - 6.16 (2 H, m) , 5.09 - 5.26 (3 H, m) , 4.65 - 4.74 (2 H, m) , 4.33 (1 H, dd, J=9.16, 4.88 Hz) , 3.67 (3 H, s) , 2.27 - 2.38 (1 H, m) , 1.61 - 1.69 (1 H, m) , 1.45 - 1.56 (1 H, m) , 1.34 (1 H, dd, .7=13.43, 5.19 Hz), 1.07 (1 H, dd, J=13.12, 5.19 Hz). Enantiómero-2: CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci8H22N05 332.15; encontrado 332.06.
Cap-185 (Enantiómero-1 y Enantiómero-2) A un frasco de hidrogenación que contenía una solución de Cap-185, etapa f (Enantiómero-2) (300 mg, 0.905 mmol) en 10 ml de MeOH se añadió Pd/C (15 mg, 0.141 mmol) bajo una capa de nitrógeno. La mezcla se sometió a hidrogenación en un agitador de Parr a 2.757 x 105 Pa durante 3 horas. La mezcla se filtró entonces y el filtrado se concentró proporcionando Cap-185 (Enantiómero-2 ) (200 mg) como un sólido blanco. CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + CnH18N05 244.12; encontrado 244.2. RM de H (500 MHz , CDC13) d ppm 5.33 (1 H, s ancho), 4.46 (2 H, d) , 4.28 (1 H, s ancho), 3.68 (3 H, s) , 2.35 (1 H, s ancho), 1.91 - 2.03 (2 H, m) , 1.56 - 1.80 (4 H, m) , 1.36 - 1.55 (2 H, m) . [Nota: se puede obtener Cap-185 (Enantiómero-1) de una forma similar.] A una solución del éster Cap-185, etapa f (Enantiómero-2) (150 mg, 0.453 mmol) en 4 mi de MeOH se añadió NaOH (4 mi de 1 N en agua, 4.00 mmol) . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. El metanOol se eliminó entonces a vacío y el residuo se neutralizó con solución de HCl 1 N y se extrajo con EtOAc (3X) . Las fases orgánicas reunidas se secaron con MgS04 y se concentraron proporcionando Cap-186 que estaba contaminado con algo de alcohol bencílico (sólido blanco pegajoso; 115 mg) . CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + CnHi6 05 242.10; encontrado 242.1. RMN de XH (500 MHz, CDC13) d ppm 6.10 - 6.19 (2 H, m) , 5.36 (1 H, d, J=8.85 Hz) , 4.75 - 4.84 (2 H, m) , 4.28 (1 H, dd, J-=8.55, 4.58 Hz) , 3.68 (3 H, s) , 2.33 - 2.45 (1 H, m) , 1.60 - 1.72 (2 H, m) , 1.30 - 1.48 (2 H, m) . a A una solución de Cap-178, etapa e (2.2 g, 18.94 mmol) , PPh3 (24.84 g, 95 mmol) y ácido 4-nitrobenzoico (14.24 g, 85 mmol) en 30 mi de benceno se añadió DEAD (42.9 mi, 95 mmol) gota a gota. La solución naranja claro resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El disolvente se eliminó entonces a vacío y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 0-15%/Hex) proporcionando Cap-187, etapa a (2.3 g) como un sólido blanco. R N de ? (500 Hz, CDC13) d ppm 8.27 - 8.34 (2 H, m) , 8.20 - 8.26 (2 H, m) , 5.45 (1 H, t, J=2.90 Hz) , 3.83 -3.96 (3 H, m) , 1.90 - 2.03 (2 H, m) , 1.80 - 1.88 (1 H, m) , I.61 - 1.70 (1 H, m) , 1.21 (3 H, d, J=6.10 Hz) .
Cap-187, etapa b A una solución de Cap-187, etapa a (2.3 g, 8.67 mmol) en 10 mi de MeOH se añadió metóxido sódico (2.372 mi, 8.67 mmol) (25% en Metanol) . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (5X) . Las fases orgánicas reunidas se secaron con MgS04 y se concentraron. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 0-15%/Hex, luego EtOAc al 15-50%/Hex) proporcionando Cap-187, etapa b (0.85 g) como aceite transparente. RM de H (500 MHz, CDC13) d ppm 4.19 - 4.23 (1 H, m) , 3.82 - 3.91 (2 H, m) , 3.73 - 3.79 (1 H, m) , 1.79 - 1.88 (1 H, m) , 1.62 - 1.68 (1 H, m) , 1.46 - 1.58 (2 H, m) , 1.14 (3 H, d, J=6.10 Hz) .
Cap-187 Los enantiómeros individuales de Cap-187 se sintetizaron a partir de Cap-187, etapa b de acuerdo con el procedimiento descrito para Cap-178. CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci0H18N05 232.12; encontrado 232.1. RMN de XH (400 MHz, CDC13) d ppm 5.26 (1 H, d, J=7.78 Hz) , 4.32 -4.43 (1 H, m) , 4.07 (1 H, dd, J"=11.54, 3.51 Hz) , 3.72 (3 H, s) , 3.39 - 3.50 (2 H, m) , 2.08 - 2.23 (1 H, m) , 1.54 - 1.68 (1 H, m) , 1.38 - 1.52 (1 H, m) , 1.11 - 1.32 (5 H, m) .
Cap-188 (Cuatro estereoisómeros) a A una solución de 2 , 2-dimetildihidro-2H-piran- 4(3H)-ona (2 g, 15.60 mmol) en 50 mi de MeOH se añadió lentamente borohidruro sódico (0.649 g, 17.16 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. A la mezcla se añadió entonces solución acuosa de HCl 1 N hasta que alcanzó el intervalo de pH ácido y luego se extrajo con EtOAc (3X) . Las fases orgánicas reunidas se secaron con MgS0 y se concentraron proporcionando Cap- 188, etapa a (1.9 g) como aceite transparente. El producto se usó en la etapa siguiente sin purificación. RMN de 1H (400 MHz, CDC13) d ppm 3.91 - 4.02 (1 H, m) , 3.79 - 3.86 (1 H, m) , 3.63 (1 H, td, J"=12.05, 2.51 Hz) , 1.82 - 1.93 (2 H, m) , 1.40 - 1.53 (1 H, m) , 1.29 - 1.38 (1 H, m) , 1.27 (3 H, s) , 1.20 (3 H, S) . etapa b Se añadió cloruro de p-tosilo (5.56 g, 29.2 mmol) a una solución de Cap- 188, etapa a (1.9 g, 14.59 mmol) y piridina (4.72 mi, 58.4 mmol) en 100 mi de CH2C12. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 días. A la reacción se añadieron 10 mi de agua, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una hora más . Se separaron las dos capas y la fase orgánica se lavó con agua y solución acuosa de HCl 1 N. La fase orgánica se secó con MgS04 y se concentró proporcionando la mezcla de dos enantiómeros como un sólido amarillo claro. La mezcla se separó entonces por HPLC quiral (Columna CHIRALPAK® AD, 21 x 250 mm, 10 um) eluyendo con dietilamina al 92%-heptano al 0.1/EtOH al 8% a 15 ml/min proporcionando Cap-188.1, etapa b (1.0 g) y Cap-188.2, etapa b (1.0 g) . La estereoquímica absoluta de los dos enantiómeros no se asignó. Cap-188.1, etapa b: CL-EM: Análisis calculado para [2 +Na]+ C28H4o a08S2 591.21; encontrado 591.3. RMN de ?? (500 MHz, CDC13) d ppm 7.79 (2 H, d, J"=8.24 Hz) , 7.34 (2 H, d, J=8.24 Hz) , 4.72 - 4.81 (1 H, m) , 3.78 (1 H, dt , J=12.44, 4.16 Hz) , 3.53 - 3.61 (1 H, m) , 2.45 (3 H, s) , 1.75 - 1.86 (2 H, m) , 1.61 - 1.71 (1 H, m) , 1.52 - 1.60 (1 H, m) , 1.22 (3 H, s) , 1.14 (3 H, s). Cap-188.2, etapa b: CL-EM: Análisis calculado para [2M+Na]+ C28H4o a08S2 591.21; encontrado 591.3; Cap-188 Los cuatro estereoisómeros de Cap-188 se pueden sintetizar a partir de Cap-188.1, etapa b y Cap-188.2, etapa b, de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación de Cap-178. Cap-188 (Estereoisómero-1) : CL-EM: Análisis calculado para [M+Na] + CnHi9 a05 268.12; encontrado 268.23. RMN de XH (500 MHz, CDC13) d ppm 5.32 (1 H, d, J=8.55 Hz), 4.26 - 4.35 (1 H, m) , 3.57 - 3.82 (5 H, m) , 2.11 - 2.34 (1 H, m) , 1.25 - 1.58 (4 H, m) , 1.21 (6 H, d, J=6.10 Hz).
Cap-188 (Estereoisómero-2) : CL-EM: Análisis calculado para [M+H]+ CnHzo Os 246.13; encontrado 246.1. RM de ?? (500 MHz, CDC13) d ppm 5.25 (1 H, d, J=8.55 Hz) , 4.33 (1 H, dd, J"=8.39( 5.04 Hz) , 3.80 (1 H, dd, J=11.90, 3.97 Hz) , 3.62 - 3.76 (4 H( m) , 2.20 - 2.32 (1 H, m) , 1.52 - 1.63 (1 H, m) , 1.27 - 1.49 (3 H, m) , 1.22 (6 H, d, J=14.04 Hz) .
A una solución de bromuro de fenilmagnesio (113 mi, 340 mmol) (3 M en éter) en 100 mi de éter se añadió gota a gota exo-2 , 3-epoxinorbornano (25 g, 227 mmol) en 50 mi de éter. Después de la exotermia inicial, la mezcla se calentó hasta reflujo durante la noche. La reacción se enfrió entonces hasta temperatura ambiente y se inactivo cuidadosamente con agua (~ 10 mi) . La mezcla se diluyó con éter y se lavó con una solución acuosa de HCl 3 N (~ 160 mi) . La fase acuosa se extrajo con éter (2X) y las fases orgánicas reunidas se secaron con MgS04 y se concentraron. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 0-18%/Hex) proporcionando Cap-189, etapa a (11 g) . RMN de XH (400 MHz, CDC13) d ppm 6.03 - 6.11 (2 H, m) , 3.76 (1 H, d, J=11.29 Hz) , 2.72 - 2.81 (2 H, m) , 1.98 (1 H, d, J=11.29 Hz) , 1.67 - 1.76 (2 H, m) , 0.90 - 0.97 (2 H, m) .
A una solución de cloruro de oxalilo (59.9 mi, 120 mmol) en 200 mi de CH2C12 a -78 °C se añadió DMSO (17.01 mi, 240 mmol) en 100 mi de CH C12. La mezcla se agitó durante 10 min, y se añadió Cap-189, etapa a (11 g, 100 mmol) en 150 mi de CH2C12 seguido por Et3N (72.4 mi, 519 mmol) en 30 mi de CH2C12. La mezcla se agitó a -78 °C durante 30 min y luego se calentó hasta temperatura ambiente. Se añadió agua (150 mi) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Las dos fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con CH2C12 (2X) . La fase orgánicas se reunieron, se secaron con MgS04 y se concentraron. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 0-5%/Hex) proporcionando Cap-189, etapa b (5.3 g) como un aceite amarillo claro. RMN de 1H (500 MHz, CDC13) d ppm 6.50 - 6.55 (2 H, m) , 2.78 - 2.84 (2 H, m) , 1.92 - 1.99 (2 H, m) , 1.17 - 1.23 (2 H, m) .
Una mezcla de Cap-189, etapa b (5.3 g, 49.0 mmol) ácido p-toluenosulfónico monohidratado (1.492 g, 7.84 mmol) y etilenglicol (4.10 mi, 73.5 mmol) en 100 mi de benceno se llevó a reflujo durante 4 horas y luego se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se repartió entre Et20 y solución acuosa saturada de NaHC03 y se separaron las dos capas. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con MgS04 y se concentró. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 0-6%/Hex) proporcionando Cap-189, etapa c (5.2 g) como un aceite transparente. RMN de ""? (400 MHz, CDC13) d ppm 6.20 (2 H, t, J"=2.13 Hz) , 3.90 - 3.97 (2 H, m) , 3.81 - 3.89 (2 H, m) , 2.54 (2 H, m) , 1.89 - 1.99 (2 H, m) , 0.95 - 1.03 (2 H, m) .
Cap-189, etapa d Una solución de Cap-189, etapa c (5.2 g, 34.2 mmol) en 60 mi de MeOH y 50 mi de CH2C12 se enfrió hasta -78 °C y se trató con ozono gas hasta que apareció un color azul claro. La reacción se burbujeó entonces con N2 para eliminar el exceso de ozono gas (desapareció el color azul) y se añadió a la reacción borohidruro sódico (1.939 g, 51.3 mmol) . La reacción se calentó entonces hasta 0 °C. Se añadió acetona a la mezcla para inactivar el borohidruro sódico en exceso. La mezcla se concentró y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 100%) proporcionando Cap-189, etapa d (5.0 g) como un aceite transparente. RMN de ¾ (400 MHz, CDC13) d ppm 3.99 - 4.09 (4 H, m) , 3.68 (4 H, m) , 2.17 - 2.29 (2 H, m) , 1.92 - 2.10 (2 H, m) , 1.77 - 1.88 (2 H, m) , 1.57 - 1.70 (2 H, m) .
Cap-189, etapa e A una solución de Cap-189, etapa d (1 g, 5.31 mmol) en 20 mi de CH2Cl2 se añadió óxido de plata (3.8 g) , cloruro de p-tosilo (1.215 g, 6.38 mmol) y KI (0.176 g, 1.063 mmol). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 días. La mezcla se filtró entonces y el filtrado se concentró. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 60%/Hex) proporcionando Cap-189, etapa e (0.79 g) como aceite transparente. CL-EM: Análisis calculado para [M+Na]+ CisH22 a06S 365.10; encontrado 365.22. RMN de *H (400 MHz, CDCl3) d ppm 7.80 (2 H, d, J=8.28 Hz) , 7.36 (2 H, d, J=8.03 Hz) , 4.11 - 4.17 (1 H, m) , 3.85 -4.06 (5 H, m) , 3.64 - 3.71 (1 H, m) , 3.55 - 3.63 (1 H, m) , 2.47 (3 H, s) , 2.32 - 2.43 (1 H, m) , 2.15 - 2.27 (1 H, m) , 1.70 - 1.89 (2 H, m) , 1.52 - 1.66 (1 H, ra), 1.35 - 1.47 (1 H, m) Cap-189, etapa f A una solución de Cap-189, etapa e (2.2 g, 6.43 mmol) en 40 mi de MeOH se añadió carbonato potásico (1.776 g, 12.85 mmol) . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se diluyó luego con agua y EtOAc . Se separaron las dos capas. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2X) . Las fases orgánicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron con MgS04 y se concentraron. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 0-15%/Hex) proporcionando Cap-189, etapa f (0.89 g, 5.23 mmol, 81%) como aceite transparente. RM de ? (400 MHz, CDC13) d ppm 3.89 - 4.02 (6 H, m) , 3.58 (2 H, dd, J=10.79, 2.51 Hz), 1.69 - 1.89 (6 H, m) .
Cap-189, etapa g A la solución de Cap-189, etapa f (890 mg, 5.23 mmol) en 15 mi de THF se añadió HC1 (15 mi, 45.0 mmol) (3 M acuoso) . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se diluyó luego con éter y se separaron las dos capas. La fase acuosa se extrajo con Éter (2X) y las fases orgánicas reunidas se secaron con MgS04 y se concentraron proporcionando Cap-189, etapa g (0.95 g, que contenía algo de disolventes residuales) . El producto se usó en la etapa siguiente sin purificación. RM de ""? (500 MHz, CDC13) d ppm 3.95 - 4.00 (2 H, m) , 3.85 (2 H, d, J"=10.68 Hz) , 2.21 - 2.28 (2 H, m) , 1.99 - 2.04 (2 H, m) , 1.90 - 1.96 (2 H, m) .
Cap-189, etapa h (Enantiómero- 1 y Enantiómero-2) A una solución de éster trimetílico de (+/-)-benciloxicarbonil-a-fosfonoglicina (1733 mg, 5.23 mmol) en 6 mi de THF a -20 °C se añadió 1 , 1 , 3 , 3 -tetrametilguanidina (0.723 mi, 5.75 mmol) . La mezcla amarillo claro resultante se agitó a -20 °C durante 1 hora, y se añadió Cap-189, etapa g (660 mg, 5.23 mmol) en 3 mi de THF y la mezcla se agitó entonces a temperatura ambiente durante 3 días. La mezcla de reacción se diluyó luego con EtOAc, se lavó con una solución acuosa 0.1 N de HCl . La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2X) y las fases orgánicas reunidas se secaron con MgS04 y se concentraron. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 0-4%/CH2Cl2) proporcionando 960 mg de la mezcla racémica. La mezcla se separó por HPLC quiral (Columna CHIRALPAK® AD, 21 x 250 mm, 10 um) eluyendo con dietilamina al 90%-heptano 0.1% /EtOAc al 10% a 15 ml/min proporcionando Cap-189, etapa h (Enantiómero-1; 300 mg) y Cap-189, etapa h (Enantiomero-2 ; 310 mg) como sólidos blancos. Cap-189, etapa h (Enantiómero-1) : CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C13H22N05 332.15; encontrado 332.2. RMN de XH (500 MHz , CDC13) d ppm 7.29 - 7.41 (5 H, m) , 6.00 (1 H, s ancho), 5.13 (2 H, s) , 3.63 - 3.87 (8 H, m) , 2.84 (1 H, s ancho), 1.84 - 2.02 (2 H, m) , 1.63 - 1.84 (2 H, m) . Cap-189, etapa h (Enantiómero-2) : CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci8H22 05 332.15; encontrado 332.2. burbujeó N2 a través de una solución de Cap etapa h (Enantiómero-2; 290 mg, 0.875 mmol) en 10 mi de MeOH en un frasco de hidrogenación de 500 mi durante 30 minutos. A la solución se añadió (S , S) -Me-BPE-Rh (9.74 mg, 0.018 mmol), y la mezcla se sometió entonces a hidrogenación a 4.136 x 105 Pa durante 6 días. La mezcla se concentró, y la HPLC analítica quiral (columna CHIRALPAK® OJ) indicó que había una pequeña cantidad de material de partida restante y un producto mayoritario. El residuo se separó entonces por HPLC quiral (Columna CHIRALPAK® OJ, 21 x 250 mm, 10 um) eluyendo con dietilamina al 70%-heptano al 0.1/ EtOAc al 30% a 15 ml/min proporcionando Cap- 189, etapa i, (150 mg) como aceite transparente. CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci8H24 05 334.17; encontrado 334.39. RMN de XK (500 MHz, CDC13) d ppm 7.28 - 7.41 (5 H, m) , 5.12 - 5.18 (1 H, m) , 5.09 (2 H, s) , 4.05 (1 H, t, J=10.07 Hz) , 3.75 (3 H, s) , 3.60 - 3.72 (2 H, m) , 3.41 - 3.50 (2 H, m) , 2.10 (1 H, s ancho) , 1.72 - 1.99 (6 H, m) .
A una solución de Cap-189, etapa i (150 mg, 0.450 mmol) en 10 mi de MeOH en un frasco de hidrogenación se añadieron dicarbonato de dimetilo (0.072 mi, 0.675 mmol) y Pd al 10%/C (23.94 mg, 0.022 mmol) bajo una capa de nitrógeno. La mezcla se sometió entonces a hidrogenación en un agitador de Parr a 3.102 x 105 Pa durante la noche. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró proporcionando Cap-189, etapa j (110 mg) como un aceite transparente. CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C12H20 O5 258.13; encontrado 258.19. RMN de XH (500 MHz, CDCI3) d ppm 5.08 (1 H, d, J=9.16 Hz) , 4.03 (1 H, t, J=10.07 Hz) , 3.75 (3 H, s) , 3.60 - 3.72 (5 H, m) , 3.46 (2 H, t, ^7=10.38 Hz) , 2.11 (1 H, s ancho), 1.72 - 1.99 (6 H, m) .
Cap-189 A una mezcla de Cap-189, etapa j (110 mg, 0.428 mmol) en 2 mi de THF y 1 mi de agua se añadió LiOH (0.641 mi, 1.283 mmol) (2 N ac . ) . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se neutralizó con a solución acuosa de HCl 1 N y se extrajo con EtOAc (3X) . Las fases orgánicas reunidas se secaron con MgS04 y se concentraron proporcionando Cap-189 (100 mg) como un sólido blanco. CL-EM: Análisis calculado para [M+Na] + CnH17N a05 266.10; encontrado 266.21. RMN de ?? (500 MHz , CDC13) d ppm 5.10 (1 H, d, J"=9.16 Hz) , 4.02 (1 H, t, J=10.07 Hz) , 3.62 - 3.78 (5 H, m) , 3.49 (2 H, d, J=10.68 Hz) , 2.07 - 2.22 (2 H, m) , 1.72 - 1.98 (6 H, m) .
Cap-190 (Mezcla diastereomérica) A una mezcla de ciclopent-3-enol (2.93 g, 34.8 mmol) e imidazol (5.22 g, 77 mmol) en 30 mi de DMF a 0 °C se añadió t-butildimetilclorosilano (6.30 g, 41.8 mmol) . La mezcla incolora resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron entonces hexanos y agua a la mezcla y se separaron las dos capas. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2X) y las fases orgánicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron con MgS04 y se concentraron. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 2%/Hex) proporcionando Cap- 190, etapa a (6.3 g) como un aceite transparente. RM de 1H (500 MHz, CDC13) d ppm 5.65 (2 H, s), 4.49 - 4.56 (1 H, m) , 2.56 (2 H, dd, J=15.26, 7.02 Hz) , 2.27 (2 H, dd, J=15.26, 3.36 Hz) , 0.88 (9 H, s) , 0.06 (6 H, s) .
Cap-190, etapa b A una solución de Cap-190, etapa a (2.3 g, 11.59 mmol) en 40 mi de CH2C12 a 0 °C se añadió m-CPBA (5.60 g, 16.23 mmol) en 5 porciones. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron entonces hexanos y agua a la mezcla y se separaron las dos capas . La fase orgánica se lavó con 50 mi de NaHS03 al 10% y salmuera, se secó con MgS04 y se concentró. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 3%-6%/Hex) proporcionando Cap-190, etapa b (1.42 g) y su diastereómero trans (0.53 g) como aceites transparentes. Cap-190, etapa b (cis) : RMN de XH (400 MHz, CDC13) d ppm 4.39 -4.47 (1 H, m) , 3.47 (2 H, s) , 2.01 - 2.10 (2 H, m) , 1.93 -2.00 (2 H, m) , 0.88 (9 H, s) , 0.04 (6 H, s) . Cap-190, etapa b (trans) : RMN de H (400 MHz , CDC13) d ppm 4.04 - 4.14 (1 H, m) , 3.47 (2 H, s) , 2.41 (2 H, dd, J"=14.05, 7.28 Hz) , 1.61 (2 H, dd, J=14.18, 6.90 Hz) , 0.87 (9 H, s) , 0.03 (6 H, s) .
Cap-190, etapa c A una solución de (S)-l,2'-metilendipirrolidina (0.831 g, 5.39 mmol) en 15 mi de benceno a 0 °C se añadió gota a gota n-butil litio (4.90 mi, 4.90 mmol) (1 M en hexano) . La solución viró a color amarillo brillante. La mezcla se agitó a 0 °C durante 30 min. Se añadió entonces Cap-190, etapa b ( cis - i somero ; 0.7 g, 3.27 mmol) en 10 mi de benceno y la mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 3 horas. Se añadieron EtOAc y solución acuosa saturada de. NH4Cl a la mezcla, y se separaron las dos capas. La fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó con MgS04 y se concentró. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOac al 15%/Hex) proporcionando Cap-190, etapa c (400 mg) como un aceite amarillo claro. RMN de 1H (500 MHz , CDC13) d ppm 5.84 - 5.98 (2 H, m) , 4.53 - 4.69 (2 H, m) , 2.63 -2.73 (1 H, m) , 1.51 (1 H, dt , J=13.73, 4.43 Hz), 0.89 (9 H, s ) , 0.08 ( 6 H , s) .
Cap-190, etapa d A una solución de Cap-190, etapa c (400 mg, 1.866 mmol) , Mel (1.866 mi, 3.73 mmol) (2 M en éter metil t-butílico) en 5 mi de THF a 0 °C se añadió NaH (112 mg, 2.80 mmol) (60% en aceite mineral) . La mezcla resultante se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se inactivo entonces con agua y se extrajo con EtOAc (3X) . Las fases orgánicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron con MgS04 y se concentraron. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 5%/Hex) proporcionando Cap-190, etapa d (370 mg) como aceite amarillo claro. RM de XH (500 MHz, CDC13) d ppm 5.92 - 5.96 (1 H, m) , 5.87 - 5.91 (1 H, m) , 4.64 - 4.69 (1 H, m) , 4.23 - 4.28 (1 H, m) , 3.32 (3 H, s) , 2.62 - 2.69 (1 H, m) , 1.54 (1 H, dt, J"=13.12, 5.49 Hz) , 0.89 (9 H, s) , 0.07 (5 H, d, J"=1.83 Hz) .
Cap-190, etapa e A una solución de Cap-190, etapa d (400 mg, 1.751 mmol) en 10 mi de EtOAc en un frasco de hidrogenación se añadió óxido de platino(IV) (50 mg, 0.220 mmol) . La mezcla resultante se sometió a hidrogenación a 3.446 x 105 Pa en un agitador de Parr durante 2 horas. La mezcla se filtró entonces a través de CELITE®, y el filtrado se concentró proporcionando Cap-190, etapa e (400 mg) como un aceite transparente. CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci2H2 02Si 231.18; encontrado 231.3. RMN de t?. (500 MHz , CDC13) d ppm 4.10 - 4.17 (1 H, m) , 3.65 - 3.74 (1 H, m) , 3.27 (3 H, s) , 1.43 - 1.80 (6 H, m) , 0.90 (9 H, s) , 0.09 (6 H, s) .
Cap-190, etapa f A una solución de Cap-190, etapa e (400 mg, 1.736 mmol) en 5 mi de THF se añadió TBAF (3.65 mi, 3.65 mmol) (1 N en THF) . El color de la mezcla viró a marrón después de varios minutos y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El componente volátil se eliminó a vacío y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 0-25%/Hex) proporcionando Cap-190, etapa f (105 mg) como aceite amarillo claro. RMN de 1H (500 MHz, CDC13) d ppm 4.25 (1 H, s ancho), 3.84 - 3.92 (1 H, m) , 3.29 (3 H, s) , 1.67 - 2.02 (6 H, m) .
Cap-190 Se sintetizó a continuación Cap-190 a partir de Cap-190, etapa f de acuerdo con el procedimiento descrito para Cap- 182. CL-EM: Análisis calculado para [M+Na] + Ci0H17NNaO5254.10; encontrado 254.3. RM de XH (500 MHz , CDC13) d ppm 5.25 (1 H, d, J=8.55 Hz) , 4.27 - 4.41 (1 H, m) , 3.81 -3.90 (1 H, m) , 3.69 (3 H, s) , 3.26 (3 H, s) , 2.46 - 2.58 (1 H, m) , 1.76 - 1.99 (3 H, m) , 1.64 - 1.73 (1 H, m) , 1.40 - I.58 (1 H, m) , 1.22 - 1.38 (1 H, m) .
A una solución de diisopropilamina (3 mi, 21.05 mmol) en THF (3 mi) a -78 °C bajo hidrógeno se añadió n-butil litio (2.5 M en hexanos; 8.5 mi, 21.25 mmol) . La reacción se agitó a -78 °C durante 10 min y luego se llevó hasta 0 °C durante 25 min. La reacción se enfrió de nuevo hasta -78°C, se añadió tetrahidro-2H-piran-4-carboxilato de metilo (3 g, 20.81 mmol) en THF (3 mi). La reacción se agitó a -78 °C durante 15 min y luego se llevó hasta 0 °C durante 30 min. La reacción se enfrió hasta -78 °C, se añadió yoduro de metilo (1.301 mi, 20.81 mmol). Después de la adición, se retiró del baño frío y se dejó que la reacción se calentara lentamente hasta -25 °C y se agitó durante 22h. Se añadieron acetato de etilo y HC1 acuoso (0.1N), y la fase orgánica se separó y se lavó con salmuera y se secó (MgS04) , se filtró y se concentró a vacío. El residuo se cargó en un cartucho de gel de sílice Thomson eluyendo con acetato de etilo al 10%/hexanos proporcionando un aceite amarillo claro (2.83 g) . RMN de ""? (400 MHz , DMSO-d6) d ppm 3.73-3.66 (m, 2H) , 3.66 (s, 3H) , 3.40-3,30 (m, 2H) , 1.95-1.93 (dm, 1H) , 1.92-1.90 (dm, 1H) , 1.43 (ddd, J = 13.74, 9.72, 3.89, 2H) , 1.18 (s, 3H) .
Cap-191, etapa b A una solución de Cap-191, etapa a (3 g, 18.96 mmol) en tolueno (190 mi) a -78°C bajo nitrógeno se añadió hidruro de diisopropilaluminio (1.5 en tolueno; 26.5 mi, 39.8 mmol) gota a gota. La reacción se continuó agitando a -78 °C durante 1.5h., y se retiró el baño y se agitó durante 18h. La reacción se inactivo con MeOH (20 mi) . Se añadió HC1 (1M, 150 mi) y la mezcla se extrajo con EtOAc (4 x 40 mi) . Las fases orgánicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo se purificó con cromatografía ultrarrápida (gel de sílice; acetato de etilo al 40%/hexanos) proporcionando un aceite incoloro (1.36 g) . RMN de 1H (400 MHz, CDC13) d ppm 3.77 (dt, J = 11.73, 4.55, 2H) , 3.69-3.60 (m, 2H) , 3.42 (s, 2H) , 1.71-1.40 (s ancho, 1H)1.59 (ddd, J = 13.74, 9.72, 4.39, 2H) , 1.35-1,31 (m, 1?) , 1.31-1,27 (m, 1H) , 1.06 (s, 3H) .
Cap-191, etapa c A una solución de D SO (5.9 mi, 83 mmol) en CH2C12 (85 mi) a -78 °C bajo nitrógeno se añadió cloruro de oxalilo (3.8 mi, 43.4 mmol) y se agitó durante 40 min. Se añadió entonces una solución de Cap-191, etapa b (4.25 g, 32.6 mmol) en CH2C12 (42.5 mi) . La reacción se continuó agitando a -78 °C bajo nitrógeno durante 2h. La reacción se inactivo con K2HP04 frío al 20% (ac) (10 mi) y agua. La mezcla se agitó a -25 °C durante 15 min, se diluyó con éter dietílico (50 mi) y se separaron las fases. La fase acuosa se extrajo con éter dietílico (2 x 50 mi) . Las fases orgánicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo se recogió en CH2C12 (4 mi) y se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, eluyendo con CH2C12 ) proporcionando un aceite incoloro (2.1 g) . RMN de 1H (400 MHz, CDCl 3 ) d ppm 9.49 (s. 1H), 3.80 (dt, J = 11.98.4.67, 2H) , 3.53 (ddd, J = 12.05, 9.41, 2.89, 2H), 1.98 (ddd, J = 4.71, 3.20, 1.38, 1H) , 1.94 (ddd, J= 4.71, 3.20, 1.38, 1H) , 1.53 (ddd, J = 13.87, 9.60, 4.14, 2H) , 1.12 (s , 3H) .
Cap-191, etapa d A una solución de Cap-191c (2.5 g, 19.51 mmol) en CHC13 (20 mi) bajo nitrógeno a -25 °C se añadió (R) -2-amino-2 - feniletanol (2.94 g, 21.46 mmol) y se agitó durante 5h. La reacción se enfrió hasta 0 °C, se añadió gota a gota cianuro de trimetilsililo (3.8 mi, 30.4 mmol) . El baño frío se retiró y se dejó agitando la reacción a -25 °C bajo nitrógeno durante 15.5 h. La reacción se trató con HCl 3N (20 mi) y agua (20 mi) , y el producto se extrajo con CHC13 (3 x 50 mi) . Las fases orgánicas reunidas se secaron (NaS04) , se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice; acetato de etilo al 40%/hexanos) proporcionando dos diastereómeros : Cap-191, etapa di (diastereómero 1) como un aceite incoloro que solidificó en un sólido blanco en reposo (3 g) . RM de XH (400 MHz, DMSO-dg) d ppm 7.42-7.26 (m, 5H) , 5.21 (t, J = 5.77, 1H) , 3.87 (dd, J = 8.53, 4.52, 1H) , 3.61-3.53 (m, 1H) , 3.53-3,37 (m, 5H) , 3.10 (d, J = 13.05, 1H) , 2.65 (d, J = 13.05, 1H) , 1.64-1.55 (m, 1H) , 1.55-1.46 (m, 1H) , 1.46-1,39 (m, 1H) , 1.31-1,23 (m, 1H) , 1.11 (s, 3H) . CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + Ci6H23N202 : 275.18; encontrado 275.20. Cap-191, etapa d2 (diastereómero 2) como un aceite amarillo claro (0.5 g) . RMN de *H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 7.44-7.21 (m, 5H) , 4.82 (t, J = 5.40, 1H) , 3.82-3.73 (m, 1H) , 3.73-3.61 (m, 3H) , 3.61-3,37 (m, 5H) , 2.71 (dd, J = 9.29, 4.77, 1H) , 1.72-1.55 (m, 2H) , 1.48-1,37 (m, 1H) , 1.35-1,25 (m, 1H) , 1.10 (s, 3H) . CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C16H23 2O2 : 275.18; encontrado 275.20.
Cap-191, etapa e A una solución de Cap-191, etapa d2 (diastereómero 2) (0.4472 g, 1.630 mmol) en CH2C12 (11 mi) y MeOH (5.50 mi) a 0 °C bajo nitrógeno se añadió tetraacetato de plomo (1.445 g, 3.26 mmol). La reacción se agitó durante 1.5h, se retiró el baño frío y se continuó agitando durante 2Oh. La reacción se trató con un regulador de pH fosfato (pH = 7; 6 mi) y se agitó durante 45 min. La reacción se filtró sobre CELITE®, se lavó con CH2C12 y se separaron las fases. La fase acuosa se extrajo con CH2C12 (3 X 25 mi) , y las fases orgánicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice; acetato de etilo al 15%/hexanos) proporcionando la imina intermedio como un aceite incoloro (181.2 mg) . RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.55 (d, J = 1.00, 1H) , 7.89-7.81 (m, 2H) , 7.61-7.46 (m, 3H) , 4.80 (d, J = 1.00, 1H) , 3.74 (tt, J = 11.80, 4.02, 2H) , 3.62-3.46 (m, 2H) , 1.79-1.62 (m, 2H) , 1.46-1,30 (m, 2H) , 1.15 (s, 3H) .
La imina intermedia se recogió en HCl 6N (10 mi) y se calentó a 90 °C durante 10 días. La reacción se retiró del calor, se dejó enfriar hasta temperatura ambiente y se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 mi) . La fase acuosa se concentró a vacío proporcionando un sólido blanquecino. El sólido se recogió en MeOH y se cargó en un cartucho MCX (6 g) previamente acondicionado, se lavó con MeOH seguido por elución con solución de NH3 2N/MeOH y se concentró a vacío proporcionando un sólido blanquecino (79.8 mg) . RM de ? (400 MHz, DMSO-de) d ppm 14.33-13.51 (s ancho, 1H) , 8.30 (s ancho, 3H) , 3.82-3.75 (m, 1H) , 3.70 (dt, J = 11.80, 4.02, 2H) , 3.58-3.43 (m, 2H) , 1.76-1.60 (m, 2H) , 1.47-1,36 (m, 1H) , 1.36-1,27 (m, 1H) , 1.08 (s, 3H) . CL-EM: Análisis calculado para [M+H] + C8H16N03 : 174.11; encontrado 174.19.
Cap-191 (Enantiómero-1) A una solución de Cap-191, etapa e (0.0669 g, 0.386 mmol) y carbonato sódico (0.020 g, 0.193 mmol) en hidróxido sódico (1M ac. ; 0.4 mi, 0.40 mmol) a 0 °C se añadió cloroformiato de metilo (0.035 mi, 0.453 mmol) gota a gota. La reacción se retiró del baño de enfriamiento y se dejó agitar -25 °C durante 3h. La reacción se lavó con éter dietílico (3 x 20 mi) . La fase acuosa se acidificó con HCl 12 N (pH ~ 1-2) , y se extrajo con acetato de etilo (2 x 20 mi) . Las fases orgánicas reunidas se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron a vacío proporcionando Cap-191 como una película incolora (66.8 mg) . RMN de 1H (400 MHz, DSO-ds) d ppm 13.10-12.37 (s ancho, 1H) , 7.37 (d, J = 9.04, 1H) , 4.02 (d, J = 9.29, 1H), 3.72-3.57 (m, 2H) , 3.56 (s, 3H) , 3.54-3.44 (m, 2H) , 1.65 (ddd, J = 13.61, 9.72, 4.27, 1H) , 1.53 (ddd, J = 13.68, 9.66, 4.27, 1H), 1.41-1,31 (m, 1H) , 1.31-1,22 (m, 1H) , 1.00 (s, 3H) . CL-EM: Análisis calculado para [M+Na] + CioHi7N(¾Na: 254.10; encontrado 254.11.
Cap-192 (Enantiómero-2 ) Se preparó Cap-192 (Enantiómero-2) a partir de Cap-191, etapa di de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación de su Enantiómero Cap-191. una solución de 2- (benciloxicarbonilamino) (dimetoxifosforil ) acetato de metilo (1.45 g, 4.2 mmol) en DCM se añadió DBU (0.70 mi, 4.7 mmol) . La mezlca de reacción se agitó durante 10 minutos, seguido por la adición de una solución de 1 , 3 -dimetoxipropan-2 -ona (0.5 g, 4.2 mmol) en DCM. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La mezcla de reacción se cargó en un cartucho de gel de sílice de 80 g que se eluyó con un gradiente de 18 minutos de EtOAc al 0-70% en hexano proporcionando Cap- 193, Etapa a (0.8 g) como un aceite denso. RM de XH (400 MHz , MeOD) d ppm 7.23 - 7.43 (5 H, m) , 4.99 -5.18 (2 H, m) , 4.16 (2 H, s) , 4.06 (2 H, s) , 3.66 - 3.78 (3 H, s) , 3.26 (3 H, s) , 3.23 (3 H, s) . CL/EM: Análisis calculado para [M+Na] + Ci6H2i Na06 : 346.14; encontrado: 346.12.
Se agitó bajo 3.79 x 105 Pa de H2 durante 18 horas una mezcla del éster Cap- 193, Etapa a (0.5 g) y tetrafluoroborato de ( + ) - 1 , 2 -bis ( (2S , 5S) -2 , 5 -dietilfosfolano) benceno (ciclooctadieno) odio (I) (0.1 g) en MeOH. La mezcla de reacción se concentró hasta sequedad. El residuo se cargó en un cartucho de gel de sílice de 25 g y eluyó con un gradiente de 18 minutos de EtOAc al 0-80% en hexano proporcionando Cap- 193, Etapa b (0.49 g) como un aceite transparente. CL/EM: Análisis calculado para [M+Na]+ Ci6H23NNa06: 348.15; encontrado: 348.19.
Se agitó bajo H2 a temperatura ambiente durante 2 horas una mezcla de reacció de Cap-193, Etapa b (0.16 g) , carbonato de dimetilo (0.13 g) y Pd al 10%/C (0.026 g) en EtOAc . La mezcla de reacción se filtró y se concentró proporcinando carbamato de metilo Cap-193, Etapa c. CL-EM: Análisis calculado para [M+Na] + Ci0Hi9NNaO6 : 272.12; encontrado: 272.07.
Cap-193 A una solución del éster Cap-193, Etapa c en THF (1 mi) y MeOH (0.25 mL) se añadió NaOH 1 N (1 mi) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se concentró y se diluyó con EtOAc y HCl 1 N. La fase acuosa se extrajo con EtOAc, y la fase orgánica reunida se lavó con NaCl saturada, se secó sobre Na2S04 anhidro, se filtró y se concentró proporcionando Cap-193 (0.082 g) . RM de 1H (400 MHz , CDCl3) 5.99 (1 H, d, J=8.56 Hz) , 4.57 (1 H, dd, J=8.56, 3.27 Hz) , 3.67 (3 H, s) , 3.49 (2 H, d, J=4.28 Hz) , 3.45 - 3.44 (2 H, m) , 3.26 - 3.35 (6 H, m) . CL-EM: Análisis calculado para [M+Na] + C9Hi7NNa06 : 258.11; encontrado: 258.13.
Cap-194 Se añadió piperidina (1.0 mi, 10 mmol) a una solución de ácido (S) -2- ( ( (9H-fluoren-9- il)metoxi) carbonilamino) -4-metoxibutanoico (0.355 g, 1 mmol) en DMF (3 mi), y la mezcla se agitó a ta durante 3 horas. Se eliminaron los volátiles y el residuo se repartió entre NaHC03 saturado (acuoso) (5 mi) y EtOAc (5 mi) . La fase acuosa se lavó seguidamente con EtOAc y Et20. Se añadió a la solución acuosa Na2C03 (212 mg, 2.0 mmol) seguido por cloroformiato de metilo (0.16 mi, 2.0 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 16 horas a ta. La mezcla de reacción se acidificó con HCl 1 N (ac.) hasta pH <7 y luego se extrajo con EtOAc (2 x 10 mi) . Las fases orgánicas reunidas se secaron (Na2S04) , se filtraron y concentraron. El residuo se purificó por cromatografía sobre sílice ultrarrápida (EtOAc/hexanos, gradiente desde 20% a 70%) proporcinando ácido (S) -4-metoxi-2- (metoxicarbonilamino) butanoico (Cap-194) (91.5 mg) como aceite viscoso. Tiempo de retención de CL-EM = 0.61 min; m/z 214 [M+Na]+. (Columna: Phenonenex-Luna 3.0 x 50mm S10. Disolvente A = 90% de agua: 10% de metanol : 0.1% de TFA. Disolvente B = 10% de agua :90% de metanol: 0.1% de TFA. Caudal = 4 ml/min. % inicial de B = 0. % final de B = 100. Tiempo de gradiente = 3 min.
Longitud de . RMN de XH (400 MHz, cloroformo-d) d ppm 7.41 (s ancho, 1 H) , 5.74 - 6.02 (m, 1 H) , 4.32 - 4.56 (m, 1 H) , 3.70 (s, 3 H) , 3.54 (t, J=5.0 Hz, 2 H) , 3.34 (s, 3 H) , 1.99 -2.23 (m, 2 H) .
Sección de Ejemplos El análisis de masas de baja resolución se realizó en un sistema Shimadzu LC acoplada con un sistema Waters Micromass ZQ MS (Cond. 1) o Waters Acquity HPLC con detección Waters PDA UV-Vis y Waters ZQ MS {Cond. 2) . El tiempo de retención (Ta) se obtuvo empleando las condiciones siguientes y debe destacarse que los tiempos de retención pueden variar ligeramente entre instrumentos : Condición la Columna = Phenomenex-Luna 4.6 X 30 mm S10 % inicial de B = 0 % final de B = 100 Tiempo de gradiente = 3 min Tiempo de detención = 4 min Caudal = 4 ml/min Longitud de nm Disolvente A = 0.1% de TFA en 10% de metanol/90% de H20 Disolvente B = 0.1% de TFA en 90% de metanol/90% de H20 Condición Ib Columna = Waters Acquity BEH C18; 1.7 µ?? ; 150 X 2.1 mm ID; (a 35 °C) Conservación 10% de B 0-1 min 10-50% de B 0-25 min 50-98% de B 25-33 min Conservación 98% de B 32-35 min 98-10% de B 35.0-35.5 min Conservación 10% de B 35.5-40 min Caudal = 0.35 ml/min Longitud de nm Disolvente A: = 0.05% de TFA en agua Disolvente B: = 0.05% de TFA en CH3CN Condición 1c Columna = Waters Acquity BEH C18; 1, µ?? ; 150 X 2.1 35 °C) Conservación 10% de B 0-lmin 10-60% de B 1-4 min 60-98% de B 4-21 min Conservación 98% de B 21-21.5 min 98-10% de B 21.5-22 min Conservación 10% de B 22-25 min Caudal = 0.35 ml/min Longitud de nm Disolvente A: = 0.05% de TFA en agua Disolvente B:= 0.05% de TFA en CH3CN Condición 2a Columna = Waters Sunfire C18, 4.6 X 150 mm, 3.5 µp? % inicial de B = 10 % final de B = 50 Tiempo de gradiente = 20 min Tiempo de detención = varía de 25 a 40 min Caudal = 1 mi/min Longitud de y 254 nm Disolvente A = 0.1% de TFA en 5% de CH3CN/95% de H20 Disolvente B: = 0.1% de TFA en 95% de CH3CN/95% de H20 Condición 2b Columna = Waters Xbridge fenilo, 4.6 X 150 trun, 3 µ? % inicial de B = 10 % final de B = 50 Tiempo de gradiente = 20 min Tiempo de detención = varía de 25 a 40 min Caudal = 1 ml/min Longitud de y 254 nm Disolvente A = 0.1% de TFA en 5% de CH3CN/95% de H20 Disolvente B: = 0.1% de TFA en 95% de CH3CN/95% de H20 Condición 3 Columna = Phenomenex Luna C18 (2), 3 u, 150 x 4.6mm % inicial de B = 0 % final de B = 100 Tiempo de gradiente = 10 min Caudal= 1 ral/min Longitud de y 256 nm Disolvente A= H20/CH3CN (95:5) + 0.05% de TFA Disolvente B= H20/CH3CN (5:95) + 0.05% de TFA Condición OLI Columna = Phenomenex-Luna 3.0 X 50 mm S10 % inicial de B = 0 % final de B = 100 Tiempo de gradiente = 4 min Tiempo de detención = 5 min Caudal = 4 ml/min Longitud de nm Disolvente A: = 0.1% de TFA en 10% de metanol/90% Disolvente B = 0.1% de TFA en 90% de metanol/90% de Condición 0L2 Columna = Phenomenex-Luna 50X 2 mm 3 u % inicial de B = 0 % final de B = 100 Tiempo de gradiente = 4 min Tiempo de detención = 5 min Caudal = 0.8 ml/min Temp. del horno = 40 °C Longitud de nm Disolvente A = 0.1% de TFA en 10% de acetonitrilo/90% de H20 Disolvente B = 0.1% de TFA en 90% de acetonitrilo/10% de H20 Condición OL3 Columna = Waters Acquity BEH C18; 1.7 µp? ; 150 X 2.1 mm ID; (a 35 °C) Conservación 10% de B 0-lmin 10-60% de B 1-4 min 60-98% de B 4-21 min Conservación 98% de B 21-21.5 min 98-10% de B 21.5-22 min Conservación 10% de B 22-25 min Caudal = 0.35 mi/min Longitud de nm Disolvente A = 0.05% de TFA en agua Disolvente B = 0.05% de TFA en CH3CN Condición OL4a Columna = Waters Sunfire C18, 4.6 X 150 mm, 3.5 µp? % inicial de B = 10 % final de B = 100 Tiempo de gradiente = 15 min Tiempo de detención = 18 min Caudal = 1 mi/min Longitud de y 254 nm Disolvente A = 0.1% de TFA en 5% de CH3CN/95% de H20 Disolvente B = 0.1% de TFA en 95% de CH3CN/95% de Condición OL4b Columna = Waters Xbridge fenilo, 4.6 X 150 mm, 3 µp? % inicial de B = 10 % final de B = 50 Tiempo de gradiente = 15 min Tiempo de detención = 18 min Caudal = 1 ml/min Longitud de y 254 nm Disolvente A = 0.1% de TFA en 5% de CH3CN/95% de H20 Disolvente B = 0.1% de TFA en 95% de CH3CN/95% de H20 Condición OL4c Columna = Waters Aquity BEH C18; 1.7 µp?; 50 X 2.1 (a 35°C) Conservación 2% de B 0-1 min 2-98% de B 1-1.5 min 98% de B 1.5-2,2 min Caudal = 0.8 ml/min Longitud de nm Disolvente A = 0.05% de TFA en agua Disolvente B = 0.05% de TFA en CH3CN Condición 0L5a Columna = Phenomenex-Luna 3.0 X 50 mm S10 % inicial de B = 0 % final de B = 100 Tiempo de gradiente = 3 min Tiempo de detención = 4 min Caudal = 4 ml/min Longitud de nm Disolvente A = 0.1% de TFA en 10% de metanol/90% de H20 Disolvente B = 0.1% de TFA en 90% de CH3CN/10% de Condición OL5b Columna = Phenomenex-Luna 3.0 X 50 mm S10 % inicial de B = 0 % final de B = 100 Tiempo de gradiente = 3 min Tiempo de detención = 4 min Caudal = 4 ml/min Longitud de nm Disolvente A = NH4OAc 10 mM en 5% de metanol/95% H20 Disolvente B = NH40Ac 10 mM en 95% de CH3CN/5% de H20 Condición D4 Columna = Phenomenex-Luna 3.0 X 50 mm S10 % inicial de B = 0 % final de B = 100 Tiempo de gradiente = 3 min Tiempo de detención = 4 min Caudal = 4 ml/min Longitud de nm Disolvente A = 0.1% de TFA en 10% de metanol/90% de H20 Disolvente B = 0.1% de TFA en 90% de metanol/90% de Condición J4 Columna = Phenomenex-Luna 4.6 X 50 mm S10 % inicial de B = 0 % final de B = 100 Tiempo de gradiente = 4 min Tiempo de detención = 5 min Caudal = 4 ml/min Longitud de nm Disolvente A = 0.1% de TFA en 10% de metanol/90% de Disolvente B = 0.1% de TFA en 90% de metanol/90% de Condición PY1 Columna = PHENO ENEX 2.0 x 50 mm, 3 im % inicial de B = 0; % final de B = 100 Tiempo de gradiente = 4 min; Tiempo de detención = 5 min Caudal = 4 ml/min; Longitud de nm Disolvente A = 0.1% de TFA en 10% de metanol/90% de agua Disolvente B = 0.1% de TFA en 90% de CH3CN/10% de agua Temperatura del horno = 40 c Ejemplo 1, Etapa a •MSA La amida la (CH3S03H) se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito para la síntesis de su enantiómero en la patente O2004/052850.
Ejemplo 1, Etapa b Un matraz de fondo redondo de 1 1 equipado con una entrada para nitrógeno, un agitador aéreo, un termoacoplador y un manto de calentamiento se cargó con 50 g (225 mmol) de la amida la y 250 mi de isopropanol. La suspensión resultante se cargó después con 252 mi de NaOEt al 23% en peso en EtOH (2.68 M, 675 mmol, 3.0 eq. ) y se agitó a 50°C durante alrededor de 1 hora. lh. La mezcla se cargo con 12.2 mi (675 mmol, 3 eq.) de agua y se calentó a 60°C. La suspensión resultante se dejó agitar a 60°C durante alrededor de 18 horas. 18h. La suspensión se enfrió a temperatura ambiente y se cargó con 250 mi de agua y con 98.2 g (450 mmol, 2.0 eq.) de di- t-butildicarbonato . Se eliminaron el etanol y el isopropanol por medio de destilación en el vacío y la mezcla acuosa se enfrió a 0°C. La mezcla se neutralizó con 76 mi (456 mmol) de HCl acuoso 6M manteniendo mientras una temperatura interna < 5°C. El producto se extrajo con 500 mi de MTBE y la capa orgánica rica se lavó con 100 mi de agua. La solución transparente se concentró hasta 150 mi por medio de destilación en el vacío y la suspensión resultante se cargó con 600 mi de heptano manteniendo mientras una temperatura interna > 45°C. La suspensión se enfrió a ta durante alrededor de 30 min y se dejó agitar a ta durante alrededor de 2 horas. ?1 producto se filtró, se lavó con 250 mi de heptano: MTBE en una proporción de 4:1 y se secó a vacío a 70 °C dando 40.5 g (178 mmol, rendimiento del 79%, 99.8 AP a 205 nm) de ácido Ib: RMN de XH (400 MHz, DMS0-d6) d 12.48 (s, 1H) , 4.02-3.80 (m, 1H) , 3.45-3.15 (m, 1H) , 2.40-2.19 (m, 1H) , 2.19-2.0 (m, 1H) , 1.70-1.50 (m, 1H) , 1.50-1,20 (ra, 9H) , 0.83-0.60 (m, 1H) , 0.33-0.55 (m, 1H) ; RM de 13C (100 MHz, DMSO-d6) d 173.7, 173.2, 155.0, 154.3, 79.4, 60.5, 60.2, 37.6, 32.6, 31.8, 28.4, 28.2, 15.6, 15.2, 14.4; HRMS calculado para CnHi8N04 (M + H; IEP+) : 228.1236. Encontrado: 228.1234.
Síntesis alternativa de ácido Ib En un reactor de 500 ml se disolvió ester de reactor lb.l (comercialmente disponible, 17.5 g, 1.00 equiv.) en THF (87.5 ml) . La solución resultante se enfrió a -75°C y DIBAL-H 1.5 M en tolueno (61.3 ml , 1.5 equiv.) se cargó manteniendo mientras la temperatura por debajo de -70°C. La solución resultante se agitó a -70 °C durante 1 hora. Se cargó ácido teifluoroacético (2.3 ml, 0.5 equivalentes) durante 10 minutos manteniendo la temperature interna por debajo de -70 °C. Se cargó ácido trifluoroacético manteniendo mientras la temperatura por debajo de -70°C. La solución resultante se agitó a -70°C durante 1 hora. Se cargo ácido trifluoroacético (2.3 mi, 0.5 equiv. ) durante 10 minutos manteniendo la temperatura interna por debajo de -70°C. Se cargó después trietilamina (51.3 mi, 6 equiv.) durante 15 minutos manteniendo la temperatura interna por debajo de -70°C. Se cargó anhídrido trifluoroacético (11.2 mi, 1.3 equiv.) durante 10 minutos manteniendo la temperatura interna por debajo de -70°C. La reacción se dejó después calendar a temperatura ambiente durante 90 minutos y se desactivó por medio de adición inverse a una solución de monohidrato de ácido cítrico acuoso al 20% (96.6 g, 1.5 equiv.) manteniendo mientras una temperatura por debajo de 15°C. La mezcla resultante se agitó a temperature ambiente durante 2 horas después se descartó la fase acuosa inferior. La fase orgánica rica en producto se lavó dos veces con 70 mi de bicarbonate de sodio acuoso saturado. El bicarbonato de sodio sólido (1.7 g, 0.1 g/g Ejemplo 146) se cargó y la solución se cambió de disolvente en tolueno puro a vacío proporcionando Ib.2 como una solución en 2L/kg de tolueno.
Se filtró a través de filtro pulidor una solución de Ib.2 (16.5 g teóricos del Ejemplo 151) en 33 mi de tolueno en un reactor de 250 mi. Se cargó después trifluorotolueno (50 mi) y cloroyodometano (43.2 g, 4.0 equiv.) y la solución resultante se enfrió a -20°C. Se cargó dietilcinc 1.1 M en tolueno (111 mi, 2.0 equiv.) manteniendo mientras la temperatura ambiente por debajo de -8°C. La solución resultante se agitó a -15 a -20°C durante 14 horas. La mezcla de reacción se calentó a 0°C después se desactivó por medio de adición inversa a una solución de ácido cítrico acuosa de 20% en peso (135.7 g, 2.3 equiv.). El reactor se aclaró con tolueno (82 mi) y el aclarado se añadió a la solución de desactivación. La mezcla bifásica resultante se agitó durante 20 minutos después de que la fase acuosa inferior se separa y descarta. La fase orgánica rica se lavó dos veces con 60 mi de NaCl acuoso al 13% en peso seguida por 60 mi de NaHC03 saturado. La solución resultante se sometió a cambio de disolvente en IPA puro al vacío proporcionando Ib.3 como una solución en 10 1/kg de IPA.
Se cargó un reactor de 250 mi con una solución de Ib.3 (147 mi, 14.7 g teóricos de ester lb.l) en IPA. La solución se calentó a 35°C y se añadió hidróxido de sodio acuoso (6.2 g, 3.0 equiv.) . La mezcla resultante se agitó a 35°C durante toda una noche. Se añadió agua (44 mi) y los solventes orgánicos se retiraron al vacío. Se añadió MTBE (145 mi] y el pH se ajustó a 3.0 con HCl acuoso 6 N. La fase acuosa se separó y descartó. El producto orgánico rico se lavó con 60 mi de agua y después se secó azeotrópicamente al vacío por medno de adición constante de volumen de MTBE. La solución se concentró a 55 mi y se agitó a 50°C durante 30 minutos. La solución se enfrió a temperatura ambiente durante 1 hora tiempo durante el que se formó una suspensión. Se cargó heptano (90 mi) durante 90 minutos y la suspensión resultante de dejó madurar durante 1 hora. Los sólidos se recogieron en un vidrio poroso de tamaño medio y se lavaron con 22.5 mi de heptano :MTBE 3:1 seguido por 22.5 mi de heptano. El sólido canela se secó en un horno al vacío de a 50°C proporcionando 5.48 g (46%) de ácido Ib con pureza de LCAP de 94.9. El ácido en bruto Ib se disolvió en 55 mi de MTBE, MTBE a 50 °C. La solución resultante se concentró a 20 mi y se enfrió a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió después heptano (33 mi) durante 90 minutos. Los sólidos resultantes se recogieron en un vidrio poroso de tamaño medio, se lavó con heptano (15 mi), y se secó en un horno al vacío a 50°C proporcionando 4.45 g de ácido Ib en forma de un polvo canela (98.8 AP, pureza quiral del 98.8%, 37% a partir del éster lb.l) .
Ejemplo 1, Etapa c Un matraz de fondo redondo de 250 mi equipado con una entrada para nitrógeno, un agitador aéreo y un termoacoplador se cargó con 20.0 g (88.0 mmol, 2.11 eq.) de ácido Ib, 16.5 g (41.7 mmol , 1 eq.) de 1.1 ' - (bifenil -4 , 4 ' -diil) bis (2-bromoetanona) , 110 mi de acetonitrilo y 55 mi de tetrahidrofurano . Después, se cargó diisopropiletilamina (15.1 mi, 86.6 mmol, 2.08 eq. ) manteniendo una temperatura interna < 25 °C. La mezcla se dejó agitar a 20-25 °C durante aproximadamente 5 horas y se cargó con 83 mi de acetato de etilo y 90 mi de NaCl acuoso al 13% en peso. Se separó la mezcla bifásica resultante y la fase orgánica rica se lavó con 90 mi adicionales de NaCl acuoso al 13% p. La capa orgánica rica se diluyó con 20 mi de tetrahidrofurano y se lavó con una mezcla acuosa de NaHC03 y NaCl (45 mi de NaHC03 acuoso 1M y 45 mi de 26% de NaCl acuoso) . La capa orgánica rica se intercambió con disolvente en tolueno mediante destilación al vacío hasta obtener un volumen diana de aproximadamente 160 mi. La solución en tolueno resultante del cetoéster le se usó como tal en la etapa siguiente.
[Nota: para la preparación de 1.11 - (bifenil -4 , 41 -diil ) bis ( 2 -bromoetanona) , véase el proceso en la solicitud de patente O2009/020825] .
Ejemplo 1, Etapa d La anterior solución en tolueno de cetoéster le se cargó con 64.2 g (832.9 mmol, 20.0 eq.) de NHOAc y se dejó agitar a 90-100 °C durante aproximadamente 18 horas. Se enfrió hasta 60 °C y se cargó con 255 mi de AcOH:agua en una proporción de 2:1. Se separó la mezcla bifásica resultante y la capa de tolueno se lavó con 58 mi de AcOH ragua en una proporción de 1:1. Las capas acuosas ricas se combinaron y el tolueno residual se eliminó mediante destilación al vacío. La solución acuosa se diluyó con 60 mi de metanol y se calentó hasta 50-60 °C. Se cargó con 106 mi (1060 mmol, 25.4 eq.) de NaOH 10 N manteniendo una temperatura interna < 60 °C. A continuación, la suspensión espesa resultante se enfrió hasta la temperatura ambiente. La suspensión espesa se filtró y se lavó con 100 mi de agua, seguidos por 400 mi de metanol, dando 26.1 g de imidazol bruto Id. El imidazol Id bruto húmero se cargó después en un matraz de fondo redondo de 500 mi equipado con una entrada para nitrógeno, un agitador aéreo y un termoacoplador . Se cargó con 165 mi de N-metil-2-pirrolidinona y se calentó hasta 50°C. La solución transparente resultante se cargó con 30 mi de metanol y se dejó agitar a 50°C durante aproximadamente 18 horas. La suspensión espesa resultante se cargó 130 mi adicionales de metanol manteniendo una temperatura interna > 45 °C. La suspensión espesa se dejó agitar a 50°C durante aproximadamente 30 minutos y se enfrió hasta la temperatura ambiente. La suspensión espesa se filtró y los sólidos se lavaron con 90 mi de metanol :N-metil-2 -pirrolidinona en una proporción de 1:1, seguido por 200 mi de metanol. Los sólidos se secaron al vacío a 70 °C, dando 22.7 g (31.5 mmol, rendimiento del 76%, 95 AP a 254 nm ) d imidazol Id: RMN de H (400 MHz, D S0-d6) d ppm 11.95 (s, 2H) , 7.89-7.76 (d, 4H) , 7.74-7.60 (d, 4H) , 7.50 (s, 2H) 4.62 (s, 2H) , 3.55-3,30 (m, 2H) , 2.45-2,20 (m, 4H) , 1.70-1.59 (m, 2H) , 1.59-0.90 (s, 18H) , 0.83-0.69 (m, 2H) , 0.65-0.49 (m, 2H) ; HRMS calculado para¦ C38H45 604 (M + H; ESI+) : 649.3502; Encontrado: 649.3524.
Ejemplo 1, Etapa e Un matraz de fondo redondo de 250 mi equipado con una entrada para nitrógeno y un agitador aéreo se cargó con 7.0 g (10.8 mmol) del imidazol id, 105 mi de metanol y 3.7 mi (20.8 mmol, 1.93 eq.) de HC1 5.6M en isopropanol. La solución resultante se trató con carbón y se filtró. El carbón se lavó con 140 mi de metanol y se combinó con el filtrado. La corriente orgánica rica se concentró hasta aproximadamente 70 mi y se cargó en un matraz de fondo redondo equipado con una entrada para nitrógeno, un agitador aéreo y un termoacoplador . La solución se cargó después con 14.75 mi (88.5 mmol, 8.2 eq.) de HC1 6M y se dejó agitar a 50 °C. Después de aproximadamente 12 horas a 50 °C, la mezcla se carbón con 50 mi de isopropanol y la suspensión espesa resultante se dejó agitar a 50°C durante 1 hora. La suspensión espesa se enfrió hasta la temperatura ambiente y se envejeció durante aproximadamente 15 horas. El producto se filtró y se lavó con 35 mi de isopropanol -.metanol a 4:1, seguido por 70 mi de isopropanol. Los sólidos se secaron a 55 °C al vacío, dando 5.3 g (8.9 mmol , rendimiento del 83%, 99.8 AP a 254 nm ) de pirrolidina le/4HCl : RMN de XH (400 MHz, DMS0-d6) d 14.00 9.38 (s ancho, 8H) , 8.31 (s, 2H) , 8.06-7.96 (d, 4H) , 7.94-7.84 (d, 4H) , 5.05-4.89 (dd, 2H) , 3.55-3.42 (m, 2H) , 2.87-2.69 (dt, 2H) , 2.64-2.53 (dd, 2H) , 2.05-1.89 (m, 2H) , 1.17-0.98 (m, 2H) , 0.96-0.82 (dd, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, DMS0-d6) d 140.0, 139.3, 133.6, 127.2, 126.6, 125.8, 116.6, 49.8, 34.3, 29.9, 15.2, 5.3; HRMS calculado para C28H29 6 (M + H; ESI+) 449.2454; Encontrado: 449.2470.
Ejemplo 1, Etapa f Un reactor con camisa de 250 mi equipado con una entrada para nitrógeno, un agitador aéreo y un termoacoplador se cargó con 4.24 g (24.2 mmol, 2.4 eq.) de ácido (S)-2- (metoxicarbonilamino) -3 -metilbutanoico (25.21 mmol, 2.5 eq.), 1-hidroxibenzotriazol monohidrato, 4.55 g (23.73 mmol , 2.35 eq.) de clorhidrato de 1- (3-dimetilaminopropil) -3-etilcarbodiimida y 60 mi de acetonitrilo . La mezcla se agitó durante aproximadamente 1 hora y se cargó con 6 g (10.1 mmol) de pirrolidina le/4HCl. La suspensión espesa resultante se enfrió hasta 10 °C y se cargó con 7.92 mi (45.41 mmol, 4.5 eq.) de diisopropiletilamina . La mezcla se dejó calentar hasta la temperatura ambiente y se agitó durante aproximadamente 19 horas. La solución orgánica resultante se lavó con 36 mi de NaCl acuoso al 13% en peso. La capa orgánica rica se cargó con 12 mi de acetonitrilo y se lavó con 36 mi de una solución acuosa que contenía NaCl acuoso al 13% en peso de NaOH 1M. Después, la capa orgánica rica se cargó con 12 mi de metanol y se calentó hasta 50°C. se añadió agua (60 mi) durante un periodo de 2 horas y la suspensión espesa resultante se enfrió hasta la temperatura ambiente y se envejeció durante aproximadamente 2 horas. Los sólidos se filtraron, se lavaron con 36 mi de acetonitrilo : agua a 1:1 y se secaron al vacío. Un reactor con camisa de 250 mi equipado con una entrada para nitrógeno, un agitador aéreo y un termoacoplador se cargó con los sólidos anteriores y se disolvió con 240 mi de etanol de grado SDA3A. La solución se concentró hasta aproximadamente. 50 mi mediante destilación al vacío y se cargó con 4.24 mi (23.19 mmol, 2.30 eq.) HCl 5.47 M en isopropanol y 30 mi adicionales de etanol SDA3A. La mezcla se concentró hasta aproximadamente 50 mi, se diluyó con 40 mi de etanol SDA3A y se trató con carbón. El carbón se filtró y se lavó con 90 mi de etanol SDA3A. El filtrado y lavado ricos se combinaron y se concentraron hasta 40 mi. Se cargaron 16 mi de acetato de etilo y se calentó hasta 40 °C. Se cargaron 60 mg de cristales de semilla de amida 1Í/2HC1 y se agitó a 40 °C durante 1 hora. Se cargaron 68 mi adicionales de acetato de etilo durante 1.5 horas manteniendo una temperatura interna de 40 °C . La suspensión espesa resultante se agitó a 40 °C durante aproximadamente 18 horas y se enfrió hasta la temperatura ambiente. La suspensión espesa se filtró y se lavó con 24 mi de acetato de etilotetanol SDA3A en una proporción de 3:1 y 30 mi de acetato de etilo. Los sólidos se secaron a 50 °C al vacío, dando 6.83 g (8.17 mmol, rendimiento del 81%, 99.5 AP a 300 nm ) de amida 1Í/2HC1: R de ? (600 MHz, DMSO-de) d 15.51 (s, 2H) , 14.95 (S, 2H) 8.19 (s, 2H) , 8.05 (d, 4H) , 7.91 (d, 4H) , 7.25 (d, 2H) , 5.18 (t, 2H) , 4.44 (t, 2H) , 3.77 (s, 2H) , 3.55 (s, 6H) , 2.50 (m, 2H) , 2.39 (m, 2H) , 2.24 (m, 2H) , 1.91 (m, 2H) , 0.95 (m, 2H) , 0.92 (d, 6H) , 0.81 (d, 6H) , 0.75 (s, 2H) ; RMN de 13C (125 MHz, DMS0-de) d 172.7, 156.9, 148.5, 139.1, 131.7, 127.1, 126.5, 125.9, 115.1, 57.8, 54.5, 51.5, 37.3, 32.9, 29.2, 19.7, 17.5, 17.5, 15.7; Análisis Elemental Calculado (corregido para 0.81% de agua): C = 59.86%, H = 6.30%, N = 13.29%, Cl = 8.41%; Encontrado: C = 59.99%, H = 6.27%, N = 13.12%, Cl = 8.42%.
Preparación de la siembra para la amida lf/2HC1 : La amida lf se preparó de acuerdo con el procedimiento básico indicado en lo que antecede usando 504 mg (0.8 mmol) de pirrolidina le.4HCl. Una vez finalizada la reacción, la solución rica en acetonitrilo se lavó con 3 mi de NaCl acuoso al 13%, 2 x 3 mi de una solución acuosa que contiene 13% de NaCl y NaOH 1M y 3 mi de NaCl acuoso al 13%. La capa orgánica rica se concentró hasta obtener un residuo y se diluyó con 10 mi de acetonitrilo. La mezcla turbia se filtró y el filtrado transparente se concentró hasta un residuo. El residuo se diluyó con 10 mi de etanol SDA3A y se cargó con 2.1 mi (1.9 mmol, 2.4 eq.) de HCl 0.88M en etanol. La mezcla se concentró hasta obtener un residuo y se diluyó con 1.8 mi de isopropanol. La solución resultante se calentó hasta 50 °C y se dejó agitar durante aproximadamente 18 horas. La suspensión espesa resultante se enfrió hasta la temperatura ambiente y se lavó con acetona : etanol en una proporción de 2:1, dando 476 mg (0.57 mmol, 78%) de la amida lf/2HCl.
[Nota: El ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) -3 -metilbutanoico se adquirió en Flamma] Ejemplos 1 y 2 Una muestra de la amida llf/2HCl (106.9 mg) no tenía base (columna 2 g MCX; lavado con MeOH; elución con NH3/MeOH 2 N) y se secó al vacío. Se añadió NCS (0.0195 g, 0.146 mmol) hasta una solución en DMF (2.5 mi) del material resultante y se calentó con un baño de aceite a 50 °C durante 16.5 horas. La mayor parte del componente volátil se eliminó a vacío y el residuo se disolvió en eOH y se sometió a purificación HPLC de fase inversa (MeOH/agua/TFA; columna: Phenomenex Luna, 30 X 100 mm S10 Axia) recuperando las sales en TFA del Ejemplo 1 (espuma blanca; 56.1 mg) y del Ejemplo 2 (espuma blanca; 22.3 mg) . Ejemplo -1: RMN de XK (D S0-d6, d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 12.61 (br s, 1H) , 8.13 (s, 1H) , 7.93 (d, J" = 8.5, 2H) , 7.90-7.86 (m, 4H) , 7.82 (d, J = 8.5, 2H) , 7.27 (d, J = 8.3, 1H) , 7.17 (d, J = 8.5, 1H) , 5.02-4.94 (m, 2H) , 4.44-4.38 (m, 1.80H), 4.31 (app s ancho, 0.2H), 3.75 (m, 1H) , 3.62 (m, 1H) , 3.55 (s, 3H) , 3.54 (s, 3H) , 2.56-2.50 (xm' parcialmente solapado con señal disolvente, 1H) , 2.41-2,23 (m, 3H) , 2.17-2.09 (m, 1H) , 2.07-2.00 (m, 1H) , 1.97-1.91 (m, 1H) , 1.88-1.81 (m, 1H) , 1.01-0.81 (m, 15H) , 0.71 (m, 1H) . CL (Cond. 2a y 2b): índice de homogeneidad > 95%. CL/EM (Cond. 1A) : Tr = 1.80 min. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C42H5oClN806: 797.35; encontrado 797.33. Ejemplo -2: RMN de H NMR (DMSO-d6, d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 7.86 (d, J = 8.6, 4H) , 7.80 (d, J" = 8.5, 4H) , 7.17 (d, J = 8.5, 2H) , 4.96 (dd, J" = 7.5, 6.0, 2H) , 4.40 (app t , J = 7.8, 2H) , 3.61 (m, 2H) , 3.54 (s, 6H) , 2.33-2,23 (m, 4H) , 2.09-1.98 (m, 2H) , 1.90-1.82 (m, 2H) , 1.01-0.82 (?t?' solapado y dos xd' a 0.96 ppm y 0.87 ppm con J = 6.8 y J = 6.5, respectivamente; 14H) ; 0.71 (m, 1.7H), 0.62 (m, 0.3H) . CL (Cond. 2a y 2b) : índice de homogeneidad > 95%. CL/EM (Cond. 1A) : Tr = 2.79 min. CL/EM : Anal. Calculado para [M+H] + C42H49CI2N8O6 : 831.32; encontrado 831.26. emplo 3, Etapa Para la síntesis de la amida 3a/2HCl, véase el procedimiento de la solicitud de patente WO2009/020825.
Ejemplo 3 A una solución de la amida 3a (32 mg, 0.043 mmol) en ácido acético (2 mi) se añadieron 2 eq. de bromo 1M en ácido acético y la reacción se agitó durante 30 minutos. Se añadió 1 eq. adicional de bromo (se formaron sólidos) y la reacción se neutralizó con 5% de NaHC03 y se extrajo con EtOAc (2 x 10 mi) . Los extractos combinados se lavaron con una solución de Na2S203 saturado y salmuera y se concentraron. El residuo se secó en alto vacío, dando el Ejemplo 3 (41 mg) . CL/EM (Cond. J4 ) : Tr 3.54 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C4oH 9Br2 806 : 897.22; encontrado 897.28.
A una mezcla de la amida 3a (197 mg, 0.243 mmol) y N-clorosuccinimida (39 mg, 0.292 mmol) en acetonitrilo (2 mi) se añadió diisopropiletilamina (100 ul, 74.2 mg, 0.574 mmol) y se agitó durante la noche. Después, a la mezcla de reacción se añadió una porción adicional de N-clorosuccinimida (66 mg, 0.494 mmol) y se agitó hasta que se confirmó mediante análisis HPLC el consumo del material de partida. Después, la mezcla de reacción bruta se purificó mediante HPLC de fase inversa (Disolvente A = H20/CH3CN (95:5) + 0.05% de TFA; Disolvente B = H20/CH3CN (5:95) + 0.05% de TFA; Columna: Luna C18, 5u, 100 x 21.5 mm; Caudal: 20 ml/min) , dando las sales en TFA del Ejemplo 4 (polvo amorfo amarillento, 60 mg) y del Ejemplo 3 (polvo amorfo amarillento, 115 mg) . Ejemplo 5: CL/EM (Cond. 3) : Tr = 6.13 min. RMN de K (DMS0-d6, TMS , 600 MHz ) : 8.16 (s, 1H) , 7.95-7.91 (m, 7H) , 7.85 (d, J = 8.8, 2H) , 7.35 (d, J = 8.4, 1H) , 7.32 (d, J = 8.4, 1H) , 5.19 (t, J = 7.3, 1H) , 5.05 (m, 1H) , 4.15 (t, J = 7.7, 1H) , 4.08 (t, J = 8.1, 1H) , 3.88-3.81 (m, 4H) , 3.56 (s, 6H) , 2.43 (m, 1H) , 2.21-2.11 (m, 4H) , 2.08-2.05 (m, 2H) , 1.97 (m, 3H) , 0.91 (d, J = 6.5, 3H) , 0.87 (d, J = 7.0, 3H) , 0.85 (d, J = 7.0, 3H) , 0.80 (d, J = 6.6, 3H) . EMAR : Calculado para [M+H]+ C4oH5oCl 806 : 773.3542 ; encontrado 773.3530. Ejemplo 4: CL/EM (Cond. 3) : Tr = 8.61 min. RMN de 1H (DMSO-d6, TMS, 600 MHz) : 7.89 (d, J = 8.3, 4H) , 7.83 (d, J = 8.3, 4H) , 7.33 (d, J = 8.4, 2H) , 5.05 (m, 2H) , 4.09 (t, J = 8.3, 2H), 3.84-3.81 (m, 4H) , 3.56 (s, 6H) , 2.24-2.15 (m, 4H) , 2.00-1.95 (m, 6H), 0.91 (d, J" = 6.7, 6H) , 0.87 (d, J = 6.6, 6H) . EMAR : calculado para [M+H] + C^^gClsNsOg : 807.3152; encontrado 807.3138.
Ejemplos 6 y 7 Ejemplo 7: R = Cl Ejemplo 6, Etapa a A una mezcla de pirrolidina le/4HCl (0.104 g, 0.174 mmol) , HATU (0.133 g, 0.349 mmol) y Cap-193 (0.082 g, 0.349 mmol) en DMF se añadió DIEA (0.183 mi). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción se purificó por HPLC preparatoria (columna Phenomenex AXIA 5 u, gradiente de 35 min a partir de B al 0-90%. A = H20/CH3CN/NH4OAc 10 mM, 95:5. B = CH3CN/H20/NH40Ac 10 mM 95:5) proporcionando Ejemplo 6, Etapa a (0.064 g) . CL/EM: anal. caled. para [M+H] + C46H59 8O10 : 883.43; encontrado: 883.26. RM de XH (400 MHz, MeOD) ppm 7.90 (2 H, s) , 7.78 -7.86 (8 H, m) , 5.13 (2 H, dd, J=9.2, 6.9 Hz) , 4.96 (2 H, d, J=5.0 Hz) , 3.73 - 3.79 (2 H, m) , 3.63 (6 H, s) , 3.39 - 3.49 (6 H, m) , 3.35 (1 H, d, J=4.8 Hz) , 3.32 - 3.34 (1 H, m) , 3.30 (6 H, s) , 3.15 (6 H, s) , 2.66 (2 H, dd, J=13.5, 9.4 Hz) , 2.37 - 2.51 (4 H, m) , 2.02 - 2.09 (2 H, m) , 1.03 - 1.14 (2 H, m) , 0.81 - 0.93 (2 H, m) .
Ejemplos 6 y 7 A una solución de Ejemplo 6, Etapa a (0.057 g) en DMF se añadió NCS (10.34 mg, 0.077 mmol) . La mezcla de reacción se calentó a 60°C durante 3 horas. La mezcla de reacción se purificó por HPLC preparatoria (Phenomenex AXIA 5 u columna de 30 x 100 mm, gradiente de 20 min desde 0-100% de B. A = H2O/CH3OH/TFA 90:10:0.1. B = CH3OH/H20/TFA 90:10:0.1) proporcionando Ejemplo 6 (0.022 g) y Ejemplo 7 (0.017 g) . Ejemplo 6: CL (Cond. J5) : Tr = 3.46 min. CL/EM: anal, caled, para [M+H] + C46H58ClN8Oio : 917.39; encontrado: 917.12. RMN de XH (400 MHz, MeOD) ppm 7.87 - 7.91 (1 H, m) , 7.77 - 7.86 (8 H, m) , 5.14 (1 H, dd, J=9.2, 6.9 Hz) , 5.05 (1 H, dd, J=8.1, 6.3 Hz) , 4.96 (2 H, t, J=5.7 Hz) , 3.73 - 3.79 (1 H, m) , 3.67 -3.72 (1 H, m) , 3.57 - 3.66 (6 H, m) , 3.32 - 3.51 (8 H, m) , 3.29 (6 H, d, J=1.8 Hz) , 3.19 (3 H, s) , 3.12 - 3.16 (3 H, m) , 2.60 - 2.72 (1 H, m) , 2.32 - 2.54 (5 H, m) , 2.02 (2 H, d, J=6.3 Hz) , 1.00 - 1.19 (2 H, m) , 0.88 (1 H, s ancho) , 0.82 (1 H, s ancho) . Ejemplo 7: CL (Cond. PY1) : Tr = 4083 min. CL/EM: anal. caled. para [M+H] + CíeHsgCls eOxo : 951.35; encontrado: 951.09. RMN de XH (400 MHz, MeOD) ppm 7.74 - 7.84 (8 H, m) , 5.05 (2 H, t, J=7.2 Hz) , 4.95 (2 H, d, J=5.5 Hz) , 3.66 - 3.72 (2 H, m) , 3.63 (6 H, s) , 3.37 - 3.53 (8 H, m) , 3.30 (6 H, s) , 3.19 (6 H, s) , 2.32 - 2.51 (6 H, ra), 1.92 - 2.06 (2 H, m) , 1.08 (2 H, dt, J=8.6, 5.8 Hz) , 0.81 (2 H, d, J=1.8 Hz) .
Ejemplo VI.
Ejemplo VI, Etapa a Una solución de carbamato Id (0.80 g, 1.23 mmol) NCS (0.214 g, 1.603 mmol) en DMF (12 mi) se calentó a 50 durante 17 horas. Después de dejar que se enfriara hasta temperatura ambiente se eliminaron los componentes volátiles al vacío. El residuo se disolvió en MeOH (36 mi) y los dos productos se separaron mediante HPLC preparativa (Columna: XTERRA, 30 X 100 mm, S5; % inicial de B = 50, % final de B = 100; Tiempo de gradiente = 10 min; Tiempo de detención = 12 min; Caudal = 30 ml/min; Longitud de Disolvente A = 10% de MeOH - 90% de H20 - 0.1% de TFA; Disolvente B = 90% de MeOH - 10% de H20 - 0.1% de TFA). Cada una de las dos fracciones se neutralizaron con una solución en exceso de NH3/MeOH 2N y se concentraron al vacío eliminando la mayoría del metanol y el residuo se repartió entre 20% de MeOH/CHCl3 y agua. La capa orgánica se secó (MgS04) , se filtró y se concentró al vacío, dando cloruro Vla-1 (espuma de color amarillo claro; 288.4 mg) y dicloruro Vla-2 (sólido de color amarillo claro; 400.4 mg) . Cloruro Vla-1: RM de 1H NMR (DMSO-dg, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : 12.62-12.60 (m, 1H) , 12.23 (s, 0.2H), 11.92 (s, 0.8H), 7.85-7.32 (m, 9H) , 4.68-4,42 (m, 2H) , 3.47-3,38 (m, 2H) , 2.40-2.35 (m, 2H) , 2.26-2,20 (m, 2H) , 1.71-1.58 (m, 2H) , 1.55-0.96 (app s ancho, 18H) , 0.82-0.69 (m, 2H) , 0.64-0.51 (m, 2H) . CL (V-Cond. 1): Tr = 2.44 min. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C38H44C1 604 : 683.31; encontrado: 683.31. Dicloruro Vla-2: RMN de lU NMR (DMS0-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz): 12.62 (s, 2H) , 7.85 (d, J = 8.8, 4H) , 7.82 (d, J = 8.9, 4H) , 4.61-4,42 (m, 2H) , 3.53-3,38 (m, 2H) , 2.41-2.35 (m, 2H) , 2.27-2,20 (m, 2H) , 1.70-1.59 (m, 2H) , 1.53-0.94 (app s ancho, 18H) , 0.80-0.70 (m, 2H) , 0.64-0.53 (m, 2H) . CL (Cond. 1A) : Tr = 2.89 min. CL/EM: Anal. Cale, para [M+H] + C38H43Cl2 604 : 717.27; encontrado: 717.31.
Ejemplo VI, Etapa b A una suspensión de cloruro Vl-a (0.2741 g, 0.401 mmol) en MeOH (1 mi) se añadió HCl 4M en dioxano (4 mi) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 7 horas y, después, se eliminó el componente volátil al vacío dando la sal HCl de Vlb en forma de un sólido marrón (231.7 mg) . El producto se usó sin purificación adicional. RMN de ¾ (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : 13.51 (s ancho, 1H) , 10.53-10.30 (m, 2H) , 9.87-9.72 (m, 1H) , 8.02-7.85 (m, 9H) , 4.72-4.68 (m, 1H) , 4.65-4.53 (m, 1H) , 3.42-3,30 (m, 2H) , 2.68-2.37 ( *m' parcialmente solapado con señal de disolvente, 4H) , 1.97-1.87 (m, 2H) , 1.16-1.07 (m, 2H) , 0.89- 0.80 (m, 2H) . CL (Cond. 1A) : Tr = 1.66 min. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C28H28C1N6: 483.21; encontrado: 483.20. [Nota: el contenido exacto en HCl del producto no se determinó] .
Ejemplo VI.
A una solución de cloruro Vlb/4HC1 (0.045 g, 0.072 mmol), ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) butanoico (0.025 g, 0.157 mmol) y , -diisopropiletilamina (0.075 ml, 0.429 mrnol) en DMF (1.5 ml)se añadió HATU (0.057 g, 0.150 .mmol) . La mezcla de reacción se agitó a ~25 °C durante 1 hora.
Se diluyó con MeOH (2.5 ml) y el producto se purificó mediante HPLC (Columna: XTEERA, 30 X 100 mmf S5; % inicial de B = 30, % final de B = 90; Tiempo de gradiente = 10 min; Tiempo de detención = 12 min; Caudal = 30 ml/min; Longitud de Disolvente A = 10% de MeOH - 90% de H20 - 0.1% de TFA; Disolvente de B = 90% de MeOH -10% de H20 - 0.1% de TFA), dando las sales en TFA del Ejemplo VI en formar de un sólido amarillo claro (39.4 mg) . RM de ¾ MR (DMSO-de, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : 14.80-14.36 (m ancho, 1.4H), 12.58 (app s ancho, 0.6H), 8.14 (s, 1H) , 7.94 (d, J = 8.5, 2H) , 7.89 (d, J = 8.3, 2H) , 7.87 (d, «7 - 8.4, 2H) , 7.82 (d, «7 = 8.6, 2H) , 7.38 (d, J = 7.8, 0.9H), 7.28 (d, J = 7.8, 0.9H), 7.07 (app s ancho, 0.1H) , 6.96 (app s ancho, 0.1H), 5.02 (dd, J = 8.8, 6.8, 1H) , 4.96 (dd, J = 7.0, 6.0, 1H) , 4.50-4.39 (m, 2H) , 3.74-3.67 (m, 1H) , 3.59-3.48 (m, 7H) , 2.60-2.47 ( 4m' parcialmente solapado con señal de disolvente, 1H) , 2.42-2,22 (m, 3H) , 2.01-1.65 (m, 4H) , 1.65-1.52 (m, 2H) , 1.06-0.84 (m, 8H) , 0.83-0.77, (m, 1H) , 0.74-0.66 (m, 1H) . CL (Cond. 2a y 2b) : índice de homogeneidad > 95%. CL (Cond. 1A) : Tr = 1.66 min. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C4oH46Cl 806 : 769.32; encontrado: 769.35.
Ejemplo V2.
El Ejemplo V2 (sal en TFA) se preparó a partir de la pirrolidina Vlb /HCl y ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) -2- (tetrahidro-2H-piran-4-il) acético de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo VI. sal HCl de carbamato Vla-2 de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación de pirrolidina Vlb. RMN de 1R (DMSO-d6, 5 = 2.5 ppm, 400 MHz) : 10.62 -10.48 (m, 2H) , 9.92-9.75 (m, 2H) , 7.92 (d, J = 8.8, 4H) , 7.89 (d, J = 9.1, 4H) , 4.68-4.57 (m, 2H) , 3.40-3,31 (m, 2H) , 2.54 -2.50 ('m' parcialmente solapado con señal de disolvente, 2H) , 2.46 -2.39 (m, 2H) , 1.91-1.85 (m, 2H) , 1.16-1.07 (m, 2H) , 0.85-080 (m, 2H) . CL (Cond. 1A) : Tr = 2.01 min. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C28H27Cl2N6 : 517.17; encontrado: 517.06. [Nota: el contenido exacto en sal HCl del producto no se determinó] .
Ejemplo V3 El Ejemplo V3 (sal en TFA) se preparó a partir de la sal HCl de pirrolidina V3a de acuerdo con el procedimiento descrito para la síntesis del ejemplo VI. RMN de 1H (DMS0-d6,= 2.5 ppm, 400 MHz) : 12.59 (s muy ancho, ~2H) , 7.86 (d, J =8.5, 4H) , 7.80 (d, J" = 8.3, 4H) , 7.46 (app s ancho, 0.13H) , 7.37 (d, J = 7.6, 1.73H) , 6.97 (app s ancho, 0.14H) , 4.97-4.94 (m, 2H) , 4.52 -4.35 (m, 2H) , 3.63 -3.45 (m, 8H) , 2.36-2,23 (m, 4H), 1.96-1.83 (m, 2H), 1.82-1.67 (m, 2H) , 1.64-1.49 (m, 2H) , 1.13-0.82 (m, 8H) , 0.78-0.61 (m, 2H) . CL (Cond. 2a y 2b) : índice de homogeneidad > 95%. CL (Cond. 1A) : Tr = 2.66 min. CL/EM: Anal.
Calculado para [M+H] + C4oH45Cl2N8 06 : 803.28; encontrado: 803.28.
Ejemplos V4-V6 Los Ejemplos V4-V6 (sal en TFA) se prepararon a partir de la sal HCl de pirrolidina V3a y los ácidos adecuados de acuerdo con el procedimiento descrito para la síntesis del ejemplo VI.
A una solución de pirrolidina le/4HCl (0.350 g, 0.589 mmol) , ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) -3- metilbutanoico (0.103 g, 0.589 mmol), ácido (S)-2- (metoxicarbonilamino) -2- (tetrahidro-2H-piran-4 - il ) acético (0.128 g, 0.589 mmol) y N, -diisopropiletilamina (0.720 mi, 4.12 mmol) en DMF (3 mi) se añadió HATU (0.493 g, 1.295 mmol). La mezcla de reacción se agitó a -25 °C durante 4 horas y después se diluyó con eOH y se purificó mediante HPLC preparativa (Columna: XTERRA, 30 X 100 mm, S5,- % inicial de B = 30, % final de B = 75; Tiempo de gradiente = 15 min; Tiempo de detención = 15 min; Caudal = 30 mi/min; Longitud de Disolvente A = 10% de MeOH - 90% de H20 - 0.1% de TFA; Disolvente de B = 90% de MeOH - 10% de H20 - 0.1% de TFA) , aislando el producto V7a de los tres posibles productos. El producto V7a se disolvió en MeOH y se lavó eliminando las bases (cartucho de 6g MCX; lavado con MeOH; elución con NH3/MeOH 2N) y se concentró al vacío dando un sólido marrón (103.2 mg) . CL (Cond. 1A) : Tr = 1.63 min. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C44H53N8 07 : 805.40; encontrado: 805.49.
Ejemplos V7 y V8 Una solución del producto V7a (0.103 g, 0.128 mmol) y NCS (0.022 g, 0.167 mmol) en DMF (1.5 mi) se calentó a 50 °C durante 24 horas. Después de dejar enfriar hasta la temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con MeOH y se purificó mediante HPLC preparativa (Columna: XTERRA, 30 X 100 mm, S5; % inicial de B = 40, % final de B = 100; Tiempo de gradiente = 15 min; Tiempo de detención = 17 min; Caudal = 30 ml/min; Longitud de Disolvente A = 10% de MeOH - 90% de H20 - 0.1% de TFA; Disolvente de B = 90% de MeOH - 10% de H20 - 0.1% de TFA), aislando una mezcla de regioisómeros V7 y V8. La mezcla se disolvió en MeOH y se sometió a una diferente condición de purificación mediante HPLC preparativa (Columna: Waters-SunFire , 30 X 100 mm, S5; % inicial de B = 10, % final de B = 50; Tiempo de gradiente = 20 min; Tiempo de detención = 20 min; Caudal = 30 ml/min; Longitud de Disolvente A = 10% de MeOH - 90% de H20 - 0.1% de TFA; Disolvente B = 90% de acetonitrilo - 10% de H20 - 0.1% de TFA), separando los dos regioisómeros en forma de sales en TFA. Ejemplo V7 (sólido blancuzco, 17.3 mg) : RMN de XH (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : 14.52 (app s ancho, demasiado ancho para integrar) , 12.64 (app s ancho, demasiado ancho para integrar) , 8.14 (s, 1H) , 7.95-7.79 (m, 8H) , 7.26 (dos xd' solapadas, J = -8.6, 1.70H) , 7.10 (app s ancho, 0.08H) , 6.98 (app s ancho, 0.22H), 5.01-4.97 (m, 1H) , 4.96-4.92 (m, 1H) , 4.50-4,46 (m, 1H) , 4.43-4,40 (m, 1H) , 3.90-3.81 (m, 2H) , 3.79-3.72 (m, 1H) , 3.71-3.64 (m, 1H) , 3.54 (app s, 6H) , 3.31-3.18 (m, 2H) , 2.65-2.50 ('m' parcialmente solapado con disolvente, 1H) , 2.45-2.19 (m, 3H) , 2.18-2.08 (m, 1H) , 2.04-1.89 (m, 2H) , 1.89-1.79 (m, 1H) , 1.69-1.59 (m, 1H) , 1.55-1.41 (m, 2H) , 1.38-1,23 (m,lH), 1.04-0.77 (m, 9H) , 0.74-0.67 (m, 1H) . CL (Cond. 2a y 2b) : índice de homogeneidad > 95%. CL (Cond. la) : Tr = 2.15 min. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C44H51CliN8 07 : 839.36; encontrado: 839.35. Ejemplo V8 (sólido blancuzco, 16.8 mg) : RMN de 1?? (DMSO-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : 14.53 (s ancho, demasiado ancho para integrar) , 12.61 (s ancho, demasiado ancho para integrar) , 8.13 (s, 1H) , 7.94 (d, J = 8.3, 2H) , 7.90 (d, J" = 8.6, 2H) , 7.85 (d, J = 8.5, 2H) , 7.82 (d, J" = 8.6, 2H) , 7.36 (d, J" = 8.8, ~1H) , 7.17 (d, J- = 8.5, ~1H) , 5.00-4.94 (m, 2H) , 4.49 (app t , J = 7.7, 1H) , 4.40 (app t, J = 7.9, 1H) , 3.90-3.78 (m, 3H) , 3.65-3.59 (m, 1H) , 3.55 (s, 3H) , 3.54 (s, 3H) , 3.35-3.19 (m, 2H) , 2.64-2.50 Cm' parcialmente solapado con señal de disolvente, 1H) , 2.41-2.34 (m, 1H) , 2.33-2,22 (m, 2H) , 2.12-1.99 (m, 2H) , 1.99-1.90 (m, 1H) , 1.89-1.81 (m, 1H) , 1.52-1,27 (m, 4H) , 1.07-0.84 (m, 8H) , 0.84-0.77 (m, 1H) ( 0.75-0.65 (m, 1H) . CL (Cond. 2a y 2b) : índice de homogeneidad > 95%. CL (Cond. la): Tr = 2.15 min. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C44H5iCli 8 07: 839.36; encontrado: 839.38.
Ejemplo V9.
A una mezcla de pirrolidina le/4HCl (2.00 g, 3.36 mmol) y Et3N (2.3 mi, 16.82 mmol) en DMF (60 mi) se añadió Boc20 (0.734 g, 3.36 mmol) seguido por DMAP (0.021 g, 0.168 mmol) y se agitó en condiciones ambientales durante 4.5 horas. El componente volátil se eliminó al vacío y el residuo se repartió entre NaOH 1.0N (20 mi) y 20% de MeOH/CHCl3 (50 mi) . La fase acuosa se lavó con 20% de MeOH/CHCl3 (50 mi, 2x) . ) . La fase orgánica combinada se secó (MgS04) y se concentró al vacio. A partir del material bruto resultante se preparó una malla de gel de sílice y se sometió a purificación en Biotage (160 g de gel de sílice) en el que la columna se eluyó primero con EtOAc hasta la salida de toda la mancha de Tr superior (es decir, derivado de bis-Boc Id; 0.28 g) y, después, la columna se eluyó con 5-10% de MeOH/CH2Cl2 en 2.5 1 eluyendo bis-Boc x residual (seguido por mono-Boc V9a (0.81 g; -que contiene 1.1 mol eq. de Et3N) . CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C33H37N6 02 : 549.30; encontrado 549.45.
Ejemplo V9, Etapa b A una solución de carbamato V9a (1 g, 1.823 mmol), ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) -2- (tetrahidro-2Jí-piran-4 -il)acético (0.400 g, 1.841 mmol) y N, N-diisopropiletilamina (0.65 mi, 3.72 mmol) en DMF (8 mi) se añadió HATU (0.770 g, 2.026 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a ~25 °C durante 3 horas. El componente volátil se eliminó al vacío y el residuo se suspendió en 20% de MeOH/CHCl3 (250 mi) se lavó con agua (3 x 40 mi) , se secó sobre MgS0 , se filtró y se concentró al vacío. El residuo se suspendió en CHC13 (4 mi) y se cargó en un cartucho de gel de sílice de Thomson y eluyó con 10% de MeOH/EtOAc, dando el producto V9b en forma de una espuma marrón (1.15 g) . CL (V-Cond. 1) : Tr = 1.70 min. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C42H50 7O6 : 748.38; encontrado: 748.40.
Ejemplo V9, etapa c Una solución de V9b (0.9387 g, 1.255 mmol) y NCS (0.335 g, 2.51 mmol) en DMF (13 mi) se calentó a 50 °C durante 24.5 h. El componente volátil se eliminó al vacío y el residuo se suspendió en CH2C12 (200 mi) , se lavó con agua (3 x 50 mi) , seguido por salmuera (50 mi) , se secó sobre MgS04 , se filtró y se concentró al vacío. El residuo se suspendió en CH2Cl2 (6 mi) y se sometió a purificación en gel de sílice (100% de acetato de etilo) , dando el compuesto V9c en forma de un sólido amarillo (720.7 mg) . CL (Cond. 1A) : Tr = 3.19 min. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C42H48C12N7 06 : 816.30 ; encontrado: 816.35.
Ej mplo V9, etapa d La pirrolidina V9d se preparó en forma de una sal HC1 a partir de carbamato V9c de acuerdo con el procedimient o descrito para la síntesis de Vlb. RMN de U (DMSO-d6í d = 2.5 ppm, 400 MHz) : 10.49-10.38 (m, 1H) , 9.84- 9.72 (m, 1H) , 7.90-7.81 (m, 8H) , 7.27 (d, J = 8.6, 0.89H) , 6.99 (app s ancho, 0.11H), 4.98-4.95 (m, 1H) , 4.65-4.55 (m, 1H) , 4.50-4,46 (m, 1H) , 3.90-3.80 (m, 2H) , 3.76 -3.64 (m, 1H) , 3.54 (s, 3H) , 3.41-3,32 (m, 1H) , 3.32-3.19 (m, 2H) , 2.54-2.40 ('m' parcialmente solapado con señal de disolvente, 2H) , 2.36-2,24 (m, 2H) , 2.06-1.95 (m, 1H) , 1.94-1.78 (m, 2H) , 1.69-1.57 (m, 1H) , 1.55-1.40 (m, 2H) , 1.39-1,27 (m,lH) , 1.17-1.07 (m, 1H) , 1.04 -0.92 (m, 1H) , 0.88-0.78 (m, 1H) , 0.76-0.66 (m,lH) . CL (Cond. la) : Ta= 2.66 min; índice de homogeneidad > 95%. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C37H4oCl2N7 04 : 716.25; encontrado: 716.28.
Ejemplo V9 El Ejemplo V9 (sal en TFA) se preparó a partir de la sal HC1 del intermedio V9d y ácido S)-2 - (metoxicarbonilamino) butanoico de acuerdo con el procedimiento descrito para la síntesis del ejemplo VI. RMN de XH (DMS0-d6, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : 12.59 (s ancho, ~2H) , 7.87-7.77 (m, 8H) , 7.29/7.26 (dos 4d' parcialmente solapados, J" = 8.6/7.8, 1.82H) , 6.97 (app s ancho, 0.18H) , 4.97-4.93 (m, 2H) , 4.50-4,42 (m, 2H) , 3.90-3.81 (m, 2H) , 3.72-3.65 (m, 1H) , 3.60-3.46 (m y dos s solapantes, los s están en 3.54 y 3.53, 7H) , 3.32-3.18 (m, 2H) , 2.38-2.18 (m, 4H) , 2.05-1,23 (colección de 'm' , 9H) , 1.09-0.85 (ra, 5H) , 0.76 -0.59 (m, 2H) . CL (Cond. 2a y 2b) : índice de homogeneidad > 95%. CL (Cond. la) : Tr = 2.66 min. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C43H49C12N807 : 859.31; encontrado: 859.43.
Ej mplos VIO -VI 6 Los Ejemplos V10-V16 (sal en TFA) se prepararon a partir de la sal HCl de pirrolidina V9d y los ácidos adecuados de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo VI. Los Ejemplos V13-16 requirieron una purificación HPLC de fase inversa adicional que empleó la condición siguiente: Columna: Waters-SunFire, 30 X 100 mm , S5; % inicial de B = 10, % final de B = 50; Tiempo de gradiente = 20 min; Tiempo de detención = 20 min; Caudal = 30 ml/min; Longitud de Disolvente A = 10% de acetoni tri lo- 90% de H20 - 0.1% de TFA; Disolvente B = 90% de acetonitrilo - 10% de H20 - 0.1% de TFA.
Ejemplos GWl-1 a GW1-3 Ejemplo GW1-1 Ejemplo GW1 -2 Ejemplo GW1 -3 Ejemplo GW1 , Etapa a Para la preparación del carbamato GWla, véase la solicitud de patente US 2009/0068140.
Ejemplo GW1, Etapa b A una solución de carbamato GQla (0.830 g, 1.271 mmol) en DMF (9 mi) se añadió NCS (0.221 g, 1.653 mmol) . La mezcla de reacción se calentó a 50 °C durante 16 horas. Se añadió más NCS (0.1 g, 0.75 mmol) y el calentamiento continuó durante 4 horas. Se dejó enfriar hasta la temperatura ambiente y se repartió entre DCM y agua (20 mi de cada) . La capa acuosa se extrajo con DCM (20 mi) y la fase orgánica combinada se secó (Na2S04) y se concentró al vacío. El material bruto resultante se disolvió en MeOH y se sometió a purificación mediante HPLC de fase inversa (MeOH/agua/TFA; columna: Phenomenex Luna, 30 X 100 mm S10 Axia) recuperando las sales en TFA de GWlb en forma de una espuma amarilla (0.25 g) . RMN de XH (MeOD, d = 3.30 ppm, 400 MHz) : 7.82 (app s, 8H) , 4.95-4.85 ('m' parcialmente solapada con señal HOD, 2H) , 4.04 (m, 2H) , 2.36-2.14 (m, 6H) , 1.77 (m, 2H) , 1.50-1,20 (solapamiento de 's ancho' y d' , 24H) . CL (Cond. la): TR = 3.0 min. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C38H47Cl2 e0 : 721.30; encontrado 721.32.
Ejemplo GN1 , Etapa c Al carbamato GWlb (0.29 g, 0.306 mmol) se añadió HC1 4N en dioxano (10 mi) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. El disolvente se eliminó y se secó al vacío durante la noche, dando la sal HC1 del producto GWlc en forma de un sólido marrón (0.21g) . RMN de 1H (MeOD, d = 3.30 ppm, 400 MHz) : 7.85 (d, J = 8.6, 4H) , 7.80 (d, J = 8.8, 4H) , 4.95-4.85 (m, 2H) , 3.89-3.80 (m, 2H) , 2.58-2.31 (m, 6H) , 2.01-1.91 (m, 2H) , 1.50 (d, 6.5 Hz, 6H) . CL (Cond. 1A) : TR = 3.0 min. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H]+ C28H3iCl2N6: 521.20; encontrado 521.20.
Ejemplos GWl-1 a GW1-3 A una solución de la sal HC1 de G lc (150 mg, 0.225 mmol) , ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) -2- (tetrahidro-2H-piran-4-il) acético (57.6 mg, 0.265 mmol) y ácido (S) -2-(metoxicarbonilamino) -3-metilbutanoico (48.0 mg, 0.274 mmol) en DMF (10 mi) se añadió DIEA (0.236 mi, 1.349 mmol) y HATU (176 mg, 0.463 mmol), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mayor parte del componente volátil se eliminó a vacío y el residuo se disolvió en MeOH y se sometió a purificación HPLC de fase inversa (MeOH/agua/TFA; columna: Phenomenex Luna, 30 X 100 mm S10 Axia) aislando los tres productos en forma de sales en TFA. El Ejemplo GWl-1 (espuma amarillo claro, 25 mg) se contaminó con impurezas no identificadas. RMN de *H (MeOD, d = 3.30 ppm, 400 Hz) : 8.05-7.93 (m, 1.54H), 7.87-7.56 (m, 6.46H), 5.42 (d ancho, J = 6.6, 0.68H), 4.97 (m, 1.32H), 4.76-4.69 (m, 1.2H) , 4.31-4.14 (m, 2.8H), 3.98-3.84 (m, 4H) , 3.68/3.67/3.63 (tres 's', 6H) , 3.40-3.21 ( vm' parcialmente solapado con señal de disolvente, 4H) , 2.72 (m, 0.7H), 2.45-1.14 (solapado con muchos 4m' y dos vd', d' en 1.51 y 1.18 con J = 6.5 y 6.3, respectivamente; 23.3H) . CL (Cond. 2a y 2b) : índice de homogeneidad > 91.8%. CL (Cond. le): TR = 6.22 min. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H]+ C46H57C12N808 : 919.37; encontrado 919.9. Ejemplo GW1-2 (espuma amarillo claro, 39 mg) ; CL (Cond. 2a y 2b): índice de homogeneidad > 95%. CL (Cond. 1A) : TR = 2.97 rain. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C44H55CI2 8O7 : 877.36; encontrado 877.35. Ejemplo GW1-3 (espuma amarillo claro, 22 mg) , CL (Cond. 2a y 2b) : índice de homogeneidad > 95%. CL (Cond. 1A) : TR = 3.07 min. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C42H53C12N806 : 835.35; encontrado 835.34.
Ejemplo GW2 e plo GW2, Etapa A una solución de carbamato GWla (0.830 g, 1.271 mmol) en DMF (9 mi) se añadió NCS (0.221 g, 1.653 mmol) . La mezcla de reacción se calentó a 50 °C durante 16 horas. Se añadió NCS adicional (O.lg, 0.75 mmol) y el calentamiento continuó a 50 °C durante 4 horas adicionales. La mezcla se repartió entre DCM y agua (20 mi de cada) . La fase acuosa se extrajo con DCM (20 mi) y la fase combinada se secó con Na2S04 y se concentró al vacío. El producto bruto resultante se disolvió en MeOH y se sometió a purificación mediante HPLC de fase inversa (MeOH/agua/TFA; columna: Phenomenex Luna, 30 X 100 mm S10 Axia) recuperando el carbamato GW2a en forma de una espuma amarillo claro (0.03g) . RMN de 1H (MeOD, d = 3.30 ppm, 400 MHz) : 7.76-7.64 (m, 8H) , 7.34 (s, 1H) , 5.10-4.65 (solapante con la señal HOD, m, 2H) , 3.99 (m, 2H) , 2.31-2.01 (m, 6H) , 1.78-1.76 (m, 2H) , 1.55-1.15 (app m ancho, 24H) . CL (Cond. 1A) : TR = 2.55 min. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C38H48C1N60: 687.34; encontrado 687.39.
Ejemplo GW2, Etapa b Al carbamato GW2a (0.19 g, 0.208 mmol) se añadió HCl 4N en dioxano (10 mi) y se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. Se eliminó el disolvente y se secó al vacío durante la noche, dando la san HCl de la pirrolidina G 2b en forma de un sólido marrón (0.16g) . RMN de 1H (MeOD, d = 3.30 ppm, 400 MHz) : 8.11 (s, 1H) , 7.95 (d, J = 8.5, 2H) , 7.87 (aparece 'd', 4H) , 7.82 (d, J = 8.8, 2H) , 5.22 (m, 1H) , 4.92 - 4.83 (solapante con la señal HOD, m, 1H) , 3.99 (m, 1H) , 3.84 (m, 1H) , 2.78-2.62 (m, 2H) , 2.57-2.31 (m, 4H) , 2.12-1.91 (m, 2H) , 1.55 (d, J = 6.8, 3H) , 1.50 (d, J= 6.8, 3H) . CL (Cond. la): TR = 1.74 min. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C28H32C1 6: 487.24; encontrado 487.21.
Ejemplo GW2 una solución de la sal HCl de la pirrolidina G 2b (80 mg, 0.126 mmol) y ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) -3-metilbutanoico (48.7 mg, 0.278 mmol) en DMF (5 ml) se añadieron DIEA (0.132 ml , 0.758 mmol) y HATU (99 mg, 0.260 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mayor parte del componente volátil se eliminó a vacío y el residuo se disolvió en MeOH y se sometió a purificación HPLC de fase inversa (MeOH/agua/TFA; columna: Phenomenex Luna, 30 X 100 mm S10 Axia) recuperando las sales en TFA de G 2 en forma de una espuma amarilla (50 mg) . RMN de XH (MeOD, d = 3.30 ppm, 400 MHz) : 8.00-7.75 (m, 9H) , 5.71 (app m ancho, 0.2H), 5.40 (d, J = 6.3, 0.45 H) , 5.15-5.11 (m, 0.87H), 5.00-4.96 (m, 0.92H) , 4.81-4.68 (m, 1.56H), 4.26-4.03 (m, 2H) , 3.71/3.70/3.64/3.63 (cuatro ^s', 6H) , 2.77-1.87 (m, 9.24H) , 1.65-1.48 ('m' & (d' solapados, 4.66 H) , 1.28 (d, J = 0.62H) , 1.17 (d, J = 6.3H, 1.23H) , 1.06-0.82 (m, 12.15H) . CL (Cond. 2a y 2b) : índice de homogeneidad > 95%. CL/ EM (Cond. 1A) : TR = 2.46 min. CL/E Anal. Calculado para [M+H] + C42H54C1N805 : 801.39; encontrado 801.41.
Ejemplo GN2-1.
El Ejemplo GW2-1 (sal en TFA) se preparó a partir de la pirrolidina GW2b y ácido (S)-2- (metoxicarboni lamino) -2- ( t e t rahidro - 2H -pi ran - 4 -il)acético de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo GW2.
Ejemplo GW3 GW3a-1 GW3a-2 GW3a-3 Los tres ésteres anteriores se prepararon a partir de 5-oxopirrolidin-l , 2-dicarboxilato de (S) -1- erc-butil 2- metilo de acuerdo con el procedimiento descrito en Tetrahedon Letters, 2003, 3203-3205.
Ejemplo GW3, Etapa b Se añadió complejo de borano-sulfuro de metilo (5.44 mi, 10.88 mmol) a una solución del éster G 3a-2 (1.4 g, 5.44 mmol) en THF (25 mi) y la mezcla de reacción se calentó a 40 °C durante 7 horas. El componente volátil se eliminó a vacio y el residuo se fraccionó entre EtOAc y agua (50 mi cada uno) . La capa acuosa se extrajo con EtOAc (30 mi) y la fase orgánica combinada se secó con Na2S04, y se concentró al vacio. El aceite incoloro resultante se purificó con una cromatografía ultrarrápida (0-50% de EtOAc/hexano) proporcionando el éster GW3b en forma de un aceite incoloro (0.77 g) . RMN de H NMR (CDC13, d = 7.24 ppm, 400 MHz) : 4.29-4.18 (m, 1H) , 3.78-3.66 (m, 4H) , 2.99 (app t, J = 10.1, 1H) , 2.43-2.97 (m, 1H) , 2.43-2.37 (m, 1H) , 2.30-2.18 (m, 1H) , 1.60-1.52 (m, 1H) , 1.47/1.42 (dps vs', 9H) , 1.08-1.05 (m, 3H) .
Ejemplo GW3, Etapa c A una solución del éster G 3b (1.69 g, 6.95 mmol) en etanol (10 mi) se añadió solución de LiOH (0.250 g, 10.42 mmol) en agua (5.00 mi), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. El disolvente orgánico se evaporó a vacío y el residuo se diluyó con agua (10 mi) y se lavó con éter (10 mi) . Se enfrió en un baño de agua y hielo, y se acidificó a un intervalo de pH de ~2 con HCl 1 N. Después se extrajo con EtOAc (20 mi, 3x) . La capa orgánica se secó con Na2S04 y se concentró a vacío dando el ácido GW3c en forma de un aceite incoloro, que se convirtió en un sólido blanco tras la exposición extendida a alto vacío (1.38g) . RM de XH NMR (CDC13, d = 7.24 ppm, 400 MHz) : 4.39-4.22 (ra, 1H) , 3.80-3.69 (m, 0.91H), 3.59-3,35 (m, 0.18H), 3.03-2.89 (m, 0.91H), 2.51-2,22 (m, 2H) , 1.98-1.91 (m, 0.71H), 1.68-1.60 (0.29H), 1.50/1.44 (dos 's', 9H) , 1.09 (app m, 3H) .
Ejemplo GW3 , Etapa d A una suspensión del GW3c (1.83 g, 7.98 mmol) y 1.1 ' - (bifenil-4,4 ' -diil)bis (2 -bromoetanona) (1.581 g, 3.99 mmol) en CH3CN (30 mi) se añadió DIEA (1.436 mi, 8.22 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se repartió entre EtOAc y agua (50 mi de cada uno) . La fase orgánica se lavó con NaHC03 saturado (20 mi) , se secó con Na2S04 y se concentró al vacío, proporcionando el diéster GW3d en forma de un sólido amarillo (2.67g), que se usó como tal en la siguiente etapa.
Ejemplo GW3 , Etapa e A una solución del dicetoéster G 3d (2.67 g, 3.85 mmol) en xilenos (30 mi) se añadió acetato amónico (2.97 g, 38.5 mmol) y la mezcla se calentó a 140°C durante 6 horas en un tubo sellado. El componente volátil se eliminó a vacío y el residuo se fraccionó entre DCM (50 mi) y agua (50 mi) . La capa orgánica se lavó con NaHC03 saturado (20 mL) , se secó con Na2S04 y se concentró al vacío. El material bruto resultante se purificó con una cromatografía ultrarrápida (50-100% de EtOAc/hexano , 100% de EtOAc-10% de MeOH/EtOAc) dando el imidazol G 3 en forma de un sólido naranja (1.3g). RMN de 1H (DMS0-d6/ d = 2.5 ppm, 400 MHz) : 12.21-11.87 (tres s anchos, 2H) , 7.82-7.51 (m, 9.2H), 7.30 (m, 0.6H), 6.88-6.81 (m, 0.2H) , 4.9-4.67 (m, 1.81H), 3.98-3.93 (m, 0.19H), 3.77-3.54 (m, 2H) , 3.07-2.76 (m, 2H) , 2.43-2.04 (m, 4H) , 1.80-1.56 (m, 2H) , 1.41-1,33 (m, 8H) , 1.10-1.04 (m, 16H) . CL/EM (Cond. 1A) : TR = 2.09 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C38H 9N604: 653.38; encontrado 653.51.
Ejemplo GW3 , Etapa f Se añadió HCl N en dioxano (12.10 mi, 48.4 mmol) al carbamato GW3e (1.3 g, 1.99 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. El componente volátil se eliminó al vacío y el producto se secó al vacío durante la noche, dando la sal HCl de la pirrolidina GW3f en forma de un sólido amarillo (1.14g) . RMN de ¾ (DMSO-ds, d = 2.5 ppm, 400 MHz) : 10.32 (app s ancho, 2H) , 9.79 (app s ancho, 2H) , 8.13 (s, 2H) , 8.02 (d, J=8.3, 4H) , 7.99 (d, J=8.3, 4H) , 5.01 (m ancho, 2H) , 3.47 (m ancho, 2H) , 3.05 (m ancho, 2H) , 2.62 (m, 2H) , 2.45 (m, 2H) , 2.21 (m, 2H) , 1.13 (d, J = 6.3, 6H) . CL/EM (Cond. 1A) : TR = 2.09 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H]+ C23H33N6: 453.28; encontrado 453.17.
Ejemplo GW3 , Etapa g (GW3g-1) (GW3g-2) (GW3g-3) A una suspensión de la sal HCl de pirrolidina GW3f (1.14 g, 1.905 mmol) , ácido (S) -2- (metoxicarbonilami.no) -2-(tetrahidro-2H-piran-4-il) acético (0.488 g, 2.248 mmol) y ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) -3-metilbutanoico (0.407 g, 2.324 mmol) en DMF (15 mi) se añadió DIEA (1.996 mi, 11.43 mmol) . Se efectuó una disolución total con la ayuda de sonicación y después se añadió HATU (1.478 g, 3.89 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mayor parte del componente volátil se eliminó a vacío y el residuo se disolvió en MeOH y se sometió a purificación HPLC de fase inversa (MeOH/agua/TFA; columna: Phenomenex Luna, 30 X 100 mm S10 Axia) dando las sales en TFA de tres productos: G 3g-l (0.28g), GW3g-2 (0.64g) y GW3g-3 (0.36g) en forma de una espuma amarillo claro. Producto GW3g-3: RMN de XH (DMSO, d = 2.5 ppm, 400 MHz): 14.74 (app s ancho, no integrable), 8.16 (s, 2H) , 7.97 (d, J=8.6 , 4H) , 7.88 (d, J"=8.3, 4H) , 7.29 (d, J"=8.0, < 2H) , 5.23 (m ancho, 0.1H), 5.07 (dd, J = 10.6, 7, 1.9H) , 4.18 (m, 2H) , 4.09 (m, 2H) , 3.53 (s, 6H) , 3.39 (m, 2H) , 2.56-2.35 (^m' parcialmente solapado con señal de disolvente, 2H) , 1.95 (m, 2H) , 1.82 (m, 2H) , 1.13 (d, J=6.3, 6H) , 0.79 (d, J=6.5 , 6H) , 0.76 (d, J=6.5, 6H) [Note: las últimas tres integraciones incluyen rotámeros minoritarios con señales en la región de 1.1-0.85 ppm de que tenían picos] . CL/EM (Cond. 1A) : TR = 1.79 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C42H55N806 : 767.42; encontrado 767.30. Producto GW3g-l, CL/EM (Cond. la) : TR = 1.62 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C46H59 808 : 851.45; encontrado 851.33. .Producto GW3g-2, CL/EM (Cond. 1A) : TR = 1.70 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C44H57 807: 809.44; encontrado 809.30.
Ejemplo GW3 A una solución de GW3g-3/2TFA (160 mg, 0.174 mmol) en DMF (2 mi) se añadió NCS (30.6 mg, 0.229 mmol). La mezcla se calentó a 50 °C durante 5.5 horas. El residuo se disolvió en MeOH y se sometió a purificación mediante HPLC de fase inversa (MeOH/agua/TFA; columna: Phenomenex Luna, 30 X 100 mm S10 Axia) recuperando las sales en TFA de GW3 en forma de una espuma amarilla (40 mg) . [Nota: para los casos análogos, la cloración se realizó en un material de partida que estaba en forma de una base libre.] RMN de 1R (MeOD, d = 3.30 ppm, 400 MHz) : 7.88 (a, 1H) , 7.84-7.76 (m, 8H) , 5.19 ( dd , J = 11.1, 7.1, 1H) , 4.98 (dd, J = 10.4, 7.3, 1H) , 4.32 (m, 1H) , 4.24-4.17 (m, 3H) , 3.63 (s, 3H) , 3.62 (s, 3H) , 3.40-3,33 (m, 2H) , 2.65 (m, 1H) , 2.50 (m, 2H) , 2.37 (m, 1H) , 1.99 (m, 2H) , 1.82 (m, 2H) , 1.22 (d, «7=6.3 , 2.85H) , 1.18 (d, J=6.3 , 2.85H) , 1.09 (m, 0.3H) , 0.92-0.85 (m, 12H) . CL (Cond. 2a y 2b) : índice de homogeneidad > 95%. CL/EM (Cond. la) : TR = 2.32 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C42H54Cl 806 : 801.39; encontrado 801.25.
Eje plo GW4 El Ejemplo G 4 (sal en TFA) se preparó a partir de GW3g-l de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo GW3. CL (Cond. 2a y 2b) : índice de homogeneidad > 95%. EM/CL (Cond. la): TA= 2.17 min (Cond. 1A) . CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C46H58C1N808 : 885.41; encontrado 885.26.
Ejemplos GN5 a GW7 una solución GW3g-2 (565 mg, 0.588 mmol) en DMF (2 mi) se añadió NCS (0.021 g, 0.161 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 50 °C durante 17 horas. La mayor parte del componente volátil se eliminó a vacío y el residuo se disolvió en MeOH y se sometió a purificación HPLC de fase inversa (MeOH/agua/TFA; columna: Phenomenex. Luna, 30X100 mm S10 Axia) dando dos fracciones (una es G 5 y la segunda es una mezcla de GW6 y G 7) . Las fracciones se secaron al vacío y se recuperaron en forma de un sólido amarillo claro. Ambas fracciones se disolvieron por separado en metanol y se sometieron a purificación en HPLC de fase inversa (ACN/TFA/Agua, Water-Sunfiré 30X100 mm S5) recuperando las sales en TFA del Ejemplo GW5 , G 6 y G 7. Ejemplo GW5 : RM de XH (MeOD, d = 3.30 ppm, 400 MHz) : 7.74 (m, 8H) , 5.02 (m, 2H) , 4.29-4.18 (m, 4H) , 3.90 (m, 2H) , 3.63 (s, 6H) , 3.41-3,33 (ra, 4H) , 2.52 (m, 2H) , 2.39 (m ancho, 2H) , 2.01-1.79 (m, 4H) , 1.58-1,27 (m, 4H) , 1.18 (d, J=6.5 , 5.63H), 1.09 (m, 0.37H), 0.93 (d, J=6.8, 3H) , 0.88 (d, J=6.5 , 3H) . CL (Cond. 2a y 2b): índice de homogeneidad > 95%. EM/CL (Cond. 1A) : TR = 2.81 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C44H55C12 307 : 877.36; encontrado 877.30. Ejemplo GW6 : RMN de XH (MeOD, d = 3.30 ppm, 400 MHz): 7.86 (s, 1H) , 7.82-7.73 (m, 8H) , 5.19 (dd, «7 = 11, 7, 1H) , 4.98 (dd, J = 10.4, 7.3, 1H) , 4.33-4.19 (m, 4H) , 3.90 (m, 2H) , 3.67 (m, 0.35H), 3.63/3.62 (dos 4s' solapados, 5.65H), 3.41-3,31 (m, 4H) , 2.65 (m, 1H) , 2.49 (m, 2H) , 2.38 (m, 1H) , 2.00-1.79 (m, 4H) , 1.57-1,27 (m, 4H) , 1.22/1.18 dos ld' solapantes, J" = 6.5/6.3, respectivamente, 5.69H), 1.09 (m, 0.31H), 0.90/0.86 (dos 'd' solapantes, J = 6.8/6.8, 6H) . CL (Cond. 2a y 2b): índice de homogeneidad > 95%. EM/CL (Cond. la): TR = 2.25 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C44H56C1N807 : 843.40; encontrado 843.24. Ejemplo GW7 : RMN de XH (MeOD, d = 3.30 ppm, 400 MHz): 7.87-7.75 (m, 9H) , 5.19 (dd, J= 11, 7.0, 1H) , 4.99 (dd, J = 10.3, 7.3, 1H) , 4.38-4.17 (m, 4H) , 3.90 (m, 2H) , 3.64/3.62 (dos 's', 6H) , 3.41-3.26 ( vm' parcialmente solapada con señal de disolvente, 4H) , 2.64 (m, 1H) , 2.50 (m, 2H) , 2.37 (m, 1H) , 2.03-1.79 (m, 4H) , 1.60-1.08 (m, 10H) , 0.92 (d, J=6.8 , 3H) , 0.86 (d, J"=6.8, 3H) . CL (Cond. 2a y 2b) : índice de homogeneidad > 95%. EM/CL (Cond. 1A) : TR = 2.24 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C44H56C1 807 : 843.40; encontrado 843.24.
Ejemplo GW8, Etapa a A una solución GW3e (0.360 g, 0.551 mmol) en DMF (9 mi) se añadió NCS (0.096 g, 0.717 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 50 °C durante 15 horas. El residuo se diluyó con MeOH y se sometió a purificación mediante HPLC de fase inversa (MeOH/agua/TFA; columna: Phenomenex Luna, 30 X 100 mm S10 Axia) recuperando la sal en TFA de GW8a en forma de una espuma amarillo claro (20 mg) . También se aislaron las sales en TFA de GW3e (60 mg) y el análogo mono-cloro (70 mg) . Carbamato GW8a: RMN de XH (MeOD, d = 3.30 ppm, 400 MHz) : 7.83 (app s, 8H) , 4.95-4.79 ( 'm' parcialmente solapado con señal HOD, 2H) , 3.85-3.75 (m, 2H) , 3.14 (m, 2H) , 2.58-2.48 (m, 2H) , 2.44-2.30 (m, 2H) , 1.80-1.71 (m, 2H) , 1.43 (s, 6H) , 1.23 (s, 12H) , 1.14/1.12 (dos (s' solapantes, 6H) . EM/CL (Cond. la): TR = 2.98 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C38H47C1N604 : 721.30; encontrado 721.39.
Ejemplo GW8, Etapa b Se añadió HCl 4N en dioxano (3 mi) a la sal en TFA de GW8a (55 mg, 0.063 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. Se eliminó el disolvente al vacío y el residuo se secó al vacío durante la noche, dando la sal HCl de la pirrolidina GW8b en forma de un sólido marrón (50 mg) . EM/CL (Cond. la) : TR = 2.20 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + CasHsiClsNg : 521.20; encontrado 521.20.
Ejemplo GW8 A una suspensión de la sal HCl de GW8b (50 mg, 0.075 mmol) en DMF (3 mi) se añadieron ácido (S)-2- (metoxicarbonilamino) -3-metilbutanoico (28.9 mg, 0.165 mmol) , DIEA (0.079 mi, 0.450 mmol) y HATU (58.7 mg, 0.154 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mayor parte del componente volátil se eliminó a vacio y el residuo se disolvió en MeOH y se sometió a purificación HPLC de fase inversa (MeOH/agua/TFA; columna: Phenomenex Luna, 30 X 100 mm S10 Axia) recuperando las sales en TFA de G 8 en forma de una espuma amarilla (40 mg) . RMN de ¾ (MeOD, d = 3.30 ppm, 400 MHz) : 7.80-7.75 (m, 8H) , 5.01 (dd, J = 10.4, 7.4, 2H) , 4.26-4.17 (m, 4H) , 3.63 (s, 6H) , 3.38-3,33 (m, 2H), 2.52-2.49 (m, 2H) , 2.45-2.33 (m, 2H) , 2.03-1.95 (m, 2H) , 1.87-1.79 (m, 2H) , 1.19 (d, J"=6.3, 6H) , 0.92 (d, J=6.8, 6H) , 0.87 (d, J"=6.8, 6H) . CL (Cond. 2a y 2b) : índice de homogeneidad > 95%. EM/CL (Cond. la) : TR = 2.89 min. CL/E Anal. Calculado para [M+H]+ Q^C^ eOg : 835.35; encontrado 835.41.
A una solución G 3a-2 (1.31 g mmol ) en THF (25 mi) se añadió bromuro de metilmagnesio (2.037 mi, 6.11 mmol) gota a gota a -40°C (baño de hielo seco/acetona) . Se agitó a la misma temperatura durante 2 horas y, después, se retiró el baño y se continuó agitando durante 2 hora adicional. Se añadieron ácido acético (1 mi), agua (10 mi) y éter (50 mi) , la mezcla se agitó y la capa orgánica se separó. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre Na2S04 y se concentró a vacío. El material en bruto resultante se purificó con cromatografía ultrarrápida (5-95% de EtOAc/hexano) proporcionando el éster GW9 en forma de un aceite incoloro (0.6 g) . RMN de 1H NMR (CDC13, d = 7.24 ppm, 400 MHz) : 4.97 (br d, J = 8.3, 1H) , 4.29 (m, 1H) , 3.74/3.73 Ps' solapante, 3H) , 2.66 (m, 1H) , 2.27-2,22 (m, 0.21H), 2.17 (s, 2.58H), 2.10-2.02 (m, 1.22H), 1.80-1.1.74 (m, 1H) , 1.43/1.40 ('s' solapante, 9H) , 1.16 (d, J=7.1, 2.6H), 1.05(d, J=6.8, 0.4H) .
Ejemplo GW9, Etapa b GW-9b-1 GW-9b-2 A una solución de la cetona GW9a (0.6 g, 2.195 mmol) en DCM (15 mi) se añadió TFA (0.849 mi, 10.98 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 7 horas. El componente volátil se eliminó al vacio y se secó al vacío durante la noche, dando un aceite amarillo claro (0.63 g) .
Una solución del producto bruto anterior (0.5g, 1.8 mmol) en metanol (20 mi) se añadió a un frasco agitador Parr de 500 mi que contiene Pd/C (0.025 g, 0.234 mmol). Después se procedió a evacuar y volver a cargar con nitrógeno (3 veces), la mezcla se agitó a 345 kPa durante 24 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de un papel de filtro y el componente volátil se eliminó al vacío, proporcionando un aceite amarillo claro (0.41g).
A una solución del producto bruto anterior (0.48g, 1.77 mmol) en CH2C12 (7 mL) se añadió DMAP (10.81 mg, 0.088 mmol), trietilamina (0.740 mi, 5.31 mmol). Se añadió dicarbonato de di-terc-butilo (0.386 g, 1.77 mmol) en porciones durante 15 minutos y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. Después de eliminar el componente volátil al vacío, el material en bruto se purificó con cromatografía ultrarrápida (0-22% de EtOAc/hexano) proporcionando dos productos mayoritarios . El primer eluido fue GW9b-l (0.54g).. RMN de XH (CDCl3, d = 7.24 pm, 400 MHz) 4.41/4.30 (m ancho, 1H) , 3.74 (s, 3H) , 3.48/3.33 (m ancho, 1H) , ¦ 2.37-2 , 22 (m, 0.2H), 2.10-2.04 (m, 0.9H), 1.98-1.19 (m, 0.9H) , 1.79 (m, 1H) , 1.46-1,32 (m, 12H) , 1.05/1.01/0.97 (tres 'd' solapantes, J = 6.8/6.6/6.3, respectivamente, 3H) . El segundo eluido fue GW9b-2 contaminado con impurezas no identificadas (0.48 g) .. Las fracciones transparentes de GW9b-2 se usaron para adquirir los datos de espectro siguientes: RM de (CDC13, d = 7.24 ppm, 400 MHz) 4.23-4.12 (dos 'dd' solapantes, 1H) , 4.00-3.85 (dos 'm' solapantes, 1H) , 3.72/3.71 ('s' solapante, 3H) , 2.34-2,20 (m, 2H) , 1.69-1.55 (1H), 1.45/1.39 ('s' solapante, 9H) , 1.13-1.01 (m, 3.13H), 0.97 (d, J = 6.3, 2.87H).
Ejemplo GW9, Etapa c A una solución de GW9b-l (3.73 g, 14.50 mmol) en etanol (40 mi) se añadió solución de LiOH (0.417 g, 17.39 mmol) en agua (20.00 mi) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. Se añadió más LiOH (O.lg, 4.3 mmol) y el calentamiento continuó durante 2 horas adicionales. La mayoría del componente orgánico se evaporó y la porción restante se lavó con éter (20 mi) . La capa acuosa se enfrió con baño de hielo-agua, se acidificó con HCl 1N hasta un pH de 2-3, se extrajo con EtOAc (50 mi, 4x) , se secó con Na2S04 y se concentró, proporcionando un aceite incoloro, que se convirtió en un sólido blanco tras la exposición a alto vacío (3.43g) . El sólido se disolvió en una cantidad mínima de EtOAc con la ayuda de una pistola de calentamiento que lo llevó a un estado de reflujo. Después de enfriar hasta la temperatura ambiente se añadieron 5 gotas de hexano y se dejó reposar a temperatura ambiente durante la noche, proporcionando el ácido G 9c en forma de agujas blancas, que se filtró y lavó con hexano, se secó al vacío (2.02g) . RMN de ?? (CDC13, d = 7.24 ppm, 400 Hz) 4.40 (app dd, ,7=8.3, 2.8, 1H) , 3.30 (m ancho, 1H) , 2.50 (m ancho, 1H) , 2.01-1.93 (m, 1H) , 1.68-1.59 (m, 1H) , 1.52 (s, 9H) , 1.29 (d, J=6.0 , 3H) , 1.07 (d, J=6.8 , 3H) .
Ejemplo GW9, Etapa d El compuesto G 9d (sal en TFA; espuma amarillo claro) se preparó a partir del ácido GW9c de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación de precursores GW3g del ácido GW3c con la excepción de que se empleó ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) -3 -metilbutanoico para la etapa final. RMN de H (MeOD, d = 3.30 ppm, 400 MHz): 7.97-7.96 (m, 2H) , 7.88-7.82 (m, 8H) , 5.70 (d ancho, J = 6.7 , 0.6H) , 5.29 (dd, J = 10.3, 1.2H), 5.19-5.14 (m, 0.2H) , -4.90 (solapado con señal HOD, 1H) , 4.38 (m, 1H) , 4.12-4.06 (m, 2H) , 3.71/3.67/3.64 ('s' solapante, 6H) , 2.73-2.68 (m, 0.6H), 2.53-2.45 (m, 1.4H), 2.35-2.18 (m, 2.5H), 2.07-1.82 (m, 3.5H), 1.53 (d, J- = 6.8, 3.6H) , 1.40 (d, J = 7.1, 0.5H), 1.30 (d, J = 7.1, 1.9H), 1.17-0.83 (colección de ¾d' solapante, 18H) . CL (Cond. 2a y 2b): índice de homogeneidad > 95%. EM/CL (Cond. la): TR = 2.07 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C44H59N806 : 795.46; encontrado 795.44.
Ejemplos GW9 y GW10 A una solución GW9d (sal en TFA; 310 mg, 0.328 mmol) en DMF (6 mi) se añadió NCS (62.5 mg, 0.468 mmol) y la mezcla se calentó a 50 °C durante 9 horas. La mayor parte del componente volátil se eliminó a vacío y el residuo se disolvió en MeOH y se sometió a purificación HPLC de fase inversa (MeOH/agua/TFA; columna: Phenomenex Luna, 30 X 100 mm S10 Axia) separando los productos mono y di-cloro. El producto monoclorado se purificó adicionalmente con una diferente condición de HPLC de fase inversa (ACN/TFA/Agua , ater-Sunfiré 30X100 mm S5) . El Ejemplo G 9 (espuma amarillo claro; 36 mg) y el Ejemplo GW10 (espuma amarillo claro; 60 mg) se recuperaron en forma de sales en TFA. Ejemplo GW9 : RM de XH (DIVISO, d = 2.50 ppm, 400 MHz): 12.71-12.64 (br m, 1H) , 8.10 (s ancho, 1H) , 7.95-7.83 (m, 8H) , 7.64-7.58 (m, 1.4H), 7.51 (d, ^=8.6, 0.6H), 5.56 (m, 0.22H), 5.33 (m, 0.33H), 5.16 (m, 0.78H), 5.04 (m, 0.67H), 4.27-4.11 (m, 2H) , 3.93-3.86 ((m' solapado con la señal H20, 2H) , 3.56-3.53 (m, 6H) , 2.62-1.64 (colección de 'm' , 8H) , 1.50-0.75 (colección de ld' , 24H) . CL (Cond. 2a y 2b) : índice de homogeneidad > 95%. EM/CL (Cond. la): TR = 2.66 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C44H58C1N806 : 829.42; encontrado 829.44.
Ejemplo G 10 : RMN de ¾ (DMSO, d = 2.50 ppm, 400 MHz) : 12.7 (m ancho, 2H) , 8.00-7.80 (m, 8H) , 7.63 (m, 0.76H), 7.51 (d, J=8.6, 1.09H), 7.08 (m, 0.09H), 6.57 (m, 0.05H), 5.33 (d, ,7=6.3, 0.74 H) , 5.05 (app t, 1.26H), 4.25-4.12 (m, 2H) , 3.90-3.85 ('m' solapado con señal de H20, 2H) , 3.58-3.49 (m, 6H) , 2.59-2.55 (m, 0.5H), 2.33-2.13 (ra, 2.7H), 1.98-1.88 (m, 4.05H), 1.71-1.63 (m, 0.75H), 1.43 (d, J=6.6 , 3.7H) , 1.18 (d, J=6.3, 2.05H), 1.05-0.76 (colección de 'd' , 18.25H), CL (Cond. 2a y 2b): índice de homogeneidad > 95%. EM/CL (Cond. la): TR = 3.29 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C44H57C12 806 : 863.38; encontrado 863.38.
El Ejemplo GWll y el Ejemplo GW12 se prepararon de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo GW9 y el Ejemplo GW10 con la excepción de que se usó ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) butanoico en lugar de ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) -3 -metilbutanoico . Ejemplo GWll (sal en TFA) : EM/CL (Cond. la): TR = 2.57 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C42H54C1 806 : 801.39; encontrado 801.38. Ejemplo GW12 (sal en TFA): EM/CL (Cond. la): TR = 3.24 min.
CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C42H53C12 806 : 835.35; encontrado 835.31.
Ejemplo OLI, Etapa a Los compuestos pirrolidina le/4HCl (455 mg, 0.766 mmol) , ácido (S) -2 - (4 , 4 -difluorociclohexil ) -2 - (metoxicarbonilamino) acético (385 mg, 1.532 mmol) , HATU (612 mg, 1.609 mmol) y DIEA (0.803 mi, 4.60 mmol) se combinaron en DMF (30 mi) y la solución amarillo resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se redisolvió en metanol y se purificó HPLC preparatoria. ( Disolvente A: 10% de acetonitrilo/90% de agua/NH4Ac 10 m ; Disolvente B : 90% de acetonitrilo/ 10% de agua/ NH40Ac 10 mM ; Columna: Sunfire Prep MS C18 de 30 x 150mm S10; Longitud de onda: 220 nM; Caudal: 40 ml/min; gradiente: 10% de B a 75% de B durante 30 min con un tiempo de conservación de 30 minutos) . Se recuperó un sólido blancuzco correspondiente al producto OLla (0.37 g, 0.396 mmol) . RM de 2H (500 MHz , DMSO-d6) d ppm 11.67 - 12.26 (2 H, m) , 7.80 (4 H, d, J=l .93 Hz) , 7.67 - 7.76 (1 H, m) , 7.65 (4 H, d, J=8.24 Hz) , 7.54 (2 H, s) , 7.23 -7.35 (2 H, m) , 5.07 (2 H, dd, J=8.24, 3.66 Hz) , 4.54 (2 H, t, J=7.93 Hz) , 3.62 (2 H, d, J"=4.27 Hz) , 3.55 (6 H, s) , 2.36 (2 H, t, J"=10.99 Hz) , 2.20 - 2.30 (2 H, m) , 2.01 (4 H, s ancho,), 1.57 - 1.85 (9 H, m) , 1.19 - 1.53 (6 H, m) , 0.92 - I.08 (2 H, m) , 0.71 (2 H, br, s,). CL (Cond. OL3) : Tr = 0.79 min. CL/EM: Anal. Calculado para [M+H] + C48H55F4 e06 : 915.42; encontrado: 915.8. Evaluación de la pureza mediante HPLC (Cond. 0L4a) : Ta= 23.12 min; índice de homogeneidad = 98.4%.
Ejemplos OLI y OL2 A una solución de la amida OLla (39 mg, 0.043 mmol) en DMF (2 mi) se añadió NCS (6.83 mg, 0.051 mmol) y la mezcla resultante se calentó hasta 50°c durante 5 horas. Después, la mezcla de reacción se purificó mediante HPLC preparatoria. Disolvente A: MeOH al 10% /agua al 90% / TFA al 0.1% ; Disolvente B: MeOH al 90% /agua al 10% / TFA al 0.1% ; Columna: Sunfire Prep MS C18 de 30 x 100 rara de 5u; Longitud de onda: 220 nM; Caudal: 40 ml/min; gradiente: 0% de B a 75% de B durante 30 min con un tiempo de conservación de 2 minutos. Tras la concentrac ión de las fracciones, se aislaron las sales en TFA del Ejemplo OLI (15 mg) y el Ejemplo 0L2 (16 mg) . Ejemplo OLI: RMN DE 1K (500 MHz , DMSO-d6) d ppm 8.11 (1 H, s) , 7.74 - 8.00 (8 H, m) , 7.40 (1 H, d, J=8.55 Hz), 7.28 (1 H, d, J"=8.24 Hz) , 4.91 - 5.05 (2 H, m) , 4.48 - 4.59 (2 H, m) , 3.74 - 3.87 (2 H, m) , 3.62 - 3.71 (1 H, m) , 3.55 (3 H, s) , 3.54 (3 H, s) , 2.19 - 2.43 (6 H, m) , 1.66 - 2.07 (19 H, m) , 1.56 (1 H, d, ,7=10.38 Hz) , 1.26 - 1.48 (5 H, m) , 0.89 - 1.02 (2 H, m) , 0.81 (1 H, s) , 0.70 (1 H, s ancho) . CL (Cond. OL3) : Tr = 0.87 min. CL/EM: Anal. Cale, para [M+H] + C48H54C1F4 806 : 949.38 ; encontrado: 949.6. Evaluación de la pureza mediante HPLC (Cond. 0L4a) : Ta= 9.16 min; índice de homogeneidad = 94.7 %. Ejemplo 0L2 : RMN de 1K (500 MHz, DMS0-d6) d ppm 7.86 (4 H, d, ,7=8.55 Hz) , 7.79 (4 H, d, J=8.24 Hz) , 7.29 (2 H, d, J"=8.55 Hz) , 4.95 (2 H, dd , J=8.55, 4.88 Hz) , 4.52 (2 H, t, J=7.63 Hz) , 3.67 (2 H, t, J=4.58 Hz) , 3.54 (6 H, s) , 2.21 - 2.40 (4 H, m) , 2.01 (4 H, s ancho) , 1.67 - 1.95 (13 H, m) , 1.27 - 1.46 (4 H, m) , 0.94 - 1.02 (2 H, m) , 0.70 (2 H, d) . CL (Cond. 0L3) : Tr = 1.01 min. CL/EM: Anal. Cale. para [M+H] + C48H53Cl2F4 806 : 983.34 ; encontrado: 983.7. Evaluación de la pureza mediante HPLC (Cond. 0L4a) : Ta= 12.25 min; índice de homogeneidad = 94.7 %.
Ejemplos 0L3 a 0L5 Ejemplo OL4: FWR2 = Cl/H No se Ejemplo OL5: R1/R2 = Cl/H determinó la regioquímica Ejemplo OL3 , Etapa a Los compuestos pirrolidina V9a (207 mg, 0.377 mmol) , ácido (S) -2 - (metoxicarbonilamino) -2- (tetrahidro-2H-piran-4-il) acético (82 mg, 0.377 mmol), HATU (178 mg, 0.415 mmol) y DIEA (0.132 mi, 0.755 mmol) se combinaron en DMF (5 mi) y la solución amarilla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla se purificó mediante HPLC preparativa. Disolvente A: MeOH al 10% /agua al 90% / TFA al 0.1% ; Disolvente B: MeOH al 90% /agua al 10% / TFA al 0.1% ; Columna: Sunfire Prep MS C18 de 30 x 100 mm de 5u,-Longitud de onda: 220 nM; Caudal: 40 ml/min; Gradiente: 20% de B a 80% de B durante 30 min con un tiempo de conservación de 2 minutos. Se recuperó un sólido blanco correspondiente a la sal en TFA de carbamato 0L3a (0.9 g) [Nota: los carbamatos O L3a y V9b son los mismos aparte de su estado] . RMN de 1H NMR (500 MHz , DMSO-d6) d ppm 8.18 (1 H, s ancho), 8.12 (1 H, s) , 7.80 - 8.00 (8 H, m) , 7.34 (1 H, d, J=8.55 Hz) , 5.01 (1 H, t, J=8.09 Hz) , 4.79 - 4.90 (1 H, m) , 4.49 (1 H, t, .7=7.48 Hz) , 3.74 - 3.87 (3 H, m) , 3.55 (4 H, s) , 3.18 - 3.32 (2 H, m) , 2.52 - 2.59 (2 H, m) , 2.37 (2 H, ddd, J"=19.99, 13.43, 6.26 Hz) , 2.07 (1 H, s ancho), 1.92 (1 H, dt, J=13.20, 6.68 Hz) , 1.73 (1 H, ddd, «7-13.20, 6.49, 6.26 Hz) , 1.06 - 1.52 (17 H, m) , 0.80 (2 H, s ancho), 0.74 (1 H, br, s, ) . CL (Cond. OLI) : Tr = 1.98 min. CL/EM: Anal. Cale. para [M+H] + ] + C42H5o 705: 748.38; encontrado: 748.52.
Ejemplo OL3 , Etapa b El carbamato OL3a (0.19 g, 0.195 mmol) se disolvió en CH2C12 (15 mi) y se cargó con HCl 4N en dioxanos (3 ral, 12.00 mmol) . La suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y después se eliminaron los volátiles a presión reducida. Se recuperó un sólido amarillento correspondiente a la sal en TFA (3X) de pirrolidina OL3b (0.12 g) y se usó sin purificación adicional. RMN de H (500 MHz, DMSO-de) d ppm 8.14 (1 H, s) , 7.83 - 8.01 (10 H, ra), 7.34 (1 H, d, J=8.55 Hz) , 5.06 (1 H, t, J=7.93 Hz), 4.73 (1 H, t, J=8.24 Hz) , 4.50 (1 H, t, J=7.48 Hz) , 3.78 - 3.87 (3 H, m) , 3.64 - 3.74 (2 H, m) , 3.56 (3 H, s) , 3.44 - 3.51 (1 H, m) , 3.39 - 3.44 (1 H, m) , 3.20 - 3.35 (2 H, m) , 2.55 - 2.64 (2 H, m) , 2.34 - 2.43 (1 H, m) , 2.06 - 2.16 (1 H, m) , 1.87 - I.97 (2 H, m) , 1.27 - 1.51 (4 H, m) , 1.12 (1 H, d, J=4.58 Hz) , 0.90 - 0.98 (1 H, m) , 0.82 - 0.89 (1 H, m) , 0.78 (1 H, s ancho). CL (Cond. 0L2): Tr = 2.51 min. CL/EM: Anal. Cale. para [M+H] + ] + C37H42N704 : 648.33; encontrado: 648.4.
Ejemplo OL3 , Etapa c Los compuestos ácido (S)-2-(4,4-difluorociclohexil ) -2 - (metoxicarbonilamino) acético (87 mg, 0.345 mmol) , la sal en TFA (3X) de la pirrolidina OL3b (261 mg, 0.345 mmol), HATU (144 mg, 0.379 mmol) y DIEA (0.301 mi, 1.724 mmol) se combinaron en DMF (10 mi) y la solución parduzca resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La muestra se purificó directamente mediante HPLC preparatoria. Disolvente A: eOH al 10% /agua al 90% / TFA al 0.1% ; Disolvente B: MeOH al 90% /agua al 10% / TFA al 0.1% ; Columna: Sunfire Prep MS C18 de 30 x 100 mm de 5u; Longitud de onda: 220 nM; Caudal: 40 mil/min; Gradiente: 30% de B a 70% de B durante 30 min con un tiempo de conservación de 2 minutos. Se recuperó un sólido blanco correspondiente a la sal en TFA (2x) de la amida OL3c (132 mg, 0.117 mmol , rendimiento del 33.8%) . RMN de XH (500 MHz , DMS0-d6) d ppm 11.68 - 12.18 (2 H, m) , 7.78 (3 H, t, J=8.39 Hz) , 7.73 (1 H, d, J"=9.46 Hz) , 7.66 (4 H, d, J"=8.55 Hz), 7.54 (2 H, dd, J=4.12, 1.68 Hz) , 7.28 (2 H, dd, J=19.68, 8.39 Hz) , 5.08 (2 H, ddd, J"=8.39, 4.12, 3.97 Hz) , 4.46 - 4.58 (2 H, m) , 3.82 -3.94 (2 H, m) , 3.61 - 3.67 (2 H, m) , 3.54 (6 H, d, J=1.53 Hz) , 3.24 (2 H, t, J"=11.29 Hz) , 2.33 - 2.41 (2 H, m) , 2.21 -2.31 (2 H, m) , 1.91 - 2.08 (4 H, m) , 1.75 - 1.89 (6 H, m) , I.58 (1 H, d, J=13.43 Hz) , 1.40 - 1.52 (2 H, m) , 1.26 - 1.40 (3 H, m) , 0.97 - 1.07 (2 H, m) , 0.67 - 0.79 (2 H, m) . CL (Cond. OLI) : Tr = 1.94 min. CL/EM: Anal. Cale, para [M+H] + C47H55N807: 881.42; encontrado: 881.58.
Ejemplos OL3 a 0L5 A una solución de la sal en TFA del ejemplo 0L3c (115 mg, 0.131 mmol) en DMF (3 mi) se añadió NCS (22.66 mg, 0.170 mmol) y la mezcla resultante se calentó hasta 50°c durante 5 horas. La mezcla de reacción se purificó mediante HPLC preparatoria. Disolvente A: MeCN al 0.5%/ agua al 95%/ NH4Ac 10 mM; Disolvente B: MeCN al 95%/ agua al 5%/ NH4Ac 10 mM ; Columna: Sunfire Prep MS C18 de 30 x 100 mm S10; Longitud de onda: 220 nM; Caudal: 35 mi/min; gradiente: 10% de B a 100% de B durante 30 min con un tiempo de conservación de 2 minutos. Se aislaron dos fracciones, en las que el primer eluido correspondió a una mezcla de análogos monoclorados (Ejemplos 0L4 y 0L5) y el segundo correspondió a análogo bis-clorado (Ejemplo 0L3). Después de la concentración de las dos fracciones correspondientes, la mezcla se redisolvió en metanol y los regioisómeros monoclorados se separaron mediante HPLC preparatoria. Disolvente A: Acetonitrilo al 10% / H20 al 90% + TFA al 0.1%; Disolvente B: acetonitrilo al 90% /agua al 10% / TFA al 0.1% ; Columna: = Phenomenex-Luna 21 X lOOmm S10; Longitud de onda: 220 nM; Caudal: 25 ml/min; gradiente: 10% de B a 50% de B durante 60 min con un tiempo de conservación de 2 minutos. Se aislaron dos fracciones, correspondientes al Ejemplo 0L4 y al Ejemplo 0L5) como TFA y no regioquímica relativa no se determinó.
El Ejemplo 0L3 (36 mg) se recuperó en forma de un sólido blanco. RMN de XH (500 MHz , DMSO-d6) d ppm 12.55 (2 H, d, J=1.22 Hz) , 7.87 (4 H, d, J=8.24 Hz) , 7.78 (4 H, d, J=l .02 Hz), 7.27 (2 H, dd, ^7=18.62, 8.55 Hz) , 5.76 (1 H, s) , 4.91 -5.01 (2 H, m) , 4.45 - 4.58 (2 H, m) , 3.85 (2 H, d, J=9.77 Hz), 3.64 - 3.71 (2 H, m) , 3.54 (6 H, s) , 3.20 - 3.31 (2 H, m) , 2.21 - 2.35 (4 H, m) , 2.02 (3 H, d, J=3.97 Hz) , 1.59 -1.93 (9 H, m) , 1.21 - 1.55 (7 H, m) , 0.93 - 1.02 (2 H, m) , 0.71 (2 H, m) . CL (Cond. 0L3): Tr = 0.95 min. CL/EM: Anal. Cale. para [M+H] + C47H53Cl2F2N807 : 949.34; encontrado: 949.8. Evaluación de la pureza mediante HPLC (Cond. 0L4b) : Ta= 11.10 min; índice de homogeneidad = 100 %.
El Ejemplo 0L4 (10 mg) se recuperó en forma de un sólido blanco. RMN de H (500 MHz , DMS0-d6) d ppm 14.62 (1 H, s ancho) , 12.59 (1 H, s ancho), 8.12 (1 H, s ancho) , 7.87 (8 H, dd, «7=19.38, 8.09 Hz) , 7.80 (2 H, d, J=7.63 Hz) , 7.40 (1 H, d, J=8.85 Hz) , 7.26 (1 H, d, 7=8.24 Hz) , 5.00 (1 H, t, J=7.93 Hz) , 4.95 (1 H, dd, «7=8.39, 5.04 Hz) , 4.54 (1 H, t, «7=7.48 Hz) , 4.49 (1 H, t, «7=7.93 Hz) , 3.86 (3 H, dd, «7=11.44, 2.59 Hz) , 3.79 (1 H, br, s,) , 3.65 - 3.72 (2 H, m) , 3.55 (6 H, d, «7=5.19 Hz) , 3.19 - 3.28 (2 H, m) , 2.20 - 2.43 (4 H, m) , I.89 - 2.07 (5 H, m) , 1.30 - 1.89 (10 H, m) , 0.92 - 1.03 (2 H, m) , 0.80 (1 H, s ancho), 0.72 (1 H, s ancho) LC (Cond. 0L3) : Tr = 0.85 min. CL/EM : Anal. Cale. para [M+H] + C47H54C1F2 807 : 915.38; encontrado: 915.9. Evaluación de la pureza mediante HPLC (Cond. OL4a) : Ta= 9.03 min; índice de homogeneidad = 100 %.
El Ejemplo OL5 (12 mg, rendimiento del 7.96%) se recuperó en forma de un sólido blanco. RMN de XH (500 MHz, DMSO-ds) d ppm 14.62 (1 H, s ancho) , 12.59 (1 H, s ancho) , 8.09 (1 H, s ancho), 7.87 - 7.98 (4 H, m) , 7.84 (2 H, d, «7=8.24 Hz), 7.80 (2 H, d, «7=8.24 Hz) , 7.35 (1 H, d, J=8.24 Hz) , 7.29 (1 H, d, «7=8.55 Hz) , 4.91 - 5.03 (2 H, m) , 4.51 (2 H, ddd, 7=15.64, 7.71, 7.48 Hz) , 3.78 - 3.90 (4 H, m) , 3.64 -3.71 (1 H, m) , 3.54 (6 H, s) , 3.16 - 3.31 (2 H, m) , 2.19 -2.44 (3 H, m) , 2.02 (3 H, s ancho), 1.64 - 1.95 (7 H, m) , 1.27 - 1.54 (6 H, m) , 0.96 (2 H, dd, J=12.21, 7.32 Hz) , 0.81 (1 H, s ancho), 0.70 (1 H, s ancho). CL (Cond. 0L3) : Tr = 0.86 min. CL/EM: Anal. Cale. para [ +H] + C47H54ClF2N807 : 915.38; encontrado: 915.9. Evaluación de la pureza mediante HPLC (Cond. OL4a) : Ta= 8.11 min; índice de homogeneidad = 100 %.
Se puede preparar el Ejemplo OL6 (sal de TFA) partiendo de pirrolidina Vlb/4HC1 y Cap 179 (Enantiómero-1) según el procedimiento descrito para la síntesis de Ejemplo VI. RMN de H (400 Hz, DMSO-d6) d ppm 8.11 (1 H, s ancho), 7.74 - 8.01 (8 H, m) , 7.22 - 7.35 (1 H, m) , 7.14 (1 H, d, J"=7.53 Hz) , 4.87 - 5.15 (2 H, m) , 4.47 (2 H, d, J=l .03 Hz) , 3.80 (1 H, s ancho), 3.65 (1 H, s ancho), 3.55 (6 H, s ancho), 3.36 (4 H, s ancho), 2.20 - 2.37 (3 H, m) , 2.13 (1 H, s ancho), 1.90 - 2.05 (2 H, m) , 1.85 (1 H, s ancho), 1.63 -1.80 (1 H, m) , 1.38 - 1.61 (2 H, m) , 0.62 - 1.14 (25 H, m) . CL (Cond. 2a y 2b) : índice de homogeneidad >95%. CL (Cond. 0L4c) : Tr = 0.85 min. CL/EM: anal, caled, para [M+H] + C5oH62ClN808 : 937.44; encontrado: 937.5.
Ejemplo 0 7 A una solución de 2.2 ' - ( 5.51 - ( bi feni 1 - 4 , 4 ' - diil)bis(lH-imidazol-5,2-diil))dipirrolidina-l- carboxilato de ( 2S , 21 S ) - tere -but i lo (500 mg , 0.800 mmol) en AcOH (30 mi) se añadió bromo (0.041 mi, 0.800 mmol) en AcOH (0.8 mi) gota a gota durante 10 min. La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante toda una noche, se neutralizó con NaHC03 saturado, se extrajo después con CH2C12. Las fases orgánicas se secaron con MgS04 y se concentraron a vacío. El material resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice; EtOAc/Hexano 1:1 después EtOAc /Hexano 2:1) proporcionando bromuro 0L7a.l (200 mg) y dibromuro OL7a.2 (140 mg) como sólidos blancos (nota: el dibromuro eluyó primero de la columna) .
Ejemplo 0L7, Etapa b.l Una mezcla de ácido ciclopropilborónico (13.49 mg, 0.157 mmol) , fosfato de potasio tribásico (90 mg, 0.423 mmol) en agua (0.03 mi) se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. Se añadieron después bromuro OL7a.l (85 mg, 0.121 mmol), acetato de Pd(II) (2.71 mg, 0.012 mmol), triciclohexilfosfina (6.8 mg, 0.024 mmol) y tolueno (1 mi) y la mezcla de reacción se agitó a 110°C durante toda una noche. El componente volátil se retiró al vacío y el residuo se purificó por HPLC preparativa usando la siguiente condición. Columna: ATERS-Sunfire OBD 19 X 100 mm S5; Disolvente A = ACN al 10%-H2O al 90%-TFA al 0.1%; Disolvente B = ACN al 90%-H2O al 10%-TFA al 0.1%; % inicial de B = 10; % final de B = 75; velocidad de flujo = 20 ml/min; tiempo de gradiente = 20 min. La sal de TFA del producto acoplado OL7b.l se recuperó en forma de un sólido amarillo claro (79 mg) .
Ejemplo OL7, Etapa b.2 Una mezcla de dibromuro OL7a.2 (140 mg, 0.179 mmol) , ácido ciclopropilborónico (40.0 mg, 0.465 mmol) , acétate de Pd(II) (8.03 mg, 0.036 mmol), fosfato de potasio tribásico (266 mg, 1.252 mmol), triciclohexilfosfina (20.07 mg, 0.072 mmol) en tolueno (1.5 mi) y agua (0.05 mi) se calentó con un microondas a 110°C durante 1.5 horas. CLEM mostró que no hay ninguna reacción. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró al vacío y el producto en bruto resultante se purificó por HPLC prep . : columna = WATERS-Sunfire OBD 19 X 100 mm S5 ; disolvente A = ACN al 10%-H2O al 90%-TFA al 0.1%; disolvente B = ACN al 90%-H2O al 10%-TFA al 0.1%; % inicial de B = 10. % final de B = 70; velocidad de flujo = 20 ml/min; tiempo de gradiente = 20 min. La sal de TFA del producto acoplado OL7b.2 se obtuvo en forma de un sólido amarillo.
Ejemplo 0L7, Etapa c A una solución de carbamato OL7b preparada anteriormente (79 mg) en CH2C12 (2 mi) se añadió HC1 (2 mi, 8.00 mmol) (4 N en dioxano) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El componente volátil se retiró a vacío proporcionando la sal de HC1 de OL7c (69 mg) , que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Ejemplo 0L7 A una mezcla de ácido (S) -2 - (metoxicarbonilamino) -3-metilbutanoico (20.09 mg, 0.115 mmol) , pirrolidina OL7/4 HC1 (35 mg, 0.057 mmol) en DMF (1 mi) se añadió DiPEA (0.06 mi, 0.34 mmol) y HATU (43.6 mg, 0.115 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y después se añadió amoniaco (2 mi, 2 M en metanol) y la agitación se continuó durante 1 hora adicional. El componente volátil se retiró al vacío y el residuo se purificó por columna de HPLC preparativa: columna = WATERS Sunfire C18 19 X 100 mm 5u; Disolvente A = MeOH al 10%-H2O al 90%-TFA al 0.1%; disolvente B = MeOH al 90%-H2O al 10%-TFA al 0.1%; % inicial de B = 10; % final de B = 75; velocidad de flujo = 25 ml/min; tiempo de gradiente = 18 min. La sal de TFA del Ejemplo OL7 se obtuvo como un sólido blanquecino (24 mg) . Tr = 1.68 min (Cond. OL5a) . (M+H)+ 779.47. RMN de ? (500 Hz, DMSO-d6) d ppm 8.12 (1 H, s ancho) , 7.97 (4 H, dd , <J=12.97, 8.39 Hz) , 7.86 - 7.92 (2 H, m) , 7.80 (2 H, d, J=8.24 Hz) , 7.32 (2 H, t, J=8.70 Hz) , 5.14 (1 H, t, J=7.02 Hz) , 5.05 (1 H, t, J=7.48 Hz) , 4.12 (2 H, t, <J=6.71 Hz) , 3.76 - 3.92 (4 H, m) , 3.54 (6 H, s) , 2.39 (2 H, d, J"=6.10 Hz) , 1.95 - 2.21 (9 H, m) , 1.08 (2 H, d, J=8.24 Hz) , 0.84 (7 H, t, J-=7.17 Hz) , 0.79 (6 H, d, J= 6.41 Hz) , 0.67 - 0.74 (1 H, m) .
Ejeraplos 0L8 a 0L14 Se prepararon los Ejemplos 0L8 - 0L14 como sales de TFA empleando los precursores apropiados y el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo 0L7.
Ejemplo 0L8-0L10 Ejemplo OL1 1 -0L14 Ejemplo 0L15, Etapa a Una mezcla de bromuro 0L7a.l (200 mg, 0.284 mmol), CsF (0.021 mi, 0.568 mmol), Pd(Ph3P)4 (19.71 mg, 0.017 mmol) y 2 - al i 1 - 4 , 4 , 5 , 5 - tet amet i 1 - 1 , 3 , 2 -dioxaborolano (0.107 mi, 0.568 mmol) en THF (3 mi) se calentó a 140°C en microondas durante 1 hora. El disolvente se retiró al vacío y el residuo se purificó por HPLC preparativa. Columna, Phenomenex Luna lOu (30 X 100 mm); disolvente A = CH3CN al 5%-H20 al 95%-NH4OAc 10 mm ; disolvente B = CH3CN al 95%-H20 al 5%-NH4OAc 10 mm; % inicial de B = 30; % final de B 100; velocidad de flujo = 25 ml/min; Tiempo de gradiente = 48 min. Se obtuvo el producto 0L15a en forma de un sólido blanco (90 mg) .
Ejemplo 0L15 Se elaboró carbamato 0L15a para la sal TFA de Ejemplo 0L15 según el procedimiento descrito para la síntesis del Ejemplo 0L7. Tr = 1.73 min (Cond. 0L5a) . (M+H) + 779.53.
Se preparó Ejemplo 0L16 (sal de TFA) a partir de precursores apropiados según el procedimiento descrito para la síntesis del Ejemplo 0L15. Tr = 1.73 min (Cond. 0L5a) . (M+H)+ 863.11.
Ejemplos 0L17 y 0L18 A una solución de OL15a (70 mg, 0.105 mmol) , diyodometano (0.102 mi, 1.263 mmol) en tolueno (0.5 mi) a 0°C se añadió rápidamente dietilcinc (1.263 mi, 1.263 mmol) (1 M en heptano) . La mezcla resultante se agitó a 0°C durante 1.5 horas después a temperature ambiente durante 4 horas . A la mezcla se añadió una solución de NaHC03 acuosa saturada y la mezcla se extrajo con CH2C12. Las fases orgánicas combinadas se secaron bajo MgS04 y se concentraron. El residuo se purificó por HPLC preparatoria: columna, Phenomenex Luna lOu (30 X 100 mm) ; disolvente A = CH3CN al 5%-H20 al 95%-NH4OAc 10 mm; disolvente B = CH3CN al 95%-H20 al 5%-NH4OAc 10 mm; % inicial de B = 30; % final de B = 100; velocidad de flujo = 25 ml/min. Tiempo de gradiente = 25 min. El material resultante (sólido blanco, 40 mg) se disolvió en CH2C12 (1 mi) y se trató con HCl (1 mi, 4.00 mmol) (4 N en dioxano) . La mezcla se agitó a temperature ambiente durante 1 hora. El componente volátil se retiró a vacío proporcionando un producto (35 mg) , que se acopló con ácido ( S ) - 2 - (me toxi carboni lamino ) -3 -met ilbutanoico de acuerdo con el procedimiento descrito para la síntesis del Ejemplo OL7. El residuo en bruto obtenido se purificó por HPLC preparativo: columna = WATERS Sunfire C18 19 X 100 mm 5u; disolvente A = MeOH al 10%-H2O al 90%-TFA al 0.1%; disolvente B = MeOH al 90%-H2O al 10%-TFA al 0.1%; % inicial de B = 20; % final de B = 85; caudal = 25 ml/min; tiempo de gradiente = 27 min. Se aislaron dos fracciones, donde el primero a eluir correspondió a la sal de TFA del Ejemplo OL18 (Tr = 1.74 min (Cond. OL5a) . (M+H)+ 793.54) y el segundo a eluir correspondió a la sal de TFA del Ejemplo OL17 (Tr = 1.77 min (Cond. 0L5a) . (M+H)+ 793.53) .
Ejemplo 0L19 Ejemplo 0L19, Etapa a Una mezcla de l-metil-5- (4 , 4 , 5 , 5-tetrametil-l , 3 , 2-dioxaborolan-2-il) -lH-pirazol (59.1 mg, 0.284 mmol) , fosfato de potasio tribásico (121 mg, 0.568 mmol) en agua (0.2 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 15 min. Se añadieron después bromuro 0L7a.l (100 mg, 0.142 mmol), Pd(Ph3P)4 (9.85 mg, 0.008 mmol y DMF (2 mi) y la mezcla de reacción se agitó durante 40 minutos a 130°C en radiación de microondas. El componente volátil se retiró a vacío y el residuo se purificó por HPLC preparativa usando la siguiente condición. Columna: Phenomenex Luna lOu (30 X 100 mm) ; disolvente A = ACN al 10%-¾0 al 90%- H4QAc 10 mm; disolvente B = ACN al 90%-H2O al 10%-N¾OAc 10 mm; % inicial de B = 10; % final de B = 80; caudal = 25 ml/min; tiempo de gradiente = 15 min. El producto acoplado OL19a se recuperó en forma de un sólido amarillo claro (120 mg) .
Ejemplo 0L19, Etapa b A una solución de carbamato 0L19a preparada anteriormente (120 mg) en CH2C12 (1 mi) se añadió HCl (1 ml, 4.00 mmol) (4 N en dioxano) , y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El componente volátil se retiró a vacío proporcionando la sal de HCl de OL19b (87 mg) , que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional .
Ejemplo OL19 A una mezcla de ácido (S) -2- (metóxocarbonilamino) -3-metilbutanoico (15.30 mg, 0.087 mmol), pirrolidina OL19b/4 HCl (30 mg, 0.044 mmol) en DMF (1 mL) se añadió DiPEA (0.053 ml, 0.306 mmol) y HATU (33.2 mg, 0.087 mmol). La mezca de reacción se agitó a temperature ambiente durante 1 hora, el componente volátil se retiró al vacío y el residuo se purificó por HPLC preparativa: columna = WATERS Atlantis OBD 30 X 100 mm 5u; disolvente A = MeOH al 10%-H2O al 90%-TFA al 0.1%; disolvente B = MeOH al 90%-H2O al 10%-TFA al 0.1%; % inicial de B = 20; % final de B = 75; caudal = 25 ml/min; tiempo de gradiente = 25 min. La sal de TFA del Ejemplo 0L19 se obtuvo como un sólido blanco (33 mg) . Tr = 1.63 min (Cond. OL5a) . (M+H)+ 819.40. RM de XH (500 MHz , DMSO-d6) d ppm 8.13 (1 H, s) , 7.88 - 7.96 (2 H, m) , 7.78 - 7.88 (4 H, m) , 7.57 (1 H, s ancho), 7.43 - 7.51 (2 H, m) , 7.33 (2 H, dd, .7=8.39, 3.51 Hz) , 6.42 (1 H, s ancho), 5.10 - 5.18 (2 H, m) , 4.11 (2 H, td, J=7.93, 2.75 Hz) , 3.78 - 3.91 (4 H, m) , 3.59 - 3.66 (3 H, m) , 3.54 (6 H, d, J=1.53 Hz) , 2.35 - 2.45 (1 H, m) , 2.30 (1 H, d, J=7.32 Hz) , 2.13 - 2.22 (2 H, m) , 1.93 - 2.13 (6 H, m) ( 0.89 (5 H, d, J=6.71 Hz) , 0.83 (6 H, t, J=6.87 Hz), 0.78 (3 H, d, J=6.71 Hz) .
Ejemplos OL20 a OL25 Los ejemplos OL20 a OL25 se prepararon como sales de TFA empleando los precursors apropiados y el procedimiento descrito por la preparación del Ejemplo OL19.
Ejemplo OL20-OL23 Ejemplo OL24-OL25 Ejemplo DSTL-1 emplo DSTL-1, Etapa A una solución de ácido 6-bromo-2-naftoico (16.5 g, 65.7 mmol) , trietilamina (18.32 mi, 131 mmol) y alcohol terc-butílico (7.54 mi, 79 mmol) en tolueno (225 mi) se añadió difenilfosforilazida (17.09 mi, 79 mmol) y se agitó durante 4 horas a 1001C. Los volátiles se eliminaron mediante evaporación rotatoria y el residuo se suspendió en EtOAc (500 mi) y se lavó con agua y salmuera. Tras la concentración se formó un precipitado, que se aisló mediante filtración y se lavó con Et20/Hex a 1:1 ara dar el Ejemplo DSTL-1, etapa a (10.5 g) . Se aisló una segunda cosecha de producto menos puro tras la concentración del licor madre (9.8 g) ; rendimiento combinado (93%). EM/CL (Cond. J4) : TR = 3.44 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+Na] + Ci5H16BrN02 : 345.02; encontrado 345.03.
E emplo DSTL-1, Etapa b El Ejemplo DSTL-1, etapa a (5 g, 15.52 mmol) se diluyó en ácido acético (50 mi) y, gota a gota, se añadió ácido nítrico ahumado (2.3 mi) durante 20 min. La reacción se agitó durante 2 horas y el producto, aislado mediante filtración, se repartió entre DCM y solución de NaHC03 saturado. La capa orgánica se concentró y se obtuvo el Ejemplo DSTL-1, etapa b, 5.7 g (cant.) . EM/CL (Cond. J4): TR = 3.52 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+Na] + Ci5Hi5BrN204 : 390.02; encontrado 390.99.
Ejemplo DSTL-1, Etapa c A una solución del Ejemplo DSTL-1, etapa b (2 g, 5.47 mmol) en MeOH (100 mi) se añadió cloruro de estaño (II) dihidrato (3 g, 16.34 mmol) y la solución se agitó durante 18 horas a 70 °C. El disolvente se eliminó mediante evaporación rotatoria y el Ejemplo DSTL-1, etapa c, (suposición teórica 1.25 g) se secó en alto vacío. EM/CL (Cond. J4) : TR = 1.49 min. CL/EM Anal. Calculado para [ +H]+ Ci0HgBrN2: 237.00; encontrado 236.96.
Ejemplo DSTL-1, Etapa d A una solución del Ejemplo DSTL-1, etapa c (1.25 g, 5.48 mmol), el ejemplo 1, etapa b (1.246 g, 5.48 mmol) y base de Hunig (7.09 g, 54.8 mmol) en DMF (70 mi) se añadió HATU (2.085 g, 5.48 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 6 horas antes de repartirse entre EtOAc (500 mi) y NaHC03 saturado (150 mi) . Las sales de estaño que precipitaron se eliminaron mediante filtración en celite y la fase orgánica se concentró dando un residuo que se suspendió en AcOH (100 mi) y se calentó a 60 °C durante 18 horas. El disolvente se eliminó mediante evaporación rotatoria en alto vacío y el residuo se suspendió en CH2C12 y se lavó con solución de NaHC03 saturado. Después de concentrar, el producto en bruto se cargó (DCM) en un cartucho de gel de sílice Thompson (110 g) y se sometió a elución por gradiente; 15 - 100% de B durante 1 1 dando el Ejemplo DSTL-1, etapa d (420 mg, 44 %) . EM/CL (Cond. J ) : TR = 2.51 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C2iH22Br 302 : 430.10 ; encontrado 430.06.
Ejemplo DSTL-1, etapa d.l El Ejemplo DSTL-1, etapa d.l se preparó a partir del Ejemplo 1, etapa b, de acuerdo con el procedimiento descrito para la síntesis de su análogo desmetano en la solicitud de patente O2008/021927.
Ejemplo DSTL-1, Etapa e A una solución del Ejemplo DSTL-1, etapa d.l (560 mg, 1.39 mmol) en D F (15 mi) se añadió NCS (203 mg, 1.52 mmol) . La mezcla de reacción se calentó a 50 °C durante 16 h. La solución se purgó con nitrógeno evaporando DMF y el residuo en bruto se cargó (DCM) en una columna Thompson de Si02 (80 g) y se realizó elución por gradiente (Biotage) . Segmento 1: 10-100% de B en 1.5 1. Segmento 2: Conservación 100% B 300 mi. (A/B Hexanos /EtOAc ) . Se aisló el Ejemplo DSTL-1, etapa e (589.1 mg , rendimiento del 92 %) . EM/CL (Cond.-D4) : TR = 2.61 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+Na ] + C19H22CI 3O: 462.04; encontrado 462.07.
Ejemplo DSTL-1, Etapa f Se añadió tetrakis (trifenilfosfina) paladio (76 mg, 0.066 mmol) se añadió en una porción a una suspensión agitada del Ejemplo DSTL-1, etapa e (580 mg, 1.32 mmol), bis (pinacolato) diboro (671 mg, 2.64 mmol) y acetato potásico (324 mg, 3.30 mmol) en una solución de dioxano (12 mi) en un vaso a presión con tapa de rosca. La mezcla de reacción se evacuó y se lavó con argón (3x) y se introdujo en un baño de aceite precalentado (0°C) y se agitó durante 16 horas. Después de enfriar, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con solución de NaHC03 saturado, salmuera y se secó sobre Na2S04. El residuo bruto se cargó (DCM) en una columna Thompson de Si02 (80 g) y se efectuó elución por gradiente (Biotage) . Segmento 1: 5-100% de B en 1.5 1. Segmento 2: Conservación 100% B 300 mi. (A/B CH2Cl2/EtQAc) . Se aisló el Ejemplo DSTL-1, etapa f (714.7 mg, rendimiento del 95%) en forma de espuma amarilla. EM/CL (Cond.-D4): TR = 2.69 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H]+ C25H34BCIN3O4 : 486.24; encontrado 486.26.
Ejemplo DSTL-1, Etapa g Se añadió tetrakis (trifenilfosfina) paladio (27.0 mg, 0.023 mmol) se añadió en una porción a una suspensión agitada del Ejemplo DSTL-1, etapa d (200 mg, 0.467 mmol) , el Ejemplo DSTL-1, etapa f (250 mg, 0.514 mmol) y NaHC03 (196 mg, 2.335 mmol) en una solución desgasificada de DME (4 mi) y agua (1 mi) en argón en un vaso a presión con tapa de rosca. La solución se evacuó y se cargó con argón (3x) y se introdujo en un baño de aceite precalentado (80°C) y se agitó durante 14 horas. La mezcla se diluyó con EtOAc (10 mi), THF (2 mi) y MeOH (1 mi) , se lavó con salmuera y se secó sobre Na2S04. Después de concentrar para eliminar el disolvente, el residuo se cargó en una columna Thompson de Si02 (80 g) y se eluyó (Biotage) por gradiente. Segmento 1: 20-100% de B en 1.5 1. Segmento 2: Conservación 100% de B para 300 mi; A/B Hexanos/EtOAc . Se aisló el Ejemplo DSTL-1, etapa g (195.0 mg, 52.6%) en forma de un sólido marrón. EM/CL (Cond.-D4) : TR = 2.40 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C4oH44Cl 604 : 707.31; encontrado 707.43.
Ejemplo DSTL-1, Etapa h sal HC! A una solución agitada del Ejemplo DSTL-1, etapa g (65 mg, 0.092 mmol) en MeOH (1 mi) se añadió HCl 4N frío (0°C) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas, se concentró y se introdujo en alto vacío proporcionando el DSTL-1, etapa h, en forma de un sólido naranj a-marrón y en forma de una sal de tetra HC1. EM/CL (Cond.-D4): TR = 1.63 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H]+ C3oH28Cl 6: 507.21; encontrado 507.26.
Ejemplo DSTL-1 El Ejemplo DSTL-1 se preparó a partir del Ejemplo DSTL-1, etapa ha, de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo GW2. La purificación se realizó mediante HPLC preparativa (0 - 50% de B) en un gradiente de 25 min a 40 ml/min) usando una columna Waters -SunFire (30 x 100 mm, S5) en la que el disolvente B = CH3CN al 90% - H20 al 10% - TFA al 0.1% y A = CH3CN al 5% H20 al 95% - TFA al 0.1%. %) . Se aisló el Ejemplo DSTL-1 (70.4 mg, 67.7%) en forma de un sólido blanco. RMN de t? ( MeOD , 500 MHz , d) : 8.47 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 8.44 (s, 1H) , 8.15 (s, 1H), 8.13 (s, 1H) , 7.91 (d, J = 8.6 Hz, 2H) , 7.85 (d, J = 8.6 Hz, 2H) , 7.80 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 5.34-5.31 (m, 1H) , 5.07 (t, J = 1.3,2 Hz, 1H) , 4.61 - 4.58 (m, 2H) , 3.39-3,31 (m, 1H) , 3.75 -3.72 (m, 1H) , 3.69 (s, 3H) , 3.68 (s, 3H) , 2.83-2.81 (m, 1H) , 2.64 -2.59 (m, 1H) , 2.49-2.48 (m, 2H) , 2.23-2.14 (m, 3H) , 2.05-2.03 (m, 1H) , 1.18-1.12 (m, 2H) , 1.05-0.92 (m, 13H) , 0.83-0.81 (m, 1H) . EM/CL (Cond. -D4) : Tr = 2.24 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C44H5oClN806 : 821.36 ; encontrado 821.54.
Ejemplo DSTL-2 El Ejemplo DSTL-2 se preparó a partir del Ejemplo DSTL-l, etapa ha, de acuerdo con el procedimiento descrito para la purificación del Ejemplo GE2 a excepción de que se usa ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) -2- (tetrahidro-2H-piran-4-il) acético en lugar de Cap-51. La purificación se realizó mediante HPLC preparativa (0 - 50% de B) en un gradiente de 25 min a 40 ml/min) usando una columna Waters- SunFire (30 x 100 mm, S5) en la que el disolvente B = CH3CN al 90% - H20 al 10% - TEA al 0.1% y A = CH3CN al 5% - H20 al 95% - TEA al 0.1%. Se aisló el Ejemplo DSTL-2 (18.0 mg) en forma de un sólido blanco. EM/CL (Cond.-D4): TR = 2.04 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + Cí^Cl gOe : 905.38; encontrado 905.60.
Ejemplos DSTL-3 y DSTL-4 Ejemplo DSTL-3, etapa a y DSTL-4, etapa a Una solución de bromo (0.079 mi, 1.4 mmol) e AcOH (1 mi) se añadió en porciones a una solución agitada del Ejemplo 1, etapa d (1.0 g, 1.541 mmol) en AcOH (40 mi), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se suspendió en DMC y se lavó con solución de NaHC03 saturado. La capa acuosa se extrajo dos veces más con DCM y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera y se secaron (Na2S0 ) . El residuo se cargó (DCM) en un cartucho Thompson de gel de sílice (160 g) y eluyeron con 30 - 100% de B en 2 1. Segmento 2: Conservación 100% de B para 800 mi. A/B Hexanos/EtOAc . Se aislaron 3 componentes; Material de partida (303.6 mg) ; Ejemplo DSTL-3, etapa a (X = H; 382.1 mg) ; sólido amarillo EM/CL (Cond. -D4) : TR = 2.21 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H]+ C38H44Br 604 : 729.26 ; encontrado: 729.28; Ejemplo DTSL-4, etapa a (X = Br; 287.2 mg) ; sólido amarillo claro. EM/CL (Cond.-D4) : TR = 2.62 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C38H43Br2 604 : 807.17; encontrado: 807.33.
Ejemplo DSTL-3, etapa b y DSTL-4, etapa b Los productos del Ejemplo DSTL-3, etapa b y DSTL-4, etapa b se realizaron por separado. La eliminación de los grupos protectores se efectuó tal como se ha descrito en el procedimiento del Ejemplo DSTL-1, etapa h.
X = H; Ejemplo DTSL-3, etapa b: Sólido amarillo, 33.1 (pureza del 97%); EM/CL (Cond.-D4): Tr = 1.49 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C28H28BrN6: 529.16; encontrado 529.24. X = Br; Ejemplo DTSL-4, etapa b: Sólido amarillo, 33 mg (pureza del 96%); EM/CL (Cond.-D4): Tr = 1.82 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C28H27Br2 6 : 607.07; encontrado 607.16.
Ejemplo DSTL-3 El Ejemplo DSTL-3 se preparó a partir del Ejemplo DSTL-3, etapa b, de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo GW2. La purificación se realizó mediante HPLC preparativa; (0 -50% de B) en un gradiente de 30 min a 40 ml/min) usando una columna Waters-SunFire (30 x 100 mm, S5) B = CH3CN al 90% - H20 al 10% TFA al 0.1% y A = CH3CN al 5% - H20 al 95% - TFA al 0.1%. Se aisló el Ejemplo DSTL-3 (29.0 mg) en forma de un sólido blanco. EM/CL (Cond.-D4): Tr = 2.07 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C42H5oBrN806 : 843.30; encontrado 843.39.
Ejemplo DSTL-4 El Ejemplo DSTL-4 se preparó a partir del Ejemplo DSTL-4, etapa b, de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo GW2. La purificación se realizó mediante HPLC preparativa; (0 -50% de B) en un gradiente de 30 min a 40 ml/min) usando una columna aters-SunFire (30 x 100 mm, S5) B = CH3CN al 90% - H20 al 10% - TFA al 0.1% y A = CH3CN al 5% - H20 al 95% - TFA al 0.1%. Se aisló el Ejemplo DSTL-4 (30.2 mg) en forma de un sólido blanco. RM al H (MeOD, 500 MHz , d) : 7.82 (s, 8H) , 5.08-5.05 (m, 2H) , 4.58 (app d, J = 6.7 Hz, 2H) , 3.76-3.74 (m, 2H) , 3.67 (s, 6H) , 2.57-2.52 (m, 2H) , 2.50-2.44 (m, 2 H) , 2.22-2.17 (m, 2H) , 2.06-2.01 (m, 2H) , 1.12-1.08 (m, 2H) , 1.04 (d, J = 6.7 Hz, 6H) , 0.95 (d, , J = 6.7 Hz, 6H) , 0.84-0.82 (m, 2H) . EM/CL (Cond.-D4): Tr = 2.56 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C42H49BrN806 : 921.31; encontrado 921.30.
Ejemplo DSTL-5 Ejemplo DSTL-5, etapa a Se añadió Accufluor (al 45-50% en alúmina) (345 mg, 1.2 mmol) en una parte a una suspensión agitada del Ejemplo 1, Etapa d, 3.3 ' - (5.5 ' - (bifenil-4 , 4 ' -diil) bis (lH-imidazol-5,2-diil))bis(2-azabiciclo[3.1.0] hexano-2 -carboxilato) de (IR, 1 'R, 3S, 3 'S, 5R, 5 'R) -tere-butilo (500 mg, 0.77 mmol) en DMF seco (5 mi) a ta. La mezcla se situó dentro de un baño de aceite precalentado a 60°C y se agitó 4 h antes de que el disolvente se retirara por evaporación rotatoria en alto vacío. El producto en bruto se cargó a un cartucho de gel de sílice de Thompson de 90 g y eluyó del 10 - 100% de B en 2 litros y se mantuvo B al 100% B para 1 1 (disolvente B = EtOAc ; disolvente A = hexanos) . Un segundo gradiente se aplicó eluyendo 0 - 100% de B en 2 litros (disolvente B = metanol; disolvente A = EtOAc) . Se recogieron tres fracciones: Ejemplo DSTL-5, etapa a (X=F) , 3.3' -(5.5 '-(bifenil-4 , 41 -diil) bis (4-fluoro-lH-imidazol-5 , 2-diil)) bis(2-azabiciclo [3.1.0] hexano-2-carboxilato) de (IR, l'R^S^'S^R^'R) -tere-butilo (45.0 mg, al 7%) como un sólido amarillo; Ejemplo DSTL-5, etapa a (X=H) 3-(5-(4'-(2-( (IR, 3S( 5R) -2- (terc-butoxicarbonil ) -2-azabiciclo [3.1.0] hexan-3-il) -lH-imidazol-5-il)bifenil-4-il) -4-fluoro-lH-imidazol-2-il) -2-azabiciclo [3.1.0] hexano-2-carboxilato de ((1R,3S,5R)-terc-butilo (193 mg, al 32%) como un sólido amarillo y recuperó el material de partida (153 mg, al 24%) .
Ejemplo DSTL-5, etapa a X = F: una muestra (-10 mg) del primer compuesto que eluye se purificó adicionalmente por HPLC preparativa (B al 0 - 100%) durante un gradiente de 30 minutos (@ 40 ml/min) usando una columna Phenomenex Luna ( 30 x 100 mm, lOu) donde el disolvente B = CH3CN al 90% - H20 al 10% - TFA al 0.1% y A = CH3CN al 5% - H20 al 95%- TFA al 0.1%. Se hubo aislado (4.6 mg) como un sólido amarillo claro. CL/EM (Cond.-D4) : Tr = 4.43 min. CL/EM anal, caled, para [M+H] + C38H43F2N604 : 685.33 ; encontrado 685.38.
Ejemplo DSTL-5, etapa a X = H: una muestra (-15 mg) del segundo compuesto que eluyese purificó adicionalmente por HPLC preparativa (B al 0 - 100%) durante un gradiente de 30 minutos (@ 40 ml/min) usando una columna Phenomenex Luna (30 x 100 mm , 10 u) donde el disolvente B = CH3CN al 90% - H20 al 10% -TFA al 0.1% y A = CH3CN al 5% - H20 al 95% - TFA al 0.1%. Se hubo aislado (11.2 mg) como un sólido blanquecino. CL/EM (Cond.-D4) : Tr = 4.43 min. CL/EM anal. caled. durante [M+H] + C38H44FN604 : 667.34; encontrado 667.40.
Ejemplo DSTL-5, etapa b X = H X = F Los productos de Ejemplo DSTL-5, etapa a, (X = F) y (X = H) , se llevaron adelante por separado. La eliminación de los grupos protectores se llevó a cabo como se describe en el procedimiento del Ejemplo DSTL-1, etapa h.
Ejemplo DTSL-5, etapa b (X = F) : sólido amarillo, 23.4 mg; CL/EM (Cond.-D4): Tr = 2.89 min. CL/E anal, caled, para [M+H]+ C28H27F2 6 : 485.22; encontrado 485.25.
Ejemplo DTSL-5, etapa b (X = H) : 18 mg (puro al 95%); CL/EM (Cond.-D4): Tr = 2.55 min. CL/EM anal, caled. para [M+H] + C28H28F 6: 467.25; encontrado 467.27.
Ejemplo DSTL-5 Se preparó el ejemplo DSTL-5 a partir del ejemplo DSTL-5, etapa b (X = H) según el procedimiento descrita para la preparación del Ejemplo GW2. La purificación se llevó a cabo por HPLC preparativa; 0% - 50%B en un gradiente de 30 min @ 40ml/min usando una columna de Waters-SunFire (30 x 100 mm, S5) B = CH3CN al 90% - H20 al 10% - TFA al 0.1% y A = CH3CN al 5% - H20 al 95% - TFA al 0.1%. Se hubo aislado Ejemplo DSTL-5 (37.3 mg, al 39%) como un sólido amarillo pálido. RMN de 2H (MeOD, 500 MHz, d) : 7.88 (s, 1 H) , 7.84 (d, J=8.5 Hz, 2H) , 7.80 (d, J=8.5 Kz, 2H) , 7.77 (d, J=8.5 Kz, 2H) , 7.68 (d, J=8.5, 2H) , 5.13 (t, J=7. O Hz, 1H) , 5.04 (t, J= 6.1Hz, 1H) , 4.56 (d, J= 6.7 Hz, 2H) 3.82 (s ancho, 1H) , 3.68-3.67 (m, 7H) , 2.72-2.68 (m, 1H) , 2.51-2.43 (m, 3H) , 2.21-2.14 (m, 2H) , 2.09 (s ancho, 1H) , 2.03 (s ancho, 1H) , 1.15-1.09 (m, 2H) , 1.02 (d, J=6.7 Hz, 6H) , 0.94 (t, J=7.0 Hz, 6H) , 0.90 (s ancho, 1H) , 0.81 (s ancho, 1H) . CE/EM (Cond-D4): RT = 3.45 min. CL/EM Anal. Cale. para [M+H] + C42H5oFN806 : 781.39; encontrado 781.54.
Ejemplo DSTL-6 Se preparó el Ejemplo DSTL-6 a partir del Ejemplo DSTL-5, etapa b (X = H) según el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo GW2 salvo usando ácido (S)-2- (metoxicarbonilamino) -2- (tetrahidro-2H-piran-4-il) acético en vez de Cap-51. La purificación se llevó a cabo por HPLC preparativa (B al 0 - 50%) en un gradiente de 25 minutos (@ 40ml/min) usando una columna Waters-SunFire (30 x 100 mm, S5) donde el disolvente B = CH3CN al 90% - H20 al 10% - TFA al 0.1% y A = CH3CN al 5% - H20 al 95% - TFA al 0.1%. Se ha aislado el Ejemplo DSTL-6 (37.1 mg, al 36%) en forma de un sólido blanco. CL/EM (Cond.-D4): Tr = 3.17 min. CL/EM Anal, caled, para [M+H] + C48H54FN806: 865.41; encontrado 865.55.
Ejemplo DSTL-7 Se preparó el Ejemplo DSTL-7 a partir del Ejemplo DSTL-5, etapa b (X = F) según el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo G 2 salvo usando ácido (S)-2- (metoxicarbonilamino) -2- (tetrahidro-2H-piran-4-il) acético en vez de Cap-51. La purificación se llevó a cabo por HPLC preparativa (B al 0 - 50%) en un gradiente de 25 min (@ 40ml/min) usando una columna Waters-SunFire (30 x 100 mm, S5) donde el disolvente B = CH3CN al 90% - H20 al 10% - TFA al 0.1% y A = CH3CN al 5% - H20 al 95% - TFA al 0.1%. Se hubo aislado el Ejemplo DSTL-7 (14 mg, al 25%) en forma de un sólido blanco. RMN de XH (MeOD, 500 MHz , d) 7.72 (d, J=8.5 Hz, 4H) , 7.64 (d, J=8.5 Hz, 4H) , 5.03 (t, J=6.7 Hz, 2H) , 4.63 (d, J= 7.6 Hz, 2H) , 3.97-3.93 (m, 4H) , 3.72 (s ancho, 2H) , 3.67 (s, 6H) , 3.42-3,37 (m, 4H) , 2.44-2.42 (m, 4H) , 2.02 (s ancho, 4H) , 1.63-1.57 (m, 6H) , 1.46-1.43 (m, 2H) , 1.14-1.19 (m, 2H) , 0.80 (s ancho, 2H) : CL/EM (Cond.-D4): Tr = 3.17 min. CL/EM Anal. caled. para [M+H] + C46H53F2 806 : 883.40; encontrado 883.57.
Ejemplo DSTL-8 Se añadió Accufluor (al 45-50% en alúmina) (274 mg, 0.92 mmol) en una parte a una suspensión agitada de Ejemplo GW1, Etapa a, 5.5 ' - (5.51 - (bifenil-4 , 4 ' -diil) bis (lH-imidazol- 5 , 2-diil) ) bis (2-metilpirrolidina-l-carboxilato) de (2S, 21 S, 5S, 51 S) -tere-butilo (400 mg, 0.6 mmol) en DMF seco (4 mi) a ta. La mezcla se situó en un baño de aceite precalentado a 60°C y se agitó 4 horas antes de que se añadan 135 mg adicionales de Accufluor y se siguieron agitando a 60°C durante 16 h. El disolvente se retiró por evaporación rotatoria en alto vacío y el producto en bruto se cargó en un cartucho de gel de sílice de 90 g Thompson y eluyó del 10 - 100% de B en 2 litros y se mantuvo B al 100% para 1 1 (disolvente B = EtOAc; disolvente A = hexanos) . Se aplicó un segundo gradiente eluyendo B al 0 - 100 % en 2 1 (disolvente metanol; disolvente A = EtOAc) Se recogieron tres fracciones: Ejemplo DSTL-8, etapa a (X = F) , 5.5' -(5.5 '-(bifenil-4, 4 ' -diil) bis (4-fluoro-lH-imidazol-5 , 2-diil) )bis (2-metilpirrolidina- 1-carboxilato) de (2S, 2 'S, 5S, 5 'S) -terc-butilo (33 mg, al 5.1%) en forma de un sólido naranja amarillento. CL/EM (Cond.-D4): Tr = 4.64 min. CL/EM Anal. caled, para [M+H] + Cagl^FzNeC : 689.36; encontrado 689.50. Ejemplo DSTL-8, etapa a (X = H) 2- (5- (4 ' - (2- ( (2S, 5S) -1- (terc-butoxicarbonil ) -5-metilpirrolidin-2-il) -lH-imidazol-5-il) bifenil-4-il) -4-fluoro-lH-imidazol-2-il) -5-metilpirrolidine- 1-carboxilato de (2S, 5S) -tere-butilo (108.6 mg, al 17%) en forma de un sólido naranja amarillento. CL/EM (Cond.-D4): Tr = 3.83 min. CL/EM Anal, caled, para [M+H] + C38H48FN604: 671.37; encontrado 671.48 y se recuperó el material de partida (321.2 mg, al 80%) como un sólido naranja roj izo .
Ejemplo DSTL-8, etapa b Los productos del Ejemplo DSTL-8, etapa a, (X = F) y (X = H) , se llevaron adelante por separado. La eliminación de los grupos protectores se llevó a cabo como se describe en el procedimiento del Ejemplo DSTL-1, etapa h.
Ejemplo DTSL-8, etapa b (X = F) : sólido amarillo, 22.7 mg; CL/EM (Cond.-D4) : Tr = 3.03 min. CL/EM Anal, caled, para [M+H] + C28H3oF2 6: 489.26; encontrado 489.35.
Ejemplo DTSL-8, etapa b (X = H) : 35 mg (puro al 95%) ; CL/EM (Cond.-D4) : Tr = 2.63 min. CL/EM Anal, caled, para [M+ H] + C28H3iFN6 : 471.27 ; encontrado 471.33.
Ejemplo DSTL -8 El Ejemplo DSTL-5 se preparó a partir del Ejemplo DSTL-8, etapa b (X = H) según el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo GW2. La purificación se llevó a cabo por HPLC preparativa; 0% - 50% de B en un gradiente de 30 min @ 40 ml/min usando una columna Waters - SunFire (30 x 100 mm, S5) B = CH3CN al 90% - H20 al 10% - TFA al 0.1% y A = CH3CN al 5% - H20 al 95% - TFA al 0.1%. Se hubo aislado Ejemplo DSTL-8 (31.9 mg , al 41%) como un sólido de color melocotón claro. CL/EM (Cond-D4) : Tr 3.66 min. CL/EM Anal. caled. para [M+H] + C42H54FN806: 785.42; encontrado 785.48.
Ejemplo DSTL-9 El Ejemplo DSTL-9 se preparó a partir del Ejemplo DSTL-8, etapa b (X = H) de acuerdo al procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo G 2 salvo usando ácido (S)-2- (metoxicarboni lamino) -2- ( tet rahidro - 2H -pi ran- 4 -il)acético en vez de Cap-51. La purificación se llevó a cabo por HPLC preparativa (B al 0 - 50%) en un gradiente de 25 min (@ 40 ml/min) usando una columna Waters -SunFire (30 x 100 mm, S5) donde el disolvente B = CH3CN al 90% - H20 al 10% - TFA al 0.1% y A = CH3CN al 5% - H20 al 95% - TFA al 0.1%. Se hubo aislado Ejemplo DSTL-9 (27.2 mg , al 32%) en forma de un sólido amarillo pálido. CL/EM (Cond.-D4) : Tr 3.37 min. CL/EM Anal, caled, para [M+H] + C46H58FN808 : 869.44; encontrado 869.54.
Ejeraplo DSTL-10 El Ejemplo DSTL-10 se preparó a partir del Ejemplo DSTL-8, etapa b (X = F) según el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo GW2 salvo porqué usa ácido (S) -2- (metoxicarbonilamino) -2-(tetrahidro-2H-piran-4-il) acético en vez de Cap-51. La purificación se llevó a cabo por HPLC preparativa (B al 0 - 50%) en un gradiente de 25 min (@ 40ml/min) usando una columna aters-SunFire (30 x 100 mm, S5) donde el disolvente B = CH3CN 90% - H20 al 10% - TFA al 0.1% y A = CH3C al 5% - H20 al 95% - TFA al 0.1%. Se hubo aislado Ejemplo DSTL-10 (13.8 mg, al 25%) como un sólido amarillo pálido. CL/E (Cond.-D4) : Tr = 4.28 min. CL/EM Anal, caled, para [M+H]+ ^^F^Oa : 887.43; encontrado 887.50.
Ejemplo DSTL-11 Ejemplo DSTL-11, etapa a La preparación de DSTL-11, etapa a, se llevó a cabo en modi análogo al compuesto J5 en solicitud de patente 20080213 US 10889A USCIP. CL/EM (Cond.-D4): Tr = 2.22 min. CL/E Anal, caled, para [M+H] + C22H27BrN304 : 476.12; encontrado 478.17.
Ejemplo DSTL-11, etapa b Se añadió hidróxido de sodio 5N (1.469 mi, 7.4 mmol) a una solución de DSTL-11, etapa a 3- (4- (4-bromofenil) -5- (etoxicarbonil ) -lH-imidazol-2-il) -2-azabiciclo [3.1.0] hexano-2-carboxilato de (IR, 3S, 5R) -tert-butilo (1.75 g, 3.7 mmol) en etanol (40 mi). La mezcla se agitó a 50°C durante 16 horas y se añadió NaOH 5N adicional (1.5 mi) . La mezcla se agitó a 60°C durante 6 h y se añadió NaOH 5N adicional (0.75 mi) y la agitación se continuó a 60°C durante 16 h. El etanol se retiró por evaporación rotatoria y el residuo se llevó en acetato de etilo y se neutralizó a pH = 5 (HCl 1 N aprox. 20 mi hasta que se cierra a pH = 7, después con regulador de pH fosfato pH =5) . La fase orgánica se seáró, se lavó con salmuera, se secó y se concentró. Se hubo aislado Ejemplo DSTL-11, etapa b (1.6 g, al 92%) en forma de un sólido blanco. CL/EM (Cond.-D4): Tr = 1.78 min. CL/EM Anal, caled, para [M+H] + C2oH22Br 304 : 448.09; encontrado 447.97.
Ejemplo DSTL-11, etapa c Se añadió CDI (0.58 g, 3.57 mmol) en una parte a una solución agitada de DSTL-11, etapa b, 4- (4-bromofenil) -2-((lR,3S,5R)-2- ( terc-butoxicarbonil ) -2-azabiciclo [3.1.0] hexan- 3 - il ) - 1H- imidazol - 5 -carboxí1 ico (1.6 g, 3.57 mmol) en THF seco (30 mi) . La mezcla se agitó a 50°C durante 4 h antes de enfriarse a ta y se añadió NH40H (conc.) (4.96 mi, 35.7 mmol). La mezcla se agitó durante 16 horas antes, se diluyó con EtOAc , se lavó con solución de NaHC03 saturada, salmuera y se secó. El producto en bruto se cargó a un cartucho de gel de sílice de 160 g de Thompson y eluyó 40 - 100% de B en 3 1, seguido por una retención a B al 100% para 1 1. (Disolvente B = EtOAc ; disolvente A = hexanos) . Se hubo aislado Ejemplo DSTL-11, etapa c, (1.76 g, al 99%). CL/EM (Cond.-D4): Tr = 1.75 min. CL/EM Anal, caled, para [M+H] + C2oH24BrN403 449.10 ; encontrado: 449.06.
Ejemplo DSTL-11, etapa Se añadió 2 , 4, 6-tricloro-l, 3 , 5-triazina (cloruro cianúrico) (168 mg, 0.91 mmol) en una parte a una solución agitada de 3- (4- (4 -bromofenil ) -5-carbamoil-lH-imidazol-2-il) -2 -azabiciclo [3.1.0] hexano-2 -carboxilato de ( IR, 3S , 5R) -tere-butilo (903 mg, 1.82 mmol) en DMF seco (4 mi) . La mezcla se agitó durante 2 horas y después se calentó a 50°C durante 16 h. Se añadió cloruro cianúrico (20 mg) y la mezcla se agitó adicionalmente a 50°C durante 24 horas, se diluyó con EtOAc y agua y la fase orgánica se lavó con solución de NaHC03 saturada, salmuera y se secó (Na2S04) . El producto en bruto se cargó a un cartucho de gel de sílice de 90 g de Thompson y se eluyó 25 -100% B en 1.5 1, seguido por una retención a B al 100% para 500 mL. (Disolvente B = EtOAc; disolvente A = hexanos) . Se hubo aislado Ejemplo DSTL-11, etapa d, (346 g al 60%) como una espuma canela amarillenta. CL/EM (Cond.-D4): Tr = 3.93 min. CL/EM Anal, caled, para [M+H]+ C2oH22BrN402431.09; encontrado: 431.01.
Ejemplo DSTL-11, etapa e Se añadió tetrakis (trifenil) paladio (45.8 mg, 0.04 mmol) a una suspensión purgada con argón de Ejemplo DSTL-11, etapa d, 3- (5- (4-bromofenil) -4 -ciano- 1H- imidazol -2 - il ) -2-azabiciclo [3.1.0] hexano-2 -carboxilato de (IR, 3S, 5R) -tere-butilo (340 mg, 0.79 mraol) , 3 - (4 - (4 - (4 , 4 , 5 , 5 -tetrametil-1,3, 2-dioxaborolan-2-il) fenil) -1H- imidazol -2 -il) -2-azabiciclo [3.1.0] hexano-2 -carboxilato de ( IR, 3S , 5R) -tere-butilo (393 mg, 0.871 mmol) y NaHC03 (333 mg, 3.96 mmol) en DME (6 mi) y agua (1.5 mi) en un tubo de paredes gruesas, coronado por un tornillo. La mezcla de reacción se purgó por flujo con argón, se selló y se sumergió en un baño de aceite precalentado (80°C) y se agitó 14 h. La mezcla se diluyó con EtOAc, se lavó con solución de NaHC03 saturada, salmuera, se secó sobre (Na2S04) . El producto en bruto se cargó a un cartucho de gel de sílice de 90 g Thompson y se eluyó con 35 - 100% de B en 1.5 1, seguido por retención a B al 100% para 0.5 1. (Disolvente B = EtOAc; disolvente A = hexanos) . Se hubo aislado Ejemplo DSTL-11, etapa e, (200 mg, al 36%) como una espuma amarilla clara.
Una muestra pequeña (-20 mg) se sometió a purificación adicional por HPLC prep. (B al 0% a B al 100% en un gradiente de 25 minutos @ 40 ml/min) usando una columna Phenomenex Gemini (30 x 100 mm, lOu) donde el disolvente B = CH3CN al 95% - H20 al 5% - NH4OAc 10 mM y A = CH3CN al 5% - H20 al 95% - NH40Ac 10 mM (12.9 mg) . CL/EM (Cond.-D4): Tr = 3.51 min. CL/EM Anal. caled. para [M+H] + C39H44 704 674.35; encontrado: 674.29.
Ejemplo DSTL-11, etapa f El producto de Ejemplo DSTL-11, etapa f se obtuvo tras eliminación de los grupos protectores según se describen en el procedimiento del Ejemplo DSTL-1, etapa h. CL/EM (Cond.-D4): Tr = 2.36 min. CL/EM Anal, caled, para [M+H] + C29H28 : 474.24; encontrado 474.13.
Ejemplo DSTL-11 El Ejemplo DSTL-11 se preparó a partir de Ejemplo DSTL-11, etapa f de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación de Ejemplo GW2. La purificación se llevó a cabo por HPLC preparativa; 0% - 50% de B en un gradiente de 30 min @ 40ml/min usando una columna Waters - SunFire (30 x 100 mm, S5) B = CH3CN al 90% - H20 al 10% - TFA al 0.1% y A = CH3CN al 5% - H20 al 95% - TFA al 0.1%. Se hubo aislado Ejemplo DSTL-11 (21.5 mg, al 31%) como un sólido blanco. RMN de K (MeOD, 500 MHz, d) : 7.93- 7.82 (m, 9 H) , 5.15-5.08 (m, 2H) , 4.58 - 4.56 (m, 2H) , 3.82 (s ancho, 1H) , 3.72 (s ancho, 1H) 3.67 (s, 6H) , 2.73 -2.67 (m, 1H) , 2.50-2.46 (m, 3H) , 2.21-2.14 (m, 2H) , 2.09 (s ancho, 1H) , 2.03 (s ancho, 1H) , 1.14-1.10 (m, 2H) , 1.05 - 1.02 (m, 6H) , 0.97-0.93 (m, 6H) , 0.90 (s ancho, 1H) , 0.83 (s ancho, 1H) . CL/EM (Cond-D4) : Tr = 3.25 min. CL/EM Anal, caled, para [M+H]+ C43H5o 906: 780.39; hallado 788.31.
Ejemplo DSTL-12 Se preparó Ejemplo DSTL-12 a partir de Ejemplo DSTL-11, etapa f según el procedimiento descrito para la preparación de Ejemplo GW2 salvo porque usa ( S ) - 2 - (metoxi carboni lamino) - 2 - ( tet rahidro -2H-p i ran- 4 - i 1 ) acét i co en vez de Cap-51. La purificación se llevó a cabo por HPLC preparativa (B al 0 - 50%) en un gradiente de 25 min (@ 40 ml/min) usando una columna Waters - SunFire (30 x 100 mm , S5) donde el disolvente B = CH3CN al 90% - H20 al 10% -TFA al 0.1% y A = CH3CN al 5% - H20 al 95% - TFA al 0.1%. Se hubo aislado Ejemplo DSTL-12 (26.7 mg , al 35%) como un sólido blanquecino. CL/EM (Cond.-D4) : Tr = 2.98 min. CL/EM Anal. caled. para [M+H] + C47H54N908: 872.41; encontrado 872.35.
Ejemplo JLR-1 Para la síntesis del Ejemplo JLR-1, etapa a, véase el procedimiento de la solicitud de patente WO2009/020825.
Ejemplo JLR-1, etapa b Una solución de bromo 1M en AcOH (0.4 mi) se añadió a una solución del Ejemplo JLR-1, etapa a (250 mg, 0.40 mmol) en ácido acético (15 mi) y se agitó durante 3 horas. La mezcla de reacción se vertió DCM (100 mi) y se trató con solución de NaHC03 saturado hasta un pH = neutro. La fase orgánica se concentró y se secó al vacío. La reacción dio una mezcla 1:1:1 del material de partida: monobromuro : dibromuro, que se separaron tras la aplicación (DCM) a una columna Thompson de Si02 (25 g) . La elución (Biotage) por gradiente 15 - 100% de B en 500 mi dio el Ejemplo JLR-1, etapa b (180 mg) . EM/CL (Cond. J4 TR = 2.75 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C36H44BrN604 : 705.26; encontrado 705.22.
Ejemplo JLR-1, etapa c Una solución de HCI 4N en dioxano (4 mi) se añadió al ejemplo JLR-1, etapa b (38 mg, 0.054 mmol) en MeOH (4 mi) y se agitó durante 4 h. El disolvente se eliminó al vacío y la sal tetra HCI se secó en alto vacío. EM/CL (Cond. J4 TR = 1.75 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C26H28Br 6: 503.16; encontrado 503.26.
Ejemplo JLR-1 El Ejemplo JLR-1 se preparó a partir del Ejemplo JLR-1, etapa c, de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo GW2. La purificación se realizó mediante HPLC preparativa en columna phenonmenex-Luna (30 x 100 mm S10) con un gradiente de 25 min de 15-100% de B a 40 ml/min) , en la que el disolvente B = MeOH al 90%- H20 al 10% - TFA al 0.1% y A = MeOH al 5% - H20 al 95% - TFA al 0.1%. EM/CL (Cond. J4 ) : Tr = 2.61 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C4oH5oBrN806 : 819.31; encontrado 819.23.
Ejeraplo JLR-2 Ejemplo JLR-2, etapa a A una solución del Ejemplo JLR-1, etapa a (400 mg, 0.640 mmol) y NaHC03 (161 mg , 1.921 mmol) en dioxano (15 mi) y agua (15 mi) se añadió yodo (162 mg, 0.640 mmol) y la reacción se agitó durante 6 horas con solución de Na2S203 al 10% (40 mi) y se diluyó con EtOAc/THF (2:1) . La fase orgánica se concentró y el producto bruto se aplicó (DCM) a una columna Thompson de gel de sílice (40 g) y eluyó con 35-100% de B en 1 1 (A/B DCM/EtOAc) , dando una mezcla del material de partida, diyoduro (255 mg) y el Ejemplo JLR-2, etapa a (46 mg, 9%). EM/CL (Cond. J4 ) : Tr = 2.45 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C36H44l 604: 751.24; encontrado 751.18.
Ejemplo JLR-2, etapa b Una solución de HCI 4N en dioxano (5 mi) se añadió al ejemplo JLR-2, etapa a (46 mg , 0.061 mmol) en MeOH (5 mi) y se agitó durante 5 h. El disolvente se eliminó al vacío y la sal tetra HCI se secó en alto vacío. EM/CL (Cond. J4 ) : Tr = 1.70 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C26H28 6: 551.13; encontrado 551.09.
Ejemplo JLR-2 El Ejemplo JLR-2 se preparó a partir del Ejemplo JLR-2, etapa b, de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo GW2. La purificación se realizó mediante HPLC semipreparativa; en columna Dynamax 6A semi-prep C8 ,- 5%-95% de B en 30 minutos a 20 ml/min), en la que el disolvente B = CH3CN al 90% - H20 al 10% NH4OAc al 1% y A = CH3CN al 5% -H20 al 95% - NH40Ac al 1%. EM/CL (Cond. J4 ) : TR = 2.35 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C4oH5oIN806: 865.29; encontrado 865.31.
Ejemplo JLR-3 Ejemplo JLR-3, etapa a A una solución del Ejemplo DSTL-1, etapa d (510 mg, 1.191 mmol) en DMF (10 mi) se añadió NCS (175 mg, 1.310 mmol) y se agitó durante 18 horas a 50 °C. El disolvente se retiró mediante evaporación rotatoria en alto vacío y el residuo se cargó (DCM) en un cartucho Thompson de de gel de sílice (80 g) . La elución por gradiente se realizó en 25 - 100% de B en 750 mi (A/B Hex/EtOAc) , dando el Ejemplo JLR-3, etapa a (250 mg, 46%). 1H-RMN (MeOD, 500 MHz , d) : 8.58 (s, 1H) , 8.39 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 7.97 (s, 1H) , 7.93 (d, J = 7.6 Hz, 1H) , 4.98 (s, 1H) , 3.70 (s, 1 H) , 2.76-2.71 (m, 1H) , 2.50-2.45 (m, 1H) , 1.86 (s, 1H) , 1.48/1.12 (s, 9H) , 0.96-0.92 (m, 1H) , 0.79-0.77 (m, 1H) . EM/CL (Cond. J4) : Tr = 3.13 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C2iH22BrCl 302 : 464.06; encontrado 464.05.
Ejemplo JLR-3, etapa a.l El Ejemplo JLR-3, etapa a.l se preparó a partir del Ejemplo DSTL-1, etapa d.l, de acuerdo con el procedimiento descrito en la solicitud de patente WO2008/021927 para la preparación de su análogo desmetano.
Ejemplo JLR-3, etapa b El Ejemplo JLR-3, etapa b, se preparó a partir del Ejemplo JLR-3, etapa a.l de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo DSTL-1, etapa g, dando el ejemplo JLR-3, etapa b. CL/E (Cond. J4) : Tr = 2.72 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C40H44CI SO4 : 707.31; encontrado 707.44.
Ejemplo JLR-3, etapa c El Ejemplo JLR-3, etapa c, se preparó a partir del Ejemplo JLR-3, etapa b de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo DSTL-3, etapa a, dando el ejemplo JLR-3, etapa c. CL/EM (Cond. J4) : Tr = 3.30 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C4oH43BrCl 604 : 787.21; encontrado 787.34.
Ejemplo JLR-3, etapa d Sal HCI El Ejemplo JLR-3, etapa d, se preparó a partir del Ejemplo JLR-3, etapa c de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo JLR-1, etapa b. CL/EM (Cond. J4): Tr = 2.37 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C3oH27BrClN66 : 587.12; encontrado 587.14.
Ejemplo JLR-3 El Ejemplo JLR-3 se preparó a partir del Ejemplo JLR-3, etapa d, de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo GW2. La purificación se realizó mediante HPLC preparativa en columna phenonmenex-Luna (30 x 100 mm S10) con un gradiente de 18 min de 15-100% de B a 40 ml/min) , en la que el disolvente B = MeOH al 90%- H20 al 10% - TFA al 0.1% y A = MeOH al 5% - H20 al 95% - TFA al 0.1%. XH-RMN (MeOD, 500 MHz , d) : 8.69-8.68 (m, 1H) , 8.52-8.50 (m, 1H) , 8.18-8.16 (m, 1H) , 7.98-7.96 (m, 1H) , 7.91-7.90 (m, 4H) , 5.34-5.34 (m, 1H) , 5.09-5.06 (m, 1 H) , 4.62-4.58 (m, 2H) , 3.91 (s ancho, 1H) , 3.76 (s ancho, 1H) 3.69 (s, 6H) , 2.77-2.73 (m, 1H) , 2.64-2.59 (m, , 1H) , 2.51-2.48 (m, 2H) , 2.23-2.16 (m, 3H) , 2.06 (s ancho, 1H) , 1.17-1.12 (m, 2H) 1.06-0.92 (m, 13H) , 0.83 (m, 1H) . EM/CL (Cond. J4 ) : Tr 3.14 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C44H4BrClN806 901.27; encontrado 901.45.
Ejemplo JLR-4 A una solución de 2-bromo-l- (4- (bromofenil) etanona (2.5 g, 8.99 mmol) y ácido (2S, 5S) -1- (terc-butoxicarbonil) -5-metilpirrolidin-2-carboxílico (1.9 g, 8.29 mmol) en acetonitrilo (75ml) se añadió base de Hunig (1.2 g, 9 mmol) y se agitó durante 6 horas a 24 °C. La mezcla reacción se concentró y el residuo se suspendió en EtOAc y se lavó con agua. La concentración dio un sólido blanco que se suspendió en xileno (90 mi) . Se añadió acetato amónico (4.23 g, 70.4 mmol) y la solución se agitó en un vaso a presión con tapa de rosca a 135 °C durante 3.5 horas. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (400 mi) y se lavó con solución de NaHC03 saturado y se concentró. El producto en bruto se cargó (DCM) hasta 80 g en un cartucho de gel de sílice Thompson y se realizó la elución por gradiente del 15 - 100% de B en 1 1 (A/B Hex/EtOAc) dando el Ejemplo JL3-4, etapa a (rendimiento no determinado) . EM/CL (Cond. J4) : Tr = 2.21 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + Ci9H25BrN302 : 406.12; encontrado 406.10. [Nota: para la preparación del ácido carboxílico de partida, véase la solicitud de patente US 2009/0068140) Ejemplo JLR-4, etapa b A una solución del Ejemplo JLR-4, etapa a (700 mg, 1.7 mmol) en DMF (10 mi) se añadió NCS (161 mg, 1.21 mmol) y se agitó durante 18 horas a 50 °C. Se añadió NCS adicional (50 mg) y la reacción continuó durante 6 horas antes de eliminar el disolvente mediante purga con nitrógeno. El producto en bruto se cargó (DCM) hasta 40g en un cartucho de gel de sílice Thompson y se realizó la elución por gradiente del 15 - 100% de B en 750 mi (A/B Hex/EtOAc) dando el Ejemplo JL3-4, etapa b (580 mg, 70%) . 1H-RMN (MeOD, 500 MHz, d) : 7.62 (appr s, 4H) , 4.77 (br, s, 1H) , 4.03 (br, s, 1H) , 2.24 (s ancho, 2H) , 2.16-2.11 (m, 1H) 1.79 (s ancho, 1H) , 1.47-1,25 (m, 12H) . EM/CL (Cond. J4) : Tr = 3.33 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + Ci9H24BrClN302 : 440.08; encontrado 440.0.
Ejemplo JLR-4, etapa c A una solución del Ejemplo DSTL-1, etapa c (1.6 g, 6.75 mmol) y ácido (2S, 5S) -1- (terc-butoxicarbonil ) metilpirrolidina-2-carboxílico (1.55 g, 6.75 mmol) en DCM (100 mi) y se agitó durante 6 horas. (Nota: La dianilina no era completamente soluble) . La mezcla de reacción se diluyó con DCM (1 vol) y se lavó con solución NaHC03 semisaturada . La concentración dio un sólido (2.5 g) . EM/CL (Cond. J4): TR = 3.07 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C2iH27Br 303 : 448.13; encontrado 448.11.
El sólido bruto (2.5 g, 5.58 mmol) se suspendió en AcOH (200 mi) y se agitó durante 18 horas a 60 °C. La concentración en alto vacío eliminó el disolvente. El residuo se suspendió en DCM, se lavó con solución de NaHC03 saturado y se concentró. El residuo se cargó (DCM) en un cartucho Thompson de gel de sílice de 80 g y la elución por gradiente se realizó del 15 - 100% de B en 750 mi. (A/B Hex/EtOAc) dando el Ejemplo JLR-4, etapa c (2.6 g). RMN de ? (MeOD, 500 Hz, d) : 8.36-8.35 (m, 2H) , 8.0 (d, J = 9Hz, 1H) , 7.91 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H) , 7.87 (d, J = 9 Hz, 1H) , 5.31-5.28 (ra, 1H) , 4.17 (br, s, 1H) , 2.59-2.56 (m, 1H) , 2.39-2.31 (m, 2H) 1.86-1.83 (m, 1H) , 1.52-1.19 (m, 12H) . EM/CL (Cond. J4) : Tr = 2.57 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C2iH25Br 302 : 430.12; encontrado 430.09.
Ejemplo JLR-4, etapa d El Ejemplo JLR-4, etapa d, se preparó a partir del Ejemplo JLR-4, etapa c de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo DSTL-1, etapa f. L/EM (Cond. J4) : TR = 2.86 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H]+ C27H37B 3O4 : 478.29; encontrado 478.25.
Ejemplo JLR-4, etapa e El Ejemplo JLR-4, etapa e se preparó a partir del Ejemplo JLR-4, etapa d y el ejemplo JLR-4, etapa b, de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo DSTL-1, etapa g, dando el Ejemplo JLR-4, etapa e. RM de ? (MeOD, 500 MHz, d) : 8.53 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 8.49 (s, 1H) , 8.20 (dd, J = 8.6, 2 Hz, 2H) , 7.97 (d, J = 8.6 Hz, 2H) , 7.92 (d, J = 8.6 Hz , 2H) , 7.88 (d, J = 8.9 Hz, 1H) , 5.32 (t, J = 6.4 Hz, 1H) , 4.85 (br, s, 1H) , 4.20 (s ancho, 1H) , 4.06 (br, s, 1H) , 2.59-2.58 (m, 1H) , 2.44-2,28 (m, 4H) , 2.19-2.15 (m, 1H) , 1.89-1.84 (m, 1H) , 1.83-1.79 (m, 1H) , 1.54-1,20 (m, 24H) . EM/CL (Cond. J4): Tr = 3.18 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C40H48ClN6O4 : 711.34; encontrado 711.31.
Ejemplo JLR-4, etapa f El Ejemplo JLR-4, etapa f, se preparó a partir del Ejemplo JLR-4, etapa e de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo JLR-1, etapa b, dando el Ejemplo JLR-4, etapa f. CL/EM (Cond. J4): Tr = 2.19 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C3oH32ClN6 : 511.24; encontrado 711.23.
Ejemplo JLR-4 El Ejemplo JLR-4 se preparó a partir del Ejemplo JLR-4, etapa f, de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo GW2. La purificación se realizó mediante HPLC preparativa en columna Luna Axia (30 x 100 mm C 18) con un gradiente de 25 min de 15-100% de B a 40 ml/min) , en la que el disolvente B = MeOH al 90%- H20 al 10% - TFA al 0.1% y A = MeOH al 5% - H20 al 95% - TFA al 0.1%. EM/CL (Cond. J4): Tr = 3.12 min. CL/EM Anal. Calculado para [M+H] + C44H54C1N806 : 825.39; encontrado 825.31.
Ejemplo JLR-5 El Ejemplo JLR-5 se preparó a partir de la pirrolidina JLR-4, etapa f, de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación del Ejemplo GW2 a excepción de que se usó ácido (S) -2 - (metoxicarbonilamino) -2 - (tetrahidro-2H-piran-4-il) acético . La purificación se realizó mediante HPLC preparativa en columna Luna Axia (30 x 100 mm C 18) con un gradiente de 25 min de 15-100% de B a 40 ml/min) , en la que el disolvente B = MeOH al 90%- H20 al 10% - TFA al 0.1% y A = MeOH al 5% - H20 al 95% - TFA al 0.1%. EM/CL (Cond. J4) : TR = 2.85 min. CL/EM Anal, calculado para [M+H]+ C48H58C1N806 : 909.41; encontrado 909.39.
Ejemplo ZY1 Ejemplo ZY1, etapa a Se añadió HATU (151 mg, 0.40 mmol) a una solución de sal de HC1 de 4.4 ' -bis (2- ( (IR, 3S, 5R) -2-azabiciclo [3.1.0] hexan-3-il) -1H- imidazol- -il ) bifenilo (Ejemplo le) (107 mg, 0.18 mmol) y ácido (S) -2-(metoxicarbonilamino) -2- ( (S) -tetrahidro-2H-piran-3-il) acético (cap-177a) (86 mg, 0.40 mmol) en DMF (1.5 mi) y DIPEA (0.25 mi, 1.4 mmol) y la mezcla se agitó a ta durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH y se purificó por HPLC prep. (H20-MeOH con regulador de pH de TFA al 0.1%) proporcionando una sal de TFA de (S,lS,l'S)-2,2'- ((lR,l'R,3S,3,S,5R,5'R)-3,3,-(4,4'- (bifenil-4 , 4 ' -diil)bis (1H-imidazol -4 ,2-diil))bis(2-azabiciclo[3.1.0] hexano-3 , 2 -diil) ) bis (2-oxo-l- ( (S) -tetrahidro-2H-piran-3-il) etaño-2 , 1-diil ) dicarbamato de dimetilo (148.5 mg) en foma de sólido amarillo claro. Tiempo de retención de CL-EM =1.61 min; m/z = 847 [M+H] + . (Columna: Phenomenex-Luna 3.0 x 50 mm S10. Disolvente A = Agua al 90%: Metanol al 10%: TFA al 0.1%. Disolvente B = Agua al 10%: Metanol al 90%: TFA al 0.1%. Caudal = 4 ml/min. % inicial de B = 0. % final de B = 100. Tiempo de gradiente = 3 min. Longitud de . RM de H (400 MHz, MeOD) d ppm 7.80 - 7.91 (m, 10 H) , 5.13 (dd, ,7=9.3, 7.0 Hz, 2 H) , 4.79 (d, J=8.3 Hz, 2 H) , 3.84 - 3.97 (m, 2 H) , 3.70 - 3.80 (m, 4 H) , 3.68 (s, 6 H) , 3.52 - 3.63 (m, 2 H) , 3.34 - 3.42 (m, 2 H) , 2.61 - 2.75 (m, 2 H) , 2.43 - 2.54 (m, 2 H) , 1.98 - 2.15 (m, 4 H) , 1.67 - 1.84 (m, 4 H) , 1.48 -1.65 (m, 4 H) , 0.98 - 1.16 (m, 2 H) , 0.77 - 0.93 (m, 2 H) .
Ejemplo ZYl Se añadió NCS (8.2 mg, 0.061 mmol) a una solución de una sal de TFA de (S , 1S , 1 ' S) -2 , 2 ' - ( ( IR, 1 ' R, 3S , 3 ' S , 5R, 5 ' R) -3 , 31 - (4.4 ' - (bifenil-4 , 41 -diil) bis (lH-imidazol-4 , 2-diil) ) bis (2-azabiciclo [3.1.0] hexano-3 , 2 -diil ) )bis (2-oxo-l- ( (S) -tetrahidro-2H-piran-3-il) etano-2 , 1-diil) dicarbamato de dimetilo (Ejemplo ZYl, etapa a) (33 mg, 0.031 mmol) en DMF (1 mi) y la mezcla se agito a 50 °C durante 16 h. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH, se filtró y se purificó por HPLC prep. (H20-MeOH con regulador de pH de TFA al 0.1%) proporcionando una sal de TFA de (S,lS,l'S)-2,2'- ( (IR, 1 'R, 3S, 3 'S, 5R, 5'R) -3, 3 ' - (4.4 · - (bifenil-4 , 4 ' -diil) bis (5-cloro-lH-imidazol-4 , 2-diil) ) bis (2-azabiciclo [3.1.0] hexano-3 , 2-diil) ) bis (2-oxo-l- ( (S) -tetrahidro-2H-piran-3-il) etano-2 , 1-diil) dicarbamato de dimetilo, (Ejemplo ZYl) (25 mg) como sólido blanco. Tiempo de retención de CL-EM = 1.92 min; m/z = 458 [M/2+H] + . (Columna: Phenomenex-Luna 3.0 x 50 mm S10. Disolvente A = Agua al 95%/Metanol al 5%/Acetato de Amonio 10 mM. Disolvente B = Agua al 5%/Metanol al 95%/Acetato de Amonio 10 mM. Caudal = 4 ml/min. % inicial de B = 0. % final de B = 100. Tiempo de gradiente = 2 min. Longitud de RMN de XH (400 MHz , MeOD) d ppm 7.77 - 7.85 (m, 8 H) , 5.03 (dd, J=8.8, 6.0 Hz, 2 H) , 4.75 - 4.86 (m, 2 H) , 3.71 - 3.89 (m, 6 H) , 3.67 (s, 6 H) , 3.36 - 3.62 (m, 4 H) , 2.38 -2.57 (m, 4 H) , 1.94 - 2.12 (m, 4 H) , 1.69 - 1.87 (m, 4 H) , 1.46 - 1.65 (m, 4 H) , 1.03 - 1.17 (m, 2 H) , 0.77 - 0.85 (m, 2 H) .
Ejemplo ZY2, etapa a Se añadió HATU (140 mg, 0.37 mmol) a una solución de una sal de HCl de 4.4 · -bis (2- ( (IR, 3S, 5R) -2-azabiciclo [3.1.0] hexan-3-il) -lH-imidazol-4-il) bifenilo, (Ejemplo le) (100 mg, 0.17 mmol) y ácido (S)-2- (metoxicarbonilamino) -2- ( (R) -tetrahidro-2H-piran-3-il) acético (capll7b) (80 mg, 0.37 mmol) en DMF (1.5 mi) y DIPEA (0.23 mi, 1.3 mmol) y la mezcla se agitó a ta durante 3 h. Después la mezcla de reacción se diluyó con MeOH y se purificó por HPLC prep. (H20-MeOH con regulador de pH de TFA al 0.1%) proporcionando una sal de TFA de (R, 1S , 1 ' S) -2 , 21 - ( (IR, 1 'R, 3S, 3 ' S, 5R, 5 'R) -3, 3 ' - (4.4¦ - (bifenil-4 , 4¦ -diil ) bis ( 1H-imidazol-4 , 2-diil) ) bis (2 -azabiciclo [3.1.0] hexano-3 , 2-diil) ) bis (2-oxo-l- ( (R) -tetrahidro-2H-piran-3-il) etano-2 , 1-diil ) dicarbamato de dimetilo (Ejemplo ZY2 , etapa a) (76.2 mg) en forma de sólido blanco. Tiempo de retención CL-EM = 1.53 min; m/z = 847 [M+H] + . (Columna: Phenomenex-Luna 3.0 x 50 mm S10. Disolvente A = Agua al 90%: Metanol al 10%: TFA al 0.1%. Disolvente B = Agua al 10%: Metanol al 90%: TFA al 0.1%. Caudal = 4 ml/min. % inicial de B = 0. % final de B = 100. Tiempo de gradiente = 3 min. Longitud de . RM de XH (400 MHz , MeOD) d ppm 7.75 - 7.96 (m, 10 H) , 5.13 (dd, J"=9.3, 7.0 Hz, 2 H) , 4.60 (d, J=8.3 Hz , 2 H) , 3.77 - 3.95 (m, 6 H) , 3.67 (s, 6 H) , 3.24 - 3.47 (m, 4 H) , 2.62 - 2.76 (m, 2 H) , 2.40 - 2.57 (m, 2 H) , 1.97 - 2.19 (m, 4 H) , 1.54 - 1.82 (m, 6 H) , 1.36 - 1.54 (m, 2 H) , 1.00 - 1.17 (m, 2 H) , 0.79 -0.93 (m, 2 H) .
Ejemplo ZY2 Se añadió NCS (5.2 mg, 0.039 mmol) a una solución de sal de TFA de (R, 1S , 1 ' S) - 2 , 2 ' - ( ( IR, 1 ' R, 3S , 3 ' S , 5R, 5 ' R) -3 , 31 - (4.4 ' - (bifenil-4, ' -diil) bis ( 1H- imidazol-4 , 2 -diil) )bis (2 -azabiciclo [3.1.0] hexano-3, 2-diil) )bis ( 2-oxo-l - ( (R) -tetrahidro-2H-piran-3 -il) etano-2 , 1-diil) dicarbamato de dimetilo (Ejemplo ZY2 , etapa a) (21 mg, 0.020 mmol) en DMF (1 mi) y la mezcla se agitó a 50°C durante 16 h. Después la mezcla de reacción se diluyó con MeOH, se filtró y se purificó por HPLC prep . (H20-MeOH con regulador de pH de TFA al 0.1%) proporcionando una sal de TFA de (R, 1S , 11 S) -2 , 2 ' -( (1R,1 'R, 3S, 3 'S, 5R, 5 ' R) -3, 3 ' - (4.4 * - (bif enil-4 , 4 ' -diil) bis (5-cloro-lH-imidazol-4 ,2- diil) )bis (2-azabiciclo [3.1.0] hexano-3, 2- diil)) bis (2-oxo-l- ( (R) -tetrahidro-2H-piran-3 -il) etano- 2 , 1-diil) dicarbamato de dimetilo (Ejemplo ZY2) (10.8 mg) en forma de sólido blanco. Tiempo de retención de CL-EM = 1.92 min; m/z = 458 [M/2 + H]+. (Columna: Phenomenex-Luna 3.0 x 50 mm S10. Disolvente A = Agua al 95%/Metanol al 5%/Acetato de Amonio 10 mM. Disolvente B = Agua al 5%/Metanol al 95%/Acetato de Amonio 10 mM. Caudal = 4 ml/min. % inicial de B = 0. % final de B = 100. Tiempo de gradiente = 2 min. Longitud de . RM de ¾ (400 MHz, eQD) d ppm 7.76 - 7.87 (m, 8 H) , 5.04 (dd, J=8.8, 6.0 Hz, 2 H) , 4.61 (d, J=8.3 Hz, 2 H) , 3.75 - 3.95 (m, 6 H) , 3.66 (s, 6 H) , 3.35 - 3.48 (m, 4 H) , 2.39 - 2.58 (m, 4 H) , 1.97 - 2.16 (m, 4 H) , 1.73 - 1.87 (m, 2 H) , 1.40 - 1.73 (m, 6 H) , 1.01 - 1.16 (m, 2 H) , 0.81 (d, <J=1.8 Hz, 2 H) .
Ejemplo ZY3 , etapa a Se añadió HATU {82 mg, 0.22 mmol) a una solución de sal de HCl de 4.4 ' -bis (2- ( (IR, 3S, 5R) -2-azabiciclo[3.1.0] hexan-3 - il) -1H- imidazol-4 -il ) bifenilo (Ejemplo le) (58.3 mg, 0.098 mmol) y ácido (R)-2-(metoxicarbonilamino) -2- ( (R) -tetrahidro-2H-piran-3-il) cético (cap 117c) (49 mg, 0.23 mmol) en DMF (1 mi) y DIPEA (0.14 mi, 0.79 mmol) y la mezcla se agitó a ta durante 3 h. Después la mezcla de reacción se diluyó con MeOH, se filtró y se purificó por HPLC prep. (H20-MeOH con regulador de pH de TFA al 0.1%) proporcionando una sal de TFA de (R, IR, 1 'R) -2 , 2 ' -( (IR, 1 'R, 3S, 3 'S, 5R, 5'R) -3, 3 ' - (4.4 ' - (bifenil-4 , 4 ' -diil) bis (1H-imidazol-4 ,2-diil))bis(2-azabiciclo[3.1.0] hexano-3 , 2-diil) ) bis (2-oxo-l- ( (R) -tetrahidro-2H-piran-3-il) etano-2 , 1-diil) dicarbamato de dimetilo (Ejemplo ZY3 , etapa a) (79.8 mg) como un sólido blanco. Tiempo de retención de CL-EM = 1.63 min; m/z = 847 [M+H] + . (Columna: Phenomenex-Luna 3.0 x 50 mm S10. Disolvente A = Agua al 90%: Metanol al 10%: TFA al 0.1%. Disolvente B = Agua al 10%: Metanol al 90%: TFA al 0.1%. Velocidad de Flujo = 4 ml/min. % inicial de B = 0. % final de B = 100. Tiempo de gradiente = 3 min. Longitud de .
Ejemplo ZY3 Se añadió NCS (6.7 mg, 0.050 mmol) a una solución de una sal de TFA de (R, IR, 11 R) -2 , 2 ' - ( ( IR, 1 ' R, 3S , 3 ' S , 5R, 5 ' R) -3 , 31 - (4.4 ' - (bifenil-4 , 4 ' -diil) bis (1H- imidazol-4 , 2-diil) ) bis (2-azabiciclo [3.1.0] hexano-3 , 2 -diil) ) bis (2-oxo-l- ( (R) -tetrahidro-2H-piran-3-il) etano-2, 1-diil) dicarbamato de dimetilo (Ejemplo ZY3 , etapa a) (27 mg, 0.025 mmol) en DMF (1 mi) y la mezcla se agitó a 50°C durante 16 h. Después la mezcla de reacción se diluyó con MeOH, se filtró y se purificó por HPLC prep. (H20-MeOH con regulador de pH de TFA al 0.1%) proporcionando una sal de TFA de (R, IR, 1 ' R) -2 , 2 ' - ((1?,1^,33,3,3^,5^)-3,3,-(4.4'- (bifenil-4 , 4 ' -diil) bis (5-cloro-lH-imidazol-4 , 2-diil) )bis (2-azabiciclo [3.1.0] hexano-3 , 2-diil) ) bis (2-oxo-l- ( (R) -tetrahidro-2H-piran-3-il) etano-2 , 1-diil) dicarbamato de dimetilo (Ejemplo ZY3) (15.8 mg) en forma de sólido blanco. Tiempo de retención de CL-EM = 1.93 min; m/z = 458 [M/2 + H]+. (Columna: Phenomenex-Luna 3.0 x 50 m S10. Disolvente A = Agua al 95%/Metanol al 5%/Acetato de Amonio 10 mM. Disolvente B = Agua al 5%/Metanol al 95%/Acetato de Amonio 10 mM. Caudal = 4 ml/min. % inicial de B = 0. % final de B = 100. Tiempo de gradiente = 2 min. Longitud de .
Se anadió HATU (75^jng, 0.20 mmol a una solución de una sal de HCl de 4.4 ' -bis (2- ( (IR, 3S, 5R) -2-azabiciclo[3.1.0] hexan-3 - il) - 1H- imidazol-4 -il ) bifenilo (Ejemplo le) (53.5 mg, 0.090 mmol) y ácido (R)-2-(metoxicarbonilamino) -2- ( (S) -tetrahidro-2H-piran-3 -il) acético (capll7d) (45 mg, 0.21 mmol) en DMF (1 mi) y DIPEA (0.13 mi, 0.72 mmol) y la mezcla de agitó a ta durante 3 h. Después la mezcla de reacción se diluyó con MeOH, se filtró y se purificó por HPLC prep. (H20-MeOH con regulador de pH de TFA al 0.1%) proporcionando una sal de TFA de (S, IR, 1 ?) -2 , 2 ' - ( (IR, 1 'R, 3S, 3 'S, 5R, 5 'R) -3, 3 ' - (4.4 ' - (bifenil-4, 4 ' -diil) bis (1H-imidazol-4 , 2 -diil) ) bis (2-azabiciclo [3.1.0] hexano-3 , 2-diil) ) bis (2-oxo-l- ( (S) -tetrahidro-2H-piran-3-il) etaño-2 , 1-diil) dicarbamato de dimetilo (Ejemplo ZY4 , etapa a) (78.5 mg) en forma de sólido blanco. Tiempo de retención de CL-EM = 1.57 min; m/z = 847 [M+H] + . (Columna: Phenomenex-Luna 3.0 x 50 mm S10. Disolvente A = Agua al 90%: Metanol al 10%: TFA al 0.1%. Disolvente B = Agua al 10%: Metanol al 90%: TFA al 0.1%. Caudal = 4 ml/min. % inicial de B = 0. % final de B = 100. Tiempo de gradiente = 3 min. Longitud de .
Ejemplo ZY4 Se añadió NCS (9.2 mg, 0.069 mmol) a una solución de una sal de TFA de (S , IR, 1 ' R) -2 , 2 ' - ( ( IR, 1 ' R, 3S , 3 ' S , 5R, 5¦ R) -3 , 31 - (4.41 - (bifenil-4 , ' -diil ) bis ( 1H- imidazol -4 , 2 -diil) ) bis (2-azabiciclo [3.1.0] hexano-3 , 2 -diil) )bis ( 2-oxo-l - ( (S) -tetrahidro-2H-piran-3-il) etano-2 , 1-diil) dicarbamato de dimetilo (Ejemplo ZY4 , etapa a) (37 mg, 0.034 mmol) en DMF (1 mi) y la mezcla se agitó a 50°C durante 16 h. Después la mezcla de reacción se diluyó con eOH, se filtró y se purificó por HPLC prep. (H20-MeOH con regulador de pH de TFA al 0.1%) proporcionando una sal de TFA de (S, IR, 1 'R) -2 , 2 ' - ( (IR, 1 'R, 3S, 3 'S, 5R, 5 'R) -3, 3 ' - (4.4 ' - (bifenil- , 4 ' -diil) bis (5-cloro-lH-imidazol-4 , 2-diil) )bis (2-azabiciclo [3.1.0] hexano-3 , 2-diil) ) bis (2-oxo-l- ( (S) -tetrahidro-2H-piran-3 -yl ) etano-2 , 1-diil ) dicarbamato de dimetilo (Ejemplo ZY4) (25 mg) en forma de un sólido blanco. Tiempo de retención de CL-EM = 1.93 min; m/z = 458 [M/2 + H] + . (Columna: Phenomenex-Luna 3.0 x 50 mm S10. Disolvente A = Agua al 95%/Metanol al 5%/Acetato de Amonio 10 mM. Disolvente B = Agua al 5%/Metanol al 95%/Acetato de Amonio 10 mM. Caudal = 4 ml/min. % inicial de B = 0. % final de B = 100. Tiempo de gradiente = 2 min. Longitud de .
Ejemplo ZY5 Se añadió NCS (5.3 mg, 0.039 mmol) a una solución de una sal de TFA de (S , 1S , 1 ' S) -2 , 2 ' - ( ( IR, 1 ' R, 3S , 31 S , 5R, 5 ' R) -3, 3 ' - (4.41 - (bifenil-4, 1 -diil ) bis ( 1H- imidazol-4 , 2 -diil) )bis (2-azabiciclo [3.1.0] hexano-3 , 2-diil) )bis (2-oxo-l- ( (S) -tetrahidro-2H-piran-3-il) etano-2 , 1-diil) dicarbamato de dimetilo (Ejemplo ZY1 , etapa a) (42.4 mg, 0.039 mmol) en DMF (1 mi) y la mezcla se agitó a 50°C durante 16 h. Después la mezcla de reacción se diluyó con eOH, se filtró y se purificó por HPLC prep. (H20-MeOH con regulador de pH de TFA al 0.1%) proporcionando Ejemplo ZY5 como una sal de TFA (11.7 mg, sólido blanco) . Tiempo de retención de CL-EM = 2.04 min; m/z = 881 [M+H] + . (Columna: Phenomenex-Luna 3.0 x 50 mm S10. Disolvente A = Agua al 90%: Metanol al 10%: TFA al 0.1%. Disolvente B = Agua al 10%: Metanol al 90%: TFA al 0.1%. Caudal = 4 ml/min. % inicial de B = 0. % final de B = 100. Tiempo de gradiente = 3 min. Longitud de . RMN de XH (400 MHz , MeOD) d ppm 7.76 - 7.92 (m, 9 H) , 5.13 (dd, J=9.2, 6.9 Hz, 1 H) , 5.04 (dd, .7=8.0, 6.5 Hz, 1 H) , 4.74 -4.80 (m, 2 H) , 3.71 - 3.94 (m, 6 H) , 3.68 (s, 3 H) , 3.67 (s, 3 H) , 3.36 - 3.63 (m, 4 H) , 2.63 - 2.75 (m, 1 H) , 2.40 - 2.55 (m, 3 H) , 1.95 - 2.15 (m, 4 H) , 1.67 - 1.86 (m, 4 H) , 1.45 -1.65 (m, 4 H) , 1.03 - 1.18 (m, 2 H) , 0.84 - 0.91 (m, 1 H) , 0.75 - 0.83 (m, 1 H) .
Ejemplo ZY6 Se añadió NCS (1.1 mg, 8.4 µp???) a una solución de una sal de TFA de (R, 1S, 1 ' S) -2 , 2 ' - ( (IR, 1 ' R, 3S, 3 ' S, 5R, 5 ' R) -3 , 3 ' -(4.4·- (bifenil-4,4 ' -diil) bis (lH-imidazol-4 , 2-diil) )bis (2-azabiciclo [3.1.0] hexano-3, 2-diil) ) bis (2-oxo-l- ( (R) -tetrahidro-2H-piran-3-il) etano-2 , 1-diil) dicarbamato de dimetilo (Ejemplo ZY2, etapa a) (8.1 mg, 8.4 µ????) en DMF (1 mi) y la mezcla se agitó a 50°C durante 16 h. Después la reacción se diluyó con MeOH, se filtro y se purificó por HPLC prep. (H20- eOH con regulador de pH de TFA al 0.1%) proporcionando una sal de TFA de Ejemplo ZY6 (2.2 mg) como un sólido blanco. Tiempo de retención de CL-EM = 2.01 min; m/z = 881 [M+H] + . (Columna: Phenomenex-Luna 3.0 x 50 mm S10. Disolvente A = Agua al 90%: Metanol al 10%: TFA al 0.1%. Disolvente B = Agua al 10%: Metanol al 90%: TFA al 0.1%. Caudal = 4 mi/min. % inicial de B = 0. % final de B = 100. Tiempo de gradiente = 3 min. Longitud de . RM de ¾ (400 MHz, MeOD) d ppm 7.77 - 7.90 (m, 9 H) , 5.12 (dd, J"=9.2, 6.9 Hz, 1 H) , 5.05 (dd, J=7.9, 6.1 Hz, 1 H) , 4.58 - 4.96 (m, 2 H) , 3.71 - 3.94 (m, 6 H) , 3.68 (s, 3 H) , 3.66 (s ancho,, 3 H) , 3.34 - 3.46 (m, 4 H) , 2.64 - 2.75 (m, 1 H) , 2.40 - 2.54 (m, 3 H) , 1.96 - 2.16 (m, 4 H) , 1.40 - 1.85 (m, 8 H) , 1.04 - 1.18 (m, 2 H) , 0.84 - 0.92 (m, 1 H) , 0.79 (m, 1 H) .
Ejemplo ZY7, etapa a Se añadió HATU (95 mg, 0.25 mmol) a una solución de una sal de HCl de 4.4¦ -bis (2- ( (IR, 3S, 5R) -2-azabiciclo [3.1.0] hexan-3-il) -lH-imidazol-4-il)bifenilo (Ejemplo le) (67.6 mg, 0.114 mmol) y ácido (S) -4 -metoxi-2 -(metoxicarbonilamino) butanoico (Ejemplo ZY7, etapa a) (50 mg, 0.26 mmol) en DMF (1 mi) y DIPEA (0.16 mi, 0.91 mmol) y la mezcla se agitó a ta durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH, se filtró y se purificó por HPLC prep. (H20-MeOH con regulador de pH de TFA al 0.1%) proporcionando una sal de TFA de (2S , 2 ' S) - 1 , 1 ' - ( ( IR, 1 ' R, 3S , 3 ' S , 5R, 5 ' R) -3 , 3 ' - (4.41 - (bifenil-4, 4 ' -diil) bis (lH-imidazol -4 , 2-diil) )bis (2-azabiciclo [3.1.0] hexano-3 , 2-diil) ) bis (4-metoxi-l-oxobutano-2 , 1-diil) dicarbamato de dimetilo (Ejemplo ZY7 , etapa a) (96.4 mg) en forma de sólido blanco. Tiempo de retención de CL-EM = 1.53 min; m/z 795 [M+H] + . (Columna: Phenomenex-Luna 3.0 x 50 mm S10. Disolvente A = Agua al 90%: Metanol al 10%: TFA al 0.1%. Disolvente B = Agua al 10%: Metanol al 90%: TFA al 0.1%. Caudal = 4 ml/min. % inicial de B = 0. % final de B = 100. Tiempo de gradiente = 3 min. Longitud de . RMN de XK (400 MHz, MeOD) d ppm 7.78 - 7.97 (m, 10 H) , 5.16 (dd, J=9.2, 6.7 Hz, 2 H) , 4.76 - 4.83 (m, 2 H) , 3.75 - 3.84 (m, 2 H) , 3.66 (s, 6 H) , 3.45 - 3.56 (m, 4 H) , 3.32 (s, 6 H) , 2.68 (dd, J=13.4, 9.4 Hz , 2 H) , 2.42 - 2.53 (m, 2 H) , 2.01 -2.23 (m, 4 H) , 1.80 - 1.95 (m, 2 H) , 1.05 - 1.18 (m, 2 H) , 0.78 - 0.98 (m, 2 H) .
Ejemplo ZY7 Se añadió NCS (9.7 mg, 0.073 mmol) a una solución de una sal de TFA de (2S , 2 ' S) - 1 , 1 ' - ( ( IR, 1 ' R, 3S , 31 S , 5R, 5 ' R) -3 , 3 ' - (4. 1 - (bifenil-4 , 41 -diil) bis ( 1H- imidazol -4 ,2-diil) ) bis (2 -azabiciclo [3.1.0] hexano-3 , 2 -diil) ) bis (4-metoxi-l-oxobutano-2 , 1-diil) dicarbamato de dimetilo (Ejemplo ZY7 , etapa a) (29 mg, 0.036 mmol) en DMF (1 mi) y la mezcla se agito a 50 °C durante 16 h. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH, se filtro y se purifico por HPLC prep . (H20-MeOH con regulador de pH de TFA al 0.1%) proporcionando una sal de TFA de (2S, 21 S) -1, 1' - ( (IR, 1 'R, 3S, 3 ' S, 5R, 5 'R) -3 , 3 ' - (4.41 -(bifenil-4, 41 -diil) bis (5 -cloro- 1H- imidazol -4 , 2-diil) ) bis (2-azabiciclo [3.1.0] hexano-3 , 2 -diil) ) bis (4 -metoxi-l-oxobutano-2 , 1-diil) dicarbamato de dimetilo (Ejemplo ZY7) (7.9 mg) en forma de sólido blanco. Tiempo de retención CL-EM = 2.51 min; m/z = 863 [M+H]+. (Columna: Phenomenex-Luna 3.0 x 50 mm S10. Disolvente A = Agua al 90%: Metanol al 10%: TFA al 0.1%. Disolvente B = Agua al 10%: Metanol al 90%: TFA al 0.1%. Caudal = 4 ml/min. % inicial de B = 0. % final de B = 100. Tiempo de gradiente = 3 min. Longitud de . RM de ¾ (400 MHz, MeOD) d ppm 7.82 (s, 8 H) , 5.07 (dd, J=8.5, 5.8 Hz, 2 H) , 4.75 - 4.83 (m, 2 H) , 3.70 - 3.76 (m, 2 H) , 3.66 (s, 6 H) , 3.44 - 3.54 (m, 4 H) , 3.32 (s, 6 H) , 2.39 - 2.57 (m, 4 H) , 1.98 - 2.21 (m, 4 H) , 1.82 - 1.94 (m, 2 H) , 1.05 -1.19 (m, 2 H) , 0.78 - 0.92 (m, 2 H) .
Ejemplo ZY8 añadió NCS (5.6 mg , 0.042 mmol) a una solución de na sal de TFA de ( 2 S , 21 S ) - 1 , 1 ' - ((l / llR,3S,3lS,5R,5,R)-3f3, 4 l b i f eni l-4,4'-diil)bis(lH-imidazol-4,2-diil))bis(2-azabiciclo [3.1.0] hexano-3, 2-diil) )bis (4-metoxi-l-oxobutano-2, 1-diil) dicarbamato de dimetilo (Ejemplo ZY7, etapa b) (33.3 mg , 0.042 mmol) en DMF (1 mi) y la mezcla se agitó a 50°C durnate 16 horas. La mezcla de reacción se diluyó com MeOH, se filtro y se purifico por HPLC prep . (H20-MeOH com regulador de pH de TFA al 0.1%) proporcionando una sal de TFA del Ejemplo ZY8 (9.4 mg) era forma de sólido blanco. Tiempo de retención de CL-EM = 1.99 min; m/z = 829 [M+H] + . (Columna: Phenomenex- Luna 3.0 x 50 mm S10. Disolvente A = Agua al 90%: Metanol al 10%: TFA al 0.1%. Disolvente B = Agua al 10%: Metanol al 90%: TFA al 0.1%. Caudal = 4 ml/min. % inicial de B = 0. % final de B 100. Tiempo de gradiente = 3 min.
Longitud de . RMN de XH (400 MHz , MeOD) d ppm 7.77 - 7.91 (m, 9 H), 5.15 (dd, J=9.2, 6.7 Hz, 1 H) , 5.07 (t, J= 7.0 Hz, 1 H), 4.77 - 4.83 (m, 2 H) , 3.76 - 3.83 (m, 1 H) , 3.68 - 3.75 (m, 1 H) , 3.66 (s, 6 H) , 3.44 - 3.56 (m, 4 H), 3.33 (s, 6 H ) , 2.63 -2.75 (m, 1 H) , 2.41 - 2.56 (m, 3 H), 1.97 - 2.23 (m, 4 H) , 1.80 - 1.95 (m, 2 H) , 1.06 - 1.19 (m, 2 H) , 0.87 - 0.96 (m, 1 H), 0.84 (m, 1 H) .
ACTIVIDAD BIOLÓGICA Se utilizó un ensayo VHC Replicón en la presente descripción, y se preparó, realizó y validó como se describe en la patente del solicitante PCT/US2006/022197 y en O'Boyle et . Al. Antimicrob Agents Chemother.; 49 ( 4 ) : 1346 - 1353 (abril de 2005) . También se han usado procedimientos de ensayo que incorporan informadores de luciferasa como se describe (Apath.com) .
Se usaron células con el replicón VHC-neo y células con replicón que contenían sustituciones de resistencia en la región NS5A para ensayar la familia de compuestos descritos en este documento. Se determinó que los compuestos tenían diferentes grados de actividad inhibidora reducida en las células que contenían mutaciones frente a la potencia inhibidora correspondiente contra las células de tipo silvestre. Por lo tanto, los compuestos de la presente descripción pueden ser eficaces para inhibir la función de la proteína NS5A del VHC y se entiende que son tan eficaces en combinaciones como se ha descrito anteriormente en la solicitud de patente PCT/US2006/022197 y en la patente del solicitante WO04/014852. Debe entenderse que los compuestos de la presente descripción pueden inhibir múltiples genotipos del VHC. La Tabla 2 muestra los valores de CE50 (Concentración eficaz inhibidora al 50 %) de compuestos representativos de la presente descripción contra el genotipo Ib del VHC. En una modalidad, los compuestos de la presente descripción son inhibidores de los genotipos la, Ib, 2a, 2b, 3a, 4a y 5a. Los valores de CE50 contra Ib del VHC son como sigue. Los valores de CE50 contra Ib del VHC son como sigue: A = 0.2 pM -<1 M; B = 1 pM - <10 pM; y C = 10 pM -< 100 pM; y D = 100 pM-0.15 µ? .
Los compuestos de la presente descripción pueden inhibir VHC mediante mecanismos además de, o distintos a, la inhibición de NS5A. En una modalidad, los compuestos de la presente descripción inhiben el replicón del VHC y en otra modalidad los compuestos de la presente descripción inhiben NS5A.
Tabla 2 10 15 20 25 Será evidente para un experto en la técnica que la presente descripción no se limita a los anteriores ejemplos ilustrativos, y que puede realizarse en otras formas específicas sin separarse de sus atributos esenciales. Por lo tanto se desea que los ejemplos sean considerados en todos los respectos como ilustrativos y como no restrictivos, haciendo referencia a las reivindicaciones anexas, en lugar de a los ejemplos anteriores, y por lo tanto se pretende que todos los cambios que entren dentro del significado y del alcance de equivalencia de las reivindicaciones estén incluidos en ellas.
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (20)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :
1. Un compuesto de fórmula (I) (i) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; caracterizados porque n es 0 , 1 ó 2 ; X está seleccionado de entre hidrógeno, alquenilo, ciano, cicloalquilo, (cicloalquil) alquilo, halo y heterociclilo; R1 está seleccionado de entre hidrógeno y halo; R2 está seleccionado de entre hidrógeno, alquenilo, ciano, cicloalquilo, (cicloalquil) alquilo, halo y heterociclilo; o R1 y R2, junto con los átomos de carbono a los que están unidos, forman un anillo aromático de seis miembros sustituidos opcionalmente con un grupo halo; con la condición de que al menos uno de X y R2 está seleccionado de entre alquenilo, ciano, cicloalquilo, (cicloalquilalquilo) , halo y heterociclilo; cada R3 es alquilo, en el que el alquilo puede, opc ionalmente , formar un anillo condensado de tres o cuatro miembros con un átomo de carbono adyacente o un anillo espirocí el ico de tres o cuatro miembros con el átomo de carbono al que está unido; en el que los anillos condensados y espirocíel icos están opc ionalmente sustituidos con uno o dos grupos alqui lo ; cada R4 está seleccionado independientemente de hidrógeno y -C(0)R5; y cada R5 está seleccionado independientemente de alcoxi, alquilo, arilalcoxi, arilalquilo, cicloalquilo , heteroc i c 1 i lo , heteroc i c 1 i 1 alqui 1 o , (NRcRd) alquenilo y (NRcRd) alquilo .
2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizados porque cada R5 está seleccionado de forma independiente de alcoxi, heteroe i c lilo y (NRcRd)alquilo .
3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizados porque X es halo.
4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizados porque R2 es halo.
5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizados porque R1 y R2 , junto con los átomos de carbono a los que están unidos, forman un anillo aromático de seis miembros sustituidos opcionalmente con un grupo halo.
6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizados porque X es hidrógeno .
7. Un compuesto caracterizado porque se selecciona de : 25 -427- ?? ?? -431- ?? -434- -435- -436- -437- ?? 25 -440- ?? -442- o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
8. Un compuesto caracterizado porque se selecciona ; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
9. Una composición caracterizada porque comprende el compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable.
10. La composición de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque además comprende al menos un compuesto adicional que tiene actividad contra el VHC.
11. La composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque al menos uno de los compuestos adicionales es un interferón o una ribavirina.
12. La composición de conformidad con la reivindicación 11, caracterizada porque el interferón está seleccionado de interferón alfa 2B, interferón alfa pegilado, interferón de consenso, interferón alfa 2A e interferón linfoblastoide tau.
13. La composición de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada porque al menos uno de los compuestos adicionales está seleccionado de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, un compuesto que potencia el desarrollo de la respuesta de linfocitos T auxiliares de tipo 1, ARN de interferencia, ARN antisentido, imiqimod, ribavirina, un inhibidor de inosina 5 ' -monofosfato deshidrogenasa, amadantina y rimantadina.
14. La composición de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada porque al menos uno de los compuestos adicionales es eficaz para inhibir la función de una diana seleccionada de metaloproteasa del VHC, serina proteasa del VHC, polimerasa del VHC, helicasa del VHC, proteína NS4B del VHC, entrada del VHC, ensamblaje del VHC, salida del VHC, proteína NS5A del VHC y IMPDH para el tratamiento de una infección por el VHC.
15. Uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la manufactura de un medicamento para tratar una infección por VHC en un paciente.
16. Uso de conformidad con la reivindicación 15, en donde además comprende administrar al menos uno de los compuestos adicionales que tiene actividad contra el VHC antes de, después de, o simultáneamente con, el compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
17. Uso de conformidad con la reivindicación 16, en donde al menos uno de los compuestos adicionales es un interferón o una ribavirina.
18. Uso de conformidad con la reivindicación 17, en donde el interferón está seleccionado de interferón alfa 2B, interferón alfa pegilado, interferón de consenso, interferón alfa 2A e interferón linfoblastoide tau.
19. Uso de conformidad con la reivindicación 16, en donde al menos uno de los compuestos adicionales está seleccionado de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, un compuesto que potencia el desarrollo de la respuesta de linfocitos T auxiliares de tipo 1, AR de interferencia, ARN antisentido, Imiqimod, ribavirina, un inhibidor de inosina 5 ' -monofosfato deshidrogenasa, amadantina y rimantadina .
20. Uso de conformidad con la reivindicación 16, en donde al menos uno de los compuestos adicionales es eficaz para inhibir la función de una diana seleccionada de metaloproteasa del VHC, serina proteasa del VHC, polimerasa del VHC, helicasa del VHC, proteína NS4B del VHC, entrada del VHC, ensamblaje del VHC, salida del VHC, proteína NS5A del VHC y IMPDH para el tratamiento de una infección por el VHC.
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