MX2011009659A - Composiciones que contienen glicerol y monogliceridos de acido organico c1 a c7, su preparacion y uso como agentes antibacterianos y anti-moho. - Google Patents

Abstract

Se describen composiciones antibacterianas y anti-moho que contienen altas cantidades de mono-glicéridos de ácidos orgánicos C1 a C7 y glicerol, su preparación y su uso en alimentos de animales.

Description

COMPOSICIONES QUE CONTIENEN GLICEROL Y MONOGLICERIDOS DE ACIDO ORGANICO Cl A C7 , SU PREPARACION Y USO COMO AGENTES ANTIBACTERIANOS Y ANTI-MOHO Campo de la Invención La presente invención se relaciona con el campo de las composiciones para alimentos animales.

Antecedentes de la Invención El problema más comúnmente conocido que afecta a las granjas y los animales de compañía es el daño causado por infecciones bacterianas y micotoxinas producido por mohos ingeridos con sus alimentos. Con relación a las infecciones bacterianas, y en particular las infecciones intestinales, frecuentemente se presentan con diarrea severa que puede comprometer, aun en un grado serio, la salud del animal y por consiguiente los ingresos financieros de la granja en conjunto .

Con relación a las micotoxinas producidas por los mohos, sus efectos tóxicos en órganos específicos y sobre las funciones fisiológicas de los animales, y su capacidad para provocar enfermedades como la toxicosis, se haN conocido durante muchos años. También se sabe que las micotoxinas carcinogénicas , como las aflatoxinas producidas por los mohos de la cepa Aspergillus, pueden transferirse de la lechE de Ref.:222700 vaca o cabra al hombre porque son muy estables y no pueden eliminarse con tratamientos térmicos normales. Las Ocratoxinas A se producen por las especies Aspergillus y Penicíllium; si se presentan en el alimento, pueden causar serias enfermedades de riñon en cerdos y especies de aves.

La toxina T-2 producida por las especies Fusarium, puede originar necrosis del tracto digestivo de los animales.

Normalmente se busca superar estas desventajas al usar ácidos de cadenas cortas, ya sea solos o en una mezcla, tal como: ácido fórmico (CiH202) , ácido acético (C2H402) , ácido propiónico (C3H502) , ácido láctico (C3H602) , ácido fumárico (C4H404) , ácido butírico (C4H802) , ácido cítrico (C6H807) , ácido benzoico (C7H602) .

Entre las limitaciones de usar los ácidos orgánicos es su fuerte acción corrosiva que puede dañar cualquier equipo con el cual entran en contacto. Las formas salinas con amonio, calcio, sodio, o potasio también pueden producir acción corrosiva que, aunque más limitada, no obstante está presente .

También existen ciertas restricciones fisiológicas a la acción de los ácidos orgánicos como tales o en la forma salina cuando se usan como antibacterianos en las dietas de los animales; con respecto a estos ácidos orgánicos se sabe que requieren de un pH ácido a fin de desarrollar la acción antibacteriana real, porque bajo estas condiciones están presentes en la forma no disociada RCOOH. Esta forma no disociada RCOOH pasa a través de la pared celular del microorganismo y, una vez dentro, se disocia de acuerdo con el pH intracelular . Para mantener su pH intracelular el microorganismo expele H+; el nivel del ácido orgánico disociado se incrementa de esta forma y no abandona al microorganismo, esto lo mata.

En el intestino, sin embargo, el pH es ligeramente básico (alrededor de 7) así que la presencia del ácido orgánico en forma no disociada es muy limitada, y por consiguiente la función antibacteriana también es muy limitada .

En vista de lo anterior, por lo tanto, existe una evidente necesidad por desarrollar nuevas composiciones capaces de contrarrestar los efectos de los mohos y bacterias presentes en los alimentos de los animales, pero que no exhiban las desventajas anteriores.

La técnica de microencapsular los ácidos orgánicos con sustancias como lípidos se desarrolló como un método para proveer ácido orgánico a los intestinos y para disminuir el pH de estos, pero los resultados obtenidos no son satisfactorios debido a la acción de amortiguamiento del bicarbonato de sodio producido por el páncreas como un regulador de pH intestinal. Sin embargo, además no es muy efectivo, esta tecnología también es muy costosa.

La acción antibacteriana de ciertos monoglicéridos de ácido graso se ha investigado en diferentes estudios, por ej emplo : 1. J. Kabara, Dennis M. Swieczkowski , Anthony J. Conley, Joseph P. Truant 1972 FATTY ACIDS AND DERIVATIVES AS ANTIMICROBIAL AGENTS. 2. G. Bergsson, J. Anrfinnsson S. Karlsson, O.

Steingrimsson, H. Thormar 1998. IN VITRO INACTIVATION OF CHLAMYDIA TRACHOMATIS BY FATTY ACIDS AND MONOGLYCERIDES . 3. G. Bergsson, J. Anrfinnsson O. Steingrimsson, H.

Thormar 2001. IN VITRO KILLING OF CANDIDA ALBICANS BY FATTY ACIDS AND MONOGLYCERIDES. 4. H. Thormar, H. Hilmarsson, G. Bergsson, 2005. STABLE CONCENTRATED EMULSIONS OF THE 1-MONOGLIYCERIDE OF CAPRIC ACID (MONOCAPRIN) ITH MICROBICIDAL ACTIVITIES AGAINST THE FOOD-BORNE BACTERIACAMPYLOBACTER JEJUNI , SALMONELLA SPP AND ESCHERICHIA COLI ; PCT/IS2005/000026 "STABLE CONCENTRATED ANTI -BACTERIAL EMULSIONS OF MONOCAPRIN IN WATER" 5. H. Hilmarsson, H. Thormar, E. Gunnarsson, 2006.

EFFECT OF GLYCEROL MONOCAPRATE (MONOCAPRIN) ON BROILER CHICKENS: AN ATTEMPT AT REDUCING INTESTINAL CAMPYLOBACTER INFECTION.

Estos estudios han enfatizado una prometedora pero no exhaustiva dirección; que hasta ahora el conocimiento actual permite, no existen estudios que confirmen la acción antibacteriana y anti-moho específicamente de las composiciones de los monoglicéridos de ácidos grasos de cadena corta combinados con glicerol.

Breve Descripción de la Invención La presente invención se relaciona con composiciones que contienen monoglicéridos de ácido graso a C7 en porcentajes entre 10% y 90% y glicerol entre 10 y 90% en peso (calculado en la composición total en peso) y agentes antibacterianos y anti-moho que se agregan a los cereales, alimento, y a los alimentos en general y agua potable planeada para la alimentación de animales.

Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 es una suspensión acuosa de una composición de la invención mostrada por el microscopio electrónico.

La Figura 2 muestra alimento sin tratamiento inoculado con Fusarium.

La Figura 3 muestra alimento inoculado con Fusarium y tratado con 0.7% de Monopropionin 43.

Descripción Detallada de la Invención Se ha encontrado sorprendentemente que las composiciones que contienen ésteres de monogl icér idos del ácido orgánico Ci a C7 combinados con glicerol tienen una fuerte potencia antibacteriana tanto con pH ácido (4.5) y con pH neutro como está presente en los intestinos de los animales (es decir, pH 7) .

En las composiciones de la invención, los ésteres de monogl icéridos de ácido orgánico como se define están presentes en cantidades entre 10% y 90% y el glicerol entre 10 y 90% en peso (calculado en la composición total en peso) ; preferentemente las cantidades están entre 40%-90% y 10%-60% respectivamente) .

El término "ácidos orgánicos Ci a C7" de acuerdo con la invención se refiere preferentemente a los siguientes ácidos: ácido fórmico, acético, propiónico, láctico, butírico, cítrico, fumárico y benzoico.

Se prefieren particularmente el ácido butírico y propiónico .

, Ejemplos de composiciones de acuerdo con la invención son las composiciones que consisten de: (a) Ester de monoglicérido del ácido butírico 42-47% Ester de diglicérido del ácido butírico 5-8% Ester de triglicérido del ácido butírico 0.5-2% Glicerol 45-50% (b) Ester de monoglicérido del ácido propiónico 45-50% Ester de diglicérido del ácido propiónico 8-12% Ester de triglicérido del ácido propiónico 1-3% Glicerol 36-40% Ejemplos específicos de las composiciones de acuerdo con la invención son composiciones que consisten de: (c) Ester de monoglicérido del ácido butírico 45% Ester de diglicérido del ácido butírico 6% Ester de triglicérido del ácido butírico 1% Glicerol 48% (d) Monoglicéridos de ácido butírico 43% Diglicéridos de ácido butírico 6% Triglicéridos de ácido butírico 1% Glicerol 50% (e) Ester de monoglicérido del ácido propiónico 49% Ester de diglicérido del ácido propiónico 10% Ester de triglicérido del ácido propiónico 2% Glicerol 39% (f) Monoglicéridos de ácido propiónico 43% Diglicéridos de ácido propiónico 6% Triglicéridos de ácido propiónico 1% Glicerol 50% Valores de potencia antibacteriana de los ácidos orgánicos solos comparados con aquellos de las composiciones de la invención se proporcionan enseguida en la tabla 1.

Tabla 1 Nota: Monopropionin 43 está compuesto de: 43% monoglicéridos del ácido propiónico 6% diglicéridos del ácido propiónico 1% triglicéridos de ácido propiónico 50% de glicerol Nota: Monobutirin 43 está compuesto de: 43% monoglicéridos del ácido butírico 6% diglicéridos del ácido butírico 1% triglicéridos de ácido butírico 50% de glicerol La Tabla 2 compara la acción antibacteriana in vitro de ácido butírico puro, de los monoglicéridos de ácido butírico sin glicerol libre y de una mezcla de monoglicéridos de ácido butírico con glicerol libre, contra Clostridium perfringens. Mientras que la mezcla de monoglicéridos del ácido butírico y glicerol ya exhibe una potencia inhibitoria (es decir, sin crecimiento) en los tres duplicados con una concentración de 1000 ppm, los monoglicéridos de ácido butírico no exhiben ninguna potencia de inhibición contra las bacterias, y el ácido butírico solo exhibe acción inhibitoria de 3000 ppm.

TABLA 2 Bacteria: Clostridium perfringens CP27 Concentración de inoculación: 105 Medio: Infusión Cerebro Corazón Tiempo de incubación y presencia de crecimiento; + para 24 horas, ++ para 37 horas y +++ para 96 horas - 3 duplicados para cada concentración Negativo Positivo Control Control ppm Ácido Monobutirin 43 Monoglicéridos (PC) butírico de ácido butírico + .500 + + + + + + + ++ + +¦ + media 1000 + Sin crecimiento + + Sin crecimiento + + Sin crecimiento + media (Continuación Tabla 2) La Tabla 3 compara la acción bacteriana in vitro del ácido acético puro, de los monoglicéridos de ácido acético sin glicerol libre y de una mezcla de monoglicéridos de ácido acético con glicerol libre contra Salmonella typhimurium.

Mientras la mezcla de monoglicéridos de ácido acético y glicerol (Monoacetin 42) exhibe una potencia inhibidora (es decir, sin crecimiento) en todos los duplicados con una concentración de 10,000 ppm, los monoglicéridos de ácido acético exhibe la potencia inhibidora contra las bacterias desde 25,000 ppm y el ácido acético exhibe acción inhibidora desde 20,000 ppm.

TABLA 3 Bacteria: Salmonella typhimurium de cerdo Concentración de inoculación: 105 Medio: Infusión Cerebro Corazón Tiempo de incubación y presencia de crecimiento; + para 24 horas, ++ para 37 horas y +++ para 96 horas - 3 duplicados para cada concentración pH 6 Negativo Positivo Control Control ppm Ácido Monoacetin 42 Monoglicéridos de (PC) acético ácido acético + 5000 + + + + + + + ++ + + + media 10000 + Sin crecimiento + + Sin crecimiento + + Sin crecimiento + media (Continuación Tabla 3) Nota: Monoacetin 42 está compuesto de: 42% monoglicéridos del ácido acético 7% diglicéridos del ácido acético 1% triglicéridos de ácido acético 50% de glicerol La Tabla 4 compara la acción bacteriana in vitro del ácido fórmico puro, de los monoglicéridos de ácido fórmico sin glicerol libre y de una mezcla de monoglicéridos de ácido fórmico con glicerol libre contra Salmonella typhimurium de cerdo. Mientras la mezcla de monoglicéridos de ácido fórmico y glicerol (Monoformin 42) exhibe una potencia inhibidora (es decir, sin crecimiento) en todos los tres duplicados con una concentración de 5,000 ppm, los monoglicéridos de ácido fórmico exhibe la potencia inhibidora contra las bacterias desde 25,000 ppm y el ácido fórmico exhibe acción inhibidora desde 15,000 ppm.

TABLA 4 Bacteria: Salmonella typhimurium de cerdo Concentración de inoculación: 105 Medio: Infusión Cerebro Corazón Tiempo de incubación y presencia de crecimiento; + para 24 horas, ++ para 37 horas y +++ para 96 horas - 3 duplicados para cada concentración pH 6 (Continuación Tabla 4) Negativo Positivo Control Control ppm Ácido fórmico Monoformin 42 Monoglicéridos (PC) de ácido fórmico media 10000 + Sin crecimiento + + Sin crecimiento + + Sin crecimiento + media 15000 Sin crecimiento Sin crecimiento + Sin crecimiento Sin crecimiento + Sin crecimiento Sin crecimiento + media 20000 Sin crecimiento Sin crecimiento + Sin crecimiento Sin crecimiento + Sin crecimiento Sin crecimiento + media 25000 Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Media 30000 Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento media 40000 Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento media Nota: Monoformin 42 está compuesto de: 42% monoglicéridos del ácido fórmico 7% diglicéridos del ácido fórmico 1% triglicéridos de ácido fórmico 50% de glicerol La Tabla 5 compara la acción bacteriana in vitro del ácido fumárico puro, de los monogl icéridos de ácido fumárico sin glicerol libre y de una mezcla de monogl icéridos de ácido fumárico con glicerol libre (Monofumarin 41) contra E. coli. Mientras la mezcla de monogl icéridos de ácido fumárico y glicerol exhibe una potencia inhibidora (es decir, sin crecimiento) en todos los tres duplicados con una concentración de 20,000 ppm, los monogl icéridos de ácido fumárico exhibe la potencia inhibidora contra las bacterias desde 60,000 ppm y el ácido fumárico exhibe acción inhibidora desde 90,000 ppm.

TABLA 5 Bacteria: E. coli Concentración de inoculación: 105 Medio: Infusión Cerebro Corazón Tiempo de incubación y presencia de crecimiento; + para 24 horas, ++ para 37 horas y +++ para 96 horas - 3 duplicados para cada concentración pH 5 Negativo Positivo Control Control ppm Ácido fumárico Monofumarin 41 Monoglicéridos de (PC) ácido fumárico + 10000 + + + + + + + ++ + + + media 20000 + Sin crecimiento + + Sin crecimiento + + Sin crecimiento + media 40000 + Sin crecimiento + + Sin crecimiento + + Sin crecimiento + media 60000 ++ Sin crecimiento Sin crecimiento ++ Sin crecimiento Sin crecimiento ++ Sin crecimiento Sin crecimiento media 80000 ++ Sin crecimiento Sin crecimiento ++ Sin crecimiento Sin crecimiento ++ Sin crecimiento Sin crecimiento Media 90000 Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento media 100000 Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento Sin crecimiento (Continuación Tabla 5) Nota: Monofumarin 41 está compuesto de: 41% monoglicéridos del ácido fumárico 7% diglicéridos del ácido fumárico 1% triglicéridos de ácido fumárico 50% de glicerol Si se prefiere, las composiciones de la invención también pueden contener principios activos de aceites esenciales (aldehido cinámico, timol, carvacol) en porcentajes comprendidos entre 1 y 20% (calculado en peso sobre el peso de la mezcla de los otros componentes) que comúnmente se proporcionan para estos productos para alimentar animales, ya que estos principios activos son solubles en lípidos pero insolubles en glicerol.

Se debe notar que cuando la composición de la invención se dispersa en agua, el glicerol rodea el monoglicérido así mismo para formar gotas que incorporan el monoglicérido, estas permanecen suspendidas en agua (los otros principios activos opcionalmente agregados se disuelven en el monoglicérido, también se incorporan dentro de la gota de glicerol) (véase la fig. 1) .

Las composiciones de la invención pueden prepararse de acuerdo con los procesos de esterificación de ácido graso ampliamente descrito en la literatura, pero usando un gran exceso de glicerol (nunca menor de 200% en peso sobre el peso de los ácidos grasos usados) a fin de obtener una gran cantidad de monoglicéridos con grandes cantidades de glicerol libre .

Las composiciones de la invención pueden agregarse al alimento animal y/o su agua potable en cantidades desde 0.1 a 1.5%, preferentemente desde 0.3-0.6% calculado en peso en base al peso del alimento o la bebida.

Las composiciones de la invención se indican particularmente para las dietas de cerdos, pollos, peces, bovinos, caprinos y animales de compañía.

EJEMPLO 1 La reacción de esterificación se realiza en lotes de 10,000 kg.

Se introducen en un reactor a temperatura ambiente 3000 kg de ácido butírico y 7000 kg de glicerol.

Se incrementa la temperatura a 140 °C, el ácido butírico que se evapora se recircula dentro del reactor por medio de un condensador de reflujo.

El otro incremento de la temperatura desde 140 a 170 °C debe ser muy lento (durante aproximadamente 4 horas) y la temperatura del condensador de reflujo debe mantenerse a 120°C a fin de evaporar el agua derivada de la reacción de esterificación mientras el ácido butírico continua reciclando dentro del reactor.

En este punto la temperatura puede incrementarse a 180 °C (pero dejando la temperatura del condensador de reflujo a 120°C) y una vez que se ha alcanzado esta temperatura se espera que la acidez de la mezcla alcance un valor menor del 1% .

Después se aplica un vacío para destilar cualquier ácido butírico hasta que se alcanza una acidez final menor de 0.2%.

La mezcla se carga a través de un enfriador para llevarla a temperatura ambiente.

Se obtiene de esta forma una mezcla que contiene 43% de éster de monoglicérido, 6% de éster de diglicérido, 1% de éster de triglicérido, y 50% de glicerol.

Una vez que se completa la reacción de esterificación el glicerol puede separarse si se desea por destilación de los ésteres de mono-, di- y triglicéridos para llegar a una concentración de monoglicérido del 90%.

EJEMPLO 2 Se asignaron sesenta lechones DanBred de 5 semanas en dos grupos de treinta cerditos cada uno: A) -control, y B) tratados, divididos en 6 corrales de diez animales cada uno.

Después de los primeros 10 días de adaptación en los encierros, todos los animales se inocularon oralmente con Salmonella typhimurium, aislada en el Instituto Zooprofilattico de Forli (Italia) de muestras fecales de cerdos infectados, con una dosis igual a 7xl07 cfu.

Al siguiente día algunos de los sujetos de cada corral presentaron diarrea. Los síntomas empeoraron y afectaron a todos los sujetos durante los siguientes tres días después de la infección.

Las muestras fecales se recolectaron el tercer día después de la infección; se encontró que el cálculo bacteriano es igual a 165,000 cfu en el grupo de control A) y 160,000 cfu en el grupo tratado B) . El grupo B) se trató desde el tercer día de infección con una mezcla compuesta de: - Monoglicéridos de ácido butírico = 45% - Diglicéridos de ácido butírico = 6% - triglicéridos de ácido butírico = 1% - Glicerol = 48% administrada en el agua potable con una dosis de 0.5% durante tres días. Al tercer día después del tratamiento, las muestras fecales se recolectaron de nuevo para un análisis de cálculo bacteriano. El grupo de control A) presentó un número cfu medio de 160,000, mientras en el grupo B) tratado el número cfu fue de 900. El uso de la mezcla de "ásteres de ácido butírico y el glicerol" con los porcentajes declarados redujo los cfus de la salmonella en 3 loglO, con una administración al 3er día. Este hecho confirma la efectividad bacteriana de la mezcla.

EJEMPLO 3 La actual prueba de campo, se realizó en una granja italiana con problemas de higiene tal como ileitis muy evidente de infecciones intracelulares Lawsonia, enteritis de Brachyspira Spp y enteritis necrótica que resulta de una infección por Treponema hydysenteriae . 1,027 cerdos DanBred que pesaron aproximadamente 25 Kg (71 días de edad) se dividieron en dos grupos: grupo de control A) y el grupo B) tratado, compuesto de 511 y 516 animales respectivamente.

Los dos grupos se alimentaron con un alimento que se formuló de forma idéntica excepto por los siguientes componentes: el alimento del grupo de control se agregó Lincomicina, 200 ppm; y Doxiciclina 250 ppm, durante los primeros 14 días de la prueba, y Lincomicina sola durante el resto del tiempo. El grupo B) tratado no recibió antibióticos en el alimento, solo una mezcla de "ésteres de ácido butírico y glicerol" compuesta como sigue: - Monoglicéridos de ácido butírico = 45% - Diglicéridos de ácido butírico = 6% - triglicéridos de ácido butírico = 1% - Glicerol = 48% administrada al alimento en una cantidad de 0.5% para reemplazar 0.5% del aceite de soya. La prueba duró 63 días. Los resultados de la eficacia del crecimiento y alimentación se resumen en la tabla 6 siguiente.

TABLA 6 Aunque el análisis fecal del grupo A) de control mostró la presencia de Lawsonia, su presencia no se encontró en el grupo B) tratado. Los episodios de diarrea también se redujeron mucho en el grupo B) tratado. Los parámetros de crecimiento, el índice de conversión del alimento del grupo B) tratado fueron comparables, y con mejor tendencia que aquellos del grupo A) de control cuya dieta tuvo los antibióticos antes mencionados. La mezcla de "ésteres de ácido butírico y glicerol" permitió que se controlaran las enfermedades destacadas, sin el uso de antibióticos. La prueba ha demostrado el efecto antibacteriano de la mezcla "ésteres de ácido butírico y glicerol" con una mejora consecuente para la salud intestinal.

EJEMPLO 4 Prueba de eficacia hacia la Salmonella typhimurium en pollos Cepa Salmonella Para la prueba, se utilizó una cepa de Salmonella typhimurium aislada y se identificó por la sección IZSLER de Forli.

Animales Se utilizaron pollos SPF (Libres de Patógenos Específicos), 30 animales por prueba. Los pollos salieron del cascarón en la sección IZLER de Forli. Los sujetos se colocaron inmediatamente en unidades de aislamiento.

Dieta Los animales recibieron agua del suministro principal de agua y un alimentador comercial de libre alimentación de ración inicial. Al alimento se le agregó Monobutirin 43.

Protocolo experimental Se prepararon 4 grupos de 30 sujetos. Las dietas fueron diferentes por la cantidad de Monobutirin 43 agregado al alimento del primer día de vida, y se identificaron como sigue: grupo 1: 1% en el alimento, grupo 2: 0.3% en el alimento. El grupo 3 recibió el mismo alimento que el grupo de control hasta el 14° día de vida, es decir hasta el 7o día posterior a la infección, y solo recibió alimento complementado con 1.4% de Monobutirin 43 después de este día.

A los 7 días de edad, todos los sujetos se infectaron por medio de la vía esofageal con 107 cfu de Salmonella typhimurium. 24 horas después de la infección, se tomaron muestras cloacales de todos los sujetos para confirmar que se adquirió la infección de Salmonella typhimurium. A los 14, 24 y 35 días de vida, se mataron 10 sujetos en cada grupo. Se recolectaron las ceca de cada animal y se determinó la carga de Salmonella typhimurium (expresada en cfu/g) .

Pruebas de Laboratorio Se confirmó la ausencia de anticuerpos contra S. typhimurium por una prueba ELISA. Las muestras cloacales se sembraron directamente dentro del Agar Entérico Hektoen y se incubaron a 37 °C durante 24 horas. Un gramo de los contenidos intestinales se diluyó en 9 mi de lactato de Ringer y se sembró sobre Agar Entérico Hektoen (volumen del ????µ??: 0.1 mi) . El cálculo de la colonia se realizó después de 24 horas de incubación a 37 °C. Para cada colección, se calculó la media geométrica de las cargas bacterianas de los 10 sujetos muertos .

Todos los sujetos, después de un día de vida, se encontraron que son seronegativos para Salmonella Typhimurium. 24 horas después de la infección, se encontró que todas las muestras cloacales fueron positivas para S. Typhimurium. Los resultados de las cargas bacterianas fecales determinados se muestran en la siguiente tabla 7.

Tabla 7 CFU en el cecum de los pollos infectados con Salmonella Typhimurium - 107 Control Grupo 1 (1% Grupo 2 Grupo 3 (1.4% en en (0.3% en alimento desde el alimento) alimento) 14° día de vida) Día de infección 0 0 0 0 (7o día de vida) 7° día post6,400,000 770, 000 2,226, 000 6,302,000 inicio infección del tratamiento (Continuación Tabla 7) EJEMPLO 5 Prueba de sensibilidad in vitro para el hongo filamentoso (moho) Materiales y métodos Se utilizaron cepas de Aspergillus spp, Penicillium spp y Fusarium spp para la prueba, que fueron aisladas e identificadas durante la actividad de diagnosis en la sección IZSLER de Forli de los alimentos completos usados en la industria avícola. Para preparar el inoculo, el micelio de los cultivos de las cepas probadas se recolectó usando un hisopo. El material recolectado de esta forma se disolvió en un caldo de cultivo (BHI - Infusión Cerebro Corazón) . Se pusieron en contacto 5 mi de suspensión fúngica y una cantidad igual del producto que se probará en un tubo de ensaye. El tubo de ensaye se incubó a 20°C ± 4°C durante 24 horas .

Después de este periodo, la suspensión fúngica después se sembró y enumeró. Se obtuvo la suspensión de control al colocar 5 mi de la suspensión fúngica + 5ml de diluyente (lactato de Ringer) dentro del tubo de ensaye. Se realizó la lectura de las pruebas después de un periodo de incubación de 5 días a 20°C ± 4°C.

Los resultados se dan en la siguiente tabla 8 se expresan como cfu/ml.

Tabla 8 Nota: Monopropionin 43 está compuesto de: 43% monoglicéridos del ácido propiónico 12% diglicéridos del ácido propiónico 1% triglicéridos de ácido propiónico 28% de glicerol 16% H20 Nota: Monobutirin 43 está compuesto de: 43% monoglicéridos del ácido butírico 6% diglicéridos del ácido butírico 1% triglicéridos del ácido butírico 50% de glicerol EJEMPLO 6 Prueba de eficacia in vi tro hacia Penicillium spp y Fusarium spp Materiales y Métodos Cepas: las cepas y mohos aislados e identificado por la sección IZSLER en Forli se usó para las pruebas. Las cepas se revitalizaron en el caldo de BHI después se enumeraron en agar OGYE (después de la incubación a 20°C durante 5 días) Sustrato:* se utilizó un alimento de pollo completo, esterilizado en un horno de secado a 100 °C durante 4 horas.

Prueba de eficacia: se inocularon 10 g de alimento con 2 mi de suspensión fúngica (en agua destilada) a la cual se agregaron 70 µ? del producto que se probará. La mezcla obtenida se mantuvo a temperatura ambiente. También se preparó un control positivo (infectado y sin tratamiento) y un control negativo (solo alimento + agua destilada) . Se evaluaron las concentraciones fúngicas en los días 7 y 14 después de la infección, en la muestra tratada y las muestras de control.

Los resultados se dan en la siguiente tabla 9.

Tabla 9 Nota: Monopropionin 43 está compuesto de 43% monoglicéridos del ácido propiónico 12% diglicéridos del ácido propiónico 1% triglicéridos de ácido propiónico 28% de glicerol libre 16% H20.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (11)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Composiciones antibacterianas y anti-moho para tratar cereales, forraje y alimento en general y agua potable proyectada para la alimentación de animales, caracterizadas porque contienen monogl icéridos de ácidos orgánicos Ci a C7 en porcentajes entre 10% y 90% y glicerol en porcentajes entre 10% y 90% en peso calculado sobre la composición total en peso. 2. Composiciones de conformidad con la reivindicación 1, caracterizadas porque las composiciones contienen monoglicéridos de ácidos orgánicos Cx a C7 en porcentajes entre 40%-90% y glicerol en porcentajes entre 10%-60% en peso calculado en peso sobre la composición total . 3. Composiciones de conformidad con las reivindicaciones 1 y 2, caracterizadas porque los ácidos orgánicos se eligen de: ácido fórmico, acético, propiónico, láctico, butírico, cítrico, fumárico, benzoico . 4. Composiciones de conformidad con la reivindicación 3, caracterizadas porque los ácidos son ácido butírico y ácido propiónico. Composiciones de conformidad con reivindicaciones 1-4, caracterizadas porque consisten de: (a) Ester de monoglicérido del ácido butírico 42-47% Ester de diglicérido del ácido butírico 5-8% Ester de triglicérido del ácido butírico 0.5-2% Glicerol 45-50% (b) Ester de monoglicérido del ácido propiónico 45-50% Ester de diglicérido del ácido propiónico 8-12% Ester de triglicérido del ácido propiónico 1-3% Glicerol 36-40% (O Ester de monoglicérido del ácido butírico 45% Ester de diglicérido del ácido butírico 6% Éster de triglicérido del ácido butírico 1% Glicerol 48% (d) Monoglicéridos de ácido butírico 43% Diglicéridos de ácido butírico 6% Triglicéridos de ácido butírico 1% Glicerol 50% (e), Éster de monoglicérido del ácido propiónico 49% Éster de diglicérido del ácido propiónico 10% Éster de triglicérido del ácido propiónico 2% Glicerol 39% (f) Monoglicéridos de ácido propiónico 43% Diglicéridos de ácido propiónico 6% Triglicéridos de ácido propiónico 1% Glicerol 50%. 6. Composiciones de conformidad con las reivindicaciones 1-5, caracterizadas porque también contiene principios activos de aceites esenciales en porcentajes comprendidos entre 1-20% en peso. 7. Proceso para preparar las composiciones de conformidad con las reivindicaciones 1-6, caracterizado porque los ácidos grasos se esterifican de acuerdo con los métodos conocidos en presencia de un gran exceso de glicerol, el cual nunca es menor de 200% de la cantidad estequiométrica necesaria para obtener los monogl icéridos ,- los principios activos de la reivindicación 6 puede agregarse a las mezclas de ésteres y glicerol obtenidas de esta forma. 8. Método para eliminar o reducir la presencia de bacterias y moho de los alimentos de animales y líquidos bebibles, caracterizado porque las composiciones de las reivindicaciones 1-6 se agregan a los alimentos o agua potable. 9. Alimentos y bebidas de animales, ya sea líquidos o sólidos, caracterizados porque se agregan a las composiciones de las reivindicaciones 1-6. 10. Alimentos y bebidas de conformidad con la reivindicación 9, caracterizados porque las composiciones se agregan en una cantidad entre 0.1 y 1.5%, preferentemente entre 0.3 y 0.5% en peso en el peso total del alimento o bebida. 11. Alimentos de conformidad con las reivindicaciones 9 y 10, caracterizados porque los alimentos son aquellos usados para alimentar cerdos, pollos, peces, bovinos, caprinos y animales de compañía.