MX2010011948A - Antagonistas de la trayectoria hedgehog de ftalazina disustituida. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a nuevos antagonistas de la trayectoria de hedgehog de ftalazina 1,4-disustituida, útiles en el tratamiento de cáncer.

Description

ANTAGONISTAS DE LA TRAYECTORIA HEDGEHOG DE FTALAZINA DISUSTITUIDA Antecedentes de la invención La presente invención se refiere a antagonistas de la trayectoria Hedgehog y, más específicamente, a nuevas ftalazinas disustituidas y uso terapéutico de las mismas. La trayectoria de señalización Hedgehog (Hh) juega un papel importante en la formación de patrón embriónico y mantenimiento del tejido en adultos dirigiendo la diferenciación y proliferación celular. La familia de la proteína Hedgehog (Hh) , la cual incluye Hedgehog Sónica (Shh) , Hedgehog India (Ihh) , y Hedgehog Desierto (Dhh) son glicoproteínas secretadas que sufren modificaciones post-traduceionales, incluyendo escisión autocatalítica y acoplamiento de colesterol al péptido amino terminal para formar el fragmento que posee actividad de señalización. Hh enlaza a la proteína transmembrana de doce pasos Ptch (Ptchl y Ptch2) , con ello aliviando la supresión mediada por Ptch de Smoothened (Smo) . La activación de Smo activa una serie de eventos intracelulares que culminan en la estabilización de los factores de transcripción Gli (Glil, Gli2, y Gli3) y la expresión de los genes dependientes de Gli que son responsables de la proliferación celular, supervivencia celular, angiogénesis e invasión.

La señalización de Hh recientemente ha atraído interés considerable en el descubrimiento que la activación aberrante de la señalización de Shh conduce a la formación de varios tumores, por ejemplo, cáncer pancreático, meduloblastoma, carcinoma de célula basal, cáncer de pulmón de células pequeñas, y cáncer de próstata. Varios antagonistas de Hh han sido reportados en la técnica, tales como el compuesto alcaloide esteroidal IP-609; el compuesto aminoprolina CUR61414; y el compuesto tiazol 2 , 4-disustituido JK18. El documento WO2005033288 describe ciertos compuestos de ftalazina 1 , 4 -disustituida que se afirma son antagonistas de hedgehog.

Aún existe una necesidad de inhibidores potentes de la trayectoria de hedgehog, particularmente aquellos que tienen perfiles de farmacodinámica, farmacocinética y toxicología deseables. La presente invención proporciona nuevas ftalazinas 1 , 4-disustituidas que son antagonistas potentes de esta trayectoria.

La presente invención proporciona un compuesto de Fórmula I: Fórmula I en donde : R1 es hidrógeno, fluoro, ciano, trifluorometilo, metoxi o trifluorometoxi ; R2 es hidrógeno o metilo; y R3, R4, R5, R6 y R7 son independientemente hidrógeno, cloro, fluoro, ciano, trifluorometilo o trifluorometoxi , siempre que al menos dos de R3, R4, R5, R6 y R7 sean hidrógeno; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. Se entenderá por el experto en la técnica, que los compuestos de la invención comprenden una porción amina terciaria y son capaces de reaccionar con un número de ácidos orgánicos e inorgánicos para formar sales de adición farmacéuticamente aceptables. Tales sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables y metodología común para prepararlos es bien conocida en la técnica. Véase, por ejemplo, P. Stahl, et al., HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS : PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2002); S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts, " Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 66, No. 1, Enero 1977.

Modalidades específicas de la invención incluyen un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde: (a) R1 es hidrógeno; (b) R1 es fluoro; (c) R2 es hidrógeno; (d) R2 es metilo; (e) R3 es cloro, fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi ; (f) R5 es fluoro, trifluorometoxi, o trifluorometilo; (g) R1 es hidrógeno, y R2 es hidrógeno; (h) R1 es fluoro, y R2 es hidrógeno; (i) R1 es hidrógeno, y R2 es metilo; (j) R1 es fluoro y R2 es metilo; (k) R1 es hidrógeno y R3 es cloro, fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi ; (1) R1 es fluoro y R3 es cloro, fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi ; (m) R2 es hidrógeno y R3 es cloro, fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi ; (n) R2 es metilo y R3 es cloro, fluoro, trifluorometilo o trifluorometoxi ; (o) R1 es hidrógeno y R5 es fluoro, trifluorometoxi , o trifluorometilo; (p) R1 es fluoro y R5 es fluoro, trifluorometoxi , o trifluorometilo; (q) R2 es hidrógeno y R5 es fluoro, trifluorometoxi, o trifluorometilo; (r) R2 es metilo y R5 es fluoro, trifluorometoxi , o trifluorometilo; (s) R3 es cloro, fluoro, trifluorometilo o trifluorometoxi y R5 es fluoro, trifluorometoxi, o trifluorometilo; (t) R1 es hidrógeno, R2 es hidrógeno, y R3 es cloro, fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi ; (u) R1 es hidrógeno, R2 es metilo, y R3 es cloro, fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi ; (v) R1 es fluoro, R2 es hidrógeno, y R3 es cloro, fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi ; (w) R1 es fluoro, R2 es metilo, y R3 es cloro, fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi ; (x) R1 es hidrógeno, R2 es hidrógeno, y R5 es fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi ; (y) R1 es hidrógeno, R2 es metilo, y R5 es fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi; (z) R1 es fluoro, R2 es hidrógeno, y R5 es fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi; (aa) R1 es fluoro, R2 es metilo, y R5 es fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi ; (bb) R1 es hidrógeno, R2 es hidrógeno, R3 es cloro, fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi y R5 es fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi; (ce) R1 es hidrógeno, R2 es metilo, R3 es cloro, fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi , y R5 es fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi ; (dd) R1 es fluoro, R2 es hidrógeno, R3 es cloro, fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi , y R5 es fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi ; (ee) R1 es fluoro, R2 es metilo, R3 es cloro, fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi , y R5 es fluoro, trifluorometilo, o trifluorometoxi ; (ff) R1 es hidrógeno, R2 es hidrógeno, R3 es trifluorometilo, y R5 es fluoro; (gg) R1 es fluoro, R2 es hidrógeno, R3 es trifluorometilo, y R5 es fluoro; (hh) R1 es hidrógeno, R2 es metilo, R3 es trifluorometilo, y R5 es fluoro; (ii) R1 es fluoro, R2 es metilo, R3 es trifluorometilo, y R5 es fluoro; (jj) tres de R3, R4, R5, R6 y R7 son hidrógeno; y (kk) cuatro de R3, R4, R5, R6 y R7 son hidrógeno.

La presente invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en combinación con un excipiente, portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.

Los compuestos de la presente invención son preferiblemente formulados como composiciones farmacéuticas administradas por una variedad de rutas. Preferiblemente, tales composiciones son para administración oral o intravenosa. Tales composiciones farmacéuticas y procesos para prepararlas son bien conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, REMINGTO : THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHAR ACY (A. Gennaro, et al., eds., 19a ed. , Mack Publishing Co., 1995).

La presente invención proporciona también un método para tratar meduloblastoma, carcinoma de células básales, cáncer esofágico, cáncer gástrico, cáncer pancreático, cáncer de tracto biliar, cáncer de próstata, cáncer de mama, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de pulmón de células no pequeñas, linfoma de células B, mieloma múltiple, cáncer de ovario, cáncer colorrectal, cáncer hepático, cáncer renal o melanoma, en un mamífero que comprende administrar a un mamífero en necesidad de tal tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

Se entenderá que la cantidad del compuesto actualmente administrado será determinada por un médico bajo las circunstancias relevantes, incluyendo la condición a ser tratada, la ruta de administración elegida, el compuesto o compuestos actuales administrados, la edad, peso, y respuesta del paciente individual, y la severidad de los síntomas del paciente. Las dosificaciones por día normalmente caerán dentro del intervalo de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal. En algunas circunstancias los niveles de dosificación por debajo del límite inferior del intervalo antedicho pueden ser más que adecuados, mientras que en otros casos se pueden emplear dosis aún mayores . Por lo tanto, el intervalo de dosificación anterior no está limitado al alcance de la invención en cualquier forma. Esta invención también proporciona un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para uso como un medicamento.

Adicionalmente, esta invención proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la manufactura de un medicamento para tratar cáncer. En particular, estos cánceres se seleccionan a partir del grupo que consiste de meduloblastoma, carcinoma de células básales, cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer pancreático, cáncer del tracto biliar, cáncer de próstata, cáncer de mama, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de pulmón de células no pequeñas, linfoma de células B, mieloma múltiple, cáncer de ovario, cáncer colorrectal, cáncer hepático, cáncer renal y melanoma.

Además, esta invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, como un ingrediente activo para tratar meduloblastoma, carcinoma de células básales, cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer pancreático, cáncer de tracto biliar, cáncer de próstata, cáncer de mama, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de pulmón de células no pequeñas, linfoma de células B, mieloma múltiple, cáncer de ovario, cáncer colorrectal, cáncer hepático, cáncer renal o melanoma.

Como se usa en la presente, los siguientes términos tienen los significados indicados: ,,Et20" se refiere a éter dietílico; "DMF" se refiere a dimetilformamida; "DMSO" se refiere a dimetilsulfóxido; "TFA" se refiere a ácido trifluoroacético; "boc" o "t-boc" se refiere a fcer-jutoxicarbonilo; "SCX" se refiere a intercambio catiónico fuerte; "PyBO" se refiere a hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxitripirrolidin-fosfonio; "prep" se refiere a preparación; "ej" se refiere a ejemplo; e "IC50" se refiere a la concentración de un agente que produce 50% de la respuesta inhibitoria máxima posible para este agente.

Esquema de Reacción 1 Se puede preparar un compuesto de Fórmula I de conformidad con las reacciones como se representa en el Esquema de Reacción 1.

Se hace reaccionar una ftalazina 1-cloro sustituida (2) con una piridina 4-amino boc protegida (3a) en una sustitución aromática nucleofílica (SNAr) para proporcionar una ftalazina piperidina sustituida de fórmula (4) . Por ejemplo, el cloruro (2) se puede hacer reaccionar con la piperidina de fórmula (3a) en un solvente aprótico dipolar tal como DMF o DMSO, en la presencia de una base orgánica tal como trietilamina o base inorgánica tal como carbonato de potasio y se caliente a 100-140 °C.

La funcionalidad amina, tal como aquella presente en la piperidinil ftalazina de fórmula (4) , se puede desproteger y además hacer reaccionar para dar compuestos adicionales de la invención. Los métodos para introducir y remover grupos protectores de oxígeno y nitrógeno bien conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, Greene y Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed. , John iley y Sons, New York, (1999)). Por ejemplo, la desprotección boc de la amino piperidinil ftalazina de fórmula (4) se puede realizar bajo condiciones ácidas, tales como cloruro de hidrógeno o ácido trifluoroacético. Alternativamente, el HCl se puede generar in situ por adición por goteo de cloruro de acetilo a una solución de un solvente alcohol tal como metanol en tolueno a 0-20 °C seguido por la adición de un compuesto de fórmula (4) y calentamiento de la solución a 30-60 °C para dar un compuesto de fórmula (5) . Será obvio para un experto en la técnica que un compuesto de fórmula (5) se puede aislar como una sal tal como la sal de clorhidrato de amina y se lleva a la Etapa 3 o se transforma a la amina libre usando una base inorgánica tal como carbonato de potasio. La 4-amino piperidina se puede acilar usando cloruro de benzoilo sustituido en un solvente inerte tal como diclorometano o dioxano y una base tal como trietilamina o piridina para dar un compuesto amida de Fórmula I . Alternativamente, un compuesto de fórmula (5) se puede acilar usando un ácido benzoico sustituido con un agente de acoplamiento apropiado tal como PyBOP y una base apropiada tal como trietilamina en un solvente inerte tal como diclorometano o usando clorhidrato de l-(3-dimetilaminopropil) -3-etilcarbodiimida y 1-hidroxibenzotriazol en un solvente aprótico dipolar tal como DMF.

Alternativamente, una ftalazina 1-cloro sustituida (2) se hace reaccionar con una N-piperidin-4-il-benzamida de fórmula (3b) en una sustitución aromática nucleofílica (SNAr) como se describe previamente para la Etapa la para dar directamente un compuesto de Fórmula I. Por ejemplo, el cloruro (2) se puede hacer reaccionar en un solvente aprótico dipolar tal como DMF o DMSO, con una N-piperidin-4-il-benzamida de fórmula (3b) , en la presencia de una base tal como trietilamina y se calienta a 80-140°C para dar una amida de Fórmula I.

Se apreciará por el experto en la técnica que compuestos de fórmula (2) en el Esquema de Reacción 1 son comercialmente disponibles o pueden ser fácilmente preparados por métodos similares a aquellos descritos en la presente o usar procedimientos que son establecidos en la técnica. Por ejemplo, un ácido 2-fenilcarbonilbenzoico, generado a partir de una reacción Grignard de un bromuro de fenilo con anhídrido itálico, pueden ser ciclizados con hidrazina para dar una 4-fenil-2H-ftalazin-l-ona . El tratamiento subsecuente con oxicloruro de fósforo proporciona la l-cloro-4-fenil- ftalazina de fórmula (2) . Alternativamente, la 1,4- dicloroftalazina se puede hacer reaccionar con un ácido fenilborónico en una reacción de acoplamiento cruzado Suzuki para dar la l-cloro-4-fenil-ftalazina correspondiente de fórmula (2) .

Se puede preparar un compuesto de Fórmula I de conformidad con las reacciones como se representa en el Esquema de Reacción 2. En la Etapa 1, una 1,4- dicloroftalazina (6) se puede hacer reaccionar con una piperidina 4-aminoboc protegida (3a) en un solvente aprótico dipolar tal como iV-metilpirrolidona o DMSO con una base apropiada tal como carbonato de potasio o trietilamina. La mezcla se calienta a 70-95°C para dar un compuesto de fórmula (7) . En un método, mostrado en la Etapa 5, un compuesto de fórmula (7) se puede desproteger y subsecuentemente acilar a la amina en la Etapa 6 usando un cloruro de benzoilo sustituido en un solvente inerte tal como diclorometano, con una base tal como trietilamina para dar una amida de fórmula (9) . Alternativamente, un compuesto de fórmula (7) se puede acilar usando un ácido fenilcarboxílico sustituido y un reactivo de acoplamiento apropiado tal como PyBOP y una base adecuada tal como trietilamina en un solvente inerte tal como diclorometano a temperatura ambiente o usando 1-hidroxibenzotriazol y clorhidrato de 1- (3-dimetilaminopropil) -3-etilcarbodiimida con un solvente apropiado tal como DMF. En la Etapa 7, el cloruro de ftalazinilo de fórmula (9) se hace reaccionar con un ácido fenilborónico bajo condiciones de acoplamiento cruzado Suzuki- iyaura . El experto en la técnica reconocerá que existe una variedad de condiciones útiles para facilitar tales reacciones de acoplamiento cruzado. Las condiciones de reacción hacen uso de un solvente adecuado tal como dioxano/agua . La reacción se realiza en la presencia de una base tal como monohidrato tribásico de fosfato de potasio, carbonato de sodio, carbonato de potasio o carbonato de cesio. La reacción tiene lugar en la presencia de un catalizador de paladio tal como tris (dibencilidenacetona) dipaladio (0) con triciclohexilfosfina o (SP-4-1) - bis [bis (1, 1-dimetiletil) (4-metoxifenil) fosfina-??] dicloro-paladio (preparado de conformidad con la síntesis del catalizador D en J". Org. Chem. 2007, 72, 5104-5112) bajo una atmósfera inerte a una temperatura de aproximadamente 80-160°C para dar un compuesto de Fórmula I .

Alternativamente, el cloruro de ftalazinilo de fórmula (7) puede ser inicialmente acoplado con un ácido fenil borónico como se muestra en la Etapa 2 bajo condiciones Suzuki-Miyaura como se describe previamente para dar una fenilftalazina de fórmula (4) . En la Etapa 3, un compuesto de fórmula (4) se puede desproteger y después acilar como se muestra en la Etapa 4 en la amina usando un cloruro de benzoilo sustituido o ácido fenilcarboxílico como se describe previamente para dar un compuesto de Fórmula I.

Las siguientes Preparaciones y Ejemplos se proporcionan para ilustrar la invención en detalle adicional y representan síntesis típicas de los compuestos de Fórmula I. Los nombres de los compuestos de la presente invención son en general, proporcionados por ChemDraw Ultra® 10.0.

Preparación 1 Ester ter-butílico del ácido { 1- [4- (4-Fluoro-fenil) ftalazin- 1-il] -piperidin-4-il} -metil-carbámico Se agregó l-cloro-4- (4-fluorofenil) -ftalazina (3.00 g, 11.6 mmol) a una solución de éster ter-butílico del ácido metil-piperidin-4-il-carbámico (2.98 g, 13.9 mmol) y trietilamina (3.52 g, 34.8 mmol) en DMF (30 mL) . Se calentó a 130°C por 3 días. Se disolvió la mezcla de reacción en diclorometano y se lavó con salmuera. Se secó la fase orgánica con sulfato de sodio, filtró, y concentró bajo presión reducida. Se purificó el residuo resultante por cromatografía instantánea (20:5:1, hexano : acetato de etilo : amoníaco 2M en metanol) para proporcionar el compuesto del título como un sólido (4.45 g, 88%). ES/ S m/z 437.2 (M+l) .

Procedimiento alterno: Se combinó éster ter-butílico del ácido metil- piperidin-4-il-carbámico (75 g, 349 mmol), l-cloro-4- (4- fluoro-fenil) -ftalazina (75 g, 289 mmol), y carbonato de potasio (80 g, 579 mmol) en dimetilsulfóxido (500 mL) y se calentó la mezcla a 110°C por 3 h. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se vertió la suspensión en agua (1.0 L) . Se recolectaron los sólidos por filtración y se secaron en un horno a vacío por 3 días para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (120 g, 95%) . ES/MS m/z 437.3 ( +l) .

Se prepararon las piperidinilftalazinas en la tabla de abajo siguiendo esencialmente el procedimiento descrito en la Preparación 1, usando la cloroftalazina y aminopiperidina tBOC protegida apropiada: Preparación 5 {l- [4- (4-Fluoro-fenil) ftalazin-l-il] piperidin-4-il }metilamina Se agregó ácido trifluoroacético (100 mL) a una solución de éster ter-butílico del ácido {l- [4- (4-fluorofenil) ftalazin-l-il] -piperidin-4-il} -metil-carbámico (11.2 g, 10.2 mmol) en dielorómetaño (100 mL) . Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante la noche, y se concentró bajo presión reducida. Se disolvió el residuo resultante en diclorometano y se lavó con NaOH 1N y salmuera. Se secó la fase orgánica con sulfato de sodio, filtró, y concentró bajo presión reducida. Se cristalizó el compuesto del título de hexano/diclorometano para obtener el compuesto del título (8.46 g, 98%). ES/MS m/z 337.2 (M+l) .

Procedimiento alterno (aislado como el clorhidrato) : Se combinó tolueno (500 mL) y metanol (30 mL) a 10°C. Se agregó cloruro de acetilo. (29 mL, 410 mmol) por goteo durante 20 min. Se mantiene la temperatura por debajo de 15°C durante la adición. Se agregó éster ter-butílico del ácido {l- [4- (4-fluoro-fenil) -ftalazin-l-il] -piperidin-4 -il}-metil-carbámico (71 g, 164 mmol) . Se calentó la suspensión a 35°C por 2 h. Se enfrió la suspensión a temperatura ambiente y se recolectó el sólido por filtración. Se secó en un horno a vacío a 40°C por 12 h para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (58 g, 95%) . ES/MS m/z 337 (M+l) .

Se prepararon la aminopiperidinilftalazinas desprotegidas en la tabla de abajo siguiendo esencialmente el procedimiento descrito en la Preparación 5, usando la aminopiperidinilftalazina tBOC protegida apropiada: ES/MS Prep Nombre químico m/z Metil- [1- (4-fenilftalazin-l-il) piperidin-4- 319.2 6 il] -amina (M+l) 1- (4- (4 -Fluorofenil) ftalazin- 1- il) piperidin-4 - 323.2 7 amina (M+l) 305.2 8 1- (4-Fenilftalazin-l-il) iperidin-4 -amina (M+l) Preparación 9 1- (4-cloroftalazin-l-il)piperidin-4-il (metil) carbamato ter-butilo Se combinó 1 , 4-diclorof alazina (5.00 g, 24.6 mmol) , metil (piperidin-4-il) carbamato de ter-butilo (5.54 g, 25.8 mmol), y carbonato de potasio (29.5 mmol; 4.08 g) en N-metilpirrolidona (50.0 mL) . Se calentó la mezcla de reacción a 80°C por 3 días y se vertió la mezcla de reacción en agua helada. Se filtró vía filtración a vacío para obtener un sólido amarillento y se secó a temperatura ambiente en un horno a vacío. Se purificó por cromatografía en gel de sílice (1:1, hexano : acetato de etilo) para obtener el producto deseado (5.79 g, 62%). ES/MS m/z 377.2 (M+l).

Procedimiento alterno: Se combinó 1, 4-dicloroftalazina (7.04 g, 35.4 mmol) , metil (piperidin-4-il) carbamato de ter-butilo (5.54 g, 37.2 mmol), trietilamina (7.4 mL, 53.1 mmol) y DMSO (85 mL) . Se calentó la mezcla de reacción a 85°C por 3 días o hasta el consumo completo del material de partida. Después del enfriamiento, se transfirió la mezcla de reacción a un embudo separador con éter dietílico y se lavó con agua. La capa orgánica se separó y se secó con MgS04, filtró, después se concentró in vacuo. Se purificó el residuo resultante por cromatografía instantánea (0-10% metanol en diclorometano) para obtener el compuesto del título (7.6 g, 57%) . ES/MS m/z 377.2 (M+l) .

Preparación 10 Metil (1- (4- (4- (trifluorometil) fenil) ftalazin-l-il)piperidin 4 -il) carbamato de ter-Jufcilo Se cargó un recipiente de microondas con 1- (4- cloroftalazin-l-il) piperidin-4-il (metil) carbamato de ter-butilo (0.201 g, 0.534 mmol), ácido 4- (trifluorometil) fenilborónico (122 mg, 0.640 mmol), monohidrato tribásico de fosfato de potasio (209 mg, 0.907 mmol) , triciclohexilfosfina (19 mg, 0.064 mmol) , 1,4-dioxano (3.5 mL) y agua (1.5 mL) . Se burbujeó nitrógeno a través de la mezcla de reacción por 5 min. Se agregó tris (dibencilidenacetona) dipaladio (0) (0.027 mmol, 25 mg) . Se burbujeó nitrógeno a través de la mezcla de reacción por otros 5 min. Se calentó el recipiente de reacción sellado en un microondas por una hora a 150°C. Se pasó la mezcla de reacción a través de una almohadilla de gel de sílice levigando con acetato de etilo. Se concentró in vacuo y purificó el residuo resultante usando cromatografía en gel de sílice (30:70, acetato de etilo : hexano) para obtener el compuesto del título (0.170 g (65%). ES/MS m/z 486.8 (M+l) .

Preparación 11 Diclorhidrato de iv-Metil-l- (4- (4- (triflourometil) fenil) ftalazin-l-il) piperidin-4 -amina Se agregó clorhidrato de hidrógeno (4.0 N en dioxano, 20 mL; 80.0 mmol) a metil (l-(4-(4- (triflourometil) fenil) ftalazin-l-il) piperidin-4-il) carbamato de ter-Jutilo (0.158 g, 0.325 mmol) . Se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Los solventes se removieron bajo presión reducida. Se usó el material crudo (0.169 g, >100%) como tal. ES/MS m/z 387.0 (M+l).

Preparación 12 1- (4- (4-cianofenil) ftalazin-l-il) iperidin-4- il (metil) carbamato de ter-butilo Se cargó un tubo de presión con 1- (4-cloroftalazin-1-il) piperidin-4-il (metil) carbamato de ter-butilo (400 mg, 1.06 mmol) , 1,4-dioxano (12 mL) , agua (4 mL) , ácido 4-cianofenilborónico (467 mg, 3.18 mmol), y carbonato de cesio (1.40 g, 4.24 mmol). Se burbujeó nitrógeno a través de la mezcla de reacción por 5 min. Se agregó (SP-4-1)-bis [bis (1, 1-dimetiletil) (4-metoxifenil) fosfina-??] dicloro-paladio (J. Org. Chem. 2007, 72, 5104-5112) (36.0 mg, 0.053 mmol) . Se burbujeó nitrógeno a través de la mezcla de reacción por algunos minutos y se selló el recipiente de reacción. Se calentó la reacción a 90°C durante la noche. Se filtró la mezcla de reacción a través de una almohadilla de gel de sílice levigando con acetato de etilo. Se removieron los solventes bajo presión reducida y purificó el residuo resultante usando cromatografía en gel de sílice (30:70, acetato de etilo rhexano) para obtener el compuesto del título (0.392 g, 83%) . ES/ S m/z 444.2 (M+l) .

Preparación 13 Diclorhidrato de 4- (4- (4- (Metilamino) piperidin-l-il) ftalazin- l-il) benzonitrilo Se preparó el compuesto del título, esencialmente siguiendo el procedimiento como se describe en la Preparación 11 usando 1- (4- (4-cianofenil) ftalazin-l-il)piperidin-4-il (metil) carbamato de ter-Jutilo (0.385 g, 0.868 mmol) . Se usó el material crudo (0.378 g, >100%) como tal en reacciones subsecuentes. ES/MS m/z 344.2 (M+l) .

Preparación 14 Diclorhidrato de 1- (4-Cloroftalazin-l-il) -iV-metilpiperidin-4- amina Se agregó clorhidrato de hidrógeno (4.0 N in dioxano, 100 mL; 400 mmol) a una solución de l-(4-cloroftalazin-l-il)piperidin-4-il (metil) carbamato de ter-Jbutilo (7.60 g; 1.00 equiv; 20.2 mmol) en metanol (100 mL) . Se agitó a temperatura ambiente una hora. Se removió el solvente bajo presión reducida para obtener el compuesto del título (7.05 g, 100%). ES/MS m/z 277.2 (M+l).

Preparación 15 N- (1- (4-Cloroftalazin-l-il) piperidin-4-il) -¿V-metil-2- (trifluorometil) benzamida Se combinó diclorhidrato de 1- (4-cloroftalazin-1- il) -N-metiipiperidin-4 -amina (1.01 g, 2.89 mmol) y trietilamina (1.2 mL, 8.61 mmol) en diclorometano (30 mL) . Se lavó a chorro el vial de reacción con nitrógeno y se agregó cloruro de 3-trifluorometilbenzoilo (0.46 mL, 3.12 mmol) . Se colocó la reacción bajo un manto de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante la noche . Se concentró a un residuo y purificó usando cromatografía en gel de sílice (0-10% metanol en diclorometano) para obtener el compuesto del título (1.11 g, 86%). ES/MS m/z 449.2 (M+l) .

Se prepararon las amidas en la tabla de abajo siguiendo esencialmente el procedimiento descrito en la Preparación 15, usando el cloruro de ácido apropiado: Ejemplo 1 Clorhidrato de N- (1- (4- (4-Fluorofenil) ftalazin-1- il)piperidin-4-il) -N-metil-4- (trifluorometoxi) benzamida Se combinó metil { 1- [4- (4-fluoro-fenil) ftalazin-1-il] piperidin-4-il}metilamina (100 mg, 0.300 mmol), trietilamina (0.12 mL, 0.89 mmol) y diclorometano (2 mL) a temperatura ambiente. Se agregó cloruro de 4- (trifluorometoxi) -benzoilo (100 mg, 0.45 mmol) a la mezcla y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se concentró la mezcla de reacción y purificó el residuo resultante por cromatografía instantánea (20:5:1, hexano : acetato de etilo: amoníaco 2M en metanol) . Se agregó HCl 1N en éter dietílico a una solución del producto aislado en diclorometano/metanol y se removieron los solventes bajo una corriente de gas de nitrógeno para proporcionar el compuesto del título como un sólido (98 mg, 58%) . ES/ S m/z 525.0 (M+l) .

Procedimiento alterno: Se agregó clorhidrato de {l- [4- (4-fluoro-fenil) - ftalazin-l-il] -piperidin-4-il} -metil-amina (58 g, 155 mmol) a 1,4-dioxano (580 mL) . Se agregó trietilamina (86 mL, 622 mmol) y se agitó por 20 min. Se agregó cloruro de 4-(trifluorometoxi)benzoilo (24 mL, 155 mmol) por goteo durante un periodo de 20 min. Se agitó por una hora a temperatura ambiente. Se agregó agua (100 mL) , se extrajo con acetato de etilo (200 mL) , y se concentró la porción orgánica bajo presión reducida. Se purificó el residuo resultante por cromatografía instantánea, levigando con acetato de etilo sobre 1 kg de obturador de sílice para proporcionar el producto como un aceite incoloro (58 g, 71%) . Se combinó tolueno (586 mL) con etanol (117 mL) y se enfrió a 3°C. Se agregó cloruro de acetilo (8 mL, lll mmol) durante un periodo de 20 min. Se agitó por 20 min y después se agregó _V-{l-[4- (4-fluoro-fenil) -ftalazin-l-il] -piperidin-4-il} -iV-metil-4-trifluorometoxi-benzamida (58 g, 111 mmol) en tolueno (40 mL) en una porción. Se agitó por 12 h. Se concentró a 1/3 del volumen. Se recolectó lo precipitado por filtración. Se secó el sólido en un horno a vacío a 40°C durante la noche para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (42 g, 67%). ES/MS m/z 525.0 (M+l) .

Se prepararon las amidas en la tabla de abajo, esencialmente siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 1, usando el cloruro de ácido apropiado: Sustituyentes ES/MS Ej. Nombre químico de benzamida m/z clorhidrato de N- (1- (4- (4- Fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 509.2 2 4-CF3 4-il) -iV-metil-4- (M+l) (trifluorometil) benzamida clorhidrato de N- (1- (4- (4- Fluorofenil ) ftalazin- 1- il ) piperidin- 509.2 3 3-CF3 4-il) -JV-metil-3- (M+l) (trifluorometil) benzamida clorhidrato de N- (1- (4- (4- Fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 509.2 4 2-CF3 4-il) -JV-metil-2- (M+l) (trifluorometil) enzamida clorhidrato de N- (1- (4- (4- Fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 525.2 5 2-OCF3 4-il) -W-metil-2- (M+l) (trifluorometoxi) benzamida clorhidrato de 2 , 6-Difluoro-W- (1- 477.2 6 (4- (4-fluorofenil) ftalazin-1- 2-F, 6-F (M+l) il) piperidin-4-il) -iV-metilbenzamida clorhidrato de 2-Fluoro-iV- (1- (4- (4- fluorofenil) ftalazin-l-il) iperidin- 2-F, 6-CF3 527.2 7 4-il) -iV-metil-6- (M+l) (trifluorometi1) benzamida Sustituyentes ES/MS Ej. Nombre químico de benzamida m/z clorhidrato de N- (1- (4- (4- Fluorofenil ) ftalazin- 1- il ) piperidin- 576.8 8 2-CF3, 5-CF3 4-il) -W-metil-2, 57 (M+l) bis (trifluorometil) benzamida clorhidrato de 2-Fluoro-W- (1- (4- (4- fluorofenil) ftalazin- l-il)piperidin- 2-F, 4-CF3 527.0 9 4-il) -iV-metil-4- (M+l) (trifluorometil) benzamida clorhidrato de 2 , 4-Dicloro-N- (1- (4- 509.0 10 (4-fluorofenil) ftalazin-1- 2-Cl, 4-C1 (M+l) il ) piperidin-4 -il ) -N-metilbenzamida clorhidrato de 2 , 4 , 6 -Trifluoro-N- 495.0 11 (1- (4- (4-fluorofenil) ftalazin-1- 2-F, 4-F, 6-F (M+l) il ) piperidin-4 - il ) -JV-metilbenzamida clorhidrato de (1- (4- (4- fluorofenil ) ftalazin- 1- il ) piperidin- 527.0 12 2-CF3, 5-F 4-il) -iV-metil-2- (M+l) (trifluorometil) benzamida clorhidrato de 3-Fluoro-N- (1- (4- (4- fluorofenil) ftalazin-l-il) iperidin- 527.0 13 3-F, 4-CF3 4-il) -W-metil-4- (M+l) (trifluorometil) benzamida clorhidrato de 2-Fluoro-W- (1- (4- (4- fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 527.0 14 2-F, 3-CF3, 4-il) -iV-metil-3- (M+l) (trifluorometil) benzamida clorhidrato de 2-Cloro-iV- (1- (4- (4- fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 543.0 15 2-Cl, 5-CF3 4-il) -iV-metil-5- (M+l) (trifluorometil) benzamida, Sustituyentes ES/MS Ej. Nombre químico de benzamida m/z clorhidrato de 3-Cloro-2-fluoro-N- (1- (4- (4-fluorofenil) ftalazin-1- 2-F, 3-Cl, 6- 561.0 16 il)piperidin-4-il) --V-metil-6- CF3 ( +l) (trifluorometil) benzamida clorhidrato de N- (1- (4- (4- Fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 525.2 17 3-OCF3 4-il) -W-metil-3- (M+l) (trifluorometoxi) benzamida clorhidrato de 2-Cloro-JV- (1- (4- (4- 475.0 18 fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 2-Cl (M+l) 4-il) -N-metilbenzamida clorhidrato de 3-Cloro-W- (1- (4- (4- 475.0 19 fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 3-Cl (M+l) 4-il) -W-metilbenzamida clorhidrato de 4-Cloro-_V- (1- (4- (4- 475.0 20 fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 4-Cl (M+l) 4-il) -W-metilbenzamida clorhidrato de 2 , 4-Difluoro-W- (1- (4- 477.0 21 (4-fluorofenil) ftalazin-1- 2-F, 4-F (M+l) il) piperidin-4-il) -N-metilbenzamida clorhidrato de 2-Fluoro-N- (1- (4- (4- fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 2-F, 5-CF3 527.0 22 4-il) -iV-metil-5- (M+l) (trifluorometil) benzamida clorhidrato de W-(l-(4-(4- Fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 577.0 23 2-CF3, 4-CF3 4-il) -JV-metil-2,4- (M+l) bis (trifluorometil) benzamida Sustituyentes ES/MS Ej. Nombre químico de benzamida m/z clorhidrato de 4-Ciano-lV- (1- (4- (4- 466.2 24 fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 4-CN ( +l) 4-il) -iV-metilbenzamida clorhidrato de 2 , 6-Dicloro-W- (1- (4- 509.0 25 (4-fluorofenil) ftalazin-1- 2-C1, 6-C1 (M+l) il) piperidin-4-il) -i\7-metilbenzamida clorhidrato de 3-Ciano-W- (1- (4- (4- 466.2 26 fluorofenil) ftalazin-l-il) iperidin- 3-CN (M+l) 4-il) -JV-metilbenzamida clorhidrato de 4-Cloro-W- (1- (4- (4- fluorofenil) ftalazin- 1-il) piperidin- 542.6 27 2-CF3, 4-Cl 4-il) -iV-metil-2- (M+l) (trifluorometil) benzamida clorhidrato de 2 , 4 -Dicloro- 5- fluoro-JV- (1- (4- (4- 2-C1, 4-Cl, 526.6 28 fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 5-F (M+l) 4-il) -iV-metilbenzamida clorhidrato de 5-Cloro-Jí- (1- (4- (4- fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 543.2 29 2-CF3, 5-Cl 4-il) -iV-metil-2- (M+l) ( trifluorometil ) benzamida clorhidrato de 4-Fluoro-iV- (1- (4- (4- fluorofenil) ftalazin-l-il) iperidin- 527.0 30 2-CF3, 4-F 4-il) -W-metil-2- (M+l) (trifluorometil) benzamida Procedimiento alterno al Ejemplo 30: Se agregó clorhidrato de { 1- [4- (4-fluoro-fenil) -ftalazin-l-il] -piperidin-4-il} -metil-amina (80 g, 240 mmol) al agua (500 mL) para formar una suspensión. Se agregó carbonato de potasio hasta que el pH es 10. Se agregó cloruro de metileno (400 mL) . Se agitó vigorosamente hasta que todos los sólidos se disolvieron. La capa orgánica se separó y se concentró a un aceite claro (74 g, 220 mmol) para proporcionar 1- [4- (4-fluoro-fenil) -ftalazin-l-il] -piperidin-4-il } -metil-amina .

Se combinó { 1- [4- (4-fluoro-fenil) -ftalazin-l-il] -piperidin-4-il} -metil-amina (12 g, 35 mmol), piridina (20 mL, 247 mmol) y 1,4-dioxano (120 mL) . Se agitó la reacción por 20 min. Se agregó diclorometano (25 mL) . Se agitó la suspensión por 20 min. Se agregó cloruro de 4-fluoro-2- (trifluorometil) benzoilo (6.5 mL, 43 mmol) por goteo durante un periodo de 20 min. Se agitó por 2 h. Se vertió la mezcla en agua (100 mL) , se extrajo con diclorometano (200 mL) y se concentró bajo presión reducida. Se purificó el residuo por cromatografía instantánea (1:1, acetato de etilo rhexano) para proporcionar el producto como un sólido blanco (10.3 g, 55%). Se agregó 4-fluoro-W- {l- [4- (4-fluoro-fenil) -ftalazin-l-il] -piperidin-4-il } -N-metil-2-trifluorometil-benzamida (10 g, 19.85 mmol) a tolueno (125 mL) para obtener una suspensión. Se agregó metanol (30 mL) para hacer una solución homogénea. Se agregó clorhidrato de hidrógeno (5.21 mL, 4.0 N en 1,4-dioxano, 20 mmol) en una porción. Se dejó agitar por una hora y se concentró a 1/3 del volumen. Se recolectó el sólido y se secó en un horno a vacío por 12 h a 35°C para obtener el compuesto del título como un sólido blanco (9.5 g, 85%). ES/MS m/z 527.0 (M+l) .

Ejemplo 31 Clorhidrato de 4-Fluoro-W-metil-iV- (1- (4-fenilftalazi il)piperidin-4-il) -2- (trifluorometil) benzamida Se combinó metil- [1- (4-fenilftalazin-1-il)piperidin-4-il] -amina (800 mg, 2.51 mmol) , trietilamina (1.05 mL, 7.54 mmol) y diclorometano (20 mL) a temperatura ambiente. Se agregó cloruro de 4-fluoro-2- (trifluorometil) benzoilo (683 mg, 3.01 mmol) a la mezcla y se agitó a temperatura ambiente durante la noche . Se concentró la mezcla de reacción y purificó el residuo resultante por cromatografía instantánea (20:5:1, hexano : acetato de etilo : amoníaco 2M en metanol) . Se agregó HCl 1N en éter dietílico a una solución del producto aislado en diclorometano/metanol . Se filtró el sólido resultante para obtener el compuesto del título (1.13 g, 88%). ES/MS m/z 509.2 (M+l) .

Se prepararon las amidas en la tabla de abajo esencialmente siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 31, usando el cloruro de ácido apropiado. Se aisló la sal de HCl por filtración o evaporando el solvente: Sustituyentes ES/MS Ej. Nombre químico de benzamida m/z clorhidrato de 3-Fluoro-W-metil-W- 509.2 47 (1- (4-fenilftalazin-l-il) piperidin- 3-F, 4-CF3 (M+l) 4-il) -4- (trifluorometil ) benzamida clorhidrato de 2-Fluoro-W-metil-N- 509.2 48 (1- (4-fenilftalazin-l-il) piperidin- 2-F, 3-CF3 (M+l) 4-il) -3- (trifluorometil) benzamida Ejemplo 49 Clorhidrato de N- (1- (4- (4-Fluorofen.il) ftalazin-1- il) iperidin-4-il) -4- (trifluorometil) benzamida Se combinó 1- (4- (4-fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin-4 -amina (110 mg, 0.34 mmol), trietilamina (0.14 mL, 1.02 mmol) y diclorometano (2 mL) a temperatura ambiente. Se agregó cloruro de 4- (trifluorometil) -benzoilo (85 mg, 0.41 mmol) a la mezcla y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se concentró la mezcla de reacción y purificó el residuo resultante por cromatografía instantánea (20:5:1, hexano : acetato de etilo: amoníaco 2M en metanol) . Se agregó HC1 1N en éter dietílico a una solución del producto aislado en diclorometano/metanol y se removieron los solventes bajo una corriente de gas de nitrógeno para proporcionar el compuesto del título como un sólido (57 mg, 32%) . ES/MS m/z 495.2 (M+l) .

Se prepararon las amidas en la tabla de abajo: esencialmente siguiendo el procedimiento como el descrito en el Ejemplo 49, usando el cloruro de ácido apropiado: Sustituyentes ES/MS Ej. Nombre químico de benzamida m/z clorhidrato de 4-Ciano-JV- (1- (4- (4- 452.0 56 fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 4-CN (M+l) 4- il) benzamida clorhidrato de 2 , 6-Difluoro-N- (1- (4- 57 463.0 ( - fluorofenil) ftalazin-l- 2-F, 6-F (M+l) il) piperidin-4-il) benzamida clorhidrato de 2-Fluoro--V- (1- (4- (4- 513.0 58 fluorofenil) ftalazin-l-il ) piperidin- 2-F, 6-CF3 (M+l) 4-il) -6- (trifluorometil) benzamida clorhidrato de 2 , 4 , 6-Trifluoro-.N- (1- 481.0 59 (4- (4 -fluorofenil) ftalazin-l- 2-F, 4-F, 6-F (M+l) il) piperidin-4 -il ) benzamida clorhidrato de 2-Fluoro-W- (1- (4- (4- 513.0 60 fluorofenil ) ftalazin- 1- il ) piperidin- 2-F, 5-CF3 (M+l) 4-il) -5- (trifluorometil) benzamida clorhidrato de 4-Fluoro-N- (1- (4- {4- 513.0 61 fluorofenil ) ftalazin- 1 - il ) piperidin- 2-CF3, 4-F (M+l) 4-il) -2- (trifluorometil) benzamida clorhidrato de N-(l-(4-(4- Fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 563.0 62 2-CF3, 4-CF3 4-il) -2,4- (M+l) bis (trifluorometil) benzamida clorhidrato de 2-Cloro-w- (l- (4- (4- 461.0 63 fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 2-C1 (M+l) 4 -il) benzamida clorhidrato de 3 -Cloro-W- (1- (4 - (4 - 461.0 64 fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 3-Cl (M+l) 4 -il) benzamida Sus ituyentes ES/MS Ej. Nombre químico de benzamida m/z clorhidrato de 4-Cloro-N- (1- (4- (4- 461.0 65 fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 4-Cl (M+l) 4 - il ) benzamida clorhidrato de 2 , 4-Dicloro-5-fluoro- 2-C1, 4-Cl, 512.6 66 N- (1- (4- (4-fluorofenil) ftalazin-1- 5-F (M-l) il) iperidin- - il ) benzamida clorhidrato de 4-Cloro-IV- (1- (4- (4- 528.6 67 fluorofenil) ftalazin-l-il) piperidin- 2-CF3, 4-Cl (M+l) 4-il) -2- (trifluorometil) benzamida Ejemplo 68 Clorhidrato de .V- (1- (4-Fenilftalazin-l-il) iperidin-4-il) -4- (trifluorometil) benzamida Se combinó 1- (4-fenilftalazin-l-il)piperidin-4-amina (110 mg, 0.34 mmol) , trietilamina (0.140 mL, 1.02 mmol) , y diclorometano (2 mL) a temperatura ambiente. Se agregó cloruro de 4- (trifluorometil) -benzoilo (85 mg, 0.41 mmol) a la mezcla y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se concentró la mezcla de reacción y purificó el residuo resultante por cromatografía instantánea (20:5:1, hexano: acetato de etilo: amoníaco 2M en metanol) . Se agregó HC1 1N en éter dietílico a una solución del producto aislado en diclorometano/metanol y se removieron los solventes colocando bajo una corriente de gas de nitrógeno para proporcionar el compuesto del título como un sólido (116 mg, 67%). ES/MS m/z 477.2 (M+l) .

Se prepararon las amidas en la tabla de abajo esencialmente siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 68, usando el cloruro de ácido apropiado: Sustituyente (s) ES/MS Ej. Nombre químico de benzamida m/z clorhidrato de 2-Cloro-iV- (1- (4- 443.0 83 fenilftalazin- 1- il ) iperidin-4 - 2-Cl (M+l) il) benzamida clorhidrato de 3-Cloro-iV- (1- (4- 443.0 84 fenilftalazin-l-il) iperidin-4- 3-Cl (M+l) il) benzamida clorhidrato de 4-Cloro-i\7- (l- (4- 443.0 85 fenilftalazin-l-il) iperidin-4- 4-Cl (M+l) il) benzamida Ejemplo 86 Clorhidrato de N- (1- (4- (4-Fluorofenil) ftalazin-l- il) piperidin-4-il) benzamida Se combinó l-cloro-4- (4-fluorofenil) f alazina (150 mg, 0.58 mmol) , N- (piperidin- -il) benzamida (178 mg, 0.87 mmol) , trietilamina (0.404 mL, 2.9 mmol) y dimetilformamida (1 mL) a temperatura ambiente. Se calentó a 100 °C y se agitó durante la noche. Se vertió la mezcla de reacción cruda sobre una columna de intercambio catiónico fuerte Phenomenex Strata® SCX (55 µp?, 70 Á) 10 g/60 mL (con un grupo funcional de ácido bencensulfónico) . Se levigó el producto deseado con amoníaco metanólico 2N (40 mL) y se concentró.

Se purificó el residuo por cromatografía instantánea (20-30% [10% amoníaco metanólico 2N en acetato de etilo] en hexano) . Se agregó ácido clorhídrico 1N en éter dietílico a una solución del producto aislado en diclorometano/metanol y se removieron los solventes bajo una corriente de gas de nitrógeno para proporcionar el compuesto del título como un sólido (137 mg, 51%). ES/MS m/z 427.2 (M+l) .

Ejemplo 87 Clorhidrato de N- (1- (4- (4-Cianofenil) ftalazin-l-il) piperidin 4-il) -4-fluoro-iV-metil-2- (trifluorometil) benzamida Se cargó un vial de reacción de 4 mL con diclorhidrato de 4- (4- (4- (metilamino) piperidin-1-il) ftalazin- 1-il) benzonitrilo (44.7 mg, 0.107 mmol) , diclorometano (1 mL) , y trietilamina (0.0598 mL, 0.429 mmol). Se lavó a chorro el vial de reacción con nitrógeno y se agregó cloruro de 4-fluoro-2- (trifluorometil)benzoilo (0.033 g, 0.14 mmol). Se tapó el vial y se dejó agitar la reacción a temperatura ambiente durante la noche. Se evaporó a un residuo y purificó usando cromatografía en gel de sílice (40:60, acetato de etilo -.hexano, después acetato de etilo) . Se agregó HC1 1N en éter dietílico a una solución del producto aislado en diclorometano/metanol y se removieron los solventes colocando bajo una corriente de gas de nitrógeno. Se secó en un horno a vacío a 50°C para obtener el compuesto del título (36.0 mg, 59%) . ES/MS m/z 533.8 (M+l) .

Se prepararon las amidas en la tabla de abajo esencialmente siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 87, usando el material de partida apropiado de la Preparación 11 o Preparación 13 y cloruro de 4- (trifluorometoxi) benzoilo: Ejemplo 90 Clorhidrato de N-Metil-2- (trifluorometil) -N- (1- (4- (4- (trifluorometil) fenil) ftalazin-l-il) iperidin-4-il) benzamida Se cargó un recipiente de microondas con N- (1- (4-cloroftalazin-l-il) piperidin-4-il) -W-metil-2- (trifluorometil) benzamida (0.101 g, 0.23 mmol) , ácido 4- (trifluorometil) fenilborónico (0.171 g, 0.9 mmol), carbonato de cesio (0.295 g, 0.91 mmol), 1,4-dioxano (3 mL) , y agua (1 mL) . Se purgó el vial de reacción dos veces con nitrógeno. Se agregó (SP-4-1) -bis [bis (1, 1-dimetiletil) (4-metoxifenil) fosfina-??] dicloro-paladio (J. Org. Chem. 2007, 72, 5104-5112) (0.002 g; 0.003 mmol) y se calentó la reacción a 90°C por 16 h. Después del enfriamiento, se separaron las dos capas y se removió el agua. Se evaporó el solvente orgánico con una corriente de nitrógeno. Se purificó el residuo de la capa orgánica usando cromatografía en gel de sílice (0-10% metanol en diclorometano) . Se agregó HCI 4N en dioxano a una solución del producto aislado en metanol y se removieron los solventes in vacuo para obtener el compuesto del título (0.100 g, 75%). ES/MS m/z 559.2 (M+l) .

Se prepararon los compuestos en la tabla de abajo, esencialmente siguiendo los procedimientos descritos en el Ejemplo 90, usando el material de partida apropiado de las Preparaciones 15-18 y el ácido borónico apropiado: Grupos R (R* = H a menos ES/MS Ej. Nombre químico que se indique m/z de otro modo) clorhidrato de 5-Fluoro-W-metil- N- (1- (4- (4- 593.2 R1 = OCF3; R3 = 95 (trifluorometoxi) fenil) ftalazin- (M+l) CF3; R6 = F 1-il) iperidin-4-il) -2- (trifluorometil) benzamida clorhidrato de W- etil-W- (1- (4- (4- R1 = OCF3; R3 = 575.2 96 (trifluorometoxi) fenil) ftalazin- CF3 (M+l) l-il)piperidin-4-il) -2- (trifluorometil) benzamida clorhidrato de 3-Ciano-W- (1- (4- 478.2 (4-metoxifenil) ftalazin-1- R1 = OCH3; R4 = 97 (M+l) il) piperidin-4-il) -N- CN metilbenzamida clorhidrato de 3-Ciano-iV-metil- 532.2 N- (1- (4- (4- R1 = OCF3; R4 = 98 (M+l) (trifluorometoxi) fenil) ftalazin- CN 1- il ) piperidin-4 - il) benzamida clorhidrato de JV-Metil-4- (trifluorometoxi) -N- 591.2 R1 = OCF3; R5 = 99 (1- (4- (4- (trifluorometoxi) fenil) (M+l) OCF3 ftalazin-1- il ) piperidin-4 - il) benzamida clorhidrato de N- (1- (4- (4- 537.2 Metoxifenil) ftalazin-1- R1 = OCH3; R5 = 100 (M+l) il)piperidin-4-il) -JW-metil-4- OCF3 (trifluorometoxi) benzamida Grupos R (Rx = H a menos ES/MS Ej. Nombre químico que se indique m/z de otro modo) clorhidrato de 5-Fluoro-2V- (1- (4- 539.2 (4-metoxifenil) ftalazin-1- R1 = 0CH3; R3 = 101 (M+l) il)piperidin-4-il) -N-metil-2- CF3; R6 = F (trifluorometil) benzamida clorhidrato de ?G- (1- (4- (4- 521.2 Metoxifenil) ftalazin-1- R1 = OCH3; R3 = 102 (M+l) il)piperidin-4-il) -N-metil-2- CF3 (trifluorometil) benzamida La trayectoria Sónica de Hedgehog (Shh) es crítica durante la embriogénesis, pero es regulada descendentemente en la mayoría de los tejidos. Por el contrario, más de 30% de meduloblastoma humano exhibe niveles altos de expresión de Glil (homólogo 1 de oncogen asociado al glioma) , indicando que la activación anormal de la trayectoria de Shh es importante en una subserie de tumores cerebrales pediátricos . La Shh secretada por células Purkinje cerebelares, promueve la proliferación de progenitores de gránulo, indicando que la activación no controlada de la trayectoria hedgehog (Hh) puede sostener el desarrollo de meduloblastoma. Esta hipótesis es confirmada por el desarrollo de meduloblastoma en ratones con gene Patched (Ptch'/+) . El tratamiento de estos ratones con un antagonista de hedgehog inhibe el crecimiento del tumor. Además, se documentó que el tratamiento antagonista de hedgehog resulta en la inhibición de la expresión Glil en estos tumores cerebrales.

La trayectoria no controlada de hedgehog ha sido reportada en un número de otros cánceres también. Por ejemplo, la Hedgehog se ha implicado como un factor de supervivencia para los siguientes cánceres: carcinoma de célula basal; cánceres del tracto gastrointestinal superior (esófago, estómago, páncreas, y tracto biliar) ; cáncer de próstata; cáncer de mama; cáncer de pulmón de células pequeñas; cáncer de pulmón de células no pequeñas; linfoma de célula B; mieloma múltiple; cáncer gástrico; cáncer de ovarios; cáncer colorrectal; cáncer hepático; melanoma; cáncer renal; y meduloblastoma .

Se ha afirmado que los elementos de la trayectoria de hedgehog son objetivos potenciales del fármaco para el tratamiento de cánceres. Una línea celular Daoy establecida de tumor de meduloblastoma (ATCC, HTB-186) , es respondedora a ligandos Hh. Cuando estas células son tratadas con medios acondicionados con Shh agregada exogenamente, la trayectoria de señalización de Hh se activa y resulta en una expresión incrementada de Glil. Ciclopamina, un alcaloide aislado del lirio del maíz Veratrum californicum es un antagonista de hedgehog débil y se ha mostrado que suprime la expresión de Glil en respuesta a la estimulación de Shh. Recientes observaciones sugieren que la ciclopamina inhibe el crecimiento de aloinjertos y células de meduloblastoma cultivadas. Usando este sistema de modelo de célula Daoy, se pueden identificar potentes inhibidores de las trayectorias de señalización de hedgehog. Puesto que los compuestos de la presente invención son antagonistas de hedgehog, son adecuados para el tratamiento de los tipos de tumor mencionados antes .

Determinación de la IC50 de Actividad Biológica El siguiente protocolo de ensayo y resultados del mismo adicionalmente demuestran que la utilidad y eficacia de los compuestos y métodos de la invención actual se dan para los propósitos de ilustración y no significan ser limitantes en cualquier forma. Los ensayos funcionales proporcionan soporte de modo que los compuestos de la presente invención exhiben la capacidad de inhibir la señalización de Shh. Todos los ligandos, solventes, y reactivos empleados en el siguiente ensayo están fácilmente disponibles a partir de fuentes comerciales o se pueden preparar fácilmente por un experto en la técnica.

La actividad biológica se determina usando un ensayo funcional en células de cáncer neuronal Daoy y mide los niveles de ácido ribonucleico Glil vía un sistema de ensayo de ADNb (ácido desoxirribonucleico ramificado) (Panomics, Inc., Fremont, CA) . Gli originalmente se descubrió en una línea celular de Glioblastoma y codifica una proteína de veta de zinc que se activa por señalización de Shh. La respuesta máxima se obtiene induciendo la transcripción de Glil en las células Daoy con medio acondicionado (células de riñon embriónico humano HEK-293 que expresan establemente Shh recombinante) por 24 horas y luego se mide la cantidad del transcripto Glil estimulado. La respuesta mínima es la cantidad de transcripto Glil inhibida con un compuesto de control en células Daoy que se han estimulado con medios acondicionados (células de riñon embriónico humano HEK-293 que expresan establemente Shh recombinante) por 24 horas.

Ensayo Funcional para Medir la Inhibición de Glil en Células Daoy El sistema de ensayo de ADNb utiliza la tecnología de ADN de cadena ramificada para permitir la amplificación de un ácido ribonucleico objetivo (transcripto) . La tecnología emplea tres tipos de sondas de ADNc específico de Glil, corto, híbrido, sintético que determinan la especificidad del transcripto objetivo [extensores de captura (CEs) , extensores de etiqueta (LEs) , y bloqueadores (BLs) ] que se hibridan como un complejo con los transcriptos objetivo para amplificar la señal de hibridación. La adición de un sustrato quimiolumigénico durante la etapa de amplificación permite la detección usando luminiscencia.

La línea de células Daoy obtenida de American Type Culture Collection (ATCC) es una línea de células de tumor neuronal humano sensible a Shh y se estableció en 1985 a partir de un tumor meduloblastoma cerebelar desmoplásico, una línea de células de tumor fisiológicamente relevante. Niveles endógenos de transcriptos de Glil son bajos en células Daoy pero pueden ser estimulados usando medio acondicionado tomado de células que establemente sobre expresan Shh humano (una línea de células HEK-293 establemente transfectada con hShh) .

Las células Daoy crecen a confluencia en matraces T225 de cultivo de tejido en medio de crecimiento Daoy que contiene Medio Esencial Mínimo (MEM) más 10% Suero Bovino Fetal (FBS) con aminoácidos no esenciales 0.1 nM y piruvato de sodio 1 mM. Las células se remueven de los matraces T225 usando tripsina/ácido etilendiaminatetraacético (EDTA) , se centrifugan, resuspenden en el medio, y luego se cuentan.

Las células Daoy luego se siembran a 50,000 células por cavidad en el medio de crecimiento en placas de cultivo de tejido claras de 96 cavidades Costar y se dejan incubar durante la noche a 37°C bajo dióxido de carbono al 5% (C02) . Las células se lavan una vez en solución salina amortiguada con fosfato (PBS) seguido por adición de 100 µ? de Medio Acondicionado con Shh (Shh-CM) para estimular los niveles de expresión de Glil. Shh-CM se diluye para lograr estimulación máxima usando medio de crecimiento de control - 0.1% FBS/DMEM (Medio Eagle Modificado con Dulbeccos) . Las células Daoy tratadas con Shh-CM luego se tratan con varias concentraciones de inhibidores de hedgehog que varían desde aproximadamente 1 µ? a 0.1 nM. Los compuestos de prueba se dejan incubar por 24 horas a 37°C bajo C02 al 5%.

La medición del transcripto Glil se realiza usando el ensayo Quantigene 2.0 Glil como se describe por el fabricante (Panomics, Inc.). Se prepara un amortiguador de mezcla de lisis diluida (DLM) , el cual incluye Proteinasa K. Después de una incubación de 24 horas con el compuesto, las células se lavan una vez con PBS y se agregan 180 µ? de DLM a las células. La placa de células que contiene el amortiguador de lisis se sella y coloca a 55°C por 30 a 45 minutos. Los lisados de célula resultantes luego son triturados 5 veces. Una serie de sonda de trabajo que contiene sondas Glil se hace diluyendo las sondas en el DLM de acuerdo con las instrucciones del fabricante, y luego se agregan 20 µ? de la serie de sonda de trabajo a las placas de ensayo de ADNb con 80 µ? de los lisados Daoy. Las placas se sellan e incuban durante la noche a 55°C. Las placas de ADNb luego se procesan de acuerdo con las instrucciones del fabricante. La señal se cuantifica leyendo las placas en el lector Perkin Elmer Envision que detecta la luminiscencia. La señal luminiscente es directamente proporcional a la cantidad de transcripto objetivo presente en la muestra.

Los datos de señal luminiscente del ensayo funcional se usan para calcular la IC50 para el ensayo in vi tro. Los datos se calculan con base en los valores de control máximos (células Daoy tratadas con Shh-C ) y el valor de control mínimo (células Daoy tratadas con Shh-CM y una concentración inhibitoria de un compuesto de control , 1 µ? de N- (3-lH-benzo [d] imidazol-2-il) -4-clorofenil) -3 , 5-dimetoxibenzamida) . Un ajuste de curva logística de cuatro parámetros se usa para generar los valores de IC50 usando programas de software ActivityBase versión 5.3, ecuación 205 (Guidance for Assay Development and HTS , versión 5, Copyright 2005, Eli Lilly and Co. y The National Institutes of Health Chemical Genomics Center) . La ecuación de 4 parámetros es como sigue: Ajuste = (A+ ( (B-A) / (1+ ( (C/x) AD) ) ) , en donde A = Fondo, B = Superior, C = IC50 y D = Coeficiente Hill.

Siguiendo el protocolo descrito, los compuestos ejemplificados en la presente exhiben una IC50 de < 30 nM. El compuesto del Ejemplo 36 tiene una IC50 de aproximadamente 2.37 nM con un error estándar de 0.150 (n=2) en el ensayo descrito anteriormente. Estos resultados proporcionan evidencia que los compuestos de la presente invención son potentes antagonistas de hedgehog y, como tal, son útiles como agentes anticancerígenos.

Claims (12)

1. REIVINDICACIONES compuesto de la siguiente fórmula Fórmula I caracterizado porque: R1 es hidrógeno, fluoro, ciano, trifluorometilo, metoxi o trifluorometoxi ; R2 es hidrógeno o metilo; y R3, R4, R5, R6 y R7 son independientemente hidrógeno, cloro, fluoro, ciano, trifluorometilo o trifluorometoxi, siempre que al menos dos de R3, R4, R5, R6 y R7 sean hidrógeno; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.
2. 2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R1 es hidrógeno, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.
3. 3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R1 es fluoro, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.
4. 4. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque R2 es metilo, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.
5. 5. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque R2 es hidrógeno, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.
6. 6. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque R3 es cloro, fluoro, trifluorometilo o trifluorometoxi , o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.
7. 7. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, caracterizado porque R5 es fluoro, trifluorometoxi o trifluorometilo, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.
8. 8. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, caracterizado porque es 4-fluoro-N- (1- (4- (4-fluorofenil) ftalazin-l-il)piperidin-4-il) -N-metil-2- (trifluorometil) benzamida, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.
9. 9. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en combinación con un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
10. 10. Un método para tratar meduloblastoma, carcinoma de células básales, cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer pancreático, cáncer del tracto biliar, cáncer de próstata, cáncer de mama, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de pulmón de células no pequeñas, linfoma de células B, mieloma múltiple, cáncer de ovario, cáncer colorrectal cáncer hepático, cáncer renal o melanoma, en un mamífero caracterizado porque comprende administrar a un mamífero en necesidad de tal tratamiento, una cantidad efectiva de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable .
11. 11. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para uso como un medicamento.
12. 12. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para uso en el tratamiento de cáncer.